FR 2945940 A1 20101203 FR 0953620 A 20090602 COMPOSITION COSMETIQUE A BASE D'ESTER D'OPC DE PIN L'invention concerne une composition cosmétique pour réparer et éventuellement prévenir les effets du vieillissement de la peau à base d'un extrait d'écorce de pin maritime dont les oligomères procyanidoliques (OPC) sont estérifiés avec un acide gras. Ces compositions sont utiles notamment pour augmenter la synthèse de collagène, pour apaiser la peau, ou encore protéger la peau des radicaux libres. Les Oligomères ProCyanidoliques (OPC), également appelés proanthocyanidines ou oligomères proanthocyanidiques, sont des molécules naturelles très répandues dans la nature. En effet, on les trouve dans les légumes, les fruits, les céréales mais également dans les pépins de raisin et l'écorce de pin. L'intérêt nutritionnel et physiologique de ces molécules est lié à leurs propriétés antioxydantes et à leur bénéfice sur le système cardiovasculaire. Les OPC appartiennent à la famille chimique des polyphénols et plus particulièrement à la classe des flavonoïdes, composés reconnus pour leurs propriétés antioxydantes. Les OPC sont constitués par une ou plusieurs unités monomères répétées de flavan-3-ol, ces unités étant indépendamment choisies parmi la catéchine, ou l'épicatéchine ou épicatéchine gallate. Ces unités sont généralement répétées de 2 à 4 fois, les OPC les plus courants étant généralement sous forme dimère. Structure biochimique d'un OPC (trimère de catéchine) Toutefois, les fonctions phénoliques des OPC rendent ces composés particulièrement sensibles aux différents facteurs de dégradation tels que la lumière, l'air et les pH acide ou basique. Cette instabilité constitue, dans la majorité des cas, un frein à l'exploitation de leurs effets bénéfiques. Pour stabiliser ces composés, il a notamment été proposé d'estérifier les extraits oligomères polyphénoliques par des dérivés d'acides gras à longues chaînes hydrocarbonées (FR 2 723 943). Les inventeurs ont maintenant mis en évidence qu'un extrait d'écorce de pin dont les oligomères procyanidoliques (OPC) sont estérifiés avec un acide gras, présentait des propriétés cosmétiques particulièrement intéressantes.. Il a ainsi été mis en évidence que les esters d'OPC extraits d'écorce de pin permettaient d'augmenter la synthèse de collagène par les fibroblastes de derme humain, et donc de réparer les effets du vieillissement cutané. Il a également été mis en évidence que ces esters d'OPC présentaient en outre des propriétés anti- inflammatoires et anti-radicalaires, les rendant ainsi particulièrement utiles pour apaiser la peau et prévenir les effets du vieillissement cutané. La présente invention a ainsi pour objet une composition cosmétique pour réparer les effets du vieillissement cutané comprenant : a) les oligomères procyanidoliques (OPC) extraits d'écorces de pin, lesdits oligomères étant estérifiés avec au moins un acide gras ; et b) un véhicule cosmétiquement acceptable. Selon un mode de réalisation préféré, les compositions cosmétiques selon l'invention comprennent : a) un extrait d'écorce de pin dont les oligomères procyanidoliques (OPC) sont estérifiés avec au moins un acide gras, et b) un véhicule cosmétiquement acceptable. Par � véhicule cosmétiquement acceptable �, on entend un véhicule adapté pour une utilisation en contact avec des cellules humaines et animales, en particulier les cellules de l'épiderme, sans toxicité, irritation, réponse allergique indue et similaire, et proportionnée à un rapport avantage/risque raisonnable. Les extraits d'écorce de pin, notamment maritime contiennent une grande variété d'oligomères procyanidoliques, dont notamment des monomères de catéchine, et de taxifoliol ainsi que des oligomères procyanidoliques de 2 à 5 unités flavan-3-ol, les monomères et les dimères étant présents de façon majoritaire. La composition des extraits d'écorce de pin se différencie de façon qualitative et/ou quantitative de celle des autres extraits d'origine végétale, en particulier des extraits de pépin de raisin, que l'on trouve notamment dans le commerce sous la dénomination VITAFLAVAN�. Plus précisément, les oligomères procyanolidiques extraits d'écorce de pin comprennent notamment du taxifoliol, du taxifoliol glucoside, du férulate glucoside et différents acides phénoliques, qui ne sont pas présents dans les extraits de pépin de raisin. A la différence de ceux-ci, ils ne comprennent pas en revanche, d'épicatéchine ou d'épicatéchine gallate.. Les OPC représentent généralement environ 70% en poids du poids total de l'extrait d'écorce de pin. Les extraits d'écorce de pin maritime sont disponibles commercialement (OLIGOPIN�, DRT). Ils peuvent être également obtenus par un procédé d'extraction classique tel que celui décrit dans le brevet FR 998 508. L'extrait d'écorce de pin peut être notamment un extrait de pin maritime français (Pinus pinaster), tel que le pin des Landes. Selon un mode de réalisation préféré de l'invention, les oligomères procyanidoliques (OPC) contenus dans les extraits d'écorce de pin maritime sont estérifiés avec un acide gras selon le procédé décrit dans la demande de brevet FR 2 723 943. Plus particulièrement, les OPC sont estérifiés selon le procédé comprenant les étapes de : a) mise en contact de l'extrait d'écorce de pin maritime dans un milieu liquide non solvant pour ledit extrait mais solvant pour les esters à obtenir, de façon à obtenir une suspension ; b) ajout à ladite suspension d'au moins une amine tertiaire aliphatique à bas poids d'ébullition, en présence d'une quantité catalytique d'au moins une base organique autre que la pyridine, et c) introduction dans ce mélange d'au moins un chlorure d'acide gras, le mélange réactionnel étant agité à une température inférieure à 40°C puis concentré par évaporation pour obtenir un extrait dont les OPC sont estérifiés. De préférence, les OPC sont estérifiés par des acides gras saturés, notamment l'acide palmitique et l'acide stéarique, plus préférentiellement l'acide palmitique L'application d'une composition cosmétique selon l'invention est effectuée par voie topique. La composition est destinée plus particulièrement au traitement de la peau et peut se présenter sous forme d'onguent, de crème, d'huile, de lait, de pommade, de poudre, de tampon imbibé, de solution, de gel, de spray, de lotion, de suspension, de savon. Les compositions selon l'invention peuvent être des compositions cosmétiques sous la forme d'émulsion huile-dans-eau ou eau-dans-huile, ou d'émulsions multiples, de micro-émulsion, de gel hydroalcoolique, de crème, d'huile, de lotion hydroalcoolique. De manière préférentielle, les compositions cosmétiques selon l'invention peuvent comprendre de 0,1 à 2,5% dudit extrait estérifié exprimé en poids par rapport au poids total de la composition, de préférence de 0,2 à 1,0%. Les compositions cosmétiques selon l'invention sont particulièrement utiles pour augmenter la synthèse de collagène, notamment par les fibroblastes de derme humain. Elles sont en outre avantageusement utiles pour apaiser la peau, et/ou pour protéger la peau des radicaux libres. Ils sont ainsi particulièrement utiles pour prévenir les effets du vieillissement cutané, notamment le photovieillissement. L'invention a également pour objet l'utilisation d'une composition cosmétique comprenant : a) les oligomères procyanidoliques (OPC) extraits d'écorce de pin, lesdits oligomères étant estérifiés avec au moins un acide gras ; et b) un véhicule cosmétiquement acceptable, pour réparer les effets du vieillissement cutané. Les exemples qui suivent illustrent l'invention sans toutefois la limiter.30 EXEMPLES Exemple 1 Préparation d'un extrait d'écorce de pin maritime contenant des OPC estérifiés L'extrait d'écorce de pin (Oligopin�) est estérifié avec l'acide palmitique selon le procédé décrit dans la demande de brevet FR 2 723 943. Dans les exemples qui suivent, les termes � esters d'OPC de pin � se réfèrent à l'extrait d'écorce de pin estérifié selon le présent exemple 1. Exemple 2 Etude de l'activité cytotoxique des esters d'OPC de pin sur une monocouche de cellule en culture 1. Objectif de l'étude Le but de cette étude est d'évaluer, par un test in vitro, la capacité des esters d'OPC de pin préparés selon l'exemple 1 à induire des effets cytotoxiques sur monocouche de fibroblastes humains. 2. Principe de l'étude L'objectif de l'étude est d'évaluer la capacité des esters d'OPC de pin à induire des effets cytotoxiques sur une culture primaire de fibroblastes humains normaux. Après application du produit sur les cellules pendant 24 heures, la viabilité cellulaire est évaluée par la mesure de l'activité de la succinate déshydrogénase mitochondriale des cellules vivantes. Cette enzyme transforme le MTT (bromure de 3(4,5-diméthylthiazol-2-yl)-2,5-diphényltétrazolium) en cristaux de formazan bleu. Après dissolution de ces cristaux, on réalise une lecture spectrophotométrique. Les absorbances mesurées sont proportionnelles au nombre de cellules vivantes. 3. Système d'essai Les cellules utilisées sont des fibroblastes de tissu de peau humaine (prépuce enfant caucasien), au passage 1. 4. Déroulement de l'étude Eléments de référence : Les contrôles suivants sont inclus à chaque analyse : - Témoin négatif : milieu de culture complet - Témoin positif : SDS Définition des séries : Six dilutions de chaque échantillon, préparées dans du milieu de culture à 0,005 % de tween 60 et 0,05 % d'huile de coton, sont testées à raison de 5 puits de tests par concentration. Les éléments de référence sont testés sur 5 puits. 10 5. Expression et interprétation des résultats L'absorbance est mesurée à 540 nm. Les résultats sont exprimés sous forme de pourcentage de mortalité comparé au contrôle négatif : Abs contrôle négatif ù Abs échantillon 15 % mortalité = Abs contrôle négatif x 100 6. Résultats UA MTT (N=8 Ecart type Mortalité en Témoin négatif (solvant 0,245 0,016 0°/0 Témoin positif 0,065 0,011 73% Esters d'OPC de pin 1000 pg/m I 500�g/ml 100�g/ml 50�g/m1 10�g/ml 1 pg/ml 0°/0 4°/0 9°/0 8°/0 0°/0 10% 0,262 0, 009 0,237 0, 034 0,224 0, 023 0,227 0,019 0,272 0, 026 ......................... 0,221 0, 027 Le contrôle positif présente une mortalité supérieure à 30%, ceci valide le test. 7. Conclusion Dans les conditions expérimentales retenues, les esters d'OPC de pin selon l'exemple 1 ne présentent pas d'effet cytotoxique significatif. Pour toutes études d'efficacité, la concentration maximale utilisée devra être 1000 pg/ml. Exemple 3 Etude de screenincl du potentiel anti-inflammatoire et anti-radicalaire 1. Principe de l'étude On reconstruit in vitro un épiderme humain dans des inserts de culture. On dépose sur le � stratum corneum � un disque de papier filtre sur lequel a été déposée la substance à l'essai (traitement préventif). 24 heures après, on irradie par les UVB puis on applique de nouveau la substance à l'essai (traitement curatif). 24 heures après, on réalise : - une étude de la cytotoxicité (MTT), - un dosage de l'IL-1 a, médiateur pro-inflammatoire dans le milieu de culture, - un dosage de MDA (malonaldéhyde) (produit terminal formé lors du processus de peroxydation lipidique induit par la formation d'espèces radicalaires, ou d'espèces activées par l'oxygène). 2. Identification de la substance à l'essai OPC estérifié selon l'exemple 1 en solution à 1 % (p/p) dans le solvant E (50 isopropanol - 50 % isopropyl myristate en p/p) 3. Protocole 3.1. Préparation du système réactif : feuillets épidermiques humains reconstruits : - Culture de kératinocytes humains au 3e passage exempts de mycoplasmes - Les kératinocytes sont ensemencés à la densité de 100 x 103 cellules/cm2 dans des inserts dont le fond est constitué d'une membrane en polycarbonate (porosité 0,4 �m û 1 cm2). - Les cellules sont incubées à 37°C en atmosphère humide contenant 5 % (v/v) de CO2 pendant 24 heures, en "situation immergée" dans le milieu de culture : MCDB/153 supplémenté par l'EGF (5 ng/mL), l'insuline (5 �g/mL), l'hydrocortisone (0,5 �g/mL), le BPE (70 �g/mL). - Le milieu de culture est remplacé par le même milieu de culture supplémenté par 1 mM de Ça++ afin d'induire la stratification de la monocouche en "situation immergée" pendant 6 jours. Le milieu de culture est changé tous les trois jours. - Le feuillet épidermique est mis en "situation émergée" au 6e jour, c'est-à-dire qu'il n'est plus nourri que par l'intermédiaire des cellules basales, le stratum corneum étant exposé à l'air. Le milieu de culture est changé tous les trois jours. 3.2. Préparation de la substance à l'essai : Au 14e jour d'incubation, le milieu de culture est changé et remplacé par le même milieu de culture supplémenté par des antibiotiques à 1% (10 000 U Penicillin û 10 000 �g/mL Streptomycin û 25 �g/mL Amphotericin) 20 �L de la substance à l'essai (3 concentrations non-cytotoxiques), ou 20 �L des témoins négatifs (milieu de culture) ou des témoins solvants sont appliqués, en conditions stériles, sur un disque de papier filtre (Whatman n°3MMChr) couvrant la surface de l'épiderme reconstruit, le côté sur lequel ont été déposés la substance à l'essai, et les témoins, au contact du � stratum corneum �. 3.3. Définition des séries : Les séries suivantes sont mises en oeuvre en triplicate : - 3 séries substance à l'essai (5, 50 et 500 �g/mL) constituées de 3 épidermes chacune (à irradier), - 1 série témoin négatif absolu (non irradiée), - 1 série témoin négatif absolu (à irradier), - 1 série témoin solvant (non irradiée), - 1 série témoin solvant (à irradier), - 1 série témoin positif 1 (Vit E : 200 �g/mL) (à irradier), - 1 série témoin positif 2 (Indométhacine : 101.1g/mL) (à irradier), Les huit premières séries sont mises à incuber pendant 24 heures à 37°C en atmosphère humide contenant 5% (v/v) de CO2 (traitement préventif pour les séries traitées). La neuvième série, correspondant au témoin positif 2 (Indométhacine), est constituée en déposant 20 �L d'une solution d'indométhacine à 10 �g/mL sur un disque de papier filtre (Whatmann n° 3 MMChr) déposé au contact de l'épiderme reconstruit et incubé pendant 3 heures à 37°C, 21 h après la mise en oeuvre des séries précédentes. Ensuite, les disques de papier filtre sont soigneusement retirés et toutes les séries sont irradiées par les UVB (0,6 J/cm2) (Spectroline modèle X-15N/F, = 312 nm) exceptée la série correspondant au témoin négatif absolu et au témoin solvant. Le traitement curatif est ensuite mis en oeuvre comme décrit plus haut pour le traitement préventif sur une période de 24 heures, sauf pour la série témoin positif 2 (Indométhacine). 3.4. Estimation de la population cellulaire (Test au MTT*) : Le test au MTT est réalisé selon les conditions décrites dans les publications Hausen M.B, Nielsen S.E. et Berg K. Re-examination and further development of a precise and rapid dyemethod for measuring cell growth/cell kilt. J. Immunol. Methods. 1989, 119, 203 ; et Mosmann T., Rapid colorimetric assay for cellular growth and survival : Application to proliferation and cytotoxic assays, J. Immunol. Methods. 1983, 65, 55-63. A la fin du temps d'incubation choisi, le disque de papier Whatman est soigneusement prélevé, le � stratum corneum � rincé, et la membrane poreuse portant le feuillet épidermique est détachée de l'insert à l'aide d'un bistouri. Les milieux de culture sont utilisés pour le dosage de l'IL-1 a et du MDA. Le feuillet épidermique est : - rincé avec du PBS (2 fois), - incubé pendant 3 heures, à 37°C, à l'obscurité, en présence de 2 mL de MTT (bromure de 3-{4,5-dimethylthiazol-2-yl}- 2,5 - diphenyl tetrazolium) à 0,5 mg/mL de milieu de culture, - rincé avec du PBS (2 fois). Les cristaux violets de formozan produits par le clivage du MTT par les enzymes mitochondriaux sont dissous dans 2 mL de DMSO sous agitation douce pendant une heure à température ambiante. Pour chaque feuillet, on pipette 200 �L de la solution obtenue dans une plaque de 96 puits pour réaliser la spectrométrie avec un lecteur de plaques (FL600 - BIO-TEK) à À = 540 nm. 3.5. Dosage de l'IL-1 a : Le dosage de l'IL-1 a est réalisé dans les milieux de culture prélevés (n = 3) dilués au 1/10' et au 1/20ème conformément au protocole décrit dans le kit de dosage. 3.6. Dosage du MDA : Préparation de la gamme étalon de MDA : - solution mère à 10 �M de malonaldéhyde bi[diméthylacetal] dans l'acide sulfurique à 1 % (v/v) (2 heures à température ambiante), - des dilutions sont réalisées entre 0,1 et 10 �M (0,1 - 1 - 2,5 - 5 et 10 �M). 500 �L de milieu de culture (ou 500 �L de gamme étalon) sont mélangés énergiquement au Vortex à 1 mL d'une solution � TCA, TBA, HCI � (TCA (acide trichloroacétique) à 0,15 % (p/v), de TBA (acide 2-thiobarbiturique) à 0,375 0/0 (p/v), d'HCI 0,25 M (chauffée 15 minutes à 100° C pour dissoudre le TBA, puis laissée refroidir). Le mélange est mis à incuber 15 minutes à 100° C et la DO mesurée à À = 535 nm contre un blanc constitué de la solution � TCA, TBA, HCI �. 11 4. Résultats Concentration 0,359 204 5 0..200 22: , 913 OPC estérifié en solution à 0;265 .4D9 1541 + UVB 0,3U 247. 5.63 0,295 -2= 9,071 252 :66 94C 438: 0,334 1:,3 .673 0,306 -� :9,025 2e. 34 783 81 9;259 .4'1.4 D'Al Témoin solvant 1103 0ä218 9,057 305 1357 .203. 9,.M4 13.2.7 Témoin négatif CU,79 19.1 tf8i-4 T=V.B 174 0,236 0,062 238 Ù22 264. 0;214 3.02 1414. Inrioméshacine 0,232 130. 0,245 9:,039 el 420 0ä38:3 59 15.3 Témoin solvant (3ä3.3,0 127 0,323 .3.4 0,357 9:,038 48 128 0,371 .47 Téfn9in négatif absolu 0,319 212 0,431 15.6 0,374 .9:,056 61 10 165 35 Tableau 1 "UA : unités arbitraires 5 Stersfauf ai t..;tnceera-nDu ,,I., i,,,IT,rl 11DA (Al) MTT) OPC estérifié en solution à-1 % 0.533 (p/p) dans le .C,,21t)2 C.051. 0521 %OeJ8 1.e,M solvant E (50 % isopropanol - 0,47�. â _M 50 % isopropyl myristate en p/p) + UVB 73 .0.29f eM5 I,e3 r12..M 025))çz 0,574 %,ffl %0t..78 1.&el 0,2K 0.5G2 T...èmln AaM.nt. D,,.543 V 1 S 0,5É4. %ffi5P 215 2,264 0,557 2,1K ruzeiu. D554 -,là,püt 11 ü,.5e -= C.01I 2,151 0A22 715 -1-àaefa p*::ieif 2,::S VitE 1B u5.5 i.35ç M2-f 0,442, %0e_7 1.407 T,?inoita O.r G:'47 O,M F.1,M1 0.361 Cl..3M C.032 :1,5: ü:.11: 0,32fi Tfuir. fségn tif ntaseiu O.323 Tableau 2 * UA : unités arbitraires 4.1. Cytotoxicité • Le témoin négatif absolu irradié : on observe une diminution de 37 % (P 4.3. Etude du MDA (Tableau 2) : • Le témoin négatif absolu irradié : le taux de MDA est augmenté de 175 (P 5. Conclusion Pour les concentrations non-cytotoxiques étudiées, 5, 50 et 500 �g/mL, la substance à l'essai, OPC estérifié selon l'exemple 1, en solution à 1 % (p/p) dans le solvant E (50 % isopropanol - 50 % isopropyl myristate en p/p) : - protège l'épiderme irradié de la cytotoxicité induite par les UVB ; - diminue le taux d'IL-1 a sécrété dans le milieu de culture après irradiation par les UVB : - 42 % par rapport au témoin solvant irradié pour 500 gg/mL ; - diminue le taux de MDA sécrété dans le milieu de culture : 35 % à 45 %. Ces résultats de � screening � montrent une activité anti-inflammatoire et même antiradicalaire. Les témoins positifs et négatifs ont validé l'expérimentation. Exemple 4 Etude de l'effet d'un élément d'essai (esters d'OPC de pin de l'exemple 1) sur la synthèse du collaclène par des fibroblastes humains 2. Objectif de l'étude Le but de cette étude est d'évaluer, par un test in vitro, l'effet des esters d'OPC de pin selon l'exemple 1 sur la synthèse du collagène par une culture de fibroblastes primaires humains. 3. Principe de l'étude Les fibroblastes sont les principales cellules du derme. Ils sont spécialisés dans la synthèse de deux types de fibres protéiques : les fibres de collagène et les fibres d'élastine constituants de la matrice extra-cellulaire. Le collagène constitue 70 % des protéines du derme et lui confère sa résistance aux tensions et aux tractions. L'objectif de cette étude est d'évaluer l'effet de l'élément d'essai sur la synthèse de collagène après un contact de 24 heures avec une mono-couche de fibroblastes humain normal. 4. Système d'essai Cellules utilisées : Les cellules utilisées sont des fibroblastes de tissu de peau humaine enfant (garçon, Caucasien), au passage 2. Les fibroblastes sont préparés et mis à jour selon le mode opératoire en vigueur. Eléments de référence : Les contrôles suivants sont inclus à chaque analyse : - Control négatif : milieu complet - Control positif : TGF13 10ng/ml Définition des séries : Trois dilutions non cytotoxiques de chaque échantillon, préparées dans du milieu de culture à 0,005 % de tween 60 et 0,05 % d'huile de coton, sont testées à raison de 3 puits par concentration. Les éléments de référence sont également testés en trois exemplaires. 5. Déroulement de l'étude Mise en contact des cellules avec le produit à l'étude : Les cellules sont ensemencées à raison de 50 000 cellules /cm2. Après 24 heures de culture (37°C, 5% CO2), elles sont incubées avec le produit à l'étude et l'élément de référence pendant 24 heures dans un milieu de 1% de SVF. Dosage du collagène : Le collagène est dosé dans la matrice extra-cellulaire et dans le milieu de culture à l'aide du coffret de dosage Sircol, Biocolor Ltd, Irlande, selon le protocole décrit dans le coffret. Le dosage est réalisé à l'aide du colorant rouge Sirius (Direct Red 80) qui présente une affinité spécifique pour la structure en triple hélice (Gly-X-Y)n du collagène natif. L'absorbance du complexe colorant-collagène est lue au spectrophotomètre à 540 nm. Une courbe standard est réalisée entre 0 et 50 pg/ml de collagène de type I. Mesure de la densité cellulaire : La densité cellulaire est évaluée dans les mêmes conditions que précédemment, par la mesure de l'activité de la succinate déshydrogénase mitochondriale des cellules vivantes. Cette enzyme transforme le MTT (bromure de 3(4,5-diméthylthiazol-2-yl)-2,5-diphényltétrazolium) en cristaux de formazan bleu. Après dissolution de ces cristaux, on réalise une lecture spectrophotométrique. Les absorbances mesurées sont proportionnelles au nombre de cellules vivantes. 6. Expression et interprétation des résultats Pour l'évaluation de la densité cellulaire, l'absorbance mesurée est exprimée en unité de MTT (U MTT). Elle est proportionnelle à la quantité de cellules présentes dans chaque puits. La concentration en collagène est exprimée en pg de collagène/ml/U MTT dans la matrice extra-cellulaire et dans le milieu de culture. Résultats Control N=3 Densité Dosage du collagène Ratio collagène Test item N=3 cellulaire pg / puits (�g/puits/U MTT (N=3) Ecart type milieu de matrice TOTAL Milieu Matrice TOTAL culture cellulaire de cellulaire culture Contrôle 0747 8.08 4.14 12.22 10.81 5.54 16.35 négatif 0.030 2.83 3.89 Contrôle 0.934 11.36 9.74 positif 21.09 12.15 10.42 22.57 TGF [31 0.037 2.03 7.42 (100ng/ml) * Contrôle 0.834 9.58 3.13 12.70 11.48 3.75 15.23 véhicule 0.014 1.41 6.10 Esters d'OPC 0.795 16.84 3.42 de pin 20.26 21.18 4.3 25.48 500 �g/ml 0.053 3.92 3.61 3.92 ---------------- - 0.719 26.85 2.04 200 �g/ml 28.89 37.36 2.84 40.20 0.062 9.00 7.68 ------------------- - - - --------------------------- - -------------- ------------- ----------- 50 �g/ml 0.677 28.07 0.27 28.34 41.45 0.40 41.85 0.032 5.55 1.92 0.720 2.45 2.57 �g/ml 5.02 3.40 3.57 6.97 0.044 1.70 2.74 *véhicule : milieu de culture à 0,005 % de tween 60 et 0,05 % d'huile de coton Stimulation du Stimulation du Stimulation de la collagène excrété collagène produit dans synthèse du dans le milieu de la matrice cellulaire collagène total culture Contrôle 12% 88% 38% positif TGF 61 (100ng/ml) Esters d'OPC 84% -------------------------------------------------------------------------- ------------------------------------- 67% de pin 225% -------------------------------------------------------------------------- ------------------------------------- 164% 500 pg/ml 261% -------------------------------------------------------------------------- ------------------------------------- 175/o 200 pg/ml 0% 15% 175% 50 �g/ml 0% 0% 5 pg/ml 0% 0% 17 Le TGF R1 à 10 pg/ml stimule de façon significative (38 %) la synthèse totale de collagène. Ce résultat valide le modèle utilisé. La stimulation est particulièrement efficace au niveau de la matrice cellulaire (88 %). En ce qui concerne l'effet du produit à l'essai, on peut noter une stimulation de la synthèse du collagène total très significative avec un maximum de plus de 175 % pour une concentration de 50 pg/ml du produit. On peut constater également que le produit présente un effet essentiellement sur la sécrétion du collagène à l'inverse de ce que l'on peut observer pour le contrôle positif (TGF (31). L'effet est maximum pour les concentrations 200 et 50 pg/ml. A 500 pg/ml, l'effet reste très marqué mais il est moins important. A 5 pg/ml, le produit n'a plus d'effet. Ce type de réponse, en � cloche �, est très souvent 15 observé dans ce type d'étude. 7. Conclusion Dans les conditions expérimentales retenues, les esters d'OPC de pin selon 20 l'exemple 1 présentent un effet important sur la synthèse du collagène. REVENDICATIONS1. Composition cosmétique pour réparer les effets du vieillissement cutané comprenant : a) les oligomères procyanidoliques (OPC) extraits d'écorces de pin, lesdits oligomères étant estérifiés avec au moins un acide gras ; et b) un véhicule cosmétiquement acceptable. 2. Composition cosmétique selon la revendication 1, pour en outre prévenir les effets du vieillissement cutané. 3. Composition cosmétique selon la revendication 1 ou 2, comprenant : a) un extrait d'écorce de pin dont les oligomères procyanidoliques (OPC) sont estérifiés avec au moins un acide gras ; et b) un véhicule cosmétiquement acceptable. 4. Composition cosmétique selon l'une quelconque des revendications précédente, dans laquelle l'acide gras est l'acide palmitique. 5. Composition cosmétique selon l'une quelconque des revendications précédentes, destinée à un usage topique. 6. Composition cosmétique selon la revendication 5, se présentant sous la forme d'onguent, de crème, d'huile, de lait, de pommade, de poudre, de tampon imbibé, de solution, de gel, de spray, de lotion, de suspension, de savon, ou de shampooing. 7. Composition cosmétique selon l'une quelconque des revendications précédentes, comprenant de 0.1 à 2.5 % dudit extrait exprimé en poids par rapport au poids total de la composition. 8. Composition cosmétique selon l'une quelconque des revendications précédentes, pour en outre apaiser la peau. 9. Composition cosmétique selon l'une quelconque des revendications précédentes, pour augmenter la synthèse de collagène. 10. Composition cosmétique selon l'une quelconque des revendications précédentes, pour en outre protéger la peau des radicaux libres. 11. Utilisation d'une composition cosmétique comprenant : a) les oligomères procyanidoliques (OPC) extraits d'écorce de pin, lesdits oligomères étant estérifiés avec au moins un acide gras ; et b) un véhicule cosmétiquement acceptable, pour réparer les effets du vieillissement cutané.