INPI-France/Brevets-Francais-2024-Chunked huggingface dataset:
Dans la préparation des sels d'ammonium tertiare des acides alkylarylsulfoniques de la présente invention, l'acide sulfonique est au moins en partie neutraliste par une amine tertiaire appropriée. On peut utiliser toute amine tertiaire appropriée telle que, par exemple, les amines tertiaires aliphatiques, cycloaliphatiques, araliphatiques et amines tertiaires analogues. 3n général, les amines tertiaires utilisées ici peuvent porter comme substituant:: des radicaux d'hydrocarbures aliphatiques, cycloaliphatiques ou araliphatiques linéaires ou ramifiés qui peuvent également contenir des Ilétéroatomes tels que l'oxygène, le soufre ou l'azote. Des exemples particuliers de substituants attachés à l'atome d'azote de l'amine tertiaire comprennent les groupes méthyle, éthyles propyle, butyle, hesyle, octyle, lauryle, stéaryle, cyclohexyle, benzyle, isopropyle, propényle, butényle-2, CH3-CH2-S-CH2-, CH3-CH2-O-CH2-CH2, (CH3)2-N-CH2-CH2-, etc.On peut également utiliser des amines tertiaires contenant des groupes hydroxyde même que d'autres produits de poids moléculaire faible ou relativement haut, obtenus à partir de monoamines ou polyamines primaires et/ou secondaires et d'oxydes d'alkyle tels que l'oxyde d'éthylène, l'oxyde de propylène, l'oxyde de 1,2-butylene ou l'oxyde de 2,3-butylène, l'oxyde de styrène, l'épichlorhydrine, etc.Des exemples illustrant les amines tertiaires pouvant être utilisées ici comprennent la triéthylènediamine la triéthylamine la diméthylbutylamine la diméthyl- (3-éthoxypropyl)amine la diméthylcyclohexylamine la diméthylstéarylamine la diéthylbutylamine la tri-n-propylamine la tri-n-butylamine la té tramé thylé thylène-diamine la tétraméthyltétraméthylène-diamine la tétraméthylhexylméthylène-diamine la méthyl-norpholine 1' éthyl-morpholine la diméthyl-p ipérazine la N-méthyl-N-(2-diméthylaminoéthyl)-pipérazine la pyridine la benzylpyridine la dimé thylé thanolamine la dié thylé thanolamine la N-mé thyl-dié thanolamine la if-butyl-dié thanolamine la triéthanolamine On considère également, selon 11 invention, l'utilisation de mélanges des amines mentionnées ci-dessus et d'amines analogues. On préfère, conformément à la présente invention, utiliser en tant que sel d'ammonium tertiaire d'acide alkylarylsulfonique, un acide sulfonique qui a été neutralisé avec une trialkylamine dans laquelle les groupes alkyle contiennent jusqu'à environ 4 atomes de carbone, ou des amines tertiaires contenant des groupes hydroxy, par exemples, respectivement, la triéthylamine ou la triéthanolamine.
La neutralisation d'un acide alkylarylsulfonique pour former les sels d'ammonium tertiaire utilisés comme l'un des constituants du catalyseur de la présente invention peut être effectuée sans difficultés conformément à des techniques connues. Par conséquent, ces sels peuvent être formés en mélangeant l'acide alkylarylsulfonique avec l'amine tertiaires à l'état anhydre, ou bien l'acide sulfonique peut être dissous ou mis en suspension dans l'eau et/ou un solvent tel qu'un alcool, par exemple l'alcool éthylique, chauffé sous agitation à une température élevée, par exemple audessus d'environ 40 C, puis encore mélangé avec l'amine tertiaire utilisés en vue de la neutralisation.
Un aspect surprenant de la présente invention réside dans le fait que les proportions relatives des acides alkylarylsulfo- niques et des amines tertiaires particulières utilisées ne néces- sitent pas d'être exectement les proportions stoéchiométriques requises pour la réaction. On préfère avoir recours à la quantité stoéchiométrique d'acide sulfonique et d'amine tertiaire utilisés, de manière que pratiquement 1 totalité de l'acide soit effecti- vement neutralisée.On considère qu'un excès d'amine, par rapport à la quantité stoéchiométrique d'amine requise, n'est pas désavan- tageux, car dans le catalyseur final, l'acide sulfonique neutralisé est utilisé conjointement avec au moins une amine.
Si l'acide sulfonique n'est pas neutralisé en totalité, on considère que les résultats obtenus avec le catalyseur final ne sont pas aussi avantageux qu'ils pourraient l'être autrement, car l'acide sulfonique lui-même n'est pas considéré comme étant efficace à toutes les fins de la présente invention. En général, si de l'acide sulfonique non neutralisé est présent, la perte des propriétés désirées du mélange de catalyseur final sera l' d'autant plus grande que le degré auquel cet acide non neutralisé est présent est plus fort. Pour obtenir des résultats acceptables, on considère actuellement qu'environ au moins 75 7c de 11 acide sulfo- nique doivent être neutralisés et de préférence que cet acide soi neutralisé entièrement.
L'amine qui est mélangée avec l'acide sulfonique neutralisé pour former la composition de catalyseur de la présente invention peut cotre l'une quelconque des amines appartenant à toute une série d ' amines bien connues. Cette amine doit eAtre liquide à la temps rature ambiante normale de manière à faciliter son utilisation.
n général, les amines que l'on considère aptes à être utilisées ici en combinaison avec les acides sulfoniques neutralisés sont des liquides qux températures ambiantes normales, par exemple entre 25 et 30 C, et à la pression atmosphérique. En raison de leur bas points d'ébullition, cette considération rend moins désirable l'utilisation de composés tels que la méthylamine, la diéthylamine, la triméthylamine, et les amines analogues ayant de bas points d'ébullition. Les résultats préférés s'obtiennent en utilisant la triéthanolamine et la triéthylamine, en raison de l'efficacité de ces composés ainsi que de leur disponibilité.Toutefois, d'autres amines- apparentées telles que celles mentionnées ci-dessus à propos des amines tertiaires utilisées dans la formulation de l'acide sulfonique neutralisé peuvent servir d'ingré diente dans la formulation de la composition de catalyseur de la présente invention. Pour obtenir les meilleurs résultats, il est préférable d'utiliser une amine tertiaire aliphatique, bien que diverses amines primaires et secondaires correspondant aux amines tertiaires, telles que la diéthylamine et l'éthylamine, puissent être utilisées avec moins d'efficacité. Il y a lieu de remarquer que des mélanges des amines sont également envisagée dans les compositions de la présente invention.
On peut faire vcrier dans des limites relativement larges les proportions relatives de l'amine et de l'acide sulfonique neutralise' qui constituent le catalyseur de la présente invention.
Des résultats très effectifs s'obtiennent lorsqu'on utilise comme ingrédiente de la composi-cion de catalyseur de la présente invention des parties en poids à peu près égales de l'acide sulfonique neutralisé et de l'amine ou des amines particulières. Toutefois, en vue d'atteindre les buts de la présente invention et de réaliser une catalyse efficace de la réaction de formation de la mousse de polyurétiïanne conformément à la présente invention, il egt essentiel qus la composition de catalyseur comprenne au moins enviroer-- 10 % en poids de l'un dc ces ingrédients, et le reste dc l'autre.De préférence, la composition de catalyseur contient d'environ 25 à environ 75 % en poids de l'amine aliphatique et d'environ 25 à environ 75 % en poids de l'acide sulfonique neutra lisé. Sur la base de travail acti'elle, il semblerait que le degré d'efficacité du mélange de catalyseur soit d'autant moindre que les proportions s1 écartent davantage du mélange en parties en poids égales. Par conséquant, le catalyseur de la présente inventior im- plique manifestement ce que l'on peut considérer comme étant une situation variable continue.
La variation des proportions des ingrédients dans un mélan ge de catalyseur de la présente irvention est considérée comme démontrant le fait que dans une matière inconnue, l'ingrédient effec tif du catalyseur de l'invention implique un type inconnu de com plexe formé entre les deux types d'ingrédients différents utilisés.
Cette conclusion est également étayée par le fait que ni l'acide sulfonique neutralisé, ni une amine, utilisés seuls dans la pre- sente invention, ne donnent les résultats effectifs d1un mélange de catalyseur commedéfini ici, pour la catalyse de réactions de production de mousse de polyuréthanne. Ceci est considéré comme la démonstration du fait que la présente invention offre un effet synergique.
Cette fonction du catalyseur est définie comme étant un réglage ou une régulation de la réaction entre les ingrédients de production de lturethamle de sorte qu'un équilibre est atteint en favorisant les réactions des hydrogenes réactifs et des groupes isocyanate formant les liaisons de polyuréthalme linéaires desi- rbbee et les réactions isocyanate-eau nécessaires aboutissant à la production d'anhydride carbonique gazeux à une vitesse telle qu'on obtient les caractéristiques de mousse désirables connues. I1 ne semble pas nécessaire d'étudier en détail ici toutes les diverses propriétés désirables qui peuvent être et qui sont obtenues comme résultat de cet équilibrage des vitesses de réaction avec le cata lyseur de la présente invention.Ces propriétés impliquent des caractéristiques telles que le rebondissement, la déformation per manente par compression, la résistance au décl1irage, l'allongement, la résistance à la traction, la résistance 2a l'humidité atmosphé rique (''résistance aux intempéries"), la porosité, etc.
g E 46 A une solution de 250 cm3 de diéthylène-glycol et de 35 cm3 d'eau dans un ballon en alliage iyïtnel, on ajoute 0,6 mole d'hydroxyde de c potassium et 0,1 mole de 4,4-dicyanométhyl- tricyclo(4.3.1.13,8)undécane. Le mélange est agité énergiquement pendant 3 heures et ensuite chauffé avec précaution à 12500 pendant 72 heures. A la fin de cette période, la solution est refroidie et ajouté à 1,5 litre d'eau. La solution aqueuse est filtrée et rendue fortement acide à l'aide d'acide chlorhydrique concentre.
Le précipité résultant est filtré, lavé à l'eau pour donner de l'acide 4,4-tricyclo(4.3.1.14,8)undécane diacétique brut. L'acide 4,4-tricyclo(4.3.1.13,8)undécane diacétique brut est ajouté à 250 cm3 de chlorure d'acétyle et chauffé au reflux pendant 5 heures À la fin de cette période, le -chlorure d'acétyle- en excès est éliminé sous pression réduite.
lia matière solide résiduelle est recristallisée à partir de méthyl-cyclohexane pour donner de l'anhydride 4,4-tricyclo- (4.3.1.13,8)undécane diacétique.
EXEMPLE 47 : On répète le.mode opératoire de l'Exemple 29, mais en substituant une quantité équivalente d'anhydride 4,4-tricyclo (4.3.1.13,8)undécane diacétique à l'anhydride de l'Exemple 29 et on substitue une quantité équivalente de solution aqueuse d'ammoniac à la méthylamine pour obtenir de la spiro-[pipéridine-4,4'-tricyclo(4.3.1.13,8)undécane]-2,6-dione.
iPT 48 à 52 On répète le mode opératoire de l'Exemple 47, mais en substituant une quantité équivalente de l'amine indiquée à la solution aaueuse d'ammoniac de l'Exemple 47 pour obtenir 1' "Imide" indiqué.
Ex. Amine Imide 48 Méthylamine 1-méthyl-spiro[pipéridine-4,4' tricyclo(4.3.1.13,8)undécane] -2,6-dione 49 Ethanolamine 1-hydroxyéthyl[pipéridine-4,4' tricyclo(4.3.1.13'8)undécane]- 2,6-dione 50 Propylamine 1-propyl[pipéridine-4,4'-tricyclo (4.3.1.13,8)undécane]-2,6-dione 51 3-hydroxypropylamine 1-(3-hydroxypropyl)-[pipéridine 4,4'-tricyclo(4.3.1.13,8)undécane] 2,6-dione 52 Isopropylamine 1-isopropyl[pipéridine-4,4'-tricy clo(4.3.1.13,8)undécane]-2,6-dione EXEMPLES 53 à 57 En utilisant le mode opératoire décrit à l'Exemple 34, à ceci près qu'on remplace la spiro[furan-2,5(3H,4H)(3,4')- tricyclo(4.3.1.138)undécane]dione par l'anhydride 4,4tricyclo(4.3.1.13,8)undécane diacétique, on obtient 1' "Imide" indiqué à partir de l' Amine" indiquée.
Ex. Amine imide 53 Allylamine 1-allyl-spiro[pipéridine-4,4' tricyclo(4.3.1.13,8)undécane] 2,6-dione 54 Méthallylamine 1-méthallyl-spiro[pipéridine-4,4' tricyclo(4.3.1.13,8)undécane] 2,6-dione 55 Diméthallylamine 1-diméthallyl-spiroEpipéridine- 4,4'-tricyclo(4.3.1.13,8)undécane] 2, 6-dione 56 Cyclopropylméthyl- 1-cyclopropylméthyl-spiro[pipéri amine dine-4,4'-tricyclo(4.3.1.13s8)- undécane3 -2, 6-dione 57 Propargylamine 1-propargyl-spiro[pipéridine-4,4' tric;yclo(4.3.1.13;8)undécane]-2,6- dione EXEMPLES 58 à 65 On répète le mode opératoire de l'Exemple 39, mais une quantité équivalente de 1' "Imide" indiqué est substituée à la 1-méthyl-spiro[pyrrolidine-3,4'-tricyclo(4.3.1.13,8) undécane]-2,5-dione de l'Exemple 39 pour donner lt:: "Amine" indiquée.
Ex. Imide Amine 58 piropipéridine-4 ,4'- tricyclo(403.1 .13i8) undécane]-2,6-dione Monohydrate de chlorhydrate de spiro[pipéridine-4,4'-tricyclo (4.3.1.13,8)undécane] 59 1-méthyl-spiro[pipéri dine-4,4'-tricyclo (4.3.1.13,8)undécane] 2 ,6-dione Chlorhydrate de 1-méthyl-spiro [pipéridine-4,4'-tricyclo(4.3.
1.13,8)undécane] 60 1 -allyl-spîro [pipéridine- 4,4'-tricyclo-(4.3.1.
1 '8)undécane] -2,6-dione Chlorhydrate de 1-allyl-spiro [pipéridine-4,4'-tricyclo(4.3.
1.13,8)undécane] 61 1-propyl-spiro[pipéridi ne-4,4'-tricyclo-(4.3.
1.13,8)undécane]-2,6 dione Chlorhydrate de 1-propyl-spiro [pipéridine-4,4'-tricyclo(4.3.
1.13,8)undécane] Ex. Imide 62 I -hydroxyéthyl-spiro- [pipéridine-4,4'-tri cyclo(4.3.1.13,8)- 63 undécane]-2,6-dione Amine Chlorhydrate de 1-hydroxyéthylspiro[pipéridine-4,4-tricyclo (4.3.1.13,8)undécane] 67 1-(3-hydroxypropyl)- spiro[pipéridine-4,4' tricyclo(4.3.1.13,8) undécane] -2 ,6-dîone Chlorhydrate de 1-(3-hydroxy- propyl)-spiro[pipéridine-4,4'tricyclo(4.3.1.13,8)-undécane] 64 1-(2-hydroxypropyl) spiro [pipéridine-4,4' - tricyclo(4.3.1.13,8) undécane] -2, 6-dione Chlorhydrate de 1-(2-hydroxy- propyl)-spiro[pipéridine-4,4'- tricyclo(4.3.1.13,8)-undécane] 65 1-cyclopropylméthyl spiro[pipéridine-4,4' - tricyclo(4.3.1.13,8) undécane]-2 ,6-dione Chlorhydrate de 1-cyclopropyl spiro[piperidine-4,4'-tricyclo- (4.3.1.13,8)undécane] EXEMPLE 66 A 0,1 mole de spiro[pipéridine-4,4'-tricyclo(4.3.1 13'8)-undécane] dans 250 cm3 de diméthylformamide, on ajoute 0,2 mole de carbonate de sodium.A ce mélange, on ajoute 0,11 mole de bromure de propargyle et le mélange est chauffé à 60-700a pendant 24 heures. À la fin de cette période, le mélange de réaction est refroidi, filtré et concentré sous pression réduite L'huile résiduelle est passée dans de l'hexane par entraînement à la vapeur d'eau. La solution à l'hexane est séchée à l'aide de sulfate de magnésium anhydre et filtrée. Le filtrat est traité à l'acide chlorhydrique anhydre pour précipitation de chlorhydrate de propargyl-spiro [pipéridine-4,4'-tricyclo(4.3.1.13,8)undécane].
EXEMPLE 67 B A 0,1 mole de spiro[pipéridine-4,4'-tricyclo-(4.3.
1.13'8)undécane] dans 15 cm3 de tétrahydrofuranne, on ajoute 300 mg de chlorure de palladium et 0,2 mole dtallène. Ce mélange est introduit dans une bombe en-acier inoxydable qui est fermée et chauffée à 120 C pendant 6 heures. A la fin du chauffage, la solution est refroidie, décantée, filtrée et évaporée sous pression réduite pour donner du 1-(2,3-di- méthylènebutyl)spiro[pipéridine(4,4')tricyclo(4.3.1.13,8) undécane].Ce produit peut eAtre traité encore si on le désire en dissolvant une mole de 1-(2,3-diméthylènebutyl)spiro- [pipéridine(4,4')tricyclo(4.3.1.13,8)undécane] dans l'éther et en traitant cette solution par unemole d'acide chlorhydrique pour former le sel chlorhvdate EXEMPLE 68: A 300 cm d'éther, on ajoute 0,133 mole d'isocyanate d'argent et 0,08 mole d'iode. lie mélange est agité pendant 30 minutes. A ce mélange, on ajoute 0,1 mole de 4-méthylène- tricyclo(4.3.1.13,8)undécane en une seule portion. Le mélange est agité énergiquement à la température ambiante pendant 5 heures environ.A la fin de cette période, le mélange est filtré à travers de la célite et le filtrat est concentré sous pression réduite. On ajoute le résidu à 200 cm) de solution éthanolique 1,5 N d'hydroxyde de potassium qui contient 25 cm d'eau. La solution est chauffée au reflux pendant 20 heures. h la fin de cette période, la solution est concentrée sous pression réduite. Le résidu est ajouté à 500 cm3 d'eau et passé dans de l'hexane par entrainement à la vapeur d'eau.
La solution à l'hexane est concentrée sous pression réduite pour donner du spiro[aziridine-2,4'-tricyclo(4.3.1.13,8) undécane].
En dehors des questions de stabilité, la nouvelle composition permet, en outre, une plus grande facilité d'emploi, dans les traitements ambulatoires, de tous les produits actifs utilisables en dermatologie et en cosmétologie et leur application à des doses unitaires bien définies.
La nouvelle composition selon l'invention est un lyophilisat d'une émulsion du type huile dans l'eau contenant essentiellement (a) - un ou plusieurs principes actifs à usage dermatologique ou cosmétologique, (b) - une phase lipidique comprenant des acides gras et leurs dérivés, des alcools gras et leurs dérivés, et des corps gras naturels d'origine animale, végétale ou minérale et des corps gras synthétiques, solides dans les conditions normales de température et de pression, et fusibles à température modérée.
(c) - une phase hydrophile constituée d'épaississant et d'émulsionnant dans l'eau.
Eventuellement l'émulsion peut également contenir des ingrédients habituels, par exemple des parfums, des colorants, des tampons, des conser- vateurs.
Le lyophilisat se présente sous forme d'une masse solide, sèche, spongieuse, non hygroscopique mais assez hydrophile pour donner, après une brève immersion dans l'eau et par onction sur la peau, une crème, une gelée, un lait ou une lotion à usage dermatologique ou cosmétologique.
Il peut entre présenté en doses unitaires et sourdes formes etdes dimensions extrtmement variables : parallélépipèdes, cylindres, sphères, hémisphères, troncs de cônes, etc. Les principes actifs peuvent être aussi bien des médicaments à usage externe que des produits cosmétiques pour l'hygiène et la protection de la peau comme, par exemple, émollients, détergents, dépilatoires, désodorisants, adoucissants, anti-solaires, anti-transpiration etc.
Comme phase lipidique on peut utiliser soit seuls soit associés - les acides gras et leur dérivés (sel8,,esters,.) - des alcools gras et leurs dérivés (esters) - des corps gras complexes d'origine animale, végétale ou synthétique, par exemple, lanolines, paraffines, blanc de baleine, cires animales, cires végetales, cires synthétiques.
Comme constituants de la phase hydrophile, on peut citer parmi les nombreux produits d'or igines diverses, comme épaississants - des gommes naturelles (arabique, adragante, guar) - des dérivés de la cellulose, - des pectines (dérivés de l'acide alginique et du carraghen) - des bentonites et silices colloidales, - dès polysaccharides, - des macromolécules synthétiques (à groupements vinyliques, acryliques etc...) - des matières amylacées - desdérivés phosphorylés d'alcools aliphatiques hydroxylés, - des triglycérides naturels ou semi-synthétiques interestérifiés, et comme émulsionnants - des agents tensio-actifs -non ioniques, par exemple Tweens, Spans, etc.
-anioniques, par exemple laurylsulfates, -cationi.ques, par exemple composés d'ammonium quaternaires.
- des agents de dispersion, tels que les polyélectrolytes organiques comme les dérivés de l'acide alkylaryl sulfonique.
- des sels organiques ou minéraux de l'acide stéarique, des alcools gras oxyéthylénés.
I1 est évident que l'on peut utiliser un ou plusieurs de chacun de ces produits en quantités variables.
Le procédé pour préparer les nouvelles compositions selon l'invention consiste essentiellement en ce que l'on soumet l'émulsion aqueuse d'ingrédients choisis pour former lesdites compositions à une lyophilisation dans des bacs comprenant une série d'alvéoles de dimensions et de formes convenables.
Plus particulièrement, On prépare une crème, une lotion, un lait ou une gelée comme ssit - On mélange tous les constituants de la phase lipidique et éventuellement tous les produits actifs ou non solubles dans cette phase qui est fondue par chauffage et homogénéisée.
- On prépare, par ailleurs, la phase hydrophile constituée par un gel plus ou moins fluide formé par les épaississants, les émulsionnants et -éventuellement d'autres composants solubles ou insolubles dans l'eau.
- On verse la phase huileuse chaude dans la phase aqueuse portée à une température idèntique, pour obtenir sous agitation une émulsion parfaite, qui peut titre coulée chaude dans des bacs à alvéoles ayant la forme et la taille voulues pour la dose unitaire recherchée, ou qui peut être refroidie en vrac de façon que l'on puisse y incorporer immédiatement avant la répartition en alvéoles le ou les principes actifs trop fragiles pour supporter une élévation de température en phase aqueuse.
a) Elution avec gradient sur DEAE Sephadex. Une colonne (25 x 1,8 cm) de DEAE Sephadex a été équilibréed'abord avec du tampon 0,01 M de succinate à pH 3,6 et ensuite à pH 4,8. Un échantillon de la nouvelle cellulase dont on a enlevé la dextranase, a été concentré, dialysé (volume final 6 ml) et introduit dans la colonne à pH 4,8; il a été élué avec un gradient de tampon se terminant à pH 3,6. La carboxyméthylcellulase, la cellobiase et la densité optique ont été mesurées à 280 m. Les résultats sont montrés à la figure 2 des dessins ci-annexés.A la figure 2, les symboles ont les significations suivantes : A= cellobiase, B= pH, C= carboxyméthylcellulose, D= densité optique, E= densité optique à 280 mt, F= activité de carboxyméthylcellulase (unités x l02), G= activité de cellobiase et H= nombre fractionnaire (2,95 ml).
Le composant cellobiase était encore actif vis-à-vis de la cellulose et cette activité a été accrue par addition de carboxyméthyl cellulase, qui elle-même manquait d'activité sur de la cellulose.
b) Concentration isoélectrioue. Un échantillon (3 ml) de la nouvelle cellulase dont on avait enlevé la dextranase a été placé au centre d'un gradient de pH (3 à 6) dans une colonne (115 ml) d'acide aminocarboxylique (Vesterberg et Svensson, Acta Chem.
Scand (1966) 20, 820). Les frictions s'écoulant de la colonne à la fin de l'essai ont été examinées quant à la densité optique à 280 m, au pH, à la cellobiase et à la carboxyméthylcellulase.
Les résultats sont montrés à la figure 3 des dessins ci-annexés.
A la figure 3, les symboles ont les significations suivantes A=cellobiase, B=pH, C=carboxymthylcellulase, D=densité optique, E=densité optinue à 280 m , Activité de carboxyr,lPthylcellulase tXn8éslf 10 2), G=activité de cellobiase et H=nombre fractionnaire La cellobiase avait un pH isoé'ectrique de 4,35; celui de la carboxyméthylcellulase était de 5,9, tandis que celui du composant C1 était de 4,05. Un essai comparatif utilisant le composant Cl préalablement isolé de T.viride a montré un même pH isoélectrique.
c) Filtration de gel sur Sephadex G-75 Une solution (5 ml) de la cellobiase obtenue après élut ion avec gradient selon le procédé (a) a été éluée à travers une colonne (43 x 25 cm) de Sephadex G-75; le tampon d'élution était 0,01 M en NaCl et 0,005 n en NaN3. La cellobiase était bien séparée d'un composant de moindre importance, optiquement dense (comme le montre la figure 4 des dessins ci-annexés), lequel s'est montré etre du Ci par son aptitude à solubiliser la cellulose, quand il agit en synergie avec la cellobiase et la carboxymethylcellulase mélangées.A la figure 4, les symboles ont les significations suivantes : A=cellobiase, B=composant C1, CI carboxyméthylcellulase, D= densité optique à 280 m, E= activité de cellobiase (M unités), F= activité de carboxyméthylcellulase(unités x 102) et G=nonbre fractionnanre (3 ,45ml) Les propriétés du complexe total de cellulase ont été recherchées et les résultats sont donnés ci-dessous.
a) Conditions optimales activité de l'enzyme.
Les effets du pH et de la température sur l'activité de la nouvelle cellulase vis-à-vis d'une fornie hautement organisée de cellulose (coton) et vis-à-vis d'un déchet cellulosique typi quement àgvricole (bagasse traitée par l'alcali) ont été mesurés.
Des fractions (1 ml) dtune solution à 1% de la nouvelle cellulase ont été mises à incuber durant 3 jours à diverses valeurs de pH et de température avec des échantillons (5 mg) de matière cellulosique. Pour les deux matières les conditions optimales de solubilisation étaient approximativement 400C et pH 4,5.
b) Effet d'un pH inadéquat sur l'activité subséouente de la cellulase.
Une solution (0,2) de nouvelle cellulase a été dialysée et maintenue à 400C durant 3 h à différentes valeurs de pH.