FR 3116720 A1 20220603 FR 2012519 A 20201202 Progestérone végétale et utilisations Institut national de recherche pour l’agriculture, l’alimentation et l’environnement Centre National de la Recherche Scientifique Université de Tours Institut Français du Cheval et de l’Equitation La présente invention est relative à l’utilisation d’une composition comprenant une progestérone dérivée d’un arbre du genre Juglans pour induire l’ovulation chez un mammifère d’élevage choisi parmi les ruminants et les monogastriques. Figure pour l’abrégé : Néant Progestérone végétale et utilisations La présente description est relative au domaine de l’utilisation de progestérone obtenue à partir de végétaux, en particulier pour certains animaux d’élevage. La maîtrise de la reproduction est une pratique courante et nécessaire en élevage. Il s’agit de mettre en œuvre des stratégies techniques ou de conduite des troupeaux permettant d’optimiser la reproduction par monte naturelle ou insémination artificielle. La maîtrise de la saisonnalité de la reproduction permet de maintenir l’offre en lait ou en viande tout au long de l’année. Ainsi, les pratiques de « désaisonnement » sont fréquentes dans les élevages d’animaux ruminants et d’animaux monogastriques. Par ailleurs, la synchronisation des chaleurs pour le groupage des mises bas est aussi un objectif recherché, notamment dans les élevages ovins et caprins, laitiers ou allaitants, afin de faciliter la gestion des lots d’animaux. La synchronisation des chaleurs, notamment dans les élevages ovins et caprins, est couramment pratiquée par administration de progestérone aux animaux, par exemple à l’aide d’éponges vaginales imprégnées de progestérone ou d’analogues de synthèse de celle-ci. Au retrait de l’éponge vaginale, les animaux peuvent recevoir une injection de gonadotropine par voie intramusculaire, les premières chaleurs apparaissant environ 24 heures après. Ces techniques de synchronisation des chaleurs permettent donc d’induire une période de reproduction à « contre-saison », c’est-à-dire en dehors de la période de reproduction naturelle. Ainsi, certaines utilisations de la progestérone (aussi désignée « P4 ») chez les animaux visent à maîtriser des cycles chez les femelles (i) du fait de sa capacité à sensibiliser le système nerveux central pour que l’œstradiol endogène induise un comportement d’œstrus et (ii) du fait de son pouvoir de régularisation de la durée du cycle ovulatoire. Plusieurs millions d’animaux de ferme sont traités annuellement dans le monde avec de la P4 de synthèse ou bien des analogues de P4, essentiellement chez les ovins, les caprins, les bovins, les équins et les porcins. Dans les élevages d’ovins et caprins notamment, la maîtrise de la reproduction est importante pour une reproduction hors saison sexuelle, aux fins de grouper les mises bas et pour la pratique de l’insémination artificielle. Le traitement hormonal d’induction et de synchronisation de l’œstrus et de l’ovulation est aujourd’hui le moyen le plus efficace pour atteindre ces objectifs. On peut citer aussi le recours à des traitements photopériodiques et/ou à « l’effet mâle », qui apparaissent comme des solutions destinées à limiter l’utilisation d’hormones dans ce type d’élevage. Il serait toutefois souhaitable de remplacer la progestérone actuellement utilisée, qui est obtenue par synthèse chimique, par de la progestérone d’origine naturelle. La présence de progestérone dans les plantes aurait été identifiée depuis la décennie des années 1960 par exemple dans les graines de pomme. Une étude de 1989 a rapporté la présence de stéroïdes, y compris la progestérone, dans 128 espèces appartenant à 50 familles de plantes, en utilisant une technique de détection par radio-immunoessai (Simons et al. , 1989, Canadian Journal of Botany, Vol. 67 (2) : 288-296). Dans le règne végétal, plusieurs publications mentionnent l’existence de P4 dans différentes plantes (blé, cardère) mais à des concentrations très faibles. Le rôle de la P4 en biologie végétale reste encore inconnu et aucune utilisation n’est faite dans ce règne. Une publication d’une équipe américaine a été réalisée en 2010 (Pauli et al. J. Nat. Prod.), laquelle mentionne l’existence de P4 dans les feuilles du noyer ( Juglans regia ). Selon cette publication, Pauli et al. auraient été les premiers à rapporter avec certitude la présence de progestérone dans des plantes. Ces auteurs avaient estimé que les publications antérieures, compte tenu de l’imprécision des techniques d’identification qui avaient été précédemment utilisées, ne pouvaient conclure avec certitude à la présence de progestérone. On rappelle que de nombreuses publications antérieures rapportaient l’utilisation de techniques d’identification par radio-immunoessai, les résultats desquelles dépendent du niveau de spécificité des anticorps disponibles au moment de la réalisation de ces travaux antérieurs. Toutefois, à la connaissance du demandeur, il n’a pas été montré dans l’état de la technique que de la progestérone d’origine végétale était capable de reproduire les propriétés physiologiques connues de la progestérone animale ou de la progestérone obtenue par synthèse chimique, c’est-à-dire qu’il n’a pas été montré qu’une progestérone végétale possédait une activité hormonale aussi efficace que celle obtenue par synthèse chimique sur les animaux. Il existe un besoin pour la disponibilité de progestérone autre que la progestérone obtenue par synthèse chimique, c’est-à-dire pour une progestérone produite naturellement, en particulier par des végétaux, et possédant une activité hormonale comparable à celle de la progestérone naturelle produite par les mammifères, ainsi qu’à celle de la progestérone obtenue par synthèse chimique qui est aujourd’hui la plus couramment utilisée. Exposé de la description Résumé La présente description est relative à l’utilisation d’une composition comprenant une progestérone végétale dérivée d’un arbre du genre Juglans pour induire ou synchroniser l’ovulation chez les mammifères d’élevage choisis parmi les ruminants et les monogastriques, en particulier les bovins, les porcins, les ovins, les équins et les caprins, y compris les chèvres. Selon certains modes de réalisation, la composition formulée pour une administration orale d’une quantité quotidienne de progestérone allant de 5 mg à 200 mg. Selon certains modes de réalisation, la composition est formulée pour une administration par voie orale, pendant une durée allant de 1 à 15 jours, de préférence de 1 à 5 jours. De préférence, la progestérone végétale provient des feuilles d’un arbre du genre Juglans . De préférence, l’arbre de la famille du genre Juglans appartenant à l’espèce Juglans regia . Selon certains modes de réalisation, la composition comprenant ladite progestérone sous la forme d’un extrait organique de feuilles dudit arbre du genre Juglans . Selon d’autres modes de réalisation, la composition comprenant ladite progestérone étant mise en œuvre sous la forme de granulés obtenus à partir d’un broyat de feuilles dudit arbre de du genre Juglans . La présente description concerne aussi un procédé pour l’obtention d’une composition comprenant de la progestérone végétale comprenant les étapes suivantes : a) préparer un broyat de feuilles d’un arbre du genre Juglans , de préférence des feuilles d’un arbre de l’espèce Juglans regia , b) préparer des granulés à partir du broyat obtenu à l’étape a). La présente description est également relative à un procédé pour l’obtention d’une composition comprenant de la progestérone végétale comprenant les étapes suivantes : a) réaliser une extraction à partir de feuilles d’un arbre du genre Juglans , de préférence des feuilles d’un arbre l’espèce Juglans regia , ou à partir d’un broyat des dites feuilles, dans un solvant organique ou dans un mélange de solvants organiques, aux fins d’obtenir un matériau d’extraction, b) récupérer la fraction liquide du matériau d’extraction obtenu à l’étape a), c) évaporer le(les) solvant(s) contenu(s) dans ladite fraction liquide, aux fins d’obtenir une composition comprenant de la progestérone végétale. La présente description a également trait à une composition de granulés comprenant (i) de 20 % à 50 % en poids d’un broyat de feuilles d’un arbre du genre Juglans , en particulier de l’espèce Juglans regia , de préférence 25 – 40 % de feuilles, (ii) de 40 % à 70 % en poids de graines d’orge ou d’un broyat de graines d’orge et (iii) de 1 % à 10 % en poids d’un sirop de sucre, en particulier d’un sirop de mélasse. représente un graphe de suivi de la concentration moyenne (±S.E.M.) de progestérone dans les feuilles d’un arbre de l’espèce Juglans regia situé en France au cours d’une année. En abscisse : le numéro du mois de l’année (p.ex. « 6 » = « juin »). En ordonnées : concentration de progestérone, exprimée en mg de progestérone par kilogramme de feuilles vertes. représente la concentration plasmatique moyenne (±S.E.M.) de progestérone au cours du temps chez un groupe de chèvres ovariectomisées n’ayant pas reçu de progestérone exogène. En abscisse : le temps, exprimé en heures après le début de l’expérience. En ordonnées : concentration plasmatique de progestérone, exprimée en nanogrammes de progestérone par millilitre de plasma sanguin. représente la concentration plasmatique moyenne (±S.E.M.) de progestérone au cours du temps chez un groupe de chèvres ovariectomisées ayant reçu 100 mg de progestérone de synthèse par voie orale au J0 de l’expérience. En abscisse : le temps, exprimé en heures après le début de l’expérience. En ordonnées : concentration plasmatique de progestérone, exprimée en nanogrammes de progestérone par millilitre de plasma sanguin. représente la concentration plasmatique moyenne (±S.E.M.) de progestérone au cours du temps chez un groupe de chèvres ovariectomisées ayant reçu par voie orale de la progestérone provenant des feuilles d’un arbre de l’espèce Juglans regia , respectivement à H1, H13, H25, H34 et H49. En abscisse : le temps, exprimé en heures après le début de l’expérience. En ordonnées : concentration plasmatique de progestérone, exprimée en nanogrammes de progestérone par millilitre de plasma sanguin. Description détaillée Il est fourni selon la présente description des compositions comprenant une progestérone provenant d’un arbre du genre Juglans , ces compositions étant destinées aux animaux d’élevage ruminants et aux animaux d’élevage monogastriques, chez les femelles de ces animaux, et plus particulièrement aux fins d’induire ou de synchroniser l’ovulation. Les inventeurs ont confirmé, par des analyses précises, la présence de progestérone dans différents tissus ou fluides des arbres du genre Juglans . En particulier, les inventeurs ont montré que de la progestérone est présente, dans les arbres du genre Juglans , dans des tissus, organes ou produits, particulièrement dans les feuilles. Les exemples montrent la présence de progestérone en particulier dans un arbre de l’espèce Juglans regia , aussi appelé noyer commun. Les résultats obtenus par les inventeurs montrent toutefois que la progestérone est retrouvée en plus grande concentration dans les feuilles. A titre indicatif, la progestérone peut être retrouvée chez certains arbres du genre Juglans , en particulier de l’espèce Juglans regia , en des concentrations de dix à cent fois plus importante dans les feuilles que dans l’huile, le brou et les fruits (noix), respectivement. C’est la raison pour laquelle les exemples illustrent l’obtention et l’utilisation de progestérone provenant de feuilles d’un arbre du genre Juglans . Ainsi, selon la présente description, la progestérone est de préférence obtenue à partir de feuilles d’un arbre du genre Juglans , et préférentiellement des feuilles d’un arbre de l’espèce Juglans regia . Les inventeurs ont montré que la progestérone était présente chez la totalité des variétés de Juglans regia qui ont été testées, ce qui semble confirmer que la progestérone est retrouvée chez toutes les variétés de l’espèce Juglans regia , le cas échéant dans des quantités variables. Il est aussi montré que la concentration de progestérone dans les tissus végétaux de Juglans , en particulier de Juglans regia , est plus importante durant les mois d’été et d’automne, c’est-à-dire dans l’hémisphère nord comme en France, dans la période allant du mois d’août au mois d’octobre. Il est montré dans les exemples qu’une composition comprenant de la progestérone provenant d’un arbre du genre juglans , plus spécifiquement d’un arbre de l’espèce Juglans regia ¸ lorsqu’elle est consommée par des ruminants comme les caprins, est rapidement transportée dans le sang, où elle peut être détectée à peine 10 heures à 12 heures après son ingestion. Ainsi, il est montré selon la présente description que la progestérone provenant d’un arbre du genre Juglans , en particulier d’un arbre de l’espèce Juglans regia , possède de bonnes propriétés de biodisponibilité. Comme il sera indiqué plus en détail plus loin dans la présente description, les compositions comprenant la progestérone peuvent se présenter sous la forme d’un extrait, ou comprenant un tel extrait, ou encore sous la forme de granulés, ces derniers étant consommés avec la ration alimentaire des animaux auxquels ils sont destinés. Les résultats des exemples montrent que l’ingestion par des caprins femelles, par voie orale, d’une composition comprenant la progestérone de Juglans , telle que décrite dans la présente demande, entraîne un passage de la progestérone dans le compartiment sanguin, à des concentrations compatibles avec les effets physiologiques attendus sur la reproduction chez ces animaux. En particulier, des résultats comparatifs montrent que la quantité de progestérone de Juglans qui transite dans le compartiment sanguin est similaire à la quantité de progestérone de synthèse qui est retrouvée dans le sang de ces animaux lorsqu’ils reçoivent un traitement classique destiné à induire l’ovulation. Il est aussi montré que la concentration plasmatique obtenue avec la progestérone de Juglans regia est du même ordre, voire supérieure, à la concentration plasmatique de progestérone qui est observée lors du premier cycle induit par « effet mâle » chez une chèvre « entière », c’est-à-dire une chèvre non-ovariectomisée. La présente description est relative à l’utilisation d’une composition comprenant une progestérone végétale dérivée d’un arbre du genre Juglans pour induire ou synchroniser l’ovulation chez un mammifère d’élevage choisi parmi les ruminants et les monogastriques. Le terme « progestérone » est utilisé dans son sens conventionnel et désigne le composé (8S,9S,10R,13S,14S,17S)-17-acétyl-10,13-diméthyl-1,2,6,7,8,9,11,12,14,15,16, 17-dodécahydrocyclopenta[a]phénanthrèn-3-one, qui est référencé comme le composé CAS n° 57-83-0. Par « dérivée d’un arbre du genre Juglans », on entend une progestérone qui est obtenue à partir des feuilles dudit arbre du genre Juglans . Par « composition comprenant une progestérone », on entend toute composition comprenant une quantité détectable, avec les techniques usuelles, de progestérone. Selon certains modes de réalisation, la composition comprend la progestérone à concentration élevée, par exemple une composition de progestérone sous forme purifiée. Dans d’autres modes de réalisation, ladite composition comprend de la progestérone à une concentration modérée, par exemple à raison de 20 mg par kilo de composition, par exemple dans des compositions sous forme de granulés destinés à être fournis aux animaux avec leur ration alimentaire. Selon la présente description, une composition comprenant une progestérone dérivée d’un arbre du genre Juglans comprend, en tant que progestérone, exclusivement de la progestérone provenant de Juglans , donc à l’exclusion de toute autre source de progestérone, notamment à l’exclusion d’une progestérone obtenue par synthèse chimique. Les réglementations relatives aux compositions vétérinaires varient selon les pays, l’utilisation de la progestérone aux fins d’induire ou synchroniser l’ovulation pouvant être considérée comme étant de nature médicamenteuse vétérinaire. Ainsi, la présente description est également relative à l’utilisation d’une composition comprenant une progestérone dérivée d’un arbre du genre Juglans pour la fabrication d’une composition vétérinaire pour induire ou synchroniser l’ovulation chez les mammifères d’élevage choisis parmi les ruminants et les monogastriques. Selon la présente description, une composition comprenant une progestérone dérivée d’un arbre du genre Juglans peut être utilisée pour synchroniser l’ovulation dans un groupe de mammifères d’élevage choisis parmi les ruminants et les monogastriques. Les techniques classiques de synchronisation de l’ovulation par administration de progestérone aux femelles d’un troupeau d’élevage s’appliquent pour synchroniser l’ovulation par administration de la progestérone d’un arbre du genre Juglans , en particulier de l’espèce Juglans regia . La synchronisation de l’ovulation dans un troupeau d’animaux d’élevage est basée sur le principe d’administrer de la progestérone de manière simultanée à chaque femelle du troupeau. Pour la synchronisation de l’ovulation, la progestérone peut être administrée par voie intra-vaginale, en utilisant des éponges intra-vaginales imprégnées de progestérone. Comme on le verra plus loin dans la présente description, la progestérone de Juglans , en particulier de Juglans regia , peut être administrée par voie orale, en particulier sous la forme de compositions destinées à être ingérées par les animaux femelles, lesquelles compositions peuvent être ajoutées à leur ration alimentaire, par exemple sous la forme de compléments alimentaires. La présente description concerne aussi une méthode pour induire ou synchroniser l’ovulation chez les mammifères d’élevage choisis parmi les ruminants et les monogastriques, comprenant une étape d’administration de progestérone auxdits mammifères d’élevage, de préférence par voie orale. Par « induire une ovulation », on entend provoquer le déclenchement de l’œstrus et l’ovulation chez un animal par administration de progestérone. Par « synchroniser une ovulation », on entend provoquer le déclenchement de l’œstrus et de l’ovulation de manière concomitante dans un groupe d’animaux en administrant de la progestérone de manière simultanée ou quasi-simultanée à une pluralité d’animaux femelles dudit groupe, le cas échéant chacun des animaux femelles dudit groupe. Il va de soi que les animaux ruminants ou monogastriques concernés par l’utilisation de la progestérone décrite dans la présente description sont exclusivement des animaux femelles. Par mammifères « ruminants », on entend les mammifères herbivores polygastriques, ce qui englobe les mammifères ruminants d’élevage bovins, ovins et caprins. Par mammifères « monogastriques », on entend les mammifères ayant un estomac simple, ce qui englobe les mammifères monogastriques d’élevage comme les porcins et les équins. Selon certains aspects de la présente description, les mammifères d’élevage sont choisis parmi les bovins, les porcins, les ovins, les équins et les caprins. Selon certains aspects préférés, les mammifères d’élevage sont des ruminants caprins, tels que des chèvres. Comme cela est connu, les arbres du genre Juglans , qui appartiennent à la famille des juglandacées, sont des arbres à feuilles caduques, lesquels sont communément appelés « noyers ». Selon certains aspects de la présente description, les arbres du genre Juglans sont de l’espèce Juglans regia , qui est aussi appelé « noyer commun ». Comme cela a été précédemment indiqué, les inventeurs ont montré que la progestérone se retrouvait en concentration particulièrement importante dans les feuilles des arbres du genre Juglans . Ainsi, de manière préférée, la progestérone contenue dans une composition selon la présente description provient des feuilles d’un Juglans , ce qui englobe les feuilles d’un Juglans regia . Comme montré dans les exemples, il a été conçu une pluralité de compositions comprenant de la progestérone de Juglans , en particulier de Juglans regia , tels que des compositions comprenant la progestérone sous la forme d’un extrait et des compositions comprenant la progestérone sous la forme d’un broyat de feuilles. Les résultats des inventeurs montrent que l’obtention d’une concentration sanguine de progestérone compatible avec le déclenchement d’un œstrus et l’induction d’une ovulation peut être obtenue par l’ingestion par les animaux d’une quantité quotidienne de progestérone allant de 5 mg à 200 mg. Ainsi, dans certains aspects d’une composition selon la présente description, la composition comprenant de la progestérone de Juglans , en particulier de Juglans regia , est formulée de manière à permettre une administration orale d’une quantité quotidienne de progestérone allant de 5 mg à 200 mg. Aux fins d’obtenir une concentration sanguine de progestérone dans le temps qui est compatible avec le déclenchement d’un œstrus et l’induction d’une ovulation, il est avantageux de fournir la composition comprenant la progestérone de Juglans , présente en quantité appropriée, pendant une durée de 1 à 15 jours, et de préférence pendant une durée de 1 à 5 jours, de manière préférée par voie orale, par exemple avec la ration alimentaire. Dans certains modes de réalisation, la composition comprenant la progestérone de Juglans , en particulier Juglans regia , est mise en œuvre sous la forme d’un extrait organique, de préférence sous la forme d’un extrait organique de feuilles dudit arbre du genre Juglans , Une telle composition sous forme d’extrait peut se présenter sous la forme d’un liquide ou sous la forme d’une poudre. Par exemple, la poudre peut être obtenue par concentration ou lyophilisation d’un extrait liquide de départ. Pour obtenir une composition comprenant une progestérone de Juglans , en particulier de Juglans regia , la progestérone mise en œuvre sous la forme d’un extrait liquide ou solide peut être combinée avec un agent ou une combinaison d’agents utilisés comme excipients acceptables dans le domaine alimentaire. Dans d’autres modes de réalisation, la composition comprenant la progestérone de Juglans , en particulier Juglans regia , est mise en œuvre sous la forme de granulés obtenus à partir d’un broyat de feuilles dudit arbre du genre Juglans . Ainsi, dans ces autres modes de réalisation, une composition comprenant une progestérone de Juglans , en particulier de Juglans regia , peut se présenter sous la forme de granulés. Par exemple, la composition comprenant une progestérone de Juglans , en particulier de Juglans regia , peut se présenter sous la forme de granulés comprenant une quantité appropriée d’un broyat de feuilles de Juglans , d’un agent de charge ou une pluralité d’agents de charge et d’un agent liant ou une pluralité d’agents liants. Comme agent de charge, on peut utiliser un composant qui entre dans la ration alimentaire du mammifère ruminant ou du mammifère monogastrique, telles que des particules de céréale, par exemple des graines d’orge ou de blé. Comme agent liant, on peut utiliser par exemple de la gélose ou un sirop sucré de viscosité adaptée, comme par exemple un sirop de mélasse. Selon certains aspects, la composition comprenant la progestérone de Juglans , en particulier de Juglans regia , est préférentiellement fournie aux mammifères ruminants ou monogastriques avec leur ration alimentaire. Par exemple, une composition sous forme de granulés comprenant la progestérone de Juglans , en particulier de Juglans regia , peut être mélangée avec les aliments fournis aux animaux. La présente description a aussi trait à divers procédés d’obtention de compositions comprenant une progestérone d’un arbre du genre Juglans , en particulier de l’espèce Juglans regia . Ainsi, la description est également relative à un procédé pour l’obtention d’une composition comprenant de la progestérone d’un arbre du genre Juglans , en particulier d’un arbre de l’espèce Juglans regia , ledit procédé comprenant les étapes suivantes : a) réaliser une extraction à partir de feuilles d’un arbre du genre Juglans , en particulier de l’espèce Juglans regia , ou à partir d’un broyat desdites feuilles, dans un solvant organique ou dans un mélange de solvants organiques, aux fins d’obtenir un matériau d’extraction, b) récupérer la fraction liquide du matériau d’extraction obtenu à l’étape a), et c) évaporer le(les) solvant(s) contenu(s) dans ladite fraction liquide, aux fins d’obtenir ladite composition comprenant la progestérone. Selon certains aspects de ce procédé, le ou les solvant(s) utilisé(s) à l’étape a) sont choisis parmi les alcools tels que l’éthanol et le méthanol, le cyclohexane, l’acétate d’éthyle, l’éther, le diéthy-éther ou encore l’éther de pétrole. Comme cela est connu, l’éther de pétrole est un mélange d’alcanes provenant de la fraction de distillation du pétrole ayant le même point d’ébullition que l’éther éthylique, à savoir 35 °C. L’étape a) est de préférence réalisée à température ambiante, c’est-à-dire à une température allant de 15 °C à 25 °C. Dans certains modes de réalisation, on utilise le méthanol en tant que solvant. Dans d’autres modes de réalisation, on utilise un mélange de cyclohexane et d’acétate d’éthyle, par exemple dans un rapport volumique cyclohexane:acétate d’éthyle d’environ 1:1. A l’étape a), le mélange solide/liquide est de préférence agité de manière continue durant 1 à 10 minutes, par exemple durant 5 minutes, puis le solide et le liquide dudit mélange sont maintenus en contact pendant une durée de 1 heure à 3 heures, par exemple pendant une durée de 1h30 à 2h30. L’étape b) est préférentiellement réalisée par centrifugation du mélange solide/liquide constituant le matériau d’extraction obtenu à la fin de l’étape a). L’étape c) d’évaporation est réalisée de préférence à température ambiante, c’est-à-dire de préférence à une température allant de 20 °C à 25 °C. L’extrait solide de progestérone obtenu à la fin de l’étape c) peut ensuite être repris dans une solution aqueuse, par exemple une solution de tampon phosphate, par exemple à la concentration 0,1 M, aux fins d’obtenir un extrait de progestérone de Juglans , en particulier de Juglans regia , sous forme liquide. Ledit extrait solide ou liquide constitue un mode de réalisation d’une composition comprenant de la progestérone de Juglans , en particulier de Juglans regia , au sens de la présente description. Selon d’autres aspects, ledit extrait solide ou liquide peut être utilisé, par exemple conjointement avec un ou plusieurs excipients acceptables dans le domaine alimentaire, pour la préparation d’une composition comprenant de la progestérone de Juglans , en particulier de Juglans regia , qui peut être fournie aux mammifères d’élevage, ruminants ou monogastriques, par exemple sous la forme d’un complément alimentaire. La présente description concerne aussi un procédé pour l’obtention d’une composition comprenant de la progestérone dérivée d’un arbre du genre Juglans , en particulier de l’espèce Juglans regia , comprenant les étapes suivantes : (a) préparer un broyat de feuilles d’un arbre du genre Juglans , en particulier de l’espèce Juglans regia , et (b) préparer des granulés à partir du broyat de feuilles obtenu à l’étape a). Le cas échéant, les feuilles récoltées en champ sont immédiatement congelées avant tout traitement ultérieur, aux fins de ne pas affecter la quantité de progestérone qu’elles contiennent. Dans ce cas, les feuilles subissent une étape préalable de décongélation au moment de préparer une composition de progestérone de Juglans , en particulier de Juglans regia , conforme à la présente description Le cas échéant, à l’étape a), on utilise des feuilles qui ont été préalablement séchées, par exemple par chauffage à une température allant de 25 °C à 35 °C, par exemple à la température de 28 °C, et pendant une durée de 10 heures à 50 heures, par exemple pensant une durée allant de 25 heures à 40 heures, telle que pendant une durée d’environ 35 heures. A l’étape a), le broyat de feuilles peut être préparé à l’aide de toute technique connue de l’homme du métier. Tout type de dispositif broyeur de végétaux couramment dans le commerce peut être utilisé. Typiquement, les feuilles sont broyées aux fins d’obtenir un broyat résultant composé d’une population de particules de feuilles broyées de 1 à 10 millimètres dans leur plus grande longueur. A titre d’exemple, on peut utiliser un dispositif broyeur équipé d’une grille munie d’un tamis avec une taille de perforation de 4 millimètres. La préparation de granulés destinés à l’ingestion orale par les animaux d’élevage est bien connue de l’homme du métier, qui peut donc utiliser toute technique bien connue pour réaliser l’étape b) du procédé. Selon certains aspects, les granulés peuvent être préparés en combinant le broyat de feuilles préparé à l’étape a) un ou plusieurs agent(s) de charge et un ou plusieurs agent(s) liant(s). Un agent de charge peut être de tout type connu et consister notamment en un matériau couramment utilisé pour l’alimentation du bétail, tels que des produits céréaliers, par exemple des graines de céréales entières ou broyées. Les produits céréaliers peuvent provenir de céréales comme, le blé, l’orge, le maïs ou le riz. L’agent de charge peut être des graines d’orge entières ou broyées, comme cela est illustré dans les exemples. De manière tout à fait préférée, on choisit des produits céréaliers substantiellement exempts de progestérone, ou totalement exempts de progestérone, aux fins d’un meilleur contrôle du contenu en progestérone des granulés obtenus. Un agent liant a pour fonction de permettre la cohésion de la combinaison des autres ingrédients constituant la composition des granulés. Les agents liants utilisés dans les compositions alimentaires pour animaux sont bien connus de l’homme du métier. A titre d’exemple, on peut utiliser de l’amidon, tel que de l’amidon de blé, de maïs ou de riz. On peut aussi utiliser des sirops à base de sucre, tel que du sirop de mélasse ou du sirop d’érable. Dans certains modes de réalisation, des granulés selon la présente description peuvent être préparés à partir de (i) un broyat de feuilles d’un arbre du genre Juglans , en particulier de l’espèce Juglans regia , (ii) de graines d’orge entières ou broyées en tant qu’agent de charge et (ii) de sirop de mélasse en tant qu’agent liant. Selon certains aspects, les granulés peuvent être préparés à l’aide d’un mélange comprenant (i) de 20 % à 50 % en poids d’un broyat de feuilles d’un arbre du genre Juglans , de préférence 25 – 40 % en poids de feuilles , en particulier de l’espèce Juglans regia , (ii) de 40 % à 70 % en poids de graines d’orge ou d’un broyat de graines d’orge et (iii) de 1 % à 10 % en poids d’un sirop de sucre, en particulier d’un sirop de mélasse, le pourcentage en poids étant exprimé par rapport au poids total. Les exemples illustrent la préparation d’une composition comprenant de la progestérone de Juglans , et plus spécifiquement de Juglans regia , pour laquelle sont mis en œuvre (i) environ 32 % en poids de feuille séchées de Juglans , (ii) 65 % en poids d’orge et (iii) environ 3 % en poids de sirop de mélasse. A l’étape b), les feuilles, le(s) agent(s) de charge et le(s) agent(s) liants sont introduits dans un dispositif mélangeur de constitution connue, par exemple un mélangeur de la marque Guédu ® . Les ingrédients sont mélangés en contrôlant que la température du mélange ne dépasse pas les 40 °C, en particulier lors de la phase de pressurage final et de génération des granulés. Les granulés ainsi générés en sortie de mélangeur, sont séchés avant leur utilisation pour les animaux. La présente description est également relative à une composition de granulés comprenant, en combinaison, (i) des feuilles séchées d’un arbre du genre Juglans , en particulier de l’espèce Juglans regia , (ii) un ou plusieurs agent(s) de charge et (iii) un ou plusieurs agent(s) liant(s). En particulier, la présente description a trait à une composition de granulés comprenant, en combinaison, (i) de 20 % à 50 % en poids d’un broyat de feuilles d’un arbre du genre Juglans , en particulier de l’espèce Juglans regia , de préférence 25 – 40 % en poids d’un tel broyat, (ii) de 40 % à 70 % en poids de graines d’orge ou d’un broyat de graines d’orge et (iii) de 1 % à 10 % en poids d’un sirop de sucre, en particulier d’un sirop de mélasse. Les compositions comprenant de la progestérone d’un arbre du genre Juglans , en particulier de l’espèce Juglans regia , peuvent avantageusement être utilisées en substitution aux techniques de déclenchement de l’œstrus et d’induction de l’ovulation connues, notamment en substitution de l’utilisation des éponges intravaginales imprégnées de progestérone. La présente description est en outre illustrée par les exemples suivants. Exemple 1 : Préparation d ’ un extrait de noyer comprenant de la progestérone A. Protocole Un extrait comprenant de la progestérone à partir de feuilles de noyer peut être obtenu selon le protocole suivant : - collecte des feuilles vertes sur l’arbre, - congélation à -20 °C et stockage à -20 °C jusqu’à utilisation, - décongélation des feuilles congelées à -20 °C, - mélange et broyage des feuilles (pétioles uniquement, sans la tige), - pesée d’un sous échantillon de feuilles (± 1 g), - extraction avec un mélange de solvants : cyclohexane/acétate d’éthyle dans le rapport volumique 1:1 dans des tubes de 3 ml, puis mélange au Vortex ® à température ambiante, pendant 5 minutes, puis le mélange est maintenu tel quel pendant une durée de 1 heure à 1,5 heures, - centrifugation du mélange résultat, (i) récupération de la fraction liquide de solvant puis (ii) évaporation de la fraction liquide récupérée, - obtention d’une solution aqueuse comprenant la progestérone par reprise dans 200 µl de tampon phosphate 0,1M, - la composition liquide aqueuse comprenant la progestérone peut être conservée à la température de + 4 °C jusqu’à utilisation. La quantification de la progestérone a été réalisée par dosage immuno-enzymatique de type ELISA, comme le kit « Progesterone Competitive ELISA kit » commercialisé par la Société ThermoFisher Scientific sous la référence #EIAP4C21. Le seuil de détection pour l’essai de quantification par test ELISA était de 0,1 mg par kilogramme de matériel. La quantification de la progestérone plasmatique peut également être réalisée selon la technique immunoenzymatique décrite par Canepa et al. (2008, Cahiers Techniques Inra, Vol. 64 : 19-30). Pour les résultats présentés dans le Tableau 1, la progestérone a été quantifiée par chromatographie en phase gazeuse-spectrométrie de masse (GC-MS pour « Gas Chromatography Mass Spectrometry »). Les résultats ont montré que les valeurs de quantité de progestérone mesurées avec respectivement la technique ELISA et la technique GC-MS étaient extrêmement voisines. Pour la préparation des échantillons de test utilisés pour les résultats représentés dans le Tableau 1, l’étape d’extraction per se a été réalisée en utilisant le méthanol comme seul solvant. 20 mg environ de feuilles de noyer préalablement finement broyées ont été soumises à une étape d’extraction par 300 µl de méthanol. Pour la quantification par GC-MS, les standards internes suivant ont été utilisés : (i) 5 ng de 19-nor-progestérone, (ii) 2 ng de 13 C 3 -Testostérone, (iii) 2 ng de 13 C 3 -17-Beta-estradiol et (iv) 5 ng de 13 C 3 -progestérone. Pour la quantification par GC-MS, le protocole suivant : (i) SPE : lavage avec H 2 O et methanol 40 % (v/v), puis collection de la fraction méthanol 90 % (v/v), (ii) HPLC : Fraction III : 13-27 min et 27-40 min, (iii) Dérivation : F2, puis (iv) analyse GC/MS. B. Résultats Les résultats de quantification de progestérone contenue dans différents extraits obtenus à partir de feuilles de noyer sont reportés dans Tableau 1 ci-après. Les résultats du Tableau 1 montrent qu’il est possible d’obtenir de manière reproductible de la progestérone, de structure identique à celle de la progestérone humaine, à partir de feuilles de noyer. Exemple 2 : Obtention de p rogestérone à partir de diverse s variétés de noyer Il a été testé la possibilité d’obtenir de la progestérone à partir des feuilles de diverses variétés de noyer. Les résultats sont représentés dans le Tableau 2 ci-dessous. Les résultats du Tableau 2 montrent que de la progestérone peut être obtenue à partir d’un grand nombre de variétés d’arbres du genre Juglans , y compris de variétés d’arbres de l’espèce Juglans regia . Des essais ont été réalisés avec plusieurs variétés de Juglans regia , en utilisant des feuilles fraichement récoltées ou bien des feuilles préalablement séchées comme produit de départ. Les résultats sont reportés dans le Tableau 3 ci-dessous. Les résultats du Tableau 3 montrent que la progestérone peut être obtenue aussi bien à partir de feuilles fraichement récoltées qu’à partir de feuilles préalablement séchées. L’évolution au cours de l’année de la concentration en progestérone dans les tissus d’arbres de l’espèce Juglans regia a été suivie. Les résultats sont décrits dans la . Les résultats de la montrent que la concentration de progestérone varie selon la période de l’année considérée. Les résultats de la montrent que la progestérone est présente à forte concentration dans la période allant du mois d’août au mois d’octobre en France, soit pendant les saisons d’été et d’automne. Ex e mple 3 : Fabrication de granulés comprenant de la progestérone végétale Il a été réalisé des granulés alimentaires comprenant de la progestérone provenant d’arbres de l’espèce Juglans regia , adaptés à être fournis à des animaux en ayant besoin, en particulier à des ruminants ou à des monogastriques en ayant besoin. Des feuilles de Juglans regia (les pétioles sans les tiges) provenant d’une pluralité de variétés (trois variétés, respectivement les variétés Franquette, Fernor et Lara) ont été mélangées puis ont été déshydratées dans une étuve à 37 °C. Le mélange de feuilles déshydratées en étuve a subi une seconde étape de déshydratation par une exposition des feuilles déshydratées à 28 °C pendant 36 heures. Les feuilles déshydratées résultantes ont été mélangées avec des grains d’orge en grains et ce mélange a été pulvérisé dans un broyeur équipé d’une grille de 4 mm. Le mélange de feuilles et de grains broyés est ensuite placé dans un mélangeur de type « Guédu » en présence de 3,25 % de mélasse. Dans ce mélange, la présence des grains d’orge est destinée à conférer aux granulés produit final une bonne consistance, en particulier permet l’obtention de granulés compacts avec une présence réduite de poudre. Dans ce mélange, la présence de mélasse permet d’augmenter l’appétence des granulés produit final. La disponibilité de la composition sous forme de granulés est particulièrement bien adaptée à la distribution d’aliments pour le bétail et permet de disposer d’un produit facile à stocker et dont il est facile de contrôler la quantité distribuée. Des tests de dosage de la progestérone dans les grains d’orge et dans la mélasse a confirmé l’absence de progestérone dans ces deux produits. La composition précise était la suivante : - 32,25 % en poids de feuilles séchées, - 64,5 % en poids d’orge (2251), - 3,25 % en poids de mélasse (2261), par rapport au poids total de la composition. Il est précisé que la composition qualitative et quantitative en ingrédients des granulés correspond à la qualité et quantité (i) des feuilles séchées, (ii) des grains d’orge et (iii) de mélasse mises en œuvre au début du procédé. Une fois le mélange bien homogène, le pressurage final pour l’obtention des granulés est réalisé en plusieurs étapes. En effet la pression entraîne un accroissement de la température et il est important de maintenir la température à une valeur inférieure à 40 °C pour éviter une dégradation de la progestérone, une telle dégradation de la progestérone se produisant à une température supérieure à 50 °C. L’opération de pressurage est donc réalisée avec un contrôle constant de la température. Environ toutes les 4 minutes la pression est suspendue afin de maintenir la température du mélange au-dessous de 40 °C. Les granulés ainsi obtenus sont ensuite laissés à l’air libre pendant 48 heures aux fins de contrôler le taux d’humidité, un taux d’humidité trop élevé pouvant favoriser le développement de moisissures. Les granulés ainsi préparés sont stockés en sac à température ambiante dans un local sec et tempéré avant d’être distribués aux animaux. Exemple 4 : Traitement de caprins avec une composition comprenant de la progestérone provenant de Juglans regia Dans cet exemple, la concentration sanguine de progestérone avec le temps, chez des chèvres ovariectomisées auxquelles on a fourni des granulés contenant de la progestérone, préparés selon le procédé décrit à l’exemple 3. Par définition, la progestérone sanguine est absente chez les chèvres ovariectomisées. En conséquence, la progestérone sanguine détectée et/ou quantifiée chez ces animaux ne peut être que de la progestérone exogène. Neuf chèvres ovariectomisées ont été enrôlées pour cet essai et ont été soumises aux conditions de test suivantes : (i) Témoin, (ii) progestérone de synthèse, 100 mg per os à J0 juste après Prise de Sang n°1 (PS1), (iii) progestérone de Juglans regia , 250 g de granulés par jour, (i) le matin après PS1 à J0, puis (ii) matin et soir juste après les prises de sang du matin et du soir pendant 2,5 jours (respectivement aux heures H1, H13, H25, H34 et H49). L’essai a été réalisé « en carré latin », c’est-à-dire que chaque chèvre a été soumise à chacun des protocoles ((i) témoin, (ii) progestérone de synthèse (iii) granulés comprenant de la progestérone selon la présente description). Les résultats présentés sur le confirment l’absence de progestérone plasmatique chez les chèvres n’ayant pas reçu de progestérone exogène. Les résultats de la montrent l’obtention d’un pic de progestérone plasmatique chez les chèvres ayant reçu la progestérone de synthèse. Les résultats de la montrent la présence de progestérone plasmatique chez les chèvres ayant reçu la progestérone de Juglans regia. Il est noté que les chèvres ont systématiquement consommé la totalité de la ration de granulés qui leur a été distribuée. Les résultats de la montrent que la progestérone de Juglans regia possède de bonnes propriétés de biodisponibilité car elle se retrouve bien dans le compartiment sanguin. Il est observé que le profil pharmacocinétique de la progestérone plasmatique est distinct chez les chèvres ayant reçu la progestérone de synthèse ( ) et celles ayant reçu la progestérone de Juglans regia ( ). La différence de profil pharmacocinétique est due à la différence de posologie, les chèvres ayant reçu la progestérone de juglans regia en des quantités journalières moindres que la progestérone de synthèse, mais selon une posologie bi-quotidienne et pendant une période de temps plus longue. Les résultats de montrent une augmentation très importante de la concentration de progestérone plasmatique à partir de 12 heures après l’ingestion des granulés. La concentration plasmatique de progestérone se maintient à des valeurs allant de 1 à 2 ng/ml pendant trois jours, puis revient au niveau initial à la fin de l’essai. Les résultats de l’Exemple 4 montrent aussi que pour les profils pharmacocinétiques observés respectivement pour la progestérone de synthèse et pour la progestérone de Juglans regia , on obtient des valeurs d’aire sous la courbe (ou AUC pour « Area Under the Curve ») de valeurs similaires. L’analyse des aires sous la courbe permet d’estimer que la quantité totale de progestérone distribuée aux chèvres ayant reçu oralement la progestérone de Juglans regia , est d’environ 60-80 mg. La concentration plasmatique obtenue avec la progestérone de Juglans regia est proche de la concentration plasmatique de progestérone observée chez les chèvres non-ovariectomisées pendant la phase lutéale du cycle ovarien. De plus, la concentration plasmatique obtenue avec la progestérone de Juglans regia est du même ordre, voire supérieure, à la concentration plasmatique de progestérone qui est observée lors du premier cycle induit par « effet mâle » chez une chèvre « entière », c’est-à-dire une chèvre non-ovariectomisée. Ces résultats confirment que l’administration de progestérone provenant de juglans regia va produire l’effet physiologique attendu. Utilisation d’une composition comprenant une progestérone dérivée d’un arbre du genre Juglans pour induire ou synchroniser l’ovulation chez des mammifères d’élevage choisis parmi les ruminants et les monogastriques. Utilisation selon la revendication 1, les mammifères d’élevage étant choisis parmi les bovins, les porcins, les ovins, les équins et les caprins. Utilisation selon l’une des revendications 1 et 2, le mammifère d’élevage étant un caprin, de préférence une chèvre. Utilisation selon l’une des revendications 1 à 3, l’arbre du genre Juglans appartenant à l’espèce Juglans regia . Utilisation selon l’une des revendications 1 à 4, la progestérone provenant des feuilles d’un arbre du genre Juglans , de préférence de l’espèce Juglans regia . Utilisation selon l’une des revendications 1 à 5, ladite composition étant formulée pour une administration orale Utilisation selon l’une des revendications 1 à 6, la composition comprenant ladite progestérone étant mise en œuvre sous la forme d’un extrait organique de feuilles dudit arbre du genre Juglans . Utilisation selon l’une des revendications 1 à 6, la composition comprenant ladite progestérone étant mise en œuvre sous la forme de granulés obtenus à partir d’un broyat de feuilles dudit arbre du genre Juglans . Procédé pour l’obtention d’une composition telle que définie dans la revendication 1 comprenant de la progestérone dérivée d’un arbre du genre Juglans comprenant les étapes suivantes : (a) réaliser une extraction à partir de feuilles d’un arbre du genre Juglans , en particulier de l’espèce Juglans regia , ou à partir d’un broyat des dites feuilles, dans un solvant organique ou dans un mélange de solvants organiques, aux fins d’obtenir un matériau d’extraction, (b) récupérer la fraction liquide du matériau d’extraction obtenu à l’étape a), et (c) évaporer le(les) solvant(s) contenu(s) dans ladite fraction liquide, aux fins d’obtenir ladite composition comprenant la progestérone. Procédé pour l’obtention d’une composition telle que définie dans la revendication 1 comprenant de la progestérone dérivée d’un arbre du genre Juglans , en particulier de l’espèce Juglans regia , comprenant les étapes suivantes : (a) préparer un broyat de feuilles d’un arbre du genre Juglans , en particulier de l’espèce Juglans regia , et (b) préparer des granulés à partir du broyat de feuilles obtenu à l’étape a). Composition de granulés comprenant (i) de 20 % à 50 % en poids d’un broyat de feuilles d’un arbre du genre Juglans , de préférence 25 – 40 % en poids de feuilles, en particulier de l’espèce Juglans regia , (ii) de 40 % à 70 % en poids de graines d’orge ou d’un broyat de graines d’orge et (iii) de 1 % à 10 % en poids d’un sirop de sucre, en particulier d’un sirop de mélasse.