FR 2901138 A1 20071123 FR 0604527 A 20060519 COMPOSITIONS DE MICRO-ORGANISMES PROBIOTIQUES, GRANULES LES CONTENANT, LEUR PROCEDE DE PREPARATION ET LEURS UTILISATIONS. La présente invention a pour objet une composition probiotique ou prémix comprenant des micro-organismes probiotiques vivants ou revivifiables et des parois de levures et/ou des levures désactivées, la présence des parois de levures et/ou de levures désactivées permettant notamment la stabilisation des micro-organismes probiotiques. Cette composition ou prémix peut être utilisé pour la préparation de granulés qui seront destinés à l'alimentation animale. Le terme probiotiques désigne des micro-organismes vivants, qui lorsqu'ils sont ingérés en quantité suffisante exercent un effet positif sur l'organisme hôte en améliorant les propriétés de sa flore intestinale au-delà des effets nutritionnels traditionnels. Ils constituent une alternative à l'emploi des antibiotiques dans l'alimentation animale. Il s'agit le plus souvent de bactéries ou de levures présentes soit dans les aliments soit dans les compléments alimentaires. Il existe quatre grands types de probiotiques : - les ferments lactiques (les lactobacilles et les coques), - les bifidobactéries d'origine humaine ou animale, - les différentes levures dont les levures de type Saccharomyces, - les autres bactéries sporulées, dont Bacillus subtillis et cereus. Les micro-organismes tués par la chaleur ne répondent 30 pas à la définition des probiotiques, même si certains effets thérapeutiques ont pu leur être attribués. Par extension, le terme probiotiques désigne également les aliments contenant de tels micro-organismes. Les probiotiques sont de plus en plus utilisés tant en alimentation humaine qu'en alimentation animale, notamment comme substitut aux antibiotiques compte tenu notamment d'un retour à une alimentation plus saine, plus naturelle et plus respectueuse de l'environnement. En nutrition animale, ces micro-organismes sont en général ajoutés dans un aliment granulé par l'intermédiaire d'un prémix contenant également des vitamines, des oligo-éléments et des acides aminés. L'introduction des micro-organismes probiotiques dans les granulés n'est cependant pas aisée, en effet, les micro-organismes probiotiques sont le plus souvent détruits au cours du processus de granulation. Cette étape de la fabrication des granulés est effectuée en présence de vapeur à des températures comprises entre 60 C et 100 C et sous des pressions allant de 0,5 à 3,5 bars; température et conditions d'humidité dans lesquelles les micro-organismes sont généralement détruits. Dans la demande de brevet EP 0 694 610, la résistance à la granulation de levures de l'espèce Phaffia rhodozyma qui produisent un colorant, l'astaxanthirie, et sont utilisées dans l'alimentation piscicole pour donne_ la couleur rouge aux saumons et truites d'élevage, a été améliorée par séchage en présence d'un sucre comme le glucose. Cependant, il ne s'agissait pas là de levures probiotiques qui doivent rester vivantes jusqu'à leur ingestion par les animaux afin de remplir leurs fonctions. De façon surprenante et inattendue, les inventeurs ont trouvé que des micro-organismes probiotiques pouvaient présenter une stabilité améliorée dans les prémix au cours du temps par mélange avec des parois de levures et/ou des levures désactivées en lieu et place des autres supports de prémix traditionnellement utilisés tels la farine de blé où le carbonate de calcium. Cette stabilité améliorée au cours du temps les rendant alors plus résistants à la granulation. L'utilisation de parois de levures dans le domaine de la pharmacologie et de l'agroalimentaire a déjà été décrite. Ces parois sont utilisées en tant qu'excipient dans la fabrication de comprimés pharmaceutiques, notamment comme agent liant à propriétés désintégrantes (Ozeki et al. AAPS PharmSciTech, 2003;4(3):E41) ou encore comme composant de produit d'enrobage (EP 1 159 882, Yuasa et al. Int J. Pharm., 2002, Apr 26;237(1-2): 15-22). A la connaissance de la Société Demanderesse, la possibilité de les utiliser pour améliorer la stabilité de micro-organismes vivants ou revivifiables n'a cependant pas à ce jour été envisagée. Il existe donc un réel besoin en micro-organismes probiotiques qui soient stables au cours du temps de telle sorte que l'effet escompté sur la santé de l'animal qui les ingère soit réel. L'invention a donc pour objet une composition probiotique ou prémix comprenant : des micro-organismes probiotiques vivants ou revivifiables, des parois de levures et/ou des levures désactivées, et éventuellement, un complément nutritionnel comprenant notamment des vitamines et/ou des oligoéléments et/ou des acides aminés et/ou d'autres additifs destinés à l'alimentation animale. Dans la présente invention, on entend par micro-organismes revivifiables ou viables des micro-organismes qui, en présence d'un milieu nutritif retrouvent leur capacité à se diviser et former des colonies. Selon un mode de réalisation particulier, ladite composition, comprend : de 0,5 à 75 de préférence 5 à 30 % de micro-organismes vivants ou revivifiables, de 10 à 95%, de préférence 15 à 80% et plus préférentiellement encore de 25 à 75 % de parois de levures et/ou de levures désactivées, de 0 à 95 de préférence de 5 à 80% de complément nutritionnel, les pourcentages étant exprimés en poids sec par rapport au poids total de la composition. Dans le cadre de la présente invention, on désigne par micro-organismes probiotiques toute levure présentant des propriétés probiotiques ainsi que les probiotiques bactériens comme les ferments lactiques et plus particulièrement lactobacilles et les bifidobactéries et à l'exception des bacillis. A titre d'exemple, on peut citer les levures probiotiques choisies dans le groupe comprenant les levures du genre Saccharomyces, de préférence de l'espèce Saccharomyces cerevisiae, ou du genre kluyveromyces telle que la Kluyveromyces marxianuset leurs mélanges. Des exemples préférés de souches de Saccharomyces cerevisiae sont la souche Saccharomyces cerevisiae Sc47 déposée auprès du NCYC sous le numéro 47, la souche Saccharomyces cerevisiae déposée auprès de la collection Pasteur (CNCM) sous le numéro I-1077, la souche Saccharomyces cerevisiae déposée auprès de la collection Pasteur (CNCM) sous le numéro I-1079, la souche Saccharomyces cerevisiae déposée auprès de la collection MUCL sous le numéro 39 885, la souche Saccharomyces cerevisiae déposée auprès de la collection CBS sous le numero 39 493.94, la souche Kluyveromyces marxianus déposée auprès de la collection MUCL sous le numéro 39434, et leurs mélanges. De façon tout à fait préférentielle la composition selon la présente invention comprend des levures correspondant à la souche Saccaharomyces cerevisiae Sc47 déposée auprès du NCYC sous le numéro 47. Ainsi, selon un mode de réalisation tout à fait particulier, ladite composition probiotique ou prémix comprend : ù de 0,5 à 75 de préférence 5 à 30 % de levures vivantes ou revivifiables, ù de 10 à 80%, de préférence 25 à 50 % de parois de levures et/ou de levures désactivées, ù de 0 à 95 de préférence 5 à 80 % de complément 15 nutritionnel, les pourcentages étant exprimés en poids sec par rapport au poids total de la composition. Cette composition est particulièrement adaptée à l'alimentation des animaux monogastriques. 20 Les parois de levures, quant à elles, peuvent être choisies parmi toutes sortes de levures de qualité alimentaire, par exemple, Saccaharomyces cerevisiae. Plus particulièrement, les parois de levure proviennent des 25 levures commercialisées sous les marques PRONARDY , SAFMANNAN , ou encore BIOMOS par respectivement les sociétés Prodessa, Biospringer et Alltech. Les parois de levures peuvent être obtenues selon les procédés connus de l'homme du métier, on citera plus 30 particulièrement l'autolyse des cellules de levures suivie de la séparation par des moyens physiques de la partie insoluble, contenant les parois, de la partie soluble. 6 2901138 Dans le cadre de lâ prés-'ente invention, les levures désactivées sont considérées comme étant des levures dénuées de tout pouvoir ferment. N'importe quel type de levures désactivées peut être utilisé pour autant qu'il 5 soit de qualité alimentaire, par exemple les Saccharomyces. Elles sont obtenues selon les procédés connus de l'homme du métier, et plus particulièrement par des traitements thermiques. Selon un mode de réalisation tout à fait avantageux 10 de l'invention, les levures désactivées ont un taux de matière sèche supérieure à 95%. Lorsqu'un mélange de levures désactivées et de parois de levures est utilisé, l'origine des levures peut être identique ou différente. La composition probiotique de l'invention présente une homogénéité très satisfaisante. Sans vouloir être liés par aucune théorie, la présence des parois de levure et/ou des levures désactivées dans la composition ou prémix selon l'invention permet de stabiliser les micro-organismes probiotiques, par une diminution de la teneur en eau des micro-organismes probiotiques et une stabilisation de cette teneur en eau au cours du temps. Cette teneur en eau augmente par contre fortement lorsqu'on utilise un support de prémix classique tel que décrit dans l'art antérieur et comprenant notamment une farine de blé ou un carbonate de calcium. De plus, l'usage du carbonate peut engendrer des problèmes d'abrasivité et de ségrégation. Ainsi selon un mode de réalisation particulier, la variation du taux de matière sèche des micro-organismes probiotiques, VA, mesurée selon le Test A suivant est positive. Test A : Au temps To, c'est-à-dire avant le mélange des micro- organismes probiotiques avec les parois de levures et/ou levures désactivées, la teneur en matière sèche des micro-organismes probiotiques est mesurée par la méthode ISO 1741. On obtient une valeur MS0. Au temps T= 14 jours, c'est-à-dire 14 jours après le mélange des micro-organismes probiotiques avec les parois de levures et/ou levures désactivées, la teneur en matière sèche des microorganismes probiotiques est mesurée. On obtient une valeur MST. On calcule alors V = [(MST - MSo) /MSo] x 100. De façon préférée, la variation du taux de matière sèche des micro-organismes probiotiques V est supérieure à 0,5%, de préférence supérieure à 1%. Selon un mode de réalisation particulier, la composition ou prémix selon l'invention comprend en outre un complément nutritionnel comprenant notamment des vitamines et/ou des oligoéléments et/ou des acides aminés et/ou d'autres additifs destinés à l'alimentation animale. Les vitamines entrant dans la composition sont choisies dans le groupe comprenant : la vitamine A, la vitamine D3, la vitamine E, les vitamines B1, B2, B5, B6, B12, C, PP, la biotine, l'acide folique, la choline, la vitamine K3, de l'acide panthoténique, et leurs mélanges. Les oligoéléments entrant dans la composition peuvent être des sels minéraux de qualité alimentaire. Ils sont choisis dans le groupe comprenant . le cuivre, le zinc, le fer, le manganèse, l'iode, le sélénium, et leurs mélanges. Les acides aminés entrant dans la composition sont choisis dans le groupe comprenant : la méthionine, la lysine, la L-thréonine, le tryptophane, et leurs mélanges. La composition ou prémix prcbiotique décrite précédemment peut être incorporée directement dans les aliments pour animaux. De façon générale, la composition selon l'invention est incorporée aux aliments à raison de 5.10' à 5.1010 CFU (Colony Forming Unit) de micro-organismes probiotiques par kg d'aliment complet, de préférence de 5.108 à 1.10u CFU par kg d'aliment complet. Par exemple, quand le micro-organisme probiotique de la composition selon l'invention est la levure Saccharomyces cerevisiae Sc47 commercialisée par la Société Lesaffre sous la marque BIOSAF , la composition selon l'invention sera incorporée à l'alimentation animale de façon à avoir 2,5 à 8.109 CFU de Saccharomyces cerevisiae Sc47 par kg d'aliment complet. La composition probiotique décrite ci-dessus peut également être utilisée dans des granulés probiotiques destinés notamment à l'alimentation animale. Ainsi, selon un autre mode de réalisation, l'invention porte sur des granulés probiotiques qui comprennent : - la composition probiotique ou prémix décrite ci-dessus, et - un mélange nutritionnel adapté à l'espèce animale visée. De manière générale, les granulés de l'invention sont constitués de un pour mille en poids de micro-organismes probiotiques. Le mélange nutritionnel est un mélange classiquement utilisé par l'homme du métier pour la préparation de granulés destinés à l'alimentation animale, sa composition dépend de l'espèce animale visée mais comprend classiquement des farines végétales comme par exemple la farine de blé et/ou des tourteaux de soja ou de colza et/ou de la pulpe de betterave et/ou la mélasse et/ou de l'urée, dans des proportions bien connues de l'homme du métier. Le Prémix est ensuite incorporé à des matières premières ( aliments) dont la nature et les quantités dépendent des espèces animales. Ce mélange nutritionnel est éventuellement enrichi en vitamines et/ou oligoéléments et/ou acides aminés et/ou autres additifs destinés à l'alimentation animale qui sont décrits ci-dessus en relation avec la composition probiotique de l'invention. Les granulés de l'invention sont préparés par un procédé comprenant les étapes suivantes : préparation d'une composition ou d'un prémix probiotique selon l'invention, incorporation ladite composition ou prémix à un mélange nutritionnel adapté à l'espèce animale visée, de préférence après un temps de latence d'au moins 14 jours ; injection de vapeur d'eau à une température comprise entre 60 C et 100 C sous des pressions allant de 0,5 à 3,5 bars dans le mélange obtenu précédemment et pressage. De façon avantageuse, la composition ou le prémix contenant les micro-organismes probiotiques est laissé au repos pendant au mois 15 jours, de préférence pendant au moins 1 mois avant d'être incorporé au mélange nutritionnel. Les granulés obtenus selon le procédé de l'invention présentent un taux de survie des micro-organismes probiotiques très satisfaisant. Selon un mode de réalisation particulier, le taux de survie des micro-organismes probiotiques à la granulation peut être mesuré par le rapport S qui correspond au ratio entre le nombre de CFU après granulation (CFUap) et le nombre de CFU avant granulation (CFUav) multiplié par cent. Le taux de survie des micro-organismes dans les granulés selon la présente invention est tel que la valeur du rapport S est supérieure ou égale à 20 de préférence supérieure ou égale à 50 % et plus préférentiellement encore supérieure ou égale à 70 L'invention porte également sur un procédé pour améliorer la stabilité de granulés probiotiques comprenant la préparation d'une composition probiotique ou d'un prémix comprenant des micro-organismes probiotiques et des parois de levures et/ou des levures désactivées, et éventuellement un complément nutritionnel comprenant notamment des vitamines, et/ou des oligoéléments, et/ou des acides aminés, et/ou d'autres additifs destinés à l'alimentation animale, cette composition étant incorporée à unmélange nutritionnel adapté à l'espèce animale visée avant l'étape de granulation par injection de vapeur et pressage. Comme mentionné précédemment, il s'est avéré que la résistance à la température de granulation réside notamment dans l'augmentation ou le maintien de la teneur en matière sèche du micro-organisme probiotique présent dans la composition selon l'invention. Les granulés de l'invention, ou obtenus selon les procédés 15 de l'invention sont destinés à être utilisés dans l'alimentation animale. L'invention permet un apport en micro-organismes probiotiques contrôlé, étant donné que la quantité de micro-organismes probiotiques vivants au final dans l'aliment pour 20 animal représente au moins de 20 % de la quantité utilisée pour la fabrication de la composition selon l'invention ou de celle des granulés. La présente invention sera plus précisément décrite et illustrée dans les exemples. Il est bien entendu que ces 25 exemples sont donnés uniquement à titre d'illustration de l'objet de l'invention, dont ils ne constituent en aucune manière une limitation. EXEMPLES : 30 Exemple 1 : matériel utilisé Les exemples de la présente invention sont réalisés avec le matériel suivant : Les levures probiotiques sont celles commercialisée sous la marque BIOSAF (dans la suite des exemples seul le terme BIOSAF sera employé). Le produit BIOSAF est un concentré de cellules vivantes de levures Saccharomyces cerevisiae souche Sc47, 1.1010 CFU/g de BIOSAF (NCYC - 47). Ce produit est destiné exclusivement à l'alimentation animale, il se présente sous la forme de microgranules et présente une stabilité thermique jusqu'à 80 C. Les parois de levure utilisées sont constituées de parois de Sacchromyces cerevisiae et préparées par autolyse suivie de centrifugation. Les levures désactivées utilisées sont constituées de parois 15 de Saccharomyces cervisiae et préparées par traitement thermique. Les caractéristiques physiques sont données dans le tableau 1 ci-dessous . Parois de levures Levures désactivées BIOSAF Granulométrie Diamètre médian Diamètre médian Diamètre médian 182, 4 pm 178, 4 pm 1354, 2 pm 68% des 68% des 68% des particules particules particules ayant ayant un ayant un un diamètre diamètre diamètre compris entre compris entre compris entre 992,5 et 1847,8 80,6 et 412,8 103,9 et 306,4 pm Pm Pm 20 10 Parois de levures Levures désactivées BIOSAF Masse 0, 452 0, 629 0, 797 volumique apparente g/cm3 Humidité % 3, 5 4, 5 7, 0 Exemple 2 : 2.1 Préparation des prémix On prépare manuellement les différents mélanges (prémix 3) dont la composition est donnée dans le tableau 2 dessous: matériel Prémix 1 Prémix 2 Prémix 3 Prémix 4 BIOSAF 14% 14% 14% 14% Parois de 14% 86 % - - levures Levures - - - 86% désactivées Farine de - - 14% - blé Complément 72% - 72% - nutritionnel Les pourcentages sont calculés en poids du poids total prémix. Le prémix 3 correspond à une composition entrant dans composition de granulés de l'art antérieur. 1 à ci- de la 15 2.2 - Evolution du taux de matière sèche Le taux de matière sèche du BIOSAF présent dans chacun des prémix 1 à 3 a été mesuré suivant la norme officielle ISO 1741 aux temps T= 1 jour, 2 jours, 7 jours et 14 jours La variation de la teneur en matière sèche selon le Test A est donnée dans le tableau ci-dessous : V = [ (MST MSo) /MSo] x 100 Prémix / Temps de 1 jour 2 jours 7 jours 14 jours contact Prémix 1 + 0,1% + 0,5% + 0,6% + 0,7% Prémix 2 + 0,4% + 0,5% + 0,8% + 1,2% Prémix 3 - 0,9% - 0,9% - 1,0% -1,2% Il est important de noter que le temps de contact entre le BIOSAF et les autres composés du prémix joue un rôle primordial, puisqu'il correspond à la mise en équilibre des humidités des produits. Si le facteur temps est défavorable à un mélange BIOSAF - farine de blé, il doit être au minimum de 14 jours dans le cas de support à base de parois de levures et/ou de levures désactivées. Exemple 3 Des études antérieures ont montrées que le procédé de mélange peut endommager le produit BIOSAF , le rendant plus apte à capter l'humidité ambiante. Il était donc indispensable de fabriquer les prémix parois de levures - BIOSAF dans des conditions industrielles pour confirmer l'effet positif desdites parois de levures.25 3.1 Préparation de prémix selon un procédé industriel : Le Biosaf est stocké dans un silo haut de 5 à 6 mètres. Lors d'une fabrication, les levures sont transportées sur 50 mètres vers la mélangeuse via un transporteur pneumatique vertical (transfert en phase dense) de 10 cm de diamètre. Une arrivée d'air (préalablement traité, séché et refroidi), permet de pousser le produit à travers le transporteur par une succession de bouchons d'air et de bouchons de produit. En sortie du transporteur, une benne peseuse contrôle le poids du produit avant d'entrer dans la mélangeuse à socs où est introduit simultanément le mélange. La mélangeuse utilisée est une mélangeuse à socs, sa vitesse de rotation est de 120 tours/min, et la durée du mélange est de 60 secondes. Le prémix final est alors dirigé vers un conditionnement en sacs ou en vrac. La composition des prémix réalisés industriellement est donnée dans le tableau ci-après : matériel Prémix Prémix Prémix 5 Ibis 3bis BIOSAF 14% 14% 56% Parois de 14% - 44% levures Levures - - - désactivées Farine de - 14% - blé complément 72% 72% - nutritionnel 20 3.2 - Evolution du taux de matière sèche L'évolution du taux de matière sèche de BIOSAF en fonction du temps de ces différents prémix a été mesurée 5 comme dans l'exemple 2. De la même façon que pour des prémix réalisés de façon manuelle, le taux de matière sèche de BIOSAF diminue dans le prémix comprenant de la farine de blé (prémix 3bis) : il 10 passe de 93% à 91,7%. Le taux de matière sèche dans les prémix selon l'invention reste stable dans le prémix Ibis (14% de parois de levures), mais augmente de 0 ,3% après un mois de contact dans le prémix 5 (44% de parois de levures). 15 L'effet des parois de levures sur l'humidité de BIOSAF est moins important lorsque le mélange est préparé dans des conditions industrielles, néanmoins il n'y a pas une baisse de la matière sèche de BIOSAF comme observée avec les supports de prémix classiques (à base de blé par exemple). 20 Exemple 4 : 4.1 Préparation de granulés. 25 Des essais de granulation ont été réalisés sur une presse de laboratoire à filière discoïdale plate fixe (Presse KAHL.14 - 175 de 3 kW, ayant un diamètre et une épaisseur des canaux respectivement de 4 et 20mm (soit un taux de compression de 5)). Le conditionneur (INRA, Nantes, France) à 30 32 pales rotatives est long de 544 mm et possède un volume 3.75 1. Le moteur de 2.2 kW est contrôlé par un régulateur de vitesse qui règle le débit. Les températures sont fixées au niveau du conditionneur (à 80 et 90 C). Deux lots de granulés ont été préparés clans les conditions définies ci-dessus. Un premier lot de granulés a été préparé avec une température d'injection de vapeur d'eau de 80 C, et un second lot à une température d'injection de vapeur d'eau de 90 C. Les prémix ont été utilisés immédiatement après leur préparation. La composition des granulés est donnée ci-après : Granulé 1 Granulé 2 Blé 29.3% 29.3% Tourteau de soja 25% 25% Tourteau de colza 20% 20% Pulpe de betterave 20% 20% Mélasse 3% 3% Urée 2% 2% Prémix 3 bis 0.7% - Prémix 5 -0.7% 4.2. Etude de la résistance à la granulation Pour chacun des lots de granulés, le taux de survie du 15 BIOSAF a été mesuré. Les résultats sont donnés ci-après : granulé 80 C 90 C Granulé 1 9,4% 2,6% Granulé 2 23,9% 5,4% Modes de calcul : % résistance ou taux de survie = quantité de cellules revivifiables dans les granulés 20 (en CFU/g) X 100 / quantité de cellules revivifiables dans la composition de granulation juste avant granulation (en CFU/g). Les résultats montrent un taux de survie très bas attestant d'une très faible résistance à la granulation du BIOSAF 25 incorporé au prémix 3bis (granulés 1) par rapport à des lots 5 10 de BIOSAF incorporés dans le prémix 5 selon l'invention (granulés 2). Exemple 5 : De la même façon que dans l'exemple 4, des granulés ont été préparés à l'aide des prémix 3bis et 5 dont la composition est donnée dans l'exemple 3. Cependant, ces prémix avaient été préparés un mois avant la granulation. Granulé 1 Granulé 3 Blé 29.3% 29.3% Tourteau de soja 25% 25% Tourteau de colza 20% 20% Pulpe de betterave 20% 20% Mélasse 3% 3% Urée 2% 2% Prémix 3 bis 0.7% - Prémix 5 - 0.7% 4.2. Etude de la résistance à la granulation 15 Pour chacun des lots de granulés, la résistance à la granulation a été évaluée par détermination du taux de survie du BIOSAF . Les résultats sont présentés ci-après granulé 80 C Granulé 1 4,6% Granulé 2 27,9% 20 Il en ressort que les granulés conformes à l'invention ont une résistance à la granulation et donc un taux de survie six fois plus important. REVENDICATIONS 1. Composition probiotique ou prémixe comprenant : - des micro-organismes probiotiques vivants ou revivifiables, et - des parois de levures et/ou des levures désactivées. 2. Composition probiotique selon la revendication 1, qui comprend en outre un complément nutritionnel comprenant notamment des vitamines, et/ou des oligoéléments, et/ou des acides aminés, et/ou d'autres additifs destinés à l'alimentation animale. 3. Composition probiotique selon la revendication 1 ou 2, comprenant: de 0,5 à 75 %, de préférence 5 à 30 % de micro-organismes vivants ou revivifiables, de 10 à 95%, de préférence 15 à 80 % et plus préférentiellement encore de 25 à 75 % de parois de levures et/ou de levures désactivées, de 0 à 95 %, de préférence de 5 à 80% de complément nutritionnel, les pourcentages étant exprimés en poids sec par rapport au poids total de la composition. 4 Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisée en ce que les micro-organismes probiotiques sont choisis dans le groupe comprenant les levures probiotiques et les bactéries probiotiques de type ferments lactiques, et plus particulièrement les lactobacilles, et bifidobactéries à l'exception des bacillis. Composition selon la revendication 4, caractérisée en ce que les levures probiotiques sont choisies dans le groupe comprenant les levures du genre Saccharomyces, de préférence de l'espèce Saccharomyces cerevisiae, ou du genre 5 Kluyveromyces, de préférence de l'espèce Kluyveromyces marxianus et leurs mélanges. 6. Composition selon la revendication 5, caractérisée en ce que les levures correspondent aux souches choisies dans le groupe comprenant la souche Saccaharomyces cerevisiae Sc47 déposée auprès du NCYC sous le numéro 47, la souche Saccaharomyces cerevisiae déposée auprès de la collection Pasteur (CNCM) sous le numéro I-1077, la souche Saccaharomyces cerevisiae déposée auprès de la collection Pasteur (CNCM) sous le numéro I-1079, la souche Saccharomyces cerevisiae déposée auprès de la collection MUCL sous le numéro 39 885, la souche Saccharomyces cerevisiae déposée auprès de la collection CBS sous le numéro 39 493.94, la souche Kluyveromyces marxianus déposée auprès de la collection MUCL sous le numéro 39434, et leurs mélanges. 7. Composition probiotique ou prémix selon l'une des revendications 1 à 6 comprenant : - de 0,5 à 75 %, de préférence 5 à 30 % de levures viables ou revivifiables, - de 10 à 80%, de préférence 25 à 50 % de parois de levures et/ou de levures désactivées, - de 0 à 95 %, de préférence 5 à 80 % de complément 30 nutritionnel, les pourcentages étant exprimés en poids sec par rapport au poids total de la composition. 8. Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, caractérisée en ce que les parois de levures et/ou les levures désactivées sont choisies parmi les Saccaharomyces. 9. Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 8, dans laquelle la variation de la teneur en matière sèchedes micro-organismes probiotiques, mesurée selon un Test A est positive, suivant le Test A, au temps To, c'est-à-dire avant le mélange des micro-organismes probiotiques avec les parois de levures et/ou levures désactivées, la teneur en matière sèche des micro-organismes probiotiques est mesurée par la méthode ISO 1741, on obtient une valeur MSo, au temps T= 14 jours, c'est-à-dire 14 jours après le mélange des micro-organismes probiotiques avec les parois de levures et/ou levures désactivées, la teneur en matière sèche des micro-organismes probiotiques est mesurée, on obtient une valeur MST, on calcule alors la variation = [(MST - MS0)/MS0] x 100. 10. Granulé probiotique comprenant : - une composition probiotique ou prémix selon l'une quelconque des revendications 1 à 9, et - un mélange nutritionnel adapté à l'alimentation animale visée. 11. Granulé selon la revendication 10, dans lequel le taux de survie S des microorganismes probiotiques est supérieur ou égal à 20%, de préférence supérieur ou égal à 50% et plus particulièrement supérieur ou égal à 70%. 12. Procédé de préparation de granulés comprenant les étapes suivantes : - préparation d'une composition probiotique ou prémix selon l'une des revendications 1 à 9, 22 2901138 incorporation de la 'composition probiotique ou prémix à un mélange nutritionnel adapté à l'alimentation animale visée, de préférence après un temps de latence d'au moins 14 jours, 5 injection de vapeur d'eau à une température comprise entre 60 C et 100 C sous des pressions allant de 0,5 à 3,5 bars dans le mélange obtenu à l'étape précédente et pressage. 10 13. Procédé pour améliorer la stabilité de granulés probiotiques comprenant la préparation d'une composition probiotique ou prémix selon l'une quelconque des revendications 1 à 9 comprenant des micro-organismes probiotiques et des parois de levures et/ou des levures 15 désactivées, et éventuellement un complément nutritionnel comprenant notamment des vitamines, et/ou des oligoéléments, et/ou des acides aminés, et/ou d'autres additifs destinés à l'alimentation animale, cette composition étant incorporée à un mélange nutritionnel adapté à l'espèce animale visée 20 avant l'étape de granulation par injection de vapeur et pressage. 14. Utilisation d'une composition probiotique ou prémix selon l'une quelconque des revendications 1 à 9 pour 25 l'alimentation animale. 15. Utilisation de granulés selon la revendication 10 ou 11, ou préparés par le procédé de la revendication 12, pour l'alimentation animale. 30