FR 2903902 A1 20080125 FR 0606648 A 20060721 1 UTILISATION D'UNE COMPOSITION COSMETIQUE POUR FAVORISER LA DEPIGMENTATION CUTANEE La présente invention concerne l'utilisation d'une composition cosmétique pour favoriser la dépigmentation cutanée par exemple pour effacer ou réduire les taches de vieillesse. La pigmentation cutanée est liée à la présence de cellules spécialisées, les mélanocytes. Ces derniers représentent environ 5% des cellules de la couche basale de l'épiderme. Ils possèdent des prolongations dendritiques leur permettant d'entrer en contact avec plusieurs kératinocytes. Les mélanocytes ont une fonction principale, la synthèse de mélanine ou mélanogénèse. La mélanogénèse est principalement stimulée par les radiations UVA et UVB du spectre solaire. Il en résulte une augmentation de la synthèse des pigments mélaniques, de la dendricité et du nombre de mélanocytes. Les UV qui pénètrent jusqu'à la couche basale de l'épiderme peuvent agir directement sur les mélanocytes ou indirectement en stimulant la production d'agents mélanogéniques par les kératinocytes (endothéline-1, monoxyde d'azote...). La mélanine est synthétisée et stockée dans des vésicules spécialisées, appelés mélanosomes. Les mélanosomes sont acheminés du centre de la cellule vers l'extrémité des dendrites où ils pourront être transférés aux kératinocytes. Le relargage des mélanosomes par les mélanocytes et la phagocytose par les kératinocytes sont induits par les UV et modulés par de nombreux facteurs. La formation de mélanine se fait généralement de façon continue et harmonieuse dans la peau et les cheveux. Mais dans certaines conditions ou sous l'effet de certains facteurs, des dérèglements de la 2903902 2 pigmentation peuvent survenir et provoquer une hyperpigmentation. Plusieurs mécanismes peuvent en être à l'origine, les deux principaux sont l'activité accrue des mélanocytes ou la prolifération mélanocytaire. Une 5 hyperactivité mélanocytaire est à l'origine des éphélides appelées communément taches de rousseur, et du chloasma aussi appelé masque de grossesse. La prolifération mélanocytaire est à l'origine du lentigo sénile encore appelé tache de vieillesse. Les taches brunes apparaissent 10 avec l'âge, sur le dos des mains, les avant-bras, le visage touchant généralement les zones découvertes. Histologiquement le lentigo sénile présente une hyperpigmentation de la couche basale de l'épiderme avec augmentation du nombre de mélanosomes. 15 Ces taches liées à l'âge sont particulièrement mal supportées et de nombreuses personnes sont tentées de les faire disparaître. La cosmétologie propose de nombreux produits cosmétiques dépigmentants agissant généralement sur la tyrosinase, enzyme 20 essentielle de la synthèse de mélanine. Ainsi dans le brevet FR 2 787 710 la Demanderesse avait proposé une composition cosmétique éclaircissante dont les actifs inhibent la tyrosinase. Il existe aussi certaines molécules aux propriétés dépigmentantes mais dont les 25 effets secondaires sont trop toxiques pour être utilisés en cosmétologie. Les produits dépigmentants étant très prisés par les personnes âgées d'un coté et par toutes les femmes asiatiques pour qui la blancheur de la peau est 30 essentielle, l'utilisation d'une composition dépigmentante à la fois efficace et sans effets secondaires néfastes est nécessaire. Un nouveau récepteur impliqué dans le transfert des mélanosomes du mélanocyte vers le 2903902 3 kératinocyte vient d'être mis en évidence, il s'agit du récepteur du facteur de croissance kératinocytaire (nommé ci après KGFR). Ce récepteur activé par le facteur de croissance kératinocytaire (nommé ci après KGF) est 5 impliqué dans la phagocytose des mélanosomes au bout des dendrites du mélanocyte. (J Invest Dermatol 125 :1190-1199,2005). La demanderesse a mis en évidence l'inactivation du KGFR par un extrait d'Alchemilla 10 vulgaris. Le transfert des mélanosomes du mélanocyte vers le kératinocyte par phagocytose étant diminué par l'action d'Alchemilla vulgaris, le kératinocyte est moins riche en mélanine, la peau se dépigmente, les taches de vieillesse sont effacées, le teint est éclairci et plus homogène. 15 L'extrait d'Alchemilla vulgaris peut également être utilisé de manière préventive. En effet il permet de prévenir l'apparition de taches de pigmentation d'origine pathologique comme le chloasma, ou naturelle comme les éphélides ou le lentigo sénile. 20 La présente invention concerne donc l'utilisation d'un extrait d'Alchemilla vulgaris dans une composition cosmétique ou dermatologique dépigmentante. La présente invention concerne aussi 25 l'utilisation d'un extrait d'Alchemilla vulgaris dans une composition cosmétique ou dermatologique comme agent dépigmentant. L'Alchemilla vulgaris est déjà utilisée en 30 cosmétologie comme agent nettoyant mais aussi pour ses propriétés astringente ou anti obésité. L'utilisation d'Alchemilla vulgaris a également été décrite pour repigmenter des lésions blanchâtres cicatricielles dans le brevet US4054649. De façon surprenante, la demanderesse a 2903902 4 mis en évidence le fait que certains extraits d'Alchemilla vulgaris avaient la propriété de favoriser la dépigmentation de la peau et/ou de prévenir l'apparition d'une pigmentation. Alchemilla vulgaris est une plante vivace, haute de 20 à 40cm, à feuilles d'un vert très clair, arrondies et bordées de lobes arrondis dentés. Ses fleurs, qui s'épanouissent en été, minuscules, vertes et peu voyantes sont dépourvues de pétales. L'Alchemille tient son nom de l'usage qu'en faisaient les alchimistes, qui recueillaient comme eau céleste , pour préparer la pierre philosophale, la rosée du bord des feuilles et les gouttes d'eau qui s'amassent au centre de celles-ci. 15 De façon avantageuse, l'extrait utilisable dans le cadre de la présente invention est issu de la plante entière et il est obtenu par extraction au moyen d'un solvant tel que l'eau, un alcool, un glycol, la glycérine, l'acétone ou un mélange de ces solvants. De 20 préférence, il s'agit d'un extrait hydro glycolique. Après macération de la plante entière dans un mélange d'eau et de butylène glycol l'extrait est filtré. On obtient un liquide brun orangé d'odeur caractéristique présentant les caractéristiques analytiques suivantes : 25 - pH : 3.5 - 5.5 - densité : 1.025 - 1.050 - indice de réfraction : 1.385 - 1.415 - matière sèche : 2.0 - 6.0% 30 On peut se procurer un extrait d'Alchemilla vulgaris utilisable selon l'invention par exemple auprès de la société Sederma, commercialisé sous la dénomination commerciale `Alchemille BG'. 5 10 2903902 5 Selon l'invention, l'extrait d'Alchemilla vulgaris peut être utilisé avec un ou plusieurs autres actifs dépigmentants. Plus particulièrement, l'extrait d'Alchemilla vulgaris selon l'invention peut être associé 5 dans une composition cosmétique ou dermatologique à un extrait de persil, et/ou un extrait de camomille tels que décrits dans le brevet FR 2 787 710. La composition selon l'invention contient 10 de l'ordre de 0,01 à 10 % en poids, et de préférence 0,01 à 5 % en poids d'un extrait d'Alchemilla vulgaris sous la forme d'une solution de concentration allant de 0.5 à 10% en matière sèche. 15 La composition cosmétique de la présente invention à application topique peut constituer notamment une composition de protection, de traitement ou de soin cosmétique ou dermatologique pour le visage, pour le cou, pour les mains ou pour le corps, comme, par exemple, 20 crèmes de jour, crèmes de nuit, laits corporels. La composition cosmétique selon la présente invention peut contenir un ou plusieurs autres composants connus de l'homme du métier, comme des agents 25 de formulation ou additifs d'usage connu et classique dans les compositions cosmétiques. A titre d'exemple et de façon non limitative, de tels agents de formulation et additifs peuvent être des gélifiants hydrophiles ou lipophiles, des adoucissants, des colorants, des agents 30 solubilisants, des agents de texture, des parfums, des charges, des actifs filmogènes, des conservateurs, des tensio-actifs, des émulsionnants, des huiles, des glycols, des vitamines, des filtres solaires,.... Grâce à ses connaissances en matière de cosmétiques, l'homme du métier 2903902 6 saura quels agents de formulation ajouter à la composition cosmétique selon l'invention et en quelles quantités en fonction des propriétés recherchées. Avantageusement la composition selon 5 l'invention peut contenir un ou plusieurs filtres solaires d'origine synthétique ou naturelle, anti UVA ou anti UVB. De façon avantageuse la composition selon l'invention peut contenir aussi un ou plusieurs actifs anti âge, notamment des actifs hydratants, des actifs anti-rides, des 10 tenseurs. De plus, la composition cosmétique selon la présente invention peut se présenter sous toute forme connue de l'homme du métier dans le domaine de la 15 cosmétique sans aucune autre restriction galénique particulière que celle pour l'application sur la peau. Ainsi, la composition cosmétique selon l'invention peut avoir la forme d'une solution ou suspension aqueuse, alcoolique ou d'une suspension huileuse ou d'une solution 20 ou d'une dispersion de type lotion ou sérum, d'une émulsion de consistance liquide ou semi-liquide de type lait, obtenues par dispersion d'une phase grasse dans une phase aqueuse (émulsion Huile dans Eau H/E) ou inversement (Eau dans Huile : E/H), ou d'une émulsion du 25 type crème H/E ou E/H ou d'un gel, d'une lotion, d'un masque. On peut également envisager les formulations cosmétiques selon l'invention sous la forme d'une mousse ou encore sous forme de compositions pour aérosol comprenant également un agent propulseur sous pression. 30 La présente invention concerne également un procédé de traitement cosmétique pour dépigmenter la peau et/ou pour prévenir l'apparition d'une pigmentation, 2903902 7 comprenant l'application sur la peau d'une composition cosmétique comportant un extrait d'Alchemilla vulgaris. La présente invention concerne aussi l'utilisation d'un extrait d'Alchemilla vulgaris pour la 5 préparation d'une composition dermatologique destinée à prévenir ou traiter une hyperpigmentation de la peau. Chez les personnes ayant une peau colorée, telles que les asiatiques par exemple, l'utilisation d'un extrait d'Alchemilla vulgaris selon la présente invention 10 permet d'obtenir et de conserver un teint plus clair, et cela de façon homogène sur l'ensemble de la zone traitée. Chez les personnes ayant une hyperpigmentation de la peau sous forme de taches, d'origine pathologique ou naturelle, l'utilisation d'un extrait d'Alchemilla vulgaris permet de 15 restaurer l'homogénéité du teint, par un éclaircissement des zones hyperpigmentées. Les exemples ci-après concernent, d'une part l'évaluation de l'inhibition par un extrait d'Alchemilla vulgaris du transfert des mélanosomes du 20 mélanocyte vers le kératinocyte, et d'autre part des compositions objets de la présente invention. Les exemples font référence aux figures suivantes dans lesquelles : 25 - la figure 1 représente le témoin non traité - la figure 2 représente l'incorporation de billes fluorescentes dans le témoin traité au KGF - la figure 3 représente l'incorporation 30 de billes fluorescentes dans les cellules traitées au KGF et avec l'extrait d'Alchemilla vulgaris. I.EVALUATION DE L'INHIBITION D'UN EXTRAIT D'ALCHEMILLA VULGARIS SUR LE TRANSFERT DES MELANOSOMES 2903902 A.PRINCIPE Le KGFR constitue le récepteur kératinocytaire du KGF facteur de croissance intervenant 5 dans la prolifération et la différenciation épidermique. Ce récepteur est internalisé lors de la fixation du KGF. Il a été montré que le KGFR a un rôle à jouer dans le transfert des mélanosomes des mélanocytes aux kératinocytes. En effet, sous l'effet de KGF, ceux-ci 10 entrent plus facilement dans la cellule. Les mélanosomes se co-localisent avec le KGFR dans des vésicules d'internalisation. Cette technique permet de mettre en évidence l'effet de certaines molécules sur la voie spécifique du transfert via une activation au KGF. Elle 15 met en jeu l'utilisation de fluosphères mimant les mélanosomes sur un modèle d'étude cellulaire de kératinocytes humains en monocouche.(J.Invest.Dermatol 125 :1190-1199 2005). B.MATERIEL ET METHODE 20 1. Ensemencement Les kératinocytes humains sont cultivés, sur lamelle de verre dans des puits d'une plaque 6 puits, à raison de 40.103 cellules/3 ml par puits, à 37 C, dans un milieu DMEM (milieu essentiel modifié Dulbecco) 25 contenant 2mM de L-glutamine et 10% de sérum de veau foetal (SVF), dans une atmosphère saturée en humidité avec 5% de CO2. Les cultures sont incubées 72 heures. 2. Traitements 30 Les cellules sont rincées et incubées 48 heures comme suit : - milieu seul (témoin) - Extrait d'Alchemilla vulgaris 0,05%* 8 2903902 9 - Extrait d'Alchemilla vulgaris 0,1%* - Extrait d'Alchemilla vulgaris 0,2%* * dans le milieu, volume final 3 ml, 5 concentration révélée non cytotoxique pour les cellules au test de réduction au bleu de Formazan. 3. Traitements et incorporation des fluosphères par les cellules 10 Le milieu pour les billes et les traitements pour cette étape est différent de celui utilisé précédemment : DMEM 10% SVF inactivé 0,5% BSA (albumine de sérum bovin). 15 a) Préparation des billes fluorescentes Les billes se préparent dans le milieu de culture précédent. L'utilisation d'albumine de sérum bovin permet de faciliter la répartition homogène des billes dans la solution. Le sérum de veau foetal inactivé apporte 20 moins de nutriments et de facteurs de croissance pouvant interagir avec le KGF apporté par l'expérience. Une concentration de 4.109 particules/ml est utilisée pour l'expérimentation. Le flacon contenant les billes est passé au vortex à sa sortie du 25 réfrigérateur puis placé dans le bain à ultra-son pour une durée de 20 minutes. Les billes passent à nouveau au vortex vigoureusement et la quantité nécessaire pour préparer la solution de travail est prélevée (sous la hotte) et mise en suspension dans le milieu. La solution 30 de travail est ensuite passée au vortex puis plongée dans le bain à ultra-son pendant 10 minutes. Ces étapes sont nécessaires afin d'obtenir une solution de billes la plus homogène possible. 2903902 10 b) Préparation des traitements La solution de travail de billes est répartie dans différents tubes l5ml correspondant aux différentes concentrations du traitement à appliquer. Le 5 KGF (10ig/ml) est ajouté à chacun des tubes afin d'obtenir une concentration finale de 20ng/ml. Chaque solution est mélangée par aspiration-refoulement à la pipette. c) Phagocytose Un volume de 3 ml de chaque solution contenant le KGF, les billes fluorescentes et l'extrait d'Alchemilla vulgaris à différentes concentrations (0,05 ; 0,1 ; 0,2%) est déposé dans chaque puits. Un puits témoin positif KGF seul est prévu. Les plaques sont agitées par rotations manuelles afin de répartir la solution de façon homogène. Les cellules sont incubées 2h dans l'incubateur 37 C-5%CO2, temps nécessaire pour que le KGFR soit internalisé sous l'effet du KGF. 20 d) Arrêt de la phagocytose Lorsque le temps d'incubation est écoulé, l'incorporation des billes par les cellules doit être stoppée en retirant les billes restées à l'état 25 extracellulaire. Pour ceci : on retire avec le système d'aspiration l'intégralité du contenu de chaque puits; on dépose 1 ml de SVF inactivé dans chaque puits, on agite et on place pendant 20 minutes 30 minimum à l'incubateur 37 C-5%CO2 ; - on retire le SVF et on procède à 4 rinçages vigoureux d'l minute environ avec 2 à 3 ml de DMEM complet froid en agitant bien les plaques à chaque rinçage ; 10 15 2903902 11 - on procède ensuite à 2 rinçages au tampon salin phosphaté (PBS) en agitant bien les plaques ou et en aspirant bien le PBS lors du dernier rinçage. 3. Visualisation du transfert 5 La visualisation se fait le jour même. Après le retrait des billes extracellulaires, la fixation des cellules (méthanol -20 C) est réalisée sur les lamelles pour visualiser les fluosphères ainsi que les kératinocytes en marquant la cytokératine par la technique 10 immunocytochimique. Pour le marquage, l'anticorps primaire utilisé est l'IgG de lapin anti-cytokératine humaine; l'anticorps secondaire est l'IgG de chèvre anti-lapin 15 couplé au FITC. Le microscope à fluorescence couplé à un logiciel d'analyse d'image nous permet de révéler le marquage et de prendre des photos. II.EXEMPLES 20 CREME ECLAIRCISSANTE % 25 GOMME XANTHANE 0,10 GLYCERINE 5,00 CETEARYL GLUCOSIDE 3,00 MONOSTEARATE DE GLYCEROL AE 2,00 TRYGLYCERIDE C8C10 10,00 30 HUILE DE SILICONE 3,00 EXTRAIT DE PERSIL 1,00 EXTRAIT DE CAMOMILLE 1,00 EXTRAIT D'ALCHEMILLA VULGARIS 2,00 CONSERVATEURS 1,00 PARFUM 0,30 2903902 12 EAU DEMINERALISEE Q.S.P 100 GEL ECLAIRCISSANT 5 % GLYCERINE 3,00 GOMME XANTHANE 0,20 10 ETHANOL 5,00 EXTRAIT DE PERSIL 1,00 EXTRAIT DE CAMOMILLE 1,00 EXTRAIT D'ALCHEMILLA VUGARIS 2,00 CONSERVATEURS 0,50 15 SOLUBILISANT 0,50 PARFUM 0,20 EAU DEMINERALISEE Q.S.P 100 20 LOTION ECLAIRCISSANTE % GLYCOL 2,00 25 CHLORURE DE SODIUM 1,00 ETHANOL 5,00 EXTRAIT DE PERSIL 1,00 EXTRAIT DE CAMOMILLE 1,00 EXTRAIT D'ALCHEMILLA VUGARIS 2,00 30 CONSERVATEURS 0,50 SOLUBILISANT 0,30 PARFUM 0,10 EAU DEMINERALISEE Q.S.P 100 35 REVENDICATIONS 1) Utilisation d'un extrait d'Alchemilla vulgaris dans une composition cosmétique dépigmentante. 2) Utilisation d'un extrait d'Alchemilla vulgaris dans une composition cosmétique comme agent dépigmentant. 3) Utilisation selon la revendication 1 ou 2, caractérisée en ce que l'extrait d'Alchemilla vulgaris est issu de la plante entière. 4) Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce l'extrait d'Alchemilla vulgaris est un extrait hydro glycolique. 5) Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que la composition contient de l'ordre de 0,01 à 10 % en poids, et de préférence 0,01 à 5 % en poids d'un extrait d'Alchemilla vulgaris sous la forme d'une solution de concentration allant de 0.5 à 10% en matière sèche. 6) Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que la composition contient en outre un extrait de persil. 7) Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que la composition contient en outre un extrait de camomille. 2903902 14 8) Procédé de traitement cosmétique pour dépigmenter la peau, comprenant l'application sur la peau d'une composition cosmétique comportant un extrait d'Alchemilla vulgaris. 5 9) Utilisation d'un extrait d'Alchemilla vulgaris pour la préparation d'une composition dermatologique destinée à prévenir ou traiter une hyperpigmentation de la peau. 10