FR 3100247 A1 20210305 FR 1909642 A 20190902 Description Titre de l'invention : Dérivé de phénazine et ses utilisations [0001] L'invention concerne des dérivés de phénazine et leurs utilisations, notamment leurs utilisations thérapeutiques. [0002] Dans le contexte du traitement des pathologies et notamment des tumeurs, de nouvelles molécules et de nouvelles approches sont en permanence développées et testées. [0003] En particulier, ces dernières années, la thérapie photodynamique a connu un essor en particulier pour le traitement des pathologies cutanées. Toutefois, les composés sensibilisants connus à ce jour ne présentent pas les meilleurs effets, et les taux d'échec sont assez grands. En outre, les longueurs d'ondes des lasers utilisés peuvent générer des effets indésirables et induire des lésions profondes des tissus exposés. [0004] Aussi, existe-t-il un besoin de fournir de nouveaux composés qui seraient efficaces pour ce type de thérapie non invasive. [0005] Une approche est d'utiliser des composés fluorescents capables de cibler spéci- fiquement les cellules d'intérêt et présentant des propriétés thérapeutiques sous activation. [0006] Or de tels composés sont rares. [0007] Certains dérivés de phénazine sont déjà connus. Divers composés ayant une telle structure de phénazine ont déjà été décrits chez Laursen Et al (chem Rev, 2004, 104 :1663), Beifuss Et al (dessus. Curr. Chem, 2005,77), Terech Et al (J Of Coll. Et entre. Sc, 2006 :633), Llusar Et al (Zeit. Fuer Anorg. Und Allge, chem, 2005, 631 : 2215; J Of Mat. Chem, 2003, 13 : 2505), Pozzo et al (Mol. Les cristaux et les Cristaux liquides Sc Et Tech, 2000, 344: 101; J Of Mat. Chem, 1998, 8 : 2575) et US 2004/065227. Toutefois, à la connaissance des inventeurs, ces composés n'ont jamais été proposés comme agents chimiothérapeutiques En outre, la demande de brevet W02011117830 décrit des composés dérivés de la phénazine, mais ici encore à la connaissance des inventeurs de tels composés n'ont pas de propriétés connues pour être utilisés en thérapie photodynamique. [0008] Aussi, il existe toujours un besoin de nouveaux composés, et l'invention vise à pallier cc manque. [0009] L'un des buts de l'invention est de fournir des composés utilisables en thérapie pho- todynamique qui soient efficaces, peu chers, faciles à produire. [0010] Un autre but de F invention est de proposer diverses utilisations thérapeutiques et diagnostiques de ces nouveaux composés. [0011] L'invention concerne un composé de formule I suivant : [0012] 2 [Chcm.1] (I), [0013] où, [0014] indépendamment l'un de le l'autre, Ri et R2 sont [0015] - soit un alkyle en Cl-C18, linéaire ou ramifié, saturé ou non, cyclique ou non, éven- tuellement substitué par un ou plusieurs groupe choisi parmi un groupe hydroxyl, un groupe amino, un groupe aminoalkyle, un groupe alkoxy en Ci-05, un alkyl en Cl-05, un peptide, un groupe pyridine, un groupe phosphine, un thiol, un C2 alcène, un groupe C2 alcyne et un halogène, ou un radical benzyle éventuellement substitué par un ou plusieurs radicaux choisi parmi un groupe hydroxyl, un groupe amino, un groupe aminoalkyl, un groupe C1-05 alkoxy, un groupe Cl- C5 alkyl, et un atome d'halogène, [0016] - soit des groupes (hétéro)aryles, éventuellement substitué par un ou plusieurs groupe choisi parmi un groupe hydroxyl, un groupe amino, un groupe amino alkyle, un groupe alkoxy en Cl-05, un alkyl en Ci-05, un peptide, un groupe pyridine, un groupe phosphine, un thiol, un C2 alcène, un groupe C2 alcyne et un halogène, or un radical benzyl éventuellement substitué par un ou plusieurs radicaux choisi parmi un groupe hydroxyl, un groupe amino, un groupe aminoalkyl, un groupe Ci-05 alkoxy, un groupe Cl- C5 alkyl, et un halogène, 10017] notamment R2 pouvant être un atome d'hydrogène, et 10018] indépendamment l'un de le l'autre, R3 et R4 sont un atome d'hydrogène FI ou cor- respondent à RI ou R2 susmentionnés, ou encore R3 et R4 sont Fun ou l'autre, ou les deux, un groupe fonctionnel carbonyle formant des fonctions amides incluant des peptides ou non, 10019] ou un sel ou un solvate de celui-ci, ou une forme protonée de celui-ci. 10020] L'invention repose sur la constatation surprenante faite par les inventeurs que les dérivés de phénatine susmentionnés possèdent des propriétés fluorescentes variables selon le degré de protonation pour des études in vitro et in vivo dans un objectif d'imagerie. Ces molécules sont également utilisables dans le cadre de thérapie photo-dynamique (PDT), à un et deux photons. 10021] Aussi, la présente invention décrit une famille de composés originaux, peu toxiques et particulièrement prometteuse pour l'imagerie a un et deux photons selon la cible visée. Leur synthèse est réalisée en peu d'étapes et à bas cout. L'intensité des marquages est remarquable, ce qui permet objectivement d'envisager une identification 3 plus précise des cibles cytoplasmiques. Les intenses foyers de fluorescence obtenus dans des régions perinucléaires pourraient notamment correspondre à la localisation de la sonde au niveau du réticulum endoplasmique. Ces composés permettent donc d'envisager une avancée cruciale dans le domaine de l'imagerie sélective, et de la thérapeutique photodynamique. [0022] Comme il sera démontré ci-après dans les exemples, ces composés ont permis de réaliser des études in vitro sur des cellules humaines cancéreuses connues pour être un bon modèle de xénogreffe, et il a été démontré que la thérapie photonique à un ou deux photons était efficace pour détruire de telles cellules. [0023] Selon la présente invention, les termes ci-dessous ont les significations suivantes : les termes mentionnés ici ayant des caractéristiques telles que par exemple Cl -C18 peuvent également être utilisés avec des nombres inférieurs d'atomes de carbone tels que Cl-C3 ou Cl-05. Si par exemple le terme C1-05 est utilisé, il signifie que la chaîne hydrocarbonée correspondante peut comprendre de 1 à 5 atomes de carbone. Si par exemple le terme C3-C8 est utilisé, il signifie que la chaîne ou le cycle hydrocarboné correspondant peut comprendre de 3 à 8 atomes de carbone. [0024] Un alkyl en Cl-C18 selon l'invention est un alkyl comprenant 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 ou 18 atomes de carbone. [0025] Par «alkyle», on entend un groupe aliphatique saturé, linéaire ou ramifié. On peut citer les exemples suivants : méthyle, éthyle, 1-propyle, 2-propyle, 1-butyle, 2-méthyl-l-propyle (également nommé i-Bu), 2-butyle (également nommé s-Bu), 2-méthy1-2-propyle (également nommé t-Bu), 1-pentyle (également nommé n-pentyle), 2-pentyle, 3-pentyle, 2-méthyl-2-butyle, 3-méthyl-2-butyle, 3-méthy1-1-butyle, 2-méthyl-l-butyle, 1-hexyl, 2-hexyl, 3-hexyl, 2-méthyl-2-pentyle, 3-méthyl-2-pentyle, 4-méthyl-2-pentyle, 3-méthyl-3-pentyle, 2-méthyl-3-pentyle, 2,3-diméthyl-2-butyle, 3,3-diméthyl-2-butyle, n-pentyle, n-hexyle, n-heptyle, H-octyle, n-nonyle, n-décyle, nundécyle, n-dodécyle, n-tridécyle, n-tétradécyle, n-pentadécyle, n-hexadécyle, nheptadécyle, n-octadécyle. L'alkyle préféré selon l'invention est le méthyle, l'éthyle, le 1-propyle, le 2-propyle, le 1-butyle, le 2-méthyl-l-propyle (également nommé i-Bu), 2-butyle (également nommé s-Bu), 2-méthyl-2-propyle (également nommé t-Bu), 1-pentyle (également nommé n-pentyle), 2-pentyle, 3-pentyle, le 2-méthyl-2-butyle, le 3-méthyl-2-butyle, le 3-méthy1-1-butyle, le 2-méthyl-l-butyle. [0026] Le terme « hydroxyl » correspond à un groupe alkyle-OH, le groupe alkyle étant tel que défini ci-dessus. [0027] Le terme « amino » correspond à une amine qui peut être, secondaire, tertiaire ou quaternaire. Par extension un « aminoalkyle » correspond à un alkyl substitué par une amine. [0028] Le terme «alcoxy» correspond à un groupe-O-alkyle, le groupe alkyle étant tel que défini ci-dessus. Les exemples suivants peuvent être cités : méthoxy (i.e. Cl alcoxy), éthoxy (i.c. C2 alcoxy), propoxy (i.c. C3 alcoxy), isopropoxy (i.e. C4 alcoxy). [0029] Le terme «atome d'halogène» correspond à un atonie de fluor, de chlore, de brome ou d'iode. Le chlore est un atome d'halogène préféré dans le cadre de la présente invention. [0030] Le ternie «atome d'halogène» correspond à un atome de fluor, de chlore, de brome ou d'iode. Le chlore et le fluor sont des atonies d'halogènes préférés dans le cadre de la présente invention. [0031] Le terme «aryle» utilisé ici signifie un groupe aromatique mono-ou poly-cyclique. Un exemple de groupe monocyclique peut être un phényle. [0032] Les composés de formule (I) possèdent des insaturations et peuvent ainsi se présenter sous leur forme tautomère. La présente invention concerne donc également les composés de formule (1) sous leur forme tautomère. [0033] Les composés de formule (I) peuvent se présenter sous la forme d'une base libre ou sous forme de sels d'addition avec des acides, qui font également partie de l'invention. [0034] Ces sels peuvent être préparés avec des acides pharmaccutiquement acceptables, niais aussi des sels avec d'autres acides, utiles par exemple pour la purification ou pour l'isolement des composés de formule (I), font également partie de l'invention. [0035] De manière avantageuse, l'invention concerne les composés susmentionnés où R1 et R2 sont, notamment indépendamment l'un de l'autre, des alkyles linéaires ou ramifiés saturés ou non, cyclique ou non, en C4-C10. [0036] Des exemples d'alkyl linéaires saturés sont les groupes butyl, pentyl, hexyl, heptyl, octyl, nonyl et decyl. [0037] Des exemples d'alkyl linéaires saturés ramifiés sont les groupes, isobutyle, sec-butyl, tert-butyl, isopentyl, néopentyl, tert-pentyl, 1-methyl isobutyl, 2,3-diméthylpentane, 2-méthylpropane, 2-méthylbutane, 2-méthylpentane, 2-éthylbutane, 3-méthylpropane, 3-méthylbutane, 3-méthylpentane [0038] De manière plus avantageuse, l'invention concerne le composé susmentionné, où la forme protonée du composé de formule I est choisie parmi les composés suivants : [0039] - le composé de formule la : [0040] [Chem.2] X-; (la), [0041] - le composé de formule Ib : [0042] [Chem.3] H N NH , HN N NH 1 2 14 2X-; (lb), et [0043] - le composé de formule Tc : [0044] [Chem.4] H I + N, HN 14 R R2 R 3X- ; (le), 100451 où X représente Cl, Br, OH, F, I, BF4 ou PF6ou tritluorométhanesulfate (Ott). 100461 Les composés de formule la sont les composés les plus avantageux selon l'invention. 100471 Aussi, avantageusement l'invention concerne un composé de formule la suivant : 100481 IChem.21 ----_,--- NR3 1 '--, I-IN '--, N 'NH 2 1 4 i R R R X ; (Ia), [0049] où X représente Cl, Br, OH, F, I, BF4 ou PF6ou trifluorométhanesulfate , et où [0050] indépendamment l'un de le l'autre, Ri et R2 sont [0051] - soit un alkyle en Cl-C18, linéaire ou ramifié, saturé ou non, cyclique ou non, éven- tuellement substitué par un ou plusieurs groupe choisi parmi un groupe hydroxyl, un groupe amino, un groupe aminoalkyle, un groupe alkoxy en Ci-05, un alkyl en Cl-05, un peptide, un groupe pyridine, un groupe phosphine, un thiol, un C2 alcène, un groupe C2 alcyne et un halogène, or un radical benzyle éventuellement substitué par un ou plusieurs radicaux choisi parmi un groupe hydroxyl, un groupe amino, un groupe aminoalkyl, un groupe Cl -05 alkoxy, un groupe Cl- C5 alkyl, et un atome d'halogène, 100521 - soit des groupes (hetero)aryles, éventuellement substitué par un ou plusieurs groupe NH 6 choisi parmi un groupe hydroxyl, un groupe amine), un groupe amino alkyle, un groupe alkoxy en C1-05, un alkyl en C1-05, un peptide, un groupe pyridine, un groupe phosphine, un thiol, un C2 alcène, un groupe C2 alcyne et un halogène, or un radical benzyl éventuellement substitué par un ou plusieurs radicaux choisi parmi un groupe hydroxyl, un groupe amino, un groupe aminoalkyl, un groupe C1-05 alkoxy, un groupe Cl- C5 alkyl, and un halogène, [0053] éventuellement R2 est un atome d'hydrogène, et [0054] indépendamment l'un de le l'autre, R3 et R4 sont un atome d'hydrogène H ou cor- respondent à RI ou R2 susmentionnés, ou encore R3 et R4 sont l'un ou l'autre, ou les deux, un groupe fonctionnel carbonyle formant des fonctions amides incluant des peptides ou non, [0055] ou un sel ou un solvate de celui-ci, ou une forme protonée de celui-ci. [0056] Des composés selon l'invention qui sont avantageux sont les suivants [0057] 7 [Tableaux 1 ] Composé de formule Où Rl est Où R2 est Où R3 est Où R4 est [Chem 2] ..', -----, - -. ---NP Pt ii .>. .----, NH. ' I 2 Ft octyl octyl octyl H octyl oct 1 octyl H H octyl octyl sert-butyl H tert-hutyl te rt-h utyl tort-butyl H nonyl nonyl nonyl H nonyl nonyl H H nonyl nonyl tert-butyl H decyl decyl décyl H decyl decyl H H decyl decyl sert-butyl H octyl Fi octyl H octyl H H H octyl H tert-butyl H tert-butyl H tert-butyl H nonyl H nonyl H nonyl H H H nonyl H sert-butyl H decyl H décyl H decyl H H H decyl H tert-butyl H 8 [Chem 2] octyl octyl octyl CI-C,8 --- -. -, -4".. ...--Nri i s A --- i -.. 1 13' Fis octyl octyl H CI-C18 octyl octyl tert-butyl CI-Cis iert-hutyl tert-butyl sert-butyl C1-C1 nonyl nonyl nonyl C1-C18 nonyl nonyl FI CI-Ci8 nonyl nonyl tert-butyl C1-C1 decyl decyl décyl C1-C18 decyl decyl H CI-C,8 decyl decyl sert-butyl CI-CI R octyl H octyl CI-C,R octyl H H CI-C18 octyl Fi tert-butyl C1-C1 fert-butyl F] sert-butyl C1-C1 nonyl H nonyl C1-C18 nonyl H H Cl-Ci8 nonyl H tert-butyl CI-CIR decyl H décyl CI-C,R decyl H H CI-C18 decyl H sert-butyl C1-C1 9 [Chem .,_.---c-z,-__ 1 + ..'----..'.'--N*c.'----%_----11-1R NH octyl octyl octyl H HN 3] +->---._ ',-;-----__ ----- I I , ---- _.---..' N r, W I - Fr octyl octyl H H octyl octyl led-butyl H lert-butyl teri-butyl sert-butyl H nonyl nonyl nonyl H nonyl nonyl FI H nonyl nonyl tert-butyl H decyl decyl décyl H decyl decyl H H decyl decyl led-butyl H octyl H octyl H octyl H H H octyl H tert-butyl H tert-butyl Fl sert-butyl H nonyl H nonyl H nonyl H H H nonyl H tert-butyl H decyl H décyl H decyl H H H decyl H led-butyl H [Chem .'---,:::_, 1 8. ..:..'--------___,,--N-:z8c,'---",--.11-1R 111-i octyl octyl octyl CI-C,8 EIN 3] ,---2--__ ,.-5:1---__ ------ I . THF t'EH Cell? reflux. 4h OC 0N Nnz ±NNH. H.D f12N.. POTC 5% Ft0H relu. 1 5 h Bac. 481.11( A B 8h [0147] ComposéA: A une solution de 1,5-difluoro-2,4-dinitrobenzène (DFNB) (m = 500 mg, 1,00 équiv.) dans de l'éthanol (v = 50 mL), ont été ajoutés du 1-Octylamine (y = 830 !IL, 2.05 équiv.) et de la N, N-diisopropyléthylamine (DIFFA) (y = 874 ML, 2,05 équiv.). La solution a été chauffée jusqu'à reflux pendant 1,5 h. Après refroidissement à température ambiante, le solide résultant en suspension a été isolé par filtration, rincé avec de l'EtOH et séché sous vide pour obtenir le compose A (m = 1.04 g, rendement quantitatif) sous une forme cristalline orange. [0148] NMR (250 MHz, CDCI 3 ): el 9.24 (s, 1H), 8.32 (br s, 2H), 5.65 (s, 1H), 3.27 (td, J = 7.0 Hz, J d = 5.3 Hz, 4H), 1.82-1.71 (m, 4H), 1.54-1.29 (m, 20H), 0.89 (t, J = 6.8 Hz, 6H). 13C NMR (63 MHz, CDC13): S 148.5, 129.5, 124.0, 90.0, 43.3, 31.7, 29.2, 29.1, 28.4, 27.1, 22.6, 14.0. ESI-MS: m/z 1M+H1+ 423.3 (100%), [M+Nal+ 445.3 (6%), [M+K]+ 461.3 (4%); [M-F11- 421.3 (100%). Analyse élémentaire pour C22I-138N404: 28 calculé. C 62.53, H 9.06, N 13.26, 0 15.15; trouvé C 62.58, H 9.19, N 13. 21 [0149] ComposéB: A une solution de composé A (ni = 1,03 g, 2,43 mmol, 1,0 équiv.) dans du THF (10 mL), du Boc2O (ni = 1,94 g, 8,89 mmol, 3,7 équiv.) et du 4-diméthylaminopyridine (DMAP) (ni = 50 mg, 0,41 mmol, 17%mol) ont été ajoutés. La solution a été chauffée à reflux pendant 4 h. Le solvant a été éliminé sous vide. Le produit brut a été purifié par chromatographie flash (silice F60, DCM 100) pour obtenir le composé B (ni = 1.52 g, 2.44 mmol, rendement quantitatif) sous la forme d'un solide jaune. [0150] r H NMR (250 MHz, CDCI 3 ): -Ody;enift MPEA 20 36 0.90-0.87 (m, 6H). NMR (100 MHz, CDC13): à 149.3, 148.8, 148.5, 143.8, 129.5, 129.0, 124.9, 124.3, 112.3, 104.6, 99.0, 92.9, 44.0, 43.1, 31.8, 31.7, 29.5, 29.4, 29.3, 29.2, 29.1, 28.3, 27.2, 26.9, 22.6, 14.1. HRMS (ESI-TOF): m/z [M-FH] for C281-145N604 calculé. 529.3497, trouvé 529.3493, crr. REVENDICATIONS[Revendication 1] Composé de formule I suivant : 'WH s (I), [Revendication 2] [Revendication 3] où, indépendamment l'un de le l'autre, R1 et R2 sont - soit un alkyle en Cl-C18, linéaire ou ramifié, saturé ou non, cyclique ou non, éventuellement substitué par un ou plusieurs groupe choisi parmi un groupe hydroxyl, un groupe amino, un groupe aminoalkyle, un groupe alkoxy en Cl-05, un alkyl en CI-05, un peptide, un groupe pyridine, un groupe phosphine, un thiol, un C2 alcène, un groupe C2 alcyne et un halogène, or un radical benzyle éventuellement substitué par un ou plusieurs radicaux choisi parmi un groupe hydroxyl, un groupe amino, un groupe aminoalkyl, un groupe CI-05 alkoxy, un groupe Cl- C5 alkyl, and un halogène, - soit des groupes (hétéro)aryles, éventuellement substitué par un ou plusieurs groupe choisi parmi un groupe hydroxyl, un groupe amino, un groupe aminoalkyle, un groupe alkoxy en Cl-05, un alkyl en CI-05, un peptide, un groupe pyridine, un groupe phosphine, un thiol, un C2 alcène, un groupe C2 alcyne et un halogène, or un radical benzyl éventuellement substitué par un ou plusieurs radicaux choisi parmi un groupe hydroxyl, un groupe amino, un groupe aminoalkyl, un groupe CI-05 alkoxy, un groupe Cl- C5 alkyl, and un halogène, et R2 pouvant notamment être un atome d'hydrogène, et indépendamment l'un de le l'autre, R3 et R4 sont H ou RI ou R2, ou encore R3 et R4 sont l'un ou l'autre, ou les deux, un groupe fonctionnel carbonyle formant des fonctions amines incluant des peptides ou non. ou un sel ou un solvate de celui-ci, ou une forme protonée de celui-ci. Composé selon la revendication 1 dans lequel RI et R2, indépendamment l'un de l'autre, sont des alkyles linéaires ou ramifiés saturés ou non, cyclique ou non, en C4-C10. Composé selon la revendication I ou 2, où la forme protonée du composé de formule I est choisie parmi les composés suivants : - le composé de formule la : 48 [Chem.2] R2 4 X ; (la), - le composé de formule lb : I Chem.3 I H NH [Revendication 4] HN NH 2X ; (Ib), et - le composé de formule le : IChem.41 1 NH 3 H NH 1 R2 R4 3X ; (Ic), où X représente Cl, Br, OH, F, I, BF4 ou PF6 ou trifluorométhanesulfate (Ott). Composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, le dit composé ayant la formule II ou In suivante : Il É U E) 50 [Chem.7] J I ; X (IV), où X représente Cl, Br, OH, F ou 1. [Revendication 5] Composition pharmaceutique comprenant, à titre de substance active, un composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, en association avec un véhicule pharmaceutiquement acceptable. [Revendication 6] Composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, pour son uti- lisation en tant que médicament. [Revendication 7] Composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, pour le traitement de pathologies, notamment le traitement de tumeurs, par thérapie photodynamique. [Revendication 8] Composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, pour son uti- lisation dans le cadre du diagnostic de pathologies, notamment de cancers. [Revendication 9] Utilisation d'un composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, pour la visualisation, in vitro ou ex vivo, de cellules vivantes, d'organites du cytoplasme ou de tissus, par microscopie à fluorescence à un ou deux photons, ledit composé étant notamment utilisé à une concentration variant de 2 à 500 nmol. L-1. [Revendication 10] Méthode in vitro d'éradication de cellules comprenant une étape d'exposition, à l'aide d'une source lumineuse émettant un ou deux photons, de cellules traitées avec un composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, ledit composé étant utilisé à une concentration variant de 1 à 1000 nmol. L-1.