FR 3154005 A1 20250418 FR 2311130 A 20231016 [0001] La présente invention concerne une composition cosmétique pour le soin de la peau comprenant des protozoaires, en particulier des protozoaires du genre amibien Willaertia. COMPOSITION COSMETIQUE COMPRENANT DES PROTOZOAIRES La présente invention concerne une composition cosmétique pour le soin de la peau comprenant des protozoaires, en particulier des protozoaires du genre amibien Willaertia . La peau est un organe important du corps humain car elle constitue la première barrière mécanique, chimique et biologique face aux agressions extérieures et participe à la thermorégulation. La peau est composée de 3 couches principales : l’épiderme, couche superficielle et mince ; le derme, couche plus épaisse et l’hypoderme, couche la plus profonde. La couche externe, l’épiderme, est principalement composée de kératinocytes, de mélanocytes et de cornéocytes, ainsi que des fibres de collagène et des fibres d’élastine qui participent à maintenir les cellules organisées, à l’élasticité et à la fermeté de la peau. Le derme est un tissu conjonctif principalement composé de la matrice extracellulaire produite par des fibroblastes, la principale population cellulaire dermique. La peau peut subir différentes formes d’altérations, notamment la formation de ridules et rides, processus naturel dû au ralentissement de la régénération de la peau et à la détérioration la matrice extracellulaire. Cette altération, due principalement à l’âge, est accélérée par l’exposition aux rayons UV qui dénaturent l’ADN des cellules de la peau et favorisent la formation des tâches de vieillesse en raison de la multiplication des mélanocytes. L’altération peut également être favorisée par d’autres facteurs comme le régime alimentaire, la pollution, le stress ou la qualité de l’hydratation de la peau. Ce vieillissement cutané peut être atténué par l’application de produits cosmétiques induisant : - une régénération de la peau par l’amélioration de la qualité et de l’abondance de la matrice extracellulaire de la peau, - un ralentissement de la mort des cellules de la peau, - une amélioration du renouvellement cellulaire, - une protection de la peau aux UV. Le marché des produits cosmétiques propose une multitude de produits anti-âge, hydratants, régénérants, protégeant du photo-vieillissement ou anti-rides. Ce segment est une industrie en pleine croissance qui a été remise en question ces dernières années en raison de l'origine et de l'impact de ses ingrédients et de ses techniques de fabrication. En mettant l'accent sur la réduction des émissions de dioxyde de carbone et l'amélioration de la dégradabilité des produits, de nombreux ingrédients conventionnels sont rejetés pour répondre aux réglementations plus exigeantes et aux exigences des consommateurs. La biotechnologie est une des solutions pour soutenir et stimuler une croissance plus durable pour l'industrie cosmétique. En effet, de nombreux composés fonctionnels issus de microorganismes comme les bactéries, champignons ou algues ont été développés ces dernières années, présentant des avantages pour la peau grâce à leurs propriétés émulsifiantes, antimicrobiennes ou antioxydantes (Prabhuddha L. Gupta et al. Nat. Prod. Bioprospect. 9, 267–278 (2019)). Une tendance actuelle est de proposer des compositions cosmétiques alliant plusieurs effets cosmétiques. On peut citer à titre d’exemple des compositions étant à la fois hydratantes et régénérantes. La solution pour obtenir un tel résultat est de multiplier les principes actifs dans la composition. La multiplication des principes actifs présente toutefois des inconvénients : - les différents principes actifs peuvent poser des problèmes de formulation ; - la multiplication des actifs sensibilise la peau et pose des problèmes de tolérance aux peaux les plus sensibles et atopiques ; - ces principes sont généralement d’origine synthétique et chimique ; et - le coût de la composition s’en trouve considérablement augmenté. Il existe donc un besoin de mettre sur le marché des compositions cosmétiques, à base de principe cosmétique naturel, permettant d’obtenir des résultats rapides et satisfaisants. Il est également nécessaire de développer des compositions cosmétiques qui soient efficaces sans avoir à multiplier les ingrédients. Résumé Dans ce contexte, les inventeurs ont mis en évidence, de façon totalement inattendue, que les protozoaires, et notamment les protozoaires du genre amibien Willaertia induisent fortement, dans les cellules épithéliales, l’expression de gènes impliqués dans le renouvellement cellulaire, le ralentissement de la mort cellulaire, la protection contre le stress oxydant et les ultraviolets (UV), et induisent plus modérément la cicatrisation et la protection de la peau contre les agents infectieux. Ils ont également montré en utilisant un modèle de peau 3D que les protozoaires protègent la peau du vieillissement intrinsèque et extrinsèque, en particulier lié à l’âge et à l’exposition aux ultraviolets. Ainsi, ces résultats montrent l’intérêt de l’utilisation des protozoaires pour le soin de la peau. Il est proposé une composition cosmétique pour le soin de la peau, de préférence pour prévenir ou réduire un ou plusieurs signes du vieillissement de la peau comprenant des protozoaires du genre amibien Willaertia et un ou plusieurs ingrédients actifs et un ou plusieurs excipients cosmétiques acceptables. De préférence, les protozoaires appartiennent à l’espèce Willaertia magna , de préférence lesdits protozoaires correspondent à la souche déposée sous le numéro PTA 7824 à l’ATCC. Dans un mode de réalisation préféré, lesdits protozoaires sont sous forme lysée. Dans un mode de réalisation particulier, lesdits excipients cosmétiques acceptables sont choisis parmi le groupe consistant en : l’eau, un composant aqueux, un corps gras, un tensio-actif, un colorant, un agent de texture, un conservateur, un humectant, un émulsifiant, un anti-oxydant, un parfum et un solvant. La composition peut être sous la forme d’une lotion, solution, suspension, émulsion, mousse, baume, huile, crème, gel, savon liquide ou savon solide. Selon un autre aspect, il est proposé l’utilisation de la composition décrite précédemment en tant qu’agent anti-âge, de préférence pour prévenir ou réduire un ou plusieurs signes du vieillissement de la peau, en particulier du vieillissement de la peau lié à l’exposition aux ultraviolets, de préférence en augmentant l’épaisseur de l’épiderme, la différenciation du stratum granulosum ou du stratum corneum et/ou en augmentant la qualité et la quantité de la matrice extracellulaire présente dans la peau, dans un mode de réalisation encore préféré, pour favoriser la régénération de la peau, ralentir la mort cellulaire dans la peau ou protéger contre le stress oxydant tel que celui induit par l’exposition aux rayonnements ultraviolets. Selon la présente divulgation, le ou les signes de vieillissements de la peau peuvent être choisis parmi le groupe constitué par : l’apparition de rides ou ridules sur la peau, un relâchement de la peau, une perte d’élasticité, de fermeté ou de densité de la peau. Selon un autre aspect, il est proposé des protozoaires du genre amibien Willaertia pour une utilisation pour protéger la peau contre des agents infectieux chez un sujet, de préférence lesdits protozoaires appartenant à l’espèce Willaertia magna , plus particulièrement à la souche déposée sous le numéro PTA 7824 à l’ATCC ou pour une utilisation pour la cicatrisation de la peau, de préférence lesdits protozoaires appartenant à l’espèce Willaertia magna , plus particulièrement à la souche déposée sous le numéro PTA 7824 à l’ATCC. D’autres caractéristiques, détails et avantages apparaîtront à la lecture de la description détaillée ci-après, et à l’analyse des dessins annexés, sur lesquels : Fig. 1 FIG. 1 montre le niveau d’expression des gènes TLR2 , HAS , et FBL5 dans les cellules humaines épithéliales (ATCC CCL-2) traitées avec un lysat d’amibe Willaertia (PTA-7824) (lot 22.LYO.040) à différentes dilutions. Le contrôle correspond au niveau d’expression dans les cellules non traitées. Fig. 2 FIG. 2 montre le niveau d’expression des gènes BCL2 , PIWI1L , FOXO1 et SGK1 dans les cellules humaines épithéliales (ATCC CCL-2) traitées avec un lysat d’amibe Willaertia (PTA-7824) (lot 22.LYO.040) à différentes dilutions. Le contrôle correspond au niveau d’expression dans les cellules non traitées. Fig. 3 FIG. 3 montre l’analyse histologique de la coloration à l’hématoxyline, phloxine et au safran (HPS) de modèles de peau 3D jeune (à gauche) ou âgée (à droite) non traitées (conditions contrôle). Barre d’échelle : 50 µm. Fig. 4 FIG. 4 montre l’analyse histologique de la coloration à l’hématoxyline, phloxine et au safran (HPS) de modèles de peau 3D âgée non traitée (contrôle à gauche) ou traitée avec le lysat d’amibe Willaertia (PTA-7824) à deux concentrations. Barre d’échelle : 50 µm. Fig. 5 FIG. 5 montre l’analyse histologique HPS (A) et de la coloration Warthin Starry (B) des modèles 3D de peau non traités, non exposées (à gauche) et exposées (à droite) aux ultraviolets (UV). Barre d’échelle : 50 µm. Fig. 6 FIG. 6 montre l’analyse histologique HPS (A) et de la coloration Warthin Starry (B) des modèles 3D de peau exposée aux ultraviolets (UV) non traitée (à gauche) et traitée avec le lysat d’amibe Willaertia (PTA-7824) à deux concentrations. Barre d’échelle : 50 µm. La demanderesse a montré de manière inattendue que les protozoaires et notamment les protozoaires du genre amibien Willaerti a induisent fortement (2 à 5 fois plus que le contrôle) l’expression de gènes impliqués dans la régénération de la peau, le ralentissement de la mort cellulaire dans la peau, la protection contre le stress oxydant, notamment contre les effets des ultraviolets, mais également, de manière modérée, dans la cicatrisation et la protection de la peau contre les agents infectieux (moins de 2 fois par rapport au contrôle). Plus particulièrement, elle a montré dans un modèle de peau 3D que les protozoaires du genre amibien Willaertia réduisent plusieurs signes du vieillissement de la peau, notamment lié à l’exposition aux ultraviolets. Composition cosmétique Dans un premier aspect, la présente demande concerne une composition cosmétique pour le soin de la peau, en particulier pour traiter ou prévenir une altération non-pathologique de la peau, de préférence pour prévenir ou réduire un ou plusieurs signes du vieillissement de la peau, ladite composition comprenant des protozoaires du genre amibien Willaertia . Les protozoaires sont des protistes hétérotrophes mobiles qui ingèrent leur nourriture par phagocytose. Les amibes font parties des formes libres de protozoaires. De préférence, les protozoaires utilisés appartiennent à l’espèce Willaertia magna . De manière encore plus préférentielle, les protozoaires utilisés dans le cadre de l’invention correspondent à la souche déposée le 21 août 2006 sous le numéro PTA 7824 à l’ATCC, cette souche ayant été déposée aux noms du CENTRE NATIONAL DE LA RECHERCHE SCIENTIFIQUE (CNRS) – 3 rue Michel Ange – 75794 PARIS CEDEX 16/France et UNIVERSITE LYON 1 CLAUDE BERNARD – 43 Boulevard du 11 Novembre 1918 – 69622 VILLEURBANNE Cedex/France. Ladite souche déposée est également décrite dans la publication de la demande internationale PCT WO2008/043969. La composition cosmétique de la présente demande comprend de préférence un lysat de protozoaires du genre amibien Willaertia tels que décrits précédemment. Un lysat désigne communément un matériau obtenu à l’issue de la destruction ou dissolution de cellules biologiques par un phénomène de lyse cellulaire exercé par exemple par des agents physiques, chimiques ou biologiques provoquant ainsi la libération des constituants biologiques intracellulaires naturellement contenus dans les cellules du microorganisme considéré. Le lysat peut être obtenu par n’importe quelle méthode bien connue de l’homme du métier, telle que l’homogénéisation à haute pression, ou le broyage. En particulier, les protozoaires du genre amibien Willaertia (e.g. ATCC PTA-7824) sont cultivés en bioréacteurs, récoltés par centrifugation pour éliminer le milieu de culture, puis lysés par broyage mécanique avec un homogénéiseur à haute pression ou à hélice. Dans un mode particulier, le lysat peut être ensuite déshydraté par lyophilisation ou atomisation ou tout autre procédé de séchage. De préférence, la composition cosmétique comprend moins de 1% (p/v) de lysat déshydraté. La composition cosmétique de la présente demande peut également comprendre au moins un excipient cosmétique acceptable. Par « excipient cosmétique acceptable », on entend une substance dépourvue d’effet cosmétique ou biologique en tant que telle, mais utile à l’incorporation de l’agent actif dans la composition cosmétique, à la mise en forme de ladite composition, ou encore à sa stabilité au cours du temps. L’excipient est avantageusement choisi parmi des solvants, des co-solvants (l’éthanol, le glycérol, l'alcool benzylique), des épaississants, des diluants, des antioxydants, des colorants, des filtres chimiques ou physiques contre les rayonnements solaires de type UV A et UV B tels que les filtres de synthèse associés ou non à des filtres constitués de particules capables d’atténuer les effets de ce rayonnement sur la peau, des agents auto-bronzants, des pigments, des charges, des conservateurs, des parfums, humectant, des absorbeurs d’odeur, des huiles essentielles, des vitamines, des acides gras essentiels, des tensioactifs, des polymères filmogènes, des oligo-éléments, des polymères filmogènes, des filtres chimiques ou minéraux, des agents hydratants ou des eaux thermales, des polymères naturels tels que des polysaccharides ou des polypeptides, des dérivés de cellulose, ou encore des polymères synthétiques, et de façon optionnelle en outre au moins un autre agent actif cosmétique. La composition cosmétique selon l’invention comprend avantageusement une phase aqueuse et peut avantageusement se présenter sous toutes les formes normalement utilisées pour une application topique, sous forme d’une solution aqueuse, hydroalcoolique ou huileuse, d’une émulsion huile-dans-eau ou eau-dans-huile, d’un gel aqueux, ou sous toute autre forme pour application topique. Cette composition peut être plus ou moins fluide et avoir l’aspect d’une crème, d’une pommade, d’un lait, d’une lotion, d’une solution, d’une suspension, d’une émulsion, d’un baume, d’une huile, d’un sérum, d’une pâte, d’une mousse, d’un gel, d’un savon liquide ou solide. Elle peut éventuellement être appliquée sur la peau sous forme d’aérosol ou au moyen d’un patch ou d’un masque ou d’un applicateur. La composition cosmétique de la présente demande peut également comprendre d’autres ingrédients actifs qui peuvent être notamment choisis parmi des agents hydratants tels que l’acide hyaluronique ou le glycérol, des agents lissants ou encore des agents anti-rides tels que l’adénosine, des complexes de polymères naturels ou synthétiques produisant sur la peau des films tenseurs au moment de l’application sur la peau, ou bien encore des actifs anti-âge, plus particulièrement des extraits de plantes obtenus par des procédés connus de l’homme du métier et qui agissent sur des cibles biologiques des couches superficielles ou profondes de la peau en particulier, l’épiderme, et le derme, pour maintenir l’élasticité de la peau, produire un effet repulpant, assurer le renouvellement ou la réparation des tissus, le maintien de la barrière cutanée ou agissant sur le teint de la peau. Il peut également s’agir d’actifs éclaircissants ou blanchissants agissant sur les tâches pouvant apparaître avec l’âge, notamment sur les mains. Utilisation cosmétique Les inventeurs dans cette demande ont montré que les protozoaires du genre amibien Willaertia permettaient de prévenir ou réduire un ou plusieurs signes du vieillissement de la peau et pouvaient être utilisés comme un agent anti-âge. Par « agent anti-âge », on entend un agent cosmétique ayant une activité biologique permettant de prévenir ou réduire un ou plusieurs signes du vieillissement de la peau. Le vieillissement de la peau est une altération non-pathologique de la peau, c’est-à-dire un processus physiologique normal, impliquant des facteurs intrinsèques (génétique, hormonal, maladies...) et extrinsèques (UV, stress, agressions climatiques, pollution...), et qui s’amplifie au cours de la vie d’un individu du fait d’un déclin de son système de défense et de son besoin croissant en antioxydants. Les modifications au niveau de la couche cornée, de l’épiderme, de la jonction épidermique et du derme varient en fonction de l’âge de l’individu et se manifestent par des « signes visibles » du vieillissement, qui progressent avec l’âge, plus ou moins vite en fonction de l’individu et de son environnement (facteurs intrinsèques et extrinsèques). Le vieillissement cutané, qu'il résulte d'un phénomène normal de sénescence ou qu'il soit accentué par un facteur extérieur tel que l'exposition aux radiations UV, implique des dysfonctionnements de la différenciation et/ou du renouvellement cellulaire se traduisant par une atrophie de l'ensemble des assises de la peau. D'un point de vue histologique, on observe, entre autres, une diminution de la qualité du derme avec une perte de consistance de la matrice extracellulaire, une diminution de l'épaisseur de l'épiderme et une altération de la couche basale contenant les kératinocytes proliférants. D'un point de vue esthétique, ces altérations se traduisent par une modification de l'aspect de la peau et de ses propriétés mécaniques : la peau est moins lisse et peut présenter des ridules, pouvant conduire avec le temps à la formation de rides profondes. La peau présente également une perte d'élasticité, de densité et de fermeté, pouvant conduire à un affaissement tissulaire et une accentuation des rides. Le vieillissement cutané peut entraîner également l'apparition de tâches pigmentaires. En particulier, les inventeurs ont montré que le traitement d’une peau âgée ou exposée aux UV par des protozoaires, notamment de protozoaires du genre amibien Willaertia , permettait d’augmenter l’épaisseur de l’épiderme, d’augmenter la différenciation terminale du stratum granulosum et/ou du stratum corneum , améliorant ainsi la fonction de barrière cutanée, et d’augmenter la qualité et la quantité de la matrice extracellulaire présente dans la peau, améliorant ainsi l’élasticité, la densité et la fermeté de la peau. Au regard de ces résultats, les protozoaires, notamment les protozoaires du genre amibien Willaertia tels que décrits précédemment, trouvent donc des applications dans le domaine cosmétique en tant qu’agent anti-âge pour prévenir ou réduire un ou plusieurs signes du vieillissement de la peau, en particulier du vieillissement lié à l’exposition aux ultraviolets, de préférence en augmentant l’épaisseur de l’épiderme, la différenciation du stratum granulosum ou du stratum corneum et/ou en augmentant la qualité et la quantité de la matrice extracellulaire présente dans la peau. Ainsi, les protozoaires, notamment les protozoaires du genre amibien Willaertia tels que décrits précédemment peuvent être utilisés pour prévenir ou réduire le relâchement de la peau, améliorer l’élasticité, la fermeté ou la densité de la peau ou prévenir ou réduire les rides et ridules de la peau. En particulier, les inventeurs ont montré que les protozoaires, notamment les protozoaires du genre amibien Willaertia permettaient d’induire dans les cellules épithéliales, l’expression des gènes suivants: HAS (pour «hyaluronan synthase 1 », Gene ID : 3036, mis à jour le 7 septembre 2023) impliqué dans la synthèse de l’acide hyaluronique, BCL2 (pour « BCL2 apoptosis regulator » Gene ID : 596, mis à jour le 17 septembre 2023) impliqué dans l’inhibition de la mort cellulaire, PIWIL1 (pour « piwi like RNA-mediated gene silencing 1 », Gene ID : 9271, mis à jour le 7 septembre 2023) impliqué dans le renouvellement cellulaire et FOXO1 (pour « Forkhead box O1 », Gene ID : 2308, mis à jour le 17 septembre 2023) et SGK 1 (pour « serum/glucocorticoid regulated kinase 1, Gene ID : 6646, mis à jour le 17 septembre 2023) impliqués dans la protection contre les effets des ultraviolets et du stress oxydatif. Ainsi, dans un mode de réalisation préféré, la présente demande concerne l’utilisation de la composition cosmétique telle que décrite précédemment pour : - favoriser la régénération de la peau, de préférence en améliorant le renouvellement cellulaire, en particulier en induisant l’expression du gène PIWIL1 dans les cellules de la peau, - réduire la mort cellulaire dans la peau, en particulier en induisant l’expression du gène BCL2 dans les cellules de la peau, - protéger de la peau contre le stress oxydatif tel que l’exposition aux rayonnements ultraviolets, en particulier en induisant l’expression des gènes FOXO1 et SGK1 dans les cellules de la peau. On entend par « régénération cellulaire de la peau » ou « régénération de la peau » selon la présente demande, le processus par lequel les cellules de l’épiderme se renouvellent continuellement pour maintenir la fonction protectrice et esthétique de la peau. Ce processus implique la formation de nouvelles cellules dans la couche basale de l’épiderme, leur migration vers la surface de la peau, leur kératinisation et leur desquamation. La durée moyenne du cycle de renouvellement cellulaire de la peau est de 28 jours, mais elle peut varier selon l’âge, le type de peau et les facteurs environnementaux. La régénération cellulaire de la peau est essentielle pour préserver la santé, l’hydratation, l’élasticité et l’éclat de la peau. On entend par « mort cellulaire dans la peau » selon la présente demande, le processus d’apoptose qui contribue à l’homéostasie de la peau, en régulant le renouvellement des cellules de l’épiderme. L’apoptose excessive peut entrainer la perte de cellules, une diminution de l’épaisseur de l’épiderme, une réduction de la production de collagène et d’élastine et une augmentation des rides et des taches. Par « stress oxydant » selon la présente demande, on entend notamment un stress résultant des effets toxiques de composés dicarbonylés (ex : glyoxal et méthylglyoxal) sur les protéines. On parle plus généralement de stress oxydant généré par le fonctionnement normal de notre organisme et par des éléments extérieurs (pollution, rayonnement UV), qui se caractérise par la production d’espèces réactives de l’oxygène (ERO ou ROS) qui peuvent réagir avec tous les composants cellulaires, en particulier les protéines et l’ADN, entraînant leur modification par oxydation. Un objet supplémentaire selon l'invention est un procédé cosmétique pour prévenir ou réduire un ou plusieurs signes du vieillissement de la peau chez un individu, comprenant l'administration d'une quantité cosmétique efficace de protozoaires, notamment de protozoaires du genre amibien Willaertia tels que décrits précédemment, de préférence par voie topique, audit individu. Les protozoaires sont typiquement appliqués sur la peau à traiter, par exemple au niveau du visage, du cou, du thorax ou des mains. De préférence, les protozoaires sont présents dans une composition cosmétique telle que décrite précédemment, et sont donc appliqués sous la forme d'une composition cosmétique, par exemple sous la forme d'une crème. Utilisation thérapeutique Les inventeurs ont également montré que les protozoaires, notamment les protozoaires du genre amibien Willaertia permettaient d’induire dans les cellules épithéliales humaines, l’expression des gènes suivants : FBL5 (pour « F-box and leucine rich repeat protein 5 », Gene ID : 26234, mis à jour le 7 septembre 2023) impliqué dans la cicatrisation et TLR2 (pour «toll like receptor 2 », Gene ID : 7097, mis à jour le 7 Septembre 2023) impliqué dans l’immunité anti-infectieuse. Ainsi, dans un autre aspect, la présente demande concerne les protozoaires, notamment les protozoaires du genre amibien Willaertia tels que décrits précédemment pour une utilisation dans la cicatrisation de la peau, en particulier en induisant l’expression du gène FBL5 dans les cellules de la peau ou pour une utilisation pour protéger la peau contre des agents infectieux, en particulier en induisant l’expression du gène TLR2 dans les cellules de la peau chez un sujet. La cicatrisation de la peau est le processus physiologique de réparation tissulaire qui se déclenche suite à une lésion cutanée, qu’elle soit accidentelle, chirurgicale ou pathologique. La cicatrisation de la peau implique plusieurs étapes successives, qui sont la coagulation, l’inflammation, la prolifération et le remodelage. La cicatrisation de la peau vise à restaurer l’intégrité, la fonction et l’aspect de la peau, mais elle peut être entravée par des facteurs individuels, environnementaux ou thérapeutiques. La cicatrisation de la peau peut aboutir à la formation d’une cicatrice, qui est le résultat final de la réparation tissulaire. La cicatrice peut être normale, hypertrophique, atrophique ou chéloïde, selon sa morphologie, sa couleur, sa texture et son relief. L’immunité de la peau est la capacité de la peau à se défendre contre les agents infectieux et les agressions extérieures, en mobilisant des mécanismes de protection à la fois physiques, chimiques et biologiques. L’immunité de la peau repose sur la barrière cutanéomuqueuse, qui est constituée de l’épiderme, de l’épithélium des muqueuses et des sécrétions associées. L’immunité de la peau implique également des cellules et des molécules du système immunitaire, qui reconnaissent et éliminent les éléments étrangers ou dangereux. L’immunité de la peau est essentielle pour préserver la santé, la fonction et l’aspect de la peau, mais elle peut être altérée par des facteurs individuels, environnementaux ou thérapeutiques. Le terme « sujet » ou « patient » doit se comprendre au sens de l’invention comme tout être vivant appartenant au règne animal. De manière préférée, par « sujet » on entend un être humain. La présente divulgation consiste également en l’utilisation des protozoaires, de préférence les protozoaires du genre amibien Willaertia tels que décrits précédemment pour la préparation d’un médicament pour une utilisation pour la cicatrisation de la peau ou pour protéger la peau contre des agents infectieux. Dans un autre mode de réalisation particulier, la présente divulgation est une méthode pour la cicatrisation de la peau ou pour protéger la peau contre des agents infectieux chez un sujet comprenant l’administration d’une quantité thérapeutiquement efficace des protozoaires, de préférence les protozoaires du genre amibien Willaertia tels que décrits précédemment chez ledit sujet. Dans le contexte de la divulgation, une quantité thérapeutiquement efficace fait référence à une dose suffisante pour favoriser la cicatrisation de la peau, notamment en restaurant l’intégrité, la fonction, l’aspect de la peau, en réduisant la durée de la phase inflammatoire ou fait référence à une dose suffisante pour protéger la peau contre des agents infectieux, en diminuant les risques d’infections par des microorganismes. La dose efficace est déterminée et ajustée en fonction de facteurs tels que la composition utilisée, les caractéristiques physiques de l'individu considéré telles que le sexe, l'âge et le poids, la médication concomitante, et d'autres facteurs, que les personnes compétentes dans le domaine médical reconnaîtront. La composition selon la présente divulgation peut être incluse dans une composition pharmaceutique, optionnellement en combinaison avec un excipient pharmaceutiquement acceptable. Le terme « composition pharmaceutique » doit se comprendre comme toute composition destinée à soigner un sujet. Un "excipient pharmaceutiquement acceptable" se réfère à un véhicule qui ne produit pas de réaction indésirable, allergique ou autre réaction fâcheuse lorsqu'il est administré à un mammifère, en particulier un humain, selon le cas. Un support ou excipient pharmaceutiquement acceptable désigne une charge solide, semi-solide ou liquide non toxique, un diluant, un matériau d'encapsulation ou un auxiliaire de formulation de tout type. Exemples Les exemples ci-après permettent d’illustrer l’invention mais n’ont aucun caractère limitatif. Exemple 1 : Détermination de l’activité biologique du Lysat Willaertia magna (souche ATCC PTA-7824) 1. Lysat d’amibe Le lysat d'amibe Willaertia magna (souche ATCC PTA-7824) a été conservé à -20°C. 2. Tests de cytotoxicité - Matériel et méthodes L'analyse de cytotoxicité est effectuée sur des cellules lymphocytaires humaines (ATCC CCL-240) en culture. Brièvement, 1.10 3 cellules lymphocytaires / puits (plaque de 48 puits, fond plat) sont mises en culture dans du milieu Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 complémenté avec du sérum de veau fœtal (10%) et de la pénicilline et streptomycine (5000U/mL, 5000µg/mL respectivement), à 37°C, et sous atmosphère 5% CO2, en présence ou non des dilutions du lysat d’amibe. Toutes les 24 heures, la viabilité des cellules lymphocytaires est évaluée par mesure d'exclusion du bleu Trypan (dilution 1/2). La numération est réalisée sur lame de comptage Kova Glasstic, avec un microscope optique Leica DMI 3000B. Les résultats sont exprimés en pourcentage (%) de viabilité (n=3, moyenne +/- déviation). Le lysat d’amibe a été dilué au 1/10, 1/100, 1/500, 1/1000 (méthode des dilutions successives) dans du milieu RPMI 1640 complémenté avec du sérum de veau fœtal (10%) et de la pénicilline et streptomycine (5000U/mL, 5000µg/mL respectivement). - Résultats [ Tableau 1 ] : % de viabilit é moyenne (n=3, moyenne +1- d é viation standard ) pour une dilution donnée du lysat d’amibe en fonction du temps. Le lysat d’amibe présente une absence de toxicité pour une dilution au 1/500 et au 1/1000. 3. Test d’induction de s gènes d’intérêt L'analyse d'induction des gènes cibles est effectuée sur des cellules humaines épithéliales (ATCC CCL-2) cultivées dans du milieu Eagle modifié par Dubelcco (Dulbecco’s Modified Eagle Medium, DMEM) (GibCo-BRL) complémenté avec du sérum de veau fœtal (10%) et de la pénicilline et streptomycine (5000U/mL, 5000µg/mL respectivement), à 37°C, et sous atmosphère 5% CO2. Brièvement, 1.10 6 cellules humaines épithéliales / puits sont mises en culture dans du milieu DMEM complémenté avec du sérum de veau fœtal (10%) et de la pénicilline et streptomycine (5000U/mL, 5000µg/mL respectivement), à 37°C, et sous atmosphère 5% CO2. Les cellules humaines épithéliales sont stimulées ou non avec du lysat d’amibe (dilution 1/100, 1/500, 1/1000) pendant 8 heures à 37°C, et sous atmosphère 5% CO2. Les ARN totaux sont extraits suivant le protocole RNAeasy de Qiagen, quantifiés par nanodrop (260 nm) et normalisés a 100 ng/µL (stockés a -20°C). Lors de la quantification des ARN totaux, le ratio 260/280 nm est défini. Le ratio 260/280 permet de détecter une contamination des acides nucléiques par des protéines. Sa valeur varie entre 2,0 et 2,2 pour de l'ARN total. Le ratio 260/280 doit se situer entre 2,0 et 2,2. Seuls les échantillons présentant le ratio cité ci-dessus ont été utilisés pour les analyses. Les ARNm contenu dans les échantillons d'ARN totaux sont transformés en ADNc par reverse transcription en utilisant une amorce oligonucléotidique simple brin 18-mer, oligo(dt) 18, puis stockés a -20°C. La PCR quantitative est réalisée sur CFX96 Bio-rad, méthode syber-green en utilisant les amorces spécifiques des gènes d'intérêt cibles. Les résultats sont exprimés en facteur multiplicatif (Fc pour en anglais « fold change ») selon la formule ci-dessous moyennée (n=3, moyenne +/- écart type). Fc = 2^(-ΔΔCt) avec ΔΔCt = (Ct gène cible - Ct gène constitutif) test - (Ct gène cible - Ct gène constitutif) contrôle Le gène constitutif ou gène contrôle est le gène GAPDH codant la glycéraldéhyde-3-phosphate déshydrogénase et les gènes cibles sont: TLR2 (immunité), TGF-beta (multiplication cellulaire, anti-inflammation), R UN X1 (multiplication cellulaire, cohésion tissulaire, différentiation cellulaire), P IWI Ll (renouvellement cellulaire), SGK1 (protection UV, anti stress oxydatif, photo vieillissement), FOXO1 (protection UV, anti stress oxydatif, photo vieillissement), BCL2 (anti-mort cellulaire), HMMR (récepteur acide hyaluronique, mobilité cellulaire), HAS (synthèse acide hyaluronique), COLA1 (synthèse de collagène), FBLS (cicatrisation). [Tableau 2] : Les résultats présentent les Fc (n=3, moyenne +/- écart type) en fonction de la dilution. Les « fold change » supérieurs ou égaux à 1 , 5 sont indiqués en gras. Une lecture du [Tableau 2] indique que les 7 gènes : BCL2 (anti-mort cellulaire), FBL5 (cicatrisation), FOXO1 (protection UV, anti stress oxydatif, photo-vieillissement), SGK1 (protection UV, anti stress oxydatif, photo-vieillissement), HAS (synthèse acide hyaluronique), PIWIL 1 (renouvellement cellulaire), TLR2 (immunité) sont régulés positivement (Fc supérieur ou égal à 1,5) par le traitement avec le lysat d’amibe, et par conséquent peuvent présenter un intérêt cosmétique. Il a été considéré pour le reste de l'analyse les gènes ayant leur expression augmentée d’au moins 1,5 fois par le traitement avec le lysat d’amibe. Ces gènes ont été séparés en deux catégories, afin de procéder à une analyse plus fine: les gènes dont l'augmentation de l'expression est comprise 1,5 et 1,99, et les gènes dont l'augmentation de l'expression est supérieure ou égale à 2. - Les gènes dont l'augmentation de l'expression est comprise entre 1.5 et 1.99. Le traitement avec le lysat d’amibe stimule modérément, dans les cellules humaines, l'expression des fonctions cellulaires suivantes : la cicatrisation ( FBL 5 ), la synthèse de l'acide hyaluronique ( HAS ), l'immunité anti-infectieuse : virus et bactéries ( TLR2 ) ( FIG. 1 ). - Les gènes dont l'augmentation de l'expression est supérieure ou égale à 2. Le traitement avec le lysat d’amibe stimule très fortement, dans les cellules humaines, l'expression des fonctions cellulaires suivantes : protection contre la mort cellulaire ( BCL2 ), renouvellement cellulaire ( PIWIL1 ), protection UV, anti stress oxydatif, photo-vieillissement ( FOXO1 et SGK1 ). Les expressions mesurées sont 2 à 5 fois supérieures au contrôle ( FIG. 2 ). Le maximum d'expression de la protection contre la mort cellulaire ( BCL2 ) se manifeste pour une dilution au 1/1000 du lysat d’amibe. Les maximums d'expressions pour les 3 autres gènes se manifestent pour la dilution 1/500 du lysat d’amibe. Conclusion Le lysat d’amibe Willaertia magna (souche ATCC PTA-7824) est non cytotoxique à partir d'une dilution au 1/500. Le lysat d’amibe stimule modérément l'expression des fonctions cellulaires de cicatrisation, la synthèse de l'acide hyaluronique, et l'immunité anti-infectieuse (virus et bactéries) qui présentent un intérêt cosmétique. Le lysat d’amibe induit très fortement l'expression des fonctions cellulaires d'importance en cosmétique suivante : protection contre la mort cellulaire, renouvellement cellulaire, et protection UV, anti stress oxydatif et photo-vieillissement. Les expressions mesurées sont 2 à 5 fois supérieures par rapport au contrôle. Le lysat d’amibe peut donc être utilisé pour les usages cosmétiques suivants : - protection contre la mort cellulaire des cellules de la peau, - le renouvellement cellulaire des cellules de la peau, - protection contre les effets des UV, - anti stress oxydatif, - protection contre le photo-vieillissement. Exemple 2: Evaluation de l'effet d'un lysat d'amibe Willaertia magna (souche ATCC PTA-7824) sur un modèle de peau 3D âgée (vieillissement intrinsèque) ou exposée à des radiations UV (vieillissement extrinsèque) 1. Matériel et méthodes 1.1 Isolement des cellu l es cutanées Le tissu cutané humain a été prélevé conformément aux principes de la Déclaration d'Helsinki et son utilisation a été déclarée au ministère français de la Recherche (déclaration n° DC-2020-4346). Un consentement éclairé écrit a été obtenu du donneur conformément à la loi française de bioéthique de 2014 (loi 94-954 du 29 Juillet 1994). Des cultures primaires de fibroblastes, de kératinocytes et de mélanocytes humains ont été établies à partir d'une biopsie de peau saine obtenue chez un nourrisson ( 40 ans). Les kératinocytes (normal human epidermal keratinocyte : NHEK) et mélanocytes (normal human epidermal melanocyte : NHEM) de l'épiderme humain normal et les fibroblastes dermiques (normal human dermal fibroblast : NHDF) ont été isolés de la peau humaine comme décrit précédemment (Germain L. et al, 1993). 1.2 Préparation de produits cosmétiques Le lysat d'amibe Willaertia magna (souche ATCC PTA-7824) a été conservé a -20°C. Avant d'être testé sur un modèle de peau en 3D, le lysat d'amibe a fait l'objet d'essais de cytotoxicité afin de vérifier la viabilité des cellules à la concentration recommandée. 1.3 Peau reconstruite en 3D et traitement - Vieillissement intrinsèque Le modèle LabSkin 3D (LabSkin Creations) de peau reconstruite sur toute l'épaisseur a été obtenu en cultivant des NHDF (> 40 ans) dans une matrice composée de collagène, de glycosaminoglycanes et de chitosane (LabSkin matriXTM) pendant 21 jours dans des conditions de culture cellulaire optimisées pour la néosynthèse de la matrice extra-cellulaire (MEC), comme décrit précédemment (Dos Santos M. et al., 2005, Tissue Engineering, 2005 May-Jun;11(5-6)). Les NHEK ont ensuite été ensemencées sur la partie supérieure des constructions équivalentes au derme et élevées à l'interface air/liquide pour permettre la formation du compartiment épidermique. Du dixième jour jusqu'à la fin de la culture au 42 ème jour, les échantillons de peau 3D ont été traités de manière systémique avec du lysat d’amibe Willaertia (PTA-7824) à 0,2E-03 % ou 0,1E-03 %. Les traitements ont été renouvelés à chaque renouvellement de milieu, soit 3 fois par semaine. Des échantillons équivalents de peau récoltés au 42ème jour de la culture cellulaire totale ont été immédiatement fixés dans du formol tamponné neutre 4% (Diapath) pendant 24 heures et inclus dans de la paraffine ou dans un composé OCT (pour en anglais : Optimal cutting temperature) et congelés à -80°C, pour analyse histologique et analyse immuno-histologique, respectivement. Pour chaque condition de culture cellulaire et chaque analyse, des équivalents de peau en 3D ont été produits en trois exemplaires. - Vieillisement extrinsèque Le modèle LabSkin 3D (LabSkin Creations) de peau reconstruite sur toute l'épaisseur a été obtenu en cultivant des NHDF ( Du 10ème jour jusqu'à la fin de la culture au 42ème jour, les échantillons de peau reconstruite en 3D ont été traités de manière systémique avec du lysat d'Amibe comme suit : 0,45E-03 % ou 0,2E-03 %. Les traitements ont été renouvelés à chaque renouvellement de milieu, soit 3 fois par semaine. Au 42ème jour, les constructions tissulaires ont été exposées à 100 mJ/cm 2 UV B . Des échantillons équivalents de peau prélevés au 42ème jour de la culture cellulaire totale ont été immédiatement fixés dans du formol tamponné neutre à 4 % (Diapath) pendant 24 heures et inclus dans de la paraffine ou dans un composé OCT et congelés a -80°C, pour analyse histologique et analyse immuno-histologique, respectivement. Pour chaque condition de culture cellulaire et chaque analyse, des équivalents de peau en 3D ont été produits en trois exemplaires. 1.4 Analyse histologique - Coloration a l'hématoxyline, à la phloxine et au safran Pour évaluer la structure cutanée globale des échantillons, une coloration à l'hématoxyline-phloxine-safran (HPS) a été réalisée. Des coupes en paraffine de 5µm de chaque condition ont été réalisées. Après déparaffinage et réhydratation, les échantillons ont été colorés à l'HPS. Après rinçage, les coupes ont été déshydratées avant le montage des lames avec un milieu de montage hydrophobe. - Coloration de Warthin-Starry Pour évaluer la synthèse de la mélanine, une coloration argentée de Warthin-Starry a été réalisée. Après déparaffinage et réhydratation, les sections ont été incubées avec une solution de nitrate d'argent à 6 % pendant 20 minutes en suivant les instructions du kit du fournisseur (Merck). Le développement de l'argent a été stoppé par une étape de lavage à l'eau. Ensuite, les sections ont été incubées avec un mélange d'hydroquinone et de gélatine. Cette étape a permis le développement des granules de mélanine en brun foncé à noir et la contre-coloration des sections équivalentes de peau en jaune à orange. 1.5 Acquisition des images Les spécimens colorés au HPS et au Warthin-Starry ont été observés à l'aide d'un microscope optique Axioskop 2 Plus (Zeiss), et les images ont été capturées à l'aide de la caméra CCD DS-Ri 1 (Nikon) et du logiciel NIS-Elements (Nikon). Les images de 16 bits ont été sauvegardées dans un format de fichier d'image non compressé (tiff). Neuf images représentatives ont été capturées pour chaque condition de la même manière. 1.6 Analyse statistique Les données ont été évaluées à l'aide d'un test de Student à sens unique, et les différences statistiquement significatives sont indiquées par des astérisques comme suit : *P 2. Résultats Vieillissement intrinsèque 2.1.1 Analyse histologique du modèle de peau vieillissante 3D non traitée. L'analyse histologique du modèle 3D de peau jeune ou vieillissante non-traitée est présentée dans la ( FIG. 3 ). La structure globale de la peau reconstruite âgée est cohérente aux niveaux épidermique et dermique, avec un épiderme pluristratifié, bien différencié de la couche basale au stratum corneum , bien ancré au-dessus de l'équivalent dermique rempli de fibroblastes et d'une matrice extracellulaire (MEC) néosynthétisée. La jonction dermo-épidermique semble cohésive et régulière. Cependant, par rapport au modèle de peau jeune, le vieillissement a une incidence sur les compartiments épidermiques et dermiques. La matrice extracellulaire est moins dense et abondante et est désorganisée, ce qui a un impact sur l’élasticité du tissu et l’hydratation. L’épaisseur de l’épiderme est réduite avec moins de couches de cellules vivantes. De plus, la différenciation terminale est interrompue avec moins de stratum granulosum et stratum corneum ce qui a un impact sur la fonction barrière ( FIG. 3 ). 2.1.2 Analyse histologique d'un modèle 3D de peau vieillissante traité au lysat d'amibe L'analyse histologique du modèle de peau vieillissante en 3D traité avec le lysat d’amibe Willaertia (PTA-7824) est présentée dans la ( FIG. 4 ). Par rapport à la condition âgée non traitée, le traitement avec le lysat d’amibe Willaertia (PTA-7824) à 0,2E-03 % a augmenté l'épaisseur de l'épiderme. De plus, il y a eu une récupération de la différenciation terminale après le traitement par rapport à la condition non traitée. En ce qui concerne le compartiment dermique, le traitement au lysat d’amibe Willaertia (PTA-7824) a amélioré la qualité et l'abondance de la matrice extracellulaire ( FIG. 4 ). Des effets similaires ont été observés avec le traitement au lysat d'amibe à 0,1E-03 %. 2.2 Vieillissement intrinsèque 2.2.1 Analyse histologique d’un modèle 3D de peau non traitée dans des conditions d'exposition aux UV B L'analyse histologique du modèle 3D de peau pigmentée exposée aux UV B est présentée dans la ( FIG. 5 ). La structure globale de la peau reconstruite exposée aux UV B est cohérente au niveau épidermique et dermique, avec un épiderme pluristratifié, bien différencié de la couche basale au stratum corneum , bien ancré au sommet de l'équivalent dermique rempli de fibroblastes et d'une MEC néosynthétisée. La jonction dermo-épidermique semble cohésive et régulière. Cependant, par rapport à la condition non exposée, le stress UV B a un impact sur les compartiments dermique et épidermique. La matrice extracellulaire est moins dense et moins abondante et est désorganisée, ce qui a un impact sur l'élasticité et l'hydratation des tissus. La matrice extracellulaire est également désorganisée. L'épaisseur de l'épiderme est réduite avec moins de couches de cellules vivantes, ce qui a un impact sur la fonction de barrière ( FIG. 5 .A). En ce qui concerne la coloration de Warthin Starry, le stress UV B stimule les mélanocytes qui produisent des pigments de mélanine par rapport à l'état non exposé aux UV B ( FIG. 5 .B). L'analyse histologique du modèle 3D de peau pigmentée exposée aux UV B et traité avec le lysat d’amibe Willaertia (PTA-7824) est présentée dans la ( FIG. 6 ). Comparé aux conditions non traitées et exposées aux UV B , le traitement avec le lysat d’amibe Willaertia (PTA-7824) 0,45E-03 % améliore la qualité et l'abondance de la MEC. De plus, le traitement induit une augmentation de l'épaisseur de l'épiderme ( FIG. 6 .A). Des effets similaires sont observés avec le traitement au lysat d’amibe Willaertia (PTA-7824) à 0,2E-03 %. En ce qui concerne la coloration de Warthin Starry, le traitement au lysat d’amibe Willaertia (PTA-7824) à 0,45E-03 % induit une stimulation modérée des mélanocytes par rapport à la condition non traitée et à la condition exposée aux UV B . Aucune différence n'a été observée entre la condition non traitée et la condition traitée avec 0,2E-03 % de lysat d’amibe Willaertia (PTA-7824) après le stress UV B ( FIG. 6 .B). Conclusions Dans l'ensemble, les résultats histologiques ont démontré des effets bénéfiques du lysat d’amibe Willaertia (PTA-7824) sur le vieillissement intrinsèque et extrinsèque du modèle de peau reconstruite en 3D. Dans la présente demande, il est fait référence au matériel biologique suivant et à la souche: - référence d’identification « Amoeba Willaertia magna : Will.C2c.Maky » et numéro d’enregistrement « PTA-7824 » déposée à l’American Type Culture Collection (ATCC), aux Etats-Unis, le 21 août 2006 par CENTRE NATIONAL DE LA RECHERCHE SCIENTIFIQUE (CNRS) – 3 rue Michel Ange – 75794 PARIS CEDEX 16/France et UNIVERSITE LYON 1 CLAUDE BERNARD – 43 Boulevard du 11 Novembre 1918 – 69622 VILLEURBANNE Cedex/France. Composition cosmétique pour le soin de la peau, de préférence pour prévenir ou réduire un ou plusieurs signes du vieillissement de la peau comprenant des protozoaires du genre amibien Willaertia et au moins un excipient cosmétique acceptable. Composition selon la revendication 1, caractérisée en ce que les protozoaires appartiennent à l’espèce Willaertia magna , de préférence lesdits protozoaires correspondent, à la souche déposée sous le numéro PTA 7824 à l’ATCC. Composition selon la revendication 1 ou 2 caractérisée en ce que lesdits protozoaires sont sous forme lysée. Composition selon l’une des revendications 1 à 3, comprenant un ou plusieurs excipients cosmétiques acceptables choisis parmi le groupe consistant en : l’eau, un composant aqueux, un corps gras, un tensio-actif, un colorant, un agent de texture, un conservateur, un humectant, un émulsifiant, un anti-oxydant, un parfum et un solvant. Composition selon l’une des revendications 1 à 4 sous la forme d’une lotion, solution, suspension, émulsion, mousse, baume, huile, crème, gel, savon liquide ou savon solide. Utilisation d’une composition cosmétique selon l’une des revendications 1 à 5 en tant qu’agent anti-âge, pour traiter ou prévenir une altération non-pathologique de la peau, de préférence pour prévenir ou réduire un ou plusieurs signes du vieillissement de la peau, en particulier du vieillissement de la peau lié à l’exposition aux ultraviolets, de préférence en augmentant l’épaisseur de l’épiderme, la différenciation du stratum granulosum ou du stratum corneum et/ou en augmentant la qualité et la quantité de la matrice extracellulaire présente dans la peau. Utilisation d’une composition cosmétique selon la revendication 6 pour favoriser la régénération de la peau, ralentir la mort cellulaire dans la peau ou protéger contre le stress oxydatif tel que celui induit par l’exposition aux rayonnements ultraviolets. Utilisation d’une composition cosmétique selon l’une des revendications 6 ou 7 dans laquelle le ou les signes de vieillissements de la peau sont choisis parmi le groupe constitué par : l’apparition de rides ou ridules sur la peau, un relâchement de la peau, une perte d’élasticité, de fermeté ou de densité de la peau. Protozoaires du genre amibien Willaertia pour une utilisation pour protéger la peau contre des agents infectieux chez un sujet, de préférence lesdits protozoaires appartenant à l’espèce Willaertia magna , plus particulièrement à la souche déposée sous le numéro PTA 7824 à l’ATCC. Protozoaires du genre amibien Willaertia pour une utilisation pour la cicatrisation de la peau, de préférence lesdits protozoaires appartenant à l’espèce Willaertia magna , plus particulièrement à la souche déposée sous le numéro PTA 7824 à l’ATCC.