FR 3091161 A1 20200703 FR 1874321 A 20181228 Description Titre de l'invention : EXTRAIT DE CHLAMYDOMONAS ACIDOPHILA,SON PROCEDE DE PREPARATION ET LES COMPOSITIONS COSMETIQUES, ET DERMATOLOGIQUES LE COMPRENANT Domaine technique [0001] L'invention se rapporte à un extrait peptidique de la microalgue Chlarnydomonas acidophda et à une composition cosmétique, dermatologique ou pharmaceutique comprenant un tel extrait. L'invention a également pour objet un procédé d'extraction d'un extrait peptidique de Chlamydomonas acidophda, ainsi que l'extrait susceptible d'être obtenu par ledit procédé. L'invention concerne également une composition ou un tel extrait pour son utilisation dans la prévention ou le traitement des troubles ou pathologies de la peau, des muqueuses ou des phanères, pour son utilisation dans la prévention ou le traitement des troubles vasculaires, ou encore pour son utilisation dans la prévention ou le traitement des altérations du tissu adipeux. L'invention concerne enfin un procédé de soin cosmétique de la peau, des phanères ou des muqueuses, en vue d'améliorer leur état ou leur aspect, consistant à administrer une telle composition ou un tel extrait. LES MICROALGUES [0002] Les micro-algues sont des organismes unicellulaires, eucaryotes, doués de photo- synthèse et qui sont donc capables comme les végétaux supérieurs d'utiliser le CO, de l'air pour leur métabolisme mais également d'autres nutriments comme le phosphore, les nitrates, etc. Elles ont été parmi les premières espèces à coloniser la terre. Il existe environ 30 000 espèces décrites mais on suppose qu'il en existe bien plus. On trouve les microalgues à l'état naturel, aussi bien en eau douce que saumâtre à salée à travers le monde. [0003] Les microalgues sont cultivables selon des procédés connus de l'homme de l'art, comme en photo-réacteurs dans des milieux contrôlés en lumière, pH et nutriments, et elles connaissent de nombreux débouchés. Elles sont capables comme les organismes supérieurs de synthétiser des protéines, carbohydrates et lipides. Certains lipides sont particuliers comme des acides gras complexes ou des pigments à propriétés biologiques particulières (xanthophylles). Elles ont connu un engouement particulier pour une éventuelle production de biocarburant et leur production en bioréacteur s'est étendue. Les autres débouchés sont divers : alimentation pour poissons (aquarium et piscicultures), alimentation et santé humaine (asthaxanthine extraite d'Haetnatococcus pluvialis, protéines de la spiruline) et quelques débouchés dans l'industrie cosmétique. 2 ART ANTERIEUR - Chlamydomonas acidophila 100041 Chlatnydoznonas acidophila de la classe des Chlorophyceae (Famille : Chlamydomo- nadaceae) est. une microalgue verte d'eau douce qui prolifère dans les eaux très acides (pH 2,3 à 3,4) et adaptées à des milieux chargés en métaux lourds. Elle a été notamment identifiée et prélevée la première fois dans des lacs volcaniques en Argentine. Elle serait riche en phytochélatines, structures particulières capables de chélater les métaux et en caroténoïdes (béta-carotène, lutéine). En dehors des publications, concernant ses conditions éventuelles de culture et développement (tolérance aux pH extrêmes, et aux métaux lourds), il existe peu de choses concernant sa composition et son utilisation. Sa « cousine » Chkanydotnonas reitzhardii est utilisée comme organisme modèle dans différents secteurs scientifiques comme la génétique. DESCRIPTION DE L'INVENTION [0005] La Demanderesse a découvert que les extraits peptidiques de la microalgue Chla- tnydotnoncts acidophila présentent des propriétés cosmétiques, pharmacologiques et dermatologiques jamais décrites jusqu'à présent. En particulier, c'est la première fois que de tels extraits de Chlanzydotnonas acidophikz sont utilisés en tant que tels, pour leurs propriétés spécifiques. [0006] L'invention a pour objet un extrait peptidique de la microalguc Chlatnydomonas acidophila. [0007] Par « extrait peptidique » on entend, au sens de la présente invention un extrait comprenant majoritairement des peptides. [0008] Par « peptide » on entend, au sens de la présente invention, un polymère d'acides aminés reliés entre eux par des liaisons peptidiques. Un peptide est notamment caractérisé par une masse moléculaire comprise entre 200 et 10 000 Daltons (Da), bornes incluses. [0009] Avantageusement, l'extrait de Chkanydotnonas acidophila selon l'invention comprend au moins 20 % en poids de peptides, les pourcentages étant exprimés par rapport au poids total dudit extrait. En particulier, l'extrait selon l'invention comprend de 20 % à 90 %, avantageusement de 20 % à 75 %, plus avantageusement de 30 % à 70 %, typiquement 65 %, en poids de peptides, les pourcentages étant exprimés par rapport au poids total dudit extrait. [0010] Avantageusement, l'extrait de Chlanlydoznonas acidophila selon l'invention est sub- stantiellement débarrassé de toute protéine, notamment de toute protéine native résiduelle. Ceci permet notamment d'éviter des réactions allergiques, et d'améliorer la solubilité et la biodisponibilité de l'extrait selon l'invention. [0011] Par « protéine » on entend, au sens de la présente invention, des macromolécules bio- logiques formées d'une ou de plusieurs chaînes polypeptidiques. Chacune de ces 3 chaînes est constituée de l'enchaînement de résidus d'acides aminés liés entre eux par des liaisons pcptidiques. Une protéine est notamment caractérisée par une niasse moléculaire supérieure à 10 000 Daltons (Da). [0012] Avantageusement, l'extrait de Chlatnydotnotzas acidophila selon l'invention est sub- stantiellement débarrassé des acides aminés libres. Les acides aminés libres ont une masse moléculaire inférieure à 200 Da. [0013] Dans l'extrait peptidique de Chlanzydonumas acidophila selon l'invention, les peptides ont avantageusement une masse moléculaire inférieure à 3500 Daltons (Da). De manière avantageuse, ces peptides recouvrent tous les composés à base d'aminoacides initialement présents dans l'extrait. [0014] Avantageusement, dans l'extrait selon l'invention, au moins 80 %, plus avanta- geusement au moins 90%, des peptides ont une masse moléculaire inférieure à 1000 Da. [0015] Avantageusement, dans l'extrait selon l'invention, au moins 30% des peptides, plus avantageusement au moins 35 %, plus avantageusement au moins 40 % des peptides, ont une masse moléculaire inférieure à 500 Da. [0016] La répartition des masses moléculaires des peptides est exprimée en pourcentage par rapport à la concentration totale de peptides. [0017] Dans le cadre de la présente invention, l'extrait peptidique de Chlatnydomonas acidophila est avantageusement obtenu par hydrolyse enzymatique, plus avantageusement en présence d'au moins une protéase. L'extrait selon l'invention est plus avantageusement susceptible d'être obtenu par le procédé décrit plus loin dans la description. [0018] L'invention a également pour objet un procédé de préparation d'un extrait peptidique de la rnicroalgue Chlatnyclomonas acidophila, comprenant au moins une étape d'hydrolyse enzymatique. Cette étape est avantageusement effectuée dans les conditions optimales de pH et de température, connues de l'homme de l'art, notamment dans les conditions optimales de pH et de température liées à l'enzyme utilisée. [0019] Avantageusement, ladite étape d'hydrolyse enzymatique est effectuée en présence d'au moins une protéase. Ladite protéase peut être avantageusement une protéase alcaline ou une protéase acide, avantageusement il s'agit d'une protéase alcaline. [0020] Avantageusement selon l'invention, le procédé de préparation d'un extrait peptidique de Chlamydomonas acidophila comprend au moins les étapes suivantes : [0021] a) dispersion en phase aqueuse de la microalgue Chlatnydomonas acidophila ; [0022] b) hydrolyse enzymatique de la dispersion aqueuse obtenue à l'étape a) ; [0023] c) traitement thermique du mélange obtenu à l'étape b) ; et [0024] d) récupération de l'extrait peptidique à la fin de l'étape c). [0025] A l'étape a), la phase aqueuse est avantageusement de l'eau. En outre, la teneur en microalgue Chlatnydonzonas achlophda dans la dispersion aqueuse est avantageusement comprise entre 0,1 % et 20%, plus avantageusement 1 % et 10%. équivalent extrait sec de la microalguc. [0026] Le traitement enzymatique (étape b) est avantageusement réalisé par ajout d'au moins une protease, avantageusement dans les conditions optimales de pH et de température connues dc l'homme de l'art, par exemple à un pH compris entre 3,0 et 9,0 et typiquement à une température comprise entre 20 °C et 90 'C. En particulier, le traitement enzymatique comprend l'ajout d'une protease de type alcaline ou acide, avantageusement d'une protease [0027] L'étape d'hydrolyse enzymatique du procédé selon l'invention est très importante, puisqu'elle permet de transformer ou de « découper » les protéines natives présentes dans Chlanzydomonas acidophda pour obtenir des peptides. [0028] Dans le cadre de la présente invention, l'étape d'hydrolyse enzymatique est avanta- geusement suivie d'une étape de traitement thermique afin de dénaturer les enzymes. Cette étape de traitement thermique est avantageusement effectuée à une température supérieure à 40°C, typiquement entre 80 °C et 100°C. [0029] Lors de l'étape d), l'extrait peptidique est avantageusement récupéré par extraction de la dispersion obtenue à la fin de l'étape c), avantageusement sous agitation, et avantageusement à un pH compris entre 3,0 et 9,0 et à une température comprise entre 20 °C et 90°C. [0030] De manière avantageuse, le procédé comprend une étape supplémentaire de filtration ou centrifugation, située entre les étapes c) et d), éventuellement suivie d'une ultrafiltration, diafiltration, ou nanofiltration. [0031] Les étapes de filtration ou de centrifugation, suivies éventuellement d'une ultra- filtration ou diafiltration sur membranes permettent notamment d'éliminer les protéines résiduelles. Les étapes de nanofiltration permettent notamment d'éliminer des sels minéraux ou des acides aminés libres par exemple. [0032] Le procédé selon l'invention comprend avantageusement une étape d'ultrafiltration à 15 kDa, avantageusement entre 10 et 15 kDa, effectuée entre les étapes c) et d), ce qui permet d'éliminer toute protéine résiduelle potentiellement allergisante. [0033] Avantageusement, le procédé selon l'invention comprend également une étape de na- nofiltration avec par exemple un seuil de coupure compris entre 100 Daltons et 300 Daltons, avantageusement entre 130 et 300 Daltons, typiquement entre 200 Daltons et 300 Daltons, pour éliminer une partie des acides aminés ou les sels minéraux, suite à l'étape d'ultrafiltration. Avantageusement, ladite étape de nanofiltration est réalisée sur membrane 200 Da. [0034] L'hydrolysat aqueux obtenu peut ensuite être stabilisé physiquement et microbiolo- giquemcnt par ajout de solvant tel que le glycérol ou les glycols comme le 1,3-propanediol dans différentes proportions adaptées à une telle stabilisation. Avantageusement, le glycérol sera présent seul ou en combinaison avec l'eau ou un glycol, avantageusement dans une proportion comprise entre 40 et 95% et préférentiellement entre 50 et 90%. De même, le glycol et préférentiellement le 1,3-propanediol, sera avantageusement présent seul ou en combinaison avec l'eau ou le glycérol, avantageusement dans une proportion comprise entre 40 % et 95 % et préférentiellement entre 50 % et 90 %. Ainsi, la présente invention porte en outre sur une composition comprenant l'extrait peptidique de Chlatnydornonas acidophila selon l'invention, un solvant choisi parmi le glycérol, les glycols et leurs mélanges en quantité efficace pour une action de stabilisation physique et microbiologique, et éventuellement dc l'eau. Les quantités efficaces pour une action dc stabilisation physique et microbiologique sont telles que décrites ci-dessus. [0035] Il existe une variante dans laquelle, l'extrait pcptidique peut être stabilisé par séchage, par des procédés connus de l'homme dc l'art, en présence ou non d'un support de type, par exemple, maltodextrines ou fibres d'acacia (Fibregum(R) société CNI). La teneur en support varie typiquement selon un ratio allant de 0 % à 80 % de support par rapport au pourcentage de matière sèche obtenue dans la forme liquide de l'extrait. L'extrait peut être séché par atomisation, lyophilisation ou tout procédé connu de l'homme dc l'art et est préférentiellement séché par lyophilisation afin d'obtenir une poudre finale. La poudre finale comprend avantageusement 30 % à 70% en poids de matière sèche de l'extrait, le complément à 100 % étant le support de lyophilisation. Plus avantageusement la poudre finale comprend 50 % de matière sèche issue de l'extrait et 50 % de support de lyophilisation, ledit support de lyophilisation étant de préférence de type maltodextrines ou fibres d'acacia. [0036] Préférentiellement, à titre d'exemple, l'extrait peptidique peut être obtenu selon le procédé suivant : [0037] a) mise en solution de la microalgue, Chlanadomonas acidophila dans de l'eau à une teneur d'environ 10 % équivalent extrait sec de la microalgue ; [0038] b) hydrolyse enzymatique par une protéase alcaline (l'alcalase de la société Lyven) ; [0039] c) traitement thermique afin de dénaturer les enzymes ; [0040] c') centrifugation, ultrafiltration et diafiltration sur membranes 15 kDa afin d'éliminer les protéines résiduelles potentiellement allergisantes ; [0041] c") nanofiltration sur membrane 200 Da afin d'éliminer des sels minéraux ou des acides aminés libres par exemple ; et [0042] d) récupération de l'extrait peptidique obtenu à la fin de l'étape c"). [0043] Dans le cadre du procédé selon l'invention, la microalgue Chlanadomonas acidophila utilisée en tant que matière première peut être issue d'une culture en milieu 6 extérieur, par exemple dans des « raceways » (= bac en forme de circuit utilisé pour l'élevage en écloscric), ou d'une culture en milieu fermé, dans des photobioréacteurs. Avantageusement, ladite microalgue utilisée en tant que matière première est issue d'une culture en photobioréacteur, notamment en photobioréacteur en milieu agité. Plus avantageusement, ladite microalguc utilisée en tant que matière première est issue d'une culture en photobioréacteurs tubulaire horizontaux ventilé à vagues en milieu agité, tels par exemple ceux développés par la société Microphyt et notamment décrits dans la demande de brevet FR 2 943 685 et la demande internationale WO 2011/058267. [0044] La présente invention a également pour objet un extrait de Chlatnydornonas acidophda, susceptible d'être obtenu par le procédé mentionné ci-dessus. Un tel extrait répond aux spécifications définies précédemment [0045] L'invention a également pour objet une composition cosmétique, dermatologique ou pharmaceutique comprenant un extrait peptidique de Chlamydomonas acidophda, en tant que principe actif, et le cas échéant un excipient approprié. [0046] Avantageusement, dans la composition selon l'invention, l'extrait peptidique de Chlatnydornonas acidophda est tel que défini ci-dessus ou est susceptible d'être obtenu par le procédé mentionné ci-dessus. Ainsi, ledit extrait est avantageusement tel que défini dans les paragraphes ci-dessus concernant l'extrait selon l'invention en tant que tel ou ceux concernant l'extrait susceptible d'être obtenu par le procédé selon l'invention. [0047] Ladite composition est avantageusement formulée pour être administrée par voie topique externe, vaginale ou par voie orale. [0048] Avantageusement, la composition selon l'invention comprend de 0,001 à 10 %, avan- tageusement 0,01 à 5 %, dudit extrait peptidique de Chlanzyclomonas aciclophila, en poids exprimé d'extrait sec, par rapport au poids total de la composition. [0049] La composition selon l'invention peut comprendre en outre un ou plusieurs autres principes actifs. [0050] Selon une première variante, les différentes préparations sont adaptées à l'administration topique et incluent notamment les crèmes, les émulsions, les laits, les pommades, les lotions, les huiles, les solutions aqueuses ou hydro-alcooliques ou glycoliques, les poudres, les patchs, les sprays, les shampooings, les vernis ou tout autre produit pour application externe. Et selon les variantes suivantes, les différentes préparations incluent notamment les soins d'hygiène intime, les soins bucco-dentaires, comme par exemple, les dentifrices, solutions buccales, gels gingivaux. [0051] Selon sa nature (cosmétique, pharmaceutique ou dermatologique), la composition selon l'invention peut en outre comprendre au moins un excipient cosmétiquement, phannaceutiquement ou dennatologiquement acceptable. Notamment, la composition 7 selon la présente invention peut en outre comprendre au moins un adjuvant cosmétiquement, pharmaccutiquement ou dermatologiquement connu de l'homme du métier, choisi parmi les tensioactifs, les épaississants, les conservateurs, les parfums, les colorants, des filtres chimiques ou minéraux, les agents hydratants, les eaux thermales, etc. L'homme du métier sait adapter la formulation de la composition selon l'invention en utilisant ses connaissances générales. [0052] Les posologies et les formes galéniques optimales des compositions selon l'invention peuvent être déterminées selon les critères généralement pris en compte dans l'établissement d'un traitement pharmacologique, dermatologique ou cosmétique adapté à un patient ou à un animal, comme par exemple l'âge ou le poids corporel du patient ou de l'animal, la gravité de son état général, la tolérance au traitement, les effets secondaires constatés, le type de peau. [0053] L'invention a aussi pour objet un extrait selon l'invention ou extrait susceptible d'être obtenu par le procédé selon l'invention ou une composition selon l'invention, pour son utilisation pour prévenir et/ou traiter : [0054] - des troubles ou pathologies de la peau et/ou des muqueuses (par exemples les gencives, parodontes, muqueuses génitales) et/ou des phanères (par exemples les cheveux et ongles) ; des troubles vasculaires ; et des altérations du tissu adipeux. [0055] L'invention a également pour objet l'utilisation d'un extrait selon l'invention ou d'un extrait susceptible d'être obtenu par le procédé selon l'invention ou d'une composition selon l'invention, pour la fabrication d'une composition cosmétique, pharmaceutique ou dermatologique pour prévenir et/ou traiter : [0056] - des troubles ou pathologies de la peau et/ou des muqueuses (par exemples les gencives, parodontes, muqueuses génitales) et/ou des phanères (par exemples les cheveux et ongles) ; des troubles vasculaires ; et des altérations du tissu adipeux. [0057] L'invention a en outre pour objet une méthode pour prévenir et/ou traiter : [0058] - des troubles ou pathologies de la peau et/ou des muqueuses (par exemples les gencives, parodontes, muqueuses génitales) et/ou des phanères (par exemples les cheveux et ongles) ; des troubles vasculaires ; et des altérations du tissu adipeux, [0059] comprenant l'administration, notamment l'administration topique, d'une quantité efficace d'un extrait selon l'invention ou d'un extrait susceptible d'être obtenu par le procédé selon l'invention ou d'une composition selon l'invention, à un sujet en ayant 8 besoin. [0060] En particulier, l'extrait selon l'invention ou l'extrait susceptible d'être obtenu par le procédé selon l'invention ou la composition selon l'invention est destiné à la prévention et/ou au traitement des réactions ou pathologies allergiques, inflammatoires, irritatives ou des troubles de la barrière ou de l'homéostasie de la peau, des phanères (cheveux et ongles) et/ou des muqueuses (gencives, parodontes, muqueuses génitales) immature(s), normale(s) ou mature(s)/âgée(s). [0061] Avantageusement, la composition ou l'extrait selon l'invention peut être utilisé(c) pour la prévention et/ou le traitement des réactions, troubles ou pathologies : [0062] de la peau, telles que l'acné, la rosacée ou érythrocouperose, le psoriasis, les troubles vasculaires, la dermite du siège, la dermatite atopique, l'eczéma, la dermatite de contact, la dermatite irritative, la dermatite allergique, la dermite séborrhéique (croûte de lait), le psoriasis, la peau sensible, la peau réactive, la peau sèche (xérose), la peau déshydratée, la peau avec rougeur, l'érythème cutané, la peau âgée ou photoâgée, la peau photosensibilisée, la peau pigmentée (mélasrna, pigmentation post-inflammatoire...), la peau dé-pigmentée (vitiligo), la peau avec cellulite, la peau relâchée, la peau avec vergetures, les dartres, les gerçures, les piqûres, les crevasses en particulier des seins, les coups de soleil, les inflammations ducs aux rayons de toutes sortes, les irritations par agents chimiques, physiques (par exemple contrainte de tension pour les femmes enceintes), bactériologiques, fongiques ou viraux, parasitaires (poux, gale, teigne, acariens, dermatophytes), radiologiques ou par déficit de l'immunité innée (peptides antimicrobiens) ou acquise (cellulaire, humorales, cytokines), et/ou des muqueuses telles que les gencives et parodontes pouvant présenter des gingivites (gencives sensibles des nouveaux nés, problèmes d'hygiène, dus au tabagisme ou autres), des parodontopathies, ou des muqueuses génitales pouvant présenter des irritations des sphères génitales males ou femelles externes ou internes et/ou des phanères tels que les ongles (ongles cassants, fragiles ...) et des cheveux (alopécie, pellicules, hirsutisme, dermites séborrhéiques, folliculites) immatures, normaux ou matures, présentant en particulier des troubles du cuir chevelu tels que les alopécies (ou pelade) androgénétiques, aiguës, localisées, cicatricielles, congénitales, occipitales du nourrisson, aerata, dues à la chimiothérapie/radiothérapie ou encore l'effluvium télogène, l'effluvium anagène, la dystrophie pilaire, la trichotillomanie, la teigne ou les pellicules grasses ou sèches. [0063] L'invention concerne également un procédé de soin cosmétique de la peau et/ou des 9 phanères et/ou des muqueuses, en vue d'améliorer leur état et/ou leur aspect, consistant à administrer un extrait selon l'invention ou un extrait susceptible d'être obtenu par le procédé selon l'invention ou une composition selon l'invention. [0064] En particulier, le procédé de soin cosmétique permet d'affermir la peau et de diminuer l'effet « peau d'orange » avantageusement par voie topique sur la peau et/ou phanères et/ou muqueuses. [0065] En particulier, l'invention concerne un procédé de soin cosmétique de la peau et/ou des phanères, pour agir sur l'élasticité ou la fermeté de la peau, en particulier comme agent tenseur ou anti-rides, pour agir sur les peaux sensibles, ou encore pour agir contre la pollution, consistant à appliquer sur la peau et/ou les phanères une composition ou un extrait selon la présente invention. [0066] En particulier, l'invention concerne un procédé de soin cosmétique de la peau et/ou des phanères, en vue d'en prévenir les altérations de la barrière et sa déshydratation, consistant à appliquer sur la peau et/ou les phanères une composition ou un extrait selon la présente invention. [0067] L'invention concerne un procédé de soin cosmétique de la peau, en vue d'en prévenir le vieillissement, consistant à appliquer sur la peau une composition ou un extrait selon la présente invention. [0068] La composition ou l'extrait selon la présente invention peut également être avanta- geusement utilisée dans la prévention et/ou le traitement des troubles vasculaires, en particulier les rougeurs et les couperoses. [0069] La composition ou l'extrait selon la présente invention peut également être avanta- geusement utilisée dans la prévention et/ou le traitement des altérations du tissu adipeux. Les altérations des tissus adipeux sont en particulier la cellulite ou l'effet peau d'orange ». La composition selon l'invention permet d'affermir la peau. [0070] La présente invention peut être illustrée de manière non-limitative par les exemples qui suivent. EXEMPLES Exemple 1 : extrait selon l'invention [0071] Un extrait pcptidique est obtenu selon le procédé suivant : [0072] a) mise en solution de la micro-algue Chlarnydomonas ne idophila, à 10 % de matière sèche dans l'eau ; [0073] b) hydrolyse par une protéase alcaline (Alcalase de la société Lyven) ; [0074] c) traitement thermique à température comprise entre 80 °C et 100 °C afin de dénaturer les enzymes; [0075] c') centrifugation, ultrafiltration et diafiltration sur membranes 15 kDa afin d'éliminer les protéines résiduelles potentiellement allergisantes [0076] c") nanofiltration sur membrane 200 Da afin d'éliminer des sels minéraux ou des acides aminés ou monosaccharides libres [0077] d) récupération de l'extrait peptidique [0078] c) Stabilisation dans un mélange glycérol /1, 3 - propanediol [0079] L'extrait peptidique liquide ainsi obtenu présente les caractéristiques suivantes : [0080] 1 - Analyse physico-chimique (% / matière sèche totale) [0081] Extrait sec (2h, 105 °C, étuve ventilée) : 1,2% [0082] pH: 5,1 [0083] Azote a-aminé (OPA, équivalent leucine) : 29 % [0084] Peptides (Kjeldahl, N x 6.25) : 70 % [0085] Cendres totales : 4 % [0086] 2- Profil des répartitions des masses molaires des peptides [0087] Inférieur à 500 Da : 40 % [0088] Entre 500 - 1000 Da : 55 % [0089] Entre 1000 - 3500 Da: 4 % [0090] Supérieur à 3500 Da: 1 % [0091] Exemple 2 : Tests d'activités biologiques de l'extrait selon l'invention [0092] L'activité biologique de l'extrait de Chlarnydomonas acidophila (CAP) obtenu à l'exemple 1 a été démontrée in vitro comme décrit ci-après. [0093] Ces études in vitro ont permis de mettre en évidence le potentiel de l'extrait CAP sur : [0094] le renforcement de la barrière cutanée (en particulier la barrière lipidique) ; l'hydratation cutanée via la synthèse d'acide hyaluronique, la production des NMF et les voies de transport des osmolytes ; les défenses anti-oxydantes et anti-inflammatoires vis-à-vis de stress aspécifiques ou liés à la pollution atmosphérique un effet anti-âge, notamment via la préservation de l'homéostasie de la matrice dermique ; les mécanismes de l'allergie. [0095] I. Screening préliminaire d'activité sur fibroblastes dermiques et épidermes reconstruits mélanisés [0096] Les activités biologiques potentielles de l'extrait de Chlarnydomonas aciclophila ont été recherchées par un test de modulation d'expression de gènes sur fibroblastes dermiques et épidermes reconstruits mélanisés. Ainsi, l'expression de 96 gènes d'intérêts majeurs en physiologie cutanée et cosmétique a été étudiée par PCR-array sur des fibroblastes et des épidermes reconstruits mélanisés. [0097] a. Matériel et Méthodes : [0098] L'extrait de Chlamyclomonas aciclophila (CAP) à 0,05 % de matière sèche a été 11 ajouté dans le milieu de culture de fibroblastes dermiques humains normaux (NHDFs) ou d'épidermes humains mélanisés reconstitués. [0099] Après 6 heures ou 24 heures d'incubation, l'expression des marqueurs sélectionnés a été évaluée par RT-PCR quantitative (carte micro-fluidique TaqMan). La variation d'expression des marqueurs étudiés par rapport au témoin a été exprimée en quantité relative (QR, QR > 1 : augmentation, QR 0,05 3,19 CASP14 Caspase 14 HAS2 Hyaluronan synthase 2 RAB11A Ras-related protein Rab-11A GBA/GBAP1 Glucosylceramidase (Betaglucocerebrosidase) SLC6A6 (TAUT transporter) HAS3 Flyaluronan synthase 3 PADI1 Peptidyl Arginine Deiminase 1 BLMH Bleomycine Hydrolase 0.0385 2,23 2,03 >0,05 >0,05 12 dermique. [0109] La biosynthèse de l'acide hyaluronique et l'hydratation de l'épiderme : [0110] Les hyaluronan-synthases-2 et -3 (HAS2 et HAS3) sont des enzymes res- ponsables de la synthèse d'acide hyaluronique (AH). L'expression graduelle de SLC6A6 dans les couches spineuse et granuleuse de l'épiderme permet de maintenir l'hydratation nécessaire au niveau de l'épiderme dans un environnement sec. Les gènes PADII, BLMH, CASP14 codent pour des enzymes impliquées dans la production des facteurs naturels d'hydratation (ou NMF pour Natural Moisturizing Factors). [0111] Le tableau 2 ci-après présente les résultats les plus significatifs de l'extrait CAP sur l'expression de gènes dans des fibroblastes. [0112] Table 2: Variations de l'expression de gènes d'intérêt dans des fibroblastes dermiques humains normaux ( NHDEs ) [0113] Quantité Relative (QR) par rapport au contrôle égal I / p value déterminée suite à un lest de Student [0114] [Tableaux2] CAP 0,0531.ens RAS 2 lira itgron NQtM AD( hydrogenase, in- IVIKE67 Antigen Xi-b7 PR DX6 Peroxieedoxin-6 ff2. PSMDI 26 some non-ATPme regulatory subunit 1 SPAIA Heat5hotinkaa prolein lA LOXU tflyE Ùdse :2A1/GLUT4 soute xn red u p telue [0115] Ces résultats montrent un potentiel d'activité de l'extrait CAP dans les axes suivants : 13 Anti-vieillissement cutané : 101161 - Les trois hyaluronan-synthases, HAS1, HAS2 (5,76 0,008) et HAS3, produites par les fibroblastes au niveau du derme sont responsables de la biosynthèse de l'acide hyaluronique (AH). 101171 - Par ailleurs, il est démontré que le vieillissement cutané est associé à la diminution de la prolifération des fibroblastes. On observe une diminution d'expression du facteur de prolifération Ki-67 liée à l'âge [Ma et al., 2011 Br. J. Dermcaol., 164(3), pp. 479-482]. L'actif CAP augmente l'expression de MKI67 après 24h de traitement témoignant d'une possible augmentation de la prolifération des cellules, cc qui renforce son effet anti-âge. [0118] - Il a été montré que l'expression de la lamine BI (LMNB1) au sein de la peau diminue avec l'âge. Les défenses anti-oxydantes : [0119] - La NAD(P)H déshydrogénase, quinone 1 (NQ01) est une flavoprotéine cy- tosolique sous le contrôle du facteur de transcription Nrf-2. NQ01 favorise, par réduction, la formation des hydroquinoncs à partir des quinones, empêchant la production d'espèces radicalaires. [0120] - La protéine HSP70 (encodée par le gène HSPA1A) est une molécule chaperone (hcat shock protein 70) qui inhibe l'agrégation des protéines dénaturées, favorise leur rcnaturation (refolding) et contrôle des médiateurs essentiels de la machinerie apoptotiquc. [0121] - Le système thiorédoxine est un des systèmes majeurs de défense anti-oxydante Parmi les 3 isoformcs de la thiorcdoxine réductasc, Pisoforme 1 codée par le gène TXNRD1 régulé par l'extrait CAP est la plus étudiée. [0122] - A côté du système thiorédoxinc, on retrouve également le système peroxyrédoxine / sulfirodoxine. Parmi les peroxyrédoxincs, b peroxyrédoxine-6 (PRDX6) est sur-exprimée par l'extrait CAP après 24h de traitement. Ceci témoigne d'une action détoxifiante de l'actif vis-à-vis de la présence de peroxydes. [0123] - Enfin l'extrait CAP stimule le gène GLCH, qui fait partie du système GLO qui détecte et neutralise certains carbonyles, et les empêche ainsi d'attaquer les cellules et leurs composants. L'homéostasie de la matrice dermique : 101241 - L'extrait CAP stimule l'expression de PSMB1, gène codant pour la sous-unité béta I du protéasome. Le protéasome joue un rôle majeur dans le maintien de l'homéostasie protéique en éliminant les protéines endommagées ou malformées qui pourraient altérer le fonctionnement cellulaire. [0125] - L'expression génique de LOXL2 est également augmentée, ce gène fait partie de la 14 famille des Lysyl oxidases, enzymes impliquées dans l'assemblage des fibres d'élastine et de collagène. H. Action anti-inflammatoire 101261 A. Activité anti-inflammatoire vis-à-vis d'un stress chimique au PMA 101271 a. Introduction : [0128] La réponse inflammatoire est la réponse normale, immédiate et transitoire de l'organisme vis à vis de toute agression de l'environnement. [0129] Cependant, dans certaines conditions pathologiques ou physiologiques, cette réaction inflammatoire peut être exacerbée et, mal contrôlée, peut conduire à des dommages tissulaires. [0130] Au niveau de la peau, le kératinocyte est l'une des premières cellules participant à l'initiation de la réaction inflammatoire en réponse à une agression de l'environnement. [0131] Le kératinocyte « agressé » va alors relarguer : [0132] - des cytokines primaires (ILla, 1L113 ou TNFa) ou secondaires (IL8) qui vont induire une cascade dc réactions impliquant le système immunitaire. [0133] - des prostaglandines (PGE), qui font partie de la famille des prostanoïdes. La voie de synthèse des prostaglandines qui aboutit à la synthèse de la PGE2 et d'autres PGEs est induite par des stimuli inflammatoires. [0134] L'activité anti-inflammatoire de l'extrait de Chlamyclornonas acidophile' selon l'invention a été évaluée sur un modèle d'inflammation induite sur kératinocytes par un traitement au PMA (Phorbol 12-Myristate 13-Acetate). Le relargage des cytokines TNFa et Prostaglandine E2 (PGE2) a été analysé. [0135] h. Matériels et Méthodes : [0136] Des kératinocytes épidermiques humaines normaux ont été pré-traités pendant 24 h par l'extrait de ChIcanydomonas acidophila (CAP) selon l'exemple 1, à des concentrations comprises entre 0,0001 % et 0,05 % de matière sèche, ou par les molécules de références anti-inflammatoires dexaméthasone à 0,1 pM ou indométacine à 0,1 pM (ces deux dernières références servant de référence anti-inflammatoire pour les cytokines et prostaglandines respectivement). [0137] L'inflammation a ensuite été induite par ajout de PMA à 10 pg/mL pendant une nuit. [0138] Un dosage de TNFa et PGE2 a ensuite été réalisé dans les surnageants de culture cellulaire. [0139] La significativité des résultats a été vérifiée par une analyse de variance à un facteur suivie d'un test de Tuckey (logiciel GraphPad Prism version 5.02, GraphPad Software, San Diego California USA). [0140] c. Résultats : [0141] Le PMA à 10 pg/m1 a significativement augmenté le relargage de TNFa dans les sur- nageants des kératinocytes et a donc bien induit une inflammation. La dexatnéthasone à 0,1 M et l'indométacine 0,1 pM, en prétraitement 24h, ont bien diminué le relargage de TNEct, démontrant ainsi leur effet anti-inflammatoire et validant le test. [0142] L'extrait de Chlamydoinanas acidophda, en prétraitement 24h aux différentes concentrations, a diminué significativement le relargage de TNFot et donc a montré une action anti-inflammatoire face au PMA. [0143] Table 3: Dosage de TNF-alpha dans des kératinocytes humains normaux stimulés par du PMA [0144] $$$p