FR 2927256 A1 20090814 FR 0800762 A 20080213 COMPOSITION POUR LE TRAITEMENT DES AFFECTIONS INFLAMMATOIRES DES VOIES RESPIRATOIRES A BASE D'UNE ALFA-AMYLASE ET D'UN ANESTHESIQUE LOCAL ET SON PROCEDE DE PREPARATION La présente invention concerne une composition pour le traitement des états congestifs de l'oropharynx sans surinfection. La nouvelle composition selon l'invention associe de manière synergique un anti-inflammatoire enzymatique et un anesthésique local. Un objet de la présente invention concerne également un procédé de préparation d'une telle composition. Les alfa-amylases sont connues depuis longtemps pour leurs propriétés anti-inflammatoires et anti-oedemateuses. Elles possèdent également des propriétés antibactériennes et antivirales qui ont été décelées plus récemment. Des travaux ont en effet démontré que grâce à leurs propriétés amylolytiques, les enzymes de cette famille provoquaient la dégradation de la paroi cellulaire et de la membrane de nombreuses bactéries qui sont riches en hydrates de carbone. De la même manière, l'alfa-amylase dégrade les constituants glucidiques présents dans l'enveloppe cellulaire des particules virales. Il est connu dans l'art antérieur d'utiliser de tels composés anti-inflammatoires pour traiter les affections inflammatoires des voies respiratoires. L'action particulièrement efficace des alfa-amylases a en effet été démontrée dans ce type d'affections et leur utilisation seules ou en association avec d'autres molécules actives telles que des composés mucolytiques a déjà été décrite (FR 2 827 776). Les affections inflammatoires des voies respiratoires, qu'elles soient d'origine virale ou bactérienne, occasionnent une gêne de la respiration invalidante associée à des douleurs persistantes contribuant à la fatigue du sujet atteint. L'inflammation des voies respiratoires est habituellement traitée par différentes substances actives selon les causes de l'affection. Le sujet est alors progressivement soulagé par l'action anti-inflammatoire mais la douleur persiste jusqu'à élimination complète du germe pathogène et du syndrome inflammatoire. Il est par ailleurs connu certaine composition ne proposant qu'une solution pour soulager les douleurs isolément sans y associer de molécule réellement active pour traiter 35 l'inflammation. La présente invention vise à apporter une solution à ce problème en proposant une composition permettant à la fois de traiter l'inflammation des voies respiratoires en cas d'affections tout en soulageant le malade des douleurs occasionnées. L'association des deux composés selon l'invention procure ainsi un effet synergique apaisant le sujet sur deux plans d'où une plus grande efficacité de la composition selon l'invention se traduisant par une disparition des symptômes plus rapide. Plus particulièrement, la présente invention consiste en une composition pour le traitement des affections inflammatoires des voies respiratoires comprenant une enzyme alfa-amylase et au moins un anesthésique local. 10 Cette enzyme est de préférence une (1,4)-a-D-glucan-glucanohydrolase, communément appelée "alpha-amylase", ou "alfa-amylase" selon la Dénomination Commune Internationale préconisée par l'Organisation Mondiale de la Santé pour les substances pharmaceutiques. Le mécanisme par lequel l'alfa-amylase dégrade les composés polysaccharidiques est une réaction d'hydrolyse où l'enzyme joue le rôle de catalyseur. Celle-ci attaque au hasard 15 les liaisons a-(1,4) de l'amidon libérant du glucose et du maltose (le maltose est un disaccharide composé de deux monomères glucoses). Les parois cellulaires sont endommagées par cette hydrolyse, ce qui conduit à une perte de virulence et à l'arrêt de la prolifération des agents infectieux dans l'organisme. 20 Dans un mode de réalisation particulier, on utilise l'alfa-amylase sécrétée naturellement par un micro-organisme bactérien, de préférence par Bacillus amyloliquefaciens. Cette bactérie, reconnue comme espèce à part entière en 1987, était considérée antérieurement comme un représentant atypique de l'espèce Bacillus subtilis (Priest et al., Int. J. Syst. Bacteriol. 37:69 1987). 25 L'alfa-amylase produite naturellement par B. amyloliquefaciens est une protéine de 58 kDa, dont les dix premiers acides aminés, déterminés par séquençage sont : Val - Asn - Gly - Thr - Leu - Met - Gln - Tyr - Phe - Glu 30 L'alfa-amylase utilisée dans la composition selon l'invention peut être produite par tout procédé de culture microbiologique mettant en oeuvre un micro-organisme compétent pour la production et l'excrétion de ladite alfa-amylase. De manière préférée, l'alfa-amylase bactérienne est obtenue par fermentation en réacteur de B. amyloliquefaciens. Les procédés de production d'enzymes par fermentation microbiologique et de purification sont bien 35 connus de l'homme du métier et sont mis en oeuvre par des entreprises spécialisées dans le domaine correspondant.5 En particulier, l'alfa-amylase entrant dans la composition revendiquée est produite par un procédé la mettant à l'abri d'une contamination par l'E.S.B. (Encéphalopathie Spongiforme Bovine). En effet, aucune matière première utilisée dans l'ensemble du cycle de production (fermentation, extraction, finition) n'est d'origine bovine ou ovine. D'autre part, toutes les matières premières utilisées en fermentation (source de carbone et de protéines, azote, sel minéraux) sont stérilisés à 125°C' pendant 30 minutes. Le produit ainsi obtenu se présente sous la forme d'une poudre fine de couleur crème à beige contenant l'enzyme alfa-amylase, soluble dans l'eau et conforme aux normes de qua- lité et de sécurité exigées pour les produits à usage pharmaceutique (absence de métaux, stérilité). L'enzyme est commercialisée sous forme de médicament, en France et dans de nombreux pays, par le laboratoire Top Pharm (Revel, France). La quantité d'alfa-amylase incorporée à la composition est définie par son niveau d'activité enzymatique exprimée en unité internationale CEIP, notée "U.CEIP", la valeur d'une unité U.CEIP étant égale à 0,7143 unité de la pharmacopée européenne. Elle est comprise entre 800 et 1 200 U.CEIP pour 500 mg de composition, et est de préférence de 1 000 U.CEIP, pour 500 mg de composition. En raison de la nature de la matière première utilisée, l'activité enzymatique de l'alfa-amylase en poudre doit être évaluée avant la préparation de la composition de manière à déterminer la quantité en poids qu'il faut incorporer à la composition pour obtenir une activité telle que définie précédemment. Ces valeurs sont contrôlées au moment de la préparation de la composition et vont décroître dans le temps par un phénomène naturel de dégradation de l'enzyme. Cependant cette décroissance est légère, de sorte que l'activité enzymatique au bout de deux ans sera encore au moins de 800 U.CEIP pour 500 mg de composition. L'activité amylolytique peut être mesurée au moyen d'une méthode analytique telle que celle détaillée dans l'exemple 4. La composition selon l'invention contient également un anesthésique local choisi parmi les composés à la disposition de l'homme de l'art. De préférence une tétracaïne (4- (butylamino)benzoate de 2-(diméthylamino)éthyle) ou l'un de ses sels tel que le chlorhydrate de tétracaïne ou d'autres dérivés acceptables, permet d'obtenir un effet synergique optimal apportant un soulagement des douleurs conjointement à l'action anti-inflammatoire des amylases. Il peut également s'agir d'une lidocaïne ou tout autre anesthé- sique de contact connu de l'homme du métier. L'anesthésique local est présent dans la composition selon l'invention à une concentration compatible avec le maintien de l'activité de l'alfa-amylase et qui apporte l'effet bénéfique recherché pour le patient. Les concentrations répondant à ces critères se situent dans un intervalle de 0,02 à 0,06 % en poids total de la composition. Dans un mode de formulation particulier, la composition selon l'invention est avantageusement complétée par l'addition d'une ou plusieurs vitamines telle que l'acide L- ascorbique (vitamine C) ou l'un de ses sels acceptables. Par cette association, il est possible de compenser les carences pouvant survenir lors de ce genre d'affection et permettre au malade de se rétablir encore plus vite. Aux principes actifs ainsi définis, sont ajoutés différentes substances utilisées pour la for- mulation des compositions à usage pharmaceutique. Des additifs peuvent être choisis parmi tout composé à la disposition de l'homme du métier, compatible avec une prise orale de la composition selon l'invention. De préférence, la composition selon l'invention comprend au moins un agent édulcorant, au moins un arôme, au moins un stabilisant, au moins un liant, au moins un colorant, au moins un lubrifiant, au moins un agent d'écoulement, au moins un agent désagrégant. De manière avantageuse, un excipient conférant un arôme caramel ou caramel-citron peut être utilisé en parallèle avec un colorant caramel. La présente invention a également pour objet un procédé de préparation de la composition ci-avant décrite. Du fait de la nature des principes actifs utilisés, en particulier la fragilité de l'enzyme alfa- 30 amylase, il a été imaginé un procédé permettant de formuler la composition selon l'invention tout en préservant l'activité enzymatique. Dans les procédés de granulation classiques, les matières actives sont généralement incorporées en phase interne. Ce type d'incorporation implique la formation d'un grain humide dans lequel sont intégrés les principes actifs. Dans ces conditions l'activité de l'enzyme alfa-amylase pourrait être fortement 35 dégradée, d'où une efficacité moindre sinon quasi nulle. Afin d'apporter une solution à ce problème technique, le demandeur a mis au point un pro-cédé original comportant une étape d'incorporation en phase externe d'une enzyme alfa-25 amylase dans une composition en association avec un anesthésique local. Plus précisément, le procédé selon l'invention permet la préparation d'une composition pour le traitement des affections inflammatoires des voies respiratoires comprenant une enzyme alfa-amylase et au moins un anesthésique local caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes : a) sélectionner et peser selon la quantité de composition désirée au moins un colorant, au moins un liant et au moins un anesthésique local, b) ajouter de l'eau purifiée et mélanger le tout jusqu'à obtention d'une solution colorante homogène, c) sélectionner, peser, calibrer au moins un édulcorant, d) pulvériser la solution colorante sur la poudre d'édulcorant, e) sécher, calibrer le mélange de manière à obtenir un pourcentage d'humidité compris entre 1,2 et 1,8 %, f) introduire le granulé calibré dans un mélangeur, g) sélectionner, peser et ajouter dans le mélangeur au moins un arôme et au moins une enzyme alfa-amylase dont l'activité amylasique a préalablement été mesurée afin de déterminer la quantité d'actif à incorporer en fonction du poids du granulé obtenu à l'étape précédente, et réajuster la quantité d'excipients de la phase externe, h) mélanger jusqu'à homogénéisation, i) ajouter au moins un additif et mélanger jusqu'à homogénéisation, j) peser et compresser selon le format défini. Ce procédé est particulièrement avantageux pour réaliser une composition selon l'invention, comprenant notamment une alfa-amylase, de préférence sécrétée par Bacillus amyloliquefaciens. Préalablement à son incorporation, on procèdera à la mesure de l'activité de l'enzyme alfa-amylase au moyen d'une méthode cinétique par spectrométrie UV telle que présentée dans l'exemple 3. L'anesthésique local peut aussi bien être incorporé dès le début du procédé (phase interne) ou en même temps que l'enzyme alfa-amylase est incorporée (phase externe). La composition selon l'invention est destinée à la préparation d'un médicament préconisé dans le traitement des pathologies affectant la sphère ORL et en particulier la sphère oropharyngée. Les exemples ci-après sont donnés à titre purement illustratif et non limitatif. EXEMPLE 1 Formule de composition Cl : préparation de 500 mg de composition Alfa-amylase Tétracaïne PVP K30 Stéarate de magnésium Talc Colorant caramel Arôme caramel Sucre glace EXEMPLE 2 Formule de composition C2 : préparation de 500 mg de composition avec vitamine C 1000 U.CEIP 0,2 mg 16,3 mg 5 mg 5 mg 3 mg 6,25 mg q.s. 500 mg Alfa-amylase Tétracaïne Acide L-ascorbique PVP K30 Stéarate de magnésium 25 Talc Colorant caramel Arôme caramel-citron Sucre glace 1000 U.CEIP 0,2 mg 30 mg 16,3 mg 5 mg 5 mg 3 mg 6,25 mg q.s. 500 mg 30 35 EXEMPLE 3 Procédé de préparation d'une composition avec incorporation des deux actifs en phase externe 1. Pesées 2. Préparation de la solution colorante Dans un bêcher en inox, introduire de l'eau purifiée. Ajouter la PVP, sous agitation mécanique. Ajouter le colorant liquide. Rincer le flacon avec le q.s de l'eau purifiée. Agitation mécanique jusqu'à homogénéité complète du mélange. 3. Calibrage du sucre glace Calibrer le grain. 4. Mouillage-granulation-séchage Incorporer le sucre glace dans le mélangeur à lit d'air fluidisé. Paramètres : T°entrée = 45 °C T° sortie = 35 °C Débit d'air d'entrée compris entre 60 et 80% Débit d'air de sortie compris entre 30 et 60% Pulvériser le sucre glace avec la solution liante colorante. Paramètres : 0 buse = 1 mm Débit liquide = 8 à 12 ml/min Rincer le dispositif de pulvérisation avec de l'eau purifiée. Contrôle bloquant d'humidité : Réalisé sur 5g de grain pendant 5 minutes à 100°C (Spécifications : 1,4 à 1,7%). 5. Séchage Si nécessaire sécher le grain pendant quelques minutes sinon mouiller avec une petite quantité d'eau purifiée. 6. Calibrage Récupérer le grain. Tamiser le grain. 7. Mélange phase externe Introduire le grain dans un mélangeur. Ajouter l'arôme préalablement tamisé, l'alfa-amylase et la tétracaïne. Homogénéiser dans le mélangeur pendant 5 minutes à vitesse déterminée (5 à 10 tours/min). 8. Mélange final/Lubrification Ajouter le talc et le stéarate de magnésium préalablement tamisés. Homogénéiser dans le mélangeur pendant 5 minutes à vitesse déterminée (5 à 10 tours/min). 9. Pesées 10. Compression Comprimer le grain : Comprimés 0 9R9 ou 0 10R9 bombé ou comprimés de forme carrée 13x13, 500 mg, dure-té > 8kP EXEMPLE 4 Méthode analytique de dosage de l'activité amylasique 1.1 Principe La méthode cinétique de dosage amylasique consiste à doser l'amidon non consommé par l'enzyme en utilisant une solution KI/I2. L'iode est pris au piège dans les chaînes glucosidiques de l'amidon ce qui le colore en bleu. Des mesures de DO à 620 nm sont effectuées pour suivre l'avancement de l'hydrolyse de l'amidon par l'alfa-amylase. 10 1.2 Matériel et réactifs Matériel : Agitateur magnétique et barreaux aimantés, Spectrophotomètre UV, Allumettes, Bain thermostaté, Balance analytique, Bêcher de 150 mL, 250 mL, 500 mL Bêcher inox de 500 mL, Cartouche de gaz. Chronomètres et décompteursä Dispensette 2 mL à 10 mL, Eprouvette graduée de 50 mL, Fioles jaugées de 50 mL, 100 mL, 200 mL, 500 mL Flacons brun, Flacons en verre, Nacelle de pesées, pH-mètre, Pipettes automatiques, Pipettes jaugée à 2 traits de 2 rnL, 5 mL, 10 mL et 20 mL Sabot de pesées. Réactifs : Acide phosphorique (H3PO4), Amidon, Chlorure de sodium (NaCl), Hydroxyde de sodium (NaOH), Iode (12), 9 Iodure de potassium (M), Phosphate de potassium anhydre (KH2PO4), Phosphate dipotassique (K2HPO4, 3 H2O), Poudre d'a-amylase (matière première), Spécialités pharmaceutiques, Poudre standard d'alfa-amylase. 1.3 Préparation des réactifs employés pour la procédure de contrôle analytique 1.3.1 Préparation du tampon phosphate pH 6,6 Peser 5,350 g (+1- 0,02) de phosphate de potassium anhydre (KH2PO4) et 5,350 g (+1- 0,02) de phosphate dipotassique (K.2HPO4, 3 H20). Mettre à dissoudre sous agitation magnétique dans un bêcher de 500 mL rempli d'eau dis-tillée. Ajuster le pH entre 6,55 et 6,65 avec de l'acide phosphorique (H2PO4) ou de l'hydroxyde de sodium (NaOH). Ajuster le volume à 500 mL en utilisant une fiole jaugée de 500 mL. Stocker le tampon phosphate obtenu dans un flacon en verre de 500 ml à 4°C pendant 1 mois. Noter la date de fabrication sur le flacon. 1.3.2 Préparation de la solution d'amidon (substrat de l'enzyme) Peser 10,0 g (+/- 1,0) d'amidon ((C6H10O5)n) à l'aide de la balance analytique. Faire la tare de la nacelle de pesées contenant l'amidon. Verser l'amidon dans un bêcher de 500 mL à parois épaisses. Peser la nacelle vide. Noter exactement la masse d'amidon introduite dans le bêcher et le taux de matière sèche du lot utilisé. Ajouter environ 50 mL d'eau distillée. Placer sous agitation magnétique jusqu'à obtenir une suspension homogène. Ajouter 400 mL d'eau distillée bouillante et augmenter la vitesse d'agitation. Faire chauffer et porter à ébullition la solution d'amidon obtenue pendant 2 minutes. Nettoyer le bêcher de 500 mL en inox avec de l'eau distillée pour récupérer les traces d'amidon Laisser refroidir à température ambiante. Ajouter 10 mL de tampon phosphate pH 6,60 (� 1.4.1). Ajuster le pH à 6,60 +/- 0,03 avec de l'acide phosphorique (H2PO4) ou de l'hydroxyde de sodium (NaOH). Verser la solution dans une fiole jaugée de 500 mL Nettoyer le bêcher avec de l'eau distillée pour récupérer les traces d'amidon Ajuster le volume au trait de jauge. Conserver la solution 1 jour à température ambiante. 1.3.3 Préparation de la solution de chlorure de sodium Peser 20,0 g (+/- 0,10) de chlorure de sodium (NaCl). Dissoudre le chlorure de sodium dans une fiole jaugée de 2 L avec 800 mL d'eau distillée par agitation manuelle. Ajouter 40 mL de tampon phosphate pH 6,60 (� 1.4.1). Agiter manuellement. Compléter au trait de jauge. 1.3.4 Préparation des solutions d'iode 1.3.4.1 Préparation de la solution mère d'iode Dans un bêcher peser 1,1 g (+1- 0,01) d'iode (I2) et 2,2 g (+/- 0,01) d'iodure de potassium 20 (KI) Verser 30 mL d'eau distillée. Laisser sous agitation magnétique jusqu'à dissolution complète de l'iode. Transvaser la solution dans une fiole jaugée de 50 mL et compléter avec de l'eau distillée. Stocker la solution obtenue dans un flacon brun à 4°C pendant 1 mois. 25 Noter la date de fabrication sur le flacon. 1.3.4.2 Préparation de la solution d'iode pour essai Peser 20 g (+1- 0,10) d'iodure e potassium (M). 30 Dissoudre sous agitation magnétique les 20 g de KI. Verser la solution dans une fiole jaugée de 500 ml.. Ajouter 2 mL de la solution mère d'iode. Compléter au trait de jauge. Stocker la solution obtenue dans un flacon brun à température ambiante pendant 1 jour.15 11 1.3.5 Préparation des échantillons à doser Les échantillons à tester sont préparés dans la solution de chlorure de so- dium (� 1.4.3.). 1.3.5.1 Préparation de la solution standard d'alfa-amylase Utiliser l'étalon d'alfa-amylase dont une activité standard a été attribuée par la méthode pharmacopée européenne de dosage de l'activité amylasique (étalon fourni par Top Pharm). L'activité de l'étalon est précisée sur le flacon utilisé (soit environ 200 000 U.CEIP/g de poudre). Peser 0,1 g (+1- 0,01) d'alfa-amylase standard à l'aide de la balance analytique. Faire la tare du sabot de pesées contenant l'alfa-amylase. Introduire la poudre dans une fiole jaugée de 100 mL. Peser le sabot de pesées vide. Noter exactement la masse d'alfa-amylase introduite dans la fiole et le numéro du lot utili-sé. Verser 40 mL de solution de NaCl. Placer sous agitation magnétique jusqu'à dissolution complète de la poudre. Compléter au trait de jauge. Faire une dilution au 1/200. 1.3.5.2 Préparation des solutions à base de la matière première La matière première est préparée suivant le protocole défini pour la solution d'alfa-amylase standard (� 1.3.5.1). 1.3.5.3 Préparation des solutions à base des spécialités pharmaceutiques Les comprimés à sucer : Dissoudre 3 pastilles dans la solution de NaCl sous agitation magnétique. Transvaser la solution dans une fiole jaugée de 200 mL. Nettoyer le bêcher avec la solution de NaCl pour récupérer les traces d'alfa-amylase. Compléter au trait de jauge. Faire une dilution au 5/50. 1.4 Procédure analytique Les réactions du dosage doivent se faire au bain-marie à 30°C. Mettre à thermostater au bain-marie pendant 15 minutes : • La solution d'alfa-amylase à doser (� 1.35) ; • 4 Flacons contenant 20 mL de solution d'amidon (milieu réactionnel) (� 1.3.2) ; • Une série de tubes contenant 5 mL de solution d'iode pour essai (� 1.3.4.2). 10 Pendant les 15 minutes : • Allumer le spectrophotomètre ; • Régler la longueur d'onde à 620 nm ; • Faire le blanc sur l'eau distillée. A temps zéro : 15 • Prélever 10 mL de solution d'alfa-amylase à doser ; • Introduire les 10 mL dans le flacon contenant les 20 mL d'amidon ; • Déclencher le chronomètre lorsque la moitié des 10 mL sont versés ; • Agiter manuellement par rotation et remettre en incubation. Après 7 à 8 minutes d'incubation, commencer les mesures de DO à 620 nm : 20 • Prélever 1 mL du milieu réactionnel 5 secondes avant le temps de mesure ; Les verser dans un tube contenant 5 mL de solution d'iode ; • Mesurer immédiatement le DO à 620 nm. Si la DO à 620 nm est aux environs de 3,000 : • Recommencer l'opération décrite ci-dessus toutes les trente secondes jusqu'à me-25 surer une DO à 620 nm d'environ 2,000 ; • Puis, espacer les prélèvements toutes les minutes jusqu'à mesurer une DO à 620 nm d'environ 0,500. Relever le temps et la valeur de la DO à 620 nm correspondante. 30 Tracer la courbe enzymatique : • Axe des Y: DO à620nm; • Axe des X : Temps en minutes. La disparition de l'amidon, mesurée par la lecture de la DO à 620 nm est directement 35 corrélée à l'activité amylasique de la protéine 1.5 Calculs de l'activité amylasique La courbe enzymatique tracée au paragraphe 1.5 présente : 40 • Une partie linéaire où le substrat est en excès par rapport à l'enzyme ; 12 15 20 25 • Une partie non linéaire. Tracer le prolongement de la partie linéaire. Tracer la droite DO à 620 nm = 0,4800. Lire le temps d'incubation T correspondant à l'abscisse du point d'intersection de ces deux 5 droites. 1.5.1 Calcul de A A représente la quantité d'amidon anhydre consommée par minutes par la solution enzymatique. Il s'exprime : Masse d'amidon (mg) x 20 x Taux de matière sèche A= ù 500 x Temps d'incubation (minutes) • 500 = Volume de la solution d'amidon en mL (� 1.4.2.). • 20 = Volume d'amidon durant la prise d'essai en mL (� 1.5). • Le taux de matière sèche est compris entre 0 et 1. 1.5.2 Calcul du coefficient de correction L'activité de la solution standard d'alfa-amylase (� 1.4.5.1) mesurée par la méthode décrite ci-dessus est comparée à l'activité amylasique définie préalablement comme la valeur vraie grâce à la méthode de dosage de la pharmacopée européenne. Le rapport de ces deux valeurs constitue le coefficient de correction. Activité réelle de l'étalon A x 200 x 100 Masse de poudre (g)x 1 x 10 x 2 • A = quantité d'amidon anhydre consommée par minutes par la solution enzymatique (� 1.5.1), • 200 = Volume de la solution à tester en mL (� 1.4.5.1), • 100 = Volume de la solution mère en mL (� 1.4.5.1), 1 = Volume de solution mère employée pour préparer la solution à tester en mL (� 1.4.5.1), • 10 = Prise d'essai de la solution à doser en mL (� 1.5), • 2 = Facteur de conversion RAU -Flèche CEIP. Ce coefficient est généralement compris entre 0,70 et 0,9. Coefficient de correction = Activité théorique de l'étalon (U.CEIP/g) Activité réelle 30 1.5.3 Calcul de l'activité enzymatique des échantillons 1.5.3.1 Calcul de l'activité enzymatique de la matière première 5 Activité enzymatique = A x 200 x 100 x Coefficient de correction = U.CEIP/g Masse de poudre (g) x 1 x 10 x 2 • A = quantité d'amidon anhydre consommée par minutes par la solution enzymatique (� 1.5.1), • 200 = Volume de la solution à tester en mL (� 1.3.5.2), • 100 = Volume de la solution mère en mL (� 1.3.5.2), 10 • 1 = Volume de solution mère employée pour préparer la solution à tester en mL (� 1.3.5.2), • 10 = Prise d'essai de la solution à doser en mL (� 1.4), • 2 = Facteur de conversion RAU CEIP. 15 1.5.3.1 Calcul de l'activité enzymatique des spécialités pharmaceutiques Les comprimés à sucer : Activité enzymatique = A x 200 x 50 x Coefficient de correction = U.CEIP/comprimé 3 x 5 x 10 x 2 • A = quantité d'amidon anhydre consommée par minutes par la solution enzymatique (� 1.6.1), 200 = Volume de la solution de comprimés en mL (� 1.4.5.3), 50 = Volume de la solution fille en mL (� 1.4.5.3), 3 = nombre de comprimés dissous, • 5 = Volume de solution employée pour préparer la solution à tester en mL (� 1.4.5.3), • 10 = Prise d'essai de la solution à doser en mL (� 1.5), • 2 = Facteur de conversion RAU - CEIP. 20 25 30 REVENDICATIONS 1- Composition pour le traitement des affections inflammatoires des voies respiratoires caractérisée en ce qu'elle comprend une enzyme alfa-amylase et au moins un anesthésique local. 2- Composition selon la revendication précédente caractérisée en ce que l'enzyme alfa-amylase est d'origine bactérienne, de préférence produite par Bacillus amyloliquefaciens. 3- Composition selon la revendication précédente caractérisée en ce que ladite enzyme alfa-amylase est présente à raison de 800 à 1 200 unités CEIP. 4- Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes caractérisée en ce que l'anesthésique local est une tétracaïne ou l'un de ses sels ou dérivés acceptables. 5- Composition selon la revendication précédente caractérisée en ce qu'elle comprend 0,02 à 0,06 % en poids total dudit anesthésique local. 6- Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes caractérisée en ce 20 qu'elle comprend une ou plusieurs vitamines, de préférence l'acide L-ascorbique ou l'un de ses sels acceptables. 7- Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes caractérisée en ce qu'elle comprend un ou plusieurs des additifs suivants : au moins un agent édulcorant, au 25 moins un arôme, au moins un stabilisant, au moins un liant, au moins un colorant, au moins un lubrifiant, au moins un agent d'écoulement, au moins un agent désagrégant. 8- Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes caractérisée en ce qu'elle présente de préférence un arôme caramel ou caramel-citron, ainsi qu'un colorant 30 caramel. 9- Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes caractérisée en ce qu'elle se présente sous une forme sèche appropriée pour l'administration orale, de préférence un comprimé à sucer. 10- Procédé de préparation d'une composition pour le traitement des affections inflammatoires des voies respiratoires comprenant au moins une enzyme alfa-amylase et au moins un anesthésique local caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes : 35a) sélectionner et peser selon la quantité de composition désirée au moins un colorant, au moins un liant et au moins un anesthésique local, b) ajouter de l'eau purifiée et mélanger le tout jusqu'à obtention d'une solution colorante homogène, c) sélectionner, peser, calibrer et tamiser au moins un édulcorant, d) pulvériser la solution colorante sur la poudre d'édulcorant, e) sécher et calibrer le mélange de manière à obtenir un pourcentage d'humidité de celui-ci compris entre 1,2 et 1,8 %, f) introduire le granulé calibré dans un mélangeur, g) sélectionner, peser et ajouter dans le mélangeur au moins un arôme et au moins une enzyme alfa-amylase dont l'activité amylasique a préalablement été mesurée afin de déterminer la quantité d'actif à incorporer en fonction du poids du mélange obtenu à l'étape précédente, h) mélanger jusqu'à homogénéisation, i) ajouter au moins un additif et mélanger jusqu'à homogénéisation, j) peser et compresser selon le format défini. 11- Procédé selon la revendication précédente caractérisé en ce que l'enzyme alfa-amylase, est d'origine bactérienne, de préférence produite par Bacillus amyloliquefaciens. 12- Procédé selon la revendication 10 ou 11 caractérisé en ce que l'activité amylasique est mesurée par une méthode cinétique par spectrométrie UV. 13- Procédé selon l'une quelconque des revendications 10 à 12 caractérisé en ce que 25 l'anesthésique local est une tétracaïne ou l'un de ses sels ou dérivés acceptables. 14- Procédé selon l'une quelconque des revendications 10 à 13 caractérisé en ce que l'anesthésique local n'est incorporé qu'à l'étape g). 30 15- Procédé selon l'une quelconque des revendications 10 à 14 caractérisé en ce que une ou plusieurs vitamines sont incorporées à l'étape i). 16- Procédé selon l'une quelconque des revendications 10 à 15 caractérisé en ce que l'additif ajouté à l'étape i) est choisi parmi le groupe suivant : au moins un agent édulco- 35 rant, au moins un arôme, au moins un stabilisant, au moins un liant, au moins un colorant, au moins un lubrifiant, au moins un agent d'écoulement, au moins un agent désagrégant.20