FR 3003164 A1 20140919 FR 1352221 A 20130313 COMPOSITION CONTENANT DE LA SUPEROXYDE DISMUTASE ISSUE DE VITIS VINIFERA La présente invention se rapporte à l'utilisation de superoxyde dismutase issue de Vitis vinifera dans des compositions cosmétiques, alimentaires ou compléments alimentaires. L'invention concerne également l'utilisation de ces compositions en particulier pour lutter contre le stress oxydatif. Le corps humain est régi par un équilibre oxydant/antioxydant : dans les conditions physiologiques, l'organisme produit en permanence des molécules oxydantes, appelées radicaux libres, tels que les Espèces Réactives à l'Oxygène (ER0s). Ces molécules sont formées par une chaîne oxydative qui transforme les molécules d'Oz en anion superoxyde (02'). L'02" est la molécule oxydante la plus active sur les cellules. Il est ensuite transformé en radical hydroxyle (01-1'), un oxydant efficace capable de synthétiser de nombreux radicaux libres secondaires (R00'). Ceci induit un stress oxydatif sur l'organisme, avec des dommages non réversibles sur les cellules de l'organisme tels que peroxydation des lipides membranaires, dégradations mitochondriales, oxydations protéiques et altérations de l'ADN. Le stress oxydatif est impliqué dans de nombreux désordres de l'organisme, tels que les maladies pro-inflammatoires et cardiovasculaires, les désordres neurologiques, les fibroses, le diabète ou encore le vieillissement cellulaire. Pour combattre le stress oxydatif et ses effets délétères, les cellules disposent de plusieurs systèmes biologiques de défense et de réparation, mais ces systèmes ont des capacités limitées et ne peuvent pas faire face à une surproduction de molécules antioxydantes. Pour restaurer l'homéostasie de l'organisme, il faut alors faire appel à des mécanismes complémentaires de défenses antioxydantes. On connaît à cet effet deux types d'antioxydants : - les antioxydants primaires, qui agissent directement contre la formation d'02' avec actions complémentaires, comme la superoxyde dismutase (SOI)), la Gluthatione Peroxidase ou encore la Catalase ; - les antioxydants secondaires, qui agissent au milieu de la chaîne oxydative, en inhibant la formation des R00', comme par exemple les P0 lyphéno Is. Plusieurs principes actifs et compositions aux propriétés antioxydantes ont été développés ces dernières années. Parmi ces produits, on connaît notamment des extraits polyphénoliques, en particulier des extraits polyphénoliques issus de produits de la vigne, développés et utilisés pour lutter contre le stress oxydatif pour diverses applications, en particulier pour des applications dans les domaines cosmétique, alimentaire et des compléments alimentaires. bans le domaine de la cosmétique en particulier, ces produits sont utilisés pour lutter contre le vieillissement cutané. Le vieillissement cutané est un phénomène inévitable résultant de deux procédés 20 complémentaires : - le vieillissement intrinsèque ou vieillissement naturel, génétiquement programmé ; il est dû à l'âge, et se traduit par : o une diminution du contenu et de l'activité des constituants de la peau 25 o une diminution des enzymes antioxydantes comme la Superoxyde dismutase, o une augmentation de la dégradation enzymatique des composants de la peau, o une perte de l'intégrité des parois vasculaires et une hyperperméabilité dermique, conduisant à une réduction de la nutrition et de l'oxygénation de la peau ; - le vieillissement extrinsèque, dépendant de facteurs environnementaux aléatoires, y compris le rayonnement solaire (UV), les substances addictives (l'alcool, le tabac), l'alimentation (déséquilibres, carences, suralimentation), les polluants chimiques, le contexte social (mode de vie stressant), etc. Tous ces facteurs engendrent une production d'EROs dans la peau. Les extraits polyphénoliques issus de la vigne, lorsqu'ils sont appliqués sur la peau, jouent leur rôle d'antioxydants secondaires : ils inhibent la formation des R00', et participent ainsi à la prévention et à la lutte contre le vieillissement cutané. Les extraits polyphénoliques sont utilisés dans le domaine alimentaire et des compléments alimentaires notamment pour leur action anti-oxydante directe ou indirecte, dans des applications pour prévenir et/ou lutter contre le stress oxydatif, le vieillissement cellulaire, ou les maladies métaboliques et neurodégénératives. Toutefois, si ces produits naturels issus de la vigne présentent certains 20 avantages, ils ne sont pas entièrement satisfaisants en termes d'efficacité en particulier parce qu'ils n'agissent qu'au milieu de la chaîne oxydative et n'ont pas d'effet direct sur la lutte contre la formation d'Oz'. Pour pallier ces inconvénients, la présente invention propose d'utiliser de la superoxyde dismutase issue de Vitis vine fera. 25 La superoxyde dismutase (SOD) est une enzyme antioxydante primaire, présente naturellement chez l'être humain. Il existe plus formes de SOD. Chez l'homme 3 isoformes ont été identifiées : la SOD1 localisée dans le cytosol, la 50D2, localisée dans la mitochondrie et la 50D3 localisée dans l'espace extracellulaire. La SOD est responsable d'une réaction de dismutation spontanée du radical superoxyde 02' en peroxyde d'hydrogène (H202) selon la réaction suivante : SOD 02* + 02 + 2H+ -> H202+ 02 Le peroxyde d'hydrogène ainsi formé est ensuite transformé en eau par l'action complémentaire de la Catalase et de la Gluthationperoxydase. Ainsi, l'action de la SOD permet de réduire la quantité d'Oz' présente dans l'organisme et donc d'inhiber à la base les dommages oxydatifs pouvant être induits par des molécules oxydantes dérivées d'Oz', tels le radical hydroxyle OH' ou le peroxynitrite ON00-. On sait que plusieurs formes de SOD ont été identifiées dans différents compartiments cellulaires de divers végétaux, comme par exemple la pulpe de Citrus lemon, les feuilles de Plgum sativum, les aiguilles de Pinus sylvestris, les racines de Curcuma comosa, etc. En fonction de son origine et de son type, la SOD présente des propriétés et une activité différente. De façon surprenante, la demanderesse a démontré que la SOD issue de vigne 15 présentait de très bonnes propriétés antioxydantes et des caractéristiques adaptées à une application cosmétique ou alimentaire ou comme complément alimentaire. Les extraits de produits de la vigne utilisés actuellement en cosmétique et dans le domaine alimentaire ou des compléments alimentaires ne contiennent pas de 20 SOD contrairement aux compositions visées dans la présente invention. Avantageusement, les compositions selon l'invention lorsqu'elles sont appliquées sur la peau apportent une supplémentation en SOD suffisamment efficace pour permettre de contrer le déficit naturel en enzymes antioxydantes du vieillissement intrinsèque de l'organisme en général et de la peau en particulier, 25 mais aussi de neutraliser la surproduction d'ER0s, notamment due au vieillissement extrinsèque. De même, les compositions selon l'invention lorsqu'elles sont ingérées apportent une supplémentation en SOD suffisamment efficace pour permettre de lutter contre de nombreux désordres de l'organisme, en particulier des maladies pro-inflammatoires et cardiovasculaires, les désordres neurologiques, les fibroses, le diabète et le vieillissement cellulaire. Selon un autre avantage, l'efficacité antioxydante des compositions selon l'invention est beaucoup plus importante que celle des compositions cosmétiques, alimentaires ou des compléments alimentaires, contenant des extraits de produits de la vigne connus jusqu'alors, y compris des extraits polyphénoliques issus de la vigne. L'invention vise donc également l'utilisation des compositions contenant de la SOD issue de Vitis vinifera comme compositions cosmétiques antioxydantes destinées à être appliquées sur la peau ou comme compositions antioxydantes destinées à être ingérées. L'invention a aussi pour objet un procédé de traitement cosmétique de traitement de la peau, destiné à prévenir et/ou lutter contre le vieillissement cutané. Elle concerne également des compositions contenant de la SOD issue de Vitis vinifera pour leur application comme composition alimentaire antioxydante ou complément alimentaire antioxydant pour prévenir et/ou lutter contre de nombreux désordres de l'organisme en particulier pour prévenir et/ou lutter contre les maladies pro-inflammatoires et cardiovasculaires, les désordres neurologiques, les fibroses, le diabète et/ou le vieillissement cellulaire. L'invention est à présent décrite en détails. Selon un premier aspect, l'invention a donc pour objet une composition 25 cosmétique, alimentaire ou complément alimentaire contenant de la superoxyde dismutase issue de Vitis vinifera. Préférentiellement, il s'agit d'une composition comprenant un extrait de Vitis vinifera contenant de la SOD à raison d'au moins 100 UI/g de matière sèche de l'extrait, encore plus préférentiellement à raison d'au moins 500 UI/g de matière sèche de l'extrait. Par compositions alimentaires et/ou compléments alimentaires selon l'invention on entend les produits alimentaires courants tels que les boissons, les huiles, les yaourts, les biscuits, y compris les produits nutritionnels et les produits diététiques, ainsi que les compléments alimentaires avec une galénique répondant aux caractéristiques réglementaires en vigueur. Par extrait de Vitis vinifera selon l'invention on entend toute molécule ou mélange de molécules obtenu à partir de Vitis vinifera. Selon l'invention, la composition comprend au moins un extrait de Vitis vinifera contenant de la SOD. Ledit extrait est de façon préférée présent dans la composition à au moins 0,05% en poids de matière sèche de la composition. La SOD utilisée dans les compositions selon l'invention est préférentiellement issue de feuilles et/ou de fruits de Vitis vinifera. Elle peut également être 15 obtenue à partir de jus de fruits de Vitis vinifera. De façon particulièrement adaptée, la SOD ou l'extrait contenant de la SOD est obtenue à partir de Vitis vinifera par un procédé comprenant une étape de séchage à une température inférieure à 100°C, encore plus préférentiellement inférieure à 60°C. Le séchage peut par exemple être réalisé par lyophilisation, 20 sous vide, par atomisation ou par séchage à air chaud. De même, on préfèrera un procédé d'obtention par extraction aqueuse, sans solvant organique. La SOD est en effet une molécule particulièrement fragile qui nécessite des conditions d'extraction douces. La SOD (ou l'extrait contenant la SOD) peut être obtenue par la mise en oeuvre 25 d'un procédé comprenant au moins les étapes suivantes : - solubilisation dans l'eau de feuilles et/ou fruits de Vitis vinifera, - centrifugation pour récupérer le surnageant, - éventuellement purification, et - séchage à une température inférieure à 100°C. Les feuilles et/ou les fruits de Vitis vinifera sont préférentiellement préalablement broyés avant solubilisation. Pour faciliter le broyage, les feuilles 5 et/ou les fruits de Vitis vinifera peuvent être congelés. La solubilisation peut être idéalement réalisée à raison d'au moins 100 g de matière fraîche par litre d'eau. La centrifugation est préférentiellement réalisée entre 4 et 20 minutes à une vitesse comprise entre 4000 et 15000 tours par minute. 10 Le surnageant récupéré après centrifugation peut être séché directement. Le séchage doit être réalisé à une température inférieure à 100°C, préférentiellement par lyophilisation. La SOD (ou l'extrait contenant de la SOD) utilisé selon l'invention est préférentiellement associée à un véhicule approprié pour un des usages visés : 15 usage externe pour une composition cosmétique, ingestion et assimilation dans l'organisme pour une composition alimentaire ou complément alimentaire. En particulier la SOD est préalablement microencapsulée au sein de microparticules biodégradables polymériques ou de substances lipidiques. Selon une variante, les compositions selon l'invention comprennent également un 20 ou plusieurs composés polyphénoliques ou au moins un extrait polyphénolique. Ces polyphénols sont préférentiellement issus de Vitis vinifera, plus particulièrement de pépins, de marc de vigne ou de feuilles de vigne ou issus d'huiles obtenues à partir Vitis vinifera. L'extrait contenant de la SOD et l'extrait polyphénolique peuvent être 25 identiques, c'est-à-dire que la SOD et les polyphénols sont obtenus selon un même procédé d'extraction à partir de Vitis vinifera. Cependant les procédés d'extraction de polyphénols sont souvent trop agressifs pour la SOD qui est généralement détruite ou inactivée. Selon un mode de réalisation particulièrement adapté l'extrait contenant la SOD issu de Vitis vin fera et l'extrait polyphénolique issu de Vitis vin fera sont donc différents et obtenus séparément. La composition selon l'invention peut comprendre un extrait de Vitis vinifera 5 contenant des polyphénols à raison d'au moins 0,05g de polyphénols (mesuré par spéctrophotométrie à 280nm) pour 100g de matière sèche de l'extrait ou pour 100g d'huile. Préférentiellement les composés polyphénoliques présents dans la composition selon l'invention sont choisis parmi les monomères, les oligomères et les 10 polymères de catéchine, d'épicatéchine et les stilbènes. Encore plus préférentiellement, les composés polyphénoliques présents dans la composition selon l'invention sont choisis parmi le resvératrol et ses dérivés. Avantageusement l'association de SOD antioxydant primaire, et de polyphénols, antioxydants secondaires, assure une action antioxydante optimale, efficace 15 notamment contre le vieillissement cellulaire, en particulier le vieillissement cutané et de nombreux autres désordres de l'organisme comme les maladies pro-inflammatoires et cardiovasculaires, les désordres neurologiques, les fibroses et le diabète. Selon un autre avantage, les polyphénols ont également d'autres effets bénéfiques, tels que le maintien de la vitalité et de l'intégrité de la peau. 20 Les compositions selon l'invention doivent être adaptées pour une utilisation cosmétique. Les compositions cosmétiques selon l'invention se présentent sous une forme appropriée pour une administration par voie topique telle que notamment crème, pommade, émulsion, gel ou lotion. 25 Les compositions alimentaires et compléments alimentaires selon l'invention se présentent sous une forme appropriée pour une administration par voie orale telle que notamment poudre, huile, liquide. Selon un autre aspect, l'invention vise spécifiquement l'utilisation des compositions contenant de la SOD issue de Vitis vinifera pour prévenir le stress oxydatif pour une application cosmétique. En particulier, l'invention a pour objet l'utilisation d'une composition contenant de la SOD issue de Vitis vinifera comme composition cosmétique antioxydante destinée à âtre appliquée sur la peau, notamment comme composition cosmétique destinée à prévenir et/ou lutter contre le vieillissement de la peau. A cet effet l'invention vise également un procédé cosmétique de traitement de la peau, destiné à prévenir et/ou lutter contre le vieillissement cutané, qui consiste à appliquer sur la peau une composition contenant de la SOD issue de Vitis vinifera. Selon un autre aspect l'invention a aussi pour objet l'utilisation des compositions contenant de la SOD issue de Vitis vinifera pour prévenir le stress oxydatif par voie orale pour une application comme composition alimentaire ou complément alimentaire. En particulier, l'invention vise une composition contenant de la SOD issue de Vitis vinifera pour son application comme composition alimentaire antioxydante ou complément alimentaire antioxydant, en particulier pour prévenir et/ou traiter le vieillissement cellulaire, les maladies pro-inflammatoires et cardiovasculaires, les désordres neurologiques, les fibroses et le diabète. L'invention est à présent illustrée par des exemples d'extraits, de compositions et des résultats d'essais comparatifs. I. Exemple d'extraits de Vitis vinifera standardisés en SOD Les extraits sont obtenus par la mise en oeuvre des étapes suivantes : - broyage de 10g de feuilles fraîches congelées de Vitis vinifera pendant 60s - homogénéisation dans 100mL d'eau distillée - Ajustement du pH - Agitation pendant 30 minutes à 20°C - Centrifugation pendant 20 minutes à 4000tour.min-1 - Récupération du surnageant - Séchage par lyophilisation à 35°C Le procédé a été mis en oeuvre sur différents cépages et trois extraits ont été obtenus sur le cépage merlot (culture biologique) : Extrait de feuille de vigne Extrait Température pH Masse de Matière Sèche totale Activité SOD extrait UI/9M5 Extrait 1 20°C 3,58 0,57g 5525 Extrait 2 20°C 4,5 0,319 4808 Extrait 3 20°C 11,1 0,91g 2268 Les extraits obtenus peuvent être standardisés avec un support tel que la maltodextrine, de la feuille de vigne séchée broyée, du jus de raisin, du marc de raisin. L'extrait standardisé pourra alors avoir une concentration moins importante en SOD que l'extrait pur obtenu lors de l'extraction spécifique mais contiendra au moins 100 UI/g de matière sèche. II. Exemple d'extraits de Vitis vinifera standardisés en polyphénols Les extraits sont obtenus par la mise en oeuvre des étapes suivantes : - extraction solide liquide de 40kg de pépins de raisin (Eau + Solvant + Acide) - Filtration (25pm), récupération de l'extrait fluide et élimination du gâteau de filtration - extraction liquide/liquide - séparation - concentration sous-vide - séchage par atomisation - récupération d'1kg d'extrait sec de Vitis vinifera L'extrait obtenu contient plus de 95% de polyphénols. Il comprend notamment (mesures HPLC) plus de 30% de flavonoïdes. III. Exemples de compositions Exemple 1: composition cosmétique - crème de jour : - extrait du point I 0,5% - extrait du point II 0,2% - conservateur 0,5% - parfums 0,6% - phase grasse + phase aqueuse 98,2% La phase grasse est constituée d'un émulsionnant et de triglycérides. La phase aqueuse est constituée d'eau associée à un acide pyrrolidone carboxylique. La composition est obtenue par mélange des constituants dans les conditions classiques connues de l'homme du métier. Exemple 2 : composition cosmétique ou alimentaire : - extrait du point I 0,8% - huile de pépin de raisin riche en polyphénols 99,2% La composition est obtenue par mélange des constituants dans les conditions classiques connues de l'homme du métier. Exemple 3 : complément alimentaire : bans une gélule de 400 mg : - extrait du point I 25mg - extrait du point II 175mg - maltodextrine 200mg La composition est obtenue par mélange des constituants dans les conditions classiques connues de l'homme du métier. IV. Essais comparatifs sur l'efficacité antioxydante d'extraits de Vitis vinifera selon l'invention Des essais ont été réalisés pour comparer l'efficacité d'extraits de Vitis vinifera contenant de la SOD à celle d'extraits polyphénoliques ne contenant pas de SOD. Trois extraits sont utilisés pour ces essais : - extrait A : contenant uniquement de la SOD ; l'extrait est obtenu par extraction aqueuse puis lyophilisé ; il a une activité SOD supérieure à 5000 UI/g. - extrait B: ne contenant pas de SOD ; l'extrait est obtenu par extraction solvant ; il contient plus de 80% de polyphénols totaux (15% de catéchine et épicatéchine et plus de 20% d'oligoprocyanidi ne). - extrait C: ne contenant pas de SOD ; l'extrait est obtenu par purification sur colonne chromatographique ; il contient plus de 98% de trans-resveratrol. Ces extraits sont ensuite introduits dans des compositions. 7 compositions ont été testées contenant un ou plusieurs des extraits 1 à 3 en combinaison, et 20 comparées à un témoin négatif non traité et un témoin traité avec de la N-Acétyl Cystéine (NAC) (témoin positif). Le stress oxydatif est généré par du peroxyde d'hydrogène. L'étude a été réalisée sur des kératinocytes issus d'épiderme humain normal (NHEK), cultivés sur des milieux de culture utilisant des milieux de croissance spécifiques 25 (Keratinocyte Growth Medium KGM-Gold de Lonza). Le stress oxydatif et les effets protecteurs du N Acetyl Cysteine (NAC) ont été évalués en mesurant le potentiel mitochondrial membranaire. Les résultats obtenus sont présentés dans le tableau ci-dessous : Essais Produits testés Potentiel mitochondrial membranaire (%) EXT. A UI/ml EXT.B EXT.0 pg/m1 mg/mi Témoin négatif 0 0 0 1,3 (non traité) Témoin positif 0 0 0 91,1 (effet protecteur avec NAC 10mM) 1 100 0 0 82 2 0 25 0 1 3 0 0 14 6,4 4 100 25 0 52,2 100 0 14 8,4 6 100 25 14 7,5 7 50 12,5 7 6,6 On constate que l'extrait standardisé en SOD est plus efficace que des extraits po lyphéno I igues seuls. En outre, un ajout de l'extrait standardisé en SOD aux extraits polyphénoliques 5 permet d'améliorer leur efficacité. De plus, avec le composition 7 on constate qu'une diminution d'un facteur 2 de la concentration de SOD et polyphénols affectent peu le pouvoir protecteur antioxydant. REVENDICATIONS1. Composition cosmétique, alimentaire ou complément alimentaire contenant de la superoxyde dismutase issue de Vitis vinifera. 2. Composition selon la revendication 1, caractérisée en ce qu'elle comprend un extrait de Vitis vinifera contenant de la superoxyde dismutase à raison d'au 5 moins 100 UI/g de matière sèche de l'extrait. 3. Composition selon la revendication 2, caractérisée en ce que l'extrait est présent à au moins 0,05% dans la composition. 4. Composition selon l'une des précédentes revendications, caractérisée en ce qu'elle comprend également des composés polyphénoliques issus de Vitis 10 vinifera. 5. Composition selon l'une des précédentes revendications, caractérisée en ce qu'elle comprend un extrait de Vitis vinifera contenant des composés polyphénoliques. 6. Composition selon la revendication 2 ou 3, caractérisée en ce qu'elle 15 comprend un extrait de Vitis vinifera contenant des composés polyphénoliques et en ce que cet extrait est différent de l'extrait contenant la superoxyde dismutase. 7. Composition selon la revendication 2 ou 3, caractérisée en ce que l'extrait de Vitis vinifera contenant de la superoxyde dismutase contient également des 20 composés polyphénoliques. 8. Composition selon l'une des revendications 4 à 7, caractérisée en ce que les composés polyphénoliques sont choisis parmi des monomères, oligomères et polymères de catéchine et d'épicatéchine, et les stilbènes. 9. Composition selon l'une des revendications 4 à 8, caractérisée en ce que 25 les composés polyphénoliques sont choisis parmi le resvératrol et ses dérivés. 10. Composition selon l'une des précédentes revendications, caractérisée en ce que la superoxyde dismutase est issue de feuilles et/ou de fruits de Vitis vinifera. 11. Composition selon l'une des précédentes revendications, caractérisée en 5 ce que la superoxyde dismutase est obtenue à partir de Vitis vinifera par un procédé comprenant une étape de séchage à une température inférieure à 100°C. 12. Composition selon l'une des précédentes revendications, caractérisée en ce que la superoxyde dismutase est obtenue par extraction aqueuse à partir de Vitis vinifera. 10 13. Composition selon l'une des précédentes revendications, caractérisée en ce que la superoxyde dismutase est obtenue par la mise en oeuvre d'un procédé comprenant au moins les étapes suivantes : - solubilisation dans l'eau de feuilles et/ou fruits de Vitis vinifera éventuellement préalablement broyés, 15 - centrifugation pour récupérer le surnageant, - éventuellement purification, et - séchage à une température inférieure à 100°C. 14. Composition selon l'une des précédentes revendications, caractérisée en ce que la superoxyde dismutase est microencapsulée. 20 15. Utilisation d'une composition selon l'une des précédentes revendications, comme composition cosmétique antioxydante destinée à âtre appliquée sur la peau. 16. Utilisation d'une composition selon l'une des revendications 1 à 14 comme composition cosmétique destinée à prévenir et/ou lutter contre le vieillissement 25 de la peau. 17. Procédé cosmétique de traitement de la peau, destiné à prévenir et/ou lutter contre le vieillissement cutané, caractérisé en ce qu'il consiste à appliquer sur la peau une composition selon l'une des revendications 1 à 14. 18. Composition selon l'une des revendications 1 à 14 pour son application comme composition alimentaire antioxydante ou complément alimentaire antioxydant. 19. Composition selon l'une des revendications 1 à 14 pour son application comme composition alimentaire ou complément alimentaire pour prévenir et/ou traiter le vieillissement cellulaire, les maladies pro-inflammatoires et cardiovasculaires, les désordres neurologiques, les fibroses et le diabète.