FR 3160187 A1 20250919 FR 2402531 A 20240314 Procédé pour évaluer la capacité d’un produit à préserver le microbiote cutané Procédé pour déterminer l’aptitude d’un produit à être mis en œuvre dans une formulation cosmétique ou pharmaceutique à usage topique, ledit produit étant une substance chimique ou biochimique de toute nature (S) ou une composition de substances chimiques ou biochimiques de toute nature (C), comprenant une étape de mise en suspension dans un seul milieu de culture adapté à la croissance bactérienne des espèces suivantes : C. xerosis , M. luteus , S. epidermidis , C. acnes et S. mitis , pour former une coculture dans ledit milieu de coculture, du consortium de souches bactériennes desdites cinq espèces susmentionnées, dans des proportions proches de celles retrouvées sur la peau ; suivie d’une mise en contact de ladite coculture dans ledit milieu de coculture du dit produit pendant une durée comprise entre sept et neuf heures, du calcul d’un score (Sc): Sc = Σ(RL espèce X )dans laquelle RL espèce X représente la réduction logarithmique suivante pour une espèce bactérienne donnée et de la détermination de l’aptitude dudit produit, à être mis en œuvre dans une formulation cosmétique ou pharmaceutique à usage topique, consistant à sélectionner ladite substance (S) ou ladite composition (C), lorsque ledit score Sc est inférieur ou égal à 5 et supérieur ou égal à -5 et à écarter ladite substance (S) ou ladite composition (C), lorsque ledit score Sc est supérieur à 5 ou inférieur -5 et que les RL espèce X individuelles de chaque espèce sont comprises entre -3 et 3. Procédé pour évaluer la capacité d’un produit à préserver le microbiote cutané Domaine de l’invention L’invention se rapporte au domaine de la cosmétique. Elle a plus particulièrement pour objet un procédé pour déterminer l’aptitude de produits à modifier le microbiote de la peau humaine (microbiote cutané), lesdits produits étant des substances chimiques ou biochimiques ou des compositions de substances chimiques ou biochimiques. Elle a aussi pour objet un procédé pour sélectionner de tels produits que l’on peut intégrer dans des formulations cosmétiques ou pharmaceutiques destinées à l’hygiène et/ou le soin de la peau humaine, administrées par application topique sur ladite peau humaine. La peau humaine est un organe complexe qui recouvre tout le corps. Elle se compose de trois couches superposées : l’épiderme qui est la couche superficielle en contact avec l’extérieur du corps humain, le derme qui est la couche la plus épaisse, comprend une proportion importante en collagène et en élastine ; on y trouve les vaisseaux sanguins et lymphatiques, les follicules pileux, les glandes sudoripares, les glandes sébacées et les terminaisons nerveuses qui permettent de ressentir le toucher ; l’hypoderme qui est la couche la plus profonde. Il s’agit d’un tissu conjonctif lâche, où passent des vaisseaux sanguins et qui peut contenir du tissu adipeux. Il a pour fonction de protéger des chocs et aide également au maintien d’une température interne adéquate. L'épiderme est un épithélium pluristratifié qui se renouvelle en permanence. Il est principalement composé de kératinocytes (85% à 95%), mais il comporte également des mélanocytes (2% à15%), des cellules de Langerhans (1% à 8%), des fibres nerveuses (moins de 1%) et des cellules de Merkel (moins de1%). Les kératinocytes prolifèrent à partir de la couche basale, puis se différencient progressivement pour donner naissance aux différentes couches épidermiques en migrant de la profondeur de l'épiderme vers sa surface, où la desquamation se produit. La peau est naturellement recouverte de microorganismes qui constituent ensemble le microbiote cutané. Les bactéries représentent au moins 75% de ces microorganismes tandis que les levures et les virus en représentent au plus les 25% restant. La densité de population de ces bactéries présentes sur la peau est estimée à environ 10 4 à 10 6 unités formant colonies (UFC) par centimètre carré. Les zones humides de la peau, comme les aisselles, ou les plis inguinaux, sont notamment colonisées par des bactéries du genre Staphylococcus ; les zones sébacées, comme le front, les ailes du nez ou le haut du dos le sont en plus grande proportion par des bactéries du genre Cutibacterium , alors que les zones sèches comme les avant-bras ou les jambes sont colonisées par une plus grande variété de bactéries comme celles des genres Staphylococcus, Cutibacterium , Micrococcus , Corynebacterium , Enhydrobacter et Streptococcus . Les formulations cosmétiques ou pharmaceutiques à usage topique utilisées à des fins d’hygiène ou thérapeutique, contiennent souvent des substances antimicrobiennes, comme des agents conservateurs, qui ont pour objet de contrôler la prolifération indésirable de microorganismes pathogènes en leur sein. Ces ingrédients actifs biocides peuvent potentiellement diminuer la charge microbienne présente à l’endroit d’application sur la peau. C’est le cas des gels hydro-alcooliques, des dentifrices ou des savons. Il est donc utile d’être capable d’évaluer l’innocuité des composants de formulations cosmétiques à usage topique, vis-à-vis du microbiote cutané. Etat de la technique Il existe aujourd’hui un certain nombre de procédés commerciaux pour certifier qu’une substance chimique ou qu’une composition chimique n’endommage pas le microbiote cutané. Le procédé du laboratoire MyMicrobiome dénommé : « MyMicrobiome Standard 18.10-12 Face and Body Microbiome» comprend quatre étapes : a. Un test de qualité au cours duquel le soin de la peau est testé pour sa contamination par les micro-organismes mésophiles aérobies (bactéries, levures, fungi). La limite de contamination acceptable est inférieure ou égale à10 3 CFU/g ou ml. b. Un test d’équilibre qui permet de vérifier que le soin de la peau ne perturbe pas l'équilibre entre le microorganisme de la peau le plus courant, Staphylococcus epidermidis, et le pathogène le plus commun, Staphylococcus aureus . Pour se faire, une coculture des deux microorganismes est mélangée avec la substance chimique ou la composition, puis incubée pendant quatre heures. Le rapport entre les quantités des deux microbes (en UFC) est comparé au même rapport du groupe témoin non traité. La substance chimique ou la composition ne doit pas avoir favorisé la croissance de Staphylococcus aureus . c. Un test de diversité : Une coculture des microbes typiques du visage et du corps, pour une peau sèche, humide ou grasse, est cultivée puis mélangée à la substance chimique ou la composition à tester. Les modifications dans la diversité de la coculture sont comparées à celles du groupe témoin non traité. La diversité de la coculture doit être préservée. d. Un test de vitalité : Une formulation cosmétique adaptée au soin de la peau du visage ou du corps doit non seulement préserver la diversité, mais aussi ne pas nuire à la croissance des microorganismes. Pour simuler le contact cutané, le test de vitalité comprend deux sous-tests. Dans le premier sous-test, des premiers lots de chaque microorganisme clé sont directement exposés la formulation à tester ; dans le second sous-test, la formulation à tester est placée sur une couche d’agar sous laquelle se trouvent des deuxièmes lots de chaque microorganisme-clé, simulant de ce fait la pénétration potentielle de la formulation dans les couches plus profondes de la peau. La croissance microbienne des deux lots est comparée au groupe témoin non traité. Elle ne doit pas avoir été significativement inhibée. Le laboratoire Labskin dispose d’un essai in vitro dans lequel une coculture de Staphylococcus epidermidis , Cutibacterium acnes , Corynebacterium striatum . Cette coculture est mise en contact pendant vingt-quatre heures avec la substance chimique ou la composition chimique ou la formulation à tester. Les résultats sont comparés à des références non traitées. Le procédé du laboratoire StratiCELL consiste à inoculer des épidermes humains reconstruits (RHE) avec ces souches microbiennes de Staphylococcus aureus ou Staphylococcus epidermidis ou Cutibacterium acnes ou Malassezia furfur puis à surveiller à la fois la croissance bactérienne et la réponse épidermique à l'infection. Cette double approche permet d'objectiver l'influence des substances ou composés actifs dermocosmétiques tels que les compositions ou les substances chimiques à propriétés anti-acnéiques ou anti-inflammatoires. Il permet également d’évaluer l’innocuité de ces compositions ou substances chimiques constitutives des formulations dermocosmétiques. La demande internationale publiée sous le numéro WO 2022/117422 A1 divulgue un procédé de criblage de l’activité biologique d'un composé au moyen d'une culture mixte synthétique, ressemblant à un microbiote cutané, en comparant le niveau de diversité et/ou le profil de diversité d'une culture mixte de micro-organismes synthétiques et la comparaison du niveau de diversité et/ou le profil de diversité d’une culture mixte synthétique non exposée à un ingrédient (microbiote témoin). Le niveau de diversité et/ou au profil de diversité est établi par extraction de l’ADN des cultures, amplification du gène codant l’ARN 16S et analyse des amplicons pour déterminer la proportion de chaque espèce. Au vu de cet état de la technique, il existe un besoin de mettre au point un procédé de sélection de substances ou de compositions chimiques ou biochimiques capables de maintenir stable le microbiote cutané humain. Ce procédé doit être un procédé in vitro , utilisant des souches sauvages et non des souches de collection, cultivées ensemble dans des conditions s’approchant de celles de la surface de la peau, il doit être reproductible, sensible, discriminant, efficace et adapté à une mise en œuvre dans le suivi et le développement de formulations topiques d’hygiène, cosmétiques ou pharmaceutiques. Selon un premier aspect l’invention a pour objet un procédé pour déterminer l’aptitude d’un produit à être mis en œuvre dans une formulation cosmétique ou pharmaceutique topique, ledit produit étant une substance chimique ou biochimique de toute nature (S) ou une composition de substances chimiques ou biochimiques (C), caractérisé en ce qu’ il comprend les étapes suivantes : a. Une étape a ) de mise à disposition de souches bactériennes des cinq espèces suivantes : i) Corynebacterium xerosis , ii) Micrococcus luteus , iii) Staphylococcus epidermidis , iv) Cutibacterium acnes et v) Streptococcus mitis , ladite mise à disposition étant réalisée en cinq groupes isolés, constitués chacun de plusieurs souches bactériennes de l’une des cinq espèces susmentionnées ; b. Une étape b ) au cours de laquelle un échantillon de chacun des dits cinq groupes isolés, constitués chacun de plusieurs souches bactériennes de l’une des cinq espèces susmentionnées mis à disposition à l’étape a ), est prélevé puis mis en culture dans un milieu spécifique approprié, pendant vingt-quatre heures à quatre-vingt-seize heures, pour produire des cultures de souches bactériennes de chacune desdites espèces susmentionnées ; c. Une étape c ) de mise en suspension dans un seul milieu de culture adapté à la croissance bactérienne de la coculture desdites souches bactériennes cultivées à l’ étape b ), pour former une coculture, dans ledit milieu de culture, du consortium de souches bactériennes desdites cinq espèces susmentionnées, dans des proportions proches de celles retrouvées sur la peau ; d. Une étape d ) de mise en contact de ladite coculture dans ledit milieu de coculture obtenue à l’ étape c ), avec ledit produit, pendant une durée comprise entre sept et neuf heures ; e. Une étape e ) de comptage des unités formant bactérie, des bactéries restantes à l’issue de l’ étape d ) ; f. Une étape f ) de calcul d’un score (Sc): [Math 1] Sc = Σ(RL espèce X ) dans laquelle RL espèce X représente la réduction logarithmique suivante pour une espèce bactérienne donnée : [Math 2] RL espèce X = (log UFC/ml dans ledit milieu de coculture en présence dudit produit) – (log UFC/ml dans ledit milieu de coculture en l’absence dudit produit) ; et g. Une étape g ) de détermination de l’aptitude dudit produit à être mis en œuvre dans une formulation cosmétique ou pharmaceutique topique, consistant à sélectionner ladite substance (S) ou ladite composition (C), lorsque ledit score Sc est inférieur ou égal à 5 et supérieur ou égal à -5 et à écarter ladite substance (S) ou ladite composition (C), lorsque ledit score Sc est supérieur à 5 ou inférieur -5, et les RL espèceX individuelles de chaque espèce sont comprises entre -3 et 3. Selon un aspect particulier du procédé tel que défini ci-dessus, le milieu de culture adapté à la croissance bactérienne de l’ensemble desdites souches bactériennes mise en œuvre à l’ étape c ), est un bouillon TSB (Tryptic Soy Broth en langue anglaise) dilué au dixième dans l’eau ayant un pH compris entre 5,2 et 7,0 et, de préférence entre 6,0 et 7,0, et comportant entre 0,5% et 5% en poids de Polysorbate 80 (monolaurate de sorbitanethoxylé (20 moles) N°Cas : 9005-65-6). Selon un autre aspect particulier du procédé tel que défini ci-dessus, les souches bactériennes des espèces Staphylococcus epidermidis, Streptococcus mitis, Micrococcus luteus, Corynebacterium xerosis et Cutibacterium acnes sont mises en suspension à l’ étape c ) dans des proportions telles que les rapports initiaux : unités formant colonie des bactéries de l’espèce Staphylococcus epidermidis sur unités formant colonie des bactéries totales est égal à 0,3% ; unités formant colonie des bactéries de l’espèce Streptococcus mitis sur unités formant colonie des bactéries totales est égal à 2,0% ; unités formant colonie des bactéries de l’espèce Micrococcus luteus sur unités formant colonie des bactéries totales est égal à 6,4% ; unités formant colonie des bactéries de l’espèce Corynebacterium xerosis sur unités formant colonie des bactéries totales est égal à 7,3% ; et unités formant colonie des bactéries de l’espèce Cutibacterium acnes sur unités formant colonie des bactéries totales est égal à 84 %. Selon un autre aspect particulier du procédé tel que défini ci-dessus, l’ étape a ) de mise à disposition desdites cinq souches bactériennes, comprend les sous-étapes successives suivantes : a1. Une sous-étape a1 ) de prélèvement de souches bactériennes sauvages sur les joues d’un panel constitué de six à vingt sujets sains ; a2. Une sous-étape a2 ) d’enrichissement puis de culture des souches des cinq espèces bactériennes sauvages suivantes : i. Corynebacterium xerosis , ii. Micrococcus luteus , iii. Staphylococcus epidermidis , iv. Cutibacterium acnes et v. Streptococcus mitis , à partir de chacun des prélèvements effectués à la sous-étape a1 ) ; a3. Une sous-étape a3 ) d’identification après prélèvement et isolement, des souches bactériennes de chacune des cinq espèces susmentionnées et cultivées lors de la sous-étape a2 ) ; a4. Une sous-étape a4 ) de rassemblement des souches bactériennes de chacune des cinq espèces susmentionnées, cultivées à la sous-étape a2 ) et identifiées à la sous-étape a3 ), pour former cinq groupes isolés constitués chacun, de six à vingt souches bactériennes de l’une des cinq espèces susmentionnées, et a5. Une sous-étape a5 ) de conservation desdits cinq groupes isolés constitués chacun, de six à vingt souches bactériennes de l’une des cinq espèces susmentionnées et formés à la sous-étape a4 ), à une température inférieure à -50°C dans un milieu de conservation constitué d’un milieu de culture standard et d’une solution aqueuse de glycérol à 10% en poids, pendant une durée de conservation non nulle. A l’issue de la sous-étape a5 ) telle que définie ci-dessus, lesdits cinq groupes constitués chacun, de six à vingt souches bactériennes de l’une des cinq espèces susmentionnées sont mis en œuvre à l’ étape b ) du procédé tel que défini précédemment. Par sujet sain, on entend tout être humain ayant tout type de peaux qu’il s’agisse du phototype ou de l’ethnicité, mais n’ayant pas de lésions cutanées comme des boutons ou des rougeurs et ne présentant pas de pathologie reconnue comme l’acné, ou la dermatite atopique. Selon un autre aspect plus particulier du procédé tel que défini ci-dessus, à la sous-étape a2 ) : i. La culture de Corynebacterium xerosis est effectuée sur de la gélose Hoyles pendant soixante-douze heures à 37°C en aérobiose, ii. La culture de Micrococcus luteus est effectuée sur de la gélose au sang ou de la gélose Chapman pendant vingt-quatre heures à 37°C en aérobiose, iii. La culture de Staphylococcus epidermidis est effectuée sur de la gélose Baird Parker pendant vingt-quatre heures à 37°C en aérobiose, iv. La culture de Cutibacterium acnes est effectuée sur de la gélose au sang pendant quarante-huit heures à 37°C en anaérobiose, et v. La culture de Streptococcus mitis est effectuée sur de la gélose au sang, de la gélose GBS ou de la gélose à Mitis salivarius pendant quarante-huit à soixante-douze heures à 37°C en aérobiose. Selon un autre aspect plus particulier du procédé tel que défini ci-dessus, la sous-étape a3 ) d’identification desdites souches bactériennes de chacune des cinq espèces susmentionnées et cultivées lors de la sous-étape a2 ), est réalisée par au moins une des méthodes choisies parmi la consultation de galeries d’identification biochimiques, la spectrométrie de masse et le séquençage du gène 16S. Selon un autre aspect plus particulier du procédé tel que défini ci-dessus, la sous-étape a4 ) est réalisée par prélèvement des colonies sur les géloses et suspension dans le milieu de culture. Selon un autre aspect plus particulier du procédé tel que défini ci-dessus, à l’ étape b ) : i) La culture de l’échantillon de Corynebacterium xerosis est effectuée dans du milieu Brain-Heart + Polysorbate 80 (1,5%) pendant cent-deux heures à 37°C, ii) La culture de l’échantillon de Micrococcus luteus est effectuée dans du milieu liquide TSB pendant vingt-quatre heures à 37°C, iii) La culture de l’échantillon de Staphylococcus epidermidis est effectuée dans du milieu liquide TSB pendant vingt-quatre heures à 37°C, iv) La culture de l’échantillon de Cutibacterium acnes est effectuée dans du milieu Brucella + Polysorbate 80 (1,5 %) pendant cent-deux heures à 37°C, et v) La culture de l’échantillon de Streptococcus mitis est effectuée dans du milieu liquide TSB pendant vingt-quatre heures à 37°C. Exemple Prélèvement des souches bactériennes sauvages : Le prélèvement est effectué en frottant légèrement un écouvillon stérile sur la joue gauche de six volontaires sains. Après un enrichissement pendant deux heures à 37°C dans les milieux appropriés aux souches des cinq espèces de bactéries sélectionnées, les échantillons sont étalés sur les géloses sélectives pour isoler les souches bactériennes sélectionnées. i. La culture de l’échantillon de Corynebacterium xerosis ( C. xerosis ) est effectuée sur de la gélose Hoyles, pendant soixante-douze heures à 37°C en aérobiose ; ii. La culture de l’échantillon de Micrococcus luteus ( M. luteus ) est effectuée sur de la gélose Chapman, pendant vingt-quatre heures à 37°C en aérobiose ; iii. La culture de l’échantillon de Staphylococcus epidermidis ( S. epidermidis ) est effectuée sur de la gélose Baird Parker, pendant vingt-quatre heures à 37°C en aérobiose ; iv. La culture de l’échantillon de Cutibacterium acnes ( C. acnes ) est effectuée sur de la gélose au sang, pendant quarante-huit heures à 37°C en anaérobie et v. La culture de l’échantillon de Streptococcus mitis ( S. mitis ) est effectuée sur de la gélose GBS pendant quarante-huit à soixante-douze heures à 37°C en anaérobiose. Identification des souches bactériennes Les souches bactériennes cultivées sont identifiées en consultant les galeries d’identification biochimiques, par spectrométrie de masse au moyen d’un spectromètre de masse MALDI-TOF (Méthode VITEK® MS, bioMérieux) ou par séquençage du gène 16S. Regroupement des espèces Les souches bactériennes appartenant à la même espèce sont regroupées pour former des groupes homogènes constitués de souches bactériennes d’une seule espèce ; ces groupes sont ensuite répartis dans des microtubes et conservés à -80°C. Coculture des groupes de souches bactériennes a. Le milieu de culture utilisé pour cultiver simultanément un échantillon de souche bactérienne de chacun des groupes est préparé en diluant au dixième dans l’eau du milieu TSB, en y ajoutant 1,5 % de polysorbate 80 et en ajustant le pH milieu à 6,5. b. La coculture des souches est effectuée à 32°C pendant huit heures en anaérobiose pour s’approcher des proportions en espèces de bactéries, représentatives de celles présentes sur la peau des joues après 8 heures d’incubation, à savoir pour 100% d’unités formant colonies (UFC), 58% pour C. acnes , 18% pour S. epidermidis , 14,6% pour S.mitis , 4,4% pour M. luteus et 5% pour C. xerosis . Pour atteindre ce résultat, la coculture est effectuée en respectant les rapports initiaux entre les espèces suivantes : - UFC pour S. epidermidis /UFC des bactéries totales = 0,3% ; - UFC pour S.mitis/ UFC des bactéries totales = 2,0% ; - UFC pour M. luteus / UFC des bactéries totales = 6,4% ; - UFC pour C. xerosis / UFC des bactéries totales = 7,3% ; - UFC pour C. acnes / UFC des bactéries totales = 84%. c. Au bout de huit heures, les proportions obtenues sont pour 100% d’UFC des bactéries totales, de 52% pour C. acnes , 21% pour S. epidermidis , 15% pour S.mitis , 8% pour M. luteus et 4% pour C. xerosis . La reproductibilité de ces résultats a été confirmée en effectuant cinq essais indépendants en suivant le même protocole. L’analyse statistique des résultats de ces essais fait apparaître qu’en ce qui concerne les concentrations bactériennes obtenues le rapport écart-type sur moyenne est inférieur à 3%. Pour mesurer la pertinence du procédé, celui-ci a été mis en œuvre a. sur des produits connus pour être sans effet sur le microbiote : le glucose, l’inuline, la glycine, la proline et le glycérol. L’ensemble des scores obtenus fait apparaître que ces produits sont neutres vis-à-vis des bactéries commensales de la peau, comme indiqué dans le tableau 1 suivant : Produit testé (concentration % massique) Score (Sc) Glucose (0,1%, 1%, 2% 5%) Sc compris entre -1,0 et 2,0 selon les concentrations Inuline (0,1%, 1%) Sc compris entre -1,0 et 1,5 selon les concentrations Glycine (0,1% , 1%) Sc compris entre -2,0 et -4,7 selon les concentrations Proline (0,1% , 1%) Sc compris entre -3,8 et -4,6 selon les concentrations Glycérol (0,1% , 1%) Sc compris entre -2,5 et -4,2 selon les concentrations b. et sur des antibactériens et des solvants couramment utilisés : le phénoxyéthanol, les para hydroxy benzoate d’alkyles ou « parabens » et le pentylèneglycol. Les résultats consignés dans le tableau 2 font logiquement apparaître que la concentration en produit est déterminante. Produit testé (concentration) Score (Sc) Phénoxyéthanol (0,5%) Sc = environ -3 Phénoxyétanol (1%) Sc entre -15 et -25 Methyl- et éthylparabens (0,1%) Sc compris entre -4,5 et -6 Methyl- et éthylparabens (1%) S C inférieur à -40 Pentylèneglycol (0,1%) Sc = -3,5 Pentylèneglycol (1%) Sc = environ -5,7 L’ensemble de ces résultats montre que le procédé objet de la présente invention permet de détecter efficacement et aisément l’innocuité ou l’agressivité d’un produit vis-à-vis du microbiote présent sur la peau humaine. Procédé pour déterminer l’aptitude d’un produit à être mis en œuvre dans une formulation cosmétique ou pharmaceutique topique, ledit produit étant une substance chimique ou biochimique (S) ou une composition de substances chimiques ou biochimiques (C), caractérisé en ce qu’ il comprend les étapes suivantes : a. Une étape a ) de mise à disposition de souches bactériennes des cinq espèces suivantes : i) Corynebacterium xerosis , ii) Micrococcus luteus , iii) Staphylococcus epidermidis , iv) Cutibacterium acnes et v) Streptococcus mitis , ladite mise à disposition étant réalisée en cinq groupes isolés, constitués chacun de plusieurs souches bactériennes de l’une des cinq espèces susmentionnées ; b. Une étape b ) au cours de laquelle un échantillon de chacun des dits cinq groupes isolés, constitués chacun de plusieurs souches bactériennes de l’une des cinq espèces susmentionnées mis à disposition à l’étape a ), est prélevé puis mis en culture dans un milieu spécifique approprié, pendant vingt-quatre heures à quatre-vingt-seize heures, pour produire des cultures de souches bactériennes de chacune desdites espèces susmentionnées ; c. Une étape c ) de mise en suspension dans un seul milieu de culture adapté à la croissance bactérienne de la coculture desdites souches bactériennes cultivées à l’ étape b ), pour former une coculture , dans ledit milieu de culture, du consortium de souches bactériennes desdites cinq espèces susmentionnées, dans des proportions proches de celles retrouvées sur la peau ; d. Une étape d ) de mise en contact de ladite coculture dans ledit milieu de coculture obtenue à l’ étape c ), avec ledit produit, pendant une durée comprise entre sept et neuf heures ; e. Une étape e ) de comptage des unités formant bactérie, des bactéries restantes à l’issue de l’ étape d ) ; f. Une étape f ) de calcul d’un score (Sc): [Math 1] Sc = Σ(RL espèce X ) dans laquelle RL espèce X représente la réduction logarithmique suivante pour une espèce bactérienne donnée : [Math 2] RL espèce X = (log UFC/ml dans ledit milieu de coculture en présence dudit produit) – (log UFC/ml dans ledit milieu de coculture en l’absence dudit produit) ; et g. Une étape g ) de détermination de l’aptitude dudit produit à être mis en œuvre dans une formulation cosmétique ou pharmaceutique topique, consistant à sélectionner ladite substance (S) ou ladite composition (C), lorsque ledit score Sc est inférieur ou égal à 5 et supérieur ou égal à -5 et à écarter ladite substance (S) ou ladite composition (C), lorsque ledit score Sc est supérieur à 5 ou inférieur -5, et les RL espèceX individuelles de chaque espèce sont comprises entre -3 et 3. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que le milieu de culture adapté à la croissance bactérienne de l’ensemble desdites souches bactériennes mise en œuvre à l’ étape c ), est un bouillon TSB (Tryptic Soy Broth en langue anglaise) dilué au dixième dans l’eau ayant un pH compris entre 5,2 et 7,0 et, de préférence entre 6,0 et 7,0, et comportant entre 0,5% et 5% en poids de Polysorbate 80. Procédé selon l’une quelconque des revendications 1 ou 2, caractérisé en ce que les souches bactériennes des espèces Staphylococcus epidermidis, Streptococcus mitis, Micrococcus luteus, Corynebacterium xerosis et Cutibacterium acnes sont mises en suspension à l’ étape c ) dans des proportions telles que les rapports initiaux : unités formant colonie des bactéries de l’espèce Staphylococcus epidermidis sur unités formant colonie des bactéries totales est égal à 0,3% ; unités formant colonie des bactéries de l’espèce Streptococcus mitis sur unités formant colonie des bactéries totales est égal à 2,0% ; unités formant colonie des bactéries de l’espèce Micrococcus luteus sur unités formant colonie des bactéries totales est égal à 6,4% ; unités formant colonie des bactéries de l’espèce Corynebacterium xerosis sur unités formant colonie des bactéries totales est égal à 7,3% ; et unités formant colonie des bactéries de l’espèce Cutibacterium acnes sur unités formant colonie des bactéries totales est égal à 84%. Procédé selon l’une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que l’étape a ) de mise à disposition desdites cinq souches bactériennes, comprend les sous-étapes successives suivantes : a1. Une sous-étape a1 ) de prélèvement de souches bactériennes sauvages sur les joues d’un panel constitué de six à vingt sujets sains ; a2. Une sous-étape a2 ) d’enrichissement puis de culture des souches des cinq espèces bactériennes sauvages suivantes : i. Corynebacterium xerosis , ii. Micrococcus luteus , iii. Staphylococcus epidermidis , iv. Cutibacterium acnes et v. Streptococcus mitis , à partir de chacun des prélèvements effectués à la sous-étape a1 ) ; a3. Une sous-étape a3 ) d’identification après prélèvement et isolement, des souches bactériennes de chacune des cinq espèces susmentionnées et cultivées lors de la sous-étape a2 ) ; a4. Une sous-étape a4 ) de rassemblement des souches bactériennes de chacune des cinq espèces susmentionnées, cultivées à la sous-étape a2 ) et identifiées à la sous-étape a3 ), pour former cinq groupes isolés constitués chacun, de six à vingt souches bactériennes de l’une des cinq espèces susmentionnées, et a5. Une sous-étape a5 ) de conservation desdits cinq groupes isolés constitués chacun, de six à vingt souches bactériennes de l’une des cinq espèces susmentionnées et formés à la sous-étape a4 ), à une température inférieure à -50°C dans un milieu de conservation constitué d’un milieu de culture standard et d’une solution aqueuse de glycérol à 10% en poids. Procédé selon la revendication 4, caractérisé en ce à la sous-étape a2 ) : i. La culture de Corynebacterium xerosis est effectuée sur de la gélose Hoyles pendant soixante-douze heures à 37°C en aérobiose, ii. La culture de Micrococcus luteus est effectuée sur de la gélose au sang ou de la gélose Chapman pendant vingt-quatre heures à 37°C en aérobiose, iii. La culture de Staphylococcus epidermidis est effectuée sur de la gélose Baird Parker pendant vingt-quatre heures à 37°C en aérobiose, iv. La culture de Cutibacterium acnes est effectuée sur de la gélose au sang pendant quarante-huit heures à 37°C en anaérobiose, et v. La culture de Streptococcus mitis est effectuée sur de la gélose au sang, de la gélose GBS ou de la gélose à Mitis salivarius pendant quarante-huit à soixante-douze heures à 37°C en aérobiose. Procédé selon l’une quelconque des revendications 4 ou 5, caractérisé en ce que la sous-étape a3 ) d’identification des souches bactériennes de chacune des cinq espèces susmentionnées et cultivées lors de la sous-étape a2 ), est réalisée par au moins une des méthodes choisies parmi la consultation de galeries d’identification biochimiques, la spectrométrie de masse et le séquençage du gène 16S. Procédé selon l’une quelconque des revendications 4 à 6, caractérisé en ce que la sous-étape a4 ) est réalisée par prélèvement des colonies sur les géloses et suspension dans le milieu de culture.