FR 2919605 A1 20090206 FR 0756812 A 20070730 La présente invention a pour objet le domaine technique des compositions cosmétiques, dermatologiques et pharmaceutiques comprenant un agent antioxydant. Les plantes du genre Radamaea ont le positionnement botanique suivant : embranchement : Angiospermes; classe: Magnoliopsida ; sous classe : Asteridae ; ordre : Scrofulariales; famille : Scrofulariaceae. Au sein du genre Radamaea, l'espèce montana peut être identifiée grâce à certains traits morphologiques généraux: arbrisseau vivace, à rameaux légèrement pubescents ; feuilles vertes elliptiques, entières, à sommet arrondi et apiculé, à base atténuée. Les plantes appartenant à l'espèce Radamaea montana appartiennent au genre Radamaea, genre endémique de Madagascar et dédié à Radama 1er par Bentham, botaniste anglais. Le genre comprend 5 espèces : Radamaea latifolia (Bonati), Radamaea montana (Benth) Radamaea perrieri (Bonati), Radamaea prostrata (Benth) et Radamaea rupestris (Bonati). Rabesa et collaborateurs (1993) soulignent dans la pharmacopée de l'Ambongo et du Boina PATROA AMIN'NY TAREHIN'NY MANANGY que la poudre de la racine, en macération, est utilisée sous forme de masque facial par les femmes. La pharmacopée a été éditée par le Centre d'information et de Documentation Scientifique et Technique d'Antananarivo page 500. Néanmoins, l'activité de tels extraits n'a jamais été mise en évidence. De plus, la forme sous laquelle l'extrait est utilisé est totalement inappropriée et même incompatible avec un usage cosmétique normal. En effet, le produit de macération obtenu présente une coloration marron foncé pour les feuilles et jaune marron foncé pour les graines et les racines et une forte odeur d'extrait végétal dans tous les cas. La concentration de l'extrait présent dans le produit de macération présente une couleur trop intense, non acceptable pour un produit cosmétique. L'invention a plus particulièrement pour objet une composition adaptée à une application topique, à activité anti-radicalaire, antioxydante, en matière de 30 protection de la peau ou de prévention du vieillissement cutané qui utilise un extrait de Radamaea montana ou un ou plusieurs principes actifs contenus dans un tel extrait. Dans le cadre de l'invention, les inventeurs ont mis en évidence que les extraits de Radamaea montana présentaient des propriétés anti-radicalaires et de ce fait des propriétés anti-oxydantes. Dans ce contexte, la présente invention a pour objet l'utilisation d'un extrait de Radamaea montana pour la préparation d'une composition cosmétique, dermatologique ou pharmaceutique, l'extrait de Radamaea montana étant utilisé en tant qu'agent anti-oxydant. L'invention a également pour objet des compositions cosmétiques, dermatologiques ou pharmaceutiques comprenant un extrait de Radamaea 10 montana utilisé en tant qu'agent anti-oxydant. Dans le cadre de l'invention, les inventeurs ont également mis en évidence que les extraits de Radamaea montana présentaient une activité inhibitrice de la tyrosinase. Or, la tyrosinase est connue pour être une enzyme clé de la biosynthèse de la mélanine, elle est même impliquée dans différentes pathologies 15 dermatologiques, comme l'apparition de taches de vieillesse, de marques dues à l'acné, de l'hyperpigmentation, ou encore dans le processus naturel de bronzage (Y. -J. Kima and H. Uyamab ; Tyrosinase inhibitors from natural and synthetic sources: structure, inhibition mechanism and perspective for the future ;, CO. Mol. Life Sci. 62 (2005) 1707-1723). Autant dire que l'inhibition de cette enzyme a 20 de vastes applications en dermatologie ou en cosmétique ce qui rend particulièrement intéressant les composés naturels ou d'extraits végétaux inhibiteurs de la tyrosinase. Cette enzyme est donc impliquée dans un processus d'oxydation enzymatique entraînant la polymérisation de la mélanine et donc l'apparition d'une pigmentation naturelle ou pathologique (Jung-Hee Hwang and 25 Byung Mu Lee ; Inhibitors of Tyrosinase and Melanin Synthesis. Journal of Toxicology and Environmental Health, Part A, 70: 393-407, 2007). Les compositions selon l'invention sont, entre autres, destinées à des traitements de la peau, entre autres pour lutter contre son vieillissement, pour l'obtention d'un effet réparateur ou protecteur, pour lutter contre l'apparition de 30 taches de vieillesse, de marques dues à l'acné, ou pour lutter contre l'hyperpigmentation, ou encore dans des compositions blanchissantes. En particulier, l'extrait cellulaire de Radamaea montana permet de lutter contre l'oxydation des lipides de la peau. Les compositions cosmétiques, dermatologiques ou pharmaceutiques selon l'invention peuvent notamment être des compositions anti-radicalaires, des compositions pour prévenir le vieillissement cutané, des compositions pour la protection solaire, des compositions de soin après exposition solaire, des shampoings réparateurs anti-radicalaires, des masques capillaires, des crèmes de jour protectrices, des crèmes pour lutter ou atténuer des phénomènes d'hyperpigmentation de la peau ou des crèmes pour obtenir un blanchiment ou éclaircissement de la peau. L'invention vise donc l'utilisation d'un extrait de Radamaea montana, en tant qu'agent anti-oxydant, et éventuellement en tant qu'inhibiteur de la tyrosinase, dans des compositions cosmétiques, pharmaceutiques ou dermatologiques, ou encore, formulée autrement l'utilisation d'un extrait de Radamaea montana, pour la fabrication de compositions cosmétiques, pharmaceutiques ou dermatologiques anti-oxydantes, et éventuellement destinée à inhiber l'activité de la tyrosinase. De telles compositions peuvent, par exemple, être utilisées pour prévenir le vieillissement cutané, pour la protection solaire, pour lutter ou atténuer des phénomènes d'hyperpigmentation de la peau ou encore pour obtenir un blanchiment ou éclaircissement de la peau. L'extrait utilisé est un extrait cellulaire de la plante qui peut être préparé selon toute méthode connue de l'homme du métier pour extraire des composés des tissus végétaux. L'extrait peut être obtenu à partir des racines, des feuilles, des tiges, des fruits, des graines et/ou des fleurs. De façon avantageuse, l'extrait sera issu des feuilles ou des graines, dont l'utilisation n'entraîne pas la mort de la plante dont elles sont extraites. De plus, les extraits des feuilles ou graines sont particulièrement actifs. A titre d'exemples de méthodes d'extraction, on peut citer les méthodes classiques d'extraction en solvant à chaud ou à froid, la macération, la lixiviation, la cryoextraction, les extractions par le CO2 supercritique, seul ou en mélange avec un co-solvant les extractions utilisant un rayonnement ondulatoire, tel que les micro-ondes ou les ultrasons. Ces méthodes peuvent être combinées à une étape ultérieure de purification, filtration, concentration et/ou séchage. De façon avantageuse, l'extrait utilisé est obtenu par extraction avec un solvant choisi parmi l'eau, les alcools, les alcanes, les cétones, les esters, les éthers, les polyols, les solvants chlorés et les mélanges d'au moins deux des 4 solvants précités. En particulier, l'extraction pourra être réalisée à l'aide d'un solvant, tel qu'un solvant alcoolique choisi parmi l'éthanol ou le méthanol ou encore le polyéthylène glycol ou le chloroforme. Un solvant tel que précédemment cités est particulièrement préféré pour l'extraction à partir des graines et/ou des feuilles de la plante. Dans le cas d'une extraction par solvant, par exemple, on peut procéder de la façon suivante : la partie de la plante sélectionnée est récoltée. Cette partie de la plante dont l'extrait est souhaitée, qui peut se trouver sous forme fraîche ou sèche, est broyée et/ou déchiquetée dans le solvant sélectionné, puis laissée à macérer, de préférence sous agitation, dans le solvant, de préférence pendant 1 heure à 30 jours. De façon avantageuse, on utilisera un rapport massique partie de la plante sur solvant compris entre 1/1 et 1/10 (m/m). L'extraction peut être réalisée à une température comprise entre -10 et 70 C, et notamment entre 18 et 60 C ou à reflux du solvant d'extraction utilisé. L'extraction peut également être réalisée par lixiviation. L'extrait obtenu peut alors être concentré, ou séché, par exemple par évaporation ou lyophilisation. L'extrait obtenu peut être incorporé tel quel à la composition ou bien être purifié, traité ou fractionné, de façon à enrichir en principe actif recherché. En particulier, l'extrait utilisé sera riche en flavonoides et dérivés et/ou en xantones et dérivés et/ou apocaroténoides. Les extraits de feuilles obtenus contiennent une proportion importante de flavonoides et xanthones. En particulier les composés suivants sont présents dans les feuilles : - 6-C-glucosyl-apigénine (isovitexine, CAS : 38953-85-4) de formule (I) : (I)25 8-C-glucosyl-apigénine (vitexine, CAS : 3681-93-4) de formule (II) : OH HO HO HO OH oH o (II) 2-C-8-D-glucopyranosyl-1,3,6,7-tetrahydroxyxanthone (mangiférine, CAS : 4773-96-0) de formule (III) : OH OH OH O (III) -1,3,6,7-tetrahydroxyxanthone (CAS : 3542-72-1) de formule (IV) : HO g 4, 0 4b OH 8b OH OH O - amentoflavone (CAS :1617-53-4) de formule (V) : OH OH O (V) -1,3,6,7-tétrahydroxy-8-prénylxanthone (CAS : 70786-45-7) de formule (VI) : OH OH OH O H3C CH3 13 14 (VI) - pyranoamentoflavone (CAS : 145701-10-6) de formule (VII) : O 1r/ 3^' OH 0 (VII) - 7"-O-méthylamentoflavone (sotetsuflavone, CAS : 2608-21-1) de formule (VIII) : (VIII)15 6"-(2-hydroxy-3-méthyl-3-butenyl)-amentoflavone (CAS : 199181-95-8) de formule (IX) : H2C CH3 OH O 12" 13" Les extraits de racines ou de graines obtenus contiennent une proportion 10 importante d'apocaroténoides. En particulier, les composés suivants sont présents dans les racines et dans les graines : - acide 13-(1,2-dihydroxy-2,6,6ùtriméthylcyclohexyl)-2,7,11-triméthyl (2E,4E,6E,8E,10E,12E)-tridecahexanoique (CAS : 64803-86-7) de formule (X) : OH 15 (X) - acide 17-(1,2-dihydroxy-2,6,6ùtri méthylcyclohexyl)-2,6,11,15-tetraméthyl (4E,6E,8E,10E,12E,14E,16E)-heptadecahexanoique (composé nouveau) de formule (XI) : OH 20 (XI) -13[(1R,2R)]-1,2-dihydroxy-2,6,6ûtriméthylcyclohexyl]-2,7,11-triméthyl (2E,4E,6E,8E,10E,12E)-tridecahexaenal (CAS : 57951-41-4) de formule (XII) : - acide 17-(1,2,4-trihydroxy-2,6,6ûtri méthylcyclohexyl)-2,6,11,15-tetraméthyl (4E,6E,8E,10E,12E,14E,16E)-heptadecahexanoique (composé nouveau) de formule (XIII) : (XIII) 10 De façon préférée, l'extrait utilisé comprend au moins un composé (I) à (XIII) ci-dessus. La présente invention a également pour objet les compositions cosmétiques, dermatologiques ou pharmaceutiques comprenant un ou plusieurs des composés (I) à (XIII) listés précédemment, obtenu par synthèse chimique ou 15 par isolement à partir d'un extrait organique de Radamaea montana. Les composés (XI) et (XIII) ci-dessus sont nouveaux et font partie intégrante de l'invention. Ils pourront être utilisés pour leurs propriétés anti-radicalaires et anti-oxydantes, leur obtention pouvant se faire par synthèse chimique ou par isolement à partir d'un extrait organique ci-dessus. 20 Pour former la composition selon l'invention, l'extrait de Radamaea montana est introduit dans un milieu physiologiquement acceptable contenant un support ou au moins un excipient physiologiquement acceptable. Le support peut être constitué d'eau et/ou d'au moins un solvant organique dans les proportions adéquates. Les excipients physiologiquement acceptables sont notamment définis 25 par la pharmacopée européenne. Ils peuvent, par exemple faciliter la pénétration de l'extrait au niveau de la peau.5 De façon avantageuse, la composition selon l'invention comprend, de préférence, de 0,00001% à 10% (m/m) préférentiellement de 0,0001% à 1% (m/m) d'extrait de Radamaea montana, ce pourcentage correspondant à un pourcentage massique donné en équivalent d'extrait sec. Dans le cas, où la composition comprend à la place d'un extrait de Radamaea montana, un ou plusieurs des composés (I) à (XIII) listés précédemment, obtenu par synthèse chimique, le composé actif ou l'ensemble de ces composés actifs représente, de préférence, de 0,00001% à 10% (m/m), préférentiellement de 0,0001% à 1% (m/m) de la composition. En particulier, la composition se présente sous une forme galénique choisie parmi les émulsions biphasiques huile dans eau, eau dans huiles, les émulsions triphasiques, les lotions, les laits, les gels, les hydrogels, les crèmes, les pommades, les savons, les shampoings, les onguents et les produits à pulvériser. L'extrait Radamaea montana peut, notamment, être incorporé à la composition sous forme sèche obtenue par évaporation, atomisation ou lyophilisation, sous forme liquide ou sous forme encapsulée ou associée à des vecteurs sélectionnés parmi les liposomes, macro-, micro- et nanoparticules, macro-, micro- et nanocapsules, talcs, bentonites et autres supports minéraux. Dans les compositions selon l'invention, l'extrait de Radamaea montana peut être combiné à un ou plusieurs additifs sélectionnés parmi les lipides, les épaississants, les tensioactifs, les émulsifiants, les gélifiants, les viscosifants, les conservateurs, les extraits de plantes, les extraits tissulaires, les agents hydratants, les agents pigmentants ou dépigmentants, les émollients, les extraits marins, des principes actifs d'origine synthétique. On peut citer : - parmi les gélifiants, la gomme xanthane, les carboxyvinyl polymères tel que l'Ultrez IOTM ou leurs sels de triéthanolamine comme le Carbomer û TEATM, - parmi les épaississants, l'alcool cétylique, le palmitate de cétyle ou les alcools cétostéaryliques comme le Sténol C7 ou le Sipol C16, C18, C7, - parmi les conservateurs, le phénoxyéthanol, le méthyl-paraben, le propyl- paraben, I'EDTA trisodique, le benzoate de sodium, - parmi les émulsifiants, le stéarate de glycérol, le sucrose sesquistéarate, le Polysorbate 60, le Arlacel 60, Arlacel 165, Tween 60, Span 60, PEG 20, Méthylglucose sesquistéarate, PEG 20 oleyl éther, û parmi les émollients, les triglycérides capriques et capryliques, le méthyl polysiloxane, l'octyl dodécanol, l'isononyl isononanoate. La composition peut encore comprendre d'autres ingrédients communément utilisés pour la formulation des produits cosmétiques, par exemple un véhicule tel que l'huile de vaseline, ou l'huile de tournesol oléique, un agent humectant tel que la glycérine ou le butylène glycol, un neutralisant tel que la triéthanolamine, un complexant tel que l'EDTA disodique et trisodique ou encore un agent de consistance tel que le stéarate de glycol. Le ou les autres principes actifs qui peuvent être contenus dans la composition, sont choisis en fonction de l'application recherchée pour la composition considérée. Ces principes actifs complémentaires peuvent être, en particulier, choisis parmi les agents drainants tel qu'un extrait de Lierre grimpant, les agents raffermissants tel qu'un extrait de Kigelia Africana, les agents antiirritants tel que le stéarate glycerrhétinique, les filtres anti-UV tels que les alkylbenzoate de 12 à 15 atomes de carbones, l'acide octyl-méthoxycinnamique, l'acide octylsalicylique ou le butyl-méthoxydibenzoyl-méthane, les antiinflammatoires comme l'a-bisabolol. La composition pourra contenir un extrait obtenu à partir des feuilles, des graines ou des racines d'une plante de l'espèce Radamaea montana, associé avec des graines de sésames, de l'arachide ou du lait de coco. Les quantités de ces différents additifs et adjuvants sont celles classiquement 25 utilisées et seront adaptées en fonction de la composition cosmétique souhaitée et de sa forme galénique. A titre illustratif et non limitatif, sont décrits ci-après, en référence aux Figures annexées, différents procédés pouvant être mis en oeuvre pour la réalisation de différents extraits de plantes de l'espèce Radamaea montana. 30 Les Figures 1 et 11 montrent schématiquement des protocoles d'extraction. Les Figures 2 à 10 et 12 à 15 donnent sous la forme de tableau les données RMN 1H ou 13C de différents composés isolés à partir d'extraits de Radamaea montana. Les analyses HPLC sont réalisées grâce à un système Waters (600E) couplé avec une barrette d'iode (Waters 991), en utilisant une phase inverse en C18 et en appliquant les conditions expérimentales suivantes: - une colonne "phase inverse (phase stationnaire lipophile) C18": particules 5 de silice (diamètre 5pm) greffées par des chaînes hydrocarbures en C18 ; diamètre intérieur 4,6 mm, longueur 25 cm; - un éluant de lipophilie croissante: mélange de: Solvant A : H20 + 2% d'acide acétique Solvant B : acétonitrile (CH3CN) /H20 8/2 + 2% d'acide acétique 10 Débit : 1ml /min Détection UV: À max fixé à 340nm Le programme d'élution est le suivant : Flux total de solvants A+B : 1ml/min Temps (min) % B dans A 0 20 20 40 35 80 50 80 55 20 65 20 La MPLC est effectuée sur un système de Büchi équipé d'une pompe B-688 15 couplée à un programmeur du gradient B-687, avec une colonne (46 x 2,6 cm) et une pré-colonne (11 x 1,5cm). La phase stationnaire utilisée est la phase Lichroprep RP18 (15-25pm; Merck), avec un gradient de MeOH dans l'eau et/ou Acétonitrile dans l'eau. Les spectres de masse ont été obtenus sur un spectromètre de Hewlett-20 Parkard 1100MSD. La technique d'ionisation utilisée est l'electrospray (en mode de positif le plus souvent). Les spectres RMN 1D et 2D (HSQC, HSQC-TOCSY, HMBC) sont réalisés dans le DMSO, à l'aide d'un spectromètre RMN de Bruker Advence DRX 500. Les séries spectrales UV, sont réalisées à l'aide d'un spectrophotomètre 25 UV/Vis, Agilent 8453, et selon les protocoles publiés par Mabry et al., en 1970 pour l'indentification des flavonoïdes. (Mabry, T.J.M., Markham, K.R., Thomas, M.B., 1970. The systematic identification of flavonoïds. Springer Verlag, Berlin & New York). I- Extraction et Isolement des composés de feuille I-1-Extraction Extraction Nombre Solvant Volume(ml) Durée(h) Résidus d'extraction sec(g) A froid 2 CHCI3 2000 4 27,6 Feuille sous (400g) agitation A chaud 2 EtOH 2400 0,15 90 sous reflux 80% Chacun des deux types d'extrait est amené à sec et repris par un faible 10 volume de méthanol. I-2-Méthodes préparatives d'isolement des composés présents dans l'extrait de feuille La purification et la détermination structurale des composés présents dans l'extrait ont été effectuées selon un protocole expérimental classique d'extraction, 15 de séparation et de purification dont les étapes sont résumées à la Figure 1. I-2-1-Séparation préliminaire Seul l'extrait éthanolique a été purifié. I-2-1-1-Fractionnement sur colonne Un fractionnement de l'extrait éthanolique 80% de feuille (6g) a été réalisé 20 par chromatographie sur colonne ouverte de sephadex LH2O (69 x 4 cm) dans le MeOH. 26 fractions ont été récupérées selon leur fluorescence en lumière de Wood. Après contrôle en HPLC et CCM sont sélectionnées les fractions 9 à 16 et 22 à 23. I-2-1-1-a-Rechromatographie et purification finale 25 Fractions 9 â 11 Par CCM de polyamide DC6 dans le toluèneMeOH-méthyléthylcétone (2-4-4) avec 10 plaques, 14 mg de composé 8-C-glucosyl-apigénine et 1 mg du composé 6-C-glucosyl-apigéniine ont été récupérés. LA 6-C-GLUCOSYL-APIGENINE (ISOVITEXINE) DE FORMULE (I) : OH présente les caractéristiques suivantes ayant permis son identification : Fluorescence sous UV à 365nm : Brun-violet Rf sur polyamide DC6 dans le toluèneMeOH-méthyléthylcétone (2-4-4) : Temps de rétention en HPLC sur une colonne C18 à 340nm : 18,54' Série spectrale UV :MeoH 271nm, 336nm AICI3 262nm, 278nm, 352nm, 382nm AICI3+HCI 260nm, 280nm, 344nm, 380nm NaOAc 279nm, 303nm, 385nm NaOAc +H3B03 , 274nm, 346nm, 408nm NaOH 278nm, 329nm, 398nm MS m/z :433 [M+Hr Les données RMN du proton et du carbone 13C sont présentées dans le tableau 1 Figure 2. La 8-C-glucosyl-apigénine (vitexine) de formule (II) : OH OH 5 OH (II) présente les caractéristiques suivantes ayant permis son identification : 20 Fluorescence sous UV à 365nm : Brun-violet Rf sur polyamide DC6 dans le toluène- MeOH- méthyléthylcétone (2-4-4) : Temps de rétention en HPLC sur une colonne C18 à 340nm : 18,54' HO HO 5 OH 0 (I) O Série spectrale UV :MeoH 270nm, 336nm AICI3 277nm, 305nm, 350nm, 386nm AICI3+HCI 278nm, 303nm, 343nm, 383nm NaOAc 280nm, 300nm, 379nm NaOAc +H3BO3 271nm, 329nm, 344nm NaOH 279nm, 329nm, 395nm MS m/z :433 [M+H]+ Les données RMN du proton et du carbone 13C sont présentées dans le tableau 2 Figure 3. Fractions 12 et 13 (225mg) Après chromatographie sur une colonne de MPLC C18 15-25pm (46 x 1,5cm avec gradient de 0% à 100% de MeOH dansl'H20), le composé 2-C-P-D-g lucopyranosyl-1,3,6,7-tetrahydroxyxanthone a été récupéré par cristallisation dans la fraction 10 (6mg) et dans la fraction 11(4mg). La 2-C-fl-D-glucopyranosyl-1,3,6,7-tetrahydroxyxanthone (mangiférine) de formule (III) : OH présente les caractéristiques suivantes ayant permis son identification : Fluorescence sous UV à 365nm : Jaune vif Rf sur polyamide DC6 dans le toluène- MeOH-méthyléthylcétone (2-4-4) : 0,16 Temps de rétention en HPLC sur une colonne C18 à 340nm : 14,69' Série spectrale UV :MeoH AICI3 AICI3+HCI NaOAc NaOAc +H3B03 NaOH MS m/z : 423 [M+H]+ 241nm, 257nm, 315nm, 366nm 236nm, 265nm, 357nm, 388nm 237nm, 266nm, 345nm, 413nm 240nm, 380nm 260nm, 312nm, 372nm 240nm, 271nm, 304nm, 390nm Les données RMN du proton et du carbone 13C sont présentées dans le tableau 3 Figure 4. Fraction 16 :(I53mg) Par CCM de polyamide DC6 dans le toluèneMeOH-méthyléthylcétone (2-4-4) avec 20 plaques de polyamide, 10mg du composé 1,3,6,7-tétrahydroxyxanthone ont été récupérés dont la purification est achevée sur colonne MPLC C18 15-25pm (23 x 1,5cm) avec gradient de 0% à 100% de MeOH dans l'H20) dans les fractions 1 à 13 (3mg). La 1,3,6,7-tétrahydroxyxanthone de formule (IV) : OH O présente les caractéristiques suivantes ayant permis son identification : 15 Fluorescence sous UV à 365nm : Jaune vif Rf sur polyamide DC6 dans le toluène- MeOH-méthyléthylcétone (2-4-4) : 0,30 Temps de rétention en HPLC sur une colonne C18 à 340nm : 24,29' MS m/z : 261 [M+H] + 20 Les données RMN du proton et du carbone 13C sont présentées dans le tableau 4 Figure 5. Fractions 22 et .13 : (I23mg) Le composé amentoflavone (4mg) a été obtenu de la fraction 22 et 23 25 après CCM de polyamide DC6 dans le toluène-MeOH-méthyléthylcétone (2-4-4) avec 15 plaques de polyamide. 30 L'amentoflavone de formule (V) : OH O présente les caractéristiques suivantes ayant permis son identification : Fluorescence sous UV à 365nm : Brun-violet Rf sur polyamide DC6 dans le toluène- MeOH- méthyléthylcétone (2-4-4) : Temps de rétention en HPLC sur une colonne C18 à 340nm: 31,15' MS m/z : 539 [M+H] + Les données RMN du proton et du carbone 13C sont présentées dans le tableau 5 Figure 6 I-2-1-2-Partage liquide-liquide Le 84 g restant de l'extrait éthanolique 80% a été dissout dans 100 ml de MeOH puis additionné avec 900 ml d'H20, ce qui nous a donné 1000 ml d'extrait. Ce dernier a été fractionné par un partage liquide-liquide. Cet extrait a été dans un premier temps partagé avec une phase apolaire Hexane, ensuite une autre phase apolaire CHCI3, puis une phase peu polaire ACOEt et enfin une phase polaire BuOH. Après évaporation des solvants, ce partage a permis d'obtenir quatre fractions de polarité croissante: Hexane, CHCI3, ACOET et BuOH. Solvant Volume pour Nombre Phase liquide obtenue Résidus chaque d'affrontements sec(g) affrontement(l) 84 g Hexane 3 4 -phase hexanique 0,10 d'extrait CHCI3 3 4 -phase chloroformique-étanolique phase methanolique + 0,24 dissouts acétonephase chloroformique +H20 dans dans 1 le BuOH Litre de AcOEt 3 4 -interphase d'AcOEt repris 4 par MeOH solvant -phase d'AcOEt repris par acétone 16 (V) (MeOH/H2 0=9/1) BuOH -phase butanolique 11 3 4 I-2-1-2-a-Séparation par fractionnement L'exploration des extraits hexanique, chloroformique et butanolique n'a révélé aucun composé intéressant, et seul l'extrait d'AcOEt soumis à des 5 expérimentations supplémentaires. Les 4 g du résidu de la phase d'AcOEt ont été fractionné sur colonne MPLC C18 15-25pm avec un gradient de 50% à 100% de MeOH dans le CHcI3. 42 fractions ont été récupérées selon leur fluorescence en lumière de Wood. Après contrôle en HPLC et CCM sont sélectionnées les fractions 13 à 18. 10 I-2-1-2-b-Rechromatographie et purification finale Fraction 13: (I7mg) Par CCM de polyamide DC6 dans le toluène- MeOHméthyléthylcétone (2-4-4) sur 16 plaques, nous avons récupéré I7mg du composé 1,3,6,7-tetrahydroxyxanthone-8-C-prénylxanthone dont la purification est enfin 15 obtenue sur colonne de MPLC C18 15-25pm (46 x 1,5cm avec gradient de 30% à 100% de MeOH dans H20) dans la fraction 5 de celle-ci (2mg). La 1,3,6,7-tétrahydroxyxanthone-8-prenylxanthone de formule (VI) : HO 3 4. O 4b OH $b 8 ' OH OH O H3C CH3 13 14 (VI) 20 présente les caractéristiques suivantes ayant permis son identification : Fluorescence sous UV à 365nm : Jaune vif Rf sur polyamide DC6 dans le toluène- MeOH-méthyléthylcétone (2-4-4) : 0,52 Temps de rétention en HPLC sur une colonne C18 à 340nm : 39,03' 25 MS m/z : 329 [M+H] + Les données RMN du proton et du carbone 13C sont présentées dans le tableau 6 Figure 7. Fractions .14 et .15:(2g) Après CCM de polyamide DC6 dans le toluène-MeOH-méthyléthylcétone (2-4-4) sur 21 plaques, sont récupérés 67mg du composé pyranoamentoflavone, dont la purification s'est poursuivie sur colonne de sephadex LH2O (23 x 1,5) dans le MeOH. Pyranoamentoflavone se retrouvant dans les fractions 10 et 11(22mg) de celle-ci, sa purification ultime est enfin achevée sur colonne de MPLC C18 15-25 pm (23 x 1,5cm avec un gradient de 30% à 100% de MeOH dans H20) dans les fractions 14, 15 et 16(6mg). La pyranoamentoflavone de formule (VII) : OH 0 (VII) présente les caractéristiques suivantes ayant permis son identification : Fluorescence sous UV à 365nm : Brun-violet MeOH-méthyléthylcétone (2-4-4) : Rf sur polyamide DC6 dans le toluène- 0,81 Temps de rétention en HPLC sur une colonne C18 à 340nm : 42,69' Série spectrale UV :MeoH 272nm, 310nm, 342nm AICI3 260nm, 299nm, 327nm, 377nm AICI3+HCI 260nm, 300nm, 327nm, 370nm NaOAc 278nm, 293nm, 361nm NaOAc +H3B03 275nm, 310, 346nmnm NaOH 276nm, 315nm, 395nm MS m/z : 605 [M+H]+ Les données RMN du proton et du carbone 13C sont présentées dans le tableau 7 Figure 8. Fraction .16 : (337mg) Lors d'une chromatographie sur colonne de sephadex LH2O (30 x 2cm) dans le MeOH, le composé 7"-O- Methylamentoflavone (sotetsuflavone) était resté sur la colonne (il ne se dissolvait pas dans le MeOH). Après récupération du résidu sur la colonne (182mg), la purification est faite sur colonne MPLC C18 15-25pm (23 x 1,5cm avec gradient de 30% à 100% de MeOH dans H20). Le composé 7"-O-méthylamentoflavone (sotetsuflavone) s'est retrouvé dans toutes les fractions (45mg). La 7"-O-méthylamentoflavone (sotetsuflavone) de formule (VIII) : H3C ~.. OH 0 (VIII) présente les caractéristiques suivantes ayant permis son identification : Fluorescence sous UV à 365nm : Brun-violet Rf sur polyamide DC6 dans le toluène- MeOH- méthyléthylcétone (2-4-4) 0,81 Temps de rétention en HPLC sur une colonne C18 à 340nm : 35,28' Série spectrale UV :MeoH 271nm, 339nm AICI3 278nm, 299nm, 348nm, 389nm AICI3+ HCI 281nm, 300nm, 343nm, 388nm NaOAc 272nm, 382nm NaOAc +H3B03 273nm, 393nm NaOH 273nm, 393nm NaOH après 5' MS m/z : 553 [M+H] + Les données RMN du proton et du carbone 13C sont présentées dans le tableau 8 Figure 9 Fractions 17 et 18 :( 244mg) Par une colonne de sephadex LH2O (30 x 2cm) dans le MeOH, le composé 6"-(2-hydroxy-3-méthyl-3-butényl) amentoflavone se trouvait dans les fractions 14 à 18 (82mg). Sa purification est poursuivie par CCM de polyamide DC6 dans le toluèneMeOH-méthyléthylcétone (2-4-4) avec 35 plaques. Nous avons récupéré 17mgdont la purification est enfin achevée sur colonne MPLC C18 15-25pm (23 x 1,5cm avec gradient de 0% à 100% de MeOH dans H20 dans les fractions 9 à 16(3mg). La 6"-(2-hydroxy-3-methyl-3-butenyl) amentoflavone de formule (IX) : OH (IX) présente les caractéristiques suivantes ayant permis son identification : Fluorescence sous UV à 365nm : Brun-violet Rf sur polyamide DC6 dans le toluène- MeOH- méthyléthylcétone (2-4-4) : 0.21 15 Temps de rétention en HPLC sur une colonne C18 à 340nm : 37,93' MS m/z : 623 [M+H] + Les données RMN du proton et du carbone 13C sont présentées dans le tableau 9 Figure 10. 20 II- Extraction et Isolement des composés de racine II-1-Extraction (lixiviation) Solvant Volume(l) Résidus sec(g) Racine Dichlorométhane 71 9,007 (610g) MeOH 151 33,930 H3C CH3 OH 12" 13"10 Chacun des deux types d'extrait est amené à sec et repris par un faible volume de méthanol. Il-2-Méthodes préparatives d'isolement des apocarotenoïdes La purification et la détermination structurale des apocarotenoïdes ont été effectuées d'après le protocole expérimental présenté sur Figure 11. II-2-1-Séparation préliminaire Après contrôle en HPLC et CCM, il ressort que les 2 extraits 10 (dichlorométhanique et méthanolique) ont les mêmes contenus et ont été réunis, pour donner un extrait de 42,937g. II-2-1-1-Séparation par fractionnement L'ensemble de deux extraits (42,937g) a été fractionné par une VLC C18 (15- 15 25pm) successivement dans l'Hexane, dans I'ACOET et dans le MeOH. Cette VLC a permis un fractionnement du bloc en 27 fractions regroupées de la façon suivante, après contrôle en HPLC et CCM en 15 fractions. Fractions Résidus sec regroupées A 2+3 42mg B 4+5+6 180mg C 7+8 288mg D 9 110mg E 10 181 mg F 11 292mg G 12+13+14 753mg H 15 _ 300mg I 16 319mg 3 17+18 2,619g K 19 2,453g L 20 606mg M 21+22 210mg N 23+24 3,001g 0 25+26+27 23,44g 20 II-2-1-1-a-Rechromatographie et purification finale Fraction J (2,619g): Après chromatographie sur une colonne de MPLC Ci8 15-25pm (46x1,5cm avec gradient de 50% à 100% de MeOH dans l'H2O) l'acide 13-(1,2-dihydroxy-2,6,6ùtriméthylcyclohexyl)-2,7,11-tri méthyl(2E,4E,6E,8E,10E,12E) tridecahexanoique ( formule X) (777mg) a cristallisé dans la fraction 42 et l'acide 17-(1,2-dihydroxy-2,6,6ùtriméthylcyclohexyl)-2,6,11,15-tetraméthyl(4E,6E, 8E,10E,12E,14E,16E) heptadecahexanoique (formule XI) (69,84 mg) dans les fractions 60 à 65. L'acide 13-(1,2-dihydroxy-2,6,6ùtriméthylcyclohexyl)-2,7,11-triméthyl(2E,4E,6E,8E, 10E,12E)-tridecahexanoique de formule (X) : 0H (X) présente les caractéristiques suivantes ayant permis son identification : Fluorescence : Jaune -orange Temps de rétention en HPLC sur une colonne C18 à 254nm, 300nm et 400nm : 20.61' MS m/z : 401 [M+H] Les données RMN du proton et du carbone 13C sont présentées dans le tableau 10 Figure 12. L'acide 17-(1,2-dihydroxy-2,6,6ùtriméthylcyclohexyl)-2,6,11,15-tetraméthyl(4E,6E, 8E,10E,12E,14E,16E)-heptadecahexanoique de formule (XI) : OH (XI) présente les caractéristiques suivantes ayant permis son identification : Fluorescence : Rouge -orange Temps de rétention en HPLC sur une colonne C18 à 254nm, 300nm et 400nm : 23,71' MS m/z : 467 [M+H]+ Les données RMN du proton et du carbone 13C-sont présentées dans le tableau 11 Figure 13. Un autre composé nommé RP8, présent dans les fractions 50 à 53 a été purifié en MPLC C18 15-25iam (46 x 1,5cm avec gradient de 50% à 100% d'acétonitrile dans l'H2O) 1,63mg ont été récupérés dans les fractions 13 à 16. Fraction G(753mg) : Une chromatographie sur colonne de MPLC C18 15-25pm (46x1,5cm avec gradient de 50% à 100% de MeOH dans l'H2O) a permis de récupérer 3mg de 13[(1R,2R)]-1,2-dihydroxy-2,6,6ùtriméthylcyclohexyl]-2,7,11-triméthyl(2E, 4E,6E,8E,10E,12E) tridecahexaenal dans la fraction 14. Le 13[(1R,2R)-1,2-dihydroxy-2,6,6 triméthylcyclohexyl]-2,7,11-triméthyl(2E,4E,6E,8E,10E,12E) -tridecahexaenal, de formule (XII) : (XII) présente les caractéristiques suivantes ayant permis son identification Fluorescence : Jaune -orange Temps de rétention en HPLC sur une colonne C18 à 254nm, 300nm et 400nm : 7,16' MS m/z : 385 [M+H] Les données RMN du proton et du carbone 13C sont présentées dans le tableaul2 Figure 14. Fraction N(3,001g): Après une chromatographie sur colonne de MPLC C18 15-25pm (46 x 1,5cm avec gradient de 50% à 100% de MeOH dans l'H2O) un composé nommé RP10 a été présent dans la fraction 23. Sa purification a été poursuivie sur une colonne ouverte de cellulose microcristalline (36 x 2,5cm avec gradient de chloroforme 50% à 100% dans l'éther de pétrole), le composé RP10 se retrouvant dans les fractions 5 et 6 de celle-ci. La purification est enfin achevée sur colonne MPLC C18 15-25pm (23 x 1,5cm avec gradient de 0% à 100% de MeOH dans H20 dans les fractions 9 à 10 (5mg). Après deux chromatographies sur colonnes ouvertes de Cellulose 5 microcristalline (36x2,5cm avec gradient de Chloroforme 50% à 100% dans l'EP) de la fraction 25, un composé nommé RP9 (7mg) a été obtenu. Après une chromatographie sur colonne de MPLC C18 15-25 pm (46x1,5cm avec gradient de 0% à 100% de MeOH dans l'H20) 18mg d'acide 17-(1,2,4-trihydroxy-2,6,6--triméthylcyclohexyl)-2,6,11,15tetraméthyl(4E,6E,8E,10E,12E,14E,16E) heptadecahexanoique ont été purifiés dans les fractions 27 et 28. L'acide 17-(1,2,4-trihydroxy-2,6,6ùtriméthylcyclohexyl)-2,6,11,15-tetraméthyl (4E,6E,8E,10E,12E,14E,16E)heptadecahexanoique de formule (XIII) : (XIII) 15 présente les caractéristiques suivantes ayant permis son identification : Temps de rétention en HPLC sur une colonne C18 à 254nm, 300nm et 400nm : 14,88' MS m/z : 483 [M+H] + Les données RMN du proton et du carbone 13C sont présentées dans le 20 tableau 13 Figure 15. Un composé nommé RP6 se trouvant dans les fractions 20 et 21 (31mg) a été purifié sur une deuxième colonne MPLC C18 15-25pm (avec gradient de 0% à 100% MeOH dans H20) où 3,3mg de composé pur ont été récupérés dans les fractions 15 et 16. 25 Fraction 4 (23,44g): Après une VLC C18 15-25pm (avec gradient de 0% à 100% MeOH dans l'H20), un composé RP7, se trouvant dans la fraction méthanolique 80%(728mg), a été obtenu. Sa purification s'est poursuivie par une chromatographie sur une colonne de 30 MPLC C18 40-63pm (50x4,5cm avec gradient de 0% à 100% de MeOH dans I'H20), le composé RP7 se retrouvant dans les fractions 17à19(18mg) de celle-ci. Une colonne de sephadex LH2O dans le MeOH a permis finalement de récupérer 4mg de composé RP7 dans les fractions 6 et 7. III- Extraction et Isolement des composés de graine III-1-Extraction (lixiviation) Solvant Volume(l) Résidus sec(gl Graine Hexane 7 0,40 (700g) MeOH 10 261 Chacun des deux types d'extrait est amené à sec et repris par un faible volume de méthanol. III-2- Méthodes préparatives d'isolement des apocarotenoïdes La purification et la détermination structurale des apocarotenoïdes ont été effectuées d'après un protocole expérimental analogue à celui de la Figure 11. III-2-1-Séparation préliminaire Seul l'extrait méthanolique a été analysé. III-2-1-1-Séparation par fractionnement 130,5g a été fractionné par une VLC de silice (15-40pm) dans le MeOH /H20, 10 fractions ont été obtenues. Après une purification et une co-chromatographie de chaque composé avec les composés des racines, il s'avère que les extraits de graines contiennent les mêmes composés que ceux des racines. IV- Activités antioxydantes des principaux composés de Radamaea montana et de l'extrait de feuille, racine et de graine L'évaluation du pouvoir antioxydant a été effectuée avec deux tests : un test de réduction d'un radical organique ABTS et un test de réduction d'un ion métallique CUPRAC. Le test ABTS utilisé est basé sur la description originale de Re et al. en 1999 (Free Radical Biology and Medecine, 26, 1231-1237), avec les modifications apportées par Arts et al. en 2002 (Journal of Agriculture and Food Chemistry, 50, 7970-7981). Le test CUPRAC utilisé est le test qui a été décrit par Apak et al. (Journal of Agriculture and Food Chemistry, 2004, 52, 7970-7981). Les activités antioxydantes des principaux composés de Radamaea montana présents dans l'extrait de feuille, en équivalent Trolox en CUPRAC et en ABTS sont données ci-après : Composé TEAC TEAC (Cuprac) (ABTS) 2-C-R-D-glucopyranosyl-1,3,6,7-tetrahydroxyxanthone 2,92 2,06 glucosyl-6-C-apigénine (isovitexine) 0,23 0,87 glucosyl-8-C-apigénine (vitexine) 0,23 0,87 1,3,6,7-tetrahydroxyxanthone 2,42 1,93 1,3,6,7-tetrahydroxyxanthone -8-prenylxanthone 1,65 1,56 Amentoflavone 1,03 1,06 7"-O-Methylamentoflavone (sotetsuflavone) 0,65 0,93 6"-(2-hydroxy-3-methyl-3-butenyl) amentoflavone 1,51 1,25 Pyranoamentoflavone 1,50 1,37 Les activités antioxydantes des principaux composés de Radamaea montana 5 présents dans l'extrait de graine et de racine, en équivalent Trolox en CUPRAC et en ABTS sont données ci-après : Composé TEAC TEA (Cuprac) C (ABTS) Acide 17-(1,2-dihydroxy-2,6,6ùtriméthylcyclohexyl)-2,6,11,15- 3,04 2,30 tetraméthyl(4E,6E,8E,10E,12E,14E,16E)-heptadecahexanoique Acide 13-(1,2-dihydroxy-2,6,6-triméthylcyclohexyl )-2,7, 1 1 - 1,24 0,60 triméthyl-,(2E,4E,6E,8E,10E, 12E)-tridecahexanoique 13-[(1 R,2R)-1,2-dihydroxy-2,6,6- tri méthylcyclohexyl]-2,7,1 1- 1,98 1,03 triméthyl-,(2E,4E,6E,8E,10E,12E) tridecahexaenal Acide 17-(1,2,4-trihydroxy-2,6,6ùtriméthylcyclohexyl)-2,6,11,15- 1,91 1,66 tetraméthyl(4E,6E,8E,10E,12E,14E,16E)- heptadecahexanoique RP6 1,52 1,71 RP8 2,28 2,00 Les activités antioxydantes des extraits organiques de feuille, racine et graine de Radamaea montana en équivalent Trolox en CUPRAC et en ABTS sont données ci-après : Extrait TEAC(Cuprac) TEAC(ABTs) Feuille extrait éthanolique 2,11 2,06 Racine extraits dichioromethanique et 1,56 1,67 méthanolique Graine extrait méthanolique 0,82 0,77 L'évaluation du pouvoir antioxydant a également été effectuée avec un test d'action de réduction de la tyrosine par la tyrosinase (inhibition de cette action avec des produits antioxydants). Ce test a été développé et optimisé à partir des descriptions de V. J. HEARING Jr (Methods in Enzymology, 1987, vol. 42, 154- 165), de Y.-J. KIM, H. UYAMA (Cellular and Molecular Lift Sciences 2005, 62, 1707-1723) et de T. SABUDAK et al. (Natural Product Research, 2006, vol. 20, n . 7, 665-670). La tyrosinase, est une enzyme-clé présente chez les plantes et les animaux dans la biosynthèse de la mélanine. Elle catalyse l'oxydation des monophénols, diphénols et quinones. Les antioxydants inhibent donc l'action de la tyrosinase. Cette inhibition peut être suivie en temps réel grâce à la vitesse de l'apparition et à l'intensité de sa coloration du milieu réactionnel (formation du complexe L-DOPA-quinone) mesurable en spectrométrie. Tyrosinace L-Tyrosine + 02 L -DOPA L -DOPA Tyrosinace L-DOPA-quinone + H2O L-DOPA= L-3,4- Dihydroxyphenylalanine Les activités antioxydantes des principaux composés de Radamaea montana 20 présents dans les extraits de feuilles, racine et graine, sont donnés sous forme d'IC5o* dans le tableau ci-dessous : NOM Ref. IC50* en pg/ml Epicatechine gallate (témoin actif dans la Epicatechi G. 55,8 littérature) Kojic acid 57,0 Acide kojique (témoin actif dans la littérature) 1 , 3, 6,7-tetra hyd roxy-8- pré nylxa nth on e RF4bis 126,2 Extrait éthanolique de racine de Radamaea Rada racine 145,2 montana 1,3,6,7-tetrahydroxy-8-3,3- RF4 153,8 (diméthylallyl)xanthone RF3 154,5 mangiférine Extrait éthanolique de feuille de Radamaea Rada feuille 188,0 montana RP2 214,9 Radamanine A 6"-(2-hydroxy-3-méthyl-3-butényl)- RF7 264,7 amentoflavone RF5 283,6 Amentoflavone Sotetsuflavone RF6 337,7 Extrait éthanolique de graine de Radamaea Rada graine 644,4 montana RF1 2134,9 Apigénine-8-C-glucoside *IC50= Concentration nécessaire en pg/ml de produit testé pour obtenir 50% d'inhibition de la tyrosinase. Les données ont par ailleurs été validées en introduisant dans les expérimentations d'évaluation de l'effet biologique deux témoins réputés actifs l'Epicatechine gallate et l'acide kojique. Les valeurs relevées pour ces deux témoins sont tout à fait en accord avec celles retrouvées dans la littérature (Y.-J. KIM, H. UYAMA (Cellular and Molecular Life Sciences 2005, 62, 1707-1723), J-H HWANG and B M LEE (Journal of Toxicology and Environmental Health, part A, 2007, 70, 393-407)). Dans cette même littérature, les extraits de plantes sont considérés comme actifs lorsque les IC50 sont inférieurs à 500 ugImi. V- Exemples de compositions Gel après soleil Eau déminéralisée QSP 100 % Glycérine de 1 à 5% de préférence 3, 00 Io Gélifiant acrylique de 0,1 à 1 % de préférence 0,30 Io Triéthanolamine de 0,1 à 1% de préférence 0,50 % Conservateur antimicrobien de 0,5 à 1 /o de préférence 0,55 Io Huile végétale ou huile minérale de 1 à 5 % de préférence 2 Parfum de 0,1 à 1% de préférence 0,15 % Radamaea montana (extrait sec) de 0,0001 % à 0,05 %, de préférence 0,001% Crème anti-radicalaire Stéarate de sorbitol de 1 à 2 % de préférence 1,50 Stéarate de glycéryl et Polyéthylène glycol-100 de 2 à 5 10 de préférence 3,25 15 Huiles minérales et huiles végétales de 10 à 20 % de préférence 13,50 % Eau déminéralisée QSP 100 10 Propylène glycol de 1 à 5 % de préférence 2,50 10 Gélifiant acrylique de 0,1 à 1% de préférence 0,40 Triéthanolamine de 0,1 à 1 % de préférence 0,40 /o 20 Conservateur antimicrobien de 0,5 à 1 % de préférence 0,80 Io Parfum de 0,1 à 1% de préférence 0,15 Gélifiant (par exemple du type SEPIGEL, commercialisé par la Société SEPPIC) de 0,1 à 2 /o de préférence 0,70 10 Radamaea montana (extrait sec) de 0,0001 % à 0,05 /o, de préférence 25 0,001% Lait solaire Eau déminéralisée QSP 100 Dioxyde de titane de 0,1 à 2 % de préférence 0,20 /o Sorbitolde 0, 5 à 5 % de préférence 1 % 30 Triéthanolamine de 0,1 à 1 % de préférence 0,30 /o Stéarate de glycéryl et Polyéthylène glycol-100 de 1. à 5% de préférence 2 /o Stéarate de glycéryl de 0,1 à 1 % de préférence 0,30 Acide stéarique de 0,5 à 5 % de préférence 1% Huiles végétales et huiles minérales de 5 à 15% de préférence 8 Io Filtre solaire (cinnamate) de 0,5 à 10 % de préférence 5 Io Antioxydant de 0,01 à 0,1 % de préférence 0,07 Io Gélifiant acrylique de 0,1 à 1% de préférence 0,10 Io Conservateur antimicrobien de 0,5 à 1 % de préférence 0,80 Parfum de 0,1 à 1% de préférence 0,40 % Radamaea montana (extrait sec) de 0,0001 % à 0,05 %, de préférence 0,001% Shampooing réparateur antiradicalaire Eau QSP 100 Io Cocamidopropyl bétaïne 15 à 20 % Alkyl éther sulfates 10 à 15 % Caprypyl/Capryl glucoside 2 à 10 % Cocamide DEA 2 à 4 % Glycérine 1 à 5 % PEG-120 Méthyl Glucose Dioléate 1 à 5 Io Parfum 0,2 à 1 % Conservateur 0,05 à 0,8 EDTA 0,05 à 0,1 Io Radamaea montana (extrait sec) de 0,0001 % à 0,1 % Masque capillaire Eau QSP 100 Io PEG-6 Stéarate + Ceteth-20 + Glycéryl stéarate + Steareth-20 5 à 10 % Alcool cétylique 2 à 5 25 Quaternium-80 1 à 5 Beurre de Karité 1 à 5 Io Huiles minérales et esters émollients 1 à 5 % Glycérine 1 à 5 Io Diméthicone copolyol 1 à 3 % 30 Parfum 0,1 à 1% Conservateur 0,1 à 0,7 Io Carbomer 0,05 à 0,5 0/0 Triéthanolamine 0,05 à 0,5 Radamaea montana (extrait sec) de 0,0001 % à 0,1 Io Crème de jour protectrice Eau QSP 100 Esters émollients 10 à 15 % Glycéryl stéarate et PEG-100 stéarate 4 à 6 % Butylène Glycol 2 à 5 Io Huile de germes de Blé 2 à 5 Io Alcool cétylique 1 à 5 Io Diméthicone 1 à 4 % Polyméthyl méthacrylate 0,5 à 2 Io Parfum 0,3 à 1 Io Conservateur 0,1 à 0,8 Io Carbomer 0,05 à 0,5 % Triéthanolamine 0,05 à 0,5 Butyl Hydroxy Toluene 0,05 à 0,1 Io Radamaea montana (extrait sec) de 0,0001 % à 0,1 Io REVENDICATIONS 1 - Utilisation d'un extrait de Radamaea montana pour la préparation 5 d'une composition cosmétique, dermatologique ou pharmaceutique, l'extrait de Radamaea montana étant utilisé en tant qu'agent anti-oxydant. 2 - Utilisation selon la revendication 1 caractérisée en ce que l'extrait de Radamaea montana est également utilisé en tant qu'inhibiteur de la tyrosinase. 3 - Utilisation selon la revendication 1 ou 2 caractérisée en ce que l'extrait 10 utilisé est issu des racines, des feuilles, des tiges, des fruits, des graines et/ou des fleurs. 4 - Utilisation selon la revendication 3 caractérisée en ce que l'extrait utilisé est issu des feuilles ou des graines. - Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, 15 caractérisée en ce que l'extrait utilisé est obtenu par extraction avec un solvant choisi parmi l'eau, les alcools, les cétones, les esters, les éthers, les polyols, les solvants chlorés et les mélanges d'au moins deux des solvants précités. 20 caractérisée en ce que l'extrait utilisé comprend au moins un composé choisi parmi: 25 - 6-C-glucosyl-apigénine (isovitexine) de formule (I) : 32 6 - Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisée en ce que l'extrait utilisé est riche en flavonoides et dérivés. 1 à 6, 7 - Utilisation selon l'une quelconque des revendications caractérisée en ce que l'extrait utilisé est riche en xantones et dérivés. 1 à 5, 8 - Utilisation selon l'une quelconque des revendications OH (I) 5108-C-glucosyl-apigénine (vitexine) de formule (II) : OH OH O (II) -2-C-13-D-glucopyranosyl-1,3,6,7-tetrahydroxyxanthone (mangiférine) de formule (III) : - 1,3,6,7-tétrahydroxyxanthone de formule (IV) : OH O -amentoflavone de formule (V) : 5. OH 0 (V) - 1,3,6,7-tétrahydroxyxanthone-8-prénylxanthone de formule (VI) : HO 3 4 O 4b OH 8b 8 OH O H3C CH3 13 14 (VI) 0 OH 0b807 OH OH OH OH(VII) - 7"-améthylamentoflavone (sotetsuflavone) de formule (VIII) : -pyranoamentoflavone de formule (VII) : OH OH 0 (VIII) -6"-(2-hydroxy-3-méthyl-3-butenyl)-amentoflavone de formule (IX) : OH H3C CH3 OH 0 12" 13" (IX) acide 13-(1,2-dihydroxy-2,6,6ûtriméthylcyclohexyl)-2,7,11-triméthyl(2E,4E,6E,8E, 10E,12E)-tridecahexanoique de formule (X) : OH (X)10acide 17-(1,2-dihydroxy-2,6,6ûtriméthylcyclohexyl)-2,6,11,15-tetraméthyl(4E,6E, 8E,10E,12E,14E,16E)-heptadecahexanoique de formule (XI) : OH (XI) 13[(1R,2R)]-1,2-dihydroxy-2,6,6--triméthylcyclohexyl]-2,7,11-triméthyl 5 ,(2E,4E,6E,8E,10E,12E)-tridecahexaenal de formule (XII) : (XII) acide 17-(1,2,4-trihydroxy-2,6,6ûtriméthylcyclohexyl)-2,6,11,15-tetraméthyl(4E, 6E,8E,10E,12E,14E,16E)-heptadecahexanoique de formule (XIII) : OH (XIII) 10 9 - Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 8, caractérisée en ce que l'extrait représente de 0,00001% et 10% (m/m), préférentiellement entre 0,0001% et 1% (m/m) de la composition. 10 Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 9, caractérisée en ce que la composition se présente sous une forme galénique 15 choisie parmi les émulsions biphasiques huile dans eau, eau dans huiles, les émulsions triphasiques, les lotions, les laits, les gels, les hydrogels, les crèmes, les pommades, les savons, les shampoings, les onguents et les produits à pulvériser. 11 - Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 10, caractérisée en ce que l'extrait est incorporé à la composition sous forme sèche 20 obtenue par évaporation, atomisation ou lyophilisation, sous forme liquide ou sous forme encapsulée ou associée à des vecteurs sélectionnés parmi les liposomes, macro-, micro- et nanoparticules, macro-, micro- et nanocapsules, talcs, bentonites et autres supports minéraux. 12 - Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 11 25 caractérisée en ce que l'extrait de Radamaea montana est combiné à un ouplusieurs additifs sélectionnés parmi les lipides, les épaississants, les tensioactifs, les émulsifiants, les gélifiants, les viscosifants, les conservateurs, les extraits de plantes, les extraits tissulaires, les agents hydratants, les agents pigmentants ou dépigmentants, les émollients, les extraits marins, des principes actifs d'origine synthétique. 13 - Composition cosmétique, dermatologique ou pharmaceutique comprenant un extrait de Radamaea montana utilisé en tant qu'agent antioxydant. 14 - Composition selon la revendication 13 caractérisée en ce que 10 l'extrait de Radamaea montana est également utilisé en tant quInhibiteur de la tyrosinase. 15 -Composition selon la revendication 13 ou 14 caractérisée en ce que l'extrait utilisé est issu des racines, des feuilles, des tiges, des fruits, des graines et/ou des fleurs. 15 16 - Composition selon la revendication 15 caractérisée en ce que l'extrait utilisé est issu des feuilles ou des graines. 17 Composition selon l'une quelconque des revendications 13 à 16, caractérisée en ce l'extrait utilisé est obtenu par extraction avec un solvant choisi parmi l'eau, les alcools, les cétones, les esters, les éthers, les polyols, les solvants 20 chlorés et les mélanges d'au moins deux des solvants précités. 18 - Composition selon l'une quelconque des revendications 13 à 17, caractérisée en ce que l'extrait utilisé est riche en flavonoides et dérivés. 19 - Composition selon l'une quelconque des revendications 13 à 18, caractérisée en ce que l'extrait utilisé est riche en xantones et dérivés. 25 20 - Composition selon l'une quelconque des revendications 13 à 19, caractérisée en ce que l'extrait utilisé comprend au moins un composé choisi parmi : - 6-C-glucosyl-apigénine (isovitexine) de formule (I) : OH (I)-8-C-glucosyl-apigénine (vitexine) de formule (II) : OH OH oH o (II) 2-C-8-D-glucopyranosyl-1,3,6,7-tétrahydroxyxanthone (mangiférine) de formule (III) : OH HO o_ .. OH HO HO 1" 5 OH O (III) -1,3,6,7-tétrahydroxyxanthone de formule (IV) : OH O - amentoflavone de formule (V) : OH OH 0 3,,, OH 0 (V) -1,3,6,7-tétrahydroxyxanthone-8-prénylxanthone de formule (VI) : HO 3 4. O 4b OH 8b 8 OH H3C CH3 13 14 (VI)- pyranoamentoflavone de formule (VII) : sOH OH OH O (VII) - 7"-0-méthylamentoflavone (sotetsuflavone) de formule (VIII) : (VIII) H3C CH3 OH O 12" 13" - acide 13-(1,2-dihydroxy-2,6,6ùtriméthylcyclohexyl)-2,7,11-triméthyl(2E,4E,6E,8E, 10E,12E)-tridecahexanoique de formule (X) : -6"-(2-hydroxy-3-méthyl-3-butenyl)-amentoflavone de formule (IX) : OH OH (X)10acide 17-(1,2-dihydroxy-2,6,6ûtriméthylcyclohexyl)-2,6,11,15-tetraméthyl(4E,6E, 8E,10E,12E,14E,16E)-heptadecahexanoique de formule (XI) : OH (XI) 13[(1R,2R)]-1,2-dihydroxy-2,6,6ûtriméthylcyclohexyl]-2,7,11-triméthyl 5 ,(2E,4E,6E,8E,10E,12E)-tridecahexaenal de formule (XII) : A6' (XII) acide 17-(1,2,4-trihydroxy-2,6,6ûtriméthylcyclohexyl)-2,6,11,15-tetraméthyl(4E, 6E,8E,10E,12E,14E,16E)-heptadecahexanoique de formule (XIII) : (XIII) 10 21 - Composition selon l'une quelconque des revendications 13 à 20, caractérisée en ce que l'extrait représente de 0,00001% et 10% (m/m), préférentiellement entre 0,0001% et 1% (m/m) de la composition. 22 -Composition selon l'une quelconque des revendications 13 à 21, caractérisée en ce que la composition se présente sous une forme galénique 15 choisie parmi les émulsions biphasiques huile dans eau, eau dans huiles, les émulsions triphasiques, les lotions, les laits, les gels, les hydrogels, les crèmes, les pommades, les savons, les onguents et les produits à pulvériser. 23 - Composition selon l'une quelconque des revendications 13 à 22, caractérisée en ce que l'extrait est incorporé à la composition sous forme sèche 20 obtenue par évaporation, atomisation ou lyophilisation, sous forme liquide ou sous forme encapsulée ou associée à des vecteurs sélectionnés parmi les liposomes, macro-, micro- et nanoparticules, macro-, micro- et nanocapsules, talcs, bentonites et autres supports minéraux. 24 - Composition selon l'une quelconque des revendications 13 à 23 25 caractérisée en ce que l'extrait de Radamaea montana est combiné à un ouplusieurs additifs sélectionnés parmi les lipides, les épaississants, les tensioactifs, les émulsifiants, les gélifiants, les viscosifants, les conservateurs, les extraits de plantes, les extraits tissulaires, les agents hydratants, les agents pigmentants ou dépigmentants, les émollients, les extraits marins, des principes actifs d'origine synthétique. 25 - Composition selon l'une quelconque des revendications 13 à 24 caractérisée en ce qu'elle se présente sous la forme d'une composition antiradicalaire, d'une composition pour prévenir le vieillissement cutané, d'une composition pour la protection solaire, d'une composition de soin après exposition solaire, d'un shampoing réparateur anti-radicalaire, d'un masque capillaire, d'une crème de jour protectrice, d'une crème pour lutter ou atténuer des phénomènes d'hyperpigmentation de la peau ou d'une crème pour obtenir un blanchiment ou éclaircissement de la peau. 26 - Composé choisi parmi l'acide 17-(1,2-dihydroxy-2,6,6-triméthylcyclohexyl)-2,6,11,15-tetraméthyl(4E,6E, 8E,10E,12E,14E,16E)-heptadecahexanoique de formule (XI) : (XI) 17-(1,2,4-trihydroxy-2,6,6ûtriméthylcyclohexyl)-2,6,11,15- -l'acide OH tetraméthyl(4E,6E,8E,10E,12E,14E,16E)-heptadecahexanoique de formule (XIII) : OH H (XIII) 27 - Utilisation d'un composé selon la revendication 26 pour la préparation d'un médicament ou d'une composition cosmétique ou dermatologique. 28 - Utilisation d'un composé selon la revendication 27 caractérisé en ce 25 que le composé est utilisé en tant qu'agent anti-oxydant. 29 - Utilisation d'un composé selon la revendication 27 caractérisé en ce que le composé est utilisé en tant qu'inhibiteurs de la tyrosinase.30 - Médicament, composition cosmétique ou dermatologique comprenant un composé selon la revendication 26.