FR 3080990 A1 20191115 FR 1870548 A 20180509 Description Titre de l'invention 9 Augmentation de la teneur en acides gras es- sentiels des oeufs par le biais d'une supplémentation nutritionnelle des animaux à l'aide d'une très faible dose d'un extrait de plante riche en flavonoïdes [00011 La présente invention se rapporte au domaine de la nutrition d'an aux producteurs d'oeufs, plus particulièrement de la supplémentation alimentaire en vue de la production et/ou de la ponte, Elle concerne tout particulièrement l'utilisation d'une composition alimentaire comprenant au moins un extrait de plante dans le but de modifier le profil lipidique des oeufs, fécondés ou non, notamment d'augmenter leur proportion en au moins un acide gras polyinsaturé (AGPI), en particulier de la famille des des AGPI dit « oméga-3 ». Art antérieur [0002] La reproduction représente une étape cruciale à la vie. Elle repose entre autres sur un fonctionnement optimal de la gamétogénèse pour la création de gamètes d'excellente qualité. Parmi les paramètres qualitatifs considérés, l'information génétique ainsi que les réserves nutritimmelles associées à ces gamètes représentent deux aspects essentiels. [0003] Les matières grasses représentent une part fondamentale des réserves nutritionnelles utilisées pendant l'embryogénèse. Des études ont notamment démontré l'impact positif de certains acides gras, tels que les acides gras insaturés, en particulier sur le développement embryonnaire (Cherian, 2015). [00041 La stratégie de modulation du profil lipidique des gamètes la plus commune consiste à supplémenter l'alimentation en matières premières riches en acides gras polyinsaturés (AGP1s)(Yannakopoulos, 2007). Cette technique induit cependant une plus grande susceptibilité de l'aliment à l'oxydation et nécessite l'addition d'antioxydants technologiques pour garantir son intégrité. Ces matières premières riches en AGPIs représentent également une portion importante de la ration alimentaire. [00051 L'utilisation d'une solution alternative, permettant d'arriver aux mêmes fins (augmentation de la proportion d' AGPIs dans les réserves nutritionnelles des gamètes) par le biais d'ingrédients non sensibles à l'oxydation, et présents en plus faible quantité dans la ration (moins de 200mg/kg d'aliment complet) permettrait d'optimiser la formulation de la ration alimentaire et d'améliorer sa stabilité. [0006] Il subsiste donc un besoin d'ingrédients non sensibles à l'oxydation et conduisant à moduler le profil lipidique des oeufs et particulièrement à augmenter la proportion d'AGPIs dans les réserves nutritionnelles des oeufs et plus particulièrement des 2 gamètes. [00071 Les polyphénols figurent parmi les substances très peu sensibles à l'oxydantion et sont connus pour leurs propriétés antioxydantes (Williamson & Manach, 2005). Des extraits de plantes riches en polyphénols sont utilisés en alimentation animale pour améliorer le statut antioxydant des animaux d'élevage. On retrouve parmi les extraits de plantes communément utilisées en alimentation animale, pour leur contenu en polyphénols, les extraits de raisin, de romarin, de thé ou encore de curcuma. [00081 Le 21 février 2017, la Commission Européenne a publié un règlement autorisant l'utilisation d'un extrait de raisin comme additif pour l'alimentation animale au sein de l'Union Européenne (Règlement d'exécution 2017/307). Celui-ci comprend au moins 80 % de polyphénols totaux exprimés en équivalent catéchine, au moins 60% de proanthocya.nidines, appartenant à la famille des Ila.vonoïdes. Il contient également au moins 0,75% d'anthocyanes et d'anthocyanidines..La dose d'utilisation recommandée est de 5 à 100 grammes dc l'extrait de raisin par tonne d'aliment complet distribué à l'animal (`Journal officiel L 44/2017', n.d.). [00091 Les auteurs de la présente invention ont montré que l'utilisation d'au moins un extrait de raisin particulier permet de résoudre en tout ou partie les problématiques évoquées ci-dessus Résumé de l'invention [00101 La présente invention a donc pour objet l'utilisation d'au moins un extrait de raisi ledit au moins un extrait de raisin comprenant : [0011] - de 50 à 95 % en poids de préférence 65 à 85% de polyphénols totaux, tout préféren- tiellement 80 à 85%, exprimés en équivalent catéchine, par rapport au poids total de l'extrait, [00121 - de 30% à 90 % en poids de préférence 50 à 70% de proanthocyanidines, tout préfé- rentiellement 60 ü70% par rapport au poids total de l'extrait, [00131 - de 0.5 à 10% en poids de préférence 0.5 à 2%, tout préférentiellement 0.75 à 2% d'anthocyanes et anthocyanidines totales par rapport au poids total de l'extrait. [00141 pour modifier le profil lipidique des oeufs chez un animal dit supplémenté par ledit au moins un extrait de raisin, choisi dans le groupe formé par les ovipares, les ovovivipares, en particulier les poissons et les volailles. [00151 On entend par « animal supplémenté » un animal ayant consommé la composition alimentaire comprenand ledit au moins un extrait de raisin selon l'invention. [00161 On entend par « animal non supplémenté » animal ayant consommé une com- position alimentaire ne comprenant pas ledit au moins un extrait de raisin selon [00171 [001 Comme déjà mentionné, ledit au moins un extrait de raisin utilisé selon l'invention est faiblement sensible à l'oxydation, voire non sensible à l'oxydation. Par conséquent il peut être utilisé pour l'obtention d'une composition alimentaire stable vis-à-vis de l'oxydation, sans addition d'agents anti-oxydants. Plus particulièrement, ledit au moins un extrait de raisin ne nécessite pas l'addition supplémentaire d'au moins un des composés choisis dans le groupe constitué par les antioxidydants technologiques, dont notament l'éthoxyquine, l'hydroxyanisole butylé (BHA) ou l'hydroxytoluène butylé (BHT). [00_9: En outre ledit au moins un extrait de raisin utilisé selon l'invention permet l'augmentation du taux d'au moins un acide gras polyinsaturé, en particulier d'au moins un acide gras polyinsaturé de la famille des acides gras polyinsaturés dît « oméga-3 » dans les oeufs des animaux dont l'alimentation a été supplémentée au moyen de cet extrait, notamment l'acide alpha linolénique et/ou l'acide docoxa.- hexaènoïque, en particulier l'acide docoxahexaènoïque, par rapport aux oeufs des animaux non supplémentés par ledit au moins un extrait de raisin, L'utilisation dudit au moins un extrait de raisin selon l'invention induit notamment l'augmentation d'au moins 10% d'au moins un acide gras polyinsaturé, en particulier de la famille des acides gras polyinsaturés dit « oméga-3 », dans les oeufs dudit animal supplémenté, de préférence d'au moins 15% et tout préférentiellement d'au moins 20% %, en poids par rapport au poids des acides gras polyinsaturés dans les oeufs dudit animal non supplémenté par ledit au moins un extrait de raisin selon l'invention. [00201 On entend par « acide gras polyinsaturé » un acide gras dont la chaine carbonée comprend plusieurs liaisons carbone-carbones insaturées. [00211 On entend par « acide gras polyinsaturé de la famille des acides gras polyinsaturés dit « oméga-3 » » des acides gras dont la chaine carbonée comprend plusieurs liaisons carbone-carbones insaturées et dont la première double liaison de la chaîne carbonée de l'acide, en comptant depuis l'extrémité oppose. 1.u carboxyle, est située sur la. troisième liaison carbone-carbone. [00221 Un autre avantage de l'invention est qu'elle permet de supprimer ou au moins de réduire la quantité d'ingrédients classiquement utilisés dans les compositions alimentaires pour animaux tels que des agents anti-oxydants et des acide(s) gras polyinsaturé(s) et ainsi de diminuer les coûts de production et également l'impact environnemental de ces compositions. [00231 Encore un autre avantage de l'invention est que l'extrait de raisin peut être utilisé dans la composition alimentaire selon l'invention dans des quantités généralement très faibles, c'est-à-dire dans des doses inférieures ou égales à 200ppm, de préférence inférieures ou égales à 100ppm, ce qui permet d'optimiser la formulation de la composition alimentaire. 4 [0024] D'autres objets, aspects, avantages, propriétés de la présente invention sont présentés dans la description détaillée et les exemples qui suivent. Description détaillée [0025] Extrait de raisin, [0026] On entend par « extrait de raisin », un extrait issu du genre botanique (Vitis), et notamment le Vitis vinifera et/ou Vitis labrusca et/ou Vitis ripa ria etlou Vitis rupestris etiou Vitis berlandieri et/ou Vitis amurensis etiou Vitis coignetiae et/ou Vitis vulpina et/ou Vitis acerifolia et/ou Vitis aestivalis et/ou Vitis rotundifolia, de préférence le Vitis vinifèra. [0 Pour préparer l'extrait de raisin utilisé dans l'invention, un élément de la structure d'une plante notamment choisi dans le groupe formé par les baies, les pépins les pellicules ou leurs mélanges sont utilisés. De préférence, les pellicules et/ou pépins de raisins, de manière tout à fait préférée les pellicules et pépins de raisin sont utilisés. [00281 Comme déjà mentionné, ledit au moins un extrait de raisin utilisable selon l'invention comprend : [00291 de 50 à 95 % en poids de préférence 65 à 85% de polyphénols totaux, tout préféren- tiellement 80 à 85%, exprimés en équivalent catéchine, par rapport au poids total de L'extrait, [0030] de 30% à 90 % en poids de préférence 50 à 70% de proanthocyanidines, tout préfé- rentiellement 60 à 70% par rapport au poids total de l'extrait, [00311 de 0.5 à 10% en poids de préférence 0.5 à 2%, tout préférentiellement 0.75 à d'anthocyanes et anthocyanidines totales par rapport au poids total de l'extrait. [ 032] On entend par « polyphénols » des composés chimiques naturels, caractérisés par présence d'au moins deux groupes phénoliques associés en structures plus ou moins complexes. Ils comprennent entre autres entre autres constitués du sous-groupe des flavonoïdes qui regroupe notamment les proanthocyanidines, les anthocyanes et les anthocyanidines. [0033] On entend par « proanthocyanidine » des polymères de catéchines. Ils sont constitués d'unités catéchines liées entre elles par des liaisons carbone-carbone de type 4-48 ou 4-*6. [0034] On entend par « anthocyanjdïne » des pigments naturels, basés sur la stru 'ion flavylium (ion 2-phénylchrornénylium). [0035] On entend par « anthocyane » les dérivés hétérosides des anthocyanidines Procédé de préparation [0036] De manière préférée, le procédé d'obtention de l'extrait de raisin tel que que décrit dans l'invention consiste à réaliser une extraction de raisin (baie entière de Vitis vïnifera dépulpée) à l'aide de solvants non synthétiques suivie d'une purification, puis d'une atomisation de l'extrait, ou à mélanger de manière homogène au moins un extrait sec de pellicule de raisin, contenant au moins 1% d'anthocyanes et d'anthocyanidines totales, avec au moins un extrait sec de pépins de raisin, contenant au moins 1% de flavonoïdes totaux. Le procédé de fabrication résulte en une composition contenant [00371 - de 50 à 95 % en poids de préférence 65 à 85% de polyphénols totaux, tout préféren- tiellement 80 à 85%, exprimés en équivalent catéchine, par rapport au poids total de l'extrait, [00381 - de 30% à 90 % en poids de préférence 50 à 70% de proanthocyanidines, out préfé- rentiellement 60 à 70% par rapport au poids total de l'extrait, [00391 et de 0.5 à 10% en poids de préférence 0.5 à 2%, tout préférentiellement 0.75 à 2% d'anthocyanes et anthocyanidines totales par rapport au poids total de l'extrait, [00401 en particulier, de manière à obtenir un extrait conforme au règlement autorisant l'utilisation d'un extrait de raisin comme additif pour l'alimentation animale au sein de l'Union Européenne (Règlement d'exécution 2017/307). [00411 Bien entendu, le procédé de fabrication doit de manière préférée respecter les bonnes pratiques de fabrication. Composition alimentaire [00421 L'invention concerne également l'utilisation d'au moins un extrait de raison selon l'invention dans une composition alimentaire, ledit au moins un extrait de raisin étant inclus dans une composition alimentaire. |0043l Avantageusement, l'utilisation de l'extrait de raisin selon l'invention ne nécessite pas d'addition supplémentaire d'antioxydant technologique dans la composition alimentaire, par rapport à une composition alimentaire non supplémentée par un extrait de raisin selon l'invention. [00441 La composition alimentaire peut comprendre en outre un véhicule physiolo- giquement acceptable, conforme à une utilisation par voie orale. [00451 Selon un premier mode de réalisation, la composition alimentaire est sous forme solide, de préférence elle est alors choisie dans le groupe formé par une poudre, un granulé, un comprimé, un pellet extrudé ou non. [00461 Lorsque la composition alimentaire est sous forme solide, alors la quantité en extrait de raisin est comprise entre 1 et 200mgfkg de préférence entre 5 et 100 mg/kg dans la composition sèche, par conséquent la quantité en extrait de raisin va de 10-4 % à 2. 10-2 %, de préférence de 5.10-4 % à 10-2 % en poids par rapport au poids total de l'extrait sec de la composition alimentaire. [0047l Selon un autre mode de réalisation, la composition alimentaire est sous forme liquide, de préférence elle est alors choisie dans le groupe formé par une suspension, une solution, une eau de boisson. [00481 Lorsque la composition alimentaire est sous forme liquide, alors la quantité en extrait de raisin est compris entre 1 et 100mg/L, de préférence entre 2.5 et 50 mg/L, par conséquent la quantité en extrait de raisin va de 10-4 % à 110-2 % de préférence de 2,5.10-4 % à 5,10-1 % en poids par rapport au poids total de la composition alimentaire. [0049] La composition entaire comprend donc une très faible dose d'extrait de raisin. [00501 La composition alimentaire selon l'invention comprenant généralement au moins un excipient choisi dans le groupe formé par additifs zootechniques, les additifs technologiques. [005H La préparation de la composition alimentaire utilisée selon l'invention met en ce- re des procédés classiques qui font partie des compétences générales de l'homme du métier. [00521 La composition alimentaire utilisée selon l'invention peut notamment être sous forme d'un additif, d'une matière première ou d'un aliment composé. [00531 On entend par « aliment composé», un mélange d'au moins deux matières premières pour aliments des animaux, comprenant ou non des additifs pour l'alimentation animale, qui est destiné à l'alimentation animale par voie orale, sous la forme d'un aliment complet pour animaux ou d'un aliment complémentaire pour animaux (Règlement767/2009) [0054] On entend par « matière première », tous produits d'origine végétale ou am al , à l'état naturel, frais ou conservés, et dérivés de leur transformation industrielle, ainsi que substances organiques ou inorganiques , comprenant ou non des additifs, qui sont destinés à être utilisés pour l'alimentation des animaux par voie orale, soit directement tels quels, soit après transformation, pour la préparation d'aliments composés pour animaux, ou en tant que supports des prémélanges (Directive96/25/CE du Conseil du 29 avril 1996). [00551 La composition alimentaire selon la présente invention peut être utilisée directement en tant qu'aliment, on peut alors la considérer comme une « matière première » dans la préparation dudit aliment composé. [00561 On entend par « additif », toutes substances, micro-organismes ou préparations, autres que les matières premières pour aliments des animaux et les prémélanges, délibérément ajoutés aux aliments pour animaux ou à l'eau pour remplir notamment une ou plusieurs des fonctions suivantes : répondre aux besoins nutritionnels des animaux, avoir un effet positif sur les caractéristiques des aliments pour animaux ou des produits d'origine animale, sur la couleur des poissons ou oiseaux d'ornement, sur les conséquences environnementales de la production animale, sur la production, le rendement ou le bien-être des animaux, ou avoir un effet coccidiostatique ou histo onostatique (Règlement EU 1831/2003), Utilisations [0057] La présente invention concerne l'utilisation d'au moins un extrait de raison selon l'invention ou d'une composition alimentaire contenant au moins un extrait de raisin selon l'invention pour modifier le profil lipidique des oeufs chez un animal choisi dans le groupe formé par les ovipares, les ovovivipares, en particulier les poissons et les volailles. [0058] Par « ovipare » au sens de la présente invention, on entend un animal qui se reproduit par des oeufs pondus avant ou après fécondation mais avant éclosion, Cette définition s'applique par exemple à un poisson qui pond des oeufs dont la fécondation est externe. La femelle pond les oeufs qui sont fécondés dans l'eau par le mâle. La croissance embryonnaire se terminera hors de l'organisme maternel. Les oeufs éclosent par la suite et le temps avant éclosion varie selon les poissons et la température. [0059] Par « Ovovivipare» au sens de la présente invention, on entend un animal qui se reproduit par des oeufs mais qui les conserve dans ses voies génitales jusqu'à l'éclosion des jeunes, l'embryon se développant uniquement à partir des réserves accumulées dans l'oeuf, Cette définition s'applique par exemple à un poisson qui porte des oeufs qui incubent et qui éclosent dans le ventre de la mère, sans relation nutritive avec celle-ci (simples échanges d'eau et de gaz). L'embryon ovovivipare se nourrit dans l'oeuf et éclot juste avant la naissance. [006 Dans le cadre de la présente invention, ledit au moins un extrait de raisin est utilisée chez un animal adulte c'est-à-dire qui a atteint sa maturité sexuelle et est en capacité de se reproduire, de préférence pendant une période allant de 2 semaines à 8 mois. [0061] Avantageusement, la modification du profil lipidique des oeufs consiste à induire dans les oeufs dudit animal dit supplémenté par ledit au moins un extrait de raisin selon l'invention, une augmentation du taux d'au moins un acide gras polyinsaturé, plus particulièrement du taux d'au moins un acide gras de la famille des acides gras polyinsaturés dit « oméga-3 » (par rapport aux oeufs dudit animal non supplémenté par ledit au moins un extrait de raisin selon l'invention. Avantageusement, ledit au moins un acides gras polyinsaturé de la famille des oméga-3 (AGPIs) dont le taux est augmenté est l'acide alpha-linolénique (ALA) et/ou l'acide docosahexaenoïque (DHA), tout particulièrement l'acide docosahexaenoïque (DHA), [0062] Généralement le taux d'au moins un acide gras polyinsaturé dans les oeufs dudit animal supplémenté par ledit au moins un extrait de raisin selon l'invention est augmenté d'au moins 10%, de préférence d'au moins 15% et tout préférentiellement d'au moins 20%, en poids par rapport au poids des acides gras polyinsaturés dans les oeufs dudit animal non supplémenté par ledit au moins un extrait de raisin. [0063] Par conséquent, selon l'invention, en l'utilisation dans le régime alimentaire d'un animal producteurs d.'oeufs ledit au moins un extrait de raisin selon l'invention à une très faible dose, permet d'obtenir une augmentation significative du taux d'au moins 8 un acide gras polyinsaturé dans les oeufs dudit animal supplémenté,en particulier une augmentation significative du taux de ALA et/ou DHA, tout particulièrement du taux de .DHA, [0064 Selon une premièrete, les oeufs obtenus par la mise en oeuvre la présente invention sont non fécondés ; il s'agit d'oeufs enrichis en acide(s) gras insaturé(s) destinés à la consommation humaine [0065] Selon une deuxième variante, les oeufs obtenus par la mise en oeuvre de la présente invention sont fécondés ; il s'agit d'oeufs destinés à la reproduction qui présentent des réserves nutritionnelles optimisés. [0066] Les exemples qui suivent visent à illustrer l Exemples [0067] Exemples de modes aiIsation de l'inven ion sans en limiter la portée. Les exemples 1 et 2 présentent des modes de réalisation de l'invention chez deux espèces de poissons et l'exemple 3 présente un mode de réalisation de l'invention chez une espèce de volaille. [0068] Exemple 1 Modulation du profil d'acide gras dans les oeufs de truite arc-en-ciel Ofworhynchus mykiss) [0069] Deux aliments ont été testés, différant uniquement par la présence de 60ppm d'extrait de raisin dans l'aliment du groupe « supplémenté ». Les aliments étaient composés de farines de poissons, feveroles dépelliculée, gluten de blé, tourteau d'extraction de soja cuit, huiles de poissons, blé, gluten de maïs, huile de colza, tourteau de colza, minéraux, vitamines. [0070] Composition des aliments des deux groupes. [00711 [Tableaux1] Groupe Contrôle (CIL) Supplémenté (NG) + Protéines (%) 39 39 Lipides (%) 27 27 Dont oméga-3 (en % des lipides) 15.5 15.5 Cellulose (%) 1.7 1,7 Cendres (%) 7 _-~:xtrait de raisin selon l'invention (mg/kg) 0 60 [0072] Chaque groupe était composé de 130 géniteurs de truite arc-en-ciel, comprenant chacun deux bassins de 40 femelles et un bassin de 50 mâles. Les poissons du même sexe étaient répartis de manière aléatoire entre les deux groupes. 9 [0073] L'ensemble des bassins étaient approvisionnés par le même circuit d'eau et la qualité de celle--ci était maîtrisée et contrôlée quotidiennement. [0074] L'essai de supplémentation s'est déroulé sur la période des 5 mois précédant la ponte. [0075] Les oeufs des femelles étaient ensuite récoltés puis conservés à -80°C jusqu'à. analyse. [0076] Dix échantillons d'oeufs de chaque groupe étaient )umis au protocole de préparation suivant : [00771 - Lyophilisation de 10g d'oeufs frais, [0078] Extraction automatique sous pression de 2g de lyophilisai d'oeufs à l'aide de dichio-- rométhane (DCM), [0079] - Evaporation à sec des extraits liquides obtenus, [0080] - Saponification de 50m d'extrait sec [0081] Dérivatisation à l'aide de BSTFA (N,O-Bis-tri é yisilyl- uoroacétamide), [0082] - Injection en GC-MS [0083] L'aire sous la courbe des pics de .DHA était ensuite'., c automatiquement afin de permettre une comparaison statistique des résultats à l'aide du test statistique de t-test (Welch, logiciel R, v3.4.1). [0084] Résultats de l'intégration des pics de DH oeufs de truite rc-en-ciel et analyse statistique associée. [0085] [Tableaux2] Groupe CTL NG Aire sous la courbe du pic de DHA (m1 A) 32861606 405071'7 [0086] Les résultats de l'analyse des oeufs de truite arc-en-ciel ont donc démontré une aug- mentation significative de la proportion en poids de .DHA dans les oeufs des poissons supplémentés en extrait de raisin (+23.3%, p