FR 3110390 A1 20211126 FR 2005199 A 20200520 L’invention concerne un dispositif de séparation et de récupération de fractions sanguines par deux chambres coniques communiquant par leurs bases, la première chambre présentant un conduit d’alimentation du fluide à traiter et des moyens de récupération d’au moins un composant présentant la seconde chambre comprenant une membrane souple déformable élastiquement séparant transversalement un espace débouchant dans le conduit de communication avec ladite seconde chambre, et une poche d’air étanche, de volume variable en fonction de la déformation de ladite membrane. Figure 1 Dispositif de séparation et de récupération de fractions sanguines Domaine de l’invention La présente invention concerne le traitement et la séparation automatisés de cellules biologiques telles que celles trouvées dans le sang total, et concerne plus spécifiquement un système fonctionnellement fermé permettant d'extraire certaines populations de cellules telles que les cellules souches hématopoïétiques, pour une utilisation immédiate ou leur mélange avec une solution additive ou une solution de stockage pour des opérations de stockage séparées ultérieures et pour les procédés permettant de réaliser une telle extraction. Le but est notamment d’automatiser l’isolement de leuco-plaquettaire ayant une grande quantité de cellules souches hématopoïétiques et de cellules souches mésenchymateuses. Il s’agit plus particulièrement du domaine de la séparation et récupération de fractions sanguines par centrifugation, notamment les lymphocytes et d’autres cellules blanches. Notamment, cette séparation à partir d’un prélèvement de sang peut être réalisée en formant en gradient de densité dans un tube à centrifuger, au-dessus d’une couche d’un fluide de densité référencé, par exemple le polyfluorocarbone liquide (Ficoll ®) de densité 1,077. Une des applications très répandue notamment en Asie concerne la chirurgie esthétique, pour la préparation de plasma riche en plaquettes (PRP), à l’aide d’un tube en forme de sablier et deux ouvertures, soumis à une centrifugation. Le concentré leuco-plaquettaire (buffy coat) est ensuite recueilli au niveau du col du tube. Le PRP est centrifugé pour éliminer les globules rouges et pour séparer les plaquettes sanguines et le facteur de croissance riche en plaquettes (Buffy coat) riche en plaquettes et en facteurs de croissance. Dans le domaine de la chirurgie, le PRP a pour fonction de reconstruire et de réparer les parties endommagées des vaisseaux sanguins. Il est possible de concentrer les facteurs de croissance favorisant la régénération cutanée ou tissulaire, ou reconstructive (ligaments vivants, tendons) pour le traitement de l'arthrite, des douleurs chroniques au dos, des douleurs pelviennes et des lésions des ligaments de l'épaule et du genou. Les consommables se présente sous la forme d’un double cône reliées par leurs bases et dont l’un présente sur sa face extérieure un puit prévu destiné à l’alimentation avec le sang prélevé. Par cette même ouverture on prélève après centrifugation la quantité de plasma désirée pour recueillir ensuite les facteurs de croissance présents dans les granules alpha des plaquettes tels que le TGF-β (« transforming growth factor beta »), le VEGF (« vascular endothelial growth factor »), et le PDGF (« platelet-derived growth factor »). Etat de la technique On connait dans l’état de la technique le brevet coréen KR101110576B1 proposant un récipient de séparation du sang et un récipient de concentration du sang pouvant séparer et concentrer facilement et avec précision le plasma ou les PLP du sang. Il comporte une partie de corps principale ayant un espace de réception inférieur situé au-dessous de l’espace de réception supérieur et de l’espace de réception supérieur et un passage reliant l’espace de réception supérieur et l’espace de réception inférieur et la partie de corps principale du dessus de la partie principale. partie de corps Les extrémités périphérique et centrale du capot supérieur et le corps principal formé en fermant l'espace de réception supérieur sont scellés à l'espace de réception supérieur et peuvent bloquer le passage de la partie goulot d'étranglement et la partie de corps principale est couplée au corps principal que la partie centrale Il est réalisé par un récipient de séparation du sang comprenant un couvercle inférieur qui ferme hermétiquement l’espace de réception et comporte une partie de garnissage en contact étroit avec l’espace de réception inférieur. Dans le récipient de séparation du sang, le couvercle supérieur présente une paire de trous pouvant être fermés avec un bouchon. La demande de brevet WO2013055070A2 décrit un autre exemple connu de dispositif pour l'extraction de plasma comprenant : une partie de corps principal cylindrique dans laquelle l'extrémité périphérique est ouverte et l'extrémité centrale est fermée ; une partie en entonnoir qui est fixée à la partie centrale interne de la partie de corps principal et est façonnée en une forme conique d'une telle façon que le diamètre de la partie centrale est petite et les diamètres des deux extrémités diminuent progressivement alors qu'elles s'approchent de la partie centrale ; une partie de couvercle destinée à fermer l'extrémité périphérique de la partie de corps principal ; un bouchon ouvert/fermé fixé à la partie de couvercle d'une manière pouvant être ouverte/fermée, dans laquelle un trou d'injection dans lequel une aiguille d'une seringue pour l'injection du sang extrait à partir d'un patient peut être insérée, est formé au niveau d'un côté latéral du bouchon ouvert/fermé ; et un second tube de centrifugation pour l'extraction ultérieure de plasma à partir de PRP et d'érythrocytes du sang centrifugé par une seconde centrifugation. Une grande quantité d'érythrocytes parmi les composants sanguins sont stockés dans une partie de stockage du sang après la centrifugation et une petite quantité de PRP peut être stockée au milieu de la partie en entonnoir ayant un petit diamètre, facilitant ainsi l'extraction d'une petite quantité de PRP. De plus, même si la quantité d'érythrocytes dépend d'un individu, la position de la partie en entonnoir peut être régulée par la configuration d'une partie d'aile de connexion de la partie en entonnoir, et ainsi il est possible de localiser précisément PRP au niveau de la partie en entonnoir. En outre, un gaz de stérilisation peut être injecté dans le dispositif d'extraction de plasma par l'intermédiaire du trou d'injection du bouchon ouvert/fermé, facilitant ainsi la stérilisation. La demande de brevet WO2011052927A2 décrit un dispositif pour extraire une couche leuco-plaquettaire à partir du sang périphérique, comprenant : un corps principal de dispositif ayant un espace de réception supérieur, un espace de réception inférieur placé sous l'espace de réception supérieur et une partie en goulot d'étranglement qui est un chemin reliant l'espace de réception supérieur et l'espace de réception inférieur ; un couvercle supérieur qui est couplé à la partie périphérique du corps principal de dispositif de façon à pouvoir glisser sur le corps principal de dispositif ; et un couvercle inférieur qui ferme l'espace de réception inférieur en étant couplé à la partie centrale du corps principal de dispositif de façon à pouvoir glisser sur le corps principal de dispositif. La présente demande de brevet WO2013100700A1 concerne un kit intégré de séparation du sang et de concentration du PRP (plasma riche en plaquettes) et un procédé d'extraction du PRP l'utilisant, et de manière plus spécifique, un kit intégré capable de séparer le sang et de concentrer le PRP en une étape, en utilisant un kit et un procédé d'extraction du PRP l'utilisant. Le kit intégré de séparation du sang et de concentration du PRP comprend : a) un corps principal comprenant une partie de stockage périphérique ; une partie de stockage centrale, et une partie de passage pour raccorder la partie de stockage périphérique et la partie de stockage centrale ; ( b) un couvercle inférieur accouplé à l'extrémité périphérique de la partie de stockage périphérique ; c) un bouchon intérieur inséré dans l'extrémité centrale de la partie de stockage centrale pour sceller la partie de stockage centrale ; d) une vis d'ajustement pour la fermeture, la vis pouvant se déplacer verticalement tout en pénétrant dans un trou formé au niveau du bouchon intérieur et scellant la partie de passage ; et e) un couvercle inférieur accouplé à l'extérieur de l'extrémité centrale de la partie de stockage centrale et à l'extérieur du bouchon intérieur pour empêcher la séparation de la vis d'ajustement pour la fermeture accouplée au bouchon intérieur en cas de centrifugation. Selon la présente invention, il est possible, en utilisant le kit intégré de séparation du sang et de concentration de la PRP, d'extraire le PRP du sang en une étape sans envoyer une couche de plasma séparée après la centrifugation dans un récipient d'hémoconcentration, permettant ainsi de minimiser une infection secondaire à transmission aérienne. Dispositif de séparation et de récupération de fractions sanguines par deux chambres coniques communiquant par leurs bases, la première chambre présentant un conduit d’alimentation du fluide à traiter et des moyens de récupération d’au moins un composant caractérisé en ce que La seconde chambre comprenant une membrane souple déformable élastiquement séparant transversalement un espace débouchant dans le conduit de communication avec ladite seconde chambre, et une poche d’air étanche, de volume variable en fonction de la déformation de ladite membrane. Dispositif susvisé caractérisé en ce que ledit moyen de récupération comprend au moins un flotteur de densité déterminée, positionné dans un canal formé dans l’interface entre lesdites chambres coniques. Dispositif susvisé caractérisé en ce que ledit moyen de récupération comprend une vanne à trois voies positionnée dans un canal formé dans l’interface entre lesdites chambres coniques, comportant un embout de sortie. Équipement pour la séparation et de récupération de fractions sanguines constitué par une centrifugeuse présentant un plateau caractérisé en ce que ledit plateau présentant au moins un logement pour un dispositif susvisé. Équipement pour la séparation et de récupération de fractions sanguines susvisé caractérisé en ce que ledit plateau présentant au moins un logement pour un dispositif susvisé et comporte un capteur d’images dont le champ de vision correspond à une zone de passage lors de la rotation du segment de communication entre lesdites chambres et une partie adjacente au moins de chacune desdites deux chambres, ledit plateau comportant un moyen de commande de la position de la vanne du dispositif déposé sur ledit plateau. Équipement pour la séparation et de récupération de fractions sanguines susvisé caractérisé en ce qu’il comporte en outre un calculateur commandant ledit moyen de commande en fonction de l’évolution des images acquises par ledit capteur d’images. Description détaillée de l’invention La présente invention sera mieux comprise à la lecture de la description qui suit, se référant aux dessins annexés relative à un exemple non limitatif de réalisation, où : la représente une vue en coupe longitudinal d’un dispositif selon l’invention la représente une vue en coupe longitudinal d’une variante du dispositif selon l’invention avec une vanne trois voies la représente une vue en coupe longitudinal de ladite variante avec une vanne trois voies à l’étape de chargement du sang la représente une vue en coupe longitudinal de ladite variante avec une vanne trois voies à l’étape de centrifugation la représente une vue en coupe longitudinal de ladite variante avec une vanne trois voies à l’étape de séparation la représente une vue en coupe longitudinal de ladite variante avec une vanne trois voies à l’étape de décélération la représente une vue en coupe longitudinal de ladite variante avec une vanne trois voies à l’étape de rotation du maneton la représente une vue en coupe longitudinal de ladite variante avec une vanne trois voies à l’étape de reprise de la décélération la représente une vue en coupe longitudinal de ladite variante avec une vanne trois voies à l’étape de remise en communication des deux cônes du dispositif. Premier contexte applicatif de l’invention L’invention sera décrite en référence des exemples de réalisation qui suivent dans le contexte plus spécifique des thérapies cellulaires par des composants sanguins. L’invention décrite ci-après concerne un dispositif, de préférence à usage unique, destiné à un système automatisé permettant de traiter et de se concentrer sur les cellules souches sans perte ni altération de leur fonctionnalité, notamment pour la greffe de cellules souches progénitrices hématopoïétiques. La fraction riche en cellules souches est isolée à partir du sang périphérique prélevé dans le système circulatoire. Pour isoler les cellules souches de la couche leuco-plaquettaire on utilise des produits à gradient de densité tels que ceux disponibles sous les noms Ficoll et Percoll (marques commerciales). Le produit à gradient de densité est d'abord introduit dans le dispositif de traitement, suivi par l'introduction de sang total, puis un composant du fluide biologique est séparé par centrifugation et collecté par pipetage par exemple. Description physique du dispositif Le dispositif de centrifugation selon l’invention est formé par une pièce moulée en matière plastique présentant une forme générale de sablier ou de bicone, avec : une partie conique périphérique (10) présentant à son extrémité périphérique une grande base fermée par un couvercle (11) présentant un orifice d’alimentation (12) une partie conique centrale (20) dont l’extrémité centrale est séparée d’un fond concave (21) par une membrane (22) élastique un manchon de liaison (30) entre la base de la partie conique périphérique (10) et la base de la partie conique centrale (20). Le couvercle (11) de la partie conique périphérique (10) présente à sa partie centrale une nervure périphériques (13) venant s’appuyer sur un joint annulaire (14) logé dans une gouttière périphérique (15) prévue à la bordure périphérique de la partie conique (10). Le rebord périphérique (16) forme un élément d’accrochage dans une chambre d’une centrifugeuse non représentée. Le manchon de liaison (30) présente deux canaux (31, 32) débouchant à l’intérieur de la partie conique inférieur (20). Le premier canal (31) met en communication le fond de la partie conique périphérique (10) avec la partie conique centrale (20). Il convient un premier flotteur (33) de densité D1. Le deuxième canal (32) traverse la partie conique périphérique (10) est débouche à l’extérieur du couvercle (11). Il enferme un premier flotteur (34) de densité D2 et un deuxième flotteur (35) de densité D3. La membrane (22) est une membrane déformable élastiquement silicone biocompatible d’une élasticité d’environ 450% et d’une épaisseur comprise entre 1 et 2 millimètres, et un diamètre de 50 millimètres. Il assure un bord périphérique torique enserrés dans des gorges annulaires prévus sur la partie frontale de la partie centrale (20) et un couvercle de fermeture. Le diamètre supérieur des parties coniques périphérique (10) et centrale (20) est de 50 millimètres, et le diamètre intérieur du canal de communication est compris entre 1 et 1,5 millimètres. Description d’une variante de réalisation vanne à trois voies Description de la centrifugeuse selon la deuxième variante Le dispositif de centrifugation selon cette variante de réalisation est également formé par une pièce moulée en matière plastique présentant une forme générale de sablier ou de bicone, avec : une partie conique périphérique (10) fermée par un couvercle (11) présentant un orifice d’alimentation (12) une partie conique centrale (20) dont l’extrémité centrale est séparée d’un fond concave (21) par une membrane (22) élastique un manchon de liaison (30) entre la base de la partie conique périphérique (10) et la base de la partie conique centrale (20). Le manchon de liaison (30) présente un canal (36). Ce canal (36) met en communication le fond de la partie conique périphérique (10) avec la partie conique centrale (20). Il est muni d’un maneton commandant une vanne trois voies (37) qui, selon sa position commande : l’écoulement de fluide entre les deux parties coniques (10, 20) l’écoulement de fluide entre la partie conique périphérique (10) et un tube de prélèvement (38) la fermeture du canal (37). La membrane (22) est une membrane déformable élastiquement silicone biocompatible d’une élasticité d’environ 450% et d’une épaisseur comprise entre 1 et 2 millimètres, et un diamètre de 50 millimètres. Elle présente une bordure périphérique torique (23) engagée entre une gorge annulaire (24) prévue sur la bordure frontale de la partie conique (20) et une gorge (25) formée dans le fond concave (21). Le bord de cette gorge (25) présente une nervure (26) assurant le maintien par clipsage de la partie conique (20). Description fonctionnelle Les figures 2 à 9 illustre une séquence de centrifugation d’un échantillon de sang. L’échantillon de sang est transféré depuis une poche stérile vers la partie conique périphérique (10) par un tube stérile la reliant à l’embout (12) de remplissage ( ). On place ensuite le dispositif dans une centrifugeuse, la partie conique (10) étant placée du côté du centre de la centrifugeuse et la partie conique (20) du côté périphérique. La vanne trois voies (37) est placée en position passante, pour permettre au sang contenu dans la partie conique (10) de s’écouler vers la partie conique (20) sous l’effet de la force centrifuge ( ). La centrifugeuse est ensuite arrêtée pour permettre aux différents composés du sang de se répartir en fonction de leur densité, de manière croissante les globules rouges, les globules blancs, les plaquettes et le plasma ( ). On procède ensuite à une décélération lente pour remonter la couche d’intérêt juste sous la zone de tri. Une fois la couche d’intérêt arrivée sur zone, passage en vitesse de centrifugation constante : les couches s’immobilisent et la membrane élastique équilibre la pression ( ). On bascule alors la vanne à trois voies (37) en position de mise en communication de l’embout de prélèvement (38) pour permettre le prélèvement des plaquettes ( ). On bascule alors la vanne à trois voies (37) en position de mise en communication de l’embout de prélèvement (38) pour permettre le prélèvement des plaquettes ( ). On remet la centrifugeuse en décélération lente : la couche d’intérêt est évacuée par l’embout de sortie latérale (38). Dès que la couche de plaquette est récupérée, on commande le retour en vitesse constante ( ). Le maneton commandant la vanne trois voies est ensuite replacé en position passante. La couche d’intérêt est isolée ( ). - Dispositif de séparation et de récupération de fractions sanguines par deux chambres coniques (10, 20) communiquant par leurs bases, la première chambre (10) présentant un conduit d’alimentation du fluide à traiter et des moyens de récupération d’au moins un composant Caractérisé en ce que La seconde chambre (20) comprenant une membrane souple (22) déformable élastiquement séparant transversalement un espace débouchant dans le conduit de communication avec ladite seconde chambre (20), et une poche d’air étanche (21), de volume variable en fonction de la déformation de ladite membrane. - Dispositif selon la revendication 1 caractérisé en ce que ledit moyen de récupération comprend au moins un flotteur de densité déterminée, positionné dans un canal formé dans l’interface entre lesdites chambres coniques (10, 20). - Dispositif selon la revendication 1 caractérisé en ce que ledit moyen de récupération comprend une vanne à trois voies positionnée (37) dans un canal (36) formé dans l’interface entre lesdites chambres coniques, comportant un embout de sortie. – Équipement pour la séparation et de récupération de fractions sanguines constitué par une centrifugeuse présentant un plateau caractérisé en ce que ledit plateau présentant au moins un logement pour un dispositif conforme à l’une au moins des revendications 1 à 3. – Équipement pour la séparation et de récupération de fractions sanguines selon la revendication précédente, caractérisé en ce que ledit plateau présentant au moins un logement pour un dispositif conforme à la revendication 3 et en ce qu’il comporte un capteur d’images dont le champ de vision correspond à une zone de passage lors de la rotation du segment de communication entre lesdites chambres et une partie adjacente au moins de chacune desdites deux chambres, ledit plateau comportant un moyen de commande de la position de la vanne du dispositif déposé sur ledit plateau. - Équipement pour la séparation et de récupération de fractions sanguines selon la revendication précédente, caractérisé en ce qu’il comporte en outre un calculateur commandant ledit moyen de commande en fonction de l’évolution des images acquises par ledit capteur d’images.