FR 2903605 A1 20080118 FR 0606324 A 20060712 L'invention a pour objet une méthode permettant d'induire une protection homologue contre les 4 sérotypes de la dengue chez un patient, comprenant l'administration séquentielle audit patient (i) d'une dose d'un virus vaccinal de la dengue d'un premier sérotype et d'une dose d'un virus vaccinal de la dengue d' un deuxième sérotype , et (ii) d'une dose d'un virus vaccinal de la dengue d'un troisième sérotype et d'une dose d'un virus vaccinal de la dengue d'un quatrième sérotype, dans laquelle les virus vaccinaux de la dengue (ii) sont administrés au moins 30 jours et au plus 1 ans après administration des virus vaccinaux de la dengue (i) .. Les maladies dengue sont causées par quatre virus du genre flavivirus de type sérologique proches mais distincts d'un point de vue antigénique (Gübler et al., 1988 In: Epidemiology of arthropod-borne viral disease. Monath TPM, editor, Boca Raton (FL): CRC Press: 223-60 ; Kautner et al., 1997, J. of Pediatrics, 131:516-524; Rigau-Pérez et al., 1998, Lancet; 352: 971-977 ; Vaughn et al., 1997, J Infect Dis; 176: 322-30). L'infection avec un sérotype de la dengue peut produire un spectre de maladie clinique allant d'un syndrome viral non spécifique jusqu'à une maladie sévère hémorragique fatale. La période d'incubation de la fièvre dengue après piqûre du moustique est d'environ 4 jours (allant de 3 à 14 jours). La fièvre dengue est caractérisée par une fièvre biphasique, des maux de tête, des douleurs dans différentes parties du corps, une prostration, des éruptions, une lymphadénopathie et une leucopénie (Kautner et al., 1997, J. of Pediatrics, 131:516-524 ; Rigau-Pérez et al., 1998, Lancet; 352: 971-977). La période virémique est la même que pour des maladies fébriles (Vaughn et al., 1997, J. Infect. Dis.; 176: 322-30). La guérison de la fièvre dengue est acquise au bout de 7 à 10 jours, mais une asthénie prolongée est usuelle. Des baisses de la numération des leucocytes et des plaquettes sont fréquentes. La dengue hémorragique est une maladie fébrile sévère caractérisée par des anomalies de l'homéostasie et une augmentation de la perméabilité vasculaire qui peut conduire à une hypovolémie et à une hypotension (dengue avec syndrome de choc) souvent compliquée par des hémorragies internes sévères. Le taux de mortalité de la dengue hémorragique peut atteindre jusqu'à 10 % sans thérapie, mais est de 1 % dans la plupart des centres ayant une 2903605 2 expérience thérapeutique (WHO technical Guide, 1986. Dengue haemorrhagic fever: diagnosis, treatment and control, p1-2. World Health Organization, Geneva, Switzerland). Le diagnostic de routine en laboratoire de la dengue est basé sur 5 l'isolation du virus et/ou la détection d'anticorps spécifiques du virus de la dengue. La dengue est la deuxième maladie infectieuse tropicale la plus importante après la malaria, plus de la moitié de la population mondiale (2,5 milliards) vivant dans des zones à risque de transmission épidémique. Chaque 10 année, les cas de dengue sont estimés à 50-100 millions, les cas de patients hospitalisés pour une dengue hémorragique à 500 000, et le nombre de morts à 25 000. La dengue est endémique en Asie, dans le Pacifique, en Afrique, en Amérique latine et dans les Caraïbes. Plus de 100 pays tropicaux sont endémiques pour les infections par le virus de la dengue et la dengue 15 hémorragique a été documentée dans 60 de ces pays (Gubler, 2002, TRENDS in Microbiology. 10:100-103 ; Monath, 1994, Proc. Natl. Acad. Sci.; 91: 2395-2400). Un certain nombre de facteurs bien décrits semblent être impliqués dans la dengue : la croissance de la population ; une urbanisation non planifiée et non contrôlée, en particulier en association avec la pauvreté ; une 20 augmentation des voyages aériens ; le manque de contrôle effectif des moustiques et la détérioration des infrastructures sanitaires et de santé publique (Gubler, 2002, TRENDS in Microbiology. 10:100-103). Les voyageurs et expatriés sont de plus en plus alertés contre la dengue (Shirtcliffe et al., 1998, J. Roy. Coll. Phys. Lond..; 32: 235-237). La dengue a constitué une des 25 principales causes de maladies fébriles au sein les troupes américaines au cours de déploiements dans des zones tropicales endémiques pour la dengue (DeFraites et al., 1994, MMWR 1994; 43: 845-848). Les virus sont maintenus dans un cycle qui implique les humains et Aedes aegypti, un moustique domestique piquant le jour, qui préfère 30 s'alimenter sur l'homme. L'infection chez l'homme est initiée par l'injection du virus au cours du repas de sang d'un moustique Aedes aegypti infecté. Le virus salivaire est déposé principalement dans les tissus extravasculaires. La première catégorie de cellules infectées après inoculation sont les cellules 2903605 3 dendritiques, qui migrent ensuite vers les ganglions lymphatiques (Wu et al., 2000, Nature Med.; 7:816-820). Après une réplication initiale dans la peau et dans les ganglions lymphatiques, le virus apparaît dans le sang au cours de la phase fébrile aiguë, généralement pendant 3 à 5 jours. 5 Les monocytes et les macrophages sont, avec les cellules dendritiques, parmi les premières cibles du virus de la dengue. La protection contre une réinfection homotypique est complète et dure probablement toute la vie, mais une protection croisée entre les différents types de dengue dure moins de quelques semaines à quelques mois (Sabin, 1952, Am. J. Trop. Med. Hyg.; 1: 10 30-50). En conséquence, un sujet peut subir une infection avec un sérotype différent. Une seconde infection par la dengue est en théorie un facteur de risque de développer une maladie dengue sévère. Cependant, la dengue hémorragique est multifactorielle : ces facteurs incluent la souche du virus impliqué, ainsi que l'âge, le statut immun et la prédisposition génétique du 15 patient. Deux facteurs jouent un rôle majeur dans la survenue de la dengue hémorragique: une réplication virale rapide avec une virémie élevée (la sévérité de la maladie étant associée au niveau de la virémie ; Vaughn et al., 2000, J. Inf. Dis.; 181: 2-9) et une réponse inflammatoire importante avec la libération de niveaux élevés de médiateurs inflammatoires (Rothman and Ennis, 1999, 20 Virology; 257: 1-6). II n'y a aucun traitement spécifique contre la dengue. Le traitement de la fièvre dengue est symptomatique avec un alitement, un contrôle de la fièvre et de la douleur avec des antipyrétiques et des analgésiques, et une prise de boisson adéquate. Le traitement de la dengue hémorragique nécessite l'équilibrage des pertes de liquide, le remplacement 25 des facteurs de coagulation et la perfusion d'héparine. Les mesures de prévention reposent actuellement sur le contrôle du vecteur et des mesures de protection personnelle qui sont difficiles à mettre en oeuvre et coûteuses. Aucun vaccin contre la dengue n'est approuvé pour le moment. Etant donné que les quatre sérotypes de la dengue sont en circulation 30 dans le monde et comme ils ont été rapportés comme étant impliqués dans des cas de fièvre hémorragique dengue, la vaccination devrait idéalement conférer une protection contre les quatre sérotypes du virus de la dengue. 2903605 -4 Des stratégies d'immunisations séquentielles ont été précédemment mises en oeuvre dans le but d'induire une protection hétérologue entre les différents sérotypes de la dengue. Ainsi, Price (1968, Am. J. Epid., 88 :392-397) a décrit une méthode 5 d'immunisation séquentielle contre la dengue comprenant une série de deux infections avec la dengue sérotype 1 puis avec la dengue sérotype 2 qui conférait une protection dans un test d'épreuve avec la dengue sérotype 3 ou 4. Whitehead et al. (1970, Am. J. Trop. Med. Hyg., 19:94-102) ont cherché 10 à déterminer l'influence d'une infection monovalente séquentielle avec deux ou trois des quatre sérotypes de la dengue sur l'immunité hétérologue conférée. Des gibbons ont ainsi été infectés initialement avec un virus dengue de sérotype 1, 2, 3 ou 4. Suite à une deuxième infection avec un sérotype hétérologue, une virémie variable a été détectée qui était dépendante de la 15 séquence d'infection et en particulier du sérotype utilisé pour la première infection. Plus spécifiquement, une seconde virémie apparaissait chez des gibbons infectés initialement avec le sérotype 2, 3 ou 4 puis provoqués avec le sérotype 1, 2 ou 4. Scherer et al. (1972, Am. J. Epid., 95 :67-79) ont décrit une infection 20 monovalente séquentielle comprenant une première infection avec un des quatre sérotypes de la dengue suivie d'une deuxième infection, voire d'une troisième infection, avec un sérotype homologue ou hétérologue. Les schémas proposés n'ont pas permis d'obtenir une protection satisfaisante contre une épreuve par un sérotype hétérologue 25 Halstead et al. (1973, Am. J. Trop. Med. Hyg., 22 :365-374) ont évalué chez le singe une méthode d'immunisation séquentielle contre la dengue comprenant une série de deux, trois ou quatre infections monovalentes avec des sérotypes hétérologues 1 à 4 de la dengue. Les auteurs ont conclu qu'une protection contre une infection ultérieure pouvait être obtenue avec la 30 séquence d'immunisation sérotypes 1, 2 puis 4 suivie d'une épreuve avec le sérotype 3. L'immunisation bivalente n'est ni décrite ni suggérée. De plus les auteurs déconseillent les immunisations séquentielles du fait de leur lourdeur et du caractère aléatoire des résultats générés. 2903605 5 Halstead et al. (1973, Am. J. Trop. Med. Hyg., 22 :375-381) ont également montré qu'une immunisation bivalente avec deux sérotypes hétérologues de la dengue ne protégeait pas, ou seulement partiellement, d'une infection par un troisième sérotype de la dengue. 5 Dans le cadre de la présente invention, l'objectif est d'induire une protection homologue contre les 4 sérotypes de la dengue. Les inventeurs ont mis en évidence qu'il est possible de générer une réponse immune comprenant des anticorps neutralisant les 4 sérotypes lorsque ces derniers sont administrés séquentiellement deux par deux. 10 Les inventeurs ont en particulier montré qu'une immunisation bivalente DEN-1,2 suivie deux mois plus tard par une immunisation bivalente DEN-3,4 induit des réponses élevées contre les quatre sérotypes chez tous les singes immunisés.La réponse immune ainsi générée est plus importante quantitativement et qualitativement (couvre tous les sérotypes). 15 Selon un premier objet la présente invention concerne donc des compositions vaccinales comprenant (i) une dose d'un virus vaccinal de la dengue d'un premier sérotype et une dose d'un virus vaccinal de la dengue d'un deuxième sérotype, et (ii) une dose d'un virus vaccinal de la dengue d'un troisième sérotype et une dose d'un virus vaccinal de la dengue d'un quatrième 20 sérotype , comme composition vaccinale de combinaison contre la dengue pour une administration séquentielle, dans laquelle les virus vaccinaux de la dengue (ii) sont administrés au moins 30 jours et au plus 1 ans après l'administration des virus vaccinaux de la dengue (i). Selon un mode de réalisation des compositions vaccinales selon 25 l'invention , les virus vaccinaux (ii) sont administrés 30 jours à 3 mois après l'administration des virus vaccinaux (i) Selon un autre mode de réalisation particulier des compositions vaccinales selon l'invention, les virus vaccinaux (ii) sont administrés 30 jours après l'administration des virus vaccinaux (i). 30 Selon un autre mode de réalisation des compositions vaccinales selon l'invention, les virus vaccinaux de la dengue (i) sont administrés sous forme d'une composition vaccinale bivalente. 2903605 6 Selon un autre mode de réalisation des compositions vaccinales selon l'invention, les virus vaccinaux de la dengue (ii) sont administrés sous forme d'une composition vaccinale bivalente. Selon un mode de réalisation particulie des compositions vaccinales 5 selon l'invention, ledit virus vaccinal de la dengue de sérotype 1 est sélectionné dans le groupe constitué de la souche VDV1 et d'un ChimerivaxTM DEN-1. Selon un autre mode de réalisation particulier des compositions vaccinales selon l'invention, ledit virus vaccinal de la dengue de sérotype 2 est sélectionné dans le groupe constitué de la souche VDV2 et d'un ChimerivaxTM 10 DEN-2. Selon un autre mode de réalisation particulier des compositions vaccinales selon l'invention, ledit virus vaccinal de la dengue de sérotype 1 est la souche VDV1 et ledit virus vaccinal de la dengue de sérotype 2 est la souche VDV2. 15 Selon un autre mode de réalisation particulier des compositions vaccinales selon l'invention, ledit virus vaccinal de la dengue de sérotype 1 est un ChimerivaxTM DEN-1 et ledit virus vaccinal de la dengue de sérotype 2 est un ChimerivaxTM DEN-2. Selon un autre mode de réalisation particulier des compositions 20 vaccinales selon l'invention, ledit virus vaccinal de la dengue de sérotype 3 est un ChimerivaxTM DEN-3. Selon un autre mode de réalisation particulier des compositions vaccinales selon l'invention, ledit virus vaccinal de la dengue de sérotype 4 est un ChimerivaxTM DEN-4,. 25 Selon un autre mode de réalisation particulier des compositions vaccinales selon l'invention, les premier et deuxième sérotypes sont respectivement CYD DEN1 et CYD DEN2 et les troisième et quatrième sérotypes sont respectivement CYD DEN 3 et CYD DEN 4 . Selon un autre mode de réalisation particulier des compositions 30 vaccinales selon l'invention, les doses de virus vaccinaux de la dengue de sérotypes 1, 2, 3 et 4 sont chacune comprise dans une gamme allant de 103 à 105 DICC50. 2903605 -7 L'invention a également pour objet l' utilisation d'un virus vaccinal de la dengue d'un troisième sérotype et d'un virus vaccinal de la dengue d'un quatrième sérotype pour la fabrication d'un vaccin contre la dengue destiné à être administré à un patient ayant reçu, au moins 30 jours et au plus 1 ans 5 auparavant, une dose d'un virus vaccinal de la dengue d'un premier sérotype et une dose d'un virus vaccinal de la dengue d'un deuxième sérotype. Selon un autre mode de réalisation particulier de l'utilisation selon l'invention, les troisième et quatrième sérotypes sont administrés sous forme d'une composition vaccinale bivalente. 10 Selon un autre mode de réalisation particulier de l'utilisation selon l'invention, les premier et deuxième sérotypes sont administrés sous forme d'une composition vaccinale bivalente. Selon un autre mode de réalisation particulier de l'utilisation selon l'invention, ledit virus vaccinal de la dengue de sérotype 1 est sélectionné dans 15 le groupe constitué de la souche VDV1 et un ChimerivaxTM DEN-1. Selon un autre mode de réalisation particulier de l'utilisation selon l'invention, ledit virus vaccinal de la dengue de sérotype 2 est sélectionné dans le groupe constitué de la souche VDV2 et d'un ChimerivaxTM DEN-2. Selon un autre mode de réalisation particulier de l'utilisation selon 20 l'invention, ledit virus vaccinal de la dengue de sérotype 1 est la souche VDV1 et ledit virus vaccinal de la dengue de sérotype 2 est la souche VDV2. Selon un autre mode de réalisation particulier de l'utilisation selon l'invention, ledit virus vaccinal de la dengue de sérotype 1 est un ChimerivaxTM DEN-1 et ledit virus vaccinal de la dengue de sérotype 2 est un ChimerivaxTM 25 DEN-2. Selon un autre mode de réalisation particulier de l'utilisation selon l'invention, ledit virus vaccinal de la dengue de sérotype 3 est un ChimerivaxTM DEN-3. Selon un autre mode de réalisation particulier de l'utilisation selon 30 l'invention, ledit virus vaccinal de la dengue de sérotype 4 est un ChimerivaxTM DEN-4,. 2903605 8 Selon un autre mode de réalisation particulier de l'utilisation selon l'invention, les premier et deuxième sérotypes sont respectivement CYD DEN1 et CYD DEN2 et les troisième et quatrième sérotypes sont respectivement CYD DEN 3 et CYD DEN 4 . 5 Selon un autre mode de réalisation particulier de l'utilisation selon l'invention, les troisième et quatrième sérotypes sont administrés 30 jours à 3 mois après l'administration des premier et deuxième sérotypes. Selon un autre mode de réalisation particulier de l'utilisation selon l'invention, les troisième et quatrième sérotypes sont administrés 30 jours 10 après l'administration des premier et deuxième sérotypes. Selon un autre mode de réalisation particulier de l'utilisation selon l'invention, les doses de virus vaccinaux de la dengue de sérotype 1, 2, 3 et 4 sont chacune comprise dans une gamme allant de 103 à 105 DICC50. L'invention va être décrite plus en détails dans la description qui suit. 15 Définitions Les virus de la dengue ou DEN sont des virus à ARN simple-brin, positif, appartenant au genre Flavivirus de la famille des flaviviridae. L'ARN génomique contient une coiffe de type I à l'extrémité 5' mais est dépourvu de queue poly-A à l'extrémité 3'. L'organisation génomique est 20 constituée des éléments suivants : région non codante (NCR) 5', protéines structurales (capside (C), pré-membrane/membrane (prM/M), enveloppe (E)) et protéines non structurales (NS1-NS2A-NS2B-NS3-NS4A-NS4B-NS5) et NCR 3'. L'ARN viral génomique est associé aux protéines de la capside pour former une nucléocapside. Comme pour les autres flavivirus, le génome viral DEN 25 code une région codante ininterrompue qui est traduite en une polyprotéine unique. VDV ou vaccin dengue Vero désigne une souche virale dengue vivante atténuée adaptée sur cellule Vero et capable d'induire une réponse humorale spécifique, y compris l'induction d'anticorps neutralisants, chez les 30 primates et en particulier chez l'homme. VDV-1 est une souche obtenue à partir d'une souche sauvage DEN-1 16007 ayant subi 11 passages sur cellules PDK (DEN-1 16007/PDK11) qui a ensuite été amplifiée sur cellules Vero à 32 C, et dont l'ARN a été purifié 2903605 -9 et transfecté dans des cellules Vero. La souche VDV-1 présente 14 mutations supplémentaires par rapport à la souche vaccinale DEN-1 16007/PDK13 (13 passages sur cellules PDK ûPrimary Dog Kidney). La souche DEN-1 16007/PDK13, aussi appelée LAV1 , a été décrite dans la demande de 5 brevet EP1159968 au nom de Mahidol University et a été déposée auprès de la Collection Nationale de Cultures de Microorganismes (CNCM) sous le numéro 1-2480. La séquence complète de la souche VDV-1 est donnée à la séquence SEQ ID NO :1. Ladite souche peut être facilement reproduite à partir de ladite séquence. Un procédé de préparation et la caractérisation de la 10 souche VDV-1 ont été décrits dans la demande de brevet internationale déposée aux noms de Sanofi-Pasteur et du Center for Disease Control and Prevention sous le numéro PCT/IB 2006/001313. VDV-2 est une souche obtenue à partir d'une souche sauvage DEN-2 16681 ayant subi 50 passages sur cellules PDK (DEN-2 16681/PDK50), 15 purifiée par plaque et dont l'ARN a été extrait et purifié avant d'être transfecté dans des cellules Vero. La souche VDV-2 a ensuite été obtenue par purification par plaque et amplification sur cellules Vero. La souche VDV-2 présente 10 mutations supplémentaires par rapport à la souche vaccinale DEN-2 16681/PDK53 (53 passages sur cellules PDK), dont 4 mutations silencieuses. 20 La souche DEN-2 16681/PDK53, aussi appelée LAV2 , a été décrite dans la demande de brevet EP1159968 au nom de Mahidol University et a été déposée auprès de la Collection Nationale de Cultures de Microorganismes (CNCM) sous le numéro I-2481. La séquence complète de la souche VDV-2 est montrée dans la séquence SEQ ID NO :2. La souche VDV-2 peut être 25 facilement reproduite à partir de ladite séquence. Un procédé de préparation et la caractérisation de la souche VDV-2 a été décrit dans la demande de brevet internationale déposée aux noms de Sanofi-Pasteur et du Center for Disease Control and Prevention sous le numéro PCT/IB 2006/001513. Par ChimeriVaxTM dengue ou CYD on désigne un virus de la 30 fièvre jaune (YF) chimère qui comprend le squelette d'un virus YFdans lequel les séquences codant pour les protéines de pré-membrane et d'enveloppe ont été remplacée par celles d'un virus DEN. On appelle ainsi CYD-1 ou CYD DEN1 un virus YF chimère contenant les séquences prM et E d'une souche 2903605 -10- dengue sérotype 1( DEN-1). On appelle CYD-2 ou CYD DEN2 un virus YF chimère contenant les séquences prM et E d'une souche DEN-2. On appelle CYD-3 ou CYD DEN3 un virus YF chimère contenant les séquences prM et E d'une souche DEN-3. On appelle CYD-4 ou CYD DEN4 un virus YF 5 chimère contenant les séquences prM et E d'une souche DEN-4. La préparation de ces ChimeriVaxTM dengue a été décrite en détails dans les demandes de brevet internationales WO 98/37911 et WO 03/101397 auxquelles on peut se reporter pour un descriptif précis de leur procédé de préparation.. Les chimères décrits dans les exemples ont été générés par 10 utilisation des séquences prM et E issues des souches DEN 1 PUO359, DEN2 PR 159, DEN3 PaH881 et DEN 4 TVP 980. Toute souche du virus de la dengue pourrait être utilisée dans le cadre de la présente invention pour la construction des chimères. De préférence, le virus YF chimère comprend le squelette d'une souche 15 de la fièvre jaune atténuée YF17D (Theiler M, and Smith HH (1937) J Exp. Med 65, p767-786.) (virus YF17D/DEN-1, YF17D/DEN-2, YF17D/DEN-3, YF17D/DEN-4). Des exemples de souches YF17D susceptibles d'être utilisées incluent YF17D204 (YF-Vax , Sanofi-Pasteur, Swifwater, PA, USA ; Stamaril , Sanofi-Pasteur, Marcy l'Etoile, France ; ARILVAXTM, Chiron, Speke, 20 Liverpool, UK ; FLAVIMUN , Berna Biotech, Bern, Switzerland ; YF17D-204 France (X15067,X15062) ; YF17D-204,234 US (Rice et al., 1985, Science, 229 :726-733), ou encore des souches apparentées YF17DD (Genbank numéro d'accès U17066), YF17D-213 (Genbank numéro d'accès U17067) et les souches YF17DD décrites par Galler et al. (1998, Vaccines 16(9/10) :1024- 25 1028). Toute autre souche de virus de la fièvre jaune suffisamment atténuée pour une utilisation chez l'homme est susceptible d'être employée. Un vaccin monovalent contient un seul sérotype de virus dengue. Un vaccin bivalent contient deux sérotypes différents de virus dengue. Un vaccin trivalent contient trois sérotypes différents de virus dengue. Un 30 vaccin tétravalent contient quatre sérotypes différents de virus dengue. Par patient , on désigne une personne (enfant ou adulte) susceptible d'être infectée par la dengue, en particulier une personne à risque d'infection 2903605 -11comme par exemple une personne voyageant dans des régions où la dengue est présente ou un habitant de ces régions. Immunisation séquentielle 5 Les inventeurs ont montré que l'administration des 4 sérotypes sous la forme de deux administrations bivalentes séquentielles permet d'obtenir une protection homologue efficace contre les 4 sérotypes. La méthode selon la présente invention présente donc un intérêt tout particulier dans le cadre d'une stratégie d'immunisation contre la dengue. 10 Les inventeurs proposent donc une méthode pour induire une réponse anticorps neutralisante contre les 4 sérotypes de la dengue chez un patient, comprenant l'administration séquentielle audit patient (i) d'une dose d'un virus vaccinal de la dengue d'un premier sérotype et d'une dose d'un virus vaccinal de la dengue d'un deuxième sérotype , et (ii) d'une dose d'un virus vaccinal de 15 la dengue d'un troisième sérotype et d'une dose d'un virus vaccinal de la dengue d'un quatrième sérotype , dans laquelle les virus vaccinaux de la dengue (ii) sont administrés au moins 30 jours et au plus 3 mois après administration des virus vaccinaux de la dengue (i). Par virus vaccinal de la dengue on entend dans le cadre de la 20 présente invention, tout virus utilisable dans le cadre d'un programme d'immunisation chez l'homme contre une infection par un virus de la dengue. Cette expression entend donc couvrir toutes les formes qui sont suffisamment atténuées pour une utilisation chez l'homme. Une forme virale est suffisamment atténuée si elle répond aux exigences 25 réglementaires pour l'obtention d'une AMM. Une telle forme se caractérise par un rapport bénéfices/risques positif. Une forme virale est atténuée si elle n'induit pas la maladie chez l'homme et ne conduit qu'à des effets secondaires au plus d'intensité modérée (i.e. moyenne à faible, voire nulle) chez la majorité des sujets vaccinés tout en conservant sa capacité à induire une réponse 30 anticorps neutralisante homologue. On peut citer à titre d'exemples non limitatifs, les souches dengue vivantes atténuées, en particulier VDV-1, VDV-2, les souches dengue inactivées, les virus chimères tels que les chimérivax TMdengue tels que décrits par exemple 2903605 - 12 - dans la demande de brevet WO 98/37911, les chimères dengue/dengue tels que décrits par exemple dans les demandes de brevets WO9640933 et WO0160847. Le virus vaccinal de la dengue de sérotype 1 peut être par exemple la 5 souche vaccinale VDV1 ou un ChimerivaxTM DEN-1, en particulier un virus YF17D/DEN-1, ou encore une souche DEN-1 16007/PDK13. Le virus vaccinal de la dengue de sérotype 2 peut être par exemple la souche vaccinale VDV2 ou un ChimerivaxTM DEN-2, en particulier un virus YF17D/DEN-2, ou encore une souche DEN-2 16681/PDK53. Le virus vaccinal de la dengue de sérotype 10 3 peut être un ChimerivaxTM DEN-3, en particulier un virus YF17D/DEN-3. Le virus vaccinal de la dengue de sérotype 4 peut être un ChimerivaxTM DEN-4, en particulier un virus YF17D/DEN-4. Il peut également s'agir d'une souche LAV4 ou DEN-4 1036/PDK48 c'est-à-dire une souche DEN-4 1036 atténuée par 48 passages sur cellules PDK. Cette souche a été décrite dans la 15 demande de brevet EP1159968 au nom de Mahidol University et a été déposée auprès de la Collection Nationale de Cultures de Microorganismes (CNCM) sous le numéro 1-2483. Chaque virus vaccinal dengue monovalent ChimeriVaxTM (sérotypes 1, 2, 3 et 4) a été préparé par amplification de chaque sérotype sur cellules Vero. 20 Plus spécifiquement, les quatre virus sont produits séparément sur des cellules Vero adhérentes en milieu sans sérum. La récolte virale, clarifiée des débris cellulaires par filtration, est alors concentrée et purifiée par ultrafiltration et chromatographie pour enlever l'ADN des cellules hôtes. Après ajout d'un stabilisant, les souches vaccinales sont stockes sous forme congelée ou 25 lyophilisée avant utilisation puis reconstitué extemporanément. Le même procédé est appliqué pour les quatre chimères. Les souches VDV 1 et 2 sont préparées par amplification sur cellules Vero. Les virus produits sont récoltés et clarifiés des débris cellulaires par filtration. L'ADN est digéré par traitement enzymatique. Les impuretés sont 30 éliminées par ultrafiltration. Les titres infectieux peuvent être augmentés par une méthode de concentration. Après ajout d'un stabilisant, les souches sont stockées sous forme lyophilisée ou congelée avant utilisation puis reconstituée extemporanément. 2903605 - 13 - Les compositions multivalentes sont obtenues par simple mélange des compositions monovalentes. Selon la présente invention, les 4 sérotypes de la dengue peuvent être administrés dans un ordre quelconque pour autant qu'ils soient administrés 5 deux par deux de façon séquentielle en respectant une période de 30 jours à 1 ans, telle que 30 jours, 45 jours, 60 jours, 3 mois, 6 mois, 9 mois et 'tans, avantageusement une période de 30 jours à 3 mois, en particulier une période de 1 à 2 mois, entre les deux séries d'administration. La méthode selon la présente invention peut donc être mise en oeuvre avec les 10 les modes de réalisation décrits ci-dessous : -(i) : sérotypes 1 et 2 ; (ii) sérotypes 3 et 4 ; ou - (i) sérotypes 1 et 3 ; (ii) sérotypes 2 et 4 ; ou -(i) sérotypes 1 et 4 ; (ii) sérotypes 2 et 3 ; ou -(i) sérotypes 2 et 3 ; (ii) sérotypes 1 et 4 ; ou15 -(i) sérotypes 2 et 4 ; (ii) sérotypes 1 et 3 ; ou -(i) sérotypes 3 et 4 ; (ii) sérotypes 1 et 2. Selon des modes de réalisation particuliers, la présente invention couvre donc les schémas suivants : - (i) CYD DEN-1 et CYD DEN-2; (ii) CYD DEN-3 et CYD DEN-4 20 -(i) CYD DEN-1 et CYD DEN-3; (ii) CYD DEN-2 et CYD DEN-4 -(i) CYD DEN-1 et CYD DEN-4; (ii) CYD DEN-2 et CYD DEN-3 - (i) CYD DEN-2 et CYD DEN-3; (ii) CYD DEN-1 et CYD DEN-4 -(i) CYD DEN-2 et CYD DEN-4; (ii) CYD DEN-1 et CYD DEN-3 - (i) CYD DEN-3 et CYD DEN-4; (ii) CYD DEN-1 et CYD DEN-2 25 -(i) VDV-1 et CYD DEN-2; (ii) CYD DEN-3 et CYD DEN-4 - (i) VDV-1 et CYD DEN-3; (ii) CYD DEN-2 et CYD DEN-4 -(i) VDV-1 et CYD DEN-4; (ii) CYD DEN-2 et CYD DEN-3 -(i) CYD DEN-2 et CYD DEN-3; (ii) VDV-1 et CYD DEN-4 - (i) CYD DEN-2 et CYD DEN-4; (ii) VDV-1 et CYD DEN-2 30 -(i) CYD DEN-1 et VDV-2 ; (ii) CYD DEN-3 et CYD DEN-4 - (i) CYD DEN-1 et CYD DEN-3; (ii) VDV-2 et CYD DEN-4 - (i) CYD DEN-1 et CYD DEN-4; (ii) VDV-2 et CYD DEN-3 - (i) VDV-2 et CYD DEN-3; (ii) CYD DEN-1 et CYD DEN-4 2903605 - 14- - (i) VDV-2 et CYD DEN-4; (ii) CYD DEN-1 et CYD DEN-3 - (i) CYD DEN-3 et CYD DEN-4; (ii) CYD DEN-1 et VDV-2 -(i) VDV-1 et VDV-2; (ii) CYD DEN-3 et CYD DEN-4 -(i) VDV-1 et CYD DEN-3; (ii) VDV-2 et CYD DEN-4 5 -(i) VDV-1 et CYD DEN-4; (ii) VDV-2 et CYD DEN-3 - (i) VDV-2 et CYD DEN-3; (ii) VDV-1 et CYD DEN-4 et - (i) VDV-2 et CYD DEN-4; (ii) VDV-1 et CYD DEN-2. On entend par dose de virus vaccinal dans le cadre de la présente invention une composition comprenant une quantité 10 immunoefficace du virus vaccinal, c'est-à-dire une quantité suffisante de virus pour induire une réponse anticorps neutralisante homologue, qui peut être mise en évidence par exemple par le test de seroneutralisation tel que décrit ci-dessous dans l'exemplel. Un sérum est considéré comme positif pour la présence d'anticorps neutralisants lorsque le titre d'anticorps neutralisants ainsi 15 déterminé est supérieur ou égal à 1 :10. Les quantités de souche vaccinales sont exprimées communément en termes d'unité formant des plages virales (PFU) ou de dose infectant 50% de la culture tissulaire (TCID50), ou encore de dose infectant 50% de la culture cellulaire (DICC50). Par exemple, les compositions selon l'invention peuvent 20 contenir de 10 à 106 DICC50, en particulier de 103 à 105 DICC50 de virus vaccinal dengue de sérotype 1, 2, 3 ou 4 pour une composition monovalente ou bivalente. Ainsi dans les compositions ou utilisation selon l'invention, les doses de virus vaccinaux de la dengue de sérotype 1, 2, 3 et 4 sont préférentiellement comprises chacune dans une gamme allant de 10 à 106 25 DICC50, tels que 10, 10,102,103,104,105 ou 106 DICC50 en particulier dans uen gamme allant de 103 à 105 DICC50, Les virus vaccinaux peuvent être utilisés à des doses identiques ou différentes, qui peuvent être ajustées en fonction de la nature du virus vaccinal utilisé et de l'intensité de la réponse immunitaire obtenue. 30 De préférence, la réponse anticorps neutralisante homologue est durable, c'est-à-dire qu'elle peut être détectée dans le sérum jusqu'à au moins 6 mois, après l'administration des sérotypes dengue (ii) 2903605 - 15 - Dans l'administration séquentielle selon l'invention les virus vaccinaux de la dengue des troisième et quatrième sérotypes sont administrés au moins 30 jours et au plus mois après l'administration des virus vaccinaux de la dengue des premiers et deuxième sérotypes. 5 Dans le cadre de la présente invention, les virus vaccinaux de la dengue des troisième et quatrième sérotypes peuvent être par exemple administrés 30 jours à 1 ans, par exemple 30 jours, 45 jours, 60 jours, 3 mois, 6 mois, 9 mois ou I ans, avantageusement 30 jours à 3 mois, en particulier 1 à 2 mois, après l'administration des virus vaccinaux de la dengue des premier et 10 deuxième sérotypes. La dose d'un virus vaccinal de la dengue d'un premier sérotype et la dose d'un virus vaccinal de la dengue d'un deuxième sérotype sont administrées simultanément forme de deux compositions monovalentes, ou sous la forme d'une seule composition bivalente. 15 De la même manière, la dose d'un virus vaccinal de la dengue d'un troisième sérotype et la dose d'un virus vaccinal de la dengue d'un quatrième sérotype sont administrées simultanément,. Par exemple, les troisième et quatrième sérotypes peuvent être administrés simultanément sous forme de deux compositions vaccinales monovalentes, ou sous la forme d'une unique 20 composition vaccinale bivalente. Les virus vaccinaux sont administrés sous forme de compositions vaccinales qui peuvent être préparées selon n'importe quelle méthode connue de l'homme du métier. Habituellement, les virus, généralement sous forme lyophilisée, sont mélangés avec un excipient pharmaceutiquement acceptable, 25 tel que de l'eau ou une solution saline tamponnée au phosphate, des agents mouillants ou stabilisants. Par excipient pharmaceutiquement acceptable , on entend tout solvant, milieu de dispersion, charge etc, qui ne produit pas de réaction secondaire, par exemple allergique, chez l'humain ou l'animal. L'excipient est sélectionné en fonction de la forme pharmaceutique choisie, de 30 la méthode et de la voie d'administration. Des excipients appropriés, ainsi que les exigences en matière de formulation pharmaceutique, sont décrites dans Remington : The Science & Practice of Pharmacy , qui représente un ouvrage de référence dans le domaine. 2903605 - 16 - De préférence, les compositions vaccinales sont préparées sous forme injectable, et peuvent correspondre à des solutions liquides, des suspensions ou des émulsions. Les compositions peuvent en particulier comprendre une solution aqueuse tamponnée de manière à maintenir un pH compris entre 5 environ 6 et 9 (comme déterminé avec un pHmètre à température ambiante). Bien qu'il ne soit pas nécessaire de rajouter un adjuvant, Les compositions peuvent néanmoins comprendre un tel composé, c'est-à-dire une substance qui augmente, stimule, ou renforce, la réponse immunitaire cellulaire ou humorale induite par la souche vaccinale administrée simultanément. 10 L'homme de l'art est à même de sélectionner parmi les adjuvants classiquement utilisés dans le domaine vaccinal, un adjuvant qui puisse être approprié dans le cadre de la présente invention. Les compositions vaccinales selon l'invention peuvent être administrées selon n'importe quelle voie utilisée habituellement en vaccination, par exemple 15 la voie parentérale (notamment intradermique, sous-cutanée, ou intramusculaire). De préférence, les compositions vaccinales sont des compositions injectables administrées par voie sous-cutanée au niveau de la région deltoïde. Le volume de composition administré dépend de la voie d'administration. 20 Pour des injections sous-cutanées, le volume est généralement compris entre 0,1 et 1,0 ml, de préférence environ 0,5 ml. La période optimale pour l'administration des premier et deuxième sérotypes, ou préférentiellement de la totalité des sérotypes 1 à 4, est d'environ 1 à 3 mois avant l'exposition au virus de la dengue. Les vaccins peuvent être 25 administrés en tant que traitement prophylactique d'une infection par un virus de la dengue chez les adultes et les enfants. Les populations ciblent incluent donc des personnes qui peuvent être naïves ( i.e. non préalablement immunisés) ou non-naïves vis-à-vis du virus de la dengue. Des administrations de rappel virus vaccinaux de la dengue de 30 sérotypes 1 à 4 peuvent en outre être mises en oeuvre par exemple entre 6 mois et 10 ans, par exemple 6 mois, 1 ans, 3 ans, 5 ans ou 10 ans après l'administration des troisième et quatrième sérotypes. 2903605 -17-L'invention est illustrée par les exemples suivants. EXEMPLES Exemple 1 : Immunisation séquentielle chez le singe 5 . La virémie et l'immunogénicité ont donc été testées dans un modèle singe.. La virémie, en particulier, a été identifiée comme l'un des facteurs associés avec la virulence et la sévérité de la maladie chez les hommes et constitue donc un paramètre important à prendre en considération. L'immunogénicité est quant à elle un paramètre clé dans le cadre de 10 l'évaluation de la protection conférée. 1.1 Matériels et méthodes : Les expériences chez les singes ont été menées selon les Directives européennes relatives à l'expérimentation animale. Les immunisations ont été 15 effectuées chez des singes cynomolgus (Macaca fascicularis) originaires de Mauritanie. Les singes ont été mis en quarantaine pendant six semaines avant immunisation. Les singes ont été immunisés par voie sous-cutanée dans le(s) bras avec 0,5 ml de composition vaccinale. Après une légère anesthésie avec de la 20 kétamine (Imalgene, Merial), du sang a été collecté par ponction au niveau des veines inguinale ou saphène. Aux jours 0 et 28, 5 ml de sang ont été échantillonnés pour évaluer les réponses anticorps, alors qu'entre les jours 2 et 10, 1 ml de sang était échantillonné pour évaluer la virémie. Le sang était collecté sur la glace et conservé sur la glace jusqu'à séparation du sérum. Pour 25 ce faire, le sang a été centrifugé pendant 20 minutes à 4 C et le sérum collecté stocké à -80 C jusqu'au moment des tests. Mesure de la virémie Les virémies post vaccinales ont été suivies par RT-PCT quantitative en 30 temps réel (qRT-PCR). Deux jeux d'amorces et de sondes localisées dans le gène NS5 de des souches DEN1 et DEN2 ont été utilisés pour quantifier l'ARN de VDV-1 et VDV-2 respectivement. Un troisième jeu d'amorces et de sonde localisées dans le gène NS5 du virus YF a été utilisé pour quantifier l'ARN du 2903605 - 18 - CYD. Enfin, 4 jeux d'amorces et de sondes spécifiques des différents sérotypes, localisées à la jonction des gènes E (DEN) / NS1 (YF) ont été utilisés pour identifier le sérotype dans les échantillons positifs pour l'ARN NS5 YF (voir aussi tableau I). 7 plasmides contenant, sous le contrôle du promoteur 5 T7, la région ciblée par chaque PCR, ont été transcrits in vitro pour générer une série d'ARN synthétiques qui ont été inclus comme référence interne dans chaque essai de RT-PCT. Ces ARN synthétiques ont été dosés par spectrophotométrie, la quantité d'ARN obtenue a été convertie en nombre de copies d'ARN et exprimée en GEQ (équivalents génomiques). 10 0,140 ml de sérum de singe a été extrait à l'aide du kit d'extraction d'ARN Nucleospin 96 virusTM de Macherey Nagel, selon les instructions du fabriquant, puis l'ARN purifié a été élué avec 0,140 ml (0,090 ml, puis 0,05 ml) d'eau exempte de RNase. Pour éviter des cycles répétés de congélation/décongélation, une première quantification a été 15 réalisée immédiatement après l'extraction sur 5 pl de ladite préparation d'ARN . Le volume restant a été congelé à 70 C. Les mélanges réactionnels contiennaient, en plus des composants du kit de quantification RT-PCR Qiagen QauntitectTMprobes (Qiagen), 10 picomoles de chaque amorce, 4 picomoles de chaque sonde et 5 l d' ARN, 20 dans un volume total de 25 pl. Dans le cas des ARN à tester, 5 pl de la préparation purifiée ont été directement introduits dans le mélange réactionnel, sans étape de dilution préalable. Les ARN synthétiques ont été dilués au 1/10 dans de l'eau exempte de RNAse, et 7 dilutions contenant approximativement 10 à 106 GEQ dans 5 pl ont été quantifiées en parallèle afin de générer la 25 courbe étalon. Les réactions de quantification ont été réalisées par l'appareil ABIPrism 700TM d' Applied Biosystem, en utilisant le programme suivant : 50 C/30 min, 95 C/15 min, puis 40 cycles de 95 C/15 secù60 C/60 sec. La limite de quantification de l'ARN viral dans ce test est de 2,9 à 3,3 30 logioGEQ/ml (800 à 2000 GEQ/ml; 4 à 10 GEQ/réaction), selon les cibles PCR (déviation standard: +/-0,3 Ioglo) La corrélation entre le titre infectieux et la quantification d'ARN viral a été établie parallèlement aux essais, par analyse de 0,140 ml d'échantillons de 2903605 - 19 - sérums de singe négatifs ( DO) dans lesquels on a ajouté une quantité connue de particules infectieuses des virus ayant servi à l'immunisation (CYD ou VDV). Lesdits sérums contrôles ont été préparés à deux dilutions contenant environ 1 PFU et environ 100 PFU dans 5 l (2.3 and 4.3 Iog10PFU/mI, respectivement). 5 Les amorces et sondes utilisées sont données dans le tableau 1 cidessous.dans lequel sont listés dans l'ordre pour chaque essai les amorces sens et anti-sens et la sonde. Tableau 1 sequence u- YF-NS5 sens 5' GCACGGATGTAACAGACTGAAGA (23 bases) YF NS5 anti 5' CCAGGCCGAACCTGTCAT (18 bases) YF-NS5 5' Farrr CGACTGTGTGGTCCGGCCCATC -Tamra (22 bases) o CYD1- sens 5' CAT TGC AGT TGG CCT G GT AA (20 b) m CYD1- antii 5' CTT TGG CAA GAG AGA GCT CAA GT (23 b) o D CYD1- 5' FarrrCCG ATC AAG GAT GCG CCA TCA-Tamra (21 b) o CYD2- sens 5' GTG GGA GTC GTG ACG CTG TA (20 b) m CYD2anti 5' GTT GAT GG C GCA TCC TTG ATC (21 b) ci Q CYD2 5' Fam-TGG GAG TTA TGG TGG GCG CCG-Tamra (21 b) 0 CYD3- sens. 5' AAA ACA CTT CCA TGT CAT TTT CAT G (25b) >-Q1 CYD3- anti: 5' GTT GAT GGC GGA TCC TTG ATC (21 b) o CYD3- 5'Fam-TG CGATAGGAATTATCACACTCTATCTGGGAGC-Tamra (33b) o CYD4 sens 5' CTT A GT ATT GTG GAT TGG CAC GAA (24 b) o C CYD4-anti: 5' GCG CCA ACT GTG AAA CCT AGA (21 b) CO CYD4-5'-FarrrAGAAACACTTCAATGGCAATGACGTGCAT-Tamra (29 b) o w VDV1-NS5 sens 5' TCG CAA CAG CCT TAA CAG C (19 b) ci) VDV1-NS5 anti 5' ACT ATC TCC CTC CCA TCC TTC (21 b) VDV1-NS5 5' Fam-TTC ACA CCA CTT GCA C-M GB/NFQ (16 b) rv VDV2-NS5 sens 5' AAT GAC AGA CAC GAC TCG (18 b) o n VDV2-NS5 anti: 5' CCC AAA ACC TAC TAT CTT CAA C (22 b) > N VDV2-NS5 5' Fam-TGG AAG TCG GCA CGT GA-M GB/NFQ (17 b) 10 Mesure des anticorps neutralisants (test de seroneutralisation) (SN50)) Classiquement, la mesure des anticorps Dengue est établie à l'aide du test PRNT50 (test de neutralisation par réduction à 50% du nombre de PFU). Ce test étant lourd et consommateur de matériel, nous avons développé le test 15 SN50, basé sur la réduction à 50 % du nombre d'unités mesurées en test DICC50. Dans une plaque de 96 puits, 0,120 ml de chaque sérum décomplémenté est ajouté à 0,480 ml de diluant ( ISCOVE 4% SVF) par puits. Des dilutions en série d'un facteur 6 sont réalisées par transfert de 0,150 ml de sérum dans 20 0,450 ml de diluant. 450 l de dilution virale à 2,7 1og10 DICC50/ml sont ajoutés 2903605 - dans chaque puits de façon à obtenir 25 DICC50/puits. La plaque est incubée à 37 C pendant 1 heure. 100 l de chaque dilution sont ensuite distribués dans 6 puits d'une plaque de 96 puits dans laquelle des cellules VERO ont été ensemencées 3 jours avant le début de l'expérience à une densité de 8000 5 cellules/puits, dans 100 l de milieu ISCOVE 4% SVF,. Après 6 jours d'incubation à 37 C, en présence de 5% de CO2, les cellules sont fixées à l'aide d'un mélange éthanol/acétone (70/30) à 4 C pendant 15 minutes, puis lavées à 3 reprises dans du PBS et incubées pendant l h à 37 C en présence de 50 i d'une dilution au 1/2000 d'un anticorps monoclonal anti-flavivirus (mAb 10 4G2). Les plaques sont ensuites lavées à 2 reprises et incubées 1H à 37 C en présence de 50 l d'une dilution au 1/1000 d'une IgG anti-souris conjuguée à la phosphatase alcaline. Les plages de lyse sont révélées par addition de 50 l d'un substrat coloré : BCIP/NBT. Les titres en anticorps neutralisants sont calculés en utilisant la formule de Karber telle que définie ci-dessous : 15 Iog,oSN50 = d + f/N (X + N/2), Dans laquelle: d représente la dilution conduisant à 100% de neutralisation (soit 6 réplicats 20 negatifs c'est-à-dire ne présentant pas de signe d'infection) f: représente le facteur de dilution en Iog10 (e.g. facteur de dilution de 1:4, f = 0,6) N: représente le nombre de réplicats / dilution (N=6) X: nombre total de puits ne présentant aucun signe d'infection, à l'exception de 25 la dilution d La limite de détection virale est de 10 SN50 (i .e. 1.0 IogioSN50) . Les souches virales qui ont été utilisées pour la neutralisation sont les souches DEN1 16007, DEN2 16681, DEN3 16562 or DEN4 1036. Pour les contrôles, les dilutions virales initiales ont été re-titrées. 30 La corrélation entre le titre neutralisant mesuré en test SN50 et le titre neutralisant mesuré classiquement en test PRNT50 est: Iog1oPRNT50 = Iog1oSN50 + 0,2 2903605 -21 - 1.2 Evaluation des immunisations séquentielles 5 3 groupes de 4 singes d'âge et poids équivalents ont été immunisés. (voir tableau 2) L'immunisation a été effectuée par voie sous-cutanée dans le bras avec une aiguille 23G1, à une dose 105 DICC50 pour chaque sérotype pour les 10 vaccins CYD DEN 1 à 4. Les VDV-1 et VDV-2 ont été injectés à une dose de 3,96 logio et 4,84 log10 respectivement. Tableau 2 : Composition des groupes et protocole d'immunisation N des Immunisations Groupe singes JO J56 AM633 VDV-1,2 CYD-3,4 AM634 1 (composition A 41-- (composition bivalente) bivalente) ù AN045 AM637 J CYD-1,2 CYD-3,4 AN002 2 ù (composition (composition AN013 bivalente) bivalente) AN073 AM496 CYD-1,2,3,4 CYD-1,2,3,4 AM645 3 _ (composition (composition AM766 AM813 tétravalente) tétravalente) Les résultats d'immunogénicité obtenus après une immunisation (J28) et 15 deux immunisations (J84) sont présentés dans le tableau 3 . Les résutlats de virémie sont donnés dans le tableau 4. -22-Tableau 3 : titre neutralisant SN50 Singes J+28 J+84 Immunisations Groupe ID DO D56 DEN-1 DEN-2 DEN-3 DEN-4 DEN-1 DEN-2 DEN-3 DEN-4 AM633 16 10 - - 20 126 20 126 AM634 126 200 - - 319 802 100 637 1 AM941 VDV 12 CYD 34 32 200 - - 252 802 40 252 AN045 25 200 - - 63 400 50 252 moyenne 35 94 - - 100 425 45 268 géométrique AM637 32 10 - - 637 31 40 159 AN002 40 31 - - 1277 634 100 159 2 AN013 CYD 12 CYD 34 20 316 - - 20 400 20 16 AN073 - - - - 63 126 40 504 moyenne 19 27 - - 179 178 42 119 géométrique 50 - 16 32 100 40 80 252 AM496 AM645 -13 31 16 - - 63 3 AM766 CYD CYD - - - 32 20 - - 80 AM813 1234 1234 25 -13 63 13 20 63 moyenne 13 25 38 11 Î 14 95 géométrique = REVENDICATIONS 1. Compositions vaccinales comprenant (i) une dose d'un virus vaccinal de la dengue d'un premier sérotype et une dose d'un virus vaccinal de la dengue d'un deuxième sérotype, et (ii) une dose d'un virus vaccinal de la dengue d'un troisième sérotype et une dose d'un virus vaccinal de la dengue d'un quatrième sérotype , comme composition vaccinale de combinaison contre la dengue pour une administration séquentielle, dans laquelle les virus vaccinaux de la dengue (ii) sont administrés au moins 30 jours et au plus 1 ans après l'administration des virus vaccinaux de la dengue (i). 2.. Compositions vaccinales selon la revendication 1, dans lesquelles les virus vaccinaux (ii) sont administrés 30 jours à 3 mois après l'administration des virus vaccinaux (i). 3. Compositions vaccinales selon la revendication 1 ou 2, dans lesquelles les virus vaccinaux de la dengue (i) sont administrés sous forme d'une composition vaccinale bivalente. 4. Compositions vaccinales selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, dans lesquelles les virus vaccinaux de la dengue (ii) sont administrés sous forme d'une composition vaccinale bivalente. 5. Compositions vaccinales selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, dans lesquelles ledit virus vaccinal de la dengue de sérotype 1 est sélectionné dans le groupe constitué de la souche VDV1 et d'un ChimerivaxTM DEN-1. 30 6. Compositions vaccinales selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, dans lesquelles ledit virus vaccinal de la dengue de sérotype 2 est 25 2903605 - 26 - sélectionné dans le groupe constitué de la souche VDV2 et d'un ChimerivaxTM DEN-2. 7. Compositions vaccinales selon l'une quelconque des revendications 1 5 à 6, dans lesquelles ledit virus vaccinal de la dengue de sérotype 1 est la souche VDV1 et ledit virus vaccinal de la dengue de sérotype 2 est la souche VDV2. 8. Compositions vaccinales selon l'une quelconque des revendications 1 10 à 6, dans lesquelles ledit virus vaccinal de la dengue de sérotype 1 est un ChimerivaxTM DEN-1 et ledit virus vaccinal de la dengue de sérotype 2 est un ChimerivaxTM DEN-2. 9. Compositions vaccinales selon l'une quelconque des revendications 1 15 à 8, dans lesquelles ledit virus vaccinal de la dengue de sérotype 3 est un ChimerivaxTM DEN-3. 10. Compositions vaccinales selon l'une quelconque des revendications 1 à 9, dans lesquelles ledit virus vaccinal de la dengue de sérotype 4 est un 20 ChimerivaxTM DEN-4,. 11. Compositions vaccinales selon l'une quelconque des revendications 1 à 6 et 8 à 10 , dans lesquelles les premier et deuxième sérotypes sont respectivement CYD DEN1 et CYD DEN2 et les troisième et quatrième sérotypes sont respectivement CYD DEN 3 et CYD DEN 4 . 12. Compositions vaccinales selon l'une quelconque des revendications 1 à 11, dans lesquelles les virus vaccinaux (ii) sont administrés 30 jours après l'administration des virus vaccinaux (i). 13. Compositions vaccinales selon l'une quelconque des revendications 1 à 12, dans lesquelles les doses de virus vaccinaux de la dengue de sérotype 2903605 - 27 - 1, 2, 3 et 4 sont chacune comprise dans une gamme allant de 103 à 105 DICC50. 14. Utilisation d'un virus vaccinal de la dengue d'un troisième sérotype et 5 d'un virus vaccinal de la dengue d'un quatrième sérotype pour la fabrication d'un vaccin contre la dengue destiné à être administré à un patient ayant reçu, au moins 30 jours et au plus 1 ans auparavant, une dose d'un virus vaccinal de la dengue d'un premier sérotype et une dose d'un virus vaccinal de la dengue d'un deuxième sérotype. 10 15.- Utilisation selon la revendication 14, dans laquelle les troisième et quatrième sérotypes sont administrés sous forme d'une composition vaccinale bivalente. 15 16. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 14 à 15, dans laquelle les premier et deuxième sérotypes sont administrés sous forme d'une composition vaccinale bivalente. 17. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 14 à 16, dans 20 laquelle ledit virus vaccinal de la dengue de sérotype 1 est sélectionné dans le groupe constitué de la souche VDV1 et un ChimerivaxTM DEN-1. 18. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 14 à 17, dans laquelle ledit virus vaccinal de la dengue de sérotype 2 est sélectionné dans le 25 groupe constitué de la souche VDV2 et d'un ChimerivaxTM DEN-2. 19. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 14 à 18, dans laquelle ledit virus vaccinal de la dengue de sérotype 1 est la souche VDV1 et ledit virus vaccinal de la dengue de sérotype 2 est la souche VDV2. 20. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 14 à 18, dans laquelle ledit virus vaccinal de la dengue de sérotype 1 est un ChimerivaxTM 30 2903605 - 28 - DEN-1 et ledit virus vaccinal de la dengue de sérotype 2 est un ChimerivaxTM DEN-2. 21. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 14 à 20, dans 5 laquelle ledit virus vaccinal de la dengue de sérotype 3 est un ChimerivaxTM DEN-3. 22. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 14 à 21, dans laquelle ledit virus vaccinal de la dengue de sérotype 4 est un ChimerivaxTM 10 DEN-4,. 23. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 14 à 18 et 20 à 22 , dans laquelle les premier et deuxième sérotypes sont respectivement CYD DEN1 et CYD DEN2 et les troisième et quatrième sérotypes sont 15 respectivement CYD DEN 3 et CYD DEN 4 . 24. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 14 à 23, dans laquelle les troisième et quatrième sérotypes sont administrés 30 jours à 3 mois après l'administration des premier et deuxième sérotypes. 25. Utilisation selon la revendication 24, dans laquelle les troisième et quatrième sérotypes sont administrés 30 jours après l'administration des premier et deuxième sérotypes. 25 26. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 14 à 24, dans laquelle les doses de virus vaccinaux de la dengue de sérotype 1, 2, 3 et 4 sont chacune comprise dans une gamme allant de 103 à 105 DICC50. 20