FR 2970869 A1 20120803 FR 1150709 A 20110131 UTILISATION DU RECEPTEUR SIGMA-1 POUR REGULER L'EXPRESSION DES CANAUX IONIQUES AU NIVEAU POST- TRANSCRIPTIONNEL DESCRIPTION Domaine technique La présente invention se rapporte à l'utilisation du récepteur Sigma-1 (Sig1 R) pour réguler l'expression des canaux ioniques au niveau post- transcriptionnel Ainsi une extinction de Sig1 R dans les cellules induit une réduction de la densité de courant engendré par les canaux ioniques, corrélée à la baisse du taux d'expression de Sig1 R, ainsi qu'une diminution de l'adhésion spécifique à la fibronectine (FN). A contrario, la co-expression de hERG et Sig1 R provoque une potentialisation du courant et du taux de protéine exprimée. La présente invention trouve une application dans la fabrication d'un médicament destiné au traitement de maladies impliquant les canaux ioniques. Il s'agit par exemple des maladies du système nerveux telles que par exemple l'épilepsie, des maladies neurodégénératives telles que par exemple la maladie d'Alzheimer, des maladies cardiaques, et du cancer. Dans la description ci-dessous, les références entre crochets ([]) renvoient à la liste des références présentée à la fin du texte. Etat de la technique Les canaux ioniques sont des protéines insérées dans les membranes des cellules de tous les êtres vivants. Ces canaux permettent aux ions (potassium, sodium, calcium et chlore) de traverser la membrane. Ce passage crée un courant électrique dont les fonctions sont fondamentales : message nerveux, contraction musculaire et cardiaque, sécrétion des hormones, composition des fluides corporels. Depuis peu, ces canaux ont également été impliqués dans la prolifération tumorale et l'agressivité métastatique. En effet, l'expression aberrante de canaux de nature différente a été observée dans de nombreux cancers primaires de l'homme, et est fréquemment corrélée à l'agressivité de la tumeur. En règle générale, les canaux ioniques exercent des effets pléïotropes sur la physiologie des cellules néoplasiques. Par exemple, en régulant le potentiel de membrane, les canaux contrôlent le flux de Cal+ intracellulaire et en conséquence le cycle cellulaire. Leurs effets sur la mitose peuvent également dépendre de la régulation du volume cellulaire, le plus souvent en coopération avec les canaux chlorure. Les canaux ioniques sont également impliqués dans les étapes néoplasiques ultimes, la stimulation de l'angiogenèse, l'interaction cellule/matrice extracellulaire ou la régulation de la motilité cellulaire. Ainsi la contribution des canaux ioniques dans le phénotype néoplasique s'étend du contrôle de la prolifération cellulaire et de l'apoptose, à la régulation de l'invasion et de la propagation métastatique. Toutefois si leur implication est de plus en plus démontrée, la régulation et les mécanismes moléculaires associés aux canaux ioniques dans un contexte tumoral restent à préciser. Les mécanismes régissant les effets des canaux ioniques sont multiples et font intervenir une cascade de voies de signalisation intracellulaire généralement déclenchée après formation de complexes protéiques avec d'autres protéines membranaires tels que les intégrines ou les récepteurs de facteur de croissance. Enfin, dans un contexte tumoral, les canaux ioniques sont généralement détournés de leur fonction première pour participer au phénotype tumoral. Ainsi, une meilleure connaissance de leur profil d'expression, de leurs partenaires, de la relation structure/fonction des complexes canalaires ouvrirait potentiellement la voie à de nouvelles stratégies thérapeutiques ciblées. En effet certaines molécules chimiques sont capables de bloquer directement ces canaux et de ralentir la croissance des tumeurs cancéreuses in vitro. Cependant l'utilisation de ces molécules chez des patients est dangereuse dans la mesure où les canaux des tumeurs sont les mêmes que ceux retrouvés dans le tissu sain (les muscles ou le cerveau...) Il existe donc un réel besoin de composés pharmacologiques palliant les défauts, inconvénients et obstacles de l'art antérieur, en particulier de composés capables de cibler les canaux ioniques dans les cancers sans altérer les fonctions des organes sains, de réduire les coûts et d'améliorer ainsi les thérapies anticancéreuses. Le récepteur Sigma-1 (Sig1 R) est une protéine ubiquitaire ancrée à la membrane cellulaire. Cette protéine est surexprimée dans les cellules tumorales au point d'être proposée comme marqueur biologique de tumeur en imagerie cellulaire [1], impliquée dans la prolifération cellulaire [2]. Son aspect le mieux décrit est la modulation des canaux ioniques bien que son mode d'action reste inconnu. L'activation du Sig1 R par des ligands exogènes spécifiques change les propriétés électriques de la membrane, conséquence de la modulation des canaux sodiques [3,4] et potassiques voltage-dépendants ou non [5-7]. Récemment, il a été montré que Sig1 R contrôle différentes familles de canaux ioniques dont les canaux potassiques voltage-dépendants (Kv) et les canaux VRCC (Volume Regulated Chloride Channel). De plus, les interactions Sig1 R-Kv ou Sig1 R- VRCC participent à plusieurs évènements cellulaires : le cycle cellulaire, la résistance à I'apoptose [8,9]. Toutefois il n'existe pas actuellement d'outil thérapeutique ciblant spécifiquement ces macrocomplexes canalaires Sig1 R/canal ionique permettant d'inhiber la prolifération cellulaire, en limitant les effets secondaires résultant de l'utilisation de molécules ayant une action non-ciblée. Description de l'invention Les Inventeurs ont maintenant mis en évidence de manière tout à fait inattendue qu'il est possible de réguler au niveau post-transcriptionnel les canaux ioniques, par exemple le canal ionique hERG (human Ether-à-gogo Related Gene), par le récepteur Sigma-1 (Sig1 R), dans un modèle de 4 cellules leucémiques myéloïdes chroniques : les cellules K562 qui expriment un seul type d'intégrine, l'a5131, récepteur de la fibronectine (FN) et le canal hERG. Un résultat analogue a été obtenu dans une autre lignée cellulaire : les cellules de cancer du sein MDA-MD-435s. Cette régulation est réalisée à travers une interaction fonctionnelle entre les deux protéines. Le canal hERG est un canal cardiaque K+ voltage-dépendant dont la fonction primordiale est de réguler le temps qui sépare deux battements successifs, et dont l'expression aberrante a été caractérisée dans de nombreux cancers incluant les cancers du sein, du colon, les 1 o neuroblastomes et les leucémies myéloïdes [10]. L'expression de hERG est corrélée au potentiel invasif des cellules, et l'étude des mécanismes mis en jeu démontre une voie de signalisation atypique : la stimulation des intégrines par la matrice extracellulaire (MEC) active hERG, étape nécessaire au recrutement de Rac1, des FAK et de l'association avec le 15 récepteur au VEGF FLT-1. Le macrocomplexe canalaire ainsi formé potentialise la migration, l'invasion et l'angiogenèse [10]. En outre, les Inventeurs ont mis en évidence que les canaux ioniques font partie intégrantes des voies de signalisation régulant l'adhésion des cellules à la matrice extracellulaire. En effet l'extinction de Sig1 R dans les cellules K562 20 provoque la diminution de l'adhésion spécifique à la fibronectine (FN). Les conséquences de ces observations sont, qu'en ciblant Sig1 R, il est possible d'agir sur le programme de tumorisation en interférant dans les voies de signalisation cellulaires assignées aux canaux ioniques. De même, ce mécanisme de régulation peut être transposé au 25 système nerveux ou cardiaque, où Sig1 R est présent, pour permettre le réexamen de certaines pathologies impliquant les canaux ioniques, en dehors de tout contexte tumoral. La présente invention a donc pour objet le récepteur sigma-1 (Sig1 R) pour utilisation comme médicament destiné à la régulation post- 3o transcriptionnelle de l'expression membranaire des canaux ioniques pour le traitement de maladies impliquant lesdits canaux ioniques. On entend par « médicament » au sens de la présente invention, tout outil ou moyen thérapeutique connu de l'homme du métier (par exemple substance ou composition) présenté comme possédant des propriétés curatives et/ou préventives à l'égard de maladies humaines ou animales, ainsi que tout produit pouvant être administré à l'homme ou à l'animal, en vue d'établir un diagnostic médical et/ou de restaurer, corriger et/ou modifier leurs fonctions organiques. On entend par « maladies impliquant les canaux ioniques » au sens de la présente invention, les maladies du système nerveux telles que par i o exemple l'épilepsie, les maladies neurodégénératives telles que par exemple la maladie d'Alzheimer, les maladies cardiaques telles que par exemple le syndrome de QT long, et le cancer. Selon un mode de réalisation particulier de l'invention, ledit médicament est destiné au traitement du cancer. 15 Selon un mode de réalisation particulier de l'invention, ledit médicament inhibe l'expression membranaire des canaux ioniques, de préférence des canaux ioniques potassiques (KI. D'autres avantages pourront encore apparaître à l'homme du métier à la lecture des exemples ci-dessous, illustrés par les figures annexées, 20 donnés à titre illustratif. Brève description des figures - La figure 1 représente la caractérisation des courants hERG dans les cellules K562. (A), Courants de queue enregistrés à -120mV suite 25 à une préimpulsion à +40mV (Epp) pour activer pleinement les canaux hERG, en l'absence (control) ou présence de E-4031 (1 µM). (B), Détail des courants de queue présenté en (A). (C), Familles de courants de queue enregistrés suite à des préimpulsions de -70 à 40mV, en l'absence (control) ou présence de E-4031 (1µM). Le graphique du bas représente la 3o soustraction graphique des deux graphiques précédents (control et (+) E- 4031. (D), Courbes I/V (courant/voltage) correspondantes aux tracés montrés en C. Les Amplitudes de courant de queue sont tracées en fonction du potentiel de préimpulsion (Epp). - La figure 2 représente la diminution du courant hERG par les ligands sigma dans les cellules K562. (A), Evolution temporelle du courant hERG enregistré à -120mV après une préimpulsion de 40mV dans deux cellules distinctes. Igmésine (Igm, gauche, 10µM) ou (+)pentazocine ((+)Ptz, droite, 10µM) appliquées dans le milieu extracellulaire pendant le laps de temps représenté par la barre noire. (B), Familles de courants hERG enregistrés à -120mV après des préimpulsions de -70 à 40mV dans 1 o une seule cellule en l'absence (gauche, contrôle) ou présence d'igmésine (10µM, droite, Igm). (C), Courbes UV correspondantes. Les amplitudes de courant de queue sont représentées comme une fonction du potentiel de préimpulsion (Epp) (D), Courbe de désactivation du courant hERG à -120mV en l'absence (barres blanches) ou présence d'igmésine (10µM, 15 barres noires). La courbe de désactivation a été ajustée à l'aide d'une fonction double exponentielle. Les valeurs représentent la moyenne ± erreur standard. Comparaison des moyennes effectuées à l'aide du test t de Student. - La figure 3 représente l'extinction de Sig1 R dans les cellules 20 K562 et MDA-MB-435. (A), Western blots de cellules K562 transduites avec un shRNA aléatoire (shRD) ou un shRNA dirigé contre Sig1 R (shSig1 R), et révélés avec des anticorps anti-actine (ligne supérieure) ou anti-Sig1 R (ligne inférieure). (B), Western blots de cellules MDA-MB-435 transduites avec un shRNA aléatoire (shRD) ou un shRNA dirigé contre 25 Sig1 R (shSig1 R), et révélés avec des anticorps anti-actine (ligne supérieure) ou anti-Sig1 R (ligne inférieure). - La figure 4 représente la réduction de la densité du courant hERG dans les cellules K562 par l'extinction de Sig1 R. (A), Familles de courants hERG enregistrés en réponse au protocole décrit en 1C. Les 30 traces ont été obtenues à partir des cellules K562 exprimant un shRNA aléatoire (K562 shRD, supérieur) ou un shRNA dirigé contre le Sig1 R (K562 shSig1 R, inférieur). (B), Moyenne des courbes IN correspondantes aux tracés des cellules K562 shRD (carrés noirs) et K562 shSig1 R (cercles noirs). (C), Histogramme montrant la moyenne des amplitudes de courant dans les cellules K562 shRD et K562 shSig1 R. (D) Courbe d'activation déduites de C. (E), Vitesse de désactivation du courant de hERG à -120mV dans les cellules K562 shRD (barres blanches) et K562 shSir1 R (barres noires). La courbe de désactivation a été ajustée à l'aide d'une fonction double exponentielle. Les valeurs représentent la moyenne ± erreur standard, test t de Student. - La figure 5 représente l'altération de l'expression protéique de hERG dans les cellules K562 par l'extinction de Sig1 R. (A), Quantité d'ARNm du gène hERG exprimé dans ces cellules transduites avec un shRNA non-ciblé (shRD) et transduites avec un shRNA anti-Sig1 R (shSig1 R). NS, signifie non significatif (test t de Student). (B), Western blots révélés avec des anticorps anti-hERG (pavé supérieur) ou antitubuline (pavé inférieur), réalisés dans les cellules K562 shRD et K562 shSig1 R. (C), Histogramme de l'analyse densitométrique des isoformes matures et immatures de hERG dans les cellules K562 shSig1 R (barres noires) par rapport aux cellules K562 shRD (barres blanches). Les valeurs correspondent au rapport densitométrique hERG/tubuline. (D), Efficacité du trafic intracellulaire de hERG1 b dans les cellules K562 shRD et shSig1 R (barres noires). L'efficacité du trafic est calculée comme le rapport densitométrique (mature)/(mature+immature). *p EXEMPLES Exemple 1 : Les ligands Sigma inhibent le courant hERG dans les cellules K562 Des expériences d'électrophysiologie dites de patch-clamp ont été réalisées dans la configuration cellule entière (whole cell). La solution saline extracellulaire baignant les cellules contient une concentration élevée en potassium pour améliorer l'amplitude du courant entrant de potassium à -120mV. Les courants hERG ont été analysés en tant que courants de queue à -120mV suscités suite à des préimpulsions de -70 à 40mV. Ce protocole permet l'enregistrement de courants entrants transitoires dont l'amplitude est corrélée à la dépolarisation impliquée lors des préimpulsions. Ces courants ont été totalement supprimés par la perfusion de l'inhibiteur E-4031 spécifique de hERG (1µM) [11] (figure 1 A,B). En outre, la soustraction graphique a révélé que E-4031 inhibe une conductance voltage dépendant (figure 1 C, D). En conclusion, ces données ont confirmé la présence de canaux hERG fonctionnels dans la lignée cellulaire K562 [12]. Afin de vérifier une potentielle interaction entre Sig1R et hERG, les effets de ligands sélectifs de Sig1 R, i.e. igmésine et (+)pentazocine [7, 9, 13, 14] ont été analysés sur le courant. Les applications extracellulaires de l'igmésine ou de la (+)pentazocine ont inhibé de manière réversible les courants. Le courant a été réduit par 40,85±2,83% (n=10) et 21,1%1,77% (n=3) pour l'igmésine et la (+)pentazocine, respectivement (10µM chacun). L'inhibition maximale s'est produite dans les 3 minutes qui ont suivi le début des applications des drogues (figure 2A). Les effets de l'igmésine (10µM) ont ensuite été étudiés sur des courbes UV enregistrées de -70 à 40mV. L'igmésine (10µM) a entraîné une réduction spectaculaire de l'amplitude du courant maximal (figure 2 B, C) suggérant que la drogue a principalement affecté la densité de courant. Néanmoins, le traitement des courbes selon une fonction de Boltzmann a révélé un déplacement apparent de 10mV vers la gauche de la valeur du voltage de demi-activation (figure 2B, tableau 1). Tableau 1 V1/2 pente K562 n=6 7,1 ±2,3 mV 17,4±3,6 K562=igmésine (10µM) -4,1 ±2,9 mV 23,1 ±2,7 n=6 p Les effets de l'extinction de Sig1 R ont été étudiés sur l'activité hERG 5 des cellules K562. Les cellules K562 ont été transduites avec un rétrovirus contenant soit un shRNA (ARN court en épingle à cheveux) aléatoire ou un shRNA dirigé contre Sig1 R, donnant lieu à deux populations cellulaires nommées respectivement shRD et shSig1 R. Les expériences de Western blot ont révélé une diminution spectaculaire de l'expression de Sig1 R dans 10 la lignée cellulaire shSig1 R (figure 3, gauche). Le même résultat a été obtenu dans les cellules MDA-MB-435s exprimant le même shRD et shSig1 R (figure 3, droite) démontrant l'efficacité et la spécificité du shRNA dirigé par Sig1 R utilisé ici. 15 Les expériences de patch-clamp ont alors été réalisées dans les lignées cellulaires K562 shRD et shSig1 R afin d'analyser les éventuelles conséquences de l'extinction de Sig1 R sur les propriétés de hERG. De manière intéressante, les familles de courant de queue enregistrées à - 120mV dans shSig1 R ont été clairement plus petites en amplitude que celles dans les cellules shRD (figure 4A). Cette diminution de l'amplitude du courant a été observée pour des potentiels d'activation compris entre - 20 et +60mV (figure 4B). A +40mV, la densité de courant a été réduite de 440/0 (figure 4C). Il est à noter que l'extinction de Sig1 R n'a pas déplacé la courbe d'activation (figure 4D, tableau 1). De la même manière, aucune différence significative n'a pu être observée pour des constantes de temps de désactivation rapides et lentes dans les deux populations cellulaires (figure 4E). En conclusion ces données ont suggéré que l'extinction de Sig1 R réduit la densité de courant sans altérer les paramètres cinétiques de hERG dans les cellules K562. Là encore, la baisse est le reflet d'une diminution du nombre de canaux actifs à la membrane cellulaire. Exemple 3 : L'extinction de Sig1 R module l'expression de hERG dans les cellules K562 Afin de mieux comprendre le lien entre l'expression de Sig1 R et les courants hERG, l'expression de hERG a été analysée dans les deux lignées cellulaires, en utilisant la PCR en temps réel et l'analyse par Western blot. Les niveaux en ARNm de hERG n'ont pas été significativement différents dans les lignes cellulaires shRD et shSig1 R, excluant toute modulation Sig1 R-dépendante de la transcription de hERG i o qui pourrait expliquer la diminution observée de la densité de courant (figure 5A). Au niveau protéique, les Western blots utilisant un anticorps anti-pan-hERG ont révélé que les cellules K562 expriment deux isoformes différentes de hERG, i.e. hERG1 a, correspondant à la protéine complète, et le variant d'épissage hERG1 b présentant une extrémité N-terminale 15 tronquée [15]. La bande à 155kDa représentant la forme pleinement glycosylée (hERG1 a mature), a été régulièrement détectée alors que la forme immature, (partiellement glycosylée), de 135kDa, de hERG1a a été rarement visible (figure 5B, gauche). Cependant, dans certaines expériences, la forme immature de 135kDa a pu être clairement observée 20 (non représenté). En revanche, l'isoforme épissée hERG1b est constamment apparue sous la forme de deux bandes distinctes, la forme mature, pleinement glycosylée de 95kDa et la forme immature, à 80kDa (figure 5B, gauche). Les deux glycoformes matures de hERG sont connues pour représenter la fraction de sous-unité de canal qui est localisée à la 25 membrane plasmique après avoir quitté le réticulum endoplasmique (ER) pour être maturée à travers l'appareil de Golgi et atteindre la surface cellulaire. De manière intéressante, l'extinction de Sig1 R a altéré le profil d'expression de hERG : dans les cellules shSig1 R, une diminution de la quantité des deux formes matures hERG1 a et hERG1 b a pu être 30 observée. Cela a été accompagné par une augmentation dans la forme immature hERG1 b (figure 5 B,C). Dans les expériences pour lesquelles la 13 forme immature hERG1 a de 135kDa a été clairement détectée, son niveau d'expression a également été augmenté dans les cellules shSig1 R par rapport aux cellules shRD (non représenté). La quantification du rapport hERG1 b mature/hERG1 b total a démontré que l'extinction de Sig1 R a significativement réduit la maturation de hERG1 b, [16] (figure 5A). En conclusion, ces résultats ont démontré pour la première fois que Sig1 R altère la régulation post-transcriptionnelle du canal hERG. L'extinction de Sig1 R induit une diminution de la forme mature de hERG1 a (150 kDa) ainsi qu'une accumulation de la forme immature du variant d'épissage i o hERG1 b (80 kDa) indiquant une baisse d'efficacité du trafic de la protéine. Ces profils d'expression sont parfaitement en accord avec la diminution du courant observée. Exemple 4 : L'expression de Sig1 R potentialise la densité de courant 15 de hERG dans les ovocytes de Xénope Afin de confirmer la fonction atypique de Sig1 R sur l'expression de hERG révélé ici en utilisant les cellules K562, les expériences ont été menées dans les ovocytes de xénope. L'injection d'ARNc de hERG (25pg/ovocyte) dans les ovocytes a induit l'apparition de courants absents 20 des ovocytes injectés avec de l'eau (figure 6A, gauche et milieu). La coinjection d'ARNc de Sig1 R (5ng/ovocyte) avec la même faible concentration d'ARNc de hERG a multiplié par cinq l'amplitude du courant par rapport aux oeufs exprimant hERG seul (figure 6 A,B). La potentialisation du courant dépend des concentrations d'ARNc de Sig1 R 25 injecté mais disparait pour des concentrations élevées d'ARNc de hERG (>_ 15ng/ovocyte, non représenté). L'expression de Sig1 R n'a pas affecté les paramètres d'activation (figure 6C, tableau 2). On peut remarquer un déplacement vers la droite de la valeur du potentiel de demi-inactivation mais cette différence est non significative (figure 6D et tableau 2). 30 Tableau 2 Activation Inactivation V1/2 pente V1/2 pente hERG1 a -28,7±0,3 mV 10,2±2,7 -54,1±7,3 mV -22,8±1,3 n=6 hERG1 a+Sig1 R -26,8±1,0 mV 9,2±0,44 -38,7±4,1 mV -24,1±1,9 n=6 N.S. N.S. N.S. N.S. (T test) (T test) (T test) (T test) Ces données indiquent que l'expression de Sig1 R régule principalement la densité de courant hERG. Afin de confirmer ces données, des analyses par Western blot des protéines membranaires d'ovocytes injectés et contrôle ont été réalisées. Les résultats ont montré que pour de faibles concentrations d'ARNc de hERG1 a injecté seul, de légères bandes correspondant aux protéines immature et mature hERG1 a ont été détectées ; la co-injection d'ARNc de Sig1R et hERG1a a résulté en une nette augmentation dans les deux protéines hERG1 a (figure 7A, supérieur). Dans les expériences de Western blot réalisées avec l'ARNm de hERG1 b, seule la bande immature de 80kDa a pu être clairement détectée, ce qui est en accord avec les précédents résultats démontrant que l'efficacité du trafic de hERG1 b est modulée à la baisse en l'absence de sous-unités hERG1 a [17]. De nouveau, la co-injection de hERG1 b avec l'ARNc de Sig1 R a provoqué une claire augmentation dans l'intensité de la bande de 80kDa (figure 7A, inférieur). En revanche, l'expression de Sig1 R n'a pas augmenté le niveau protéique de hERG lorsque des concentrations élevées d'ARNc de Sig1 R (>_ 15ng/ovocyte) ont été injectées (non représenté). Ces résultats ont montré que l'expression de Sig1 R stimule le courant hERG via l'augmentation de la quantité de canal hERG. Ainsi ces expériences concluent que Sig1 R stabilise les canaux à la membrane plasmique. L'existence d'une interaction directe entre hERG et Sig1 R a ete explorée dans des ovocytes de xénope via l'injection d'ARNc de hERG1a 15 ou de hERG1 a+cMyc-Sig1 R. Il est à noter qu'il a été démontré que Sig1 R étiqueté cMyc en partie NH2-terminale est fonctionnellement exprimé dans les cellules HEK293 [9] et augmente le courant hERG dans les ovocytes de Xénope de la même manière que le fait I'ARNc de Sig1 R natif (non représenté). Les récepteurs Sig1 R ont été immunoprécipités en utilisant un anticorps dirigé contre l'étiquette cMyc et le résultat de I'immunoprécipitation a été résolu sur un gel SDS PAGE. Le western blot a été révélé en utilisant l'anticorps anti-pan-hERG et I'anti Sig1 R. Comme montré dans la figure 7B, dans les ovocytes co-injectés (Sig1 R- cMyc+hERG1 a) les deux protéines co-immunoprécipitent démontrant ainsi une interaction fonctionnelle directe entre Sig1 R et hERG. Exemple 5 : Sig1 R module l'adhésion des cellules K562 à la FN Il a récemment été démontré l'association fonctionnelle entre les canaux hERG et les intégrines [18,10]. Le rôle de l'interaction Sig1 R/hERG sur l'adhésion cellulaire dépendant de l'intégrine à la matrice extracellulaire (MEC) a été testé in vitro. L'expression d'un seul sous-type d'intégrine, i.e. l'intégrine a5131, a été rapportée dans les cellules K562 [18]. Cette intégrine présente une affinité élevée pour la la fibronectine (FN) un composant de la matrice extracellulaire (MEC). L'adhésion cellulaire à des puits recouverts de MEC a été significativement inhibée dans les cellules shSig1 R par rapport aux cellules shRD 40%, figure 8A). Dans les cellules sauvages, le bloqueur de canal hERG (E-4031) et l'igmésine ont inhibé l'adhésion cellulaire spécifique dépendant de la FN. De manière intéressante, l'igmésine n'a pas produit d'effet additif par rapport aux cellules K562 traitées avec E-4031 (figure 8B). De même, les ligands sigma n'ont plus d'effet sur l'adhésion des cellules shSig1 R (non représenté). Ces résultats indiquent que Sig1 R inhibe l'adhésion cellulaire spécifique à la FN via l'interaction avec le complexe hERG/intégrine a5131 comme précédemment décrit dans les cellules myéloïdes leucémiques [10]. Listes des références 10 8. 2004 9. 10. 11. 15 1990 12. 13. 14. 1996 20 15. 16. 17. 18. Renaudo A. et al., J. Biol. Chem., 282 : 2259-2267, 2007 Pillozzi S. et al., Blood, 110 : 1238-1250, 2007 Sanguinetti MC et Jurkiewicz, NK, J. Gen. Physiol., 96(1) :195-215, Cavarra MS. et al., J. Membr. Biol., 219(1-3) :49-61, 2007 Roman, FJ et al., J. Pharm. Pharmacol., 42, 439-440, 1989 Hanner M. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA., 93(15) :8072-8077, Guasti L. et al., Mol Oeil Biol. 28(16) 5043-60. 2008. Phartiyal P. et al., J. Biol. Chem., 283(7) :3702-3707, 2008 Phartiyal P. et al., J. Biol. Chem., 282(13):9874-82, 2007 Cherubini A. et al., Mol. Biol. Cell, 16(6):2972-2983, 2005 1. 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Récepteur sigma-1 selon l'une quelconque des revendications 1 ou 2, où l'expression membranaire des canaux ioniques est inhibée. 4. Récepteur sigma-1 selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, où le canal ionique est un canal ionique potassique.15