FR 2924345 A1 20090605 FR 0854144 A 20080623 UTILISATION DE LA MEQUITAZINE SOUS LA FORME DE RACEMATE OU D'ENANTIOMERES POUR LA PREPARATION D'UN MEDICAMENT DESTINE AU TRAITEMENT OU A LA PREVENTION DE PATHOLOGIES IMPLIQUANT LES RECEPTEURS HISTAMINIQUES H4 La présente invention concerne de façon générale, l'utilisation du 10-[(3R)-1-azabicyclo[2.2.2]oct-3-ylméthyl]-10H-phénothiazine ainsi que de ses sels pharmaceutiquement acceptables pour la préparation d'un médicament permettant de prévenir ou de traiter les pathologies médiées par l'activation du récepteur histaminique H4, et ce par voie locale, orale ou pulmonaire. Le 10-[(3R)-1-azabicyclo[2.2.2]oct-3-ylméthyl]-10H-phénothiazine dérive d'un racémate. A l'origine ce racémate est un médicament, efficace dans le traitement des affections allergiques. C'est un antihistaminique de type anti-H1. Il possède un carbone asymétrique conduisant à deux configurations spatiales distinctes : lévogyre (configuration S) et dextrogyre (configuration R). L'analyse des profils pharmacologiques des deux énantiomères et du mélange racémique a pu montrer que ces composés, de manière inattendue, étaient porteur d'une affinité pour le récepteur histaminique H4. Cette propriété s'ajoute à leur affinité vis-à-vis du récepteur H1. Cette propriété particulière n'avait ni été mise en évidence ni même simplement envisagée dans l'art antérieur. Elle est exemplifiée ci-après. Le récepteur H4 décrit par Nakamura et coll. (2000) et cloné par Morse et coll. (2001) est une protéine transmembranaire de 390 acides aminés couplée à l'hétérodimère Gi/o, dont l'activation induit une mobilisation calcique intracellulaire, une diminution d'AMPc et une activation de la voie MAP kinase. Ce récepteur bien que proche sur le plan tridimensionel du récepteur H1, comporte seulement 35% d'homologie avec ce dernier. Il est largement postulé que l'activation de tel ou tel sous-type de récepteurs histaminiques se traduirait par des effets physiologiques ou physiopathologiques différents. Cette sélectivité réceptorielle justifierait l'existence des sous- types de récepteurs histaminiques. La mise en jeu du récepteur H1 induit l'activation de la protéine Gq, celle du récepteur H2 induit l'activation de la protéine Gs, celle du récepteur H3 induit l'activation de la protéine Gi/o (Lovenberg et coll., 1999). Fonctionnellement l'activation de ces récepteurs se traduit par un effet moléculaire différent. Selon les ligands du récepteur H3 considérés, certains ont une affinité pour le récepteur H4. Il s'agit du thiopéramide, du clobenpropit, de l'imétit, et du R-a-méthylhistamine. En outre la répartition des sous-types de récepteur est elle aussi différente. Chez l'homme le récepteur H4 est principalement exprimé dans les tissus périphériques comme les cellules de la moelle osseuse, les cellules hématopoïétiques (éosinophiles, basophiles, mastocytes, lymphocytes T et cellules dendritiques). En dehors de leur répartition anatomique, la spécificité du rôle des récepteurs histaminergiques en physiopathologie dépend de l'implication de l'histamine dans ces processus. La fonction de l'histamine comme médiateur de l'allergie est clairement établi. De nombreuses données récentes attribuent à l'histamine une fonction dans la régulation de la réponse immunitaire ; plus précisément par l'intermédiaire du récepteur H4 nouvellement décrit. Les antagonistes du récepteur H4 inhibent la réponse des lymphocytes T, et la réponse immunitaire cellulaire à une stimulation antigénique est inhibée in vitro par l'inactivation du récepteur H4, selon un processus apoptotique protéine-kinase dépendant (Sugata et coll., 2007). L'histamine est un médiateur important pour la réponse allergique immédiate mais intervient également dans la régulation des cellules présentatrices d'antigènes (Dy et coll., 2004). Ainsi l'activation du récepteur H4 induit la différentiation des monocytes en cellules dendritiques immunocompétentes. Quand le récepteur H4 est activé, une diminution de l'I112p70 apparaît et entraîne la différentiation des monocytes (Gutzner et coll., 2005). Takeshita et coll. (2003) ont démontré que le récepteur H4 intervenait directement dans le recrutement des polynucléaires neutrophiles, ce recrutement ou chimiotactisme étant dépendant des mastocytes. Ainsi, la diminution du chimiotactisme et donc la baisse de l'infiltration des neutrophiles via l'inactivation du récepteur H4 a clairement été établie. A titre d'exemple, dans les modèles d'inflammation provoquée par injection d'agents tels que les carraghénanes, ou bien dans les modèles d'inflammation résultant de challenge à l'ovalbumine, l'intérêt des antagonistes des récepteurs H4 émerge comme agents putatifs pouvant contrôler les phénomènes inflammatoires périphériques. La plupart sont liés à une physiopathologie : • la dermatite atopique, le prurit dermatologique, • les inflammations bronchiques (asthme, bronchopneumopathie obstructive), • l'inflammation intestinale (syndrome de l'intestin irritable), • l'inflammation articulaire (arthrite rhumatoïde), • l'inflammation stromatique péri-tumorale permettant l'angiogenèse et sa conséquence : le développement tumoral. Implication du récepteur H4 dans les inflammations dermatologiques/prurit. L'inhibition du récepteur H4 par un ligand spécifique comme le JNJ7777120 limite les comportements d'auto-démangeaison chez l'animal chez qui le prurit a été préalablement induit par injection sous-cutané d'histamine (Bell et coll., 2004). Il semble que l'activité des antagonistes des récepteurs H4 soit supérieure à celle des anti-H1 comme la desloratadine ou la cétirizine. Cependant l'activité de ces antihistaminiques "classiques" n'est pas nulle dans ce modèle, démontrant ainsi que l'effet antiprurigineux des antihistaminiques H1 ne réside pas dans leur propriété sédative. En outre cette activité antiprurigineuse a été démontrée pour certains anti-H1 dénués d'effets sédatifs. Par ailleurs, la localisation périphérique du récepteur H4 confirme l'hypothèse selon laquelle son inactivation permettrait un contrôle local de l'affection, plutôt qu'un contrôle central. L'expression du récepteur H4 corrobore ces données. En effet selon Lippert et coll. (2004) les mastocytes cutanés humains expriment le récepteur histaminique H4, ce qui confirme le rôle de l'histamine comme agent régulateur autocrine et paracrine de l'inflammation cutané. De plus il a été montré que chez les lymphocytes T provenant de patients ne présentant pas d'atopie, l'histamine par l'intermédiaire du récepteur H4 agit en inhibant l'activation de la protéine STAT1. Ce messager est une protéine d'activation de la transcription de facteurs régulant la réponse immune et la balance Th1/Th2. Dans le cas des lymphocytes provenant de patients présentant une atopie, le signal toujours médié par l'activation du récepteur H4 par l'histamine, se traduit in fine par la génération d'interféron y. Ce facteur entraîne une amplification des phénomènes inflammatoires. Dans les cellules provenant de patients ne présentant aucune atopie, l'expression de STAT1 est déjà réduite et le niveau d'interféron y.est bas. Ainsi l'inhibition du récepteur H4 serait d'autant plus efficace chez les patients présentant une atopie que chez les volontaires sains (Horr et coll., 2006). On peut donc conclure que l'effet conjugué d'un anti-H1 doublé d'une composante anti-H4 constituerait une propriété de choix pour un agent thérapeutique destiné à limiter les conséquences dermatologiques du prurit comme les démangeaisons et les complications qui en découlent lésions, infections connexes. Implication du récepteur H4 dans l'inflammation des voies aériennes L'expression au niveau bronchique et de l'épithélium alvéolaire du récepteur H4 a poussé les investigations vers l'étude de sa mise en jeu dans les phénomènes inflammatoires bronchiques comme l'asthme ou la bronchopneumopathie obstructive. La modélisation de ces pathologies chez l'animal par la méthode du challenge à l'ovalbumine a permis de préciser le rôle du récepteur H4 dans ce contexte (Dunford et coll., 2006). Comme vu précédemment, l'inactivation du récepteur H4 par l'intermédiaire d'antagonistes spécifiques permet de limiter le chimiotactisme, et donc, l'infiltration des neutrophiles au sein de l'épithélium pulmonaire inflammé. Ceci a pour conséquence une rupture de la cascade immunitaire et inflammatoire. En effet les lymphocytes T CD4 ne sont plus activés lorsque le récepteur H4 est neutralisé. De plus les chimiokines et cytokines voient leur taux diminuer, ceci a pour conséquence une réduction de la réponse des lymphocytes T. Ainsi il est logique de proposer tout antagoniste du récepteur H4 comme agent de lutte contre les phénomènes inflammatoires de l'épithélium pulmonaire, quelle que soit leur origine intoxication, réaction allergique ou détresse respiratoire chronique induite par une tumeur. Implication du récepteur H4 dans les inflammations du tractus intestinal. Un autre exemple d'inhibition des phénomènes inflammatoires par les antagonistes du récepteur H4 est apporté dans les études de Varga et coll. (2005). Une inflammation du colon est induite chez l'animal par administration de trinitrobenzène. Au préalable un traitement à l'aide de composés antagonistes du récepteur H4 est engagé. A terme les animaux ainsi prétraités présentent des scores histologiques inflammatoires moindres que les animaux témoins. En parallèle, on note une diminution des taux de facteurs d'inflammation comme le TNF-î. Ainsi l'intérêt des inhibiteurs du récepteur H4 apparaît dans les pathologies comme le syndrome de l'intestin irritable (Bowel). Implication du récepteur H4 dans les inflammations articulaires L'implication du récepteur H4 a également été établie lors des phénomènes inflammatoires consécutifs à une arthrite rhumatoïde. Ikawa et coll. (2005) ont analysé l'expression du récepteur H4 par la mesure indirecte des transcrits (RT-PCR) dans des échantillons de synoviocytes provenant de patients présentant une arthrite rhumatoïde. Les analyses montrent que l'expression du récepteur H4 est très importante dans ces prélèvements, laissant supposer que le récepteur histaminique H4 jouerait un rôle dans la cascade inflammatoire consécutive à l'arthrite rhumatoïde. Par voie de conséquence, l'intérêt des inhibiteurs du récepteur H4 dans les pathologies inflammatoires des synoviocytes apparaît certain. Implication du récepteur H4 dans l'angiogenèse associée au développement tumoral L'activité de l'histidine décarboxylase, enzyme qui catalyse la synthèse de l'histamine, est retrouvée dans de nombreux tissus tumoraux. Ceci ne signifie pas obligatoirement que l'augmentation des taux d'histamines pourrait être à l'origine de l'apparition des phénomènes carcinomateux, mais il est cependant clairement établi que l'inflammation concomitante à la cancérisation tissulaire met en jeu l'histamine. L'histidine décarboxylase est exprimée dans les tumeurs du colon, du sein, de l'endomètre, du poumon à petites cellules et dans les mélanomes. Les travaux de Cianchi et coll. (2005) ont démontré la surexpression de cette enzyme dans les cellules Caco2, HT29 et HCT116. In vitro l'histamine induit dans ces cultures d'adénocarcinome du colon une augmentation de la production de facteurs pro-inflammatoires du type prostaglandine E2 et une augmentation des productions des facteurs de croissances vasculaires VEGF. Il est probable que cet effet agoniste de l'histamine via le récepteur H4 se traduise par une potentialisation de la division cellulaire. En effet, ces deux biomarqueurs participent au développement du réseau vasculaire péritumoral (angiogenèse). L'action agoniste de l'histamine sur le développement vasculaire est antagonisée par les inhibiteurs du récepteur H4 ainsi que par les inhibiteurs des cyclooxygénases 1 et 2. Si l'action des inhibiteurs cox était connue en raison de leur potentiel anti-inflammatoire, celle des antagonistes des récepteurs H4 et leur efficacité envers les phénomènes de développement des réseaux vasculaires péri-tumoraux est nouvellement décrite. Ces données laissent suggérer une utilité des antagonistes des récepteurs H4 dans l'angiogenèse. En outre les résultats de ces études montrent que l'inhibition de l'activité de l'histamine par le blocage des récepteurs H4 diminue la division cellulaire des cellules d'adénocarcinome du colon en culture. Pour les raisons citées précédemment il apparaît que le candidat inhibiteur devrait posséder une action de liaison mixte à la fois sur le récepteur H1 et sur le récepteur H4 pour avoir une action complète vis-à-vis de l'inhibition de l'inflammation périphérique médiée par l'histamine. Dans le cadre des pathologies dermatologiques impliquant le récepteur H4, et dans le but de diminuer les effets adverses induits par les agents antihistaminiques, la voie transdermique semble d'intérêt, dès lors que la molécule candidate possède une propension à franchir la couche cornée et à atteindre sa cible sous-cutanée : les mastocytes exprimant les récepteurs H4. De même dans le cadre de pathologies inflammatoires des voies aériennes, il est d'intérêt de proposer une forme galénique susceptible de toucher la cible directement au niveau de l'épithélium bronchique en limitant la pénétration systémique de l'agent d'intérêt. Ainsi la limitation du taux plasmatique de métabolites actifs des drogues peut également reposer, outre une spécificité de voie d'administration, sur un métabolisme hépatique particulier ne produisant pas de métabolites actifs, pouvant exacerber l'effet de la drogue initialement administrée, mais également augmenter la fréquence et l'intensité des effets secondaires. En outre, plus la demi-vie du produit sera longue, plus la fréquence d'administration sera faible, facilitant ainsi la 10 compliance au traitement. L'objet de la présente invention est de mettre en évidence les propriétés particulières et inattendues du 10-[(3R)-1-azabicyclo[2.2.2]oct-3-ylméthyl]-10H-phénothiazine (énantiomère dextrogyre de la méquitazine ; codifié ici sous le nom V0162), 15 du 10-[(3S)-1-azabicyclo[2.2.2]oct-3-ylméthyl]-10H-phénothiazine (énantiomère levogyre de la méquitazine ; codifié ici sous le nom V0114) et du mélange racémique des deux énantiomères 10-[(3R,3S)-1-azabicyclo[2.2.2]oct-3-ylméthyl]-10H-phénothiazine (codifié ici sous le nom L0013). 20 La présente invention concerne l'utilisation du 10-[(3R)-1- azabicyclo[2.2.2]oct-3-ylméthyl]-10H-phénothiazine, du 10-[(3S)-1-azabicyclo[2.2.2]oct-3-ylméthyl]-10H-phénothiazine ou du 10-[(3R,3S)-1-azabicyclo[2.2.2]oct-3-ylméthyl]-10H- phénothiazine, ou bien de l'un de leurs sels pharmaceutiquement 25 acceptables pour la préparation d'un médicament destiné à prévenir ou à traiter les pathologies impliquant les récepteurs histaminiques H4. Selon une autre caractéristique de l'invention, les pathologies impliquant les récepteurs histaminiques H4 sont 30 choisies parmi la dermatite atopique, le prurit, les inflammations bronchiques telles que l'asthme et la bronchopneumopathie obstructive. Selon une autre caractéristique de l'invention, le médicament est présenté sous une forme adaptée à l'administration orale et comportant une teneur en principe actif suffisante pour antagoniser les récepteurs histaminiques H4 cibles. Selon une autre caractéristique de l'invention, le médicament est présenté sous une unité de dosage par voie orale permettant une dose d'administration comprise entre 1pg.kg-' et 10 mg. kg-1, avantageusement entre 0.01 mg. kg-1 et 1mg. kg-1 . Selon une autre caractéristique de l'invention, le médicament est présenté sous la forme d'un comprimé. Selon une autre caractéristique de l'invention, le médicament est présenté sous la forme d'une solution pour pulvérisation buccale, spécifiquement adaptée pour le traitement de l'asthme ou de la bronchopneumopathie obstructive. Selon une autre caractéristique de l'invention, le médicament est destiné à prévenir ou à traiter les pathologies impliquant les récepteurs histaminiques H4 et les récepteurs muscariniques. Selon une autre caractéristique de l'invention, les pathologies impliquant lesdits récepteurs sont choisies parmi 20 les pathologies respiratoires. Selon une autre caractéristique de l'invention, lesdites pathologies sont choisies parmi l'emphysème, l'asthme et les bronchopneumopathies obstructives. Selon une autre caractéristique de l'invention, celle-ci 25 s'étend à un produit contenant du 10-[(3R)-1- azabicyclo[2.2.2] oct-3-ylméthyl]-10H-phénothiazine. Selon une autre caractéristique de l'invention, le médicament est présenté sous une forme appropriée à son administration par voie topique. 30 Selon une autre caractéristique de l'invention, le médicament se présente sous la forme d'un gel, d'une émulsion ou d'une crème présentant une concentration en principe actif comprise entre 0,01 et 10 en poids. Selon une autre caractéristique de l'invention, le médicament est destiné au traitement de la dermatite atopique et du prurit. La dermatite atopique est une maladie inflammatoire de la peau, parfois également appelée eczéma atopique ou dermite atopique, caractérisée par des lésions prurigineuses d'origines diverses, par exemple, bactérienne, fongique ou allergénique. De façon générale, l'objet de la présente invention permet de traiter le prurit qui est considéré généralement comme un symptôme de démangeaison de la peau, apparaissant en liaison avec différents types de lésions dermatologiques. Enfin, l'invention s'étend également à un produit contenant du 10-[(3R)-1-azabicyclo[2.2.2]oct-3-ylméthyl]-10H-phénothiazine, du 10-[(35)-1-azabicyclo[2.2.2]oct-3-ylméthyl]-1OH-phénothiazine ou du 10-[(3R,3S)-1-azabicyclo[2.2.2]oct-3-ylméthyl]-10H-phénothiazine, ou bien l'un de leurs sels pharmaceutiquement acceptables ainsi qu'un médicament de la classe des antihistaminiques de type anti-H1, des corticoïdes, des anti-muscariniques à courte ou à longue durée d'action et des (32-mimétiques, comme produit de combinaison pour une utilisation simultanée, séparée ou étalée dans le temps dans une thérapie anti-inflammatoire par antagonisme des récepteurs histaminiques H4. Les exemples ci-après montrent que : - l'affinité in vitro vis-à-vis du récepteur histaminique H4 humain est effective et de niveau micromolaire pour ce qui concerne les trois composés cités ci-dessus. -les composés se comportent comme des agonistes inverses vis-à-vis du récepteur H4, cette propriété n'ayant jamais été 30 décrite dans l'art antérieur. - le passage transcutané ou transmucosal des composés V0114, V0162 et du L0013 est considérable et est propre à ce pharmacophore. - la demi-vie de ces composés est longue, ce qui permet d'envisager des schémas posologiques compatibles avec les indications potentielles de ces produits. La combinaison de toutes ces propriétés, reprises à titre d'exemples du présent brevet montre de manière inattendue que le 10-[(3R)-1-azabicyclo[2.2.2]oct-3-ylméthyl]-10H-phénothiazine (énantiomère dextrogyre ; codifié ici sous le nom V0162), le 10-[(3S)-1-azabicyclo[2.2.2]oct-3-ylméthyl]-10H-phénothiazine (énantiomère levogyre ; codifié ici sous le nom V0114) et le mélange racémique des deux énantiomères 10-[(3R,3S)-1-azabicyclo[2.2.2]oct-3-ylméthyl]-10H-phénothiazine (codifié ici sous le nom L0013) sont des composés actifs dans les pathologies impliquant le récepteur H4, telles qu'elles sont énumérées ci-dessus. EXEMPLE 1 Affinité in vitro vis-à-vis des récepteurs histaminiques H4 humains, du 10-[(3R)-1-azabicyclo[2.2.2]oct-3-ylméthyl]-10H-phénothiazine (énantiomère dextrogyre; codifié ici sous le nom V0162), du 10-[(3S)-1-azabicyclo[2.2.2]oct-3- ylméthyl]-lOH-phénothiazine (énantiomère levogyre ; codifié ici sous le nom V0114) et du mélange racémique des deux énantiomères 10-[(3R,3S)-1-azabicyclo[2.2.2]oct-3-ylméthyl]-10H-phénothiazine (codifié ici sous le nom L0013) Le but de cette étude est de déterminer une constante d'affinité du composé vis-à-vis du récepteur humain histaminique H4 in vitro. Le modèle choisi est la cellule HEK-293 transfectée de manière stable par les ADNc codant pour le récepteur humain H4 (Liu et coll., 2001). Dans un premier temps est déterminée l'affinité des cellules exprimant chaque type de récepteur pour un ligand dont il a été établi par ailleurs qu'il se fixait à 100 % sur le récepteur. Le ligand optimal pour le récepteur recombinant est l'histamine tritiée à 10nM. La liaison vis-à-vis des récepteurs est définie comme suit : différence entre la liaison globale et la liaison non spécifique déterminée en présence d'excès de ligand froid. Les résultats sont exprimés en pourcentage de la liaison optimale obtenue avec le ligand modèle (100 ~) . Table 1 : liaison réceptorielle in vitro Récepteur Composés testés à 10pM Code Inhibition humain (%) H4 (10-[(3S)-1-azabicyclo[2.2.2]oct- V0114 33 (h) 3ylméthyl]-10H-phénothiazine) V0162 52 (10-[(3R)-1-azabicyclo[2.2.2]oct-3-ylméthyl]-10H-phénotiazine) (10-[(3R,3S)-1-azabicyclo[2.2.2]oct-3-ylméthyl]-10H-phénothiazine Ces résultats montrent que le V0162, le V0114 et le L0013 sont des composés qui de manière inattendue, se lient fortement aux récepteurs histaminiques humain de type H4. Dans une deuxième série d'expériences, les constantes d'affinité de ces trois composés sont précisément déterminées par compétition avec le radioligand histamine tritiée sur des préparations membranaires provenant de cellules CHO exprimant de façon stable le récepteur histaminique H4. Table 2 : Détermination des constantes d'affinité vis à vis du récepteur H4 in vitro Code Composés testés K (pM) V0114 (10-[(3S)-1-azabicyclo[2.2.2]oct-3-ylméthyl]-10H- 2.49+0.37 phénothiazine) V0162 (10-[(3R)-1-azabicyclo[2.2.2]oct-3-ylméthyl]-10H- 1.18+0.16 phénothiazine) L0013 (10-[(3R,3S)-1-azabicyclo[2.2.2]oct-3-ylméthyl]-1.63+0.20 10H-phénothiazine) Ces résultats montrent que les trois composés présentent des affinités vis-à-vis du récepteur histaminique H4. Ces affinités sont au niveau micromolaire. L'activité de ces composés vis-à-vis des récepteurs H4 est renforcée par le fait que les trois composés V0162, V0114 et L0013 présentent une forte capacité à franchir la barrière cutanée. De plus leur demi-vie longue dans l'organisme permet d'envisager un effet rémanent au niveau de la cible réceptorielle. EXEMPLE 2 : Caractérisation des composés V0162, V0114 et L0013 comme agonistes inverses du récepteur H4 Ces études ont été réalisées dans le but de définir l'impact fonctionnel sur le récepteur H4 (agoniste, antagoniste, agoniste inverse) des composés 10-[(3R)-1-azabicyclo[2.2.2]oct-3-ylméthyl]-10H-phénothiazine (énantiomère dextrogyre; codifié ici sous le nom V0162), 10-[(3S)-1-azabicyclo[2.2.2]oct-3-ylméthyl]-10H-phénothiazine (énantiomère levogyre; codifié ici sous le nom V0114) et du mélange racémique des deux énantiomères 10-[(3R,3S)-1-azabicyclo[2.2.2]oct-3-ylméthyl]-10H-phénothiazine (codifié ici sous le nom L0013). Les protéines G appartiennent à une famille de protéines qui agissent comme des commutateurs moléculaires dans de nombreuses fonctions essentielles de la cellule. Leur activité régulatrice est fondée sur leur capacité à cycler entre une forme inactive liée au GDP et une forme active liée au GTP, cette dernière transmettant un signal d'action aux protéines dites effectrices située en aval de la cascade de signalisation. Afin de caractériser l'impact fonctionnel des trois composés V0162, V0114 et L0013 sur le récepteur H4, des études utilisant le test d'activation des protéines G ont été réalisées. Brièvement, le test repose sur la quantification du GTP radiomarqué au [35S] lié aux protéines G induit lors de la fixation des différents composés sur le récepteur. Ces résultats ont été rapportés sous la forme de diagrammes représentés aux figures annexées 1 et 2. Les résultats du test d'activation des protéines G représentés à la Figure la montrent que les trois composés V0114, V0162 et L0013 antagonisent l'action activatrice induite par 0.1 pM d'histamine au niveau du récepteur H4, comme observé avec le thiopéramide et l'antagoniste sélectif H4, le JNJ7777120. Le récepteur H4 est connu pour posséder une activité constitutive et la Figure lb montre que les composés V0114, V0162 et L0013 se comportent comme le thiopéramide à savoir comme des agonistes inverses du récepteur H4 (diminution de l'activité basale en absence d'agoniste), alors que le composé JNJ7777120 est un antagoniste neutre. Cette activité agoniste inverse des composés V0162, V0114, L0013 et du thiopéramide est bien due à une action sur le récepteur H4 car les Figures 2a à 2d montrent que l'antagoniste neutre JNJ7777120 bloque cette activité. L'ensemble de ces résultats montre pour la première fois que les composés V0162, V0114 et le L0013 sont des agonistes inverses du récepteur H4. Ce fonctionnement sur l'inactivation réceptorielle différencie le V0162, V0114 et le L0013 de la famille des antagonistes neutres comme le JNJ7777120. EXEMPLE 3: Activité anti-inflammatoire in vivo du V0114 et du L0013 dans le modèle de l'oedème plantaire induit par l'histamine chez la souris Le but de cette expérimentation était de détecter une éventuelle activité anti-inflammatoire des V0114, V0162 et du L0013 vis-à-vis de l'oedème plantaire induit par l'histamine chez la souris. Le principe de l'essai est inspiré de la publication de Kreutner et coll. (2000). Tous les groupes étaient composés de 10 animaux. Les produits ont été administrés par voie orale (25 mL.kg-1) en prétraitement, à différents temps : 120, 90, 60 et 30 minutes avant l'agent phlogogène. 60 minutes plus tard, une injection intrapédieuse (10 pL) a été réalisée sous anesthésie à l'Isoflurane. La patte droite a reçu 13 pg de dihychlorhydrate d'histamine et la patte gauche du sérum physiologique (véhicule de l'histamine). Trente minutes après les injections, les animaux ont été euthanasiés par dislocation cervicale. Les prélèvements et les pesées des pattes ont été réalisés. Les oedèmes ont été quantifiés par la différence entre le poids des pattes (poids patte droite - poids patte gauche). Table 3 : Détermination de l'activité anti-inflammatoire in vivo, après administration per os Composés Groupe Doses Prétraitement Inhibition de testés expérimental (mg.kg-1) (min) l'inflammation (~) véhicule 10 - -120 - - -90 - 10 - -60 - 10 - -30 - V0114 10 3 -120 -71 10 3 -90 -72 10 3 -60 -58 10 3 -30 -63 V0162 10 3 -120 +12 10 3 -90 -5 10 3 -60 +25 10 3 - 30 +2 L0013 10 3 -120 -80 10 3 -90 -82 10 3 -60 -65 10 3 -30 -54 Le V0114 et L0013 induisent un effet anti-inflammatoire 10 puissant et statistiquement significatif en comparaison aux groupes véhicules prétraités aux mêmes temps. Cette activité (-58 % à -72 %) pour le V0114 et (-54% à -82 %) pour le L0013 est plus importante quand les animaux sont prétraités 90 et 120 minutes avant l'injection intrapédieuse de l'agent phlogogène. Dans les conditions expérimentales suivies, le V0114 et le L0013, administrés par voie orale en prétraitement -120, -90, -60 et -30 minutes, démontrent un puissant effet anti-inflammatoire vis-à-vis d'un oedème à histamine sur la patte de la souris. Le V0162 ne réduit pas cet oedème, ce qui tendrait à prouver une absence d'effet anti-histaminique dans ce modèle. Cependant les produits sont administrés par la voie orale. Or il apparaît dans le test suivant que le produit V0162 est actif lorsqu'il est administré directement par la voie intraveineuse. En conclusion cette étude montre que l'activité anti H4 mise en évidence in vitro, est confirmée in vivo chez l'animal. EXEMPLE 4: Activité anti-histaminique in vivo du V0114 et du L0013 après administration par voie intraveineuse, dans le modèle de bronchoconstriction induite par l'histamine chez la souris Le but de ces expérimentations est d'évaluer l'activité des trois composés V0162, V0114 et L0013 vis-à-vis de la bronchoconstriction induite par l'histamine dans le modèle de Konzett (1940) chez le cobaye. Nous avons vu précédemment que les trois composés exerçaient une activité antihistaminique vis-à-vis du récepteur H4 in vitro, par contre in vivo, seuls le V0114 et le L0013 se sont révélés anti-inflammatoires lorsque l'inflammation est générée par l'histamine. Il semble que le V0162 perde son activité lorsqu'il est administré par voie orale. Dans le but d'analyser l'activité par voie intraveineuse des trois produits, le test suivant a été réalisé. Les animaux sont ventilés au moyen d'une pompe respiratoire à pression constante, par un volume d'air en excès. L'air, qui ne pénètre pas dans les poumons, parvient à un capteur et mesure chaque inspiration. Les variations observées traduisent les modifications du tonus bronchique. Une bronchoconstriction induite par l'histamine provoque une augmentation du volume en excès mesuré dans le capteur. Les administrations des différents composés sont effectués par la voie de la veine jugulaire préalablement cathétérisée. Puis la stimulation histaminique est réalisée par voie intraveineuse à la dose de 7 pg.kg-l. Table 4 : Détermination de l'activité anti-histaminique in vivo, après administration intraveineuse des composés Composés Groupe Doses Inhibition à Inhibition à testés expérimental (mg.kg-1) 5 min (%) 30 min (%) véhicule 8 - 0 0 V0114 6 12.5 -15+3 -35+6 25 -29+3 -71+5 5 37.5 -51+8 -91+2 5 50 -48+6 -97+2 V0162 5 25 -17+3 -9+8 5 37.5 -23+4 -9+9 5 50 -31+ 12 -4+10 L0013 6 12.5 -35+6 -39+7 25 -35+5 -61+5 6 37.5 -26+4 -51+8 5 50 -37+5 -57+7 L'histamine induit une bronchoconstriction dans ce modèle. 5 Les trois composés induisent une inhibition des effets de l'histamine, lorsqu'ils sont administrés par voie intraveineuse. Ainsi la voie d'administration semble importante pour l'atteinte de la cible. Mais ce résultat est modifié lorsque l'on considère les mesures après 30 min. Le V0162 semble perdre son activité 10 antagoniste, alors que cette activité est maximale avec le V0114. Ces expérimentations montrent que, in vivo, après administration intraveineuse, les composés s'opposent à l'action de l'histamine sur les phénomènes qu'engendre ce médiateur au niveau de la sphère pulmonaire. EXEMPLE 5: Passage transcutané du 10-[(3R,3S)-1- azabicyclo[2.2.2] oct-3-ylméthyl]-10H-phénothiazine. L'intérêt du récepteur H4 dans le prurit a été établi récemment. Dès lors un agent antagoniste ciblant les récepteurs histaminique H4 impliqués dans le prurit dermatologique peut constituer une arme de choix pour rompre les comportements liés au prurit, et par voie de conséquence, éviter les surinfections engendrées par les lésions de la peau occasionnées par le prurit. De même un tel agent anti-H4 se révélerait utile pour prévenir ou éradiquer les manifestations observées dans les cas d'atopie, comme cela est exposé précédemment. Pour ce faire il est utile de disposer d'un agent anti-H4 susceptible de franchir la barrière cutanée afin d'atteindre sa cible au niveau des mastocytes sous-cutanés. Le but de ces expérimentations est d'évaluer la capacité du 10-[(3R,3S)-1-azabicyclo[2.2.2]oct-3-ylméthyl]-10H-phénothiazine à franchir la barrière cutanée. Les explants de peau humaine ont été disposés en chambre de diffusion dynamique (surface de diffusion de 0,636 cm2), le derme en contact avec le milieu récepteur (Eau ; NaCl 0,9 % azide de Na 0.1 % / éthanol ; 75 / 25 ; v/v). Le débit est de 1.5 ml/heure. L'étude est réalisée à 32°C. Un dépôt de la solution de contenant le composé (500 pl à 2,5 mg/ml, soit 10 pCi par cellule) est réalisé à t = 0. L'étude de passage est réalisée sous occlusion. Le liquide récepteur est prélevé à 3, 6, 9, 12, 16, 20, 24 heures. Les résultats montrent qu'un flux maximum quasi constant de composé est atteint à partir de 16 H, et les quantités cumulées à 24 H sont de 5.4 pg/cm2/h ; 107 pg/cm2. Le dosage du composé dans l'épiderme et le derme (fig. 3b), 25 à 24 H montre un gradient de concentration et donc, une répartition homogène de cette molécule dans la peau : - Epiderme = 56 � 17 pg/cm2 - Derme = 45 � 14 pg/cm2 - total = 101 pg/cm2 30 -zone réceptrice= 107 � 28 pg/cm2 Cette étude montre que le 10-[(3R,3S)-1-azabicyclo[2.2.2]oct-3-ylméthyl]-10H-phénothiazine est une molécule ayant un bon potentiel de passage transcutané (env. 100 pg/cm2/24 H). La quantité de composé stockée dans la peau, après 24 H, est équivalente voire supérieure à la quantité cumulée retrouvée dans le liquide récepteur pendant 24 H. EXEMPLE 6: Evaluation de l'activité anti-inflammatoire des 5 composés V0114 et V0162 chez le rat dans le modèle de bronchopneumopathie chronique obstructive L'intérêt du composé dans la réduction de l'inflammation pulmonaire a été évalué dans le modèle suivant. Les animaux sont exposés à des doses de cadmium par nébulisation chronique. A 10 terme, les animaux développent une réaction inflammatoire et un emphysème pulmonaire. Ce modèle a été validé chez le rat afin de l'utiliser pour l'identification de molécules potentiellement efficaces pour le traitement des maladies respiratoires chroniques liées à la persistance d'une réaction inflammatoire 15 neutrophilique médiée par l'activation du récepteur H4. Suite à l'installation de la pathologie les animaux sont traités quotidiennement par administration pulmonaire de doses variant entre 10 et 50pg de composé d'intérêt administré par nébulisation. 20 Les résultats montrent que les composés testés restaurent partiellement la capacité respiratoire et notamment le rythme respiratoire et augmentent le flux inspiratoire et expiratoire. De plus en fin d'expérimentation les liquides bronchioloalvéolaires sont prélevés et un comptage des cellules 25 immunocompétentes est effectué. Les résultats montrent une diminution des neutrophiles infiltrés, lorsque l'on compare les groupes traités aux animaux n'ayant reçu que le placebo. L'ensemble de ces résultats confirme l'activité anti-inflammatoire des composés testés, par l'antagonisme exercé sur 30 le récepteur histaminique H4. Les trois composés présentent des affinités réceptorielles vis-à-vis du récepteur H4. Nous avons pu établir que ce sont des agonistes inverses de ce récepteur. In vitro et in vivo ces activités de type anti-inflammatoire ont été démontrées et établies dans les modèles consacrés. De plus ces composés possèdent des qualités de pharmacocinétique et de pénétration transcutanée rendant possible des administrations topiques (cutanée ou pulmonaire). Les propriétés particulières de ces trois composés sur le récepteur H4 et les utilisations en thérapeutique qui en découlent, n'ont jamais été mises en évidence auparavant. Ces propriétés prises ensemble ou considérées séparément sont exemplifiées ci-dessus. Ces exemples montrent le rationnel d'utilisation du 10-[(3R)-1-azabicyclo[2.2.2]oct-3-ylméthyl]-10H-phénothiazine, du 10-[(3S)-1-azabicyclo[2.2.2]oct-3-ylméthyl]-10H-phénothiazine ou du 10-[(3R,3S)-1-azabicyclo[2.2.2]oct-3-ylméthyl]-10H-phénothiazine dans les pathologies médiées par le récepteur histaminique H4. De plus l'activité préalablement établie du dérivé lévogyre (10-[(3S)-1-azabicyclo[2.2.2]oct-3-ylméthyl]- 10H-phénothiazine) et du mélange racémique (10-[(3R,3S,)-1-azabicyclo[2.2.2]oct-3-ylméthyl]-10H-phénothiazine) en tant qu'inhibiteur du récepteur H1, confère à ces deux produits une double propriété anti-H4 et anti-H1. Cette double capacité attribue à ces composés une supériorité par rapport aux produits antihistaminiques décrits jusqu'à présent dans l'art antérieur. De même l'activité antimuscarinique du dérivé dextrogyre (10-[(3R)-1-azabicyclo[2.2.2]oct-3-ylméthyl]-10H-phénothiazine) clairement établie par ailleurs est renforcée par son activité anti-H4. Cette double propriété n'est pas décrite pour les composes (10-[(3R,3S,)-1-azabicyclo[2.2.2]oct-3-ylméthyl]-10H- phénothiazine), (10-[(3R)-1-azabicyclo[2.2.2]oct-3-ylméthyl]- 10H-phénothiazine) et (10-[(3S)-1-azabicyclo[2.2.2]oct-3- ylméthyl]-10H-phénothiazine) dans l'art antérieur. La présente invention a en outre permis de démontrer pour le V0162 et le L0013 l'intérêt de la double activité antiH4 et anti M1/M3 dans l'inhibition des phénomènes inflammatoires et de détresse respiratoire chez les patients présentant un asthme ou une bronchopneumopathie obstructive. Le récepteur H4 est impliqué dans les pathologies mettant en jeu le recrutement de cellules immunocompétentes et notamment des éosinophiles et macrophage. Il a donc été envisagé d'utiliser les ligands de ce récepteur dans le but de limiter les infiltrations des éosinophiles et le recrutement des macrophages au niveau pulmonaire lors d'emphysème, de bronchopneumopathies obstructives ou d'asthme. Cette activité peut être judicieusement complétée par une activité spasmolytique. De manière inattendue le V0162 ou (10-[(3R)-1-azabicyclo[2.2.2]oct-3-ylméthyl]-10H-phénothiazine), et le L0013 ou (10-[(3R,3S)-1-azabicyclo[2.2.2]oct-3-ylméthyl]-10H- phénothiazine) démontrent une activité complémentaire anticholinergique. Cette activité n'est pas observée in vivo pour l'énantiomère lévogyre V0114 ou (10-[(3S)-1- azabicyclo[2.2.2]oct-3-ylméthyl]-10H-phénothiazine). Ces deux propriétés réunies dans un seul composé permettent d'envisager l'utilisation du V0162 et/ou du L0013 dans le traitement des pathologies respiratoires comme l'asthme, la bronchopneumopathie obstructive. EXEMPLE 7 : Affinité du V0162 vis-à-vis des récepteurs muscariniques Le but de ce test est d'évaluer l'activité inhibitrice des composés sur la fixation de l'acéthylcholine sur les récepteurs M1, M2 et M3. Pour ce faire, une quantité fixe d'acéthylcholine radiomarquée est incubée en présence de doses variables des composés à tester : V0162, L0013 et V0114.30 Récepteurs Composé IC50(nM) K (nM) nH humains testé M1 V0114 5.9 5.1 1.1 (h) V0162 1.6 1.4 1.0 L0013 2.1 1.8 0.8 M2(h) V0114 94 66 1.0 V0162 10 7 1.1 L0013 20 14 0.9 M3(h) V0114 17 12 1.0 V0162 5.5 3.9 1.1 L0013 8 5.7 1.2 Ainsi, in vitro V0162 et L0013 démontrent une très forte affinité vis à vis des récepteurs muscariniques impliqués dans l'initiation, la régulation et le maintien des contractions des muscles bronchiques. L'énantiomère lévogyre est moins inhibiteur de la fixation de l'acéthylcholine vis-à-vis des trois récepteurs muscariniques. Cette différence est encore plus remarquable in vivo, puisque seuls le V0162 et le L0013 antagonisent l'effet de l'acéthylcholine. EXEMPLE 8 : Inhibition de l'effet de l'acéthylcholine sur la contraction des muscles respiratoires Les cobayes sont anesthésiés et ventilés de manière artificielle. L'air qui pénètre dans les poumons est mesuré au moyen d'un capteur. Chaque inspiration est donc quantifiée. On induit par la suite une bronchoconstriction par injection intraveineuse d'acéthylcholine. L'acéthylcholine a pour effet direct et immédiat une modification du tonus bronchique. Les effets bronchoconstricteurs de l'acéthylcholine sont évalués en mm à l'apogée des effets. 20 minutes après l'injection de l'acéthylcholine, les divers produits à tester sont administrés : V0162, L0013 et V0114. Les effets des produits sont comparés à ceux de l'atropine comme méthode standard. Composé Dose Pourcentage n testé (pg/kg) d'inhibition (o) Véhicule - - 6 V0162 25 -9+3 5 50 -29+4 5 100 -37+5 5 V0114 25 -7+3 5 50 -6+1 5 100 -14+4 5 L0013 25 -8+1 5 50 -25+ 2 5 100 -24+6 5 atropine 5 -76+8 5 Les résultats montrent que le V0162 et le L0013 sont deux produits capables d'induire une inhibition du bronchospasme induit par l'acéthylcholine. En revanche, le V0114 est peu actif. EXEMPLE 9 Effet brochondilatateur du L0013, absence d'effet bronchodilatateur du V0114 Les effets du V0114 (0,5, 50 et 100 mg/kg) sur les fonctions respiratoires, sont analysés après administration orale (p.o.) chez des rats mâles Wistar (8 rats/dose). Le L0013 (100 mg/kg) administré dans les mêmes conditions sert de substance de référence. La théophylline (100 mg/kg), administrée dans les mêmes conditions expérimentales, sert de substance de référence. 0,5 % de carboxyméthylcellulose dans de l'eau distillée est utilisée en tant que véhicule témoin. A la fin de la période de test (i.e. 360 minutes après l'administration de la dose), le comportement des animaux ainsi que le diamètre de leurs pupilles (myosis/mydriasis) sont évalués. Des prises de sang sont effectuées sur chaque rat (hormis ceux appartenant au groupe de la théophylline) afin d'analyser la teneur de la substance dans le sang. Le véhicule témoin n'a pas d'effet sur le temps d'inspiration, d'expiration, le pic du flux d'inspiration, d'expiration, le volume respiratoire, le taux respiratoire, le temps de relaxation, la pause respiratoire et améliore la pause respiratoire après la période de test de 360 minutes. On a observé une très légère augmentation de la pause respiratoire suite à l'administration (+24 % maximum à 120 minutes dans le groupe du véhicule témoin, p Le L0013 tend à diminuer le temps d'inspiration (-26 contre +6 dans le groupe du véhicule témoin, à 60 minutes de l'administration), le temps d'expiration (-24 contre +3 dans le groupe du véhicule témoin, à 60 minutes de l'administration), le temps de relaxation (-30 % contre -2% dans le groupe du véhicule témoin, à 120 minutes de l'administration) et le volume respiratoire (-26 % contre -6 % dans le groupe du véhicule témoin, à 60 minutes de l'administration). Il tend également à augmenter le pic du flux d'inspiration (+14 contre -13 dans le groupe du véhicule témoin, à 60 minutes de l'administration), le pic du flux d'expiration (+23 contre -4 dans le groupe du véhicule témoin, à 120 minutes de l'administration). Ces effets indiquent des propriétés respiratoires stimulantes et bronchodilatatrices. La théophylline (100 mg/kg, p.o.) diminue sensiblement et rapidement le temps d'inspiration (-60 % contre +6 % dans le groupe du véhicule témoin, à 60 minutes de l'administration, p Pris ensemble ces résultats montrent que le V0162 et le L0013 démontrent un potentiel antimuscarinique en plus de leur activité inhibitrice vis-à-vis du récepteur H4. Ces deux propriétés sont d'intérêt dans le but de préparer des formes médicamenteuses susceptibles de prévenir, réduire et de traiter les pathologies respiratoires mettant en jeu les récepteurs muscariniques et histaminergiques de type H4 ; comme la bronchopneumopathie obstructive, l'asthme ou tout déficit de la fonction respiratoire. REVENDICATIONS 1. Utilisation du 10-[(3R)-1-azabicyclo[2.2.2]oct-3-ylméthyl]-lOH-phénothiazine, du 10- [ (3S) -1-azabicyclo[2.2.2]oct-3-ylméthyl]-10H-phénothiazine ou du 10-[(3R,3S)-1-azabicyclo[2.2.2]oct-3-ylméthyl]-10H-phénothiazine, ou bien de l'un de leurs sels pharmaceutiquement acceptables pour la préparation d'un médicament destiné à prévenir ou à traiter les pathologies impliquant les récepteurs histaminiques H4, choisies parmi la dermatite atopique, le prurit, les inflammations bronchiques telles que l'asthme et la bronchopneumopathie obstructive. 2. Utilisation selon la revendication 1, caractérisée en ce que le médicament est présenté sous une forme adaptée à l'administration orale et comportant une teneur en principe actif suffisante pour antagoniser les récepteurs histaminiques H4 cibles. 3. Utilisation selon la revendication 2, caractérisée en ce que le médicament est présenté sous une unité de dosage par voie orale permettant une dose d'administration comprise entre lpg. kg-1 et 10 mg. kg-1, avantageusement entre 0.01 mg. kg-1 et lmg. kg-1 4. Utilisation selon la revendication 3, caractérisée en ce que le médicament est présenté sous la forme d'un comprimé. 5. Utilisation selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisée en ce que le médicament est présenté sous la forme d'une solution pour pulvérisation buccale, spécifiquement adaptée pour le traitement de l'asthme ou de la bronchopneumopathie obstructive. 6. Utilisation selon l'une des revendications précédentes, caractérisée en ce que le médicament est destiné à prévenir ou à traiter les pathologies impliquant les récepteurs histaminiques H4 et les récepteurs muscariniques. 7. Utilisation selon la revendication 6, caractérisée en ce que les pathologies impliquant lesdits récepteurs sont choisies parmi les pathologies respiratoires. 8. Utilisation selon la revendication 7, caractérisée en ce 5 que lesdites pathologies sont choisies parmi l'emphysème, l'asthme et les broncho-pneumopathies obstructives. 9. Utilisation selon l'une des revendications 6 à 8, du 10- [(3R)-1-azabicyclo[2.2.2]oct-3-ylméthyl]-10H-phénothiazine. 10. Utilisation selon la revendication 1, caractérisée en 10 ce que le médicament est présenté sous une forme appropriée à son administration par voie topique. 11. Utilisation selon la revendication 10, caractérisée en ce que le médicament se présente sous la forme d'un gel, d'une émulsion ou d'une crème présentant une concentration en principe 15 actif comprise entre 0,01 et 10 en poids. 12. Utilisation selon l'une des revendications 10 et 11, caractérisée en ce que le médicament est destiné au traitement de la dermatite atopique et du prurit.