FR 2907786 A1 20080502 FR 0609460 A 20061027 1 La présente invention concerne des thionucléosides et leurs applications pharmaceutiques. Un objet de la présente invention consiste en une composition pharmaceutique comprenant, à titre de principe actif, au moins un composé choisi parmi : les composés répondant à la formule (II) suivante : HOC Base S(0),R1 (II) où l'atome S est lié au carbone en 2' ou au carbone en 3' du nucléoside, et les composés répondant à la formule (III) suivante : SSR (III) formules dans lesquelles B représente une base nucléotidique, purique ou pyrimidique, naturelle ou modifiée, x est égal à 0, 1 ou 2, et R1, R représentent un groupement carboné ou un reste moléculaire hydrocarboné pouvant être substitué et/ou interrompu par un ou des atomes et/ou par un ou des groupements comprenant un ou des atomes, lesdits atomes étant choisis parmi N, O, P, S, Si, X où X représente un halogène, ladite composition comprenant en outre au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable. L'invention concerne aussi l'utilisation des composés ci-dessus, ainsi que ceux plus spécifiquement décrits ci-après en tant que principe actif thérapeutique, ou médicament. Celui-ci est en particulier destiné à incorporer une composition 30 pharmaceutique selon l'invention. 10 15 20 25 HO 2907786 2 L'invention réside dans l'application d'une telle composition dans des traitements anti-viraux, notamment anti-VIH1 et anti-VIH2 et dans des traitements anticancéreux. Les composés répondant à la formule (II) sont avantageusement des 5 composés répondant aux caractéristiques ci-après, celles-ci étant considérées seules ou en combinaison les unes avec les autres. R1 est choisi parmi R3-Si(R4)(R5)(R6) où R3 représente une chaîne hydrocarbonée de deux atomes de carbone, éventuellement insaturée et/ou substituée, et R4, R5 et R6, identiques ou différents, représentent chacun, indépendamment les uns des autres, un groupement hydrocarboné ; de préférence, R3 y représente CH2-CH2 et R4, R5 et R6 sont identiques et représentent CH3, B est une base nucléotidique choisie parmi les bases pyrimidiques, naturelles ou modifiées ; l'homme du métier a à sa disposition dans la littérature des bases modifiées qu'il sait obtenir et utiliser, en particulier, comme analogues de bases naturelles (à titre d'exemple, il peut se reporter à l'ouvrage Frontiers in Nucleosides and Nucleic Acids Editeurs R. F. Schinazi, D. C. Liotta, IHL Press, 2004, p. 3-55); la 5-bromo-uracile en est un exemple. Des composés préférentiels selon l'invention répondent à toutes les caractéristiques ci-dessus, en outre l'atome S est lié au carbone en 2' du nucléoside et x est égal à 0. De tels composés sont notamment choisis parmi les composés suivants : 2',3'-Didéshydro-2',3'-didésoxy-2'-(2-triméthylsilyl)éthylthiouridine 1 2' ,3 '-Didéshydro-2' ,3 ' -di désoxy-2 ' -(2-(triméthylsilyl)éthylthiothymidine 3 2' ,3' -Didéshydro-2 ' ,3' -di désoxy-2' -(2-triméthylsilyl)éthylthiocytidine 5 D'autres composés d'intérêt selon l'invention répondent à toutes les caractéristiques ci-dessus, en outre l'atome S est lié au carbone en 3' du nucléoside et x est égal à 0. Le composé 2',3'-didéshydro-2',3'-didésoxy-3'-(2-triméthylsilyl)éthylthiothymidine 4 en est un exemple préféré. D'autres composés préférentiels de l'invention répondent à toutes les caractéristiques ci-dessus, en outre l'atome S est lié au carbone en 2' du nucléoside et x est égal à 1. De tels composés sont notamment choisis parmi les composés suivants : Sulfoxyde de la 2',3'-didéshydro-2',3'-didésoxy-2'-(2-triméthylsilyl) éthylthiothymidine 6 Sulfoxyde de la 2',3'-didéshydro-2',3'-didésoxy-2'-(2-triméthylsilyl)éthylthiouridine 8. Encore d'autres composés avantageux de l'invention répondent à toutes les caractéristiques ci-dessus, en outre l'atome S est lié au carbone en 2' du nucléoside 2907786 3 et x est égal à 2. Un composé. préféré est la sulfone de la 2',3'-didéshydro-2',3'-didésoxy-2'-(2-triméthylsilyl)éthylthiothymidine 7. D'autres composés d'intérêt selon l'invention sont des composés de formule (II) non silylés où l'atome de S est lié au carbone en 2' du nucléoside, x est 5 égal à 0 et R1 représente un groupement alkyle. Ils sont illustrés par les composés suivants : la 2',3'-didéshydro-2',3'-didésoxy-2'-(3-méthylbutyl)thiouridine 2, et la 2',3'-didéshydro-2',3'-didésoxy-2'-méthylthiouridine 31. La structure des composés identifiés par un chiffre ou un nombre est représentée à la fin de la description et leurs propriétés sont illustrées dans les exemples 10 qui suivront. D'autres composés répondant à la formule (II) sont avantageusement des composés répondant aux caractéristiques ci-après, celles-ci étant considérées seules ou en combinaison les unes avec les autres. x est égal à 0 et Ri représente SR2 où R2 représente un groupement 15 carboné ou un reste moléculaire hydrocarboné pouvant être substitué et/ou interrompu par un ou des atomes et/ou par un ou des groupements comprenant un ou des atomes, lesdits atomes étant choisis parmi N, O, P, S, Si, X où X représente un halogène ; il est avantageusement choisi parmi les groupements ortho-nitrophényle, para-nitrophényle et trichlorométhyle. 20 B est une base nucléotidique choisie parmi les bases pyrimidiques, naturelles ou modifiées, telles que définies ci-dessus. Lorsque l'atome S est lié au carbone en 2' du nucléoside, les composés privilégiés sont choisis parmi : Disulfure de 2',3'-didéshydro-2',3'-didésoxythymidin-2'-yle et de trichlorométhyle 12 25 Disulfure de 2',3'-didéshydro-2',3'-didésoxyuridin-2'-yle et de trichlorométhyle 13 Disulfure de 2',3'-didéshydro-2',3'-didésoxythymidin-2'-yle et de 4-nitrophényle 14 Disulfure de 2',3'-didéshydro-2',3'-didésoxythymidin-2'-yle et de 2-nitrophényle 15 Disulfure de 2',3'-didéshydro-2',3'-didésoxyuridin-2'-yle et de 4-nitrophényle 16 Disulfure de 2',3'-didéshydro-2',3'-didésoxyuridin-2'-yle et de 2-nitrophényle 17 30 Les composés répondant à la formule (II) ci-dessus présentent un effet antiprolifératif et/ou un effet cytotoxique, et peuvent être destiné au traitement d'un cancer. Ainsi, selon l'invention, on les utilisera avantageusement pour l'obtention d'un médicament dans un traitement anticancéreux. Les composés de l'invention répondant à la formule (III) sont 35 avantageusement des composés répondant aux caractéristiques ci-après, celles-ci étant considérées seules ou en combinaison les unes avec les autres. 2907786 4 B représente une base pyrimidique, naturelle ou modifiée, telle que définie ci-dessus. R est de préférence choisi parmi CH2-CH=CH2, les groupements alkyles, par exemple CH3, C4H9, C8HI7, les groupements hydroxyalkyles, par exemple 5 CH2CH2OH, C6HH12OH, CH2CH2NH2.HC1, et les groupements ortho-nitrophényle, para-nitrophényle et trichlorométhyle. Ainsi, un tel composé peut être choisi parmi les composés suivants : Disulfure de 2',3'-didésoxycytidin-3'-yle et de méthyle 19 Disulfure de 3'-désoxythymidin-3'-yle et d'allyle 20 10 Disulfure de 3'-désoxythymidin-3'-yle et de 2-hydroxyéthyle 21 Disulfure de 3'-désoxythymidin-3'-yle et de trichlorométhyle 22 Disulfure de 5-bromo-2',3'-didésoxyuridin-3'-yle et de méthyle 23 Disulfure de 3'-désoxythymidin-3'-yle et de butyle 24 Disulfure de 3'-désoxythymidin-3'-yle et de 4-nitrophényle 25 15 Disulfure de 3'-désoxythymidin-3'-yle et de 2-nitrophényle 26 Disulfure de 3'-désoxythymidin-3'-yle et du chlorohydrate de 2-aminoéthyle 27 Disulfure de 3'-désoxythymidin-3'-yle et d'octyle 28 Disulfure de 3'-désoxythymidin-3'-yle et d'hexyle 29 Disulfure de 3'-désoxythymidin-3'-yle et de 6-hydroxyhexyle 30 20 Les composés répondant à la formule (III) ci-dessus présentent une application dans le traitement d'une infection virale, en particulier d'une infection par le VIHI ou le VIH2. Selon l'invention, on les utilisera avantageusement pour l'obtention d'un médicament dans un traitement antiviral, comme un traitement anti-VIH1 ou anti-VIH2. 25 L'invention concerne aussi de nouveaux composés disulfure de nucléoside répondant à la formule (I) suivante : SSR (I) 30 dans laquelle : quand B représente la thymine, R est choisi parmi CH2-CH=CH2, C4H9, CH2CH2OH et CH2CH2NH2.HC1, et quand B est une base nucléotidique choisie parmi l'uracile, la cytosine et la 5-bromouracile, R représente CH3. HO 2907786 5 Certains de ces composés sont décrits à la fin de la description sous les références 19, 20, 21, 23 24, 27. L'invention concerne aussi un procédé de préparation d'un composé répondant à la formule (IV) suivante : SOXR1 dans laquelle B, x et R1 sont tels que défini précédemment pour la formule (II). Selon ce procédé : 10 on dispose d'un composé répondant à la formule (II) précédente où R1 représente R3-Si(R4)(R5)(R6) où R3 représente une chaîne hydrocarbonée de deux atomes de carbone, éventuellement insaturée et/ou substituée, et R4, R5 et R6, identiques ou différents, représentent chacun, indépendamment les uns des autres, un groupement hydrocarboné ; 15 on fait réagir ledit composé avec un composé de formule RSX où X représente un halogène et R représente un groupement carboné ou un reste moléculaire hydrocarboné pouvant être substitué et/ou interrompu par un ou des atomes et/ou par un ou des groupements comprenant un ou des atomes, lesdits atomes étant choisis parmi N, O, P, S, Si, X où X représente un halogène, pour obtenir un disulfure ; 20 on réalise une réduction du disulfure en sulfure ; et on fait réagir le sulfure obtenu avec un composé R'X où R' représente R représentent un groupement carboné ou un reste moléculaire hydrocarboné pouvant être substitué et/ou interrompu par un ou des atomes et/ou par un ou des groupements comprenant un ou des atomes, lesdits atomes étant choisis parmi N, O, P, S, Si, X où X 25 représente un halogène ; et X représente un halogène. Le schéma de synthèse de ce procédé selon l'invention qui illustré dans la partie expérimentale de la description est ci-après exposé, avec R1 représentant CH2CH2Si(CH3)3 : 5 2907786 6 RSCI HOC B Réducteur %SSR HOC Base, R'X Un autre objet de l'invention est un procédé de synthèse généralisé à l'obtention 5 de composés disulfure tels que des acides aminés soufrés, selon le schéma de synthèse ci-après et illustré dans la partie expérimentale de la description. HO BocHN,, BocHN4 CO2Me /CO2Me Si- SH S \ NO2 10 34 35 36 L'invention est ci-après décrite plus en détail avec des exemples illustrant les procédés de synthèse qui peuvent mis en oeuvre par l'homme du métier pour obtenir les composés ci-dessus, ainsi que les propriétés pharmaceutiques de ceux-ci. 15 I- Procédé d'obtention des composés de l'invention Les composés sulfure silylés saturés servant de réactifs de départ dans les synthèses suivantes et dont la préparation n'est pas décrite peuvent être obtenus à partir de procédés connus de l'homme du métier (C. Chambert et al. J. Org . Chem. 2000, 65, 20 249 ; Stamm, J. Org. Chem, 1963, 3264 ; Mahadevan et al. Synth. Commun. 1994, 3099 ; C. Chambert et al. J. Org . Chem. 2002, 67, 1898-1904) 2907786 7 2',3'-didésoxy-2'-(3-méthylbutyl)thio uridine 2 o A une solution de 2'-désoxy-2'-(3-méthyl butyl) thiouridine 33 (0,5 g ; 1, 51 5 mmol) dans la pyridine anhydre (20 mL), maintenue à 0 C sous argon, est ajouté le chlorure de diméthoxytrityle (1,023 g ; 3 mmol) et le 4-(dimethylamino)pyridine DMAP (18,3 mg ; 0,15 mmol). Le mélange est laissé sous agitation pendant 15 minutes, puis il est laissé revenir à température ambiante, et agité pendant 5h. Les solvants sont ensuite évaporés et coévaporés au toluène. Le résidu obtenu est repris 10 dans un mélange de dichlorométhane-méthanol-triéthylamine 2%, pour être chromatographié sur gel de silice avec un mélange de dichlorométhane-méthanol 98/2-triéthylamine 2%. Le produit tritylé obtenu est dissous dans la pyridine anhydre (7 mL) à 0 C, sous argon pendant 15 minutes. Puis on ajoute le chlorure de mésyle (0 ,15 mL ; 1,92 15 mmol) et le mélange est laissé sous agitation pendant 15 h. On neutralise par addition d'eau (5 mL) à 0 C et on laisse sous agitation pendant 30 minutes. On évapore et coévapore les solvants au toluène. Le composé tritylé-mésylé est traité avec de l'acide dichloroacétique DCA 2% dans le dichlorométhane (25 mL) pendant 15 minutes. Le mélange réactionnel est 20 neutralisé par addition de NaHCO3 5% (300 mL) et le résidu est lavé au dichlorométhane. Les phases organiques réunies sont séchées sur sulfate de sodium puis concentrées pour donner le produit mésylé détritylé (0,245 g ; 0,6 mmol ; 40%). Ce produit est ensuite dissous dans l'acétonitrile (1,5 mL) sous argon pendant 15 minutes, puis le K2CO3 (0,06 g ; 0,43 mmol) est ajouté. Le mélange réactionnel est 25 laissé sous agitation pendant 19 h à 60 C. Ensuite, on filtre pour éliminer les sels minéraux en rinçant avec du méthanol. On évapore à sec et le produit obtenu est chromatographié sur gel de silice dans un mélange de dichlorométhane-méthanol (95 : 5). La 2'-3' didésoxy-2'-(3-méthylbutyl) thiouridine 2 est ainsi obtenue sous la forme des cristaux blancs (0,082, g ; 0,26 mmol, 76,5%). 30 2907786 8 F : 131-133 C RMN 1H (200 MHz, CDC13) 8 8,76 (1 H, s, 3-H) ; 7,58 (1 H, d, J = 8,1 Hz, 6- H) ; 6,9 (1 H, dd, J = 1,5 Hz, J = 3,2 Hz, l'-H) ; 5,81 (1 H, t, J= 1,6 Hz, 3'-H) ; 5,68 (1 H, d, J = 8,1 Hz, 5-H) ; 4,95 (1 H, m, 4'-H) ; 3,91 (1 H, dd, J = 2,6 Hz, J = 12,6 Hz, 5'- 5 H) ; 3,73 (1H, dd, J = 3, 2 Hz, J = 12,52 Hz, 5'-H) ; 2,81 (2 H, m, S-CH2) ; 1,73 (1 H, m, CH-(CH3) 2) ; 1,55 (2 H, m, (CH2-CH)) ; 0,93 (6 H, d, J = 6,4 Hz, (CH3-CH)). RMN 13C (50 MHz, CDC13) 8 163,27 (CO) ; 150,64 (CO) ; 141,0 ; 134,9 ; 123,68 ; 102,67 ; 90,33 ; 87,37 ; 63,54 (5'-CH2) ;37,23 (S-CH2) ; 30,46 (CH2-CH) ; 27,5 ; 22,18 ((CH3)2). 10 SM (FAB+, glycérol) m/z 313 [M+H]+ Sulfoxyde de la 2',3'-didéshydro-2',3'-didésoxy-2'-(2-triméthylsilyl)éthyl thiothymidine 6 O Ce composé est préparé à partir de la 2'-désoxy-2'-(2-(triméthylsilyl)éthyl)thiothymidine 37 dont la synthèse est ci-après décrite : HO OH S\ \Si\ A une suspension de 2,2'-anhydrothymidine (5 g ; 22 mmol) et de carbonate de potassium anhydre (11 g ; 79 mmol) dans le DMF (110 mL) est ajouté le 2-(triméthylsilyl)éthanethiol (3,5 g ; 26 mrnol). La solution est laissée sous agitation et 25 sous argon à 120 C pendant 3 h. Après filtration et rinçage des sels minéraux avec du dichlorométhane, les solvants sont évaporés sous pression réduite pour donner une 15 20 2907786 9 huile jaune. Ce résidu est chromatographié sur gel de silice dans un mélange dichlorométhane-méthanol (95 : 5). Le sulfure 37 est obtenu sous la forme d'un solide blanc (6,9 g ; 19 mmol ; 88 %). 5 F : 58-60 C RMN 'H (400 MHz, CDCI3) 8 8,73 (1H, s, NH) ; 7,25 (1 H, d, J = 8,0 Hz, 6-H) ; 5,46 (1 H, d, J = 9,2 Hz, l'-H) ; 4,36 (1 H, m, 3'41) ; 4,24 (1 H, m, 4'-H) ; 3,99 (2 H, m, 2'H +5'-H) ; 3,81 (1 H, m, 5'-H) ; 2,60 (2 H, m, S-CH2) ; 1,96 (3 H, s, 5-CH3) ; 0,85 (2 H, m, CH2Si) ; -0,02 (9 H, s, Si(CH3)3). 10 RMN 13C (100 MHz, CDCI3) 8 163,4 (C2) ; 150,5 (C4) ; 138,87 (C6) ; 111,4 (C5) ; 93,3 (CI') ; 86,6 (C4') ; 71,5 (C3') ; 63,1 (5'-CH2) ; 52,8 (C2') ; 28,4 (S-CH2) ; 18,1 (CH2-Si) ; 12,4 (CH3) ; -1,8 (Si(CH3)3). SM (DCI, NH3-isobutane) m/z 375 [M+H]+, 392 [M+H+NH3]+ 15 A une solution de 2'-désoxy-2'-(2-(triméthylsilyl)éthyl)thiothymidine 37 (0,05 g, 0,14 mmol), dans le méthanol (5 mL) est ajouté le sel de tétrabutylammonium de l'oxone (100 mg,0,56 mmol) par portion de 25 mg (0,5 équivalent) toutes les 30 min (analyses par CCM). Le mélange est laissé sous agitation pendant 15 heures puis est ensuite évaporé à sec et est chromatographié sur gel de silice avec un mélange 20 dichlorométhane-méthanol (95 : 5). Le sulfoxyde insaturé 6 est ainsi obtenu sous la forme d'une poudre blanche (30 mg ; 0,008 mmol, 58%). RMN 1H (400 MHz, CDCI3) 8 8,69 (1H, s, NH) ; 7,89 (1 H, s, 6-H) ; 6,90 (1 H, m, 1'-H) ; 6,89 (1 H, m, 3'-H) ; 5,11 (1 H, m, 4'-H) ; 3,99 (2 H, m, 5'-Hx2) ; 3,07-2,76 (2 H, 25 m, S-CH2) ; 1,88 (3H, s,5-CH3) ; 1,10-0,94 (2 H, m, CH2Si) ; 0,02 (9 H, s, Si(CH3)3). RMN i3C (100 MHz, CDC13) 8 163,7 (C2) ; 150,5 (C4) ; 140,1 (C2') ; 137,8 (C3') ; 135,8 (C6) ; 111,7 (C5) ; 87,6 (C1'+ C4') ; 62,9 (5'-CH2) ; 48,1 (S-CHz) ; 12,4 (CH3) ;6,7 (CH2-Si) ; -1,9 (Si(CH3)3). SM (DCI, NH3-isobutane) : m/z 373 [M+H]+. 30 2907786 10 Sulfone de la 2 ' ,3 '-didéshydro-2' ,3 '-didésoxy-2'-(2-triméthylsilyl)éthyl thiothymidine 7 HO. A une solution de 2'-désoxy-2'-(2-(triméthylsilyl)éthyl)thiothymidine 37 (0,02 5 g, 0,06 mmol), dans le dichlorométhane anhydre (1 mL) est ajouté l'acide métachloroperbenzoïque mCPBA (15 mg, 0,09 mmol). Le mélange est laissé sous agitation et sous argon pendant 15 heures puis est: ensuite évaporé à sec et est chromatographié sur gel de silice avec un mélange dichlorométhane-méthanol (95 : 5). La sulfone insaturée 7 est ainsi obtenu sous la forme d'une poudre blanche (15 mg ; 0,004 mmol, 10 68%). F : 78- 80 C RMN 1H (400 MHz, CDC13) 6 7,60 (1 H, s, 6-H) ; 7,18 (1 H, m, l'-H) ; 6,18 (1 H, m, 3'-H) ; 5,08 (1 H, m, 4'-H) ; 3,97 (2 H, m, 5'-Hx2 ) ; 3,03 (2 H, m, S-CH2) ; 1,88 (3H, 15 s,5-CH3) ;0,98-0,87 (2 H, m, CH2Si) ; 0,02 (9 H, s, Si(CH3)3). RMN 13C (100 MHz, CDC13) 8 162,5 (C2) ; 150,9 (C4) ; 145,5 (C2') ; 138,8 (C3') ; 135,8 (C6) ; 110,5 (C5) ; 91,4 (Cl') ; 85,8 (C4') ; 62,8 (5'-CH2) ; 50,9 (S-CH2) ; 13,1 (CH3) ;8,5 (CH2-Si) ; -2,1 (Si(CH3)3). SM (DCI, NH3-isobutane) : m/z 389 [M+H]+. 20 Sulfoxyde de la 2',3'-didéshydro-2',3'-didésoxy-2'-(2-triméthylsilyl)éthyl thiouridine 8 o Ce composé est préparé à partir de la 2'-désoxy-2'-(2-(triméthylsilyl)éthyl)thiouridine 37. 25 2907786 11 A une solution de 2'-désoxy-2'-(2-(triméthylsilyl)éthyl)thiouridine 37 (0,1 g, 0,29 mmol), dans le méthanol (5 mL) est ajouté le sel de tétrabutylammonium de l'oxone (208 mg, 0,58 mmol) par portions de 52 mg (0,5 equivalent) toutes les 30 min (analyses par CCM). Le mélange est laissé sous agitation pendant 15 heures puis est 5 ensuite évaporé à sec et est chromatographié sur gel de silice avec un mélange dichlorométhane-méthanol (95 : 5). Le sulfoxyde insaturé 8 est ainsi obtenu sous la forme d'une poudre blanche (70 mg ; 0,019 mmol, 64%). RMN 1H (400 MHz, CDC13) 8 8,19 (1 H, d, J = 8,0 Hz, 6-H) ; 6,87 (1 H, m, 3'-H) ; 10 6,83 (1 H, m, l'-H) ; 5,77 (1 H, d, J = 8,0 Hz, 5-H) ; 5,12 (1 H, m, 4'-H) ; 3,97 (2 H, m, 5'-Hx2 ) ; 3,07-2,84 (2 H, m, S-CH2) ; 1,05-077 (2 H, m, CH2Si) ; 0,08 (9 H, s, Si(CH3)3). RMN 13C (100 MHz, CDC13) 8 163,5 (C2) ; 150,5 (C4) ; 143,9 (C6) ; 140,4 (C2') ; 103,9 (C3') ; 103,0 (C5) ; 87,9 (Cl') ; 87,7 (C4') ; 62,7 (5'-CH2) ; 53,4 (S-CH2) ; 6,6 15 (CH2-Si) ; -1,9 (Si(CH3)3). SM (DCI, NH3-isobutane) : m/z 352 [M+H]+. s 20 S-CH3 A une solution de 2',3'-didésoxy-3'-(2-triméthylsilyl)éthylthiocytidine (0,05 g ; 0,014 mmol) et de disulfure de méthyle (320 L ; 3,55 mmol) dans le THF anhydre (2 mL) est ajouté le tétrafluoroborate de diméthyl(thiométhyl)sulfonium (36 mg ; 0,023 mmol). Le mélange est laissé 48 h sous agitation et sous argon, puis une solution de 25 bicarbonate de sodium (10% ; 100 .tL) est ajoutée. Après évaporation à sec, le résidu obtenu est dissous dans le minimum d'eau pour être chromatographié sur une cartouche C18 (1 g) avec un mélange eau-méthanol (9 : 1) puis après évaporation à sec est repris dans le minimum d'éluant pour être chromatographié sur gel de silice avec un mélange dichlorométhane (90 : 10) et donner le disulfure méthylé 19 (37 mg ; 0,128 mmol ; 30 92%) sous la forme d'un mousse blanche. RMN 1H (400 MHz, MeOD) 8 8,17 (1 H, d, J = 7,6 Hz, 6-H) ; 6,15 (1 H, dd, J =6,8 Hz, J = 4 Hz, l'-H) ; 5,92 (1 H, d, J = 7,6 Hz, 5-H) ; 4,03 (1 H, m, 4'-H) ; 3,95-3,82 (2 Disulfure de 2',3'-didésoxycytidin-3'-yle et de méthyle 19 NH2 )N4 HO 2907786 12 H, m, 5'-H x 2) ; 3,53 (1 H, m, 3'-H) ; 2,67 (1 H, m, 2'-H) ; 2,42 (1 H, m, 2'-H) ; 2,48 (3 H, s, CH3-S). RMN 13C (100 MHz, MeOD) 8 163,4 (C4) ; 150, 2 (C2) ; 143,7 (C6) ; 96,4 (C5) ; 88,0 (Cl') ; 87,9 (C4') ; 62,5 (5'-CH2) ; 46,8 (C3') ; 40,9 (2'-CH2) ; 25,3 (S-CH3). 5 SM (FAB+, glycérol) m/z = 290 [M+H]+ ; 312 [M+Na]+. Disulfure de 5-bromo-2',3'-didésoxyuridin-3'-yle et de méthyle 23 0 Br~NH 1 HO S, S-CH3 10 Ce composé est préparé à partir de 1a2',3'-Didésoxy-3'-(2-(triméthylsilyl)éthyl)thiouridine 38 dont la synthèse est décrite ci-dessous. SS 38 15 A une suspension d'hydrure de sodium (60% ; 234 mg ; 7,02 mmol) dans le DMF anhydre (8 mL) est ajouté une solution de 2-(triméthylsilyl)éthanethiol (980 L ; 7,02 mmol) dans le DMF (8 mL). Ce mélange est laissé sous agitation et sous argon pendant 15 min, puis le dérivé 51 (3 g ; 5,85 mmol) est ajouté. Après 24 h sous argon à 90 C, l'hydrure de sodium non réagi est neutralisé par 3 mL de méthanol et les solvants 20 sont évaporés sous pression réduite. Le résidu est ensuite repris dans le dichlorométhane (100 mL) et la solution est neutralisée avec une solution de NaH2PO4 (10% ; 10 mL), lavée à l'eau (100 mL) et séchée sur sulfate de sodium avant d'être évaporée à sec. Le résidu est repris dans le dichlorométhane pour être chromatographié sur gel de silice avec un mélange dichiorométhane-acétate d'éthyle (8 : 2) contenant 25 1% de triéthylamine et donner le sulfure sous la forme d'une mousse jaune. La mousse jaune pâle obtenue est dissoute dans une solution d'acide dichloroacétique dans le dichlorométhane (2% ; 80 mL). La solution orange obtenue est laissée sous agitation et sous argon pendant 4 heures avant d'être neutralisée par une solution de bicarbonate de sodium (5% ; 30 mL). La phase aqueuse est extraite au 2907786 13 dichlorométhane (50 mL) et les phases organiques sont rassemblées pour être séchées sur sulfate de sodium avant d'être évaporées à sec. Le résidu est repris dans le dichlorométhane pour être chromatographié sur gel de silice avec un mélange dichlorométhane-acétate d'éthyle (6 : 4) et donner le sulfure 38 (1,06 g ; 3,08 mmol ; 5 56% (2 étapes)) sous la forme d'un solide blanc. F:148 C RMN 1H (400 MHz, CDC13) 8 9,47 (1 H, s, NH) ; 7,82 (1H, d, J = 8,4 Hz, 6-H) ; 6,12 (1 H, dd, J = 7,0 Hz, J = 3,6 Hz, l'-H) ; 5,73 (1H, d, J = 8,4 Hz, 5-H) ; 4,05 (1 H, m, 3'- 10 H) ; 3,85 (2 H, m, 5'-H x 2 ) ; 3,47 (1 H, m, 4'-H) ; 2,64-2,50 (4 H, m, 2'-H x 2, SCH2) ; 0,84 (2 H, m, CH2-Si) ; -0, 02 (9 H, s, Si(CH3)3). RMN 13C (100 MHz, CDC13) 8 163,9 (CO) ; 150,4 (CO) ; 140,9 ; 101,9 ; 86,2 ; 85,7 ; 61,0 (5'-CH2) ; 40,7 ; 40,1 (2'-CH2) ; 27,5 (S-CH2) ; 17,4 (CH2-Si) ; -1,8 (Si(CH3)3). SM (FAB+, glycérol) m/z = 345 [M+H]+. 15 Microanalyse pour C14H24N2O4SSi, 0,33 H2O: Calculée C 47,97 ; H 7,09 ;N 7,99 ; S 9,15. Trouvée C 47,82 ; H 7,13 ;N 7,79 ; S 9,66. A une solution de nucléoside silylé 38 (0,150 g ; 0,44 mmol) dans le 20 dichlorométhane anhydre (4 mL) est ajoutée le bromure de cyanogène (0,230 mg ; 2,17 mmol). Le mélange est laissé sous agitation et sous argon pendant 96 h à 40 C. Le disulfure symétrique apparaît progressivement sous la forme d'un précipité beige tandis que le second produit reste en solution. Après hydrolyse par une solution de tampon phosphate (0,5 M ; pH 7 ; 2 mL) pendant 30 min, les solvants sont évaporés à sec. Le 25 résidu obtenu est repris dans le minimum de dichlorométhane pour être chromatographié sur gel de silice avec un mélange dichlorométhane- méthanol (98 : 2 puis 95 : 5). Un disulfure symétrique est obtenu sous la forme d'une poudre blanche (27 mg ; 0,04 mmol ; 21%), et le dérivé bromosilylé 39 recherché, ci-dessous est obtenu sous la forme d'une poudre blanche (42 mg, 0,1 mmol, 25%). 30 2907786 Dérivé bromosylilé 39 5 RMN 1H (400 MHz, CDC13) 8 8,41 (1H., s, 6-H) ; 6,09 (1 H, dd, J = 6,7 Hz, J = 3,2 Hz, l'-H) ; 4,14 (1H, s, 5'-H) ; 4,93 (2 H, rn, 4'-H et 5'-H) ; 3,95 (1 H, m, 3'-H) ; 2,66 (2 H, m, S-CH2) ; 2,60-2,44 (2 H, m, 2'-H x2) ; 1,28 (1H, t, 5'-OH) ; 0,88 (2 H, m, CH2-Si) ; -0,02 (9 H, s, Si(CH3)3). RMN 13C (100 MHz, CDCI3) S 158,8 (C2) ; 149,3 (C4) ; 140,4 (C6) ; 96,1 (C5) ; 86,3 10 (Cl') ; 86,2 (C4') ; 60,8 (5'-CH2) ; 41,2 (2'-CH2) ; 39,6 (C3') ; 27,6 (S-CH2) ; 17,5 (CH2-Si) ; -1,5 (Si(CH3)3). SM (FAB+, NBA) m/z = 423 [M+H]+. A une solution de 5-bromo-2',3'-•didésoxy-3'-(2-triméthylsilyl)éthylthiouridine, 15 39 (0,02 g ; 0,005 mmol) et de disulfure de méthyle (170 L ; 1,90 mmol) dans le THF anhydre (500 L) est ajouté le tétrafluoroborate de diméthyl(thiométhyl)sulfonium (22 mg ; 0,014 mmol). Le mélange est laissé 24 h sous agitation et sous argon, puis une solution de bicarbonate de sodium (10% ; 100 L) est ajoutée. Après évaporation à sec, le résidu obtenu est dissous dans le minimum d'eau pour être chromatographié sur une 20 cartouche C18 (1 g) avec un mélange eau-méthanol (9 :1) puis après évaporation à sec est repris dans le minimum d'éluant pour être chromatographié sur gel de silice avec un mélange dichlorométhane (95 : 5) et donner le disulfure méthylé 23 (11 mg, 0,003 mmol, 65 %) sous la forme d'un mousse blanche. 25 RMN 1H (400 MHz, MeOD) 8 8,67 (1 H, s, 6-H) ; 6, 11 (1 H, dd, J = 6,8 Hz, J = 3,5 Hz, l'-H) ; 4,01 (2 H, m, 4'-H et 5'-H) ; 3,84 (1 H, m, 5'-H) ; 2,64-2,52 (2 H, m, 2'-H x 2) ; 2,48 (3H, s, S-CH3). RMN 13C (100 MHz, MeOD) 8 160,3 (C2) ; 150,1 (C4) ; 140,7 14 39 3,62 (1 H, m, 3'-H) ; (C6) ; 95,2 (C5) ; 86,0 (C4') ; 85,3 (Cl') ; 59,7 (5'-CH2) ; 44,1 (C3') ; 39,5 (2'-CH2) ; 23,2 (S-CH3). 30 SM (DCI, NH3-isobutane): m/z 369 [M+H]+. 2907786 15 2'-Désoxy-2'-(3-méthylbutyl)thio uridine 33 O HO A une suspension de 2,2'-anhydrouridine (0,5 g ; 2,2 mmol) et de carbonate de potassium anhydre (1,1 g ; 7,9 mmol) dans le diméthylformamide DMF (11 mL) est 5 ajouté le 3-méthylbutariethiol (0,271 g ; 2,6 mmol). La solution est laissée sous agitation et sous argon à 120 C pendant 5 h. Après filtration et rinçage des sels minéraux au dichlorométhane, les solvants sont évaporés sous pression réduite pour donner une huile jaune. Ce résidu est repris dans le dichlorométhane-méthanol (98 : 2) pour être chromatographié sur gel de silice dans un mélange dichlorométhaneméthanol 10 (95 : 5). Le sulfure 33 est obtenu sous la forme d'un solide blanc (0,387 g ; 1,17 mmol ; 54%). F : 66-67 C RMN 1H (200 MHz, DMSO-d6) 8 11, 33 (1 H, s, 3-H) ; 7,86 (1 H, d, J = 8,1 Hz, 6-H) ; 15 6,0 (1 H, d, J = 8,8 Hz, l'-H) ; 5,69 (1 H, d, J= 8,1 Hz, 5-H) ; 5,56 (1 H, d, J= 5,3 Hz 3'-OH) ; 5,06 (1 H, t, J== 5,1 Hz, 5'-OH) ; 4,17 (1 H, m, 3'-H) ; 3,86 (1 H, m, 4'H) ; 3,55 (2 H, m, 5'-H) ; 3,4 (1 H, dd, J = 5,2 Hz, J = 8,75 Hz, 2'-H) ; 2,4 (2 H, m, S-CH2) ; 1,55 (1 H, m, CH-(CH3)2) ; 1,3 (2 H, m, (CH2-CH)) ; 0,7 (6 H, m, (CH3-CH)). RMN 13C (50 MHz, DMSO-d6) S 162,74 (CO) ; 150,6 (CO) ; 140,3 ; 102,3 ; 87,67 ; 20 86,5 ; 72,08 ; 61,35 (5'-CH2) ; 51,7 ; 38,5 (S-CH2) ; 28,4 (CH2-CH) ; 26,7 ; 21,9 ((CH3)2). SM (FAB+, glycérol) m/z 331 [M+H] 219 [M-uracile]+ I1.5 Propriétés des composés de l'invention Les propriétés biologiques des composés de l'invention et les applications pharmaceutiques qui en résultent sont ci-après exposées. Ces propriétés ont été mises en évidence dans des essais où ils ont manifesté un effet antiprolifératif et un effet cytotoxique pour une utilisation dans un traitement 30 anticancéreux ainsi que dans des essais où ils ont manifesté un effet antiviral. 2907786 16 Propriétés dans une application anticancéreuse 1. Description des essais 5 1.1 Effets antiprolifératifs Les composés testés sont soumis à deux essais, un premier essai de mesure de leur influence sur la ribonucléotide réductase et un second essai de mesure de leur influence de l'incorporation de la thymidine tritiée. 10 1.1.1. Mesure des concentrations intracellulaires en 2'-désoxyribonucléotides (dNTP) Le protocole suivi pour effectuer ce test (Roy, B.; Beuneu, C.; Roux, P.; Buc, H.; Lemaire, G.; Lepoivre, M. Simultaneous determination of pyrimidine or purine deoxyribonucleoside triphosphates usine; a polymerase assay. Anal. Biochem. 1999, 15 269, 403-409) consiste à cultiver des cellules humaines de lymphome T CEM-SS en présence des composés testés. Les concentrations en dNTP et en particulier de dATP sont mesurées après24 h d'incubation. Le dATP est le nucléoside triphosphate dont la concentration diminue le plus lors de tests avec les inhibiteurs classiques de ribonucléotide réductase tel que l'hydroxyurée qui a été utilisée comme témoin. 20 La quantification est rapportée au nombre de cellules vivantes dénombrées après coloration au bleu de trypan ou rapporté au nombre de cellules initial (environ 2 millions). Elle est mesurée en % par rapport à une manipulation témoin. 1.1.2. Tests d'incorporation de la thymidine tritiée 25 Ces tests sont réalisés sur la lignée cellulaire L1210 (lymphome de souris) selon un protocole publié (Lepoivre M., Flaman J.-M., Bobé P., Lemaire G., Henry Y. J. Biol Chem. 1994, 269, 21891-21897). Les puits sont ensemencés (10 000 cellules par puits) et après 72 h de culture, la [3H]thymidine ainsi que le composé testé sont ajoutés au milieu de culture. Après 8 heures d'incubation, l'ADN est séparé des autres 30 constituants cellulaires et la quantité de thymidine marquée incorporée est quantifiée et comparée à un témoin (sans composé). 1.2. Effets cytotoxiques L'effet cytotoxique d'un composé est étudié sur des cellules humaines CEM et 35 de carcinome mammaire MCF-7 résistantes ou non à la gemcitabine qui est un nucléoside anticancéreux utilisé en chimiothérapie. 2907786 17 La cytotoxicité (CC50) a été estimée en mesurant la réduction du bromure de 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltétrazolium (MTT) qui est converti en formazan violet insoluble. Pour cela, 100.000 cellules (lignées CEM-SS ou MCF-7 humaines) sont ensemencées par puits dans 100 l de milieu de culture, dans des plaques de 5 microtitration à 96 puits. Après 24h, les produits à tester sont ajoutés dans 100 i et l'incubation est poursuivie 48 à 72h. Puis le MTT est ajouté à raison de 20 pl d'une solution à 5mg/ml dans du PBS. Trois heures plus tard, 100 ul d'une solution de DMF/acide acétique/HC1/SDS (dodécyl sulfate de sodium) sont ajoutés. Après 3h à 37 C, l'absorbance du formazan est mesurée à 590 nm et comparée à celle du témoin 10 non traité. 2. Résultats des essais 2.1. Effets antiprolifératifs 15 2.1.1 Mesure des concentrations intracellulaires en 2'-désoxyribonucléotides (dNTP) Le nucléoside 1 a été testé dans les conditions suivantes. Les effets du composé 1 à 50 M sur les concentrations en 2'- 20 désoxynucléosides 5'-triphosphates (dNTP) nécessaires à la synthèse de l'ADN sont calculés à partir des concentrations en dNTP mesurées après 24h et déterminées en pmol de dNTP/million de cellules. Les pourcentages sont exprimés en % du contrôle avec une moyenne de 4 témoins en tenant compte des numérations et sont comparés à celui d'un agent anticancéreux, l'hydroxyurée (HU), testé à une concentration de 25 63 1.1M. Comme l'indique le tableau 1 ci-dessous, le composé 1 s'est avéré antiprolifératif sur cellules de lymphome T CEM/SS en faisant décroître fortement les concentrations en nucléosides triphosphates nécessaires à la synthèse de l'ADN. 30 Tableau 1 dCTP dATP dGTP Témoin Hydroxyurée, 63 M dTTP dTTP dNTP 2907786 18 % (1 à 50 M) 50 31 42 85 51 24 h 2.1.2. Décroissance de l'incorporation de thymidine tritiée dans des cellules L1210 en % du contrôle Les effets du composé 1 à respectivement 50 M et 200 M sur les concentrations en thymidine tritiée incorporée sont exprimés en % du contrôle Les résultats sont présentés dans le tableau 2. 10 Tableau 2 1 à 50 M 62 1à200 M 14 Une inhibition (diminution de 38 et 86% pour les concentrations respectivement de 50 M et 200 M) de l'incorporation de thymidine tritiée dans 15 l'ADN est observée en présence du dérivé 1 ce qui signifie qu'il inhibe cette synthèse et donc agit sur la prolifération cellulaire. 2.2 Effets cytotoxiques 20 2.2.1 Composés de formule (II) où R1 représente CH2CH2Si(CH3)3 Les composés 1 et 3 à 8 répondant à la formule (II) ci-dessus ; le composé 2 correspondant au composé non silylé, il répond à la formule (II) cidessus où R1 représente CH2CH2CH(CH3)2 et a également été testé pour observer une influence éventuelle du silicium. Ces composés ont été évalués pour leur cytotoxicité sur cellules 25 humaines CEM et cellules de carcinome mammaire MCF-7 résistantes (MCF-7*) ou non (MCF-7) à la gemcitabine qui est un nucléoside anticancéreux utilisé en chimiothérapie. Les résultats sont présentés dans le tableau 3 ci-dessous : 5 30 Tableau 3 2907786 19 Composés 3 1 2 5 4 7 6 8 CC50 M 13 156 200 217 82 63 200 200 CEM _ CC50 M 40 69 200 41%de 33%de 120 MCF 7 cytotoxicité cytotoxicité à 200 M à 200 M EC50 M 37 MCF-7* _ EC50 M 41 MCF-7* 2.2.2 Composés disulfure de formule (II) où x est nul et R1 représente SR2 Les composés disulfure insaturés 11, 12 et 13 répondant à la formule ci-dessus 5 ont manifesté une cytoxicité sur des lignées cellulaires humaines CEM et des lignées cellulaires de carcinome mammaire MCF-7, comme le montrent les résultats dans le tableau 4 ci-dessous : Tableau 4 Composé 11 12 13 EC50 M 200 46 41 CEM puis plafond puis plafond EC50 M 85 CEM puis plafond EC50 M 194 MCF-7 EC50 M 177 MCF-7* EC50 M 194 MCF-7* Les composés disulfure insaturés :L4, 15, 16 et 17 répondant à la formule (II) cidessus ont manifesté un effet cytotoxique sur lymphocytes humains T4 CEM et cellules humaines Molt4/C8 et cellules de souris leucémiques (L1210) et de cancer mammaire 15 de souris (FM3A), comme le montrent les résultats dans le tableau 5 ci-dessous : human T4-lymphocyte CEM and Molt4/C8 cells, murine leukemia (L1210) and murine mammary carcinoma cells (FM3A) 10 2907786 20 Tableau 5 Composé L1210/0 FM3A/0 Molt4/C8 CEM HeLa 14 31 3 39 3 12 5 31 1 7.4 1.6 15 42 3 175 30 30 15 28 0 31 1 16 42 4 45 2 28 10 41 1 16 2 17 43 5 206 25 42 1 40 4 29 9 2.2.3 Composés disulfure saturés de formule (I) 5 Les composés disulfure 18, 19, 20, 21, 22 et 23 répondant à la formule (I) ci-dessus ont manifesté un effet cytotoxique sur les cellules CEM, comme le montrent les résultats dans le tableau 6 ci-dessous : Tableau 6 Composé 18 19 20 21 22 23 EC50 M 152 200 48 200 21 66 CEM EC50 M 46 CEM Les composés disulfure 18, 20, 21 et 22 précités, ainsi que les composés disulfure 24, 25, 26 et 27 ont manifesté un effet cytotoxique sur les cellules L1210/0, FM3A/0, Molt4/C8, CEM et HeLa, comme le montrent les résultats dans le tableau 7 15 ci-dessous : Tableau 7 Composé L1210/0 FM3A/0 Molt4/C8 CEM HeLa 18 44 1 >500 66 9 187 1 56 8 10 2907786 21 20 43+5 299 + 45 34+6 128 + 18 40+7 24 32+0 286+24 28+7 44+1 23+2 21 26+3 > 500 128 + 33 347+ 71 > 100 25 32+3 148+ 16 29+2 34+0 28+ 12 26 33+7 220+19 31+5 32+1 15+0 22 45+1 244+49 55+19 121+18 39+10 27 65+9 > 500 163 + 41 437 + 71 > 100 On observe que les effets cytotoxiques sont dépendants de la nature de la chaîne latérale des disulfures et des lignées cellulaires. 2907786 Propriétés antivirales 1. Description des essais Le test d'évaluation est décrit dans Roy, B. ; Chambert, S.; Lepoivre M.; 5 Aubertin, A.-M.; Balzarini, J.; Décout, J.-L., Deoxyribonucleoside 2'- or 3'-mixed disulfides: prodrugs to target ribonucleotide reductase and/or to inhibit HIV reverse transcription. J. Med. Chem. 2003, 46, 2565-2568. La toxicité et les activités antivirales ont été mesurées à différentes concentrations, leur évolution en fonction de la concentration a permis d'évaluer : 10 - la concentration à laquelle 50% des cellules sont mortes en l'absence de virus (CC 50) pour chacun des composés testés, à partir de l'évolution de l'absorbance à 540 nm du formazan en fonction de la concentration en composé testé - la concentration en composé qui conduit à une diminution de 50% de l'activité de la transcriptase inverse virale (EC50). Cette concentration est déterminée à 15 partir de la courbe représentant l'évolution du pourcentage d'activité transcriptase inverse restante (définie comme étant le rapport de l'activité de la transcriptase inverse en présence du composé à tester sur celle des cellules non traitées) en fonction de la concentration en composé testé. Les composés dérivés des familles suivantes ont montré des effets anti-HIV 20 (HIV 1 et 2) avec une toxicité modulée par le substituant R. O NH, 71 NH HOC HOC N), '0 22 SSR 23 R=CH3 SSR 19 25 2. Résultats des essais 2.1. Effets antiviraux Les composés identifiés dans les tableaux ci-après ont été testés et ont manifesté des effets anti-HIV-1 et anti-HIV-2. 30 Dans les tableaux ci-après : EC50 : concentration requise pour protéger de 50% les cellules CEM contre la cytopathogénicité du HIV 5 2907786 23 CC50 : concentration cytotoxique ou concentration requise pour réduire de 50% la viabilité des cellules CEM Première et deuxième séries Composé 18 19 EC50 M 4,0 0.0 3,3 2,3 HIV-1 Tenofovir : 5,5 2,1 Tenofovir 5,5 2,1 EC50 M 6,5 0,7 10,5 9,3 HIV-2 Tenofovir : 2,6 2,0 Tenofovir : 2,6 2,0 Composé 18 20 24 21 22 27 EC50 M 10.3 5.7 12.5 3.5 8 :3 13.5 3.0 25 0 27.5 3.5 HIV-1 EC50 M 11.7 2.9 15 7 > 10 14 7 17.5 3.5 27.5 3.5 HIV-2 CC50 M 107 7 53 7 23.3 0.6 > 250 103 4 > 250 Troisième série Composé 18 20 24 21 22 27 EC50 M 22.5 3.5 17.5 3.5 > 10 17.5 3.5 20 0 20 0 HIV-1 EC5â1tM 17.5 11 20 7 > 10 15 7 27.5 3.5 27.5 3.5 HIV-2 *CEM/TK->50 >50 >10 >50 22.5 3.5 150 0 EC50 M HIV-2 2907786 24 • Effet dans des cellules CEM n'exprimant pas l'activité thymidine kinase (CEM/TK-, cellules ne présentant pas d'activité thymidine kinase). Composé 16 17 30 31 32 19 EC50 tM 37.5 17.7 6.5 4.9 3.0 0.0 > 10 15.0 0.0 20 7 HIV-1 EC50 M 9.5 7.8 >10 4.5 2.1 6.5 0.7 15.0 0.0 20 7 HIV-2 *CEM/TK- 32.5 25 > 10 > 10 > 10 > 50 45 21 EC50 M HIV-2 5 Les résultats mentionnés dans ces tableaux montrent un effet anti-VIH-1 et anti-VIH-2 de la majorité des nucléosides testés. La forte diminution des effets antiviraux dans les cellules CEM/TK- confirme que les nucléosides doivent être phosphorylés in vivo pour être actifs. La toxicité des composés actifs dépend fortement de la nature de la chaîne latérale portée par la fonction disulfure. 10 2.2. Effet inhibiteur de la transformation de cellules C3H/3T3 d'embryons de souris induite par le Moloney Sarcoma Virus (Modèle d'infection par le VIH) Composé 18 19 20 24 21 25 26 14 15 PMÉA PMEA EC50 8,3 48 2.2 1,0 5,.9 0,89 1,1 15 8,3 0,23 0,53 2,3 2 0,3 0,5 0,5 +0,36 0,8 0 0,4 0,03 0,13 MIC >100 >100 100 100 >100 20(>4) 20 100 100 >10 >20 ( g/ M) (>20) (>20) (>4) (>20) (>20) EC50 : concentration efficace à 50% 15 MIC : concentration inhibitrice minimale Ces données confirment l'effet anti-rétroviral marqué des composés évalués. 2907786 25 III-Procédé d'obtention d'un composé de formule (IV) selon le procédé de l'invention Le procédé décrit précédemment est ci-dessous illustré pour la synthèse de la 2',3'-Didéshydro-2',3'-didésoxy-2'-méth.ylthiouridine 31 0 SMe Ce composé est préparé à partir du disulfure de 2',3'-didéshydro-2',3'-didésoxyuridin-2'-yle et de 4-nitrophényle 40 dont la synthèse à partir d'un halogénure 10 de sulfényle stable est décrite ci-dessous. Disulfure de 2',3'-didéshydro-2',3'-didésoxyuridin-2'-yle et de 4-nitrophényle 40 5 HOC N O S-S 15 NO240 A une solution de 2' ,3 '-didéshydro-2' ,3 '-didésoxy-2'-(2-triméthylsilyl)éthyl)thiouridine (200 mg ; 0,58 mmol) dans le dichlorométhane anhydre (6 mL), maintenue sous argon, est ajouté le chlorure de 4-nitrobenzène sulfényle (333 mg ; 1,75 mmol). Le mélange est laissé sous agitation pendant 15 heures puis le solvant 20 est évaporé. Le résidu obtenu est repris dans le minimum de dichlorométhane pour être chromatographié sur gel de silice dans un mélange dichlorométhane-méthanol (98 : 2) puis (95 : 5) pour donner le composé 40 (152 mg ; 0,38 mmol ; 66 %) sous la forme d'une poudre jaune. 25 RMN 1H (400 MHz, CDC13) S 9,40 (1 H, s, NH) ; 8,16 (2 H, m, Ar) ; 7,65 (1 H, d, J = 8,0 Hz, 6-H ) ; 7,60 (2 H, m, Ar) ; 7,04 (1 H, m, l'-H);6,48(1 H, m, 3'-H) ; 5,70(1 H, d, J = 8,4 Hz, 5-H) ; 4,99 (1 H, ls, 4'-H) :; 3,94 (1 H, m, 5'-H) ; 3,83 (1 H, m, 5'-H). 2907786 26 RMN 13C (100 MHz, CDC13) 8 162,9 (C2) ; 150,3 (C4) ; 146,8 (C-NO2) ; 143,9 (C-SS) ; 140,8 (C6) ; 135,1 (C2') ; 131,8 (C3'); 126,6 (2 C, Ar) ; 126,3 (2 C, Ar) ; 102,8 (C5) ; 89,7 (Cl') ; 87,0 (C4') ; 63,0 (5'-CH2). SM (DCI, NH3-isobutane) : m/z 396 [M+H]+ ; 413 [M+NH3]+ 5 A une solution de disulfure de 2',3'-didéshydro-2',3'-didésoxyuridin-2'-yle et de 4-nitrophényle 40 (30 mg, 0,08 mmol) dans du méthanol anhydre est ajouté du DTT (6,3 mg, 0,09 mmol). La solution est maintenue sous agitation pendant 30 minutes puis de l'iodure de méthyle (50 L, 0,8 mmol) est ajouté en présence de NaHCO3 (8 mg, 10 0,10 mmol). Après 15 heures, le mélange réactionnel est évaporé puis le résidu est chromatographié sur gel de silice dans un mélange dichlorométhane-méthanol (95 : 5). Le composé insaturé méthylé 31 est obtenu sous la forme d'un solide blanc (6 mg, 0,023 mmol, 31%). 15 RMN 1H (400 MHz, CDC13) 8 7,60 (1 H, d, J = 8 Hz, 6-H) ; 6,93 (1 H, m, l'-H) ; 5,76 (1 H, s, 3'-H) ; 5,73 (1 H, d, J = 7,6 Hz, 5-H); 4,99 (1 H, m, 4'-H) ; 3,94 - 3,76 (2 H, m, J = 3,2 Hz, J = 11,6 Hz, 5'-H x 2) ; 2,41 (Me). RMN 13C (100 MHz, CDC13) 8 162,8 (C2) ; 150,5 (C4) ; 141,8 (C6) ; 136,4 (C3') ; 122,3 (C2') ; 102,8 (C5) ; 90,2 (Cl') ; 87,2 (C4') ; 63,6 (5'-CH2) ; 15,1 (Me). 20 SM (DCI, NH3-isobutane) : m/z 257 [M+H]+. 25 IV- Autre procédé de l'invention H BocHN,,, COOMe H BocHN,,, ' COOMe 7 5iMe3 H AIBN, 70 C BocHN,,,, COOMe tube scellé ArSCI, bCM, 48h NO2 5H ai% Sulfure silylé en série cystéine 35 30 2907786 34 35 Une solution de dérivé cystéine protégé 34 (1 g, 4,25 mmol) et de triméthylvinylsilane (740 mL, 5,1 mrnol) est agitée en présence d'une quantité 5 catalytique (10%) d'AIBN à 70 C dans un tube scellé pendant 24h. Le mélange réactionnel est ensuite évaporé sec pour donner le composé 35 (1,1 g, 81%) sous la forme d'une huile jaune claire. RMN 1H CDC13 5,40 (1H, d, NH), 4,52 (1H, m, Ha), 3,72 (3H, s, CH3), 2,95 (2H, d, CH2S), 2, 52 (2H, m, CH2S), 1,41 (9H, s, (CH3)3), 0,81 (2H, m, CH2Si), 0,12 10 (9H, s, (CH3)3Si). RMN 13C CDC13 8 171,5 (C=O), 155,0 (C=O), 79,8 (C Boc), 53,2, 52,3 (2 CH2S), 34,2 (CH), 28,2 (3 CH3 Boc), 17,2 (CH2Si), -1,9 (3 CH3Si). HRMS pour C14H29NO4NaSSi [M+Na]+: théorique: 358,1484 ; trouvée : 358, 1483 15 Disulfure de cystéine et de 4-nitrophényle 36 27 BocHN H BocHN, H ---CO2Me CO2Me SH NO2 20 A une solution de cystéine sulfure silylée 35 (100 mg, 0,31 mmol) dans le dichlorométhane anhydre (5 mL) est ajouté le chlorure de 4-nitrobenzènesulfényle (177 mg, 0,93 mmol) puis le milieu réactionnel est agité à température ambiante sous atmosphère inerte pendant 48 heures. Le mélange est ensuite dilué avec du dichlorométhane, lavé avec de l'eau, puis évaporé à sec. Le résidu est purifié par 25 chromatographie sur gel de silice dans un mélange cyclohexane-dichlorométhane (50-50 puis 70-30 puis 0-100) pour donner le composé 36 (79 mg, 69%) sous la forme d'une huile jaune claire. RMN 1H CDC13 8 8,22 (2H, d, Harom), 7,66 (2H, d, Harom), 5,31 (1H, m, NH), 4,62 (1H, m, Ha), 3,78 (3H, s, CO2CH3), 3,32 (1H, dd, CH2), 3,19 (1H, dd, CH2), 1,46 30 (9H, s, (CH3)3). 2907786 28 RMN 13C CDC13 8 107,7 (C=O), 154,8 (CùO), 146,4, 145,9 (2C arom), 126,2, 124,1 (2x2C arom), 80,5 (C(CH3)3), 52,7 (CO2CH3), 41,2 (CH2S), 28,2 (3 CH3). 2907786 29 Les composés identifiés dans la description et les revendications par leur référence sont ci-après décrits. COMPOSES DE FORMULE (II) 5 Composés sulfure insaturés Les composés silylés 1, 3-8 sont silylés, les composés 2 et 31 ne sont pas silylés O o NH HO, N O O /OI S\ / Si xO NH HO NLO HO O\/ S 2 o SMe NH2 NH NH CN 0 HO\/0~ HO~0` L s / 5 ,Si\ 1 i S 3 /Si , 4 ,Si\ O O O NH NH H01 N O H01 N O HO 6 /S( 7 10 12 13 Composés disulfure insaturés 0 NH HO _N 0 S-S+CI Cl HO NH HO \ N S-S 02 0, O2N 17 14 15 16 15 2907786 30 COMPOSES DE FORMULE (III) 0 NH2 r ~N OH -S-S (r NH "O\ O _N •--p 0 -s-s 5 18 19 20 Br (/ `NH HO\ 0 _N~ `(Yy 0 S-S-L'OH QH _ N~ `i\/ O -s-s 21 22 23 OZ NH HO O N- \-j 0 NH HO _ N ~~YYYUO s-s " "O\ O _N 0 s-s 02N 10 24 25 26 " HOC O ~{~y 0 27 ' NH HO N'4 j 0 28 NH Ir NH HO S-S-N"/\-OH 29 30 NH2.HCI S-S-\/w\ 15 Autres composés de l'invention : 11 NO2 36 REVENDICATIONS 1. Composé disulfure de nucléoside répondant à la formule (I) suivante : HO SSR dans laquelle : quand B représente la thymine, R est choisi parmi CH2-CH=CH2, C4H9, CH2CH2OH et CH2CH2NH2.HC1, et quand B représente une base nucléotidique choisie parmi l'uracile, la cytosine et la 5-bromouracile, R représente CH3. 2. Composition pharmaceutique comprenant, à titre de principe actif, au moins un composé choisi parmi les composés répondant à la formule (II) suivante : où l'atome S est lié au carbone en 2' ou au carbone en 3' du nucléoside, et les composés répondant à la formule (III) suivante : SSR formules dans lesquelles B représente une base nucléotidique, naturelle ou modifiée, x est égal à 0, 1 ou 2, et R1, R représentent un groupement carboné ou un reste moléculaire hydrocarboné pouvant être substitué et/ou. interrompu par un ou des atomes et/ou par un 25 ou des groupements comprenant un ou des atomes, lesdits atomes étant choisis parmi N, O, P, S, Si, X où X représente un halogène, et un excipient pharmaceutiquement acceptable. 3. Composition selon la revendication 2, caractérisée en ce que le composé répond à la formule (II) dans laquelle RI est choisi parmi R3-Si(R4)(R5)(R6) où R3 30 représente une chaîne hydrocarbonée de deux atomes de carbone, éventuellement Hom Base S(0),R1 HO 2907786 32 insaturée et/ou substituée, et R4, R5 et R6, identiques ou différents, représentent chacun, indépendamment les uns des autres, un groupement hydrocarboné. 4. Composition selon la revendication 3, caractérisée ce que R3 représente CH2-CH2 et R4, R5 et R6 sont identiques et représentent CH3. 5 5. Composition selon la revendication 3 ou 4, caractérisée en ce que B est choisie parmi les bases pyrimidiques, naturelles ou modifiées. 6. Composition selon l'une quelconque des revendication 3 à 5, caractérisée en ce que l'atome S est lié au carbone en 2' du nucléoside. 7. Composition selon l'une quelconque des revendications 3 à 6, 10 caractérisée en ce que le composé répond à la formule (II) dans laquelle x est égal à O. 8. Composition selon la revendication 7, caractérisée en ce que le composé est choisi parmi les composés suivants : 2' ,3 ' -D i déshydro-2 ' ,3'-didésoxy-2'-(2-tr:iméthylsilyl)éthylthiouridine 1 2',3'-Didéshydro-2',3'-didésoxy-2'-(3-méthylbutyl)thiouridine 2 15 2 ' ,3 '-Didéshydro-2 ' ,3 ' -d idé soxy-2 '-(2-(triméthylsilyl)éthylthiothymidine 3 2 ' ,3 '-Didéshydro-2 ' ,3 ' -d idé soxy-3 ' -(2-triméthylsilyl)éthylthiothymidine 4 2' ,3'-Didéshydro-2',3'-didésoxy-2'-(2-tri:méthylsilyl)éthylthiocytidine 5 9. Composition selon l'une quelconque des revendications 3 à 6, caractérisée en ce que le composé répond à la formule (II) dans laquelle x est égal à 1 20 10. Composition selon la revendication 9, caractérisée en ce que le composé est choisi parmi les composés suivants : Sulfoxyde de la 2',3'-didéshydro-2',3'-didésoxy-2'-(2-triméthylsilyl)éthyl thiothymidine 6 Sulfoxyde de la 2',3'-didéshydro-2',3'-didésoxy-2'-(2-triméthylsilyl)éthylthiouridine 8 11. Composition selon l'une quelconque des revendications 3 à 6, caractérisée en ce que le composé répond à la formule (II) dans laquelle x est égal à 2. 12. Composition selon la revendication 11, caractérisée en ce que le composé est la sulfone de la 2',3'-didéshydro-2',3'-didésoxy-2'-(2-triméthylsilyl)éthyl)thiothymidine 7. 13. Composition selon la revendication 3, caractérisée en ce que x est égal à 0 et Ri représente SR2 où R2 représente un groupement carboné ou un reste moléculaire hydrocarboné pouvant être substitué et/ou interrompu par un ou des atomes et/ou par un ou des groupements comprenant un ou des atomes, lesdits atomes étant choisis parmi N, O, P, S, Si, X où X représente un halogène. 2907786 33 14. Composition selon la revendication 13, caractérisé en ce que R2 est choisi parmi les groupements ortho-nitrophényle, para-nitrophényle et trichlorométhyle. 15. Composition selon la revendication 13 ou 14, caractérisée en ce que B 5 est chosie parmi les bases pyrimidiques, naturelles ou modifiées. 16. Composition selon l'une quelconque des revendications 13 à 15, caractérisée en ce que l'atome S est lié au carbone en 2' du 2',3'-didéshydro-2',3'-didésoxyribose. 17. Composition selon la revendication 16, caractérisée en ce que le 10 composé est choisi parmi. : Disulfure de 2',3'-didéshydro-2',3'-didésoxythymidin-2'-yle et de trichlorométhyle 12 Disulfure de 2',3'-didéshydro-2',3'-didésoxyuridin-2'-yle et de trichlorométhyle 13 Disulfure de 2',3'-didéshydro-2',3'-didésoxythymidin-2'-yle et de 4-nitrophényle 14 Disulfure de 2',3'-didéshydro-2',3'-didésoxythymidin-2'-yle et de 2-nitrophényle 15 15 Disulfure de 2',3'-didéshydro-2',3'-didésoxyuridin-2'-yle et de 4-nitrophényle 16 Disulfure de 2',3'-didéshydro-2',3'-didésoxyuridin-2'-yle et de 2-nitrophényle 17 18. Composition selon la revendication 2, caractérisé en ce que le composé répond à la formule (III) dans laquelle R est choisi parmi CH2-CH=CH2, C4H9, CH2CH2OH et CH2CH2NH2.HC1, et les groupements ortho-nitrophényle, para- 20 nitrophényle et trichlorométhyle. 19. Composition selon la revendication 18, caractérisée en ce que B représente une base pyrimidique, naturelle ou modifiée. 20. Composition selon la revendication 19, caractérisé en ce que le composé est choisi parmi les composés suivants : 25 Disulfure de 3'-désoxythymidin-3'-yle et d'allyle 20 Disulfure de 3'-désoxythymidin-3'-yle et de 2-hydroxyéthyle 21 Disulfure de 3'-désoxythymidin-3'-yle et de trichlorométhyle 22 Disulfure de 3'-désoxythymidin-3'-yle et de butyle 24 Disulfure de 3'-désoxythymidin-3'-yle et de 4-nitrophényle 25 30 Disulfure de 3'-désoxythymidin-3'-yle et de 2-nitrophényle 26 Disulfure de 3'-désoxythymidin-3'-yle et du chlorohydrate de 2-aminoéthyle 27 Disulfure de 3'-désoxythymidin-3'-yle et d'hexyle 31 Disulfure de 3'-désoxythymidin-3'-yle et d'octyle 30 Disulfure de 3'-désoxythymidin-3'-yle et de 6-hydroxyhexyle 32 Disulfure de 2',3'-didésoxycytidin-3'-yle et de méthyle 19 Disulfure de 5-bromo-2',3'-didésoxyuridin-3'-yle et de méthyle 23 2907786 34 21. Utilisation d'un composé choisi parmi les composés répondant à la formule (II) suivante : HOC Base O SSR formules dans lesquelles 10 B représente une base nucléotidique, naturelle ou modifiée, x est égal à 0, 1 ou 2, et R1, R représentent un groupement carboné ou un reste moléculaire hydrocarboné pouvant être substitué et/ou interrompu par un ou des atomes et/ou par un ou des groupements comprenant un ou des atomes, lesdits atomes étant choisis parmi 15 N, O, P, S, Si, X où X représente un halogène, En tant que principe actif thérapeutique. 22. Utilisation selon la revendication 21, caractérisée en ce que le composé est défini à l'une quelconque des revendications 3 à 20. 23. Utilisation d'un composé choisi parmi 20 les composés répondant à la formule (II) suivante : S(0)XR1 5 où l'atome S est lié au carbone en 2' ou au carbone en 3' du nucléoside, et les composés répondant à la formule (III) suivante : HO Base 25 S(0),R1 où l'atome S est lié au carbone en 2' ou au carbone en 3' du nucléoside, et les composés répondant à la formule (III) suivante : HO,, B J SSR formules dans lesquelles B représente une base nucléotidique, naturelle ou modifiée, x est égal à 0, 1 ou 2, et 20 25 2907786 35 R1, R représentent un groupement carboné ou un reste moléculaire hydrocarboné pouvant être substitué et/ou interrompu par un ou des atomes et/ou par un ou des groupements comprenant un ou des atomes, lesdits atomes étant choisis parmi N, O, P, S, Si, X où X représente un halogène, 5 pour obtenir un médicament dans un traitement anti-cancéreux. 24. Utilisation selon la revendication 23, caractérisée en ce que le composé est tel que défini dans l'une quelconque des revendications 3 à 17. 25. Utilisation selon la revendication 23 ou 24, caractérisée en ce que ledit composé a un effet antiprolifératif et/ou un effet cytotoxique. 10 26. Utilisation d'un un composé choisi parmi les composés répondant à la formule (II) suivante : HO Base S(0),R1 où l'atome S est lié au carbone en 2' ou au carbone en 3' du nucléoside, 15 et les composés répondant à la formule (III) suivante : SSR formules dans lesquelles B représente une base nucléotidique, naturelle ou modifiée, x est égal à 0, 1 ou 2, et R1, R représentent un groupement carboné ou un reste moléculaire hydrocarboné pouvant être substitué et/ou interrompu par un ou des atomes et/ou par un ou des groupements comprenant un ou des atomes, lesdits atomes étant choisis parmi N, O, P, S, Si, X où X représente un halogène, pour obtenir un médicament dans un traitement antiviral. 27. Utilisation selon la revendication 26, caractérisée en ce que le traitement antiviral est un traitement anti-VIH1 ou anti-VIH2. 28. Utilisation selon la revendication 26 ou 27, caractérisé en ce que le composé est tel que défini dans l'une quelconque des revendications 18 à 20. HO