FR 2903696 A1 20080118 FR 0606330 A 20060712 1 La présente invention a pour objet un nouveau procédé de purification de composés du type diaminophénothiazinium en particulier le bleu de méthylène, il a également pour objet les produits résultant de ce procédé dont le degré de pureté est plus élevé que ceux connus de l'art antérieur. Elle a encore pour objet l'utilisation de ces composés pour la préparation de médicaments. Le chlorure de méthylthioninium, également connu sous les noms de bleu de méthylène ou chlorure de 3.7-bis(diméthylamino)phénothiazine-5-ylium, est un composé organique répondant à la formule ci-dessous : Ce composé a été utilisé de longue date comme colorant et indicateur redox, comme révélateur optique dans des systèmes biophysiques, dans des matériaux nanoporeux comme matériau séparateur, et en imagerie photoélectrochromique. Il est également connu pour ses applications comme agent antiseptique, antiinfectieux, comme antidote et comme agent de diagnostique. Il trouve des utilisations notamment en gynécologie. néonatalogie. cancérologie, oncologie, urologie, ophtalmologie et gastro-entérologie. De nouvelles utilisations dans le domaine thérapeutique sont en cours de développement. telle que la réduction des contaminants pathogéniques dans le sang (GB2373787). la prévention ou l'inhibition d'une réaction hémodynamique excessive (WO03/082296). De nombreuses méthodes de synthèse ont été décrites pour ce composé. depuis la plus ancienne en 1877 (Brevet allemand n 1886). Toutes ces méthodes ont en commun d'utiliser des composés métalliques dans au moins une étape de synthèse : Le Brevet DE-1886 décrit un procédé dans lequel on fait un couplage oxydant du N.N-diméthyl-l.4-diaminobenzène avec H2S et FeCl3. Fiez David et a1., Fundamental Processes of Dye Chemistry , 1949. lnterscience. 308-314. décrit un procédé dans lequel le cycle thiazine est formé par traitement au dioxyde de manganèse ou au sulfate de cuivre. Ce procédé comporte encore un traitement au chlorure de zinc et au dichromate de sodium et au thiosulfate d'aluminium. Cl 2903696 2 Le document WO 2006/032879 décrit un procédé de préparation du bleu de méthylène qui comporte une étape de réduction par du fer. une étape d'oxydation par du dichromate de sodium. une étape d'oxydation par du sulfate de cuivre. Ces procédés requièrent d'effectuer des purifications fastidieuses et 5 coûteuses afin de réduire les impuretés, notamment les impuretés métalliques du bleu de méthylène. Malgré les étapes de purifications ultérieures, ces différents procédés conduisent inévitablement à un bleu de méthylène comportant de nombreuses impuretés métalliques et également des impuretés organiques, notamment de l'azur B, de l'azur C et de l'azur A. 10 Le document WO 2006/032879 affirme pouvoir atteindre un taux d'impuretés métalliques représentant 10% du seuil maximal fixé par la pharmacopée européenne, mais d'après les exemples on constate que ce taux n'est pas obtenu simultanément pour tous les métaux et que les résultats des étapes de purification ne sont pas toujours reproductibles. Une analyse détaillée des contenus en métaux de différents 15 bleus de méthylène disponibles commercialement est illustrée dans ce document. La pharmacopée européenne a été modifiée récemment dans le sens d'une augmentation des seuils de tolérance des impuretés métalliques car aucun producteur de bleu de méthylène n'était en mesure de produire. et surtout de produire en quantité industrielle, un bleu de méthylène d'une qualité répondant à ses précédentes exigences. 20 Un premier objet de l'invention a donc été la mise au point d'un procédé de purification du bleu de méthylène qui donne accès à un bleu de méthylène d'une grande pureté. notamment qui comporte un très faible taux d'impuretés métalliques et organiques. qui soit extrapolable à l'échelle industrielle dans des conditions économiques satisfaisantes, et qui ne soit pas sujet à des variations de qualité. 25 Le procédé qui a été mis au point s'applique non seulement au bleu de méthylène, mais également à d'autres dérivés de type diaminophénothiazinium. Le procédé de l'invention est un procédé de purification de composés répondant à formule (I) ci-dessous : X 30 (1) 2903696 3 dans laquelle chacun de Ri, R2. R3, R1, R5, R6, R7. R8, R9. R10 peut être choisi, indépendamment des autres, parmi le groupe constitué de : - l'atome d'hydrogène; 5 - les groupements alkyle en C1-C6, linéaires ramifiés ou cycliques, saturés ou insaturés, éventuellement substitués par une plusieurs fonctions choisies parmi un atome d'halogène, une fonction alcoxy en C1-C6. alkyloxycarbonyle en C1-C6, -CONH2. - les groupements aryle éventuellement substitués par une ou plusieurs fonctions choisies parmi : un alkyle en C1-C4, un atome d'halogène, une fonction alcoxy en 10 C1-C6, alkyloxycarbonyle en C1-C6. -CONH2, étant entendu que deux groupements Ri (i=1,2,...10) placés successivement sur la figure (I) peuvent être joints pour former un cycle. Par exemple RI avec R5. ou R5 avec R6, R7 avec R8. R8 avec R3. R3 avec RI, Ra avec R9. Rio avec R2 ou R2 avec Ri peuvent consister en une seule chaîne alkyle éventuellement substituée de façon à 15 former un quatrième cycle. X- représente un anion organique ou inorganique. Les anions utilisables incluent, par exemple, les anions des acides minéraux tels que par exemple l'acide chlorhydrique, l'acide bromhydrique. l'acide sulfurique, l'acide phosphorique, l'acide nitrique ; les anions des acides organiques tels que 20 par exemple, l'acide acétique, l'acide trifluoroacétique, l'acide oxalique. l'acide tartrique. l'acide succinique, l'acide maléique. l'acide fumarique. l'acide gluconique. l'acide citrique. l'acide malique, l'acide ascorbique. l'acide benzoïque. ils incluent également OH-. Ce procédé est caractérisé en ce qu'il comporte au moins une étape au cours de laquelle un composé de formule (Il) : 25 (H) est soumis à une filtration sur un support susceptible de retenir les composés métalliques, les groupements RI, R2, R3, R4. R5. R6. R7. R8, R9. Rio ayant la 30 même définition que dans la formule (1) et R représente un groupement choisi parmi : 2903696 4 -un groupement phényle ou benzyle. éventuellement substitués par une ou plusieurs fonctions choisies parmi : un alkyle en C1-C4. un atome d'halogène, un halogénoalkyle en C1-C.4, un groupement nitro, - un groupement alkyle en C1-C8, linéaire, ramifié ou cyclique. 5 - un groupement alkyl amino en C1-C8, - un groupement alcoxy en C1-C8, - un groupement phényloxy ou benzyloxy éventuellement substitués sur le noyau aromatique par une ou plusieurs fonctions choisies parmi : un alkyle en C1-C4, un atome d'halogène, un halogénoalkyle en C1-C4, un groupement nitro, 10 Z représente un atome choisi parmi O et S. Un tel support peut être choisi parmi : un gel de silice, un gel d'alumine (neutre, basique ou acide), une diatomite éventuellement modifiée. de la célite, une membrane microporeuse. les résines greffées par des groupements capteurs de métaux et les fibres greffées par des groupements capteurs de métaux, tels que des fonctions thiol, 15 acide carboxylique, amine tertiaire, ou tout autre support ayant la propriété de retenir les métaux. Parmi les fibres greffées. on peut citer notamment les produits commercialisés par la société Johnson Matthey sous la marque Smopex . Parmi les diatomites, on peut citer les produits commercialisés par la société CECA sous la marque Clarcel . Le composé de formule (11) est obtenu à partir du composé de formule (1) 20 par réduction du composé de formule (1) puis par réaction de la fonction amine du cycle phénothiazinium avec un groupement protecteur approprié R-CZ-Y dans lequel R et Z ont la même définition que ci-dessus et Y représente un groupe partant choisi parmi : un atome d'halogène tel que Cl. 1, Br, un groupement alcoxy en C1-C6. un groupement -OCOR (anhydride), un groupement hydroxyle, éventuellement en présence d'un activateur du type 25 dicyclohexylcarbodiimide (DCC). Avantageusement R est choisi parmi un groupement phényle, un groupement toluyl. Certains composés de formule (Il) tels que le benzoyl leuco bleu de méthylène sont disponibles commercialement. Le composé représenté par la formule (1) peut être représenté par 30 plusieurs structures résonnantes équivalentes. A titre d'illustration et de façon non limitative, on fait figurer ci-dessous d'autres structures qui sont équivalentes à celle de la formule (I) : 2903696 5 X X 5 l0 15 Dans la formule (1). et dans la formule (11), de préférence R,, R2. R3, R4, R; et R6, R7. R8. R9. Rio, identiques ou différents sont choisis parmi l'atome d'hydrogène et un alkyle en C1-C4. Avantageusement R5, R8. R9 et Rio représentent H. Avantageusement encore, l'une ou plusieurs des conditions suivantes sont vérifiées : - X représente Cl ou 011. - Ri. R2. R3. R4. identiques ou différents sont choisis parmi un atome d'hydrogène et le méthyle, - R6 représente un atome d'hydrogène, - R7 représente un atome d'hydrogène. - Z représente O. De façon avantageuse le composé de formule (1) est le chlorure de tétraméthyhhionine ou bleu de méthylène. R5, X 2903696 6 Selon une autre variante le composé de formule (I) est le chlorure de diméthylthionine ou Azur A. ou le chlorure de triméthylthionine ou Azur B, ou le chlorure de monométhylthionine ou Azur C. Selon l'invention le procédé de purification du composé de formule (1) 5 comporte au moins une étape de filtration d'un composé de formule (Il) sur un support susceptible de retenir les composés métalliques. tel qu'un gel de silice, d'alumine (neutre, basique ou acide), une diatomite éventuellement modifiée, une résine fonctionnalisée par des capteurs de métaux, des fibres fonctionnalisées par des capteurs de métaux, de la célite, une membrane microporeuse ou tout autre support capable de retenir les composés 10 métalliques. De façon plus détaillée, le composé de formule (II) est mis en solution dans un solvant approprié, on prépare un filtre avec le support de filtration que l'on introduit dans un récipient approprié. tel qu'une colonne de verre, un filtre en verre fritté ou une essoreuse industrielle. Le récipient rempli du support de filtration choisi est 15 humidifié, préférentiellement par le même solvant que celui dans lequel est dissout le composé de formule (Il). La solution contenant le composé de formule (Il) est déposée sur le filtre. la solution qui traverse le filtre est récupérée, le filtre est rincé plusieurs fois par un solvant identique ou différent de celui ayant servi à solubiliser le composé de formule (II). Les 20 fractions éluées sont récupérées et éventuellement concentrées. Parmi les solvants utilisables pour solubiliser les composés de formule (II) on peut citer : les solvants chlorés, comme par exemple le dichlorométhane ou le chloroforme, les alcools tels que isopropanol, éthanol, méthanol ou acétonitrile. acétate d'éthyle. tétrahydrofurane, ou un mélange de ces solvants. 25 La solution du composé de formule (I) est avantageusement d'une concentration allant de I g/l à l03 g/l. Des concentrations plus faibles conduisent à utiliser des volumes de solvant trop importants avec des conséquences sur la sécurité et la taille du matériel. Des concentrations plus importantes sont difficilement envisageables en raison de la solubilité des produits. 30 On prévoit d'utiliser environ 0,1 à l0 kg de support de filtration par kg de produit à filtrer. On prévoit avantageusement de rincer le filtre avec 0,1 à 50 1 de solvant par kg de produit de formule (Il) jusqu'à élution totale du produit de formule (Il). Le procédé de l'invention présente l'avantage de débarrasser le produit de formule (Il) de ses impuretés métalliques. De façon avantageuse. la fabrication du composé de formule (Il) se fait à partir du composé de formule (1) que l'on fait réagir avec un groupement de protection RCZ-Y dans lequel Y est avantageusement choisi parmi : Cl, Br, 1, un groupement alcoxy en 2903696 7 C1-C6, un groupement -OCOR (anhydride). un groupement hydroxyle. éventuellement en présence d'un activateur du type dicyclohexylcarbodiimide (DCC). La réaction se fait de façon classique en milieu basique ou neutre dans de l'eau ou dans un mélange d'eau et d'un autre solvant tel que par exemple acétonitrile. 5 tétrahydrofurane, dichlorométhane ou tout autre solvant organique approprié. La réaction est exothermique, et on utilise de préférence des moyens de refroidissement qui permettent de maintenir la température du mélange aux environs de la température ambiante. Le produit de départ (1) est soit commercial, soit préparé par des 10 méthodes connues. telles que celles décrites dans WO 2006/032879. D'une façon générale les produits de formule (I) sont préparés par des procédés de synthèse qui font appel à l'utilisation de dérivés métalliques que l'on retrouve comme impuretés dans les produits (I). C'est le cas du bleu de méthylène, mais aussi de l'azur A, de l'azur B et de l'azur C. 15 Les composés de formule (1) ne peuvent pas être débarrassés de leurs impuretés métalliques de façon directe, simple et efficace. Les méthodes de l'art antérieur font appel à des recristallisations successives qui n'ont pas des rendements satisfaisants et qui conduisent à des produits dont le taux d'impuretés résiduelles est difficile à contrôler. En outre les produits de formule (1) ont la propriété de chélater les 20 métaux alors que les produits (Il) sont non chélatants, car neutres. Dans les différentes étapes du procédé de l'invention, on veille à employer des matériaux, des réactifs, des solvants dépourvus de résidus métalliques de façon à ne pas introduire de contamination externe. Après que le produit de formule (II) ait été purifié suivant le procédé de 25 l'invention, on procède avantageusement à une étape de déprotection de l'amine du cycle phénothiazine du composé de formule (II). Cette déprotection est faite par tout moyen connu de l'homme du métier, en évitant l'introduction de contaminants métalliques et dans des conditions évitant la dégradation du composé de formule (1). Parmi les moyens utilisables pour la déprotection du groupe R-CZ- on peut citer : les quinones, comme par 30 exemple la 2,3-dichloro-5,6-dicyano-1,4-benzoquinone (DDQ). HNO3. . HCIO4. 12, HCI, H2SO4, H202. un traitement par des rayonnements ultraviolets. De préférence on utilise une quinone pour cette étape. et de façon très préférentielle la 2,3-dichloro-5,6-dicyano-].4-benzoquinone. De façon avantageuse, cette réaction de déprotection est faite dans un solvant choisi parmi : l'acétate d'éthyle, l'acétonitrile. le tétrahydrofurane, l'acétone. Le 35 solvant préféré pour cette étape est l'acétonitrile. Des conditions de déprotection avantageuses prévoient l'emploi de 0,80 à 1,I équivalents molaires de DDQ par rapport au composé (II). encore plus avantageusement de 0,85 à 1,05 équivalents molaires de DDQ par rapport au composé (Il). 2903696 8 avantageusement de 0,90 à l équivalent molaire. Préférentiellement, cette déprotection se fait à une température comprise entre -30 C et -5 C. Bien que non totalement exclues, une température plus basse aurait l'inconvénient d'allonger les durées de réaction, une température plus élevée pourrait conduire à la formation de produits secondaires. 5 En fonction du moyen de déprotection employé on peut être amené à faire un échange d'ions pour aboutir au composé de formule (1) comportant l'anion X-souhaité. De préférence, cet échange d'ion est fait par traitement avec HC1 dans l'acétate d'éthyle. D'autres solvants pourraient être utilisés, mais certains sont susceptibles de conduire à la formation de produits secondaires. 10 Les conditions de déprotection des composés de formule (II) exposées ci-dessus sont particulièrement avantageuses en ce qu'elles permettent d'aboutir à un composé de formule (1) sans introduire au cours de cette étape d'impuretés métalliques ou former d'impuretés organiques. Selon une variante de l'invention, on peut prévoir de purifier le composé de formule (Il) par d'autres moyens que la filtration sur un support 15 susceptible de retenir les métaux, comme par exemple par cristallisation dans un solvant approprié. Selon cette variante, on déprotège ensuite le composé de formule (II) à l'aide d'une quinone, en particulier le DDQ, de préférence dans les conditions exposées ci-dessus. Un autre objet de l'invention est donc un procédé de purification de 20 composés répondant à formule (1) décrite ci-dessus, caractérisé en ce qu'il comporte au moins une étape de déprotection de l'amine du cycle phénothiazine du composé de formule (Il) par traitement par une quinone, en particulier par la 2,3-dichloro-5,6-dicyano-1,4-benzoquinone (DDQ). Avantageusement on emploie les conditions de mise en oeuvre du DDQ qui ont été décrites ci-dessus. 25 La méthode de déprotection du composé (II) en composé (1) permet d'aboutir à un composé (1) qui ne comporte pas d'impuretés métalliques additionnelles par rapport au produit (II). En outre, ces conditions de déprotection évitent la formation de produits de dégradation organique. En effet, les composés de formule (l) sont d'une stabilité limitée et l'utilisation de certaines conditions de traitement conduit à des 30 dégradations, par exemple du bleu de méthylène en Azur A, B et C. Le procédé de l'invention permet d'avoir accès à un composé de formule (1) purifié de ses contaminants métalliques de façon fiable, reproductible et applicable à l'échelle industrielle. Ces qualités sont essentielles pour pouvoir fournir un produit de formule (1) de qualité pharmaceutique. 35 Notamment le procédé de purification de l'invention est le seul qui permette d'obtenir en quantités industrielles et de façon reproductible un bleu de méthylène ou chlorure de tétraméthylthionine qui comprenne 0,02 g/g ou moins de cadmium par g de bleu de méthylène. Un tel produit constitue un autre objet de l'invention. 2903696 9 Un autre objet de l'invention est un bleu de méthylène ou chlorure de tétraméthylthionine ayant un taux de pureté supérieur à 97%. mesurée en CLHP (chromatographie liquide haute performance) dans les conditions de la pharmacopée européenne 5.4 (édition d'avril 2006) et comprenant moins de 4,5 pg/g d'aluminium, 5 avantageusement moins de 3 g/g d'aluminium, encore plus avantageusement moins de 2,5 g/g d'aluminium. Le procédé de l'invention est également le seul à donner accès à un bleu de méthylène ou chlorure de tétraméthylthionine ayant un taux de pureté supérieur à 97%. mesurée en CLHP dans les conditions de la pharmacopée européenne 5.4 (édition d'avril 10 2006) et comprenant moins de 0,5 g/g d'étain. Un tel produit constitue un autre objet de l'invention. Le procédé de l'invention est le seul à donner accès, en quantité industrielle, à un bleu de méthylène ou chlorure de tétraméthylthionine comprenant moins de 3% d'impuretés, mesuré en CLHP dans les conditions de la pharmacopée européenne 15 5.4 (édition d'avril 2006) et un taux d'impuretés métalliques inférieur à 20 g/g, avantageusement inférieur à 15 iag/g, encore plus avantageusement inférieur à ]o g/g. Un autre objet de l'invention est un composé de formule (1). à l'exclusion du bleu de méthylène ou chlorure de tétraméthylthionine et comportant un taux d'impuretés métalliques global inférieur à 100 g/g, avantageusement inférieur à 50 g/g, 20 en particulier inférieur à 30 g/g. De préférence ce composé satisfait une ou plusieurs des conditions suivantes : - pureté supérieure à 97%, mesurée en CLHP dans les conditions de la pharmacopée européenne 5.4 (édition d'avril 2006) - taux d'aluminium inférieur à 5 g/g, avantageusement inférieur à 4 25 g/g, encore plus avantageusement inférieur à 3 g/g. - taux de cadmium inférieur à 0,1 g/g, avantageusement inférieur à 0,05 g/g, encore mieux inférieur à 0,02 g/g, - taux d'étain inférieur à 0,5 pg/g, avantageusement inférieur à 0.4 g/g et encore plus avantageusement inférieur à 0,3 g/g. 30 Le bleu de méthylène est utilisé depuis des décennies dans le traitement de la malaria et dans le traitement de diverses infections. Il est utilisé comme agent antiseptique, anti infectieux, comme antidote et comme agent de diagnostique. De façon récente son activité antivirale a été mise en évidence, et il pourrait être utilisé dans la préparation d'un médicament destiné à lutter contre une pathologie telle qu'une infection, 35 la présence de contaminants pathogéniques dans le sang, une réaction hémodynamique excessive. une infection par le HIV, le virus West Nile. le virus de l'hépatite C. la maladie d'Alzheimer. 2903696 10 Enfin il pourrait également être utilisé en cosmétique ou pour des produits destinés à une application ophtalmique. Pour toutes ces applications thérapeutiques, et en particulier dans le contexte de la prévention et du traitement de la maladie d'Alzheimer, il est nécessaire de 5 disposer d'un bleu de méthylène ayant un degré de pureté élevé et en particulier comportant très peu d'impuretés métalliques. Un médicament comprenant un bleu de méthylène de l'invention, dans un support pharmaceutiquement acceptable, constitue un autre objet de l'invention. Le support et les quantités de bleu de méthylène à administrer sont bien 10 connus de l'homme du métier. L'invention a en outre pour objet un procédé de préparation d'un médicament comportant un composé de formule (1), caractérisé en ce que ce procédé comporte une purification du produit de formule (1) telle que décrite ci-dessus. PARTIE EXPERIMENTALE 15 Un bleu de méthylène commercial est purifié conformément au procédé de la figure 1. 1- Synthèse du Benzoyl leuco bleu de Méthylène (Etape A) Dans un réacteur double enveloppe de 120 L muni d'une agitation et sous azote on introduit : 20 - 80 L d'eau distillée, 4,2 kg (I 0,7 moles) de bleu de méthylène commercialisé par la société LEANCARE LTD sous la référence CI 52015, comprenant d'importantes quantités d'impuretés métalliques (Al, Fe, Cu, Cr). On laisse 15 min sous agitation puis on ajoute 6,9 kg de sodium 25 hydrosulfite Na2SZO4 en solution aqueuse à 85%. La coloration vire du bleu vers le beige. On laisse 45 min supplémentaires sous agitation, puis on ajoute 2,69 kg de soude sous forme de pastilles. La température de la réaction est maintenue entre 18 et 20 C. La durée d'addition est de 30 min et on laisse sous agitation 30 min supplémentaires. Ensuite on ajoute goutte-à-goutte 7,90 L de chlorure de benzoyle. Le mélange réactionnel vire vers 30 une coloration vert-beige. La durée d'addition est de 2h et ensuite on laisse sous agitation pendant 20 h. Traitement : Après arrêt de l'agitation on laisse décanter 15 min et on aspire le surnageant. On ajoute 80 L d'eau (25 volumes) et après agitation et décantation on aspire 35 de nouveau le surnageant. On ajoute 24 L d'EtOH et après une agitation d'environ 5 min on ajoute 16 L d'eau. Après avoir agité pendant 15 min, le mélange est filtré sur recette. Cette opération est répétée 3 fois. Après séchage on obtient 2.9 kg (Rdt : 66%) de benzoyl leuco bleu de méthylène. 2903696 11 2- Purification On utilise 4,25 kg de benzoyl leuco bleu de méthylène issu de la première étape. solubilisé dans 30 L de CHzCIz. On filtre sur 3 parts de silice (Merck Gerudan Si60) (11.5 kg) et 0,5kg de sable de Fontainebleau on rince avec 30 litres de 5 CHzCIz. On élimine CHzCIz par évaporation sous vide. On ajoute 6 L d'éthanol. On laisse sous agitation à froid puis on filtre sur recette. On sèche sous vide. On obtient 3,4 kg de benzoyl leuco bleu de méthylène purifié (Rdt : 80%). Pureté : +99 % CLHP Métaux : le contenu en métaux (en pg/g) est donné pour 3 essais dans le 10 tableau 1. 2903696 Tableau 1 Essai Essai 1 Essai 2 Essai 3 AI 0,5 0,5 0,1 Cu 0 0 0,4 Fe 0 0 0,1 Zn 0,9 0,7 0,5 Ni 0,1 0,1 0,1 Cr 0,3 0,3 0,03 Mo 0,1 0,1 0,1 Mn 0,02 0 0 Sn 0,5 0,4 0,5 Pb 5 3,2 2,4 Cd 0,2 0,2 0,07 3Débenzoylation 5 Dans un réacteur double enveloppe émaillé de 1001 à température ambiante, on introduit : - 45 L d'acétonitrile (ACN) - 1,6 kg du benzoyl leuco bleu de méthylène issu de la seconde étape et on place sous agitation. On laisse agiter 30 min à température ambiante puis on baisse la 10 température à -18 C. On ajoute en une portion 950 g de DDQ solubilisés dans 4 L d'ACN. On laisse agiter 2h à -18 C. On filtre. On obtient un complexe du 3,7-bis(diméthyl amino)phénothiazine avec le DDQ qui est utilisé directement dans l'étape suivante. 4- Salification Dans le réacteur double enveloppe émaillé, on réintroduit le gâteau issu 15 de la troisième étape en plusieurs morceaux. On ajoute 4 L d'AcOEt. On laisse tourner pendant 30 min à température ambiante. On baisse la température à -18 C. On ajoute 2.5 kg d'HCI dans 16 L d'AcOEt (solution 4N) . On agite 2h à -18 C. On filtre puis on réintroduit le gâteau dans le réacteur. On ajoute 30 L d'AcOEt à -18 C et on filtre à nouveau. 5- Neutralisation On ajoute 30 L d'acétone puis une solution de 200 g de NaOH solubilisés dans 500 ml d'eau. On filtre.On introduit le produit issu de la quatrième étape dans le réacteur avec 30 L d'acétone. On agite le milieu pendant lh à température ambiante. Le pH est de 4,0. On filtre. On laisse sous vide sur la recette. 6- Purification et hydratation Dans un réacteur émaillé de 40 L sous N2. à température ambiante, on a introduit 1,9 kg du produit de la cinquième étape et 30 L du mélange 50/50 CH2C12/EtOH. On chauffe au reflux (43 C). On filtre à chaud avec un filtre microfibre (Whatman GF/D). 12 20 25 2903696 13 Cette opération est effectuée 2 fois. On nettoie le réacteur à l'eau déminéralisée. On réintroduit le filtrat dans le réacteur. On distille sous vide à 28 C 24 litres de solvant (3h). Le milieu est remis dans le réacteur. On ajoute l L d'eau microfiltrée. On refroidit à -18 C. On ajoute 40 L d'AcOEt et on laisse la nuit sous agitation à froid. On filtre. On empatte 5 avec 10 L d'AcOEt. On obtient 1.4 kg de bleu de méthylène purifié sous la forme trihydratée. REVENDICATIONS 1. Procédé de purification d'un composé répondant à formule (1) ci-dessous : X (1) dans laquelle chacun de RI, R2. R3, R4. R. R6, R~. R8. R9. R10 peut être choisi, indépendamment des autres. parmi le groupe constitué de : - l'atome d'hydrogène, - les groupements alkyle en C1-C6. linéaires ramifiés ou cycliques, saturés ou insaturés, éventuellement substitués par une plusieurs fonctions choisies parmi un atome d'halogène. une fonction alcoxy en CI-C6, alkyloxycarbonyle en C1-C6. -CONH2. - les groupements aryle éventuellement substitués par une ou plusieurs fonctions choisies parmi : un alkyle en C1-C4, un atome d'halogène, une fonction alcoxy en C1-C6, alkyloxycarbonyle en CI-C6. -CONH2. X- représente un anion organique ou inorganique, caractérisé en ce qu'il comporte au moins une étape au cours de laquelle un composé de formule (II) : dans laquelle R représente un groupement choisi parmi : -un groupement phényle ou benzyle. éventuellement substitués par une ou plusieurs fonctions choisies parmi : un alkyle en C1-C4, un atome d'halogène. un halogénoalkyle en C1-C4, un groupement nitro. 10 15 20 25 30 35 2903696 15 - un groupement alkyle en C1-C8, linéaire, ramifié ou cyclique, - un groupement alkyl amino en C1-C8. - un groupement alcoxy en C1-C8, - un groupement phényloxy ou benzyloxy éventuellement substitués sur 5 le noyau aromatique par une ou plusieurs fonctions choisies parmi : un alkyle en C1-C4, un atome d'halogène. un halogénoalkyle en C1-C4, un groupement nitro, Z représente un atome choisi parmi 0 et S, est soumis à une filtration sur un support susceptible de retenir les composés métalliques. 2. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que RI, R2, R3, R4, R5 et Rb, identiques ou différents, sont choisis parmi l'atome d'hydrogène et un alkyle en C1-C4. 3. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'une ou plusieurs des conditions suivantes sont vérifiées : - R5, R8, R9 et R10 représentent H. - X représente Cl ou OH, - Ri. R2. R3, R4. identiques ou différents sont choisis parmi un atome d'hydrogène et le méthyle, - R6 représente un atome d'hydrogène, - R7 représente un atome d'hydrogène - Z représente O. 10. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que le composé de formule (1) est le chlorure de tétraméthylthionine ou bleu de méthylène. 11. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que le composé de formule (1) est choisi parmi : le chlorure de diméthylthionine ou Azur A, le chlorure de triméthylthionine ou Azur B, le chlorure de monométhylthionine ou Azur C. 12. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que le support de filtration est choisi parmi : un gel de silice, un gel d'alumine neutre, basique ou acide, une diatomite éventuellement modifiée, de la célite, une membrane microporeuse, une résine greffée par des groupements capteurs de métaux, des fibres greffées par des groupements capteurs de métaux. 13. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que pour la filtration le composé de formule (II) est mis en solution dans un solvant choisi parmi les solvants chlorés, comme le dichlorométhane ou le chloroforme. 2903696 16 les alcools tels que éthanol, isopropanol, méthanol, l'acétonitrile, l'acétate d'éthyle, le tétrahydrofurane, ou un mélange de ces solvants. 8. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que il comporte en outre une étape de déprotection de l'amine du cycle 5 phénothiazine du composé de formule (11). 9. Procédé selon la revendication 8, caractérisé en ce que la déprotection est faite par un moyen choisi parmi : les quinones, comme le 2,3-dichloro-5,6-dicyano-1,4-benzoquinone, HNO3, HCIO4, I2, HCI, H2SO4, H2O2. un traitement par des rayonnements ultraviolets. 10 10. Procédé selon la revendication 9, caractérisé en ce que la déprotection est faite par le 2,3-dichloro-5,6-dicyano-1,4-benzoquinone dans l'acétonitrile. 11. Procédé selon l'une quelconque des revendications 8 à l0, caractérisé en ce qu'il comporte en outre une étape d'échange d'ion. par traitement avec HCl dans l'acétate d'éthyle. 15 12. Procédé de purification d'un composé répondant à formule (I) ci-dessous : X (D dans laquelle chacun de R,. R2. R3. R.,, R5, R6. R7, R8, R9, R,o peut être choisi, indépendamment des autres, parmi le groupe constitué de : 20 - l'atome d'hydrogène. - les groupements alkyle en C1-C6, linéaires ramifiés ou cycliques, saturés ou insaturés, éventuellement substitués par une plusieurs fonctions choisies parmi un atome d'halogène, une fonction alcoxy en C,-C6, alkyloxycarbonyle en C1-C6, -CONH2. - les groupements aryle éventuellement substitués par une ou plusieurs fonctions choisies parmi : un alkyle en C,-C4. un atome d'halogène, une fonction alcoxy en C1-C6, alkyloxycarbonyle en C,-C6, -CONH2. X- représente un anion organique ou inorganique, caractérisé en ce qu'il comporte au moins une étape au cours de laquelle un composé de formule (II) : 2903696 (It) dans laquelle R représente un groupement choisi parmi : - un groupement phényle ou benzyle, éventuellement substitués par une ou plusieurs fonctions choisies parmi : un alkyle en C1-C4, un atome d'halogène, un 5 halogénoalkyle en C1-C4. un groupement nitro, - un groupement alkyle en C1-C8, linéaire, ramifié ou cyclique, un groupement alkyl amino en C1-C8, - un groupement alcoxy en C1-C3, - un groupement phényloxy ou benzyloxy éventuellement substitués sur 10 le noyau aromatique par une ou plusieurs fonctions choisies parmi : un alkyle en C1-C4, un atome d'halogène, un halogénoalkyle en C1-C4, un groupement nitro, Z représente un atome choisi parmi O et S, est soumis à une étape de déprotection de l'amine du cycle phénothiazine par traitement par une quinone, en particulier par la 2,3-dichloro-5,6-dicyano-1.4-15 benzoquinone (DDQ). 13. Procédé de préparation d'un médicament comportant un composé de formule (1) tel que défini par la revendication 1, caractérisé en ce que ce procédé comporte une purification du composé de formule (I) selon le procédé suivant l'une quelconque des revendications l à 12. 20 14. Bleu de méthylène (chlorure de 3,7-bis(diméthylamino)phénothiazine-5-ylium ) caractérisé en ce qu'il comprend une quantité de cadmium de 0,02 g ou moins par g de bleu de méthylène. 15. Bleu de méthylène (chlorure de 3,7-bis(diméthylamino)phénothiazine-5- ylium) ayant un taux de pureté supérieur à 97% et 25 comprenant moins de 4,5 pg/g d'aluminium, avantageusement moins de 3 pg/g d'aluminium, encore plus avantageusement moins de 2.5 lag/g d'aluminium. 16. Bleu de méthylène (chlorure de 3,7-bis(diméthylamino)phénothiazine-5-ium) ayant un taux de pureté supérieur à 97% et comprenant moins de 0,5 g/g d'étain, avantageusement moins de 0,3 g/g d'étain. 2903696 18 17. Bleu de méthylène (chlorure de 3,7-bis(diméthylamino)phénothiazine-5-ium) comprenant moins de 3% d'impuretés et un taux d'impuretés métalliques inférieur à 20 g/g, avantageusement inférieur à 15 gg/g, encore plus avantageusement inférieur à 10 g/g. 18. Composé de formule (I), à l'exclusion du bleu de méthylène, comportant un taux d'impuretés métalliques global inférieur à 100 g/g, avantageusement inférieur à 50 g/g, en particulier inférieur à 30 g/g. 19. Composé selon la revendication 18, caractérisé en ce qu'il satisfait une ou plusieurs des conditions suivantes : - pureté supérieure à 97% -taux d'aluminium inférieur à 5 mg/g, avantageusement inférieur à 4 g/g, encore plus avantageusement inférieur à 3 g/g, - taux de cadmium inférieur à 0,1 g/g, avantageusement inférieur à 0,05 g/g, encore mieux inférieur à 0,02 g/g, - taux d'étain inférieur à 0,5 iag/g, avantageusement inférieur à 0,4 g/g et encore plus avantageusement inférieur à 0,3 g/g. 24. Médicament comprenant un bleu de méthylène selon l'une quelconque des revendications 14 à 17 dans un support pharmaceutiquement acceptable. 25. Utilisation d'un bleu de méthylène selon l'une quelconque des 20 revendications 14 à 17 pour la préparation d'un médicament destiné à la prévention ou au traitement d'une pathologie sélectionnée parmi : une infection, la présence de contaminants pathogéniques dans le sang, une réaction hémodynamique excessive, une infection par le H1V, le virus West Nile, le virus de l'hépatite C. la maladie d'Alzheimer. 5 10 15