FR 2906718 A1 20080411 FR 0608752 A 20061005 1 COMPOSITION COSMETIQUE A BASE D'HUILE ESSENTIELLE DE MYHRRE POUR LA FERMETE ET LE DRAINAGE DE LA PEAU La présente invention concerne le domaine de la cosmétique et plus particulièrement du soin de la peau du corps et du visage notamment dans une perspective de fermeté et de drainage. L'invention se rapporte tout particulièrement à l'utilisation de l'huile essentielle de Myrrhe, issue de Commiphora myrrha, dans des compositions cosmétiques. Commiphora myrrha est un arbuste, ou petit arbre épineux des régions semi-arides d'Afrique orientale (Somalie, Ethiopie, Egypte, Soudan et Arabie.) Il appartient à la famille des Burséracées comme l'encens, l'oliban, les élémis ou l'opopanax (qui sont aussi fournisseurs de résines ou gommes oléo-résineuses.) On appelle Myrrhe, la gomme résineuse récoltée de C.myrrha, qui suinte naturellement du tronc, ou lorsque les canaux sécréteurs schizolygènes sont endommagés suite à des blessures naturelles ou volontaires (incisions). Un liquide épais et blanchâtre s'écoule alors du tronc, et durcit à l'air pour donner des masses irrégulières de couleur jaune à rouge-brun. La Myrrhe a été utilisée depuis la nuit des temps dans les cultures anciennes, et en particulier par les Égyptiens dans la composition de parfum, et surtout dans les rites d'embaumement. Cet arbre sacré a été particulièrement recherché pour ses "pouvoirs" et on lui accorda une importance considérable. Ses propriétés antiseptiques ont largement été mises à profit pour nettoyer les plaies et prévenir de la gangrène. Aujourd'hui, la Myrrhe est 2906718 2 Aujourd'hui, la Myrrhe est particulièrement utilisée sous forme de teinture pour soigner les inflammations buccales. La Myrrhe peut être fractionnée par 5 entrainement à la vapeur, et on obtient ainsi ladite huile essentielle de Myrrhe. L'huile essentielle de Myrrhe présente une odeur chaude, résineuse, épicée et boisée. Elle est visqueuse et collante, de couleur jaune brun. Les constituants majoritaires de l'huile 10 essentielle de Myrrhe sont : lindestrène, curzérène, germacrone, 13-élémène, épi-a-cadinol, (3-germacrène, asélinène, atractylone, trans-y-cadinène, S-cadinène, et yélémène, S-germacrène, caryophyllène (Figure 1). 15 On a observé qu'en vieillissant la peau s'amincit, plus particulièrement au niveau du derme. Celui-ci perd de sa matière par défaut de synthèse et par dégradations. Les fibroblastes, responsables de la synthèse des macromolécules du tissu conjonctif dermique, en 20 produisent de moins en moins, moins régulièrement, et de moins bonne qualité. Le photo-vieillissement génère par ailleurs, l'expression d'enzymes ciblant et dégradant particulièrement les collagènes et l'élastine. 25 Ces deux phénomènes se renforcent et contribuent à la perte de matière, au manque de fermeté et au relâchement cutané. La Demanderesse a recherché une solution à ces problèmes et sa connaissance des huiles essentielles lui a 30 permis de mettre en évidence que l'huile essentielle de Myrrhe était capable de palier, au moins en partie, aux phénomènes ci-dessus de façon à donner à la peau un aspect plus ferme. Cette action remarquable a été démontrée grâce 2906718 3 au rôle de l'huile essentielle de Myrrhe sur les fibroblastes et l'orientation de leur maturation en myofibroblastes. 5 De même, la Demanderesse a recherché une solution aux préoccupations très actuelle de l'amincissement et des jambes lourdes et a constaté que de façon innatendue l'huile essentielle de Myrrhe présentait une action favorable sur l'angiogenèse. Les travaux effectués par la 10 Demanderesse lui permettent maintenant de proposer l'huile de Myrrhe comme actif cosmétique présentant un effet drainant et donc utiles comme amincissant et/ou pour lutter contre les jambes lourdes et une circulation difficile, et/ou pour agir favorablement sur le drainage et 15 l'élimination des toxines. En conséquence, la présente invention a pour objet une composition cosmétique constituée ou comportant de l'huile essentielle de Myrrhe comme agent actif pour 20 améliorer la fermeté de la peau et/ou présenter un effet drainant. L'huile essentielle de Myrrhe est présente dans la composition de l'invention en quantité cosmétiquement 25 efficace pour augmenter les propriétés contractiles des fibroblastes et leur maturation en myofibroblastes et/ou stimuler l'angiogenèse. Les compositions selon l'invention peuvent être 30 de l'huile essentielle de Myrrhe pure. De manière préférentielle, ces compositions peuvent comprendre de 0,0001% à 5 % et de préférence de 0.01% à 1% d'huile essentielle de Myrrhe exprimée en poids par rapport au poids total de la composition. 2906718 4 Les compositions de l'invention peuvent par ailleurs comprendre un ou plusieurs autres agents actifs sur les cellules endothéliales pour une efficacité drainante 5 comme ceux choisis dans le groupe comprenant : les oligo-éléments (et dérivés), les sels minéraux, les huiles essentielles, l'escine, les extraits de plantes (ginkgo biloba, marronnier d'inde, bigarade), les peptides... 10 Les compositions de l'invention peuvent par ailleurs comprendre un ou plusieurs autres agents actifs sur les pré-adipocytes et/ou adipocytes pour une efficacité minceur globale, comme ceux choisis dans le groupe comprenant : les bases xanthiques (ou extraits végétaux en 15 contenant tels que le guarana, le café, le kola, le cacoa), les peptides, les oligo-éléments (et dérivés), les sels minéraux, les flavonoïdes, les huiles essentielles, les enzymes, les protéines,... 20 Les compositions de l'invention peuvent par ailleurs comprendre un ou plusieurs autres agents actifs pour pallier aux phénomènes de l'inflammation liés à la problématique de la cellulite, comme ceux choisis dans le groupe comprenant : allantoïne, bisabolol, les flavonoïdes, 25 les huiles essentielles, les oligo-éléments (et dérivés), la rutine, ... L'huile essentielle de Myrrhe ou les compositions en comprenant peuvent être appliquées par voie 30 topique et peuvent se présenter sous forme de crème, de lait, de solution, de gel, de spray, d'huile, de suspension, de patch, etc... Ces compositions peuvent se présenter sous la forme d'émulsion. huile dans l'eau ou eau dans l'huile, d'émulsion à phases multiples, de micro-émulsion, de nano- 2906718 5 émulsion et tout type de système de vectorisation associé permettant une meilleure pénétration. L'invention concerne aussi l'utilisation d'une 5 huile essentielle de Myrrhe en tant qu'agent pour améliorer la fermeté de la peau et/ou présenter un effet drainant dans une composition cosmétique. Dans cette utilisation, l'huile essentielle de 10 Myrrhe est aussi utile comme amincissant et/ou pour lutter contre les jambes lourdes et une circulation difficile, et/ou pour agir favorablement sur le drainage et l'élimination des toxines. Comme indiqué précédemment, l'huile essentielle de Myrrhe est présente en quantité 15 cosmétiquement efficace pour augmenter les propriétés contractiles des fibroblastes et leur maturation en myofibroblastes et/ou stimuler l'angiogenèse. L'invention concerne encore un procédé de soin 20 cosmétique plus particulièrement pour raffermir et/ou drainer la peau caractérisé en ce qu'il consiste à appliquer sur la peau de tout ou partie du corps une composition comme définie précédemment. 25 D'autres avantages et caractéristiques de l'invention apparaîtront des exemples qui suivent dans lesquels il sera fait référence aux dessins en annexe dans lesquels : - La figure 1 donne le profil chromatographique 30 de l'huile essentielle de Myrrhe. - La figure 2 représente l'expression du pouvoir contractile des fibroblastes dans le temps, en présence ou en absence d'huile de Myrrhe. 2906718 6 - La figure 3 représente l'action de l'huile de Myrrhe sur l'angiogenèse. Exemple 1 : Contraction des dermes équivalents 5 (action fermeté) 1) Principe du test Lorsque les fibroblastes sont cultivés dans des conditions classiques, à savoir en monocouche, ces derniers 10 acquièrent un phénotype différent de la réalité dermique. Des techniques particulières ont été développées qui permettent de les cultiver en trois dimensions dans un espace défini contenant du collagène. Dans ces conditions particulières, les 15 fibroblastes s'arrondissent et développent des interactions tridimensionnelles avec la matrice. Dans ces conditions de culture, il est ainsi possible de déterminer le pouvoir contractile des cellules et leur maturation en myofibroblastes, dont l'augmentation est associée in vivo à 20 une densification du derme . 2) Déroulement du test Les fibroblastes ont été ensemencés à raison de 4 x 105 cellules par flasque de 75 cm2 (GREINER, 25 réf.658175), puis cultivés dans un milieu nutritif DMEM sans rouge de phénol (INVITROGEN, réf. 31053028) contenant 10% de sérum de veau nouveau-né (SVNN, INVITROGEN, réf. 16010159, lot 40F1420D), 1% d'une solution d'acides aminés non essentiels (INVITROGEN, réf. 11140035), 100pg/ml de 30 pénicilline, 100U/ml de streptomycine, 2mM de L-glutamine et 1% d'une solution de pyruvate de sodium (INVITROGEN, réf. 11360039). En fonction des cultures, le milieu de culture contenait ou non l'huile essentielle de Myrrhe (2,5.10-5%, 2906718 7 p/v). À titre de contrôle positif, une culture en présence de TGF(3 (SIGMA, T7039) à 5ng/ml a été utilisée. Les cellules, ont alors été placées dans un incubateur à 37 C, 5% de CO2 et à saturation en humidité, 5 pendant 7 jours avec un changement de milieu tous les 2 jours. Après 7 jours de culture, les fibroblastes ont été trypsinés et ensemencés dans des lattices à raison de 165 000 cellules ml composée de 2,75m1 de milieu, 1,5m1 10 d'une solution de collagène type I à 3,74mg/ml (Becton Dickinson, réf 4236) et de 0,25m1 d'une solution NaOH à 0,02N. L'ensemble a été ensemencé dans une boîte de pétri de 35mm de diamètre (boite pour la bactériologie, non-traitée pour la culture cellulaire). 15 Chacune des boîtes ensemencées a été déposée dans un incubateur à 37 C, 5% CO2 et 95% d'humidité, pendant 30 minutes. Après 30 minutes, le gel a été décollé des bords des boîtes et celles-ci ont été replacées à l'étuve. La contraction des lattices de collagène a été 20 évaluée en observant une cinétique (après 15H - 21H - 24H û 29H et 39H) au moyen de deux résultats bruts: d'une part la mesure du diamètre des lattices concernées et d'autre part le dénombrement des fibroblastes de ces mêmes lattices. Le diamètre des lattices a été mesuré à l'aide 25 d'une règle graduée. Le comptage cellulaire a été réalisé comme suit : les lattices de collagène ont été digérées par 2ml d'une solution de collagénase (SIGMA, C9891) à 2mg/ml, incubée à 37 C pendant 15min et agitée régulièrement. Une fois la 30 lattice complètement solubilisée, cette solution a été centrifugée à 1200 tours/min. Le culot a ensuite été repris dans lml d'une solution tampon HBSS et le dénombrement cellulaire a été effectué à l'aide d'une cellule de Malassez. 2906718 8 cellulaire a été effectué à l'aide d'une cellule de Malassez. A partir des résultats bruts des mesures de diamètres et des comptages cellulaires des lattices de 5 collagène, le rapport R ci-après a été calculé pour chaque condition : Contraction de la lattice (mm) R = Nombre de cellules dans la lattice 10 A partir de ces différents rapports, les droites d'étalonnage pour le témoin négatif, le témoin positif (TGFP) et l'actif ont été validées et ont permis de déterminer l'efficacité de l'actif par comparaison des 15 coefficients directeurs et des ordonnées à l'origine. Ce protocole a permis d'évaluer la capacité de l'huile essentielle de Myrrhe à stimuler les fibroblastes, à augmenter leur pouvoir contractile et à les orienter vers un phénotype de myofibroblastes. 20 Ce phénotype de myoblastes est associé à un réseau collagénique plus dense en périphérie de chaque cellule d'où résulte un effet densificateur. 3) Résultats 25 Comme le montre la figure 2, les cellules dermiques traitées avec l'huile essentielle de Myrrhe sont plus contractiles que les cellules non-traitées, et les cellules traitées avec TGF-(3, le témoin positif. 30 Exemple 2 : Effet de l'huile essentielle de Myrrhe sur l'angioqenèse (action drainante) 1) Principe 2906718 9 d'une unique couche de cellules endothéliales formant leur paroi. L'angiogenèse favorise la réparation et la nutrition des tissus. Le VEGF est un facteur de croissance qui stimule ce phénomène sur des cultures de cellules endothéliales 5 alors que la suramine (produit utilisé en cancérologie) l'inhibe. Il agit globalement, sans systématiquement être impliqué dans tous les processus cités ci-avant. Dans ce modèle, les cellules endothéliales humaines sont cultivées dans un milieu spécifique nutritif 10 et sur un coating de matrigel. Ce dernier permet ainsi d'étudier la capacité des cellules à former des ramifications entre elles, en présence ou non d'actifs. 2) Matériel et Méthode Pour cette étude on utilise : - Cellules endothéliales : HUVEC - Milieux de culture : EGM-2 bullet Kit et DMEM avec rouge de phénol - Matrigel - Plaques de culture Déroulement de l'étude : Le matrigel (MatrigelTM Basement Membrane Matrix, réf 356234, BD Biosciences) est tout d'abord décongelé sur 25 glace à 4 C et une solution à 5mg/mL est préparée avec du milieu DMEM (réf 41966029, Invitrogen). Des plaques de culture (48 puits réf. 677 180, Greiner) sont mises sur pain de glace et 125pL/puits de matrigel sont ajoutés. 30 Le coating s'effectue à 37 C pendant au moins 2h. 15 20 Deux milieux sont utilisés pour : 2906718 10 -un pour la prolifération cellualire : milieu EGM-2 (réf C-22111, Promocell)complet (c'est-à-dire contenant tous les facteurs de croissance du bullet kit) - un pour ensemencer les cellules : L'EGM-2 5 complet sans VEGF. On peut ainsi étudier le comportement de l'actif sans le facteur majeur déclenchant l'angiogenèse. Dans cette expérience, trois témoins sont utilisés : - un témoin milieu : milieu seul, 10 - un témoin négatif suramine (réf S2671, Sigma), un témoin positif VEGF (réf C302600, Promocell). Les actifs et les témoins sont mis en contact 15 avec les cellules (taux : 20 000 cellules / 250pL) juste avant l'ensemencement. Les suspensions cellulaires ainsi préparées sont ajoutées délicatement, goutte à goutte, à raison de 250pL / puits (2 puits / conditions). Les plaques sont incubées à 37 C pendant 16 heures. 20 Ensuite, pour chaque condition, trois photos (minimum) sont prises aléatoirement et le nombre de ramifications moyen est calculé. En comparant le nombre moyen de ramifications du témoin milieu, fixé à 0% d'action sur l'angiogenèse, on 25 obtient donc le pourcentage d'action de chaque actif selon la formule suivante : % d'action = 100 x Nombre de ramifications crées par les cellules traitées par l'actif / Nombre de ramifications crées dans le puits témoin milieu 30 Selon les résultats, les actifs sont classés de "très fort stimulant" à "fort inhibiteur" selon la formule suivante : % d'action corrigé = 1 % d'action de l'actif û 100 1. 5 10 15 2906718 11 > 100 TRES FORT STIMULANT > 40 % FORT STIMULANT > 20 % STIMULANT 0 +i - 20 % EFFET NUL REVENDICATIONS 1) Composition cosmétique constituée ou comportant de l'huile essentielle de Myrrhe comme agent actif pour améliorer la fermeté de la peau et/ou présenter un effet drainant. 2) Composition selon la revendication 1, caractérisée en ce que l'huile essentielle de Myrrhe est présente dans la composition de l'invention en quantité cosmétiquement efficace pour augmenter les propriétés contractiles des fibroblastes et leur maturation en myofibroblastes et/ou stimuler l'angiogenèse. 3) Composition selon l'une des revendications 1 ou 2, caractérisée en ce qu'elle comprend de 0,0001% à 5 % et de préférence de 0.01% à 1% d'huile essentielle de Myrrhe exprimée en poids par rapport au poids total de la composition. 4) Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce qu'elle comprend un ou plusieurs autres agents actifs sur les préadipocytes et/ou adipocytes, comme ceux choisis dans le groupe comprenant : les bases xanthiques, les peptides, les oligo-éléments, les sels minéraux, les huiles essentielles, les enzymes et les protéines. 5) Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce qu'elle comprend un ou plusieurs autres agents actifs sur les cellules endothéliales, comme ceux choisis dans le groupe comprenant : les oligo-éléments (et dérivés), les sels minéraux, les huiles essentielles, l'escine, les extraits de 2906718 17 plantes (ginkgo biloba, marronnier d'inde, bigarade), les peptides... 6) Composition selon l'une quelconque des 5 revendications précédentes, caractérisée en ce qu'elle comprend un ou plusieurs autres agents actifs sur les phénomènes de l'inflammation, comme ceux choisis dans le groupe comprenant : allantoïne, bisabolol, les flavonoïdes, les huiles essentielles, les oligo-éléments (et dérivés), la 10 rutine, ... 7) Utilisation d'une huile essentielle de Myrrhe en tant qu'agent pour améliorer la fermeté de la peau et/ou présenter un effet drainant dans une composition cosmétique. 15 8) Utilisation selon la revendication 7, caractérisée en ce que ladite huile est aussi un agent utile comme amincissant et/ou pour lutter contre les jambes lourdes et une circulation difficile, et/ou pour agir 20 favorablement sur le drainage et l'élimination des toxines. 9) Utilisation selon l'une des revendications 7 ou 8, caractérisée en ce que ladite l'huile essentielle de Myrrhe est présente en quantité cosmétiquement efficace pour 25 augmenter les propriétés contractiles des fibroblastes et leur maturation en myofibroblastes et/ou stimuler 1'angiogenèse. 10) Utilisation selon l'une quelconque des 30 revendications 7 à 8, caractérisée en ce que ladite composition comprend de 0,0001% à 5 % et de préférence de 0.01% à 1 % d'huile essentielle de Myrrhe exprimée en poids par rapport au poids total de la composition. 2906718 18 11) Utilisation selon l'une quelconque des revendications 5 à 7, caractérisée en ce que ladite composition comprend un ou plusieurs autres agents actifs sur les pré-adipocytes comme ceux choisis dans le groupe 5 comprenant : les bases xanthiques, les peptides, les oligo-éléments, les sels minéraux, les huiles essentielles, les enzymes et les protéines. 12) Procédé de soin cosmétique plus 10 particulièrement pour raffermir et/ou drainer la peau caractérisé en ce qu'il consiste à appliquer sur la peau de tout ou partie du corps une composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 7. 15