FR 2931695 A1 20091204 FR 0802894 A 20080528 PROCEDE D'EXTRACTIOiN SELECTIVE DE PROTEINES MEMBRANAIRES AVEC LES CALIXARENES DESCRIPTION 5 Domaine technique La présente invention se rapporte à un procédé d'extraction sélective de protéines membranaires avec au moins un calixarène. L'utilisation des calixarènes dans le procédé selon l'invention permet 10 de solubiliser sélectivement les protéines membranaires tout en préservant leur structure tridimensionnelle qui est essentielle à leur activité enzymatique. Dans la description ci-dessous, les références entre crochets [ ] 15 renvoient à la liste des références présentée à la fin du texte. État de la technique L'extraction des protéines membranaires est une étape prérequise pour leur étude en solution, notamment leur caractérisation structurale par 20 radiocristallographie, qui implique de les maintenir en solution dans un état topologique identique à celui qu'elles adoptent dans les membranes. En général, cette étape est réalisée à l'aide de détergents ou tensioactifs qui, d'une part, déstructurent la bicouche membranaire en entrant en compétition avec les chaînes aliphatiques des lipides qui la 25 constituent et, d'autre part, maintiennent la protéine membranaire en solution du fait de leur composante hydrophile. Bien qu'étant les plus efficaces pour solubiliser les protéines membranaires, les détergents ou tensioactifs anioniques, comme par exemple le sodium dodécyle sulfate (SDS) ou le désoxycholate de sodium, 30 sont généralement déstructurants. Par ailleurs, l'efficacité de la phase de déstructuration de la bicouche lipidique est fonction de la longueur de la chaîne aliphatique du détergent ou tensioactif, un paramètre qui varie en fonction de l'origine des membranes et des protéines qui y sont insérées. Dans le cadre de la présente invention, les termes � tensioactif �, � surfactant � et � détergent � sont indifféremment utilisés pour désigner des molécules ayant des propriétés particulières dues à leur structure amphiphiles. Une molécule est dite amphiphile lorsqu'elle possède à la fois un groupe polaire et hydrophile et un groupe apolaire et hydrophobe. Le terme � extraction sélective � dans la présente invention signifie un procédé permettant d'extraire sélectivement les protéines membranaires par solubilisation des membranes lipidiques dans lesquelles ces protéines sont insérées, qu'elles soient naturelles ou artificielles, et la mise en solution desdites protéines. À ce jour, il existe très peu de détergents polyanioniques non dénaturants pour les protéines membranaires permettant leur extraction sélective. Il existe donc un réel besoin d'un procédé d'extraction palliant les défauts, limitations, inconvénients et obstacles de l'art antérieur, en particulier d'un procédé mettant en oeuvre des molécules anioniques ayant des propriétés détergentes permettant d'extraire sélectivement les protéines membranaires sans les dénaturer. Description de l'invention La présente invention a précisément pour but de répondre à ce besoin en fournissant un procédé d'extraction sélective de protéines membranaires comprenant une étape qui consiste à mettre en contact une solution aqueuse de la protéine membranaire à extraire avec au moins un calixarène de formule (I) : OR1 OR4 R20 OR3 X3 (1) dans laquelle : ^ n est un nombre entier égal à 1, 3, 5 ou 6 ; ^ R1, R2, R3, R4 représentent, indépendamment l'un de l'autre, un atome d'hydrogène ; un groupe (C1_12) alkyle linéaire ou ramifié éventuellement substitué par un ou plusieurs hétéroatomes choisis dans le groupe d'atomes O, S, N, P ; un groupe (C1_12) alkyle linéaire ou ramifié éventuellement substitué par un groupe ùCOOR où R est un groupe (C14 alkyle linéaire ou ramifié ; un groupe aryle comprenant de 6 à 20 atomes de carbone ; ^ X1, X2, et X3 représentent, indépendamment l'un de l'autre, un groupe ù (CH2)m-000R' dans lequel - m est un nombre entier allant de 0 à 10, - R' représente un atome d'hydrogène ou un groupe (C14 alkyle linéaire ou ramifié ; ou l'un de ses sels pharmaceutiquement acceptables. Selon un mode de réalisation particulier de l'invention, le procédé d'extraction sélective de la protéine membranaire peut être réalisée avec au moins un calixarène de formule (I) dans laquelle : ^ n est un nombre entier égal à 1 ; ^ R1, R2, R3, R4 représentent, indépendamment l'un de l'autre, un atome d'hydrogène ; un groupe (C1_12) alkyle linéaire ou ramifié ; ^ X1, X2 et X3 représentent, indépendamment l'un de l'autre, un groupe û (CH2)m-OOOR' dans lequel - m est un nombre entier allant de 0 à 10, - R' représente un atome d'hydrogène ; ou l'un des sels pharmaceutiquement acceptables. On entend par � alkyle � au sens de la présente invention, un radical carboné linéaire, ramifié ou cyclique, saturé ou insaturé, éventuellement substitué, comprenant 1 à 12 atomes de carbone. À titre indicatif, on peut citer les radicaux méthyle, éthyle, propyle, butyle, isobutyle, pentyle, hexyle, octyle, nonyle, décyle, undécyle, dodécanyle et leurs isomères ramifiés. Le groupe alkyle peut être éventuellement substitué par un ou plusieurs hétéroatomes choisis dans le groupe d'atomes O, S, N, P. Le terme � aryle � désigne de manière générale un substituant aromatique cyclique comportant de 6 à 20 atomes de carbone. Dans le cadre de l'invention le groupe aryle peut être mono- ou poly- cyclique éventuellement substitué. À ce titre on peut citer le benzyle, le phényle. Dans le cadre de la présente invention, le terme � sels pharmaceutiquement acceptables � comprend les sels préparés avec des acides ou bases, non toxiques, en fonction des substituants présents sur les composés. Lorsque les composés de l'invention comportent des fonctions acides, les sels correspondants peuvent être obtenus par addition d'une base organique ou inorganique sur le composé sous forme neutralisée en présence éventuellement dans un solvant de préférence inerte. Des exemples de sel d'addition d'une base peuvent être les sels de sodium, potassium, calcium, ammonium, amino (organique), ou magnésium. Lorsque les composés de l'invention comportent des fonctions basiques, les sels correspondants peuvent être obtenus par addition d'un acide organique ou inorganique éventuellement dans un solvant de préférence inerte. Des exemples de sels d'additions d'acide inorganique peuvent être les sels hydrochlorique, hydrobromique, nitrique, carbonique, monohydrogéncarbonique, phosphorique, monohydrogénphosphorique, dihydrogénophosphorique, sulfurique, monohydrogénosulfurique hydroiodique. Des exemples de sels d'additions d'acide organique peuvent être les sels acétique, propionique, isobutyrique, maléique, malonique, benzoïque, succinique, subérique, fumarique, lactique, mandélique, phthalique, benzénesulfonique, p-tolylsulfonique, citrique, tartarique, méthanesulfonique. Les calixarènes de formules (I) sont des molécules anioniques ayant des propriétés détergentes. Ils disposent d'une face hydrophile constituée de plusieurs fonctions carboxyliques et d'une face hydrophobe constituée de groupes alkyles. La multiplicité de charges négatives favorise d'une part l'interaction ionique de la molécule détergente avec la surface hydrophile de la protéine et d'autre part prévient sa pénétration (déstructurante) au coeur (hydrophobe) des protéines. L'utilisation des calixarènes clans le procédé selon l'invention permet d'extraire sélectivement les protéines membranaires en les solubilisant sélectivement tout en préservant leur structure tridimensionnelle qui est essentielle à leur activité enzymatique. Ainsi, après leur reconstitution dans les lipides naturels ou synthétiques, les protéines membranaires retrouvent leur activité Par ailleurs, selon les substituant présents, notamment la longueur des groupes alkyles dans R', R2, R3 et/ou R4, les calixarènes de formule (I) peuvent s'ajuster aux types de membranes et de protéines et permettre de réaliser une extraction et une solubilisation sélectives et efficaces. En outre, de par leur structure notamment la nature des substituants X2 et/ou X3, les calixarènes selon l'invention, peuvent former des micelles dont l'existence est modulable en fonction du pH. Cette propriété est particulièrement utile pour favoriser ou au contraire défavoriser la formation de micelles et ainsi maintenir une protéine membranaire en solution avec des détergents à des degrés différents d'organisation. En effet, l'absence de micelles favorise l'établissement de contacts protéine-protéine qui facilitent la formation de cristaux en solution. Le procédé de l'invention permet d'extraire toute protéine membranaire, et avantageusement toute protéine membranaire présente dans une fraction membranaire biologique issue d'organisme procaryotique ou eucaryotique, sain ou altéré. De préférence, la protéine membranaire est une protéine choisie dans le groupe comprenant des protéines de transport, des glycoprotéines P (Pgp/ABCB1) [1], MRP1/ABCC1 [2], BCRP/ABCG2 [3], et toute protéine de cette classe. Plus particulièrement, la protéine de transport peut être un transporteur ABC (ATP-binding Cassette en anglais ou protéine à domaine de liaison à l'ATP en français), choisie dans le groupe comprenant BmrA [4]. L'étape de mise en en contact d'une solution aqueuse comprenant la protéine membranaire à extraire avec au moins un calixarène de formule (I) peut être réalisé à un pH allant de 5.5 à 10, de préférence de 6 à 9. Le procédé d'extraction peut être réalisé à une température allant de 0 à 100°C, de préférence de 4 à 25°C. Le procédé d'extraction met en oeuvre une concentration de calixarène de formule (I) allant de 10-6 à 10"2 M. Le procédé de l'extraction selon l'invention peut être réalisé avec des calixarènes en solution ou des calixarènes en agrégats colloïdaux du fait de leur propriété tensioactive. Au sens de la présente invention, on entend par agrégat colloïdal des ensembles de quelques à quelques centaines de molécules de calixarène s'organisant en fonction des forces de répulsion vis-à-vis du solvant. Étant donné leur nature, les calixarènes de formule (I) sont capables de former des agrégats dans un milieu approprié comme par exemple dans l'eau, dans une solution aqueuse, dans un milieu isotonique ou dans un milieu biologique. L'agrégat peut être choisi dans le groupe comprenant les micelles, les liposomes, les nanoparticules lipidiques. De préférence, les calixarènes sont sous forme de micelles. Le terme micelle désigne est un agrégat sphéroïdal de molécules de calixarène de formule (I) qui s'organise en fonction du solvant utilisé. Par exemple dans l'eau ou un solvant aqueux, les extrémités lipophiles sont tournées vers l'intérieur de la micelle tandis que les extrémités hydrophiles forment l'interface de la micelle avec le solvant. Dans un solvant organique, par exemple de l'huile, l'arrangement est inversé. Le terme liposome désigne des petites vésicules fabriquées artificiellement constituées notamment de lamelles de phospholipides, séparées les unes des autres par des compartiments aqueux. Ils peuvent avoir une structure très proche de celle des membranes cellulaires. Dans le cadre de la présente invention, le terme nanoparticule signifie un assemblage de quelques centaines à quelques milliers de molécules de calixarène de formule (I), conduisant à un objet dont au moins l'une de ses dimensions est de taille nanométrique, par exemple entre 1 et 300 nm. Dans le procédé de l'invention, l'étape de mise en contact d'une suspension aqueuse comprenant la protéine membranaire à extraire avec le calixarène de formule (I) peut être éventuellement réalisée en présence d'au moins un co-soluté choisi dans le groupe comprenant, i) les sels organiques et inorganiques choisi dans le groupe comprenant les sels pharmaceutiquement acceptables ; ii) les petites molécules bioactives choisies dans le groupe des acides aminés, des vitamines, des lipides, des stéroïdes, des carbohydrates ou des métabolites ; iii) les molécules bioactives oligomériques choisies dans le groupe des peptides, des oligonucléotides, des oligosaccharides ; iv) les molécules biologiques polyrnériques choisies dans le groupe des protéines, polynucléotides et polysaccharides. Selon un mode de réalisation de l'invention, l'étape de mise en contact peut être précédée par une étape dans laquelle : - la protéine membranaire à extraire ou la fraction membranaire la contenant est solubilisée dans une solution tampon, et - le calixarène de formule (I) est ajouté suivant les conditions de température, de pH et de concentrations décrites précédemment. Les protéines membranaires complexées avec les calixarènes de formule (I) et les protéines membranaires non complexées peuvent être séparées par centrifugation, typiquement pendant 1h, à 4° C et à une vitesse de 100 000xg. Les conditions de centrifugation dépendront de la nature de la protéine. L'homme du métier saura choisir les conditions les optimales de centrifugation, par exemple décrites dans [6]. D'autres avantages pourront encore apparaître à l'homme du métier à la lecture des exemples ci-dessous, illustrés par les figures annexées, donnés à titre illustratif. 2 0 Brève description des figures - La figure 1 représente les propriétés surfactant de molécules p(COOH)3-Ar4-o(CnH2n+1), n=1-12. L'effet des dérives de calix[4]arène, comportant des chaînes alkyle avec 1 à 12 groupes méthylène, sur la 25 tension de surface de l'eau a été suivi en fonction de la concentration desdits dérivés aux pH 6,0 (non exposé) et 8,0 (exposé). DDM signifie [3D-dodécyl maltopyranoside. Chaque point correspond à la moyenne de trois valeurs. - La figure 2 représente le potentiel surfactant des molécules 30 p(COOH)3-Ar4-o(CnH2n+1), n=1-12 en fonction de la longueur des chaînes alkyle et le pH. L'effet des molécules comportant une chaîne alkyle ayant de 1 à 12 groupes méthylène (n, axe X dans la figure 2) sur la tension de surface de l'eau a été mesuré à une concentration de 10"2M, à pH 6,0 (triangles) et à pH 8,0 (carrés). Chaque point correspond à la moyenne de trois valeurs. - La figure 3 représente la Concentration Micellaire Critique (CMC) de la série p(COOH)3-Ar4-o(CnH2n+1), n=1-12 en fonction du pH et la longueur des chaînes alkyle. L'effet sur la CMC des molécules ayant une chaîne alkyle avec 1 à 12 groupes méthylène (n, axe X sur la figure) est mesuré à une concentration de 10-2 M, à pH 6,0 (cercles pleins) et 8,0 (cercles vides). Chaque point correspond à la moyenne de trois valeurs, estimées à partir des données de la figure 1. - La figure 4 représente la modulation du potentiel surfactant du composé p(COOH)3-Ar4-o(C7H15) par les acides aminés (aa). Le composé p(COOH)3-Ar4-o(C7H15) est présente à une concentration de 10"2 M alors que celle des acides amines varient comme indiqué. La tension de surface est mesurée au pH 8,0. Les acides aminés sont indiqués par leur code à trois lettre : Glu = acide glutamique, Trp = tryptophane, Asn = asparagine, Gly = glycine, Ala = alanine, Ser = sérine, Phe = phénylalanine, Leu = leucine, Pro = Proline, Lys = lysine, His = histidine, Arg = arginine. Chaque point correspond à la moyenne de trois valeurs. - La figure 5 représente le schéma topologique de BmrA exprimée dans une bactérie et insérée dans sa membrane plasmique. BmrA est une protéine homodimérique, chaque monomère étant constitué d'un domaine transmembranaire (TMD) lié à un domaine de liaison- nucléotide (nucléotide-binding dornain (NBD)) [4, 5]. - La figure 6 représente les tests de solubilisation de membranes enrichies en BmrA avec les molécules p(COOH)3-Ar4-o(CnH2n+1) et d'autres détergents connus. Les fractions membranaires sont préparées comme indiqué dans l'exemple 1'I et analysées après incubation soit avec des molécules p(COOH)3-Ar4-o(CnH2n+1), n= 1 to 12 comme indiqué dans la figure 6 soit avec des détergents connus (FC12, FosCholine 12: n- dodécylphosphocholine, détergent zwitterionique ; SDS : sodium dodécylsulfate, détergent anionique fort ; DDM : n-dodécyl-(3-D-maltopyranoside, détergent non chargé), soit avec un tampon (No Det). Après séparation de la protéine solubilisée (S, surnageant) et non solubilisé (P, pellet, culot) par centrifugation à 100 000xg, 1 h, 4°C, le contenu protéique est analysé par SDS PAGE. Les lignes pointillées grises et noires et la ligne noire servent d'échelle de l'efficacité des molécules à solubiliser. ) Les lignes � no det � signifient � sans détergent �. - La figure 7 représente l'effet de la concentration des molécules p(COOH)3-Ar4-o(CnH2n+1) sur la solubilisation de BrmA. Les conditions expérimentales sont celles de la figure 6, à l'exception des concentrations des molécules butyle, heptyle et dodécyle qui sont comme indiquées dans la figure, pour lesquelles la correspondance g/L M est indiquée dans le tableau 2. Les lignes � no det � signifient � sans détergent �. - La figure 8 représente l'effet de la solubilisation par des séries p(COOH)3-Ar4-o(CnH2n+1) sur l'activité ATPasique de BmrA. Les essais de solubilisation ont lieu comme dans la figure 7 et les essais d'activité ATPasique sont décrits dans l'exemple 11. Les lignes pointillées verticales représentent la CMC de chaque composé. Les losanges noirs correspondent à un essai dans lequel BmrA est solubilisée avec p(COOH)3-Ar4-o(C7H15) puis reconstituée dans des lipides après élimination du détergent avec des biobeads (Bio-Rad) selon la procédure décrite dans Lenoir et al. [6]. L'axe des ordonnées représente l'activité spécifique en %, 100% d'activité correspondant à 0,25 pmol Pi produit/mg protéine/min. EXEMPLES Méthodes Générales Solvants et réactifs Le dichlorométhane (CH2Cl2) et le toluène sont distillés, sous atmosphère d'azote, sur CaH2, le tétrahydrofurane (THF) est distillé, sous atmosphère d'azote, sur sodium et benzophénone. Le diéthyl éther est distillé, sous atmosphère d'azote, sur CaH2 et conservé à 0-4°C sous azote sur Tamis moléculaire 4A. Les autres solvants utilisés proviennent du fournisseur Carlo-Erba. Résonance Maqnétique Nucléaire (RMN) Les spectres 1H et 13C sont effectués sur un appareil Bruker AV500. Les déplacements chimiques (b) des spectres RMN 1H sont calibrés selon le témoin Tetraméthylsilane (TMS) ayant pour valeur de b 0.00PPM. Les b des spectres de RMN 13C sont calibrés sur la valeur de référence du solvant Les mesures sont effectuées à 25°C dans des tubes de 5 mm de diamètre. Les spectres sont effectués dans des solvants deutérés provenant du fournisseur Aldrich ou SDS. Chromatographie Les chromatographies sur couche mince (CCM) sont réalisées sur des plaques d'aluminium � TLC Silica gel 60F254 � de Merck. Les composés sont révélés sous lampe UV ou/et sont trempés dans le révélateur à l'acide phosphomolybdique dans l'acide sulfurique et l'éthanol suivi d'un chauffage avec un décapeur thermique. Les colonnes chromatographiques sont réalisées avec un gel de silice (Silica gel 60 (40-63 dam) de Merck. Spectrométrie de masse Masse ESI : Les échantillons sont analysés sur un spectromètre Perkin Elmer Sciex API 300 dans des solvants de qualité � pour Analyse �. Exemple 1 : Synthèse de 25-Butyloxycalix[4]arène À une suspension de calix[4]arène (20 g, 0.47 mol) dans du DMF anhydre (943 ml), des solutions de CsF (8.49 g, 1.2 équivalents) et d'iodobutane (35,47 ml, 10 équivalents) ont été ajoutées. Le mélange réactionnel est agité à 40°C pendant 96 h. Le progrès de la réaction est suivi par CCM ou TLC (Chromatographie sur Couche Mince ou Thin Layer Chromatography). Une fois la réaction terminée, elle est arrêtée par ajout d'acide hydrochlorique 1M (250 ml). Le milieu réactionnel est extrait avec du CH2Cl2 (2 x 200 ml). Les phases organiques sont rassemblées, lavées avec de l'eau (2 x 250 ml) et séchées sur du MgSO4. Après évaporation du solvant, le produit brut restant est repris avec un mélange CH2Cl2/MeOH (1:1). La solution est ensuite filtrée pour éliminer le calix[4]arène qui n'a pas réagi et purifié par chromatographie sur colonne (CH2Cl2/hexane 1:1). Un solide blanc est obtenu avec un rendement de 68% par la procédure p.f. = 239°C ; 1H RMN (CDCI3) b 1.14 (t, 3H, 2JH.H = 7.1 Hz, Ar-OCH2CH2CH2CH3), 1.74 (m, 2H, Ar-O(CH2)2CH2CH3), 2.18 (m, 2H, Ar-OCH2CH2CH2CH3), 3.48 (d, 4H, 2JH_H = 13.3 Hz, Ar-CH2-Ar), 4.17 (t, 2H, 2JH4H = 7.0 Hz, Ar-OCH2 (CH2)2CH3), 4.30 (d, 2H, 2JH_H = 13.6 Hz, Ar-CH2-Ar), 4.37 (d, 2H, 2JH-H = 12.9 Hz, Ar-CH2-Ar), 6.69-7.07 (m, 12H, Ar-H), 9.46 (s, 2H, Ar-OH), 9.77 (s, 1H, Ar-OH). 13C RMN (CDCI3) b 14.2 (Ar-O(CH2)3CH3), 19.2 (Ar-O(CH2)2CH2CH3), 19.7 (Ar-OCH2CH2CH2CH3), 31.4 and 32.3 (Ar-CH2-Ar); 77.1 (Ar-OCH2(CH2)2CH3), 120.8; 121.8; 121.7; 126.1; 128.3; 128.7; 129.3 (Ar), 149.1 and 150.6 (ArC-OH), 151.5 (ArC-O(CH2)3CH3). ES spectre de masse (CHCI3) m/z: 481.2 [M+H]+, 503.3 [IM+Na]+, 519.2 [M+K]+. Exemple 2 : Synthèse de 25-Dodécyloxycalix[4]arène À une suspension de calix[4]arène (20 g, 0.47 mol) dans du DMF anhydre (943 ml), des solutions de CsF (8.49 g, 1.2 équivalents) et d'iodododécane (35.47 ml, 10 équvalents) ont été ajoutées. Le mélange réactionnel est agité à 40°C pendant 96 h. Le progrès de la reaction est suivi par TLC. Une fois la reaction terminée, elle est arrêtée par ajout d'acide hydrochlorique 1M (250 ml). Le milieu réactionnel est extrait avec du CH2Cl2 (2 x 200 ml). Les phases organiques sont rassemblées, lavées avec de l'eau (2 x 250 ml) et séchées sur du MgSO4. Après évaporation du solvant, le produit brut restant est repris avec un mélange CH2Cl2/MeOH (1:1). La solution est ensuite filtrée pour éliminer le calix[4]arène qui n'a pas réagi et purifiéé par chromatographie sur colonne (CH2Cl2/hexane 1:1). Un solide blanc est obtenu avec un rendement de 48%, p.f. = 235°C; 1H RMN (CDCI3) b 1.01 (t, 3H, 3JH_H= 7.0 Hz, Ar-O(CH2)11CH3), 1.42 (m, 4H, Ar-O(CH2)8CH2CH2CH3), 1.49 (m, 4H, Ar-O(CH2)7CH2CH2(CH2)2CH3), 1.53 (m, 4H, Ar-O(CH2)5CH2CH2(CH2)4CH3), 1.62 (m, 4H, Ar-O(CH2)3CH2CH2(CH2)6CH3), 1.80 (m, 2H, Ar-O(CH2)2CH2(CH2)8CH3), 2.29 (m, 2H, Ar-OCH2CH2(CH2)9CH3), 3.57 (d, 4H, 2JH_H = 13.3 Hz, Ar-CH2-Ar), 4.26 (t, 2H, 2JH_H = 6.8 Hz, Ar-OCH2(CH2)10CH3), 4.39 (d, 2H, 2JH_H= 13.1 Hz, Ar-CH2-Ar), 4.48 (d, 2H, 2 JH_H= 13.1 Hz, Ar-CH2-Ar), 6.77-7.18 (m, 12H, Ar-H), 9.57 (s, 2H, Ar-OH), 9.88 (s, 1H, Ar-OH). 13C NMR (CDCI3) b 14.3 (Ar-O(CH2)11CH3), 22.9 (Ar-O(CH2)10CH2CH3), 26.1 (Ar- O(CH2)9CH2CH2CH3), 29.6 (Ar-O(CH2)8CH2(CH2)2CH3), 29.7 (Ar-O(CH2)7CH2(CH2)3CH3), 29.8 (Ar-O(CH2)7CH2(CH2)4CH3), 29.8 (Ar- O(CH2)5CH2(CH2)5CH3), 29.9 (Ar-O(CH2)4CH2(CH2)6CH3), 30.1 (Ar- O(CH2)3CH2(CH2)7CH3), 31.6 (Ar-O(CH2)2CH2(CH2)8CH3), 31.8 (Ar- OCH2CH2(CH2)8CH3), 32.1 and 32.2 (Ar-CH2-Ar), 77.7 (Ar-OCH2(CH2)10CH3) 121.1; 122.1; 122.4; 126.2; 128.4; 128.6; 128.9; 129.1; 129.5; 134.4 (Ar), 149.4 and 151.0 (ArC-OH), 151.6 (ArC-O(CH2)11CH3). ES spectre de masse (CHCI3) m/z: 593.2 [M+H]+, 615.2 [M+Na]+, 631.3 [M+K]+. Exemple 3 : Synthèse de 5,11,17 Tris-[(Carboxylato)méthyl] 25-monométhyloxy 26,27,28 tris-hydroxycalix[4]arène ù composé 5a Dans un ballon sont placés 5g de tris-[(cyano)méthyl] monométhyloxy26,27,28 tris-hydroxycalix[4]arène dans 50 ml de EtOH. 50 ml de KOH 3M sont ajoutés. Le mélange réactionnel est chauffé à reflux pendant 72h. La solution est refroidie, traitée avec 500m1 d'eau glacée, acidifié avec une solution HCI 12N. Le produit jaune est récupéré par filtration et placé puis porté à reflux pendant 72h dans 50 ml de MeOH et 4.5 g de NaOH dans 50 ml d'eau. La solution est ensuite refroidie, traitée avec 250m1 d'eau glacée, acidifiée avec du HCI, filtrée, lavée à l'eau pour fournir le 5,11,17 tris-[(carboxy)méthyl] 25-monométhyloxycalix[4]arène sous forme d'une poudre blanc cassé à jaune avec un rendement de 72%. p.f. = 221°C, 'H RMN (DMSO) b 3.24 (s, 2H, Ar-CH2OOOH), 3.31 (s, 4H, Ar-CH2COOH), 3.39 (d, 2H, 2JH_H = Hz, Ar-CH2-Ar), 3.48 (d, 2H, 2JH_H = 13.2 Hz, Ar-CH2-Ar), 4.01 (s, 3H, Ar-OCH3), 4.18 (d, 2H, 2JH_H = 13.2 Hz, Ar-CH2-Ar), 4.25 (d, 2H, 2JH_H = 13.2 Hz, Ar-CH2-Ar), 6.89-7.16 (m, 9H, Ar-H), 8.79 (s, 2H, Ar-OH), 9.50 (s, 1H, Ar-OH), 12.07 (s, 3H, Ar-CH2-COOH), 13C RMN (DMSO) b 21.1 (Ar-CH2-COOH), 29.1 and 30.9 (Ar-CH2-Ar), 66.1 (Ar-OCH3), 142.7; 143.1; 147.4; 148.4 (Ar), 150.3 and 153.5 (ArC-OH), 154.1 (ArC-OCH3), 168.4 and 169.3 (Ar-CH2-COOH). ES spectre de masse (DMSO) m/z: 613.1 [M+H]+, 635.1 [M+Na]+, 611.3 [M-H]-. Exemple 4 : Synthèse de 5,11,17 Tris-[(Carboxylato)méthyl] 25-monobutyloxy 26,27,28 tris-hydroxycalix[4]arène - composé 5b Dans un ballon sont placés 5g de tris-[(cyano)méthyl] monobutyloxy26,27,28 tris-hydroxycalix[4]arène dans 50 ml de EtOH. 50 ml de KOH 3M sont ajoutés. Le mélange réactionnel est chauffé à reflux pendant 72h. La solution est refroidie, traitée avec 500m1 d'eau glacée, acidifié avec une solution de HCI 12N. Le produit jaune est récupéré par filtration puis porté à reflux pendant 72 h dans 50 ml MeOH et 4.5 g of NaOH dans 50 ml d'eau. La solution est refroidie, traitée avec 250m1 d'eau glacée, acidifiée avec du HCI, filtrée, et lavée avec de l'eau pour fournir le 5,11,17 tris-[(carboxy)méthyl] 25-monobutyloxycalix[4]arène sous forme d'une poudre blanc cassé à jaune avec un rendement de 75%. p.f. = 223°C, 1H RMN (DMSO) b 1.07 (t, 3H, 2JH_H = 6.9 Hz, Ar-O(CH2)3CH3), 1.69 (m, 2H, Ar-O(CH2)2CH2CH3), 2.01 (m, 2H, Ar-OCH2CH2CH2CH3), 3.17 (s, 2H, Ar-CH2OOOH), 3.31 (s, 4H, Ar-CH2OOOH), 3.38 (d, 2H, 2JH_H =13.1 Hz, Ar-CH2-Ar), 3.48 (d, 2H, 2H, 2JH_H 13.1 Hz, Ar-CH2-Ar), 3.57 (t, 2H, 2JH-H = Hz, Ar-OCH2(CH2)2CH3), 4.11 (d, 2H, 2JH_H = 13.1 Hz, Ar-CH2-Ar), 4.20 (d, 2H, 2JH_H = 13.1 Hz, Ar-CH2-Ar), 6.82-7.12 (m, 9H, Ar-H), 8.87 (s, 2H, Ar-OH), 9.56 (s, 1H, Ar-OH), 13C RMN (DMSO) b 13.8 (Ar-O(CH2)3CH3), 18.6 (Ar-O(CH2)2CH2CH3), 22.1 (Ar-CH2-COOH), 30.3 (Ar-OCH2CH2CH2CH3), 30.6 and 31.4 (Ar-CH2-Ar), 76.6 (Ar-OCH2(CH2)2CH3), 125.7; 127.6; 128.7, 130.1; 134.0 (Ar), 147.8 and 150.0 (ArC-OH), 151.9 (ArC-O(CH2)3CH3), 172.9 (Ar-CH2-COOH). ES spectre de masse (DMSO) m/z: 677.1 [M+Nar, 653.3 [M-H]-. Exemple 5 : Synthèse de 5,11,17 Tris-[(Carboxylato)méthyl] 25-monohexyloxy 26,27,28 tris-hydroxycalix[4]arène - composé 5c Dans un ballon sont placés 5g de tris-[(cyano)méthyl] monohexyloxy26,27,28 tris-hydroxycalix[4]arène dans 50 ml de EtOH. 50 ml de KOH 3M sont ajoutés. Le mélange réactionnel est chauffé à reflux pendant 72h. La solution est refroidie, traitée avec 500m1 d'eau glacée, acidifié avec une solution de HCI 12N. Le produit jaune est récupéré par filtration puis porté à reflux pendant 72 h dans 50 ml MeOH et 4.5 g of NaOH dans 50 ml d'eau. La solution est refroidie, traitée avec 250ml d'eau glacée, acidifiée avec du HCI, filtrée, et lavée avec de l'eau pour fournir le 5,11,17 Tris-[(carboxy)méthyl] 25-monohexyloxycalix[4]arène sous forme d'un solide jaune avec un rendement de 69%, m.p = 222°C, 1H RMN (DMSO) b 0.95 (t, 3H, 2JH_H = 7.1 Hz, Ar-O(CH2)5CH3), 1.42 (m, 4H, Ar-O(CH2)3CH2CH2CH3), 1.67 (m, 2H, Ar-O(CH2)2CH2(CH2)2CH3), 2.02 (m, 2H, Ar-CH2CH2(CH2)3CH3), 3.16 (s, 2H, Ar-CH2-COOH), 3.31 (s, 4H, Ar-CH2-COOH), 3.38 (d, 2H, 2JH_H = 12.9 Hz, Ar-CH2-Ar), 3.50 (d, 2H, 2JH-H = 12.9 Hz, Ar-CH2-Ar), 4.04 (t, 2H, 2JH_H = 7.2 Hz, Ar-OCH2(CH2)4CH3), 4.15 (d, 2H, 2JH_H = 12.9 Hz, Ar-CH2-Ar), 4.20 (d, 2H, 2JH_H = 12.9 Hz, Ar-CH2-Ar), 6.85-7.18 (m, 9H, Ar-H), 8.89 (s, 2H, Ar-OH), 9.53 (s, 1H, Ar-OH), 13C NMR (DMSO) b 14.0 (Ar-O(CH2)5CH3), 22.3 (Ar-CH2-COOH), 24.8 (Ar-O(CH2)4CH2CH3), 29.3 (Ar-O(CH2)3CH2CH2CH3), 29.7 (Ar-O(CH2)2CH2(CH2)2CH3), 30.3 (Ar-OCH2CH2(CH2)3CH3), 30.6 and 31.7 (Ar-CH2-Ar), 77.2 (Ar-OCH2(CH2)4CH3), 123.2; 124.2; 125.4; 126.9; 127.9; 129.6; 134.0 (Ar), 147.8 and 150.0 (ArC-OH), 151.9 (ArC-O(CH2)5CH3). ES spectre de masse m/z: 683.1 [M+H]+, 681.5 [M-H]-. Exemple 6 : Synthèse de 5,111,17 Tris-[(Carboxylato)méthyl] 25-monododécyl 26,27,28 tris-hydroxycalix[4]arène ù composé 5d Dans un ballon sont placés 5g de tris-[(cyano)méthyl] monododécyloxy26,27,28 tris-hydroxycalix[4]arène dans 50 ml de EtOH. 50 ml de KOH 3M sont ajoutés. Le mélange réactionnel est chauffé à reflux pendant 72h. La solution est refroidie, traitée avec 500ml d'eau glacée, acidifié avec une solution de HCI 12N. Le produit jaune est récupéré par filtration puis porté à reflux pendant 72 h dans 50 ml MeOH et 4.5 g of NaOH dans 50 ml d'eau. La solution est refroidie, traitée avec 250ml d'eau glacée, acidifiée avec du HCI, filtrée, et lavée avec de l'eau pour fournir le 5,11,17 tris-[(carboxy)méthyl] 25-monododécyloxycalix[4]arène sous forme d'un solide jaune avec un rendement de 71%, p.f. = 210°C, 1H RMN (DMSO) b 0.81 (t, 3H, 2JH-H = 7.0 Hz, Ar-O(CH2)11CH3), 1.01 (m, 4H, Ar-O(CH2)9CH2CH2CH3), 1.03 (m, 4H, Ar-O(CH2)7CH2CH2(CH2)2CH3), 1.10 (m, 4H, Ar-O(CH2)5CH2CH2(CH2)4CH3), 1.25 (m, 2H, Ar-O(CH2)4CH2(CH2)5CH3), 1.44 (m, 2H, Ar-O(CH2)3CH2(CH2)6CH3), 1.67 (m, 2H, Ar-O(CH2)2CH2(CH2)7CH3), 2.01 (m, 2H, Ar-OCH2CH2(CH2)8CH3), 3.18 (s, 2H, Ar-CH2-COOH), 3.30 (s, 4H, Ar-CH2-COOH), 3.35 (d, 2H, 2JH-H = 13.2 Hz, Ar-CHrAr), 3.47 (d, 2H, 2JH_H = 13.2 Hz, Ar-CH2-Ar), 4.01 (t, 2H, 2JH-H = 7.1 Hz, Ar-OCH2(CH2)10CH3), 4.13 (d, 2H, 2JH-H = 13.2 Hz, Ar-CHrAr), 4.17 (d, 2H, 2JH-H = 13.2 Hz, Ar-CH2-Ar), 6.83-7.12 (m, 9H, Ar-H), 8.91 (s, 2H, Ar-OH), 9.53 (s, 1H, Ar-OH), 13C RMN (DMSO) b 13.8 (Ar-O(CH2)11CH3), 21.2 (Ar-CH2-COOH), 24.6 (Ar-O(CH2)10CH2CH3), 24.8 (Ar-O(CH2)9CH2CH2CH3), 28.7 (Ar-O(CH2)8CH2(CH2)2CH3), 28.8 (Ar-O(CH2)7CH2(CH2)3CH3), 29.1 (Ar-O(CH2)6CH2(CH2)4CH3), 29.4 (Ar-O(CH2)5CH2(CH2)5CH3), 29.6 (Ar-O(CH2)4CH2(CH2)6CH3), 29.8 (Ar-O(CH2)3CH2(CH2)7CH3), 29.9 (Ar- O(CH2)2CH2(CH2)8CH3), 30.2 (Ar-OCH2CH2(CH2)9CH3), 30.5 and 31.6 (Ar-CH2-Ar), 77.8 (Ar-OCH2(CH2)10CH3), 123.1; 124.3; 124.6; 127.2; 128.4; 129.7; 134.1 (Ar), 147.1 and 150.3 (ArC-OH), 151.4 (ArC-O(CH2)11CH3), 170.3 (Ar-CH2-COOH). ES spectre de masse m/z: 767.2 [M+H]+, 765.1 [M-Hf. Exemple 7 : Propriétés surfactantes -1 La figure 1 montre l'effet surfactant des molécules p(COOH)3-Ar4-o(CnH2n+1), n=1-12 molécules. Comme montré, l'efficacité de baisser la tension de surface de l'eau, un effet typique d'un surfactant, augmente avec le nombre de groupes méthylène. Les molécules les plus courtes ne modifient pas la tension de surface de l'eau, ce qui signifie qu'elles ne se comportent pas comme une rnolécule détergente. Par contre, les molécules comportant une chaine alkyle plus longue (n= 3-12) se comportent comme des détergents. Comme attendu, le potentiel du surfactant augmente avec la longueur de la chaîne alkyle, et la molécule p(COOH)3-Ar4-o(C12H25) montre des propriétés tensioactives proches à celles de DDM ([3D-dodécyl maltopyranoside), un détergent non ionique classiquement utilise pour solubiliser la membrane des protéines. Cet exemple illustre la première propriété des composés calixarènes de l'invention, c'est-à-dire que les molécules de calixarènes p(COOH)3-Ar4-o(CnH2n+i), n=3-12 se comportent comme des surfactants Comme montré dans la figure 2, le pH module le potentiel des molécules sur la tension de surface. A pH 6 et 8, la tension de surface augmente régulièrement avec la longueur des chaînes alkyle atteignant un plateau qui correspond à la moitié de la surface de tension initial (n = 12 à pH 8.0). Ces effets illustrent une propriété de l'invention qui est que le simple changement du pH permet de moduler la tension de surface du milieu en présence des calixarènes de l'invention. Cet effet peut être réduit ou amplifié en fonction de la longueur de la chaîne alkyle des calixarènes de l'invention. Exemple 8 : Propriétés surfactantes - 2 Comme montré dans la figure 3, les calixarènes p(COOH)3-Ar4-o(CnH2n+1), n=1-12 se comportent comme des détergents avec une concentration micellaire critique (CMC) pouvant aller de 0.15 à 1.5 mM. Par concentration micellaire critique (CMC), il est entendu la concentration au delà de laquelle la concentration des molécules détergentes n'augmente plus car lesdites molécules sont impliquées dans des micelles. Les molécules comportant une chaîne alkyle avec un nombre de groupes méthylène inférieur à 8 montrent une CMC de l'ordre du mM qui ne dépend pas du pH. Au contraire, lorsqu'el les chaînes alkyle incluent plus de 8 groupes méthylène, la CMC résultante diminue sensiblement à 0.15mM lorsque le pH augmente de 6 à 8. Cet exemple illustre une propriété importante des calixarènes de la série p(COOH)3-Ar4-o(CnH2n+i), n=1-12 dont la sensibilité au pH dépend de la longueur de la chaîne alkyle. Cette propriété est particulièrement importante pour les calixarènes p(COOH)3-Ar4-o(CnH2n+1), n=9-12 qui peuvent être utilisés soit à un pH acide soit à un pH basique, pour favoriser ou défavorise la formation des micelles. Cette propriété est typiquement pour faciliter l'élimination du détergent sans en augmenter la concentration pendant l'étape de concentration de la membrane de la protéine solubilisée. Exemple 9 : Interaction de p(COOH)3-Ar4-o(CäH2r+1), avec les acides aminés La figure 4 illustre la propriété unique des calixarènes de la série p(COOH)3-Ar4-o(CnH2n+1), exemplifié avec n=7, à former des complexes avec les acides aminés, modulant la tension de surface du milieu. Aucun effet n'est observé avec les acides aminés tels que l'acide glutamique, ou son dérivé aminé, l'asparagine. Un effet modéré est observé avec la glycine. Cet effet est amplifié avec l'hydrophobicité (alanine, phénylalanine, leucine) et devient très prononcé avec les acides aminés chargés positivement tels que l'histidine, la lysine et l'arginine. Cet exemple illustre une propriété importante de la molécule p(COOH)3-Ar4-o(C7H15) (et d'autres), avec lequel le potentiel surfactant peut être augmenté facilement en ajoutant des acides aminés chargés positivement. Les complexes résultants sont proches des composés zwittérioniques. Exemple 10 : Taille des agrégats Le tableau 1 indique l'état d'agrégation des molécules p(COOH)3-Ar4- o(CnH2n+1)• Tableau 1. L'état d'agrégation des molécules p(COOH)3-Ar4-o(CnH2n+1) Diamètre apparent (nm) composé pH 2 pH 4 pH 6 pH 8 22 5a 950 340 270 260 550 270 5b 500 145 90 25 210 5c 850 210 400 6 890 730 5d 880 100 190 8 40 Comme illustré dans le tableau 1, tous les systèmes observés forment des agrégats de type micellaire. Les effets biologiques des molécules p(COOH)3-Ar4-o(CnH2n+1) Les séries p(COOH)3-Ar4-o(CnH2n+1) ont fait l'objet d'essais pour la solubilisation de BmrA, une protéine membranaire appartenant aux transporteurs ABC et qui protège les cellules contre l'efflux et la fuite des xenobiotiques vers l'extérieur de la cellule [Chami 2002 JMB 315 1075 ; Orelle 2003 JBC 278-47 47002]. Comme schématisé dans la figure 5, BmrA est une protéine homodimérique insérée dans la membrane plasma de la bactérie. Cette protéine efflue des xénobiotiquesvia l'hydrolyse d'ATP, une activité enzymatique qui dépend du repliement correct du transporteur et qui requiert des lipides [7]. Une telle activité est utilisée pour vérifier l'intégrité fonctionnelle de la protéine au cours de la procédure de solubilisation. Exemple 11 : Capacité de solubilisation des membranes biologiques 20 des calixarènes de l'invention Les bactéries compétentes C41 BL21(DE3) E. cou ont été transformées avec le plasmide pET15b-BMRA portant le gène codant pour BmrA et placées sous le contrôle d'un promoteur inductible et un gène codant pour la protéine conférant de la résistance à l'ampicilline. Un clone positif a été cultivé dans un milieu liquide à 37°C, 200 rpm en présence d'ampicilline jusqu'à une phase de croissance mi-exponentielle. L'expression de BmrA est induite épar addition de 1 mM d'isopropyl thio R-galactoside et continuée à 25°C pendant 4 h. Les bactéries ont été cueillies par centrifugation, cassées dans une presse de French (French press), et la fraction membranaire a été isolée par une série d'étapes de centrifugation à vitesses faible et élevée. Le contenu des protéines a été évalué par colorimétrie [8] et fixé à 20 mg/ml (20 mM Tris-Cl pH 8,0, 200 ml NaCl, 300 mM sucrose) avant congélation et conservation dans de l'azote liquide. Avant usage, la fraction membranaire est ensuite rapidement dégelée dans l'eau et maintenue à 4°C dans de la glace. La solubilisation est effectuée à 4°C (ou à température ambiante - 23°C- quand indiqué, en diluant dans le même tampon la fraction membranaire à une concentration finale de 2 mg protéines/ml, puis en ajoutant les détergents et les molécules testées à 10 mg/mi (1%) ou moins quand indiqué, suivi d'une incubation de 2 h à 4°C. Les fractions de protéines solubilisées ou non solubilisées sont séparées par une étape de centrifugation de 200 000xg pendant 1 h à 10°C. Chaque culot de centrifugation est suspendu dans. le volume initial et chargé, ensemble avec le surnageant sur une électrophorèse du type Laemmli gel polyacrylamide (SDS PAGE) [9] et comme décrit par exemple dans [7] pour analyser leur contenu en protéines. BmrA migre dans de telles conditions à environ 70 000 daltons. L'activité ATPasique est mesurée en évaluant le contenu en phosphate inorganique (Pi) après 5 minutes d'incubation à 37°C. La fraction de Pi produite par d'autres activités ATPasique est déduite en mesurant la même activité en présence de 1 mM d'ortho vanadate qui inhibe l'activité ATPase de BmrA (par exemple comme décrit dans [10]. Comme montré dans la figure 6, BmrA est progressivement retrouvée dans le surnageant, en fonction de la longueur de la chaîne alkyle des molécules p(COOH)3-Ar4-o(Cr,H2n,.1). Aucune solubilisation n'a lieu avec les molécules les plus courtes(n=1,2) donnant un schéma comparable à celui obtenu avec aucun détergent (lignes � no det �). La solubilisation augmente progressivement avec n=3,4, et est plus prononcée avec n=5 et 6 conduisant au même schéma que celui obtenu avec DDM. La solubilisation paraît complète pour n > 7, comme obtenue avec FC12 ou SDS. En conséquence, ces molécules solubilisent efficacement les protéines membranaires. Ceci est confirmé avec les données de la figure 7, qui montrent que la solubilisation a lieu à une concentration en molécules > CMC, environ 1.5 mM pour le composé heptyle (1g/L=1.6mg/ml) alors que ce n'est pas le cas pour le composé dodécyle étant donné qu'à une CMC de 0.15 mM (correspondant à 0.1 g/L), aucune solubilisation n'a lieu, probablement à cause d'un rapport détergent / protéine trop faible. Le tableau 2 indique la correspondance g/L en M pour les molécules testées. Tableau 2 : Poids moléculaires (PM), concentrations micellaires critiques (CMC) et correspondance entre la masse et les concentrations molaires des molécules testées p(COOH)3- [composés], m Ar4- PM CMC, M 10gIL 1 gIL 0,1 gIL 0,01 gIL 0,001 gIL o(C1H3) 612 >1,5E-03 1,6E-02 1,6E-03 1,6E-04 1,6E-05 1,6E-06 O(C3H7) 640 -1,5E-03 1,6E-02 1,6E-03 1,6E-04 1,6E-05 1,6E-06 O(C7H15) 696 -1,5E-03 1,4E-02 1,4E-03 1,4E-04 1,4E-05 1,4E-06 o(C12H25) 766 -1,5E-04 1,3E-02 1,3E-03 1,3E-04 1,3E-05 1,3E-06 Exemple 12 : Effet de la solubiilisation par la série p(COOH)3-Ar4-o(Cä H2n+1) sur l'activité ATPase de BmrA L'effet de la solubilisation par la série p(COOH)3-Ar4-o(CnH2n+i) sur l'activité ATPasique de BmrA a été analysé dans les mêmes conditions que la figure 7. La figure 8 montre l'effet de la solubilisation de BrmA par les molécules méthyle, butyle, heptyle et dodécyle et les détergents de contrôle (FC12 and C12E8, un détergent non chargé) sur l'activité ATPasique. Comme classiquement observé, l'activité ATPasique décroit avec la solubilisation comme observée pour FC12 et C12E8. Remarquablement, la comparaison entre les figures 7 et 8 montre que la molécule heptyle, à 1 mg/rnl, solubilise plutôt efficacement BmrA alors que cette concentration, légèrement en dessous de la CMC, ne conduit pas à l'inactivation. Ceci est également vrai pour le composé dodécyle, à la même concentration, 1 mg/ml, 1/10 de CMC. Les expériences de reconstitution de BrmA dans des bicouches lipidiques après élimination du détergent montrent une activité ATPasique totalement récupérée (losange noir dans la figure 8) indiquant que les molécules de l'invention préservent la topologie de BmrA dans un état fonctionnel. Liste des références [1]. Juliano, R. L., and Ling, V. (1976) A surface glycoprotein modulating drug permeability in Chinese hamster ovary cell mutants, Biochim Biophys Acta 455, 152-162. [2]. Cole, S. P., Bhardwaj, G., Gerlach, J. H., Mackie, J. E., Grant, C. 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B., and Goffeau, A. (1998) ATPase and multidrug transport activities of the overexpressed yeast ABC protein Yorlp, J. Biot. 1 o Chem. 273, 12612-12622. REVENDICATIONS1. Procédé d'extraction sélective de protéines membranaires comprenant une étape qui consiste à mettre en contact une solution aqueuse de la protéine membranaire à extraire avec au moins un calixarène de formule (I) : OR1 OR4 R20 OR3 X3 (I) dans laquelle : ^ n est un nombre entier égal à 1, 3, 5 ou 6 ; ^ R1, R2, R3, R4 représentent, indépendamment l'un de l'autre, un atome d'hydrogène ; un groupe (C1_12) alkyle linéaire ou ramifié éventuellement substitué par un ou plusieurs hétéroatomes choisis dans le groupe d'atomes O, S, N, P ; un groupe (C1_12) alkyle linéaire ou ramifié éventuellement substitué par un groupe ùCOOR où R est un groupe (C14 alkyle linéaire ou ramifié ; un groupe aryle comprenant de 6 à 20 atomes de carbone ; ^ X1, X2, et X3 représentent, indépendamment l'un de l'autre, un groupe û (CH2)m-COOR' dans lequel - m est un nombre entier allant de 0 à 10, - R' représente un atome d'hydrogène ou un groupe (C14 alkyle linéaire ou ramifié ; ou l'un de ses sels pharmaceutiquement acceptables. 2. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'extraction sélective de la protéine membranaire est réalisée avec au moins un calixarène de formule (I) dans laquelle : ^ n est un nombre entier égal à 1 ; ^ R1, R2, R3, R4 représentent, indépendamment l'un de l'autre, un atome d'hydrogène ; un groupe (C1_12) alkyle linéaire ou ramifié ; ^ X1, X2 et X3 représentent, indépendamment l'un de l'autre, un groupe û (CH2)m-COOR' dans lequel - m est un nombre entier allant de 0 à 10, - R' représente un atome d'hydrogène ; ou l'un des sels pharmaceutiquement acceptables. 3. Procédé selon l'une des revendications 1 ou 2, caractérisé en ce que la protéine membranaire à extraire est présente dans une fraction membranaire biologique issue d'organisme procaryotique ou eucaryotique, sain ou altéré. 4. Procédé selon la revendication 3, caractérisé en ce que la protéine membranaire est une protéine choisie dans le groupe comprenant des protéines de transport, des glycoprotéines P (Pgp/ABCB1), MRP1/ABCC1, BCRP/ABCG2, et toute protéine de cette classe. 5. Procédé selon la revendication 4, caractérisé en ce que la protéine de transport est un transporteur ABC, choisi dans le groupe comprenant BmrA. 6. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'étape de mise en en contact d'une solution aqueuse comprenant la protéine membranaire à extraire avec au moins un calixarène de formule (I) est réalisée à un pH allant de 5.5 à 10. 7. Procédé selon la revendication 6, caractérisé en ce que l'étape de mise en contact d'une solution aqueuse comprenant la protéine membranaire à extraire avec au moins un calixarène de formule (I) est réalisée à une température allant de 0 à 100°C. 8. Procédé selon à la revendication 7, caractérisé en ce que l'étape de mise en contact d'une solution aqueuse comprenant la protéine membranaire à extraire avec au moins un calixarène de formule (I) est réalisée à une concentration de calixarène allant de 10"6 à 10-2 M. 9. Procédé selon la revendication 8, caractérisé en ce que l'étape de mise en contact d'une solution aqueuse comprenant la protéine membranaire à extraire avec au moins un calixarène de formule (I) est réalisée avec des calixarènes en solution ou des calixarènes en agrégats colloïdaux. 10. Procédé selon la revendication 9, caractérisé en ce que l'agrégat colloïdal est dans le groupe comprenant les micelles, les liposomes, les nanoparticules lipidiques. 11. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'étape de mise en contact d'une solution aqueuse comprenant la protéine membranaire à extraire avec au moins un calixarène de formule (I) est réalisée éventuellement en présence d'au moins un co-soluté choisi dans le groupe comprenant, i) les sels organiques et inorganiques choisi dans le groupe comprenant les sels pharmaceutiquement acceptables ; ii) les petites molécules bioactives choisies dans le groupe des acides aminés, des vitamines, des lipides, des stéroïdes, des carbohydrates ou des métabolites ; iii) les molécules bioactives oligomériques choisies dans le groupe des peptides, des oligonucléotides, des oligosaccharides ; iv) les molécules biologiques polymériques choisies dans le groupe des protéines, polynucléotides et polysaccharides. 12. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 11, dans lequel l'étape de mise en contact est précédée par une étape dans laquelle la protéine membranaire à extraire ou la fraction membranaire la contenant est solubilisée dans une solution tampon. 13. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 12, caractérisé en ce que les protéines complexées avec les calixarènes de formule (I) et les protéines non complexées sont séparées par centrifugation.