FR 3131835 A1 20230721 FR 2200371 A 20220117 L’invention concerne un procédé de préparation d’un mélange de conjugués de formule (I) : (I) dans laquelle la tête d’accroche, le bras de liaison, l’espaceur, M et u sont tels que définis dans la description, procédé qui comprend une étape de réaction entre un anticorps ou un fragment d’anticorps et un composé de formule (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (III) ou (IV) tel que défini dans la description. Procédé de préparation de conjugués anticorps-médicament La présente invention concerne un procédé de préparation d’un mélange de conjugués anticorps-médicament (en anglais « Antibody Drug Conjugate » ou « ADC ») et les conjugués susceptibles d’être obtenus par ce procédé. Etat de la technique Le début des années 2000 a vu une intensification de la recherche sur des conjugués anticorps-médicament (en anglais « Antibody Drug Conjugate » ou « ADC »), ces conjugués représentant potentiellement une alternative ou un complément aux thérapies « classiques » pour délivrer de manière ciblée un principe actif, notamment un médicament cytotoxique. Le conjugué anticorps-médicament permet donc de combiner la spécificité du ciblage par les anticorps avec de nouvelles fonctions effectrices puissantes par les agents qui leur sont conjugués. La structure d'un conjugué anticorps-médicament consiste typiquement en un anticorps lié au médicament par une molécule dont une partie va fixer l’anticorps et une autre partie va se coupler au médicament, généralement par l’intermédiaire d’un bras d’espacement (ou linker) de longueur et nature variables. Après fixation sur son antigène cible, l'anticorps est le plus souvent internalisé dans la cellule par endocytose médiée par des récepteurs. Les vésicules fusionnent avec des lysosomes où le médicament est libéré de l'anticorps via différents mécanismes. Le médicament actif agit ensuite directement sur la cellule en induisant sa mort et parfois sur les cellules cancéreuses voisines par transport ou diffusion dans l'environnement. L'anticorps est donc principalement utilisé comme vecteur et apporte le médicament dans la cellule ciblée. Des conjugués anticorps-médicament sont décrits dans la demande WO 2015/004400. Par ailleurs, la demande PCT/FR2021/051345, déposée le 19 juillet 2021, décrit des têtes d’accroche qui permettent l’obtention de composés qui, lorsqu’ils sont conjugués à des protéines, notamment des anticorps, permettent l’obtention d’une « structure » telle qu’en moyenne le nombre de tête d’accroche conjuguée par protéine (anticorps) est contrôlé : le conjugué majoritaire visé portant soit 1 molécule par protéine (anticorps) soit 2 molécules par protéine (anticorps). La présente invention concerne un procédé de préparation d’un mélange de conjugués de formule (I) : (I) dans laquelle la tête d’accroche, le bras de liaison, l’espaceur, M et u sont tels que définis ci-après. La présente invention concerne également un mélange de conjugués susceptible d’être obtenu par le procédé susmentionné. La présente invention concerne également une composition contenant un mélange de conjugués de formule (I), et l’utilisation de cette composition comme médicament, notamment pour le traitement du cancer. Définitions Le terme « anticorps » désigne un hétérotétramère constitué de deux chaînes lourdes d'environ 50-70 kDa chacune (dites les chaînes H pour Heavy) et de deux chaînes légères d'environ 25 kDa chacune (dites les chaînes L pour Light), liées entre elles par des ponts disulfures intercaténaires. Chaque chaîne est constituée, en position N-terminale, d'une région ou domaine variable, dit VL pour la chaîne légère, VH pour la chaîne lourde, et en position C-terminale, d'une région constante, constituée d'un seul domaine dit CL pour la chaîne légère et de trois ou quatre domaines nommés CH1, CH2, CH3, CH4, pour la chaîne lourde. Le terme « F(ab') 2 » désigne un fragment d’anticorps qui conserve la capacité dudit anticorps à se lier un antigène. Le fragment F(ab') 2 est obtenu par digestion enzymatique des immunoglobulines par la pepsine ou par IdeS. F(ab') 2 est formé de deux fragments Fab' liés par des ponts disulfures intercaténaires. Le fragment Fab' est constitué de la région Fab (constituée des régions variables et des domaines CH1 et CL) et d'une région charnière. Brève description des figures Les Figures 1A, 1B et 1C représentent la structure de conjugués obtenus par le procédé conforme à l’invention. Dans ces figures, le carré gris représente la tête d’accroche, l’ovale comportant la lettre M représente le principe actif et l’ovale gris entre M et la tête d’accroche représente le motif bras de liaison-espaceur. Procédé de préparation d’un mélange de conjugués anticorps-médicament de formule (I) : (I) dans laquelle : i) la tête d’accroche est un composé de formule (IIa), (IIb), (IIc) ou (IId) : (IIa) (IIb) (IIc) (IId) dans lesquelles : - T représente –(CH 2 ) y – , y étant un entier allant de 0 à 6 ; - W est -OR a , -COR 2 , -CONR 3 R 4 ou -NR 3 COR 4 ; - R a est -(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -R 5 , -(CR c R d ) r -R 5 , -COR b , -(CR c R d ) r -NHCO-(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -R 5 , -(CR c R d ) r -CONH-(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -R 5 , -(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -NHCO-(CR c R d ) r -R 5 ou -(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -CONH-(CR c R d ) r -R 5 ; - R b est -(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -R 5 , -O(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -R 5 , -(CR c R d ) r -R 5 , -O(CR c R d ) r -R 5, -(CR c R d ) r -NHCO-(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -R 5 , -(CR c R d ) r -CONH-(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -R 5 , -(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -NHCO-(CR c R d ) r -R 5 ou -(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -CONH-(CR c R d ) r -R 5 ; - R 2 est -(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -R 5 , -(CR c R d ) r -R 5 , -O(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -R 5 , -O(CR c R d ) r -R 5 , -O(CR c R d ) r -NHCO-(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -R 5 , -O(CR c R d ) r -CONH-(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -R 5 , -O(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -NHCO-(CR c R d ) r -R 5 ou -O(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -CONH-(CR c R d ) r -R 5 ; - R 3 est -H, -(C 1 -C 6 )alkyle ou –(CH 2 ) v -SO 3 H, de préférence R 3 est -H ou -(C 1 -C 6 )alkyle ; - R 4 est -(CH 2 CH 2 O) q R 5 , -(CR c R d ) r R 5 , -(CR c R d ) r -NHCO-(CH 2 CH 2 O) q -R 5 , -(CR c R d ) r -CONH-(CH 2 CH 2 O) q -R 5 , -(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -NHCO-(CR c R d ) r -R 5 , -(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -CONH-(CR c R d ) r -R 5 , -CH-[(CR c R d ) r -CONH-(CR c R d ) r -(OCH 2 CH 2 ) q -R 5 ] 2 , -CH-[(CR c R d ) r -NHCO-(CR c R d ) r -(OCH 2 CH 2 ) q -R 5 ] 2 , -CH-[(CR c R d ) r -CONH-(CR c R d ) r -R 5 ] 2 , ou -CH-[(CR c R d ) r -NHCO-(CR c R d ) r -R 5 ] 2 , de préférence R 4 est -(CH 2 CH 2 O) q R 5 , -(CR c R d ) r R 5 , -(CR c R d ) r -NHCO-(CH 2 CH 2 O) q -R 5 , -(CR c R d ) r -CONH-(CH 2 CH 2 O) q -R 5 , -(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -NHCO-(CR c R d ) r -R 5 , ou -(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -CONH-(CR c R d ) r -R 5 ; - chaque R 5 est -(CH 2 ) s R 6 ; - chaque R 6 est choisi parmi : ; - R c est H ; - chaque R d est choisi parmi -H, -CH 2 -SO 3 H ou -SO 3 H ; - R 7 est -H ou -CH 3 ; - chaque q est un entier allant de 1 à 24 ; - chaque r est un entier allant de 1 à 8 ; - chaque s est un entier allant de 0 à 6 ; - chaque v est un entier allant de 1 à 6 ; ii) le bras de liaison est une liaison directe ; un pont -S-S- ; ou un groupe de formule -(A) z - - A est un résidu d’acide aminé ; - z est égal à 1, 2, 3, 4 ou 5 ; iii) l’espaceur est une liaison directe ou un groupe de formule : - G est un sulfate, un sucre, un glucuronide, ou un galactoside, ledit sucre étant un groupe saccharide choisi de préférence parmi un acide bêta-glucuronique, un bêta-D-galactose, un beta-D-glucose, un alpha-D-mannose, un N-acétyl-D-glucosaminyle, un N-acétyl-D-galactosaminyle, un D-glucuronyle, un L-iduronyle, un D-glucopyranosyle, un D-galactopyranosyle, un D-mannopyranosyle ou un L-fucopyranosyle, de préférence G est un sulfate, un acide bêta-glucuronique, ou un bêta-D-galactose ; - R 12 est -H ou -NO 2 ; iv) M est une molécule d’intérêt ; et v) u, qui représente le rapport entre M et l’anticorps (ou F(ab’)2), est compris dans la gamme allant de 2 à 5 ; étant entendu que le mélange contient au moins 50% (en masse) d’un conjugué de formule (I) dans lequel u = 2, 3 ou 5 ; ledit procédé comprenant : a1) la réaction d’un anticorps (ou fragment F(ab’) 2 ) avec un composé de formule (IIa) ou (IIb) : b1) la réaction du composé obtenu à l’étape a1) avec un composé de formule (IIa), (IIb), (IIc) ou (IId) tel que défini ci-dessus ; étant entendu que : - si un composé (IIa) est utilisé à l’étape a1) et un composé (IIa) est utilisé à l’étape b1), les deux composés (IIa) ont une structure différente ; - si un composé (IIb) est utilisé à l’étape a1) et un composé (IIb) est utilisé à l’étape b1), les deux composés (IIb) ont une structure différente ; c1) la réaction du composé obtenu à l’étape b1) avec deux composés identiques ou non, répondant chacun à la formule (III) : (III) dans laquelle : - R 8 est R 6 -(CR c R d ) r -CO-, R 6 -(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) s -CO-, R 6 -(CR c R d ) r -NH-, où R 6 , R c , R d , q, r et s sont tels que définis ci-dessus ; - le bras de liaison, l’espaceur et M sont tels que définis ci-dessus, M étant identique ou non dans chaque composé (III) ; ou bien a1) la réaction d’un anticorps (ou fragment F(ab’) 2 ) avec un composé de formule (IIa) ou (IIb) ; b2) la réaction du composé obtenu à l’étape a1) avec un composé de formule (IV) : (IV) dans laquelle : i) la tête d’accroche est un composé de formule (II’a), (II’b), (II’c), ou (II’d) : (II’a) (II’b) (II’c) (II’d) dans lesquelles : - T est tel que défini ci-dessus ; - Y est -OR’ a , -COR’ 2 , -CONR’ 3 R’ 4 ou -NR’ 3 COR’ 4 ; - R’ a est -(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -R’ 5 , -(CR c R d ) r -R’ 5 , -COR’ b , -(CR c R d ) r -NHCO-(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -R’ 5 , -(CR c R d ) r -CONH-(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -R’ 5 , -(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -NHCO-(CR c R d ) r -R’ 5 ou -(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -CONH-(CR c R d ) r -R’ 5 ; - R’ b est -(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -R’ 5 , -O(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -R’ 5 , -(CR c R d ) r -R’ 5 , -O(CR c R d ) r -R’ 5, -(CR c R d ) r -NHCO-(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -R’ 5 , -(CR c R d ) r -CONH-(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -R’ 5 , -(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -NHCO-(CR c R d ) r -R’ 5 ou -(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -CONH-(CR c R d ) r -R’ 5 ; - R’ 2 est -OH, -(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -R’ 5 , -(CR c R d ) r -R’ 5 , -O(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -R’ 5 , -O(CR c R d ) r -R’ 5 , -O(CR c R d ) r -NHCO-(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -R’ 5 , -O(CR c R d ) r -CONH-(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -R’ 5 , -O(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -NHCO-(CR c R d ) r -R’ 5 ou -O(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -CONH-(CR c R d ) r -R’ 5 ; - R’ 3 est -H, -(C 1 -C 6 )alkyle ou –(CH 2 ) v -SO 3 H, de préférence R’ 3 est -H ou -(C 1 -C 6 )alkyle ; - R’ 4 est -(CH 2 CH 2 O) q R’ 5 , -(CR c R d ) r R’ 5 , -(CR c R d ) r -NHCO-(CH 2 CH 2 O) q -R’ 5 , -(CR c R d ) r -CONH-(CH 2 CH 2 O) q -R’ 5 , -(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -NHCO-(CR c R d ) r -R’ 5 , -(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -CONH-(CR c R d ) r -R’ 5 , -CH-[(CR c R d ) r -CONH-(CR c R d ) r -(OCH 2 CH 2 ) q -R’ 5 ] 2 , -CH-[(CR c R d ) r -NHCO-(CR c R d ) r -(OCH 2 CH 2 ) q -R’ 5 ] 2 , -CH-[(CR c R d ) r -CONH-(CR c R d ) r -R’ 5 ] 2 , ou -CH-[(CR c R d ) r -NHCO-(CR c R d ) r -R’ 5 ] 2 , de préférence R’ 4 est -(CH 2 CH 2 O) q R’ 5 , -(CR c R d ) r R’ 5 , -(CR c R d ) r -NHCO-(CH 2 CH 2 O) q -R’ 5 , -(CR c R d ) r -CONH-(CH 2 CH 2 O) q -R’ 5 , -(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -NHCO-(CR c R d ) r -R’ 5 , ou -(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -CONH-(CR c R d ) r -R’ 5 ; - chaque R’ 5 est -(CH 2 ) s R’ 6 ou -(CH 2 ) s R’ 7 ; - R’ 6 est choisi parmi : ; - R’ 7 est -COOH ou –NR’ 8 R’ 9 ; - R’ 8 est -H, -(C 1 -C 6 )alkyle ; - R’ 9 est -H, -(C 1 -C 6 )alkyle ; - R’ 10 est -H ou -CH 3 ; où R c , R d , q, r et s sont tels que définis ci-dessus ; et ii) le bras de liaison est une liaison directe ; un pont -S-S- ; ou un groupe de formule -R’ 11 -(A) z - ; - R’ 11 est une liaison directe, un groupe R’ 6 -(CR c R d ) r -CO-, R’ 6 -(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) s -CO-, R’ 6 -(CR c R d ) r -NH-, où R’ 6 - , R c , R d , q, r et s sont tels que définis ci-dessus ; - A est un résidu d’acide aminé ; - z est égal à 1, 2, 3, 4 ou 5 ; et iii) l’espaceur et M sont tels que définis à l’étape c1) ; c2) la réaction du composé obtenu à l’étape b2) avec un composé de formule (III) tel que défini à l’étape c1), la molécule d’intérêt M du composé (III) étant identique à ou différente de la molécule d’intérêt M du composé (IV) ; ou bien a1) la réaction d’un anticorps (ou fragment F(ab’) 2 ) avec un composé de formule (IIa) ou (IIb) ; b3) la réaction du composé obtenu à l’étape a1) avec un composé de formule (III) tel que défini ci-dessus ; c3) la réaction du composé obtenu à l’étape b3) avec un composé de formule (IV) tel que défini ci-dessus, la molécule d’intérêt M du composé (IV) étant identique à ou différente de la molécule d’intérêt M du composé (III) ; ou bien a1) la réaction d’un anticorps (ou fragment F(ab’) 2 ) avec un composé de formule (IIa) ou (IIb) ; b3) la réaction du composé obtenu à l’étape a1) avec un composé de formule (III) tel que défini ci-dessus ; c4) la réaction du composé obtenu à l’étape b3) avec un composé de formule (IIa), (IIb), (IIc) ou (IId) tel que défini ci-dessus ; d1) la réaction du composé obtenu à l’étape c4) avec un composé de formule (III) tel que défini ci-dessus, la molécule d’intérêt M étant identique ou non dans chaque composé (III). Procédé de préparation selon la revendication 1, qui comprend les étapes a1), b1) et c1). Procédé de préparation selon la revendication 2, dans lequel la tête d’accroche utilisée à l’étape a1) et à l’étape b1) répond à l’une des formules (IIa), (IIb), (IIc) ou (IId) dans lesquelles : - W est -CONR 3 R 4 ou -NR 3 COR 4 , de préférence W est -CONR 3 R 4 ; - R 3 est -H ou –(C 1 -C 6 )alkyle ; - R 4 est -(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -R 5 , ou -(CR c R d ) r -R 5 ; - chaque R 5 est -(CH 2 ) s R 6 ; - R 6 est choisi parmi : ; - R c , R d sont tels que définis ci-dessus ; - q est un entier allant de 1 à 12, de préférence q est un entier allant de 1 à 8 ; - r est un entier allant de 1 à 6. Procédé de préparation selon la revendication 3, dans lequel la tête d’accroche est un composé de formule (IIa1), (IIa2), (IIa3), (IIa4), (IIa5), ou (IIa6) : (IIa1) ; (IIa2) ; (IIa3) ; (IIa4) ; (IIa5) ; (IIa6). Procédé de préparation selon la revendication 1, qui comprend les étapes a1), b2) et c2). Procédé de préparation selon la revendication 5, dans lequel la tête d’accroche utilisé à l’étape b2) répond à l’une des formules (II’a), (II’b), (II’c) ou (II’d) dans lesquelles : - Y est –CONR’ 3 R’ 4 ou –NR’ 3 COR’ 4 , de préférence Y est –CONR’ 3 R’ 4 ; - R’ 3 est -H ou –(C 1 -C 6 )alkyle ; - R’ 4 est -(CH 2 CH 2 O) q -(CH 2 ) r -R’ 5 , ou -(CR c R d ) r -R’ 5 ; - R’ 5 est -(CH 2 ) s R’ 6 ; - R’ 6 est choisi parmi : ; - R c , R d sont tels que définis ci-dessus ; - q est un entier allant de 1 à 12, de préférence q est un entier allant de 1 à 8 ; - r est un entier allant de 1 à 6. Procédé de préparation selon la revendication 6, dans lequel la tête d’accroche est un composé de formule (II’a1), (II’a2), (II’a3), (II’a4), (II’a5), (II’a6), (II’a7), (II’a8) ou (II’b1) : (II’a1) ; (II’a2) ; (II’a3) ; (II’a4) ; (II’a5) ; (II’a6) ; (II’a7) ; (II’a8) ; (II’b1). Procédé de préparation d’un mélange de conjugués anticorps-médicament de formule (I) telle que définie à la revendication 1, qui comprend : a2) la réaction d’un anticorps (ou fragment F(ab’) 2 ) avec un composé de formule (IV) tel que défini à la revendication 1, dans laquelle la tête d’accroche est uniquement un composé de formule (II’a) ou (II’b) ; b4) la réaction du composé obtenu à l’étape a2) avec un composé de formule (IV) tel que défini à la revendication 1, M étant identique ou non dans chaque composé (IV), étant entendu que : - si un composé (II’a) est utilisé à l’étape a2) et un composé (II’a) est utilisé à l’étape b4), les deux composés (II’a) ont une structure différente ; - si un composé (II’b) est utilisé à l’étape a2) et un composé (II’b) est utilisé à l’étape b4), les deux composés (II’b) ont une structure différente ; ou bien a2) la réaction d’un anticorps (ou fragment F(ab’) 2 ) avec un composé de formule (IV) tel que défini à la revendication 1, dans laquelle la tête d’accroche est uniquement un composé de formule (II’a) ou (II’b) ; b5) la réaction du composé obtenu à l’étape a2) avec un composé de formule (IIa), (IIb), (IIc) ou (IId) tels que définis à la revendication 1 ; c5) la réaction du composé obtenu à l’étape b5) avec un composé de formule (III) tel que défini à la revendication 1, la molécule d’intérêt M du composé (III) étant identique à ou différente de la molécule d’intérêt M du composé (IV). Procédé de préparation selon l’une quelconque des revendications précédentes, dans lequel le bras de liaison est une liaison directe ou un groupe de formule –R 11 -(A) z - dans laquelle R 11 et A sont- tels que définis à la revendication 1, et z est égal à 2, 3 ou 4. Procédé de préparation selon l’une quelconque des revendications précédentes, dans lequel l’espaceur est une liaison directe ou un groupe de formule : ; de préférence un groupe de formule : . Procédé de préparation selon l’une quelconque des revendications précédentes, dans lequel M est un principe actif choisi parmi : le méthotrexate, un immunomodulateur, la duocarmycine, la combrétastatine, la calichéamicine, la monométhylauristatine E (MMAE), la monométhylauristatine F (MMAF), la maytansine, le DM1, le DM4, le SN38, l’amanitine et ses analogues, la pyrrolobenzodiazépine, un dimère de pyrrolobenzodiazépine, la pyrrolopyridodiazépine, un dimère de pyrrolopyridodiazépine, un inhibiteur de l’histone désacétylase, un inhibiteur de tyrosine kinase, la ricine ; de préférence M est l’amanitine, un dimère de pyrrolobenzodiazépine, la MMAF ou la MMAE. Mélange de conjugués anticorps-médicament de formule (I) susceptible d’être obtenu par le procédé selon l’une quelconque des revendications précédentes, ledit mélange comprenant majoritairement un conjugué dans lequel u = 2, 3 ou 5, étant entendu que lorsque le mélange contient majoritairement un conjugué comprenant deux molécules d’intérêt M fixées sur l’anticorps ou sur le fragment F(ab’) 2 (u = 2), ces 2 molécules d’intérêt M sont différentes l’une de l’autre. Composition comprenant un mélange de conjugués anticorps-médicament selon la revendication 12.