FR 2906035 A1 20080321 FR 0608091 A 20060915 PROCEDE DE MESURE QUANTITATIVE DE CIBLES BIOMOLECULAIRES DEPOSEES SUR UNE BIOPUCE, ET DISPOSITIF POUR SA MISE EN OEUVRE. La présente invention concerne un procédé de mesure quantitative de cibles biomoléculaires ayant été déposées sur une biopuce, et un dispositif pour la mise en oeuvre de ce procédé. L'invention s'applique notamment à la mesure quantitative d'acides nucléiques non marqués ayant été hybridés sur des sondes de cette biopuce. Les biopuces représentent une révolution majeure dans les techniques de biologie moléculaire de ces dix dernières années. En permettant l'étude simultanée du niveau d'expression de plusieurs centaines, voire de plusieurs milliers de gènes, elles permettent d'appréhender l'impact d'une maladie ou d'un stress (e.g. résultant d'une radiation, d'une pollution ou de la prise d'un médicament) au niveau du génome complet d'un individu. Ces techniques deviennent ainsi de plus en plus utilisées en biologie moderne. Les biopuces se répartissent en deux grandes familles, comprenant les puces microfluidiques et les puces à matrices de sondes. Ces dernières sont organisées en matrices de spots ou points de mesure, et elles sont généralement obtenues en déposant ou en synthétisant à des coordonnées précises sur un support passif des sondes moléculaires formées de biopolymères tels que de l'ADN, des protéines ou des anticorps, par exemple. Ces biopuces à matrices de sondes permettent d'identifier les cibles présentes dans un échantillon biologique lorsque ces cibles viennent s'hybrider spécifiquement au niveau de chaque spot de sondes. II existe, d'une part, les biopuces à haute complexité (plus de 5000 spots) pour les études pan-génomiques et, d'autre part, les biopuces à basse et à moyenne complexité, qui sont dédiées à une thématique donnée (e.g. tests thérapeutiques, détecteur biologique). La technologie actuelle des biopuces à matrices de sondes présente un certain nombre de limitations majeures, notamment : 2906035 2 - le fort encombrement stérique des marqueurs fluorescents, qui modifie de façon sporadique la reconnaissance entre les sondes et les cibles et entraîne ainsi de nombreux artéfacts de mesure diminuant la reproductibilité des expériences ; 5 - l'absence de mesure quantitative, qui interdit de comparer les niveaux d'expression entre deux cibles différentes ; et - le coût élevé de cette technologie actuelle, tant en production qu'en mise en oeuvre. 10 C'est la raison pour laquelle plusieurs alternatives à cette technologie ont été développées récemment, avec en particulier : - les technologies RT PCR en carte microfluidique ( Reverse Transcriptase Polymerase Chain Reaction , soit une amplification en chaîne par polymérisase après transcription inverse d'un acide 15 ribonucléique en ADN complémentaire), qui permettent d'amplifier jusqu'à 386 cibles différentes en parallèle, avec une simplification de la mise en oeuvre et une amélioration de la détection qui sont toutefois pénalisées par l'absence de mesure quantitative pour une réelle comparaison entre les cibles, par la limitation du nombre de cibles à analyser (bien en dessous d'une biopuce de 20 basse complexité) et par un coût élevé de mise en oeuvre ; - les biopuces sur film Nylon , basées sur l'hybridation des cibles dans un grand volume et un marquage en chimiluminescence, qui procurent également une mise en oeuvre simplifiée et une détection améliorée, mais qui sont néanmoins pénalisées par l'absence de mesure 25 quantitative, le grand volume de réaction requis (limitant pour les analyses d'échantillons de faible concentration) et les coûts très élevés de production et de mise en oeuvre ; et - de nouveaux concepts de biopuces sans marquage, qui sont basés sur la détection de la cible par mesure de l'impédance ou par la 30 résonance plasmonique de surface ( SPR ou Surface Plasmon Resonance ), et qui ont été notamment décrits dans David F et al., Bioscience Bioelectron. 2005, dans Li C. M. et al., Front Biosci. 2005 ou dans 2906035 3 Macanovic A. et al., Nucleic Acid Research 2004, mais qui ne permettent pas une quantification du nombre de cibles, posent problème pour réaliser des puces à haute densité et impliquent, tant pour la technique de mesure de l'impédance que pour la technique SPR , des artéfacts de mesure dus aux 5 tailles et aux conformations variables des cibles. Des procédés de spectrométrie ICP ( Inductively Coupled Plasma , i.e. spectrométrie de masse couplée à un plasma induit) ont également été mis au point, cf. Inchul Yang et al., Analytical Biochemistry 10 (2004), vol.335, 150-161 ou Heinrich F. Arlinghaus et al., Analytical Chemistry (1997), vol.69, n 18, 3747-3753, procédés qui permettent de doser le phosphore contenu dans un acide nucléique pour estimer par exemple le taux d'hybridation de celui-ci sur une biopuce à PNA ( Peptide Nucleic Acid , i.e. acides nucléiques peptides). 15 Toutefois, il apparaît que l'utilisation de la spectrométrie de masse pour doser le phosphore à partir d'un plasma généré à la surface d'une biopuce est une méthode lente (prenant typiquement plusieurs heures pour 1 cm' sur la biopuce), et que l'instrumentation nécessaire à sa mise en oeuvre est coûteuse. De plus, il est à noter que cette technique de spectrométrie 20 ICP n'est pas quantitative, car elle ne fournit que la quantité brute de nucléotides hybridés, sans pouvoir différentier entre la taille et le nombre des biomolécules. Le document de Brevet US-A-2006/0105354 présente une 25 méthode de quantification en temps réel d'une multitude de cibles formées d'acides nucléiques marqués et qui se sont liées à la surface d'une biopuce de type à matrice de sondes, comprenant notamment l'émission d'un faisceau laser d'excitation à la surface de la matrice et la mesure de l'émission lumineuse des cibles hybridées en réponse à ce faisceau d'excitation. 30 Un inconvénient majeur de cette méthode est qu'elle n'est pas non plus quantitative au sens indiqué ci-dessus, et qu'elle requiert en outre la présence de molécules marquées liées aux molécules cibles. 2906035 4 Un but de la présente invention est de proposer un procédé de mesure quantitative de cibles biomoléculaires ayant été déposées sur une biopuce de type à matrice de sondes hybridées par ces cibles, ladite matrice comportant une multitude de points de mesure ou spots comprenant 5 chacun une pluralité de ces sondes, qui remédie à l'ensemble des inconvénients précités. A cet effet, le procédé de mesure selon l'invention comprend les étapes suivantes : a) on focalise au moins un faisceau laser sur chaque point de 10 mesure, pour en extraire un plasma chaud et confiné comprenant un élément chimique à quantifier qui est uniquement présent dans lesdites cibles, b) on détecte et l'on analyse des raies lumineuses d'émission dudit plasma pour chaque point de mesure, en mesurant les intensités respectives de ces raies, puis 15 c) on détermine, via un étalonnage préalable de ces raies établissant une corrélation entre les intensités des raies propres audit élément à quantifier et des concentrations données de cet élément, la concentration dans chaque point de mesure dudit élément ou d'un groupe l'incorporant au sein desdites cibles. 20 On notera que cette corrélation entre intensités de raies y et concentrations x est avantageusement de type linéaire (i.e. une relation de proportionnalité, à une constante affine près, selon l'équation y = ax + b). On notera également que ce procédé selon l'invention permet 25 de scanner (i.e. analyser en un balayage) rapidement et efficacement l'ensemble des points de mesure de la biopuce, et de déduire de l'étape c) précitée le nombre d'atomes dudit élément dans chaque point de mesure, pour en déduire le nombre de sondes ayant été hybridées par lesdites cibles, le tout en quelques minutes seulement. 30 Pour quantifier les cibles hybridées sur la biopuce, on notera qu'il est nécessaire que la taille de ces cibles soit connue ou calibrée. 2906035 5 Selon une autre caractéristique de l'invention, antérieurement à l'étape a), l'on traite avantageusement chaque cible lors d'une étape de calibration (encore appelée normalisation par l'homme de l'art) pour que sa taille soit sensiblement égale à celle de chaque sonde, de sorte à éliminer les 5 parties non hybridées des cibles. Cette étape de calibration est de préférence mise en oeuvre en traitant la biopuce par une enzyme de type nucléase, telle qu'une exonucléase, qui est apte à dégrader tous les acides nucléiques à simple brin qui sont présents sur chaque point de mesure pour ne conserver que des doubles brins sonde/ cible. 10 De préférence, le ou chaque faisceau laser utilisé à l'étape a) est émis dans la gamme infrarouge û visible - ultraviolet selon une impulsion de durée comprise entre 1 fs et 100 ns, avec une fréquence comprise entre 10 Hz et 100 kHz et une énergie comprise entre 10 mW et 1 kW. 15 A titre encore plus préférentiel, ledit ou chaque faisceau laser est émis dans l'ultraviolet à une longueur d'onde de 266 nm ou 193 nm, en utilisant par exemple les harmoniques d'un laser Nd : YAG (laser à grenat d'yttrium et d'aluminium dopé au néodyme), et selon une impulsion de durée sensiblement égale à 10 ns. 20 Egalement à titre préférentiel, ledit ou chaque faisceau laser présente une densité de puissance à la surface de chaque point de mesure qui est supérieure à 1 GW.cm-2, en utilisant un laser compact et des lentilles de focalisation, pour l'obtention par vaporisation d'un plasma chaud à durée de vie d'environ 2 ps. 25 A ces très hautes densités d'énergie, on notera qu'une partie du matériau de chaque point de mesure est éjectée de la biopuce par le phénomène de vaporisation, et ce plasma chaud, très lumineux et à durée de vie très courte est généré. Ce matériau ablaté sous forme de plasma est dissocié en ses divers constituants atomiques et ioniques et, à la fin de 30 chaque impulsion laser, ce plasma refroidit rapidement. Durant cette période, les atomes et les ions excités émettent des radiations lumineuses qui leur sont caractéristiques du fait de leur retour à des niveaux d'énergies plus bas. 2906035 6 Selon une autre caractéristique de l'invention, l'on confine le plasma généré par ledit ou chaque faisceau de telle sorte que ce plasma n'interfère pas avec les autres points de mesure à analyser, et l'on détecte 5 simultanément les raies d'émissions du plasma correspondant audit ou à chaque faisceau. Avantageusement, l'on peut adjoindre au ou à chaque plasma confiné au moins un agent d'activation du plasma, tel que de l'argon ou de l'hélium. Egalement avantageusement, on peut utiliser un unique faisceau laser qui ablate chaque point de mesure selon une surface de côté compris entre 1 pm et 20 pm, et l'on déplace alors la biopuce via des micro-déplacements planaires selon un pas sensiblement égal à 10 pm, pour balayer la totalité desdits points de mesure. En variante, l'on peut déplacer simultanément plusieurs faisceaux lasers en mouvement relatif par rapport à la biopuce, pour que ces faisceaux ablatent la totalité des points de mesure. Selon une autre caractéristique de l'invention, l'on utilise 20 avantageusement la technique de spectroscopie d'émission optique induite par laser ( LIBS en abrégé pour Laser Induced Breakdown Spectroscopy ) pour la mise en oeuvre des étapes a) à c) et, de préférence, on utilise en parallèle la technique de fluorescence induite par laser ( LIF en abrégé pour Laser Induced Fluorescence ) pour ces mêmes étapes. 25 Avantageusement, l'on utilise des cibles comprenant des acides nucléiques non marqués, et des sondes choisies dans le groupe constitué par les acides nucléiques, les acides nucléiques peptides ( PNA , voir la figure 4 annexée pour la formule chimique d'un motif caractéristique), les acides nucléiques verrouillés ( LNA ) et les éthers ribonucléiques 30 ( ERN , voir la figure 5 annexée pour la formule chimique d'un motif caractéristique) qui sont transparents pour la technique LIBS à une longueur d'onde de 254 nm ou de 194 nm. 10 15 2906035 7 On notera que ces molécules, résistantes aux digestions enzymatiques par les exonucléases, permettent de protéger les parties des cibles d'acides nucléiques hybridées avec les sondes lors d'une digestion. Après digestion, les cibles d'acides nucléiques hybridées sont ainsi toutes 5 connues de l'opérateur et équivalentes à celles des sondes. On notera également que le procédé de mesure quantitative selon l'invention peut également être adapté pour l'étude des protéines, en utilisant des anticorps couplés avec des acides nucléiques (la séquence d'acide nucléique servant d'ancre et de balise pour la reconnaissance des 10 anticorps). Encore plus avantageusement, l'on utilise le phosphore présent dans ces cibles d'acides nucléiques à titre d'élément à quantifier pour la détection dans le plasma, à l'étape b), de raies d'émission atomiques et 15 ioniques du phosphore, de préférence à la longueur d'onde de 253 nm 3 nm et/ou 194 nm 3 nm et/ou 153 nm 3 nm. On notera que l'utilisation de sondes et de cibles toutes deux formées d'acides nucléiques permet d'augmenter la sensibilité de la détection en augmentant le taux de phosphore mesuré. Cependant, dans certaines 20 configurations, il peut être avantageux d'utiliser des sondes PNA , notamment lorsque les concentrations des cibles sont très faibles. En effet, l'affinité très élevée des PNA pour les acides nucléiques permet de piéger toutes les cibles oligonucléotidiques présentes dans le milieu à analyser. De plus, comme les PNA sont capables de se fixer 25 spontanément à une surface d'or par leur extrémité COOH ou NH, ces molécules PNA sont particulièrement avantageuses pour des dépôts de sondes sur un support plastique de biopuce (e.g. en polyimide Kapton ) recouvert d'une couche d'or de quelques microns d'épaisseur. Le fait que les PNA ne contiennent pas de phosphore, et 30 plus généralement aucun atome ayant une raie d'émission propre à 254 nm ou à 194 nm, permet à la limite de réaliser la quantification des cibles oligonucléotidiques directement après l'hybridation, sans avoir recours à 2906035 s l'étape de calibration précitée pour dégrader les simples brins. Toutefois, pour que les mesures selon l'invention soient absolument quantitatives, on devra réaliser cette calibration des cibles. On notera toutefois que le procédé selon l'invention pourrait 5 s'appliquer à un élément chimique à détecter dans un plasma autre que le phosphore, par exemple l'iode, à titre non limitatif. Afin d'améliorer les limites de détection, on peut avantageusement : 10 (i) mettre en oeuvre la technique LIBS en effectuant une double impulsion laser de type double pulse LIBS , et/ou (ii) utiliser cette technique LIBS en parallèle avec la technique LIF (i.e. une combinaison LIBS-LIF ). Via l'une et/ou l'autre de ces deux méthodes préférentielles (i) 15 et (ii), on parvient notamment à maintenir plus longtemps et à amplifier les raies d'émission du phosphore et, grâce à l'obtention d'un meilleur rapport signal sur bruit, d'abaisser ainsi d'un facteur au moins égal à dix le seuil de détection du phosphore et donc des acides nucléiques dont il est issu. Concernant spécifiquement cette méthode (i) de double 20 impulsion laser, on peut la mettre en oeuvre avec un autre angle et un autre faisceau pour l'impulsion seconde (puissance, fréquence, longueur d'onde), mais également avec le même angle et/ou avec un faisceau laser de même nature que celui de l'impulsion première. En effet, compte tenu de la durée de vie d'environ 2ps du plasma, ce dernier est optiquement analysable à partir de 25 100 ns environ après sa formation (fin du rayonnement de type corps noir et émergence des raies atomiques et ioniques recherchées). Cette seconde impulsion laser, peu de temps avant son extinction, permet de prolonger la durée de vie du plasma et d'amplifier l'émission émise. On choisit avantageusement une longueur d'onde pour 30 laquelle l'atome ou les atomes visés a (ont) une forte absorption ou émission, autrement dit une longueur d'onde caractéristique de l'atome. 2906035 9 Par exemple dans le cas du phosphore à titre d'élément chimique à quantifier dans le procédé de l'invention, on peut réaliser la seconde excitation à 254 nm, à 193 nm ou à 153 nm et la détection avec une observation à ces mêmes longueurs d'onde (l'absorption importante par l'air 5 des rayonnements à 193 nm et à 153 nm peut atténuer sensiblement la fluorescence du plasma à ces longueurs d'onde). Il est ainsi possible d'augmenter l'émission lumineuse des ions et/ou des atomes ciblés (en l'occurrence le phosphore), en exaltant leur fluorescence propre par cette seconde impulsion laser. 10 Selon une autre caractéristique du procédé selon l'invention, l'ablation de matière de la biopuce et la formation du plasma peuvent être découplées. Dans ce cas, une première impulsion laser ablate une partie de la surface de la biopuce et l'expulse au-dessus de celle-ci, puis une seconde impulsion utilisant avantageusement un laser de type femtoseconde à une 15 fréquence de 100 Hz à 100 kHz crée le plasma et génère l'émission caractéristique de ses constituants. Eventuellement, une troisième impulsion peut être ensuite utilisée pour exalter la fluorescence des composés ciblés. Le procédé selon l'invention permet ainsi de détecter efficacement et rapidement des acides nucléiques sans marquage de ces 20 derniers, notamment à partir de la fluorescence des atomes de phosphore constitutifs des molécules d'acides nucléiques après l'émission d'un plasma. Pour disposer d'une mesure véritablement quantitative de ces molécules d'acides nucléiques, on procède nécessairement à la calibration précitée des cibles via une normalisation de leurs tailles respectives. 25 Un dispositif selon l'invention pour la mise en oeuvre du procédé de mesure quantitative tel que défini ci-dessus comporte : - une biopuce de type à matrice de sondes hybridées par des cibles biomoléculaires, la matrice comportant une multitude de points de 30 mesure ou spots comprenant chacun une pluralité desdites sondes, - une unité de génération et de confinement de plasma qui comprend des moyens de focalisation d'au moins un faisceau laser sur des 2906035 10 points de mesure pour en extraire un plasma chaud contenant un élément chimique à quantifier, tel que le phosphore, uniquement présent dans ces cibles, et des moyens pour confiner le ou chaque plasma ainsi extrait, - une unité de spectrographie qui est reliée à ladite unité de 5 génération de plasma et qui est adaptée pour détecter et analyser des raies lumineuses d'émission du plasma pour chaque point de mesure, de telle sorte que l'on détermine la concentration dans chaque point de mesure dudit élément à partir d'une corrélation entre les intensités des raies propres audit élément à quantifier et des concentrations données de cet élément. 10 Avantageusement, les cibles hybridant ces sondes comprennent des acides nucléiques non marqués, et lesdites sondes sont choisies dans le groupe constitué par les acides nucléiques, les acides nucléiques peptides ( PNA ), les acides nucléiques verrouillés ( LNA ) et 15 les éthers ribonucléiques ( ERN ). Selon une autre caractéristique de l'invention, la taille de chaque cible est avantageusement sensiblement égale à celle de chaque sonde suite à l'étape de calibration précitée, toutes les cibles de chaque point de mesure étant alors hybridées. 20 Comme indiqué précédemment, l'analyse optique du plasma généré point par point à la surface de la biopuce permet de reconstituer une image en chaque point de mesure de la quantité d'atomes de phosphore, et donc de la quantité de nucléotides au sein des acides nucléiques formant les cibles hybridées. Il est ainsi possible d'en déduire les taux d'hybridation de 25 chaque point ou spot de la biopuce. On notera que pour réaliser une quantification de manière absolue du nombre d'oligonucléotides hybridés sur chaque spot , il est indispensable que le matériau constitutif de la biopuce ne contienne pas de phosphore. La Demanderesse a établi qu'un support de biopuce constitué de 30 polyimide, tel que du Kapton , ou de ce polyimide recouvert d'une couche d'or, est neutre et particulièrement bien adapté pour réaliser des mesures par la technique LIBS à la longueur d'onde d'émission de 194 nm ou de 2906035 11 266 nm. Plus généralement, peuvent convenir pour la réalisation des biopuces selon l'invention tous les types de matériaux ne contenant pas du phosphore (e.g. plastique, verre, silice, etc.) et compatibles avec les matériels biologiques. 5 Les raies d'émission du plasma généré en chaque point de mesure peuvent par exemple être captées par une ou deux fibres optiques d'acquisition dont l'extrémité libre est disposée à une distance du plasma comprise entre 0,5 mm et 10 mm. En raison de leur ouverture numérique élevée, la ou chaque fibre d'acquisition est coiffée d'un jeu de lentilles 10 adéquates (collimateur de fibre) pour injecter correctement les rayonnements émis par le plasma. Ce dispositif selon l'invention permet ainsi d'analyser la surface d'une biopuce, que l'on positionne avantageusement sur une table à micro-déplacements (suivant deux directions orthogonales X et Y). Les 15 déplacements de la table permettent le balayage de toute la surface à analyser par le ou chaque faisceau laser avec, par exemple, un pas de 10 pm qui correspond à la zone ablatée à chaque impulsion du laser. L'analyse optique du plasma généré point par point à la surface de la biopuce permet de reconstituer une image de la quantité 20 d'atomes de phosphore en chaque point de mesure, qui est proportionnelle à la quantité de nucléotides. Il est donc possible d'en déduire les taux d'hybridation de chaque point de mesure ( spot ) sur la biopuce. On notera que pour réaliser une quantification de manière absolue du nombre d'oligonucléotides hybridés sur chaque spot , il est 25 indispensable que le matériau constitutif de la biopuce ne contienne pas de phosphore. Selon une autre caractéristique de l'invention, lesdits moyens pour confiner le ou chaque plasma extrait comportent au moins un 30 arrangement de n chambre(s) à plasma (n 1) délimité par une enceinte qui surmonte la biopuce en étant ouverte sur cette dernière, ladite enceinte étant pourvue d'orifices d'excitation qui sont chacun destinés à recevoir un faisceau 2906035 12 laser d'excitation apte à former ledit plasma et étant traversée par des fibres optiques d'acquisition des raies d'émission respectives de ces plasmas pour leur transmission à l'unité de spectrographie, ledit ou chaque arrangement de chambre(s) à plasma étant en mouvement relatif par rapport à la biopuce. 5 Cette ou ces chambre(s) permettent de confiner les plasmas produits et pour qu'il n'y ait pas d'interférence entre la lumière émise par ces différents plasmas dans le cas de plusieurs chambres. Quant à ladite enceinte, elle peut par exemple présenter une géométrie sensiblement parallélépipédique qui est adaptée pour entourer la chambre à plasma ou au 10 moins une ligne de plusieurs chambres à plasma, et qui est formée par une technique de structuration mécanique ou au laser à partir d'une poudre ou d'un polymère liquide, telle que la stéréolithographie, le laminage, le frittage ou la photolithographie, ou encore par moulage. 15 Selon un premier mode de réalisation de l'invention, ladite unité de génération de plasma comporte des moyens pour émettre une pluralité de faisceaux lasers d'excitation et pour les acheminer respectivement et de manière simultanée à l'intérieur des chambres à plasma via lesdits orifices d'excitation. 20 Selon un premier exemple relatif à ce premier mode de réalisation, ces faisceaux laser d'excitation peuvent être respectivement issus de différentes sources lasers. Dans ce cas, l'orifice d'excitation de chaque chambre à plasma selon l'invention reçoit une fibre optique d'excitation qui est destinée à guider le faisceau laser correspondant à une longueur d'onde 25 donnée et qui est pourvue à son extrémité libre d'une première lentille optique adaptée pour faire converger ce faisceau sur la biopuce. Selon un second exemple relatif à ce premier mode de réalisation, ces faisceaux laser d'excitation peuvent être issus : - d'une unique source laser qui émet un faisceau amont à 30 plusieurs longueurs d'ondes superposées et de préférence distantes entre elles de 0,4 nm à 1 nm, et 2906035 13 - d'un démultiplexeur en longueurs d'ondes pour la séparation du faisceau amont en des faisceaux aval présentant respectivement autant de longueurs d'onde que de fibres optiques d'excitation destinées à les véhiculer. 5 Selon un second mode de réalisation de l'invention, ladite unité de génération de plasma comporte des moyens pour émettre un unique faisceau laser d'excitation et pour l'acheminer successivement à l'intérieur desdites chambres à plasma en le déplaçant d'un orifice d'excitation à un autre via une tête galvanométrique. 10 Conformément auxdits premier et second modes de réalisation de l'invention, chaque chambre à plasma peut être délimitée par une surface latérale de révolution dont le sommet est pourvu de l'un desdits orifices d'excitation, qui présente sur cette surface latérale un orifice 15 d'acquisition recevant ladite fibre d'acquisition et qui débouche immédiatement au-dessus de la biopuce via une ouverture inférieure de ladite chambre, de sorte à confiner le plasma extrait de celle-ci par le faisceau laser correspondant. De préférence, la surface latérale de chaque chambre à 20 plasma est cylindrique ou conique en divergeant vers la biopuce, de hauteur comprise entre 2 mm et 10 mm et débouchant à une distance de cette dernière comprise entre 5 pm et 200 pm, avec un diamètre pour ladite ouverture inférieure qui est compris entre 1 mm et 5 mm. Selon une autre caractéristique avantageuse de l'invention, ledit arrangement de chambres à plasma et ladite biopuce peuvent être respectivement montés mobiles selon deux axes X et Y orthogonaux, de telle manière qu'à chaque mouvement de la biopuce selon l'axe Y ledit arrangement effectue K mouvements selon l'axe X, où : - K est défini par le rapport P/I de la distance P entre les fibres d'excitation respectives de deux chambres adjacentes et de la largeur 1 selon 25 30 2906035 14 l'axe X de la surface ablatée à chaque impulsion laser, ce rapport étant modulé par le facteur de la forme de l'ablation après vaporisation, et où - la distance P entre ces deux fibres d'excitation est définie par l'équation P = L/(N-1) avec N >1, L étant la largeur de la biopuce et N le 5 nombre de fibres d'excitation dans ledit arrangement. Egalement avantageusement, la distance P entre deux fibres d'excitation adjacentes est un multiple du pas entre deux points de mesure sur la biopuce. 10 Selon une autre caractéristique de l'invention, ladite enceinte peut être pourvue d'au moins un solénoïde adapté pour y générer un champ magnétique, de sorte à augmenter la durée de vie du ou de chaque plasma et/ou à contrôler sa forme, ainsi que la sélection des différentes particules chargées. 15 En plus de ce champ magnétique, on peut également générer un champ électrique via des moyens pouvant par exemple consister à utiliser à titre de support de la biopuce un matériau électriquement conducteur ou bien un support porteur d'une électrode à laquelle est associée une autre électrode portée par ladite enceinte pour générer une différence de potentiel. 20 De préférence, la fibre optique d'acquisition de chaque chambre à plasma est pourvue d'une seconde lentille optique à son extrémité libre débouchant dans la chambre, et la face interne de laditesurface latérale est conçue pour former localement un miroir concave apte à optimiser la réflexion des radiations lumineuses émises par le plasma en direction de 25 ladite fibre d'acquisition. Selon une autre caractéristique préférentielle de l'invention, ladite unité de spectrographie comprend au moins un spectrographe de type photomultiplicateur. On notera toutefois que l'on pourrait également utiliser, 30 pour la détection des raies d'émission du plasma, un spectrophotomètre, une caméra de type CCD ou CCD intensifiée ( Charge Coupled Device , i.e. dispositif à couplage de charge) ou bien une galette de micro-canaux. 2906035 15 Egalement à titre préférentiel, un filtre optique transparent uniquement à la longueur d'onde souhaitée peut être agencé entre chaque fibre optique d'acquisition et le spectrographe. 5 Egalement avantageusement, ladite unité de génération de plasma peut également comporter des moyens auxiliaires pour l'émission d'un faisceau laser d'excitation seconde et pour l'introduction de ce faisceau d'une chambre à une autre, via au moins un orifice d'excitation seconde formé dans la partie inférieure de la surface latérale de chaque chambre à hauteur 10 d'expansion du plasma ou d'expulsion de la matière extraite de la biopuce, chaque orifice d'excitation seconde étant alors formé à un emplacement prévu pour ne pas être affecté par la fibre d'acquisition ni par ledit miroir concave. En relation avec ledit premier mode de réalisation de l'invention, lesdits moyens auxiliaires d'émission peuvent avantageusement 15 comporter une tête galvanométrique apte à déplacer ledit faisceau d'excitation seconde d'un orifice d'excitation seconde à un autre et, dans ce cas, chaque orifice d'excitation seconde peut être pourvu d'une troisième lentille optique apte à faire converger le faisceau laser d'excitation seconde correspondant à ladite hauteur d'expansion ou d'expulsion. 20 En variante et en relation avec ledit second mode de réalisation de l'invention, chaque chambre à plasma peut avantageusement présenter une paire d'orifices d'excitation seconde se faisant face, de telle sorte que ces paires d'orifices soient alignées au sein dudit arrangement de chambres pour la focalisation à travers cet alignement d'un faisceau laser 25 d'excitation seconde émis par lesdits moyens auxiliaires d'émission. Selon une autre caractéristique de l'invention commune auxdits premier et second modes précités de l'invention, chaque chambre à plasma peut être en outre pourvue d'un orifice d'injection gazeuse qui est 30 formé sur ladite surface latérale à proximité immédiate dudit orifice d'excitation et qui reçoit un conduit destiné à introduire un gaz inerte, tel que de l'argon ou de l'hélium, apte à appauvrir la chambre en oxygène et à activer 2906035 16 le plasma lors de sa formation. On peut par exemple opérer sous pression réduite. Selon un exemple préférentiel de réalisation de l'invention, 5 chaque point de mesure peut comporter une bille magnétique ou paramagnétique, par exemple en polystyrène contenant des particules de cobalt, de nickel ou de leur oxyde, chaque bille présentant une couleur différente de celle du reste de la biopuce et de celle des autres points de mesure, de sorte que ces billes forment des mires aptes à être identifiées de 10 manière univoque par un système de capture d'images dont est pourvue ladite unité de spectrographie. Selon une autre caractéristique de cet exemple préférentiel selon l'invention, la biopuce peut comporter une feuille en matière plastique formant un écran magnétique, par exemple en polyamide (e.g. du Kapton ), 15 sur laquelle sont formés autant de trous que de billes et qui surmonte une lame aimantée apte à générer dans ces trous un champ magnétique d'intensité comprise entre 0,5 T et 5 T. Selon un exemple de réalisation de l'invention, chaque bille est constituée de deux demi-sphères qui sont collées l'une à l'autre dans l'un 20 desdits trous et dont seule la demi-sphère inférieure tournée vers ladite lame aimantée présente des propriétés paramagnétiques, lesdites sondes étant greffées sur la surface convexe de la demi-sphère supérieure qui est colorée pour former l'une des mires précitées. En variante, chaque bille peut être constituée d'une demi- 25 sphère supérieure colorée qui est destinée à former ladite mire et sur la surface convexe de laquelle sont greffées lesdites sondes, un cône présentant des propriétés paramagnétiques étant collé par sa base sous la tranche de cette demi-sphère et du côté de ladite lame aimantée, à l'intérieur desdits trous. 30 On notera que cette dernière géométrie de bille, qui est asymétrique par rapport au plan horizontal médian de la bille (parallèle à la 2906035 17 surface de la biopuce), permet avantageusement d'améliorer le rendement du procédé selon l'invention. Les caractéristiques précitées de la présente invention, ainsi 5 que d'autres, seront mieux comprises à la lecture de la description suivante de plusieurs exemples de réalisation de l'invention, donnés à titre illustratif et non limitatif, ladite description étant réalisée en relation avec les dessins joints, parmi lesquels : 10 la figure 1 représente des clichés illustrant les raies d'émissions du phosphore dans un plasma obtenu par le procédé de l'invention, pour des échantillons cibles caractérisés par différentes concentrations d'oligonucléotides (en abrégé échantillon OLIGOs ), les figures 2 et 3 sont des graphiques illustrant la relation de 15 proportionnalité (à une constante près) mesurée entre les intensités de ces raies d'émission et les concentrations ou rapports de dilution testés, respectivement, les figures 4 et 5 représentent les séquences caractéristiques des formules chimiques respectives des PNA et des ERN , utilisables 20 comme sondes sur la biopuce à matrice de sondes selon l'invention, la figure 6 est une vue schématique partielle en perspective d'un dispositif de mesure quantitative selon un premier mode de réalisation de l'invention, la figure 7 est une vue schématique latérale illustrant 25 l'espacement entre l'arrangement de chambres à plasma et la biopuce qui sont inclus dans le dispositif de la figure 6, la figure 8 est une vue schématique en perspective d'une chambre à plasma incluse dans l'arrangement du dispositif de la figure 6, la figure 9 est une vue de dessus de la chambre à plasma de 3 0 la figure 8, les figures 10 et 11 sont des vues schématiques en perspective illustrant respectivement la formation d'un plasma à un instant t 2906035 18 dans la chambre de la figure 8 et l'acquisition, à partir de cette chambre, de ses raies d'émission à un instant t+At, la figure 12 est un schéma de principe d'un démultiplexeur par filtrage en cascade utilisable selon l'invention pour décomposer un faisceau 5 laser d'entrée en une pluralité de faisceaux laser de sortie, pour leur guidage dans des fibres optiques d'excitation de la biopuce, la figure 13 est un médaillon illustrant un composant du démultiplexeur illustré à la figure 12, les figures 14 et 15 sont deux autres schémas de principe 10 d'un multiplexeur-démultiplexeur à réseau de diffraction, qui est également utilisable comme variante selon l'invention du dispositif des figures 12 et 13, la figure 16 est une vue schématique partielle en perspective d'un dispositif de mesure quantitative selon un second mode de réalisation de l'invention correspondant à une variante de la figure 6, 15 la figure 17 est une vue schématique latérale illustrant l'espacement entre l'arrangement de chambres à plasma et la biopuce qui sont inclus dans le dispositif de la figure 16, la figure 18 est une vue schématique en perspective d'une chambre à plasma incluse dans l'arrangement du dispositif de la figure 16, 20 la figure 19 est une vue de dessus de la chambre à plasma de la figure 18, les figures 20 et 21 sont des vues schématiques en perspective illustrant respectivement la formation d'un plasma à un instant t dans la chambre de la figure 18 et l'acquisition, à partir de cette chambre, de 25 ses raies d'émission à un instant t+At, la figure 22 est une vue schématique en coupe méridienne d'une bille formant chaque point de mesure d'une biopuce à matrice de sondes selon l'invention, selon un premier exemple de l'invention, la figure 23 est une vue schématique en coupe méridienne 30 d'une bille formant chaque point de mesure d'une biopuce à matrice de sondes selon l'invention, selon un second exemple de l'invention, 2906035 19 la figure 24 est une vue schématique en coupe méridienne d'une bille formant chaque point de mesure d'une biopuce à matrice de sondes selon l'invention, selon un troisième exemple de l'invention, les figures 25 et 26 sont deux vues schématiques locales en 5 perspective et partiellement en coupe de biopuces selon l'invention incorporant les billes de la figure 22 et de la figure 24, respectivement, et la figure 27 est un schéma de procédé illustrant les principales étapes de fabrication des billes d'une biopuce selon la figure 25. 10 Pour quantifier les acides nucléiques cibles qui se sont hybridés sur les sondes d'une biopuce à matrice de sondes par le procédé de l'invention, on rappelle qu'il est nécessaire que la taille de ces cibles soit connue ou calibrée. Pour obtenir cette calibration, on a traité les biopuces après 15 hybridation par une enzyme de type exonucléase, telle que la Phosphosdiesterase 1 de venin, qui est capable de dégrader tous les acides nucléiques simple brin présents sur la biopuce. Après ce traitement par exonucléase et un lavage, seuls les double brins sonde/cible sont présents sur les biopuces avec des cibles ayant exactement la taille des sondes (à 20 l'encombrement stérique près de l'exonucléase). La concentration de phosphore mesurée est alors proportionnelle aux taux d'hybridation, pour peu que la taille et la densité des sondes soient parfaitement calibrées. En effet, comme illustré aux graphiques des figures 2 et 3, l'intensité du signal d'émission mesuré est linéairement 2.5 corrélée à la concentration d'un oligonucléotide (testé sur 19mer) présent sur une feuille de polyimide de dénomination Kapton formant le support de la biopuce (voir figure 1). Le dispositif de mesure selon un premier mode de réalisation 30 de l'invention, qui est illustré aux figures 6 à 11, utilise en parallèle les techniques LIBS et LIF , et il comporte essentiellement : 2906035 20 - une biopuce 1 de type à matrice de sondes hybridées par des cibles et comportant une multitude de spots 2 de sondes, - une unité de génération et de confinement de plasma qui comprend des moyens de focalisation 3 et 4 de plusieurs faisceaux laser en 5 différents points de la biopuce 1 et de manière simultanée, pour extraire en chacun d'entre eux un plasma chaud contenant un élément chimique à quantifier, tel que le phosphore, qui est uniquement présent dans ces cibles, et des moyens pour confiner le ou chaque plasma ainsi extrait, et - une unité de spectrographie 5 qui est reliée à l'unité de 10 génération et de confinement de plasma et qui est adaptée pour détecter et analyser des raies d'émission du plasma pour chaque spot 2, de sorte que l'on détermine la concentration dans chaque spot 2 dudit élément à partir d'une corrélation entre les intensités des raies propres audit élément et des concentrations données de cet élément. 15 Comme illustré à la figure 6, les moyens de confinement sont formés d'un arrangement 6 de n chambre(s) à plasma 7 (n 1) dont les parois sont par exemple en forme de cône droit divergeant vers la biopuce 1 (des formes cylindriques sont également envisageables). Cet arrangement 6 est 20 délimité par une enceinte 8 par exemple de forme parallélépipédique qui surmonte la biopuce 1 en étant ouverte sur cette dernière et qui est en mouvement relatif par rapport à cette biopuce 1. L'enceinte 8 est pourvue de N orifices d'excitation première 9 qui sont respectivement formés aux sommets des chambres 7 et qui sont 25 destinés à recevoir N fibres optiques d'excitation première 10 véhiculant N faisceaux laser d'excitation première 10' (voir figure 10) et adéquates pour la longueur d'onde utilisée. Une lentille optique, telle qu'une lentille liquide (non représentée), est accolée à l'extrémité libre de chaque fibre 10, pour que le faisceau 10' correspondant soit convergent à la surface de la biopuce 1. 30 En fonctionnement, ces faisceaux 10' sont ainsi focalisés sur chaque spot par les moyens de focalisation 3 précités, en vue de former le 2906035 21 plasma précité à analyser via la technique LIBS ou bien d'ablater seulement dans un premier temps la matière de la biopuce 1. Comme illustré à la figure 7, le bord inférieur 8a de l'enceinte 8 est de préférence séparé de la biopuce 1 d'une distance d comprise entre 5 5 pm et 200 pm. Quant aux chambres à plasma 7, elles présentent par exemple chacune une hauteur (selon l'axe Z) allant de 2 mm à 10 mm et une ouverture inférieure (base du cône ou extrémité du cylindre) de diamètre pouvant aller de 1 mm à 5 mm. Chaque chambre à plasma 7 est en outre pourvue, sur sa 10 paroi latérale conique (voir figure 8), d'un orifice ou pore d'injection gazeuse 11 qui est de préférence adjacent à l'orifice d'excitation première 9 correspondant et qui reçoit un conduit 12, tel qu'un tuyau ou durite, qui est d'axe sensiblement perpendiculaire à une génératrice du cône formé par la chambre 7 et qui permet d'injecter un gaz neutre tel que l'argon. En effet, afin 15 de limiter l'absorption de la lumière ultraviolette émise par le plasma dans le cas de cibles formées d'acides nucléiques, on chasse ainsi l'oxygène de l'air qui se trouve dans chaque chambre à plasma 7. De plus, l'enceinte 8 est traversée par N fibres optiques d'acquisition 13 des raies d'émission de ces plasmas qui communiquent 20 respectivement avec l'intérieur des chambres 7, pour la transmission à l'unité de spectrographie 5 des spectres de raies propres à chaque chambre 7 (voir la flèche A aux figures 8, 9 et 11). Chacune des fibres d'acquisition 13 est reçue dans un orifice d'acquisition 14 formé dans la paroi latérale d'une chambre 7, et l'extrémité libre de chaque fibre 13 est coiffée d'une lentille 25 optique 13a adaptée pour injecter la lumière émise par le plasma dans cette fibre 13. De plus, la face interne conique (ou cylindrique) de la paroi de chaque chambre 7 située en face de l'orifice d'acquisition 14 est polie et métallisée, de sorte à former un miroir concave 15 (à la manière d'une sphère 30 d'intégration, voir figure 9) apte à réfléchir un maximum de lumière vers la fibre d'acquisition 13. 2906035 22 Les autres moyens de focalisation 4, qui sont compris dans l'unité de génération et de confinement du plasma, sont par exemple destinés à mettre en oeuvre la technique LIF précitée, parallèlement à la technique LIBS . Ces moyens 4, qui constituent des moyens auxiliaires d'excitation 5 seconde, peuvent également servir à générer le plasma dans chaque chambre 7, après l'ablation réalisée par les moyens de focalisation 3. Ces moyens de focalisation 4 comportent à cet effet une tête laser 16 associée en aval à une tête galvanométrique 17, pour la focalisation suivant des angles variables d'un unique faisceau laser 18 d'excitation 1 o seconde à travers un trou ou fente d'excitation seconde 19 formé(e) à la fois dans l'enceinte 8 et dans la paroi latérale de chaque chambre 7 (voir figures 8 et 9). Chaque trou ou fente 19 est formé(e) à la hauteur d'expansion prévue du plasma ou bien à la hauteur d'expulsion de la matière ablatée de la biopuce 1, et à un angle aveugle pour la fibre d'acquisition 13 15 correspondante ou pour le miroir 15. En regard de chaque trou ou fente 19 peut être disposée une lentille optique (non illustrée) faisant converger le faisceau laser 18 au niveau de formation du plasma ou de la matière éjectée (ce plasma est symbolisé par la référence P à la figure 10). Cette lentille peut éventuellement reposer sur de 20 petits vérins magnétiques constitués par des électroaimants qui permettent de réaliser la mise au point. Le déplacement du faisceau laser 18, d'un trou ou fente d'excitation seconde 19 à l'autre, est assuré par un jeu de miroirs montés sur moteurs galvanométriques qui forme la tête galvanométrique 17 précitée. Ce 25 montage permet de décaler du délai souhaité l'impulsion d'excitation seconde 18 de celle du faisceau d'excitation première 10' véhiculé par chaque fibre optique 10. Quant à l'unité de spectrographie 5, elle comporte un détecteur qui est de préférence un photomultiplicateur ( PM en abrégé), un 30 spectrophotomètre, une caméra CCD , CCD intensifiée ou une galette de micro-canaux, par exemple. Un filtre optique ne sélectionnant que la longueur d'onde souhaitée peut être intercalé entre chaque fibre 2906035 23 optique d'acquisition 13 et le détecteur, pour injecter la lumière dans ce dernier. De plus, une lentille adéquate peut être collée en sortie de chaque fibre optique 13. Ce dispositif selon les figures 6 à 11 permet de balayer toute 5 la surface de la biopuce 1 plus rapidement qu'avec les dispositifs de l'art antérieur. Le temps d'analyse lors de ce balayage sera inversement proportionnel au nombre de faisceaux d'excitation 10' utilisés. Les différents faisceaux d'excitation première 10' véhiculés 10 par les N fibres 10 peuvent être obtenus à partir de différentes sources laser. Toutefois, une alternative consiste à utiliser une source unique produisant un faisceau constitué de la superposition de plusieurs longueurs d'onde proches les unes des autres (typiquement distantes entre elles de 0,4 nm à 1 nm), puis de décomposer le faisceau à l'aide d'un démultiplexeur en longueur d'onde 15 ( Wavelength Division Multiplexing ou WDM en abrégé), afin d'injecter chaque longueur d'onde dans une fibre 10 unique. Les figures 12 à 15 illustrent cette variante selon l'invention pour l'obtention des N faisceaux précités d'excitation première. Plus précisément, on peut utiliser à cet effet un démultiplexeur 20 20 par filtrage en cascade, tel que celui illustré schématiquement à la figure 12, qui montre les N=6 faisceaux aval 21 de longueur d'ondes respectives Xi à 46 qui sont obtenus à partir du faisceau amont 22. Ces faisceaux aval 21 sont respectivement issus de collimateurs 23 qui sont chacun constitués par exemple d'une lentille à gradient d'indice. Comme illustré dans le médaillon de 25 la figure 13, chacune des six cavités 24 que comporte le démultiplexeur 20 est entourée latéralement de réflecteurs diélectriques multicouches 25. On notera que ce faisceau amont 22 doit être d'énergie suffisante (car tenant compte des pertes éventuelles liées au montage), de sorte que toutes les longueurs d'ondes utilisées produisent un faisceau 30 suffisamment énergétique pour entraîner la vaporisation partielle de la surface de la biopuce 1 et la formation d'un plasma. Le cas échéant, le plasma sera produit par une seconde impulsion laser dans la matière expulsée par un 2906035 24 autre faisceau ayant une longueur d'onde adéquate pour induire l'émission des atomes expulsés, et plus particulièrement ceux du phosphore, comme expliqué antérieurement. En variante, on peut utiliser un multiplexeur-démultiplexeur à 5 réseau de diffraction, tel que celui illustré aux figures 14 et 15. Le multiplexeur-démultiplexeur 30 de la figure 14 comporte un réseau de diffraction 31 et, à son extrémité qui est opposée à celle pourvue de la fibre optique d'entrée 32 et des fibres optiques de sortie 33, un miroir de type sphérique 34 apte à réfléchir le faisceau incident pour générer les 10 faisceaux respectivement véhiculés par les fibres de sortie 33. La figure 15 illustre quant à elle le multiplex 35 prévu en amont du système optique incorporant ce réseau de diffraction 31. Concernant les déplacements relatifs à réaliser entre 15 l'arrangement 6 de chambres à plasma 7 et la biopuce 1, on peut par exemple disposer cet arrangement 6 sur une structure mobile selon un axe X (voir figure 6). Les déplacements selon cet axe X sont assurés par un moteur de type pas à pas, un système d'aimants, d'électroaimants, un système galvanométrique ou toute autre système permettant d'assurer un déplacement 20 précis selon l'axe X (dans certains cas de figure, l'axe X peut être circulaire avec un rayon constant). La biopuce 1 à analyser se déplace quant à elle selon un axe Y perpendiculaire à la direction de l'axe X, et les mouvements sur cet axe Y sont assurés par des systèmes équivalents à ceux décrits ci-dessus pour l'axe 25 X. Les mouvements en X et en Y sont définis par la hauteur Z selon Y et la largeur I selon X de la surface sondée à chaque impulsion laser. Si cette surface sondée à chaque impulsion n'est pas de section rectangulaire, les mouvements en X et en Y devront être réduits jusqu'à Z/2 et 1/2, pour permettre d'ablater toute la surface des zones parcourues. 30 A chaque mouvement de la biopuce 1 selon l'axe Y, l'arrangement 6 de chambres à plasma 7 effectue K mouvements selon l'axe X, le nombre K étant défini par la distance P entre les fibres d'excitation 10 de 2906035 25 deux chambres à plasma 7 consécutives et par la largeur I selon X de la surface ablatée à chaque impulsion laser, de telle manière que K soit égal à P/I (modulé par le facteur de la forme de l'ablation après vaporisation). La distance P précitée entre deux fibres d'excitation 10 5 consécutives est définie par la largeur L de la biopuce 1 à analyser et le nombre N de fibres d'excitation 10 de l'arrangement 6, de telle manière que P soit égal à L/(N-1) si N >1. Le même raisonnement peut être tenu pour les déplacements selon l'axe Y, si l'arrangement 6 est constitué de plusieurs lignes de chambres 10 à plasmas 7 accolées. Afin de diminuer la surface à ablater pour réaliser l'analyse d'une biopuce 1, l'écartement choisi entre deux fibres d'excitation 10 consécutives est avantageusement un multiple du pas des spots 2 de sondes sur la biopuce 1. En effet les matrices de spots 2 de sondes 15 formant les biopuces 1 selon l'invention sont telles que ces matrices sont espacées d'un pas constant sur de grandes régions de la biopuce 1 (typiquement plusieurs cm2). En réalisant un arrangement 6 de chambres à plasma 7 tenant compte de ce pas, il devient possible de n'ablater que les régions sur lesquelles ont été greffées des sondes. 20 De même, la résolution de l'ablation et les valeurs des déplacements en X et en Y entre deux ablations sont avantageusement adaptées à la région de la biopuce 1 qui est examinée. L'ensemble des déplacements selon les axes X et Y peut être par exemple assuré par une seule platine de micro-déplacements sur laquelle est déposée la biopuce 1, 25 les chambres à plasma 7 restant fixes. Le dispositif de mesure selon un second mode de réalisation de l'invention, qui est illustré aux figures 16 à 21, utilise également en parallèle les techniques LIBS et LIF , et il se différencie essentiellement 30 du dispositif selon le premier mode de l'invention qui vient d'être décrit en référence aux figures 6 à 11 par ce qui suit. 2906035 26 En premier lieu, l'arrangement 106 de chambres à plasma 107 selon ce second mode n'est pas pourvu de fibres d'excitation, du fait que ce sont les orifices d'excitation première 109 au sommet de chaque chambre à plasma 107 qui servent de points d'entrée pour un unique faisceau laser 5 d'excitation 110 délivré par des moyens de focalisation 103. A chaque orifice 109 est avantageusement disposée une lentille optique (non illustrée) faisant converger le faisceau laser 110 à la surface de la biopuce 1 à analyser, cette lentille pouvant éventuellement reposer sur de petits vérins magnétiques constitués par des électro-aimants qui permettent de réaliser la mise au point. 10 Comme illustré à la figure 17, l'enceinte 108 est de préférence séparée de la biopuce 1 d'une distance d' comprise entre 50 pm et 100 pm. Le déplacement du faisceau laser 110 d'un orifice d'excitation 109 à l'autre le long de l'arrangement 106 de chambres 107 est assuré par un jeu de miroirs montés sur des moteurs galvanométriques, formant ainsi une 15 tête galvanométrique 111 prévue en aval d'une tête laser 112. Ce système de miroirs galvanométriques est défini de telle manière que le faisceau laser 110 soit toujours perpendiculaire à la surface de la biopuce 1, dans la zone de celle-ci à analyser. Ceci implique l'utilisation d'un miroir de longueur voisine à la somme de la longueur et de l'amplitude de déplacements de l'arrangement 20 106, et de deux autres miroirs de plus petite taille. Un autre mode de réalisation de cette tête galvanométrique 111 peut consister à utiliser, en plus des deux miroirs animés d'un mouvement de rotation unique, un miroir animé non seulement d'un mouvement de rotation mais encore d'un mouvement de translation, comme 25 illustré à la figure 16. On utilise de préférence une tête galvanométrique 111 avec un objectif télécentrique assurant un champ de travail pour lequel le faisceau d'excitation 110 reste perpendiculaire à la surface à analyser. On notera que de nombreuses possibilités existent pour assurer la perpendicularité du faisceau d'excitation 110 à la biopuce 1, cette 30 contrainte permettant de bien synchroniser le déplacement de l'arrangement 106 de chambres 107 et du faisceau 110, pour la reconstitution de l'image. 2906035 27 En second lieu, les moyens auxiliaires d'excitation seconde 104 comportent une tête laser 116 associée à une lentille de focalisation 117, pour l'émission seconde d'un unique faisceau laser focalisé 118 selon la technique LIF . A cet effet, deux trous ou fentes d'excitation seconde 119 5 sont prévus en vis-à-vis sur la paroi latérale (conique ou cylindrique) de chaque chambre à plasma 107, se faisant face à la hauteur d'expansion prévue du plasma ou à la hauteur d'expulsion de la matière ablatée, et toujours à un angle aveugle pour chacune des N fibres d'acquisition 113 (pourvues chacune d'une lentille 113a analogue à la lentille 13a à proximité 10 de l'orifice d'acquisition 114 correspondant de la chambre 107) ou pour le miroir concave précité (voir figures 18, 20 et 21). Comme illustré à la figure 16, l'ensemble des chambres de l'arrangement 106 est relié par une ligne droite imaginaire passant par les N paires de trous ou fentes d'excitation seconde 119 des n chambres 107. 15 Via ces moyens auxiliaires d'excitation seconde 104, on peut ainsi exciter l'ensemble des plasmas générés par l'unique faisceau laser 110. Exemple de mise en oeuvre du procédé selon l'invention et de fabrication d'une biopuce utilisée dans ce procédé : 20 Il convient de noter au préalable que la fibre d'excitation 10 prévue au sommet de chaque chambre à plasma 7 du dispositif selon le premier mode de l'invention peut être doublée ou même triplée par une ou deux fibres supplémentaires pour, d'une part, permettre la capture de l'image 25 de la surface de la biopuce 1 (en mode RGB , i.e. rouge vert bleu) par une caméra vidéo ou un appareil photographique numérique et pour, d'autre part, assurer l'éclairage de cette surface par une lumière blanche. Ce dispositif selon l'invention permet ainsi de réaliser une image en couleur ou en noir et blanc de la surface de la biopuce 1. 30 De ce fait, on peut repérer la position des sondes, à condition quelles soient greffées sur des mires d'une couleur différente de celle du fond de la biopuce 1. On ne déclenchera l'ablation que lorsque la chambre à 2906035 28 plasma 7, 107 surmontera une de ces mires. Dans cette configuration, on peut établir un code couleur, en mélangeant les trois couleurs de bases du code RGB sur les 3 fois 256 niveaux possibles (niveaux normalement gérés par une caméra vidéo ou par un appareil photographique numérique). 5 Ceci fournit donc 16 777 216couleurs possibles pour ces mires, et permet d'attribuer une mire de couleur différente à chaque spot 2 de cibles. Pour réaliser ces mires de couleurs différentes, on peut utiliser des pigments d'imprimante couleur, qui ne contiennent pas de phosphore (i.e. jaune, cyan, magenta ou CMY en abrégé). De même, il est 10 possible d'utiliser une imprimante de 16 millions de couleurs pour imprimer un réseau de mires de couleurs différentes sur la biopuce 1 (l'imprimante opère la conversion RGB en un mélange de pigments). On greffe alors chaque spot 2 de cibles sur une mire de couleur unique permettant son identification univoque au moment de la lecture 15 de la biopuce 1. En utilisant ce procédé de mires, on peut analyser une biopuce 1 dans laquelle les répartitions des spots de sondes sont aléatoires dans la matrice la constituant. Pour réaliser cela, on met avantageusement en oeuvre, en combinaison selon la présente invention : 20 - le procédé d'analyse d'acides nucléiques en suspension qui est décrit dans la Demande de Brevet Internationale déposée le 24/02/2006 par la Demanderesse sous le n PCT/FR2006/00428, et - le procédé de fabrication d'un réseau organisé de sondes liées à un support par couplage magnétique à l'aide d'un vecteur de fixation, 25 qui est décrit dans la Demande de Brevet Internationale WO-A-02/43855 au nom de la Demanderesse. Plus précisément, on greffe chaque sonde biomoléculaire en un grand nombre de copies sur une bille magnétique ou paramagnétique 30 d'une couleur donnée et unique. Il peut par exemple s'agir d'une bille calibrée de polystyrène contenant des particules de cobalt, de nickel ou d'un de leurs oxydes. 2906035 29 On peint ou l'on teinte par exemple les particules dans la masse par un mélange de pigments, comme décrit pour les mires. On mélange alors ces particules de manière stoechiométrique, de façon à obtenir un mélange stoechiométrique de sondes différentes dans lequel chacune 5 d'entre elles est capable de s'hybrider à une séquence nucléique présente dans un mélange de cibles à analyser. On mélange les sondes et les cibles, chaque type de sondes s'hybridant aux cibles complémentaires et les saturant. On isole, on lave puis on remet en solution les particules et les complexes sonde/cible. 10 En référence aux figures 22 à 26, une feuille 40 par exemple à base d'un polyimide tel que du Kapton , de 1 pm à 10 pm d'épaisseur (de préférence égale au diamètre de chaque bille 41a, 41b ou 41c) est percée d'une multitude de trous 42 de diamètre égal à celui des billes 41a, 41b, 41c pour former une matrice de trous 42 (idéalement, il y a autant de trous 42 que 15 de billes 41a, 41b, 41c). On dépose ou bien on colle cette feuille 40 en Kapton sur une lame aimantée 43 de quelques centimètres de côté (idéalement 2,5 cm x 7,6 cm). La lame 43 est avantageusement constituée d'un polymère ou d'une résine contenant des particules aimantées, et le champ magnétique généré par cette lame 43 est de l'ordre de 0,5 T à 5 T. La 20 feuille 40 forme un écran magnétique sur ses domaines recouvrant la lame 43, alors qu'elle laisse le champ magnétique libre au niveau des trous 42. Selon l'exemple de réalisation de la figure 22 en relation avec la figure 25, chaque bille 41a est constituée de deux demi-sphères identiques 25 S1 et S2 qui sont collées l'une à l'autre, via leurs tranches T (i.e. surfaces planes) respectives, dans l'un de ces trous 42 et dont seule la demi-sphère inférieure S2 tournée vers la lame aimantée 43 présente des propriétés paramagnétiques, étant par exemple réalisée en un polymère ou une résine contenant des particules paramagnétiques. 30 Sont également visibles aux figures 22 à 26 les sondes biologiques 44 greffées sur la surface convexe de la demi-sphère supérieure S1, qui est colorée pour former la mire précitée. 2906035 30 Dans la variante de la figure 23, la demi-sphère inférieure S2' présente un diamètre inférieur à celui de la demi-sphère supérieure colorée Si', sur laquelle sont greffées les sondes 44, et elle est également assemblée par collage à cette dernière et de manière centrée, via les tranches T 5 respectives des demi-sphères Si' et S2', formant ainsi chaque bille 41b. Dans l'autre variante illustrée aux figures 24 et 26, chaque bille 41c est constituée d'une demi-sphère supérieure colorée Si", sur la surface convexe de laquelle sont greffées les sondes 44, un cône S2" à propriétés paramagnétiques étant collé par sa base sous la tranche T de cette 10 demi-sphère Si" et en regard de la lame aimantée 43, à l'intérieur des trous 42. On notera que cette géométrie asymétrique de bille 41c permet d'améliorer le rendement du procédé et en outre d'incruster plus facilement de telles billes 41c dans les trous 42 de la feuille 40, prévus 15 également de forme conique. Comme indiqué précédemment, la demi-sphère supérieure S1, SI', Si" de chacune de ces billes 41a, 41b, 41c est avantageusement constituée d'une matière plastique peinte ou colorée, telle que le polystyrène 20 (ou de tout autre matériau biocompatible ne contenant pas de phosphore). Après avoir assemblé la feuille de Kapton 40 sur la lame aimantée 43, on dépose les complexes billes/sondes/cibles à la surface de cette feuille 40 recouvrant cette lame 43. Puis on déplace un stylet, dont la 25 pointe est alimentée par un champ magnétique inférieur au champ de la lame 43 (typiquement de 0,5 T à 1,5 T, via un aimant statique ou un électroaimant), au-dessus de la feuille 40, à une distance qui représente sensiblement les trois quarts du diamètre moyen des billes 41a, 41b, 41c. Ces dernières sont attirées par ce stylet, et se déplacent à la surface de la feuille 40, du fait que 30 le champ magnétique à travers la feuille 40 est plus faible que celui du stylet. Toutefois, dès que le stylet passe à proximité d'un trou 42 de la feuille 40, une bille 41a, 41b, 41c est capturée par le champ magnétique, du fait que ce 2906035 31 dernier est plus fort dans ce trou 42. En raison de la taille des trous 42 et de la concurrence des champs magnétiques, une seule bille 41a, 41b, 41c sera capturée par trou 42. Une fois toutes les billes 41a, 41b, 41c capturées, on peut enlever la lame 43 en laissant les billes 41a, 41b, 41c sur la feuille 40. 5 On analyse ensuite la lame magnétique 43 et/ou la feuille de Kapton 40 par le dispositif de mesure selon l'invention décrit ci-dessus. On détermine la couleur de chaque bille 41a, 41b, 41c grâce au système de capture d'image, ce qui permet de déterminer la nature de la sonde 44. On détermine la quantité de sondes 44 fixées sur chaque bille 41a, 41b, 41c par 10 la quantification du phosphore, après ablation de matière et analyse des raies d'émission d'un plasma chaud généré par cette ablation. Comme illustré à la figure 27, la fabrication des billes polaires magnétiques 41a peut être réalisée par usinage laser (voir flèches B et C) 15 d'une plaque 50 constituée de deux feuilles ou films 51 et 52 en matériaux différents qui sont respectivement constitués de polystyrène et d'une résine paramagnétique et qui sont collés ensemble via une couche adhésive 53. Par exemple, il est possible d'utiliser deux feuilles 51 et 52 à base d'un polymère de dénomination Vacrel dont seule la feuille inférieure 52 contient des 20 nanoparticules de nickel ou de cobalt. Lors d'une première étape (i), on obtient ainsi par cet usinage laser des paires de demi-sphères SI et S2 collées ensemble, ces paires étant reliées entre elles via la couche adhésive 53. Lors d'une seconde étape (ii), on procède à la coloration des 25 demi-sphères supérieures S1, dans le cas où le matériau les constituant n'est pas déjà coloré. Lors d'une troisième étape (iii), on procède à la séparation de ces paires de demi-sphères S1 et S2 par un nouvel usinage laser (flèches D), pour l'individualisation des billes 41a correspondantes et le greffage des 30 sondes 44. On polymérise ainsi les billes 41a dans la masse des films 51 et 52, par focalisation d'un faisceau laser. La structure finale des billes 41a 2906035 32 peut être obtenue à l'aide de caches ou d'une grille posée à la surface des films 51 et 52, pour l'obtention de chaque paire de demi-sphères S1 et S2 collées ensemble. Ces billes 41a sont libérées par digestion des parties non polymérisées des films, via de la soude. 5 Une autre alternative pour réaliser ces billes polaires magnétiques consiste à les fabriquer à partir de deux résines photosensibles différentes et d'un ou de deux faisceaux lasers, pour réaliser une stéréophotographie. On utilise une première résine magnétiquement neutre pour la synthèse de la première partie (e.g. demi-sphère Si) de la bille 4-1a, et 10 une deuxième résine contenant des particules paramagnétiques de cobalt ou de nickel pour la synthèse de la deuxième partie (e.g. demi-sphère S2). REVENDICATIONS 1) Procédé de mesure quantitative de cibles biomoléculaires ayant été déposées sur une biopuce (1) de type à matrice de sondes (44) hybridées par lesdites cibles, ladite matrice comportant une multitude de points de mesure (2) comprenant chacun une pluralité desdites sondes, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes : a) on focalise au moins un faisceau laser (10', 110, 18, 118) sur chaque point de mesure, pour en extraire un plasma chaud (P) et confiné comprenant un élément chimique à quantifier qui est uniquement présent dans lesdites cibles, b) on détecte et l'on analyse des raies lumineuses d'émission dudit plasma pour chaque point de mesure, en mesurant les intensités respectives de ces raies, puis c) on détermine, via un étalonnage préalable de ces raies établissant une corrélation entre les intensités des raies propres audit élément à quantifier et des concentrations données de cet élément, la concentration dans chaque point de mesure dudit élément ou d'un groupe l'incorporant au sein desdites cibles. 2) Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'on déduit de l'étape c) le nombre d'atomes dudit élément dans chaque point de mesure (2), pour en déduire le nombre de sondes (44) ayant été hybridées par lesdites cibles. 3) Procédé selon la revendication 1 ou 2, caractérisé en ce que l'on utilise la technique de spectroscopie d'émission optique induite par laser ( LIBS ) pour la mise en oeuvre des étapes a) à c). 4) Procédé selon la revendication 3, caractérisé en ce que l'on utilise en parallèle la technique de fluorescence induite par laser ( LIF ) pour la mise en oeuvre des étapes a) à c). 30 5 10 2906035 34 5) Procédé selon une des revendications précédentes, caractérisé en ce que l'on utilise des cibles comprenant des acides nucléiques non marqués. 6) Procédé selon une des revendications 5, caractérisé en ce que l'on utilise des sondes choisies dans le groupe constitué par les acides nucléiques, les acides nucléiques peptides ( PNA ), les acides nucléiques verrouillés ( LNA ) et les éthers ribonucléiques ( ERN ). 7) Procédé selon la revendication 5 ou 6, caractérisé en ce que l'on utilise, à titre d'élément à quantifier, le phosphore présent dans les cibles d'acides nucléiques pour la détection dans ledit plasma (P), à l'étape b), de raies d'émission atomiques et ioniques du phosphore. 15 20 25 8) Procédé selon la revendication 7, caractérisé en ce que l'on détecte à l'étape b) les raies d'émission du phosphore à la longueur d'onde de 253 nm 3 nm et/ou 194 nm 3 nm et/ou 153 nm 3 nm. 9) Procédé selon une des revendications précédentes, caractérisé en ce que, antérieurement à l'étape a), l'on traite chaque cible lors d'une étape de calibration pour que sa taille soit sensiblement égale à celle de chaque sonde (44), de sorte à éliminer les parties non hybridées des cibles. 10) Procédé selon la revendication 9, caractérisé en ce que l'on met en oeuvre cette étape de calibration en traitant la biopuce (1) par une enzyme de type nucléase, telle qu'une exonucléase, qui est apte à dégrader tous les acides nucléiques à simple brin qui sont présents sur chaque point de mesure (2) pour ne conserver que des doubles brins sonde/ cible. 11) Procédé selon une des revendications précédentes, caractérisé en ce que ledit ou chaque faisceau laser (10', 110, 18, 118) utilisé 2906035 à l'étape a) est émis dans la gamme infrarouge û visible - ultraviolet selon une impulsion comprise entre 1 fs et 100 ns, avec une fréquence comprise entre 10 Hz et 100 kHz et une énergie comprise entre 10 mW et 1 kW. 5 12) Procédé selon la revendication 11, caractérisé en ce que ledit ou chaque faisceau laser (10', 110, 18, 118) présente une densité de puissance à la surface de chaque point de mesure (2) qui est supérieure à 1 GW.cm-2, pour l'obtention par vaporisation du plasma (P) de type chaud et à durée de vie d'environ 2 ps. 10 13) Procédé selon une des revendications précédentes, caractérisé en ce que l'on utilise un unique faisceau laser (110) qui ablate chaque point de mesure (2) selon une surface de côté compris entre 1 pm et 20 pm, et en ce qu'on déplace la biopuce (1) via des micro-déplacements 15 planaires selon un pas sensiblement égal à 10 pm, pour balayer la totalité desdits points de mesure. 14) Procédé selon une des revendications 1 à 12, caractérisé en ce que l'on déplace simultanément plusieurs faisceaux lasers (10') en 20 mouvement relatif par rapport à la biopuce (1), pour que ces faisceaux ablatent la totalité desdits points de mesure (2). 15) Procédé selon une des revendications précédentes, caractérisé en ce que l'on confine le plasma (P) généré par ledit ou chaque 25 faisceau (10', 110, 18, 118) de telle sorte que ce plasma n'interfère pas avec les autres points de mesure (2) à analyser, et en ce que l'on détecte simultanément les raies d'émissions du plasma correspondant audit ou à chaque faisceau. 30 16) Procédé selon la revendication 15, caractérisé en ce que l'on adjoint audit ou à chaque plasma (P) confiné au moins un agent d'activation, tel que de l'argon ou de l'hélium. 2906035 36 17) Dispositif pour la mise en oeuvre d'un procédé de mesure quantitative selon une des revendications précédentes, caractérisé en ce qu'il comporte : 5 - une biopuce (1) de type à matrice de sondes (44) hybridées par des cibles biomoléculaires, ladite matrice comportant une multitude de points de mesure (2) comprenant chacun une pluralité desdites sondes, - une unité de génération et de confinement de plasma qui comprend des moyens de focalisation (3 et 4) d'au moins un faisceau laser 10 (10', 110, 18, 118) sur les points de mesure pour en extraire un plasma chaud (P) contenant un élément chimique à quantifier, tel que le phosphore, qui est uniquement présent dans lesdites cibles, et des moyens pour confiner le ou chaque plasma ainsi extrait, et - une unité de spectrographie (5) qui est reliée à ladite unité 15 de génération et de confinement de plasma et qui est adaptée pour détecter et analyser des raies d'émission du plasma pour chaque point de mesure, de telle sorte que l'on détermine la concentration dans chaque point de mesure dudit élément à partir d'une corrélation entre les intensités des raies propres audit élément à quantifier et des concentrations données de cet élément. 20 18) Dispositif selon la revendication 17, caractérisé en ce que lesdites cibles hybridant lesdites sondes (44) comprennent des acides nucléiques non marqués, et en ce que lesdites sondes sont choisies dans le groupe constitué par les acides nucléiques, les acides nucléiques peptides 25 ( PNA ), les acides nucléiques verrouillés ( LNA ) et les éthers ribonucléiques ( ERN ). 19) Dispositif selon la revendication 18, caractérisé en ce que la taille de chaque cible est sensiblement égale à celle de chaque sonde (44), 30 de telle sorte que toutes les cibles de chaque point de mesure (2) sont hybridées. 2906035 37 20) Dispositif selon une des revendications 17 à 19, caractérisé en ce que lesdits moyens pour confiner le ou chaque plasma (P) extrait comportent au moins un arrangement (6, 106) de n (n 1) chambre(s) à plasma (7, 107) délimité par une enceinte (8, 108) qui surmonte la biopuce 5 (1) en étant ouverte sur cette dernière, ladite enceinte étant pourvue d'orifices d'excitation (9, 109) qui sont chacun destinés à recevoir un faisceau laser d'excitation (10', 110) apte à former ledit plasma et étant traversée par des fibres optiques d'acquisition (113) des raies d'émission de ces plasmas pour leur transmission à ladite unité de spectrographie (5), ledit ou chaque 10 arrangement de chambre(s) à plasma étant en mouvement relatif par rapport à la biopuce. 21) Dispositif selon la revendication 20, caractérisé en ce que ladite unité de génération de plasma comporte des moyens (3) pour émettre 15 une pluralité de faisceaux lasers d'excitation (10') et pour les acheminer respectivement et de manière simultanée à l'intérieur desdites chambres à plasma (7) via lesdits orifices d'excitation (9). 22) Dispositif selon la revendication 21, caractérisé en ce que 20 lesdits faisceaux laser d'excitation (10') sont respectivement issus de différentes sources lasers. 23) Dispositif selon la revendication 21 ou 22, caractérisé en ce que l'orifice d'excitation (9) de chaque chambre à plasma (7) reçoit une 25 fibre optique d'excitation (10) qui est destinée à guider le faisceau laser (10') correspondant à une longueur d'onde donnée et qui est pourvue à son extrémité libre d'une première lentille optique adaptée pour faire converger ce faisceau sur la biopuce (1). 30 24) Dispositif selon la revendication 21, caractérisé en ce que lesdits faisceaux laser d'excitation (10') sont issus d'une unique source laser qui émet un faisceau amont (22) à plusieurs longueurs d'ondes superposées 2906035 38 et distantes entre elles de 0,4 nm à 1 nm et d'un démultiplexeur (20, 30) en longueurs d'ondes pour la séparation de ce faisceau amont en des faisceaux aval (21) présentant respectivement autant de longueurs d'onde que de fibres optiques d'excitation (10) destinées à les véhiculer. 5 25) Dispositif selon la revendication 20, caractérisé en ce que ladite unité de génération de plasma comporte des moyens (103) pour émettre un unique faisceau laser d'excitation (110) et pour l'acheminer successivement à l'intérieur desdites chambres à plasma (107) en le 10 déplaçant d'un orifice d'excitation (109) à un autre via une tête galvanométrique (111). 26) Dispositif selon une des revendication 21 à 25, caractérisé en ce que chaque chambre à plasma (7, 107) est délimitée par une surface 15 latérale de révolution dont le sommet est pourvu de l'un desdits orifices d'excitation (9, 109), qui présente sur cette surface latérale un orifice d'acquisition (14, 114) recevant ladite fibre d'acquisition (13, 113) et qui débouche immédiatement au-dessus de la biopuce (1) via une ouverture inférieure de ladite chambre, de sorte à confiner le plasma (P) extrait de celle- 20 ci par le faisceau laser (10', 110) correspondant. 27) Dispositif selon la revendications 26, caractérisé en ce que la fibre optique d'acquisition (14, 114) de chaque chambre à plasma (7, 107) est pourvue d'une seconde lentille optique (13a, 113a) à son extrémité 25 libre débouchant dans la chambre, et en ce que la face interne de ladite surface latérale est conçue pour former localement un miroir concave (15) apte à optimiser la réflexion des radiations lumineuses émises par ledit plasma (P) en direction de ladite fibre d'acquisition (13, 113). 30 28) Dispositif selon la revendication 26 ou 27, caractérisé en ce que ladite unité de génération de plasma comporte également des moyens auxiliaires (4, 104) d'émission d'un faisceau laser d'excitation seconde (18, 2906035 39 118) et d'introduction de ce faisceau d'une chambre (7, 107) à une autre, via au moins un orifice d'excitation seconde (19, 119) formé dans la partie inférieure de la surface latérale de chaque chambre à hauteur d'expansion du plasma (P) ou d'expulsion de la matière extraite de la biopuce (1), chaque 5 orifice d'excitation seconde étant formé à un emplacement prévu pour ne pas être affecté par ladite fibre d'acquisition (13, 113) ni par ledit miroir concave (15). 29) Dispositif selon la revendication 28, lorsque la 10 revendication 26 est selon la revendication 21, caractérisé en ce que lesdits moyens auxiliaires d'émission (4) comportent une tête galvanométrique (17) apte à déplacer ledit faisceau d'excitation seconde (18) d'un orifice d'excitation seconde (19) à un autre. 15 30) Dispositif selon la revendication 29, caractérisé en ce que chaque orifice d'excitation seconde (19) est pourvu d'une troisième lentille optique apte à faire converger le faisceau laser d'excitation seconde (18) correspondant à ladite hauteur d'expansion ou d'expulsion. 20 31) Dispositif selon la revendication 28, lorsque la revendication 26 est selon la revendication 25, caractérisé en ce que chaque chambre à plasma (107) présente une paire d'orifices d'excitation seconde (119) se faisant face, de telle sorte que ces paires d'orifices soient alignées au sein dudit arrangement (106) de chambres pour la focalisation à travers cet 25 alignement d'un faisceau laser d'excitation seconde (118) émis par lesdits moyens auxiliaires d'émission (104). 32) Dispositif selon une des revendications 17 à 31, caractérisé en ce que chaque point de mesure (2) comporte une bille 30 magnétique ou paramagnétique (41a, 41b, 41c), par exemple en polystyrène contenant des particules de cobalt, de nickel ou de leur oxyde, chaque bille présentant une couleur différente de celle du reste de la biopuce (1) et de 2906035 celle des autres points de mesure, de sorte que ces billes forment des mires aptes à être identifiées de manière univoque par un système de capture d'images dont est pourvue ladite unité de spectrographie (5). 5 33) Dispositif selon la revendication 32, caractérisé en ce que la biopuce (1) comporte une feuille (40) en matière plastique formant écran magnétique, par exemple en polyimide, sur laquelle sont formés autant de trous (42) que de billes (41a, 41b, 41c) et qui surmonte une lame aimantée (43) apte à générer dans ces trous un champ magnétique d'intensité comprise 10 entre 0,5 T et 5 T. 34) Dispositif selon la revendication 33, caractérisé en ce que chaque bille (41a, 41b) est constituée de deux demi-sphères (Si et S2 ou Si' et S2') qui sont collées l'une à l'autre dans l'un desdits trous (42) et dont seule 15 la demi-sphère inférieure (S2 ou S2') tournée vers ladite lame aimantée (43) présente des propriétés paramagnétiques, lesdites sondes (44) étant greffées sur la surface convexe de la demi-sphère supérieure (Si ou Si') qui est colorée pour former ladite mire. 20 35) Dispositif selon la revendication 33, caractérisé en ce que chaque bille (41c) est constituée d'une demi-sphère supérieure (Sr) colorée qui est destinée à former ladite mire et sur la surface convexe de laquelle sont greffées lesdites sondes (44), un cône (S2") présentant des propriétés paramagnétiques étant collé par sa base sous la tranche (T) de cette demi- 25 sphère et du côté de ladite lame aimantée (43), à l'intérieur desdits trous (42). 36) Dispositif selon une des revendications 26 à 35, caractérisé en ce que ladite surface latérale de chaque chambre à plasma (7, 107) est cylindrique ou conique en divergeant vers la biopuce (1), de hauteur 30 comprise entre 2 mm et 10 mm et débouchant à une distance de la biopuce comprise entre 5 pm et 200 pm, avec un diamètre pour ladite ouverture inférieure qui est compris entre 1 mm et 5 mm. 2906035 41 37) Dispositif selon une des revendications 26 à 36, caractérisé en ce que chaque chambre à plasma (7, 107) est pourvue en outre d'un orifice d'injection gazeuse (11) qui est formé sur ladite surface 5 latérale à proximité immédiate dudit orifice d'excitation (9, 109) et qui reçoit un conduit (12) destiné à introduire un gaz inerte, tel que de l'argon ou de l'hélium, apte à appauvrir la chambre en oxygène et à activer ledit plasma (P) lors de sa formation. 10 38) Dispositif selon une des revendications 20 à 37, caractérisé en ce que ledit arrangement (6) de chambres à plasma (7) et la biopuce (1) sont respectivement montés mobiles selon deux axes X et Y orthogonaux, de telle manière qu'à chaque mouvement de la biopuce selon l'axe Y ledit arrangement effectue K mouvements selon l'axe X, où : 15 - K est défini par le rapport P/I de la distance P entre les fibres d'excitation (10) respectives de deux chambres adjacentes et de la largeur I selon l'axe X de la surface ablatée à chaque impulsion laser, ce rapport étant modulé par le facteur de la forme de l'ablation après vaporisation, et où - la distance P entre ces deux fibres d'excitation est définie 20 par l'équation P = L/(N-1) avec N >1, L étant la largeur de la biopuce et N le nombre de fibres d'excitation dans ledit arrangement. 39) Dispositif selon la revendication 38, caractérisé en ce que la distance P entre deux fibres d'excitation (10) adjacentes est un multiple du 25 pas entre deux points de mesure (2) sur la biopuce (1). 40) Dispositif selon une des revendications 20 à 39, caractérisé en ce que ladite enceinte (8, 108) est pourvue d'au moins un solénoïde adapté pour y générer un champ magnétique, notamment de sorte 30 à augmenter la durée de vie du ou de chaque plasma (P) et/ou à contrôler sa forme. 2906035 42 41) Dispositif selon une des revendications 20 à 40, caractérisé en ce qu'il est pourvu de moyens pour générer un champ électrique, qui sont par exemple constitués d'un matériau électriquement conducteur pour le support de la biopuce ou bien d'une électrode portée par 5 ce support de biopuce à laquelle est associée une autre électrode portée par ladite enceinte pour générer une différence de potentiel. 42) Dispositif selon une des revendications 20 à 41, caractérisé en ce que ladite enceinte (8, 108) présente une géométrie 10 sensiblement parallélépipédique qui est adaptée pour entourer au moins une ligne de plusieurs chambres à plasma (7, 107), et qui est formée par une technique de structuration mécanique ou au laser à partir d'une poudre ou d'un polymère liquide, telle que la stéréolithographie, le laminage, le frittage ou la photolithographie. 15 43) Dispositif selon une des revendications 17 à 42, caractérisé en ce que ladite unité de spectrographie (5) comprend au moins un spectrographe de type photomultiplicateur, et en ce qu'un filtre optique transparent uniquement à la longueur d'onde souhaitée est agencé entre 20 chaque fibre optique d'acquisition (13, 113) et ledit spectrographe.