FR 2912313 A1 20080815 FR 0753223 A 20070213 COMPOSITION D'EXTRAIT DE BLE ET D'ESCULINE ET UTILISATION EN COSMETIQUE DESCRIPTION 5 Domaine technique La présente invention se rapporte à une association comprenant un extrait de germe de blé et de l'esculine, à une composition 1 o cométique ou dermatologique, ainsi qu'à un procédé de fabrication de ces compositions. On entend par association, un mélange d'un extrait de germe de blé et d'esculine. Les compositions de la présente invention permettent 15 notamment de protéger les cellules épidermiques face à des agressions externes et de prévenir et/ou traiter le vieillissement cutané. Art antérieur L'esculine est une molécule naturelle appartenant à la catégorie 20 des coumarines, plus particulièrement des 7 hydroxy coumarines. L'esculine ou esculoside est une coumarine, benzo pyrone naturelle de la structure suivante : OH HO .. OH HOC"` O 25 L'esculine se retrouve dans nombre d'espèces végétales mais une des sources les plus connues est l'écorce de marronnier d'inde O HO (Aesculus hippocastanum). La molécule est connue pour ses capacités de fluorescence sous lumière UV et ses propriétés azurantes. Il est connu depuis longtemps que l'esculine possède une action sur la microcirculation et pour ce fait est fréquemment retrouvée dans des préparations pharmaceutiques pour les jambes lourdes ou pour les hémorroïdes. En cosmétique, très peu de brevets liés à l'utilisation d'esculine ont été détectés. On peut citer par exemple la demande JP6145035, ayant pour titre Composition cosmétique protégeant des rayons ultraviolets ( ULTRAVIOLET RAY PREVENTING COSMETIC ), ou la demande JP5000934, ayant pour titre Péparation externe pour la peau ( EXTERNAL PREPARATION FOR SKIN ) où l'esculine est utilisée en tant qu'inhibiteur de synthèse de mélanine. L'extrait de germe de blé, par sa richesse en nutriments, protéines , vitamines , oligoéléments, ou lipides et vitamine E pour un extrait de type huileux, est très utilisé en cosmétique pour ses propriétés nourrissantes. En revanche, les inventeurs n'ont détecté aucun art antérieur divulguant une composition associant à la fois de l'esculine et un extrait de germe de blé. Cette association est à la base de la présente invention. Elle présente de nombreux effets inattendus sur les cellules de la peau, effets qui sont exposés ci-dessous et démontrés au travers des résultats expérimentaux fournis dans la présente demande. Exposé de l'invention L'association de la présente invention comprend donc un extrait de germe de blé et de l'esculine. Cette composition, comme décrit dans la présente, peut être une composition cosmétique. Lors de différents tests in vitro réalisés à partir de cette association, les inventeurs ont montré l'intérêt de cette association, bénéfique notamment dans le domaine de l'anti-âge. En particulier, les inventeurs ont démontré que l'association de l'extrait de germe de blé et de l'esculine présente in vitro d'intéressantes activités sur plusieurs mécanismes biologiques. Cette association montre d'ailleurs une certaine synergie d'action pour ces activités. Ces activités sont décrite ci-après : Premièrement, une activité sur la prolifération des kératinocytes en culture monocouche : l'association de la présente invention stimule de façon significative la prolifération de kératinocytes en culture monocouche. Deuxièmement, une activité sur la protection des cellules épidermiques face à certaines agressions : l'association de la présente 1 o invention possède d'une part des propriétés de lutte contre des agressions appliquées à la peau, notamment les agressions UVB et les agressions thermiques par application de chaud ou de froid, on entend par température chaude ou froide, des températures des climats tempérés, et d'autre part permet de protéger les kératinocytes et d'en augmenter leur 15 viabilité dans des conditions d'agression par UVB et d'agressions thermiques. L'association de l'invention présente un rôle préventif, puisque son apport avant les agressions permet, in vitro, d'augmenter la viabilité cellulaire, ainsi qu'un pouvoir curatif, puisque son apport après les agressions permet aux cellules de retrouver plus rapidement une bonne 20 viabilité. Aussi, l'association de la présente invention permet une protection immédiate et totale puisque sa présence, respectivement pendant les agressions, ou avant, pendant et après les agressions (correspondant à un traitement total) permet aux cellules épidermiques de retrouver une viabilité cellulaire nécessaire. L'association de l'extrait de 25 germe de blé avec l'esculine peut donc être présentée comme un actif anti-agression ou anti-stress . Aussi, cette association permet d'obtenir non seulement des effets additionnels, mais aussi des effets synergiques sur la viabilité des cellules épidermiques soumises à des agressions UVB et/ou thermique par application de chaleur ou de froid. 30 Troisièmement, une activité sur l'expression des intégrines a2131 au niveau de la jonction dermo-épidermique : Les intégrines sont des récepteurs membranaires constitués de deux sous unités a et R. Elles assurent, d'une part, une fonction d'adhésion cellules-cellules ou cellules-matrice extracellulaire (MEC) et d'autre part, une fonction de transduction du signal. Associées à leurs ligands de la MEC, elles jouent un rôle important pour la différenciation, la migration et l'adhésion des kératinocytes basaux à la jonction dermo-épidermique (JDE). Les intégrines et leur rôle(s) sont décrits dans les documents Role of integrins in regulating epidermal adhesions, growth and differenciation û F.M. Watt, The EMBO Journal 2002, Vol. 21, No 15 : 3919-3926 [1], Laminin 5 deposition promotes kératinocytes motility û K. Zhangé and R.H. Kramer, Experimental Oeil Research 1996, 227: 309-322 [2], et Keratinocyte migration requires intégrine a2131 mediated interaction with the laminine 5 y2 chain û F. Decline and P. Rousselle, Journal of Oeil Science 2000, 114 : 811-823 [3]. L'ancrage des kératinocytes à la JDE régule le phénomène de différenciation kératinocytaire. Particulièrement, les isotypes a2131, a3131 et a6134 sont les 3 principales intégrines exprimées de façon constitutive par les kératinocytes. Les intégrines a2131, comme toutes les intégrines pl sont localisées sur les membranes des cellules. Les intégrines a2131 ont un rôle prépondérant dans l'adhésion intercellulaire, elles ont pour ligands extracellulaires le collagène principalement. Des études sur des cultures de kératinocytes humains normaux (KHN) in vitro sur subsrat de collagène ont permis de réaliser des immnunomarquages de différentes intégrines. Les résultats ont montré que le traitement des KHN par l'association entre l'extrait de germe de blé et de l'esculine permet une augmentation de l'expression des intégrines a2131. Ceci se traduit par une augmentation des cohésions intercellulaires et inter-tissulaires entre l'épiderme et le derme, cohésions qui ont tendance à diminuer lors du vieillissement et du photo-vieillissement. Il ressort de ces études que l'association d'un extrait de germe de blé et d'esculine conforme à la présente invention, incorporée dans une formule cosmétique, peut être utilisée pour lutter contre le vieillissement cutané. Plus précisément, cette association peut intégrer des compositions cosmétiques à visé anti-âge. L'association de la présente invention peut donc être utilisée pour la préparation d'une composition cosmétique ou dermatologique. Il peut s'agir par exemple d'une composition destinée à augmenter la prolifération des kératinocytes, et/ou d'une composition destinée à protéger des cellules épidermiques face à une agression par UV et/ou d'une composition destinée à protéger des cellules épidermiques face à une agression thermique par application de chaleur ou de froid et/ou d'une 1 o composition destinée à améliorer la cohésion intercellulaire et inter-tissulaire entre l'épiderme et le derme et/ou d'une composition destinée à augmenter l'expression des intégrines a2131 au niveau de la jonction dermoépidermique et/ou d'une composition destinée à prévenir et/ou à traiter le vieillissement cutané. 15 Dans la présente invention, l'esculine utilisée peut être extraite par exemple de l'écorce de marronnier d'inde Aesculus hippocastanum. On peut se procurer cette esculine par exemple auprès de la société INDENA (France) Selon l'invention, de préférence, l'extrait de germe de blé est 20 obtenu par un procédé permettant l'extraction des protéines, vitamines, oligoéléments et des acides nucléiques dudit germe de blé. Les procédés d'extraction utilisés dans le domaine de la fabrication des produits cosmétiques et connus de l'homme du métier peuvent être utilisés pour mettre en oeuvre la présente invention. On peut par exemple utiliser 25 l'extrait de germe de blé commercialisé par la société ALBAN MULLER (France) De préférence, dans la présente invention, on utilise un extrait issu d'un procédé d'extraction tel que décrit dans la demande FR 2 831 161 déposée par les laboratoires de biologie végétale YVES ROCHER. En 30 effet, ce procédé d'extraction favorise l'extraction des acides nucléiques présents dans les cellules par une double action enzymatique lors du procédé. Ce procédé comprend les étapes suivantes : extraire en milieu aqueux la matière végétale, en présence d'enzymes cellulolytiques à pH initial de 9 à 13, séparer la matière végétale pour récupérer un extrait aqueux, traiter l'extrait par une protéase, et séparer les insolubles pour récupérer un extrait aqueux purifié du germe de blé. On se réfèrera à la description de FR 2 831 161 pour les détails de mise en oeuvre de ce procédé d'extraction. Selon l'invention, l'extrait de germe de blé comprend les éléments suivants, en % en poids/poids (en g /100 g d'extrait) - 55 à 65 % de glucides, - 25 à 35 % de protéines, - 0,25 à 1 % d'acides nucléiques, - 6à10%de cendres. Selon l'invention, l'extrait de germe de blé peut comprendre en outre une ou plusieurs vitamine(s) choisie(s) dans le groupe comprenant les vitamines B1, B2, B6 et B9. Ces vitamines peuvent être celles présentes dans le germe de blé à l'origine de l'extrait de germe de blé utilisé ou être ajoutées dans l'extrait. Leur concentration correspond donc à celle qui peut être obtenue par extraction à partir du germe de blé et du procédé d'extraction utilisés. L'association de la présente invention peut être obtenue simplement par mélange d'esculine et d'extrait de germe de blé, avantageusement dans des proportions telles que : - esculine : 0,1 à 5,0 % en poids par rapport à la composition et - extrait de germe de blé : 10 à 30% en poids par rapport à la composition L'association de la présente invention peut être utilisée par exemple pour la fabrication d'une composition cosmétique. La composition cosmétique peut être par exemple sous la forme d'une lotion, d'une crème ou d'un lait. Lorsqu'elle est sous forme de lotion, elle peut être appliquée directement sur la peau au moyen d'un applicateur, par exemple de coton, ou être pulvérisée. Pour la fabrication de ces compositions cosmétiques, on peut utiliser par exemple un des procédés tels que ceux décrits dans les documents décrits dans exemple 6. De préférence, l'association de la présente invention telle que définie ci-dessus sera utilisée en une quantité allant de 0,5 à 10 % en poids de la composition cosmétique. L'association de la présente invention 1 o peut alors constituer le principe actif de la composition cosmétique. Selon l'invention, l'association de la présente invention peut par exemple être encapsulée dans des liposomes ou des sphérulites en utilisant les procédés connus de l'homme du métier. On obtient ainsi une 15 composition cosmétique selon l'invention. L'encapsulation a pour intérêt de protéger les molécules extraites et permettre une pénétration séperieure dans les couches de l'épiderme. D'autres avantages pourront encore apparaître à l'homme du 20 métier à la lecture des exemples qui suivent, donnés à titre illustratif et non limitatif. EXEMPLES 25 Tests d'efficacité in vitro : Les inventeurs de la présente ont testé l'efficacité de l'extrait de germe de blé, seule ou en association avec de l'esculoside, sur des cultures monocouches de kératinocytes humains normaux (KHN). Dans les exemples qui suivent, les concentrations qui sont 30 exprimées en % sont des % en poids/volume (p/v). Il s'agit de grammes pour 100 mL. Les proportions utilisées dans ces exemples peuvent bien entendu être étendues à des quantités plus importantes tout en restant proportionnelles à celles indiquées. Exemple 1 : test sur la prolifération des KHN : Les KHN sont ensemencés (passage 2) en plaque 24 puits, à raison de 9100 cellules / puits / mL milieu KBM (Cambrex, référence commerciale CC-3101) complémenté en gentamycine/amphotérycine B, insuline, hydrocortisone (SIGMA) et extrait de glande pituitaire bovine (BPE pour bovine pituitary extract commercialisé par la société Cambrex (Etats unis). Les cellules sont incubées pendant 24 heures à 37 C, sous atmosphère 5% CO2 et à saturation en humidité. Elles sont ensuite traitées dans le milieu KBM complémenté en gentamycine/amphotérycine B, insuline, hydrocortisone et BPE, le traitement a lieu pendant 1 à 6 jours (J), avec un renouvellement du traitement au bout du 3ème jour. Un témoin positif est réalisé, il est constitué du milieu KBM complémenté en gentamycine/amphotérycine B, insuline, hydrocortisone, BPE et en facteur de croissance épidermique. Les concentrations finales testées des actifs sont les suivantes, exprimées en g / 100 ml : - Extrait de Germe de blé (GDB) à 0,05% et 0,010/0 -Esculoside à 25.10-4% et 5.10-4% - association selon la présente invention : GDB ù esculoside : 0,05% GDB + 25.10-4% esculoside et 0,01% GDB + 5.10-4% esculoside. Tableau 1 : résultats des tests de prolifération de KHN Actifs testés seuls Gain de GDB Esculoside croissance 0,05% - 0,01 % 25.10-4% û 5.10-4% (%) J2 24-/ /-/ J3 33-28 /-/ J6 66-42 /-/ Association de la présente invention Gain de Association de l'invention Association de l'invention croissance 0,05% GDB + 0,01% GDG + (%) 25.10-4% esculoside 5.10-4% esculoside J2 28 / J3 41 34 J6 68 43 J2 = 2 jours, J3 = 3 jours, etc. Dans les conditions expérimentales précitées, les inventeurs ont pu mettre en évidence que : - l'extrait de germe de blé permet d'augmenter significativement la prolifération de KHN en culture monocouche, tout au long de la durée du traitement, - l'association de l'extrait de germe de blé avec de l'esculoside permet d'augmenter significativement la prolifération de KHN en culture monocouche, tout au long de la durée du traitement, de façon additionnelle. Exemple 2 : test sur la protection des KHN face à différentes aqressions : Une agression (ou stress en anglais) est l'ensemble des perturbations biologiques provoquées par une intervention chimique et/ou physique sur un organisme. Une agression intense ou prolongée serait source de différents troubles, par exemple un vieillissement prématuré de la peau. Dans cet exemple, les KHN sont ensemencés (passage 2 ou 3) en plaque 24 puits, à raison de 30000 cellules / puits / mL de milieu K-SFM (In vitrogen, référence commerciale 17005075) complémenté en extrait de glande pituitaire bovine (BPE) et en facteur de croissance épidermique (EGF pour Epidermal Growth Factor ). Les cellules sont incubées pendant 24 heures à 37 C, 5% 002 et à saturation en humidité. Après 24 heures de culture (J1), les actifs sont appliqués pendant 24 heures (J2) soit en conditions préventives (traitement avant les agressions), soit en conditions curatives (traitement après les agressions). Les actifs sont aussi appliqués soit en conditions immédiates (pendant les agressions), soit en conditions totales, c'est à dire en conditions préventives pendant 24 heures, puis immédiates pendant l'agression puis curatives pendant 24 heures. Les concentrations finales testées des actifs sont les suivantes, les dilutions ayant été réalisées dans le milieu K-SFM complet : - extrait de germe de blé : 0,05% et 0,01 % p/v - esculoside : 25.10-4% et 5.10-4% p/v - association de la présente invention : 0,05% GDB + 25.10- 4% esculoside, et 0,01% GDB + 5.10-4% esculoside Le témoin non traité milieu KSFM complémenté est aussi réalisé. Une plaque témoin pour chacune des conditions est réalisée de la même façon, mais ne subit aucune agression. Les différentes agressions sont réalisées de la façon suivante : -agression UVB (312 nm): rinçage des cellules par HBSS (Invitrogen, référence commerciale 14025050) puis irradiation des cellules à 50mJ/cm2 (irradiateur Vilmer Lourbat, référence commerciale RMX 3W), les cellules étant incubées dans 1 mL/puits de tampon HBSS (avec ou sans traitement) -agression thermique par application de chaleur : rinçage des cellules par HBSS puis incubation des cellules pendant 30 minutes à +45 C, 1 mL/ puits milieu KSFM complémenté (avec ou sans traitement) - agression thermique par application de froid : rinçage des cellules par HBSS puis incubation des cellules pendant 30 minutes à +4 C, 1 mL/ puits milieu KSFM complémenté (avec ou sans traitement) Après les agressions, les cellules sont rincées par la solution tampon HBSS. A J2 (2ème jour), la viabilité cellulaire est évaluée par le test au 20 MTT (Sigma, référence commerciale M5655). 10 15 Tableau 2 : résultats des tests sur la protection des KHN face à différentes agressions Actifs testés seuls Association de la préser Agression û û 0,05% GDB + 25.10-4% esculoside 0,01 0,05% 0GDB4O1/0 0 25. 10Es-/o 4% 5losi.10- 10- /o -UVB /-/ /-/ 23 Curatif -Froid /- / /- / 25 -Chaud / - / / - / 35 -UVB /û/ /û/ 23 Préventif -Froid /- / /- / 12 -Chaud /- / /- / 21 -UVB / û/ / û/ 30 Immédiat -Froid /- / /- / 23 -Chaud /- / /- / 25 -UVB 19- / 25- / 51 Total -Froid 16 - / 17 - / 31 -Chaud 12 - / 25 - / 47 Dans ces conditions expérimentales, les inventeurs ont pu observer que : - l'extrait de germe de blé à 0,05% en traitement total, permet une protection des KHN face aux agressions UVB, thermique par application de chaleur et thermique par application de froid - l'esculoside à 25.10-4% en traitement total, permet une protection des KHN face aux agressions UVB, thermique par application de chaleur et thermique par application de froid - l'association de la présente invention à la concentration de 0,05% GDB + 25.10-4% esculoside permet une protection curative, préventive, immédiate et totale pourtoutes les agressions, - l'association de la présente invention à la concentration de 0,01% GDB + 5.10-4% esculoside permet une protection curative, immédiate et totale pour toutes les agressions et préventive pour l'agression UVB - - l'association de l'extrait de germe de blé avec l'esculoside permet de protéger de façon additionnelle voire synergique les KHN soumis à des agressions UVB, thermique par application de chaleur et thermique par application de froid et ce pour tous les types de traitement. Exemple 3 : test sur l'expression des intéqrines : La jonction dermo-épidermique (JDE), localisée entre le derme et l'épiderme, assure la compartimentation et joue un rôle important sur le 30 comportement des cellules qui lui sont adjacentes, les KHN basaux de l'épiderme. 10 15 20 25 La JDE est une membrane constituée de collagènes et de laminines. Les hémidesmosomes, structures kératinocytaires particulières, permettent l'adhésion des KHN à la JDE. Les hémidesmosomes sont constitués de la plaque dense intracellulaire et de protéines transmembranaires telles que les intégrines. Les intégrines sont des récepteurs transmembranaires constitués de deux sous unités a et R. Elles assurent, d'une part, une fonction d'adhésion cellules-cellules ou cellules-matrice extracellulaire (MEC) et d'autre part, une fonction de transduction du signal. Associées à leurs ligands de la JDE, elles jouent un rôle important pour la différenciation, la migration et l'adhésion des KHN basaux à la JDE. Particulièrement, les isotypes a2131, a3131 et a6134 sont les 3 principales intégrines exprimées de façon constitutive par les KHN. Les intégrines a2131 et a3131, comme toutes les intégrines (31 sont localisées sur la périphérie des KHN. Les intégrines a2131 ont un rôle prépondérant dans l'adhésion inter cellulaire, elles ont pour ligands extracellulaires le collagène principalement. Les intégrines a3131 ont un rôle dans l'adhésion des cellules entre elles mais aussi avec la matrice extracellulaire et permettent la migration des KHN. Leur principal ligand est la laminine. Les KHN sont ensemencés (passage 2 ou 3) dans des chambres de culture ( Lab Tech en anglais) à 4 compartiments (Becton Dickinson, référence commerciale 354114) 1 compartiment = 1,7 cm2), à raison de 7000 cellules / compartiment / mL milieu K-SFM (In vitrogen, référence commerciale 17005075) complémenté en extrait de glande pituitaire bovine (BPE) et en facteur de croissance épidermique. Préalablement à l'ensemencement, les surfaces des compartiments ont été pré traitées ou non, soit par une solution de collagène IV (Becton Dickinson, référence commerciale 354233) à 3pg/cm2 ou 7pg/cm2 soit par une solution de laminine V (Becton Dickinson, référence commerciale 354232) à 3pg/cm2 ou 7pg/cm2. Ces pré traitements permettent d'obtenir un substrat de collagène IV ou un substrat de laminine V sur lesquels les KHN peuvent être ensemencés. Ces substrats déposés ont pour rôle de mimer la JDE. Les cellules sont incubées pendant 7 jours à 37 C, sous atmosphère 5% CO2 et à saturation en humidité, avec un renouvellement du milieu à 4 jours de culture. Les cellules sont ensuite traitées pendant 3 jours avec soit l'extrait de germe de blé à 0,01% (p/v), soit l'esculoside à 5.10-4% (p/v), soit une l'association selon l'invention des deux (0,01% GDB + 5.10-4% 1 o esculoside), les dilutions étant réalisées dans le milieu K-SFM complet. Un témoin milieu K-SFM complet non traité est aussi réalisé. Après des étapes de fixation et de perméabilisation, les cultures sont immunomarquées avec l'anticorps primaire anti a2131 (Tebu-bio, mouse monoclonal IgG, réf : sc-13546) puis l'anticorps secondaire (Tebu- 15 bio, goat anti-mouse IgG, rhodamine conjugated, réf : sc-2092). L'observation des immunomarquages se fait grâce à un microscope couplé à un système de fluorescence (Olympus U-RFL-T). Un filtre adapté permet de sélectionner la longueur d'onde d'excitation pour la rhodamine à 550 nm. La fluorescence émise est de couleur rouge. Plus 20 l'expression des intégrines recherchées est augmentée et plus il y aura de cellules dont les membranes émettront une fluorescence rouge et / ou plus l'intensité de la fluorescence rouge sera élevée. Pour cela, nous avons défini une légende faite de signe "-" signifiant "absence d'expression des intégrines recherchées", de signe "-/+" signifiant "légère augmentation de 25 l'expression des intégrines recherchées" ou de signe(s) "+".signifiant "une augmentation d'autant plus significative de l'expression des intégrines recherchées" qu'il y a de signe "+". 30 Tableau 3 : augmentation de l'expression des intégrines a2R1 dans les conditions suivantes : Sans Substrat Substrat substrat collagène IV laminine V Sans traitement - -1+ -1+ Extrait GDB (0,01%) + +++ +++ Esculoside -1+ + + (5.10-4%) Association de l'invention + ++++ ++++ 0,01% extrait germe de blé + 5.10-4% esculoside Dans les conditions expérimentales précitées, les inventeurs ont pu observer que : - extrait de germe de blé, - l'esculoside - l'association de l'extrait de germe de blé et del' esculoside permettent l'augmentation de l'expression des intégrines a2131 dans une culture monocouche de kératinocytes humains normaux et plus particulièrement l'association de l'extrait de germe de blé et de l'esculine. Ceci se traduit par une augmentation des cohésions intercellulaires et inter tissulaires entre l'épiderme et le derme, cohésions qui ont tendance à diminuer lors du vieillissement et du photo- vieillissement. De plus, l'augmentation de l'expression des intégrines implique aussi une meilleure adhésion à la jonction dermo-épidermique, donc une meilleure différenciation et une fonction barrière de l'épiderme améliorée. Exemple 4 : préparation d'une association selon l'invention Dans cet exemple, on réalise une association comprenant 20% d'extrait de germe de blé et 1% d'esculine, envue de son encapsulation. L'extrait de germe de blé utilisé est un extrait sec réalisé selon le protocole du brevet FR 2 831 161 déposée par les laboratoires de biologie végétale YVES ROCHER. L'esculine utilisée est commercialisée par la société INDENA sous la référence 3030600. Le protocole suivant est utilisé : a) Faire chauffer de l'eau déminéralisée à 50 C, 1 o b) Ajouter l'extrait sec de germe de blé à raison de 20% d'extrait sec dans l'eau en poids/poids, c) Solubiliser l'extrait 30 minutes à 50 C sous agitation, d) Ajouter l'esculine à raison de 1% en poids/poids dans dans la solution obtenue en c), et 15 e) Solubiliser l'esculine dans l'extrait 30 minutes sous agitation. On obtient une association selon la présente invention. Cette association est de préférence utilisée extemporanément pour la préparation d'une composition cosmétique. 20 Exemple 5 : encapsulation d'une association selon l'inveniton Dans cet exemple, on encapsule l'association préparée dans l'exemple 4. On décrit ici les étapes classiques des procédés d'encapsulation pemrettant d'obtenir des liposomes : 25 1 ù Solubilisation des conservateurs utilisés pour le produit une fois encapsulé 2 ù Dispersion / Solubilisation des actifs, c'est à dire de l'association selon la présente invention à encapsuler, dans l'eau 3 ù Ajout de Lécithines pour former des premières vésicules. 30 4 ù Microfluidisation à haute pression pour réduire la taille des vésicules formées. - Ajout d'un agent réticulant pour éviter la sédimentation des liposomes. CREME N ligne Phase Description Quantité 1 A EAU PURIFIEE 52.099 2 A TALC 1.000 3 A PROPYLENE GLYCOL 3.000 4 A D PANTHENOL 0.150 5 A ALLANTOINE 0.100 6 A POTASSIUM SORBATE 0.200 7 A NA 4 EDTA 0.100 8 B GOMME XANTHANE 0.200 9 B BUTYLENE GLYCOL 2.000 C ACETATE DE TOCOPHEROL 0.100 11 C STEARETH-2 2.000 12 C MONOSTEARATE DE GLYCEROL 40 OV 2.500 13 C BMDBM 0.500 14 C ALCOOL STEARYLIQUE OV 3.000 C COCOATE ETHYL HEXYL 2.000 16 C ALCOOL STEARYLIQUE 210E 2.600 17 C HUILE MINERALE 15 1.500 18 C DIMETHICONE 20 CST 2.000 19 D VEGETOSTEROL 0.100 E HUILE DE TOURNESOL 3.000 21 E ETHYLHEXYLE STEARATE 3.000 22 E HUILE DE SESAME VIERGE BIO 3.000 23 F PHENOXYETHANOL 0.200 24 F CONSERVATEURS 1.500 G L ARGININE 1.000 26 G EAU PURIFIEE 5.000 27 G ACIDE LACTIQUE 90% INODORE 0.700 28 H VITAMINE A PALMITATE 1M 0.300 29 H PARFUM 0.350 H VITAMINE F ETHYL ESTER O 0.300 31 I EAU PURIFIEE 4.000 32 I UREE 0.500 33 J ASSOCIATION GERME DE BLE / ESCULINE SELON L'INVENTION 2.000 Exemple 6 : compositions et obtention de compositions cosmétiques 5 Total 100.000 Mode OPERATOIRE Préparation d'une phase aqueuse "AB" : 1) Dans le mélangeur, introduire les composants de la phase A, (voir ci-dessus, tableau de l'exemple 6) chauffer à 80 C, turbiner à vitesse moyenne. 2) Ajouter la gomme de xanthane préalablement dispersé dans le butylene glycol. 3) Mettre sous vide partiel, agiter pales+racleur vitesse rapide, turbine 1 o grande vitesse jusqu'à ce que le gel soit lisse (10 minutes environ). Préparation d'une phase grasse "CDE": 4) Dans un fondoir, chauffer ensemble les composants C à 80 -85 C en agitant lentement jusqu'à fusion complète. 15 5) Agiter et disperser le VEGETOSTEROL (phase D) dans le vortex. Maintenir la température et l'agitation jusqu'à fusion complète. Ajouter la phase E. Préparation d'une émulsion 20 6) Aspirer le phase CDE dans AB. Ajouter ensuite la phase F. Turbiner (15 minutes sur MCD 1000), pales+racleur vitesse moyenne. 7) Arrêter la turbine et refroidir sous vide. 8) Vers 40 ajouter G ,puis H puis I. 9) Turbiner à grande vitesse (15 minutes sur MCD 1000). 25 10) Vers 35 C, introduire la phase J. Turbiner (15 minutes sur MCD 1000). 11) A 25 C, arrêter et contrôler. 19 30 SERUM A NA 4 EDTA 0.025 A ALLANTOINE 0.200 A BUTYLENE GLYCOL 3.000 A POBM 0.200 A EXTRAIT DE SHIITAKE 6.000 A BETA ESCINE 0.100 A EAU PURIFIEE 57.97 B PEMULEN TR2 0.100 B COCOATE ETHYL HEXYL 0.500 C GOMME XANTHANE 0.100 C PROPYLENE GLYCOL 3.000 D VASELINE NON LEVRES 1.000 D ALCOOL C16/C18 AE 1.000 D ACETATE DE TOCOPHEROL 0.100 E 5 CYCLOMETHICONE 65% 5.000 F HYDROXYDE DE SODIUM 0.015 F EAU PURIFIEE 0.985 G GLUADINE AGP 1.000 G UREE 3.000 G EAU PURIFIEE 5.000 H PVP/ACRYLATE 845 0.400 H ASSOCIATION GERME DE BLE 5.000 / ESCULINE SELON L'INVENTION I VITAMINE A PALMITATE 1M 0.100 I PARFUM 0.300 I VITAMINE F ETHYL ESTER 0.300 J AMIDON DE MAIS 1.000 J ALCOOL 95% AGRICOLE 4.000 K EAU PURIFIEE 0.005 K HYDROXYDE DE SODIUM L COLORANT 0.100 Total 100.00040 Mode Opératoire P+R = PALES+RACLEUR 5 T = TURBINE PV, MV, GV = PETITE, MOYENNE, GRANDE VITESSE Dans cet exemple, la fabrication s'effectue sous vide. 10 ^ PHASE AQUEUSE "ABC" : 1) Introduire l'EAU DEMINERALISEE CHAUDE A dans le mélangeur (75 C). Ajouter les autres composants A en vérifiant leur dissolution. Agiter P+R MV+TGV (3min sur MCD10). 2) A 75 C, introduire la dispersion B dans A sous TMV. 15 3) Mettre sous vide partiel, agiter P+R MV+TGV (3min sur MCD10) jusqu'à ce que le gel soit lisse. 4) Sous TGV, ajouter ensuite la dispersion C homogène. 5) Mettre sous vide partiel, agiter P+R MV+TGV (3min sur MCD10) jusqu'à ce que le gel soit lisse. Vérifier le gel (TM204). 20 • PHASE GRASSE "D": 7) Dans un fondoir, chauffer ensemble les composants D à 70-75 C en agitant lentement jusqu'à fusion complète. 25 ^ EMULSION : 8) A 70-75 C, P+R PV, aspirer D dans ABC en filtrant sur toile inox 80 à 200 microns. Remettre sous vide et agiter P+R MV+TGV (3 min sur MCD10). 30 8) A la suite, ajouter la dispersion E sous agitation P+R MV + TGV (5 min). 21 • REFROIDISSEMENT : 9) Refroidir à 60 C sous vide avec P+R MV. 10) Vers 60 C, neutraliser en ajoutant la phase F sous P+R MV. 11) Continuer le refroidissement jusqu'à 40 C sous vide maxi avec P+R MV. 12) A 40 C, introduire le mélange G sous P+R MV. Continuer à refroidir avec P+R MV jusqu'à 35 C. 13) A 35 C, ajouter la solution limpide H sous P+R MV. 14) A 30 C, ajouter la phase I sous P+R MV + TPV (3min). 15) Poursuivre le refroidissement et ajouter doucement J sous P+R MV. 16) Ajuster le pH à l'aide de la phase K. Mesure préventive: Dans cet exemple, la quantité de NaOH peut aller de 0.001 à 0.005%. 17) Introduire K en cuve et agiter P+R MV. 18) Se référer au témoin et faire un essai couleur au laboratoire à l'aide de la phase L avant de teinter le vrac. Bien agiter P+R MV 19) A 25 C, arrêter et contrôler. 20 25 30 Références bibliographiques [1] Role of integrins in regulating epidermal adhesions, growth and differenciation ù F.M. Watt, The EMBO Journal 2002, Vol. 21, No 15 : 3919-3926. [2] Laminin 5 deposition promotes kératinocytes motility ù K. Zhang and R.H. Kramer, Experimental Oeil Research 1996, 227: 309-322. [3] Keratinocyte migration requires intégrine a2131 mediated interaction with the laminine 5 y2 chain ù F. Decline and P. Rousselle, Journal of Oeil Science 2000, 114: 811-823. 5 REVENDICATIONS 1. Association comprenant un extrait de germe de blé et de l'esculine. 2. Association selon la revendication 1, dans laquelle l'extrait de germe de blé est obtenu par un procédé permettant l'extraction des protéines, vitamines, oligoéléments et acides nucléiques dudit germe de blé. - 15 -- 20 4. 3. Association selon la revendication 2, dans laquelle l'extrait de germe de blé est obtenu par un procédé d'extraction comprenant les étapes suivantes : extraire en milieu aqueux la matière végétale, en présence d'enzymes cellulolytiques à pH initial de 9 à 13, séparer la matière végétale pour récupérer un extrait aqueux, traiter l'extrait par une protéase, et séparer les insolubles pour récupérer un extrait aqueux purifié du germe de blé. Association selon la revendication 1, dans laquelle l'extrait de germe de blé comprend les éléments suivants, en % en poids/volume (g/100mL) : 25 - 55 à 65 % de glucides, - 25 à 35 % de protéines, - 0,25 à 1 % d'acides nucléiques, - 6à10%de cendres. 10 5. Association selon la revendication 3 ou 4, dans laquelle l'association comprend en outre une ou plusieurs vitamine(s) choisie(s) dans le groupe comprenant les vitamines B1, B2, B6 et B9. 6. Association selon la revendication 1, dans laquelle l'esculine est issue de l'écorce de marronnier d'inde. 7. Composition cosmétique qui comprend une association selon l'une quelconque des revendications 1 à 6. 8. Composition cosmétique qui comprend une association selon l'une quelconque des revendications 7, ladite composition cosmétique étant choisie parmi une composition destinée à augmenter la prolifération des kératinocytes, une composition destinée à protéger des cellules épidermiques face à une agression par UV ou une agression thermique, une composition cométique destinée à améliorer la cohésion intercellulaire et inter-tissulaire entre l'épiderme et le derme, une composition cosmétique destinée à augmenter l'expression des intégrines a2131 au niveau de la jonction dermoépidermique et une composition cosmétique destinée à prévenir et/ou à traiter le vieillissement cutané. 9. Utilisation d'une association selon l'une quelconque des revendications 1 à 6 pour la préparation d'une composition cosmétique ou dermatologique. 10. Utilisation selon la revendication 9, dans laquelle la composition cosmétique ou dermatologique est destinée à augmenter la prolifération des kératinocytes. 30 11. Utilisation selon la revendication 9, dans laquelle la composition cosmétique ou dermatologique est destinée à protéger des25 cellules épidermiques face à une agression par UV ou une agression thermique. 12. Utilisation selon la revendication 9, dans laquelle la composition cosmétique ou dermatologique est destinée à améliorer la cohésion intercellulaire et inter-tissulaire entre l'épiderme et le derme. 13. Utilisation selon la revendication 9, dans laquelle la composition cosmétique ou dermatologique est destinée à augmenter l'expression des intégrines a2131 au niveau de la jonction dermoépidermique. 14. Utilisation selon la revendication 9, dans laquelle la composition cosmétique ou dermatologique est destinée à prévenir et/ou à traiter le vieillissement cutané.