FR 2920668 A1 20090313 FR 0706246 A 20070906 1 La présente invention concerne une nouvelle utilisation de l'oléocanthal et d'extraits de l'huile d'olive contenant de l'oléocanthal et des dérivés, pour la préparation d'un médicament utile en thérapeutique et en nutraceutique pour le traitement d'affections du métabolisme lipidique. L'obésité constitue aujourd'hui un problème majeur de santé publique dans le monde, en particulier en Amérique du Nord, en raison de facteurs de prédisposition génétiques, des modes de vie sédentarisés et de régimes nutritionnels déséqui- librés. Selon l'Organisation Mondiale de la Santé (OMS, 2002) un milliard de personnes dans le monde seraient en surpoids dont 300 millions en état d'obésité, et ces chiffres sont en augmentation dans de nombreux pays. On sait que l'obésité augmente de manière significative les risques de diabète de type 2, d'hyperlipidémie, de résistance à l'insuline, d'arthrose et de maladies cardiovasculaires, notamment d'hypertension artérielle et d'athérosclérose. La surcharge pondérale peut entraîner les mêmes risques, bien qu'ils soient moins élevés, mais elle peut aussi dégénérer en obésité. On sait aussi qu'une alimentation excessive, chez les personnes obèses ou présentant une surcharge pondérale établie, peut entraîner des dommages lipidiques et protéiques importants. L'obésité et la surcharge pondérale ont aussi des conséquences néfastes sur le comportement psychologique des personnes qui en sont affectées. Les liens entre l'obésité et la réponse inflammatoire ont fait l'objet de nombreuses études. Ainsi, on a constaté qu'une alimentation excessive et la consommation de certains nutriments peut déclencher des médiateurs impliqués dans le mécanisme de l'inflammation. L'obésité, la résistance à l'insuline et le diabète de type 2 sont liés à une inflammation chronique caractérisée par une production anormale de cytokines proinflammatoires comme le TNFa qui est présent à un taux élevé dans les tissus adipeux des obèses. Un signal métabolique tel qu'un excès alimentaire lipidique provoque la B1775FR 2 mise en éveil des adipocytes, entraînant une augmentation de la masse graisseuse, qui déclenche une réponse inflammatoire au niveau du réticulum endoplasmique et la production de TNFa qui, après infiltration macrophagique, entraîne une pertur- bation des mécanismes de régulation de l'organisme et une augmentation du stress métabolique, qui à son tour entraîne une réaction inflammatoire chronique. Une prise en charge thérapeutique de ces troubles doit tenir compte de ces mécanismes. La prescription d'exercices physiques et de régimes diététiques appropriés est généralement le premier moyen de lutte contre l'obésité et la surcharge pondérale. Divers médicaments ont aussi été proposés pour traiter l'obésité, par exemple des anorexigènes tels que le chlorhydrate de sibu- tramine et le rimonabant, ou encore des inhibiteurs de lipases gastro-intestinales. Ces médicaments présentent cependant des effets secondaires qui en limitent l'utilisation. Il est donc souhaitable de mettre au point de nouveaux médicaments et alicaments susceptibles de participer au traitement de la surcharge pondérale et de l'obésité. L'huile d'olive, et en particulier l'huile d'olive vierge, contient notamment des acides gras mono-insaturés (acide oléique) ainsi que des composés phénoliques à propriétés anti-oxydantes qui ont pour effet de retarder l'oxydation des lipoprotéines LDL. Parmi ces composés phénoliques, on distingue des alcools phénoliques tels que le tyrosol et l'hydroxytyrosol, des acides benzoïques, des acides caféique et élénolique estérifiés par le tyrosol et l'hydroxytyrosol, ainsi que des flavonoïdes tels que des flavones et flavonols. Des études épidémiologiques ont montré les effets bénéfiques pour la santé des régimes diététiques méditerranéens comprenant: un apport élevé en fibres, fruits, légumes, et en huile d'olive qui constitue la source principale de matière grasse. On peut se référer par exemple à RW Owen et al., Lancet Oncol. (Oct. 2000) 107-12. P. Andrewes et al., J. Agric. Food Chem. 51:5, 1415-1420 (2003), ont montré que l'huile d'olive contient un dérivé phénolique particulier, à savoir la deacetoxy ligstroside aglycone, qui est responsable de son goût typique. G.K. Beauchamp et al. Nature, vol. 437, 45-46 (Sept. 2005), ont montré que la deacetoxy ligstroside aglycone, aussi dénommée oléocanthal, contenue dans l'huile d'olive vierge obtenue par première pression à froid, présente des propriétés inhibitrices des enzymes COXl et COX2, c'est-à-dire des propriétés Io anti-inflammatoires voisines de celles de l'ibuprofène, molécule utilisée depuis de nombreuses années comme médicament anti-inflammatoire non-stéroidien. Ces propriétés de l'oléocanthal sont aussi décrites dans WO 2006122128. Ces propriétés montrent que l'oléocanthal pourrait être envisagé dans les 15 indications de l'ibuprofène, c'est-à-dire comme anti-inflammatoire général, par voie orale, susceptible d'être utile en rhumatologie. L'oléocanthal, ou deacetoxy-ligstroside aglycone, a été détecté dans des huiles d'olive de diverses provenances, plus 20 particulièrement dans l'huile d'olive vierge obtenue par première pression à froid, à des concentrations très faibles qui varient généralement de 20 à 200 ppm (masse), soit de 0,002 à 0,02% en poids, en fonction de la provenance de l'huile d'oliveä 25 L'oléocanthal peut être représenté par la formule générale (I) suivante : o (I) L'oleuropéine, que l'on trouve dans les fruits et principalement dans les feuilles de l'olivier, est un glyco-30 Bide représenté par la formule générale (II) ci-dessous : HO O-Glucose (II) L'utilisation de l'oleuropéine dans des compositions alimentaires ou pharmaceutiques afin de stimuler la minéralisation osseuse chez l'homme ou l'animal a été proposée dans WO 2004091591. L'activité antivirale de certains dérivés d'oleuropéine a aussi été décrite dans le brevet US 6.455.580. Des dérivés tels que l'oleuropéine aglycone, présentant des propriétés anti-oxydantes, et sa forme dialdéhydique peuvent aussi être extraits de l'huile d'olive. Parmi les autres dérivés d'intérêt que contient l'huile d'olive, on peut citer les formes aldéhyde de l'oleuropéine aglycone et du ligstroside aglycone, représentées par la formule (III) ci-dessous, CHO R O HOH3CO2C (III) dans laquelle R est un atome d'hydrogène ou un groupe hydroxy, et la forme dialdéhyde de la décarboxyméthyl oleuropéine aglycone représentée par la formule (IV). HO C°.' O 0 4 (IV) Une utilisation pharmaceutique de ces composés requiert l'obtention de fractions relativement concentrées. De plus, l'oléocanthal est un produit très fragile, facilement détruit par la chaleur et par oxydation, comme le sont d'ailleurs la 5 plupart des autres composés polyphénoliques naturellement présents dans les huiles végétales. Ces dérivés, ainsi que l'oléocanthal, participent aux propriétés utiles de l'huile d'olive et pour cette raison divers procédés d'extraction ont été mis au point pour les isoler ou pour produire des extraits enrichis en l'un ou l'autre ou plusieurs de ces dérivés. Les études effectuées par la demanderesse ont montré de manière étonnante que ces dérivés, et tout particulièrement l'oléocanthal et certains dérivés, ainsi que des extraits les contenant, présentent des propriétés intéressantes permettant de les utiliser en thérapeutique et en nutraceutique pour réguler ou restaurer le métabolisme lipidique. La présente invention a donc pour objet l'utilisation de dérivés de formule générale (A) ci-après 0 (A) dans laquelle R représente un atome d'hydrogène ou un groupe hydroxy, ainsi que des extraits les contenant, pour la préparation d'un médicament destiné au traitement des troubles du métabolisme lipidique. L'invention concerne plus particulièrement l'utilisation de l'oléocanthal représenté par la formule générale (A) ci-dessus, où R est un atome d'hydrogène. L'invention a également pour objet l'utilisation d'un extrait d'huile d'olive contenant un dérivé de formule générale (A) ci-dessus, plus particulièrement de l'oléo- canthal, pour la préparation d'un médicament ou d'un alicament, notamment pour le traitement des surcharges pondérales et de l'obésité. L'extrait utilisé dans l'invention peut contenir non seulement l'oléocanthal mais aussi un dérivé d'oleuropéine, notamment la forme dialdéhyde de la décarboxyméthyl oleuropéine aglycone représentée par la formule (A) ci-dessus où R est un groupe hydroxy. L'oléocanthal et les extraits le contenant sont plus particulièrement indiqués dans le traitement de la surcharge pondérale et des troubles métaboliques en résultant, notamment des affections telles que l'obésité et les maladies qui lui sont liées, en particulier le diabète de type 2, la résistance à l'insuline, l'athérosclérose. Comme indiqué plus en détail ci-dessous, les études 15 effectuées par le demandeur ont montré que l'oléocanthal et les compositions à base d'oléocanthal suivant la présente invention exercent une action directe sur le métabolisme lipidique, se traduisant par une diminution de la captation des lipides, plus particulièrement des acides gras circulants, 20 par les adipocytes. Les études effectuées ont montré que l'oléocanthal, aux concentrations de 0,3 et 1,0 pg/ml, sur une durée de 24 h, a pour effet de diminuer le relargage de l'oléate à la face inférieure de la barrière intestinale, avec un taux d'inhi- 25 bition de 43% et 45% respectivement. Ceci montre que l'oléocanthal, in vivo, pourrait diminuer le passage des lipides ingérés dans le sang. De plus, les études ont montré que l'oléocanthal ne provoque pas d'inhibition de la formation de nouveaux 30 adipocytes, ni la néosynthèse de lipides par ces cellules. Par contre, aux concentrations de 0,3 et 1,0 pg/ml, il limite le stockage des lipides en diminuant l'incorporation des acides gras circulants dans les adipocytes. Etant donné que ce phéno- mène est le mécanisme majeur d'accumulation des graisses sous- 35 cutanées, il apparaît que l'oléocanthal peut être efficace 7 comme composant de médicament ou d'alicament administré dans le cadre d'un traitement amincissant. Enfin, les études ont mis en évidence une action de l'oléocanthal sur les mécanismes inflammatoires impliqués dans les troubles métaboliques caractéristiques de l'obésité, de l'insulino-résistance et du diabète de type 2. Ces études démontrent donc l'intérêt de l'action de l'oléocanthal sur les gènes induits par le TNFa, permettant d'en limiter les effets néfastes par une modulation du système des kinases dont le rôle est crucial dans l'action de l'insuline et la capture du glucose. Ces résultats montrent que l'oléocanthal peut être utilisé avantageusement dans des traitements destinés à maîtriser les conséquences des troubles nutritionnels chez les sujets obèses ou ayant tendance à le devenir. L'oléocanthal de l'invention peut aussi être utilisé directement ou sous forme d'extrait d'huile d'olive à teneur élevée en oléocanthal, par exemple de l'ordre de 10% à 30% en poids, en complément alimentaire de régime diététique destiné à des sujets présentant une surcharge pondérale. Des extraits à plus forte concentration en oléocanthal, de l'ordre de 50 à 90% en poids, peuvent être préparés pour des applications spcifiques. La concentration en forme dialdéhyde de la décarboxyméthyl oleuropéine aglycone, quand l'extrait en contient, est généralement. comprise entre 1 et 15% environ. Les compositions à base d'oléocanthal suivant la présente invention peuvent être administrées par voie orale en utilisant des formulations adaptées, et plus particulièrement au moyen de gouttes, gélules ou capsules molles. Les capsules ou gélules peuvent être à base de gélatine, préparées suivant les techniques classiques. Les doses unitaires utilisées peuvent être de l'ordre de 0,1 à 50 mg, et de préférence entre 1 et 25 mg de dérivé de formule (A), notamment d'oléocanthal. 8 La posologie est choisie par le praticien en fonction de l'état du patient et de l'objectif visé, mais elle est généralement ccmprise entre 5 et 25 mg d'oléocanthal par jour pour un adulte. Ainsi, un traitement adapté à un cas moyen peut consister à administrer une à trois capsules de 25 mg d'extrait à 10% d'oléocanthal par jour. La durée du traitement est adaptée à l'état du patient et par exemple, pour un patient présentant une surcharge pondérale établie avec tendance à l'obésité, le traitement peut consister à administrer une capsule de 25 mg d'extrait à 10% d'oléocanthal par jour pendant 1 à 2 mois, suivi d'un traitement d'entretien à raison de 1 à 3 capsules par semaine pendant 2 à 3 mois. Le traitement peut être renforcé et prolongé pour un patient obèse, et il peut être par exemple de 2 ou 3 capsules (contenant des extraits à 10 ou 30% selon l'état du patient) par jour pendant 2 à 3 mois, suivi d'une capsule par jour pendant 3 à 6 mois. Pour un patient diabétique, le traitement est généralement d'une capsule par jour sans limitation de durée. Dans ce dernier cas, un tel traitement par l'oléo- canthal peut limiter ou retarder, voire éviter un traitement classique à l'insuline. Plusieurs exemples de formulations adaptées à l'invention et des résultats expérimentaux sont indiqués ci-après à titre non limitatif. Exemple 1 Un extrait à 10% d'oléocanthal est préparé à partir d'une huile d'olive vierge, première pression à froid, d'origine Pietra Pinta dont la teneur en oléocanthal est d'environ 48 mg/kg. L'huile est extraite par un mélange éthanol/eau, la phase hydro-alcoolique est lavée à l'hexane, préconcentrée et extraite à l'acétate d'éthyle. La phase acétate d'éthyle est ensuite concentrée à sec. 9 On obtient ainsi un extrait contenant environ 10% d'oléocanthal en phase huileuse, comprenant notamment : - oléocanthal env. 10% - dérivé d'oleuropéine env. 15% -pinorésinols env. 10% Le dérivé d'oleuropéine indiqué ci-dessus est constitué par la forme dialdéhyde de la décarboxyméthyl oleuropéine aglycone. L'extrait contient encore quelques pourcents de dérivés d'oléocanthal (masse moléculaire 362) et d'oleuropéine (masse moléculaire 378). Cet extrai- est conditionné en capsules molles à paroi à base de gélatine suivant une technique classique, chaque capsule contenant 25 mg d'extrait. Exemple 2 Un extrait à 30% d'oléocanthal est préparé à partir d'une huile d'olive vierge, première pression à froid, d'origine Campione, dont la teneur en oléocanthal est d'environ 212 mg/kg. L'huile est extraite par un mélange éthanol/eau, la phase hydro-alcoolique est lavée à l'hexane, préconcentrée et extraite à l'acétate d'éthyle. La phase acétate d'éthyle est ensuite concentrée à sec. On obtient ainsi un extrait contenant environ 30% d'oléocanthal en phase huileuse, comprenant notamment : -oléocanthal env. 30% - dérivé d'oleuropéine env. 10% - pinorésinols env. 12% Le dérivé d'oleuropéine indiqué ci-dessus est le même que dans l'Exemple 1.. L'extrait contient encore quelques pourcents de dérivés d'oléocanthal (masse moléculaire 362) et d'oleuropéine (masse moléculaire 378). Cet extrait est conditionné en capsules de 25 mg comme dans l'Exemplel. 10 Exemple 3 Un extrait: à 50% d'oléocanthal est préparé à partir de l'extrait de :L'Exemple 2, et purifié par chromatographie préparative. Cet extrait, qui contient environ 10% de dérivé d'oleuropéine et moins de 10% de pinorésinols, est conditionné en capsules molles suivant la même technique que dans l'Exemple 1, afin de préparer des capsules à forte teneur en oléocanthal, destinées à des traitements de patients obèses. Exemple 4 Les effets des extraits d'oléocanthal suivant l'invention ont été étudiés sur la différenciation des adipocytes, sur la lipogenèse et sur le stockage des lipides circulants. Les essais ont été effectués en utilisant trois extraits dont la teneur en oléocanthal était respectivement de 1 pg/ml, 0,3 pg/ml et 0,1 pg/ml. Les molécules de référence utilisées sont le TNFa, qui est un inhibiteur de la différenciation des adipocytes, et la cérulénine qui est un inhibiteur de la lipogenèse. Les cellules utilisées sont des pré-adipocytes de souris de lignée 3T3-Ll cultivées à confluence en milieu de croissance DMEM. A forte confluence, le milieu de culture a été remplacé par du milieu de différenciation (DMEM contenant des molécules différenciantes). Des cultures contrôles ont été réalisées pendant toute la durée de l'expérience (contrôles non différenciés). Après différenciation, les cellules ont été transférées en milieu post-différenciation (milieu de croissance + insuline) puis incubées pendant 48 h à 37°C et 5% de CO2. Pour la mesure de la différenciation d'adipocytes, après incubation, le milieu de post-différenciation a été éliminé, et les cellules ont été incubées dans le milieu de croissance DMEM pendant 24 h et 5% de CO2. Après élimination des surnageants de culture, les cellules ont été rincées en PBS et 11 les lipides intracellulaires ont été colorés par l'Adipored (BioWhittaker PT-7009). Pour la mesure du stockage des lipides circulants, les mêmes manipulations sont effectuées mais après incubation, le milieu de post-différenciation a été éliminé, et les cellules ont été incubées dans le milieu de croissance DMEM supplémenté avec le marqueur radioactif [19C] oléate (Biotrend CFA243) pendant 48 h et 5% de CO2. En fin d'incubation, les adipocytes ont été lavés et les lipides ont été extraits selon le proto- Cole de Bligh et Dyer, séchés sous azote, et la radioactivité a été mesurée en scintillation liquide (compteur LKB Rackbeta). Les mesures ont aussi été faites simultanément sur un témoin (sans oléocanthal). On a constaté que les cellules non différenciées étaient faiblement marquées, au contraire des cellules différenciées colorées par l'Adipored. De nombreuses vésicules graisseuses caractéristiques de la différenciation des adipocytes étaient présentes.Les effets sur le stockage des lipides circulants ont été évalués en mesurant l'incorporation du [14C] oléate dans les adipocytes différenciés. Comme le montrent les résultats du Tableau 1 ci-dessous, le traitement par le produit de référence, la céruline à 20 pM, a diminué significativement l'incorporation d'oléate dans les adipocytes. On constate aussi que l'oléocanthal, à 1 et 0,3 pg/ml, a inhibé significativement l'incorporation d'oléate de manière dose-dépendante. Tableau 1 Cpm % témoin Témoin différencié 32000 100 Contrôle non différencié 6763 21 Cérulénine 20 pM 11487 36 (p 0,05) Inv. = oléocanthal de l'invention. Ces résultats montrent que l'oléocanthal suivant la présente invention n'inhibe pas la formation de nouveaux adipocytes ni, de façon significative, la synthèse de lipides par ces cellules. Par contre, aux concentrations de 0,3 et 1 pg/ml il limite significativement le stockage des lipides dans les adipccytes. Etant donné que ce phénomène est le mécanisme majeur d'accumulation des graisses sous-cutanées, ces résultats démontrent l'intérêt de l'oléocanthal de l'invention dans des traitements amincissants. Exemple 5 Les effets des extraits d'oléocanthal de l'invention sur le passage des lipides à travers la barrière épithéliale 15 intestinale ont été étudiés comme indiqué ci-après. L'étude a été faite par mesure de la cinétique de passage de l'acide oléique en présence de l'oléocanthal de l'invention dans le modèle de barrière épithéliale intestinale reconstruite à partir de cellules de lignée Caco2. 20 Des cellules Caco2 ont été ensemencées sur des inserts Millicell 24 (Millipore) en milieu de culture MEM. A près deux semaines de culture, en renouvelant les inserts et le milieu de culture tous les jours, l'intégrité de la barrière épithéliale obtenue a été vérifiée par des mesures de résistance 25 électrique. Une solution de [14C] oléate à 2 pCi/ml dans un tampon taurocholate 10 mM dans le PBS à pH 7,4 a été déposée à la surface des inserts en présence d'oléocanthal de l'invention. Un même essai sans oléocanthal est effectué comme témoin. 30 On a prélevé 50 pl du compartiment apical (compartiment donneur) et 50 pl du compartiment basal (compartiment récepteur) à intervalles de temps réguliers (0, 30 min, 1 h, 2 h, 13 4 h, 6 h et 24 h) et la radioactivité présente a été mesurée en scintillation liquide. Les résultats sont indiqués au Tableau 2 ci-après. Tableau 2 30 min. 1 h 2 h Cpm % Cpm % Cpm % Témoin 2555 100 8525 100 12006 100 1 pg/ml 4624 181 7008 82 10555 88 0,3 pg/ml 4672 183 9015 106 9934 83 0,1 pg/ml 9045 354 10675 125 13769 115 4 h 6 h 24 h Cpm % Cpm % Cpm % Témoin 19763 100 20657 100 47413 100 1 pg/ml 18714 95 18697 91 27178 57 0,3 pg/ml 17642 89 16503 80 26058 55 0,1 pg/ml 17479 88 23739 115 44878 95 L'oléocanthal selon l'invention a été testé aux concentrations de 0,lpg/ml, 0,3 pg/ml et 1 pg/ml, comme indiqué au tableau ci-dessus. 10 Le pourcentage indiqué est calculé par rapport au témoin. Ces résultats montrent une diminution au cours du temps de la quantité de [14C] oléate présente au niveau du compartiment apical, parallèlement à une augmentation de la quantité de [14C] oléate dans le compartiment basal des inserts de 15 culture. Cependant, il apparaît que la majorité de l'oléate pénétrant dans les cellules se trouve métabolisée et ne ressort pas dans le compartiment basal. On constate que, dans les conditions de l'expérimentation, l'oléocanthal de l'invention, à la concentration de 0, 1 pg/ml, ne modifie pas la 20 pénétration de l'oléate dans la barrière Caco2. Par contre, aux concentrations de 0,3 et 1 pg/ml, il tend à diminuer le relargage de l'oléate du côté du compartiment basal de la barrière après 6 heures de culture.5 REVENDICATIONS 1. Utilisation de dérivés de formule générale (A) ci-après (A) dans laquelle R représente un atome d'hydrogène ou un groupe hydroxy, ainsi que des extraits les contenant, pour la préparation d'un médicament destiné au traitement des troubles du métabolisme lipidique. 2. Utilisation selon la revendication 1, caractérisée en ce que le dérivé est l'oléocanthal représenté par la 10 formule (A) où R est un atome d'hydrogène. 3. Utilisation selon la revendication 1, caractérisée en ce que le dérivé de formule générale (A) est utilisé sous forme d'extrait d'huile d'olive. 4. Utilisation selon la revendication 3, caractérisée 15 en ce que l'extrait d'huile d'olive contient 10 à 30% en poids d'oléocanthal. 5. Utilisation selon la revendication 4, caractérisée en ce que l'extrait contient en outre la forme dialdéhyde de la décarboxyméthyl oleuropéine aglycone. 20 6. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que l'on utilise des doses unitaires comprises entre 1 et 25 mg de dérivé de formule (A). 7. Utilisation selon l'une quelconque des revendica- 25 tions 1 à 6, caractérisée en ce que le médicament est destiné au traitement des surcharges pondérales et de l'obésité. 8. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, caractérisée en ce que le médicament est destiné15 au traitement du diabète de type 2, de la résistance à l'insuline, et de l'athérosclérose. 9. Utilisation d'un dérivé de formule générale (A) suivant la revendication 1, pour la préparation d'un alicament 5 pour le traitement des surcharges pondérales.