FR 2908605 A1 20080523 FR 0610152 A 20061121 1 L'invention concerne l'utilisation d'un concentré de membranes de globules gras laitiers, comme source de lipides polaires dans des aliments et préparations nutritionnelles. Les globules gras du lait sont constitués d'un noyau de triglycérides en-5 touré par une mince membrane appelée "membrane de globules gras lai-tiers" ou MFGM (Milk Fat Globule Membrane). Cette membrane, qui a une épaisseur d'environ 10 à 20 nm, joue un rôle d'émulsifiant et protège les globules de la coalescence et de la dégradation enzymatique. Elle est essentiellement constituée de : 10 û protéines spécifiques : principalement des glycoprotéines telles que mucine-1, xanthine déshydrogénase/oxydase, butyrophiline et protéose peptone 3 ; û lipides neutres : mono-, di- et triglycérides, ainsi que cholestérol et esters de cholestérol ; 15 û lipides polaires, essentiellement phospholipides et sphingolipides ; û et faibles quantités de minéraux et de vitamines. La majeure partie de la fraction lipidique de ces membranes est constituée par les lipides polaires (phospholipides et sphingolipides). Il s'agit de molécules amphiphiles avec une queue hydrophobe et un groupe de tête 20 hydrophile, qui contribuent largement aux propriétés émulsifiantes de la membrane. Les principaux types de lipides polaires présents dans la membrane des globules gras laitiers sont (avec leur teneur relative moyenne) : - phospholipides (plus exactement glycérophospholipides) : phosphati- 25 dylcholine (PC, 35%), phosphatidyléthanolamine (PE, 30%), phospha- tidylinositol (PI, 5%), phosphatidylsérine (PS, 3%) ; sphingolipides : sphingomyéline (SM, 25%), glucosylcéramide (GluCer, traces), lactosylcéramide (LacCer, traces), gangliosides (Gang, traces). 30 Ces lipides polaires issus des globules gras du lait présentent une activité biologique importante, notamment par leurs métabolites qui sont absorbés par la paroi intestinale. La présente invention propose d'utiliser les propriétés biologiques avantageuses de ces lipides polaires issus des membranes des globules gras du 35 lait (phospholipides et sphingolipides), pour la fabrication d'un aliment, 2908605 2 d'une boisson ou d'un supplément alimentaire utilisable dans des aliments et préparations nutritionnelles, indiqués pour traiter des troubles impliquant la paroi intestinale. Plus précisément, l'invention propose d'utiliser un ingrédient contenant un concentré MFGM de membranes de globules gras du lait contenant, avec des pourcentages exprimés en poids par rapport à l'extrait sec, 5 à 25 % de lipides polaires, 40 à 70 % de matières grasses totales, et 30 à 50 % de protéines solubles. Cet ingrédient est, selon l'invention, utilisé pour la fabrication d'un aliment, d'une boisson ou d'un supplément alimentaire destiné à une indication impliquant la paroi intestinale. Ces indications sont celles du groupe formé par : l'amélioration des défenses immunitaires et de la résistance aux infections chez le jeune enfant ; l'amélioration du confort intestinal et la réduction du syndrome du côlon irritable ; l'amélioration de la qualité de la paroi intestinale des personnes souffrant d'intolérance comme l'intolérance au gluten et autres pathologies intestinales ; l'amélioration des paramètres lipidiques sanguins chez le sujet hypercholestérolémique ; la réduction des allergies chez le jeune enfant ; l'amélioration des fonctions mentales et comportementales comme l'humeur, en particulier la réduc- tion du stress, de l'agressivité et de l'hyperactivité ; et l'amélioration des performances cognitives comme la mémoire. L'ingrédient contient typiquement 8 à 15 % de lipides polaires, et il est avantageusement issu du babeurre. Le supplément alimentaire est de préférence formulé pour contenir de 25 0,01 à 5 g de lipides polaires pour 100 g. 0 On va maintenant décrire un exemple de mise en oeuvre de l'invention, en 30 référence au dessin annexé. La figure 1 est une illustration schématique d'un exemple de procédé pour l'obtention d'un ingrédient destiné à mettre en oeuvre la présente invention. 0 35 2908605 3 Les membranes de globules gras peuvent être obtenues à partir de différents produits et co-produits laitiers tels que babeurre, babeurre d'huile, lactosérum, ... On décrira ci-dessous, en référence à la figure annexée, l'exemple d'un 5 procédé mis en oeuvre à partir de babeurre. La première étape est un écrémage du lait entier (étape 10) permettant de séparer la crème du lait écrémé. La crème obtenue est barattée (étape 12) pour en extraire le beurre et, comme co-produit, le babeurre. Le procédé peut utiliser, comme illustré, ce babeurre tel quel (babeurre 10 doux), mais on peut également produire un babeurre acide en prévoyant une étape d'acidification de la crème après écrémage et avant barattage, d'une manière en elle-même connue. Le babeurre est ensuite soumis en tant que de besoin à une acidification (étape 14), nécessaire pour obtenir la séparation, et à un chauffage op- 15 tionnel (étape 16). Ce babeurre, riche en membranes globulaires, est ensuite soumis à une étape de séparation de la phase liquide (sérum) par filtration, pression et/ou centrifugation (étape 18). Le caillé obtenu se présente sous forme d'un fromage frais à très faible 20 teneur en matière grasse. Ce fromage frais, qui piège les caséines, peut éventuellement servir, après centrifugation (étape 20), à la préparation d'un ingrédient spécifique enrichi en caséines. Le co-produit de la fabrication du fromage frais, constitué par la fraction liquide ou sérum, présente quant à lui une forte teneur en protéines séri- ques et membranaires, et en lactose. C'est ce co-produit qui sera utilisé pour préparer l'ingrédient de l'invention. Le sérum peut être concentré par ultrafiltration et/ou microfiltration, avec ou sans dialyse (étapes 22 et 24), pour donner un ingrédient fortement enrichi en éléments membranaires, notamment en lipides polaires tels que phospholipides et sphingolipides. Cette préparation de concentré de membranes de globules gras contient également les protéines solubles du lait, mais en proportions différentes de celles d'un lactosérum, avec une concentration particulièrement intéressante en alphalactalbumine et en sérumalbumine. 2908605 4 Le produit final se présente sous la forme d'un ingrédient en poudre, obtenu après séchage par exemple par atomisation. Le procédé que l'on vient de décrire permet de recueillir la quasi-totalité du matériel membranaire dans l'ingrédient final, dont la composition corn-5 prend typiquement (tous les pourcentages étant exprimés en poids par rapport à l'extrait sec) : 5 à 25% de lipides polaires, généralement environ 10%, - 40 à 70% de matières grasses totales, généralement 50%, 30 à 50% de protéines solubles, généralement 50%, 10 lactose, û minéraux. Cet ingrédient a été obtenu par mise en oeuvre d'un procédé tel que décrit dans le WO-A-01/78518 (N.V. Marc Boone), auquel on pourra se référer pour de plus amples détails. Ce procédé comprend essentiellement les 15 étapes consistant à : û refroidir du babeurre doux ayant un pH de 6,6 ou plus, obtenu par pré- paration d'un beurre provenant d'une crème non acidifiée, après pas- teurisation pendant 2 à 4 minutes à une température comprise entre 82 et 85 C, jusqu'à une température comprise entre 22 et 24 C ; 20 û ajouter une culture de bactéries lactiques comprenant au moins l'un des genres bactériens suivants : Lactococcus lactis, Lactococcus cre- moris, Lactococcus diacetylactis et Leuconostoc et un coagulant ; û permettre l'acidification de ce mélange pendant 12 à 16 heures jusqu'à un pH compris entre 4,0 et 4,7 ; 25 chauffer le mélange pendant 60 à 65 minutes à une température comprise entre 45 et 50 C ; û séparer le mélange en fromage blanc et sérum. Le sérum ainsi séparé du fromage blanc (qui peut être utilisé à d'autres fins) a été concentré comme exposé plus haut, pour donner un ingrédient 30 fortement enrichi en MFGM utilisé pour différentes études cliniques présentées ci-dessous. 2908605 5 Première étude clinique Cette première étude, réalisée chez l'adulte, a permis de mettre en évidence une amélioration de la qualité de la paroi intestinale. 5 Le protocole était le suivant : étude en double aveugle, cross-over, randomisée. La perméabilité intestinale a été mesurée chez 10 volontaires adultes après 4 jours de consommation (30 g/jour de concentré), par un test lactulose/rhamnose après un stress indométacine induit. Contrôle Traité Valeur p J1 0,019 0,007 0,026 0,017 0,386 J5 0,034 0,007 0,034 0,013 0,646 Différence ratio L/R 0,015 0,013 0,008 0,018 0,386 Valeur p 0,013 0,203 10 Chez les volontaires recevant le supplément de MFGM, on n'a pas observé d'augmentation significative de la perméabilité intestinale. Ces résultats permettent d'envisager les applications suivantes : formulation d'aliments destinés à préserver et/ou améliorer les fonctions membranaires et applications dans le but d'améliorer la qualité de la paroi intestinale, la capacité digestive et la tolérance alimentaire ; formulation d'aliments destinés à améliorer le confort digestif des per-sonnes souffrant du syndrome du colon irritable ou IBS (Irritable Bowel Syndrome), d'intolérance au gluten et autres pathologies intestinales ; 20 ù formulation de laits et boissons pour nourrissons et enfants en bas âge ainsi que d'aliments destinés à la prévention des allergies alimentaires. Les aliments seront formulés pour contenir typiquement de 0,01 à 5 g de lipides polaires pour 100 g (ou 100 ml), apportés par un concentré de membranes de globules gras laitiers. 25 Deuxième étude clinique II s'agit d'une étude réalisée chez l'enfant pour évaluer les bénéfices d'un lait enrichi en MFGM sur le confort intestinal et la résistance aux maladies 30 infectieuses courantes. 2908605 6 Pour cela, 182 enfants de 2,5 à 6 ans ont consommé pendant plus de 90 jours 200 ml d'une boisson lactée contenant 5 g d'un concentré de membranes de globules gras (250 mg de lipides polaires pour 100 ml), ou un placebo. 5 Les résultats en sont résumés dans le tableau ci-dessous. Supplé- Fièvre diarrhée constipa- toux visite au médica- École ment tion médecin tion manquée Sans Moyenne 2,60 1,72 0,42 14,41 1,14 16,88 3,09 Écart-type 3,06 2,83 1,68 13,46 1,42 21,40 3,89 Avec Moyenne 1,71 1,51 0,39 14,89 1,11 14,32 2,47 Écart-type 2,47 2,40 1,77 17,37 1,38 18,82 3,30 Total Moyenne 2,18 1,62 0,41 14,64 1,13 15,68 2,80 Écart-type 2,83 2,63 1,72 15,37 1,40 20,22 3,63 Diff. vs. -0,89 -0,22 -0,03 0,48 -0,04 -2,56 -0,62 placebo -34,34 -12,53 -8,15 3,34 -3,36 -15,16 -20,12 % diff. vs. placebo 0,028 0,890 0,844 0,445 0,965 0,516 0,431 valeur p On note en particulier une réduction significative des épisodes fiévreux et une tendance à la baisse de l'absentéisme. 10 À la fin de la période d'intervention (120 jours) un questionnaire validé (ASEBA) a été soumis aux parents ; ce questionnaire contient 100 rubriques, et il est utilisé pour les recherches sur les questions de santé men-tale, comportement et émotions. 169 parents ont répondu à ce questionnaire. La consommation de bois-15 son enrichie en MFGM a révélé une amélioration significative du comportement et de l'émotionnel. Ces résultats permettent d'envisager les applications suivantes : - formulation d'aliments infantiles destinés à améliorer les défenses immunitaires ; 2908605 7 ù formulation d'aliments destinés à améliorer les fonctions mentales, les comportements et l'humeur, réduire le stress et l'agressivité, et améliorer les performances cognitives comme la mémoire. Les aliments seront formulés pour contenir typiquement de 0, 01 à 5 g de 5 lipides polaires pour 100 g (ou 100 ml), apportés par un concentré de membranes de globules gras laitiers. REVENDICATIONS 1. Utilisation d'un ingrédient contenant un concentré MFGM de membranes de globules gras du lait, cet ingrédient contenant, avec des pourcentages exprimés en poids par rapport à l'extrait sec : à 25 % de lipides polaires, 5 û 40 à 70 % de matières grasses totales, û 30 à 50 % de protéines solubles, pour la fabrication d'un aliment, d'une boisson ou d'un supplément alimentaire destiné à une indication impliquant la paroi intestinale, parmi les indications du groupe constitué par : û l'amélioration des défenses immunitaires et de la résistance aux infec-tions chez le jeune enfant, - l'amélioration du confort intestinal et la réduction du syndrome du côlon irritable, l'amélioration de la qualité de la paroi intestinale des personnes souf-15 frant d'intolérance comme l'intolérance au gluten et autres pathologies intestinales, -l'amélioration des paramètres lipidiques sanguins chez le sujet hypercholestérolémique, - la réduction des allergies chez le jeune enfant, 20 û l'amélioration des fonctions mentales et comportementales comme l'humeur, en particulier la réduction du stress, de l'agressivité et de l'hyperactivité, et l'amélioration des performances cognitives comme la mémoire. 25 2. L'utilisation de la revendication 1, où l'ingrédient contient 8 à 15 % de lipides polaires. 3. L'utilisation de la revendication 1, où l'ingrédient est un ingrédient issu du babeurre. 4. L'utilisation de la revendication 1, où le supplément alimentaire est formulé pour contenir de 0,01 à 5 g de lipides polaires pour 100 g. 30