FR 2945818 A1 20101126 FR 0953383 A 20090520 Dans des environnements naturels, des populations de micro-organismes se développent, associées aux surfaces inertes ou vivantes, où elles forment des communautés fixées et hétérogènes fréquemment incluses dans une gangue protectrice exo-polymérique. Ces structures complexes bactériennes sont appelées biofilms. L'invention concerne de manière générale l'observation non-invasive de biofilms. Plus particulièrement, l'invention concerne les dispositifs d'observation non-invasive par microscopie confocale de biofilms. Les propriétés spécifiques des biofilms (morphologie, croissance, etc.) dépendent des conditions de vie (surface inerte ou vivante, disponibilité de nutriments, oxygène, pH, etc.). Ces formes communautaires microbiennes se trouvent naturellement très répandues dans les environnements industriels et médicaux où elles sont bien souvent indispensables. Cependant, certains biofilms peuvent aussi s'avérer nuisibles (corrosion industrielle, infections, etc.). Une meilleure connaissance fondamentale des biofilms bactériens constitue donc un enjeu économique et un enjeu tant au niveau industriel qu'au niveau de la santé publique. Les nouvelles voies de recherche qui se dessinent aujourd'hui nécessitent de 20 pénétrer plus profondément dans la compréhension du développement des biofilms, et ce grâce particulièrement à la microscopie confocale non-invasive. La microscopie confocale laser est aujourd'hui très largement utilisée pour l'observation non-invasive û et non destructrice û de biofilms. Elle permet d'enregistrer en images la structure de biofilms, et de suivre leur croissance en temps réel. 25 La méthode consiste à faire des coupes optiques successives très fines du biofilm, généralement espacées les unes des autres d'environ 1 micromètre, soit la taille d'une bactérie. Un microscope confocal produit une source lumineuse laser destinée à être dirigée sur une couche très mince du biofilm (par exemple 0,4 micromètre). La 30 longueur d'onde du laser excite directement un fluorophore contenu dans les bactéries. Le microscope confocal comprend un détecteur apte à enregistrer l'émission de photons du fluorophore excité autour d'une position spatiale déterminée, et à transformer ce signal lumineux en une image photographique de la couche de biofilm. Par décalages successifs du laser (par exemple de 0,6 micromètre), il est possible 35 d'acquérir un ensemble d'images (par exemple 100 images). A partir de cet ensemble, un logiciel de reconstruction 3D permet de reconstruire virtuellement le biofilm par projection volumétrique sur une certaine épaisseur (par exemple 100 micromètres). La méthode permet ainsi, par acquisition d'images à coordonnée spatiale 5 déterminée, d'obtenir une reconstruction 3D d'une partie du biofilm. D'autres logiciels permettent de déduire de ces images des informations quantitatives sur le biofilm (biomasse, épaisseur, morphologie, taux de recouvrement de la surface, etc.). En réitérant cette méthode dans le temps, il est possible de suivre en temps 10 réel l'évolution de biofilms selon des coordonnées spatiales tridimensionnelles déterminées. Cette technologie permet d'étudier d'une part les interactions de biofilms avec des surfaces inertes ou vivantes qui les entourent, et d'autre part la structure des micro-organismes constituant le biofilm en fonction de leur environnement. 15 Pour permettre le développement in vitro de biofilms, il est nécessaire de créer un environnement propice. Pour ce faire, un ensemble d'observation de biofilms comprend généralement une enceinte de culture en plastique moulé constituée de canaux indépendants, étanches et stériles. Les canaux sont ainsi aptes à recueillir des biofilms. Un circuit de 20 distribution en milieu nutritif assure un environnement propice au développement du biofilm sans intervention extérieure. Pour l'observation, les canaux sont hermétiquement recouverts d'une unique lamelle de verre et l'enceinte est fixée à un microscope confocal. Eventuellement, les canaux peuvent contenir des cellules vivantes (par 25 exemple des cellules eucaryotes), pour observer le développement du biofilm sur surface vivante. On a illustré sur la figure 1 une enceinte de culture 1 selon l'état de l'art. Cette enceinte de culture comprend trois canaux 2a, 2b et 2c recouverts par une lamelle de verre 3. 30 La figure 2 illustre un schéma d'un ensemble d'observation non-invasive du développement de biofilms selon l'état de l'art comprenant une enceinte de culture 1, un système de distribution en milieu nutritif et un microscope confocal 7. Le système de distribution est composé d'une réserve en milieu nutritif 4, d'une pompe péristaltique 5 assurant la circulation du milieu dans l'enceinte de culture 1 à travers les canaux 2a, 35 2b, 2c et une évacuation 6 du milieu usé. De nombreuses critiques ont été émises à l'encontre de tels dispositifs qui ne donnent pas entière satisfaction, et notamment : - La température de l'enceinte de culture est imposée par le laser du microscope confocal. Ainsi, pour une expérience souhaitée à 37°C, il est nécessaire de déplacer fréquemment l'enceinte de culture dans une chambre à 37°C, et il n'est pas possible, après déplacement dans une chambre à la température souhaitée de l'expérience, de replacer le biofilm précisément au même endroit d'observation, ce qui induit un biais sur les coordonnées spatiales d'acquisition d'images. En outre, ces mouvements perturbent le développement du biofilm. - Les enceintes de culture en plastique moulé selon l'état de l'art se déforment au cours de l'expérience, ce qui induit également un biais sur les coordonnées spatiales d'acquisition d'image, en particulier le long d'un axe veritcal. Une intervention manuelle longue et lourde est nécessaire à chaque prise d'images, et le système ne permet pas de prise d'images automatisée à haut débit. - Les expériences connaissent des échecs dus à la présence de bulles dans le système de distribution en milieu nutritif qui arrachent le biofilm. Un but de l'invention est de fournir un ensemble d'observation du 20 développement de biofilm sur surface inerte ou vivante amélioré, permettant notamment de pallier au moins un de ces inconvénients. A cet effet, l'invention propose un dispositif pour cultiver in vitro des biofilms comprenant : une enceinte de culture en matériau rigide choisi pour ses propriétés de faible 25 dilatation thermique, ladite enceinte comprenant un ou plusieurs canaux à l'intérieur desquels le ou les biofilms sont destinés à se développer, le ou lesdits canaux débouchant sur une ou des faces de ladite enceinte, - un support de ladite enceinte, - des moyens de distribution d'un milieu nutritif pour alimenter le ou lesdits 30 canaux, des moyens de contrôle d'une température de ladite enceinte. Selon une réalisation possible de l'invention, le support comprend un conduit de circulation, et les moyens de contrôle sont destinés à provoquer une circulation d'eau chaude à l'intérieur dudit conduit. 35 Avantageusement mais facultativement, le dispositif comprend au moins l'une des caractéristiques suivantes : - l'enceinte de culture est en pyrex�, le support comprend des moyens de verrouillage de l'enceinte sur le support, le support comprend au moins deux ouvertures opposées, une ouverture étant apte à permettre l'alimentation du ou des canaux de l'enceinte par les moyens de distribution en milieu nutritif, une autre ouverture étant apte à permettre l'accès à l'enceinte d'un laser d'un microscope confocal, - l'enceinte de culture a une forme générale de parallélépipède rectangle, le ou 10 les canaux s'étendant dans le sens de la longueur et/ou de la largeur de ce parallélépipède rectangle, - le support est au moins partiellement constitué de métal, - le support est au moins partiellement constitué d'acier ou d'aluminium, - le système de distribution comprend un ou plusieurs filtres à évent placés en 15 amont du ou des canaux. L'invention concerne également un ensemble d'observation d'un développement de biofilms comprenant un microscope confocal, et un dispositif pour cultiver in vitro des biofilms selon l'invention. 20 Avantageusement mais facultativement, l'ensemble d'observation comprend au moins l'une des caractéristiques suivantes : - l'ensemble comprend une plateforme motorisée qui permet de contrôler le déplacement relatif du support et du microscope confocal, - l'ensemble comprend des moyens d'acquisition des données issues du 25 microscope confocal et des moyens de traitement des données issues du microscope confocal de sorte à construire des images 3D des biofilms, - l'ensemble comprend des moyens d'enregistrement des images 3D, - l'ensemble comprend une interface afin de permettre à un utilisateur d'entrer un ou des paramètres au comportement du microscope confocal, 30 - au moins un des paramètres est représentatif d'une coordonnée spatiale d'acquisitions d'images par le microscope confocal, - au moins un des paramètres est représentatif d'une durée de prise d'images par le microscope confocal. 35 L'invention concerne aussi un produit de programme d'ordinateur comprenant des instructions de code enregistrées sur un support utilisable dans un ordinateur, caractérisé en ce qu'il comprend des instructions pour la mise en oeuvre d'une acquisition automatique d'images et une reconstruction tridimensionnelle dans le cadre de l'invention. L'invention présente de nombreux avantages. L'enceinte de culture rigide selon l'invention permet de cultiver un biofilm ou plusieurs biofilms en parallèle sans se déformer au cours de l'expérience. En outre, il suffit de chauffer l'eau de circulation à la température souhaitée pour fixer ou contrôler la température tout au long d'une expérience sans avoir à déplacer l'enceinte de culture. Le biofilm n'est pas perturbé par des chocs. En particulier, il est possible de cultiver des biofilms à 37°C de sorte à créer des conditions de développement similaires à celles du corps humain. L'enceinte de culture selon l'invention possède en outre une faible dilatation thermique, ce qui réduit encore le biais sur les coordonnées spatiales d'acquisition d'images. L'invention permet ainsi d'acquérir des images en des coordonnées spatiales fixes et de suivre l'évolution du ou des biofilms en des points déterminés au début d'une expérience, et qui ne varient pas. L'ensemble d'observation selon l'invention permet d'observer le développement de biofilms sur surface inerte entretenue ou vivante, qui s'agisse de cellules humaines 20 ou animales pré-implantées comme de biofilms bactériens. L'ensemble d'observation selon l'invention permet d'obtenir des reconstructions tridimensionnelles de un ou plusieurs biofilms de manière automatique, sans nécessité d'intervention manuelle après le déclenchement de l'expérience. 25 D'autres caractéristiques, buts et avantages de la présente invention apparaîtront à la lecture de la description détaillée qui va suivre, au regard des dessins annexés, donnés à titre d'exemples non limitatifs et sur lesquels : - la figure 1 illustre une enceinte de culture de biofilms selon l'état de l'art, - la figure 2 est une représentation simplifiée d'un ensemble d'observation du 30 développement de biofilms selon l'état de l'art, - la figure 3 illustre un dispositif pour cultiver in vitro des biofilms selon une réalisation possible de l'invention, la figure 4 représente une vue de dessus d'une partie du dispositif représenté sur la figure 3, 35 - la figure 5 illustre des enceintes de culture de biofilms selon une réalisation possible de l'invention, - la figure 6 illustre un support d'enceinte de culture selon une réalisation possible de l'invention, et - la figure 7 illustre un ensemble d'observation d'un développement de biofilms selon une réalisation possible de l'invention. En référence à la figure 3, un dispositif 10 pour cultiver in vitro des biofilms selon une réalisation possible de l'invention comprend une enceinte de culture rigide 20 comprenant un ou plusieurs canaux 21, un support 30 et un système de distribution en milieu nutritif. Le système de distribution comporte une réserve en milieu nutritif 4, une pompe péristaltique 5, un réservoir de collecte de milieu usé 8 et des tubes de connexion 11, 12, 13. La pompe péristaltique 5 assure la circulation du milieu nutritif. Le support présente une entrée 311 et une sortie 312 connectées à un circuit de thermorégulation 40 pour permettre le contrôle de la température de l'enceinte de culture par circulation d'eau à l'intérieur du support. Ainsi, la température de l'enceinte 20 est maintenue constante au cours d'une expérience et on n'a pas besoin de la déplacer régulièrement dans une chambre dédiée. Le support sera décrit plus loin en détail en référence à la figure 6. Avantageusement, le système de thermorégulation 40 comprend des tubes 41 20 et 42, une pompe de circulation 43 et un bain d'eau chauffé 44. Avantageusement, le système de distribution en milieu nutritif comporte un filtre à évent 9 associé à chaque canal et placé en amont de ce canal dans le sens de circulation du milieu nutritif, de sorte à éliminer l'air et à éviter que des bulles pénètrent dans les canaux et n'arrachent le biofilm. 25 Préférentiellement mais non limitativement, le ou les filtres à évents 9 sont disposés sur le support 30 de sorte à éliminer les bulles au plus proche du ou des canaux (21). Avantageusement, l'évacuation du milieu usé peut se faire de diverses autres manières. 30 Avantageusement, les tubes de connexion 11, 12, 13 sont en matériau flexible. On a représenté sur la figure 4 une vue de dessus du support du dispositif 10 illustré par la figure 3. Avantageusement, l'enceinte de culture 20 comprend un nombre donné (par exemple 6) de canaux 21 distincts. Ainsi, on peut observer un nombre donné de 35 biofilms se développer indépendamment sous les mêmes conditions d'expériences. On a représenté sur les figures 5a à 5d des enceintes de culture 20 selon des réalisations possibles de l'invention. Les figures 5a et 5d illustrent une enceinte de culture 20 comportant 6 canaux 21 selon une réalisation possible de l'invention. On a distingué une face 22 et une face 5 23 de l'enceinte de culture 20. La figure 5a illustre l'enceinte de culture 20 hors du cadre d'une utilisation. Avantageusement, l'enceinte de culture 20 comprend deux bouchons 25 associés à chaque canal 21 de sorte à boucher les ouvertures et à maintenir stérile l'enceinte de culture 20 avant une utilisation. Préférentiellement, les canaux 21 sont parallèles. 10 La figure 5d illustre une vue en coupe latérale de l'enceinte de culture 20 dans le cadre d'une utilisation possible selon l'invention. L'enceinte de culture 20 est disposée sur le support 30. Un biofilm 26 est disposé à l'intérieur d'un canal 21. Avantageusement, la face 23 est dirigée vers le haut, de sorte à pouvoir alimenter le canal 21 en milieu nutritif verticalement et par le haut à travers l'ouverture 15 22. La figure 5b représente, selon une réalisation possible de l'invention, une enceinte de culture comportant trois canaux 21. Préférentiellement, les canaux 21 sont parallèles. La figure 5c représente, selon des réalisations possible de l'invention, des 20 enceintes de cultures 20 à canal unique de formes diverses : canal en forme de T 211, canal en forme de croix 212, canal en circuit fermé 213. Facultativement, le canal en circuit fermé 213 a une forme sensiblement rectangulaire. De manière préférentielle mais non limitative, les canaux 21 sont, en référence aux figures 5a, 5b et 5c, les canaux 21 s'étendent dans le sens de la longueur et/ou de 25 la largeur du parallélépipède rectangle. L'enceinte de culture selon l'invention est en matériau rigide, de sorte à ne pas se déformer au cours d'une expérience pour permettre des acquisitions d'images selon les coordonnées spatiales fixes au cours du temps. Avantageusement, l'enceinte de culture est en matériau à faible dilatation 30 thermique. Dans le cadre de l'invention, on entend par � matériau à faible dilatation thermique � un matériau dont le coefficient de dilatation thermique entre 20°C à 300°C est inférieur à 50*10-7/°C. Avantageusement encore, l'enceinte de culture est en matériau à forte inertie 35 thermique. Dans le cadre de l'invention, on entend par � matériau à forte inertie thermique � un matériau ayant les propriétés suivantes : - une masse volumique comprise entre 2000 et 2500 kg/m3 - une capacité calorifique massique à 25°C supérieure 740 J.kg-'.K-1 - une conductivité thermique entre 20°C et 150°C comprise entre 0.0110 et 0.0130 J.cm-'.s-'.°C-1. Préférentiellement, mais non limitativement, l'enceinte de culture est en pyrex�, matériau qui présente de bonnes propriétés dans le cadre de l'invention : 10 - faible dilatation thermique, - forte inertie thermique, - bonne résistance hydrolytique, - bonne résistance à la compression (3600 bars à 20°C) et à la traction (142 bars à 20°C), 15 - bonne transparence, - résistance à la chaleur sans déformation jusqu'à 300°C à pression atmosphérique. L'enceinte de culture 20 et les canaux 21 sont alors facilement réalisables de manière reproductible, par exemple par laminage ou extrusion. 20 La résistance à la chaleur permet de recycler et autoclaver l'enceinte de culture entre deux expériences. Préférentiellement, mais non limitativement, l'enceinte de culture a une haute entre 1 et 12 millimètres. La figure 6 illustre un support 30 d'enceinte de culture selon une réalisation 25 possible de l'invention sous forme éclatée. Le support 30 comprend un conduit 31, une entrée 311 et une sortie 312. Ainsi, le support permet une circulation d'eau dans le conduit 31. L'eau est par exemple chauffée dans un ballon de sorte à maintenir l'enceinte de culture à une température souhaitée de l'expérience, permettant ainsi le contrôle de la température. 30 Avantageusement, le support comprend un système de verrouillage de l'enceinte de culture 20 comprenant ici, préférentiellement mais non limitativement, des mâchoires 351, 352 et une bague de maintien 33. Ainsi, le biofilm n'est pas perturbé par des mouvements parasites au cours de son développement. Préférentiellement, mais non limitativement, les mâchoires 351, 352 sont des 35 mâchoires à vis. Avantageusement, la bague de maintien 33 est fixée au support 30 par des vis 331. Ainsi, le jeu entre la bague de maintien 33 et le support 30 est réglable et adaptable à plusieurs enceintes de cultures 20. Avantageusement, le support 30 prévoit au moins deux ouvertures opposées 342 et 343. Ainsi on peut alimenter les canaux 21 de l'enceinte de culture 20 en milieu nutritif par le dessus du support 30 à travers l'ouverture 342. D'autre part, l'ouverture 342 permet d'observer le développement des biofilms dans les canaux 21 par le dessous du support 30. En particulier, elle permet de viser les biofilms avec un laser d'un microscope confocal. De manière avantageuse, le support 30 est constitué de matériau lourd de sorte à assurer une bonne stabilité de l'enceinte de culture au cours de l'expérience. Préférentiellement, mais non limitativement, le support 30 est partiellement constitué de métal comme de l'acier et/ou de l'aluminium. Le support 30 en matériau lourd combiné au système de verrouillage assure l'immobilité de l'enceinte de culture 20 au cours d'une expérience. Ainsi, il est possible d'acquérir des images à coordonnées spatiales fixes sur le biofilm, et de suivre l'évolution du biofilm en des points déterminés. Préférentiellement, le support 30 comprend un dispositif d'enclenchement pour être adapté sur tout microscope confocal existant. En référence à la figure 7, un ensemble d'observation 50 d'un développement de biofiims selon l'invention comprend un dispositif pour cultiver in vitro des biofilms 10 selon l'invention et un microscope confocal 7. Avantageusement, l'ensemble d'observation 50 comprend une plateforme motorisée 51 connectée au microscope confocal 7 et le support 30 du dispositif 10 est fixé sur la plateforme motorisée 51. La plateforme motorisée permet de déplacer le support 30 par rapport au microscope confocal 7, et ainsi de déplacer par rapport au microscope confocal 7 le ou les biofilms 26 contenus dans le ou les canaux 21 de l'enceinte de culture 20 disposée sur le support 30. Avantageusement, l'ensemble d'observation 50 comprend des moyens d'acquisition 52 des images du microscope confocal 7, connectés directement ou indirectement au microscope confocal 7. Avantageusement, l'ensemble d'observation 50 comprend des moyens d'enregistrement 54 connectés directement ou indirectement aux moyens de traitement 53 et aptes à stocker des images 3D des biofiims.35 De manière avantageuse, l'ensemble d'observation 50 comprend une interface 55 qui permet à un utilisateur de définir des paramètres de l'expérience. Cette interface est connectée directement ou indirectement au microscope confocal. Préférentiellement, mais non limitativement, l'interface 55 comprend un dispositif d'affichage, par exemple un écran, et un dispositif d'interaction comme un clavier ou une souris. Préférentiellement, mais non limitativement, l'utilisateur peut définir des coordonnées spatiales de l'acquisition d'images, une durée de l'expérience, le nombre de couches de biofilms à chaque prise d'images, l'épaisseur de ces couches ou l'intervalle entre deux couches. Avantageusement, au moins deux éléments parmi les dispositifs 53, 54 et l'interface 55 sont regroupés dans un ordinateur. Avantageusement, la prise d'images, la construction 3D et l'enregistrement sont automatisés. Ainsi, aucune intervention de l'utilisateur quant à la prise d'images n'est plus nécessaire après le début de l'expérience. L'acquisition d'images et la reconstruction tridimensionnelles sont réalisées automatiquement, selon des coordonnées spatiales déterminées par l'utilisateur avant le déclenchement de l'expérience. Selon l'invention, l'acquisition d'images et la reconstruction tridimensionnelles automatiques sont réalisées par un produit de programme d'ordinateur comprenant des instructions de code enregistrées sur un support utilisable dans un ordinateur. Le produit de programme d'ordinateur comprend des instructions pour la mise en oeuvre d'un tri les reconstructions tridimensionnelles dans des fichiers d'ordinateur en fonction d'une référence de l'expérience. La référence comprend par exemple une date et un numéro d'expérience. Préférentiellement, le produit de programme d'ordinateur comprend des instructions pour la mise en oeuvre d'un repositionnement du microscope en vue de prises d'images successives selon des coordonnées spatiales fixes, et ce pour un ou plusieurs biofilms en parallèle. Le produit de programme d'ordinateur selon l'invention a fait l'objet d'un dépôt chez huissier en date du 30 mars 2009. REVENDICATIONS1. Dispositif (10) pour cultiver in vitro des biofilms caractérisé en ce qu'il comprend : - une enceinte de culture (20) en matériau rigide à faible dilatation thermique, ladite enceinte comprenant un ou plusieurs canaux (21) à l'intérieur desquels le ou les biofilms (26) sont destinés à se développer, lesdits canaux (21) débouchant sur une ou des faces de ladite enceinte, - un support (30) de ladite enceinte (20), - des moyens de distribution d'un milieu nutritif pour alimenter lesdits canaux (21), et - des moyens de contrôle d'une température de ladite enceinte (20). 2. Dispositif selon la revendication précédente, dans lequel l'enceinte de culture (20) est en pyrex Cl 3. Dispositif selon la revendication précédente, dans lequel ledit support (30) comprend un conduit de circulation (31), lesdits moyens de contrôle étant aptes à assurer une circulation d'eau à température contrôlée à l'intérieur dudit conduit. 4. Dispositif selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans lequel le support (30) comprend des moyens de verrouillage de l'enceinte (20) sur ledit support (30). 25 5. Dispositif selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans lequel le support (30) comprend au moins deux ouvertures (342, 343) opposées, une ouverture (342) pour permettre l'alimentation du ou des canaux (21) de l'enceinte (20) par les moyens de distribution en milieu nutritif, une autre ouverture (343) pour permettre l'accès à l'enceinte d'un laser d'un microscope confocal. 30 6. Dispositif selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans lequel l'enceinte de culture (20) a une forme générale de parallélépipède rectangle, le ou les canaux (21) s'étendant dans le sens de la longueur et/ou de la largeur de ce parallélépipède rectangle. 35. Dispositif selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans lequel le support (30) est au moins partiellement constitué de métal. 8. Dispositif selon la revendication 7, dans lequel le support (30) est au moins partiellement constitué d'acier ou d'aluminium. 9. Dispositif selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans lequel le système de distribution comprend un ou plusieurs filtres à évent (9) placés en amont du ou des canaux (21). 10. Support (30) pour enceinte de culture tel que défini dans l'une quelconque des revendications précédentes. 11. Ensemble d'observation (50) d'un développement de biofilms comprenant un 15 microscope confocal (7), caractérisé en ce qu'il comprend un dispositif (10) selon l'une quelconque des revendications 1 à 9. 12. Ensemble d'observation selon la revendication précédente, comprenant une plateforme motorisée (51) qui permet de contrôler le déplacement relatif du support 20 (30) et du microscope confocal (7). 13. Ensemble d'observation selon l'une des revendications 11 et 12, comprenant des moyens d'acquisition (52) des données issues du microscope confocal (7) et des moyens de traitement (53) des données issues du microscope confocal (7) de sorte à 25 construire des images 3D des biofilms. 14. Ensemble d'observation selon la revendication précédente, comprenant des moyens d'enregistrement (54) des images 3D. 30 15. Ensemble d'observation selon l'une des revendications 11 à 14, comprenant une interface (55) afin de permettre à un utilisateur d'entrer un ou des paramètres relatifs au comportement du microscope confocal (7). 16. Ensemble d'observation selon la revendication précédente, dans lequel au 35 moins un des paramètres est représentatif d'une coordonnée spatiale d'acquisition d'images par le microscope confocal (7).10. Ensemble d'observation selon l'une des revendications 15 et 16, dans lequel moins un des paramètres est représentatif d'une durée de prise d'images par le microscope confocal (7).