FR 2913602 A1 20080919 FR 0705134 A 20070716 La présente invention a pour objet de nouvelles compositions cosmétiques, dermatologiques ou pharmaceutiques présentant un effet apaisant et restructurant du derme pour lutter contre les agressions liées, et plus particulièrement contre les cicatrices, à une intervention de chirurgie esthétique ou à un traitement de la peau par des appareillages tels que des lasers. Pour lutter efficacement contre les conséquences de ces interventions, les actifs associés présentent une synergie remarquable alliant un effet apaisant immédiat avec une action 10 restructurante accélérée. Les femmes ont tendance actuellement à vouloir paraître plus jeune le plus longtemps possible et cherchent à estomper les marques du vieillissement de la peau qui se traduit par un relâchement du tissu cutané et par l'apparition de ridules et de rides. On traite en général les effets du vieillissement à l'aide de produits cosmétiques contenant des actifs agissant sur la peau. Depuis quelques années, un véritable engouement s'est manifesté pour des actes 20 interventionnistes à visée esthétique réalisés par des professionnels, tels que la chirurgie réparatrice de la face, du cou, du corps, du cuir chevelu et l'utilisation de différents appareillages tels que les lasers, les lampes flash qui permettent de traiter de nombreuses lésions de la peau (taches vasculaires, taches pigmentaires) ou de lutter contre le vieillissement et les rides. 25 Les femmes qui s'adressent à ces techniques ont ressenti les premiers effets du vieillissement tels que fragilité et diminution de la souplesse de la peau, apparition des ridules et des rides. 30 Ces phénomènes sont dus essentiellement à de profondes modifications caractérisées par des altérations de la Matrice Extracellulaire (MEC). L'épiderme et le derme séparés par la membrane basale, constituent le revêtement cutané 35 qui repose sur l'hypoderme. L'épiderme constitue la couche la plus superficielle de la peau et en assure sa résistance et son imperméabilité. Le derme, la couche interne de la peau, tissu conjonctif est composé de cellules 40 (essentiellement fibroblastes) dispersées dans un milieu complexe appelé Matrice Extracellulaire (MEC). Cette matrice se compose de fibres de collagène et d'élastine, de glycoprotéines (fibronectine et laminine) de protéoglycanes. La matrice extracellulaire constitue une charpente pour les cellules qui permet la cohésion des tissus et des organes dans les organismes pluricellulaires. Le derme est le siège de profondes modifications au cours du vieillissement cutané, les 50 changements les plus significatifs de la Matrice Extracellulaire (MEC) surviennent dans le derme. 15 45 La fragmentation des fibres de collagène, les altérations du matériel élastique représentent certaines caractéristiques du derme vieillissant. Le principal composant de la MEC est le collagène, composant protéique majoritaire du 5 derme constitué de 2 sous-unités : le collagène I (80% chez l'adulte) et le collagène III. Ensemble ils constituent le système fibrillaire qui assure la résistance de la peau. La fibronectine et la laminine sont des glycoprotéines de structure localisées au niveau de la jonction épidermique ; la fibronectine en tant que constituant essentiel de la Matrice 10 provisoire lors de la réparation cutanée est particulièrement importante dans le processus de cicatrisation. Les altérations des qualités mécaniques de la peau âgée sont la conséquence de l'atrophie du réseau structural de la MEC du derme et la prévention du vieillissement cutanée passe par 15 le maintien de l'intégrité de cette matrice. Les conséquences de ces actes interventionnistes (chirurgie réparatrice, traitement lasers, ...) sont l'apparition de phénomènes inflammatoires et la formation de lésions cicatricielles. 20 La demanderesse a constaté que l'on pouvait d'une part remédier aux effets délétères de l'inflammation et de la cicatrisation, et d'autre part favoriser la réparation et la restructuration de la MEC en associant : • Une famille de peptides biomimétiques d'un facteur de croissance dont l'un des 25 composés est commercialisé sous la marque Kollaren et est fabriqué par l'Institut Européen de Biologie Cellulaire • Avec des huiles présentant une teneur en acide alpha-linolénique supérieure à 15% et un rapport acide Oméga-6 sur acide Omega-3 inférieur ou égal à 5. (I) Les peptides actifs répondent à la formule générale : A-X-GIy-His-Lys-Y (II) 35 - dans laquelle A peut représenter un hydrogène ou un radical correspondant à un acide monocarboxylique de formule générale R-COOH dans laquelle R représente un radical aliphatique en CI-Cil - dans laquelle X peut représenter une liaison ou la lysine, l'arginine, l'ornithine, 40 - Y représente un groupe -OH ou NH2. Dans le cadre de la présente invention, on entend par : • Gly, la glycine, • Lys, la lysine, 45 • His, l'histidine. Parmi les composés peptidiques, on peut citer les peptides suivants : • H-Gly-His-Lys-OH • H-Gly-His-Lys-NH2 50 • Ac-Lys-Gly-His-Lys-OH • Ac-Lys-Gly-His-Lys-NH2 30 Ces peptides ont été décrits dans les Brevets FR 2 741 075 et FR 2 857 597 déposés par l'Institut Européen de Biologie Cellulaire. Cette famille de peptides présente le pouvoir de mimer le signal naturel du renouvellement 5 de la peau et la capacité de réactiver la synthèse des protéines de la matrice extracellulaire, tels que les collagènes, la fibronectine, les laminines, l'élastine. Parmi les huiles répondant à la définition précédente (I), on peut citer l'huile de lin, l'huile de chanvre, l'huile de cameline, l'huile de noix, l'huile de colza normal. Il est connu que les lipides sont des constituants essentiels de notre organisme. Ils jouent un rôle important au niveau cutané, d'un point de vue structurel fonction barrière cutanée , d'un point de vue mécanique souplesse membranaire et d'un point de 15 vue biologique implication dans les phénomènes inflammatoires . Certains de ces lipides ne sont pas synthétisés par notre organisme, bien qu'indispensables, tels les acides gras essentiels. Leur absorption déclenche, à l'aide de plusieurs enzymes, une cascade de réactions chimiques. Dans la famille des AGPI omega-3, seul l'acide alpha-linolénique (ALA) est dit essentiel car l'organisme ne peut le fabriquer. Il est le précurseur de : L'acide eicosapentanoïque (EPA) qui lui-même peut se transformer en eicosanoïdes de série-3 qui ont des effets anti-inflammatoires. Cet acide EPA joue un rôle régulateur des processus inflammatoires. 30 • L'acide docosahexanoïque (DHA) qui est capable de stimuler l'expression de la glutathion peroxydase, d'où une protection anti-oxydante. De nombreuses études ont montré qu'une supplémentation en acides omega-3 DHA et EPA avait un effet sur la peau. Ces effets très prometteurs sur la peau, obtenus après supplémentation alimentaire, ont conduit la cosmétique à s'intéresser à l'utilisation par voie topique des acides EPA et DHA. Leurs utilisations s'est avérée limitées par leurs caractéristiques organoleptiques liées à 40 leur origine. La source principale de ces AGPI est les huiles de poissons riches en EPAJDHA. Or ces huiles présentent de nombreux motifs de contestation qui ne permettent pas leur 45 utilisation par voie topique : Qualité de la Matière Première, Reproductibilité de cette Matière Première, Stabilité des caractéristiques techniques, particulièrement l'odeur, 50 Méthodes d'extraction (désodorisation). 10 20 25 35 La demanderesse vient de découvrir que l'acide alpha-linolénique peut-être biotransformé par les cellules de la peau que sont les kératinocytes pour produire les deux AGPI oméga-3 que sont les EPAIDHA. Ce phénomène de métabolisation de l'acide alpha-linolénique en EPA et DHA connu par voie générale n'avait jamais été démontré par voie topique. Cette biotransformation permettant de générer EPAIDHA par les cellules de la peau joue un rôle important dans les processus inflammatoires. Elle permet de résoudre les problèmes liés à l'utilisation directe des acides EPAIDHA constituant des huiles de poissons. Pour que cet effet soit efficace, il est nécessaire d'utiliser des huiles telles que celles 15 définies précédemment et contenant de grandes quantités d'acide alpha-linolénique. Or la demanderesse a constaté que l'on parvenait à atteindre l'efficacité la plus performante en associant le tripeptide-1, (dénomination INCI), commercialisé sous la marque Kollaren fabriqué par l'Institut Européen de Biologie Cellulaire et l'Huile de 20 Cameline commercialisée par la société PHYTOCOS. L'association de ces 2 actifs permet de traiter efficacement tous types de peaux agressés mécaniquement, notamment la zone la plus atteinte comme les cicatrises. 25 L'huile de cameline, huile la plus riche en acide alpha-linolénique (40%) est très vite absorbée par la peau et agit à très court terme. Elle assure rapidement sont action sur le processus inflammatoire, suite à la bioconversion de l'acide alpha-linolénique en EPA/DHA. De plus, elle a une action sur la barrière cutanée dont elle favorise la reconstitution. 30 Le tripeptide-1 (INCI), qui mime le signal naturel du renouvellement de la peau, est un actif de choix pour la réparation et la reconstruction de la MEC, en agissant sur des différentes composantes de sa structure. 35 Son action promotrice de la synthèse du collagène I et II, de fibronectine, de laminine et de 1'élastine a été démontrée in vitro. Son action contribue à la restauration des propriétés biomécaniques de la peau, telles que la fermeté, l'élasticité et favorise la cicatrisation. 40 L'association de ces deux actifs permet d'obtenir une véritable action prolongée d'apaisement et de réparation. Il est également possible d'obtenir une action régénératrice complémentaire en combinant 45 à l'association Kollaren-huile de cameline, un autre peptide dénommé Thymulen fabriqué par l'Institut Européen de Biologie Cellulaire capable de combattre les déficiences des mécanismes de défense de la peau. L'acétyl tetrapeptide-2 possède un pouvoir de régénération cellulaire important 50 accompagné d'une capacité à stimuler les défenses immunitaires naturelles cutanées.10 La présente invention a également pour objet une composition cosmétique, dermatologique ou pharmaceutique comprenant l'association du peptide-tripeptide-1-(Kollaren) et de l'huile de cameline. Dans la composition cosmétique topique, le tripeptide-1 peut être présent à une concentration comprise entre 10-8M et 10-2M, de préférence entre 10-4Met 10-6M. L'huile de cameline peut être présente à une concentration comprise entre 1% et 20%, de préférence entre 5% et 10%. La présente invention concerne également des compositions cosmétiques pour l'apaisement et la régénération du derme comprenant le tripeptide-1 et l'huile de cameline. Il a pu être mis en évidence que les associations décrites assuraient une atténuation rapide 15 des inflammations liées à l'agression, qu'elle facilitait la maîtrise des réparations tissulaires et qu'elle augmentait la vitesse de réparation du derme. Si la composition de l'invention est essentiellement destinée à favoriser la cicatrisation et à traiter les peaux agressées par des traitements cosmétiques ou thérapeutiques de la peau tels 20 que des interventions chirurgicales de la peau, des traitements de la peau par laser, de la dermabrasion ou de peelings, elles est également destinée au traitement curatif et préventif du vieillissement cutané. La composition cosmétique, dermatologique ou pharmaceutique pourra se présenter sous 25 les formes qui sont habituellement connues pour ce type d'administration, c'est-à-dire notamment les lotions, les mousses, les gels, les dispersions, les sprays, les sérums, les masques, les laits corporels, les pommades, les solutions, les émulsions, les gels, ou les crèmes par exemple, avec des excipients permettant notamment une pénétration cutanée afin d'améliorer les propriétés et l'accessibilité du principe actif Ces compositions contiennent 30 généralement outre le conjugué tétrapeptidique selon la présente invention, un milieu physiologiquement acceptable, en général à base d'eau ou de solvant, par exemple des alcools, des éthers ou des glycols. Elles peuvent également contenir des agents tensioactifs, des conservateurs, des agents stabilisants, des émulsifiants, des épaississants, d'autres principes actifs conduisant à un effet complémentaire ou éventuellement synergique, des 35 oligo-éléments, des huiles essentielles, des parfums, des colorants, du collagène, des filtres chimiques ou minéraux, des agents hydratants, des eaux végétales, ou des eaux thermales. La présente invention est illustrée dans les exemples suivants qui ne sont pas limitatifs. Exemple 1 Etude du tripeptide-1 sur la production de protéines de la MEC par les fibroblastes par immunofluorescence. ^ Matériel : fibroblastes de lignée humaine. ^ Protocole : les fibroblastes sont mis en culture en présence ou en absence du tripeptide-1 à 10"7M. ^ Etude microscopique par microscopie confocale. 40 45 - Résultats : AUGMENTATION % - Collagène de type I + 305% - Collagène de type II + 105% - Fibronectine + 155% - Laminine + 85% - Elastine + 15% Exemple 2 Etude de la biotransformation de l'acide alpha-linolénique par les kératinocytes de la peau. ^ Matériel : kératinocytes de lignée NCTC. ^ Protocole : - les kératinocytes sont mis en contact avec l'huile de cameline pendant 30 mn, à la température de 37 C. - Après incubation, l'huile est éliminée, les cellules sont rincées et 15 remises au contact du milieu de culture. - Des dosages ont lieu 3H55H224H (J1), 48H (J2), 72H (J3) sur le milieu de culture (surnageant) et à l'intérieur des cellules après lyse. 20 ^ Dosage HPLC de l'acide alpha-linolénique et des acides EPA et DHA. > Résultats : a) Dans le surnageant, aucune trace d'acide alpha-linolénique n'est retrouvée des 3H. 25 Apparition des acides EPA et DHA après 3H d'incubation. b) Le dosage HPLC révèle dans les cellules de kératinocytes des quantités importantes d'acide alpha-linolénique dès 3H d'incubation et l'apparition de l'acide EPA à J2. 30 Exemple 3 Etude de la biotransformation de l'acide alpha-linolénique par des fibroblastes. 35 ^ Matériel : Fibroblastes de lignée MRC5. ^ Protocole : Identique à celui décrit pour l'exemple 2. ^ Dosage HPLC de l'acide alpha-linolénique et des acides EPA et DHA. 6 10 > Résultats : Dans le surnageant, l'acide alpha-linolénique est détecté en plus faible quantité que la 5 quantité de départ. Apparition des acides EPA et DHA après 3H d'incubation, dans le milieu surnageant. 10 Exemple 4 Evaluation de l'effet cicatrisant d'une formulation contenant le complexe tripeptide-1 et huile de Cameline dans un modèle de peau maintenu en survie. Pour permettre d'évaluer l'effet cicatrisant, un modèle d'altération des capacités réparatrices de la peau a été réalisé par application d'un dei~~iocorticoïde à la surface de 15 l'épiderme afin de quantifier la stimulation du renouvellement cellulaire. La stimulation du renouvellement cellulaire a été étudiée par quantification du potentiel mitotique des cellules basales. 20 ^ Matériel : Fragments de peau de plusieurs donneurs différents. ^ Protocole : Les fragments de peau sont mis en survie pendant 4 jours avec application d'un dermocorticoïde de classe II à JO et JI. La formulation a été appliquée tous les jours de Jl à J4. ^ Résultat : Analyse immunohistochimique de la prolifération cellulaire. 0/0 Peau Témoin 12 6,2 Peau + dermocorticoïde (peau contrôle) 7,5 2,5 NS : p = 0,075 Peau + dermocorticoïde + Formule contenant 11,7 3,2 le complexe ~ p = 0,02 # : différence statistiquement significative par rapport au modèle d'altération par 30 dermocorticoïde (test apparié du Student, p L'effet cicatrisant a été mis en évidence par obtention d'une restauration statistiquement significative de l'index mitotique de l'épithélium après altération expérimentale de la peau. Exemple 5 Evaluation de l'effet hydratant et restructurant d'une formulation contenant le complexe tripeptide-1 et huile de Cameline dans un modèle de peau maintenu en survie. 40 L'effet hydratant et restructurant a été analysé après réalisation d'un modèle d'altération de la barrière cutanée par le lauryl sulfate de sodium (LSS) responsable d'une perte insensible en eau accompagnée d'altération de l'expression de l'involucrine. L'évaluation de l'expression de l'involucrine permettra de quantifier la protection apportée 45 par la formulation au niveau de la couche cornée et la stimulation de son métabolisme au niveau des kératinocytes de la peau. 7 25 35 ^ Matériel : Fragments de peau de plusieurs donneurs différents. ^ Protocole : Les fragments de peau sont mis en survie pendant 4 jours avec 2 applications topiques de LSS à 1% à JO et J1. La formulation a été appliquée tous les jours de Jl à J4. ^ Evaluation immunohistochimique de l'expression de l'involucrine. Score Intensité Score Topographie Peau témoin 2,4 + 0,8 2 + 0,8 Peau + LSS (peau contrôle) 1,4 + 1,2 1,7 + 1,5 * p = 0,04 Peau + LSS + formule 3 0,9 25 1 contenant le complexe ~ p = 0,003 * : différence statistiquement significative par rapport à la peau témoin (test apparié du Student, p = L'effet hydratant et restructurant a été visualisé et quantifié après réalisation du modèle d'altération de la barrière cutanée par le LSS, par la mise en évidence d'une augmentation de l'involucrine au niveau de l'épiderme. L'augmentation de cette expression témoigne de la protection apportée par le complexe, mais également de la stimulation du métabolisme des cellules de la partie supérieure de l'épithélium. Exemple 6 Evaluation de l'effet apaisant d'une formulation contenant le complexe tripeptide-1 et huile de Cameline dans un modèle de peau maintenue en survie. L'effet apaisant a été analysé après réalisation sur la peau d'un modèle de brûlure 30 expérimentale (application d'un gel agarose à 80 C). L'activité apaisante a été étudiée en analysant la limitation à la fois de la destruction de l'épiderme (correspondant à l'extension de la brûlure) et de la dilatation vasculaire. 10 20 25 ^ Matériel: Fragments de peau de plusieurs donneurs différents. ^ Protocole : Les fragments de peau sont mis en survie pendant 4 jours. Le modèle expérimental d'altération est obtenu par brûlure après application d'un gel d'agarose à 85 C à J0. La formulation a été appliquée tous les jours jusqu'à J4. ^ Résultats : 1) Analyse histologique des altérations cellulaires au niveau de l'épiderme (% de cellules altérées) % Peau + brûlure (peau contrôle) 24,1 25,1 Peau + brûlure + formule contenant le 15,8 11,6 complexe 2) Analyse histologique de la dilatation des vaisseaux (surface de vaisseaux dilatés en m2) m2 Peau Témoin 171,6 38,9 Peau + brûlure (peau contrôle) 270,8 56,9 * p = 0,00005 Peau + brûlure + formule comprenant le 197,8 78,1 complexe # p = 0,003 * : différence statistiquement significative par rapport à la peau témoin (test apparié de 20 Student, p 4) Analyse histologique de l'oedème (score) Score Peau Témoin 1,73 0,34 Peau + brûlure (peau contrôle) 2,26 0,64 * p = 0,036 Peau + brûlure + Crème Gel Universkin 1,88 + 0,78 * : différence statistiquement significative par rapport à la peau témoin (test apparié de 15 Student, p La limitation de la destruction de l'épiderme (correspondant à l'extension de la brûlure) a été observée de façon plus modérée et non significative. 10 5 Exemple 7 : Emulsion traitante PHASE HUILEUSE % EN POIDS - Montanov 68 5% - Huile de cameline 5% - Huile de vaseline 3% - Isopropyl palmitate 7% PHASE AQUEUSE - Glycérine 5% - Sepigel 305 0,3% - Conservateur 0,5% -Tripeptide-1 10 ppm - Eau qsp 100% Exemple 8 CREME GEL % A - Dow Corning 9040 6% - Huile de cameline 2% - Regû -Seb 3% Sepigel 305 3% B - Eau 82% -Glycérine 4% - Tripeptide-1 5 ppm 11 REVENDICATIONS 1) Composition cosmétique, dermatologique ou pharmaceutique destinée au soin de peaux agressées par des traitements esthétiques, cosmétiques ou thérapeutique tels que interventions chirurgicales, traitements laser, dermabrasions, peelings, comprenant dans un milieu physiologiquement acceptable au moins : a) Un peptide répondant à la formule générale A-X-GIy-His-Lys-Y (II) - dans laquelle A peut représenter un hydrogène ou un radical correspondant à un acide monocarboxylique de formule générale R-COOH dans laquelle R représente un radical aliphatique en CI-C11 - dans laquelle X peut représenter une liaison ou la lysine, l'arginine, l'ornithine, - Y représente un groupe ùOH ou NH2. associé avec b) Une huile présentant une teneur en acide a-linolénique supérieure à 15% et un rapport acide oméga-6 sur acide oméga-3 inférieur ou égal à 5 (I) 2) Composition cosmétique, dermatologique ou pharmaceutique destinée au soin de la peau agressée par des traitements cosmétiques, dermatologiques ou thérapeutiques tels que interventions chirurgicales, traitements laser, dermabrasions, peelings, comprenant dans un milieu physiologiquement acceptable au moins. 1) Le peptide de formule H-Gly-His-Lys-OH associé avec 2) L'huile de cameline. 3) Compositions selon les revendications 1) et 2) caractérisées en ce qu'elles contiennent 30 de 10"8M à 10-2M en poids de peptide de la formule générale (II) et de 1% à 20% d'une huile comme défini dans la revendication 1). 4) Compositions selon les revendications 1) et 2) caractérisées en ce qu'elles contiennent de 10-4M à 10-6M en poids de peptide de formule H-Gly-His-Lys-OH et de 5% à 10% d'huile 35 de cameline. 5) Utilisation d'un peptide répondant à la formule générale (II) associé à une huile répondant à la définition générale (I) pour la préparation d'une composition cosmétique, dermatologique ou pharmaceutique destinée à la réparation tissulaire cutanée. 6) Utilisation du peptide de formule H-Gly-His-Lys-OH associé à l'huile de cameline pour la préparation d'une composition cosmétique, dermatologique ou pharmaceutique destinée à la réparation tissulaire cutanée. 45 7) Utilisation du peptide de formule H-Gly-His-Lys-OH associé à l'huile de cameline pour la préparation d'une composition cosmétique, dermatologique ou pharmaceutique destinée à apaiser la peau fragilisée par des traitements chirurgicaux, des traitements par laser, des peelings. 50 8) Utilisation du peptide de formule H-Gly-His-Lys-OH associé à l'huile de cameline pour la préparation d'une composition cosmétique, dermatologique ou pharmaceutique destinée à favoriser la cicatrisation de peau fragilisée par des traitements chirurgicaux, des traitements par laser, des peelings. 40 9) Utilisation du peptide de formule H-Gly-His-Lys-OH associé à l'huile de cameline pour la préparation d'une composition cosmétique, dermatologique ou pharmaceutique destinée à favoriser la restructuration et la régénération de la peau fragilisée par des traitements chirurgicaux, des traitements par laser, des peelings. 10) Procédé de traitement cosmétique en ce qu'on applique sur la peau une composition cosmétique comprenant au moins un peptide associé à une huile selon l'une quelconque des revendications 1 à 4.