FR 2947454 A1 20110107 FR 0903234 A 20090702 - 1 - La présente invention concerne de nouvelles compositions médicamenteuses à usage humain et animal comportant l'association de lyophilisats d'inhibiteurs naturels des enzymes protéasiques humaines et animales (extraits du blanc de l'oeuf de caille de l'espèce Coturnix coturnix Japonica de souche B. mina), à des lyophilisats de plantes médicinales prescrites en phytothérapie et inscrites à la pharmacopée, en utilisant une ou plusieurs plantes entières ou une ou plusieurs de leurs fractions les plus pharmacologiquement actives, association de lyophilisats intimement mélangés et incorporés, par exemple, dans des gélules à délitement rapide pour la voie orale, par exemple, étant bien entendu que toutes les techniques de fabrication qui garantissent l'homogénéité, la durée d'action et la stabilité des principes actifs, peuvent être employées sans restrictions. Cette association potentialise l'efficacité de chacun des principes actifs et maximise leurs actions thérapeutiques, par exemple, innovation qui bénéficie de l'effet technique surprenant obtenu par la lyophilisation et par le mélange intime des principes actifs, ce qui induit une excellente synergie d'actions et potentialise chacun de ses composants. Les formulations qui seront proposées pour une gélule, par exemple, pourront aussi servir à la fabrication de compléments alimentaires à usage humain et animal, par exemple, de produits cosmétologiques et pour tous autres produits, ces formulations n'étant proposées qu'à titre purement indicatif sans aucune restriction. 2947454 - 2 - La présente invention décrit plus particulièrement, par exemple, de nouvelles compositions médicamenteuses indiquées dans les maladies allergiques, les maladies infectieuses, en pathologie générale, et comme immunostimulant et correcteur 5 du système immunitaire. Il est bien évident que les différentes formulations proposées pourront être obtenues sous forme liquide, solide, poudre, lyophilisat, crème et pommade, par exemple, ou sous 10 toutes les formes galéniques pharmaceutiquement acceptables, comme les comprimés, les gélules, les globules, les granules, les fluides, les poudres, les sachets et les ampoules, par exemple, pour usage par voie orale, sublinguale, nasale, oculaire et cutanée, par exemple. 15 Par � protéases humaines à serine � on entend, des enzymes pro-inflammatoires et protéolytiques comme la trypsine secrétée par les cellules exocrines du pancréas, par exemple, et ses homologues cellulaires, inclus dans les 20 granulations intracytoplasmiques des cellules immunitaires comme les mastocytes, les basophiles, les neutrophiles et les eosinophiles. A l'état physiologique, chaque individu possède des 25 anti-protéases endogènes, qui inhibent l'effet nocif de ces enzymes protéasiques et maintiennent l'équilibre du système enzymes-anti-enzymes. Chez certains individus, ces anti-enzymes ont une 30 activité déficiente, ce qui déséquilibre le système enzymes anti-enzymes et favorise l'activité pro-inflammatoire et protéolytique : ce déséquilibre induit l'apparition de 2947454 - 3 manifestations allergiques, par exemple, infectieuses, un déséquilibre immunitaire et des symptômes cliniques observées en pathologie générale. 5 Par � inhibiteurs naturels des enzymes protéasiques humaines �, on entend des glycoprotéines (dont il en existe plus d'une centaine dans le règne végétal, animal, bactérien, viral et parasitaire), contenues dans le blanc de l'oeuf de caille japonaise de l'espèce Coturnix coturnix Japonica 10 (l'oeuf étant considéré comme un produit naturel), par exemple, dotées d'une puissante activité anti-protéasique humaine, et une très forte activité anti-inflammatoire spécifique (allergie) et non spécifique (infection et pathologie générale) ; deux fractions ont été isolées du 15 blanc de l'oeuf de caille : - l'ovomucoïde, d'un poids moléculaire de 28 kDA, inhibe la trypsine humaine pancréatique et ses homologues comme l'élastase du neutrophile, la tryptase et la carboxypeptidase du mastocyte, par exemple, et, 20 - l'ovoinhibiteur , d'un poids moléculaire de 57 kDA, qui n'inhibe pas la trypsine humaine, mais la protéinase, serine protéase d'une moisissure nommée aspergillus orizae et la subtilisine, serine protéase du bacille subtilis, et enfin l'âl-chymotrypsine. 25 L'association de ces deux inhibiteurs naturels des protéases humaines, dans une proportion, par exemple, de trois fractions d'ovomucoïde pour une fraction d'ovoinhibiteur, confère à l'innovation une activité anti- 30 protéasique plus large et plus puissante par rapport à chacun de ces inhibiteurs pris séparément. 2947454 - 4 L'innovation se compose, par exemple, d'un mélange intime d'un lyophilisat d'un ou de plusieurs inhibiteurs naturels des protéases humaines (ovomucoïde et ovoinhibiteur) et d'un lyophilisat d'une ou de plusieurs plantes entières, ou d'une 5 ou de plusieurs fractions de ces plantes, les plus pharmacologiquement actives, incorporé dans une gélule à délitement rapide, ou dans des comprimés proposés pour les voies orale et sublinguale, des crèmes et des pommades pour la voie cutanée, par exemple. 10 Selon l'état antérieur, on connaît notre brevet n° 02 047 02 dans lequel on décrit une composition médicamenteuse comportant une solution neutre d'excipient dans laquelle on incorpore, par exemple, un homogénat d'oeufs 15 de caille seul (mélange de jaunes et de blancs entiers) et ou une ou plusieurs solutions d'extraits de plantes médicinales utilisées en phytothérapie. La présente invention décrit plus particulièrement, par 20 exemple, et sans restrictions, de nouvelles compositions médicamenteuses indiquées en particulier dans les maladies inflammatoires immuno-allergiques, les maladies infectieuses, les déséquilibres immunitaires, mais également en pathologie générale. 25 Il n'était donc pas évident, même pour l'homme de l'art, d'associer un lyophilisat d'une ou de plusieurs plantes médicinales ou d'une ou de plusieurs de leurs fractions les plus pharmacologiquement actives à un lyophilisat d'un ou de 30 plusieurs inhibiteurs naturels des serine protéases humaines. 2947454 - 5 - Par � plantes médicinales � on entend toutes les plantes dont l'efficacité a été démontrée en médecine humaine et animale et qui figurent à la pharmacopée ; après préparation pharmaceutique on peut les utiliser entières ou en partie 5 selon la fraction la plus pharmacologiquement active de la plante, par exemple, et selon le procédé industriel qui aura été choisi pour préparer, par exemple, un lyophilisat de la plante entière ou de l'une de ses fractions ; on peut ainsi préparer différentes formes galéniques à partir de la plante 10 entière ou de l'une de ses fractions. Les plantes médicinales ont une efficacité thérapeutique dans toutes les pathologies et ont une forte activité immunostimulante et correctrice du système immunitaire, c'est le cas des plantes comme la chicorée, l'echinacée, le propolis, par exemple. 15 Par � extraits de plantes médicinales � on entend une partie de la plante comme, par exemple, la racine, la tige, la feuille, la fleur ou le fruit ou tout autre constituant actif de ladite plante utilisée en phytothérapie. Conformément à la présente invention, on propose le mélange intime d'un lyophilisat composé d'un ou de plusieurs inhibiteurs naturels de protéases et d'un lyophilisat d'un extrait ou d'une plante entière. 25 Selon l'invention, et particulièrement dans les maladies inflammatoires allergiques, le plantain est indiqué dans le rhume des foins, par exemple, la rhinite perannuelle, la sinusite, la laryngite, la trachéite et l'asthme ; ces 30 indications ne sont évidemment pas limitatives. 20 2947454 - 6 - La feuille de plantain, par exemple et selon la présente invention, contient des substances pharmacologiquement actives comme les iridoïdes dont le principe actif dominant et l'aucuboside ; le plantain est aussi indiqué dans le 5 traitement des affections broncho-pulmonaires, car il contient des mucilages ayant une action adoucissante et émolliente qui facilitent l'expectoration. De plus, et de part sa composition, le plantain est 10 également anti-inflammatoire. Toute autre fraction ou composant d'une plante médicinale ou la totalité de ladite plante peut être intimement mélangé à un ou plusieurs inhibiteurs naturels des 15 protéases humaines. Selon l'invention, le marrube blanc, par exemple, est une plante médicinale vivace à feuilles dentelées duveteuses à fleurs blanches ; ces fleurs contiennent des lactones 20 diterpéniques, dont la marrubine, conférant au marrube blanc d'étonnantes propriétés sur le système respiratoire : il fluidifie les secrétions bronchiques et facilite l'expectoration, il est antitussif et calme la toux rebelle des trachéites ; la présence de mucilages adoucissants et 25 anti-inflammatoires justifie son emploi dans les inflammations de la gorge ; dilatateur des bronches, il est tout indiqué dans l'asthme et son association au plantain induit une synergie d'action surprenante qui en maximise et potentialise les effets. 30 Le trèfle rouge est utilisé entier dans la ménopause ; il est traditionnellement reconnu pour ses phyto-oestrogènes. - 7 Il contient quatre isoflavones ^ la biochanine, la formononétine, le génistène et la daidzeine, qui atténuent les désagréments de la ménopause liés à une carence en oestrogènes ; le trèfle rouge intervient également dans l'ostéoporose présente lors de la ménopause. 1/ Obtention des lyophilisats des inhibiteurs naturels des protéases humaines et des plantes médicinales. On utilise un lyophilisateur ; la lyophilisation ou séchage à froid, est un procédé qui consiste à retirer l'eau d'un aliment ou de tout autre produit solide ou liquide, afin de le rendre stable à la température ambiante et à faciliter sa conservation ; la lyophilisation comprend trois étapes : la congélation, la dessiccation primaire et la dessiccation secondaire ou séchage final : - la congélation consiste à ramener la température du produit à lyophiliser à une température comprise entre -20° et -80°C de façon à bloquer l'eau sous forme de glace, cela évite l'altération des principes actifs, - la dessiccation primaire ou sublimation, est le passage d'une substance de l'état solide ou liquide à l'état gazeux ; le produit ou l'aliment est desséché en le mettant sous vide, la glace devient alors de la vapeur ; la déshydratation du produit entraîne une perte d'eau de 80 à 90%, - la dessiccation secondaire commence quand toute la glace est sublimée ou supprimée, les aliments ou les produits sont séchés, la température du lyophilisateur s'élève spontanément et brièvement une fois que toute l'eau est sublimée ce qui permet d'obtenir un produit sec à 95% voire plus, sans la moindre altération de sa composition 2947454 -8- initiale ; la lyophilisation permet le mélange des produits ainsi obtenus, leur conservation et leur stabilité pouvant durer plusieurs années ; l'excellente action pharmacologique du produit fini (inhibiteurs 5 naturels des protéases humaines et plantes médicinales) repose sur l'effet surprenant induit par la technique de lyophilisation, l'association des produits potentialise et maximise leur efficacité grâce à une excellente synergie d'action. 10 2/ Obtention d'un ou de plusieurs inhibiteurs naturels antiprotéases humaines : Les inhibiteurs naturels des protéases humaines extraits du blanc de l'oeuf de caille comprennent : 15 -l'ovomucoïde, qui est contenu dans le blanc, est isolé par précipitation à l'aide de l'acide trichloracétique et de l'acétone ; la fraction protéique isolée est ensuite purifiée par chromatographie séquentielle sur DEAE- 20 cellulose ; une fois purifié, l'ovomucoïde est lyophilisé ; l'activité anti-protéases humaines (trypsine et homologues)est testée sur un substrat de caséine ; on fait réagir 2 pg d'ovomucoïde sur 1 pg de trypsine humaine : l'ovomucoïde du blanc de l'oeuf de caille n'est 25 détruit ni par la digestion ni par un pH gastrique acide ce qui permet son administration par voie orale, par exemple, -l'ovoinhibiteur est obtenu par précipitation à l'aide de l'acide trichloracétique et de l'acétone ; on obtient un 30 précipité qui est dialysé et lyophilisé ; on mesure la capacité d'inhibition des inhibiteurs protéasiques en faisant réagir la fraction obtenue sur la protéinase 2947454 - 9 - d'aspergillus orizae en utilisant un substrat de caséine, puis la subtilisine du bacillus subtilis, l'achymotrypsine et la trypsine humaine : l'ovoinhibiteur n'inhibe pas l'activité protéasique de la trypsine 5 humaine, mais inhibe la protéinase, la subtilisine et l'a-chymotrypsine. 3/ Exemple de formulation d'une gélule de lyophilisat d'inhibiteurs naturels des protéases humaines et de plantain. Ovomucoïde 3 mg Ovoinhibiteur 1 mg Plantain (feuille) 431 mg 4/ Exemple de formulation d'une gélule de lyophilisat d'inhibiteurs naturels des protéases humaines et de marrube blanc. Ovomucoïde 3 mg Ovoinhibiteur 1 mg Marrube blanc (fleur) 431 mg 25 5/ Exemple de formulation d'une gélule de lyophilisat d'inhibiteurs naturels des protéases humaines de plantain et de marrube blanc. Ovomucoïde 3 mg Ovoinhibiteur 1 mg Plantain (feuille) 216 mg Marrube blanc (fleur) 215 mg 10 15 20 30 5 2947454 - 10 - 6/ Exemple de formulation d'une gélule de lyophilisat d'inhibiteurs naturels des protéases humaines et de trèfle rouge. Ovomucoïde 3 mg Ovoinhibiteur 1 mg Trèfle rouge (entière) 431 mg 10 15 20 25 30 REVENDICATIONS1/ Compositions médicamenteuses destinées à la médecine humaine et animale, caractérisées en ce qu'elles contiennent un mélange intime d'un lyophilisat d'un ou de plusieurs inhibiteurs naturels des protéases humaines extraits du blanc de l'oeuf de caille de l'espèce Coturnix coturnix Japonica de la souche B.mina, et d'un lyophilisat d'une ou de plusieurs plantes médicinales entières, ou d'une ou de plusieurs de leurs fractions et en ce que cette association constitue un mélange pharmacologiquement actif grâce à ses composants. 2/ Compositions médicamenteuses selon la revendication 1, caractérisées en ce que l'association des deux lyophilisats comporte un ou plusieurs inhibiteurs naturels des enzymes protéasiques humaines comme l'ovomucoïde et l'ovoinhibiteur, dans une proportion de trois fractions d'ovomucoïde pour une fraction d'ovoinhibiteur, par exemple, intimement mélangé à un lyophilisat d'une ou de plusieurs plantes médicinales entières ou à une ou plusieurs de leurs fractions, maximise l'activité médicamenteuse globale de la présente innovation qui bénéficie, de plus, de l'effet technique surprenant conféré par la lyophilisation, si bien que l'administration de cette nouvelle composition peut se faire par voie orale, sublinguale ou percutanée selon la forme galénique choisie, gélule, comprimé, fluide, poudre, crème ou pommade, par exemple, ou toutes formes galéniques pharmaceutiquement acceptables. 3/ Compositions médicamenteuses selon les revendications 1 et 2, caractérisées en ce qu'elles comprennent, 2947454 - 12 - - un lyophilisat d'un ou de plusieurs inhibiteurs naturels des enzymes protéasiques humaines, - un lyophilisat d'une ou de plusieurs plantes médicinales entières ou d'une ou de plusieurs de leurs fractions, 5 comme la feuille de plantain, la fleur de marrube blanc, le trèfle rouge entier, par exemple, chaque principe actif pouvant constituer à lui seul un nouveau produit. 4/ Compositions médicamenteuses selon l'une quelconque 10 des revendications précédentes caractérisées sur ce qu'elles se présentent sous forme de gélules à délitement rapide. 5/ Compositions médicamenteuses, selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisées en ce qu'elles 15 possèdent une activité immunostimulante et correctrice du système immunitaire et une puissante activité en pathologie générale (allergie, infections, par exemple), liée à l'activité de chacun de ses composants. 20 6/ Compositions médicamenteuses, selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisées en ce que les formulations utilisées peuvent être appliquées à la fabrication de compléments alimentaires, de produits cosmétiques et de tous autres produits. 25 7/ Compositions médicamenteuses, selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisées en ce que les différentes formulations peuvent être utilisées pour toutes les formes galéniques pharmacologiquement acceptables par la 30 technique de lyophilisation ou tout autre procédé de fabrication qui garantit l'homogénéité, la stabilité de la présente innovation et sa durée d'action. 2947454 - 13 - 8/ Compositions médicamenteuses, selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisées en ce que les inhibiteurs naturels des enzymes protéasiques humaines 5 peuvent être d'origine animale, végétale, bactérienne, virale et parasitaire ou de toutes autres provenances et que les plantes médicinales ou leurs fractions utilisées ont toutes une activité pharmacologique prouvée. 10