FR 2922023 A1 20090410 FR 0707013 A 20071005 Méthode et installation de détection électrochimique d'un composé biologique La présente invention se rapporte à une méthode et à une 5 installation de détection électrochimique pour détecter la présence d'un composé biologique donné dans un échantillon. On connaît des installations permettant de mettre en oeuvre des méthodes pour détecter la présence d'un composé biologique dans un échantillon. Le test ELISA, par exemple, acronyme de � Enzyme Linked io Immuno Sorbent Assay � est un test immunologique qui permet de détecter et/ou de doser une protéine dans un liquide biologique. Dans la technique de dosage dite "en sandwich", des puits sont ménagés sur une plaque et ils sont tapissés avec un anticorps de capture capable de se lier spécifiquement à un antigène donné que l'on recherche dans l'échantillon 15 biologique. L'anticorps de capture est adsorbé dans le fond des puits, par interaction électrostatique par exemple, et c'est lui qui assure la spécificité du test. L'échantillon biologique à tester est ensuite déposé dans les puits de la plaque et si l'antigène recherché est présent il se lie spécifiquement à l'anticorps de capture. 20 Un deuxième anticorps, l'anticorps traceur, apte à pouvoir se lier à l'antigène recherché et éventuellement capturé est alors ajouté dans les puits. Les puits sont ensuite rincés de manière à éliminer tous les anticorps traceurs exceptés ceux qui se sont liés à l'antigène recherché et capturé. L'anticorps traceur, prisonnier de l'antigène recherché et capturé, 25 est alors couplé à une enzyme catalysant la formation d'un produit coloré. La réaction peut ainsi être quantifiée par colorimétrie par l'intermédiaire de la loi de Beer-Lambert. On en déduit ainsi la concentration en antigène recherché, puisque le nombre de molécules d'anticorps traceur fixées dépend du nombre de molécules d'antigènes immobilisées par l'anticorps 30 de capture. Cette méthode est largement utilisée, par exemple pour dépister le VIH en mettant en évidence la présence d'anticorps anti-VIH dans le sang. Cependant, la quantification colorimétrique est peu sensible de sorte que cette méthode est plutôt utilisée comme une méthode qualitative. Et d'ailleurs, en clinique humaine, lorsque le VIH est dépisté par le test ELISA, ce dernier est complété par d'autres techniques plus précises. Aussi, il a été imaginé d'adopter des méthodes électrochimiques en espace confiné. La méthode n'est plus photométrique mais électrochimique, et elle n'est plus mise en oeuvre dans des puits, mais dans des micro-canaux. On pourra notamment se référer au document io EP 1 404 448 lequel décrit une telle méthode. Selon le même principe de dosage dit "en sandwich", un micro-canal dont la paroi interne est équipée d'électrodes, est tout d'abord rempli d'une solution comprenant un anticorps de capture qui vient s'adsorber sur ladite paroi interne. Puis l'échantillon est injecté dans le micro-canal, de manière à ce que le 15 composé biologique puisse être capturé par l'anticorps de capture. Après rinçage, un deuxième anticorps traceur est injecté dans le micro-canal et il vient se lier à l'antigène capturé. Ensuite, par l'intermédiaire d'une enzyme catalysant la formation d'un composé électrochimiquement actif, on peut mesurer un courant électrique grâce aux électrodes ; courant électrique 20 qui est directement proportionnel à la quantité d'anticorps traceur et par conséquent de composé biologique capturé. Ainsi, il n'est plus ici mesuré une quantité de photons, mais une quantité d'électrons. En outre, le seuil de détection du composé biologique est d'autant plus bas que l'espace est confiné. Cependant, la mise en oeuvre d'un micro-canal présente des 25 inconvénients liés à l'écoulement des fluides et en particulier des solutions qui s'écoulent à l'intérieur du micro-canal, lequel écoulement est directement fonction des tensions de surface relatives. En réalité, il est non seulement malaisé d'adsorber l'anticorps de capture sur la surface interne du micro-canal, mais il est aussi difficile d'y injecter l'échantillon 30 pour le stabiliser ensuite à l'intérieur, afin que le composé biologique puisse y être capturé. Aussi, un problème qui se pose et que vise à résoudre la présente invention, est de fournir une installation de détection électrochimique qui permette de s'affranchir des difficultés de mise en oeuvre de la paroi interne sur laquelle est adsorbé l'anticorps de capture, tout en abaissant encore le seuil de détection des composés biologiques, et également qui permette une meilleure accessibilité à cette paroi interne de manière à pouvoir mettre aisément en contact successivement, les différentes solutions avec la paroi interne. La présente invention propose selon un premier objet, dans le but to de résoudre ce problème, une installation de détection électrochimique pour détecter la présence d'un composé biologique donné dans un échantillon, ladite installation comprenant une cellule de détection présentant une paroi interne et deux électrodes sur ladite paroi interne, ladite paroi interne présentant deux portions rapprochées en regard l'une 15 de l'autre pour former un espace confiné, et une partie active qui s'étend dans ledit espace confiné et sur laquelle est adsorbé un matériel biologique de capture, ledit composé biologique donné étant susceptible d'être capturé spécifiquement par ledit matériel biologique de capture lorsque ledit échantillon est mis en contact avec ladite partie active, ledit 20 composé biologique donné capturé étant susceptible d'être reconnu par un marqueur spécifique lorsque ledit marqueur spécifique est mis en contact avec ladite partie active, ledit marqueur spécifique étant susceptible de produire un porteur de charge spécifique dudit marqueur dans ledit espace confiné, ledit composé biologique donné capturé et 25 reconnu étant détecté ensuite par l'intermédiaire du porteur de charge en mesurant la quantité de courant électrique qui traverse lesdites électrodes ; selon l'invention, lesdites portions de paroi sont mobiles l'une par rapport à l'autre entre une position écartée et une position rapprochée ; et ladite partie active est ménagée sur l'une desdites 30 portions de paroi, tandis que lesdites portions sont portées dans ladite position rapprochée pour former ledit espace confiné, après que ledit échantillon et ledit marqueur ont été successivement mis en contact avec ladite partie active. Ainsi, une caractéristique de l'invention réside dans la mise en oeuvre d'une paroi interne en deux portions de paroi indépendantes l'une de l'autre, susceptibles d'être rapprochées en regard l'une de l'autre sans pour autant être en contact, et de façon à former l'espace confiné. De la sorte, ladite une desdites portions de paroi, située à l'air libre, peut alors être préparée aisément pour in fine, être recouverte par l'autre desdites portions de paroi de manière à former l'espace confiné et réaliser ensuite io la mesure du courant électrique. Ainsi qu'on l'expliquera ci-après, il est en effet bien plus aisé de réaliser la préparation de ladite une desdites paroi dans l'espace ouvert qu'elle délimite, plutôt que dans l'espace déjà confiné d'un micro-canal dans lequel il est impossible d'ajuster précisément la position de ladite partie active et où l'échantillon biologique 15 et le marqueur spécifique notamment, ne peuvent être mis en contact avec ladite surface active, que par écoulement à l'intérieur dudit canal. Compte tenu des tensions de surface des solutions utilisées pour véhiculer successivement les différents composés actifs, ces solutions doivent être injectées sous pression à l'intérieur du micro-canal. 20 Précisément, selon un mode de mise en oeuvre de l'invention particulièrement avantageux, les électrodes sont situées sur l'une desdites portions de paroi. De la sorte, ces électrodes sont situées dans l'espace confiné où sont produits les porteurs de charge, et par conséquent, la détection électrochimique est instantanée. En outre, la détection 25 électrochimique n'est ainsi perturbée par aucune autre espèce extérieure. Selon un mode particulier de réalisation de l'invention, lesdites portions de paroi sont respectivement formées par une plaque support, par exemple en matière plastique ou encore en verre, formant ladite une desdites portions de paroi, et une plaque de recouvrement, pour recouvrir 30 ladite une desdites portions de paroi. Ainsi, la plaque support peut aisément être manipulée et préparée, par exemple par un automate, et la plaque de recouvrement peut alors être rapportée sur la plaque support par un second automate, de manière à pouvoir mesurer le courant électrique ensuite. Par ailleurs, la plaque support est avantageusement traitée pour faciliter notamment, l'adsorption du matériel biologique de capture. Avantageusement, ladite plaque support présente une pluralité de portions de paroi sur lesquelles sont respectivement ménagées des parties actives de façon à former une pluralité de cellules de détection. Ainsi, on peut multiplier le nombre de mesures pour un échantillon donné, sans augmenter considérablement pour autant le temps de préparation. io Car en effet, certaines des étapes de préparation, ainsi qu'on l'expliquera ci-après plus en détail, et notamment les phases de rinçage, peuvent être réalisées simultanément en une seule opération. Par ailleurs, on comprend également que cette plaque support peut aisément être manipulée et préparée par l'intermédiaire d'automates. Au surplus, 15 lesdites portions de paroi sont avantageusement planes, ce qui facilite plus encore à la fois la préparation de la plaque support, puisque portée dans une position horizontale, les différents composés en solution peuvent être déposés sous forme de gouttes, et aussi le recouvrement de la plaque support, par une seule lamelle de verre par exemple. Sont alors 20 formées, en une seule opération, une pluralité d'espaces confinés de liquide à l'intérieur desquels on réalise simultanément la mesure du courant électrique. Préférentiellement, lesdites deux électrodes sont situées sur l'autre desdites portions de paroi, opposée à celle sur laquelle est formée ladite 25 partie active, de telle sorte que ces électrodes ne sont mises en contact avec le liquide qu'au moment de la mesure ou quelques instants avant. Ainsi, les électrodes ne sont ni polluées ni même perturbées par les différentes espèces chimiques ou biologiques qui interfèrent avec la partie active de ladite une desdites parois. 30 Selon un second objet, la présente invention propose une méthode de détection électrochimique pour détecter la présence d'un composé biologique donné dans un échantillon, ladite méthode étant du type selon laquelle : on fournit une cellule de détection présentant une paroi interne et deux électrodes sur ladite paroi interne, ladite paroi interne présentant deux portions rapprochées en regard l'une de l'autre formant un espace confiné ; on adsorbe un matériel biologique de capture sur une partie active qui s'étend dans ledit espace confiné ; on met ledit échantillon en contact avec ladite partie active, ledit composé biologique donné étant susceptible d'être capturé spécifiquement par ledit matériel biologique de capture ; on met ladite partie active en contact avec un marqueur spécifique, ledit composé biologique donné capturé étant susceptible io d'être reconnu par ledit marqueur spécifique et ledit marqueur spécifique étant susceptible de produire un porteur de charge spécifique dudit marqueur dans ledit espace confiné ; et, on mesure la quantité de courant électrique qui traverse lesdites électrodes pour détecter ledit composé biologique donné capturé et reconnu par l'intermédiaire du porteur de 15 charge ; selon l'invention, on fournit deux portions de paroi, mobiles entre une position écartée et une position rapprochée l'une de l'autre pour former lesdites portions de paroi ; et on ménage ladite partie active sur l'une desdites portions de paroi, tandis qu'on porte lesdites portions dans ladite position rapprochée pour former ledit espace confiné après que ledit 20 échantillon et ledit marqueur ont été successivement mis en contact avec ladite partie active. Ainsi, une caractéristique de l'invention réside, dans la mise en oeuvre de la partie active et de l'échantillon biologique ainsi que du marqueur spécifique dans un espace ouvert délimité par ladite une 25 desdites portions de paroi et ce dans une première phase. Ce n'est qu'ensuite, dans une seconde phase, que l'on rapproche les deux portions de paroi pour former l'espace confiné. Enfin, la mesure du courant électrique peut être réalisée. Selon l'art antérieur, la préparation en préalable à la mesure du courant électrique est réalisée dans un micro- 30 canal et par conséquent dans l'espace confiné, ce qui la rend d'autant plus malaisée. Or, selon l'invention, durant la préparation de ladite une desdites portions de paroi, la partie active peut être ménagée en déposant simplement à la pipette, une goutte d'un matériel biologique de capture plus communément dénommé sonde de capture, à la surface de ladite une desdites portions de paroi, par exemple à la surface d'une électrode. Cette portion de paroi est ainsi laissée un temps déterminé en atmosphère contrôlée afin de permettre l'adsorption ou l'accrochage de façon covalente de la sonde de capture sur sa surface. Puis, cette surface est rincée afin d'éliminer les sondes de capture non adsorbées. Ensuite, la surface est mise en contact avec un échantillon biologique incorporant un composé biologique à détecter, soit une molécule cible. to Après une durée d'incubation donnée, la surface de la portion de paroi est rincée de façon à éliminer les molécules non reconnues spécifiquement par la sonde de capture, puis elle est mise en contact avec le marqueur spécifique dont le surplus est également éliminé par rinçage. Le marqueur spécifique s'est fixé sur les molécules cibles 15 immobilisées par la sonde de capture. Enfin, la partie active est recouverte par l'autre desdites portions de paroi après qu'a été déposé sur cette partie active, un composé en phase aqueuse apte à générer avec le marqueur spécifique, le porteur de charge. Ainsi, l'autre desdites portions de paroi permet d'emprisonner une mince couche de liquide au 20 droit de la surface active. Cette mince couche de liquide est d'autant plus mince que la pression exercée sur l'autre desdites portions de paroi contre l'électrode est forte. Ainsi, les molécules cibles prises en sandwich entre les sondes de capture et les molécules du marqueur spécifique baignent-elles dans une mince couche liquide immobilisée entre les 25 portions de paroi. Par conséquent, dès l'instant où le composé en phase aqueuse a été mis en contact avec la partie active, des porteurs de charge spécifiques du marqueur sont produits, et leur concentration augmente d'autant plus rapidement que la couche de liquide est mince. Ainsi, les porteurs de charge échangeront d'autant plus d'électrons aux 30 électrodes et le courant électrique qui traversera ces dernières sera d'autant plus important. Selon un mode de réalisation de l'invention particulièrement avantageux, lesdites électrodes sont formées sur l'une desdites portions de paroi par une méthode de sérigraphie. Ainsi, on réalise précisément sur l'une desdites portions de paroi, l'impression d'une fine couche d'un matériau conducteur, incorporant par exemple du carbone et selon une forme prédéterminée pour dessiner au moins deux électrodes. Un tel mode de réalisation permet non seulement de réaliser aisément les électrodes, mais aussi de leur donner une même forme lorsque l'on utilise une pluralité de portions de paroi. De la sorte, les mesures des quantités io de courant pour lesdites pluralité de portions de paroi recouvertes, peuvent alors être comparées en s'affranchissant des dimensions des électrodes. En outre, avantageusement on fournit une plaque support sur laquelle on va réaliser la partie active et une plaque de recouvrement pour 15 venir confiner l'espace au regard de ladite partie active et de manière à former respectivement lesdites portions de paroi. Selon un mode privilégié de réalisation on réserve une pluralité de portions de paroi sur ladite plaque support dans lesquelles on ménage une partie active, de façon à pouvoir former une pluralité de cellules de 20 détection avec la même plaque support. En outre, on forme parallèlement une pluralité de paires d'électrodes espacées d'une distance correspondant à la distance d'espacement des parties actives, sur ladite plaque de recouvrement. Ladite pluralité de paires d'électrodes est aisément réalisée avec une 25 parfaite reproductibilité, par ladite méthode de sérigraphie. On obtient alors des paires d'électrodes identiques espacées d'une même distance. De la sorte, en recouvrant la plaque support avec la plaque de recouvrement et en veillant à ce que les paires d'électrodes coïncident avec les parties actives correspondantes, on réalise une pluralité de 30 cellules de détection sur une même plaque support. En outre, lorsque la plaque de recouvrement est rapportée sur la plaque support, on emprisonne une couche d'une solution aqueuse conductrice du courant électrique, entre lesdites portions de paroi. Ainsi, cette solution aqueuse est susceptible de maintenir en position fixe la plaque de recouvrement par le simple jeu des tensions superficielles de la solution, de la plaque support et de la plaque de recouvrement. De la sorte, une couche plane de la solution aqueuse conductrice, d'une épaisseur de l'ordre de la dizaine de pm, par exemple 40 pm, est susceptible d'être emprisonnée entre la plaque de recouvrement et la plaque support. Par ailleurs, en recouvrant la plaque support avec la plaque de io recouvrement portant les électrodes, ces dernières sont mises en contact avec le milieu aqueux au dernier moment, juste avant la mesure. Ainsi, la surface des électrodes est dépourvue de composés chimiques qui pourraient perturber cette mesure. Selon un mode préféré de mise en oeuvre de l'invention, et ainsi 15 qu'on l'expliquera plus en détail dans la suite de la description, on incrémente une différence de potentiel en fonction du temps entre lesdites électrodes, et on choisit l'intensité maximale en réponse, comme mesure de ladite quantité de courant qui les traverse. D'autres particularités et avantages de l'invention ressortiront à la 20 lecture de la description faite ci-après de modes de réalisation particuliers de l'invention, donnés à titre indicatif mais non limitatif, en référence aux dessins annexés sur lesquels : - la Figure 1 est une vue schématique de dessus d'un élément de l'installation de détection électrochimique conforme à l'invention ; 25 -la Figure 2 est une vue schématique en perspective d'un autre élément de l'installation de détection électrochimique ; - la Figure 3 est une vue schématique en perspective montrant les deux éléments illustrés sur les Figures 1 et 2, associés ; - la Figure 4 est une vue schématique partielle en coupe 30 perpendiculaire des éléments représentés sur la Figure 3, dans une position de mesure ; - la Figure 5 est une courbe voltampérométrique obtenue grâce aux éléments représentés sur la Figure 4 ; et, - la Figure 6 est une courbe de calibration, d'une intensité en fonction d'une concentration. La méthode de détection électrochimique conforme à l'invention vise à détecter indirectement la présence d'un composé biologique, une molécule complexe, dans un échantillon quelconque. II s'agit notamment de révéler la présence d'ADN, d'oligonucléotide, d'ARN, de microARN ou de tout autre protéine dans un échantillon donné io Le principe est basé sur la reconnaissance affine entre un composé biologique, soit une molécule cible, une sonde de capture constituée d'un matériel biologique de capture et un marqueur spécifique de la molécule cible. Cette dernière est alors prise en sandwich entre la sonde de capture et le marqueur spécifique. 15 Ainsi, conformément à l'invention, dans une première étape de la méthode, la sonde de capture est adsorbée ou accrochée de façon covalente sur une surface déterminée, en déposant une goutte d'une solution comportant le matériel biologique formant la sonde de capture. Dans une deuxième étape, et après incubation pendant une durée 20 déterminée, la surface est rincée afin d'éliminer les sondes de capture non adsorbées ou non accrochées. Dans une troisième étape, la surface est mise en contact avec l'échantillon incorporant le composé biologique ou molécule cible. Puis, selon une quatrième étape, la surface est rincée afin d'éliminer les 25 molécules cibles non reconnues spécifiquement et non capturées par la sonde de capture. Ensuite, dans une cinquième étape, la surface est mise en contact avec le marqueur spécifique ; puis rincée dans une sixième étape afin d'éliminer les molécules du marqueur qui n'ont pas pu être capturées. 30 Enfin, dans une dernière étape le marqueur spécifique, qui a reconnu les molécules cibles capturées et qui s'est fixé dessus, est détecté par l'intermédiaire d'une mesure électrochimique. La présente invention concerne également une installation de détection électrochimique laquelle permet de réaliser cette mesure électrochimique. Des éléments de cette installation, selon un premier mode de mise en oeuvre particulier, sont représentés sur la Figure 1 et ils comportent notamment une plaque 10, dite � plaque de recouvrement �, en matière plastique sur laquelle a été sérigraphié un triplet d'électrodes 12. La sérigraphie permet en effet d'appliquer avec une précision de l'ordre du 1/100 de millimètre, à l'état liquide ou pâteux, une composition conductrice du courant électrique qui, une fois solidifiée, constitue une io électrode. Ces électrodes comprennent une électrode centrale 14 présentant un disque circulaire 16 d'un diamètre inférieur à 10 mm par exemple de 4 mm et à partir duquel s'étend une portion linéaire de raccordement 18, et deux électrodes périphériques 20 et 22 qui présentent respectivement une partie hémicirculaire 24, 26 qui borde le 15 disque circulaire 16 et une partie linéaire 28, 30 qui longe la portion linéaire de raccordement 18. Bien évidemment, non seulement les deux électrodes périphériques 20, 22 s'étendent espacées de l'électrode centrale 14 sans être en contact avec elle, mais aussi, ces deux électrodes ne se rejoignent pas non plus et ne sont donc pas en contact 20 l'une avec l'autre. Quant à la portion linéaire de raccordement 18 et aux parties linéaires 28, 30, elles sont respectivement reliées à des bornes 32, 34, 36. Ainsi qu'on l'expliquera ci-après, la mesure électrochimique précitée consiste à appliquer un potentiel entre la borne 32 correspondant à l'électrode centrale 14 et l'une ou l'autre des bornes 34, 36 des 25 électrodes périphériques 20, 22 et de mesurer le courant électrique qui les traverse alors. Il sera montré dans la description qui va suivre, la faisabilité de la méthode, en adoptant les éléments de l'installation précitée. Toutefois, les troisième, quatrième et cinquième étapes précitées sont réalisées en une 30 seule étape, en fournissant une molécule cible c'est-à-dire le composé biologique, qui a déjà été reconnu par un marqueur spécifique. Chaque molécule cible est par conséquent déjà reliée à une molécule de marqueur spécifique. La Figure 2 représente une plaque support 38 sur laquelle la sonde de capture, ou le matériel biologique de capture qui est ici un anticorps IgG, est adsorbé sur une portion de surface. Pour cela, une goutte de 10pL d'une solution d'IgG dans un tampon PBS, décrit ci-après, est déposée et elle s'étend alors sur une portion de surface référencée S de la plaque support 38, valant environ 0,125 cm2. Le tampon PBS est un tampon phosphate à pH 7,4 contenant : NaH2PO4 4.3 mM (milli-mole par io litre), Na2HPO41 5.1 mM, et NaCl 50 mM. La plaque support 38 est laissée à incuber pendant deux heures en atmosphère humide. La portion de surface S de la plaque support 38 est ensuite rincée à trois reprises par simple trempage dans une solution de PBS ne contenant pas d'anticorps IgG. La portion de surface S alors recouverte 15 de sondes de capture, constitue une partie active de la plaque support 38. Puis, la plaque support 38 est plongée dans une solution tamponnée d'un volume de 5 mL contenant la molécule cible déjà reconnue par le marqueur spécifique. Le marqueur est une enzyme, 20 l'alcaline phosphatase, chimiquement modifiée avec l'ajout d'un anti-IgG qui lui, correspond à la molécule cible. La concentration de la solution d'incubation précitée correspond alors à la concentration en molécule cible de l'échantillon biologique. La faisabilité de la méthode sera démontrée ci-après avec cinq concentrations différentes variant de 5.10- 15 25 à 1000. 10-15 M (mole par litre). En outre, le tampon de la solution est du Tris (Tris-(hydroxymethyl) aminomethane) à 0.1 M TB (Tris Buffer) de pH 9.0, contenant du MgCl2 à 1 mM. Le temps d'incubation est de 12 heures de façon à atteindre un état d'équilibre pour la formation du complexe IgG-anti-IgG-marqueur. La rapidité avec laquelle cet état d'équilibre est 30 atteint dépend (i) de la constante d'équilibre définie par le rapport des concentrations à l'équilibre des différentes espèces, (ii) de la diffusion du marqueur associé à l'anti-IgG et (iii) du rapport entre la concentration volumique du marqueur associé, la surface S et de la concentration surfacique de l'IgG, c'est-à-dire de la quantité d'anticorps IgG adsorbée sur la portion de surface S. Ce temps peut être réduit, on travaillera alors hors équilibre. Ensuite, la surface est rincée afin d'éliminer le marqueur associé non reconnu spécifiquement par l'IgG et ceci par simple trempage successif dans une solution tampon TB. Alors, et ainsi que l'illustre maintenant la Figure 3, une goutte 40 de 4pL contenant le substrat de l'enzyme marqueur, est déposée sur la to portion de surface S. Le substrat de l'enzyme marqueur est ici le 2,6 dichloro-amino-phényl-phosphate (2,6-DCPAPP) 1 mM dans une solution tampon TB. Puis, cette goutte est écrasée en appliquant la plaque de recouvrement 10 sur la plaque support 38, de façon que la portion de 15 surface S soit recouverte par le disque circulaire 16 et les parties hémicirculaires 24, 26 des électrodes 12. Sur la Figure 4, on retrouve ainsi illustrées, la plaque support 38 et la plaque de recouvrement 10 qui définissent un espace confiné 44 dans lequel est emprisonnée une fine couche de solution d'une épaisseur d 20 comprise entre 20 pm et 100 pm, 40pm par exemple. Ainsi, cette fine couche est emprisonnée entre une première portion de paroi interne 41, correspondant à la surface de la plaque support 38 et une seconde portion de paroi interne 43, correspondant à la surface de la plaque de recouvrement 10. La plaque de recouvrement 10 est laissée libre, et elle 25 est maintenue en position fixe par rapport à la plaque support 38 par les simples forces tensio-actives qui agissent entre la solution, la plaque de recouvrement 10 et la plaque support 38. Cette fine couche de solution emprisonnée, présente alors une partie située au droit de la portion de surface S, laquelle partie définit un volume de forme sensiblement 30 cylindrique, d'une épaisseur de 40 pm pour reprendre l'exemple précité d'un diamètre voisin de 5 mm. C'est dans ce volume que s'accumule alors rapidement le produit généré par l'enzyme et qui est le 2,6 di-chloro- amino-phénol sous sa forme réduite. Ce produit constitue un porteur de charges électrochimiquement actif. La vitesse d'accumulation de ce produit est fonction de la concentration surfacique en complexe IgG-anti-IgG-marqueur et par conséquent de la concentration initiale en molécule cible associée au marqueur spécifique. La détermination de la concentration de la molécule produite par l'activité enzymatique, à un instant t, est réalisée par une mesure électrochimique et précisément, en mesurant le courant électrique qui circule dans l'électrode centrale 14 et l'une des électrodes périphériques 20, 22 pour un potentiel donné appliqué entre ces électrodes. La technique la plus sensible retenue est ici la voltamètrie cyclique. En l'espèce, le potentiel est incrémenté, puis décrémenté de 0, 1 mVolt (milli-Volt) par seconde, entre -0,4 et 0,6 V. On obtient alors une courbe intensité i /potentiel v telle qu'illustrée sur la Figure 5. L'extremum de la courbe correspondant à la valeur maximale Imax du courant électrique exprimé en pA (micro-ampère) qui traverse les électrodes, durant le balayage en potentiel, est alors enregistré car il correspond à la sensibilité électrochimique maximale de détection. Ainsi, cinq essais ont été réalisés avec cinq solutions distinctes présentant des concentrations en marqueur enzymatique associé à un anti-IgG, respectivement de 0, 5 fM (5.10-15 mole par litre), 20 fM, 150 fM et 1000 fM. Pour ces cinq essais, la mesure électrochimique est réalisée 20 minutes après avoir déposé une goutte du substrat de l'enzyme marqueur puis recouvert cette goutte avec la plaque de recouvrement 10. Les résultats obtenus sont ainsi consignés dans le tableau ci-dessous. [cible] (fM) 0 5 20 150 1000 imax (NA) 0 0.03 0.14 0.39 2.16 Des considérations théoriques non développées ici, montrent que la valeur du courant électrique varie linéairement en fonction de la concentration en molécules cibles associées au marqueur enzymatique. La Figure 6, où les valeurs du tableau ci-dessus ont été reportées, illustre cette variation et définit ainsi une courbe de calibration. De la sorte, il est aisé en mesurant le courant électrique qui traverse les électrodes pour une valeur de potentiel correspondant à la valeur maximale de courant électrique, et en reportant ensuite cette valeur maximale sur la courbe de calibration représentée sur la Figure 6 de déduire la concentration molaire correspondante en molécules cibles associées. En outre, si l'on souhaite améliorer le seuil de détection de la molécule cible, ou bien le temps nécessaire à la détection, il est possible de forcer le rapprochement de la plaque de recouvrement 10 et de la plaque support 38 à une distance d inférieure à 40 pm. La production de molécule produite par l'activité enzymatique, ne dépend que de la concentration en composé biologique dans l'échantillon. Elle est par conséquent identique si le volume de l'espace confiné est plus faible, en revanche la concentration, elle, augmente d'autant plus rapidement. Et par conséquent, puisque l'intensité du courant électrique qui traverse les électrodes dépend de la concentration en molécules produites, le composé biologique cible sera d'autant plus rapidement détectable. On observera que la distance d entre les deux plaques, ou le rapport surface active sur le volume qui s'étend entre les deux plaques au droit de la surface active, permet d'ajuster la dynamique de la réponse de l'installation de détection, dans la mesure où l'ensemble des sites de captures ne sont pas saturés par la molécule cible. Bien évidemment, la mise en oeuvre de la méthode décrite ci-dessus selon le mode de mise en oeuvre particulier, dans lequel la molécule cible est directement associée à son marqueur, est identiquement transposable à l'identification d'une molécule cible dans un échantillon biologique donné. Les troisième, quatrième et cinquième étapes sont alors rétablies distinctement. Par ailleurs, selon un deuxième mode particulier de réalisation de 30 l'invention non représenté, les électrodes sont, non pas sérigraphiées sur la plaque de recouvrement, mais à l'opposé sur la plaque support. Ce deuxième mode de réalisation est avantageux lorsque les électrodes sont insensibles aux espèces chimiques ou aux composés biologiques qui pourraient s'accumuler à sa surface. Car en effet, dans ce cas il est plus aisé de faire coïncider la position de la surface active avec celle des électrodes, puisqu'il suffit d'appliquer les solutions sur les électrodes 5 disposées sur la plaque support. En outre, selon un troisième mode particulier de réalisation non représenté, une pluralité de cellules électrochimiques sont formées sur une même plaque support. Ainsi par exemple, on réalise tout d'abord une pluralité de triplets d'électrodes alignées sur la plaque support, par io exemple quatre triplets, chaque triplet correspondant aux électrodes illustrées sur la Figure 1. On réalise ensuite sur la plaque support les différents dépôts au niveau de chacune des électrodes centrales desdits triplets pour préparer la mesure. Et après avoir déposé une goutte de solution contenant le substrat de l'enzyme marqueur sur chacun des 15 dépôts, on recouvre la plaque support avec une seule lamelle de verre. Ainsi on réalise simultanément une mesure de l'intensité du courant électrique qui traverse les électrodes. De la sorte, on peut soit réaliser une série de mesures pour un même échantillon biologique et être alors certain de la présence de la molécule cible ou alors, réaliser 20 simultanément plusieurs mesures de différents échantillons. Selon une variante de réalisation de l'invention particulièrement avantageuse, visant à augmenter la sensibilité de la méthode et ce, dans le cas où les porteurs de charges peuvent être produits par une enzyme, on démultiplie la production des porteurs de charges. Pour ce faire, on 25 utilise un support, par exemple des nanoparticules, des dendrimères ou encore des �branched � ADN, sur lesquels une pluralité d'enzymes sont présentes ; et préférentiellement un grand nombre. Ainsi pour chaque composé biologique capturé, il y aura une multitude d'enzymes qui produiront le porteur de charges et par conséquent l'augmentation de la 30 concentration de celui-ci dans l'espace confiné se fera plus rapidement. Des dendrimères sur lesquels plus d'une centaine de phosphatases alcalines sont accrochées, existent dans le commerce. Selon une autre variante de réalisation de l'invention, toujours dans le but d'augmenter la sensibilité de la détection, il est possible d'amplifier le signal électrochimique par un recyclage redox du produit électrodétectable. Ceci peut être réalisé soit par une autre électrode à un potentiel approprié soit par une enzyme, une enzyme redox par exemple, en présence de son substrat. Dans le cas d'un recyclage par une autre électrode, l'amplification du signal est d'autant plus forte que les électrodes sont proches l'une de l'autre. Il convient alors d'utiliser un réseau d'électrodes interdigitées. Dans le cas d'un recyclage par une to enzyme redox, celle-ci peut être soit laissée à réagir dans le film de solution qui constitue l'espace confiné, soit immobilisée à la surface de l'électrode de travail, soit greffée sur des particules. Par exemple, il peut être pratique d'avoir la partie active sur une des parois, et sur l'autre paroi, les électrodes modifiées avec cette enzyme redox. 15 Dans l'exemple détaillé ci-dessus la détection est basée sur une activité enzymatique. Mais la production du porteur de charge peut également résulter, selon encore une autre variante, de la dissolution d'une particule métallique. Par exemple, le marqueur est une particule d'or qui va être dissoute après l'étape de confinement. Sa dissolution est 20 réalisée par la l'électrogénération de Br2 dans un milieu contenant du HBr et sa détection est réalisée par son électrodépostion sur l'électrode. On pourra notamment se référer au document FR 00 00814, lequel divulgue un dosage immunologique à l'aide de marqueurs colloïdaux métalliques. Selon une dernière variante de réalisation, la surface active peut être 25 ménagée sur des particules magnétiques. Ainsi, ces particules magnétiques sont traitées de manière à assurer la capture puis le marquage de la molécule cible. Ensuite, les particules sont déposées sur l'une des deux parois et, après formation de l'espace confiné à l'aide de la deuxième paroi, la révélation et la mesure électrochimique sont réalisées. 30 L'avantage d'une telle variante réside dans la possibilité de réaliser la structure � sandwich � indépendamment de la mise en oeuvre des deux parois. REVENDICATIONS 1. Installation de détection électrochimique pour détecter la présence d'un composé biologique donné dans un échantillon, ladite installation comprenant une cellule de détection présentant une paroi interne et deux électrodes (14 ; 20, 22) sur ladite paroi interne, ladite paroi interne présentant deux portions (41, 43) rapprochées en regard l'une de l'autre pour former un espace confiné (44), et une partie active (S) qui s'étend dans ledit espace confiné et sur laquelle est adsorbé un matériel io biologique de capture, ledit composé biologique donné étant susceptible d'être capturé spécifiquement par ledit matériel biologique de capture lorsque ledit échantillon est mis en contact avec ladite partie active (S), ledit composé biologique donné capturé étant susceptible d'être reconnu par un marqueur spécifique lorsque ledit marqueur spécifique est mis en 15 contact avec ladite partie active, ledit marqueur spécifique étant susceptible de produire un porteur de charge spécifique dudit marqueur dans ledit espace confiné, ledit composé biologique donné capturé et reconnu étant détecté ensuite par l'intermédiaire du porteur de charge en mesurant la quantité de courant électrique qui traverse lesdites 20 électrodes ; caractérisée en ce que lesdites portions de paroi (41, 43) sont mobiles l'une par rapport à l'autre entre une position écartée et une position rapprochée ; et en ce que ladite partie active (S) est ménagée sur l'une desdites 25 portions de paroi (41), tandis que lesdites portions (41, 43) sont portées dans ladite position rapprochée pour former ledit espace confiné (44), après que ledit échantillon et ledit marqueur ont été successivement mis en contact avec ladite partie active (S). 2. Installation de détection électrochimique selon la revendication 30 1, caractérisée en ce que lesdites électrodes (14 ; 20, 22) sont situées sur l'une desdites portions de paroi (41). 3. Installation de détection électrochimique selon la revendication 1 ou 2, caractérisée en ce que lesdites portions de paroi (41, 43) sont respectivement formées par une plaque support (38) formant ladite une desdites portions de paroi et une plaque de recouvrement (10) pour 5 recouvrir ladite une desdites portions de paroi. 4. Installation de détection électrochimique selon la revendication 3, caractérisée en ce que ladite plaque support (38) présente une pluralité de portions de paroi sur lesquelles sont respectivement ménagées des parties actives (S) de façon à former une pluralité de cellules de détection. io 5. Installation de détection électrochimique selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisée en ce que lesdites portions de paroi (41, 43) sont planes. 6. Installation de détection électrochimique selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisée en ce que lesdites 15 deux électrodes (14 ; 20, 22) sont situées sur l'autre desdites portions de paroi (43). 7. Méthode de détection électrochimique pour détecter la présence d'un composé biologique donné dans un échantillon, ladite méthode étant du type selon laquelle : 20 - on fournit une cellule de détection présentant une paroi interne et deux électrodes (14 ; 20, 22) sur ladite paroi interne, ladite paroi interne présentant deux portions (41, 43) rapprochées en regard l'une de l'autre formant un espace confiné (44) ; - on adsorbe un matériel biologique de capture sur une partie 25 active (S) qui s'étend dans ledit espace confiné (44) ; - on met ledit échantillon en contact avec ladite partie active, ledit composé biologique donné étant susceptible d'être capturé spécifiquement par ledit matériel biologique de capture ; - on met ladite partie active en contact avec un marqueur 30 spécifique, ledit composé biologique donné capturé étant susceptible d'être reconnu par ledit marqueur spécifique et ledit marqueur spécifiqueétant susceptible de produire un porteur de charge spécifique dudit marqueur dans ledit espace confiné ; et, - on mesure la quantité de courant électrique qui traverse lesdites électrodes pour détecter ledit composé biologique donné capturé et 5 reconnu par l'intermédiaire du porteur de charge; caractérisée en ce qu'on fournit deux portions de paroi (41, 43), mobiles entre une position écartée et une position rapprochée l'une de l'autre ; et en ce qu'on ménage ladite partie active (S) sur l'une desdites io portions de paroi (41), tandis qu'on porte lesdites portions dans ladite position rapprochée pour former ledit espace confiné (44) après que ledit échantillon et ledit marqueur ont été successivement mis en contact avec ladite partie active. 8. Méthode de détection électrochimique selon la revendication 7, 15 caractérisée en ce qu'on forme lesdites électrodes (14, 20, 22) sur l'une desdites portions de paroi (41) par une méthode sérigraphique. 9. Méthode de détection électrochimique selon la revendication 7 ou 8, caractérisée en ce qu'on fournit une plaque support (38) et une plaque de recouvrement (10) pour former respectivement lesdites portions 20 de paroi (41, 43). 10. Méthode de détection électrochimique selon la revendication 9, caractérisée en ce qu'on réserve une pluralité de portions de paroi sur ladite plaque support (38) dans lesquelles on ménage une partie active, de façon à former une pluralité de cellules de détection. 25 11. Méthode de détection électrochimique selon la revendication 10, caractérisée en ce qu'on forme une pluralité de paires d'électrodes sur ladite plaque de recouvrement (10). 12. Méthode de détection électrochimique selon l'une quelconque des revendications 7 à 11, caractérisée en ce qu'on emprisonne une 30 couche d'une solution aqueuse entre lesdites portions de paroi. 13. Méthode de détection électrochimique selon l'une quelconque des revendications 7 à 12, caractérisée en ce qu'on incrémente ladifférence de potentiel en fonction du temps entre lesdites électrodes pour mesurer ladite quantité de courant qui les traverse.