FR 3127503 A1 20230331 FR 2110163 A 20210927 Système de conservation et méthode de formulation écobiologique respectant le microbiote cutané. L’invention concerne une méthode de formulation écobiologique, consistant à sélectionner des conservateurs (ou des substances pouvant jouer ce rôle) ainsi que leurs concentrations d’utilisation, afin de permettre la conservation microbiologique de compositions topiques écobiologiques, tout en respectant le microbiote cutané. L’invention concerne une méthode de sélection des ingrédients ayant des propriétés bactéricides ainsi que leurs concentrations d’utilisation, afin de permettre la conservation de compositions topiques écobiologiques respectant le microbiote cutané. Cette composition est caractérisée en ce qu’elle comprend des ingrédients connus pour leur effet antimicrobien, mais à des concentrations qui respectent le microbiote cutané, exprimé par des mesures de Marge de Sécurité Microbiote ou de Facteur de Protection du Microbiote Cutané ou MPF, selon une méthode de test spécifique. Système de conservation et méthode de formulation écobiologique respectant le microbiote cutané Domaine de l’invention L’invention concerne une méthode de formulation écobiologique permettant de réaliser des formulations robustes d’un point de vue microbiologique (ne se repolluant pas à l’utilisation), consistant à sélectionner des conservateurs (ou des substances pouvant jouer ce rôle) ainsi que leurs concentrations d’utilisation, afin de permettre la conservation microbiologique de compositions topiques écobiologiques, tout en respectant le microbiote cutané. L’invention concerne également une méthode de sélection des ingrédients ayant des propriétés bactéricides ainsi que leurs concentrations d’utilisation, afin de permettre la conservation de compositions topiques écobiologiques respectant le microbiote cutané. Plus généralement, l’invention concerne une méthode de détermination de l’effet sur le microbiote cutané d’une substance à utiliser dans une composition topique afin : - de n’utiliser que des substances respectant le microbiote cutané, - de ne les utiliser qu’à des concentrations permettant de respecter le microbiote cutané. Egalement, l’invention concerne une méthode de sélection d’une substance (et de sa concentration) ou de chaque substance (et de sa concentration) à utiliser dans une composition topique écobiologique, respectant le microbiote cutané. Encore, l’invention concerne une composition topique écobiologique respectant le microbiote cutané. Etat de la technique Les compositions topiques cutanées contiennent notamment des conservateurs dont la fonction première est de tuer toutes les bactéries, les champignons et les levures susceptibles de se développer dans la formulation. Par exemple, le document FR 2797586 décrit des émulsions qui contiennent divers conservateurs comme des parahydroxybenzoates tels que le parahydroxybenzoate de méthyle et le parahydroxybenzoate de propyle, ou encore des methylisothiazolinones. Afin de déterminer la force de cette propriété bactéricide, des techniques normées dans le domaine de la cosmétique et des applications dermopharmaceutiques sont utilisées. Appelés « challenge test », ces tests évaluent la capacité de ces conservateurs ou de ces substances ayant un effet antimicrobien, d’inhiber la croissance de plusieurs microorganismes connus pour être des polluants microbiens classiques des formulations cosmétiques, parmi lesquels : Candida albicans , Aspergilus niger , Escherichia coli, Staphylococcus aureus,… Donc, par définition, ces conservateurs vont avoir un effet agressif, délétère, sur les bactéries en général, qui sera contrôlé sur les bactéries ci-dessus, mais ils devraient également avoir ce même effet agressif sur les bactéries du microbiote cutané en particulier. Utiliser ces conservateurs va donc générer un traumatisme important sur l’écosystème du microbiote cutané. Ces conservateurs peuvent être considérés comme des polluants pour les formulations cosmétiques puisqu’ils n’apportent aucun avantage à la biologie cutanée, voire même qu’ils déséquilibrent le microbiote cutané, synonyme de dérèglements pouvant être à l’origine de pathologies cutanées (M. Fournière et al., Microorganisms 2020, 8(11), 1752 ; H. Zhou et al., Front Cell Infect. Microbiol. 2020, 10, 570261). Engagés depuis plus de 20 ans dans l’écobiologie cutané, les inventeurs ont r ejeté cette utilisation potentiellement toxique des conservateurs et ont recherché une façon écobiologique d’utiliser les molécules possédant des activités anti-microbiennes. Par ailleurs, les études toxicologiques réalisées sur les formulations avant leur possible commercialisation, nécessitent de réaliser des calculs de « Marges de Sécurité » par ingrédient, qui permettent de vérifier que les ingrédients ne sont pas utilisés à des concentrations qui pourraient être toxiques. Cette limite de toxicité est mesurée pour des doses systémiques, orales, cutanées, oculaires, mais elle ne concerne que la toxicité potentielle de ces ingrédients pour les cellules des différents organes du corps humain. Or, la première couche de cellules qu’un produit topique par exemple, rencontre lors de son application n’est pas humaine mais microbienne. La toxicité des formulations et des ingrédients qui les composent vis-à-vis de ce microbiote n’est jusqu’ici pas pris en compte, alors que celui-ci joue un rôle majeur dans le maintien de la santé de la peau). Pour cette raison, les inventeurs ont développé, et c’est un des objets de la présente invention, une « Marge de Sécurité Microbiote » qui permet de sélectionner des ingrédients et de vérifier que les ingrédients ne sont pas utilisés à des concentrations qui pourraient être toxiques pour le microbiote ce qui est radicalement nouveau. En effet, dans l’état de la technique, il n’est pas connu de réaliser une formulation écobiologique en sélectionnant préalablement les ingrédients selon leur capacité à ne pas déstabiliser le microbiote cutané. Cette sélection peut être réalisée sur tous les ingrédients, mais en particulier sur les agents conservateurs, les émulsionnants et les surfactants, les filtres solaires, les parfums, tous des composés généralement agressifs ou toxiques pour les cellules en général, et pour les bactéries, les champignons, les levures, les virus… du microbiote en particulier. Le microbiote de la peau humaine a été particulièrement bien décrit dans un article de Allison L. Byrd et al publié dans Nature Reviews, Microbiology, Advance on Line Publication 2018, p1-13. Buts et problèmes techniques de l’invention Un but principal de l’invention est de résoudre le problème technique consistant à fournir une méthode de conservation des formules écobiologiques capable de préserver le microbiote cutané. Un autre but principal de l’invention est de résoudre le problème technique consistant à fournir une solution technique de détection et de sélection de substances à utiliser topiquement respectant le microbiote cutané, en mesurant une « marge de sécurité microbiote ». Un autre but principal de l’invention est de résoudre le problème technique consistant à fournir une nouvelle composition topique respectant le microbiote cutané et donc écobiologique. Encore, un but principal de l’invention est de résoudre les problèmes techniques ci-dessus selon une solution technique préservant le microbiote cutané utilisable à l’échelle industrielle. Méthode de test puis de sélection d’une substance ou d’un mélange de substances à utiliser comme ingrédient pour la réalisation de compositions topiques écobiologiques, cosmétiques, diététiques, pharmaceutiques ou alimentaires, respectueuses du microbiote cutané, avantageusement conservée comprenant les étapes suivantes : a) la sélection d’un microbiote de référence comprenant plusieurs genres bactériens majoritaires présents dans le microbiote cutané et mimant ainsi le microbiote cutané, de l’individu ou du groupe d’individu considéré, b) l’ajout à des espèces bactériennes, chacune représentative d’un genre bactérien majoritaire, de quantités croissantes de la substance ou du mélange de substances à tester, c) la réalisation d’une période d’incubation, suivie par d) la détermination de la concentration minimale inhibitrice ou CMI de ladite substance ou dudit mélange de substances à tester induisant au moins 50% de réduction de la croissance cellulaire, de préférence au moins 80% de réduction de la croissance cellulaire, de chacune des espèces bactériennes de l’étape b) ; et e) la sélection de ladite substance ou mélange de substances testée, lorsque sa CMI, pour chaque espèce microbienne de l’étape b), est supérieure ou égale à sa concentration d’utilisation ([C] PF ). Méthode selon la revendication 1, caractérisée en ce qu’elle comprend en outre une étape supplémentaire de détermination pour chaque substance ou pour chaque mélange de substances sélectionnée en e), d’une marge de sécurité vis-à-vis du microbiote (« MoS Microbiote ») selon l’équation ci-dessous : Dans laquelle : a n : % genre bactérien n du microbiote de référence CMI n : Concentration Minimale Inhibitrice de la substance ou mélange de substances testée sur au moins une espèce bactérienne représentative du genre bactérien n majoritaire du microbiote de référence [C] PF : concentration d’utilisation de la substance ou mélange de substances testée, k : nombre de genres bactériens. Méthode selon la revendication 2, caractérisée en ce qu’on retient parmi les substances ou le mélange de substances sélectionnées dans l’étape e), celles dont la valeur de la MoS Microbiote est supérieure ou égale à 1 et en particulier, supérieure ou égale à 10. Méthode selon l’une des revendications 1 à 3, caractérisée en ce que le microbiote de référence comprend majoritairement les genres bactériens choisis parmi Corynebacterium, Cutibacterium, Staphylococcus, et leurs mélange(s). Méthode selon l’une des revendications 1 à 4, caractérisée en ce que le microbiote de référence comprend, en pourcentage du nombre total de genres bactériens qu’il contient, au moins : De 0 à 10% de Corynebacterium, De 35 à 85% de Cutibacterium, De 5 à 35% de Staphylococcus. Méthode selon l’une des revendications 1 à 5, caractérisée en ce que le microbiote de référence représente de 70 à 90% des genres bactériens présents à la surface de la peau et qu’il comprend, en pourcentage du nombre total de genres bactériens qu’il contient : de 0-10% de Corynebacterium, de 40-80% de Cutibacterium, de 10-40% de Staphylococcus. Méthode selon l’une des revendications 1 à 6, caractérisée en ce que la quantité minimum de substance ou de mélange de substances ajoutée aux espèce microbiennes correspond à la concentration d’utilisation [C PF . Méthode selon l’une des revendications 1 à 7, caractérisée en ce que la substance est choisie dans le groupe comprenant : - Au moins une substance du type conservateur ou une substance du type aidant à la conservation, par exemple un glycol ou polyol, - Au moins un émulsionnant ou un détergent ou un agent moussant, - Au moins un filtre solaire, - Au moins un ingrédient bioactif et/ou un excipient et/ou une substance, susceptible d’avoir un effet antimicrobien et donc susceptible de déstabiliser le microbiote cutané. Méthode selon l’une des revendications 1 à 8, caractérisée en ce que la substance de type conservateur est choisi dans le groupe comprenant : Methylisothiazolinone, Diazolidinyl Urée, Phenoxyethanol, Chlorphenesine, Potassium Sorbate, Capryloyl Glycine ; et en ce que la substance de type aidant à la conservation est choisie parmi le groupe comprenant : Pentylene Glycol, Caprylyl Glycol, Propanediol et Hexanediol. Méthode selon l’une des revendications 1 à 8, caractérisée en ce que l’émulsionnant ou le détergent ou l’agent moussant est choisi dans le groupe comprenant : Glyceryl Stearate Citrate, Sucrose Stearate, PEG-6 Caprylic/Capric glycerides, Caprylyl/Capryl Glucoside, Sodium Cocoampho Acetate, Sodium Cocoyl Glutamate/ Propanediol. Composition topique écobiologique, caractérisée en ce que toutes les substances qu’elle contient qui sont susceptibles d’avoir un effet antimicrobien et donc susceptibles de déstabiliser le microbiote cutané, ont une valeur du « MoS microbiote » à leur concentration d’utilisation, supérieure ou égale à une valeur prédéterminée. Composition selon la revendication 11, caractérisée en ce que la valeur prédéterminée est supérieure ou égale à 1 et en particulier, supérieure à 10. Composition selon l’une des revendications 11 à 12, caractérisée en ce qu’elle comprend au moins une substance de type conservateur choisie dans le groupe comprenant : Methylisothiazolinone, Diazolidinyl Urée, Phenoxyethanol, Chlorphenesine, Potassium Sorbate, Capryloyl Glycine, et éventuellement en ce au moins une substance de type aidant à la conservation choisie parmi le groupe comprenant : Pentylene Glycol, Caprylyl Glycol, Propanediol et Hexanediol. Composition selon l’une des revendications 11 à 13, caractérisée en ce qu’elle comprend au moins un émulsionnant ou un détergent ou l’agent moussant choisi dans le groupe comprenant : Glyceryl Stearate Citrate, Sucrose Stearate, PEG-6 Caprylic/Capric glycerides, Caprylyl/Capryl Glucoside, Sodium Cocoampho Acetate, Sodium Cocoyl Glutamate/Propanediol. Composition selon l’une des revendications 11 à 14, pour utilisation pour la réduction ou la disparition des rides de l’épiderme ou des parties supérieures de la peau. Composition selon l’une des revendications 11 à 14, pour utilisation dans un soin apaisant pour lutter contre l’irritation ou l’inflammation non pathologique de l’épiderme ou des parties supérieures de la peau.