FR 3135617 A1 20231124 FR 2204890 A 20220520 ------ Nano-assemblages à base de curcumine ou de dérivé de la curcumine et leur procédé de préparation La présente invention porte sur un nano-assemblage formé par un auto-assemblage d’un composé choisi parmi les composés de Formule (Ia) : R représentant un groupe alkyle ; et les composés de Formule (Ib) : (Ib), ledit composé de Formule (Ib) étant associé à au moins une nanoparticule super-paramagnétique. Nano-assemblages à base de curcumine ou de dérivé de la curcumine et leur procédé de préparation La présente invention porte sur des nano-assemblages à base de curcumine ou de dérivé de la curcumine, leur procédé de préparation et leur utilisation. L’hyperthermie liquide magnétique est une technique de traitement du cancer dans laquelle des nanoparticules magnétiques sont administrées à un patient à proximité d’une tumeur. Le patient est ensuite soumis à un champ magnétique alternatif appliqué localement, de telle sorte que les nanoparticules magnétiques s’échauffent et émettent de la chaleur à leur proximité, permettant ainsi d’augmenter la température de la tumeur, soit pour entraîner l’apoptose des cellules cancéreuses (dans ce cas l’échauffement local atteint une température de 42-43°C) soit pour les sensibiliser pour un traitement chimiothérapeutique ultérieur. Des nanoparticules magnétiques peuvent également être utilisées dans des méthodes d’imagerie. Par exemple, l’imagerie à particule magnétique (IPM) est une technique tomographique émergente non invasive offrant une grande résolution (théoriquement 200-500 μm), une haute sensibilité (qui pourrait se rapprocher de 10 -7 -10 -8 M) et une imagerie en temps réel. La curcumine est utilisée dans de multiples indications thérapeutiques, car cette molécule présente un potentiel thérapeutique intéressant notamment comme anti-inflammatoires et anti-cancéreux. Toutefois, son utilisation à des fins thérapeutiques connait trois limitations. Premièrement, son caractère faiblement hydrophile entraîne sa faible solubilité dans l’eau, ce qui est un frein à son utilisation comme composé thérapeutique. Deuxièmement, sa relative stabilité chimique qui conduit à une rapide décomposition de la molécule est également un frein à son utilisation thérapeutique. Enfin, la curcumine connait deux formes mésomères : une forme dicétone, responsable du caractère anti-inflammatoire et anti-cancéreux de la molécule et une forme énol. Malheureusement en solution, la curcumine se trouve principalement dans sa forme énol. De nombreuses publications décrivent l’encapsulation de la curcumine dans une matrice polymérique. Cependant, la taille de ces nano-assemblages est élevée, supérieure à 100 nm, ce qui provoque un faible temps de circulation dans le sang, une diffusion très lente voire nulle dans les matrices visqueuses extracellulaires, une internalisation dans les cellules très ralentie ce qui peut engendrer des phénomènes de vésiculation. La taille des nanoparticules ou nano-assemblages est un paramètre critique dans le contrôle de leurs biodistributions. En effet, les nanoparticules inférieures à 10 nm ont une taille inférieure à la barrière de filtration rénale et sont donc rapidement éliminées. Hoshyar, N.; Gray, S.; Han, H.; Bao, G. The Effect of Nanoparticle Size on in Vivo Pharmacokinetics and Cellular Interaction. Nanomed. 2016 , 11 (6), 673–692. A contrario, des nanoparticules avec des tailles supérieures à 200 nm sont rapidement prises en charge par le système phagocytaire mononucléé et une taille limite de 150 nm est généralement admise pour éviter une filtration par la rate. Il apparait qu’une taille comprise entre 10 et 150 nm permet une bonne circulation des nanoparticules dans le sang. Par contre, pour une bonne internalisation cellulaire par endocytose, il est décrit que les nanoparticules doivent avoir une taille comprise entre 30 et 60 nm. Des modèles thermodynamiques prédisent même que la taille idéale pour une internalisation cellulaire efficace est de 50 nm. Zhang, S.; Li, J.; Lykotrafitis, G.; Bao, G.; Suresh, S. Size-Dependent Endocytosis of Nanoparticles. Adv. Mater. 2009 , 21 (4), 419–424. Cette taille a depuis été validée expérimentalement. Lu, F.; Wu, S.-H.; Hung, Y.; Mou, C.-Y. Size Effect on Cell Uptake in Well-Suspended, Uniform Mesoporous Silica Nanoparticles. Small 2009 , 5 (12), 1408–1413 ; Xu, W.; Zhou, M.; Guo, Z.; Lin, S.; Li, M.; Kang, Q.; Xu, Y.; Zhang, X.; Xie, J. Impact of Macroporous Silica Nanoparticles at Sub-50nm on Bio-Behaviors and Biosafety in Drug-Resistant Cancer Models. Colloids Surf. B Biointerfaces 2021 , 206 , 111912 ; Jiang, W.; Kim, B. Y. S.; Rutka, J. T.; Chan, W. C. W. Nanoparticle-Mediated Cellular Response Is Size-Dependent. Nat. Nanotechnol. 2008 , 3 (3), 145–150. Or, il s’avère que des nano-assemblages de la curcumine dans cette gamme de taille ne sont pas décrit dans la littérature. De plus, la curcumine n'est pas la seule espèce composant la nanoparticule et est généralement l’espèce minoritaire. De plus, la curcumine possède une très mauvaise solubilité dans l’eau. Par analyse HPLC, la solubilité de la curcumine dans l’eau ou dans un tampon aqueux à pH = 5 est de 0,011 µg/mL Tønnesen, H. H.; Karlsen, J. Studies on Curcumin and Curcuminoids. Z. Für Lebensm.-Unters. Forsch. 1985 , 180 (2), 132–134. Des études utilisant une méthode de détermination par spectrométrie UV-Visible donne une valeur plus importante de 0,6 µg/mL, Kurien, B. T.; Singh, A.; Matsumoto, H.; Scofield, R. H. Improving the Solubility and Pharmacological Efficacy of Curcumin by Heat Treatment. Assay Drug Dev. Technol. 2007 , 5 (4), 567–576. Cette faible solubilité de la curcumine dans l’eau rend difficile son utilisation dans le corps humain. La présente invention vise à résoudre ces inconvénients en utilisant un dérivé de la curcumine améliorant la solubilité et la stabilité de la molécule en phase aqueuse, permettant de bloquer la molécule dans sa forme dicétone, biologiquement active. Afin d’augmenter la quantité de dérivé de curcumine dans l’eau, la présente invention propose non pas d’augmenter les propriétés hydrophiles du dérivé de curcumine mais plutôt d’augmenter l’hydrophobicité de ce dernier afin de permettre son auto-assemblage dans l’eau. L’auto-assemblage est un processus dans lequel des composants chimiques tels que des molécules, nanoparticules métalliques, colloïdes, polymères ou tout autre composé s’organisent en structures ordonnées de manière spontanée par des interactions physico-chimiques telles que des liaisons chimiques faibles non covalentes. Ainsi, l’hydrophobicité du dérivé de la curcumine est contrôlée pour pouvoir former des nano-assemblages de petite taille. Cette formulation sous forme de nano-assemblages permet d’augmenter l’index thérapeutique du dérivé de curcumine en limitant sa diffusion non spécifique alors observée pour les composés moléculaires. La petite taille des nano-assemblages obtenus permet de faciliter les interactions avec les cellules du corps et d’augmenter leur vitesse de circulation dans le sang ainsi que leur diffusion dans les milieux visqueux, par exemple dans les matrices extracellulaires. Il a également été découvert de manière surprenante que l’association de curcumine avec une nano-particule super-paramagnétique permet de former un nano-assemblage présentant une bonne concentration massique dans l’eau. A cet effet, la présente invention porte sur un nano-assemblage formé par un auto-assemblage d’un composé choisi parmi les composés de Formule (Ia) : R représentant un groupe alkyle ; et le composé de Formule (Ib) : (Ib), ledit composé de Formule (Ib) étant associé à au moins une nanoparticule super-paramagnétique. Lorsque le composé de Formule (Ia) ou de Formule (Ib) est associé à au moins une nanoparticule super-paramagnétique, le nano-assemblage résultant peut être dénommé nano-assemblage hydride magnétique. R peut représenter un groupe alkyle comportant au moins 4 atomes de carbone, de préférence comportant entre 4 et 16 atomes de carbone. En particulier, R peut être choisi parmi butyle, pentyle, octyle, undécyle, dodécyle, tridécyle, tétradécyle, pentadécyle et octadécyle. Le nano-assemblage selon la présente invention peut être est constitué par auto-assemblage du composé de Formule (Ia) seulement. Ledit nano-assemblage peut alors être sphérique. Un tel nano-assemblage peut être dénommé nano-assemblage organique. Le nano-assemblage peut alors présenter un diamètre, tel que mesuré par microscopie électronique en transmission, compris entre 40 nm et 110 nm. Il peut également présenter un potentiel zêta, tel que mesuré par zêtamétrie, compris entre -30 mV et -40 mV. La mesure de zêtamétrie peut être réalisée à 25°C. La valeur du potentiel zêta peut être déduite de la mobilité éléctrophorétique en utilisant un modèle de Smoluchowski. Le nano-assemblage peut être enrobé par un polymère de stabilisation. Le polymère de stabilisation peut un poly-électrolyte cationique. En particulier, le poly-électrolyte cationique peut être un polymère à base de poly- L -lysine. Le polymère de stabilisation peut être fonctionnalisé par une fonction apte à être associée par bioconjugaison à une fonction complémentaire, par exemple par chimie click ou couplage peptidique, et le nano-assemblage peut être couplé à une molécule d’intérêt, notamment choisie parmi les peptides, les fluorophores ou les biomolécules, la molécule d’intérêt étant fonctionnalisée par une fonction complémentaire de la fonction du polymère de stabilisation fonctionnalisé. En particulier, le polymère de stabilisation peut être fonctionnalisé par une fonction alcyne et la molécule d’intérêt par une fonction azide afin de pouvoir conduire la bioconjugaison de la molécule d’intérêt et du polymère de stabilisation par chimie click. Dans un mode de réalisation particulier, un composé de Formule (Ia) est associé à au moins une nanoparticule super-paramagnétique. L’au moins une nanoparticule super-paramagnétique peut être composée d’oxyde de fer. En particulier, lorsqu’il y a plus d’une nanoparticule super-paramagnétique, la ou les autres nanoparticules super-paramagnétiques peuvent être de taille et de forme différente. L’au moins une nanoparticule super-paramagnétique peut présenter : une forme sphérique avec un diamètre compris entre 6 et 20 nm, tel que mesuré par microscopie électronique en transmission ; ou une forme cubique avec une arête comprise entre 10 et 70 nm, telle que mesurée par microscopie électronique en transmission ; ou une forme de bâtonnet avec une longueur comprise entre 30 et 50 nm et une largeur comprise entre 6 et 8 nm, telles que mesurées par microscopie électronique en transmission. Le nano-assemblage peut être sphérique et présenter un diamètre, tel que mesuré par microscopie électronique en transmission, compris entre 40 nm et 250 nm. Il peut alors présenter un potentiel zêta, tel que mesuré par zêtamétrie, compris entre +25 mV et +40 mV. L’invention porte également sur un procédé de préparation d’un nano-assemblage selon l’invention, caractérisé par le fait que l’on conduit une flash-nanoprécipitation par les étapes suivantes : dans une première seringue, on place une solution du composé de Formule (Ia) ou de Formule (Ib) dans un solvant miscible avec l’eau, choisi parmi le tetrahydrofurane, l’acétone ou l’acétonitrile, laquelle contient, le cas échéant, au moins une nano-particule super-paramagnétique, et dans une deuxième seringue on place de l’eau ou un tampon phosphate salin, lequel contient, le cas échéant, un polymère de stabilisation ; on injecte le contenu des deux seringues dans un mélangeur de nanoprécipitation à une vitesse de 2 à 10 mm/s, en particulier à 5 mm/s ; et on récupère les nano-assemblages dans un flacon réceptacle contenant de l’eau, et le cas échéant, un polymère de stabilisation. En particulier, le flacon réceptacle peut contenir de l’eau en une quantité permettant de réaliser une dilution de l’ensemble du milieu réactionnel sortant du mélangeur par un facteur d’au moins cinq, de préférence d’au moins dix. La présente invention porte également sur une composition pharmaceutique comprenant un ou plusieurs nano-assemblages selon la présente invention. La présente invention porte également sur un nano-assemblage selon la présente invention pour son utilisation dans le traitement de maladies inflammatoires. La présente invention porte également sur un nano-assemblage selon la présente invention pour son utilisation dans le traitement du cancer. La présente invention porte également sur un nano-assemblage selon la présente invention pour son utilisation en hyperthermie liquide magnétique. La présente invention porte également sur un agent de contraste pour l’imagerie à résonnance magnétique caractérisé par le fait qu’il comprend des nano-assemblages selon la présente invention. La présente invention porte également sur un agent pour l’imagerie à particules magnétique caractérisé par le fait qu’il comprend des nano-assemblages selon la présente invention. Le composé de Formule (Ia) peut être obtenu à l’aide d’une synthèse en deux étapes, la première étape consistant en un couplage amidique de l’acide 4-formylbenzoïque avec un aminoalcane et la seconde étape consistant en la condensation de Knoevenagel du composé obtenu à la première étape avec de la curcumine sous forme énol pour obtenir un tel composé de Formule (Ia) selon la présente invention. Le schéma général de synthèse de ce composé de Formule (Ia) est indiqué ci-dessous : Des nanoparticules super-paramagnétiques de forme sphérique et cubique peuvent être obtenues par décomposition thermique d’un précurseur de fer(III), comme par exemple l’acétylacétonate de fer(III). Le précurseur de fer(III) est dissous dans un solvant ou un mélange de solvants à haute température d’ébullition, supérieure à 280°C, en présence d’un acide gras, tel que par exemple l’acide oléique ou l’acide décanoïque, et éventuellement d’une amine, telle que par exemple l’oléylamine et l’ensemble des composés est chauffé à haute température, supérieure à 200°C. Des nanoparticules super-paramagnétiques en forme de bâtonnet sont préparées par voie solvothermale. Pour cela, du pentacarbonyle de fer est mis en solution dans un solvant à haut point d’ébullition, tel que par exemple le 1-octanol en présence d’un acide gras, tel que par exemple l’acide oléïque et d’une amine, telle que par exemple l’hexadécylamine. L’ensemble des composés est chauffé dans un autoclave à 200°C. La présente le schéma général de synthèse nanoparticules super-paramagnétiques de forme sphérique (voie A), cubique (voie B) et en bâtonnet (voie C). Les nano-assemblages selon la présente invention peuvent être préparés par flash nano-précipitation. Le procédé de flash nano-précipitation peut être conduit dans un appareillage schématisé à la . Sur la , on a représenté de façon schématique le dispositif utilisé pour la synthèse des nano-assemblages selon l’invention par un procédé de flash-nanoprécipitation. Ce dispositif comporte un mélangeur 1 doté de deux orifices d’entrée 2 et d’un orifice de sortie 3. Le mélangeur 1 est typiquement un mélangeur à jets d’impacts de liquides confinés. L’un des orifices d’entrée 2 du mélangeur 1 est en communication fluidique avec une première seringue 4 tandis que le second orifice d’entrée 2 est en communication fluidique avec une seconde seringue 5. Une enclume 6 est positionnée au-dessus des pistons des seringues 4 et 5 afin de pouvoir procéder à l’injection simultanée des contenus des seringues 4 et 5. Un flacon réceptacle 7 est placé sous l’orifice de sortie 3 du mélangeur 1. Pour la synthèse des nano-assemblages organiques selon l’invention, on peut placer une solution du composé de Formule (Ia) dans un solvant tel que le tetrahydrofurane, l’acétone ou l’acétonitrile, dans la première seringue 4. Dans l’autre seringue 5, on place de l’eau ou du tampon phosphate salin, en présence ou non d’un polymère de stabilisation pour obtenir au moins un nano-assemblage organique. Pour la synthèse des nano-assemblages hybrides magnétiques selon l’invention, on peut placer une solution du composé de Formule (Ia) ou de Formule (Ib) et au moins une nanoparticule super-paramagnétique dans un solvant tel que le tetrahydrofurane, l’acétone ou l’acétonitrile, dans la première seringue 4. Dans l’autre seringue 5, on place de l’eau ou du tampon phosphate salin, en présence d’un polymère de stabilisation pour obtenir un nano-assemblage hybride magnétique. Par déplacement de l’enclume 6, les contenus des seringues 4 et 5 sont injectés simultanément dans le mélangeur 1. Le mélange des contenus des deux seringues dans le mélangeur 1 provoque la formation des nano-assemblages qui sont ensuite évacués dudit mélangeur par l’orifice de sortie 3 pour être recueillis dans le flacon réceptacle 7. Facultativement, le polymère de stabilisation peut présenter une fonctionnalisation pour pouvoir greffer des composés d’intérêts à la surface du nano-assemblage par chimie « Click ». Typiquement, le greffage de composés d’intérêts peut se faire par une réaction de cycloaddition. Cette réaction est catalysée par du Cu(I) à l’interface entre des nano-assemblages, ces derniers présentant par l’intermédiaire du polymère de stabilisation une fonction alcyne et une molécule commerciale d’intérêt comprenant une fonction azide. La est une représentation schématique d’un nano-assemblage organique (NAO) selon l’invention. La est une représentation schématique d’un nano-assemblage hybride magnétique selon l’invention. Sur la , le nano-assemblage hybride magnétique (NAHM) contient des nanoparticules super-paramagnétiques (NPM) et est enrobé par un polymère de stabilisation (POLY). Les exemples suivants illustrent la présente invention sans toutefois en limiter la portée. Exemple 1 : synthèse du composé de Formule (Ia) Etape 1 : couplage amidique A 2 g d’acide 4-formylbenzoïque (13,3 mmol) dans du dichlorométhane anhydre (40 mL) sont ajoutés 2,9 mL de chlorure d’oxalyle (33,3 mmol) et deux ou trois gouttes de diméthylformamide anhydre. Le milieu réactionnel est agité à température ambiante pendant deux heures puis évaporé à sec à l’aide d’un évaporateur rotatif. Le brut réactionnel est mis en solution dans 40 mL de diméthylformamide anhydre et l’amine primaire aliphatique (20 mmol) est ajoutée. Le milieu est chauffé à 90 °C pendant 24 heures. Après retour à température ambiante, le précipité est filtré puis lavé 3 fois avec une solution de NaOH 1M afin d’éliminer le réactif acide 4-formylbenzoïque, puis neutralisé par une solution de HCl 1M et lavé 3 fois avec de l’éther diéthylique pour éliminer l’amine aliphatique en excès. Aucune purification supplémentaire n’est nécessaire. L’amine primaire aliphatique est choisie parmi la butylamine, la pentylamine, l’octylamine, l’undécylamine, la dodécylamine, la tridécylamine, la tétradécylamine, la pentadécylamine et l’octadécylamine, en fonction de la longueur de la chaîne alkyle R souhaitée. La quantité de matière de l’amine primaire aliphatique utilisée est la même quelle que soit la longueur de la chaîne de l’amine. Etape 2 : Condensation de Knoevenagel A 0,76 g du composé obtenu à l’étape 1 (2,2mmol), 0,37 g de curcumine (1 mmol) sont ajoutés dans 40 mL de chloroforme anhydride, de dichlorométhane anhydride avec l’ajout éventuel d’une faible quantité de diméthylsulfoxyde suivant la solubilité du composé obtenu à l’étape 1. Puis, 20 µL de pipéridine (0,2 mmol), 12 µL d’acide acétique glacial (0,2 mmol) et 2,5 g de tamis moléculaire 4Å sont ensuite ajoutés. Le milieu est agité à température ambiante pendant 48 heures. Après filtration pour éliminer le tamis moléculaire, le milieu est évaporé à l’évaporateur rotatif afin d’éliminer le chloroforme et les catalyseurs. Le milieu est dilué dans le dichlorométhane et extrait plusieurs fois à l’eau. Après séchage sur sulfate de sodium anhydre et évaporation, le brut réactionnel est purifié sur colonne de chromatographie de silice avec comme éluant un mélange dichlorométhane/acétate d’éthyle 8/2. Caractère hydrophobe des composés de Formule (Ia) Pour déterminer le caractère hydrophobe des composés de Formule (Ia), des mesures d’angle de contact ont été effectuées. Une solution de curcumine ou de composé de Formule (Ia) a été préparée à une concentration de 2,2 mM. Puis, 3 dépôts successifs de 100 μL ont été réalisés sur une lame de microscope en verre par enduction centrifuge (vitesse de rotation de 2000 tpm, 1,5 min de séchage entre chaque dépôt) afin de former un film mince et homogène. Pour les mesures d’angle de contact, environ 8 μL de solvant sont déposés sur le film mince préparé ci-dessus à l’aide d’une seringue à injection automatique. Deux solvants ont été utilisés : l’eau et le diiodométhane. La montre l’évolution de l’angle de contact en fonction du composé étudié du dérivé de curcumine et plus précisément, pour les composés de Formule (Ia) avec R = C 8 , C 12 , C 14 et C 16 . Dans les deux cas, eau et diiodométhane alors utilisés comme solvants, une augmentation de l’angle de contact est observée avec l’augmentation de la longueur de la chaine du groupe R. La curcumine présente la valeur la plus faible de 77° avec l’eau. Cette valeur confirme que la curcumine ainsi que ses dérivés sont des molécules peu hydrophiles, entrainant leur faible solubilité dans l’eau mais pas assez hydrophobes pour former des nano-assemblages stables. Le film du composé de Formule (Ia) avec R = C 8 présente un angle de contact avec l’eau de 88°. Pour les autres composés de Formule (Ia), les angles de contact sont supérieurs à 90 avec une valeur maximale de 103° pour le composé de Formule (Ia) avec R = C 16 . La même tendance est observée pour les angles de contact avec le solvant diiodométhane. Exemple 2 : synthèse de nano-assemblages organiques selon l’invention Synthèse Une solution organique à 0,55 mM du composé de Formule (Ia) obtenu dans l’Exemple 1 est préparée dans 1 mL de tétrahydrofurane. On utilise un dispositif de préparation par flash-nanoprécipitation tel que décrit ci-dessus en relation avec la . Le mélangeur 1 est un mélangeur à jets d’impact de liquides confinés. On place la solution organique du composé de Formule (Ia) dans la seringue 4 et on place de l’eau dans la seconde seringue 5. Les deux pistons des seringues sont poussés simultanément à une vitesse de 5 mm/s pour amener les solutions dans le mélangeur 1, de manière simultanée. En sortie de mélangeur, la solution de nano-assemblages est directement diluée dans 24 mL d’eau. Concentration massique dans l’eau Les nano-assemblages organiques selon la présente invention peuvent avoir une concentration molaire allant jusqu’à 0,4 mmol/L, soit une concentration massique comprise entre 200 et 290 µg/mL (selon le dérivé de la curcumine utilisé). La méthode selon l’invention permet donc d’augmenter la concentration massique de la molécule d’un facteur 25000 environ par rapport à la solubilité la plus faible de la curcumine de 0,011 µg/mL. Caractérisation Afin d’obtenir des informations sur la morphologie des nano-assemblages, des photos à l’échelle nanométrique sont réalisées grâce à un microscope électronique en transmission (MET). L’analyse de ces photos permet également d’obtenir le diamètre des nano-assemblages, noté d MET . Pour cela, une distribution en taille d’environ 300 nano-assemblages par échantillon est réalisée. Cette distribution est ensuite modélisée par une fonction log normale. Les échantillons sont déposés sur des grilles en cuivre recouverte d’un film de carbone et sont ensuite laissés à sécher à l’air libre. La est une photo MET montrant des nano-assemblages selon la présente invention. La mesure du potentiel zêta, noté ζ, est basé sur la mesure de la mobilité électrophorétique des nano-assemblages, noté U E . Un champ électrique est appliqué sur l’échantillon et les particules chargées en suspension vont migrer vers l’électrode de charge opposée. La vitesse de migration des nano-assemblages est ainsi mesurée. Il est alors possible de remonter à la valeur du potentiel zêta, ζ, grâce à l’équation de Henry Equation de Henry Avec ε , constant diélectrique de l’eau, η , viscosité dynamique de l’eau et f(κa) , fonction de Henry. Nous ferons ici l’approximation de Smoluchowski i.e. f(κa) = 1.5. Le tableau 1 ci-dessous indique les valeurs de diamètre MET, et de potentiel zêta pour les nano-assemblages organiques selon l’invention en fonction de la longueur de la chaîne carbonée R du composé de Formule (Ia) d MET (nm) ζ (mV) R = C 8 86,9 ± 8,3 -42,6 ± 9,0 R = C 12 68,0 ± 13,4 -33,5 ± 3,9 R = C 14 48,5 ± 1,1 -32,8 ± 2,8 R = C 16 50,8 ± 1,0 -30,9 ± 2,3 Pour les quatre systèmes étudiés, la morphologie des nano-assemblages organiques est la même. Des sphères régulières en forme et en taille sont observées. Une corrélation peut être observée entre la taille des nano-assemblages et la longueur de la chaîne latérale du composé de Formule (Ia) qui la compose. Plus le composé de Formule (Ia) a une chaîne latérale longue, plus la taille du nano-assemblage organique est petite. Par exemple, le composé avec R = C 8 permet d’obtenir des nano-assemblages de 87 nm de diamètre, tandis que les composés avec R > C 14 permettent d’obtenir des nano-assemblages d’environ 50 nm de diamètre soit la taille idéale pour obtenir une longue circulation dans le sang et une bonne internalisation cellulaire. Les composés de Formule (Ia) avec les chaînes les plus longues sont les plus hydrophobes. Lors de la nanoprécipitation, de nombreux nucléis se forment pour limiter localement les interactions avec le milieu aqueux environnant. La concentration locale en composé organique libre diminue alors fortement. Il y a donc moins de composés organiques disponibles pour venir alimenter ces nombreux nucléis, ce qui donne, au final, une taille de nano-assemblages plus petite. Pour chaque système, le potentiel zêta, ζ, est négatif et inférieur à -30 mV, indiquant une bonne stabilité colloïdale des nano-assemblages organiques. En effet, cela montre la présence d’interaction électrostatique permettent aux nano-assemblages organiques de se repousser et ainsi d’éviter leur agrégation. Des mesures similaires ont été réalisées sur des nano-assemblages organiques préparés tel que décrit ci-dessus avec une solution de curcumine à la place de la solution du composé de Formule (Ia). La curcumine étant un composé peu hydrophobe, il est difficile de former des nano-assemblages stables. Plusieurs essais ont été menés et les résultats sont très peu reproductibles. Dans les mêmes conditions de synthèse, il est parfois possible de former des nano-assemblages ou, plus fréquemment des précipités de taille micrométrique. Stabilité des nano-assemblages La stabilité des nano-assemblages dans le temps a été étudiée sur 3 mois avec des mesures à T = 0, T = 1 jour, 2 jours, 7 jours, 30 jours et 90 jours d’incubation à 37 °C. Cinq systèmes ont été étudiés : les nano-assemblages à base de curcumine, les nano-assemblages selon l’invention avec R = C 8 , C 12 , C 14 et C 16 . Trois techniques de caractérisations ont été couplées : l’imagerie par MET, le potentiel zêta, ζ, et la chromatographie liquide haute performance (HPLC). Pour chaque système, seize nanoprécipitations successives, telles que présentées ci-dessus, ont été réalisées puis réunies dans un même flacon pour avoir un total de 40 mL de solution de nano-assemblages homogène. A chaque intervalle de temps, tels que définis dans le précédent paragraphe, 2x2 mL de solution sont prélevés et lyophilisés pour les mesures HPLC, 5 μL sont déposés sur une grille MET et laissés sécher à l’air, 3 mL sont prélevés pour les mesures de potentiel zêta, ζ. Tous les échantillons ont été analysés dans les mêmes conditions de concentration. La présente l’évolution du diamètre MET en fonction du temps, la l’évolution du potentiel zêta, ζ, en fonction du temps et la l’évolution de la concentration en curcumine ou en composé de Formule (Ia) en fonction du temps mesuré par HPLC. Sur la légende des Figures 7, 8 et 9 l’abréviation CDNP désigne les nano-assemblages, Curc indique que les nano-assemblages ont été obtenus avec de la curcumine et C 8 , C 12 , C 14 et C 16 indiquent que les nano-assemblages ont été obtenus avec le composé de Formule (Ia) avec R = C 8 , C 12 , C 14 et C 16 . Pour chaque système le potentiel zêta, ζ, reste stable, négatif avec des valeurs comprises entre -30 et -40 mV. Des analyses HPLC ont également été réalisées. Après lyophilisation, les nano-assemblages sont dissociés dans le méthanol afin d’obtenir une solution organique de composés moléculaires de curcumine ou de composé de Formule (Ia). Cette étude HPLC permet de quantifier la stabilité moléculaire des différents composés quand ils sont sous forme de nano-assemblages et de déterminer les éventuels produits de dégradation des composés. La montre l’évolution de la concentration en curcumine ou composé de Formule (Ia) mesurée par HPLC au cours du temps, normalisée par rapport à la concentration théorique en composé moléculaire initialement injectée. Pour la curcumine, à T = 0, seulement 60 % de la concentration théorique injectée est mesurée. La curcumine n’étant pas assez hydrophobe, elle ne permet pas de former des nano-assemblages stables. Dès la nanoprécipitation, une part non négligeable de composé organique précipite au fond du pilulier. Le prélèvement n’est alors ni homogène ni représentatif de la globalité de l’échantillon. Une forte dégradation est observée après 30 jours d’incubation, seul 10% de la curcumine est dosée. Enfin après 90 jours d’incubation, la quantité de curcumine restante est inférieure à la limite de détection. Les composés de Formule (Ia) avec R = C 8 , C 12 et C 14 ont un profil relativement similaire. Environ 85 % des composés sont détectés à T = 0. Aucun précipité n’est observé à l’œil nu (contrairement à la curcumine) lors de la nanoprécipitation. L’écart entre la concentration dosée et la concentration initialement injectée peut être due à des pertes de produits lors de la lyophilisation. La concentration en composés de Formule (Ia) avec R = C 8 , C 12 et C 14 reste relativement stable sur les deux premiers jours d’analyse (5 % de dégradation pour le composé de Formule (Ia) avec R = C 8 et 19 % de dégradation pour les composés de Formule (Ia) avec R = C 12 et C 14 ). Après 90 jours d’incubation, une faible concentration en composé de Formule (Ia) avec R = C 12 et C 14 est relevée (inférieure à 5 %). Pour le composé de Formule (Ia) avec R = C 8 , à 90 jours d’incubation, encore 27 % du produit est détecté. Pour le composé de Formule (Ia) avec R = C 16 , seulement 75 % du composé est dosé à T = 0. Une constante et rapide diminution de la concentration est observée lors des deux premiers jours d’incubation (61 % à 1 jour et 48 % à 2 jours). Cette diminution est toujours effective pour les temps les plus longs mais en moindre mesure (28 % de composé dosé à 7 jours et 16 % à 30 jours). Après 90 jours d’incubation, comme pour les composés de Formule (Ia) avec R = C 12 et C 14 , moins de 5 % de composé est détecté. Pour chacun des systèmes, aucun des produits de dégradation de la curcumine (vanilline, acide férulique et feruloylméthane) n’a pu être détecté. Pour les composés de Formule (Ia), aucune trace de curcumine n’a pu être mise en évidence. Cette étude de suivi de dégradation des composés de Formule (Ia) et de curcumine quand ils sont sous forme de nano-assemblages organiques ont pu mettre en évidence certains éléments. Premièrement, l’étude a pu confirmer une nouvelle fois que la curcumine ne forme pas de nano-assemblages stables et que le composé moléculaire se décompose rapidement. Ensuite, des différences de comportement ont été observées en fonction de la longueur de la chaine carbonée du composé de Formule (Ia). Les composés de Formule (Ia) avec R = C 12 et C 14 ont un comportement très similaire avec une bonne stabilité sur les temps courts. Le composé de Formule (Ia) avec R = C 8 montre la stabilité chimique la plus importante. Les mesures de MET ont montré la faible stabilité colloïdale des nano-assemblages avec R = C 8 due à une croissance d’Ostwald assez rapide, mais sa stabilité reste toutefois satisfaisante pour une utilisation rapide du nano-assemblage. Le diamètre des nano-assemblages avec R = C 12 , C 14 et C 16 varie peu au cours du temps et il n’y a pas de modification de morphologie des nano-assemblages organiques. Pour tous les systèmes, le potentiel zêta, ζ, reste constant au cours du temps, avec des valeurs comprises entre -30 et -40 mV. Enfin, toutes les analyses effectuées montrent que la curcumine ne permet pas à elle seule de former des nano-assemblages. Les mesures HPLC ont également mis en évidence que les modifications structurelles apportées via la condensation de Knoevenagel ont permis d’accroître la stabilité moléculaire des dérivés de Formule (Ia) par rapport à la curcumine. Exemple 3 : synthèse des nanoparticules super-paramagnétiques Nanoparticules sphériques Dans un ballon bicol de 100 mL, on a introduit 1,4 g d’acétylacétonate de fer(III) (4 mmol), 7,1 g d’acide oléïque (25 mmol) et 12 mL d’oléylamine (36 mmol)). Le milieu est chauffé à 120 °C sous agitation magnétique (1200 tpm) et 3 cycles de vide-argon sont réalisés. Le milieu est maintenu à cette température sous vide partiel pendant 2 heures. La réaction est alors mise sous argon et chauffé à 220 °C pendant 30 min, puis, porté à reflux pendant 40 min. Après retour à 120 °C, les nanoparticules formées sont oxydées sous air pendant 1h30. Après retour à température ambiante, un excès d’éthanol est ajouté pour précipiter les nanoparticules puis centrifugés (10 000 tpm, 10 min). Le culot est repris dans une solution d’acide oléique à 0,02% dans de l’hexane et précipité à nouveau dans l’éthanol puis centrifugé (10 000 tpm, 10 min). L’opération est ensuite répétée une fois. Finalement les nanoparticules sont stockées dans le THF. Suivant la qualité du vide, des nanoparticules sphériques de 6,2 nm (vide partiel = 3,7 mmbar) ou 12,1 nm (vide partiel = 0,9 mmbar) sont obtenues. La montre une photo MET des nanoparticules sphériques de 12,1 nm. Nanoparticules cubiques Dans un tricol de 50 mL surmonté d’un réfrigérant à eau et relié à une pompe à vide, sont introduits 0,35 g d’acétylacétonate de fer(III) (1 mmol) et 0,86 g d’acide décanoïque (5 mmol) dans un mélange de 23 ml de dibenzylether et 2 mL de squalane. Le milieu est chauffé à 65 °C sous agitation magnétique (1200 tpm) et 3 cycles de vide-argon de 20 minutes chacun sont réalisés. Le milieu est ensuite maintenu à cette température sous vide partiel (0,9 mmbar) pendant 1 heure. Puis, la température est augmentée jusqu’à 220 °C sous argon avec une rampe de température de 3 °C/min. Le milieu est chauffé à 220 °C pendant 2h30. Enfin, le milieu est chauffé jusqu’à reflux et y est maintenu pendant 30 min. Après retour à température ambiante, un excès d’éthanol est ajouté pour précipiter les nanoparticules puis centrifugés (10 000 tpm, 10 min). Le culot est repris dans une solution d’acide oléique à 0,02% dans de l’hexane et précipité à nouveau dans l’éthanol puis centrifugé (10 000 tpm, 10 min). L’opération est ensuite répétée une fois. Finalement les nanoparticules sont stockées dans le THF. La montre une photo MET des nanoparticules cubiques de 22,1 nm. Nanoparticules en forme de bâtonnet Dans un ballon de 50 mL, sont introduits 0,605 g d’hexadécylamine et 1,795 g d’acide oléique dans 8mL de 1-octanol. La solution est chauffée à 55°C pendant 30 minutes. A la suite de quoi la solution est laissée revenir à température ambiante. 2 mL de pentacarbonyle de fer sont alors ajoutés. Le mélange est ensuite agité pendant 1 heure à température ambiante. La solution est ensuite transférée dans un autoclave avec un insert de protection en téflon puis mise à chauffer dans un four à 200°C pendant 6 heures. Une fois la solution revenue à température ambiante, une grande quantité d’éthanol est ajoutée afin de faire précipiter les nano-bâtonnets. La solution est alors centrifugée pendant 10 min à 10 000 tpm. L’opération est ensuite répétée une fois. Finalement les nanoparticules sont stockées dans le THF. La montre une photo MET des nanoparticules en forme de bâtonnet obtenues avec une longueur de 49 nm et une épaisseur de 6,8 nm. Exemple 4 : synthèse d’un nano-assemblage hybride magnétique renfermant une nanoparticule super-paramagnétique Une solution organique à 0,825 mM en composé de Formule (Ib) et à 0,05 % en particules super-paramagnétiques (en masse de fer) de 6,2 nm obtenues à l’Exemple 3 est préparée dans 1 mL de THF. On prépare une solution aqueuse à 0,5 mg/mL en poly- L -lysine commerciale (Alamanda Polymers, Inc., Huntsville, AL, USA) dans 1 mL de PBS. On procède comme à l’Exemple 2 en plaçant la solution organique dans la seringue 4 et on place la solution aqueuse dans la seconde seringue 5. Les deux pistons des seringues sont poussés simultanément à une vitesse de 5 mm/s pour amener les solutions dans le mélangeur 1. En sortie de mélangeur, la solution de nano-assemblages est directement diluée dans 24 mL d’une solution aqueuse à 0,19 mg/mL en poly- L -lysine. La montre une photo MET du nano-assemblage obtenu d’un diamètre de 60,9 nm et d’un potentiel ζ = 34 mV. Propriétés de chauffage : Les propriétés de chauffage des nano-assemblages ont été mesurées par l’intermédiaire du taux d’absorption spécifique (SAR : Specific Absorption Rate) avec un champ magnétique alternatif appliqué à une fréquence de 486,55 kHz et une amplitude de 29,5 kA/m. Pour les nano-assemblages obtenus dans cet exemple, le SAR est de 447 W/g. Dans les mêmes conditions, les nanoparticules super-paramagnétiques seules ont une valeur de SAR de 6,4 W/g. Concentration massique dans l’eau Les nano-assemblages hybrides magnétiques selon la présente invention peuvent avoir une concentration molaire en composé de formule (Ib) de 0,32 mmol/L. Exemple 5 : synthèse d’un nano-assemblage hybride magnétique renfermant une nanoparticule super-paramagnétique Une solution organique à 0,55 mM en composé de Formule (Ia) avec R = C 14 et à 0,3 % en particules super-paramagnétiques (en masse de fer) de 6,2 nm obtenues à l’Exemple 3 est préparée dans 1 mL de THF. On prépare une solution aqueuse à 10 mg/mL en poly- L -lysine commerciale (Alamanda Polymers, Inc., Huntsville, AL, USA) dans 1 mL de PBS. On procède comme à l’Exemple 2 en plaçant la solution organique dans la seringue 4 et on place la solution aqueuse dans la seconde seringue 5. Les deux pistons des seringues sont poussés simultanément à une vitesse de 5 mm/s pour amener les solutions dans le mélangeur 1. En sortie de mélangeur, la solution de nano-assemblages est directement diluée dans 24 mL d’eau. La montre une photo MET d’un nano-assemblage obtenu d’un diamètre de d = 107, 6 nm et d’un potentiel zêta de ζ = +36 mV. Concentration massique dans l’eau Les nano-assemblages hybrides magnétiques selon la présente invention ont une concentration molaire de 0,21 mmol/L. Exemple 6 : fonctionnalisation d’un nano-assemblage hybride magnétique Un nano-assemblage hybride magnétique a été synthétisé comme à l’Exemple 4, à la différence que le polymère de stabilisation utilisé est de la poly- L -lysine fonctionnalisée par du propargyl-dPEG1-amide commerciale (Alamanda Polymers, Inc., Huntsville, AL, USA) ( ). Une solution organique à 0,55 mM en composé de Formule (Ib) et à 0,3 % en particules super-paramagnétiques (en masse de fer) obtenues à l’Exemple 3 avec un diamètre de 6,2 nm est préparée dans 1 mL de THF. On prépare une solution aqueuse à 5 mg/mL en poly- L -lysine fonctionnalisée par du propargyl-dPEG1-amide dans 1 mL de PBS. On procède comme à l’Exemple 2 en plaçant la solution organique dans la seringue 4 et on place la solution aqueuse dans la seconde seringue 5. Les deux pistons des seringues sont poussés simultanément à une vitesse de 5 mm/s pour amener les solutions dans le mélangeur 1. En sortie de mélangeur, la solution de nano-assemblages est directement diluée dans 24 mL d’eau. La montre une photo MET d’un nano-assemblage obtenu avec un diamètre d = 74 nm. La surface du nano-assemblage hybride magnétique est ensuite fonctionnalisée avec une molécule d’intérêt selon la réaction de chimie « click ». La montre le schéma réactionnel de la réaction de fonctionnalisation de la surface du nano-assemblage hybride magnétique. A partir d’une solution de nano-assemblages hybrides magnétiques fonctionnalisés par un polymère de type poly- L -lysine portant une fonction propargyle, sont ajoutés 100 µL d’une solution d’ascorbate de sodium à 0,009 mg/mL, 100 µL de solution de sulfate de cuivre à 0,011 mg/mL et 100 µL d’une solution de sulfo-cyanine5-azide (Jena Bioscience GmbH, Jena, Allemagne) à 0,25 mg/mL. Le milieu est agité à température ambiante pendant 24 heures. Trois lavages successifs par décantation magnétique sont réalisés pour éliminer les réactifs en excès. La montre une photo MET d’un nano-assemblage obtenu après fonctionnalisation de sa surface avec un fluorophore d’un diamètre d = 72,5 nm et d’un potentiel zêta ζ= 29 mV. – Nano-assemblage formé par un auto-assemblage d’un composé choisi parmi les composés de Formule (Ia) : R représentant un groupe alkyle ; et le composé de Formule (Ib) : (Ib), ledit composé de Formule (Ib) étant associé à au moins une nanoparticule super-paramagnétique. - Nano-assemblage selon la revendication 1, caractérisé par le fait que R représente un groupe alkyle comportant au moins 4 atomes de carbone, de préférence comportant entre 4 et 16 atomes de carbone. - Nano-assemblage selon l’une des revendications 1 ou 2, caractérisé par le fait que R est choisi parmi butyle, pentyle, octyle, undécyle, dodécyle, tridécyle, tétradécyle, pentadécyle et octadécyle. - Nano-assemblage selon l’une des revendications 1 à 3, caractérisé par le fait que le nano-assemblage est constitué par auto-assemblage du composé de Formule (Ia) seulement. - Nano-assemblage selon la revendication 4, caractérisé par le fait que le nano-assemblage est sphérique et présente un diamètre, tel que mesuré par microscopie électronique en transmission, compris entre 40 nm et 110 nm. - Nano-assemblage selon l’une des revendications 4 et 5, caractérisé par le fait que le nano-assemblage présente un potentiel zêta, tel que mesuré par zêtamétrie, compris entre -30 mV et -40 mV. - Nano-assemblage selon l’une des revendications 1 à 6, caractérisé par le fait que ledit nano-assemblage est enrobé par un polymère de stabilisation. - Nano-assemblage selon la revendication 7, caractérisé par le fait que le polymère de stabilisation est un poly-électrolyte cationique. - Nano-assemblage selon la revendication 8, caractérisé par le fait que le poly-électrolyte cationique est un polymère à base de poly- L -lysine. – Nano-assemblage selon l’une des revendications 7 à 9, caractérisé par le fait que le polymère de stabilisation est fonctionnalisé par une fonction apte à être associée par bioconjugaison à une fonction complémentaire, par exemple par chimie click ou couplage peptidique, et que le nano-assemblage est couplé à une molécule d’intérêt, notamment choisie parmi les peptides, les fluorophores ou les biomolécules, la molécule d’intérêt étant fonctionnalisée par une fonction complémentaire de la fonction du polymère de stabilisation fonctionnalisé. - Nano-assemblage selon l’une des revendications 1 à 3 et 7 à 10, caractérisé par le fait qu’un composé de Formule (Ia) est associé à au moins une nanoparticule super-paramagnétique. - Nano-assemblage selon la revendication 1 à 3 et 7 à 11, caractérisé par le fait que l’au moins une nanoparticule super-paramagnétique est composée d’oxyde de fer. - Nano-assemblage selon l’une des revendications 1 à 3 et 7 à 12, caractérisé par le fait que l’au moins une nanoparticule super-paramagnétique présente : une forme sphérique avec un diamètre compris entre 6 et 20 nm, tel que mesuré par microscopie électronique en transmission ; ou une forme cubique avec une arête comprise entre 10 et 70 nm, telle que mesurée par microscopie électronique en transmission ; ou une forme de bâtonnet avec une longueur comprise entre 30 et 50 nm et une largeur comprise entre 6 et 8 nm, telles que mesurées par microscopie électronique en transmission. - Nano-assemblage selon l’une des revendications 1 à 3 et 7 à 13, caractérisé par le fait que le nano-assemblage est sphérique et présente un diamètre, tel que mesuré par microscopie électronique en transmission, compris entre 40 nm et 250 nm. - Nano-assemblage selon la revendication 14, caractérisé par le fait que ledit nano-assemblage présente un potentiel zêta, tel que mesuré par zêtamétrie, compris entre +25 mV et +40 mV. – Procédé de préparation d’un nano-assemblage selon l’une des revendications 1 à 15, caractérisé par le fait que l’on conduit une flash-nanoprécipitation par les étapes suivantes : dans une première seringue, on place une solution du composé de Formule (Ia) ou (Ib) dans un solvant miscible avec l’eau, choisi parmi le tetrahydrofurane, l’acétone ou l’acétonitrile, laquelle contient, le cas échéant, au moins une nano-particule super-paramagnétique, et dans une deuxième seringue on place de l’eau ou un tampon phosphate salin, lequel contient, le cas échéant, un polymère de stabilisation ; on injecte le contenu des deux seringues dans un mélangeur de nanoprécipitation à une vitesse de 2 à 10 mm/s, en particulier à 5 mm/s ; et on récupère les nano-assemblages dans un flacon réceptacle contenant de l’eau, et le cas échéant, un polymère de stabilisation. - Composition pharmaceutique comprenant un ou plusieurs nano-assemblages selon l’une des revendications 1 à 15. – Nano-assemblage selon l’une des revendications 1 à 15 pour son utilisation dans le traitement de maladies inflammatoires – Nano-assemblage selon l’une des revendications 1 à 15 pour son utilisation dans le traitement du cancer. – Nano-assemblage selon l’une des revendications 1 à 3 et 7 à 15 pour son utilisation en hyperthermie liquide magnétique. - Agent de contraste pour l’imagerie à résonnance magnétique caractérisé par le fait qu’il comprend des nano-assemblages selon l’une des revendications 1 à 3 et 7 à 15. - Agent pour l’imagerie à particules magnétique caractérisé par le fait qu’il comprend des nano-assemblages selon l’une des revendications 1 à 3 et 7 à 15.