FR 2933617 A1 20100115 FR 0854687 A 20080710 COMPOSITIONS VISANT A FAVORISER LE DEVELOPPEMENT ET LA CROISSANCE D'UNE MICROFLORE VAGINALE BENEFIQUE La présente invention se rapporte à des compositions dermatologiques ou 5 pharmaceutiques visant à favoriser le développement et la croissance d'une microflore vaginale bénéfique. Chez une femme saine, la flore urogénitale comprend près de 50 espèces différentes de microorganismes. Parmi ces microorganismes, 95% de la population est constituées de diverses souches de lactobacilles. Ces lactobacilles jouent un rôle de protection contre les 10 pathogènes par divers mécanismes : production de peroxyde d'hydrogène, production d'acide lactique, production de bactériocines, inhibition de l'adhésion et de l'expansion des pathogènes. Ainsi, la croissance de nombreux pathogènes de la flore vaginale tels que Gardnerella vaginalis, Prevotella bivia, Neisseria gonorrhoeae, Candida albicans est inhibée par les lactobacilles. Les lactobacilles spécifiques du vagin sont notamment 15 Lactobacillus crispatus, Lactobacillus jensenii et Lactobacillus vaginalis. La flore vaginale normale est ainsi principalement composée de lactobacilles formant un biofilm protecteur à la surface de la muqueuse. Ces lactobacilles coexistent avec une multitude d'autres espèces dont des pathogènes potentiels. Une rupture de cet équilibre peut être un facteur qui induit des vaginoses dues à une augmentation du pH 20 vaginal et à une diminution des lactobacilles, laissant alors aux pathogènes la possibilité de se développer. L'antibiothérapie est l'un des traitements communément utilisé pour traiter les déséquilibres de la microflore vaginale. Il présente cependant les inconvénients habituels des traitements antibiotiques et s'avère de moins en moins efficace. En outre, il vise à 25 éliminer la flore pathogène mais détruit également la flore normale. Les produits d'hygiène vaginale déjà existants sur le marché ne visent pas à favoriser le développement et la croissance de la microflore bénéfique du vagin. La présente invention propose des compositions dermatologiques ou pharmaceutiques visant spécifiquement à favoriser le développement de la microflore 30 vaginale bénéfique. L'invention concerne donc des compositions dermatologiques ou pharmaceutiques comprenant : - un prébiotique choisi parmi les gluco-oligossaccharides (GOS), les fructooligosaccharides (FOS) et leurs mélanges ; et - un extrait végétal contenant des isoflavones choisi parmi les extraits de soja (Glycine max), les extraits de trèfle (Trifolium sp.) et leurs mélanges. De préférence, les compositions selon l'invention comprennent 0,5% à 7% de prébiotique et 0,5% à 5% d'extrait végétal contenant des iso flavones. Préférentiellement, les isoflavones sont choisies parmi la formonétine, la biochanine A, la génistéine, la daidzéine, la genistine, la daidzine, l'equol, et leurs mélanges. Préférentiellement, l'extrait végétal est un extrait de trèfle choisi parmi les variétés Trifolium subterraneum L., Trifolium repens L et Trifolium pratense L. Dans un mode de réalisation préféré, l'extrait végétal est un extrait de Trifolium pratense L contenant au moins de la génisteine, de la daidzéine et de la formonétine. Dans un autre mode de réalisation particulièrement avantageux, le prébiotique comprend un GOS a-1,6/a-1,4 ayant un degré de polymérisation d'au moins 4. Les compositions selon l'invention peuvent se présenter avantageusement sous la forme d'un gel vaginal, d'un savon, d'un spray ou d'une crème pour une application vaginale. Les compositions selon l'invention conviennent plus particulièrement pour le traitement et la prévention des effets de la ménopause sur les muqueuses vaginales ainsi que pour le traitement et la prévention des vaginoses bactériennes. L'invention se rapporte aussi à l'utilisation d'une de ces compositions pour la 25 fabrication d'un médicament pour le traitement et la prévention des effets de la ménopause sur les muqueuses vaginales ainsi que pour le traitement et la prévention des vagino ses bactériennes. L'invention a donc pour objet des compositions dermatologiques ou pharmaceutiques 30 comprenant : - un prébiotique choisi parmi les gluco-oligossaccharides (GOS), les fructooligosaccharides (FOS), et leurs mélanges ; et - un extrait végétal contenant des isoflavones choisi parmi les extraits de soja (Glycine max), les extraits de trèfle (Trifolium sp.) et leurs mélanges. Les prébiotiques sont généralement des oligosaccharides ou des polysaccharides à courte chaîne constitués approximativement de deux à vingt unités de sucre. Il s'agit de composés non digestibles qui exercent une action bénéfique sur la santé en stimulant sélectivement la croissance et/ou l'activité métabolique d'une ou d'un nombre limité de bactéries. Les prébiotiques sélectionnés dans les compositions de la présente invention agissent comme un substrat sélectif d'une ou d'un nombre restreint de bactéries bénéfiques qui résident dans le vagin et qui stimulent la croissance de celles-ci. Les prébiotiques utilisés dans les compositions de la présente invention ciblent plus particulièrement Lactobacillus crispatus, Lactobacillus jensenii et Lactobacillus vaginalis. La plupart des prébiotiques disponibles commercialement sont des oligosaccharides, extraits de matrices végétales naturelles ou obtenus par synthèse (chimique ou biotechnologique). Il existe différents types d'oligosaccharides à potentiel prébiotique tels que les glucooligossacharides (GOS), les fructooligosaccharides (FOS), les galactooligosaccharides, etc. Les oligosaccharides respectivement prébiotiques vis-à-vis de l'intestin et du vagin sont différents. En effet, l'intestin est constitué de nombreuses enzymes qui risquent de dégrader l'oligosaccharide. Celui-ci doit avoir une structure chimique longue et complexe lui permettant de résister à l'attaque enzymatique. A l'inverse, dans le vagin, en l'absence de contraintes enzymatiques, les oligosaccharides prébiotiques possèdent des structures plus courtes et plus simples. Les FOS sont des fructo-oligosaccharides à courte chaine constitués de molécules de fructose et pouvant contenir une molécule de glucose à l'une des extrémités (en fonction de l'origine du FOS). Les FOS existent à l'état naturel dans un certain nombre de plantes comme l'oignon, la tomate, l'artichaut, la banane, le topinambour, l'asperge, le poireau, le blé, le seigle et l'ail. Les FOS peuvent être produits industriellement par 2 procédés différents : Le FOS Raftilose� (Orafti, Belgique) provenant de l'hydrolyse de l'inuline de chicorée. Il existe également d'autres producteurs de ce type de FOS. Le FOS Actilight� (Béghin Meiji, France) obtenu par synthèse enzymatique. Le FOS Actilight� est produit à partir de saccharose et d'une enzyme, la f3-fructosyl transférase selon le mécanisme suivant : fructo s yltrans feras e n (Fru -Glc) Fru) n-1 - Fru - Glc + (n- l) Glc (32-al 132-1 132-al Saccharose FOS Actilight� La fructosyl-transferase est produite par Aspergillus piger ou Aureobasidium pullulans. A partir de n molécules de saccharose, un mélange de saccharose, glucose et de fructooligosaccharides est obtenu. Le FOS Actilight� est ensuite purifié par chromatographie. Les FOS Actilight� contiennent des degrés de polymérisation allant jusqu'à 6 et 10 dont la proportion de glucose, fructose et saccharose est en moyenne de 5% : Structure du FOS Actilight� 4 OH OH 20 25 OH 132-1 OH 15 30 DP4 DP5 Les GOS sont des gluco-oligosaccharides à courte chaine constitués d'un 35 enchainement d'unités glucose liées en al-6 et pouvant contenir également des liaisons al-2, al-3, al-4. Le GOS al-6 est un gluco-oligosaccharide linéaire constitué d'un enchainement d'unités glucose liées entre elles par des liaisons al-6. Il est obtenu par une réaction de transglucosylation enzymatique à partir d'un donneur, le saccharose, sur un accepteur qui 40 peut être le glucose, l'alpha-glucoside de méthyle, l'isomaltose, l'isomaltotriose et le maltose. Si l'accepteur est le maltose (glucoses liés en al-4) alors on aboutit à la synthèse enzymatique de GOSal-6/al-4 Les GOS sont des glucanes de petite taille. Ils sont synthétisés par une réaction de transglucosylation catalysée par des enzymes de la famille des glucane-saccharases. Ces enzymes assurent le transfert d'unités glucosyle provenant du substrat donneur sur le produit accepteur à son extrémité non réductrice. L'oligosaccharide ainsi produit devient alors substrat pour donner un oligosaccharide de degré de polymérisation supérieur. Les glucane-saccharases acceptent un nombre limité de substrats donneurs (en général du saccharose) mais un nombre variable de produits accepteurs (par exemple, glucose ou maltose). Il existe une grande variété de glucane-saccharases qui présentent différents spécificités et catalysent la formation de différents types de liaisons osidiques (a-(1-2), a-(1-3), a-(1-4), a-(1-6)). Les rendements de la réaction dépendent fortement du ratio [donneur]/[accepteur] et de la teneur en sucres totaux dans le milieu. La vitesse de réaction dépend du type d'accepteur; par exemple, la synthèse avec comme accepteur du maltose est plus efficace qu'avec du glucose. Synthèse enzymatique du GOSa1-6/al-4 Glucane-saccharase Glc-Glc + n (Glc-Fru) (Glc)n ù Glc ù Glc+ n Fru al-4 al-132 al-6 al-4 Maltose Saccharose GOSa1-6/al-4 (accepteur) (donneur) Cette réaction enzymatique est catalysée par la glucane-saccharase de Leuconostoc mesenteroides NRRL B-512 (F.) Les GOSa-1,6/a-1,4 sont des mélanges d'oligosaccharides. Le mélange est constitué d'oligosaccharides allant jusqu'au degré de polymérisation 11. 5 GOS DONNEUR ACCEPTEUR ENZYME LIAISONS GOSa1-2/al-6/a1-4 saccharose maltose B-1299 (1) 65% al-6 35% al-2 5% al-3 GOSal-6/al-4 saccharose maltose B-512F (2) 95% al-6 5% al-35 (1) glucane-saccharase de Leuconostoc mesenteroides NRRL B-1299 (2) glucane-saccharase de Leuconostoc mesenteroides NRRL B-512F Structure du GOSal-6/al-4 GOSal-6/al-4 (DP5) al-6 10 15 20 Parmi les prébiotiques utilisables dans les compositions de la présente invention, on citera plus particulièrement les oligosaccharides décrits dans le EP-B-O 591 443 et 25 notamment le GOSal-2/al-6 ayant un degré de polymérisation d'au moins 4. Un autre prébiotique préféré est le FOS Actilight� de DP3. Dans un mode de réalisation préféré de l'invention, les compositions comprennent un mélange de prébiotiques spécifiques de la microflore du vagin. Les compositions selon la présente invention comprennent également des isoflavones extraites des plantes ayant une structure spatiale similaire aux oestrogènes. Ces phytoestrogènes améliorent la cytologie vaginale, la trophicité et l'hydratation de la muqueuse vaginale ce qui contribue à rendre les conditions de croissance de la microflore bénéfique du vagin plus favorables. Parmi les nombreuses sources de phytoestrogènes connues, ont été choisis avantageusement les extraits de soja (Glycine max), les extraits de trèfle (Trifolium sp.) et leurs mélanges. L'extrait végétal est typiquement sous forme glycériné ou glycolique ou aqueux ou sec ou au CO2 supercritique. Les compositions peuvent en outre comprendre au moins un agent gélifiant d'origine naturelle végétale, ou minérale ou de synthèse, formant au contact de l'eau une gelée de type � hydrocolloïdale � de nature thixotrope, non chargée électriquement. Il peut s'agir de polymères dérivés de l'acide acrylique, d'hydroxyethylcellulose, de carboxymethylcellulose, de gommes xanthane, de guar, de galactomanannes, de succinoglycanes, de carrhagenhannes kappa ou iota, de bentonites, d'hectorites, de silicates de magnésium. L'agent gélifiant représente de 0,5 à 5 % dans la composition finale Les compositions peuvent également comprendre un glycol qui peut être du monopropylène glycol, du dipropylène glycol, de la glycérine, di-glycérine, triglycérine, du monopropanediol, du butylène glycol, de l'hexylène glycol. Il peut être ajouté à la composition dans la proportion de 1 à 80 % de préférence de 3 à 10% de la composition totale. Les compositions selon l'invention peuvent aussi comprendre un système conservateur composé de 1 à 4 agents fongistatiques et bactériostatiques, sous forme de sels d'acides organiques : lactique, citrique, sorbique, benzoïque, salicylique, tartrique, glycolique, etc. Ils peuvent être ajoutés à la composition entre 0,1 et 2 % de la composition totale. Avantageusement, les compositions comprendront des ré-ajusteurs de pH destinés à amener la préparation à pH physiologique : acide citrique, lactique, glycolique, chlorhydrique, borique, hydroxyde de sodium, hydroxyde de potasssium, AMP cyclique, triéthanolamine, trométhamine, ethylène diamine tetraacétique, tampon citrique /citrates, etc. Le ou les ré-ajusteurs sont ajoutés à la composition entre 0,05% et 5% particulièrement entre 0,05% et 1% de la composition finale. Les compositions peuvent en outre comprendre au moins un composé choisi dans le groupe constitué par - des actifs classiquement utilisés en dermatologie tels que les émollients, les actifs hydratants, les agents restructurants de la barrière cutanée, les agents anti-irritants, les agents apaisants, - des principes actifs ayant une action thérapeutique complémentaire, tels que les antibiotiques, les agents anti-bactériens, les composés antifongiques, les agents anti-viraux, les agents anti-inflammatoires, etc. Les compositions selon l'invention peuvent être formulées sous la forme de différentes préparations adaptées à une administration topique, à une administration orale ou vaginale. Selon un mode de réalisation préféré, les différentes préparations sont adaptées à l'administration topique et incluent les crèmes, les émulsions, les laits, les pommades, les lotions, les huiles, les solutions aqueuses ou hydro -alcooliques ou glycoliques, les poudres, les sprays, les gelées, les gels, hydrogels ou tout autre produit pour application externe. L'invention concerne aussi des compositions pharmaceutiques comprenant un 20 prébiotique et un extrait végétal contenant des isoflavones tels que définis ci-dessus ainsi qu'un véhicule pharmaceutique approprié. Dans les compositions pharmaceutiques de la présente invention pour l'administration orale, l'ingrédient actif peut être administré sous forme unitaire d'administration, en mélange avec des supports pharmaceutiques classiques. Les formes 25 unitaires d'administration appropriées comprennent les formes par voie orale telles que les comprimés, les gélules, les poudres, les granules et les solutions ou suspensions orales. Lorsque l'on prépare une composition solide sous forme de comprimés, on mélange l'ingrédient actif principal avec un véhicule pharmaceutique tel que la gélatine, l'amidon, le lactose, le stéarate de magnésium, le talc, la gomme arabique ou analogues. On peut 30 enrober les comprimés de saccharose ou d'autres matières appropriées ou encore on peut les traiter de telle sorte qu'ils aient une activité prolongée ou retardée et qu'ils libèrent d'une façon continue une quantité prédéterminée de principe actif. On obtient une préparation en gélules en mélangeant l'ingrédient actif avec un diluant et en versant le mélange obtenu dans des gélules molles ou dures. Une préparation sous forme de sirop ou d'élixir peut contenir l'ingrédient actif conjointement avec un édulcorant, un antiseptique, ainsi qu'un agent donnant du goût et un colorant approprié. Les poudres ou les granules dispersibles dans l'eau peuvent contenir l'ingrédient actif en mélange avec des agents de dispersion ou des agents mouillants, ou des agents de mise en suspension, de même qu'avec des correcteurs du goût ou des édulcorants. De préférence, les compositions pharmaceutiques de la présente invention se présentent sous la forme d'un gel, d'une gelée, d'un savon, d'un spray ou d'une crème pour une application topique vaginale. Les compositions selon l'invention conviennent plus particulièrement pour le traitement et la prévention des effets de la ménopause sur les muqueuses vaginales ainsi que pour le traitement et la prévention des vaginoses bactériennes. On entend par vaginose ou vaginose bactérienne un déséquilibre de la flore microbienne du vagin. Elle se caractérise par la disparition des lactobacilles et la multiplication de germes anaérobies tels que le Gardnerella vaginalis. Elle témoigne d'un déséquilibre de la flore vaginale avec disparition de l'effet protecteur du bacille de Dôderlein. L'invention se rapporte aussi à l'utilisation d'une de ces compositions pour la fabrication d'un médicament pour le traitement et la prévention des effets de la ménopause sur les muqueuses vaginales ainsi que pour le traitement et la prévention des vagino ses bactériennes. L'invention se rapporte aussi à l'utilisation d'un prébiotique et d'un extrait végétal contenant des isoflavones tel que définis ci-dessus pour la fabrication d'un médicament pour le traitement et la prévention des effets de la ménopause sur les muqueuses vaginales ainsi que pour le traitement et la prévention des vaginoses bactériennes. L'invention concerne des compositions dermatologiques pour l'hygiène vaginale et le soin vaginal. Les compositions selon la présente invention sont plus particulièrement 30 adaptées pour l'hygiène et le soin vaginal des femmes ménopausées. Dans le cadre d'une utilisation dermatologique, la composition sera avantageusement formulée sous la forme d'une préparation adaptée à une administration topique. L'invention a aussi pour objet des méthodes d'hygiène vaginale et de soin vaginal pour les femmes ménopausées. L'invention concerne aussi une méthode de traitement dermatologique et de soin hygiénique pour le traitement et la prévention des effets de la ménopause sur les muqueuses vaginales ainsi que pour le traitement et la prévention des vaginoses bactériennes. Figures Figure 1 : Croissance BLL 2008 Lactobacillus crispatus Figure 2 : Croissance BLL 2005 Lactobacillus crispatus Exemples Exemple 1 : Gelée vaginale MATIERE PREMIERE % Eau bio-osmosée QSP 100 Aqua Glycérine végétale codex 5 Glycerin GOSa 5,0 Alpha-glucan / oligo saccharide (Génibio�) Sterocare� (Sederma�) 2,0 Trifolium Pratense extract Natrosol� 250 HHX.Ph 1,0 Hydroxyethylcellulose Ronkosal� SB 0,7 Conservateur Purac� HS 90 QSP Ph 4, 3 Lactic acid +1- 0,1 0.22 La concentration de stérocare peut également varier de 0.5 à 3 %. Le reste de la formule restant inchangé. Pour une formulation en gel, des agents gras sont ajoutés. 11 Exemple 2 : Formule gel placebo MATIERE PREMIERE % Eau bio-osmosée QSP 100 Aqua Glycérine végétale codex 5 Glycerin Natrosol� 250 HHX.Ph 1,0 Hydroxyethylcellulose Ronkosal� SB 0,7 Conservateur Purac� HS 90 QSP Ph 4, 3 Lactic acid +/- 0,2 0.3 Il s'agit de la même formule sans le GOS et le stérocare. Exemple 3 : Mousse lavante (ou gel d'hygiène intime) MATIERE PREMIERE % Eau purifiée QSP 100 Aqua Protéol� APL 15 Sodium Cocoyl apple amino acides Moussant dérivé de la pomme Laureth P065 3 Aqua, coco-glucoside, glyceryl oleate GOSa 1 Alpha-glucan / oligo saccharide (Génibio�) Trèfle rouge HG 1 Trifolium Pratense, glycerine, eau Actif (Greentech�) Sepinov� EMT10 0.7 Hydroxy ethyl acrylate/sodium (agent stabilisant) Suttocide�A 0.5 Sodium methyl hydroxy glycinate (conservateur) Purac� HS 90 0.4 (PH 5-5.5) acide lactique Ajusteur de PH Thé vert menthe 12309 (parfum) 0.06 Colorant rouge autorisé CE 0.00066 CI 16035 EDTA 0.05 Ethylene diamine tetra acétique (agent séquestrant) Les concentrations en GOS et en trèfle rouge peuvent varier entre 0,5 et 1,5%. Exemple 4 : Gélule Oligosaccharides prébiotiques (GOS et/ou FOS) Isoflavones (de trèfle et/ou de soja) Excipients : lactose monohydraté, amidon de pomme de terre, glutamate de sodium, thiosulfate de sodium, enveloppe de la gélule (dioxyde de titane E171, gélatine) Exemple 5 : Crème Oligosaccharides prébiotiques (GOS et/ou FOS) Isoflavones (de trèfle et/ou de soja) Excipients : vaseline, cire émulsionnable non ionique au cétamacrogol 1000, paraffine liquide, glycine, acide sorbique, solution concentrée d'hydroxyde de sodium qsp PH 4-5, eau purifiée Exemple 6 Nous avons choisi deux souches de Lactobacilles BLL 2005 et 2008 (les deux souches les plus significatives en terme d'activité probiotique) pour lesquelles nous avons testé d'une part, le glucose seul qui le substrat universel des Lactobacilles, et le glucose + Stérocare (1,5% et 3%), et d'autre part, le GOS seul et le GOS + Stérocare (1,5% et 3%). Dans les deux cas, nous observons que le Stérocare augmente la consommation de substrats par les Lactobacilles et donc leur croissance (Figure 1). Exemple 7 : Suivi de la croissance de bactéries lactiques : croissance en présence ou 10 non de gel hygiène vaginale Concentration initiale en sucres 5g/1, et inoculation à 2% Les gels d'hygiène vaginale formule active et formule placébo des exemples 1 et 2 ont été utilisés. BLL 2005 - Lactobacillus crispatus Temps MRS + Glucose MRS + Placebo MRS + Gel actif (h) Turbidité 1/10 pH Turbidité 1/10 pH Turbidité 1/10 pH - 640 nm - 640 nm - 640 nm Pré-culture 0,328 4,0 0,0 0,005 6,5 0,004 6,4 0,005 6,4 2,5 0,005 / 0,005 / 0,004 / 4,0 0,008 / 0,007 / 0,005 / 6,0 0,014 4,9 0,011 6,0 0,011 6,2 24,0 0,214 4,9 0,022 6,0 0,166 5,2 29,5 0,224 / 0,022 / 0,190 / 46,5 0,195 4,9 0,021 6,0 0,185 5,1 15 Les résultats ci-dessus et la figure 2 montrent sans ambiguïté que le gel actif permet la croissance de la souche alors que ce n'est pas le cas avec le placébo. REVENDICATIONS1. Composition dermatologique ou pharmaceutique caractérisée en ce qu'elle comprend : - un prébiotique choisi parmi les gluco-oligossaccharides (GOS), les fructooligosaccharides (FOS), et leurs mélanges ; et - un extrait végétal contenant des isoflavones choisi parmi les extraits de soja (Glycine max), les extraits de trèfle (Trifolium sp.) et leurs mélanges. 2. Composition selon la revendication 1 caractérisée en ce qu'elle comprend 0,5% à 7% de prébiotique et 0,5% à 5% d'extrait végétal contenant des isoflavones. 3. Composition selon l'une des revendications précédentes caractérisée en ce que les isoflavones sont choisies parmi la formonétine, la biochanine A, la génistéine, la daidzéine, la génistine,la daidzine, l'equol et leurs mélanges. 4. Composition selon l'une des revendications précédentes caractérisée en ce que l'extrait végétal est un extrait de trèfle choisi parmi les variétés Trifolium subterraneum L., Trifolium repens L et Trifolium pratense L. 5. Composition selon l'une des revendications précédentes caractérisée en ce que l'extrait végétal est un extrait de Trifolium pratense L contenant au moins de la génisteine, de la daidzéine et de la formonétine. 25 6. Composition selon l'une des revendications précédentes caractérisée que le prébiotique comprend un GOS a-1,6/a-1,4 ayant un degré de polymérisation d'au moins 4. 7. Composition selon l'une des revendications précédentes caractérisée en ce que la 30 composition est sous la forme d'un gel vaginal, d'un savon, d'un spray ou d'une crème pour une application vaginale.20 8. Composition selon l'une des revendications précédentes pour le traitement et la prévention des effets de la ménopause sur les muqueuses vaginales ainsi que pour le traitement et la prévention des vaginoses bactériennes. 9. Utilisation d'une des compositions selon l'une des revendications 1 à 8 pour la fabrication d'un médicament pour le traitement et la prévention des effets de la ménopause sur les muqueuses vaginales ainsi que pour le traitement et la prévention des vaginoses bactériennes. 10. Utilisation d'une composition dermatologique selon l'une des revendications 1-7 pour l'hygiène et le soin vaginal.