FR 2919805 A1 20090213 FR 0705831 A 20070810 Titre de l'invention : compositions cosmétiques destinées à lutter contre le vieillissement de la peau humaine et contenant au moins un extrait d'algue et un polysaccharide. La présente invention concerne des compositions à usage cosmétique, destinées à lutter contre le vieillissement de la peau humaine et caractérisées par le fait qu'elles contiennent au moins une association d'un extrait d'algue de type Laminaria et d'un polysaccharide du type biosaccharide gum. Les extraits d'algues ont de nombreuses propriétés reconnues en cosmétique. Les extraits d'algues de la famille de Phéophycées comme la Laminaria ochroleuca sont connues comme étant osmoprotecteurs et anti-radicalaires. Ces propriétés sont revendiquées dans le brevet EP1074262, avec comme effet complémentaire résultant de ces dernières, un effet anti-vieillissement de la peau. Par la suite, un effet anti-inflammatoire de ces extraits a été découvert et c'est cette activité qui est le plus souvent mise en avant dans les développements commerciaux. Les polysaccharides extraits de végétaux sont très nombreux et ils ont des compositions et structures très variées. Leurs propriétés cosmétiques sont elles aussi très nombreuses et très variées. Le polysaccharide décrit en nomenclature INCI sous le nom de biosaccharide gum-2, comprend des sucres hexosidiques ou pentosidiques, des molécules d'acide uronique et des molécules de rhamnose fixées de manière ramifiée. Dans le brevet WO 2004078789, un tel polysaccharide est revendiqué pour stimuler le relargage de 13- endorphines dans la peau et donc d'avoir des propriétés calmantes et adoucissantes. Ces deux extraits à vocation essentiellement calmante et adoucissante (anti-inflammatoire) peuvent certes avoir un effet préventif du vieillissement car il est connu qu'une inflammation chronique de la peau humaine ou de tout autre organe en accélère le vieillissement, mais ils ne sont pas prédestinés par leur propriétés connues à avoir un effet rajeunissant. C'est pourtant l'effet surprenant qui a été constaté en testant un complexe de ces deux principes actifs, complexe que l'on nomme Novaxyline , constitué en proportions variables d'un extrait de Laminaria ochroleuca et de biosaccharide gum-2. Expérience 1. Dans un premier test, on a étudié l'effet de ce complexe dénommé Novaxyline , sur la sénescence cellulaire de fibroblastes humains en culture. La sénescence est un phénomène de vieillissement cellulaire ou les cellules sont bloquées en phase G1 du cycle cellulaire et ne rentrent jamais dans la phase conduisant à la division cellulaire. Les cellules sénescentes sont caractérisées par leur métabolisme actif avec une surexpression de la (3-galactosidase. En conditions expérimentales, les cellules en culture, privées de sérum, arrêtent de croître, mais continuent de traverser le cycle cellulaire jusqu'à ce qu'elles atteignent la phase G1 à partir de laquelle les cellules ont deux voies possibles : entrer dans un état quiescent GO dans lequel le taux de synthèse protéique est fortement réduit par rapport aux cellules en prolifération (les cellules ne sont pas métaboliquement actives, et n'expriment pas la (3-galactosidase); ou bien entrer dans un état sénescent. Les phases G1, S, G2 et M sont les sous-divisions classiques du cycle cellulaire. Gi intervalle entre la fin de la mitose et le début de la synthèse de l'ADN, S : phase de réplication de l'ADN, G2 : intervalle entre la fin de la réplication de l'ADN et le début de la mitose, M : phase mitotique aboutissant aux deux cellules filles (Hayflick L. 1977 in Handbook of the Biology ofAgeing, Goldstein S. 1990 Science 249, 1129-1133). Des primocultures de fibroblastes sont obtenues à partir d'une biopsie de peau humaine. Les essais sont réalisés sur des fibroblastes entre le el" et le 10ème passage, afin d'assurer la présence de cellules sénescentes au niveau des cellules témoins. Les cellules sénescentes sur-exprimant l'enzyme (3-galactosidase, la méthode consiste à fournir aux cellules de la P-galactoside, qui, après transformation, forme un précipité bleu qui permet de doser l'activité (3-galactosidase. Quatre lots ont été constitués : un lot témoin, un lot mis en présence de complexe Novaxyline à 5%, un lot avec 2,5% de complexe et un lot avec 1 ,25% de complexe, celui-ci étant constitué de 40% d'extrait de Laminaria ochroleuca et 60% de polysaccharide (biosaccharide gum-2). Les fibroblastes ont été ensemencés sur des lamelles dans des boites multipuits (6 puits), à raison de 105 cellules par puit dans 3ml de milieu de culture. Ils ont ensuite été maintenus pendant 5 jours en étuve à CO2, en présence et en absence du complexe à l'étude à différentes dilutions. Après 5 jours d'incubation, les cellules ont été lavées une fois avec un tampon phosphate, puis fixées 4 minutes dans un mélange de formaldéhyde (2%) et de glutaraldéhyde (0,2%). Les tapis cellulaires ont été lavés 3 fois avec le tampon phosphate, puis mis en contact avec la solution colorante contenant la (3-galactoside. Les échantillons ont été gardés à 37 C dans une étuve dépourvue de CO2 entre 2 et 6 heures. L'intensité de la coloration a été appréciée sous microscope optique. Après coloration, les cellules ont été lavées par de l'eau distillée puis ont été séchées à 50 C, puis les lamelles ont été montées sur lame grâce à un kit de montage. L'analyse des différents échantillons a été réalisée grâce à un microscope optique relié à une caméra, permettant avec un analyseur d'images, de visualiser les cellules sur écran. Le comptage des cellules a été effectué après seuillage des images et appréciation de l'intensité de la coloration. Les résultats sont résumés dans le tableau suivant : Nombre de cellules comptées % de cellules sénescentes Témoin 108 23 Novaxyline à 5% 149 11 Novaxyline à 2,5% 141 14 Novaxyline à 1,25% 130 19 On voit donc que le complexe Novaxyline composé à 40% d'extrait d'algue Laminaria ochroleuca et 60% de polysaccharide biosaccharide gum-2, diminue le nombre de cellules sénescentes dans une culture de fibroblastes humains par rapport à une culture témoin, et ce, dès la concentration de 1,25%. Ce complexe est donc capable d'un effet rajeunissant surprenant et incontestable sur des fibroblastes humains, les fibroblastes étant le type principal de cellules du derme. Un autre effet totalement surprenant de ce complexe Novaxyline sur la peau humaine est l'activation des protéines du type Sirtuin. On sait depuis le milieu des années 1930 que la restriction calorique retarde le vieillissement et allonge la durée de vie. (McCay & Al, Journal of Nutrition 1935 ; 10 :63- 79). Cet effet a été constaté sur plusieurs espèces : souris, rats, poissons, mouches, vers et levures (Brown-Borg & Al, Nature. 1996 ;384 :33, Duffy & Al Chronobiol Int. 1990 ;7 :113-124, Jiang & Al, FASEB J. 2000 ;14 :2135-2137). En 2000 un chercheur au Massachusetts Institue of Technology (USA) et son équipe (L. Guarente & Al, Nature, 2000 ;403 ;795-800) ont découvert que la restriction calorique active des gènes qui ont été baptisés Sir (Silent information regulator). Depuis de nombreuses études ont montré que l'activation des gènes du types Sir (également appelés Sirtuin) est liée à un ralentissement du vieillissement. Les protéines Sirtuin que l'on trouve chez l'homme sont nomenclaturées Sirt-1 à Sirt-9. Expérience 2. On a préparé à partir d'une plastie abdominale d'une femme âgée de 56 ans, 24 explants de peau de 10mm de diamètre environ. Les explants ont été mis en survie en milieu BEM (Bio-EC's Explants Medium) à 37 C en atmosphère humide enrichie de 5% de CO2. Ces explants ont été répartis en 8 lots : Lot 1 : explants non traités Lot 2 : explants traités par le Resvératrol à 201.rM (activateur de Sirtuin de référence) Lot 3 : expiants traités par le Resvératrol à 100 M Lot 4 : explants traités par le complexe Novaxyline Lot 5 : explants non traités soumis à des UVB (200mJ/cm2) Lot 6 : explants traités par le Resvératrol à 20 M puis soumis à des UVB (200mJ/cm2) Lot 7 : explants traités par le Resvératrol à 10011M puis soumis à des UVB (200mJ/cm2) Lot 8 : explants traités par le complexe Novaxyline puis soumis à des UVB (200mJ/cm2) Les produits à tester ont été appliqués sur les explants concernés deux heures après leur préparation. L'application a été renouvelée le lendemain et le surlendemain. Le complexe Novaxyline a été appliqué par voie topique à raison de 2mg par expiant. Le Resvératrol a été incorporé dans le milieu de survie. Le jour de la préparation des lots, les trois explants du lot 1 ont été prélevés. Chaque expiant a été coupé en deux, une moitié fixée dans du formol tamponné, l'autre moitié a été congelée à -80 C. Le 4 jour, 24 heures après l'irradiation, les explants de chaque lot ont été prélevés et traités de la même manière. Après 24h de fixation dans le formol tamponné, les prélèvements ont été déshydratés et imprégnés en paraffine à l'aide d'un automate de déshydratation. Ils ont été mis en bloc à l'aide d'une station d'enrobage. Des coupes de 5 m ont été réalisées à l'aide d'un microtome et collées sur des lames de verre histologiques silanisées superfrost. Les observations microscopiques on été réalisées en microcopie optique, à l'aide d'un microscope à objectif x40. Les prises de vues ont été réalisées avec une caméra et stockées à l'aide d'un logiciel d'archivage. L'observation de la morphologie générale a été effectuée sur des coupes paraffine colorées au trichrome de Masson, variante de Goldner. L'immunomarquage de la protéine Sirt-1 a été réalisé sur coupes en paraffine avec l'anticorps polyclonal anti-Sirt-1 avec un système amplificateur biotine/streptavidine et révélé en VIP. Résultats des observations morphologiques. Observations avant tout traitement. Sur les explants non traités, le stratum corneum est peu épais, légèrement feuilleté, modérément kératinisé en surface et nettement à sa base. La structure épidermique est normale avec un net relief de la jonction dermo-épidermique. Dans le derme papillaire, le collagène se présente sous forme de fibres d'épaisseur moyenne formant un réseau plus ou moins dense. Le derme papillaire est bien cellularisé. Observations au 4 jour. Sur les explants non traités et non irradiés, la structure épidermique est comparable à celle observée avant tout traitement. La structure épidermique est comparable sur les explants non traités et irradiés aux UVB. Sur les explants traités avec le Resvératrol à 2011M et non traités, la morphologie épidermique est très bonne. L'irradiation UVB induit une légère acanthose épidermique. Sur les explants traités avec le Resvératrol à 1001.tM et non irradiés, la morphologie épidermique est bonne (les cellules de Langherans sont très dendritiques), avec une légère acanthose épidermique. L'irradiation UVB induit une légère augmentation du nombre d'assises cellulaires épidermiques. Sur les explants traités avec le complexe Novaxylien , et non irradiées, la structure épidermique est proche de celle observée sur les explants traités avec le Resvératrol et non irradiées. Sur les explants traités avec le complexe Novaxyline et irradiées, les structures épidermiques et dermiques sont proches de celles traitées avec le Resvératrol et irradiées. Résultats de l'analyse de l'activation de la protéine Sirt-l. Avant tout traitement, Sirt-1 est modérément observée dans les noyaux d'un grand nombre de kératinocytes. Après les traitements (4 jour), sur les explants non traités et non irradiés, l'expression de Sirt-1 est comparable à celle observée avant tout traitement. Elle est très nettement surexprimée après irradiation UVB. Sur les explants traités avec le Resvératrol à 20 M et non irradiés, Sirt-1 est légèrement surexprimée par rapport aux témoins non traités. Elle est très nettement surexprimée après irradiation UVB. Sur les explants traités avec le Resvératrol à 100 M et non irradiés, Sirt-1 est nettement surexprimée par rapport aux témoins non traités. Elle n'est pratiquement pas surexprimée après irradiation UVB. Sur les explants traités avec le complexe Novaxyline et non irradiés, Sirt-1 est assez nettement surexprimée par rapport aux témoins non traités. Elle est très nettement surexprimée après irradiation UVB, assez proche de celle observée sur les explants traités avec le Resvératrol à 201.tM (la concentration la plus active de Resvératrol). On voit donc que le complexe Novaxyline provoque une stimulation des structures épidermiques et dermiques sur des explants de peau humaine provenant d'une femme de 56 ans. De même, ce complexe augmente l'expression de la protéine Sirt-1 dans les mêmes explants irradiés ou pas en UVB, surexpression du même ordre de grandeur qu'un activateur reconnu de Sirt-1 : le Resvératrol. On démontre ainsi la surprenante activité anti-âge de ce complexe Novaxyline dont les composant sont surtout connus pour des activités calmantes, adoucissantes et anti-radicalaires. Cette activité anti-vieillissement se manifeste aussi bien par la diminution de cellules sénescentes dans une culture de fibroblastes, que par la surexpression de la protéine Sirt-1, protéine largement impliquée dans les effets anti-âge de la restriction calorique. Le complexe Novaxyline , objet de la présente invention, est donc composé d'un extrait d'algue du type Laminaria ochroleuca et d'un polysaccharide du type biosacchride gum-2 dans des proportions qui peuvent varier de 20% à 80% pour chacun des composants, ou de 30% à 70%, ou préférentiellement de 40% à 60%. Ce complexe peut-être incorporé dans des préparations cosmétiques dans des proportions 10 allant de 0,1% à 20%, préférentiellement de 0,5% à 5%, comme cela est montré dans les exemples suivants, donnés à titre indicatif mais non limitatif. Exemple 1 : Crème pour le corps. On prépare la phase grasse suivante : Isocetyl stearate 4g Huile de jojoba 5g 15 Beurre de karité l g Huile d'avocat 4g Caprylic/capric triglyceride 4g Hydrogenated polyisobutene 4g Cetyl alcohol 2g 20 Jojoba esters 1g Cetyl ricinoleate 4g Dipentaerythrityl hexacaprylate/hexacaprate 3g Cetyl alcohol/Glyceryl stearate/PEG-75 stearate/Ceteth-20/Steareth-20 4g Ce mélange est porté à 70 C et bien homogénéisé. 25 Par ailleurs, on prépare la phase aqueuse suivante : Eau purifiée 59g Pentylène glycol 1g Mélange d'acide sébacique, d'acide 10-hydroxydécanoïque, de 1,10-decanediol 1g On porte l'eau à 70 C. La phase grasse, homogène et chauffée à 70 C, est versée lentement 30 sur la phase aqueuse portée à la même température, sous agitation assez vive. L'agitation est maintenue pendant 15 minutes après l'introduction de la phase grasse. L'émulsion huile dans l'eau se forme, elle est ensuite refroidie lentement sous agitation faible. Quand la température est à 40 C environ, on ajoute : Complexe Novaxyline 3g On homogénéise doucement en refroidissant jusqu'à température ambiante. On obtient ainsi une agréable crème de soins pour le corps ayant un effet anti-vieillissement. 10 15 20 Mélange d'acide sébacique, d'acide 10-hydroxydécanoïque, de 1,10-decanediol 1g On porte la phase aqueuse à 70 C. La phase grasse, homogène et chauffée à 70 C, est versée lentement sur la phase aqueuse portée à la même température, sous agitation assez vive. L'agitation est maintenue pendant 15 minutes après l'introduction de la phase grasse. L'émulsion huile dans l'eau se forme, elle est ensuite refroidie lentement sous agitation 25 faible. Quand la température est à 40 C environ, on ajoute : Complexe Novaxyline 5g On homogénéise doucement en refroidissant jusqu'à température ambiante. On obtient ainsi une agréable crème de soins pour le visage ayant un effet anti-vieillissement. Les compositions cosmétiques de la présente invention peuvent se présenter sous forme 30 appropriée suivant les règles de l'art en usage, entre autre sous forme de liquides, de pâtes, de crèmes, d'émulsions, de lotions, d'huiles, de gels, de masques, de solides, de poudres, de granulés, de sprays, présentées dans des contenants adéquats tels que flacons, bouteilles, pots, sachets, boites, ampoules, crayons, porte-bâtons. Exemple 2 : crème de soin anti-rides pour le visage 8g On prépare la phase grasse suivante : Squalane végétal Huile de jojoba 6g Huile de Macadamia 4g Arachidyl alcohol / Behenyl alcohol / Arachidyl glucoside 4g Huile de coco hydrogénée 3g Alcool cétylique 3g Ce mélange est porté à 70 C et bien homogénéisé. 58,7g Par ailleurs, on prépare la phase aqueuse suivante : Eau purifiée Glycérine 3g Butylène glycol 2g Aluminium starch octenyl succinate 1g Gomme xanthane 0,3g Pentylène glycol 1g Les compositions cosmétiques, de la présente invention peuvent être composées d'émulsion huile/eau ou eau/huile, d'émulsion à phases gémellaires, de micro-émulsion, d'émulsion PIT, de nano-émulsion, d'émulsion multiple eau/huile/eau ou huile/eau/huile, de pseudo-émulsion (dispersion de deux phases non miscibles au moyen de gélifiants), de gel aqueux, de gel gras, de gel hydro-alcoolique, de phase grasse, de suspension, de savon solide ou liquide, de solution moussante, de liquide aqueux, de liquide gras, de liquide hydro-alcoolique, de poudres compressées ou non, d'une des formes précédentes contenant des micro-capsules, des nano-capsules, des liposomes. Les compositions de la présente invention dans le cas d'une application cosmétique peuvent donc comprendre en outre les adjuvants cosmétiques classiquement mis en oeuvre comme des composants de phase huileuse, des gélifiants, des émulsionnants, des électrolytes, des humectants, des séquestrants, des émollients, des agents hydratants, des agents filmogènes, des pigments insolubles, des colorants, des filtres solaires, des principes actifs complémentaires ou tout autre ingrédient habituellement utilisé en cosmétologie, 000---000 Revendications 1) Compositions cosmétiques destinées à lutter contre le vieillissement de la peau humaine et caractérisées par le fait qu'elles contiennent au moins une association d'un extrait d'algue du type Laminaria et d'un polysaccharide du type biosaccharide gum. 2) Compositions cosmétiques suivant la revendication 1 et caractérisées par le fait qu'elles diminuent le nombre de cellules sénescentes de la peau. 3) Compositions cosmétiques suivant la revendication 1 et caractérisées par le fait qu'elles stimulent les structures épidermiques et dermiques des peaux âgées. 4) Compositions cosmétiques suivant la revendication 1 et caractérisées par le fait qu'elles augmentent l'expression des Sirtuins dans la peau. 5) Compositions cosmétiques suivant les revendications 1 à 4 et caractérisées par le fait que l'extrait d'algue est du type Laminaria ochroleuca. 6) Compositions cosmétiques suivant les revendications 1 à 4 et caractérisées par le fait que le polysaccharide est du type biosaccharide gum-2 7) Compositions cosmétiques suivant les revendications 1 à 6 et caractérisées par le fait que l'association d'extrait d'algue et de polysaccharide est réalisée dans les proportions qui peuvent varier de 20 à 80% pour chacun des composants, ou de 30 à 70%, préférentiellement de 40 à 60%. 8) Compositions cosmétiques suivant les revendications 1 à 7 et caractérisées par le fait qu'elles contiennent une proportion de l'association d'extrait d'algue et de polysaccharide comprise entre 0,1 et 20%, préférentiellement entre 0,5 et 5%. 9).Compositions cosmétiques suivant les revendications 1 à 8 et caractérisées par le fait qu'elles peuvent se présenter sous forme de liquides, de pâtes, de crèmes, d'émulsions, de lotions, d'huiles, de gels, de masques, de solides, de poudres, de granulés, de sprays, présentées dans des contenants adéquats tels que flacons, bouteilles, sachets, pots, boites, ampoules, crayons, porte-bâtons. 10).Compositions cosmétiques suivant les revendications 1 à 9 et caractérisées par le fait qu'elles peuvent être composées d'émulsion huile/eau ou eau/huile, d'émulsion à phases gémellaires, de micro-émulsion, d'émulsion PIT, de nano-émulsion, d'émulsion multiple eau/huile/eau ou huile/eau/huile, de pseudo-émulsion (dispersion de deux phases non miscibles au moyen de gélifiants), de gel aqueux, de gel gras, de gel hydroalcoolique, de phase grasse, de suspension, de savon solide ou liquide, de solution moussante, de liquide aqueux, de liquide gras, de liquide hydro-alcoolique, de poudrescompressées ou non, d'une des formes précédentes contenant de micro-capsules, des nano-capsules, des liposomes. 000---000