FR 2918844 A1 20090123 FR 0705276 A 20070720 La présente invention concerne une composition sous forme de poudre comprenant un mélange d'enzymes. Les enzymes sont utilisées depuis longtemps dans diverses applications industrielles, et notamment en nutrition animale. Dans ce cas, les enzymes améliorent la digestibilité des sources végétales et donc permettent aux animaux d'élevage de digérer leurs aliments plus efficacement. Les enzymes sont produites par une grande variété d'organismes : plantes, animaux, et surtout microorganismes, c'est-à-dire tout organisme mono ou pluricellulaire, en particulier choisi parmi les bactéries, les levures et les champignons. La demande de brevet EP1007743 décrit notamment un mélange d'enzymes obtenues à partir de Penicillium funiculosum, mis en forme sous forme liquide ou sous forme de poudre et destiné à l'alimentation animale. Les enzymes sont ajoutées aux aliments sous forme liquide par pulvérisation ou elles sont incorporées dans les aliments en mélangeuse puis les aliments sont granulés dans une presse. Une partie importante des aliments pour animaux subissent un traitement thermique pour des raisons d'hygiène (qualité microbiologique) ou de facilité de consommation par les animaux (présentation sous forme de miette ou en granulé). Ces traitement thermiques reposent sur l'utilisation de vapeur à température plus ou moins élevée et associée éventuellement à une agglomération (presse à granuler). II s'avère néanmoins que les enzymes sont des protéines qui sont par nature sensibles à la température. On constate une perte d'activité enzymatique lorsque des hautes températures sont utilisées. Un objet de la présente invention est de proposer une composition sous forme de poudre comprenant un mélange enzymatique qui soit thermorésistante. Description de l'invention La présente invention concerne une composition thermorésistante pour animaux sous forme de poudre granuleuse comprenant : a) un mélange sous forme liquide d'au moins deux enzymes, b) un support choisi dans le groupe consistant en la farine de blé, l'amidon, le gypsum, la maltodextrine et les rafles de maïs, et c) un enrobant choisi dans le groupe consistant en la cellulose et ses dérivés, la chitine, la carraghénine, l'alginate de sodium, les gommes végétales, les gommes obtenues par fermentation et les amidons et dérivés. Selon un mode de réalisation, le mélange sous forme liquide d'au moins deux enzymes est obtenu à partir de la fermentation d'un seul microorganisme. Selon un autre mode de réalisation le mélange sous forme liquide d'au moins deux enzymes est obtenu à partir de la fermentation de deux microorganismes différents. Avantageusement le mélange sous forme liquide d'au moins deux enzymes est un moût de fermentation filtré et concentré obtenu à partir d'au moins un microorganisme. Selon un autre mode de réalisation la composition comprend : a) de 15 à 50 % en poids dudit mélange d'au moins deux enzymes, b) de 25 à 60 % en poids dudit support, c) de 25 à 60 % en poids dudit enrobant. Selon un mode de réalisation, les au moins deux enzymes sont choisies dans le groupe consistant en une xylanase, une (3-glucanase, une cellulase, une pectinase, une phytase et une protéase. Avantageusement, les au moins deux enzymes sont choisies dans le groupe consistant en la phytase, l'endo-1,443-xylanase, l'a-arabiriofuranosidase, la 3-xylosidase, la feruloyl estérase, l'endo-1,5 a-arabinanase, l'endo-1,3(4)-(3-glucanase, la laminarinase, l'endo-1,4-8-glucanase, la cellobiohydrolase, la f3-glucosidase, la polygalacturonase, la pectine estérase, la rhamnogalacturonase, l'aspartic protéase, la métallo protéase, l'endo-1,4-f3-mannanase, la R-mannosidase et l'a-galactosidase. Selon un mode de réalisation de l'invention, le microorganisme est Penicillium funiculosum déposé à l'IMI (International Mycological Institute, Bakeham Lane, Englefield Green, Egham, Surrey, TW20 9TY, UK) le 24 mars 1998 sous le numéro IMI 378536. Selon un mode de réalisation de l'invention, l'enrobant est la carboxyméthylcellulose ou l'éthylcellulose.35 Selon un mode de réalisation de l'invention, la composition est susceptible d'être obtenue par le procédé comprenant les étapes suivantes : a) coséchage des composés suivants : - un support choisi dans le groupe consistant en la farine de blé, 5 l'amidon, le gypsurn, la maltodextrine et les rafles de maïs, et -un mélange sous forme liquide d'au moins deux enzymes, de façon à obtenir une base intermédiaire, b) granulation par imprégnation de la base intermédiaire avec un enrobant choisi dans le groupe consistant en la cellulose et ses dérivés, la 10 chitine, la carraghénine, l'alginate de sodium, les gommes végétales, les gommes obtenues par fermentation et les amidons et dérivés, c) enrobage de la base intermédiaire imprégnée avec un enrobant choisi dans le groupe consistant en la cellulose et ses dérivés, la chitine, la carraghénine, l'alginate de sodium, les gommes végétales, les gommes 15 obtenues par fermentation et les amidons et dérivés, et d) séchage. La présente invention concerne également un additif nutritionnel pour animaux sous forme de poudre comprenant : 20 a) un mélange sous forme liquide d'au moins deux enzymes, b) un support choisi dans le groupe consistant en la farine de blé, l'amidon, le gypsum, la maltodextrine et les rafles de maïs, et c) un enrobant choisi dans le groupe consistant en la cellulose et ses dérivés, la chitine, la carraghénine, l'alginate de sodium, les gommes 25 végétales, les gomrnes obtenues par fermentation et les amidons et dérivés. La présente invention concerne aussi un aliment pour animaux caractérisé en ce qu'il comprend une base nutritionnelle pour animaux et un additif nutritionnel selon la revendication 10. 30 Enfin, la présente invention concerne l'utilisation d'un enrobant choisi dans le groupe consistant en la cellulose et ses dérivés, la chitine, la carraghénine, l'alginate de sodium, les gommes végétales, les gommes obtenues par fermentation et les amidons et dérivés pour préparer un additif nutritionnel pour 35 animaux comprenant un mélange d'au moins deux enzymes obtenues à partir de la fermentation d'un seul microorganisme. Avantageusement, l'enrobant est la carboxyméthylcellulose. Composition La présente invention concerne donc une composition thermorésistante pour animaux sous forme de poudre granuleuse. Par "composition thermorésistante", on entend une composition qui résiste à la chaleur. Une des propriétés importantes de la composition selon la présente invention est d'être résistante à la chaleur. En effet, la composition selon la présente invention va subir un traitement thermique destiné d'une part à obtenir une qualité microbiologique et d'autre part à mettre en forme la composition afin d'être plus facililement utilisable par les éleveurs et consommable par les animaux. On parle de procédé de pelletisation. La pelletisation est une agglomération d'aliments ss forme de petits granulés. Ces granulés ne sont pas friables, à la différence des agglomérats. Après pelletisation, on obtient des pellets. Les pellets sont des granulés de taille de 1,5 à 6 mm de diamètre et de 1,5 à 4 cm de longueur. Pour la pellitisation, on utilise par exemple des presses à granuler dont le fonctionnement est basé sur l'utilisation de vapeur à température plus ou moins élevée. Par exemple, la composition résiste à une température supérieure à 80 C, 85 C ou 90 C. Par "poudre granuleuse", on entend une poudre qui présente une certaine granulométrie. Selon la présente invention, les exigences granulométriques de la composition obtenue sont les suivantes : Taille des particules Pourcentage dans le mélange Supérieur à 800 pm ou = à 40%, de préférence ou = à 12% Inférieur à 100 pm La composition de la présente invention est destinée aux animaux. Autrement dit, la composition selon la présente invention est adaptée à l'utilisation en nutrition animale. Par "animal", on entend plus particulièrement les animaux d'élevage et notamment les animaux de pacage (notamment les bovins élevés pour la viande, le lait, le fromage et le cuir ; les ovins élevés pour la viande, la laine et le fromage ; les caprins ; les porcins), les lapins, les volailles (les poulets, les poules, les dindes, les canards, les oies et autres), les animaux aquatiques (par exemple les poissons, les crevettes, les huîtres et les moules), les animaux de loisir et de compagnie (notamment le cheval, le chien, le chat ). Les bovins, ou boviinés, constituent une sous-famille des bovidés, mammifères ruminants polygastriques, qui comprend plusieurs espèces importantes d'animaux d'élevage (races laitières, races à viande et races mixtes). On entend par "composition adaptée à l'utilisation en la nutrition animale", une composition dont les caractéristiques sont telles qu'elle convient pour la nutrition animale. Les caractéristiques essentielles à une utilisation en nutrition animale sont notamment le pH et la température auxquels la composition comprenant le mélange d'enzymes est active. En effet, le pH du système digestif des animaux est acide et il est donc essentiel que les enzymes reste active à ce pH, ce afin de conserver leurs activités. Selon un mode de réalisation de la présente invention, la composition conserve les activités enzymatiques attendues à un pH acide, par exemple inférieur à 7, de préférence inférieur à 5. La présente invention concerne donc une composition thermorésistante pour animaux sous forme de poudre granuleuse comprenant : a) un mélange sous forme liquide d'au moins deux enzymes, b) un support choisi dans le groupe consistant en la farine de blé, l'amidon, le gypsum, la maltodextrine et les rafles de maïs, et c) un enrobant choisi dans le groupe consistant en la cellulose et ses dérivés, la chitine, la carraghénine, l'alginate de sodium, les gommes végétales, les gommes obtenues par fermentation et les amidons et dérivés. Les enzymes sont produites par une grande variété d'organismes : plantes, animaux, et surtout microorganismes. Par "microorganisme", on entend tout organisme mono ou pluricellulaire, en particulier choisi parmi les bactéries, les levures et les champignons. De manière avantageuse, les levures sont choisies parmi par exemple Pichia pastoris, Saccharomyces cerevisae, Yarrowia lipolytica et Schwanniomyces occidentalis. Les champignons sont par exemple choisis parmi les Aspergillus, les Trichoderma et les Penicilliums, préférentiellement parmi Penicillium funiculosum, Trichoderma reesei, Aspergillus niger, Aspergillus awamori, Aspergillus kawachii et Trichoderma koningii. Selon un mode de réalisation, le mélange sous forme liquide d'au moins deux enzymes est obtenu à partir de la fermentation d'un seul microorganisme. Avantageusement le mélange sous forme liquide d'au moins deux enzymes est un moût de fermentation filtré et concentré obtenu à partir d'un seul microorganisme. Selon un autre mode de réalisation de la présente invention, le microorganisme utilisé provient d'une souche de microorgansime à l'état isolée non modifiée génétiquement produisant au moins deux activités enzymatiques. Alternativement, il peut s'agir d'un organisme hôte transformé avec un polynucléotide, une cassette d'expression et/ou un vecteur. Dans un mode de réalisation de l'invention, le microrganisme est une souche de Penicillium funiculosum dans laquelle on exprime ou sur-exprime une enzyme. Dans un autre mode de réalisation, l'organisme hôte est une souche de Debatyomyces castellii dans laquelle on exprime ou sur-exprime une enzyme. Dans un autre mode encore de réalisation, l'organisme hôte est une souche de Ruminococcus gnavus dans laquelle on exprime ou sur-exprime une enzyme. Selon un mode de réalisation de l'invention, le microorganisme est Penicillium funiculosum déposé à l'IMI (International Mycological Institute, Bakeham Lane, Englefield Green, Egham, Surrey, TW20 9TY, UK) le 24 mars 1998 sous le numéro IMI 378536. Selon un autre mode de réalisation, la composition comprend de 15 à 50 % en poids dudit mélange d'au moins deux enzymes, 30 préférentiellement de 20 à 40% en poids. Selon un autre mode de réalisation de la présente invention, la composition thermorésistante pour animaux sous forme de poudre granuleuse comprend un mélange sous forme liquide d'au moins trois enzymes, quatre enzymes, huit enzymes ou dix enzymes. 35 Selon un mode de réalisation, les au moins deux enzymes sont choisies dans le groupe consistant en une xylanase, une (3-glucanase, une cellulase, une pectinase, une phytase et une protéase. Avantageusement, les au moins deux enzymes sont choisies dans le groupe consistant en la phytase, l'endo-1,4-(3-xylanase, l'a-arabinofuranosidase, la 6-xylosidase, la feruloyl estérase, l'endo-1,5 a-arabinanase, l'endo-1,3(4)-(3-glucanase, la laminarinase, l'endo-1,4-3-glucanase, la cellobiohydrolase, la p-glucosidase, la polygalacturonase, la pectine estérase, la rhamnogalacturonase, l'aspartic protéase, la métallo protéase, l'endo-1,4-(3-mannanase, la f3-mannosidase et l'a-galactosidase. La présente composition comprend également un support. Le support est choisi dans le groupe consistant en la farine de blé, l'amidon, le gypsum, la maltodextrine et les rafles de maïs. Le support est présent dans la composition à une teneur comprise entre 25 et 60 % en poids de la composition thermorésistante sous forme de poudre granuleuse. La présente composition comprend enfin un enrobant. L'enrobant est choisi dans le groupe consistant en la cellulose et ses dérivés, la chitine, la carraghénine, l'alginate de sodium, les gommes végétales, les gommes obtenues par fermentation et les amidons et dérivés. Les gommes végétales sont des exsudats de plantes qui se solidifient par dessiccation. A titre indicatif des gommes pouvant être utilisées dans la présente invention, on peut citer les gommes suivantes : gomme arabique, gomme Karaya, gomme adragante, gomme guar, gomme xanthane. Par "amidons et dérivés", on entend tout polysaccharide formé de l'association de deux polymères : l'amylose et l'amylopectine. Selon la présente invention, l'amidon peut se trouver sous forme de poudre ou sous forme d'empois. A titre indicatif, il peut s'agir d'amidon natif de blé, d'amidon natif de maïs, d'amidon natif de riz ou de fécule de pomme de terre. II peut également s'agir des mêmes amidons traités physiquement, par exemple prégélatinisés. Selon un mode de réalisation de l'invention, l'enrobant est la carboxyméthylcellulose ou l'éthylcellulose. L'enrobant est présent dans la composition thermorésistante sous forme de poudre granuleuse à une teneur comprise entre 25 et 60 % en poids, de préférence entre 30 et 58% en poids. Selon un autre objet de la présente invention, la composition est susceptible d'être obtenue par le procédé comprenant les étapes suivantes : 35 a) coséchage des composés suivants : - un support choisi dans le groupe consistant en la farine de blé, l'amidon, le gypsurn, la maltodextrine et les rafles de maïs, et - un mélange sous forme liquide d'au moins deux enzymes, de façon à obtenir une base intermédiaire, b) granulation par imprégnation de la base intermédiaire avec un enrobant choisi dans le groupe consistant en la cellulose et ses dérivés, la chitine, la carraghénine, l'alginate de sodium, les gommes végétales, les gommes obtenues lpar fermentation et les amidons et dérivés, c) enrobage de la base intermédiaire imprégnée avec un enrobant choisi dans le groupe consistant en la cellulose et ses dérivés, la chitine, la carraghénine, l'alginate de sodium, les gommes végétales, les gommes obtenues par fermentation et les amidons et dérivés, et d) séchage. L'enrobant, identique ou différent, est utilisé au cours de deux étapes successives du procédé. Ceci conduit à une poudre présentant un aspect nouveau, dans laquelle l'enrobant se trouve à la fois à l'intérieur et à l'extérieur de la poudre granuleuse. Ceci confère à la poudre des propriétés avantageuses. La composition sous forme de poudre présente une bonne coulabilité. Un exemple de protocole de mesure permettant d'évaluer la coulabilité de la poudre est la détermination de l'angle de talus. Cette méthode repose sur la détermination de l'angle à la base du cône d'éboulement obtenu en faisant passer l'échantillon à travers un entonnoir spécial placé à une hauteur conventionnelle, au-dessus d'une plaque parfaitement plane et horizontale. Cette méthode nécessite l'appareillage suivant : verrerie et matériel de laboratoire, entonnoir en acier inoxydable, dont la base a un diamètre (d) intérieur de 6 mm (l'entonnoir se fixant sur le support), plaque en acier inoxydable gravée de 4 droites formant entre elles un angle de 45 et passant à l'aplomb du centre de l'entonnoir, support en acier inoxydable fixé à la plaque. La méthode consiste à ajuster la hauteur (H) entre la plaque et la base de l'entonnoir à 40 mm, vérifier l'aplomb de centre de l'entonnoir avec le point de croisement des droites gravées, verser la poudre dans l'entonnoir, arrêter l'alimentation quand le sommet du cône touche la base de l'entonnoir, tracer sur chaque ligne gravée, un trait à la base du cône de silice formé, éliminer la silice et mesurer la distance séparant deux traits d'une même ligne pour chacune d'elles. L'angle du Talus d'éboulement exprimé en degrés est donné par la formule : a = Arctg 2H D-d dans laquelle : H : la hauteur du cône en mm (H = 40) d : diamètre intérieur de la base de l'entonnoir en mm (d = 6 mm) D : moyenne arithmétique des 4 mesures en mm a : angle de Talus en degré. Selon la présente invention, la composition sous forme de poudre présente un angle de repos compris entre 20 et 50 , de préférence entre 20 et 45 . 10 Un autre exemple de protocole de mesure permettant d'évaluer la coulabilité de la poudre est la mesure de la compressibilité, selon la formule suivante : Compressibilité = %(densité tassée û densité non tassée) 15 densité tassée Selon la présente invention, la composition sous forme de poudre présente un index de compressibilité compris entre 0 et 40%, de préférence entre 0 et 20%. 20 Les compositions sous forme de poudre de la présente invention peuvent en outre comprendre un principe actif différent du mélange d'enzymes ou plusieurs principes actifs. Par "principe actif', on entend toutes substances possédant une activité physiologique établie chez l'animal. Entrent notamment dans la 25 catégorie de principe actif selon l'invention les compléments alimentaires. Les compléments alimentaires pour animaux sont des produits destinés à être ingérés, en complément de l'alimentation courante, afin de pallier l'insuffisance des apports journaliers en certains composés. Il est par exemple connu, de manière générale, de complémenter les rations alimentaires des animaux 30 d'élevage avec des principes actifs, de manière à augmenter la performance zootechnique des animaux élevés. II peut notamment s'agir de vitamines, de sels minéraux, d'acides aminés, d'oligo-éléments, d'hormones ou d'antibiotiques. 35 Procédé de préparation de la composition sous forme de poudre granuleuse Le procédé de préparation de la composition susmentionnée comprend les étapes suivantes : a) coséchage des composés suivants : - au moins un support choisi dans le groupe consistant en la farine de blé, l'amidon, le gypsum, la maltodextrine et les rafles de maïs, et - au moins un mélange sous forme liquide d'au moins deux enzymes obtenues à partir d'un seul microorganisme moyennant quoi on obtient une base intermédiaire, b) granulation par imprégnation de la base intermédiaire avec un enrobant choisi dans le groupe consistant en la cellulose et ses dérivés, la chitine, la carraghénine, l'alginate de sodium, les gommes végétales, les gommes obtenues par fermentation et les amidons et dérivés, c) enrobage de la base intermédiaire imprégnée avec un enrobant choisi dans le groupe consistant en la cellulose et ses dérivés, la chitine, la carraghénine, l'alginate de sodium, les gommes végétales, les gommes obtenues par fermentation et les amidons et dérivés, et d) séchage. La première étape du procédé consiste donc en un coséchage du mélange enzymatique qui se trouve sous forme liquide avec le support selon l'invention. Cette étape peut être réalisée en continu, sur une tour de séchage par atomisation. Le coséchage se déroule à une température non dégradante. La poudre doit être maintenue à une température inférieure à 45 C. Cette étape conduit à ce qu'une partie importante du mélange enzymatique sous forme liquide soit retenue sur le support. On obtient une poudre microgranulée de dimension comprise entre 50 et 250pm. L'humidité de la poudre est inférieure à 20%. La deuxième étape du procédé consiste en une granulation par imprégnation de la base intermédiaire avec un enrobant choisi dans le groupe consistant en la cellulose et ses dérivés, la chitine, les gommes végétales, les gommes obtenues par fermentation et les amidons et dérivés. II s'agit en l'espèce d'une granulation humide qui consiste à effectuer dans un mélangeur, également appelé granulateur, équipé d'un système d'addition de liquide, une densification des particules associée à une granulation pour donner la cohésion aux particules. Cette étape peut être réalisée en continu ou en discontinu. La troisième étape du procédé consiste à déposer un film suffisant d'un enrobant choisi dans le groupe consistant en la cellulose et ses dérivés, la chitine, les gommes végétales, les gommes obtenues par fermentation et les amidons et dérivés. Cet enrobant peut être le même que celui utilisé lors de l'étape de granulation ou il peut être différent. Cette étape peut être réalisée en en continu ou en discontinu, par exemple sur un sécheur à lit fluidisé. La quantité d'enrobant dépend de la granulométrie finale du produit souhaitée. La quatrième étape consiste à sécher le produit final. Ce séchage peut être réalisé en continu sur un lit fluidisé ou en batch, de manière à ce que la teneur en eau du produit soit inférieure à 10%, préférentiellement à 8%. Il est possible d'ajouter une étape intermédiaire entre la deuxième et la troisième étape. Cette étape consiste à sécher la poudre granulée de manière continue ou de manière discontinue. II est également possible d'ajouter une étape de tamisage entre la 15 deuxième et la troisième étape ou après l'étape optionnelle de séchage de la poudre granulée. Procédé de pelletisation Selon la présente invention, le procédé de pelletisation comprend 20 les étapes suivantes : a) on alimente d'une part la composition thermorésistante sous forme de poudre granuleuse et d'autre part la base nutritionnelle dans un alimentateur, b) on chauffe le mélange à une température comprise entre 60 et 25 100 C, de préférence entre 70 C et 90 C, c) on pelletise ladite composition dans une presse à granuler, et d) les pellets obtenus sont coupés à la longueur désirée, e) on procède au séchage et refroidissement des pellets obtenus à l'étape d). 30 Additif nutritionnel pour animaux La présente invention concerne également un additif nutritionnel sous forme de poudre comprenant : a) un mélange sous forme liquide d'au moins deux enzymes, 35 b) un support choisi dans le groupe consistant en la farine de blé, l'amidon, le gypsum, la maltodextrine et les rafles de maïs, et c) un enrobant choisi dans le groupe consistant en la cellulose et ses dérivés, la chitine, la carraghénine, l'alginate de sodium, les gommes végétales, les gommes obtenues par fermentation et les amidons et dérivés. Aliment pour animaux La présente invention concerne également un aliment pour animaux caractérisé en ce qu'il comprend une base nutritionnelle pour animaux et un additif nutritionnel tel que ci-dessus défini. La base nutritionnelle comprend par exemple un mélange de blé, du tourteau de soja, des graines de soja extrudées, de l'huile de palme, du carbonate de calcium, du phosphate bicalcique, du sel, un prémix contenant de la méthionine. Utilisation Un objet de la présente invention concerne également l'utilisation de la carboxyméthylcellulose pour préparer un additif nutritionnel pour animaux comprenant un mélange d'au moins deux enzymes obtenues à partir de la fermentation d'un seul microorganisme. Un autre objet de la présente invention est l'utilisation de la 20 carboxyméthylcellulose pour préparer un additif nutritionnel pour animaux destinée à améliorer les performances de croissance des animaux, par exemple améliorer l'indice de consommation. 25 Description des figures La figure 1 représente les granulométries respectives d'une poudre de l'art antérieur et d'une poudre selon la présente invention; en abscisses, le diamètre en pm; en ordonnées, le pourcentage dans le produit. Exemple 1 Une composition selon l'invention a été préparée selon le procédé de la 35 présente invention. Elle se présente sous forme de poudre et contient 55% de carboxylméthylcellulose, 25% de farine de blé et 20% de moût de fermentation 30 filtré concentré obtenu à partir de la fermentation de Penicillium funiculosum IMI 378536 qui contient 19 activités enzymatiques. 1. Coséchage 475 kg/h de solution enzymatique à 28,7% MS (matière sèche) sont pulvérisés à 165 bars et coséchés en continu sur farine à raison de 113 kg/h à basse température. La répartition dans l'extrait sec est donc la suivante : 55% enzyme pur et 45 % du support, en l'espèce de la farine. - 146 C : température air entrée - 49 C : température air sortie - 40 C : température air du lit statique - 35 C : température air du vibro fluidiseur (première section) - 27 C : température air du vibro fluidiseur (deuxième section) La poudre micro granulée obtenue à ce stade présente un caractère de poudre 15 sans fines inférieur à 63 pm, ce qui en fait un produit apte à être manipulé dans une deuxième phase. La granulométrie moyenne en D(v, 0,5) est 117 microns et l'humidité de 7,5%. Le produit obtenu en fin de cette première étape est appelé base intermédiaire. 20 2. Granulation par imprégnation Elle est faite dans un mélangeur de la façon suivante : - 30 secondes de mélange préalable des ingrédients, c'est-à-dire de 0,77 kg d'extrait sec de CMC par kg d'extrait sec de base intermédiaire, - 120 secondes d'addition d'eau à raison de 0,18 kg d'eau par kg d'extrait sec 25 et base intermédiaire, sous agitation, secondes de mélange terminal. L'objectif de cette étape est d'obtenir des particules de l'ordre de 150 à 200 pm en moyenne, avec une humidité de 14%, tout en maintenant le produit à moins de 45 C afin de ne pas détériorer les activités enzymes. 30 3. Séchage intermédiaire sur lit fluidisé On sèche le produit sur sécheur à lit fluidisé à une température de 55 C en entrée et une température de 25 C en sortie, afin de ne pas détériorer les activités enzymes. La base intermédiaire avant enrobage est alors à 7 ou 8% 35 d'humidité. 4. Enrobage On pulvérise entre 7 et 7,5% d'une solution de CMC de basse viscosité réchauffée avant pulvérisation à une température variant entre 60 et 70 C. La quantité de solution déposée est de 0,25 kg d'extrait sec de CMC par kg d'extrait sec de produit à enrober. La poudre obtenue à ce stade a une granulométrie moyenne de 300 à400 pm et une humidité de 10 à 11%. Le produit final est alors sécher en continu sur un lit fluidisé ou en batch, l'objet dans ce cas est de ramener le produit à une teneur en eau inférieure à 10% et 10 préférentiellement à inférieure 8%. Le produit final obtenu a une teneur en eau de 7,6% et une densité de 450 g/l. 5. Mesure de granulométrie 15 La granulométrie a été mesurée respectivement pour les compositions suivantes : La première composition est le produit ROVABIOTM EXCEL AP qui se présente sous forme de poudre. La seconde composition a été préparée selon le procédé décrit ci-dessus. Il 20 s'agit donc d'une composition selon l'invention qui contient 55% de carboxylméthylcellulose, 25% de farine de blé et 20% de moût de fermentation filtré concentré obtenu à partir de la fermentation de Penicillium funiculosum IMI 378536. 25 La granulométrie des compositions est reprise dans le tableau ci-dessous : Taille des % dans le produit % dans le produit de la particules ROVABIOTM EXCEL AP 2nde composition > 800 pm 0% 0,5% 630 pm 500 pm 400pm 315 pm 200 pm 160 100 pm Exemple 2 Objectif L'objectif est de tester à la granulation quatre préparations enzymatiques ajoutées dans une base d'aliment volaille croissance. 3 températures de traitement en sortie de conditionneur (80, 85 et 90 C) sont appliquées pour chaque préparation enzymatique. Matériels et Méthodes 1. Aliment et enzymes 180 kg d'aliment farine volaille croissance sont utilisés pour réaliser ces essais. Quatre compositions sous forme de poudre sont testées. Chaque compositions répondant ou non aux critères de la composition selon la présente invention est appelé item d'essai. La première composition est le produit ROVABIOTM EXCEL AP qui se présente sous forme de poudre et contient 19 activités enzymatiques. Ce produit se compose de 20% de farine de blé et de 80% de moût de fermentation filtré concentré obtenu à partir de la fermentation de Penicillium funiculosum IMI 378536 qui contient 19 activités enzymatiques. La seconde composition a été préparée selon le procédé décrit à l'exemple 1. Elle se présente sous forme de poudre de granulométrie ci-dessus mentionnée et contient 55% de carboxylméthylcellulose, 25% de farine de blé et 20% de moût de fermentation filtré concentré obtenu à partir de la fermentation de Penicillium funiculosum IMI 378536 qui contient 19 activités enzymatiques. La troisième composition a été préparée selon le procédé décrit à l'exemple 1. Elle se présente sous forme de poudre de granulométrie ci-dessus mentionnée et contient 35% de carboxylméthylcellulose, 45% de farine de blé et 20% de moût de fermentation filtré concentré obtenu à partir de la fermentation de Penicillium funiculosum IMI 378536 qui contient 19 activités enzymatiques. La quatrième composition a été préparée selon le procédé décrit à l'exemple 1. Elle se présente sous forme de poudre de granulométrie ci-dessus mentionnée et contient 35% de carboxylméthylcellulose, 45% de farine de blé et 20% de moût de fermentation filtré concentré obtenu à partir de la fermentation de Penicillium funiculosum IMI 378536 qui contient 19 activités enzymatiques. 2. Mélanges Deux mélanges de 60 kg d'aliment volaille croissance sont préparés à l'aide d'une mélangeuse à pâles à axe horizontal tournant à 60 tr/mn. La durée de chaque mélange est de 2 minutes. Chaque lot mélangé est vidangé dans un bac rectangulaire avant sa mise en sacs. Un échantillon d'environ 1 kg représentatif de chaque mélange est prélevé par regroupement de 20 échantillons obtenus par quartage dans le bac rectangulaire. Voir le tableau des mélanges ci-dessous. w ww w Composition sous forme de Qté de Qté z â poudre préparation d'aliment w et taux d'incorporation enzymatiqu blanc e incorporé incorporée dans dans chaque chaque mélange mélange A Volaille ROVABIOTM EXCEL AP à 50g/T 3 g 59 998 kg croissance Composition selon l'invention 3 g 59 998 kg (55% CMC) à 50g/T B _ 2 g 39 998 k g Composition selon l'invention (35% CMC) à 50g/T C _ 2 g 39 998 kg Composition selon l'invention (35% CMC) à 50g/T p 3. Granulation Les essais de granulation sont réalisés sur une presse de laboratoire à filière plate (Presse KAHL 14-175 de 3 kW). Pour un d'aliment farine poulet de chair croissance, la filière de presse choisie pour les essais aura des canaux de 4 mm de diamètre et de 24 mm d'épaisseur (taux de compression: 6). 4. Séchage û Refroidissement Pour chaque essai de granulation, un sécheur refroidisseur de laboratoire est utilisé pour sécher et refroidir les échantillons de granulés chauds recueillis en sortie de filière. Le temps de séchage refroidissement est au minimum de 5 minutes pour une charge en granulés chauds d'environ 3.5 kg par refroidisseur. Un échantillon d'environ 500g représentatif de chaque fabrication est prélevé. 5. Mesures et prélèvements destinés au contrôle de la granulation Les mesures et les prélèvements sont réalisés pendant le régime stabilisé de la presse (débit constant, Puissance Electrique Consommée et Températures 20 stables). Les mesures d'humidités et de temps de séjour en filière sont réalisées à partir d'échantillons prélevés pendant la phase stabilisée de chaque essai. Les caractérisations et paramètres de conduite de pressage sont relevés et enregistrés pendant les essais. 6. Méthodes analytiques 6.1 33-glucanase par la méthode au DNS L'essai se base sur l'hydrolyse enzymatique de 33-glucane de l'orge, un 13-1,3(4)-glucane. Les produits de la réaction sont déterminés par colorimétrie en mesurant l'augmentation des groupes réducteurs à l'aide d'acide 3,5-dinitrosalicylique (DNS). La concentration en sucre réducteur disponible après hydrolyse enzymatique est déterminée à l'aide une courbe de glucose étalon dont l'absorbance ,est mesurée à 540 nm. L'activité enzymatique calculée est ensuite exprimée en équivalents glucose. Une solution contenant 1 ml d'une solution de 3-glucane de l'ordre à 1% (mN) dans un tampon acétate de sodium 0,1 M à pH 5,0 et 1 ml de solution de l'enzyme à la dilution appropriée est incubée à 50 C pendant 10 minutes. La réaction enzymatique est stoppée par l'ajout de 2 ml d'une solution de DNS (1% (mN) d'acide 3,5-dinitrosalicylique, 1,6% (mN) de NaOH, 30% (mN) de tartrate de potassium et sodium (+) dans de l'eau distillée). La solution est homogénéisée puis placée dans un bain-marie bouillant à 95 C minimum et ensuite refroidie dans un bain à la température ambiante (pendant 5 minutes). Dix ml d'eau ultrapure sont ajoutés à la solution et l'absorbance est mesurée à 540 nm dans une cellule en verre ayant une longueur de trajet optique de 1 cm. L'absorbance est corrigée avec celle obtenue pour une solution de référence à laquelle le DNS est ajouté avant la solution enzymatique. Les résultats sont convertis en pmoles de sucre réducteur par comparaison avec une gamme de solutions étalons allant de 0,00 à 0,04% (mN) de glucose, traitées au DNS comme dans le cas des essais. Une unité d'activité d'endo-1,3(4)-[3-glucanase est définie comme la quantité d'enzyme qui produit 1 pmole d'équivalent glucose par minute et par gramme 30 de produit, dans les conditions de l'essai (pH 5,0 et 50 C). 6.2 Xylanase par la méthode au DNS L'essai se base sur l'hydrolyse enzymatique de xylane de bouleau, un polymère de xylose contenant des ponts (3-D-1,4. Les produits de la réaction 35 sont déterminés par colorimétrie en mesurant l'augmentation des groupes réducteurs à l'aide d'acide 3,5-dinitrosalicylique. La concentration en sucre réducteur disponible après hydrolyse enzymatique est déterminée à l'aide d'une courbe de xylose étalon dont l'absorbance est mesurée à 540 nm. L'activité enzymatique calculée est ensuite exprimée en équivalents xylose. Une solution contenant 1 ml d'une solution de xylane de bouleau à 1% (m/V) dans un tampon acétate de sodium 0,1 M à pH 5,0 et 1 ml de solution de l'enzyme à la dilution appropriée est incubée à 50 C pendant 10 minutes. La réaction enzymatique est stoppée par l'ajout de 2 ml d'une solution de DNS (1% (mN) d'acide 3,5-dinitrosalicylique, 1,6% (mN) de NaOH, 30% (mN) de tartrate de potassium et sodium (+) dans de l'eau distillée). La solution est homogénéisée puis placée dans un bain-marie bouillant à 95 C minimum et ensuite refroidie dans un bain à la température ambiante (pendant 5 minutes). Dix ml d'eau ultrapure sont ajoutés à la solution et l'absorbance est mesurée à 540 nm dans une cellule en verre ayant une longueur de trajet optique de 1 cm. L'absorbance est corrigée avec celle obtenue pour une solution de référence à laquelle le DNS est ajouté avant la solution enzymatique. Les résultats sont convertis en pmoles de sucre réducteur par comparaison avec un gamme de solutions étalons allant de 0,00 à 0,04% (mN) de xylose, traitées au DNS comme dans le cas des essais. Une unité d'activité d'endo-1,4-p-xylanase est définie comme la quantité 20 d'enzyme qui produit 1 pmole d'équivalent xylose par minute et par gramme de produit, dans les conditions de l'essai (pH 5,0 et 50 C). 6.3 Xylanase par la méthode viscosimétrie Cette méthode est spécifique à la détermination de l'activité endo-1,4-(3- 25 xylanase dans les aliments. L'endo-1,4-R-xylanase hydrolyse les ponts xylosidiques du xylan. L'essai est basé sur l'hydrolyse enzymatique des ponts xylosiques d'une solution d'arabinose de blé, polysaccharide de p-1,4-xylan substitué avec de l'arabinose. L'activité enzymatique est proportionnelle à la réduction de viscosité d'une solution d'arabinoxylan de blé en présence de 30 l'enzyme à doser. Une unité d'activité d'endo-1,4-P-xylanase est définie comme la quantité d'enzyme qui hydrolysera le substrat, réduisant la viscosité de la solution, pour donner un changement de la fluidité relative de 1 unité sans dimensions par minute dans les conditions de l'analyse : pH 5,5 et 30 C. 35 Résultats des essais 1. Consignes de réglages Les consignes de régulation de la presse sont les suivantes: Débit : environ 41 kg/h Températures de traitement en sortie conditionneur : 80, 85 et 90 C 5 Températures subies en sortie de filière Pression de vapeur : 1.6 bars Réglage de la hauteur de coupe des couteaux : 10 mm 2. Bilan des activités enzymatiques A B C D Taux de CMC 0 55% 35% 35% Xylanase DNS 3810 4027 5344 5304 Xylanase visco 31053 30293 32273 31153 B-glucanase DNS 4676 5265 6300 6081 Tableau : activité enzymatique (unités/g) On constate que les différentes formulations permettent de préserver les principales activités enzymatiques de référence du concentré enzymatique 15 initial. 3. Taux de récupération en activité xylanase mesurée par viscosimétrie sur les aliments après passage en presse à différentes températures Température de traitement presse Taux de CMC 80 C 85 C 90 C A 0 76% 68% 54% B 55% 100% 85% 82% C 35% 99% 90% 81% D 35% 96% 86% 83% On constate que l'activité xylanase du produit standard (A) est affectée par la montée en température des conditions de granulation (jusqu'à 46% de pertes à 90 C). Les différentes formulations testées permettent de limiter la perte d'activité à moins de 20%. 10 20 25 Exemple 3 Objectif Etude de l'effet nutritionnel de RovabioTM Excel AP et d'une composition selon la présente invention sur la valeur d'EMAN (Energie métabolisable apparente avec correction azotée, ou AMEN) d'un aliment à base de blé chez le poulet entre 12 et 22 jours Matériel et méthodes 1. Schéma expérimental Les animaux utilisés sont des poussins mâles de souche Ross PM3. 7 régimes de 12 répétitions de 1 poulet par cage soit 84 cages au total Les essais sont réalisés en randomisation aléatoire contrôlée Les items d'essai contiennent des activités enzymatiques potentiellement 15 capables d'améliorer la digestibilité d'un aliment à base de blé et de maïs chez le poulet. Régimes 1 2 3 4 5 6 7 Bases Starter BMS (blé maïs soja) Croissais Blé mélange ce Produits Témoin Les valeurs d'activité enzymatique xylanase visco sont supérieures à la 5 recommandation de 1100 U/kg d'aliment pour les aliments sauf pour le régime 2. 2. Digestibilité de l'énergie Régimes 1 2 3 4 5 6 7 Items Témoin API Inv 1 Inv 2 AP2 Inv 3 AP3 Dose / 50 g/t 50 g/t 50 g/t 50 g/t 50 g/t 50 g/t Base Blé Moyennes 3184 a 3238 ac 3231 ac 3300 c 3280 bc 3233 ac 3200 ab AMEn* Ecart type 112,8 109,8 127,7 123,6 69,7 92,9 110,9 Cv 3,54 3,39 3,95 3,75 2,13 2,87 3,47 kcal/kg Nb 12 12 12 12 12 10 12 MS valeurs Delta 54,0 46,2 115,9 95,5 48,9 15,8 Moyennes 2913 a 2961 ac 2954 ac 3018 c 2998 bc 2958 ac 2928 ab AMEn* Ecart type 102,1 100,4 115,8 111,6 63,7 84,7 100,1 Cv 3,51 3,39 3,92 3,70 2,12 2,86 3,42 kcal/kg Nb 12 12 12 12 12 10 12 valeurs Delta 48,8 41,0 105,6 85,6 45,2 15,1 Tableau : Résultats de digestion de l'énergie par régime * : Energie matabolisable apparente Tous les items testés ont permis d'améliorer la digestibilité de l'énergie de l'aliment testé mais avec des efficacités variables Les améliorations d'AMEn sont d'un niveau modéré, atteignant +105 kcal/kg MS environ pour la composition 2 selon l'invention. 5 10 Les deux types de compositions ont eu le même effet sur I'AME mesurée. Une seconde analyse a donc été réalisée par produit. Items Témoin Excel AP Invention Dose / 50 g/t 50 g/t Base Blé Moyennes 3184 a 3244 ab 3256 b AMEn Ecart type 112,8 97,8 118,3 CV 3,54 3,02 3,63 kcal/kgMS Nb valeurs 12 48 36 Delta 59,3 71, 6 Moyennes 2913 a 2966 ab 2978 b AMEn Ecart type 102,1 88,9 107,3 CV 3,51 3,00 3,60 kcal/kg Nb valeurs 12 48 36 Delta 53,5 65,0 Tableau : Résultats de digestion de l'énergie par produit Cette seconde analyse montre que globalement les items T-Flex ont amélioré la digestibilité de l'énergie de l'aliment testé. Par contre l'amélioration obtenue avec les items Excel AP est non significative malgré une tendance forte (p=0.06). 3. Performances de croissance Régimes 1 2 3 4 5 6 7 Items Témoin API Inv 1 Inv 2 AP2 lnv 3 AP3 Dose / 50 g/t 50 g/t 50 g/t 50 g/t 50 g/t 50 g/t Base Blé Poids Moyennes 322 324 324 324 324 323 323 début Adaptation Ecart type 22,1 21,2 21,1 22,2 20,8 21,6 22,4 (g) CV 6,9 6,5 6,5 6,9 6,4 6,7 6,9 Poids fin Moyennes 663 686 685 676 681 681 675 Bilan Ecart type 79,4 65,5 50,6 50,2 40,4 45,7 35,7 (g) CV 12,0 9,5 7,4 7,4 5,9 6,7 5,3 Gain de Moyennes 341 362 361 352 356 358 352 poids J12-J22 Ecart type 62, 8 49,8 37,7 37,4 33,9 32,2 34,5 (g) CV 18,4 13,7 10,5 10,6 9,5 9,0 9,8 Conso Moyennes 665 672 674 649 656 671 658 J12-J22 Ecart type 104,6 75,0 64,7 51,7 45,9 62,6 49,8 (g) CV 15,7 11,2 9,6 8,0 7,0 9,3 7,6 IC* Moyennes 1, 96 a 1,86 b 1,87 b 1,85 b 1,85 b 1,88 b 1,87 b J12-J22 Ecart type 0,108 0, 066 0,076 0,107 0,073 0,073 0,071 CV 5,510 3,558 4,038 5,774 3,958 3,898 3, 793 Delta (%) -5,1 -4,7 -5,8 -6,0 -4,5 -4,7 Tableau : Résultats de croissance de J12 à J22 * : Indice de Consommation Contrairement à ce qui a été observé pour la digestibilité de l'énergie, les items testés ont pratiquement tous eu un effet significatif sur les performances de croissance (indice de consommation) sur la période totale d'étude (12 à 22 jours). Les compositions selon l'invention (Inv 1, Inv 2 et Inv 3) et les compositions Rovabio TM Excel AP (API, AP2 et AP3) ont apporté pratiquement la même amélioration d'indice. 5. Conclusion L'ensemble des items testés sur aliment à base de blé a eu un effet sur I'AME de l'aliment testé. Les améliorations obtenues sont modérées. Globalement les produits selon l'invention ont significativement amélioré l'AME de l'aliment. Les performances de croissance et notamment sur l'indice de consommation sur la période globale (J12-J22) ont été fortement et significativement améliorées par tous les produits. REVENDICATIONS 1. Composition thermorésistante pour animaux sous forme de poudre 5 granuleuse comprenant : a) un mélange sous forme liquide d'au moins deux enzymes, b) un support choisi dans le groupe consistant en la farine de blé, l'amidon, le gypsum, la maltodextrine et les rafles de maïs, et c) un enrobant choisi dans le groupe consistant en la cellulose et ses 10 dérivés, la chitine, la carraghénine, l'alginate de sodium, les gommes végétales, les gommes obtenues par fermentation et les amidons et dérivés. 2. Composition thermorésistante selon la revendication 1, dans laquelle le mélange sous forme liquide d'au moins deux enzymes est obtenu à partir de la 15 fermentation d'un seul microorganisme. 3. Composition thermorésistante selon la revendication 1, dans laquelle le mélange sous forme liquide d'au moins deux enzymes est obtenu à partir de la fermentation de deux microorganismes différents. 4. Composition thermorésistante selon la revendication 1, comprenant : a) de 15 à 50 % en poids dudit mélange d'au moins deux enzymes, b) de 25 à 60 % en poids dudit support, c) de 25 à 60 % en poids dudit enrobant. 5. Composition thermorésistante selon la revendication 1 ou 2, dans laquelle le mélange sous forme liquide d'au moins deux enzymes est un moût de fermentation filtré concentré obtenu à partir de la fermentation d'au moins un microorganisme. 6. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans laquelle les au moins deux enzymes sont choisies dans le groupe consistant en une xylanase, une $3-glucanase, une cellulase, une pectinase, une phytase et une protéase. 7. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans laquelle les au moins deux enzymes sont choisies dans le groupe consistant en la phytase, l'endo-1,4-Ç3-xylanase, l'a-arabinofuranosidase, la f3-xylosidase, la feruloyl 20 25 30 35estérase, I'endo-1,5 a-arabinanase, l'endo-1,3(4)-[3-glucanase, la laminarinase, l'endo-1,4-[i-glucanase, la cellobiohydrolase, la 3-glucosidase, la polygalacturonase, la pectine estérase, la rhamnogalacturonase, l'aspartic protéase, la métallo protéase, l'endo-1,4-(3-mannanase, la [3-mannosidase et l'a-galactosidase. 8. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes dans laquelle un microorganisme est Penicillium funiculosum déposé à l'IMI (International Mycological Institute, Bakeham Lane, Englefield Green, Egham, Surrey, TW20 9TY, UK) le 24 mars 1998 sous le numéro IMI 378536. 10 9. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes dans laquelle l'enrobant est la carboxyméthylcellulose ou l'éthylcellulose. 10. Composition susceptible d'être obtenue par le procédé comprenant 15 les étapes suivantes : a) coséchage des composés suivants : - un support choisi dans le groupe consistant en la farine de blé, l'amidon, le gypsum, la maltodextrine et les rafles de maïs, et - un mélange sous forme liquide d'au moins deux enzymes, 20 de façon à obtenir une base intermédiaire, b) granulation par imprégnation de la base intermédiaire avec un enrobant choisi dans le groupe consistant en la cellulose et ses dérivés, la chitine, la carraghénine, l'alginate de sodium, les gommes végétales, les gommes obtenues par fermentation et les amidons et dérivés, 25 c) enrobage de la base intermédiaire imprégnée avec un enrobant choisi dans le groupe consistant en la cellulose et ses dérivés, la chitine, la carraghénine, l'alginate de sodium, les gommes végétales, les gommes obtenues par fermentation et les amidons et dérivés, et d) séchage. 30 11. Additif nutritionnel pour animaux sous forme de poudre granuleuse comprenant : a) un mélange sous forme liquide d'au moins deux enzymes, b) un support choisi dans le groupe consistant en la farine de blé, 35 l'amidon, le gypsum, la maltodextrine et les rafles de maïs, et c) un enrobant choisi dans le groupe consistant en la cellulose et ses dérivés, la chitine, la carraghénine, l'alginate de sodium, les gommes végétales, les gommes obtenues par fermentation et les amidons et dérivés.5 12. Additif nutritionnel pour animaux sous forme de poudre granuleuse selon la revendication 11 caractérisé en ce que le mélange sous forme liquide d'au moins deux enzymes est obtenu à partir de la fermentation d'un seul microorganisme. 1342. Aliment pour animaux caractérisé en ce qu'il comprend une base nutritionnelle pour animaux et un additif nutritionnel selon la revendication 11 ou 12. 14. Utilisation d'un enrobant choisi dans le groupe consistant en la 10 cellulose et ses dérivés, la chitine, la carraghénine, l'alginate de sodium, les gommes végétales, les gommes obtenues par fermentation et les amidons et dérivés pour préparer un additif nutritionnel pour animaux selon la revendication 12. 15. Utilisation selon la revendication 14, selon laquelle l'enrobant est la 15 carboxyméthylcellulose.5