INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Le composé iminohalogènure (III) ainsi obtenu est mis en réaction avec un alcool inférieur sous refroidissement, de préfé- rence à des températures comprises entre OOC et -250C, sans être isolé du mélange de réaction. Comme alcool inférieur utilisé dans la réactions on peut citer le méthanol, l'éthanol, l'alcool n-propylique, etc. et il est préférable que les quantités d' alcool mises en oeuvre soient moléculairement en excès par rapport au matériau de départ.
De plus, l'ester 3',5'-di-tert-butyl-4'-hydroxybenzylique de l'a-aminobenzylpénicilline (V) peut entre produit en faisant réagir le composé imino-éther (IV) ainsi obtenus sans être isolé du mélange de réaction, directement avec le chlorhydrate du chlorure de phénylglycyle ou la 4-phényl-2,5-oxazolidinedione dans un solvant organique inerte sous refroidissement ou à des tempéra; tures comprises entre 0 C et -2'50C ou en hydrolysant le composé imino-éther (IV) sans l'isoler du mélange de réaction, pour four- nir l'ester 3,5-di-tert-butyl-4-hydroxybenzylique (ive) de l'acide 6-aminopénicillanique et en faisant ensuite réagir lester (IV') avec de la phénylglycine dont le groupe amino a été protégé ou un dérivé réactif de la phénylglycine sous refroidissement ou de préférence à des températures comprises entre 0 C et -25 C dans un solvant inerte tel que le chloroforme, le toluène, le chloroéthane, le trichloréthylène le dichlorométhane, le tétrahydrofuranne, etc.
De plus l'hydrolyse du composé imino-éther (IV) ci-dessus mentionné peut être effectuée par le procédé conventionnel mais il est préférable que l'hydrolyse soit effectuée entre OOC et -250C et avec un pH de 4 - 5.
L'ester 3,5-di-tert-butyl-4-hydroxybenzylique (IV') de l'acide 6-aminopénicillanique peut entre facilement isolé en le transformant en un sel d'addition d'un acide par exemple le benze- nesulfonate ou le p-toluènesulfonate de celui-ci. De même la réaction entre le composé (IV') et la phénylglycine dont le groupe amino a été protégé, est de préférence effectuée en présence d'un agent de condensation tel que le dicyclohexylcarbodiimide, le chlorure de l'acide pivalique, etc.Lorsque la phénylglycine dont le groupe amino a été protégé par un groupe o-nitrophénylthio, u,n groupe 2-éthoxycarboxyl-1-méthylvinylique, etc. est mise en réaction avec le composé (IV'), le composé (V) peut être obtenu en traitant le composé ainsi obtenu de la manière usuelle, par exemple avec l'acide chlorhydrique ou l'acide acétique pour libérer le groupe protecteur du groupe amino.
L'ester 3',5,-ditertbutyl-4tlhydroxybenzylique (V) de l'a-aminobenzylpénicilline ainsi obtenu peut entre isolé et puri -fi par les procédés chimiques usuels tels que l'extraction, la concentration, la reprécipitation, la recristallisation et similaires.
En traitant le nouveau composé (V) avec au moins son équi- valent d'un matériau basique faible, dans un solvant organique tel quelea diméthylformamide, l'acétone, le dioxane, le tétrahydrofuranne, le dichlorométhane, le dichloroéthane, le trichloréthy-lène, le chloroforme, le toluène, etc. sous refroidissement, de préférence sous refroidissement à la glace, dans une condition anhydre, on peut former de l'ampicilline. Comme matériau basique faible utilisé dans ce traitement, on peut convenablement utiliser un sel dtun métal alcalin tel qu'un sel de sodium ou un sel de potassium du thiophénol; des amines primaires telles que la méthylamine, l'éthylamine, la n-propylamine, l'isopropylamine > la n-butylamine, la tert-butylamine, la cyclohexylamine, la 4-méthylcyclohexylamine et la cyclopropylamine, et des amines secondaires telles que la diméthylamine, la diéthylamine, la dibu tylamine, la diisopropylamine, la dicyclohexylamine et la bis(4-méthylcyclohexyl)amine.
Afin d'isoler l'ampicilline du mélange réactionnel, de 1: eau est ajoutée à ce mélange > la phase aqueuse ainsi formée est séparée, le pH de la solution aqueuse est réglé au point isoélectrique (pH 5 - 6) et la solution est concentrée, ce qui assure la précipitation du produit recherché.
On décrira maintenant plusieurs exemples de mise en oeuvre de la présente invention EXEMPLE I: a) Dans 930ml de diméthylformamide, on a mis en suspension 93g d'un sel de potassium de la benzylpénicilline et on a ajouté ensuite à la suspension lOg de 2,6-di-tert-butylphénol et 25g de bicarbonate de potassium.
La suspension a été refroidie entre -10 C et 150C et, tout en brassant la suspension, on y a ajouté progressivement en une durée de 5 heures, lOOg de bromure de 3,5di-tert-butyl-4 hydroxybenzyle.
Les composés de l'invention exercent donc une action sédative sur la motricité. Grâce à cette propriété, ils peuvent être utilisés en thérapeutique pour le traitement des états d'excitation. La dose quotidienne à administrer sera comprise entre environ 5 et 500 mg de substance active.
Action sur le système nerveux central Inhibition de la motricité spontanée On a déterminé l'action exercée par les composés de formule I sur la motricité spontanée de la souris. Dans une cage traversée par un certain nombre de rayons lumineux, cn mesure la motricité totale de la souris par le nombre des interruptions des faisceaux lumineux. Une heure après administration do la substance à étudier, on répète l'essai. A partir de 1 mg/kg, les nouveaux composés inhibent de manière significative la motricité spontanée.
La DE50 est la dose qui diminue de 50% la motricité spontanée.
Les résultats obtenus sont rassemblés dans le tableau II suivant.
T A B L E A U II
DE50 en mg/kg Substance (Mode d'administration) 2-acétonyl-1,3,4,9b-tétra hydro-5-méthyl-2H-indéno 2 [1,2-c]pyridine (voie sous-cutanée) 1,3,4,9b-tétrahydro-5 méthyl-2- (3-oxo-3-phényl .10 propyl)-2H-indéno[1,2-c] (voie sous-cutanée) pyridine 1,3,4,9b-tétrahydro-5 méthyl-2-(3-oxobutyl)-2H- 4,5 indéno[1,2-c]pyridine (voie sous-cutanée) 2-[4-(p-fluorophényl)-4-oxo butyl)-1,3,4,9b-tétrahydro- 3 5-méthyl-2H-indéno[1,2-c] (voie intrapéritonéale) pyridine Essai à la barre tournante On détermine l'aptitude dune souris à se maintenir sur une barre horizontale tournant à une vitesse donnee. Les souris qui réussissent à s'agripper pendant au moins une minute sont retenues pour l'essai. Une heure après injection de le substance, on répète l'essai et on compte les souris ataxiques, c'est-à- dire celles otui n'arrivent plus à se maintenir pendant une minute.
La DE50 est la dose pour laquelle 50% des souris sont ataxiques Les composes de l'invention inhibent l'aptitude des souris à se maintenir sur la barrc tournante Les résultats obtenus son'c rassemblés dans le tableau III suivant.
Substance DE50 en mg/kg Substance (voie sous-cutanée) 2-acétonyl-1,3,4,9b-tétra hydro-5-méthyl-2H-indéno 20 [1,2-c]pyridine
1,3,4,9b-tét.rahydro-5-méthyl- 2-(3-oxo-3-phényl-propyl)-2H- 28 Indéno [1,2-c ipyridine 1,3,4, 9b-tétrahydro-5-méthyl- 2-(3-oxobutyl)-2H-indéno[1,2-c] 15 pyri dine Potentialisation de la narcose barbiturique chez la souris La substance à essayer est administrée par voie intraveineuse soit 10 minutes avant, soit après une dose inactive de pentothal (20 mg/kg i.v.), et l'on observe la durée du sommeil.
On admet une potentialisation si l'animal s'endort (décubitus latéral) pour 2 minutes ou plus. La DE50 est définie par la dose de la substance à essayer qui détermine ce phénomène chez 50% des animaux. Les composés de formule I potentialisent la narcose barbiturique chez la souris. Les résultats obtenus sont rassemblés dans le tableau IV.
DE50 en mg/kg (voie intraveineuse) Substance Substance injectée Substance injectée avant le pentothal après le pentothal 2-acétonyl-1,3,4,9b tétrahydro-5-méthyl-2H- 17 54 indéno[1,2-c]pyridine 1,3,4,9b-tétrahydro-5 méthyl-2-(3-oxo-3-phényl- 30 20 propyl)-2H-indéno[1,2-c] pyridine 1,3,4,9b-tétrahydro-5 méthyl-2-(3-oxobutyl)-2H- 4,3 6,5 indéno[1,2-c]pyridine Les nouveaux composés exercent donc une action sédative sur le système nerveux central. Grâce à cette propreté, ils peuvent être utilisés en thérapeutique comme sédatifs.La dose quotidienne à administrer sera comprise entre 5 et 500 mg de substance active.
Toxicité aiguë La toxicité aiguë des composés de l'invention a été déterminée chez la souris après administration de la substance par voie sous-cutanée ou orale. Pour la 1,3,4,9b-tétrahydro- 5-méthyl-2-(3-oxobutyl)-2H-indéno[1,2-c]pyridine, la DL50 est supérieure à 200 mg/kg (voie sous-cutanée): pour les autres composés, elle est en général supérieure à 300 mg/kg, par voie orale ou sous-cutanée.
Les nouveaux composés ainsi que leurs sels acceptables du point de vue pharmaceutiqu? peuvent être utilisés comnie médicaments, soit seuls, soit mis sous des formes médicamenteuses appropriées pour l'administration par la voie orale, entérale ou parentérale. Pour préparer des formes médicamenteuses appropriées, on travaille la substance active avec des excipients minéraux ou organiques, inertes du point de vue pharmacologique. Comme excipients, on pourra utiliser par exemple: pour des comprimés et des dragees: le lactose, l'amidon, le talc, l'acide stéarique etc.; pou des sirops: des solutions de saccharose, de sucre inverti, de glucose etc.; pour des préparations injectables: l'eau, des alcools, le glycérolS des huiles végétales etc.; pour des suppositoires: des huiles naturelles ou durcies, des cires etc..
Les préparations peuvent en outre contenir des agents de conservation, des stabilisants, des mouillants, des auxiliai- res de dissolution, des édulcorants, des colorants, des aromatisants etc., appropriés.
Une solution refroidie à iO de 0,932 g d' hydroxy-α-{2-oxo-3ss-(N-phénylacétamino)-4ss-[2-(2,2,2- trichloréthyoxy-carbonyloxyméthyl)-2-propylmercapto]-1-azéti dinylj -acétate de tert.-butyle dans 18 ml d'un mélange 1 r de dioxanne et tétrahydrofuranne est additionné de 0,366 ml de pyridine et d'une solution de 0,328 ml de chlorure de thionyle dans 10 ml d'un mélange 1 : 1 de dioxanne et tétrahydrofuranne.
Le mélange réactionnel est agité pendant une heure à 0 et pendant une autre heure à la température ambiante ; le précipité qui se forme est séparé par filtration et le filtrat est évaporé dans un évaporateur rotatif. Le résidu huileux, qui contient 1'α-chlor-α-{2-oxo-3ss-(N-phénylacétamino)-4ss-[2-(2,2,2- trichloréthyoxycarbonyloxyméthyl)-2-propylmercapto]-1-azétidinyl} -acétate de tert.-butyle,est évaporé à sec encore deux fois avec chaque fois 50 ml de benzène, repris dana 20 ml de dioxanne et chauffé pendant 17 heures avec 0,769 g de triphénylphosphine et 0,122 ml de pyridine à 55 . Après refroidissement on filtre le mélange réactionnel sur terre de diatomées et évapore le filtrat à sec. On obtient un résidu huileux brun foncé qui est chromatographie sur 25 fois son poids de gel de silice.On élue avec l'acétate d'éthyle 1'α - 5 2-oxo-3ss -(N-phénylacétylasino)- 4ss-[2-(2,2,2-trichloréthyoxy-carbonyloxyméthyl)-2-propylmercap to]-1-azétidinyl}-α-triphénylphosphoranyliden-acétate de tert.-butyle, produit unitaire d'après la chromatographe en couche mince (gel de silice) : Rf = 0,16 (benzène/acétate éthyle 1 : 1) ; spectre d'absorption infra-rouge (dans le chlorure de méthylène) : bandes caractéristiques à 3,04y , 3,45 5,68 , 5,969 , 6,14 et 6,63jt ; spectre d'absorption ultraviolette (dans l'éthanol) : absorption finale à 220 m B:Une solution de 2,625 g de pénicilline V dans 30 ml de tétrahydrofuranne est additionnée sous agitation et refroidissement à -10 de 5,31 ml d'une solution 10 ml de 2 ml de triéthylanine dans le tétrahydrofuranne. On ajoute alors lentement 3,6 ml d'une solution 10-ml de 2 ml de chloroformiate d'éthyle dans le tétrahydrofuranne et quand l'addition est terminée on agite pendant encore 90 minutes entre -10 et-5 Le mélange réactionnel est alors traité avec une solution de 0,51 g d'azidure de sodium dans 5,1 ml d'eau et dilué avec 150 ml d'eau glacée. On extrait trois fois au chlorure de méthylène ; les extraits organiques sont lavés à l'eau, séchés et évaporés à 250 sous pression réduite.On obtient ainsi l'azidure de pénicilline V sous forme d'une huile légèrement jaunâ- tre ; spectre d'absorption infra-rouge (dans le chlorure d Méthylène) : bandes caractéristiques à 3,04 , 4,70 , 5,61 , 5,82 , (épaulement), 5,93 , 6,62 , 6,71 , 8,50 et 9,40 Une solution de 2,468 g d'azidure de pénicilline V dans 30 ml de benzène est chauffée pendant 30 minutes à 700.
Par évaporation de la solution sous pression réduite on peut obtenir le 3-isocysanato-2,2-diméthyl-6-(N-phényloxyacétyl-amino penam pur ; spectre d'absorption infra-rouge (dans le chlorure de méthylène) : bandes caractéristiques à 3,03 > i , 4,46 , 5,59 , 5,93 , 6,62 , 6,62 , 6,70 , 7,53 , 8,28 , 8,53 , 9,024 et 9,40 .
La solution ci-dessus de 3-isocyanato-2,2-diméthyl-6- (N-phényloxyacétyl-amino)-penam est additionnée de 3,4 ml d'une solution 10 ml de 2 ml de 2,2,2-trichloroéthanol dans le benzène et le mélange réactionnel est maintenu à 70 pendant 95 minutes.
Le solvant est chassé sous pression réduite et le résidu est purifié sur une colonne de gel de silice lavée à l'acide. On lave avec 300 ml d'un mélange 19 : 1 de benzène et acétate d'éthyle et élue le 2,2-diméthyl-6-(N-phényloxyacétyl-amino)-3 (N-2,2,2-*tricloréthoxycarbonyl-amino)-penam avec 960 ml d'un mélange 9 : 1 de benzène et acétate d'éthyle.Le produit fond à 169 - 171 (décomposition) , [α]D20 = + 83 (c = 1,015 dans le chloroforme) ; chromatogramme en couche mince (gel de silice): Rf = 0,5 dans un mélange 1 : 1 de benzène et acétate d'éthyle spectre d'absorption infra-rouge (dans le chlorure de méthy- lène) : bandes caractéristiques à 3,05 , 5,62 , , 5,77ji , 5,93 , 6,72 , 6,62 , 6,70 , 8,30 , 9,23, et Une solution de 3 g de 2,2-diméthyl-6-(N-phényloxyacé- tyl-amino)-3-(N-2,2,2-trichloréthoxycarbonyl-amino)-penam dans 65 ml d'acide acétique aqueux à 90 % et 30 ml de diméhylfor- mamide est additionnée en 20 minutes, en refroidissant à la glace, de 32,6 g de poudre de zinc et agitée pendant 20 minutes.L'excès de zinc est séparé par filtration et le résidu sur filtre est lavé au benzène ; le filtrat est dilué avec 450 ml de benzène, lavé avec une solution aqueuse saturée de chlorure de sodium et à l'eau, séché et évaporé sous pression - réduite. Le résidu est purifié sur une colonne de 45 g de gel de silice lavé à l'acide. On élue avec 100 ml de benzène et 400 ml d'un mélange 9 : t de benzène et acétate d'éthyle et obtient des produits apolaires.Avec 100 nil d'un mélange 4 : 1 de benzène et acétate d'éthyle on lave le produit de départ et avec 500 autres ml du mélange 4 : 1 de benzène et acétate d'éthyle et 200 ml d'un mélange 2 : 1 de benzène et acétate on obtient le 3-hydroxy-2,2-diméthyl-6-(N-phényloxyacétyl-ami no)-penam qui cristallise spontanément sous forme d'hydrate et fond dans l'intervalle de 62 - 850 après trituration avec l'éther saturé d'eau.
Si on empbie du 2,2-diméthyl-6-(N-phényloxyacétylamino)-3-(N-2,2,2-trichloréthoxycarbonyl-amino)-penam chromatographie, dans l'acide acétique dilué sans addition de dimé- thylformamide, on obtient le produit pur qui fond à 62 = 700 chromatogramme en couche mince (gel de silice) : Rf = 0,35 dans le mélange 1 : 1 de benzène et acétate d'éthyle- ; spectre d'absorption infra-rouge (dans le chlorure de méthylène) bandes caactéristiques à 2,93 , 3,09 , 5,65 , 5,96 , 6,29 , 6,65 , 6,75 , 8,57 , 9,27 , 10,00 , et 11,95 Une solution de 0,18 g d'hydrate de 3-hydroxy-2,2diméthyl-6-(N-phénoxyacétyl-amino)-penam dans 5 ml de tétrahydrofuranne est additionnée à 0 de 0,3 ml d'une solution de borohydrure de sodium dans 5 ml d'eau.Le mélange est agité pendant 20 minutes à 00, ajusté à pli 4 avec 12 gouttes d'acide acétique et dilué avec 50 ml de chlorure de méthylène. La solution organique est lavée deux fois avec une solution saturée de chlorure de sodium, les solutions aqueuses de lavage sont lavées avec du chlorure de méthylène et les solutions organiques réunies sont séchées et évaporées sous p--ession réduite.Le résidu cristallin est recristallisé dans un mélange de chlorure de méthylène et éther, ce qui donne la 4)b-(2-hydro- xyméthyl-2-propyl-nercapto )-3 P t-(N-phényloxyacétyl-asino)- azétidin-2-one, qui, après cristallisations répétées est obtenue en aiguilles fondant à 156 - 1570 ; [α]D20 = + 13O + 10 (c = 0,708 dans le chloroforme) ; spectre d'absorption infrarouge (dans le chlorure de méthylène) : bandes caractéristiques à 3,03 , 4,46 , 5,59 , 5,93 , 6,62 , 6,62 , 6,70 , 7,53 , 8,2 , 8,53 , 9,24 et 9,40 .
Une solution de 0,4 g de 4ss-(2-hydrixyméthyl-2-propyl- mercapto)-3ss-(N-phényloxyacétyl-amino)-azétidin-2-one et 0,52 g de chlorure de 2,2,2-trichloroéthoxy-carbonyle dans 6 ml de tétrahydrofuranne est additionnée lentement et à 0 sous agitation de 0,6 ml de pyridine dans 4 ml de tdtrahydrofuranne. Une fois l'addition terinée, on agite pendant trois heures et dilue avec 100 ml de chlorure de méthylène ; la solution organique est lavée, séchée et évaporée. Le résidu est chromatographié sur 40 g de gel de silice lavé à l'acide.Avec le benzène ainsi qu'avec des mélanges de benzène et d'acétate d'éthyle, on extrait des sous-produits, principalement le carbonate de 2,2,2-tri chloroéthyle. La 3 ss-(N-phényloxyacétyl-amino)-4 P - g 2-(2,2,2- trichloroéthoxy-carbonyloxyméthyl)-2-rpopylmercapto]-azéditin2-one est éluée avec un mélange 1 : 1 de benzène et acétate d'éthyle et recristallisée dans un mélange d'éther et pentane, P.P. 93 - 950 ; [α]D20 = -6 + 1 (c = 1,17 dans le chloroforme) ; spectre d'absorption infra-rouge (dans le chlorure de méthylène) : bandes caractéristiques à 3,O3p , 5,63 , 5,68)) 5,92 , 6,26 , 6,69 , 6,70 , 7,25 et 8,08 Une solution de 0,4 g d'hydrate de glyoxylate de tert.- butyle dans 5 mi de toluène est déshydratée azéotropiquement par distillation de 2 ml de toluène. On refroidit à O ajoute 0,121 g de 3ss-(N-phényloxyacétyl-amino)-4ss-[@2,2,2 trichloréthoxy-carbonyloxyméthyl)-2-propylmercapto]-azétidin2-one dans 2 ml de toluène anhydre.Le mélange est chauffé à 900 pendant 90 minutes ; on distille les constituants volatils sous une pression de 0,01 sa Hg. Le résidu huileux est repris dans un mélange de benzène et pentane et lavé à l'eau. La phase organique est séchée et le solvant est chassé sous pression réduite.Le résidu est chromatographié sur 3,5 g de gel de silice lavé à l'acide et on obtient le mélange amorphe des isomères de l'α-hydroxy-α-{2-oxo-3ss-(N-phényloxyacétyl- amino)-4ss-[2-(2,2,2-trichloréthoxy-carbonyloxyméthyl)-2-pro pylmercapto]-1-azétidinil} -acétate de tert.-butyle par élution avec un mélange 4 : 1 de benzène et acétate d'éthyle ; spectre d'absorption infra-rouge (dans le chlorure de méthylène) : bandes caractéristiques à à 3,03 , 5,64 , 5,80 , 5,94 , 6,27 , 7,32 , 8,17 et 8,69 .
Une solution de 0,254 g d'α-hydroxy-α-{2-oxo-3ss-(N- phényloxyacétyl-amino)-4ss-[2-(2,2,2-trichloréthoxy-carbonyloxyméthyl)-2propylmercapto]-1-azétidinyl} -acétate de tert.butyle dans 5 ml de dioxanne (séché par l'hydroxyde d'aluminium, activité I) est refroidie à 0 et additionnée de 0,320 g de base d'Hünig polymère (diisopropylaminométhylène polystyrol préparée par chauffage d'un mélange de 100 g de chlorométhylpolystyrol [J.Am.Chem.Soc. 85, 2149 (1963)], 500 ml de benzène, 200 oxyde méthanol et 100 ml de diisopropylamine à 1500 en agitant, filtration, lavage avec 1 000 ml de méthanol, 1 000 ml d'un mélange 3 : 1 de dioxanne et triéthylamine, 1 000 ml de méthanol, et séchage pendant 16 heures à 1000/10 nim Hg ; le produit neutralise 1,55 milliéquivalents d'acide chlorhydrique par gramme dans un mélange 2 : 1 de dioxanne et eau) et avec 0,6 ml d'une solution de chlorure de thionyle dans le dioxanne sec (1 ml de chlorure de thionyle pour 10 ml de solution). Après deux heures on filtre le mélange, lave le résidu du filtre avec du dioxanne sec et évapore le filtrat à sec sous vide élevé. Le résidu qui contient l' α-Chlor-α- t2-oxo-3P -(N-phényloxyacétyl- amino-4ss-[2.(2,2,2-trichloréhoxy-carbonyloxyméthyl)-2-propyl mercapto]-1-azétidinyl} -acétate de tert.-butyle est dissous dans 5 ml de dioxanne, additionné de 0,2 g de triphénylphosphine et 0,2 g de base d'Hünig polynère et agité à 55 pendant 16 heures. On filtre, lave le résidu du filtre au benzène et évapore le filtrat sous pression réduite. Le résidu est chromatographié sur 15 g de gel de silice lavé à l'acide.Les fractions lavées avec un mélange 4 : 1 et les premières avec un mélange 2 : 1 de benzène et acétate d'éthyle contiennent du produit de départ n'ayant pas réagi tandis que les autres fractions éluées avec le mélange 2 : 1 de benzène t acétate d'éthyle et avec un mélange 1 : 1 des mêmes solvants contiennent l'α-{2-oxo-3ss- (N-phényloxyacétyl-amino)-4p f2-(2, 2,2-trichloréthoxy-carbonyl- oxy-méthyl)-2-propylmecapto]-1-azétidinyl} -α-triphénylphos- phoranyliden-acétate de tert.-butyle amorphe, spectre d'absorption infra-rouge (dans le chlorure de méthylène) : bandes caractéristiques à 3,03 , 5,699 , 5,94y , 6,2 et 8,9 et que les autres fractions contiennent un peu d'oxyde de triphénylphosphine.
C. Une suspension de 0,5 g d'acide 6-amino-penicillanique dans 4 ml de chloroforme (fraîchement distillé sur pentoxyde de phosphore) est traitée avec 1 ml d'hexaméthyldisilazane de formule [(CH3)3Si]2 NH et 1 ml de chloroforme séché sur pentoxyde de phosphore ; le mélange réactionnel est porté au reflux pendant 2 1/2 heures à l'abri de l'humidité, refroidi à 0 et traité avec 0,385 g de fluoroformiate de tert.-butyle distillé après addition de 1,7 ml d'une solution de 2 ml de triéthylamine dans le chloroforme. Le mélange est maintenu pendant 30 minutes à 0 puis pendant 90 minutes à la température ambiante et dilué avec du chlorure de méthylène froid.La solution organique est lavée avec une solution aqueuse froide à 10 ss d'acide .citrique et avec de l'eau, les solutions aqueuses de lavage étant encore lavées au chlorure de méthylène froid. Les extraits organiques réunis sont extraits deux fois avec une solution aqueuse diluée de bicarbonate de sodium et immédiatement après la séparation acidifiés à 0 à l'acide citrique. La phase organique est séparée, séchée et évaporée ; on obtient ainsi l'acide 6-(N-tert.butyloxycarbonyl-amino)-penicillanique pur amorphe ; spectre d'absorption infra-rouge (dans le chlorure de méthylène) : bandes caractéristiques à 3,04 , 5,63 , 5,82 , 6,67 , 7,32 et 8,60S qui est employé sans purification.
- Une solution de 0,08 g de 3-hydroxy-2,2-diméthyl-6-(N- tert.-butyloxycarbonyl-amino)-penam dans 5 ml de tétrahydrofuranne est additionnée à 0 de 0,13 ml d'une solution de 0,38 g de borohydrure de sodium dans 5 ml d'eau. Le mélange réactionnel est agité pendant 20 minutes à la température ambiante, acidifié avec 5 gouttes d'acide acétique et dilué au chlorure de eéthy- lène. La phase organique est lavée avec une solution aqueuse saturée de chlorure de sodium, séchée et évaporée soc.s pres- sion réduite.Le résidu est chromatographié sur 0,5 @ @@ & ---l de silice lavé à l'acide, avec des portions de 5 ml de et c-t de mélanges 9 : 1 et 4 : 1 de benzène et d'acétate d'éthyle on extrait des sous-produits apolaires et avec 10 ml d'un mélange 1 : 1 de benzène et d'acétate d'éthyle on élue le 4) -(2- hydroxyméthyl-2-propylmercapto)-3ss-(N-tert.-butyloxycarbonyl amino)-azétidin-2-one amorphe ; spectre d'absorption infrarouge (dans le chlorure de méthylène) : bandes caractéristiques à 3,03 , S,63y , 5,83 , 6,639 , 7,31Ji , 8,60 et g,43 .