FR 3109301 A1 20211022 FR 2003896 A 20200417 L’invention concerne un principe actif cosmétique ou dermatologique comprenant au moins un hydrolysat d’écorce de fruits immatures de Punica granatum . L’invention a également pour objet une composition l’incluant, un procédé d’obtention ainsi que l’utilisation de ce principe actif pour prévenir et/ou lutter contre l’acné. PRINCIPE ACTIF COMPRENANT UN EXTRAIT PARTICULIER DE PUNICA GRANATUM ET UTILISATIONS POUR PREVENIR ET/OU LUTTER CONTRE L’ACNE L’invention concerne un principe actif pour la peau spécifique comprenant un hydrolysat d’écorce de fruits immatures de Punica granatum , utile en cosmétique ou dermatologique en particulier pour prévenir et/ou lutter contre l’acné. L’invention concerne également les compositions cosmétiques ou dermatologiques l’incluant, un procédé d’obtention d’un tel principe actif ainsi que ses utilisations. L’acné est une pathologie cutanée chronique multifactorielle du système pilosébacé. Elle se manifeste notamment par l’apparition de différentes lésions cutanées non inflammatoires ou rétentionnelles telles que les comédons, et des lésions inflammatoires telles que les papules, pustules, nodules et kystes. Elle affecte principalement le visage. Ces imperfections sont inconfortables et difficiles à masquer et entraînent souvent un impact négatif sur la qualité de vie de ceux qui en souffrent. L’acné implique quatre grandes composantes biologiques que sont la modification de l’activité de la glande sébacée, l’hyperkératinisation, la modification du microbiote cutané par la colonisation de la bactérie Cutibacterium acnes ( C. acnes ) et l’inflammation. Ces quatre composantes physiopathologiques de l’acné sont biologiquement liées car elles ont toutes un impact les unes sur les autres sans pour autant former un cercle vicieux. De nombreux traitements anti-acné existent sur le marché mais beaucoup sont constitués de produits de synthèse de substances médicamenteuses et très peu de produits d’origine naturelle sont réellement efficaces. On trouve aussi des actifs agissant sur l’une ou l’autre des composantes biologiques de l’acné, mais aucun actif naturel n’agissant sur l’ensemble de ces quatre paramètres. L’objectif de l’invention est de répondre à cette problématique en proposant un principe actif capable de lutter efficacement contre la multiplicité des paramètres à l’origine de l’acné. A cet effet, l’invention a pour objet un principe actif cosmétique ou dermatologique comprenant au moins un extrait particulier de Punica granatum . Punica granatum ou grenadier est très connu et très utilisé. Le fruit du grenadier peut être consommé frais, en sirop, en jus, les arilles séchés (entiers, poudre ou mélasse). De nombreuses utilisations médicinales sont également connues : - en médecine traditionnelle l’écorce de fruit de grenade a des propriétés astringentes, anti-bactérienne, antihémorragique, anti inflammatoire, - en pharmacopée marocaine la décoction d’écorce de grenade ou en poudre est utilisée pour le traitement de maladies gastro-intestinales, - en pharmacopée indienne les extraits de zeste, de fleurs, de feuilles et écorce de grenade sont utilisées comme anti-bactériens. En cosmétique des extraits sont utilisés notamment comme antioxydants, en capillaire et comme nettoyant cutané. De plus, il a été décrit l’utilisation d’extraits d’écorce de grenade pour des applications anti-acné en particulier des extraits éthanoliques seuls ou en combinaison avec d’autres extraits, pour diminuer la quantité de sébum sécrétée, minimiser les pores et pour un effet anti-bactérien. Toutefois l’inventeur a démontré que ces extraits existants d’écorce de grenade ne présentent pas des résultats satisfaisants pour prévenir ou lutter contre toutes les composantes biologiques de l’acné. L’inventeur a sélectionné une étape précise de la maturation des fruits de Punica granatum et un type d’extraction particulier. En effet, de façon surprenante, le choix spécifique de fruits immatures de Punica granatum combiné à une hydrolyse enzymatique, permet d’améliorer efficacement l’effet anti-acné par rapport aux extraits de Punica granatum existants. L’invention a par conséquent pour objet un principe actif cosmétique ou dermatologique particulier à savoir un principe actif comprenant au moins un hydrolysat d’écorce de fruits immatures de Punica granatum , ainsi que son utilisation en application sur la peau pour prévenir et/ou lutter contre l’acné. L’invention a également pour objet un procédé d’obtention d’un tel principe actif ainsi que les compositions l’incluant adaptées à une application topique sur la peau. Avantageusement, la sélection particulière de fruits immatures de Punica granatum combinée à une hydrolyse enzymatique permet de lutter efficacement contre l’acné, en particulier de lutter efficacement contre les quatre grandes composantes de l’acné : les modifications de la sébogénèse, l’hyperkératinisation, l’inflammation, et les modifications du microbiote. D’autres caractéristiques et avantages ressortiront de la description détaillée de l’invention qui va suivre réalisée en regard notamment des exemples, résultats d’essais, résultats d’essais comparatifs et figures. Figures La Figure 1 représente le profil chromatographique entre 250 et 390 nm d’un extrait d’écorce de fruits immatures de Punica granatum. La Figure 2 représente le profil chromatographique entre 250 et 390 nm d’un extrait d’écorce de fruits matures de Punica granatum. La Figure 3 représente le profil chromatographique entre 250 et 390 nm du jus de Punica granatum. Définitions Par « actif cosmétique ou dermatologique » ou « principe actif cosmétique ou dermatologique » au sens de l’invention, on entend au moins une molécule, préférentiellement un ensemble de molécules présentant un effet sur la peau. Par « extrait » d’une matière première X, au sens de la présente invention, on entend toute molécule ou mélange d’au moins deux molécules obtenu(e) à partir d’une matière première X, quel que soit le procédé d’extraction de ladite ou desdites molécule(s). Il peut s’agir par exemple d’un extrait obtenu par extraction aqueuse et/ou hydroalcoolique et/ou hydroglycolique, etc. Par « hydrolysat » d’une matière première X au sens de l’invention, on entend toute extraction obtenue à partir d’une matière première X, par un procédé comprenant au moins une étape d’hydrolyse enzymatique ou chimique d’un extrait aqueux. L’hydrolysat est sous forme liquide. Par « hydrolysat enzymatique » d’une matière première X au sens de l’invention, on entend toute extraction obtenue à partir d’une matière première X par un procédé comprenant au moins une étape d’hydrolyse enzymatique d’un extrait aqueux. Par « extrait hydroglycolique » d’une matière première X au sens de l’invention, on entend tout extrait obtenu à partir d’une matière première X par un procédé comprenant comme principale étape une étape d’extraction à l’aide d’au moins un mélange d’au moins deux solvants (eau et un solvant glycolique, comme par exemple le butylène glycol). Par « extrait éthanolique » d’une matière première X au sens de l’invention, on entend tout extrait obtenu à partir d’une matière première X par un procédé comprenant au moins une étape d’extraction à l’aide d’éthanol, comme par exemple une distillation éthanolique. Par « extraction aqueuse » d’une matière première X au sens de l’invention, on entend tout extrait obtenu à partir d’une matière première X par un procédé comprenant comme seul solvant d’extraction l’eau. Par « Ellagitanins », on entend les composés polyphénoliques aussi nommés tanins ellagiques. Description détaillée de l’invention I. P rincipe actif L’invention vise donc un principe actif spécifique, particulièrement utile pour prévenir et/ou lutter contre l’acné. Ledit principe actif est un principe actif cosmétique ou dermatologique comprenant au moins un hydrolysat particulier de Punica granatum . Le principe actif est obtenu à partir d’écorce de fruits immatures de Punica granatum . Le choix de ce stade de maturité des fruits est essentiel car il contient des molécules différentes ou des mêmes molécules mais en quantité différentes, de celles contenues dans l’écorce de fruits matures de Punica granatum . Préférentiellement par fruits immatures de Punica granatum on entend des fruits : - qui ont un diamètre inférieur à 10 cm, préférentiellement inférieur à 8cm, et/ou - qui ont une couleur qui n’est ni rouge, ni orangée, préférentiellement qui ont une couleur verte. Par ailleurs le principe actif selon l’invention est un hydrolysat, c’est-à-dire qu’il est obtenu par un procédé comprenant une étape d’hydrolyse d’un extrait aqueux. Préférentiellement il s’agit d’un hydrolysat enzymatique, encore plus préférentiellement un hydrolysat enzymatique obtenu par hydrolyse réalisée à l’aide d’au moins une carbohydrase. Selon un mode de réalisation préféré, il s’agit d’un hydrolysat aqueux c’est-à-dire qu’avant hydrolyse, l’écorce de Punica granatum a fait l’objet d’une solubilisation dans l’eau. Quoi qu’il en soit l’invention exclut tout autre extrait comme les extraits éthanolique ou hydroglycolique de Punica granatum . Le principe actif selon l’invention peut se présenter sous forme liquide ou sous forme poudre ou sous forme de film. Lorsqu’il se présente sous forme liquide, le principe actif selon l’invention est préférentiellement exclusivement constitué l’hydrolysat d’écorce de fruits immatures de Punica granatum et d’eau, le solvant d’extraction. Des conservateurs ou stabilisants peuvent être ajoutés pour faciliter la conservation et l’utilisation industrielle du principe actif. Le principe actif selon l’invention sous forme liquide se présente préférentiellement sous forme d’un liquide limpide, avec une faible odeur et une couleur ocre à ambré. Il peut toutefois être plus coloré et/ou être décoloré par tout procédé connu de l’homme du métier. Préférentiellement, le principe actif selon l’invention sous forme liquide a une teneur en matières sèches de 10 g/L à 40g/L. Lorsqu’il se présente sous forme poudre, le principe actif selon l’invention est constitué par : - un support tel que par exemple les maltodextrines, et - au moins l’hydrolysat d’écorce de fruits immatures de Punica granatum selon l’invention. Dans ce cas, préférentiellement, l’hydrolysat représente au moins 10% en poids du principe actif et le support au plus 90%. Le principe actif selon l’invention peut aussi être présenté sous forme d’un film sec. Dans ce cas, l’hydrolysat d’écorce de fruits immatures de Punica granatum représente préférentiellement au moins 0.1% en poids du film sec. Préférentiellement l’hydrolysat comprend des polyphénols, des sucres, des minéraux et des protéines. Plus préférentiellement, l’hydrolysat du principe actif selon l’invention comprend : - au moins 35% de polyphénols en poids par rapport au poids de matières sèches de l’hydrolysat, et/ou - au moins 25% de sucres en poids par rapport au poids de matières sèches de l’hydrolysat, et/ou - moins de 15% de protéines en poids par rapport au poids de matières sèches de l’hydrolysat, et/ou - moins de 25% de minéraux en poids par rapport au poids de matières sèches de l’hydrolysat. Ainsi, lorsque le principe actif est sous forme liquide et qu’il est constitué uniquement par l’hydrolysat, le principe actif selon l’invention comprend ces constituants dans ces proportions. Lorsqu’il est sous forme de poudre, et qu’il est constitué au moins par l’hydrolysat et un support, le principe actif selon l’invention comprend : - au moins 4% de polyphénols en poids par rapport au poids de matières sèches du principe actif, et/ou. - au moins 93% de sucres en poids par rapport au poids de matières sèches du principe actif, et/ou - moins de 1% de protéines en poids par rapport au poids de matières sèches du principe actif, et/ou - moins de 2% de minéraux en poids par rapport au poids de matières sèches du principe actif. La teneur en composés phénoliques peut être déterminée par dosage colorimétrique. Les composés phénoliques forment en présence de ferricyanure de potassium et de chlorure de fer des complexes colorés qui peuvent être dosés par spectrophotométrie à 715 nm. L’intensité de cette coloration est proportionnelle à la quantité de composés phénoliques présents dans l’échantillon. Des solutions de calibration sont préparées à partir d’un standard d’acide gallique ou d’acide ellagique de 40 à 120 mg/L, préférentiellement d’acide ellagique. Une courbe de calibration des densités optiques des solutions de calibration en fonction de leur concentration est construite. Les échantillons sont préalablement dilués avec de l’eau distillée pour que la teneur en polyphénols corresponde à la gamme d’étalonnage. La quantité de polyphénols des échantillons est déterminée grâce à la courbe de calibration. Les composés phénoliques du principe actif selon l’invention peuvent être caractérisés par toute méthode adaptée en particulier par chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse. Selon un mode de réalisation préféré, les polyphénols présents dans l’hydrolysat sont des Ellagitanins. Les Ellagitanins présents dans l’hydrolysat sont préférentiellement au moins pour 50% la Punicalagine et ses dérivés, pour moins de 40% la Punicaline, pour moins de 20% les dérivés d’HHDP et pour moins de 10% l’acide Ellagique. Préférentiellement, le principe actif selon l’invention comprend les Ellagitanins présentés dans le tableau 1. Sous-famille d’Ellagitanins Attribution Dérivés d’HHDP” HHDP-Glucose et isomères Lagerstannine C Pedunculagine Punicafoline Punicacortéine A ou B Vescalagine Di(HHDP-galloylglucose) pentose Casuariine Punigluconine Oenothéine B Punicaline Punicaline alpha et beta° Punicalagine et dérivés Punicacortéine C ou D Punicalagine alpha et beta° Digalloyl gallagil hexoside Acide ellagique Acide ellagique HHDP : 2,3-(S)-HexaHydroxyDiPhenoyl La teneur en sucres totaux peut être déterminée à l’aide de la méthode de DUBOIS (Dubois M. et al . Analytical chemistry , 28, 3, 350-356, 1956). Toutes les fonctions réductrices sont libérées en présence d’acide sulfurique concentré et donnent avec le phénol un composé coloré jaune-orangé. La coloration obtenue, mesurée à 490 nm sur un spectrophotomètre, est proportionnelle à la quantité de sucres totaux de l’échantillon. La détermination des masses molaires des sucres est réalisée par HPLC avec détection RI. La fraction glucidique du principe actif selon l’invention sous forme de poudre est préférentiellement composée de 55% à 65% d’oligosaccharides et de 35% à 45% de polysaccharides constitués de glucose et de fructose. La taille moyenne des sucres est une masse molaire moyenne 13 140 Da. La fraction glucidique du principe actif sous forme liquide est préférentiellement composée de 85 à 100% d’oligosaccharides constitués de glucose et de fructose. Leurs tailles sont inférieures à 3600Da. Le dosage des protéines dans le principe actif selon l’invention peut être réalisé notamment par la méthode de KJELDHAL (référence : Official method of analysis of the A.O.C., 12th ed. W Horwitz, E.D., New-York, 15-60, 1975). La teneur en protéines est exprimée en pourcentage par rapport à la teneur en matières sèches. De plus, pour déterminer la taille des composés peptidiques présents dans le principe actif selon l’invention, il est possible de réaliser une chromatographie de type F.P.L.C. La teneur en cendres brutes peut être déterminée par la pesée des résidus issus de l’incinération des échantillons de l’extrait selon l’invention à 550°C dans un four à moufle électrique. Les minéraux, présents dans le principe actif, sont le potassium, sodium et le chlore majoritairement. D’autres minéraux tels que le phosphore, le magnésium et le soufre peuvent être présents. L’analyse des minéraux constituant les cendres du principe actif selon l’invention peut être réalisée par spectrométrie d’émission optique (ICP/OES) et le dosage des ions chlorures par titration au nitrate d’argent. L’hydrolysat d’écorce de fruits immatures de Punica granatum selon l’invention peut être obtenu par tout moyen. Préférentiellement il est obtenu par la mise en œuvre d’un procédé comprenant au moins une extraction aqueuse et une hydrolyse enzymatique. Selon un mode de réalisation particulièrement adapté, l’hydrolysat selon l’invention est obtenu par la mise en œuvre des étapes suivantes : a/ Solubilisation de poudre d’écorce de fruits de Punica granatum immatures dans l’eau, à raison d’au moins 50g/L, b/ Hydrolyse enzymatique, préférentiellement à l’aide d’une carbohydrase, c/ Séparation des phases soluble et insoluble, par tout moyen permettant de séparer une phase insoluble de la phase soluble, par exemple par centrifugation, filtration ou décantation d/ récupération de la phase soluble, et inactivation enzymatique par tout moyen permettant l’inactivation des activités enzymatiques, par exemple par traitement thermique, e/ purification des composés polyphénoliques par tout moyen permettant le tri moléculaire, f/ éventuellement désodorisation ou décoloration par ajout d’un adjuvant de procédé permettant la désodorisation ou la décoloration g/ préférentiellement filtration et filtration stérilisante. Les étapes du procédé décrit ci-avant, prises individuellement, sont usuelles dans le domaine des extractions d’actifs à partir de matières premières naturelles et l’homme du métier est à même d’en ajuster les paramètres réactionnels sur la base de ses connaissances générales. L’hydrolysat obtenu peut être utilisé tel quel sous forme liquide et constituer le principe actif selon l’invention. L’hydrolysat peut également éventuellement être associé à un support et séché (atomisation ou lyophilisation notamment), pour se présenter sous forme poudre. L’hydrolysat peut également éventuellement être associé à des composés permettant sa présentation sous forme d’un film sec. II. Composi tion Le principe actif selon l’invention est préférentiellement utilisé dans des compositions, comprenant un milieu cosmétiquement/dermatologiquement acceptable. Il s’agit de compositions dans différentes formes galéniques, adaptées à une application par voie topique sur la peau. Ces compositions peuvent se présenter notamment sous forme d’émulsions huile-dans-eau, émulsions eau-dans-huile, émulsions multiples (Eau/Huile/Eau ou Huile/Eau/Huile) qui peuvent être éventuellement des microémulsions ou des nanoémulsions, ou sous forme de solutions, suspensions, hydrodispersions, gels aqueux ou poudres. Elles peuvent être plus ou moins fluides et avoir l’aspect de crèmes, émulsions ou gels ou tous autres aspects des cosmétiques de soin peau. Il peut s’agir de compositions comprenant au moins 0,1% d’un principe actif selon l’invention sous la forme liquide, préférentiellement entre 0,1 et 10% ou au moins 0,05% du principe actif selon l’invention sous la forme poudre, préférentiellement entre 0,05% et 2%. Ces compositions comprennent, outre l’actif, un milieu physiologiquement acceptable et de préférence cosmétiquement et/ou dermatologiquement acceptable, c'est-à-dire qui ne provoque pas de sensations d’inconfort inacceptables pour l’utilisateur telles que des rougeurs, tiraillements ou picotements. Les compositions selon l’invention peuvent contenir comme adjuvant au moins un composé choisi parmi : - les huiles, qui peuvent être choisies notamment parmi les huiles de silicone, linéaires ou cycliques, volatiles ou non volatiles ; - les cires, telles que l’ozokérite, la cire de polyéthylène, la cire d’abeille ou la cire de carnauba, - les élastomères de silicone, - les tensioactifs, de préférence émulsionnants, qu’ils soient non ioniques, anioniques, cationiques ou amphotères, - les co-tensioactifs, tels que les alcools gras linéaires, - les épaississants et/ou gélifiants, - les humectants, tels que les polyols comme la glycérine, - les colorants, les conservateurs, les charges, - les tenseurs, - les séquestrants, - les parfums, - et leurs mélanges, sans que cette liste soit limitative. Des exemples de tels adjuvants sont cités notamment dans le Dictionnaire CTFA ( International Cosmetic Ingredient Dictionary and Handbook publié par le Personal Care Product Council ). Bien entendu, l’homme du métier veillera à choisir les éventuels composés complémentaires, actifs ou non-actifs, et leur quantité, de telle sorte que les propriétés avantageuses du mélange ne soient pas, ou sensiblement pas, altérées par l’adjonction envisagée. Ces compositions sont notamment destinées à être utilisées pour améliorer la qualité de la peau, en particulier pour prévenir et/ou lutter contre l’acné. Préférentiellement la composition comprenant le principe actif cosmétique selon l’invention est appliquée, préférentiellement sur le visage, au moins une fois par jour pendant au moins 14 jours. III. Utilisation Le principe actif et les compositions selon l’invention, sont particulièrement efficaces pour un traitement de la peau par voie topique et en particulier pour un effet de prévention ou de traitement de l’acné. L’invention a par conséquent également pour objet un principe actif selon l’invention ou une composition l’incluant pour son utilisation dans la prévention et/ou le traitement de l’acné. Ainsi l’invention vise l’utilisation d’un hydrolysat d’écorce de fruits immatures de Punica granatum pour prévenir et/ou lutter contre l’acné. Le principe actif selon l’invention est capable d’influer positivement sur ces quatre composantes biologiques de l’acné. Sur la modification de la glande sébacée, première composante de l’acné, le principe actif selon l’invention est capable d’agir sur les différents facteurs augmentant la sébogénèse. En effet, sous l’influence de divers facteurs endogènes (ex : hormones, C. acnes , activité lipophagique) et exogènes (ex : stress), le métabolisme des glandes sébacées est activé, caractérisé par des modifications quantitatives et qualitatives du sébum. Ceci se traduit par une augmentation de la sébogénèse et par conséquent une production anormalement élevée de sébum. Le principe actif selon l’invention est aussi capable d’agir sur l’hyperkératinisation, autre composante de l’acné. L’hyperkératinisation est un évènement biologique précoce dans le développement des lésions d’acné. Elle est caractérisée par une anomalie de prolifération et de kératinisation des kératinocytes folliculaires favorisant l’obstruction du canal excréteur, une mauvaise évacuation du sébum et consécutivement la dilatation du canal pilosébacé à l’origine de la formation d’un microcomédon. Le principe actif selon l’invention agit aussi sur l’inflammation, troisième composante de l’acné. L’inflammation est le phénomène biologique concomitant à toutes les étapes de la formation des lésions acnéiques : microcomédon, comédon, lésion inflammatoire, érythème post-inflammatoire et même cicatrice. La bactérie C. acnes joue un rôle essentiel dans l’apparition des lésions inflammatoires. Elle stimule la production de médiateurs pro-inflammatoires par plusieurs types cellulaires de l’unité pilosébacée (les kératinocytes, les sébocytes, les cellules immunitaires infiltrant les lésions d’acné). Le principe actif selon l’invention présente enfin la capacité d’agir sur le microbiote cutané des peaux acnéiques. La bactérie Cutibacterium acnes ( C. acnes ) est considérée comme l’un des facteurs pathogènes majeurs contribuant au développement de l’acné. L’acné est caractérisée par une perte de diversité phylotypique de C. acnes au profit du phylotype IA1. La population de C. acnes phylotype IA1 possède une capacité à communiquer et s’organiser pour mettre en place des facteurs de virulence (ex : formation de biofilms) via le système de quorum sensing et ainsi coloniser le follicule. Le principe actif selon l’invention, ou les compositions le contenant, agissent sur les principales modifications induites au cours de l’acné : En normalisant l’activité de la glande sébacée, En exerçant une activité kératolytique, En réduisant la réponse inflammatoire, Et en contrôlant le microbiote cutané modifié par la colonisation par C. acnes . Par la normalisation de ces quatre paramètres, le principe actif selon l’invention rétablit l’homéostasie des peaux acnéiques. III. A/ Influence sur les modifications quantitatives et qualitatives du sébum. L’acné est une pathologie caractérisée par des modifications quantitatives et qualitatives du sébum. La physiopathologie de ce désordre cutané est associée à une augmentation de la production du sébum et une altération de sa composition lipidique. Le métabolisme des glandes sébacées est influencé par divers facteurs endogènes et exogènes : - sensibilité aux hormones : Les glandes sébacées sont sensibles aux androgènes. Elles possèdent l’équipement enzymatique nécessaire à la métabolisation de la testostérone en dihydrotestostérone (DHT) et les récepteurs spécifiques de la DHT. La stimulation de ces récepteurs active les gènes intervenant dans la production du sébum. Dans l’acné, il existe une augmentation de la quantité et de l’activité des enzymes de la glande sébacée intervenant dans le métabolisme de la testostérone et notamment de la 5-alpha-réductase de type I aboutissant à une surproduction de DHT. De plus, le nombre des récepteurs à la DHT est augmenté chez le sujet acnéique ainsi que sa sensibilité à la DHT. C’est pourquoi l’acné est considérée comme « une maladie hormonale périphérique ». Avantageusement, le principe actif selon l’invention inhibe la conversion de la testostérone en DHT, et limite ainsi l’excès d’androgènes impliqués dans la physiopathologie de l’acné. - colonisation par C. acnes : Le sébum est un substrat de choix pour la croissance de microorganismes contribuant au développement de l’acné tels que C. acnes . Il a été montré que C. acnes possède une activité stimulatrice de la lipogénèse. Dans l’acné, la bactérie hyperproliférative serait capable de stimuler directement, ou indirectement via des facteurs solubles, la production de gouttelettes lipidiques par les sébocytes. Par ce mécanisme, C. acnes est capable d’aggraver l’hyperséborrhée, composante physiopathologique majeure de l’acné. Avantageusement, en réponse à l’agression cutanée par C. acnes , le principe actif selon l’invention limite la sécrétion de lipides dans les sébocytes. - impact neuronale consécutif au stress : De nombreuses preuves cliniques supportent aujourd’hui l’hypothèse de l’influence de neuromédiateurs sur le cours de l’acné. En effet, les émotions négatives telles que le stress sont capables d’en exacerber les symptômes. D’un point de vue neurologique, la particularité des patients acnéiques est qu’ils possèdent une innervation accrue dans l’environnement des glandes sébacées. Ces observations morphologiques appuient l’existence d’une véritable communication entre le système nerveux et les glandes sébacées. En effet, ces dernières possèdent les récepteurs spécifiques à des neuropeptides, notamment la substance P, qui une fois activés entraînent la production de sébum. Avantageusement, le principe actif selon l’invention inhibe la sécrétion de lipides induite par la substance P ou par la combinaison de C. acnes et de la substance P sur des sébocytes. -altération de l’activité lipophagique des sébocytes : Des travaux de recherche récents ont mis en évidence une activation de l’autophagie dans les sébocytes normaux. En cas d’altération du fonctionnement de ce processus, des changements morphologique et fonctionnel au niveau de la glande sébacée apparaissent. Cette dernière devient hypertrophique, la lipogénèse est augmentée et la composition lipidique du sébum est modifiée. mTORC1, puissant inhibiteur de l’autophagie et régulateur de la production des lipides, est retrouvé fortement exprimé dans la peau acnéique, reliant ainsi les changements quantitatif et qualitatif du sébum à une inactivation de l’autophagie. Avantageusement le principe actif selon l’invention rétablit le mécanisme de lipophagie dans les sébocytes humains différenciés. En limiter l’impact des médiateurs bactériens, hormonaux et neuropeptidiques sur les sébocytes tout en rétablissant le mécanisme de lipophagie, le principe actif selon l’invention permet de normaliser l’activité de la glande sébacée, composant biologique clé de la physiopathologie de l’acné. III. B/. Influence sur l’ hyperkératinisation Le principe actif selon l’invention est également capable d’agir sur l’hyperkératinisation qui intervient dans l’acné. L’hyperkératinisation est un évènement biologique précoce dans le développement des lésions d’acné. Il s’agit d’une anomalie de prolifération et de kératinisation des kératinocytes qui tapissent la paroi du follicule. Elle conduit à une accumulation de cornéocytes et une obstruction du canal excréteur. Ces modifications altèrent l’évacuation normale du sébum provoquant alors une rétention et une dilatation du canal pilosébacé, à l’origine de la formation d’un microcomédon. Ce dernier est une lésion préclinique invisible à l’œil nu caractérisée histologiquement par la distension de la paroi du follicule et qui évolue progressivement vers le comédon. D’un point de vue biologique, le phénomène d’hyperkératinisation est caractérisé par l’augmentation de kératines, notamment la cytokératine-16 (CK-16) dont la présence est fortement accrue dans les lésions acnéiques. Ces observations ont permis de qualifier la cytokératine-16 de marqueur d’hyperkératinisation liée à l’acné. Plusieurs facteurs seraient impliqués dans le phénomène d’hyperkératinisation dont : -la modification de la composition du sébum : Les changements quantitatif et qualitatif du sébum observés dans l’acné seraient associés à l’apparition des défauts de prolifération et kératinisation des kératinocytes tapissant la paroi du canal pilosébacé. Le squalène, composant du sébum, est la principale source de lipides péroxydés dans la peau acnéique. Au-delà de provoquer une irritation cutanée, les squalènes péroxydés exercent un fort pouvoir comédogène -la colonisation par C. acnes En colonisant le canal pilosébacé, C. acnes est capable de modifier la biologie des kératinocytes et d’influencer leur prolifération et leur différenciation. La bactérie stimule la synthèse de cytokines pro-inflammatoires dans le follicule pilosébacé, en particulier l’interleukine 1α (IL-1α), facteur majeur de l’apparition d’une hyperkératinisation. En effet, cette cytokine est capable d’activer les gènes codant pour des cytokératines, notamment CK-16 mais également induire la production d’autres kératines telles que CK-5. De plus, des études ont montré que C. acnes est capable d’exercer un effet direct sur la biologie des kératinocytes et la formation de microcomédons. Avantageusement, un hydrolysat d’écorce de fruits immatures de Punica granatum selon l’invention est capable d’avoir un effet sur l’hyperkératinisation qui intervient dans l’acné. En particulier, lorsqu’il est appliqué sur la peau, le principe actif selon l’invention est capable de : - renormaliser l’épaisseur du stratum corneum et, - diminuer la synthèse des cytokératines CK-5 et CK-16. III. C./ Influence sur l’inflammation Le principe actif selon l’invention est également capable d’agir sur l’inflammation qui intervient dans l’acné. L’inflammation est un processus fondamental présent tout au long du développement des lésions d’acné. En effet, elle est présente dès les stades précoces jusqu’aux stades les plus tardifs de la pathologie. En tant que bactérie majeure associée à la pathogénèse de l’acné, C. acnes p articipe activement à la création d’un environnement inflammatoire. En colonisant le follicule pilosébacé, la bactérie joue un rôle essentiel dans le déclenchement de la réaction inflammatoire et l’apparition des lésions inflammatoires. Elle stimule la production de médiateurs de l’inflammation par plusieurs types cellulaires de l’unité pilosébacée. De plus, des facteurs exogènes et endogènes tels que les hormones, le stress, composition du sébum, etc, accentuent le phénomène inflammatoire. Plusieurs types cellulaires du follicule pilosébacé sont impliqués dans ces mécanismes inflammatoires : les kératinocytes, les sébocytes mais également les cellules immunitaires infiltrant les lésions d’acné. -Inflammation kératinocytaire : Dans une peau acnéique, la modification de la composition du sébum et notamment la peroxydation des squalènes influence l’état inflammatoire du follicule pilosébacé en stimulant la sécrétion de la cytokine pro-inflammatoire IL-1α par les kératinocytes. De plus, la colonisation du follicule pilosébacé par C. acnes entraîne la production et la sécrétion par les kératinocytes de nombreux médiateurs pro-inflammatoires : *des cytokines pro-inflammatoires (IL-8, IL-1α, etc) ; *des chimiokines (CCL5, CCL20, CXCL1, etc) ; * des métalloprotéinases (MMP2, MMP9, etc). Avantageusement le principe actif selon l’invention inhibe la sécrétion des chimiokines, des cytokines et des métalloprotéinases dans des épidermes reconstruits 3D mimant une peau acnéique. -Inflammation sébocytaire : L’acné est caractérisée par un changement de la composition du microenvironnement des follicules sébacés induisant une colonisation et une activité métabolique accrue de C. acnes . La bactérie est capable d’induire une réponse inflammatoire au niveau des sébocytes qui produisent de nombreux médiateurs pro-inflammatoires. Parmi ces derniers, les sébocytes sécrètent des cytokines pro-inflammatoires (IL-6, IL-8, etc) contribuant à la réaction inflammatoire observée dans les lésions d’acné. La sécrétion de ces médiateurs confère aux sébocytes la capacité de promouvoir la différenciation des lymphocytes T helper naïfs en Th17, renforçant ainsi le phénomène inflammatoire. De plus, la glande sébacée est sensible à des émotions négatives telles que le stress. Il a été montré que les patients acnéiques présentent une innervation accrue dans l’environnement des glandes sébacées témoignant de l’existence d’une communication entre les systèmes nerveux et sébacé. Le rôle pathogène de la substance P comme neuromédiateur de l’inflammation dans l’acné est à ce jour bien décrit dans la littérature. Elle entraîne la sécrétion de cytokines pro-inflammatoires (IL-6, IL-8, etc) exacerbant l’environnement inflammatoire des glandes sébacées. La suite de la description montrera que le principe actif selon l’invention inhibe la sécrétion d’IL-6 et d’IL-8 par les sébocytes humains soumis à l’inflammation par la substance P et/ou C. acnes . -Inflammation lymphocytaire Th17 : Un infiltrat de cellules immunitaires est présent dans les lésions d’acné, infiltrat composé majoritairement de lymphocytes T helper CD4 + .Récemment, des études ont mis en évidence le profil Th17 de ces cellules, suggérant que l’acné est une pathologie dans laquelle les lymphocytes Th17 contribuent de manière significative au phénomène inflammatoire. Il a été démontré que C. acnes détient la capacité à induire une différenciation des lymphocytes naïfs en lymphocytes Th17. Ces cellules produisent une cytokine pro-inflammatoire impliquée dans de nombreuses pathologies inflammatoires, l’interleukine 17 (IL-17) et dont la quantité est également retrouvée augmentée dans les lésions d’acné. La présence d’IL-17 entraîne la sécrétion de médiateurs pro-inflammatoires par les cellules épithéliales, tels que l’IL-8 et le CCL20, exacerbant alors le processus inflammatoire. L’apparition et l’exacerbation du phénomène inflammatoire décrit dans les lésions d’acné fait donc intervenir divers protagonistes et facteurs. Les médiateurs inflammatoires produits favorisent la comédogénèse puis la rupture du follicule conduisant à l’apparition des lésions inflammatoires. Avantageusement le principe actif est capable de réguler la bilogie des LTh17 et de limiter l’inflammation induite par ces cellules. Ainsi, un hydrolysat d’écorce de fruits immatures de Punica granatum est capable d’avoir un effet sur l’inflammation qui intervient dans l’acné. En particulier, lorsqu’il est appliqué sur la peau, le principe actif selon l’invention est capable de : - réguler la biologie de l’épiderme acnéique et limiter l’inflammation marqueur de la physiopathologie de l’acné, notamment en inhibant la sécrétion de CCL5, de CCL20, de CXCL1, et en inhibant la sécrétion d’IL-1α, d’IL-8, et en inhibant la sécrétion de MMP2 et MMP9 ; - réguler la biologie des LTh17 et limiter ainsi l’inflammation induite par ces cellules, actrices importantes de la physiopathologie de l’acné, -limiter l’inflammation sébocytaire caractéristique de la physiologie de l’acné, notamment en inhibant la sécrétion d’IL-6 et d’IL-8. III. D/ . Influence sur le microbiote de C. acnes Le principe actif selon l’invention est capable d’agir face au C. acnes . Le Cutibacterium acnes ( C. acnes ) est une espèce majeure de la flore commensale cutanée dont l’habitat privilégié est le follicule pilosébacé. Cette bactérie est considérée comme l’un des facteurs pathogènes majeurs contribuant au développement de l’acné. Les études menées sur C. acnes et son rôle dans l’acné ont mis en lumière de nouvelles données et mécanismes expliquant sa virulence dans la pathologie. - Phylotypes de C. acnes Récemment, des études de taxonomie basées sur des investigations génomiques et biologiques ont permis d’identifier différents sous-types de l’espèce C. acnes et de les classer en trois phylotypes : I, II et III. Des études phylogénétiques supplémentaires ont conduit à la re-segmentation du phylotype I en quatre phylotypes IA1, IA2, IB et IC. L’espèce bactérienne C. acnes est donc aujourd’hui classée en six phylotypes différents avec des caractéristiques biochimiques et de virulence distinctes. Dans l’acné, une perte de diversité phylotypique de C. acnes au profit du phylotype IA1 a été observée en comparaison aux peaux saines. Ce phylotype possède une capacité à former des biofilms supérieure aux autres. Il a ainsi été décrit comme le phylotype virulent associé au développement des lésions acnéiques. La prépondérance du C. acnes IA1 contribue à la pathogénèse de l’acné en induisant de nombreuses modifications dans l’environnement pilo-sébacé. En effet, il agit sur les autres composantes impliquées dans la physiopathologie de l’acné en : - induisant une augmentation de la lipogénèse et en modifiant les lipides du sébum ; - stimulant les sébocytes, les kératinocytes et les cellules immunitaires pour produire les nombreuses cytokines, chimiokines et métalloprotéinases matricielles impliquées dans le phénomène inflammatoire observé dans l’acné ; - modifiant la biologie des kératinocytes et ainsi favoriser l’hyperkératinisation à l’origine de la formation de microcomédons. La composante bactérienne constitue donc un paramètre important dans le développement des lésions d’acné. Cibler la bactérie C. acnes phylotype IA1 et réduire sa virulence est une stratégie incontournable pour lutter contre cette pathologie. Avantageusement, le principe actif selon l’invention limite la croissance de la bactérie C. acnes phylotype IA1. - Quorum sensing et biofilm Dans la peau acnéique, les microcomédons constituent des microenvironnements anaérobies riches en lipides, favorables à la croissance et l’établissement de C. acnes . En effet, ce dernier peut se comporter comme une bactérie opportuniste pathogène grâce à un mode de croissance en biofilm. Le biofilm est une structure hétérogène constituée par la population bactérienne englobée dans une matrice extracellulaire d’ADN, de protéines et de polysaccharides produite par ses soins, le tout adhérant à une surface. Cette croissance en biofilm confère aux bactéries des propriétés spécifiques de morphologie, de croissance, de communication et de résistance aux biocides afin d’optimiser leur survie. Pendant longtemps, les bactéries ont été considérées comme des entités individuelles et asociales jusqu’à la découverte d’un système de communication inter-bactérien nommé quorum sensing (QS). Le QS implique la production, la sécrétion et la détection par les bactéries de petites molécules de communication appelées auto-inducteurs (AI). Il permet aux bactéries de communiquer afin de mettre en place une réponse précise aux signaux qu’elles perçoivent et ainsi adapter leur mode de vie pour qu’il soit le plus propice à leur survie. Via ce système, elles synchronisent la régulation de leurs gènes, notamment ceux impliqués dans la virulence (Mion et al. 2019; Jiang et al. 2019). En effet, plusieurs études ont mis en évidence le rôle du QS dans la formation des biofilms, notamment dans l’acné où C. acnes produit l’auto-inducteur 2 (AI-2) via l’enzyme LuxS (Lwin, Kimber et McFadden 2014). Le principe actif selon l’invention présente également un effet anti-bactérien à l’encontre des bactéries qui interviennent dans l’acné, en particulier C. acnes de phylotype IA1. L’efficacité anti-bactérienne directe du principe actif selon l’invention est réelle puisqu’il - présente un effet bactériostatique en inhibant la croissance du C. acnes , - réduit l’activité du quorum sensing de C. acnes , et - inhibe aussi la formation de biofilm. Grâce à cette approche inédite, le principe actif selon l’invention est capable de cibler les quatre composantes majeures de la physiopathologie de l’acné. Il normalise l’activité de la glande sébacée. Il possède également une activité kératolytique et de contrôle sur la colonisation par C. acnes . Il réduit les réponses inflammatoires sébocytaire, kératinocytaire et lymphocytaire de type Th17. Enfin, il agit directement en anti-bactérien en limitant la croissance de C. acnes et en inhibant le quorum sensing et la formation d’un biofilm bactérien. Son efficacité thérapeutique est cliniquement démontrée sur des volontaires adultes souffrant d’acné légère à modérée : le nombre de lésions acnéiques est significativement diminué avec un score GEA abaissé. Cet actif améliore la qualité et l’aspect des peaux acnéiques. C’est un soin performant alliant rapidité d’action et efficacité dans le soin quotidien des peaux acnéiques. Ainsi l’invention vise l’utilisation d’un principe actif comprenant un hydrolysat d’écorce de fruit de grenade immature sur les peaux acnéiques pour : - réduire les lésions acnéiques rétentionnelles et inflammatoires, et/ou - réduire les lésions acnéiques non-inflammatoires, et/ou - atténuer l’aspect gras de la peau, et/ou - atténuer l’aspect brillant de la peau, et/ou - diminuer les marques sur la peau liées aux boutons d’acné, et/ou - rendre les pores moins visibles, et/ou - affiner le grain de peau. L’invention vise ainsi également un procédé non thérapeutique, à savoir un procédé cosmétique non thérapeutique de traitement de la peau pour un effet anti-acné, qui consiste en l’application topique sur la peau d’une composition comprenant un principe actif selon l’invention. IV. Exemples et résultats d’essais L’invention est à présent illustrée par des exemples et des résultats d’essais démontrant le caractère nouveau et inventif du principe actif tant dans le choix de la matière première utilisée (écorce de grenade immature) que dans le procédé d’obtention, pour cibler l’efficacité multifactorielle recherchée. IV.A Exemple de principes actifs et comparaison à des extraits de grenades existants IV.A1. Exemple 1 : exemple de principe actif selon l’invention sous forme liquide Le principe actif est obtenu par la mise en œuvre des étapes suivantes : a/ Solubilisation de poudre d’écorce de fruits de Punica granatum immatures dans l’eau, à raison de 50g/L, b/ Hydrolyse enzymatique à l’aide d’une carbohydrase, c/ Séparation des phases soluble et insoluble, par centrifugation, d/ récupération de la phase soluble, et inactivation enzymatique par traitement thermique, e/ purification par filtration des composés polyphénoliques, f/ désodorisation par ajout d’un adjuvant de procédé permettant la désodorisation, g/ filtrations et filtration stérilisante. Le principe actif obtenu présente les caractéristiques analytiques suivantes : - un taux de matières sèches de 14,8 g/L, - une teneur en polyphénols totaux (gamme en acide ellagique) de 5,5g/l, soit 37% en poids de matière sèche -une teneur en sucres totaux de 5.2g/l, soit 35% en poids de matière sèche de l’hydrolysat (calculé à l’aide d’une gamme de glucose) - une teneur en peptides de 0.28g/l, soit 2% en poids de matière sèche de l’hydrolysat (déterminée par la méthode de KJELDAHL) - et 1.6g/l de cendres soit 11% de cendres en poids de matière sèche (déterminée par la pesée des résidus issus de l’incinération des échantillons de l’hydrolysat à 550°C dans un four à moufle électrique). Les polyphénols de l’hydrolysat sont des Ellagitanins, plus précisément, ce sont la Punicalagine et ses dérivés, la Punicaline, les dérivés d’HHDP et l’acide Ellagique. IV.A2. Exemple 2 : exemple de principe actif selon l’invention sous forme poudre Le principe actif est obtenu par la mise en œuvre des étapes suivantes : a/ Solubilisation de poudre d’écorce de fruits de Punica granatum immatures dans l’eau, à raison de 50g/L, b/ Hydrolyse enzymatique à l’aide d’une carbohydrase, c/ Séparation des phases soluble et insoluble, par centrifugation, d/ récupération de la phase soluble, et inactivation enzymatique par traitement thermique, e/ purification par filtration des composés polyphénoliques, f/ introduction de maltodextrine, à raison de 90% (v/v), g/ concentration, stérilisation et atomisation. Le principe actif comprenant l’hydrolysat selon l’invention et un support, obtenu par la mise en œuvre du procédé ci-avant décrit, présente les caractéristiques analytiques suivantes : - un taux de matières sèches de 965 mg/g de principe actif, -une teneur en sucres totaux de 897,5 mg/g, soit 93% en poids de matière sèche du principe actif (calculé à l’aide d’une gamme de glucose) - une teneur en polyphénols totaux (gamme en acide ellagique) de 38,6 mg/g, soit 4% en poids de matière sèche du principe actif - une teneur en peptides de 1% en poids de matière sèche du principe actif (déterminée par la méthode de KJELDAHL) - et 2% de cendres en poids de matière sèche (déterminée par la pesée des résidus issus de l’incinération des échantillons de l’hydrolysat à 550°C dans un four à moufle électrique). Les polyphénols présents dans l’hydrolysat sont des Ellagitanins. Ce sont la Punicalagine et ses dérivés, la Punicaline, les dérivés d’HHDP et l’acide Ellagique. IV.A3. Essais comparatifs démontrant le caractère inventif du principe actif selon l’invention a. Comparaison jus commercial, jus frais et écorce L’objectif de cette étude est de comparer l’efficacité de plusieurs produits issus de grenade. Un jus commercial de grenade a été sélectionné. Un jus de grenade fraiche a été préparé par pression des grenades. Une extraction aqueuse d’écorce de grenade fraiche a été réalisée par solubilisation aqueuse à raison de 200g/l et filtration. Des dilutions ont été réalisées afin d’obtenir des produits ayant des teneurs en matière sèche semblables. Ces trois produits ont été comparés à l’hydrolysat de l’exemple 1. Les informations sont présentées dans le tableau 2. Caractéristique de la matière première Teneur en Matières sèches (g/L) % des Ellagitanins vs Hydrolysat Hydrolysat d’Ecorce de grenade immature MS = 13 g/L 100% Extrait d’écorce fraiche de grenade MS = 14.3g/L 54% Jus de grenade fraiche MS = 13.5g/L 0% Jus commercial de grenade MS = 11.6g/L 5% Pour des teneurs en matières sèches similaires (11,6g/L à 14,3 g/L)), les 4 produits présentent de fortes différences en termes de teneur en Ellagitanins. L’hydrolysat d’écorce de grenade immature présente bien une plus grande teneur en Ellagitanins que les deux jus de grenade fraiche ou jus commercial de grenade et que l’extrait d’écorce fraiche de grenade. b. Comparaison fruits immatures vs. fruits matures Dans le cadre de la présente comparaison, un fruit « immature » récolté en début d’été a une écorce verte, un diamètre inférieur à 8 cm et présente de marqueurs particuliers (teneur élevée en punicalagine & dérivés), tandis qu’un fruit « mature » récolté en fin d’automne, a une écorce orangée/rouge, un diamètre supérieur à 10 cm et présente des marqueurs différents (teneur élevée en punicaline). Les écorces de grenade disponibles sur le marché sont un sous-produit de l’industrie du jus de grenade. Ainsi, les écorces de grenade issues de cette industrie sont toujours des écorces de grenade matures, afin que le jus de grenade soit sucré et doux gustativement. Le chromatogramme des différents extraits (écorces de fruits immatures, écorces de fruits matures, jus de fruits matures) sont présentés respectivement dans les Figures 1, 2 et 3 On constate que l’extrait de grenade immature présente une richesse et une diversité en polyphénols bien plus importante que le jus de grenade ou que l’extrait de grenade mature. De plus, l’activité anti-bactérienne ( C. acnes ) de ces trois produits a été comparée selon la méthode décrite plus loin dans la présente demande. Le diamètre d’inhibition est proportionnel à l’efficacité anti-bactérienne du produit testé. Les résultats sont présentés dans le tableau 3. Inhibition de croissance de C. acnes (diamètre en cm) Jus de grenade 0 Extrait d’écorce de grenade mature 1,6 ± 0,1 Extrait d’écorce de grenade immature 1,9 ± 0,0 On constate que le jus de grenade n’est pas capable d’inhiber la croissance bactérienne de C. acnes et également que l’extrait de grenade immature présente une activité anti-bactérienne plus forte que l’extrait de grenade mature. c. Comparaison des produits obtenus par une extraction aqueuse versus une extraction à l’éthanol L’art antérieur indique l’existence d’extraits éthanoliques de grenade sur le marché. Dans le tableau 4 sont présentés les résultats comparant un extrait éthanolique et un extrait aqueux. L’extrait éthanolique est obtenu par solubilisation de poudre d’écorce de grenade à raison de 50g/L dans l’éthanol absolu. Il est comparé à un extrait aqueux obtenu de manière similaire par solubilisation de poudre d’écorce de grenade à raison de 50g/L dans l’eau distillée. Essais Somme des aires des Ellagitanins (U.A.) % des Ellagitanins vs Process Eau Extrait Aqueux 13 287 229 100% Extrait Ethanolique 3 072 755 23% On constate que l’extrait aqueux présente une teneur en composés Ellagitanins beaucoup plus importante, que l’extrait éthanolique. d. Comparaison du principe actif selon l’invention avec la punicalagine seule Les résultats de l’effet anti-bactérien du principe actif selon l’invention comparé à ceux de la punicalagine, composé majoritaire des polyphénols présents dans le fruit de la grenade sont présentés dans le tableau 5. Diamètre d’inhibition (cm) Dépôt 15µL Dépôt 30µL Hydrolysat selon l’invention de l’exemple 1 1.3 ± 0.1 1.8 ± 0.0 Punicalagine à la même dose que dans Ex 1 1.1 ± 0.1 1.4 ± 0.1 On constate que la punicalagine présente un effet anti-bactérien sur la croissance du C. acnes , mais on note surtout que l’hydrolysat de l’exemple 1 selon l’invention inhibe la croissance du C. acnes de manière plus importante que la punicalagine à la même dose (+23%). IV.B Exemples de compositions cosmétiques ou dermatologiques selon l’invention IV. B1. Exemple 3 : exemple de composition d’une lotion purifiante selon l’invention Un exemple de formulation contenant un principe actif selon l’invention est présenté dans le tableau 6 suivant. Cette lotion est fraîche et non collante, elle purifie la peau en douceur. Ingrédients INCI name % A Acide glycolique Glycolic acid 0,50 Acide salicylique Salicylic acid 0,10 Acide lactique 90% Lactic acid & Aqua (water) 0,90 Hydrolite 6 1,2-Hexanediol 1,00 DUB DIOL Methyl propanediol 10,00 B Eau Aqua (water) qsp 100 Soude 28% Aqua (water) & Sodium hydroxide 1,90 C Dissolvine GL 47-S Aqua (water) & Tetrasodium glutamate diacetate 0,05 D Oramix CG 110 Caprylyl/capryl glucoside & Aqua (water) 0,50 E Principe actif de l’exemple 2 Maltodextrin & Punica granatum extract 0,50 Il est obtenu par la mise en œuvre du mode opératoire suivant : - Placer A sous agitation magnétique jusqu’à solubilisation, -Placer B sous agitation magnétique -Ajouter B dans A en filet sous agitation magnétique -Ajouter C, puis D et E sous agitation magnétique et agiter jusqu’à limpidité IV. B2. Exemple 4 : exemple de composition de sérum traitant selon l’invention Un exemple de formulation contenant un principe actif selon l’invention est présenté dans le tableau 7 suivant. Ce soin léger et glissant s’étale facilement et pénètre rapidement en laissant la peau douce sas laisser de sensation grasse ou collante. Ingrédients INCI name % A Eau Aqua (Water) 76,5 Glycerine Glycerin 2,0 Butylene Glycol Vert Butylene Glycol 3,0 Conservateur - 1,0 B Emulium Delta MB 1 Cetyl Alcohol & Glyceryl Stearate & PEG-75 Stearate & Ceteth-20 & Steareth-20 3,0 Huile de Jojoba 2 Simmondsia Chinensis (Jojoba) Seed Oil 2,0 DUB MCT 5545 3 Caprylic/Capric Triglyceride 4,0 DUB DIS 3 Diisopropyl Sebacate 4,0 Cetiol CC 4 Dicaprylyl Carbonate 3,0 C Sepiplus 400 5 Polyacrylate-13 & Polyisobutene & Polysorbate 20 & Sorbitan Isostearate & Aqua (Water) 1,0 D Principe actif de l’exemple 1 Maltodextrin & Punica granatum Extract 2,5 Eau Aqua (Water) 2,0 E Solution Acide Citrique 10% Aqua (Water) & Citric Acid qs pH Il est obtenu par la mise en œuvre du mode opératoire suivant : - Placer A sous agitation douce et chauffer à 80°C -Placer B sous agitation magnétique et chauffer à 80°C -Sous rotor stator, émulsionner B dans A durant 5 min. -A 40°C, sous agitation modérée, ajouter C puis D -Ajuster le pH entre 4,5 et 5,0 avec E. IV. C. Démonstration de l’effet et de l’efficacité d’un principe actif selon l’invention sur les différents facteurs à l’origine de l’acné Les études suivantes permettent de démontrer l’ensemble des efficacités du principe actif selon l’invention. Il agit sur l’activité de la glande sébacée, sur l’activité kératolytique, sur l’inflammation et sur le contrôle de C. acnes . L’ensemble de ces 4 voies d’efficacité lui procure une efficacité globale et complète sur l’acné. IV.C1 . Etude de l’efficacité du principe actif selon l’invention sur les modifications de l ’activité de la glande sébacée . L’acné est une pathologie caractérisée par des modifications quantitatives et qualitatives du sébum. En effet, sous l’influence de divers facteurs endogènes (ex : hormones, Cutibacterium acnes, activité lipophagique) et exogènes (ex : stress), le métabolisme des glandes sébacées est activé. Ceci se traduit par une augmentation de la sébogénèse et par conséquent une production anormalement élevée de sébum. Les études suivantes vont montrer que le principe actif selon l’invention agit sur les 4 paramètres influant l’activité de la glande sébacée. a. Etude de l’efficacité du principe actif selon l’invention sur l’activité de la glande sébacée sous influence hormonale L’objectif de cette étude a été d’évaluer l’effet d’un principe actif selon l’invention sur la composante sébacée dont l’activité est modifiée par les hormones androgènes. L’activité de la 5-alpha réductase a été évaluée in vitro sur sébocytes humains primaires (SHN). Cette enzyme catalyse la conversion de la testostérone en dihydrotestostérone (DHT). Le protocole opératoire pour la culture et le traitement des sébocytes humains pour l’étude du métabolisme de la testostérone est le suivant. Des sébocytes humains normaux (SHN) sont ensemencés dans un milieu de culture spécifique et incubés à 37°C. Dans un premier temps, les cellules sont ensuite prétraitées avec le principe actif de l’exemple 2 à 0,0006% ou 0,0015%. Le lendemain, les cellules sont traitées avec une solution de testostérone radiomarquée contenant ou non le principe actif de l’exemple 2 à 0,0006% ou 0,0015% pendant 24 heures. Les surnageants de culture sont récupérés. Analyse de l’activité de la 5-alpha réductase : Les stéroïdes contenus dans les surnageants de culture ont été extraits dans un mélange de chloroforme/méthanol. La phase organique, contenant les stéroïdes, a été collectée et les différentes espèces moléculaires (métabolites de la testostérone) ont été séparées par chromatographie sur couche mince (CCM) en utilisant comme solvant de séparation un mélange dichlorométhane/acétate d’éthyle/méthanol. La révélation des plaques de chromatographie et l’évaluation de la quantité de testostérone transformée ont été réalisées par analyse densitométrique des différents spots correspondant aux différents métabolites de la testostérone. Les résultats sur l’activité de la 5-alpha réductase sont présentés dans le tableau 8 (Valeurs moyennes de la conversion de la testostérone en DHT par la 5-alpha réductase par les SHN différenciés.). SHN différenciés Activité de la 5-alpha réductase Témoin Invention (ex2) 0,0006% Invention (ex2) 0,0015% Moyenne (UA) 54 39 34 Ecart-type 12 13 14 Variation de l’activité de la 5-alpha testostérone / Témoin -28% -37% Testé à 0,0015% sur SHN différenciés, le principe actif selon l’invention inhibe significativement la conversion de la testostérone en DHT de 37%. Le principe actif selon l’invention régule donc la biologie des sébocytes et limite ainsi l’excès d’androgènes impliqués dans la physiologie de l’acné. b. Etude de l’efficacité du principe actif selon l’invention sur l’activité de la glande sébacée sous influence de la substance P et/ou de C. acnes L’objectif de cette étude est d’évaluer in vitro l’effet du principe actif selon l’invention sur la sébogénèse, grâce à l’analyse de la sécrétion de gouttelettes lipidiques par les SHN soumis à un stress par la substance P et/ou C. acnes . Le protocole opératoire pour la culture et le traitement des sébocytes humains pour l’étude de la sébogénèse est décrit en suivant. Des sébocytes humains normaux (SHN) sont ensemencés dans un milieu de culture spécifique et incubés à 37°C. Ensuite, les cellules sont traitées avec une suspension de C . acnes en présence ou non de substance P pendant 24 heures. Le principe actif de l’exemple 2 est appliqué à 0,0006% ou 0,0015% conjointement au traitement C. acnes +/- Substance P. Enfin, les cellules sont rincées avec du tampon PBS puis fixées. Pour la coloration des gouttelettes lipidiques, les cellules sont fixées dans du paraformaldehyde et la sonde BODIPY TM , qui colore les lipides neutres, est utilisée. Les noyaux sont marqués. Les résultats sur la sébogénèse sont présentés dans le tableau 9 (Valeurs moyennes de la coloration des lipides par la sonde BODIPY TM des SHN traités C. acnes ). SHN non traités SHN traités C. acnes Coloration des lipides Témoin Témoin Invention (ex2) 0,0006% Invention (ex2) 0,0015% Moyenne (UA) 23,3 95,4 65,6 50,8 Ecart-type 7,9 19,4 23,8 18,9 Variation de la coloration des lipides / Témoin SHN traités C. acnes -41% -62% Les résultats sur la sébogénèse sont présentés dans le tableau 10 (Valeurs moyennes de la coloration des lipides par la sonde BODIPY TM des SHN traités par la substance P .). SHN non traités SHN traités Substance P Coloration des lipides Témoin Témoin Invention (ex2) 0,0006% Invention (ex 2) 0,0015% Moyenne (UA) 17.9 104.1 64.1 26.8 Ecart-type 4.4 16.8 21.5 5.8 Variation de la coloration des lipides / Témoin SHN traités Substance P -46% -87% Les résultats sur la sébogénèse sont présentés dans le tableau 11 (Valeurs moyennes de la coloration des lipides par la sonde BODIPY TM des SHN traités C. acnes + Substance P). SHN non traités SHN traités C. acnes + Substance P Coloration des lipides Témoin Témoin Invention (ex2) 0,0006% Invention (ex 2) 0,0015% Moyenne (UA) 23,3 143,3 75,3 56,3 Ecart-type 7,9 38,0 33,7 29,0 Variation de la coloration des lipides / SHN traités C. acnes + substance P -57% -73% On constate que testé à 0,0015% sur SHN traités C. acnes +/- Substance P, le principe actif selon l’invention inhibe significativement la sécrétion de gouttelettes lipidiques induite par C. acnes de 62%, par la substance P de 87% et la combinaison de C. acnes et de la substance P de 73%. En réponse à C. acnes et/ou à la substance P, le principe actif selon l’invention limite ainsi l’excès de sécrétion de lipides, paramètres caractéristique de la physiopathologie de l’acné. c. Etude de l’efficacité du principe actif selon l’invention sur la lipophagie de la glande sébacée Lors du dysfonctionnement des sébocytes, des travaux de recherche ont montré que des changements morphologique et fonctionnel au niveau de la lipophagie des sébocytes apparaissent. L’implication de la lipophagie a été étudiée grâce à l’analyse simultanée du marqueur Light Chain 3 (LC3b) et de la sécrétion de gouttelettes lipidiques par les SHN stimulés par un cocktail de différenciation. Le protocole opératoire pour la culture et le traitement des sébocytes humains pour l’étude de la lipophagie est décrit en suivant. Des sébocytes humains normaux (SHN) sont ensemencés dans un milieu de culture spécifique et incubés à 37°C dans une atmosphère contenant 5% de CO 2 . Les cellules sont traitées avec une solution d’acide linoléique et de testostérone pendant 24 heures. 6 heures après le début du traitement, le principe actif de l’exemple 2 est ajouté à 0,0006% ou 0,0015%. Les cellules sont ensuite rincées avec du tampon PBS puis fixées. Pour l’analyse immunocytologique du LC3b, les cellules sont fixées dans du méthanol. L’anticorps primaire est utilisé. Les noyaux sont marqués avec du 4ʹ,6-diamidino-2-phenylindole . La visualisation est réalisée sur le microscope couplé à un système d’analyse d’images. La coloration et la synthèse des différents marqueurs étudiés sont proportionnelles à l’intensité de la fluorescence (couleur jaune ou verte) présente dans les SHN. Les résultats sur la lipophagie sont présentés dans le tableau 12 (valeurs moyennes de la synthèse de LC3b par les SHN différenciés.) et dans le tableau 13 (valeurs moyennes de la coloration des lipides par la sonde BODIPY TM des SHN différenciés). SHN non différenciés SHN différenciés Synthèse de LC3b Témoin Témoin Invention (ex2) 0,0006% Invention (ex2) 0,0015% Moyenne (UA) 15,9 6,7 14,9 17,8 Ecart-type 4,8 4,7 7,5 6,1 Variation de la synthèse de LC3b / Témoin SHN différenciés +89% +121% SHN non différenciés SHN différenciés Sécrétion des lipides Témoin Témoin Invention (ex2) 0,0006% Invention (ex2) 0,0015% Moyenne (UA) 16,6 321,2 133,8 85,5 Ecart-type 19,2 159,6 35,1 38,2 Variation de la sécrétion des lipides / Témoin SHN différenciés -62% -77% On constate que testé à 0,0015% sur SHN différenciés, sébocytes présentant une défaillance de la lipophagie et une lipogénèse accrue, le principe actif selon l’invention augmente significativement la synthèse de LC3b de 121% et inhibe significativement la sécrétion de gouttelettes lipidiques de 77%. En rétablissant le mécanisme de lipophagie dans des sébocytes humains différenciés, ACNESIUM® limite la production de lipides, composante caractéristique de la physiopathologie de l’acné. IV.C2. Etude de l’efficacité du principe actif selon l’invention sur l’ hyperkératinisation Comme décrit précédemment dans la partie C2, l’hyperkératinisation est un évènement biologique précoce dans le développement des lésions d’acné. Elle se caractérise par une anomalie de prolifération et de kératinisation des kératinocytes folliculaires favorisant l’obstruction du canal excréteur, une mauvaise évacuation du sébum et consécutivement la dilatation du canal pilosébacé à l’origine de la formation d’un microcomédon. L’objectif de cette étude a été d’évaluer l’effet d’un principe actif selon l’invention sur l’hyperkératinisation. L’hyperkératinisation a été évaluée en mesurant l’épaisseur du stratum corneum et en étudiant la synthèse des cytokératines CK-5 et CK-16 dans un modèle mimant une peau acnéique (nommé SILABSKIN® RE mimic acné) Le protocole opératoire pour la culture et le traitement des SILABSKIN ® RE mimic acné est présenté en suivant. Des kératinocytes humains normaux sont ensemencés dans des inserts dans un milieu de culture spécifique et incubés à 37°C. Les SILABSKIN ® RE sont passés en interface air/liquide puis le milieu de culture est changé tous les 2 jours. Ensuite, les SILABSKIN ® RE sont traités topiquement avec une suspension de C . acnes , le principe actif de l’exemple 2 est appliqué topiquement à 0,003% et 0,006% conjointement à l’application de C. acnes . Après 2h, l’excédent de solution bactérienne est aspiré. Le lendemain, les SILABSKIN ® RE sont de nouveau traités topiquement avec une suspension de C . acnes , le principe actif de l’exemple 2 est appliqué topiquement à 0,003% et 0,006% conjointement à l’application de C. acnes . Après 2h, l’excédent de solution bactérienne est aspiré. Les SILABSKIN ® RE sont enfin traités topiquement avec une solution de squalène péroxydé . Enfin, les sous-nageants de culture sont récupérés et stockés à -80°C et les tissus sont récupérés et fixés dans du paraformaldehyde .Après fixation, les SILABSKIN ® RE sont déshydratés et inclus en paraffine. Des coupes sont réalisées à l’aide d’un microtome. La coloration hématoxyline/éosine est réalisée. Les analyses immunohistologiques des cytokératines-5 et -16 ont été réalisées après incubation des anticorps primaires, suivie d’une incubation avec l’anticorps secondaire. Les noyaux sont marqués avec du 4ʹ,6-diamidino-2-phenylindole. La visualisation est réalisée sur le microscope couplé à un système d’analyse d’images. La synthèse des différents marqueurs étudiés est proportionnelle à l’intensité de la fluorescence (couleur verte) présente sur les épidermes reconstruits. Une analyse quantitative des images a été réalisée à l’aide du logiciel Matlab. Les résultats sont présentés dans les tableaux 14 (valeurs moyennes de l’épaisseur du st r a tum corneum des SILABSKIN ® RE mimic acné), 15 (valeurs moyennes de la synthèse de cytokératine-5 par les SILABSKIN ® RE mimic acné) et 16 (valeurs moyennes de la synthèse de cytokératine-16 par les SILABSKIN ® RE mimic acné). SILABSKIN ® RE SILABSKIN ® RE mimic acné Témoin Témoin Invention (ex2) 0,003% Invention (ex2) 0,006% Stratum Cornéum /épaisseur totale (%) 24,0 30,6 25,5 24,0 Ecart-type 1,8 5,6 4,4 3,9 Variation de l’épaisseur du Stratum cornéum -77% -100% Dans le modèle 3D d’épiderme reconstruit mimant une peau acnéique, le stratum cornéum est plus épais que dans le modèle témoin, témoignant d’une hyperkératinisation. On constate qu’appliqué en topique à 0,006% sur SILABSKIN ® RE mimic acné, le principe actif selon l’invention renormalise significativement l’épaisseur du stratum corneum de 100%. SILABSKIN ® RE SILABSKIN ® RE mimic acné Synthèse du cytokératine-5 Témoin Témoin Invention (ex2) 0,003% Invention (ex2) 0,006% Moyenne (UA) 9,0 15,0 11,6 9,9 Ecart-type 2,9 1,7 4,0 2,5 Variation de la synthèse du cytokératine-5 / Témoin SILABSKIN ® RE mimic acné -57% -85% SILABSKIN ® RE mimic acné Synthèse de cytokératine-16 Témoin Témoin Invention (ex2) 0,003% Invention (ex2) 0,006% Moyenne (UA) 8,6 29,8 12,7 10,2 Ecart-type 3,7 18,6 7,5 6,8 Variation de synthèse de cytokératine-16 / SILABSKIN ® RE mimic acné -81% -92% Dans le modèle 3D d’épiderme reconstruit mimant une peau acnéique, les cytokératines -5 et -16 sont retrouvées en quantité plus importante que dans les épidermes reconstruits témoin. On constate qu’appliqué en topique à 0,006% sur SILABSKIN ® RE mimic acné, le principe actif selon l’invention diminue significativement la synthèse des cytokératines-5 et 16 de respectivement 85% et 92%, limitant ainsi l’hyperkératinisation, modification épidermique majeure apparaissant lors de l’acné. IV.C3. Etude de l’efficacité du principe actif selon l’invention sur l’inflammation Comme décrit précédemment dans la partie C3, l’inflammation est le phénomène biologique concomitant à toutes les étapes de la formation des lésions acnéiques : microcomédon, comédon, lésion inflammatoire, érythème post-inflammatoire et même cicatrice. La bactérie C. acnes stimule la production de médiateurs pro-inflammatoires par plusieurs types cellulaires de l’unité pilosébacée (kératinocytes, sébocytes, cellules immunitaires infiltrant les lésions d’acné). L’objectif de ces études a été d’évaluer l’effet d’un principe actif selon l’invention sur l’inflammation kératinocytaire, l’inflammation sébocytaire et sur la biologie des lymphocytes Th17. a. Etude de l’efficacité du principe actif selon l’invention sur l’inflammation kératinocytaire L’inflammation kératinocytaire a été étudiée sur un modèle 3D mimant une peau acnéique (nommé SILABSKIN® RE mimic acné) en dosant différents médiateurs de l’inflammation, retrouvés en grande quantité dans la peau acnéique : CCL5, CCL20, CXCL1, IL-1α, IL-8, MMP2 et MMP9. Le protocole opératoire de culture et de traitement des SILABSKIN ® RE mimic acné est décrit en suivant. Des kératinocytes humains normaux sont ensemencés dans des inserts dans un milieu de culture spécifique et incubés à 37°C. Les SILABSKIN ® RE sont passés en interface air/liquide puis le milieu de culture est changé tous les 2 jours. Ensuite, les SILABSKIN ® RE sont traités topiquement avec une suspension de C . acnes , le principe actif selon l’invention est appliqué topiquement à 0,003% et 0,006% conjointement à l’application de C. acnes . Après 2h, l’excédent de solution bactérienne est aspiré. Le lendemain, les SILABSKIN ® RE sont de nouveau traités topiquement avec une suspension de C . acnes , le principe actif selon l’invention est appliqué topiquement à 0,003% et 0,006% conjointement à l’application de C. acnes . Après 2h, l’excédent de solution bactérienne est aspiré Les SILABSKIN ® RE sont enfin traités topiquement avec une solution de squalène péroxydé. Les sous-nageants de culture des SILABSKIN ® RE sont récupérés et stockés à -80°C. La sécrétion des médiateurs inflammatoires (CCL5, CCL20, CXCL1, IL-1α, IL-8, MMP2 et MMP9) par des SILABSKIN RE ® mimic acné a été évaluée par la technique multiplex (LEGENDPlex TM ). L’acquisition des résultats est réalisée à l’aide d’un cytomètre en flux. L’analyse est faite à l’aide du logiciel LEGENDplex™ Data Analysis Software. Les résultats sur la sécrétion de CCL5, de CCL20 et de CXCL1 sont présentés dans le tableau 17 (valeurs moyennes de la synthèse de CCL5 par les SILABSKIN ® RE mimic acné), dans le tableau 18 (Valeurs moyennes de la synthèse de CCL20 par les SILABSKIN ® RE mimic acné.), et dans le tableau 19 (Valeurs moyennes de la synthèse de CXCL1 par les SILABSKIN ® RE mimic acné). SILABSKIN ® RE SILABSKIN ® RE mimic acné Synthèse de CCL5 Témoin Témoin Invention (ex2) 0,003% Invention (ex2) 0,006% Moyenne (pg/mL) 30 47 36 30 Ecart-type 14 17 6 10 Variation de la synthèse CCL5 -65% -100% SILABSKIN ® RE SILABSKIN ® RE mimic acné Synthèse de CCL20 Témoin Témoin Invention (ex2) 0,003% Invention (ex2) 0,006% Moyenne (pg/mL) 36 119 74 54 Ecart-type 18 46 49 23 Vartion de la synthèse de CCL20 -54% -78% SILABSKIN ® RE SILABSKIN ® RE mimic acné Synthèse CXCL1 Témoin Témoin Invention (ex2) 0,003% Invention (ex2) 0,006% Moyenne (pg/mL) 480 749 553 495 Ecart-type 120 230 160 109 Variation de la synthèse CXCL1 -73% -94% Dans le modèle 3D d’épiderme reconstruit mimant une peau acnéique, la synthèse des chimiokines, médiateurs responsables de l’attraction des cellules immunitaires est augmentée. On constate que testé à 0,006% sur SILABSKIN ® RE mimic acné, le principe actif selon l’invention inhibe significativement la sécrétion de CCL5, de CCL20, de CXCL1 de respectivement 100%, 78%, 94%. Le principe actif selon l’invention régule la biologie de l’épiderme acnéique et limite ainsi l’inflammation marqueur important de la physiopathologie de l’acné. Les résultats sur la synthèse de cytokines sont présentés dans le tableau 20 (valeurs moyennes de la synthèse d’IL-1α par les SILABSKIN ® RE mimic acné) et dans le tableau 21 (valeurs moyennes de la synthèse d’IL-8 par les SILABSKIN ® RE mimic acné). SILABSKIN ® RE SILABSKIN ® RE mimic acné Synthèse IL-1 α Témoin Témoin Invention (ex2) 0,003% Invention (ex2) 0,006% Moyenne (pg/mL) 39 78 49 43 Ecart-type 5 18 17 17 Variation de la synthèse IL-1 α -74% -90% SILABSKIN ® RE SILABSKIN ® RE mimic acné Synthèse d’IL-8 Témoin Témoin Invention (ex2) 0,003% Invention (ex2) 0,006% Moyenne (pg/mL) 271 601 381 310 Ecart-type 168 112 190 143 Variation synthèse d’IL-8 -67% -88% Dans le modèle 3D d’épiderme reconstruit mimant une peau acnéique, la synthèse des cytokines pro-inflammatoires caractéristiques des peaux acnéiques est augmentée. On constante que testé à 0,006% sur SILABSKIN ® RE mimic acné, le principe actif selon l’invention inhibe significativement la sécrétion d’IL-1α, d’IL-8 de respectivement 90%, 88%. Les résultats sur la synthèse de métalloprotéinases matricielles sont présentés dans le tableau 22 (valeurs moyennes de la synthèse de MMP2 par les SILABSKIN ® RE mimic acné) et dans le tableau 23 (valeurs moyennes de la synthèse de MMP9 par les SILABSKIN ® RE mimic acné). SILABSKIN ® RE SILABSKIN ® RE mimic acné Synthèse de MMP2 Témoin Témoin Invention (ex2) 0,003% Invention (ex2) 0,006% Moyenne (pg/mL) 674 1013 614 541 Ecart-type 295 258 352 283 Variation de la synthèse MMP2 -118% -139% SILABSKIN ® RE SILABSKIN ® RE mimic acné Synthèse de MMP9 Témoin Témoin Invention (ex2) 0,003% Invention (ex2) 0,006% Moyenne (ng/mL) 102 181 142 106 Ecart-type 42 61 19 36 Variation synthèse MMP9 / SILABSKIN ® RE mimic acné -49% -95% Dans le modèle 3D d’épiderme reconstruit mimant une peau acnéique, la synthèse des métalloprotéinases matricielles contribuant à l’extension du phénomène inflammatoire dans les lésions d’acné est augmentée. On constate que testé à 0,006% sur SILABSKIN ® RE mimic acné, le principe actif selon l’invention inhibe significativement la sécrétion de MMP2 et de MMP9 de respectivement 139% et 95%. L’ensemble de ces études démontrent la capacité du principe actif selon l’invention à limiter l’inflammation kératinocytaire. b. Etude de l’efficacité du principe actif selon l’invention sur la réponse inflammatoire Th17 Un infiltrat de cellules immunitaires est présent dans les lésions d’acné, infiltrat composé majoritairement de lymphocytes T helper CD4+. Ces cellules ont un profil Th17, ce qui suggère que l’acné est une pathologie dans laquelle les lymphocytes Th17 contribuent de manière significative au phénomène inflammatoire. L’effet du principe actif selon l’invention a été évalué sur la réponse inflammatoire Th17. Cette étude porte sur l’analyse de la sécrétion de l’IL-17 produite par les lymphocytes Th17, cellules retrouvées en grand nombre dans les zones lésionnelles d’acné. Le protocole opératoire la culture et le traitement des lymphocytes Th17 est décrit en suivant. Des lymphocytes T (LT) naïfs sont isolés à partir de cellules mononucléées du sang périphérique. Ils sont ensemencés dans des plaques pré-coatées avec un anticorps anti-CD3 contenant du milieu spécifique. Un mix permettant la différenciation des LT naïfs en LTh17 est ajouté. Les cellules sont ensuite incubées à 37°C. Après plusieurs jours, le milieu de culture est éliminé et remplacé par un milieu contenant le mix de différenciation en présence ou non du principe actif selon l’invention (0,0015% ou 0,0060%). Le lendemain, les surnageants de culture des cellules sont récupérés et stockés à -80°C. La sécrétion d’IL-17 a été évaluée par la technique ELISA. Les résultats de l’effet sur les lymphocytes Th17 sont présentés dans le tableau 24 (valeurs moyennes de la sécrétion d’IL-17 par les lymphocytes Th17). Lymphocytes Th17 Sécrétion d’IL-17 Témoin Invention (ex2) 0,0015% Invention (ex2) 0,0060% Moyenne (pg/mL) 1 538 1 118 949 Ecart-type 389 362 330 Variationde la sécrétion d’IL-17 -27% -38% On constate que testé à 0,0060% sur des lymphocytes Th17, le principe actif selon l’invention inhibe significativement la sécrétion d’IL-17 de 38%. Le principe actif selon l’invention régule la biologie des LTh17 et limite ainsi l’inflammation induite par ces cellules, actrices importantes de la physiopathologie de l’acné. IV.C3. Etude de l’efficacité du principe actif selon l’invention sur l’inflammation sébocytaire C. acnes induit une réponse inflammatoire au niveau des sébocytes. Ces derniers produisent alors de nombreux médiateurs (IL-6, IL-8…) qui contribuent à la réaction inflammatoire observée dans les lésions d’acné. Par ailleurs, le rôle pathogène de la substance P comme neuromédiateur de l’inflammation dans l’acné est à ce jour bien décrit dans la littérature. L’inflammation sébocytaire a été étudiée en analysant la sécrétion d’IL-6 et d’IL-8 par des sébocytes soumis à une exposition bactérienne ( C. acn es phylotype IA1) et à une influence neuronale (substance P). Le protocole opératoire la culture et le traitement des sébocytes humains est décrit en suivant. Des sébocytes humains normaux (SHN) sont ensemencés dans un milieu de culture spécifique et incubés à 37°C dans une atmosphère contenant 5% de CO 2 . Les cellules sont traitées avec une suspension de C . acnes et/ou de substance P, et le principe actif selon l’invention est appliqué à 0,0006% ou 0,0015% conjointement au traitement C. acnes +/- Substance P. Les surnageants de culture sont ensuite récupérés et stockés à -80°C. La sécrétion d’IL-17, d’IL-6, d’IL-8 a été évaluée par la technique ELISA. Les résultats de l’effet sur l’inflammation sébocytaire sont présentés : dans le tableau 25 (synthèse d’IL-6 par les sébocytes traités par C. acnes ), dans le tableau 26 (synthèse d’IL-8 par les sébocytes traités par C. acnes ), dans le tableau 27 (synthèse d’IL-6 par les sébocytes traités par la substance P), dans le tableau 28 (synthèse d’IL-8 par les sébocytes traités par la substance P), dans le tableau 29 (synthèse d’IL-6 par les sébocytes traités par C. acnes + Substance P.) et dans le tableau 30 (synthèse d’IL-8 par les sébocytes traités par C. acnes + Substance P.). SHN non traités SHN traités C. acnes Synthèse d’IL-6 Témoin Témoin Invention (ex2) 0,0006% Invention (ex2) 0,0015% Moyenne (pg/mL) 109 246 158 97 Ecart-type 71 99 45 36 Variation de la synthèse d’IL-6 -64% -109% SHN non traités SHN traités C. acnes Synthèse d’IL-8 Témoin Témoin Invention (ex2) 0,0006% Invention (ex2) 0,0015% Moyenne (pg/mL) 145 349 194 91 Ecart-type 72 116 48 49 Variation de synthèse d’IL-8 / Témoin SHN traités C. acnes C. acnes -76% -126% Le traitement par C. acnes stimule l’inflammation dans les sébocytes humains normaux. Testé à 0,0015%, le principe actif selon l’invention inhibe significativement la sécrétion d’IL-6 et d’IL-8 par les sébocytes humains de respectivement 109% et 126%. SHN non traités SHN traités Substance P Synthèse d’IL-6 Témoin Témoin Invention (ex2) 0,0006% Invention (ex2) 0,0015% Moyenne (pg/mL) 132 198 112 75 Ecart-type Variation synthèse d’IL-6 / Témoin SHN traités substance P -130% -186% SHN non traités SHN traités Substance P Synthèse d’IL-8 Témoin Témoin Invention (ex1) 0,0006% Invention (ex1) 0,0015% Moyenne (pg/mL) 166 244 143 91 Ecart-type Variation de synthèse d’IL-8 / Témoin SHN traités Substance P -130% -196% Le traitement par la substance P, neuromédiateur du stress, stimule l’inflammation dans les sébocytes humains normaux. On constate que testé à 0,0015% sur sébocytes traités par la substance P, le principe actif selon l’invention inhibe significativement la sécrétion d’IL-6 et d’IL-8 de respectivement 186% et 196%. SHN non traités SHN traités C. acnes + Substance P Synthèse d’IL-6 Témoin Témoin Invention (ex2) 0,0006% Invention (ex2) 0,0015% Moyenne (pg/mL) 109 394 258 193 Ecart-type 71 108 73 32 Variation synthèse d’IL-6 / Témoin SHN traités C. acnes + substance P -48% -71% SHN non traités SHN traités C. acnes + Substance P Synthèse d’IL-8 Témoin Témoin Invention (ex2) 0,0006% Invention (ex2) 0,0015% Moyenne (pg/mL) 145 539 220 192 Ecart-type 72 120 36 46 Shapiro-Wilks 0,081 0,105 0,374 0,115 Variation de synthèse d’IL-8 / Témoin SHN traités C. acnes + Substance P C. acnes -81% -88% Le traitement cumulé par C. acnes et la substance P, exacerbe l’inflammation dans les sébocytes humains normaux. Testé à 0,0015% sur sébocytes traités par C. acnes + Substance P, le principe actif selon l’invention inhibe significativement la sécrétion d’IL-6 et d’IL-8 de respectivement 71% et 88%. L’ensemble de ces études démontrent la capacité du principe actif selon l’invention à réguler l’inflammation sébocytaire caractéristique de la physiologie de l’acné. Ces effets ont été démontrés face à l’agent pathogène clé de la pathologie C. acnes mais aussi dans des conditions mimant un stress psychologique. IV.C4. Etude de l’efficacité du principe actif selon l’invention sur la modification du microbiote Comme décrit précédemment dans la partie C4, la bactérie C. acnes est considérée comme l’un des facteurs pathogènes majeurs contribuant au développement de l’acné. L’acné est caractérisée par une perte de diversité phylotypique de C. acnes au profit du phylotype IA1. De plus, la population de C. acnes phylotype IA1 possède une capacité à communiquer et s’organiser pour mettre en place des facteurs de virulence (formation de biofilms) via le système de quorum sensing et ainsi coloniser le follicule. L’objectif de ces études est de montrer l’effet du principe actif sur la croissance de la bactérie C. acnes , sur le recrutement des bactéries par le quorum sensing et sur la formation d’un biofilm de C. acnes . a. Etude de l’efficacité du principe actif selon l’invention sur la croissance bactérienne L’objectif de cette étude a été d’évaluer l’effet anti-bactérien direct du principe actif sur la croissance de C. acnes . Le protocole opératoire de culture de la souche bactérienne est le suivant : C. acnes est cultivé en conditions d’anaérobiose à 37°C, sur des géloses au sang dans des bouillons adéquats. Pour mesurer la concentration minimale inhibitrice (CMI) du principe actif selon l’invention, C. acnes a été ensemencé en absence et en présence du principe actif selon l’invention à différentes concentrations. La croissance est évaluée par mesure de la densité optique à 600nm. Une courbe de décroissance exponentielle est tracée et modélisée selon l’équation DO = DOmax x e – d c (c= concentration du principe actifs, d=facteur déduit des données expérimentales). On en déduit la CMI50, qui représente la concentration minimale du principe actif à partir de laquelle la croissance de C. acnes est abaissée de 50%. Les résultats sur la croissance de C. acnes phylotype IA1sont présentés dans le tableau 31. Concentration en Principe actif selon l’invention Moyenne de la croissance de C. acnes phylotype IA1 0% 0.748 0.0006% 0.744 0.003% 0.740 0.006% 0.629 0.014% 0.571 0.029% 0.509 0.043% 0.383 0.06% 0.276 0.09% 0.159 0.11% 0.111 0.14% 0.095 0.17% 0.064 0.29% 0.048 0.57% 0.032 Plus la concentration du principe actif selon l’invention est élevée, plus la croissance de la souche C. acnes est inhibée. La concentration minimale inhibitrice (CMI) permettant d’inhiber 50% de la croissance est de 0,043% du principe actif selon l’invention. Le principe actif selon l’invention présente un effet bactériostatique d’au moins 50% sur la croissance de C. acnes phylotype IA1, à partir d’une concentration de 0,043%. b. Etude de l’efficacité du principe actif selon l’invention sur le quorum sensing La population de C. acnes phylotype IA1 possède une capacité à communiquer et s’organiser pour mettre en place des facteurs de virulence via le système de quorum sensing. L’effet du principe actif selon l’invention sur le quorum sensing a été appréhendé en mesurant l’expression du gène Lux, un gène pivot dont le niveau d’activité est lié à celui du QS. Une culture de C. acnes est ensemencée en bouillon spécifique, en présence et en absence du principe actif selon l’invention (0,006%), à partir d’une pré-culture en phase exponentielle de croissance. Cette culture est réalisée à 37°C dans des conditions d’anaérobiose durant 24h, et est suivie par mesure de densité optique à 600 nm. À l’issue des 24h de croissance, les cultures sont centrifugées : - les culots bactériens sont incubés et lavés dans le RNAprotect Bacteria Reagent RNA Protect, selon les recommandations du fournisseur. Ils sont ensuite conservés à sec à -80°C en vue de l’extraction des ARN totaux. - les surnageants de culture sont quant à eux prélevés, filtrés (0,2μm) et conservés à -20°C en vue de mesurer la quantité d’AI-2 sécrétée au cours de la croissance. Les résultats sur l’expression de LuxS et de la synthèse de l’autoinducteur Al-2 sont présentés dans les tableaux 32 et 33. Expression de LuxS par C. acnes Témoin Principe actif selon l’invention à 0.006% Moyenne -1.07 -1.50 Ecart Type 0.34 0.10 Variation de l’expression de LuxS / Témoin -26% Testé à 0,006% sur C. acnes , le principe actif selon l’invention limite de 26% l’expression de LuxS, gène majeur du quorum sensing. Synthèse de l’autoinducteur Al-2 Témoin Principe actif selon l’invention à 0.006% Moyenne (ng/ml) 831 690 Ecart Type Variation de la synthèse de AI-2 / Témoin -17% Testé à 0,006% sur C. acnes , le principe actif selon l’invention limite significativement la sécrétion de l’autoinducteur AI-2 de 17%. L’ensemble de ces données démontrent la capacité du principe actif à réduire l’activité du quorum sensing de C. acnes . c. Etude de l’efficacité du principe actif selon l’invention sur la formation de biofilm Pour évaluer la capacité du principe actif selon l’invention à limiter le biofilm de C. acnes , la bactérie est ensemencée à partir d’une pré-culture en phase exponentielle en présence ou en absence d’une quantité sub-inhibitrice du principe actif selon l’invention (0,006%), en microplaques. Les microplaques sont incubées en anaérobiose à 37°C durant 48h pour favoriser la formation du biofilm. Après 48h, les puits de la microplaque sont vidés par aspiration et les bactéries non adhérées sont éliminées. Le biofilm est ensuite coloré au cristal violet. Le cristal violet est quantifié par mesure de spectrophotométrie à 540nm. La quantité de biofilm formé est proportionnelle au cristal violet dosé dans le puits. Les résultats sur les biofilms de C. acnes phylotype IA1 sont présentés dans le tableau 34. Témoin Principe actif selon l’invention à 0.006% Moyenne des Biofilms de C. acnes (DO à 540nm) 1.035 0.586 Ecart Type 0.511 0.386 Activité anti-biofilm / Témoin -43% A la concentration sub-inhibitrice (0.006%), le principe actif selon l’invention empêche significativement la formation d’un biofilm par C. acnes phylotype IA1 de 43%. En limitant la croissance et la formation de biofilm du C. acnes , le principe actif selon l’invention exerce une activité anti-bactérienne contre le phylotype virulent associé au développement des lésions acnéiques. IV.D. Démonstration de l’effet et de l’efficacité d’un principe actif selon l’invention sur les peaux acnéiques Il a été démontré précédemment que grâce à une approche inédite, le principe actif selon l’invention est capable de cibler les quatre composantes majeures de la physiopathologie de l’acné. Des essais ont également été réalisés pour démontrer cliniquement l’efficacité thérapeutique sur des volontaires adultes souffrant d’acné légère à modérée, y compris son impact sur le lipidome des peaux acnéiques. Des travaux précédents ont démontré qu’il existe une variation du lipidome entre des peaux présentant des lésions d’acné et des peaux saines. Le profil lipidique des peaux acnéiques présente des particularités à savoir : -la formation en grande quantité d’acides gras libres pro-inflammatoires par l’hydrolyse des triglycérides par la lipase bactérienne (acide oléique, acide palmitique) ; -une modification du profil de saturation/insaturation des acides gras en faveur des AG insaturés (augmentation des AG insaturés spécifiques du sébum : acide sapiénique et acide sébaléique) ; - une élévation des taux de cholestérol, esters de cire et composés associés aux squalènes (tri-terpènes). Ces modifications lipidiques sont impliquées dans la pathogénèse de l’acné puisqu’elles participent au phénomène inflammatoire, à la perturbation de la fonction barrière, à l’hyperkératose et la formation de comédons. Au-delà de l’augmentation de la quantité de sébum, les modifications qualitatives et quantitatives des lipides sébacés jouent donc un rôle important dans la comédogénèse et l’apparition d’un terrain inflammatoire. Ces modifications altèrent l’environnement physiologique des sébocytes et des kératinocytes et influencent grandement la formation des lésions acnéiformes. Avantageusement, un hydrolysat d’écorce de fruits immatures de Punica granatum est capable d’avoir un effet sur les modifications quantitatives et qualitatives du profil lipidique du sébum qui interviennent dans l’acné. En particulier, lorsqu’il est appliqué sur la peau, le principe actif selon l’invention est capable de : - Diminuer la quantité d’acide gras - D’abaisser le ratio acides gras insaturés / acides gras saturés - De réduire la quantité de squalènes, - De diminuer la quantité de cholestérol - De tendre à diminuer la quantité de cire. Le principe actif selon l’invention est capable de réguler la biologie des sébocytes. a. Etude de l’efficacité du principe actif selon l’invention sur le lipidome des peaux acnéiques L’objectif de cette étude a été d’évaluer l’effet du principe actif selon l’invention formulé à 0,5% sur le profil lipidique du sébum des peaux présentant une acné légère à modérée. Cette étude a été réalisée chez 36 sujets adultes caucasiens, de sexe féminin et d’âge compris entre 25 et 43 ans, concernés par une acné d'intensité légère à modérée, localisée sur le visage et nécessitant la mise en place d’un traitement. Les sujets ont été répartis en deux groupes : Groupe placebo : groupe de 18 femmes ayant appliqué biquotidiennement pendant 30 jours, une formule placebo sur l’ensemble du visage. Groupe Principe actif selon l’invention : groupe de 18 femmes ayant appliqué biquotidiennement pendant 30 jours, une formule contenant le principe actif selon l’invention sur l’ensemble du visage. La quantité et la nature des lipides du sébum a été évalué par prélèvement, à J0 et J30, suivi des dosages UPLC-MS/MS. L’identification des espèces d’intérêt a été validée par l’injection de composés standards et la quantification des espèces a été réalisée par addition de composés standards deutérés à des concentrations connues. Les résultats correspondant à la quantité d’acides gras libres après utilisation d’une des deux formules sont présentés dans le tableau 35. Groupe placebo Groupe Principe actif Principe actif vs placebo Acide gras saturé Acide Palmitique J0 1.985 2.670 -42% J30 2/337 2.030 Acides gras insaturés Acide Sapiènique J0 0.622 0.904 -61% J30 0.798 0.610 Acide Oléique J0 0.644 1.020 -49% J30 0.753 0.699 Acide Sébaléique J0 0.227 0.360 -65% J30 0.286 0.219 Rapport Acides gras insaturés (AGI) / Acides gras saturés (AGS) J0 0.760 0.775 -14% J30 0.788 0.694 Squalène J0 6.677 8.301 -28% J30 7.594 7.128 Cholestérol J0 0.855 0.992 -26% J30 0.933 0.830 Cire J0 1.133 1.362 -35% J30 1.431 1.244 Dans les conditions de cette étude, 30 jours après le début des applications, le principe actif selon l’invention formulé à 0,5% améliore significativement la qualité du profil lipidique du sébum des sujets acnéiques en : diminuant significativement la quantité d’acide gras (acide palmitique : -42%, acide sapiénique : -61%, acide oléique : -49%, acide sébaléique : -65%) ; abaissant significativement le ratio acides gras insaturés / acides gras saturés de 14% ; réduisant significativement la quantité de squalènes de 28% ; diminuant significativement la quantité de cholestérol de 26% ; Il tend également à réduire la quantité de la cire de 35%. L’ensemble des résultats obtenus révèle de bonnes performances du soin contenant le principe actif selon l’invention et confirme l’intérêt de ce dernier chez les sujets adultes caucasiens dans l’amélioration de la composante lipidique de l’acné. b. Etude clinique du principe actif selon l’invention sur des peaux présentant une acné légère à modérée. L’objectif de cette étude clinique a été d’évaluer l’effet du principe actif selon l’invention formulé à 0,5% en tant que soin destiné au traitement des peaux présentant une acné légère à modérée. Cette étude a été réalisée chez 92 sujets adultes caucasiens, sexe féminin et d’âge compris entre 25 et 48 ans, concernés par une acné d'intensité légère à modérée, localisée sur le visage et nécessitant la mise en place d’un traitement. Les sujets ont été répartis en deux groupes : Groupe placebo : groupe de 46 femmes ayant appliqué pendant 30 jours, matin et soir, la formule placebo sur l’ensemble du visage. Groupe Principe actif : groupe de 46 femmes ayant appliqué pendant 30 jours, matin et soir, la formule contenant le principe actif selon l’invention sur l’ensemble du visage. Après 30 jours d’étude, les évaluations ont été réalisées par le dermatologue (scorage clinique des lésions, scorage de la gravité de l’acné, évaluation de l’état de la peau et appréciation globale du soin). A chacune des visites, le dermatologue a évalué le nombre exact de lésions acnéiques sur le visage (comédons ouverts, comédons fermés, papules, pustules, nodules et kystes) et a scoré la gravité de l’acné en utilisant l’échelle internationalement reconnue GEA (Global Evaluation Acne). L’échelle GEA comporte 6 stades. Stade 0 Acné guérie, pas de lésions Une pigmentation résiduelle et/ou un érythème peuvent être présents. Stade 1 Acné presque guérie, pratiquement pas de lésions Rares comédons ouverts ou fermés dispersés et rares papules. Stade 2 Acné légère Facilement identifiable ; moins de la moitié du visage est atteinte. Quelques comédons ouverts ou fermés, et quelques papulopustules. Stade 3 Acné modérée Plus de la moitié du visage est atteinte. Nombreuses papulopustules. Nombreux comédons ouverts ou fermés. Stade 4 Acné sévère Tout le visage est atteint, couvert de nombreuses papulopustules, comédons ouverts ou fermés et rares nodules. Stade 5 Acné très sévère Acné très inflammatoire recouvrant le visage avec présence de nodules. Une diminution du score GEA permet de conclure à une efficacité clinique du traitement correspondant. A chacune des visites (J0 et J30), le dermatologue a établi un état clinique de la peau en évaluant différents paramètres ayant trait à la problématique des peaux acnéiques selon les 6 critères suivants sur une échelle de cotation allant de 0 à 9 (de nul à important) : intensité de la séborrhée, intensité de l’érythème lié aux boutons, importance des pores dilatés, intensité de la sécheresse cutanée, irrégularité du teint, irrégularité du relief L’appréciation globale de l’efficacité du produit a été évaluée par le dermatologue après 30 jours d’application biquotidienne, à l’aide d’un questionnaire qui contenait les items suivants : 1) Le produit favorise la réduction des lésions inflammatoires 2) Le produit favorise la réduction des lésions rétentionnelles 3) Le produit atténue l'aspect brillant de la peau 4) Le produit atténue les pores dilatés 5) Le produit présente un effet hydratant 6) Le produit peut être utilisé pour soigner l’acné légère à modérée 7) Globalement, le produit est satisfaisant Pour les items allant de 1 à 7, 5 choix de notation étaient possibles : tout à fait d’accord, d’accord, pas d’accord, pas du tout d’accord, sans opinion. Les résultats correspondant au comptage du nombre total de lésions rétentionnelles (comédons ouverts et fermés) sont présentés dans le tableau 37. Nombre de lésions rétentionnelles J30 vs J0 J0 J30 Evolution (%) p-valeur Groupe placebo 18,2 12,6 -30.9% p Groupe Principe actif selon l’invention 0,5% 18,8 11,2 -40.6% p Dans les conditions de cette étude, après 30 jours d’utilisation biquotidienne sur le visage, le groupe utilisant la formule contenant le principe actif selon l’invention révèle des performances significativement plus favorables que le groupe placebo : réduction du nombre de lésions rétentionnelles de 40,6% pour le groupe ayant utilisé la formule contenant le principe actif selon l’invention versus 30,9% pour le groupe ayant appliqué la formule placebo. Les résultats correspondant au comptage du nombre total de lésions inflammatoires (papules, pustules et nodules) sont présentés dans le tableau 38. Nombre de lésions inflammatoires J30 vs J0 J0 J30 Evolution (%) p-valeur Groupe placebo 11.5 7.0 -38.9% P Groupe Principe actif à 0.5% 11.3 5.7 -49.2% P Dans les conditions de cette étude, après 30 jours d’utilisation biquotidienne sur le visage, le groupe utilisant la formule contenant le principe actif selon l’invention révèle des performances plus favorables que le groupe placebo : réduction du nombre de lésions inflammatoires de 49,2% pour le groupe ayant utilisé la formule contenant le principe actif selon l’invention versus 38,9% pour le groupe ayant appliqué la formule placebo. Les résultats correspondant au comptage du nombre total de lésions (rétentionnelles + inflammatoires) sont présentés dans le tableau 39. Nombre total de lésions J30 vs J0 J0 J30 Evolution (%) p-valeur Groupe placebo 29.7 19.6 -34.0% P Groupe Principe actif à 0.5% 30.1 16.9 -43.9% P Dans les conditions de cette étude, après 30 jours d’utilisation biquotidienne sur le visage, le groupe utilisant la formule contenant le principe actif selon l’invention révèle des performances significativement plus favorables que le groupe placebo : réduction du nombre total de lésions de 43,9% pour le groupe ayant utilisé la formule contenant le principe actif selon l’invention versus 34,0% pour le groupe ayant appliqué la formule placebo. L’ensemble de ces résultats montre l’intérêt du traitement par le principe actif selon l’invention dans le soin quotidien des états de la peau acnéique. Les résultats du scorage de la gravité de l’acné après utilisation des formules sont présentés dans le tableau 40. Score GEA (U.A.) J30 vs J0 J0 J30 Evolution (%) p-valeur Groupe placebo 2.4 2.0 -17.0% P Groupe Principe actif à 0.5% 2.3 1.7 -26.4% P Dans les conditions de cette étude, après 30 jours d’utilisation biquotidienne sur le visage, une réduction du score de gravité de l’acné de 26,4% a été obtenue chez les sujets ayant utilisé la formule contenant le principe actif selon l’invention et de 17,0% chez les sujets ayant appliqué la formule placebo. Cet effet a été observé chez 61% des sujets appartenant au groupe le principe actif selon l’invention contre seulement 33% des sujets du groupe placebo. Les résultats correspondant au scorage de différents paramètres caractéristiques de l’état de la peau acnéique après utilisation de la formule principe actif selon l’invention ou placebo sont présentés respectivement dans les tableaux 41 et 42. Score (U.A.) J30 vs J0 J0 J30 Evolution (%) p-valeur Intensité de la séborrhée 4.4 2.7 -39% P Intensité de l’érythème lié aux boutons 4.5 2.7 -39% P Importance des pores dilates 4.3 3.1 -27% P Intensité de la sécheresse cutanée 1.6 1.5 Non significatif Irrégularité du teint 4.3 2.7 -37% P Irrégularité du relief 4.3 2.7 -37% P Score (U.A.) J30 vs J0 J0 J30 Evolution (%) p-valeur Intensité de la séborrhée 4.5 3.0 -33% P Intensité de l’érythème lié aux boutons 4.8 3.3 -32% P Importance des pores dilates 4.0 3.0 -26% P Intensité de la sécheresse cutanée 1.8 1.7 Non significatif Irrégularité du teint 4.54 3.0 -32% P Irrégularité du relief 4. 3.0 -31% P Dans les conditions de cette étude, après 30 jours d’utilisation biquotidienne sur le visage, le groupe utilisant la formule contenant le principe actif selon l’invention révèle des performances plus favorables que le groupe placebo : intensité de la séborrhée (-39% versus 33%), intensité de l'érythème lié aux boutons (-39% versus -32%), importance des pores dilatés (-27% versus -26% ), irrégularité du teint (-37% versus -32%), et irrégularité du relief (-37% versus -31%), Ces résultats montrent l’intérêt du traitement le principe actif selon l’invention dans le soin quotidien des états de la peau acnéique. Principe actif cosmétique ou dermatologique comprenant au moins un hydrolysat d’écorce de fruits immatures de Punica granatum . Principe actif selon la revendication 1, caractérisé en ce que les fruits immatures de Punica granatum ont un diamètre inférieur à 10 cm. Principe actif selon l’une des précédentes revendications, caractérisé en ce que les fruits immatures de Punica granatum ont un diamètre inférieur à 8 cm. Principe actif selon l’une des précédentes revendications, caractérisé en ce que les fruits immatures de Punica granatum sont de couleur verte. Principe actif selon l’une des précédentes revendications, caractérisé en ce que l’hydrolysat comprend des polyphénols, des sucres, des minéraux et des protéines. Principe actif selon l’une des précédentes revendications, caractérisé en ce que l’hydrolysat comprend au moins 35% de polyphénols en poids par rapport au poids de matières sèches de l’hydrolysat. Principe actif selon l’une des précédentes revendications, caractérisé que l’hydrolysat comprend au moins 25% de sucres en poids par rapport au poids de matières sèches de l’hydrolysat. Principe actif selon l’une des précédentes revendications, caractérisé en ce qu’il se présente sous forme liquide ou sous forme poudre. Principe actif selon l’une des précédentes revendications, caractérisé en ce que les polyphénols présents dans l’hydrolysat sont au moins pour partie des Ellagitanins. Principe actif selon la précédente revendication, caractérisé en ce que les Ellagitanins représentent la totalité des polyphénols de l’hydrolysat. Principe actif selon la revendication 9 ou 10, caractérisé en ce que les Elligatanins présents dans l’hydrolysat sont au moins pour partie la Punicalagine et ses dérivés, la Punicaline, les dérivés d’HHDP et l’acide Ellagique. Principe actif selon l’une des précédentes revendications caractérisé en ce que l’hydrolysat est un hydrolysat enzymatique. Composition cosmétique ou dermatologique comprenant au moins 0,1% en poids d’un principe actif sous forme liquide ou au moins 0,05% d’un principe actif sous forme poudre selon l’une des revendications 1 à 12. Composition cosmétique ou dermatologique selon la précédente revendication, caractérisée en ce qu’elle se présente sous forme d’un gel, d’une lotion, d’une émulsion, d’une crème ou d’une pommade. Procédé d’obtention d’un principe actif selon l’une des revendications 1 à 12, caractérisé en ce qu’il comprend au moins une extraction aqueuse et une hydrolyse enzymatique. Procédé d’obtention d’un principe actif selon la précédente revendication, caractérisé en ce qu’il comprend au moins les étapes suivantes : a/ Solubilisation de poudre d’écorce de fruits immatures de Punica granatum dans l’eau, à raison d’au moins 50g/L, b/ Hydrolyse enzymatique à l’aide d’une carbohydrase, c/ Séparation des phases soluble et insoluble, d/ récupération de la phase soluble et inactivation enzymatique thermique, e/purification des composés polyphénoliques. Principe actif cosmétique ou dermatologique selon l’une des revendications 1 à 12, pour son utilisation sur la peau pour prévenir et/ou lutter contre l’acné. Principe actif cosmétique ou dermatologique pour une utilisation selon la revendication 17, pour prévenir et/ou lutter contre un excès de sécrétion de sébum. Principe actif cosmétique ou dermatologique pour une utilisation selon la revendication 17 ou 18, pour prévenir et/ou lutter contre les modifications quantitatives et qualitatives du sébum. Principe actif cosmétique ou dermatologique pour une utilisation selon l’une des revendications 17 à 19, pour prévenir et/ou lutter contre une hyperkératinisation de la peau. Principe actif cosmétique ou dermatologique pour une utilisation selon l’une des revendications 17 à 20, pour prévenir ou lutter contre une inflammation des cellules de la peau et/ou des sébocytes. Principe actif cosmétique ou dermatologique pour une utilisation selon l’une des revendications 17 à 21, pour un effet anti-bactérien. Principe actif cosmétique ou dermatologique pour une utilisation selon l’une des revendications 17 à 22, pour prévenir ou lutter contre le quorum sensing et la formation d’un biofilm de Cutibacterium acnes . Principe actif cosmétique ou dermatologique pour une utilisation selon l’une des revendications 17 à 23, pour : - réduire les lésions acnéiques rétentionnelles et inflammatoires, et/ou - réduire les lésions acnéiques non-inflammatoires, et/ou - atténuer l’aspect gras de la peau, et/ou - atténuer l’aspect brillant de la peau, et/ou - diminuer les marques sur la peau liées aux boutons d’acné, et/ou - rendre les pores moins visibles, et/ou - affiner le grain de peau. Principe actif cosmétique ou dermatologique pour une utilisation selon l’une des revendications 17 à 24, caractérisé en ce que l’utilisation est réalisée au sein d’une composition selon l’une des revendications 13 ou 14.