FR 2900821 A1 20071116 FR 0608191 A 20060919 Compositions cosmétiques ou dermatologiques à base d'extraits de plantes La présente invention se rapporte au domaine des nécessités de la vie et plus particulièrement au domaine de la cosmétologie et de la dermatologie. La présente invention se rapporte plus particulièrement à l'utilisation d'extraits de plantes à des fins cosmétiques ou dermatologiques. La présente invention a spécifiquement pour objet la réalisation de compositions cosmétiques 10 ou dermatologiques contenant, à titre de principe actif, au moins un extrait de Kalanchoe linearifolia, en association ou en mélange avec au moins un excipient et/ou véhicule approprié. Kalanchoe linearifolia appartient à la famille des Crassulacées. Le genre Kalanchoe 15 comprend approximativement 120 espèces, localisées majoritairement en Afrique, plus particulièrement à Madagascar. Des extraits de Kalanchoe comme Kalanchoe brasiliensis ont déjà montré une activité anti-inflammatoire (Mourào R.H. et. al., Phytotherapy Research 1999, 352-354). 20 La médecine traditionnelle malgache utilise le jus issu des fleurs fraîches broyées de Kalanchoe linearifolia en application topique, notamment pour le traitement de l'eczema. Bien que certaines espèces apparentées soient connues, aucune littérature spécifique ne décrit les propriétés cosmétiques ou dermatologiques de Kalanchoe linearifolia. Or, la Demanderesse a constaté que des extraits de Kalanchoe linearifolia présentent des propriétés intéressantes, notamment en terme d'activité anti-inflammatoire et cicatrisante. D'une manière générale, les extraits de Kalanchoe linearifolia ont une toxicité très faible ; ils sont aptes à une utilisation cosmétique ou dermatologique. Les utilisations cosmétiques et dermatologiques considérées pour les compositions contenant ces extraits de plantes concernent notamment le traitement de l'hypersensibilité cutanée, du vieillissement cutané et la réparation cutanée. 25 30 Les utilisations cosmétiques comprennent, d'une manière générale et non exhaustive, le traitement préventif et/ou curatif des peaux sensibles et intolérantes, des peaux hyperréactives, des peaux sujettes aux rougeurs et des peaux grasses à imperfections. Elles comprennent également le traitement préventif et/ou curatif des peaux marquées par les signes du vieillissement, tels que l'amincissement de la peau, les rides et ridules, le flétrissement de la peau ou le manque d'élasticité. Les utilisations dermatologiques comprennent, de manière non exhaustive, l'usage dans les cas de dermatite atopique (eczema), de psoriasis, de prurit, de rosacée, de dermite séborrhéique, d'acné et pour la cicatrisation des plaies. Un extrait de Kalanchoe linearifolia utilisé selon l'invention peut être préparé à partir de matériel végétal issu de la plante entière ou de partie de plante comme les feuilles, les tiges, les fleurs, les pétales, les fruits ou les racines. Selon une forme préférentielle de l'invention, un extrait de Kalanchoe linearifolia est préparé à partir de matériel végétal issu des feuilles et des tiges de la plante. Toute méthode d'extraction connue de l'homme du métier peut être utilisée pour préparer un 20 extrait de Kalanchoe linearifolia utilisé selon l'invention. On peut notamment utiliser les méthodes d'extraction par des solvants comme l'eau, les alcools ou les solvants organiques. On peut également utiliser des mélanges de ces différents solvants, comme par exemple des mélanges hydroalcooliques. Les extractions peuvent 25 notamment avoir lieu à température ambiante ou à une température plus élevée, selon le point d'ébullition du solvant utilisé. Préférentiellement, les extractions ont lieu à une température comprise entre 20 et 70 C. 30 Parmi les alcools pouvant être utilisés comme solvant d'extraction, on peut notamment citer l'éthanol.15 Parmi les solvants organiques pouvant être utilisés comme solvant d'extraction, on peut notamment citer l'acétate d'éthyle, le dichlorométhane et les alcanes comme l'hexane, le cycloh.exane, l'heptane ou l'octane. On peut également réaliser une série d'extractions successives par différents solvants, chaque phase d'extraction étant concentrée et le concentrât étant soumis à une nouvelle extraction par un solvant différent. Cette méthode permet de réaliser plusieurs extraits au contenu spécifique, pouvant présenter des propriétés originales. Par exemple, on peut effectuer une première extraction du matériel végétal à l'aide d'un solvant alcoolique ou hydroalcoolique comme l'éthanol ou un mélange éthanol/eau, concentrer la phase d'extraction obtenue et effectuer une extraction du concentrât à l'aide d'un solvant organique, comme un alcane ou l'acétate d'éthyle. Cette opération peut être répétée plusieurs fois à l'aide de différents solvants. Selon une forme de l'invention, un extrait de Kalanchoe linearifolia constitue le principe actif des compositions selon l'invention. Selon une autre forme de l'invention, le principe actif des compositions selon l'invention est 20 constitué de l'association d'un extrait de Kalanchoe linearifolia avec un ou plusieurs autres composés naturels ou synthétiques, purs ou sous forme d'extraits végétaux, d'action complémentaire, similaire ou synergique. Selon une forme préférentielle de l'invention, le principe actif des compositions selon 25 l'invention est constitué de l'association d'un extrait de Kalanchoe linearifolia avec un extrait de Sida acuta. Cette plante tropicale appartient à la famille des Malvacées. Des extraits de cette plante présentent également des propriétés anti-inflammatoires et cicatrisantes. Un extrait de Sida acuta utilisé selon l'invention peut être préparé à partir de matériel végétal 30 issu de la plante entière ou de partie de plante comme les feuilles, les tiges, les fleurs, les pétales, les fruits ou les racines. Selon une forme préférentielle de l'invention, un extrait de Sida acuta est préparé à partir de matériel végétal issu des feuilles et des tiges de ]la plante. Toute méthode d'extraction connue de l'homme du métier peut être utilisée pour préparer un extrait de Sida acuta utilisé selon l'invention, notamment les méthodes décrites ici pour la préparation d'extraits de Kalanchoe linearifolia. Un extrait de de Kalanchoe linearifolia ou une composition contenant l'un au moins de ces extraits, sont utilisés selon l'invention en application topique sur la peau et/ou les ongles et/ou les cheveux et/ou les muqueuses externes. 10 La quantité d'extrait utilisable selon l'invention peut varier dans une large mesure en fonction de l'effet recherché. Pour donner un ordre de grandeur, on peut utiliser l'extrait à l'état pur en une quantité représentant de 0,0001 à 20% du poids total de la composition, et préférentiellement en une 15 quantité représentant de 0,01 à 10% du poids total de la composition. Les compositions selon l'invention comprennent un support cosmétiquement ou dermatologiquement acceptable, en association ou en mélange avec le principe actif. Elles peuvent renfermer les adjuvants couramment utilisés dans les domaines cosmétiques et 20 dermatologiques, comme par exemple des agents émollients ou adoucissants, des gélifiants, des antioxydants, des solvants, des filtres, des conservateurs, des pigments ou des parfums. Elles peuvent se présenter sous une forme compatible avec une application topique, comme les solutions aqueuses, hydroalcooliques ou huileuses, les dispersions, les suspensions, les émulsions huile dans eau ou eau dans huile, les gels aqueux ou huileux, les crèmes, les laits, 25 les pommades, les lotions, les pâtes, les poudres, les mousses, les sticks ou les aérosols. Les propriétés pharmacologiques, notamment anti-inflammatoires et cicatrisantes des compositions selon l'invention, conduisent à des utilisations cosmétiques telles que le traitement préventif et/ou curatif des troubles de la peau, comme par exemple les peaux 30 sensibles et intolérantes, les peaux hyper-réactives, les peaux sujettes aux rougeurs et/ou les peaux grasses à imperfections, ainsi que le traitement préventif et/ou curatif des peaux marquées par les signes du vieillissement, comme la peau amincie, les rides et ridules, la peau flétrie ou manquant d'élasticité.5 Les propriétés notamment anti-inflammatoires et cicatrisantes des compositions selon l'invention conduisent à des utilisations dermatologiques telles que l'usage dans les cas de dermatite atopique (eczema), de psoriasis, de prurit, de rosacée, de dermite séborrhéique, d'acné et pour la cicatrisation des plaies. Les exemples suivants illustrent l'invention sans toutefois la limiter : Exemple 1 : Réalisation d'un extrait de plante utilisé selon l'invention Ces méthodes peuvent être appliquées aussi bien à la réalisation d'un extrait de Kalanchoe 10 linearifolia qu'à la réalisation d'un extrait de Sida acuta. La matière végétale utilisée est issue des feuilles et des tiges de la plante. Exemple 1.1 : Réalisation de l'extrait brut (fraction fl) de Kalanchoe linearifolia 1100 g de matière végétale séchée sont dispersés dans 5 L d'éthanol à 70 . Le mélange est 15 agité durant 1 heure à 50 C, puis filtré sur entonnoir, le résidu solide étant rincé par 2 L d'éthanol. La phase alcoolique est concentrée sous pression réduite. Le résidu est repris dans 1,5 litre d'eau et lyophilisé. Un solide brun est obtenu. Dans les exemples suivants, cet extrait sera dénommé fraction fl . 20 Exemple 1.2 : Réalisation de l'extrait à l'aide de solvants peu polaires (fraction f2) de Kalanchoe linearifolia La fraction fl précédemment obtenue est mise en solution dans 500 mL d'éthanol. La solution est extraite par 3 x 200 mL d'hexane. Les phases hexaniques sont rassemblées puis concentrées. Un produit visqueux est obtenu. Dans les exemples suivants, cet extrait sera 25 dénommé fraction f2 . Exemple 1.3 : Réalisation de l'extrait à l'aide d'un solvant de polarité intermédiaire (fraction f3) de Kalanchoe linearifolia La phase éthanolique de l'étape précédente est concentrée sous pression réduite et reprise dans 500 mL d'eau. Cette solution aqueuse est extraite par 3 * 200 mL d'acétate d'éthyle. Les 30 phases organiques sont rassemblées puis concentrées. Un produit visqueux est obtenu. Dans les exemples suivants, cet extrait sera dénommé fraction f3 .5 Exemple 1.4 : Réalisation d'un extrait hydrosoluble (fraction f4) de Kalanchoe linearifolia La phase aqueuse de l'étape précédente est lyophilisée. Un solide brun est obtenu. Dans les exemples suivants, cet extrait sera dénommé fraction f4 . Exemple 1.5 : Réalisation d'un extrait (fraction f5)de Kalanchoe linearifolia 100 g de matière végétale séchée sont dispersés dans 2,5 L d'heptane. La suspension est soumise à une extraction au soxhlet à reflux du solvant pendant 4 heures. Après filtration sur entonnoir, la matière végétale est récupérée et ajoutée à 1 L d'éthanol à 70 . Le mélange est agité durant 7 heures au reflux du solvant, puis filtré sur entonnoir. Le résidu solide est ajouté à 1 L d'éthanol à 70 et le mélange est laissé au repos durant 3 jours. Après filtration, les phases alcooliques sont rassemblées et concentrées sous pression réduite. Le résidu est repris dans 1,5 litre d'eau et lyophilisé. Un solide brun est obtenu. La composition de cet extrait est très proche de celle de la fraction f3. Exemple 2 : Evaluation de l'activité anti-inflammatoire d'extraits de Kalanchoe 15 linearifolia 1- OBJECTIFS Il s'agit de tester les fractions de Kalanchoe linearifolia (KLN) dans un test discriminatoire anti-inflammatoire. Les fractions KLN fl, f2, f3., f4 ont été étudiées. 20 2-CONDITIONS EXPERIMENTALES L'inflammation est provoquée par injection intra-péritonéale d'une solution d'acide acétique 0,6% qui provoque une inflammation du réseau mésentérique chez la souris Swiss. Cet état inflammatoire se traduit par une augmentation de la perméabilité capillaire de la paroi endothéliale avec pour conséquence un chimiotactisme accru. Le témoin de cette 25 augmentation de la perméabilité, est le Bleu Evans, colorant injecté au préalable par voie intraveineuse dans la veine caudale des souris. Une substance à caractère anti-inflammatoire réduit cette perméabilité et par conséquent l'invasivité par le colorant de la cavité abdominale (mesure par D.O.) 30 3-METHODOLOGIE 3.1-Plan expérimental 1 dose unique a été testée dans cette étude: 1 g/kg (n = 6) la concentration en Bleu Evans (BE) sera déterminée par une méthode colorimétrique. Le produit de référence utilisé pour évaluer les extraits est la phénylbutazone (PNB) à la dose de 100 mg/kg. 3.2-Critère d'évaluation La réduction de l'inflammation se traduit par une diminution du passage du colorant (Bleu d'Evans) dans la cavité abdominale donc de sa concentration dans l'exsudat. 3.3-Pertinence de la méthode Ce test est très utilisé pour évaluer un nouvel antiinflammatoire en première intention. II a été décrit par Whittle pour la première fois en 1964 et est encore largement utilisé en screening d'évaluation. 3.4-Déroulement de l'essai 3.4.1 Race de souris utilisée Des souris des deux sexes, de race Swiss pesant entre 27 et 30 g ont été utilisées. Dix huit heures avant l'expérience, les animaux ont été mis à jeun, tout en ayant un accès libre à l'eau. Les animaux ont été répartis par lot de 6 souris, un lot ayant reçu uniquement de l'eau distillée, a servi de lot témoin. 3.4.2 Voie d'administration des extraits Ces extraits ont été administrés par voie orale, par gavage. Ils ont été dilués dans de l'eau distillée à la dose de 1 g/kg. 4 lots de traités sont ainsi constitués. La phénylbutazone (PNB) a été utilisée à la dose de 100 mg/kg comme produit de référence. 3.5 -Protocole expérimental 3.5.1 Perméabilité capillaire 45 minutes après l'administration des extraits, une solution de colorant (du bleu d'Evans : BE) à la concentration de 0.5% préparée dans une solution physiologique de NaCl (0.9%) a été injectée par voie intraveineuse dans la veine caudale des souris à raison de 10 ml/kg de poids corporel. 15 minutes après l'injection du BE, une solution d'acide acétique (0.6%) a été injectée par voie intra-péritonéale à raison de 10 ml/kg. Après 30 minutes, les animaux ont été sacrifiés et leur cavité abdominale a été rincée avec 5 ml d'eau distillée contenant 500 UI d'héparine. L'eau de rinçage a été quantitativement collectée et centrifugée à la vitesse de 2000 t/min E La concentration en BE dans le surnageant a été déterminée à l'aide d'un spectrophotomètre à la longueur d'onde de 620 nm (Whittle, 1964). L'activité inhibitrice des extraits de plantes ainsi que celle de la substance de référence a été exprimée en pourcentage de la perméabilité capillaire chez les animaux traités par rapport au 5 témoin. 3.5.1 Calcul du pourcentage d'inhibition Pourcentage d'inhibition = 1 - (DO2/DO1 x 100) Où: DO1= 1 a moyenne de la densité optique du BE chez les animaux témoins 10 DO2 = 1 a moyenne de la densité optique du BE chez les animaux traités. Les activités des différents extraits ont été comparées à celle du PNB. 4-RESULTATS ET DISCUSSION : KLN Le tableau 2 ci-dessous montre les variations individuelles de l'inhibition de la perméabilité 15 capillaire provoquée par l'acide acétique injecté par voie i.p. chez la souris, après administration per os de différentes fractions. Chaque valeur est la moyenne de 6 observations. EXTRAIT PNB (0,1 g) KLN KLN KLN KLN Excipient n = 6 fl f2 f3 f4 témoins % Inhibition 71,9 53,9 17,7 61,3 33 -3,1 Moyenne 9,3 +2,9 +4,7 +6,3 +6,6 +1,22 t s.e.m. '//'témoins P L'extrait brut fl et la fraction f3 sont anti-inflammatoires de façon significative. La modération de la perméabilité cellulaire atteste de l'efficacité de fl du fait des molécules sélectionnées dans f3. Les fractions f2 et f4 doivent être considérées comme peu actives dans ce test, bien que f4 soit 5 significativement différent du lot des animaux témoins au stade inflammatoire. Conclusion : L'activité antiinflammatoire de KLN est confirmée, surtout en ce qui concerne la fraction f3. Exemple 3 : Evaluation de l'activité cicatrisante d'extraits de Kalanchoe linearifolia 10 1- OBJECTIFS Evaluer comparativement in vivo chez la souris la potentialité accélératrice de la néoformation de tissus dermiques et épidermiques au moyen des fractions de Kalanchoe linearifolia (KLN) fl, f2, f3, f4, en comparaison avec : - un groupe recevant un produit de référence (TECA 1% - principe actif du 15 Madécassol ROCHE-NICHOLAS), un groupe traité uniquement par l'excipient des extraits, - un groupe neutre ne recevant aucun traitement. 2-CONDITIONS EXPERIMENTALES 20 Les plaies ont été obtenues par excision de la peau après une légère anesthésie à l'éther. La surface initiale des plaies est de 12,5 mm2, délimitées avec un tampon d'encre de diamètre égal à 4mm. Les extraits ont été préparés sous forme d'onguent, avec pour excipient, un mélange de lanoline-vaseline-eau (40 / 50 / 10), à un concentration de 10% pour les extraits fl. L'extrait 25 fl est expérimenté à 10%, les fractions f2 à f4, à 5% et le TECA à 1%. 3 -METHODOLOGIE 3.1- Plan expérimental Période de préparation des animaux en expérience (10 jours) 30 Préparation des onguents (2 jours) Durée prévue de l'expérimentation (4 semaines) Exploitation des résultats (1 semaine). 3.2 ù Critères d'évaluation Durée de la cicatrisation totale Evolution de la surface des plaies 3.3 - Pertinence de la méthode L'évaluation de l'effet d'un cicatrisant dans le processus réparatoire naturel, peut être faite avec une méthode telle que l'excision linéaire. Toutefois, le choix s'est porté sur la technique de la plaie circulaire qui présente l'avantage d'une meilleure précision de mesure, du fait de la continuité du processus de reconstitution jusqu'au stade de fermeture totale de la plaie 3.4 - Déroulement de l'essai 3.4.1-Manipulation des animaux Par série de manipulations, les extraits ont été évalués systématiquement par rapport au produit de référence, le TECA, et les deux groupes témoins évoqués en 1. Après rasage, les animaux sélectionnés (Souris Swiss : 4 mâles et femelles n = 8 d'un poids de 23 grammes +/-3) sont légèrement anesthésiés à l'éther, puis les excisions de la peau sont faites avec une paire de ciseaux chirurgicaux. Les plaies sont pratiquées au niveau de l'omoplate, région non accessible au grattage. Chaque animal est placé dans une cage individuelle, où il reçoit de la nourriture granulée et de l'eau à volonté, durant tout le traitement jusqu'à la cicatrisation totale. Les applications ont débuté 24 heures après l'excision. 3.4.2-Evaluation de la cicatrisation Avant chaque mesure, les croûtes sont humidifiées avec de l'eau distillée et enlevées pour la précision des mesures. Les extraits (ou le produit de référence) sont appliqués sur les plaies quotidiennement (7/7 jours), par étalement en couche fine et continue de l'onguent au moyen d'une spatule. Le relevé de la surface des plaies a été fait par planimétrie directe sur un papier millimétré semi-transparent. 3.5 û Analyse des résultats Les résultats obtenus ont été analysés statistiquement par analyse de variance suivi d'un "t" test de Student. Le degré de signification a été fixé pour S à une valeur de P Le paramètre d'évaluation est le temps total qui correspond à 100% de cicatrisation, c'est à dire de la fermeture complète des plaies. L'activité du KLN a été comparée statistiquement à celle du TECA, ainsi qu'aux témoins non traités. 4- RESULTATS ET DISCUSSION : KLN Les résultats obtenus après application journalière des préparations d'extraits ainsi que de l'excipient sont résumés dans le Tableau 4 : durée moyenne de la cicatrisation à 100% des plaies provoquées par excision de la peau chez la souris (moyenne écart standard à la moyenne, n = 8). Produit TECA K KLN KLN KLN Excipient Neutre f1N f2 f3 f4 Moyenne 14 24 21 23 24 25 28 (jours) s.e.m. 0,75 0,78 0,93 0,75 1,02 1,27 1,05 't' Student // P Conclusion : L'activité cicatrisante de KLN n'est pas significative. Exemple 4: Composition cosmétiques et dermatologiques contenant des extraits de Kalanchoe linearifolia Réalisation d'un onguent : Dénomination INCI Concentration (%) Petrolatum 25 ù 75 Paraffinum liquidum 15 ù 30 Polydecene 5 ù 20 Dipentaerythrityl pentahydroxystearate / 1 ù 3 isostearate Glycerin 1ù 10 Extrait de plante 0,1 ù 5 Kalanchoe linearifolia 0,1 ù 5 TOTAL Qsp 100 Réalisation d'une émulsion : Dénomination INCI Concentration (%) Caprylic/capric triglyceride 5 ù 15 Stearalkonium hectorite / propylene carbonate 1 ù 10 Myristyl myristate 1 ù 5 Hexyl decyl stearate 5 ù 15 Isostearyl diglyceryl succinate 1ù10 Extrait de plante 0,1 ù 5 Kalanchoe linearifolia 0,1 ù 5 Aqua Qsp 100 Les extraits de plantes utilisés ici sont les fractions f5. REVENDICATIONS 1. Compositions cosmétiques ou dermatologiques destinées à l'application topique, caractérisées en ce qu'elles renferment, à titre de principe actif, au moins un extrait de 5 Kalanchoe linearifolia, en association ou en mélange avec un excipient ou véhicule approprié. 2. Compositions cosmétiques ou dermatologiques selon la revendication 1, caractérisées en ce qu'elles renferment en outre un extrait de Sida acuta. 3. Compositions cosmétiques ou dermatologiques selon la revendication 1 ou la revendication 2, caractérisées en ce que l'extrait ou les extraits sont obtenus selon un procédé impliquant une étape d'extraction de la plante ou d'une partie de la plante séchée, à l'aide d'un solvant alcoolique ou hydroalcoolique. 15 4. Compositions cosmétiques ou dermatologiques selon l'une des revendications précédentes, caractérisées en ce que la quantité de l'extrait ou de chacun des différents extraits est comprise entre 0,0001 et 20% du poids total de la composition. 20 5. Compositions cosmétiques ou dermatologiques selon l'une des revendications précédentes, caractérisées en ce que la quantité de l'extrait ou de chacun des différents extraits est comprise entre 0,01 et 10% du poids total de la composition. 6. Compositions cosmétiques ou dermatologiques selon l'une des revendications 25 précédentes, caractérisées en ce qu'elles renferment en outre un ou plusieurs principes actifs complémentaires. 10