FR 2956581 A1 20110826 FR 1000783 A 20100225 1 La présente invention se rapporte à l'utilisation d'au moins un végétal du genre Borojoa, et notamment de l'espèce Borojoa patinoi dans ou pour la préparation d'une composition destinée à traiter de manière préventive et/ou curative, les signes cutanés du vieilissement. Elle concerne plus particulièrement l'utilisation du fruit de Borojoa patinoi dans ou pour la préparation d'une composition topique ou orale destinée à traiter de manière préventive et/ou curative, les signes cutanés du vieillissement. Les arbres du genre Borojoa sont répartis géographiquement en Amérique équatoriale. On retrouve principalement le genre Borojoa, au Vénézuéla, en Colombie, en Equateur et à Panama. C'est un genre des forêts tropicales humides qui s'adapte jusqu'à 1200 m d'altitude dans ces régions. Le genre Borojoa, qui appartient à la famille des Rubiacées, est encore connu sous le nom de Borojo. Le genre Borojoa est constitué de quelques espèces qui sont souvent confondues sous le nom Borojo, et essentiellement représenté par les espèces Borojoa patinoi Cuatrec., Borojoa sorbilis Cuatrec.et Borojoa verticillata (Ducke) Cuatrec. Mais le genre Borojoa est aussi représenté par les espèces Borojoa atlantica Dwyer, Borojoa claviflora (K. Schum.) Cuatrec., Borojoa duckei Steyerm., Borojoa panamensis Dwyer, Borojoa stipularis (Ducke) Cuatrec.et Borojoa universitatis Steyerm. L'espèce Borojoa patinoi est la plus répandue puisque cultivée, notamment en Colombie et au Panama par les populations locales pour son fruit comestible. Le fruit est alors consommé en jus de fruit ou en marmelade. Ainsi, à Panama, la société Earthly products Inc. Comercialise un jus de fruit au Borojo sous La marque Pura Vitta Borojo Juice. Le Borojo, nom vernaculaire pouvant être notamment représenté par les espèces Borojoa patinoi Cuatrec., Borojoa sorbilis Cuatrec. et Borojoa verticillata (Ducke) Cuatrec, désigne essentiellement le fruit de la plante. Riche en acides aminés essentiels, en minéraux et oligoéléments, notamment en 2 phosphore, le fruit Borojo est traditionnellement consommé comme un complément alimentaire à haute valeur nutritive. Le fruit est ausssi traditionnellement utilisé pour différentes applications médicinales : Le premier usage médicinal revient aux amérindiens Chocoes qui se servaient du fruit Borojo pour embaumer leurs morts. La culture afro-amérindienne a fait évoluer l'utilisation médicinale du fruit Borojo sous la forme de cataplasmes ou emplâtres pour soigner les maux de reins et respiratoires, mais aussi comme stimullant sexuel. Par conséquent, il n'a été révélé dans la litérature aucune utilisation d'au moins une plante appartenant au genre Borojoa dans ou pour la préparation d'une composition topique ou orale destinée à traiter de manière préventive et/ou curative, les signes cutanés du vieillissement. C'est justement ce type d'utilisation qui fait l'objet de la présente invention. En effet, les inventeurs de la présente invention ont maintenant découvert de façon surprenante et inattendue que l'utilisation d'au moins un végétal du genre Borojoa, et notamment de l'espèce Borojoa patinoi, et qu'au moins les extraits du fruit présentent une activité anti-vieillissement et antirides, et peuvent être utilisés comme agent destinés à améliorer l'aspect de la surface de la peau. Les inventeurs de la présente invention ont également pu mettre en évidence que cette activité est, au moins en partie, liée à une activité de stimulation de la synthèse d'acide hyaluronique par les fibroblastes. Les inventeurs de la présente invention ont également pu mettre en évidence de façon surprenante et inattendue que l'activité anti-vieillissement et antirides 25 est, au moins en partie, liée à une inhibition de la sénescence cellulaire. L'acide hyaluronique est un glycosaminoglycane, c'est l'un des principaux composants de la matrice extracellulaire. Il est particulièrement présent dans les tissus et notamment la peau et le cartilage. En apport exogène, Il est 30 actuellement utilisé en médecine esthétique comme produit de comblement des rides, et en cosmétique pour ses propriétés hydratantes. 3 L'acide hyaluronique est un polymère essentiellement produit par les fibroblastes et autres cellules spécialisées du tissu conjonctif, mais aussi par les kératinocytes au niveau de l'épiderme. II est constitué d'unités récurrentes de disaccharides qui sont composés d'acide D-glucuronique et de D-N- s acetylglucosamine liés entre eux par des liaisons glycosidiques alternées béta-1,4 et béta-1,3. In vivo, la taille de ce polymère atteint généralement 100 à 10 000 Kda. Cette molécule a une structure tridimensionnelle qui présente un volume très important par rapport à son poids moléculaire. Elle joue un rôle fondamental dans la matrice extracellulaire où elle attire l'eau et se lie à elle. 10 Elle peut ainsi fixer jusqu'à 1000 fois son poids en eau. L'acide hyaluronique présente également une fonction structurante pour le maintien de la densité du derme et de l'épiderme, ce qui assure la fermeté de la peau, et lui confère une apparence jeune. L'acide hyaluronique participe à la protection contre les dommages radicalaires, 15 et favorise la prolifération des fibroblastes, et par la suite, la synthèse du collagène et de l'élastine. Une peau jeune est généralement lisse et élastique parce qu'elle contient notamment une quantité importante d'acide hyaluronique. En vieillissant, la capacité de la peau à produire de l'acide hyaluronique diminue, sa capacité à 20 retenir l'eau diminue également. La peau devient alors plus fine, plus sèche, moins élastique et moins capable de se restaurer. Les rides se forment et la peau vieillit de manière apparente. On comprend alors à la lecture de ce qui précède l'importance de l'acide hyaluronique dans la structure des tissus, particulièrement de la peau, et 25 l'importance de maintenir et stimuler sa présence dans la peau pour lutter contre le vieillissement et les signes cutanés du vieillissement. Un des buts de la présente invention est donc de pouvoir disposer d'un produit nouveau qui présente, de manière significative, un effet stimulateur sur la synthèse endogène d'acide hyaluronique, notamment au niveau de la peau. 30 A la connaissance de la demanderesse l'activité stimulatrice de la synthèse d'acide hyaluronique par au moins un végétal du genre Borojoa, et notamment de l'espèce Borojoa patinoi, et plus particulièrement de son fruit, n'a jamais été décrite. L'acide béta galactosidase est une hydrolase spécifique des cellules eucaryotes localisée dans les lysosomes (Suzuki et al., 1995). Cette enzyme coupe le groupement terminal béta galactosyl résiduel d'un grand nombre de substrats naturels comme les glycoproteines et les glycosaminoglycanes. L'activité des béta galactosidases est utilisée depuis de nombreuses années et dans de nombreux laboratoires de par le monde pour marquer la sénescence cellulaire in vitro ( e.g. Reznikoff et al., 1996 ; Serrano et al., 1997 ; Bodnar et al., 1998 ; Van der Ioo et al., 1998 ; Tsukamoto et al., 1998 ; Matsunaga et al., 1999) et in vivo ( Sigal et al., 1999 ; Mishima et al., 1999). Ainsi, l'activité de la béta galactosidase sert de marqueur de sénescence cellulaire et notamment sur les fibroblastes (Dimri et al., 1995). L'augmentation de l'activité de cette enzyme traduit la mise en place des processus de sénescence, donc de vieillissement cellulaire. A contrario, la diminution de l'activite béta galactosidase traduit l'inhibition des processus de sénescence, donc un effet anti-âge sur les cellules. On comprend alors à la lecture de ce qui précède l'importance d'inhiber l'activité de la béta galactosidase dans les cellules des tissus, particulièrement de la peau pour lutter contre le vieillissement et les signes cutanés du vieillissement. Un autre but de la présente invention est donc de pouvoir disposer d'un produit nouveau qui présente, de manière significative, un effet inhibiteur sur l'activité de l'enzyme béta galactosidase, notamment au niveau de la peau. A la connaissance de la demanderesse un effet inhibiteur sur l'activité de l'enzyme béta galactosidase, notamment au niveau de la peau par au moins un végétal du genre Borojoa, et notamment de l'espèce Borojoa patinoi, et plus particulièrement de son fruit, n'a jamais été décrit. Par signes cutanés du vieillissement on entend toutes modifications de l'aspect extérieur de la peau dues au vieillissement, comme par exemple les rides et ridules, la peau flétrie, la peau molle, la peau amincie, le manque d'élasticité de la peau, le manque de fermeté de la peau, le manque de tonus de la peau, mais également toutes modifications internes de la peau qui ne se traduisent pas systématiquement par un aspect extérieur modifié, comme par exemple toutes dégradations internes de la peau, particulièrement la diminution de la teneur en acide hyaluronique. La préparation d'une composition selon l'invention, ayant une activité stimulatrice de la synthèse d'acide hyaluronique, ainsi qu'un effet inhibiteur sur l'enzyme béta galactosidase, contient au moins un végétal du genre Borojoa, et notamment de l'espèce Borojoa patinoi, et plus particulièrement de son fruit. De manière particulièrement avantageuse, la pulpe séchée du fruit et réduite en fine poudre est utilisée brute, elle peut constituer à elle seule le principe actif des compositions selon l'invention, ou sous forme d'extrait, en tant qu'agent cosmétique ou alimentaire destiné à traiter de manière préventive et/ou curative, les signes cutanés du vieillissement, conférant ainsi des propriétés anti-âges et anti-rides à la composition selon l'invention. Toute méthode d'extraction connue de l'homme du métier peut être utilisée pour préparer l'extrait selon l'invention. On peut en particulier citer les extraits aqueux, alcooliques ou utilisant un solvant organique. On entend, par solvant aqueux, tout solvant constitué totalement ou pour partie d'eau. A titre d'exemple, on peut citer l'eau elle-même, les solvants hydroalcooliques en toute proportion ou encore les solvants constitués d'eau et d'un composé comme le propylène glycol. On entend par extrait selon l'invention, la fraction liquide débarrassée des particules en suspension, issue de la macération du végétal avec le solvant. L'extrait obtenu peut constituer à lui seul le principe actif dans la préparation d'une composition selon l'invention. La quantité d'extrait ou de pulpe séchée de borojo pour la préparation d'une composition selon l'invention est fonction de l'effet recherché et fonction également de la concentration de l'extrait, cette quantité peut donc varier dans une large mesure. Pour donner un ordre de grandeur, on peut utiliser l'extrait ou la pulpe séchée de borojo selon l'invention, à l'état pur de 0,00001% à 50% du poids total de la composition et préférentiellement en une quantité représentant de 0,0001% à 25% du poids total de la composition. La préparation d'une composition selon l'invention peut être sous toutes formes galéniques et alimentaires imaginables, adaptées aussi bien à une application topique sur la peau et/ou les muqueuses et/ou les cheveux qu'à une administration par la voie orale. La composition selon l'invention peut être une composition cosmétique ou dermatologique. Préférentiellement, la composition est une composition cosmétique. La composition est une composition cosmétique car elle est destinée à améliorer l'aspect cutané général de l'individu qui en fait usage. Pour une administration par la voie orale, la composition contenant l'invention peut se présenter sous toutes les formes adaptées, particulièrement sous forme d'une solution buvable, d'un comprimé, d'une gélule, d'une capsule ou encore d'un aliment nutritionnel ou d'un complément nutritionnel. Ladite composition comprend en outre au moins un excipient approprié adapté à l'administration orale. Pour une administration par application topique sur la peau, les cheveux et/ou les muqueuses, la composition selon l'invention comprend un support cosmétiquement acceptable, compatible avec la peau, les muqueuses, les ongles, les cheveux et peut se présenter sous toutes les formes galéniques, notamment sous forme d'une solution aqueuse, hydroalcoolique ou huileuse, d'une émulsion huile dans eau, d'une émulsion eau dans huile, d'un gel aqueux ou huileux, d'un produits anhydre liquide, pâteux ou solide. Cette composition peut être plus ou moins fluide et avoir l'aspect d'une crème blanche ou colorée, d'une pommade, d'un lait, d'une lotion, d'un sérum, d'une pâte, d'une mousse. Elle peut éventuellement être appliquée sur la peau sous forme d'aérosol. Elle peut également se présenter sous forme solide, par exemple sous forme de stick. Des exemples de formulations, ci-dessous, permettent d'illustrer les 5 compositions selon l'invention sans toutefois en limiter la portée. Exemple 1 : Crème main anti-âge et hydratante Ingrédients Eau QSP Gomme de Xanthane 0,7 Stéarate de glycéryle 4,5 Sucrose stéarate 1,5 Beurre de karité 7 Huile de tournesol 5 Huile de coco 3 Huile de jojoba 1 Glycérine 3 Acide sorbique 0,35 Benzoate de sodium 0,5 Vitamine E 0,2 Parfum 0,5 Extrait Glycériné de Borojoa patinoi 1 10 8 Exemple 2 : Sérum visage anti-ride Ingrédients % Eau QSP Activated clay 7 Xanthan gum 0,3 Copaïba 1,5 Oléïne de karité 5 Huile de tournesol 9 Huile de Balanites 9 Glycérine 10 Acide sorbique 0,35 Benzoate de sodium 0,5 Vitamine E 0,2 Parfum 0,5 Extrait glycériné de Borojoa 2,5 patinoi 5 Exemple 3 : Lotion raffermissante anti-âge Ingrédients % Eau QSP Gomme de Xanthane 0,2 Lauryl glucoside 1 Hydrolat de Zingiber zerumbet 5 Glycérine 4 Acide sorbique 0,35 Benzoate de sodium 0,5 Parfum 0,1 Extrait Glycériné de Borojoa patinoi 1,5 Exemple 4 : Soluté buvable anti-âge (1 ampoule de 10 ml par jour) Ingrédients % Eau QSP Acide citrique QS Glucose 3,5 Sorbate de potassium 0,35 Arôme alimentaire 0,15 Extrait alcoolique de Borojoa patinoi 20 Exemple 5 : Gélule anti-âge (1 à 2 gélules de 350 mg) Composition de la poudre des gélules Ingrédients % Maltodextrine QSP Acide citrique QS Sorbate de potassium 0,35 Extrait sec de Borojoa patinoi 20 Des exemples illustrant l'activité de la préparation selon l'invention sont également décrits. Comme l'illustrent les résultats d'activité ci-après, les compositions contenant 10 des extraits de Borojoa patinoi (Rubiacées), selon l'invention, sont des compositions qui induisent une augmentation de la teneur en acide hyaluronique dans des cultures de fibroblaste humains en monocouche. Les extraits retenus pour la démonstration sont des extraits alcooliques préparés à partir de poudre de pulpe séchée de Borojoa patinoi. 15 Ainsi, l'extrait éthanolique de poudre de pulpe séchée de Borojoa patinoi présente une composition telle que suit : pulpe séchée de Borojoa patinoi 33, 33% éthanol 96° 48,89 % eau 17,78 % 11 la composition étant exprimée en pourcentage en poids par rapport au poids total de ladite composition. Cet extrait est laissé à l'obscurité à température ambiante pendant 6 heures puis filtré. Le filtrat est récupéré. Cet extrait sera appelé dans ce qui suit "PB EtOH" et sera désigné comme « l'actif », Comme l'illustrent les résultats d'activité ci-après, les compositions contenant des extraits de Borojo, et notamment de Borojoa patinoi (Rubiacées), selon l'invention, sont des compositions qui induisent une augmentation de la teneur en acide hyaluronique dans des cultures de fibroblastes humains normaux adultes cultivés en monocouches. Les résultats ci-après illustrent l'effet dose de l'actif « PB EtOH » dans sa capacité à moduler la production d'acide hyaluronique dans des cultures de fibroblastes humains normaux adultes cultivés en monocouches. Des monocouches confluentes de fibroblastes dermiques humains normaux ont été obtenues en cultivant des cellules issues d'une plastie abdominale réalisée chez une femme de 33 ans. Les fibroblastes ont été incubés 24 heures à 37°C, sous atmosphère humide et 5 % de CO2, en absence (milieu de culture seul), ou en présence de Transforming Growth Factor béta (TGF béta) à 10 ng/ml (produit de référence), ou de concentrations croissantes de l'actif à l'essai. Ces concentrations (VN) sont exprimées en volume de l'actif par rapport au volume total du milieu d'incubation dans lequel l'actif est stabilité. - "PB EtOH" - > 0,001 ; 0,01 et 0,1 %, v/v. L'actif a été solubilisé directement dans le milieu d'incubation. A la fin de la période d'incubation, l'acide hyaluronique contenue dans les milieux de culture a été quantifié à l'aide d'un kit E.L.I.S.A. sensible et spécifique. 12 À la fin de cette période d'incubation, les protéines contenues dans les lysats cellulaires ont été quantifiées par une méthode spectrocolorimétrique (méthode de Bradford). Les résultats sont donnés sous forme de ng d'acide hyaluronique par pg de protéines totales du tapis cellulaire (moyennes +1- la déviation standard, S.D.). La significativité statistique des différences observées entre les conditions "témoin" et "produit de référence" a été évaluée par un test de Student (Student t-test ; ** : p 13 Les résultats, ci-après, illustrent l'effet dose de l'actif PB EtOH pour sa capacité à inhiber l'activité des enzymes béta-Galactosidases dans des cultures de fibroblastes humains normaux adultes cultivés en monocouches. Des monocouches confluentes de fibroblastes dermiques humains normaux ont été obtenues en cultivant des cellules issues d'une plastie abdominale réalisée chez une femme mature de 47 ans. Les fibroblastes ont été incubés 48 heures à 37°C, sous atmosphère humide et 5 % de CO2, en absence (milieu de culture seul) ou en présence de concentrations croissantes de l'actif à l'essai ou en présence de Resveratrol 100 pM comme produit de référence. Aucune étude ne fait mention de composé de référence reconnu pour réduire l'activité de la Béta-Galactosidase dans un modèle de fibroblastes dermiques humains normaux, nous avons alors tenté d'utiliser le Resveratrol 100 pM comme produit de référence dans cette étude. Les concentrations (VN) de l'actif testé sont exprimées en volume de l'actif par rapport au volume total du milieu d'incubation dans lequel l'actif est stabilité : - "PB EtOH" -> 0,001 ; 0,01 et 0,1 %, v/v. L'actif a été solubilisé directement dans le milieu d'incubation. A la fin de la période d'incubation, l'état de sénescence des cellules a été évalué par la révélation de l'activité Béta-Galactosidase dans les tapis cellulaires. La quantification des cellules « Béta-Galactosidase positive » a été réalisée à l'aide d'un Kit de marquage histochimique de la marque SIGMA « Senescence histochemical staining kit », par analyse d'images à l'aide du logiciel Image J. Cette quantification a été réalisée sur 3 clichés pris de manière aléatoire dans chacun des puits de culture. La significativité statistique des différences observées entre les conditions « contrôle » et « produits de référence » (Resveratrol 100 pM) a été évaluée par un test de student (Student t-test ; p 14 La significativité statistique des différences observées entre les conditions « contrôle » et « produits à l'essai », a été évaluée par une analyse de la variance à un facteur (One Way ANOVA ou One Way Ranks), suivie, lorsque cela était nécessaire, d'un test de Holm-Sidak ou de Dunn's (p Les résultats présentés concernent l'actif "PB EtOH" et montrent que dans les conditions expérimentales retenues après 48 heures d'incubation, l'actif "PB EtOH" induit une diminution significative de l'activité de la Béta-Galactosidase, par rapport aux conditions « témoin » : - "PB EtOH" à 0,01 % - - 48,0 % (p REVENDICATIONS1. Utilisation dans une composition cosmétique ou pour la fabrication d'une composition cosmétique d'au moins un végétal du genre Borojoa, et notamment de l'espèce Borojoa patinoi dans ou pour la préparation d'une 10 composition topique ou orale destinée à traiter de manière préventive et/ou curative, les signes cutanés du vieilissement. 2. Utilisation selon la revendication 1, d'au moins un végétal du genre Borojoa, et notamment de l'espèce Borojoa patinoi dans ou pour la préparation d'une composition cosmétique étant destinée à stimuler la 15 synthèse d'acide hyaluronique par les fibroblastes. 3. Utilisation selon l'une quelconque revendication, d'au moins un végétal du genre Borojoa, et notamment de l'espèce Borojoa patinoi dans ou pour la préparation d'une composition cosmétique étant destinée à inhiber la sénescence cellulaire, et plus particulièrement l'activité des 20 enzymes béta galactosidases, notamment au niveau des fibroblastes. 4. Utilisation selon l'une quelconque revendication, d'au moins un végétal du genre Borojoa, et notamment de l'espèce Borojoa patinoi dans ou pour la préparation d'une composition cosmétique étant destinée à lutter contre les rides et ridules. 25 5. Utilisation selon l'une quelconque revendication, d'au moins un végétal du genre Borojoa, et notamment de l'espèce Borojoa patinoi dans ou pour la préparation d'une composition cosmétique étant destinée à lutter contre la peau flétrie. 6. Utilisation selon l'une quelconque revendication, d'au moins un végétal 30 du genre Borojoa, et notamment de l'espèce Borojoa patinoi dans ou pour la préparation d'une composition cosmétique étant destinée à lutter contre le manque d'élasticité et/ou de tonus de la peau. 15 7. Utilisation selon la revendication 1, caractérisée en ce que le végétal est séché, et plus particulièrement sa pulpe de fruit. 8. Utilisation selon la revendication 1, caractérisée en ce que le végétal est sous forme d'extrait, et plus particulièrement sa pulpe est sous forme d'extrait. 9. Utilisation selon les revendications 8 et 9, caractérisée en ce que le végétal ou son extrait est introduit dans la préparation d'une composition cosmétique selon l'invention, à l'état pur de 0,00001% à 50% du poids total de la composition et préférentiellement en une quantité représentant de 0,0001% à 25% du poids total de la composition.