FR 2904782 A1 20080215 FR 0607306 A 20060811 1 Co-colloïdes supramoléculaires obtenus à l'aide de systèmes macrocycliques polyanioniques La présente invention décrit une méthode de dispersion de substances hydrophobes en phase aqueuse. Une telle méthode est utile pour de nombreuses applications, notamment pour la formulation de substances actives pharmaceutiques ou cosmétiques. L'un des problèmes majeurs rencontré lors du développement et de l'utilisation de nombreuses substances biologiquement actives réside dans leur nature hydrophobe. En phase aqueuse, les substances actives hydrophobes ont tendance à précipiter, limitant ainsi considérablement leurs concentrations biodisponibles et leurs activités biologiques. Il est possible d'augmenter la concentration biodisponible de substances actives hydrophobes en phase aqueuse de plusieurs façons, par exemple, par inclusion dans des molécule hôtes appropriées, telles que des cyclodextrines, ou bien par encapsulation dans une dispersion colloïdale appropriée, telle que des micelles, des liposomes ou des nanoparticules lipidiques. Les méthodes d'encapsulation peuvent également apporter une protection des molécules contre la dégradation par la lumière ou par des réactions enzymatiques. Les autres méthodes qui permettent de modifier la concentration des substances actives sont l'utilisation de cosolvants ou de co-solutés ou les modifications de pH. Par ailleurs, l'utilisation de co-cristaux permet la modification de cinétique de dissolution et permet ainsi de modifier la signature pharmacocinétique d'une substance active. Pour préparer des dispersions colloïdales, on utilise une ou plusieurs molécules amphiphiles. Une molécule amphiphile est une molécule qui combine de façon covalente un groupe hydrophobe apolaire et un groupe hydrophile polaire. Les molécules amphiphiles ont une 2904782 2 double affinité, pour les phases apolaires (air, huile, solvants organiques) d'une part, et pour l'eau, d'autre part. Les lipides sont des exemples de molécules amphiphiles. Au dessus d'une concentration critique dans un environnement 5 aqueux, les molécules amphiphiles sont généralement capables de s'auto-assembler en formant des structures de nature colloïdale, caractérisées par la présence de particules en suspension. Le type de structure colloïdale obtenu dépend de la structure chimique des molécules amphiphiles, et notamment du rapport de la taille de la tête 10 polaire et de la taille de la queue apolaire de la molécule. Les dispersions colloïdales peuvent être utilisées pour augmenter la concentration biodisponible des substances actives hydrophobes. Le principe est que la substance active hydrophobe doit être associée avec les groupements hydrophobes des molécules amphiphiles. 15 Toutefois, un inconvénient des méthodes utilisant des molécules amphiphiles réside dans le fait que le pourcentage maximum (appelé aussi facteur de charge qui est calculé en unité de poids) de substances actives pouvant être dispersées dans la structure colloïdale est trop faible, de l'ordre de 5 à 10 %. Un autre inconvénient de ces assemblages 20 colloïdaux est leur faible stabilité dans le temps, notamment à température ambiante. Ces problèmes ont été surmontés par l'utilisation de nanoparticules lipidiques solides (également connues sous l'abbréviation SLN pour solid lipid nanoparticles en anglais) qui regroupe les 25 nanocapsules et les nanosphères polymériques. De telles structures sont de nature matricielle. Dans ce cas, les facteurs de charge sont généralement plus élevés, de l'ordre de 30%, et la stabilité dans le temps est améliorée. 2904782 3 Par ailleurs, des méthodes utilisant des produits de la famille des calix arènes ont été décrites. Ainsi, le brevet US 2005/0240051. Al de N. Yasuda et M. Furukawa décrit notamment une méthode utilisant des calix arènes pour solubiliser des matériaux à base de carbone, tels que 5 des fullérènes, du graphite, du diamant et des colorants, dans un solvant organique non aqueux tel que le toluène, une huile ou une résine. Cependant, les calix arènes utilisés dans ce brevet ne sont pas solubles dans l'eau et ce brevet ne concerne pas une méthode de dispersion des substances pharmaceutiques ou cosmétiques. 10 Dans la demande de brevet WO 03/024583, les auteurs décrivent un système de dispersion dans l'eau utilisant des calix arènes de nature amphiphile et non hydrophile. Ces calix arènes amphiphiles peuvent s'auto-assembler spontanément et former des dispersions colloïdales. L'addition d'une molécule hydrophobe à cette suspension colloïdale de 15 calix arènes est possible mais n'est pas nécessaire. Dans deux articles (Eur. J. Pharm. Biopharm., 2004, 58(3), 629-636 et J. Pharm. Pharmacol., 2004, 56(6), 703-708), W. Yang et MM. De villiers ont montré qu'il était possible de solubiliser la nifédipine, le furosémide et la niclosamide (des substances actives d'intérêt 20 pharmaceutiques très peu solubles dans l'eau) en utilisant des para sulfonato-calix arènes dans une solution aqueuse acide. Cependant, les objectifs de ces travaux et les procédés utilisés sont différents de la présente invention. En effet, W. Yang et MM. De villiers ne décrivent qu'une méthode de solubilisation et non une méthode de dispersion 25 colloïdale, notamment caractérisée par la présence de particules. Plus récemment, les systèmes de co-cristaux, fondés sur des systèmes d'assemblages supra-moléculaires non-covalents ont été utilisés pour modifier les propriétés pharmacocinétiques et physiques des produits pharmaceutiques. Dans ce cas, on utilise les interactions 2904782 4 non-covalentes connues pour qu'un agent cristallisant soit lié à une substance pharmaceutique lui conférant ainsi des propriétés physiques, une stabilité et un taux de dissolution différents. Au vu de ce qui précède, l'invention a notamment pour but de 5 mettre en oeuvre une nouvelle méthode consistant à disperser des substances actives hydrophobes, telles que des substances d'intérêt pharmaceutiques ou cosmétiques, en solution aqueuse. L'invention a également pour objet de proposer de nouvelles dispersions qui ne présentent pas l'ensemble des inconvénients précités 10 dans l'art antérieur et en particulier qui sont stables dans le temps. Enfin, l'invention a également pour objet de proposer de nouvelles dispersions qui peuvent être utilisées comme véhicules pour des substances actives hydrophobes d'intérêt pharmaceutique ou cosmétique. 15 De manière surprenante et avantageuse, le demandeur vient maintenant de découvrir que ces buts pouvaient être atteints en mettant en oeuvre un procédé de dispersion en milieu aqueux d'une molécule hydrophobe, telle que des substances actives hydrophobes d'intérêt pharmaceutiques ou cosmétiques, qui comprend une étape consistant à 20 former un complexe supramoléculaire entre ladite molécule hydrophobe et ladite molécule hydrophile. Dans la suite du texte, les dispersions ainsi obtenues dans le cadre de la présente invention, sont désignées par les termes dispersions co-colloïdales . 25 Ainsi, le procédé de dispersion selon l'invention, permet de générer des dispersions co-colloïdales de molécules actives hydrophobes en solution aqueuse. De plus, ces dispersions co-colloïdales sont stables dans le temps. 2904782 5 Ainsi, selon une première variante de l'invention, il est proposé une dispersion co-colloïdale dans un milieu aqueux d'au moins un complexe supramoléculaire amphiphile dans laquelle ledit complexe amphiphile comprend une molécule hydrophile et une molécule 5 hydrophobe associées par des liaisons non covalentes. La présente invention utilise la formation d'une association inter-moléculaire et non-covalente entre une molécule de substance active hydrophobe, dite molécule invitée et une molécule hydrophile hôte appropriée. Cette association résulte dans la formation de 10 complexes supramoléculaires amphiphiles comprenant une tête polaire et une queue apolaire. En phase aqueuse, ces complexes supramoléculaires amphiphiles sont capables de s'auto-assembler et former des suspensions de particules, caractéristiques des dispersions colloïdales. La taille des particules obtenues varie entre 10 nm et 1 m, et préférentiellement 15 entre 100 et 450 nm. Cette méthode permet donc de disperser une molécule hydrophobe dans une phase aqueuse sous forme d'une dispersion de nature colloïdale. Une phase aqueuse contient au moins 50% d'eau et peut être constitué par exemple d'eau pure, d'une solution isotonique, 20 d'un milieu physiologique ou d'un soluté pharmaceutique injectable ou à usage topique. Les dispersions co-colloïdales décrites dans la présente invention diffèrent de toutes les dispersions colloïdales connues, par exemple celles qui utilisent des lipides, en ce qu'il n'existe pas de liaisons 25 covalentes dans l'assemblage de l'entité amphiphile. Elles diffèrent donc également de toutes les dispersions colloïdales connues en ce que la molécule hydrophobe que l'on veut disperser est nécessaire à la formation de la structure colloïdale formée en milieu aqueux. 2904782 6 Ainsi, à l'inverse des dispersions colloïdales décrites dans la demande de brevet WO 03/024583, les dispersions co-colloïdales selon la présente invention sont constituées par l'assemblage de deux molécules, l'une hydrophile et l'autre hydrophobe formant un complexe 5 supramoléculaire amphiphile; ainsi, aucune des deux molécules ne peut former une dispersion colloïdale quand elle est utilisée seule. Il s'agit donc bien d'états de matière différents. Les molécules hôtes hydrophiles qui sont utilisées dans 10 l'invention utilisent notamment des dérivés de la famille des calix arènes, et préférentiellement des calix arènes hydrosolubles anioniques, par exemple les molécules de para-sulfonato calix[4]arène et de parasulfonato calix[6]arène. Les calix arènes utilisées dans la présente invention présentent la 15 formule générale (I) R1 R2 dans laquelle, - R, représente un atome d'hydrogène ou un groupement polaire, tel qu'un hydroxyl, un carboxylate, un sulfonate, un phosphonate, un sulfonamide ou un amide, ou un groupement alkyle, alcène ou alcyne, linéaire, ramifié ou cyclique, éventuellement substitués, notamment par 20 2904782 7 un groupement polaire, et préférentiellement un atome d'hydrogène ou un groupe sulfonate. - R2 représente un groupe polaire, tel qu'un hydroxyle, un carboxylate, un sulfonate, un phosphonate, un sulfonamide, un amide, un 5 ester ou un alkyl, ramifié ou substitué par un groupement polaire et préférentiellement un hydroxyle si RI est un sulfonate ou un groupe phophonate si RI est un atome d'hydrogène. - R3 R4, R5, R6 représentent chacun indépendamment un atome d'hydrogène, un groupe alkyle, alcène ou alcyne, éventuellement 10 substitué, notamment par un groupement polaire, en particulier des fonctions hydroxyles, substituées ou pas, et préférentiellement un atome d'hydrogène. - X représente un atome de carbone, (lorsque x=1 et y=1) de soufre ou d'oxygène (lorsque x=0 et y=0) ou d'azote (lorsque x=1 et 15 y=0) ; - n est un nombre compris entre 4 et 8. Les substances actives hydrophobes invitées susceptibles d'être dispersées en phase aqueuse selon l'invention sont très nombreuses. Les exemples décrits ci-dessous montrent que l'invention permet de 20 disperser sous forme de dispersions co-colloïdales des molécules ayant des structures chimiques très différentes. Les expériences conduites montrent que les molécules à disperser doivent présenter une partie hydrophobe et des groupes chimiques qui permettent les interactions de nature non covalente avec les molécules hôtes hydrophiles. Les 25 interactions de nature non-covalentes mises en jeu peuvent inclure des liaisons hydrogènes, des interactions ion-ion, des interactions ion-dipôle, des interactions cation-n, des interactions it-n, des forces de Van Der Walls ou des interactions hydrophobes. La taille de la substance active hydrophobe ne constitue pas une condition restrictive. 2904782 8 Ainsi la présente invention a également pour objet un procédé de dispersion en milieu aqueux d'une molécule hydrophobe d'intérêt pharmaceutique comprenant une étape consistant à former un complexe amphiphile supramoléculaire entre ladite molécule hydrophobe et une 5 molécule hydrophile. En variante, il est également proposé un procédé de dispersion en milieu aqueux d'un agent cosmétique hydrophobe comprenant une étape consistant à former un complexe amphiphile supramoléculaire entre ledit agent hydrophobe et une molécule hydrophile. 10 La présente invention concerne également un procédé permettant d'obtenir des dispersions co-colloïdales qui consiste à ajouter une composition comprenant, dans un solvant organique, au moins un calix arène hydrosoluble anionique à une composition 15 comprenant, dans un solvant organique, une molécule hydrophobe, à ajouter un solvant aqueux puis à éliminer ledit solvant organique. En particulier, le procédé permettant d'obtenir des dispersions co-colloïdales est le suivant. 20 1.) Solubilisation des molécules en solvant organique. La molécule hôte et la molécule invitée sont préalablement solubilisées séparément dans un solvant organique puissant, préférentiellement le tétrahydrofurane (THF). Les quantités de produits et les volumes de solvant sont déterminés en fonction des concentrations 25 et du volume final souhaités. Par exemple, à l'échelle du laboratoire, pour obtenir une dispersion co-colloïdale de substance active à une concentration finale de 50 mg/L, on solubilise 2,5 mg de molécule hôte, préférentiellement le para-sulfonato calix[4]arène, dans 5 mL de THF et on solubilise séparément 2,5 mg de substance active dans 5 ml de THF. 2904782 9 2.) Formation du co-colloïde. Les deux solutions sont ensuite mélangées à part égale (5 mL pour une préparation à l'échelle du laboratoire) et maintenues sous 5 agitation constante, par exemple avec un agitateur magnétique réglé à 350 tours par minutes ou un appareil de type Vortex. Puis, le solvant final, par exemple de l'eau pure (50 mL), est progressivement ajouté avec un débit fixe de 200 mL/s et en maintenant une agitation constante pendant une demi-heure. 10 3.) Formation du co-colloïde. Le solvant organique initial est ensuite éliminé, préférentiellement par évaporation, par exemple en plaçant la dispersion pendant 15 minutes, sous pression réduite et à une température de 40 C. 15 La dispersion co-colloïdale finalement obtenue apparaît homogène, légèrement opaque à l'examen visuel, montrant ainsi que la substance active hydrophobe a été dispersée de façon homogène. Les conditions techniques (volumes de solvant, quantités de 20 produits, durée de chaque phase, etc.) indiquées ci-dessus sont données à titre d'exemple et peuvent, bien entendu, être adaptées en fonction de la nature de la substance active hydrophobe, ainsi que des volumes et des concentrations finales souhaitées. 25 Les substances actives qui peuvent être dispersés selon l'invention incluent par exemple des substances actives sur le système nerveux périphérique et central, sur les fonctions rénales, cardiovasculaires, gastro-intestinales, sanguines, immunes, hormonales, génitales ou reproductives, des anti-inflammatoires, des anti- 2904782 10 parasitaires, des antibiotiques, des anticancéreux, des antidotes, des vitamines, des produits pour la nutrition parentérale ou des produits à usage dermatologique, topique ou ophtalmologique. Les substances actives hydrophobes d'intérêt pharmaceutique qui 5 peuvent être dispersées sous forme de co-colloïdes incluent par exemple la penclomedine, le tamoxifene, la tetracaïne, la chlorhexidine, la mifepristone, l'étoposide, la clarithromycine, le benzafibrate, l'azithromycine, l'itraconazole, le propofol, le palmitoyl de rhizoxin, le clofibrate, l'acide clofibrique, le gemfibrozil, l'acediasulfone, 10 l'acetophenetidine, le 1-acetyl-2-phenylhydrazine, l'alexidine, le chlorate d'ambenomium, l'amidinomycine, le p-chlorobenzhydrazide, la 2,3ùdiaminophenazine, le dichlorphenamide, la divicine, etc. Les dispersions co-colloïdales peuvent également contenir des additifs divers tels que des régulateurs de pression osmotique, par 15 exemple le sucrose ou la glycerine, des oxidants tels que l'alpha-tocophérol ou l'acide ascorbique ou des conservateurs tels que le methyl, l'éthyl- et le butyl-parabène. Les compositions à usage cosmétique de l'invention incluent des préparations pour la peau ou les cheveux, tels que des shampoings, des 20 préparations à usage cutané ou des lotions de protection solaires. Les exemples qui suivent sont destinés à mieux comprendre l'invention sans présenter un caractère limitatif. Ces exemples sont illustrés par les figures 1 à 4 annexées représentant les dispersions co- 25 colloïdales conformes à la présente invention qui ont été caractérisées au moyen de différentes techniques d'analyse. 2904782 11 EXEMPLES Préparation des dispersions co-colloïdales 5 Les exemples décrits ci-dessous ont permis de caractériser la méthode de préparation des dispersions co-colloïdales ainsi que de caracteriser la qualité desdites dispersions. On prépare une dispersion co-colloïdale selon le procédé décrit ci-dessus. Ainsi, dans une première solution, on solubilise 2,5 mg de 10 para-sulfonato calix[4]arène (désigné C4S dans les tableaux ci-dessous) dans 5 mL de THF et on solubilise séparément, dans une deuxième solution, 2,5 mg de tamoxifène (anticancéreux) dans 5 mL de THF. Le tamoxifène est une substance active hydrophobe. Les deux solutions sont ensuite mélangées à part égale et 15 maintenues sous agitation constante avec un agitateur magnétique réglé à 350 tours par minutes ou un appareil de type Vortex. 50 mL d'eau pure est ensuite progressivement ajoutée avec un débit fixe de 200 mL/s tout en maintenant une agitation constante pendant une demi-heure. On évapore ensuite le THF en plaçant le mélange pendant 15 20 minutes, sous pression réduite à une température de 40 C. A la suite de ce procédé, on obtient une dispersion co-colloïdale ayant une concentration finale en tamoxifène et en para-sulfonato calix[4]arène de 50mg/L. La dispersion co-colloïdale apparaît homogène et légèrement opaque à l'examen visuel, ce qui indique que le 25 tamoxifène a été dispersée de façon homogène. Ce procédé a été réalisé à trois reprises en utilisant le para sulfonato calix[6]arène (désigné par le terme C6S dans les tableaux ci-dessous) et le tamoxifène à différentes concentrations afin d'obtenir des 2904782 12 dispersions co-colloïdales ayant des concentrations finales en para sulfonato calix[6]arène et en tamoxifène différentes. Ce procédé a également été réalisé à quatre reprises en utilisant le para sulfonato calix[4]arène et la tétracaïne à différentes 5 concentrations afin d'obtenir des dispersions co-colloïdales ayant des concentrations finales différentes en para sulfonato calix[4]arène et en tétracaïne (anesthésique local). Ce procédé a été réalisé à deux reprises en utilisant le para sulfonato calix[6]arène et le para sulfonato calix[4]arène avec la 10 chlorhexidine (antibiotique) à des concentrations égales. Ce procédé a été réalisé à deux reprises en utilisant le para sulfonato calix[6]arène et le para sulfonato calix[4]arène avec la mifepristone (abortif) à des concentrations égales. Le tamoxifène, la tétracaïne, la chlorhexidine et le mifepristone 15 utilisées dans ces préparations sont des substances pharmacologiquement actives connues pour leur faible solubilité dans l'eau. Le tableau suivant indique les dispersions co-colloïdales qui ont été obtenues ainsi que les concentrations finales en calix arènes 20 (molécules hôtes) et en substances actives hydrophobes (molécules invitées) présentes dans de telles dispersions. 2904782 13 Exemple Molécule hôte (concentration finale) Molécule invitée (concentration finale) no 1 C4S (50 mg/1) Tamoxifène (50 mg/1) 2 C6S (50 mg/ml) Tamoxifène (50 mg/I) 3 C6S (55 mg/ml) Tamoxifène (25 mg/1) 4 C6S (87,4 mg/ml) Tamoxifène (12,4 mg/1) 5 C4S (50 mg/1) Tétracaïne (50 mg/1) 6 C4S (70 mg/1) Tétracaïne (30 mg/1) 7 C4S (83 mg/1) Tétracaïne (17 mg/1) 8 C4S (50 mg/1) Tétracaïne (50 mg/1) 9 C4S (50 mg/1) Chlorhexidine (50 mg/1) 10 C6S (50 mg/1) Chlorhexidine (50 mg/1) 11 C4S (50 mg/1) Mifepristone (50 mg/1) 12 C6S (50 mg/1) Mifepristone (50 mg/1) Dans tous les cas, on obtient une dispersion co-colloïdale homogène légèrement blanchâtre. Ainsi, les molécules actives 5 hydrophobes ont été dispersées dans une phase aqueuse alors qu'elles sont peu ou faiblement solubles dans l'eau. De cette façon, ces dispersions co-colloïdales peuvent être utilisées comme véhicules pour des substances actives hydrophobes d'intérêt pharmaceutique. 10 Différentes techniques ont été ensuite employées afin de caractériser une dispersion co-colloïdale ayant une concentration finale en tamoxifène et en para-sulfonato calix[6]arène égales à 50 mg/L (correspondant à l'exemple n 2 dans le tableau décrit ci-dessus). En particulier, on a utilisé la diffusion dynamique de la lumière, la 15 microscopie à force atomique, la microscopie électronique à balayage et la microscopie électronique à transmission. Ces techniques permettent une analyse des particules colloïdales en suspension en phase aqueuse ou après séchage. 2904782 14 La technique de diffusion dynamique de la lumière (ou DLS pour Dynamic Light Scaterring en langue anglaise) permet d'obtenir des informations concernant la taille des particules. Lorsqu'un faisceau lumineux monochromatique et polarisé rencontre une particule, la 5 lumière est diffusée dans toutes les directions de l'espace. Les variations d'intensité de la lumière diffusée sont liées aux taux de diffusion des molécules dans la région étudiée, car celles-ci sont animées d'un mouvement brownien. Les données sont directement analysées pour donner les coefficients de diffusion. Lorsque plusieurs 10 espèces moléculaires sont présentes, une distribution des coefficients de diffusion peut être observée. Ces données sont ensuite traitées pour obtenir le diamètre des particules. En effet, la relation entre le coefficient de diffusion et la taille est fondée sur les relations théoriques du mouvement brownien des particules sphériques (loi de 15 Stockes-Einstein). Ainsi, pour un milieu de viscosité connue, la mesure du coefficient de diffusion de translation est suffisante pour calculer le rayon hydrodynamique des particules. La détermination de la taille des particules en solution est réalisée à température ambiante. Les analyses sont faites à l'aide d'un spectromètre 4700C MALVERN. La source 20 lumineuse utilisée est un laser SIEMENS 40MW. Chaque mesure est répétée dix fois, les tailles et les indices de polydispersité retenus correspondant à la moyenne des dix mesures. L'exploration en Microscopie à Force Atomique (ou AFM pour Atomic Force Microscopy, en anglais) consiste en l'analyse d'une 25 surface, grâce à une fine pointe de quelques micromètres de long et d'une centaine d'Angstrôms de diamètre, montée à l'extrémité d'un bras mobile de silicium, appelé microlevier, ayant une constante de force connue. Les différents appareils commercialisés présentent diverses géométries. L'AFM utilisé est basé sur la technique de l'Explorer 2904782 15 (Topometrix Inc.). Dans ce montage, la céramique piézo-électrique servant à générer le mouvement de balayage porte le microlevier. Dans les autres techniques, plus courantes, la céramique porte l'échantillon, le reste de la tête AFM étant statique. L'équilibre des forces s'exerçant 5 entre la surface de l'échantillon et la pointe provoque des variations de position du microlevier. Le signal est collecté sur un photo-détecteur à quatre cadrans via la réflexion d'un laser sur le microlevier dont on mesure la déflexion, proportionnelle aux forces agissant sur la sonde. Ces données sont alors transformées en coordonnées spatiales, générant 10 ainsi une image de la surface. L'AFM mesure les forces entre la pointe et l'échantillon. Ces forces dépendent de la nature de l'échantillon et de la distance entre la pointe et l'échantillon. Lorsque la pointe s'approche de la surface, elle subit d'abord des forces attractives à longue distance (forces de van der Waals). Puis, à l'approche de la surface, les orbitales 15 électroniques de la pointe et de l'échantillon créent des forces répulsives qui neutralisent les forces attractives avant de devenir les forces dominantes. Les mesures sont réalisées en utilisant un microscope "Explorer ThermoMicroscope" équipé d'un scanner del00 m, en mode non-contact. La vitesse de balayage est de 1-2 Hz. Pour chaque 20 échantillon les balayages ont été réalisés à 50 m, 20 m, 10 m et 5 m. Les microleviers sont en silicium, la fréquence de résonance fo est 260 kHz et la constante de raideur est de 45 N. Pour les études faites avec la microscopie électronique à balayage, on dépose un volume de 50 l de dispersion co-colloïdale sur 25 une lamelle de verre, puis on laisse sécher à température ambiante pendant 18 heures. Les échantillons sont ensuite recouverts d'une couche d'or-palladium et observés à l'aide d'un microscope électronique Hitachi S800 à 15kV. 2904782 16 Des études utilisant la microscopie électronique à transmission après fracture à froid et après coloration négative sont aussi réalisées. Pour ces dernières, on dépose un volume de 5 l de dispersion cocolloïdale à 0.2mM sur une grille de cuivre (300-mesh) recouverte d'un 5 film de Formvar (Polyvinyl formal). Après 5 minutes d'adsorption, les échantillons sont colorés négativement, soit avec une solution aqueuse de silicotungstène de sodium à 1%, soit avec une solution aqueuse d'acétate d'uranyle à 4%. Ils sont ensuite immédiatement observés à l'aide d'un microscope électronique Philips CM120 à 80 kV. 10 La dispersion co-colloïdale selon l'exemple n 2 a été étudiée selon les façons suivantes : Observations en microscopie à force atomique (AFM) 15 La figure 1 représente l'image obtenue en microscopie à force atomique d'une dispersion co-colloïdale à base de tamoxifène et de para sulfonato calix[6]arène C6S selon l'exemple n 2. Ainsi, les études AFM sur la dispersion co-colloïdale mettent en 20 évidence l'existence de nanoparticules, même après séchage de l'échantillon. Une analyse topographique de la taille de ces particules révèle une hauteur de 75 nm et un diamètre approximatif de 300 nm. Ce diamètre est légèrement plus grand que celui déterminé par diffusion de 25 la lumière (voir résultats ci-dessous) et s'explique par le léger aplatissement des particules consécutif au séchage de l'échantillon. 2904782 17 Observations en microscopie électronique à transmission La figure 2 représente des images d'une dispersion co-colloïdale selon l'exemple n 2 en microscopie électronique à balayage avec trois 5 grossissements différents : 50 m, 10 m et 1 m. La figure 3 représente des images d'une dispersion co-colloïdale selon l'exemple n 2 obtenues par microscopie électronique à transmission après coloration négative avec trois grossissements différents : 2 m, 100 nm et 200 nm. En ce qui concerne, les images qui 10 ont été prises avec un grossissement égal à 200 nm, ces dernières ont été réalisées à deux endroits différents de la dispersion co-colloïdale. La figure 4 représente des images d'une dispersion co-colloïdale selon l'exemple n 2 obtenues par microscopie électronique à transmission après fracture à froid négative avec deux grossissements 15 différents 2 m et 200 nm. En ce qui concerne, les images qui ont été prises avec un grossissement égal à 200 nm, ces dernières ont été réalisées à trois endroits différents de la dispersion co-colloïdale. Ces images permettent d'identifier les particules de la dispersion 20 co-colloïdale. Elles montrent notamment une structuresphérique externe, mais également une structure interne organisée en petites vésicules. Une telle structure est différente de la structure multilamellaire des liposomes. 25 Par ailleurs, on obtient des images similaires avec des dispersions co-colloïdales à base de para-sulfonato calix[6]arène et de griséofulvine ou de chlorhexidine. 2904782 18 Mesure de la taille et de la polydispersité des particules La dispersion co-colloïdale de tamoxifène et de parasulphonatocalix[6]arène selon l'exemple n 2 a été analysée par 5 diffusion dynamique de la lumière immédiatement après sa formation. Les mesures ont été répétées dix fois et montrent l'existence d'une dispersion co-colloïdale constituées de particules monodispersées ayant un diamètre moyen égal environ à 230 nm. L'indice de polydispersité est de 0,03 démontrant que les particules ont un diamètre 10 constant. Ces mesures ont été également répétées dix fois sur les dispersions co-colloïdales des exemples 1 et 3 à 12. Les résultats sont regroupés dans le tableau suivant. Exemple Molécule hôte (concentration finale) / Mesure moyenne des particules no. Molécule invitée (concentration finale) mesurées par DLS 1 C4S (50 mg/1) / Tamoxifène (50 mg/1) 190 nm 2 C6S (50 mg/ml) / Tamoxifène (50 mg/1) 230 nm 3 C6S (55 mg/ml) / Tamoxifène (25 mg/1) 225 nm 4 C6S (87,4 mg/ml) / Tamoxifène (12,4 mg/1) 215 nm 5 C4S (50 mg/1) / Tétracaïne (50 mg/1) 205 nm 6 C4S (70 mg/l) / Tétracaïne (30 mg/1) 440 nm 7 C4S (83 mg/1) / Tétracaïne (17 mg/1) 269 nm 8 C4S (50 mg/1) / Tétracaïne (50 mg/1) 220 nm 9 C4S (50 mg/l) / Chlorhexidine (50 mg/1) 275 nm 10 C6S (50 mg/1) / Chlorhexidine (50 mg/1) 460 nm 11 C4S (50 mg/1) / Mifepristone (50 mg/1) 238 nm 12 C6S (50 mg/1) / Mifepristone (50 mg/1) 191 nm 15 Ces résultats montrent que la méthode de préparation de dispersions co-colloïdales permet d'obtenir des populations relativement homogènes de particules dont la taille varie approximativement entre 2904782 19 150 nm et plus de 450 nm selon la nature des molécules hôtes et des molécules invitées et le ratio de concentrations entre les deux molécules. 5 Etudes de la stabilité des dispersions co-colloïdales La stabilité des dispersions cocolloïdales selon les exemples 1 à 12 a été étudiée pour des températures égales à 4, 20, 40 et à 80 C. Les dispersions sont placées dans des enceintes à température contrôlée et 10 des échantillons sont prélevés périodiquement pour analyser la taille et la polydispersité des particules ou la morphologie en microscopie à force atomique. Les résultats sont regroupés dans le tableau suivant. Dispersion Molécule hôte no. Molécule invitée 1 C4S (50 mg/1) Tamoxifène (50 mg/1) 2 C6S (50 mg/ml) Tamoxifène (50 mg/I) 5 C4S (50 mg/1) Tétracaïne (50 mg/1) 8 C4S (50 mg/1) Tétracaïne (50 mg/1) 11 C4S (50 mg/1) Mifepristone (50 mg/l) 12 C6S (50 mg/1) Mifepristone (50 mg/1) Stabilité des particules mesurées par diffusion dynamique de la lumière à différentes températures A 20 C, la taille moyenne des particules décroît légèrement de 190 à 130 nm sur une période de 15 jours. A 80 C, la taille moyenne des particules décroît de 190 à 175 nm sur une période de 15 jours A 4 C, 20, 40 et 80 C la taille moyenne des particules est maintenue proche de 200 nm sur une période de 43 jours. A 4 C, la taille moyenne des particules augmente de 205 à 230 nm et sur une période de 15 jours puis est maintenue stable pendant 28 jours. A 20, 40 et 80 C, la taille moyenne des particules décroît de 205 à 165 nm et sur une période de 15 jours puis est maintenue stable pendant 28 jours. A 4 et 20 C, la taille moyenne des particules décroît de 220 à 170 et 150 nm, respectivement, sur une période de 15 jours. A 20 et 80 C, la taille moyenne des particules décroît de 238 à 220 sur une période de 15 jours. A 20 C, la taille moyenne des particules décroît de 190 à 174 sur une période de 15 jours. A 80 C, la taille moyenne des particules est maintenue à 190 nm pendant 15 jours. 15 2904782 20 Ces résultats montrent que la taille des particules varie faiblement, même lorsque les préparations sont maintenues pendant plusieurs semaines à des températures basses (4 C) ou élevées (80 C), montrant ainsi la remarquable stabilité des dispersions co-colloïdales. 5 Ainsi les résultats montrent que la taille des particules n'est pratiquement pas influencée par la température de stockage. On observe des résultats similaires pour d'autres dispersions co-colloïdales qui n'ont pas été exemplifiées. 10 Etudes des interactions des suspensions colloïdales avec l'albumine Afin d'envisager une administration intraveineuse des dispersions co-colloïdales, il est nécessaire de s'assurer que de telles 15 dispersions ne s'agrègent pas au contact de l'albumine qui est la protéine la plus abondante dans le système sanguin. Les interactions des dispersions co-colloïdales avec l'albumine ont donc également été étudiées. Une solution à 1 mg/ml d'albumine bovine (BSA) a été ajoutée à une dispersion co-colloïdale de tamoxifène et le mélange a été analysé 20 par diffusion dynamique de la lumière et en microscopie à force atomique. Les analyses par diffusion de lumière montrent que la taille des particules en présence de BSA dépasse 1 m mais celles-ci restent 25 toujours monodispersées. Ce phénomène s'explique par la présence d'une matrice protéique protectrice qui enveloppe les particules colloïdales. Les images obtenues par microscopie à force atomique révèlent au contraire l'existence de particules de taille bien plus réduite que la taille normale des particules colloïdales (15 nm au lieu de 200 nm 2904782 21 ou de 1000 nm). On explique cet aspect par le fait que la BSA forme un gel protéique assez dense qui recouvre les particules co-colloïdales et ne laisse entrevoir qu'une partie des particules à la surface du champ examiné par le microscope à force atomique. Il apparaît donc que les 5 interactions avec la principale protéine sanguine ne dénaturent pas les systèmes co-colloïdaux, mais que l'albumine peut former une matrice autour des particules, qui pourrait les protéger pendant le transport dans le sang. REVENDICATIONS 1. Dispersion co-colloïdale dans un milieu aqueux d'au moins un complexe supramoléculaire amphiphile dans laquelle ledit complexe amphiphile comprend une molécule hydrophile et une molécule hydrophobe associées par des liaisons non covalentes. 2. Dispersion co-colloïdale selon la revendication 1, caractérisée par le fait que la molécule hydrophile est un calix arène hydrosoluble. 3. Dispersion co-colloïdale selon la revendication 1 ou 2, caractérisée par le fait que la molécule hydrophile est un calix arène hydrosoluble anionique. 4. Dispersion co-colloïdale selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisée par le fait que la molécule hydrophile est un para-sulfonato calix arène. 5. Dispersion co-colloïdale selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée par le fait que la molécule hydrophobe est une molécule d'intérêt pharmaceutique ou un agent cosmétique. 6. Dispersion co-colloïdale selon la revendication 5, caractérisée par le fait que la molécule hydrophobe est choisie parmi des substances actives sur le système nerveux périphérique et central, sur les fonctions rénales, cardiovasculaires, gastro-intestinales, sanguines, immunes, hormonales, génitales ou reproductives, des anti- inflammatoires, des anti-parasitaires, des antibiotiques, des anticancéreux, des antidotes, des vitamines, des produits pour la nutrition parentérale ou des produits à usage dermatologique, topique ou ophtalmologique. 2904782 23 7. Procédé de dispersion en milieu aqueux d'une molécule hydrophobe d'intérêt pharmaceutique comprenant une étape consistant à former un complexe amphiphile supramoléculaire entre ladite molécule hydrophobe et une molécule hydrophile. 5 8. Procédé de dispersion en milieu aqueux d'un agent cosmétique hydrophobe comprenant une étape consistant à former un complexe amphiphile supramoléculaire entre ledit agent hydrophobe et une molécule hydrophile. 9. Procédé de préparation d'une dispersion co-colloïdale telle 10 que définie à l'une quelconque des revendications 1 à 6 consistant à ajouter une composition comprenant, dans un solvant organique, au moins un calix arène hydrosoluble anionique à une composition comprenant, dans un solvant organique, une molécule hydrophobe, à ajouter un solvant aqueux puis à éliminer ledit solvant organique.