INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
1ère 4,5 0,14 2,8 9ss93 45 2e 2,6 0,12 1,7 9,85- 39 En utilisant des solutions semblables, l'extraction a été exécutée dans un mélangeur-décanteur à tuyau contenant 24 éléments dans un tube d'un diamètre de 1,25 cm. Les 24 éléments occupaient une longueur de 70 cm. La chambre de mélange statique est suivie par un tube vide de 30 cm de long agissant en tant que décanteur. Le mélangeur-décanteur était tel qu'illustré à la figure 1. Les deux phases s'écoulaient à travers leeélangeur avec une vitesse linéaire d'approximativement 30 cm/sec., en donnant ainsi un temps de séjour de 2 secondes. Le produit de raffinage provenant du premier contact a été envoyé à nouveau dans le mélangeur st#atique avec du solvant frais. Pendant ces deux contacts, il a été possible d'observer que les deux phases étaient complètement séparées approximativement à l'extrémité du tube de décanteur de 30 cm de long. Les résultats obtenus sont présentés dans le tableau 2.
Les sels d'addition avec les acides peuvent titre par exemple les sels formés avec les acides chlorhydrique, bromhydrique, nitrique, sulfurique, phosphorique, acétique, formique, benzolque, maléique, fumarique, succinique, tartrique, citrique, oxalique, benzylique, glyoxylique, aspartique, aikanesulfonique et arylsulfonique.
L'invention a également pour objet un procédé de préparation des dérivés de formule (i) ainsi que de leurs sels caractérisé en ce que lton fait réagir un dérivé magnésien de formule : dans laquelle X et X ont la signification déjà indiquée, avec un dérivé de formule : dans laquelle Hal représente un atome d'halogène, R1 et R2 ont la signification déjà indiquée, pour obtenir un dérivé de formule :: dans laquelle X, X', R1 et R2 ont la signification déjà indiquée, soumet le dérivé de formule (fiv) à l'action d'un agent d'hydrolyse acide pour obtenir un dérive de formule dans laquelle X, X', R1 et R2 ont la signification déjà indiquée, fait réagir le dérivé de formule (V) avec un halogénure de méthylmagnésium de formule Hal-Mg-CH3, dans laquelle Hal représente un atome d'halogene, pour obtenir un dérivé de formule dans laquelle X, X', R1 et R2 ont la signification déjà indiquée, soumet le dérivé de formule (VI) obtenu à ltaction d'un agent déshydratant pour obtenir un dérivé de formule (I),dans laquelle A, représente un radical méthylène et I, Xt, R1 et R2 ont la signification déjà indiquée et que, soit on isole et Si désiré salifie ledit dérivé de formule (I) ainsi obtenu, soit on soumet ce demier à l'action de l'hydrogène en présence d'un catalyseur pour obtenir un dérivé de formule (I),dans laquelle A, représente un radical méthyl et X, X', R1 et R2 ont la signification aéja indiquée que l'on peut si désiré salifier par addition d'un acide minéral ou organique.
Ce procédé est illustré par le schéma no 1 annexé. Dans des conditions préférentielles de mise en oeuvre de l'invention, le procédé de préparation des dérivés de formule (I) ci-dessus décrit est en outre caractérisé en ce que a) l'agent d'hydrolyse acide du dérivé de formule (nit) est constitué de préférence par une solution méthanolique d'acide chlorhydrique, b) la préparation du dérivé de formule (VI) est effectuée par réaction du produit de formule (V) avec un halogénure de méthyl magnésium tel que le chlorure, le bromure ou 1 'iodure de méthyl magnésium, c) la deshydratation du dérivé de formule (VI) est effectuée au mosan d'un acide minéral fort tel que l'acide chlorhydrique, d) le catalyseur utilisé au cours de l'hydrogénation est un cata lyseur à base de palladium ou de platine.
L'invention a aussi pour objet un procédé de préparation des dérivés répondant à la formule générale (I), dans laquelle R2 représente un atome d'hydrogène, I, X', À et R1 ont la signification déjà indiquée, qui consiste à préparer selon le procédé indiqué précédemment, un dérivé de formule (I), dans laquelle R2 représente un radical méthyle et R1 représente un radical alcoyle, X, X' et À ayant la signification déjà indiquée, ledit procédé étant caractérisé en ce que l'on soumet ensuite le dérivé de formule (I) ainsi préparé à l'actiuh d'un chioroformiate d'alcoyle de formule Cl-COO-Z dans laquelle Z, représente un alcoyle, pour obtenir un dérivé de formule dans laquelle X, , À, R1 et Z ont la signification déjà indiquée et que l'on saponifie le dérivé de formule (VII) pour obtenir un dérivé de formule (I),dans laquelle R2 représente un atome d'hydrogène, X, I', À et R1 ont la signification déjà indiquée.
Les produits de formule (I) présentent un caractère basique.
On peut avantageusement préparer les sels d'addition des dérivés de formule (I), en faisant réagir en proportions sensiblement stoechiométriques.un acide minéral ou organique avec ledit dérivé de formule (I). Les sels peuvent être préparés sans isoler les bases correspondantes.
Les produits, objet de la présente invention, possèdent de très intéressantes propriétés pharmacologiques, illustrées plus loin dans la partie expérimentale ; ils sont doués notamment de propriétés antidépressives et neurosédatives.
En raison de ces propriétés, ces produits peuvent trouver leur emploi en thérapeutique et la présente demande a également pour objet l'application à titre de médicaments et notamment de médicaments antidépresseurs ouneurosédatifs, des dérivés du t5R7 dibenzo Candit cycloheptène de formule I ainsi que de leurs sels d'addition avec les acides pharmaeeutiquement acceptables.
Ces médicaments trouvent par exemple leur emploi dans le traitement des états dépressifs, des mélancolies, des psychoses maniacodépressives de l'anxiété.
La dose usuelle est variable selon l'affection en cause, le produit utilisé, le sujet traité et la voie d'administration. Elle peut être par exemple de 25 à 250 mg par jour par voie orale chez l1homme Ltinvention a enfin pour objet les compositions pharmaceutiques qui renferment au moins un dérivé précité ou un de ses sels d'addition avec les acides pharmaceutiquement-acceptables à titre de principe actif.
A titre de médicaments, les dérivés répondant à la formule I et leurs sels d'addition avec les acides pharmaceutiquement acceptables, peuvent etre incorporés dans des compositions pharma- ceutiques destinées à la voie digestive ou parentérale ; ces compositions pharmaceutiques peuvent etre, par exemple, solides ou liquides et se présenter sous les formes pharmaceutiques couramment utilisées en médecine humaine, comme par exemple, les comprimés, simples ou dragéifiés, les gélules, les granulés, les suppositoires, les préparations injectables ; elles sont préparées sel n les méthodes usuelles. le ou les principes actifs peuvenXt/ttre incorporés à des excipients habituellement employés dans ces compositions pharmaceutiques, tels que le talc, la gomme arabique, le lactose, l'amidon, le stéarate de magnésium, le beurre de cacao, les véhicules aqueux ou non, les corps gras d'origine animale ou végétale, les dérivés paraffiniques, les glycols, les divers agents mouillants, dispersants ou émulsifiants, les conservateurs.
L'invention s'étend en outre aux produits industriels nouveaux utiles notamment pour la préparation des dérivés répondant à la formule I, à savoir les produits de formule et notamment la 10-(ss-diméthylamino éthyl) [5H] dibenzo [a,d] cycloheptène 5-one; les produits de formule et notamment le 5-méthyl 5-hydroxy 10-(diméthylamino éthyl) N dibenzo [a,d] cycloheptène; les produits de formule et notamment le 5-méthylène 10-(ss-N-méthyl N-éthoxycarbonylamino- éthyl) [5H] dibenzo [a,d] cycloheptène et le 5-méthyl 10-(ss-N-méthyl N-éthoxycarbonylamino éthyl) [5H] dibenzo [a,d] cycloheptène.
Les produits de formule II peuvent être préparés par ie procédé figurant dans le brevet français 1428086.
Il va être donné maintenant, à titre non limitatif, des exemples de mise en oeuvre de l'invention.
Exemple 1 : 5-méthylène 10-(ss-diméthylamino éthyl) /5t7 dibenzo [a,d] cycloheptène : Stade A : 10-(ss-diméthylamino éthyl) [5H] dibenzo heptène 5-one 1) Condensation : A une solution de magnésien du 10-bromo 5,5-éthylènedioxy [5H] dibenzo [a,d] cycloheptène (obtenu selon le procédé décrit dans le brevet français n 1428086) préparée à partir de 100 g de 10-bromo 5,5-éthylènedioxy [5H]dibbenzo [a,d] cycloheptène et de 8,5 g de magnésium et titrant 0,2 mole/litre, on ajoute 73 cm3 de 1-(ss- diméthylamino) 2-chloroéthane et 1,09 g de chlorure cuivreux ; on agite pendant dix-huit heures à température ambiante, et ajoute à nouveau 73 cm3 de 1-(ss-diméthylamino) 2-chloroéthane et maintient 11 agitation pendant encore virgt-quatre heures.
On verse le mélange réactionnel dans une solution aqueuse saturée de chlorure d'ammonium, on décante la phase organique, extrait la phase aqueuse à l'éther, sèche les phases organiques sur sulfate de magnésium et évapore à sec ; on obtient 103 g de 1o-(p- diméthylaminoéthyl) 5,5-éthylènedioxy [5H] dibenzo [a,d] cyclo heptène.
Il va de soi que de nombreuses modifications peuvent être apportées à l'appareil décrit sans sortir du cadre de l'invention.
La présente invention concerne la préparation rapide d'enzymes purifiées par extraction par affinité.
Les enzymes sont actuellement extraites et purifiées en deux étapes essentielles. La première étape consiste à effectuer une extraction le la matière de départ, telle broyat de tissu, lyssat microbien, millieu de fermentation, par précipitation ou extraction fractionnées au moyen de sels neutres ou de solvants organiques; on obtient un extrait brut, qui correspond à un mélange des enzymes avec des protéines de propruiétés physicochimiques @den tiques. La deuxième étape consiste à séparer les enzymes de leurs contaminants protéiques, par des opérations physicochimiques comme les cristallisations fractionnées, les ultrafiltrations sélectives sur memoranes ou La chromatogra- p@ie sur des supports appropriés tels que échangeurs d'ions, celluloses modifiées ou tamis moléculaires adaptés.Les différences de comportement de ces macromolécules permettent d'isoler les enzymes pures.
On connaît de nombreux procédés couramment appliqués depuis plusieurs années. Généralement, ces procédés sont très longs et provoquent des pertes importantes de rendement, dues à de nombreuses difficultés techniques.
Tout d'abord,les précipitations par les sels fourmissent des extraits bruts très chargés en sels minéraux, ce qui nécessite l'élimination de ces sels par des opérations longues, soit de dialyse au travers de membranes semi-perméa- bles soit de reprécipitations successives par ces alcools ou des solvants.
D'autre part, l'absence de sélectivités étroite exige des précipitations en ge r.e n- des concentrations croissantes en sels, tone e nombreux transferts et reprIses augmentant la durée des opérations et provoquant ses pertes inévita- bles de produit. De plus, les opérations de précipitation doivent s'effectuer en solution aqueuse à des températures allant de ++ C à +10 C. Ce séjour prolongé des enzymes en solution dans ces conditions de température entraîne des risques certains d'autolyse et d'inactivation d'un fraction de cse molécules actives. En outre, la précipitation par les solvant-organiques n'est pas applicable à toutes les enzymes, certaines étant dénaturées en phase organique.La cristallisation des enzymes demande une durée prolongée, et plusieurs opérations successives sont toujours nécessaires pour parvenir à un produit purifié; et l'on sait les pertes de rendement importantes qui proviennent ce ces opérations. Par ailleurs, la chromatographie sur des supports ionisés permet que très exceptionnellement, de parvenir à @coler une fraction protéique pure à partir d'un mélange hétérogène de protéines sont les caractéristiques physicochimiques sont proches. ############ chromatographie de gel-filtration ne permet pas, en raison te la durée des opération et des pertes te char- ges importantes dans la mise en oeuvre de ces procédés te parvenir a une exploitation industrielle satisfaisante. Enfin, la filtration gélective sur membranes d'ultrafiltration est d'un emploi très limité, étant donné les colmatages qui apparaissent à partir de solutions colloidales.
Dans I'ensemble, ces voies technologiques basées sur des différences de caractéristiques physicochimiques ne sont pas suffisamment sélectives pour obtenir une purification rapide et efficace avec des rendements- convenables. Ces difficultés sont en grande partie responsables du coût très élevé des enzymes pures.
I1 a été trouvé suivant la présente invention un procédé mettant en oeuvre la sélectivité enzymes-substrats et conduisant à l'obtention d'enzymes purifiées d'une manière simplifiée, rapide et efficace, c'est-à-dire avec des rendements élevés, tout en évitant les autolyses et les dégradations enzymatiques au cours de la lyse cellulaire.
le nouveau procédé perfectionné est basé sur l'extraction par affinité, suivie éventuellement d'une ultime purification par la chromatographie dlaffinité. Selon une variante de I'invention, les opérations initiales d'extraction, sont conduites en phase hydroorganique à basse température.
Selon l'objet de l'invention, on isole sélectivementune enzyme à partir d'un mélange protéique hétérogène, en utilisant l'extraction par affinité.
On sait que les enzymes forment de manière très spécifique des complexes avec leurs substrats ou des inhibiteurs compétitifs, analogues de leurs substrats.
I1 a été trouvé selon l'invention des molécules constituées d'un support, soluble en milieu hydro organique, associé avec plusieurs restes d'inhibiteur sélectif d'une enzyme déterminée. Le polyinhibiteur obtenu, permet ainsi d'effectuer spécifiquement un complexe avec plusieurs molécules d'enzymes. Le complexe formé, désigné par Poly I - (E)n, peut être sélectivement isolé, soit par précipitations des autres protéines, le complexe restant en solution par suite des propriétés particulières de solubilité du support, soit par précipitation sélective du complexe, Poly I - (E)n, en raison de son poids moléculaire élevé par rapport aux autres protéines présentes.
Le complexe isolé est ensuite dissocié par modification du pH ou -de la force ionique. L'enzyme est isolée par une dernière précipitation totale à l'aide d'un solvant pur et le polyinhibiteur est recyclé.
On peut également appliquer un traitement "en cascade" à un mélange de plusieurs enzymes différentes, à l'aide de plusieurs polyinhibfteurs sélectifs différents afin d'isoler successivement les enzymes présentes dans le mélange initial.
Les nolyinhibiteurs peuvent etre constitués de molécules supports à. chaîne aliphatique possédant au moins deux sites ou groupes fonction nels aux extrémités sur lesquels sont branchés des inhibiteurs à l'aide de'li- aisonstelles celles couramment utilisées pour la chromatographie d'affinité.
On peut citer quelques supports et inhibiteurs appropriés.
Les impulsions 213 positionnent aussi la bascule 111 en 215, tandis que le signal remise en position initiale arrive en 216.
En mme temps, une représentation numérique de la durée de chaque impulsion de l'univibrateur est engendrée dans le compteur 121 et mémorisée ultérieurement dans les organes de blocage 132. Pendant l'impulsion de sortie de l'univibrateur qui est transmise par 212 au discriminateur de phase 12, le comptage du compteur 121 est déclenché par le commutateur 119 et le conducteur 118. La durée de l'impulsion de l'univibrateur est ainsi mesurée en fonction des intervalles des impulsions d'horloge et le nombre binaire représentant la durée des impul sions est transmis par les conducteurs 125 de sortie du compteur qui sont reliés aux organes de blocage 132.A l'instant du front arrière de l'impulsion de l'univibrateur, le comptage atteint est mémorisé dans les organes de blocage, les signaux de commande de mémorisation 219 étant transmis aux organes de blocage par le conducteur 117. Par eonséquent, à l'apparition de chaque impulsion tachymétrique de référence retardée, les signaux de sortie des organes 132 représentent un nombre binaire qui indique exactement le retard introduit par l'univibrateur 113.
La fréquence d' horloge peut entre par exemple de 7 850 kHz. Le compteur 121 est effacé par une impulsion de référence tachymétrique retardée dans l'élément 109 d'une quantité appropriée, si bien que l'impulsion d'effacement se produit juste avant l' impulsion de révérende tachymétrique suivante.
Dans le mode "enregistrement pour montage", on désire maintenir un retard constant. Lorsque l'appareil passe du mode !?reproduction pour montage" à celui t! enregistrement pour les commtateurs 119 et 131 reviennent à leur position d'inhibition 119a et 131 a. Chaque impulsion de référence tachymétrique positionne le basculeur 115 qui déclenche le compteur 121 par le conducteur 118 et le oomrntitateur 119.Le compteur 121 est commandé par les signaux d'horloge 201 et effacé par son entrée 218 et son signal de sortie parallèle est comparé à l'information de retard mémorisée dans les organes de blocage 132, Le signal de sortie du compteur parvient au comparateur 127 par le conducteur 125 et le signal de sortie des organes 132 parvient au comparatour par les portes 139. Quand le comptage du compteur 121 est égal à celui mémorisé dans les organes 132, ce comparateur émet l'impulsion de sortie de référence tachymétrique convenablement retardée transmise par le conducteur 129 et qui est app'c--Ce au discriminateur de phase 12 par le commutateur 131.L'impulsion de sortie appliquée au conducteur 129 ramène le basculeur 111 en position de départ. Pendant le mode d'inhibition, le passage aboutissant aux organes 132 est ouvert par le commutateur 130. Par conséquent, le retard du dispositif à à tard n'uf:rique est déterminé par le contenu des organes 132 recevant le signal de ménorisation en 219 et par l'univibrateur 113 commandé par une tension. Etant donné que le contenu des organes 132 reste inchangé pendant une séquence d' enregistrement pour montage de longueur quelconque, le retard gelé des impulsions de référence tachymétriques est maintenu avec une excellente stabilité.
La figure 3 représente une autre forme de réalisation de l'invention qui comprend la même boucle de base d'asservissement de vitesse verrouillée en phase pour régler avec précision la vitesse et la phase de l'analyseur ERNt 24. Au lieu d'intercaler sur le trajet des impulsions de référence tachy- métriques un dispositif pour retarder numériquement les impul sions, comme ans la réalisation de la figure 1, la phase des impulsions de référence tachymétriques est modifiée par un dis positif à retard commandé par une tension qui est la tension de commande du retard 222 ,laquelle peut tre gelée dans un en semble 30 de conversion analogique-numérique et numérique-ana logique.
Les signaux tension d'errealr, signal: d'horloge et inhibition lignes 221 sont appliqués à 1' ensemble 30 qui est représenté en détail sur la figure 4. La tension de sortie ana- logique de l'ensemble 30 est appliquée par un commutateur 26 à l'ensenibla 28 pendant les modes de fonctionnement "reproduction" et "montage" de l'appareil ERV. Pendant les modes de fonctionnement "arrêt", "navette" et "enregistrement normal", une tens on nulle est appliquée à l' ensem'Dle 28 par le commutateur 26 relié à la masse, si bien que la phase de l'impulsion de référence tachymétrique n'est pas modifiée avec ces modes.
L'ensemble 28 à retard commande par une tension peut prendre diverses formes, par exemple celle d'un univibrateur commandé par une tension. En variante, les impulsions de référence tachymétriques peuvent déclencher une tension en dents de scie qui est comparée à la tension de commande du retard dans un comparateur qui applique une impulsion de sortie correctement retardée à un discriminateur de phase 12.
En référence aux détails de la figura 4, la tension 214 erreur lignes est appliqué à l'entrée négative d'un comparateur 62 par une résistance d'entrée 60. Comme on ltexplique ciaprès, l'entrée positive du comparateur 62 reçoit le signal de sortie analogique de l'ensemble des convertisseurs analogIque- numérique el; numérique-analogique. Le signal de sortie du comparateur 62 est appliqué dIrectement à l'entrée J d'un basculeur JK 64 et, par un inverseur 66, a L'entrée K du basculeur.La sortie Q du basculeur 64 est reliée à une entrée d'un circuit nntersection-négation 74 et sa sortie 4 est reliée à une entrée d'un circuit intersection-négation 72.
Un signal d'horloge , par exemple à 42 kHz, est appliqué à une entrée d'un circuit negation-intersection 68. La fréquence de ce signal d'horloge n'est pas imposée et peut varier très largement. L'autre entrée du circuit 68 est une entrée inhibition si bien qu'il n'y a aucun signal de sortie du circuit 68 dans le mode iibition et le comptage dans l'ensemble 76 est maintenu. Les signaux de sortIe du circuit 68 sont appliqués à l'entrée impulsion d'horloge Cp du basculeur 64 et le signal de sortie du circuit 68 est appliqué à un inverseur 14 si bien que l'autre phase du signal d'horloge est appliqué aux autres entrées des circuits 72 et 74.
En fonctionnement, le signal de sortie du circuit 72 augmente le comptage du compteur à chaque impulsion d'horloge Si le signal analogique en retour (à l'entrée positive du comparateur) provenant de la sortie de l'ensemble 30 a une ar.lpli- tude supérieure à la tension d'erreur (à l'entrée négative du comparateur). Par conséquent, le compteur 76 dans les deux sens compte en croissant les impulsions d'horloge consécutives sans que la valeur de la tension en retour dépasse le niveau à l'entrée; le compteur 76 compte en décroissant quand la tension en retour est inférieure à la tension à l'entrée.
En conséquence, la valeur numérique dans le compteur 76, et par conséquent la valeur analogique décodée sortant du convertisseur numérique analogique 78,suivent la tension continue du signal d' erreur d'entrée et quand les impulsions d'horloge sont arrêtées, la valeur numérique et la tension de sortie analogique correspondante sont maintenues à la dernière valeur d'entrée commandée par Le compteur 76 peut avoir par exemple une capacité de huit bits, ce qui nécessite huit conducteurs parallèles 77 reliant le compteur 76 au convertisseur numérique-analogique 78.
Le convertisseur 78 peut entre un circuit en échelle classique, par exemple. Dans ces conditions, le convertisseur numérique analogique 78 n a pas besoin dletre très précis, mais par contre son pouvoir résolvant et sa stabilité ont une importance extrême. Ceci signifie qu' il est sans importance que le signal de sortie analogique du convertisseur 78 constitue un décodage précis de la valeur numérique transmise par les conducteurs 77, mais il importe qu'il résolve les valeurs numériques et maintienne la valeur analogique correspondellte tant que le même signal d'entrée numérique est appliqué.
La tension de sortie analogique du convertisseur 78 est inversée par l'amplificateur opérationnel 82 et est appliquée à 11 entrée positive du comparateur 62. L' amplificateur 82 reçoit le signal de sortie du convertisseur 78 par une résistance d'entrée 80, à son entrée négative. L'entrée positive est reliée à la masse par une résistance 86. Une résistance 84 classique de réaction est branchée entre la sortie et l'entrée négatve de l'amplificateur 82.
Le signal analogique représentant la tension analogique continue d'entrée est appliqué au commutateur 26 (figure 3).
En fonctionnement, pendant le mode de fonctionnement reproduction (reproduction ou reproduction pour montage) le signal de sortie analogique du circuit 78 est proportionnel à la tension d'erreur lignes. La fréquence de synchronisation de l'hors loge est suffisamment élevée pour qu'te modification de la tension continue d'entrée 2o5roque un changement pratiquement instantané de la tension de sortie analogique. Quand on passe au mode enregistrement pour montage, on désire maintenir la dernière tension continue d'erreur. Par conséquent, l'entrée inhibition commande le circuit 68 de façon à arrêter l'horloge et à maintenir invariable le comptage dans le compteur 76 dans les deux sens > maintenant ainsi le signal de sortie analogique décodé inchangé et égal à la dernière tension d'erreur lignes en mode reproduction. D'autres montages pour maintenir avec précision la tension continue d'erreur se présenteront à l' esprit des spécialistes de la présente technique sur la base de ces principes.