FR 3075200 A1 20190621 FR 1762217 A 20171215 Variants avec fragment Fc ayant une affinite augment& pour FcRn et une affinite augment& pour au moins un recepteur du fragment Fc La presente invention se rapporte a un polypeptide (appele egalement variant) comprenant une region Fc mut& et presentant une affinite augment& pour le recepteur FcRn ainsi qu'une affinite augment& pour au moins un recepteur du fragment Fc (FcR) par rapport a un polypeptide parent. Un anticorps est constitue d'un tetramere de chaines lourdes et legeres. Les deux chaines legeres sont identiques entre elles, et les deux chaines lourdes sont identiques et reliees par des ponts disulfures. II existe cinq types de chaines lourdes (alpha, gamma, delta, epsilon, mu), qui determinent les classes d'immunoglobulines (IgA, IgG, IgD, IgE, IgM). Le groupe de la chaine legere comprend deux sous-types, lambda et kappa. Les IgG sont des anticorps solubles qui peuvent etre trouves dans le sang et d'autres fluides corporels. L'IgG est une glycoproteine en forme de Y avec un poids moleculaire approximatif de 150 kDa, composee de deux chaines lourdes et deux chaines legeres. Chaque chaine se distingue en une region constante et une region variable. Les deux domaines carboxy-terminaux des chaines lourdes forment le fragment Fc, tandis que les domaines amino-terminaux des chaines lourdes et legeres reconnaissent l'antigene et sont nommes fragment Fab. Les proteines de fusion Fc sont creees par une combinaison d'un fragment Fc d'anticorps avec un domaine proteique qui fournit la specificite pour une cible therapeutique donnee. Des exemples sont des combinaisons du fragment Fc avec tout type de proteines therapeutiques ou leurs fragments. Les polypeptides Fc, notamment les fragments Fc, les anticorps therapeutiques et les proteines de fusion Fc, sont utilises aujourd'hui pour traiter diverses maladies, comme la polyarthrite rhumatoIde, le psoriasis, la sclerose en plaques et de nombreuses formes de cancer. Des anticorps therapeutiques peuvent etre des anticorps monoclonaux ou polyclonaux. Les anticorps monoclonaux sont obtenus a partir d'une lignee cellulaire de production d'anticorps unique, qui montre une specificite identique pour un seul antigene. Les proteines de fusion Fc therapeutiques sont utilisees ou developpees comme medicaments contre les maladies autoimmunes et/ou a composante inflammatoire, 2 comme l'etanercept (Enbrel d'Amgen, qui est un recepteur TNF lie a un fragment Fc) ou Alefacept (Amevive de Biogen Idec, qui est LFA-3 lie a la portion Fc d'IgG1 humaine). Les polypeptides Fc, tels que les fragments Fc, les anticorps et proteines de fusion Fc, 5 ont notamment une activite dependante de la liaison de leur partie Fc a leurs recepteurs, a savoir le FcRn et les recepteurs du fragment Fc (FcR), tels que les recepteurs FcyRl (CD64), FcyRllla (CD16a) et FcyRI la (CD32a). L'un des effets recherches dans les therapies faisant intervenir les interactions de 10 polypeptides Fc avec les recepteurs du fragment Fc (FcR), est une inhibition de l'activation du systeme immunitaire par liaison aux recepteurs Fc presents a la surface des cellules effectrices. Notamment dans le cadre du traitement de maladies inflammatoires et/ou auto-immunes, impliquant des autoanticorps et/ou cytokines, les therapies a base de fragments Fc peuvent agir par blocage des recepteurs Fc et ainsi par 15 competition avec les autoanticorps pour l'acces a ces recepteurs. Cela entraine une inhibition des activites directes normalement mediees par les autoanticorps (par exemple cytotoxicite cellulaire dependante des anticorps, cytotoxicite dependante du complement, ou phagocytose cellulaire dependante des anticorps) et une diminution de l'activation du systeme immunitaire, notamment du relargage de cytokines. Ainsi, les traitements a base 20 de fragments Fc sont particulierement adaptes aux maladies auto-immunes et/ou inflammatoires, declenchees par des stimulations incontrolees des cellules du systeme immunitaire, notamment par des autoanticorps et/ou des cytokines. La therapie de base proposee pour le traitement de ces maladies est une therapie a base 25 d'immunoglobulines intraveineuses (IgIV) qui consiste a administrer aux malades par voie intraveineuse des immunoglobulines (IgG le plus souvent) issues de pools de dons de plasma humain. II est communement admis que ces IgIV agissent notamment en bloquant les recepteurs Fc et ainsi en entrant en competition avec les autoanticorps pour l'acces a ces recepteurs. Plus recemment, des fragments Fc ont ete developpes dans le but de 30 modifier leurs proprietes de liaison aux recepteurs Fc. Neanmoins, leur efficacite reste a demontrer. II existe toujours un besoin d'optimiser ces fragments Fc, de maniere notamment a augmenter leur temps de demi-vie, et/ou leur efficacite therapeutique. 35 La Demanderesse a maintenant mis au point des fragments Fc particuliers, presentant une activite amelioree tout en presentant une liaison au FcRn et/ou une demi-vie 3 amelioree. Ces fragments Fc peuvent etre utilises en therapie, et sont notamment adaptes pour le traitement des maladies inflammatoires et/ou auto-immunes, en vue d'apporter une meilleure efficacite au produit qui les contient En particulier, ces fragments peuvent presenter un blocage plus efficace des recepteurs 5 Fc presents sur les cellules du systeme immunitaire, qui sont alors moins, ou ne sont plus, accessibles pour la liaison des autoanticorps, dont l'activite est alors inhibee. En outre, certains de ces fragments Fc particuliers presentent, comme cela est demontre en exemples, une meilleure inhibition de la cytotoxicite dependante du complement (CDC) que les IVIg. Ils permettraient donc de diminuer la toxicite des autoanticorps pathogenes, 10 tels que ceux qui sont impliques dans les maladies inflammatoires et/ou auto-immunes. La presente invention fournit ainsi un variant d'un polypeptide parent ayant des proprietes optimisees relatives a l'activite fonctionnelle mediee par Ia region Fc. La presente invention se rapporte ainsi a un variant d'un polypeptide parent comprenant 15 un fragment Fc, ledit variant presentant une affinite augmentee pour le recepteur FcRn, et une affinite augmentee pour au moins un recepteur du fragment Fc (FcR) choisi parmi les recepteurs FcyRI (CD64), FcyRllla (CD16a) et FcyRlla (CD32a), par rapport a celle du polypeptide parent, ledit variant comprenant : (i) une mutation choisie parmi 434Y, 378V, 378T, 434S, 226G, P228L, P228R, 230S, 20 230T, 230L, 241 L, 264E, 307P, 315D, 330V, 362R, 389T et 389K ; (ii) au moins une mutation choisie parmi 334N, 326E, 326T, 352L, 378V, 378T, 396L, 397M, 421T, 334R, 307N et 394P ; et (iii) au moins une mutation choisie parmi 352S, 226Y, 227S, 231V, 234P, 2431, 246R, 246E, 247T, 248E, 253F, 254F, 255W, 259A, 261 R, 262A, 263A, 266M, 267N, 267G, 25 274E, 274R, 276S, 278H, 282A, 283G, 284L, 2861, 286Y, 287T, 288E, 288R, 298N, 302A, 308A, 308G, 309P, 312G, 316D, 319H, 320T, 320R, 320M, 322E, 3231, 333G, 334N, 334R, 336T, 339T, 340E, 343S, 345G, 349S, 349H, 350A, 359A, 361H, 3631, 366A, 373D, 375R, 377T, 378V, 378T, 379A, 380G, 383R, 385R, 389S, 393A, 3931, 394P, 3971, 397M, 398P, 405V, 405L, 410R, 412M, 414R, 421S, 423L, 423Y, 423S, 30 423P, 428T, 431V, 431T, 434K, 434S, 435R, 436H, 440G, 440N, 442F, 442P et 447N, Ia numerotation etant celle de l'index EU ou equivalent dans Kabat et avec Ia condition que les mutations (i), (ii) et (iii) n'aient pas lieu sur les memes acides amines. Selon un mode de realisation, le variant selon ('invention comprend en outre au moins une 35 mutation (iv) dans le fragment Fc choisie parmi Y296W, K290G, V240H, V2401, V240M, V240N, V240S, F241H, F241Y, L242A, L242F, L242G, L242H, L2421, L242K, L242P, 4 L242S, L242T, L242V, F243L, F243S, E258G, E2581, E258R, E258M, E258Q, E258Y, V259C, V2591, V259L, T260A, T260H, T260I, T260M, T260N, T260R, T260S, T260W, V262S, V263T, V264L, V264S, V264T, V266L, S267A, S267Q, S267V, K290D, K290E, K290H, K290L, K290N, K290Q, K290R, K290S, K290Y, P291G, P291Q, P291R, R2921, 5 R292L, E293A, E293D, E293G, E293M, E293Q, E293S, E293T, E294A, E294G, E294P, E294Q, E294R, E294T, E294V, 02951, Q295M, Y296H, S298A, S298R, Y3001, Y300V, Y300W, R301A, R301M, R301P, R301S, V302F, V302L, V302M, V302R, V302S, V303S, V303Y, S304T, V305A, V305F, V3051, V305L, V305R et V305S. 10 Un tel variant est appele « variant selon l'invention », « mutant selon l'invention » ou « polypeptide selon l'invention ». De preference, le variant selon l'invention presente a la fois une affinite augmentee pour le recepteur FcRn, et une affinite augmentee pour tous les recepteurs FcyRl (CD64), 15 FcyRllla (CD16a) et FcyRlla (CD32a). De preference, en outre, le variant selon l'invention est capable d'inhiber la cytotoxicite dependante du complement (CDC), attribuee a une modification de liaison aux proteines du complement, en particulier le C1q. Cette inhibition est significativement amelioree par rapport a celle conferee par des IVIg. 20 De preference, le variant selon l'invention est different du variant consistant en un fragment Fc, notamment d'IgG1, presentant les cinq mutations N434Y, K334N, P352S, V397M et A378V, et produit en cellules HEK293, la numerotation etant celle de l'index EU ou equivalent dans Kabat. Ainsi, de preference, le variant selon l'invention est different du 25 fragment Fc, notamment d'IgG1, N434Y/K334N/P352S/V397M/A378V produit en cellules HEK293, la numerotation etant celle de l'index EU ou equivalent dans Kabat. Tout au long de la presente demande, la numerotation des residus dans la region Fc est celle de la chaine lourde d'immunoglobuline selon l'index EU ou equivalent dans Kabat et 30 al. (Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5e ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, dans le Maryland, 1991). L'expression «index EU ou equivalent dans Kabat>> fait reference a la numerotation EU des residus de l'anticorps humain IgG1, IgG2, IgG3 ou IgG4. Cela est illustre sur le site IMGT (http://www.imgtorg/IMGTScientificChart/Numberinq/Hu IGHGnber.html). 35 5 Par «polypeptide» ou «proteine», on entend une sequence comprenant au moins 100 acides amines attaches de maniere covalente. Par «acide amine», on entend l'un des 20 acides amines naturels ou des analogues non naturels. 5 Le terme « position » signifie une position dans la sequence d'un polypeptide. Pour la region Fc, les positions sont numerotees selon l'indice de l'UE ou equivalent dans Kabat. Le terme «anticorps» est utilise dans le sens commun. II correspond a un tetramere qui comprend au moins une region Fc, et deux regions variables. Les anticorps comprennent notamment les immunoglobulines pleine longueur, les anticorps monoclonaux, les 10 anticorps multi-specifiques, les anticorps chimeriques, les anticorps humanises et les anticorps entierement humains. La partie amino-terminale de chaque chaine lourde comprend une region variable d'environ 100 a 110 acides amines responsable de la reconnaissance de l'antigene. Dans chaque region variable, trois boucles sont rassemblees pour former un site de liaison a l'antigene. Chacune des boucles est appelee 15 une region determinant la complementarite (ci-apres denomme un «CDR»). La partie carboxy-terminale de chaque chaine lourde definit une region constante principalement responsable de la fonction effectrice. Les IgG ont plusieurs sous-classes, notamment IgG1, IgG2, IgG3 et IgG4. Les sous-classes d'IgM sont notamment IgM1 et IgM2. Ainsi, par «isotype», on entend l'une des 20 sous-classes d'immunoglobulines definies par les caracteristiques chimiques et antigeniques de leurs regions constantes. Les isotypes connus d'immunoglobulines humaines sont les IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1, IgA2, IgM1, IgM2, IgD et IgE. Les IgG pleine longueur sont des tetrameres et se composent de deux paires identiques de deux chaines d'immunoglobulines, chaque paire ayant une chaine legere et une 25 chaine lourde, chaque chaine legere comprenant les domaines VL et CL, et chaque chaine lourde comprenant les domaines VH, Cy1 (aussi appele CH1), Cy2 (egalement appele CH2), et Cy3 (egalement appele CH3). Dans le cadre d'une IgG1 humaine, « CH1 » fait reference aux positions 118 a 215, « CH2 » renvoie aux positions 231 a 340 et « CH3 » se refere aux positions 341 a 447 selon l'index EU ou equivalent dans Kabat. 30 La chaine lourde des IgG comprend egalement un domaine charniere flexible N-terminal qui se refere aux positions 216 a 230 dans le cas d'IgG1. Le domaine charniere inferieur se refere aux positions 226 a 230 selon l'index EU ou equivalent dans Kabat. Par "region variable", on entend la region d'une immunoglobuline qui comprend un ou plusieurs domaines Ig sensiblement codes par l'un quelconque des genes VK, VA et/ou 35 VH qui composent les chaines kappa, lambda, et lourde d'immunoglobuline, 6 respectivement. Les regions variables comprennent les regions determinant la complementarite (CDR) et les regions charpente (FR). Le terme "Fc" ou "region Fc" designe la region constante d'un anticorps a ('exclusion du premier domaine de region constante d'immunoglobuline (CH1). Ainsi Fc fait reference 5 aux deux derniers domaines (CH2 et CH3) de region constante d'IgG1, et a la charniere flexible N-terminale de ces domaines. Pour une IgG1 humaine, la region Fc correspond au residu C226 jusqu'a son extremite carboxy-terminale, soit les residus de la position 226 a 447, 00 la numerotation est selon l'index EU ou equivalent dans Kabat. La region Fc utilisee peut comprendre en outre une partie de la region charniere superieure, situee 10 entre les positions 216 a 226 selon l'index EU ou equivalent dans Kabat ; dans ce cas, la region Fc utilisee correspond aux residus de la position 216 a 447, 217 a 447, 218 a 447, 219 a 447, 220 a 447, 221 a 447, 222 a 447, 223 a 447, 224 a 447 ou 225 a 447, 00 la numerotation est selon l'index EU ou equivalent dans Kabat. De preference dans ce cas, la region Fc utilisee correspond aux residus de la position 216 a 447, 00 la numerotation 15 est selon l'index EU ou equivalent dans Kabat. De preference, la region Fc utilisee est choisie parmi les sequences SEQ ID NO :1 a 10 et 14. Par «polypeptide parent», on entend un polypeptide de reference. Ledit polypeptide 20 parent peut etre d'origine naturelle ou synthetique. Dans le contexte de la presente invention, le polypeptide parent comprend une region Fc, appelee « region Fc parente ». Cette region Fc peut etre choisie parmi le groupe de regions Fc de type sauvage, leurs fragments et leurs mutants. De preference, le polypeptide parent comprend un fragment Fc humain, de preference un fragment Fc d'une IgG1 humaine ou d'une IgG2 humaine. 25 Le polypeptide parent peut comprendre des modifications d'acides amines preexistantes dans la region Fc (par exemple un mutant Fc) par rapport a des regions Fc de type sauvage. Avantageusement, le polypeptide parent est une region Fc isolee (i.e. un fragment Fc en tant que tel), une sequence derivee d'une region Fc isolee, un anticorps, un fragment 30 d'anticorps comprenant une region Fc, une proteine de fusion comprenant une region Fc ou un conjugue Fc, cette liste n'etant pas !imitative. Par « sequence derivee d'une region Fc isolee », on entend une sequence comprenant au moins deux regions Fc isolees liees entre elles, telle qu'un scFc (single chain Fc) ou un multimere Fc. Par « proteine de fusion comprenant une region Fc », on entend une 35 sequence polypeptidique fusionnee a une region Fc, ladite sequence polypeptidique etant de preference choisie parmi les regions variables de tout anticorps, les sequences de 7 liaison d'un recepteur a son ligand, les molecules d'adhesion, les ligands, les enzymes, les cytokines et les chimiokines. Par « conjugue Fc », on entend un compose qui est le resultat du couplage chimique d'une region Fc avec un partenaire de conjugaison. Le partenaire de conjugaison peut etre proteique ou non proteique. La reaction de couplage 5 utilise generalement des groupes fonctionnels sur la region Fc et le partenaire de conjugaison. Divers groupes de liaison sont connus dans l'art anterieur comme etant appropries pour la synthese d'un conjugue; par exemple, des groupes de liaison homo-ou heterobifonctionnels sont bien connus (voir, catalogue Pierce Chemical Company, 20052006, section technique sur des agents de reticulation, pages 321-350). Parmi les 10 partenaires de conjugaison appropries, on peut citer les proteines therapeutiques, les etiquettes, les agents cytotoxiques tels que les agents chimiotherapeutiques, les toxines et leurs fragments actifs. Les toxines appropriees et leurs fragments incluent notamment la toxine de la diphterie, l'exotoxine A, la ricine, l'abrine, la saporine, la gelonine, la calicheamicine, les auristatines E et F et la mertansine. 15 Avantageusement, le polypeptide parent - et donc le polypeptide selon l'invention - consiste en une region Fc. Avantageusement, le polypeptide parent - et donc le polypeptide selon l'invention - est un anticorps. 20 Par « mutation », on entend un changement d'au moins un acide amine de la sequence d'un polypeptide, notamment un changement d'au moins un acide amine de la region Fc du polypeptide parent. Le polypeptide mute ainsi obtenu est un polypeptide variant ; c'est un polypeptide selon l'invention. Un tel polypeptide comprend une region Fc mutee, par rapport au polypeptide parent. De preference, la mutation est une substitution, une 25 insertion ou une deletion d'au moins un acide amine. Par «substitution», on entend le remplacement d'un acide amine a une position particuliere dans une sequence de polypeptide parent par un autre acide amine. Par exemple, la substitution N434S se refere a un polypeptide variant, en ('occurrence un variant pour lequel l'asparagine a la position 434 est remplace par la serine. 30 Par "insertion d'acide amine" ou "insertion", on entend ('addition d'un acide amine a une position particuliere dans une sequence de polypeptide parent. Par exemple, ('insertion G>235-236 designe une insertion de glycine entre les positions 235 et 236. Par « deletion d'acides amines» ou «deletion», on entend la suppression d'un acide amine a une position particuliere dans une sequence de polypeptide parent. Par exemple, 35 E294de1 designe la suppression de ('acide glutamique en position 294. 8 De preference, le libelle suivant de mutation est utilise: « 434S » ou « N434S », et signifie que le polypeptide parent comprend I'asparagine en position 434, qui est remplacee par la serine dans le variant. Dans le cas d'une combinaison de substitutions, le format prefere est le suivant: « 259I/315D/434Y » ou « V2591/N315D/N434Y ». Cela signifie qu'il existe 5 trois substitutions dans le variant, en positions 259, 315 et 434, et que I'acide amine en position 259 du polypeptide parent, a savoir Ia valine, est remplace par I'isoleucine, que I'acide amine en position 315 du polypeptide parent, soit I'asparagine, est remplace par I'acide aspartique et que I'acide amine en position 434 du polypeptide parent, soit I'asparagine, est remplace par Ia tyrosine. 10 Par «FcRn» ou «recepteur Fc neonatal» tel qu'utilise ici, on entend une proteine qui se lie a la region Fc des IgG et est codee au moins en partie par un gene FcRn. Comme cela est connu dans la technique, la proteine FcRn fonctionnelle comprend deux polypeptides, souvent designes sous le nom de chaine lourde et de chaine legere. La chaine legere est 15 la beta-2-microglobuline et la chaine lourde est codee par le gene FcRn. Sauf indication contraire ici, FcRn ou proteine FcRn se refere au complexe de la chaine a avec la beta-2- microglobuline. Chez l'homme, le gene codant pour le FcRn est appele FCGRT. De preference, le variant selon l'invention presente une affinite augmentee pour le 20 recepteur FcRn, par rapport a celle du polypeptide parent, d'un ratio au moins egal a 2, de preference superieur a 5, de preference superieur a 10, de preference superieur a 15, de preference superieur a 20, de preference superieur a 25, de preference superieur a 30. De preference, le variant selon l'invention presente une demi-vie augmentee par rapport a 25 celle du polypeptide parent. De preference, le variant selon l'invention presente une demi- vie augmentee par rapport a celle du polypeptide parent, d'un ratio au moins egal a 2, de preference superieur a 5, de preference superieur a 10, de preference superieur a 15, de preference superieur a 20, de preference superieur a 25, de preference superieur a 30. 30 L'une des fonctions majeures du FcRn est connue sous le nom de recyclage des IgG. Elle consiste a extraire les IgG de la voie du catabolisme endothelial des proteines plasmatiques pour les restituer intactes dans la circulation. Ce recyclage explique leur demi-vie longue dans des conditions physiologiques normales (trois semaines pour les IgG), tout en permettant le maintien de concentrations plasmatiques elevees. La 35 transcytose des IgG d'un pole a l'autre des epitheliums ou des endotheliums est la 9 deuxierne fonction majeure du FcRn permettant d'assurer leur biodistribution dans l'organisme. De preference, le variant selon l'invention presente une affinite augmentee pour au moins 5 un recepteur du fragment Fc (FcR) choisi parmi les recepteurs FcyRI (CD64), FcyRIlla (CD16a) et FcyRIla (CD32a), par rapport a celle du polypeptide parent, d'un ratio au moins egal a 2, de preference superieur a 5, de preference superieur a 10, de preference superieur a 15, de preference superieur a 20, de preference superieur a 25, de preference superieur a 30. 10 Le recepteur FcyRI (CD64) est implique dans la phagocytose et l'activation cellulaire. Le recepteur FcgRllla (CD16a) est egalement implique dans l'activite dependante du fragment Fc, notamment I'ADCC et la phagocytose ; i1 presente un polymorphisme V/F en position 158. Le recepteur FcgRlla (CD32a) est, quant a lui, implique dans l'activation plaquettaire et la phagocytose ; i1 presente un polymorphisme H/R en position 131. 15 De preference, le variant selon l'invention presente a la fois une affinite augmentee pour le recepteur FcRn, et une affinite augmentee pour tous les recepteurs FcyRI (CD64), FcyRIlla (CD16a) et FcyRIla (CD32a). 20 L'affinite d'un polypeptide comprenant une region Fc pour un FcR peut etre evaluee par des procedes bien connus de l'art anterieur. Par exemple, l'homme de l'art peut determiner ('affinite (Kd) en utilisant la resonance plasmonique de surface (SPR). Alternativement, l'homme de l'art peut effectuer un test ELISA approprie. Un dosage ELISA approprie permet de comparer les forces de liaison du Fc parent et du Fc mute. 25 Les signaux detectes specifiques du Fc mute et du Fc parent sont compares. L'affinite de liaison peut etre indifferemment determinee en evaluant les polypeptides entiers ou en evaluant les regions Fc isolees de ceux-ci. De preference, la region Fc mutee du polypeptide selon l'invention comprend de 3 a 20 30 mutations par rapport au polypeptide parent, de preference de 4 a 20 mutations. Par «de 3 a 20 modifications d'acides amines», on englobe 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 et 20 mutations d'acides amines. De preference, elle comprend de 4 a 15 mutations, de preference de 4 a 15 mutations, de preference de 4 a 10 mutations par rapport au polypeptide parent. 35 Plus preferentiellement, la region Fc mutee du polypeptide selon l'invention comprend au moins une combinaison de 4 mutations, ladite combinaison comprenant une mutation (i) 10 telle que decrite ci-dessus, au moins 2 mutations (ii) telles que decrites ci-dessus et au moins une mutation (iii) telle que decrite ci-dessus, la numerotation etant celle de l'index EU ou equivalent dans Kabat et avec la condition que la mutation (i) n'a pas lieu sur le merne acide amine que la mutation (ii). 5 Plus preferentiellement, la region Fc mutee du polypeptide selon ('invention comprend une combinaison de 5 mutations, ladite combinaison comprenant une mutation (i) telle que decrite ci-dessus, au moins 2 mutations (ii) telles que decrites ci-dessus et au moins 2 mutations (iii) telles que decrites ci-dessus, la numerotation etant celle de l'index EU ou 10 equivalent dans Kabat et avec la condition que la mutation (i) n'a pas lieu sur le merne acide amine que la mutation (ii). De preference, la mutation (i) est choisie parmi 434Y et 378V. De preference, la mutation (ii) est choisie parmi 334N, 378V et 397M. 15 De preference, la mutation (iii) est choisie parmi 352S, 334N, 378V et 397M. De preference, lorsqu'une mutation (iv) est presente, elle est choisie parmi K290G et Y296W. De preference, la region Fc mutee du polypeptide selon ('invention comprend les 20 mutations suivantes: (i) une mutation choisie parmi 434Y et 378V; (ii) au moins une mutation choisie parmi 334N, 378V et 397M; (iii) au moins une mutation choisie parmi 352S, 334N, 378V et 397M ; et (iv) eventuellement au moins une mutation choisie parmi K290G et Y296W, 25 la numerotation etant celle de l'index EU ou equivalent dans Kabat et avec la condition que les mutations (i), (ii) et (iii) n'aient pas lieu sur les memes acides amines. De preference, la region Fc mutee du polypeptide selon ('invention comprend les mutations suivantes: 30 (i) une mutation 434Y; (ii) au moins deux mutations choisies parmi 334N, 378V et 397M, de preference les deux mutations 334N et 378V; (iii) au moins deux mutations choisies parmi 352S, 334N, 378V et 397M, de preference les deux mutations 352S et 397M ; et 35 (iv) eventuellement au moins une mutation choisie parmi K290G et Y296W, 11 la numerotation etant celle de ('index EU ou equivalent dans Kabat et avec la condition que les mutations (i), (ii) et (iii) n'aient pas lieu sur les memes acides amines. De preference, la region Fc mutee du polypeptide selon l'invention comprend une 5 combinaison de mutations choisie parmi les combinaisons : N434Y/K334N/P352S/V397M/A378V et N434Y/K334N/P352S/V397M/A378V/Y296W. De preference, le polypeptide selon l'invention est produit dans des cellules epitheliales mammaires de mammiferes non humains transgeniques. 10 De preference, le polypeptide selon l'invention est produit dans des animaux transgeniques non humains, de preference dans des mammiferes non humains transgeniques, plus preferentiellement dans leurs cellules epitheliales mammaires. 15 Par « mammifere non humain transgenique », on entend un mammifere notamment choisi parmi les bovins, les porcins, les chevres, les ovins et les rongeurs, de preference parmi la chevre, la souris, la truie, la lapine, la brebis et la vache. De preference, ('animal transgenique non humain ou le mammifere transgenique non humain est une chevre transgenique. 20 De preference, le variant selon l'invention comprend au moins les cinq mutations N434Y, K334N, P352S, V397M et A378V dans son fragment Fc, et est produit dans des cellules epitheliales mammaires de mammiferes non humains transgeniques, ou bien dans des animaux transgeniques non humains, de preference dans des mammiferes non humains 25 transgeniques, telle qu'une chevre. Un tel variant presente a la fois une affinite augment& pour le recepteur FcRn, et une affinite augment& pour tous les recepteurs FcyRl (CD64), FcyRllla (CD16a) et FcyRlla (CD32a). Ainsi, de preference, le variant selon l'invention est le variant Fc N434Y/K334N/P352S/V397M/A378V produit dans des cellules epitheliales mammaires de 30 mammiferes non humains transgeniques. Alternativement, de preference, le variant selon l'invention est le variant Fc N434Y/K334N/P352S/V397M/A378V produit dans des animaux transgeniques non humains, de preference dans des mammiferes non humains transgeniques, telle qu'une chevre. Un tel variant presente a la fois une affinite augment& pour le recepteur FcRn, et une affinite augment& pour tous les recepteurs 35 FcyRl (CD64), FcyRllla (CD16a) et FcyRlla (CD32a). De preference, le variant selon l'invention comprend la sequence SEQ ID NO :11. 12 Alternativement, de preference, le variant selon ('invention est le variant Fc N434Y/K334N/P352S/V397M/A378V/Y296W produit dans des cellules epitheliales mammaires de mammiferes non humains transgeniques. Alternativement, de preference, le variant selon ('invention est le variant Fc N434Y/K334N/P352S/V397M/A378V/Y296W 5 produit dans des animaux transgeniques non humains, de preference dans des mammiferes non humains transgeniques, telle qu'une chevre. Un tel variant presente a la fois une affinite augment& pour le recepteur FcRn, et une affinite augment& pour tous les recepteurs FcyRI (CD64), FcyRIlla (CD16a) et FcyRIla (CD32a). 10 De preference, le procede de production d'un variant selon !'invention comprend !'expression dudit variant dans des cellules epitheliales mammaires de mammiferes non humains transgeniques. Ainsi, la presente invention a egalement pour objet un procede de production d'un polypeptide parent comprenant un fragment Fc, !edit variant presentant une affinite 15 augment& pour le recepteur FcRn, et une affinite augment& pour au moins un recepteur du fragment Fc (FcR) choisi parmi les recepteurs FcyRI (CD64), FcyRIlla (CD16a) et FcyRIla (CD32a), par rapport a celle du polypeptide parent, !edit variant comprenant : 20 25 30 (iv) eventuellement au moins une mutation choisie parmi Y296W, K290G, V240H, V240I, V240M, V240N, V240S, F241H, F241Y, L242A, L242F, L242G, L242H, L242I, L242K, L242P, L242S, L242T, L242V, F243L, F243S, E258G, E258I, E258R, E258M, E258Q, E258Y, V259C, V259I, V259L, T260A, T260H, T260I, T260M, T260N, T260R, T260S, T260W, V262S, V263T, V264L, V264S, V264T, V266L, S267A, S267Q, S267V, K290D, 35 K290E, K290H, K290L, K290N, K290Q, K290R, K290S, K290Y, P291G, P291Q, P291R, R292I, R292L, E293A, E293D, E293G, E293M, E293Q, E293S, E293T, E294A, E294G, (i) une mutation choisie parmi 434Y, 378V, 378T, 434S, 226G, P228L, P228R, 230S, 230T, 230L, 241 L, 264E, 307P, 315D, 330V, 362R, 389T et 389K ; (ii) au moins une mutation choisie parmi 334N, 326E, 326T, 352L, 378V, 378T, 396L, 397M, 421T, 334R, 307N et 394P ; (iii) au moins une mutation choisie parmi 352S, 226Y, 227S, 231V, 234P, 2431, 246R, 246E, 247T, 248E, 253F, 254F, 255W, 259A, 261 R, 262A, 263A, 266M, 267N, 267G, 274E, 274R, 276S, 278H, 282A, 283G, 284L, 2861, 286Y, 287T, 288E, 288R, 298N, 302A, 308A, 308G, 309P, 312G, 316D, 319H, 320T, 320R, 320M, 322E, 3231, 333G, 334N, 334R, 336T, 339T, 340E, 343S, 345G, 349S, 349H, 350A, 359A, 361H, 3631, 366A, 373D, 375R, 377T, 378V, 378T, 379A, 380G, 383R, 385R, 389S, 393A, 3931, 394P, 3971, 397M, 398P, 405V, 405L, 410R, 412M, 414R, 421S, 423L, 423Y, 423S, 423P, 428T, 431V, 431T, 434K, 434S, 435R, 436H, 440G, 440N, 442F, 442P et 447N ; et 13 E294P, E294Q, E294R, E294T, E294V, Q295I, Q295M, Y296H, S298A, S298R, Y3001, Y300V, Y300W, R301A, R301M, R301P, R301S, V302F, V302L, V302M, V302R, V302S, V303S, V303Y, S304T, V305A, V305F, V3051, V305L, V305R et V305S, Ia numerotation etant celle de l'index EU ou equivalent dans Kabat et avec Ia condition 5 que les mutations (i), (ii) et (iii) et eventuellement (iv) n'aient pas lieu sur les memes acides amines, ledit procede comprenant l'expression dudit variant dans des cellules epitheliales mammaires de mammiferes non humains transgeniques. 10 En particulier, un tel procede comprend les etapes suivantes : a) preparation d'une sequence d'ADN comprenant une sequence codant pour le variant, une sequence codant pour un promoteur de caseine de mammifere ou un promoteur de lactoserum de mammifere, et une sequence codant pour un peptide signal permettant la secretion dudit variant ; 15 b) introduction de la sequence d'ADN obtenue en a) dans un embryon de mammifere non humain, afin d'obtenir un mammifere non humain transgenique exprimant le variant code par ladite sequence d'ADN obtenue en a) dans la glande mammaire ; et c) recuperation du variant dans le lait produit par le mammifere non humain transgenique obtenu en b). 20 L'etape a) comprend ainsi la preparation d'une sequence d'ADN comprenant une sequence codant pour le variant, une sequence codant pour un promoteur de caseine de mammifere ou un promoteur de lactoserum de mammifere, et une sequence codant pour un peptide signal permettant la secretion dudit variant. Une telle etape est illustree en 25 figure 1. La sequence codant le variant est une sequence d'ADN codant pour le variant selon ('invention. Par exemple ce variant a pour sequence SEQ ID NO :11. Avec le peptide signal, la 30 sequence correspondante est la sequence SEQ ID NO :13. La sequence codant pour un promoteur de caseine de mammifere ou un promoteur de lactoserum de mammifere, permet d'exprimer le variant dans le lait. L'homme du metier sait choisir un tel promoteur. 35 14 Dans le cadre de la presente demande, un peptide signal est une sequence d'acides amines, de preference de 2 a 30 acides amines, situee a l'extremite N-terminale du variant de polypeptide Fc, servant a adresser celui-ci dans le lait du mammifere hOte. De preference, la sequence codant pour un peptide signal est interposee entre la sequence 5 codant pour le variant et le promoteur. Sans une telle sequence, le variant resterait dans le tissu mammaire, et la purification serait difficile et exigerait le sacrifice de l'animal hOte. Le peptide signal peut etre dive lors de la secretion. La sequence codant pour le peptide signal peut etre celle qui est naturellement associee a un polypeptide parent selon l'invention. Alternativement, la sequence codant pour le peptide signal peut etre celle de 10 la proteine de lait dont est issu le promoteur, savoir, lorsque le gene de la proteine de lait est digere en vue d'isoler le promoteur, un fragment d'ADN est selectionne comprenant la fois le promoteur et la sequence codante le peptide signal directement en aval du promoteur. Une autre alternative consiste a utiliser une sequence signal derivee d'une autr8prOteine seCreteequi n'est ni la proteine de lait nOrma|em9nt8xprimee partir 15 du promoteur, ni un polypeptide selon l'invention. De preference, le peptide signal a pour sequence SEQ ID NO :12. La sequence d'ADN utilisee peut comprendre desQodonSmtimises. L'optimisation de codon a pour but de remplacer les codons naturels pardesQodonSdont 20 les ARN de transfert (ARNt) portant les acides amines sont les plus frequents dans le type cellulaire considere. Le fait de mobiliser des ARNt frequemment rencontres a pour avantage majeur d'accroitre la vitesse de traduction des ARN messagers (ARNm) et donc d'augmenter le titre final (Carton JM et al, Protein Expr Purif, 2007). L'optimisation de sequence joue aussi sur la prediction des structures secondaires d'ARNm qui pourrait 25 ralentir la lecture par le complexe ribosomal. L'optimisation de sequence a egalement un impact sur le pourcentage de G/C qui est directement lie a la demi-vie des ARNm et donc leur potentiel d'être traduit (Chechetkin, J. of theoretical biology 242, 2006 922-934). L'optimisation de codons peut etre faite par substitution des codons naturels en utilisant des tables de frequence des codons (codon Usage Table) pour mammiferes et plus 30 particulierement pour Homo sapiens. II existe des algorithmes presents sur internet et mis a disposition par les fournisseurs de genes de synthese (DNA2.0, GeneArt, MWG, Genscript) qui permettent de faire cette optimisation de sequence. De preference, l'etape a) est comprend les etapes suivantes : 15 (al) preparation d'une sequence d'ADN comprenant une sequence codant pour le variant selon l'invention, directement fusionnee a son extremite N-terminale a une sequence codant pour un peptide signal permettant la secretion dudit variant ; (a2) introduction de la sequence d'ADN obtenue en (al) dans un vecteur comprenant 5 une sequence codant pour un promoteur de caseine de mammifere ou un promoteur de lactoserum de mammifere ; (a3) digestion dudit vecteur obtenu en (a2), af in d'obtenir une sequence d'ADN comprenant la sequence codant pour un promoteur de caseine de mammifere ou un promoteur de lactoserum de mammifere, et la sequence d'ADN comprenant une 10 sequence codant pour le variant selon ('invention directement fusionnee a son extremite N-terminale a une sequence codant pour un peptide signal. En d'autres termes, de preference, a la fin de l'etape a), on obtient une sequence d'ADN comprenant, de ('extremite N- a C-terminale, la sequence codant pour un promoteur de 15 caseine de mammifere ou un promoteur de lactoserum de mammifere, fusionnee a la sequence codant pour un peptide signal, elle-meme fusionnee a la sequence codant pour le variant selon ('invention. Ensuite, le procede selon ('invention comprend une etape b) d'introduction de la sequence 20 d'ADN obtenue en a) dans un embryon de mammifere non humain, afin d'obtenir un mammifere non humain transgenique exprimant le variant code par ladite sequence d'ADN obtenue en a) dans la glande mammaire. Enf in, le procede selon ('invention comprend une etape c) de recuperation du variant dans 25 le lait produit par le mammifere non humain transgenique obtenu en b). Les etapes b) et c) sont connues de l'art anterieur, notamment du brevet EP0264166. De preference, un tel procede comprend, apres l'etape c), une etape de purification d) du 30 lait recupere. L'etape de purification d) peut etre realisee par toute methode connue de l'art anterieur, notamment par purification sur proteine A. Une fois encore, une telle etape est notamment decrite dans le brevet EP0264166. La presente invention a egalement pour objet une sequence d'ADN comprenant un gene 35 codant un variant d'un polypeptide parent comprenant un fragment Fc, ledit variant presentant une affinite augment& pour le recepteur FcRn, et une affinite augment& pour 16 au mains un recepteur du fragment Fc (FcR) choisi parmi les recepteurs FcyRI (CD64), FcyRIlla (CD16a) et FcyRIla (CD32a), par rapport a celle du polypeptide parent, ledit 5 10 15 la numerotation etant celle de l'index EU ou equivalent dans Kabat et avec la condition que les mutations (i), (ii) et (iii) n'aient pas lieu sur les memes acides amines, ledit gene etant sous le controle d'un promoteur de transcription de la caseine ou du lactoserum de mammifere qui ne contrale pas naturellement la transcription dudit gene, 20 ladite sequence d'ADN comprenant en outre une sequence codant pour un peptide signal permettant la secretion dudit variant, interposee entre la sequence codant pour le variant et le promoteur. La presente invention a egalement pour objet une sequence d'ADN comprenant un gene 25 codant un variant d'un polypeptide parent comprenant un fragment Fc, ledit variant presentant une affinite augmentee pour le recepteur FcRn, et une affinite augmentee pour au mains un recepteur du fragment Fc (FcR) choisi parmi les recepteurs FcyRI (CD64), FcyRIlla (CD16a) et FcyRIla (CD32a), par rapport a celle du polypeptide parent, ledit 30 35 variant comprenant : (i) une mutation choisie parmi 434Y, 378V, 378T, 434S, 226G, P228L, P228R, 230S, 230T, 230L, 241L, 264E, 307P, 315D, 330V, 362R, 389T et 389K ; (ii) au mains une mutation choisie parmi 334N, 326E, 326T, 352L, 378V, 378T, 396L, 397M, 421T, 334R, 307N et 394P ; et (iii) au mains une mutation choisie parmi 352S, 226Y, 227S, 231V, 234P, 2431, 246R, 246E, 2471, 248E, 253F, 254F, 255W, 259A, 261R, 262A, 263A, 266M, 267N, 267G, 274E, 274R, 276S, 278H, 282A, 283G, 284L, 2861, 286Y, 2871, 288E, 288R, 298N, 302A, 308A, 308G, 309P, 312G, 316D, 319H, 3201, 320R, 320M, 322E, 3231, 333G, 334N, 334R, 3361, 3391, 340E, 343S, 345G, 349S, 349H, 350A, 359A, 361H, 3631, 366A, 373D, 375R, 377T, 378V, 378T, 379A, 380G, 383R, 385R, 389S, 393A, 3931, 394P, 3971, 397M, 398P, 405V, 405L, 410R, 412M, 414R, 421S, 423L, 423Y, 423S, 423P, 428T, 431V, 431T, 434K, 434S, 435R, 436H, 440G, 440N, 442F, 442P et 447N, variant comprenant : (i) une mutation choisie parmi 434Y, 378V, 378T, 434S, 226G, P228L, P228R, 230S, 230T, 230L, 241L, 264E, 307P, 315D, 330V, 362R, 389T et 389K ; (ii) au mains une mutation choisie parmi 334N, 326E, 326T, 352L, 378V, 378T, 396L, 397M, 421T, 334R, 307N et 394P ; et 2431, 246R, (iii) au mains une mutation choisie parmi 352S, 226Y, 227S, 231V, 234P, 246E, 2471, 248E, 253F, 254F, 255W, 259A, 261R, 262A, 263A, 266M, 267N, 267G, 274E, 274R, 276S, 278H, 282A, 283G, 284L, 2861, 286Y, 2871, 288E, 288R, 298N, 17 302A, 308A, 308G, 309P, 312G, 316D, 319H, 320T, 320R, 320M, 322E, 3231, 333G, 334N, 334R, 336T, 339T, 340E, 343S, 345G, 349S, 349H, 350A, 359A, 361H, 3631, 366A, 373D, 375R, 377T, 378V, 378T, 379A, 380G, 383R, 385R, 389S, 393A, 3931, 394P, 3971, 397M, 398P, 405V, 405L, 410R, 412M, 414R, 421S, 423L, 423Y, 423S, 423P, 428T, 431V, 431T, 434K, 434S, 435R, 436H, 440G, 440N, 442F, 442P et 447N, Ia numerotation etant celle de l'index EU ou equivalent dans Kabat et avec Ia condition que les mutations (i), (ii) et (iii) n'aient pas lieu sur les memes acides amines, ladite sequence d'ADN comprenant optionnellement une sequence codant pour un peptide signal permettant Ia secretion dudit variant. 10 Le gene de la sequence d'ADN mentionne ci-avant peut eventuellement coder pour un variant comprenant, outre les mutations (i), (ii) et (iii), au moins une mutation (iv) choisie parmi Y296W, K290G, V240H, V240I, V240M, V240N, V240S, F241H, F241Y, L242A, L242F, L242G, L242H, L242I, L242K, L242P, L242S, L242T, L242V, F243L, F243S, 15 E258G, E2581, E258R, E258M, E258Q, E258Y, V259C, V259I, V259L, T260A, T260H, T260I, T260M, T260N, T260R, T260S, T260W, V262S, V263T, V264L, V264S, V264T, V266L, S267A, S267Q, S267V, K290D, K290E, K290H, K290L, K290N, K290Q, K290R, K290S, K290Y, P291G, P291Q, P291R, R292I, R292L, E293A, E293D, E293G, E293M, E293Q, E293S, E293T, E294A, E294G, E294P, E294Q, E294R, E294T, E294V, 02951, 20 Q295M, Y296H, S298A, S298R, Y300I, Y300V, Y300W, R301A, R301M, R301P, R301S, V302F, V302L, V302M, V302R, V302S, V303S, V303Y, S304T, V305A, V305F, V3051, V305L, V305R et V305S, la numerotation etant celle de l'index EU ou equivalent dans Kabat et avec la condition que les mutations (i), (ii), (iii et (iv) n'aient pas lieu sur les memes acides amines. 25 Alternativement, le polypeptide selon ('invention peut etre produit dans des cellules de mammifere en culture. Les cellules preferees sont la lignee de rat YB2/0, la lignee de hamster CHO, en particulier les lignees CHO dhfr- et CHO Lec13, les cellules PER.C6TM (Crucell), NSO, SP2/0, les cellules HeLa, BHK ou COS. De preference, on utilise la lignee 30 de hamster CHO. Ainsi, la presente invention a egalement pour objet un procede de production d'un polypeptide parent comprenant un fragment Fc, ledit variant presentant une affinite augmentee pour le recepteur FcRn, et une affinite augmentee pour au moins un recepteur du fragment Fc (FcR) choisi parmi les recepteurs FcyRl (CD64), FcyRllla (CD16a) et 35 FcyRlla (CD32a), par rapport a celle du polypeptide parent, ledit variant comprenant : 5 18 5 10 (iv) eventuellement au moins une mutation choisie parmi Y296W, K290G, V240H, V2401, V240M, V240N, V240S, F241H, F241Y, L242A, L242F, L242G, L242H, L2421, L242K, 15 L242P, L242S, L242T, L242V, F243L, F243S, E258G, E2581, E258R, E258M, E258Q, E258Y, V259C, V2591, V259L, T260A, T260H, T260I, T260M, T260N, T260R, T260S, T260W, V262S, V263T, V264L, V264S, V264T, V266L, S267A, S267Q, S267V, K290D, K290E, K290H, K290L, K290N, K290Q, K290R, K290S, K290Y, P291G, P291Q, P291R, R2921, R292L, E293A, E293D, E293G, E293M, E293Q, E293S, E293T, E294A, E294G, 20 E294P, E294Q, E294R, E2941, E294V, Q295I, Q295M, Y296H, S298A, S298R, Y3001, Y300V, Y300W, R301A, R301M, R301P, R301S, V302F, V302L, V302M, V302R, V302S, V303S, V303Y, S3041, V305A, V305F, V3051, V305L, V305R et V305S, Ia numerotation etant celle de l'index EU ou equivalent dans Kabat et avec Ia condition que les mutations (i), (ii) et (iii) et eventuellement (iv) n'aient pas lieu sur les memes 25 acides amines, ledit procede comprenant l'expression dudit variant dans des cellules de mammifere en culture. En particulier, un tel procede comprend les etapes suivantes : 30 a) preparation d'une sequence d'ADN codant pour le variant; b) introduction de la sequence d'ADN obtenue en a) dans des cellules de mammifere en culture. L'introduction peut etre effectuee de fagon transitoire ou stable (i.e. integration de la sequence d'ADN obtenue en a) dans le genome des cellules) ; et c) expression du variant a partir des cellules obtenues en b), puis 35 d) optionnellement, recuperation du variant dans le milieu de culture. (i) une mutation choisie parmi 434Y, 378V, 378T, 434S, 226G, P228L, P228R, 230S, 230T, 230L, 241 L, 264E, 307P, 315D, 330V, 362R, 389T et 389K ; (ii) au moins une mutation choisie parmi 334N, 326E, 326T, 352L, 378V, 378T, 396L, 397M, 421T, 334R, 307N et 394P ; (iii) au moins une mutation choisie parmi 352S, 226Y, 227S, 231V, 234P, 2431, 246R, 246E, 247T, 248E, 253F, 254F, 255W, 259A, 261 R, 262A, 263A, 266M, 267N, 267G, 274E, 274R, 276S, 278H, 282A, 283G, 284L, 2861, 286Y, 287T, 288E, 288R, 298N, 302A, 308A, 308G, 309P, 312G, 316D, 319H, 320T, 320R, 320M, 322E, 3231, 333G, 334N, 334R, 336T, 339T, 340E, 343S, 345G, 349S, 349H, 350A, 359A, 361H, 3631, 366A, 373D, 375R, 377T, 378V, 378T, 379A, 380G, 383R, 385R, 389S, 393A, 3931, 394P, 3971, 397M, 398P, 405V, 405L, 410R, 412M, 414R, 421S, 423L, 423Y, 423S, 423P, 428T, 431V, 431T, 434K, 434S, 435R, 436H, 440G, 440N, 442F, 442P et 447N ; et 19 La presente invention a egalement pour objet une composition pharmaceutique comprenant (i) un polypeptide selon l'invention, et (ii) au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable. La presente invention a egalement pour objet une composition pharmaceutique 5 comprenant (i) le variant consistant en un fragment Fc, notamment d'IgG1, presentant les cinq mutations N434Y, K334N, P352S, V397M et A378V, et produit en cellules HEK293, Ia numerotation etant celle de l'index EU ou equivalent dans Kabat, et (ii) au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable. Ainsi, de preference, Ia presente invention a egalement pour objet une composition pharmaceutique comprenant (i) le variant 10 consistant en un fragment Fc, notamment d'IgG1, presentant les cinq mutations N434Y, K334N, P352S, V397M et A378V, et produit en cellules HEK293, Ia numerotation etant celle de l'index EU ou equivalent dans Kabat, et (ii) au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable. 15 La presente invention a egalement pour objet le polypeptide selon l'invention ou la composition telle que decrite precedemment, pour son utilisation comme medicament. La presente invention a egalement pour objet ('utilisation du variant consistant en un fragment Fc, notamment d'IgG1, presentant les cinq mutations N434Y, K334N, P352S, V397M et A378V, et produit en cellules HEK293, la numerotation etant celle de l'index EU 20 ou equivalent dans Kabat (i.e. variant N434Y/K334N/P352S/V397M/A378V produit en cellules HEK293), comme medicament. Comme indique precedemment, avantageusement, le polypeptide parent - et donc le polypeptide selon l'invention - est un anticorps. Dans ce cas, l'anticorps peut etre dirige 25 contre un antigene choisi parmi un antigene tumoral, un antigene viral, un antigene bacterien, un antigene fongique, une toxine, une cytokine membranaire ou circulante et un recepteur membranaire. Lorsque l'anticorps est dirige contre un antigene tumoral, son utilisation convient particulierement dans le traitement de cancers. Par « cancer », on entend toute condition 30 physiologique caracterisee par une proliferation anormale des cellules. Des exemples de cancers incluent notamment les carcinomes, les lymphomes, les blastomes, les sarcomes (incluant les liposarcomes), les tumeurs neuroendocrines, les mesotheliomes, les meningiomes, les adenocarcinomes, les melanomes, les leucernies et les pathologies lymphoIdes malignes, cette liste n'etant pas exhaustive. 35 Lorsque l'anticorps est dirige contre un antigene viral, son utilisation convient particulierement dans le traitement des infections virales. Les infections virales sont 20 notamment des infections dues au VIH, a un retrovirus, a un virus Coxsackie, au virus de la variole, de la grippe, de la fievre jaune, du Nil occidental, a un cytomegalovirus, a un rotavirus ou au virus de l'hepatite B ou C, cette liste n'etant pas exhaustive. Lorsque l'anticorps est dirige contre une toxine, son utilisation convient particulierement 5 dans le traitement des infections bacteriennes, par exemple les infections par la toxine tetanique, la toxine diphterique, les toxines du charbon Bacillus anthracis, ou encore dans le traitement des infections par les toxines botuliques, les toxines de la ricine, les shigatoxines, cette liste n'etant pas exhaustive. Lorsque l'anticorps est dirige contre une cytokine, son utilisation convient particulierement 10 dans le traitement des maladies inflammatoires et/ou auto-immunes. Les maladies inflammatoires et/ou auto-immunes incluent notamment le purpura thrombotique thrombocytopenique (PTI), le rejet de greffes ou d'organes, la maladie du greffon contre l'hote, la polyarthrite rhumatoIde, le lupus erythernateux dissernine, les differents types de sclerose, le syndrome de Sjogren primitif (ou syndrome de Gougerot-Sjogren), les 15 polyneuropathies auto-immunes comme la sclerose en plaques, le diabete de type I, les hepatites auto-immunes, la spondylarthrite ankylosante, le syndrome de Reiter, l'arthrite de goutte, la maladie cceliaque, la maladie de Crohn, la thyroIdite chronique d'Hashimoto (hypothyroIdie), la maladie d'Adisson, les hepatites auto-immunes, la maladie de Basedow (hyperthyroIdie), la colite ulcerative, les vascularites comme les vascularites 20 systemiques associees aux ANCA (anticorps anti-cytoplasme des neutrophiles), les cytopenies auto-immunes et autres complications hematologiques de l'adulte et de l'enfant, telles que les thrombopenies auto-immunes aigues ou chroniques, les anernies hemolytiques auto-immunes, la maladie hemolytique du nouveau-ne (MHN), la maladie des agglutinines froides, l'hernophilie acquise auto-immune ; le syndrome de 25 Goodpasture, les nephropathies extra-membraneuses, les affections cutanees bulleuses auto-immunes, la myasthenie refractaire, les cryoglobulinemies mixtes, le psoriasis, l'arthrite chronique juvenile, les myosites inflammatoires, les dermatomyosites et les affections systemiques auto-immunes de l'enfant incluant le syndrome des antiphospholipides, la maladie des tissus conjonctifs, ('inflammation auto-immune 30 pulmonaire, le syndrome Guillain-Barre, la polyradiculonevrite inflammatoire demyelisante chronique (PDCI), la thyroIdite auto-immune, le mellitis, le myasthenia gravis, la maladie autoimmune inflammatoire de rceil, la neuromyelite optique (maladie de Devic), les sclerodermies, le pemphigus, le diabete par insulinoresistance, la polymyosite, I'anemie de Biermer, la glornerulonephrite, la maladie de Wegener, la maladie de Horton, la 35 periarthrite noueuse et le syndrome de Churg et Strauss, la maladie de Still, la polychondrite atrophiante, la maladie de Behget, la gammapathie monoclonale, la 21 granulomatose de Wegener, le lupus, la rectocolite hemorragique, le rhumatisme psoriasique, la sarcoIdose, la colite collagene, la dermatite herpetiforme, la fievre mediterraneenne familiale, la glomerulonephrite a depots d'IgA, le syndrome myasthenique de Lambert-Eaton, l'ophtalmie sympathique, le syndrome de Fiessinger- 5 Leroy-Reiter et le syndrome uveo-meningo-encephalique. D'autres maladies inflammatoires sont egalement comprises, comme par exemple le syndrome de detresse respiratoire aigue (ARDS), l'arthrite septique aigue, l'arthrite adjuvante, l'encephalomyelite allergique, Ia rhinite allergique, Ia vasculite allergique, l'allergie, l'asthme, l'atherosclerose, l'inflammation chronique due a des infections 10 bacteriennes ou virales chroniques, Ia bronchopneumopathie chronique obstructive (MPOC), les maladies coronariennes, l'encephalite, les maladies inflammatoires de l'intestin, l'osteolyse inflammatoire, l'inflammation associee a des reactions d'hypersensibilite aigue et retardee, l'inflammation associee a des tumeurs, une lesion nerveuse peripherique ou des maladies demyelinisantes, une inflammation associee a un 15 traumatisme des tissus tels que les brUlures et l'ischernie, l'inflammation due a une meningite, le syndrome de defaillance multiviscerale (multiple organ dysfunction syndrome, MODS), Ia fibrose pulmonaire, Ia septicernie et le choc septique, le syndrome de Stevens-Johnson, l'arthrite indifferenciee, et les spondylarthropathies indifferenciees. Dans un mode de realisation particulier de ('invention, Ia maladie auto-immune est le 20 purpura thrombotique idiopatique (PTI) et le Ia polyradiculonevrite inflammatoire demyelisante chronique (PDCI). De preference, la pathologie auto-immune ou inflammatoire est choisie parmi le purpura thrombocytopenique immunologique (appele egalement purpura thrombocytopenique 25 idiopathique, ou PTI), la neuromyelite optique ou maladie de Devic (NMO) et la sclerose en plaques. La sclerose en plaques et notamment etudiee grace a un modele d'encephalomyelite auto-immune experimentale (EAE). Les sequences decrites dans la presente demande peuvent etre resurnees comme suit: SEQ ID Proteine Sequence NO: 1 Region Fc d'IgG1 CPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVV VDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNST YRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTIS KAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLT VDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK humaine G1m1,17 (residus 226-447 selon ('index EU ou equivalent dans Kabat) sans region charniere superieure N- terminale 22 2 Region Fc d'IgG2 CPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVV DVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTF RVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISK TKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPS DIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTV DKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK humaine sans region charniere superieure N- terminale 3 Region Fc d'IgG3 CPRCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVV VDVSHEDPEVQFKWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNST FRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTIS KTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESSGQPENNYNTTPPMLDSDGSFFLYSKLT VDKSRWQQGNIFSCSVMHEALHNRFTQKSLSLSPGK humaine sans region charniere superieure N- terminale 4 Region Fc d'IgG4 CPSCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVV VDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNST YRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTIS KAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSL humaine sans region TCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDG SFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSLGK charniere superieure N- terminale 5 Region Fc d'IgG1 CPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVV VDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNST YRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTIS KAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLT VDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK humaine G1m3 sans region charniere superieure N-terminale 6 Region Fc d'IgG1 EPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMI SRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKT KPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSN KALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR humaine G1m1,17 avec DELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYK TTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVM HEALHNHYTQKSLSLSPGK region charniere superieure N-terminale (residus 216-447 selon ('index EU ou equivalent dans Kabat) 7 Region Fc d'IgG2 ERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTP EVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPRE EQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPA PIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCL VKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFF LYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSL SLSPGK humaine avec region charniere superieure N- terminale 8 Region Fc d'IgG3 ELKTPLGDTTHTCPRCPEPKSCDTPPPCPRCPEPKSC DTPPPCPRCPEPKSCDTPPPCPRCPAPELLGGPSVFL FPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFKWYV DGVEVHNAKTKPREEQYNSTFRVVSVLTV LHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKTKGQPREP QVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWES SGQPENNYNTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQ GNIFSCSVMHEALHNRFTQKSLSLSPGK humaine avec region charniere superieure N- terminale 9 Region Fc d'IgG4 ESKYGPPCPSCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRT PEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPR EEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLP SSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEM TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTP PVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEAL humaine avec region charniere superieure N- terminale 23 HNHYTQKSLSLSLGK 10 Region Fc d'IgG1 EPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMI SRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKT KPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSN KALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR EEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYK TTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVM HEALHNHYTQKSLSLSPGK humaine G1m3 avec region charniere superieure N-terminale 11 Variant Fc A3A 184AY DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPE VTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREE QYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAP IENTISKAKGQPREPQVYTLSPSRDELTKNQVSLTCLV KGFYPSDIVVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFL YSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHYHYTQKSLS LSPGK 12 Peptide signal MRWSWIFLLLLSITSANA 13 Variant Fc A3A 184AY avec peptide signal MRWSWIFLLLLSITSANADKTHTCPPCPAPELLGGPSV FLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWY VDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWL NGKEYKCKVSNKALPAPIENTISKAKGQPREPQVYTLS PSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIVVEWESNGQPEN NYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSC SVMHEALHYHYTQKSLSLSPGK (i.e. fusion de SEQ ID NO :12 avec SEQ ID NO :11) 14 Region Fc d'IgG1 DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPE VTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREE QYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAP IEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLV KGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFL YSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLS LSPGK humaine G1m1,17 avec residus 221-447 selon ('index EU ou equivalent dans Kabat La presente invention sera mieux comprise a la lecture des exemples suivants. Les legendes des figures sont les suivantes : 5 Figure 1 : Production du variant A3A-184AY dans le lait de chevre et de souris ('aide du vecteur Bc451 A) Le vecteur beta caseine, Bc451, a ete digere par Xhol. Dans le vecteur Bc451, le fragment Notl-Notl est le fragment procaryote. Le fragment Notl 10 (15730) - Xhol est la sequence genomique 3' qui contient le signal polyA. Le fragment BamHl - Xhol est la region promotrice de beta caseine. B) Le fragment Sall contenant la region codante du variant Fc A3A-184AY (i.e. FC3179 A3A-184AY 884 bp) a ete insert dans le vecteur, pour generer la construction genique BC3180 FC A3A-184AY (C). 15 D) Le fragment d'ADN pour la micro-injection a ensuite ete isole du vecteur procaryote. Pour cela, BC3180 a ete digere par Notl et Nrul. Le fragment libere de 16.4kb, contenant 24 le gene Fc (codant le variant A3A-184AY) sous controle du promoteur de la beta caseine, a ensuite ete purifie par elution de gel. Figure 2: Resultats des tests dans un modele preventif d'arthrite induite par le 5 transfert de serum de souris K/BxN La maladie a ete induite en transferant 10 pl de serum de souris K/BxN par voie intraveineuse le jour 0 a des souris C57/BI/6J. Les molecules testees ont ete administrees une fois par voie intraperitoneale a JO, 2h avant l'injection de serum de souris K/BxN. Le score clinique ( ,) est obtenu en additionnant l'indice des quatre pattes: 20 0 = normal, 1 = gonflement d'une articulation, 2 = gonflement de plus d'une articulation, et 3 = gonflement severe de toute l'articulation (unites arbitraires ou ,). Figure 4 : Resultats des tests de liaison des Fc et IVIg aux cellules sanguines Des IVIg ou des variants Fc selon l'invention marques par Alexa ant ete incubes a 65 nM 25 (10 pg / ml pour Fc dans du PBS 2% CSF) avec des cellules cibles pendant 20 minutes Sur d8 la glace. Apres 2 lavages dans du PBS a 2% de CSF, les cellules ant ete mises en suspension dans 500 pl d'Isoflow avant l'analyse par cytornetrie de flux. Les resultats sont les suivants : A) Cellules B marquees avec des anti-CD19 (« % positive B cells ») ; 30 B) Cellules NK marquees avec des anti-CD56 (« % positive NK cells ») ; C) Monocytes marques avec des anti-CD14, en presence d'IVIg (« % positive cells + IVIG ») ; D) Monocytes CD16+ marques avec des anti-CD14 et avec l'anticorps anti-CD16 3G8, en presence d'IVIg (« % positive cells + IVIG ») ; 35 E) Neutrophiles marques avec des anti-CD15, en presence d'IVIg (« % positive cells + IVIG ») ; 25 F) Cellules NK marquees avec des anti-CD56, en presence d'IVIg ou de Fc WT (« % cell positives »). Figure 5 : Resultats des tests d'ADCC, d'activation des cellules Jurkat CD64 et de 5 CDC A) Inhibition de ('activation des cellules Jurkat CD64 : Des cellules Raji (50 ill a 5 x 106 cellules / ml) ont ete melangees avec du Rituxan (50 ill a 2 pg / ml), des cellules Jurkat exprimant CD64 humain (Jurkat-H-CD64) (25 ill a 5 x 106 cellules / ml), du PMA (50 ill a 40 ng / ml), puis incubees avec les IVIg ou le variant selon 10 l'invention (RFC A3A-184AY) a 1950 nM. Apres une nuit d'incubation, les plaques ont ete centrifugees (125 g pour 1 minute) et l'IL2 contenue dans le surnageant a ete evaluee par ELISA. Les resultats ont ete exprimes en pourcentage par rapport aux IVIg, selon la formule suivante: (IL-2 IVIg / IL-2 de l'echantillon) X100. 15 B) Inhibition de l'ADCC : Des cellules effectrices (cellules mononucleaires) (25 ill a 8 x 107 cellules / ml) et des globules rouges Rhesus positifs (25 ill a 4 x 107 cellules / ml final) ont ete incubes avec differentes concentrations (0 a 75 ng / ml) d'anticorps anti-Rhesus D, avec un rapport 20 Effecteur / Cible de 2/1. Apres 16 heures d'incubation, la lyse a ete estimee en quantifiant l'hemoglobine liberee dans le surnageant en utilisant un substrat specifique (DAF). Les resultats sont exprimes en pourcentage de lyse specifique en fonction de la quantite d'anticorps. L'inhibition de ('ADCC a ete induite par les IVIg ou le variant Fc selon l'invention (RFC A3A-184AY) ajoute a 33 nM. 25 Les resultats sont exprimes en pourcentage, 100% et 0% etant les valeurs obtenues avec les IVIg a 650 nM et 0 nM respectivement selon la formule suivante: [(ADCC avec echantillon a 33nM - ADCC sans IVIg) / (ADCC avec IVIg a 33nM - ADCC sans IVIg) x100]. 30 C) Activite d'inhibition de la CDC : Des cellules Raji ont ete incubees pendant 30 minutes avec une concentration finale de 50 ng/ml de rituximab. Une solution de serum de jeune lapin diluee a 1/10 et prealablement incubee avec le variant Fc selon l'invention (rFc A3A-184AY) ou des IVIg (vol / vol) pendant 1h a 37°C a ete ajoutee. Apres 1 heure d'incubation a 37°C, les 35 plaques ont ete centrifugees (125 g pour 1 minute) et la CDC a ete estimee en mesurant la LDH intracellulaire liberee dans le milieu de culture. 26 Les resultats ont ete exprimes en pourcentage d'inhibition et compares aux IVIg et au controle negatif (Fc sans fonction Fc, i.e. rFc neg), 100% cnrrespondant a une inhibition complete de l'activite lytique et 0% a la valeur temoin obtenue sans Fc ou IVIg. 5 EXEMPLES EXEMPLE 1: Preparation de variants (fragments Fc mutes) selon ('invention produits dans le lait d'animaux transaeniques et caracterisation desdits variants 10 I. Materiels et methodes Principe : Un fragment Fc selon ('invention peut etre produit dans le lait d'animaux transgeniques, en plagant la sequence codante du fragment Fc dans un vecteur d'expression specifique 15 du lait. Le vecteur peut etre introduit dans le genome d'une souris ou d'une chevre transgenique, par micro-injection. Suite au criblage et a ('identification d'un animal possedant le transgene, les femelles sont reproduites. Suite a la parturition, traire les femelles permet de recuperer leur lait, dans lequel le Fc a pu etre secrete suite a ('expression du promoteur specifique du lait. 20 Sequence proteique du variant Fc A3A-184AY (K334N/P352S/A378V/V397M/N434Y) : DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYV DGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDW LNGKEYKCKVSNKALPAP I ENTISK AKGQPREPQVYTLSPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIVVEWESNGQPENNYKTTPPM 25 LDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHYHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO :11) Un peptide signal (MRWSWIFLLLLSITSANA, SEQ ID NO :12) est lie a l'extremite Nterminale de la sequence proteique, afin d'obtenir la sequence SEQ ID NO :13. II permet la secretion de la proteine dans le lait, une fois exprime. 30 Optimisation de la sequence nucleotidique : La sequence nucleotidique a ete optimisee pour ('expression dans la glande mammaire de chevre. Pour cela, la sequence a ete optimisee pour l'espece Bos taurus par l'algorithme d'un fournisseur de genes de synthese (tel que GeneArt). 35 Vecteur d'expression : 27 Le vecteur d'expression de la beta caseine de chevre (Bc451) a ete utilise pour la production du variant A3A-184AY dans le lait de souris et de chevre (voir figure 1). Le vecteur beta caseine, Bc451, a ete digere par Xhol (figure 1A). Le fragment Sall contenant la region codante du variant Fc A3A-184AY a ete insert pour generer la 5 construction genique BC3180 FC A3A-184AY (figures 1B et 1C). Le fragment d'ADN pour la micro-injection a ensuite ete isole du vecteur procaryote. BC3180 a ete digere par Notl et Nrul (figure 1D). Le fragment libere de 16.4kb contenant le gene Fc sous controle du promoteur de la beta caseine a ensuite ete purifie par elution 10 de gel. Cet ADN a ensuite ete utilise dans l'etape de micro-injection. Production chez la souris : Le fragment d'ADN a été insert par micro-injection dans des embryons de souris preimplantatoires. Les embryons ont ensuite ete implantés dans des femelles pseudo- 15 gravides. Les descendants qui sont nes ont été cribles pour la presence du transgene par analyse PCR. Expression chez la chevre : Le fragment d'ADN prepare pour la micro-injection peut egalement etre utilise pour la 20 production du variant Fc A3A-184AY dans le lait de chevre. EXEMPLE 2: Preparation de variants (fragments Fc mutes) selon ('invention produits dans des cellules HEK et caracterisation desdits variants 25 I. Materiels et methodes pour la production Chaque mutation d'interet dans le fragment Fc de sequence SEQ ID NO :14 a ete inseree par PCR de chevauchement en utilisant deux ensembles d'amorces adaptees pour integrer la ou les mutation(s) ciblees avec le(s) codon(s) codant l'acide amine souhaite. 30 Avantageusement, quand les mutations a inserer sont proches sur la sequence du Fc, elles sont ajoutees via un meme oligonucleotide. Les fragments ainsi obtenus par PCR ont ete associes et le fragment resultant a ete amplifie par PCR en utilisant des protocoles standards. Le produit de PCR a ete purifie sur gel d'agarose 1% (w/v), digere avec les enzymes de restriction adequates et clone. 35 Le fragment Fc recombinant a ete produit par transfection transitoire (par lipofection) dans les cellules HEK293 (Cellules 293-F, freestyle InvitroGen) dans du milieu F17 additionne 28 de L-glutamine en utilisant le vecteur pCEP4. Apres 8 jours de culture, le surnageant est clarifie par centrifugation et filtre sur filtre de 0,2pm. Le Fragment Fc est ensuite purifie sur proteine A Hi-Trap, et ('elution est faite avec un tampon citrate 25mM pH = 3,0, neutralisation et dialyse dans du PBS avant sterilisation par filtration (0,2pm). 5 II. Tests de liaison sur Octet® (technologie BLI « Bio-Layer Interferometry », appareil Octet RED96, Fortebio, Pall) Protocoles : 10 Liaison au FcRn humain (hFcRn) Le recepteur hFcRn biotinyle est immobilise sur des Biosensors Streptavidin, dilue a 0.7 pg/ml en tampon de run (tampon phosphate 0,1M, NaCI 150mM, Tween 20 0,05%, pH6). Les variants selon l'invention, WT et IVIg, ont ete testes a 200, 100, 50, 25, 12.5, 6.25, 15 3.125 et 0 nM en tampon de run (200 nM = 10 pg/ml pour les Fc). - Design de l'essai: Baseline 1 x 120s en tampon de run Loading 300s : le recepteur est chargé sur les biosensors 20 Baseline 2 x 60s en tampon de run Association 60s : les echantillons (Fc ou IVIg) sont ajoutes aux biosensors charges en hFcRn Dissociation 30s en tampon de run Regeneration 120s en tampon de regeneration (tampon Phosphate 0,1M, NaCI 150mM, 25 Tween 20 0,05%, pH7.8). - Interpretation des resultats: Les courbes d'association et de dissociation (premieres 10s) sont utilisees pour calculer les constantes cinetiques d'association (kon) et de dissociation (koff) en utilisant un 30 modele d'association 1/1. Le KD (nM) est ensuite calcule (kon/koff). Liaison aux recepteurs hCD16aV et hCD32aH Le recepteur hCD16aV (R&D system) ou hCD32aH (PX therapeutics) HisTag est immobilise sur des Biosensors anti-Penta-HIS (HIS 1K), dilue a 1 pg/ml en tampon de 35 cinetique (Pall). Les variants Fc selon l'invention, WT et IVIg, ont ete testes a 1000, 500, 250, 125, 62.5, 31.25, 15 et 0 nM en tampon de cinetique. 29 -Loading avant chaque échantillon -Design de l'essai : Toutes les etapes sont realisees en tampon de cinetique (Pall) Baseline 1 x 60s 5 Loading 400s Baseline 2 x 60s Association 60s Dissociation 30s Regeneration 5s en tampon de regeneration (Glycine 10mM pH 1.5 / 10 Neutralisation : PBS). -Interpretation des resultats : Les courbes d'association et de dissociation (premieres 5s) sont utilisees pour calculer les constantes cinetiques d'association (kon) et de dissociation (koff) en utilisant un modele 15 d'association 1/1. Le KD (nM) est ensuite calcule (kon/koff). Resultats : Les resultats sont presentes dans le tableau 1 ci-dessous : 20 Tableau 1 Molecule hCD16aV SD hFcRn SD hCD32aH SD IVIg 653,8 4,0 34,4 1,94 438,2 114,3 Fc-WT (HEK) 504,3 75,0 36,5 8,2 659,3 203,1 A3A-184AY (HEK) 132,0 14,1 7,8 0 313,0 29,7 SD = ecart-type Les resultats montrent que le variant Fc A3A 184AY selon ('invention presente a la fois 25 une affinite augmentee pour le recepteur hFcRn, et une affinite augmentee pour les recepteurs FcyRllla (CD16a) et FcyRlla (CD32a), et ce, compare au Fc parent non mute (Fc-WT) mais egalement compare aux IVIg. III. Tests sur modele d'arthrite induite par le transfert de serum de souris K/BxN 30 Protocole : 30 Le modele K/BxN a ete genere en croisant les souris transgeniques pour le recepteur de cellules T KRN a la souche de souris NOD. Les souris K/BxN F1 developpent spontanement une maladie a l'Age de 3 a 5 semaines et partagent de nombreuses caracteristiques cliniques avec l'arthrite rhumatoIde humaine. 5 La maladie a ete induite en transferant 10 pl de serum de souris K/BxN par voie intraveineuse le jour 0 a des souris C57/BI/6J. Les molecules testees ont ete administrees une fois par voie intraperitoneale a JO, 2h avant ou 72 heures apres l'injection de serum de souris K/BxN. 10 Les souris ont ete surveillees quotidiennement pour rechercher et identifier des signes d'arthrite afin d'evaluer l'incidence et la severite en ajoutant l'indice des quatre pattes: 0 = normal, 1 = gonflement d'une articulation, 2 = gonflement de plus d'une articulation, et 3 = gonflement severe de toute l'articulation. 15 Resultats : Les souris ayant regu du serum K/BxN ont developpe une arthrite dans l'articulation. La maladie etait caracterisee par une augmentation de la taille de la cheville, induisant une augmentation du score clinique. Ces souris ont montre une augmentation significative du 20 score clinique et de l'epaisseur de la cheville par rapport aux souris temoins traitees avec du serum physiologique. 1-Modele preventif : Administre 2h avant l'injection de serum de souris K/BxN, le traitement par 750 mg/kg de 25 fragment Fc de type sauvage (Fc WT) a significativement reduit le score clinique compare au groupe traite par serum de souris K/BxN. Le traitement par le variant Fc A3A-184AY selon l'invention a significativement reduit le score clinique de maniere similaire au fragment Fc WT, mais une dose 15 fois plus faible (50 mg/kg) (figure 2). 30 2-Modele therapeutique : 72h apres l'injection de serum de souris K/BxN, les IVIg administrees a 2 g/kg ne recluisent pas significativement le score clinique compare au groupe traite par serum de souris K/BxN. 35 31 Cependant, le traitement par le fragment Fc WT a 750 mg/kg (dose moleculaire equivalente a 2g /kg d'IVIg) a significativement reduit le score clinique compare au groupe traite par serum de souris K/BxN. De plus, le traitement par le variant Fc A3A-184AY selon l'invention a significativement reduit le score clinique de maniere similaire au 5 fragment Fc WT, mais a une dose 4 fois plus faible (190 mg/kg) (figure 3). IV. Tests in vitro sur cellules Protocoles : 10 Evaluation de la liaison des fragments Fc et IVIg aux cellules sanguines Des IVIg ou des variants Fc selon l'invention marques par Alexa ont ete incubes a 65 nM (10 pg / ml pour Fc dans du PBS 2% CSF) avec des cellules cibles pendant 20 minutes sur de la glace. Apres 2 lavages dans du PBS a 2% de CSF, les cellules ont ete mises en 15 suspension dans 500 pl d'Isoflow avant ('analyse par cytometrie de flux. Les cellules B, les cellules NK, les monocytes et les neutrophiles etaient specifiquement marques avec des anti-CD19, anti-CD56, anti-CD14 et anti-CD15 respectivement. Le recepteur FcgRlll (CD16) a ete mis en evidence en utilisant l'anticorps anti-CD16 3G8. 20 Inhibition de IADCC Pour mimer la situation de lyse de globules rouges qu'on observe dans le purpura thrombopenique idiopathique (PTI), impliquant les autoanticorps du patient atteint du PTI, une lyse de globules rouges mediee par des cellules effectrices en presence d'un anticorps monoclonal anti-Rhesus D (RhD) a ete conduite, et la capacite de differentes 25 quantites d'Immunoglobulines polyvalentes (IVIg) ou de fragments Fc recombinants mutes ou non mutes, a inhiber cette lyse, par exemple par competition avec l'anti-RhD pour la fixation des recepteurs Fc a la surface des cellules effectrices, a ete evaluee. La cytotoxicite des anticorps anti-RhD a ete etudiee par la technique d'ADCC. Brievement, des cellules effectrices (cellules mononucleaires) (25 pi a 8 x 107 cellules / 30 ml) et des globules rouges Rhesus positifs (25 pi a 4 x 107 cellules / ml final) ont ete incubes avec differentes concentrations (0 a 75 ng / ml) d'anticorps anti-RhD, avec un rapport Effecteur / Cible de 2/1. Apres 16 heures d'incubation, la lyse a ete estimee en quantifiant l'hemoglobine liberee dans le surnageant en utilisant un substrat specifique (DAF). 32 Les resultats sont exprimes en pourcentage de lyse specifique en fonction de la quantite d'anticorps. L'inhibition de ('ADCC induite par les IVIg ou le variant Fc selon l'invention (RFC A3A-184AY) ajoute a 33 nM a ete evaluee. Les resultats sont exprimes en pourcentage, 100% et 0% etant les valeurs obtenues avec 5 les IVIg a 650 nM et 0 nM respectivement selon la formule suivante: [(ADCC avec echantillon a 33nM - ADCC sans IVIg) / (ADCC avec IVIg a 33nM - ADCC sans IVIg) x100]. Inhibition de l'activation des cellules Jurkat CD64 10 Ce test estime la capacite des variants Fc selon l'invention ou des IVIg (IgG totales) a inhiber la secretion d'IL2 par des cellules Jurkat exprimant CD64 humain (Jurkat-H-CD64) induite par la lignee cellulaire Raji avec Rituxan. Brievement, des cellules Raji (50 ill a 5 x 106 cellules / ml) ont ete melangees avec du Rituxan (50 ill a 2 pg / ml), des cellules Jurkat H-CD64 (25 ill a 5 x 106 cellules / ml), un 15 ester de phorbol (PMA, 50 µl a 40 ng / ml), puis incubees avec les IVIg ou le variant Fc selon l'invention a 1950 nM. Apres une nuit d'incubation, les plaques ont ete centrifugees (125 g pour 1 minute) et l'IL2 contenue dans le surnageant a ete evaluee par ELISA. Les resultats ont ete exprimes en pourcentage par rapport aux IVIg, selon la formule 20 suivante: (IL-2 IVIg / IL-2 de ('echantillon) X100. Activite d'inhibition de la CDC Ce test estime la capacite du variant Fc selon l'invention ou des IVIg a inhiber l'activite 25 CDC mediee par le rituximab sur la lignee cellulaire Raji en presence de serum de jeune lapin comme source de complement. Brievement, les cellules Raji ont ete incubees pendant 30 minutes avec une concentration finale de 50 ng / ml de rituximab. Une solution de serum de jeune lapin diluee a 1/10 et prealablement incubee avec le variant selon l'invention ou des IVIg (vol / vol) pendant 1h a 37°C a ete ajoutee. Apres 1 heure 30 d'incubation a 37°C, les plaques ont ete centrifugdes (125 g pour 1 minute) et la CDC a ete estimee en mesurant la LDH intracellulaire liberee dans le milieu de culture. Les resultats ont ete exprimes en pourcentage d'inhibition et compares aux IVIg et au controle negatif (Fc sans fonction Fc), 100% correspondant a une inhibition complete de l'activite lytique et 0% a la valeur temoin obtenue sans Fc ou IVIg. 35 33 I..esultats : Les resultats sont en figures 4 et 5. Le variant Fc selon l'invention (A3A-184AY) presente une meilleure inhibition de l'activite 5 des cellules Jurkat exprimant CD64, de I'ADCC et de la CDC, en comparaison avec les IVIg. Ces resultats montrent qu'un variant selon l'invention tel que A3A-184AY peut etre efficace, et au moins aussi efficace que les IVIg, pour le traitement de pathologies impliquant des autoanticorps de patients, notamment par blocage des recepteurs Fc sur les cellules effectrices du patient. 10 EXEMPLE 3: Preparation de variants (fragments Fc mutes) selon l'invention produits dans des cellules CHO Le fragment Fc recombinant peut etre obtenu a partir de la SEQ ID NO :14 de la meme 15 fagon que celle decrite en exemple 2. Ce fragment Fc mute peut etre produit par transfection transitoire (par lipofection) dans les cellules CHO-S ou ExpiCHO (InvitroGen) en milieu PROCH4 additionne de L-glutamine en utilisant le vecteur OPtiCHO. Apres 7 jours de culture, le surnageant est clarifie par centrifugation et filtre sur filtre de 0,2pm. Le fragment Fc est ensuite purifie sur proteine A Hi-Trap, et ('elution est faite avec un tampon 20 citrate 25mM pH = 3,0, neutralisation et dialyse dans du PBS avant sterilisation par filtration (0,2pm). REVENDICATIONS1. Variant d'un polypeptide parent comprenant un fragment Fc, !edit variant presentant une affinite augmentee pour le recepteur FcRn, et une affinite augmentee pour au moins un recepteur du fragment Fc (FcR) choisi parmi les recepteurs FcyRI (CD64), FcyRIlla (CD16a) et FcyRIla (CD32a), par rapport a celle du polypeptide parent, caracterise en ce qu'il comprend : (i) une mutation choisie parmi 434Y, 378V, 378T, 434S, 226G, P228L, P228R, 230S, 230T, 230L, 241L, 264E, 307P, 315D, 330V, 362R, 389T et 389K ; et (ii) au moins une mutation choisie parmi 334N, 326E, 326T, 352L, 378V, 378T, 396L, 397M, 421T, 334R, 307N et 394P ; (iii) au moins une mutation choisie parmi 352S, 226Y, 227S, 231V, 234P, 2431, 246R, 246E, 247T, 248E, 253F, 254F, 255W, 259A, 261R, 262A, 263A, 266M, 267N, 267G, 274E, 274R, 276S, 278H, 282A, 283G, 284L, 2861, 286Y, 287T, 288E, 288R, 298N, 302A, 308A, 308G, 309P, 312G, 3160, 319H, 320T, 320R, 320M, 322E, 3231, 333G, 334N, 334R, 336T, 339T, 340E, 343S, 345G, 349S, 349H, 350A, 359A, 361H, 3631, 366A, 373D, 375R, 377T, 378V, 378T, 379A, 380G, 383R, 385R, 389S, 393A, 3931, 394P, 3971, 397M, 398P, 405V, 405L, 410R, 412M, 414R, 421S, 423L, 423Y, 423S, 423P, 428T, 431V, 431T, 434K, 434S, 435R, 436H, 440G, 440N, 442F, 442P et 447N, la numerotation etant celle de ('index EU ou equivalent dans Kabat et avec la condition que les mutations (i), (ii) et (iii) n'aient pas lieu sur les mernes acides amines. 2. Variant selon la revendication 1, comprenant en outre au moins une mutation (iv) dans le fragment Fc choisie parmi Y296W, K290G, V240H, V240I, V240M, V240N, V240S, F241H, F241Y, L242A, L242F, L242G, L242H, L242I, L242K, L242P, L242S, L242T, L242V, F243L, F243S, E258G, E2581, E258R, E258M, E258Q, E258Y, V259C, V2591, V259L, T260A, T260H, T260I, T260M, T260N, T260R, T260S, T260W, V262S, V263T, V264L, V264S, V264T, V266L, S267A, S267Q, S267V, K290D, K290E, K290H, K290L, K290N, K290Q, K290R, K290S, K290Y, P291G, P291Q, P291R, R2921, R292L, E293A, E293D, E293G, E293M, E293Q, E293S, E293T, E294A, E294G, E294P, E294Q, E294R, E294T, E294V, Q295I, Q295M, Y296H, S298A, S298R, Y300I, Y300V, Y300W, R301A, R301M, R301P, R301S, V302F, V302L, V302M, V302R, V302S, V303S, V303Y, S304T, V305A, V305F, V3051, V305L, V305R et V305S. 3. Variant selon la revendication 1 ou 2, caracterise en ce qu'il comprend : (i) une mutation choisie parmi 434Y et 378V; 35 (ii) au moins une mutation, de preference au moins deux mutations, choisie(s) parmi 334N, 378V et 397M; (iii) au moins une mutation, de preference au moins deux mutations, choisie(s) parmi 352S, 334N, 378V et 397M ; et 5 (iv) eventuellement au moins une mutation choisie parmi K290G et Y296W, Ia numerotation etant celle de ('index EU ou equivalent dans Kabat et avec Ia condition que les mutations (i), (ii) et (iii) n'aient pas lieu sur les memes acides amines. 4. Variant selon l'une des revendications 1 a 3, presentant une affinite augmentee pour le 10 recepteur FcRn, par rapport a celle du polypeptide parent, d'un ratio au moins egal a 2, de preference superieur a 5, de preference superieur a 10, de preference superieur a 15, de preference superieur a 20, de preference superieur a 25, de preference superieur a 30. 5. Variant selon l'une des revendications 1 a 4, presentant une affinite augmentee pour au 15 moins un recepteur du fragment Fc (FcR) choisi parmi les recepteurs FcyRI (CD64), FcyRIlla (CD16a) et FcyRIla (CD32a), par rapport a celle du polypeptide parent, d'un ratio au moins egal a 2, de preference superieur a 5, de preference superieur a 10, de preference superieur a 15, de preference superieur a 20, de preference superieur a 25, de preference superieur a 30. 20 6. Variant selon l'une des revendications 1 a 5, caracterise en ce qu'il est produit dans des cellules epitheliales mammaires de mammiferes non humains transgeniques. 7. Variant selon l'une des revendications 1 a 6, caracterise en ce qu'il est produit dans 25 des animaux transgeniques non humains, de preference dans des mannmiferes non humains transgeniques. 8. Variant selon la revendication 7, caracterise en ce que ('animal transgenique non humain est une chevre transgenique. 30 9. Variant selon l'une des revendications 1 a 8, caracterise en ce que le polypeptide parent comprend un fragment Fc parent qui est un fragment Fc humain, de preference un fragment Fc d'une IgG1 humaine ou d'une IgG2 humaine, plus preferentiellement choisi parmi les sequences SEQ ID NO :1 a 10 et 14. 35 36 10. Variant selon l'une des revendications 1 a 9, caracterise en ce qu'il est choisi parmi un fragment Fc isole, une sequence derivee d'un fragment Fc isole, un anticorps, un fragment d'anticorps comprenant un fragment Fc, et une proteine de fusion comprenant un fragment Fc. 5 11. Variant selon l'une des revendications 1 a 10, dirige contre un antigene choisi parmi un antigene tumoral, un antigene viral, un antigene bacterien, un antigene fongique, une toxine, une cytokine membranaire ou circulante, un recepteur membranaire. 10 12. Variant selon l'une des revendications 1 a 11, pour son utilisation comme medicament. 13. Variant selon l'une des revendications 1 a 11, pour son utilisation dans le traitement d'une pathologie auto-immune ou inflammatoire, de preference choisie parmi le purpura 15 thrombocytopenique immunologique, la neuromyelite optique ou maladie de Devic et la sclerose en plaques. 14. Composition pharmaceutique comprenant un variant selon l'une des revendications 1 a 11, et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable. 15. Procede de production d'un variant d'un polypeptide parent comprenant un fragment Fc, ledit variant presentant une affinite augmentee pour le recepteur FcRn, et une affinite augmentee pour au moins un recepteur du fragment Fc (FcR) choisi parmi les recepteurs FcyRI (CD64), FcyRIlla (CD16a) et FcyR1la (CD32a), par rapport a celle du polypeptide parent, caracterise en ce qu'il comprend (i) une mutation choisie parmi 434Y, 378V, 378T, 434S, 226G, P228L, P228R, 230S, 230T, 230L, 241L, 264E, 307P, 315D, 330V, 362R, 389T et 389K ; (ii) au moins une mutation choisie parmi 334N, 326E, 326T, 352L, 378V, 378T, 396L, 397M, 421T, 334R, 307N et 394P ; 231V, 234P, 2431, 246R, (iii) au moins une mutation choisie parmi 352S, 226Y, 227S, 246E, 247T, 248E, 253F, 254F, 255W, 259A, 261R, 262A, 263A, 266M, 267N, 267G, 274E, 274R, 276S, 278H, 282A, 283G, 284L, 2861, 286Y, 287T, 288E, 288R, 298N, 302A, 308A, 308G, 309P, 312G, 316D, 319H, 320T, 320R, 320M, 322E, 3231, 333G, 334N, 334R, 336T, 339T, 340E, 343S, 345G, 349S, 349H, 350A, 359A, 361H, 3631, 366A, 373D, 375R, 377T, 378V, 378T, 379A, 380G, 383R, 385R, 389S, 393A, 3931, 20 25 30 35 37 394P, 3971, 397M, 398P, 405V, 405L, 410R, 412M, 414R, 421S, 423L, 423Y, 423S, 423P, 428T, 431V, 431T, 434K, 434S, 435R, 436H, 440G, 440N, 442F, 442P et 447N ; et (iv) eventuellement au moins une mutation choisie parmi Y296W, K290G, V240H, V240I, V240M, V240N, V240S, F241H, F241Y, L242A, L242F, L242G, L242H, L242I, L242K, 5 L242P, L242S, L242T, L242V, F243L, F243S, E258G, E258I, E258R, E258M, E258Q, E258Y, V259C, V259I, V259L, T260A, T260H, T260I, T260M, T260N, T260R, T260S, T260W, V262S, V263T, V264L, V264S, V264T, V266L, S267A, S267Q, S267V, K290D, K290E, K290H, K290L, K290N, K290Q, K290R, K290S, K290Y, P291G, P291Q, P291R, R2921, R292L, E293A, E293D, E293G, E293M, E293Q, E293S, E293T, E294A, E294G, 10 E294P, E294Q, E294R, E294T, E294V, Q2951, Q295M, Y296H, S298A, S298R, Y300I, Y300V, Y300W, R301A, R301M, R301P, R301S, V302F, V302L, V302M, V302R, V302S, V303S, V303Y, S304T, V305A, V305F, V3051, V305L, V305R et V305S,la numerotation etant celle de ('index EU ou equivalent dans Kabat et avec Ia condition que les mutations (i), (ii) et (iii) et eventuellement (iv) n'aient pas lieu sur les memes acides amines, 15 comprenant ('expression dudit variant dans des cellules epitheliales mammaires de mammiferes non humains transgeniques. 16. Procede de production d'un variant d'un polypeptide comprenant un fragment Fc selon Ia revendication 15, comprenant les &tapes suivantes 20 a) preparation d'une sequence d'ADN comprenant une sequence codant pour le variant, une sequence codant pour un promoteur de caseine de mammifere ou un promoteur de lactoserum de mammifere, et une sequence codant pour un peptide signal permettant Ia secretion dudit variant ; b) introduction de Ia sequence d'ADN obtenue en a) dans un embryon de mammifere non 25 humain, afin d'obtenir un mammifere non humain transgenique exprimant le variant code par ladite sequence d'ADN obtenue en a) dans Ia glande mammaire ; et c) recuperation du variant dans le lait produit par le mammifere non humain transgenique obtenu en b). 30 17. Procede de production d'un variant d'un polypeptide comprenant un fragment Fc selon la revendication 15 ou 16, dans lequel le mammifere non humain transgenique est choisi parmi les bovins, les porcins, les chevres, les ovins et les rongeurs, de preference parmi la chevre, Ia souris, la truie, la lapine, la brebis et Ia vache. 35 18. Sequence d'ADN comprenant un gene codant un variant d'un polypeptide parent comprenant un fragment Fc, !edit variant presentant une affinite augment& pour le 38 recepteur FcRn, et une affinite augmentee pour au moins un recepteur du fragment Fc (FcR) choisi parmi les recepteurs FcyRI (CD64), FcyRIlla (CD16a) et FcyRlla (CD32a), par rapport a celle du polypeptide parent, caracterise en ce que ledit variant comprend : 5 10 15 Ia numerotation etant celle de ('index EU ou equivalent dans Kabat et avec Ia condition que les mutations (i), (ii) et (iii) n'aient pas lieu sur les nnennes acides amines, ledit gene etant sous le controle d'un promoteur de transcription de Ia caseine ou du lactoserum de mammifere qui ne controle pas naturellement la transcription dudit gene, 20 ladite sequence d'ADN comprenant en outre une sequence codant pour un peptide signal permettant Ia secretion dudit variant, interposee entre Ia sequence codant pour le variant et le promoteur. (i) une mutation choisie parmi 434Y, 378V, 378T, 434S, 226G, P228L, P228R, 230S, 230T, 230L, 241L, 264E, 307P, 315D, 330V, 362R, 389T et 389K ; et (ii) au moins une mutation choisie parmi 334N, 326E, 326T, 352L, 378V, 378T, 396L, 397M, 421T, 334R, 307N et 394P ; (iii) au moins une mutation choisie parmi 352S, 226Y, 227S, 231V, 234P, 2431, 246R, 246E, 247T, 248E, 253F, 254F, 255W, 259A, 261R, 262A, 263A, 266M, 267N, 267G, 274E, 274R, 276S, 278H, 282A, 283G, 284L, 2861, 286Y, 287T, 288E, 288R, 298N, 302A, 308A, 308G, 309P, 312G, 316D, 319H, 320T, 320R, 320M, 322E, 3231, 333G, 334N, 334R, 336T, 339T, 340E, 343S, 345G, 349S, 349H, 350A, 359A, 361H, 3631, 366A, 373D, 3758, 377T, 378V, 378T, 379A, 380G, 383R, 385R, 389S, 393A, 3931, 394P, 3971, 397M, 398P, 405V, 405L, 410R, 412M, 414R, 421S, 423L, 423Y, 423S, 423P, 428T, 431V, 431T, 434K, 434S, 435R, 436H, 440G, 440N, 442F, 442P et 447N,