FR 3095212 A1 20201023 FR 1904067 A 20190416 Description Titre de l'invention : Nouveau procédé d'aldolisations multiples [0001] La présente invention concerne un nouveau procédé d'aldolisations multiples, et les produits polyhydroxylés obtenus. [0002] Les polyols constituent une famille de molécules très répandue dont la synthèse sté- réospécifique représente un enjeu important. [0003] Ces motifs sont très présents dans les produits naturels et peuvent présenter des propriétés biologiques intéressantes, par exemple dans les statines (hypolipémiants), les médicaments anticancéreux, anti-ostéoporose, antibiotiques, composés antifongiques ou édulcorants. Leur synthèse est en général assez complexe et a conduit au développement de réactions d'aldolisations organocatalytiques (Chem Soc Rev, 2018, 47,4388-4480) ou enzymatiques. En particulier, le motif chiral 1,3-syncliol se retrouve dans de nombreux produits naturels. Son obtention reste un challenge actuel (Chem. Eur. 12018, 24, 4909-4915). La biocatalyse, et notamment les réactions catalysées par les désoxyribose-5-phosphate aldolases (DERA) offrent des solutions intéressantes de par leur faible spécificité de substrat du côté de l'électrophile (J. Am. Chem. Soc.1990, 112, 2013-2014), et ont prouvé leur potentiel dans l'obtention de molécules d'intérêt biologique (J. Am. Chem. Soc.1992, 114, 741-748). [0004] Les différentes méthodes de synthèse de polyols décrites dans l'art antérieur présentent plusieurs inconvénients comme des rendements pas toujours élevés, un contrôle de la stéréochimie des produits (notamment pour les réactions organocatalysées) et des aldolisations multiples, pas toujours maitrisés. Dans ce dernier cas en particulier, même si l'acétaldéhyde ou l'acétaldéhyde monosubstitué par un groupement alkoxy, halo ou azido, a été décrit comme conduisant, en présence d'une DERA, à une double addition de l'acétaldéhyde (Demande de brevet US005795749A), la triple addition constitue une limite puisque l'aldol correspondant n'a réussi à être obtenu qu'avec un rendement de 6% après 12 jours de réaction (J. Ani. Chem. Soc. 1995, 117, 7585-7591) et uniquement. en utilisant l'acétaldéhyde lors d'une auto aldolisation (pas d'aldolisation croisée). [0005] Les aldol isations enzymatiques catalysées par les DERA présentent également souvent des problèmes inhérents à la stabilité du biocatalyseur et à l'inhibition de l'enzyme utilisée, par les produits ou les réactifs, ce qui a souvent nécessité des développements importants pour modifier ces enzymes afin de pallier à ces inconvénients ( Proc. Nad. Acad. Sci.,2004, 101, 5788-5793, Biotechnol. J.2006, 1, 537-548). [0006] L'un des buts de l'invention est la mise à disposition d'un nouveau procédé éco- compatible et stéréospécifique d'aldolisations multiples sur une molécule de départ approprié. 2 [0007] L'un des autres buts de l'invention est la mise à disposition d'un nouveau procédé d'aldolisations multiples permettant de réaliser plus de deux réactions d'aldolisations successives. [0008] L'un des autres buts de l'invention est la possibilité de mettre en oeuvre des réactions d'aldolisations à l'aide d'une enzyme naturelle de façon simple, sans problèmes de stabilité ou d'inhibition de l'enzyme. [0009] L'un des autres buts de l'invention est la possibilité d'accéder de façon stéréo- spécifique à une large variété de produits polyhydroxylés chiraux. [0010] Un autre but de l'invention est la possibilité d'utiliser les composés polyhydroxylés obtenus comme médicaments ou comme intermédiaire de synthèse dans la préparation de principes actifs anti-cholestérol, anticancéreux, anti-ostéoporose, antibiotiques, de produits antifongiques ou d'édulcorants. [0011] Un objet de la présente invention est l'utilisation d'une aldolase, préférentiellement une DERA, dans la mise en oeuvre d'un procédé comportant des aldolisations multiples successives. [0012] Un premier objet de la présente invention est l'utilisation d'une aldolase, préféren- tiellement une DERA, dans la mise en oeuvre d'un procédé comportant des aldolisations multiples successives sur un substrat de départ, pour obtenir le composé correspondant au produit des aldolisations. [0013] Au sens de la présente invention, on entend par « aldolase » une enzyme catalysant les réactions d'aldolisation sur un substrat approprié, dont par exemple les dihydroxyacétone phosphate (DHAP) aldolases (fructose-1,6-bisphosphate aldolase, rhamnulose-l-phosphate aldolase, fuculose-l-phosphate aldolase, tagatose-1,6-bis phosphate aldolase), les dihydroxyacétone (DHA) aldolases (fructose-6-phosphate aldolase), les acétaldéhyde aldolases (désoxyribose-5-phosphate aldolase, DERA), les pyruvate aldolases et les glycine aldolases. Les aldolases sont définies ici en fonction du substrat nucléophile naturel qu'elles utilisent. [0014] Au sens de la présente invention, on entend par « DERA » toute enzyme capable de catalyser la rétroaldolisation du 2-désoxy-D-ribose-5-phosphate pour conduire à 1' acétaldéhyde et au D-glycéraldéhyde-3-phosphate. [0015] Au sens de la présente invention, on entend par « aldolisations multiples suc- cessives » des réactions d'aldolisations d'un nombre supérieur ou égal à deux et allant jusqu'à 10, notamment G, de préférence 4, intervenant les unes à la suite des autres. [0016] Au sens de la présente invention, on entend par « composé correspondant au produit d'aldolisations » un composé obtenu par la mise en oeuvre d'un procédé comportant des aldolisations multiples successives sur le substrat de départ. [0017] A titre d'exemple, la mise en oeuvre d'un procédé de triple aldolisation ou de quadruple aldolisation sur l'hydroxypyruvaldéhyde phosphate (HPP) en présence 3 d'acétaldéhyde comme réactif conduit à obtenir les composés polyhydroxylés suivants correspondant aux produits d'aldol isations ou à toutes formes cycliques correspondantes (hémiacétals) : [0018] [Che m.]] produll de Ire tri Odet lion HP? [0019] Selon un mode de réalisatim particulier, la présente invention concerne l'utilisation tic d'une aldolase, telle que définie précéderminent, dans laquelle le procédé comportant des aldolisations multiples successives est « one-pot » et « one-step ». [0020] Au sens de la présente invention, on entend par « 011e-pot» des réactions consécutives qui ont lieu dans le même contenant sans transvasement du milieu réactionnel après chaque réaction successive. [0021] Au sens de la présente invention, on entend par « one-step » des réactions consécutives où substrat et réactifs sont introduits dans le milieu réactionnel dès le début et sans isolement ni purification des produits intermédiaires obtenus après chaque réaction successive. [0022] Selon un mode de réalisation particulier, la présente invention concerne l'utilisation d'une aldolase, telle que définie précéderminent, dans laquelle le procédé comporte au moins trois aldolisations successives. [0023] Selon un mode de réalisation particulier, la présente invention concerne l'utilisation d'une aldolase, telle que définie précéderminent, dans laquelle le procédé comporte trois, quatre ou cinq aldolisations successives. [0024] Selon un mode de réalisation particulier, la présente invention concerne l'utilisation d'une aldolase, préférentiellement, une DERA, dans la mise en oeuvre d'un procédé comportant des aldolisations multiples successives, notamment au moins trois aldolisations successives, notamment, trois, quatre ou cinq aldolisations successives, sur un substrat de départ pour obtenir le composé correspondant au produit d'aldolisations. [0025] Selon un mode de réalisation particulier, la présente invention concerne l'utilisation d'une aldolase, telle que définie précédemment, dans laquelle le substrat de départ répond à l'une des formules (I) ou (II) suivantes [0026] [Chem.21 H;f0:::PO, (I) 10:itde Fa çttadFped [0027] le groupement phosphate pouvant être sous une forme salifiée, [0028] dans laquelle R = 0 ou S; [0029] [Chem.3] R , I-120PC (II) [0030] le groupement phosphate pouvant être sous une forme salifiée, [0031] dans laquelle R, et/ou R2 = H, Alkyle en C, à C6, Halogène, SH, S-Alkyle en C, à C6, 0-Alkyle en C1 à C6, OCO-Alkylc en C1 à C6, SCO-Alkylc en C1 à C6, SCS-Alkyle en C1 à C6, N-Alkyle2cn C1 à C6, NH-Alkyle en C1 à C6, NHCO-Alkyle en C1 à C6, NO2, Cycloalkylc en C3 à C6, S-Cycloalkylc en C3 à C6, 0-Cycloalkyle en Cs à C6, °COCycloalkylc en C3 à C6, SCO-Cycloalkylc en C3 à C6, SCS-Cycloalkylc en Cs à C6, NCycloalkyle2 en Cs à C6, N-Alkylcycloalkylc en C3 à C6, NH-Cycloalkylc en Cs à C6, NHCO-Cycloalkylc en C3 à C6, [0032] R1 et R, pouvant former un cycle. [0033] Au sens de la présente invention on entend par « forme salifiée » un substrat de formule I ou II, dans lequel le groupement phosphate est sous une forme ionique, ayant un ou deux contre-ion(s) cationique(s), notamment choisi(s) parmi le sodium, le potassium, le lithium ou l'ammonium. Les formes salifiées sont de préférence les di-sels de sodium de formule IA ou 113 suivantes : [0034] [Chem.41 R. Na20-3P0.....'-L50 (IA) [0035] [Chem.5] Ri R2 Na 203P0 (IIA) [0036] Au sens de la présente invention, on entend par « alkyle en C1 à C6» une chaîne carbonée acyclique, saturée ou insaturée, linéaire ou ramifiée, comprenant de 1 à 6 atomes de carbone. [0037] On entend par « cycloalkyle en C; à C » un cycle à 3, 4, 5 ou 6 chainons, saturé ou insaturé, ramifié ou non, notamment un cyclopropyle, un cyclobutyle, un cyclopentyle ou un cyclohexyle. [0038] Au sens de la présente invention, l'expression « R, et R2 pouvant former un cycle» désigne des composés spirocycliques comme par exemple, de façon non-limitante, les structures ci-dessous : [0039] [Chem.6] 3+,C23,C [0040] Selon un mode de réalisation particulier, la présente invention concerne l'utilisation d'une aldolase, telle que définie précédemment, dans laquelle le substrat de départ est de formule (II) [0041] dans laquelle R, et/ou R2 = H, Alkyle en CI à C6, Halogène, SH, 5-Alkyle en CI à C6, 0-Alkyle en C, à C6, OCO-Alkyle en C1 à C6, SCO-Alkyle en CI à C6, SCS-Alkyle en C, à C6, N-Alkyle, en CI à C6, NH-Alkyle en C, à C6, NHCO-Alkyle en CI à C6, NO2, [0042] le groupement phosphate pouvant être sous une forme salifiée. [0043] Selon un mode de réalisation particulier, la présente invention concerne l'utilisation d'une aldolase, telle que définie précédemment, dans laquelle le substrat de départ est de formule (II) dans laquelle, [0044] R, et/ou Rn = Alkyle en C1 à C6, 5-Alkyle en CI à C6, 0-Alkyle en CI à C6, NH- Alkyle en CI à C, SCO-Alkylc en CI à C. SCS-Alkyle en CI à C6, N-Alkyle2 en CI à C6, NH-Alkyle en C, à C6, NHCO-Alkyle en CI à C6, [0045] R, et R2pouvant former un cycle, [0046] le groupement phosphate pouvant être sous une forme salifiée. [0047] Selon un mode de réalisation particulier, la présente invention concerne l'utilisation d'une aldolase, telle que définie précédemment, dans laquelle le substrat de départ répond à la formule (H) dans laquelle RI et/ou R, = Cycloalkylc en C3 à C6, 0- Cycloalkyle en C3 à C6, S-Cycloalkylc en C3 à C6, OCO-Cycloalkyle en C3 à C6, SCOCycloalkyle en C3 à C6. SCS-Cycloalkyle en C3 à C6, N-Cycloalkyle2 en C3 à C6. NHCycloalkyle en C3 à C6, N-Alkylcycloalkyle en CI à C6, NHCO-Cycloalkyle en C3 à C6, [0048] le groupement phosphate pouvant être sous une forme salifiée. [0049] Selon un mode de réalisation particulier, l'utilisation d'une aldolase telle que définie précédemment est particulièrement appropriée sur des substrats de départ ayant une structure correspondant aux formules (I) ou (H), éventuellement salifiée, afin de mettre en oeuvre des réactions d'aldolisations multiples successives. [0050] Selon un mode de réalisation particulier, la présente invention concerne l'utilisation d'une aldolase, telle que définie précédemment, dans laquelle le substrat de départ est le HPP de formule (III) [0051] [Chem.7] H » PO (III) [0052] le groupement phosphate pouvant être sous une forme salifiée. 6 [0053] Au sens de la présente invention, on entend par « HPP » l'hydroxypyruvaldéhyde phosphate, analogue du glycéraldéhyde-3-phosphate (03P), substrat naturel de nombreuses aldolases. [0054] Selon un mode de réalisation particulier, la présente invention concerne l'utilisation d'une aldolase, telle que définie précédemment, dans laquelle raldolasc est choisie parmi les aldolases ayant comme substrat le glycéraldéhyde-3-phosphate (G3P) de formule (IV) [0055] [Chem.8] OH 20*0 (IV) [0056] le groupement phosphate pouvant être sous une forme salifiée, notamment sous la forme d'un di-sel de sodium de formule (V) [0057] [Chem.9] OH Na202.P0 (V). )0058] Selon un mode de réalisation particulier, la présente invention concerne l'utilisation d'une aldolase, telle que définie précédemment, dans laquelle le composé correspondant au produit d'aldolisations répond à l'une des formules suivantes sous leurs formes linéaire, hémiacétalc, acétale, hérnicétale ou cétale : )0059] )Chem.10) o 03Na2 0 [0060] Outre l'utilisation d'une aldolase dans la réalisation d'aldolisations multiples suc- cessives, l'invention porte également sur le procédé d'aldolisations multiples en lui-même. [0061] Selon un mode de réalisation particulier, la présente invention concerne l'utilisation d'une aldolase, telle que définie précédemment, dans laquelle le procédé conduit à obtenir un mélange de produits d'aldolisations, ayant subi un nombre d'aldolisations différent, ce nombre d'aldolisations pouvant être supérieur ou égal à I. 7 [0062] Un second objet de la présente invention est un procédé comportant n aldolisations multiples successives, n étant un entier de 3 à 10, notamment 6, de préférence 4, en présence d'une aldolase sur un substrat de départ, pour obtenir le composé correspondant au substrat de départ ayant subi n réactions d'aldolisation, [0063] comportant une première étape d'aldolisation sur un substrat de départ en présence d'une aldolase pour obtenir le composé correspondant au substrat de départ ayant subi 1 réaction d'aldolisation, [0064] suivie d'une deuxième étape d'aldolisation sur le susdit composé correspondant au substrat de départ ayant subi 1 réaction d'aldolisation pour obtenir le composé correspondant au substrat de départ ayant subi 2 réactions d'aldolisation, [0065] suivie d'une (i)ième étape d'aldolisation sur le susdit composé correspondant au substrat de départ ayant subi (i-1) réactions d'aldolisation pour obtenir le composé correspondant au substrat de départ ayant subi (i) réactions d'aldolisation, i étant un entier variant de 3 à (n-1), [0066] suivie d'une dernière étape d'aldolisation sur le susdit composé correspondant au substrat de départ ayant subi (n-1) réactions d'aldolisation pour obtenir le composé correspondant au substrat de départ ayant subi n réactions d'aldolisation. [0067] Selon un mode de réalisation particulier, la présente invention concerne le procédé, tel que défini précédemment, comportant trois, quatre ou cinq aldolisations successives. [0068] Selon un mode de réalisation particulier, la présente invention concerne le procédé, tel que défini précédemment, dans lequel le substrat répond à l'une des formules (I) ou (II) suivantes [0069] [Chem.11] H JI (I) [0070] le groupement phosphate pouvant être sous une forme salifiée, [0071] dans laquelle R = 0 ou S ; [0072] [Chem.12] R1 R- H :cf)7,PC) (II) [0073] le groupement phosphate pouvant être sous une forme salifiée, [0074] dans laquelle R1 et/ou R2 = H, Alkyle en CI à C6, Halogène, SH, S-Alkyle en CI à C6, 0-Alkyle en C1 à C6, OCO-Alkyle en C1 à C6, SCO-Alkyle en CI à C6, SCS-Alkyle en C1 à C6, N-Alkylc, en CI à C6, NII-Alkylc en C1 à C6. NHCO-Alkyle en CI à C6, NO2, Cycloalkyle en C-; à C6. S-Cycloalkylc en C-; à C6, 0-Cycloalkyle en C3 à C6. °CO- 8 Cycloalkylc en C3 à C. SCO-Cycloalkyle en C3 à C. SCS-Cycloalkyle en C3 à G, NCycloalkyle2 en C3 à C6, N-Alkylcycloalkyle en C3 à C6, NH-Cycloalkylc en C3 à C6, NHCO-Cycloalkylc en C3 à C6, N-Alkylcycloalkyle en C3 à C6, [0075] R, et R2pouvant former un cycle. [0076] Selon un mode de réalisation particulier, la présente invention concerne le procédé, tel que défini précédemment, dans lequel le substrat de départ est de formule (II) [0077] dans laquelle R, et/ou R2 = H, Alkyle en CI à C, Halogène, SH, S-Alkyle en CI à G, 0-Alkyle en C, à C6, OCO-Alkyle en C1 à G, SCO-Alkylc en CI à C, SCS-Alkyle en C, à C6, N-Alkylen en CI à C6, NH-Alkyle en C, à G, NHCO-Alkyle en CI à C6, NO2, [0078] le groupement phosphate pouvant être sous une forme salifiée. [0079] Selon un mode de réalisation particulier, la présente invention concerne le procédé, tel que défini précédemment, dans lequel le substrat de départ est de formule (II) [0080] dans laquelle R, et/ou R2 = Alkyle en C, à G, 5-Alkyle en CI à C6, 0-Alkyle en C, à C6, NH-Alkyle en CI à CG, SCO-Alkyle en CI à C6, SCS-Alkyle en CI à C6, N-Alkyle, en CI à C6, NH-Alkyle en CI à C6, NHCO-Alkyle en CI à C6, [0081] RI et R2 pouvant former un cycle, [0082] le groupement phosphate pouvant être sous une forme salifiée, [0083] Selon un mode de réalisation particulier, la présente invention concerne le procédé, tel que défini précédemment, dans lequel le substrat de départ répond à la formule (II) [0084] dans laquelle RI et/ou R2 = Cycloalkyle en C3 à C6, 0-Cycloalkyle en C, à C6, 5- Cycloalkyle en C3 à C6, OCO-Cycloalkyle en C3 à C6, SCO-Cycloalkyle en C3 à C6, SCS-Cycloalkyle en C3 à CG, N-Cycloalkyle2 en C3 à C6, NH-Cycloalkyle en C3 à C6, N-Alkylcycloalkyle en C3 à C6, NHCO-Cycloalkyle en C3 à C6, [0085] le groupement phosphate pouvant être sous une forme salifiée. [0086] Selon un mode de réalisation particulier, la présente invention concerne le procédé, tel que défini précédemment, dans lequel le substrat de départ est le HPP de formule (III) [0087] [Chem.13] 0 H (III) [0088] le groupement phosphate pouvant être sous une forme salifiée, notamment sous la forme d'un di-sel de sodium de formule (VI) [0089] [Chem.14] 0 N a20?P0 (VI). [0090] Selon un mode de réalisation particulier, la présente invention concerne le procédé, 9 tel que défini précédemment, dans lequel l'aldolase est choisie parmi les aldolases ayant comme substrat le glycéraldéhyde-3-phosphate (03P) de formule (IV) [0091] [Chem.] 5] OH H20 (IV) 100921 le groupement phosphate pouvant être sous une forme salifiée, notamment sous la forme d'un di-sel de sodium de formule (V) [0093] [Chem.16] Na 3P (V). [0094] Selon un mode de réalisation particulier, la présente invention concerne le procédé, tel que défini précédemment, mis en oeuvre à une température de 0 à 40 °C, en particulier de 0 à 10°C, de 10 à 20°C, de 20 à 30 °C, de 30 à 40°C, pour une durée allant d'une réaction instantanée à 2 semaines, en particulier de 0 à 1 minute, de 2 à 5 minutes, de 5 à 10 minutes, de 10 à 30 minutes, de 30 minutes à 1 heure , de 1 à 2 heures, de 2 à 5 heures, de 5 à 10 heures, de 10 à 24 heures, d'I à 2 jours, de 2 à 5 jours, de 5 à 10 jours, de 10 jours à 2 semaines. [0095] Selon un mode de réalisation particulier, la présente invention concerne le procédé, tel que défini précédemment, dans lequel le composé correspondant au produit d'aldolisations répond à l'une des formules suivantes sous leurs formes linéaire, hémiacétale, acétalc, hémicétale ou cétalc, [0096] [Chem. 1 T1 o Ua.t.O.,P0 ON O , , ' M C.%?1 [0097] Par ailleurs, au-delà de l'utilisation d'une aldolasc dans la réalisation d'aldol isations multiples successives et du procédé correspondant, l'invention porte également sur les produits obtenus par ces réactions d'aldolisations multiples. [0098] Selon un mode de réalisation particulier, la présente invention concerne le procédé, tel que défini précédemment, dans lequel les réactions d'aldol isations multiples suc- cessives ont lieu dans un milieu réactionnel comprenant de l'eau. [0099] Selon un mode de réalisation particulier, la présente invention concerne le procédé, tel que défini précédemment, conduisant à obtenir un mélange de composés correspondant au substrat de départ ayant subi un nombre d'aldolisations différent, ce nombre pouvant être supérieur ou égal à 1. [0100] Un des avantages du procédé de l'invention est qu'il n'entraîne pas l'inactivation de l'enzyme après la réaction d'aldolisation. Celle-ci peut être réutilisée pour catalyser d'autres réactions d'aldolisation. [0101] Cet avantage permet d'envisager d'utiliser le procédé de l'invention sous la forme d'un procédé en continu comportant l'enzyme immobilisée qui pourrait être industrialisable. [0102] Un troisième objet de la présente invention est un composé polyhydroxylé répondant à l'une des formules suivantes sous leurs formes linéaire, hémiacétalc acétalc, hé- micétale ou cétale : [0103] [Chem.18] o [0104] Les produits obtenus par les réactions d'aldolisations multiples précédemment décrites peuvent notamment être utilisés comme médicaments ou pour la préparation de médicaments. [0105] Les produits précédemment décrits obtenus par les réactions d'aldolisations multiples de l'invention peuvent également être engagés dans une réaction de déphosphorylation conduisant par exemple aux produits suivants : [0106] [Chem.19] o (3.H &ti OF Oii [0107] Selon un mode dc réalisation particulier, la présente invention concerne un composé o t3H 11 obtenu par des réactions d'aldolisations multiples, tel que défini précédemment, pour son utilisation comme médicament, ou comme intermédiaire de synthèse dans la préparation de principes actifs anti-cholestérol, anticancéreux, anti-ostéoporose, antibiotiques, de produits antifongiques ou d'édulcorants. Exemples : [0108] Les réactifs suivants ont été achetés chez Sigma-Aldrich : dihydroxyacétonc (DHA), acétaldéhyde, chlorure de cobalt hexahydrate, NADH, a-glycérophosphate déshydrogénase du muscle de lapin, glycylglycine. [0109] L'isopropyl-ri-D-thiogalactoside (IPTG) a été acheté chez Alexis Biochemicals. [0110] La DHAP (Dihydroxyacétone phosphate) a été préparée à partir dc la dihy- droxyacétone selon la procédure précédemment publiée (Adv. Synth. Ca/a1.2012, 354, 1725-1730). [0111] Les mesures d'activité et le suivi cinétique des réactions enzymatiques ont été réalisés sur un spectrophotomètre Lambda 25 de chez Perkin Elmer à 340 nni dans des cuves en polystyrène de 1 mL. [0112] Les spectres de RMN (Résonance Magnétique Nucléaire) ont été mesurés dans l'eau deutérée (Of)) sur un spectromètre Brukcr AC-400, opérant à 400 MHz pour les spectres 'H et 100 MHz pour les spectres "C. Les déplacements chimiques (à) sont décrits en ppm par rapport au signal du TMS. Les constantes de couplage sont données en Hertz. [0113] Les spectres de masse en ionisation par électrospray (ESI-MS) et haute résolution (HR-MS) ont été enregistrés sur un micro Orbitrap Q-Exactive (70000 V) avec une niasse interne (FLP04) et une masse externe (Leu-enképhaline). Exemple 1 : Production des enzymes [01 14] Exemple 1-1: criblage des DERA dans les réactions d'aldolisation [0115] 124 DERA se sont révélées capables de réaliser des multi-additions dans des conditions non optimisées (Tableau I). Ceci a été mis en évidence par un criblage LC/ MS des lysats d'une collection de DERA issues de la biodiversité en présence del-1PP et d'acétaldéhyde. Une DERA capable de faire une quadruple addition (Uniprot id P0A6L0) a été sélectionnée. [0116] 11) [Tableaux1 ] Uniprot ID mono-a ddition hi-add ition tri-ad dition quadri -additi on cinq-a dditio n six-ad dition Genome P0A6L0 N/A oui oui oui oui oui DERA A. coli (strain KI2) AOLS D N/A oui oui N/A N/A N/A Acidothermus cellulolyticus (strain ATCC 5 43068/ 1113) 1351EH6 N/A oui oui oui N/A N/A Aciduliprofundum boonei (strain DSM 19572 /T469) COWOV 9 N/A oui oui oui oui N/A Actinomyces coleocanis DSM 15436 COW 10 oui oui oui oui N/A N/A Actinotnyces coleocanis DSM 15436 6 AOKGV 6 N/A oui oui N/A N/A N/A Aeromonas hydrophila subsp. hydrophila (strain ATCC 7966 / NCIB 9240) BOMY Y8 N/A oui oui oui N/A N/A Alistipes putredinis DSM 17216 A8MH1 8 N/A oui N/A N/A N/A N/A Alkaliphilus oremlandii (strain OhILAs) B6WB7 0 N/A oui N/A N/A N/A N/A Anaerococcus hydrogenalis DSM 7454 C7RF30 N/A oui N/A N/A N/A N/A Anaerococcus prevotii (strain ATCC 9321 / DSM 20548 / JCM 6508 / PCI) C7REE 6 N/A oui oui oui N/A N/A Anaerococcus prevotii (strain ATCC 9321 / DSM 20548 / JCM 6508 / PCI) B 1 C9V 1 N/A oui N/A N/A N/A N/A Anaerofustis stercorihominis DSM 17244 BOM A N/A oui oui N/A N/A N/A Anaerostipes caccae DSM 13 A8 14662 BOMEI 3 N/A oui oui oui N/A N/A Anaerostipes caccae DSM 14662 BOMET N/A oui oui oui N/A N/A Anaerostipes caccae DSM 14662 2 BOPHA N/A oui oui N/A N/A N/A Anaerotruncus colihotninis DSM 17241 1 B7GM NI N/A oui oui oui N/A N/A Anoxybacillus flavithermus (strain DSM 21510 /WKI) D7 B.I Y 9 N/A oui oui oui N/A N/A Arcanohacteritun haemolytictan (strain ATCC 9345 / DSM 20595 / NBRC 15585 / NCTC 8452 / 11018) El VTU 5 N/A oui oui oui N/A N/A A rthrobacter arilaitensis (strain DSM 16368 / CIP 108037 / JCM /3566/ Re117) B8HFF N/A oui oui N/A N/A N/A Arthrobacter chlorophenolieus (strain A6 / ATCC 700700 / DSM 12829 / JCM 12360) 3 C8W8Y N/A oui oui N/A N/A N/A Atopobium parvulum (strain ATCC 33793 / DSM 20469 / JCM 10300 / VPI 0546) 2 E6TW3 oui oui oui oui N/A N/A Bacillus celltdosilyticus (strain ATCC 21833 / DSM 2522 / PERM P-1141 / JCM 9156 IN-4) 3 Q81EY 8 N/A oui oui oui N/A N/A Bacillus cereus (strain ATCC 14579 / DSM 31) D5DGD 3 N/A oui oui oui N/A N/A Bacillus megateriurn (strain DSM 319) 14 D6XYX 2 N/A oui oui N/A N/A N/A Bacillus selenitireducens (strain ATCC 700615/ DSM 15326 / MLS10) E1X340 N/A oui oui oui N/A N/A Bacteriovorax marintts (strain ATCC BAA-682 / DSM 15412 / SJ) BONSF 0 N/A oui oui oui N/A N/A Bacteroides stercoris ATCC 43183 COCN/ A6 N/A oui oui oui N/A N/A Blautia hydrogenotrophica DSM 10507 D4RYH 7 N/A oui oui N/A N/A N/A Butyrivibrio crossolus DSM 2876 Q3ABV 0 oui oui oui oui Carboxydothennus hydrogenoformans (strain Z2901 / DSM 6008) FlISPI oui oui oui oui N/A oui Cellulosilytictun letttocellum (strain ATCC 49066/ aSiVI 5427 / NCIMB I 1756 / RHM5) C7PV91 N/A oui oui N/A N/A N/A Chitinophaga pinensis (strain ATCC 43595 / DSM 2588 / NCIB 11800/ UQM 2034) B805H 4 N/A oui oui N/A N/A N/A Chloroflexus aggregans (strain MD-66 / DSM 9485) B3QZ0 0 N/A oui oui N/A N/A N/A Chloroherpeton thalassitun (strain ATCC 35110/ GB-78) Q7NRS 9 N/A oui oui oui N/A N/A Chromobacterium violaceum (strain ATCC 12472 / DSM 30191 / JCM 1249 / NBRC 12614/ NCIMB 9131 / NCTC 9757) BORDJ3 N/A oui oui oui N/A N/A Clavibacter michiganensis subsp. sepedonicus (strain ATCC 33113 / JCM 9667) COCZD 0 N/A oui oui oui N/A N/A Clostridium asparag Orme DSM 15981 COCZB N/A oui oui N/A N/A N/A Clostridium asparagifortne DSM 15981 7 COD4T N/A oui oui oui N/A N/A Clostridiutn asparagifortne DSM 15981 2 A8RNT N/A oui oui N/A N/A N/A Clostridiutn bolleae ATCC MA-613 5 A8 RS U N/A oui oui oui N/A N/A Clostridium bolteae ATCC MA-613 8 A 8S3 1 9 N/A oui oui oui N/A N/A Clostridiutn bolteae ATCC MA -613 B819D0 N/A oui oui oui N/A N/A Clostriditun cellulolyticum (strain ATCC 35319 / DSM 5812 / JCM 6584 / H10) D9SKJ3 N/A oui oui N/A N/A N/A Clostridium cellulovorans (strain ATCC 35296 / DSM 3052 / OCM 3 / 743B) G8LTX N/A oui oui oui Clostridium clariflavum (strain DSM 19732 / NBRC 101661 / EBR45) 3 D3A9Q N/A oui oui N/A N/A N/A Clostridium hathewayi DSM 13479 6 D3AHT 8 N/A oui oui N/A N/A N/A Clostridium hathewayi DSM 13479 D3AQA 5 N/A oui oui oui N/A N/A Clostridnun hathewayi DSM 13479 COC305 N/A oui oui oui N/A N/A Clostridium hylemonae DSM 15053 16 COC3B 7 N/A oui oui N/A N/A N/A Clostridium hylemonae DSM 15053 A7VQ0 7 N/A oui oui oui N/A N/A Clostridium leptum DSM 753 A7VSD 0 N/A oui oui oui N/A N/A Clostridium leptunt DSM 753 D8G114 N/A oui N/A N/A N/A N/A Clostridiutn ljutzgdahlii (strain ATCC 55383 / DSM 13528 / PETC) A9KKG 9 N/A oui oui oui N/A N/A Clostridiutn phytofermentons (strain ATCC 700394 / DSM 18823 / ISDg) D9R027 oui oui oui oui N/A N/A Clostridium sacchorolyticum (strain ATCC 35040 / DSM 2544 / NRCC 2533 / WM1) E3PT30 N/A N/A oui oui N/A N/A Clostridiutn sticklandii (strain ATCC 12662 / DSM 519 /JCM 1433/ NCIB 10654) A4A8W 3 N/A N/A oui N/A N/A N/A Con gregibacter liwralis KT71 B5Y7V 3 oui N/A oui oui N/A N/A Coprothennobacter pro-teolyticus (entai ATCC 35245 / DSM 5265 / BT) B5Y7V 3 N/A oui oui N/A N/A N/A Coprothermobacter pro-teolyticus (strain ATCC 35245 / DSM 5265 / BT) C3PI20 N/A oui oui oui N/A N/A Corvnebacterium auritnucosum (strain ATCC 700975 /DSM 44827/ CN-1) C8RUX 1 N/A oui oui N/A N/A N/A Corvnebacterium jeikeium ATCC 43734 17 C4LJX4 N/A oui oui N/A N/A N/A Corvnebacterium kroppenstedtii (strain DSM 44385 / CCUG 35717) F6CHK 8 N/A oui oui oui N/A N/A Desullatomaculum kuznetsovii (strain DSM 6115 / VKM B-1805 / 17) C9LPE9 N/A oui oui N/A N/A N/A Dialister invisus DSM 15470 COX8W oui oui oui oui N/A N/A Enterococcus faecalis TX0104 3 B7CBX N/A oui N/A N/A N/A N/A Euhacteritun informe DSM 3989 4 A8RFU N/A oui oui N/A N/A N/A Eubacteriwn dolichum DSM 399/ 5 B I Y KT N/A oui oui oui N/A N/A Exiguohacterium sibiricum (strain DSM 17290 /JCM 7 13490 / 255-15) BOSON1 N/A oui oui N/A N/A N/A Finegoldia magna (strain ATCC 29328) A5FIC8 oui oui oui N/A N/A N/A Flavobacterium johnsoniae (strain ATCC 17061 / DSM 2064 / UW101) A6H1F N/A oui oui N/A N/A N/A Flavobacterium psychrophilum (strain JIP02/86 / ATCC 49511) 6 DOL2X N/A oui oui N/A N/A N/A Gordonia bronchialis (strain ATCC 25592 / DSM 43247 / JCM 3198/ NCTC 10667) 8 P44430 N/A oui oui N/A N/A N/A Haemophilus influenwe (strain ATCC 51907/ DSM 11121 / KW20 / Rd) E3DLZ 8 N/A N/A oui N/A N/A N/A Halanaerobium Praevalens (strain ATCC 18 33744 / DSM 2228 / GSL) E3DQ6 N/A oui oui N/A N/A N/A Halanaerobium 7 praevalens (strain ATCC 33744 / DSM 2228 / GSL) E1V588 N/A oui oui oui N/A N/A Halomonas elongata (strain ATCC 33173 / DSM 2581 / NBRC 15536 / NCIMB 2198 / 1H9) B8CX10 N/A oui oui N/A N/A N/A Hcdothermothrix orenii (strain H 168 / OCM 544 / DSM 9562) BOT AF N/A oui oui oui N/A N/A Heliolmeterium modes-ticaldum (strain ATCC 51547 /Icel) 2 B9 Y B2 1 N/A oui oui oui N/A N/A Holdematzia filifonnis DSM 12042 H1P040 N/A oui oui N/A N/A N/A Holopizaga foetida DSM 6591 E3H811 N/A oui oui N/A N/A N/A Byobacter polytropus (strain DSM 2926 / CuHBul ) B20G3 6 N/A oui oui N/A N/A N/A Kocuria rhizophila (strain ATCC 9341 / DSM 348/ NBRC 103217 / DC2201) C5CFG N/A oui oui N/A N/A N/A Kosmotoga olearia (strain TBF 19.5.1) 8 AONS7 N/A oui oui oui N/A N/A Labrenzia aggregata IAM 12614 3 COWZ I 1 N/A oui oui N/A N/A N/A Lactobacillus fertnentum ATCC 14931 A5VHQ N/A oui N/A N/A N/A N/A Lactobacillus reuteri (strain DSM 20016) 9 D8KI19 N/A N/A N/A oui N/A N/A Lactococcus lactis subsp. 19 cretnoris (strain NZ9000) C7N8Y N/A oui N/A N/A N/A N/A Leptotrichia buccalis (strain ATCC 14201 / DSM 1135 / JCM 12969/ NCTC 10249) 8 B1HTK N/A oui oui oui N/A N/A Lysinibacillus sphaericus (strain C3-41) 8 E4TMX N/A oui oui N/A N/A N/A Mari virga tractuosa (strain ATCC 23168/ DSM 4126 / NBRC 15989/ NC1MB 1408 /VKM B1430 /H-43) 4 C6L1B8 N/A oui oui oui N/A N/A Marvitzbryatztia formatexigens DSM 14469 D7BDIO N/A oui oui N/A N/A N/A Meiothermus silvatzus (strain ATCC 700542 / DSM 9946/ V1-R2) D3DYY N/A oui N/A N/A N/A N/A Methanobrevibacter ru-minantiutn (strain ATCC 35063 / aSiVI 1093 / JCM 13430/M1) 5 C9KLB 4 N/A oui oui oui N/A N/A Mitsuokella multacida DSM 20544 G2PMV N/A oui oui N/A N/A N/A Muricauda ruestringensis (strain DSM 13258 / LMG 19739 / B1) 9 AOQW W6 N/A oui oui N/A N/A N/A Mycobacteritun smegmatis (strain ATCC 700084 / mc(2)155) ElQXS N/A oui oui oui oui N/A Olsenella uli (strain ATCC 49627 / DSM 7084 / CIP 109912 / JCM 12494/ VPI D76D-27C) 9 B7B6E0 N/A oui oui N/A N/A N/A Parabacte roides johnsonii DSM 18315 A9BEN 0 N/A oui oui N/A N/A N/A Petrotoga mobilis (strain DSM 10674 / SJ95) D2QX2 5 N/A oui oui N/A N/A N/A Pirellula staleyi (strain ATCC 27377 / DSM 6068 / ICPB 4128) D 1PG7 0 N/A oui oui oui N/A N/A Prevotella copri DSM 18205 Q6 A 655 N/A oui oui N/A N/A N/A Propiotzibacteriutn acnes (strain KPA171202 / DSM 16379) D4BZH oui N/A oui N/A N/A N/A Pro videncia reugeri DSM 1131 8 Q2K DR oui oui oui oui N/A N/A Rhizobium etli (strain CFN 42 /ATCC 51251) 9 Q2 R RZ N/A oui oui N/A N/A N/A Rhodospirillum rubrutn (strain ATCC I 1170 / NCIB 8255) 2 DOMHJ 1 N/A oui oui N/A N/A N/A Rhodothennus marinus (strain ATCC 43812 / DSM 4252 / R-10) A7NMT 7 N/A oui oui N/A N/A N/A Roseiflexus castenholzii (strain DSM 13941 / HLM) A3QGT N/A oui oui oui N/A N/A Shewanella loihica (strain ATCC BAA-1088 / PV-4) 3 H1NOL 9 N/A oui N/A N/A N/A N/A Singulisphaera acidiphila DSM 18658 F8F1L4 N/A oui oui oui N/A N/A Spirochaeta caldaria (strain ATCC 51460 / DSM 7334 1H]) E1R9R0 N/A oui oui oui N/A N/A Spirochaeta smaragdinae (strain DSM 11293 / JCM 15392 / SEBR 4228) Q8CNH 7 N/A oui N/A N/A N/A N/A Staphylococcus epidermidis (strain ATCC 21 12228) Dl AXG N/A oui N/A N/A N/A N/A Streplobacillus motu-lermis (strain ATCC 14647 / DSM 12112 / NCTC 10651 /990]) 3 Q8E2U N/A oui oui oui N/A N/A Streptococens agalactiae serotype III (strain NEM316) 1 El M46 5 N/A oui oui oui N/A N/A Strepweoecus mitis NCTC 12261 Dl PP71 N/A oui oui oui N/A N/A Subdoligranulum variabile DSM 15176 FOS V D N/A oui oui oui N/A N/A Syntrophobotulus glycolicus (strain DSM 8271 / FIGlyR) 2 Dl B7V 1 N/A oui oui N/A N/A N/A Thermanaerovibrio acidamitiovoratis (strain ATCC 49978 / DSM 6589 / Stt883) D9TPN 8 N/A oui oui N/A N/A N/A Thennounaerobacterium thennosaecharolyticum (strain ATCC 7956 / DSM 571 / NCIB 9385 / NCA 3814) A8F4C7 N/A oui N/A N/A N/A N/A Thermowga !enjugue (strain ATCC BAA-301 / DSM 14385 / TMO) D2C3N 0 N/A oui oui oui N/A N/A Thermutoga naphthophila (strain ATCC BAA-489 / DSM 13996 / JCM 10882/ RKU-10) B9K8N 5 N/A oui N/A N/A N/A N/A Thermotoga neapolitana (strain ATCC 49049 / DSM 4359 / NS-E) C4LAZ oui oui oui oui N/A N/A Tohnnonas auensis (strain 1 DSM 9187 / TA4) Dl BL3 4 NIA oui oui NIA NIA N/A Veillonella parvula (strain ATCC 10790 / DSM 2008 / JCM 12972 / Te3) [0117] Tableau 1 : Alclolisations avec des DERA issues de la biodiversité 10118] Exemple 1-2 : Production et purification de RhuA Bthet et DERA 10119] Les différentes protéines impliquées je de Bactervides theMiotaomieron (RhuA Uniprot Id Q8A1A0), et de E. col( (P0A6L0) ont été surexprimées dans E. coli et purifiées. 10120] La souche E. col( contenant le plasmide avec le gène d'intérêt a été mise en culture à l'échelle des 200 mL dans Luria-Bertani (LB) en présence d'ampicilline à 37°C sous agitation jusqu'à atteindre une DO de 0,5 mesurée par spectrophotométrie à 600 nm. L'expression des aldolases a été induite avec l'IPTG (isopropyl 13- D-1-thiogalactopyranoside) (0,5 mM) à une température de 30°C pendant 12h. Les cellules ont été recueillies par centrifugation, lavée deux fois et re-suspendues clans un tampon phosphate 50 mM pH 8 contenant 10 mM d'imidazole. Les cellules en solution ont été cassées par sonication à 4°C selon le programme suivant : 10 s d'ultra-sons alternés par 15 s de repos pendant 25 min. Le lysat obtenu a été centrifugé à 4000 tr/ min pendant 15 min et le surnageant contenant la protéine d'intérêt a été récupéré. Les protéines ont ensuite été purifiées par chromatographie d'affinité IMAC (lmmobilized Metal Ion Affinity Chromatography) sur une colonne Ni-NTA-agarose (résine d'aearose chargée avec un composé nickel-acide nitriloacetique) de diamètre 1,5 cm et un volume de phase stationnaire de 5 mL La résine a d'abord été lavée abondamment par de l'eau. Le lysat a été déposé sur la résine et rincé avec un tampon phosphate 50 mM pH 8 contenant 20 mM d'imidazole pour éliminer les protéines non retenues. La protéine d'intérêt a été éluée avec un tampon phosphate 50 mM pH 8 contenant 250 mM d' imidazole. Une dialyse contre de l'eau a été réalisée pour retirer tout sous-produit provenant du tampon avant lyophilisation. [0121] Exemple 1-3 : Tests d'activité pour RhuA BU t ate [0122] L'activité de RhuA Bme, a été déterminée selon la procédure précédemment publiée (V. Laurent, E. Darii, A. Aujon, M. Debacker, J.-L. Petit, V. Hélainc, T. Liptaj, M. Breza, A. Mariage, L. Nauton, et al., Atzgew. Chem. Int. Ed.2018, 57, 5467-5471). [0123] L'activité DERA ,'/, a été confirmée selon le protocole de rétroaldolisation suivant : [0124] dans une cuve de spectrophotomètre sont introduit : [0125] 960 pL de tampon GlyGly (50 mM, pH 7,5) 20 pL NADH (12 mg.mL-,) 10 pL D-désoxyribose-5-phosphate (170 mM) 23 2 pL GPDH/TPI (soit 26 U TPI et 3U GDPH) 10 pL de DERA à tester (1 mg.mL1) [0126] La disparition du NADU est suivie au cours du temps par spectrophotométrie par mesure de la DO à 340 nm. Une mole de NADU disparue par minute correspond à une mole de D-désoxyribose-5-phosphate disparue par minute. [0127] Exemple 2 : Synthèse du I-IPP (hydroxypyruvaldéhyde phosphate) (1) [0128] 15 mg d'aldolase (RhuA Erne, ; Uniprot Id Q8A1A0) ont été additionnés à une solution aqueuse d'un volume de 5 mL contenant 3 mL de DHAP (provenant d'une solution mère à 66 mM dans l'eau) et 80 pL de CoC12 (provenant d'une solution à 50 mM dans l'eau). Le pH a été ajusté à 7.5 avant l'ajout de RhuA. Le mélange réactionnel a été agité sous atmosphère d'oxygène à température ambiante pendant 3h jusqu'à disparition complète de la DHAP. La consommation de la DHAP a été suivie par spectrophotométrie. [0129] La protéine (RhuA /m'et ; Uniprot Id Q8A1A0) a ensuite été éliminée en utilisant une chromatographie d'affinité sur ions métalliques immobilisés (IMAC) et l'éluât a été lyophilisé. 1.2 mL d'eau ont ensuite été ajoutés au résidu sec et cc mélange a été centrifugé pendant 10 minutes à 14000 rpm. Le précipité de l'enzyme restante a été jeté alors que le surnageant a été fractionné en quatre portions de 300 pL chacune. Chaque fraction a été mélangée avec 1.5 mL d'éthanol, la suspension obtenue centrifugée et le surnageant enlevé. Cette opération est répétée quatre fois. Les solides combinés sont alors lavés trois fois avec 1.8 mL d'éthanol. Le solide est solubilisé dans 1 int d'eau et la fraction non-soluble est éliminée par centrifugation. Le surnageant est alors évaporé deux fois sous vide pour éliminer les traces de solvant, et enfin lyophilisé [0130] 83 mg de HPP (1) ont été obtenus. En utilisant le DMF comme référence interne, une pureté de 30% a été déterminée, le rendement obtenu est de 47%. [0131] Dans D20 seule la forme hydratée a été observée : RMN 'H (400 MHz, D20) ô 5.01 (s, 1H, 1), 3.98 (d, J= 6.4 Hz, 2H, 3). RMN 'C NMR (101 MHz, DnO) h 94.65 (d, J = 6.0 Hz, 2), 90.07 (1) , 66.46 (d, J = 3.6 Hz, 3). HRMS ESI-: rn/z calculée pour [C3I-1406 P] = 166.9751; mesurée 166.9741. [0132] [Chem.20] H OF0 '0,90:e4a2 01: [0133] Exemple 3 : Synthèses utilisant la DERA avec l'acétaldéhyde comme nu- cléophile [0134] [Chem.21] 24 .120.J"Ce CH (54 '1H -ÉjH [0135] Le HPP a été généré in situ en utilisant 3 mL de DHAP (provenant d'une solution mère à 66 mNI dans l'eau). La RhuA est dénaturée en diminuant le pH à 5. Après centrifugation, 10 équivalents d'acétaldéhyde puis 20 mg de DERA Eton ont été ajoutés dans le milieu réactionnel après avoir ajusté le pH à 7.5. Le milieu réactionnel a été agité pendant 3 heures. La disparition du HPP (environ 1 heure) a été suivie par spectrophotométrie. La DERA a été éliminée par précipitation résultant de l'acidification du milieu réactionnel, puis centrifugation. Après avoir augmenté le pH à 6.5, la solution a été chargée sur une colonne remplie d'une résine échangeusc anionique (Dowcx 1x8, bicarbonate form 200-400 Mcsh). Cette dernière a été lavée avec 4 volumes d'eau. Puis l'aldol a été élue avec 4 volumes d'une solution à 0.5 M dc NH4 HCO3. Les fractions positives sur CCM (NH4OH/Et0H 4/5) ont été évaporées plusieurs fois avec de l'eau pour éliminer le NI-I4HCO. [0136] 66 mg de produit ont été obtenus (86% de rendement). Dans l'eau, les deux formes a et [3 furanosiqucs sont obtenues dans les mêmes proportions : RMN 'H (500 MHz, D2 0) à 5.09 (dd, J = 10.2, 2.1 Hz, 2H, HI, H1'), 4.53 (q, J = 7.2 Hz, 1H, H7'), 4.48 (q, J = 7.2 Hz, 1H, H7), 4.37 (t, J = 6.3 Hz, 1H, H9), 4.31 (m, 2H, H3, H3'), 4.28 (m, 1H, H9'), 4.16 (m,1H, Hb11'), 4.06 - 3.96 (m, 2H, H5, H5'), 3.89 (m, 3H, Hall', Hall, Hbll), 2.23 - 2.06 (m, 2H, H8, H8'), 2.07 - 1.95 (m, 1H, H6a'), 1.93 (m, 2H, H2b, H2b'), 1.86 (m, 1H, Ha6), 1.76 (m, 1H, Hb6'), 1.71 (m, 2H, H4b, H4'b), 1.66 (m, 1H, H6b), 1.53 (m, 4H, H2a, H2'a, H4a, H4'a). [0137] RMN (101 MHz, D20) à 106.10 (d, J = 7.3 Hz, 10'), 102.80 (d, J = 9.3 Hz, 10), 91.89 (2C, 1, 1'), 77.47 (7'), 75.18 (9'), 74.10 (7), 71.06 (9), 68.53 (5'), 68.22 (5), 66.67 (1s, Il), 65.21 (ls, 11'), 64.77 (2C, 3, 3'), 41.98 (6'), 40.21 (6), 38.04 (2C, 2, 2'), 37.17 (8'), 36.65 (8), 36.56 (2C, 4, 4'). HRMS EST-: m/z calculée pour [CI,H200,0P]- = 343.0800; mesurée 343.0798. [Revendication 1] [Revendication 2] REVENDICATIONSUtilisation d'une aldolase, choisie parmi les dihydroxyacétone phosphate (DHAP) aldolases (fructose-1,6-bisphosphate aldolasc, rhamnulose-1-phosphate aldolasc, fuculose-l-phosphate aldolase, tagatose-1,6-bisphosphate aldolasc), les dihydroxyacétone (DHA) aldolases (fructose-6-phosphate aldolase), les acétaldéhyde aldolases (désoxyribose-5-phosphate aldolasc, DERA), les pyruvatc aldolases et les glycine aldolases, préférentiellement une DERA, dans la mise en oeuvre d'un procédé comportant n aldol isations successives, où n est un entier de 2 à 10, de préférence n égal à 3, 4 ou 5, sur un substrat de départ, défini comme le substrat nucléophile naturel utilisé par ladite aldolase pour obtenir le composé polyhydroxylé correspondant au substrat de départ ayant subi n réactions d' aldolisation. Utilisation, selon la revendication 1, dans laquelle le substrat de départ répond à l'une des formules (I) ou (II) suivantes : [Chem.22] [Revendication 3] (I) le groupement phosphate pouvant être sous une forme salifiée, dans laquelle R = 0 ou S ; [Chem.23] R] H203PC").'.'.,,,x (II) le groupement phosphate pouvant être sous une forme salifiée, dans laquelle RI et/ou R2 = H, Alkyle en C1 à C6, Halogène, SH, S-Alkyle en C1 à C6, 0-Alkyle en C1 à C6, OCO-Alkyle en CI à C6, SCOAlkyle en C1 à C6, SCS-Alkyle en C1 à C6, N-Alkyle, en CI à C6, NH-Alkyle en C1 à C6, NHCO-Alkyle en CI à C6, NO,, Cycloalkyle en C3 à C6, S-Cycloalkyle en C3 à C6. O-Cycloalkyle en C3 à C6, OCOCycloalkyle en C3 à C6, SCO-Cycloalkyle en C3 à C6, SCS-Cycloalkyle en C5 à C6, N-Cycloalkyle, en C3 à C6, N-Alkylcycloalkyle en C3 à C6, NH-Cycloalkyle en C3 à C6, NHCO-Cycloalkyle en C5 à C6, RI et R, pouvant former un cycle. Utilisation, selon l'une des revendications 1 à 2, dans laquelle l'aldolase est choisie parmi les aldolases ayant comme substrat le glycéraldéhyde- 26 3-phosphate (G3P) de formule (IV) [Chem.24] OH [Revendication 4] (IV) le groupement phosphate pouvant être sous une forme salifiée. Utilisation, selon l'une des revendications 1 à 3, dans laquelle le composé correspondant au produit d' aldolisations répond à l'une des formules suivantes sous leurs formes linéaire, hémiacétale, acétale, hémicétale ou cétale : [Chem.25] C4 5t CI [Revendication 5] Procédé comportant n aldolisations multiples successives, n étant un entier de 3 à 10, notamment 6, de préférence 4, en présence d'une aldolase choisie parmi les dihydroxyacétonc phosphate (DHAP) aldolascs (fructose-1,6-bisphosphate aldolase, rhamnulose-l-phosphate aldolase, fuculose-l-phosphate aldolase, tagatose-1,6-bisphosphate aldolase), les dihydroxyacétonc (DHA) aldolascs (fructose-6-phosphate aldolase), les acétaldéhyde aldolascs (désoxyribose-5-phosphate aldolase, DERA), les pyruvatc aldolascs et les glycine aldolascs, préférentiellement une DERA, sur un substrat de départ, défini comme le substrat nucléophile naturel utilisé par ladite aldolase, pour obtenir le composé correspondant au substrat de départ ayant subi n réactions d'aldolisation comportant une première étape d'aldolisation sur un substrat de départ en présence d'une aldolase pour obtenir le composé correspondant au substrat de départ ayant subi 1 réaction d'aldolisation. suivie d'une deuxième étape d'aldolisation sur le susdit composé correspondant au substrat de départ ayant subi 1 réaction d'aldolisation pour obtenir le composé correspondant au substrat de départ ayant subi 2 réactions d' aldolisation, 27 [Revendication 6] [Revendication 7] suivie d'une (i)ième étape d'aldolisation sur le susdit composé correspondant au substrat de départ ayant subi (i-1) réactions d'aldolisation pour obtenir le composé correspondant au substrat de départ ayant subi(i) réactions d'aldolisation, i étant un entier variant de 3 à (n-1), suivie d'une dernière étape d'aldolisation sur le susdit composé correspondant au substrat de départ ayant subi (n-1) réactions d'aldolisation pour obtenir le composé correspondant au substrat de départ ayant subi n réactions d'aldolisation. Procédé selon la revendication 5, dans lequel le substrat de départ répond à l'une des formules (I) ou (H) suivantes [Chem.26] 0 ft (I) le groupement phosphate pouvant être sous une forme salifiée, dans laquelle R = 0 ou S ; [Chem.27] R1 R H2 0 3P0 (H) le groupement phosphate pouvant être sous une forme salifiée, dans laquelle R1 et/ou R2 = H, Alkyle en C1 à C6, Halogène, SH, S-Alkyle en C1 à C6, 0-Alkyle en C1 à C6. OCO-Alkyle en CI à C6, SCOAlkyle en C1 à C6. SCS-Alkyle en C1 à C6, N-Alkyle, en C1 à C6, NH-Alkyle en C1 à C6. NHCO-Alkyle en C1 à C6, NOE, Cycloalkyle en C3 à C6. S-Cycloalkyle en C3 à C6. O-Cycloalkyle en C3 à C6, °COCycloalkyle en C3 à C6, SCO-Cycloalkyle en C3 à C6. SCS-Cycloalkyle en C3 à C6, N-Cycloalkyle2 en C3 à C6, N-Alkylcycloalkyle en Cs à C6, NH-Cycloalkyle en C3 à C6. NHCO-Cycloalkyle en C3 à C6, NAlkylcycloalkyle en Cs à C6/ RI et R, pouvant former un cycle. Procédé selon l'une des revendications 5 à 6, dans lequel le substrat de départ est le HPP de formule (HI) [Chem.281 (III) le groupement phosphate pouvant être sous une forme salifiée, 28 notamment sous la forme d'un di-sel de sodium de formule (VI) [Chem.29] Na "0 [Revendication 81 (VI). Procédé selon l'une des revendications 5 à 7, dans lequel l'aldolase est choisie parmi les aldolases ayant comme substrat le glycéraldéhyde3-phosphate (G3P) de formule (IV) [Chem.30] OH [Revendication 9] H 202F (IV) le groupement phosphate pouvant être sous une forme salifiée, notamment sous la forme d'un di-sel de sodium de formule (V) [Chem.31] OH Na -0-, (V). Procédé, selon l'une des revendications 5 à 8, dans lequel le composé correspondant au produit d'aldolisations répond à l'une des formules suivantes sous leurs formes linéaire, hémiacétale, acétale, hémicétale ou cétale : [Chem.32] [Revendication 10] Composé polyhydroxylé répondant à l'une des formules suivantes sous leurs formes linéaire, hémiacétale, acétalc, hémicétale ou cétalc : [Chcm.33] 29