FR 2913339 A1 20080912 FR 0753680 A 20070307 UTILISATION COSMETIQUE D'UN EXTRAIT DE DEBARYOMYCES HANSENII La présente invention concerne l'utilisation d'un extrait de Debaryomyces hansenii en tant que principe actif pour une application au traitement de la peau. L'invention se rapporte également à des extraits de Debaryomyces hansenii et aux compositions cosmétiques et/ou dermopharmaceutiques contenant un extrait de Debaryomyces hansenii. Debaryomyces hansenii, décrite pour la première fois en 1978 par Meyer et Yarrow, est une levure marine du genre Torulopsis, appartenant à la classe des Ascomycètes. Elle est cryotolérante, alcane-assimilante, de forme ronde à allongée et se reproduit par bourgeonnement multilatéral. Debaryomyces hansenii est utilisée en alimentaire, notamment pour la fabrication du fromage. Elle présente des activités protéolytiques et lipolytiques utiles pour la maturation du fromage. Elle est utilisée en particulier pour le croûtage comme agent d'affinage, favorise l'implantation d'autres microorganismes et joue un rôle de protection contre les contaminants en particulier le Mucor. Or, de façon surprenante, Debaryomyces hansenii présente des propriétés remarquables au niveau de la peau. La peau est un organe complexe qui couvre la surface totale du corps et exerce de nombreuses fonctions vitales. Elle est organisée en trois couches principales 20 l'épiderme, le derme et l'hypoderme. La peau est constamment soumise à des agressions, tant externes qu'internes, qui peuvent menacer son équilibre et son aspect. C'est pourquoi on recherche des principes actifs capables de protéger la peau contre ces agressions susceptibles d'altérer son bon fonctionnement et son aspect, et de lutter contre les manifestations qui en découlent. Pour répondre à cette problématique, la présente invention vise à utiliser au 5 moins un extrait de Debaryomyces hansenii en tant que principe actif pour la préparation d'une composition destinée au traitement de la peau. L'invention vise également des extraits de Debaryomyces hansenii particuliers, utiles en tant que principes actifs pour la préparation de compositions destinées au traitement de la peau, ainsi que des compositions cosmétiques et/ou 10 dermopharmaceutiques incluant au moins un extrait de Debaryomyces hansenii en tant que principe actif. Un extrait de Debaryomyces hansenii susceptible d'être utilisé selon l'invention peut être obtenu par un procédé comprenant au moins une étape de solubilisation de Debaryomyces hansenii dans un milieu aqueux ou hydroglycolique. 15 Un extrait de Debaryomyces hansenii susceptible d'être utilisé selon l'invention peut être un hydrolysat chimique ou enzymatique. De manière préférentielle, les compositions selon l'invention peuvent contenir de 0,01 à 50 % d'un extrait de Debaryomyces hansenii. L'administration d'une composition contenant un extrait de Debaryomyces 20 hansenii selon l'invention est de préférence effectuée par voie topique. La composition peut se présenter sous toutes les formes permettant l'application par voie topique. L'utilisation d'un extrait de Debaryomyces hansenii selon l'invention permet de protéger la peau et de lutter contre toutes manifestations perturbant son 25 activité et son apparence. En particulier, l'utilisation d'un extrait de Debaryomyces hansenii selon l'invention permet de lutter contre le vieillissement cutané, notamment de prévenir et diminuer les rides, d'améliorer les propriétés biomécaniques de la peau, de restructurer la peau, d'hydrater et de protéger la couche cornée, de blanchir la peau et d'augmenter le renouvellement cellulaire. Le vieillissement cutané se traduit par une peau plus fine, plus lisse, sèche et moins élastique. Son expression la plus évidente se manifeste par l'apparition de rides qui correspondent à des changements dans la structure et la composition du derme. L'essentiel des propriétés mécaniques de résistance à la tension du derme est lié à un réseau fibreux de collagènes, éléments majoritaires de la matrice extracellulaire, et un des principaux paramètres dans la lutte contre le vieillissement cutané et contre l'apparition des rides est la régulation de la biosynthèse et de la dégradation de cette matrice extracellulaire. Or un extrait de Debaromyces hansenii selon l'invention est capable de stimuler la synthèse de collagène I constitutif de la matrice extracellulaire de la peau. Ainsi, on peut avantageusement utiliser un extrait de Debaromyces hansenii selon l'invention en tant que principe actif pour la préparation d'une composition cosmétique destinée à prévenir et/ou à traiter les signes du vieillissement cutané, en particulier destinée à prévenir et/ou à lutter contre l'apparition des rides et/ou d'améliorer les propriétés biomécaniques cutanées. La peau est colorée par des pigments, les mélanines, synthétisés par des cellules spécialisées, les mélanocytes. La coloration de la peau varie en fonction du type 20 et de la quantité de mélanines synthétisées. Plusieurs enzymes sont impliquées dans le processus de mélanogenèse, qui transforment la tyrosine en pigments mélaniques. Parmi ces enzymes, la tyrosinase est une enzyme clé qui catalyse l'hydroxylation de la tyrosine en dihydroxyphanylalanine (DOPA), ainsi que l'oxydation de cette DOPA en 25 DOPAquinone. Un extrait de Debaromyces hansenii selon l'invention est capable d'inhiber l'activité de la tyrosinase et ainsi d'atténuer les pigmentations cutanées disgracieuses. Un extrait de bebaromyces hansenii selon l'invention est donc également utile en tant que principe actif pour la préparation d'une composition cosmétique destinée à la dépigmentation et à l'éclaircissement de la peau. En outre, les extraits de bebaromyces hansenii selon l'invention sont capables de stimuler la prolifération des fibroblastes, cellules constitutives du derme. Ainsi, on peut utiliser un extrait de bebaromyces hansenii selon l'invention en tant que principe actif pour la préparation d'une composition cosmétique destinée à favoriser le renouvellement cellulaire de la peau. La présente invention est maintenant décrite en détail en s'appuyant sur des exemples non limitatifs de procédés d'obtention d'extraits et de compositions. 1. PROCEDE DE PREPARATION D'UN EXTRAIT DE bEBARYOMYCES HANSENII SELON L'INVENTION L'extrait de bebaryomyces hansenii selon l'invention peut être obtenu par la mise 15 en oeuvre d'un procédé comprenant au moins les étapes suivantes : - solubilisation de bebaryomyces hansenii en milieu aqueux ou hydroglycolique, - séparation des phases soluble et insoluble, et - purification de la fraction active contenue dans la fraction soluble. 20 Selon un mode de réalisation préféré, le procédé comprend au moins les étapes suivantes : - solubilisation de bebaryomyces hansenii en milieux aqueux ou hydroglycolique, préférentiellement à raison de 10 à 200g/I, -hydrolyse(s) enzymatique(s) et/ou chimique(s) successives ou 25 simultanées, - séparation des phases soluble et insoluble, par filtration, décantation, centrifugation et/ou concentrations successives, et purification de la fraction active contenue dans la fraction soluble, par filtration, ultrafiltration ou absorption. L'étape d'hydrolyse(s) a pour objectif de favoriser la solubilisation de la levure. Elle peut être réalisée par exemple à l'aide de plusieurs enzymes utilisées en combinaison. La proportion en poids de la ou des enzyme(s) est alors comprise entre 0,01 et 20g/I. Cette étape d'hydrolyse(s) enzymatique(s) peut être suivie par une étape de traitement thermique pour réduire les activités enzymatiques résiduelles. Le procédé peut également comprendre une étape de déprotéinisation, 10 préférentiellement par précipitation ou adsorption sélective, après l'étape de séparation des phases soluble et insoluble. Après l'étape d'élimination des molécules non actives par filtration ou ultrafiltration, une concentration de la fraction active peut être réalisée par filtration, ultrafiltration et/ou osmose inverse. Une étape de filtration 15 stérilisante et/ou de lyophilisation et/ou d'atomisation peut aussi être introduite. 2. EXEMPLES DE PREPARATION D'EXTRAITS DE bEBARYOMYCES HANSENII UTILE SELON L'INVENTION 20 2.1 Procédé de préparation d'un extrait A Le procédé de préparation de l'extrait A comprend les étapes suivantes - solubilisation de bebaryomyces hansenii dans un milieu aqueux, - hydrolyse(s) enzymatique(s) successives(s) d'au moins deux enzymes, - séparation des phases soluble et insoluble, 25 - traitement thermique afin de neutraliser les activités enzymatiques, - concentration de la fraction soluble par filtration, - purification de la fraction active par absorption sur adjuvant, et - filtration stérilisante. 2.2 Procédé de préparation d'un extrait B Le procédé de préparation de l'extrait B comprend les étapes suivantes : - solubilisation de bebaryomyces hansenii dans un milieu aqueux, - hydrolyse enzymatique, - séparation des phases soluble et insoluble, - traitement thermique afin de neutraliser l'activité enzymatique, - concentration de la fraction soluble par filtration, et -filtration stérilisante et atomisation. 2.3 Procédé de préparation d'un extrait C Le procédé de préparation de l'extrait C comprend les étapes suivantes : - solubilisation de bebaryomyces hansenii dans un milieu hydroglycolique pouvant contenir 0 à 50% de solvant de type butylène glycol, - séparation des phases soluble et insoluble, - concentration de la fraction soluble par filtration, et - filtration stérilisante et lyophilisation. 3. CARACTERISATION D'EXTRAITS DE bEBAROMYCES HANSENNI SELON L'INVENTION Les exemples de procédés de préparation décrits au paragraphe 2. permettent d'obtenir des extraits de bebaromyces hansenii susceptibles d'être utilisés selon l'invention, caractérisés par différents paramètres. 3.1/ Matières sèches On mesure le taux de matières sèches par passage à l'étuve à 105 C d'un échantillon de poids initial donné jusqu'à obtention d'un poids constant. 25 Le taux de matières sèches est compris entre 5 et 300g/l. 3.2/ Mesure du pH Le pH est mesuré par la méthode potentiométrique à température ambiante. On obtient des valeurs comprises entre 4,0 et 10,0. 3.3/ Détermination de la teneur en sucres totaux On utilise la méthode de DUBOIS (DUBOIS M. & al [1956], Analytical 5 chemistry, 28, n 3 p 350-356). En présence d'acide sulfurique concentré et de phénol, les sucres réducteurs donnent un composé jaune-orangé. A partir d'une gamme étalon, on peut déterminer le taux de sucres totaux d'un échantillon. 10 Le taux de sucres totaux des extraits selon la présente invention est de 0,1 à 100 g/I. 3.4/ Caractérisation des carbohydrates Un analyse HPLC (chromatographie liquide haute performance) des extraits montrent que la fraction glucidique est composée essentiellement de glucose et 15 de mannose. 3.5/ Détermination de la teneur en protéines Le taux de protéines des extraits est obtenu par la méthode de LOWRY. Les résultats donnent une teneur en protéines de 1 à 135g/l. 3.6/ Caractérisation de la fraction protéique 20 La masse molaire des différentes espèces moléculaires présentes dans les extraits est déterminée par FPLC ( fast protein liquid chromatography). Des marqueurs permettent de servir d'étalons et on constate que le principe actif selon l'invention est composé essentiellement d'une fraction peptidique de masse moléculaire inférieure à 5 KDaltons. 4. EXEMPLES DE COMPOSITIONS La présente invention couvre aussi les compositions cosmétiques et/ou dermopharmaceutiques incluant un extrait de bebaryomyces hansenii selon la présente invention dans différentes formes galéniques, adaptées à l'administration par voie topique. Ces compositions peuvent se présenter notamment sous forme de crèmes, émulsions huile-dans-eau, émulsions eau-dans-huile, émulsions multiples, solutions, suspensions ou poudres. Elles peuvent être plus ou moins fluides et avoir l'aspect d'une crème, d'une lotion, d'un lait, d'un sérum, d'une pommade, d'un gel, d'une pâte ou d'une mousse, ou sous forme solide. Ces compositions contiennent entre 0,01 et 50 % en poids de l'extrait de bebaryomyces hansenii selon la présente invention. Les exemples de compositions qui suivent sont obtenus par mélange des différents composants. Les quantités indiquées sont données en pourcentage de poids. 4.1 Exemple de composition anti-rides La formulation est la suivante - acide stéarique : 7,0% Myristate isopropyl : 7,0% - Stearyl alcool/Ceteareth 20 : 3,0% Stearyl stearate : 1,0% - Minerai oil/dibutyl lauryl glutamide : 1,0% Conservateurs : 0,7% Triethanolamine : 0,3% -Extrait de bebaryomyces hansenii : 5,0% - Eau : 75% 4.2 Exemple de composition hydratante La formulation est la suivante : - Cetearyl octonoate : 5,0% - Isopropyl palmitate : 5,0% - Polyacrilamide/C13-C14 Isoparaffine/laureth7 : 2,0% - Montanox 60 : 1,7% - Sorbitan sesquioleate : 1,3% - Conservateurs : 0,7% - Extrait de bebaryomyces hansenii : 8,0% -Eau : 76,3% 4.3 Exemple de composition rafermissante La formulation est la suivante : - Isononyl isononanoate : 5,0% - Arachidyl alcool/Behenyl alcool/ Arachidyl glucoside : 3,0% - Cetearyl alcool/Cetearyl glucoside : 2,0% - Po lyacr i lam i de/C13 -14 Isoparaff in/ Laureth-7 : 2,07. -Conservateurs : 0,7% - Extrait de bebaryomyces hansenii : 4,0% - Eau : 83,3 4.4 Exemple de composition restructurante La formulation est la suivante : - Isohexadecane: 5,0% - Arachidyl alcool/Behenyl Alcool/ Arachidyl glucoside : 3,0% - Butylène glycol : 3,0% - Isopropyl palmitate : 2,0% - Polyacrilamide/C-13-C14 paraffine/ laureth7 : 1,5% - Cetearyl alcool : 1,0% - PEG-100 stearate : 1,0% - Glyceryl stearate : 1,0% -Conservateurs: 0,7% - bimethicone/Cyclomethicone 0,5% - Extrait de bebaryomyces hansenii: 20,0% - Eau : 61,3% 4.5 Exemple de composition dépigmentante La formulation est la suivante : - Arachidyl alcool / Behenyl alcool / Arachidyl glucoside : 3,0% - Isononyl isononanoate : 2, 0% - Cetearyl octanoate : 10,0% - Polyacrilamide / C13-14 Isoparaff in / Laureth-7 : 2,0% - Conservateurs : 0,5% - Extrait de bebaryomyces hansenii: 4,0% - Eau : 78,5% 5. EVALUATION DE L'EFFET DES EXTRAITS DE DEBAROMYCES HANSENII SELON L'INVENTION 5.1/ Etude de l'effet anti-âge Cette étude a pour objectif d'évaluer l'effet d'un extrait de bebaromyces 25 hansenii sur la synthèse de collagène I, composant majeur de la matrice extracellulaire du derme. L'étude est réalisée sur des fibroblastes humains normaux selon le protocole opératoire qui suit. A J1, les fibroblastes sont ensemencés dans un milieu complet contenant 10% de Sérum de Veau Foetal, puis sont incubés dans une étuve à 37 C. A J2, les cellules sont traitées avec un extrait de bebaromyces hansenii à 1% dilué dans le milieu de culture. L'incubation se fait 24 heures à l'étuve. A J3, les surnageants sont récupérés puis stockés à -80 C avant analyse par dosage ELISA. Les résultats obtenus, présentés dans le tableau ci-dessous, sont exprimés en pourcentage de collagène I synthétisé par rapport à un témoin Taux de collagène I(%)/témoin Témoin 100 Extrait de bebaromyces hansenii à 1% 163 On constate que l'utilisation de l'extrait de bebaromyces hansenii à 1% stimule la synthèse de collagène I par fibroblastes humains normaux de 63%. 5.2/ Etude de l'activité dépigmentante Le but de cette étude est d'évaluer l'activité dépigmentante d'un extrait de bebaromyces hansenii sur des cultures de mélanocytes B16F1 par mesure de 15 l'activité anti-tyrosinase et du taux de mélanine synthétisé. Le protocole opératoire est le suivant. A J1, les mélanocytes B16F1 sont ensemencés dans un milieu complet enrichi par 10nM de a-MSH (alpha melanocyte stimulated hormone) avec un extrait de bebaromyces hansenii à 2%. Les cellules sont incubées pendant 48 heures à 20 37 C. A J3, on réalise une trypsination cellulaire. On observe la couleur des culots et on compte les cellules à l'aide de la cellule de Mallassez. Les culots sont ensuite lysés avec 1mL de tampon sodium phosphate contenant 1% de Triton 100X. Le lysat cellulaire est centrifugé et le surnageant est récupéré pour le dosage de la 25 tyrosinase et le culot pour le dosage du taux de mélanine. Les résultats du dosage de tyrosinase montrent que l'extrait de bebaromyces hansenii dosé à 2% inhibe l'activité de la tyrosinase, enzyme-clé de la mélanogenèse, de 46% Concernant le dosage du taux de mélanine synthétisé, les résultats montrent que 5 l'extrait de bebaromyces hansenii à 2% réduit de 57% la synthèse de mélanine. 5.3/ Etude de l'effet sur le renouvellement cellulaire L'objectif de cette étude est de déterminer l'effet d'un extrait de bebaromyces hansenii sur la capacité de prolifération de fibroblastes humains normaux. Le protocole opératoire consiste à cultiver des fibroblastes humains normaux en 10 milieu MEM additionné de 10% de sérum de veau foetal. Après 24 heures, le milieu de culture est remplacé, puis additionné d'un extrait de bebaromyces hansenii à 1%. Après 72 heures de traitement, on étudié la croissance cellulaire par mesure de coloration M.T.T. (Methyl Tiazol diphenyl Tetrazolium). On mesure la densité 15 optique à 540nm. Les résultats exprimés en pourcentage de prolifération cellulaire, sont présentés dans le tableau qui suit Pourcentage de prolifération cellulaire Témoin 100 Extrait de bebaromyces hansenii à 1% 212 On constate qu'après 72 heures de traitement, l'extrait de bebaromyces 20 hansenii à 1% favorise le renouvellement cellulaire de fibroblastes humains de 112%. REVENDICATIONS 1. Utilisation d'au moins un extrait de Debaryomyces hansenii en tant que principe actif pour la préparation d'une composition cosmétique et/ou dermopharmaceutique destinée au traitement de la peau. 2. Utilisation d'au moins un extrait de Debaryomyces hansenii selon la revendication 1, caractérisée en ce que la composition est une composition cosmétique et/ou dermopharmaceutique destinée à prévenir et/ou traiter le vieillissement cutané. 3. Utilisation d'au moins un extrait de Debaryomyces hansenii selon la revendication 1 ou 2, caractérisée en ce que le composition est une composition cosmétique et/ou dermopharmaceutique destinée à améliorer les propriétés biomécaniques de la peau. 4. Utilisation d'au moins un extrait de Debaryomyces hansenii selon la revendication 1 ou 2, caractérisée en ce que le composition est une composition cosmétique et/ou dermopharmaceutique destinée à prévenir et/ou lutter contre l'apparition des rides et à restructurer la peau. 5. Utilisation d'au moins un extrait de Debaryomyces hansenii selon la revendication 1, caractérisée en ce que la composition est une composition cosmétique et/ou dermopharmaceutique destinée à hydrater et protéger la couche cornée de la peau. 6. Utilisation d'au moins un extrait de Debaryomyces hansenii selon la revendication 1, caractérisée en ce que la composition est une composition cosmétique et/ou dermopharmaceutique destinée à une activité dépigmentante ou éclaircissante. 7. Extrait de Debaryomyces hansenii adapté pour l'utilisation selon l'une des revendications 1 à 6, caractérisé en ce qu'il est obtenu par un procédécomprenant au moins un étape de solubilisation de bebaryomyces hansenii dans un milieu aqueux ou hydroglycolique. 8. Extrait de bebaryomyces hansenii selon la revendication 7, caractérisé en ce qu'il est obtenu par un procédé comprenant au moins les étapes suivantes : - solubilisation de bebaryomyces hansenii en milieux aqueux ou hydroglycolique, - séparation des phases soluble et insoluble, et -purification de la fraction active contenue dans la fraction soluble. 9. Extrait de bebaryomyces hansenii selon la revendication 7, caractérisé en ce qu'il est obtenu par un procédé comprenant au moins les étapes suivantes : - solubilisation de bebaryomyces hansenii en milieux aqueux ou hydroglycolique, hydrolyse(s) enzymatique(s) et/ou chimique(s) successives ou simultanées, séparation des phases soluble et insoluble, par filtration, décantation, centrifugation et/ou concentrations successives, et purification de la fraction active contenue dans la fraction soluble, par filtration ou ultrafiltration. Extrait de bebaryomyces hansenii selon l'une des revendications 7 à 9, caractérisé par : - un taux de matières sèches compris entre 5 et 300g/l, - un pH comprise entre 4 et 10, 25 - une teneur en protéine comprise entre 1 et 135g/I, et - une teneur en sucres totaux comprise entre 0,1 et 100g/I. 11. Composition cosmétique et/ou dermopharmaceutique adaptée pour l'utilisation selon l'une des revendications 1 à 6, caractérisée en ce qu'elle - - -10.contient comme principe actif entre 0,01 et 50% d'au moins un extrait de bebaryomyces hansenii. 12. Composition cosmétique et/ou dermopharmaceutique selon la revendications 11, caractérisée en ce qu'elle se présente sous forme de crème, émulsion huile-dans-eau, émulsion eau-dans-huile, émulsions multiples, solutions, suspensions ou poudres.