FR 2968552 A1 20120615 FR 1060485 A 20101214 UTILISATION COSMETIQUE D'UN EXTRAIT DE MANNE DE FRENE DESCRIPTION Domaine technique La présente invention se rapporte à l'utilisation cosmétique d'un extrait de manne de frêne, à une composition cosmétique comprenant un extrait de manne de frêne, ainsi qu'à un procédé cosmétique mettant en oeuvre un extrait de manne de frêne. On appelle la manne de frêne, la sève séchée à l'air libre qui s'écoule le long du tronc de Fraxinus ornus L ou de Fraxinus angustifolia Vahl. subsp. angustifolia La présente invention trouve ses applications dans le domaine 15 de la cosmétique. La peau est un organe vital à part entière qui se compose de trois tissus distincts, assumant chacun différents rôles grâce à différents types cellulaires et structures. L'hypoderme, situé en profondeur et constitué en majeure partie de lobules graisseux ou adipocytes, assure 20 une fonction de support primaire, de protection mécanique et thermique et joue par ailleurs un rôle de stockage des réserves énergétiques. En position intermédiaire, le derme est aussi un tissu conjonctif investi majoritairement de fibroblastes qui synthétisent les différentes protéines matricielles, dont collagènes et fibres élastiques, donnant à la peau ses 25 qualités de compressibilité et d'élasticité connues. Au sein de la trame conjonctive, s'intercalent aussi d'autres cellules et structures, tel un important réseau circulatoire et nutritif, constitué des vaisseaux sanguins et des capillaires lymphatiques et les annexes épidermiques, notamment poils, ongles, glandes pilosébacées et 30 glandes sudoripares, qui prennent naissance dans le derme profond. Le tissu le plus en surface et donc le plus exposé est l'épiderme. Cet épithélium pluristratifié, Malpighien, et kératinisant, dont la partie la plus externe est la couche cornée, se compose de différentes cellules 2 associées à de nombreuses fonctions de barrière de protection. Les cellules majoritaires sont les kératinocytes qui, par leurs processus de prolifération / différenciation, aboutissent à la formation de la couche cornée connue pour son aspect et ses propriétés hydrophobes, compactes et étanches. Le rôle majeur de l'épiderme est donc d'apporter à la peau, via la différenciation et le stratum corneum une première ligne de protection contre les agressions, notamment physiques, chimiques, thermiques, hydriques, bactériologiques. 1 o Les conditions de vie actuelles font subir à l'organisme toutes sortes d'agressions permanentes auxquelles il est difficile de se soustraire de façon continue et efficace. Ces agressions sont mieux connues sous le nom de stress. Parce qu'elle agit comme barrière entre le corps et les éléments extérieurs, la peau se trouve directement confrontée à ces divers 15 stress quotidiens, notamment les rayons ultraviolets, la pollution, les métaux lourds, les variations de température. Pour pouvoir s'en défendre et garder un niveau d'activité biologique optimum, la peau a besoin d'eau qu'elle stocke et métabolise en fonction des besoins physiologiques. Avec l'âge et l'accumulation visibles ou non des effets des 20 différents stress, les systèmes de défense physiques peuvent être débordés, déréglés ou défaillants. Les cellules se déshydratent, l'homéostasie n'est plus respectée, les programmes cellulaires sont perturbés par le manque d'eau, ce qui peut entraîner jusqu'à la mort cellulaire, précipiter des mécanismes du vieillissement ou, à minima, 25 altérer l'état de surface de la peau, d'où les typologies des peaux déshydratées et dénutries / délipidés. La peau délipidée ou dénutrie peut correspondre un état transitoire mais aussi à un état acquis. Les symptômes, peau sèche, aspect de sa surface sec, rêche, cassant et mat, manquant de souplesse, 3o de luminosité et de radiance, proviennent d'une déshydratation accrue souvent liée à une incapacité biologique acquise ou transitoire à recréer un film hydrophobe efficace en surface. Les causes sont les mêmes que celles de la déshydratation auxquelles peuvent s'ajouter des déséquilibres 3 hormonaux liés à l'âge. Les conséquences sont aussi marquées par le manque de confort, l'hyper-réactivité face aux différents stress environnementaux et l'accentuation des processus de vieillissement où les rides et les stries de déshydratation deviennent alors beaucoup plus visibles. La fonction sébacée est assurée par les glandes sébacées annexées aux poils, l'ensemble constituant les follicules pilo-sébacés. Elles sont réparties uniformément et abondamment sur la surface du corps à l'exception des paumes des mains et des plantes des pieds. Leur rôle est la production de sébum et son acheminement à la surface de la peau via un canal excréteur qui traverse le derme superficiel et l'épiderme. Le sébum est composé en majeure partie de lipides, comprenant environ 42% de glycérides, 16% d'acides gras libres, 25% de cires et 12% de squalène (appelé aussi spinacène ou suprène). Il forme un film lipidique qui s'émulsionne avec la sueur pour contribuer au film hydrolipidique protecteur de la peau. Le rôle du sébum est de renforcer l'hydrophobicité et l'imperméabilité de la couche cornée, de protéger la peau grâce à ses propriétés antibactériennes et antifongiques, de lui donner un aspect satiné et réflecteur de lumière grâce à ses propriétés lubrifiantes et d'apporter souplesse à la couche cornée. Un excès de sébum entraîne la maladie inflammatoire et bactérienne bien connue de l'acné alors qu'un manque de sébum est la cause principale des peaux sèches et des cheveux secs. Directement dépendante des sécrétions hormonales notamment celle de la testostérone, la sécrétion de sébum, importante à la naissance est faible chez l'enfant. Elle s'active à la puberté, reste stationnaire chez l'adulte puis se ralentit à l'âge mûr, plus précisément au moment de la ménopause chez les femmes accentuant les mécanismes du vieillissement intrinsèque. La peau déshydratée ne correspond pas à une typologie génétiquement déterminée, mais le plus souvent à un état physiologique passager. Les symptômes, notamment manque d'éclat, de souplesse, de 4 tonicité et de résistance, tiraillements, desquamation irrégulière et/ou rougeurs, ont une cause bien précise : ils sont le reflet d'un manque d'eau en surface dû à une rupture dans l'équilibre hydrique de la couche cornée, notamment lorsque la teneur en eau est inférieure à 10%. Les origines de la déshydratation sont très diverses et peuvent être liées à plusieurs facteurs qui sont soit internes, à savoir physiologiques : notamment mauvaise rétention naturelle de l'eau (« Natural Moisturizing Factors » (NMF)), mauvaise cohésion entre les cornéocytes ou rupture du film hydrolipidique ; ou externes, à savoir 1 o agressions climatiques, chimiques, hygiène excessive, etc. La conséquence finale de la déshydratation cutanée se traduit par le fait que l'eau n'est plus retenue dans les cellules de la couche cornée. Une hydratation efficace implique une action à deux niveaux : favoriser la diminution de la perte en eau et aider la peau à retenir l'eau 15 dans ses cellules. Si cet état s'installe, la peau devient irritable et peut devenir le siège d'inflammations chroniques. L'eau contenue dans la peau représente environ 10% du poids du corps, soit 6 à 8 litres. Elle est principalement stockée au niveau du derme, à environ 70%. Bien que présente en relativement faible quantité 20 dans la couche cornée, environ 13%, l'eau est vitale pour les fonctions de la peau, apportant élasticité, souplesse et plasticité. La teneur en eau des couches superficielles de la peau conditionne leurs qualités mécaniques et esthétiques. Le maintien du flux d'eau à travers la peau, des couches profondes vers la surface, est un mécanisme fondamental assurant un 25 apport d'eau régulé aux cellules, essentiel aux réactions biochimiques. Maintenir une bonne hydratation cutanée est donc la vocation de tous produits de soin cosmétique. Les soins dits hydratants apportent de l'eau, via la formule des soins utilisés, et renforcent de surcroît les systèmes naturels liés à l'hydratation, notamment l'angiogenèse, la 30 différenciation, les fonctions sébacées. Ces systèmes sont les suivants: L'eau contenue et/ou utilisée par la peau provient du derme qui contient une réserve considérable, environ 7 à 8 kg, du plasma, sachant que le maintien de la réserve plasmatique est lié à la volémie, donc à l'hydratation, et donc de l'irrigation du tissu par les capillaires sanguins. La bonne hydratation dermique dépend donc directement de l'optimisation des mécanismes d'angiogenèse. Ensuite, dans le derme, 5 l'eau est liée aux macro-molécules de la substance fondamentale: mucopolysaccharides, glycoprotéines, acide hyaluronique et autres protéoglycanes qui retiennent l'eau comme une éponge. Seule une toute petite partie de cette eau dermique est libre. C'est elle qui va, après migration transépidermique, gagner les espaces intercornéocytaires et plus 1 o encore pénétrer à l'intérieur des cornéocytes et lier les facteurs naturels d'hydratation ou « Natural Moisturizing Factors » (NMF). Les facteurs du NMF jouent un rôle fondamental dans la rétention ou stockage des molécules d'eau dans le stratum corneum. Celles-ci sont attirées et retenues dans les cornéocytes grâce à un double 15 phénomène d'osmose et d'attraction par des éléments hygroscopiques intracellulaires, notamment l'urée et acide lactique, regroupés sous le nom de NMF. Les éléments du NMF proviennent eux-mêmes de la protéolyse de la filaggrine qui entoure les filaments de kératine. Enfin, l'eau intercornéocytaire ne peut quitter le cornéocyte du fait de la nature 20 hydrophobe des lipides des espaces intercornéocytaires, appelés aussi ciment intercornéocytaire. La différenciation kératinocytaire est une maturation orientée des kératinocytes épidermiques en cornéocytes, c'est à dire kératinocytes de la couche cornée, durant laquelle les cellules changent de taille, de 25 morphologie, de composition biochimique, de nature membranaire, d'activité biologique. Ils passent notamment d'une composante hydrique à une composante lipidique majoritaire. Les cornéocytes sont des kératinocytes morts, anucléés qui s'empilent à la surface de la peau, avant de desquamer. Ils forment ainsi une couche étanche, compacte et très 3o hydrophobe à travers de laquelle la pénétration d'agents exogènes ou les déperditions hydriques ne sont normalement pas possibles. De la qualité et du bon déroulement du processus de différenciation dépendent 6 directement le bon état de surface de la peau, son aspect esthétique, hydraté, lisse, confortable, etc. Le film hydrolipidique de surface est une émulsion naturelle formée d'eau et de lipides. Il s'étale à la surface de la couche cornée et s'insinue entre les cornéocytes superficiels. Une de ses fonctions essentielles est de retenir l'eau à la surface de la peau, empêchant ainsi sa déshydratation et la pénétration des bactéries par ce biais. Il protège les cornéocytes des agressions mécaniques et caustiques, et fait écran aussi en maintenant l'eau sous la couche cornéocytaire pour faciliter les 1 o réactions biologiques et limiter la perte insensible en eau, notamment par perspiration, venant de la profondeur. La partie aqueuse de l'émulsion provient à la fois de l'eau dermique qui monte dans l'épiderme et de l'eau de l'atmosphère qui se dépose sur la peau et qui est absorbée. La partie lipidique de l'émulsion provient du sébum et des lipides cornéocytaires. 15 Il existe donc un réel besoin de fournir des compositions et des procédés de traitement cosmétiques contenant des principes actifs permettant de nourrir et/ou de réhydrater efficacement la peau. Fraxinus ornus L., appelé frêne à manne ou frêne à fleurs, appartient à la famille des Oléacées. C'est un petit arbre de 7-10 m de 20 haut, se couvrant de grappes de fleurs blanches à la fin du printemps. Originaire du bassin méditerranéen, il est présent de l'Espagne au Liban, du littoral jusqu'en moyenne montagne et se caractérise par une bonne résistance à la sécheresse estivale. L'espèce est cultivée en Sicile, près de Palerme pour la production de manne de frêne. En été, les troncs sont 25 incisés, la sève s'écoule le long du tronc et sèche avec la chaleur. Les morceaux de manne sont ensuite récupérés, séchés à nouveau au soleil et triés en fonction de leur qualité. La manne peut être également obtenue à partir de l'espèce Fraxinus angustifolia Vahl. subsp. angustifolia, également cultivée en Italie. 3o La manne de frêne est traditionnellement utilisée comme régulateur de transit et comme laxatif doux, préconisé surtout pour les enfants. Elle peut également servir pour calmer la toux. Des utilisations plus récentes mentionnent des usages alimentaires, comme édulcorant. 7 Exposé de l'invention Les inventeurs de la présente sont les tout premiers à avoir mis en évidence que l'utilisation de manne de frêne permet précisément de répondre efficacement au besoin précité. Selon l'invention, on appelle la manne de frêne, la sève séchée à l'air libre qui s'écoule le long du tronc des frênes, par exemple de Fraxinus ornus L. ou de Fraxinus angustifolia Vahl. subsp. angustifolia. La présente invention utilise cette manne de frêne telle quelle ou un extrait de 1 o cette manne de frêne. Aussi, selon l'invention, quelques soit l'utilisation ou la composition présentée ci-dessous, on entend par « manne de frêne », de la manne de frêne ou un extrait de manne de frêne. Selon l'invention, quelque soit l'utilisation ou la composition de la présente invention, lorsqu'il 15 s'agit d'un extrait de manne de frêne, il peut s'agir par exemple d'un extrait aqueux. Un extrait de manne de frêne peut être obtenu par exemple par extraction de la manne de frêne dans de l'eau. Pour l'extraction de la manne de frêne dans de l'eau, on mélange par exemple de 1 à 25 kg de 20 manne de frêne dans 10 à 100 kg d'eau sous agitation à une température de 20°C à 50°C, pendant 15 minutes à 2 heures. L'extrait peut être ensuite filtré par exemple sur toile ou sur plaque de cellulose. Il peut aussi être séché par exemple dans un système sous vide et broyé afin d'obtenir de préférence un extrait exempt d'impureté et / ou exploitable pour l'industrie 25 cosmétique. Ainsi, dans la présente invention, la manne de frêne peut être utilisée comme matière première végétale pour la fabrication d'un extrait pouvant être utilisé tel quel ou rentrer dans une formulation de cosmétique, dermatologique, ou pharmaceutique. 3o Les données expérimentales montrent en effet de manière inattendue que la manne de frêne présente la propriété d'agir positivement sur les mécanismes précités, notamment rétablir l'équilibre lipidique et /ou 8 hydrique de la peau, permettent de préserver et / ou rétablir l'équilibre lipidique et / ou hydrique de la peau, ou permettant d'empêcher un déséquilibre lipidique et / ou hydrique de la peau. Les inventeurs ont ainsi mis en évidence pour la première fois que la manne de frêne est, de manière inattendue, capable de stimuler l'angiogenèse pour améliorer l'irrigation dermique, de stimuler le synthèse d'éléments dermiques et épidermiques intervenant dans le stockage de l'eau dans les tissus cutanées, de stimuler la synthèse du sébum pour rétablir l'écran hydrophobe à la surface de la peau et de limiter les processus inflammatoires qui pourraient résulter de la rupture de la barrière épidermique. La présente invention se rapporte donc notamment à l'utilisation de manne de frêne ou d'un extrait de manne de frêne en tant qu'actif cosmétique. Selon l'invention, cette utilisation peut être mise en oeuvre par application sur la peau de manne de frêne, d'un extrait de manne de frêne ou d'une composition cosmétique, dermatologique ou pharmaceutique selon l'invention, ou encore par ingestion. La présente invention se rapporte notamment à cette utilisation pour prévenir ou traiter un déséquilibre hydrique de la peau et / ou pour prévenir ou traiter un déséquilibre lipidique de la peau et / ou pour stimuler la production et/ou la sécrétion de sébum et / ou pour stimuler la différenciation kératinocytaire et / ou pour stimuler l'expression de protéines impliquées dans la rétention et le stockage de l'eau dans le tissu cutané et/ou pour stimuler l'angiogenèse. La présente invention se rapporte également à l'utilisation de manne de frêne ou d'un extrait de manne de frêne en tant qu'actif cosmétique pour traiter un état cutané choisi parmi une sécheresse cutanée, une perte d'éclat de la peau, une perte de couleur, une perte de 3 o teint, une perte de satiné de la peau, une perte de velouté de la peau, une perte de brillance des cheveux ou plusieurs de ces états. Selon l'invention, la manne de frêne ou l'extrait de manne de frêne peut être utilisé(e) seul(e) ou en combinaison avec un composé ou 9 un mélange de composés choisi parmi de la sève d'érable, du sucre d'agave, de la bétaïne, un extrait lipophile d'argousier et de la mangiférine. La sève d'érable, du sucre d'agave et de la bétaine, sont des protecteurs de viabilité cellulaire en cas d'exposition à des stress environnementaux. Ils permettant de renforcer l'effet de la manne de frêne ou de l'extrait de manne de frêne, ce qui conduit à un double effet pour lutter contre les états cutanés déshydratés et / ou desséchés ou traiter ces états. L'extrait lipophile d'argousier est un stimulant de l'activité 5- 1 o alpha-réductase et donc de la synthèse de sébum. Il permet de renforcer l'effet de la manne de frêne ou de l'extrait de manne de frêne ce qui conduit à un double effet pour lutter contre les états cutanés déshydratés et/ou desséchés ou traiter ces états. La mangiférine est un protecteur de viabilité cellulaire en cas 15 d'expositions à des stress environnementaux notamment ultraviolets (UV). Elle permet de renforcer l'effet de l'extrait de manne de frêne ce qui conduit à un double effet pour lutter contre les états cutanés déshydratés ou desséchés, notamment en cas d'expositions solaires ou traiter ces états. La présente invention se rapporte également à une composition 20 cosmétique ou dermatologique comprenant de la manne de frêne ou un extrait de manne de frêne. La présente invention se rapporte également à l'utilisation de manne de frêne ou d'un extrait de manne de frêne pour la fabrication d'une composition selon l'invention. 25 Dans la présente, on entend par « composition », une composition cosmétique, dermatologique ou pharmaceutique. Aussi, chaque fois qu'il est fait mention de la « composition » ou de la « composition selon l'invention » ou de la « composition de la présente invention », on se réfère à une composition cosmétique, dermatologique 30 ou pharmaceutique selon l'invention. Selon l'invention, la composition peut comprendre par exemple de 0,001% à 50% en poids de manne de frêne ou d'un extrait de manne 2968552 io de frêne, par exemple de 0,005 à 10% en poids, % en poids exprimés par rapport au poids total de ladite composition. Comme indiqué ci-dessus, selon l'invention, la composition peut comprendre en outre un ou plusieurs des composés choisis dans le groupe s comprenant de la sève d'érable, du sucre d'agave, de la bétaine, un extrait lipophile d'argousier et de la mangiférine. Ainsi, l'extrait de manne de frêne seul ou en combinaison avec d'autres ingrédients actifs, peut être incorporé dans une composition cosmétique, dermatologique ou pharmaceutique notamment pour traiter ou lo empêcher un état desséché et/ou déshydraté de la peau ou tout état cutané généré par un manque d'eau et / ou de lipides de surface. Selon l'invention, la composition peut comprendre en outre au moins un excipient cosmétique, dermatologique ou pharmaceutique. Il peut s'agir des excipients habituellement utilisés par l'homme du métier dans 15 ces compositions, par exemple eau, glycérine, huiles beurres. Comme indiqué ci-dessus, la composition de la présente invention permet de traiter un état cutané choisi parmi une sécheresse cutanée, une perte d'éclat de la peau, une perte de satiné de la peau, une perte de velouté de la peau, une perte de brillance des cheveux ou 20 plusieurs de ces états. Selon l'invention, la composition peut se présenter sous toute forme utile pour son application sur la peau. Il peut s'agir par exemple de toute forme connue de l'homme du métier, par exemple d'une forme choisie parmi une crème, une pommade, une solution, une émulsion, une 25 microémulsion, un sérum, un gel, une lotion, un lait, un baume, un onguent, un beurre, une huile, un comprimé, une gélule. L'utilisation ou la composition de la présente invention permet de rétablir l'équilibre lipidique et/ou hydrique de la peau. Cette composition peut être notamment destinée à des personnes ayant la peau 30 particulièrement asséchée et/ou déshydratée par le manque de lipides et/ou d'eau. Selon l'invention, la manne de frêne, l'extrait ou la composition de la présente invention peut, par exemple, être placé(e) dans un dispositif 11 approprié pour une application topique. Il peut s'agir par exemple d'un dispositif se présentant sous une forme choisie parmi un pot, un flacon-pompe, une lingette, un masque, un dispositif transdermique, un patch, un spray, une capsule ou une gélule ledit dispositif comprenant de la manne de frêne ou un extrait de manne de frêne ou une composition selon l'invention. La présente invention se rapporte également à un procédé de traitement cosmétique comprenant une application topique d'un extrait de manne de frêne ou d'une composition selon l'invention tel(le) que défini(e) ci-dessus. Selon l'invention, le procédé peut comprendre par exemple une application sur la peau de manne de frêne ou d'un extrait de manne de frêne ou d'une composition comprenant de la manne de frêne D'autres avantages pourront encore apparaître à l'homme du métier à la lecture des exemples suivants. EXEMPLES Exemple 1 : Procédé d'obtention de l'extrait de manne de frêne L'extrait de manne de frêne testé par les inventeurs est un extrait obtenu par solubilisation de la manne dans de l'eau (10% en poids de manne de frêne dans l'eau) à température ambiante, 25°C, sous 25 agitation pendant 1 heure. Après filtration sur filtre cellulose, l'extrait est ensuite concentré sous vide à 60°C, séché dans une étuve à vide à 60°C jusqu'à obtention d'un solide, puis broyé afin d'obtenir une poudre blanche, de fine granulométrie, soluble dans l'eau pouvant rentrer dans des compositions 30 cosmétiques, dermatologiques ou pharmaceutiques.20 12 Exemple 2 : Stimulation de la synthèse du sébum via l'activité 5-alpha-réductase Dans cette expérience, le finastéride provient de Sigma (référence catalogue F1293). Les fibroblastes humains transformés (Hs68) proviennent d'ATCC (référence commerciale CRL-1635). Le milieu DMEM (Dulbecco's Modified Eagle's Medium) provient de Invitrogen (référence commerciale 31053028). Le SVF (Sérum de Veau Foetal) provient de Invitrogen (référence commerciale 1070098). In vitro, sur des cultures de fibroblastes, il est possible de 1 o quantifier la présence et la transformation de la testostérone et donc d'en déduire l'activité de l'alpha-5-réductase et ses modifications. Le finastéride (20pM) est un agent qui bloque la conversion de la testostérone en 5-hydroxytestostérone et donc qui inhibe l'activité de la 5-alpha-réductase. C'est donc le témoin interne négatif aux manipulations. 15 Des cultures de fibroblastes humains transformés (Hs68) ont été réalisées en conditions classiques (DMEM + 10% en volume/volume de SVF) et traitées pendant 24h avec l'extrait de manne de frêne (concentrations définies comme non cytotoxiques; 50pg/mL, 1 et 5 mg/mL) avant l'adjonction de testostérone marquée au 14C. À l'issue de 24 heures 20 supplémentaires, les stéroïdes (testostérone et 5-alphadéhydrotestostérone) des surnageants sont quantifiés grâce à la radioactivité après une séparation par chromatographie couche mince. Les valeurs de déhydrotestostérone (DHT) radioactive (dpm) sont exprimées en % des stéroïdes totaux et sont corrigées par le taux de 25 protéines cellulaires (Tableau 1). Des cultures ont aussi été traitées avec le finastéride (20pM), considéré comme le contrôle témoin interne de l'expérience. Les résultats de ces expérimentations sont présentés dans le tableau 1 ci-dessous. 30 Tableau 1 : Effet de l'extrait de manne de frêne sur l'activité de la 5-alpha-réductase Milieu seul Finastéride Manne de frêne 20NM 50pg/mL lmg/mL 5mg/mL 1,49 0,36 1,69 12,71 3,72 5,32 1,27 6,21 9,16 13,35 100 23,8 111,4 172,2 251 En présence de finastéride, l'activité de l'enzyme est inhibée de 76%. Les résultats montrent une augmentation significative allant jusqu'à 151% de l'activité 5-alpha-réductase des cellules, lorsque celles-ci sont incubées avec l'extrait de manne de frêne. L'extrait de manne de frêne permet donc de stimuler la production de sébum et donc de recréer une barrière étanche et hydrophobe lors d'une application topique. Exemple 3 : Stimulation de l'angiogenèse cutanée via la migration des cellules endothéliales L'angiogenèse correspond à la ramification et à l'extension de capillaires sanguins existants, dont la paroi est constituée d'une unique couche de cellules endothéliales. L'angiogenèse favorise la réparation, l'hydratation et la nutrition des tissus. Dans cette expérience, le VEGF est un facteur de croissance qui favorise l'angiogenèse sur culture monocouche de cellules endothéliales qui provient de Promocell (marque commerciale) (référence commerciale C302600, Promocell); alors que le MAZ51 est le témoin Activité 5-alpharéductase 14 négatif (inhibition de l'angiogenèse) et provient de sigma (référence commerciale S2671). Les cellules endothéliales humaines, HUVEC C (Normal Human Umbilical Vein Endothelial cells, référence A-12200, Promocell), sont cultivées dans un milieu spécifique nutritif constitué de DMEM avec rouge de phénol (réf 41966029, Invitrogen) complété par l'EGM-2 bullet Kit (référence C-22111, Promocell) et sur un revêtement (« coating ») de matrigel (marque de commerce) (Matrigel Basement Membrane Matrix, référence commerciale 356234, BD Biosciences). 1 o L'extrait de manne de frêne de l'exemple 1 (0,08 ; 0,4 et 2 mg/mL) et les témoins sont mis en contact avec les cellules (20 000 cellules / 250pL) juste avant l'ensemencement. Les suspensions cellulaires ainsi préparées sont ajoutées délicatement, goutte à goutte, à raison de 250pL par puits de culture. 15 Après incubation à 37°C pendant 16 heures trois photos (minimum) sont prises aléatoirement pour chaque condition et le nombre de ramifications moyen est calculé. En comparant le nombre moyen de ramifications du témoin milieu, fixé à 0% d'action sur l'angiogenèse, on obtient donc le 20 pourcentage d'action de chaque référence et de l'extrait de manne de frêne (% d'action = (100 x Nombre de ramifications crées par les cellules traitées par l'actif)/ Nombre de ramifications crées dans le puits témoin milieu). Les résultats obtenus permettent le classement suivant : > 100% TRES FORT STIMULANT ; 25 > 40% FORT STIMULANT ; > 20% STIMULANT ; 0+/-20%EFFET NUL; l'angiogenèse est déjà induit ou non). L'extrait est alors qualifié « stimulant ». Cette stimulation entraine une amélioration de l'angiogenèse, du réseau de capillaires sanguins et donc, par voie de conséquence, une amélioration de l'hydratation et de la nutrition du tissu cutané. Exemple 4 : Limitation des phénomènes inflammatoires L'inflammation cutanée est un phénomène complexe mettant en jeu toutes les cellules de la peau et de nombreuses cellules sanguines. 1 o L'une des premières étapes est l'expression de médiateurs pro-inflammatoires (interleukine 6, IL6, et tumor necrosis factor alpha, TNFa, notamment) par les kératinocytes sous l'effet du stress. Il est possible in vitro de mimer cette étape en irradiant les cellules et analysant les surnageants correspondants. 15 Dans cette expérience les cellules sont des kératinocytes humains normaux provenant de plasties abdominales cultivées avec du KSFM (kératinocytes serum free medium, invitrogen 17005075) provenant de Invitrogen en plaque 96 puits. Ils sont soumis aux radiations du simulateur solaire (Suntest CPS+ (marque de commerce). 20 Les analyses de surnageants se font grâce à des techniques de type ELISA commercialisées par Bender MedSystem (BMS213INSTCE pour IL6 et BMS223INSTCE pour le TNFa (marque de commerce) . Le stress solaire (760W/m2 pendant 13minutes) a été appliqué sur des cultures de kératinocytes préconfluentes traitées pendant 24h par 25 l'extrait de manne de frêne (0,25% en p/v de milieu de culture. 24h après l'irradiation les surnageants ont été prélevés et analysés (ELISA) au regard de la viabilité résiduelle des cellules (dosage d'activité mitochondriale au MTT). Le tableau 2 ci-dessous résume les résultats obtenus. 30 Tableau 2 : Effet de l'extrait de manne de frêne sur l'expression de l'IL6 et du TNFalpha Plaque témoin non Plaque irradiée irradiée [IL-6] en [TNFa] [IL-6] en % IL-6 [TNFa] % TNFa pg/mL en pg/mL pg/mL en pg/mL Témoin 4,4 4,7 66,2 100 288,8 100 milieu de culture Manne de 2,4 6,3 35,9 54 166,5 58 frêne Le tableau 2 montre l'effet anti-inflammatoire de l'extrait de manne de frêne puisque le traitement permet de limiter l'expression des messagers pro-inflammatoires de 46% pour l'IL6 et de 42% pour le TNFa. Ces résultats valident donc l'utilisation de l'extrait de manne de frêne dans un soin cosmétique à destination des peaux sèches ou déshydratées dont la barrière épidermique est fragilisée et qui sont par conséquent sensibles aux inflammations et irritations récurrentes. 1 o Exemple 5 : Synthèse des éléments dermiques ou épidermiques permettant le stockage et la rétention de l'eau dans la peau Dans cette étude, les kératinocytes humains normaux proviennent de plastie abdominale. Ils ont été cultivés en KSFM (kératinocytes serum free medium, invitrogen 17005075) provenant de 15 Invitrogen en plaque multipuits avec et sans l'extrait de manne de frêne à 0,4% pendant 24h. A l'issue du test, l'ARN cellulaire correspondant de chaque condition a été extrait et purifié par la méthode classique au Trizol en vue d'une réaction de RT-PCR sur support multipuits (« Array ») pour permettre ainsi l'analyse de 64 gènes impliqués dans la différenciation des 2o kératinocytes. Les résultats ont montré que le traitement favorisait nettement l'expression de certains gènes codant des protéines impliquées dans le stockage et la rétention de l'eau notamment la hyaluronane synthase 3, un facteur de croissance épidermique liant l'héparine (« heparin binding EGF- 17 like growth factor »), donc ayant une affinité avec les molécules d'eau, des protéoglycanes ayant une affinité avec les molécules d'eau (« small proline rich protein 1B et 2A »). L'application topique de l'extrait de manne de frêne permet donc de stimuler l'expression génique de certaines protéines impliquées dans la rétention de l'eau dans le tissu cutané et donc son hydratation. Exemple 6 : Synthèse des éléments épidermiques impliqués dans la différenciation épidermique 1 o Les mêmes tests que décrit dans l'exemple 5 ont permis de démontrer que le traitement des cellules par l'extrait de manne de frêne induisait une stimulation de l'expression génique de certaines protéines impliquées dans la différenciation kératinocytaire notamment la loricrine (protéine associées aux enveloppes cornées), la transglutaminase 1 15 (enzyme permettant l'association moléculaire au niveau des enveloppes cornifiées), la kératine 2 (kératine exprimée dans les strates épidermiques les plus différenciées) et la calmoduline 5 (protéine impliquée dans la fixation du calcium en fonction de la différenciation). L'application topique de l'extrait de manne de frêne permet donc 20 de stimuler l'expression génique de certaines protéines impliquées dans la différenciation kératinocytaire menant à la formation de la couche cornée et donc de renforcer la fonction barrière naturelle de la peau. Exemple 7 : Exemple de formule : soin relipidant, à destination des 25 peaux sèches On prépare, par mélange des différents composants, une crème ayant la composition décrite dans le tableau 3 ci-dessous. Tableau 3 : Exemple de composition sous forme de soin relipidant 30 jour pour visage INGREDIENTS % en poids EAU 60,380 BEURRE DE BUTYROSPERMUM PARKII 5,000 GLYCERINE 5,000 COCO-CAPRYLATE/CAPRATE 4,900 3,500 TRIGLYCERIDE CAPRYLIQUE/CAPRIQUE 3,400 ALCOOL BEHENYL 3,300 HUILE DE GRAINE DE BRASSICA CAMPESTRIS ALCOOL ARACHIDYL & ALCOOL BEHENYL & GLUCOSIDE ARACHIDYL METHYLPROPANEDIOL 2,900 DIMETHICONE 2,700 ALCOOL CETYLIQUE 2,000 MANGIFERINE 1,000 SESQUISTEARATE METHYL GLUCOSE 0,800 PHENOXYETHANOL 0,700 PARFUM 0,500 GOMME DE XANTHANE 0,300 COPOLYMERE CROISE ACRYLATES/C10-30 ALKYL ACRYLATE ACIDE SORBIQUE 0,200 ACETATE DE TOCOPHERYL HYDROXYDE DE SODIUM Total ........................................ Exemple 8 : Exemple de formule : soin hydratant, à destination des peaux déshydratées On prépare, par mélange des différents composants, une crème ayant la composition décrite dans le tableau 4 ci-dessous. 3,000 0,250 Tableau 4 : Exemple de composition sous forme de soin hydratant jour pour visage INGREDIENTS EAU % en poids 78,325 GLYCERINE 6,000 ACIDE STEARIQUE 4,000 HUILE DE GRAINE DE BRASSICA CAMPESTRIS 3,000 ALCOOL STEARYL 2,700 METHYLPROPANEDIOL 2,200 GLYCERIN & EAU & ALCOOL & EXTRAIT DE FLEURS D'ARNICA CHAMISSONIS 1,000 PHOSPHATE DE POTASSIUM CETYL 0,600 GLYCERYL STEARATE SE 0,600 PHENOXYETHANOL 0,500 TALC 0,500 ACIDE SORBIQUE PARFUM 0,200 ACETATE DE TOCOPHERYL 0,100 HYDROXYDE DE SODIUM 0,050 COPOLYMER CROISE ACRYLATES/C10-30 ALKYL ACRYLATE 0,050 EDTA TETRASODIUM 0,025 Total 100,000 REVENDICATIONS1. Utilisation de manne de frêne ou d'un extrait de manne de frêne en tant qu'actif cosmétique. 2. Utilisation selon la revendication 1, pour prévenir ou traiter un déséquilibre hydrique de la peau. 3. Utilisation selon la revendication 1 ou 2, pour prévenir ou traiter 10 un déséquilibre lipidique de la peau. 4. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, pour stimuler la production et/ou la sécrétion de sébum. 15 5. Utilisation cosmétique selon l'une quelconque des revendications précédentes, pour stimuler la différenciation kératinocytaire. 6. Utilisation cosmétique selon l'une quelconque des revendications précédentes, pour stimuler l'expression de protéines 20 impliquées dans la rétention et le stockage de l'eau dans le tissu cutané. 7. Utilisation cosmétique selon l'une quelconque des revendications précédentes, pour stimuler l'angiogénèse. 25 8. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, pour traiter un état cutané choisi parmi une sécheresse cutanée, une perte d'éclat de la peau, une perte de couleur de la peau, une perte de teint de la peau, une perte de satiné de la peau, une perte de velouté de la peau, une perte de brillance des cheveux ou plusieurs de ces 30 états.5 9. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans laquelle la manne de frêne ou l'extrait de manne de frêne est utilisé(e) en combinaison avec un composé ou un mélange de composés choisi parmi de la sève d'érable, du sucre d'agave, de la bétaïne, un extrait lipophile d'argousier et de la mangiférine. 10. Composition cosmétique ou dermatologique comprenant de la manne de frêne ou un extrait de manne de frêne. 11. Composition selon la revendication 10, ladite composition comprenant de 0,001 % à 50% en poids de manne de frêne ou d'un extrait de manne de frêne par rapport au poids total de ladite composition. 12. Composition selon la revendication 10 ou 11 comprenant en outre un ou plusieurs des composés choisis dans le groupe comprenant de la sève d'érable, du sucre d'agave, de la bétaine, un extrait lipophile d'argousier et de la mangiférine. 13. Composition selon l'une quelconque des revendications 10 à 12, comprenant en outre au moins un excipient cosmétique, dermatologique ou pharmaceutique. 14. Composition selon l'une quelconque des revendications 10 à 13, ladite composition se présentant sous une forme choisie parmi une crème, une pommade, une solution, une émulsion, une microémulsion, un sérum, un gel, une lotion, un lait, un baume, un onguent, un beurre, une huile, un comprimé, une gélule. 15. Dispositif se présentant sous une forme choisie parmi un pot, un flacon-pompe, une lingette, un masque, un dispositif transdermique, un patch, un spray, une capsule ou une gélule, ledit dispositif comprenant de la manne de frêne ou un extrait de manne de frêne ou une composition selon l'une quelconque des revendications 10 à 14.