FR 2921267 A1 20090327 FR 0706694 A 20070925 Composition cosmétique amincissante La présente invention concerne le domaine des cosmétiques et plus particulièrement le domaine des amincissants. La présente invention concerne plus particulièrement l'utilisation d'un activateur de la périlipine dans une composition cosmétique amincissante. Le tissu adipeux (ou hypoderme) est rattaché à la partie inférieure du derme par des expansions de fibres de collagène. Son épaisseur est variable, mince sur le front, il se développe largement sur des zones particulières (cuisses, abdomen). La localisation anatomique du tissu adipeux est un véritable caractère sexuel secondaire. Chez l'homme, il est prépondérant au dessus de la ceinture, au niveau de l'abdomen et des épaules, alors que, chez la femme, il se concentre au dessous de la ceinture, dans la partie basse de l'abdomen et au niveau des hanches, fesses et cuisses. Cette localisation liée au sexe est fortement soulignée en cas d'obésité dont on distingue deux formes, la forme androïde et la forme gynoïde. Le tissu adipeux est constitué : - de cellules spécifiques, les adipocytes qui ont la possibilité de stocker des graisses (lipogenèse) mais également de les mobiliser (lipolyse), - d'une matrice extracellulaire, - d'un réseau capillaire dense. Le développement du tissu adipeux se caractérise par une modification de l'ensemble des composants du tissu hypodermique. Ces perturbations ont également des 1 répercussions au niveau des couches plus superficielles. Au niveau du derme, on observe une augmentation de l'épaisseur, probablement due à un engorgement liquidien (rétention d'eau) et à une infiltration de lobules adipeux déformant la jonction derme / hypoderme ; en surface la peau prend un aspect capitonné c'est la fameuse � peau d'orange �. Le développement du tissu adipeux fait intervenir différents mécanismes : - la réorganisation de la matrice extracellulaire, - la différenciation des pré-adipocytes en adipocytes, - l'augmentation du volume des adipocytes. La lipolyse correspond au catabolisme des triglycérides stockés dans les adipocytes c'est-à-dire leur dégradation en acides gras non estérifiés et en glycérol. Les molécules ainsi libérées dans le flux sanguin peuvent être utilisées par d'autres tissus comme substrat énergétique (acides gras) ou servir de précurseurs néoglucogéniques (glycérol). La mobilisation des acides gras à partir des triglycérides stockés dans le tissu adipeux, nécessite l'activation d'une enzyme lipolytique, la lipase hormono-sensible (LHS). La lipase hormono-sensible hydrolyse les triglycérides en diglycérides puis les diglycérides en monoglycérides, elle est l'enzyme limitant de la lipolyse. La lipase des monoglycérides (LMG) dégrade ensuite les monoglycérides en acides gras non estéri:Eés et glycérol. L'activité de la LHS est contrôlée de façon étroite par phosphorylation réversible par une protéine kinase 2 dépendante de l'AMPc (PKA) ou du GMPc (PKG). Par ailleurs, la phosphorylation de la LHS permet une redistribution de la lipase du compartiment cytosolique vers la vacuole lipidique lui permettant d'agir sur les triglycérides. Les périlipines sont des protéines majoritairement exprimées à la surface de la vacuole lipidique et interviennent probablement dans sa stabilisation. La Demanderesse a mis en évidence l'action de Scabiosa arvensis sur l'activité de la périlipine. En effet un extrait de Scabiosa arvensis permet de phosphoryler la périlipine. L'activation de la périlipine permet à la LHS de subir un réarrangement fonctionnel et de se colocaliser sur la vacuole lipidique au côté de la périlipine. Elle peut ainsi pénétrer dans la vacuole pour hydrolyser les triglycérides. Il en résulte donc qu'un extrait de Scabiosa arvensis agit comme actif amincissant lorsqu'il est appliqué sur la peau au moyen d'une composition cosmétique. La demande concerne donc l'utilisation d'un activateur de la périlipine dans une composition cosmétique amincissante. La demande concerne également l'utilisation d'un activateur de la périlipine dans une composition cosmétique comme agent amincissant et/ou anti cellulite et/ou anti peau d'orange et/ou stimulateur de la lipolyse. On évalue l'activité d'un activateur de la périlipine par le test décrit ci après : - mise en culture de pré-adipocytes 30 3 - incubation des cellules avec l'actif - détection par immunofluorescence du réarrangement protéique de la périlipine et de la LHS comme illustré dans l'exemple I. Cet activateur peut être sous la forme d'un extrait de plante, plus particulièrement un extrait de plante de la famille des Dipsacaceaes. De façon préférentielle, il s'agit d'un extrait de Scabiosa arvensis. Scabiosa arvensis, nommée communément scabieuse, est une plante herbacée vivace à port érigé de 30 cm à 1.30 m de haut. Les feuilles disposées en rosette sont simples, lancéolées, plus ou moins découpées, opposées et poilues tout comme la tige. Les fleurs de couleur parme sont regroupées en un capitule de 15 à 40 mm de diamètre. Originaire d'Eurasie, commune en Europe, la scabieuse colonise les prairies et les bois jusqu'à 1900m en se reproduisant par la dispersion de ses graines. On utilise dans l'invention la partie aérienne de la plante. L'extrait de Scabiosa arvensis est obtenu par la mise en œuvre d'un procédé comprenant au moins une étape de solubilisation de Scabiosa arvensis et au moins une étape d'hydrolyse enzymatique. On obtient un extrait hydro-alcoolique de Scabiosa arvensis, préférentiellement un extrait hydro-glycériné de la plante. Il s'agit d'un liquide limpide jaune et de faible odeur présentant les caractéristiques suivantes - pH = 4,6 - matières sèches = 512,7 g/1 4 - sucres totaux 9,3 g/1 - polyphénols totaux = 0,17 g/1 On peut se procurer un extrait de Scabiosa arvensis utilisable selon l'invention par exemple auprès de la société SILAB, commercialisé sous la dénomination REDUCELL 2. La composition selon l'invention contient de l'ordre de 0,01 à 10 % en poids, et de préférence 0,01 à 5 % en poids d'un extrait de Scabiosa arvensis. Selon l'invention, l'extrait de Scabiosa arvensis peut être utilisé en association avec un ou plusieurs autres actifs amincissants. Plus particulièrement, l'extrait de Scabiosa arvensis selon l'invention peut être associé dans une composition cosmétique à un composé choisi parmi la caféine, un extrait de géranium, un extrait de Baccharis genistelloides, un extrait de petit houx, un extrait de marron d'Inde, un extrait de Ginkgo biloba ou un extrait de vigne rouge. En particulier l'extrait de Scabiosa arvensis peut être associé dans une composition cosmétique à de la caféine. De même, l'extrait de Scabiosa arvensis peut être associé dans une composition cosmétique à un extrait de géranium tel que décrit dans le brevet FR 2804319 Enfin, l'extrait de Scabiosa arvensis peut être associé dans une composition cosmétique à un extrait de Baccharis genistelloides tel que décrit dans le brevet FR 2867074 5 La composition cosmétique selon la présente invention peut contenir un ou plusieurs autres composants connus de l'homme du métier, comme des agents de formulation ou additifs d'usage connu et classique dans les compositions cosmétiques. A titre d'exemple et de façon non limitative, de tels agents de formulation et additifs peuvent être des gélifiants hydrophiles ou lipophiles, des adoucissants, des colorants, des agents solubilisants, des agents de texture, des parfums, des charges, des actifs filmogènes, des conservateurs, des tensio-actifs, des émulsionnants, des huiles, des glycols, des vitamines, des filtres solaires,.... Grâce à ses connaissances en matière de cosmétiques, l'homme du métier saura quels agents de formulation ajouter à la composition cosmétique selon l'invention et en quelles quantités en fonction des propriétés recherchées. De plus, la composition cosmétique selon la présente invention peut se présenter sous toute forme connue de l'homme du métier dans le domaine de la cosmétique sans aucune autre restriction galénique particulière que celle pour l'application sur la peau. Ainsi, la composition cosmétique selon l'invention peut avoir la forme d'une solution ou suspension aqueuse, alcoolique ou d'une suspension huileuse ou d'une solution ou d'une dispersion de type lotion ou sérum, d'une émulsion de consistance liquide ou semi-liquide de type lait, obtenues par dispersion d'une phase grasse dans une phase aqueuse (émulsion Huile dans Eau : H/E) ou inversement (Eau dans Huile : E/H), ou d'une émulsion du type crème H/E ou E/H ou d'un gel, d'une lotion, d'un masque. On peut également envisager les 6 formulations cosmétiques selon l'invention sous la forme d'une mousse ou encore sous forme de compositions pour aérosol comprenant également un agent propulseur sous pression. La présente invention concerne aussi un procédé de traitement cosmétique amincissant, comprenant l'application sur la peau d'une composition cosmétique comportant un activateur de la périlipine. La présente invention concerne également l'utilisation d'un activateur de la périlipine pour la préparation d'une composition dermatologique destinée à l'amincissement corporel. Les exemples ci-après concernent, d'une part l'évaluation de l'activation de la périlipine par un extrait de Scabiosa arvensis, et d'autre part des compositions objets de la présente invention. Les exemples font référence aux figures suivantes dans lesquelles : - les figures la à le représentent la visualisation de la colocalisation de la périlipine et de la LHS pour des cellules basales. La figure la représente la visualisation de la périlipine. La figure lb représente la visualisation de la LHS. La figure le représente la visualisation de la superposition des deux marqueurs LHS et périlipine ainsi que le résultat de l'analyse d'image par le logiciel LUCIA°. - les figures 2a à 2c représentent la visualisation de la colocalisation de la périlipine et de la LHS pour des cellules traitées à l'isoprotérénol 100e. La figure 2a représente la visualisation de la périlipine. 7 La figure 2b représente la visualisation de la LHS. La figure 2c représente la visualisation de la superposition des deux marqueurs LHS et périlipine ainsi que le résultat de l'analyse d'image par le logiciel LUCIA°. La figure 2d représente le diagramme du pourcentage de colocalisation des deux marqueurs LSH et périlipine. - les figures 3a à 3c représentent la visualisation de la colocalisation de la périlipine et de la LHS pour des cellules traitées avec 0.11% d'un extrait de Scabiosa arvensis. La figure 3a représente la visualisation de la périlipine. La figure 3b représente la visualisation de la LHS. La figure 3c représente la visualisation de la superposition des deux marqueurs LHS et périlipine ainsi que le résultat de l'analyse d'image par le logiciel LUCIA°. La figure 3d représente le diagramme du pourcentage de colocalisation des deux marqueurs LSH et périlipine. - les figures 4a à 4c représentent la visualisation de la colocalisation de la périlipine et de la LHS pour des cellules traitées avec 0.33% d'un extrait de Scabiosa arvensis. La figure 4a représente la visualisation de la périlipine. La figure 4b représente la visualisation de la LHS. La figure 4c représente la visualisation de la superposition des deux marqueurs LHS et périlipine ainsi que le résultat de l'analyse d'image par le logiciel LUCIA°. La figure 4d représente le diagramme du pourcentage de colocalisation des deux marqueurs LSH et périlipine. 8 I.EVALUATION DE L'ACTIVATION DE LA PERILIPINE PAR UN EXTRAIT DE SCABIOSA ARVENSIS A.MATERIEL ET METHODE 1. Culture des pré-adipocytes 3T3-Ll a)Milieux de culture : Le milieu de culture employé est un milieu nutritif complet comme le milieu essentiel modifié Dulbeco (DMEM). Du fait de l'intensité du métabolisme glucidique dans ces cellules, nous supplémentons le milieu en glucose à une concentration finale de 4,5 g/l (Gibco). Les conditions de culture standard pour les préadipocytes nécessitent la supplémentation du milieu avec 10 % de sérum de veau foetal (Cambrez). Dans ces conditions, l'attachement, la croissance cellulaire et la différenciation adipocytaire sont satisfaisantes. b)Evolution des cultures, rythmes prolifératifs et différenciation : Les pré-adipocytes, pour notre expérience, sont ensemencés dans des plaques 6 puits avec lamelle de verre à raison de 20.000 cellules par boîte. Celles-ci se multiplient jusqu'à confluence, stade atteint 6 jours après l'ensemencement. Après la confluence, les cellules cessent de se multiplier et nous assistons à la mise en place d'un programme de différenciation par l'ajout au milieu nutritif, d'insuline (Sigma) (1,7 }mol/L), d'IBMX (Sigma) (0,5 mmol/L) et de dexamethasone (Sigma) (1pmol/L). 9 Les cellules s'arrondissent et commencent à accumuler des triglycérides sous forme de gouttelettes qui coalescent entre elles. 2 - Déroulement de l'étude Les cellules sont rincées et incubées pendant 24 heures dans un milieu DMEM contenant 2mM de L-glutamine (Gibco) et 0,1% de BSA (albumine de sérum bovin) (PAA), milieu nutritif utilisé pour l'étude. Les cellules sont rincées et incubées 3 heures comme suit . . Milieu seul (témoin) . Isoprotérénol 100 gM (Sigma) (référence positive choisie pour son action stimulante de la voie adrénergique-PKA non spécifique). . Scabiosa arvensis 0,11% * dans milieu . Scabiosa arvensis 0,33% * dans milieu (volume final 2 ml) (2 puits par condition) * concentration révélée non cytotoxique pour les cellules au test MTT (Mosmann, J Immunol Meth 1983 65 : 55-63). Chaque tapis cellulaire est ensuite rincé, fixé au méthanol (-20°C) avant de procéder à la révélation de la périlipine et de la lipase hormono-sensible par immunofluorescence. 3 - Immunofluorescence : Immunolocalisation de LHS et de la périlipine (Plin) par réactions en double marquage Les réactions en double marquage sont très simples à mettre en oeuvre lorsqu'on dispose d'anticorps 10 primaires obtenus d'espèces animales différentes et d'anticorps secondaires spécifiques de ces espèces, marqué à l'isothiocyanate de fluorescéine (FITC) ou à l'isothiocyanate de rhodamine (TRITC). Les cellules fixées au méthanol à -200C pendant 4 minutes puis au formaldéhyde 3,7% pendant 10 minutes sont perméabilisées dans une solution de triton X100 0,1% dans du PBS pendant 10 minutes à température ambiante. Les sites aspécifiques sont saturés par une solution de BSA 2% dans du PBS (tampon salin phosphaté) pendant 10 minutes à température ambiante. Les cellules sont incubées avec le ter anticorps anti-périlipine (Anticorps Acris, dilution 1 :100) (source : cobaye) puis avec l'anticorps secondaire anti-cobaye couplé au TRITC (isothiocyanate de tétramethylrhodamine Abcys, dilution 1 :75). Dans un second temps, les cellules sont incubées avec le 2nd anticorps anti-LHS (Cayman chemical, dilution 1 :100) (source : lapin) puis avec l'anticorps secondaire anti- lapin couplé au FITC (isothiocyanate de fluorescéine Zymed, dilution 1 :100). Le temps d'incubation entre chaque anticorps est d'l heure. Entre chaque incubation d'anticorps, 3 rinçages au PBS de 3 minutes chacun sont nécessaires. Les lamelles sont montées sur lame de verre puis observées au microscope à fluorescence (Nikon Eclipse 50i). Des clichés photographiques sont analysés par le logiciel d'analyse d'image Lucia�. B.RESULTATS 11 La périlipine est détectée par un anticorps de cobaye suivi_ d'un anticorps secondaire anti-cobaye couplé à un fluorochrome rouge (TRITC). Elle apparaît donc en rouge. LHS est détecté par un anticorps de lapin suivi d'un anticorps secondaire anti-lapin couplé à un fluorochrome vert (FITC). Il apparaît donc en vert. La superposition des deux marquages périlipine et LHS identifie la zone de colocalisation apparaissant en jaune. La colocalisation des deux marqueurs est le signe d'un réarrangement de la périlipine et de la LHS. L'isoprotérénol est un analogue structural des catécholamines où la fonction amine est substituée par un groupement isopropyle. L'encombrement plus important de la fonction amine, comparativement à celui de la noradrénaline et même à celui de l'adrénaline, fait perdre à cette substance son affinité pour les récepteurs n-adrénergiques, mais lui conserve sa capacité à être reconnue par les récepteurs R-adrénergiques et à les stimuler. L'isoprotérénol stimulant la voie p-adrénergique-PKA permet la phosphorylation concomitante de la périlipine et de la LHS. Dans ces conditions expérimentales, on observe un net marquage de la périlipine autour de chaque gouttelette dans le cas des adipocytes traités par l'isoprotérénol par rapport au témoin, signe du réarrangement de la périlipine phosphorylée pour que la LHS puisse être réarrangée. En effet, la LHS se positionne autour de la gouttelette, se co-localisant avec son co-activateur, la périlipine. L'observation par microscopie montre que la périlipine et la LHS sont largement co-localisées à la 12 surface de la vacuole lipidique lorsque les adipocytes sont traités par l'isoprotérénol. La référence positive valide l'expérimentation. L'extrait de Scabiosa arvensis appliqué sur les adipocytes engendre les mêmes effets que l' isoprotérénol. Nous notons un marquage intense de la périlipine et de la LHS à la périphérie des gouttelettes lipidiques. L'observation par microscopie montre que périlipine et LHS sont très largement localisées à la périphérie des gouttelettes lipidiques. Les zones d'intérêt sont majoritairement jaunes. Scabiosa arvensis a induit la phosphorylation des périlipines favorisant ainsi l'accès de la LHS activée à ses substrats lipidiques. B.CONCLUSION Scabiosa arvensis contrôle, via l'activation de récepteurs de la membrane plasmique de l'adipocyte, la LHS et son co-activateur correspondant, la périlipine, protéines elles-mêmes essentielles à l'activation de la lipolyse. II.EXEMPLES LOTION AMINCISSANTE o Glycol 30,00 Conservateur 0,50 Caféine 1,00 Extrait de géranium 1,00 13 Extrait de Baccharis genistelloides 1,00 Extrait de Scabiosa arvensis 1,00 Eau déminéralisée QSP 100 GEL AMINCISSANT ° Carbomer 0,39 Alcool 96,2° 41,50 Caféine 1,98 Extrait de géranium 1,50 Extrait de liane du Pérou 3,00 Extrait d'aigremoine 0,75 Extrait de Baccharis genistelloides 3,00 Base neutralisante 0,18 Extrait de Scabiosa arvensis 1,00 Parfum ... 0,50 Eau déminéralisée QSP 100 EMULSION AMINCISSANTE ° 0 25 Carbomer 0,50 Polymère acrylique 5,00 Caféine 2,00 Extrait de Baccharis genistelloides 1,00 Extrait de Scabiosa arvensis 1, 00 30 Extrait d'aigremoine 0,25 Extrait de liane du Pérou 1,00 Extrait de géranium 0,50 Silicone 1,50 10 15 20 14 10 Ester g-as 1,50 Silicone volatile 6,00 HeliogeL 0,50 Soude 0,15 Alcool 96,2° 15,00 Menthol 0,35 Parfum 0,50 Eau déminéralisée QSP 100 15 REVENDICATIONS 1. Utilisation d'un activateur de la périlipine dans une composition cosmétique amincissante. 2. Utilisation d'un activateur de la périlipine dans une composition cosmétique comme agent amincissant et/ou anti cellulite et/ou anti peau d'orange et/ou stimulateur de la lipolyse. 10 3. Utilisation selon la revendication 1 ou 2 caractérisée en ce que cet activateur est sous la forme d'un extrait de plante. 15 4. Utilisation selon la revendication 3 caractérisée en ce que cet activateur est sous la forme d'un extrait de plante de la famille des Dipsacaceaes. 5. Utilisation selon les revendications 3 ou 4 20 caractérisée en ce que cet activateur est un extrait de Scabiosa arvensis. 6. Utilisation selon la revendication 5 caractérisée en ce que l'extrait de Scabiosa arvensis 25 est un extrait des parties aériennes de la plante. 7. Utilisation selon les revendications 5 ou 6 caractérisée en ce que l'extrait de Scabiosa arvensis est un extrait hydro-alcoolique de la plante. 8. Utilisation selon les revendications 5 à 7 caractérisée en ce que l'extrait de Scabiosa arvensis est un extrait hydro-glycériné de la plante. 30 16. Utilisation selon les revendications 5 à 8, caractérisée en ce que la composition contient de l'ordre de 0,01 à 10 % en poids, et de préférence 0,01 à 5 % en poids d'un extrait de Scabiosa arvensis. 10. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que la composition contient en outre un composé choisi parmi la caféine, un extrait de géranium, un extrait de Bocchoris genistelloides, un extrait de petit houx, un extrait de marron d'Inde, un extrait de Ginkgo biloba ou un extrait de vigne rouge. 11. Procédé de traitement cosmétique amincissant, comprenant l'application sur la peau d'une composition cosmétique comportant un activateur de la périlipine. 12. Utilisation d'un activateur de la périlipine pour la préparation d'une composition dermatologique destinée à l'amincissement corporel. 30 17