FR 3152728 A1 20250314 FR 2309591 A 20230912 Bouchon pour un dispositif de diffusion de réactif pour échantillons biologiques Un bouchon (5) pour un dispositif de diffusion de réactif pour échantillons biologiques comprend un corps (21) présentant une première extrémité (12) et une deuxième extrémité (14), ledit corps (21) comprenant en outre un canal d’évacuation (27) de liquide débouchant au niveau de la première extrémité (12) et une portion de fixation (25) au niveau de la deuxième extrémité (14) propre à être montée sur un contenant (3) de dispositif de diffusion de réactif pour échantillons biologiques, le corps (21) comprenant en outre un canal de transfert (16) débouchant au niveau de la deuxième extrémité (14) et relié fluidiquement audit canal d’évacuation (27), de sorte qu’un liquide contenu dans ledit contenant (3) sur lequel est monté ledit bouchon (5) est propre à être déchargé par le canal d’évacuation (27). Le canal de transfert (16) comprend en outre une portion de diffusion (18) formant logement, la portion de diffusion (18) comprenant un volume, le bouchon (5) comprenant en outre un support de réactif (39) en matériau poreux recevant au moins un réactif (41) lyophilisé, lequel support de réactif (39) occupe sensiblement tout le volume de la portion de diffusion (18) de sorte qu’un liquide issu du contenant et s’écoulant à travers vers le canal d’évacuation (27) est contraint de traverser le support de réactif (39). Figure 2 Bouchon pour un dispositif de diffusion de réactif pour échantillons biologiques L’invention concerne le domaine de l’analyse d’échantillons biologiques, comme par exemple la détection de séquences d’acides nucléiques par réaction PCR ou tout autre procédé d’amplification d’acides nucléiques in vitro . L’analyse d’échantillons biologiques permet la réalisation de tests diagnostiques. Les tests PCR font également partie des méthodes d’analyse d’échantillons biologiques. Les méthodes classiques de préparation d’échantillons biologiques pour les tests PCR nécessitent généralement des équipements spécifiques et du personnel qualifié, tel que des techniciens de laboratoire, notamment pour les opérations de pipetage, de mélange, de calcul de concentration ou encore de remplissage de cartouche. Afin d’améliorer le rendement et la rapidité de ces tests, des dispositifs de distribution équipés de réactifs ont été développés. De tels dispositifs nous sont connus des documents US2010304359 et WO2021066209 mais également des documents WO2020257356 et US5454786. US2010304359 décrit un dispositif de collecte d’échantillon comprenant un bouchon compte-gouttes équipé d’un compartiment comprenant au moins un réactif. Les réactifs sont lyophilisés et maintenus à l’intérieur du compartiment par un tamis. Le tamis peut fonctionner comme un filtre en fonction de la taille ou de l’affinité du mélange d’extraction. WO2021066209 décrit un ensemble pour produits cosmétiques. L’ensemble comprend un premier récipient d’une longueur prédéterminée et creux, dont l’intérieur est rempli d’un contenu liquide. L’ensemble comprend en outre un second récipient, couplé de manière amovible au premier récipient, dans lequel un contenu liquide du premier récipient peut s’écouler. L’intérieur du second récipient étant rempli de produits cosmétiques séchés sous forme de poudre. WO2020257356 décrit des dispositifs de détection d'acides nucléiques cibles. Le dispositif comprend une cartouche microfluidique pour la détection d'un acide nucléique cible munie d’une chambre d'amplification connectée fluidiquement à une valve, un canal de dosage de l'échantillon et une chambre de réactif de détection comprenant une nucléase programmable. US5454786 décrit un assemblage de cartouche destiné à contenir un produit lyophilisé, formant une partie jetable d'un stylo injecteur. L’assemblage comprend une cartouche cylindrique en verre destinée à recevoir le produit, un bouchon de fermeture, un boîtier de cartouche et un mécanisme de piston. Il est connu d’utiliser des réactifs lyophilisés sous différentes formes. On retrouve des réactifs lyophilisés sous forme de poudre, de pastilles, de pilules ou de poudres compressées et également des réactifs directement lyophilisés. Ces réactifs, quelle que soit la forme sous laquelle ils sont lyophilisés, sont en général stockés dans un compartiment servant à leur réhydratation. L’utilisation de réactifs lyophilisés présente de nombreux avantages tels que la simplification des conditions de stockage, l’amélioration de la stabilité des réactifs ou leur réaction avec les échantillons sous forme liquide. Cependant, l’utilisation de réactifs lyophilisés sous forme de billes, de pilule, de pastille ou de poudre présente un certain nombre d’inconvénients. La manipulation de ces réactifs est compliquée dans une logistique de production car elle requiert des équipements spécifiques et présente un risque accru de perte d’une partie du réactif, généralement coûteux. Dans le cas des réactifs directement lyophilisés dans un compartiment, le rendement de lyophilisation est réduit car l’élément dans lequel ils sont lyophilisés est plus volumineux. Les pilules, les pastilles et les poudres compressées nécessitent des étapes de production supplémentaires, augmentant le temps et le coût de production. D’autre part, il est difficile de disposer ces réactifs de manière homogène dans le compartiment de mélange. Il est souvent nécessaire de disposer d’un compartiment comprenant de nombreuses pièces, complexifiant encore le montage. En outre, comme les liquides s’écoulent par le chemin présentant le moins de résistance fluidique, ceux-ci ont tendance à passer par les interstices entre les réactifs plus que par les réactifs eux-mêmes. Cela a pour conséquence de réduire le taux de récupération des réactifs et donc réduire les performances ou augmenter le coût du dispositif. Par ailleurs, l’utilisation de réactifs lyophilisés sous forme de billes, de pilules, de pastilles ou de poudres compressées ne permettent pas une grande reproductibilité des mesures, engendrant ainsi une large variabilité de résultats. Selon les domaines, la reproductibilité des mesures ne présente pas la même importance ni les mêmes tolérances. Dans le cadre de tests diagnostiques PCR par exemple, la reproductibilité des mesures est primordiale. Les réactifs doivent également être isolés du liquide d’échantillon afin de ne pas se dégrader avec le temps. La Demanderesse a cherché à améliorer la situation. L’invention propose un bouchon pour un dispositif de diffusion de réactif pour échantillons biologiques comprenant un corps présentant une première extrémité et une deuxième extrémité. Ledit corps comprend en outre un canal d’évacuation de liquide débouchant au niveau de la première extrémité et une portion de fixation au niveau de la deuxième extrémité propre à être montée sur un contenant de dispositif de diffusion de réactif pour échantillons biologiques. Le corps comprend en outre un canal de transfert débouchant au niveau de la deuxième extrémité et relié fluidiquement audit canal d’évacuation, de sorte qu’un liquide contenu dans ledit contenant sur lequel est monté ledit bouchon est propre à être déchargé par le canal d’évacuation. Le bouchon est caractérisé en ce que le canal de transfert comprend en outre une portion de diffusion formant logement, la portion de diffusion comprenant un volume. Le bouchon comprend en outre un support de réactif en matériau poreux recevant au moins un réactif lyophilisé, lequel support de réactif occupe sensiblement tout le volume de la portion de diffusion de sorte qu’un liquide issu du contenant et s’écoulant à travers vers le canal d’évacuation est contraint de traverser le support de réactif. Ainsi, le nombre d’étapes nécessaires à la préparation d’échantillons biologiques est réduit. Les étapes étant simples, la préparation d’échantillons biologiques peut alors être réalisée par des individus sans qualification technique spécifique. Dans un mode de réalisation, le support de réactif est réalisé en fibre de cellulose, en polyuréthane, en PVA ou en acétate de cellulose. Ces matériaux permettent une bonne répartition du réactif et un bon écoulement du liquide d'échantillon. Ils sont également biocompatibles avec le réactif et ne vont pas inhiber des molécules présentes dans le réactif. Dans un mode de réalisation, le support de réactif présente une porosité comprise entre 50 µm et 1500 µm. La porosité choisie permet à la fois de supporter le réactif et de permettre un bon écoulement du liquide, augmentant ainsi le taux de récupération du réactif. Dans un mode de réalisation, le réactif est choisi dans le groupe comprenant : des enzymes, des amorces, des oligos, des plasmides, de l’ARN, de l’ADN, des dNTP, des bactéries, des virus, des anticorps, des protéines, des stabilisants, des lyoprotecteurs, du polyéthylène glycol, des polymères non-ramifiés, des nanoparticules, des fluorophores, des sondes fluorescentes et des colorants. Dans un mode de réalisation, le bouchon comprend en outre un séparateur disposé dans le canal de transfert entre la deuxième extrémité et le support de réactif, ledit séparateur étant apte à isoler le réactif du liquide issu du contenant ou retarder sa migration lorsque la pression dans le canal de transfert est inférieure ou égale à la pression dans le canal d’évacuation. Le séparateur permet d’isoler le réactif du liquide d’échantillon lorsque le dispositif de dilution n’est pas utilisé. Dans un mode de réalisation, le séparateur est disposé dans le canal de transfert, en amont du support de réactif, le séparateur occupant transversalement tout le logement, de sorte qu’un liquide issu du contenant et s’écoulant à travers le canal d’évacuation est contraint de traverser le séparateur avant de traverser le support de réactif. L’isolation du liquide d’échantillon est améliorée. Dans un mode de réalisation, le séparateur est réalisé dans un matériau poreux, préférablement en fibre de cellulose, en polyuréthane, en PVA ou en acétate de cellulose. Ces matériaux permettent d’isoler ou retarder la dilution du liquide d’échantillon en l’absence de surpression dans le contenant. Dans un mode de réalisation, le séparateur comprend une membrane élastomère présentant des orifices aptes à s’ouvrir en cas de surpression du côté de la portion de fixation. L’isolation du liquide d’échantillon est améliorée. Dans un mode de réalisation, le canal d’évacuation présente une forme cylindrique, conique ou une combinaison de formes conique et cylindrique. Le volume des gouttes est maîtrisé. Dans un mode de réalisation, le corps comprend une paroi, s’opposant à l’écoulement du liquide issu du contenant, disposée entre le canal d’évacuation et le canal de transfert, ladite paroi présentant au moins un orifice de diamètre inférieur au diamètre du canal d’évacuation, de sorte que le liquide issu du contenant traverse la paroi uniquement par l’orifice. La paroi permet d’interrompre l’écoulement du liquide dans le canal d’évacuation si l’intérieur du contenant n’est pas pressurisé. Dans un mode de réalisation, un dispositif de diffusion de réactif pour échantillons biologiques comprend un contenant apte à contenir et à décharger un liquide, un liquide contenu dans le contenant, et est caractérisé en ce qu’il comprend en outre le bouchon selon l’invention. Dans un mode de réalisation, le dispositif de diffusion de réactif pour échantillons biologiques comprend en outre un bouchon de scellement apte à sceller hermétiquement le contenant ou dans lequel le contenant comprend un opercule thermoscellé apte à sceller hermétiquement ledit contenant. Le risque de mélanger le liquide d’échantillon avec le réactif hors phase de préparation d’échantillon, lors du transport par exemple, est écarté. Dans un mode de réalisation, un procédé de production d’un bouchon pour dispositif de diffusion de réactif pour échantillons biologiques comprend les étapes de lyophilisation d’un réactif sur le support de réactif en matériau poreux : - appliquer le réactif sous forme liquide sur le support de réactif - déshydrater le réactif à basse température et à basse pression et d’installation du support de réactif à l’intérieur du bouchon : - placer le support de réactif dans le logement - maintenir le support de réactif dans le logement. Dans un mode de réalisation, un procédé d’utilisation d’un bouchon pour flacon comprend les étapes de montage du bouchon sur un contenant de liquide, de mise sous pression du liquide du contenant et d’application de gouttes de liquide obtenues en sortie du bouchon sur un emplacement de dépose, une surface ou un contenant. Le procédé de préparation d’échantillons biologiques est simple et rapide. Ainsi, il peut être réalisé par des personnes sans qualification particulière. D’autres caractéristiques et avantages de l’invention apparaîtront à l’examen de la description détaillée ci-après, et des dessins annexés, sur lesquels : FIG. 1 illustre une éclatée du dispositif de diffusion de réactif pour échantillons biologiques comprenant un bouchon selon un aspect de l’invention. FIG. 2 illustre une vue en coupe longitudinale du bouchon de la FIG. 1 . FIG. 3 illustre une vue de détail de la vue en coupe de la FIG. 2 . FIG. 4 illustre une vue de dessous du bouchon de la FIG. 1 . FIG. 5 illustre les différentes pièces qui composent un kit de test d’échantillon biologique utilisant le dispositif de diffusion de réactif pour échantillons biologiques de la FIG. 1 . FIG. 6 illustre en vue de côté la première étape de l’utilisation kit de la FIG. 5 , à savoir le prélèvement d’un échantillon. FIG. 7 illustre en vue éclatée la deuxième étape de l’utilisation du kit de la FIG. 5 . FIG. 8 illustre en vue de côté la troisième étape de l’utilisation du kit FIG. 5 . FIG. 9 illustre en vue éclatée la quatrième étape de l’utilisation du kit de la FIG. 5 . FIG. 10 illustre en vue de côté la quatrième étape de l’utilisation du kit de la FIG. 5 . FIG. 11 illustre en perspective la cinquième étape de l’utilisation du kit de la FIG. 5 . FIG. 12 illustre en vue de côté la cinquième étape de l’utilisation du kit de la FIG. 5 . FIG. 13 illustre la sixième étape de l’utilisation du kit de la FIG. 5 . FIG. 14 illustre la septième étape de l’utilisation du kit de la FIG. 5 . On fait référence aux figures 1, 2, 3 et 4. Un dispositif de diffusion de réactif pour échantillons biologiques 1 comprend un contenant 3 et un bouchon 5. Le bouchon 5 se fixe sur le contenant 3 par l’intermédiaire d’une fixation 4. Ici, le bouchon 5 est un bouchon compte-gouttes. Un échantillon à tester est mélangé dans un liquide de support 10. Le liquide obtenu après mélange de l’échantillon dans le liquide de support 10 est défini comme étant un liquide d’échantillon 101. Le liquide de support 10 peut être de l’eau, un tampon de lyse, tampon de décharge d’échantillon ou encore un tampon de transport. L’échantillon peut être un échantillon pour test PCR ou pour un autre type d’analyse. Le bouchon 5 reçoit en outre au moins un réactif 41 apte à se diffuser dans le liquide d’échantillon 101. Le liquide obtenu après diffusion du réactif 41 est défini comme étant un liquide de réaction 102. Le contenant 3 est apte à contenir et à décharger le liquide de support 10 ou le liquide d’échantillon 101. Le déchargement de liquide de support 10 ou de liquide d’échantillon 101 se fait généralement par une augmentation de pression dans le contenant 3. Le dispositif 1 est configuré pour générer et déposer des gouttes 19 de liquide de réaction 102 sur un emplacement de dépose 2, une surface ou un contenant qui peut être un tube ou une plaque à puits. Ici, le contenant 3 comprend un corps 7 de révolution. Le corps 7 de révolution comprend un réservoir 9 et une portion de fixation 11 au bouchon 5. Le réservoir 9 présente ici une forme généralement cylindrique avec une paroi latérale 13 et un fond 15 à une première extrémité du réservoir 9. Le réservoir 9 est creux. Ici, le réservoir 9 est déformable et souple. Le réservoir 9 présente une ouverture 17 au niveau de la portion de fixation 11. L’ouverture 17 présente ici une forme de disque. Une compression extérieure du réservoir 9 du contenant 3 augmente la pression à l’intérieur du contenant 3, de sorte que le liquide d’échantillon 101 issu du réservoir 9 traverse la portion de fixation 11 quand il est évacué du contenant 3, déchargeant ainsi le liquide d’échantillon 101 contenu dans le contenant 3 à travers l’ouverture 17 du réservoir 9 et la portion de fixation 11. La contenance du flacon est inférieure à 1 litre, ici préférablement comprise entre 0,5 millilitre et 100 millilitres. Ici, le contenant 3 est réalisé dans un matériau polymère souple. En variante, le contenant peut être une seringue. Le bouchon 5 comprend un corps 21. Le corps 21 comprend une première extrémité 12 et une deuxième extrémité 14. Le corps 21 comprend une portion d’évacuation (ou nez) 23 au niveau de la première extrémité 12 et une portion de fixation 25 au contenant 3 au niveau de la deuxième extrémité 14. Le corps 21 comprend une ouverture de sortie 29 ménagée dans la première extrémité 12. Le corps 21 comprend une ouverture d’introduction 6 ménagée dans la deuxième extrémité 14. La portion d’évacuation 23 comprend un canal d’évacuation 27. Le canal d’évacuation 27 est débouchant dans l’ouverture de sortie 29 de la première extrémité 12. L’ouverture de sortie 29 présente un contour formant une arête 30, dite arête de décollement, de préférence vive, de manière à faciliter la formation des gouttes 19. La portion d’évacuation 23 est ici allongée. Ici, la portion d’évacuation 25 est comprise entre 0,5 mm et 20 mm. Le corps 21 comprend en outre un canal de transfert 16. Le canal de transfert 16 est débouchant sur l’ouverture d’introduction 6 de la deuxième extrémité 14. Le canal de transfert 16 est relié fluidiquement au canal d’évacuation 27. Le liquide d’échantillon 101 issu du contenant 3 peut s’écouler dans le bouchon 5 en passant à travers le canal de transfert 16 et être déchargé par le canal d’évacuation 27. Ici, le corps 21 du bouchon présente une forme de révolution, et le canal d’évacuation 27 présente un axe de révolution. Le canal de transfert 16 présente également un axe de révolution. L’axe de révolution du canal 27 et l’axe de révolution du canal de transfert 16 sont colinéaires. En variante, l’axe de révolution du canal 27 et l’axe de révolution du canal de transfert 16 peuvent être décalés angulairement. En variante, le canal d’évacuation présente une forme courbe. Le canal d’évacuation 27 est apte à acheminer le liquide de réaction 102 jusqu’à l’ouverture de sortie 29. Le canal d’évacuation 27 et l’arête de décollement 30 collaborent pour former les gouttes 19 de liquide de réaction 102. Le canal d’évacuation 27 présente une forme de révolution : cylindrique, en tronc de cône ou une combinaison de ces formes. Ici, le canal d’évacuation présente une forme tronconique, s’agrandissant dans le sens de l’écoulement. Ici, le diamètre de l’ouverture de sortie 29 est compris entre 0,2 mm et 4mm. Les gouttes 19 obtenues présentent un volume précis déterminé en fonction du dimensionnement du canal d’évacuation 27. Ainsi, le volume des gouttes 19 est reproductible. Le canal d’évacuation 27 comprend un bord intérieur 42 et une surface transversale comprise entre 0,3 et 15 mm². Le canal d’évacuation 27 présente une longueur comprise entre 0,5 mm et 100 mm, préférablement entre 0,5 mm et 20 mm. Préférentiellement, un chanfrein 45 est ménagé sur le corps 21 entre l’arête 30 de l’ouverture de sortie 29 et le canal d’évacuation 27. Ici, le chanfrein 45 présente un angle compris entre 0° et 60°. Le chanfrein 45 et l’arête 30 facilitent la séparation de la goutte 19 du corps 21 du bouchon 5. La fixation 4 scelle la portion de fixation 11 du contenant 3 à la portion de fixation 25 du bouchon 5. Généralement, la fixation 4 comprend une première partie 191 portée par le contenant 3, et plus précisément la portion de fixation 11, et une deuxième partie 192 portée par le bouchon 5. La première partie 191 est apte à engager la deuxième partie 192 de sorte que le bouchon 5 et le contenant 3 sont solidaires quand la première partie 191 et la deuxième partie 192 sont engagées. Ici, la première partie 191 de la fixation 4 est un filetage disposé sur un extérieur de la portion de fixation 11 du contenant 3. La deuxième partie 192 de la fixation 4 est un taraudage disposé sur une paroi intérieure du canal de transfert 16. La fixation 4 est réalisée par vissage de la première partie 191 de la fixation 4 sur la deuxième partie 192 de la fixation 4. Ainsi, ici, la portion de fixation 11 du contenant 3 pénètre dans la portion de fixation 25 du bouchon 5. En variante, la première partie de fixation peut être un taraudage disposé sur la paroi intérieure de l’intérieur de la portion de fixation du contenant. La deuxième partie de fixation peut être un filetage disposé sur un bord extérieur de la portion de fixation du bouchon. Dans cette variante, la portion de fixation du bouchon pénètre dans la partie de fixation du contenant. En variante, la première partie de fixation et la deuxième partie de fixation peuvent comprendre chacune des cannelures ou une surface lisse présentant une concordance de forme. La fixation du bouchon sur le contenant se fait par insertion du bouchon sur le contenant. Ici, la portion de fixation 11 du contenant 3 comprend une portion en saillie annulaire 35 sur l’extérieur de la portion de fixation 11. Le bouchon 5 comprend un support de réactif 39. Le support de réactif 39 comprend le réactif 41 sous forme séchée ou lyophilisée. Le support de réactif 39 équipé du ou des réactifs 41 est apte à diffuser ce dernier dans un liquide qui le traverse, ici le liquide d’échantillon 101. L’utilisation d’un support poreux pour recevoir le réactif est particulièrement novatrice. La Demanderesse n’a connaissance d’aucune solution en faisant usage. La difficulté de cette solution réside dans le choix du substrat pour le support de réactif 39 car ce dernier doit à la fois permettre le passage du fluide de manière homogène, rapide et efficace tout en étant compatible avec le ou les réactifs 41. Certains substrats classiques sont inhibiteurs et absorbent certaines molécules du ou des réactifs 41. D’autres substrats ne permettent pas d’optimiser le chemin fluidique du liquide. Le support de réactif 39 est ici réalisé en matériau poreux, préférablement en fibre de cellulose ou acétate de cellulose. Le support de réactif 39 peut également être réalisé en polyuréthane ou en PVA. Le support de réactif 39 comprend des pores répartis uniformément dans tout le support de réactif 39. Le support de réactif 39 présente une porosité comprise entre 50 µm et 1500 µm. Le support de réactif 39 est réalisé en matériau compressible. Le réactif 41 est déposé sur le support de réactif 39 avant l’installation de ce dernier dans le bouchon 5. Le procédé de dépose du réactif 41 sur le support de réactif 39 comprend le dépôt du réactif 41 sous forme liquide sur le support de réactif 41 et la lyophilisation de la totalité du réactif 41 selon un processus de déshydratation à basse température et basse pression. Les supports de réactif 39 contenant le réactif 41 sous forme liquide sont disposés dans un lyophilisateur sur un élément assurant le transfert thermique de lyophilisation (plateau, réceptacle ou étagère). Le processus de lyophilisation débute par une phase de congélation à une température inférieure à la température de transition vitreuse du réactif 41, comprise généralement entre -10°C et -80°C, de manière à former de la glace. La congélation est suivie d’une phase de séchage primaire, permettant de sublimer la glace, à une pression comprise entre 5 µbar et 500 µbar. Le processus de lyophilisation se termine par une phase de séchage secondaire à une température supérieure à 0°C. Une liste non exhaustive de réactifs pouvant être utilisés est donnée ci-après : enzymes (polymérase, rétrotranscriptase), amorces (sens, anti-sens), oligos, plasmides, ARN, ADN, dNTP, bactéries, virus, anticorps, protéines, stabilisants, lyoprotecteur (Mannitol, Tréhalose, Sérum albumine bovin), polyéthylène glycol, polymère non-ramifié (Agarose), nanoparticules (or, argent, silice, polymère), fluorophores (cyanine, isothiocyanate de fluorescéine, fluorescéine, phycoérythrine, protéine fluorescente verte, rhodamine, SYBR Green), sondes fluorescentes et colorants. Le réactif 41 est réparti de manière sensiblement uniforme dans les pores du support de réactif 39. Ainsi, le support de réactif 39 est apte à diffuser le réactif 41 de façon homogène dans le liquide d’échantillon 101 lors de l’écoulement de ce dernier. Le liquide de réaction 102 est ainsi obtenu en aval du support de réactif 39 par la diffusion du réactif 41 dans le liquide d’échantillon 101. Le canal de transfert 16 du corps 21 comprend en outre une portion de diffusion 18 ménagée dans ce dernier. La portion de diffusion 18 est apte à recevoir le support de réactif 41 à la manière d’un logement. Le support de réactif 41 occupe sensiblement tout le volume de la portion de diffusion 18, de sorte que le liquide d’échantillon 101 issu du contenant 3 est contraint de traverser le support de réactif 39 pour atteindre le canal d’évacuation 27. Le bouchon 5 peut comprendre un séparateur 43. A l’état monté, le séparateur 43 est configuré pour isoler fluidiquement le support de réactif 39 du liquide d’échantillon 101 issu du contenant 3. Le séparateur 43 est disposé dans le canal de transfert 16 entre l’ouverture d’introduction 6 de la deuxième extrémité 14 et le support de réactif 39. Dans une première variante représentée ici, le séparateur 43 est réalisé dans un matériau poreux, préférablement en fibre de cellulose ou acétate de cellulose. Le séparateur 43 peut également être réalisé en polyuréthane ou en PVA. Ainsi, il agit comme retardateur de dilution. Ici, le séparateur 43 présente une porosité comprise entre 50 µm et 1500 µm. Dans une deuxième variante, le séparateur peut être réalisé dans un matériau élastomère formant une membrane comme un septum. Le séparateur est alors équipé d’orifices configurés pour s’ouvrir en présence d’une surpression du côté de l’intérieur de la portion de fixation, rendant possible le passage du liquide à travers le séparateur. Ici, le canal de transfert 16 comprend une première portion 24, une deuxième portion 26 et une troisième portion 28. La première portion 24 et la deuxième portion 26 sont reliées fluidiquement. La deuxième portion 26 et la troisième portion 28 sont reliées fluidiquement. La troisième portion 28 est reliée fluidiquement au canal d’évacuation 27. La première portion 24 est une portion de réception du contenant 3. Le liquide d’échantillon 101 issu du contenant s’écoule dans le bouchon 5 d’abord par la première portion 24. La première portion 24 présente ici un axe de révolution. La première portion 24 comprend un bord intérieur 31. La deuxième partie 192 de la fixation 4, ici un taraudage, est réalisée dans le bord intérieur 31. La première portion 24 se termine par un fond 8 à l’opposé de l’ouverture d’introduction 6. Le fond 8 est sensiblement plat et perpendiculaire à l’axe de révolution de la première portion 24. Une ouverture 81 est ménagée dans le corps 21 à partir du fond 8 pour la communication fluidique avec la deuxième portion 26, de sorte que l’ouverture 81 est débouchante sur la deuxième portion 26. La deuxième portion 26 présente ici un axe de révolution. La deuxième portion 26 est ici cylindrique et comprend un bord intérieur 32. En variante, la deuxième portion 26 pourrait être conique. La portion de diffusion 18 est réalisée dans la deuxième portion 26. Le support de réactif 39 présente une forme analogue à la portion de diffusion 18. Comme la deuxième portion 26, la portion de diffusion 18 peut présenter une forme cylindrique, en tronc de cône ou une combinaison de ces formes, voir une forme sphérique. Le volume de la deuxième portion 26 est occupé d’une part par le support de réactif 39 et d’autre part par le séparateur 43. Le séparateur 43 présente également une forme analogue à la deuxième portion 26. La deuxième portion 26 présente un diamètre intérieur compris entre 1 mm et 15 mm. Le support de réactif 39 et le séparateur 43 présente chacun un diamètre extérieur. Le diamètre extérieur du support de réactif 39 est légèrement supérieur au diamètre intérieur de la deuxième portion 26. Le support de réactif 39 est ainsi monté serré dans la deuxième portion 26 et plus précisément dans la portion de diffusion 18. Le diamètre extérieur du séparateur 43 est légèrement supérieur au diamètre intérieur de la deuxième portion 26. Le séparateur 43 est ainsi également monté serré dans la deuxième portion 26. En variante, le séparateur et le support de réactif pourraient être collés dans la deuxième portion. En variante, le séparateur et le support de réactif pourraient être encastrés dans la deuxième portion. La troisième portion 28 présente ici un axe de révolution. Ici, l’axe de révolution de la première portion 24, l’axe de révolution de la deuxième portion 26 et l’axe de révolution de la troisième portion 28 sont colinéaires. La troisième portion 28 est une portion de raccordement. La troisième portion 28 est apte à canaliser le liquide de réaction 102 sortant de la deuxième portion 26 via le support de réactif 39 vers le canal d’évacuation 27. La troisième portion 28 comprend une première extrémité voisine de la deuxième portion 26 et une deuxième extrémité voisine du canal d’évacuation 27. Ici, la troisième portion 28 présente une forme d’abord cylindre puis tronconique de diamètre décroissant dans le sens de l’écoulement et présente un bord intérieur 44. En variante, la portion de diffusion et le support de réactif peuvent présenter une forme conique ou sphérique. Le corps 21 peut comprendre au moins une butée d’arrêt du support de réactif 39 qui définit l’extrémité de la portion 26 à l’opposé du fond 8. La butée d’arrêt est configurée pour arrêter en translation le support de réactif 39 lors de son insertion dans la portion de diffusion 18. Ici, la troisième portion 28 comprend plusieurs butées sous forme d’ailettes 40. Les ailettes 40 sont en saillie à partir du bord intérieur 44 au voisinage de la deuxième portion 26. Les ailettes 40 sont régulièrement réparties le long de la circonférence du bord intérieur 44. En variante, la butée peut être un épaulement présent sur toute la circonférence de la deuxième portion. De manière préférée, une paroi 51 est disposée entre le canal d’évacuation 27 et le canal de transfert 16. La paroi 51 comprend au moins un orifice 52 de diamètre inférieur au plus petit diamètre du canal d’évacuation 27 de manière à former une barrière capillaire. L’orifice 52 présente un bord distant du bord 42 du canal d’évacuation 27. La paroi 51 permet d’interrompre l’écoulement du liquide de réaction 102 dans le canal d’évacuation en l’absence de différence de pression positive entre le canal de transfert 16 et le canal d’évacuation 27. Ici, la paroi 51 s’étend perpendiculairement à l’écoulement et présente une épaisseur comprise entre 0,2 mm et 10 mm, préférablement entre 0,2 mm et 2 mm. A l’état monté, le bouchon 5 et le contenant 3 peuvent présenter une liaison étanche. Ici, l’étanchéité est réalisée par un joint plat 47 disposé sur le fond 8. Le joint plat 47 présente une forme de disque dans lequel un perçage 49 est ménagé. A l’état monté, le perçage 49 est disposé en regard de la deuxième portion 26 de manière à permettre le passage du liquide d’échantillon 101. Ici, le joint plat 47 est comprimé entre le fond 8 et la première extrémité du contenant 3. En variante, l’étanchéité peut être réalisée par une chicane ou un joint radial disposé sur la portion de fixation du contenant ou sur la portion de fixation du bouchon. Ici, l’arrêt en translation du bouchon 5 sur le contenant 3 est réalisé par le contact de la première extrémité du contenant 3 sur le joint plat 47. En l’absence de joint, l’arrêt en translation du bouchon 5 sur le contenant 3 est réalisé par le contact de la première extrémité du contenant 3 sur le fond 8. Ici, le bouchon 5 comprend une surface de préhension 33 sur une surface extérieure. La surface de préhension 33 est apte à faciliter le déplacement relatif du bouchon 5 par rapport au contenant 3, notamment en rotation. Ici, la surface de préhension 33 comprend des cannelures. Ici, le bouchon 5 est réalisé dans un matériau polymère compatible avec les réactifs pour la PCR et non inhibiteur d’au moins un composé des réactifs. Le bouchon 5 est réalisé dans un matériau préférentiellement compatible avec les techniques de production par injection tel que le PP, le HDPE, le LDPE, le PET ou le PS. On fait référence à la FIG. 5 . Le dispositif de diffusion de réactif pour échantillons biologiques 1 peut faire partie d’un kit de test d’échantillon biologique qui comprend en outre un bouchon de scellement 53. Le bouchon de scellement 53 est apte à obturer hermétiquement le contenant 3. Le bouchon de scellement 53 se fixe sur le contenant 3 de la même manière que le bouchon 5, par l’intermédiaire d’une portion de fixation 55. L’obturation du contenant 3 à l’aide du bouchon de scellement 53 permet de transporter et de stocker le contenant 3 lorsqu’il contient du liquide d’échantillon 101 ou du liquide de support 10. Le bouchon de scellement 53 peut être réalisé dans un matériau polymère (PP, HDPE, LDPE, PET, PS). En variante, le bouchon de scellement 53 peut prendre la forme d’un opercule thermoscellé sur le contenant 3. L’opercule comprend un film en aluminium complexé avec une résine thermocollante. Le kit de test d’échantillon biologique peut comprendre en outre un instrument de récupération d’échantillon, ici un écouvillon 57. En variante, l’instrument de récupération d’échantillon peut être une seringue, une pipette, un biocollecteur, un autre contenant ou une pince. Le kit de test d’échantillon biologique peut comprendre en outre un support 59 comprenant l’emplacement de dépose 2 du liquide de réaction 102, ici une puce à réaction PoC (Point-of-Care). En variante, le support comprenant l’emplacement de dépose peut être un récipient. Dans le kit de test d’échantillon biologique, le bouchon 5 peut être emballé dans un emballage individuel hermétique à l’oxygène et à l’humidité. Dans une variante préférentielle, l’emballage individuel comprend un élément dessicant. L’emballage est également apte à protéger le bouchon de la lumière visible et ultraviolet. L’emballage est généralement réalisé en aluminium et est fermé par thermoscellage. Le procédé d’utilisation du kit de test d’échantillon biologique comprend les étapes suivantes. Dans une première étape, illustrée en FIG. 6 , on prélève l’échantillon à l’aide de l’instrument de récupération, ici l’écouvillon 57. Ici, dans le cadre d’un test PCR, on prélève un échantillon nasal chez le patient à l’aide de l’écouvillon 57. Dans le cadre d’un contrôle sanitaire environnemental ou du suivi d’espèce dans l’agroalimentaire, le prélèvement consiste à prélever une partie du liquide à tester. Dans une deuxième étape, illustrée en FIG. 7 , on ouvre le contenant 3 en retirant le bouchon de scellement 53, ici en le dévissant. Dans une troisième étape, illustrée en FIG. 8 , on introduit l’échantillon dans le liquide de support 10 contenu dans le contenant 3. Dans cette étape, on homogénéise le mélange comprenant l’échantillon et le liquide de support 10 de manière à répartir l’échantillon de façon homogène dans le liquide de support 10, formant ainsi le liquide d’échantillon 101. Pour cela, le mélange est ici réalisé à l’aide de l’écouvillon 57. Dans une quatrième étape, illustrée en figures 9 et 10, on installe le bouchon 5 sur le contenant 3, de manière à obtenir le dispositif de diffusion de réactif pour échantillons biologiques 1. La première partie 191 de la fixation 4 est engagée sur la deuxième partie 192 de la fixation 4. Le bouchon 5 est ici vissé sur le contenant 3. Le montage est réalisé à la verticale pour éviter de vider le contenant 3 de son contenu. Dans la variante où le bouchon est emballé, le bouchon est d’abord sorti de son emballage avant d’être installé sur le contenant 3. Dans une cinquième étape, illustrée en figures 11 et 12, le liquide d’échantillon 101 est déchargé du contenant 3 afin de former des gouttes de liquide de réaction 102. Dans un premier temps, le dispositif de diffusion 1 est retourné. Le bouchon 5 se retrouve orienté vers le bas à la verticale, ou avec un angle compris entre 0° et 90° avec la verticale. Dans un second temps, une mise sous pression de l’intérieur du contenant 3 permet au liquide d’échantillon 101 de s’écouler à travers l’ouverture 17 de la portion de fixation 11 du contenant 3. Ici, la mise sous pression est obtenue par la compression du contenant 3, le contenant 3 étant souple. En variante, la mise sous pression de l’intérieur du contenant peut être réalisée par le déplacement d’un piston, par exemple dans le cas d’une seringue. Le liquide d’échantillon 101 s’écoule ensuite dans le bouchon 5 et traverse le séparateur 43 puis le support de réactif 39. Le liquide d’échantillon 101 entre en contact avec le réactif 41 disposé sur le support de réactif 39. Le réactif 41 se diffuse dans le liquide d’échantillon 101 formant ainsi le liquide de réaction 102. Ici, le liquide de réaction 102 traverse la paroi 51 par l’orifice 52. Le liquide de réaction 102 s’écoule dans le canal d’évacuation 27 sous forme de gouttes 19 de liquide de réaction 102. Les gouttes 19 quittent le bouchon 5 par l’ouverture de sortie 29. Selon la pression exercée sur le contenant 3, une ou plusieurs gouttes 19 de liquide de réaction 102 traversent le bouchon 5 et sortent par l’ouverture de sortie 29. Ici, le dispositif de diffusion de réactif pour échantillons biologiques 1 est incliné vers le bas pour émettre les gouttes 19 de liquide de réaction 102. La portion d’évacuation 23 et plus particulièrement l’orifice 29 sont orientés vers l’emplacement de dépose 2 du liquide de réaction 102. Une au moins des gouttes 19 est déposée sur l’emplacement de dépose 2, ici sur la puce à réaction PoC. Dans une sixième étape, illustrée en FIG. 13 , le support 59 est introduit dans un dispositif d’analyse 60 du liquide de réaction 102 pour être analysé. Ici, le dispositif d’analyse effectue un thermocyclage puis un suivi optique. Dans une septième étape, illustrée en FIG. 14 , l’échantillon est analysé et les résultats sont communiqués. Généralement les résultats sont obtenus après un temps d’attente de quelques minutes à quelques dizaines de minutes. Toutes ces opérations peuvent être réalisées par quelqu’un sans qualification technique spécifique. Bouchon (5) pour un dispositif de diffusion de réactif pour échantillons biologiques comprenant un corps (21) présentant une première extrémité (12) et une deuxième extrémité (14), ledit corps (21) comprenant en outre un canal d’évacuation (27) de liquide débouchant au niveau de la première extrémité (12) et une portion de fixation (25) au niveau de la deuxième extrémité (14) propre à être montée sur un contenant (3) de dispositif de diffusion de réactif pour échantillons biologiques, le corps (21) comprenant en outre un canal de transfert (16) débouchant au niveau de la deuxième extrémité (14) et relié fluidiquement audit canal d’évacuation (27), de sorte qu’un liquide contenu dans ledit contenant (3) sur lequel est monté ledit bouchon (5) est propre à être déchargé par le canal d’évacuation (27), caractérisé en ce que le canal de transfert (16) comprend en outre une portion de diffusion (18) formant logement, la portion de diffusion (18) comprenant un volume, le bouchon (5) comprenant en outre un support de réactif (39) en matériau poreux recevant au moins un réactif (41) lyophilisé, lequel support de réactif (39) occupe sensiblement tout le volume de la portion de diffusion (18) de sorte qu’un liquide issu du contenant et s’écoulant à travers vers le canal d’évacuation (27) est contraint de traverser le support de réactif (39). Bouchon (5) selon la revendication 1, dans lequel le support de réactif (39) est réalisé en fibre de cellulose, en polyuréthane, en PVA ou en acétate de cellulose. Bouchon (5) selon la revendication 1 ou 2, dans lequel le support de réactif (39) présente une porosité comprise entre 50 µm et 1500 µm. Bouchon (5) selon l’une des revendications précédentes, dans lequel le réactif (41) est choisi dans le groupe comprenant : des enzymes, des amorces, des oligos, des plasmides, de l’ARN, de l’ADN, des dNTP, des bactéries, des virus, des anticorps, des protéines, des stabilisants, des lyoprotecteurs, du polyéthylène glycol, des polymères non-ramifiés, des nanoparticules, des fluorophores, des sondes fluorescentes et des colorants. Bouchon (5) selon l’une des revendications précédentes, comprenant en outre un séparateur (43) disposé dans le canal de transfert (16) entre la deuxième extrémité (14) et le support de réactif (39), ledit séparateur (43) étant apte à isoler le réactif du liquide issu du contenant (3) ou retarder sa migration lorsque la pression dans le canal de transfert (16) est inférieure ou égale à la pression dans le canal d’évacuation (27). Bouchon (5) selon la revendication 5, dans lequel le séparateur (43) est disposé dans le canal de transfert (16), en amont du support de réactif (39), le séparateur (43) occupant transversalement tout le logement, de sorte qu’un liquide issu du contenant et s’écoulant à travers le canal d’évacuation (27) est contraint de traverser le séparateur (43) avant de traverser le support de réactif (39). Bouchon (5) selon la revendication 5 ou 6, dans lequel le séparateur (43) est réalisé dans un matériau poreux, préférablement en fibre de cellulose, en polyuréthane, en PVA ou en acétate de cellulose. Bouchon (5) selon la revendication 5 ou 6, dans lequel le séparateur (43) comprend une membrane élastomère présentant des orifices aptes à s’ouvrir en cas de surpression du côté de la portion de fixation. Bouchon (5) selon l’une des revendications précédentes, dans lequel le canal d’évacuation (27) présente une forme cylindrique, conique ou une combinaison de formes conique et cylindrique. Bouchon (5) selon l’une des revendications précédentes, dans lequel le corps (21) comprend une paroi (51), s’opposant à l’écoulement du liquide issu du contenant (3), disposée entre le canal d’évacuation (27) et le canal de transfert (16), ladite paroi (51) présentant au moins un orifice (52) de diamètre inférieur au diamètre du canal d’évacuation (27), de sorte que le liquide issu du contenant (3) traverse la paroi (51) uniquement par l’orifice (52) . Dispositif de diffusion de réactif pour échantillons biologiques comprenant : - un contenant (3) apte à contenir et à décharger un liquide, - un liquide contenu dans le contenant (3), caractérisé en ce qu’il comprend en outre un bouchon (5) selon l’une des revendications précédentes. Dispositif de diffusion de réactif pour échantillons biologiques selon la revendication 11 comprenant en outre un bouchon de scellement (53) apte à sceller hermétiquement le contenant (3) ou dans lequel le contenant (3) comprend un opercule thermoscellé apte à sceller hermétiquement ledit contenant (3). Procédé de production d’un bouchon (5) pour dispositif de diffusion de réactif pour échantillons biologiques selon l’une des revendications 1 à 10 comprenant les étapes de lyophilisation d’un réactif (41) sur le support de réactif (39) en matériau poreux : - appliquer le réactif (41) sous forme liquide sur le support de réactif (39), - déshydrater le réactif (41) à basse température et à basse pression, et d’installation du support de réactif (39) à l’intérieur du bouchon (5) : - placer le support de réactif (39) dans le logement, maintenir le support de réactif (39) dans le logement. Procédé d’utilisation d’un bouchon (5) pour flacon, comprenant les étapes de : - montage du bouchon (5) selon l’une des revendications 1 à 10 sur un contenant de liquide, - mise sous pression du liquide du contenant, - application de gouttes de liquide obtenues en sortie du bouchon sur un emplacement de dépose, une surface ou un contenant.