FR 3156032 A1 20250606 FR 2313531 A 20231204 L’invention concerne une eau minérale naturelle de Treignac destinée à être utilisée en aérosolthérapie dans le cadre de pathologies inflammatoires humaines et animales, l’eau minérale naturelle de Treignac présentant les caractéristiques suivantes : une teneur en Silice, exprimée en SiO 2 , inférieure à 30 mg/L, étant notamment de 6 à 9 mg/L ; un résidu sec à 180°C inférieur à 30 mg/L ; et un pH de 5,5 à 6, l’eau minérale étant concentrée jusqu’à huit fois par osmose inverse, concentration sous vide ou lyophilisation. Elle concerne également une composition aqueuse pour la prévention et/ou le traitement de pathologies inflammatoires, caractérisée par le fait qu’elle consiste en une eau minérale de Treignac concentrée, le cas échéant en combinaison avec au moins un co-agent choisi parmi les agents de formulation compatibles. L’invention concerne en outre un dispositif médical comprenant un dispositif de génération d’aérosol et une eau minérale de Treignac ou la composition de l’invention, conditionnée sous sa forme concentrée, stérile, au volume optimal pour une séance d’aérosolthérapie. Figure à publier avec l’abrégé : Figure 1A DISPOSITIF AÉROSOL D'EAU DE TREIGNAC CONCENTRÉE POUR UNE UTILISATION ANTI-INFLAMMATOIRE EN PNEUMOLOGIE La présente invention porte sur l’eau minérale naturelle de Treignac et son utilisation en aérosolthérapie dans le cadre de pathologies inflammatoires humaines et animales. Parmi ces pathologies inflammatoires, les pathologies inflammatoires bronchiques touchent une proportion élevée de la population et sont actuellement traitées par voie générale et locale par des anti-inflammatoires puissants non dénués d’effets secondaires. Un traitement de fond léger sans effets secondaires serait donc souhaitable et attendu. Par microscopie électronique à balayage, il a auparavant été démontré par des travaux des inventeurs que l’eau de Treignac concentrée était susceptible d’induire la formation de figures fractales de silice condensée, la silice étant le composé majoritaire de cette eau minérale, celle-ci étant dissoute sous forme d’acide orthosilicique (33% du résidu sec) (Agnès Smith et al., Fractal structures and silica films formed by the Treignac water on inert and biological surfaces , Nanoscale Advances, 2020, 2, 3821-3828). L’intérêt de l’eau concentrée réside dans la concentration élevée en acide hydroxysilicique naturel et du respect de l’équilibre ionique de l’eau minérale naturelle. Les études in vitro concernant l’effet filmogène ont montré que les propriétés de l’eau minérale naturelle de Treignac sont conservées et mêmes amplifiées dans l’eau concentrée. En outre, le brevet FR1908259 décrit une composition comportant un constituant filmogène et au moins un extrait de parois cellulaires de champignons comestibles macroscopiques, pour une utilisation par application sur une barrière biologique externe de façon à former un film d’acide orthosilicique condensé piégeant l’extrait de parois cellulaires de champignons. Le constituant filmogène pouvant être constitué par une eau minérale de Treignac naturelle, cette eau minérale à l’état concentré, en particulier concentré par osmose inverse, ou un produit de déshydratation de cette eau minérale concentrée. Pour faire suite à ces études antérieures sur l’effet hydratant, apaisant, filmogène et protecteur de cette eau minérale naturelle, et in vitro, par les inventeurs sur la formation de formes fractales de silice condensée, les inventeurs ont souhaité tester l’effet de cette eau sur des cellules en culture issues d’une muqueuse humaine objet de nombreuses pathologies inflammatoires, à savoir la muqueuse respiratoire. Ils ont donc préalablement testé l’effet biologique de ce produit sur la libération de cytokines impliquées dans les processus inflammatoires bronchiques sur des cellules bronchiques normales en culture par rapport à une autre eau minérale de composition comparable, ainsi qu’à des témoins NaCl. Les inventeurs ont alors constaté de façon surprenante que l’eau minérale naturelle de Treignac brumisée sur les cellules bronchiques en culture induit une inhibition significative de la sécrétion des cytokines IL-6, IL-8 et TNF-α directement impliquées dans les processus inflammatoires. C’est ainsi que l’invention vise à proposer un produit naturel à effet anti-inflammatoire modéré ayant une facilité d’utilisation par les patients sous la forme d’un aérosol généré par des appareils à génération d’aérosol communément utilisés. Ce produit naturel est envisagé permettre de diminuer les doses médicamenteuses locales ou générales qui sont données aux patients dans le cadre de traitements en pneumologie. Des pathologies qui pourraient directement bénéficier de l’utilisation de la présente invention sont, par exemple, l’asthme, la bronchopneumopathie chronique obstructive (BPCO) ou la dilatation des bronches et la mucoviscidose. L’invention propose également un dispositif médical pour l’administration d’une aérosolthérapie à un sujet, ledit dispositif médical utilisant l’eau minérale de Treignac concentrée comme produit naturel à visée anti-inflammatoire. Plus particulièrement, le dispositif médical met en jeu un masque respiratoire pour administrer l’aérosol au sujet. Dans certains modes de réalisation, le produit naturel peut être administré préalablement ou consécutivement à une thérapie anti-inflammatoire classique par la prise de médicaments corticoïdes ou bronchodilatateurs. Description détaillée de l’invention La présente invention a donc d’abord pour objet une eau minérale naturelle de Treignac destinée à être utilisée en aérosolthérapie dans le cadre de pathologies inflammatoires humaines et animales, l’eau minérale naturelle de Treignac présentant les caractéristiques suivantes : une teneur en Silice, exprimée en SiO 2 , inférieure à 30 mg/L, étant notamment de 6 à 9 mg/L ; un résidu sec à 180°C inférieur à 30 mg/L ; et un pH de 5,5 à 6. En particulier, l’eau minérale naturelle de Treignac peut avoir la composition suivante : Calcium 0,9 mg/L Magnésium 0,42 mg/L Sodium 2,80 mg/L Potassium 0,26 mg/L Silice 6,93 mg/L Bicarbonates 3,3 mg/L Chlorures 3,23 mg/L Sulfates 0,65 mg/L Nitrates 3,04 mg/L Nitrites Fluor et les propriétés suivantes: pH 5,7 Résidu sec à 180°C 22mg/L Conductivité 27 µS/cm. L’eau minérale naturelle de Treignac peut être, préalablement à son application, concentrée jusqu’à huit fois par : osmose inverse ; concentration sous vide; ou lyophilisation. L’osmose inverse est une technologie membranaire de séparation basée sur la sélectivité par diffusion. Une membrane semi-perméable est placée entre deux compartiments contenant des solutions de salinité différente. L’osmose est un phénomène naturel qui consiste en la migration de l’eau de la solution la moins concentrée vers la solution la plus concentrée (flux osmotique). Lorsque l’on applique une pression supérieure à la pression osmotique sur la solution la plus concentrée, le flux d’eau est dirigé en sens inverse du flux osmotique. C’est ce principe qui est appliqué. La concentration de l’eau minérale de Treignac peut également s’effectuer par concentration sous vide dans un évaporateur sous vide, ou par lyophilisation, à savoir surgélation puis évaporation sous vide. A titre d’exemple, que ce soit par osmose inverse ou par évaporation sous vide le produit final obtenu après concentration est liquide et, en ciblant une concentration finale de 8X, les valeurs des résidus secs correspondants varient de 160 à 220 mg/L avec une moyenne de 180 mg/L. Les concentrations correspondantes de silice exprimée en SiO 2 varient de 50 à 60mg/L avec une moyenne de 54 mg/L. Dans un mode de réalisation particulier, l’eau concentrée ou le lyophilisat, après resolubilisation dans de l’eau distillée ou permutée stérile, est ultérieurement soumis à une étape de stérilisation par filtration ou préférablement par irradiation gamma. La filtration peut s’effectuer sur filtres à membrane PVDF de 0,22 µm. A titre d’exemple, on peut utiliser un filtre à seringue stérile ø 33 mm porosité 0,2 µm ClearLine® - membrane : PVDF. Dans le mode de réalisation par lequel l’eau minérale naturelle de Treignac est concentrée par lyophilisation,le lyophilisat est resolubilisé par de l’eau distillée ou permutée stérile de façon à obtenir une concentration finale allant de 50 à 60 mg/L de silice exprimée en SiO 2 . A titre d’exemple, partant d’un litre d’eau concentrée de résidu sec 180 mg/L et de concentration en silice de 54mg/L on obtiendra en théorie 180 mg de poudre qu’il faudra dissoudre dans 125 mL d’eau distillée ou permutée. Les pathologies inflammatoires ciblées par la présente invention peuvent être des pathologies inflammatoires respiratoires, en particulier les pathologies inflammatoires respiratoires sont choisies parmi l’asthme, la bronchopneumopathie chronique obstructive, la mucoviscidose, les allergies, la dilatation des bronches, les pathologies interstitielles pulmonaires. Les pathologies inflammatoires ciblées peuvent également être une pathologie inflammatoire de la muqueuse nasale, en particulier une rhinite ou une sinusite. La présente invention concerne également une composition aqueuse pour la prévention et/ou le traitement de pathologies inflammatoires, la composition pouvant consister en une eau minérale telle que définie ci-dessus, le cas échéant en combinaison avec au moins un co-agent choisi parmi les agents de formulation compatibles. Des co-agents à titre d’exemple peuvent être, sans y être limités, un agent pro-hydratant, notamment l’acide hyaluronique. L’eau minérale de Treignac ou la composition de l’invention est destinée à être appliquée par aérosol. On entend par « aérosol » un ensemble de fines particules, solides ou liquides, en suspension dans un milieu gazeux. Pour répondre aux besoins de l’invention, l’aérosol doit contenir des particules dont la taille est inférieure ou égale à 3µm. A cet effet, l’aérosol est produit par un dispositif de génération d’aérosol de type nébuliseur ultrasonique Ultraneb et la taille des particules d’aérosol est inférieure ou égale à 3µm. Un nébuliseur ultrasonique dispose d’un cristal piézo-électrique qui transforme l’impulsion électrique en vibrations. Le contenu aqueux entre donc en vibration et les particules de la solution se dissolvent et sont mélangées à l’air. Plus la fréquence ultrasonique est élevée, plus les gouttelettes obtenues sont fines. Il est également possible d’utiliser un nébuliseur pneumatique qui est doté d’un moteur et composé de deux éléments, le compresseur pneumatique qui produit l’air comprimé et la chambre du nébuliseur dans laquelle la solution se transforme en fines particules. Il est entendu que tout type de nébuliseur ou dispositif de génération d’aérosol adapté à la production d’aérosol remplissant les critères de la présente invention peut être utilisé dans le dispositif médical de l’invention. Le dispositif de génération d’aérosol comporte une cuve destinée à recevoir la solution aqueuse à aérosoliser. En règle générale, les produits utilisés en aérosol en pneumologie sont soit de l’eau physiologique (NaCl 9 g/L) pour hydrater et nettoyer l’arbre bronchique, soit des médicaments (broncho-dilatateurs ou corticoïdes). Le thermalisme utilise également les aérosols (eau minérale, eau de mer) avec utilisation d’un masque ou par respiration d’un brouillard externe, mais aucun des produits utilisés jusqu’ici n’a montré d’activité anti-inflammatoire sur les cytokines locales. L’invention concerne également l’utilisation de cette eau minérale ou de la composition pour le traitement de fond associé le cas échéant au traitement médicamenteux de pathologies inflammatoires chez l’homme et/ou l’animal à l’aide d’un générateur d’aérosol. A cet effet, l’aérosolthérapie à l’eau minérale de Treignac concentrée stérile peut être associée à un traitement anti-inflammatoire à base de corticoïdes ou bronchodilatateurs. Les séances d’aérosolthérapie peuvent être observées à raison de 2 à 3 fois par jour. La présente invention concerne en outre un dispositif médical comprenant un dispositif de génération d’aérosol et une eau minérale de Treignac ou une composition associée, dans lequel l’eau minérale de Treignac ou la composition est conditionnée sous sa forme concentrée, stérile, au volume optimal pour une séance d’aérosolthérapie. On peut prévoir, à cet effet, un volume allant de 5 à 10 mL et une séance d’aérosolthérapie d’une durée allant de 10 à 15 minutes. Le dispositif médical peut être adapté à une utilisation en aérosolthérapie par utilisation d’un dispositif de génération d’aérosol couplé à un masque et/ou embout buccal ou appliqué sans masque ni embout buccal dans une enceinte ou pièce dédiée. Dans un mode de réalisation particulier, le masque est un masque naso-buccal. Dans un autre mode de réalisation particulier, l’aérosolthérapie s’effectue dans une enceinte fermée dédiée. Par ailleurs, le dispositif médical peut être utilisé en soins ambulatoires à l’hôpital, au cabinet médical ou autre centre de soins. Il peut également être utilisé au domicile du sujet. On va maintenant décrire des modes de réalisation particuliers de la présente invention, avec référence aux figures annexées. Sur ces figures : FIG. 1 est un graphique représentant la libération nette d'IL-6 (moyenne de triplicates) par les cellules bronchiques normales en culture stimulées par le Poly(I:C) à 0,3 µg/mL et après aérosolisation dans les différentes conditions de l'Exemple 6 (eau physiologique, eau de Treignac concentrée et eau de Volvic concentrée) ; FIG. 1 est un graphique représentant la libération nette d'IL-8 (moyenne de triplicates) par les cellules bronchiques normales en culture stimulées par le Poly(I:C) à 0,3 µg/mL et après aérosolisation dans les différentes conditions de l'Exemple 6 (eau physiologique, eau de Treignac concentrée et eau de Volvic concentrée) ; FIG. 1 est un graphique représentant la libération nette de TNFα (moyenne de triplicates) par les cellules bronchiques normales en culture stimulées par le Poly(I:C) à 0,3 µg/mL et après aérosolisation dans les différentes conditions de l'Exemple 6 (eau physiologique, eau de Treignac concentrée et eau de Volvic concentrée) ; FIG. 2 est un graphique représentant la libération nette d’IL-6 en pg/mL (moyenne de 9 mesures) par les cellules bronchiques normales en culture dans les différentes conditions de l’Exemple 7 (eau physiologique, NaCl 55 mg/L, Eau de Treignac concentrée), avec une stimulation par Poly(I:C) à 0,3 µg/mL ; FIG. 3 est un graphique représentant la libération spontanée d’IL-6 (moyenne de 9 mesures) après aérosolisation et sans activateur Poly(I:C). Exemple 1 : Préparation d’eau de Treignac concentrée On prépare, par osmose inverse, un concentrat d’eau minérale naturelle de Treignac. L’eau de Treignac de départ a la composition suivante : Calcium 0,9 mg/L Magnésium 0,42 mg/L Sodium 2,80 mg/L Potassium 0,26 mg/L Silice 6,93 mg/L Bicarbonates 3,3 mg/L Chlorures 3,23 mg/L Sulfates 0,65 mg/L Nitrates 3,04 mg/L Nitrites Fluor Dans les conditions techniques suivantes : pression de 10 6 Pa (10 bar) et réfrigération par de l’eau du robinet à 12°C. L’appareil d’osmose inverse utilisé a été fabriqué par la société Techniques Industrielles Appliquées (TIA). Le modèle est le BL 200 procédé membranaire. Les membranes CSM (Customer Satisfaction Membrane) sont des membranes polyamide en composite à couche mince (thin film composite, TFC). La constitution de l’appareil est la suivante : cuve en acier inoxydable d’un volume de 45 L (diamètre de 31,5 cm et hauteur de 57 cm) ; pompe CAT Pumps 311 ; et support pour mise en place de la membrane. Les conditions opératoires pour la tenue de cet essai sont les suivantes : Pression : 10 6 Pa (10 bar) Réfrigération : eau du robinet (température de 12°C). Réalisation de l’essai Avant l’utilisation de l’appareil, ce dernier a été lavé à l’aide d’eau osmosée dont la conductivité était inférieure à 3 µS/com. La cuve en acier inoxydable est ensuite remplie d’eau minérale naturelle de Treignac. Une fois cette cuve remplie, le système d’osmose inverse est mis en fonctionnement. L’eau présente dans la cuve en acier inoxydable transite par ce tuyau également en acier inoxydable. La mesure de la pression de fonctionnement est assurée à ce niveau. L’eau pénètre dans la membrane. La quantité de liquide constituant le perméat est renouvelée par addition d’eau minérale naturelle de Treignac en continu directement dans la cuve. Le fonctionnement de l’appareil est maintenu avec recirculation du concentrat jusqu’à l’obtention d’un volume de concentrat égal au huitième du volume initial d’eau minérale naturelle de Treignac. Il s’agit d’une concentration par facteur huit. Le concentrat présent dans la cuve est ensuite récupéré dans un container. Dosage de la silice Le dosage de la silice est pratiqué par un test au molybdate d’ammonium en cuve HACH Lange LCW 028. La très faible minéralité de l’eau minérale naturelle de Treignac (22 mg de résidu sec à 180°C en moyenne) permet d’obtenir, selon le procédé décrit, une eau osmosée faiblement minéralisée, ayant la même portion de minéraux que l’eau d’origine mais contenant de 55 à 65 mg de silice/L (exprimés en SiO 2 ). Exemple 2 : Préparation d’un concentrat par évaporation sous vide d’eau de Treignac concentrée L’eau minérale naturelle est soumise à un vide de -950 mbar à une température de 40°C. Une ébullition régulière est maintenue pendant 15h à un débit de l’ordre de 6 mL/min afin d’obtenir un concentrat de 8 fois. Exemple 2bis : Préparation d’un lyophilisat d’eau de Treignac concentrée Dans un pot en polypropylène, 300 mL d’eau de Treignac concentrée sont congelés à -20°C. L’eau ainsi congelée est ensuite introduite dans le lyophilisateur Christ alpha 1-4 LSC plus, et laissée jusqu’à totale lyophilisation. Celle-ci permet de récupérer 56,61 mg de résidu sec. Le stockage du résidu obtenu se fait dans un récipient hermétique lui-même stocké dans un dessiccateur afin d’éviter toute réhydratation. Exemple 3 : Préparation d’une pulvérisation (d’un aérosol) à base d’une composition de l’invention La composition de l’invention est obtenue sous forme de solution concentrée 8 fois et stérilisée par irradiation gamma. Cette solution est ensuite introduite dans le réservoir du nébuliseur. Le dispositif de génération d’aérosol est connecté au masque. Exemple 4 : Mise au point des conditions d’aérosolisation pour l’essai in vitro Dispositif de génération d’aérosol : nébuliseur UltraNeb (ref MC201206d1). Les essais ont abouti à une mise au point d’une production d’un aérosol régulier dont la taille des gouttelettes est 2 . Les conditions d’aérosolisation ont été standardisées (saturation d’une enceinte de 5L pendant une heure et une minute de contact avec les plaques) et ont permis l’aérosolisation régulière des plaques et le dépôt de 1µL/cm 2 du produit aérosolisé. Exemple 5 : Mise au point des conditions d’expérimentation in vitro L’essai se place dans un contexte de lutte contre les maladies respiratoires inflammatoires chroniques, notamment la bronchopneumopathie chronique obstructive (BPCO) qui représente la 3 ème cause de mortalité dans le monde. L’hypothèse de travail est donc que l’eau de Treignac concentrée aérosolisée pourrait aller former un film protecteur au niveau des bronchioles et exercer son activité protectrice et/ou diminuer l’intensité des symptômes inflammatoires. Les cellules utilisées dans l’étude sont des cellules épithéliales primaires bronchiques HBEpC (ref : Bioalternatives HBEpC1, utilisées au 5 ème passage, 50000 cellules/puits). Conditions de culture des cellules : 37°C, 5% de CO 2 . Milieu de culture : Milieu de base Airway epithelial cell optimisé pour le test. Le stimulant permettant l’inflammation de cellules est le Poly(I:C) (acide polyinosinique :polycytidylique), analogue synthétique d’ARN double brin car il a été décrit que des ARN double brin (agonistes du TLR3) induisent un réponse inflammatoire proche de celle observée dans le BPCO. Les marqueurs d’inflammation analysés sont l’IL-6, le TNF-α et l’IL-8. Produits testés Eau minérale de Treignac concentrée par osmose inverse : résidu sec 55 mg/L, conductivité 72 µS/cm, SiO2 18,3 mg/L, Na+ 6,2 mg/L, Cl- 9 mg/L, pH 6,9 Eau minérale de Volvic concentrée par osmose inverse : résidu sec 74 mg/L, conductivité 94 µS/cm, SiO2 18 mg/L, Na+ 7 mg/L, Cl- 8 mg/L NaCl 9 g/L (eau physiologique) NaCl 55 mg/L Protocole établi Les cellules normales bronchiques (Bioalternatives HBEpC1) sont réparties dans les plaques 24 puits de façon à être adhérentes et non jointives au bout de 48 heures d’incubation. Les plaques sont vidées de leur milieu et les plaques sont disposées dans une enceinte saturée d’un brouillard de produit à tester issu d’un générateur d’aérosol utilisé en thérapie humaine (Ultraneb – ref MC201206d1), les gouttelettes étant calibrées ( Le dépôt de brouillard a été préalablement standardisé à 1 µg/cm2 en 1 minute. Le milieu de culture est alors ajouté par addition de 0,3 ou 0,1 µg/mL de l’activateur poly(I:C) mimant une infection virale. Au bout de 48 heures, les cytokines sont dosées par ELISA dans les surnageants de culture et les résultats sont exprimés en pg/mL. Exemple 6 : Effet de l’aérosolisation d’eau de Treignac concentrée sur les cellules épithéliales bronchiques in vitro Dans un premier essai, l’eau physiologique NaCl 0,9% et les eaux Eau de Treignac Concentrat et Eau Volvic Concentrat ont été évaluées sur la libération de trois marqueurs d’inflammation, l’IL-6, le TNF-α et l’IL-8, par les cellules HBEpC en condition d’aérosolisation et stimulées ou non par l’activateur Poly(I:C). Le Poly(I:C) (pureté 10%, Sigma, ref. P9582) est en solution stock à 0,5 mg/mL en eau ultrapure et utilisé à une concentration de 0,3 µg/mL. La quantification des trois marques d’inflammation a été réalisée par dosage multiplex par la méthode BD TM Cytometric Bead Array (CBA). Composé testé Aspect/ stockage Application Condition de test Concentration testée Eau physiologique t NaCl 0,9% Liquide Température ambiante Aérosolisation Saturation nébuliseur 60 min, débit 4 puissance 4, 1 min brumisation, 20 min en incubateur à 37°C Pure Eau de Treignac Concentrat* Liquide Stockage : +4°C Aérosolisation Saturation nébuliseur 60 min, débit 4 puissance 4, 6 min brumisation, 20 min en incubateur à 37°C Dilution au 1/3 en eau ultrapure Eau Volvic Concentrat* Liquide Stockage : +4°C Aérosolisation Saturation nébuliseur 60 min, débit 4 puissance 4, 1 min brumisation, 20 min en incubateur à 37°C Dilution au 1/3 en eau ultrapure * stérilisation par filtration 0,22 µm avant utilisation Cultures et traitements Conditions non-aérosolisées Les cellules HBEpC ont été ensemencées en plaques 24 puits et cultivées en milieu de culture pendant 24 heures. Le milieu a ensuite été remplacé par du milieu de culture contenant ou non (témoins et condition Eau de Treignac Concentrat) la référence bafilomycine (inhibiteur de l’effet activateur de Poly(I:C)), testée à 3 nM, et les cellules ont été préincubées pendant 24 heures. Après préincubation, le milieu a été remplacé par du milieu de culture contenant ou non la référence bafilomycine ou le composé Eau de Treignac Concentrat (testé en systémique) et contenant ou non (conditions non-stimulées) l’activateur Poly(I:C), testé à 0,3 µg/mL. Les cellules ont ensuite été incubées 48 heures. Conditions aérosolisées Les cellules HBEpC ont été ensemencées en plaques 24 puits et cultivées en milieu de culture pendant 24 heures. Le milieu a ensuite été remplacé par du milieu de culture contenant ou non la référence bafilomycine, testée à 3 nM, et les cellules ont été incubées pendant 24 heures. Le milieu a été retiré de chaque puits et les plaques ont été placées dans l’enceinte (préalablement saturée en brume pendant 45/60 minutes avec les composés à tester). Les cellules ont été incubées dans cette enceinte afin que les gouttelettes puissent se déposer à la surface du tapis cellulaire, puis dans un incubateur à 37°C. A la fin de l’incubation, le milieu de culture contenant ou non la référence bafilomycine et contenant ou non l’activateur Poly(I:C), testé à 0,3 µg/mL, a été ajouté. Les cellules sont ensuite incubées pendant 48 heures. Toutes les conditions expérimentales ont été réalisées en triplicate. Après incubation, les surnageants de culture ont été collectés afin de doser la quantité d’IL-6, de TNF-α et d’IL-8 secrétée. Dosage multiplex (système CBA) Les quantités de cytokines présentes dans les surnageants de culture ont été mesurée à l’aide de kits BD TM CBA spécifiques : Human IL-6 Flex Set (BD TM Biosciences, Billes A7, Ref. 558276), Human TNF Flex Set (BD TM Biosciences, Billes D9, Ref. 558273) et Human IL-8 Flex Set (BD TM Biosciences, Billes A9, Ref. 558277). Résultats Les résultats observés sur les cellules non brumisées (inhibition par la bafilomycine, libération spontanée des trois cytokines testées et aspect des cultures) sont conformes aux résultats attendus et valident le protocole. Dans les conditions expérimentales du test, en conditions basales (absence de stimulation par le Poly(I:C), l’aérosolisation des HBEpC avec les différentes eaux a induit une augmentation de la libération basale d’IL-6 (entre 305% et 448% du témoin non aérosolisé) et d’IL-8 (entre 272% et 397% du témoin non aérosolisé), sans moduler la libération de TNF-α. La stimulation des cellules aérosolisées par le Poly(I:C) à 0,3 µg/l a présenté les effets suivants, les résultats étant obtenus en triplicates et exprimés en libération nette de cytokine, représentant la différence entre la libération des cytokines après activation des cellules et la libération spontanée en absence de stimulation par l’activateur Poly(I:C) : relargage d’IL-6 : dans toutes les conditions aérosolisées, la libération nette d’IL-6 par les cellules bronchiques était augmentée, mais cette stimulation était significativement plus faible en réponse à l’Eau de Treignac Concentrat (33,1% du témoin « eau physiologique » (NaCl 9g/L)) ( FIG. 1 ). relargage d’IL-8 : La comparaison de l’effet de l’Eau de Treignac Concentrat à son témoin eau physiologique Nacl 9g/L montrait également un effet inhibiteur de l’Eau de Treignac Concentrat (19,7%) ( FIG. 1 ). relargage de TNF-α : La comparaison de l’effet de l’Eau de Treignac Concentrat à son témoin eau physiologique Nacl 9g/L montrait également une inhibition de 78% par l’Eau de Treignac Concentrat ( FIG. 1 ). L’eau de Volvic testée en parallèle n’a montré aucun effet inhibiteur statistiquement significatif sur la libération des trois cytokines testées. Dans toutes les conditions aérosolisées, la bafilomycine a montré les mêmes effets contre le Poly(I:C) qu’en absence d’aérosolisation. Les résultats obtenus dans cette expérience suggèrent que l’Eau de Treignac Concentrat aurait un effet inhibiteur contre l’activation des cellules bronchiques induite par le Poly(I:C) en diminuant le relargage d’IL-6, d’IL-8 et de TNF-α. Exemple 7 : Effet de l’aérosolisation d’eau de Treignac concentrée sur la libération d’IL-6 par les cellules épithéliales bronchiques in vitro Dans une seconde série d’expériences, l’eau de Treignac Concentrat ainsi que NaCl 55 mg/L (salinité équivalente à l’eau de Treignac concentrée au 1/3) et l’eau physiologique NaCl 9 g/L ont été évalués en hexaplicates sur la libération d’un seul marqueur d’inflammation IL-6 (par dosage ELISA) par les cellules HBEpC en condition d’aérosolisation et stimulées ou non par Poly(I:C). Composé testé Aspect/ stockage Application Condition de test Concentration testée Eau physiologiquet NaCl 0,9% Liquide Température ambiante Aérosolisation Saturation nébuliseur 45 min, débit 4 puissance 4, 2,5 min brumisation, 20 min en incubateur à 37°C NaCl 9 g/L Saturation nébuliseur 45 min, débit 4 puissance 4, 2,25 min brumisation, 20 min en incubateur à 37°C NaCl 55 mg/L (dilution du Nacl 0,9% en eau ultrapure) Eau de Treignac Concentrat* Liquide Stockage : +4°C Aérosolisation Saturation nébuliseur 45 min, débit 4 puissance 4, 6 min brumisation, 20 min en incubateur à 37°C Dilution au 1/3 en eau ultrapure * stérilisation par filtration 0,22 µm avant utilisation ** stérilisation par filtration 0,22 µm après dilution L’activateur Poly(I:C) (pureté 10%, Sigma, ref. P9582) est en solution stock à 0,5 mg/mL en eau ultrapure et utilisé à une concentration de 0,3 µg/mL. Conditions aérosolisées Les cellules HBEpC ont été ensemencées en plaques 24 puits et cultivées en milieu de culture pendant 48 heures avec renouvellement du milieu après 24 heures d’incubation. Le milieu a été retiré de chaque puits et les plaques ont été placées dans l’enceinte (préalablement saturée en aérosol pendant 45 minutes avec les composés à tester). Les cellules ont été incubées dans cette enceinte afin que les gouttelettes puissent se déposer à la surface du tapis cellulaire, puis dans un incubateur à 37°C. A la fin de l’incubation, le milieu de culture contenant ou non (témoins non stimulés) l’activateur Poly(I:C), testé à 0,1 et 0,3 µg/mL, a été ajouté. Les cellules ont ensuite été incubées pendant 48 heures. Après incubation, les surnageants de culture ont été collectés afin de doser la quantité d’IL-6 secrétée. Dosage par ELISA La quantité d’IL-6 présente dans les surnageants de culture a été mesurée à l’aide d’un kit de dosage ELISA selon les instructions des fournisseurs : Human IL-6 Duo Set (R&D Systems, Ref. DY206). Résultats Du fait de la bonne stimulation des cellules bronchiques par le Poly(I:C) à 0,3 µg/mL sur le relargage d’IL-6 et de l’effet inhibiteur marqué de l’Eau de Treignac Concentrat observé, cette expérience a été réalisée pour confirmer l’effet de cette eau sur ce médiateur dans les mêmes conditions techniques. L’effet du Poly(I:C) en absence d’aérosolisation ayant déjà été observé précédemment, ces conditions non aérosolisées n’ont pas été répétées. Dans les conditions expérimentales, en absence de stimulation par Poly(I:C), une libération basale d’IL-6 a été observée dans les différentes conditions aérosolisées, avec une libération statistiquement plus faible après aérosolisation par l’Eau de Treignac Concentrat en comparaison avec les deux témoins NaCl 55 mg/L et NaCL 9 g/L (83% et 80% de ces témoins respectifs). La stimulation des cellules aérosolisées par le Poly(I:C) a globalement induit une augmentation de la libération d’IL-6 par les cellules bronchiques avec un effet dépendant de la concentration de Poly(I:C) : NaCl 55 mg/L : 226% et 287% du témoin aérosolisé Eau de Treignac Concentrat : 215% et 245% du témoin aérosolisé NaCl 9 g/L : 196% et 296% du témoin aérosolisé. En comparant l’effet de l’aérosolisation sur la réponse des cellules à la stimulation par Poly(I:C), l’Eau de Treignac Concentrat a montré un effet inhibiteur sur la libération d’IL-6 (41%)( FIG. 2 ). Les calculs statistiques réalisés sur les 9 valeurs (issues des deux séries d’expériences) concernant la libération d’IL-6 par Poly(I:C) par rapport à l’eau physiologique montrent que l’eau de Treignac induit une inhibition statistiquement significative (34,7%, p Dans les conditions expérimentales précédentes, la libération spontanée d’IL-6 par les cellules bronchiques aérosolisées par l’eau de Treignac concentrat n’est pas significativement différente de la libération spontanée d’IL-6 de ces mêmes cellules aérosolisées par l’eau physiologique (NaCl 9g/L) ( FIG. 3 ). Ces résultats sont en faveur de l’absence de toxicité de l’eau de Treignac concentrat sur les cellules bronchiques en culture. Pour résumer, l’eau de Treignac brumisée sur les cellules bronchiques en culture induit une inhibition significative de la sécrétion des trois cytokines testées. La répétition des expériences pour l’IL-6 (9 mesures) montre une inhibition de 37,4% pour une significativité de p Une première expérience réalisée en triplicate a montré une inhibition significative de la libération des cytokines IL-6 (33,1%), TNF (78%), IL-8 (19,7%) par rapport au témoin eau physiologique NaCl 9 g/L. L’activité de l’eau minérale de Volvic est non significative sur la libération de ces cytokines. Une deuxième série d’expériences a été réalisée en hexaplicate afin de confirmer l’effet de l’eau minérale de Treignac sur la libération d’IL6 par rapport à deux témoins NaCl, à savoir l’eau physiologique NaCl 9g/L comme précédemment, ainsi que NaCl 55 mg/L (correspondant à la salinité de l’eau minérale de Treignac concentrée). L’effet inhibiteur de l’eau de Treignac a de nouveau été confirmé par rapport aux deux témoins. L’analyse des 9 valeurs obtenues lors des expériences 1 et 2 montre une inhibition significative de 41% et une absence de toxicité sur la libération spontanée d’IL-6. L’eau minérale de Treignac concentrée présente également sur ce modèle un effet biologique original : cet effet sur la libération des cytokines pro-inflammatoires peut être qualifié d’anti-inflammatoire. Les inventeurs disposent donc d’une eau minérale concentrée, déjà utilisée en cosmétique, ayant des propriétés anti-inflammatoires modérées sur les principales cytokines impliquées dans les pathologies inflammatoires bronchiques, le tout sans ajout d’actifs chimiques. Un des avantages de la présente invention est que celle-ci, contrairement aux traitements de première intention comme ceux utilisant des corticoïdes ou bronchodilatateurs, reste dépourvue de toxicité. Les résultats des tests de toxicité in vitro et in vivo sur les cellules bronchiques sont en faveur de son utilisation en pneumologie. De plus, concernant la mise en œuvre de l’invention, les volumes nécessaires d’eau minérale de Treignac par patient sont relativement faibles et la matière première est accessible à faible coût. Par ailleurs, le traitement de cette eau à l’échelle industrielle est aisé et peu onéreux. 1 – Eau minérale naturelle de Treignac destinée à être utilisée en aérosolthérapie dans le cadre de pathologies inflammatoires humaines et animales, l’eau minérale naturelle de Treignac présentant les caractéristiques suivantes : une teneur en Silice, exprimée en SiO 2 , inférieure à 30 mg/L, étant notamment de 6 à 9 mg/L ; un résidu sec à 180°C inférieur à 30 mg/L ; et un pH de 5,5 à 6. - Eau minérale concentrée destinée à être utilisée en aérosolthérapie dans le cadre de pathologies inflammatoires humaines et animales, caractérisée par le fait que l’eau minérale naturelle selon la revendication 1 est, préalablement à son application, concentrée jusqu’à huit fois par osmose inverse, concentration sous vide ou lyophilisation, l’eau minérale concentrée présentant les caractéristiques suivantes : une teneur en Silice, exprimée en SiO 2 , se situant dans une plage allant de 6 à 9 mg/L jusqu’à 50 à 65 mg/L ; un résidu sec à 180°C se situant dans une plage allant jusqu’à 160-220 mg/L. - Eau minérale concentrée selon la revendication 2, caractérisée par le fait que l’eau concentrée ou le lyophilisat, après resolubilisation totale dans de l’eau distillée ou permutée stérile, est ultérieurement soumis à une étape de stérilisation par filtration ou préférablement par irradiation gamma. - Eau minérale selon l’une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisée par le fait que les pathologies inflammatoires ciblées sont des pathologies inflammatoires respiratoires, en particulier les pathologies inflammatoires respiratoires sont choisies parmi l’asthme, la bronchopneumopathie chronique obstructive, la mucoviscidose, les allergies, la dilatation des bronches, les pathologies interstitielles pulmonaires. - Eau minérale selon l’une des revendications 1 à 3, caractérisée par le fait que la pathologie inflammatoire est une pathologie inflammatoire de la muqueuse nasale, en particulier une rhinite ou une sinusite. - Composition aqueuse pour la prévention et/ou le traitement de pathologies inflammatoires, caractérisée par le fait qu’elle comprend une eau minérale ou eau minérale concentrée telle que définie à l’une quelconque des revendications 1 à 5, le cas échéant en combinaison avec au moins un co-agent choisi parmi les agents de formulation compatibles. - Eau minérale selon l’une des révendications 1 à 5 ou composition selon la revendication 6, caractérisée par le fait qu’elle est formulée sous forme d’un aérosol. - Eau minérale selon l’une des revendications 1 à 5, 7 ou composition selon l’une des revendications 6 ou 7, caractérisée par le fait que l’aérosol est produit par un dispositif de génération d’aérosol de type nébuliseur ultrasonique et que la taille des particules d’aérosol est inférieure ou égale à 3µm. - Eau minérale selon l’une quelconque des revendications 1 à 5, 7 et 8 ou composition selon l’une quelconque des revendications 6 à 8 destinée à être utilisée en aérosolthérapie en association le cas échéant au traitement médicamenteux de pathologies inflammatoires chez l’homme et/ou l’animal. - Dispositif médical, caractérisé par le fait qu’il comprend un dispositif de génération d’aérosol et une eau minérale de Treignac selon l’une quelconque des revendications 1 à 5, 7 et 8 ou une composition selon l’une quelconque des revendications 6 à 8, dans lequel l’eau minérale de Treignac ou la composition est conditionnée sous sa forme concentrée, stérile, au volume optimal pour une séance d’aérosolthérapie. - Dispositif médical selon la revendication 10, caractérisé par le fait que le dispositif médical est adapté à une utilisation en aérosolthérapie par utilisation d’un dispositif de génération d’aérosol couplé à un masque et/ou embout buccal ou appliqué sans masque ni embout buccal dans une enceinte ou pièce dédiée. - Dispositif médical selon l’une quelconque des revendications 10 ou 11, caractérisé par le fait que le dispositif médical est utilisé en soins ambulatoires à l’hôpital, au cabinet médical ou autre centre de soins. - Dispositif médical selon l’une quelconque des revendications 10 à 12, caractérisé par le fait que le dispositif médical est utilisé au domicile du sujet.