FR 3092992 A1 20200828 FR 1901773 A 20190221 Description Titre de l'invention : INHIBITEUR D'ACYL-THIOESTÉRASES POUR LE TRAITEMENT ET/OU LA PRÉVENTION DE LA MALADIE DE HUNTINGTON [0ool] ARRIERE-PLAN DE L'INVENTION [0002] La présente invention concerne le domaine du traitement et de la prévention des maladies neurodégénératives, et porte en particulier sur le traitement et la prévention de la maladie dc Huntington. [0003] Les maladies neurodégénératives ou troubles neurodégénératifs comprennent une large gamme de pathologies qui affectent principalement les neurones. Des exemples de maladies neurodégénératives et troubles neurodégénératifs qui sont liés à des défauts d'adressage des protéines et de leur trafic intracellulaire comprennent notamment, mais sans y être limité(e)s, la maladie de Huntington, la maladie de Parkinson, la Sclérose Latérale Amyotrophique ou maladie de Charcot (SLA), la maladie de Charcot-Marie-Tooth, la neuropathie axonale sensitivomotrice, le syndrome de Perry, la maladie d'Alzheimer précoce autosomique dominante (AD3), le syndrome de paralysie supranucléraire progressive (PSP), la paraplégie spastique autosomique. [0004] La maladie de Huntington est une maladie neurologique d'origine génétique ca- ractérisée par des déficits psychiatriques, moteurs et cognitifs apparaissant aux alentours de 30-40 ans chez l'Homme et par une dysfonction et une dégénérescence des neurones du cortex et du striatum. La maladie de Huntington touche en France environ 6000 personnes, et plus de 12000 personnes sont porteuses du gène muté, provisoirement indemnes de signes cliniques. C'est une maladie rare dont la prévalence, stable, est environ de 10 à 14 malades pour 100,000 au sein de la population caucasienne. Il n'existe pas à l'heure actuelle de traitement neuroprotecteur permettant de ralentir l'apparition ou la progression de la maladie. En particulier, aucune thérapie médicamenteuse non symptomatique n'est disponible dans le commerce. Des thérapies en développement actuellement se focalisent notamment sur des stratégies antisens ou de micro-ARN comme régulateurs traductionnels. [0005] La maladie de Huntington a une transmission autosomique dominante et elle est à pé- nétrance complète. Il est admis que le porteur du gène muté développera la maladie au cours de sa vie. Le gène HD est situé chez l'Homme sur le chromosome 4p16.3. Il est composé de 67 exons et couvre 170 kb. Il code pour la protéine Huntingtine (HTT), laquelle remplit une fonction cruciale dans la régulation de la dynamique intracellulaire, notamment dans le transport. axonal. Elle régule le trafic de vésicules et en 2 particulier du BDNF (Brain Derived Neurotrophic Factor), un facteur neurotrophique essentiel. [0006] Le gène muté contient une répétition du trinucléotide CAC (cytosine, adénine, guanine) instable qui code pour une expansion de polyglutaminc (polyQ) dans la protéine Huntingtine HTT. Lorsque le gène code pour une protéine avec plus de 35 glutamincs, il déclenche une dysfonction puis une mort neuronale, notamment dans le cortex et le striatum. Les personnes porteuses de 39 répétitions à 60 sont certaines de développer la maladie de Huntington, dans ce cas la pénétrance est dite complète ; la pénétrance réduite est observée en présence de 36 à 39 répétitions (Rubinsztcin et al., 1996). Les expansions de plus de 60 répétitions sont habituellement associées avec les formes juvéniles et adolescentes de la maladie de Huntington (Gencik et al., 2002).11 est admis que dans la maladie de Huntington, l'expansion polyQ conduit à un gain de nouvelles fonctions toxiques, mais également à une perte des fonctions ncuroprotectrices de HTT sauvage. Avant même l'apparition des premiers symptômes, des dysfonctions existent au sein du réseau neuronal cortico-striatal. [0007] Lorsque la Huntingtine est mutante, le transport du BDNF du cortex vers le striatum est réduit, conduisant à la dysfonction et à la mort des neurones du striatum et du cortex (Gauthier et al., 2004). Une des stratégies thérapeutiques est de restaurer ce transport afin de compenser le déficit d'apport ncurotrophique et de ralentir la progression des symptômes de la maladie de Huntington. [0008] La maladie de Huntington est généralement caractérisée par une triade de symptômes : moteurs, cognitifs et psychiatriques. Les troubles moteurs sont généralement divisés en deux phases : la première, la phase hyperkinétique, apparaît au cours de stades précoces de la maladie et est caractérisée par une importante chorée (Dorsey et al, 2013), la seconde, la phase hypokinétique, apparaît plus tardivement et est caractérisée par de la bradykinésie, de la dystonie, des troubles de l'équilibre et de la marche. Les troubles cognitifs se manifestent plusieurs années avant le début des symptômes moteurs. Une gamme de déficiences cognitives est observée dans de nombreux domaines comme la vitesse psychomotrice, la fonction exécutive, l'attention, la mémoire épisodique et de travail, l'apprentissage, les émotions et les odeurs (Paulsen, 2011; Papp et al., 2011). Enfin, une grande variété de symptômes neuropsychiatriques survient dans la maladie de Huntington, à savoir l'anxiété, l'irritabilité, l'apathie, des comportements obsessionnels compulsifs et la psychose. [0009] On connaît à l'heure actuelle le lien entre la palmitoylation et la maladie de Huntington, tel que résumé dans la revue de Fiona B. Young et al., 2011. La palmitoylation est une modification importante pour l'adressage des protéines et leur trafic à l'intérieur des neurones. Elle correspond à l'ajout d'un acide gras, le palmitate, sur un résidu cystéine. Contrairement aux autres acylations telles que la myristoylation et 3 l'isoprénylation, la palmitoylation est réversible. La palmitoylation augmente r hydrophohicite des protéines et favorise donc les interactions avec la bicouche lipidique. Par conséquent, elle modifie l'adressage des protéines. [0010] La palmitoylation est catalysée par une famille de protéines, les palmitoyl- acyl-transférases (PAT). Les gènes codant pour ces protéines sont hautement conservés parmi les espèces. L'une d'entre elles, HIP14, palmitoylc diverses protéines impliquées dans la plasticité synaptique, l'exocytose ou encore le développement. [0011] Contrairement aux PAT, la découverte des enzymes qui catalysent la dépalmi- toylation a été beaucoup moins rapide. A ce jour, six enzymes responsables de la dépalmitoylation ont été identifiées : PPT1 (protein-palmitoyl thioesterase), PPT2, APT1, APT2, APTL1 et les protéines ABHD17 (Tsc et al., 2015 ; Tomatis et al., 2010 et Zcidman et al., 2009). APT1 et APT2 sont des protéines cytosoliques ayant des substrats communs. APT1 est exprimée dans de nombreux tissus chez la souris (Hirano et al., 2009). Elle a notamment un rôle dans la mémoire. [0012] Des travaux suggèrent une altération de la palmitoylation lorsque la Huntingtinc (HTT) est mutante et que la réexpression d'une enzyme appelée HIP14 promouvant la palmitoylation pourrait inhiber la mort des cellules. Cependant, la surexpression de HIP14 a des effets toxiques et il n'existe pas de molécules stimulant cette enzyme. La surexpression de HIP14 dans des neurones corticaux augmente la palmitoylation de HTT et rclocalise HTT à l'appareil de Golgi, suggérant que la localisation de HTT au Golgi est dépendante de sa palmitoylation (Yanaï et al., 2006). [0013] Les présents inventeurs ont utilisé une stratégie inverse consistant à inhiber les enzymes responsables de la dépalmitoylation, les acyl-thioestérases, pour lesquelles il existe des molécules sélectives. Jusqu'ici les travaux publiés concernent le rétablissement de l'activité de HIP14 dans le traitement de la maladie de Huntington sans décrire le processus de dépalmitoylation comme nouvel axe thérapeutique. [0014] Comme indiqué ci-dessus, le lien entre la palmitoylation et la maladie de Huntington est bien connu (Yanaï et al.. 2006), tout comme les enzymes impliquées dans ce processus : HIP14 et HIP14L pour la palmitoylation des protéines, y compris la palmitoylation de la protéine Huntingtine HTT. Les enzymes régulant la réaction inverse, la dépalmitoylation, sont les thioestérases, dont font partie APT1 et APT2 (Young et al.. 2012). D'autres publications décrivent par ailleurs des molécules inhibitrices des thioestérases dont ML-348 (Adibekian et al.. 2012 et Vujic et al.. 2015). [0015] Si l'on connaît, notamment de la publication de Adibekian et al., 2012, des molécules inhibitrices de thioestérase et en particulier ML-348, le potentiel thérapeutique de ce dernier n'est pas évoqué. Par ailleurs, il ressort des travaux de Vujic et al.. 2015, que les inhibiteurs ML-348 (spécifique de APT1) et ML-349 (spécifique de APT2) n'ont pas d'effet biologiquement significatif sur des cellules de mélanomes, par opposition à la Pal mostatinc B. Ces études restent muettes sur le potentiel en recherche thérapeutique sur les maladies neurodégénératives notamment sur la maladie de Huntington. [0016] Il n'existe pas actuellement de molécule permettant le rétablissement du trafic intra- cellulaire qui est altéré dans une maladie neurodégénérative telle que la maladie de Huntington. La présente invention a pour objet de mettre en évidence le rôle important de l'inhibiteur de racyl-thioestérase APT1, ML-348, dans le traitement et la prévention de la maladie de Huntington. Ses effets, tant sur les déficits cognitifs que sur les déficits moteurs, montrent le nouveau potentiel thérapeutique et prophylaxique de ce composé sur la maladie de Huntington. Cet inhibiteur présente un intérêt majeur car il n'existe pour le moment aucune thérapie médicamenteuse neuroprotectrice pour soigner la maladie de Huntington. [0017] BREVE DESCRIPTION DE L'INVENTION [0018] Afin de pouvoir cribler des molécules en rapport à la dynamique intracellulaire globale dans les neurones, les inventeurs ont adapté un système appelé RUSH (Retention Using Selective Hooks) qui permet de suivre le trafic vésiculaire depuis le réticulum endoplasmique (RE) jusqu'à la membrane plasmique (Boncompain et al., 2012), ceci dans des cellules sauvages et mutantes pour la maladie de Huntington. Ils ont observé que la pal mostatinc B, un inhibiteur non spécifique des acyl-thiolestérases était capable de restaurer le trafic intracellulaire de manière comparable à des cellules sauvages. Ils ont alors testé d'autres molécules inhibitrices sélectives pour différentes acyl-thioestérases (APT1 et APT2) présentes dans les neurones. [0019] Ainsi, ils ont pu montrer que seule la molécule ML-348 spécifique de APT1 était efficace. Grâce à l'approche microtluidique in vitro qui consiste à fabriquer, dans un matériau biocompatible et transparent, des chambres de culture et des canaux à l'échelle des cellules, ils ont reconstitué le circuit cortico-striatal normal et dysfonctionnel dans la maladie de Huntington. Ce système étant compatible avec la microscopie rapide à haute résolution, il permet d'étudier des mécanismes de trafic intracellulaire dans un réseau neuronal mature et fonctionnel. [0020] Les résultats détaillés ci-après montrent que : l'inhibition d'APT' par ML-348 restaure le transport du BDNF du cortex vers le striatum, suggérant que ML-348 est une molécule d'intérêt thérapeutique pour la maladie de Huntington ; ML-348 traverse la barrière hémato-encéphalique : chez des souris HttcArd4"-F modèles de la maladie de Huntington et âgées de 5 mois, traitées par ML-348, il a pu être montré que ce traitement restaure les altérations comportementales liées à la maladie, aussi bien au niveau de la motricité qu'au niveau de l'anxiété. [0021] Les inventeurs, après identification de l'inhibiteur ML-348 comme molécule restaurant les cinétiques de la voie de sécrétion, ont évalué son effet sur le réseau cortico-striatal in vitro. ML-348 est capable d'améliorer les déficits de transport axonal du BDNF, les défauts de densité synaptique et de signalisation striatalc dans la maladie de Huntington. Le traitement de neurones sains ne montre pas de défauts du réseau cortico-striatal, hormis au niveau du nombre de vésicules de BDNF transportées le long de l'axone. La potentielle multiplicité des substrats d'APT1 ne permet pas de conclure que la restauration du fonctionnement du réseau sur puce microfluidique soit duc uniquement au rétablissement des cinétiques de transport dans les voies de sécrétion. Cependant, étant donné le rôle du transport axonal et des afférences corticales dans le fonctionnement du réseau, il semble que le rétablissement du trafic soit essentiel au mécanisme de restauration. [0022] La présente invention a donc pour objet un inhibiteur de l'acyl-thioestérase APT1, ML-348, de formule A : [Chem.1] A 100231 destiné à être utilisé dans le traitement et/ou la prévention d'une maladie ou d'un trouble chez un sujet en ayant besoin. 100241 Selon un mode de réalisation particulier, l'inhibiteur peut être destiné à être utilisé dans le traitement et/ou la prévention d'une maladie neurodégénérative ou d'un trouble neurodéeénératif 100251 De telles maladies neurodégénératives ou troubles neurodégénératifs comprennent, niais sans y être limités, la maladie de Huntington, la maladie de Parkinson, la Sclérose Latérale Amyotrophique ou maladie de Charcot (SLA), la maladie de CharcotMarie-Tooth, la neuropathie axonalc sensitivomotrice, le syndrome de Ferry, la maladie d' Alzheimer précoce autosomique dominante (AD3), le syndrome de paralysie supranucléraire progressive (PSP), la paraplégie spastiquc autosomique. [0026] De manière préférée, la maladie neurodégénérative ou le trouble neurodégénératif est la maladie de Huntington. [0027] En outre, l'inhibiteur de l'acyl-thiocsthérase APT1 de la présente invention est capable de se lier à Facyl-thioestherase APT1. [0028] Ainsi, la liaison de ML-348 permet d'empêcher le substrat de se fixer sur le site actif 6 de l'enzyme acyl-thioesthérase APT1 et/ou l'enzyme APT1 de catalyser sa réaction de dépalmitoylation. [0029] L'invention concerne également une composition pharmaceutique comprenant : au moins l'inhibiteur de l'acyl-thioestérase APT1 de la présente invention ; et au moins un excipient pharmaccutiquement acceptable. [0030] L'expression "excipient pharrnaccutiquement acceptable" se réfère à un matériel non toxique qui est compatible avec un système biologique tel qu'une cellule, une culture cellulaire, un tissu ou un organisme. Cet excipient pharmaccutiquement acceptable ne produit pas de réaction indésirable, allergique ou autre lorsqu'il est administré à un animal, en particulier un être humain. Les caractéristiques de l'excipient dépendront du mode d'administration utilisé. [0031] Ceci comprend n'importe quel solvant, diluant, milieu de dispersion, agglutinant, liant, lubrifiant, délitant, revêtement, agent antibactérien et antifongique, agent isotonique et agent retardateur d'absorption, et adjuvants similaires. Un excipient pharmaccutiquement acceptable se réfère à une charge solide, semi-sol ide ou liquide non-toxique, un diluant, une matière d'encapsulation ou une formulation accessoire de tout type. Pour l'administration humaine, les préparations devront satisfaire les exigences de stérilité, pyrogénicité, dc sûreté générale et de pureté telles que requises par les Bonnes pratiques de fabrication des substances actives à usage humain et vétérinaire. [0032] Selon l'invention, l'inhibiteur de l'acyl-thioestérase APT1 ou la composition est destiné(e) à être administré(e) au sujet selon une quantité thérapeutiquement efficace. [0033] L'expression « quantité thérapeutiquement efficace » signifie le taux ou la quantité de composé nécessaire et suffisante pour ralentir ou stopper la progression, l'aggravation ou la détérioration d'un ou plusieurs symptômes de la maladie ou du trouble, en particulier la maladie neurodégénérative ou le trouble neurodégénératif, plus particulièrement la maladie de Huntington; soulager les symptômes de la maladie ou du trouble, en particulier la maladie neurodégénérative ou le trouble neurodégénératif, plus particulièrement la maladie de Huntington. [0034] La « quantité thérapeutiquement efficace » dépend du sujet, du stade de la maladie à traiter et du mode d'administration, et peut être déterminée par des opérations de routine par l'homme du métier. [0035] Une « quantité thérapeutiquement efficace » correspond à une quantité suffisante pour diminuer les symptômes de la maladie et l'évolution de celle-ci. Cette quantité peut varier avec l'âge, le sexe du sujet et le stade de la maladie et sera déterminée par l'homme du métier. [0036] Avantageusement, une quantité thérapeutiquement efficace peut varier entre 0,01 et 100 mg/kg de masse corporelle, de préférence entre 0,1 et 20 mg/kg, et de façon davantage préférée entre 0,1 et 2 mg/kg, en une ou plusieurs administration quo- 7 tidiennes, pendant un ou plusieurs jours. [0037] En outre, la dose thérapeutiquement efficace spécifique pour n'importe quel patient dépendra d'une diversité de facteurs comprenant le trouble traité et la gravité du trouble ; l'activité du composé spécifique utilisé ; la composition spécifique utilisée, l'âge, la masse corporelle, l'état de santé général, le sexe et le régime du patient ; la durée d'administration, la voie d'administration, et le taux d'excrétion du composé spécifique utilisé ; la durée du traitement ; les médicaments utilisés en combinaison ou simultanément avec le composé spécifique utilisé ; et les facteurs similaires bien connus dans la technique médicale. Par exemple, il est bien dans les compétences de l'homme du métier de commencer des doses du composé à des taux inférieurs à ceux requis pour obtenir l'effet thérapeutique désiré et d'augmenter progressivement le dosage jusqu'à ce que l'effet désiré soit obtenu. Cependant, le dosage quotidien des produits peut être modifié sur une large gamme allant d'environ 10 à environ 10000 mg par adulte par jour, de préférence de 100 à environ 5000, de façon davantage préférée d'environ 200 à environ 2000 mg par adulte par jour. De préférence, les compositions contiennent 10, 50, 100, 250, 500, 1000 et 2000 mg du principe actif pour l'ajustement symptomatique du dosage au patient à traiter. Un médicament typiquement contient d'environ 10 à environ 10000 mg du principe actif, de préférence 100 à environ 5000, de façon davantage préférée d'environ 200 à environ 2000 mg du principe actif. Une quantité efficace du médicament est d'ordinaire fournie à un dosage allant de 0,1 mg/kg à environ 100 mg/kg de masse corporelle par jour, de préférence d'environ 1 mg/kg à 40 mg/kg de masse corporelle par jour, de façon davantage préférée d'environ 2 mg/kg à 20 mg/kg de masse corporelle par jour. [0038] Dans les compositions pharmaceutiques de la présente invention, le principe actif, seul ou en combinaison avec un autre principe actif, peut être administré sous une forme d'administration unitaire, sous la forme d'un mélange avec des supports pharmaceutiques classiques, à des animaux et des êtres humains. Les formes d'administration unitaires appropriées comprennent les formes adaptées à la voie orale telles que les comprimés, les gélules, les poudres, les granules et les suspensions ou solutions pour voie orale, les formes d'administration sublinguale et buccale, les aérosols, les implants, les formes d'administration sous-cutanée, transdermique, topique, intrapéritonéale, intramusculaire, intraveineuse, sous-dermique, transdermique, intrathécale et intranasale et les formes d'administration rectale. [0039] Dans un mode de réalisation particulier de l'invention, l'inhibiteur ou la composition est destiné(e) à une utilisation comme médicament. [0040] A cet effet, la composition pharmaceutique ou le médicament contient des véhicules qui sont phannaceutiquement acceptables pour une formulation adaptée pour l'administration par voie orale. 8 [0041] Des exemples de formes adaptées pour l'administration par voie orale comprennent, niais sans y être limitées, des comprimés, des comprimés à orodispersion, des comprimés effervescents, des poudres, des granules, des pilules (comprenant des pilules édulcorées), des dragées, des gélules (comprenant des gélules de gélatine des sirops, des liquides, des gels ou d'autres solutions, des suspensions, des bouillies, des formes liposornales et similaires. [0042] Dans un mode de réalisation, la composition pharmaceutique ou le médicament contient des véhicules qui sont pharmaceutiquement acceptables pour une formulation apte à être injectée. [0043] Des exemples de formes adaptées à l'injection comprennent, mais sans y être limitées, des solutions, telles que, par exemple, des solutions aqueuses stériles, des dispersion, des émulsions, des suspensions, des formes solides appropriées pour l'utilisation pour préparer des solutions ou suspensions par l'ajout d'un liquide avant l'utilisation, par exemple, une poudre, des formes liposomales ou similaires. [0044] Le mode d'administration peut être par injection ou par perfusion graduelle. L'injection peut être intraveineuse, intra-péritonéale, intramusculaire, sous-cutanée ou transdermale. [0045] Les préparations pour une administration parentérale peuvent inclure des solutions aqueuses ou non-aqueuses stériles, des suspension ou des émulsions. Des exemples de solvants non-aqueux sont le propylène glycol, le polyéthylène glycol, des huiles végétales ou des esters organiques injectables tels que l'éthyl oléate. Des véhicules aqueux comprennent l'eau, des solutions alcool/eau, des émulsions ou des suspensions. [0046] Dans un mode de réalisation particulier, l'inhibiteur de l'acyl-thioestérase APTI, ML-348, ou la composition pharmaceutique est destiné(e) une utilisation dans le traitement et/ou la prévention d'une maladie ou d'un trouble lié(e) à un trafic intracellulaire altéré entre le réticulum endoplasmique et l'appareil de Golgi et entre celui-ci et la membrane plasmique. [0047] Pour mieux illustrer l'objet de la présente invention, on va maintenant en décrire ci- dessous, à titre illustratif et non limitatif, les exemples ci-après en liaison avec les dessins annexés. [0048] Sur ces dessins : [0049] [fig.1A] est une représentation schématique du système RUSH KDEL-GPI-mCherry. [0050] [fig.1B] est un graphique représentant la quantification de la fluorescence du Golgi à chaque instant dans les cellules striatales StHdhQ7/Q7 (ronds) et StHdhQ111/Q111 (canés). Les panels sous les courbes représentent le trafic de GPI à l'intérieur de l'appareil de Golgi. 9 [0051] [fig.1C] représente la cinétique des cellules exprimant le plasmide GPI-KDEL-mCherry à partir de l'ajout de biotine à t=0 jusqu'à 90 minutes après cet ajout de biotine (barre d'échelle=10 pm). [0052] [fig.2A] est une représentation schématique de la réaction de palmitoylation/dépalmitoylation catalysée par les palmitoyl-acyl-transférases (PAT) et les acyl-thioestérases (dePAT). Les principales dePAT et leurs inhibiteurs sont indiqués dans le panel de droite. [0053] [fig.213] est un graphique représentant la quantification de fluorescence dans le Golgi en fonction du temps après l'ajout de biotine sur des cellules StHdhQ7/Q7 (ronds), StHdhQ111/Q111 (carrés) et StHdhQ111/Q111 traitées 1 heure par la Palmostatine B à lOpM (triangles). [0054] [fig.2C] est un graphique représentant la quantification de fluorescence dans le Golgi en fonction du temps après l'ajout de biotine sur des cellules StHdhQ7/Q7 (ronds), StHdhQ111/Q111 (carrés) et StHdhQ111/Q111 traitées 1 heure par ML-348 à lOpM (triangles). [0055] [fig.2D] est un graphique représentant la quantification de fluorescence dans le Golgi en fonction du temps après l'ajout de biotine sur des cellules StHdhQ7/Q7 (ronds), StHdhQ111/Q1 II (carrés) et StHdhQ111/Q111 traitées 1 heure par ML-349 à IORM (triangles). [0056] [fig.2E] est une représentation schématique de la réaction de pahnitoylation/dépalmitoylation catalysée par les palmitoyl-acyl-transférases (PAT) et les acyl-thioestérases (dePAT). Le silençage génique des acyl-thioestérases est schématisé dans le panel de droite. [0057] [fig.2F] est un graphique représentant la quantification de fluorescence dans le Golgi en fonction du temps après l'ajout de biotine sur des cellules StHdhQ7/Q7 avec si-CTRL (ronds), StHdhQ111/Q1 1 1 avec si-CTRL (carrés) et StHdhQIII/Q1 1 1 avec si-APTI (triangles). [0058] [fig.2G] est un graphique représentant la quantification de fluorescence dans le Golgi en fonction du temps après l'ajout de biotine sur des cellules StHdhQ7/Q7 avec si-CTRL (ronds), StHdhQ111/Q1 1 1 avec si-CTRL (carrés) et StHdhQIII/Q1 1 1 avec si-APT2 (triangles). [0059] [fig.3A] est une représentation schématique des dispositifs microfluidiqucs utilisés pour re- construire le réseau cortico-striatal in vitro et les conditions de traitement. [0060] [fig.313] est une représentation schématique de la zone d'enregistrement vidéo pour le trafic de BDNF-mCherry. [0061] [fig.3C] représente des kymographes montrant le trafic axonal de BDNF-mCherry obtenu à partir de cellules de type sauvage et de cellules HdhCAG/+ traitées ou non par ML- 348. [0062] [fig.3D] est un graphique représentant les vélocités antérograde et rétrograde du transport de BDNF-mCherry. [0063] [fig.3E] est un graphique représentant le nombre de vésicules antérogrades et rétrogrades en déplacement le long de 100jun d'axone. [0064] [fig.3F] est un graphique représentant la vitesse d'échoulemcnt [0065] [fig.3G] est un graphique représentant le flux net linéaire. [0066] [fig.311] est une représentation schématique du dispositif microfluidique et de la zone d'enregistrement pour DSD95 et la synaptophysine SYP. [0067] [fig.3I] est une représentation graphique du nombre de points de PSD95 et SYP adjacents le long de 100pm de neurite. [0068] [fig.3.1] est une représentation schématique du dispositif microfluidique en situation de sti- mulation des neurones corticaux où un marquage phosphoERK (pERK) est réalisé à l'intérieur du compartiment postsynaptique. [0069] [fig.3K] est un graphique représentant la quantification des cellules immunopositives pour pERK. [0070] [fig.3L] est une représentation graphique de la toxicité de ML-348 mise en évidence par un test MTT au sel de tétrazolium MTT (bromure de 3-(4,5-dimethylthiazol-2-y1)-2,5-diphenyl tetrazolium) : absorbance à 595-690 nm des cellules neuronales du cortex de souris en fonction de la concentration de ML-348 (de 100 nM à 100 pM) permet de quantifier le nombre de cellules vivantes et métabo- 11 liquement actives. [0071] [fig.3M] est une autre représentation graphique des résultats du test MTT sur des cellules neuronales de cortex de souris : témoin négatif (milieu neurobasal NB+B27), témoin positif (milieu ncurobasal NB+B27 + 1% de DMSO), et cellules en présence de 11.1M de ML-348 dans milieu neurobasal NB+B27. [0072] [fig.4A] est une représentation schématique de l'injection intrapéritonéale de ML-348 (2mg/kg) chez les souris, puis l'extraction des cerveaux à t= 0, 30, 60 et 180 minutes avant l'analyse de pharmacocinétique. [0073] [fig.413] est une représentation graphique montrant la concentration plasmatique de ML-348 au cours du temps. [0074] [fig.4C] est une représentation graphique de la concentration de ML-348 dans le cerveau au cours du temps. [0075] [fig.41D] est une représentation schématique de r imrnunoprecipitation d'une protéine palmitoylée par la méthode ABE (Acyl-Biotin-Exchange) dans laquelle un lysat de cerveau est soumis à ABE séquentiel pour biotinyler des protéines palmitoylées avant leur immunoprécipitation avec des billes revêtues de streptavidine. [0076] [fig.4E] représente la migration sur gel d'électrophorèse après ABE d'un lysat de cerveau provenant de souris injectées avec une solution témoin ou avec une solution de ML-348 à 0,3 mg/kg sur un gel sans marquage. [0077] [fig.4F] représente la migration sur gel d'électrophorèse après ABE d'un lysat de cerveau provenant de souris injectées avec une solution témoin ou avec une solution de ML-348 à 0,3 mg/kg en présence de sh-eptavidine-HRP. La Figure 4F montre la palmitoylation des protéines cérébrales après injection de ML-348 en comparaison avec la situation témoin (CTRL). [0078] [fig.40] est un gel d'électrophorèse montrant le taux constant d'APT I avant et après l'injection de ML-348. [0079] [fig.5A] est une représentation schématique du programme expérimental (0/F : Open Field, HL : Horizontal Ladder, NSF : Novelty-Suppressed Feeding). [0080] [fig.5B] 12 est un graphique représentant le nombre d'entrées dans la zone centrale d'un appa- reillage de test d'Open Field sur une période de 60 minutes. [0081] [fig.5C] est un graphique représentant la latence jusqu'à la prise de nourriture mesurée sur une période de 10 minutes après l'entrée dans la zone de test de NSF. [0082] [fig.5D] est un graphique représentant la locomotion spontanée des souris en tant que distance totale parcourue pendant 60 minutes dans le cadre du test d'Open Field. [0083] [fig.5E] est une représentation graphique du score d'erreurs moyen et de la durée moyenne de traversée de l'échelle pour le test d'Horizontal Laddcr permettant de mettre en évidence la motricité. [0084] [fig.5F] est une représentation graphique de la vitesse moyenne atteinte par les souris sur un appareil rotarod à vitesse accélérée et du nombre de chutes sur un appareil rotarod à vitesse fixe. [0085] [fig.6A] est une représentation graphique de la densité synaptique mesurée sous la forme du nombre de points adjacents de PSD95 et Vglut-1 sur des neurones de souris de type sauvage vs HdhCAG/-F. [0086] [fig.6B] présente les résultats du test ABE sur des neurones de souris de type sauvage vs HdhCAG/-F avec ou sans traitement par ML-348. [0087] La Figure 1 montre que les dynamiques intracellulaires sont retardées dans la maladie de Huntington. [0088] Si l'on se réfère à la Figure 1A, on peut voir que GPI (glycosylphosphatidyl inositol) est fusionné avec SBP (Streptavidin-Binding Peptide) et un marqueur fluorescent mCherry (mChr) pour constituer le « Rapporteur ». Le Rapporteur est retenu dans le réticulum endoplasmique à l'aide de la partie hameçon (KDEL-Streptavidine, en grisé). L'ajout de biotine à t=0 libère le Rapporteur et permet son trafic à travers la voie sécrétoire après avoir quitté le réticulum endoplasmique pour l'appareil de Golgi 16 mm) puis la membrane plasmique (tc-2 60 mm) [0089] Sur la Figure 1B, les inventeurs ont étudié le trafic du Rapporteur GPI-SBP-mCherry par imagerie en temps réel pendant 90 minutes dans les cellules StHc107/07(ronds) et St HdhQ""Q"' (carrés). Les nombres sur l'axe X représentent le temps quand la fluorescence du Golgi est la plus forte pour chaque type de cellules. Les nombres indiqués sur la flèche horizontale indiquent la durée écoulée pour que la fluorescence traverse le Golgi pour chaque type de cellules. Il a ainsi été observé que le pic de fluorescence 13 était à 16,6 minutes pour les cellules striatalcs de souris StadhQ71Q7, alors qu'il était retardé jusqu'à 23,6 minutes dans les cellules SU-Neill/QUI reproduisant le phénotype de la maladie de Huntington. Du graphique et des images prises en microscopie à fluorescence ressort que le Rapporteur présente une rétention prolongée dans l'appareil du Golgi dans les cellules StIldh9III/QIII. [0090] Sur la Figure 1C, on peut également observer la cinétique d'apparition et de dis- parition de la fluorescence mCherry dans l'appareil de Golgi, avec un trafic réduit du réticulum endoplasmique vers le Golgi pour les cellules StlidhQ111/QIII ainsi que la rétention prolongée décrite plus haut, la détection de la fluorescence mCherry étant possible bien après 40 minutes après l'ajout de biotinc. [0091] La Figure 2 montre que les inhibiteurs de r acyl-thioesterasc APT1 restaurent la dynamique intracellulaire dans la maladie de Huntington. [0092] Si l'on se réfère à la Figure 2A, il existe des molécules inhibitrices des dépalmi- toylases (acyl-thioestérases) APT1 et APT2 : la Palmostatine B. non spécifique, et ML- 348, inhibiteur spécifique de APT1 et ML-349, inhibiteur spécifique de APT2. [0093] Sur la Figure 2B, on peut constater que le traitement par la Palmostatine B à 101.1M pendant 1 heure sur les cellules StHdhQ''''Q"' (triangles) restaure les cinétiques du réticulum endoplasmique vers l'appareil de Golgi : 18 minutes après l'ajout de biotine pour l'apparition du pic de fluorescence dans le Golgi vs 23,3 min sans traitement (carrés). Le traitement par la Palmostatine B diminue également la durée que prend la fluorescence pour quitter l'appareil de Golgi (21,3 min vs 25,4 minutes sans traitement). [0094] Sur la Figure 2C, les inventeurs ont étudié les effets similaires de ML-348 sur les ci- nétiques : 18.9 min après l'ajout de biotine pour l'apparition du pic de fluorescence dans le Golgi vs 23,2 min sans traitement. Le traitement par ML-348 diminue aussi la durée de rétention dans le Golgi à une valeur identique à celle obtenue chez les cellules de type sauvage (15,1 minutes), en opposition à 24 minutes pour les cellules StHdh Q" ''Q" ' non traitées. [0095] En revanche, sur la Figure 2D, le traitement par ML-349 (inhibiteur spécifique de APT2) ne fait apparaître aucun effet sur les cinétiques du réticulum endoplasmique vers l'appareil de Golgi ni sur la durée de rétention dans le Golgi. [0096] Ces résultats suggèrent que l'inhibition de APT1 plutôt que APT2 est capable de restaurer le trafic du réticulum endoplasmique vers la membrane plasmique qui est altéré dans les cellules affectées par la maladie de Huntington. [0097] Les inventeurs ont ensuite procédé à démontrer que le traitement par les inhibiteurs spécifiques de APT1 et APT2 (Figure 2E) jouaient effectivement un rôle d'inhibition sur l'activité de ces enzymes. Le silençage génique par des ARNsi spécifiques (Figure 2F et 2G, triangles), si-API1 et si-APT2, se traduit par la restauration du trafic du RE 14 vers le Golgi et l'absence de rétention de la fluorescence mCherry dans l'appareil de Golgi dans le cas de si-APT1 (Figure 2F), et une arrivée plus tardive dans le Golgi et la rétention de la fluorescence à ce niveau dans le cas de si-APT2 (Figure 2G). Ces résultats soulignent que les inhibiteurs ML-348 et ML-349 utilisés dans l'expérience ont bien une action inhibitrice sur leurs enzymes spécifiques cibles, et que seule l'inhibition de APT1 a un effet sur les cellules affectées par la maladie de Huntington et est une cible d'intérêt pour la prévention et le traitement de la maladie. [0098] La Figure 3 montre l'effet d'un traitement chronique par ML-348 sur le réseau cortico-striatal. [0099] Si l'on se réfère à la Figure 3A, les inventeurs ont reproduit le réseau cortico-striatal in vitro sur un dispositif microfluidique composé de deux chambres neuronales qui sont connectées par l'intermédiaire de microcanaux. Les expériences sont réalisées sur une période de temps allant de 2 à 12 jours in vitro (Days in vitro), soit DIV2 à DIV12, et une fixation/acquisition à DIV 12. [0100] Conformément à la Figure 3B, les inventeurs ont traité des neurones avec 1pM de ML-348 quotidiennement à l'intérieur du dispositif microfluidique et l'analyse de transport axonal du BDNF-mCherry a été effectuée dans la partie distalc des longs microcanaux. [0101] Sur la Figure 3C, les kymographes montrent le trafic axonal de BDNF-mCherry obtenu à partir de cellules de type sauvage et de cellules Hdhcmv+ traitées ou non par ML-348. On peut observer le défaut de transport axonal de BDNF chez les cellules HdhcAci+ non traitées, lequel transport étant restauré au moins en partie par le traitement par ML-348 pour atteindre sensiblement celui observé pour les cellules témoins de type sauvage non traitées. [0102] De manière similaire, sur les Figures 3D à 3G, on peut observer que les défauts de transport axonal dans les neurones HdhcAck (maladie de Huntington) se répercutant sur les vitesses de transport antérograde et rétrograde du BDNF-mCheny, le nombre de vésicules antérogrades et rétrogrades se déplaçant sur une distance de 1014tm et ceci pendant 30 secondes ainsi que le flux net linéaire sont restaurés, et l'on retrouve des valeurs sensiblement égales à celles de type sauvage lors du traitement du réseau Hdh c.:4rib' par ML-348. [0103] Sur la Figure 3H, on peut voir la zone d'enregistrement qui a été choisie pour l'évaluation de la densité de synapses par la quantification du nombre de points de synaptophysine (SYP), un marqueur présynaptique, et du nombre de points de PSD95, un marqueur postsynaptique. La Figure 31 témoigne que dans le réseau microfluidique HdhcAG/+, le nombre de synapses est diminué dans les dispositifs microfluidiques. Le traitement par ML-348 du réseau de type sauvage a légèrement réduit la connectivité de la synapse, mais ce résultat n'est statistiquement pas significatif. En revanche, le traitement par ML-348 du réseau HdhcAGR- a permis la restauration du nombre de synapses se rapprochant de celui du réseau de type sauvage. Le double marquage immunofluorescent de SYP et PSD95 permet de visualiser que la colocalisation des marqueurs à l'intérieur de la rnicrochambre est restaurée dans le réseau HdhcAchtraité par ML-348. Ceci est indicatif d'une restauration du nombre de synapses par ML-348 dans le réseau HdhcAGii- (données non illustrées). [0104] Sur la Figure 3,1, on peut visualiser la zone d'enregistrement qui a été choisie pour l'analyse du compartiment postsynaptique en situation de stimulation des neurones corticaux par la glycine/strychnine pendant 15 minutes. [0105] La Figure 3K est une représentation graphique du pourcentage de cellules phosphoERK immunopositives dans l'espace postsynaptiquc. Le traitement par ML-348 de neurones HdhcAch a permis de restaurer la signalisation postsynaptiquc vers des valeurs rencontrées dans les neurones de types sauvages. Le double marquage pERK/ coloration DAPI permet de visualiser la forte inhibition du marquage pERK dans le réseau HdhcAck non traité, inhibition qui est levée par le traitement par ML-348 qui restaure le marquage vers des valeurs équivalentes à celles du réseau de type sauvage (données non illustrées). [0106] Les résultats précédents ont donc permis de mettre en évidence que l'inhibiteur de APT1, ML-348, restaure les événements présynaptiques, synaptiques et postsynaptiques qui sont altérés dans le réseau cortico-striatal dans la maladie de Huntington, confirmant l'intérêt thérapeutique majeur de cette molécule. [0107] La Figure 3L permet de visualiser au moyen d'un test MTT au sel de tétrazolium MTT (bromure de 3-(4,5-dimethylthiazol-2-y1)-2,5-diphenyl tetrazolium) l'effet non-toxique d'un traitement par ML-348 sur les cellules neuronales du cortex de souris. Ainsi, pour des concentrations de ML-348 de 100 nM, IRM ou IORM, aucun effet n'a été observé sur la viabilité des cellules. Seule la concentration de 100pM s'est révélée toxique sur une période de 48 heures, et a été écartée. Le traitement des cellules neuronales par 1pM de ML-348 n'a révélé aucune toxicité, et ce pendant 12 jours. [0108] Sur la Figure 3M, les résultats du test MTT sur des neurones du cortex de souris en culture après un traitement chronique jusqu'à DIV12 indiquent que la concentration utilisée de ML-348 (1RM) n'est pas toxique pour les neurones. En effet, le dosage de la densité optique à 595-690 nm par spectroscopie indique que la quantité relative de neurones vivants et métaboliquement actifs est sensiblement la même entre les témoins (CTRLI et CTRL2) et les cellules traitées par ML-348. [0109] La Figure 4 met en évidence que ML-348 est fonctionnel après l'injection. [0110] Si l'on se réfère à la Figure 4A, les inventeurs ont procédé à l'injection des souris par voie intrapéritonéale avec ML-348 (2 mg/kg) et ont analysé la pharmacocinétique de la molécule. Ils ont mesuré par LC-MS/MS après 30, 60 et 180 minutes la concentration 16 plasmatique (Figure 4B) et la quantité dans le cerveau (Figure 4C) de ML-348. Cette expérience a permis de mettre en évidence que ML-348 traverse efficacement la barrière hémato-encephalique comme le montrent les valeurs [Cerveau]I[Plasma] dans le tableau de la Figure 4C. Par ailleurs, la molécule est rapidement dégradée 60 minutes après l'injection intrapéritonéalc. La capacité de la molécule ML-348 à traverser librement la barrière hémato-encéphal igue constitue un argument supplémentaire à l'efficacité de la molécule in vivo chez la souris. [0111] Sur la Figure 4D, on peut visualiser la représentation graphique de l'expérimentation mise en place pour tester l'efficacité de la molécule pour augmenter le taux de pal mitoylation dans le cerveau 30 minutes après l'injection. Un test ABE (Acyl-Biotin-Exchangc) a été réalisé sur un lysat de cerveau provenant de souris injectées avec une solution de ML-348 à 0,3 nig/kg, (ou une solution témoin): les protéines pal mitoylécs sont d'abord biotinylécs avant d'être immunoprécipitées par des billes revêtues de streptavidine. [0112] En conséquence, on peut visualiser par comparaison entre un gel sans marquage (Figure 4E) et un gel en présence de streptavidine-HRP (Figure 4F) que le taux de palmitoylation dans les lysats de cerveau était accru. En revanche, le gel de la Figure 4G indique que le taux d'expression de l'enzyme APT1 n'était pas différent entre les lysats de cerveaux témoins non traités et ceux traités par ML-348 (comparaison avec le taux d'expression de la tubulinc). [0113] La Figure 5 montre les effets du traitement par ML-348 sur les comportements anxio- dépressif (5B-5C) et moteur (5D-5F) chez des souris modèles de la maladie de Huntington (HdhCAG140/±) vs des souris de type sauvage (VVT). [0114] Si l'on se réfère à la Figure 5A, on peut visualiser les différents tests compor- tementaux réalisés sur des souris âgées de 7 mois entre 16 et 28 jours post-implantation d'une micropompe sous-cutanée (traitement chronique par injection sous-cutanée constante de ML-348). Le programme expérimental comprend les tests suivants : 0/F: Open Field, HL: Horizontal Ladder, Rotarod et NSF: Novelty-Suppressed Feeding. [0115] Dans un premier temps, sur la Figure 5B, les résultats du test de l'Open Field (champ ouvert) sont exprimés en nombres d'entrées dans la zone centrale sur une période de 60 minutes. Cet essai est établi pour tester les comportements liés à l'anxiété. Les inventeurs ont constaté que le nombre d'entrées au centre de la zone était légèrement inférieur chez les souris HdlicAG4 par comparaison aux souris de type sauvage. Cependant, ces différences ont été jugées non significatives statistiquement, ce qui présume que le phénotype anxieux lié à la maladie de Huntington n'est pas détectable 7 mois chez les souris. Le traitement par ML-348 n'a également pas eu d'effet significatif quel que soit le groupe de souris. [0116] Sur la Figure 5C, les inventeurs ont étudié les comportements lié à l'anxiété et la dé- 17 pression à l'aide du test NSF (test de l'alimentation en environnement nouveau après privation de nourriture) qui est révélateur des stades anxieux et dépressifs. La latence jusqu'à la prise de nourriture dans un nouvel environnement était significativement plus longue pour les souris Hdhum-w- par comparaison aux souris de type sauvage et le traitement par ML-348 permet de rétablir le comportement des souris HdhcAGh vers celui des souris de type sauvage. Ces observations suggèrent que ML-348 a un effet significatif sur les comportements anxio-dépressifs induits par la maladie de Huntington. [0117] En addition aux tests se focalisant sur les comportements anxio-dépressifs, des tests supplémentaires ont été effectués sur les souris pour évaluer leurs comportements moteurs (Figures 3D-5F). Sur la Figure 5D, le graphique représente la locomotion spontanée des souris en tant que distance totale parcourue pendant 60 minutes dans le cadre du test d'Open Field. On constate que la distance parcourue était légèrement inférieure pour les souris Hdhcsk par comparaison aux souris de type sauvage, mais cette différence n'a pas été estimée statistiquement significative. [0118] La Figure 5E représente le score d'erreurs moyen et la durée moyenne de traversée de l'échelle du test d'Horizontal Ladder (échelle horizontale). Ce test permet d'étudier la coordination motrice des pattes avant et arrière des souris. On peut noter que les souris HdhcAci+ ont montré des défauts significatifs dans cette tâche comme en témoignent les scores d'erreurs élevés et l'augmentation de la durée de traversée de l'échelle. Une amélioration des performances des souris est rendue possible par le traitement par ML-348. [0119] La Figure 5F représente, sur le panel du haut, la vitesse moyenne atteinte (en rotations par minute, rpm) par les souris sur un appareil rotarod à vitesse accélérée, de 4 à 40 rpm en 600 secondes, de 4 à 40 rpm en 300 secondes et de 4 à 40 rpm en 120 secondes, respectivement. On observe que les souris Hdhc^ci+ traitées par ML-348 retrouvent une coordination motrice proche de celle des souris de type sauvage, en particulier clans la condition 300s où les résultats ont été jugés statistiquement significatifs. Dans le panel du bas, la vitesse moyenne atteinte par les souris est étudiée sur un appareil rotarod fixe à vitesse constante de, respectivement, 10 rpm, 15 rpm et 20 rpm. Une vitesse élevée en rotarod à vitesse fixe (20 rpm) ne permet pas de montrer de différence significative entre les souris de type sauvage et les souris HdhcAci+, en revanche, à une vitesse moindre (10 et 15 rpm), ML-348 a amélioré significativement les performances des souris Hdlev-14 puisque les valeurs observées étaient similaires à celles des souris de type sauvage non traitées. [0120] La Figure 6 montre l'augmentation de la densité de synapses et de la palmitoylation après un traitement par ML-348 de 28 jours. [0121] La Figure GA permet de chiffrer la densité de synapses post-mortem sur des neurones de souris témoins ou après 28 jours de traitement par ML-348 au moyen du nombre de 18 points adjacents de PSD95 et Vglut-1 pour 100 !lm; On note qu'il y a une réduction significative de ce nombre de points adjacents chez les souris HdhcAah non traitées. Le traitement par ML-348 restaure la densité synaptique à un niveau sensiblement égal à celui des souris sauvages non traitées. (WT CTRL=36; WT ML-348=36; frAG/k CTRL=36; HdHcAch ML-348=36; F3,140 =3.65 , * p