FR 3057776 A1 20180427 FR 1660244 A 20161021 Lepista flaccida destiné à être utilisé dans le traitement d'une maladie due à une mutation non-sens L'invention concerne le champignon Lepista flaccida destiné à être utilisé dans le traitement d'une maladie due à une mutation non-sens d'un gène conduisant à l'introduction prématurée d'un codon stop UGA et/ou UAA. Elle concerne également un extrait de Lepista flaccida destiné à être utilisé dans le traitement d'une maladie due à une mutation non-sens d'un gène conduisant à l'introduction prématurée d'un codon stop UGA et/ou UAA. Elle concerne aussi cet extrait de Lepista flaccida destiné à être utilisé dans le traitement d'une maladie due à une mutation non-sens d'un gène conduisant à l'introduction prématurée d'un codon stop UGA et/ou UAA obtenu par macération et/ou infusion de Lepista flaccida dans un solvant. Elle concerne encore une composition pharmaceutique comprenant cet extrait de Lepista flaccida. Les mutations non-sens correspondent à des mutations ponctuelles qui conduisent à transformer un codon permettant l'incorporation d'un acide aminé lors de la traduction en un codon stop (UGA, UAG ou UAA) qui provoque l'arrêt de la traduction. Ces mutations sont à l'origine d'environ dix pourcent des cas de maladies génétiques rares, telles que la mucoviscidose, la myopathie de Duchenne, l'hémophilie, le nanisme, etc... ou fréquentes telles que certaines maladies métaboliques, neurologiques ou cancers (Mort et al., 2008, Hume Mutat. 29, 1037-1047). La conséquence d'une mutation non-sens est l'activation d'un mécanisme de surveillance des ARNm qui va dégrader PARNm porteur de la mutation non-sens. Ce mécanisme est appelé NMD (pour « nonsense-mediated mRNA decay ») et prévient la synthèse d'une protéine tronquée (Hug et al., 2016 ; Nucleic acids res. 44, 1483-1495 ; Kervestin and Jacobson, 2012; Popp and Maquat, 2014 Mol tells. 37, 1-8; Schweingruber et al., 2013, Biochem biophys. Acta. 1829: 612-623). Une mutation non-sens conduit par conséquent à l'absence d'expression du gène porteur de cette mutation dans la majeure partie des cas. Plusieurs stratégies ont été développées pour corriger les conséquences d'une mutation non-sens (Benhabiles et al., 2016, Non-Senne Mutation Correction in liman Diseases: an Approach for Targeted Medicine, Elseivier edn. Publisher Catherine Van 3057776 2 Der Laan), notamment l'inhibition du NMD et/ou l'activation de la translecture. La translecture est un mécanisme conduisant à l'incorporation, au cours de la traduction, d'un acide aminé lorsque le ribosome atteint un codon stop prématuré. La translecture n'est pas observée sur le codon stop physiologique (i.e., le codon stop terminant une phase ouverte 5 de lecture sauvage) dans les cellules d'eucaryotes supérieurs, même en présence de molécules activatrices de translecture (Welch et al., 2007, Nature. 447, 87-91), à l'exception à ce jour de quatre gènes utilisant la translecture sur leur codon stop physiologique (Loughran et al., 2014, Nucleic Acids res. 42, 8828-8838). La translecture d'un codon stop prématuré à partir d'un ARNm porteur de ce codon stop prématuré permet 10 de conduire à la synthèse d'une protéine de taille identique à celle de la protéine sauvage et présentant au maximum un seul acide aminé muté (différent) par rapport à la protéine sauvage. L'acide aminé incorporé lors de la translecture au niveau du codon stop prématuré peut être différent de celui présent dans la protéine sauvage. Si cet acide aminé n'est pas incompatible avec la fonction de la protéine, la protéine synthétisée après translecture sera 15 alors fonctionnelle. Plusieurs molécules ont été identifiées pour leur capacité à induire la translecture (Benhabiles et al., 2016 précédemment cité). Il s'agit notamment de certains membres de la famille des aminoglycosides comme la gentamycine ou la généticine (aussi appelée G418) et des molécules n'appartenant pas à cette famille comme l'ataluren (aussi appelé PTC124 20 ou Translarna) ou l'amlexanox (Du et al., 2009; J. Exp. Med. 206, 2285-2297 ; Welch et al., 2007, précédemment cité). Cependant, ces molécules ont une efficacité de translecture très limitée et/ou une toxicité importante. Par exemple, il n'a pas été clairement démontré chez des patients atteints de myopathie de Duchenne liée à une mutation non-sens, que l'ataluren pouvait restaurer l'expression d'un gène porteur de cette mutation non-sens 25 (Fitzhugh and Writer, 2016 Bioword. 27, 3-5). Le G418 est une des molécules activant la translecture les plus efficaces (Bidou et al., 2004, Gen. Ther., 11, 619-627; Dranchak et al., 2011, J. Cell Biochem. 112, 1250-1258; Sangkuhl et al., 2004, Hum Mol Genet. 13, 893903), mais sa toxicité ne permet pas un développement thérapeutique (Swan, 1997, Seminephrol, 17, 27-33). 30 Par ailleurs, la 2,6-diaminopurine (DAP) est connue pour son utilisation en clinique dans le traitement de la leucémie (Burchenal et al., 1949, Cancer. 2, 119) et son activité antivirale (Friend, 1951, Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 78, 150-153). 3057776 3 La clitocine est connue pour sa capacité à corriger les mutations non-sens (brevet W02004/009609) mais également pour leur toxicité. Dans ce contexte, l'invention propose d'utiliser le champignon Lepista flaccida ou un extrait de ce champignon pour la correction des mutations non-sens. Le champignon est 5 connu sous plusieurs dénominations, les plus usuelles étant Lepista flaccida, Lepista inversa, Paralepista flaccida, Paralepista inversa, Clitocybe flaccida et Clitocybe inversa. Selon le référentiel taxonomique utilisé, ce champignon est dénommé Lepista flaccida (source Mycobank) ou Paralepista flaccida (source Index fungorum). Pour la suite du texte, seul le nom Lepista flaccida est retenu. 10 Plus précisément, l'invention propose le champignon Lepista flaccida destiné à être utilisé dans le traitement et/ou la prévention d'une maladie due à une mutation non-sens d'un gène conduisant à l'introduction prématurée d'un codon stop UGA et/ou UAA. En effet, les inventeurs ont découvert qu'un extrait de Lepista flaccida permet de traiter et/ou prévenir une maladie due à une mutation non-sens d'un gène conduisant à 15 l'introduction prématurée d'un codon stop UGA et/ou UAA. Un premier procédé de préparation de cet extrait est un procédé de macération et/ou infusion du champignon Lepista flaccida dans un solvant. Le procédé peut être appliqué aussi bien au champignon fraîchement collecté qu'au champignon déshydraté par lyophilisation ou par séchage. 20 Le terme macération signifie que le champignon est mis en contact avec le solvant sans chauffage. Le terme infusion signifie que le champignon est mis en contact avec le solvant chaud, généralement chauffé à une température comprise entre 20°C et 100°C, selon le point d'ébullition du solvant utilisé. 25 L'extrait peut également être préparé d'abord par macération (à froid) puis par infusion (le solvant est chauffé, toujours en présence du champignon) ou l'inverse. Plus précisément, ce procédé comprend les étapes suivantes : A) macération et/ou infusion du champignon Lepista flaccida dans un solvant choisi parmi : 30 - de l'eau ; de l'eau acidifiée par exemple avec de l'acide acétique, de l'acide chlorhydrique, de l'acide faunique, de l'acide trifluoroacétique, de l'acide fluorhydrique, de l'acide fluoroacétique, de l'acide oxalique ; 3057776 4 de l'eau rendue basique par exemple avec de l'hydroxyde de sodium ou de l'ammoniaque, - un hydrocarbure tel que l'hexane, le cyclohexane, le benzène, le toluène, le xylène, le trichloroéthylène, le perchloroéthylène, 5 - un alcool tel que le méthanol, l'éthanol, le propan-l-ol, propan-2-o1, le butanol, l'alcool furfurylique, - une cétone telle que l'acétone et la méthylisobutylcétone, - un éther tel que l'éther diéthylique (appelé également éther éthylique, oxyde de d'éthyle ou diéthyléther), le méthyl terbutyl éther et le 10 tétrahydrofurane, - un glycol tel que l'éthylène glycol et le propylène glycol, - un éther de glycol tel que le propylène glycol méthyl éther et le propylène glycol butyl ether, - un ester tel que l'acétate d'éthyle, le lactate d'éthyle, 15 - un ester de carbonate tel que le carbonate de propylène, - un dérivé nitré tel que le nitrométhane, le 2-nitropropane et le nitrobenzène, - un dérivé soufré tel que le chlorure de thionyle, le chlorure de sulfuryle, et le diméthylsulfoxyde, 20 - un dérivé azoté tel que le diméthylformamide, la triéthylamine, la N- méthyl-2-pyrrolidone, le N,N-diméthylformamide, la pyridine et l'acétronitrile, - un dérivé chloré tel que le chloroforme et le dichlorométhane (appelé également chlorure de méthylène), et 25 - les mélanges de deux ou plus de ces solvants, à une température comprise entre 20 et 100 °C selon le point d'ébullition des solvants ; B) filtration du mélange obtenu à l'étape A) pour récupérer d'une part une phase solide et d'autre part une phase liquide ; C) récupération de la phase liquide obtenue après l'étape B) 30 De préférence, dans ce premier procédé, le solvant est choisi parmi de l'eau, un alcool en C2 à C4, un mélange d'eau et d'au moins un alcool en C2 à C4 et un mélange d'au moins deux alcools en C2 à C4. 3057776 5 Selon un mode de mise en oeuvre préféré, ce premier procédé comprend de plus, avant l'étape A), une étape Al) de congélation à -80°C des champignons Lepista flaccida tels qu'obtenus après récolte et de lyophilisation, des champignons Lepista flaccida tels qu'obtenus après récolte. L'étape Al) de lyophilisation des champignons Lepista flaccida tels qu'obtenus après récolte peut également être remplacée par une étape de séchage à l'étuve à 40°C pendant 24 à 72 heures des champignons Lepista flaccida tels qu'obtenus après récolte. Toujours de préférence, le premier procédé de l'invention comprend de plus après l'étape Al) mais avant l'étape A), une étape A2) de broyage des champignons obtenus après l'étape Al). Cependant, lorsque les solvants ne sont pas simplement de l'eau, ils doivent être évaporés et l'extrait obtenu doit être remis dans de l'eau potable, avant d'être consommé. Ainsi, le procédé selon l'invention peut également comprendre, après l'étape C), lorsque le solvant n'est pas de l'eau, une étape d'évaporation de ce solvant et la dilution dans de l'eau de la phase obtenue après cette évaporation du solvant. De préférence, dans l'extrait de l'invention le champignon après macération et/ou infusion est retiré, par exemple par une simple filtration. Egalement de préférence, le Lepista flaccida est séché ou lyophilisé avant sa macération et/ou infusion dans le solvant. En effet, dans un tel cas, il se conserve mieux et ne contient plus d'eau, ce qui permet d'obtenir une concentration en principe(s) actif(s) de l'extrait de Lepista flaccida plus importante dans le solvant. Le champignon Lepista flaccida doit être congelé avant d'être lyophilisé. Il peut être encore broyé avant sa macération et/ou infusion dans le solvant. Mais l'extrait de Lepista flaccida de l'invention peut aussi être obtenu par un second procédé. Ce second procédé comprend les étapes suivantes : a) congélation à -80°C pendant 7 à 12 heures et lyophilisation à -110°C pendant 24 à 48 heures sous vide secondaire à le mbar des champignons Lepista inversa, b) broyage des champignons Lepistaflaccida, c) extraction trois fois avec du méthanol distillé de la poudre lyophilisée broyée obtenue à l'étape b), d) récupération de la phase solide obtenue à l'étape c) et extraction trois fois avec de l'eau distillée à pH = 6 de cette phase solide, e) rassemblement des phases aqueuses obtenues à l'étape d) et congélation à -20°C, 3057776 6 f) décongélation et filtration sur résine polyaromatique hydrophobe des phases aqueuses obtenues après l'étape e) et maintien en contact de ces phases aqueuses avec la résine pendant 7 à 12 heures, g) rinçage à l'eau distillée de la résine après l'étape f), 5 h) désorption avec du méthanol des produits contenus dans la phase aqueuse après l'étape g), i) désorption avec de l'acétone des produits contenus dans la phase méthanolique obtenue après l'étape h), j) évaporation de la phase acétonique obtenue à l'étape i), et 10 k) récuperation de l'extrait obtenu après l'étape j). L'extrait obtenu après l'étape k) peut ensuite être dissout dans de l'eau pour obtenir l'effet thérapeutique et/ou préventif voulu. Dans ce second procédé de la préparation de l'extrait de Lepista flaccida, la résine qui peut être utilisée à l'étape g) est une résine du type Amberlite-XAD4, une résine de 15 type XAD1180, une résine du type XAD2, une résine du type XAD16N, une résine du type XAD7HP, une résine du type XAD1600N. Un rapport d'environ un litre de résine pour 0,4 1 de phase aqueuse est de préférence utilisé à l'étape f). II suffit ensuite de simplement boire l'extrait obtenu par l'un des procédés décrits 20 ci-dessus pour obtenir l'effet thérapeutique et/ou préventif voulu. Dès lors, l'invention propose également un extrait de Lepista flaccida obtenu par l'un des procédés ci-dessus destiné à être utilisé dans le traitement et/ou la prévention d'une maladie due à une mutation non-sens d'un gène conduisant à l'introduction prématurée d'un codon stop UGA et/ou UAA. 25 L'extrait de l'invention comprend de la 2,6-diaminopurine (DAP), de la clitocine ainsi que d'autres composés qui restent à être identifiés. La clitocine peut être l'anomère alpha de la clitoeine (6-amino-5-nitro-4-(a-D-ribofizanosylamino)-pyrimidine), l'anomère beta de la clitoeine (6-amino-5-nitro-4-(P-D-ribofuranosylamino)-pyrimidine), ou un mélange des deux. 30 Comme cela sera montré dans les exemples, cet extrait n'a pas de toxicité in vivo. Il est capable de restaurer l'expression des gènes contenant une mutation non-sens UGA et/ou UAA d'une manière très efficace. 3057776 7 La présente invention a aussi pour objet une composition pharmaceutique comprenant un extrait de Lepista flaccida tel que défini ci-dessus et un excipient pharmaceutiquement acceptable destinée à être utilisée dans le traitement et/ou la prévention d'une maladie due à une mutation non-sens d'un gène conduisant à 5 l'introduction prématurée d'un codon stop UGA et/ou UAA. On entend par « excipient » une substance qui comporte l'extrait de Lepista flaccida selon l'invention dans une composition lui conférant par exemple des propriétés de stabilité, de forme (par exemple liquide, solide, gélule), de goût, de dissolution (par exemple dissolution ciblée dans l'estomac ou le tube digestif) et de couleur. 10 Un « excipient pharmaceutiquement acceptable » désigne un excipient qui ne produit pas de réaction défavorable, allergique ou indésirable lorsqu'il est administré à un sujet. Cela inclut tous les solvants, les milieux de dispersion, les enrobages, les agents antibactériens et antifongiques, les agents isotoniques, les agents à absorption retardée et autres substances similaires. Pour une administration chez un être humain, les préparations 15 doivent répondre aux critères de stérilité, de pyrogénicité, et aux nonnes de sécurité et de pureté générales requises par les offices régulateurs. L'excipient peut par exemple être de l'eau. La présente invention a aussi pour objet une méthode pour traiter et/ou prévenir des maladies dues à une mutation non-sens d'un gène conduisant à l'introduction prématurée 20 d'un codon stop UGA et/ou UAA telle que définie ci-dessus, comprenant l'administration d'une quantité thérapeutiquement efficace d'un extrait de Lepista flaccida ou d'une composition pharmaceutique tels que définis ci-dessus à un sujet ayant besoin de ce traitement. Les termes « traitement » ou « traiter » concernent à la fois le traitement 25 thérapeutique et les termes « prévention » ou « prévenir » concernent les mesures prophylactiques ou préventives, pour lesquels l'objet est d'empêcher ou de ralentir la progression de la maladie due à une mutation non-sens d'un gène conduisant à l'introduction prématurée d'un codon stop UGA et/ou UAA. Les sujets qui ont besoin d'un traitement incluent ceux qui ont déjà une maladie due à une mutation non-sens d'un gène 30 conduisant à l'introduction prématurée d'un codon stop UGA et/ou UAA, ceux prédisposés à une maladie due à une mutation non-sens d'un gène conduisant à l'introduction prématurée d'un codon stop UGA et/ou UAA et ceux chez qui une maladie due à une 3057776 8 mutation non-sens d'un gène conduisant à l'introduction prématurée d'un codon stop UGA et/ou UAA doit être prévenue, Un sujet est traité avec succès pour une maladie due à une mutation non-sens d'un gène conduisant à l'introduction prématurée d'un codon stop UGA et/ou UAA si, après 5 avoir reçu une quantité thérapeutiquement efficace de Lepista flaccida ou d'extrait de Lepista flaccida ou d'une composition pharmaceutique selon l'invention, le sujet montre une réduction observable ou mesurable, ou l'absence, de l'un au moins des points suivants : réduction du nombre de cellules pathogènes, réduction du pourcentage de cellules pathogènes par rapport aux cellules totales, et/ou de l'un ou de plusieurs des 10 symptômes associés à la maladie due à une mutation non-sens d'un gène conduisant à l'introduction prématurée d'un codon stop UGA et/ou UAA ou une amélioration de la qualité de vie. Les paramètres d'évaluation ci-dessus sont facilement mesurables par les procédures de routine familières à un médecin. Avantageusement, les patients sont présélectionnés comme présentant dans un gène 15 d'intérêt ladite mutation non-sens sur au moins un allèle. Le terme « sujet » concerne un mammifère, de préférence un humain. Dans un mode de réalisation préféré, le sujet peut être un « patient », i.e. un animal à sang chaud, de préférence un humain, en attente de recevoir ou recevant des soins médicaux, qui a fait l'objet d'une procédure médicale, ou qui est suivi pour le développement d'une maladie 20 génétique liée à une mutation non-sens d'un gène conduisant à l'introduction prématurée d'un codon stop UGA et/ou UAA. Une « quantité thérapeutiquement efficace » concerne la quantité de Lepista flaccida ou d'extrait de Lepista flaccida ou de composition pharmaceutique nécessaire et suffisante pour, sans causer d'effets secondaires significatifs et défavorables pour le sujet, diminuer 25 ou stopper la progression, ou l'aggravation de l'un ou de plusieurs des symptômes de la maladie due à une mutation non-sens d'un gène conduisant à l'introduction prématurée d'un codon stop UGA et/ou UAA, pour soulager les symptômes de la maladie due à une mutation non-sens d'un gène conduisant à l'introduction prématurée d'un codon stop UGA et/ou UAA, et/ou pour guérir la maladie due à une mutation non-sens d'un gène conduisant 30 à l'introduction prématurée d'un codon stop UGA et/ou UAA. Les modes et voies d'administration du Lepista flaccida ou d'extrait de Lepista flaccida ou d'une composition pharmaceutique tels que définis ci-dessus peuvent être 3057776 9 adaptés par l'homme du métier en fonction du sujet et du procédé de préparation de l'extrait. A titre d'exemple, Lepista flaceida ou l'extrait de Lepista flaecida selon l'invention peut être formulé pour une administration par voie orale ou nasale, ou par injection par voie intraveineuse, intramusculaire ou sous-cutanée, de préférence par voie 5 orale. La détermination de la dose à laquelle ledit Lepista flaccida ou extrait de Lepista flaceida selon l'invention est utilisé peut s'effectuer par des techniques connues de l'homme du métier, par exemple lors d'essais cliniques. Cette dose dépendra de divers facteurs comprenant notamment l'activité de l'extrait de Lepista flaceida selon l'invention, 10 du mode d'administration, de la durée de l'administration, de la durée du traitement, d'autres médicaments ou composés utilisés en combinaison avec ledit Lepista flaceida ou extrait de Lepista flaceida selon l'invention, de l'âge, du sexe, du poids, de l'état de santé générale et de l'histoire médicale antérieure du sujet qui est traité. On entend par « maladie due à une mutation non-sens d'un gène conduisant à 15 l'introduction prématurée d'un codon stop UGA et/ou UAA », une maladie causée partiellement ou totalement par la présence d'une mutation non-sens affectant un ou deux allèles un gène d'intérêt dans les cellules geiiuinales et/ou les cellules somatiques ; la mutation non-sens étant une mutation ponctuelle d'un codon qui entraîne le changement d'un codon codant un acide aminé en un codon stop UGA et/ou UAA qui entraîne l'arrêt 20 de la traduction. En particulier, la maladie peut être causée partiellement par la présence d'une mutation non-sens affectant un allèle d'un gène d'intérêt, l'autre allèle présentant un autre type de mutation. Plusieurs maladies dues à cette mutation non-sens ont été décrites (Keeling et al., 2006; Bidou et al., 2012; Lee and Dougherty, 2012 ; Kosuga et al., 2016). Ces maladies peuvent affecter différents organes, tels que le foie, les intestins, le rein, le 25 poumon, le muscle, la moelle osseuse ou le système nerveux central. Les maladies dues à la mutation non-sens d'un gène conduisant à l'introduction prématurée d'un codon stop UGA et/ou UAA peuvent être identifiées par des méthodes de génotypage des cellules du sujet à traiter, plus particulièrement par séquençage ou par quantification de l'expression du gène d'intérêt. Ces méthodes sont bien connues de 30 l'homme du métier (Baharin et al., 2015 ; Bladen et al., 2015 ; Cane et al., 2015 ; Carmosino et al., 2016 ; Csanyi et al., 2016 ; Kosuga et al., 2016 ; Lin et al., 2016 ; Roosing et al., 2016 ; Xia et al., 2016 ; Zemrani et al., 2016 ; Zhao et al., 2016). Par 3057776 10 exemple, la Demande Internationale WO 2012/016930 décrit de manière générale une méthode pour déterminer si une maladie est due à cette mutation non-sens. Les maladies traitées et/ou prévenues par l'extrait de Lepista flaceida selon l'invention ou par la composition pharmaceutique de l'invention sont en particulier les 5 maladies inflammatoires dues à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, les maladies neurodégénératives dues à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, les maladies auto-immunes dues à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, les maladies cardiovasculaires dues à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, les maladies pulmonaires dues à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, les cancers dus à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, l'amylose 10 due à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, la maladie d'Alzheimer due à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, l'athérosclérose due à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, le gigantisme dû à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, le nanisme dû à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, l'hypothyroïdie due à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, l'hyperthyroïdie due à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, la mucoviscidose due à ladite 15 (auxdites) mutation(s) non-sens, l'obésité due à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, la maladie de Parkinson due à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, la maladie de Niemann Pick due à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, l'hypercholestérolémie familiale due à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, la rétinite pigmentaire due à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, le syndrome de Marfan dû à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, 20 les maladies lysosomales dues à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, les dystrophies musculaires dues à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, l'hémophilie due à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, les eéroïde-lipofiiscinoses neuronales infantiles tardives dues à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, la béta-thalassémie due à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, le syndrome de Dravet dû à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, 25 l'achromatopsie due à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, le syndrome d'Usher de type IC dû à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, le syndrome d'Elhers-Danlos type musculocontractural dû à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, le syndrome Alagille dû à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, le syndrome d'Alstrôm dû à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, un déficit en antithrombine dû à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, le 30 complexe de Carney dû à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, le syndrome de Currarinon dû à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, l'anémie de Blackfan-Diamond due à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, la protoporphyrie érythropoïétique due à ladite 3057776 11 (auxdites) mutation(s) non-sens, la maladie de Fabry due à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, le déficit congénital en facteur XIII dû à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, la glycogénose de Bickel-Fanconi due à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, la triméthylaminurie due à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, la maladie de Gaucher due 5 à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, la maladie de Rendu-Osier due à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, l'homocystinurie due à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, le syndrome de Joubert dû à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, la maladie de Krabbe due à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, l'acidurie L-2-HG due à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, l'acidémie méthylmalonique due à ladite (auxdites) mutation(s) non- 10 sens, le syndrome de Peters-plus dû à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, le syndrome de Townes-Brocks dû à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, la maladie de von Willebrand due à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, le syndrome de Wiskott-Aldrich dû à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, le syndrome de Kabuki dû à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, la maladie de Dorfinan-Chanarin due à ladite (auxdites) mutation(s) 15 non-sens, la maladie des yeux de poisson due à un déficit partiel en lécithine-cholestérol- acyl-transférase due à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, les mucopolysaccharidoses dues à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, le déficit en coenzyme Q10 dû à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, le syndrome de Zellweger dû à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, le cancer colorectal dû à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, 20 l'entéropathie congénitale due à un déficit de l'entéropeptidase due à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, le syndrome de Peutz-Jeghers dû à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, le syndrome de Jervell et Lange Nielsen dû à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, le syndrome de Lynch dû à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, la maladie des inclusions microvillositaires due à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, la xanthinurie 25 due à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, l'acidose due à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, le syndrome d'Alport dû à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, le syndrome de Bardet Biedl dû à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, le syndrome de Birt-Hogg-Dubé dû à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, la maladie de Dent due à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, le syndrome de Gitelman dû à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, 30 le syndrome de léiomyomatose héréditaire-cancer du rein dû à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, la maladie de Minkowski-Chauffard due à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, l'amaurose congénitale de Leber due à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, l'intolérance 3057776 12 aux protéine dibasiques avec lysinurie due à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, la néphronophthise due à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, la polykystose rénale récessive due à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, le pseudohypoaldostéronisme dû à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, l'hypoplasie et la dysplasie rénales dues à ladite 5 (auxdites) mutation(s) non-sens, le carcinome à cellule claire du rein dû à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, le carcinome papillaire du rein de type 2 dû à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, le syndrome d'Ochoa dû à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, la maladie de von Hippel-Lindau due à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, la tumeur de Wilms due à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, le rachitisme hypophosphatémique lié 10 à l'X dû à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, la néphropathie hyperuricémique familiale juvénile due à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, la sclérose tubéreuse de Bourneville due à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, le syndrome néphrotique finlandais dû à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, le syndrome néphrotique idiopathique cortico-résistant dû à ladite (auxdites) mutation(s), le syndrome de Pierson dû 15 à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, le syndrome de Denys-Drash dû à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, le syndrome de Schimke dû à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, la résistance au glucocorticoïde primaire due à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, le rachitisme vitamino-résistant hypophosphatémique dû à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, l'hyperoxalurie primitive de type 1 due à ladite (auxdites) 20 mutation(s) non-sens, le pseudohypoaldostéronisme type 1 (PHA1) dû à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, l'acidose tubulaire rénale type 2 due à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, la maladie de Bassen-Kornzweig due à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, le syndrome d'Alpers Huttenlocher dû à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, le déficit en carbamoyl-phosphate synthase I (CPS1) dû à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, la 25 maladie de surcharge en esters de cholestérol due à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, le déficit en citrine dû à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, le syndrome de DubinJohnson dû à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, la déficience en facteur V due à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, la glycogénose due à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, l'hémophilie due à un déficit en facteur VIII ou IX due à ladite (auxdites) mutation(s) 30 non-sens, le carcinome hépatocellulaire dû à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, la porphyrie hépatoérythropoïétique due à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, la paraplégie spastique familiale due à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, l'hypo- 3057776 13 betalipoprotéinémie due à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, le déficit constitutionnel en facteur XI dû à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, le diabète de type adulte chez le jeune dû à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, l'anémie hypochrome microcytaire due à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, le syndrome de déplétion de l'ADN mitochondrial 5 dû à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, la déplétion de l'ADN mitochondrial due à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, la phénylcétonurie due à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, la polykystose hépatique due à ladite (auxdites) mutations) non-sens, la porphyrie cutanée tardive due à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, la cholestase intrahépatique progressive familiale due à ladite (auxdites) mutation(s) non- 10 sens, la maladie de Wilson due à ladite (auxdites) mutations) non-sens, l'hypercholestérolémie autosomale dominante due à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, la déficience en facteur XII due à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, la déficience en facteur X due à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, l'hypofibrinogénémie due à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, l'afibrinogénémie due à ladite (auxdites) mutation(s) non- 15 sens, la déficience en facteur VII due à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, l'agammaglobulinémie due à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, la thrombocytopénie amégakaryocytaire due à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, l'anémie dysérythropoïétique congénitale type 2 due à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, les dystrophies musculaires de Duchenne (DMD) et de Becker (BMD) dues à ladite (auxdites) 20 mutation(s) non-sens, les myopathies centronucléaires dues à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, les dystrophies musculaires des ceintures dues à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, la myopathie de Miyoshi due à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, la dystrophie musculaire congénitale de type Ullrich due à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, l'amyotrophie spinale due à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, l'épidermolyse 25 bulleuse dystrophique due à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, la maladie de Hailey- Hailey due à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, l'épidermolyse bulleuse jonctionnelle type Herlitz due à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, le syndrome de Netherton dû à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, le syndrome de Hurler dû à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, la LINCL (Late Infantile Neuronal Ceroid Lipofuscinosis) due à 30 ladite (auxdites) mutation(s) non-sens. 3057776 14 L'invention sera mieux comprise et d'autres caractéristiques et avantages de celle- ci apparaitront plus clairement à la lecture des exemples qui suivent et qui sont décrits en référence aux figures annexées dans lesquelles : - la figure 1 est une représentation schématique de la construction utilisée pour 5 démontrer l'efficacité de l'extrait de Lepista flaccida de l'invention en tant que correcteur de mutations UGA, UAG et UAA, - la figure 2 montre la mesure de l'activité luciférase dans les cellules humaines HeLa exprimant un gène luciférase porteur d'un codon stop prématuré UAA, UAG ou UGA traitées avec l'extrait de Lepista flaccida obtenu selon le procédé décrit dans 10 l'exemple 1 par rapport au contrôle positif G418 à 1 mg/ml, - la figure 3 représente l'analyse par Western blot montrant la réexpression du gène TP53 porteur d'une mutation non-sens sur ses deux allèles après traitement avec l'extrait de Lepista flaccida obtenu selon le procédé décrit dans l'exemple 1 en comparaison avec le G418. La taille de la protéine p53 totale (p53FL) et la protéine p53 tronquée (p53TR) sont 15 indiquées sur le côté droit du gel et les poids moléculaires sont indiqués à gauche du gel. Les trois colonnes de gauches représentent une dilution en série d'extrait de cellules Hela non traitées. CBP80 est utilisé comme contrôle de charge. - la figure 4 montre la courbe de toxicité cellulaire de l'extrait de Lepista flaccida obtenu selon le procédé décrit dans l'exemple 1 en comparaison à celle du contrôle positif 20 G418, - La figure 5 montre l'efficacité de correction des mutations non-sens par le traitement avec l'extrait de Lepista flacecida obtenu selon le procédé décrit dans l'exemple 2. A) mesure de l'activité luciférase dans les cellules humaines HeLa exprimant un gène luciférase porteur d'un codon stop prématuré UAA, UAG ou UGA traitées avec l'extrait de 25 Lepista flaccida obtenu selon le procédé décrit dans l'exemple 1 ou 2 par rapport au contrôle positif G418 à 21 gg/u1 ou 1000 pig/ml. B) Analyse par western blot de la réexpression du gène TP53 porteur d'une mutation non-sens sur ses deux allèles après traitement avec l'extrait Lepista flaccida obtenu selon le procédé décrit dans l'exemple 1 et 2. La taille de la protéine p53 totale (p53FL) et la protéine p53 tronquée (p53TR) sont 30 indiquées sur le côté droit du gel et les poids moléculaires sont indiqués à gauche du gel. Les trois colonnes de gauches représentent une dilution en série d'extrait de cellules Hela non traitées. UPF1 est utilisé comme contrôle de charge. 3057776 15 - La figure 6 montre l'effet in vivo de l'extrait de Lepista flaccida de l'invention sur des souris MDX (porteuses d'une mutation non-sens UAA dans le gène codant la dystrophine) ayant bu de l'eau contenant l'extrait de Lepista flaccida de l'invention en comparaison à celui de souris MDX n'ayant bu que de l'eau pure seulement. 5 Exemple 1 Préparation d'un extrait de Lepista flaccida selon l'invention par le premier procédé décrit ci-dessus. Les collectes de champignons Lepista flaccida ont eu lieu en région parisienne (bois de Vincennes, Parc du Sausset, forêt de Fontainebleau). 8 kg de matériel frais ont été 10 collectés. Les trois champignons communément synonymisées (Lepista flaccida, Lepista inversa et Paralepista flaccida) ont été récoltés et mélangés. Après avoir été dépoussiérés, les champignons ont été placés au congélateur à -80°C pendant une nuit puis lyophilisés à 110°C sous vide secondaire à 10-4 mbar pendant 24 à 48 heures. Les champignons secs obtenus ont ensuite été broyés au mortier et conservés dans 15 des bocaux en verre à température ambiante. 646 g de champignon sec ont été obtenus, (rendement 8 %). La poudre de champignon est macérée dans un mélange hydroalcoolique (50/50 eau/méthanol) sous agitation pendant 24 heures à température ambiante, puis filtrée pour ne récupérer que la phase hydroalcoolique. 20 Un litre du mélange hydroalcoolique pour 10g de poudre lyophilisée est utilisé. Exemple 2 Un autre mode de préparation de l'extrait de Lepista flaccida selon l'invention consiste à faire macérer la poudre de champignon comme obtenu à l'exemple 1, dans de 25 l'eau à une température de 100°C pendant 20 minutes, puis à filtrer cette poudre pour ne récupérer que la phase aqueuse. Un litre d'eau pour 5 g de poudre lyophilisée est utilisé. La préparation de l'extrait de Lepista flaccida selon l'invention est de préférence effectuée avec des champignons lyophilisés ou séchés et broyés sous forme de poudre car 30 la préparation de l'extrait à la concentration voulue est ainsi plus facile. De plus, la poudre de champignons lyophilisés ou séchés se conserve de manière plus simple et durable par rapport au champignon frais. 3057776 16 Exemple 3 L'efficacité de l'extrait de Lepista flaccida de l'exemple 1 a été identifié par criblage en utilisant la construction montrée en figure 1. Dans cette construction, l'ADNc codant la firefly luciférase a été interrompu par un intron et une mutation non-sens (soit UGA, soit 5 UAG, soit UAA) a été introduite à plus de 55 nucléotides en amont de la position de l'intron, de façon à activer le nonsense-mediated mRNA decay (NMD) sur l'ARNm correspondant. Dans ce test, les cellules HeLa sont transfectées avec la construction montrée en figure I portant une des trois mutations non-sens en utilisant de la lipofectamine selon le 10 protocole du fabricant (Lifetechnologies). Le jour suivant, les cellules sont réparties en plaques de 96 puits et l'extrait de Lepista flaccida obtenu à l'exemple 1 et le contrôle positif G418 sont ajoutés immédiatement avant une incubation de 24 heures. Finalement, le substrat SteadyLite plus (Perkin Elmer) est ajouté au milieu de culture et les plaques ont été lues au luminomètre Tristar (Berthold). Chaque puits est lu sur 10 secondes et la plaque 15 est lue deux fois. La figure 2 montre les résultats de ce test de criblage sur chacune des trois mutations non-sens et dont le puits indiqué contient de l'extrait de Lepista flaccida de l'exemple 1 à 100 ng/i1L. Dans ces figures, le contrôle positif est le composé G418 à I mg/ml. On constate à partir de la figure 2 que l'extrait de Lepista flaccida de l'invention n'a aucun 20 effet sur le codon UAG, mais qu'il est en revanche beaucoup plus efficace que le contrôle G418 sur les codons UAA et UGA. Exemple 4 Pour valider l'efficacité de l'extrait de Lepista flaccida obtenu dans l'exemple 1 en 25 tant que correcteur des mutations non-sens UGA et/ou UAA, les cellules Calu-6 (porteuses d'une mutation non-sens UGA sur les deux allèles codant le gène TP53 au niveau du codon 196) ont été incubées pendant 24 heures en présence de milieu de culture (RPMI, 10% de sérum de boeuf décomplémenté et 1% de zellshield), de milieu de culture contenant 25 ng/i.t1 d'extrait de Lepista flaccida de l'exemple 1 ou 1 mg/ml de G418. Les protéines 30 sont ensuite purifiées au moyen d'un tampon de lyse contenant 5% de SDS, 50 mM Tris pH 7.3 et 20 mM EDTA. Le lysat obtenu est soumis à 30 pulses de sonication avant d'être centrifugé 5 minutes à 10000xg. Le surnageant est récupéré et un dixième est déposé sur 3057776 17 un gel d'acrylamide à 10% avant de transférer les protéines sur une membrane de nitrocellulose. Cette membrane est ensuite exposée à un anticorps primaire anti-p53 ou CBP80 pendant une nuit à 4°C, puis à un anticorps secondaire couplé à une activité peroxidase pour révéler la présence des protéines p53 et CBP80 en utilisant le substrat 5 supersignal West Femto (Pierce). Comme on peut le voir en figure 3, l'extrait de Lepista flaccida de l'invention permet de restaurer l'expression du gène TP53 contenant une mutation non-sens UGA, dans des cellules Calu-6, plus efficacement que le contrôle positif G418. En figure 3, « p53FL » désigne une protéine p53 de longueur entière et « p53TR » 10 désigne une protéine p53 tronquée. Exemple 5 Dans cet exemple, la toxicité de l'extrait de Lepista flaccida obtenu à l'exemple 1 a été évaluée. Pour cela, la croissance de la population de cellules en l'absence ou en 15 présence soit de l'extrait de Lepista flaccida de l'invention, soit du contrôle positif G418 a été suivie. Le test a été effectué de la façon suivante : 15 puits de plaques à 6 puits ont reçu 50 000 cellules Calu-6 au départ et sont incubées par groupe de 5 en présence de DMSO, d'extrait de Lepista flaccida obtenu à 20 l'exemple 1 ou de contrôle positif G418. Toutes les 48 heures, les cellules d'un puits par condition de traitement sont récoltées après digestion à la trypsine et comptées au cytomètre TALI (Lifetechnologies). Le reste des cellules collectées est utilisé pour mesurer l'apoptose comme décrit dans lia et al., 2015, Cell Def Differ. 22, 1754-1763. La concentration de l'extrait de Lepista flaccida obtenu à l'exemple 1 de l'invention 25 dans le milieu de culture était de 25 ng/ill et la concentration en contrôle positif G418 était de 1 000 ng/j,11. Un comptage des cellules et une mesure de l'apoptose ont été effectués sur chaque culture de cellules tous les deux jours. La figure 4 montre le résultat de ces mesures sur 10 jours. Comme on peut le voir à 30 la figure 4, on note un ralentissement de la croissance de la population de cellules avec l'extrait de Lepista flaccida selon l'invention mais cette croissance est toujours positive, 3057776 18 indiquant qu'il y a plus de cellules en division que de cellules en arrêt de cycle cellulaire ou mortes. On peut également voir à partir de la figure 4 que, la population traitée avec le contrôle positif G418, contrairement à la population de cellules traitées avec l'extrait de 5 Lepista flaccida de l'invention, diminue indiquant une forte toxicité de G418 comparé à l'extrait Lepista Flaccida. Exemple 6 L'efficacité de l'extrait de Lepista flaccida obtenu selon l'exemple 2 a été identifiée 10 par criblage comme décrit dans l'exemple 3. Dans ce test, les cellules HeLa sont transfectées avec la construction montrée en figure 1 portant une des trois mutations non-sens en utilisant de la lipofectamine selon le protocole du fabricant (Lifetechnologies). Le jour suivant, les cellules sont réparties en plaques de 96 puits et les extraits de Lepista flaccida de l'exemple 1, et de l'exemple 2 et les contrôles positifs G418 sont ajoutés 15 immédiatement avant une incubation de 24 heures. Finalement, le substrat SteadyLite plus (Perkin Elmer) est ajouté au milieu de culture et les plaques ont été lues au luminomètre Tristar (Berthold). Chaque puits est lu sur 10 secondes et la plaque est lue deux fois. La figure 5A montre les résultats de ce test de criblage sur chacune des trois mutations non-sens après traitement avec les extraits Lepista flaccida. On constate que les 20 extraits obtenus par le procédé de l'exemple 1 (H7) et celui de l'exemple 2 (infusion à 100°C) sont beaucoup plus efficaces que les contrôles positifs G418 à 21 jag/iuil et 1000pg/gl sur les codons UAA et UGA. Pour valider l'efficacité de l'extrait de Lepista flaccida de l'exemple 2 en tant que correcteur des mutations non-sens UGA et/ou UAA, les cellules Calu-6 (porteuses d'une 25 mutation non-sens UGA sur les deux allèles codant le gène TP53 au niveau du codon 196) ont été incubées pendant 24 heures en présence de milieu de culture (RPMI, 10% de sérum de boeuf décomplémenté et 1% de zellshield), contenant 25 ng/ill d'extrait de Lepista flaccida de l'exemple 1 ou 2. Les protéines sont ensuite purifiées au moyen d'un tampon de lyse contenant 5% de SDS, 50 mM Tris pH 7.3 et 20 mM EDTA. Le lysat obtenu est 30 soumis à 30 pulses de sonication avant d'être centrifugé 5 minutes à 10000xg. Le surnageant est récupéré et un dixième est déposé sur un gel d'acrylamide à 10% avant de 3057776 19 transférer les protéines sur une membrane de nitrocellulose. Cette membrane est ensuite exposée à un anticorps primaire anti-p53 ou UPF1 pendant une nuit à 4°C, puis à un anticorps secondaire couplé à une activité peroxidase pour révéler la présence des protéines p53 et UPF1 en utilisant le substrat supersignal West Femto (Pierce). 5 Comme on peut le voir à la figure 5B, l'extrait de Lepista flaccida de l'exemple 2 (100°C) comme celui de l'exemple 1 (H7) permet de restaurer l'expression du gène TP53 contenant une mutation non-sens UGA, dans des cellules Calu-6. En figure 5B, «p53FL » désigne une protéine p53 de longueur entière et « p53TR » désigne une protéine p53 tronquée. 10 Exemple 7 Dans cet exemple, l'extrait de Lepista flaccida obtenu à l'exemple 2 a été testé sur des souris MDX. Deux groupes de souris MDX ont été constitués de la façon suivante : quatre mâles et 15 cinq femelles ont été exposés à l'extrait de Lepista flaccida, et trois mâles et trois femelles n'ont pas reçu de traitement. Toutes les souris avaient entre 6 et 8 semaines au début de l'expérience. La boisson de l'un des deux groupes de souris était de l'eau uniquement, et la boisson de l'autre groupe était la phase aqueuse obtenue au cours du mode préparation de l'extrait de Lepista flaccida selon l'exemple 2. 20 Tous les deux jours des exercices physiques ont été effectués pour mesurer la capacité à courir de chaque groupe de souris. Pour cela, les souris sont introduites dans une roue fermée liée à un ordinateur et à un logiciel pour mesurer le temps de course. La figure 6 montre les résultats de ces essais. Comme on peut le voir en figure 6, le temps de course des souris du groupe traité 25 avec l'extrait de Lepista flaccida de l'invention augmentait régulièrement avec le traitement passant d'environ 100 s à plus de 350 s en sept jours alors que sur la même période le groupe de souris n'ayant pas été traité n'augmentait pas ou peu sa capacité à courir : le temps de course passant de 100 s à environ 150 s. 30 En conclusion, l'extrait de Lepista flaccida de l'invention a la propriété de pouvoir corriger les mutations non-sens UGA et UAA, uniquement. Cette semi-exclusivité de codons stop est un avantage puisque cela diminue les éventuels effets non spécifiques. 3057776 20 L'extrait de Lepista flaccida de l'invention permet une réexpression au niveau protéique d'un gène porteur d'une mutation non-sens UGA et/ou UAA à un niveau bien plus important que ce qui peut être atteint avec le G418 qui est pourtant la molécule conduisant à la réexpression la plus efficace, jusqu'à présent (Bidon et aL, 2004, Dranchak et aL, 5 2011; Sangkuhl et al., 2004, précédemment cités). L'extrait de Lepista flaccida de l'invention a un autre avantage en comparaison au G418 qui est qu'il ne montre que peu ou pas de toxicité sur des cellules en culture comme observé en suivant la prolifération cellulaire et le taux d'apoptose dans des cellules exposées au DMSO, au 0418 ou à l'extrait de Lepista flaccida de l'invention. 10 Enfin, il a été montré que l'extrait de Lepista flaccida de l'invention active la translecture mais n'induit pas d'inhibition du NMD pour corriger les mutations non-sens UGA et/ou UAA. Enfin l'effet in vivo de l'extrait du Lepista flaccida a été démontré sur des souris MDX. 15 REVENDICATIONS1. Lepista flaccida destiné à être utilisé dans le traitement et/ou la prévention d'une maladie due à une mutation non-sens d'un gène conduisant à l'introduction prématurée d'un codon stop UGA ou UAA. 2. Extrait de Lepista flaccida destiné à être utilisé dans le traitement et/ou la prévention d'une maladie due à une mutation non-sens d'un gène conduisant à l'introduction prématurée d'un codon stop UGA ou UAA. 3. Extrait de Lepista flaccida destiné à être utilisé selon la revendication 2 obtenu par macération ou infusion du champignon Lepista flaccida dans un solvant. 4. Extrait de Lepista flaccida destiné à être utilisé selon la revendication 2 ou 3 obtenu par un procédé comprenant les étapes suivantes : A) macération et/ou infusion du champignon Lepista flaccida dans un solvant choisi parmi : - de l'eau, de l'eau acidifiée par exemple avec de l'acide chlorhydrique, de l'acide formique, de l'acide trifluoroacétique, de l'acide acétique, de l'acide fluorhydrique, de l'acide fluoroacétique, de l'acide oxalique, de l'eau rendue basique par exemple avec de l'hydroxyde de sodiums ou de l'ammoniaque, - un hydrocarbure tel que l'hexane, le cyclohexane, le benzène, le toluène, le xylène, le trichloroéthylène, le perchloroéthylène, - un alcool tel que le méthanol, l'éthanol, le propan-l-ol, propan-2-ol, le butanol, l'alcool furfurylique, - une cétone telle que l'acétone et la méthylisobutylcétone, - un éther tel que l'éther diéthylique, le méthyl terbutyl éther et le tétrahydrofurane, - un glycol tel que l'éthylène glycol et le propylène glycol, - un éther de glycol tel que, le méthyl éther, le propylène glycol méthyl éther et le propylène glycol butyl éther, - un ester tel que l'acétate d'éthyle, le lactate d'éthyle, - un ester de carbonate tel que le carbonate de propylène, 3057776 22 - un dérivé nitré tel que le nitrométhane, le 2-nitropropane et le nitrobenzène, - un dérivé soufré tel que le chlorure de thionyle, le chlorure de sulfuryle et le diméthylsulfoxyde, - un dérivé azoté tel que le diméthylforma.mide, la triéthylamine, la N-méthy1-2- pyrrolidone, le N,N-diméthylformamide, la pyridine et l'acétronitrile, - un dérivé chloré tel que le chloroforme et le dichlorométhane, - les mélanges de deux ou plus de ces solvants, à une température comprise entre 20 et 100 °C selon le point d'ébullition des solvants; B) filtration du mélange obtenu à l'étape A) pour récupérer d'une part une phase solide et d'autre part une phase liquide ; C) récupération de la phase liquide obtenue après l'étape B). 5. Extrait de Lepista flaccida destiné à être utilisé selon la revendication 3 ou 4 caractérisé en ce que dans son procédé d'obtention, le solvant est choisi parmi un alcool en Cy à C4, de l'eau, un mélange d'eau et d'au moins un alcool en C2 à C4 et un mélange d'au moins deux alcools en C2 à C4. 6. Extrait de Lepista flaccida destiné à être utilisé selon l'une quelconque des revendications 2 à 5 caractérisé en ce qu'il comprend de plus, après l'étape C), lorsque le solvant n'est pas de l'eau, une étape d'évaporation de ce solvant et la dilution dans de l'eau de la phase obtenue après cette évaporation du solvant. 7. Extrait de Lepista flaccida destiné à être utilisé selon l'une quelconque des revendications 2 à 6, caractérisé en ce qu'il comprend de la 2,6-diamino purine (DAP) et de la clitocine. 8. Composition pharmaceutique comprenant un extrait de Lepista flaccida selon l'une quelconque des revendications 2 à 7 et un excipient pharmaceutiquement acceptable destinée à être utilisée dans le traitement et/ou la prévention d'une maladie due à une mutation non-sens d'un gène conduisant à l'introduction prématurée d'un codon stop UGA ou UAA. 3057776 23 9. Lepista flaccida selon la revendication 1 pour son utilisation selon la revendication 1 caractérisé en ce que ladite maladie est choisie parmi la mucoviscidose due à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, les dystrophies musculaires dues à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, l'hémophilie due à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, la béta-thalassémie due à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, la rétinite pigmentaire due à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, les mucopolysaccharidoses dues à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, l'amyotrophie spinale due à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens. 10. Extrait de Lepista flaccida selon l'une quelconque des revendications 2 à 7 pour son utilisation selon la revendication 2, caractérisé en ce que ladite maladie est choisie parmi la mucoviscidose due à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, les dystrophies musculaires dues à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, l'hémophilie due à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, la béta-thalassémie due à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, la rétinite pigmentaire due à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, les mucopolysaccharidoses dues à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, l'amyotrophie spinale due à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens. 11. Composition pharmaceutique selon la revendication 8 pour son utilisation selon la revendication 8, caractérisée en ce que ladite maladie est choisie parmi la mucoviscidose due à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, les dystrophies musculaires dues à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, l'hémophilie due à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, la béta-thalassémie due à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, la rétinite pigmentaire due à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, les mucopolysaccharidoses dues à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens, l'amyotrophie spinale due à ladite (auxdites) mutation(s) non-sens.