FR 2947456 A1 20110107 FR 0903292 A 20090706 PROCEDE D'INACTIVATION D'AU MOINS UN AGENT PATHOGENE DANS UN ECHANTILLON DE PLASMA SANGUIN HUMAIN DESCRIPTION 5 Domaine technique [1] La présente invention se rapporte à un procédé d'inactivation d'au moins un agent pathogène d'un échantillon de plasma sanguin humain, à un plasma obtenu par ce procédé et à un dispositif pour la mise 10 en oeuvre du procédé. [2] Le plasma sanguin humain obtenu est un plasma biologiquement actif dans lequel au moins un agent pathogène est inactivé. [3] Le procédé et les produits obtenus par ce procédé trouvent 15 notamment des applications dans les domaines thérapeutiques et non thérapeutiques. [4] Dans la description ci-dessous, les références entre parenthèses (Réf) renvoient à la liste des références présentées à la fin du texte. 20 Etat de la technique [5] La sécurisation du plasma sanguin humain, qui peut être considérée comme l'inactivation des agents pathogènes et la sauvegarde de ses propriétés thérapeutiques, est actuellement assurée par des 25 procédés chimiques. II s'agit de procédés comprenant l'ajout dans le plasma de substances chimiques susceptibles de le décontaminer, par exemple des solvants et détergents etc., des procédés associant substances chimiques et procédés physico-chimiques, par exemple des molécules photosensibles associées à une illumination par une radiation 30 lumineuse de longueur d'onde donnée (UV par exemple), ou des procédés thermiques, par exemple la pasteurisation à 60°C après ajout de stabilisateurs de protéines, la filtration, l'irradiation gamma...(Ref.1) C. Naegelen et al. [Evolution des techniques de préparation des produits sanguins labiles (PSL) : inactivation des pathogènes dans les PSL], Transfusion Clinique et Biologique 16 (2006) pp.179-189. [6] Ces procédés sont contraignants du fait que tout ajout d'une substance étrangère dans le plasma sanguin humain implique à l'issue du procédé une étape d'élimination et/ou de purification du plasma ou qu'ils affectent les propriétés du plasma. Cette étape finale ne permet pas d'obtenir un plasma sanguin � identique �. En effet, l'élimination des substances chimiques n'est jamais totale et peut entrainer une toxicité à long terme, par exemple par accumulation. Par ailleurs, le traitement du plasma à des températures élevées, c'est-à-dire supérieure ou égale à 60°C dénature les protéines présentes et donc de ce fait oblige à ajouter encore des produits chimiques pour stabiliser ces protéines. [7] Des procédés de traitements sous hautes pressions sont connus dans le domaine agro-alimentaire pour inactiver certains agents pathogènes tels que des moisissures, des bactéries et parfois des virus. Par exemple A. JOFRE et al. [LWT Food Science and Technology 42(5) (2009) p.924-928, intitulé � Efficiency of high hydrostatic pressure at 600 MPa against food-borne micro-organisms by challenge test convenience �] (Ref.2) décrivent l'application d'une pression de 600 MPa afin de sécuriser des aliments. [8] D'autres procédés ont été utilisés afin d'inactiver des agents pathogènes, par exemple Staphylococcus aureus (S. aureus) dans du jambon (C.C. TASSOU et al. � Temperature-assisted high hydrostatic pressure inactivation of Staphylococcus aureus in a ham mode) system: evaluation in selective and non selective medium � J. Applied Microbiology 104 (2008), 1764-1773 (Ref.3). Les résultats obtenus ont montré qu'il était nécessaire d'appliquer une pression de 500 MPa à 20°C pendant 45 minutes afin d'atteindre une réduction de 5 log de la quantité de pathogènes présents. Une réduction de 6 log était atteinte à 400 MPa avec un chauffage du milieu à 55°C pendant les 7 premières minutes du traitement. Les pressions et températures utilisées dans cet article ne permettent pas le maintien de l'activité biologique du plasma sanguin humain. [009] Des travaux antérieurs ont également mis en évidence qu'il était notamment nécessaire d'atteindre des valeurs élevées de la pression (environ 500 MPa) afin d'obtenir une réduction à température ordinaire, c'est-à-dire à 20°C de 6 log de la population de Staphylococcus aureus (S. aureus) au sein d'un milieu modèle tel que le bouillon tryptone-sel [Y. RIGALDIE : � Sur l'impact des traitements sous Hautes Pressions dans la décontamination et la stérilisation de formes pharmaceutiques renfermant des molécules thérapeutiques sensibles aux procédés énergétiques � Thèse de l'Université Bordeaux 1 (01 juillet 2002) N°d'ordre 2526 (Ref. 4)]. Les valeurs élevées de la pression nécessaires pour inactiver certains pathogènes dont S. aureus sont une contrainte importante pour la mise au point d'un procédé d'inactivation d'un agent pathogène dans du plasma sanguin tout en conservant l'activité biologique dudit plasma. [0010] Par ailleurs dans Y. RIGALDIE et al. [� Pharmaceuticals perspectives of High Pressures : a soft tool for sterilization of fragile drugs � Defect and Diffusion Forum 208-209 (2002), 55-58 (Ref. 5)] il a été montré d'une part que l'inactivation de S. aureus par un traitement Hautes Pressions en continu atteignait dans un milieu modèle (par exemple un bouillon tryptone-sel) environ 2,3 log pour un traitement de 10 minutes à 600 MPa et d'autre part que de basses températures (-17°C) avait peu d'effet sur l'inactivation par rapport à la température ambiante. [0011] Il est connu que le plasma sanguin humain possède des propriétés biologiques spécifiques. En effet, le plasma comprend environ trois cents protéines différentes. Les protéines les plus représentées en proportion sont l'albumine, les anticorps ou Immunoglobulines, le fibrinogène, l'alpha 1 antitrypsine, l'alpha 2 macroglobuline, la transferrine, les lipoprotéines (HDL et LDL). Il comprend également les facteurs de coagulation qui sont pris dans la plupart des cas comme référence pour mesurer l'activité biologique du plasma. Le plasma est � biologiquement actif � lorsque l'activité des facteurs de coagulation, notamment les facteurs Vlllc, V et XI présents dans le plasma est supérieure à 50% (Pharmacopée Européenne 5.6 01/2007 :1646 (Ref. 6). Le plasma peut, au travers de certaines de ses protéines, interagir avec les membranes de certains micro-organismes (A. KUNERT et al. The Journal of Immunology 179 (2007), 2979-2988 (Ref.7) ou induire la sporulation (l'introduction dans le plasma d'une suspension composée de 50% de forme végétative de B.subtilis et de 50% de forme sporulée de B. subtilis conduit très rapidement à une sporulation quasi-totale). [0012] Différentes études ont montré que le traitement du plasma sanguin à des pressions comprises entre 200 et 500 MPa à une température de -10°C n'était pas intéressante pour la conservation des produits sanguins et que cette méthode n'était pas à retenir pour l'inactivation de virus et de microorganismes dans les produits sanguins (A. M. MATSER et al. � High Pressure processing for preservation of blood products� High Pressure Research 25 (2005), p.37-41) (Ref.8). [0013] La demande internationale WO 02/056824 (Ref. 9) décrit un procédé de stérilisation de produits sanguins utilisant des valeurs de pressions incompatibles avec la conservation de l'activité biologique du plasma sanguin. Différentes combinaisons de températures et pressions sont testées, cependant ces combinaisons ne permettent pas de maintenir l'activité des facteurs de coagulation Vlllc, V et XI afin d'obtenir un plasma sanguin humain biologiquement actif. Par ailleurs, dans ce document, les procédés diffèrent en fonction de l'agent pathogène ; ce qui rend ces procédés difficilement industrialisables. [0014] D'autres essais ont été réalisés dans l'état de la technique afin d'inactiver S. aureus dans le plasma sanguin (� Deciphering Mechanisms for Infectious Agent Inactivation Using Cyclic High Pressure or Pressure Cycling Technology � F. TAO et al. (BBI Inc.- Boston Biomedica Inc.) BIOPHYSICS 2003 û Poster 021604 (Ref.10). [0015] Dans l'article de S. DUSING et al. [� Inactivation of viruses in plasma by cycled pulses of high pressure � Trends in High Pressure Bioscience and Biotechnology, Ed. R. HAYASHI, Elsevier Science BV (2002)] (Ref.11), seuls sont pris en compte le mode d'application de la pression, notamment des cycles de 60 secondes à hautes pressions c'est-à-dire entre environ 400 et 500 MPa, séparés par 300 secondes à pression ambiante et des basses températures c'est-à-dire environ -20°C. Les pressions utilisées dans ce document ne sont pas compatibles avec la conservation de l'activité biologique du plasma sanguin humain. [0016] Aussi, il existe un réel besoin dans l'état de la technique palliant ces défauts, inconvénients et obstacles de l'art antérieur, en particulier d'un procédé permettant d'inactiver au moins un agent pathogène dans le plasma sanguin humain et permettant également de garder l'activité de protéines plasmatiques, par exemple les facteurs Vlllc, V et XI afin que le plasma soit biologiquement actif. [0017] II existe également un réel besoin dans l'état de la technique de trouver un procédé permettant d'inactiver au moins un agent pathogène dans le plasma sanguin humain et permettant également de garder l'activité biologique sans introduction de produits externes, par exemple des produits chimiques, et sans étape postérieure de purification afin d'éliminer des produits introduits susceptibles d'être toxiques, par exemple par accumulation ou tout autre processus. [0018] En particulier, il existe un réel besoin dans l'état de la technique de trouver un procédé plus efficace permettant de réduire les coûts, de diminuer le temps nécessaire pour l'inactivation et d'améliorer l'efficacité d'inactivation d'au moins un agent pathogène tout en conservant l'activité biologique du plasma sanguin humain. Description de l'invention [0019] La présente invention permet de résoudre notamment ces défauts, inconvénients et obstacles de l'art antérieur en fournissant un procédé d'inactivation d'au moins un agent pathogène d'un échantillon de plasma sanguin humain comprenant au moins 5 cycles comprenant chacun : la compression dudit échantillon de sa pression initiale Po à une pression PI, PI étant compris de 190 à 210 MPa, la température dudit plasma à la pression PI étant comprise entre - 10°C et -3°C du fait de la compression, - le maintien éventuel de la pression P~ durant un temps compris de 110 à 130 secondes, et la détente de l'échantillon jusqu'à la pression Po, la vitesse d'augmentation de la pression pour ladite compression et la vitesse de diminution de la pression pour ladite détente sont réalisées à une vitesse vl comprise de 47,5 à 52,5 MPa.s'. [0020] De manière surprenante et totalement inattendue, les inventeurs ont démontré que la combinaison des différents paramètres définis dans le procédé de l'invention permet d'inactiver au moins un agent pathogène avec une efficacité très supérieure aux procédés de l'état de la technique, et permet en outre de conserver l'activité biologique de l'échantillon de plasma sanguin humain traité. [0021] En outre, les inventeurs ont montré que, de manière surprenante et inattendue, les caractéristiques du procédé de l'invention ont un effet synergique sur l'inactivation de cibles biologiques, par exemple au moins un agent pathogène, permettant ainsi d'inactiver lesdites cibles tout en conservant l'activité biologique de l'échantillon de plasma sanguin humain. [0022] De plus le procédé de l'invention permet l'inactivation d'au moins un agent pathogène sans introduction de produits externes et ne nécessite pas d'étape de purification permettant ainsi de réduire le temps et les coûts de réalisation. [0023] Le procédé de l'invention permet donc avantageusement d'inactiver au moins un agent pathogène présent dans le plasma sanguin humain mais également de conserver l'activité biologique dudit échantillon de plasma sanguin humain. [0024] Dans la présente par � échantillon de plasma sanguin humain�, il est entendu tout échantillon de plasma provenant d'un être humain quel que soit son origine, âge, sexe, taille et/ou poids. L'échantillon peut également avoir été préalablement traité par toute technique connue de l'homme du métier pour, par exemple, sa conservation, par exemple par congélation [0025] Dans la présente par � inactivation�, il est entendu la suppression de l'activité biologique d'au moins un agent pathogène ou d'un ensemble d'agents pathogènes. Par exemple, l'inactivation ne permet pas une reprise de l'activité biologique de l'agent pathogène. L'inactivation peut être constatée par toute méthode connue de l'homme du métier. Par exemple, il peut s'agir de l'absence de croissance d'un agent pathogène dans un milieu adapté pour sa croissance et/ou de transmettre son activité pathogène [� Pathogen inactivation techniques� , J.P.R. PELLETIER, S. TRANSUE , E.L. SNYDER, Best Practice & Research Clinic Haematology vol.19 (1) (2006) ,pp.205-242 ] (Ref.12) [0026] Dans la présente par � agent pathogène � il est entendu toute entité biologique connue de l'homme du métier. Par exemple, il peut s'agir d'une bactérie, d'une moisissure, d'un virus, d'une levure, d'une protéine infectieuse et/ou de parasites. Par exemple, l'agent pathogène peut être choisi dans le groupe comprenant les agents pathogènes de la pharmacopée européenne décrit dans Pharmacopée Européenne 6.0, 5.1 Textes Généraux sur la microbiologie 01 /2008 :50101 (Ref.13), par exemple il peut s'agir d'agents pathogènes responsables de maladies, par exemple Candida albicans, Aspergillus Niger, ou encore responsables de maladies nocosomiales, par exemple Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa. [0027] Dans la présente par � adiabatique �, il est entendu l'accroissement ou la diminution de température résultant de la compression ou de la décompression notamment d'un constituant liquide ou gazeux dans un système clos en raison du premier principe de la thermodynamique. [E. HECHT � Physique � Editeur : De Boech (1999)] (Ref. 14) [0028] Dans la présente la pression initiale Po est par exemple la pression à laquelle se trouve l'échantillon avant la mise en oeuvre du procédé de l'invention. Par exemple, la pression Po peut être égale à la pression atmosphérique, ou toute pression de stockage de plasma sanguin inférieure à P. La pression initiale peut être, par exemple égale à environ 0,1 MPa. [0029] Dans la présente par � vitesse d'augmentation et/ou de diminution de la pression �, il est entendu une vitesse exprimée en Méga Pascal par seconde (MPa. s"'). Elle peut être linéaire et/ou variable, dans ce dernier cas on parle alors plutôt de cinétique. [0030] Selon l'invention, l'échantillon de plasma sanguin humain auquel est soumis le procédé de l'invention est de préférence contenu dans tout contenant connu de l'homme du métier pour être résistant aux pressions du procédé de l'invention. Par exemple, dans des contenants hermétiques et/ou déformables, par exemple un tube de prélèvement, une poche plastique pour transfusion, un récipient stérile, un emballage spécifique par exemple des emballages décrits dans Y. LAMBERT, G. DEMAZEAU, A. LARGETEAU, S. LABORDE-CROUBIT, M. CABANNES and J.M. BOUVIER, [� New packaging solutions for high pressure treatments of foods �. High Pressure Research. 2000, vol 19, 207-212] (Ref. 15). [0031] Par exemple, l'emballage peut comprendre une surface interne en contact avec le plasma compatible chimiquement et biologiquement avec le plasma et une surface externe en contact avec le milieu transmetteur compatible chimiquement avec ce dernier, par exemple en terme de perméabilité, etc tel que décrit dans la Pharmacopée Européenne 5.0 01/2005 : 30203 (Ref. 16) [0032] L'emballage peut par exemple comprendre une connectique, c'est-à-dire des moyens permettant de remplir et/ou de vider l'emballage. Par exemple, une connectique peut permettre le remplissage et/ou l'utilisation, par exemple thérapeutique du plasma sanguin humain après mise en oeuvre d'un procédé selon l'invention. [0033] Par exemple, l'emballage hermétique peut être tout emballage connu de l'homme du métier répondant de préférence aux 4 critères suivants : (i) la conservation de l'herméticité dudit emballage et sa connectique, (ii) la compatibilité chimique entre la surface intérieure de l'emballage et de sa connectique avec le plasma, et avec un milieu transmetteur de pression pour sa partie externe, (iii) le maintien des propriétés barrières notamment afin d'éviter tout transfert gazeux ou de molécules chimiques au travers de la paroi, (iv) la sauvegarde de l'intégrité chimique de l'emballage, c'est-à-dire le non relargage de molécules chimiques vers le contenant plasma. [0034] Dans la présente, la pression peut être appliquée de manière isostatique au moyen d'un liquide transmetteur de pression. [0035] Dans la présente par � application de la pression de manière isostatique �, il est entendu l'application uniforme de la pression en tout point de l'échantillon. [0036] Dans la présente par � milieu transmetteur �, il est entendu tout milieu connu de l'homme du métier susceptible d'être utilisé dans le procédé de l'invention. Par exemple, il peut s'agir d'un milieu liquide ou gazeux. Par exemple, il peut s'agir d'un milieu liquide facile à mettre en oeuvre et souvent choisi en fonction de sa température de fusion, notamment lors de son utilisation à basse température, par exemple un milieu dont la température de fusion est inférieure à la température de traitement de l'échantillon par exemple un milieu liquide apolaire, par exemple l'hexane, le glycol ou d'un milieu polaire, par exemple le propanol, le n-butanol, l'éthanol, l'acide acétique, l'isopropanol, de préférence le milieu liquide transmetteur est choisi dans le groupe comprenant un mélange glycol et eau, par exemple le Kryo 30 Lauda, et l'éthanol. [0037] L'application de la pression de manière isostatique permet avantageusement de comprimer et de détendre de manière uniforme et sans gradient de pression en tout point de l'échantillon. [0038] Dans la présente par � activité biologique d'un échantillon de plasma sanguin humain �, il est entendu une activité des facteurs Vlllc, V et XI présents dans le plasma supérieure à 50% telle qu'indiquée par la norme de la Pharmacopée Européenne relative au plasma humain viroinactivé (Pharmacopée Européenne 5.6 01/2007:1646 (Ref.6) et/ou supérieure à 70% pour le facteur Vlllc et supérieure à 50% pour les facteurs V et XI telle que requise par la Législation française (Réf.17). [0039] Dans la présente, la température initiale To de l'échantillon avant compression peut être choisie, par exemple, en fonction de la vitesse de montée en pression vl, de la nature chimique du milieu transmetteur de pression et de la valeur de la pression. Par exemple, la température initiale peut être comprise de -18°C à -3°C. [0040] Selon un mode particulier de réalisation du procédé de l'invention, la compression et/ou la détente sont adiabatiques. [0041] Dans la présente invention, la pression PI peut être égale à 200 MPa. Dans la présente la température dudit plasma à la pression PI [0042] peut être comprise de -10°C à -3°C, de préférence de -8°C à -4°C, de manière encore plus préférée égale à environ -5°C. [0043] Dans la présente invention, la pression PI peut être maintenue pendant une durée de 110 à 130 secondes par cycle, par exemple pendant une durée de 120 secondes par cycle. [0044] La présente invention a également pour objet l'utilisation du procédé défini précédemment pour l'inactivation d'au moins un agent pathogène et/ou d'un ensemble d'agents pathogènes dans le plasma sanguin humain. [0045] La présente invention a également pour objet le plasma sanguin humain obtenu par le procédé défini précédemment. [0046] Le plasma sanguin humain obtenu par le procédé de l'invention peut être avantageusement utilisé dans le domaine médical, par exemple pour le traitement de différentes pathologies, pour des transfusions comme décrit dans le document de l'Agence Française de Sécurité Sanitaire des Produits de Santé � Transfusion de plasma frais congelé : produits, indications � (2002) (Réf. 18) et/ou toute autre pathologie. [0047] Le plasma obtenu par le procédé de l'invention possède de manière avantageuse les propriétés biologiques du plasma sanguin humain selon les normes de la pharmacopée européenne et également de la Législation Française. [0048] D'autres avantages pourront encore apparaître à l'homme du métier à la lecture des exemples ci-dessous, illustrés par les figures annexées, donnés à titre illustratif. Brève description des figures - Les figures 1 A à c sont des histogrammes représentant le pourcentage d'activité de protéines plasmatiques (ordonnée) en fonction de la pression en Méga Pascal (MPa) (abscisse). En particulier, elles représentent respectivement l'effet de la valeur de la pression sur l'activité du facteur de coagulation Vllllc (figure 1A), du facteur de coagulation V (figure 1B), du facteur de coagulation XI (figure 1C), la vitesse d'application est de 3,33 MPa. s', le temps d'application, également dénommé maintien de la pression, de 10 minutes à température ambiante. - Les figures 2 A à c sont des histogrammes représentant le pourcentage d'activité de protéines plasmatiques (ordonnée) en fonction de la pression en MPa (abscisse) pour trois vitesses différentes d'application de la pression. En particulier, elles représentent respectivement l'effet de la vitesse d'application de la pression sur l'activité du facteur de coagulation Vlllc (figure 2A), du facteur de coagulation V (figure 2B), du facteur de coagulation XI (figure 2C) pour différentes valeurs de la pression (100, 150, 200 et 250 MPa), la pression étant appliquée pendant 10 minutes à température ambiante. - Les figures 3 A à c sont des histogrammes représentant le pourcentage d'activité de protéines plasmatiques (ordonnée) en fonction de la pression en MPa (abscisse) et de différents modes d'application la pression et pour une même durée totale de traitement. La vitesse d'application de la pression est de 3,33 MPa.s-1 à température ambiante. En particulier, les figures 3A, 3B et 3C représentent respectivement l'effet du mode d'application de la pression sur l'activité des facteurs de coagulation Vllllc, V et XI en mode continu (10 minutes), modes cycliques (5 cycles de 2 minutes et 20 cycles de 30 secondes). - Les figures 4 A à c sont des histogrammes représentant le pourcentage d'activité de protéines plasmatiques (ordonnée) en fonction de la pression en MPa (abscisse) pour deux valeurs de la température : ambiante et - 15°C. La vitesse d'application de la pression est supérieure ou égale à 50 MPa.s-1 et le temps d'application de la pression de 10 minutes. En particulier, les figures 4A, 4B et 4C représentent respectivement l'effet de la température sur l'activité des facteurs de coagulation en fonction de la valeur de la pression. - Les figures 5 A à c sont des histogrammes représentant le pourcentage d'activité de protéines plasmatiques (ordonnée) en fonction de la pression en MPa (abscisse), de la vitesse d'application de la pression et de la température. En particulier, les figures 5 A à c représentent respectivement l'effet de la combinaison d'une vitesse d'application rapide, d'une application cyclique de la pression et des températures sur l'activité des facteurs de coagulation Vllllc, V et XI, la vitesse d'application étant supérieure ou égale à 50 MPa.s"1, le temps d'application de 2 minutes répété 5 fois et la température de -15°C. - La figure 6 est un diagramme représentant l'inactivation de Staphylococcus aureus dans du plasma sanguin humain (ordonnée) en fonction de la température (abscisse) pour une combinaison de paramètres caractéristiques du traitement : une vitesse d'application de la pression de 50 MPa.s"', d'un mode d'application cyclique de la pression de 5 cycles de 2 min et pour une pression de 200 MPa. En particulier, cette figure représente l'effet drastique de la température sur l'inactivation par des hautes pressions de Staphylococcus aureus en suspension dans du plasma sanguin humain. - La figure 7 est un diagramme représentant l'inactivation de Staphylococcus aureus (ordonnée) en fonction de la température (abscisse) dans du plasma sanguin humain pour des valeurs croissantes de pression allant de 200 à 300 MPa. - La figure 8 est un diagramme représentant l'inactivation de S. aureus, de P. aeruginosa, de A. piger et de C. albicans (ordonnée) en fonction de la température (abscisse). En particulier, cette figure représente l'effet de la température sur l'inactivation de 4 microorganismes mis en suspension dans un échantillon de plasma sanguin humain. - La figure 9 est un histogramme représentant l'inactivation de Staphylococcus aureus (ordonnée) en fonction de la pression (abscisse) et de la vitesse d'application de la pression. En particulier, cette figure représente l'effet de la vitesse d'application de la pression sur l'inactivation de Staphylococcus aureus en suspension dans du plasma sanguin humain en sélectionnant comme mode d'application de la pression 5 cycles de 2 minutes et une température de -5°C environ. - La figure 10 est un histogramme représentant le pourcentage d'activité de facteurs de coagulation (ordonnée) en fonction de la pression (abcisse) pour diverses valeurs de la vitesse d'application de la pression. La figure 10A représente le pourcentage d'activité du facteur Vlllc (FVlllc) et la figure 10B le pourcentage d'activité du facteur V (EV). En particulier, cette figure représente l'effet de la vitesse d'application de la pression sur l'activité des facteurs de coagulation au cours d'un traitement cyclique (5x2min) à basse température (Température d'environ -5°C). - La figure 11 est une photographie représentant l'observation au microscope optique (Objectif X100) de sang contaminé par Plasmodium berghei avant (A) et après traitement par le � Procédé Hautes Pressions de Sécurisation du Plasma � (B). (N : Noyau, C : Cytoplasme, V : Vacuole) - La figure 12 représente le résultat d'une analyse par Western Blot d'échantillons de plasma sanguin humain infectés ou non par la protéine infectieuse du prion de hamster (263 K), Tlx : Témoin infecté non traité par le procédé, HPIx : Echantillon infecté traité par le procédé, TNx : Témoin négatif non traité par le procédé, HPNx : Témoin négatif traité par le procédé. EXEMPLES 10 Exemple 1 : mesure de l'activité biologique du plasma sanguin humain après traitement sous hautes pressions [0049] Des échantillons de 4 mL environ de plasma sanguin humain frais ont été prélevés et placés dans des tubes étanches, puis mis à 15 congeler à -30°C dans l'attente d'être traités sous hautes pressions. [0050] Les conditions de traitement étaient les suivantes : une vitesse d'application de la pression de 100 MPa en 30 secondes (3,33 MPa.s-'), une durée de traitement de 10 minutes de manière continue à la pression désirée, c'est à dire de 100 MPa à 250 MPa et une température ambiante 20 de l'ordre de 20°C. [0051] Les échantillons ont été placés dans un dispositif générateur de hautes pressions en phase liquide par compression directe de type � Framatome �, le milieu transmetteur était le mélange glycol/eau (Kryo 30 Lauda). 25 [0052] Par application continue de la pression, il est entendu une application constante de la pression à une valeur donnée. [0053] L'activité des facteurs de coagulation : facteur Vlllc, facteur V et facteur XI a été choisie comme référence afin de déterminer l'activité biologique du plasma sanguin humain. Cette activité a été déterminée 30 avant et après traitement par la méthode du temps de céphaline avec5 activateur décrite dans la notice d'utilisation STA C.K. PREST (Diagnostica Stago) (Réf 19). Ce dosage consiste à mesurer, en présence de céphaline et d'activateur, le temps de coagulation d'un plasma immunodéplété en facteur à doser, le facteur de coagulation manquant étant apporté par l'échantillon à tester. Pour chaque facteur de coagulation, le pourcentage d'activité résiduelle est ensuite déterminé par le rapport entre la valeur d'activité après traitement hautes pressions et la valeur d'activité avant traitement hautes pressions. L'effet de la valeur de la pression sur le pourcentage d'activité résiduelle pour ces trois facteurs de coagulation est présenté sur les figures 1 A à C. [0054] L'analyse de l'activité résiduelle des facteurs de coagulation vis-à-vis de la pression, présentée sur la figure 1, a montré que l'activité du facteur XI était peu affectée après traitement à des pressions de 100 MPa et 250 MPa (soit 1000 bar et 2500 bar), en revanche les facteurs Vlllc et V étaient, dans ce domaine de pression, très sensibles à la pression entraînant une forte perte d'activité, c'est-à-dire de l'ordre de 80 à 100% pour une pression d'environ 250 MPa. [0055] Tel que démontré dans cet exemple, le traitement du plasma sanguin à des pressions croissantes de 100 MPa à 250 MPa entraîne une forte diminution de l'activité des facteurs Vlllc et V ce qui conduit à considérer que tout procédé de sécurisation du plasma sanguin humain, c'est-à-dire tout procédé permettant l'inactivation des micro-organismes pathogènes par application de hautes pressions, s'accompagne d'une perte d'activité importante de l'activité des facteurs de coagulation et donc de la perte de l'activité biologique du plasma sanguin. Exemple 2: mesure de l'activité biologique du plasma sanguin humain après traitement sous hautes pressions en fonction de la vitesse d'application de la pression [0056] Du plasma sanguin humain frais a été préparé selon le procédé décrit dans l'exemple 1. Les conditions de traitement étaient : une durée de traitement de 10 minutes de manière continue à une pression donnée allant de 100 à 250 MPa, à une température de l'ordre de 20°C. [0057] La vitesse d'application de la pression a été choisie comme variable. Dans cet exemple, trois vitesses ont été choisies avec des valeurs suffisamment différentes d'une part et des valeurs accessibles pour un équipement industriel réalisé par l'Homme de l'Art d'autre part, c'est-à-dire 100 MPa en 30 secondes (ou 3,33 MPa.s-') (valeur identique à la vitesse d'application de la pression utilisée dans l'exemple 1), 100 MPa en 12 secondes (8,33 MPa.s-') et 100 MPa en 2 secondes (50 MPa.s-'). [0058] Les échantillons ont été placés dans un dispositif générateur de hautes pressions en phase liquide par compression directe de type � Framatome � et le milieu transmetteur était le mélange glycol/eau (Kryo 30 Lauda) pour les vitesses de 3,33 MPa.s-1 et 8,33 MPa.s-'. Un équipement générateur de hautes pressions par compression indirecte mis en place en interne avec comme milieu transmetteur l'éthanol a été utilisé pour la vitesse de 50 MPa.s-' [0059] L'activité biologique du plasma sanguin humain a été mesurée après traitement par le pourcentage d'activité des facteurs de coagulation tel que décrit dans l'exemple 1 (facteur Vlllc, facteur V et facteur XI) mesuré par la méthode du temps de céphaline avec activateur [0060] Les pourcentages d'activité résiduelle par rapport à l'activité avant traitement hautes pressions de chacun des facteurs de coagulation pour les mêmes valeurs de pression mais avec des vitesses d'application de la pression variables : 3,33 MPa.s-', 8,33 MPa.s"' et 50 MPa.s-1 sont représentés sur la figure 2. [0061] L'analyse des résultats présentés sur la figure 2 a montré que la vitesse d'application de la pression dans le domaine allant de 3,33 MPa.s-' à 50 MPa.s', quelle que soit la valeur de la pression de traitement et quelle que soit la nature du facteur de coagulation (facteur Vlllc, facteur V, facteur XI) a peu d'effet (aux erreurs expérimentales près) sur l'activité des facteurs de coagulation, au moins pour des pressions comprises entre 100 MPa et 250 MPa. [0062] L'absence d'effet de la vitesse d'application de la pression sur l'activité biologique du plasma est surprenante compte tenu de l'enseignement technique décrit dans la littérature, par exemple dans la demande internationale WO 00/48641 (Ref. 20) qui préconise des accroissements de pression très rapides, allant jusqu'à 1000 MPa.s"'. De plus, l'application de ces accroissements très rapides de pression sont très difficiles à mettre en oeuvre avec un équipement industriel. Exemple 3: mesure de l'activité biologique du plasma sanguin humain après traitement sous hautes pressions en fonction du mode d'application de la pression [0063] Du plasma sanguin humain frais a été préparé selon le procédé décrit dans l'exemple 1. Les conditions de traitement sous hautes pressions étaient : une vitesse d'application de la pression constante, égale à 100 MPa en 30 secondes (soit 3,33 MPa.s-1), la température de l'ordre de 20°C, une durée de traitement de 10 minutes à une pression variant de 100 à 250 MPa. [0064] Les échantillons ont été placés dans un dispositif générateur de hautes pressions en phase liquide par compression directe de type � Framatome � et le milieu transmetteur était le mélange glycol/eau (Kryo 30 Lauda). [0065] Le mode d'application de la pression varie selon un mode continu, c'est-à-dire le maintien de la pression constante pendant un temps de 10 minutes, ou un mode cyclique, c'est-à-dire 5 cycles de 2 minutes à la pression sélectionnée ou 20 cycles de 30 secondes à la pression sélectionnée. Les cycles correspondent, par exemple à une compression de l'échantillon, le maintien de la pression pendant un temps approprié et la détente de l'échantillon. La durée des cycles a été choisie de telle manière qu'elle puisse être transposable à l'échelle industrielle. [0066] L'activité biologique du plasma sanguin humain a été mesurée par le pourcentage d'activité résiduelle des facteurs de coagulation tel que décrit dans l'exemple 1 (facteur Vlllc, facteur V et facteur XI). L'activité de ces facteurs de coagulation a été mesurée par la méthode du temps de céphaline avec activateur décrite dans la notice d'utilisation STA C.K. PREST (Diagnostica Stago) (Réf 19). [0067] Les valeurs obtenues pour l'activité résiduelle des trois facteurs de coagulation pris comme références à l'issue de ces trois types de traitement (un en mode continu et deux en mode cyclique) pour une vitesse d'application de la pression correspondant à 3,33 MPa.s-1 et une température de l'ordre de 20°C sont données sur la figure 3. [0068] La comparaison de l'application d'une pression en mode cyclique (5 cycles de 2 minutes) par rapport à une application en mode continu pour une même durée de 10 minutes et pour une même valeur de la pression appliquée (la vitesse d'application et la température étant constantes) montre une différence de comportement entre le facteur Vlllc et le facteur V. [0069] Le facteur XI présentait toujours un comportement particulier par rapport aux deux autres facteurs de coagulation dans la mesure où son activité était peu ou pas (aux erreurs d'expérience près) perturbée par la pression. [0070] Tel que démontré dans cet exemple, le facteur V est plus sensible que le facteur Vlllc au mode d'application cyclique de la pression, c'est-à-dire que son activité résiduelle apparaît davantage sauvegardée pour une application cyclique que pour une application continue pour une même valeur de la pression. [0071] De plus de manière inattendue et surprenante, ce phénomène est plus accentué pour un mode cyclique correspondant à 5 cycles de 2 minutes par rapport à 20 cycles de 30 secondes. Exemple 4: mesure de l'activité biologique du plasma sanguin humain après traitement sous hautes pressions en fonction de la température [0072] Du plasma sanguin humain frais a été préparé selon le procédé décrit dans l'exemple 1. [0073] Les conditions de traitement étaient : une vitesse d'application de la pression constante et égale à 50 MPa.s-', une durée de traitement en continu de 10 minutes à une pression comprise entre 100 et 300 MPa. [0074] Les échantillons ont été placés dans un équipement générateur de hautes pressions par compression indirecte mis en place en interne avec comme milieu transmetteur l'éthanol. [0075] Dans cet exemple, deux températures différentes de traitement ont été testées, soit la température ambiante (approximativement 20°C), soit une température négative voisine de -15°C. [0076] La mesure de l'activité biologique du plasma sanguin humain a 2o été mesurée par le pourcentage d'activité résiduelle des facteurs de coagulation tel que décrit dans l'exemple 1 (facteur Vlllc, facteur V et facteur XI) mesurée par la méthode du temps de céphaline avec activateur décrite dans la notice d'utilisation STA C.K. PREST (Diagnostica Stago) (Réf 19). 25 [0077] Les pourcentages d'activité résiduelle (par rapport à l'activité avant traitement hautes pressions) des trois facteurs de coagulation pris comme références à l'issue de ces traitements (pour une vitesse d'application de la pression de 100 MPa en 2 secondes (soit 50 MPa.s-'), une durée de traitement de 10 minutes en mode continu) mais avec deux températures différentes (20°C et -15°C environ) sont données sur la figure 4. [0078] Il apparaît de manière surprenante et inattendue que les trois facteurs de coagulation ont des comportements différents vis-à-vis de la variation de température (entre 20°C et -15°C environ). Le facteur XI demeure insensible à la température, dans les limites des erreurs expérimentales, et conserve une activité proche de 90%, quelles que soient les conditions. En revanche, la sauvegarde d'activité des facteurs Vlllc et V est favorisée à basses températures, en particulier c'est pour le facteur V que ce phénomène semble le plus amplifié. Par exemple à 220 MPa à -15°C, l'activité du facteur V est supérieure à 50% (et répond donc aux normes de la Pharmacopée Européenne), alors que dans les mêmes conditions de pression mais à température ambiante, c'est à dire à 20°C environ, elle est très faible (environ 10%). [0079] Tel que démontré dans cet exemple, un effet de synergie important entre basse température et vitesse d'application de la pression existe pour la conservation de l'activité des facteurs Vlllc et V, nettement amplifié pour le facteur V. Exemple 5: mesure de l'activité biologique du plasma sanguin humain après traitement sous hautes pressions en associant trois paramètres caractéristiques du traitement : la vitesse d'application de la pression, le mode d'application de la pression et une basse température [0080] Du plasma sanguin humain frais a été préparé selon la procédure détaillée dans l'exemple 1. [0081] Les échantillons ont été placés dans un équipement générateur de hautes pressions par compression indirecte mis en place en interne avec comme milieu transmetteur l'éthanol. [0082] Le procédé de traitement a consisté à associer un ensemble de paramètres associés à la pression : vitesse d'application de la pression, mode d'application de la pression et température, en particulier basse température, c'est à dire une température de -15°C environ. [0083] Différentes valeurs de la pression comprises entre 100 MPa et 250 MPa ont été testées. Les valeurs des paramètres associés ont été de 50 MPa.s-' pour la vitesse d'application de la pression, de 5 cycles de 2 minutes pour le mode d'application et une température de -15°C environ. [0084] Le pourcentage d'activité résiduelle des facteurs de coagulation pris déjà comme références dans l'exemple 1 (facteur Vlllc, facteur V et facteur XI) a été comme dans l'exemple 1 mesurée par la méthode du temps de céphaline avec activateur. [0085] Les pourcentages d'activité résiduelle (par rapport à l'activité avant traitement hautes pressions) des trois facteurs de coagulation, à l'issue d'un traitement selon dans les conditions décrites ci-dessus, sont montrés sur la figure 5. [0086] Tel que démontré dans cet exemple, de manière surprenante et inattendue, un très grand effet de synergie est observé au travers de la combinaison des paramètres associés au paramètre pression pour les facteurs Vlllc et V (l'effet le plus important étant observé pour le facteur V). Par exemple à 240 MPa (soit 2400 bar) l'activité du facteur V est de l'ordre de 90% et celle du facteur Vlllc voisine de 70%. Ces valeurs d'activités sont compatibles avec la Législation française (J.O. n°123 du 28 mai 2003, Arrêté du 29 avril 2003 fixant la liste et les caractéristiques des produits sanguins labiles) (Réf 17) et permet, en outre l'utilisation thérapeutique du plasma sanguin humain obtenu. [0087] Si l'on se réfère à l'exemple N°1 où seule la valeur de la pression était prise en compte, on observait à 250 MPa une valeur de l'activité proche de 10% pour le facteur Vlllc et proche de zéro pour le facteur V. [0088] Tel que démontré dans cet exemple, le procédé de l'invention via la combinaison des 3 paramètres associés à la pression : vitesse d'application de la pression, mode d'application de la pression et température permet de manière surprenante le maintien de l'activité des facteurs de coagulation et donc le maintien de l'activité biologique du plasma sanguin humain. Exemple 6 : exemple d'inactivation d'un agent pathogène dans le plasma sanguin humain sous hautes pressions en fonction de la température. [0089] Staphylococcus aureus est un agent pathogène bien identifié et provoque de nombreuses maladies nosocomiales. Cet agent pathogène a été choisi comme modèle dans cet exemple. [0090] Une suspension dense, c'est à dire supérieure à 108 UFC/mL (UFC : Unité Formant Colonie) de S. aureus (ATCC 6538) a été préparée dans du bouillon tryptone-sel (TS) (AES Chemunex) à partir d'une culture de 48h sur gélose trypticase soja (TCS) (AES Chemunex). Cette suspension a servi à contaminer du plasma sanguin humain à raison de 10 mL de suspension pour 300 mL de plasma. [0091] Les échantillons de plasma contaminés ont alors été placés dans des tubes stériles et étanches, puis conservés au congélateur dans l'attente de traitement par un procédé d'inactivation. [0092] Avant et après procédé d'inactivation, un dénombrement des échantillons est réalisé afin de déterminer l'efficacité destructrice de ce traitement. Pour cela, des dilutions en cascade des échantillons sont réalisées dans du bouillon TS. Pour chaque dilution, deux boîtes de pétri sont ensemencées de la manière suivante : 1 mL de la dilution est placé au fond de la boîte puis de la gélose TCS en surfusion est versée. Après homogénéisation et gélification, les boîtes de pétri sont mises à l'étuve à 35°C pendant 48h. Les boîtes contenant entre 15 et 300 colonies isolées sont ensuite sélectionnées pour le dénombrement, et, après comptage des colonies, la concentration en S. aureus est déterminée par le calcul suivant : N= (n, +O,1xn2)xd avec N : concentration en S. aureus (en UFC/mL) Ec: somme des colonies comptées sur toutes les boîtes retenues ni : nombre de boîtes retenues à la première dilution n2 : nombre de boîtes retenues à la deuxième dilution d : taux de dilution de la première dilution [0093] L'efficacité destructrice du traitement est ensuite calculée de la façon suivante : ED=-log N No avec ED : efficacité destructrice N : concentration en S. aureus après traitement hautes pressions No : concentration en S. aureus avant traitement hautes pressions [0094] Le traitement d'inactivation mis en oeuvre était celui décrit à l'exemple N°5. Pour une valeur constante de la pression (200 MPa), les valeurs des paramètres associés ont été une vitesse de 50 MPa.s', 5 cycles de 2 minutes pour le mode d'application. Seule la température a été prise en compte comme variable (de -25°C environ à +35°C environ). [0095] Les échantillons ont été placés dans un équipement générateur de hautes pressions par compression indirecte mis en place en interne avec comme milieu transmetteur l'éthanol. [0096] La figure 6 montre l'effet de la température au cours d'un tel traitement sur son efficacité destructrice vis-à-vis de S. aureus. [0097] De manière tout à fait inattendue et surprenante, il apparaît un domaine étroit en température entre -10°C et -5°C où l'efficacité destructrice de S. aureus est amplifiée. Ce même phénomène est observé en changeant avec le même appareillage la nature du milieu transmetteur : le mélange glycol/eau (Kryo 30 Lauda) au lieu de l'éthanol. Pour les très basses températures (température inférieure à -10°C), le rôle de la température semble critique puisque la sensibilité de S. aureus vis-à-vis du traitement imposé décroît très rapidement (l'efficacité destructrice ED diminuant drastiquement) alors que la variation est plus progressive pour les températures supérieures à -5°C. [0098] Tel que démontré dans cet exemple, le procédé de l'invention via la combinaison appropriée des 3 paramètres associés à la valeur de la pression: vitesse d'application de la pression, mode d'application de la pression et température a un effet synergique sur l'inactivation de S. aureus. Exemple 7 : exemple d'inactivation d'un agent pathogène dans le plasma sanguin humain sous hautes pressions en fonction de la température et de la valeur de la pression [0099] Dans l'exemple 6, la valeur de la pression avait été fixée à 200 MPa. Tout en conservant les valeurs des paramètres associés à la pression (vitesse d'application de 50 MPa .s-' et mode d'application cyclique de 5 cycles de 2 minutes), les inventeurs ont cherché à évaluer si l'effet surprenant lié à une amplification de l'efficacité destructrice de S. aureus pour un domaine étroit de température pouvait être observé pour diverses valeurs de la pression (200 MPa, 250 MPa, 300 MPa). [00100] Les méthodes de préparation et de dénombrement des échantillons sont identiques à celles décrites dans l'exemple N°6. [00101] Les échantillons ont été placés dans un équipement générateur de hautes pressions mis en place en interne avec comme milieu transmetteur l'éthanol. [00102] L'analyse de la figure 7 donnant l'évolution de l'efficacité destructrice de S. aureus en fonction de la température pour trois valeurs de la pression, tous les autres paramètres associés au traitement demeurant constants (vitesse d'application de 50 MPa.s-1 et mode d'application cyclique de 5 cycles de 2 minutes) montre un phénomène tout à fait particulier. [00103] Tel que démontré dans cet exemple, dans un domaine de pression compris entre 200 et 300 MPa, il semble que l'inactivation du pathogène soit maximum dans un intervalle de température particulier et étroit de -5°C�2 °C. Exemple 8: exemple d'inactivation d'agents pathogènes dans le plasma sanguin humain sous hautes pressions en fonction de la température. [00104] Dans l'exemple 6, la valeur de la pression avait été fixée à 200 MPa. Dans cet exemple, les valeurs des paramètres associés à la pression étaient les suivants : vitesse d'application de 50 MPa.s"' et mode d'application cyclique de 5 cycles de 2 minutes. Les inventeurs ont cherché à déterminer si l'effet surprenant lié à une amplification de l'efficacité destructrice de S. aureus dans un intervalle de température particulier était observé pour d'autres agents pathogènes de la Pharmacopée Européenne tels que Pseudomonas aeruginosa (ATCC 9027), Candida albicans (ATCC 10231) et Aspergillus niger (ATCC 16404) en maintenant 200 MPa comme valeur de la pression (Figure 8). [00105] Les méthodes de préparation et de dénombrement des échantillons étaient identiques à celles décrites dans l'exemple 6, à l'exception du milieu de culture pour C. albicans et A. piger, pour lesquels la gélose utilisée est la gélose Sabouraud (AES Chemunex). [00106] Les échantillons ont été placés dans un équipement générateur de hautes pressions par compression indirecte mis en place en interne avec comme milieu transmetteur l'éthanol. [00107] L'analyse de la figure 8 démontre de manière tout à fait surprenante et inattendue que malgré des différences très importantes au niveau de la structure des agents pathogènes : deux bactéries, dont un coque Gram positif (S. aureus) et un bacille Gram négatif (P. aeruginosa), 1 o une moisissure sous forme de spores (A. piger), et une levure (C. albicans), l'amplification de l'efficacité destructrice pour un domaine particulier ou intervalle de températures particulier. Cet intervalle de température recouvrait (aux erreurs d'expériences près) celui de S. aureus (Température égale à -6°C � 5°C). 15 [00108] La différence observée à très basse température, c'est-à-dire des températures inférieures à -5°C, est fonction de la sensibilité de chacun des micro-organismes vis-à-vis notamment de la pression. [00109] Tel que démontré dans cet exemple, le procédé de l'invention via la combinaison particulière des paramètres associés à la valeur de la 20 pression (vitesse d'application de la pression, mode d'application de la pression et température) a un effet synergique sur l'inactivation d'un ensemble de cibles biologiques. Exemple 9: exemple d'inactivation d'un agent pathogènes sous 25 hautes pressions en fonction de la vitesse d'application de la pression [00110] Afin d'évaluer l'apport de la vitesse d'application de la pression dans le phénomène de synergie entre les trois paramètres associés au procédé d'inactivation (vitesse d'application de la pression, mode 3o d'application de la pression et température), du plasma sanguin humain contaminé par S. aureus (préparé selon le protocole décrit à l'exemple 6) a été traité dans les conditions suivantes : un mode d'application cyclique de 5 cycles de 2 minutes, une température d'environ -5°C, et une pression de 200 MPa, 250 MPa ou 300 MPa. Pour chacun de ces traitements, deux vitesses d'application de la pression ont été utilisées, à savoir 3,33 MPa.s-1 et 50 MPa.s-'. Les résultats obtenus sont présentés sur la figure 9. [00111] Les échantillons ont été placés dans un dispositif générateur de hautes pressions en phase liquide par compression directe de type � Framatome � et le milieu transmetteur était le mélange glycol/eau (Kryo 30 Lauda) pour la vitesse de 3,33 MPa.s-'. Un équipement générateur de hautes pressions par compression indirecte mis en place en interne avec comme milieu transmetteur l'éthanol a été utilisé pour la vitesse de 50 MPa.s"1 [00112] Les résultats présentés dans la figure 9 démontrent bien qu'il faut associer à la fois une vitesse d'application rapide (50 MPa.s-') à un mode d'application cyclique (5 cycles de 2 minutes) et une température négative (environ -5°C) afin d'obtenir l'effet synergique pour que l'inactivation de S. aureus soit la plus efficace. [00113] En particulier à 200 MPa, cet effet de synergie est bien démontré car en utilisant une vitesse d'application de 3,33 MPa.s', l'efficacité destructrice (inactivation du pathogène) du traitement était très faible, voir nulle, alors qu'en utilisant une vitesse d'application de 50 MPa.s-', elle est proche de 5 log. Exemple 10 : exemple de mise en oeuvre d'un procédé d'inactivation d'au moins un agent pathogène dans le plasma sanguin humain [00114] Afin d'évaluer l'effet de la vitesse d'application de la pression au cours d'un traitement cyclique (5 cycles de 2 minutes) à une température d'environ -5°C sur la sauvegarde de l'activité des facteurs de coagulation (F Vlllc et F V), deux vitesses d'application ont été testées (3,33 MPa.s"' et 50 MPa.s-') pour des valeurs croissantes de pression (150 MPa à 250 MPa). [00115] Les échantillons ont été placés dans un dispositif générateur de hautes pressions en phase liquide par compression directe de type � Framatome � et le milieu transmetteur était le mélange glycol/eau (Kryo 30 Lauda) pour la vitesse de 3,33 MPa.s"1. Un équipement générateur de hautes pressions par compression indirecte mis en place en interne avec comme milieu transmetteur l'éthanol a été utilisé pour la vitesse de 50 MPa.s-' [00116] Les pourcentages d'activité résiduelle (par rapport à l'activité avant la mise en oeuvre d'un procédé d'inactivation) des facteurs de coagulation Vlllc et V, à l'issue de la mise en oeuvre d'un procédé d'inactivation dans les conditions décrites ci-dessus, sont montrés sur la figure 10. [00117] L'examen de la figure 10 démontre que la valeur de la vitesse d'application a peu d'influence sur la sauvegarde de l'activité des facteurs Vlllc et V. II a été montré, dans l'exemple 9, qu'une vitesse d'application rapide (50 MPa.s-l) permettait d'augmenter considérablement (effet synergique) l'efficacité destructrice (inactivation) du procédé d'inactivation d'agents pathogènes quand ce paramètre est combiné de façon appropriée à un traitement cyclique (5 cycles de 2 minutes) et une basse température (T = -6°C � 5°C). [00118] De plus, il est important de remarquer qu'en choisissant une pression de 200 MPa, une vitesse d'application de la pression de 50 MPa.s-', un cyclage de 5 cycles de 2 minutes et une température de l'ordre de -5°C, la sauvegarde d'activité du facteur Vlllc est supérieure à 70%, et celle du facteur V supérieure à 50%, ce qui répond à la fois aux exigences de la Pharmacopée Européenne (activité des facteurs de coagulation supérieure à 50%) (Ref. 6) mais aussi à celles de la Législation Française (activité des facteurs de coagulation supérieure à 50% sauf pour le facteur Vlllc pour lequel l'activité doit être supérieure à 70%) (Ref. 17). [00119] Tel que démontré dans cet exemple, la présente invention permet donc d'inactiver au moins un agent pathogène dans le plasma sanguin humain tout en conservant son activité biologique. Exemple 11 : inactivation de Plasmodium berghei (hématozoaire) et Trypanosoma brucei brucei (protozoaire extracellulaire) par mise en oeuvre d'un procédé de l'invention [00120] Un procédé d'inactivation d'un agent pathogène selon l'invention a été ensuite testé sur des modèles de parasites susceptibles de contaminer les produits sanguins d'une part Plasmodium berghei (hématozoaire) et d'autre part Trypanosoma brucei brucei (protozoaire extracelulaire). [00121] Pour chacun des deux parasites, 10 échantillons de sang de souris (Mus musculus) contaminés ont été traités. Les valeurs des paramètres associés à la pression étaient : une vitesse d'application de la pression de 50 MPa.s-', un mode d'application de la pression de 5 cycles de 2 minutes, une température d'environ -5°C, une pression initiale de 0,1 MPa et une pression de 200 MPa. [00122] Les échantillons ont été placés dans un équipement générateur de hautes pressions par compression indirecte mis en place en interne avec comme milieu transmetteur l'éthanol. [00123] En parallèle, un échantillon témoin non traité a été conservé ainsi qu'un témoin de température (échantillon équilibré à -15°C pendant 30 minutes). Chaque échantillon a ensuite été observé en microscopie optique puis injecté à une souris. Les conclusions de l'observation microscopique d'une part et les résultats concernant le nombre de souris survivantes un mois après l'injection sont présentés dans le tableau 1 ci- dessous [00124] tableau 1 : résultats microscopiques et nombre de souris survivantes Plasmodium berghei Trypanosoma brucei brucei Echantillo Echantillo Témoin Témoin contamin Témoin Témoin contamin contnon températur é non températur é amin e traité par contamin e traité par é le é le Procédé Procédé Observation Voir la parasites Voir la Parasites 50% de Pas de microscopiqu figure vivants figure nombreu parasites parasites e 10A 10B x et vivants, vivaces peu vivaces Nombre de 0/1 0/1 10/10 0/1 0/1 10/10 souris survivantes [00125] Les résultats de l'observation microscopique sont en outre illustrés à la figure 11. [00126] Tel que démontré dans cet exemple, un procédé d'inactivation selon l'invention est efficace pour l'inactivation d'une part de Plasmodium berghei (hématozoaire) et d'autre part de Trypanosoma brucei brucei (protozoaire extracelulaire). [00127] Tel que démontré dans cet exemple, le procédé de l'invention permet d'inactiver des agents pathogènes tels que des parasites tout en conservant l'activité biologique du plasma sanguin humain. Exemple 12 : mise en oeuvre d'un procédé selon l'invention sur la protéine infectieuse du prion présente dans un échantillon de plasma sanguin humain [00128] La protéine infectieuse du Prion constitue actuellement l'un des 20 objectifs de la sécurisation de produits biologiques. Le prion de hamster a été choisi comme modèle. [00129] Du plasma sanguin humain contaminé par du broyat de cerveau de hamster infecté par la protéine infectieuse du prion (263 K) (EFS Pyrénées-Méditerrannée) a été utilisé. [00130] A partir desdits broyats de cerveau de hamster infecté par la souche 263 K (IBH), des échantillons de plasma sanguin humain (1 mL) ont été contaminés puis placés dans des tubulures fermées de manière étanche d'une part et résistant à la pression d'autre part. [00131] En parallèle des échantillons négatifs (non contaminés) ont été préparés dans les mêmes conditions en ajoutant alors du broyat de cerveau de hamster sain (NBH). Les tubulures ont été placées aussitôt après préparation dans la carboglace. [00132] Les échantillons ont été traités par paire, une tubulure contenant du plasma contaminé par le broyat de cerveau infecté et une tubulure contenant du plasma contaminé par le broyat de cerveau non infecté, en utilisant un procédé d'inactivation d'agent pathogène selon l'invention associant la combinaison appropriée de paramètres associés à la pression c'est à dire une vitesse d'application de la pression de 100 MPa en 2 secondes, soit une vitesse d'augmentation de la pression et de diminution de la pression de 50 MPa.s-'' un mode d'application de la pression de 5 cycles de 2 minutes, soit la compression de l'échantillon, le maintien de la pression pendant 120 secondes et la diminution de la pression, la compression étant égale à une pression PI de 200 MPa, la température de l'échantillon à la pression PI était d'environ -5°C. Les échantillons ont été placés dans un équipement générateur de hautes pressions par compression indirecte mis en place en interne avec comme milieu transmetteur l'éthanol. [00133] L'analyse des échantillons a été menée au travers du protocole suivant : extraction de la protéine prion par précipitation au NaPTA 4%, digestion à la protéinase K à 200�g/mL, détection de la PrPsC par Western Blot (l'anticorps utilisé étant l'anticorps 3F4). [00134] Une comparaison 2 à 2 des signaux obtenus, le prion migrant à environ 27-29 kDa pour les échantillons infectés, a montré une très forte diminution de la quantité de PrPSO pour ceux ayant été soumis à un procédé selon l'invention par rapport à ceux non traités (Figure 12 comparaison des échantillons traités HPI1 à HPI4 par rapport aux échantillons non traités TI1 à TI4). Ces résultats étaient en outre reproductibles pour les 4 couples d'échantillons infectés (témoin T non traité et échantillon traité par le procédé de l'invention). II apparaît donc clairement que la protéine infectieuse PrP$0 a été modifiée par la mise en oeuvre d'un procédé selon l'invention ; ce qui suggère une répercussion négative quant à son pouvoir infectieux. [00135] Tel que démontré dans les exemples précédents, le procédé de la présente invention, permet d'inactiver au moins un agent pathogène par exemple un agent pathogène dans le plasma sanguin humain, tout en conservant l'activité biologique dudit plasma. Ainsi le plasma obtenu peut, par exemple être utilisé dans le domaine thérapeutique. Liste des références C. Naegelen, H. Isola, D. Denis, J-P. Maurel, R. Tardivel, S. Bois, C. Vignoli, J-P. Cazenave . 2009. Evolution des techniques de préparation des produits sanguins labiles (PSL) : inactivation des pathogènes dans les PSL. Transfusion Clinique et Biologique vol.16 :179-189 A. Jofré, T. Aymerich, N. Grèbol, M. Garriga. 2009. 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Defect and Diffusion Forum vol.208-209: 55-58 (Réf 6) Pharmacopée Européenne 5.6. Plasma humain (mélange de) traité pour viro-inactivation. 01/2007 :1646. pp 2439-2441 (Réf 1) 10 (Réf 2) 15 (Réf 3) 20 (Réf 4) (Réf 7) A. Kunert, J. Losse, C. Gruszin, M. Hühn, K. Kaendler, S. Mikkat, D. Volke, R. Hoffmann, T. Sakari Jokiranta, H. Seeberger, U. Moellmann, J. Hellwage, P. F. Zipfel. 2007. Immune evasion of the human pathogen Pseudomonas aeruginosa: elongation factor Tuf is a factor H and plasminogen binding protein. The Journal of Immunology vol.179(5): 2979-2988 A. M. Matser, C. Van Der Ven, C. W. N. Gouwerok, D. De Korte. 2005.High-pressure processing for preservation of blood products. High Pressure Research vol.25(1): 37-41 R. A. Hess, M. M. Manak, S. K. Dusing. 2002. Pressure cycling inactivation of pathogens in biological materials used for therapeutics or vaccines. WO 02/056824 F. Tao, N. Lawrence, C. Li, J. Behnke, J. Lathey, M. Manak, R. T. Schumacher. 2003. 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(Réf 16) Pharmacopée Européenne. 5.0 01/2005: 30203 (Réf 17) J.O. n°123 du 28 mai 2003 , Arrêté du 29 avril 2003 fixant la liste et les caractéristiques des produits sanguins labiles. (Réf 18) Transfusion de plasma frais congelé : produits, indications. 2002. Agence Française de Sécurité Sanitaire des Produits de Santé. (Réf 19) Notice d'utilisation. STA ù C.K. PREST�. Diagnostica Stago (Réf 20) J.A. Laugharn, D.W .Bradley., R.A. Hess, 2000. Rapid Cryobaric sterilization and vaccine preparation, WO 00/48641 Revendications1. Procédé d'inactivation d'au moins un agent pathogène d'un échantillon de plasma sanguin humain caractérisé en ce qu'il comprend au moins 5 cycles comprenant chacun : - la compression dudit échantillon de sa pression initiale Po à une pression Pi, Pi étant compris de 190 à 210 MPa, la compression de Po à Pi, la température dudit plasma à la pression Pi étant compris de -10°C à -3°C du fait de la compression, le maintien éventuel de la pression Pi durant un temps compris de 110 à 130 secondes, et la détente de l'échantillon jusqu'à la pression Po, la vitesse d'augmentation de la pression pour ladite compression et la vitesse de diminution de la pression pour ladite détente étant réalisée à une vitesse v1 de 47,5 à 52,5 MPa/s"1. 2. Procédé selon la revendication 1 dans lequel la compression et/ou la détente est adiabatique. 3. Procédé selon la revendication 1 ou 2, dans lequel l'agent pathogène est choisi dans le groupe comprenant les bactéries, les moisissures, les levures, les virus, les protéines infectieuses et/ou les parasites. 4. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, dans lequel l'échantillon est à une température initiale avant compression comprise de -18°C à -3°C. 25 5. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, dans lequel la pression initiale Po est de 0,1 MPa. 6. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, dans lequel la pression PI est maintenue pendant une durée de 120 secondes. 7. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, dans lequel la pression PI est égale à 200 MPa. 8. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 7, dans lequel l'échantillon est dans un emballage hermétique. 9. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 8, 15 dans lequel la pression est appliquée de manière isostatique au moyen d'un milieu transmetteur de pression. 10. Procédé selon la revendication 9, dans lequel le milieu transmetteur de pression est un milieu liquide polaire ou apolaire. 11. Procédé selon la revendication 9 ou 10, dans lequel le milieu transmetteur est l'éthanol et/ou un mélange glycol et eau. 12. Utilisation du procédé selon la revendication 1 pour 25 l'élimination sélective d'au moins un agent pathogène dans le plasma sanguin humain. 13. Plasma sanguin humain obtenu par le procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 12. 20 30