FR 2917427 A1 20081219 FR 0755819 A 20070618 L'invention concerne l'identification et l'utilisation de composés modulateurs de l'enzyme TACE pour le traitement de l'acné. L'acné est une affection cutanée qui résulte de l'occlusion de l'extrémité supérieure ainsi que de la partie interne du canal pilo- sébacé par la multiplication anormale des kératinocytes, et de l'hyper activité hormonale androgénique apparaissant souvent lors de la puberté, qui provoque une importante augmentation de la séborrhée au niveau des glandes sébacées. L'obstruction du canal pilo-sébacé provoque la formation de comédons ou microkystes, s'accompagnant d'une prolifération de bactéries Propionibacterium acnes ainsi que de Pytirosporum ovale dans les follicules pilo-sébacés obstrués. Cette affection, particulièrement fréquente chez les adolescents, s'accompagne d'une réaction inflammatoire de la peau, pouvant se présenter sous forme de papules ou pustules généralement localisées au niveau du derme superficiel. Dans certains cas la réaction inflammatoire peut atteindre le derme profond, formant des nodules et macrokystes. Les traitements classiques de l'acné utilisent le peroxyde de benzoyle, l'érythromycine, l'isotrétinoïne et divers antiseptiques. Cependant, l'utilisation d'antibiotiques tels que l'érythromycine se heurte aujourd'hui à des phénomènes de résistance bactérienne et des modifications de flore. La demanderesse propose maintenant d'utiliser des inhibiteurs de l'enzyme TACE, pour prévenir et/ou améliorer les phénomènes d'acné. De manière préférentielle, l'inhibiteur de TACE est utilisé seul, à savoir sans autre principe actif anti-acné, voire sans aucun autre principe actif. L'acné à traiter comprend toutes les formes d'acné, à savoir notamment les acnés vulgaires, comédoniennes, polymorphes, les acnés nodulokystiques, conglobata, ou encore les acnés secondaires telles que l'acné solaire, médicamenteuse ou professionnelle. TACE L'enzyme TACE, pour TNF-alpha converting enzyme , est responsable de la production de TNF-alpha. Cette enzyme est membre de la famille ADAM des métalloprotéases (Becherer et al, Handb. Exp. Pharmacol, 2000, 140 :235-258). Elle transforme rapidement le proTNFa, une protéine précurseur de 26kDa, en la protéine TNFa mature de 17kDa. L'inhibition de TACE (ou ADAM 17) conduit à l'inhibition de la synthèse de TNFa (Nelson et al, Exp. Opin. Invest. Drugs, 1999, 8 :383-392). Il a par ailleurs été montré que des inhibiteurs de TACE suppriment la production de TNF et la réponse inflammatoire chez des animaux modèles atteints d'une arthrite induite par du collagène (Newton et al, Ann Rheum, Dis, 2001, 60 :iii25-iii32). Il a été en outre montré que P. acnes stimule le relarguage de TNFa par les kératinocytes et les macrophages (Gro et al, Br J Dermatol. 2004, 150(3) :421-428). Une surexpression de TNFa a par ailleurs été observée dans des lésions acnéiques (Kang et al, Am J Pathol. 2005, 166(6) :1691-9). L'analyse du transcriptome d'une lésion acnéique à un stade inflammatoire a permis l'identification d'un large panel de gènes exprimés préférentiellement dans la lésion (Trivedi et al, JID.2006, May;126(5):1071-9.). Sans vouloir être liés à un mécanisme d'action particulier, les inventeurs émettent l'hypothèse que les inhibiteurs de TACE ont un impact sur les phénomènes inflammatoires observés dans l'acné, notamment via la modulation par le TNFa de plusieurs gènes impliqués dans l'inflammation. Parmi les marqueurs de la lésion d'acné inflammatoire et rapportés pour être induits en réponse à l'exposition du TNFa, on trouve les gènes impliqués dans la "réponse au stress" suivants : - SGK (Li X et al. J Biol Chem 2002 11 22;277(47):45129-40); - SOD2: (Horrevoets et al. Blood 1999 May 15;93(10):3418-31); le gène impliqué dans I'angiogenèse suivant : - ECGF1 (Zhu et al. Oncogene 2002 Dec 5;21(55):8477-85), les gènes impliqués dans la migration cellulaire et le remodelage suivants : -MMP1, MMP3 (Reunanen et al. J Biol Chem 2002 Aug 30;277(35):32360-8), - T1A-2 (Banno et al.. J Biol Chem. 2004 Jul 30;279(31):32633-42. Epub 2004 May 15) ; les gènes impliqués dans la réponse immunitaire suivants : - DEFB4 (Seo SJ et al, J Dermatol Sci. 2001 Nov;27(3):183-91), - IL1 F9 (Kumar et al J Biol Chem 2000 Apr 7;275(14):10308-14), - CXCL2 (Banno et al J Biol Chem 2004 Jul 30;279(31):32633-42; Siwkowski et al, Mol Pharmacol 2004 Sep 01;66(3):572-9), - IL-8: (Brasier et al, J Biol Chem 1998 Feb 6;273(6):3551-61 ; Terui et al, Blood 1998 Oct 15;92(8):2672-80), - CCR1 (Li et al, J Biol Chem 2002 11 22;277(47):45129-40; Sozzani et al, J Immunol 1998 Aug 1;161(3):1083-6), - CD14 (Enomoto et al, J Pharmacol Exp Ther 2003 Sep 01;306(3):846-54), - CD47 (Banno et al, J Biol Chem 2004 Jul 30;279(31):32633-42), - FPR1 (Mandai et al, J Immunol 2005 Nov 01;175(9):6085-91), - PLSCR1 (Banno et al J Biol Chem 2004 Jul 30;279(31):32633-42), - TNC (Scherberich et al, Oncogene 2005 Feb 24;24(9):1525-32; Banno et al, J Biol Chem 2004 Jul 30;279(31):32633-42), - CYBB (Dusi et al, Eur J Immunol 2001 Mar 1;31(3):929-38). Le TNFa inhibe en revanche le gène FRZB impliqué dans le développement (Tian et al, J Biol Chem 2005 Apr 29;280(17):17435-48). Enfin, le TNFa inhibe deux gènes impliqués dans le métabolisme : - KYNU (Banno et al, J Biol Chem 2004 Jul 30;279(31):32633-42), - AKR1 B10 (Iwata et al, J Biol Chem 1999 Mar 19;274(12):7993-8001). Plusieurs molécules inhibitrices de TACE sont en développement, principalement pour le traitement de l'arthrite. De nombreuses demandes de brevets proposent également des inhibiteurs de TACE, pour le traitement de l'arthrite, de cancers, ou autres maladies. Dans le contexte de l'invention, le terme gène TACE ou acide nucléique TACE signifie le gène ou l'acide nucléique qui code pour l'enzyme TACE. Si la cible visée est de préférence le gène humain ou son produit d'expression, l'invention peut également faire appel à des cellules exprimant une TACE hétérologue, par intégration génomique ou expression transitoire d'un acide nucléique exogène codant pour l'enzyme Méthodes de criblage Un objet de l'invention est une méthode in vitro de criblage de composés candidats pour le traitement préventif et/ou curatif de l'acné, comprenant la détermination de la capacité d'un composé à inhiber l'expression ou l'activité de la TACE ou l'expression de son gène ou l'activité d'au moins un de ses promoteurs, une inhibition de l'expression ou de l'activité de la TACE, ou de l'expression de son gène ou de l'activité d'au moins un de ses promoteurs indiquant l'utilité du composé pour le traitement préventif ou curatif de l'acné. Par inhibition , on entend tout effet de diminution sur l'expression ou l'activité de l'enzyme, sur l'expression de son gène ou sur l'activité d'au moins un de ses promoteurs. Les composés testés peuvent être de tout type. Ils peuvent être d'origine naturelle ou avoir été produits par synthèse chimique. Il peut s'agir d'une banque de composés chimiques structurellement définis, de composés ou de substances non caractérisés, ou d'un mélange de composés. Différents techniques peuvent être mises en oeuvre pour tester ces composés et identifier les composés d'intérêt thérapeutique, modulateurs de l'expression ou de l'activité de TACE. De préférence, la méthode de criblage comprend les étapes suivantes : a. Préparation d'au moins deux échantillons biologiques ou mélanges réactionnels ; b. Mise en contact d'un des échantillons ou mélanges réactionnels avec un ou plusieurs des composés à tester ; c. Mesure de l'expression ou de l'activité de l'enzyme TACE, de l'expression de son gène ou de l'activité d'au moins un de ses promoteurs, dans les échantillons biologiques ou mélanges réactionnels ; d. Sélection des composés pour lesquels une inhibition de l'expression ou de l'activité de l'enzyme TACE, ou une inhibition de l'expression de son gène ou une inhibition de l'activité d'au moins un de ses promoteurs, est mesurée dans l'échantillon ou le mélange traité en b) par rapport à l'échantillon ou au mélange non traité. Dans l'ensemble du présent texte, à moins qu'il ne soit spécifié autrement, par expression d'une enzyme , on entend la quantité de cette enzyme. Par activité d'une enzyme , on entend son activité biologique. Par activité d'un promoteur , on entend la capacité de ce promoteur à déclencher la 15 transcription de la séquence d'ADN codée en aval de ce promoteur (et donc indirectement la synthèse de la protéine, ici l'enzyme, correspondante). Selon un premier mode de réalisation, les échantillons biologiques ou mélanges réactionnels de l'étape a) sont des cellules transfectées avec un gène rapporteur lié de manière opérante à tout ou partie du promoteur du gène TACE. La méthode est alors 20 réalisée par la mise en contact d'un composé (étape b)) avec ces échantillons biologiques ou mélanges réactionnels, puis par la détermination du niveau d'expression dudit gène rapporteur (étape c)). La sélection de l'étape d) se fait par la constatation d'une différence de niveau d'expression, par rapport à un contrôle réalisé en l'absence du composé. Cette différence indique l'utilité du composé pour le traitement préventif ou curatif de l'acné. 25 Le gène rapporteur peut notamment coder pour une enzyme qui, en présence d'un substrat donné, conduit à la formation de produits colorés, telle que CAT (chloramphenicol acétyltransférase), GAL (beta galactosidase), ou GUS (beta glucuronidase). Il peut également s'agir du gène de la luciférase ou de la GFP (Green Fluorescent Protein). Le dosage de la protéine codé par le gène rapporteur, ou de son 30 activité, est réalisé classiquement, par des techniques colorimétriques, fluorométriques, ou de chimioluminescence, entre autres. 10 Selon un deuxième mode de réalisation, les échantillons biologiques ou mélanges réactionnels de l'étape a) sont des cellules exprimant le gène TACE codant pour TACE. La méthode de criblage comprend alors la mise en contact d'un composé (étape b)) avec les échantillons biologiques ou mélanges réactionnels, puis la détermination du niveau d'expression dudit gène (étape c)). La sélection de l'étape d) se fait par la constatation d'une différence de niveau d'expression du gène TACE, par rapport à un contrôle réalisé en l'absence du composé. Cette différence indique l'utilité du composé pour le traitement préventif ou curatif de l'acné. La cellule utilisée ici peut être de tout type. Il peut s'agir d'une cellule exprimant le gène TACE de manière endogène, comme par exemple une cellule de foie, une cellule ovarienne, ou encore mieux un kératinocyte ou une cellule du système immunitaire comme les cellules THP1. Il peut également s'agir d'une cellule transformée par un acide nucléique hétérologue, codant pour TACE, de préférence humain, ou de mammifère. Une grande variété de systèmes de cellules hôtes peut être utilisée, telle que par exemples les cellules Cos-7, CHO, BHK, 3T3, HEK293 Peuvent également être utilisés des microorganismes tels que des bactéries (par exemple E. coli ou B. subtilis); des levures (par exemple Saccharomyces, Pichia); cellules d'insecte, telles que Sf9 ou Sf21. L'acide nucléique peut être transfecté de manière stable ou transitoire, par toute méthode connue de l'homme du métier, par exemple par phosphate de calcium, DEAE-dextran, liposome, virus, électroporation, ou microinjection. Dans cette méthode, le niveau d'expression du gène TACE peut être déterminé en évaluant le niveau de transcription dudit gène, ou son niveau de traduction Par niveau de transcription d'un gène, on entend la quantité l'ARNm correspondant produite. Par niveau de traduction d'un gène, on entend la quantité de protéine produite. L'homme du métier est familier des techniques permettant la détection quantitative ou semi-quantitative de l'ARNm d'un gène d'intérêt. Les techniques basées sur l'hybridation de l'ARNm avec des sondes nucléotidiques spécifiques sont les plus usuelles (Northern Blot, RT-PCR, Rnase protection assay). Il peut être avantageux d'utiliser également des marqueurs de détection, tels que d'agents fluorescents, radioactifs, enzymatiques or autres ligands (par exemple, avidin/biotin).35 Le niveau de traduction du gène est évalué par exemple par des méthodes de type dosage immunologique, analyse par spectrométrie de masse (MALDI-TOF et analyse sur couche mince), etc. Pour un dosage immunologique du produit dudit gène, les anticorps utilisés peuvent être de type polyclonal ou monoclonal. Leur production relève de techniques conventionnelles. Le dosage immunologique peut être réalisé en phase solide ou en phase homogène; en un temps ou en deux temps; en méthode sandwich ou en méthode compétitive, à titre d'exemples non limitatifs. Selon un mode de réalisation préféré, l'anticorps de capture est immobilisé sur une phase solide. On peut utiliser, à titre d'exemples non limitatifs de phase solide, des microplaques, en particulier des microplaques de polystyrène, ou des particules ou des billes solides, des billes paramagnétiques. Dosages ELISA, radioimmunoessais, ou toute autre technique de détection peuvent être mis en oeuvre pour révéler la présence des complexes antigènes-anticorps formés. La caractérisation des complexes antigène/anticorps, et plus généralement des protéines isolées ou purifiées mais également recombinantes (obtenues in vitro et in vivo) peut être réalisée par analyse en spectrométrie de masse (protéomique). Selon un troisième mode de réalisation, les échantillons biologiques ou mélanges réactionnels de l'étape a) sont des mélanges réactionnels comprenant une enzyme TACE ou de préférence un fragment N-terminal de 610 acides de l'enzyme TACE recombinante humaine, et un substrat de l'enzyme. La méthode de criblage comprend alors la mise en contact d'un composé (étape b)) avec ces mélanges puis la détermination de l'activité enzymatique (étape c)). La sélection de l'étape d) se fait par la constatation d'une diminution d'activité, par rapport à un contrôle réalisé en l'absence du composé. Une telle diminution indique l'utilité du composé pour le traitement préventif ou curatif de l'acné. Un test d'activité enzymatique est décrit dans Jin et al, Anal Biochem. 2002 Mar 15;302(2):269-75. On peut également modifier ce test, en utilisant un substrat différent. Ainsi, on peut utiliser comme substrat fluorogénique le peptide MCAPLAQAV(Dpa)RSSSR-NH2 dont la séquence d'amino-acides entoure le site de clivage du précurseur de TNFa. Le site de clivage se situe entre les résidus Alanine et Valine. Le groupement donneur fluorescent est MCA ((7-methoxycoumarin-4-yl) acetyl) et le groupement accepteur quenchant est Dpa (3-(2,4-dinitrophenyl)-L-2,3-diaminopropionique amide). L'activité de clivage du substrat par l'enzyme recombinante humaine TACE est suivie en fluorescence par excitation à 320nm et émission à 420nm. Une autre manière de mesurer l'activité de la TACE consiste à mesurer la production de TNFa, par exemple par un immuno-essai utilisant la technologie HTRF (homogeneous time resolved fluorescence) sur kératinocytes ou cultures de cellules THP1. Pour cela, les cellules sont stimulées préalablement au LPS et/ou TPA et le TNFa produit par les cellules est dosé à l'aide de deux anticorps murins reconnaissant chacun un épitope différent de TNFa humain. Chaque anticorps est conjugué soit avec un cryptate d'europium, soit avec une allophycocyanine XL665. Cette combinaison permet de mesurer un signal FRET quand les deux anticorps se fixent chacun à une extrémité du TN Fa produit. Les inhibiteurs TACE candidats peuvent ensuite être testés sur des modèles d'acné, ou sur des patients atteints d'acné. L'invention fournit ainsi également une méthode de criblage de composés candidats pour le traitement et/ou la prévention de l'acné, ladite méthode comprenant l'administration d'un composé inhibiteur de TACE à un sujet présentant une peau acnéique ou à tendance acnéique, et l'évaluation de l'état de l'acné. L'administration est réalisée de préférence par voie topique. Par voie topique, on entend une application sur la peau ou les muqueuses. Inhibiteurs de l'enzyme L'invention a également pour objet l'utilisation d'un inhibiteur de l'enzyme humaine TACE, notamment un inhibiteur obtenu par la méthode de criblage ci-dessus décrite, pour la préparation d'un médicament destiné au traitement préventif et/ou curatif de l'acné. De préférence, le médicament ne contient pas d'inhibiteur de cyclooxygénase-2 (COX-2). De préférence, l'inhibiteur de l'enzyme humaine TACE est le seul principe actif anti-acné contenu dans le médicament. Encore plus préférentiellement, l'inhibiteur de l'enzyme humaine TACE est le seul principe actif contenu dans le médicament. Il est ainsi décrit ici une méthode de traitement préventif et/ou curatif de l'acné, ladite méthode comprenant l'administration d'une quantité thérapeutiquement efficace d'un modulateur de l'enzyme humaine TACE à un patient nécessitant un tel traitement. Le terme inhibiteur se réfère à un composé ou une substance chimique qui élimine ou réduit substantiellement l'activité enzymatique de TACE. Le terme substantiellement signifie une réduction d'au moins 20%, de préférence d'au moins 30%, de préférence encore d'au moins 50%, et de manière plus préférée d'au moins 70% ou 90%. Plus particulièrement il peut s'agir d'un composé qui interagit avec, et bloque, le site catalytique de l'enzyme. Un inhibiteur préféré interagit avec l'enzyme en solution à des concentrations en inhibiteur de moins de 1 M, de préférence moins de 0,1 M, de préférence encore moins de 0,01 M. Le composé modulateur peut être un anticorps inhibiteur anti-TACE, de préférence un anticorps monoclonal. De manière avantageuse, un tel anticorps inhibiteur est administré en une quantité suffisante pour obtenir une concentration plasmatique d'environ 0.01 g par ml à environ 100 g/ml, de préférence d'environ 1 g par ml à environ 5 g/ml. D'autres inhibiteurs préférés sont indiqués dans le tableau 1 ci-dessous : Tableau 1 : Inhibiteurs de TACE Structure __~ ~.--•--•. { M _ tee C. Hj .>, Lu t:n ---- ...~....~- -- -- - ..~.._.-- ' 00 # t i13 J Cl Mi Z F+V~I-~ ('t a 1V. .. --- _mon_ ... . ~~ -- - 0 f ~ti32 T}r .... Ceee4fs H01 7:r 0 Ï S rte tu ro l~ w 0 t'A Ori T% 4 `'zig 3 H; N 1à 3 ~ ot ~ t L N O. lk # i.Y r} 0 NH iv 1:a iv iiy9 t_ra T1 i. vv 0 Structure d,~rf ,~ Dawa T12. f ., 0 T15 .. _~T. T16 N e0H n3 T17 e+ T18 0 H NE H x,. N AC0 1 S ructu py+ ' L M 2O ~t 2 B o T2 2 3 . . tl *ROI i `2 9 4 \ OH M. t. . ,Cid 1 -C~ :ti3 r 0 ~+~s Structure S 0 ~ 4.r eue- Y 5.2a` F3C T27 0 lys\ a T3 ï~ T28 1-1!g 0 iF N ~nti *3. > :. Et 1 OH T 4'7 sy~~~U T30 el s, S Structure . N 0 T31 T 32 T33 Les noms, numéro CAS, et références des inhibiteurs encore plus préférés sont indiqués 5 dans le tableau 2 ci-dessous : Tableau 2 : Noms d'inhibiteurs TACE : Nom(s) Reference T'I lw3646, 3434N-isopponyl-N-(4- methoxyphenylsulfonyl)amino- ph enyl'j-3-(3-fflidi) 2(E)- prorenohydrox amic a dit 1(Waknap Plvaenaceuti cal Co.) Abstracta of Papen, 222nd (2R,3 S),N4 hydroxy- '147783-67-3 US 5( 52262 NI .(1S) -2 -(methyl.arn i na) -2-ox.o- 1 --(pile n ylmethyl )eh y1j-2-(2 - melhylpropyl)-3-(2-propenyl ) .1.e T4 BB-1433, (2 3S)-N 1-[US - - 1 47783-68-4 W0 94/02447 (cycl oh ex ylrne th yl)-2-(roelh yl- aminü)-2--oxothyll-N3- di hydroxy2-(2 m.e hylpropyl) butaaediamide T5 fiÎ7,à4 batimeî7i(s) N4 ,:.e ù.1 ù 1 W0 90/05719 hydroxy-N 1 - [( 1 S)-2-(neth yl- 130370-60-4 i! amno)-2-oxo --l-(phenylmethyl) ethyl 2 (2-met:h ylpropyl)- 3- 1(2 1.1 ïd _ T6 Ro-32-731 f (hydroxyamino)carbonyl -2-(2- 219613-022 US 6235787 me-th propyl)-6-phenyl-5-hexen- oie .2(2- mt1w1propyl)-2- m5 ... T7 GW-3333 (2R,3 (fonnyU _ IWO 98/38179 b ydroxyami no)-4-methy -242- 212609-68-2 methylprop l)-N[(IS.,2S )-2- methyl - 1 [(.2 --pyri (lin y1a:mi o) arbonyl jbu.tyUpentarliuni.de 101 axoSrnithl(hn e) T8 r( J \, f 'l-- - WO 0011246.6 , >.... - 2O21-f-2 hydmxyarni no)-N- f( 1 8)44 [i min o, i no) tue h/ a 11'M "' 1 mi o] 4 i' thiazd ylamin* arbou ylj ta# J-2- (2m aan-àde (,- G1 al,,; o al e) T9 Gl 129471, (2R,3S)-N4-byclroy130370-59-\V(, 90/05719 N 1 4(1 -(plenylme Èhyl)et 1y 1--('â rnehylpmpyl)-3-[ phm4thio) methyl]-butanediamWe (Bhtish oTeehnolo ev) TIO C(JS - 3 cO90A , (uk , 1 4P 1(4- 209397-76 US 577062$ ethoxyphenyl-ul forl.y J (4-pyrad-ny hnethyl)umi noj-N-hydre,)x y4- pmpoxycyc ob maneacetamide i (Nov ti-s) .... 1`_[(-682., Iv î~ ,38)-3 44- K3 ,5- T 11 dimet.h ylphenyl) metlwxy]pheuyl -1 223406-214 US 6057336 N-hyroxy-,3-dimethyl-2-x- p yrrol dirieiaceumi de (Bristol- Squib) T12 DPC .-33 3. > ('R) ~vy hydroxy US 6057336 dineth yl- 2-oxo-3- [4 -(2 meth yl-4 quinolinylmethox y)phenyl]- i - pyrrolî di ne ac otamido Squibb) ï:i: t33 1 3 1. 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CGS 27023A, s 2R)- N hy droxo =2- { tR4 r:1'.'tho l'17~)Ln • 1) i,lf i 1;(3- E . y d7' - v.1 e thyl -a i o-j-3,,, ~~ o hyl- 169799-04-6 S 5455258 lb utz n~urw e moûnhv'~dre h1 onces (Nova:rt~-) 2 z Ii.('5S)-5-:U(2iZ,3S)-2-(cycTobexyl-• 212609-63-7 \ ~O 98138179 è. etllyl) (fttr~3 yl ydr xy mit:) 1 #s~Cobe Ll1ai1~ nol-(` i3~s.4 -6,a Tr i` • acjd, %: ~ Y . ~4 4 1: çit ( 1' ', (.n -2256, (2-S,3R)-- 4 [1;~•~!+f _l .- _t24 propylj-N 415 9 t 3.tlÈ; ,71p1rop-v ~_tt l:Sti tt r~.}I+F,~ : 2 1, 2 ~`~ W(). 97/18207 SP CI5 1914 s_36_ ' - , (8S ,l R, l 2S jf 2- r..~@ liyd{..1 '• •~-1-(2-me t:~ x.111 p l)-NC(~~- i,2 (3~.?Ld r Z1~2}li i uf'"._. . r;thwl]... 2, 10-di.oxo-1-ox a-3,,9 -ut azazyc pcntc`adecari L î2-dicaFboxam dl SL 22, (S.S,7R,1 OS) 6 _•h ydroxy eth f i _ 7(' niethylp;rcp' 1)_ o\n--7- +. 112x1. ma-9-1 ••[l{Y.l±i4e~y:}~+ Ci~..++f 6LT.0,2: 1. 1lhyy~~ .pp.Tlâ1~deca- 1,15 triii ,1 0dieaCrbox- ty i (8Sy11R,l2S) I24iyc roxy 2 10-- -h 088_8 iA tt t~ .-- . et gai., .+g9 Zax di oûNS-[ --oxo-2(1 p:ipeet i.n ) 4yleee,T u L,k dû.t'lr Ya [2'-(tri :izf~, ot1:a.tt~ rl 3 C T Y r i 9I h ppléa.. yy1 ~~~.~_jjf 3 x.4 S.~j y I 7^ ,q {~l `l 1 . iaz Gic L,I.~Ylyde @tâa:L61..-i. me- ,1 2- Y h ~4`f .41 ~'.$, r, 'd ic 7L ~a i Je (L)!lI 4mt) (8S iiR,12S)'N12--hydrox; S-[2- X , .43 , }caf., -2,10-T28 d tl .o-11 [[2-itrr~~la:~.dr~~r~z~ethyl) ;'7088-85-2 ~ c (#rt;,'3 44121), s' [t Éanediamïde, mor o- F$ kB-R7785. i 2S,iR,1 _ I-hydroxy- W . 95'Q 4715 2-#?l.ths1 \ ~1- [(IS)-2 (%it:th `i•• arnino)-oxo--1-phen ieth']_.1'?168158-16-:" j ! rnethy1propyt)buta .~`ti. 3 ti#ii s II Itx on .1.,,an n ~~__1 Les inhibiteurs TACE préférés incluent W-3646, Ro-32-7315, GW-3333, l'apratastat ou le (3S)-N-hydroxy-4-[[4-[(4-hydroxybut-2-ynyl)oxy]phenyl]sulfonyl]-2, 2-dimethylthiomorpholine-3-carboxamide, GW-4459, CGS-33090A, DPC-333, TNF-484, WTACE2, SP-057, SL-422, FYK-1388, et KB-R7785. Sont également avantageux les inhibiteurs TACE suivants: acide 3[3-[N-isopropyl-N- (4-methoxyphenyl-sulfonyl) amino]-phenyl]-3(3-pyridyl)-2 (E) -propenohydroxamique, (2R, 3S)-3-(formylhydroxyamino)-4-methyl-2-(2-methylpropyl)-N-[(IS, 2S)-2-methyl-1- [ (2- pyridinylamino) carbonyl] butyl] pentanamide, (2R, 3S)-3- (formylhydroxyamino)-N- [(IS)-4- [[imino (nitroamino) -methyl] amino]-1-[(2-thiazolylamino) carbonyl] butyl]-2-(2- methylpropyl) -hexanamide, (aR, la, 4R)-a;-[[(4-ethoxyphenyl)-sulfonyl] (4-pyridinylmethyl) amino] -N-hydroxy-4-propoxy-cyclohexaneacetamide, et (aR)-N- hydroxy- a, 3-dimethyl-2-oxo-3- [4-(2-methyl-4-quinolinyl-methoxy) phenyl]-1- pyrrolidineacetamide. Le tableau 3 suivant indique les références des demandes de brevets décrivant divers inhibiteurs TACE: Tableau 3 : Référence d'inhibiteurs TACE -------- 1"ïï; ---- [7S 20010011 134 US 20010014688 11S 20010025047 1 20010039287 US 2001 01'1110 US 200100)1.698' u S 20010(49449 l US 20010051614 _f L S OW I. 1. 2l,t),OM922 US 20020013333 US 20020013341 US 5304549 US 5455258 US 559-1106 --- US 5629285 US 565226 US 5665777 US 5778686 US 5733653 --LUS 5770624 { {~d fil S 5817822 i US 58/2146 5~ ~~3s~1~ S 5929278 US 5932595 r ù _ .. . LS59523M 9'i 1 US 5967481 S 5977401 98513 US 598 911 1 US 59361'32 US 60136,19 US 6057336 US60 3786 US607190 1IS6087 59 US 6090840 US 6100266 US 6114372 US 61 181 1_T5614374-4 US 6153757 't TS 617 0 61 a WO 0046'221 0056704 Ç 0059285 WO 0069812 _LAO 0069819 , ) 0069821 W 006982 1 '0100 91 17 WO 0098 9 0071514 1 WC) 007510S ....... ... WQ01.1159rt17?1 1 ,4001 0 0014 189 ,lWO 0155112 O0 60820 0173 ! C 0162742 .____... WO 016250 WO 0162751 00170673 O01,07 4 • WC) 0185680 WU01 7870 1 WO0157883 W00204416 O 0X06215 \ O 9005719 W ••.k 7 ~.... 950471 F ..} ~@ O 95060 3O 90244 1W Q63->1(26 WO 9633167 1 \I'() 9633968 rWO 9702239 WO 9718188 VVO 9718207 '1 ~1 1)511 'O 9153 ùR--O9720824 L ' 9,2411 1 WO 9742168 WO 9743249 O 97432'.)O " WO 9749674 l92 WO O 9816506 W0 9816514 9S-165.10 f O 9830541 \VO 9830551 .4~.. 98.3 48 WO 9837877 \VO 983816 3 WO 98',8179 WO 9839326 O 98432P3 WC 98S1665 WO 9855449 _ ~. ù. ~ _ 9902510 WO 9903878 WO 9906410 WO 991SO7 i WO 9931052 \~6O 993a%`T$ WO 9 008$` + WO 4 2436 WO 9958531 'd 96141 WU 9965867 20 Les composés inhibiteurs sont formulés au sein de composition pharmaceutique, en association avec un véhicule pharmaceutiquement acceptable. Ces compositions peuvent êtreadministrées par exemple par voie orale, entérale, parentérale, ou topique. De préférence, la composition pharmaceutique est appliquée par voie topique. Par voie orale, la composition pharmaceutique peut se présenter sous forme de comprimés, de gélules, de dragées, de sirops, de suspensions, de solutions, de poudres, de granules, d'émulsions, de suspensions de microsphères ou nanosphères ou de vésicules lipidiques ou polymériques permettant une libération contrôlée. Par voie parentérale, la composition pharmaceutique peut se présenter sous forme de solutions ou suspensions pour perfusion ou pour injection. Par voie topique, la composition pharmaceutique est plus particulièrement destinée au traitement de la peau et des muqueuses et peut se présenter sous forme d'onguents, de crèmes, de laits, de pommades, de poudres, de tampons imbibés, de solutions, de gels, de sprays, de lotions ou de suspensions, de patchs. Elle peut également se présenter sous forme de suspensions de microsphères ou nanosphères ou de vésicules lipidiques ou polymériques ou de patchs polymériques ou d'hydrogels permettant une libération contrôlée. Cette composition pour application topique peut se présenter sous forme anhydre, sous forme aqueuse ou sous la forme d'une émulsion. Dans une variante préférée, la composition pharmaceutique se présente sous la forme d'un gel, d'une crème ou d'une lotion. La composition pharmaceutique peut en outre contenir des additifs inertes ou des combinaisons de ces additifs, tels que - des agents mouillants; -des agents d'amélioration de la saveur; - des agents conservateurs tels que les esters de l'acide parahydroxybenzoïque; - des agents stabilisants; - des agents régulateurs d'humidité; - des agents régulateurs de pH; - des agents modificateurs de pression osmotique; - des agents émulsionnants; -des filtres UV-A et UV-B ; - et des antioxydants, tels que l'alpha-tocophérol, le butylhydroxyanisole ou le butylhydroxytoluene, la Super Oxyde Dismutase, l'Ubiquinol ou certains chélatants de métaux.10 REVENDICATIONS 1. Méthode in vitro de criblage de composés candidats pour le traitement préventif etlou curatif de l'acné, comprenant la détermination de la capacité d'un composé à inhiber l'expression ou l'activité de l'enzyme TACE, ou l'expression de son gène ou l'activité d'au moins un de ses promoteurs. 2. Méthode selon la revendication 1, comprenant les étapes suivantes : a. Préparation d'au moins deux échantillons biologiques ou mélanges réactionnels ; b. Mise en contact d'un des échantillons ou mélanges réactionnels avec un ou plusieurs des composés à tester ; c. Mesure de l'expression ou de l'activité de l'enzyme TACE, de l'expression 15 de son gène ou de l'activité d'au moins un de ses promoteurs, dans les échantillons biologiques ou mélanges réactionnels ; d. Sélection des composés pour lesquels une inhibition de l'expression ou de l'activité de l'enzyme TACE, ou une inhibition de l'expression de son gène ou une inhibition de l'activité d'au moins un de ses promoteurs, est mesurée dans 20 l'échantillon ou le mélange traité en b) par rapport à l'échantillon ou au mélange non traité.