FR 2917426 A1 20081219 FR 0704319 A 20070618 Réacteur pour la mise en oeuvre d'un procédé de culture de tissus osseux La présente invention se rapporte à un procédé et un dispositif permettant de cultiver du tissu osseux. La greffe osseuse est largement pratiquée, par exemple lorsque à la suite d'exérèse de tumeurs ou encore de tissus osseux infectés, il est nécessaire de combler cette perte de tissus osseux, parfois importante, par une transplantation osseuse. io Aussi, un greffon osseux autologue est-il transplanté pour combler l'espace osseux laissé libre par l'exérèse. Par conséquent, il est tout d'abord nécessaire de déterminer sur le patient par imagerie de la partie osseuse atteinte, les paramètres morphologiques de l'espace osseux à combler, soit sa forme et ses 15 dimensions. Ensuite, le greffon est prélevé sur une autre partie osseuse saine dudit patient en tenant compte des paramètres morphologiques précités. Puis, le greffon est implanté sous une forme massive dans ledit espace à combler de manière à obtenir une continuité mécanique dans ladite partie osseuse atteinte. 20 Cependant, le prélèvement d'un greffon sur le patient déjà affaibli par sa pathologie, n'est pas toujours souhaitable ni possible. Aussi, il a été imaginé de reproduire artificiellement des greffons osseux à la dimension désirée pour ensuite les transplanter dans l'espace osseux à combler. On pourra notamment se référer au document 25 américain US 2005/002910, dans lequel il est décrit un réacteur permettant de produire des greffons osseux de grande taille, par exemple la tête d'un fémur. Cependant, non seulement le temps nécessaire à la production de tels greffons osseux est relativement long mais au surplus, il doit être 30 conformé à l'espace osseux à résorber, ce qui requiert des moyens supplémentaires relativement complexes, et notamment des parois de réacteur déformables. Aussi, un problème qui se pose et que vise à résoudre la présente invention est de fournir un dispositif pour mettre en oeuvre un procédé de culture de tissus osseux, qui permette de produire rapidement un tissu osseux prêt à être implanté et aussi qui soit relativement simple à mettre 5 en oeuvre. Dans le but de résoudre ce problème, selon un premier aspect, la présente invention propose un procédé de culture de tissus osseux, ledit procédé étant du type selon lequel, on fournit des particules d'un matériau compatible avec le tissu osseux et des cellules souches de cellules io osseuses ; puis on ensemence lesdites particules avec lesdites cellules souches de cellules osseuses ; aussi, on fournit un fluide nutritionnel contenant des éléments nutritionnels destinés à faire proliférer des cellules osseuses et on délivre lesdits éléments nutritionnels auxdites cellules souches de cellules osseuses par l'intermédiaire d'un écoulement 15 dudit fluide nutritionnel ; selon l'invention, on maintient lesdites cellules souches de cellules osseuses à l'intérieur dudit écoulement de façon que ledit écoulement exerce des contraintes mécaniques sur lesdites cellules et que lesdites cellules osseuses prolifèrent sur lesdites particules pour former des granules de tissu osseux implantables ; et enfin, on récupère 20 lesdits granules de tissus osseux implantables pour les transplanter. Ainsi, une caractéristique de l'invention réside dans le mode de production de tissus osseux en faisant proliférer des cellules souches mésenchymateuses sur des particules indépendantes les unes des autres grâce à l'écoulement d'un fluide nutritionnel qui non seulement permet 25 l'apport des éléments nutritionnels, mais aussi exerce des contraintes mécaniques sur les cellules, ce qui stimule plus encore leur prolifération. Avantageusement, ledit écoulement de fluide nutritionnel à la paroi desdites particules formant une couche limite pariétale, on forme un écoulement apte à exercer des contraintes de cisaillement pariétal 30 comprises entre 104 et 10.2 Pa dans ladite couche limite pariétale. Ces contraintes de cisaillement pariétal sont par exemple de l'ordre de 10-3 Pa. De la sorte, on obtient des granules de tissus osseux individualisées que l'on peut ensuite transplanter dans l'espace osseux à combler. Ainsi, dans une certaine mesure, il n'est nul besoin de prévoir à l'avance, ni même de mesurer au préalable le volume de l'espace osseux à combler, puisque les granules de tissus osseux sont produites en relativement grand nombre, et elles sont ensuite insérées par paquet dans l'espace osseux jusqu'à ce qu'il soit entièrement comblé. Ensuite, ces granules de tissus osseux se transforment très rapidement en un implant osseux solide qui s'étend dans l'espace osseux à combler. Selon un mode préféré de mise en oeuvre de l'invention, on fournit io avantageusement un matériau minéral pour fournir lesdites particules, par exemple du phosphate tricalcique ou encore du carbonate de calcium, dont la densité est bien supérieure à la densité de l'eau. On expliquera plus en détail dans la suite de la description, l'avantage de cette densité. Une céramique naturelle ostéo-conductrice à base de corail constitue un 15 matériau privilégié pour former ces particules, car il est particulièrement peu coûteux. En outre, il est relativement aisé de produire des particules calibrées dans ce matériau. Préférentiellement, on fournit des particules poreuses pour permettre aux cellules de proliférer à l'intérieur de ces particules, comme on 20 l'expliquera dans la description détaillée, ce qui permet une reconstitution plus rapide de tissus osseux sains après transplantation. Et le matériau précité à base de corail présente l'avantage d'être lui-même poreux. Avantageusement, on fournit des particules résorbables c'est-à-dire des particules dont le matériau disparaît peu à peu après l'implantation du 25 greffon pour disparaître complètement à terme. Les particules à base de corail précitées présentent cette qualité. De manière préférée, on fournit des particules dont les dimensions sont comprises entre 0,8 et 5 mm, et par exemple on fournit des particules de formes sensiblement cubiques avec des côtés de 3 mm. Le matériau minéral précité est aisément 30 conditionné en particules cubiques de cette dimension. Selon un autre mode préféré de mise en oeuvre de l'invention, le pH du fluide nutritionnel qui s'écoule entre les particules ensemencées et dans lequel baignent les cellules, est maintenu à une valeur comprise entre 7 et 8, par exemple 7,4. Selon un autre aspect, la présente invention propose un réacteur pour culture de tissus osseux, ledit réacteur comprenant une chambre de culture longitudinale dans laquelle sont maintenues des particules d'un matériau compatible avec le tissu osseux, lesdites particules étant destinées à être ensemencées avec des cellules souches de cellules osseuses, ledit réacteur comprenant des moyens pour délivrer des éléments nutritionnels aux particules ensemencées par l'intermédiaire io d'un écoulement de fluide nutritionnel ; le réacteur comprend des moyens pour maintenir lesdites cellules souches de cellules osseuses à l'intérieur dudit écoulement de façon que ledit écoulement exerce des contraintes mécaniques sur lesdites cellules et que lesdites cellules osseuses prolifèrent sur lesdites particules pour former des granules de tissu 15 osseux implantables. Ainsi, le réacteur conforme à l'invention permet de maintenir les cellules osseuses au coeur de l'écoulement de fluide nutritionnel, ce qui permet non seulement de délivrer les éléments nutritionnels aux cellules afin qu'elles prolifèrent, mais aussi d'exercer des contraintes mécaniques 20 sur ces cellules qui promeuvent leur prolifération. Selon un mode de mise en oeuvre du réacteur particulièrement avantageux, ladite chambre de culture est un tube cylindrique à directrice circulaire, présentant un dimère D et une longueur L, le rapport de la longueur L et du diamètre D étant compris entre 10 et 15. Ce tube 25 cylindrique est par exemple réalisé en matière plastique, idéalement transparente, à un coût avantageux, de manière à pouvoir être jeté après un cycle de culture, par exemple de 21 jours. Les particules sont introduites et placées dans le réacteur de manière à occuper un espace cylindrique circulaire d'une hauteur h et d'un diamètre d, le rapport de la 30 hauteur h et du diamètre d étant compris de préférence entre 4 et 6, par exemple 5, de façon à obtenir des caractéristiques d'écoulement optimales autour des particules. Avantageusement, ladite chambre de culture est orientée verticalement et lesdites particules sont maintenues dans ladite chambre de culture en appui sur une grille de retenue, de sorte que le fluide nutritionnel s'écoule de manière ascensionnelle à travers ladite grille puis dans la chambre de culture. Ainsi, toutes les particules, dans la chambre de culture, subissent-elles un écoulement à leurs parois, sensiblement identique. En outre, lesdits moyens pour délivrer des éléments nutritionnels auxdites particules ensemencées, comprennent des moyens de pompage io destinés à pomper un fluide nutritionnel dans un réservoir selon un débit prédéfini, pour produire ledit écoulement de fluide nutritionnel dans la chambre de culture. Avantageusement, lesdits moyens de pompage permettent de créer un écoulement dont le débit est compris entre 8 et 15 ml/min, de manière 15 à créer un écoulement sensiblement laminaire à la paroi desdites particules ensemencées sans pour autant les entraîner en suspension dans le fluide nutritionnel. Ainsi, durant l'écoulement, les particules demeurent en appui les unes sur les autres, retenues par ladite grille. D'autres particularités et avantages de l'invention ressortiront à la 20 lecture de la description faite ci-après d'un mode de réalisation particulier de l'invention, donné à titre indicatif mais non limitatif, en référence aux dessins annexés sur lesquels : - la Figure 1 est une vue schématique d'un réacteur pour la mise en oeuvre d'un procédé de culture de tissus osseux conformes à l'invention ; 25 - la Figure 2A est une vue schématique d'une partie d'un réacteur tel qu'illustrée sur la Figure 1 ; et, - la Figure 2B est un diagramme de numération se rapportant à la partie de réacteur représenté sur la Figure 2A. La Figure 1 illustre un réacteur pour culture de tissus osseux 30 conforme à l'invention. Le réacteur comprend un tube cylindrique 10 en matière plastique à directrice circulaire, d'un diamètre extérieur voisin de 33 mm, et d'une hauteur totale H de 215 mm. Le diamètre intérieur du tube cylindrique 10 est cependant compris entre 10 et 15 mm, par exemple 12 mm. Le tube cylindrique 10 définit une chambre de culture 11 d'une hauteur voisine de 160 mm. On notera que les dessins de la Figure 1 ne sont pas reproduits dans les proportions des dimensions données ci- dessus pour des raisons de clarté. Une chambre de remplissage 12 est formée à la base du tube cylindrique 10 et elle présente une hauteur de 40 mm pour un diamètre de 26 mm. Une grille d'appui 14 est montée entre la chambre de culture 11 et la chambre de remplissage 12, et elle s'étend selon une section droite du io tube cylindrique 10. Cette grille d'appui 14 est formée d'un disque percé d'orifices 15 de 1 mm de diamètre, lesquels orifices sont espacés entre eux d'une distance de 2 mm. Le tube cylindrique 10 est monté sensiblement verticalement sur une embase 16 permettant de l'obturer de manière étanche, et cette embase 15 16 présente une ouverture d'entrée 18 qui débouche dans la chambre de remplissage 12 à l'opposé de la grille d'appui 14. Cette ouverture d'entrée 18 est reliée à un réservoir 20 d'une capacité d'au moins 250 ml, par l'intermédiaire d'un conduit d'arrivée 22, lequel conduit d'arrivée 22 traverse une pompe péristaltique 24. Par ailleurs, l'ouverture d'entrée 18 20 est prolongée d'un tube en T 26 situé à l'intérieur de la chambre de remplissage 12 et près de l'ouverture d'entrée 18 ; le tube en T 26 présentant deux ouvertures opposées orientées transversalement dans une direction sensiblement perpendiculaire au tube cylindrique 10. Au surplus, le réacteur présente un obturateur 28 permettant 25 d'obturer hermétiquement le tube cylindrique 10 dans sa partie supérieure. Et l'obturateur 28 présente une ouverture de sortie 30 reliée au réservoir 20 par l'intermédiaire d'un conduit de retour 32. Ainsi, la pompe péristaltique 24 est adaptée pour aspirer dans le réservoir 20 un fluide nutritionnel 31 que l'on décrira ci-après et pour le 30 refouler dans la chambre de remplissage 12 afin qu'il puisse s'écouler dans la chambre de culture 11 à travers la grille d'appui 14, puis ensuite s'échapper par l'ouverture de sortie 30 pour revenir, selon un circuit fermé, dans le réservoir 20 par l'intermédiaire du conduit de retour 32. De la sorte, le fluide nutritionnel s'écoule de manière ascensionnelle dans la chambre de culture 11. On notera que le circuit fermé de fluide nutritionnel est de préférence étanche vis-à-vis de l'atmosphère extérieure. Par ailleurs, grâce au tube en T 26, le fluide nutritionnel s'écoule dans la chambre de remplissage 12 et à travers les orifices 15 de la grille d'appui 14 selon des caractéristiques d'écoulement homogènes pour toute la surface de la grille. En réalité, les caractéristiques de cet écoulement qui, en amont de la chambre de culture 11, sont tributaires de la pompe io péristaltique 24, et notamment la vitesse instantanée du flux, sont-elles amorties grâce au tube en T 26. Ainsi, l'écoulement ascensionnel du fluide nutritionnel à l'intérieur de la chambre de culture 11 est-il homogène selon une section de cette chambre de culture 11. Le procédé de culture de tissus osseux conforme à l'invention fait 15 aussi appel à des particules d'un matériau minéral, et en l'espèce de particules à base de corail d'espèce Pontes. Ce matériau est essentiellement constitué de carbonate de calcium et les particules formées dans ce matériau sont essentiellement de géométrie cubique avec des côtés d'environ 3 mm de longueur. Par ailleurs, ce matériau est 20 poreux et il est également résorbable comme on expliquera ci-après. Ces particules vont alors être chargées dans la chambre de culture 11 en appui sur la grille d'appui 14, mais auparavant, elles sont ensemencées avec des cellules souches de cellules osseuses. Ces cellules souches, des cellules souches mésenchymateuses (CSMs) et en 25 l'espèce une lignée cellulaire murine C3H1OT1/2 contenant 106 cellules par millilitre et, exprimant un marqueur fluorescent, GFP, facilement repérable en microscopie à fluorescence, sont semées sur les particules précitées. Les particules ensemencées, libres, sont alors chargées dans la 30 chambre de culture 11 et au-dessus de la grille d'appui 14 sur une hauteur comprise entre 40 et 60 mm. Les particules ensemencées et chargées forment entre elles des interstices à travers lesquels le fluide nutritionnel va pouvoir s'écouler. S'agissant précisément du fluide nutritionnel, incorporant des éléments nutritionnels et notamment du BME (Based Medium Eagle) et du sérum de veau foetal (SVF), il est introduit dans le réservoir 20 et injecté dans la chambre de remplissage 12 à raison de 10 ml par minute. De la sorte, la chambre de remplissage 12 se remplit progressivement de fluide nutritionnel, lequel s'écoule ensuite à travers la grille d'appui 14 puis entre les particules ensemencées de la chambre de culture 11. Le débit de io 10 ml par minute est suffisamment modéré, et les particules sont suffisamment denses par rapport à la densité du fluide nutritionnel, pour que l'écoulement ne provoque pas le décollement des particules ensemencées. Ces particules ensemencées demeurent en lit tassé durant l'écoulement, c'est-à-dire en appui les unes sur les autres et elles 15 sont retenues par la grille d'appui 14. On suppose alors en première approximation, que la porosité de l'ensemble des particules ensemencées en lit tassé , qui équivaut au volume de l'espace occupé par les particules moins le volume total des particules, divisé par ledit volume de l'espace qu'elles occupent, est voisin de 0,5. 20 Ainsi, après avoir chargé 250 particules du type précitées, préalablement ensemencées d'un nombre total de 236 millions de cellules souches, après 15 jours de culture, pour un débit de fluide nutritionnel de 10 ml par minute, on obtient 1 500 millions de cellules, soit plus de six fois plus. Le fluide nutritionnel du réservoir 20 est toutefois remplacé tous les 25 trois jours, car il s'épuise en éléments nutritionnels du fait de la prolifération des cellules et aussi il contient des déchets cellulaires. Par ailleurs, la surface d'une cellule sur laquelle le fluide nutritionnel exerce des contraintes est sensiblement équivalente à 10.'0 m2. Les cellules adhérant aux particules, elles sont alors soumises à des 30 contraintes de cisaillement d'origine visqueuse de la part du fluide nutritionnel, qui apparaissent alors au sein de la couche limite pariétale ou la couche limite à la paroi. Ce sont ces contraintes, qui exercent des efforts et des forces sur ces cellules. Compte tenu des dimensions du bioréacteur et d'un débit d'écoulement en fluide nutritionnel de 10 ml par minute, on obtient un nombre de Reynolds caractéristique de l'écoulement, voisin de 10. Ce nombre, est caractéristique d'un écoulement de Poiseuille dominé par la viscosité, il est en outre largement inférieur à 2000, valeur du nombre de Reynolds à partir de laquelle l'écoulement n'est plus laminaire et devient turbulent. io Par ailleurs, en considérant que l'ensemble des particules en lit tassé constitue un milieu poreux au travers duquel s'écoule le fluide nutritionnel, on peut alors définir des canaux ou pores équivalents à travers lesquels s'écoule le fluide. Le nombre de Reynolds, caractéristique de l'écoulement dans ces canaux, est alors sensiblement divisé par deux, 15 soit voisin de 5. A fortiori, l'écoulement du fluide nutritionnel à travers ces canaux ou pores est caractéristique des écoulements laminaires. Les contraintes de cisaillement pariétal dans ces canaux sont alors, en appliquant les lois classiques de l'écoulement des fluides dans un tube, d'environ 4.10-3 Pa. Aussi, les forces associées rapportées à la 20 surface d'une cellule sont de l'ordre de 4.10-13 N, soit de 40 pico Newton (pN). On obtient alors des granules d'un matériau biohybride osseux constitué respectivement d'une particule de corail enduite de colonies cellulaires de types cellules osseuses. On se reportera d'abord à la Figure 25 2A sur laquelle sont représentées schématiquernent des strates 33 de particules de corail 35, les unes sur les autres et de la première 34, au contact d'une grille d'appui 14' à la quatorzième et dernière, 36, située vers l'ouverture de sortie 30', puis ensuite à la Figure 2B illustrant la quantité de cellules présente sur les granules des différentes strates 30 après 21 jours de culture. Cette quantité de cellules est comptabilisée par l'index de prolifération cellulaire qui est le rapport du nombre de cellules à l'instant t = 21 jours et du nombre de cellules initialement ensemencées. L'index et de prolifération cellulaire est porté en abscisse sur une échelle allant de 0 à 10, tandis que le numéro de chacune des strates est reporté en ordonnée sur une échelle allant de 1 à 14 et correspondant précisément aux strates successives. Ainsi, sous la forme d'un histogramme, le diagramme de la Figure 2B, reporte horizontalement pour chacune des strates 33, l'index de prolifération sous la forme d'un trait épais dont l'extrémité correspond à cet index. Ainsi, on observe que la prolifération des cellules varie entre 7 et 8 fois le nombre de cellules initiales après 21 jours de culture et ce, quelle io que soit la strate de particules considérées entre la première 34 et la quatorzième 36. Par conséquent, il apparaît que la prolifération des cellules est sensiblement identique sur toutes les strates de particules ensemencées, de la première 34 à la quatorzième 36, ce qui signifie que les conditions d'apport en éléments nutritionnels sont sensiblement 15 identiques, quelle que soit la position des particules au sein de la chambre de culture 11. Cela signifie que les conditions d'écoulement sont relativement homogènes autour des particules ensemencées, de la première 34 à la dernière strate 36. Cette caractéristique est déterminante puisque le matériau 20 biohybride prêt à être implanté et qui comporte une pluralité de granules doit présenter une concentration cellulaire relativement homogène pour toutes les granules. On notera que la totalité des cellules osseuses cultivées durant 21 jours sur 250 particules selon le mode de mise en oeuvre décrit ci-dessus, permettent de combler un défaut osseux d'un 25 volume compris entre 850 et 900 mm3. Toutefois, si l'on souhaite combler un espace osseux plus important, il est possible dans une certaine mesure d'augmenter le nombre de particules ensemencées initialement chargées dans la chambre de culture 11. Si l'espace osseux à combler est très important, ou si plusieurs espaces osseux doivent être comblés 30 simultanément, il convient de prévoir un réacteur d'une taille supérieure dont les dimensions seraient déterminées par homothétie par rapport au réacteur précité. Par exemple, les dimensions d'un tel nouveau réacteur pourraient être du double de celui qui est illustré sur la figure 1. Moyennant un ajustement du débit en fluide nutritionnel, on obtiendrait alors des conditions d'écoulement de ce fluide nutritionnel, entre les particules ensemencées, totalement analogues à celles que l'on obtient dans le réacteur ici décrit. Au surplus, selon le mode de mise en oeuvre de l'invention illustré sur la Figure 1, on vérifie l'absence d'abrasion des granules du matériau biohybride tout au long de la culture, laquelle abrasion pourrait provenir de l'écoulement du fluide nutritionnel. Pour cela, on mesure le taux de io calcium du fluide nutritionnel durant les 21 jours de culture et on vérifie qu'il oscille entre 3 et 4 millimoles par litre. Par ailleurs, les cellules qui se multiplient sur les particules de corail ne se détachent pas. Car en effet, si on mesure initialement une quantité de un million de cellules dans le fluide nutritionnel, au bout de six jours, il n'en reste plus que 250 000 environ et 15 ce nombre n'évolue plus jusqu'au 21e jour. En outre, durant les 21 jours de culture, le pH du fluide nutritionnel demeure constant au voisinage de 7,4. On notera que le maintien du pH à un pH physiologique est déterminant pour la survie et le développement des cellules souches mésenchymateuses ; et que contrairement aux 20 techniques de l'art antérieur, le procédé selon l'invention ne nécessite aucune régulation particulière de ce pH. Par ailleurs, les particules du matériau utilisé, à base de corail d'espèce Porites, constitue des matrices poreuses à l'intérieur desquels les cellules osseuses peuvent également proliférer. 25 Ainsi, grâce au procédé de culture de tissus osseux conforme à l'invention et au réacteur permettant sa mise en oeuvre, la prolifération des cellules osseuses à partir de cellules souches mésenchymateuses, est optimal car les transferts d'éléments nutritionnels, d'oxygène et de déchets cellulaires notamment, entre le fluide nutritionnel et les cellules 30 s'opèrent de manière rapide compte tenu de l'écoulement du fluide nutritionnel à travers les particules. Les transferts de matière par diffusion et par convection sont par nature augmentés, par rapport à des cellules cultivées dans un fluide nutritionnel statique. Outre les transferts de matière, qui permettent de nourrir les cellules, les contraintes mécaniques, notamment de pression et de cisaillement, exercées sur les cellules par le fluide nutritionnel qui s'écoule entre les particules, permettent d'augmenter la prolifération et la différenciation des cellules souches. Ainsi, le procédé de culture selon l'invention, permet d'augmenter de façon très significative la productivité de la culture de cellules osseuses. io Au surplus, le réacteur mettant en oeuvre le procédé, fonctionne en circuit fermé et seul le réservoir de fluide nutritionnel est changé durant un cycle de production, ce qui évite non seulement les contaminations de la culture de cellules osseuses, mais aussi les temps de manipulations. D'ailleurs, le changement de réservoir peut être automatisé. 15 Par ailleurs, la conception du réacteur est relativement simple et il peut être réalisé dans un matériau jetable à un coût avantageux. REVENDICATIONS 1. Procédé de culture de tissus osseux, ledit procédé étant du type selon lequel : - on fournit des particules (35) d'un matériau compatible avec le tissu osseux ; - on fournit des cellules souches de cellules osseuses ; -on ensemence lesdites particules avec lesdites cellules souches de cellules osseuses ; io - on fournit un fluide nutritionnel (31) contenant des éléments nutritionnels destinés à faire proliférer des cellules osseuses ; - on délivre lesdits éléments nutritionnels auxdites cellules souches de cellules osseuses par l'intermédiaire d'un écoulement dudit fluide nutritionnel (31) ; 15 caractérisé en ce qu'on maintient lesdites cellules souches de cellules osseuses à l'intérieur dudit écoulement de façon que ledit écoulement exerce des contraintes mécaniques sur lesdites cellules et que lesdites cellules osseuses prolifèrent sur lesdites particules (35) pour former des granules de tissu osseux implantables ; 20 et en ce qu'on récupère lesdits granules de tissus osseux implantables pour les transplanter. 2. Procédé de culture selon la revendication 1, caractérisé en ce que, ledit écoulement de fluide nutritionnel à la paroi desdites particules formant une couche limite pariétale, on forme un écoulement apte à 25 exercer des contraintes de cisaillement pariétal comprise entre 10-4 et 10-2 Pa dans ladite couche limite pariétale. 3. Procédé de culture selon la revendication 1 ou 2, caractérisé en ce qu'on fournit un matériau minéral pour fournir lesdites particules (35). 4. Procédé de culture selon l'une quelconque des revendications 30 1 à 3, caractérisé en ce qu'on fournit des particules calibrées. 5. Procédé de culture selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisé en ce qu'on fournit des particules poreuses. 6. Procédé de culture selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisé en ce qu'on fournit des particules résorbables. 7. Procédé de culture selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, caractérisé en ce lesdites particules (35) présentent des dimensions comprises entre 0,8 et 5 millimètres. 8. Procédé de culture selon l'une quelconque des revendications 1 à 7, caractérisé en ce qu'on fournit des particules (35) présentant une forme sensiblement cubique. 9. Procédé de culture selon l'une quelconque des revendications 1 à 8, caractérisé en ce que lesdites particules (35) comprennent du carbonate de calcium. 10. Procédé de culture selon l'une quelconque des revendications 1 à 9, caractérisé en ce qu'on maintien le pH dudit fluide nutritionnel (31) entre 7 et 8. 11. Réacteur pour culture de tissus osseux, ledit réacteur comprenant une chambre de culture (11) longitudinale dans laquelle sont maintenues des particules (35) d'un matériau compatible avec le tissu osseux, lesdites particules étant destinées à être ensemencées avec des cellules souches de cellules osseuses, ledit réacteur comprenant des moyens pour délivrer des éléments nutritionnels aux particules ensemencées par l'intermédiaire d'un écoulement de fluide nutritionnel (31) ; caractérisé en ce qu'il comprend des moyens (10,12,14,16, 26) pour maintenir lesdites cellules souches de cellules osseuses à l'intérieur dudit écoulement de façon que ledit écoulement exerce des contraintes mécaniques sur lesdites cellules et que lesdites cellules osseuses prolifèrent sur lesdites particules pour former des granules de tissu osseux implantables. 12. Réacteur selon la revendication 11, caractérisé en ce que ladite chambre de culture (11) est un tube cylindrique à directrice circulaire, présentant un dimère D et une longueur L, le rapport de la longueur L et du diamètre D étant compris entre 10 et 15. 13. Réacteur selon la revendication 11 ou 12, caractérisé en ce que ladite chambre de culture est orientée verticalement et en ce que lesdites particules (35) sont maintenues dans ladite chambre de culture (11) en appui sur une grille de retenue (14). 14. Réacteur selon la revendication 13, caractérisé en ce que ledit écoulement de fluide nutritionnel est produit à travers ladite grille (14). 15. Réacteur selon l'une quelconque des revendications 11 à 14, caractérisé en ce que lesdits moyens pour délivrer des éléments nutritionnels auxdites particules ensemencées, comprennent des moyens de pompage (24) pour produire ledit écoulement de fluide nutritionnel (31). 16. Réacteur selon la revendication 15, caractérisé en ce que lesdits moyens de pompage (24) permettent de créer un écoulement dont le débit est compris entre 8 et 15 ml/min.15