FR 3161553 A1 20251031 FR 2404519 A 20240430 Titre : Compositions, en particulier, pharmaceutiques de bactériophages de la classe des Caudoviricetes , procédé et utilisations associés La présente invention concerne des compositions, et en particulier des compositions pharmaceutiques, comprenant, voire constituées d’une suspension de bactériophages de la classe des Caudoviricetes ayant une activité lytique contre au moins une souche de bactéries Gram positive, à un titre d’au moins 10 8 PFU/mL, dans une solution aqueuse comprenant, voire constituée de : - au moins un surfactant non ionique, et en particulier un seul surfactant non-ionique, choisi parmi la famille des polysorbates, à une concentration molaire supérieure à sa concentration micellaire critique, mais n’excédant pas 2 mg/mL, - un ou plusieurs sels neutres formés d’une paire d’ions monovalents, dont la concentration molaire totale est dans la gamme allant de 75 à 160 mM, - un mélange tampon conférant à la composition un pH de 6,0 à 7,9, et préférentiellement de 7,0 à 7,5, typiquement choisi parmi les couples ion hydrogénophosphate/ion dihydrogénophosphate, acide citrique/ion citrate et acide citrique/ion hydrogénophosphate, la molarité du mélange tampon étant dans la gamme allant de 4 mM à 100 mM, - de l’eau, ladite composition comprenant moins de 0,9 unités d’endotoxines bactériennes par mL, une concentration en protéines totales de moins de 0,09 mg/mL et ladite suspension de bactériophages dans ladite solution aqueuse présentant une osmolalité comprise entre 150 mOsm/kg à 600 mOsm/kg, ainsi que des procédés et utilisations associés. Figure pour l’abrégé : néant. Compositions, en particulier, pharmaceutiques de bactériophages de la classe des Caudoviricetes , procédé et utilisations associés La présente invention concerne le domaine de la thérapie. Elle concerne plus précisément de nouvelles compositions pharmaceutiques contenant une suspension aqueuse de bactériophages de la classe des Caudoviricetes ayant une activité lytique contre au moins une souche de bactéries Gram positive, et en particulier, de bactériophages dirigés contre au moins une souche de Staphylococcus aureus ; de telles compositions pharmaceutiques pour leur utilisation en tant que médicament et dans diverses applications médicales ; ainsi que leur procédé de préparation. En juillet 2022, l’Agence européenne des médicaments (EMA) a publié une « liste des principaux groupes thérapeutiques en préparation aux crises » en réponse au nombre croissant de pénuries de médicaments amplifiées par la crise de la COVID 19 (European Medicines Agency 2022). Cette liste comprend les « antibactériens à usage systémique ». Cependant, la menace croissante de la résistance aux antibiotiques compromet l’efficacité de ce groupe thérapeutique. En effet, en avril 2019, l’Organisation mondiale de la santé prédisait qu’au rythme constaté, 10 millions de personnes pourraient mourir chaque année de bactéries multirésistantes d’ici 2050 (Interagency Coordination Group on Antimicrobial Resistance 2019). De nouvelles approches pour traiter les infections bactériennes sont donc recherchées et les anciennes telles que la phagothérapie sont réétudiées. Les bactériophages sont des virus qui infectent des bactéries. Ils reconnaissent spécifiquement une bactérie, injectent leur charge génétique à l’intérieur de celle-ci et détournent la voie métabolique de la bactérie hôte pour former de nouveaux virions, ce qui conduit à la lyse de la paroi cellulaire bactérienne et à la libération de particules de phage dans l’environnement direct de la bactérie lysée (Stone et al. 2019). Lorsqu’ils sont présents sur le site infectieux des bactéries ciblées, ils peuvent réduire considérablement la charge bactérienne et lutter contre les infections bactériennes. En 1919, Félix d’Hérelle a traité avec succès la dysenterie bacillaire par des phages (d’Herelle 1931) et des produits à base de phages ont été commercialisés en France de 1930 à 1976 (Dublanchet 2014; Vidal 1943). Cependant, des résultats cliniques contradictoires, l’avènement de la production de masse des antibiotiques et un contexte géopolitique bilatéral ont eu raison de cette stratégie thérapeutique. Toutefois, certains pays (e.g., Géorgie, Russie, Pologne) ont maintenu cette thérapie depuis plus de cent ans (Międzybrodzki et al. 2018; Żaczek et al. 2022). La pharmacopée européenne, qui établit des normes pour les produits pharmaceutiques en Europe, comprend un chapitre général « 5.31. MÉDICAMENTS UTILISÉS EN PHAGOTHÉRAPIE ». Il contient un ensemble d’exigences relatives aux substances actives et médicaments pour usage humain ou vétérinaire utilisés en phagothérapie, ainsi qu’à leur production et leur contrôle. Ces normes sont essentielles pour garantir la qualité et la cohérence des produits à base de bactériophages dans toute l'Europe. Cependant, la diversité des modes de production rapportés dans la littérature est sujette à d’importantes fluctuations quantitatives et qualitatives rendant difficiles l’application des standards usuels de Bonnes Pratiques de Fabrication (Ferry et al. 2021; Tanir et al. 2021). En 2018, à l’initiative des autorités belges, une monographie générique a été élaborée sur la façon de préparer et de tester en toute sécurité les phages destinés aux patients (Pirnay et al. 2018; Verbeken et Pirnay 2022; Tanir et al. 2021). Cependant, aucune mention de formulation permettant un stockage prolongé de suspensions de phages, purifiées ou non, avec et sans agitation, n’est précisée dans ces textes. Au cours des cinquante dernières années, plus de 5100 bactériophages ont été identifiés et étudiés, dont plus de 90% possèdent une queue et appartiennent aux morphotypes myovirus, siphovirus et podovirus (Harada et al. 2018). La taxonomie des virus a été entièrement révisée en 2021 et l’ordre des Caudovirales ainsi que les familles Myoviridae , Siphoviridae et Podoviridae ont été abolies. La taxonomie utilisée dans la présente demande de brevet est définie dans Walker et al. 2021 (Walker et al. 2021). Les phages, bien que spécifiques de types bactériens, présentent des analogies de structures protéiques et d’acides nucléiques. Schématiquement, une particule de bactériophage prototypique est composée d’un ou deux brins d’acide nucléique protégés par la capside icosaédrique protéique, qui est attachée à la gaine contractile terminée à sa base par une plaque de forme hexagonale coordonnant le mouvement des fibres de la queue. La stabilité des préparations bactériophagiques est affectée par la structure protéique externe qui peut subir un dépliement propice à une agrégation réduisant la capacité d’infection des phages. Ces phénomènes d’agrégation sont dépendants d’un grand nombre de facteurs, incluant notamment la nature de la phase dispersante (eau, mélange eau-cosolvants) (Mendez et al. 2002), des concentrations en substances dissoutes (cations mono- et bivalents) (Drab 2018), du pH (Meyer et al. 2017), de l’agitation mécanique (Hoe et al. 2014; Francius et al. 2021), de la température de production et de conservation (Ergin 2022), du conditionnement (verre, polypropylène) (Richter et al. 2021). Plus le titre en bactériophages est élevée, plus il est difficile d’obtenir des suspensions de bactériophages stables dans le temps. Le titre en bactériophages est un élément clé de leur stabilité et de leur activité en suspension (Duyvejonck et al. 2021). Par ailleurs, pour pouvoir être utilisés dans des compositions administrables à l’être humain, les bactériophages doivent subir une opération de purification, pour réduire notamment la présence d’endotoxines et de protéines bactériennes résiduelles. Les étapes de purification déséquilibrent les interactions phages-milieu dispersant et phages-matériau de conditionnement et sont sources d’instabilité pour les suspensions de phage purifiées. Plus les suspensions de bactériophages sont purifiées, plus les bactériophages ont tendance à s’agréger, ce qui peut nuire à leur activité lytique sur les bactéries cibles. D’ailleurs, afin de limiter les phénomènes d’instabilité (dont les phénomènes d’agrégation) des suspensions de bactériophages, elles sont souvent vendues non purifiées avec des bactériophages congelés à l’intérieur de leur cellule hôte. La structure chimique (protéique et nucléique) des bactériophages les différencient grandement des protéines et anticorps, ce qui rend la préparation de formulations de bactériophages présentant une bonne stabilité et des propriétés anti-infectieuses préservées très spécifique (Batinovic et al. 2019). Dans ce contexte, l’objectif de l’invention est de proposer des compositions comprenant un titre élevé en bactériophages et un faible taux d’endotoxines et de protéines bactériennes résiduelles, qui soient administrables à l’être humain ou à l’animal, notamment sous la forme d’une composition injectable, et donc utilisables en tant que matière première à usage pharmaceutique, médical, vétérinaire. Ces compositions doivent être stables dans le temps, réduire l’agrégation des bactériophages et permettre de garantir le maintien de l’activité lytique antibactérienne. La présente invention concerne des compositions comprenant une suspension de bactériophages de la classe des Caudoviricetes ayant une activité lytique contre au moins une souche de bactéries Gram positive, à un titre d’au moins 10 8 PFU/mL, de préférence à un titre de 10 8 à 10 10 PFU/mL, et notamment à un titre de 10 9 à 10 10 PFU/mL, dans une solution aqueuse. Ladite solution aqueuse comprend : - au moins un surfactant non ionique, et en particulier un seul surfactant non-ionique, choisi parmi la famille des polysorbates, à une concentration molaire supérieure à sa concentration micellaire critique, mais n’excédant pas 2 mg/mL (ce qui correspond à 0,2 % (m/v)), - un ou plusieurs sels neutres formés d’une paire d’ions monovalents, dont la concentration molaire totale est dans la gamme allant de 75 à 160 mM, - un mélange tampon conférant à la composition un pH de 6,0 à 7,9, et préférentiellement de 7,0 à 7,5, typiquement choisi parmi les couples ion hydrogénophosphate/ion dihydrogénophosphate, acide citrique/ion citrate et acide citrique/ion hydrogénophosphate, la molarité du mélange tampon étant dans la gamme allant de 4 mM à 100 mM, - de l’eau. Ladite composition comprend moins de 0,9 unités d’endotoxines bactériennes (UE) par mL, une concentration en protéines totales de moins de 0,09 mg/mL et ladite suspension de bactériophages dans ladite solution aqueuse présente une osmolalité comprise entre 150 mOsm/kg à 600 mOsm/kg. De manière avantageuse, dans les compositions selon l’invention, la solution aqueuse dans laquelle les bactériophages sont en suspension est constituée : - d’au moins un surfactant non ionique, et en particulier un seul surfactant non-ionique, choisi parmi la famille des polysorbates, à une concentration molaire supérieure à sa concentration micellaire critique (CMC), mais n’excédant pas 2 mg/mL (ou 0,2 % (m/v)), - d’un ou plusieurs sels neutres formés d’une paire d’ions monovalents, dont la concentration molaire totale est dans la gamme allant de 75 à 160 mM, - d’un mélange tampon conférant à la composition un pH de 6,0 à 7,9, et préférentiellement de 7,0 à 7,5, typiquement choisi parmi les couples ion hydrogénophosphate/ion dihydrogénophosphate, acide citrique/ion citrate et acide citrique/ion hydrogénophosphate, la molarité du mélange tampon étant dans la gamme allant de 4 mM à 100 mM, - d’eau. Aussi, en particulier, la présente invention concerne des compositions constituées d’une suspension de bactériophages de la classe des Caudoviricetes ayant une activité lytique contre au moins une souche de bactéries Gram positive, le titre en dits bactériophages étant d’au moins 10 8 PFU/mL, de préférence de 10 8 à 10 10 PFU/mL, et notamment de 10 9 à 10 10 PFU/mL, dans une solution aqueuse constituée : - d’au moins un surfactant non ionique, et en particulier un seul surfactant non-ionique, choisi parmi la famille des polysorbates, à une concentration molaire supérieure à sa concentration micellaire critique, mais n’excédant pas 2 mg/mL (ce qui correspond à 0,2 % (m/v)), - d’un ou plusieurs sels neutres formés d’une paire d’ions monovalents, dont la concentration molaire totale est dans la gamme allant de 75 à 160 mM, - d’un mélange tampon conférant à la composition un pH de 6,0 à 7,9, et préférentiellement de 7,0 à 7,5, typiquement choisi parmi les couples ion hydrogénophosphate/ion dihydrogénophosphate, acide citrique/ion citrate et acide citrique/ion hydrogénophosphate, la molarité du mélange tampon étant dans la gamme allant de 4 mM à 100 mM, - d’eau, ladite suspension aqueuse comprenant moins de 0,9 unités d’endotoxines bactériennes (UE) par mL, une concentration en protéines totales de moins de 0,09 mg/mL et ladite suspension de bactériophages dans ladite solution aqueuse présentant une osmolalité comprise entre 150 mOsm/kg à 600 mOsm/kg. Dans la définition des compositions selon l’invention, la concentration molaire totale donnée dans la gamme allant de 75 à 160 mM correspond à la concentration molaire du ou des sels neutres formés d’une paire d’ions monovalents présents dans la composition. Le pH et l’osmolalité sont choisis pour être compatibles avec une administration chez l’être humain et l’animal, et notamment permettre une administration parentérale ou entérale. L’osmolalité de la suspension est choisie pour respecter l’isotonie sanguine et tissulaire. De manière préférée, les compositions selon l’invention sont des compositions pharmaceutiques. Aussi, en particulier, la présente invention concerne des compositions pharmaceutiques comprenant une suspension de bactériophages décrite dans la présente description, et notamment des compositions pharmaceutiques constituées d’une telle suspension de bactériophages. Dans les compositions selon l’invention, les bactériophages forment une suspension colloïdale dans le milieu dispersant, lequel correspond à la solution aqueuse sélectionnée. C’est-à-dire que les bactériophages sont dispersés dans la solution aqueuse sous la forme de particules dont la taille, au moins dans une direction, est entre 1 nanomètre et 1 micromètre. De manière non manifeste, les inventeurs ont montré que les compositions selon l’invention, permettaient d’obtenir une suspension stable de bactériophages. La stabilité (« shelf-life » en anglais) est, en particulier, évaluée, après un temps de stockage, en absence d’agitation, en conditions réfrigérées (température dans la gamme 2°C – 8°C), par le maintien du titre de bactériophages à une valeur de 10 8 PFU/mL ou plus. "PFU" signifie en anglais "plaque forming unit" (unité formant une plaque), selon une définition bien connue de l’homme du métier. Le titre de bactériophages peut en particulier être déterminé par titration spot test. Les bactériophages ayant une activité lytique lysent la cellule hôte, provoquant une zone d'éclaircissement (ou plaque) sur un tapis de bactéries ciblées par l’activité lytique des bactériophages et c’est ces zones qui sont dénombrées pour la détermination du titre. Dans les exemples donnés ci-après, des essais ont été réalisés et mettent en évidence d’autres caractéristiques des compositions selon l’invention qui sont en lien avec la stabilité observée, il s’agit notamment (i) d’une variation de pH inférieure à 1, et/ou (ii) d’un maintien de l’osmolalité de la suspension (erreur inférieure à 10 %), et/ou (iii) d’un indice d’agrégation, déterminé par spectrophotométrie UV, inférieur à 7. Les compositions selon l’invention présentent une stabilité à long terme, notamment sur une période supérieure à un an, et de préférence de 2 ans ou plus, en conditions réfrigérées (température dans la gamme 2°C – 8°C) et de 1 mois à température ambiante (température dans la gamme 15°C – 25°C). En particulier, il a été constaté pour les compositions des exemples illustrant l’invention qu’une stabilité à 5°C sur une période d’au moins un an pouvait être obtenue. La solution aqueuse, ou milieu dispersant, présente dans les compositions selon l’invention a été sélectionnée pour optimiser la stabilité des suspensions bactériophagiques obtenues. Pour ce faire, des études de stabilité ont été menées (i) en condition de stress (i.e., température, pH, force ionique, agitation horizontale et rotative favorisant notamment la ventilation et la cavitation) afin d’induire des phénomènes d’agrégation et de fragmentation des bactériophages qui inactivent les bactériophages ; (ii) dans différents conditionnements pour lesquels la mouillabilité des compositions a été étudiée ; (iii) en condition de stockage associée à la durée de conservation (en anglais « shelf-life »). Ainsi, la présente invention rapporte l’effet stabilisant inattendu de l’association particulière d’un surfactant neutre et d’une solution saline tamponnée particulière sur des suspensions de bactériophages de la classe Caudoviricetes , et en particulier des bactériophages de la classe Caudoviricete s appartenant au genre Silviavirus , ayant, notamment, un morphotype myovirus et une activité lytique contre au moins une souche de Staphylococcus aureus . Par ailleurs, l’effet stabilisant face aux variations de pH et au stress mécanique, qui sont des conditions connues pour inactiver les bactériophages au cours du stockage, a été mise en évidence. Dans les compositions selon l’invention, il a été démontré que l’agrégation entre bactériophages était réduite et que l’activité antibactérienne était préservée dans le temps. En particulier, dans les compositions selon l’invention, et notamment dans les compositions pharmaceutiques selon l’invention, les bactériophages de la classe des Caudoviricetes appartiennent au genre des Silviavirus , et ont, notamment, un morphotype myovirus, lesdits bactériophages ayant une activité lytique contre au moins une souche de Staphylococcus aureus . Dans le cadre de l’invention, par souci de simplification, on utilisera le terme bactériophages pour désigner les bactériophages de la classe des Caudoviricetes ayant une activité lytique contre au moins une souche de bactéries Gram positive, et en particulier les bactériophages de la classe des Caudoviricetes appartenant au genre des Silviavirus , et ayant, notamment, un morphotype myovirus, et ayant une activité lytique contre au moins une souche de Staphylococcus aureus . Selon des modes de réalisation avantageux, dans les compositions selon l’invention, et notamment dans les compositions pharmaceutiques selon l’invention, la solution aqueuse, ou milieu dispersant, présente une force ionique de 150 à 400 mM. La force ionique est choisie (i) pour encore limiter les phénomènes d’agrégation induits par les interactions électrostatiques (attraction/répulsion) liées aux charges portées par les bactériophages, (ii) pour faciliter la déstabilisation de la paroi bactérienne des bactéries cibles. De manière avantageuse, les compositions selon l’invention, et notamment les compositions pharmaceutiques selon l’invention, sont stables sur au moins un an à une température appartenant à la gamme de 2 à 8°C, c’est-à-dire qu’elles présentent un titre de bactériophages qui reste supérieur ou égal à 10 8 PFU/mL. Dans le cadre de l’invention, le stockage à une température appartenant à la gamme de 2 à 8°C se fait sans agitation. En particulier, un tel stockage des compositions selon l’invention est réalisé dans un contenant en verre de type I ou de type II. En particulier, avant la période de stockage sur au moins un an à une température appartenant à la gamme de 2 à 8°C, lesdites compositions selon l’invention, et notamment lesdites compositions pharmaceutiques selon l’invention, ont un titre de bactériophages qui appartient à la gamme allant de 10 9 à 10 10 PFU/mL. Aussi, de manière préférée, les compositions selon l’invention, et notamment les compositions pharmaceutiques selon l’invention, sont stables sur au moins un an à une température appartenant à la gamme de 2 à 8°C, c’est-à-dire qu’elles présentent un titre de bactériophages de la classe des Caudoviricetes qui appartiennent au genre des Silviavirus , et qui ont, notamment, un mophotype myovirus, et qui ont une activité lytique contre au moins une souche de Staphylococcus aureus qui reste supérieur ou égal à 10 8 PFU/mL. En particulier, avant la période de stockage sur au moins un an à une température appartenant à la gamme de 2 à 8°C, lesdites compositions selon l’invention, et notamment lesdites compositions pharmaceutiques selon l’invention, ont un titre de bactériophages de la classe des Caudoviricetes appartenant au genre des Silviavirus , et, qui ont, notamment, un mophotype myovirus, et qui ont une activité lytique contre au moins une souche de Staphylococcus aureus , qui appartient à la gamme allant de 10 9 à 10 10 PFU/mL. En particulier, on n’observe pas une diminution du titre de bactériophages sur la période considérée de plus de un log. On peut noter que dans les compositions selon l’invention, et notamment dans les compositions pharmaceutiques selon l’invention, les bactériophages ne sont ni sous une forme conjuguée, ni sous une forme complexée. Ainsi, les compositions selon l’invention sont simples à préparer. Selon des modes de réalisation avantageux, les compositions selon l’invention, et notamment les compositions pharmaceutiques selon l’invention, comprennent du polysorbate 80, en tant que surfactant non-ionique, à une concentration molaire supérieure à 0,013 mM (équivalent à 0,017 mg/mL, ce qui correspond à la CMC du polysorbate 80) et inférieure ou égale à 1,6 mM (équivalent à 2,0 mg/mL), de préférence dans la gamme allant de 0,16 mM (équivalent à 0,2 mg/mL) à 0,38 mM (équivalent à 0,5 mg/mL), ou du polysorbate 20, à une concentration molaire supérieure à 0,05 mM (équivalent à 0,06 mg/mL, ce qui correspond à la CMC du polysorbate 20) et inférieure ou égale à 1,77 mM (équivalent à 2,0 mg/mL), de préférence dans la gamme allant 0,18 mM (équivalent à 0,2 mg/mL) de à 0,44 mM (équivalent à 0,5 mg/mL). Selon des modes de réalisation avantageux qui peuvent être combinés aux précédents, dans les compositions selon l’invention, et notamment dans les compositions pharmaceutiques selon l’invention, le mélange tampon est un mélange KH 2 PO 4 / Na 2 HPO 4 , typiquement KH 2 PO 4 à une concentration molaire de 1 à 15 mM et Na 2 HPO 4 à une concentration molaire de 3 à 56 mM. Selon des modes de réalisation avantageux, les compositions selon l’invention, et notamment les compositions pharmaceutiques selon l’invention, comprennent seulement du NaCl, en tant que sel neutre, qui est présent à une concentration molaire de 75 à 160 mM, typiquement à une concentration molaire de 150 à 160 mM. Selon des modes de réalisation avantageux, les compositions selon l’invention, et notamment les compositions pharmaceutiques selon l’invention, ne contiennent aucun composé d’origine animale. Aussi, dans ce cas, les polysorbates présents dans la composition seront d’origine synthétique. De manière avantageuse, les compositions selon l’invention, et notamment les compositions pharmaceutiques selon l’invention, sont stériles, apyrogènes et isotoniques ou hypertoniques. Par ailleurs, du fait de la présence du surfactant non-ionique et de l’ajustement de sa concentration, il est possible de moduler l’angle de contact de la composition avec différents types de surface, ce qui présente un intérêt à la fois pour le conditionnement, mais également pour la préparation de la composition selon l’invention, notamment sa stérilisation, qui nécessite une opération de filtration terminale, car cela permet d’élargir le spectre des filtres utilisables. En particulier, les compositions selon l’invention présentent une adsorption aux interfaces gaz-liquide et liquide-matériau classiquement utilisé dans le domaine médical notamment, suffisamment faible pour réduire les phénomènes d’adsorption de surface. Aussi, selon des modes de réalisation avantageux, les compositions selon l’invention, et notamment les compositions pharmaceutiques selon l’invention, sont conditionnées dans un contenant tel qu’un flacon, une poche ou une seringue délimité par des parois qui sont en verre de type I, en verre de type II, polystyrène, polypropylène, polyéthylène, polyéthylène téréphtalate, traitées ou non avec une huile de silicone, notamment fermé avec un bouchon en un matériau de caoutchouc (en particulier, en bromobutyle ou chlorobutyle) perfluoré ou non. En particulier, les compositions selon l’invention, et notamment les compositions pharmaceutiques selon l’invention, présentent une mouillabilité des parois de leur contenant correspondant à un angle de contact de 20 à 60°. Notamment, le contenant est fermé par un bouchon et les compositions selon l’invention, et notamment les compositions pharmaceutiques selon l’invention, présentent une mouillabilité du bouchon fermant leur contenant correspondant à un angle de contact inférieur à 90°. Selon des modes de réalisation particuliers qui peuvent être mis en œuvre quel que soit le mode de réalisation des compositions décrites dans la présente description, dans les compositions selon l’invention, et notamment dans les compositions pharmaceutiques selon l’invention, ladite suspension de bactériophages dans ladite solution aqueuse, ou milieu dispersant, est supplémentée avec une solution visqueuse ou un hydrogel d’éther de cellulose - préférentiellement, d’hydroxypropylméthylcellulose, hydroxypropylcellulose, hydroxyéthylcellulose, de polyéthylène glycol, d’alcool polyvinylique, d’alginate de sodium, de PVA-alginate de sodium, d’acrylate, de méthacrylate, de polyacrylate, d’acide hyaluronique, d’acrylamide, de polyacrylamide (e.g., poly(N-isopropylacrylamide), poly(N-isopropylacrylamide-co-allylamine)), de polyéthylèneglycol-maleimide, oxyde de polyéthylène, de poloxamers, de gomme guar, d’agarose, de gélatine, de collagène, de chitosan, de nanohydroxyapatite, de silicate, ou de silicate d'alumine hydraté. C’est-à-dire que la suspension de bactériophages dans la solution aqueuse sélectionnée selon l’invention est mélangée avec ladite solution visqueuse ou ledit hydrogel. C’est alors le mélange obtenu qui est administré en tant que médicament. Selon des modes de réalisation avantageux, les compositions selon l’invention, et notamment les compositions pharmaceutiques selon l’invention, sont adaptées à une administration entérale, ou adaptées à une administration par injection, notamment par voie parentérale, incluant les administrations intraveineuse, intraartérielle, intramusculaire, sous-cutanée et/ou intra-articulaire. L’invention concerne également les compositions selon l’invention, et notamment les compositions pharmaceutiques selon l’invention, pour leur utilisation en tant que médicament, notamment pour leur utilisation dans le traitement des infections ostéo-articulaires. Par ailleurs, les compositions selon l’invention sont très simples à préparer, utilisent des composants largement disponibles et peu chers et sont compatibles avec différentes applications et notamment, pour leur utilisation en tant que compositions pharmaceutiques. Les excipients utilisés présentent une excellente innocuité et sont compatibles avec différentes voies d’administration, notamment par voie entérale ou parentérale et sont facilement disponibles en tant que matières premières à usage pharmaceutique (MPUP). Leur molarité et osmolalité sont, par ailleurs, adaptées à une administration chez l’être humain ou l’animal, tout en garantissant la stabilité et l’activité des bactériophages présents, ce qui était un réel challenge, dans le contexte actuel. Aussi, l’invention concerne un procédé de préparation d’une composition, et notamment d’une composition pharmaceutique, selon l’invention, comprenant l’introduction dans une solution aqueuse comprenant, voire constituée de : - au moins un surfactant non ionique, et en particulier un seul surfactant non-ionique, choisi parmi la famille des polysorbates, à une concentration molaire supérieure à sa concentration micellaire critique, mais n’excédant pas 2 mg/mL (ce qui correspond à 0,2 % (m/v)), - un ou plusieurs sels neutres formés d’une paire d’ions monovalents, dont la concentration molaire totale est dans la gamme allant de 75 à 160 mM, - un mélange tampon conférant à la composition un pH de 6,0 à 7,9, et préférentiellement de 7,0 à 7,5, typiquement choisi parmi les couples ion hydrogénophosphate/ion dihydrogénophosphate, acide citrique/ion citrate et acide citrique/ion hydrogénophosphate, la molarité du mélange tampon étant dans la gamme allant de 4 mM à 100 mM, - de l’eau, - de bactériophages purifiés en quantité nécessaire pour obtenir au final dans la composition un titre d’au moins 10 8 PFU/mL, et typiquement de 10 8 à 10 10 PFU/mL en bactériophages, et notamment de 10 9 à 10 10 PFU/mL en bactériophages. Du fait de la purification des bactériophages, ladite suspension de bactériophages en solution aqueuse obtenue et donc la composition qui la comprend ou qui est constituée de ladite suspension de bactériophages en solution aqueuse, comprend moins de 0,9 unités d’endotoxines bactériennes (UE) par mL et une concentration en protéines totales de moins de 0,09 mg/mL. Par ailleurs, ladite solution aqueuse et donc ladite suspension de bactériophages dans ladite solution aqueuse, présente une osmolalité comprise entre 150 mOsm/kg à 600 mOsm/kg. En effet, la présence des bactériophages n’a pas d’influence sur l’osmolalité obtenue. En particulier, dans le procédé de préparation selon l’invention, postérieurement à l’introduction des bactériophages dans la solution aqueuse, ou milieu dispersant, la suspension obtenue est stérilisée avec mise en œuvre d’une opération de filtration terminale, par passage sur un filtre en polyethersulfone, polystyrène, poly(styrène-butadiène) ou polyfluorure de vinylidène. Selon un autre de ses aspects, l’invention concerne l’utilisation d’une solution aqueuse ou milieu dispersant comprenant, voire constituée de : - au moins un surfactant non ionique, et en particulier un seul surfactant non-ionique, choisi parmi la famille des polysorbates, à une concentration molaire supérieure à sa concentration micellaire critique, mais n’excédant pas 2 mg/mL (ou 0,2 % (m/v)), - un ou plusieurs sels neutres formés d’une paire d’ions monovalents, dont la concentration molaire totale est dans la gamme allant de 75 à 160 mM, - un mélange tampon conférant à la composition un pH de 6,0 à 7,9, et préférentiellement de 7,0 à 7,5, typiquement choisi parmi les couples ion hydrogénophosphate /ion dihydrogénophosphate, acide citrique/ion citrate et acide citrique/ion hydrogénophosphate, la molarité du mélange tampon étant dans la gamme allant de 4 mM à 100 mM, - de l’eau, pour améliorer la stabilité au stockage à une température appartenant à la gamme de 2 à 8°C, de bactériophages de la classe des Caudoviricetes ayant une activité lytique contre au moins une souche de bactéries Gram positive, lesdits bactériophages étant placés en suspension dans ladite solution aqueuse à un titre d’au moins 10 8 PFU/mL, et typiquement de 10 8 à 10 10 PFU/mL en bactériophages, et notamment de 10 9 à 10 10 PFU/mL et ladite composition comprenant moins de 0,9 unités d’endotoxines bactériennes (UE) par mL, une concentration en protéines totales de moins de 0,09 mg/mL et ladite suspension de bactériophages dans ladite solution aqueuse présentant une osmolalité comprise entre 150 mOsm/kg à 600 mOsm/kg. En particulier, selon cette utilisation, la stabilité obtenue correspond à un titre de bactériophages qui reste supérieur ou égal à 10 8 PFU/mL, après stockage de la composition à une température appartenant à la gamme de 2 à 8°C, sur au moins un an. Dans les procédés et utilisations selon l’invention, la solution aqueuse sélectionnée est utilisée en tant que milieu dispersant des bactériophages. Toutes les caractéristiques décrites dans la présente description, en lien avec les compositions selon l’invention, s’appliquent aux procédés de préparation et aux utilisations selon l’invention. La description plus détaillée qui va suivre en référence aux Figures annexées et aux exemples donnés à titre purement illustratifs permet de mieux comprendre l’invention. Les compositions selon l’invention comprennent un certain nombre de caractéristiques et composants qui vont être décrits de manière plus détaillée. D’une manière générale, lorsqu’il n’en est pas spécifié autrement, les termes utilisés dans la présente invention ont la signification classiquement reconnue par l’homme du métier, et notamment sont tels que définis par la pharmacopée européenne. Lorsqu’il est fait référence à la pharmacopée européenne (Ph. Eur.), il s’agit de la version applicable au 1er janvier 2024. L’osmolalité est déterminée selon la Ph. Eur. 2.2.35. L’osmolalité en mOsm/kg est mesurée par l’abaissement cryoscopique avec un osmomètre cryoscopique. Le pH est déterminé selon la Ph. Eur. 2.2.3. La stérilité est déterminée selon la Ph. Eur. 2.6.1. La CMC est déterminée par la modification brutale (coude) de la courbe de la tension superficielle (en mN/m) en fonction du log de la concentration en tensioactif dans l’eau. La tension superficielle peut utilement être mesurée par un tensiomètre, par exemple à anneau. La concentration en endotoxines bactériennes présentes, exprimée en unité d’endotoxines (UE) par mL, est déterminée selon la Ph. Eur. 2.6.14. La concentration en protéines totales présentes dans la composition est déterminée selon la méthode de Bradford (méthode 3 de la Ph. Eur 01/2008 : 20533 sur le dosage des protéines totales). Par protéine, on entend une macromolécule formée de une ou plusieurs chaines polypeptidiques, lesdites chaines polypeptidiques correspondant à un enchainement de plus de 20 acides aminés liés entre eux par des liaisons peptidiques. La force ionique est calculée par la formule suivante : avec c i la concentration molaire de l’espèce ionique i, et z i la charge de l’ion considéré. Les charges z i des ions considérés sont les suivantes : Na + =1 ; Cl - =-1 ; K + =1 ; H 2 PO 4 - =-1 ; HPO 4 2- =-2. En particulier, les méthodes plus détaillées décrites dans les exemples pourront être utilisées. Bactériophages Les bactériophages de la classe Caudoviricetes sont des phages présentant une structure tête-queue (Zhu et al. 2022) qui peuvent présenter une activité lytique contre des bactéries. Par activité lytique contre une souche de bactéries, on entend que les bactériophages entrainent la lyse d’au moins une partie des dites bactéries de ladite souche. L’activité lytique à l’encontre des bactéries cibles peut être évaluée selon toute technique connue de l’homme du métier, notamment in vitro par le dénombrement des plages de lyse lors des titrations des bactériophages sur un tapis d’au moins une souche bactérienne ciblée par le phage. La titration peut être réalisée par exemple par spot-test. Dans le cadre de l’invention, les bactériophages de la classe Caudoviricetes qui présentent une activité lytique contre au moins une souche de bactéries Gram positive, et en particulier contre au moins une souche de bactéries Staphylococcus aureus sont particulièrement avantageux et appartiennent majoritairement à la famille Herelleviridae , à la sous-famille Twortvirinae et au genre Silviavirus (ICTV 2023). En particulier, des phages présentant une activité lytique contre différentes souches de bactéries Gram positive, et en particulier contre au moins une souche de bactéries Staphylococcus aureus seront privilégiés. Un phage à queue se compose d'une tête contenant son génome viral (dans le cadre de l’invention, il s’agit souvent d’une capside icosaédrique contenant de l’ADN double brin), ainsi que d'une queue qui joue un rôle crucial dans la reconnaissance et l'infection des bactéries cibles. La queue est composée de protéines spécifiques qui interagissent de manière sélective avec les récepteurs présents à la surface des bactéries, permettant ainsi au phage de s'attacher et de pénétrer efficacement dans les cellules bactériennes. Une fois à l'intérieur de la bactérie, le phage à queue libère son matériel génétique, amorçant ainsi le processus de réplication virale et conduisant finalement à la lyse de la bactérie hôte. Les bactériophages, et en particulier ceux de la classe Caudoviricetes (Turner, Kropinski, and Adriaenssens 2021), et notamment du genre Silviavirus , présentant les morphotypes suivants peuvent être utilisés dans le cadre de l’invention (Harada et al. 2018): - Myovirus : Les myovirus ont une queue contractile. - Siphovirus : Les siphovirus ont une queue longue et non contractile. - Podovirus : Les podovirus ont une queue courte et non contractile. A titre d’exemple de bactériophages pouvant être utilisés dans le cadre de l’invention, on peut citer : - Des bactériophages dirigés contre Staphylococcus aureus , correspondant, par exemple, à PP1493 et PP1815 (https://www.hygienes.net/actualite/focus/lansm-autorise-un-acces-compassionnel-pour-des-bacteriophages-dans-les-infections-osteo-articulaires), à l’un des bactériophages listés dans les documents suivants : Plumet et al. 2022, Malik et al. 2017, WO 2018/162566, ou à l’un de ceux utilisés dans les exemples qui vont suivre, à savoir vB_SauM-V1SA19 et vB_SauM-V1SA20 déposés dans GenBank sous les numéros ON814134.1 (https://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/ON814134) et ON814135.1 (https://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/ON814135). Ces deux derniers bactériophages ont également fait l’objet d’une publication présentant des images en TEM et des comparaisons de leurs génomes, notamment (C. Kolenda, 2022). Tout autre bactériophage ayant une activité lytique contre au moins une souche de Staphylococcus aureus peut être utilisé. - Des bactériophages dirigés contre Streptococcus pneumoniae, correspondant, par exemple au phage Dp-1 (siphovirus, Taxonomy ID: 59241), Bactériophage SOCP (podovirus, Taxonomy ID: 1498213) listés dans le document suivant : (Qadir and Sajjad 2017). - Des bactériophages dirigés contre Enterococcus faecalis , correspondant, par exemple, à Ben (myovirus), Bill (myovirus), Carl (myovirus), CCS1 (myovirus), CCS2 (siphovirus), SDS1 (siphovirus) et UMP (podovirus) listés dans le document suivant : (Wandro et al. 2022). - Des bactériophages dirigés contre Cutibacterium acnes , correspondant, par exemple, au phage Y3Z (siphovirus), déposé dans GenBank sous le numéro OQ411034 (https://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/OQ411034) (Xuan et al. 2023), ou au phage PA6 (siphovirus) déposé dans GenBank sous le numéro DQ431235 (https://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/DQ431235). Les compositions selon l’invention peuvent contenir un seul type de bactériophages ou bien une combinaison de différents types de bactériophages, et en particulier une combinaison de différents types de bactériophages de la classe Caudoviricetes, notamment du genre Silviavirus, et ayant, notamment, un morphotype myovirus, qui présentent une activité lytique contre au moins une souche de bactéries Staphylococcus aureus . L’utilisation d’une combinaison de différents types de bactériophages peut être choisie pour augmenter le spectre d’action conduisant à la lyse d’un plus grand nombre de bactéries cibles, des compositions selon l’invention. Dans les compositions selon l’invention, les bactériophages en suspensions ont été purifiées, après culture in vitro et isolation de leur milieu naturel. La culture in vitro peut se faire selon toute technique classique, notamment décrite dans les publications précitées, sur des cellules hôtes correspondant à l’une des bactéries contre laquelle l’activité lytique est recherchée. L’obtention de suspensions de bactériophages purifiées peut se faire selon les méthodes décrites dans la littérature qui utilisent des étapes de filtration et/ou centrifugations et notamment décrites dans Kolenda et al. 2022. En particulier, les bactériophages sont prélevés de l’environnement (e.g., en amont de centrales de traitement des eaux, d’effluents d’élevages bovins) ou sont issus de souches cliniques. Les bactériophages dits lytiques sont ensuite isolés par piquage successif de plages de lyses isolées sur des géloses bactériennes puis caractérisés génétiquement ; les bactériophages sont entrainés si besoin afin d’augmenter leur activité, leur spectre, leur affinité, etc. (e.g., protocole d’Appelmans ou autre technique favorisant les évènements de recombinaisons) (Burrowes, Molineux, and Fralick 2019); produits sur une souche bactérienne de l’espèce contre laquelle ils sont dirigés, exempte de prophages, de facteurs de résistance, de virulence majeurs ; purifiés par ultracentrifugation avec un gradient de chlorure de césium (densités de 1,6, 1,5 et 1,3) à la suite de laquelle ils sont collectés entre les anneaux correspondant aux densités de 1,6 et 1,5 puis ils sont dialysés plusieurs fois dans un tampon du type PBS (de l’anglais « phosphate-buffered saline »), enfin une étape de polissage permet de les resuspendre dans la solution aqueuse (utilisée en tant que milieu dispersant des bactériophages) sélectionnée pour former la composition selon l’invention. Après une telle étape de purification, les concentrations d’endotoxines bactériennes et de protéines bactériennes résiduelles sont considérablement réduites. Ainsi, il est possible d’obtenir des compositions qui comprennent de tels bactériophages purifiés en tant que principe actif à visée thérapeutique qui ont une concentration d’endotoxines bactériennes qui correspond à moins de 0,9 UE/mL par composition. De manière avantageuse, dans les compositions selon l’invention, la concentration en protéines totales est inférieure à 0,09 mg/mL, ce qui correspond quasi exclusivement aux protéines constitutives des bactériophages. Les compositions selon l’invention comprennent ou sont constituées d’une suspension de bactériophages de la classe Caudoviricetes dans une solution aqueuse (utilisée en tant que milieu dispersant des bactériophages) définie dans le cadre de l’invention. Cette solution aqueuse est composée d’eau, d’au moins un surfactant non ionique, d’au moins un sel neutre constitué d’ions monovalents et d’un mélange tampon, sur lesquels plus de détails sont donnés ci-après. Surfactants non ioniques Les compositions selon l’invention comprennent un ou plusieurs surfactants non-ioniques choisis parmi les polysorbates, ledit surfactant non-ionique étant présent à une concentration supérieure à sa concentration micellaire critique (CMC). Sa présence contribue à limiter l’impact des phénomènes de cavitation, de ventilation et les phénomènes d’agrégation bactériophages-bactériophages. De manière connue, les polysorbates sont des esters d'acides gras et de polyoxyéthylène sorbitane. En plus d’assurer la stabilité de la composition et le maintien de l’activité des bactériophages, en combinaison avec les autres composants présents, le ou les polysorbates présents permettent d’ajuster la mouillabilité de la composition, et les angles de contact composition/air et composition/parois des contenants ou bouchons. Aussi, de manière additionnelle, le ou les polysorbates présents permettent également de limiter les phénomènes d’agrégation aux interfaces gaz-liquide et liquide-solide. Le surfactant non-ionique du type polysorbate à la concentration choisie, est compatible avec une administration chez l’être humain ou l’animal, et en particulier, par injection, notamment avec une administration parentérale. De manière avantageuse, la quantité de polysorbate, et en particulier la quantité de polysorbate 80, est choisie pour assurer une mouillabilité des matériaux de conditionnement (contenant et bouchon lorsqu’un bouchon est présent) de la composition selon l’invention correspondant à un angle de contact matériau/composition de 20° à 60° pour les parois des contenants et à un angle de contact inférieur ou égal à 90° pour les bouchons. Les polysorbates sont des esters d'acides gras et de polyoxyéthylène sorbitane. Dans le cadre de l’invention, du polysorbate 80 (PS80 ou Tween ® 80) ou du polysorbate 20 (PS20 ou Tween ® 20) sera de préférence utilisé. Les nombres 20, 40, 60 et 80 qui suivent le terme "polysorbate" correspondent au principal type d'acide gras associé au résidu polyoxyéthylène sorbitane de la molécule, c'est-à-dire que le monolaurate est indiqué par 20, le monopalmitate par 40, le monostéarate par 60 et le monooléate par 80. Sels neutres La composition selon l’invention comprend un ou plusieurs sels neutres formés d’ions monovalents. A titre d’exemple typique de sel neutre, on peut citer NaCl et KCl. La concentration molaire totale en sel neutre est de 75 à 160 mM. Si un seul sel neutre formé d’ions monovalents et en particulier du NaCl est présent dans la composition selon l’invention, sa concentration dans la composition est de 75 à 160 mM. Si plusieurs sels neutres formés d’ions monovalents sont présents (typiquement NaCl et KCl) dans la composition selon l’invention, leur concentration totale dans la composition est de 75 à 160 mM. De manière avantageuse, la composition selon l’invention comprend en tant que sel neutre formé d’ions monovalents seulement NaCl. Mélange tampon La composition selon l’invention a un pH de 6,0 à 7,9, et préférentiellement de 7,0 à 7,5. Ce pH est ajusté et maintenu stable grâce à la présence d’un mélange tampon. Le mélange tampon peut être constitué d’une base faible et de son acide conjugué, voire d’un acide autre que l’acide conjugué, ou encore être constitué d’un acide faible et de sa base conjuguée, voire d’une base autre que sa base conjuguée. A titre d’exemple de mélange tampon pouvant être utilisé dans les compositions selon l’invention, on peut citer les couples ion hydrogénophosphate/ion dihydrogénophosphate, acide citrique/ion citrate et acide citrique/ion hydrogénophosphate. La molarité du mélange tampon (c’est-à-dire la somme des molarités de la base et de l’acide constituant le mélange tampon) est dans la gamme allant de 4 mM à 100 mM. Le mélange tampon présente, de préférence, une capacité tampon dans la gamme allant de 8 mM/ΔpH à 30 mM/ΔpH. Le mélange tampon est, avantageusement un mélange KH 2 PO 4 / Na 2 HPO 4 , typiquement KH 2 PO 4 à une concertation molaire de 1 à 15 mM et Na 2 HPO 4 à une concentration molaire de 3 à 56 mM. Avec de telles concentrations, la molarité du mélange tampon est dans la gamme allant de 4 à 71 mM. Il est possible d’ajuster la molarité du mélange tampon en fonction du mode d’administration souhaitée. Plus spécifiquement, la molarité du mélange tampon pourra être choisie pour permettre une administration intraveineuse et intramusculaire : dans ce cas, elle sera inférieure ou égale à 25 mM. Dans la cadre de l’invention, l’eau utilisée est de l’eau adaptée pour un usage pharmaceutique, notamment de l’eau pour préparation injectable, en particulier définie dans la Ph. Eur. Conditionnement La composition selon l’invention peut être conditionnée dans tout contenant adapté, notamment sous la forme d’un flacon, poche ou une seringue, délimité par une ou plusieurs parois en contact de la composition qui sera avantageusement en verre de type I (couramment utilisé dans le domaine médical et qui présente, généralement, un angle de contact avec l’eau de 40°), en verre du type II, en polystyrène (qui présente, généralement, un angle de contact avec l’eau de 68°), en polypropylène (qui présente, généralement, un angle de contact avec l’eau de 102°), en polyéthylène (qui présente, généralement, un angle de contact avec l’eau de 96°), en polyéthylène téréphtalate (qui présente, généralement, un angle de contact avec l’eau de 64°), les parois pouvant ou non être enduites d’une huile de silicone (qui lorsqu’elle est présente conduit à un angle de contact avec l’eau >> 90°). En particulier, pour le conditionnement des compositions selon l’invention, les contenants en verre de type I ou II sont préférés. Les verres de type I et II sont, notamment, définis dans la Ph. Eur. 3.2.1. Préférentiellement, la composition présente une mouillabilité des matériaux de conditionnement qui correspond à un angle de contact matériau/milieu liquide de 20° à 60° avec les parois des contenants, et inférieur ou égal à 90° avec un bouchon pouvant fermer ledit contenant. A titre d’exemple de matériau pouvant constituer le bouchon, on peut citer les silicones, le polypropylène, le polyéthylène haute densité, les caoutchoucs, notamment le chlorobutyle ou le bromobutyle perfluoré, etc. Avec une telle mouillabilité notamment, les compositions selon l’invention peuvent être filtrées, notamment lors d’opération de stérilisation, à travers un filtre en polyéthersulfone (qui présente, généralement, un angle de contact avec l’eau de 60°), en polystyrène (qui présente, généralement, un angle de contact avec l’eau de 68°), en poly(styrène-butadiène) (qui présente, généralement, un angle de contact avec l’eau de 69°). Préférentiellement, la composition assure une mouillabilité des matériaux de filtration telle que les angles de contact matériau de filtration /milieu liquide sont inférieurs à 60°. Ceci rend possible l’utilisation de filtres en polyfluorure de vinylidène (angle de contact avec l’eau de 145°- 89°). Autres détails sur les compositions, et notamment les compositions pharmaceutiques selon l’invention et leurs utilisations médicales La composition selon l’invention peut directement être en tant que telle une composition pharmaceutique administrable à l’être humain ou à l’animal. Une composition pharmaceutique administrable à l’être humain ou à l’animal peut donc être constituée de la suspension de bactériophages de la classe Caudoviricetes dans la solution aqueuse (utilisée en tant que milieu dispersant des bactériophages) définie dans le cadre de l’invention. Elle peut être adaptée à une administration entérale et topique (e.g., cutanée, mucosale, buccale, ophtalmique) ou encore à une administration par injection, par voie parentérale, incluant les administrations intraveineuse, intraartérielle, intramusculaire, sous-cutanée et/ou intra-articulaire. En fonction du mode d’administration auquel une composition pharmaceutique selon l’invention est destinée, selon d’autres modes de réalisation, cette dernière pourra également comprendre un ou plusieurs composants, et notamment un ou plusieurs excipients pharmaceutiquement acceptables, la rendant adaptée au mode d’administration envisagé. Dans un tel cas, la composition pharmaceutique administrable à l’être humain ou à l’animal comprend une composition selon l’invention constituée de la suspension de bactériophages de la classe Caudoviricetes dans la solution aqueuse (utilisée en tant que ou milieu dispersant des bactériophages) définie dans le cadre de l’invention, en mélange avec un ou plusieurs autres excipients pharmaceutiquement acceptables ou un ou plusieurs autres principes actifs. Les compositions pharmaceutiques selon l’invention sont destinées au traitement d’affection liées à la présence de bactéries Gram positive, et notamment du type Staphyloccocus aureus . Elles seront administrées à un sujet, qui peut être un être humain ou un animal, en quantité efficace. Une quantité « efficace » dans le cadre d’un traitement fait référence à un traitement qui entraîne une diminution du nombre de bactéries Gram positive, et notamment du type Staphyloccocus aureus chez un sujet après ledit traitement par rapport au nombre de bactéries Gram positive, et notamment du type Staphylococcus aureus avant ledit traitement. Dans le cas d’une composition pharmaceutique adaptée à une administration entérale et topique (e.g., cutanée, mucosale, buccale, ophtalmique), préférentiellement, une composition pharmaceutique comprend une composition selon l’invention constituée d’une suspension de bactériophages de la classe Caudoviricetes dans la solution aqueuse (ou milieu dispersant) définie dans le cadre de l’invention, en mélange avec une solution visqueuse ou un hydrogel d’éther de cellulose – préférentiellement, d’hydroxypropylméthylcellulose, hydroxypropylcellulose, hydroxyéthylcellulose, de polyéthylène glycol, d’alcool polyvinylique (PVA), d’alginate de sodium, de PVA-alginate de sodium, d’acrylate, de méthacrylate, de polyacrylate, d’acide hyaluronique, d’acrylamide, de polyacrylamide (e.g., poly(N-isopropylacrylamide), poly(N-isopropylacrylamide-co-allylamine)), de polyéthylèneglycol-maleimide, oxyde de polyéthylène, de poloxamers, de gomme guar, d’agarose, de gélatine, de collagène, de chitosan, de nanohydroxyapatite, de silicate, de silicate d'alumine hydraté. Une composition pharmaceutique administrable à l’être humain ou à l’animal peut comprendre une composition selon l’invention constituée de la suspension de bactériophages de la classe Caudoviricetes dans la solution aqueuse (utilisée en tant que milieu dispersant des bactériophages) définie dans le cadre de l’invention, en mélange avec un agent antibactérien présentant une synergie et/ou une complémentarité d’action permettant d’améliorer, d’augmenter, de renforcer et/ou d’élargir l’activité antibactérienne de la composition. Par exemple, dans la cadre de suspensions de bactériophages dirigés contre Staphylococcus aureus , les composés pouvant potentialiser l’effet antibactérien des bactériophages, peuvent être choisis dans le groupe des pénicillines M (oxacilline, cloxacilline, flucloxacilline), des pénicillines A (amoxicilline/acide clavulanique), les synergistines (pristinamycine), l’acide fusidique, la mupirocine, la céfazoline, la gentamicine, les macrolides, les lincosamines, le triméthoprime-sulfaméthoxazole, la rifampicine, les glycopeptides (vancomycine), la ceftaroline ou le linézolide. En fonction de l’application visée, la composition selon l’invention pourra présenter un effet bactéricide ou un effet bactériostatique et pourra être choisi en fonction de l’affection. A titre d’exemple, une composition de bactériophages de la classe Caudoviricetes selon l’invention est une composition pharmaceutique, notamment adaptée pour une administration entérale ou encore une composition pharmaceutique injectable pour une administration parentérale et, en particulier destinée au traitement d’une infection ostéo-articulaire, d’une septicémie ou d’une infection chez une personne diabétique. Les compositions pharmaceutiques selon l’invention sont en particulier destinées et adaptées à un usage chez l’être humain. Toutes les caractéristiques préférées décrites dans la présente description s’appliquent aux compositions pharmaceutiques, utilisations médicales et méthodes de traitement décrites dans la présente description. Les compositions selon l’invention peuvent être utilisées pour la fabrication d’un médicament, notamment pour la fabrication d’un médicament pour le traitement d’une infection ostéo-articulaire, d’une septicémie ou d’une infection chez une personne diabétique, d’un médicament ayant un effet bactéricide ou bactériostatique contre Staphylococcus aureus . Les méthodes de traitement comprenant l’administration chez l’homme ou l’animal d’une quantité efficace d’une composition selon l’invention, pour le traitement d’une infection ostéo-articulaire, d’une septicémie ou d’une infection chez une personne diabétique, ou pour l’obtention d’un effet bactéricide ou bactériostatique contre Staphylococcus aureus , font également partie de la présente invention. Exemples Les exemples ci-après, en référence aux Figures annexées, sont donnés à titre d’illustration seulement. La FIG. 1 présente les spectres UV-visible d’une suspension de bactériophages utilisée dans les exemples au cours des étapes de purification. Le spectre UV-visible d’une suspension de phages obtenue après l’étape d’ultrafiltration (« post-polissage ») formulée dans le milieu F4 (KH 2 PO 4 : 1,06 mM ; Na 2 HPO 4 : 2,97 mM ; NaCl : 155,17 mM), montre deux longueurs d’onde caractéristiques (256 nm et 244 nm) correspondant aux absorbances du complexe protéine-acide nucléique des phages. La FIG. 1 présente les spectres UV-visible d’une suspension de bactériophages obtenus après dilutions successives dans le milieu F4 (KH 2 PO 4 : 1,06 mM, Na 2 HPO 4 : 2,97 mM, NaCl : 154 mM, titre initial : 26,7 x 10 8 PFU/mL). La FIG. 1 présente la courbe de l’absorbance (256 nm) d’une suspension de bactériophage formulée dans le milieu F4 (KH 2 PO 4 : 1,06 mM ; Na 2 HPO 4 : 2,97 mM ; NaCl : 155,17 mM) en fonction du titre bactériophagique (absorbance vs PFU/mL). Les limites de détection et de quantification (i.e., 3 x écart-type blanc /pente et 9 x écart-type blanc /pente) étaient respectivement de 1,6 x 10 8 PFU/mL et 4,7 x 10 8 PFU/mL. L’impact de la filtration utilisée pour la stérilisation terminale sur le titre bactériophagique est d’environ 10% (variation non significative ). La FIG. 2 présente la caractérisation de la mouillabilité des (A) bouchons (1. BIIR : bromobutyle perfluoré ; 2. CIIR : chlorobutyle), des flacons (B) en verre de type I, (C) en polystyrène, (D) en polyéthylène téréphtalate, (E) des filtres en poly(styrène-butadiène) fonction de la concentration en PS80 (%). La mouillabilité des matériaux est déterminée à partir de la moyenne de 3 (†) ou 4 (‡) mesures d’angles de contact solution/matériau. Les barres d’erreur présentent l’écart-type de ces mesures. La composition en mélange tampon et en sels neutres de la F1 est de KH 2 PO 4 : 14,78 mM, Na 2 HPO 4 : 56,38 mM, NaCl : 154 mM. La composition en mélange tampon et en sels neutres de la formulation F4 est de KH 2 PO 4 : 1,06 mM, Na 2 HPO 4 : 2,97 mM, NaCl : 154 mM. Les variations d’angle de contact entre les suspensions supplémentées ou non en PS80 sont comparées par un test de Student-t : NS : non significatif. * p La FIG. 3 présente l’évolution de l’indice d’agrégation (AI) en fonction du pH de la suspension de bactériophages F4 (KH 2 PO 4 : 1,06 mM, Na 2 HPO 4 : 2,97 mM, NaCl : 154 mM). Une forte agrégation des bactériophages est observée pour un pH ≤ 4. Chaque valeur correspond à une détermination expérimentale. Avec AI > 30 : forte agrégation ; AI La FIG. 4 présente (A) l’évolution du titre bactériophagique (titre initial : 10 9 PFU/mL) de la formulation F1-PS80 (KH 2 PO 4 : 14,78 mM ; Na 2 HPO 4 : 56,38 mM ; NaCl : 154 mM ; PS80 : 0,05 % (correspondant à 0,38 mM)) conditionnée dans des flacons en verre de type I (5 mL rempli à 3 mL ; espace de tête : 40%) stockée en conditions « shelf-life » (i.e., 4°C et 25°C). (B) détail de l’évolution à 5°C et (C) détail de l’évolution à 25°C. Chaque valeur est la moyenne ± écart-type de trois déterminations expérimentales. La ligne représente le seuil au-dessous duquel la suspension ne répond plus au critère de stabilité (titre 8 PFU/mL). Analyse de variance sur l’ensemble des groupes puis comparaisons multiples par Post Hoc tests (Tukey HSD): NS : non significatif. * p La FIG. 5 présente (A) l’évolution du titre (titre initial : 10 9 PFU/mL) d’une suspension de bactériophages du morphotype myovirus, formulée dans F4 (KH 2 PO 4 : 1,06 mM, Na 2 HPO 4 : 2,97 mM, NaCl : 154 mM), après 21 jours d’agitation horizontale (25 Hz) dans des flacons en polystyrène (15 mL rempli à 10,6 mL ; espace de tête : 30%) en fonction de la concentration en PS80. Chaque valeur est la moyenne ± écart-type de deux déterminations expérimentales. (B) l’analyse de variance sur l’ensemble des groupes puis comparaisons multiples par Post Hoc tests (Tukey HSD ou Bonferroni) : NS : non significatif. * p La FIG. 6 présente l’évolution du titre (titre initial >10 9 PFU/mL) d’un lysat phagique (non purifié ; barres hachurées) et d’une suspension purifiée (barres blanches) dans la formulation F4 sans PS80 (KH 2 PO 4 : 1,06 mM, Na 2 HPO 4 : 2,97 mM, NaCl : 154 mM), conditionnées dans des flacons en polystyrène (15 mL remplis à 5 mL ; espace de tête de 67%) soumis pendant 28 jours à une agitation rotative (0,7 Hz). Chaque valeur correspond à la moyenne ± écart-type de 3 déterminations expérimentales. Analyse de variance sur l’ensemble des groupes puis comparaisons multiples par Post Hoc tests (Tukey HSD) NS : non significatif. * p LISTE DES MATIERES PREMIERES, MATERIELS ET EQUIPEMENTS UTILISES DANS LES EXEMPLES Les excipients utilisés sont les suivants : chlorure de sodium (NaCl) FRESENIUS 0,9 % (Fresenius Kabi, Sevres, France) ; eau pour préparations injectables Lavoisier (Laboratoires Chaix et du Marais, Gailletrous, France) ; PBS (de l’anglais « phosphate-buffered saline ») 1X à pH 7,4 (GibcoTM, Life Technologies Corporation, Grand Island, NY, USA et Life TechnologiesTM, Paisley, Angleterre) ; phosphate de potassium monobasique KH 2 PO 4 , CAS : 7778-77-0 (ReagentPlus®, Sigma-Aldrich®, Saint Louis, MO, USA) ; sodium phosphate dibasique anhydre Na 2 HPO 4 , CAS : 7558-79-4 (CARLO ERBA Reagents S.A.S., Val de Reuil, France) ; Tween® 80 (polysorbate 80 ou PS80) (EMPROVE® ESSENTIAL, Merck KGaA, Darmstadt, Allemagne) ; Tween® 20 (polysorbate 20 ou PS20) (BioXtra, Merck KGaA, Darmstadt, Allemagne). Une solution d’acide chlorydrique HCl 1 M a été réalisée en extemporanée pour forcer l’agrégation des bactériophages en pH acide (cf. FIG. 3 ) : 10,8 g HCl R (CARLO ERBA Reagents S.A.S., Val de Reuil, France) dilué dans de l’eau déminéralisée, quantité suffisante pour (qsp.) 100 mL. Elle a été utilisée pour modifier le pH de la solution, en lien avec les résultats présentés FIG. 3 . Les conditionnements utilisés sont listés ci-dessous : flacons en verre blanc de type I de 5 mL (SGD Pharma, Puteaux, France) ; bouchons en chlorobutyle, bromobutyle tefloné et en silicone (Gravis Trelazé, Trélazé, France) ; bouchons en bromobutyle recouvert d’un polymère fluoré Raydylyo® (ARaymond® Life SASU, St Egreve, France) ; tubes à centrifuger coniques en polystyrène 15 mL avec bouchon en polypropylène (Corning TM Falcon TM , Fischer Scientific SAS, Illkirch, France). CARACTERISTIQUES GÉNÉTIQUES DES BACTERIOPHAGES UTILISES DE MORPHOTYPE MYOVIRUS vB_SauM-V1SA19 - de morphotype myovirus (Kolenda et al. 2022) utilisé dans tous les exemples qui vont suivre : Lignée : Viruses; Duplodnaviria; Heunggongvirae; Uroviricota; Caudoviricetes ; Herelleviridae; Twortvirinae; Silviavirus ; unclassified Silviavirus Taxonomie ID: 2972385 GenBank génome partiel : ON814134.1 245 protéines ; taille du génome l 138 507 pb. MATERIELS ET METHODES : OBTENTION DE SUSPENSIONS DE BACTERIOPHAGES PURIFIEES : Les bactériophages ont été isolés comme décrit dans (Kolenda et al. 2022). La souche de S. aureus P2SA225 (complexe clonal CC6 ; sensible à la méthicilline ; isolée d’un prélèvement nasal obtenu lors de l’étude clinique ERS1242607) a été incubée pendant 2 heures à 37 °C et sous agitation à 180 rotations par minutes (rpm) dans 1 L de milieu de culture Superior Broth TM (Athena Enzyme Systems TM , Baltimore, MD, USA) contenu dans une flasque de culture Frenbach de 2,5 L (Avantor TM VWR TM , Radnor, PA, USA). Le bactériophage vB_SauM-V1SA19 a été ajouté de manière à atteindre une MOI (de l’anglais « multiplicity of infection ») de 10 -2 puis le tout a été incubé environ 3 heures (Kolenda et al. 2022). La quantité d’ADN double brin contenue dans le Fernbach a ensuite été dosée à l’aide d’un Fluoromètre Quantus™ (Promega, Madison, WI, USA) avec le kit Quantifluor® dsDNA System (Promega, Madison, WI, USA). Pour chaque µg d’ADN a été ajouté au Fernbach (i) 1 unité d’enzyme de Benzonase® Nucléase (Sigma-Aldrich Chimie S.a.r.l., Saint-Quentin de Fallavier, France) et (ii) 2 mL de MgCl 2 à 1 M (Invitrogen TM , ThermoFischer Scientific Baltic UAB, Vilnius, Lituanie), soit une quantité suffisante pour atteindre une concentration dans le Fernbach de 2 mM. Le tout a été incubé 1 heure à 37°C, sous agitation à 180 rpm. La production a été récoltée et filtrée sur une cartouche de filtration progressive (0,8 µm – 0,22 µm) Polycap TC 150 (Cytiva, Buckinghamshire, Angleterre) et conditionnée en poche de 1 L en uLDPE FlexFilm ® (Avantor TM , VWR TM , Radnor, PA, USA). Le produit ainsi obtenu est nommé lysat phagique. La concentration en endotoxines bactériennes de ce lysat phagique était typiquement comprise entre 1 et 50 EU/mL, en fonction du lot de production. La concentration en protéines totales de ce lysat phagique était typiquement supérieure à 0,2 mg/mL. La production a ensuite été purifiée par ultracentrifugation (Boulanger 2009). Dans un tube ultra clair à paroi fine (Beckman Coulter France S.A.S, Villepinte, France) ont été versés 9 mL de (i) solution de chlorure de césium (ClCs) (Sigma-Aldrich Chimie S.a.r.l., Saint-Quentin de Fallavier, France) à 1,6 g/L dans du NaCl FRESENIUS 0,9 % (Fresenius Kabi, Sevres, France) ; (ii) solution de ClCs à 1,5 g/L ; (iii) solution de ClCs à 1,3 g/L ; (iv) de suspension de bactériophage à purifier. Le tube a été ultracentrifugé à 120 000 g (SW32Ti rotor, Beckman, Brea, CA, USA) pendant 2 heures à 4°C. Les bactériophages purifiés ont ensuite été récoltés entre les anneaux de masse volumique 1,5 et 1,6 g/L avant d’être dialysé (10K MWCO cassettes, Serva Electrophoresis GmbH, Heidelberg, Allemagne) deux fois dans 3 L de tampon PBS 1X à pH 7,4 (Gibco TM , Life Technologies Corporation, Grand Island, NY, USA et Life Technologies TM , Paisley, Angleterre). Après purification, les quantités d’endotoxines et de protéines totales ont été évaluées. La concentration en endotoxines bactériennes des formulations était comprise entre 0,05 et 0,5 EU/mL, en fonction du lot de production, et leur concentration en protéines totales étaient de PREPARATION DES COMPOSITIONS DE BACTERIOPHAGES : Une unité d’ultrafiltration Amicon® Ultra de 15 mL de membrane Ultracel-100 en cellulose régénérée (100 kD, Merck-Millipore, Sigma-Aldrich Chimie S.a.r.l., Saint-Quentin de Fallavier, France) a été remplie de la suspension purifiée de bactériophage obtenue et centrifugée (Centrifuge 5810 avec rotor A-4-81 Eppendorf SE, Hamburg, Allemagne) pendant 15 minutes à 3 100 g. Cette étape est communément appelée polissage. Le rétentat a ensuite été resuspendu dans la solution aqueuse (milieu dispersant des bactériophages) de formulation sélectionnée (détaillée ci-après) et la composition ainsi obtenue a été stockée dans des bouteilles de 125 mL en polyéthylène téréphtalate (PET, PharmaTainer TM , SaniSure®, Camarillo, CA, USA). Puis la formulation a été stérilisée par filtration terminale. Plus précisément, cette filtration consiste à filtrer et aliquoter la suspension dans le conditionnement d’intérêt à l’aide d’une seringue 3 pièces 10 mL BD Plastipak TM (Becton Dickson France SAS, Grenoble, France) connectée à une unité de filtration 0,22 µm en polyéthersulfone (Sterivex-GP, Millipore Merck KGaA, Damstadt, Allemagne). La FIG. 1 montre l’évolution du spectre UV-visible de la suspension de bactériophages en fonction des étapes de purification. L’étape d’ultrafiltration lors de la préparation des compositions de bactériophages, nommée polissage, est caractérisée par un spectre UV-visible avec deux absorbances à 244 nm et 256 nm correspondant au complexe protéine – acide nucléique (Morag et al. 2018). La détermination de l’absorbance à 350 nm permet d’apprécier l’indice d’agrégation (AI) des bactériophages en suspension (Pignataro, Herrera, and Dodero 2020). Une relation linéaire entre le maximum d’absorbance et le titre bactériophagique a été mise en évidence. La FIG. 1 montre l’évolution du spectre UV en fonction de la dilution et la FIG. 1 permet d’apprécier la réduction non significative du titre bactériophagique à l’issue de la filtration stérilisante terminale. ESSAI DE STABILITE SOUS AGITATION Les compositions préparées ont été placées soit en (i) agitation rotative verticale à 40 rpm (Cole-Parmer® TR-200D Series Stuart, Saint Neots, Angleterre) ; soit en (ii) agitation horizontale à mouvement vibrant entre 150 et 2000 tr/min ou rpm (orbite 3 mm, Multi Reax, Heidolph Instruments, Schwabach, Allemagne). MESURES EFFECTUEES Les mesures d’absorbance ont été réalisées par spectrophotomètre UV-Visible V-730 (Jasco, Lisses, France). L’indice d’agrégation (AI) a été calculé d’après les mesures d’absorbance et selon la formule (Pignataro, Herrera, and Dodero 2020) avec λ max mesurée à 255 nm. Avec AI > 30 : forte agrégation ; AI TM Duo S213 (Mettler-Toledo SAS, Viroflay, France) et l’OsmoPRO (Radiometer S.A.S., Neuilly-Plaisance, France). Les mesures de titre bactériophagique (PFU/mL) ont été réalisées par titration dite spot-test sur une souche bactérienne de référence (en l’occurrence P2SA225 pour le bactériophage vB_SauM-V1SA19). P2SA225 a été mise en culture la veille à 180 rpm et 37°C dans 9 mL de milieu de culture Trypto Caséine Soja (TSB, bioMérieux S.A., Marcy-L’Etoile, France). Après environ 20 heures d’incubation, 500 µL de bouillon bactérien a été déposé dans une boite de Pétri carrée 120 x 120 mm en polystyrène (Greiner Bio-one, Courtaboeuf, France). Environ 30 mL de TSB-soft (30 g/L de TSB solide BD-Difco TM – 7,56 g/L d’agar en granules BD-Difco TM (FisherScientific SAS, Illkirch, France)) liquéfié a alors été coulé par-dessus et le tout a été homogénéisé avant de sécher pour former une gélose. La suspension à titrer a été diluée en série au 10 ème dans du TSB (bioMérieux S.A., Marcy-L’Etoile, France) dans une plaque 96 puits puis 5 µL de chaque puit a été déposé sur la gélose. Chaque mesure a été réalisée en triplicat de bouillon bactérien. Les titres en bactériophages ont été lus après une incubation de 20 h à 37°C. Les mesures d’angle de contact ont été réalisées en déposant 10 µL de liquide sur la surface d’intérêt, puis une photo a été prise et l’angle à l’interface a été mesuré avec le logiciel ImageJ (Nih.gov). Les analyses statistiques ont été réalisées, comme indiqué dans les légendes des figures, par ANOVA suivie de comparaisons multiples par Post Hoc (Tukey HSD ou Bonferroni) ou test de Student avec α=0,05, en utilisant le logiciel KaleidaGraph (version 3.6, Synergy Software). METHODE DE PREPARATION DES SOLUTIONS AQUEUSES (MILIEU DISPERSANT DES BACTERIOPHAGES) DES COMPOSITIONS : Les formulations ont été préparées comme détaillé ci-dessous, au maximum la veille de la mise en suspensions des bactériophages : F1 : KH 2 PO 4 : 14,78 mM ; Na 2 HPO 4 : 56,38 mM ; NaCl : 154 mM Dans deux poudriers stériles en polypropylène de 180 mL (CORNING® GOSSELIN TM , Borre, France), peser respectivement 800 mg de Na 2 HPO 4 et 200 mg de KH 2 PO 4 . Dissoudre les deux poudres dans moins de 100 mL de NaCl 0,9 % ajoutées avec une seringue 3 pièces 30 mL BD Plastipak TM (Becton Dickson France SAS, Grenoble, France) puis transvaser le liquide dans le poudrier contenant le Na 2 HPO 4 dont la tare a été réalisée avant l’ajout de la poudre. Enfin, verser NaCl 0,9 %, qsp. 100 g. Si la dissolution n’est pas complète, placer le poudrier au bain à ultra-sons 10 min à 40 °C (FB15051, Fischerbrand®, FisherScientific SAS, Illkirch, France). F2 : eau pour préparation injectable. F1-PS80 (composition selon l’invention) : KH 2 PO 4 : 14,78 mM ; Na 2 HPO 4 : 56,38 mM ; NaCl : 154 mM ; PS80 : 0,05 % (correspondant à 0,38 mM) Même formulation que F1. Puis ajouter 47 µL de PS80 à 100 mL de F1. F1-PS20 (composition selon l’invention) : KH 2 PO 4 : 14,78 mM ; Na 2 HPO 4 : 56,38 mM ; NaCl : 154 mM ; PS20 : 0,05 % (correspondant à 0,44 mM) Même formulation que F1. Puis ajouter 46 µL de PS20 à 180 mL de F1. F2-PS80 : eau pour préparation injectable (EPPI) ; PS80 : 0,05 % (correspondant à 0,38 mM) Peser 100 mg d’EPPI dans un poudrier stérile de 180 mL (CORNING® GOSSELIN TM , Borre, France). Ajouter 47 µL de PS80. F3-PS80 : NaCl 0,9 % ; PS80 : 0,05 % (correspondant à 0,38 mM) Peser 100 mg de NaCl 0,9 % (correspondant à 154 mM) dans un poudrier stérile de 180 mL (CORNING® GOSSELIN TM , Borre, France). Ajouter 47 µL de PS80. F4-PS80 (composition selon l’invention) : KH 2 PO 4 : 1,06 mM ; Na 2 HPO 4 : 2,97 mM ; NaCl : 155,17 mM ; PS80 : 0,05 % (correspondant à 0,38 mM) Peser 100 mg de PBS 1X à pH 7,4 (GibcoTM, Life Technologies Corporation, Grand Island, NY, USA et Life TechnologiesTM, Paisley, Angleterre) dans un poudrier stérile de 180 mL (CORNING® GOSSELIN TM , Borre, France). Ajouter 47 µL de PS80. Les % sont des % massiques par rapport au volume de la solution aqueuse. Les compositions obtenues ont ensuite été immédiatement conditionnées dans le contenant sélectionné. La concentration en endotoxines bactériennes de toutes les formulations était comprise entre 0,05 et 0,5 EU/mL, et leur concentration en protéines totales étaient de RESULTATS OBTENUS Dans les exemples selon l’invention, des compositions de suspensions de phages de la classe Caudoviricetes fortement concentrées (>10 8 PFU/mL) ont été obtenues et se sont montrées résistantes à des variations de pH, à l’adsorption sur les matériaux de conditionnement et au stress mécanique connus pour réduire l’activité des bactériophages au cours du (i) procédé de production, (ii) stockage, (iii) transport. La composition de la suspension a été choisie en fonction de propriétés intrinsèques biochimiques et biophysiques évaluées lors de tests de stress forcés (agitation mécanique, pH, force ionique, mouillabilité des matériaux de conditionnement) (Nowak et al. 2017; Dumas, Huille, and Prades 2019) pour réduire (i) l’exposition des régions hydrophobes des protéines bactériophagiques, (ii) le taux d’agrégats des bactériophages (potentiellement immunogéniques) non covalents (interactions hydrophobes et/ou électrostatiques réversibles) et covalents (par formation de ponts disulfure). Afin d’apprécier la stabilité des compositions de suspensions de bactériophages, et notamment d’évaluer la résistance à l’agrégation et aux variations de pH, un essai d’agrégation induit (i) par une agitation rotative (40 rotations par minute, 0,7 Hz), (ii) et par une agitation horizontale (1 500 rotations par minute, 25 Hz) du conditionnement final a été réalisé pendant 14-21 jours à température ambiante (15°C – 25°C) (Kopp et al. 2020).Une mesure du spectre UV-visible enregistré au cours de l’essai a permis de déterminer l’indice d’agrégation (AI) des bactériophages. Un titrage par la technique spot-test des bactériophages a été réalisé au cours et à la fin de l’essai. Afin de limiter encore les phénomènes d’agrégation (i) bactériophages-bactériophages, (ii) aux interfaces gaz-liquide et liquide-solide, un conditionnement primaire (flacon et bouchon) a été choisi en tenant compte : du volume de remplissage par rapport au volume total offert par le conditionnement ; de la mouillabilité du conditionnement primaire. Le conditionnement sélectionné répondait aux critères suivants : - Flacon en polystyrène. La mouillabilité du flacon en polystyrène a pu être utilement améliorée, avec obtention d’une valeur inférieure à 70°, par la présence et la quantité de surfactant non-ionique sélectionnée, comme mis en évidence sur la FIG. 2 ©, par rapport à une solution sans surfactant. La surface hydrophile du flacon (appréciée par un angle de contact avec l’eau inférieur à 90°) est de nature à limiter les phénomènes d’agrégation entre les parties hydrophobes des protéines bactériophagiques et les parois du flacon. - Flacon en verre pharmaceutique de type I. La mouillabilité du flacon en verre de type I a pu être utilement améliorée, avec l’obtention d’une valeur inférieure à 32°, par la présence et la quantité de surfactant non-ionique sélectionnée, comme mis en évidence sur la FIG. 2 (B). La surface hydrophile de tels flacons (appréciée par un angle de contact avec l’eau inférieur à 90°) est de nature à limiter les phénomènes d’agrégation entre les parties hydrophobes des protéines bactériophagiques et les parois du flacon. - Le matériau du bouchon. La mouillabilité des bouchons en bromobutyle recouverts d’un revêtement en polymère perfluoré (BIIR) et chlorobutyle (CIIR) a pu être utilement améliorée, avec l’obtention d’une valeur inférieure à 90°, par la présence et la quantité de surfactant non-ionique sélectionnée, comme mis en évidence à la FIG. 2 , parties A-1 et A-2. A titre de comparaison, après 14 jours d’agitation rotative à 0,7 Hz, comme détaillé dans le Tableau 1, le bactériophage placé dans des suspensions exemptes de surfactant (F1 : solution saline tamponnée et F2 : eau pour préparation injectable) présente une chute de son titre bactériophagique d’au moins 2 log associé à un indice d’agrégation élevé mesuré par spectrophotométrie UV (respectivement de 25 et une valeur négative signe que les agrégats formés perturbent grandement la lumière incidente). Ainsi, la présence du surfactant non ionique à la concentration préconisée est nécessaire pour préserver le titre et protéger de l’agrégation. Cependant, toujours d’après le Tableau 1, le simple ajout de surfactant n’est pas suffisant pour réduire l’agrégation à un seuil acceptable (AI de 12 à J14 pour la formulation F2-PS80 ; AI de 7 à J14 pour la formulation F3-PS80). A titre d’illustration, la FIG. 3 présente l’évolution du taux d’agrégation de la suspension de bactériophage F4-PS80 en fonction du pH (le pH est modifié par ajout de HCl). La présence du tampon phosphate salin dans les compositions utilisées dans les exemples permet de maintenir un pH proche de la neutralité. De manière inattendue et non prévisible, l’addition de sels neutres formés d’un couple monovalents tels que NaCl (qui sont dans les premiers éléments de la série de Hofmeister et donc susceptibles d’induire une agrégation (Okur et al. 2017)) a renforcé le pouvoir antiagrégant et la stabilité à l’agitation des suspensions bactériophagiques. En effet, d’après le Tableau 1 : - A conditionnements comparables (verre de type I de 5 mL rempli à 3 mL), la réduction du titre bactériophagique est plus importante dans la formulation F1 (bactériophage dans un tampon phosphate salin à 338 mM) que dans la formulation F2 (bactériophages dans eau pour préparations injectables). Ainsi, alors que les bactériophages sous agitation présentent une relative stabilité dans l’eau, les interactions bactériophages – eau sont déstabilisées par l’ajout d’anions kosmotropes (présents dans F1). La formulation F1 sans surfactant n’est pas suffisante pour préserver le titre sous agitation. -Les compositions F1-PS80 et F4-PS80 selon l’invention, contenant les électrolytes décrits précédemment, préservent le titre bactériophagique et présentent un indice d’agrégation proche de 3, tandis que les formulations F2-PS80 et F3-PS80 exemptes de tampon phosphate, présentent un titre préservé mais un indice d’agrégation supérieur ou égal à 7, ce qui est prédictif d’une instabilité. Les résultats du tableau 1 illustrent que l’un sans l’autre, i.e., (i) solution saline contenant un mélange tampon, du type phosphate dans l’exemple illustré et (ii) PS80, sont insuffisants pour maintenir l’activité antibactérienne des bactériophages ainsi que des taux d’agrégation acceptables tout au long des étapes traversées par un produit fini, e.g., stockage shelf-life ; transport. Dans le Tableau 1 les analyses granulométrique, électrocinétique et du titre bactériophagique après 14 jours d’agitation rotative (0,7 Hz) à température ambiante 15°C – 25°C sont présentées pour les compositions hors invention et selon l’invention correspondant à des suspensions de bactériophages du morphotype myovirus comprenant un mélange tampon et un surfactant neutre, choisi dans la série des polysorbates (PS), conditionnées (i) dans des flacons en polystyrène (diamètre 20 mm, volume de remplissage 2 ou 5 mL dans un flacon de 15 mL fermé par un bouchon en PEHD), (ii) dans des flacons de type I (diamètre 20 mm, volume de remplissage 3 mL dans un flacon de 5 mL fermé par bouchon bromobutyle perfluoré). Le titre initial en bactériophage était de 10 9 PFU/mL. Chaque valeur est la moyenne ± écart-type de 3 (†) ou 4 (‡) déterminations expérimentales. ND : non déterminé. Les indices d’agrégations de 7 ou plus sont prédictifs d’une baisse de stabilité dans le temps. Formulations et conditionnement Concentration du mélange tampon (mM) Capacité tampon mM/ΔpH Force ionique (mM) Osmolalité (mOsm/kg) ‡ pH AI † Titre 10 8 * (PFU/mL) † F1 KH 2 PO 4 : 14,78 mM ; Na 2 HPO 4 : 56,38 mM ;NaCl :154 mM 3 mL – flacon en verre de type I 71 28 338 431 ± 1 7,3 -32 ± 15 0,01 ± F2 Eau pour injections 2 mL - flacon en polystyrène 0 0 0 ND ND ND 3 mL - flacon en verre de type I 0 0 0 4 ± 6,7 25 ± 0,6 ± 0,2 F2-PS80 Eau pour injections ; PS80 : 0,05% 2 mL - flacon en polystyrène 0 0 0 ND ND ND 0,06 ± 0,07 3 mL - flacon en verre de type I 0 0 0 4 ± 6,6 12 ± 1 2 ± 1 F3-PS80 NaCl : 154 mM ; PS80 : 0,05% 3 mL - flacon en verre de type I 0 0 154 287 ± 1 6,5 7 ± 1 3 ± 1 F4-PS80 KH 2 PO 4 : 1,06 mM ; Na 2 HPO 4 : 2,97 mM NaCl : 155,17 mM ; PS80: 0,05% 5 mL - flacon en polystyrène 4 8 165 294 ± 1 7,4 4 ± 2 ± F1-PS80 KH 2 PO 4 : 14,78 mM ; Na 2 HPO 4 : 56,38 mM ; NaCl: 154 mM ; PS80: 0,05% 3 mL – flacon en verre de type I 71 28 338 433 ± 1 7,3 2 ± 1 5 ± 3 5 mL - flacon en polystyrène 71 28 338 423 ± 1 7,3 3 ± 1 0,47 ± 0,08 F1-PS20 KH 2 PO 4 : 14,78 mM ;Na 2 HPO 4 : 56,38 mM ; NaCl: 154 mM ; PS20: 0,05% 5 mL - flacon en polystyrène 71 28 338 423 ± 1 7,3 6 ± 7 0,65 ± 0,09 Une mesure du titre bactériophagique (PFU/mL) après agitation rotative (0,7 Hz) confirme le lien entre agrégation et activité antibactérienne (Tableau 2). Dans une première phase précoce ( Dans le Tableau 2, sont présentés : le titre bactériophagique des suspensions de bactériophages formulées dans F4 (KH 2 PO 4 : 1,06 mM, Na 2 HPO 4 : 2,97 mM, NaCl : 154 mM), conditionnées dans un flacon (15 mL rempli à 6 mL ; espace de tête : 60%) en polystyrène bouché par un bouchon en polyéthylène haute densité (PEHD) en fonction de la concentration en PS80 (%) après 14 jours d’agitation rotative (titre initial : 10 9 PFU/mL, 40 rotations par minute, 0,7 Hz). Chaque valeur est la moyenne ± écart-type de 3 ou 4 déterminations expérimentales. Analyse de variance sur l’ensemble des groupes puis comparaisons multiples par Post Hoc tests (Tukey HSD ou Bonferroni) : NS : non significatif. * p Composition [1] PS80 (%) Angle de contact PFU/mL [1]/polystyrène (flacon) [1]/PEHD (bouchon) a : 0 74° 97° nd b : 0,001 72° 97° 2 x 10 2 ± 4 x 10 2 NS : a c : 0,005 63° 92° 6 x 10 6 ± 2 x 10 6 *** : a,b 0,05 56° 70° 2 x 10 8 ± 1 x 10 7 *** : a,b, * :c A titre de comparaison, les taux d’agrégation et les titres de suspensions de bactériophages de la classe Caudoviricetes soumises (i) à une agitation rotative (14 jours, 40 rotations par minutes, 0,7 Hz), (ii) maintenues dans deux solutions aqueuses tamponnées de force ionique différente (F1-PS80 et F4-PS80), (iii) contenant 0,05% PS80, (iv) conditionnées dans des flacons en verre de type I (5 mL rempli à 3 mL, espace de tête : 40%) et (v) fermés par un bouchon BIIR perfluoré sont présentés dans le Tableau 1. Les compositions F1-PS80 et F4-PS80 ayant des concentrations en chlorure de sodium (155 mM) - tampon phosphate (environ 4 et 71 mM, respectivement) – 0,05% PS80 – verre borosilicaté de type I fermé par un bouchon BIIR perfluoré préservent le titre bactériophagique dans des conditions de stress mécanique intense. En absence d’agitation et de surfactant, la composition chlorure de sodium (155 mM) - tampon phosphate (4 – 71 mM) – verre borosilicaté de type I fermé par un bouchon BIIR perfluoré maintient le titre bactériophagique en fonction de la température de conservation ( FIG. 4 -A et FIG. 4 -B). A 5°C, le titre bactériophagique ne présente pas de diminution significative à un an par rapport à J0 ( FIG. 4 -B), alors qu’une baisse d’environ 4 log du titre initial est observée pour une température de conservation de 25°C ( FIG. 4 -C). Ces différences s’expliquent, en partie, par la diminution des mouvements Browniens à faible température réduisant les chocs matériau-bactériophages et bactériophages-bactériophages (i.e., les bactériophages sont des particules colloïdales non mobiles, (Kasman and Porter 2022)) à l’origine d’une adsorption sur les matériaux, d’une agrégation /agglomération entre bactériophages puis d’une fragmentation des particules virales. A noter qu’après 1 an, le titre d’une suspension de bactériophage conservée à 5°C est toujours supérieur au seuil de stabilité de 10 8 PFU/mL (8 log). Afin de distinguer les effets de la cavitation et/ou de la ventilation (produits par la rotation et la chute de la suspension) des effets purement mécaniques, un essai d’agrégation des bactériophages induit par une agitation horizontale (1500 rotations par minute, 25 Hz) a été réalisé pendant 21 jours à température ambiante (15°C – 25°C) dans un flacon en polystyrène (15 mL rempli à 10,6 mL, espace de tête : 30%). Les résultats de la réduction du titre bactériophagique dans le temps pour différentes concentrations de PS80 sont présentés sur les FIG. 5 (A) et FIG. 5 (B). Il convient de noter que les essais à 0,02% et 0,05% sont au-dessus de la CMC du polysorbate 80. L’instabilité sous agitation d’une suspension purifiée formulée sans PS80, par rapport à un lysat phagique (non purifié) est présentée sur la FIG. 6 . En effet, dès deux jours d’agitation, le titre de la suspension purifiée est inférieur à 10 8 PFU/mL alors que le titre de la suspension non purifiée est toujours supérieur à 10 8 PFU/mL à un mois d’agitation. Composition, et notamment composition pharmaceutique, comprenant, voire constituée d’une suspension de bactériophages de la classe des Caudoviricetes ayant une activité lytique contre au moins une souche de bactéries Gram positive, à un titre d’au moins 10 8 PFU/mL, typiquement à une concentration de 10 8 à 10 10 PFU/mL, et notamment de 10 9 à 10 10 PFU/mL, dans une solution aqueuse comprenant, voire constituée de : - au moins un surfactant non ionique, et en particulier un seul surfactant non-ionique, choisi parmi la famille des polysorbates, à une concentration molaire supérieure à sa concentration micellaire critique, mais n’excédant pas 2 mg/mL, - un ou plusieurs sels neutres formés d’une paire d’ions monovalents, dont la concentration molaire totale est dans la gamme allant de 75 à 160 mM, - un mélange tampon conférant à la composition un pH de 6,0 à 7,9, et préférentiellement de 7,0 à 7,5, typiquement choisi parmi les couples ion hydrogénophosphate/ion dihydrogénophosphate, acide citrique/ion citrate et acide citrique/ion hydrogénophosphate, la molarité du mélange tampon étant dans la gamme allant de 4 mM à 100 mM, - de l’eau, ladite composition comprenant moins de 0,9 unités d’endotoxines bactériennes (UE) par mL, une concentration en protéines totales de moins de 0,09 mg/mL et ladite suspension de bactériophages dans ladite solution aqueuse présentant une osmolalité comprise entre 150 mOsm/kg à 600 mOsm/kg. Composition selon la revendication 1, caractérisée en ce que les bactériophages de la classe des Caudoviricetes appartiennent au genre des Silviavirus , ayant une activité lytique contre au moins une souche de Staphylococcus aureus . Composition selon la revendication 1 ou 2, caractérisée en ce que lesdits bactériophages ont un morphotype myovirus. Composition selon l’une des revendications précédentes, caractérisée en ce que la solution aqueuse présente une force ionique de 150 à 400 mM. Composition selon l’une des revendications précédentes, caractérisée en ce qu’elle est stable sur au moins un an à une température appartenant à la gamme de 2 à 8°C, c’est-à-dire qu’elle présente un titre de bactériophages qui reste supérieur ou égal à 10 8 PFU/mL. Composition selon l’une des revendications précédentes, caractérisée en ce que les bactériophages ne sont ni sous une forme conjuguée, ni sous une forme complexée. Composition selon l’une des revendications précédentes, caractérisée en ce qu’elle comprend du polysorbate 80, en tant que surfactant non-ionique, à une concentration molaire supérieure à 0,013 mM et inférieure ou égale à 1,6 mM, de préférence dans la gamme allant de 0,16 mM à 0,38 mM, ou du polysorbate 20, en tant que surfactant non-ionique, à une concentration molaire supérieure à 0,05 mM et inférieure ou égale à 1,77 mM, de préférence dans la gamme allant 0,18 mM de à 0,44 mM. Composition selon l’une des revendications précédentes, caractérisée en ce que le mélange tampon est un mélange KH 2 PO 4 / Na 2 HPO 4 , typiquement KH 2 PO 4 à une concentration molaire de 1 à 15 mM et Na 2 HPO 4 à une concentration molaire de 3 à 56 mM. Composition selon l’une des revendications précédentes, caractérisée en ce qu’elle comprend seulement du NaCl, en tant que sel neutre, qui est présent à une concentration molaire de 75 à 160 mM, typiquement à une concentration molaire de 150 à 160 mM. Composition pharmaceutique selon l’une des revendications précédentes, caractérisée en ce qu’elle ne contient aucun composé d’origine animale. Composition selon l’une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce qu’elle est stérile, apyrogène et isotonique ou hypertonique. Composition selon l’une des revendications précédentes, caractérisée en ce qu’elle est conditionnée dans un contenant tel qu’un flacon, une poche ou une seringue délimité par des parois qui sont en verre de type I, verre de type II, polystyrène, polypropylène, polyéthylène, polyéthylène téréphtalate, traitées ou non une huile de silicone, notamment fermé avec un bouchon en un matériau de caoutchouc perfluoré ou non. Composition selon la revendication 12, caractérisée en ce qu’elle présente une mouillabilité des parois du contenant correspondant à un angle de contact de 20 à 60°. Composition selon la revendication 12 ou 13, caractérisée en ce que le contenant est fermé par un bouchon et la composition présente une mouillabilité du bouchon correspondant à un angle de contact inférieur à 90°. Composition selon l’une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que ladite suspension de bactériophages dans ladite solution aqueuse est supplémentée avec une solution visqueuse ou un hydrogel d’éther de cellulose, de polyéthylène glycol, d’alcool polyvinylique, d’alginate de sodium, de PVA-alginate de sodium, d’acrylate, de méthacrylate, de polyacrylate, d’acide hyaluronique, d’acrylamide, de polyacrylamide, de polyéthylèneglycol-maleimide, oxyde de polyéthylène, de poloxamers, de gomme guar, d’agarose, de gélatine, de collagène, de chitosan, de nanohydroxyapatite, de silicate, ou de silicate d'alumine hydraté. Composition selon l’une des revendications précédentes, caractérisée en ce qu’elle est adaptée à une administration entérale, ou adaptée à une administration par injection, notamment par voie parentérale, incluant les administrations intraveineuse, intraartérielle, intramusculaire, sous-cutanée et/ou intra-articulaire. Composition selon l’une quelconque des revendications précédentes, pour son utilisation en tant que médicament, notamment pour son utilisation dans le traitement des infections ostéo-articulaires. Procédé de préparation d’une composition, et notamment composition pharmaceutique, selon l’une quelconque l’une quelconque des revendications 1 à 16, comprenant l’introduction dans une solution aqueuse comprenant, voire constituée de : - au moins un surfactant non ionique, et en particulier un seul surfactant non-ionique, choisi parmi la famille des polysorbates, à une concentration molaire supérieure à sa concentration micellaire critique, mais n’excédant pas 2 mg/mL, - un ou plusieurs sels neutres formés d’une paire d’ions monovalents, dont la concentration molaire totale est dans la gamme allant de 75 à 160 mM, - un mélange tampon conférant à la composition un pH de 6,0 à 7,9, et préférentiellement de 7,0 à 7,5, typiquement choisi parmi les couples ion hydrogénophosphate /ion dihydrogénophosphate, acide citrique/ion citrate et acide citrique/ion hydrogénophosphate, la molarité du mélange tampon étant dans la gamme allant de 4 mM à 100 mM, - de l’eau, de bactériophages purifiés en quantité nécessaire pour obtenir au final dans la composition un titre d’au moins 10 8 PFU/mL, et typiquement de 10 9 à 10 10 PFU/mL en bactériophages. Procédé de préparation selon la revendication 18 caractérisé en ce que postérieurement à l’introduction des bactériophages dans la solution aqueuse (ou milieu dispersant), la suspension obtenue est stérilisée avec mise en œuvre d’une opération de filtration, par passage sur un filtre en polyethersulfone, polystyrène, poly(styrène-butadiène) ou polyfluorure de vinylidène. Utilisation d’une solution aqueuse comprenant, voire constituée de : - au moins un surfactant non ionique, et en particulier un seul surfactant non-ionique, choisi parmi la famille des polysorbates, à une concentration molaire supérieure à sa concentration micellaire critique, mais n’excédant pas 2 mg/mL, - un ou plusieurs sels neutres formés d’une paire d’ions monovalents, dont la concentration molaire totale est dans la gamme allant de 75 à 160 mM, - un mélange tampon conférant à la composition un pH de 6,0 à 7,9, et préférentiellement de 7,0 à 7,5, typiquement choisi parmi les couples ion hydrogénophosphate/ion dihydrogénophosphate, acide citrique/ion citrate et acide citrique/ion hydrogénophosphate, la molarité du mélange tampon étant dans la gamme allant de 4 mM à 100 mM, - de l’eau, pour améliorer la stabilité au stockage à une température appartenant à la gamme de 2 à 8°C, de bactériophages de la classe des Caudoviricetes ayant une activité lytique contre au moins une souche de bactéries Gram positive, lesdits bactériophages étant placés en suspension dans ladite solution aqueuse à un titre d’au moins 10 8 PFU/mL, et typiquement de 10 8 à 10 10 PFU/mL en bactériophages, et notamment de 10 9 à 10 10 PFU/mL et ladite composition comprenant moins de 0,9 unités d’endotoxines bactériennes par mL, moins de 0,09 mg/mL ou 90 nm/mL de protéines totales et l’osmolalité de ladite suspension de bactériophages dans ladite solution aqueuse étant dans la gamme allant de 150 mOsm/kg à 600 mOsm/kg. Utilisation selon la revendication 20, caractérisée en ce que la stabilité obtenue correspond à un titre de bactériophages qui reste supérieur ou égal à 10 8 PFU/mL, après stockage de la composition à une température appartenant à la gamme de 2 à 8°C sur au moins un an.