FR 2963736 A1 20120217 FR 1056523 A 20100810 COMPOSITION THERAPEUTIQUE COMPRENANT UN DERIVE DE GALVINOXYL ET DE LA PROPOLIS, ET SON UTILISATION CONTRE LES VIRUS A CAPSIDE LIPIDIQUE, NOTAMMENT LES VIRUS DE L'HERPES La présente invention a trait à une nouvelle composition thérapeutique comprenant un dérivé de galvinoxyl et de la propolis, à un procédé de préparation de ladite composition, et à l'utilisation de cette composition en tant que moyen antiviral, d'une manière générale, vis-à-vis des virus à capside lipidique (en abrégé : LCV), et en particulier vis-à-vis des virus de l'herpès et de leurs analogues qui font partie de l'ensemble des LCV. La propolis est une substance gommeuse que l'on récupère dans les ruches. Plus précisément, il s'agit d'une substance que les abeilles recueillent sur certaines plantes, notamment les écailles de bourgeon de peupliers et d'aunes, rassemblent et utilisent pour colmater les fissures des ruches, fixer les rayons et vernisser les parois. Dans le domaine de l'apiculture, la propolis est connue comme étant le moyen antibiotique ou désinfectant de la ruche empêchant la prolifération des bactéries et des moisissures. La propolis brute renferme généralement des résines et substances balsamiques (approximativement 55-50 %25 en poids), de la cire d'abeille (approximativement 30-35% en poids), des huiles éthérées (approximativement 10 % en poids) et des pollens (approximativement 5 % en poids), voir notamment EP-A-O 061 508 (page 2, lignes 1-28), EP- A-0 109 993 (page 1, lignes 24-26) et E.M.SCHNEIDEWIND et 0 al., Die Pharmazie 34, 103, (1979). On connaît, notamment de EP-A-O 061 508 (page 3, lignes 6-7) et de EP-A-O 109 993 (page 2, lignes 3-8; page 10, lignes 7-11; et page 11, lignes 1-4) précités, d'une part, et de EP-A-O 310 757 (page 3, lignes 31-32), d'autre part, les propriétés antivirales de la propolis extraite des ruches et purifiée vis-à-vis des virus de l'herpès (notamment HSV1 et HSV2) et des virus de la grippe (notamment IVA) . Par commodité, les abréviations suivantes sont utilisées dans la présente description. EBV = virus de Epstein Ban HSV1 = virus herpès simplex de type 1 30 HSV2 = virus herpès simplex de type 2 HSV1R = virus herpès simplex de type 1 résistant à l'acyclovir [substance antivirale de référence répondant à la formule développée de 2-amino-1,9-dihydro-9-[(2-hydroxyéthoxy)méthyl]-6H purine-6-one] IVA = virus de la grippe de type A LCV = virus à capside lipidique Dérivé de galvinoxyl (DéG) Prp = propolis Rp = rapport pondéral RT = température ambiante (15-20°C) TV = titre infectieux de l'échantillon de virus ZV = virus de Zoster Selon l'invention il a été découvert de manière surprenante qu'une composition 15 comprenant un dérivé de galvinoxyl et de la propolis pouvait être utilisée comme moyen antiviral vis-à-vis des virus à capside lipidique (LCV), et en particulier vis-à-vis des virus de l'herpès. Ainsi la présente invention a pour objet une composition thérapeutique 20 caractérisée en ce qu'elle comprend un dérivé de galvinoxyl et de la propolis, ledit dérivé de galvinoxyl étant chimiquement dénommé « 2,6-di-t-Butyl-(3,5-di-t-butyl-4-oxo-2,5-cyclohexadien- 1-ylidene)-p-tolylhydroy» et est représenté par la formule suivante : 10 He.. ÿé, B C\ CHI i- '3 C 3 FI,; 25 Pour plus de commodité, le composé 2,6-di-t-Butyl-(3,5-di-t-butyl-4-oxo-2,5-cyclohexadien-l-ylidene) -p-tolylhydroy tel que défini ci-dessus sera simplement dénommé « dérivé de galvinoxyl » dans la présente demande. Selon un mode de réalisation avantageux de l'invention, la composition thérapeutique telle que définie ci-dessus comprend plus particulièrement : (i) de 100 à 650 parties en poids de dérivé de galvinoxyl, pour (ii) une partie en poids de propolis. De façon avantageuse, la composition thérapeutique selon l'invention comprend le dérivé de galvinoxyl (DéG) et la propolis (Prp) dans un rapport pondéral (Rp = DéG/Prp) allant de 100/1 à 650/1, et plus particulièrement allant de 135/1 à 560/1. 10 Le composant propolis qui intervient dans la composition selon l'invention sera une Prp purifiée, notamment une Prp soluble dans l'eau ou les solvants organiques usuels, obtenue par traitement de la Prp brute par un alcool, tel que MeOH ou EtOH, ou un mélange eau-alcool. Conviennent notamment à cet effet, les Prp obtenues selon les procédés décrits dans DE-A-1 037 651, FR-A-2 256 764, FR-A-2 374 030, FR-A-2 594 336, EP-A-O 061 508, 15 EP-A-O 109 993, EP-A-O 135 601 et EP-A-O 310 757, et se présentant sous la forme de poudres ou granules de couleur blanche ou brun-clair. La composition de l'invention telle que définie ci-dessus est destinée au traitement des maladies provoquées par les virus à capside lipidique (LCV), et plus 20 particulièrement par les souches de l'herpès HSV1, HSV2 et/ou HSV1R. La composition thérapeutique utile dans les traitements des maladies virales provoquées par les LCV comprendra le mélange DéG/Prp avec un Rp allant de 100/1 à 650/1, en association avec un ou plusieurs excipients appropriés pour administration orale, injectable 25 ou locale. Ainsi que mentionné précédemment, une telle composition sera particulièrement avantageuse vis-à-vis de l'herpès et des maladies analogues à l'herpès. On a en effet trouvé qu'une telle composition était particulièrement efficace dans le traitement de l'herpès simplex 30 de type 1 et de type 2, notamment les maladies provoquées par les souches HSV1 et HSViR, qui sont transmissibles par contact entre muqueuses, d'une part, et les maladies provoquées par les souches HSV2, qui sont sexuellement transmissibles et comprennent notamment les végétations vénériennes, d'autre part.5 Selon l'invention, on préconise une nouvelle utilisation thérapeutique suivant laquelle on utilise un mélange comprenant le dérivé de galvinoxyl et la propolis dans un rapport pondéral dérivé de galvinoxyl/propolis allant de 100/1 à 650/1, et plus particulièrement allant de 135/1 à 560/1, pour l'obtention d'un médicament antiviral destiné à une utilisation en thérapeutique humaine ou vétérinaire vis-à-vis des maladies provoquées par les virus à capside lipidique, notamment les maladies provoquées par les souches (i) HSV1, HSV2 et HSV1R et (ii) IVA, EBV et ZV. Ainsi l'invention a plus particulièrement pour objet une composition telle que définie ci-dessus comprenant un dérivé de galvinoxyl et de la propolis, pour utilisation comme médicament antiviral en thérapeutique humaine ou vétérinaire afin de traiter des maladies provoquées par les virus à capside lipidique, et plus particulièrement celles provoquées par les souches de l'herpès HSV1, HSV2 et HSViR. La composition antivirale selon l'invention peut être préparée selon une méthode connue en soi. Le procédé pour la préparation de la composition est caractérisé en ce qu'il consiste à mélanger le dérivé de galvinoxyl et la propolis dans un milieu physiologique 20 aqueux ou huileux approprié, à une température comprise entre 15°C et 75°C. Selon un mode de réalisation avantageux de l'invention, le rapport pondéral entre le dérivé de galvinoxyl et la propolis va de 100/1 à 650/1, et de préférence de 135/1 à 560/1. D'autres avantages et caractéristiques de l'invention seront mieux compris à la lecture qui va suivre d'essais comparatifs et d'exemples de préparation. Bien entendu, l'ensemble de ces éléments n'est nullement limitatif mais est donné à titre d'illustration. 30 EXEMPLE 1 - Essais comparatifs - On fait appel à un milieu de culture contenant DéG aux concentrations de 50 ou 25 mg/ml et à des solutions de Prp à des concentrations décroissantes de 0,363 mg/ml, 0,272 mg/ml, 180 mg/ml, 136 mg/ml et 0,090 mg/ml. Des volumes égaux dudit milieu de culture et desdites solutions sont incubés en présence de HSViR pendant 1 heure à 37°C sous agitation. 25 Après centrifugation, les titres infectieux sont déterminés de la manière habituelle selon la méthode dite des dilutions limites et comparés à des échantillons témoins de virus HSViR, des échantillons témoins de propolis et des échantillons témoins de HG1 incubés dans les mêmes conditions (il n'a pas été nécessaire de préparer d'échantillons témoins d'excipient dès lors que des essais précédents ont démontré l'absence d'effet de l'excipient sur les virus, notamment HSViR). Pour mesurer précisément l'interaction de DéG et de Prp, on a utilisé la méthode décrite par R.F.SCHINAZI et al., Antimicrob. Agents Chemother. , 22 (No 3), pages 499-507 (1982) et reprise par J.C. POTTAGE, ibidem 30, (No 2), pages 215-219, (1986), en tenant compte des définitions suivantes : Ya = titre infectieux en présence de Prp/titre TV, Yb = titre infectieux en présence de DéG/titre TV, Yab = titre infectieux en présence de Prp + DéG /titre TV, Yc = Ya X Yb . Si: 1) Yab Yc mais au composé le moins actif seul, l'interaction est un antagonisme, et 4) Yab > au composé le plus actif mais Pour simplifier les calculs, les titres infectieux trouvés lors des essais des associations DéG/Prp et des essais témoins ont été exprimés par leur logarithme décimal. Les résultats obtenus ont été consignés dans le tableau I ci-après. Les résultats du tableau I montrent que : - aux plus fortes concentrations utilisées (Prp 0,363 mg/ml et DéG 50 mg/ml), il n'est pas possible d'observer une interaction dès lors que à cette dose la propolis seule est virucide, - à la concentration en Prp de 0,272 mg/ml, on observe uniquement un effet d'interférence avec DéG, - en revanche, pour les faibles concentrations en Prp (0,090 à 0,180 mg/ml), il y a une synergie avec DéG intervenant à la concentration de 25 ou 50 mg/ml. Dans le cas d'espèce, il y a synergie quand le rapport Rp = DéG/Prp est compris entre 135/1 et 560/1. TABLEAU I : Etude de l'association Prp/DéG sur le titre infectieux de HSV1R TV Titre Titre Essais Ya Yb Yab Yc Interaction Prp DéG Prp + DéG 4,5 3,5 (a) 2 (f) 0,5 0,77 0,44 0,11 0,33 synergie 4,5 4,5 (a) 3 (g) 2,5 1 0,66 0,55 0,66 synergie 5,0 4,0 (a) 2 (g) 0 0,8 0,4 0 0,32 synergie 4,5 2,5 (b) 2 (f) 0 0,55 0,44 0 0,24 synergie 4,0 1,0 (c) 1 (f) 0 0,25 0,25 0 0,06 synergie 4,5 1,5 (c) 2 (f) 0 0,33 0,44 0 0,14 synergie 4,5 3,5 (c) 3 (g) 2 0,77 0,66 0,44 0,50 synergie 5,0 3,0 (c) 2 (g) 1 0,6 0,4 0,2 0,24 synergie 4,0 0 (d) 2 (f) 0,5 0 0,5 0,12 0 interférence 5,0 1,0 (d) 2 (g) 1,0 0,2 0,4 0,25 0,08 interférence 4,0 0 (e) 2 (f) 0 0 0,5 0 0 (h) Notes (a) Ppr à la concentration de 0,090mg/ml (b) Prp à la concentration de 0,136 mg/ml (c) Prp à la concentration de 0,180 mg/ml (d) Prp à la concentration de 0,272 mg/ml (e) Prp à la concentration de 0,363 mg/ml (f) DéG à la concentration de 50 mg/ml (g) DéG à la concentration de 25 mg/ml (h) dose trop élevée en Prp EXEMPLE 2 - Formulation - On porte à 70-75°C un mélange de 59 g de vaseline blanche, de 2,99 g de sesquioléate de sorbitan et de 3 g de monooléate de glycerol. On cesse de chauffer quand le 10 mélange est devenu homogène et ajoute ensuite sous agitation 5 g de DéG puis 0,01 g de propolis, on ajoute alors 30 g d'eau à une température inférieure ou égale à 65 °C et poursuit l'agitation jusqu'à refroidissement à RT. On homogénéise et obtient une pommade constituée par une émulsion eau-dans-huile, utilisable comme collyre. 15 EXEMPLE 3 - Formulation - On mélange à 70-75°C 56,98 g de vaseline blanche avec 3,5 g de sesquioléate de sorbitan, 3,5 g de monooléate de glycérol. Quand le mélange est devenu homogène, on cesse le chauffage et ajoute 7 g de DéG. On mélange à nouveau et ajoute sous agitation un mélange constitué de 0,02 g de propolis et de 30 g d'eau à une température inférieure à 70°C environ. On poursuit l'agitation jusqu'à refroidissement à RT, puis on homogénéise et obtient une pommade constituée par une émulsion eau-dans-huile, utilisable comme collyre. EXEMPLE 4 - Formulation - On mélange 4,66 g de stéarate de polyéthylèneglycol 1500 avec 13 g de monostéarate de glycérol, 3 g de monooléate de glycérol, 10,5 g d'oléate de décyle, 5,5 g de triglycéride caprique/caprylique et 5 g d'isostéarate de glycérol. On chauffe progressivement jusqu'à 70-75°C et on cesse le chauffage dès que le mélange est devenu homogène. On ajoute alors 8 g de DéG et agite lentement. On verse alors dans le mélange résultant 3 g de propylèneglycol, 0,3 g de citral, 0,04 g de Prp et 47 g d'eau. On agite le mélange résultant tout en le laissant se refroidir jusqu'à RT. Après passage dans un dispositif d'homogénéisation, on obtient une émulsion eau-dans-huile ayant la consistance d'une crème. EXEMPLE 5 - Obtention de la propolis purifiée - La propolis utilisée dans les exemples 1-5 ci- dessus est une propolis purifiée obtenue par extraction avec EtOH à 80 % [i.e. mélange EtOH/H2O dans un rapport pondéral d'environ (8/2)], comme indiqué ci-après. La Prp brute est déposée par les abeilles sur des grilles plastiques perforées montées sur des cadres disposés dans les ruches. Ces grilles contenant la Prp brute sont prélevées des ruches et amenées à -30°C dans un congélateur de façon à rendre la Prp brute cassante, que l'on broie ensuite au mortier. Le matériau broyé est extrait avec EtOH à 80 %, à raison de 1 partie en poids de Prp brute pour 10 parties en volume de EtOH à 80 %, pendant 24 h, sous agitation, à RT. Le résidu insoluble est écarté par filtration. Le filtrat que l'on recueille est évaporé sous pression réduite et donne un extrait sec de couleur brun-clair. Rendement : 65 % en poids, par rapport à la Prp brute de départ. REVENDICATIONS1. Composition thérapeutique caractérisée en ce qu'elle comprend un dérivé de 5 galvinoxyl et de la propolis, ledit dérivé de galvinoxyl étant chimiquement dénommé « 2,6- di-t-Butyl-(3,5-di-t-butyl-4-oxo-2,5-cyclohexadien-1-ylidene) -p-tolylhydroy » et est représenté par la formule suivante : 2. Composition thérapeutique selon la revendication 1, caractérisée en ce qu'elle renferme : (i) de 100 à 650 parties en poids du dérivé de galvinoxyl pour (ii) une partie en poids de propolis. 3. Composition thérapeutique selon la revendication 1 ou 2, caractérisée en ce qu'elle comprend le dérivé de galvinoxyl (DéG) et la propolis (Prp) dans un rapport pondéral (Rp = DéG/Prp) allant de 100/1 à 650/1. 20 4. Composition thérapeutique selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisée en ce qu'elle comprend le dérivé de galvinoxyl (DéG) et la propolis dans un rapport pondéral (Rp = DéG/Prp) allant de 135/1 à 560/1. 5. Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, destinée au 25 traitement des maladies provoquées par les virus à capside lipidique (LCV). 6. Composition selon la revendication 5, destinée au traitement des maladies provoquées par les souches de l'herpès HSV1, HSV2 et/ou HSV1R. 10 155 7. Procédé pour la préparation d'une composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisé en ce qu'il consiste à mélanger le dérivé de galvinoxyl et la propolis dans un milieu physiologique aqueux ou huileux approprié, à une température comprise entre 15 et 75°C. 8. Procédé selon la revendication 7, caractérisé en ce que le rapport pondéral entre le dérivé de galvinoxyl et la propolis va de 100/1 à 650/1.