FR 2909280 A1 20080606 FR 0610470 A 20061130 2909280 Utilisation de l'acide gamma-aminobutyrique en tant qu'agent dépigmentant La présente invention se rapporte aux nécessités de la vie et plus 5 particulièrement aux soins corporels. Elle a plus précisément pour objet des compositions cosmétiques destinées à assurer un éclaircissement de la peau notamment dans les cas de défauts esthétiques liés à une pigmentation irrégulière anormale ou to excessive ou destinées à assurer l'éclaircissement d'une peau normale visant à passer d'un phénotype foncé à un phénotype plus clair. En outre, les compositions selon l'invention trouvent une utilisation chez les sujets à peau claire pour atténuer les effets du chloasma ou des 15 éphélides. La présente invention a spécifiquement pour objet l'utilisation d'acide gamma-aminobutyrique (GABA) ou de ses sels ou de ses dérivés en vue de la réalisation de compositions dépigmentantes destinées à être appliquées 20 sur la peau et sur les téguments. L'acide gamma-aminobutyrique a déjà trouvé des utilisations en dermatologie, notamment comme agent réparateur des tissus . En outre, dans la demande de brevet PCT/FR96/01051, la Demanderesse a déjà 25 décrit l'utilisation de l'acide gamma-aminobutyrique en association avec un acide a-hydroxylé et un extrait de plantes. Comme agent dépigmentant, cette mention est très succinte et ne fournit aucune précision sur la réalité de cette action. Elle n'est d'ailleurs pas l'objet de revendications. 30 On a maintenant déterminé que cet acide trouvait un emploi remarquable en tant qu'agent dépigmentant en comparaison avec des agents classiques usuels comme les dérivés de l'hydroquinone (arbutine) ou l'acide kojique, tout en étant moins cytotoxique.. L'acide gamma-aminobutyrique ainsi que ses sels et ses dérivés, utilisé dans de telles compositions a été étudié sur des cellules isolées et notamment sur des cultures de mélanocytes humains normaux. Sur les 2909280 2 modèles expérimentaux utilisés, il manifeste une action inhibitrice sur la tyrosinase et entraîne une nette diminution de la synthèse de la mélanine. On constate en particulier une réduction significative du contenu intracellulaire en mélanine des cellules en culture. Les résultats obtenus sont fonction de la dose, ce qui est en faveur d'un effet spécifique de l'acide gamma-aminobutyrique sur ce type de paramètre. Les compositions selon l'invention contiennent comme principe actif l'acide gamma-aminobutyrique tel quel ou sous forme d'un sel avec un to acide minéral ou organique, physiologiquement compatible ou encore sous forme d'ester d'alcoyle inférieur ou de polyol. Parmi les sels d'acide gamma-aminobutyrique utilisables, on pourra citer le chlorhydrate, le sulfate, le phosphate, l'acétate, le propionate, le citrate, 15 le tartrate, le benzoate, le pidolate, le glucose-phosphate, le méthane sulfonate, ou le p-toluène sulfonate. Les esters d'acide gamma-aminobutyrique qui peuvent être utilisés dans la mise en oeuvre de l'invention peuvent être un ester rnéthylique, 20 éthylique, propylique, butylique, hexylique, ou un ester de poly éthylène glycol, un ester de polybutylène glycol ou encore un ester de sucre ou de polyol comme le mannitol, le sorbitol ou le glycérol. Selon les besoins, ces esters seront solubles dans l'eau ou solubles dans 25 des solvants organiques comme les huiles. Leur choix sera déterminé par la nature de la composition cosmétique dans laquelle ils sont incorporés à titre de principe actif. Les compositions selon l'invention pourront contenir d'autres principes 30 actifs comme des extraits de plantes riches en polyphénols ou en tannins comme l'extrait de mûrier blanc ou bien des acides a-hydroxylés comme l'acide lactique, ou encore des extraits de fruits comme les extraits de citron ou de pamplemousse, également riches en acides alpha-h.ydroxylés. 35 Les compositions à base d'acide gamma-aminobutyrique pourront être additionnées d'agents épaississants, d'agents gélifiants, d'agents émulsionnants, d'agents parfumants, d'agents stabilisants, d'agents conservateurs, d'agents améliorant le toucher ou la fluidité. 2909280 3 On pourra citer à cet égard comme agent émulsionnant le stéarate de polyéthylène glycol ou les esters de sucres comme le sucrose ester. 5 Comme agent épaississant, on pourra citer des dérivés de la cellulose comme la méthylcellulose, l'éthylcellulose, la (3-hydroxyéthylcellulose, la carboxyméthylcellulose ou la carboxyméthylcellulose réticulée comme l'Acdisol . Un agent gélifiant sera par exemple un polymère d'acide acrylique ou d'acrylamide, comme les carbomères commercialisés sous la dénomination Carbopol (Goodrich). La concentration en acide gamma-aminobutyrique dans les compositions 15 pourra varier de 0.4 à 10% de la composition totale avec une préférence pour de 0.5 à 5%. Les exemples suivants illustrent l'invention sans toutefois la limiter. 20 Exemple 1 : Crème à base de chlorydrate d'acide gamma-aminobutyrique Chlorydrate d'acide gamma-aminobutyrique 7.5 g Extrait de mûrier blanc 0.5 g Extrait de citron BG 2.0 g Cire Lanette 3.75 g 25 Agent émulsionnant 0.5 g Eau qsp 100 g Acide gamma-aminobutyrique 2 g Propylène glycol 5 g Huile d'amandes douces 10 g Huile de silicone 0.1 g Germaben II 0.02 g Carbopol 936 0.4 g Triéthanolamine 0.1 g Parfum floral qs Eau purifiée 80 g Exemple 2 : Gel à base d'acide gamma-aminobutyrique 30 35 2909280 4 Exemple 3 : Etude de la cytotoxicité des compositions à base d'acide gamma-aminobutyrique. L'objectif de cette étude a été d'évaluer la cytotoxicité de l'acide gammaaminobutyrique, de l'extrait de mûrier blanc et de l'extrait de citron pris 5 isolément par rapport à celle d'un acide a-hydroxylé bien connu comme l'acide lactique (composé E). On effectue la détermination sur des mélanocytes humains normaux obtenus à partir d'un sujet jeune (4 ans). Pour les réalisations des essais, Io les cellules ont été cultivées jusqu'à l'obtention de mono couches confluentes. Incubation des cellules : Les cellules ont mises en incubation pendant 72 heures en l'absence (essai témoin) ou en présence de concentrations croissantes de composé E ou de chacun des produits essayés. Pour le composé E, on a essayé des concentrations de 0.003 ; 0.03 ; 0.075 ; 0.15 ; 0.5 ; 0.75 ; 1.5 et 3% (v/v) et pour le produit selon l'invention : 0.01 ; 0.1 ; 0.25 ; 0.5 ; 1 ; 2.5 ; 5 ; 10% (v/v). Le produit essayé a été préparé en diluant directement l'acide gammaaminobutyrique dans de l'eau ultra pure, en quantité suffisante pour 100% (v/v). A titre de comparaison, on a préparé une solution à 10% d'acide kojique et une solution d'acide lactique à 30% (composition E). Les préparations essayées ont été ensuite diluées directement dans le milieu d'incubation des mélanocytes. Evaluation des effets : A la fin de la période d'incubation, la viabilité des cellules a été évaluée par une méthode spectrophotométrique de dosage de l'activité des phosphatases intracellulaires. 35 Selon la méthode de Yan T. et al. (Anal. Biochem. 24 (1996) 103-108), on dose le p-nitrophénol résultant de la transformation du phosphate de pnitrophényle par les phosphatases intra-cellulaires des cellules viables. 20 25 2909280 5 L'absorbance du p-nitrophénol libéré à 405 nm est directement proportionnelle au nombre des cellules viables présentes dans le puits de culture. 5 Résultats : L'acide lactique (composition E) après 72h d'incubation, diminue significativement le nombre de mélanocytes viables, présents dans les puits de culture. Cet effet est détectable (moins de 80 % des cellules viables encore présentes dans le puits de culture) dès la dose de 0.03 %. 10 L'acide lactique est donc nettement cytotoxique. L'acide gamma-aminobutyrique ne montre un effet cytotoxique décelable dans les mêmes conditions qu'à partir de la dose de 0.5%. En conséquence la composition dépigmentante selon l'invention contenant de 15 l'acide gamma-aminobutyrique à 10 % ne manifeste d'effet cytotoxique qu'à des doses expérimentales plus élevées (voir figure I, II et III: et tableau I). Tableau I Etude de la cytotoxicité de l'acide lactique (E) et de la composition à base d'acide gamma-aminobutyrique Actif E Actif E 0,003 0,03 0,075 0,15 0,3 0,75 1,5 3 (%, v/v) _ % viabilité 87,7 78,4 75,6 74,3 _7,0 2,7 0,2 1,4 (par rapport au témoin) 76,0 70,0 _ 62,5 6,7 2,5 0,6 0,8 74,9 78,8 71,3 61,9 60,9 4,9 1,9 -0,3 0,3 Moyenne 80,8 73,2 70,8 65,9 6,2 2,4 0,2 0,8 s.d. 6,1 4,5 7,7 7,3 1,1 0,4 0,4 0,5 Composition Composition 0,01 0,1 0,25 0,5 1 2,5 5 10 (%, v/v) % viabilité 96,6 88,0 68,0 60,6 8,2 1,8 0,2 0,1 (par rapport au témoin) 109,7 88,6 88,1 78,7 8,3 0,5 -0,2 -0,1 111,7 101,6 96,1 89,5 10,7 1,6 -0,4 0,3 Moyenne 106,1 92,7 84,1 76,3 9,1 1,3 -0,1 0,1 s.d. 8,2 7,7 14,5 14,6 1,4 0,7 0,3 0,2 2909280 6 Les compositions à base d'extrait de mûrier blanc ou d'extrait de citron ont également des effets modérés. Exemple 4 : Effet mélano-modulateur des principes actifs contenus 5 dans les compositions selon l'invention La recherche d'un effet mélanomodulateur a été menée en 2 étapes : - Effet mélanomodulateur des ingrédients pris séparément aux concentrations prédéterminées dans le test de cytotoxicité. - Effet mélanomodulateur du complexe, i.e. GABA en association avec 10 les ingrédients mûrier blanc, citron et acide lactique. .l ère étape Ces essais ont été menés sur un modèle de mélanocytes humains 15 normaux cultivés en mono couche. L'acide gamma-aminobutyrique, l'extrait de citron et l'extrait de mûrier blanc ont été solubilisés et dilués directement dans le milieu de culture. 20 Incubation des cellules avec les produits essayés : Les mélanocytes humains normaux ont été mis en incubation pendant 72 heures en l'absence (témoin) ou en présence d'un produit de référence (acide kojique 250 M)) ou de concentrations croissantes des produits actifs essayés. 25 Acide gamma-aminobutyrique (composition A) 0.001 ; 0.01 ; 0.1% Extrait de mûrier blanc ( Composition C) 0.01 ; 0.1 ; 0.5% Extrait de citron (Composition D) 0.01 ; 0.1 ; 1% 30 Dans cette méthode, on dose le rapport mélanine/protéines en pourcentage du témoin. On a déterminé également les valeurs obtenues avec le solvant seul et une solution d'acide kojique à 250 M dans ce solvant(DMSO) pris comme substance de référence. Le tableau II fournit les résultats obtenus sur les principes actifs séparés A (acide gamma-aminobutyrique), C, D et l'acide lactique (composition E). L'acide gamma-aminobutyrique fournit des résultats statistiquement 5 2909280 7 significatifs dès la concentration de 0.1%. Les composés C et D ont un effet mélanomodulateur modéré. 2ème étape On a également évalué l'effet d'un complexe contenant les principes actifs A (acide gamma-aminobutyrique), C, D et l'acide lactique (composition E) comme élément de comparaison sur la synthèse de mélanine dans un modèle de mélanocytes humains normaux cultivés en monocouche. 10 Tableau II Véhicule (DMSO) et produit de référence Contrôle f_. DMSO Acide Kojique 250 gM mélanine / 96,8 100,6 95,6 98,2 73,1 65,9 protéines (% du témoin) 97,8 110,7 98,4 105,4 84 3 69,5 93,0 91,4 99,4 105,9 84,5 78,1 _ 110,5 99,2 95,7 97,3 93,9 66,3 100,6 ` 106,4 97,2 91,5 88,0 70,6 102,4 ~ Oz,9 , - É -- 100,9 99,3 - - 96,1 91,4 - - :Moyenne 10Q 00 98,45 77 40* S.D. 4,56 3,33 4 57 *: moyenne significativement différente de celle du groupe témoin milieu seul (p - 14,1% (ns) Complexe à 0,5% (v/v) _> - 19,7% (p - 25,4% (p REVENDICATIONS 1. Utilisation de l'acide gamma-aminobutyrique, d'un de ses sels ou d'un de ses dérives en tant qu'agent dépigmentant ou mélano 5 modulateur. 2. Utilisation selon la revendication 1 dans laquelle on utilise l'acide gamma-aminobutyrique libre comme agent dépigmentant. 10 3. Utilisation selon la revendication 1 dans laquelle on utilise un sel d'acide gamma-aminobutyrique comme agent dépigmentant. 4. Utilisation selon la revendication 1 dans laquelle le sel d'acide gamma-aminobutyrique est un sel avec un acide minéral ou 15 organique physiologiquement compatible. 5. Utilisation selon la revendication 1 ou la revendication 4 dans laquelle le sel d'acide gamma-aminobutyrique est le chlorydrate d'acide gamma-aminobutyrique. 6. Utilisation selon la revendication 1 dans laquelle on utilise un ester d'acide gamma-aminobutyrique comme agent dépigmentant. 7. Utilisation selon la revendication 1 et la revendication 6 dans 25 laquelle on utilise un ester d'alcoyle inférieur d'acide gamma-aminobutyrique comme agent dépigmentant. 8. Utilisation selon la revendication 1 dans laquelle l'acide gamma-aminobutyrique est additionné d'un extrait végétal riche en 30 polyphénols ou en tannins, comme agent dépigmentant. 9. Utilisation selon la revendication 1 dans laquelle l'acide gamma-aminobutyrique est additionné en outre d'un acide ahydroxylé, comme agent dépigmentant. 10. Utilisation de l'acide gamma-aminobutyrique, de ses sels ou de ses dérivés dans des compositions cosmétiques topiques. 20 2909280 13 11. Utilisation de l'acide gamma-aminobutyrique selon la revendication 10 dans des compositions aqueuses ou huileuses choisies parmi les laits, les lotions, les émulsions huile dans l'eau ou eau dans l'huile, les crèmes, les gels et les eaux de toilette. 12. Utilisation de l'acide gamma-aminobutyrique, un de ses sels ou un de ses dérivés selon la revendication 1 dans des compositions cosmétiques à une concentration variant de 0.4% à 10%. 13. Utilisation selon la revendication 12 à une concentration variant de 0.5% à 5% comme agent dépigmentant. 20