FR 2912406 A1 20080815 FR 0753211 A 20070213 1 SELS CRISTALLINS ANHYDRES DE VINFLUNINE, PROCEDE DE PREPARATION ET UTILISATION EN TANT QUE MEDICAMENT ET MOYEN DE PURIFICATION DE LA VINFLUNINE La présente invention concerne de nouvelles formes salifiées et cristallines de la vinflunine, leurs procédés d'obtention, ainsi que leurs utilisations dans le domaine thérapeutique. La vinflunine est un dérivé indolique de la famille de la vinblastine et de la Vincristine. HO Vinblastine R=CH3 10 Vincristine R=CHO Ces composés font partie des alcaloïdes antimitotiques, extraits de Catharanthus roseus, et sont utilisés depuis de nombreuses années en chimiothérapie anticancéreuse. Les difficultés d'obtention de ces dérivés 15 par extraction à partir des plantes ont conduit plusieurs groupes de recherche à identifier de nouvelles substances voisines ayant les mêmes propriétés et à mettre au point leur procédé d'obtention par hémisynthèse. Ainsi la vindesine et la vinorelbine (Navelbine) ont pu être obtenues et commercialisées pour le traitement de cancers. La structure chimique des 20 ces composés présente comme caractère principal l'association de deux monomères alcaloïdes, la catharanthine et la vindoline. HO Vindesine Vinorelbine Dans le cadre de la mise au point de nouvelles voies synthétiques pour obtenir la vinorelbine, la réactivité de ce composé en milieu super acide a conduit à identifier une nouvelle molécule, la 20',20'-difluoro-3',4'-dihydrovinorelbine, ou vinflunine (WO95/03312). L'intérêt thérapeutique de ce composé a également pu être vérifié au cours des mêmes travaux. La conformation exacte de la vinflunine a été étudiée par différentes méthodes de spectroscopie RMN 1H et RMN 13C (Magn. Reson. Chem., 2001, 39, p. 43-48). Cette étude a été menée sur le ditartrate de vinflunine en solution. Toutefois, ce sel possède des propriétés hygroscopiques qui en limite la stabilité à l'état solide, et constituent un handicap lors de la fabrication industrielle. A ce jour, il est isolé sous forme de solide poudreux amorphe et doit être conservé à une température négative, inférieure à - 15 C, et sous une atmosphère de gaz inerte, par exemple sous azote, ou argon. Aujourd'hui , aucune forme cristalline anhydre du ditartrate n'a pu être obtenue, bien qu'une forme cristalline hydratée du ditartrate ait été mise en évidence par cristallisation dans des solvants hydro-alcooliques (demande de brevet FR 0512942). La manipulation et la conservation de ce composé est donc délicate, et toute forme permettant d'améliorer la stabilité physique à l'état solide permettrait de simplifier les processus de fabrication, conservation, et conditionnement. Classiquement, la cristallisation d'un composé amorphe peut présenter de très grosses difficultés et l'obtention des premiers cristaux est toujours problématique. Toutefois, ce type de forme solide permet de palier bon nombre d'inconvénients de la forme amorphe. En effet, elle retient moins d'eau et sa stabilité, améliorée dans le temps, facilite sa manipulation lors des processus industriels de fabrication grâce notamment à une tendance à moins s'agglomérer en motte, et à une meilleure coulabilité. Elle permet également d'envisager des formes galéniques plus variées, et d'en faciliter la fabrication et la manipulation. Classiquement, la filtrabilité d'une suspension cristalline est fortement augmentée par rapport à une suspension d'un solide amorphe. La Demanderesse a mis en évidence qu'il était possible d'obtenir des formes cristallines en utilisant d'autres sels, pouvant donner des structures cristallisées anhydres dans un système de solvant approprié. Les acides testés, choisis parmi des acides minéraux ou organiques pharmaceutiquement acceptables, ont donné des sels cristallins dont le rapport molaire acide utilisé - vinflunine est de 1 pour 1 ou 2 pour 1 selon les acides utilisés. La plupart des acides peuvent donner des sels qui précipitent indifféremment avec 1 ou 2 équivalent(s) molaire(s) selon la quantité d'acide mise en oeuvre. La présente invention a trait à des sels sous formes cristallisées essentiellement dépourvues de toute molécule d'eau de constitution, de cristallisation et/ou de solvatation. Ces sels seront désignés dans l'ensemble de la présente demande de brevet sous la dénomination, sels cristallins anhydres de vinflunine. L'acide fumarique donne un sel qui précipite avantageusement avec un rapport molaire acide fumarique - vinflunine de 1 pour 1, 25 indifféremment de la quantité d'acide mise en oeuvre. L'obtention d'un sel cristallin permet également d'ouvrir la voie à des techniques de purification par cristallisation, ce qui représente un avantage non négligeable, compte tenu des difficultés rencontrées lors de la fabrication d'une vinflunine de très haute qualité. 30 Les sels cristallins anhydres de vinflunine, obtenus selon le procédé, peuvent se classer en deux groupes : - les sels d'acides minéraux ou d'acides organiques de type aliphatiques, constituant un groupe ayant une solubilité dans l'eau avantageuse pour un usage pharmaceutique - les sels d'acides organiques aromatiques qui eux présentent une faible solubilité aqueuse mais dont la cristallinité présente un avantage dans la mise au point d'une technique de purification par cristallisation de la vinflunine . En effet, on peut envisager une recristallisation de l'un de ces sels, plus ou moins solubles, pour améliorer la pureté d'une vinflunine brute. Ce sel peut ensuite être traité au moyen d'une base telle que, par exemple, le bicarbonate de sodium, une amine tertiaire, ou préférentiellement de l'ammoniaque, pour donner une vinflunine base de meilleure qualité, laquelle est ensuite salifiée à nouveau avec l'un des acides pharmaceutiquement acceptables pour donner un sel hydrosoluble utilisable en tant que médicament. Ce type de purification par cristallisation peut intervenir à différents niveaux dans le procédé de fabrication ; soit en purification finale pour l'obtention de lots de haute qualité, soit en pré-purification d'un lot, avant la mise en oeuvre d'une autre technique d'affinage telle que, par exemple, la chromatographie préparative. La Demanderesse a mis en évidence que ces sels cristallisés anhydres ont une meilleure stabilité dans le temps, comme le prouve l'étude comparative ditartrate de vinflunine amorphe versus fumarate de vinflunine cristallin, reportée dans le texte. Ainsi, la présente invention a pour objet les sels cristallins anhydres de vinflunine, obtenus avec des acides minéraux ou organiques pharmaceutiquement acceptables tels que, par exemple et de manière non exhaustive, les sels d'acides bromhydrique, sulfurique, lactique, fumarique, pour le groupe des sels cristallins hydrosolubles et les acides para-toluène sulfonique, benzoïque, mandélique, para-hydroxy benzoïque pour le groupe des sels cristallins peu solubles. L'ensemble de ces sels peut se représenter de manière générale par la formule (I) : Acide 1 ou 2 où [Acide] représente les acides bromhydrique, sulfurique, lactique, fumarique, pour le groupe des sels cristallins hydrosolubles et les acides para-toluène sulfonique, benzoïque, mandélique, para-hydroxy benzoïque pour le groupe des sels cristallins peu solubles. 10 D'une manière avantageuse, on retiendra plus particulièrement le fumarate. Ce sel s'obtient assez facilement, il cristallise de manière abondante et présente la particularité de toujours posséder une stoechiométrie de 1 équivalent molaire d'acide fumarique pour 1 équivalent molaire de vinflunine, ce qui représente des avantages non 15 négligeables en terme de reproductibilité, de fabrication et de rapport masse du produit actif sur masse du sel. Ce dernier avantage a son importance pour la préparation de formes orales telles que par exemple comprimés, gélules ou capsules dont la composition nécessite des quantités importantes de principe actif tout en 20 évitant de trop fortes augmentations de volume, rendant incommode l'utilisation de cette voie. Dans cette optique, les sels cristallins, qui sont une forme plus condensée de la matière que les sels amorphes, présentent également un avantage. L'état cristallin anhydre de la vinflunine salifiée selon l'invention, est 25 mis en évidence au moyen de techniques connues de l'homme du métier, telles que par exemple la diffraction des rayons X de poudre, la Formule (I) 5 spectrométrie infrarouge, et peut être vérifiée par simple microscopie. A titre comparatif, le diffractogramme de poudre du ditartrate de vinflunine amorphe (ne présentant pas de raies caractéristiques) est présenté figure 1. L'invention concerne donc également les procédés de préparation des sels de vinflunine cristallisés caractérisés en ce qu'ils comprennent les étapes suivantes : dissolution de la vinflunine base dans un solvant approprié ; • ajout d'un acide dans une proportion de 1 ou 2 équivalent(s) molaire(s), en solution ou non dans un solvant approprié ; évaporation du mélange solvant ; agitation dans un liquide ou mélange de liquides, non solvant ou faiblement solvant, à température ambiante ou réfrigéré, durant un temps nécessaire à la précipitation ; filtration et récupération des cristaux ou solides amorphes formés ; • maturation par longue agitation des solides amorphes dans un liquide ou mélange de liquides, non solvant ou faiblement solvant, à température ambiante ou réfrigéré durant un temps nécessaire à la cristallisation. filtration et récupération des cristaux formés, rinçage, au moyen d'un liquide ou mélange de liquides, non solvant ou faiblement solvant et séchage sous vide des cristaux. De préférence, les solvants utilisés pour dissoudre la vinflunine base sont l'acétone, l'acétate d'éthyle, le toluène. On peut également utiliser, le dichlorométhane, des alcools tels que, par exemple, l'éthanol, le méthanol ou les propanols 1 et 2. De préférence, les solvants utilisés pour dissoudre les acides sont l'eau, l'acétone, l'acétate d'éthyle, le toluène. On peut également utiliser le dichlorométhane, des alcools tels que, par exemple, l'éthanol, le méthanol ou les propanols 1 et 2.30 De préférence, les liquides non solvants ou faiblement solvants utilisés pour précipiter les sels sont l'éther éthylique, l'éther isopropylique, l'acétate d'éthyle, l'acétone et le toluène. On peut également utiliser le tertiobutylméthyl-éther, l'hexane, l'heptane ou l'éther de pétrole. De préférence, les liquides non solvants ou faiblement solvants utilisés pour les maturations des sels amorphes sont, par exemple et de manière non limitative, l'éther éthylique et l'éther isopropylique, l'acétate d'éthyle, l'acétone et le toluène. On peut également utiliser le tertiobutyl-méthyléther, l'hexane, l'heptane ou l'éther de pétrole. De préférence, les liquides non solvants ou faiblement solvants utilisés pour le rinçage des cristaux sont l'éther éthylique et l'éther isopropylique. On peut également utiliser le tertiobutyl-méthyl éther, l'hexane, l'heptane ou l'éther de pétrole. Comme indiqué ci-dessus, la température de précipitation ou de maturation peut être contrôlée afin d'optimiser les temps nécessaires et la qualité de la cristallisation. Ainsi on choisira avantageusement une température inférieure à 50 C, et plus particulièrement une température comprise entre 4 C et 25 C. La quantité de solvant devra être ajustée par l'homme du métier et 20 sera de préférence comprise entre 1 et 20 parties en volume (ml) rapporté à la masse (g) de vinflunine. Du fait de l'intérêt thérapeutique déjà démontré de la vinflunine et de ses dérivés, en particulier des sels, la présente invention a également pour objet un médicament comprenant l'un des sels cristallins de vinflunine 25 selon l'invention. Dans un aspect particulier, l'invention concerne l'utilisation d'un sel cristallisé de vinflunine pour la préparation d'un médicament destiné à être utilisé pour le traitement de la pathologie cancéreuse. On peut citer notamment, et de façon non limitative, les cancers du sein, de la vessie, du poumon non à petites cellules et de la prostate. 30 L'invention a aussi pour objet une composition pharmaceutique caractérisée en ce qu'elle contient une quantité efficace d'un sel cristallisé de vinflunine selon l'invention, dans un milieu physiologiquement acceptable. Parmi les compositions pharmaceutiques, on pourra citer plus particulièrement celles qui conviennent à une administration orale, parentérale, intraveineuse ou sous-cutanée, et plus particulièrement convenant à une administration orale, sous forme de comprimés, capsules, ou gélules. La posologie varie selon le sexe, l'âge le poids du patient, et la voie d'administration. Les exemples suivants illustrent l'invention, sans en limiter la portée. Stabilité comparée du ditartrate amorphe et du fumarate cristallin : 1. Matière première Lot OP3.OB - ditartrate de vinflunine amorphe Lot JLM4008400 - fumarate de vinflunine cristallin 20 2. Conditions de stabilités Les études de stabilité sont réalisées sous forme de poudre à l'abri de la lumière dans les conditions suivantes : flacon fermé : 50 C flacon ouvert : 40 C, 75% Humidité Relative 25 Un point est réalisé à To puis à To + 14 jours 3. Conditions analytiques Système CLHP Colonne : Sunfire C18, 5 pm, 4.6 x 250 mm (Waters) thermostatée 30 à 35 C Eluant : CH3CN/MeOH/H2O/KH2PO4 400/150/450/6.8 (ml/ml/ml/g) ajusté à pH 7 (avec KOH) Débit : 1 ml/min Détection : 269 nm 35 4. Résultats15 Lot Temps Conditions Analyse Teneur en Nature du sel d'analyse de CLHP eau de vinflunine stabilité OP3.0B To - 99,28 % 6,27 % Ditartrate To + 14i 50 C 97,18 % - amorphe 40 C, 75 % HR 98,21 % 10,18 % To - 99,52 % 1,33 % JLM4008400 Fumarate To + 14 j 50 C 99,56 % - cristallisé 40 C, 75 % HR 99,38 % 4,18 % Le composé ditartrate de vinflunine amorphe se dégrade sous forme de poudre à hauteur de 2,1 % à 50 C (flacon fermé) et 1,07 % en présence d'humidité (40 C, 75% HR) alors que le fumarate de vinflunine cristallin, dans les mêmes conditions, reste stable (dégradation inférieure à 0,2%). Légendes des figures : FIGURE 1 : Diffractogramme de poudre amorphe. FIGURE 2 : Diffractogramme de poudre du FIGURE 3 : Diffractogramme de poudre du FIGURE 4 : Diffractogramme de poudre du FIGURE 5 : Diffractogramme de poudre du FIGURE 6 : Diffractogramme de poudre du FIGURE 7 : Diffractogramme de poudre du FIGURE 8 : Diffractogramme de poudre du FIGURE 9 : Diffractogramme de poudre du du ditartrate de vinflunine bromhydrate sulfate lactate fumarate para toluène sulfonate benzoate mandélate para hydroxy benzoate Cristallisation des sels de vinflunine Exemple 1 : le bromhydrate Une prise d'essai de 4,56g de vinflunine base est mise en solution dans un minimum d'acétone, ajouter ensuite 2 équivalents d'une solution aqueuse d'acide bromhydrique, soit 0,53m1 pour une solution à 62 %. Le sel précipite lentement, diluer avec un peu d'éther éthylique et laisser reposer une nuit. Filtrer et laver à l'éther. Sécher 20 heures sous vide à 70 , à l'abri de la lumière. On obtient 4, 43g de sel cristallin. 1H NMR (400 MHz, MeOH) 5 ppm 0.72 (t, J=7.33 Hz, 3 H) 1.37 -1.46 (m, 1 H) 1.47 - 1.55 (m, 1 H) 1.60 - 1.97 (m, 4 H) 1.72 (t, J=19.00 Hz, 3 H) 2.04 (s, 3 H) 2.12 - 2.22 (m, 1 H) 2.65 - 2.77 (m, 2 H) 2.75 (s, 3 H) 2.81 - 3.20 (m, 4 H) 3.33 - 3.44 (m, 2 H) 3.54 - 3.65 (m, 3 H) 3.64 (s, 1 H) 3.77 (s, 7 H) 3.87 (s, 3 H) 4.87 (s, 2 H) 4.93 (d, J=15.16 Hz, 1 H) 5.07 (d, J=15.16 Hz, 1 H) 5.31 (s, 1 H) 5.42 (d, J=10.1 1 Hz, 1 H) 5.87 (dd, J=10.11, 4.55 Hz, 1 H) 6.38 (s, 2 H) 7.13 - 7.22 (m, 2 H) 7.38 (d, J=7.07 Hz, 1 H) 7.72 (d, J=7.07 Hz, 1 H) 10.25 (br. s., 1 H) Exemple 2 : le sulfate Une prise d'essai de 4,29g de vinflunine base est mise en solution dans un mélange d'acétone et d'éthanol, puis ajouter 2 équivalents d'acide sulfurique 3M soit 3,5ml. Evaporer et reprendre le résidu dans l'acétone, ajouter de l'éther éthylique puis laisser reposer une nuit, filtrer et laver à l'éther. On obtient 4,77g de poudre amorphe. Cette poudre est agitée 24 heures dans l'acétone à température 25 ambiante, ajouter un peu d'éther isopropylique, filtrer et laver à l'éther isopropylique. Sécher 20h sous vide à 70 , à l'abri de la lumière. On obtient 4.53g de produit cristallin. 1H NMR (400 MHz, MeOH) â ppm 0.73 (t, J=7.33 Hz, 3 H) 1.44 - 1.56 (m, 2 H) 30 1.63 - 1.83 (m, 2 H) 1.71 (t, J=19.45 Hz, 3 H) 1.89 (d, J=13.00 Hz, 1 H) 1.99 - 2.09 (m, 1 H) 2.07 (s, 3 H) 2.26 - 2.36 (m, 1 H) 2.67 (dd, J=15.66, 6.06 Hz, 1 H) 2.79 (s, 3 H) 2.97 (dd, J=14.40, 2.78 Hz, 1 H) 3.12 (t, J=14.40 Hz, 1 H) 3.30 - 3.35 (m, 3 H) 3.34 (s, 1 H) 3.40 - 3.51 (m, 2 H) 3.71 - 3.82 (m, 1 H) 3. 72 (s, 1 H) 3.76 (s, 3 H) 3.81 (s, 3 H) 3.85 - 3.94 (m, 2 H) 3.88 (s, 3 H) 4.88 (s, 5 H) 4.94 (d, J=15.00 Hz, 1 H) 5.05 (d, J=15.00 Hz, 1 H) 5.31 (s, 1 H) 5.64 (d, J=10.11 Hz, 1 H) 5.92 (dd, J=10.11, 4.55 Hz, 1 H) 6.42 (s, 1 H) 6.59 (s, 1 H) 7.12 (dd, J=7.33 Hz, 1 H) 7.15 (dd, J=7.33 Hz, 1 H) 7.37 (d, J=7.58 Hz, 1 H) 7.73 (d, J=7.58 Hz, 1 H) 10.41 (s, 1 H) Exemple 3 : le lactate Une prise d'essai de 4,59g de vinflunine base est mise en solution dans un minimum d'acétone puis l'on ajoute 2 équivalents d'acide L(+)lactique (1,01g) en solution dans l'acétone. Evaporer l'acétone et triturer dans l'éther isopropylique puis laisser reposer une nuit, filtrer et laver à l'éther isopropylique. On obtient 4.63 g de poudre amorphe. Cette poudre est agitée 24 heures dans le toluène à température ambiante. Ajouter un peu d'éther isopropylique, filtrer et laver à l'éther isopropylique. Sécher 20 heures sous vide à 70 , à l'abri de la lumière. On obtient 3,81g de produit cristallin. 1H NMR (400 MHz, MeOH) â ppm 0.70 (t, J=7.33 Hz, 3 H) 1.33 (d, J=7.07 Hz, 3 H) 1.36 - 1.49 (m, 2H) 1.60 - 1.81 (m, 2H) 1.70 (t, J=19.00 Hz, 3H) 1.84 - 1.94 (m, 1 H) 1.99 - 2.12 (m, 1 H) 2.02 (s, 3 H) 2.27 - 2.40 (m, 1 H) 2.61 - 2.83 (m, 4 H) 2.72 (s, 3 H) 3.06 - 3.27 (m, 6 H) 3. 47 - 3.56 (m, 1 H) 3.59 (s, 1 H) 3.66 - 3.73 (m, 1 H) 3.76 (s, 6 H) 3.85 (s, 3 H) 4.09 (q, J=7.00 Hz, 1 H) 4.87 (s, 4 H) 4.92 - 5.03 (m, 2 H) 5.25 - 5.35 (m, 2 H) 5.84 (dd, J=10.1 1, 4.55 Hz, 1 H) 6.28 (s, 1 H) 6.35 (s, 1 H) 7.13 7.23 (m, 2 H) 7.36 (d, J=7.58 Hz, 1 H) 7.70 (d, J=7.58 Hz, 1 H) Exemple 4 : le fumarate Une prise d'essai de 4,58 g de vinflunine base est mise en solution dans un minimum d'acétone puis l'on joute 1 équivalent d'acide fumarique (0,65g) en solution dans du méthanol. Evaporer les solvants, triturer dans acétone, filtrer et laver à l'éther. Sécher 20heures sous vide à 70 , à l'abri de la lumière. On obtient 3,54 g de sel cristallin. 1H NMR (400 MHz, MeOH) â ppm 0.71 (t, J=7.33 Hz, 3 H) 1.31 - 1.41 (m, 1 H) 1.41 -1.50(m, 1 H) 1.60 - 1.84 (m, 3 H) 1.70 (t, J=19.20 Hz, 3 H) 1.89(d,J=14.00 Hz, 1 H) 1.99 - 2.12 (m, 1 H) 2.02 (s, 3 H) 2.37 - 2.47 (m, 1 H) 2.69 - 2.75 (m, 6 H) 2.80 (dd, J=13.89, 2.27 Hz, 1 H) 3.11 (t, J=14.40 Hz, 1 H) 3.17-3.39 (m,4H) 3.55 (d, J=14.65 Hz, 1 H) 3.59 (s, 1 H) 3.71 (d, J=13.14 Hz, 1 H) 3.76 (s, 6 H) 3.86 (s, 3 H) 4.87 (s, 5 H) 5.00 (d, J=13.00 Hz, 1 H) 5.27 - 5.35 (m, 2 H) 5.84 (dd, J=10.11, 4.04 Hz, 1 H) 6.32 (s, 1 H) 6.35 (s, 1 H) 6.66 (s, 2 H) 7.10 - 7.20 (m, 2 H) 7.35 (d, J=7.58 Hz, 1 H) 7.70 (d, J=7.58 Hz, 1 H) Exemple 5 : le para toluène sulfonate Une prise d'essai de 1,8 g de vinflunine base est mise en solution dans un minimum d'acétone puis l'on ajoute 2 équivalents d'acide para toluène sulfonique (0,76 g) en solution dans l'acétate d'éthyle. Ajouter de l'éther isopropylique puis laisser reposer une nuit, filtrer et laver à l'éther isopropylique. On obtient 2,5g de poudre amorphe. Cette poudre est agitée 24 heures dans le toluène à température ambiante, filtrer et laver à l'éther isopropylique. Sécher 20 heures sous vide à 70 , à l'abri de la lumière. On obtient 1;5 g de produit cristallin. 1H NMR (400 MHz, MeOH) ppm 0.67 (t, J=7.33 Hz, 3 H) 1.45 - 1.55 (m, 2 H) 1. 58 - 1.83 (m, 2 H) 1.71 (t, J=19.00 Hz, 3 H) 1.89 (d, J=14.00 Hz, 1 H) 2.02 (s, 1 H) 2.05 (s, 3 H) 2.19 - 2.30 (m, 1 H) 2.35 (s, 6 H) 2.67 (dd, J=15.66, 6.06 Hz, 1 H) 2.78 (s, 3 H) 2.92 (dd, J=14.15, 2.53 Hz, 1 H) 3. 03 - 3.44 (m, 5 H) 3.54 - 3.64 (m, 1 H) 3.59 (s, 1 H) 3.68 (s, 1 H) 3.72 -3.82 (m, 3 H) 3.76 (s, 3 H) 3.79 (s, 3 H) 3.87 (s, 3 H) 4.87 (s, 2 H) 4.93 (d, J=15.16 Hz, 1 H) 5.05 (d, J=15.16 Hz, 1 H) 5.29 (s, 1 H) 5.55 (d, J=10.61 Hz, 1 H) 5.83 (dd, J=10.11, 4.55 Hz, 1 H) 6.40 (s, 1 H) 6.62 (s, 1 H) 7.05 (dd, J=7.33 Hz, 1 H) 7.18 (dd, J=7.33 Hz, 1 H) 7.18 (d, J=8.08 Hz, 4 H) 7.39 (d, J=8.08 Hz, 1 H) 7.57 (d, J=8.08 Hz, 4 H) 7.63 (d, J=8.08 Hz, 1 H) 10.43 (s, 1 H)30 Exemple 6 : le benzoate Une prise d'essai de 1,8 g de vinflunine base est mise en solution dans un minimum d'acétate d'éthyle puis l'on ajoute 2 équivalents d'acide benzoïque (0,54 g) en solution dans l'acétate d'éthyle. Evaporer l'acétate d'éthyle et triturer le résidu dans de l'éther isopropylique, filtrer et laver le précipité à l'éther isopropylique. Sécher 20heures sous vide à 70 , à l'abri de la lumière. On obtient 2,1g de sel cristallin. 1H NMR (400 MHz, MeOH) 3 ppm 0.70 (t, J=7.07 Hz, 3 H) 1.30 - 1.40 (m, 2 H) 1.54 - 1.92 (m, 4 H) 1.68 (t, J=20. 00 Hz, 3 H) 2.02 (s, 3 H) 2.03 - 2.11 (m, 1 H) 2.28 - 2.37 (m, 1 H) 2.65 (d, J=16.00 Hz, 2 H) 2.64 (s, 1 H) 2.71 (s, 3 H) 3.02 - 3.29 (m, 6 H) 3.50 (d, J=14.15 Hz, 1 H) 3.57 (s, 1 H) 3.62 (d, J=12.63 Hz, 1 H) 3.75 (s, 6 H) 3.85 (s, 3 H) 4.78 (d, J=14.00 Hz, 1 H) 4.88 (d, J=14.00 Hz, 1 H) 4.87 (br. s., 2 H) 5.28 (d, J=10.50 Hz, 1 H) 5.30 (s, 1 H) 5.82 (dd, J=10.1 1, 4.04 Hz, 1 H) 6.32 (s, 1 H) 6.34 (s, 1 H) 7.07 (dd, J=7.33 Hz, 1 H) 7.14 (dd, J=7.33 Hz, 1 H) 7.31-7.36(m, 2H) 7.38 (d, J=7.58 Hz, 1 H) 7.45-7.47(m, J=7.4 Hz, 1H) 7.70 (d, J=7.58 Hz, 1 H) 7.92(d, J=7.4 Hz, 2H) Exemple 7 : le mandélate Une prise d'essai de 1,3g de vinflunine base est mise en solution dans un minimum d'acétone puis l'on ajoute 1 équivalent d'acide R(-)mandélique (0,24 g) en solution dans l'acétone. Evaporer l'acétone sous vide et triturer le résidu dans de l'éther isopropylique. Laisser reposer une nuit à température ambiante, filtrer et laver le précipité à l'éther isopropylique. Sécher 20 heures sous vide à 70 , à l'abri de la lumière. On obtient 1,3 g de sel cristallin. 1H NMR (400 MHz, MeOH) S ppm 0.70 (t, J=7.07 Hz, 3 H) 1.32 - 1.44 (m, 2 H) 1.55 - 1.92 (m, 3 H) 1.68 (t, J=19.00 Hz, 3 H) 1.98 - 2.08 (m, 1 H) 2.01 (s, 3 H) 2.28 -2.42 (m, 1 H) 2.55 - 2.87 (m, 3 H) 2.67 (s, 1 H) 2.72 (s, 3 H) 3.00 3.29 (m, 6 H) 3.60 (s, 2 H) 3.57 (s, 1 H) 3.75 (s, 6 H) 3.85 (s, 3 H) 4. 89 (s, 3 H) 4.88 (s, 4 H) 5.29 (d, J=10.00 Hz, 1 H) 5.29 (s, 1 H) 5.82 (dd, J=9.60, 4.04 Hz, 1 H) 6.33 (s, 2 H) 7.09 (t, J=7.58 Hz, 1 H) 7.16 (t, J=7.58 Hz, 1 H) 7.20 - 7.30 (m, 3 H) 7.34 (d, J=8.08 Hz, 1 H) 7.43 (d, J=7.07 Hz, 2 H) 7.67 (d, J=8.08 Hz, 1 H) Exemple 8 : le para hydroxy benzoate Une prise d'essai de 1,3 g de vinflunine base est mise en solution dans un minimum d'acétone puis l'on ajoute 1 équivalent d'acide para hydroxy benzoïque (0,22 g) en solution dans l'acétone. Evaporer l'acétone sous vide et triturer le résidu dans de l'éther isopropylique. Laisser reposer une nuit à température ambiante, filtrer et laver le précipité à l'éther isopropylique. Sécher 20 heures sous vide à 70 , à l'abri de la lumière. On obtient 1.3g de sel cristallin. 1HNMR(400MHz, MeOH)ppm0.71 (t, J=7.07 Hz, 3H) 1.29 - 1.40 (m, 2H) 1.56 - 1.92 (m, 3 H) 1.67 (t, J=19.20 Hz, 3 H) 1.98 - 2.08 (m, 1 H) 2.01 (s, 3 H) 2.28 - 2.38 (m, 1 H) 2.53 - 2.76 (m, 2 H) 2.65 (s, 1 H) 2.71 (s, 3 H) 3.00 - 3.28 (m, 7 H) 3.49 (d, J=13.64 Hz, 1 H) 3.58 (d, J=10.00 Hz, 1 H) 3.57 (s, 1 H) 3.75 (s, 6 H) 3.84 (s, 3 H) 4.76 (d, J=14.00 Hz, 1 H) 4.84 (d, J=15.00 Hz, 1 H) 4.89 (s, 4 H) 5.28 (d, J=14.00 Hz, 1 H) 5.30 (s, 1 H) 5.82 (dd, J=9.60, 4.04 Hz, 1 H) 6.34 (s, 2 H) 6.74 (d, J=8.59 Hz, 2 H) 7.06 (dd, J=7.33 Hz, 1 H) 7.12 (dd, J=7.33 Hz, 1 H) 7.31 (d, J=8.08 Hz, 1 H) 7.70 (d, J=7.58 Hz, 1 H) 7.79 (d, J=8.08 Hz, 2 H) - Résonance magnétique nucléaire : Le spectre RMN 'H est enregistré à la fréquence nominale de 400 MHz sur un spectromètre Bruker Avance DPX 400 équipé d'une sonde inverse large bande et d'un accessoire gradient z. Avant l'enregistrement du spectre RMN le produit est préalablement solubilisé dans le méthanol deutérié (Eurisotop, référence D 324-B, Lot A-3561) à la concentration voisine de 0.4 % (p/v). Les déplacements chimiques sont exprimés en p.p.m. par rapport au T.M.S. (tétraméthylsilane) utilisé comme standard interne. Les constantes de couplage sont exprimées en Hertz. La résonance magnétique nucléaire est utilisée d'une part pour confirmer l'intégrité structurale de la molécule du sel de vinflunine après l'essai de cristallisation et d'autre part pour déterminer le rapport molaire acide utilisé - vinflunine. Ce rapport est de 1 pour 1 ou 2 pour 1 selon les acides utilisés. - Diffraction des rayons X de poudre Les échantillons ont été analysés sur un diffractomètre D8 Advance Bruker AXS équipé d'une anticathode de cuivre (X=1.54060Â) fonctionnant avec une tension de 30kV et une intensité de 53mA, d'un bloc de fente primaire variable et du détecteur Vantec. Les analyses ont été réalisées entre 2 et 40 20 avec un pas de 0,007 20 et un temps, de comptage de 40s. Les échantillons ont été déposés sur un porte échantillon zéro réflexion (C79298 -A3158-B188 Brucker AXS). REVENDICATIONS 1. Sels cristallins anhydres de vinflunine obtenus avec 1 ou 2 équivalent(s) d'un acide minéral ou organique pharmaceutiquement acceptable. 2. Sels cristallins anhydres selon la revendication 1, caractérisés en ce qu'ils sont choisis parmi, le fumarate, le brohydrate, le sulfate, le lactate, le para-toluène sulfonate, le benzoate, le mandélate, et le para-bydroxy benzoate. 3. Procédé de préparation des sels cristallins de vinflunine comprenant les étapes de : ^ dissolution de la vinflunine base dans un solvant ou un mélange de solvants, addition d'un acide minéral ou organique, précipitation du sel, filtration et récupération du sel formé, ^ maturation, cristallisation du sel dans un solvant ou non solvant, ^ filtration, rinçage, et séchage sous vide des cristaux. 7. Procédé de préparation selon la revendication 3, caractérisé en ce que la vinflunine base est dissoute dans un solvant ou mélange de solvants choisis parmi ; l'acétone, l'acétate d'éthyle, l'éther, le toluène, le dichlorométhane, le méthanol, l'éthanol, le propanol 1 et le propanol 2. 8. Procédé de préparation selon les revendications 3 et 4, caractérisé en ce que les acides sont choisis parmi les acides minéraux ou organiques pharmaceutiquement acceptables, tels que par exemple ; l'acide bromhydrique, sulfurique, lactique, fumarique, para toluène sulfonique, benzoïque, mandélique, para hydroxy benzoïque. 9. Procédé de préparation selon les revendications 3 à 5, caractérisé en ce que les acides sont utilisés dans les proportions de 1 ou 2 équivalent(s) molaire(s) pour 1 équivalent molaire de vinflunine.7. Procédé de préparation selon l'une des revendications 3 à 6, caractérisé en ce que les acides sont introduits en solution dans de l'eau, un alcool, ou un solvant organique approprié. 8. Procédé de préparation selon l'une des revendications 3 à 7, caractérisé en ce que la précipitation du sel est réalisée dans le milieu ou bien dans un solvant ou mélange de solvant/non solvant, tel que par exemple l'acétone, l'acétate d'éthyle, l'éther, l'éther isopropylique, le toluène, l'hexane, l'heptane, cyclohexane ou éther de pétrole. 9. Procédé de préparation selon l'une des revendications 3 à 8, caractérisé en ce que les maturations sont réalisées dans un solvant ou mélange de solvant/non solvant, tel que par exemple l'acétone, l'acétate d'éthyle, l'éther, l'éther isopropylique, le toluène, l'hexane, l'heptane, cyclohexane ou éther de pétrole. 10. Sels cristallins anhydres de vinflunine selon l'une des revendications 1 et 2 ou obtenus par la mise en oeuvre du procédé selon l'une des revendications 3 à 9, en tant que moyen de purification de la vinflunine. 11. Sels cristallins de vinflunine selon l'une des revendications 1 et 2 ou obtenus par la mise en oeuvre du procédé selon l'une des revendications 3 à 9, en tant que médicament. 12. Composition pharmaceutique caractérisée en ce qu'elle comprend une quantité efficace d'un sel cristallin anhydre de vinflunine selon l'une des revendications 1 et 2 ou obtenus par la mise en oeuvre du procédé selon l'une des revendications 3 à 9, dans un milieu physiologiquement acceptable. 13. Utilisation d'un sel cristallin anhydre de vinflunine selon l'une des revendications 1 et 2 ou obtenus par la mise en oeuvre du procédé selon l'une revendications 3 à 9, pour la préparation d'un médicament destiné à être utilisé pour le traitement de la pathologie cancéreuse.