FR 2924023 A1 20090529 FR 0759379 A 20071128 Utilisation d'un extrait d'Aloe pour la promotion et le renfort de la cohésion des cellules de la peau La présente invention a trait à des compositions cosmétiques pour le soin 5 de la peau, adaptées notamment pour lutter contre les effets néfastes du vieillissement cutané (effet dit � anti-âge �). On connaît actuellement différents actifs cosmétiques ayant des effets anti-âge du type précité. La plupart de ces produits servent uniquement à camoufler 10 les rides et à hydrater la peau, mais certains produisent néanmoins des changements dans la structure de la peau. Il a notamment été décrit de tels effets en employant des dérivés de la vitamine A, en particulier le rétinol, le palmitate de rétinyle et les acides rétinoïques, qui sont utilisés pour diminuer les irrégularités de la peau et réduire les rides, ou la kinétine (N6-fururyladénine) qui agit comme anti- 15 oxydant et stimule les voies de maintenance et de réparation cellulaire. Un but de la présente invention est de fournir un nouveau moyen de lutter contre les effets néfastes du vieillissement cutané. 20 A cet effet, l'invention propose l'utilisation cosmétique d'un extrait d'Aboe, en particulier un extrait d'Aloe vera pour promouvoir et/ou renforcer la cohésion cellulaire au sein de l'épiderme. Par � renforcer la cohésion cellulaire au sein de l'épiderme �, on entend ici 25 accentuer, consolider les jonctions qui assurent la cohésion des cellules de la peau. Par ailleurs, l'expression � promouvoir la cohésion cellulaire au sein de l'épiderme � désigne ici le fait de provoquer le développement de la cohésion des cellules de la peau. 30 Par � extrait d'A/oe �, on entend, au sens de la présente description, une composition comprenant tout ou partie des principes actifs contenus initialement dans des feuilles de plantes du genre Abe, ces principes actifs incluant de préférence des polysaccharides (dérivé acétylé du mannane, dérivés d'acides uroniques...), initialement présents dans le suc du parenchyme mucilagineux des feuilles d'Alpe. Les espèces du genre Aloe sont des espèces succulentes, ou fibreuses, dont quelques unes sont utilisées en pharmacie et aussi plus récemment en cosmétologie et diététique. C'est notamment le cas d'Alpe vera, originaire d'Afrique du Nord, où il est utilisé depuis l'Antiquité. Sa culture a ensuite été introduite en Amérique (Antilles, Vénézuela...), et, depuis quelques années, les cultures d'Aloe vera ne cessent de se développer dans les régions subtropicales l0 des Etats-Unis (Floride, Texas...). Parmi les plantes du genre Abe utiles selon l'invention, on peut en particulier citer l'Aloe vera, désigné également par Abe barbadensis, qui appartient à la famille des Asphodelaceae, et également, de façon non limitative, l'Alpe perryi. 15 Selon un mode de réalisation préférentiel, l'extrait d'Aloe utilisé selon l'invention est un extrait d'Alpe vera. Un extrait d'Alpe vera utile selon l'invention est une composition 20 comprenant du suc de parenchyme mucilagineux de feuilles d'Alpe vera éventuellement concentré etlou additionné d'agents stabilisants. Dans ce cadre, on peut en particulier employer les compositions généralement désignées par le terme de � gel d'Alpe vera �. Un tel � gel d'Alpe vera � est typiquement obtenu par extraction du suc provenant du parenchyme mucilagineux des feuilles d'Alpe 25 vera, suivie d'une purification du suc et stabilisation à froid, selon un procédé connu en soi. Dans le cadre de la présente invention, les inventeurs ont maintenant mis en évidence qu'un extrait d'Alpe, notamment un extrait d'Alpe vera, du type précité 30 fournit, de manière inattendue, des propriétés de promotion et de renforcement de la cohésion cellulaire au sein de l'épiderme, qui s'avèrent notamment utiles pour lutter contre les effets néfastes du vieillissement cutané. Sans être limité par une théorie particulière, les travaux réalisés par les inventeurs permettent d'avancer que l'adjonction d'un extrait d'Alpe, notamment d'Alpe vera, sur des cultures de kératinocytes humains permet de stimuler la synthèse des protéines des structures jonctionnelles, renforçant ainsi la cohésion cellulaire. De façon plus générale, on peut utiliser selon l'invention tout extrait d'Alpe qui stimule la synthèse des protéines des structures jonctionnelles exprimées par les cellules de la peau. Les kératinocytes épidermiques expriment quatre types principaux de structures jonctionnelles : les jonctions gap, les desmosomes, les jonctions d'adhérence et les hémidesmosomes. Les jonctions gap sont des régions spécialisées des contacts intercellulaires, qui comportent des canaux permettant des échanges de nutriments, d'ions et de petites molécules entre les cellules. Ce type de jonction est indispensable aux communications intercellulaires. Les desmosomes sont des jonctions de cohésion forte qui se présentent sous la forme de deux disques de structure symétrique, chacun constitué de deux parties : la plaque dense intracellulaire et les domaines extracellulaires de protéines transmembranaires. Ces protéines transmembranaires comprennent deux types de cadhérines desmosomiales complémentaires, les desmogléines et les desmocollines, dont les isoformes les plus répandues sont les isoformes 1 et 3. La plaque dense contient entre autres les domaines intracellulaires de ces cadhérines desmosomiales ainsi que la desmoplakine, qui couple les sites d'adhésion intercellulaire au réseau de filaments intermédiaires, ce qui permet de renforcer mécaniquement l'adhésion intercellulaire. Les jonctions d'adhérence ont une structure similaire à celle des desmosomes mais elles ne sont pas constituées des mêmes protéines. En effet, les protéines transmembranaires y sont des cadhérines classiques, telles que la E-cadhérine. Enfin, les hémidesmosomes sont des jonctions qui permettent l'adhésion stable de l'épiderme avec le derme sous-jacent. Elles sont définies comme des domaines denses dans la membrane plasmique qui connectent la membrane basale extracellulaire au réseau de filaments intermédiaires intracellulaire. Dans la peau, les hémidesmosomes sont constitués entre autres de l'intégrine x6134 et de protéines cytoplasmiques de la famille des plakines. L'intégrine (16[34 se lie à un composant majeur de la membrane basale, la laminine 5 (a3(33y2), tandis que les protéines de la famille des plakines connectent les filaments de kératine, créant ainsi un complexe d'ancrage stable. Cet attachement stable des kératinocytes basaux à la membrane plasmique procuré par les hémidesmosomes est d'une importance fondamentale pour maintenir l'intégrité de la peau. L'ensemble de ces protéines des jonctions intercellulaires joue donc un rôle fondamental dans la cohésion cellulaire au sein de l'épiderme. L'effet de renforcement de la cohésion cellulaire mis en évidence par les inventeurs peut notamment être utilisé pour prévenir et/ou lutter contre le vieillissement cutané, et notamment contre le photo-vieillissement cutané. A ce sujet, il est à souligner que la dégradation de la cohésion cellulaire au sein de l'épiderme est un des aspects du vieillissement cutané. En effet, au cours du vieillissement, et notamment du photo-vieillissement cutané, le métabolisme cellulaire général est freiné et la synthèse protéique est ralentie, en particulier au niveau de l'épiderme, ce qui perturbe fortement son renouvellement et l'ensemble du mécanisme de différenciation. Le tissu épithélial devient moins organisé, les cellules moins jointives, et elles communiquent moins entre elles. Un aspect important de ce processus est la dégradation et le non-renouvellement des protéines spécifiques des différentes structures jonctionnelles présentes entre les cellules de l'épiderme, en particulier entre les kératinocytes. La structure de la jonction dermo-épidermique s'en trouve altérée, l'ancrage des kératinocytes basaux est de mauvaise qualité, si bien que la cohésion cellulaire au sein de l'épiderme n'est plus assurée. Une autre utilisation intéressante de l'effet mis en évidence par les inventeurs est de lutter contre le stress thermique auquel sont soumises les cellules épidermiques. L'extrait d'Aloe utilisé selon la présente invention est généralement mis en oeuvre par voie topique. Selon un premier mode de réalisation, l'extrait d'Aloe employé selon 5 l'invention est appliqué en tant que tel sur la peau, éventuellement additionné d'additifs, notamment des stabilisants, par exemple à hauteur de 0,1 à 20%, par exemple de 0,5 à 10% en masse d'additifs par rapport à la masse totale de l'extrait d'Aloe. Selon un deuxième mode de réalisation, l'extrait d'Aloe utilisé selon l'invention est mis en oeuvre au sein d'une composition cosmétique, généralement à usage topique, en association avec un véhicule cosmétiquement acceptable. Par � véhicule cosmétiquement acceptable �, on entend un véhicule adapté pour une utilisation en contact avec des cellules humaines et/ou animales, en particulier les cellules de l'épiderme, sans toxicité, irritation, réponse allergique indue et similaire, et proportionné à un rapport avantage/risque raisonnable. En particulier, l'extrait d'Alpe utilisé selon la présente invention peut être mis en oeuvre au sein d'une composition cosmétique se présentant sous forme d'onguent, de crème, d'huile, de lait, de pommade, de poudre, de tampon imbibé, de solution, de gel, de spray, de lotion, de suspension, de savon, ou de shampoing. Les compositions de l'invention peuvent être des compositions cosmétiques sous la forme d'émulsion huile-dans-eau ou eau-dans-huile, ou d'émulsion multiple, de micro-émulsion, de gel hydroalcoolique, de crème, d'huile, de lotion hydroalcoolique. De manière préférentielle, les compositions cosmétiques utilisées selon ['invention comprennent de; ~ 0,1 à 80 % de l'extrait d'Alpe exprimé en poids par rapport au poids total de la composition, de préférence de 0,2 à 50% de l'extrait d'Alpe. Notamment, afin d'obtenir une efficacité satisfaisante, ladite composition cosmétique contient de préférence plus de 0,5% d'extrait d'Alpe. Par ailleurs, notamment pour des raisons économiques, on préfère généralement que la composition contienne de préférence moins de 40% d'extrait d'Alpe, de préférence encore moins de 30% d'extrait d'Ales, préférentiellement moins de 20% d'extrait d'Aloe. Ainsi, de façon particulièrement avantageuse, une composition cosmétique utilisée selon l'invention contient typiquement de 1 à 15% en poids de l'extrait d'Aloe, en poids par rapport au poids total de la composition. Différents aspects de la présente invention ressortiront encore plus nettement au vu des exemples illustratifs ci-après. EXEMPLE 1 Modulation de l'expression de marqueurs de la communication interkératinocytaire par un extrait d'Aloe vera dans une culture monocouche de kératinocytes humains normaux. L'effet d'un extrait d'Aloe vera sur la synthèse de protéines des jonctions intercellulaires dans des kératinocytes a été étudié dans les conditions décrites ci- après. A) Matériel et méthodes Les cellules utilisées sont des kératinocytes humains normaux, ensemencés (passage 2 ou 3) dans des labteks II à 8 chambres (Nunk, ref 154941) à raison de 6500 cellules/chambre/5001.'1 de milieu K-SFM de base (Invitrogen, ref 17005-075) additionné d'extrait de glande pituitaire bovine et de facteur de croissance épidermique (EGF) (milieu de prolifération), et incubés pendant 24 heures à 37°C, 5% de CO2 et 95% d'humidité. Les cellules ont ensuite été traitées avec l'extrait d'Aloe vera aux concentrations de 0, 1% et 0,01% (poids/volume), pendant 2 jours, les traitements étant réalisés dans le milieu K-SFM de base additionné d'extrait de glande pituitaire bovine et d'EGF. En parallèle, des cellules non traitées ont été incubées de la même façon avec du milieu K-SFM de base additionné d'extrait de glande pituitaire bovine et d'EGF seul. Le jour suivant, les cellules ont de nouveau été traitées avec l'extrait d'Aloe vera pendant 24 heures, les traitements étant réalisés soit dans le milieu de prolifération précédent, soit dans un milieu de différenciation composé du milieu KSFM de base complémenté avec 1,5 mM de CaCl2 et 1 mM de butyrate de sodium. Parallèlement, des cellules témoins non traitées ont été incubées soit en milieu de prolifération, soit en milieu de différenciation. Les labteks ont ensuite été démontées et les lames rincées avec du PBS (Invitrogen, ref 18912-014) avant que les cellules ne soient fixées pendant 5 minutes avec du méthanol glacial. Les cellules ont ensuite été rincées en PBS puis perméabilisées par une solution de PBS 0,1% Triton X-100 (Sigma, ref X-100) avant d'être de nouveau rincées en PBS. Des immunomarquages ont ensuite été réalisés, après avoir saturé les sites non spécifiques par une solution de PBS 5% SAB (sérum albumine bovine, Sigma, ref A2153). Les anticorps primaires monoclonaux de souris antidesmogléine 3, (Progen, ref 61002), anti-desmocolline 3 (Progen, ref 61093) et anti-E-cadhérine (Progen, ref 10028) ont été incubés au 1/50 pendant 1 h30 à température ambiante. Un deuxième marquage a ensuite été réalisé à chaque fois avec l'anticorps primaire polyclonal de lapin anti-Ki-67 (1/50, 1h30, température ambiante, Santa Cruz, ref sc-15402), spécifique de la protéine nucléaire Ki-67, utilisée comme marqueur de prolifération cellulaire. En parallèle, des cellules ont été marquées avec l'anticorps primaire polyclonal de lapin anti-laminine 5 (chaine 133) (Santa Cruz, ref sc-20775), dilué au 1/50 et incubé pendant 1 h30 à température ambiante. Pour chaque marquage, après un lavage de 5 minutes avec la solution de PBS 1% SAB dans laquelle les dilutions ont été effectuées, les cellules ont été incubées pendant 1 h30 à température ambiante et à l'obscurité avec les anticorps secondaires anti-souris couplés à la rhodamine (goat anti-mouse IgG rhodamine conjugated, Santa Cruz, ref sc-2092) dilués au 1/500 en PBS 1% SAB, et pendant 1 h30 à température ambiante et à l'obscurité avec les anticorps secondaires antilapin couplés à la fluorescéine (goat anti-rabbit, FITC conjugated, Santa Cruz, ref sc-2012), dilués au 1/500 en PBS 1% SAB. Après rinçage au PBS, les préparations ont été montées en milieu de montage (Fluorescent Mounting Medium, DakoCytomation, ref S3023). Les lames ont ensuite été observées avec un microscope Olympus IX50 couplé à un système de fluorescence (Olympus U-RFL-T). Un filtre adapté permet de sélectionner les longueurs d'onde d'excitation de 550 nm (rhodamine) ou de 488 nm (fluorescéine). B) Résultats Dans les conditions expérimentales, l'Aloe vera semble d'une part induire et stimuler la différenciation des kératinocytes humains normaux par la sur- expression des protéines jonctionnelles (desmogléine 3, desmocolline 3, E-cadhérine) en condition de prolifération, et d'autre part stimuler la synthèse de la laminine 5, un des composants majeurs de la jonction dermo-épidermique. Ceci se traduit par la stimulation de l'activité métabolique des kératinocytes et notamment par la synthèse des protéines spécifiques des structures jonctionnelles, ce qui favorise et renforce la cohésion cellulaire au sein de l'épiderme, ainsi que la structure de la jonction dermo-épidermique. La cohésion et la communication interkératinocytaires touchées au cours du vieillissement ou du photo-vieillissement cutané sont donc stimulées d'une façon globale dans ce modèle in vitro. EXEMPLE 2 Formulations Deux exemples de formulation cosmétique typiques utiles pour fournir l'effet de prévention et de cohésion cellulaire selon l'invention sont décrits ci-dessous. composition) Eau : qsp 100 Extrait d'Aloe vera : 1 à 15% Conservateurs : 1,5% Propylène glycol : 5% Gomme xanthane : 0,3% Acide stéarique 100 OE : 3% Stéarate de sorbitan : 2% Sorbitan laurate 20 OE : 3% Alcool cetylstéarique : 1,5% A) Exemple de composition sous forme d'émulsion (% en poids de la Copolymère acrylique acrylate : 0,5% 30 Cire d'abeille : 1% Huile de germe de blé : 5% Dimethicone : 2% Cyclomethicone : 5% Gel de polyacrylamide : 2% Parfum : 0,10% B) Exemple de composition sous forme de crème C% en poids de la composition) Eau : qsp 100 Extrait d'Aloe vera : 1 à 15% Gomme xanthane : 0,3% Séquestrant : 0,05% Conservateurs : 1,5% Acide C18 : 2,5% Acide C16 : 2,5% Trilaurine : 1% Beurre de karité : 0,05% Acétate de tocophérol : 0,05% Beta bisabolol : 0,05% Huile de germe de blé : 5% Dimethicone : 3% Acide polyacrylique : 0,3% TEA : 1,5% Parfum : 0,1% 9 Revendications 1- Utilisation d'un extrait d'Aloe pour promouvoir etlou renforcer la cohésion cellulaire au sein de l'épiderme. 2- Utilisation selon la revendication 1, dans laquelle ledit extrait d'A/oe est un extrait d'Aloe vera. 3- Utilisation selon les revendications 1 ou 2, dans laquelle ledit extrait d'Aloe 10 est un gel d'Aloe vera. 4- Utilisation selon l'une des revendications 1 à 3 où l'extrait stimule la synthèse des protéines des structures jonctionnelles exprimées par les cellules de la peau. 5- Utilisation selon l'une des revendications 1 à 4 pour prévenir et/ou lutter contre le vieillissement cutané, notamment le photo-vieillissement cutané. 6- Utilisation selon l'une des revendications 1 à 4 pour lutter contre le stress 20 thermique auquel sont soumises les cellules épidermiques 7- Utilisation selon l'une des revendications 1 à 6, dans laquelle ledit extrait d'Aloe est appliqué en tant que tel sur la peau, éventuellement additionné de 0,1 à 20% en masse d'additifs par rapport à la masse totale de l'extrait 25 d'Aloe. 8- Utilisation selon l'une des revendications 1 à 6, dans laquelle ledit extrait d'Aloe est mis en oeuvre au sein d'une composition cosmétique à usage topique en association avec un véhicule cosmétiquement acceptable. 9- Utilisation selon la revendication 8, dans laquelle ladite composition cosmétique contient de 1 à 15% dudit extrait d'Aloe exprimé en poids par rapport au poids total de la composition. 15 30 10-Utilisation selon les revendications 8 ou 9, dans laquelle ladite composition cosmétique est un onguent, une crème, une huile, un lait, une pommade, une poudre, un tampon imbibé, une solution, un gel, un spray, une lotion, 5 une suspension, un savon ou un shampoing.