FR 3135988 A1 20231201 FR 2205144 A 20220530 La présente invention se rapporte à une protéine de fusion, à un acide nucléique codant ladite protéine, à un vecteur comprenant ledit vecteur, à une cellule hôte comprenant ledit acide nucléique et/ou vecteur, un procédé de fabrication d’une protéine de fusion et un procédé de bioconversion d’un substrat. La protéine de fusion de la présente invention comprend, successivement (i) au moins un polypeptide d’adressage et d’ancrage à la membrane bactérienne, (ii) au moins un polypeptide correspondant au domaine hydrophile d’un cytochrome P450 de plante, (iii) au moins un polypeptide de liaison comprenant au moins 47 acides aminés et (iv) au moins un polypeptide correspondant au domaine hydrophile d’une NADPH P450 réductase de cytochrome P450 de plante. Figure d’abrégé : Fig.1 . Protéine de fusion et utilisation pour la bioconversion de molécules Domaine technique de l’invention La présente invention se rapporte à une protéine de fusion comprenant successivement (i) au moins un polypeptide d’adressage et d’ancrage à la membrane bactérienne, (ii) au moins un polypeptide correspondant au domaine hydrophile d’un cytochrome P450 de plante, (iii) au moins un polypeptide de liaison, et (iv) au moins un polypeptide correspondant au domaine hydrophile d’une NADPH P450 réductase de cytochrome P450 de plante. La présente invention se rapporte également à l’acide nucléique codant la protéine de fusion, au vecteur comprenant ledit acide nucléique, la cellule hôte comprenant ledit acide nucléique et/ou vecteur et au procédé de production de ladite protéine de fusion. La présente invention se rapporte également à un procédé de bioconversion d’un substrat comprenant l’utilisation d’une protéine de fusion. La présente invention trouve une application, notamment dans le domaine de la production de protéines et/ou polypeptides, de la synthèse de molécules, par exemple de bioconversion, et dans le domaine biologique et/ou médical. Dans la description ci-dessous, les références entre crochets ( [ ] ) renvoient à la liste des références présentée à la fin du texte. Art antérieur Le métabolisme spécialisé des plantes est un métabolisme d’adaptation des plantes à des conditions environnementales changeantes. Chaque plante a développé au cours de son évolution un arsenal de molécules lui permettant de répondre à des conditions de vie qui lui sont spécifiques. La diversité de molécules ainsi produites est quasi inépuisable. Ces molécules, qui peuvent être très complexes ont été largement utilisées par l’homme pour notamment des utilisations dans le domaine de la santé. La synthèse de ces molécules se fait grâce à des voies de biosynthèses complexes faisant intervenir de nombreuses étapes catalysées par des enzymes spécifiques. Les cytochromes P450s (P450s) font partie de ces enzymes et peuvent être considérées comme des outils de très grande précision pour produire des molécules à haute valeur ajoutée. Les cytochromes P450s sont donc des enzymes impliquées dans de nombreux processus liés à l’adaptation des plantes à leur environnement. Ils sont à l’origine d’une partie de la grande diversité de molécules ayant des propriétés physico-chimiques remarquables dans un contexte physiologique mais également pour des applications chez l’Homme dans divers domaines dont notamment les domaines médical, cosmétique, pharmaceutique ou encore dans le domaine de l’agronomie. Les données moléculaires concernant les P450s ont augmenté de par l’utilisation de méthodes de séquençage à haut débit. Les données mises à disposition pour de nombreuses plantes notamment réputées comme plantes médicinales, ouvrent des perspectives de production ciblée de molécules déjà identifiées ou non identifiées / caractérisées. L’étude fonctionnelle des cytochromes P450 est cependant complexe dans la mesure où ce sont 1) des protéines membranaires et intracellulaires, 2) des protéines relativement fragiles, 3) des protéines qui nécessitent pour être actives de fonctionner en tandem avec une NADPH P450 réductase pourvoyeuse d’électrons nécessaires aux réactions d’oxydations. Pour réaliser une caractérisation fonctionnelle de ces enzymes, des outils/procédés ont donc été mis au point. Les cytochromes P450s fonctionnant avec des NADPH-P450 réductases, ces deux enzymes doivent être en interaction proches afin de permettre un transfert d’électrons de la réductase vers le P450 afin de permettre la réalisation de la réaction, à savoir une réaction d’oxydation. Chez les plantes, les deux enzymes sont ancrées dans la membrane du réticulum endoplasmique et sont donc intracellulaires. Un procédé connu pour la caractérisation fonctionnelle des P450 comprend notamment une production hétérologue dudit P450 dans une levure. A partir de cette production, une approche de bioconversion a été envisagée. Pour ce faire, un substrat potentiel du P450 est ajouté dans le milieu de culture, ledit substrat pénètre dans la levure et le produit obtenu peut être stocké dans la levure. Par ailleurs, lorsque le produit obtenu est stocké dans la levure, des étapes additionnelles de lyse de la levure et de purification pour la récupération du produit sont nécessaires. Toutefois, la mise en œuvre de ce procédé n’est pas possible notamment lorsque le substrat est hydrophobe. En effet, lorsqu’il est hydrophobe, le substrat ne peut entrer dans la levure (passer la membrane) utilisée. Il existe donc un réel besoin de trouver un moyen et/ou procédé permettant une production et/ou caractérisation fonctionnelle des cytochromes P450 et/ou permettant une bioconversion de molécule ou substrat hydrophobe par des cytochromes P450. Un autre procédé connu pour une caractérisation fonctionnelle des P450 ou la conversion de molécules/substrats par des P450 comprend en outre l’élimination de la paroi cellulaire et la production d’extraits membranaires, à savoir des microsomes. Lesdits microsomes sont incubés en présence de NADPH et de substrats potentiels. Ce procédé comprend notamment des étapes complexes d’extraction des protéines, notamment des P450. En outre, ce procédé implique, de par les nombreuses étapes d’élimination de la paroi cellulaire et/ou d’extraction des protéines, notamment une dégradation des P450s empêchant ainsi des utilisations multiples des P450s. Il existe donc un réel besoin de trouver un moyen et/ou procédé permettant une production et/ou caractérisation fonctionnelle des cytochromes P450 tout en permettant une conservation des cytochromes P450 actifs. Il existe également un réel besoin de trouver un moyen et/ou procédé de bioconversion réutilisable et/ou ne comprenant pas d’étape d’extraction de protéines. La présente invention a précisément pour but de répondre à ces besoins en fournissant une protéine de fusion comprenant successivement (i) au moins un polypeptide d’adressage et d’ancrage à la membrane bactérienne, (ii) au moins un polypeptide comprenant le domaine hydrophile d’un cytochrome P450 de plante, (iii) au moins un polypeptide de liaison comprenant au moins 47 acides aminés, de préférence comprenant 51 acides aminés et (iv) au moins un polypeptide comprenant le domaine hydrophile d’une NADPH P450 réductase de cytochrome P450 de plante. Les inventeurs ont démontré de manière surprenante et inattendue que la protéine de fusion selon l’invention peut être avantageusement adressée à la membrane plasmique de bactérie et/ou à la membrane externe de bactéries, avantageusement via sa séquence d’adressage, par exemple sous forme de tonneau bêta. En outre, les inventeurs ont démontré de manière surprenante que la protéine de fusion selon l’invention est adressée à la surface desdites membranes, et avantageusement la partie hydrophile est à la surface externe de ladite membrane. Avantageusement, les inventeurs ont démontré qu’une fois au niveau de la membrane bactérienne, la portion de la protéine de fusion comprenant un polypeptide comprenant le domaine hydrophile d’un cytochrome P450 de plante, un polypeptide de liaison et un polypeptide comprenant le domaine hydrophile d’une NADPH P450 réductase de cytochrome P450 de plante est située à l’extérieur de la cellule bactérienne ou de la bactérie et fait face à l’environnement externe de la bactérie. Les inventeurs ont également démontré de manière surprenante que la protéine de fusion selon l’invention, avantageusement lorsqu’elle est présente à la surface externe de la membrane de cellules peut être utilisée dans des procédés de bioconversion de substrats. Les inventeurs ont également démontré de manière surprenante que lorsque la protéine de fusion selon l’invention est utilisée dans un procédé de bioconversion, elle permet avantageusement une bioconversion du substrat directement dans le milieu, avantageusement à l’extérieur de la bactérie, permettant avantageusement une bioconversion de substrat, avantageusement en s’affranchissant d’étapes d’extraction de protéines membranaires, permettant avantageusement de limiter les risques de dégradation des protéines lors des étapes de purification des protéines et de réaliser la production de molécules d’intérêt directement dans le milieu de culture réduisant ainsi les étapes de purification. Dans la présente, par membrane on entend une membrane bactérienne. Il peut s’agir par exemple de toute membrane à la surface de la bactérie. Il peut s’agir par exemple de la membrane externe de bactérie gram négative, de la membrane plasmique de bactérie gram positive. Avantageusement la membrane bactérienne est la membrane externe de bactéries gram négative. Dans la présente, par polypeptide d’adressage et d’ancrage à la membrane bactérienne on entend tout polypeptide connu de l’homme du métier adapté permettant un adressage et un ancrage dudit polypeptide à la membrane bactérienne. Il peut s’agir par exemple d’un polypeptide d’adressage et d’ancrage à la membrane plasmique de bactéries gram positive. Il peut s’agir par exemple d’un polypeptide d’adressage et d’ancrage à la membrane externe de bactérien gram négative. Il peut s’agir par exemple d’un polypeptide décrit dans le document Jarmander, J., Gustavsson, M., Do, TH. et al. A dual tag system for facilitated detection of surface expressed proteins in Escherichia coli . Microb Cell Fact 11, 118 (2012). https://doi.org/10.1186/1475-2859-11-118 [14]. Il peut s’agir par exemple d’un polypeptide dont la structure quaternaire forme un tonneau bêta. Il peut s’agir par exemple d’un polypeptide ayant un pourcentage d’identité d’au moins 90%, par exemple de 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100% avec le polypeptide de séquence MNKAYSIIWSHSRQAWIVASELARGHGFVLAKNTLLVLAVVSTIGNAFAVDHHHHHHLEALFQGPGTQKQRTELENLYFQGEQKLISEEDLSRVNNNGSIVINNSIINGNITNDADLSFGTAKLLSATVNGSLVNNKNIILNPTKESAAAIGNTLTVSNYTGTPGSVISLGGVLEGDNSLTDRLVVKGNTSGQSDIVYVNEDGSGGQTRDGINIISVEGNSDAEFSLKNRVVAGAYDYTLQKGNESGTDNKGWYLTSHLPTSDTRQYRPENGSYATNMALANSLFLMDLNERKQFRAMSDNTQPESASVWMKITGGISSGKLNDGQNKTTTNQFINQLGGDIYKFHAEQLGDFTLGIMGGYANAKGKTINYTSNKAARNTLDGYSVGVYGTWYQNGENATGLFAETWMQYNWFNASVKGDGLEEEKYNLNGLTASAGGGYNLNVHTWTSPEGITGEFWLQPHLQAVWMGVTPDTHQEDNGTVVQGAGKNNIQTKAGIRASWKVKSTLDKDTGRRFRPYIEANWIHNTHEFGVKMSDDSQLLSGSRNQGEIKTGIEGVITQNLSVNGGVAYQAGGHGSNAISGALGIKYSF (SEQ ID NO 1). Avantageusement, le polypeptide d’adressage et d’ancrage à la membrane est un polypeptide de séquence MNKAYSIIWSHSRQAWIVASELARGHGFVLAKNTLLVLAVVSTIGNAFAVDHHHHHHLEALFQGPGTQKQRTELENLYFQGEQKLISEEDLSRVNNNGSIVINNSIINGNITNDADLSFGTAKLLSATVNGSLVNNKNIILNPTKESAAAIGNTLTVSNYTGTPGSVISLGGVLEGDNSLTDRLVVKGNTSGQSDIVYVNEDGSGGQTRDGINIISVEGNSDAEFSLKNRVVAGAYDYTLQKGNESGTDNKGWYLTSHLPTSDTRQYRPENGSYATNMALANSLFLMDLNERKQFRAMSDNTQPESASVWMKITGGISSGKLNDGQNKTTTNQFINQLGGDIYKFHAEQLGDFTLGIMGGYANAKGKTINYTSNKAARNTLDGYSVGVYGTWYQNGENATGLFAETWMQYNWFNASVKGDGLEEEKYNLNGLTASAGGGYNLNVHTWTSPEGITGEFWLQPHLQAVWMGVTPDTHQEDNGTVVQGAGKNNIQTKAGIRASWKVKSTLDKDTGRRFRPYIEANWIHNTHEFGVKMSDDSQLLSGSRNQGEIKTGIEGVITQNLSVNGGVAYQAGGHGSNAISGALGIKYSF (SEQ ID NO 1). Dans la présente par cytochrome P450 on entend des protéines à activité mono-oxygénase capables d'oxyder des substrats en se servant de l'oxygène moléculaire dissous dans le cytoplasme ou dans le milieu, ainsi que des équivalents réducteurs fournis par la NADPH-cytochrome P450-réductase. (Guengerich et Macdonald, « Mechanisms of cytochrome P450 catalysis », FASEB J. 1990, 4, pp 2453-2459 [1] ) . Il peut s’agir par exemple de tout cytochrome P450 de plantes connus de l’homme du métier. Il peut s’agir par exemple de cytochromes P450 de plantes tels que décrit dans Xu Jun et al. « The cytochrome P450 superfamily: Key players in plant development and defense » Journal of Integrative Agriculture 2015, 14(9): 1673–1686 [2]. Il peut s’agir par exemple de cytochromes P450 de plantes appartenant aux familles CYP51, CYP71, CYP72, CYP74, CYP85, CYP86, CYP97, CYP710, CYP711 et CYP727. Il peut s’agir par exemple de cytochrome P450 de plante appartenant à la famille CYP51, CYP71, CYP73, CYP75, CYP76, CYP77, CYP78, CYP79, CYP80, CYP81, CYP82, CYP83, CYP84, CYP89, CYP92, CYP93, CYP98, CYP99, CYP701, CYP703, CYP705, CYP706, CYP712, CYP719, CYP723, CYP726, CYP736, CYP72, CYP709, CYP714, CYP715, CYP721, CYP734, CYP735, CYP749, CYP74, CYP85, CYP87, CYP88, CYP90, CYP702, CYP707, CYP708, CYP716, CYP718, CYP720, CYP724, CYP725, CYP728, CYP729, CYP733, CYP86, CYP94, CYP96, CYP704, CYP730, CYP731, CYP732, CYP97, CYP710, CYP711 ou CYP727. Il peut s’agir par exemple d’un cytochrome P450 appartenant à la famille CYP76 ou CYP73. Il peut s’agir par exemple du cytochrome P450 CYP76F112 ou CYP73A1. Dans la présente par domaine hydrophile d’un cytochrome P450 de plante on entend la séquence polypeptidique du cytochrome P450 comprenant le domaine enzymatique et l’activité biologique, avantageusement l’activité enzymatique, du cytochrome P450. L’homme du métier, par ces connaissances générales sait identifier le domaine enzymatique du cytochrome P450. Il peut s’agir par exemple d’un polypeptide isolé à partir d’un cytochrome P450. Il peut s’agir par exemple d’un polypeptide ayant un pourcentage d’identité d’au moins 25%, par exemple de 28%, 30%,40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 99% avec un polypeptide choisi dans le groupe comprenant HRNLTDLAKRFGEILLLRMGQRNLVVVSSPELAKEVLHTQGVEFGSRTRNVVFDIFTGKGQDMVFTVYGEHWRKMRRIMTVPFFTNKVVQQYRYGWEAEAAAVVDDVKKNPAAATEGIVIRRRLQLMMYNNMFRIMFDRRFESEDDPLFLKLKALNGERSRLAQSFEYNYGDFIPILRPFLRNYLKLCKEVKDKRIQLFKDYFVDERKKIGSTKKMDNNQLKCAIDHILEAKEKGEINEDNVLYIVENINVAAIETTLWSIEWGIAELVNHPEIQAKLRHELDTKLGPGVQITEPDVQNLPYLQAVVKETLRLRMAIPLLVPHMNLHDAKLGGFDIPAESKILVNAWWLANNPDQWKKPEEFRPERFLEEEAKVEANGNDFRYLPFGVGRRSCPGIILALPILGITIGRLVQNFELLPPPGQSKIDTDEKGGQFSLHILKH (SEQ ID NO 2), IPVPIFGNWLQVGDDLNHRNLTDLAKRFGEILLLRMGQRNLVVVSSPELAKEVLHTQGVEFGSRTRNVVFDIFTGKGQDMVFTVYGEHWRKMRRIMTVPFFTNKVVQQYRYGWEAEAAAVVDDVKKNPAAATEGIVIRRRLQLMMYNNMFRIMFDRRFESEDDPLFLKLKALNGERSRLAQSFEYNYGDFIPILRPFLRNYLKLCKEVKDKRIQLFKDYFVDERKKIGSTKKMDNNQLKCAIDHILEAKEKGEINEDNVLYIVENINVAAIETTLWSIEWGIAELVNHPEIQAKLRHELDTKLGPGVQITEPDVQNLPYLQAVVKETLRLRMAIPLLVPHMNLHDAKLGGFDIPAESKILVNAWWLANNPDQWKKPEEFRPERFLEEEAKVEANGNDFRYLPFGVGRRSCPGIILALPILGITIGRLVQNFELLPPPGQSKIDTDEKGGQFSLHILKHSTIVAKPRSF (SEQ ID NO 3), MDIFTSLLYLALILFFSLQVFRSFAFPKHKRLPPGPKPRPIIGSLLELGDQPHRSLARLSESYGPFMHLKLGQVTTVVISSTTMAKEVLQANSQVVSSRTITDASRAHRHSDFSMVMLPVSPLWRNLRKISNSHLLSSKALDGNMELRNKKVQELLNDVHKSVQAGEAVEIASLSFRATLNLLSTTFFSMDMADDTNSVTLKELKEAMSHMMEELGKPNLADYFPFLQKIDPQGIRRRNTVTFRKLINLFGRIIDQRLKVREASGSLKDDDILDTLINMMVVDQEKKEDQLDKTIIEHFLLDLFSAGTETTSTTLEWAMAELVKAPEIMSKARAELDQVIGKGNQVKESDVSRLPYLQAIVKETFRMHPTAPLLIPRKADSDIEISDYIIPKDAQ (SEQ ID NO 4), KPRPIIGSLLELGDQPHRSLARLSESYGPFMHLKLGQVTTVVISSTTMAKEVLQANSQVVSSRTITDASRAHRHSDFSMVMLPVSPLWRNLRKISNSHLLSSKALDGNMELRNKKVQELLNDVHKSVQAGEAVEIASLSFRATLNLLSTTFFSMDMADDTNSVTLKELKEAMSHMMEELGKPNLADYFPFLQKIDPQGIRRRNTVTFRKLINLFGRIIDQRLKVREASGSLKDDDILDTLINMMVVDQEKKEDQLDKTIIEHFLLDLFSAGTETTSTTLEWAMAELVKAPEIMSKARAELDQVIGKGNQVKESDVSRLPYLQAIVKETFRMHPTAPLLIPRKADSDIEISDYIIPKDAQ (SEQ ID NO 5) Avantageusement, il peut s’agir d’un polypeptide isolé à partir d’un cytochrome P450 de plante comprenant le domaine hydrophile dudit cytochrome P450 de plante exempte de domaine transmembranaire. Il peut s’agir par exemple d’un polypeptide ayant un pourcentage d’identité d’au moins 25%, par exemple de 28%, 30%,40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 99% avec un polypeptide choisi dans le groupe comprenant IPVPIFGNWLQVGDDLNHRNLTDLAKRFGEILLLRMGQRNLVVVSSPELAKEVLHTQGVEFGSRTRNVVFDIFTGKGQDMVFTVYGEHWRKMRRIMTVPFFTNKVVQQYRYGWEAEAAAVVDDVKKNPAAATEGIVIRRRLQLMMYNNMFRIMFDRRFESEDDPLFLKLKALNGERSRLAQSFEYNYGDFIPILRPFLRNYLKLCKEVKDKRIQLFKDYFVDERKKIGSTKKMDNNQLKCAIDHILEAKEKGEINEDNVLYIVENINVAAIETTLWSIEWGIAELVNHPEIQAKLRHELDTKLGPGVQITEPDVQNLPYLQAVVKETLRLRMAIPLLVPHMNLHDAKLGGFDIPAESKILVNAWWLANNPDQWKKPEEFRPERFLEEEAKVEANGNDFRYLPFGVGRRSCPGIILALPILGITIGRLVQNFELLPPPGQSKIDTDEKGGQFSLHILKHSTIVAKPRSF (SEQ ID NO 3), et KPRPIIGSLLELGDQPHRSLARLSESYGPFMHLKLGQVTTVVISSTTMAKEVLQANSQVVSSRTITDASRAHRHSDFSMVMLPVSPLWRNLRKISNSHLLSSKALDGNMELRNKKVQELLNDVHKSVQAGEAVEIASLSFRATLNLLSTTFFSMDMADDTNSVTLKELKEAMSHMMEELGKPNLADYFPFLQKIDPQGIRRRNTVTFRKLINLFGRIIDQRLKVREASGSLKDDDILDTLINMMVVDQEKKEDQLDKTIIEHFLLDLFSAGTETTSTTLEWAMAELVKAPEIMSKARAELDQVIGKGNQVKESDVSRLPYLQAIVKETFRMHPTAPLLIPRKADSDIEISDYIIPKDAQ (SEQ ID NO 5) . Dans la présente par un polypeptide de liaison on entend tout peptide de liaison adapté connu de l’homme du métier. Il peut s’agir par exemple d’un polypeptide de liaison comprenant au moins 47 acides aminés, de préférence comprenant 51 acides aminés. Il peut s’agir par exemple d’un polypeptide de séquence PGGSGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGSGGSP (SEQ ID NO 6). Dans la présente par NADPH P450 réductase de cytochrome P450 de plante on entend des protéines à activité oxydoréductase qui catalyse la réaction : NADPH + H + + n hémoprotéine oxydée ⇌ NADP + + n hémoprotéine réduite. Il peut s’agir par exemple de toute NADPH P450 réductase de cytochrome P450 de plante connue de l’homme du métier. Il peut s’agir par exemple de NADPH P450 réductase de cytochrome P450 de plante décrite dans Kenneth Jensen et al., « Plant NADPH-cytochrome P450 oxidoreductases », Phytochemistry 2010, Volume 71, 2–3, Pages 132-141 [3]. Dans la présente par domaine hydrophile de NADPH P450 réductase de cytochrome P450 de plante on entend la séquence polypeptidique de NADPH P450 réductase de cytochrome P450 de plante comprenant le domaine réductase et l’activité biologique, avantageusement l’activité réductrice, de la NADPH P450 réductase de cytochrome P450 de plante. L’expression "domaine réductase", tel qu'il est utilisé ici, fait référence à une séquence d'acides aminés qui fonctionne comme un donneur d'électrons. En particulier, il sert de donneur d'électrons pour la partie oxygénase d’un cytochrome P450. L’homme du métier, par ces connaissances générales sait identifier le domaine catalytique, en particulier le domaine réductase, d’une NADPH P450 réductase de cytochrome P450 de plante. Il peut s’agir par exemple d’un polypeptide isolé à partir d’une de NADPH P450 réductase de cytochrome P450 de plante. Il peut s’agir par exemple d’un polypeptide ayant un pourcentage d’identité d’au moins 90%, par exemple de 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100% avec un polypeptide choisi dans le groupe comprenant TRVSIFFGTQTGTAEGFAKALSEEIKARYEKAAVKVIDLDDYAADDDQYEEKLKKETLAFFCVATYGDGEPTDNAARFYKWFTEENERDIKLQQLAYGVFALGNRQYEHFNKIGIVLDEELCKKGAKRLIEVGLGDDDQSIEDDFNAWKESLWSELDKLLKDEDDKSVATPYTAVIPEYRVVTHDPRFTTQKSMESNVANGNTTIDIHHPCRVDVAVQKELHTHESDRSCIHLEFDISRTGITYETGDHVGVYAENHVEIVEEAGKLLGHSLDLVFSIHADKEDGSPLESAVPPPFPGPCTLGTGLARYADLLNPPRKSALVALAAYATEPSEAEKLKHLTSPDGKDEYSQWIVASQRSLLEVMAAFPSAKPPLGVFFAAIAPRLQPRYYSISSSPRLAPSRVHVTSALVYGPTPTGRIHKGVCSTWMKNAVPAEKSHECSGAPIFIRASNFKLPSNPSTPIVMVGPGTGLAPFRGFLQERMALKEDGEELGSSLLFFGCRNRQMDFIYEDELNNFVDQGVISELIMAFSREGAQKEYVQHKMMEKAAQVWDLIKEEGYLYVCGDAKGMARDVHRTLHTIVQEQEGVSSSEAEAIVKKLQTEGRYLRDVW (SEQ ID NO 7), YEKAAVKVIDLDDYAADDDQYEEKLKKETLAFFCVATYGDGEPTDNAARFYKWFTEENERDIKLQQLAYGVFALGNRQYEHFNKIGIVLDEELCKKGAKRLIEVGLGDDDQSIEDDFNAWKESLWSELDKLLKDEDDKSVATPYTAVIPEYRVVTHDPRFTTQKSMESNVANGNTTIDIHHPCRVDVAVQKELHTHESDRSCIHLEFDISRTGITYETGDHVGVYAENHVEIVEEAGKLLGHSLDLVFSIHADKEDGSPLESAVPPPFPGPCTLGTGLARYADLLNPPRKSALVALAAYATEPSEAEKLKHLTSPDGKDEYSQWIVASQRSLLEVMAAFPSAKPPLGVFFAAIAPRLQPRYYSISSSPRLAPSRVHVTSALVYGPTPTGRIHKGVCSTWMKNAVPAEKSHECSGAPIFIRASNFKLPSNPSTPIVMVGPGTGLAPFRGFLQERMALKEDGEELGSSLLFFGCRNRQMDFIYEDELNNFVDQGVISELIMAFSREGAQKEYVQHKMMEKAAQVWDLIKEEGYLYVCGDAKGMARDVHRTLHTIVQEQEGVSSSE (SEQ ID NO 8). Avantageusement, il peut s’agir d’un polypeptide isolé à partir d’une de NADPH P450 réductase de cytochrome P450 comprenant le domaine hydrophile de ladite NADPH P450 réductase de cytochrome P450 exempte de domaine transmembranaire. Il peut s’agir par exemple d’un polypeptide ayant un pourcentage d’identité d’au moins 90%, par exemple de 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100% avec le polypeptide de séquence TRVSIFFGTQTGTAEGFAKALSEEIKARYEKAAVKVIDLDDYAADDDQYEEKLKKETLAFFCVATYGDGEPTDNAARFYKWFTEENERDIKLQQLAYGVFALGNRQYEHFNKIGIVLDEELCKKGAKRLIEVGLGDDDQSIEDDFNAWKESLWSELDKLLKDEDDKSVATPYTAVIPEYRVVTHDPRFTTQKSMESNVANGNTTIDIHHPCRVDVAVQKELHTHESDRSCIHLEFDISRTGITYETGDHVGVYAENHVEIVEEAGKLLGHSLDLVFSIHADKEDGSPLESAVPPPFPGPCTLGTGLARYADLLNPPRKSALVALAAYATEPSEAEKLKHLTSPDGKDEYSQWIVASQRSLLEVMAAFPSAKPPLGVFFAAIAPRLQPRYYSISSSPRLAPSRVHVTSALVYGPTPTGRIHKGVCSTWMKNAVPAEKSHECSGAPIFIRASNFKLPSNPSTPIVMVGPGTGLAPFRGFLQERMALKEDGEELGSSLLFFGCRNRQMDFIYEDELNNFVDQGVISELIMAFSREGAQKEYVQHKMMEKAAQVWDLIKEEGYLYVCGDAKGMARDVHRTLHTIVQEQEGVSSSEAEAIVKKLQTEGRYLRDVW (SEQ ID NO 7). Dans la présente, la protéine de fusion peut comprendre un ou plusieurs acides aminés non naturels, par exemple, un ou plusieurs acides aminés D et/ou des acides aminés modifiés chimiquement. Les acides aminés non naturels peuvent être lévogyres (L-), dextrogyres (D-), ou des mélanges de ceux-ci. Les acides aminés non naturels sont les acides aminés qui ne sont généralement pas synthétisés dans les processus métaboliques normaux des organismes vivants et qui ne sont pas naturellement présents dans les protéines. En outre, les acides aminés non naturels ne sont pas non plus reconnus par les protéases communes. L'acide aminé non naturel peut être présent à n'importe quelle position dans la protéine de fusion. Par exemple, l'acide aminé non naturel peut se trouver à l'extrémité N-terminale, à l'extrémité C-terminale ou à toute position entre l'extrémité N-terminale et l'extrémité C-terminale. Les acides aminés non naturels peuvent, par exemple, être des acides aminés chimiquement modifiés et peuvent par exemple comprendre des groupes alkyle, aryle ou alkylaryle que l'on ne trouve pas dans les acides aminés naturels. Certains exemples d'acides aminés alkylés non naturels comprennent l'acide α-aminobutyrique, l'acide β-aminobutyrique, l'acide γ-aminobutyrique, l'acide 8-aminovalérique et l'acide ε-aminocaproïque. Certains exemples d'acides aminés aryliques non naturels comprennent l'acide ortho-, méta- et para-aminobenzoïque. Certains exemples d'acides aminés alkylaryles non naturels comprennent l'acide ortho-, méta- et para-aminophénylacétique, et l'acide γ-phényl-β-aminobutyrique. Les acides aminés non naturels comprennent les dérivés d'acides aminés naturels. Les dérivés d'acides aminés naturels peuvent, par exemple, inclure l'ajout d'un ou plusieurs groupes chimiques à l'acide aminé naturel. Par exemple, un ou plusieurs groupes chimiques peuvent être ajoutés à une ou plusieurs des positions 2′, 3′, 4′, 5′ ou 6′ du cycle aromatique d'un résidu de phénylalanine ou de tyrosine, ou à la position 4′, 5′, 6′ ou 7′ du cycle benzo d'un résidu de tryptophane. Le groupe peut être n'importe quel groupe chimique qui peut être ajouté à un cycle aromatique. Certains exemples de tels groupes comprennent un alkyle en C1-C4 ramifié ou non ramifié, tel que le méthyle, l'éthyle, le n-propyle, l'isopropyle, le butyle, l'isobutyle ou le t-butyle, un alkyloxy en C1-C4 (c'est-à-dire un alcoxy), un amino, un alkylamino en C1-C4 et un dialkylamino en C1-C4 (par exemple, méthylamino, diméthylamino), un nitro, un hydroxyle, un halo (c'est-à-dire un fluoro, un chloro, un bromo ou un iodo). Certains exemples spécifiques de dérivés non naturels d'acides aminés naturels comprennent la norvaline (Nva) et la norleucine (Nle). La protéine de fusion selon l’invention peut être produite et/ou synthétisée par tout procédé adapté connu de l’homme du métier. Dans la présente, les termes "polypeptide", "peptide" et leurs équivalents grammaticaux font référence à un polymère de résidus d'acides aminés. Dans la présente, une "protéine fonctionnelle" est une protéine qui est biologiquement active. Dans la présente, le pourcentage d'identité de séquence peut être déterminé par toute méthode connue de l'homme de l'art. Il peut être déterminé par exemple par l'utilisation de BLASTP et BLASTN, par exemple en utilisant des paramètres par défaut. Dans la présente, l'expression « pourcentage d'identité » signifie le pourcentage déterminé par comparaison directe de deux séquences (nucléiques ou protéiques), en déterminant le nombre de nucléotides ou de résidus d'acides aminés communs aux deux séquences, puis en le divisant par le nombre de nucléotides ou de résidus d'acides aminés de la plus longue des deux séquences et en multipliant le résultat par 100. Dans la présente, le mot « comprend » et ses variations, telles que « comprend » et « comprenant », doivent être interprétés dans un sens ouvert et inclusif, c'est-à-dire comme "incluant, mais non limité à". Dans la présente par « consistant en » ou « constitué », on entend incluant, et limité à, ce qui suit l'expression « consistant en » ou « constitué ». Ainsi, l'expression « consistant en » ou « constitué », indique que les éléments énumérés sont requis ou obligatoires, et qu'aucun autre élément ne peut être présent. Un autre objet de l'invention concerne un polynucléotide ou acide nucléique codant pour une protéine de fusion selon l'invention. Il peut s’agir par exemple d’un polynucléotide ou acide nucléique codant pour une protéine de fusion comprenant successivement (i) au moins un polypeptide d’adressage et d’ancrage à la membrane bactérienne, (ii) au moins un polypeptide comprenant le domaine hydrophile d’un cytochrome P450 de plante, (iii) au moins un polypeptide de liaison comprenant au moins 47 acides aminés, de préférence comprenant 51 acides aminés, et (iv) au moins un polypeptide comprenant le domaine hydrophile d’une NADPH P450 réductase de cytochrome P450 de plante. Il peut s’agir par exemple d’un polynucléotide ou acide nucléique codant pour une protéine de fusion selon l’invention dans lequel la séquence polynucléotidique ou acide nucléique codant pour un polypeptide d’adressage et d’ancrage à la membrane bactérienne, avantageusement à la membrane externe de bactéries gram négatives, est choisi dans le groupe comprenant l’acide nucléique de séquence : accatgggcaataaggcctacagtatcatttggagccactccagacaggcctggattgtggcctcagagttagcc agaggacatggttttgtccttgcaaaaaatacactgctggtattggcggttgtttccacaatcggaaatgcatttgcagtcgaccaccatcaccatcaccatctggaagcgctgttccagggtccgggtaccgctacagtgaatggtagtcttgttaataacaaaaatatcattcttaatcctacaaaagaaagtgcggccgctataggtaatactcttaccgtgtcaaattatactgggacaccgggaagtgttatttctcttggtggtgtgcttgaaggagataattcacttacggaccgtctggtggtgaaaggtaatacctctggtcaaagtgacatcgtttatgtcaatgaagatggcagtggtggtcagacgagagatggtattaatattatttctgtagagggaaattctgatgcagaattctctctgaagaaccgcgtagttgccggagcttatgattacacactgcagaaaggaaacgagagtgggacagataataagggatggtatttaaccagtcatcttcccacatctgatacccggcaatacagaccggagaacggaagttatgctaccaatatggcactggctaactcactgttcctcatggatttgaatgagcgtaagcaattcagggccatgagtgataatacacagcctgagtctgcatccgtgtggatgaagatcactggaggaataagctctggtaagctgaatgacgggcaaaataaaacaacaaccaatcagtttatcaatcagctcgggggggatatttataaattccatgctgaacaactgggtgattttaccttagggattatgggaggatacgcgaatgcaaaaggtaaaacgataaattacacgagcaacaaagctgccagaaacacactggatggttattctgtcggggtatacggtacgtggtatcagaatggggaaaatgcaacagggctctttgctgaaacttggatgcaatataactggtttaatgcatcagtgaaaggtgacggactggaagaagaaaaatataatctgaatggtttaaccgcttctgcaggtgggggatataacctgaatgtgcacacatggacatcacctgaaggaataacaggtgaattctggttacagcctcatttgcaggctgtctggatgggggttacaccggatacacatcaggaggataacggaacggtggtgcagggagcagggaaaaataatattcagacaaaagcaggtattcgtgcatcctggaaggtgaaaagcaccctggataaggataccgggcggaggttccgtccgtatatagaggcaaactggatccataacactcatgaatttggtgttaaaatgagtgatgacagccagttgttgtcaggtagccgaaatcagggagagataaagacaggtattgaaggggtgattactcaaaacttgtcagtgaatggcggagtcgcatatcaggcaggaggtcacgggagcaatgccatctccggagcactggggataaaatacagcttctgataatga (SEQ ID NO 9), atgaataaggcctacagtatcatttggagccactccagacaggcctggattgtggcctcagagttagccagaggacatggttttgtccttgcaaaaaatacactgctggtattggcggttgtttccacaatcggaaatgcatttgcagtcgaccaccatcaccatcaccatctggaagcgctgttccagggtccgggtacccagaaacagcgtaccgagctcgaaaacctgtacttccagggtgaacagaaactgattagcgaagaagatctgtctagagtgaataacaatggaagcattgtcattaataacagcattataaacgggaatattacgaatgatgctgacttaagttttggtacagcaaagctgctctctgctacagtgaatggtagtcttgttaataacaaaaatatcattcttaatcctacaaaagaaagtgcggccgctataggtaatactcttaccgtgtcaaattatactgggacaccgggaagtgttatttctcttggtggtgtgcttgaaggagataattcacttacggaccgtctggtggtgaaaggtaatacctctggtcaaagtgacatcgtttatgtcaatgaagatggcagtggtggtcagacgagagatggtattaatattatttctgtagagggaaattctgatgcagaattctctctgaagaaccgcgtagttgccggagcttatgattacacactgcagaaaggaaacgagagtgggacagataataagggatggtatttaaccagtcatcttcccacatctgatacccggcaatacagaccggagaacggaagttatgctaccaatatggcactggctaactcactgttcctcatggatttgaatgagcgtaagcaattcagggccatgagtgataatacacagcctgagtctgcatccgtgtggatgaagatcactggaggaataagctctggtaagctgaatgacgggcaaaataaaacaacaaccaatcagtttatcaatcagctcgggggggatatttataaattccatgctgaacaactgggtgattttaccttagggattatgggaggatacgcgaatgcaaaaggtaaaacgataaattacacgagcaacaaagctgccagaaacacactggatggttattctgtcggggtatacggtacgtggtatcagaatggggaaaatgcaacagggctctttgctgaaacttggatgcaatataactggtttaatgcatcagtgaaaggtgacggactggaagaagaaaaatataatctgaatggtttaaccgcttctgcaggtgggggatataacctgaatgtgcacacatggacatcacctgaaggaataacaggtgaattctggttacagcctcatttgcaggctgtctggatgggggttacaccggatacacatcaggaggataacggaacggtggtgcagggagcagggaaaaataatattcagacaaaagcaggtattcgtgcatcctggaaggtgaaaagcaccctggataaggataccgggcggaggttccgtccgtatatagaggcaaactggatccataacactcatgaatttggtgttaaaatgagtgatgacagccagttgttgtcaggtagccgaaatcagggagagataaagacaggtattgaaggggtgattactcaaaacttgtcagtgaatggcggagtcgcatatcaggcaggaggtcacgggagcaatgccatctccggagcactggggataaaatacagcttctgataatga (SEQ ID NO 10). Il peut s’agir par exemple d’un polynucléotide ou acide nucléique codant pour une protéine de fusion selon l’invention dans lequel la séquence polynucléotidique ou acide nucléique codant pour un polypeptide comprenant le domaine hydrophile d’un cytochrome P450 de plante est choisi dans le groupe comprenant l’acide nucléique de séquence : cctggcccaatcccggttccaattttcggcaactggctacaagttggcgatgatttgaaccaccggaacttaaccgatctggctaagaggtttggtgagatcttgctgctacgcatggggcagaggaatctggtagttgtgtcttcgcctgagcttgctaaagaggtgttgcatacacaaggagtggagtttggttcgagaacaaggaatgttgtgttcgatatttttactgggaagggtcaggatatggtgtttacggtttatggtgagcattggaggaagatgaggaggatcatgaccgtaccctttttcaccaacaaagttgttcagcaatacaggtatgggtgggaggctgaggccgcggcggttgtggacgatgtgaagaagaatccggctgcagcaactgaaggaatcgtgatccgaagacggttacaactcatgatgtataacaacatgttcagaatcatgttcgacagacgattcgaaagtgaagatgatcccttgtttttgaaactcaaggcgttgaacggtgagaggagtcgattggcgcagagctttgagtacaactatggcgatttcatccctattttgcggccgtttttgagaaattatttgaagttgtgcaaggaagttaaagataaaaggattcagctcttcaaggattacttcgttgacgaaaggaagaagattggaagcactaagaaaatggacaacaatcagttgaaatgtgccattgatcacattcttgaagctaaagagaagggtgagatcaatgaagacaatgttctttacattgttgaaaacatcaatgttgcagcaatcgagacaactctatggtcgatcgaatggggaattgcggagctagttaaccatcccgagatccaagccaaactcaggcacgagctcgacaccaagctcgggcccggtgtccagatcaccgagcccgacgtccaaaacctcccttacctccaagccgtggtcaaggaaaccctccgtctccgtatggcgatcccgcttctagtcccacacatgaacctccatgacgctaagctcggcgggtttgacatcccggccgaaagcaagatcttggtcaacgcgtggtggttagcaaacaaccccgaccaatggaagaaacccgaggagtttaggccagagaggtttttggaagaggaagcgaaggttgaggctaacgggaatgattttaggtacttgccgtttggagtcgggagaaggagttgccccgggattattcttgcattgccgatacttggtattacaatcgggcgtttggtgcagaatttcgagctgttgcctccaccgggacagtctaagatcgataccgatgagaagggtgggcagtttagtttgcatatcttgaagcactctactatcgtagctaaacctaggtcattt (SEQ ID NO 11), atggacctcctcctcatagaaaaaaccctcgtcgccttattcgccgccattatcggcgcaatactaatctccaaactccgcggtaaaaaattcaagctcccacctggcccaatcccggttccaattttcggcaactggctacaagttggcgatgatttgaaccaccggaacttaaccgatctggctaagaggtttggtgagatcttgctgctacgcatggggcagaggaatctggtagttgtgtcttcgcctgagcttgctaaagaggtgttgcatacacaaggagtggagtttggttcgagaacaaggaatgttgtgttcgatatttttactgggaagggtcaggatatggtgtttacggtttatggtgagcattggaggaagatgaggaggatcatgaccgtaccctttttcaccaacaaagttgttcagcaatacaggtatgggtgggaggctgaggccgcggcggttgtggacgatgtgaagaagaatccggctgcagcaactgaaggaatcgtgatccgaagacggttacaactcatgatgtataacaacatgttcagaatcatgttcgacagacgattcgaaagtgaagatgatcccttgtttttgaaactcaaggcgttgaacggtgagaggagtcgattggcgcagagctttgagtacaactatggcgatttcatccctattttgcggccgtttttgagaaattatttgaagttgtgcaaggaagttaaagataaaaggattcagctcttcaaggattacttcgttgacgaaaggaagaagattggaagcactaagaaaatggacaacaatcagttgaaatgtgccattgatcacattcttgaagctaaagagaagggtgagatcaatgaagacaatgttctttacattgttgaaaacatcaatgttgcagcaatcgagacaactctatggtcgatcgaatggggaattgcggagctagttaaccatcccgagatccaagccaaactcaggcacgagctcgacaccaagctcgggcccggtgtccagatcaccgagcccgacgtccaaaacctcccttacctccaagccgtggtcaaggaaaccctccgtctccgtatggcgatcccgcttctagtcccacacatgaacctccatgacgctaagctcggcgggtttgacatcccggccgaaagcaagatcttggtcaacgcgtggtggttagcaaacaaccccgaccaatggaagaaacccgaggagtttaggccagagaggtttttggaagaggaagcgaaggttgaggctaacgggaatgattttaggtacttgccgtttggagtcgggagaaggagttgccccgggattattcttgcattgccgatacttggtattacaatcgggcgtttggtgcagaatttcgagctgttgcctccaccgggacagtctaagatcgataccgatgagaagggtgggcagtttagtttgcatatcttgaagcactctactatcgtagctaaacctaggtcattttaa (SEQ ID NO 12), atggatattttcacctccttactgtatcttgctctcattcttttcttttctcttcaagtcttccgttcctttgcgtttcctaaacacaaaaggcttccacctggtccaaaacctcgtcccatcatcggaagcctcttggagctcggcgaccaaccccacaggtccttggccaggctttccgagtcttacggcccgtttatgcatttgaagctcggccaagtcacgacggttgtcatttcctccaccaccatggctaaagaagtcctccaggcaaacagccaagtcgtctccagccggacaatcaccgacgcaagccgcgcccacagacacagcgattttagcatggttatgttgcccgtatcccctctgtggcgaaaccttcggaaaataagcaactcacacttgctttcctccaaggctcttgatggcaacatggagctgagaaacaaaaaggtgcaagagctcctaaatgatgtccacaaaagcgtccaggccggggaggcggtggagatcgcgagcctttctttcagagctactctgaatctcttgtccaccacatttttctccatggacatggcggatgacacaaattccgtcactctaaaagagctcaaggaggctatgtcgcacatgatggaagagttggggaagcctaacttggccgattatttcccgtttctacaaaagattgacccccaaggcattaggcggcgcaacacggttactttccggaaactgatcaacttgtttgggcgtatcatcgaccaaagattgaaagtgagagaagcgagtggttctttgaaagatgatgatattttagacactcttatcaacatgatggtggtggatcaggagaagaaagaggatcagcttgacaaaaccataattgaacattttttactggatttattttcagcggggactgaaacgacttcaaccacgttggagtgggcaatggctgagctagtaaaagcgccagagattatgtcaaaagcccgagcagagctagatcaagttataggcaaaggaaaccaagtgaaggaatcggacgtatctcgactcccttacttacaagccattgttaaagaaaccttccgcatgcaccctacagctccattattgattcctcgcaaagccgacagtgacatcgaaatctccgactatatcatcccgaaggatgctcaggtgattgtcaatgtatgggccattggtagagactcaagcacatgggaaaatcccgacaagtttataccggagaggtttttggacatcgatatagatgtcggaggccgggattttaagctcattccgttcggtgctggtcggagaatatgtcccggattcccattggcgatgcgaatgttgcacttgatgttggggtctttgcttcactcgtttgattggaagttggaagatggggttagacctgatgctctaaacatggatgaaaagtttggcctcaccttgcaaatggctcagcctttgcgagctatccccgtgccgacaaagcattag (SEQ ID NO 13), atcatcggaagcctcttggagctcggcgaccaaccccacaggtccttggccaggctttccgagtcttacggcccgtttatgcatttgaagctcggccaagtcacgacggttgtcatttcctccaccaccatggctaaagaagtcctccaggcaaacagccaagtcgtctccagccggacaatcaccgacgcaagccgcgcccacagacacagcgattttagcatggttatgttgcccgtatcccctctgtggcgaaaccttcggaaaataagcaactcacacttgctttcctccaaggctcttgatggcaacatggagctgagaaacaaaaaggtgcaagagctcctaaatgatgtccacaaaagcgtccaggccggggaggcggtggagatcgcgagcctttctttcagagctactctgaatctcttgtccaccacatttttctccatggacatggcggatgacacaaattccgtcactctaaaagagctcaaggaggctatgtcgcacatgatggaagagttggggaagcctaacttggccgattatttcccgtttctacaaaagattgacccccaaggcattaggcggcgcaacacggttactttccggaaactgatcaacttgtttgggcgtatcatcgaccaaagattgaaagtgagagaagcgagtggttctttgaaagatgatgatattttagacactcttatcaacatgatggtggtggatcaggagaagaaagaggatcagcttgacaaaaccataattgaacattttttactggatttattttcagcggggactgaaacgacttcaaccacgttggagtgggcaatggctgagctagtaaaagcgccagagattatgtcaaaagcccgagcagagctagatcaagttataggcaaaggaaaccaagtgaaggaatcggacgtatctcgactcccttacttacaagccattgttaaagaaaccttccgcatgcaccctacagctccattattgattcctcgcaaagccgacagtgacatcgaaatctccgactatatcatcccgaaggatgctcaggtgattgtcaatgtatgggccattggtagagactcaagcacatgggaaaatcccgacaagtttataccggagaggtttttggacatcgatatagatgtcggaggccgggattttaagctcattccgttcggtgctggtcggagaatatgtcccggattcccattggcgatgcgaatgttgcacttgatgttggggtctttgcttcactcgtttgattggaagttggaagatggggttagacctgatgctctaaacatggatgaaaagtttggcctcaccttgcaaatggctcagcctttgcgagctatccccgtgccgacaaagcattag (SEQ ID NO 14), de préférence de séquence SEQ ID NO 11. Il peut s’agir par exemple d’un polynucléotide ou acide nucléique codant pour une protéine de fusion selon l’invention dans lequel la séquence polynucléotidique ou acide nucléique codant pour un polypeptide de liaison est choisi dans le groupe comprenant l’acide nucléique de séquence : ccgggcggttctggtggcggtagcggcggtggcggttctggcggtggcggtagcggcggtggcggttctggcggtggcggtagcggcggtggcggttctggcggtggcggtagcggcggtggcggttctggtggcggtagcggcggttctccg (SEQ ID NO 15). Il peut s’agir par exemple d’un polynucléotide ou acide nucléique codant pour une protéine de fusion selon l’invention dans lequel la séquence polynucléotidique ou acide nucléique codant pour un polypeptide comprenant le domaine hydrophile d’une NADPH P450 réductase de cytochrome P450 de plante est choisi dans le groupe comprenant l’acide nucléique de séquence : atgacttctgctttgtatgcttccgatttgtttaagcagctcaagtcaattatggggacagattcgttatccgacgatgttgtacttgtgattgcaacgacgtctttggcactagtagctggatttgtggtgttgttatggaagaaaacgacggcggatcggagcggggagctgaagcctttgatgatccctaagtctcttatggctaaggacgaggatgatgatttggatttgggatccgggaagactagagtctctatcttcttcggtacgcagactggaacagctgagggatttgctaaggcattatccgaagaaatcaaagcgagatatgaaaaagcagcagtcaaagtcattgacttggatgactatgctgccgatgatgaccagtatgaagagaaattgaagaaggaaactttggcatttttctgtgttgctacttatggagatggagagcctactgacaatgctgccagattttacaaatggtttacggaggaaaatgaacgggatataaagcttcaacaactagcatatggtgtgtttgctcttggtaatcgccaatatgaacattttaataagatcgggatagttcttgatgaagagttatgtaagaaaggtgcaaagcgtcttattgaagtcggtctaggagatgatgatcagagcattgaggatgattttaatgcctggaaagaatcactatggtctgagctagacaagctcctcaaagacgaggatgataaaagtgtggcaactccttatacagctgttattcctgaataccgggtggtgactcatgatcctcggtttacaactcaaaaatcaatggaatcaaatgtggccaatggaaatactactattgacattcatcatccctgcagagttgatgttgctgtgcagaaggagcttcacacacatgaatctgatcggtcttgcattcatctcgagttcgacatatccaggacgggtattacatatgaaacaggtgaccatgtaggtgtatatgctgaaaatcatgttgaaatagttgaagaagctggaaaattgcttggccactctttagatttagtattttccatacatgctgacaaggaagatggctccccattggaaagcgcagtgccgcctcctttccctggtccatgcacacttgggactggtttggcaagatacgcagaccttttgaaccctcctcgaaagtctgcgttagttgccttggcggcctatgccactgaaccaagtgaagccgagaaacttaagcacctgacatcacctgatggaaaggatgagtactcacaatggattgttgcaagtcagagaagtcttttagaggtgatggctgcttttccatctgcaaaacccccactaggtgtattttttgctgcaatagctcctcgtctacaacctcgttactactccatctcatcctcgccaagattggcgccaagtagagttcatgttacatccgcactagtatatggtccaactcctactggtagaatccacaagggtgtgtgttctacgtggatgaagaatgcagttcctgcggagaaaagtcatgaatgtagtggagccccaatctttattcgagcatctaatttcaagttaccatccaacccttcaactccaatcgttatggtgggacctgggactgggctggcaccttttagaggttttctgcaggaaaggatggcactaaaagaagatggagaagaactaggttcatctttgctcttctttgggtgtagaaatcgacagatggactttatatacgaggatgagctcaataattttgttgatcaaggcgtaatatctgagctcatcatggcattctcccgtgaaggagctcagaaggagtatgttcaacataagatgatggagaaggcagcacaagtttgggatctaataaaggaagaaggatatctctatgtatgcggtgatgctaagggcatggcgagggacgtccaccgaactctacacaccattgttcaggagcaggaaggtgtgagttcgtcagaggcagaggctatagttaagaaacttcaaaccgaaggaagatacctcagagatgtctggtga (SEQ ID NO 16), actagagtctctatcttcttcggtacgcagactggaacagctgagggatttgctaaggcattatccgaagaaatcaaagcgagatatgaaaaagcagcagtcaaagtcattgacttggatgactatgctgccgatgatgaccagtatgaagagaaattgaagaaggaaactttggcatttttctgtgttgctacttatggagatggagagcctactgacaatgctgccagattttacaaatggtttacggaggaaaatgaacgggatataaagcttcaacaactagcatatggtgtgtttgctcttggtaatcgccaatatgaacattttaataagatcgggatagttcttgatgaagagttatgtaagaaaggtgcaaagcgtcttattgaagtcggtctaggagatgatgatcagagcattgaggatgattttaatgcctggaaagaatcactatggtctgagctagacaagctcctcaaagacgaggatgataaaagtgtggcaactccttatacagctgttattcctgaataccgggtggtgactcatgatcctcggtttacaactcaaaaatcaatggaatcaaatgtggccaatggaaatactactattgacattcatcatccctgcagagttgatgttgctgtgcagaaggagcttcacacacatgaatctgatcggtcttgcattcatctcgagttcgacatatccaggacgggtattacatatgaaacaggtgaccatgtaggtgtatatgctgaaaatcatgttgaaatagttgaagaagctggaaaattgcttggccactctttagatttagtattttccatacatgctgacaaggaagatggctccccattggaaagcgcagtgccgcctcctttccctggtccatgcacacttgggactggtttggcaagatacgcagaccttttgaaccctcctcgaaagtctgcgttagttgccttggcggcctatgccactgaaccaagtgaagccgagaaacttaagcacctgacatcacctgatggaaaggatgagtactcacaatggattgttgcaagtcagagaagtcttttagaggtgatggctgcttttccatctgcaaaacccccactaggtgtattttttgctgcaatagctcctcgtctacaacctcgttactactccatctcatcctcgccaagattggcgccaagtagagttcatgttacatccgcactagtatatggtccaactcctactggtagaatccacaagggtgtgtgttctacgtggatgaagaatgcagttcctgcggagaaaagtcatgaatgtagtggagccccaatctttattcgagcatctaatttcaagttaccatccaacccttcaactccaatcgttatggtgggacctgggactgggctggcaccttttagaggttttctgcaggaaaggatggcactaaaagaagatggagaagaactaggttcatctttgctcttctttgggtgtagaaatcgacagatggactttatatacgaggatgagctcaataattttgttgatcaaggcgtaatatctgagctcatcatggcattctcccgtgaaggagctcagaaggagtatgttcaacataagatgatggagaaggcagcacaagtttgggatctaataaaggaagaaggatatctctatgtatgcggtgatgctaagggcatggcgagggacgtccaccgaactctacacaccattgttcaggagcaggaaggtgtgagttcgtcagaggcagaggctatagttaagaaacttcaaaccgaaggaagatacctcagagatgtctgg (SEQ ID NO 17), de préférence de séquence SEQ ID NO 17. Dans le présent document, les termes "polynucléotide(s)", "oligonucléotide(s)", "acide(s) nucléique(s)", "acide(s) polynucléique(s)", ou tout équivalent grammatical tel qu'utilisé dans le présent document, font référence à une forme polymère de nucléotides ou d'acides nucléiques de toute longueur, qu'il s'agisse de ribonucléotides ou de désoxyribonucléotides. Ce terme se réfère uniquement à la structure primaire de la molécule. Ainsi, ce terme inclut l'ADN double et simple brin, l'ADN triplex, ainsi que l'ARN double et simple brin. Il inclut également les formes modifiées, par exemple par méthylation et/ou par coiffage, et non modifiées du polynucléotide. Le terme englobe également les molécules qui comprennent des nucléotides non naturels ou synthétiques ainsi que des analogues de nucléotides. Les séquences d'acide nucléique et les vecteurs divulgués ou envisagés ici peuvent être introduits dans une cellule par, par exemple, transfection, transformation ou transduction. Dans la présente, l'acide nucléique ou polynucléotide peut être produit et/ou obtenu par toute méthode adaptée connue de l'homme de l'art. Un autre objet de l'invention concerne un vecteur comprenant un acide nucléique codant pour une protéine de fusion selon l’invention. Il peut s’agir par exemple d’un vecteur comprenant un polynucléotide ou acide nucléique codant pour une protéine de fusion comprenant successivement (i) au moins un polypeptide d’adressage et d’ancrage à la membrane bactérienne, (ii) au moins un polypeptide comprenant le domaine hydrophile d’un cytochrome P450 de plante, (iii) au moins un polypeptide de liaison comprenant au moins 47 acides aminés, de préférence comprenant 51 acide aminés, et (iv) au moins un polypeptide comprenant le domaine hydrophile d’une NADPH P450 réductase de cytochrome P450 de plante. Dans la présente, le vecteur peut être tout vecteur connu de l'homme du métier adapté à l'expression d'un acide nucléique. Il peut s’agir par exemple de tout vecteur répliqué en faible nombre de copie dans les bactéries connu de l’homme du métier et/ou disponible dans le commerce. Il peut s’agir par exemple du vecteur décrit dans le document Rosano GL and Ceccarelli EA « Recombinant protein expression in Escherichia coli : advances and challenges. » Front. Microbiol. 2014, 5:172. doi: 10.3389/fmicb.2014.00172 [15], par exemple répliqués en un dizaine de copie par bactéries. Il peut s'agir par exemple de tout vecteur choisi parmi les vecteurs listés dans le catalogue https://blog.addgene.org/plasmid-101-origin-of-replication [4] ou https://www.qiagen.com/cn/resources/faq?id=1f42840e-fbd7-4734-b0cd-e17372a9e5a4&lang=en [5]. Il peut s'agir par exemple du vecteur d'expression décrit dans le document WO 83/004261 [7]. Le vecteur peut être tout plasmide adapté connu de l'homme du métier et/ou disponible dans le commerce. Il peut s'agir par exemple d'un plasmide choisi dans le groupe comprenant pACYC, pSC101, SuperCos, pWE15, pGEX, pColE1, pR-K, pAIDA1, de préférence pAIDA1. Il peut d’agir par exemple d’un plasmide modifié, par exemple du plasmide pAIDA1, comprenant un gène de résistance à la tétracycline et une cassette de clonage comprenant le promoteur T7 RNA polymérase et le terminateur T7 RNA polymérase . Il peut s’agir par exemple du plasmide pAIDA1 dans lequel le gène cmlA est remplacé par le gène de résistance à la tétracycline de séquence ttctcatgtttgacagcttatcatcgataagctttaatgcggtagtttatcacagttaaattgctaacgcagtcaggcaccgtgtatgaaatctaacaatgcgctcatcgtcatcctcggcaccgtcaccctggatgctgtaggcataggcttggttatgccggtactgccgggcctcttgcgggatatcgtccattccgacagcatcgccagtcactatggcgtgctgctagcgctatatgcgttgatgcaatttctatgcgcacccgttctcggagcactgtccgaccgctttggccgccgcccagtcctgctcgcttcgctacttggagccactatcgactacgcgatcatggcgaccacacccgtcctgtggatcctctacgccggacgcatcgtggccggcatcaccggcgccacaggtgcggttgctggcgcctatatcgccgacatcaccgatggggaagatcgggctcgccacttcgggctcatgagcgcttgtttcggcgtgggtatggtggcaggccccgtggccgggggactgttgggcgccatctccttgcatgcaccattccttgcggcggcggtgctcaacggcctcaacctactactgggctgcttcctaatgcaggagtcgcataagggagagcgtcgaccgatgcccttgagagccttcaacccagtcagctccttccggtgggcgcggggcatgactatcgtcgccgcacttatgactgtcttctttatcatgcaactcgtaggacaggtgccggcagcgctctgggtcattttcggcgaggaccgctttcgctggagcgcgacgatgatcggcctgtcgcttgcggtattcggaatcttgcacgccctcgctcaagccttcgtcactggtcccgccaccaaacgtttcggcgagaagcaggccattatcgccggcatggcggccgacgcgctgggctacgtcttgctggcgttcgcgacgcgaggctggatggccttccccattatgattcttctcgcttccggcggcatcgggatgcccgcgttgcaggccatgctgtccaggcaggtagatgacgaccatcagggacagcttcaaggatcgctcgcggctcttaccagcctaacttcgatcattggaccgctgatcgtcacggcgatttatgccgcctcggcgagcacatggaacgggttggcatggattgtaggcgccgccctataccttgtctgcctccccgcgttgcgtcgcggtgcatggagccgggccacctcgacctgaatggaagccggcggcacctcgctaacggattcaccactccaagaattggagccaatcaattcttgcggagaactgtgaatgcgcaaaccaacccttggcagaacatatccatcgcgtccgccatctccagcagccgcacgcggcgcatctcgggcagcgt (SEQ ID NO 18) et dans lequel la cassette AIDA taatacgactcactataggggaattgtgagcggataacaattcccctctagaaataattttgtttaactttaagaaggagatataccatgggcaataaggcctacagtatcatttggagccactccagacaggcctggattgtggcctcagagttagccagaggacatggttttgtccttgcaaaaaatacactgctggtattggcggttgtttccacaatcggaaatgcatttgcagtcgaccaccatcaccatcaccatctggaagcgctgttccagggtccgggtacccagaaacagcgtaccgagctcgaaaacctgtacttccagggtgaacagaaactgattagcgaagaagatctgtctagagtgaataacaatggaagcattgtcattaataacagcattataaacgggaatattacgaatgatgctgacttaagttttggtacagcaaagctgctctctgctacagtgaatggtagtcttgttaataacaaaaatatcattcttaatcctacaaaagaaagtgcggccgctataggtaatactcttaccgtgtcaaattatactgggacaccgggaagtgttatttctcttggtggtgtgcttgaaggagataattcacttacggaccgtctggtggtgaaaggtaatacctctggtcaaagtgacatcgtttatgtcaatgaagatggcagtggtggtcagacgagagatggtattaatattatttctgtagagggaaattctgatgcagaattctctctgaagaaccgcgtagttgccggagcttatgattacacactgcagaaaggaaacgagagtgggacagataataagggatggtatttaaccagtcatcttcccacatctgatacccggcaatacagaccggagaacggaagttatgctaccaatatggcactggctaactcactgttcctcatggatttgaatgagcgtaagcaattcagggccatgagtgataatacacagcctgagtctgcatccgtgtggatgaagatcactggaggaataagctctggtaagctgaatgacgggcaaaataaaacaacaaccaatcagtttatcaatcagctcgggggggatatttataaattccatgctgaacaactgggtgattttaccttagggattatgggaggatacgcgaatgcaaaaggtaaaacgataaattacacgagcaacaaagctgccagaaacacactggatggttattctgtcggggtatacggtacgtggtatcagaatggggaaaatgcaacagggctctttgctgaaacttggatgcaatataactggtttaatgcatcagtgaaaggtgacggactggaagaagaaaaatataatctgaatggtttaaccgcttctgcaggtgggggatataacctgaatgtgcacacatggacatcacctgaaggaataacaggtgaattctggttacagcctcatttgcaggctgtctggatgggggttacaccggatacacatcaggaggataacggaacggtggtgcagggagcagggaaaaataatattcagacaaaagcaggtattcgtgcatcctggaaggtgaaaagcaccctggataaggataccgggcggaggttccgtccgtatatagaggcaaactggatccataacactcatgaatttggtgttaaaatgagtgatgacagccagttgttgtcaggtagccgaaatcagggagagataaagacaggtattgaaggggtgattactcaaaacttgtcagtgaatggcggagtcgcatatcaggcaggaggtcacgggagcaatgccatctccggagcactggggataaaatacagcttctgataatgacagatccggctgctaacaaagcccgaaaggaagctgagttggctgctgccaccgctgagcaataactagcataaccccttggggcctctaaacgggtcttgaggggttttttg (SEQ ID NO 44) est remplacée par une cassette de clonage comprenant la séquence promotrice taatacgactcactata (SEQ ID NO 19) et la séquence terminatrice tagcataaccccttggggcctctaaacgggtcttgaggggttttttg (SEQ ID NO 20) du gène de la T7 RNA ploymérase. Le vecteur peut être tout chromosome artificiel de levure adapté connu de l'homme de l'art. Il peut s'agir, par exemple, d'un Chromosome Artificiel de la Levure choisi dans le groupe comprenant pYAC-RC, pYAC3(+). Le vecteur peut être tout chromosome artificiel bactérien adapté connu de l'homme de l'art. Il peut s'agir par exemple d'un chromosome artificiel bactérien choisi dans le groupe comprenant pUvBBAC, pCC1BAC, pBAC 108L. Le vecteur d’expression d’une protéine de fusion selon l’invention peut comprendre les éléments suivants liés de manière fonctionnelle : a) un promoteur b) une séquence codant pour une protéine de fusion selon l’invention c) des signaux de terminaison de la transcription. Dans la présente, par « promoteur », on entend une séquence ADN agissant en cis localisée en 5’ du site d’initiation de la transcription de la séquence codant pour un polypeptide à laquelle une séquence ADN d’une ARN polymérase peut se lier et initier une transcription correcte, et comprenant éventuellement des activateurs. Il peut s’agir par exemple de tout promoteur adapté connu de l’homme du métier. Il peut s’agir par exemple d’un promoteur constitutif, d’un promoteur viral, d’un promoteur bactérien. Il peut s’agir par exemple du promoteur T7, le promoteur T7 de bactériophage, de préférence le promoteur T7. Dans la présente, par « signaux de terminaison de la transcription », on entend une séquence ADN adaptée pour la terminaison de la transcription. Il peut s’agir de tout signal de terminaison de la transcription connu de l’homme du métier. Il peut s’agir par exemple du terminateur T7 de séquence tagcataaccccttggggcctctaaacgggtcttgaggggttttttg (SEQ ID NO 20), Le vecteur peut être choisi en fonction de la cellule hôte sélectionnée. L'homme de l'art, compte tenu de ses connaissances techniques, adaptera le vecteur en fonction de la cellule hôte. La cellule hôte peut être toute cellule appropriée pour l'expression d’un acide nucléique ou d’un vecteur selon l'invention. Il peut s'agir, par exemple, de bactérie, par exemple de bactéries gram négatives ou de bactéries gram positives. Il peut s’agir par exemple Escherichia coli , Pischia pastoris , Saccharomyces cerevisiae . De préférence, la cellule hôte est Escherichia coli, de manière encore plus préférée, la cellule hôte peut être la souche bactérienne Escherichia coli BL21 (DE3) pLysE . Avantageusement, les inventeurs ont démontré que l’expression de la protéine de fusion dans des cellules hôtes, par exemple des cellules bactériennes, permet avantageusement une production de la protéine de fusion et une localisation à la surface de la membrane de la cellule hôte. Par exemple, lorsque la cellule hôte est une bactérie gram négative, l’expression de la protéine de fusion permet avantageusement une production de la protéine de fusion et une localisation à la surface de la membrane externe de la bactérie. En d’autres termes, les inventeurs ont démontré que l’expression de la protéine de fusion dans des cellules hôtes permet avantageusement une production de la protéine de fusion, une localisation à la surface de la cellule hôte et avantageusement un ancrage de la protéine de fusion à la cellule hôte via sa membrane. La présente invention a également pour objet une cellule hôte comprenant un acide nucléique selon l’invention et/ou un vecteur selon l’invention. La cellule hôte peut être tel que définie ci-dessus. De préférence la cellule hôte est une cellule bactérienne, par exemple une bactérie gram négative ou une bactérie gram positive, de préférence Escherichia coli , de manière encore plus préférée, la cellule hôte peut être la souche bactérienne Escherichia coli (BL21 (DE3) pLysE) . La présente invention a également pour objet, un procédé de production d’une protéine de fusion selon l’invention comprenant la culture d’une cellule hôte selon l’invention dans des conditions appropriées pour l’expression de la protéine de fusion. La culture de la cellule hôte selon l’invention peut être réalisée dans tout milieu de culture adapté connu de l’homme du métier. Il peut s’agir par exemple de tout milieu riche de culture adapté connu de l’homme du métier. L’homme du métier de par ces connaissances générales adaptera et/ou choisira le milieu de culture en fonction de la cellule hôte. Par exemple, lorsque la cellules hôte est une cellule bactérienne, le milieu de culture peut être un milieu SOC, un milieu bouillon lysogène (en anglais LB « lysogeny broth »), de préférence un milieu SOC. La culture de la cellule hôte selon l’invention peut être réalisée à toute température adaptée à la cellule hôte connue de l’homme du métier. Par exemple la culture peut être réalisée à une température comprise de 20 à 30°C, par exemple à une température de 26°C. Le temps de culture peut être tout temps adapté à la cellule hôte connu de l’homme du métier. Par exemple Le temps de culture de la cellule hôte selon l’invention peut être compris de 24 à 72 heures, par exemple 53 heures. Avantageusement, les inventeurs ont démontré que la protéine de fusion selon l’invention est présente à la surface de la cellule hôte dans laquelle elle est exprimée et est une protéine fonctionnelle. En particulier, les inventeurs ont démontré de manière surprenante que la protéine de fusion présentait une activité biologique, en particulier une activité enzymatique du cytochrome P450 de plante et une activité réductase de la NADPH P450 réductase de cytochrome P450 de plante. En d’autres termes, la protéine de fusion possède avantageusement de manière simultanée l’activité biologique du cytochrome P450 de plante et de la NADPH P450 réductase de cytochrome P450 de plante. Les inventeurs ont également démontré de manière surprenante et inattendue que la protéine de fusion selon l’invention étant une protéine fonctionnelle et présentant l’activité biologique du cytochrome P450 de plante et une activité réductase de la NADPH P450 réductase de cytochrome P450 de plante permet une bioconversion de substrats présents dans le milieu de culture. La présente invention a également pour objet un procédé de bioconversion d’un substrat par une protéine de fusion selon l’invention comprenant les étapes : - introduction dans un milieu de culture comprenant d’une cellule hôte selon l’invention, du substrat, - incubation dudit milieu de culture pendant un temps suffisant pour la bioconversion dudit substrat par ladite protéine de fusion, et - optionnellement récupération des métabolites résultant de la bioconversion dudit substrat. Le milieu de culture est tel que défini ci-dessus. La cellule hôte est telle que définie ci-dessus. Dans la présente, le substrat peut être tout substrat adapté connu de l’homme du métier. Il peut s’agir par exemple d’un composé ou substrat, par exemple naturel ou obtenu par synthèse ou hémi-synthèse chimique. Il peut s’agir par exemple connu de tout composé ou substrat, par exemple naturel ou obtenu par synthèse ou hémi-synthèse chimique, connu de l’homme du métier. Il peut s’agir par exemple de l’acide cinnamique, de la déméthylsubérosine. ll peut s’agir également de tout nouveau composé dont on cherche à mettre en évidence qu’il est un substrat d’un cytochrome P450 de plante. Dans la présente, la concentration du substrat dans le milieu de culture comprenant d’une cellule hôte peut être compris de 100 µM à 250 µM, par exemple égale à 200 µM. Dans la présente, le procédé de bioconversion peut comprendre en outre et préalablement à l’étape d’incubation, une étape d’introduction de nicotinamide adénine dinucléotide phosphate (NADPH) dans le milieu de culture. Dans la présente, la concentration de nicotinamide adénine dinucléotide phosphate (NADPH) dans le milieu de culture comprenant d’une cellule hôte peut être compris de 200 µM à 450 µM, par exemple égale à 400 µM. L’étape d’incubation de la cellule hôte selon l’invention peut être réalisée à toute température adaptée à la cellule hôte connue de l’homme du métier. Par exemple l’incubation peut être réalisée à une température comprise de 15 à 30°C, par exemple à une température de 20°C. Le temps d’incubation peut être tout temps adapté à la cellule hôte connu de l’homme du métier. Par exemple Le temps d’incubation de la cellule hôte selon l’invention peut être compris de 30 minutes à 72 heures, par exemple 1 heure. Dans la présente, la récupération des métabolites peut être réalisée par tout procédé adapté connu de l’homme du métier. Il peut s’agir par exemple d’une technique choisie parmi, une ultrafiltration, une filtration sur membrane ou sur gel, un échange d’ions, une élution sur hydroxyapatite, une séparation par interactions hydrophobes, par chromatographie, par exemple par chromatographie liquide ou tout autre moyen connu. Dans la présente, les métabolites obtenus peuvent être tout métabolite de plante. Il peut s’agir par exemple de métabolites appartenant à la famille des polyphénols, des alcaloïdes et/ou des terpènes. Il peut s’agir avantageusement de métabolites appartenant à la famille des polyphénols. Les métabolites obtenus peuvent donner accès à de nouveaux produits qui peuvent être des actifs alimentaires, cosmétiques, pharmaceutiques et parapharmaceutiques utilisables dans les domaines agroalimentaires, cosmétiques, pharmaceutiques et parapharmaceutiques. Ces nouveaux produits peuvent également être des produits actifs ou non actifs mais présentant une neutralité et/ou stabilité qui est très intéressante pour une utilisation dans chacun de ces domaines. D’autres avantages apparaîtront encore à la lumière des exemples qui suivent, donnés à titre illustratif et non limitatif, en référence aux figures annexées. Brève description des figures représente un schéma de la protéine de fusion comprenant successivement un polypeptide d’adressage et d’ancrage à la membrane externe (C), un polypeptide comprenant le domaine hydrophile d’un cytochrome P450 de plante (B), un polypeptide de liaison comprenant au moins 47 acides aminés (L) et un polypeptide comprenant le domaine hydrophile d’une NADPH P450 réductase de cytochrome P450 de plante (A), M correspond à la membrane bactérienne. représente une représentation schématique du plasmide pAIDA1-TetR-laclQ. représente une représentation schématique du plasmide pAIDA1-T7. représente une représentation schématique du plasmide pAIDA1-T7 représente une représentation schématique du plasmide pAIDA1-T7-CYP73A1-ATR1. représente un schéma de différents éléments d’un exemple de protéine de fusion selon l’invention. Sur la figure AIDA1-tonneau-bêta AIDA1- β1 et AIDA1 linker représentent respectivement un polypeptide d’adressage et d’ancrage à la membrane externe, un polypeptide de liaison, P450 73A1 un polypeptide comprenant le domaine hydrophile d’un cytochrome P450 de plante (P450 CYP73A1), lieur (« linker » en anglais) flexible : un polypeptide de liaison et ATR1 :P450 Reductase un polypeptide comprenant le domaine hydrophile d’une NADPH P450 réductase de cytochrome P450 de plante. représente des chromatogrammes correspondants à l’analyse réalisée par chromatographie liquide haute performance (HPLC) de milieu de culture issue d’une d’expérimentation de bioconversion en présence d’acide cinnamique. L’abscisse correspond au temps d’élution en minute et l’ordonné correspond à des unités arbitraires et permet de voir l’efficacité de la métabolisation. La figure 7A représente un diagramme concernant la métabolisation d’acide cinnamique par bioconversion, sur cette figure la figure 7A représente les chromatogrammes obtenus après culture de la souche E. Coli BL21 (DE3) pLysE transformée avec le plasmide pAIDA1-T7-CYP73A1-ATR1 et la figure 7B représente le diagramme après culture de la souche E. Coli BL21 (DE3) pLysE transformé avec le plasmide pAIDA1-T7 dans la . Dans la figure 7A on constate l’apparition d’acide para-coumarique qui est le produit de métabolisation de l’acide cinnamique. Dans la figure 7B, l’acide cinnamique n’est pas métabolisé. représente un alignement de séquences peptidiques réalisés avec l’outil de recherche d'alignement local de base (BLAST également désigné en anglais « Basic Local Alignment Search Tool »). Les séquences correspondent aux cytochromes P450 CYP76F112 et P450 CYP73A1 représente la réaction chimique correspondant la transformation de l’acide cinnamique en acide para-coumarique par le cytochrome P450 CYP73A1 (CYP73A1) et la réaction chimique correspondant la transformation de la déméthylsubérosine en Marmesine par le cytochrome P450 CYP76F112 (CYP76F112). EXEMPLES Exemple 1 : procédé de préparation d’une protéine de fusion et procédé de biotransformation utilisant ladite protéine 1) Construction d’un plasmide d’expression générique pAIDA-T7 La base du plasmide d’expression construit repose sur un plasmide commercial pAIDA1 (https://www.addgene.org/79180/ [11]) qui est un plasmide à faible nombre de copie (« low copy » en anglais). Remplacement du gène de sélection Le plasmide pAIDA1 a été d’abord modifié en remplaçant le gène conférant la résistance au chloramphénicol par un gène conférent la résistance à la Tétracycline cloné à partir du plasmide pBR322 commercialisé par la société Fisher Scientific (https://www.fishersci.fr/shop/products/fermentas-pbr322-dna/10191220 [11]). Pour cela, le plasmide pAIDA1 était la matrice qui a été amplifiée par réaction de polymérisation en chaîne (PCR) en utilisant l’enzyme PrimeSTAR Max polymérase commercialisé par la société Takara Bio Inc, selon le procédé Protocole 1 : PrimeSTAR Max polymérase Protocole tel que décrit dans (https://www.takarabio.com/documents/User%20Manual/R045A_e.v2102Da.pdf [6]). L’amplification a été réalisée en utilisant les amorces LAEWXpr17-lacIQ (tggcgacaccatcgaatggtgc (SEQ ID NO : 21) et LAEWXpr02: Reverse: tttagcttccttagctcctg (SEQ ID NO : 22). Cette amplification a permis de copier le plasmide dans sa globalité à l’exception du gène de résistance au chloramphénicol. Le même procédé a été mis en œuvre et a permis d’amplifier la séquence codant du gène de résistance à la Tétracycline. L’amplification a été faite cette fois à partir du plasmide pBR322 en utilisant les amorces LAEWXpr03 (gctaaggaagctaaaatgaaatctaacaatgcgct (SEQ ID NO 41)) et LAEWXpr04 (tcgatggtgtcgccacgctgcccgagatgc (SEQ ID NO 42)). Les deux produits de PCR obtenus, à savoir le plasmide pAIDA1 sans le gène de résistance au chloramphénicol et la séquence codante du gène de résistance à la tétracycline ont été fusionnés en utilisant le kit In-Fusion commercialisé par la société Takara Bio Inc selon le procédé Protocole 2 : In-Fusion Protocole décrit dans le document https://www.takarabio.com/documents/User%20Manual/In/In-Fusion%20Snap%20Assembly%20User%20Manual_071320.pdf [16]. Le plasmide recombinant obtenu a été introduit dans des bactéries Escherichia coli TOP10 chimiocompétentes commercialisées par la société Life Technologies Corporation selon le protocole de transformation TOP10 décrit dans https://assets.thermofisher.com/TFS-Assets/LSG/manuals/oneshottop10_man.pdf [17]). Les bactéries transformées ont été étalées sur un milieu de culture LB (bouillon lysogène) (10g peptone, 5g extrait de levure, 5g NaCl) contenant de la tétracycline. L’insertion du gène codant pour la résistance à la tétracycline a été vérifiée par PCR en utilisant les amorces LAEWXpr17 (SEQ ID NO 21) et LAEWXpr02 (SEQ ID NO 22). Le plasmide pAIDA1-TetR-lacI Q , représenté sur la , recombinant ainsi construit a été utilisé pour la construction des autres plasmides. Pour simplifier la nomenclature, le plasmide est également désigné pAIDA1. Ce plasmide a été amplifié et purifié à partir d’une colonie positive selon le procédé Protocole 3 : le plasmide purification protocole décrit dans le document https://www.mn-net.com/media/pdf/45/51/02/Instruction-NucleoSpin-Plasmid.pdf [18]. a) Promoteur et terminateur Le promoteur et le terminateur de la cassette AIDA du plasmide pAIDA1 ont été remplacés par deux cassettes de clonage disposant du promoteur et du terminateur de la T7 RNA Polymérase. Pour réaliser cette étape, différents clonages ont été réalisés (i) pAIDA1 a été amplifié par PCR en utilisant les amorces LAEWXpr30 (tcatcatcatgcctaatgagtgagaattcc (SEQ ID NO 23)) et LAEWXpr31 (ttggtgcgcaaactattaactgg (SEQ ID NO 24)). Cette étape d’amplification s’inclue par le fragment d’ADN contenu entre le promoteur pAIDA1 et le terminateur de pAIDA1. Le produit d’amplification correspondait donc au plasmide sans promoteur et terminateur (ii) En parallèle, le terminateur T7 a été amplifié par PCR à partir du plasmide pET28b-2 en utilisant les amorces LAEWXpr32-1-fr (ctcattaggcatgatgatgaaaggaagggaagaaagcgaaagg (SEQ ID NO 25)) et LAEWXpr32-2-rv (agtactcctaggactagtggtaccagatccggctgctaacaaagc (SEQ ID NO 26)). Enfin le promoteur T7 a été amplifié par PCR à partir du plasmide pET28b-2 en utilisant les amorces LAEWXpr33-1-rv (gttaatagtttgcgcaccaaatcggtgatgtcggcgatatagg (SEQ ID NO 27)) et LAEWXpr33-2-fr (ggtaccactagtcctaggagtactatggctgctgcccatggtata (SEQ ID NO 28)) selon le Protocole 1 tel que mentionné ci-dessus. (iii) Les trois fragments ont été fusionnés à l’aide du kit In-Fusion selon le Protocole 2 tel que mentionné ci-dessus. Ce produit de ligation a permis de générer le plasmide pAIDA1-T7 représenté sur la . b) Insertion de la cassette AIDA1 La séquence AIDA du plasmide pAIDA1 original a été amplifié par PCR en utilisant les amorces LAEWXpr36-AIDA-fr (aactttaagaaggagatataccatgggcaataaggcctacagtatcatttgg (SEQ ID NO 29)) et LAEWXpr37-AIDA-rv (tttgttagcagccggatctgtcattatcagaagctgtattttatc (SEQ ID NO 30)) selon le Protocole 1 tel que mentionné ci-dessus. En parallèle, le plasmide pAIDA1-T7 a été digéré par les enzymes de restriction Nco I et Kpn I selon le procédé Protocole 4 : protocole de digestion tel que décrit dans http://assets.thermofisher.com/TFS-Assets/BID/Reference-Materials/fastdigest-restriction-enzymes-labaid.pdf [19]. Le plasmide pAIDA1-T7- Nco I- Kpn I linéarisé et l’amplicon AIDA1 ont été fusionnés par In-Fusion selon le Protocole 2 mentionné ci-dessus. Le plasmide recombinant générique pAIDA1-T7 complet avec AIDA1 a été amplifié par transformation de bactéries. Le plasmide générique pAIDA1-T7 complet avec AIDA1 obtenu est représenté sur la . 2) Construction de plasmide recombinant pour l’expression d’une protéine de fusion P450-ATR Le plasmide pAIDA1-T7 a été digéré par les enzymes de restriction Kpn I and Sac I selon le Protocole 4 tel que mentionné ci-dessus. La séquence codant pour la partie extra-membranaire de la NADPH P450 réductase 1 d’ Arabidopsis thaliana (ATR1) telle que décrite dans Urban et al, (1997) J Biol Chem 272(31):19176-86 [20]) a été amplifiée par PCR à partir d’un plasmide (pCR8_ATR1) en utilisant les amorces LAEWXpr05 Forward (agcgctgttccagggtccgggtaccactagagtctctatcttc (SEQ ID NO 31)) et LAEWXpr06 Reverse (ccgccaccagaaccgcccggccagacatctctgaggtatc (SEQ ID NO 32)) selon le Protocole 1 tel que mentionné ci-dessus). Le lieur (en anglais « linker ») (riche en paire GC) a été amplifié à partir d’une séquence synthétique en utilisant l’enzyme PrimeSTAR GXL DNA Polymérase commercialisé par la société Takara Bio Inc en utilisant les amorces LAEWX15-FlexL-fr (ccgggcggttctggtggcgg (SEQ ID NO 33)) et LAEWX16-FlexL-rvs (cggagaaccgccgctaccgc (SEQ ID NO 34)) selon le procédé Protocole 5 décrit dans PrimeSTAR GXL DNA Polymérase Manual, https://www.takara.co.kr/file/manual/pdf/R050A_e.v1906Da.pdf [21]). La séquence d’ADN codant pour la partie extra-membranaire du P450, CYP73A1 (Urban et al, (1997) J Biol Chem 272(31):19176-86 [20]) a été amplifié par PCR à partir d’un plasmide pYeDP60-CYP73A1 en utilisant les amorces LAEWXpr07 Forward (gcggtagcggcggttctccgcctggcccaatcccggttcc (SEQ ID NO 35)) et LAEWXpr08 Reverse (gaagtacaggttttcgagctcaaatgacctaggtttagc (SEQ ID NO 36)) selon le Protocole 1 mentionné ci-dessus. Les 4 fragments d’ADN générés par amplification PCR, à savoir SEQ ID NO 17, SEQ ID NO 15, SEQ ID NO 11 et le plasmide pAIDA1-T7 a été digéré par les enzymes de restriction Kpn I and Sac I selon le Protocole 4 tel que mentionné ci-dessus. La séquence du plasmide digérée obtenu correspond à la séquence : aaggaagggaagaaagcgaaaggagcgggcgctagggcgctggcaagtgtagcggtcacgctgcgcgtaaccaccacacccgccgcgcttaatgcgccgctacagggcgcgtcccattcgccaatccggatatagttcctcctttcagcaaaaaacccctcaagacccgtttagaggccccaaggggttatgctagttattgctcagcggtggcagcagccaactcagcttcctttcgggctttgttagcagccggatctgtcattatcagaagctgtattttatccccagtgctccggagatggcattgctcccgtgacctcctgcctgatatgcgactccgccattcactgacaagttttgagtaatcaccccttcaatacctgtctttatctctccctgatttcggctacctgacaacaactggctgtcatcactcattttaacaccaaattcatgagtgttatggatccagtttgcctctatatacggacggaacctccgcccggtatccttatccagggtgcttttcaccttccaggatgcacgaatacctgcttttgtctgaatattatttttccctgctccctgcaccaccgttccgttatcctcctgatgtgtatccggtgtaacccccatccagacagcctgcaaatgaggctgtaaccagaattcacctgttattccttcaggtgatgtccatgtgtgcacattcaggttatatcccccacctgcagaagcggttaaaccattcagattatatttttcttcttccagtccgtcacctttcactgatgcattaaaccagttatattgcatccaagtttcagcaaagagccctgttgcattttccccattctgataccacgtaccgtataccccgacagaataaccatccagtgtgtttctggcagctttgttgctcgtgtaatttatcgttttaccttttgcattcgcgtatcctcccataatccctaaggtaaaatcacccagttgttcagcatggaatttataaatatcccccccgagctgattgataaactgattggttgttgttttattttgcccgtcattcagcttaccagagcttattcctccagtgatcttcatccacacggatgcagactcaggctgtgtattatcactcatggccctgaattgcttacgctcattcaaatccatgaggaacagtgagttagccagtgccatattggtagcataacttccgttctccggtctgtattgccgggtatcagatgtgggaagatgactggttaaataccatcccttattatctgtcccactctcgtttcctttctgcagtgtgtaatcataagctccggcaactacgcggttcttcagagagaattctgcatcagaatttccctctacagaaataatattaataccatctctcgtctgaccaccactgccatcttcattgacataaacgatgtcactttgaccagaggtattacctttcaccaccagacggtccgtaagtgaattatctccttcaagcacaccaccaagagaaataacacttcccggtgtcccagtataatttgacacggtaagagtattacctatagcggccgcactttcttttgtaggattaagaatgatatttttgttattaacaagactaccattcactgtagcagagagcagctttgctgtaccaaaacttaagtcagcatcattcgtaatattcccgtttataatgctgttattaatgacaatgcttccattgttattcactctagacagatcttcttcgctaatcagtttctgttcaccctggaagtacaggttttcgagctccggaccctggaacagcgcttccagatggtgatggtgatggtggtcgactgcaaatgcatttccgattgtggaaacaaccgccaataccagcagtgtattttttgcaaggacaaaaccatgtcctctggctaactctgaggccacaatccaggcctgtctggagtggctccaaatgatactgtaggccttattgcccatggtatatctccttcttaaagttaaacaaaattatttctagaggggaattgttatccgctcacaattcccctatagtgagtcgtattaatttcgcgggatcgagatctcgatcctctacgccggacgcatcgtggccggcatcaccggcgccacaggtgcggttgctggcgcctatatcgccgacatcaccgatttggtgcgcaaactattaactggcgaactacttactctagcttcccggcaacaattaatagactggatggaggcggataaagttgcaggaccacttctgcgctcggcccttccggctggctggtttattgctgataaatctggagccggtgagcgtgggtctcgcggtatcattgcagcactggggccagatggtaagccctcccgtatcgtagttatctacacgacggggagtcaggcaactatggatgaacgaaatagacagatcgctgagataggtgcctcactgattaagcattggtaactgtcagaccaagtttactcatatatactttagattgatttaaaacttcatttttaatttaaaaggatctaggtgaagatcctttttgataatctcatgaccaaaatcccttaacgtgagttttcgttccactgagcgtcagaccccttaataagatgatcttcttgagatcgttttggtctgcgcgtaatctcttgctctgaaaacgaaaaaaccgccttgcagggcggtttttcgaaggttctctgagctaccaactctttgaaccgaggtaactggcttggaggagcgcagtcaccaaaacttgtcctttcagtttagccttaaccggcgcatgacttcaagactaactcctctaaatcaattaccagtggctgctgccagtggtgcttttgcatgtctttccgggttggactcaagacgatagttaccggataaggcgcagcggtcggactgaacggggggttcgtgcatacagtccagcttggagcgaactgcctacccggaactgagtgtcaggcgtggaatgagacaaacgcggccataacagcggaatgacaccggtaaaccgaaaggcaggaacaggagagcgcacgagggagccgccagggggaaacgcctggtatctttatagtcctgtcgggtttcgccaccactgatttgagcgtcagatttcgtgatgcttgtcaggggggcggagcctatggaaaaacggctttgccgcggccctctcacttccctgttaagtatcttcctggcatcttccaggaaatctccgccccgttcgtaagccatttccgctcgccgcagtcgaacgaccgagcgtagcgagtcagtgagcgaggaagcggaatatatcctgtatcacatattctgctgacgcaccggtgcagccttttttctcctgccacatgaagcacttcactgacaccctcatcagtgccaacatagtaagccagtatacactccgctagcgctgaggtctgcctcgtgaagaaggtgttgctgactcataccaggcctgaatcgccccatcatccagccagaaagtgagggagccacggttgatgagagctttgttgtaggtggaccagttggtgattttgaacttttgctttgccacggaacggtctgcgttgtcgggaagatgcgtgatctgatccttcaactcagcaaaagttcgatttattcaacaaagccacgttgtgtctcaaaatctctgatgttacattgcacaagataaaaatatatcatcatgaacaataaaactgtctgcttacataaacagtaatacaaggggtgttatgagccatattcaacgggaaacgtcttgctcgagtatccgctcatgagattatcaaaaaggatcttcacctagatccttttgtaagttctcatgtttgacagcttatcatcgataagctttaatgcggtagtttatcacagttaaattgctaacgcagtcaggcaccgtgtatgaaatctaacaatgcgctcatcgtcatcctcggcaccgtcaccctggatgctgtaggcataggcttggttatgccggtactgccgggcctcttgcgggatatcgtccattccgacagcatcgccagtcactatggcgtgctgctagcgctatatgcgttgatgcaatttctatgcgcacccgttctcggagcactgtccgaccgctttggccgccgcccagtcctgctcgcttcgctacttggagccactatcgactacgcgatcatggcgaccacacccgtcctgtggatcctctacgccggacgcatcgtggccggcatcaccggcgccacaggtgcggttgctggcgcctatatcgccgacatcaccgatggggaagatcgggctcgccacttcgggctcatgagcgcttgtttcggcgtgggtatggtggcaggccccgtggccgggggactgttgggcgccatctccttgcatgcaccattccttgcggcggcggtgctcaacggcctcaacctactactgggctgcttcctaatgcaggagtcgcataagggagagcgtcgaccgatgcccttgagagccttcaacccagtcagctccttccggtgggcgcggggcatgactatcgtcgccgcacttatgactgtcttctttatcatgcaactcgtaggacaggtgccggcagcgctctgggtcattttcggcgaggaccgctttcgctggagcgcgacgatgatcggcctgtcgcttgcggtattcggaatcttgcacgccctcgctcaagccttcgtcactggtcccgccaccaaacgtttcggcgagaagcaggccattatcgccggcatggcggccgacgcgctgggctacgtcttgctggcgttcgcgacgcgaggctggatggccttccccattatgattcttctcgcttccggcggcatcgggatgcccgcgttgcaggccatgctgtccaggcaggtagatgacgaccatcagggacagcttcaaggatcgctcgcggctcttaccagcctaacttcgatcattggaccgctgatcgtcacggcgatttatgccgcctcggcgagcacatggaacgggttggcatggattgtaggcgccgccctataccttgtctgcctccccgcgttgcgtcgcggtgcatggagccgggccacctcgacctgaatggaagccggcggcacctcgctaacggattcaccactccaagaattggagccaatcaattcttgcggagaactgtgaatgcgcaaaccaacccttggcagaacatatccatcgcgtccgccatctccagcagccgcacgcggcgcatctcgggcagcgtggcgacaccatcgaatggtgcaaaacctttcgcggtatggcatgatagcgcccggaagagagtcaattcagggtggtgaatgtgaaaccagtaacgttatacgatgtcgcagagtatgccggtgtctcttatcagaccgtttcccgcgtggtgaaccaggccagccacgtttctgcgaaaacgcgggaaaaagtggaagcggcgatggcggagctgaattacattcccaaccgcgtggcacaacaactggcgggcaaacagtcgttgctgattggcgttgccacctccagtctggccctgcacgcgccgtcgcaaattgtcgcggcgattaaatctcgcgccgatcaactgggtgccagcgtggtggtgtcgatggtagaacgaagcggcgtcgaagcctgtaaagcggcggtgcacaatcttctcgcgcaacgcgtcagtgggctgatcattaactatccgctggatgaccaggatgccattgctgtggaagctgcctgcactaatgttccggcgttatttcttgatgtctctgaccagacacccatcaacagtattattttctcccatgaagacggtacgcgactgggcgtggagcatctggtcgcattgggtcaccagcaaatcgcgctgttagcgggcccattaagttctgtctcggcgcgtctgcgtctggctggctggcataaatatctcactcgcaatcaaattcagccgatagcggaacgggaaggcgactggagtgccatgtccggttttcaacaaaccatgcaaatgctgaatgagggcatcgttcccactgcgatgctggttgccaacgatcagatggcgctgggcgcaatgcgcgccattaccgagtccgggctgcgcgttggtgcggatatctcggtagtgggatacgacgataccgaagacagctcatgttatatcccgccgttaaccaccatcaaacaggattttcgcctgctggggcaaaccagcgtggaccgcttgctgcaactctctcagggccaggcggtgaagggcaatcagctgttgcccgtctcactggtgaaaagaaaaaccaccctggcgcccaatacgcaaaccgcctctccccgcgcgttggccgattcattaatgcagctggcacgacaggtttcccgactggaaagcgggcaagtgagtggataaccgtattaccgcctttgagtgagctgataccgggaattctcactcattaggcatgatgatga (SEQ ID NO 43) . Ensuite, les séquences SEQ ID NO 17, SEQ ID NO 15, SEQ ID NO 11 ont été fusionnés par In-Fusion selon le protocole Protocole 2 mentionné ci-dessus. Le produit de ligation a été introduit dans des bactéries E. coli et directement mis en culture sans passer par une phase de sélection sur milieu sélectif. La présence des éléments constitutifs du plasmide a été vérifiée par des PCR en utilisant les amorces LAEWXpr35-amont-T7 (tccatccagtctattaattgttgc (SEQ ID NO 37)), LAEWXpr22- ATR1-rv (ccagacatctctgaggtatcttcc (SEQ ID NO 38)), LAEWXpr24-2kbATR1-fr (ggagcaggaaggtgtgagttcgtc (SEQ ID NO 39)) et LAEWXpr25-P540-rv (accctggaagtacaggttttcg (SEQ ID NO 40)). L’ensemble des étapes a à e a permis la construction d’un plasmide pAIDA1-T7-CYP73A1-ATR1 représenté sur la . 3) Protéine de fusion La protéine de fusion obtenue contient de l’extrémité N-terminale à l’extrémité C-terminale : - un tag de 6 Histidines, permettant une immunodétection des protéines avec des anticorps anti His - une séquence de clivage permettant d’enlever le tag, - une séquence c-MYC, permettant une immunodétection des protéines avec des anticorps anti c-MYC - un peptide de liaison AIDA1 - un polypeptide d’adressage et d’ancrage à la membrane externe : la séquence d’ancrage béta Barel de AIDA1, à savoir la séquence SEQ ID NO 1 - une séquence polypeptidique du cytochrome P450 CYP73A1 (cinnamate hydroxylase d’ Helianthus tuberosus , NCBI ID : Sequence ID: Q04468.1) dans laquelle l’ancre membranaire a été retirée de la séquence codante, à savoir la séquence SEQ ID NO 3), - un peptide de liaison de 51 acides aminés PGGSGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGSG GSP (SEQ ID NO 6), et - une séquence polypeptidique de la NADPH P450 réductase d’Arabidopsis ( Arabidopsis thaliana P450 reductase 1 (ATR1), mRNA - Sequence ID: NM_118585.4 ) dans laquelle l’ancre membranaire a été retirée, à savoir la séquence SEQ ID NO 7. Les séquences nucléiques codantes correspondant aux différents éléments de la protéine de fusion décrit ci-dessus ont été utilisées et assemblées successivement de 5’ vers 3’. En particulier, il s’agissait de : - la séquence SEQ ID NO 44 codant pour un lieur AIDA1, - la séquence SEQ ID NO 10 codant pour un polypeptide d’adressage et d’ancrage à la membrane externe : la séquence d’ancrage Tonneau bêta - la séquence SEQ ID NO 11 codant pour le cytochrome P450 CYP73A1 cinnamate hydroxylase d’Helianthus tuberosus, NCBI ID : Sequence ID: Q04468.1) - la séquence SEQ ID NO 15 codant pour un peptide de liaison de 51 acides aminés, et - la séquence SEQ ID NO 17 codant pour la NADPH P450 réductase d’Arabidopsis (Arabidopsis thaliana P450 reductase 1 (ATR1), mRNA - Sequence ID: NM_118585.4) La est une représentation schématique de la protéine de fusion obtenue. 4) Expression des protéines recombinantes dans les bactéries E. coli a) Le système d’expression utilisé Le plasmide pAIDA1 et les plasmides recombinants contenant les gènes codant pour la protéine de fusion ont été introduits dans bactéries E. coli BL21(DE3) plysE » (Novagen's® pET Systems). Les bactéries BL21 (DE3) pLysE sont adaptées pour la production de protéines placées sous le contrôle du promoteur T7. Les bactéries BL21 (DE3) pLysE portent le lysogène lambda DE3 et contiennent le plasmide pLysE, qui exprime de manière constitutive le lysozyme T7. Le lysozyme T7 réduit l'expression basale des gènes cibles en inhibant l'ARN polymérase T7. La souche BL21 (DE3) pLysE permet donc un contrôle plus strict de l'ARN polymérase T7. b) Préparation d’un exemple de protéine de fusion La protéine de fusion a été exprimée à partir du plasmide dont la construction a été décrite précédemment. Après la transformation des bactéries par le produit de ligation, il n’y a pas d’étape de sélection sur milieu solide. Les bactéries transformées ont été immédiatement mises en culture dans 50 ml de milieu SOC (Dextrose, 3.603 g/L, KCl, 0.186 g/L, MgSO 4 , 4.8 g/L, Tryptone, 20 g/L, extrait de levure (en anglais « Yeast extract ») 5 g/L) comprenant de la Tétracycline (20 µg/ml) et du Chloramphénicol (20 µg/ml), dans un erlenmeyer stérile de 250 mL. La culture a été réalisée pendant 53 h à 26°C avec une agitation de 180 tours par minute. Les cultures ont été ensuite refroidies sur de la glace pendant 10 minutes. La densité optique de la culture a été ajustée à D0 550nm = 0,3 par dilution dans du milieu SOC (4°C). Le volume du milieu de culture a été mesuré et les antibiotiques ont été re-ajoutés pour être à une concentration finale de 20 µg/ml de Tétracycline et 20 µg/ml de Chloramphénicol. La production de la protéine de fusion a été induite par ajout d’isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside (IPTG) à une concentration de 20µM final pendant 24h à 7°C, sous une agitation de 180 tours par minutes. Au bout de 24h, la densité optique a été ajustée à 0,3 par dilution dans du milieu SOC (4°C). Les bactéries présentent dans 1,5 mL ont été récoltées par deux centrifugations à basse vitesses successives (4°C, 20 min, 1000 xg et 4°C, 10 min, 4000 xg). Les bactéries ont été ensuite suspendues dans du tampon KPi (88 mM avec des additifs de KCl 1 mM, MgSO 4 4 mM, glycérol 5% v/v, glucose 5% w/v, à 4°C (produits commandés chez Sigma Aldrich)). La est une représentation schématique de la protéine de fusion obtenue, ladite protéine de fusion étant ancrée dans la membrane bactérienne. 5) Bioconversion Une étude de la bioconversion de l’acide cinnamique a été réalisée. La (CYP73A1) représente la réaction de bioconversion correspondante. Pour cela, de l’acide cinnamique (200 µM) en tant que substrat et du nicotinamide adénine dinucléotide phosphate (NADPH) (400 µM) ont été ajoutés dans le milieu comprenant les bactéries E. coli obtenues au point 4 ci-dessus re-suspendues. Le procédé de bioconversion a été réalisé à 20°C pendant 1h et sous agitation à 180 tours par minute. La réaction a été stoppée par une extraction avec 1 volume d’Acétate d’Ethyle. Les milieux ont été mélangés par vortex pendant 1 minutes suivi par une centrifugation à 10 000xg pour séparer les phases organiques et aqueuses. La phase organique supérieures a été récupérée et évaporée par Vivaspin. La poudre obtenue a été suspendue dans 150 µL de méthanol. L’extrait ainsi obtenu a été analysé par Chromatographie liquide à ultra haute performance couplée à un spectre de masse (UHPLC/MS/MS) Les résultats obtenus représentés sur la . La figure 7A représente un chromatogramme obtenu à 300 nm et montrant 2 pics. Le pic majoritaire correspond au substrat, c’est-à-dire le cinnamate. Le pic minoritaire correspond au p-coumarate ou acide p-couramique formé par bioconversion dans le milieu de culture. Ce chromatogramme a été obtenu à partir du milieu de culture dans lequel ont été cultivées les bactéries recombinantes transformées avec les plasmides pAIDA1-T7-CYP73A1-ATR1 selon le point 4 ci-dessus. Le chromatogramme de la figure 7B correspond à une analyse du milieu de culture dans lequel ont été bactéries recombinantes transformées avec le plasmide pAIDA1-T7 dans la . Ce plasmide ne peut produire de protéine de fusion et représente un contrôle négatif. L’analyse du chromatogramme indique la présence de cinnamate qui a été rajouté dans le milieu de culture. Aucune métabolisation de p-coumarate n’a pu être mise en évidence. Cet exemple démontre donc clairement qu’un exemple de protéine de fusion comprenant successivement (i) au moins un polypeptide d’adressage et d’ancrage à la membrane bactérienne, avantageusement à la membrane externe, (ii) au moins un polypeptide comprenant le domaine hydrophile d’un cytochrome P450 de plante, (iii) au moins un polypeptide de liaison comprenant au moins 47 acides aminés, de préférence comprenant 51 acides aminés, et (iv) au moins un polypeptide comprenant le domaine hydrophile d’une NADPH P450 réductase de cytochrome P450 de plante permet la bioconversion de substrat. Cet exemple démontre également clairement qu’un exemple de protéine de fusion selon l’invention peut être exprimé à la surface de cellule, en particulier de cellule bactérienne, et peut avantageusement être utilisé dans un procédé de bioconversion de substrats. Cet exemple démontre également clairement qu’un exemple de protéine de fusion selon l’invention peut être exprimée à la surface de cellule, en particulier de cellule bactérienne, et peut avantageusement permettre une bioconversion de substrats dans le milieu de culture de ladite cellule. Exemple 2 : protéine de fusion et bioconversion Dans cet exemple, le cytochrome P450 est le cytochrome CYP76F112 (marmesin synthase, Ficus carica cytochrome P450 CYP76F112 mRNA, complete cds Sequence ID: MW348922.1). Dans cet exemple le procédé d’obtention de la protéine de fusion est identique au procédé décrit dans l’exemple 1 à l’exception des éléments suivants : - La séquence codant pour le cytochrome P450 CYP73A1 est remplacée par la séquence codant pour le cytochrome P450 CYP76F112 de séquence caagtcacgacggttgtcatttcctccaccaccatggctaaagaagtcctccaggcaaacagccaagtcgtctccagccggacaatcaccgacgcaagccgcgcccacagacacagcgattttagcatggttatgttgcccgtatcccctctgtggcgaaaccttcggaaaataagcaactcacacttgctttcctccaaggctcttgatggcaacatggagctgagaaacaaaaaggtgcaagagctcctaaatgatgtccacaaaagcgtccaggccggggaggcggtggagatcgcgagcctttctttcagagctactctgaatctcttgtccaccacatttttctccatggacatggcggatgacacaaattccgtcactctaaaagagctcaaggaggctatgtcgcacatgatggaagagttggggaagcctaacttggccgattatttcccgtttctacaaaagattgacccccaaggcattaggcggcgcaacacggttactttccggaaactgatcaacttgtttgggcgtatcatcgaccaaagattgaaagtgagagaagcgagtggttctttgaaagatgatgatattttagacactcttatcaacatgatggtggtggatcaggagaagaaagaggatcagcttgacaaaaccataattgaacattttttactggatttattttcagcggggactgaaacgacttcaaccacgttggagtgggcaatggctgagctagtaaaagcgccagagattatgtcaaaagcccgagcagagctagatcaagttataggcaaaggaaaccaagtgaaggaatcggacgtatctcgactcccttacttacaagccattgttaaagaaaccttccgcatgcaccctacagctccattattgattcctcgcaaagccgacagtgacatcgaaatctccgactatatcatcccgaaggatgctcag (SEQ ID NO 45). - Le substrat acide cinnamique est remplacé par la déméthylsubérosine. La bioconversion du substrat génère la marmésine tel que représenté sur la (CYP76F112). Une comparaison des séquences peptidiques des cytochromes P450 CYP76F112 et P450 CYP73A1 par alignement de séquences peptidiques réalisée avec l’outil de recherche d'alignement local de base (BLAST également désigné en anglais « Basic Local Alignment Search Tool ») et est représenté sur la . Le résultat obtenu démontre un pourcentage d’identité de 28,7%. Dans cet exemple, la bioconversion est réalisée selon le procédé décrit dans l’exemple 1 ci-dessus dans lequel le substrat utilisé est la déméthylsubérosine, Cet exemple démontre clairement qu’un exemple de protéine de fusion comprenant successivement (i) au moins un polypeptide d’adressage et d’ancrage à la membrane bactérienne, (ii) au moins un polypeptide comprenant le domaine hydrophile d’un cytochrome P450 de plante, (iii) au moins un polypeptide de liaison comprenant au moins 47 acides aminés, de préférence comprenant 51 acides aminés, et (iv) au moins un polypeptide comprenant le domaine hydrophile d’une NADPH P450 réductase de cytochrome P450 de plante permet la bioconversion de substrat. Cet exemple démontre également clairement qu’un exemple de protéine de fusion selon l’invention peut être exprimé à la surface de cellule, en particulier de cellule bactérienne, et peut avantageusement être utilisé dans un procédé de bioconversion de substrats. Cet exemple démontre également clairement qu’un exemple de protéine de fusion selon l’invention peut être exprimée à la surface de cellule, en particulier de cellule bactérienne, et peut avantageusement permettre une bioconversion de substrats dans le milieu de culture de ladite cellule. Références bibliographiques 1. Guengerich et Macdonald, 1990, FASEB J. 4, pp 2453-2459 2. XU Jun et al. « The cytochrome P450 superfamily: Key players in plant development and defense » Journal of Integrative Agriculture 2015, 14(9): 1673–1686 3. Kenneth Jensen et al., Plant NADPH-cytochrome P450 oxidoreductases, Phytochemistry Volume 71, 2–3, Fevrier 2010, Pages 132-141 4. https://blog.addgene.org/plasmid-101-origin-of-replication 5. https://www.qiagen.com/cn/resources/faq?id=1f42840e-fbd7-4734-b0cd-e17372a9e5a4&lang=en 6. https://www.takarabio.com/documents/User%20Manual/R045A_e.v2102Da.pdf 7. WO 83/004261 8. 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Protéine de fusion comprenant successivement (i) au moins un polypeptide d’adressage et d’ancrage à la membrane bactérienne, (ii) au moins un polypeptide comprenant le domaine hydrophile d’un cytochrome P450 de plante, (iii) au moins un polypeptide de liaison comprenant au moins 47 acides aminés, de préférence comprenant 51 acides aminés, et (iv) au moins un polypeptide comprenant le domaine hydrophile d’une NADPH P450 réductase de cytochrome P450 de plante. Protéine de fusion selon la revendication 1, dans laquelle la structure quaternaire dudit au moins un polypeptide d’adressage et d’ancrage à la membrane forme un tonneau bêta. Protéine de fusion selon la revendication 1 ou 2, dans laquelle le polypeptide d’adressage et d’ancrage est le polypeptide de séquence MNKAYSIIWSHSRQAWIVASELARGHGFVLAKNTLLVLAVVSTIGNAFAVDHHHHHHLEALFQGPGTQKQRTELENLYFQGEQKLISEEDLSRVNNNGSIVINNSIINGNITNDADLSFGTAKLLSATVNGSLVNNKNIILNPTKESAAAIGNTLTVSNYTGTPGSVISLGGVLEGDNSLTDRLVVKGNTSGQSDIVYVNEDGSGGQTRDGINIISVEGNSDAEFSLKNRVVAGAYDYTLQKGNESGTDNKGWYLTSHLPTSDTRQYRPENGSYATNMALANSLFLMDLNERKQFRAMSDNTQPESASVWMKITGGISSGKLNDGQNKTTTNQFINQLGGDIYKFHAEQLGDFTLGIMGGYANAKGKTINYTSNKAARNTLDGYSVGVYGTWYQNGENATGLFAETWMQYNWFNASVKGDGLEEEKYNLNGLTASAGGGYNLNVHTWTSPEGITGEFWLQPHLQAVWMGVTPDTHQEDNGTVVQGAGKNNIQTKAGIRASWKVKSTLDKDTGRRFRPYIEANWIHNTHEFGVKMSDDSQLLSGSRNQGEIKTGIEGVITQNLSVNGGVAYQAGGHGSNAISGALGIKYSF (SEQ ID NO 1). Protéine de fusion selon l’une quelconque des revendications 1 à 3, dans laquelle ledit polypeptide du domaine hydrophile d’un cytochrome P450 de plante est un polypeptide ayant une identité de séquence d’au moins 28% identité avec le polypeptide de séquence IPVPIFGNWLQVGDDLNHRNLTDLAKRFGEILLLRMGQRNLVVVSSPELAKEVLHTQGVEFGSRTRNVVFDIFTGKGQDMVFTVYGEHWRKMRRIMTVPFFTNKVVQQYRYGWEAEAAAVVDDVKKNPAAATEGIVIRRRLQLMMYNNMFRIMFDRRFESEDDPLFLKLKALNGERSRLAQSFEYNYGDFIPILRPFLRNYLKLCKEVKDKRIQLFKDYFVDERKKIGSTKKMDNNQLKCAIDHILEAKEKGEINEDNVLYIVENINVAAIETTLWSIEWGIAELVNHPEIQAKLRHELDTKLGPGVQITEPDVQNLPYLQAVVKETLRLRMAIPLLVPHMNLHDAKLGGFDIPAESKILVNAWWLANNPDQWKKPEEFRPERFLEEEAKVEANGNDFRYLPFGVGRRSCPGIILALPILGITIGRLVQNFELLPPPGQSKIDTDEKGGQFSLHILKHSTIVAKPRSF (SEQ ID NO 3). Protéine de fusion selon l’une quelconque des revendications 1 à 4, dans laquelle ledit polypeptide de liaison est un polypeptide de séquence PGGSGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGSGGSP (SEQ ID NO 6). Protéine de fusion selon l’une quelconque des revendications 1 à 5, dans laquelle ledit polypeptide d’un domaine hydrophile d’une NADPH P450 réductase est un polypeptide ayant une identité de séquence d’au moins 90% avec le polypeptide de séquence TRVSIFFGTQTGTAEGFAKALSEEIKARYEKAAVKVIDLDDYAADDDQYEEKLKKETLAFFCVATYGDGEPTDNAARFYKWFTEENERDIKLQQLAYGVFALGNRQYEHFNKIGIVLDEELCKKGAKRLIEVGLGDDDQSIEDDFNAWKESLWSELDKLLKDEDDKSVATPYTAVIPEYRVVTHDPRFTTQKSMESNVANGNTTIDIHHPCRVDVAVQKELHTHESDRSCIHLEFDISRTGITYETGDHVGVYAENHVEIVEEAGKLLGHSLDLVFSIHADKEDGSPLESAVPPPFPGPCTLGTGLARYADLLNPPRKSALVALAAYATEPSEAEKLKHLTSPDGKDEYSQWIVASQRSLLEVMAAFPSAKPPLGVFFAAIAPRLQPRYYSISSSPRLAPSRVHVTSALVYGPTPTGRIHKGVCSTWMKNAVPAEKSHECSGAPIFIRASNFKLPSNPSTPIVMVGPGTGLAPFRGFLQERMALKEDGEELGSSLLFFGCRNRQMDFIYEDELNNFVDQGVISELIMAFSREGAQKEYVQHKMMEKAAQVWDLIKEEGYLYVCGDAKGMARDVHRTLHTIVQEQEGVSSSEAEAIVKKLQTEGRYLRDVW (SEQ ID NO 7). Protéine de fusion selon l’une quelconque des revendications 1 à 6, dans laquelle ledit polypeptide comprenant le domaine hydrophile d’un cytochrome P450 de plante ou ledit polypeptide comprenant le domaine hydrophile d’une NADPH P450 réductase est exempte de domaine transmembranaire. Acide nucléique codant pour une protéine de fusion selon l’une quelconque des revendications 1 à 7. Vecteur, de préférence d’expression, comprenant un acide nucléique selon la revendication 8. Cellule hôte comprenant un acide nucléique selon la revendication 8 et/ou un vecteur selon la revendication 9. Cellule hôte selon la revendication 10, ladite cellule hôte étant une cellule bactérienne, de préférence Escherichia coli . Procédé de production d'une protéine de fusion comprenant la culture d’une cellule hôte selon la revendication 10 ou 11 dans des conditions appropriées pour l'expression de la protéine de fusion Procédé de bioconversion d’un substrat par une protéine de fusion selon l’une quelconque des revendications 1 à 7 comprenant les étapes de : - introduction dans un milieu de culture comprenant une cellule hôte selon la revendication 10 ou 11, dudit substrat, - incubation dudit milieu de culture pendant un temps suffisant pour la bioconversion dudit substrat par ladite protéine de fusion, et - optionnellement récupération des métabolites résultant de la bioconversion dudit substrat.