FR 2947179 A1 20101231 FR 0903169 A 20090626 -1- La présente invention décrit un procédé synergique entre plusieurs molécules permettant une protection et un équilibre cellulaire jamais égalé avec une bio-disponibilité des plus remarquables. En temps normal les molécules dites actives et d'où elles proviennent d'ailleurs, quant elles sont réunies peuvent entraîner un système antagonisme parfois important résultant souvent d'une perturbation de l'intimité cellulaire. Allant parfois de la dysphasie à l'anaplasie. Rares sont les antibiotiques ou les anti-cancéreux et les antalgiques qui ont une réelle symbiose entre eux. Ces molécules actives de par leur composition induisent des dysfonctionnements sévères. C'est d'ailleurs leur rôle dans les antimitotiques. L'influence de la nutrition sur le développement des maladies dégénératives et cardiovasculaires est un fait établi depuis plusieurs années. La compréhension des mécanismes mis enjeu reste l'objet de nombreux débats de la recherche active. Celles-ci ont conduit à faire émerger un nombre important de nutriments. L'invention a pour objet de protéger une formule originale sur la préservation cellulaire et la prévention des maladies dégénératives. Le fonctionnement harmonieux des cellules de l'organisme humain implique des échanges permanents entre celles-ci et les liquides extracellulaires qui les baignent repose sur la constante des concentrations intracellulaires et extra-cellulaires de l'eau et des différents électrolytes et oligo-éléments qui constitue l'équilibre hydroélectrique et cellulaire. Les phénomènes de carence ou de malnutrition se définissent comme étant un état de déficit énergétique en protéines ou en n'importe quel autre macro ou micro nutriment spécifique produisant un changement mesurable des fonctions corporelles. Cet état devrait être spécifiquement réversible par un traitement nutritionnel. Par ailleurs les carences qui intéressent cette formulation concernent des pathologies diverses mais surtout digestives qui sont une grande cause du développement des malnutritions. Les atteintes digestives et ORL qui entravent l'acte alimentaire parmi lesquelles les cancers ORL de l'oesophage et de l'estomac tiennent une place importante. Les maladies de l'intestin grêle et du colon ont souvent comme conséquence des maladies inflammatoires et dégénératives grandes pourvoyeuses de dénutrition. Dans des conditions normales notre organisme produit en permanence des molécules oxydantes qui sont des formes hautement réactives dérivées de l'oxygène. Ce sont des radicaux libres primaires (02, OH', H2O2). Ces radicaux sont très dangereux car ils attaquent toutes les cibles cellulaires (acides nucléiques, acides gras et protéines). Nous sommes munis d'un système d'élimination naturels de ces radicaux libres primaires constitués d'enzymes anti-oxydantes, des 2- molécules qui sont capables de neutraliser les formes actives de l'oxygène et pemettent de maintenir au niveau de la cellule et de l'organisme des niveaux non cytotoxiques de radicaux libres. Dans certaines conditions (tabac, stress, pollution...) l'organisme humain subit un stress oxydant, les radicaux libres primaires non éliminés vont alors oxyder les constituants cellulaires et engendrer une formation de radicaux libres secondaires (ROO) qui sont capables de réactions en chaîne (peroxydation des lipides) qui conduisent à la destruction des cellules et entraînent de nombreuses pathologies, comme les maladies liées à l'affaiblissement de l'immunité( maladies virales, allergiques, auto-immunes), les maladies de dégénérescence( cancers, sclérose), les maladies cardiovasculaires( athérosclérose, les maladies inflammatoires, les maladies dermatologiques-les maladies iatrogènes liées à l'administration prolongée de xénobiotiques (chimiothérapie, antibiotiques, ....) à l'exposition aux rayons, les maladies liées au vieillissement, etc... Dans ces conditions de stress nos lignes de défense sont débordées. Il va donc falloir aider notre organisme à se défendre et à contrôler la production de radicaux libres primaires, car cela entraînera une production moins importante de radicaux libres secondaires et tertiaires et donc par conséquent une protection des constituants cellulaires et un maintien de l'activité biologique de la cellule. On le comprend ce n'est pas un seul antioxydant qui peut faire ce travail mais un pool, un cocktail de plusieurs anti-oxydants. On distingue alors au niveau des cellules trois lignes de défense inégalement puissantes pour détoxiquer la cellule. D'abord les anti-oxydants primaires (détoxication active) qui sont les enzymes superoxyde catalase et peroxydase (la SOD) et la glutathion peroxydase sélénium dépendante. Puis les anti-oxydants secondaires et tertiaires (détoxication passive) avec les vitamines A ou E, les polyphénols et le sélénium (séléno-méthionine et séléno-cystéine). Contrairement aux enzymes antioxydantes une molécule d'antioxydant piège un seul radical libre. Pour pouvoir fonctionner à nouveau cette molécule d'antioxydant doit donc être régénérée par d'autres systèmes. La vitamine E qui est liposoluble s'insère au niveau des membranes cellulaires et piège les radicaux libres organiques provenant de l'oxydation des lipides. Elle contribue à diminuer la peroxydation lipidique. Elle est régénérée par la vitamine C qui est également indispensable au fonctionnement de l'ascorbate peroxydase. Le sélénium qui est nécessaire au fonctionnement de la glutathion peroxydase sélénium dépendante. Le monde en général manque de sélénium. La France, la Belgique, l'Allemagne, l'Italie et les Pays Européens en particulier sont en zone sélénéprive. Le sélénium est un métalloïde classé dans le groupe des oligo-éléments dont la teneur dans l'organisme est étroitement dépendante 2947179 -3- de l'alimentation et donc de l'origine géographique. Le manque de sélénium est impliqué dans de nombreuses maladies et d'abord les risques cardio-vasculaires, c'est les 3 phénomènes connus: - Augmentation de l'oxydabilité des lipoprotéines de haute densité 5 - Diminution de la protection vis-à-vis des métaux lourds cardiotoxiques - Modification du métabolisme des leucotréines, des prostaglandines et en particulier des thromboscanp A2 impliqués dans l'agrégation plaquettaire En cancérologie le mécanisme de cet effet anticancéreux potentiel étudié sur de nombreux animaux associerait une inhibition spécifique de la croissance cellulaire des cellules tumorales 10 une régulation de la division et de la différenciation cellulaire avec une potentialisation du système immunitaire faisant intervenir le sélénium vis à vis du groupement thiol. L'effet anticancéreux se manifesterait aux doses nutritionnelles mais augmenterait à des doses plus élevées. Il pourrait donc servir comme adjuvant avant et après une chimiothérapie. Les aliments les plus riches en sélénium sont les céréales, les poissons et les viandes, les fruits 15 et les légumes que l'on demande de consommer tous les jours (campagne télévisée). La plupart des fruits et légumes traités par des insecticides, fongicides n'en contiennent pratiquement plus. Le sélénium est un oligo-élément que l'on trouvait il y a 50 ans à 10cm dans le sol, aujourd'hui nous le trouvons à plus d'un mètre et les fruits et légumes cultivés parfois hors-sol n'ont pas les racines assez longues pour aller puiser certaines substances nutritives dont le sélénium. Les 20 apports quotidiens recommandés par l'AFSSA sont de 50mcg par jour pour un adulte car nous manquons environ de 30 à 60% tous les jours. Le sélénium est indispensable à l'activité de nombreuses enzymes qui interviennent dans les phénomènes d'oxydo-réduction cellulaire. Son principal rôle biologique reconnu est d'être le cofacteur de la gluthation peroxydase sélénium dépendante qui représente 65% de l'activité 25 gluthation peroxydase totale. Son rôle est de protéger les cellules contre l'oxydation en catalisant les hydroperoxydes tissulaires. Pour que le sélénium soit bio-disponible il faut qu'il soit lié aux protéines sous forme de sélénométhionine et de séléno-cystéine. Il est alors métabolisé par réductions successives, gluthation dépendante puis méthylation. Son élimination est en général urinaire. 30 C'est pourquoi nous l'avons retenu en premier dans notre formulation et pour qu'il soit biodisponible nous l'avons induit dans deux acides aminés soufrés d'une algue spiruline, qui sont la méthionine et la cystéine. Cette opération se fait en bassin lors de la culture de 1 'algue selon un processus spécifique. C'est grâce à cette opération que l'on obtient une algue séléniée avec laquelle 2947179 -4- on a obtenu des résultats sur patients remarquables en association avec les autres composants du cocktail. Nous avons induit 25mcg (microgramme) de sélénium pour 400mg d'algue spiruline. En deuxième nous avons sélectionné une vitamine E spécifique qui est du succinate de 5 tocophérol, qui reste la forme la plus active et la plus abondante dans la nature aujourd'hui. Elle suscite un intérêt croissant comme agent anti-radicalaire pouvant être impliqué dans la prévention de certaines pathologies comme le cancer ou les maladies cardiovasculaires. En augmentant par le biais de la supplémentation on retrouve un effet protecteur à une dose de 100mg par jour. Ces doses sont difficilement atteintes par l'alimentation. Par ailleurs la vitamine 10 E est très synergétique avec le sélénium en limitant la production de radicaux libres hydroxyles et en favorisant la stabilité des séléno-enzymes. Nous avons donc retenu la vitamine E en raison de 8mg par gélule. En troisième nous avons pris une SOD, extraite d'un concentré de jus de melon, cucumis melo, lyophilisé riche en actifs anti-oxydants. De plus cette SOD est gastro-protégée par de la cire 15 végétale afin qu'elle ne soit pas détruite par les sucs gastriques de l'estomac. Nous retrouvons donc la SOD gastro-protégée à 5mg par gélule. Enfin nous y avons ajouté des polyphénols. Les polyphénols suscitent depuis une dizaine d'années un intérêt croissant de la part des nutritionnistes. Ils forment un grand ensemble ayant en commun un élément structural, le noyau benzénique auquel est lié au moins un 20 groupe hydroxyle (OH) libre ou engagé dans d'autres fonctions ( ester, ether, hétéroside...) Les deux principales classes sont les acides phénoliques et les flavonoïdes. Chaque classe comprend de nombreuses molécules différentes. Le groupe des flavanols, des anthocyanes sont très importants. Mais il y a un flavonoïde qui attire particulièrement l'attention c'est le resvératrol (variété de raisin) qui est le seul flavonoïde à avoir un pouvoir anti-carcinogène 25 reconnu grâce à une molécule le stilbène. Nous retiendrons donc 25mg d'extrait de raisin riche en resvératrol contenant 3% de stilbène. Par ailleurs un extrait d'olive garanti en polyphénol tyrosol hydroxytyrol et oleuropéine et une variété d'extrait d'olive et en particulier de l'enveloppe membranaire d'olive riche en acide maslinique qui contient une molécule importante qui est la triterpenoïd reconnu comme 30 carcinogenèse naturelle. En particulier l'acide maslinique est un inhibiteur de protéase. Nous retiendrons également 25mg d'extrait d'olive contenant au moins 2% acide maslinique par gélule. La formulation décrite ci-dessus (algue séléniée, vitamine E, SOD, polyphénols de raisin (resvératrol) et d'olive (acide maslinique) est parfaitement synergique (découplage des -5- principes actifs), nouvelle, originale et innovante. Elle protège et défend l'organisme par trois lignes de défense couplées selon le schéma : Oxydan t Lipide protéines ...�- Radicaux II (ROO) Radicaux libres I (02ùOH" H202) ,Radicaux libres III Noyau cellulaire Chromosome gêne Anti-oxydant vitamine E Anti-oxydant sélénium Polyphénol de raisin et d'olive Séléno-méthionine Séléno-cystéine Il s'en suit une neutralisation importante des radicaux libres primaires, secondaires et 5 tertiaires. Donc peu de destruction cellulaire, moins d'inflammation et au final moins de maladies dégénératives. De plus cette formulation augmentant les défenses naturelles que sont les lymphocytes, les hystiocytes, les monocytes, les macrophages améliore de façon significative les taux de cuivre, de potassium, de magnésium, de fer dans le sang, alors que chacun des anti-oxydants 10 pris à part n'a pas cet effet. On peut comparer l'effet des différents composants de la formulation sur des sérums oxydés, grâce au coefficient d'anti-oxydant que l'on définit comme étant la péri-équation entre la vitamine C, l'acide urique, la vitamine E, la gluthation peroxydase et l'enzyme Q10. Ainsi sur le graphique rapporté sur la figure N°1, on peut directement lire l'effet d'anti-oxydation sur 15 des sérums préparés présentant tous initialement un coefficient d'anti-oxydant de 0.8 tg/L. L'invention a plus particulièrement pour objet un procédé de formulation exacerbé et décuplé dont les effets des produits et leur addition simultanée ont été étudié par : 1. l'induction de sélénium dans une micro-algue avec une stabilité des séléno-enzymes agissant de plus en plus sur la constance et la stabilité à l'intérieur des cellules. 20 2. la sod 3. l'extrait de raisin garanti en resvératrol en stilbène, et surtout en extrait d'olive garanti en acide maslinique dont le triterpernoïd. De nombreuses études réalisées dans notre laboratoire à l'université de Montpellier ont permis de préciser les facteurs structuraux influant l'absorption des polyphénols car les taux de 1 Anti-oxydant primaire SOD 2947179 -6- polyphénols ingérés peuvent varier largement et parfois de plus de 30%. La présence de sélénium induit dans la spiruline facilitent l'absorption des polyphénols parce-qu'ils sont dégradés en molécules de petite taille. Les mêmes essais réalisés avec par exemple du sélénium sur levure donnent des résultats dix fois inférieurs. Les études statistiques associées à ces essais ont montré une forte synergie entre l'algue séléniée et les polyphénols par rapport au mélange sélénium sur levure et polyphénols. L'analyse du stress oxydatif par dosage du pouvoir anti-radicalaire et le réglage des différents paramètres ci-dessus ont démontré que le stress oxydatif est 3 fois moins important avec le cocktail mis au point, que ce qu'il aurait été si on avait employé chaque composant séparément (principe synergétique de l'association). De plus, et c'est une caractéristique fondamentale de l'invention, le pouvoir anti-oxydant du sérum préparé selon la formulation reste constant pendant plus de 12 semaines alors qu'en moyenne celui-ci s'effondre pour chaque anti-oxydant au bout de 8 semaines, comme on peut le voir sur les courbes rapportées à la figure N°2. Par ailleurs l'atoxicité de cette formulation a été prouvée, grâce à des études toxicologiques conformes aux lignes directrices définies par l'OCDE. REVENDICATIONS1. formulation d'un cocktail anti-radicalaire composé d'une cyanobactérie séléniée (sélénium induit dans les protéines de l'algue), d'une vitamine E, d'un enzyme superoxyde dismustase (SOD), de polyphénols de raisin riche resvératrol, de polyphénols d'olive riche en acide maslinique 2. formulation selon la revendication 1, caractérisée en ce que la cyanobactérie utilisée est une spiruline 3. formulation selon la revendication 1, caractérisée en ce que pour 400mg d'algue spiruline séléniée la quantité de sélénium minimum induit est de 25 mcg (microgramme), la quantité de vitamine E est de 8 mg, la quantité de SOD est de 5 mg, l'extrait de raisin est de 25 mg et celui d'olive de 25 mg également 4. formulation selon la revendication 1, caractérisée en ce qu'au moins 2 acides aminés soufrés (méthionine et cystéine) de la cyanobactérie choisie ont été transformés en séléno-méthionine et séléno-cystéine transformant l'algue en algue séléniée 5. formulation selon la revendication 1, caractérisée en ce que le resvératrol choisi est garanti en stilbène à au moins 3% 6. formulation selon la revendication 1, caractérisée en ce que les polyphénols d'olive 20 contiennent au moins 2% d'acide maslinique 7. formulation selon la revendication 1, caractérisée en ce que la SOD utilisée est gastroprotégée par une cire végétale 25