FR 2928927 A1 20090925 FR 0801559 A 20080321 Composés du type acide (1-+4) R-D-polyglucuronique - mélange et produit phytosanitaire associés- utilisation et méthode de synthèse associées La présente invention concerne des polymères ou des oligomères de type acide (1ù>4)-(3-c-polyglucuronique, un mélange contenant au moins un lo polymère et/ou d'oligomère de type acide (1ù*4)-p-D-polyglucuronique, un produit phytosanitaire contenant un tel mélange, l'utilisation d'un tel mélange pour l'induction de certains gènes chez les végétaux et un procédé de fabrication de ces composés. Le document FR 2 795 289 concerne l'utilisation de polymères et 15 d'oligomères de (1-+4) R-D-glucuronanes (éventuellement acétylés, étherifiés ou estérifiés), en tant que produits phytosanitaires, dans le cadre d'applications liées à l'amplification de l'enzyme (1-+3) et/ou (1->4)-P-D-glucanase. Ces composés permettent de fabriquer des produits biofertilisants qui, administrés à des plantes, permettent à ces dernières, en cas d'infection ou d'agression par 20 des phytopathogènes, de se défendre par l'intermédiaire de leurs mécanismes de défense naturels. Un but de la présente invention est de fournir de nouvelles molécules susceptibles d'avoir un effet éliciteur sur les plantes. Dans ce but, la présente invention propose un composé du type polymère 25 ou oligomère de type acide (1ù>4)-j3-D-polyglucuronique de formule (I) suivante : (I) dans laquelle : - n est un nombre entier ; - RI est choisi parmi les radicaux suivants : H, alkyles, acyles, HSO3 et les sels de ce dernier ; - les (n+2) radicaux R2 et les (n+2) radicaux R3 sont choisis indépendamment les uns des autres parmi les radicaux suivants :H, alkyles, acyles, HSO3 et les sels de ce dernier ; io -Y est choisi parmi les radicaux suivants : alcoxys, hydroxyle et les sels de ce radical ; et au moins un des (n+2) radicaux R2 ou au moins un des (n+2) radicaux R3 est un radical HSO3 ou un sel de ce radical. Dans la formule générale (I), n peut être nul, on obtient alors un dimère. 15 Par le terme de � polymère � ou de � glucuronane �, on entend au sens de la présente invention, les acides (1 ù>4)-(3-D-polyglucuroniques de formule générale (I) dans laquelle n est supérieur ou égal à 28 ; le terme � oligoglucuronane � désignant un oligomère, donc un composé de formule générale (I) dans laquelle n est inférieur à 28. 20 Les sels des radicaux HSO3 sont, par exemple, les sels de sodium ou d'ammonium. Selon un premier mode de réalisation des composés de l'invention, 8 Avantageusement, le composé contient au moins (n+2) radicaux HSO3 ou de sels de ce radical. Le nombre de radicaux sulfate ou de sels de ce radical influence les propriétés élicitrices du composé. On obtient une bonne efficacité en tant qu'éliciteur, particulièrement lorsque la molécule contient au moins (n+2) radicaux HSO3. La présente invention concerne également un mélange qui contient au moins un composé tel que précité. Les composés de l'invention sont faciles à obtenir en mélange. Le mélange de l'invention peut ainsi contenir un seul type de polymère ou lo d'oligomère selon l'invention. Il peut également contenir un ou des autres composés différents de ceux de l'invention. Le mélange selon l'invention peut aussi contenir une pluralité de molécules selon la formule générale (I) qui présentent une même valeur de n mais qui comportent des radicaux différents pour RI, R2 , R3 et Y. II peut également contenir des composés selon la formule 15 (I) qui présentent des valeurs de n différentes et qui comportent des radicaux différents pour RI, R>, R3 et Y, et en particulier comportent un nombre de radicaux sulfate ou de sels de ce radical différents. Selon un mode de réalisation, le mélange contient une pluralité de composés de formule générale (I), lesdits composés présentant des valeurs de 20 n différentes et lesdits composés de formule générale (I) dans laquelle n=npn sont les plus nombreux dans ledit mélange. Ainsi, indépendamment de la nature des radicaux RI, R2, R3 et Y, il est possible de déterminer une sorte de composé de formule (I) qui est la plus nombreuse, en fonction des valeurs prises par n. Ainsi, les composés les plus 25 nombreux présentent tous la même valeur pour n mais peuvent comporter des radicaux de nature différents. En d'autres termes, la fréquence des molécules de composés de formule générale (I) dans laquelle n=nPr, est la plus élevée dans le mélange. Le nombre des molécules de formule générale (I) présentant une même valeur de n, notée np, (indépendamment des radicaux RI, R2, R3 et Y qui peuvent être différents d'une molécule à l'autre pour cette valeur de n) est plus important que le nombre de molécules contenues dans chacun des groupes de composés présentant une valeur de n différente de npn, pris séparément. Les composés de formule générale (I) dans laquelle n=np, sont les molécules les plus nombreuses (i.e. prépondérantes) dans le mélange. Ces molécules peuvent, par exemple, représenter au moins 50% du nombre total des molécules du mélange, par exemple, 70%. io Avantageusement, selon un premier mode de réalisation, 0 La présente invention concerne également un produit phytosanitaire qui contient le mélange selon l'invention. Avantageusement, ledit mélange contient des composés de formule générale (I) dans laquelle n=np, qui sont les plus nombreux dans le mélange et il contient une concentration comprise entre 200 pM et 1 mM desdits composés les plus nombreux. La concentration précitée est calculée en référence aux molécules les plus nombreuses. Le degré de polymérisation de cette molécule (DPpn) peut être mesuré par RMN 1H. On considère que le mélange est composé de molécules lo de formule générale (I) dans laquelle n=npr,. On estime la masse molaire de ces composés les plus nombreux en déterminant, par exemple, le 0/0 d'acétylation et/ou le taux de sulfatation ts du mélange. Le pourcentage d'acétylation et le taux de sulfatation peuvent être déterminés expérimentalement. Le même calcul peut être fait en déterminant le nombre is des autres radicaux tels que définis en référence à la formule générale (I) et qui peuvent être disposés à la place des radicaux RI, R2, R3 non sulfatés et non acétylés. Dans les exemples qui suivent, les molécules de l'invention sont obtenues de la façon suivante : on obtient tout d'abord des polysaccharides, par 20 fermentation (culture de la souche S meliloti M5N1CS en bioréacteur). Ces polysaccharides sont ensuite dégradés par une enzyme fongique de type glucuronane lyase comme exposé dans le document FR0504924. On obtient donc un mélange de polymères et/ou d'oligomères de degré(s) de polymérisation plus faibles. Ces molécules peuvent comporter un ou 25 plusieurs radicaux acétyle en lieu et place d'au moins un des radicaux R2 et R:3. Dans l'étape de dégradation, en fonction du temps de dégradation et du pourcentage d'acétylation du polysaccharide substrat, on arrive à contrôler le degré de polymérisation (i.e.: la valeur de n dans la formule (I)) des molécules présentes en plus grand nombre dans le mélange issu de la fermentation. Ces molécules qui peuvent être acétylées, sont ensuite soit sulfatées (on peut déterminer le taux de sulfatation du mélange), soit éventuellement désacétylées (on peut mesurer le % d'acétylation), et il est donc possible d'estimer la masse molaire de la molécule la plus nombreuse dans le mélange. La présente invention concerne également l'utilisation d'un mélange selon l'invention pour modifier l'induction d'au moins un gène compris parmi les gènes suivants : PAL codant une phénylalanine ammonia-lyase, 1ère enzyme de la voie des phénylpropanoïdes Io - STS codant la stilbène synthase, enzyme responsable de la synthèse du resvératrol - GST codant une gluthation-S-transférase impliquée dans les processus de détoxification chit4c, codant une chitinase acide classe IV, de la famille des protéines 15 PR3 - PR6 codant un inhibiteur de protéases ; PGIP codant un inhibiteur de polygalacturonase, protéine ayant un rôle dans la résistance vis-à-vis de B. cinerea ; - PR1 codant une première protéine de stress végétal ; 20 - PR4 codant une seconde protéine de stress végétal - pdfl.2 codant ne troisième protéine de stress végétal ; VSP2 codant une protéine de stockage végétatif ; et/ou induire la synthèse de H202 et/ou la diminution du pH chez un végétal ou dans des cellules végétales. 25 Ce végétal peut être la vigne ou tout autre végétal présentant, notamment un intérêt économique, ornemental ou alimentaire. La présente invention concerne également une méthode de synthèse d'un mélange selon l'invention. Selon l'invention, de manière caractéristique, cette méthode de synthèse comprend une étape de sulfatation d'un mélange d'au moins un polymère ou oligomère type acide (1-+4)-8-D-polyglucuronique de formule générale (II) (II) dans laquelle n, RI et Y sont tels que précités et les (n+2) radicaux R4 et les (n+2) radicaux R5 sont choisis indépendamment les uns des autres parmi les radicaux : H, alkyles, acyles, HSO3 et les sels de ce radical, au moins un des (n+2) radicaux R4 ou des (n+2) radicaux R5 est différent d'un radical HSO3 ou d'un sel de ce radical ; ladite étape de sulfatation comprend le chauffage par utilisation d'une onde io électromagnétique, du type micro-onde, dudit mélange comprenant au moins un polymère ou oligomère de type acide (1-a4)-(3-D-polyglucuronique de formule (Il), en présence d'agent sulfatant. L'onde électromagnétique précitée est définie comme étant une onde qui présente une longueur d'onde comprise dans la gamme de 30 centimètres (1 15 GHz) à 1 millimètre (300 GHz). Avantageusement, ledit mélange d'au moins un polymère ou oligomère de type acide (1- *4)-f3-o-polyglucuronique de formule (Il) est déposé, à l'état solide, sur un support, avec ledit agent sulfatant à l'état solide, et ledit support est irradié par ladite onde électromagnétique. 20 L'agent sulfatant n'est pas limité selon la présente invention. Il peut s'agir d'un agent contenant un complexe choisi parmi SO3.DMF, SO3.Et3N, SO3.Me3N, SO3.pyridine. La quantité d'agent sulfatant par rapport au mélange de polymères et/ou d'oligomères de type acide (1-*4)-8-D-polyglucuronique de formule générale (II) à sulfater, détermine le taux de sulfatation du mélange 25 final obtenu. La méthode selon l'invention peut comprendre, avant ladite étape de sulfatation, une étape d'estérification dans laquelle un mélange contenant au moins un polymère ou oligomère de type acide (1->4)-(3-D-polyglucuronique de formule générale (II) et/ou au moins un composé du type polymère ou oligomère de type acide (1--4)-(3-o-polyglucuronique de formule (I) est mis en présence d'un alcool de formule ROH puis irradié par une onde électromagnétique de type micro-onde. Dans l'alcool précité, R peut représenter un radical alkyle comportant de 1 à 12 atomes de carbone. io La présente invention sera mieux comprise à la lecture des figures annexées qui font référence aux exemples qui suivent et qui sont fournis à titre non limitatif, sur lesquelles : - la figure 1 représente la production d'H2O2 dans le milieu de culture des cellules de vigne en réponse au traitement avec les différents mélanges utilisés 1s à une dose de 200NM ; -la figure 2 représente l'expression, après 24 heures de traitement, des gènes impliqués dans la défense mesurée par RT-PCR quantitative chez les cellules de vigne traitées avec les différents mélanges utilisés à une dose de 200 NM; 20 - la figure 3 représente l'expression, après 24 heures de traitement, des gènes impliqués dans la défense mesurée par RT-PCR quantitative chez les cellules de vigne traitées avec 4 concentrations différentes de mélanges spécifiques ; et - la figure 4 représente l'expression, après 24 heures de traitement, des 25 gènes impliqués dans la défense mesurée par RT-PCR quantitative chez les plants d'Arabidopsis infiltrés avec des mélanges selon l'invention à la concentration de 1g/l. Exemples Les oligoglucuronanes de l'invention peuvent être obtenus par sulfatation d'oligoglucuronanes. Ces oligoglucuronanes non sulfatés peuvent être obtenus selon les procédés décrits dans le document FR 05049:24. Ces composés peuvent comporter des fonctions acétyles. s Les oligoglucuronanes non sulfatés étant insolubles dans la plupart des solvants excepté l'eau, sont mis sous forme de sels d'ammonium afin de les rendre solubles. La sulfatation des oligoglucuronanes de l'invention peut être obtenue par une méthode de sulfatation classique, avec une solution de poly ou ~o d'oligoglucuronane(s) (sous forme de sel d'ammonium) et de l'agent sulfatant à base de SO3 dans du DMF anhydre. Avantageusement, on peut procéder à une sulfatation des glucuronanes et/ou des oligoglucuronanes par onde électromagnétique, notamment du type micro-ondes, avec ou sans solvant: 15 Selon la méthode utilisant un solvant, une solution de l'échantillon obtenu précédemment (sous forme de sel d'ammonium) et de l'agent sulfatant à base de SO3 dans du DMF anhydre, est maintenue sous argon. Le mélange est alors irradié, sous agitation, par les micro-ondes avec une puissance comprise entre 10 et 300W (la fréquence de l'onde est de 2450 MHz). Le DMF est ensuite 20 évaporé sous pression réduite. Dans le cas de la méthode sans solvant, le mélange d'oligoglucuronanes ainsi que le complexe sulfatant, tous deux solides, sont déposés sur un support, le mélange est alors irradié par les micro-ondes avec une puissance comprise entre 10 et 300W. Une fois la réaction terminée, le support solide est 25 rincé plusieurs fois à l'eau. La solution est alors évaporée sous pression réduite puis resolubilisée dans du méthanol et neutralisée avec une base. Dans toutes les méthodes utilisées, on obtient des sels (de sodium) de polymères et/ou d'oligomères d'acide glucuronique. On procède ensuite à une étape d'élimination des sels, réalisée en deux temps : Tout d'abord l'utilisation de la résine Chelex qui permet d'éliminer en général plus de 70% massique des sels, et enfin le passage sur Superdex 30 pour obtenir un échantillon purifié. Les polymères et/ou les oligomères d'acide glucuronique peuvent être soumis à une réaction d'estérification de la fonction acide en C6, lorsque Y représente un groupe hydroxyle, avant l'étape de sulfatation. Cette réaction peut être mise en oeuvre en utilisant des micro-ondes. L'échantillon est mis en réaction avec un minimum d'alcool ROH (R = CPHp,+,, p = 1 à 12). On obtient un mélange hétérogène que l'on place sous atmosphère d'argon avec un io catalyseur acide (un de ceux cités dans l'article : Tetrahedron, 2007, 63, 12424-12428). Le milieu hétérogène est alors irradié par les micro-ondes avec une puissance comprise entre 10 et 300W (la fréquence de l'onde est de 2450 MHz). Le mélange réactionnel est alors évaporé sous pression réduite. Les réactions précitées permettent d'obtenir des mélanges 15 d'oligoglucuronanes et de glucuronanes selon l'invention. Ces mélanges sont caractérisés par un degré de polymérisation DPpn qui correspond au degré de polymérisation de l'espèce la plus nombreuse dans le mélange. Ce degré de polymérisation est mesuré par RMN 1H. Les mélanges sont également caractérisés par un % d'acétylation et/ou par un taux de sulfatation (ts). 20 Le % d'acétylation est calculé à partir du degré d'acétylation. Le degré d'acétylation est défini comme étant le nombre moyen de radicaux acétate par molécule d'acide glucuronique de formule générale (I) dans laquelle n=npn et qui est présente en plus grand nombre dans le mélange. Il varie entre 0 et 2. Exprimé en pourcentage, il varie entre 0 et 200 %. 25 Le degré d'acétylation est calculé à partir de données RMN 1H. L'intégration des résonances des protons des unités acide glucuronique dans la région à champ faible (4,3 à 5,8 ppm), à champ fort (3 à 4 ppm) et dans la région de résonance des acétates (1,9 à 2,2 ppm) permet de calculer le degré d'acétylation. L'aire d'un proton est la somme des aires des pics dans la région à champ fort et à champ faible divisée par 5 (en considérant que chaque résidu acide glucuronique possède 5 protons différents et en négligeant l'insaturation sur l'extrémité non réductrice). D'où : Aire des acétates Aire des acétates dAc et % acétylation = x 100 3 x Aire d'un proton 3 x Aire d'un proton Le tableau 1 récapitule ces différents mélanges en leur attribuant un code, par souci de simplification. Par ailleurs, à titre d'exemple comparatif, des mélanges d'oligoglucuronanes et/ou de glucuronanes non sulfatés ont également été lo synthétisés. Tableau 1 : mélanges d'oligo et/ou de glucuronanes testés Code échantillon DP pn (ts) %d'acétylation 14A 14 0 69 14D 14 0 0 14S 14 2 o 10,5A 10-11 0 61 10S 10 1,18 61 6,9A 7 0 36 7S 7 2 0 6,7D 6-7 0 0 6,4A 6-7 0 36 5,3A 5-6 0 16 4D 4-5 0 0 4S2 4-5 1,37 0 4S3 4-5 2 o 4bllSI 4 0,9 0 4b1 1S2 4 1,9 o 4b11S3 4 2 0 Dans le tableau 1, le degré de polymérisation des composés les plus nombreux du mélange (DPpn) correspond au DP moyen du mélange. Etude de l'effet éliciteur des produits phytosanitaires de l'invention L'effet éliciteur des molécules est testé par leur capacité à (i) induire la production d'eau oxygénée H202 par les cellules en culture, (ii) à stimuler l'expression de gènes de défenses déterminés. Etude sur des cultures cellulaires de vigne L'activité biologique des différents mélanges est testée sur cultures cellulaires plutôt que sur des plantes entières. Ces molécules sont directement lo appliquées dans le milieu de culture des cellules. Pour tous les tests, trois répétitions indépendantes doivent permettre de valider le résultat obtenu. Pour chaque solution, plusieurs concentrations différentes sont testées. a) Mesure de la production d' H2O Le premier critère utilisé est la mesure d'une réaction précoce de 15 défense : la production d'eau oxygénée (H202) par les cellules. Le dosage de H202 est effectué juste après l'ajout du mélange à tester. Méthodologie utilisée Le test est basé sur la peroxydation du luminol en présence de peroxydases et de H202. La luminescence émise est représentative de 20 l'accumulation de H202 lors du burst oxydatif et est mesurée grâce à un luminomètre modèle lumat LB 9507. Une solution stock de luminol (8,8 mg dans 1 ml NaOH 1M + 9 ml MES (acide 2-N-Morpholinoethanesulfonique) 300 mM pH 7,0) est constituée (solution A à pH 12,9). Un ml de solution A est tamponné avec 9 ml de MES 25 300 mM pH 7,0 (solution de travail ou solution B à pH 7,0). Juste avant le dosage, 1 mg/ml (concentration finale équivalent à 60U) de peroxydases de type II sont rajoutés à la solution B. Lors du test et pour chaque condition, 200 pl du milieu de culture des suspensions cellulaires sont placés dans un tube de 10 ml spécialement utilisé pour le luminomètre modèle lumat LB 9507. Cinquante pl de solution B sont injectés dans le tube et la luminescence 5 enregistrée sur une période de 10 s. La luminescence est exprimée en RLU et convertie en concentration de H202 présent dans le milieu. Les mesures sont effectuées toutes les 10 minutes sur une période de 60 minutes. b) Mesure de l'expression de gènes de défense 10 Différents gènes ont été ciblés. Ils codent des protéines impliquées dans différentes catégories de défenses, l'exemple de la vigne sera détaillé ici. - PAL codant une phénylalanine ammonia-lyase, lère enzyme de la voie des phénylpropanoïdes ; - STS codant la stilbène synthase, enzyme responsable de la synthèse du 15 resvératrol ; - GST codant une gluthation-S-transférase impliquée dans les processus de détoxication ; chit4c, codant une chitinase acide classe IV, de la famille des protéines PR3 ; 20 - PR6 codant un inhibiteur de protéases ; PGIP codant un inhibiteur de polygalacturonase, protéine ayant un rôle dans la résistance vis-à-vis de B. cinerea ; Méthodologie utilisée Les ARN totaux sont extraits à partir de 100 mg de cellules (Extract ail, 25 Eurobio). Après obtention des ADNc correspondants par transcription inverse, une vérification de la qualité des matrices ADNc est effectuée par PCR � classique � utilisant des amorces spécifiques d'un gène d'actine. Les produits de PCR sont vérifiés par électrophorèse en gel d'agarose et visualisation sous UV après coloration au BET. Le taux d'expression des différents gènes est mesuré par RT-PCR quantitative en temps réel grâce à un couple d'amorces spécifiques de chaque gène en présence de Sybrgreen (Absolute QPCR SYBR Green ROX Mix, Abgène). Le contrôle interne permettant d'effectuer la normalisation est le gène EF1alpha. Le calibrateur utilisé comme référence xl est un échantillon non traité ou un échantillon traité contrôle. Les échantillons sont déposés en duplicats. Les résultats (moyenne du duplicat) sont exprimés en ratio d'expression par rapport au calibrateur après normalisation par le contrôle interne selon la méthode de comparaison des Ct. io Traitements de plants d'Arabidopsis En parallèle des manipulations réalisées sur cellules de vigne, les différentes molécules ont été testées sur la plante modèle Arabidopsis thaliana, de manière à avoir une approche � plante entière � sur l'utilisation des molécules proposées. is Des feuilles d'A. thaliana ont donc été infiltrées avec les différents mélanges (solution à 1 g/L) et l'expression de 4 gènes de défense codant 3 protéines PR (PR1, PR4 et pdfl.2) et une protéine de stockage végétatif (� vegetative storage protein � (VSP2) a été observée après 24 heures de traitement. 20 L'utilisation de plantes entières permet de réaliser des tests d'infection afin de tester le potentiel de protection des différentes molécules appliquées. Les tests consistent à inoculer les plantes traitées par les éliciteurs potentiels avec des conidies de Botrytis cinerea (105 conidies par ml) et de suivre l'apparition des lésions toutes les 24 h. 25 RESULTATS OBTENUS Traitements éliciteurs sur cultures cellulaires de viqne Les cellules de vigne ont été traitées avec les mélanges dont les caractéristiques sont décrites dans le tableau 1. De manière à pouvoir estimer le potentiel éliciteur des différents oligosaccharides testés, nous avons suivi au niveau des cultures cellulaires : - le burst oxydatif (production d'H2O2 extracellulaire) l'expression de gènes de défense. Burst oxydatif De manière à pouvoir mieux caractériser le potentiel éliciteur des différents mélanges utilisés, nous avons suivi, pendant 1 heure, la production d'H2O2 (exprimée en pM) dans le milieu de culture des cellules de vigne traitées avec les molécules à une dose de 200pM. Les résultats présentés dans la ~o figure 1 sont représentatifs de 3 manipulations indépendantes. D'après la figure 1, aucun mélange de DPpn 4-5 n'est capable d'induire une production d'H2O2 par les cellules de vigne. Pour les échantillons de DPp, 5-7, seule le mélange 6,4A induit une production d'H2O2 de l'ordre de 3 NM. Enfin pour les échantillons de DPpn de l'ordre de 10-14, seules les mélanges 15 10,5A et 14A induisent une production d'H2O2 de l'ordre de 2,5 et 4,75 pM respectivement. En conclusion, les mélanges de l'invention qui contiennent des molécules contenant des radicaux HSO3 n'induisent aucun burst oxidatif. Expression des gènes de défense 20 Le potentiel éliciteur des mélanges selon l'invention a été évalué en étudiant l'expression de différents gènes impliqués dans les mécanismes de défense chez la vigne par RT-PCR quantitative. Les gènes étudiés sont les suivants : PAL codant une phénylalanine ammonia-lyase, 1ere enzyme de la voie 25 des phénylpropanoïdes - STS codant la stilbène synthase, enzyme responsable de la synthèse du resvératrol - GST codant une gluthation-S-transférase impliquée dans les processus de détoxication chit4c, codant une chitinase acide classe IV, de la famille des protéines PR3 - PR6 codant un inhibiteur de protéases ; PGIP codant un inhibiteur de polygalacturonase, protéine ayant un rôle dans la résistance vis-à-vis de B. cinerea. La Figure 2 annexée représente l'expression, après 24 heures de traitement, des gènes impliqués dans la défense mesurée par RT-PCR quantitative chez les cellules de vigne traitées avec les différents mélanges utilisés à une dose de 200 pM. Les résultats sont exprimés en facteur Io d'induction par rapport au contrôle traité avec de l'eau pris comme référence x1. Les résultats de la figure 2 montrent que les 3 mélanges les plus efficaces par rapport aux réponses testées sont 6,4A ; 14A et 14S (5/6 gènes induits d'un facteur >_ 5). 15 Les mélanges 10,5A ; 6,9A ; 6,7D et 4bllSl sont également efficaces, mais n'induisent que 2-3/6 des gènes testés d'un facteur >_ 5. Les mélanges 5,3A et 4b11S3 n'induisent qu'un seul gène d'un facteur >_ 5. Les autres mélanges ont un faible effet (facteur d'induction des gènes La Figure 4 annexée représente l'expression, après 24 heures de traitement, des gènes impliqués dans la défense mesurée par RT-PCR quantitative chez les plants d'Arabidopsis infiltrés avec des mélanges selon l'invention à la concentration de 1g/I. Les résultats sont exprimés en facteur d'induction par rapport au contrôle traité avec de l'eau pris comme référence x1. Les résultats illustrés figure 4 montrent que les différents mélanges ont un effet éliciteur sur au rnoins un des gènes étudiés quand ils sont infiltrés dans des feuilles de plants d'Arabidopsis à une dose de lg/l. Pour un DPpn de 4-5, la présence d'au moins un radical HSO3 engendre un facteur d'induction plus fort pour un gène considéré. Pour les DPpn de 5 à 7, la présence d'au moins un radical HSO3 ne semble pas très probante mais il faudrait agir sur la concentration de la dose injectée. Pour les DPpn de l'ordre de 10 à 14, on constate que la présence d'au moins un radical HSO3 entraîne un facteur d'induction plus élevé (voir 10,5 A et 10S). Pour un même DPpn de 14, le mélange 14S qui présente un taux de sulfatation de 2 induit un plus grand nombre de gènes que les deux autres mélanges non sulfatés. Revendications 1. Composé du type polymère ou oligomère de type acide (1ù>4)-R-D-polyglucuronique de formule (I) suivante : /Y y c R3 O (I) dans laquelle : - n est un nombre entier ; - RI est choisi parmi les radicaux suivants : H, alkyles, acyles, HSO3 et les sels de ce dernier ; io - les (n+2) radicaux R2 et les (n+2) radicaux R3 sont choisis indépendamment les uns des autres parmi les radicaux suivants : H, alkyles, acyles, HSO3 et les sels de ce dernier ; -Y est choisi parmi les radicaux suivants : alcoxys, hydroxyle et les sels de ce radical ; 15 et au moins un des (n+2) radicaux R2 ou au moins un des (n+2) radicaux R3 est un radical HSO3 ou un sel de ce radical. 2. Composé selon la revendication 1, caractérisé en ce que 8 3. Composé selon la revendication 1, caractérisé en ce que 0 4. Composé selon l'une des revendications précédentes, caractérisé en ce 20 qu'il contient au moins (n+2) radicaux HSO3 ou de sels de ce radical. 5. Mélange caractérisé en ce qu'il contient au moins un composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 4. 6. Mélange selon la revendication 5, caractérisé en ce qu'il contient une pluralité de composés de formule générale (I), lesdits composés présentant des 25 valeurs de n différentes et en ce que lesdits composés de formule générale (I) dans laquelle n=npn sont les plus nombreux dans ledit mélange. 7. Mélange selon la revendication 6, caractérisé en ce que OSnpn52. 8. Mélange selon la revendication 6, caractérisé en ce 8 9. Mélange selon l'une quelconque des revendications 6 à 8, caractérisé en ce que ledit mélange présente un taux de sulfatation ts = (nombre de radicaux HSO3 contenus dans le mélange)/[(npn+2)], tel que 1 10. Produit phytosanitaire caractérisé en ce qu'il contient un mélange selon l'une quelconque des revendications 5 à 9. 11. Produit phytosanitaire selon la revendication 10, caractérisé en ce que ledit mélange contient des composés de formule générale (I), dans laquelle n=npn, qui sont les plus nombreux dans le mélange et en ce qu'il contient une io concentration comprise entre 200 pM et 1 mM desdits composés les plus nombreux. 12. Utilisation d'un mélange selon l'une quelconque des revendications 5 à 9, pour modifier l'induction d'au moins un gène compris parmi les gènes suivants : - PAL codant une phénylalanine ammonia-lyase, 1 ère enzyme de la voie 15 des phénylpropanoïdes - STS codant la stilbène synthase, enzyme responsable de la synthèse du resvératrol - GST codant une gluthation-S-transférase impliquée dans les processus de détoxification 20 - chit4c, codant une chitinase acide classe IV, de la famille des protéines PR3 - PR6 codant un inhibiteur de protéases ; - PGIP codant un inhibiteur de polygalacturonase, protéine ayant un rôle dans la résistance vis-à-vis de B. cinerea ; 25 - PR1 codant une première protéine de stress végétal PR4 codant une seconde protéine de stress végétal - pdfl .2 codant ne troisième protéine de stress végétal ; - VSP2 codant une protéine de stockage végétatif ; 22 et/ou induire la synthèse de H202 et/ou la diminution du pH chez un végétal ou dans des cellules végétales. 13. Utilisation selon la revendication 12, caractérisée en ce que ledit végétal est la vigne. 14. Méthode de synthèse d'un mélange contenant au moins un polymère ou un oligomère de type acide (1--- 4)-(3-o-polyglucuronique de formule générale (I) suivante : lo dans laquelle : -n est un nombre entier ; - RI est choisi parmi les radicaux suivants : H, alkyles, acyles, HSO3 et les sels de ce dernier ; - les (n+2) radicaux R2 et les (n+2) radicaux R3 sont choisis 15 indépendamment les uns des autres parmi les radicaux suivants : H, alkyles, acyles, HSO3 et les sels de ces radicaux ; - Y est choisi parmi les radicaux suivants : alcoxys, hydroxyle et les sels de ce radical ; et au moins un des (n+2) radicaux R2 ou des (n+2) radicaux R3 est un radical HSO3 ou un sel de ce radical, 24 ladite méthode étant caractérisée en ce qu'elle comprend une étape de sulfatation d'un mélange d'au moins un polymère ou oligomère type acide (1->4)-(3-D-polyglucuronique de formule générale (II) (I) Y °-'--c' I O 0 0 R1 R50 O R4/ R5O OR4 R50 0R4\ ndans laquelle n, RI et Y sont tels que précités et les (n+2) radicaux R4 et les (n+2) radicaux R5 sont choisis indépendamment les uns des autres parmi les radicaux : H, alkyles, acyles, HSO3 et les sels de ce radical, en ce que au moins un des (n+2) radicaux R4 ou des (n+2) radicaux R5 est 5 différent d'un radical HSO3 ou d'un sel de ce radical ; en ce que ladite étape de sulfatation comprend le chauffage par utilisation d'une onde électromagnétique de type micro-onde, dudit mélange comprenant au moins un polymère ou oligomère de type acide (1ù>4)-P-D-polyglucuronique de formule (II), en présence d'agent sulfatant. 10 15. Méthode selon la revendication 14, caractérisée en ce que ledit mélange d'au moins un polymère ou oligomère de type acide (1 -*4)-(3-D-polyglucuronique de formule (II) est déposé, à l'état solide, sur un support, avec ledit agent sulfatant à l'état solide, et ledit support est irradié par ladite onde électromagnétique. 15 16. Méthode selon la revendication 14 ou 15, caractérisée en ce que ledit agent sulfatant contient un complexe choisi parmi SO3.DMF, SO3.Et3N, SO3.Me3N et SO3.pyridine. 17. Méthode de synthèse selon l'une des revendications 14 à 16, caractérisée en ce qu'elle comprend, avant ladite étape de sulfatation, une étape 20 d'estérification dans laquelle un mélange contenant au moins un polymère ou oligomère de type acide (1 -4)-3-D-polyglucuronique de formule générale (II) et/ou au moins un composé du type polymère ou oligomère de type acide (1-*4)-(3-D-polyglucuronique de formule (I) est mis en présence d'un alcool de formule ROH puis irradié par une onde électromagnétique, de type micro-onde. 25 18. Méthode selon la revendication 17, caractérisée en ce que R représente un radical alkyle comportant de 1 à 12 atomes de carbone.