FR 2899338 A1 20071005 FR 0602676 A 20060328 PROCEDE DE DETERMINATION DU CARACTERE ANTIGENIQUE D'UNE COMPOSITION DESTINEE A L'ALIMENTATION HUMAINE ET/OU DE CHACUN DE SES COMPOSANTS La présente invention concerne un procédé de détermination du caractère antigénique d'une composition destinée à l'alimentation humaine, et/ou de chacun de ses composants. On sait qu'une substance nutritionnelle dans son action physiologique peut se révéler bénéfique, sans effet, voire toxique pour le consommateur. C'est ainsi que dans le domaine de la complémentation nutritionnelle commercialisée sur le marché actuellement, il a été constaté qu'un même produit peut se comporter différemment en fonction des individus. Les causes en sont multiples et complexes. En effet, les aliments ne sont pas métabolisés passivement, ils participent activement aux processus biologiques dans lesquels les paramètres mis en place subissent l'influence d'une situation génétique ou épigénétique de l'individu. Les aliments fonctionnels peuvent ainsi interagir à différents niveaux ; nous allons retenir plus particulièrement deux processus: 1 ) Mode d'action des lectines : Les lectines sont des structures de nature protidique que l'on retrouve sur les plantes, les animaux, les virus, les bactéries etc... Ce sont des agglutinines agissant comme un système de protection (sorte de système immunitaire primitif équivalent à nos anticorps). Ces lectines ont la propriété de s'agglutiner sur des glucides de surface des cellules. ( "History of lectins : from hemagglutinins to biological recognition molecules: Nathan Sharon and Halina Lis, 2004") Les antigènes érythrocytaires, situés à la surface des globules rouges, sont constitués de glycoprotéines dont la partie glucidique peuvent réagir avec certaines lectines en provoquant une hémagglutination, endommageable pour l'hématie. Lectine Glucide de surface Antigène érythrocytaire de nature 35 rouge glucidique R'Brevets\24000\24098 llefinitif.doe 27.03/06 Page 1 sur 12 Les lectines sont sélectives et spécifiques de certains glucides. Le degré d'adhérence des lectines aux cellules dépend du degré de glycosylation du tissu soit de la quantité d'éléments glyco-conjugués qu'il contient. Au niveau intestinal, la toxicité des lectines est due à leur capacité de se lier aux sites de récepteurs glucidiques situés sur la cellule de la muqueuse intestinale avec pour conséquence la perturbation de l'absorption des nutriments à travers la paroi de l'intestin. Ce sont des facteurs anti-nutritionnels. (Kondo, Abe, Arai - 1989) Ainsi par exemple l'oryzacystatine (dans la semence de riz) est un inhibiteur des proteinases de cysteine tels que la papaine, ficine, chymopapaine, cathepsine C. En général, les lectines sont détruites au cours de la cuisson, mais certaines résistent à hautes températures. Action sur les hématies : Les lectines qui échappent à la neutralisation, passent dans la circulation sanguine, et peuvent déclencher des hémagglutinations avec destruction des globules rouges et blancs. Comme elles sont sélectives, leurs comportements varient en fonction des glucides des antigènes qui se trouvent sur les érythrocytes des groupes sanguins A, B, O, ou AB. Action sur le tractus digestif : - inflammation des muqueuses : lectine de gluten sur l'intestin lectine d'arachide sur l'estomac - stimulent la libération d'histamine : allergies alimentaires - interfèrent avec la digestion des protéines ( Ex : lectine de germe de blé inhibe l'aminopeptidase nécessaire pour transformer les polypeptides en acides aminés - augmentent la taille des organes ( foie, pancréas, intestin grêle) - diminuent l'absorption des aliments : perturbation de la croissance - bloquent les hormones digestives ( Ex : la cholécystokinine inhibe la sécrétion de l'amylase) Nous notons donc que les interférences de ces structures agglutinantes avec les nutriments expliquent les différences d'efficacité en fonction des structures cellulaires. 2 ) Immuno-génétique: Les antigènes des 4 groupes sanguins sont des glucides de nature oligosaccharidique (que l'on retrouve aussi sous forme soluble dans la salive). R:ABrevets\24000\24098 Definitif.doc 27/03/06 Page 2 sur 12 Ce qui distingue les érythrocytes des autres cellules, c'est le récepteur membranaire de type FI de nature oligosaccharidique appelé N-acétylglucosamine. Le gène H du chromosome 19 produit l'enzyme fucose tranférase pour placer un fucose sur une chaîne précurseur. La synthèse de ces antigènes est sous l'influence d'enzymes spécifiques lesquels sont codés par des gènes spécifiques. - Les personnes du groupe sanguin A possèdent l'allèle A du gène ABO retrouvé sur le chromosome 9 à l'emplacement q 34. La biosynthèse des antigènes A est régie par l'enzyme N-acétylgalactosaminetransférase codé par cet allèle A du groupe A . Cet enzyme ajoute le sucre N-acétyl-D-galactosamine sur le fucose du récepteur H : c'est le récepteur A. - Les personnes du groupe B possèdent l'allèle B du gène ABO situé sur le chromosome 9 au locus q34. La biosynthèse des antigènes B est régie par l'enzyme D-galactoysltransférase codé par cet allèle B du gène ABO du groupe B. Cet enzyme ajoute le sucre D-galactose au fucose du récepteur H pour donner le récepteur B. - Les personnes du groupe AB possèdent l'allèle A et l'allèle B du gène ABO. Ces allèles sont co-dominants. Ils seront munis de récepteurs A et de récepteurs B en quantités égales. - Les personnes du groupe O possèdent 2 allèles O récessifs aux allèles A et B. Cet allèle ne code pour aucun enzyme. Le fucose du récepteur H est intact. On peut ainsi établir la relation entre les différents maillons de la chaîne métabolique : Nutriment ù lectine ù antigène ù enzyme - gène système ABO - chromosome 9q34 rendant les nutriments efficaces, sans effet ou néfastes. On sait aussi que la biosynthèse de la substance H est régie par la N-acétylgalactosamine transférase a-1 codée par le gène H ( FUT1) du système Hh situé sur le chromosome 19 , tandis que le 2-fucosyltranférase est codé par le gène FUT2 du système Sese situé sur le chromosome 19. (Etudes faites après extraction de l'ADN et amplification par PCR) En fonction des sites récepteurs spécifiques présentés par les gènes des groupes sanguins, les lectines sélectifs particuliers vont s'adhérer ou pas. D'où la nécessité de tenir compte de ces critères qui sont totalement ignorés dans les produits qui se trouvent actuellement sur le marché. R:ABrevets\24000\24098 Detinitif doc 27/03/06 Page 3 sur 12 Nous nous intéressons donc à la relation des nutriments avec le chromosome 9 plus précisément à son site 9q34 correspondant au gène du système ABO des groupes sanguins, et au chromosome 19 sur lequel on retrouve le gène FUT1 du système Hh et FUT2 du système Sese afin de déterminer notre choix sur les ingrédients qui rentreront dans la composition de nos compléments nutritionnels. Cette nouvelle discipline de la Nutrigénétique nous permet ainsi d'innover pour plus de rigueur nécessaire à la qualité des produits, de cibler à la carte les besoins des individus, de protéger davantage le consommateur. Dans les produits qui se trouvent actuellement sur le marché les ingrédients actifs sont retenus en fonction de leurs propriétés traditionnellement connues ou reconnues. Pourtant, l'efficacité de ces produits est toute relative, malgré leurs propriétés traditionnellement reconnues, et ces substances, commercialisées parfois depuis de nombreuses années, peuvent dans certains cas entraîner de très graves désagréments. Dans l'intérêt des consommateurs, on cherche à augmenter l'efficacité, à diminuer les inconvénients et à cibler l'action nutritionnelle Pour cela, la présente invention a ainsi pour objet de se différencier des produits mis sur le marché par la concurrence en décelant notamment les incompatibilités immuno-génétiques. 25 L'objet de la présente invention est ainsi de fournir de nouvelles compositions palliant au moins partiellement aux inconvénients précités. La présente invention a ainsi pour objet un procédé de détermination du caractère antigénique d'une composition destinée à l'alimentation humaine, et/ou de chacun de ses composants, caractérisé en ce que l'on: 30 a) procède à une détermination du comportement non immuno-réactif de chaque ingrédient potentiel de cette composition pris isolément, vis à vis du profil immunogénétique de l'individu susceptible de recevoir cette composition, b) sélectionne les ingrédients, qui n'ont pas donné lieu à une immuno- 35 réaction, c) prépare une composition renfermant les ingrédients ainsi sélectionnés, n'ayant pas donné lieu à immuno-réaction, et R:A6revets\24000\24098 Definitif-doc 27/03/06 Page 4 sur 1220 d) vérifie à nouveau que la composition ainsi préparée, renfermant les différents ingrédients sélectionnés, ne donne pas d' immuno-réaction avec le système de l'individu auquel on souhaite donner cette composition. L'invention a également pour objet un procédé de détermination du caractère antigénique d'une composition destinée à l'alimentation humaine, et/ou de chacun de ses composants tel que défini ci-dessus, caractérisé en ce que l'on a) procède à une détermination du comportement antigénique de chaque ingrédient potentiel de cette composition pris isolément, vis à vis du profil immunogénétique du système sanguin de l'individu susceptible de recevoir cette composition, b) sélectionne les ingrédients, qui n'ont pas donné lieu à une hémagglutination, c) prépare une composition renfermant les ingrédients ainsi sélectionnés, n'ayant pas donné lieu à une hémagglutination, et d) vérifie à nouveau que la composition ainsi préparée, renfermant les différents ingrédients sélectionnés, ne donne pas de réaction d' hémagglutination avec le système sanguin de l'individu auquel on souhaite donner cette composition. Selon l'invention, le procédé de détermination du caractère antigénique d'une composition destinée à l'alimentation humaine, et/ou de chacun de ses composants est caractérisé en ce que l'on procède à une détermination du comportement antigénique de chaque ingrédient potentiel de cette composition pris isolément, vis à vis du profil immunogénétique du système sanguin A B O de l'individu susceptible de recevoir cette composition. Suivant des modes de réalisation préférés, l'invention comprend une ou plusieurs des caractéristiques suivantes: - Le procédé de détermination du caractère antigénique d'une composition destinée à l'alimentation humaine, tel que défini ci-dessus, est caractérisé en ce que l'on procède à une détermination du comportement antigénique de cette composition, vis à vis du profil immunogénétique du système sanguin A B O de l'individu susceptible de la recevoir. - Le procédé est caractérisé en ce qu'il est appliqué à la préparation de compositions destinées à être utilisées en alimentation humaine et/ou en diététique. R:ABrevets\24000\24098 Definitif doc 27/03/06 Page 5 sur 12 L'invention a également pour objet un kit permettant de déterminer le caractère antigénique d'une composition destinée à l'alimentation humaine, et/ou de chacun de ses composants, caractérisé en ce qu'il est constitué de réactifs permettant de déterminer s'il y a ou non immuno-réaction entre le système de l'individu et l'ingrédient ou la composition que l'on souhaite lui administrer. Selon une variante de l'invention le kit tel que défini ci-dessus, est caractérisé en ce qu'il est constitué de réactifs permettant de déterminer s'il y a ou non hémagglutination entre le système sanguin de l'individu et l'ingrédient ou la composition que l'on souhaite lui administrer. L'invention a enfin pour objet les compositions destinées à l'alimentation humaine, telles qu'obtenues lors de la mise en oeuvre du procédé défini ci-dessus et notamment les compositions diététiques telles qu'obtenues D'autres caractéristiques et avantages de l'invention apparaîtront à la lecture de la description qui suit d'un mode de réalisation préféré de l'invention, donnée à titre d'exemple 20 Bien entendu, la présente invention n'est pas limitée aux exemples et au mode de réalisation décrits et représentés ci-après, mais elle est susceptible de nombreuses variantes accessibles à l'homme de l'art. Exemple de réalisation de l'invention : 25 I û PRINCIPE de l'ESSAI Détermination de l'action hémagglutinante de l'échantillon à tester par détection de la présence de lectines de nature protidique capable d'agglutiner les antigènes glucidiques situés sur les récepteurs membranaires à la surface des cellules érythrocytaires. 30 II û OBJECTIF de l'ESSAI Permet l'application et la mise en place du principe innovant par la sélection des principes actifs compatibles ou pas avec les systèmes sanguins pour la mise au point des formulations. III ù METHODE : ETAPES PROCEDURALES R:ABrev ets\24000\24098 Definitif duc 27/03/06 Page 6 sur 12 35 Isolation du principe actif à tester nécessaire pour éviter que les autres composants du produit ne réagissent avec les érythrocytes et interférent sur la réaction d'agglutination Mise en oeuvre de l'essai 1 û Descriptif du mode opératoire Phase 1 Etablir un témoin de réaction d'hémagglutination avec le système sanguin qui doit servir de référence comparative Exemple : lectine de blé + groupe sanguin B = agglutination Phase 2 : Mise en présence de l'échantillon à tester avec les érythrocytes d'un système sanguin déterminé ( ex : système sanguin ABO) d'au moins 5 individus du même groupe 2 û Exécution du mode opératoire * Exécution de la phase 1 - Préparation de 4 concentrations différentes de l'élément û témoin - Préparation de 4 séries de 4 tubes à essai contenant une dilution à 1/10 de sang humain dans du NACL à 0.9%. Chaque série représentant la dilution de sang d'un groupe sanguin différent soit A, B, O, ou AB. -Mélanger les tubes de façon homogène de l'élément témoin aux tubes de dilution sanguine spécifiquement selon l'ordre défini des différents groupes sanguins. - Mettre les mélanges ainsi réalisés dans l'incubateur à 37 pendant 2 heures. - Lecture des résultats : les comportements du témoin en fonction des différents groupes sanguins vont être identifiés. Les tubes témoins ainsi réalisés vont pouvoir servir d'étalons et être comparés aux tubes de la phase 2. * Exécution de la phase 2 - Préparation de 4 concentrations différentes de l'élément à tester - Préparation de 4 séries de 4 tubes à essai contenant 4 dilutions à 1/10 de sang humain des 4 groupes sanguins - Mélanger de façon homogène l'élément à tester aux tubes de dilution sanguine spécifiquement selon l'ordre défini des différents groupes sanguins -Mettre les mélanges ainsi réalisés dans l'incubateur à 37 pendant 2 heures. Lecture des résultats : en fonction des différents groupes sanguins,le comportement de l'élément testé va être une réponse : négative (-) : pas d'agglutination R:\Brevets\24000\24098 Definitifdoc 27/03/06 Page 7 sur 12 positive (+) : présence d'agglutination La comparaison avec les tubes témoins vont déterminer de l'intensité de la réponse positive 4+ à 1+. Les résultats faiblement positifs ne seront pas retenus compte tenu des risques d'interférences dus à des sous-groupes ou à un autre système sanguin plus ou moins immunogènes. Exigence de l'évaluation : Un contrôle de cet examen macroscopique par un examen microscopique sur microplaque est systématiquement pratiqué avant de déclarer la validation du résultat. Interprétation des résultats : Une réponse franche et claire par l'importance de l'hémagglutination de même qu'un contrôle microscopique confirmant ce résultat sont nécessaires pour déclarer l'identification de la présence de lectine à l'origine de la réaction d'agglutination avec des glucides de surface des membranes des cellules sanguines. Validation des substances analysées : La présence de cette lectine dans le produit testé le rend immunologiquement incompatible avec certains groupes sanguins mais pas avec d'autres. Certaines substances analysées vont être déclarées valides pour l'utilisation qui leur est destinée ou pas. Le déterminant innovant : Cette preuve par l'agglutination de la réaction antigénique démontre que la lectine du produit testé est sélective de certains glucides, que leur degré d'agglutination aux cellules sanguines dépend de la quantité d'éléments glycoconjugués présents. Ces glucides de surface de nature oligosaccharide sont les composants glucidiques des antigènes des groupes sanguins. Ces récepteurs membranaires de type H dont le fucose est destiné à recevoir le glucide spécifique de chaque groupe sanguin est sous l'influence d'enzymes spécifiques codés par des gènes spécifiques situés sur le chromosome 9 à l'emplacement de l'appendice q autour de la bande 34. La biosynthèse des antigènes A est régie par l'enzyme N-acétylgalactosaminetransférase qui permet la fixation du glucide N-acétyl-D- galactosamine sur le fucose du récepteur H. La biosynthèse des antigènes B est régie par l'enzyme D-galactosyltransférase qui permet la fixation du glucide D-galactose sur le fucose du récepteur H. R:ABrevets\24000\24098 Definitifdoc 2703/06 Page 8 sur 12 Le groupe AB est muni du récepteur A et du récepteur B en quantités égales. Le groupe O : son récepteur H est intact. Le gène du groupe O ne code pour aucun enzyme. Le caractère génétique de cette réaction immunologique lui donne un caractère déterminant capable d'entraîner une possibilité de mutation non maîtrisable sur le long terme. Toute réaction d'agglutination fort en dommageable pour la cellule peut entraîner la lyse de celle-ci, c'est un risque immunologique que nous ne voulons pas prendre dans la recherche des meilleurs principes actifs pour nos formulations. 10 Conclusion de l'essai : Par cet essai , on va pouvoir déclarer le principe actif apte ou non à intégrer la formulation prévue pour une allégation donnée. Une mise au point de la formulation non pas basée uniquement par l'utilisation 15 du principe actif pour ses propriétés traditionnellement reconnues, mais une sélection par compatibilité immunogénétique donne plus de sécurité-santé au destinataire final du produit fabriqué selon cette formulation ciblée. R:ABrevets\24000\24098 llefmitifdoc 27/03/06 Page 9 sur 12 REVENDICATIONS 1. Procédé de détermination du caractère antigénique d'une composition destinée à l'alimentation humaine, et/ou de chacun de ses composants, caractérisé en ce que l'on: a) procède à une détermination du comportement non agglutinant de chaque ingrédient potentiel de cette composition pris isolément, vis à vis du profil immunogénétique de l'individu susceptible de recevoir cette composition, b) sélectionne les ingrédients, qui n'ont pas donné lieu à une agglutination, c) prépare une composition renfermant les ingrédients ainsi sélectionnés, n'ayant pas donné lieu à agglutination, et d) vérifie à nouveau que la composition ainsi préparée, renfermant les différents ingrédients sélectionnés, ne donne pas agglutination avec le système de l'individu auquel on souhaite donner cette composition. 2. Procédé de détermination du caractère antigénique d'une composition destinée à l'alimentation humaine, et/ou de chacun de ses composants selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'on: a) procède à une détermination du comportement antigénique de chaque ingrédient potentiel de cette composition pris isolément, vis à vis du profil immunogénétique du système sanguin de l'individu susceptible de recevoir cette composition, b) sélectionne les ingrédients, qui n'ont pas donné lieu à une hémagglutination, c) prépare une composition renfermant les ingrédients ainsi sélectionnés, n'ayant pas donné lieu à une hémagglutination, et d) vérifie à nouveau que la composition ainsi préparée, renfermant les différents ingrédients sélectionnés, ne donne pas de réaction d' hémagglutination avec le système sanguin de l'individu auquel on souhaite donner cette composition. 3. Procédé de détermination du caractère antigénique d'une composition destinée à l'alimentation humaine, et/ou de chacun de ses composants selon la revendication 2, caractérisé en ce que l'on procède à une détermination du comportement antigénique de chaque ingrédient potentiel de cette composition pris isolément, vis à vis du profil immunogénétique du système sanguin A B O de l'individu susceptible de recevoir cette composition. R:kBrevets\24000\24098 Non unite.doc 28/07/06 Page 10 sur 12 4. Procédé de détermination du caractère antigénique d'une composition destinée à l'alimentation humaine, selon l'une quelconque des revendications 1, 2 ou 3, caractérisé en ce que l'on procède à une détermination du comportement antigénique de cette composition, vis à vis du profil immunogénétique du système sanguin A B O de l'individu susceptible de la recevoir. 5. Procédé, selon l'une quelconque des revendications 1, 2 ou 3, caractérisé en ce que ce procédé est appliqué à la préparation de compositions destinées à être utilisées en alimentation humaine et/ou en diététique. R:\Brevets\24000\24098 Non unite.doc 28/07/06 Page 11 sur 12