FR 3161107 A1 20251017 FR 2403922 A 20240416 L’invention concerne des compositions comprenant une association synergique de mémantine et de vitamine D, leur méthode de préparation et leur utilisation dans la prévention et le traitement des maladies neurodégénératives, en particulier de la maladie de Alzheimer. Compositions contenant une combinaison synergique de mémantine et de vitamine D La présente invention concerne des compositions comprenant une association synergique de mémantine et de vitamine D, leur méthode de préparation et leur utilisation dans la prévention et le traitement des maladies neurodégénératives, en particulier de la maladie d‘Alzheimer. L'excitotoxicité du glutamate est impliquée dans les dommages neurologiques aigus causés par l'ischémie et les lésions cérébrales traumatiques, ainsi que dans la neurodégénérescence chronique de la maladie d'Alzheimer et de la maladie de Huntington. La mort neuronale excitotoxique par suractivation du récepteur N-méthyl-D-aspartique (récepteurs NMDA ou NMDAR) contribue à un flux excessif et continu de calcium (Ca 2+ ) dans la cellule. Cela déclenche toute une série de réactions entraînant la mort cellulaire, notamment un stress oxydatif accru, une activation inappropriée des protéases telles que la calpaïne, une dysrégulation des voies liées au Ca 2+ , des dommages mitochondriaux et une cascade apoptotique. La mémantine (MEM) est un antagoniste non compétitif des récepteurs NMDA, de faible affinité et voltage-dépendant. Elle est actuellement prescrite pour le traitement de la maladie d’Alzheimer conjointement avec des inhibiteurs de l'acétylcholinestérase tels que la galantamine, le donépézil et la rivastigmine (Allgaier et al. , Frontiers in Bioscience, 2014, vol. 19, p. 1345-1354). Comme il s'agit d'un antagoniste de faible affinité, il bloque les récepteurs NMDA, mais il en est rapidement déplacé, ce qui évite le blocage prolongé du canal des récepteurs NMDA et les effets secondaires négatifs sur l'apprentissage et la mémoire qui ont été observés chez les antagonistes NMDAR de haute affinité (anesthésiques dissociatifs, kétamine et MK-801). Un autre avantage de la mémantine est qu'elle n'interagit avec le canal des récepteurs NMDA que lorsqu'il est pathologiquement activé sous une concentration excessive de glutamate dans la fente synaptique, comme c'est le cas pour la maladie d’Alzheimer (Masters et al. , Nature Reviews/Disease primers, 2015, 1, p. 1-18). Il est généralement admis que le cholécalciférol est une forme de vitamine D, également appelée vitamine D 3 . Le cholécalciférol est une substance essentielle nécessaire à l'homéostasie du calcium et du phosphore dans le corps humain. En outre, les récepteurs du cholécalciférol (VDR) et les enzymes activant le cholécalciférol ont été trouvés dans différentes structures du cerveau, notamment l'hippocampe, le cortex préfrontal et l'amygdale (Adam et al. , Clin Endocrinol Metab, February 2010, 95(2), p. 471–478). Le cholécalciférol pourrait moduler différents processus physiologiques dans le cerveau, tels que la régulation du facteur neurotrophique dérivé du cerveau (BDNF) et d'autres facteurs neurotrophiques, la neurogénèse, la neuroplasticité, la neuroprotection et la neuroimmunomodulation (DeLuca et al. , Neuropathology and Applied Neurobiology, 2013, 39(5), p. 458-484) ; Koshkina et al. , Nutrients, 2019, 11, p. 1726). Utilisé seul, le cholécalciférol n’a aucune efficacité démontrée dans le traitement des maladies neurodégénératives et en particulier de la maladie d’Alzheimer. Dans cette optique, un traitement pharmacologique précoce avec des substances réduisant l'excitotoxicité du glutamate pourrait représenter une très bonne option pour améliorer la survie neuronale (et la fonction cognitive), et pourrait représenter une stratégie thérapeutique intéressante pour les patients diagnostiqués avec la maladie d'Alzheimer et plus généralement atteints d’une maladie neurodégénérative. Ainsi le brevet FR 2 965 178 B1 décrit des compositions pharmaceutiques comprenant une association de 5 à 20 mg de chlorhydrate de mémantine et de 800 à 2000 UI de cholécalciférol qui pourraient être utiles dans le traitement de la maladie d’Alzheimer. Ce brevet suggère, sans néanmoins le démontrer, qu'il pourrait y avoir un effet de potentialisation entre les deux principes actifs, notamment un effet potentialisateur de la vitamine D sur la mémantine. La demande de brevet EP 2 363 119 A1 décrit des compositions pharmaceutiques comprenant de 1 à 40 mg de mémantine et de 200 à 10 000 UI de vitamine D soit de 5 à 250 mg de vitamine D. Ces compositions sont décrites comme pouvant être utiles dans le traitement de la maladie d’Alzheimer mais aucun résultat prouvant cet effet n'est donné. Anweiler C. et al. (Neurobiology of Aging, 2014, 35, p. 331-335) décrivent un effet synergique neuroprotecteur d’une composition comprenant 1 µM de mémantine et 100 nM de vitamine D dans un modèle in vitro de toxicité du glutamate sur des cellules corticales. D. Charier et al. (Annales Françaises d’Anesthésie et de Réanimation 33S, 2014, A168– A173) décrivent un effet synergique de la mémantine à une concentration de 1 mM et de la vitamine D à une concentration de 100 nM sur la prévention de la mort neuronale sur un modèle de neurones de souris cultivés sur milieu microfluidique et soumis à une agression par du sang. Bien que la combinaison mémantine/vitamine D et sa potentielle application dans le traitement de la maladie d’Alzheimer aient déjà été décrites, ces principes actifs sont utilisés à des doses élevées qui pourraient présenter des effets secondaires néfastes. En effet, il ressort des différentes publications de l’art antérieur que la mémantine, lorsqu’elle est administrée seule, est efficace dans le traitement de la maladie d’Alzheimer à une dose supérieure à 5 mg. A titre d’exemple, les médicaments à base de mémantine prescrits pour le traitement des formes modérées à sévères de la maladie d'Alzheimer contiennent, quels que soient les fabricants, des doses de 10 mg ou de 20 mg de mémantine. A de telles doses, la mémantine entraine fréquemment des effets indésirables tels que somnolence, sensation vertigineuse, troubles de l'équilibre, essoufflement, maux de tête, constipation, hypertension artérielle et augmentation des transaminases… Il a par ailleurs été reconnu que les récepteurs sur lesquels la mémantine est active, à savoir les récepteurs NMDA, peuvent s’internaliser, baissant l’efficacité de la mémantine et ainsi créer un échappement thérapeutique après une certaine durée de traitement (Katherine W. Roche et al. , Nature Neuroscience, 2001, volume 4, pages 794–802). Il existe donc un besoin pour des compositions pharmaceutiques permettant de remédier à ces inconvénients afin de prévenir et/ou de traiter les maladies neurodégénératives, en particulier la maladie d’Alzheimer, de façon efficace tout en limitant les effets secondaires néfastes habituellement observés ou susceptibles d’être observés lorsqu’une dose de 5 mg ou plus de mémantine est utilisée et en diminuant ou supprimant l’échappement thérapeutique. La présente invention a pour but de satisfaire ce besoin. Selon un premier aspect, l’invention a pour objet une composition pharmaceutique comprenant une association synergique de mémantine et de vitamine D et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable, ladite composition étant caractérisée en ce que la dose unitaire de mémantine présente au sein de ladite composition est inférieure à 5 mg et en ce que la dose unitaire de vitamine D présente au sein de ladite composition est inférieure à 0,8 mg. Selon un deuxième aspect, l’invention a pour objet ladite composition pharmaceutique pour son utilisation dans la prévention et/ou le traitement des maladies neurodégénératives, et en particulier de la maladie d’Alzheimer. Selon un troisième aspect, l’invention a pour objet une préparation combinée comprenant au moins deux composants individuels, ladite préparation étant caractérisée en ce qu’un premier composant renferme une dose unitaire de mémantine en une quantité inférieure à 5 mg et en ce qu’un deuxième composant renferme une dose unitaire de vitamine D en une quantité inférieure à 0,8 mg pour une utilisation simultanée, séparée ou séquentielle dans la prévention et/ou le traitement des maladies neurodégénératives, et en particulier de la maladie d’Alzheimer. Enfin selon un quatrième aspect, l’invention a pour objet une méthode pour prévenir, inhiber, retarder ou traiter la dégénérescence neuronale, notamment celle liée à la maladie d’Alzheimer chez un sujet qui en a besoin, ladite méthode étant caractérisée en ce qu’elle comprend l'administration d’une composition pharmaceutique telle que définie selon le premier aspect de l’invention ou d’une préparation combinée telle que définie selon le troisième aspect de l’invention audit sujet. En effet, et ainsi que cela est démontré dans les exemples qui suivent, les inventeurs ont mis en évidence que la combinaison de mémantine et de vitamine D permet de diminuer de façon très importante la dose unitaire efficace de mémantine habituellement utilisée dans le traitement de la maladie d’Alzheimer. En particulier, les inventeurs ont pu démontrer que lorsque la mémantine est utilisée en association avec de la vitamine D, il est possible de diminuer la dose unitaire efficace de mémantine par un facteur d’au moins 100. L’invention a donc pour premier objet une composition pharmaceutique comprenant une association synergique de mémantine et de vitamine D, ladite composition étant caractérisée en ce que la dose unitaire de mémantine présente au sein de ladite composition est inférieure à 5 mg et en ce que la dose unitaire de vitamine D présente au sein de ladite composition est inférieure à 0,8 mg. Dans un mode de réalisation avantageux de l’invention, la mémantine se présente sous forme de sel, notamment de chlorhydrate. Conformément à l’invention, la vitamine D peut être choisie dans le groupe comprenant la vitamine D 2 ou ergocalciferol, la vitamine D 3 ou cholécalciférol, la vitamine D 4 ou 22-dihydroergocalciférol, la vitamine D 5 ou sitocalciférol, leurs dérivés comme par exemple la vitamine D 6 dérivé éthylé de la vitamine D 4 ou la vitamine D 7 , dérivé 24R-méthyl de la vitamine D 3 , ainsi que leurs sels. Dans un autre mode de réalisation particulièrement avantageux de l’invention, la vitamine D est du cholécalciférol. Dans un autre mode de réalisation selon l’invention, la dose unitaire de mémantine est inférieure ou égale à 0,5 mg et la dose unitaire de vitamine D est inférieure ou égale à 0,08 mg. A de telles doses unitaires, chacun de ces deux composés ne présente aucune activité sur la survie neuronale et protection du réseau neuritique. Selon une forme de réalisation préférée de l’invention, la dose unitaire de mémantine est de 5 µg à 0,5 mg environ et la dose unitaire de vitamine D est de 0,8 µg à 8 µg environ. Egalement selon une forme de réalisation préférée de l’invention, le rapport molaire mémantine / vitamine D au sein de ladite association synergique est de 1:2 à 1:100 et encore plus préférentiellement de 1:3,5 à 1:100. Conformément à l’invention, on entend par « excipient pharmaceutiquement acceptable », toute substance autre que la ou les substances actives, destinée à apporter une consistance, un goût, une couleur à un médicament, tout en évitant toute interaction avec le ou les substances actives. L’excipient pharmaceutiquement acceptable selon l’invention sera choisi selon la forme pharmaceutique et le mode d'administration souhaité, parmi les excipients habituels qui sont connus de l'homme du métier, en vue d’être administré à l’Homme ou aux animaux. La composition pharmaceutique conforme à la présente invention peut se présenter sous toute forme pharmaceutique adaptée à l’administration locale, régionale, systémique ou continue. On peut citer à titre d’exemple les voies d’administration suivantes : voie orale, sublinguale, sous-cutanée, parentérale, intramusculaire, intraveineuse, intranasale, ou rectale ou par toute autre voie d’administration. Les formes d'administration appropriées comprennent les formes par voie orale telles que les comprimés, les gélules molles ou dures, les poudres, les granules et les solutions ou suspensions orales, les formes d'administration sublinguale, buccale, intranasale, par inhalation, les formes d'administration sous-cutanée, intramusculaire ou intraveineuse, les formes d'administration rectale et les implants. Selon une forme de réalisation préférée de l’invention, la composition pharmaceutique est formulée pour une administration par la voie orale. La composition pharmaceutique conforme à la présente invention peut être préparée par toutes techniques connues de l’homme du métier, notamment par mélange de la mémantine et du cholécalciférol avec au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable. Comme indiqué précédemment, l’association synergique présente dans la composition pharmaceutique conforme à la présente invention présente un effet neuroprotecteur à une dose de mémantine très faible qui est totalement inactive lorsqu’elle est utilisée seule. Aussi l’association synergique de mémantine et de vitamine D utilisable selon l’invention présente un meilleur indice thérapeutique que la mémantine seule. L’invention a également pour objet la composition pharmaceutique comprenant une association synergique de mémantine et de vitamine D et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable telle que définie selon le premier objet de l’invention, pour son utilisation dans la prévention et/ou le traitement des maladies dégénératives. Parmi les maladies neurodégénératives, on peut notamment mentionner la maladie d’Alzheimer, les démences telles que la démence à corps de Lewy, la démence fronto-temporale (DFT) et la démence mixte, et d’autres maladies neurodégénératives comme la maladie de Charcot (ou sclérose latérale amyotrophique ou SLA) ou encore la paralysie supranucléaire progressive (PSP). Parmi ces maladies neurodégénératives, l’invention vise plus particulièrement le traitement de la maladie d’Alzheimer. La mémantine et le cholécalciférol peuvent être formulés conjointement ou bien également être mélangés juste avant l’administration. Dans ce cas ils peuvent se présenter sous une forme apte à une administration combinée pour leur utilisation dans la prévention et/ou le traitement des maladies neurodégénératives et en particulier de la maladie d’Alzheimer. Ainsi l’invention a pour troisième objet une préparation combinée comprenant au moins deux composants individuels, ladite préparation étant caractérisée en ce qu’un premier composant renferme une dose unitaire de mémantine en une quantité inférieure à 5 mg et en ce qu’un deuxième composant renferme une dose unitaire de vitamine D en une quantité inférieure à 0,8 mg, pour une utilisation simultanée, séparée ou séquentielle dans la prévention et/ou le traitement des maladies neurodégénératives, et en particulier de la maladie d’Alzheimer. Enfin, l’invention a pour quatrième objet une méthode pour prévenir, inhiber, retarder ou traiter la dégénérescence neuronale, notamment celle liée à la maladie de Alzheimer chez un sujet qui en a besoin, dans laquelle la méthode comprend l'administration d'une quantité efficace de la composition pharmaceutique telle que définie selon le premier objet de l’invention ou d’une préparation combinée selon le troisième objet de l’invention. Selon ce quatrième objet, la posologie habituelle pour un adulte d’environ 70 kg comprend l’administration d’une composition pharmaceutique telle que définie selon le premier objet de l’invention ou d’une préparation combinée telle que définie selon le troisième objet de l’invention, à raison d’une fois ou deux par jour. Selon une forme de réalisation particulière de l’invention et lorsque ladite méthode comprend l’administration d’une préparation combinée, alors la dose unitaire de mémantine et la dose unitaire de vitamine D sont de préférence administrées simultanément, en encore plus préférentiellement, simultanément et par voie orale. Brève description des figures Les figures 1 à 4 et l’exemple qui suivent illustrent l’invention : FIG. 1 La figure 1A représente l’effet de la mémantine seule sur la survie des neurones MAP-2 dans une culture primaire de neurones corticaux lésés par du glutamate conformément à l’exemple. Les résultats sont exprimés en pourcentage par rapport au témoin moyenne ± écart-type (n=4-6/groupe). Témoin = 100 % correspond à milieu sans glutamate One-way ANOVA suivie par un test LSD Fisher’s test. *p FIG. 2 La figure 2A représente l’effet d’une association de mémantine (à 500 pM) et de cholécalciférol (à des doses variant de 5 nM à 80 nM) sur la survie des neurones MAP-2 dans une culture primaire de neurones corticaux lésés par du glutamate conformément à l’exemple. Les résultats sont exprimés en pourcentage par rapport au témoin moyenne ± écart-type (n=4-6/groupe). Témoin = 100 % correspond à milieu sans glutamate. One-way ANOVA suivie par un test LSD Fisher’s test. *p FIG. 3 La figure 3A représente l’effet d’une association de mémantine (à 1 nM) et de cholécalciférol (à des doses variant de 5 nM à 80 nM) sur la survie des neurones MAP-2 dans une culture primaire de neurones corticaux lésés par du glutamate conformément à l’exemple. Les résultats sont exprimés en pourcentage par rapport au témoin moyenne ± écart-type (n=4-6/groupe). Témoin = 100 % correspond à milieu sans glutamate. One-way ANOVA suivie par un test LSD Fisher’s test. *p FIG. 4 La figure 4A représente l’effet d’une association de mémantine (à 10 nM) et de cholécalciférol (à des doses variant de 5 nM à 80 nM) sur la survie des neurones MAP-2 dans une culture primaire de neurones corticaux lésés par du glutamate conformément à l’exemple. Les résultats sont exprimés en pourcentage par rapport au témoin moyenne ± écart-type (n=4-6/groupe). Témoin = 100 % correspond à milieu sans glutamate. One-way ANOVA suivie par un test LSD Fisher’s test. *p EXEMPLE : PREVENTION DE LA TOXICITE DU GLUTAMATE DES CELLULES NEURONALES PAR DIFFERENTES CONCENTRATIONS DE MEMANTINE, DE CHOLECALCIFEROL ET D’UNE COMPOSITION SYNERGIQUE SELON L’INVENTION L’excitotoxicité du glutamate est responsable de la mort neuronale dans les troubles neurologiques aigus, y compris les maladies neurodégénératives. La perte de l'homéostasie du calcium est un médiateur clé de la mort cellulaire induite par le glutamate. Les inventeurs ont testé la mémantine seule pour sa capacité à prévenir ou à réduire les effets toxiques du glutamate sur les neurones corticaux primaires lésés par le glutamate. 1.1 Matériel et méthodes 1.1.1 Cultures primaires de neurones corticaux Toutes les expériences ont été réalisées conformément au guide des Instituts Nationaux de la Santé pour le soin et l'utilisation des animaux de laboratoire et ont suivi les réglementations actuelles de l'Union européenne (directive 2010 / 63 / UE). Numéro de l'accord : B1301310. Les neurones corticaux de rats ont été mis en culture comme décrit par Callizot et al . (J. Neurosc. Res. (2013), 91(5), 706-716). Des rattes gravides (Wistar) de 15 jours de gestation ont été tuées en utilisant une anesthésie profonde avec chambre à CO 2 et une dislocation cervicale. En bref, les fœtus ont été recueillis et immédiatement placés dans un milieu Leibovitz L15 glacé avec une solution (PS) de pénicilline (10 000 U/mL) et de streptomycine (10 mg/mL) à 2 % et une solution de sérum albumine bovine (BSA) à 1 %. Les cortex ont été traités pendant 20 minutes à 37°C avec une solution de trypsine et d'EDTA à une concentration finale de 0,05 % de trypsine et 0,02 % d'EDTA. La dissociation a été arrêtée par l'ajout du milieu Eagle's modifié de Dulbecco (DMEM) avec 4,5 g/L de glucose, contenant de la DNAse I grade II (concentration finale 0,5 mg/mL) et 10 % de sérum de veau fœtal (FCS). Les cellules ont été dissociées mécaniquement par trois passages forcés à travers l'embout d'une pipette de 10 mL. Les cellules ont ensuite été centrifugées à 515 x g pendant 10 minutes à 4°C. Le surnageant a été jeté, et le culot a été remis en suspension dans un milieu de culture défini composé d'un milieu neurobasal avec une solution à 2 % de supplément B27, 2 mmol/L de L-glutamine, 2 % de solution PS, et 10 ng/mL de facteur neurotrophique dérivé du cerveau (BDNF). Les cellules viables ont été comptées dans un cytomètre Neubauer, en utilisant le test d'exclusion au bleu de trypan. Les cellules ont été ensemencées à une densité de 25 000 cellules par puits dans des plaques de 96 puits pré-enrobées de poly-L-lysine et ont été cultivées à 37°C dans un incubateur air (95 %) - CO 2 (5 %). Pour éviter tout effet de bord, les première et dernière colonnes ainsi que les première et dernière lignes des plaques de culture n'ont pas été utilisées dans l'étude. Les puits vides ont été remplis d'eau. Le milieu a été renouvelé tous les 2 jours. 1.1.2 Composés testés et exposition au glutamate Pré-incubation : au 13 ème jour de culture, la mémantine (chlorhydrate de mémantine SIGMA ALDRICH) et le cholécalciférol (SIGMA ALDRICH), ont été dilués dans le milieu de culture tel que défini au point 1.1.1. jusqu'à une concentration finale de 1x et préincubés avec des neurones corticaux primaires pendant 1h, avant l'exposition au glutamate. Traitement au glutamate : le 13 ème jour de la culture, le glutamate a été ajouté à une concentration finale de 20 µM diluée dans le milieu de culture encore en présence des composés (seuls ou en association) pendant 20 minutes. Après 20 minutes, le glutamate a été éliminé par lavage et un peu de milieu de culture frais avec les composés à tester a été ajouté pendant 48 heures supplémentaires. 1.1.3 Immunomarquage : MAP-2 (survie et réseau de neurones) MAP-2 est un marqueur neuronal présent dans les corps cellulaires et les neurites des neurones, et qui permet d'étudier la survie des neurones et la longueur du réseau neuritique. 48 heures après l'application du glutamate, le surnageant de culture cellulaire a été éliminé. Les cellules ont été fixées par une solution froide d'éthanol (95 %) et d'acide acétique (5 %) pendant 5 minutes à -20 °C. Les cellules ont été lavées deux fois dans du tampon phosphate salin (PBS). Les cellules ont été perméabilisées et les sites de fixation non spécifiques bloqués avec une solution de PBS contenant 0,1 % de saponine et 1 % de sérum de veau fœtal pendant 15 minutes à température ambiante. Les cultures ont ensuite été incubées pendant 2 heures avec un anticorps monoclonal de souris anti-microtubule-associé à la protéine 2 (MAP-2), à une dilution de 1/400, dans du PBS contenant 1 % de sérum de veau fœtal et 0,1 % de saponine. Cet anticorps a été révélé par une IgG anti-microtubule de chèvre Alexa Fluor 488 (Molecular Probes) (dilution au 1/400) dans du PBS contenant 1 % de sérum de veau fœtal, 0,1 % de saponine, pendant 1 heure à température ambiante. 1.1.4 Analyse automatique par ordinateur Pour chaque condition, 30 photos (représentatives de l'ensemble de la zone du puits) par puits ont été prises en utilisant ImageXpress® (Molecular Devices) avec un grossissement de 20 fois. Toutes les images ont été générées en utilisant les mêmes paramètres d'acquisition. À partir des images, des analyses ont été automatiquement effectuées par MetaXpress® (Molecular Devices). Les données suivantes ont été examinées : - la survie totale des neurones (nombre de neurones MAP-2 positif) ; les données sont exprimées en nombre moyen de neurones de 30 images par puits. - le réseau total de neurones (MAP-2 en µm) ; les données sont exprimées en longueur moyenne du réseau de neurones de 30 images par puits. 1.1.5 Analyse statistique Toutes les valeurs ont été exprimées en moyenne +/- SEM (écart-type de la moyenne). L'analyse statistique a été effectuée par ANOVA à sens unique, suivie d'un test de Dunnett ou de Fisher au LSD. p 1.1.6 Résultats * Effets de la mémantine seule sur des neurones corticaux lésés par du glutamate Ils sont donnés dans les figures 1A et 1B. Le stress glutamatergique induit une perte de neurones corticaux (figure 1A) et un rétrécissement du réseau neuritique total (figure 1B). La mémantine utilisée seule montre des effets neuroprotecteurs, car elle améliore fortement la survie neuronale à toutes les concentrations testées comprises entre 50 nM et 10 µM. En outre, un effet protecteur important sur le réseau neuritique a été observé pour des concentrations de 100 nM à 10 µM. Seules les deux concentrations les plus faibles (500 pM et 10 nM) sont inactives. Lorsque la mémantine est utilisée seule, on observe un effet neuroprotecteur (survie et réseau neuritique) fonction de la dose. * Effets d’une association synergique de mémantine et de cholécalciférol sur des neurones corticaux lésés par du glutamate Ils sont donnés dans les figures 2A, 2B, 3A, 3B, 4A et 4C. Les 3 premières doses inactives pour la mémantine ont été sélectionnées, à savoir les doses de 500 pM, 1 et 10 nM. Chacune de ces doses de mémantine a été testée en association avec le cholécalciférol a des doses allant de 5 nM à 80 nM, doses également très basses. Le stress glutamatergique induit une perte de neurones corticaux (figure 2A, 3A et 4A) et un rétrécissement du réseau neuritique total (figure 2B, 3B et 4B). Ces résultats montrent : - pour une concentration en mémantine de 500 pM, on observe un effet neuroprotecteur significatif de l’association mémantine + cholécalciférol à la fois sur la survie des neurones et sur le réseau neuritique pour des concentrations en cholécalciférol de 35 nM et 50nM. Il est intéressant de remarquer que lorsque la concentration en cholécalciférol est inférieure à 35 nM ou supérieure à 50 nM, cet effet n’est pas observé. - pour une concentration en mémantine de 1 nM, on observe un effet neuroprotecteur significatif de l’association mémantine + cholécalciférol sur la survie des neurones pour des concentrations en cholécalciférol de 20 nM et 35 nM. Il est intéressant de remarquer que lorsque la concentration en cholécalciférol est inférieure à 35 nM ou supérieure à 50 nM, cet effet n’est pas observé. - pour une concentration en mémantine de 1 nM, on observe un effet neuroprotecteur significatif de l’association mémantine + cholécalciférol sur le réseau neuritique pour des concentrations en cholécalciférol de 20 nM, 35 nM et 50nM. Il est intéressant de remarquer que lorsque la concentration en cholécalciférol est inférieure à 20 nM ou supérieure à 50 nM, cet effet n’est pas observé. - pour une concentration en mémantine de 10 nM, on observe un effet neuroprotecteur significatif de l’association mémantine + cholécalciférol à la fois sur la survie des neurones et sur le réseau neuritique pour des concentrations en cholécalciférol allant de 20 nM à 80 nM. Il est intéressant de remarquer que lorsque la concentration en cholécalciférol est inférieure à 20 nM ou supérieure à 80 nM, cet effet n’est pas observé. Ainsi, quelle que soit la concentration en mémantine testée (500 µM, 1 nM, ou 10 nM qui sont toutes les trois des concentrations à laquelle la mémantine seule est inactive vis-à-vis de la protection neuronale, l’association avec du cholécalciférol à une concentration très faible également, de 35 nM, permet d’obtenir une association synergique ayant un effet neuroprotecteur significatif. L’ensemble de ces résultats démontre que l’association de la mémantine avec de la vitamine D permet de diminuer par un facteur d’au moins 100 les doses efficaces de mémantine habituellement utilisées seule dans le traitement de la maladie d’Alzheimer. Sans vouloir être liés par une quelconque théorie, les Inventeurs pensent que ces résultats sont dus à de nouveaux mécanismes d’action parmi lesquels on peut envisager, entre autres, la stimulation d’une autre sous-unité du récepteur NMDA que celle habituellement mise en œuvre avec des doses de mémantine supérieures, ou une modification morphologique de ce récepteur lui-même, et/ou une meilleure utilisation des ions calcium. Composition pharmaceutique comprenant une association synergique de mémantine et de vitamine D et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable, ladite composition étant caractérisée en ce que la dose unitaire de mémantine présente au sein de ladite composition est inférieure à 5 mg et en ce que la dose unitaire de vitamine D présente au sein de ladite composition est inférieure à 0,8 mg. Composition selon la revendication 1, caractérisée en ce que la mémantine se présente sous forme de sel, notamment de chlorhydrate. Composition selon la revendication 1 ou 2, caractérisée en ce que la dose unitaire de mémantine est inférieure ou égale à 0,5 mg et la dose unitaire de vitamine D est inférieure ou égale à 0,08 mg. Composition selon l’une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisée en ce que la dose unitaire de mémantine est de 5 µg à 0,5 mg et la dose unitaire de vitamine D est de 0,8 µg à 8 µg. Composition selon l’une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisée en ce que le rapport molaire mémantine / vitamine D au sein de ladite association synergique est de 1:2 à 1:100. Composition selon l’une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisée en ce que la vitamine D est du cholécalciférol. Composition pharmaceutique selon l’une quelconque des revendications 1 à 6 pour son utilisation dans la prévention ou le traitement des maladies neurodégénératives. Composition pharmaceutique pour son utilisation selon la revendication 7, caractérisée en ce que la maladie neurodégénérative est la maladie d’Alzheimer. Préparation combinée comprenant au moins deux composants individuels, ladite préparation étant caractérisée en ce qu’un premier composant renferme une dose unitaire de mémantine en une quantité inférieure à 5 mg et en ce qu’un deuxième composant renferme une dose unitaire de vitamine D en une quantité inférieure à 0,8 mg, pour une utilisation simultanée, séparée ou séquentielle dans la prévention et/ou le traitement des maladies neurodégénératives, en particulier de la maladie d’Alzheimer.