FR 2944209 A1 20101015 FR 0952344 A 20090409 UTILISATION COSMETIQUE D'UN PRINCIPE ACTIF ISSU D'ADENOPHORA STRICTA POUR DEPIGMENTER LA PEAU, AGENT COSMETIQUE, PROCEDE D'OBTENTION ET COMPOSITIONS La présente invention concerne l'utilisation dans une composition cosmétique d'un principe actif issu d'Adenophora stricto pour dépigmenter ou éclaircir la peau. L'invention se rapporte également à un agent cosmétique dépigmentant issu d'Adenophora stricto, à un procédé d'obtention ainsi qu'à des compositions dépigmentantes et/ou éclaircissantes comprenant au moins un principe actif issu d'Adenophora stricto. La couleur de la peau chez l'homme est le résultat d'un subtil mélange de pigments dont l'essentiel résulte de variations quantitatives et qualitatives des mélanines, pigments produits et sécrétés par des cellules spécialisées appelées mélanocytes situées dans la couche basale de l'épiderme. Deux types de mélanines sont synthétisées : les eumélanines de couleur noire, qui sont photoprotectrices, et les phaeomélanines, de couleur jaune-rouge qui sont photosensibilisantes. La couleur de la peau découle de l'association de ces deux groupes de mélanines sous l'influence d'enzymes et de nombreux gènes de contrôle. La production de mélanines, ou mélanogenèse, assure une pigmentation constitutive de la peau dès la naissance. Elle conduit également à une pigmentation facultative ou induite, le bronzage, qui correspond à une réponse évolutive et adaptative de l'organisme à différents stimuli dont les expositions prolongées au soleil. Il est courant que des personnes souhaitent recourir à une dépigmentation de la peau pour des raisons cosmétiques diverses, soit pour un éclaircissement global, soit pour éliminer ou atténuer des tâches issues de désordres locaux de la pigmentation. En effet, une des caractéristiques du vieillissement cutané est l'apparition de tâches pigmentaires disgracieuses appelées lentigo solaires pour les zones les plus fréquemment photo-exposées, et lentigo séniles pour les tâches pigmentaires assez larges qui apparaissent chez le sujet âgé. Actuellement, il existe de nombreux agents de la dépigmentation destinés à éclaircir la peau ou à limiter les pigmentations excessives et restaurer une coloration normale de la peau. Ces actifs agissent soit directement sur la vitalité des mélanocytes, soit en inhibant une des enzymes impliquées dans la synthèse de mélanine. Toutefois il subsiste toujours un besoin pour un produit cosmétique dépigmentant efficace, capable d'atténuer visiblement la pigmentation de la peau. Pour répondre à cette problématique, la présente invention propose d'utiliser un principe actif issu d'Adenophora stricto comme agent dépigmentant. L'Adenophora est une plante herbacée de la famille des Campanulacées. L'Adenophora stricto est une espèce particulière, traditionnellement utilisée comme plante ornementale. Elle est également utilisée en médecine chinoise. D'après l'Oriental Materia Medica, Adenophora radix, permet de traiter le phlegme, de contrôler la toux, de nourrir le Yin et de nettoyer les poumons. Adenophora radix est également connu comme expectorant, cardiotonique et anti-fongique. En outre, en médecine orientale, la racine d'Adenophora est employée en tant qu'agent de détoxication. En cosmétique, Adenophora stricto est connue pour quelques applications spécifiques. Ainsi, la demande de brevet FR-2.904.934 décrit l'utilisation d'un complexe contenant un extrait de Chaparral, un extrait d'Adenophora stricto et un extrait de Lupinus albus dans une composition anti-vieillissement. De même la demande de brevet japonais JP-3.176.414 décrit une utilisation d'un extrait d'Adenophora stricto dans une composition cosmétique anti-pelliculaire. Toutefois l'utilisation d'Adenophora stricto pour dépigmenter la peau n'a jamais été envisagée. Or, de façon surprenante, Adenophora stricto présente des propriétés remarquables qui lui permettent d'agir simultanément sur plusieurs facteurs essentiels impliqués dans le phénomène de pigmentation cutanée. L'invention vise donc l'utilisation cosmétique d'un principe actif d'Adenophora stricto dans une composition cosmétique comme agent dépigmentant ou agent d'éclaircissement de la peau. En particulier l'invention vise l'utilisation d'un principe actif issu d'Adenophora stricto contenant au moins 30% de sucres. L'utilisation d'un tel actif permet d'agir sur la mélanocytogenèse, sur la mélanogenèse, sur le transport des mélanosomes et sur la mélanogenèse photo- induite. Préférentiellement l'invention vise l'utilisation d'un actif qui permet d'agir simultanément sur ces différents phénomènes. L'invention vise également un agent cosmétique dépigmentant, obtenu à partir d'Adenophora stricto, présentant une teneur en sucres supérieure à 30% par rapport à la teneur totale en matière sèche, un procédé d'obtention de cet actif cosmétique ainsi que des compositions cosmétiques incluant au moins un actif. Par � agent dépigmentant � ou � agent d'éclaircissement �, on entend un principe actif cosmétique capable de dépigmenter ou d'éclaircir la peau humaine. Les principes actifs issus d'Adenophora stricto selon l'invention peuvent être obtenus par un procédé comprenant au moins une étape d'hydrolyse enzymatique. De manière préférentielle, les compositions cosmétiques selon l'invention contiennent 0,01 à 20% d'un extrait d'Adenophora stricto. Elles peuvent se présenter sous toutes formes permettant l'application par voie topique. L'invention vise aussi un procédé cosmétique pour dépigmenter des tâches pigmentaires et/ou éclaircir la peau, comprenant l'application topique sur la peau d'au moins une composition cosmétique contenant entre 0,01 à 20% d'un extrait d'Adenophora stricto. La présente invention est maintenant décrite en détail. Selon un premier aspect l'invention vise donc l'utilisation d'un principe actif issu d'Adenophora stricto dans une composition cosmétique comme agent dépigmentant ou agent d'éclaircissement de la peau. Préférentiellement il s'agit d'un principe actif osidique issu d'Adenophora stricto, encore plus préférentiellement un principe actif issu d'Adenophora stricto présentant une teneur en sucres supérieure ou égale à 30% par rapport à la teneur totale en matière sèche. Le processus de synthèse des mélanines par les mélanocytes différenciés, la mélanogenèse, met en jeu différentes enzymes qui catalysent chacune des réactions conduisant à la formation des pigments mélaniques au sein des mélanosomes. Trois enzymes sont particulièrement impliquées dont la tyrosinase. L'actif issu d'Adenophora stricto selon la présente invention propose de réduire l'activité de la tyrosinase et par conséquent de limiter la synthèse des pigments mélaniques. Les mélanocytes possèdent des expansions cytoplasmiques appelées � dendrites mélanocytaires �, qui leur permettent de rentrer en contact avec les kératinocytes des couches suprabasales. Chaque mélanocyte est en relation avec environ 36 kératinocytes, formant ainsi une � unité épidermique de mélanisation �. En même temps que se déroule la synthèse des mélanines, les mélanosomes sont transportés vers l'extrémité des dendrites mélanocytaires. Les mélanosomes sont transportés le long de fibres d'actine et de tubuline grâce à un complexe moléculaire d'ancrage aux extrémités des dendrites comprenant Rab27 et la mélanophiline. Les mélanosomes sont ensuite transférés vers les kératinocytes associés. La présente invention propose un actif issu d'Adenophora stricto capable de réduire la synthèse de Rab27 et/ou de la mélanophiline au sein des mélanocytes, limitant ainsi le transport des mélanosomes vers l'extrémité des dendrites mélanocytaires. En outre l'actif selon l'invention permet aussi de bloquer le transfert des mélanosomes, du mélanocyte vers les kératinocytes auxquels il est associé. Au sens de l'invention � mélanogenèse � désigne le processus de synthèse de la mélanine incluant toutes les réactions enzymatiques et/ou non enzymatiques se rapportant au procédé de synthèse d'un précurseur chimique de la mélanine, d'un de ses intermédiaires ou sous-produits. De même, le terme � transport des mélanosomes � désigne le processus de mobilité des mélanosomes incluant toutes les réactions enzymatiques et/ou non enzymatiques se rapportant au procédé de migration des mélanosomes. Par ailleurs, le terme � inhiber � signifie au sens de la présente invention, diminuer, limiter ou bloquer l'action ou le fonctionnement d'un procédé. Selon l'invention l'utilisation d'un principe actif issu d'Adenophora stricto permet donc d'atténuer la pigmentation de la peau, préférentiellement simultanément - en contrôlant la mélanogenèse par la tyrosinase, et - en contrôlant le transport des mélanosomes au sein des mélanocytes et en bloquant le transfert des mélanosomes vers les kératinocytes via Rab27 et/ou mélanophiline. Avantageusement, l'utilisation d'un extrait d'Adenophora stricto permet donc de réduire la formation des pigments mélaniques et de limiter leur concentration au sein des kératinocytes. Il peut être utilisé en tant que principe actif dans une composition cosmétique pour un effet dépigmentant efficace en vue par exemple d'éclaircir la peau et/ou de réduire des tâches pigmentaires cutanées de vieillissement ou UV-induites. Selon un deuxième aspect, l'invention concerne un principe actif ou agent cosmétique dépigmentant particulièrement adapté, obtenu à partir d'Adenophora stricto, présentant une teneur en sucres supérieure à 30% du poids total de l'extrait sec. De façon préférée il s'agit d'un principe actif issu d'Adenophora stricto présentant une teneur en sucres comprise entre 40 et 65% par rapport à la teneur totale en matière sèche. L'actif selon l'invention peut être obtenu à partir de toute partie d'une plante d'Adenophora stricto, notamment de la graine, de la feuille, de la tige et du bourgeon. Préférentiellement il est obtenu à partir de racines d'Adenophora stricto. Il peut notamment se présenter sous forme liquide, ou sous forme de poudre 15 après atomisation ou lyophilisation. Préférentiellement il se présente sous forme d'un liquide aqueux limpide de couleur claire, et peut être défini par les caractéristiques exposées ci-après. Matières sèches : On mesure le taux de matières sèches par passage à l'étuve à 105°C en 20 présence de sable d'un échantillon de poids initial donné jusqu'à obtention d'un poids constant. Le taux de matières sèches d'un actif issu d'Adenophora stricto selon l'invention est compris entre 10 et 150 g/I, plus particulièrement entre 24 et 44 g/I. 25 Mesure du pH : Le pH mesuré par la méthode potentiométrique à température ambiante conduit à des valeurs comprises entre 3 et 5, plus particulièrement entre 3 et 4. Détermination de la teneur en sucres totaux On utilise la méthode de DUBOIS. En présence d'acide sulfurique concentré et de phénol, les sucres réducteurs donnent un composé jaune orangé. A partir d'un gamme étalon, on peut déterminer le taux de sucres totaux d'un échantillon. Le taux de sucres totaux d'un actif issu d'Adenophora stricto selon l'invention est compris entre 5 et 85 g/I, préférentiellement entre 13 et 25 g/I. L'actif contient au moins 30% de sucres totaux par rapport aux matières sèches totales. Préférentiellement la teneur est comprise entre 40 et 65%. Caractérisation des carbohydrates L'analyse par HPLC d'un principe actif selon l'invention permet de déterminer la répartition des poids moléculaires de la fraction glucidique. Poids moléculaire (Da) Pourcentage de la fraction glucidique d'un principe actif selon l'invention (%) Monosaccharides Détermination de la teneur en protéines Le taux de protéines est obtenu par la méthode de Kjedhal. La teneur en protéines totales peut être exprimée en pourcentage par rapport à la teneur en matières sèches. L'actif cosmétique selon l'invention issu d'Adenophora stricto contient moins 10 de 40% de protéines par rapport aux matières sèches totales, préférentiellement moins de 20%. Détermination de la teneur en composés phénoliques Les composés phénoliques forment en présence de ferricyanure de potassium des composés colorés, détectables à 715nm. 15 L'intensité de coloration est proportionnelle à la quantité de composés phénoliques. Les lectures sont réalisées à partir d'une gamme étalon d'acide gallique allant de 40 à 120mg/I. La teneur en composés phénoliques est exprimée en pourcentage par rapport aux matières sèches. L'actif cosmétique selon l'invention issu d'Adenophora stricto contient moins de 10% de composés phénoliques par rapport aux matières sèches totales, préférentiellement moins de 5%. Fraction active La fraction active d'un actif issu d'Adenophora stricto selon l'invention est déterminée dans l'étude de la synthèse de mélanine. La fraction active permet de réduire de 40% la synthèse de mélanine dans des cultures de mélanocytes B16F1. L'analyse de la fraction active d'un principe actif selon l'invention permet de déterminer un degré de polymérisation moyen égal à 4,9, représentatif d'oligosaccharides. La caractérisation par chromatographie en phase gazeuse (CPG) de la fraction active du principe actif donne les résultats suivants Composition de la fraction active du principe actif selon l'invention (%) Arabinose 29.5 Acide galacturonique 26.9 Glucose 16.8 Galactose 8.5 Rhamnose 8.4 Xylose 3.9 Acide Glucuronique 3.7 Mannose 1.6 Fucose 0.7 La fraction active d'un principe actif issu d'Adenophora stricto selon l'invention se caractérise donc par une fraction carbohydrate composée d'oligosaccharides principalement d'arabinose, d'acide galacturonique et de glucose. Selon un autre aspect, la présente invention vise un procédé d'obtention d'un agent cosmétique issu d'Adenophora stricto. Le procédé comprend au moins une étape d'hydrolyse enzymatique. Préférentiellement il s'agit d'un procédé comprenant les étapes suivantes : - solubilisation d'une poudre de racines d'Adenophora stricto en 10 milieu aqueux, - au moins une hydrolyse enzymatique, - séparation des phases soluble et insoluble, - traitement thermique en vue du blocage des activités enzymatiques, et 15 - filtration, et/ou - filtration stérilisante. Le procédé peut comprendre une étape de concentration par ultrafiltration, précipitation et/ou chromatographie. L'agent cosmétique obtenu peut être ensuite présenté sous forme liquide ou sous 20 forme de poudre après atomisation ou lyophilisation. Le procédé peut également comprendre une étape d'ajout de conservateur(s), et/ou des étapes permettant de stabiliser la couleur et l'odeur de l'actif obtenu. La présente invention couvre aussi les compositions cosmétiques pour application topique sur la peau destinée à un effet dépigmentant, comprenant entre 0,1 25 et 25% en poids d'un agent cosmétique issu d'Adenophora stricto selon l'invention. Ces compositions peuvent se présenter notamment sous forme de crèmes, émulsions huile-dans-eau, émulsions eau-dans-huile, émulsions multiples, solutions, suspensions ou poudres. Elles peuvent être plus ou moins fluides et avoir l'aspect d'une crème, d'une lotion, d'un lait, d'un sérum, d'une pommade, d'un gel, d'une pâte ou d'une mousse, ou sous forme solide. Ces compositions sont notamment destinées à réduire des tâches d'hyperpigmentation et/ou à éclaircir la peau. Des tests ont montré la compatibilité du principe actif avec les matières premières utilisées en cosmétique : épaississants, émulsionnants, solvants. On peut également citer un exemple de formulation ayant montré une stabilité physique, incluant 4% d'agent cosmétique issu d'Adenophora stricto selon l'invention : - Arachidyl alcool/Behenyl alcool/Arachidyl glucoside : 3,0% - Isononyl isononoate : 2,0% - Cetearyl octonoate : 10,0% - Polyacrylamide/C13-14 Isoparaffin/Laureth-7 : 2,0% - Conservateurs : 0,5% - Agent cosmétique selon l'invention : 4,0% - Eau : 78,5%. L"invention est maintenant illustrée par des études évaluant l'effet d'un agent cosmétique issu d'Adenophora stricto. L'actif utilisé pour ces études est un actif issu d'Adenophora stricto présentant les caractéristiques suivantes : - solution aqueuse - aspect : liquide limpide - couleur : jaune - matières sèches : 30,7 g/I - teneur en sucres totaux : 14,4g/l, soit 46% de l'extrait sec - teneur en protéines totales : 3,1g/I, soit 10% de l'extrait sec. Cet exemple d'extrait n'est bien entendu pas limitatif. 1/ Evaluation de l'effet sur la mélanogenèse 1-1/Etude de l'activité anti-tyrosinase L'objectif de cette étude est d'évaluer l'effet dépigmentant d'un actif issu d'Adenophora stricto, en mesurant l'inhibition de l'activité tyrosinase. L'étude est réalisée sur cultures de mélanocytes B16F1 selon le protocole suivant. Les cellules sont ensemencées et incubées dans un milieu de culture adapté. On ajoute au milieu de culture l'agent cosmétique issu d'Adenophora stricto à 2%, et les cellules sont incubées pendant plusieurs jours. Ensuite, on réalise une trypsination cellulaire et on effectue le dosage de la tyrosinase. Les résultats obtenus pour les cellules traitées avec l'actif selon l'invention par rapport aux cellules non traitées, montrent une diminution de l'activité tyrosinase de 227o. Ainsi, ces résultats montrent bien qu'un actif issu d'Adenophora stricto permet d'inhiber l'activité de l'enzyme tyrosinase impliquée dans la synthèse de mélanine, et donc d'inhiber la mélanogenèse. 1-2/ Quantification du taux de mélanine synthétisée Cette étude a pour objectif d'évaluer l'effet dépigmentant d'un actif issu d'Adenophora stricto, en mesurant le taux de mélanine synthétisée. L'étude est réalisée sur cultures de mélanocytes B16F1 selon le protocole décrit ci-après. Les cellules sont ensemencées dans un milieu de culture adapté et incubées. On ajoute au milieu de culture l'agent cosmétique issu d'Adenophora stricto à 2%, et les cellules sont incubées pendant plusieurs jours. Ensuite, on réalise une trypsination cellulaire et on effectue le dosage de la mélanine. Les résultats obtenus pour les cellules traitées avec l'actif selon l'invention par rapport aux cellules non traitées, montrent une diminution du taux de mélanine synthétisée de 50%. Ces résultats montrent bien qu'un actif issu d'Adenophora stricto permet de diminuer fortement la synthèse de mélanine par les mélanocytes. 2/ Evaluation de l'effet sur le transport des mélanosomes 2-1/Etude de la synthèse de Rab27a Le but de cette étude est d'évaluer la capacité d'un actif issu d'Adenophora stricto à limiter la synthèse de Rab27a, un des facteurs indispensables au transport des mélanosomes. L'étude est réalisée par Western Blot sur cultures de mélanocytes B16F1 Le protocole opératoire est le suivant. Les mélanocytes sont ensemencés dans un milieu de culture adapté et sont traités par l'agent cosmétique issu d'Adenophora stricto à 2%, puis incubés pendant plusieurs jours. A la fin de l'incubation, les extraits cellulaires sont récupérés puis stockés. On réalise ensuite un dosage des protéines totales à l'aide d'un kit de dosage. Le Western Blot est réalisé par électrophorèse sur gel SbS-polyacrylamide et l'immunomarquage est effectué avec des anticorps adaptés pour Rab27a. Les bandes obtenues sont ensuite semi-quantifiées par densitométrie. On constate que testé à 2% sur mélanocytes B16F1, l'actif selon l'invention issu d'Adenophora stricto, diminue significativement de 45% la synthèse de Rab27a, un des facteurs indispensables au transport de mélanosomes. Ainsi, ces résultats montrent bien qu'un actif issu d'Adenophora stricto permet de limiter le transport de mélanosomes. 2-2/Etude de la synthèse de mélanophiline Cette étude a pour objectif d'évaluer la capacité d'un actif issu d'Adenophora stricto à limiter la synthèse de mélanophiline, un des facteurs indispensables au transport des mélanosomes. L'étude est réalisée par Western Blot sur cultures de mélanocytes humains normaux. Le protocole opératoire est le suivant. Les mélanocytes sont ensemencés dans un milieu de culture adapté et sont traités par l'agent cosmétique issu d'Adenophora stricto à 2%, puis incubés pendant plusieurs jours. A la fin de l'incubation, les extraits cellulaires sont récupérés puis stockés. On réalise ensuite un dosage des protéines totales à l'aide d'un kit de dosage. Le Western Blot est réalisé par électrophorèse sur gel SbS-polyacrylamide et l'immunomarquage est effectué avec des anticorps adaptés pour la mélanophiline. Les bandes obtenues sont ensuite semi-quantifiées par densitométre après analyse d'images. On constate que testé à 2% sur mélanocytes humains normaux, l'actif selon l'invention issu d'Adenophora stricto, diminue significativement de 34% la synthèse de mélanophiline, un des facteurs indispensables au transport de mélanosomes. Ainsi, ces résultats montrent qu'un actif issu d'Adenophora stricto permet bien de limiter le transport de mélanosomes. Ces différentes études permettent de montrer qu'un extrait d'Adenophora stricto présente bien un effet dépigmentant, en particulier inhibiteur de la mélanogenèse et inhibiteur du transport des mélanosomes. REVENDICATIONS1. Utilisation cosmétique d'un principe actif issu d'Adenophora stricto dans une composition cosmétique comme agent dépigmentant de la peau. 2. Utilisation cosmétique d'un principe actif contenant des sucres, issu d'Adenophora stricto, dans une composition cosmétique comme agent 5 dépigmentant de la peau. 3. Utilisation cosmétique selon l'une des précédentes revendications, caractérisée en ce que le principe actif issu d'Adenophora stricto présente une teneur en sucres supérieure à 30% par rapport à la teneur totale en matière sèche. 10 4. Utilisation cosmétique selon l'une des précédentes revendications, caractérisée en ce que le principe actif issu d'Adenophora stricto est un agent destiné à inhiber le transport des mélanosomes. 5. Utilisation cosmétique selon la revendication 4, caractérisée en ce que le principe actif issu d'Adenophora stricto est inhibiteur de la synthèse de 15 Rab27a et/ou de la mélanophiline dans des mélanocytes humains. 6. Utilisation cosmétique selon l'une des précédentes revendications, caractérisée en ce que le principe actif issu d'Adenophora stricto est un agent destiné à inhiber la mélanogenèse. 7. Utilisation cosmétique selon la revendication 6, caractérisée en ce que 20 le principe actif issu d'Adenophora stricto est inhibiteur de la synthèse des mélanines et/ou de l'activité de la tyrosinase dans les mélanocytes. 8. Utilisation cosmétique selon l'une quelconque des précédentes revendications, pour éclaircir la peau et/ou réduire des tâches pigmentaires cutanées. 9. Agent cosmétique dépigmentant, obtenu à partir d'Adenophora stricto, présentant une teneur en sucres supérieure ou égale à 30% par rapport à la teneur totale en matière sèche. 10. Agent cosmétique selon la revendication 9, caractérisé en ce qu'il 5 présente une teneur en sucres comprise entre 40 et 65% par rapport à la teneur totale en matière sèche. 11. Agent cosmétique selon l'une des revendications 9 ou 10, caractérisé en ce qu'il présente les caractéristiques suivantes - un taux de matières sèches compris entre 10 et 150 g/I, 10 - un pH compris entre 3 et 5, et 12. Agent cosmétique selon l'une des revendications 9 à 11, caractérisé en ce qu'il présente les caractéristiques suivantes : - un taux de matières sèches compris entre 24 et 44 g/I, et - un pH compris entre 3 et 4. 15 13. Agent cosmétique selon l'une des revendications 9 ou 12, caractérisé en ce qu'il présente : - une teneur en protéines inférieure à 40%, et - une teneur en composés phénoliques inférieure à 10%, par rapport à la teneur totale en matières sèches. 20 14. Agent cosmétique selon l'une des revendications 9 à 13, caractérisé en ce qu'il présente : - une teneur en protéines inférieure à 20%, et - une teneur en composés phénoliques inférieure à 5%, par rapport à la teneur en matières sèches. 25 15. Procédé d'obtention d'un agent cosmétique dépigmentant selon l'une des revendications 9 à 14, comprenant au moins une étape de solubilisation de racines d'Adenophora stricto en milieu aqueux et une d'hydrolyse enzymatique. 16. Composition cosmétique pour application topique sur la peau destinée à un effet dépigmentant, caractérisée en ce qu'elle comprend entre 0,1 et 25% en poids d'un agent cosmétique selon l'une des revendications 9 à 14. 17. Procédé cosmétique pour réduire des tâches pigmentaires et/ou 5 éclaircir la peau, comprenant l'application topique sur la peau d'une composition selon la revendication 16.