FR 2978441 A1 20130201 FR 1102317 A 20110725 Nouveaux analogues de céramides, leurs procédés de préparation et leurs applications dans les compositions pharmaceutiques et cosmétiques » L'invention concerne de nouveaux analogues de céramides, leurs procédés de préparation et leurs applications dans les compositions pharmaceutiques et cosmétiques. 10 Les céramides représentent une classe particulière de lipides intraépidermiques naturellement présents dans la peau et les cheveux. Ils sont formés à partir rie la sphyngosine ou du sphingosène qui s'associe avec certains acides gras insaturés comme l'acide linoléique. Ils jouent un 15 rôle fondamental dans la structure de l'épiderme et de ses fonctions, notamment dans le maintien et le contrôle de l'hydratation et la cohésion de la couche cornée. Mais le contenu de la peau en céramides varie dans diverses conditions : il est plus important lorsque l'épiderme subit différentes agressions comme un traumatisme, l'exposition solaire, l'augmentation de l'évaporation de l'eau cutanée et il diminue chez le sujet âgé et chez le sujet atteint de dermatite atopique. 20 Le vieillissement du sujet entraîne donc leur diminution dans la peau ainsi que l'apparition de taches brunes. Le traitement des taches est réalisé à l'aide de produits dépigmentants en particulier 1' acide rétinoïque, l'acide azélaïque, l'acide ascorbique et l'hydroquinone. Tous présentent des effets secondaires. En particulier, l'hydroquinone, un des dépigmentants les plus connus, entraîne la dégénérescence des fibres de collagène et d'élastine, et possède dès effets 25 génotoxiques et cancérigènes. Il n'est plus utilisé que sur prescription médicale. La présente invention a pour objet de nouveaux diamides cycliques dans lesquels les deux fonctions amides sont portées par un cycle comportant de 3 à 5 atomes de carbone, inspirés des éléments constitutifs des bicouches lipidiques constituant les membranes cellulaires et leurs procédés de préparation. 30 Un autre but de l'invention est l'élaboration de préparations pharmaceutiques et cosmétiques pour mettre à profit leurs effets biologiques, en particulier en tant qu'agents pour lutter contre le vieillissement de la peau et en tant qu'agent dépigmentant. L'invention a plus particulièrement pour objet les composés représentés par la formule générale 1 figurant ci-après T=X1 ou Zl W=X2.ou Z2 10 dans laquelle T est égal à XI ou Z,, W est égal à X2 ou Z2, - - X1, X2, Z, et Z2 représentent indépendamment l'un de l'autre un groupe choisi parmi o X1 NR Yt R1 Z1H / \ yt R2 Z2 N ay 2 H Y2 15 o dans lequel 1 Yl et Y2 représentent indépendamment l'un de l'autre D -FI, -OH, -OH éventuellement couplé à un composé osidique pouvant être un a- ou (3-furanose ou un a- ou (3-pyranose, -ORa, -OCOCH3, ° -OSi(L)3, - -OSitBdPh de formule, - -OSitBdM de formule, - -000H, - COORb, -NH2, - -NR.Rd, - NHCORe , NHCOORf , - le groupe -OTHP de formule, \/ - un groupe dérivé de l'éthylèneglyeol de formule, dans laquelle S varie de 1 à 12, un groupe dérivé du propylèneglycol de formule, OH 15 dans laquelle 5' varie de 1 à 5, - un groupe -O-CH(RZ)-O-Q, dans lequel RZ représente un groupe alkyle ou aralkyle comportant de 1 à 30 atomes de carbone, qui peut, mais pas forcément, contenir une ou plusieurs fonctions éthers et éventuellement un hydroxyle terminal, Ra, Rb, Ra, Rd représentent des groupes alkyles linéaires ou ramifiés comportant de 1 à 4 atomes de carbone, éventuellement substitués par un ou plusieurs atomes d'halogène, ou des chaînes carbonées interrompues par des atomes d'oxygène ou de soufre, des groupes benzyles éventuellement substitués par un atome d'halogène, un groupe hydroxy, un groupe alkoxy comportant de 1 à 8 atomes de carbone, Re représente un groupe alkyle linéaire ou ramifié contenant de 1 à 4 atomes de carbone, un groupe 10 phtalimido (dans ce cas le NH est remplacé par N), un groupe benzyle éventuellement substitué par un atome d'halogène, un groupe hydroxy, un groupe alkoxy et en particulier substitué par le groupe méthoxy en position para, Rf représente un groupe alkyle linéaire ou ramifié comportant de 1 à 4 atomes de carbone, éventuellement substitué par un ou plusieurs atomes d'halogène, ou une chaîne carbonée 15 interrompue par des atomes d'oxygène ou de soufre, un groupe phényle, un groupe benzyle éventuellement substitué par un atome d'halogène, un groupe hydroxy, un groupe alkoxy et en particulier substitué par le groupe méthoxy en position para, le groupe phosphonate de formule o- P- OR4 OR4 dans lequel R4 représente un groupe alkyle linéaire ou ramifié, comportant de 1 à 6 atomes de carbone, en particulier méthyle, éthyle, isopropyle, tertiobutyle, (OR4)2 formant éventuellement un cycle entre les deux atomes d'oxygène, les groupes (OR4)2 provenant notamment de diols tels que l'éthane-1,2- 25 diol, le propane-1,3-diol, le 2,2-diméthylpropane-1,3-diol, le 2,3-diméthylbutane-2,3-diol (pinacol), le 2-méthylbutane-2,3-diol, le 1,2-diphényléthane-1,2-diol, le 2-méthylpentane-2,4-diol, le 1,2- dihydroxybenzène (catéchol), le 2,2'-azanediyldiéthanol, le 2,2'-(butylazanediyl)diéthanol, l'acide 2,3-dihydroxysuccinique (acide tartrique) et ses esters, ou (OR4)2 provient notamment de diacides 2978441 tels que l'acide 2,2'-(méthylazanediyl)diacétique (mida), - R' et R2 représentent, indépendamment l'un de l'autre, des chaînes linéaires ou ramifiées possédant de 1 à 30 atomes de carbone, R' et R2 étant saturées ou insaturées, substituées ou non par un atome d'halogène, et dans le cas d'une insaturation, la double liaison C=C étant éventuellement substituée -par un atome de fluor, de chlore, de brome ou par un groupe -CF3, et dans le cas où R' et R2 ne comprennent qu'un seul carbone, ils sont choisis 10 parmi les groupes de formule « -CHV- », dans laquelle V représente -H, -F, -Cl ou -Br, Y, et Y2 étant alors égaux au groupe phosphonate -P(0)(OR4)2, R4 ayant la signification indiquée ci-dessus, --m=1,2,3etn= 0,1 sous réserve que m+n soit différent de 4, 15 T et W pouvant être : en position trans l'un par rapport à l'autre, en position cis l'un par rapport ou l'autre. Les composés de formule générale I représentée ci-dessus contiennent tous deux chaînes nominées 20 X,, X2, Z, et Z2. Ces chaînes comportent toutes une fonction amide -CO-NH- . XI, X2, Z, et Z2 possèdent pour partie terminale Y, et Y2 , pouvant être l'hydrogène si cette chaîne n'est pas fonctionnalisée en position terminale. Si le carbone terminal est fonctionnalisé, Y, et Y2 peuvent être des fonctions acide carboxylique ou sa forme ester. Y, et Y2 peuvent encore être des fonctions alcool, protégées ou non. Dans le cas d'un alcool protégé, Y, et Y2 peuvent être dérivés 25 de composés osidiques, c'est à dire de sucres, la liaison se faisant entre le -OH terminal et l'oxygène anomérique. Ces sucres sont les a- ou (3-furanoses et les a- ou 5-pyranoses. La protection d'un alcool peut aussi être réalisée par passage à une fonction éther en utilisant par exemple le dérivé du tétrahydropyrane, représenté précédemment, éventuellement sous sa forme ouverte. 30 Y, et Y2 peuvent encore être des fonctions amines primaires, secondaires ou tertiaires, éventuellement protégées sous forme d'amide -NHCORL , ou de carbamate NHCOORf , Y, et Y2 peuvent encore être des groupes phosphonates -F(0)(OR4)2, R4 ayant la signification indiquée ci-dessus. Dans les formules représentant les chaînes nommées XI, X2, Z, et Z2 , les radicaux Ri et R2 représentent la chaîne carbonée comprise entre la fonction amide -CO-NH- fixée au cycle, par l'azote ou le carbonyle, et le groupe terminal nommé Y, ou Y2 Les radicaux R' et R2 comportent alors de 1 à 30 atomes de carbone. R' et R2 peuvent être saturés ou insaturés comportant dans ce cas une, deux ou trois doubles liaisons carbone/carbone. Un ou plusieurs des carbones d'une ou plusieurs liaison(s) C=C peut porter un atome de fluor, de chlore, de brome ou un groupe -CF3. 10 Les indices m et n permettent de faire varier la taille du cycle. « m »peut prendre les valeurs 1, 2 ou 3. « n » peut prendre les valeurs 0 ou 1. Les composés faisant l'objet de l'invention sont des dérivés de cyclopropanes, de cyclobutanes ou de cyclopentanes fonctionnalisés par deux chaînes amides, chacune étant liée à un atome de carbone du cycle. 15 Lorsque n=0 et m=l, alors ces composés sont des dérivés de cyclopropane. Lorsque la somme n+m=2, alors ces composés sont des dérivés de cyclobutane. Lorsque la somme n+m=3, alors ces composés sont des dérivés de cyclopentane. Les composés n+m=4 ne font pas l'objet de la présente invention. 20 T et W sont les deux chaînes portées par le cycle carboné. Toutes deux sont fixées au cycle par leur fonction amide. Deux possibilités de branchement de la chaîne au cycle existent : la chaîne latérale est soit fixée par l'azote, soit fixée par le carbone du carbonyle. D'autre part, comme il est défini ci-dessus, les parties R' et R2 peuvent être identiques ou différentes. Il en est de même pour les parties terminales Y, et Y2. Ceci amène à distinguer des composés nouveaux appartenant à six familles. 25 Nous distinguerons en effet ^ les composés dans lesquels les chaînes amides latérales sont toutes les 2 fixées au cycle par l'atome d'azote, toutes les deux ayant les mêmes parties R' et YI. Ces composés sont symétriques. les composés dans lesquels les chaînes amides latérales sont toutes les 2 fixées au 30 cycle par l'atome d'azote, mais différentes par les natures respectives de R' et R2 et de YI et Y2. Ces composés sont qualifiés de dissymétriques. - les composés dans lesquels les chaînes amides latérales sont toutes les 2 fixées au cycle par le carbone du carbonyle, toutes les deux ayant les mêmes parties R' et Y,. Ces composés sont symétriques. - les composés dans lesquels les chaînes amides latérales sont toutes les 2 fixées au cycle par le carbone du carbonyle, mais différentes par les natures respectives de R' et R2 et de Y, et 5 Y2. Ces composés sont qualifiés de dissymétriques. - les composés dans lesquels une chaîne latérale est fixée au cycle par l'azote tandis que l'autre y est fixée par le carbonyle, toutes les deux ayant les mêmes parties R' et Y,. Les composés sont alors appelés composés mixtes. les composés dans lesquels une chaîne latérale est fixée au cycle par l'azote tandis 10 que l'autre y est fixée par le carbonyle, mais différentes par les natures respectives de R' , R2 et de Yl ,Y2. Ces composés sont aussi appelés composés mixtes. D'autre part, les composés représentés par la formule générale T présentent une stéréochimie cis ou trans. Ils sont « cis » Si les deux chaînes sont situées du même côté du cycle et « trans » dans le cas 15 opposé. Ceci est représenté dans le schéma figurant ci-après : I cis I trans L'invention a pour objet les composés dans lesquels T et W sont identiques ou différents et 20 répondent à la formule IA , IB, le OU ID Ig ID dans laquelle X1, X2, Z, , Z2, m et n ont les significations indiquées précédemment. Quatre familles répondent respectivement aux formules générales IA , IB, le OU ID. - IA et IB représentent les composés dans lesquels les chaînes amides latérales sont fixées toutes les deux au cycle par l'atome d'azote. Les composés IA sont symétriques car les chaînes latérales sont rigoureusement identiques ; les composés IB sont dissymétriques car les chaînes latérales sont différentes. - le ou ID représentent les composés dans lesquels les chaînes amides latérales sont fixées 10 toutes les deux au cycle par le groupe carbonyle. Les composés le sont symétriques car les chaînes latérales sont rigoureusement identiques ; les composés ID sont dissymétriques car les chaînes latérales sont différentes. Pour tous les composés IA , IB, le ou ID, il est possible d'avoir les configurations cis ou trans. L'invention a pour objet les composés dans lesquels T et W _ sont différents et répondent à la formule IE X, , Z2, m et n ont les significations indiquées ci-dessus. Les composés IE sont les composés qualifiés de « composés mixtes » car les deux chaînes ne sont pas fixées par la même partie de la fonction amide, l'une étant liée par l'atome d'azote, l'autre par l'atome de carbone du carbonyle. Pour tous les composés IE, il est possible d'avoir les configurations cis ou trans. 15 20 25 L'invention a pour objet les composés de formule II o o dans laquelle R', R2, Y,, Y2, m et n ont les significations indiquées ci-dessus, R', R2 sont identiques ou différents, Y, et Y2 sont identiques ou différents. Deux familles sont ici concernées. Les composés II présentent des branchements sur le cycle par l'atome d'azote, pour les 2 chaînes latérales. On englobe ici les composés symétriques et dissymétriques. Pour tous les composés II, il est possible d'avoir les configurations cis ou trans. L'invention a aussi pour objet les composés de formule III 15 dans laquelle R', R2, Y,, Y2, m et n ont les significations indiquées ci-dessus, R', R2 sont identiques ou différents, Y, et Y2 sont identiques ou différents. 10 2978441. Deux autres familles sont ici concernées. Les composés III présentent des branchements sur le cycle par l'atome de carbone du groupe carbonyle pour les 2 chaînes latérales. On englobe ici les composés symétriques et dissymétriques. Pour tous les composés III, il est possible d'avoir les configurations cis ou trans. L'invention a aussi pour objet les composés représentés ci-après par la formule IV 0 10 dans laquelle R', R2, Y,, Y2i m et n ont les significations indiquées ci-dessus, R', R2 sont identiques ou différents, Y, et Y2 sont identiques ou différents. 15 Deux autres familles sont ici concernées. Il s'agit des composés qualifiés de composés « mixtes ». En effet, les deux chaînes ne sont pas fixées par la même partie de la fonction amide, l'une étant liée par l'atome d'azote, l'autre par l'atome de carbone du carbonyle comme cela est représenté ci-dessus. D'autre part, les parties R' et R2 peuvent être identiques ou différentes. Les parties terminales Y, et Y2 des chaînes latérales peuvent également être identiques ou différentes. 20 Pour tous les composés IV, il est possible d'avoir les configurations cis ou trans. L'invention a pour objet les composés de formule I dans laquelle n est égal à 0 et m est égal , et répondant aux formules VA, Ve, Vc, VD et VE Vg vc VD VE dans lesquelles X,, X2, Zl , Z2, m et n ont les significations indiquées ci-dessus. Dans ce cas, m=l et n=0. Les composés VA, VB, Vc, VD et VE sont donc dérivés d'un cycle à trois atomes de carbone, cycles éventuellement formés à partir d'un composé de départ oléfinique. Ce sont donc des dérivés de cyclopropane. Les deux chaînes amides sont chacune fixée à un atome de carbone du cycle. Toutes les familles sont englobées. Pour tous les composés V, il est possible d'avoir les configurations cis ou trans. L'invention a pour objet les composés de formule I dans laquelle n+m est égal à 2, et répondant à la formule générale XXII XXII dans laquelle T et W ont les significations indiquées ci-dessus. 15 Dans ce cas, la somme m+n=2. Les composés XXII sont donc dérivés d'un cycle à quatre atomes de carbone. Les composés XXII sont des dérivés de cyclobutane. Les deux chaînes amides sont chacune fixées à un atome de carbone du cycle. Elles peuvent être portées par des carbones adjacents ou séparés par un autre atome de carbone du cycle. 20 Toutes les familles sont englobées. Pour tous les composés XXII, il est possible d'avoir les configurations cis ou trans.10 L'invention a aussi pour objet les composés de formule I dans laquelle n est égal à 0 et m est égal à 2, et répondant aux formules XXIIA, XXIIB, XXIIC, XXIIn et XXIIE X, _ x1 . xt z, XXIIA XXIIB XXIIn XXHE dans lesquelles XI, X2, Z, , Z2, m et n ont les significations indiquées ci-dessus. Dans ce cas, la somme m+n=2 avec n=0 et m=2. Les composés XXIIA, XXIIB, XXIIC, XXIIn et XXIIE sont donc dérivés d'un cycle à quatre atomes de carbone. Les composés XXII sont des dérivés de cyclobutane. Les deux chaînes amides sont chacune fixées à un atome de carbone du 10 cycle ; elles sont portées par des atomes de carbone adjacents. Toutes les familles sont englobées. Pour tous les composés XXIIn, XXIIB, XXIIC, XXIID et XXIIE, il est possible d'avoir les configurations cis ou trans. 15 L'invention a aussi pour objet les composés de formule I dans laquelle n est égal à 1 et m est égal à 1 et répondant aux formules XXIIF, XXII c,XXIIH, XXIII et XXIIJ représentées ci-après : XXIIF XXIIB XXIII XXIIJ dans lesquelles X1, X2, Z, , Z2, m et n ont les significations indiquées ci-dessus. 20 Dans ce cas, la somme m+n=2 avec n=l et m=1. Les composés XXIIF, XXIIG, XXII, XXIII et XXIIJ sont donc dérivés d'un cycle à quatre atomes de carbone. Les composés XXII sont des dérivés dè cyclobutane. Les deux chaînes amides sont chacune fixées â un atome de carbone du cycle ; elles sont portées par des atomes de carbone séparés par un autre atome de carbone, sur le cycle. Toutes les familles sont englobées. Pour tous les composés XXIIF, XXIIG, XXIIH, XXIII et XXIIJ, il est possible d'avoir les configurations cis ou trans. 1 O. L'invention a aussi pour objet les composés de formule I dans laquelle n+m est égal à 3 et répondent à la formule générale VI dans laquelle T et W ont les significations indiquées ci-dessus. 15 Dans ce cas, la somme m+n=3. Les composés VI sont donc dérivés d'un cycle à cinq atomes de carbone. Les composés VI sont des dérivés de cyclopentane. Les deux chaînes amides sont chacune fixées à un atome de carbone du cycle. Elles peuvent être portées par des carbones adjacents ou séparés par un autre atome de carbone du cycle. 20 Toutes les familles sont englobées. Pour tous les composés VI, il est possible d'avoir les configurations cis ou trans. L'invention a aussi pour objet les composés de formule I dans laquelle n est égal à 0 et m 25 est égal à 3 et répondant aux formules VIA, VIE, VIE, VIn et VIE représentées ci-après : VIA VIB VID VIE dans lesquelles XI, X2, Z, , Z2, m et n ont les significations indiquées ci-dessus. Dans ce cas, la somme m+n=3 avec n=0 et m=3. Les composés VIA, VIB, VIc, VID et VIE sont donc dérivés d'un cycle à cinq atomes de carbone. Les composés VI sont des dérivés de cyclopentane. Les deux chaînes amides sont chacune fixées à un atome de carbone du cycle ; elles sont portées par des atomes de carbone adjacents. Toutes les familles sont englobées. Pour tous les composés VIA, VIB, VIc, VID et VIE, il est possible d'avoir les configurations cis ou 10 trans. L'invention a aussi pour objet les composés de formule I dans laquelle n est égal à 1 et m est égal à 2 et répondant aux formules VIF, VIG, VIH, VII et VI2 représentées ci-après : X2 VII Z2 VIJ 15 dans lesquelles XI, X2, Z, , Z2, m et n ont les significations indiquées ci-dessus. Dans ce cas, la somme m+n=3 avec n=1 et m=2. Les composés VIF, VIG, VIE, VII et VIT sont donc dérivés d'un cycle à cinq atomes de carbone. Les composés VI sont des dérivés de cyclopentane. 20 Les deux chaînes amides sont chacune fixées à un atome de carbone du cycle ; elles sont portées par des atomes de carbone séparés par un autre atome de carbone, sur le cycle. Toutes les familles sont englobées. Pour tous les composés VIF, VIG, VIH, VII et VI, , il est possible d'avoir les configurations cis ou trans. L'invention a pour objet les composés représentés par la formule 1 cis dans lesquels les groupes T et W sont en cis l'un de l'autre, I cis dans laquelle T, W, m et n ont les significations indiquées ci-dessus. Ces composés sont des isomères« cis » car les deux chaînes portées par le cycle sont situées du même côté du cycle. L'invention a pour objet les composés représentés par la formule I trans dans lesquels les 15 groupes T et W sont en trans l'un de l'autre I trans dans laquelle T, W, m et n ont les significations indiquées ci-dessus. Ces composés sont des isomères« trans » car les deux chaînes portées par le cycle sont situées de 20 part et d'autre du cycle. 10 297.8441 L'invention a pour objet les composés représentés par la formule générale I dans laquelle X, X2, Z, et Z2 sont représentés comme ci-après H ; /NR O - R' et R2 représentant, indépendamment l'un de l'autre, des chaînes linéaires ou ramifiées, 5 possédant de 1 à 30 atomes de carbone, - les groupes R'-Y, et R2-Y2 représentant, indépendamment l'un de l'autre, l'un des groupes de formules suivantes, le radical amine pouvant être éventuellement substitué, le radical hydroxyle terminal pouvant être éventuellement couplé à un reste osidique choisi parmi les a- ou (3-furanoses et les a- ou (3-pyranoses, ou couplé à une chaîne aliphatique linéaire comportant un ou plusieurs 10 atomes d'oxygène, de formules représentées ci-dessous, dans lesquelles varie de 1 à 12, 5' varie de 1 à 5, ou un radical pouvant être éventuellement protégé, 15 Ra représentant un groupe alkyle linéaire ou ramifié comportant de 1 à 4 atomes de carbone, éventuellement substitués par un ou plusieurs atomes d'halogène, p (H2C)-OH p(H C)-CH p (H2C) -OTHP p (H2C) - NH 2 p(HyC)-OCOCH3 N~ R'-:. y Z2 RY2 2 H- RI Zi H/ ~yy s' / THP (CH2)p /_\/OH /_\CH3 (CH2)p (CH2)p \ /NI-12 (CH2)p /OCOCI-43 (CH2)p \ /CH3 }--- \ j THP (Ci2)p / (CH2)p P` HpC { NHBoc p( H2C) NH Boc / NHBoc NHBoc HO HO HO 1-10 HO HO OH dans lesquelles ^ p varie de 1 à 28, ^ r varie de 1 à 29, ^ s+t varie de 2 à 27, - s+u varie de 2 à 24, - s+v varie de à 2 à 21. Les différentes natures de X,, X2, Zl et Z2 ont été représentées comme ci-dessus. Les deux chaînes latérales comportent chacune une fonction amide. La longueur des chaînes varie, ces deux chaînes étant choisies indépendamment l'une de l'autre. Les parties R' et R2 sont saturées ou insaturées, contenant alors de une à trois doubles liaisons carbone/carbone portant éventuellement un atome d'halogène ou un groupe -CF3. Les parties terminales Y, et Y2 sont des hydrogène, des fonctions alcools protégées ou non, amines 15 protégées ou non, en particulier sous forme -NHBoc et de ses dérivés, acides carboxyliques ou esters, comme cela a été décrit précédemment. 20 L'invention concerne les composés répondant à l'une des formules ci-après. composé 1 composé 2 19 OH 25 composé 3 composé 4 OH NH composé 5 composé 6 OH OH composé 9 composé 10 NH composé 11 composé 12 composé 13 composé 14 OH composé 15 OH composé 17 10composé 18 composé 19 composé 20 OH 0 o composé 22 o o composé 23 composé 24 o oH composé 27 composé 29 composé 30 o composé 31 composé 32 composé 33 composé 34 composé 35 composé 36 composé 37 composé 38 composé 39 composé 40 F OH composé 41 composé 42 F composé 45 composé 46 composé 47 Fcomposé 48 F F F composé 49 composé 50 F composé 51 composé 52 F composé 53 composé 54 composé 55 composé 56 o o o composé 57composé 58 composé 59 composé 60 composé 61 composé 62 composé 63 composé 64 composé 65 composé 66 OTHP composé 67 composé 68 F composé 69 composé 70 OTHP composé 71 composé 72 F composé 73 composé 74 0 composé 75 composé76 composé 77 composé 78 composé 79 composé 80 composé 81 composé 82 2978441. 30 composé 83 composé 84 o composé 85 composé 86 F composé 87 composé 88 o o o composé 89 composé 90 composé 93 composé 95 composé 94 F 2978441.. composé 99 composé 100 o. Fit \% composé 102 xcr composé 103 composé 104 F SitBdPl OSiBcPh OSitBdPh OSIBdPh F composé 105 composé 106 o OTHP O F composé 110 F F composé 111 composé 112 OTHP F composé 113 F composé 114 WoH F composé 115 composé 116 composé 119 composé 120 composé 117 F composé 118 F composé 121 composé 122 composé 123 composé 124 composé 125 composé 126 10- composé 127 composé 128 composé 129 composé 130 1=4 composé 131 composé 132 o .2978441 composé 133 composé 134 composé 135 composé 136 composé 137 composé 13 8 composé 141 composé 139 o composé 140 composé 142 composé 143 composé 144 composé 145 o HN O o- HN/O\ o o composé 146 composé 147 composé 149 composé 148 composé 150 composé 151 F composé 152 composé 153 composé 154 composé 156 composé 155 10 composé 157 composé 158 composé 159 composé 160 composé 161 L'invention s'étend à un procédé de préparation de composés de formule I, cis et trans, représentée par la formule ci-apres T=X1 ou Zl' W=X2 ou Z2 10 dans laquelle T est égal à X, ou W est égal à X2 ou Z2, XI, X2, Zl et Z2 représentent indépendamment l'un de l'autre un groupe choisi parmi : N Y, H NR X 2 Y2 N/R\Y H qui comprend une réaction d'amidification entre un composé de formule VII VII dans lequel - m = 1, 2, 3 et n = 0, 1, sous réserve que m+n soit différent de 4, 10 - A = -NH2, -0OOH, -NH-CO-R'-Y, ou -CO-NH-R'-Y,, - B = -NH2, -COOH, -NH-CO-Ri-Y, ou -CO NH-R'-YI, dans lesquels - - Yt représente o -H, o -OH, o -OH éventuellement couplé à un composé osidique pouvant être un a- ou (3-furanose ou un a ou (3-pyranose, o -O0OCH3, 15 20 ...2978441 10 15 OSi(Ra)3, ^ -OSitBdPh de formule, - -OSitBdM de formule, -000H, - COORb, - NHH2, ^ - fl? K , - -.N ~~GGC+~-0ORe , n NHCOORf , - le groupe -OTHP de formule, o un groupe dérivé de l'éthylèneglycol de formule, dans laquelle S varie de 1 à 12, un groupe dérivé du propylèneglycol de formule, dans laquelle 8' varie de 1 à ^ un groupe -O-CH(RZ)-O-Q, dans lequel RZ représente un groupe alkyle ou araikyle comportant de 1 à 30 atomes de carbone, qui peut, mais pas forcément, contenir une ou plusieurs fonctions éthers et éventuellement un hydroxyle terminal, Ra, Rb, RÇ, Rd représentent des groupes alkyles linéaires ou ramifiés comportant de 1 à 4 atomes de 5 carbone, éventuellement substitués par un ou plusieurs atomes d'halogène, ou des chaînes carbonées Interrompues par des atomes d'oxygène ou de soufre, des groupes benzyles éventuellement substitués par un atome d'halogène, un groupe hydroxy, un groupe alkoxy comportant de 1 à 8 atomes de carbone, Re représente un groupe alkyle linéaire ou ramifié contenant de 1 à 4 atomes de carbone, un groupe phtalimido (dans ce cas le NH est remplacé par N), un groupe benzyle éventuellement substitué par un atome d'halogène, un groupe hydroxy, un groupe alkoxy et en particulier substitué par le groupe méthoxy en position para, Rf représente un groupe alkyle linéaire ou ramifié comportant de 1 à 4 atomes de carbone, éventuellement substitué par un ou plusieurs atomes d'halogène, ou une chaîne carbonée interrompue par des atomes d'oxygène ou de soufre, un groupe phényle, un groupe benzyle éventuellement substitué par un atome d'halogène, un groupe hydroxy, un groupe alkoxy et en particulier substitué par le groupe méthoxy en position para, le groupe phosphonate de formule 0 dans lequel R4 représente un groupe alkyle linéaire ou ramifié, comportant de 1 à 6 atomes de carbone, en particulier méthyle, éthyle, isopropyle, tertiobutyle, (OR4)2 formant éventuellement un cycle entre les deux atomes d'oxygène, les groupes (OR4)2 provenant notamment de diols tels que l'éthane-1,2- 25 diol, le propane-1,3-diol, le 2,2-diméthylpropane-1,3-diol, le 2,3-diméthylbutane-2,3-diol (pinacol), le 2-méthylbutane-2,3-diol, le 1,2-diphényléthane-1,2-diol, le 2-méthylpentane-2,4-diol, le 1,2- dihydroxybenzène (catéchol), le 2,2'-azanediyldiéthanol, le 2,2'-(butylazanediyl)diéthanol, l'acide 2,3-dihydroxysuccinique (acide tartrique) et ses esters, ou (OR4)2 provient notamment de diacides tels que l'acide 2,2'-(méthylazanediyl)diacétique (mida), - - R' représente une chaîne linéaire ou ramifiée possédant de 1 à 30 atomes de carbone, R' étant saturée ou insaturée, substituée ou non par un atome d'halogène, - et dans le cas d'une insaturation, la double liaison C=C étant éventuellement substituée par un atome de fluor, de chlore, de brome ou par un groupe -CF3, - et dans le cas où R' ne comprend qu'un seul carbone, il est choisi parmi les, groupes de formule « -CHV- », dans laquelle V représente -H, -F, -Cl ou -Br, Y, étant alors égal au groupe phosphonate -P(0)(OR4)2, R4 ayant la signification indiquée ci-dessus, sous réserve que ^ si A= -NH2 alors BL -COOH, - si A= -COOH alors B -NH2, - si A= -NH-CO-R'-Y, alors B -CO-NH-R'-Y,, - si A= -CO-NH-R'-Y, alors B -NH-CO-R'-Y,, - si A= -NH-CO-R'-Y, alors B -NH-CO-R'-Y,, - si A= -CO-NH-R'-Yi alors B -CO-NH-R'-Y,, et un composé de formule générale VIII R2 D Y2 dans lequel Y2 a la même signification que Y,, R2 a la même signification que R', 25 Y, et Y2 pouvant être égaux ou différents, R' et R2 pouvant être égaux ou différents, - D = -NH2 ou -CO-R5 dans laquelle R5 représente 30 - un groupe hydroxyle-OH, 47 - un groupe alkoxy -OR6, R6 représentant une chaîne alkyle linéaire ou ramifiée comprenant de 1 à 8 atomes de carbone, ^ un atome de chlore -CI, ^ un groupe acyloxy -O-CO-R', R7 représentant une chaîne alkyle linéaire ou ramifiée comprenant de 1 à 8 atomes de carbone, ou étant éventuellement égal à -R2-Y2, les significations de R2 et de Y2 étant celles précédemment définies, ^ un groupe dérivé du benzotriazole -OR', de formule, 10 en particulier dérivé de DHATU (2-(1H-7-Azabenzotriazol-l-yl)-1,1,3,3-tétraméthyl uronium hexafluorophosphate méthanaminium), HBTU (2-(1H-Benzotriazole-1-yl)-1,1,3,3-tétraméthyluroniurn hexafluorophosphate, HOBt (1-hydroxybenzotriazole), 15 aBOP(Benzotriazole-l-yl-oxy-tris-(diméthylamino)-phosphonium hexafluorophosphate), ~PyBOP(Benzotriazole-1-yl-oxy-tris-(diméthylamino)-phosphonium hexafluorophosphate), - un groupe dérivé d'un carbodiimide, de formule, dans laquelle R9 et R10, différents ou égaux, représentent un groupe alkyle comportant de 1 à 10 atomes de carbone, linéaire, ramifié ou cyclique, éventuellement substitué par un groupe amino, en particulier cyclohexyle, isopropyle, éthyle, diméthylpropylamino, ledit carbodiimide étant notamment choisi parmi les composés suivants DCC (N,N'-Dicyclohexylcarbodiimide), EDCI (1-éthyl-3-(3-diméthylaminopropyl) carbodiimide), DIC (N,N'-Diisopropylcarbodiimide), - Si A=B= -NH2 alors D= -CO-R5, 1 Si A=B= -COOH alors D= -NH2, - Si AB avec A= -NH2 et B= -NH-CO-R'-Y,, alors D=-CO-R5, - Si AB avec A= -COOH et B=-CO-NH-R'-Y,, alors D=-NH2, - Si A~B avec A= -COOH et B= NH-CO-RI-Yi alors D=-NH2, - Si AB avec A= -NH2 et B= -CO-NH-RI-Y,, alors D= -CO-R5, ladite réaction d'amidification permettant d'obtenir les composés de formule I représentée ci-dessus. 15 Si R5 est un groupe hydroxyle -OH, alors le composé VIII est un acide carboxylique. Si R5 est un groupe alkoxy -OR6, alors le composé VIII est un ester. Si R5 est un atome de chlore -Cl, alors le composé VIII est un chlorure d'acide. 20 Si R5 est un groupe acyloxy -O-CO-R', alors le composé VIII est un acide anhydride symétrique si R' est égal à -R2-Y2, mixte dans le cas contraire. Si R5 est un groupe dérivé du benzotriazole -OR', alors le composé VIII est un ester activé. Si R5 est un groupe dérivé de carbodiimide, alors le composé VIII est un 0-acylisourée. - « Si A=B= -NH2 alors D= -CO-R5 »: le composé VII porte deux groupes NH2, alors on utilisera deux équivalents de l'acide carboxylique de formule générale VIII. Deux couplages ont donc lieu au cours de la même étape de réaction, permettant d'obtenir les chaînes latérales portant la fonction amide. La molécule obtenue est symétrique, les chaînes amides latérales étant toutes les deux fixées au cycle par l'atome d'azote, toutes les deux ayant les mêmes parties RI et YI, les significations de RI et Y, étant indiquées précédemment. 10 ^ « Si A=B= -COOH alors D= -NH2 » : le composé VII porte deux groupes -COOH, alors on utilisera deux équivalents de l'amine de formule générale VIII. Deux amidifications ont donc lieu au cours de la même étape de réaction. La molécule obtenue est symétrique, les chaînes amides latérales étant toutes les deux fixées au cycle par le groupe carbonyle, toutes les deux ayant les mêmes parties R' et Y,. - « Si AB avec A= -NH2 et B= NH-CO-R'-Y,, alors D=-CO-R5 » : le composé VII possède déjà une chaîne latérale obtenue par une précédente amidification. Au cours de la dernière étape de réaction du procédé, on effectue alors la seconde amidification. Le composé obtenu possède alors deux chaînes amides fixées au cycle par l'atome d'azote, mais différentes par les natures respectives de R' et R2 et de Y, et Y2 Les significations de R',R2, Y, et Y2 ont été précédemment définies. Ces composés sont qualifiés de dissymétriques car les chaînes latérales sont différentes. Dans ce procédé, on réalise donc deux amidifications mais en deux étapes différentes de façon à pouvoir obtenir des chaînes latérales de natures différentes. - « Si AB avec A= -COOH et B=-CO-NH-R'-Y,, alors D=-NH2 » : le composé VII possède déjà une chaîne latérale obtenue par une précédente amidification. Au cours de la dernière étape de réaction du procédé, on effectue alors la seconde amidification. Le composé obtenu possède alors 2 chaînes amides fixées au cycle par le carbonyle, mais différentes par les natures respectives de R' et R2 et de Y, et Y2 dont les significations ont été précédemment définies. Ces composés sont qualifiés de dissymétriques. Dans ce procédé, on réalise donc deux amidifications mais en deux étapes différentes de façon à pouvoir obtenir des chaînes latérales de natures différentes. - « Si AB avec A= -COOH et B= -NH-CO-R'-Y,, alors D=-NH2 » ou « si AeB avec A= -NH2 et B= -CO-NH-R'-Y,, alors D= -CO-R5 », la dernière étape du procédé est une amidification conduisant à des composés dans lesquels une chaîne latérale est fixée au cycle par l'azote tandis que l'autre y est fixée par le carbonyle. On obtient alors la famille des composés mixtes. Les composés ont une configuration cis ou trans qui dépend de la configuration du produit de départ. L'invention concerne un procédé de préparation des composés de formule IA et IB, cis et trans, représentés par les formules figurant ci-après : xl xA dans lesquelles X, et X2 ont les significations indiquées ci-dessus, qui comprend une amidification entre un composé de formule VII représenté ci-après : dans lequel m = 1, 2, 3 et n= 0, 1, sous réserve que m+n soit différent de 4, A et B sont tels que : 10 - A = B = -NI-12, - ou A = -NH2 et B= -NH-CO-R'-Y,, et un composé de formule V HA 2 R5 R2 dans lequel 15 R2, R5 et Y2 ont les significations indiquées ci-dessus, lequel procédé permet d'obtenir les composés de formule IA et IB représentés ci-dessus. 297844.1 Par ce procédé, deux familles de composés sont accessibles. Il s'agit des familles de composés dans lesquelles les chaînes amides latérales sont branchées au cycle par les atomes d'azote. On englobe les composés symétriques et dissymétriques précédemment définis. Si le produit cible porte deux groupes X,, il est symétrique. Si le produit cible porte un groupe X, et un groupe X2, il est disymétrique. Les formules de XI et de X2 sont rappelées ci-après : H - Si « A B = -NH2 », alors les deux amidifications ont lieu dans la même étape de réaction avec deux équivalents du composé de formule VIIIA. Le composé est symétrique. 10 - Si « A = -NH2 et B= -NH-CO-R'-Yi », alors la seconde amidification se fait avec un équivalent du composé de formule VIIIA. Le composé est dissymétrique. L'invention concerne en particulier un procédé de préparation des molécules symétriques de 15 formule IIA cis et trans représentés ci-après o HN Fe /- Y1 HN'R\ o dans lesquels - m = 1, 2, 3 et n = 0, 1, sous réserve que m+n soit différent de 4, 2:978441 - R',Y1 ont les significations indiquées ci-dessus, comprenant la réaction entre une diamine de formule VIIA représentée ci-après : NH2 NH2 dans laquelle m et n ont les significations indiquées ci-dessus, et un composé de formule VIIIA 10 R', R5 et Y, ayant les significations indiquées ci-dessus, lequel procédé permet d'obtenir les composés de formule IIA représentés ci-dessus. L'amidification est réalisée de façon classique, en particulier 15 par réaction entre un acide carboxylique et une amine (R5= -OH) par réaction entre une forme activée de l'acide et une amine, la forme activée pouvant être un chlorure d'acide (R5= -Cl), un anhydride (R5= -O-CO-R'), par réaction entre une forme activée de l'ester, ladite activation étant obtenue à partir d'un dérivé de benzotriazole ou d'un dérivé de carbodiimide. 20 Ce couplage est réalisé en série cis ou trans et est représenté par l'équation chimique suivante : R5 /Y1 v>zA Il suffit donc d'une étape pour préparer ces composés. L'invention concerne en particulier un procédé de préparation des molécules dissymétriques de formule IIB cis et trans représentée ci-après HN ~R1 H2N HN~R~~Yt o +2éq R5 RI ;A Y1 RI et R2 différents IIB o dans laquelle - m = 1, 2, 3 et n 0, 1, sous réserve que m+n soit différent de 4, - RI, R2 , YI et Y2 ont les significations indiquées ci-dessus, 10 à condition que RI et R2 soient différents l'un de l'autre, - YI et Y2 étant identiques ou différents, qui comprend une réaction entre un aminoamide de formule VIID représenté par la formule figurant ci-après Y' HN R, NH2 "ID dans laquelle R1,Y,, m et n ont les significations indiquées ci-dessus, et un composé de formule VIIIA VIII A 10 dans lequel R2, R5 et Y2 ont les significations indiquées ci-dessus, lequel procédé permet d'obtenir les composés de formule IIB représentés ci-dessus. La préparation des molécules dissymétriques nécessite quatre étapes réactionnelles. Dans le schéma ci-après, la dernière étape est représentée : il s'agit de la seconde amidification, réalisée en série cis ou trans o Y, YzIIB /YI HN VIII, HN R1 Le composé obtenu possède alors deux chaînes amides fixées au cycle par l'atome d'azote, mais différentes par les natures respectives de R' et R2 et de YI et Y2. « R'-YI » est apporté au cours de la première amidification tandis que « R2-Y2 » est apporté au cours de la seconde amidification. Procéder de cette façon permet de préparer des composés dissymétriques. L'invention concerne en particulier un procédé de préparation du composé VIID représenté par la formule figurant ci-après o HN. NH2 VIID 10 par déprotection de la fonction amine du composé IX représenté ci-après : o HNRi HN Rp. dans lequel ^ Rp' est un groupe protecteur des amines choisi parmi : o -COL, dans lequel Re représente un groupement alkyle linéaire ou ramifié 15 contenant de 1 à 4 atomes de carbone, un groupement phtalimido (dans ce cas le NH est remplacé par N), un groupe benzyle éventuellement substitué par un atome d'halogène, un groupe hydroxy, un groupe alkoxy et en particulier substtué par le groupe méthoxy en position para, COORf, dans lequel Rf représente un groupe alkyle linéaire ou ramifié comportant de 1 à 4 atomes de carbone, éventuellement substitué par un ou plusieurs atomes d'halogène, plus particulièrement méthyle, éthyle, propyle, tert-butyle, ou une chaîne carbonée interrompue par des atomes d'oxygène ou de soufre, un groupe phényle, un groupe benzyle ou ses dérivés, éventuellement substitués par un atome d'halogène, un groupe hydroxy, un groupe alkoxy et en particulier substitué par le groupe méthoxy en position para, le groupe benzyle ou ses dérivés, ^ m = 1, 2, 3 et n = 0, 1, sous réserve que m+n soit différent de 4, - R1, Y, ont les significations indiquées ci-dessus, lequel procédé permet d'obtenir les composés de formule VIID représentés ci-dessus. Pour réaliser les deux amidifications distinctes qui conduisent aux composés dissymétriques, une 15 fonction amine du composé cyclique a été préalablement protégée sous la forme « -NH-Rp' ». L'équation suivante permet de représenter l'étape de déprotection, rendant la seconde fonction amine à nouveau utilisable pour un couplage de type peptidique : o 10 o H N /\ R1 HNR, /Yt N H2 N R. HN 20 L'invention concerne en particulier un procédé de préparation du composé IX représenté par la formule figurant ci-après : HN~ Rp. qui comprend une monoacylation entre la diamine X dont une fonction amine est bloquée par un groupe protecteur HN Rp' dans laquelle Rp' est un groupe protecteur des amines choisi parmi : -CORe, dans lequel Re représente un groupement alkyle linéaire ou ramifié contenant de 1 à 4 atomes de carbone, un groupement phtalimido (dans ce cas le NH est remplacé 10 par N), un groupe benzyle éventuellement substitué par un atome d'halogène, un groupe hydroxy, un groupe alkoxy et en particulier subsitué par le groupe méthoxy en position para, -COORf, dans lequel Rf représente un groupe alkyle linéaire ou ramifié comportant de 1 à 4 atomes de carbone, éventuellement substitué par un ou plusieurs atomes d'halogène, plus particulièrement méthyle, éthyle, propyle, tert-butyle, ou une chaîne carbonée 15 interrompue par des atomes d'oxygène ou de soufre, un groupe phényle, un groupe benzyle ou ses dérivés, éventuellement substitués par un atome d'halogène, un groupe hydroxy, un groupe alkoxy et en particulier subsitué par le groupe méthoxy en position para, le groupe benzyle ou ses dérivés, .2978441 10 ^ m = 1, 2, 3 et n = 0, 1, sous réserve que m+n soit différent de 4, - R', Y, ont les significations indiquées ci-dessus, et un composé de formule VIIIA représenté par. la formule figurant ci-après : dans laquelle R' , R5 et Yl ont les significations indiquées ci-dessus, lequel procédé permet d'obtenir les composés de formule IX représentés ci-dessus. Cette réaction est la première du procédé de préparation des composés dissymétriques dont le branchements des chaînes latérales s'effectuent par l'atome d'azote. Une fonction amine étant bloquée, le premier couplage permet d'obtenir le composé IX. L'équation chimique de ce couplage figure ci-après HN Lx X VIII, La première chaîne latérale est ainsi fixée au cycle. L'invention concerne en particulier un procédé de préparation du composé X représenté par 20 la formule figurant ci-après HN X par protection de la diamine de formule, représentée ci-après NH2 VIIA dans laquelle m = 1, 2, 3 et n = 0, 1, sous réserve que m+n soit différent de 4, lequel procédé permet d'obtenir les composés de formule X représentés ci-dessus. 10 Une seule fonction amine du composé VIIA est protégée de façon à pouvoir effectuer la première amidification. La protection s'effectue par transformation en fonction amide ou carbamate. Elle est représentée par l'équation suivante protection n >. NH2 vnA HN Rp. X HN~ /Y1 L'invention concerne en particulier un procédé de préparation des composés de formule IIB cis et trans représentée ci-après ; RI et RZ différents II$ dans laquelle - m = 1, 2, 3 et n = 0, 1, sous réserve que m+n soit différent de 4, - R', R2, Y, et Y2 ont les significations indiquées ci-dessus, à condition que R' et R2 soient différents l'un de l'autre, - Y, et Y2 étant identiques ou différents, - procédé comprenant une 1ère étape qui consiste à protéger un des groupes amino de la diamine de formule VIIA représentée ci-après m et n ayant les significations indiquées ci-dessus, pour obtenir le composé X de formule suivante : HN RI,2978441 dans laquelle - m et n ont les significations indiquées ci-dessus, ^ Rp' est un groupe protecteur des amines choisi parmi -CORe, dans lequel Re représente un groupement alkyle linéaire ou ramifié contenant de 1 à 4 atomes de carbone, un groupement phtalimido (dans ce cas le NH est remplacé par N), un groupe benzyle éventuellement substitué par un atome d'halogène, un groupe hydroxy, un groupe alkoxy et en particulier subsitué par le groupe méthoxy en position para, -COORf, dans lequel Rf représente un groupe alkyle linéaire ou ramifié 10 comportant de 1 à 4 atomes de carbone, éventuellement substitué par un ou plusieurs atomes d'halogène, plus particulièrement méthyle, éthyle, propyle, tert-butyle, ou une chaîne carbonée interrompue par des atomes d'oxygène ou de soufre, un groupe phényle, un groupe benzyle ou ses dérivés, éventuellement substitués par un atome d'halogène, un groupe hydroxy, un groupe alkoxy et en particulier substitué par le groupe méthoxy en position para, 15 G le groupe benzyle ou ses dérivés, procédé comprenant une deuxième étape qui consiste à effectuer une amidification entre le composé X représenté ci-dessus et un composé de formule VIIIA représenté par la formule figurant ci-après R5 dans laquelle Ri , R5 et YI ont les significations indiquées ci-dessus, pour obtenir le composé IX possédant la formule suivante: o dans lequel m,n, R', YI et Rp. ont les significations indiquées ci-dessus, procédé comprenant une troisième étape qui consiste à effectuer une déprotection du groupe amino du composé IX pour obtenir le composé de formule VIID représenté ci-après : NH2 vIID 10 dans laquelle m,n, R1, Y1 ont les significations indiquées ci-dessus, > procédé comprenant une quatrième étape qui consiste à effectuer une amidification entre le composé VIID ci-dessus et le composé VIIIA de formule suivante o sous réserve que R' et R2 soient différents l'un de l'autre, pour obtenir le composé cible IIB /--., /-Y' HN RI R1 et R2 différents II$ HN \ Y2 m,n, R',R3, Yi, Y2 etRp ayant les significations indiquées ci-dessus. 5 Le procédé de préparation de la famille des composés dissymétriques dont les deux chaînes latérales sont fixées au cycle par l'azote met donc en jeu quatre étapes, réalisées en série cis ou trans. - La première étape consiste à protéger une fonction amine du composé VIIA. - La deuxième étape consiste à effectuer la première amidification par réaction avec 10 un équivalent de composé VIIIA. - La troisième étape consiste à déprotéger la deuxième fonction amine, la rendant disponible pour la quatrième et dernière étape. - La quatrième étape consiste à effectuer la seconde amidification. 15 Cette suite réactionnelle est représentée ci-après : oo HN,, Les chaînes latérales sont différentes car elles ont pour origine des acides carboxyliques ou dérivés différemment substitués, R5-OC-R'-Y1 et R5-OC-R2-Y2. L'invention concerne un procédé de préparation des composés de formule le et ID cis et trans représentés ci-après Z, et Z2 ont les significations indiquées ci-dessus, qui comprend un couplage entre un composé de formule VII vn dans lequel - m = 1, 2, 3 et n = 0, 1, sous réserve que m+n soit différent de 4, 10 - A et B sont tels que : -A=B= -COOH, - ou A = -COOH et B= -CO-NH-R'-Y,, - R' et Y, ont'les significations indiquées ci-dessus, 15 et un composé de formule VIIIB, VIIIB H2 N Y2 dans lequel R2 et Y2 ayant les significations indiquées ci-dessus, lequel procédé permet d'obtenir les composés de formule le et ID . Par ce procédé, deux familles de composés sont accessibles. Il s'agit des familles de composés dans lesquelles les chaînes amides latérales sont fixées sur le cycle par les groupes carbonyles. On englobe les composés symétriques et dissymétriques précédemment définis. Si le produit cible porte deux groupes Zl, il est symétrique. Si le produit cible porte un groupe Zl et un groupe Z2, il est dissymétrique. Les formules de Z, et de Z2 sont rappelées ci-après : 7 ' Y1 N/ R2 Y2 H Z1 - Si « A = B = -COOH », alors les deux amidifications ont lieu dans la même étape de réaction 10 avec deux équivalents de l'amine formule VIIIB. Le composé est symétrique. - Si « A = -COOH et B= -CO-NH-R'-Y, », alors la seconde amidification se fait avec un équivalent de l'amine formule VIIIB. Le composé est dissymétrique. L'invention concerne en particulier un procédé de préparation des molécules symétriques de formule IIIA cis et trans représentés ci-après : H dans lesquels 20 - m = 1, 2, 3 et n = 0, 1, sous réserve que m+n soit différent de 4, 15 66 ,2978441 - R1,Y1 ont les significations indiquées ci-dessus, qui comprend une réaction entre un composé de formule VHB VIIg dans laquelle m, n et R5 ont les significations indiquées ci-dessus, et une amine de formule VIIIB H N~R\Y VIII$ 2 1 10 R1,Y, ayant les significations indiquées ci-dessus, lequel procédé permet d'obtenir les composés de formule IIIA représentée ci-dessus. Ce couplage est réalisé en série cis ou trans et est représenté par l'équation chimique suivante : + 2 éq H2N \Yi VIIIB R N VIIB Il suffit donc d'une étape pour préparer ces composés. L'invention concerne en particulier un procédé de préparation des molécules dissymétriques de formule IIIB cis et trans représentés ci-après H K \ N Y2 H dans lesquels - m = 1, 2, 3 et n = 0, 1, sous réserve que m+n soit différent de 4, - R', R2, Y, et Y2 ont les significations indiquées ci-dessus, à condition que R' et R2 soient différents l'un de l'autre, 10 - Yl et Y2 sont identiques ou différents, qui comprend une réaction entre un composé de formule XI représentée ci-après : dans laquelle 15 m et n ont les significations indiquées ci-dessus, et une amine de formule VHIB 10 VIIIB I-12 N Y2 dans laquelle R2,Y2 ont les significations indiquées ci-dessus, lequel procédé permet d'obtenir les composés de formule IIIB représentée ci-dessus. La préparation de ces molécules dissymétriques nécessite deux ou quatre étapes réactionnelles, selon la méthode `choisie. Dans le schéma ci-après, la dernière étape est représentée : il s'agit du la seconde amidification, réalisée en série cis ou trans : 68 IIIB R1 et R2 différents H HOOC 15 XI Le composé obtenu possède alors deux chaînes amides fixées au cycle par le groupe carbonyle. Elles différent par les natures respectives de R1 et R2 et de YI et Y2 , Procéder de cette façon permet de préparer des composés dissymétriques. L'invention concerne aussi un procédé de préparation du composé XI représenté ci-après : dans lequel R1,Y1, m et n ont les significations indiquées précédemment, par réaction entre un anhydride XX représenté ci-après : dans lequel m et n ont les significations indiquées ci-dessus, et une amine de formule VIIIB H N/R~Y1 VIIIB dans laquelle 10 R1,Y1 ont les significations indiquées ci-dessus, lequel procédé permet d'obtenir les composés de formule XI représentée ci-dessus. La réaction est représentée par l'équation suivante : H2NY, vmB cooH Les composés XI obtenus possèdent la stéréochimie relative cis. L'invention concerne aussi un procédé de préparation des composés de formule IIIB cis représentée ci-après dans laquelle ^ m = 1, 2, 3 et n = 0, 1, sous réserve que m+n soit différent de 4, ^ R', R2, Y, et Y2 ont les significations indiquées ci-dessus, à condition que R' et R2 soient différents l'un de l'autre, ^ Yl et Y2 étant identiques ou différents, - procédé comprenant une 1 ère étape qui consiste à faire réagir un anhydride cyclique de formule XX représentée ci-après xx m et n ayant les significations indiquées ci-dessus, avec une amine de formule VIIIB N/R\Y, VfB H2 dans laquelle R',YI ont les significations indiquées ci-dessus, pour obtenir le composé XI cis de formule suivante : XI 15 dans lequel R',YI, m et n ont les significations indiquées ci-dessus, - procédé comprenant une seconde étape qui consiste à effectuer une amidification par réaction entre le composé XI et une amine de formule VIIIB représentée ci-après : / VIIIB H2N Y2 pour obtenir le composé cible IIIB de stéréochimie relative cis: H dans laquelle R2,Y2 ont les significations indiquées ci-dessus, à conditions d'être respectivement différents de R' et de YI, m,n, R',R2, Y,, Y2 ayant les significations indiquées ci-dessus. Cette méthode possède l'avantage de ne nécessiter que deux étapes, depuis le produit de départ XX jusqu'à la molécule cible de formule IIIB. Elle est utilisée pour préparer à la fois les composés cyclopropaniques, cyclobutaniques et cyclopentaniques, chaînes latérales en -1,2 et en -1,3. Les molécules obtenues sont de configuration cis. Dans l'équation suivante, les deux étapes sont représentées : xx Les composés XX sont représentés ci-après : n=1 ; m=1 n=0 ; m=3 n=1 ; m=2 L'invention concerne en particulier un procédé de préparation du composé XI représenté ci-après dans lequel R',Y1, m et n ont les significations indiquées ci-dessus, par déprotection de la fonction acide carboxylique bloquée sous la forme d'une fonction ester du composé XII représenté ci-après COORP XII dans lequel 10 - Rp est un groupe benzyle ou alkyle linéaire ou ramifié comportant de 1 à 4 atomes de carbone, et en particulier méthyle, éthyle, isopropyle, tertiobutyle, ^ m = 1, 2, 3 et n = 0, 1, sous réserve que m+n soit différent de 4, - R', Y, ont les significations indiquées ci-dessus, 15 lequel procédé permet d'obtenir les composés de formule XI représentée ci-dessus. Pour procéder en deux réactions distinctes de façon à préparer des composés dissymétriques, une fonction acide du composé cyclique a été préalablement protégée sous la forme ester « -COORp». L'équation suivante permet de représenter l'étape de déprotection, rendant la seconde fonction acide 20 à nouveau utilisable pour une amidification COOR, COOH xt L'invention concerne en particulier un procédé de préparation du composé XII représenté par la formule ci-après C OORP X dans laquelle ^ Rp est un groupe benzyle ou alkyle linéaire ou ramifié comportant de 1 à 4 atomes de carbone, et en particulier méthyle, éthyle, isopropyle, tertiobutyle, ^ m = 1, 2, 3 et n 0, 1, sous réserve que m+n soit différent de 4, ^ R', Y, ont les significations indiquées ci-dessus, qui comprend une amidification par réaction entre le composé XIII dont une fonction acide est bloquée par un groupe protecteur sous forme d'ester : COOH COORP XIII dans lequel - Rp a la signification indiquée ci-dessus, ^ m = 1, 2, 3 et n = 0, 1, sous réserve que m+n soit différent de 4, et une amine de formule VIIIB R~ \ H2N- YI VIIIB R',Y, ayant les significations indiquées ci-dessus, lequel procédé permet d'obtenir les composés de formule XII représentée ci-dessus. Ce couplage est le premier du procédé de préparation des composés dissymétriques dont les branchements des chaînes latérales s'effectuent par le groupe carbonyle. Une fonction acide étant bloquée, le premier couplage permet d'obtenir le composé XII. L'équation chimique de ce couplage figure ci-après COORP XIII R1 l éq H2N Yi COOR, XII La première chaîne latérale est ainsi fixée au cycle. L'invention concerne en particulier un procédé de préparation du composé XIII représenté 15 par la formule ci-après COOH COORP XIII par protection du diacide de formule VIIB représentée ci-après COOH vu. dans laquelle m = 1, 2, 3 et n = 0, 1, sous réserve que m+n soit différent de 4, lequel procédé permet d'obtenir les composés de formule XIII représentée ci-dessus. Une seule fonction acide du composé VIIB est protégée de façon à pouvoir effectuer la première amidification. La protection s'effectue par formation d'une fonction ester. Elle est représentée par l'équation suivante COOH COO H L'invention concerne en particulier un procédé de préparation des composés de formule IIIB cis et trans représentée ci-après : COOR, XIII H IIIB Rl et R2 différents Y2 dans laquelle - m = 1, 2, 3 et n = 0, 1, sous réserve que m+n soit différent de 4, - R', R2, Y, et Y2 ont les significations indiquées ci-dessus, à condition que R' et R2 soient différents l'un de l'autre, - Y, et Y2 étant identiques ou différents, - procédé comprenant une 1 ère étape qui consiste à protéger par estérification un des groupes carboxyliques du diacide de formule VIIB représentée ci-après COOH COOH VIIB m et n ayant les significations indiquées ci-dessus, pour obtenir le composé XIII de formule suivante COO H COORP 15 dans laquelle - m et n ont les significations indiquées ci-dessus, - Rp est un groupe benzyle ou alkyle linéaire ou ramifié comportant de 1 à 4 atomes de carbone, et en particulier méthyle, éthyle, isopropyle, tertiobutyle, 20 - procédé comprenant une deuxième étape qui consiste à effectuer une amidification entre le composé XIII représenté ci-dessus et le composé VIIIB représenté ci-après 1 H N/R\Y vmB 2 1 dans lequel R' et Y, ont les significations indiquées ci-dessus, pour obtenir le composé monoamide XII possédant la formule suivante: C OOR, XII dans laquelle m,n, R', Y, et Rp ont les significations indiquées ci-dessus, 10 - procédé comprenant une troisième étape qui consiste à effectuer une déprotection du groupe acide du composé XII représenté ci-dessus pour obtenir le composé de formule XI représenté ci-après : COOH X dans laquelle 15 m,n, R', Y, ont les significations indiquées ci-dessus, procédé comprenant une quatrième étape qui consiste à effectuer une seconde amidification entre le composé XI représenté ci-dessus et le composé VIHB de formule suivante : Ra H2NJ Y2 VIIIB R', R2, Yl et Y2 ont les significations indiquées ci-dessus, à condition que R' et R2 soient différents l'un de l'autre, pour obtenir le composé cible IHB : I IIB RI et R2 différents R2 ON Y2 m,n, R',R2, Y,, Y2 et Rp ayant les significations indiquées ci-dessus. 10 Cet autre procédé de préparation de la famille des composés dissymétriques dont les deux chaînes latérales sont fixées au cycle par le groupe carbonyle met donc en jeu quatre étapes, réalisées en série cis ou trans. Les trans sont donc accessibles par cette voie. - La première étape consiste à protéger une fonction acide du composé VIIB. - La deuxième étape consiste à effectuer la première amidification par réaction avec 15 un équivalut d'amine. - La troisième étape consiste à déprotéger la deuxième fonction acide, la rendant disponible pour la quatrième et dernière étape. - La quatrième et dernière étape consiste en une seconde amidification. 20 Cette suite réactionnelle est représentée ci-après : XII XI Les chaînes latérales sont différentes car elles ont pour origine des amines différemment _substituées, H2N-R'-YI et H2N-R2-Y2. L'invention concerne en particulier un. procédé de préparation des composés de formule IE cis et trans représentée ci-après IE dans laquelle 10 m,n, XI et Z2 ont les significations indiquées ci-dessus, qui comprend une réaction entre un composé de formule VII dans lequel 15 - m = 1, 2, 3 et n = 0, 1, sous réserve que m+n soit différent de 4, - AB, A= -COOH et B= -NH-CO-R'-YI, R',YI ont les significations indiquées ci-dessus, et un composé de formule VIIIB R2 VIII3 H2N Y2 dans laquelle - R2 et Y2 ont les significations indiquées ci-dessus, R' et R2 sont identiques ou différents, - Yl et Y2 sont identiques ou différents, lequel procédé permet d'obtenir les composés de formule IE représentée ci-dessus. 10 Ce procédé permet de préparer les composés mixtes. Il s'agit des familles de composés dans lesquelles une chaîne amide latérale est branchée au cycle par l'atome d'azote, tandis que l'autre est branchée au cycle par le groupe carbonyle. Les formules de X, et de Z2 sont rappelées ci-après : H o 81 N Yl X1R2 NRY2 Z2 15 On peut distinguer deux sous-familles, selon que les parties R'-Y, et R2-Y2 sont identiques ou différentes. Le procédé fait intervenir deux amidifications réalisées en deux étapes distinctes, une protection, une déprotection et une modification fonctionnelle de -COOH en -NH2, notamment par réaction de type Curtius. 20 L'invention concerne en particulier un procédé de préparation des composés mixtes de formule IV cis et trans représentée ci-après 82 o HN R1 Iv R 1 et R2 différents ou égaux dans laquelle - m ° 1, 2, 3 et n = 0, 1, sous réserve que m+n soit différent de 4, - R', R2, Y1 et Y2 ont les significations indiquées ci-dessus, R' et R2 sont identiques ou différents l'un de l'autre, ^ Y, et Y2 sont identiques ou différents l'un de l'autre, qui comprend une amidification entre le composé de formule XIV représentée ci-après : o /-YI HN R' XIV COOH dans laquelle R',Y1, m et n ont les significations indiquées ci-dessus, et une amine de formule VIIIB VMB, H2N Y2 R2,Y2 ayant les significations indiquées ci-dessus, lequel procédé permet d'obtenir les composés de formule IV ci-dessus. Cette amidification est réalisée en série cis ou trans. Elle est représentée par l'équation chimique suivante o o iv L'invention concerne en particulier un procédé de préparation des composés XIV cis ou trans de formule représentée ci-après xIv COOH dans laquelle ^ m 1, 2, 3 et n = 0, 1, sous réserve que m+n soit différent de 4, 10 - R', Yl ont les significations indiquées ci-dessus, qui comprend une déprotection de la fonction acide carboxylique, bloquée sous forme de fonction ester dans le composé XV représenté ci-après o HN SRI Y -1 xv COORP dans lequel ^ m,n, R', Y1 ont les significations indiquées ci-dessus, ^ Rp est un, groupe benzyle ou alkyle linéaire ou ramifié comportant de 1 à 4 atomes de carbone, et en particulier méthyle, éthyle, isopropyle, tertiobutyle, lequel procédé permet d'obtenir les composés de formule XIV représentée ci-dessus. Pour procéder en deux amidifications distinctes de façon à préparer des composés mixtes, la 10 fonction acide du composé cyclique a été préalablement protégée sous la forme ester « -COOR,,». L'équation suivante permet de représenter l'étape de déprotection, rendant cette fonction acide à nouveau utilisable pour une seconde amidification : Y 1-41+1 ~ R1 COORP COOH Xrv xv /-YI 15 L'invention concerne en particulier un procédé de préparation des composés XV cis et trans représentés par la formule ci-après o /Y1 xv COORp dans laquelle ^ m = 1, 2, 3 et n = 0, 1, sous réserve que m+n soit différent de 4, - R', YI ont les significations indiquées ci-dessus, - R, est un groupe benzyle ou alkyle linéaire ou ramifié comportant de 1 à 4 atomes de carbone, et en particulier méthyle, éthyle, isopropyle, tertiobutyle, qui comprend une amidification entre l'aminoester de formule XVI représentée ci-après : xv' COORP m, n et Rp ayant les significations indiquées ci-dessus, et un composé de formule générale VIIIA o R5 Rt 15 R' , R5 et YI ayant les significations indiquées ci-dessus, lequel procédé permet d'obtenir les composés de formule XV représentée ci-dessus. Cette amidification est la première du procédé de préparation des composés mixtes. La fonction 20 acide étant bloquée, elle permet d'obtenir le composé XV. L'équation chimique de cette réaction figure ci-après H2N Y, COORP COORP XVI La première chaîne latérale est ainsi fixée au cycle. L'invention concerne en particulier un procédé de préparation de l'aminoester XVI cis ou trans représenté par la formule figurant ci-après COORi, dans laquelle 10 m =1, 2, 3 et n = 0, 1, sous réserve que m+n soit différent de 4, - Rp est un groupe benzyle ou alkyle linéaire ou ramifié comportant de 1 à 4 atomes de carbone, et en particulier méthyle, éthyle, isopropyle, tertiobutyle, qui comprend une réaction de type Curtius réalisée sur le composé de formule XIII représentée ci-15 après, possédant une fonction acide carboxylique bloquée sous forme d'ester et une fonction acide carboxylique transformée en fonction amine, en particulier par réaction de type Curtius : XVI COOH COOR,, m, n et Rp ayant les significations indiquées ci-dessus, lequel procédé permet d'obtenir les composés de formule XVI représentée ci-dessus. Une fonction acide carboxylique est bloquée sous forme d'ester. L'autre fonction acide, libre, est transformée en fonction amine, en particulier par réaction de type Curtius. Cette étape entraîne la modification fonctionnelle du -COOH libre en -NH2, fonction -NH2 alors disponible pour une amidification ultérieure. 10 L'équation de la réaction de type Curtius est représentée ci-après : XVI L'invention concerne en particulier un procédé de préparation du composé XIII cis ou trans 15 représenté par la formule figurant ci-après COOH 000Rp HOOC H2 N C OORp COORp 10 dans laquelle ^ m =1, 2, 3 et n = 0, 1, sous réserve que m+n soit différent de 4, - Rp est un groupe benzyle ou alkyle linéaire ou ramifié comportant de 1 â 4 atonies de carbone, et en particulier méthyle, éthyle, isopropyle, tertiobutyle, qui comprend une protection d'une des deux fonctions acide carboxylique du diacide de formule VIIB coOH cooH m et n ayant les significations indiquées ci-dessus, lequel procédé permet d'obtenir les composés de formule XIII représentée ci-dessus. L'équation de la réaction est représentée ci-après : COOH Protection COOR, COOH Xiv Une seule des deux fonctions acides est alors disponible pour une réaction de type Curtius. L'invention concerne en particulier un procédé de préparation des composés de formule IV 20 cis et trans représentée ci-après 89 o HN ~R1 Iv R1 et R2 différents ou égaux dans laquelle - m = 1, 2, 3 et n = 0, 1, sous réserve que m+n soit différent de 4, - R', R2 , YI et Y2 ont les significations indiquées ci-dessus, R' et R2 sont identiques ou différents, - YI et Y2 sont identiques ou différents, - procédé comprenant une 1 ère étape qui consiste à protéger par estérification un des groupes carboxyliques du diacide de formule VIIB représentée ci-après : COOH vlls COOH m et n ayant les significations indiquées ci-dessus, pour obtenir le composé XIII de formule suivante : 000.Rp dans laquelle - m et n ont les significations indiquées ci-dessus, - Rp est un groupe benzyle ou alkyle linéaire ou ramifié comportant de 1 à 4 atomes de carbone, et en particulier méthyle, éthyle, isopropyle, tertiobutyle, - procédé comprenant une deuxième étape qui consiste à effectuer une réaction de type Curtius sur le composé XIII de formule représentée ci-dessus pour obtenir le composé de formule XVI représentée ci-après xvi COORp 10 m, n et Rp ayant les significations indiquées ci-dessus, - procédé comprenant une troisième étape qui consiste en une amidification entre le composé XVI représenté ci-dessus et le composé VIIIA représenté ci-après : o 15 R' , R$ et YI ayant les significations indiquées ci-dessus, pour obtenir le composé monoamide XV possédant la formule suivante: o HN~ COORp xv 10 91 dans laquelle m,n, R', Yl et Re ont les significations indiquées ci-dessus, - procédé comprenant une quatrième étape qui consiste à effectuer une déprotection du groupe acide du composé XV représenté ci-dessus pour obtenir le composé de formule XIV représenté ci-après: HN RI COOH dans laquelle m,n, R', Y, ont les significations indiquées ci-dessus, - procédé comprenant une cinquième étape qui consiste à effectuer une amidification entre le composé XIV représenté ci-dessus et le composé VIIIB de formule suivante : xrv R 2 H2N Y2 VI B R', R2, Y, et Y2 ayant les significations indiquées ci-dessus, R' et R2 sont identiques ou différents 15 l'un de l'autre, lequel procédé permet d'obtenir les composés de formule IV représentée ci-dessus. Cette stratégie multi-réactionnelle permet d'accéder à la famille des composés mixtes, en série trans 20 et en série cis. Cette suite réactionnelle est représentée ci-après : 92 o protection Curtius amidüïcation COORp xm Hooc COOH CooRp xv COOR, Iv RI et R2 différents XI Y2 H Xv Les chaînes latérales peuvent être différentes si R' et R2 sont différents. L'invention concerne aussi un procédé de préparation des composés cis de formule 1V représentée ci-après /-Yi HN~~R1 dans laquelle ^ m = 1, 2, 3 et n = 0, 1, sous réserve que m+n soit différent de 4, - R', R2, Yt et Y2 ont les significations indiquées ci-dessus, R1 et R2 sont identiques ou différents, Y, et Y2 sont identiques ou différents, qui comprend une amidification entre le composé cis de formule XXI représentée ci-après : 93 'ou dans laquelle m,n, R2, Y2 ont les significations indiquées ci-dessus, avec lé-cô posé de 'formule VIIIA : dans laquelle R1, R$ et Y1 ont les significations indiquées ci-dessus, lequel procédé permet d'obtenir les composés de formule IV cis représentée ci-dessus. 15 Ce procédé constitue une- deuxième méthode de préparation des composés mixtes, à partir d'anhydride cyclique. Ci-dessus est décrite la troisième et dernière étape du procédé. Seule la stéréochimie relative cis est obtenue. 20 La réaction est représentée par l'équation suivante 94 297844'1 IoI /YI HM R1 o H2N XXI L'invention concerne aussi un procédé de préparation de l'amidoamine XXI cis représentée par la formule figurant ci-après H dans laquelle ^ m = 1, 2, 3 et n = 0, 1, sous réserve que m+n soit différent de 4, - R2 et Y2 ont les significations indiquées ci-dessus, 10 qui comprend une réaction permettant de transformer -COOH en -NH2 sans changer la configuration initiale, en particulier une réaction de type Curtius, réalisée sur le composé cis de formule XI représentée ci-après XXI Yp5 dans laquelle m,n, R2, Y2 ont les significations indiquées ci-dessus, lequel procédé permet d'obtenir les composés de formule XXI représentée ci-dessus. Dans la deuxième étape, on effectue une réaction de type Curtius, par réarrangement du dérivé azide en isocyanate, suivi d'une décarboxylation, qui permet la transformation du groupe carboxyle en groupe amino. La réaction est représentée par l'équation suivante R2 N Y2 H HOOC XI XXI L'invention concerne aussi un procédé de préparation de l'amidoacide XI cis représenté par la formule figurant ci-après COOH XI 15 dans laquelle ^ m = 1, 2, 3 et n = 0, 1, sous réserve que m+n soit différent de 4, - R2 et Y2 ont les significations indiquées ci-dessus, qui comprend une réaction d'amidification entre l'anhydride cis de formule XX représentée ci-après xx dans laquelle m et n ont les significations indiquées ci-dessus, et l'amine de formule VIIIB : H2N Y2 VIIIB dans laquelle R2, Y2 ont les significations indiquées ci-dessus, 10 lequel procédé permet d'obtenir les composés de formule XI représentée ci-dessus. La réaction entre l'anhydride XX et l'amine conduit au composé XI. Elle est représentée par l'équation suivante : XI VIII$ xx 15 L'invention concerne aussi un procédé de préparation des composés cis de formule IV représentée ci-après /Y1 HNy RI IV R1 et R2 différents ou égaux dans laquelle - m = 1, 2, 3 et n = 0, 1, sous réserve que m+n soit différent de 4, - R1, R2, Y1 et Y2 ont les significations indiquées ci-dessus, Ri et R2 sont identiques ou différents, - Yl et Y2 sont identiques ou différents, - procédé comprenant une 1 ère étape qui consiste à faire réagir un anhydride cyclique de formule XX représentée ci-après xx m et n ayant les significations indiquées ci-dessus, avec une amine de formule VHIB Rz NY VIIIB H2 2 dans laquelle 15 R2,Y2 ont les significations indiquées ci-dessus, pour obtenir le composé XI cis de formule suivante : COOH dans lequel R,Y2, m et n ont les significations indiquées ci-dessus, - procédé comprenant une deuxième étape qui consiste à effectuer une réaction de type Curtius sur le composé XI de formule représentée ci-dessus pour obtenir le composé de formule XXI représentée ci-après xxi dans laquelle RZ,Y2, m et n ont les significations indiquées ci-dessus, - procédé comprenant une troisième et dernière étape qui consiste en une amidification entre le 15 composé XXI représenté ci-dessus et le composé VIIIA représenté ci-après : o R5 Ri 'Y1 R' , R5 et Yl ayant les significations indiquées ci-dessus, pour obtenir le composé cis IV possédant la formule suivante: dans laquelle R', RZ , Yz ,Y2 , m et n ont les significations indiquées ci-dessus. Ce second procédé de préparation de la famille des composés mixtes, c'est à dire des composés possédant une chaîne latérale fixée au cycle par l'azote et une chaîne latérale fixée au cycle par le groupe carbonyle, met en jeu trois étapes, réalisées successivement, en série cis. - La première étape consiste à utiliser un anhydride cyclique pour réaliser une 10 amidification par réaction avec une amine. La première chaîne latérale du composé cible est alors obtenue ; elle est fixée au cycle par le groupe carbonyle. - La deuxième étape consiste à réaliser une réaction de type Curtius qui permet de modifier le groupe -COOH en groupe -NH2. - La troisième et dernière étape consiste à effectuer la seconde amidification par 15 réaction avec un équivalent d'acide. La seconde chaîne est alors fixée au cycle par l'atome d'azote. Cette suite réactionnelle est représentée ci-après : HOOC H2N rv RI et R2 différents ou égaux 100 Les composés XX sont représentés ci-après n=1 ; m°1 n=0 ;.m=3 n=1 ; m=2 L'invention concerne aussi un procédé de préparation spécifique des composés de formule IIc représentée ci-après o HN R3 V IIc o dans laquelle m = 1, 2, 3 et n = 0, 1, sous réserve que m+n soit différent de 4, ^V=H,F,ClouBr, 10 - R3 représente une chaîne alkyle linéaire non-ramifiée, saturée ou insaturée, comportant de 5 à 28 atomes de carbone, terminée par un hydrogène, un groupe -OH, ou une forme protégée de celui-ci, un groupe -NH2 ou une forme protégée de celui-ci en particulier -NHBoc, par réaction de W ttig-Horner entre un aldéhyde de formule générale XVII R3. H o R3 ayant la signification indiquée ci-dessus, et un phosphonoacétamide de formule générale XVIII HN OR4 P OR4 O dans laquelle * m, n et V ont les significations indiquées ci-dessus, - R4 représente un groupe alkyle linéaire ou ramifié, comportant de 1 à 6 atomes de carbone, en particulier méthyle, éthyle, isopropyle, tertiobutyle, (OR4)2 formant éventuellement un cycle entre les deux atomes d'oxygène, les groupes (OR4)2 provenant notamment de diols tels que l'éthane-1,2-diol, le propane-1,3-diol, le 2,2-diméthylpropane-1,3-diol, le 2,3-diméthylbutane-2,3-diol (pinacol), le 2-méthylbutane-2,3-diol, le 1,2-diphényléthane-1,2-diol, le 2-méthylpentane-2,4-diol, le 1,2-dihydroxybenzène (catéchol), le 2,2'-azanediyldiéthanol, le 2,2'-(butylazanediyl)diéthanol, l'acide 2,3-dihydroxysuccinique (acide tartrique) et ses esters, ou (OR4)2 provient notamment de diacides tels que l'acide 2,2'-(méthylazanediyl)diacétique (mida), en particulier méthyle, éthyle, isopropyle, tertiobutyle, lequel procédé permet d'obtenir les composés de formule IIc représentée ci-dessus. Ce second procédé de préparation de diamides cycliques fait intervenir une réaction de type Wittig-20 Horner entre un phosphonoacétamide représenté par la formule XVIII et un aldéhyde de formule XVII. Ce procédé représente un deuxième mode de préparation des composés symétriques de la famille dans laquelle les deux chaînes latérales sont fixées au cycle par l'atome d'azote, ces chaînes latérales o I oR4 HN OR4 2978441 102 étant identiques. Le motif cyclique est déjà présent chez le phosphonoacétamide, composé stable et facile à manipuler. Cette réaction permet de créer des chaînes insaturées porteuses d'une double liaison conjuguée au carbonyle de l'amide. En outre, le dérivé phosphoré peut être porteur d'un halogène, V=F, Cl, Br, ce qui permet d'obtenir des composés Ilc halogénés. L'équation de cette réaction est représentée ci-après R3 H o XVII o XVIII L'invention concerne aussi un procédé de préparation du phosphonoacétamide XVIII 10 représenté par la formule figurant ci-après 0 0 Il R4 HN OR4 u HN /OR4 If~'0R4 O 2978441 103 dans laquelle - m = 1, 2, 3 et n = 0, 1, sous réserve que m+n soit différent de 4, - V= H, F, Cl ou Br, - R4 représente un groupe alkyle linéaire ou ramifié, comportant de 1 à 6 atomes de carbone, 5 en particulier méthyle, éthyle, isopropyle, tertiobutyle, (OR4)2 formant éventuellement un cycle entre les deux atomes d'oxygène, les groupes (OR4)2 provenant notamment de diols tels que l'éthane-1,2-diol, le propane-1,3-diol, le 2,2-diméthylpropane-1,3-diol, le 2,3-diméthylbutane-2,3-diol (pinacol), le 2-méthylbutane-2,3-diol, le 1,2-diphényléthane-1,2-diol, le 2-méthylpentane-2,4-diol, le 1,2-dihydroxybenzène (catéchol), le 2,2'-azanediyldiéthanol, le 2,2'- 10 (butylazanediyl)diéthanol, l'acide 2,3-dihydroxysuccinique (acide tartrique) et ses esters, ou (OR4)2 provient notamment de diacides tels que l'acide 2,2'-(méthylazanediyl)diacétique (mida), en particulier méthyle, éthyle, isopropyle, tertiobutyle, qui comprend une amidification entre la diamine de formule générale VIIA représentée ci-après : VIIA m et n ayant les significations indiquées ci-dessus, et l'acide carboxylique phosphorylé de formule VIIIc v OR4 dans laquelle V et R4 ont les significations indiquées ci-dessus, lequel procédé permet d'obtenir les composés de formule XVIII représentée ci-dessus. OR4 1- 00c P Cette réaction permet de préparer le phosphonoacétamide représenté par la formule XVIII par amidification entre la diamine cyclique de formule VIIA et un acide phosphonoacétique. Il est possible de travailler en série halogénée, V représentant alors le fluor, le chlore ou le brome, porté par le carbone situé en a du groupe carboxylique, 5 La réaction est réalisée dans les conditions classiques d'amidification. Elle est représentée par l'équation suivante H2N NH2 vIIA vInc H- OR' \/ ~`O R4 V HN ^ / OR4 ``OR4 xvf Le produit obtenu est ainsi un amide phosphonique capable d'être engagé dans une réaction de type Wittig-Horner, comme cela est décrit précédemment. Il est obtenu avec un rendement de l'ordre de 10 95%, après purification par chromatographie sur silice. L'invention concerne aussi un procédé de préparation des composés de formule III représentée ci-après o 15 dans laquelle 2978441 105 - m = 1, 2, 3 et n = 0, 1, sous réserve que m+n soit différent de 4, V= H, F, Cl ou B - - R3 représente une chaîne alkyle linéaire non-ramifiée, saturée ou insaturée, comportant de 5 à 28 atomes de carbone, terminée par un hydrogène, un groupe -OH, ou une forme protégée de celui-ci, un groupe -NH2 ou une forme protégée de celui-ci en particulier -NHBoc, - procédé comprenant une première étape qui consiste à effectuer une réaction entre la diamine de formule générale VIL, représentée ci-après N H2 NH2 10 m et n ayant les significations indiquées ci-dessus, et l'acide carboxylique phosphorylé de formule VIIIC v OR4 HOOC P o dans laquelle -V= H, F, Cl ou Br, 15 - R4 représente un groupe alkyle linéaire ou ramifié, comportant de 1 à 6 atomes de carbone, en particulier méthyle, éthyle, isopropyle, tertiobutyle, (OR4)2 formant éventuellement un cycle entre les deux atomes d'oxygène, les groupes (OR4)2 provenant notamment de diols tels que l'éthane-1,2-diol, le propane-1,3-diol, le 2,2-diméthylpropane-1,3-diol, le 2,3-diméthylbutane-2,3-diol (pinacol), le 2-méthylbutane-2,3-diol, le 1,2-diphényléthane-1,2-diol, le 2-méthylpentane-2,4- 20 diol, le 1,2-dihydroxybenzène (catéchol), le 2,2'-azanediyldiéthanol, le 2,2'-(butylazanediyl)diéthanol, l'acide 2,3-dihydroxysuccinique (acide tartrique) et ses esters, ou (OR4)2 provient notamment de diacides tels que l'acide 2,2'-(méthylazanediyl)diacétique (mida), en 106 particulier méthyle, éthyle, isopropyle, tertiobutyle, - procédé comprenant une seconde étape qui consiste à réaliser une réaction de Wittig-Horner entre le composé VIIIc représentée ci-dessus et un aldéhyde de formule XVII représenté par la formule suivante R3. H XVII dans laquelle R3 a les significations indiquées ci-dessus, 10 lequel procédé permet d'obtenir les composés de formule IIc représentée ci-dessus. Un second procédé est décrit permettant de préparer les composés symétriques de la famille dans laquelle les deux chaînes latérales sont fixées au cycle par l'atome d'azote. - La première étape consiste à réaliser une réaction entre une diamine cyclique et un 15 acide portant une fonction ester phosphorique. Les groupes -NH2 sont ainsi transformés en phosphonoacétamides qui sont des composés stables et faciles à manipuler. - Dans la seconde étape, le phosphonoacétamide précédemment obtenu est engagé dans une réaction de type Wittig-Horner avec un aldéhyde, ce qui conduit au remplacement du groupe phosphonate -P(0)(OR4) par une chaîne carbonée avec formation d'une double liaison C=C 20 éventuellement substituée par un atome d'halogène, l'halogène pouvant être le fluor, le chlore ou le brome. Cette séquence en deux étapes est représentée par l'équation suivante : NH, VIIIc HN OR4 ``OR4 XVIII 107 O O P,-OR4 o Les composés de formule IIc sont obtenus en deux étapes avec un excellent rendement global. Un autre aspect de l'invention consiste en la composition pharmaceutique contenant à titre de substance active l'un au moins des composés de formule I, en association avec un véhicule pharmaceutiquement acceptable. $n raison de leurs propriétés pharmacologiques, les composés selon l'invention trouvent un emploi 10 en thérapeutique en tant qu'agents dépigmentants de la peau, agents anti-âge, agents aux effets tenseurs, agents anti-inflammatoires. A ces fins, ils seront employés sous forme de compositions pharmaceutiques renfermant à titre de principe actif au moins un des composés de formules générales I en association ou en mélange avec un excipient ou un véhicule inerte, non toxique, pharmaceutiquement acceptable. 15 Pour l'usage thérapeutique, ils seront présentés sous une des formes pharmaceutiques appropriées pour l'administration par voie digestive ou par voie topique. R3 H XVII O XVIII 2978441 108 On pourra citer, à cet égard, les comprimés nus ou enrobés, les dragées, les gélules, les poudres, ainsi que les crèmes, les pommades, les lotions, les émulsions, les sprays, les sérums, les laits. Un autre aspect de l'invention consiste en la composition pharmaceutique contenant à titre de substance active plusieurs des composés de formule I, en association avec un véhicule pharmaceutiquement acceptable. Les compositions pharmaceutiques pourront contenir des mélanges de composés de formule I, dans des proportions variables_ Selon un aspect particulier de l'invention, la composition pharmaceutique contient de 15 0,005% à 20% en masse de substance active par dose unitaire. La posologie peut varier selon la forme pharmaceutique et le poids du sujet. 20 Un autre aspect de l'invention consiste en la composition cosmétique contenant à titre de substance active l'un au moins des composés de formule I, en association avec un véhicule cosmétiquement acceptable. En raison de leurs propriétés cosmétiques, les composés selon l'invention trouvent un emploi en 25 thérapeutique en tant qu'agents dépigmentants de la peau, agents anti-âge, agents aux effets tenseurs, cicatrisants. A ces fins, ils seront employés sous forme de compositions cosmétiques renfermant à titre de principe actif au moins un des composés de formules générales I en association ou en mélange avec 30 un excipient ou un véhicule inerte, non toxique, cosmétiquement acceptable. Pour l'usage thérapeutique, ils- seront présentés sous une des formes cosmétiques appropriées pour l'administration par voie cutanée. On pourra citer, à cet égard, les crèmes, les pommades, les gels, les huiles, les sérums, les laits, les sprays, les émulsions. Les excipients qui conviennent pour de telles administrations sont les huiles, l'eau et l'alcool ainsi que les tensioactifs, les additifs comme des conservateurs, des anti-oxydants, --des colorants, des parfums. Un autre aspect de l'invention consiste en la composition cosmétique contenant à titre de substance active plusieurs des composés de formule I, en association avec un véhicule cosmétiquement acceptable. 15 Les compositions cosmétiques pourront contenir des mélanges de composés de formule I, dans des proportions variables. Selon un aspect particulier de l'invention, la composition cosmétique contient de 0,005% à 20% en masse de substance active par dose unitaire. Le dosage peut varier selon la forme. 10 20 25 30 110 EXEMPLES Les techniques d'analyses sont les suivantes : Résonance magnétique nucléaire Les spectres RMN ont été réalisés à 300MHz (spectromètre Brücker) pour le proton. Les déplacements chimiques sont exprimés en ppm, le chloroforme résiduel étant pris comme référence interne (singulet à 7.28ppm), ou le diméthylsulfoxyde résiduel étant pris comme référence interne 10 (massif à 2,50ppm). La multiplicité des signaux est symbolisée par les lettres suivantes : s singulet, d doublet, dd doublet de doublet, t triplet, q quadruplet et m multiplet. Point de fusion Les points de fusion ont été mesurés par DSC (calorimétrie différentielle à balayage) sur un appareil Mettler Toledo. 15 Chromatographie : LCMS L'analyse LC/MS correspond à un couplage de l'analyse en HPLC et de l'analyse en spectrométrie de masse. Elle est effectuée sur une appareil Alliance Waters 2695-ZQ2000. HPLC (Waters réf. 2690) Détecteur : Détecteur DAD ( Waters, réf. : 2996 , 190nm à 800nm): 20 Détecteur : Corona (ESA): Détecteur Masse (Waters, réf. ZQ2000) : 100 - 1500 Dalton ; Ion négatif et positif Température four HPLC : 40°C Débit : 1mL/min 25 Les méthodes utilisées pour la HPLC figurent ci-après. Dans les tableaux de résultats analytiques, le numéro du gradient figure en exposant, avec le temps de rétention. 1.Méthode « HCOOH ACN grad1 » 30 Colonne : XTerra ® MS C18 : 4,6 mm x 150 mm, 5µm (Waters, réf. 186000490) Eluant A : Eau (HCOOH-0.02%) ; Eluant B= CH3CN) avec gradient d'élution Condition d'élution : gradient Min HCO2H à 0.2%o MeCN Curve 90 10 4 75 25 8 65 35' 6 11 5 95 7 14 5 95 7 17 90 10 6 20 90 10 6 1.Méthode « HCOOH ACN grad7 » Colonne XTerra ® MS C18 4,6 mm x 150 mm, 5µm (Waters réf. 186000490) Eluant A Eau (HCOOH-0.02%) ; Eluant B= C1-I3CN) avec gradient d'élution Condition d'élution : gradient Min. HCO2H à 0.2%o MeCN Curve 50 50 9 5 95 7 12 5 95 7 17 50 50 6 20 50 50 6 3.Méthode «HCOOH ACN_grad9» Colonne XTerra ® MS C18 : 4,6 mm x 150 mm, 5µm (Waters, réf. 186000490) Eluant A Eau (HCOOH-0.02%) ; Eluant B= CH3CN) avec gradient d' élution Condition d'élution : gradient Min. HCO2H à 0.2%o MeCN Curve 40 60 10 0 100 7 14 0 100 7 17 40 60 6 20 40 60 6 4.Méthode «HCOOH ACN gradll » Colonne XTerra ® MS C18 : 4,6 x 150 mm, 5jm (Waters, réf. 186000490) Eluant A : Eau (HCOOH-0.02%) ; Eluant B= CH3CN) avec gradient d'élution Condition d'élution : gradient 112 Min. HCO1H à 0.2%o MeCN Curve 30 70 7 0 100 7 15 0 100 7 20 30 70 7 25 30 70 7 5.Méthode « SF-HCOOH ACN _ grad7 30mm » Colonne : Sunfire T C8 : 4,6 mm x 150 mm, 3.5µm (Waters réf. 186002732) Eluant A : Eau (HCOOH-0.02%) ; Eluant B= CH3CN) avec gradient d'élution Condition d'élution gradient Min. HCO2H à 0.2%o MeCN Curve 50 50 9 5 95 7 22 5 95 7 27 50 50 6 30 50 50 6 6.Méthode « SF-HCOOH ACN_gradl2 45mm » Colonne : Sunfire TM C8 4,6 mm x 150 mm, 3.5µm (Waters réf. 186002732) 10 Eluant A : Eau (IHCOOII-0.02%) ; Eluant B= CH3CN) avec gradient d'élution Condition d'élution : gradient Min. HCO2H à 0.2%o MeCN Curve 10 90 0 100 6. 35 0 100 6 40 10 90 6 45 10 90 6 I- Obtention des motifs cycliques de départ, composés de formules VIIA et VIIB représentée ci-après VIIB COOH COOH NH2 2978441 113 I-1 : dérivés de cyclopropane I-1-a : cyclopropanes en configuration relative cis : Les cycles cyclopropaniques, n=0 et m=1, de configuration cis sont obtenus à partir de l'anhydride décrit dans la littérature, anhydride commerciaL Les produits de départ ont été décrits dans les différentes publications citées dans la liste suivante (1) Skatteboel L.; Stenstroem Y. Acta Chemica Scandinavica 1989, 43, 1, 93-96, (2) Csuk, R. ; von Scholz, Y. Tetrahedron, 1994, 50, 35, 10431-10442 (3) Payne, G.B. J. Org. Chem. 1967, 32, 3351-3355 (4) Kenneweil P.D., Matharu S., Taylor J.B., Westwood R., Sammas P.G. J. of the Chemical Society, Perkin Transactions 1 : Organic and Bioorganic Chemistry, 1982, 2553-2562 (5) Majchrzak M.W., Kotelko A., Lambert J.B. Synthesis, 1983, 6, 467-470 15 (6) Mohr P., Waespe-Sarcevic N., Tamm C., Gawronska K., Gawronsky J.K. Helvetica Chimica Acta, 1983, 66, 2501-2511 (7) Tufariello J.J., Milowsky A.S., Al-Nuri M., Goldstein S. Tet. Lett., 1987, 28, 267-270. Les diamines cis correspondantes sont obtenues par la méthode décrite dans la publication de 20 référence (8) en réalisant une réaction de type Curtius. (8) Reddy V.K., Valasinas A., Sarkar A., Basu H.S., Marton L.J., Frydman B. J. of Med. Chem., 1998, 41, 4723-4732. Les différentes étapes sont représentées dans le schéma réactionnel figurant ci-après : 7Ocl 0 0 HO 4 I-1-b : cyclopropanes en configuration relative trans Le diacide trans est commercial et fourni par Aldrich. Si on les prépare, les cyclopropanes de configuration relative trans peuvent être obtenus à partir de la condensation du chloroacétate sur un dérivé acrylique. Les produits utilisés ont été synthétisés à partir des modes opératoires décrits dans les références (1) (8) citées précédemment, la référence (8) concernant particulièrement la réaction de Curtius permettant d'accéder à la diamine trans. Les différentes étapes sont représentées dans le schéma réactionnel figurant ci-après : H2N Ni-12 I-2 : dérivés de cyclobutanes Ils sont préparés par les mêmes méthodes que celles décrites ci-dessus. 15 I-3 : dérivés de cyclopentane diamine. I-3-a : Configurations relatives cis et trans, en position -1,2 Elles sont obtenues en trois étapes à parir du cyclopentanediol correspondant. Cette séquence est 20 utilisée dans les deux séries, cis et trans. La stéréochimie du carbone fonctionnel n'est pas modifiée par la suite de réactions fournissant la diamine. Les synthéses en série cis et trans sont décrites dans les publications référencées ci-après : (9) Kuppert D., Sander J., Roth C., Woerle M., Weyhermueller T., Reiss G.J., Schilde U., Mueller I., Hegetschweiler K. European Journal of inorganic chemistry, 2001, 10, 25 2525-2542. (10) Gouin S.G., Gestin J.F., Joly K., Loussouarn A., Reliquet A., Meslin J.C., Deniaud D. Tetrahedron, 2002, 16, 1131-1136. (11) Goeksu S., Secen H., Suetbeyaz Y. Synthesis, 2002, 16, 2373-2378. Par exemple, pour le composé cis, la synthèse en trois étapes est représentée ci-après : !\ OMS OH I-3-b : Configurations relatives cis et trans, en position -1,3 10 Les 1,3-diaminocyclopentanes sont décrites depuis 1925, notamment par Diels et dans des brevets Pfizer, AstraZeneca et Roche. Les modes opératoires utilisés sont accessibles dans ces brevets et publications, dont les références figurent ci-après (12) Diels, Blom, Koll Justus Liebigs Annalen der Chemial, 1925, 443, 247. 15 (13) Cohen S.G., Journal ofAmerican Chemical Society, 1961, 83, 2895-2900. (14) Minisci F. , Gazzetta Chimica Italia, 1964, 94, 67-90. (15) Blanchard, Comptes Rendus des Séances de l'Académie des Sciences, Série Sciences Chimiques, 1970, 270, 657. (16) AstraZeneca AB, AstraZeneca UK limited, Patent W02007/138277 Al, 2007. 20 (17) Hoffmann-La Roche AG, Patent W02008/650210A1 2008. (18) Pfizer Products Inc., Patent W02008/65500 A2, 2008. I-4 : dérivés de cyclopentane diacides cis et trans Les acides 1,2-cyclopentanedicarboxylique trans et cis, et 1,3-cyclopentanedicarboxylique cis sont des produits commerciaux. 25 6 II- Obtention des précurseurs de chaînes latérales, composés de formule générale VIII : II-1 : acides gras saturés, composés de formule VIIIA Y2 R2 HOOC/ \Y2 VMA 10 Les acides gras utilisés répondant à la formule ci-dessus avec R2-Y2 une chaîne alkyle comportant de 7 à 29 atomes de carbone, saturée ou insaturée présentant un nombre variable de doubles liaisons, sont commerciaux : par exemple, on utilisera l'acide oléique, l'acide myristique, l'acide palmitique. II-2 : acides gras a,(3-insaturés composés de formule VIIIA / HOOC Y2 HOOC 15 Ces dérivés répondent à la formule ci-dessus avec - V représentant un atome d'hydrogène, de fluor, de chlore, de brome, d'iode ou groupe alkyle simple, - t variant de 1 à 25, - Yl et R2 ayant les significations indiquées ci-dessus, 20 Les acides gras a,(3-insaturés sont obtenus par réduction partielle de lactone ou lactame protégé ou non, suivi d'une réaction de type Wittig-Homer et d'une saponification. Leur synthèse est décrite dans le brevet FR2911338. 25 Les 3 étapes du mode opératoire sont décrites dans les exemples suivants : ^ Exemple 1 : Etape a, réduction partielle de la lactone en lactol 30g de lactone sont dissous dans 10 volumes de toluène, sous atmosphère d'azote. Le milieu est refroidi à -78°C et 1,01 équivalents de Dibal-H (ACROS) en solution à 20% dans le toluène sont additionnés goutte à goutte, en maintenant la température à -78°C. Le mélange est agité pendant 2 heures à -78°C. Huit volumes d'une solution saturée de sels de Rozen (sels de tartrate double ACROS) sont ajoutés à -78°C. Après 18 heures d'agitation vigoureuse à température ambiante, le mélange biphasique est filtré sur vélite, puis extrait à l'acétate d'éthyle. Les phases organiques sont lavées avec une solution saturée de NaCl, séchées sur MgSO4, filtrées et concentrées sous vide pour donner un brut de 30 g (contenant quelques traces de dm1). Le lactol, en équilibre forme ouverte, forme cyclique, est utilisé ainsi, sans purification supplémentaire. Exemple 2 : le 8-hydroxyoctanal suivant est préparé selon l'exemple 1 ; ses caractéristiques 15 analytiques sont données ci-après Caractérisation, étape a, forme ouverte : CCM : Rf= 0,4 (heptane / acétate d'éthyle 6/4) 20 'H RMN (300MHz, CDC13) : S 1,34-1,68 (m, 10H) ; 2,45 (t, J= 5,4 Hz, 2H) ; 3,66 (t, J 6,6 Hz, 2H) ; 9,78 (t, J= 1,8 Hz, 1H). ^ Exemple 3 : étape b, Réaction de Wittig-Horner 25 19 g de lactol obtenu à l'étape a sont dilués dans 13 volumes d'éthanol. 1,2équivalents de triéthylphosphonacétate sont additionnés au milieu en présence de 1,5 équivalents de carbonate de potassium. Le milieu réactionnel est chauffé à 40°C pendant 18 heures. A température ambiante, le milieu est hydrolysé par 10 volumes d'eau distillée et extrait avec de l'acétate d'éthyle. Les phases organiques sont lavées par une solution saturée de NaCl, séchées sur MgSO4, filtrées et concentrées 30 sous vide pour donner un produit brut de 20 g. L'ester obtenu est purifié par chromatographie avec le mélange élisant heptane / acétate d'éthyle 7/3. 15 g de produit sont obtenus (53% de rendement). 2978441 . 118 Exemple 4 : le composé suivant est préparé selon l'exemple 3 ; ses caractéristiques analytiques sont les suivantes 6 o Caractérisation, étape b, avec V égal à hydrogene : CCM : Rf = 0,4 (heptane / acétate d'éthyle 7/3) 1H RMN (300MHz, CDC13) : S 1,24-1,38 (m, 9H) ,.1,43-1,50 (m, 2H) ; 1,51-1,57 (m, 2H) ; 2,15-2,21 (q, 2H) ; 3,60-3,64 (t, 2H) ; 4,14-4,20 (t, 2H) ; 5,77-5,82 (d, 10 J= 15,6 Hz, 1H) ; 6,91-6,98 (dt, J= 15,6 Hz, 1H). Exemple 5 : Cette étape est également réalisée en série fluorée à partir du triéthyl 2-fluoro-2-phosphonoacétate. 2 isomères sont alors possibles : E et/ou Z. L'équivalent de la molécule ci-dessus en série fluorée est préparée selon l'exemple 3 et est représentée ci-après O Caractérisation, étape b, avec V égal à fluor : CCM : Rf = 0,43 (heptane / acétate d'éthyle 7/3) 1H RMN (300MHz, CDC13) : 5 1.28 (t, 6H) 1,30-1,65 (m, 20H) ; 2.16 (q, 4H) ; 2,27 20 (m, 2H) ; 2.52 (m, 2H) ; 3.66-3.71 (t, 4H) ; 5.99-6.11 (dt, J = 21.0Hz configuration E, 1H) 6,18-6.34 (dt, J= 3 3.0Hz configuration Z, 1H). ^ -Exemple 6 : Etape c, réaction de saponification 25 0,60 g d'hydroxy-ester obtenu à l'étape précédente b sont solubilisés dans 10 volumes de tétrahydrofurane. Lentement, 2,4 équivalents d'une solution de soude 2M sont additionnés. Le milieu est chauffé à 65°C pendant 3 heures. Une fois la réaction terminée, le milieu est hydrolysé par l'ajout d'une solution d'acide chlorhydrique 3M, jusqu'à l'obtention d'un pH 2. Le mélange est concentré à sec et la phase aqueuse est alors extraite par de l'acétate d'éthyle. Les phases organiques sont lavées par une solution saturée de NaCl, séchées sur MgSO4, filtrées et concentrées sous vide pour donner un produit brut de 0,6 g. L'hydroxy-acide insaturé VIIIA est obtenu, sous forme d'un solide blanc, par recristallisation dans l'acétonitrile à froid, m = 0,37g (rendement égal à 71%). Exemple 7 : il est préparé par le protocole décrit dans l'exemple 6. Dans le cas du composé suivant, les caractéristiques analytiques sont les suivantes o HO" 6'" OH 10 Caractérisation, étape c CCM : Rf 0,1 (heptane / acétate d'éthyle 6/4) iH RMN (300 MHz, CDCl3) : 8 1,33-1,37 (m, 6H) ; 1,45-1,49 (m, 2H) ; 1,55-1,58 (m, 2H) ; 2,20-2,25 (q, 2H) ; 3,62-3,66 (t, 2H) ; 5,79-5,84 (d, J= 15,6 Hz, 1H) ; 7,03-7,10 (dt, J= 15,6 Hz, 1H) 15 Spectroscopie de Masse : [M±Na]+ 209 (calculée 186) Point de fusion : 62,5°C ± l ''C Exemple 8 : Cette étape est également réalisée en série fluorée. La molécule ci-dessous est préparée 20 selon l'exemple 6, en série fluorée, et est caractérisée par : o Caractérisation CCM : Rf = 0,12 (heptane / acétate d'éthyle 6/4) 25 'H RMN (300MHz, CDCl3) : S 1,30-1,65 (m, 20H) ; 2.27 (m, 2H) ; 2.52 (m, 2H) ; 3.66-3.71 (t, 4H) 5.99-6.11 (dt, J = 21.0Hz configuration E, 1H) ; 6,18-6.34 (dt, J = 33.0Hz configuration Z, 1H). 5 II-3 : amines grasses, composés de formule VIIIB R` H2N/ Y2 VIIIB Les amines dites grasses utilisées répondent à la formule ci-dessus avec R2-Y2 une chaîne alkyle saturée comportant de 8 à 22 atomes de carbone saturée : oléylamine, undécylarnine, octylamine en sont des exemples. III - Accès aux pseudo-céramides « -NH-CO- » symétriques Les composés de formule IIA représentés ci-après sont obtenus à partir de deux méthodes : méthode A = amidification ; méthode B = amidification suivie d'une réaction de Wittig-Homer. Les deux méthodes sont décrites ici. Y1 R' HN Y, IIA 15 HI-1- méthode A : amidification Cette méthode comprend une réaction d'amidification éventuellement suivie d'une étape de déprotection. La réaction d'acylation est représentée par l'équation suivante : 10 2978441 121 Y, +2éq Rs' R vIIIA III-1-1 Amidification : Exemple 9 : Accès aux composés cibles« -NH-CO- » symétriques par amidification 1 équivalent d'acide carboxylique VIIIA est solubilisé dans 10 volumes de tétrahydrofurane, sous atmosphère inerte. Le motif cyclique diamine en série trans ou série cis est ajouté (0.5 équivalent), ainsi que 2,5 équivalents de 1-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethyl-carbodümide hydrochloride et 1,2 10 équivalents de 1-hydroxybenzotriazole. La suspension est refroidie à 0°C et 3 équivalents de N,N-diisopropyléthylamine sont lentement additionnés. L'ajout de quelques gouttes de N,N'-diméthylformamide permet la solubilisation totale. Le milieu réactionnel est agité pendant 16h à température ambiante. Une analyse par chromatographie sur couche mince permet de contrôler la fin de la réaction. Le mélange est concentré sous vide. Le résidu est repris par du dichlorométhane 15 et de l'eau distillée. Il est extrait trois fois par du dichlorométhane. Les phases organiques rassemblées sont lavées par une solution de HC1 2M puis par une solution saturée de NaCl. Elles sont séchées sur Na2SO4, filtrées et concentrées pour conduire à une huile marron, qui est purifiée par chromatographie sur gel de silice (éluant dichlorométhane / méthanol 98/2). Un produit pur est obtenu avec un rendement variant entre 50% et 95%. 20 Exemple 10 : Les composés 1 à 152 sont préparés selon le protocole de l'exemple 9. Les caractéristiques analytiques du composé 27 figurent ci-après : DIA 2 ti- Caractérisation : composé 27 CCM : Rf = 0.3 (dichloromethane / méthanol 98/2) 1H RMN (300 MHz, CDCl3) : 1,30-1,78 (m, 28H) ; 2.10 (m, 6H) ; 3.30 (m, 2H) ; 3.45 (m, 2H) ; 3.65 (m, 2H) 3.80 (m, 2H) ; 4.15 (m, 2H) ; 4.50 (m, 2H) ; 5,67-5,73 (d, J 15,3 Hz, 2H) ; 6.18 (d, 2H) ; 6.70-6.776 (dt, J= 15,3 Hz, 2H) Spectroscopie de Masse [M+Na]+ 571.3 (calculée 548.77) HPLC : méthode HCOOH ACN gradient 1, tR = 7.2 min, 95% à 210nm. III-1- 2 déprotections: Exemple 11 : Déprotection de la fonction alcool terminal : hydrolyse d'un motif 15 tétrahydropyrane Dans certains cas, le dérivé acide utilisé comporte un groupement protecteur sous forme -OTHP sur la fonction alcool terminal. Le composé diamide diprotégé est mis en solution dans 50 volumes de méthanol. Une quantité catalytique d'acide p-toluènesulfonique est additionnée et le mélange est 20 agité à 40°C pendant 4h. Un suivi par chromatographie sur couche mince permet de contrôler la fm de la réaction. Le milieu est alors concentré sous vide ; le résidu est repris par du dichloromethane et de l'eau distillée. Après plusieurs extractions par du dichlorométhane, les phases organiques sont lavées par une solution saturée de NaCl. Elles sont séchées sur MgSO4, filtrées et concentrées sous vide. Le résidu est purifié par trituration dans un mélange eau / acétate d'éthyle ou sur colonne de 25 silice pour conduire à une fraction de produit pur avec des rendements voisins de 70%. Exemple 12 : Déprotection de la fonction alcool terminal: hydrolyse d'un motif terbutyldiphénylsilyle, 10 123 Dans certains cas, le dérivé acide utilisé dans le couplage peptidique, comporte un groupement protecteur sous la forme « tBdPhSiO- » sur la fonction alcool terminal, Le composé diamide diprotégé est mis en solution dans 15 volumes de tétrahydrofurane. A 0°C, une solution de fluorure de tetrabutylammonium (3 équivalents à 1M dans le THF) est additionnée lentement. Après 3h d'agitation à température ambiante, un contrôle par CCM permet de vérifier la fin de la réaction. Le milieu réactionnel est alors hydrolysé par ajout d'une solution saturée en NH4C1. Le mélange est extrait trois fois à l'acétate d'éthyle et les phases organiques rassemblées sont lavées par une solution saturée en NaCl. Après séchage sur MgSO4 et filtration, le solvant organique est éliminé sous vide. Le résidu obtenu- est trituré dans des mélanges organiques ou est purifié par chromatographie sur gel de silice. Exemple 13 : Déprotection de la fonction alcool terminal : hydrolyse d'un motif acétate Dans certains cas, le dérivé acide utilisé dans la réaction d'amidification, comporte un groupement protecteur sous la forme -OAc sur la fonction alcool terminaL Le composé diamide diprotégé est mis en solution dans 4 volumes de méthanol. A température ambiante, une solution aqueuse fraîchement préparée de carbonate de potassium (0,9 équivalent) et d'hydrogénocarbonate de potassium (1,7 équivalents) est additionnée. Le milieu réactionnel est agité pendant 4 heures. Un contrôle par CCM permet de vérifier la déprotection totale. Le mélange est alors concentré à sec puis repris par de l'acétate d'éthyle et de l'eau. Après trituration, le solide est filtré et séché sous vide. Selon la longueur de la chaîne, le rendement varie entre 30% et 70%. Exemple 14 : le produit déprotégé composé 36 est obtenu par le protocole décrit dans l'exemple 25 13. Ses caractéristiques analytiques sont les suivantes Caractérisation : composé 36 CCM : Rf = 0.15 (dichlorométhane / méthanol 98/2) 1H RMN (300 MHz, CDC13) : 5 0.89 (m, 2H) ; 1,27-1,60 (m, 16H) ; 2.20 (m, 4H) ; 2.64 (m, 4H) ; 2.90 (m, 4H) ; 3,65 (t, 2H) ; 5,70-5,84 (dt, .J 24.6 Hz, 2H) ; 6.21-6.04 (dt, J 37.8Hz,2H) Spectroscopie de Masse : [M+Na]+ 467.2 (calculée 444.57) HPLC : méthode HCOOH. ACN gradient 1, tR = 10.6 min, 97% à 240nm. Exemple 15 : Déprotection de la fonction amine terminale : hydrolyse d'un motif carbamate Dans certains cas, le dérivé acide utilisé dans la réaction d'amidification, comporte un groupement protecteur sous la forme -NHBoc sur la fonction amine terminale. Le composé diamide diprotege 15 est mis en solution dans 2 volumes d'éther diéthylique. Une solution d'acide chlorhydrique sec dans l'éther diéthylique (2M) est ajoutée et le milieu réactionnel est agité à température ambiante pendant 2h. Un suivi par CCM permet de contrôler la fin de la réaction. Après concentration à sec, le résidu est trituré dans le dichlorométhane pour conduire à un sel dichlorhydrate du composé souhaité, avec un rendement variant entre 70% et 95%. 20 Exemple 16 : le produit déprotégé, composé 101, est obtenu par le protocole décrit dans l'exemple 15. Ses caraotéristiques analytiques sont les suivantes Caractérisation composé 101 10 CIH 2978441 125 'H RMN (300 MHz, DMSO-d6) : 6 0.89 (m, 2H) ; 1,30-1,57 (m, 12H) ; 2.12 (m, 4H) ; 2.51-2.76 (m, 8H) ; 5,62-5,82 (dt, J = 15.0 Hz, 2H) ; 6.55-6.63 (dt, J = 30.0 Hz, 2H) ; 7.93 (s, 4H) ; 8J5 (s, 2H). 5 III-2-méthode B, couplage et réaction de Wittig-Horner, utilisation d'un intermédiaire phosphanoacétamide III-2-1 : Formation d'un intermédiaire diphosphonoacétamide Exemple 17 Préparation des phosphonoacétamides 10 Sous atmosphère inerte, l'acide diéthylphosphonoacétique (4 équivalents) est dilué dans le dichlorométhane (14 volumes). Le réactif 0-(7-Azabenzotriazol-l-yl)-N,N,N',N'-tétramethyluronium hexafluorophosphate (4.4 équivalents) ainsi que la triéthylamine (6.5 équivalents) sont ajoutés. Après cinq minutes d'agitation à température ambiante, le motif cyclique diamine (1 équivalent) est additionné et le milieu réactionnel est chauffé à 50°C pendant 30min. Un 15 suivi par chromatographie sur couche mince permet de contrôler la fin de la réaction. Le milieu est alors hydrolysé par ajout d'eau distillée puis par ajout d'une solution saturée en NH4C1. Après deux extractions par de l'acétate d'éthyle, les phases organiques sont lavées par une solution saturée en NaCl, séchées sur MgSO4, filtrées et concentrées sous vide. Le résidu est purifié sur colonne de silice avec un gradient dichlorométhane / méthanol. Le produit pur est obtenu avec un rendement 20 supérieur à 95%. Exemple 18 : Le composé 144 est obtenu en utilisant le protocole de l'exemple 17. Les caractéristiques analytiques du composé 144 sont les suivantes o HN N H Caractérisation composé 144, intermédiaire diphosphonoacétamide : CCM : Rf = 0.2 (dichlorométhane / méthanol 95/5) 'H RMN (300 MHz, DMSO-d6) S 1.12 (m, 2H) ; 1.22 (t, 12H) ; 1.42 (m, 2H) ; 1.83 ( 2H) ; 2.72 (d, 4H) ; 3.42 (m, 2H) ; 4.0 (q, 8H) ; 8.04 (d, 2H) Spectroscopie de Masse [M+H]+ 457.2 ; [M-H]- 455.2 (calculée 456.42) HPLC : méthode HCOOH ACN_gradient 1, tR = 7.28 min, 94% à 210nm. III-2-2 : Réaction de type Wittig-Horner du dérivé diphosphonoacétamide : 10 Exemple 19 : Accès aux composés cibles « -NH-CO- » symétriques par réaction de type Wittig-Horner sur le phosphonoacétamide. Le composé diphosphonoacétamide est engagé en réaction de type Wittig-Horner : sous atmosphère inerte, 1 équivalent de produit diphosphonoacétamide est solubilisé dans le 15 tétrahydrofurane (10 volumes). Une base de type K2CO3 (4 équivalents) et le dérivé aldéhyde (4 équivalents) sont ajoutés au milieu réactionnel. Ce dernier est chauffé à 50°C pendant une nuit sous agitation. Un contrôle par CCM permet de vérifier la fin de la réaction. A température ambiante, le mélange est hydrolysé par ajout d'eau distillée. Après trois extractions par de l'acétate d'éthyle, les phases organiques sont lavées par une solution saturée en NaCl, séchées sur MgSO4, filtrées et 20 concentrées sous vide. Le résidu brut est purifié par trituration dans du dichlorométhane les sels insolubles sont éliminés par filtration alors que le filtrat est concentré pour conduire au produit souhaité. IH-2-3 : Formation d'un intermédiaire fluoré diphosphonoacétamide Exemple 20 : Préparation de phosphonoacétamide fluoré. Sous atmosphère inerte, l'acide diéthylphosphonofluoroacétique (3 équivalents) est dilué dans le dichlorométhane (14 volumes). Le réactif O-(7-Azabenzotriazol-l-yl)-N,N,N',N'-tétramethyluronium hexafluorophosphate (3 équivalents) ainsi que la triéthylamine (6.4 équivalents) sont ajoutés. Après cinq minutes d'agitation à température ambiante, le motif cyclique diamine (1 équivalent) est additionné et le milieu réactionnel est chauffé à 50°C pendant 30min. Un suivi par chromatographie sur couche mince permet de contrôler la fm de la réaction. Le milieu est alors hydrolysé par ajout d'eau distillée puis par ajout d'une solution saturée en NH4C1. Après deux extractions par de l'acétate d'éthyle, les phases organiques sont lavées par une solution saturée en NaCl, séchées sur MgSO4, filtrées et concentrées sous vide. Le résidu est purifié sur colonne de silice avec un gradient dichlorométhane / méthanol. Le produit pur est obtenu avec un rendement supérieur à 90%. Exemple 21 : Le composé 145 est obtenu en utilisant le protocole de l'exemple 20. Les caractéristiques analytiques du composé 145 sont les suivantes : Caractérisation de l'intermédiaire fluoré diphosphonoacétamide composé 145 CCM : Rf = 0.3 (dichlorométhane / méthanol 85/15) 'H RMN (300 MHz, DMSO-d6) : 8 5.21-5.50 (m, 2H); 4.25 (m, 8H) ; 3.25 (m, 2H), 1.80-2.14 (m, 2H), 1.40 (t, 12H), 1.38 (m, 4H). Spectroscopie de Masse : [M+Hr = 493.1; [MH]- - 491.1 (calculée 492.4) HPLC : méthode HCOOH ACN gradient 1, tR = 8.l 8min. 0 o HN o F F 2978441. III-2-4 : Réaction du dérivé fluoré diphosphonoacétamide en réaction de type Wittig-Horner Exemple 22 : Préparation des composés cibles « -NH-CO- » symétriques par réaction de type Wittig-Horner sur le diphosphonoacétamide fluoré. Le composé diphosphonoacétamide ainsi obtenu est engagé en réaction de type Wittig-Horner : sous atmosphère inerte, 1 équivalent de produit diphosphonoacétamide est solubilisé dans le tétrahydrofurane (10 volumes). Une base de type K2CO3 (4 équivalents) et le dérivé aldéhyde (4 équivalents) sont ajoutés au milieu réactionnel. Ce dernier est chauffé à 50°C pendant une nuit sous 10 agitation. Un contrôle par CCM permet de vérifier la fm de la réaction. A température ambiante, le mélange est hydrolysé par ajout d'eau distillée. Après trois extractions par de l'acétate d'éthyle, les phases organiques sont lavées par une solution saturée en NaCl, séchées sur MgSO4, filtrées et concentrées sous vide. Le résidu brut est purifié par trituration dans du dichlorométhane : les sels insolubles sont éliminés par filtration alors que le filtrat est concentré pour conduire au produit 15 souhaité (description dans le tableau 2). La description analytique des phosphonoacétamides XVIII obtenus répondant au schéma suivant figurent dans le tableau 1 ci-après. La référence du composé est indiquée par « c » suivi de son 20 numéro. o L-- OR4 P HN OR4 xv"25 10 TABLEAU 1 N° n m contigu V 'H LC MS aspect compo ration a sé RMN c144 1 2 cis H 0K 7.28min' [M+H]+ Huile incolore 457.2 c145 1 2 Cis F 0K 8.18min' [M+H]+ Huile incolore 493.1; [M- Hl- 491.1 aOK spectre' cohérent ' : colonne X-Terra, gradient 1 Les caractéristiques analytiques des composés cibles « -NH-CO- » symétriques de formule IIA représentée ci-dessus, provenant d'acides gras a,13-insaturés décrits précédemment, sont rassemblées dans le tableau 2 ci-après 15 o TABLEAU 2 N° n m Configu V t Y, ' LC MS aspect comp ration H et point osé R de fusion M N c i 0 1 cis FI 1 OH OK 6.93min' [M+H]+ 353.1 Solide beige c 2 0 l cis H 2 011 0K 7.84min' [M+H]+ 380.9 Solide [ M-H]" 3 79.0 blanc c3 0 1 cis H 3 OH OK 9.08min' [M+Na]+ 431.3 Solide [M-HI- 407.3 blanc c4 0 1 cis H 4 OH OK 10.34min' [M+H]+ 437.1 Solide [M-H]" 435.2 blanc c5 0 1 cis H 5 OH OK 11.16min' [M+H]+ 465.4 Solide 463.3 blanc _{M-Hf c6 0 1 cis H 6 OH OK 11.87min' [M+Na]+ 515.4 Solide [M_H] 491.3 blanc c7 0 1 cis H 7 OH OK NA [M+Na]+ 543.3 Solide [M-H] 519.4 blanc c8 1 2 cis F 1 OTHP OK 10.0min' [M-H]- 583.3 Huile Z/E incolore c9 0 1 cis H 9 OH NA 10.09min' [M+H]+ 577.3 Solide [M-Hl- 575.4 blanc c 0 0 1 cis H 10 OH NA 11.22min' [M+H]+ 605.4 Solide [M-H]- 603.6 blanc cll 0 1 cis H 11 OH NA 12.35min.' [M+Na]+ 655.4 Solide blanc c12 0 3 cis H 1 OH OK 7.58min' [M+H]+ 381.2 Solide beige e13 0 3 cis H 2 OH OK 8.57min' [M+H]+ 409.2 Solide [M-H]- 407.2 blanc c 14 0 3 . cis H 3 OH 0K 9.89min' [M+H]+ 437.2 Liquide 435.2 incolore c15 0 3 cis H 4 OH OK 10.82min' [M+H]+ 465.2 Solide [M+HCOOH-H]- blanc 509.2 c16 - 0 3 cis H 6 OH OK 12.21min' [M+Hj+ 521.3 Solide [M+HCOOH-H]_ jaune pâle 565.3 C17 0 3 cis H 7 OH OK 12.75min' [M+H]+ 549.3 Solide blanc e - - {M+Na]+ 655.3 - - - - : - - [M+Na]+ 683.4 . - c22 1 2 cis H 3 OH OK 9.70min' [M+H]+ 437.2 Solide blanc c23 1 2 cis H 4 OH OK 10.7bmin' [M+H]+ 465.2 - c24 1 2 cis H 7 OH 0K 12.75min' [M+H]+ 549.3 - - c25 1 2 cis H 10 OH 0K 11.66min' [M+H]+ 655.3 - - c26 1 2 cis H 11 OH NA 12.95iniii' [M+Na]+ 6$3.4 - - c27 0 3 cis H 1 -OTHP OK 7.23min' [M+Na]+ 571.3 - - c28 0 3 cis H 2 -OTHP OK 13.16min' [M+Na]+ 599.4 - - [M- - 575.5 - , c29 1 2 cis H 4 -OTHP OK NA [M+H]+ 633.4 Solide blanc c30 1 2 cis H 7 -OTHP OK 15.09min' [M+Na] 739.6 Solide blanc c31 0 3 cis H 7 -OTHP OK 15.22min' [M+Na]+ 739.6 Solide blanc c32 0 1 cis H 10 -OTHP 0K 23.52min' [M+Na]+ 795.6 Solide blanc c33 0 3 cis H 11 -OTHP OK NA [M+Na]+ 851.5 Solide blanc c34 1 2 cis H 11 -OTHP OK 18.06min' NA Solide blanc c35 0 1 cis F 1 OH OK 8.82min' [M+Na]+ 410.9 Solide E/E [M-Hl- 3 87.0 blanc c36 0 1 cis F 3 OH OK 10.65min' [M+Na1+ 467.2 Solide [M-H]- 443.3 blanc c37 0 1 cis F 4 OH OK 11.55min' [M+Na]+ 495.0 Solide [M-H1- 471.1 blanc c38 0 1 cis F 5 OH OK 12.30min' [M+H]+ 501.0 Solide 1M-H1- 499.0 blanc c39 0 1 cis F 6 OH 0K 12.85min` [M+H]+ 529.1 Solide [M-HI- 527.1 blanc cassé c40 0 1 cis F 7 OH OK 9.07min' [M+H]+ 579.2 Solide [M-H]- 555.3 beige c41 0 1 cis F 9 OH OK 11.87min' [M+Na]+ 635.2 Solide blanc c42 0 1 cis F 10 OH OK 12.42min' [M+Na]+ 663.4 Solide blanc c43 0 I cis F 10 OH OK 12.83min' [M+Na]+ 663.4 Solide E/E blanc c44 0 l cis F 11 OH NA 14.31min' [M+Nar 691.3 Solide [M-Hi 668.1 blanc c45 0 3 cis F 3 OH OK 11.13min' [M+Na]+ 495.1 Solide Z/Z [M-Hr 471.1 blanc c46 0 3 cis F 3 OH 0K 11.40min' [M+Na]+ 495.1 Solide [M-H]- 471.1 blanc c47 0 3 cis F 3 OH OK 11.69min' [M+Na1+ 495.1 Solide E/E [M-H]- 471.1 blanc c48 0 3 cis F 4 OH NA 12.10min' [M+H]+ 501.2 Solide [M-H]' 499.2 blanc c49 0 3 cis F 4 OH 0K 12.29min' [M+H]+ 501.2 Solide EIE [M-H]- 499.2 blanc c50 0 3 cis F 7 OH OK 10.05min' [M+H]+ 585.2 Solide Z/Z [M-H]- 583.2 blanc c51 0 3 cis F 7 OH OK 10.73min' [M+H]+ 585.2 Solide E/E [M-H]- 583.2 blanc c52 0 3 cis F 7 OH OK 10.40min' [M+H]+ 585.2 Solide [M-Hi 583.2 blanc c53 0 3 cis F 10 OH OK 13.35min' [M+Na]+ 691.3 Solide blanc c54 0 3 cis F 11 OH OK 14.81min' [M+Na]+ 719.4 Solide blanc c55 1 2 cis F 3 OH 0K 11.20min' [M+Na]+ 495.2 Solide Z/Z [M-Hl- 471.3 blanc c56 1 2 cis F 3 OH OK 11.44min' [M+Na]+ 495.2 Solide [M-Hr 471.3 blanc c57 1 2 cis F 3 OH OK 11.70min' [M+Na]+ 495.2 Solide E/E [M-Hl- = 471.3 ` blanc c58 1 2 cis F 4 OH OK 11.86min' [M+Na]+ 523.2 Solide Z/Z [M-H]- 499.2 blanc cassé c59 1 2 cis F 4 OH 0K 12.08min' [M+Na]+ 523.2 Solide [M-H]- 499.2 blanc c60 1 2 cis F 7 OH OK 10.40min' [M+H]+ 585.2 Solide [M-H]- 583.1 blanc c61 1 2 cis F 10 OH OK 13.52min' [M+Na]+ 691.3 Solide [M-H]- 667.3 blanc c62 1 2 cis F 11 OH NA 14.68min' [M+H]+ 697.3 Solide Z/Z [M-H]" 695.4 blanc c63 1 2 cis F I1 OH NA 15.03min' [M+H]+ 697.3 Solide 104- [M-Hr 695.4 blanc 105°C c64 1 2 cis F 11 OH NA 15.51min' [M+H]+ 697.3 Solide E/E [M-H]- 695.4 blanc c65 cis F 3 -OTHP OK NA [M+Na}+ 6612 Solide Z/Z [M-H]- 639.3 jaune c66 4 3 cis F 3 -OTHP OK NA [M+Na1+ 663.2 Liquide [M-Hl- 639.3 incolore c67 Q 3 eis _ F 3 -OTHP OK N.,° _ Liquide E/E NA [M+Na]+ 663.2 incolore [M-H]- 639.4 c68 1 2 cis F 3 -OTHP OK NA [M+Na]+ 663.2 Solide Z/Z 84-88°C [M-H]- 639.2 blanc c69 1 2 cis F 3 -OTHP OK NA [M+Na]+ 663.2 Liquide [M-H]- 639.3 incolore c70 1 2 cis F 3 -OTHP OK NA [M+Na]+ 663.2 Liquide E/E [M-H]" 639.2 incolore c71 0 3 cis F 4 -OTHP OK 12.83min' [M+Na]+ 691.4 Liquide incolore c72 0 3 cis F 4 -OTHP OK 13.16min' [M+Na]+ 691.4 Liquide E/E [M-H]- 667.5 incolore c73 1 2 cis F 4 -OTHP OK 12.54min' [M+Na]+ 691.5 Solide Z/Z [M-HCOOH-H]" = blanc 713.5 c74 1 2 cis F 4 -OTHP OK 12.79min' [M+Na]+ 691.5 Liquide [M-HCOOH-H]- incolore 713.6 c75 Q 3 cis F 11 -OTHP OK NA [M+Na]+ 887.5 Solide blanc c76 1 2 cis. F 11 -OTHP OK 20.52min' [M+Na]+ 887.5 Solide Z/Z [M-HCOOH-H]- blanc 909.5 c77 1 2 cis F 11 -OTHP OK 24.52min' [M+Na]+ 887.5 Solide blanc c78 1 2 cis F 11 -OTHP OK NA NA Solide E/E blanc c79 0 3 cis H 7 -H OK 17.29min' [M+H]+ 517.3 Solide blanc c80 1 2 cis H 7 -H OK 19.17min' [M+H]+ 517.3 Solide beige c81 0 3 cis F 7 -H 0K 14.08min' [M+H]+ 553.4 Solide Z/Z [M-H]- 551.5 blanc c82 0 3 cis F 7 -H OK 14.31min' [M+H]+ 553.4 Solide blanc c83 1 2 cis F 7 -H 0K 14.24min' [M+H]+ 553.4 Solide Z/Z blanc c84 1 2 cis F 7 -H OK 14.39min' [M+H]+ 575.3 c85 1 2 cis F 7 -H OK 14.79min' [M+H]+ 553.4 Solide E/E ' [M-H]- 551.6 blanc c86 0 1 cis F 7 -H ' OK 20.30min' [M+Na]+ 547.2 Solide E/E [M-H]- 523.2 blanc c87 4 1 cis H 3 -OAc OK 11,99min' [M+H]+ 493.3 Solide blanc c88 0 1 trans H 3 -OAc OK 12.13min' [M+H]+ 493.3 Solide blanc crème c89 0 1 cis F 11 -OAc OK NA [M+Na]+ 775.4 Solide blanc c90 1 2 cis F 7 -OAc OK 12.26min' [M+Na]+ 663.3 Solide blanc e91 0 1 trans F 7 OH NA 12.66min' [M+H1+ 521.4 Solide [M+Na]+ 543.4 jaune c92 0 1 trans F 3 OH 0K 10.4 à [M+H]+ 445.4 Solide 11.0min' [M-H]- 443.3 blanc c93 0 1 trans H 10 OH OK NA [M+Na]+ 627.5 Solide blanc c94 0 1 cis F 10 OH OK NA [M+Na]+ 663.5 Solide E/E [M-H]" 639.5 blanc c95 0 1 trans H 4 OH OK 9.95min' [M+H]+ 437.4 Solide blanc c96 0 1 trans F 11 OH OK NA NA Solide E/E blanc c97 0 1 - trans H 11 - OH -OK NA .[M+Na]+ -655.-6 Solide blanc c98 0 1 cis H 8 OH OK 8.60min' [M+H]+ 549.1 Solide [M-H]- 547.2 blanc c99 1 2 cis H 1 -OTHP OK NA [M+H]+ 549.1 Solide beige c100 0 3 cis F 7 H OK 14.60min' [M+H]+ 553.3 Solide E/E ' [M-H]" 551.4 blanc c101 0 1 trans H 1 -NH2 OK 2.5min' [M+H]+ 351.4 - Solide jaune et 02 0 1 trans H 1 -NHBoc 0K 11.96min' [M+H]+ 551.4 Solide [M+ blanc HCOOH-H]" 595.5 c103 0 1 cis F 5 -OtBdPh 0K NA [M+Na]+ 1000.2 Pâte jaune Z/Z [M-Hl- 976.2 c104 0 1 cis F 5 - OK NA [M+Na]+ 1000.1 Pâte jaune OtBdPh [M-H]- 976.2 c 105 0 1 cis F 5 - OK NA [M+Na]+ 1000.1 Pâte jaune E/E OtBdPh [M-H]- 976.2 c106 1 2 cis F 1 -OTHP OK 10.46min' [M-H]" 583.3 Huile incolore c107 0 3 cis F 1 -OTHP OK 9.80min' [M-H]- 583.4 Solide blanc c108 0 1 cis F 1 -OTHP OK 8.40min' [M+Na]+ 579.2 Cire [M-H]- 555.3 blanche c 109 1 cis F 1 -OTHP OK NA NA Solide blanc cl 10 0 1 cis F 1 -OTI-IP OK 9.06min' [M-H]- = 555.1 Huile incolore et i l 0 1 cis F l -OTHP OK 8.65min' [M-H]- 555.1 Cire blanche c112 0 1 cis F l' OH OK 8.60min' [M+Na]+ 411.3 Soldie beige c113 0 1 cis F 1 OH OK 8.32min' [M+H]+ 389.3 Solide blanc c114 1 2 cis F 1 OH OK NA [M+H]+ 417.2 Huile dorée c115 1 2 cis F 1 OH OK NA [M+H]+ 417.2 Huile dorée c116 1 2 cis F 1 OH OK NA [M+H]+ 417.2 cire blanche c117 0 3 cis F 1 OH OK 10.00min' [M+H]+ 417.2 Cire beige c118 0 3 cis F 1 OH OK 9.29min' [M+H]+ 417.3 Solide ' blanc c149 1 2 cis F 1 OTHP OK 9.64min' [M-H]-583.3 Cire Z/Z blanche c150 0 3 cis F 1 OTHP OK NA NA Huile E/E dorée c151 0 3 cis F 1 OTHP OK NA NA Huile Z/E dorée c152 1 2 cis F 1 OTHP 0K 9.67+10. [M-H]"583.3 Huile 06+ dorée 10.46min 7 aOK = spectre cohérent b :l'indice après le temps de rétention renvoie à la méthode utilisée. 1 : Méthode HCOOH_ACN grad 1 : Méthode HCOOH_ACN grad 7 11 : Méthode HCOOH_ACN grad 11 Les caractéristiques analytiques des composés cibles « -NH-CO- » symétriques de formule LIA représentée ci-dessous dans lesquels -R'-Y, est un groupe alkyle , provenant d'acides gras saturés, sont rassemblées dans le tableau 3 ci-après o r possède de 6 à 29 atomes de carbone. TABLEAU 3 N° n m Configu a 1H LC` MS aspect ration RMN' c119 0 1 cis Acide 0K 17.3 min12 [M+Nar 735.6 Solide érucique blanc (22:1(13)) c120 0 1 cis Acide OK 15.8 min' [M+Na]+ 56.73. Solide palmitoléïque _ blanc (16:1(9)) c121 0 1 cis Acide oléïque 0K 19.9 min' [M+Na]+ 623.5 Solide (18:1(9)) blanc c122 0 1 cis Acide 0K 16.2 min' [M+Na]+ 619.4 Solide linoléique blanc (18:2(9,12)) c123 0 1 cis Acide 0K 14.1 min' [M+Na]+ 615.4 Solide linolenique beige (10:3(9,12,15) c124 0 3. cis Acide . 0K 19.5 min12 [M+Hr 741.2 Solide, érucique blanc (22:1(13)) c125 0 3 cis ' Acide 0K 15.5 min' [M+Na]+ 543.3 Solide myristique blanc (14:0) c126 0 3 cis Acide 0K 16.2 min' [M+Na]+595.4 Huile palmitoléïque jaune (16:1(9)) c127 0 3 cis Acide oléïque 0K; 20.5 min' [M+Na]+651.4 Pâte (18:1(9)) blanche .c 128 0 3 . cis Acide OK 1.6.7 min' .[M+Na]+ 647A Huile linoléïque jaune (18:2(9,12)} c 129 0 3 cis Acide OK 14.4 min' [M+Na]+ 642.7 Huile linolénique jaune (10:3(9,12,15) c130 1 2 cis Acide 0K 26.3 min9 [M+H]+ 741.6 Solide érucique blanc (22:1(13)} c131 1 2 cis Acide 0K 22.4 min' [M+Na]+ 627.6 Solide margarique blanc (17:0) c132 1 2 cis Acide 0K 15.4 min' [M+Na]+ 543.3 Solide myristique blanc (14:0) c133 1 2 cis Acide 0K 15.9 [M+Na]+ 595.3 Solide palmitoléïque blanc (16:1(9}) c134 1 2 cis Acide oléïque 0K 20.2 min' [M+Na]+ 651.5 Solide (18:1(9)) blanc c 135 1 2 cis Acide OK 16.5 min' [M+Na]+ 647.4 pâte linoléïque jaune (18:2(9,12)) e136 : 1 2 cis : Acide OK 14.3 min' [M-1-Ne e + 643.4 Pâte linolénique jaune (10:3(9,12,15) c137 0 1 cis Acide 0K 15.2 min' [M+Na]+515.4 Solide myristique blanc (14:0) a : nomenclature des acides gras (t :u(v)) : t= nombre de carbones, u= nombre de doubles liaisons, v= le ou les carbones)- portant les doubles liaisons). b : 0K = spectre cohérent ; NA = non analysé ° : l'indice après le temps de rétention renvoie à la méthode utilisée. 'a : Méthode SF-HCOOH_ACN gradl2 Méthode HCOOH_ACN grad 9 : Méthode SF-HCOOH_ACN grad7 10 138 IV- Méthode générale de couplage pour accès aux composés cibles « -CO-NH- » symétriques de formule IIIA H RI Exemple 23 : Préparation des composés de formule IIIA qui comprend un couplage peptidique, selon le mode opératoire décrit ci-après Le diacide cyclique (1 équivalent) est mis en solution, sous atmosphère inerte, dans 10 volumes de tetrahydrofurane. Le réactif 1-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethyl-carbodiimide hydrochloride (2,5 10 équivalents) et le 1-hydroxybenzotriazole (1,2 équivalents) sont ajoutés. Le milieu hétérogène (suspension) est refroidi à 0°C et 3 équivalents de N,N-diisopropyléthylamine sont lentement additionnés. Le réactif comportant une fonction amine (2,2 équivalents) est additionné après 10 minutes d'agitation. L'ajout de quelques gouttes de N,N'-diméthylformamide permet la solubilisation totale. Le milieu réactionnel est agité pendant une nuit à température ambiante. Une 15 analyse par chromatographie sur couche mince permet de contrôler la fin de la réaction. Le mélange est concentré sous vide. Le résidu est repris par du dichlorométhane et de l'eau distillée. Il est extrait trois fois par du dichlorométhane. Les phases organiques rassemblées sont lavées par une solution de HC1 2M puis par une solution saturée de NaCl. Elles sont séchées sur Na2SO4, filtrées et concentrées pour conduire à un résidu, qui est purifié par chromatographie sur gel de silice (élution 20 par un gradient dichlorométhane / méthanol). Un produit pur est obtenu avec un rendement variant entre 50% et 95%. Exemple 24 : Les composés 138 à 143 sont préparés selon le protocole décrit dans l'exemple 23. 25 Les caractéristiques analytiques du composé 138 dont la formule figure ci-après, sont rapportées : Caractérisation :composé 138 'H RMN (300 MHz, CDCl3) : S en ppm 7.00 (bs, 2H) ; 5.35 (m, 411) ; 3.19 (m, 4H) ; 2.00 (m, 6H) ; 1.89(m, 2H) ; 1.46 (m, 4H) ; 1.29 (m, 4811) ; 0.78 (t, 6H) Spectroscopie de Masse : [M+H]+629.6 calculée 629.08 HPLC : méthode SF HCOOH ACN grad 7, tR = 25.56min. Les caractéristiques analytiques des composés cibles « -CO-NH- » symétriques de formule MA représentée ci-dessous dans lesquels -R1-Y1 est un groupe alkyle provenant d'amines grasses saturées, sont rassemblées dans le tableau 4 ci-après 15 r possède de 6 à 29 atomes de carbone. 10 20 TABLEAU 4 N° n m Configu R-CO s 1H LC` MS aspec ration RMNb et point de t fusion c138 0 1 cis Oléylamine OK NA [M+H]+ 629.6 Solide (18:1(9)) blanc c139 0 1 cis Oetylamine OK 10.71min' [M+H]+353.4 Solide (8 :0) JM-H]- 351.4 blanc c140 0 1 cis Dodécylamine OK 14.18min' [M+H]+ 465.5 Solide (12 :0) f M-H]- 463.4 blanc c141 0 1 cis Undécylamine OK NA [M+H]+ 437.4 Solide (11 :0) [M-H]- 435.3 blan c142 0 3 cis Oléylamine OK NA NA Cire (18/1(9)) 41-43°C blanche c143 Q 3 cis Octylamine OK 10,86min' [M-HI- 379,4 Solide (8/0) blanc a : nomenclature des amines à longue chaîne alkyle (t :u(v)) : t= nombre de carbones, u= nombre de doubles liaisons, v= le ou les carbone(s) portant les doubles liaisons). b OK = spectre cohérent ; NA = non analysé e : l'exposant après le temps de rétention renvoie à la méthode utilisée. méthode SF HCOOH ACN_grad 7 10 V Accès aux composés cibles «-CO-NH-» dissymétriques, produit cyclique de départ : anhydrides La synthèse comporte deux étapes. 15 Les équations du schéma réactionnel figurent ci-après : Rt H2N/' \Y1 R1 COOi xx Xi 'V-1: ouverture de l'anhydride Exemple 25 : Préparation de l'amidoacide de formule XI par amidification: Dans cette première étape réalisée sous atmosphère inerte, l'anhydride acide cycloalcanedicarboxylique (1 équivalent) est mis en solution dans 3 volumes de dichlorométhane, le composé amine (1 équivalent) est alors additionné, ainsi que la triéthylamine (2 équivalents). Les ajouts sont progressifs car la réaction est exothermique. Un suivi par CCM (CH2C12/ MeOH + acide acétique) 10 permet de contrôler la fin de la réaction. Le mélange est alors lavé par une solution d'acide chlorhydrique 0,5N. La phase aqueuse est à nouveau extraite par du dichlorométhane. Les phases organiques sont séchées sur MgSO4, filtrées, et concentrées sous vide. Le résidu brut est purifié sur colonne de gel de silice pour conduire à une huile, avec un rendement voisin de 65%. 15 Exemple 26 : le composé cyclopropanique suivant est préparé selon l'exemple 24. Ses caractéristiques analytiques sont les suivantes 20 Caractérisation CCM : Rf = 0.6 (DCM 90 /MeOH 10 / AcOH 0.01%) 1H RMN (300MHz, CDC13) : S 7.03 (bs, 1H, NH); 3.30 (t, 2H); 2.12 (m, 1H); 1.99 (m, 1.47-1.71 (m, 4H), 1.29 (m, 10H); 1.10 (t, 3H). Spectroscopie de Masse : [M+H]+ 242.3, [M-H]_ 240.2 , calculée 241.33 HPLC : méthode HCOOH ACN grad 1, tR = 11.58 min. V-2 : amidification Exemple 27 : préparation des composés cibles « -CO-NH- » dissymétriques par amidification réalisée sur l'amidoacide XI. Dans cette deuxième étape réalisée sous atmosphère inerte, le dérivé cyclopropyle-acide 10 carboxylique XI obtenu précédemment (1 équivalent) est mis en solution dans 20 volumes de dichlorométhane. A température ambiante, 1,1 équivalent de 1-hydroxybenzotriazole, 1,1 équivalent de 1-(-3-diméthylaminopropyl)-3-éthyl-carbodiimide hydrochloride et 2 équivalents de N,N-diisopropyléthylamine sont introduits. Après 5 minutes d'agitation, le composé amine (1,2 équivalent) est additionné. Le milieu réactionnel est agité pendant 18h à température ambiante. Un 15 suivi CCM permet de contrôler la fin de la réaction. Le mélange est alors hydrolysé par ajout d'eau. Après trois extractions par de l'acétate d'éthyle, les phases organiques sont lavées par une solution saturée en NaCl. Elles sont ensuite séchées sur MgSO4, filtrées et concentrées sous vide. Le résidu brut est purifié sur colonne de gel de silice éluée par un gradient heptane / acétate d'éthyle pour conduire à un solide blanc avec un rendement voisin de 30%. 20 Exemple 28 : le composé 146 est préparé selon l'exemple 27. Ses caractéristiques analytiques sont les suivantes Caractérisation : composé 146 CCM : Rf = 0.35 (heptane /acétate d'éthyle 50/50) 'H RMN (300MHz, CDC13) 8 3.28 (m, 4H); 2.05-2.24 (m, 2H) ; 1.51-1.63 (m, 6H), 1.23 (m, 30 28H); 0.85 (t, 6H). 25 10 Spectroscopie de Masse : [M+H]+ 409.4, [M+HCOOH-H]- 453.3 , calculée 408.87 HPLC : méthode HCOOH ACN_grad 1, tR = 16.18 min. Les résultats analytiques des composés obtenus figurent dans le tableau 5 reproduit ci-après : Les indices 1, 2, 3 figurant dans la formule permettent de repérer les protons correspondant en RMN. TABLEAU 5 N° n m p q 'H RMN a LC b MS aspect c146 0 1 2 6 3.28 (m, 4H, H2); 2.05-2.24 (m, 16.18min' [M+H]+ Solide blanc 2H, H,) ; 0.85 (t, 6H, H3). 409.4 c147 0 1 5 12 6.73 (bs, 2H, NI]); 5.36 (ni, 4H, 18.20min' [M+Na}+ Solide blanc, H vinyliques); 3.22 (m, 4H, H2); 555.7 0.89 (t, 6H, H3) c160 0 1 6 12 6.84 (bs, 2H, NH); 5.35 (m, 2H, 19.34min' [M+Na]+ Solide blanc Hvinyliques); 0.89 (t, 6H, H3) 569.7 c156 0 2 6 12 5.87 (bs, 2H, NH); 5.37 (m, 2H, NA [M+Nar Solide blanc Hvinyliques); 2.90 (m,2H, H,) ; 596.6 0.89 (t, 6H, H3) ; 0.90 (t, 6H, H3) cl 57 0 2 3 6 5.85 (bs, 2H, NH); 2.89 (m,2H, NA NA Solide blanc Hi) ; 0.89 (t, 6H, H3) c158 0 2 2 12 5.85 (bs, 2H, NH); 5.35 (m, 2H, 25.63min' [M+H]+ Solide blanc Hvinyliques); 2.90 (m,2H, H,) ; 519.4 0.89 (t, 6H, H3) c159 ; 0 2 2 6 10 aOK = spectre cohérent ; NA : non-analysé. b : l'indice après le temps de rétention renvoie à la méthode utilisée. I : Méthode HCOOH ACN grad 1 : Méthode SF-H000H ACN grad 7 VI- Accès aux composés cibles mixtes « -CO-NH- et -NH-CO- », produit cyclique de départ : anhydrides La synthèse comporte trois étapes : première réaction d'acylation, puis réaction de type Curtius, enfin amidification. Les équations du schéma réactionnel figure ci-apres XI XXI 15 VI-1: première acylation Le protocole est le même que celui décrit ci-dessus dans le protocole de l'exemple 25. VI-2 : réaction de type Curtius 20 Exemple 29 : Préparation de l'amidoamine XXI par réaction de type Curtius sur l'amidoacide obtenu selon le protocole de l'exemple 25. Le produit XI issu de la réaction entre l'anhydride et l'amine est engagé en réaction de type Curtius. 25 Pour cela, le composé est mis en solution dans l'éthanol et le toluène en présence de quelques gouttes d'acide sulfurique concentre, à 120°C pendant 5h. Le milieu est ensuite concentré à sec pour donner un liquide beige, de façon quantitative. L'ester éthylique obtenu est alors mis en solution dans l'éthanol (10 volumes) en présence d'hydrazine (4.4 équivalents), à 80°C pendant 20h. A température ambiante, 10 volumes de chloroforme sont ajoutés, le milieu est refroidi, puis filtré pour donner un solide blanc. Le dérivé hydrazide est mis en solution dans un mélange glace / HCl concentré, à 0°C. Très lentement, une solution de NaNO2 (2.5 équivalents) dans 2 volumes d'eau est additionnée. Après 15 min d'agitation, le milieu est extrait à l'éther, les phases organiques sont lavées par une solution de NaCl saturée. Cette solution est additionnée très lentement sur une solution de toluène préchauffée à 85°C. (Le montage doit permettre une distillation de l'éther éthylique). Après 2h d'addition et 1h d'agitation jusqu'à distillation complète de l'éther, le milieu encore chaud est versé sur une solution de HC1 concentré préchauffée à 60°C. Après 20 min d'agitation, le milieu est concentré sous vide, puis subit des co-évaporations en présence de toluène et éthanol. Le résidu est purifié par trituration dans des solvants organiques, pour conduire à un solide blanc. VI-3 : amidification L'amine XXI obtenue est engagée en réaction d'amidification avec un dérivé acide carboxylique, en suivant les conditions du protocole décrit dans l'exemple 27. VII - Accès aux composés cibles dissymétriques « -NH-CO- », produit cyclique de départ : diamine La synthèse comporte quatre étapes : protection d'une des deux fonctions amine, première 25 amidification réalisée avec la fonction non-protégée par réaction avec un acide gras, déprotection de la fonction amine bloquée puis seconde amidification avec un acide gras différent de celui utilisé dans le premier couplage. Les équations du schéma réactionnel figure ci-après o I18 HN YZ vu, VII-1 : Monoprotection Exemple 30: Préparation des composés de formule X par protection d'une fonction amine du 5 composé de formule VIIA. Dans cette première étape, le composé diamine VIL est mis en solution dans le tétrahydrofurane (10 volumes). Puis à 0°C, 1,1 équivalent de Boc2O ainsi que 1 équivalent de triéthylamine sont additionnés. Le milieu réactionnel est agité pendant une nuit à température ambiante. Un contrôle 10 CCM permet de vérifier la fin de la réaction. Le mélange est alors concentré sous vide puis purifié sur une colonne de gel de silice pour conduire au composé mono-protégé. VII-2 : première amidification Le composé diamine mono-protégé X obtenu au stade précédent est engagé en réaction de couplage en présence de N,N-diisopropyléthylamine (DIRA), de 1-hydroxybenzotriazole(HOBT), 1-(3-diméthylaminopropyl)-3-éthyl-carbodiimide hydrochloride (EDCI) en suivant les conditions du protocole décrit dans l'exemple 27. 20 On obtient le composé IX. VII-3 : déprotection H2N vr[D 15 Exemple 31 : Préparation de l'amidoamine VIID par déprotection du composé de formule IX. La fonction amine protégée par un groupement Boc est déprotégée par action de l'acide trifluoroacétique (2 équivalents) en solution dans le tétrahydrofurane (5 volumes), en agitation pendant 20h. Après concentration à sec, le composé VIID obtenu est directement engagé en stade suivant sans purification supplémentaire. VII-4 : deuxième amidification Exemple 32 : Préparation des composés ciblés dissymétriques « -NH-CO- » de formule IIB par amidification. 10 L'amidoamine VIID obtenue par l'exemple 31 est engagée en couplage peptidique avec un dérivé acide carboxylique différent de celui utilisé pour la première amidification, en présence de N,N diisopropyléthylamine (DIEA), de 1-hydroxybenzotriazole(HOBT), 1-(3-diméthylaminopropyl)-3-éthyl-carbodiimide hydrochloride (EDCI) dans le dichlorométhane, en suivant les conditions du 15 protocole décrit dans l'exemple 27. On obtient les composés HE dissymétriques. Les caractéristiques RMN des exemples préparés figurent dans les tableaux suivants. 20 Les déplacements des protons en positions 1, 2, 3 indicées sur le schéma sont donnés ainsi que les déplacements des protons vinyliques, lorsqu'il y en a. On rappelle que Ria représente une chaîne linéaire ou ramifiée possédant de 1 à 30 atomes de carbone, saturée ou insaturée, et dans le cas d'une insaturation, la double liaison C=C étant éventuellement substituée par un atome de fluor, de chlore, de brome ou par un groupe -CF3. 25 Tableau A 2978441. 'H RMN description (300MHz, CDC13, ppm) c119 5.92 (s, 2H, NH) ; 5.38 (t, 4H, Hvinyliques) ; 2.74 (m, 2H, H,) ; 2.18 (t, 4H, H2) ; 0.91 (t, 6H, H3) cT20 5.92 (s, 2H, NH) ; 5.38 (m, 4H, Hvinyliques) ; 2.74 (m, 2H, Hi) ; 2.I9 (t, 4H, H2) ; 0.91 (t, 6H, H3) c121 5.93 (s, 2H, NH) ; 5.37 (m, 4H, Hvinyliques) ; 2.73 (m, 2H, Hl) ; 2.19 (t, 4H, H2) ; - 0.91 (t, 6H, H3) c122 5.96 (s, 2H, NH) ; 5.32 (m, 8H, Hvinyliques) ; 2.80 (m, 2H, H,) ; 2.18 (t, 4H, H2) ; 0.92 (t, 6H, H3) c123 5.93 (s, 2H, NH) ; 5.39 (m, 12H, Hvinyliques) ; 2.73 (m, 2H, H,) ; 2.20 (t, 4H, H2) ; 1.01 (t, 6H, H3) c137 5.91 (s, 2H, NH) ; 2.74 (m, 2H, H,) ; 2.19 (t, 4H, H2) ; 0.93 (t, 6H, H3) Tableau- Il 'H RMN description (300MHz, CDC13, ppm) c124 6.11 (s, 2H, NH) ; 5.37 (m, 4H, Hvinyliques) ; 4.11 (m, 2H, H,) ; 2.20 (t, 4H, H2) ; 0.91 (t, 6H, H3) c125 6.11 (s,2H,NH);4.12(m,2H,Hi);2.18(m,4H,H2);0.90(t,6H,H3) c126 6.10 (s, 2H, NH) ; 5.35 (m, 4H, Hvinyliques) ; 4.10 (m, 2H, H,) ; 2.16 (t, 4H, H2) ; 0.88 (t, 6H, H3) cl 27 6.11 (s, 2H, NH) ; 5.36 (m, 4H, Hvinyliques) ; 4.11 (m, 2H, H,) ; 2.19 (t, 4H, H2) ; 0.90 (t, 6H, H3) c128 6_12 (s, 2H, NH) ; 539 (m, 8H, Hvinyliques) ; 4.11 (m, 2H, H,) ; 2.18 (t, 4H, H2) ; 0.92 (t, 6H, H3) c129 6.13 (s, 2H, NH) ; 5.38 (m, 12H, Hvinyliques) ; 4.12 (m, 2H, H,) ; 2.20 (t, 4H, H2) ; I.0& (t, 6H, H3) Tableau C o 9 10 'H RMN description (300MHz, CDC13, 8 ppm) c130 6.45 (s, 2H, NH) ; 5.36 (m, 4H, Hvinyliques) ; 4.08 (m, 2H, H,) ; 2.38 (dt, 1H, H4) ; 2.17 (t, 4H, H2) ; 0.90 (t, 6H, H3) cl31 6.39 (s, 2H, NH) ; 4.06 (m, 2H, H,) ; 2.378 (dt, 1H, H4) ; 2.19 (t, 4H, H2) ; 0.91 (t, 6H, H3) c132 6.35 (s, 2H, NH) ; 4.08 (m, 2H, HI) ; 2.38 (dt, 1H, H4) ; 2.17 (t, 4H, Hz) ; 0.90 (t, 6H, H3) cl33 5.36 (m, 4H, Hvinyliques) ; 4.07 (m, 2H, H,) ; 2.37 (dt, 1H, H4) ; 2.17 (t, 4H, H2) ; 0.90 (t, 6H, H3) HN Tableau D c134 6.39 (s, 2H, NH) ; 5.35 (m, 4H, Hvinyliques) ; 4.09 (m, 2H, H,) ; 2.38 (dt, 1H, H4) ; 2.17 (t, 4H, H~ ; 0.90 (t, 6H, H3) c135 6.45 (s, 2H, NH) ; 5.35 (m, 8H, Hvinyliques) ; 4.08 (m, 2H, H,) ; 2.38 (dt, 1H, H4) ; 2.17 (t, 4H, H2) ; 0.90 (t, 6H, H3) c136 6.43 (s, 2H, NH) ; 5.36 (m, 12H, Hvinyliques) ; 4.06 (m, 2H, H,) ; 2.37 (dt, 1H, H4); 2.17 (t, 4H, H2) ; 0.96 (t, 6H, H3) HN 2 R'\ 2 3 3 IN 'H RMN description (300MHz, CDCI3, 8 ppm) c138 7.01 (s, 2H, NH) ; 5.35 (m, 4H, Hvinyliques) ; 3.23 (m, 4H, H2) ; 1.92 (m, 2H, H1); 0.88 (t, 6H, H3) c139 6.71 (s, 2H, NH);3.24(ni,4H,H2); 1.90(m,2H,H,);0.91 (t, 6H, H3) c I40 6.79 (s, 2H, NH) ; 3.21 (m, 4H, H2) ; 1.89 (m, 2H, HI); 0.89 (t, 6H, H3) c141 6.54(s,2H,NH);3.15(m,4H,H2); 1.81 (m, 2H, HI); 0.83 (t, 6H, H3) Tableau E N° 'H RMN description (300MHz, CDC13, 8 ppm) c142 5.95 (s, 2H, NH) ; 5.35 (m, 4H, Hvinyliques) ; 3.19 (m, 4H, H2) ; 2.90 (m, 2H, H,); 0.89 (t, 6H, H3) c143 5.93 (s, 2H, NH) ; 3.17 (m, 4H, 112) ; 2.90 (m, 2H, H,); 0.91 (t, 6H, H3) Tableau F Y, et V ont les significations précédemment définies. 2978441 151 N° Solvant 'H RMN description (300MHz, 5 ppm) deutéré c10l DMSO-d6 8.15 (s, 2H, NH); 7.93 (s, 4H, -NH2); 6.55-6.63 (dt, 2H, 113, JE 15Hz); 5.85 (dd, 2H, 112, JE 15Hz); 2.80 (m, 2H, HI); 2.76 (t, 4H, 115); 2.12 (m, 4H, 114) c36 CDC13 6.58 (s, 2H, NH); 6.04-6.21 (dt, 1H, H3, Jz 36.9Hz); 5.71-5.84 (dt, 1H, H3, JE 24.6Hz); 3.65 (t, 4H, H5); 2.90 (m, 2H, H,); 2.64 (m, 2H, H4 E); 2.20 (m, 2H, H4 Z); configuration E/Z c92 DMSO-d6 6.43 (s, 2H, NH); 5.82-6.00 (dt, 1H, H3, Jz 36.0Hz); 5.67-5.80 (dt, 1H, H3, JE 27.0Hz); 3.36 (t, 4H, H5); 3.07 (m, 2H, H,); 2.11 (m, 4H, 114); configuration E/Z c93 MeOD 6.77-6.84 (dt, 2H, 113, JE 15Hz); 5.80 (dd, 2H, 112, JE 15Hz); 3.54 (t, 4H, 115); 2.68 (m, 2H, HI); 2.17 (m, 4H, H4) c94 CDC13 6.59 (s, 2H, NH); 5.70-5.84 (dt, 2H, H3, JE 24.0Hz); 3.65 (t, 4H, H5); 2.89 (Tn, 2H, H,); 2.63 (m, 4H, 114 E); configuration E/E c42 CDC13 6.58 (s, 2H, NH); 6.05-6.20 (dt, 1H, H3, Jz 36.9Hz); 5.70-5.82 (dt, 1H, H3, JE 24.6Hz); 3.66 (t, 4H, 115); 2.90 (m, 2H, H,); 2.63 (m, 2H, H4 E); 2.21 (m, 2H, Ha Z); configuration E/Z c40 CDC13 6.56 (s, 2H, NH); 6.05-6.20 (dt, 2H, H3, Jz 36.9Hz); 3.66 (t, 4H, H5); 2.91 (m, 2H, H,); 2.22 (m, 4H, H4); configuration Z/Z c95 DMSO-d6 7.65 (s, 2H, NH); 6.54-6.64 (dt, 2H, H3, JE 18Hz); 5.91 (dd, 2H, H2, JE 18Hz); 3.37 (t, 4H, H5); 2.81 (m, 2H, H,); 2.10 (m, 4H, Hal e4 DMSO-d6 7.66 (s, 2H, NH); 6.54-6.64 (dt, 2H, H3, JE15Hz); 5.91 (dd, 2H, H2, JE 15Hz); 3.38 (t, 4H, H5); 2.80 (m, 2H, H,); 2.10 (m, 4H, H4) c96 CDC13 6.65 (s, 2H, NH); 5.69-5.84 (dt, 2H, H3, JE 27.0Hz); 3.66 (t, 4H, H5); 2.78 (m, 2H, H,); 2.62 (m, 4H, H4 E); configuration E/E c97 MeOD 6.74-6.82 (dt, 2H, 113, JE 15Hz); 5.73 (dd, 2H, H2, JE 15Hz); 3.54 (t, 4H, H5); 2.59 (m, 2H, Hi); 2.17 (m, 4H, H4) et DMSO-d6 7.81 (s, 2H, NH); 6.55-6.65 (dt, 2H, 113, JE15Hz); 5.93 (dd, 2H, H2, JE 15Hz); 3.38 (t, 4H, H5); 2.83 (m, 2H, H,); 2.10 (m, 4H, H4) c2 DMSO-d6 7.67 (s, 2H, NH); 6.55-6.65 (dt, 2H, H3, JE15Hz); 5.92 (dd, 2H, H2, JE 15Hz); 3.38 (t, 4H, 115); 2.80 (m, 2H, HI); 2.10 (m, 4H, HI c3 DMSO-d6 7.67 (s, 2H, NH); 6.55-6.64 (dt, 2H, H3, JE15Hz); 5.93 (dd, 2H, 112, JE 15Hz); 3.4.0(t,.4H, H5); 2.82 (m, 2H, H,); 2_10 (m., 4H,H4) c5 DMSO-d6 7.65 (s, 2H, NIA); 6.55-6.63 (dt, 2H, H3, JE15Hz); 5.91 (dd, 2H, 112, JE 15Hz); 338 (t, 4H, H5) 2.81 (m, 2H, H,) c37 CDC13 6.58 (s, 2H, NH); 6.04-6.21 (dt, 1H, 113, Jz 36.9Hz); 5.71-5.84 (dt, 1H, 113, JE 24.6Hz); 3.65 (t, 4H,115); 2.90 (m, 2H, H,); 2.64 (m, 2H, H4 E); 2.20 (ni, 2H, H4 Z); configuration mélange E/Z c39 CDC13 6.58 (s, 2H, NH); 6.04-6.21 (dt, 1H, 113, Jz 36.9Hz); 5.72-5.81 (dt, 1H, H3, JE 24.6Hz); 3.66 (t, 4H, 115); 2.90 (m, 2H, H,); 2.63 (m, 2H, Ha E); 2.22 (ni, 2H, H4 Z); configuration mélange E/Z c41 CDC13 6.60 (s, 2H, NH); 5.72-5.83 (dt, 2H, 113, JE 24.9Hz); 3.67 (t, 4H, 115); 2.88 (ni, 2H, H,); 2.61 (m, 4H, H4); configuration E/E c38 CDC13 6.58(s, 2H, NH); 6.04-6.21 (dt, 1H,113, Jz 36.9Hz); 5.72-5.81 (dt, 1H, 113, JE 24.6Hz); 3.65 (t, 4H, H5), 2.89 (m, 2H, Hi); 2.63 (m, 2H, H4 E); 2.19 (m, 2H, H4 2); configuration E/Z c32 CDC13 6.81 (dt, 2H, 113, JE15Hz); 6.55 (s, 2H, NH); 5.78 (dd, 2H, H2, JE 15Hz); 3.38 (t, 2H, HTHP); 3.50-3.90 (m, 8H, dont Hs); 2.83 (m, 2H, Hi); 2.15 (m, 4H, H4) c86 CDC13 6.58 (s, 2H, NH); 5.70-5.84 (dt, 2H, H3, JE 24.6Hz); 2.89 (m, 2H, H,); 2.63 (m, 4H, H4); 0.85 (t, 6H, H5 avec X=H); configuration E/E c43 DMSO-d6 7.96 (s, 2H, NH); 5.65-5.79 (dt, 2H,113, JE 24.0Hz); 3.37 (m, 4H, 115); 2.95 + D20 (m, 2H, H,); 2.49 (m, 4H, H4); configuration E/E c7 EtOD 7.52 (s, 2H, NH); 6.83 (m, 2H, H3, JE15Hz); 5.87 (dd, 2H, H2, JE 15Hz); 2.80 (m, 2H, Hi); 2.17 (m, 4H, H5) c89 CDC13 6.56 (s, 2H, NH); 6.03-6.18 (dt, 1H, H3, Jz 36.9Hz); 5.67-5.81 (dt, 1H, H3, JE 24.6Hz); 4.04 (t, 4H, Hs); 2.87 (m, 2H, H,); 2.61 (m, 2H, H4 E); 2.14 (m, 2H, H4 Z); 2.04 (s, 6H, -O-CO-CH3); configuration E/Z c35 CDC13 6.62 (s, 2H, NH); 5.70-5.80 (dt, 2H, H3, JE24.6Hz); 3.66 (t, 4H, Hs); 2.89 (m, 2Ii, Hi); 2.67 (m, 4H, H4); configuration E/E c103 CDC13 7.36-7.70 (m, 10H, H aromatiques); 6.55 (s, 2H, NH); 6.05-6.22 (dt, 2H, H3, Jz 36.9Hz); 3.66 (t, 4H,Hs); 2.91 (m, 2H, H,); 2.21 (rn, 4H, H4 2); 1.00 (s, 9H, H tButyle); configuration Z/Z c104 CDC13 7.36-7.71 (m, 10H, H aromatiques); 6.56 (s, 2H, NH); 6.05-6.22 (dt, 1H, 113, Jz 36.6Hz); 5.70-5.83 (dt, 1H, 113, JE 24.3Hz); 3.67 (t, 4H, Hi); 2.90 (m, 2H, Hi); 2.62 (m, 2H, 114 E); 2.21 (m, 2H, H4 Z); 1.00 (s, 9H, H tButyle); configuration E/Z e105 CDCI3 7.36-7.71 (m, 10H, H aromatiques); 6.56 (s, 2H, NH); 5.70-5.83 (dt, 2H, 113, JE 24.6Hz); 3.67 (t, 4H, Hs); 2.90 (m, 2H, Hl); 2.62 (m, 4H, H4 E); 1.00 (s, 9H, H tButyle); configuration E/E c102 DMSO-d6 8.05 (s, 2H, NH); 6.77(s, 2H, NHBoc); 6.55-6.64 (dt, 2H, 113, JE 18Hz); 5.80 (dd, 2H, 112, JE 18Hz); 2.90 (m, 4H, Hs); 2.88 (m, 2H, H,); 2.10 (m, 4H, 114); 1.36 (s, 9H, -Boc) cllO CDC13 6.20 (s, 2H, NH); 6.04-6.16 (dt, 1H, H3, Jz 36.9Hz); 5.70-5.85 (dt, 1H, H3, JE 24.6Hz); 4.58 (m, 2H, H pied -THP); 3.35-3.86 (m, 8H dont H5); 2.85 (ni, 2H, HI); 2.63 (m, 2H, 114 E); 2.22 (m, 2H, H¢ Z); configuration E/Z et l l CDC13 6.56 (s, 2H, NH); 6.05-6.22 (dt, 2H,113, Jz 36.9Hz); 4.58 (m, 2H, H pied - THP); 3.36-3.87 (m, 8H dont Hs); 2.91 (m, 2H, 2.22 (m, 4H, 114 Z); configuration Z/Z c112 CDC13 6.62 (s, 2H, NH); 5.95-6.13 (dt, 2H, H3, JE 27.3Hz); 3.66 (t, 4H, Hs); 2.89 (m, 2H, Hi); 2.63 (m, 4H, H4 E); configuration DE c113 CDC13 6.63 (s, 2H, NH); 6.04-6.21 (dt, 1H, H3, Jz 36.6Hz); 5.71-5.85 (dt, IH, H3, JE 24.6Hz); 3.65 (t, 4H, I-I5); 2.89 (m, 2H, H,); 2.63 (m, 2H, H4 E); 2.22 (m, 2H, H4 Z); configuration E/E c109 CDC13 5.95-6.13 (dt, 2H, 113, Jz 36.6Hz); 3.56 (t, 4H, Hs); 2.86 (m, 2H, HI); 2.16 (m, 4H,114 Z); configuration Z/Z Tableau G N° Solvant 1H RMN description (300MHz, 8 ppm) deutéré c18 CDC13 6.83 (dt, 2H, 1137 JE14.5Hz); 6.42 (s, 2H, NH); 5.80 (dd, 2H, Hz, JE 14.5 Hz); 4.20 (m, 2H, Hi); 3.66 (t, 4H, 115) c53 CDC13 6.55 (s, 2H, NI]); 6.02-6.18 (dt, 1H,113, Jz 36.9Hz); 5.69-5.80 (dt, 1H, 113, JE 24.6Hz); 4.31 (m, 2H, Hi); 3.66 (t, 4H, 115); 2.61 (m, 2H, H4 E); 2.19 (m, 2H, H4 Z); configuration E/Z c33 CDC13 6.78-6.87 (dt, 2H, 113, JE15.OHz); 6.17 (s, 2H, NH); 5.79 (dd, 2H, Hz, JE 15.0Hz); 4.59 (t, 2H, H THP); 4.19 (m, 2H, Hi); 3.36-3.91 (m, 8H, dont H5) c75 CDC13 6.55 (s, 2H, NI]); 6.03-6.17 (dt, 1H, H3, Jz 36.9Hz); 5.71-5.80 (dt, 1H, H3, JE 24.6Hz); 4.59 (t, 2H, HTHP); 4.31 (m, 2H, H1); 3.36-3.93 (m, 8H, dont H5); 2.63 (m, 2H, H4 E); 2.20 (m, 2H, H4 Z); configuration E/Z c19 DMSO-d6 7.32 (set, 2H, NH); 6.54-6:61 (dt, 2H, H3, JE15.3Hz); 5.80 (dd, 2H, Hzi JE 15.3Hz); 4.16 (m, 2H, Hi); 3.39 (t, 4H, H5) c54 CDC13 6.60 (s, 2H, NH); 6.02-6.18 (dt, 1H, H3, Jz 36.9Hz); 5.69-5.80 (dt, 1H, H3, JE 24,6Hz); 4.31 (m, 2H, Hi); 3.66 (t, 4H, 115); 2.62 (m, 2H, H4 E); 2.20 (m, 2H, 114 Z); configuration E/Z c50 CDC13 6.60 (s, 2H, NH); 6.02-6.19 (dt, 2H, H3, Jz 36.9Hz); 4.30 (m, 2H, Hi); 3.66 (t, 4H, H5); 2.22 (m, 4H, H4 Z); configuration Z/Z c52 CDC13 6.57 (s, 2H, NH); 6.02-6.20 (dt, 1H, H3, Jz 36.9Hz); 5.69-5.83 (dt, 1H,113, JE 24.6Hz); 4.30 (m, 2H, HI); 3.66 (t, 4H, H5); 2.61 (m, 2H, H4 E); 2.21 (m, 2H, H4 Z); configuration E/Z c51 CDC13 6.55 (s, 2H, NH); 5.67-5.80 (dt, 2H, H3, JE 24.6Hz); 4.30 (m, 2H, Hi); 3.66 (t, 4H, 115); 2.61 (m, 4H, H4 E); configuration EfE c34 CDC13 6.80-6.88 (dt, 2H, 113, JE15.3Hz); 6.54 (s, 2H, NH); 5.78 (dd, 2H, Hz, JE 15.3Hz); 4.59 (t, 2H, H THP); 4.15 (m, 2H, Hi); 3.36-3.89 (m, 8H, dont H4) c65 CDC13 6.65 (s, 2H, NI]); 6.03-6.18 (dt, 2H, H3, Jz 36.9Hz); 4.59 (t, 2H, HTHP); 4.31 (m, 2H, HL); 3.35-3.89 (m, 8H, dont 115); 2.22 (m, 4H, H4 Z); configuration ZIZ c66 CDC13 6.65 (s, 2H, NH); 6.03-6.18 (dt, 1H,1137 Jz 36.9Hz); 5.69-5.80 (dt, 1H,113, JE 24.6Hz); 4.59 (t, 2H, H THP); 4.31 (m, 2H, Hi); 3.37-3.88 (m, 8H, dont H5); 2.62 (m, 2H, H4 E); 2.20 (in, 2H, H4 Z); configuration E/Z c67 CDC13 6.65 (s, 2H, NH); 5.69-5.80 (dt, 2H, H3, JE 24.6Hz); 4.59 (t, 2H, H.THP); 4.31 (m, 2H, H,); 3.37-3.88 (m, 8H, dont 115); 2.62 (m, 4H, H4 E); configuration E/E c14 CDC13 6.74 (dt, 2H, H3, JE 15.0Hz); 6.11 (s, 2H, NH); 5.71 (dd, 2H, 112, JE 15.OHz); 4.11 (m, 2H, Hi); 3.576 (t, 4H, H5) c31 CDC13 6.81-6.86 (dt, 2H, 113, JE15.OHz); 6.16 (s, 2H, NH); 5.78 (dd, 2H, 112, JE 15.0Hz); 4.60 (t, 2H, H THP); 4,19 (m, 2H, Hi); 3.38-3.89 (m, 8H, dont H5) c17 CDC13 6.74 (dt, 2H, H3, JE15.3Hz); 6.11 (s, 2H, NH); 5.70 (dd, 2H, H2, JE 15.3Hz); 4.10 (m, 2H, Hi); 3.57 (t, 4H, H5) c45 DMSO-d6 7.90 (s, 2H, NH); 5.78-5.97 (dt, 2H, H3, Jz 36.9Hz); 4.25 (m, 2H, H,); 3.37 (t, 4H, H5); 2.12 (m, 4H, H4 Z); configuration Z/Z c46 DMSO-d6 7.90 (s, 2H, NH); 5.81-5.98 (dt, 1H, H3, Jz 36.9Hz); 5.67-5.80 (dt, 2H, H,, JE 24.6Hz); 4.23 (m, 2H, Hi); 3.37 (t, 4H, H5), 2.44 (m, 2H, H4 E); 2.12 (m, 2H, H4 Z); configuration E/Z c47 DMSO-d6 7.90 (s, 2H, NH); 5.67-5.81 (dt, 2H,. H3, JE 24.6Hz); 4.23 (m, 2H, Hi); 3.37 (t, 4H,115); 2.43km, 4H, H4 E); configuration E/E c79 CDC13 6.77-6.87 (dt, 2H, H3, JE15.3Hz); 6.26 (s, 2H, NH); 5.75-5.81 (dd, 2H, H2, JE 15.3 Hz); 4.20 (m, 2H, HI); 0.89 (t, 6H, H5 avec X=H) c27 CDC13 6.70-6.77 (dt, 2H, H3, JE15.3Hz); 6.18 (s, 2H, NH); 5.70 (dd, 2H, 112, JE 15.3 Hz); 4.50 (t, 2H, H THP); 4.11 (m, 2H, Hi); 3.27-3.80 (m, 8H, dont H5) c12 CDC13 . 6.82 (dt, 2H, H3, JE15.3Hz); 6.20 (s, 2H, NH); 5.80 (dd, 2H, H2, JE 15.3Hz); 4.20 (m, 2H, Hi); 3.66 (t, 4H, H5) c28 CDCI3 6.78-6.88 (dt, 2H, H3, JE15.3Hz); 6.18 (s, 2H, NH); 5.78 (dd, 2H, H2, JE 15.3 Hz); 4.59 (t, 2H, H THP); 4.20 (m, 2H, H,); 3.36-3.92 (m, 8H, dont H5) c13 CDC13 6.82 (dt, 2H, H3, JE15.OHz); 6.22 (s, 2H, NH); 5.79 (dd, 2H, 112, JE 15.0Hz); 4.19 (m, 2H, Hi); 3.66 (t, 4H, H5) c15 DMSO-d6 7.46 (sd, 2H, NH); 6.50-6.60 (dt, 2H, 113, JE15.OHz); 5.87 (dd, 2H, H2, JE : 15.0Hz); 4.12 (m, 2H, Hi); 3.37 (t, 4H, 115) c71 CDC13 6.55 (s, 2H, NH); 6.03-6.18 (dt, 1H, H3, Jz 36.9Hz); 5.69-5.80 (dt, 1H, 113, JE 24.6Hz); 4.59 (t, 2H, H THP); 4.31 (m, 2H, Hi); 3.37-3.89 (m, 8H, dont H5); 2.62 (m, 2H, H4 E); 2.20 (m, 2H, H4 Z); configuration E/Z c72 CDC13 6.54 (s, 2H, NIA; 5.67-5.80 (dt, 2H, 113, JE 24.6Hz); 4.59 (t, 2H, H THP); _ 4.31 (m, 2H, Hi); 3.35-3.92 (m, 8H, dont H5); 2.62 (m, 4H, Ha E); configuration E/E c73 CDC13 _ 6:55 (s, 2H, NH); 6.03-6.18 (dt, 2H, H3, Jz 36.9Hz); 4.59 (t, 2H, HM)); 4.31 (m, 2H, Hi); 3.37-3.89 (m, 8H, dont 115); 2.20 (m, 4H, H4 Z); configuration Z/Z c74 CDC13 6:55 (s, 2H, NI]); 6.03-6.18 (dt, 1H, H3, Jz 36.9Hz); 5.69-5.80 (dt, 1H, H3, JE 24.6Hz); 4.59 (t, 2H, H THP); 4.25 (m, 2H, Hi); 3.37-3.89 (m, 8H, dont. H5); 2.63 (m, 2H, H4 E); 2.20 (m, 2H, H4 Z); configuration E/Z 2978441 155 c49 CDC13 6.53 (s, 2H, NH); 5.67-5.81 (dt, 2H, H3, JE 24.6Hz); 4.30 (m, 2H, H1); 3.65 (t, 4H, H5); 2.63 (m, 4H, H4 E); configuration E/E c81 CDC13 6.59 (s, 2H, NH); 6.02-6.19 (dt, 2H, H3, Jz 36.9Hz); 4.31 {-m, 2H, HI); 2.22 (m, 4H, H4 Z); 0.90 (t, 6H, 115 avec X=H); configuration Z/Z c82 CDC13 6.55 (d, 2H, NH); 6.01-6.18 (dt, 1H, H3, Jz 36.9Hz); 5.68-5.82 (dt, 1H, 113, JE 24.6Hz); 4.31 (m, 2H, Hi); 2.63 (m, 2H, H4 E); 2.20 (m, 2H, H4 Z); 0.90 (t, 6H, 115 avec X=-H); configuration E/Z clOO CDC13 6.54 (s, 2H, NH); 5.32-5.81 (dt, 2H, H3, JE 24.9Hz); 4.31 (m, 2H, H,); 2.61 (m, 4H, H4 E); 0.90 (t, 6H, H5 avec X=H); configuration E/E c16 DMSO-d6 7.46 (d, 2H, NH); 6.50-6.60 (dt, 2H, H3, JE15.OHz); 5.88 (dd, 2H, H2, JE 15.0Hz); 4.111m, 2H, HI); 3.37 (t, 4H, H5) c107 CDC13 6.51 (s, 2H, NH); 5.94-6.11 (dt, 2H,113, Jz 36.9Hz); 4.51 (t, 2H, H THP); 4.22 (m, 2H, HI); 3.27-3.82 (m, 8H, dont IIS); 2.15 (m, 4H, H4 Z); configuration Z/Z c117 CDC13 6.54 (s, 2H, NH); 5.67-5.81 (dt, 2H, 113, JE 24.9Hz); 4.32 (m, 2H, HI); 3.65 (t, 4H, Hs); 2.63 (m, 4H, H4 E); configuration E/E c118 CDC13 6.59 (s, 2H, NH); 6.01-6.19 (dt, 2H, H3, Jz 36.9Hz); 4.32 (m, 2H, HI); 3.66 (t, 4H, H5); 2.22 (m, 4H, H4 Z); configuration Z/Z Tableau H o Na Solvant 'H RMN description (300MHz, S ppm) deutéré c61 CDC13 6.77 (bs, 2H, NH); 6.03-6.16 (ch, 1H, H3, Jz 36.9Hz); 5.69-5.79 {dt, 1H,H3, JE 24.9Hz); 4.24 (m, 2H, H~); 3.65 (t, 4H, H5); 2.64 (m, 2H, 114 E); 2.19 (m, 2H, H4 Z); configuration E/Z c60 CDCI3 6.85 (bs, 2H, NH); 6.03-6.16 (dt, 1H, 113, Jz 36.9Hz); 5.69-5.79 (dt, 1H,H3, JE 24.9Hz); 4.24 (m, 2H, H~); 3.66 (t, 4H, 115); 2.64 (m, 2H, H4 E); 2.22 (m, 2H, H4 Z); configuration E/Z c76 CDC13 6.90 (s, 2H, NI]); 6.01-6.19 (dt, 2H, H3, Jz 37.2Hz); 4.59 (t, 2H, H THP); 4.25 (m, 2H, Hi); 3.36-3.90 (m, 8H, dont Hs), 2.20 (m, 4H, Ha Z); configuration Z/Z c77 CDCI3 6.80 (s, 2H, NH); 6.02-6.16 (dt, 1H, H3, Jz 36.9Hz); 5.70-5.80 (dt, 1H, H3, JE 24.6Hz); 4.59 (t, 2H, H THP); 4.24 (m, 2H, Hi); 3.36-3.90 (m, 8H, dont 115); 2.63 (m, 2H, Ha E); 2.19 (m, 2H, H4 Z); configuration E/Z c78 CDC13 6.73 (s, 2H, NH); 5.67-5.80 (dt, 2H, H3, JE 24.6Hz); 4.59 (t, 2H, H THP); 4.24 (m, 2H, Ht); 3.36-3.91 (m, 8H, dont H5); 2.65 (m, 4H, Ha E); configuration E/E c68 CDC13 6.92 (s, 2H, NH); 6.00-6.18 (dt, 2H, H3, Jz 37.2Hz); 4.59 (t, 2H, H THP); 4.23 (m, 2H, H,); 3.35-3.88 (m, 8H, dont Hs); 2.18 (m, 4H, Ha Z); configuration Z/Z c69 CDC13 6.80 (s, 2H, NH); 6.00-6.15 (dt, 1H, H3, Jz 36.9Hz); 5.68-5.78 (dt, 1H, H3, JE 24.9Hz); 4.59 (t, 2H, H THP); 4.24 (m, 2H, Hi); 3.36-3.88 (in, 8H, dont H5); 2.62 (m, 2H, H4 E); 2.19 (m, 2H, 114 Z); configuration E/Z c70 CDCI3 6.74 (s, 2H, NH); 5.65-5.80 (dt, 2H, H3, JE 25.2Hz); 4.59 (t, 2H, H THP); 4.23 (m, 2H, Hi); 3.35-3.88 (m, 8H, dont H5); 2.64 (m, 4H, H4 E); configuration E/E c55 DMSO-d6 8.31 (d, 2H, NH); 5.82-6.00 (dt, 2H, 113, Jz 36.6Hz); 4.12 (m, 2H, Hi); 3.36 (t, 4H, Hs); 2.12 (m, 4H, 114 Z); configuration Z/Z c56 DMSO-d6 8.31 (d, 2H, NH); 5.82-6.00 (dt, 1H, 113, Jz 36.6Hz); 5.67-5.5.81 (dt, 1H,H3, JE 24.9Hz); 4.12 (m, 2H, H1); 3.36 (t, 4H,. H5); 2.10-2.26 (m, 4H, H4 Z et E); configuration E/Z c57 DMSO-d6 8.30 (d, 2H, NH); 5.67-5.81 (dt, 2H,H3, JE 24.9Hz); 4.12 (m, 2H, Hi); 3.36 (t, 4H, Hs); 2.22 (m, 4H, H4 E); configuration E/E c22 DMSO-d6 7.93 (d, 2H, NH); 6.54-6.63 (dt, 2H, H3, JE15.6Hz); 5.83-5.88 (dd, 2H, H2, JE 15.6Hz); 4.01 (m, 2H, Hi); 3.37 (t, 4H, Hs); 2.12 (m, 4H, H4) c30 CDCI3 6.78-6.87 (dt, 2H, 113, JE15.OHz); 6.54 (d, 2H, NH); 5.83-5.88 (dd, 2H, 112, JE 15.0Hz); 4.59 (m, 2H, H -THP); 4.15 (m, 2H, Ht); 3.36-3.89 (m, 8H, dont Hi); 2.17 (m, 4H, H4) c24 CDC13 6.78-6.93 (dt, 2H, H3, JE15.OHz); 5.79-5.84 (dd, 2H, H2, JE 15.0Hz); 4.13 (m, 2H, Hi); 3.66 (t, 4H, Hs); 2.18 (m, 4H, Ha) c80 CDC13 6.81-6.91 (dt, 2H, 113, JE15.OHz); 6.55 (s, 2H, NH); 5.77-5.82 (dd, 2H, H2, JE 15.0 Hz); 4.17 (m, 2H, H,); 0.91 (t, 6H, H5 avec X=H) c20 DMSO-d6 7.95 (d, 2H, NH); 6.54-6.63 (dt, 2H, H3, JE15.OHz); 5.83-5.88; (dd, 2H, H2, JE 15.0Hz); 4.02 (m, 2H, Hi); 3.37 (t, 4H, II5); 2.13 (m, 4H, 114) c21 CDC13 6.78-6.93 (dt, 2H, H3, JE15.OHz); 5.79-5.84 (dd, 2H, H2, JE 15.0Hz); 4.17 (m, 2H, Hi); 3.64 (t, 4H, Hs); 2.21 (m, 4H, Ha) c29 DMSO-d6 7.92 (d, 2H, NH); 6.54-6.63 (dt, 2H, H3, JE15.6Hz); 5.83-5.88 (dd, 2H, H2, JE 15.6Hz); 4.52 (m, 2H, H -THP); 4.01 (m, 2H, Hi); 3.30-3.80 (m, 8H, dont H5); 2.12 (m, 4H, H4) c23 DMSO-d6 7.93 (d, 2H, NH); 6.54-6.63 (dt, 2H, H3, JE15.6Hz); 5.83-5.88 (dd, 2H, H2, JE 15.6Hz); 4.02 (m, 2H, H,); 3.36 (t, 4H, H5); 2.14 (m, 4H, H4) c73 CDC13 6.85 (s, 2H, NH); 5.99-6.18 (dt, 2H, H3, Jz 36.9Hz); 4.59 (t, 2H, H THP); 4.25 (m, 2H, H,); 3.35-3.90 (m, 8H, dont H5); 2.20 (m, 4H, H4 Z); configuration Z/Z c74 CDCI3 6.85 (s, 2H, NH); 5.99-6.18 (dt, 1H, 113, Jz 36.9Hz); 5.63-5.82 (dt, 1H, H3, JE 24.6Hz); 4.59 (t, 2H, H THP); 4.25 (m, 2H, H,); 3.35-3.90 (m, 8H, dont 115); 2.65 (m, 2H, H4 E); 2.20 (m, 2H, Ha Z); configuration E/Z e58 CDCI3 6.94 (s, 2H, NH); 5.94-6.08 (dt, 2H, 113, Jz 36.9Hz); 4.12 (m, 2H, Hi); 3.57 (t, 4H, H5); 2.12 (m, 4H, 114 Z); configuration Z/Z c59 CDC13 6.90 (bs, 2H, NH); 5.94-6.09 (dt, 1H, H3, Jz 37.2Hz); 5.58-5.72 (dt, 1H,H3, JE 25.2Hz); 4.15 (m, 2H, Hi); 3.57 (t, 4H, H5); 2.54 (m, 2H, Ha E); 2.11 (m, 2H, H4 Z); configuration E/Z c99 CDC13 6.79-6.86 (dt, 2H, 113, JE15.3Hz); 6.69 (d, 2H, NH); 5.76-5.82 (dd, 2H, H2, JE 15.3Hz); 4.57 (m, 2H, H -THP); 4.15 (m, 2H, Hi); 3.36-3.88 (m, 8H, dont H5); 2.18 (m, 4H, Ha) c83 CDC13 6.90 (s, 2H, NH); 6.02-6.19 (dt, 2H, H3, Jz 37.2Hz); 4.25 (m, 2H, H,); 2.22 (m, 4H, 114 Z); 0.90 (t, 6H, H5); configuration Z/Z c84 CDC13 6.81 (s, 2H, NH); 6.00-6.18 (dt, 1H, H3, Jz 37.2Hz); 5.67-5.81 (dt, 1H, H3, JE 24.9Hz); 4.24 (m, 2H, Hi); 2.65 (m, 2H, 114 E); 2.22 (m, 2H, 114 Z); 0.90 (t, 6H, 115); configuration E/Z c85 CDC13 6.73 (s, 2H, NH); 5.67-5.81 (dt, 2H, H3, JE 24.9Hz); 4.25 (m, 2H, Hi); 2.65 (m, 4H, H4 E); 0.91 (t, 6H, H); configuration E/E c90 CDC13 6.57 (s, 2H, NH); 6.03-6.21 (dt, 1H, H3, Jz 36.9Hz); 5.70-5.84 (dt, 1H, 113, JE 24.9Hz); 4.07 (t, 4H, H5); 2.91 (m, 2H, H,); 2.64 (m, 2H, Ha E); 2.19 (m, 2H, Ha Z); 2.06 (s, 6H, -O-CO-CH3); configuration E/Z c106 CDC13 6.75 (s, 2H, NH); 5.67-5.80 (dt, 2H, H3, JE 24.6Hz); 4.59 (t, 2H, H THP); 4.21 (m, 2H, H,); 3.36-3,87 (m, 8H, dont 115); 2.67 (in, 4H, Ha E); configuration E/E c114 CDC13 6.90 (d, 2H, NH); 5.67-5.81 (dt, 2H,H3, JE 24.9Hz); 4.21 (m, 2H, Hi); 4.06 (t, 4H, H5); 2.63 (m, 4H, Ha E); configuration E/E c115 CDC13 6.90 (d, 2H, NH); 6.00-6.18 (dt, 1H, H3, Jz 36.6Hz); 5.68-5.82 (dt, 1H, H3, JE 24.9Hz); 4.22 (m, 2H, Hi); 3.66 (t, 4H, H5); 2.63 (m, 2H, H4 E); 2.22 (ni, 2H, Ha Z); configuration E/Z c116 CDCl3 6.97 (d, 2H, NH); 6.06-6.19 (dt, 2H, H3, Jz 36.6Hz); 4.22 (m, 2H, H,); 3.66 (t, 4H, H5); 2.23 (m, 4H, 114 Z); configuration Z/Z 10 Exemple 33 : Screening de l'activité anti-tyrosinase Les tests ont été effectués par la réaction à la DOPA Oxydase sur épiderme séparé, comparativement à un témoin DOPA et à de l'acide kojique à 0.06%. Les produits sont testés en solution à 30µg/mL dans du DMSO. Mode opératoire : Les épidermes provenant d'une plastie abdominale congelée (femme 33 ans) ont été séparés par incubation dans du NaBr 2N pendant 1h00 à37°C. Ils ont ensuite été fixés dans un fixateur formolé tamponné, rincés et mis en contact avec le mélange volume / volume : solutions de L- DOPA / formulation à tester. 10 Après l'incubation, ils ont été rincés et montés entre lame et lamelle avec du liquide de montage de type Aquatex. L'observation a été réalisée en microscopie optique à l'objectif x 10. Les prises de vue ont été réalisées avec une caméra tri CCD Sony DXC 390P et stockées à l'aide du logiciel d'archivage de données Leica IM1000. 15 Pour chaque lot, plusieurs champs microscopiques ont été analysés à l'aide du logiciel d'analyse d'images LEICA QWin. Pour chaque champ, les mélanocytes DOPA positifs ont été dénombrés et la surface de la zone a été mesurée pour déterminer le nombre de mélanocyte par mm2. 20 Résultats Les observations des épidermes testés avec les différentes solutions de produits solubilisés dans le DMSO donnent les résultats suivants N° composé Variatio n Témoin Acide kojique -81 c40 -61 c59 -56 c 42 -55 - c129 -52 c93 -48 c127 -45 c79 -45 Réf 4 -36 2-Ruoro-14- hydroxy- tetradec-2- enoic acid Réf 5 -29 (E)-15- Hydraxy- pentadec-2- enoic acid Réf 6 -24 (E)-12- Hydroxy- dodec-2-enoic acid Réf1 -16 (E)-18- Hydroxy- octadec-2- enoic acid Réf3 -15 (E)-14- Hydroxy- tetradec-2- enoic acict 25 Les variations sont plus importantes avec les composés 40, 59 et 42 qu'avec les composés références notés réf 1, réf 3, réf 4, réf 5 et réf 6, et indiqués dans le tableau ci-dessus. Ces composés sont donc plus efficaces que les composés références pour limiter l'activité tyrosinase. Exemple 34 : Screening de l'activité anti- mélanogénèse Il a été effectué pour des composés en solution dans le DMSO. La synthèse de mélanine a été mesurée dans un modèle de mélanocytes B16 stimulé avec un dérivé stable de l'a-MSH (hormone naturelle de stimulation de la mélanogénèse : Melanocyte Stimulating Hormone) : la NDP-MSH ([Nle4, DPhe']-a-MSH ). 10 Culture et traitements Les mélanocytes ont été ensemencés en plaque 96 puits et cultivés pendant 24h (37°C, 5% CO2, DMEM lg/L glucose sans rouge phénol complémenté avec de glucose 3g/L, L-glutamine 2mM, 15 Pénicilline 50U/mL, Streptomycine 50gg/mL, sérum de Veau Foetal (SVF) 10%). Après incubation, le milieu de culture a ensuite été remplacé par du milieu de culture complémenté ou non (Témoin non stimulé) avec un dérivé stable de l'a-MSH et contenant ou non (témoins) les composés à tester ou la référence (acide kojique à 25, 100, 400, 800 µg/mL). Chaque condition expérimentale a été réalisée en n=3, à l'exception des témoins réalisés en n=6. Les cellules ont 20 ensuite été incubées pendant 72h. Des puits sans cellule ont reçu en parallèle les mêmes quantités de milieu supplémenté ou non en NDP-MSH et contenant ou non les composés à l'essai ou la référence afm de quantifier le bruit de fond lié à la présence des composés. Dosage de la mélanine 25 A la fin de l'incubation de 72heures, la mélanine totale (intra et extra-cellulaire) a été quantifiée par mesure de l'absorbance de chaque échantillon à 405nm (lecture directe des plaques de culture) contre une gamme étalon de mélanine (concentrations de mélanine testées de 0,78 à 100µg/mL). Le bruit de fond, mesuré dans les puits sans cellule, a été retranché aux valeurs mesurées afin de 30 ne prendre en compte que l'effet lié à la production de mélanine sans tenir ,compte des 2.978441 interférences éventuelles liées à la présence des composés. Les résultats ont été exprimés en pourcentage de mélanine par rapport au témoin ainsi qu'en pourcentage d'inhibition. Evaluation de la viabilité des cellules - Test de réduction du MTT A la fin du traitement, les cellules ont été incubées en présence de MTT (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide) dont la transformation en cristaux bleus de formazan est proportionnelle à l'activité de la succinate deshydrogénase (enzyme mitochondriale). Après dissociation des cellules, le formazan a été solubilisé en milieu DMSO et la densité optique (DO), représentative du nombre de cellules vivantes et de leur réactivité métabolique, a été mesurée avec un lecteur de microplaques à 540nm (VERSAmax, Molecular Devices). Nom et concentrations testées (MM) Données normalisées Viabilité (MTT) Inhibition (%) % témoin stimulé Témoin stimulé 10-' M 0 - 100 Témoin non - 100 103 stimulé 25 gg/mL 59 103 Acide kojique 100 gg/mL 83 99 400 µg/mL 93 96 1 0 108 c59 3 9 90 10 38 88 10 -1 89 c40 30 -6 85 100 40 86 1 -11 87 c44 3 36 88 10 69 91 c69 30 116 87 100 112 78. c66 30 119 96 100 118 93 c67 30 119 71 100 116 81 e70 30 115 90 100 116 86 c74 30 110 78 100 111 81 c106 30 114 73 100 119 36 c149 30 108 87 100 120 28 30 104 83 cilO 100 120 0 30 93 116 c71 100 109 104 c72 30 &7 102 100 112 86 c8 30 86 86 100 115 77 c60 30 83 105 100 97 101 c49 30 83 83 100 118 0 c108 30 73 75 100 105 80 c59 30 71 82 100 118 2 c107 30 66 95 100 120 26 c58 30 62 101 100 83 98 clll 30 25 98 100 108 57 c68 30 95 64 100 108 50 c140 10 112 45 30 123 0 Refl: 30 0 79 (E)-18- 1 ydroxy- 100 115 63 octadec-2-enoic acid c161 30 17 89 100 114 75 c27 30 12 89 100 110 71 c122 30 8 75 = 100 109 79 30 94 c40 100 98 94 c115 30 94 100 95 97 c128 30 9 88 100 93 75 c7 30 0 77 100 92 83 c135 30 0 82 100 90 75 c116 30 6 88 100 87 91 Ref 2 : 30 83 18-Hydroxy- 100 79 72 octadec-2-en-2- fluoro-oic acid c46 30 0 77 - 100 75 68 c30 10 42 77 30 71 76 c15 30 2 76 100 73 74 Ref3 : 30 0 92 (E)-14- tetrahydropyran 100 11 103 yloxy-tetradec- 2-enoic acid Ref 4 : 30 0 114 14-Hydroxy- 100 0 95 tetraadec-2-en- 2-fluoro-oic acid L'inhibition de la mélanogénèse par les composés revendiqués est démontrée au niveau cellulaire. Leurs propriétés dépigmentantes sont supérieures à celles des composés de référence, notamment 5 ceux de la famille des hydroxy-acides a,(3 insaturés (ref 1, ref2, ref3, ref 4). Exemple 35 : Inhibition de l'élastase leucocytaire 10 Les élastases sont une sous-famille des protéases à sérine responsables de la dégradation de l'élastine. Parmi les nombreux substrats naturels de cette enzyme, on trouve, en plus de l'élastine, les protéoglycanes du cartilage, la fibronectine et les collagènes de type I, II, III et IV. Au niveau cutané, l'inhibition de l'élastase permet de lutter contre les effets du vieillissement photo-induit ou non et de limiter l'apparition des rides et des vergetures. Modèle biologique : élastase leucocytaire humaine Conditions ^ Témoin (n=6) - Référence: AAPV (N-methoxysuccinyl-Ala-Ala-Pro-Val-chloromethyl ketone) 100 µM (n=6) 10 - composés testés (n=2) Incubation : 1 heure Test : L'activité de l' élastase leucocytaire humaine a été évaluée en utilisant le kit EnzChek® Elastase assay kit. La mesure de l'activité repose sur l'utilisation d'un substrat fluorescent (DQTM Elastin) dont la fluorescence est « quenchée » de part la présence de groupements « quencheurs » au niveau des sites lytiques. Après action de l'enzyme, les groupements « quencheurs » sont libérés et la fluorescence émise est proportionnelle à l'activité de l'enzyme. Les résultats ont été exprimés en pourcentage d'inhibition de l'activité enzymatique. 20 Traitement Données normalisées Composé testé Concentration (pM) Inhibition (%) Écart-type (%) Témoin - 0 5 AAPV 100 95 2 DMSO 0.3% 0 2 c129 30 57 Z c128 30 75 1 Exemple 36 : Prolifération des fibroblastes dermiques humains âgés: En plus d'une diminution de la production et une augmentation de la dégradation de la matrice extracellulaire, le vieillissement dermique est accompagné d'une diminution de la capacité 25 proliférative des fibroblastes. Ainsi, une stimulation de la prolifération des fibroblastes âgés permet de reverser partiellement les effets néfastes du vieillissement. Modèle biologique : Fibroblastes dermiques humains vieillis selon le modèle de Hayflick, (fibroblastes obtenus par repiquages successifs) (P17NHDF) Conditions de culture : 37°C, 5% CO2 Milieu de culture : DMEM/sérum de veau foetal (SVF) 10% 10 Conditions : ^ Témoin (n=6) - Contrôle fibroblastes normaux non vieillis (P7 NHDF) (n=2) - Référence: EGF (Epidermal Growth Factor) à 10 ng/mL (n=2) - composés testés (n=2) Incubation : 72 heures 15 Test : Les effets sur la prolifération ont été évalués en mesurant l'incorporation de [3H]-Thymidine dans des fibroblastes vieillis selon le modèle de Hayflick. Le modèle de Hayflick consiste à effectuer des repiquages successifs afin d'induire un phénotype "âgé". Les résultats ont été exprimés en pourcentage de stimulation de l'incorporation de [3H]-Thymidine. Traitement Données normalisées Composés testés Concentrations(pM) Stimulation (%) écart-type (%) Témoin P 17 - 0 14 Témoin P7, - 308 86 EGF 10ng/ml 89 5 _ c85 10 22 1 c7 10 63 13 c42 3 48 64 Exemple 37 : Prolifération et/ou migration des fibroblastes Les phases de migration et de prolifération des cellules sont des phases majeures de la cicatrisation qui interviennent après la phase d'inflammation. Elles sont nécessaires pour la recolonisation de la 20 25 plaie. Une augmentation de la migration et de la prolifération des cellules permet une amélioration de la cicatrisation. Modèle biologique : Fibroblastes dermiques humains normaux (NHDF) Conditions de culture : 37°C, 5% COz Milieu de culture : DMEM 10 Conditions : Témoin (NHDF en milieu d'essai DMEM 0% SVF) (n=6) ^ Référence: SVF (Sérum de Veau Foetal) à 10% (n=2) - composés testés (n=2) Incubation : 72 heures Test : Les fibroblastes humains normaux ont été ensemencés dans des plaques 96 puits adaptées 15 pour les études de migration. Dans ces plaques, les supports ont été pré-traités avec une solution de collagène et un cache a été placé au centre de chaque puit, empêchant l'adhésion des cellules dans cette zone et formant ainsi une plaie artificielle. Après marquage des cellules à la calcéine, les caches ont été retirés puis les cellules ont été traitées avec les composés ou la référence. 20 La migration des cellules a été suivie microscopiquement pendant 72 heures avec prise de clichés à 0 h, 24h, 48 h et 72 h. Les résultats ont été exprimés en pourcentage de recouvrement et comparés au témoin non traité. Traitement Concentration % témoin écart-type (%) (NM) 24h Témoin - 100 3 SVF 10 ng/mI 154 39 DMSO 0.1 % 112 13 c132 10 131 8 c90 1 132 20 -c27 -1fï 131 ,14 c42 3 130 16 25 166 Exemple 38 : Prolifération et/ou migration des kératinocytes: Les phases de migration et de prolifération des cellules sont des phases majeures de la cicatrisation qui interviennent après la phase d'inflammation et sont nécessaires pour la recolonisation de la plaie. Une augmentation de la migration et de la prolifération des cellules permet une amélioration de la cicatrisation. 10 Modèle biologique : Kératinocytes épidermiques humains normaux (NHEK) Conditions de culture : 37°C, 5% CO2 Milieu de culture : Kératinocyte-SFM -EP -EGF (milieu de culture kératinocyte - serum free medium (SFM) sans extrait pituitaire (EP) et sans Epidermal Growth Factor ( EGF) Conditions : ^ Témoin (n=6) 15 - Référence: EGF (Epidermal Growth Factor) à 10 ng/ml (n=2) - composés testés (n=2) Incubation : 72 heures Test : Les kératinocytes humains normaux ont été ensemencés dans des plaques 96 puits adaptées pour les études de migration. Dans ces plaques, les supports ont été pré-traités avec une solution de 20 collagène et un cache a été placé au centre de chaque puit, empêchant l'adhésion des cellules dans cette zone et formant ainsi une plaie artificielle. Après marquage des cellules à la calcéine, les caches ont été retirés puis les cellules ont été traitées avec les composés ou la référence. La migration des cellules a été suivie microscopiquement pendant 72 heures avec prise de clichés à 25 0 h, 24h, 48 h et 72 h. Les résultats ont été exprimés en pourcentage de recouvrement et comparés au témoin non traité. Ils sont rassemblés dans le tableau suivant Traitement 1 Concentration I % témoin 1 écart-type (%) 30 (PM) 48h Témoin - 100 9 EGF 10 ng/mL 161 5 DMSO 0.1% 76 5 c79 1 141 3 c85 10 176 2 c132 10 138 5 c40 30 144 12 c17 1 141 9 c90 1 130 3 c3& 3 154 7 c45 3 145 6 c42 3 141 15 c53 3 137 17 10 15