FR 3152813 A1 20250314 FR 2309436 A 20230907 L’invention se rapporte au domaine des biotechnologies. L’invention concerne plus particulièrement un procédé enzymatique de synthèse in vitro d’au moins un oligosaccharide phosphate et/ou au moins un polysaccharide phosphate (1) comprenant la fourniture d’une préparation comprenant au moins une enzyme glycoside phosphorylase (10a) ne catalysant pas la formation de liaison osidique 1-1 ; la fourniture d’une composition comprenant au moins un sucre-phosphate substrat de ladite enzyme (10b), ladite composition ne comprenant substantiellement pas de sucre non phosphorylé substrat accepteur de ladite au moins une enzyme glycoside phosphorylase ; la mise en réaction (20) de la préparation comprenant l’au moins une glycoside phosphorylase avec la composition comprenant au moins un sucre-phosphate substrat de ladite enzyme ; l’ obtention (30) d’un mélange comprenant au moins un oligosaccharide phosphate ou au moins un polysaccharide phosphate. Figure à publier avec l’abrégé : Figure 2 Nouveau procédé de synthèse d’oligosaccharides phosphate ou de polysaccharides phosphate L’invention se rapporte au domaine des biotechnologies. Plus particulièrement, l’invention concerne les enzymes actives sur les glucides, et un nouveau procédé de synthèse enzymatique in vitro de polysaccharides phosphate et/ou d’oligosaccharides phosphate, sans extrémités réductrices. Les oligo- et polysaccharides représentent une classe de biomolécules très diverse constituées de chaînes linéaires ou ramifiées d'unités glycosyles liées entre elles par différents types de liaisons α ou β-osidiques. Leur diversité structurale résulte à la fois de la nature des monomères, de la position et de l'anomérie de leurs liaisons covalentes (α- ou β-). Ces molécules jouent des rôles divers et importants dans une multitude de processus cellulaires. En raison de leurs structures et de leurs fonctions biologiques très diversifiées, les oligosaccharides sont utilisés dans un large éventail d'applications dans l'industrie alimentaire, dans l’industrie de la santé, la cosmétique, dans l’industrie chimique. L’utilisation de procédés de synthèse chimique pour les produire à une échelle industrielle présente des coûts élevés et des risques de contamination par des composés chimiques ou intermédiaires de synthèses indésirables. Ces procédés peuvent aussi poser des problèmes de pollution et de retraitement des nombreux solvants générés. La synthèse enzymatique est une alternative particulièrement intéressante à la synthèse chimique car moins énergivore, plus respectueuse de l’environnement que les procédés chimiques, et particulièrement spécifique quant aux produits synthétisés. Le développement de la glycomique et les méthodes analytiques permettent le développement de nouveaux outils aux fins d’identification et de l’exploration des activités des enzymes actives sur les glucides. Ainsi, l’annotation fonctionnelle des nombreuses enzymes actives sur les glucides a permis le développement de la base de données des enzymes actives sur les glucides (CAZy pour, en terminologie anglosaxonne, Carbohydrate-Active enZymes ; http://www.cazy.org), recensant près de 300 familles de modules catalytiques et auxiliaires qui sont accessibles en ligne et contenant plus de 100000 entrées non redondantes. Parmi les enzymes actives sur les glucides, on distingue 3 grandes familles, les glycoside hydrolases (GH), les glycoside transférases (GT) et les glycoside phosphorylases (GP). Les GP sont des catalyseurs précieux pour les biotechnologies blanches, en raison de leur capacité à synthétiser efficacement les oligo- et polysaccharides, sans qu'il soit nécessaire d'utiliser des sucres activés coûteux comme substrats. La réversibilité de la réaction de phosphorolyse en fait des outils attrayants pour la diversification des réactions de glycosylation. Ainsi, les GP sont connues dans l’art et utilisées soit pour produire des monosaccharides phosphate à partir d’oligosaccharides ou de polysaccharides, soit pour synthétiser des oligosaccharides à partir de monosaccharides phosphate et d’un glycoside accepteur (WO 2021/229185 ; Li et al ; 2022). De manière tout à fait inattendue, il a été découvert qu’il est possible d’utiliser ces enzymes pour synthétiser des oligo- et polysaccharides phosphates : Ces enzymes peuvent en effet utiliser un sucre-phosphate à la fois comme donneur de sucre et comme accepteur de sucre pour la synthèse d’oligosaccharides phosphates ( FIG. 2 ), cette réaction est ci-après dénommée « réaction de synthèse de sucres phosphate ». Le procédé de l’invention permet ainsi de produire des oligo- et polysaccharides sans extrémité réductrice car celle-ci est engagée dans la liaison avec le groupement phosphate. Cette propriété est d’un intérêt tout particulier pour de nombreuses applications car cela peut éviter des réactions de Maillard lorsque les sucres sont utilisés dans des formulations comprenant des peptides ou protéines. En outre, comme cela a été évoqué ci-dessus, ces oligo- ou polysaccharides phosphate issus de ce procédé ont des applications multiples par exemple dans le domaine de la nutraceutique et des compléments alimentaires, de la médecine, notamment de la vaccinologie (les sucres étant une composante essentielle de la paroi de certains microorganismes pathogènes), du développement de médicaments, de la formulation pharmaceutique et cosmétologique (Wang et al, 2022 ; Budhathoki et al, 2022). Il existe un besoin fort pour une alternative écologique, fiable et de rendement élevé pour la synthèse de ces composés. Le procédé de la présente invention comble ce besoin. L’invention concerne donc la découverte par les inventeurs d’une nouvelle activité enzymatique de la glycoside phosphorylase de synthèse de sucres phosphate qui, mise en œuvre dans le procédé de l’invention, permet de produire des oligosaccharides phosphate et des polysaccharides phosphate non réducteurs. Ces molécules ont des applications multiples, car les oligosaccharides et les polysaccharides sont utilisés dans de nombreux domaines technologiques. Un objet de la présente invention est donc un procédé enzymatique de synthèse in vitro d’un oligosaccharide phosphate et/ou polysaccharide phosphate comprenant les étapes suivantes : fourniture d’une préparation comprenant au moins une enzyme glycoside phosphorylase ne catalysant pas la formation de liaison osidique 1-1, fourniture d’une composition comprenant au moins un sucre-phosphate substrat de ladite enzyme, ladite composition ne comprenant substantiellement pas de sucre non phosphorylé substrat accepteur de ladite au moins une enzyme glycoside phosphorylase, mise en réaction de la préparation comprenant l’au moins une glycoside phosphorylase avec la composition comprenant au moins un sucre-phosphate substrat de ladite enzyme, obtention d’un mélange comprenant au moins un oligosaccharide phosphate ou un polysaccharide phosphate. Comme évoqué, un tel procédé permet la production simple et spécifique d’oligosaccharides phosphate ou de polysaccharides phosphate non réducteurs sans avoir recours aux procédés de synthèse chimique qui présentent les inconvénients susmentionnés de pollution, de rendement et/ou de spécificité faibles ou insatisfaisants. Selon d’autres caractéristiques optionnelles du procédé, ce dernier peut inclure facultativement une ou plusieurs des caractéristiques suivantes, seules ou en combinaison : l’au moins une enzyme glycoside phosphorylase appartient à une famille d’enzymes à activité glucidique référencée dans la base de données CAZY.org dans les familles suivantes : GH3, GH13_18, GH65, GH94, GH112, GH130, GH149, GH161, GT35, GT108 et GH131. En effet, les GP identifiées par les inventeurs font partie de ces groupes de classification CAZy ; l’au moins un enzyme glycoside phosphorylase correspond à une enzyme référencée sous le numéro d’accession NCBI ou UNIPROT suivant : AAQ05801.1, AUG44408.1, 2207198A, AAD40317.1, AAN24362.1, AAN58596.1, AAO21868.1, AAO33821.1, AAO84039.1, AAX33736.1, ABS59292.1, ADL69407.1, CCA61958.1 , BAN03569.1, AGK37834.1, BAA14344.1, BAF62433.1, CAA30846.1, CAA80424.1, ADP98617.1, ADH62582.1, AEJ61152.1, AAC74391.2, AAV43670.1, ADH99560.1, BAC54904.1, BAD97810.1, CAA11905.1, AAO80764.1, ABX42243.1, ABX43667.1, ABX43668.1, AAE30762.1, ABP66077.1, ADQ05832.1, AAC74398.1, ACL68803.1, ADC90669.1, SHM33122.1, ABX41399.1, ADI00307.1, AAB95491.2, AAC45510.1, AAD36910.1, AAL67138.1, AAQ20920.1, ABD80580.1, ABN51514.1, ADU20744.1, BAA25846.1, BAA28631.1, CAB16926.1, ADU22883.1, BAB71818.1, ABN54185.1, AAC45511.1, BAJ10826.1, ABX81345.1, AAG23740.1, BAC87867.1, CAC97070.1, ABX41081.1, AAM43298.1, ABD80168.1, EAA28929.1, 6HQ6, ABX81671.1, ACL75793.1, ACL76454.1, ACL76688.1, ACL77700.1, AFH48717.1, AHC20114.1, AIQ57809.1, AIQ60507.1, QCO92799.1, QCO92836.1, QCO92991.1, QCO92946.1, QCO92990.1, QCO92945.1, QCO92835.1, ACB74662.1, ABX42289.1, AAO07997.1, ABX40964.1, ABX43387.1, EEG94248.1, ACV29689.1, ZP_05748149.1, ACZ00636.1, ABG83511.1, BAH10636.1, ADL32981.1, AEN95946.1, CAC96089.1, ABY93074.1, ABY93073.1, CAZ94304.1, AAS19693.1, ADU21379.1, ADU20661.1, CAH06518.1, VCV21228.1, AAO76140.1, VCV21229.1, AAD36300.1, WP_026485574.1, WP_026486530.1, ABK05267.1, AUO30192.1, QCO92814.1, WP_019688419.1, ACJ76363.1, BAU78234.1, CBZ24448.1, CBZ24449.1, CBZ24451.1, CBZ24452.1, CAH1385118.1, CAH1385117.1, CAH1385115.1, CAH1385116.1, ADD61463.1, BAD80751.1, ABP51432.1, AAL81659.1, AAD28735.1, ABN51595.1, AAD03471.1, AAC06896.1, AAC00218.1, AAM24997.1, AAM52219.1, BAB98701.1, BAB99480.1, AAC76453.1, AAC76442.1, BAA19592.1, AAD53957.1, AAN59210.1, AAL26558.1, AGL50099.1, BAB11741.1, CAC93400.1, AAB46846.1, ABB88567.1, CAA44069.1, AAA33211.1, AAD46887.1, AAN17338.1, AAL23578..1, AAP33020.1, AAK69600.1, AAB60395.1, CAA75517.1, AAC17451.1, BAK00834.1, AAA63271.1, AAK01137.1, AAL23577.1, AAD30476.1, AAG00588.1, ACJ76617.1, AAK15695.1, BAB92854.1, AAV87308.1, AAB68800.1, AAA41252.1, AAH70901.1, AAA41253.1, AAB68057.1, AAA33809.1, BAA00407.1, CAA52036.1, CAA59464.1, AAL23579.1, AAF82787.1, CAA84494.1 ou CAA85354.1 ou de séquence SEQ ID NO 1 ; Les inventeurs ont notamment identifié un ou des sucres phosphate donneurs pour chacune de ces enzymes, ainsi : le sucre-phosphate substrat est le β-glucose-1P et l’au moins une enzyme glycoside phosphorylase correspond à une enzyme référencée sous le numéro d’accession NCBI ou UNIPROT suivant : AAQ05801.1, AUG44408.1, AAV43670.1, ADH99560.1, BAC54904.1, BAD97810.1, CAA11905.1, AAO80764.1, ABX42243.1, ABX43667.1, ABX43668.1, AAE30762.1, ABP66077.1, ADQ05832.1, AAC74398.1, ACL68803.1, ADC90669.1, SHM33122.1, ABX41399.1, ou ADI00307.1; le sucre-phosphate substrat est le α-mannose-1P et l’au moins une enzyme glycoside phosphorylase correspond à une enzyme référencée sous le numéro d’accession NCBI ou UNIPROT suivant : ADD61463.1, CAC96089.1, ABY93074.1, ABY93073.1, CBZ24449.1, CAH1385118.1, CAH1385117.1, BAJ10826.1, CAZ94304.1, AAS19693.1, ADU21379.1, ADU20661.1, CAH06518.1, VCV21228.1, AAO76140.1, VCV21229.1, AAD36300.1, WP_026485574.1, WP_026486530.1, ABK05267.1, CBZ24448.1, CBZ24451.1, CBZ24452.1, CAH1385115.1, ou CAH1385116.1, ou de séquence SEQ ID NO 1, comme le montre la partie expérimentale les CAC96089.1, ABY93073.1, CBZ24449.1, CAH1385118.1 ou CAH1385117.1sont particulièrement efficaces pour synthétiser des oligo- ou des polysaccharide phosphorylés non réducteurs polymères de résidus mannosyls aux liaisons β-1,2 ou β-1,3, et sont donc particulièrement préférés. le sucre-phosphate substrat est le α-glucose-1P et l’au moins une enzyme glycoside phosphorylase correspond à une enzyme référencée sous le numéro d’accession NCBI ou UNIPROT suivant : 2207198A, AAD40317.1, AAN24362.1, AAN58596.1, AAO21868.1, AAO33821.1, AAO84039.1, AAX33736.1, ABS59292.1, ADL69407.1, CCA61958.1 , BAN03569.1, AGK37834.1, BAA14344.1, BAF62433.1, CAA30846.1, CAA80424.1, ADP98617.1, ADH62582.1, AEJ61152.1, AAC74391.2, AAB95491.2, AAC45510.1, AAD36910.1, AAL67138.1, AAQ20920.1, ABD80580.1, ABN51514.1, ADU20744.1, BAA25846.1, BAA28631.1, CAB16926.1, ADU22883.1, BAB71818.1, ABN54185.1, AAC45511.1, BAJ10826.1, ABX81345.1, CAC97070.1, ABX41081.1, AAM43298.1, ABD80168.1, EAA28929.1, ACL75793.1, ACL76454.1, ACL76688.1, ACL77700.1, AFH48717.1, AHC20114.1, AIQ57809.1, AIQ60507.1, QCO92799.1, QCO92836.1, QCO92991.1, QCO92946.1, QCO92990.1, QCO92945.1, QCO92835.1, AUO30192.1, QCO92814.1, WP_019688419.1, ACJ76363.1, BAU78234.1, 6HQ6, ABP51432.1, AAL81659.1, AAD28735.1, ABN51595.1, AAD03471.1, AAC06896.1, AAC00218.1, AAM24997.1, AAM52219.1, BAB98701.1, BAB99480.1, AAC76453.1, AAC76442.1, BAA19592.1, AAD53957.1, AAN59210.1, AAL26558.1, AGL50099.1, BAB11741.1, CAC93400.1, AAB46846.1, ABB88567.1, CAA44069.1, AAA33211.1, AAD46887.1, AAN17338.1, AAL23578..1, AAP33020.1, AAK69600.1, AAB60395.1, CAA75517.1, AAC17451.1, BAK00834.1, AAA63271.1, AAK01137.1, AAL23577.1, AAD30476.1, AAG00588.1, ACJ76617.1, AAK15695.1, BAB92854.1, AAV87308.1, AAB68800.1, AAA41252.1, AAH70901.1, AAA41253.1, AAB68057.1, AAA33809.1, BAA00407.1, CAA52036.1, CAA59464.1, AAL23579.1, AAF82787.1, CAA84494.1 ou CAA85354.1; le sucre-phosphate substrat est le α-N-acetyl-D-glucosamine-1P et l’au moins une enzyme glycoside phosphorylase correspond à une enzyme référencée sous le numéro d’accession NCBI ou UNIPROT suivant : AAG23740.1, BAC87867.1 ou ABX81671.1, ou le sucre-phosphate substrat est le β-N-acetyl-D-glucosamine-1P et l’au moins une enzyme glycoside phosphorylase correspond à une enzyme référencée sous le numéro d’accession NCBI ou UNIPROT AAQ05801.1 ; le procédé comprend en outre une étape de purification de l’au moins un oligosaccharide phosphate et ou de l’au moins un polysaccharide phosphate, ce qui est d’un intérêt particulier pour faciliter les utilisations ultérieures de ces produits du procédé selon l’invention ; dans le procédé de l’invention la au moins une glycoside phosphorylase est immobilisée. Dans le cas de l’utilisation de GP recombinantes, cela présente l’avantage, notamment, de pouvoir réutiliser indéfiniment celles-ci immobilisées sur leur support, tant qu’elles présentent la nouvelle activité identifiée ici à un niveau satisfaisant. la préparation comprenant au moins une enzyme glycoside phosphorylase est une culture d’un microorganisme tel qu’une bactérie ou une levure ou un champignon exprimant l’au moins une enzyme glycoside phosphorylase. L’utilisation directe de la culture du microorganisme exprimant la GP recombinante peut avantageusement permettre de s’affranchir des étapes de purification de la GP recombinante. ladite mise en réaction s’opère en solution, avec une préparation d’enzyme recombinante purifiée en solution. L’utilisation d’une préparation purifiée de la GP recombinante peut permettre de contrôler efficacement les paramètres de la nouvelle réaction et l’activité de la GP ; ou le maintien de concentrations en excès de l’au moins un sucre-phosphate substrat de la GP. Cela permet notamment de déplacer l’équilibre de la réaction vers la production d’oligo- et/ou polysaccharides phosphate et d’augmenter ainsi le rendement et/ou la production de ceux-ci. Brèves descriptions des Figures La FIG. 1 est un diagramme représentant le procédé selon l’invention. La FIG. 2 représente la réaction catalysée par la glycoside phosphorylase dans le procédé de l’invention. Les 2 sucres-phosphate sont condensés pour produire un oligosaccharide phosphate et un phosphate inorganique, selon le sens 1 de la réaction synthèse de sucres phosphate. La FIG. 3 est le résultat de l’analyse par chromatographie à échange d’anions avec détecteur par ampérométrie pulsée (en terminologie anglosaxonne High Performance Anion Exchange Chromatography with Pulsed Amperometric detection ou « HPAEC-PAD ») des produits obtenus à l’issue du procédé de l’invention utilisant la réaction de synthèse de sucres phosphate catalysée par, en A : les GP β-1,2 mannoside phosphorylases Teth514_1788 (GENBANK : ABY93073.1), Lin0857(GENBANK : CAC96089.1 ), Uhgb_MS (GENBANK : CAH1385118.1), MTP4 (GENBANK : CBZ24449.1), et en B : la GP β-1,3 mannoside phosphorylase U7 (GENBANK : CAH1385117.1). Pour toutes ces GP, le substrat donneur est le mannose-1-phosphate (Man-1P). La FIG. 4 comprend un chromatogramme obtenu par chromatographie d’échange d’anions couplée à une double détection par ampérométrie pulsée et spectrométrie de masse (HPAEC-PAD-MS). Les produits obtenus à l’issue du procédé de l’invention utilisant la réaction de synthèse de sucres phosphate catalysée par la GP MTP4 sont séparés et détectés sous forme de pics présentant des temps de rétention différents. Les signaux correspondants aux masses moléculaires des oligosaccharides phosphates sont extraits du signal global de spectrométrie de masse (MS) et comparés au signal ampérométrique (PAD). La plage de détection MS utilisée permet de mettre en évidence des oligosaccharides phosphates constitués de 2 à 6 unités mannosyl (DP2 à DP6). A noter que, pour cette enzyme, le signal PAD permet de détecter des oligosaccharides non réducteurs dont la taille est estimée s'étendre jusqu'à 13 unités mannosyl (DP13). La FIG. 5 comprend un chromatogramme obtenu par HPAEC-PAD-MS. Les produits principaux obtenus à l’issue du procédé de l’invention utilisant la réaction de synthèse de sucres phosphate catalysée par la GP Teth1788 sont constitués d’oligosaccharides phosphates constitués de 2 à 6 unités mannosyl (DP2 à DP6). A noter que, pour cette enzyme, le signal PAD permet de détecter des oligosaccharides non réducteurs dont la taille est estimée s'étendre au-delà de 14 unités mannosyl (>DP14). La FIG. 6 comprend un chromatogramme obtenu par HPAEC-PAD-MS. Les produits principaux obtenus à l’issue du procédé de l’invention utilisant la réaction de synthèse de sucres phosphate catalysée par la GP Lin0857 sont constitués d’oligosaccharides phosphates constitués de 2 et 3 unités mannosyl (DP2 et DP3). La FIG. 7 comprend un chromatogramme obtenu par HPAEC-PAD-MS. Les produits principaux obtenus à l’issue du procédé de l’invention utilisant la réaction de synthèse de sucres phosphate catalysée par la GP Uhgb_MS sont constitués d’oligosaccharides phosphates constitués de 2 et 3 unités mannosyl (DP2 et DP3). La FIG. 8 comprend un chromatogramme obtenu par HPAEC-PAD-MS. Les produits principaux obtenus à l’issue du procédé de l’invention utilisant la réaction de synthèse de sucres phosphate catalysée par la GP U7 sont constitués d’oligosaccharides phosphates constitués de 2 et 3 unités mannosyl (DP2 et DP3). La FIG. 9 est le résultat de l’analyse par HPAEC-PAD de la purification d’oligosaccharides phosphates obtenus à l’issue du procédé de l’invention utilisant la réaction de synthèse de sucres phosphate catalysée par la GP MTP4. Avant purification, les oligosaccharides phosphates sont mélangés avec des oligosaccharides normaux et du mannose. Après purification, seuls les oligosaccharides phosphate sont détectés. L’invention est décrite ci-après plus en détail et précisées pour certains modes de réalisation. Définitions Au sens de l’invention un « procédé enzymatique de synthèse in vitro » d’un oligosaccharide ou polysaccharide phosphate, s’entend d’un procédé mis en œuvre au moyen de préparations d’enzymes purifiées ou partiellement purifiées (telles que des surnageants de culture et/ou lysats cellulaires) ou d’organismes procaryotes ou eucaryotes modifiés et mis en culture de manière à permettre la mise en œuvre du dit procédé enzymatique de synthèse in vitro d’oligo- et/ou polysaccharide phosphate non réducteurs via une expression adéquate de ces enzymes. Ainsi dans un mode de réalisation particulier, ce procédé peut entièrement être opéré au sein d’un microorganisme recombinant, c’est-à-dire modifié génétiquement de manière à réaliser le procédé dans des conditions de culture adéquates. Dans un autre mode de réalisation particulier, un procédé selon l’invention peut être réalisé en partie, c’est-à-dire au moins réaction enzymatique, au sein d’un microorganisme organisme vivant. Dans un autre mode de réalisation particulier, le procédé est exclusivement mis en œuvre au moyen d’enzymes recombinantes purifiées ou partiellement purifiées. Une glycoside phosphorylase (GP) est définie comme une enzyme qui catalyse i) la dégradation des glycosides en utilisant le phosphate inorganique pour rompre les liaisons osidiques (phosphorolyse) et/ou ii) leur synthèse en utilisant les sucres phosphate comme donneurs de glycosyle (en terminologie anglosaxonne, reverse phosphorolyse) (Li a et al, 2022). Les deux réactions opposées de phosphorolyse et de reverse phosphorolyse résultent donc en un équilibre qui dépend des conditions réactionnelles. Les GP partagent des caractéristiques structurelles et mécaniques avec les glycosides hydrolases et les glycosyl-transférases. Ainsi, une enzyme catégorisée, par exemple dans la base de données CAZy, comme une GH ou une GT peut très bien avoir des activités relevant d’une GP. Plus particulièrement, les enzymes ayant des activités de GP peuvent présenter des similarités de séquence (en terminologie anglosaxonne « sequence similarity networks ») permettant d’identifier de nouvelles GP (comme, par exemple, selon la méthodologie décrite par Li b et al (2022)). Ainsi, une fois une enzyme identifiée comme une GP, soit de par ses activités enzymatiques (Li a et al, 2022) soit par des analogies de séquences, elle pourra aisément être testée par l’homme de l’art qui pourra vérifier si elle présente une activité de synthèse de sucres phosphate telle que découverte par les inventeurs. Le tableau 1 liste des exemples de glycoside phosphorylases, le numéro Genbank renvoie à la séquence peptidique de la protéine avec un sucre phosphate substrat utilisable dans la réaction de synthèse de sucre(s) phosphate. Famille CAZy N° NCBI ou UNIPROT ou numéro de séquence Nom de la protéine Sucre-phosphate substrat GH130 CAC96089.1 β-(1,2)-oligomannan phosphorylase (Lin0857) α-mannose-1P GH130 ABY93074.1 β-(1,2)-oligomannan phosphorylase (Teth514_1789) α-mannose-1P GH130 ABY93073.1 β-(1,2)-oligomannan phosphorylase (Teth514_1788) α-mannose-1P GT108 CBZ24449.1 β-(1,2)-oligomannan phosphorylase / mannosyltransferase MTP4 (LMXM_10_1260) α-mannose-1P GH130 CAH1385118.1 β-1,2-oligomannan phosphorylase (Uhgb_mS) α-mannose-1P GH130 CAH1385117.1 U7 :β-1,3-oligomannan phosphorylase (U7; 340101.Vvad_PD3074) α-mannose-1P GH3 AAQ05801.1 bifunctional N-acetyl-β- glucosaminidase/β-glucosidase (Nag3) β-N-acetyl-D-glucosamine-1P GH3 AUG44408.1 β-glucoside phosphorylase (BglP) β-glucose-1P GH13_18 2207198A sucrose phosphorylase (SPase) α-glucose-1P GH13_18 AAD40317.1 sucrose phosphorylase α-glucose-1P GH13_18 AAN24362.1 sucrose phosphorylase (Spl;BL0536) α-glucose-1P GH13_18 AAN58596.1 sucrose phosphorylase (GtfA;SMU.881) α-glucose-1P GH13_18 AAO21868.1 sucrose phosphorylase (LaSP;GtfA2;LBA1437) α-glucose-1P GH13_18 AAO33821.1 sucrose phosphorylase (SucP;SP;BaSP) α-glucose-1P GH13_18 AAO84039.1 sucrose phosphorylase (SplP) α-glucose-1P GH13_18 AAX33736.1 sucrose phosphorylase (LmSP1) α-glucose-1P GH13_18 ABS59292.1 sucrose phosphorylase (742sp) α-glucose-1P GH13_18 ADL69407.1 6F-P-sucrose phosphorylase (SPP;TtSPP;Tthe_1921) α-glucose-1P GH13_18 CCA61958.1 6F-P-sucrose phosphorylase (sucP) α-glucose-1P GH13_18 BAN03569.1 sucrose 6(F)-phosphate phosphorylase (YM304_32550) α-glucose-1P GH13_18 AGK37834.1 sucrose phosphorylase (ScrP) α-glucose-1P GH13_18 BAA14344.1 sucrose phosphorylase (LmSPase) α-glucose-1P GH13_18 BAF62433.1 sucrose phosphorylase(Spl) α-glucose-1P GH13_18 CAA30846.1 sucrose phosphorylase (GftA;SmSP) α-glucose-1P GH13_18 ADP98617.1 glucosylglycerol phosphorylase (HP15_2853) α-glucose-1P GH13_18 ADH62582.1 glucosylglycerate phosphorylase (Mesil_0665) α-glucose-1P GH13_18 AEJ61152.1 glucosylglycerate phosphorylase (Spith_0877) α-glucose-1P GH13_18 AAC74391.2 glucosylglycerate phosphorylase (YcjM) α-glucose-1P GH65 AAV43670.1 maltose phosphorylase (MalP;LBA1870) β-glucose-1P GH65 ADH99560.1 maltose phosphorylase (Bsel_2056) β-glucose-1P GH65 BAC54904.1 maltose phosphorylase(MPase) β-glucose-1P GH65 BAD97810.1 maltose phosphorylase(MapA) β-glucose-1P GH65 CAA11905.1 maltose phosphorylase β-glucose-1P GH65 AAO80764.1 maltose phosphorylase (MalP;EF0957) β-glucose-1P GH65 ABX42243.1 nigerose phosphorylase (Cphy_1874) β-glucose-1P GH65 ABX43667.1 nigerose phosphorylase (Cphy_3313) β-glucose-1P GH65 ABX43668.1 nigerose phosphorylase (Cphy_3314) β-glucose-1P GH65 AAE30762.1 kojibiose phosphorylase (KojP;KPase) β-glucose-1P GH65 ABP66077.1 kojibiose phosphorylase (CsKP;Csac_0439) β-glucose-1P GH65 ADQ05832.1 1,3-α-oligoglucan phosphorylase (ChGP) β-glucose-1P GH65 AAC74398.1 kojibiose phosphorylase (YcjT) β-glucose-1P GH65 ACL68803.1 kojibiose phosphorylase (HoGP) β-glucose-1P GH65 ADC90669.1 Trisaccharide α-glucan phosphorylase (MiGP) β-glucose-1P GH65 SHM33122.1 nigerose phosphorylase (AmNP) β-glucose-1P GH65 ABX41399.1 3-O-α-glucopyranosyl-L- rhamnose phosphorylase (Cphy_1019) β-glucose-1P GH65 ADI00307.1 1,2-alpha-glucosylglycerol phosphorylase (Bsel_2816) β-glucose-1P GH94 AAB95491.2 cellobiose phosphorylase(CbpA) α-glucose-1P GH94 AAC45510.1 cellobiose phosphorylase(CepA) α-glucose-1P GH94 AAD36910.1 cellobiose phosphorylase (CepA;TM1848) α-glucose-1P GH94 AAL67138.1 cellobiose phosphorylase(Cbp) α-glucose-1P GH94 ABD80580.1 cellobiose phosphorylase 94A (Cbp;SdCBP;Sde_1318;Cep94A) α-glucose-1P GH94 ABN51514.1 cellobiose phosphorylase (Cbp;CtCBP;Cthe_0275) α-glucose-1P GH94 ADU20744.1 cellobiose phosphorylase (CBP;RaCBP;Rumal_0187) α-glucose-1P GH94 BAA25846.1 cellobiose-phosphorylase (Cbp) α-glucose-1P GH94 BAA28631.1 cellobiose phosphorylase (Cbp;CgCBP) α-glucose-1P GH94 CAB16926.1 cellobiose phosphorylase (CepA) α-glucose-1P GH94 ADU22883.1 cellodextrin phosphorylase (CDP;RaCDP;Rumal_2403) α-glucose-1P GH94 BAB71818.1 cellobiose phosphorylase (Cdp-ym4) α-glucose-1P GH94 ABN54185.1 cellodextrin-phosphorylase (Cdp;CtCDP;Cthe_2989) α-glucose-1P GH94 AAC45511.1 cellodextrin phosphorylase (CepB;CsCdP) α-glucose-1P GH94 BAJ10826.1 laminaribiose phosphorylase (LbpA) α-glucose-1P GH94 ABX81345.1 laminaribiose phosphorylase (ACL_0729;ACL0729) α-glucose-1P GH94 AAG23740.1 diacetylchitobiose phosphorylase (ChbP) α-N-acetyl-D-glucosamine-1P GH94 BAC87867.1 chitobiose phosphorylase (ChbP;VpChBP) α-N-acetyl-D-glucosamine-1P GH94 CAC97070.1 β-(1,2)-oligoglucan phosphorylase (LiSOGP;Lin1839) α-glucose-1P GH94 ABX41081.1 β-(1,2)-oligoglucan phosphorylase (LpSOGP;Cphy_0694) α-glucose-1P GH94 AAM43298.1 cellobionic acid phosphorylase (CelAP;NdvB;XCC4077) α-glucose-1P GH94 ABD80168.1 cellobionic acid phosphorylase 94B (Cep94B;CBAP;SdCBAP) α-glucose-1P GH94 EAA28929.1 cellobionic acid phosphorylase (CelAP;NdvB;NCU09425) α-glucose-1P GH94 ABX81671.1 acholetin (β-1,3-N-acetylglucosaminide) phosphorylase (AchP) α-N-acetyl-D-glucosamine-1P GH94 ACL75793.1 cellodextrin phosphorylase (CdpA) α-glucose-1P GH94 ACL76688.1 cellodextrin phosphorylase (CdpB) α-glucose-1P GH94 ACL77700.1 cellodextrin phosphorylase (CdpC) α-glucose-1P GH94 AFH48717.1 4-O-β-D-glucosyl-N-acetyl-D-glucosamine phosphorylase (IaGP) α-glucose-1P GH94 AHC20114.1 solabiose phosphorylase (GGalP) α-glucose-1P GH94 AIQ57809.1 3-O-β-D-glucopyranosyl β-D-glucuronide phosphorylase (PBOR_13355) α-glucose-1P GH94 AIQ60507.1 solabiose phosphorylase (PBOR_28850) α-glucose-1P GH94 QCO92799.1 cellobiose phosphorylase (GH94_E) α-glucose-1P GH94 QCO92836.1 cellobiose phosphorylase (GH94_G) α-glucose-1P GH94 QCO92991.1 cellodextrin phosphorylase (GH94_A) α-glucose-1P GH94 QCO92946.1 cellodextrin phosphorylase (GH94_D) α-glucose-1P GH94 QCO92990.1 laminaribiose phosphorylase (GH94_B) α-glucose-1P GH94 QCO92945.1 laminaribiose phosphorylase (GH94_C) α-glucose-1P GH94 QCO92835.1 cellodextrin phosphorylase (GH94_F) α-glucose-1P GH112 ACB74662.1 D-galactosyl-β-(1,4)-L-rhamnose phosphorylase (GalRhaP) α-galactose-1P GH112 ABX42289.1 D-galactosyl-(1,4)-L-rhamnose phosphorylase (Cphy_1920) α-galactose-1P GH112 AAO07997.1 β-(1,3)-galactosyl-N- acetylhexosamine phosphorylase (GalGlyNAcP) α-galactose-1P GH112 ABX40964.1 β-(1,3)-galactosyl-N- acetylhexosamine phosphorylase (Cphy_0577) α-galactose-1P GH112 ABX43387.1 β-(1,3)-galactosyl-N- acetylhexosamine phosphorylase (Cphy_3030) α-galactose-1P GH112 EEG94248.1 β-1,3-galactosyl-N-acetylhexosamine phosphorylase (RiGLnbp112) α-galactose-1P GH112 ACV29689.1 β-(1,3)-galactosyl-N- acetylhexosamine phosphorylase / galacto-N-biose/lacto-N-biose I phosphorylase (GLNBP;Apre_1669) α-galactose-1P GH112 ZP_05748149.1 β-(1,3)-galactosyl-N- acetylhexosamine phosphorylase / galacto-N-biose phosphorylase (GNBP;HMPREF0357_1319) α-galactose-1P GH112 ACZ00636.1 β-(1,3)-galactosyl-N- acetylhexosamine phosphorylase / galacto-N-biose phosphorylase (GNBP;Smon_0146) α-galactose-1P GH112 ABG83511.1 galacto-N-biose phosphorylase (CPF_0553) α-galactose-1P GH112 BAH10636.1 β-(1,3)-galactosyl-N- acetylhexosamine phosphorylase (GnpA) α-galactose-1P GH112 ADL32981.1 β-galactoside phosphorylase (bpr_I0232) α-galactose-1P GH112 AEN95946.1 β-1,3-galactosyl-N-acetylhexosamine phosphorylase (RhGLnbp112) α-galactose-1P GH112 BAD80751.1 galacto-N-biose / lacto-N-biose phosphorylase (LnpA1;LnbP;GLNBP;BLLJ_1623) α-galactose-1P GH130 CAZ94304.1 β-(1,3)-mannooligosaccharide phosphorylase (zobellia_231) α-mannose-1P GH130 AAS19693.1 β-(1,4)-mannosylglucose phosphorylase (Unk1) α-mannose-1P GH130 ADU21379.1 β-(1,4)-mannosylglucose phosphorylase (RaMP1;RaMGP;Rumal_0852) α-mannose-1P GH130 ADU21379.1 β-(1,4)-mannosylglucose phosphorylase (RaMP1;RaMGP;Rumal_0852) α-mannose-1P GH130 ADU20661.1 β-(1,4)-mannooligosaccharide phosphorylase (RaMP2;Rumal_0099) α-mannose-1P GH130 CAH06518.1 β-(1,4)-mannosylglucose phosphorylase (MGP;BF0772) α-mannose-1P GH130 VCV21228.1 β-1,4-mannosylglucose phosphorylase (RiGH130_1; ROSINTL182_05475) α-mannose-1P GH130 AAO76140.1 β-(1,4)-mannosyl-N-acetyl-glucosamine phosphorylase (BT1033) α-mannose-1P GH130 VCV21229.1 β-1,4-mannooligosaccharide phosphorylase (Ri130_2; ROSINTL182_05474) α-mannose-1P GH130 AAD36300.1 β-(1,4)-mannooligosaccharide phosphorylase(TM1225) α-mannose-1P GH130 WP_026485574.1 CalpoDRAFT_0075 α-mannose-1P GH130 WP_026486530.1 CalpoDRAFT_1209 α-mannose-1P GH130 ABK05267.1 β-mannoside phosphorylase (Arth_3892) α-mannose-1P GH149 6HQ6 ou 6HQ8 β-(1,3)-glucan phosphorylase (Pro_7066) α-glucose-1P GH149 AUO30192.1 β-(1,3)-glucan phosphorylase(EgP1) α-glucose-1P GH149 QCO92814.1 β-1,3-oligoglucan phosphorylase (GH149_H) α-glucose-1P GH161 WP_019688419.1 β-(1,3)-glucan phosphorylase (PapP) α-glucose-1P GH161 ACJ76363.1 β-(1,3)-glucan phosphorylase (TaCDP) α-glucose-1P GH161 BAU78234.1 β-(1,3)-glucan phosphorylase (OdBGP) α-glucose-1P GT108 CBZ24448.1 β-(1,2)-oligomannan phosphorylase / mannosyltransferase MTP3 (LMXM_10_1250) α-mannose-1P GT108 CBZ24451.1 β-(1,2)-oligomannan phosphorylase / mannosyltransferase MTP6 (LMXM_10_1280) α-mannose-1P GT108 CBZ24452.1 β-(1,2)-oligomannan phosphorylase / mannosyltransferase MTP7 (LMXM_10_1290) α-mannose-1P GH130 SEQ ID NO 1 G1-8A : β-(1,3)-mannose phosphorylase (G1-8A_GL0038729 locus= scaffold17912_1:1303:2508) α-mannose-1P GH130 CAH1385115.1 β-1,4-mannosylglucose phosphorylase (U1; MH0431_GL0150624) α-mannose-1P GH130 CAH1385116.1 β-1,4-mannooligosaccharide phosphorylase (U3; MH0373_GL0093988) α-mannose-1P GH130 ADD61463.1 β-(1,4)-mannopyranosyl-[N- glycan] phosphorylase /β-(1,4)- mannopyranosyl-chitobiose phosphorylase (Uhgb_MP) α-mannose-1P GT35 ABP51432.1 glucan/maltodextrin phosphorylase (GlgP;PyglgP;Pars_1881) α-glucose-1P GT35 AAL81659.1 α-glucan/maltodextrin phosphorylase (PF1535) α-glucose-1P GT35 AAD28735.1 maltodextrin phosphorylase (MalP) α-glucose-1P GT35 ABN51595.1 α-glucan phosphorylase (α-GP;Cthe_0357) α-glucose-1P GT35 AAD03471.1 glycogen phosphorylase(GlgP) α-glucose-1P GT35 AAC06896.1 glycogen phosphorylase (GlgP;Aq_717) α-glucose-1P GT35 AAC00218.1 glycogen phosphorylase (GlgP;BSU30940) α-glucose-1P GT35 AAM24997.1 α-glucan phosphorylase (GlgP;TTE1805) α-glucose-1P GT35 AAM52219.1 glycogen phosphorylase α-glucose-1P GT35 BAB98701.1 maltodextrin/glycogen phosphorylase (MalP;GlgP1;cg1479) α-glucose-1P GT35 BAB99480.1 glycogen phosphorylase (GlgP;GlgP2;cg2289) α-glucose-1P GT35 AAC76453.1 glycogen phosphorylase (GlgP;b3428) α-glucose-1P GT35 AAC76442.1 maltodextrin phosphorylase (MalP;b3417) α-glucose-1P GT35 BAA19592.1 glycogen phosphorylase (GlgP) α-glucose-1P GT35 AAN59210.1 maltodextrin phosphorylase (GlgP;SMU.1564) α-glucose-1P GT35 AAL26558.1 glycogen phosphorylase (Glg) α-glucose-1P GT35 AGL50099.1 α-glucan phosphorylase (AgpA;Tmari_1175) α-glucose-1P GT35 BAB11741.1 α-glucan phosphorylase (GlgP) α-glucose-1P GT35 CAC93400.1 glycogen phosphorylase (glgP,YPO3938) α-glucose-1P GT35 AAB46846.1 glycogen phosphorylase (myophosphorylase) α-glucose-1P GT35 ABB88567.1 plastidial starch phosphorylase (PhoB;Sta4) α-glucose-1P GT35 CAA44069.1 glycogen phosphorylase 1 (GlpV;GP1) α-glucose-1P GT35 AAA33211.1 glycogen phosphorylase 2 (GlpD;GP2) α-glucose-1P GT35 AAD46887.1 glycogen phosphorylase (GlyP;GLYP;CG7254;Dmel_CG7254) α-glucose-1P GT35 AAN17338.1 glycogen phosphorylase-2 α-glucose-1P GT35 AAB60395.1 glycogen phosphorylase (brain) (bGP) α-glucose-1P GT35 CAA75517.1 glycogen phosphorylase α-glucose-1P GT35 AAC17451.1 glycogen phosphorylase (PigM) α-glucose-1P GT35 BAK00834.1 plastidial α-(1,4)-glucan phosphorylase (Pho1;HvPho1) α-glucose-1P GT35 AAA63271.1 α-glucan phosphorylase L α-glucose-1P GT35 AAK01137.1 starch phosphorylase α-glucose-1P GT35 AAD30476.1 glycogen phosphorylase (PygM) α-glucose-1P GT35 ACJ76617.1 glycogen phosphorylase (PygM) α-glucose-1P GT35 AAK15695.1 α-(1,4)-glucan phosphorylase L α-glucose-1P GT35 BAB92854.1 α-(1,4)-glucan phosphorylase (Os01g0851700) α-glucose-1P GT35 AAV87308.1 glycogen phosphorylase (PYGB) α-glucose-1P GT35 AAB68800.1 glycogen phosphorylase α-glucose-1P GT35 AAA41252.1 glycogen phosphorylase α-glucose-1P GT35 AAB68057.1 glycogen phosphorylase (Gph1;YPR160w) α-glucose-1P GT35 AAA33809.1 α-glucan phosphorylase H α-glucose-1P GT35 BAA00407.1 α-glucan phosphorylase L1 α-glucose-1P GT35 CAA52036.1 α-glucan phosphorylase L2 α-glucose-1P GT35 CAA59464.1 α-glucan phosphorylase α-glucose-1P GT35 CAA84494.1 α-glucan phosphorylase (Pho2;VfPho2) α-glucose-1P La GP nommée G1-8A : β-(1,3)-mannose phosphorylase (G1-8A_GL0038729 locus= scaffold17912_1:1303:2508) dans le tableau 1 a pour séquence protéique (SEQ ID NO 1) : MHKPIIRYSPEPVLEPKEGCIWADTMVLNPAIVKDPYSDTIHMLFRATGPWPAKNLKGKSDPYPIFLGYAKSDDRGETWQPDFGRPALAPALEYEMDKMYIRDIYDREVVNYANGCVEDPRIFEVEGELYLTTACRMFPPGPYWEGDKRRDNIPDWAMEPDNPFGTTASRNDTTTVLFKLDLDKLKSREYERAFGYVCNLTDGNVTANRDVFLFPRKMKIDGKMRYVMLHRPENPDKFEAGKGIYKPAIFLAAAEKPEDFCTGKCMHKLLAKGIFDWEEERIGASFPPVEIESGKWLISYHGKQMPDYGYTQSFMIVEEQEDDFPLIIHRCPERLMYARQKWELPDKFACPCIFTSGGIVMDEELVMSYGAADQKVGLARANLEEIVDYVSSFDENGNEIELE. Une GP peut accepter 1, 2, voire plus, sucres-phosphate différents comme substrats possibles. Dans un mode de réalisation particulier celui-ci ou ceux-ci sont sélectionnés parmi : α-galactose-1P, α-glucose-1P, α-mannose-1P, α-N-acetyl-D-glucosamine-1P, β-glucose-1P, β-N-acetyl-D-glucosamine-1P. « Polynucléotide(s) », « oligonucléotide(s) », « acide(s) nucléique(s) », « nucléotide(s) », « acide(s) polynucléique(s) » ou tout équivalent utilisé fait référence à une forme polymère de nucléotides ou d'acides nucléiques de toute longueur, soit ribonucléotides ou désoxyribonucléotides. Ce terme fait référence à la structure primaire de la molécule. Elle comprend également les formes modifiées, par exemple par méthylation et/ou par coiffage, et les formes non modifiées du polynucléotide. Le terme comprend également les polymères de nucléotides ou d'acides nucléiques comprenant des nucléotides non naturels ou synthétiques ainsi que les analogues nucléotidiques. Les séquences d'acides nucléiques et les vecteurs, par exemple des vecteurs d’expression, peuvent être introduits dans une cellule, par exemple par transfection, transformation ou transduction. La séquence nucléotidique codant une GP telle que listée dans le tableau 1 ci-dessus peut être optimisée en fonction de l’hôte dans lequel la GP recombinante est produite et, par exemple, en fonction de son code génétique et de l’usage des codons propre à cet hôte. Cette séquence nucléotidique peut être soit intégrée dans un vecteur d’expression soit intégrée dans le génome de l’organisme hôte. L’expression de la GP recombinante peut être soit inductible soit constitutive. De préférence, l’expression de la GP recombinante est inductible. « Vecteur d'expression » s’entend de tout vecteur d'expression connu de la personne de l’art pour être adapté pour l'expression de gènes codant pour des protéines dans des microorganismes et plus particulièrement adaptés pour la surproduction et éventuellement la purification de GP recombinantes telles que celles listées dans le tableau I. De nombreux systèmes d’expression de protéines recombinantes sont connus et disponibles dans le commerce. La personne de l’art saura, en fonction de la GP recombinante produite et du microorganisme hôte, choisir le vecteur, les conditions de cultures et le système de purification approprié. Le vecteur peut être un plasmide, un chromosome artificiel de levure (YAC) ou bactérien (BAC). Il peut s'agir, par exemple, de n'importe quel vecteur sélectionné parmi les vecteurs listés dans les catalogues en ligne ou décrits aux sites suivants : - https://france.promega.com/products/vectors/protein-expression-vectors, - https://www.thermofisher.com/search/browse/category/fr/fr/85801/Bacterial%20Expre ssion%20Vectors, - https://www.embl.de/pepcore/pepcore_services/strains_vectors/vectors/bacterial_expre ssion_vectors/popup_bacterial_expression_vectors/index.html, - http://babel.ucmp.umu.se/cpep/web_content/Pages/CPEP_09_vectors.html, ou - https://www.embl.de/pepcore/pepcore_services/strains_vectors/vectors/gateway_vecto rs/index.htm. Il peut s'agir, par exemple, du vecteur d'expression décrit dans le document WO 83/004261. Il peut s'agir par exemple du plasmide pWKS130 décrit par Wang et Kushner (1991) ; du plasmide commercialisé par la société Thermofisher sous la référence commerciale pBAD-HisA, du plasmide commercialisé par la société Thermofisher sous la référence commerciale pTRC. Il peut s’agir par exemple d’un plasmide choisi dans le groupe comprenant pBAD-HisA, pTRC, pMX, pUC19, pHP45-CmR, pcDNA3.1(+), pcDNA3.3-TOPO, pcDNA3.4-TOPO, pFastBac1, pET100/D-TOPO, pET151/D-TOPO, pRSET A, pYes2.1V5-His TOPO, pDONR221, pGEX-3X ; pBluescript, pET, pGEX, pLys, pRARE, pDEST, pETG, de préférence le plasmide pBAD-HisA Comme mentionné, le vecteur peut être n'importe quel chromosome artificiel de levure (YAC) adapté, connu de l’homme du métier et/ou disponible dans le commerce. Il peut s'agir par exemple d'un chromosome artificiel de levure choisi dans le groupe comprenant pYAC-RC et pYAC3. Le vecteur également peut être n'importe quel chromosome artificiel bactérien (BAC) adapté pour l’expression dans des bactéries, connu de l’homme du métier et/ou disponible dans le commerce. Il peut s'agir par exemple d'un chromosome artificiel bactérien choisi dans le groupe comprenant pUvBBAC, pCC1BAC et pBAC 108L. Le promoteur peut être tout promoteur connu de la personne du métier adapté pour permettre une expression de protéines recombinantes dans un microorganisme tel qu’une bactérie, une levure ou un champignon, voire une cellule d’un eucaryote supérieur, de préférence dans une bactérie. Il peut s’agir par exemple d’un promoteur constitutif ou d’un promoteur inductible. Il peut s’agir par exemple d’un promoteur constitutif choisi dans le groupe comprenant le promoteur CMV, EF1A, ou SV40. Il peut s’agir par exemple d’un promoteur constitutif mentionné sur la page internet http://parts.igem.org/Promoters/Catalog/Constitutive, d’un quelconque promoteur de la souche E. coli K-12 connu de la personne du métier, par exemple un promoteur choisi parmi les 3908 promoteurs de la souche E. coli K-12 répertoriés sur le site biocyc.org: https://biocyc.org/group?id=:ALL-PROMOTERS&orgid=ECOLI. Il peut s’agir par exemple d'un promoteur inductible, par exemple pBAD ou pLac. Il peut s’agir par exemple d’un promoteur inductible décrit et/ou mentionné sur la page : http://parts.igem.org/Promoters/Catalog. La personne du métier saura choisir le promoteur en fonction de la séquence nucléique à exprimer et/ou de la cellule hôte, plus globalement en fonction du système et des conditions d’expression choisies. La production de protéines recombinantes est aujourd’hui une technologie courante dans le domaine des biotechnologies qui fait partie des opérations de routine pour la personne de l’art, qui sait comment déterminer les conditions de production (telle que l’organisme de production (tel qu’une bactérie, une levure, un champignon, voire un eucaryote supérieur), optimisation de la séquence génétique, conditions de culture, conditions de purification, le choix et l’emplacement d’un éventuel Tag) en fonction de l’enzyme concernée. Une synthèse des différentes stratégies possibles est rapportée par Tripathi et Shrivastava (2019). Typiquement, comme cela est illustré par les exemples expérimentaux, l’hôte d’expression de la GP est E. coli BL21 et le vecteur d’expression est un plasmide du type pBAD ou pET, inductibles respectivement à l’arabinose et au lactose (et ses dérivés tels que l’IPTG ou l’allolactose). Le tag de purification est le plus souvent un tag6His qui peut être positionné en C-ter et/ou en N-ter de la protéine recombinante, qui peut être introduit directement dans la séquence du gène synthétique ou présent initialement dans le vecteur d’expression. La purification des enzymes recombinantes est typiquement réalisée par chromatographie d’affinité sur résine de cobalt (par exemple : TALON® Metal Affininity Resin, Takara). Un « polysaccharide » ou un « oligosaccharide » s’entend d’un polymère linéaire ou ramifié d’unités de monosaccharides liées entre eux par des liaisons α- ou β-osidique. Par convention, dans l’art, un oligosaccharide comprend un nombre d’unités glycosyles compris entre 2 et 10 et un polysaccharide s’entend d’un polymère d’unités glycosyles comprenant plus de 10 unités. Plus particulièrement, en lien avec la nouvelle activité identifiée par les inventeurs, un polysaccharide phosphate ou un oligosaccharide phosphate s’entend d’un polymère d’unités glycosyles liées entre elles par une ou des liaisons α- ou β-osidiques et dont l’extrémité réductrice est liée à un phosphate inorganique par une liaison α- ou β-. Ainsi un tel polysaccharide phosphate ou oligosaccharide phosphate ne comprend pas d’extrémité réductrice. En d’autres termes, le polysaccharide phosphate ou oligosaccharide phosphate produit issu du procédé selon l’invention ne comprend pas de fonction hémiacétalique libre, l’hydroxyle de cette dernière étant impliquée dans une liaison avec un groupement phosphate. Une « liaison osidique 1-1 » est une liaison impliquant les résidus hydroxyles hémiacétaliques de deux sucres. De manière évidente, une GP catalysant la formation de liaisons osidiques 1-1 ne pourra produire, lors de la réaction de synthèse de sucres phosphate identifiée par les inventeurs, de polysaccharide phosphate à partir d’une préparation de sucre-phosphate puisque les extrémités réductrices des deux sucres sont engagées dans la liaison osidique. Une telle activité peut facilement être identifiée en utilisant les méthodes décrites, par exemple, dans la partie expérimentale, ou à partir des données enregistrées dans la base de données CAZy ( ). Comme mentionné l’invention réside dans la caractérisation d’une activité jusqu’ici inconnue pour les GP qui est la condensation de sucres-phosphate, pour synthétiser un oligosaccharide phosphate ou polysaccharide phosphate non réducteur, tel qu’illustré plus particulièrement à la FIG. 2 . Un objet de l’invention réside donc dans un procédé enzymatique de synthèse in vitro d’un oligosaccharide phosphate ou polysaccharide phosphate 1 comprenant les étapes de : Fourniture d’une préparation comprenant au moins une enzyme GP (10a) ne catalysant pas la formation de liaison osidique 1-1 : Ladite préparation peut comprendre ou consister en une préparation protéique enrichie en glycoside phosphorylase. Plus particulièrement, ladite préparation comprenant au moins une GP est issue d’une étape de purification de ladite GP à partir d’un lysat de culture ou d’un surnageant de culture d’un microorganisme exprimant ladite GP. Ainsi dans un mode de réalisation, ladite préparation comprenant au moins une enzyme glycoside phosphorylase est une préparation dans laquelle l’au moins une GP représente au moins 80%, au moins 85%, de préférence au moins 90% de la fraction protéique de ladite préparation. Cela peut facilement être déterminé en mesurant une activité spécifique de la GP dans la préparation. Alternativement, ladite préparation peut consister en une culture d’un microorganisme exprimant ladite GP. Le gène codant pour la GP peut être inséré au génome de l'organisme hôte pour obtenir sa surexpression, dans le chromosome du microorganisme ou dans un vecteur d’expression tel que décrit ci-dessus. Le microorganisme peut-être une bactérie, une levure ou un champignon, selon des préférences déterminées par la personne du métier. Néanmoins dans ce mode de réalisation, les bactéries sont particulièrement préférées. Egalement, ladite préparation peut consister en un surnageant de culture non purifié. Egalement, ladite préparation peut consister en un lysat cellulaire non purifié. Dans un autre mode de réalisation, ladite préparation peut comprendre l’enzyme immobilisée sur un support. Cela présente l’avantage d’une réutilisation possible de l’enzyme, une fois la réaction terminée en récupérant l’enzyme insolubilisée, par exemple, par filtration, sédimentation (passive, ou par exemple, par application d’un champ magnétique aimantation dans le cas de l’utilisation d’un support magnétique pour l’enzyme), ou centrifugation du mix réactionnel, voire d‘une utilisation en continu. Pour mettre en œuvre cette stratégie, on peut par exemple se référer à la revue de Sheldon et al (2021) ou encore au manuel de Marian Lujan Ferreira « Biocatalyst immobilization: foundations and applications » (Elsevier, 2022) qui recensent les différentes stratégies d’immobilisation pour les procédés enzymatiques. On pourra se référer également à Zhong et al (2020) qui s’intéresse spécifiquement à l’immobilisation de la GP. Egalement, ladite préparation peut comprendre plusieurs GP différentes, c’est-à-dire 2, 3 GP ou plus. Ce qui peut permettre d’obtenir des sucre phosphates enchainant différentes unités glycosyles, ou d’obtenir des mélanges de sucres phosphate à l’issue de la mise en œuvre du procédé. Ainsi dans un mode de réalisation particulier, la préparation d’au moins une enzyme glycoside GP comprend au moins deux GP choisies parmi les enzymes référencées sous le numéro d’accession NCBI ou UNIPROT AAQ05801.1, AUG44408.1, 2207198A, AAD40317.1, AAN24362.1, AAN58596.1, AAO21868.1, AAO33821.1, AAO84039.1, AAX33736.1, ABS59292.1, ADL69407.1, CCA61958.1 , BAN03569.1, AGK37834.1, BAA14344.1, BAF62433.1, CAA30846.1, CAA80424.1, ADP98617.1, ADH62582.1, AEJ61152.1, AAC74391.2, AAV43670.1, ADH99560.1, BAC54904.1, BAD97810.1, CAA11905.1, AAO80764.1, ABX42243.1, ABX43667.1, ABX43668.1, AAE30762.1, ABP66077.1, ADQ05832.1, AAC74398.1, ACL68803.1, ADC90669.1, SHM33122.1, ABX41399.1, ADI00307.1, AAB95491.2, AAC45510.1, AAD36910.1, AAL67138.1, AAQ20920.1, ABD80580.1, ABN51514.1, ADU20744.1, BAA25846.1, BAA28631.1, CAB16926.1, ADU22883.1, BAB71818.1, ABN54185.1, AAC45511.1, BAJ10826.1, ABX81345.1, AAG23740.1, BAC87867.1, CAC97070.1, ABX41081.1, AAM43298.1, ABD80168.1, EAA28929.1, ABX81671.1, ACL75793.1, ACL76454.1, ACL76688.1, ACL77700.1, AFH48717.1, AHC20114.1, AIQ57809.1, AIQ60507.1, QCO92799.1, QCO92836.1, QCO92991.1, QCO92946.1, QCO92990.1, QCO92945.1, QCO92835.1, ACB74662.1, ABX42289.1, AAO07997.1, ABX40964.1, ABX43387.1, EEG94248.1, ACV29689.1, ZP_05748149.1, ACZ00636.1, ABG83511.1, BAH10636.1, ADL32981.1, AEN95946.1, CAC96089.1, ABY93074.1, ABY93073.1, CAZ94304.1, AAS19693.1, ADU21379.1, ADU20661.1, CAH06518.1, VCV21228.1, AAO76140.1, VCV21229.1, AAD36300.1, WP_026485574.1, WP_026486530.1, ABK05267.1, AUO30192.1, QCO92814.1, WP_019688419.1, ACJ76363.1, BAU78234.1, CBZ24448.1, CBZ24449.1, CBZ24451.1, CBZ24452.1, CAH1385118.1, CAH1385117.1, CAH1385115.1, CAH1385116.1, ADD61463.1, BAD80751.1, ABP51432.1, AAL81659.1, AAD28735.1, ABN51595.1, AAD03471.1, AAC06896.1, AAC00218.1, AAM24997.1, AAM52219.1, BAB98701.1, BAB99480.1, AAC76453.1, AAC76442.1, BAA19592.1, AAD53957.1, AAN59210.1, AAL26558.1, AGL50099.1, BAB11741.1, CAC93400.1, AAB46846.1, ABB88567.1, CAA44069.1, AAA33211.1, AAD46887.1, AAN17338.1, AAL23578..1, AAP33020.1, AAK69600.1, AAB60395.1, CAA75517.1, AAC17451.1, BAK00834.1, AAA63271.1, AAK01137.1, AAL23577.1, AAD30476.1, AAG00588.1, ACJ76617.1, AAK15695.1, BAB92854.1, AAV87308.1, AAB68800.1, AAA41252.1, AAH70901.1, AAA41253.1, AAB68057.1, AAA33809.1, BAA00407.1, CAA52036.1, CAA59464.1, AAL23579.1, AAF82787.1, CAA84494.1, 6HQ6, ou CAA85354.1 ou de séquence SEQ ID NO 1. Dans un mode de réalisation, l’au moins une enzyme glycoside GP est choisie parmi les enzymes référencées sous le numéro d’accession NCBI ou UNIPROT: AAQ05801.1, AUG44408.1, 2207198A, AAD40317.1, AAN24362.1, AAN58596.1, AAO21868.1, AAO33821.1, AAO84039.1, AAX33736.1, ABS59292.1, ADL69407.1, CCA61958.1 , BAN03569.1, AGK37834.1, BAA14344.1, BAF62433.1, CAA30846.1, CAA80424.1, ADP98617.1, ADH62582.1, AEJ61152.1, AAC74391.2, AAV43670.1, ADH99560.1, BAC54904.1, BAD97810.1, CAA11905.1, AAO80764.1, ABX42243.1, ABX43667.1, ABX43668.1, AAE30762.1, ABP66077.1, ADQ05832.1, AAC74398.1, ACL68803.1, ADC90669.1, SHM33122.1, ABX41399.1, ADI00307.1, AAB95491.2, AAC45510.1, AAD36910.1, AAL67138.1, AAQ20920.1, ABD80580.1, ABN51514.1, ADU20744.1, BAA25846.1, BAA28631.1, CAB16926.1, ADU22883.1, BAB71818.1, ABN54185.1, AAC45511.1, BAJ10826.1, ABX81345.1, AAG23740.1, BAC87867.1, CAC97070.1, ABX41081.1, AAM43298.1, ABD80168.1, EAA28929.1, 6HQ6, ABX81671.1, ACL75793.1, ACL76454.1, ACL76688.1, ACL77700.1, AFH48717.1, AHC20114.1, AIQ57809.1, AIQ60507.1, QCO92799.1, QCO92836.1, QCO92991.1, QCO92946.1, QCO92990.1, QCO92945.1, QCO92835.1, ACB74662.1, ABX42289.1, AAO07997.1, ABX40964.1, ABX43387.1, EEG94248.1, ACV29689.1, ZP_05748149.1, ACZ00636.1, ABG83511.1, BAH10636.1, ADL32981.1, AEN95946.1, CAC96089.1, ABY93074.1, ABY93073.1, CAZ94304.1, AAS19693.1, ADU21379.1, ADU20661.1, CAH06518.1, VCV21228.1, AAO76140.1, VCV21229.1, AAD36300.1, WP_026485574.1, WP_026486530.1, ABK05267.1, AUO30192.1, QCO92814.1, WP_019688419.1, ACJ76363.1, BAU78234.1, CBZ24448.1, CBZ24449.1, CBZ24451.1, CBZ24452.1, CAH1385118.1, CAH1385117.1, CAH1385115.1, CAH1385116.1, ADD61463.1, ou BAD80751.1 ou de séquence SEQ ID NO 1. Dans un mode de réalisation particulier, la préparation d’au moins une enzyme glycoside GP comprend au moins deux GP choisies parmi les enzymes référencées sous le numéro d’accession NCBI ou UNIPROT: AAQ05801.1, AUG44408.1, 2207198A, AAD40317.1, AAN24362.1, AAN58596.1, AAO21868.1, AAO33821.1, AAO84039.1, AAX33736.1, ABS59292.1, ADL69407.1, CCA61958.1 , BAN03569.1, AGK37834.1, BAA14344.1, BAF62433.1, CAA30846.1, CAA80424.1, ADP98617.1, ADH62582.1, AEJ61152.1, AAC74391.2, AAV43670.1, ADH99560.1, BAC54904.1, BAD97810.1, CAA11905.1, AAO80764.1, ABX42243.1, ABX43667.1, ABX43668.1, AAE30762.1, ABP66077.1, ADQ05832.1, AAC74398.1, ACL68803.1, ADC90669.1, SHM33122.1, ABX41399.1, ADI00307.1, AAB95491.2, AAC45510.1, AAD36910.1, AAL67138.1, AAQ20920.1, ABD80580.1, ABN51514.1, ADU20744.1, BAA25846.1, BAA28631.1, CAB16926.1, ADU22883.1, BAB71818.1, ABN54185.1, AAC45511.1, BAJ10826.1, ABX81345.1, AAG23740.1, BAC87867.1, CAC97070.1, ABX41081.1, AAM43298.1, ABD80168.1, EAA28929.1, ABX81671.1, ACL75793.1, ACL76454.1, ACL76688.1, ACL77700.1, AFH48717.1, AHC20114.1, AIQ57809.1, AIQ60507.1, QCO92799.1, QCO92836.1, QCO92991.1, QCO92946.1, QCO92990.1, QCO92945.1, QCO92835.1, ACB74662.1, ABX42289.1, AAO07997.1, ABX40964.1, ABX43387.1, EEG94248.1, ACV29689.1, ZP_05748149.1, ACZ00636.1, ABG83511.1, BAH10636.1, ADL32981.1, AEN95946.1, CAC96089.1, ABY93074.1, ABY93073.1, CAZ94304.1, AAS19693.1, ADU21379.1, ADU20661.1, CAH06518.1, VCV21228.1, AAO76140.1, VCV21229.1, AAD36300.1, WP_026485574.1, WP_026486530.1, ABK05267.1, AUO30192.1, QCO92814.1, WP_019688419.1, ACJ76363.1, BAU78234.1, CBZ24448.1, CBZ24449.1, CBZ24451.1, CBZ24452.1, CAH1385118.1, CAH1385117.1, CAH1385115.1, CAH1385116.1, ADD61463.1, 6HQ6 ou BAD80751.1 ou de séquence SEQ ID NO 1. Dans un autre mode de réalisation l’au moins une enzyme glycoside GP est choisie parmi les enzymes référencées sous le numéro d’accession NCBI ou UNIPROT: AAQ05801.1, AUG44408.1, 2207198A, AAD40317.1, AAN24362.1, AAN58596.1, AAO21868.1, AAO33821.1, AAO84039.1, AAX33736.1, ABS59292.1, ADL69407.1, CCA61958.1 , BAN03569.1, AGK37834.1, BAA14344.1, BAF62433.1, CAA30846.1, CAA80424.1, ADP98617.1, ADH62582.1, AEJ61152.1, AAC74391.2, AAV43670.1, ADH99560.1, BAC54904.1, BAD97810.1, CAA11905.1, AAO80764.1, ABX42243.1, ABX43667.1, ABX43668.1, AAE30762.1, ABP66077.1, ADQ05832.1, AAC74398.1, ACL68803.1, ADC90669.1, SHM33122.1, ABX41399.1, ADI00307.1, AAB95491.2, AAC45510.1, AAD36910.1, AAL67138.1, AAQ20920.1, ABD80580.1, ABN51514.1, ADU20744.1, BAA25846.1, BAA28631.1, CAB16926.1, ADU22883.1, BAB71818.1, ABN54185.1, AAC45511.1, BAJ10826.1, ABX81345.1, AAG23740.1, BAC87867.1, CAC97070.1, ABX41081.1, AAM43298.1, ABD80168.1, EAA28929.1, 6HQ6, ABX81671.1, ACL75793.1, ACL76454.1, ACL76688.1, ACL77700.1, AFH48717.1, AHC20114.1, AIQ57809.1, AIQ60507.1, QCO92799.1, QCO92836.1, QCO92991.1, QCO92946.1, QCO92990.1, QCO92945.1, QCO92835.1, ACB74662.1, ABX42289.1, AAO07997.1, ABX40964.1, ABX43387.1, EEG94248.1, ACV29689.1, ZP_05748149.1, ACZ00636.1, ABG83511.1, BAH10636.1, ADL32981.1, AEN95946.1, CAC96089.1, ABY93074.1, ABY93073.1, CAZ94304.1, AAS19693.1, ADU21379.1, ADU20661.1, CAH06518.1, VCV21228.1, AAO76140.1, VCV21229.1, AAD36300.1, WP_026485574.1, WP_026486530.1, ABK05267.1, AUO30192.1, QCO92814.1, WP_019688419.1, ACJ76363.1, BAU78234.1, CBZ24448.1, CBZ24449.1, CBZ24451.1, CBZ24452.1, CAH1385118.1, CAH1385117.1, CAH1385115.1 ou CAH1385116.1 ou de séquence SEQ ID NO 1. Dans un mode de réalisation particulier, la préparation d’au moins une enzyme glycoside GP comprend au moins deux GP choisies parmi les enzymes référencées sous le numéro d’accession NCBI ou UNIPROT: AAQ05801.1, AUG44408.1, 2207198A, AAD40317.1, AAN24362.1, AAN58596.1, AAO21868.1, AAO33821.1, AAO84039.1, AAX33736.1, ABS59292.1, ADL69407.1, CCA61958.1 , BAN03569.1, AGK37834.1, BAA14344.1, BAF62433.1, CAA30846.1, CAA80424.1, ADP98617.1, ADH62582.1, AEJ61152.1, AAC74391.2, AAV43670.1, ADH99560.1, BAC54904.1, BAD97810.1, CAA11905.1, AAO80764.1, ABX42243.1, ABX43667.1, ABX43668.1, AAE30762.1, ABP66077.1, ADQ05832.1, AAC74398.1, ACL68803.1, ADC90669.1, SHM33122.1, ABX41399.1, ADI00307.1, AAB95491.2, AAC45510.1, AAD36910.1, AAL67138.1, AAQ20920.1, ABD80580.1, ABN51514.1, ADU20744.1, BAA25846.1, BAA28631.1, CAB16926.1, ADU22883.1, BAB71818.1, ABN54185.1, AAC45511.1, BAJ10826.1, ABX81345.1, AAG23740.1, BAC87867.1, CAC97070.1, ABX41081.1, AAM43298.1, ABD80168.1, EAA28929.1, ABX81671.1, ACL75793.1, ACL76454.1, ACL76688.1, ACL77700.1, AFH48717.1, AHC20114.1, AIQ57809.1, AIQ60507.1, QCO92799.1, QCO92836.1, QCO92991.1, QCO92946.1, QCO92990.1, QCO92945.1, QCO92835.1, ACB74662.1, ABX42289.1, AAO07997.1, ABX40964.1, ABX43387.1, EEG94248.1, ACV29689.1, ZP_05748149.1, ACZ00636.1, ABG83511.1, BAH10636.1, ADL32981.1, AEN95946.1, CAC96089.1, ABY93074.1, ABY93073.1, CAZ94304.1, AAS19693.1, ADU21379.1, ADU20661.1, CAH06518.1, VCV21228.1, AAO76140.1, VCV21229.1, AAD36300.1, WP_026485574.1, WP_026486530.1, ABK05267.1, AUO30192.1, QCO92814.1, WP_019688419.1, ACJ76363.1, BAU78234.1, CBZ24448.1, CBZ24449.1, CBZ24451.1, CBZ24452.1, CAH1385118.1, CAH1385117.1, CAH1385115.1, 6HQ6, ou CAH1385116.1 ou de séquence SEQ ID NO 1. Fourniture d’une composition comprenant au moins un sucre-phosphate substrat de ladite enzyme 10b, ladite composition ne comprenant substantiellement pas de sucre non phosphorylé substrat accepteur de ladite au moins une enzyme glycoside phosphorylase. Sucre-phosphate substrat s’entend d’un aldose ou un cétose sur lequel un groupement phosphate est fixé sur la fonction hémiacétalique. Dans un mode particulier de réalisation, le sucre-phosphate substrat s’entend d’un oligo- ou polysaccharide phosphate. Il est bien entendu que le sucre phosphate substrat peut être partiellement fonctionnalisé au moyen de groupements fonctionnels fixés sur au moins un des groupements hydroxyles qu’il comprend (excepté l’hydroxyle de la fonction hémiacétalique) ; par exemple, et de façon non limitative, il peut être méthylé, acylé, acétylé, N-acétylé, déshydroxylé, carboxylé, ou déshydroxylé. Cela résulte en la formation, à l’issue du procédé de l’invention, d’oligo- ou polysaccharides phosphate portant ces fonctionnalisations. Préférentiellement ladite composition ne comprend substantiellement pas, de même que bien évidemment la préparation enzymatique, de sucre non phosphorylé substrat accepteur de l’au moins une GP ; cela permet d’assurer un rendement maximal en oligosaccharide ou polysaccharide phosphorylé non réducteur. Ainsi, de préférence, ladite de composition comprenant au moins un sucre-phosphate substrat de ladite enzyme (10b), ne comprend substantiellement pas de sucre non phosphorylé substrat accepteur de l’au moins une GP. Ladite composition peut comprendre un sucre non phosphorylé substrat accepteur de la GP, néanmoins dans cette hypothèse, dans ladite composition, le au moins un sucre-phosphate substrat de la GP peut représenter au moins 70% des sucres substrats de la GP présents dans la composition, de préférence au moins 80 %, de manière encore plus préférée au moins 90% et de manière particulièrement préférée au moins 95% des sucres substrat de la GP présents dans la composition. Bien entendu, la composition peut comprendre sans restriction d’autres sucres non-substrat de la GP, phosphorylés ou non. Dans un mode de réalisation particulier, la composition comprenant au moins au moins un sucre-phosphate substrat comprend 2, 3, voire plus, sucres phosphate substrats. En effet, quoique la plupart du temps très spécifiques, certaines GP peuvent accepter de sucres-phosphate substrats différents. C’est-à-dire qu'une enzyme peut catalyser ladite réaction à partir de 1, 2, voire plus, sucres-phosphate substrats différents, résultant, par exemple, à l’issue de la mise œuvre du procédé selon ce mode de réalisation particulier, en la production d’un mélange d’oligo- ou polysaccharides phosphate différents. Mise en réaction 20 de la préparation comprenant la au moins une glycoside phosphorylase avec la composition comprenant au moins un sucre-phosphate substrat de ladite enzyme, « Mise en réaction » s’entend de la mise en présence de l’au moins une GP et de l’au moins au moins un sucre-phosphate substrat de ladite GP et de la fourniture de conditions propices à la réaction de synthèse de sucres phosphate telle de décrite dans la FIG. 2 . Dans un mode de réalisation particulier, le sucre-phosphate substrat est le α-mannose-1P et l’au moins une enzyme glycoside phosphorylase correspond à une enzyme référencée sous le numéro d’accession NCBI ou UNIPROT suivant : CAC96089.1, ABY93074.1, ABY93073.1, CBZ24449.1, CAH1385118.1, CAH1385117.1, BAJ10826.1, CAZ94304.1, AAS19693.1, ADU21379.1, ADU20661.1, CAH06518.1, VCV21228.1, AAO76140.1, VCV21229.1, AAD36300.1, WP_026485574.1, WP_026486530.1, ABK05267.1, CBZ24448.1, CBZ24451.1, CBZ24452.1, CAH1385115.1, ou CAH1385116.1. Dans un autre mode de réalisation particulier, le sucre-phosphate substrat est le α-galactose-1P et l’au moins une enzyme glycoside phosphorylase correspond à une enzyme référencée sous le numéro Genbank suivant : ACB74662.1, ABX42289.1, AAO07997.1, ABX40964.1, ABX43387.1, EEG94248.1, ACV29689.1, ZP_05748149.1, ACZ00636.1, ABG83511.1, BAH10636.1, ADL32981.1 ou AEN95946.1. Dans un autre mode de réalisation particulier, le sucre-phosphate substrat est le α-glucose-1P et l’au moins une enzyme glycoside phosphorylase correspond à une enzyme référencée sous le numéro d’accession NCBI ou UNIPROT suivant : 2207198A, AAD40317.1, AAN24362.1, AAN58596.1, AAO21868.1, AAO33821.1, AAO84039.1, AAX33736.1, ABS59292.1, ADL69407.1, CCA61958.1 , BAN03569.1, AGK37834.1, BAA14344.1, BAF62433.1, CAA30846.1, CAA80424.1, ADP98617.1, ADH62582.1, AEJ61152.1, AAC74391.2, AAB95491.2, AAC45510.1, AAD36910.1, AAL67138.1, AAQ20920.1, ABD80580.1, ABN51514.1, ADU20744.1, BAA25846.1, BAA28631.1, CAB16926.1, ADU22883.1, BAB71818.1, ABN54185.1, AAC45511.1, BAJ10826.1, ABX81345.1, CAC97070.1, ABX41081.1, AAM43298.1, ABD80168.1, EAA28929.1, ACL75793.1, ACL76454.1, ACL76688.1, ACL77700.1, AFH48717.1, AHC20114.1, AIQ57809.1, AIQ60507.1, QCO92799.1, QCO92836.1, QCO92991.1, QCO92946.1, QCO92990.1, QCO92945.1, QCO92835.1, AUO30192.1, QCO92814.1, WP_019688419.1, ACJ76363.1, 6HQ6, ou BAU78234.1 . Dans un autre mode de réalisation particulier, le sucre-phosphate substrat est le α-glucose-1P et l’au moins une enzyme glycoside phosphorylase correspond à une enzyme référencée sous le numéro Genbank suivant : ABP51432.1, AAL81659.1, AAD28735.1, ABN51595.1, AAD03471.1, AAC06896.1, AAC00218.1, AAM24997.1, AAM52219.1, BAB98701.1, BAB99480.1, AAC76453.1, AAC76442.1, BAA19592.1, AAD53957.1, AAN59210.1, AAL26558.1, AGL50099.1, BAB11741.1, CAC93400.1, AAB46846.1, ABB88567.1, CAA44069.1, AAA33211.1, AAD46887.1, AAN17338.1, AAL23578..1, AAP33020.1, AAK69600.1, AAB60395.1, CAA75517.1, AAC17451.1, BAK00834.1, AAA63271.1, AAK01137.1, AAL23577.1, AAD30476.1, AAG00588.1, ACJ76617.1, AAK15695.1, BAB92854.1, AAV87308.1, AAB68800.1, AAA41252.1, AAH70901.1, AAA41253.1, AAB68057.1, AAA33809.1, BAA00407.1, CAA52036.1, CAA59464.1, AAL23579.1, AAF82787.1, CAA84494.1 ou CAA85354.1, et la mise en réaction comprend également la fourniture d’un oligo- ou polysaccharide accepteur de formule maltodextrin [(1,4)-α-D-glucosyl]n. La personne de l’art saura comment optimiser les conditions réactionnelles (telle que la température, la concentration en sel, le pH, la concentration en sucre-phosphate substrat de la GP) propre à garantir du rendement optimal de la réaction de synthèse de sucres phosphate. Par exemple, le tampon réactionnel utilisé peut être choisi parmi la liste de tampons proposés sur les sites internet : https://hamptonresearch.com/uploads/cg_pdf/Hampton_Research_CG101_Buffer_Table.pdf, ou https://www.sigmaaldrich.com/FR/fr/support/calculators-and-apps/buffer-calculator, qui permet de choisir en fonction du pH réactionnel optimum souhaité qui peut varier en fonction de la GP utilisée. La température réactionnelle peut être comprise entre 5 °C et 90 °C , 10 °C et 80 °C , 15 °C et 70 °C, 20 °C et 60 °C, 25 °C et 50 °C, préférentiellement entre 30 °C et 40 °C ; typiquement, la température réactionnelle est de 37 °C mais la température optimale de l’enzyme peut grandement varier selon l’enzyme considérée et/ou les conditions de production et sera aisément déterminée par des tests in vitro . La durée de la mise en réaction peut être de 1 h à 48 h, de préférence de 5 h et 40 h, de 10 h à 30 h, voire de 15 h à 20 h selon les conditions de mise en œuvre du procédé. La réaction peut être mise en œuvre dans un contenant clos, par exemple lieu en réacteur clos, sans échange avec le milieu extérieur, dans lequel les deux compositions sont alors mises en réaction. Il peut s’agir dans un réacteur à cuve agitée, au moyen par exemple d’un homogénéisateur à hélices, pour maintenir un mélange homogène de l’enzyme et du milieu réactionnel. Tout autre moyen visant à maintenir l’homogénéité du mélange de la préparation et de la composition peut être utilisé. Avantageusement, quand la GP est immobilisée, et pour éviter la dégradation de l’enzyme immobilisée du fait des forces de cisaillement associées à l’agitation, l’enzyme immobilisée peut être associée à un support au travers duquel ou sur lequel un flux de mix réactionnel (ici par exemple le tampon de réaction et la composition comprenant le sucre-phosphate substrat de la GP) est opéré. Alternativement, toujours dans ce mode de réalisation de réacteur à flux, l’enzyme immobilisée n’est pas associée un support mais est maintenue en suspension dans un compartiment du réacteur au travers duquel circule le mix réactionnel et notamment le ou les sucres-phosphate. Le réacteur peut avoir un volume supérieur ou égal à 100 mL, 200 mL, 300 mL, 400 mL, 500 mL, 600 mL, 700 mL, 800 mL, 900 mL, voire supérieur ou égal à 1 L, 2 L, 3 L, 4 L, 5 L, 10 L, 20 L, 30 L, 40 L, 50 L, 60 L, 70 L, 80 L, 90 L, voire supérieur ou égal à 100 L, 200 L, 300 L, 500 L, 1000 L, 2000 L, 3000 L, supérieur ou égal à 10000 L. Des exemples de conception des bioréacteurs applicables ici sont fournis par Sheldon et al (2021). Avantageusement, dans un mode de réalisation particulier, le contenant dans lequel a lieu la mise en réaction est pourvu d’un moyen visant à garantir le déplacement de l’équilibre de la réaction en faveur de la synthèse d’oligo- ou polysaccharide(s) phosphate. Cela peut s’opérer, par exemple, en assurant l’évacuation du phosphate inorganique libre généré par la réaction (par exemple en utilisant des moyens de filtration permettant d’éliminer le phosphate inorganique du milieu réactionnel ou des moyens permettant la précipitation du phosphate inorganique formé) et/ou des oligo- ou polysaccharides produits, ou en assurant un fort excès en sucre(s)-phosphate substrat(s) de l’au moins une GP dans l’enceinte de la mise en réaction, par exemple en complémentant de manière continue le réacteur le ou les sucres-phosphate substrat de l’au moins une GP. Dans un mode de réalisation particulier, le phosphate inorganique est précipité en utilisant par exemple des sels de calcium. Obtention 30 d’un mélange comprenant au moins un oligosaccharide phosphate et/ou au moins un polysaccharide phosphate. Comme illustré sur la FIG. 2 , le produit de la réaction de synthèse de sucres phosphate telle que découverte par les inventeurs comprend au moins un oligosaccharide phosphate ou au moins un polysaccharide phosphate dont l’extrémité hémiacétalique est liée par une liaison covalente avec un phosphate inorganique, et du phosphate inorganique comme produit de la réaction. • Etape optionnelle de purification de l’au moins un oligosaccharide phosphate ou de l’au moins un polysaccharide phosphate. Dans un mode de réalisation particulier, ledit procédé enzymatique de synthèse in vitro d’au moins un oligosaccharide phosphate ou au moins un polysaccharide phosphate 1 peut comprendre en outre une étape de purification de ou des oligo- ou polysaccharides phosphate produit par le procédé de l’invention. Lors de cette étape, le ou les oligo- ou polysaccharides phosphate produits peuvent être purifiés du phosphate inorganique, des oligosaccharides non phosphorylés et des monosaccharides par une précipitation au calcium suivie d’une précipitation à l’éthanol, dont le résultat est illustré FIG. 9 . Par exemple, l’introduction en excès d’ions Ca2+ dans le milieu réactionnel (par exemple, 5 mol de Ca2+ / 1 mol Man-1P substrat initial de la réaction) permet de faire précipiter le phosphate inorganique car ces deux espèces chimiques se combinent pour former un précipité insoluble. Il préférable d’apporter les ions Ca2+ via un sel qui n’a que peu d’effet sur le comportement physico-chimique global du milieu réactionnel et qui peut être enlevé facilement par la suite. L’acétate de calcium est un sel préféré. Après centrifugation, le surnageant est récupéré, filtré et mélangé à de l’éthanol (par exemple, 85% en concentration finale) afin de précipiter les oligo- et/ou polysaccharides phosphate. Les oligosaccharides non phosphorylés et les monosaccharides restent en effet solubles dans la solution. Après centrifugation, le culot est lavé à l’éthanol 85% puis séché sous flux d’azote. Le culot est ensuite réhydraté puis séché une nouvelle fois à l’évaporateur rotatif. Finalement, les produits de réaction sont lyophilisés pour une conservation et une stabilité optimale. Etape optionnelle de production de sucre-phosphate substrat de l’au moins une GP. Dans un autre mode de réalisation particulier, ledit procédé enzymatique de synthèse in vitro d’au moins un oligosaccharide phosphate ou au moins un polysaccharide phosphate 1 peut comprendre en outre une étape de production de sucre-phosphate substrat de l’au moins une GP. Celle-ci peut être opérée par voie enzymatique ou chimique, la voie enzymatique étant particulièrement préférée. La voie chimique peut être, par exemple telle que décrite par Degani et Halmann (1971). De manière préférée, le sucre-phosphate substrat de l’au moins une GP est synthétisé par voie enzymatique, qui présente les avantages déjà énumérés. Ainsi, le sucre-phosphate substrat de l’au moins une GP, peut être produit : en utilisant une GP dans des conditions réactionnelles favorisant la réaction de phosphorolyse, c’est-à-dire lyse d’un oligo- ou polysaccharide (α- ou β-glycosides) en présence de phosphate inorganique, en utilisant une Glucose Hydrolase (GH) qui va catalyser l’hydrolyse d’un oligosaccharide ou polysaccharide pour produire un monosaccharide non phosphorylé à son extrémité hémiacétalique, lequel est ensuite ‘phosphorylé’ en utilisant, par exemple, une kinase en présence d’ adénosine triphosphate comme donneur de phosphate (Liu et al (2015). en utilisant une GP qui va catalyser la phosphorolyse, d’un disaccharide pour produire un sucre non phosphorylé à son extrémité hémiacétalique, lequel est ensuite ‘phosphorylé’ en utilisant, par exemple, une kinase en présence d’ adénosine triphosphate comme donneur de phosphate. Cette étape enzymatique supplémentaire de synthèse du sucre-phosphate substrat de la GP peut être effectuée extemporanément à partir d’enzymes purifiées qui vont éventuellement catalyser des réactions successives (comme par exemple illustré dans Zhong et al (2020)). Alternativement, un microorganisme peut être modifié génétiquement de manière à exprimer la ou les enzymes complémentaires permettant d’aboutir à partir d’un substrat polysaccharidique à produire au moins un oligosaccharide phosphate ou au moins un polysaccharide phosphate désiré, par ledit microorganisme (comme par exemple illustré dans la demande WO 2021/229185 ou l’article de Tian et al (2020)) . Dans un mode de réalisation particulier, ledit procédé enzymatique de synthèse in vitro d’au moins un oligosaccharide phosphate ou au moins un polysaccharide phosphate 1 peut comprendre en outre une étape d’identification de l’au moins un sucre-phosphate substrat de la GP. Par exemple, une telle étape peut comprendre un test tel que celui mise en œuvre par Macdonald et al (2019), ou illustré dans la partie expérimentale, est particulièrement avantageux car rapide est simple à mettre en œuvre. Etape optionnelle de caractérisation de la GP. Dans un autre mode de réalisation particulier, ledit procédé enzymatique de synthèse in vitro d’au moins un oligosaccharide phosphate ou au moins un polysaccharide phosphate 1 peut comprendre en outre une étape de caractérisation de la GP ; en d’autres termes une étape d’identification pour une enzyme donnée des activités caractéristiques d’une GP à savoir la phosphorolyse des oligo- et polysaccharides et/ou la reverse phosphorolyse telles que décrites plus haut et détaillées dans Li et al (2022). Par exemple, une telle étape peut comprendre un test tel que celui mise en œuvre par Macdonald et al (2019). Cette étape de caractérisation peut comprendre, donc, l’identification des sucres donneur et accepteur de la GP tel qu’explicité dans la partie expérimentale. Résultats expérimentaux i. Production des GP recombinantes Tableau 2 : Glycosides phosphorylases recombinantes produites et testées in vitro pour leur activité de synthèse de sucres phosphate . Famille CAZy N° GENBANK Nom Origine GH130 ABY93073.1 Teth1788 Thermonobacter sp. X-514 GH130 CAC96089.1 Lin0857 Listeria innocua Clip 11262 GH130 CAH1385118.1 Uhgb_mS Bactérie du microbiome mammifère GH130 CAH1385117.1 U7 Bactérie du microbiome mammifère GT108 CBZ24449.1 MTP4 Leishmania mexicana MNYC/BZ/62/M379 Clonage Le gène codant pour l’enzyme Teth514-1788 de la souche Thermoanaerobacter sp. X-514 (Teth514-1788, numéro d'accès Genbank ABY93073.1) appartenant à la famille GH130 de la classification CAZy (http://www.cazy.org/) a été synthétisé et cloné dans le vecteur pBAD HisA par la société Biomatik (Biomatik, Ontario, Canada) entre les sites de restriction NcoI et XhoI. Le gène codant pour l'enzyme Lin0857 de la souche Listeria innocua Clip 11262, (numéro d’accès Genbank CAC96089.1) appartenant à la famille GH130 de la classification CAZy a été synthétisé par la société TWIST Bioscience (TWIST, San Francisco, États-Unis) et cloné entre les sites de restriction NcoI et XhoI, dans le plasmide pBAD-HisA. Le gène codant pour l'enzyme Uhgb_mS (numéro d’accès Genbank CAH1385118.1), appartenant à la famille GH130 de la classification CAZy a été synthétisé avec une optimisation des codons pour une expression dans E. coli par la société Biomatik Limited (Cambridge, Ontario, Canada) et cloné dans le plasmide pET-23a (+) avec un tag 6 (His) aux extrémités N- et C-terminales. Le gène codant pour l'enzyme U7 (numéro d’accès Genbank CAH1385117.1) appartenant à la famille GH130 de la classification CAZy a été synthétisé avec une optimisation des codons pour une expression dans E. coli par la société Biomatik Limited (Cambridge, Ontario, Canada) et cloné entre les sites de restrictions NdeI et XhoI dans le plasmide pET-23a (+) avec un tag 6 (His) aux extrémités N- et C-terminales. Le gène codant pour l'enzyme MTP4 de la souche Leishmania mexicana MNYC/BZ/62/M379, (numéro d’accès Genbank CBZ24449.1) appartenant à la famille GT 108 de la classification CAZy a été synthétisé par la société Integrated DNA Technologies (München-Flughafen, Allemagne) et cloné par la méthode « in fusion » dans le plasmide pET-28 avec un tag 6 (His) à l’extrémité C-terminale en utilisant ces amorces pour amplifier le gène MTP4 et le plasmide pET 28 respectivement : Fw : SEQ ID NO 2 : 5’-AGGAGATATACCATGAAGCAGACTAAGGCGTCCTTTGAGGCTAACAAACG-3’. Rev : SEQ ID NO 3: 5’-GTGGTGGCTGCTGCCCAGGGATGAGGCCATCGGGAAATTCAGGTCTC-3’ Fw: SEQ ID NO 4 : 5’-GGCAGCAGCCACCACCACCACCACCACTGAGATC-3’ Rev : SEQ ID NO 5 : 5’-CATGGTATATCTCCTTCTTAAAGTTAAACAAAATTATTTCTAG-3’ Expression Les glycoside phosphorylases recombinantes de la famille CAZy GH130 et GT108 listées dans le tableau 2 ont été produites dans E. coli BL21. Les enzymes placées sur vecteur pET ont été produites chez E. coli BL21(star) tandis que celles présentes sur pBAD ont été produites chez BL21-AI. Le protocole de production est ensuite identique pour les 5 GP. Un volume de 50 µL de cellules, rendu préalablement compétentes, a été transformé avec 1 µL d’ADN plasmidique contenant la séquence nucléotidique de l’enzyme à produire. Après incubation des cellules en présence du plasmide pendant 30 min, la transformation a été réalisée par choc thermique à 42°C pendant 30 sec. Après 1h d’expression phénotypique en milieu SOC à 37°C à 200 rpm d’agitation, les cellules ont été utilisées pour ensemencer 20 mL de milieu LB complémenté avec l’antibiotique de sélection puis incubées une nuit à 37°C à 200 rpm. Le lendemain, la préculture a été utilisée pour ensemencer 200 mL de milieu auto-inductible ZYM complémenté avec l’antibiotique de sélection à une DO = 0,05. Pour les vecteurs pET, le milieu ZYM contenait du lactose pour l’induction des plasmides, tandis qu’il contenait de l’arabinose pour l’induction des gènes portés par le vecteur pBAD. Les cellules ont été incubées 24h à 21°C à 160 rpm. A la fin de la culture, les cellules ont été récupérées par centrifugation (15 min, 10 000 g). Tout autre organisme et/ou technique usuelle de production et purification de protéines recombinantes peut être employée. Purification La purification des 5 GP a été réalisée selon le même protocole. Les culots cellulaires correspondant aux 100 mL de culture ont été repris à DO = 100 dans du tampon Tris-HCl (50 mM) + NaCl (350 mM) à pH = 7,5. Les cellules ont ensuite été lysées à froid par sonication. Les fractions protéiques totales obtenues ont été centrifugées à froid 30 min à 12 000g, puis seules les fractions protéiques solubles ont été conservées. Les enzymes taguées 6His ont été purifiées des autres protéines bactériennes par chromatographie d’affinité sur résine de cobalt (TALON® Metal Affinity Resin, Takara). L’incubation des fractions totales avec la résine de cobalt a duré 1h à 4°C. L’élution finale a été réalisée dans du tampon Tris-HCl (20 mM) + NaCl (100 mM) + Imidazole (300 mM) équilibré à pH = 7,5. Les GP recombinantes ont enfin été dessalées sur colonne de dessalage PD-10 (GE Healthcare) selon le protocole fourni par le fabricant. L’élution finale a été réalisée avec du tampon Tris-HCl (20 mM) + NaCl (150 mM) équilibré à pH = 7,5. ii. Identification du sucre donneur et receveur Les données CAZy ( ) identifient les substrats des enzymes identifiées dans cette base. Les sucres substrat donneur et accepteur pour une glycoside phosphorylase putative peuvent aisément être identifiés en utilisant par exemple des tests chromogéniques qui détectent la présence du phosphate inorganique libéré par le sucre donneur lors de la réaction de synthèse de l’oligosaccharide par la glycoside phosphorylase. Un exemple est le test au bleu de molybdène. Brièvement, ce test est basé sur la formation de phosphomolybdène en présence du réactif molybdate. Dans des conditions acides, le phosphomolybdate est réduit en molybdène, dont le bleu est le réactif de la réaction. L'intensité de la couleur bleue peut être quantifiée par la mesure de l'absorbance à 655 nm. Par exemple, le milieu réactionnel peut contenir 45 µL d’enzyme purifiée pour une concentration finale de 0,03 mg.ml -1 dans 255 µL d’une solution de contenant 20 mM de Tris/HCl (pH 7.0), 200 mM de molybdate de sodium, 10 mM de monosaccharide-1-phosphate. et 10 mM d’un monosaccharide accepteur (concentration finale). La réaction est suivie par des prélèvements de 50 µl transférés en microplaque 96 puits contenant 150 µl d’une solution d’acide L-ascorbique à 0,24 % (W/V) dans du HCl 0,1 N par puits. Après incubation à température ambiante pendant 5 minutes, 150 µl de solution d'arrêt [2 % (v/v) d'acide acétique et 2 % (p/v) de citrate de sodium tribasique dihydraté] sont ajoutés pour arrêter la réaction. L'absorbance est mesurée à 655 nm à l'aide d'un lecteur de microplaques (InfiniteM200pro, TECAN). Une unité d'activité correspond à la quantité d'enzyme qui catalyse la production de 1 µmol de phosphate inorganique par min-1 dans les conditions de l'essai. Cette méthode est adaptée à la détection de l'activité catalysée par la GP produite dans des extraits cellulaires bruts d' E. coli et détaillée par Macdonald et al (2019), ce qui permet le criblage d’un grand nombre d’extraits, de sucres donneurs et accepteurs. iii. Test de l’activité de de synthèse d’oligo- ou polysaccharides phosphate La réaction de synthèse avec le sucre-1-phosphate comme seul substrat peut être conduite selon des conditions déterminées par les caractéristiques physico-chimique de la GP testée, notamment ses conditions optimales d’activité et de stabilité (températures, pH, salinité, etc…). En adaptant le test au molybdate, en utilisant uniquement un sucre-1-phosphate comme substrat, il est possible de détecter une potentielle activité de synthèse d’oligosaccharides phosphate ou polysaccharides phosphate. Une confirmation par HPAEC-PAD peut ensuite être réalisée pour confirmer la nature des produits synthétisés. Les enzymes du tableau 2 ont été testées dans des conditions similaires. En l’occurrence, les réactions ont été réalisées dans un volume de 500 µL à 37°C sous 900 rpm d’agitation. 5µM d’enzymes ont été mis en présence de 75 mM de mannose-1-phosphate (Man-1P) pendant 20h. Pour les enzymes Lin0857, MTP4, Uhgb_MS et U7, le milieu réactionnel était à pH = 7 dans un tampon Tris-HCl concentré à 100 mM. Pour l’enzyme Teth1788, le milieu réactionnel était à pH = 5 dans un tampon acétate de sodium concentré à 100 mM. En fin de réaction, l’enzyme a été inactivée en chauffant le milieu réactionnel 5 min à 95°C. Après centrifugation pour éliminer l’enzyme précipitée, les produits de réaction ont été analysés par HPAEC-PAD et HPAEC-PAD-MS. iv. Réaction de synthèse d’oligo- ou polysaccharides phosphate Les réactions de synthèse avec le sucre-1-phosphate comme seul substrat ont été conduites à 37°C et pH = 7 sous agitation pendant 20h. Les temps finaux ainsi qu’un contrôle ne contenant que le sucre-1-phosphate ont été analysés par chromatographie d’échange d’anions simple (High Performance Anion Exchange Chromatography with Pulsed Amperometric detection « HPAEC-PAD ») ou couplée à un spectromètre de masse (Mass Spectrometer, « HPAEC-PAD-MS »). v. Détection et caractérisation des oligo- et/ou polysaccharides phosphate synthétisés Les produits réactionnels obtenus avec les 5 GP ont été analysés dans un premier temps par chromatographie d’échange d’anions couplée avec un détecteur à ampérométrie pulsée (High Performance Anion Exchange Chromatography with Pulsed Amperometric detection « HPAEC-PAD », FIG. 3 ). La séparation a été réalisée sur une colonne IC Dionex CarboPac PA100 2 mm (Thermo Scientific). Avec un débit de 0,250 mL/min sur la phase mobile, le protocole suivant a été utilisé : 1) phase isocratique de 3 min à 75 mM NaOH, 2) gradient de 1 min de 75 à 150 mM de NaOH, 3) phase isocratique de 1 min à 150 mM NaOH, 4) gradient de 1 min de 0 à 50 mM d’acétate de sodium, 5) gradient de 10 min de 50 à 175 mM d’acétate de sodium. La détection a été réalisée avec un module Dionex ED40 fonctionnant avec une électrode d’or et une référence pH Ag/AgCl. Les produits réactionnels obtenus avec les 5 GP ont été analysés dans un second temps par chromatographie d’échange d’anions couplée avec un détecteur à ampérométrie pulsée et un spectromètre de masse (Mass Spectrometer, « HPAEC-PAD-MS », FIG. 4 à 8). La séparation a été réalisée sur une colonne IC Dionex CarboPac PA100 2 mm (Thermo Scientific). Avec un débit de 0,250 mL/min sur la phase mobile, le protocole suivant a été utilisé : 1) phase isocratique de 3 min à 75 mM NaOH, 2) gradient de 1 min de 75 à 150 mM de NaOH, 3) phase isocratique de 1 min à 150 mM NaOH, 4) gradient de 1 min de 0 à 50 mM d’acétate de sodium, 5) gradient de 16 min de 50 à 125 mM d’acétate de sodium, 6) phase isocratique de 23 min à 125 mM d’acétate de sodium. La détection en ampérométrie a été réalisée avec un module Dionex ED40 fonctionnant avec une électrode d’or et une référence pH Ag/AgCl. La détection des masses molaires a été réalisée avec un spectromètre de masse ISQ EC (Thermo Scientific). Deux modules de dessalage Dionex AERES 500e 2mm (Thermo Scientific) ont été utilisé avec un débit d’eau de 1 mL/min et une tension de 50 et 100 mA. Les paramètres utilisés étaient les suivants : température de vaporisation : 289°C, température du tube de transfert d’ions : 300 °C, tension source d’ions positif : 3000 V, tension source d’ions négatif : -2000V, pression d’azote : 55,3 psig, polarité : négative, masse analysée : 175 à 1250, temps d’analyse : 0,2 sec, type de spectre ; centroïde, tension source CID : 5. Les masses molaires extraites du signal global ont été lissées grâce à une fonction de type gaussienne de 301 points. Comme le montre la FIG. 3 , pour les enzymes du tableau 2 testées, des pics aux temps de rétention très hauts et supérieurs à celui du mannose-1-phosphate sont visibles. Ces pics ne peuvent correspondre à des β-mannosides usuels car leurs temps de rétention sont bien connus et inférieurs à celui mannose-1-phosphate. Etant donné l’activité catalytique de ces enzymes, la régularité des pics et leur reproductibilité (notamment pour les β-1,2 mannosides phosphorylases), ils correspondent très certainement à des β-mannosides phosphate de différents degrés de polymérisation. Des analyses en spectrométrie de masse doivent permettre de confirmer cette hypothèse. Les analyses par HPAEC-PAD-MS des pics produits par les enzymes MTP4 ( FIG. 4 ), Teth1788 ( FIG. 5 ), Lin0857 ( FIG. 6 ), Uhgb_MS ( FIG. 7 ) et U7 ( FIG. 8 ) montrent, après traitement du signal, qu’ils ont exactement la masse de molécules de Man-1P polymérisées avec une ou plusieurs unités mannosyles. En d’autres termes, ces pics correspondent bien à des oligosaccharides de mannoses comportant une unique phosphorylation, le groupement phosphate ne pouvant qu’être à l’extrémité réductrice des chaînes, en position α. Les 5 GP mentionnées dans le tableau 2 sont donc capables d’utiliser le mannose-1-phosphate en tant que donneur et accepteur pour synthétiser des oligosaccharides et polysaccharides phosphate. Comme le montrent les FIG. 4 à 8, l’analyse par HPAEC-PAD-MS rend possible de caractériser le degré de polymérisation (DP) des oligo- et polysaccharides phosphate produits jusqu’au moins 6 unités. Cependant, le signal ampérométrique pour MTP4 et Teth1788 suggèrent que des oligo- et polysaccharides phosphate de DP supérieur sont produits. MTP4 synthétiserait des oligosaccharides jusqu’à DP = 13. Teth1788 synthétiserait des oligo- et polysaccharides au-delà de DP = 14 dans les conditions testées. Le tableau 3 résume les activités, et oligosaccharides détectés pour les enzymes testées. Nom Substrat Produit DP maximal détecté Teth1788 Man-1P β-1,2-MOS-αPi >14 Lin0857 Man-1P β-1,2-MOS-αPi 4 Uhgb_MS Man-1P β-1,2-MOS-αPi 3 U7 Man-1P β-1,2-MOS-αPi 4 MTP4 Man-1P β-1,2-MOS-αPi 13 Bibliographie Li a , A.; Benkoulouche, M.; Ladeveze, S.; Durand, J.; Cioci, G.; Laville, E.; Potocki-Veronese, G. Discovery and Biotechnological Exploitation of Glycoside- Phosphorylases. Int. J. Mol. Sci. 2022, 23, 3043. Li b A, Laville E, Tarquis L, Lombard V, Ropartz D, Terrapon N, Henrissat B, Guieysse D, Esque J, Durand J, Morgavi DP, Potocki-Veronese G. Analysis of the diversity of the glycoside hydrolase family 130 in mammal gut microbiomes reveals a novel mannoside-phosphorylase function. Microb Genom. 2020 Oct;6(10):mgen000404. Liu Y, Nishimoto M, Kitaoka M. Facile enzymatic synthesis of sugar 1-phosphates as substrates for phosphorylases using anomeric kinases. Carbohydr Res. 2015 Jan 12;401:1-4 Lujan Ferreira, M. (Editor) Biocatalyst Immobilization Foundations and Applications. 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Procédé enzymatique de synthèse in vitro d’au moins un oligosaccharide phosphate et/ou au moins un polysaccharide phosphate (1) comprenant les étapes suivantes : fourniture d’une préparation comprenant au moins une enzyme glycoside phosphorylase (10a) ne catalysant pas la formation de liaison osidique 1-1, fourniture d’une composition comprenant au moins un sucre-phosphate substrat de ladite enzyme (10b), ladite composition ne comprenant substantiellement pas de sucre non phosphorylé substrat accepteur de ladite au moins une enzyme glycoside phosphorylase, mise en réaction (20) de la préparation comprenant l’au moins une glycoside phosphorylase avec la composition comprenant au moins un sucre-phosphate substrat de ladite enzyme, obtention (30) d’un mélange comprenant au moins un oligosaccharide phosphate ou au moins un polysaccharide phosphate. Procédé enzymatique de synthèse in vitro d’au moins un oligosaccharide phosphate et/ou au moins un polysaccharide phosphate (1) selon la revendication précédente, dans lequel l’au moins une enzyme glycoside phosphorylase appartient à une famille d’enzymes à activité glucidique référencée dans la base de données CAZY.org dans les familles suivantes : GH3, GH13_18, GH65, GH94, GH112, GH130, GH149, GH161, GT35, GT108 et GH131. Procédé enzymatique de synthèse in vitro d’au moins un oligosaccharide phosphate et/ou au moins un polysaccharide phosphate (1) selon l’une quelconque des revendications précédentes, dans lequel l’au moins un enzyme glycoside phosphorylase correspond à une enzyme référencée sous le numéro d’accession NCBI ou UNIPROT suivant : AAQ05801.1, AUG44408.1, 2207198A, AAD40317.1, AAN24362.1, AAN58596.1, AAO21868.1, AAO33821.1, AAO84039.1, AAX33736.1, ABS59292.1, ADL69407.1, CCA61958.1 , BAN03569.1, AGK37834.1, BAA14344.1, BAF62433.1, CAA30846.1, CAA80424.1, ADP98617.1, ADH62582.1, AEJ61152.1, AAC74391.2, AAV43670.1, ADH99560.1, BAC54904.1, BAD97810.1, CAA11905.1, AAO80764.1, ABX42243.1, ABX43667.1, ABX43668.1, AAE30762.1, ABP66077.1, ADQ05832.1, AAC74398.1, ACL68803.1, ADC90669.1, SHM33122.1, ABX41399.1, ADI00307.1, AAB95491.2, AAC45510.1, AAD36910.1, AAL67138.1, AAQ20920.1, ABD80580.1, ABN51514.1, ADU20744.1, BAA25846.1, BAA28631.1, CAB16926.1, ADU22883.1, BAB71818.1, ABN54185.1, AAC45511.1, BAJ10826.1, ABX81345.1, AAG23740.1, BAC87867.1, CAC97070.1, ABX41081.1, AAM43298.1, ABD80168.1, EAA28929.1, 6HQ6, ABX81671.1, ACL75793.1, ACL76454.1, ACL76688.1, ACL77700.1, AFH48717.1, AHC20114.1, AIQ57809.1, AIQ60507.1, QCO92799.1, QCO92836.1, QCO92991.1, QCO92946.1, QCO92990.1, QCO92945.1, QCO92835.1, ACB74662.1, ABX42289.1, AAO07997.1, ABX40964.1, ABX43387.1, EEG94248.1, ACV29689.1, ZP_05748149.1, ACZ00636.1, ABG83511.1, BAH10636.1, ADL32981.1, AEN95946.1, CAC96089.1, ABY93074.1, ABY93073.1, CAZ94304.1, AAS19693.1, ADU21379.1, ADU20661.1, CAH06518.1, VCV21228.1, AAO76140.1, VCV21229.1, AAD36300.1, WP_026485574.1, WP_026486530.1, ABK05267.1, AUO30192.1, QCO92814.1, WP_019688419.1, ACJ76363.1, BAU78234.1, CBZ24448.1, CBZ24449.1, CBZ24451.1, CBZ24452.1, CAH1385118.1, CAH1385117.1, CAH1385115.1, CAH1385116.1, ADD61463.1, BAD80751.1, ABP51432.1, AAL81659.1, AAD28735.1, ABN51595.1, AAD03471.1, AAC06896.1, AAC00218.1, AAM24997.1, AAM52219.1, BAB98701.1, BAB99480.1, AAC76453.1, AAC76442.1, BAA19592.1, AAD53957.1, AAN59210.1, AAL26558.1, AGL50099.1, BAB11741.1, CAC93400.1, AAB46846.1, ABB88567.1, CAA44069.1, AAA33211.1, AAD46887.1, AAN17338.1, AAL23578..1, AAP33020.1, AAK69600.1, AAB60395.1, CAA75517.1, AAC17451.1, BAK00834.1, AAA63271.1, AAK01137.1, AAL23577.1, AAD30476.1, AAG00588.1, ACJ76617.1, AAK15695.1, BAB92854.1, AAV87308.1, AAB68800.1, AAA41252.1, AAH70901.1, AAA41253.1, AAB68057.1, AAA33809.1, BAA00407.1, CAA52036.1, CAA59464.1, AAL23579.1, AAF82787.1, CAA84494.1 ou CAA85354.1, ou de séquence SEQ ID NO 1. Procédé enzymatique de synthèse in vitro d’au moins un oligosaccharide phosphate et/ou au moins un polysaccharide phosphate (1) selon l’une des revendications 1 à 3, dans lequel : le sucre-phosphate substrat est le β-glucose-1P et l’au moins une enzyme glycoside phosphorylase correspond à une enzyme référencée sous le numéro Genbank suivant : AAQ05801.1, AUG44408.1, AAV43670.1, ADH99560.1, BAC54904.1, BAD97810.1, CAA11905.1, AAO80764.1, ABX42243.1, ABX43667.1, ABX43668.1, AAE30762.1, ABP66077.1, ADQ05832.1, AAC74398.1, ACL68803.1, ADC90669.1, SHM33122.1, ABX41399.1, ou ADI00307.1, le sucre-phosphate substrat est le α-mannose-1P et l’au moins une enzyme glycoside phosphorylase correspond à une enzyme référencée sous le numéro d’accession NCBI ou UNIPROT suivant : ADD61463.1, CAC96089.1, ABY93074.1, ABY93073.1, CBZ24449.1, CAH1385118.1, CAH1385117.1, BAJ10826.1, CAZ94304.1, AAS19693.1, ADU21379.1, ADU20661.1, CAH06518.1, VCV21228.1, AAO76140.1, VCV21229.1, AAD36300.1, WP_026485574.1, WP_026486530.1, ABK05267.1, CBZ24448.1, CBZ24451.1, CBZ24452.1, CAH1385115.1, ou CAH1385116.1 ou de séquence SEQ ID NO1, le sucre-phosphate substrat est le α-glucose-1P et l’au moins une enzyme glycoside phosphorylase correspond à une enzyme référencée sous le numéro d’accession NCBI ou UNIPROT suivant : 2207198A, AAD40317.1, AAN24362.1, AAN58596.1, AAO21868.1, AAO33821.1, AAO84039.1, AAX33736.1, ABS59292.1, ADL69407.1, CCA61958.1 , BAN03569.1, AGK37834.1, BAA14344.1, BAF62433.1, CAA30846.1, CAA80424.1, ADP98617.1, ADH62582.1, AEJ61152.1, AAC74391.2, AAB95491.2, AAC45510.1, AAD36910.1, AAL67138.1, AAQ20920.1, ABD80580.1, ABN51514.1, ADU20744.1, BAA25846.1, BAA28631.1, CAB16926.1, ADU22883.1, BAB71818.1, ABN54185.1, AAC45511.1, BAJ10826.1, ABX81345.1, CAC97070.1, ABX41081.1, AAM43298.1, ABD80168.1, EAA28929.1, ACL75793.1, ACL76454.1, ACL76688.1, ACL77700.1, AFH48717.1, AHC20114.1, AIQ57809.1, AIQ60507.1, QCO92799.1, QCO92836.1, QCO92991.1, QCO92946.1, QCO92990.1, QCO92945.1, QCO92835.1, AUO30192.1, QCO92814.1, WP_019688419.1, 6HQ6, ACJ76363.1, BAU78234.1, ABP51432.1, AAL81659.1, AAD28735.1, ABN51595.1, AAD03471.1, AAC06896.1, AAC00218.1, AAM24997.1, AAM52219.1, BAB98701.1, BAB99480.1, AAC76453.1, AAC76442.1, BAA19592.1, AAD53957.1, AAN59210.1, AAL26558.1, AGL50099.1, BAB11741.1, CAC93400.1, AAB46846.1, ABB88567.1, CAA44069.1, AAA33211.1, AAD46887.1, AAN17338.1, AAL23578..1, AAP33020.1, AAK69600.1, AAB60395.1, CAA75517.1, AAC17451.1, BAK00834.1, AAA63271.1, AAK01137.1, AAL23577.1, AAD30476.1, AAG00588.1, ACJ76617.1, AAK15695.1, BAB92854.1, AAV87308.1, AAB68800.1, AAA41252.1, AAH70901.1, AAA41253.1, AAB68057.1, AAA33809.1, BAA00407.1, CAA52036.1, CAA59464.1, AAL23579.1, AAF82787.1, CAA84494.1 ou CAA85354.1, le sucre-phosphate substrat est le α-N-acetyl-D-glucosamine-1P et l’au moins une enzyme glycoside phosphorylase correspond à une enzyme référencée sous le numéro d’accession NCBI ou UNIPROT suivant : AAG23740.1, BAC87867.1 ou ABX81671.1, le sucre-phosphate substrat est le β-N-acetyl-D-glucosamine-1P et l’au moins une enzyme glycoside phosphorylase correspond à une enzyme référencée sous le numéro d’accession NCBI AAQ05801.1, ou le sucre-phosphate substrat est le α-galactose-1P et l’au moins une enzyme glycoside phosphorylase correspond à une enzyme référencée sous le numéro d’accession NCBI suivant : BAD80751.1, ACB74662.1, ABX42289.1, AAO07997.1, ABX40964.1, ABX43387.1, EEG94248.1, ACV29689.1, ZP_05748149.1, ACZ00636.1, ABG83511.1, BAH10636.1, ADL32981.1 ou AEN95946.1. Procédé enzymatique de synthèse in vitro d’au moins un oligosaccharide phosphate et/ou au moins un polysaccharide phosphate (1) selon l’une des revendications précédentes dans lequel l’au moins une enzyme glycoside phosphorylase correspond à une enzyme référencée sous le numéro d’accession NCBI ou UNIPROT suivant : CAC96089.1, ABY93074.1, ABY93073.1, CBZ24449.1, CAH1385118.1 ou CAH1385117.1. Procédé enzymatique de synthèse in vitro d’au moins un oligosaccharide phosphate et/ou au moins un polysaccharide phosphate (1) selon l’une des revendications précédentes comprenant en outre une étape de purification (40) de l’oligosaccharide phosphate et/ou du polysaccharide phosphate. Procédé enzymatique de synthèse in vitro d’au moins un oligosaccharide phosphate et/ou au moins un polysaccharide phosphate (1) selon l’une des revendications précédentes dans lequel ladite glycoside phosphorylase est immobilisée sur un support insoluble. Procédé enzymatique de synthèse in vitro d’au moins un oligosaccharide phosphate et/ou au moins un polysaccharide phosphate (1) selon l’une des revendications 1 à 6 dans lequel ladite préparation comprenant au moins une enzyme glycoside phosphorylase est une culture d’un microorganisme tel qu’une bactérie, une levure ou un champignon exprimant l’au moins une enzyme glycoside phosphorylase. Procédé enzymatique de synthèse in vitro d’au moins un oligosaccharide phosphate et/ou au moins un polysaccharide phosphate (1) selon l’une des revendications 1 à 6 dans lequel ladite mise en réaction s’opère en solution, avec une préparation d’enzyme recombinante purifiée en solution. Procédé enzymatique de synthèse in vitro d’au moins un oligosaccharide phosphate et/ou au moins un polysaccharide phosphate (1) selon l’une des revendications précédentes dans lequel la mise en réaction comprend le maintien de concentrations en excès de l’au moins un sucre-phosphate substrat de la GP.