FR 3093640 A1 20200918 FR 1902726 A 20190315 Description Titre de l'invention : Phytoecdysones et leurs dérivés pour leur utilisation dans le traitement de maladies neuromusculaires Domaine technique de l'invention [0001] L'invention relève de l'utilisation de phytoecdysones et de dérivés hémi-synthétiques de phytoecdysones pour le traitement de maladies neuromusculaires, en particulier l'amyotrophie spinale infantile et la sclérose latérale amyotrophique. Technique antérieure [0002] Les maladies neuromusculaires sont caractérisées par une altération du fonc- tionnement des unités motrices, composées de motoneurones, jonctions neuromusculaires et muscles squelettiques. Quelle que soit l'origine de la maladie, nerveuse comme dans l'amyotrophie spinale infantile ou la sclérose latérale amyotrophique, ou musculaire, toutes provoquent une altération de la fonction motrice des patients, pouvant aller du handicap à la mort prématurée lorsque les muscles vitaux sont atteints. La prise en charge de ces maladies neuromusculaires reste encore aujourd'hui symptomatique et représente un coût économique considérable au regard du niveau de handicap des patients, de la progressivité de ces pathologies et des besoins humains et matériels qu'elles nécessitent. La recherche et le développement de thérapies permettant d'alléger les symptômes moteurs et la dépendance des patients revêtent un intérêt social et économique certain. [0003] Parmi ces maladies neuromusculaires, deux sont décrites comme affectant spéci- fiquement les motoneurones : les amyotrophies spinales infantiles (ou SMA), dont les symptômes apparaissent à l'enfance et la sclérose latérale amyotrophique (ou SLA) dont les symptômes se déclarent à l'âge adulte. Ces deux maladies neurodégénératives, aux causes et aux manifestations cliniques différentes, ont en commun une dénervation musculaire progressive, responsable d'une amyotrophie (Al-Chalabi et Hardiman, 2013 ; Crawford et nu-do, 1996). [0004] Les amyotrophies spinales infantiles représentent la cause la plus commune de mortalité infantile d'origine génétique avec une prévalence de 1/6000 à 1/10000 naissances (Crawford et Pardo, 1996). Trois types principaux de sévérité sont décrits, suivant l'âge d'apparition des symptômes et la progression des atteintes cliniques, allant du type 1, le plus sévère, au type 3 dont la durée de vie peut être supérieure à 40 ans. Les patients atteints de SMA présentent une atteinte symétrique des muscles squelettiques par atrophie des fibres musculaires isolées ou regroupées en fascicules. La quasi-totalité des SMA sont à prédominance proximale, c'est-à-dire touchant les muscles du tronc et proches du tronc. Progressivement, le déficit moteur s'étend, dans 2 un premier temps, aux muscles des membres inférieurs, puis dans un second temps, aux muscles des membres supérieurs en affectant préférentiellement les muscles extenseurs. Bien que présentant une grande hétérogénéité clinique, des analyses génétiques ont pu démontrer que toutes les formes de SMA sont causées par la mutation du gène SMNI , pour Survival Of Motor Neurons, positionné en région chromosomique 5q13. [0005] Dans le génome humain, il existe une copie centromériquc inverse de ce gène, le gène SMN2, pouvant être retrouvé en plusieurs copies (Lorson et al., 1998), mais qui ne permet de compenser que partiellement la perte de fonction du gène SMNI . En effet, SMN2 présente 5 différences nucléotidiques avec SMN I , dont une au niveau de l'exon 7, favorisant son excision par épissage dans 90% des ARNm produits par le gène SMN2. Cet épissage alternatif conduit à la production d'une protéine SMNA7 tronquée et instable. Ainsi, seuls 10% des protéines produites par le gène SMN2 sont complètes et fonctionnelles (Vitte et al., 1997 ; Lefebvre et al., 1997). Il a donc été démontré un lien entre le nombre de copies du gène SMN2, leur niveau d'expression et la sévérité de la maladie. La protéine SMN est une petite protéine ubiquitaire, localisée dans des domaines discrets des noyaux, appelés Gems pour Gemini of Coiled Bodies, et dans le cytoplasme des cellules. Bien que la protéine SMN ait des rôles spécifiquement neuronaux, tels que la croissance axonale (McWhorter et al., 2003) et le transport axonal (Aktcn et al., 2011 ; Peter et al., 2011), elle est aussi impliquée dans des fonctions ubiquitaires telles que la biogénèse de ribonucléoprotéines nucléaires (Buhler et al., 1999 ; Liu et al., 1997 ; Zhang et al., 2008) ou encore la régulation de la traduction des ARNm (Sanchez et al., 2013). Ainsi, ni l'expression de la protéine SMN, ni ses fonctions cellulaires ne permettent d'expliquer directement la dégénérescence spécifique des motoneurones. [0006] Cependant, le développement de différents modèles animaux et l'avancée de la recherche fondamentale ont permis de démontrer que la délétion conditionnelle du gène Sinn uniquement au niveau des neurones ne reproduit pas les symptômes complets de la SMA, ni la dégénérescence motoneuronale (Frugier et al., 2000). D'autres études ont décrit un rôle de la protéine SMN dans le bon fonctionnement des astrocytes (Rindt et al., 2015), des cellules de Schwann (Hunter et al., 2014), du coeur (Bevan et al., 2010 ; Heier et al., 2010 ; Shabadi et al., 2010 ; Biondi et al., 2010), du foie (Vitte et al., 2004) et des vaisseaux (Somers et al., 2016), suggérant un rôle joué par le métabolisme énergétique dans la progression et la sévérité de la maladie. D'autres études encore se sont attachées à l'unité motrice dans la SMA et ont mis en évidence des altérations spécifiques des jonctions neuromusculaires (Kariya et al., 2008 ; Kong et al., 2009 ; Muray et al., 2008 ; Biondi et al., 2008), un constituant essentiel à la survie des motoneurones. En effet, il a été démontré que la protéine SMN 3 participe au bon fonctionnement des jonctions neuromusculaires en agissant sur le pool de vésicules de neurotransmetteurs, l'activité synaptique (Torres-Benito et al., 2011), niais aussi la maturation des jonctions, étape cruciale permettant d'acquérir leur fonctionnalité et leur maintien (Kariya et al., 2008 ; Blondi et al., 2008). D'autre part, l'invalidation du gène Sinn dans les cellules musculaires uniquement, engendre de graves altérations musculaires (Cifucntes-Diaz et al., 2001 ; Rajendra et al., 2007 ; Lee et al., 2011), telles qu'une dystrophie sévère (Cifuentes-Diaz et al., 2001), une mauvaise organisation de la structure sarcomérique permettant la contraction (Walker et al., 2008), une diminution de la fusion correcte des cellules souches musculaires, (Nicole et al., 2003), et donc de leur différentiation (Shafey et al., 2005). De plus, les cellules rnyogéniques des patients atteints de SMA sont pauvres en certains facteurs, comme les CANP (« Calcium-Activated Neuiral Protease » en terminologie anglo-saxonne), essentiels à la mise en place des contacts neuromusculaires (Fidzianska et al., 1984 ; Vrhova et al., 1989). Enfin, il a été constaté, in vitro, que les motoneurones en co-culture avec des cellules musculaires SMA dégénèrent plus rapidement (Vrhova et al., 1989). [0007] A cc jour, des approches très différentes ont été envisagées afin de développer un traitement pour la SMA. Les stratégies de recherches actuelles s'orientent, pour la plupart, sur la modification de l'expression de SMN directement ou non, soit par l'augmentation de l'expression du gène SMN2, ou la modification de l'épissage des transcrits SMN2, ou des thérapies géniques visant à réintroduire le gène correct. Certaines recherches se concentrent sur des approches indépendantes de SMN en développant des thérapies cellulaires ou bien en se focalisant sur l'activation de la neuroprotection (Olésoxime) ou sur l'amélioration de la fonction musculaire (activateur de troponine). [0008] Malgré des dizaines d'essais cliniques en cours dans la SMA, à ce jour, seulement deux molécules ont été approuvées par les autorités. [0009] La première, un activateur de la troponine (CK-2127107), vise à augmenter la sen- sibilité sarcomérique au calcium afin d'améliorer l'endurance et la performance de la fonction musculaire (Hwee et al., 2015). Cette molécule a récemment été désignée comme médicament orphelin pour la SMA par les agences règlementaires américaines (Mai 2017). [0010] La seconde, un oligonucléotide anti-sens (ASO), vise à favoriser l'inclusion de l'exon 7 des transcrits produits par les gènes SMN2, permettant ainsi de faire sur-exprimer la protéine SMN complète par les cellules de la moelle épinière après injections intrathécales (Hache et al., 2016 ; Chiriboga et al., 2016). Cette molécule, développée par la société Biogen et nommée Nusinersen, a été approuvée par les autorités américaines et européennes et constitue la première molécule à visée théra- peutiquc mise sur le marché pour traiter les amyotrophies spinales infantiles sévères, de type 1 et de type 2. Les premiers résultats obtenus avec ASO ciblant l'intron 7, que cc soit sur modèles animaux (Hua et al., 2010 ; Passini et al., 2011) ou lors des essais cliniques de phases II et 111 sur patients SMA sévères (Finkcl et al., 2016), sont très impressionnants et prometteurs pour cette maladie létale. Cependant, plusieurs zones d'ombre subsistent quant à une utilisation d'un oligonucléotide in vivo injecté dans le système nerveux central seul et/ou sur le long terme. Tout d'abord, la communauté scientifique manque de recul sur la tolérance à long terme des patients pour ce genre de molécules exogènes ciblant l'expression génique. De plus, un autre questionnement concerne les risques inhérents à une surexpression importante et non contrôlée de la protéine SMN, protéine dont la fonction a été associée à la prolifération cellulaire (Grice et al., 2011). De plus, l'efficacité du Nusinerscn semble d'autant plus importante que le début du traitement intervient précocement vis-à-vis de la progression de la maladie, situation clinique difficile à obtenir au regard du temps de diagnostic et du parcours clinique des familles. Enfin, dans la SMA, il est important de noter l'importance du rôle joué par les altérations multi-tissulaires sur la progression de la maladie. Or, le Nusinersen est une molécule qui ne franchit pas la barrière hématoencéphalique, ce qui impose un traitement par voie intrathécale ne permettant de cibler que les neurones et les cellules gliales sans cibler les autres organes tels que les muscles, le foie, le pancréas et le système vasculaire. Leurs altérations pourraient, par conséquent, limiter les effets thérapeutiques du Nusinersen. Enfin, les patients atteints de SMA de type 3, pour qui le niveau d'expression de la protéine SMN est bien supérieur et pour lesquels le pronostic vital est rarement engagé, aucune autorisation de traitement n'a encore été approuvée, laissant cette sévérité orpheline de thérapie. [0011] Il apparaît donc essentiel de développer des approches physiologiques et/ou pharma- cologiques complémentaires au Nusinersen afin de potentialiser ses effets protecteurs et de limiter le plus possible l'évolution clinique des patients, leur dépendance et leur prise en charge clinique. [0012] Les phytoecdysones représentent une importante famille de stérols polyhydroxylés. Ces molécules sont produites pas diverses espèces de plantes (fougères, gymnospermes, angiospermes) et participent à la défense de ces plantes contre les ravageurs. La phytoecdysone majoritaire du règne végétal est la 20-hydroxyecdysone. [0013] Le brevet FR 3 021 318 divulgue que les phytoecdysones, et plus particulièrement la 20-hydroxyecdysone (20E), ont fait l'objet de nombreuses études pharmacologiques. Ces études ont mis en avant les propriétés antidiabétiques et anabolisantes de cette molécule. Ses effets stimulants sur les synthèses protéiques dans les muscles sont observés chez le rat in vivo (Syrov et al., 2000 ; Toth et al., 2008 ; Lawrence et al., 2012) et sur des myotubes murins C2C12 in vitro (Gorelick-Feldman et al., 2008). Certains des effets décrits ci-dessus clans des modèles animaux ont été retrouvés clans des études cliniques, encore peu nombreuses. Ainsi, la 20-hydroxyecdysone favorise l'augmentation de la masse musculaire chez de jeunes sportifs (Simakin et al., 1988). Enfin, le brevet français FR 3 021 318 décrit en outre l'utilisation de 20-hydroxyecdysone et de dérivés de 20-hydroxyecdysone, pour le traitement et la prévention de la sarcopénie et de l'obésité sarcopénique (Lafont et al., 2017). Présentation de l'invention [0014] La présente invention a pour objectif de limiter la perte motoneuronale liée à des maladies neuromusculaires ainsi que les conséquences de cette dégénérescence. [0015] Les phytoecdysones représentent une importante famille de phytostérols polyhy- droxylés structuralcment apparentés aux hormones de mue des insectes. Ces molécules sont produites par de nombreuses espèces végétales et participent à leur défense contre les insectes ravageurs. La phytoecdysone majoritaire est la 20-hydroxyccdysone. [0016] Les inventeurs ont découvert de manière inattendue que la les phytoccdysones et des dérivés hémi-synthétiques de la phytoecdysones améliorent de manière significative la survie ainsi que l'évolution pondérale de mammifères atteints d'une amyotrophie spinale. De plus, les phytoecdysones et leurs dérivés hémi-synthétiques limitent l'atrophie et l'aplasie musculaire présentes dans cette pathologie et limitent significativement la perte des motoneurones des mammifères atteints par une amyotrophie spinale. [0017] À cet effet, l'invention concerne au moins une phytoecdysone et/ou au moins un dérivé hémi-synthétique de phytoccdysone, pour leur utilisation dans le traitement d'une maladie neuromusculaire. [0018] De préférence l'invention concerne une composition comprenant au moins une phy- toecdysone et/ou au moins un dérivé hérni-synthétique de phytoccdysonc, pour son utilisation dans le traitement d'une maladie neurornusculaire. [0019] Dans des modes particuliers de réalisation, l'invention répond en outre aux caracté- ristiques suivantes, mises en oeuvre séparément ou en chacune de leurs combinaisons techniquement opérantes. [0020] Les phytoccdysones et leurs dérivés sont avantageusement purifiés au grade pharma- ceutique. [0021] Une phytoecdysone utilisable selon l'invention est par exemple la 20-hydroxyecdysone et un dérivé hémi-synthétique de phytoecdysone utilisable est par exemple un dérivé hémi-synthétique de 20-hydroxyecdysone. [0022] A cet effet, selon un mode particulier de réalisation, la composition comporte de la 20-hydroxyecdysone et/ou au moins un dérivé hémi-synthétique de 20-hydroxyecdysone. 6 [0023] La 20-hydroxyccdysone et ses dérivés sont avantageusement purifiés au grade phar- maceutique. [0024] La 20-hydroxyccdysone utilisée est de préférence sous forme d'un extrait de végétaux riches en 20-hydroxyoedysone ou d'une composition comportant à titre d'agent actif la 20-hydroxyccdysone. Des extraits de végétaux riches en 20-hydroxyccdysone sont par exemple des extraits de Stemmacantha carthamoides (aussi appelée Leuzea carthamoides), Cyanotis arachnoidea et Cyanotis vaga. [0025] Les extraits obtenus sont de préférence purifiés au grade pharmaceutique. [0026] Dans un mode de réalisation la 20-hydroxyecdysone est sous forme d'extrait de plante ou d'une partie de plante, ladite plante étant choisie parmi les végétaux contenant au moins 0,5% de 20-hydroxyccdysone en poids sec dudit végétal, ledit extrait comportant au moins 95%, et de préférence au moins 97%, de 20-hydroxyccdysone. Ledit extrait est de préférence purifié au grade pharmaceutique. [0027] Ledit extrait est appelé par la suite BIO101. Tl comporte de façon remarquable entre 0 et 0,05 %, en poids sec de l'extrait, d'impuretés, comme des composés mineurs, susceptibles d'affecter l'innocuité, la disponibilité ou l'efficacité d'une application pharmaceutique dudit extrait. [0028] Selon un mode de réalisation de l'invention, les impuretés sont des composés à 19 ou 21 atomes de carbone, tels que la Ruhrostérone, la Dihydrorubrostérone ou la Poststérone. [0029] La plante à partir de laquelle est produit BI0101 est de préférence choisie parmi Stemmacantha carthamoides (aussi appelée Leuzea carthamoides), Cyanotis arachnoidea et Cyanotis vaga. [0030] Les dérivés de phytoecdysone et notamment de 20-hydroxyecdysone sont obtenus par hémisynthèse et peuvent notamment être obtenus de la façon décrite dans la demande de brevet européenne n° EP 15732785.9. [0031] Selon un mode de réalisation préféré, l'invention vise la composition pour son uti- lisation chez le mammifère dans le traitement d'une maladie neuromusculaire comportant une altération de la fonction musculaire due à une affection spécifique des motoneurones, plus particulièrement due à une altération de la fonction des moto-neurones ou leur dégénérescence. [0032] Dans un mode de réalisation, la fonction musculaire altérée par la maladie neuro- musculaire est celle du muscle strié squelettique ou du myocarde. [0033] Dans un mode de réalisation, l'altération de la fonction musculaire due à la maladie neuromusculaire est liée à une aplasie et/ou une atrophie. [0034] Dans un mode de réalisation particulier, l'invention vise la composition pour son uti- lisation dans le traitement d'une altération des motoneurones chez le mammifère atteint d'une maladie neuromusculaire. 7 [0035] Dans un mode de réalisation particulier, l'invention vise la composition pour son uti- lisation dans le traitement d'une affection des motoneurones résultant d'une altération génétique chez le mammifère atteint d'une maladie neuromusculaire. [0036] Par altération génétique on entend une mutation telle qu'une substitution ou une insertion de nucléotide(s) ou une délétion de nucléotide(s). [0037] Dans un mode de réalisation particulier, l'invention vise la composition pour son uti- lisation chez le mammifère dans le traitement de l'amyotrophie spinale infantile (SMA) ou la sclérose latérale amyotrophique (SLA). [0038] Dans un mode de réalisation particulier, l'invention vise la composition pour son uti- lisation chez le mammifère dans le traitement d'une maladie neuromusculaire sporadique (liée à la mutation aléatoire d'un gène causal ou d'un ou plusieurs gènes de susceptibilité) ou d'une forme familiale dans laquelle on retrouve une mutation d'au moins un gène choisi parmi SMN1 qui intervient dans le cadre de la SMA, de SOD1, TARDBP codant la protéine TAR DNA-binding protein 43, VCP (« Valosin Containing Protein » en terminologie anglo-saxonne) FUS/TLS (« Fused in sarcotna/ translocated in liposarcoma » en terminologie anglo-saxonne) et C9ORF72 (« chromosome 9 open reading fratne 72 » en terminologie anglo-saxonne) impliqués dans le cadre de la SLA. [0039] Dans un mode de réalisation particulier, les phytoccdysoncs sont administrées à une dose comprise entre 3 et 15 milligrammes par kilogramme par jour chez l'humain. On entend ici par phytoecdysone, aussi bien les phytoecdysones de manière générale que leurs dérivés, la 20-hydroxyecdysone (notamment sous forme d'extrait) et ses dérivés. [0040] De préférence, les phytoecdysones sont administrées à une dose de 200 à 1000 mg/ jour, en une ou plusieurs prises, chez un humain adulte, et une dose de 5 à 350 mg/ jour, en une ou plusieurs prises, chez l'humain enfant ou le nourrisson. On entend ici par phytoecdysone, aussi bien les phytoecdysones de manière générale que leurs dérivés, la 20-hydroxyecdysone (notamment sous forme d'extrait) et ses dérivés. [0041] Dans des modes de réalisation la composition comporte au moins un composé considéré comme un dérivé de phytoecdysone, ledit au moins un composé étant de formule générale (I) : 8 [Chem.1] dans laquelle : V-U est une liaison simple carbone-carbone et Y est un groupement hydroxyle ou un hydrogène, ou V-U est une liaison éthylénique C=C ; X est un oxygène, Q est un groupement carbonyle ; R 1 est choisi parmi : un groupement (C1-C6)W(CI-C6) ; un groupement (C1-C6)W(C1-C 6)W(C1-C6) ; un groupement (CI-C6)W(C1-C6)CO3(CI-C6); un groupement (C1-C6)A, A représentant un hétérocycle éventuellement substitué par un groupement de type OH, OMe, (C1-C6), N(CI-C6). CO2(CI-C6) ; un groupement CH2Br W étant un hétéroatome choisi parmi N, O et S, de préférence O et encore plus préférentiellement S. [0042] Dans le cadre de la présente invention on entend par « (C1-C6) », tout groupe alkyle de 1 à 6 atomes de carbones, linéaire ou ramifié, en particulier, les groupes méthyle, éthyle, n-propyle, iso-propyle, n-butyle, iso-butyle, sec-butyle, t-butyle, n-pcntylc, nhexyle. Avantageusement il s'agit d'un groupe méthyle, éthyle, iso-propyle ou t-butyle, en particulier d'un groupe méthyle ou éthyle, plus particulièrement d'un groupe méthyle. [0043] Dans un mode de réalisation préféré, dans la formule (1) : Y est un groupement hydroxyle ; R ' est choisi parmi : un groupement (CI-C6)W(C,-C6) ; un groupement (CI-C6)W(CI - C6)W(CI-C6) ; un groupement (C1-C6)W(CI-C6)CO2(CI-C6); un groupement (C1-C6)A. A représentant un hétérocycle éventuellement substitué par un groupement de type OH, OMe, (C1-C6), N(Ci-C6), CO2(CI-C6) W étant un hétéroatome choisi parmi N. O et S. de préférence O et de préférence encore S. [0044] Dans des modes de réalisation la composition comporte au moins un composé choisi parmi les composés suivants : n° 1 : 9 (2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-trihydroxy-10,13-diméthyl-17-(2-morphol inoacét y1)-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-décahydro-1H-cyclopenta[a] phénanthren-6-one, n° 2 : (2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-trihydroxy-1742- (3-hydroxypyrrolidin-l-y1)acét y1]-10,13-dhnéthyl-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-décahydro-1H-cyclopenta[a] phénanthren6-one; n° 3 : (2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-trihydroxy-1742- (4-hydroxy-l-pipéridypacéty1]- 10,13-dhnéthyl-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-décahydro-1H-cyclopenta[a] phénanthren-6-o ne; n° 4 : (2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-trihydroxy-174214-(2-hydroxyéthyl) -1-pipéridy 1] acétyl ]-10,13-di méthy1-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-décahydro-1H-cyclopenta[a]phénant hrèn-6-onc; n° 5 : (25,3R,5R,1 OR,13R,14S,17S)-1712-(3-diméthylaminopropyl (méthypamino)acétyl]-2,3,14-trihydroxy-10,13-diméthyl-2,3,4,5,9,11,12, 15,16,17-déc ahydro-1H-cyclopenta[a]phénanthren-6-one; n° 6 : 242-oxo-2-[(2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-trihydroxy-10, 13-diméthy1-6-oxo-2, 3,4,5,9,11,12,15,16,17-décahydro-1H-cyclopenta[a]phénanthren-17-y1Whyl] sulfanylac étate d'éthyle; n° 7 : (2S,3R,5R,10R,1312,14S,17S)-17-(2-éthylsulfanylacéty1)-2,3, 14-trihychoxy-10,13-dim éthy1-2,3,4,5,9,11,12,15,16,17-décahydro-1H-cyclopenta[a] phénanthrèn-6-one; n° 8 : (2S,3R,5R,10R,13R,14S,17S)-2,3,14-trihydroxy-1742-(2-hydroxyéthyl sulfanyl)acétyl] - 10,13-diméthy1-2,3,4,5,9, 11,12,15,16,17-décahydro- 1H cyclopenta[a]phénanthrèn-6-one. [0045] Dans des modes de réalisation la composition comporte au moins un composé considéré comme un dérivé de phytoecdysone, ledit au moins un composé étant de formule générale (II) : I Chem.2 [0046] Le composé de formule (II) est par la suite appelé BIO103. [0047] Dans des modes de réalisation la composition est incorporée à une formulation phar- maceutique acceptable pouvant être administrée par voie orale. [0048] Dans le cadre de la présente invention on entend par « pharmaceutique acceptable » ce qui est utile dans la préparation d'une composition pharmaceutique, qui est généralement sûr, non toxique et qui est acceptable pour une utilisation vétérinaire de même que pharmaceutique humaine. Brève description des figures [0049] L'invention sera mieux comprise à la lecture de la description suivante, donnée à titre d'exemple nullement limitatif, et faite en se référant aux figures qui représentent : [0050] [fig.1A] La figure 1A représente la courbe de l'évolution pondérale des souris SMA traitées avec un véhicule ou avec B10101 de la naissance (PO) à 11 jours post-natal (PI 1). Ici et dans la suite de la description, P correspond au nombre de jours après la naissance (postnatal) ; [0051] [fig.1B] La figure 1B est une représentation de Kaplan-Meier des courbes de survie pré-P1 1 des souris SMA traitées avec le véhicule ou avec BI0101 de PO à PI 1 ; [0052] [fig.2] La figure 2 est un histogramme représentant le nombre total de fibres musculaires d'un muscle Tihialis anterior (Tihialis) dc souris contrôles saines (contrôle véhicule), SMA traitées avec le véhicule (SMA véhicule), ou SMA traitées avec B10101 (SMA BI0101) de PO à Pl 1 ; [0053] [fig.3A] La figure 3A est une image représentative dc section transversale du muscle Tihialis anterior colorée à l'Hématoxyline Eosine, de souris contrôle saine (contrôle) ; [0054] [fig.3B] 11 La figure 3B est une image représentative de section transversale du muscle Tihialis anterior colorée à l'Hématoxyline Eosine, de souris SMA traitées avec le véhicule (SMA véhicule) de PO à Pl 1 ; [0055] [fig.3C] La figure 3C est une image représentative de section transversale du muscle Tihialis anterior colorée à l'Hématoxyline Eosine, de souris SMA traitées avec BI0101 (SMA BI0101) de PO à Pl 1 ; [0056] [fig.3D] La figure 3D est un histogramme représentant la surface de section transversale des fibres musculaires du muscle Tihialis anterior (Tihialis) de souris contrôles saines (contrôle véhicule), SMA traitées avec le véhicule (SMA véhicule) de PO à P11, ou SMA traitées avec B10101 (SMA BI0101) de PO à Pl 1 ; [0057] [fig.3E] La figure 3E est un histogramme représentant la surface de section transversale des fibres musculaires du muscle Plantaris de souris contrôles saines (contrôle véhicule), SMA traitées avec le véhicule (SMA véhicule) de PO à Pl 1, ou SMA traitées avec BI0101 (SMA BI0101) de PO à Pl 1 ; [0058] [fig.3F] La figure 3F est un histogramme représentant la surface de section transversale des fibres musculaires du muscle Solcus de souris contrôles saines (contrôle véhicule), SMA traitées avec le véhicule (SMA véhicule) de PO à Pl 1, ou SMA traitées avec BI0101 (SMA BI0101) de PO à Pll ; [0059] [fig.4A] La figure 4A est un histogramme représentant la distribution des fibres musculaires du muscle Tibialis anterior (Tibialis) selon leur surface de section transversale, chez des souris SMA traitées avec le véhicule (SMA véhicule) de PO à P11, ou SMA traitées avec BI0101 (SMA BI0101) de PO à Pll ; [0060] [fig.4B] La figure 4B est un histogramme représentant la distribution des fibres musculaires du muscle Plantaris selon leur surface de section transversale, chez des souris SMA traitées avec le véhicule (SMA véhicule) de PO à P11, ou SMA traitées avec BI0101 (SMA BI0101) de PO à Pll ; [0061] [fig.4C] La figure 4C est un histogramme représentant la distribution des fibres musculaires du muscle Soleus selon leur surface de section transversale, chez des souris SMA traitées avec le véhicule (SMA véhicule) de PO à P11, ou SMA traitées avec BI0101 (SMA BI0101) de PO à Pll ; [0062] [fig.5A] 12 La figure 5A représente un Western Blot illustrant la phosphorylation de AKT du muscle Plantaris de souris saines contrôles (CTL VH), de souris SMA traitées avec le véhicule (SMA VH) de PO à Pl I, ou SMA traitées avec BI0101 (SMA BI0101) de PO à Pll ; [0063] [fig.SB] La figure 5B représente un histogramme illustrant la quantification par densitométrie de la phosphorylation de AKT du muscle Plantaris de souris saines contrôles (CTL VH), de souris SMA traitées avec le véhicule (SMA VH) de PO à P11, ou SMA traitées avec BI0101 (SMA BI0101) de PO à Pll ; [0064] [fig.SC] La figure 5C représente un Western Blet illustrant la phosphorylation de ERK du muscle Plantaris de souris saines contrôles (CTL VH), de souris SMA traitées avec le véhicule (SMA VH) de PO à P11, ou SMA traitées avec BI0101 (SMA BI0101) de PO à Pll ; [0065] [fig.SD] La figure 5D représente un histogramme illustrant la quantification par densitométrie de la phosphorylation de ERK du muscle Plantaris de souris saines contrôles (CTL VH), de souris SMA traitées avec le véhicule (SMA VH) de PO à P11, ou SMA traitées avec BI0101 (SMA BI0101) de PO à Pll ; [0066] [fig.SE] La figure 5C représente un Western Blot illustrant le niveau d'expression de la protéine SMN du muscle Plantaris de souris saines contrôles (CTL VH), de souris SMA traitées avec le véhicule (SMA VH) de PO à P11, ou SMA traitées avec BI0101 (SMA BI0101) de PO à Pll ; [0067] [fig.SF] La figure 5F représente un histogramme illustrant la quantification par densitométrie de la protéine SMN du muscle Plantaris de souris saines contrôles (CTL VH), de souris SMA traitées avec le véhicule (SMA VH) de PO à P11, ou SMA traitées avec BI0101 (SMA BI0101) de PO à Pll ; [0068] [fig.6A] La figure 6A représente un Western Blot illustrant la phosphorylation de AKT au niveau de la moelle épinière de souris saines contrôles (CTL VH), de souris SMA traitées avec le véhicule (SMA VH) de PO à P11, ou SMA traitées avec BI0101 (SMA BI0101) de PO à Pll ; [0069] [fig.6B] La figure 6B représente un histogramme illustrant la quantification par densitométrie de la phosphorylation de AKT au niveau de la moelle épinière de souris saines contrôles (CTL VH), de souris SMA traitées avec le véhicule (SMA VH) de PO à P11, 13 ou SMA traitées avec 13-10101 (SMA BIO101) de PO à Pl 1 ; [0070] [fig.6C] La figure 6C représente un Western Blet illustrant la phosphorylation de ERK au niveau de la moelle épinière de souris saines contrôles (CTL VH), de souris SMA traitées avec le véhicule (SMA VH) de PO à P11, ou SMA traitées avec BI0101 (SMA BI0101) de PO à Pl 1 ; [0071] [fig.6D] La figure 6D représente un histogramme illustrant la quantification par densitométrie de la phosphorylation de ERK au niveau de la moelle épinière de souris saines contrôles (CTL VH), de souris SMA traitées avec le véhicule (SMA VH) de PO à P11, ou SMA traitées avec 13-10101 (SMA BI0101) de PO à Pl 1 ; [0072] [fig.6E] La figure 6E représente un Western Blot illustrant le niveau d'expression de la protéine SMN au niveau de la moelle épinière de souris saines contrôles (CTL VH), de souris SMA traitées avec le véhicule (SMA VH) de PO à Pl 1, ou SMA traitées avec BI0101 (SMA BI0101) de PO à Pl 1 ; [0073] [fig.6F] La figure 6F représente un histogramme illustrant la quantification par densitométrie de la protéine SMN au niveau lombaire de la moelle épinière de souris saines contrôles (CTL VH), de souris SMA traitées avec le véhicule (SMA VH) de PO à P11, ou SMA traitées avec BI0101 (SMA BI0101) de PO à Pli ; [0074] [fig.7A] La figure 7A est une image représentative de marquage en immunofluorescence des motoneurones (anti-Choline Acétyltransférase) sur une coupe transversale de la région lombaire de la moelle épinière de souris contrôles saines (Contrôle Véhicule) ; [0075] [fig.7B] La figure 7B est une image représentative de marquage en immunotluorescence des motoneurones (anti-Choline Acétyltransférase) sur une coupe transversale de la région lombaire de la moelle épinière de souris SMA traitées au véhicule de PO à Pll (SMA Véhicule) ; [0076] [fig.7C] La figure 7C est une image représentative de marquage en immunotluorescence des motoneurones (anti-Choline Acétyltransférase) sur une coupe transversale de la région lombaire de la moelle épinière de souris SMA traitées au BI0101 de PO à Pli (SMA BI0101) ; [0077] [fig.7D] La figure 7D représente un histogramme du nombre total de motoneurones par coupe par hémi moelle épinière ventrale de souris saines contrôles (contrôle véhicule), SMA 14 traitées au véhicule (SMA véhicule) de PO à Pl 1, SMA traitées avec BI0101 (SMA BI0101) de PO à Pl 1 ; [0078] [fig.7E] La figure 7E représente un histogramme du nombre de motoneuroncs latéraux et distaux par coupe par hémi moelle épinière ventrale de souris saines contrôles (contrôle véhicule), SMA traitées au véhicule (SMA véhicule) de PO à P11, SMA traitées avec BI0101 (SMA BI0101) de PO àPli ; [0079] [fig.7F] La figure 7F est un histogramme représentant la distribution des motoneurones selon leur surface de soma, par coupe par hémi moelle épinière ventrale de souris saines contrôles (contrôle véhicule), SMA traitées au véhicule (SMA véhicule) de PO à P11, SMA traitées avec BI0101 (SMA BI0101) de PO à Pl 1 ; [0080] [fig.8A] La figure 8A représente la courbe de poids des souris SMA traitées avec le véhicule ou avec B10103 de PO à Pl 1 ; [0081] [fig.8B] La figure 8B est une représentation de Kaplan-Meier des courbes de survie pré-Pl 1 des souris SMA traitées avec le véhicule ou avec BI0101 de PO à Pl 1 ; [0082] [fig.9A] La figure 9A est un histogramme représentant la surface de la section transversale des fibres musculaires du muscle Tibialis anterior (Tibialis) de souris contrôles sailles (contrôle véhicule), SMA traitées avec le véhicule (SMA véhicule) de PO à Pl 1, ou SMA traitées avec BI0103 (SMA BI0101) de PO à Pli ; [0083] [fig.9B] La figure 9B est un histogramme représentant la surface de section transversale des fibres musculaires du muscle Plantaris de souris contrôles saines (contrôle véhicule), SMA traitées avec le véhicule (SMA véhicule) de PO à Pl 1, ou SMA traitées avec BI0103 (SMA BI0101) de PO à Pli ; [0084] [fig.9C] La figure 9C est un histogramme représentant la surface de section transversale des fibres musculaires du muscle Soleus de souris contrôles saines (contrôle véhicule), SMA traitées avec le véhicule (SMA véhicule) de PO à Pl 1, ou SMA traitées avec BI0103 (SMA BI0101) de PO à Pli ; [0085] [fig.10M La figure 10A est un histogramme représentant la distribution des fibres musculaires du muscle Tibialis anterior (Tibialis) selon la surface de section transversale, de souris SMA traitées avec le véhicule (SMA véhicule) de PO à Pl 1, ou SMA traitées avec BI0103 (SMA BIO103) de PO à Pli ; 100861 Ifig.10B La figure 10B est un histogramme représentant la distribution des fibres musculaires du muscle Plantaris selon la surface de section transversale, de souris SMA traitées avec le véhicule (SMA véhicule) de PO à Pl 1, ou SMA traitées avec B10103 (SMA B10103) de PO à Pll ; [0087] [fig.10C] La figure 10C est un histogramme représentant la distribution des fibres musculaires du muscle Solens selon la surface de section transversale, de souris SMA traitées avec le véhicule (SMA véhicule) de PO à Pl 1, ou SMA traitées avec B10103 (SMA BIO103) de PO à Pl 1 ; Description des modes de réalisation [0088] L'invention sera décrite ci-après dans le contexte particulier de certains de ses domaines d'application préférés, non limitatifs. [0089] 1. Procédé de purification de B10101 [0090] B10101 est préparé à partir dc 20-hydroxyccdysone pure à de l'ordre de 90°k, selon les étapes suivantes : i) dissolution à chaud de 20-hydroxyccdysone pure à de l'ordre de 90% dans du méthanol, filtration et concentration partielle, ii) ajout de 3 volumes d'acétone, iii) refroidissement à une température comprise entre 0 et 5°C, sous agitation, iv) filtration du précipité obtenu, y) rinçages successifs avec de l'acétone et de l'eau, et vi) séchage. [0091] Cette purification met en jeu un processus dc recristallisation approprié à cette molécule et apte à être réalisé à l'échelle industrielle. [0092] La filtration de l'étape i) est réalisée grâce à un filtre à particules de 0,2 wn. [0093] La concentration partielle de l'étape i) est avantageusement effectuée par distillation sous vide, à une température de l'ordre de 50°C, en présence de McOH. [0094] L'étape vi) de séchage est effectuée sous vide à une température de l'ordre dc 50°C. [0095] 2. Procédé de synthèse de B10103 [0096] B10103 est obtenu par hemi-synthèse à partir de 20-hydroxyecdysone puis puri- fication au grade pharmaceutique selon le procédé de préparation suivant : 16 [Chem.3] BI0101 Poststérone EtSH K,CO,iDNe 2G'Cl2Gi) [0097] Schéma de synthèse de BIO103 en 3 étapes : I) coupure oxydante de la chaîne latérale de la 20-hydroxyccdyson entre les carbones C20 et C22 pour obtenir la poststéronc (protocole connu de l'homme du métier), H) introduction d'un atome de brome en position C21, HI) réaction du composé bromé ainsi obtenu avec de l'éthane-thiol. [0098] 3. Activité biologique de BIO101 et BIO103 [0099] a. Analyse phénotypique des effets de BIO101 [0100] Un modèle de souris SMA sévère a été utilisé sur fonds génétique FVB/NRj, ca- ractérisé par l'invalidation de l'exon 7 du gène murin Smn et exprimant 2 copies du transgène humain SMN2 (Smn A7/47; huSMN2 +14 ) (Hsieh et al., 2000). Les souris issues de ces croisements ayant le génotype « FVB/NRj-Smn"A7 huSMN24+ 2 copies » sont décrites comme « SMA ». Ces souris se caractérisent par un défaut de croissance progressif qui s'observe à partir de 4 jours post-natal et présentent une dégénérescence d'environ 50% des motoneurones de la corne ventrale de la moelle épinière en fin de vie, une atrophie musculaire progressive et une durée de vie moyenne de 12 jours environ (Hsieh et al., 2000). Les souris ayant le génotype « FVB/NRj-Smn+JA7 huSMN24+ 2 copies » ne présentent aucun phénotype particulier et sont utilisées comme souris dites « contrôles ». Les souris ont été traitées par gavage quotidien à une dose de 50mg/kg, soit avec la molécule BIO101 complexée à un véhicule (dans le cas présent la cyclodextrine), soit avec le véhicule seul (VH). Le poids et la survie ont été analysés quotidiennement jusqu'à Pl 1. Dans la suite de la description, n correspond à la taille de l'échantillon et p correspond à la « valeur p » utilisée pour quantifier la significativité statistique d'un résultat. 17 [0101] Les résultats démontrent que BIO101 seul (n=18, avec n pour la taille de l'échantillon), en traitement oral quotidien dès la naissance des souris, permet de limiter significativement (p