FR 2944794 A1 20101029 FR 0952770 A 20090428 Procédé de préparation d'oligomères de glycoside de flavonoïde et utilisation en cosmétique La présente invention concerne un procédé de préparation d'oligomères de 5 glycoside de flavonoïde et les utilisations des oligomères de glycoside de flavonoïde obtenus. Le terme flavonoïde est attribué à une classe de métabolites secondaires qui dérivent de la structure phénylbenzopyrone suivante : O 10 Les principales classes de flavonoïdes sont les flavones, les flavonols, les flavanones, ainsi que les dihydroflavanols. Un glycoside de flavonoïde est un flavonoïde lié par une liaison C-glucosyle ou 0-glycosidique à un ou plusieurs sucres, qui peut être un mono- ou un oligosaccharide. Des exemples de glycosides de flavonoïdes incluent la 15 hespéridine, la naringine, la rutine et la quercitrine. Kurisawa et al. (Biomacromolecules 2003, 4, 1394-1399) décrit la préparation d'oligomères de rutine par dissolution de rutine dans un mélange de méthanol et de tampon suivi d'une polymérisation par une solution de laccase. Les oligomères d'oligorutine obtenus présentent des propriétés antioxydantes. 20 Toutefois, le méthanol n'est pas adapté à une utilisation cosmétique en raison de sa forte toxicité. L'objectif de la présente invention est de fournir un procédé alternatif de préparation d'oligomères de glycoside de flavonoïde qui mette en oeuvre des solvants d'origine végétale, utilisables de façon industrielle sans protection 25 particulière et compatible avec des formulations cosmétiques et/ou pharmaceutiques, et leurs utilisations à des fins cométiques et/ou pharmaceutiques. Selon un premier aspect, l'invention concerne un procédé de préparation d'oligomères de glycoside de flavonoïde comprenant les étapes consistant à : a) solubiliser un glycoside de flavonoïde dans un mélange comprenant de la glycérine, de l'éthanol et une solution aqueuse, et b) polymériser le glycoside de flavonoïde solubilisé par une enzyme laccase. Par � oligomère de glycoside de flavonoïde �, on désigne une molécule constituée de l'enchaînement répété de monomères (à savoir le glycoside de flavonoïde), reliés les uns aux autres par des liaisons covalentes. L'oligomère comprend de préférence de 2 à 50 monomères, notamment de 2 à 10. Toutefois, les polymères de glycoside de flavonoïde comprenant plus de 50 monomères sont également inclus. Par � solution aqueuse �, on désigne une solution dans laquelle le solvant est majoritairement de l'eau. La solution aqueuse peut être une solution tampon, et est de préférence de l'eau. Avantageusement, le procédé selon l'invention met en oeuvre des solvants d'origine végétale et des moyens biotechnologiques les plus naturels possibles. Les inventeurs associent de la glycérine et de l'éthanol afin de solubiliser le glycoside de flavonoïde, même en présence d'eau. La présence d'eau est nécessaire pour mettre en oeuvre la réaction de polymérisation par une enzyme laccase. Le procédé selon l'invention est particulièrement avantageux car il ne met en oeuvre que des solvants peu toxiques, peu coûteux et adaptés pour une utilisation industrielle. Les oligomères de glycoside de flavonoïde obtenus par le procédé peuvent être utilisés dans des compositions cosmétiques et/ou pharmaceutiques sans étape de purification poussée : en particulier, la présence de traces d'éthanol et/ou de glycérine n'est pas incompatible avec les utilisations cosmétiques et/ou pharmaceutiques des compositions. De préférence, dans le procédé précité, le glycoside de flavonoïde a la formule (I) suivante : dans laquelle : OH O (I) R1, R2, R3, R4, R5, R6 à R7 représentent indépendamment H ou OH, G représente un glycoside, un diglycoside ou un triglycoside. La formule (I) représente le squelette de base des flavonols. De préférence, R1, R2, R3, R4 et R7 représentent H et R5 et R6 représentent 5 OH. Le glycoside de flavonoïde a donc la formule (Il) suivante : HO OH OH OH O dans laquelle G est tel que défini ci-dessus. La rutine de formule suivante est le glycoside de flavonoïde particulièrement préféré : OH OH HO HO HO 10 OH La rutine ou quercétine-3-rutinoside, est un glycoside de quercétine, la quercétine appartenant à la classe des flavonols. La rutine, décrite dans de nombreuses plantes, est très peu soluble dans l'eau. Elle se présente sous la forme d'une poudre jaune. La mise en oeuvre du procédé selon l'invention à partir de rutine 15 permet d'obtenir des oligomères de rutine (oligorutine) : majoritairement des dimères et trimères de rutine, qui sont très solubles dans l'eau et les solvants polaires, contrairement à la rutine. Cette meilleure solubilité permet une utilisation plus aisée, notamment en cosmétique, dans la phase aqueuse des émulsions par exemple. A la fin de l'étape b) de polymérisation de la rutine, une solution 20 parfaitement limpide, stable, de couleur rouge-brun est obtenue. De préférence, dans l'étape a) du procédé précité, les proportions relatives de glycérine, d'éthanol et de solution aqueuse dans le mélange sont d'environ 1/1/2. Ces proportions sont particulièrement adaptées pour solubiliser le glycoside de flavonoïde. De préférence, l'étape a) du procédé précité comprend les étapes de : a) solubiliser du glycoside de flavonoïde dans un pré-mélange comprenant de la glycérine, de l'éthanol, et 13) ajouter une solution aqueuse à la solution obtenue lors de l'étape a) pour obtenir la solution comprenant ledit glycoside de flavonoïde. La décomposition de l'étape a) en ces deux étapes permet en effet de faciliter la solubilisation du glycoside de flavonoïde. Le glycoside de flavonoïde se solubilise facilement dans le pré-mélange comprenant de la glycérine et de l'éthanol. De préférence, le pré-mélange est constitué de glycérine et d'éthanol. Ensuite, lors de l'étape 13), une solution aqueuse est ajoutée à la solution obtenue lors de l'étape a) de manière à créer un milieu réactionnel favorable à l'activité de l'enzyme tout en conservant le glycoside de flavonoïde sous forme solubilisée. En présence d'eau, le glycoside de flavonoïde, en particulier la rutine, ne reste que quelques heures en solution avant de précipiter. Il est donc préférable de réaliser l'étape b) de polymérisation avant que cette précipitation n'ait lieu. La présence d'eau dans la solution est cependant nécessaire pour la polymérisation par l'enzyme laccase. De préférence, l'étape a) est réalisée à une température comprise entre 50 et 100°C, de préférence entre 60°C et 80°C. Ces gammes de température sont en effet particulièrement adaptées pour solubiliser le glycoside de flavonoïde. De préférence, dans l'étape a), la solution comprenant ledit glycoside de flavonoïde à un pH de 3 à 9, de préférence de 4 à 8. Le pH de la réaction peut être régulé en fonction du pH optimal de fonctionnement de l'enzyme laccase choisie pour l'étape b). Par exemple, un tampon acétate (pH régulé à 4,5) est particulièrement adapté lorsque les laccases Pycnoporus sont utilisées pour l'étape b). Un tampon Tris Maléate (pH régulé à 7,5) est particulièrement adapté lorsque la laccase commerciale Subérase� est utilisée pour l'étape b). L'enzyme laccase utilisée dans l'étape b) du procédé précité peut être commerciale ou être issue d'un milieu extracellulaire de champignons. De préférence, l'enzyme laccase n'est pas génétiquement modifiée (enzyme laccase non OGM), car les modes de réalisation, dans lesquels tous les composants mis en oeuvre dans le procédé sont d'origine végétale, sont préférés. De préférence, dans l'étape b) du procédé précité, l'enzyme laccase est dans un milieu extracellulaire de champignons, les champignons du milieu extracellulaire de champignons étant notamment choisis parmi Pycnoporrus, coccineus, Pycnoporus sanguineus, Pycnoporus cinnabarinus, trametes suaveolens, Trametes versicolor, Phlebia radiata, Phlebia subochracea, Phlebia gigantea. Dans l'étape b) du procédé précité, le rapport de la concentration en glycoside de flavonoïde sur la concentration en enzyme laccase dépend de chaque enzyme utilisée et de son activité exprimée en nKatal/g. La concentration en enzyme laccase est adaptée pour obtenir une activité enzymatique au moins égale à 300 nkatal/g de glycoside de flavonoïde. Ces concentrations permettent d'obtenir de bons rendements en oligomères de glycoside de flavonoïde. Généralement, le rendement de la polymérisation est compris entre 50% et 90%. De préférence, l'étape b) est effectuée à une température de 20 à 40°C, de préférence de 30 à 35°C. De préférence l'étape b) dure de 2 à 72 heures, notamment de 4 à 36 heures, de préférence de 8 à 24 heures. Ces températures et durées de réaction permettent d'obtenir de bons rendements en oligomères de glycoside de flavonoïde. Dans un mode de réalisation, le procédé de préparation d'oligomères de glycoside de flavonoïde est un procédé de préparation d'oligomères de rutine et il comprend une étape préalable d'extraction de la rutine d'une espèce choisie parmi Sophora japonica, Fagopyrum esculentum, Dimorphandra mollis, Eucalyptus macrorrhyncha, Viola tricolor, Morus alba, Hydrangea paniculata, Sambucus canadensis, Petroselinum crispum, Polygonum hydropiper, Lycopersicon esculentum, Nicotiana glauca, Ruta graveolens, Viola odorata, Prunus armeniaca, Zizyphus jujuba, Rumex acetosa, Nicotiana tabacum, Sambucus nigra, Citrus sinensis, Rheum rhabarbarum, Rumex acetosella, Eschscholzia californica subsp. Californica, Tussilago farfara, Humulus lupulus, Ricinus communis, Camellia sinensis, Ficus carica, Forsythia suspensa, Artemisia dracunculus, Magnolia kobus, Ruscus aculeatus, Apium graveolens, Spinacia oleracea, Brassica oleracea var. gemmifera var. gemmifera et Citrus limon. De préférence, le procédé de préparation d'oligomères de rutine comprend une étape préalable d'extraction de la rutine d'une espèce choisie parmi Sophora japonica, Fagopyrum esculentum, Dimorphandra mollis et Eucalyptus macrorrhyncha. Selon un second aspect, l'invention concerne une composition cosmétique comprenant un oligomère de glycoside de flavonoïde obtenu selon le procédé précité en association avec un véhicule cosmétiquement acceptable. Par " véhicule cosmétiquement acceptable ", on entend un véhicule adapté pour une utilisation en contact avec des cellules humaines et animales, notamment la peau. Dans un mode de réalisation préféré, la composition cosmétique précitée comprend un oligomère de glycoside de flavonoïde obtenu selon le procédé précité à partir d'un glycoside de flavonoïde de la formule (Il) suivante : OH OH dans laquelle G est tel que défini ci-dessus. Dans un mode de réalisation particulièrement préféré, la composition cosmétique précitée comprend un oligomère de glycoside de flavonoïde obtenu selon le procédé précité à partir de la rutine. Cette composition cosmétique comprend donc un oligomère de rutine (oligorutine) en association avec un véhicule cosmétiquement acceptable. De préférence, la composition cosmétique selon l'invention est exempte de conservateur. En effet, l'ajout de conservateurs pour préserver la composition cosmétique d'une contamination microbiologique n'est généralement pas nécessaire. OH O HO Selon un troisième aspect, l'invention concerne une méthode de traitement cosmétique comprenant l'application topique sur la peau d'une composition cosmétique précitée pour fournir un effet de protection, de régénération, de restructuration, de redensification et/ou d'hydratation de la peau, tel qu'un effet de réduction et/ou de ralentissement de l'apparition des rides, une amélioration ou un maintien de la fermeté de la peau, un effet de prévention et/ou de ralentissement du vieillissement cutané, notamment du photo-vieillissement cutané. Les oligomères de glycoside de flavonoïde, notamment l'oligomère de rutine (oligorutine), présentent en effet des propriétés au niveau du tissu conjonctif dermique (synthèse/renouvellement, hydratation et protection). Le tissu conjonctif dermique joue un rôle essentiel dans le support et le maintien de l'architecture cutanée. Les modifications de sa texture et de sa composition sont largement responsables des altérations de la peau qui surviennent au cours du vieillissement. Le relief de la couche cornée est, par ailleurs, directement conditionné par la qualité et la densité du derme qui la sous-tend. C'est en effet le tissu dermique qui confère à la peau ses qualités biomécaniques (compressibilité, extensibilité, étirabilité, fermeté...). Plus que l'épiderme, dont le renouvellement est rapide et constant, le derme subit des troubles importants liés à l'âge, par le vieillissement de ses cellules et de sa matière. En vieillissant, les fibroblastes sont de moins en moins réactifs et de moins en moins prolifératifs. De plus, les macro-molécules constitutives du derme telles que les fibres de collagène, les fibres élastiques, les protéoglycanes et les glycosaminoglycanes ont tendance à dégénérer et à se fragmenter, notamment sous l'effet d'enzymes UV-dépendantes (MMP, matrix metallo proteases). Leurs réseaux se désorganisent et se réorientent parallèlement à la jonction dermoépidermique. Les synthèses de ces macromolécules ne sont plus assurées par les fibroblastes. Ces phénomènes d'altération du tissu dermique provoquent en surface un défaut d'organisation de l'épiderme et d'une façon plus visible et plus directe, une perte de fermeté pouvant aller jusqu'à la ptose cutanée et/ou la formation de rides. Par sa position externe, la peau est un organe particulier qui est particulièrement exposé et qui subit les stress environnementaux (variations thermiques, variations hydriques, irradiations physiques liées aux UV...). Ceux-ci contribuent et accélèrent l'apparition des phénomènes précités. Les oligomères de glycoside de flavonoïde, notamment l'oligomère de rutine (oligorutine), présentent la capacité de stimuler la synthèse et le renouvellement du derme, en stimulant la synthèse de collagène et d'acide hyaluronique, de maintenir l'hydratation du derme, grâce à l'acide hyaluronique, de protéger le derme contre les dégradations UV-induites, en inhibant les MMP. Plus globalement, les oligomères de glycoside de flavonoïde, notamment les oligomères de rutine (oligorutine), peuvent être incorporés, seuls ou en combinaison avec d'autres ingrédients actifs, dans des gammes de soins anti-age (fermeté, anti-rides), dans des gammes d'hydratation et/ou dans des gammes pour peaux sensibles. Selon un quatrième aspect, l'invention concerne une composition pharmaceutique, notamment dermatologique, comprenant un oligomère de glycoside de flavonoïde obtenu selon le procédé précité en association avec un véhicule pharmaceutiquement acceptable. Par "véhicule pharmaceutiquement acceptable", on entend un véhicule adapté pour une utilisation en contact avec des cellules humaines, notamment la peau. Dans un mode de réalisation préféré, la composition pharmaceutique précitée comprend un oligomère de glycoside de flavonoïde obtenu selon le procédé précité à partir d'un glycoside de flavonoïde de la formule (Il) suivante : OH OH dans laquelle G est tel que défini ci-dessus. De préférence, la composition pharmaceutique selon l'invention est exempte de conservateur. En effet, l'ajout de conservateurs pour préserver la composition pharmaceutique d'une contamination microbiologique n'est généralement pas nécessaire. Selon un cinquième aspect, l'invention concerne la composition pharmaceutique (notamment dermatologique) précitée pour une utilisation dans le traitement de l'inflammation. L'invention concerne également l'utilisation d'une OH O HO composition pharmaceutique précitée pour la préparation d'un médicament utile pour traiter l'inflammation, et une méthode de traitement thérapeutique de l'inflammation comprenant l'application topique de la composition pharmaceutique précitée. Par � inflammation �, on entend notamment les rougeurs, démangeaisons, picotements et oedèmes. Par sa position externe, la peau est un organe particulier qui est particulièrement exposé et qui subit les stress environnementaux (variations thermiques, variations hydriques, irradiations physiques liées aux UV...). Ceux-ci sont la source des défauts de la différenciation épidermique, donc de l'établissement de la fonction barrière de la couche cornée et par conséquent des phénomènes inflammatoires. Ces derniers provoquent rougeurs, démangeaisons, picotements, oedèmes de façon plus ou moins anarchiques. Avec leurs répétitions, l'intégrité de la matrice dermique est aussi atteinte par les élastases des cellules sanguines lors de leur migration vers le foyer lésionnel. Les oligomères de glycoside de flavonoïde, notamment l'oligomère de rutine (oligorutine), présentent la capacité de limiter les processus inflammatoires, en inhibant les dégradations des membranes cellulaires. Les oligomères de glycoside de flavonoïde, notamment l'oligomère de rutine (oligorutine), peuvent avantageusement être utilisés lors de processus cicatriciels ou inflammatoires. Des exemples suivent pour illustrer de manière non limitative divers modes de réalisation de l'invention. EXEMPLES Exemple 1 : Procédé de préparation d'oligorutine par biotransformation Etape a) : solubilisation de la rutine Sont introduits dans un erlenmeyer vissé de 50 mL : 120 mg de rutine (Rutine DAB (code 7140716 ; 27/03/2006)), 10 g de glycérine (Glycérine végétale) et 10 g d'éthanol 95% (Ethanol agricole 95% non dénaturé). Le mélange est agité à 65°C (bouchon vissé) jusqu'à dissolution complète de la rutine. Celui-ci est ensuite refroidi à l'aide d'un bain de glace pendant 5 minutes et 20 g de tampon sont introduits. Le tampon est soit du tampon acétate, soit du tampon Tris maléate à pH 6, soit du tampon Tris maléate à pH 7,5. Le tampon acétate comprend 38 mL d'acide acétique 0,2M et 8 mL d'acétate de sodium 0,2M (80K1089) dans une fiole de 100 mL complétée par de l'eau déminéralisée comprenant de l'acide acétique et de l'acétate de sodium. Le pH de la solution comprenant la rutine obtenue est de 4,5. Les tampons tris-maléate comprennent de la Trizma base (077K54571), de l'acide maléique (095K5423) et de l'hydroxyde de sodium (7065021307CO2). Le tampon Tris maléate à pH 6 est préparé à partir de 30 mL d'une solution de Tris maléate 0,2M et de 5 mL d'une solution de NaOH 0,2M dans une fiole de 100 mL complétée avec de l'eau déminéralisée. Le pH de la solution comprenant la rutine obtenue est de 6. Le tampon Tris maléate à pH 7,5 est préparé à partir de 25 mL d'une solution de Tris maléate 0,2M et de 25 mL d'une solution de NaOH 0,2M dans une fiole de 100 mL complétée avec de l'eau déminéralisée. Le pH de la solution comprenant la rutine obtenue est de 7,5. La solution comprenant la rutine est agitée à 65°C jusqu'à dissolution complète de la rutine. Le mélange est de nouveau refroidi sur bain de glace est le pH mesuré. Etape b) : polymérisation de la rutine L'erlenmeyer comprenant la solution comprenant la rutine est ensuite placé dans un bain-marie préalablement chauffé à 30°C. Selon l'essai réalisé, 13,5 �L d'enzyme Laccase issue de Pycnoporus coccineus (activité enzymatique : 2680 nkatal/mL) ou 125 �L de suberase sont introduits. Le milieu enzymatique est ajusté pour obtenir une activité enzymatique de 300 nkatal / g de rutine est observée. Le milieu réactionnel est agité à 500 rpm/min durant 24h à une température de 30°C. Plusieurs prélèvements sont réalisés à des temps différents t=0h, t=1 minute, t=2h, t= 4h, t= 6h, t= 8h, la réaction est arrêtée à t= 24h. Après chaque prélèvement et à la fin de la réaction s'ensuit une inactivation enzymatique en plaçant le mélange 1 h au bain-marie à 90°C. Chaque prélèvement est ensuite dosé par HPLC. Dans les exemples suivants, l'oligorutine 1 a été obtenue en utilisant de la laccase suberase; l'oligorutine 2 a été obtenue en utilisant de la laccase issue de Pycnoporus sanguineus; l'oligorutine 3 a été obtenue en utilisant de la laccase issue de Pycnoporus coccineus. Exemple 2: effet de l'oligorutine sur la synthèse de la matrice dermique : Synthèse et maturation de collagène de type I par des fibroblastes humains normaux Dans cette étude, les fibroblastes humains normaux proviennent de plastie abdominale. Des cultures de fibroblastes sont réalisées dans un milieu classique (DMEM û milieu de Dubelcco), complémenté de Vitamine C (Sigma� ref A8960) et de TGF-beta (R&D system� - ref 240-B-010) pour servir de témoin positif interne de l'expérience. Une partie des cultures est traitée par l'oligorutine obtenue par le procédé de l'exemple 1. On réalise un immunomarquage de façon classique sur l'ensemble des cultures par un anticorps spécifique fabriqué chez le lapin et dirigé contre le collagène I (Tebu� 600-401-103-05) et révélé en fluorescence par un anticorps GAR couplé alexa (Invitrogen�, A11008 GAR-ALEX 488). La fluorescence est ensuite quantifiée. Les données sont exprimées en pourcentages de production de collagène I par mesure de la surface marquée rapportée au nombre de cellules par rapport au témoin négatif (milieu seul) fixé arbitrairement à 100. Quantité de collagène I % stimulation synthèse (�g/mL) Collagène I Témoin (sans actif) 0,174 0 % Témoin + (TGF-beta) 0,320 84 0/0 oligorutine 1 0,365 110 0/0 oligorutine 2 0,349 100 % (pour 0.1 % d'oligorutine (volume d'oligorutine/volume de milieu de culture� L'oligorutine stimule de manière significative la production de collagène I par les fibroblastes (cellules dermiques). Plus particulièrement, la présence de 0,1% d'oligorutine induit une augmentation significative de la synthèse de collagène I par les fibroblastes de 110%. Cette augmentation entraîne plus de matière dans le derme, plus de fermeté et plus de volume. Ceci présente un avantage certain dans la mesure où le collagène disparaît en fonction de l'âge et/ou des irradiations UV. Exemple 3: effet de l'oligorutine sur la synthèse de la matrice dermique : Synthèse de l'acide hyaluronique par des fibroblastes humains normaux L'étude de la synthèse des GAG totaux (glycosaminoglycane) donne une indication directe sur la synthèse de l'acide hyaluronique qui est le principal GAG. Les cultures de fibroblastes humains normaux sont réalisées pendant 72h dont 24h en présence de 3H glucosamine pour suivre l'incorporation de ce motif dans tous les GAG d'une part et en présence de 35Sulfate pour doser les GAG sulfatés (dermatane, chondroïtine, héparine...). L'acide hyaluronique est le seul GAG non sulfaté; l'impact du traitement sur sa synthèse sera donc accessible par complémentarité. 0/0 stimulation synthèse acide hyaluronique Témoin (sans actif) 0 °/0 oligorutine 1 30% (pour 0,5% d'oligorutine (volume d'oligorutine/volume de milieu de culture)) L'oligorutine présente une forte activité au niveau de la synthèse des GAG totaux, mais pas des GAG sulfatés, ce qui indique plus particulièrement une action au niveau de la synthèse de l'acide hyaluronique. En présence de 0,5% d'oligorutine, la synthèse d'acide hyaluronique augmente de manière significative à hauteur de 30%. Cette augmentation entraîne plus de matière, plus d'hydratation (due à l'affinité entre l'acide hyaluronique et les molécules d'eau), plus de fermeté, plus de volume et plus de rétention de molécule d'eau. Ceci présente un avantage certain dans la mesure où l'acide hyaluronique disparaît en fonction de l'âge et/ou des irradiations UV. Exemple 4 : effet de l'oligorutine sur la protection de la matrice dermique : Inhibition de la MMP3 Différents travaux expérimentaux ont éclairé le rôle de certaines MMP (métalloprotéinase matricielle) dans les dégradations des protéines de la matrice extracellulaire soumises à une inflammation due à différents stress. Un excès de ces enzymes (collagénase, gélatinase, stromélysine...) déséquilibre le rapport entre la destruction et le remplacement des collagènes, élastines, fibronectine... entraînant des désordres structuraux majeurs ou le vieillissement accéléré des tissus. Des tests enzymatiques ont été réalisés pour voir l'impact de l'oligorutine sur la MMP3 selon la procédure explicitée dans la publication J. Biol. Chem., 1994, 269, 20952. Activité anti-MMP3 oligorutine 1 76 % d'inhibition oligorutine 2 66 % d'inhibition oligorutine 3 60 % d'inhibition (pour 3,33% d'oligorutine (volume d'oligorutine/volume de milieu de culture)) L'oligorutine permet donc d'inhiber l'activité de la MMP3 à hauteur de 76%. Cette inhibition entraîne une certaine protection du réseau collagénique lors d'irradiation UV et préserve donc l'intégrité des qualités biomécaniques de la peau (étirabilité, fermeté, compressibilité, élasticité...). Parallèlement, des cultures en monocouche de fibroblastes humains normaux ont été réalisées, traitées par l'oligorutine et stressées par des irradiations UVA (23J/cm2). Après 24h de culture supplémentaire, la viabilité des cellules a été estimée par le dosage au WST1 (disulfonate de 4-[3-(4-iodophényl)-2-(4-nitrophényl)-2H-5-tétrazolio]-1,3-benzène (roche diagnostics�)) et les surnageants ont été recueillis pour l'analyse des profils d'expression des MMP et TIMP (tissue inhibitors of metalloproteinases) par la méthode Quantibody. Cette méthode permet un dosage simultané des MMP1, 2, 3, 8, 9, 10 et des TIMP1, 2 et 4. Les résultats montrent que le traitement avec l'oligorutine permet d'inhiber l'expression des MMP1, 10 et 8 sans modifier celle des TIMP. L'oligorutine protège donc le tissu conjonctif des éventuelles attaques enzymatiques des MMP induites par les stress environnementaux. Exemple 5 : effet de l'oligorutine sur les processus inflammatoires Des tests enzymatiques ont révélé que l'oligorutine présente une activité anti-inflammatoire. Elle permet en effet de limiter l'activité de la cycloxygénase 2 et donc de limiter les voies de dégradation de l'acide arachidonique. La méthode utilisée est celle décrite en 1995 par Glaser et al (Eur. J. Pharmacol., 1995, 281, 107). Activité anti-COX2 oligorutine 1 71 % d'inhibition (pour 3,33% d'oligorutine (volume d'oligorutine/volume de milieu de culture)) 20 L'oligorutine permet donc d'inhiber l'activité de la COX2 à hauteur de 71%. Cette inhibition entraîne une certaine protection de la peau car elle va limiter les phénomènes inflammatoires (et leurs conséquences: rougeurs, irritations, gonflements, dégradation de la matrice dermique) pouvant être provoqués par des 25 stress environnementaux et/ou par un défaut de barrière à la surface de l'épiderme. Exemple 6 : formulation d'oligorutine dans une crème de jour Cet exemple fournit un exemple de composition cosmétique / pharmaceutique comprenant de l'oligorutine. Les chiffres indiqués correspondent à des pourcentages massiques des composants par rapport au poids total de la composition. AQUA qsp 100 GLYCERINE 6.2 COCOATE D'ETHYLHEXYLE 6 EAU CENTAUREA CYANUS 4 ALCOOL CETYLIQUE 4 METHYLSILANOL DE MANNURONATE DE SODIUM 4 HUILES VEGETALES 11 STEARATE DE GLYCERYL AE 3 SESQUISTEARATE DE METHYL GLUCOSE 2 PECTINE HYDROLYSEE 1.5 OLIGORUTINE 1 ACACIA SENEGAL 1 BEURRE DE KARITE BUTYROSPERMUM PARKII 1 TALC 1 SORBITOL 1 REVENDICATIONS1.- Procédé de préparation d'oligomères de glycoside de flavonoïde comprenant les étapes consistant à : a) solubiliser un glycoside de flavonoïde dans un mélange comprenant de la glycérine, de l'éthanol et une solution aqueuse pour obtenir une solution comprenant ledit flavonoïde, et b) polymériser le glycoside de flavonoïde solubilisé par une enzyme laccase. 2.- Procédé de préparation d'oligomères de glycoside de flavonoïde selon la revendication 1, dans lequel le glycoside de flavonoïde a la formule (I) suivante : R4 OH O dans laquelle : R1, R2, R3, R4, R5, R6 à R7 représentent indépendamment H ou OH, 15 G représente un glycoside, un diglycoside ou un triglycoside. 3. Procédé de préparation d'oligomères de glycoside de flavonoïde selon l'une quelconque des revendications 1 à 2, dans lequel le glycoside de flavonoïde est la rutine. 20 4.- Procédé de préparation d'oligomères de glycoside de flavonoïde selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, dans lequel l'étape a) comprend les étapes de : a) solubiliser du glycoside de flavonoïde dans un pré-mélange comprenant de 25 la glycérine, de l'éthanol, et R) ajouter une solution aqueuse à la solution obtenue lors de l'étape a) pour obtenir la solution comprenant ledit glycoside de flavonoïde, (I) 5.- Procédé de préparation d'oligomères de glycoside de flavonoïde selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, dans lequel l'enzyme laccase est issue d'un milieu extracellulaire de champignons. 6.- Procédé de préparation d'oligomères de glycoside de flavonoïde selon la revendication 3, comprenant une étape préalable d'extraction de la rutine d'une espèce choisie parmi Sophora japonica, Fagopyrum esculentum, Dimorphandra mollis, Eucalyptus macrorrhyncha, Viola tricolor, Morus alba, Hydrangea paniculata, Sambucus canadensis, Petroselinum crispum, Polygonum hydropiper, Lycopersicon esculentum, Nicotiana glauca, Ruta graveolens, Viola odorata, Prunus armeniaca, Zizyphus jujuba, Rumex acetosa, Nicotiana tabacum, Sambucus nigra, Citrus sinensis, Rheum rhabarbarum, Rumex acetosella, Eschscholzia californica subsp. Californica, Tussilago farfara, Humulus lupulus, Ricinus communis, Camellia sinensis, Ficus carica, Forsythia suspensa, Artemisia dracunculus, Magnolia kobus, Ruscus aculeatus, Apium graveolens, Spinacia oleracea, Brassica oleracea var. gemmifera var. gemmifera et Citrus limon. 7.- Composition cosmétique comprenant un oligomère de glycoside de flavonoïde obtenu selon l'une quelconque des revendications 1 à 6 en association avec un véhicule cosmétiquement acceptable. 8.- Composition cosmétique selon la revendication 7, dans laquelle l'oligomère de glycoside de flavonoïde est de l'oligorutine. 9.- Méthode de traitement cosmétique comprenant l'application topique sur la peau d'une composition cosmétique selon l'une quelconque des revendications 7 à 8 pour fournir un effet de protection, de régénération, de restructuration, de redensification et/ou d'hydratation de la peau, tel qu'un effet de réduction et/ou de ralentissement de l'apparition des rides, une amélioration ou un maintien de la fermeté de la peau, un effet de prévention et/ou de ralentissement du vieillissement cutané, notamment du photo-vieillissement cutané. 10.- Composition pharmaceutique comprenant un oligomère de glycoside de flavonoïde obtenu selon l'une quelconque des revendications 1 à 6 en association avec un véhicule pharmaceutiquement acceptable. 11.- Composition pharmaceutique selon la revendication 10, dans laquelle l'oligomère de glycoside de flavonoïde est de l'oligorutine. 12.- Composition pharmaceutique selon l'une quelconque des revendications 10 à 11 pour une utilisation dans le traitement de l'inflammation.10