FR 3088534 A1 20200522 FR 1860597 A 20181116 DD18818 LP 1 Dispositif de préparation d'un volume calibré de plasma sanguin Domaine technique de l'invention La présente invention se rapporte à un dispositif de préparation d'un volume calibré de plasma sanguin. L'invention concerne également un système de préparation d'un volume calibré de plasma sanguin et un procédé de commande mis en oeuvre pour obtenir un échantillon de volume calibré de plasma sanguin à partir d'un échantillon sanguin présent dans un dispositif de prélèvement connecté sur le dispositif de préparation du système. Etat de la technique Beaucoup d'analyses médicales sont réalisées à partir du plasma sanguin plutôt que dans le sang total (Par exemple : mesure des taux hormonaux, des protéines, des glucides, lipides,...). Pour réaliser ces analyses, il est donc nécessaire de procéder à une séparation du plasma sanguin présent dans un échantillon sanguin. La centrifugation est la technique la plus couramment utilisée pour extraire le plasma sanguin. Une centrifugation entre 1000g et 3000g sur une durée de 5mn à 15mn permet de séparer par densité les composants sanguins et de récupérer le plasma surnageant à partir de sang anti-coagulé. Cette technique nécessite une centrifugeuse, ce qui est régulièrement le cas dans un environnement médicalisé mais devient délicat dès lors qu'on est sur le terrain opérationnel. Pour des applications de terrain, des techniques de séparation du plasma sanguin sans centrifugation existent. Elles sont basées sur un principe de filtration, sur un principe de déplétion des globules sanguins par sédimentation, sur un principe d'agglutination des globules rouges, ou encore sur une combinaison de ces différentes méthodes. Les filtres utilisés pour la séparation du plasma sont généralement composés d'un gradient de porosité permettant de retenir les globules sanguins dans l'épaisseur du filtre en fonction de leur taille. Ce gradient permet le passage du plasma et limite l'occlusion du filtre. Par ailleurs, il est connu que la détermination des concentrations des composants à doser dans le sang nécessite une connaissance du volume de plasma sur lequel l'analyse est réalisée. Pour cela, le volume d'analyse doit donc être connu et donc calibré. Dans un laboratoire d'analyse, après centrifugation du sang, un prélèvement calibré de plasma peut facilement être effectué (à la pipette, ou sur robot d'analyse). En revanche, dans un dispositif de type "laboratoire sur puce" ("lab on chip'') DD18818 LP 2 employé sur le terrain, la génération d'un volume calibré de plasma sanguin peut s'avérer plus compliquée, notamment si l'on souhaite récupérer le volume calibré sous forme liquide et non sous une forme sèche. 5 Des dispositifs qui utilisent des membranes séparatives combinées à une solution de calibration du plasma ont déjà été décrits dans l'état de la technique. Le brevet US5169789A décrit un dispositif qui associe une membrane séparative située au-dessus d'une cavité contenant le sang prélevé. Dans un premier temps la sédimentation des globules sanguins entraine une augmentation de la 10 concentration des globules sanguins au fond de la cavité et une déplétion de ces globules sanguins sur le dessus, au voisinage de la membrane séparative. Le couvercle du dispositif porte la membrane séparative et possède une ouverture afin d'introduire une pipette. La pipette permet de générer une dépression suffisante pour aspirer le plasma à travers la membrane. Les caractéristiques de la pipette jouent donc un rôle 15 dans la quantité de plasma collecté. Par ailleurs, ce dispositif ne propose pas de solution pour maîtriser les bulles d'air contenues dans la membrane séparative, ces bulles d'air venant modifier le volume de plasma récupéré dans la pipette. La demande de brevet US 2014/0263059A1 décrit pour sa part un système 20 micro-fluidique de séparation du plasma par filtration en utilisant le principe d'agglutination des globules rouges. La membrane employée pour la filtration présente un gradient de porosité donné et est recouverte d'agents agglutinants (telles que les lectines par exemple) qui conduisent à la formation d'agglutinats de globules rouges. Dans cette solution, la quantité de plasma qui est extraite varie selon la valeur de 25 l'hématocrite (elle diminue quand l'hématocrite augmente). Aujourd'hui, il n'existe pas de solution permettant de préparer un volume calibré de plasma à partir d'un prélèvement sanguin, qui soit : - Simple d'utilisation, évitant l'usage d'une pipette et permettant notamment 30 d'adapter facilement le volume calibré à obtenir en fonction de l'application, - Fiable pour obtenir un volume calibré de plasma, garanti sans bulles d'air, - Utilisable dans différentes conditions, notamment directement sur le terrain et sans employer de matériels spécifiques tels qu'une centrifugeuse. 35 DD18818 LP 3 Exposé de l'invention Ce but est atteint par un dispositif de préparation d'un volume calibré de plasma sanguin à partir d'un échantillon sanguin, ledit dispositif comportant : - Une carte comprenant un réseau fluidique, 5 - Un module de connexion fluidique agencé sur la carte et comprenant : o Au moins un organe de connexion fluidique qui est adapté pour connecter un dispositif de prélèvement d'un échantillon sanguin et qui comporte une première entrée fluidique dudit réseau fluidique par laquelle est introduit l'échantillon sanguin prélevé, 10 o Une première sortie fluidique dudit réseau fluidique connectée à ladite première entrée fluidique, o Des moyens de libération de l'échantillon sanguin à travers ladite première entrée fluidique, - Un module de séparation du plasma sanguin contenu dans ledit échantillon 15 sanguin, comprenant : o Une chambre réalisée dans la cade, o Une membrane séparative séparant ladite chambre en un premier espace et un deuxième espace, o Au moins une deuxième entrée fluidique dudit réseau fluidique reliée 20 à ladite première sortie fluidique du module de connexion et débouchant dans le premier espace de la chambre, o Une deuxième sortie fluidique dudit réseau fluidique débouchant dans ledit deuxième espace de la chambre, - Un module d'obtention d'un volume calibré de plasma sanguin obtenu après 25 séparation, comprenant : o Au moins un ensemble de pompage fluidique, o Une première liaison fluidique reliée à ladite deuxième sortie fluidique via une première vanne fluidique dudit réseau fluidique, o Un premier réservoir de collecte connecté à l'ensemble de pompage 30 via une deuxième liaison fluidique commandée par une deuxième vanne fluidique du réseau, o Un deuxième réservoir de collecte connecté à l'ensemble de pompage via une troisième liaison fluidique commandée par une troisième vanne fluidique du réseau. 35 DD18818 LP 4 Selon une particularité, ledit organe de connexion comporte une première aiguille présentant un premier canal interne entre ladite première entrée fluidique et ladite première sortie fluidique et une extrémité libre contondante. Selon une autre particularité, les moyens de libération de l'échantillon sanguin 5 opèrent par gravité et en ce qu'ils comportent une deuxième aiguille présentant une extrémité libre contondante et un deuxième canal interne relié à une première ouverture réalisée sur la carte, une deuxième ouverture réalisée sur la carte étant reliée audit premier canal interne de ladite première aiguille. Selon une autre particularité, ladite première ouverture et ladite deuxième 10 ouverture sont chacune recouvertes d'un filtre hydrophobe. Selon une réalisation particulière, l'ensemble de pompage comporte une seule pompe et le premier réservoir de collecte et le deuxième réservoir de collecte sont reliés en parallèle à ladite pompe respectivement via la deuxième liaison fluidique et via la troisième liaison fluidique. 15 Selon une autre réalisation particulière, l'ensemble de pompage comporte deux pompes, une première pompe reliée par la première liaison fluidique à la deuxième sortie fluidique et au premier réservoir de collecte par la deuxième liaison fluidique et une deuxième pompe reliée par une quatrième liaison fluidique au premier réservoir de collecte et au deuxième réservoir de collecte par la troisième liaison fluidique. 20 Selon cette autre réalisation particulière, le module d'obtention d'un volume calibré de plasma sanguin comporte une cinquième liaison fluidique reliant directement ladite première pompe audit deuxième réservoir de collecte. Selon une autre particularité, chaque pompe comporte une cavité réalisée dans la carte et une membrane déformable séparant de manière étanche ladite cavité en un 25 premier volume destiné à être connecté à un point de commande pneumatique et un deuxième volume dans lequel débouche une ou plusieurs desdites liaisons fluidiques. Selon une autre particularité, la cavité de ladite seule pompe présente un volume qui correspond à un volume unitaire du volume calibré à obtenir dans le deuxième réservoir de collecte. 30 Selon une autre particularité, la cavité de ladite deuxième pompe présente un volume qui correspond à un volume unitaire du volume calibré à obtenir dans le deuxième réservoir de collecte. Selon une autre particularité, la chambre du module de séparation du plasma sanguin comporte un volume mort agencé entre ladite membrane séparative et au moins 35 une paroi du deuxième espace de la chambre. DD18818 LP 5 Selon une autre particularité, la carte comporte une cavité agencée sous ladite membrane séparative et agencée entre la première sortie fluidique et la deuxième entrée fluidique. Selon une autre particularité, le deuxième réservoir de collecte comporte 5 plusieurs chambres fluidiques agencées en parallèle. L'invention concerne également un système de préparation d'un volume calibré de plasma sanguin, ledit système comportant : - un dispositif tel que défini ci-dessus, 10 un système d'actionnement pneumatique comprenant au moins un point de commande pneumatique connecté à l'ensemble de pompage et plusieurs points de commande pneumatiques connectés chacun à une vanne fluidique distincte du réseau fluidique, - une unité de traitement et de commande dudit système d'actionnement 15 pneumatique, configurée pour exécuter une séquence de commande adaptée pour obtenir un volume calibré de plasma sanguin. Selon une particularité, le système comporte une pompe connectée sur ledit dispositif et reliée à ladite première entrée fluidique pour aspirer l'échantillon sanguin dans ledit dispositif. 20 L'invention concerne également un procédé de commande mis en oeuvre dans une unité de commande pour obtenir un échantillon de volume calibré de plasma sanguin à partir d'un échantillon sanguin présent dans un dispositif de prélèvement connecté sur le dispositif de préparation du système tel que celui défini ci-dessus, ledit 25 procédé comportant une séquence de commande ayant les étapes suivantes : a)Commande d'ouverture de la première vanne fluidique, de fermeture de la deuxième vanne fluidique et de fermeture de la troisième vanne fluidique, b) Commande de l'ensemble de pompage pour aspiration dudit échantillon 30 sanguin à travers ladite membrane séparative, c) Commande de fermeture de la première vanne fluidique et d'ouverture de la deuxième vanne fluidique, d) Commande de l'ensemble de pompage pour remplissage au moins partiel dudit premier réservoir de collecte, 35 e) Mise en oeuvre des étapes a) à d) jusqu'à remplissage au moins partiel du premier réservoir de collecte, DD18818 LP 6 f) Commande d'ouverture de la deuxième vanne fluidique et de fermeture de la troisième vanne fluidique, g)Commande de l'ensemble de pompage pour aspiration dudit plasma sanguin contenu dans le premier réservoir de collecte, 5 h) Commande de fermeture de la deuxième vanne fluidique et d'ouverture de la troisième vanne fluidique, i) Commande de l'ensemble de pompage pour remplissage du deuxième réservoir de collecte, j) Mise en oeuvre des étapes f) à i) jusqu'à obtenir le volume calibré souhaité 10 dans le deuxième réservoir de collecte. Brève description des figures D'autres caractéristiques et avantages vont apparaître dans la description détaillée qui suit, faite en regard des dessins annexés dans lesquels : 15 La figure 1 représente de manière schématique le système de préparation conforme à l'invention ; Les figures 2A à 2C représentent, vue en coupe, la carte du dispositif de préparation de l'invention selon différentes variantes de réalisation ; La figure 3 illustre le principe de fonctionnement d'une pompe employée 20 dans le dispositif de l'invention ; La figure 4 représente en vue de dessus une réalisation particulière de la carte micro-fluidique employée dans le dispositif de préparation conforme à l'invention ; La figure 5 représente les différentes étapes du procédé de préparation d'un 25 volume calibré de plasma sanguin ; La figure 6 montre une variante de réalisation du réseau fluidique employé dans le dispositif de l'invention. 30 Description détaillée d'au moins un mode de réalisation Dans la suite de la description, les termes : "haut", "bas", "au-dessous", "au-dessus", "supérieur", "inférieur" ou termes équivalents sont à considérer de manière non limitative en suivant un axe vertical (X) visible sur les dessins ; 35 "amont" et "aval" sont à considérer en tenant compte du sens de déplacement du fluide dans le système ; DD18818 LP 7 En référence à la figure 1, le système de préparation d'un volume calibré de plasma sanguin comporte plusieurs parties : - Un dispositif 1 de préparation du volume calibré de plasma sanguin, se 5 présentant sous la forme d'une unique carte 10 ; - Un système d'actionnement de type pneumatique SP permettant d'actionner des éléments à commande pneumatique présents sur la carte ; - Une unité de traitement et de commande UC configurée pour exécuter une séquence de commande de différents points de commande pneumatique 10 du système d'actionnement pneumatique, en vue d'obtenir, à partir d'un échantillon sanguin prélevé, le volume calibré de plasma sanguin ; cette unité de traitement et de commande peut comporter un microcontrôleur et des entrées/sorties connectées au système d'actionnement pneumatique ; 15 De manière générale, la carte 10 du dispositif comporte notamment un réseau fluidique RF ou même micro-fluidique pouvant comporter des réservoirs, des canaux fluidiques, des vannes et une ou plusieurs pompes. La carte peut également comporter plusieurs points de commande pneumatique destinés chacun à la commande pneumatique d'un élément du réseau fluidique de la carte. Un point de commande 20 pneumatique comporte une entrée et un canal pneumatique par lesquels peut être appliquée une pression ou une dépression d'air. Le dispositif 1 comporte avantageusement trois modules distincts : - Un module M1 de connexion fluidique sur lequel peut être connecté un 25 dispositif de prélèvement sanguin ; - Un module M2 de séparation du plasma sanguin contenu dans l'échantillon sanguin ; - Un module M3 d'obtention d'au moins un volume calibré de plasma sanguin, après séparation ; 30 Selon un aspect particulier de l'invention, ces trois modules sont avantageusement réalisés sur la même carte 10 et sont interconnectés via le réseau fluidique RF de la carte. On considérera que la carte 10 présente une face supérieure, une face inférieure et une épaisseur formant sa tranche. La carte peut être réalisée par 35 assemblage de plusieurs substrats et le réseau fluidique est avantageusement créé par DD18818 LP 8 gravure ou moulage sur un ou plusieurs des substrats de la carte. Ce type de carte 10 étant bien connu, sa réalisation n'est pas décrite dans la présente demande. En référence à la figure 1, le module M1 de connexion fluidique permet une 5 connexion directe d'un dispositif de prélèvement sanguin, tel que par exemple le tube 2 utilisé lors de la prise de sang sur le patient, destiné à contenir un échantillon sanguin ECH de sang total. Ce tube 2 peut être bouché par un septum 20. Ce module M1 peut comporter au moins une première aiguille 100 en proéminence sur la face supérieure de la carte 10. La première aiguille 100 comporte un 10 canal interne agencé entre une entrée fluidique et une sortie fluidique, et une extrémité libre 101 contondante pour perforer le septum 20 du tube 2 de prélèvement. Sa sortie fluidique est reliée à une cavité 103 via un canal fluidique 102 du réseau RF de la carte. Le module M1 comporte ainsi un circuit fluidique de prélèvement comportant le canal de l'aiguille, le canal 102 et la cavité 103 réalisée dans la carte. 15 La connexion du tube 2 sur ce module M1 est réalisée en perçant le septum 20 par l'extrémité 101 de l'aiguille 100. Une liaison étanche permet d'éviter les fuites de liquide autour de la connexion. Pour libérer l'échantillon sanguin ECH présent dans le tube 2, différentes 20 solutions peuvent être envisagées. Trois exemples sont donnés ci-dessous. Par gravité - Figure 2A : Dans ce cas, le module M1 comporte en plus une deuxième aiguille 104 du même type que la première aiguille, c'est-à-dire avec un canal interne et une extrémité libre contondante pour perforer le septum apposé sur le tube. 25 Son canal est relié à un premier évent 105 réalisé sur la carte via un canal fluidique 106 du réseau RF de la carte. Ce premier évent peut être recouvert d'un filtre hydrophobe 107. Pour permettre la libération du fluide présent dans le tube, la cavité 103 est reliée à un deuxième évent 108 via un canal 109 du réseau RF. Ce deuxième évent 108 peut également être recouvert d'un filtre hydrophobe 110. On peut noter que chaque filtre 30 hydrophobe présent dans le dispositif permet de laisser passer les gaz (par exemple : air, azote, vapeur d'eau...) mais pas les liquides. Lors de la connexion du tube sur le module, le septum 20 est perforé par les aiguilles pour permettre au sang de s'écouler par gravité dans la cavité du circuit fluidique de prélèvement. La longueur de la deuxième aiguille 104 sera choisie supérieure à celle de la première aiguille 100 et est adaptée 35 pour rester en contact avec l'air présent dans le tube, au-dessus du niveau du sang prélevé dans le tube. DD18818 LP 9 Par aspiration - Figure 2B : Dans cette configuration, le module M1 peut présenter une architecture à une seule aiguille 100 venant perforer le septum 20. Une pompe 3 est connectée au deuxième évent 108 référencée ci-dessus, à travers le filtre 5 hydrophobe 110. Le filtre hydrophobe 110 bloque le sang et assure un remplissage complet de la cavité 103 sans contrainte de durée d'application de la dépression. De manière avantageuse, le vide d'air appliqué par la pompe 3 peut être absorbé de différentes manières, par exemple en utilisant un tube déformable ou en intégrant au circuit fluidique de prélèvement du module une membrane déformable 111. Cette 10 membrane 111 est tendue sur une face de la cade 10 pour recouvrir au moins partiellement la cavité 103 réalisée dans la carte. Lors de l'aspiration générée par la pompe 3, la membrane 111 sera donc amenée à se déformer pour compenser le phénomène d'aspiration. Cependant, comme le volume à aspirer est faible, il serait également possible de se passer de ces solutions de compensation du vide d'air généré 15 par la pompe 3 lors de l'aspiration. Par gravité et aspiration - Figure 2C : Cette architecture correspond à celle de la figure 2A, à laquelle est ajoutée la pompe 3 de l'architecture de la figure 2B, permettant ainsi de compléter la libération par gravité. L'actionnement de la pompe 3 permet 20 d'aspirer l'échantillon dans le réseau fluidique RF, comme décrit précédemment. Le module M2 de séparation du plasma sanguin comporte préférentiellement une membrane 4 séparative faisant office de filtre (représentée sur les figures 2A à 2C). 25 Celle-ci est logée dans la carte 10 pour séparer une chambre en deux espaces distincts. Un premier espace, côté amont, peut correspondre à la cavité 103 du circuit fluidique de prélèvement qui contient le sang prélevé par le premier module M1 et un deuxième espace 112, côté aval, qui est destiné à recevoir un volume de plasma obtenu après filtration par la membrane 4. Selon une configuration particulière, la cavité est située 30 sous la membrane 4 et le deuxième espace est situé au-dessus de la membrane 4. De manière connue, la membrane 4 séparative est spécifiquement étudiée pour la génération de plasma à partir du sang total. La nature de la membrane permet aux composants cellulaires de sang (globules rouges, globules blancs et plaquettes) d'être capturés dans des larges pores de la membrane sans lyse, alors que le plasma s'écoule 35 dans des pores plus petits du côté aval de la membrane. Ce type de membrane est bien DD18818 LP 10 connu et n'est pas décrit en détails dans la présente demande. Il pourra s'agir d'une membrane telle que décrite dans la demande de brevet US2014/0263059A1. Il faut noter que pour passer à travers la membrane 4, il est nécessaire de venir aspirer l'échantillon sanguin présent dans la cavité 103. Cette aspiration est réalisée en 5 employant une pompe du module M3 d'obtention du volume calibré de plasma dont l'architecture et le principe de fonctionnement sont décrits ci-dessous. Le module M3 d'obtention du volume calibré de plasma utilise en effet une pompe de type fluidique, à actionnement pneumatique. 10 Ce type de pompe 5 représenté sur la figure 3 (E0 - dans l'état non actionné) comporte une membrane 50 déformable agencée dans une cavité de la carte et séparant la cavité en deux volumes 51, 52 étanches l'un par rapport à l'autre. Le premier volume 51 est destiné à pomper le plasma obtenu après séparation et le deuxième volume 52 permet l'actionnement pneumatique de la membrane. 15 Au moins deux liaisons fluidiques 53, 54 du réseau débouchent dans le premier volume 51 et une liaison pneumatique 55 débouche dans le deuxième volume 52. La première liaison fluidique 53 est commandée par une première vanne fluidique V1 commandable à l'ouverture ou à la fermeture par le système d'actionnement pneumatique SP. 20 La deuxième liaison fluidique 54 est commandée par une deuxième vanne fluidique V2 commandable à l'ouverture ou à la fermeture par le système d'actionnement pneumatique SE'. Bien entendu, dans la solution de l'invention, les deux vannes fluidiques pourront être de type normalement fermé ou normalement ouvert, de type monostable 25 ou bistable. On verra également que la pompe peut être connectée à plus de deux liaisons fluidiques commandées, selon la configuration envisagée. En référence à la figure 3, le principe de fonctionnement d'une telle pompe 5 est le suivant : 30 El : Une pression est appliquée dans le deuxième volume de la pompe pour plaquer la membrane 50 au fond de la cavité et initier le principe d'aspiration ; La vanne V2 est alors ouverte et la vanne V1 peut être ouverte ou fermée ; La première vanne fluidique V1 est commandée à l'ouverture et la deuxième 35 vanne fluidique V2 est commandée à la fermeture ; DD18818 LP 11 - E2 : Une dépression est appliquée dans le deuxième volume 52 pour faire remonter la membrane 50, créant une aspiration du fluide par la première liaison fluidique 53 dans le premier volume 51 de la cavité. La dépression est avantageusement appliquée jusqu'à plaquer la membrane 50 en haut 5 de la cavité et remplissage complet du premier volume 51 (qui correspond alors au volume complet de la cavité de la pompe) ; - La première vanne fluidique V1 est commandée à la fermeture et la deuxième vanne fluidique V2 est commandée à l'ouverture. - E3 : Une pression est appliquée à la membrane 50 pour pousser le fluide 10 présent dans le premier volume 51 par la deuxième liaison fluidique 54 jusqu'à plaquer la membrane 50 au fond de la cavité et évacuer la totalité du fluide en dehors de la pompe 5 ; 15 Ce principe de fonctionnement de la pompe 5 est appliqué au dispositif de l'invention, notamment à son module M3 d'obtention de volume calibré de plasma. Le module M3 d'obtention de volume calibré de plasma comporte en effet un ensemble de pompage EP pouvant inclure une seule pompe 5 ou deux pompes 5A, 5B selon deux modes de réalisation possible. 20 Dans les deux réalisations, la première liaison fluidique 53 évoquée ci-dessus communique avec le deuxième espace 112 de ladite chambre à travers la première vanne fluidique V1 commandable à l'ouverture ou à la fermeture par le système d'actionnement pneumatique SP, afin de permettre l'aspiration du plasma dans le module M3. La deuxième liaison fluidique 54 communique pour sa part avec un premier 25 réservoir de collecte R1 du module M3 de calibration à travers la deuxième vanne fluidique V2 commandable à l'ouverture ou à la fermeture par le système d'actionnement pneumatique SP. Par ailleurs, le module M3 comporte également un deuxième réservoir de collecte R2. 30 L'architecture fluidique du module M3 est réalisée sur la carte 10. L'architecture fluidique d'une réalisation à une seule pompe est représentée sur la figure 4. Sur cette figure 4, on a ainsi représenté : 35 - La membrane séparative 4; - La pompe 5 ; DD18818 LP 12 La liaison fluidique 53 reliant ladite pompes au deuxième espace 112 de la chambre ; - La première vanne fluidique V1 commandable à l'ouverture ou à la fermeture via un point de commande pneumatique P1 ; 5 Le premier réservoir de collecte R1 ; - La deuxième liaison fluidique 54 reliant la pompe 5 au premier réservoir de collecte R1 ; La deuxième vanne fluidique V2 commandable à l'ouverture ou à la fermeture via un point de commande pneumatique P2 ; 10 Le deuxième réservoir de collecte R2; - Une troisième liaison fluidique 56 reliant le premier volume 51 de la pompe au deuxième réservoir de collecte R2 ; - Une troisième vanne fluidique V3 commandable à l'ouverture ou à la fermeture via un point de commande pneumatique P3, cette vanne V3 étant 15 agencée sur la troisième liaison fluidique 56 ; Chaque réservoir de collecte R1, R2 peut prendre une forme quelconque et un volume quelconque. Bien entendu, ils seront tous les deux avantageusement d'un volume supérieur ou égal au volume de la cavité de la pompe 5. Il pourra notamment 20 s'agir d'un simple canal fluidique, dont la section (constante ou non) et la longueur définissent le volume du réservoir. Dans la première réalisation, la pompes est ainsi reliée aux deux réservoirs en parallèle, via deux liaisons fluidiques distinctes commandables chacune à l'ouverture ou à la fermeture. 25 Dans la réalisation à une seule pompe 5, le volume de la pompe, correspondant au volume maximal de sang qu'elle peut aspirer dans sa cavité, correspond à l'unité de base du volume calibré à obtenir. En effet, comme il est possible de faire un ou plusieurs cycles de pompage, on peut obtenir dans le deuxième réservoir de collecte R2 défini ci-dessus un volume égal à celui de la pompe, multiplié par le nombre de cycles de 30 pompage effectué. Partant de cette première architecture, en référence à la figure 5, l'obtention d'un volume calibré de plasma sanguin se déroule comme explicité ci-dessous. Sur la figure 5, l'état 0 d'une vanne correspond à son état fermé, c'est-à-dire qu'elle n'autorise 35 pas l'écoulement du fluide dans la liaison fluidique qu'elle commande, et l'état 1 d'une DD18818 LP 13 vanne correspond à son état ouvert, c'est-à-dire qu'elle autorise l'écoulement du fluide dans la liaison fluidique qu'elle commande. - Initialement, la première vanne fluidique V1 est ouverte et la deuxième vanne fluidique V2 et la troisième vanne fluidique V3 sont fermées 5 - El 0 : La pompe 5 est actionnée comme expliqué ci-dessus pour aspirer du plasma dans son premier volume 51. L'aspiration générée permet d'entraîner le sang prélevé et présent dans la cavité 103 à travers la membrane séparative 4 pour séparer le plasma sanguin. Le plasma séparé présent dans ledit deuxième espace 112, est ensuite transféré dans le 10 premier volume 51 de la pompe via la première liaison fluidique 53. Le premier volume Si de la pompe est rempli en totalité par le plasma sanguin et par des éventuelles bulles d'air. - La première vanne fluidique V1 est fermée. La deuxième vanne fluidique V2 est ouverte et la troisième vanne fluidique V3 est maintenue fermée. 15 - E20 : La pompe 5 est actionnée pour déplacer le plasma présent dans son deuxième volume 51 par la deuxième liaison fluidique 54 en direction du premier réservoir de collecte Ri. - Le cycle de pompage correspondant aux étapes E1 0 à E20 précédentes peut être mis en oeuvre une ou plusieurs fois. Une fois que le premier 20 réservoir de collecte R1 est rempli de plasma selon la quantité souhaitée, la première vanne fluidique V1 est fermée, la deuxième vanne fluidique V2 est ouverte et la troisième vanne fluidique V3 est fermée. - E30 : L'actionnement de la pompe 5 permet d'aspirer un premier volume calibré unitaire de plasma en provenance du premier réservoir de collecte 25 R1 dans le premier volume 51 de la pompe via la deuxième liaison fluidique 54. - La première vanne fluidique V1 reste fermée, la deuxième vanne fluidique V2 est fermée et la troisième vanne fluidique V3 est ouverte. - E40 : La pompe 5 est actionnée pour déplacer le volume calibré unitaire de 30 plasma prélevé dans son premier volume 51 vers le deuxième réservoir de collecte R2 à travers la troisième liaison fluidique 56. Le cycle de pompage des étapes E30 à E40 peut être mis en oeuvre jusqu'à obtention du volume total calibré demandé. Le nombre de cycles de pompage est appliqué en fonction du volume total calibré à obtenir. Le 35 volume de plasma présent dans le premier réservoir de collecte R1 pourra DD18818 LP 14 être au moins égal au volume de plasma calibré à obtenir dans le deuxième réservoir de collecte R2. Selon une particularité de cette réalisation, le volume de la cavité de la pompe 5 peut être choisi faible afin de permettre une gamme de volumes avec une bonne 5 résolution. Par exemple on peut avoir une pompe de 5pL que l'on va actionner une ou plusieurs fois pour obtenir des volumes de plasma calibrés allant de 5pL, 10pL, 15pL, 20pL... Dans la deuxième réalisation représentée sur la figure 6, l'ensemble de 10 pompage EP du module d'obtention du volume calibré peut comporter deux pompes 5A, 5B. La première pompe 5A est employée pour récupérer le plasma en provenance du module M2 de séparation et le diriger vers le premier réservoir de collecte R1 ou directement vers le deuxième réservoir de collecte R2. Cette première pompe 5A peut 15 avoir une capacité importante (par exemple 50pL, 100pL etc...) afin de permettre de limiter le nombre d'actionnements. La deuxième pompe 5B présente un volume plus faible (par exemple 5pL, 10pL, 25pL, etc...) et est employée pour prélever le plasma en provenance du premier réservoir de collecte R1 pour le transférer vers le deuxième réservoir de collecte R2 correspondant au volume calibré. Dans cette réalisation, comme 20 illustré par la figure 6, la première pompe 5A, le premier réservoir de collecte R1, la deuxième pompe 5B et le deuxième réservoir de collecte R2 sont alors connectés en série de la manière suivante : - Première liaison fluidique 53, - Première vanne fluidique V1 contrôlant la première liaison fluidique, 25 - Première pompe 5A, - Premier réservoir de collecte R1, - Deuxième liaison fluidique 54, - Deuxième vanne fluidique V2 contrôlant la deuxième liaison fluidique, - Nouvelle liaison fluidique, dite quatrième liaison fluidique 57, 30 - Nouvelle vanne fluidique V4 contrôlant la quatrième liaison fluidique 57, - Deuxième pompe 5B, - Troisième liaison fluidique 56, - Troisième vanne fluidique V3 contrôlant la troisième liaison fluidique 56, Par ailleurs, en plus de cette configuration en série, une cinquième liaison 35 fluidique 58 relie donc directement la première pompe 5A au deuxième réservoir de collecte R2, via une cinquième vanne fluidique V5. DD18818 LP 15 Le fonctionnement de la deuxième réalisation est le suivant. La première pompe 5A permet d'aspirer le plasma séparé dans le module M2 vers le premier réservoir de collecte R-1 via la liaison fluidique 54 ou directement vers le deuxième réservoir de collecte R2 via la liaison fluidique 58. Un ou plusieurs cycles de pompage de la première 5 pompe 5A peuvent être réalisés selon la quantité de plasma à transférer. Comme la première pompe 5A peut être choisie avec un volume supérieur à celui de la deuxième pompe 53, celle-ci peut ainsi servir à transférer directement un plus gros volume de plasma vers le deuxième réservoir de collecte R2. Puis, pour affiner le volume calibré à obtenir, une quantité de plasma est transférée du premier réservoir de collecte R1 vers 10 le deuxième réservoir de collecte R2 en employant la deuxième pompe 5B. Le volume calibré à obtenir pourra ainsi être déterminé à partir du nombre de cycles de pompage appliqué à la première pompe 5A directement vers le deuxième réservoir de collecte R2 puis par le nombre de cycles de pompage appliqué à la deuxième pompe 5B du premier réservoir de collecte R1 vers le deuxième réservoir de collecte R2. On peut noter qu'il 15 est également possible d'utiliser la première pompe 5A pour transférer un volume de plasma dans le premier réservoir de collecte R1 puis de transférer du plasma jusqu'à obtenir le volume calibré en employant la deuxième pompe 5B. Dans la première architecture et la deuxième architecture, la récupération du 20 plasma sanguin est toujours réalisée en deux étapes et de manière asynchrone. Cette solution permet notamment de supprimer les bulles d'air. Le stockage intermédiaire d'un volume de plasma dans le premier réservoir de collecte R1 permet en effet d'éliminer les bulles d'air dans ce réservoir, avant transfert vers le deuxième réservoir de collecte R2. En effet, lors du premier pompage vers le premier réservoir de collecte R1, les bulles 25 d'air sont évacuées et le deuxième pompage vers le deuxième réservoir de collecte R2 à volume calibré permet de récupérer du plasma sans bulle d'air. Selon une réalisation particulière, le deuxième réservoir de collecte R2 peut être remplacé par un ensemble de plusieurs chambres reliées en parallèle à un même canal 30 de répartition. Chaque chambre pourra loger un réactif différent permettant in fine le dosage d'un analyte particulier dans chaque chambre. Selon une particularité, les deux réservoirs de collecte R1, R2 peuvent être ouverts à l'air ambiant, être dotés d'un évent ou être recouverts d'une membrane déformable. 35 On comprend de chaque réalisation décrite ci-dessus que la filtration à travers la membrane séparative 4 est réalisée du bas vers le haut (lorsque le dispositif est DD18818 LP 16 disposé sur un support plan), c'est-à-dire de la cavité 103 vers la pompe 5. En plaçant la cavité 103 sous la membrane 4, la partie la moins riche en éléments figurés de l'échantillon du sang est filtrée en premier lors de l'aspiration, permettant d'éviter de surcharger la membrane dès le début du processus de séparation du plasma. 5 Selon une autre particularité, le module M2 de séparation peut présenter un volume mort au-dessus de la membrane afin de mieux répartir la pression sur toute la membrane lors de l'aspiration par la pompe. De manière avantageuse, il serait possible de prévoir une analyse du plasma directement dans le deuxième réservoir de collecte R2 à volume calibré ou, si elles sont 10 présentes, dans chaque chambre si ce deuxième réservoir R2 est remplacé par un réseau de plusieurs chambres en parallèle. Le procédé permettant d'obtenir un volume final calibré dans le deuxième réservoir de collecte R2 est réalisé en suivant une séquence de commande adaptée, 15 notamment en envoyant des ordres de commande successifs au système d'acfionnement pneumatique. La séquence de commande est exécutée par l'unité de traitement et de commande UC du système. Après activation du système de préparation et en considérant de manière non 20 limitative que les vannes fluidiques sont de type normalement fermé, pour obtenir un volume calibré, la séquence exécutée par l'unité de traitement et de commande UC sur une architecture dotée d'un ensemble de pompage EP à une seule pompe 5, peut comporter les étapes suivantes : - Génération d'une commande et émission de la commande à une pompe 3 25 (si la libération est réalisée par aspiration) externe pour aspirer l'échantillon sanguin en dehors du tube 2 après avoir connecté celui-ci sur le module M1 de connexion ; Cette commande est optionnelle si la libération est réalisée uniquement par gravité ; - Génération d'une commande à destination du système d'actionnement 30 pneumatique SP pour commander la première vanne fluidique V1 à l'ouverture ; - Génération d'une commande et émission de la commande vers le système d'acfionnement pneumatique SP pour commander la pompe 5 afin d'aspirer l'échantillon sanguin ECH à travers la membrane séparative pour récupérer 35 le plasma sanguin dans le premier volume 51 de la pompe 5; DD18818 LP 17 - Génération d'une commande à destination du système d'actionnement pneumatique SE' pour commander la deuxième vanne fluidique V2 à l'ouverture ; - Génération d'une commande et émission de la commande vers le système 5 d'actionnement pneumatique SE' pour commander la pompe 5 afin d'injecter le plasma sanguin présent dans le volume de la pompe 5 vers le premier réservoir de collecte R1 ; - L'unité de commande UC peut déterminer le nombre de cycles de pompage nécessaires pour remplir suffisamment le premier réservoir de collecte ; 10 Une fois le premier réservoir de collecte R1 rempli au moins partiellement de plasma sanguin (éventuellement obtenu après plusieurs cycles de pompage), génération d'une commande à destination du système d'actionnement pneumatique SE' pour commander la deuxième vanne fluidique V2 à l'ouverture ; 15 - Génération d'une commande et émission de la commande vers le système d'actionnement pneumatique SE' pour commander la pompe 5 afin d'aspirer le plasma sanguin présent dans le premier réservoir de collecte R1 vers le volume de la pompe 5 ; - Génération d'une commande à destination du système d'actionnement 20 pneumatique pour commander la troisième vanne fluidique V3 à l'ouverture ; - Génération d'une commande et émission de la commande vers le système d'actionnement pneumatique SE' pour commander la pompe 5 afin d'injecter le plasma sanguin présent dans le volume de la pompe vers le deuxième 25 réservoir de collecte R2 ; - L'unité de commande UC peut déterminer le nombre de cycles de pompage nécessaires pour obtenir le volume calibré souhaité dans le deuxième réservoir de collecte R2 ; 30 Le principe de commande sera identique pour un ensemble de pompage EP à deux pompes tel que décrit ci-dessus. La solution de l'invention présente de nombreux avantages parmi lesquels : 35 - Une calibration du volume de plasma précise, notamment grâce à l'élimination des bulles d'air par le passage via le premier réservoir de collecte ; DD18818 LP 18 - Possibilité de choisir le volume calibré en adaptant le nombre de cycles de pompage vers le deuxième réservoir de collecte ; - Possibilité de réaliser plusieurs analyses en parallèle sur la même carte avec des volumes de plasma différents dans le cas d'une solution à plusieurs chambres 5 en parallèle ; - Réalimentation automatique du sang dans la cavité par gravité ; - Contrôle précis de la pression pour éviter l'hémolyse ; REVENDICATIONS1. Dispositif (1) de préparation d'un volume calibré de plasma sanguin à partir d'un échantillon sanguin (ECH), caractérisé en ce qu'il comporte Une carte (10) comprenant un réseau fluidique (RF), Un module (M1) de connexion fluidique agencé sur la carte et compre- nant : Au moins un organe de connexion fluidique qui est adapté pour connecter un dispositif de prélèvement d'un échantillon sanguin et qui comporte une première entrée fluidique dudit réseau flui- digue par laquelle est introduit l'échantillon sanguin prélevé, o Une première sortie fluidique dudit réseau fluidique connectée à ladite première entrée fluidique, o Des moyens de libération de l'échantillon sanguin à travers ladite première entrée fluidique, - Un module (M2) de séparation du plasma sanguin contenu dans ledit échantillon sanguin (ECH), comprenant : o Une chambre réalisée dans la carte, o Une membrane séparative (4) séparant ladite chambre en un premier espace et un deuxième espace, o Au moins une deuxième entrée fluidique dudit réseau fluidique reliée à ladite première sortie fluidique du module (M1) de connexion et débouchant dans le premier espace de la chambre, o Une deuxième sortie fluidique dudit réseau fluidique débouchant dans ledit deuxième espace de la chambre, Un module (M3) d'obtention d'un volume calibré de plasma sanguin ob- tenu après séparation, comprenant o Au moins un ensemble de pompage (EP) fluidique, o Une première liaison fluidique reliée à ladite deuxième sortie fluidique via une première vanne fluidique (V1) dudit réseau flui- clique. o Un premier réservoir de collecte (R1) connecté à l'ensemble de pompage (EP) via une deuxième liaison fluidique commandée par une deuxième vanne fluidique (V2) du réseau, 20 o Un deuxième réservoir de collecte (R2) connecté à l'ensemble de pompage (EP) via une troisième liaison fluidique commandée par une troisième vanne fluidique (V3) du réseau. 5 2. Dispositif selon la revendication 1, caractérisé en ce que ledit organe de connexion comporte une première aiguille (100) présentant un premier canal interne entre ladite première entrée fluidique et ladite première sortie fluidique et une extrémité libre contondante (101). 3. Dispositif selon la revendication 2, caractérisé en ce que les moyens de 10 libération de l'échantillon sanguin opèrent par gravité et en ce qu'ils comportent une deuxième aiguille (104) présentant une extrémité libre contondante et un deuxième canal interne relié à une première ouverture (105) réalisée sur la carte, une deuxième ouverture (106) réalisée sur la carte étant reliée audit premier canal interne de ladite première aiguille (100). 15 4. Dispositif selon la revendication 3, caractérisé en ce que ladite première ouverture et ladite deuxième ouverture sont chacune recouvertes d'un filtre hydrophobe (107, 110). 5. Dispositif selon l'une des revendications 1 à 4, caractérisé en ce que l'ensemble de pompage (EP) comporte une seule pompe (5) et en ce que le pre- 20 mier réservoir de collecte (R1) et le deuxième réservoir de collecte (R2) sont re- liés en parallèle à ladite pompe respectivement via la deuxième liaison fluidique et via la troisième liaison fluidique. 6. Dispositif selon la revendication 5, caractérisé en ce que la pompe (5) comporte une cavité réalisée dans la carte et une membrane (5) deformable sé- 25 parant de manière étanche ladite cavité en un premier volume (51) destiné à être connecté à un point de commande pneumatique et un deuxième volume (52) dans lequel débouche une ou plusieurs desdites liaisons fluidiques et en ce que la cavité de la pompe (5) présente un volume qui correspond à un volume unitaire du volume calibré à obtenir dans le deuxième réservoir de collecte (R2). 30 7. Dispositif selon l'une des revendications 1 à 4, caractérisé en ce que l'ensemble de pompage (EP) comporte deux pompes, une première pompe (5A) reliée par la première liaison fluidique à la deuxième sortie fluidique et au premier réservoir de collecte (R1) par la deuxième liaison fluidique et une deuxième pompe (53) reliée par une quatrième liaison fluidique au premier réservoir de 21 collecte (R1) et au deuxième réservoir de collecte (R2) par la troisième liaison fluidique. 8. Dispositif selon la revendication 7, caractérisé en ce que le module (M3) d'obtention d'un volume calibré de plasma sanguin comporte une cinquième liai- 5 son fluidique reliant directement ladite première pompe (5A) audit deuxième ré- servoir de collecte (R2). 9. Dispositif selon la revendication 7 ou 8, caractérisé en ce que chaque pompe (5, 5A, 5B) comporte une cavité réalisée dans la carte et une membrane (5) deformable séparant de manière étanche ladite cavité en un premier volume 10 (51) destiné à être connecté à un point de commande pneumatique et un deu- xième volume (52) dans lequel débouche une ou plusieurs desdites liaisons fluidiques. 10. Dispositif selon la revendication 9, caractérisé en ce que la cavité de ladite deuxième pompe (5B) présente un volume qui correspond à un volume uni- 15 taire du volume calibré à obtenir dans le deuxième réservoir de collecte (R2). 11. Dispositif selon l'une des revendications 1 à 10, caractérisé en ce que la chambre du module de séparation du plasma sanguin comporte un volume mort agencé entre ladite membrane (4) séparative et au moins une paroi du deuxième espace de la chambre. 20 12. Dispositif selon l'une des revendication 1 à 11, caractérisé en ce que la carte (10) comporte une cavité (103) agencée sous ladite membrane séparative (4) et agencée entre la première sortie fluidique et la deuxième entrée fluidique. 13. Dispositif selon l'une des revendications 1 à 12, caractérisé en ce que le deuxième réservoir de collecte (R2) comporte plusieurs chambres fluidiques 25 agencées en parallèle. 14. Système de préparation d'un volume calibré de plasma sanguin, caractérisé en ce qu'il comporte : un dispositif tel que défini dans l'une des revendications 1 à 13, 30 un système d'actionnement pneumatique (SP) comprenant au moins un point de commande pneumatique connecté à l'ensemble de pompage et plusieurs points de commande pneumatiques connectés chacun à une vanne fluidique distincte du réseau fluidique, 27 une unité de traitement et de commande (UC) dudit système d'actionnement pneumatique (SP), configurée pour exécuter une séquence de commande adaptée pour obtenir un volume calibré de plasma sanguin. 15. Système selon la revendication 14, caractérisé en ce qu'il comporte une 5 pompe (3) connectée sur ledit dispositif et reliée à ladite première entrée fluidique pour aspirer l'échantillon sanguin (EUH) dans ledit dispositif. 16. Procédé de commande mis en oeuvre dans une unité de commande pour obtenir un échantillon de volume calibré de plasma sanguin à partir d'un échan- 10 tillon sanguin (ECH) présent dans un dispositif de prélèvement connecté sur le dispositif de préparation du système tel que défini dans l'une des revendication 14 ou 15, ledit procédé étant caractérisé en ce qu'il comporte une séquence de commande ayant les étapes suivantes : a) Commande d'ouverture de la première vanne fluidique (V1), de ferme- 15 ture de la deuxième vanne fluidique (V2) et de fermeture de la troi- sième vanne fluidique (V3), b) Commande de l'ensemble de pompage pour aspiration dudit échantillon sanguin à travers ladite membrane séparative (4), c) Commande de fermeture de la première vanne fluidique (V1) 20 verture de la deuxième vanne fluidique (V2), d) Commande de l'ensemble de pompage (EP) pour remplissage au moins partiel dudit premier réservoir de collecte (R1), e) Mise en oeuvre des étapes a) à d) jusqu'à remplissage au moins partiel du premier réservoir de collecte (R1), 25 f) Commande d'ouverture de la deuxième vanne fluidique (V2) et de fer- meture de la troisième vanne fluidique (V3). g) Commande de l'ensemble de pompage (EP) pour aspiration dudit plasma sanguin contenu dans le premier réservoir de collecte (R1), h) Commande de fermeture de la deuxième vanne fluidique (V2) et d'ou- 30 verture de la troisième vanne fluidique (V3), i) Commande de l'ensemble de pompage (EP) pour remplissage du deuxième réservoir de collecte (R2), j) Mise en oeuvre des étapes f) à i) jusqu'à obtenir le volume calibré souhaité dans le deuxième réservoir de collecte (R2).35