FR 2899585 A1 20071012 FR 0602975 A 20060405 1 L'invention concerne des composés comprenant une partie de reconnaissance d'une cible biologique, couplée à une partie de signal capable de complexer le Gallium L'invention concerne aussi des procédés d'obtention de ces composés, et des procédés de screening capables de sélectionner de tels composés pour leur synthèse chimique et leurs utilisations diagnostiques. On connaît déjà des composés désignés composés spécifiques vectorisés destinés à l'imagerie moléculaire en médecine nucléaire. On connaît ainsi de nombreux composés comprenant un biovecteur couplé à un radionucléide. Selon la nature du biovecteur et du radionucléide, le biovecteur est couplé au radionucléide soit directement, soit par l'intermédiaire d'un chélate qui complexe le radionucléide. Selon le spectre de dégradation des radionucléides, on peut les utiliser pour une imagerie PET ou pour une imagerie SPECT. L'imagerie PET (émission de positrons donnant lieu à une émission de photons détectés par un scanner PET) utilisant le radionucléide F18 est particulièrement utilisée pour le suivi métabolique de zones tumorales en utilisant le FDG (fluorodeoxyglucose). Un inconvénient majeur de l'utilisation des isotopes courants tels que le F18 en PET est la nécessité d'un cyclotron producteur de l'isotope, et cela en général à proximité du site d'administration du produit au patient compte tenu de la durée de vie des isotopes, ce qui pose des problèmes de coût et de logistique importants. De nombreux composés utilisant le technicium et l'indium ont été décrits pour leur utilisation en imagerie SPECT (émission de photons, avec utilisation de radionucléides émettant une énergie de l'ordre de 100 à 200 keV notamment). Le SPECT présente toutefois une plus faible résolution spatiale que le PET et peut impliquer une visualisation du patient 2 à 3 jours après l'administration du produit du fait de la durée de vie de certains isotopes tels que l'Inl 11. Le choix entre le PET et le SPECT est notamment fonction de l'indication diagnostique, Le demandeur s'est particulièrement intéressé à l'utilisation en imagerie PET du Gallium Ga 68 car cet isotope est produit, non pas par un cyclotron, mais par un 2 générateur (Germanium Ge68 / Gallium Ga68), appareil beaucoup moins complexe et coûteux que le cyclotron. Des composés spécifiques utilisant le Ga68 ont été décrits, notamment le Ga68/S3N ( agent chélatant tetradentate amine trithiolate), le DOTATOC (DOTA-DPhel-Tyr3- octréotide, le biovecteur étant un analogue de la somatostatine). Il est rappelé que du fait de l'état d'oxydation 3+ du Ga 68, celui-ci est typiquement couplé à différents chélates dont notamment des dérivés du DOTA, DTPA, NOTA. Deux procédés de préparation sont possibles : - le biovecteur est couplé au chélate puis le composé formé est complexé avec le Ga68 produit par le générateur - le chélate est complexé avec le Ga68 produit par le générateur, puis le complexe formé est couplé au biovecteur. La durée de vie du Ga68 est de 68 minutes, ce qui rend son utilisation possible en PET clinique, mais requiert comme pour le F18 (dont la demi vie est de 121 minutes) une durée de préparation faible du produit incorporant le Ga68, et de préférence inférieure à environ 40 minutes. Un procédé de préparation destiné à réduire le temps de préparation de composés avec Ga68 a été décrit dans WO2004/089425 qui concerne un procédé avec micro-ondes. Le besoin demeure d'obtenir de nouveaux composés utilisant le Ga68 particulièrement efficaces notamment pour certaines indications diagnostiques non couvertes à ce jour avec cet isotope, et dont la préparation est suffisamment rapide et simple pour une utilisation clinique courante et économique. A cet effet l'invention concerne selon un aspect une méthode de sélection de composés efficaces en imagerie PET du gallium Ga68 comprenant : - la sélection de biovecteurs B ayant une affinité au moins micromolaire, de préférence nanomolaire, à partir d'une base de molécules pharmacologiques actives - la sélection de chélates Ch ayant avec le gallium 68Ga3+ une constante d'affinité log K d'au moins 10, et de préférence d'au moins 20, 25, 30, 35, dans une banque de chélates linéaires ou macrocycliques - le sélection de liens chimiques L destinés au couplage d'au moins un biovecteur avec au moins un chélate (désigné Ch dans la demande) - la synthèse des composés (B- L û Ch) 3 - la synthèse des composés (B û L û Ch - Ga68) par complexation du composé (B- L - Ch) avec le Ga68 - l'imagerie PET du composé (B û L û Ch - Ga68). Par l'expression biovecteur issue d'une base de molécules pharmacologiques actives, on entend toute molécule (désignée biovecteur) ayant une activité connue pour le ciblage d'une zone pathologique et/ou diagnostique d'intérêt, notamment des molécules issues de chimiothèques, et notamment tout biovecteur ou catégorie de biovecteurs cités dans la présente demande. Selon une réalisation la base ou chimiothèque est une banque de biovecteurs utilisés pour l'imagerie SPECT. Selon une réalisation la base ou chimiothèque est une banque de biovecteurs utilisés pour l'imagerie PET au F18. L'invention concerne aussi tout produit vectorisé utilisable en imagerie PET au gallium Ga68, obtenu par un procédé de sélection ci-dessus. L'invention concerne aussi un procédé de préparation de composés efficaces en imagerie PET du gallium Ga68 comprenant : - la synthèse d'un composé (B - Ch) par couplage d'un biovecteur à un chélate linéaire ou macrocyclique la complexation du composé (B-Ch) avec le gallium Ga68 en moins de 20 minutes. L'invention concerne aussi des composés destinés à l'imagerie PET au gallium 68 comprenant un biovecteur B et un chélate capable de complexer le Ga68, le chélate comportant au moins une partie de masquage du chélate in vivo de manière à ne pas altérer l'affinité du biovecteur avec sa cible biologique. L'invention concerne aussi des composés destinés à l'imagerie PET au gallium 68 comprenant un biovecteur B et un chélate capable de complexer le Ga68, le chélate comportant en outre une partie de reconnaissance d'une cible biologique améliorant la biodistribution du composé, ladite partie de reconnaissance étant différente du biovecteur. Le demandeur a ciblé plusieurs axes d'amélioration majeurs. 4 Selon un aspect, le demandeur a étudié des produits dont le chélate complexant le Gallium n'altère pas la spécificité de la reconnaissance de la cible biologique par le biovecteur du produit. Le demandeur a ainsi étudié plusieurs voies de synthèse chimique et plusieurs types de chélates n'altérant pas cette reconnaissance. Selon un autre aspect, le demandeur a étudié des produits dont la spécificité de ciblage est particulièrement élevée. Le demandeur a ainsi étudié plusieurs voies de synthèse chimique et plusieurs types de biovecteurs améliorant la spécificité du produit. Le demandeur a ainsi recherché des biovecteurs à forte spécificité, notamment des biovecteurs connus du domaine thérapeutique, ayant de préférence une affinité au moins micromolaire, notamment nanomolaire, mais non encore utilisés dans le domaine diagnostique. Le demandeur a aussi étudié les possibilités d'association de plusieurs biovecteurs, entre eux ou par l'intermédiaire du ou des chélates du produit : -les biovecteurs sont couplés entre eux par un groupe de liaison chimique (linker), au moins un biovecteur étant couplé à au moins un chélate - le composé comprend un chélate qualifié de central et: porteur de plusieurs biovecteurs par l'intermédiaire de linkers appropriés - Le cas échéant le biovecteur est couplé à un chélate couplé lui-même à plusieurs chélates reliés entre eux par des linker approprié. Le demandeur a par ailleurs étudié un assemblage entre le ou les biovecteurs et le ou les chélates de manière à ce que l'accès à la cible ne soit pas gêné malgré la présence du ou des chélates : - le chélate est espacé du ou des biovecteurs par un linker d'une taille suffisante et d'une structure chimique telles que la reconnaissance du ou des biovecteurs par la cible n'est pas altérée - pour des biovecteurs d'une taille suffisante, le biovecteur comprend d'une part une partie de reconnaissance de la cible biologique non reliée directement au chélate, et d'autre part au moins une partie de structure dont la liaison (directe ou par un linker) avec un ou plusieurs chélates n'interfère pas sur la reconnaissance spécifique. - La structure du chélate est définie de manière à ce qu'il apparaisse comme invisible ou transparent en milieu biologique vis-à-vis du biovecteur. Ces chélates sont notamment utiles lorsque le biovecteur doit atteindre un site de reconnaisance difficile d'accès tels qu'un site catalytique d'une enzyme, ou pour des biovecteurs dont le couplage avec des chélates connus pose un problème de spécificité ou de reconnaisance par leur cible biologique (notamment biovecteurs de petite taille et/ou ayant des difficultés d'accès à une zone biologique). Ce caractère transparent peut être obtenu par l'utilisation de groupes chimiques appropriés notamment des groupes 5 hydrophiles ou au contraire lipophiles masquant le chélate. Parmi les associations biovecteurs/chélates, on peut citer notamment : -un biovecteur central relié à plusieurs chélates - un chélate central relié à plusieurs biovecteurs identiques ou différents - un premier ensemble [biovecteur porteur de chélates(s)] couplé par l'intermédiaire d'un linker hydrophobe ou hydrophile à un second ensemble [biovecteur porteur de chélates(s)] , s'écrivant par exemple (Ch)2- B1 û Linker û B2 (Ch)2 avec Ch représentant des chélates identiques ou différents et Bl et B2 représentant des biovecteurs identiques ou différents - plusieurs biovecteurs formant une sorte de couronne en interaction avec le gallium -un ensemble B 1- (Linker porteur de Ch) û B2 û Ch Le demandeur a aussi étudié des composés utilisables en imagerie PET du Ga68 et comprenant en plus du biovecteur et du chélate une structure chimique lui conférant des propriétés diagnostiques utiles, selon une logique par exemple décrite dans W02005/082425 page 60-67, notamment des polymères (polysaccharides, poly acides aminés, polymères hydrophiles de type PEG par exemple), des systèmes d'encapsulation de type liposomes, des systèmes lipidiques de transport et/ou de libération du composé de diagnostique tels que des liposomes, des micelles (qui permettent un passage dans le système lymphatique au lieu du système circulatoire), des nanoémulsions. Le demandeur a aussi étudié plusieurs voies de synthèse chimique et plusieurs types de chélates permettant d'activer le produit sur le site de ciblage, selon un fonctionnement qualifié de intelligent ou smart. Lorsque le produit est à proximité de sa cible in vivo, il subit une modification de structure telle que l'affinité du biovecteur vis-à- vis de sa cible est améliorée. Par affinité améliorée, on entend que le biovecteur a une meilleure reconnaissance et/ou que sa durée d'interaction avec sa cible est augmentée. Par exemple, le produit subit une modification de conformation et/ou un clivage par 6 exemple enzymatique entraînant une meilleure exposition du site de liaison du biovecteur vis-à-vis de sa cible. L'origine de ladite modification de structure peut être localement notamment liée au pH, au potentiel d'oxydo-réduction .... Le biovecteur peut par exemple être un substrat ou un inhibiteur d'une enzyme. Selon un autre aspect, on cherche des composés dont le biovecteur est couplé directement à au moins un gallium, sans utilisation de chélate, la reconnaissance du biovecteur n'étant pas altérée par l'interaction entre le biovecteur et le ou les atomes de gallium. Différents cas sont possibles, par exemple : - le biovecteur comprend deux sites, dont un site de reconnaissance de la cible et un site d'interaction avec le gallium, ce second site formant une sorte de loge autour du gallium. - le biovecteur comprend plusieurs sites, chaque site étant à la fois un site de reconnaissance et un site d'interaction avec le gallium, chaque site formant une sorte de loge autour du gallium. Le cas échéant ces deux sites de reconnaissance sont des biovecteurs différents ciblant des cibles identiques ou différentes. On peut aussi utiliser des composés comprenant, en plus du chélate et de la partie biovecteur de ciblage, une partie de transport capable de véhiculer le biovecteur de ciblage jusqu'à une zone d'intérêt. Par exemple la zone d'intérêt sera un territoire biologique du cerveau rendu accessible au composé grâce à un transporteur capable de passer la barrière hémato encéphalique (BHE). On aura par exemples les associations suivantes : (Ch) û X û L1 û Y ; X û (Ch) û Y ; X û L1 û (Ch) û L2 û Y , avec :Xun biovecteur de ciblage, Y une partie de transport, LI et L2 des linkers le cas échéant biodégradables. Selon un autre aspect, le demandeur a étudié l'utilisation de biovecteur connus pour leur forte spécificité pour une cible biologique associée à une zone pathologique, mais dont le couplage avec les isotopes couramment utilisés en médecine nucléaire, notamment avec le F18, est chimiquement difficile et/ou pose des problèmes de stabilité du complexe biovecteur-F18 synthétisé. Le demandeur a ainsi étudié l'utilisation de biovecteurs reconnus pour leur spécificité (typiquement d'au moins 10-9 à 10-12 M), et dont le couplage avec le gallium (par l'intermédaire du chélate) est nettement plus facile et/ou plus rapide et/ou fournit un complosé plus stable qu'avec le 7 F18. Ceci permet aussi de laisser davantage de temps au praticien dans l'utilisation clinique du produit. Les difficultés de couplage du F18 (Kryptofix R , réaction d'échange avec le mésylate ou le trifate, utilisation de F18 anhydre, F18-F2, F18XeF2, F18 DAST ...) sont rappelés dans l'art antérieur, par exemple dans WO2005/082425. Le demandeur a étudié en particulier l'utilisation du gallium au lieu du F18 pour des indications diagnostiques (à l'aide de biovecteurs appropriés) requérant la forte résolution spatiale du PET (2 à 3 fois supérieures à celle SPECT), notamment en oncologie (diagnostique précoce des cancers, bilan d'extension, suivi de thérapies), neurologie, cardiologie, infectiologie. On ciblera notamment la détection de zones tumorales de l'ordre de 5 mm, la détection de tumeurs primaires et de nodules métastatiques. Le demandeur a aussi étudié l'utilisation du gallium au lieu du F18, pour des biovecteurs dont la spécificité de reconnaissance de leur cible (notamment entre une zone normale et une zone pathologique ou à risque pathologique) est assez élevée pour obtenir un bon contraste dans l'image et donc pour répondre au besoin diagnostique, même si la résolution en imagerie PET avec le gallium est moins élevée qu'avec le F18. Le demandeur a particulièrement étudié l'utilisation du gallium pour l'indication diagnostique perfusion myocardique en imagerie PET, éventuellement en combinaison avec un traitement thérapeutique, en sélectionnant les biovecteurs prometteurs parmi la liste des nombreux biovecteurs utilisés ou utilisables dans cette indication. Le demandeur a aussi étudié des produits diagnostiques en imagerie PET incorporant du Ga68 pour le suivi de l'efficacité d'un produit thérapeutique, le biovecteur du composé de diagnostique étant identique ou différent du biovecteur du produit thérapeutique, les deux produits étant coadministrés simultanément ou en différé. On peut aussi utiliser des composés mixtes comprenant une partie thérapeutique et une partie diagnostique, se séparant éventuellement sur le site d'action du composé mixte. Le demandeur a aussi étudié des méthodes d'imagerie plus spécialement destinées à l'imagerie PET du Ga68, en particulier des appareillages, des séquences, des méthodes de traitement du signal, des méthodes d'acquisition, de transfert et de compilation de données, adaptées aux particularités (demie-vie ...) du Ga68. L'imagerie physiologique 8 à l'aide du produit en imagerie PET du Ga68 est le cas échéant combinée à une lecture anatomique au scanner avec éventuellement produit de contraste pour scanner aux rayons X. On peut coadministrer de manière simultanée ou en différé un produit PET au Ga68 et un autre produit de contraste. Le demandeur a ainsi étudié des possibilités d'administration de plusieurs produits, presque simultanée ou au contraire différée de quelques heures, pour une imagerie en PET, chaque produit apportant une information diagnostique pertinente, par exemple un produit marqué au F18 et un produit marqué au Ga68. Le demandeur a aussi étudié les possibilités de combiner les résultats obtenus sur un même patient en combinant les modalités d'imagerie en utilisant des produits marqués au Ga, par exemple en PET-CT ou en PET IRM. Le demandeur s'est intéressé également à des composés comprenant un biovecteur utilisé en imagerie SPECT avec le technicium l'indium par exemple, mais qu'il serait intéressant d'utiliser en imagerie PET avec le Gallium, compte tenu de l'efficacité de la reconnaissance spécifique connue de ces biovecteurs. Le choix de tels composés est permis par le fait que la chimie est assez proche entre le gallium et ces éléments. Par exemple de tels composés comprennent un biovecteur couplé à un chélate complexant le gallium au lieu de l'Indium, avec comme avantage une obtention rapide des résultats alors que l'utilisation de l'Indium nécessitait une visualisation du patient 2 à 3 jours après l'administration du produit. En outre le demandeur a étudié l'utilisation de biovecteurs connus pour leur utilisation dans certaines indications connues en SPECT compte tenu du radionucléide utilisé jusqu'à présent (technicium notamment), dans d'autres indications diagnostiques en imagerie PET grâce à l'utilisation du Ga68 au lieu du radionucléide utilisé jusqu'à présent. En outre, contrairement à l'utilisation de l'indium qui nécessite un chélate/et ou un biovecteur stable au moins 2 à 3 jours, avec le gallium le chélate et/ou le composé chélate/biovecteur peut n'être stable que 1 à 3 heures (le temps de la préparation du produit et de l'imagerie du patient). Le demandeur a en particulier étudié des composés comprenant des biovecteurs dont la cinétique de biodistribution est telle que le gallium ne soit pas désintégré avant d'atteindre sa cible biologique, ces composés atteignant leur cible chez le patient en moins de deux à trois heures. 9 Parmi les biovecteurs utilisés en SPECT, le demandeur a notamment étudié des améliorations mises au point pour le SPECT et susceptibles d'être utiles pour le PET du gallium. On peut citer notamment : - le couplage avec des dérivés quinoline et quinolinine (W02005/079886) - le couplage avec des dérivés de ciblage mitochondrial avec un ciblage et une rétention suffisantes dans le myocarde (dérivés de roténone dans WO2003/086476, dérivés inhibiteurs de MC1 du US2005/0191238) - le couplage avec des dérivés pyridyle et imidazolyle (WO 2003/077727) - le couplage avec des dérivés benzodiazépines (WO00/61195) pour le ciblage de GPIIbIIa (thrombus) avec des chélates porteur de groupes sulfure - le couplage avec des dérivés porteurs de fonctions 'phosphine porteurs de groupes hydroxy, polyhydroxy, carboxy ou ploycarboxy (WO01/77122) pour améliorer la biodistribution notamment de biovecteurs ciblant des intégrines -l'utilisation d'agents de protection contre l'oxydation (WO01/00637) -l'utilisation d'agents stabilisants (agents radiprotecteurs et antimicrobiens de WO02/053192) - l'utilisation de dérivés Cardiolite et Myoview. Pour le choix de biovecteurs appropriés, le demandeur s'est intéressé tout particulièrement aux grandes familles de biovecteurs utilisés en thérapeutique et/ou en imagerie de diagnostique : protéines, glycoprotéines, lipoprotéines, polypeptides, peptides, peptidomimétiques, colorants, sucres, oligosaccharides, neuromédiateurs, et de manière générale tout ligand peptidique ou non connu de l'homme du métier comme capable de reconnaître au moins une cible biologique telle que notamment des récepteurs, des enzymes, sans que le couplage avec le chélate n'altère de manière non souhaitée l'activité biologique de la cible. Pour le choix des biovecteurs, le demandeur s'est intéressé à tout biovecteur - connu de l'art antérieur et utilisable en imagerie - connu de l'art antérieur, non décrit pour l'imagerie, mais qui peut l'être compte tenu de sa reconnaissance spécifique d'au moins une cible biologique indicatrice d'un état ou d'un risque d'état pathologique Le choix du biovecteur peut être réalisé en fonction de sa structure et/ou en fonction de son utilisation souhaitée en imagerie, telle que le marquage d'un mécanisme biologique 10 susceptible d'être altéré et se traduisant par exemple par un niveau d'expression modifié de la cible du biovecteur par rapport à l'état non pathologique: récepteurs cellulaires, métabolisme cellulaire, transport intra ou extracellulaire, molécules informatrices et/ou activatrices d'effecteurs ou de cellule. A titre d'exemples on citera les biovecteurs suivants, cités notamment dans W02004/112839 capables de cibler un ligand associé à (intervenant directement ou indirectement et/ou surexprimés dans) un processus pathologique. 1) Les biovecteurs décrits dans les documents WO 01/97850 (ciblant des récepteurs VEGF et angiopoiétine), US 6 372 194 (polymère tel que polyhystidine), WO 2001/9188 (polypeptide ciblant la fibrine), WO 01/77145 (peptide de ciblage d'intégrines), WO 02 26776 (ligand de ciblage d'intégrine av(33), WO 99/40947 (ligands ciblant par exemple le récepteur KDR/Flk-1 dont R-X-K-X-H et R-X-K-X-H, ou les récepteurs Tie-1 e 2), WO 02062810 (glycosides de sialyl Lewis), WO 02/40060 (antioxydants tels que l'acide ascorbique), US 6 524 554 (ciblage de la tuftsine), WO 02/094873 (ciblage de récepteurs à protéine G ,GPCR en particulier la cholécystokinine), US 6 489 333 (association antagoniste d'intégrine et mime de la guanidine), US 6 511 648 (quinolone ciblant av(33 ou 5), US A 2002/0106325, WO01/97861 (benzodiazépines et analogues ciblant des intégrines), WO 01/98294 (imidazoles et analogues), WO 01/60416 (inhibiteurs de MMP, notamment des hydroxamates), WO 02/081497 (peptides de ciblage d'av[33 tels que RGDWXE), WO 01/10450 (peptides RGD), US 6 261 535 (anticorps ou fragments d'anticorps (FGF, TGFb, GV39, GV97, ELAM, VCAM, inductible par TNF ou IL), US 5 707 605 (molécule de ciblage modifiée par interaction avec sa cible), WO 02/28441 (agents de ciblage de dépôts amyloïdes), WO 02/056670 (peptides clivés cathepsines), US 6 410 695 (mitoxantrone ou quinone), US 6 391 280 (polypeptides ciblant des cellules épithéliales), US 6 491 893 (GCSF), US 2002/0128553, WO 02/054088, WO 02/32292, WO 02/38546, W020036059, US 6 534 038, WO 99/54317 (inhibiteurs de cystéines protéases), WO 0177102, EP 1 121 377, Pharmacological Reviews (52,n 2, 179 ; facteurs de croissance PDGF, EGF, FGF, ...), Topics in Current Chemistry (222, W.Krause, Springer), Bioorganic & Medicinal Chemistry (L1, 2003, 1319-1341 ; dérivés tétrahydrobenzazépinones ciblant avf33). 11 2) Les inhibiteurs d'angiogenèse, notamment ceux testés en essais cliniques ou déjà commercialisés, notamment : - les inhibiteurs d'angiogenèse impliquant des récepteurs FGFR ou VEGFR tels que SU101, SU5416, SU6668, ZD4190, PTK787, ZK225846, des composés azacycles 5 (WO 00244156, WO 02059110) ; - les inhibiteurs d'angiogenèse impliquant des MMP tels que le BB25-16 (marimastat), le AG3340 (prinomastat), le solimastat, le BAY12-9566, le BMS275291, le metastat, le neovastat ; - les inhibiteurs d'angiogenèse impliquant des intégrines tels que le SM256, le SG545, 10 des molécules d'adhésion bloquant le EC-ECM (tels que le EMD 121-974, ou la vitaxine) ; - des médicaments à mécanisme d'action antiangiogenèse plus indirect tels que le carboxiamidotriazole, le TNP470, la squalamine, le ZD0101 ; - les inhibiteurs décrits dans le document WO 99/40947 , les anticorps monoclonaux 15 très sélectifs pour la liaison au récepteur KDR, les analogues de la somatostatine (WO 94/00489), les peptides de liaison à la sélectine (WO 94/05269), des facteurs de croissance (VEGF, EGF, PDGF, TNF, MCSF, interleukines); des biovecteurs de ciblage de VEGF décrits dans Nuclear Medicine Communications ,1999, 20 ; -les peptides inhibiteurs du document WO 02/066512. 20 - des dérivés de folates - des agents de ciblage de la maladie d'Alzheimer - des exopolysaccharides 3) Des biovecteurs capables de cibler des récepteurs : CD36, EPAS-1, ARNT, NHE3, 25 Tic-1, 1/KDR, Fit-1, Tek, neuropiline-1, endogline, pléientropine, endosialine, Axl., alPi, a2ssl, a4P1, a5pl, eph B4 (éphrine), récepteur laminine A, récepteur neutrophiline 65, récepteur leptine OB-RP, récepteur chimiokine CXCR-4 (et autres récepteurs cités dans le document WO99/40947), LHRH, bombésine/GRP, récepteurs gastrine, VIP, CCK. 30 4) Des biovecteurs de type inhibiteurs de tyrosine kinase. 5) Les inhibiteurs du récepteur GPIIb/IIIa connus choisis parmi : (1) le fragment fab d'un anticorps monoclonal du récepteur GPIIb/IIIa, Abciximab (ReoProTM) , (2) les petites molécules peptidiques et peptidomimétiques injectées en intraveineuse telles 12 que l'eptifibatide (IntegrilinTM) et le tirofiban (AggrastatTM). Eta.nt rappelé que le choix éventuel d'un anticorps devra prendre en compte la durée d'atteinte de sa cible. 6) Des ligands antagonistes de récepteurs au fibrinogène (EP 425 212), des peptides ligands de récepteurs IIb/IIIa, des ligands du fibrinogène, des ligands de la thrombine, des peptides capables de cibler la plaque d'athérome, les plaquettes, la fibrine, des peptides à base d'hirudine, des dérivés à base de guanine ciblant le récepteur IIb/IIIa. 7) D'autres biovecteurs ou fragments biologiquement actifs de biovecteurs connus de l'homme du métier comme médicaments, à action anti-thrombotique, anti agrégation plaquettaire, antiathérosclérotique, antiresténotique, anticoagulante. 8) D'autres biovecteurs ou fragments biologiquement actifs de biovecteurs ciblant av33, décrits en association avec des DOTA dans le brevet US 6 537 520, choisis parmi les suivants : mitomycine, tretinoine, ribomustine, gemcitabine, vincristine, etoposide, cladribine, mitobronitol, methotrexate, doxorubicine, carboquone, pentostatine, nitracrine, zinostatine, cetrorelix, letrozole, raltitrexed, daunorubicine, fadrozole, fotemustine, thymalfasin, sobuzoxane, nedaplatin, cytarabine, bicalutamide, vinorelbine, vesnarinone, aminoglutethimide, amsacrine, proglumide, elliptinium acetate, ketanserin, doxifluridine, etretinate, isotretinoine, streptozocine, nimustine, vindesine, flutamide, drogenil, butocin, carmofur, razoxane, sizofilan, carboplatine, mitolactol, tegafur, ifosfamide, prednimustine, picibanil, levamisole, teniposide, improsulfan, enocitabine, lisuride, oxymetholone, tamoxifen, progesterone, mepitiostane, epitiostanol, formestane, interferon-alpha, interferon-2 alpha, interferonbeta, interferon-gamma, colony stimulating factor-1, colony stimulating factor-2, denileukin diftitox, interleukin-2, leutinizing hormone releasing factor. 9) certains biovecteurs ciblant des types particuliers de cancers, par exemple des peptides ciblant le récepteur ST associé au cancer colo-rectal, ou le récepteur tachykinine. 10) des biovecteurs utilisant des composés de type phosphines. 11) des biovecteurs de ciblage de P-sélectine, E-sélectine (par exemple le peptide de 8 acides aminés décrit par Morikawa et al, 1996, 951). 12) l'annexine V ou des biovecteurs ciblant les processus apoptotiques. 13) tout peptide obtenu par des technologies de ciblage telles que le phage display, modifié éventuellement par des acides aminésnon naturels (http//chemlibrary.bri.nrc.ca), par exemple des peptides issus de banques phage 13 display : RGD, NGR, CRRETAWAC, KGD, RGD-4C, XXXY*XXX, RPLPP, APPLPPR. 14) d'autres biovecteurs peptidiques connus de ciblage de plaques d'athérome cités notamment dans le document WO 2003/014145. 15) des vitamines (folates notamment). 16) des ligands de récepteurs hormonaux dont les hormones et les stéroïdes. 17) des biovecteurs ciblant des récepteurs opioïdes. 18) des biovecteurs ciblant des récepteurs TKI, des récepteurs CXCR (1 à 4 notamment). 19) des antagonistes LB4 et VnR. 20) des composés nitriimidazoles et benzylguanidines.. 21) des biovecteurs rappelés dans Topics in Current Chemistry, vol.222, 260-274, fundamentals of receptor-based diagnostic metallopharmaceuticals, notamment : - des biovecteurs de ciblage de récepteurs peptidiques surexprimés dans les tumeurs (récepteurs LHRH, bombésine/GRP, récepteurs VIP, récepteurs CCK, récepteurs tachykinine par exemple), notamment les analogues de somatostatine ou de bombésine, des peptides dérivés octréotide éventuellement glycosylés, les peptides VIP, les alpha-MSH, les peptides CCK-B - des peptides choisis parmi : des peptides cycliques RGI), fibrine-chaîne alpha, 20 CSVTCR, tuftsine, fMLF, YIGSR (récepteur : laminine) 24) des polysaccharides et des dérivés d'oses, des dérivés ciblant Glut. 25) des biovecteurs utilisés pour des produits de type smart. 26) des marqueurs de la viabilité myocardique (par exemple tétrofosmine et hexakis2métoxy-2méthylpropylisonitrile). 25 25) des traceurs du métabolisme des sucres et des graisses. 26) des ligands de récepteurs de neurotransmetteurs (récepteurs D,5HT,Ach,GABA,NA). 27) des oligonucléotides. 28) des biovecteurs peptidiques du W003/011115 pages 36 à 4:3 30 28) des biovecteurs déjà utilisés pour le SPECT ou le PET, cités dans : WO03/018640, WO 03/020701, WO03/078569, US2003/0152513, WO 03/086475, WO 2005/002293, US 20050048000, WO2004/069365, WO2005/012335, WO2005/044312, WO2005/042033, WO2003/013346, WO2005/023314, WO2005/019247, 14 WO2005/049096, WO2005/049095, WO2005/044313, WO2005/042033, US2004/0210041, US2005/201943, WO2005/082889. 29) des biovecteurs issus des squelettes chimiques désignés scaffolds et décrits dans US 2005/026127. Pour la partie linker du produit, à titre d'exemples on citera les linkers suivants : 1) les acides aminés 2) des liens L capables d'interagir avec au moins un groupe fonctionnel de biovecteur 10 et au moins un groupe fonctionnel du chélate. On citera notamment : a.l (CH2)2 - phenyl - NH , (CH2)3 - NH, NH-(CH2)2-NH, NH-(CH2)3-NH, rien ou une simple liaison a.2 P1-l-P2, identiques ou différents, P1 et P2 étant choisis parmi O, S, NH, rien, CO2, NCS, NCO, SO3H, NHCO, CONH, NHCONH, NHCSNH, SO2NH-, NHSO2-, 15 squarate Avec 1 = Alkylène, alkoxyalkylène, polyalkoxyalkylène, alkylène interrompu par phénylène, alkylidène, alcilidène 3) des liens décrits dans le brevet US 6 264 914, capables de réagir avec les groupes 20 fonctionnels (du biovecteur et du chélate) amino, hydroxyle, sulfhydryle, carboxyle, carbonyle, carbohydrates, thioéthers, 2-aminoalcohols, 2-aminothiols, guanidinyle, imidazolyle, phénolique. Des groupements capables de réagir avec des groupes sulfhydryle incluent les composés alpha-haloacétyle du type X-CH2CO- (où X=Br, Cl ou I), qui peuvent aussi 25 être utilisés pour agir avec des groupes imidazolyle, thioéther, phénol, amino. Des groupements capables de réagir notamment avec des groupes amino incluent : -des composés d'alkylation : composés alpha-haloacétyle, dérivés N-maleémide, composés aryle (nitrohaloaromatiques par exemple), aldéhydes et cétones capables de formation de bases de Schiff, des dérivés époxides tels que l'épichlorohydrine, des 30 dérivés de triazines contenant de la chlorine très réactifs vis-à-vis de nucléophiles, des aziridines, des esters de l'acide squarique, des éthers alpha.-haloalkyle. -des composés d'acylation : isocyanates et isothiocyanates, des chorures de sulfonyle, des esters tels que des nitrophenylesters ou des N-hydroxysuccinimidyl esters, des5 15 anhydrides d'acide, des acylazides, des azlactones, des imidoesters. Des groupements capables de réagir avec des groupes carboxyle incluent des composés diazo (diazoacétate esters, diazoacétamides), des composés modifiant des acides carboxyliques (carbodiimides par exemple), des dérivés isoxazolium (nitrophenylchloroformate, carbonyldiimidazoles...), des dérivés quinoline. Des groupements capables de réagir avec des groupes guanidinyle incluent des composés diones tels que le phenylènediglyoxal, des sels diazonium. 4) certains liens décrits dans le brevet US 6 537 520 de formule (Cr6r7)g-(W)h-(Cr6ar7a)g'-(Z)k-(W)h'-(Cr8r9)g '-(W)h"-(Cr8ar9a)gä avec : -g+h+g'+k+h'+g"+h"+g"' différent de 0; - W choisi parmi 0, S, NH, NHC(=O), C(=O)NH, C(=O), C(=O)O, OC(=O), 15 NHC(=S)NH, NHC(=O)NH, SO2, (OCH2CH2)s, (CH2CH2O)s', (OCH2CH2CH2)s", (CH2CH2CH2O)t ; - Z choisi dans le groupe : aryle substitué par 0-3 rio, cycloalkyle C3-10 substitué par 0-3 rio, système hétérocycle de 5-10 membres contenant 1-4 hétéroatomes indépendamment choisis parmi N, S, O et substitutué par 0-3 rio ; 20 -r6,r6a, r7, r7a, r8, r8a, r9, r9a indépendamment choisis parmi : H, =0, COOH, SO3H, PO3H, C1-05 alkyle substitué par 0-3 rio, aryle substitué par 0-3 rio, benzyle substitué par 0-3 rio, C1-05 alkoxy substitué par 0-3 rio, NHC(=O)r11, C(=O)NH rH, NHC(=O)NH NH ri 1, ri 1, et un lien avec le chélate ; - rio indépendamment choisi parmi : un lien avec le chélate, COOr11, OH, NH r11, 25 SO3H, PO3H, aryle substitué par 0-3 r11, Cl-5 alkyle substitué par 0-1 r12, Cl-5 alkoxy substitué par 0-1 r12, et un hétérocycle de 5-10 membres contenant 1-4 hétéroatomes indépendamment choisis parmi N, S, O et substitué par 0-3 ri 1; - ri i est indépendamment choisi parmi : H, aryle substitué par 0-1 r12, hétérocycle à 5-10 membres comprenant 1-4 hétéroatomes choisis parmi N, S, O et substitué par 0-1 30 r12, C3-10 cycloalkyle substitué par 0-1 r12, polyalkylène glycol substitué par 0-1 r12, carbohydrate substitué par 0-1 r12. - r12 est un lien avec le chélate ; 16 - avec k choisi parmi 0, 1, 2; h choisi parmi 0, 1, 2; h' choisi parmi 0, 1, 2, 3, 4, 5; h" choisi parmi 0, 1, 2, 3, 4, 5; g choisi parmi 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9,10; g' choisi parmi 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10; g" choisi parmi 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10; g"' choisi parmi 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10; s choisi parmi 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9,10; s' choisi parmi 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9,10; s" choisi parmi 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9,10; t choisi parmi 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9,10. 5) certains liens décrits dans le document WO 02/085908, par exemple une chaîne linéaire ou ramifiée de linker choisis parmi : - CR6"'R7"'-, -(R6"')C=C(R7"')=, -CC-, -C(0)-, -0-, -S-, -SO2-, -N(R3"')-, - (R6"')C=N-, -C(S)-, -P(O0(OR3"')-, -P(0)-(OR3"')O-, avec R"'3 un groupe capable de réagir avec un azote ou un oxygène - Une région cyclique (cycloalkyles divalents, hétérocyclyles divalents) - Des polyalkylènes, polyalkylènes glycols 6) des linkers du document W003/011115 pages 124- 125 notamment 0 H2N H2N , NH2 NH2 n H2N NH2 HZN-~N R H2N'ù'-'N~~NH2 OH H2N, NH2 HNNH and H/--\ H2N NH2 o o IrLG IeLG "RR'N. N - NR'R" L "RR'N NR'R" LG -LG R'N" NR' "RR'N NR'R" "RR'N O rtjnLLG R'O2CNCO2R' R:n LG n~LG NN ~~ 0O J R1 Ri~NRI ~N O R'R2 NR1R2 NR'R2 (LG NH~vN/\N R'R2N NRlR2 F42N NA' R2 Le choix des liens (structure et taille) pourra se faire notamment de manière à contrôler notamment la charge, la lipophilie, l'hydrophilie du produit en fonction de l'indication diagnostique recherchée, pour optimiser le ciblage biologique, la biodistribution. On pourra en particulier utiliser des linkers biodégradables in vivo, des linkers PEG ou mini-PEG. Pour la partie chélate du produit, un grand nombre de chélates peuvent être utilisés. On pourra utiliser notamment un chélate linéaire parmi : EDTA, DTPA diéthylènetriaminopentaacétique acide, N-[2-[bis(carboxyméthyl)amino]-3-(4-ethoxyphenyl)propyl]-N-[2-[bis (carboxyméthyl)amino]éthyle]-L-glycine (EOB-DTPA), N,N-bis[2-[bis(carboxyméthyl)amino]éthyle]-L-glutamique acide (DTPAGLU), N,N-bis[2-[bis(carboxyméthyl)amino]éthyle]-L-lysine (DTPA-LYS), des dérivés mono- ou bis-amide du DTPA, tels que N,N-bis[2-[carboxyméthyl[(méthylcarbamoyl)méthyle]amino]éthyle] glycine (DTPA-BMA), 4-carboxy-5,8, 1 1-tris(c arboxym éthyl)- 1 -phenyl-2-oxa-5,8, 1 1-triazatridec an- 13-oic acide (BOPTA), On pourra utiliser notamment un chélate macrocyclique parmi 1,4,7,10-tetraazac yclododecan- 1 ,4,7,10-tetraacetic acide (DOTA), 1,4,7,10- O NH HN R'R2N `NRiR2 RiR2F1 'NRIR2, 18 tetraazacyclododecan-1,4,7-triacetic acide (DO3A), 10-(2-hydroxypropyl)-1,4,7,10-tetraazacyclododecan- 1 ,4,7-triacetic acide (HPDO3A) 2-methyl-1,4,7,10-tetraazacyclododecan-1,4,7,10-tetraacetic acide (MCTA), ( alpha , alpha ', alpha ", alpha "')-tetramethyl-1,4,7,10-tetraazacyclododecan- 1,4,7,10-tetraacetic acide (DOTMA), 3,6,9,15-tetraazabicyclo[9.3.1]pentadeca- 1 (15), 1 1, 1 3-triene-3,6,9-triacetic acide (PCTA). On pourra aussi utiliser des dérivés dans lesquels un ou plusieurs groupes carboxyliques sont sous forme d'un sel, ester, amide correspondant ; ou un composé correspondant dans lequel un ou plusieurs groupes carboxyliques sont remplacés par un groupe phosphonique et/ou phosphinique tel que 4-carboxy-5,11-bis(carboxyméthyl)-1-phényl-12-[(phénylméthoxy)méthyl]-8(phosphonométhyl)-2- oxa-5,8,11-triazatridecan-13-oic acide, N,N'-[(phosphonométhylimino)di-2,1-ethanediyl]bis[N-(carboxyméthyl) glycine], N,N'-[(phosphonométhylimino)di-2,1-ethanediyl]bis[N-(phosphonométhyl) glycine], N,N'-[(phosphinométhylimino)di-2,1-ethanediyl]bis[N-(carboxyméthyl) glycine], 1,4,7,10-tetraazacyclododecane-1,4,7,10-tetrakis[méthylen (méthylphosphonique)]acide, or 1,4,7,10-tetraazacyclododecane-1,4,7,10-tetrakis[méthylen (méthylphosphinique)] acide. On peut aussi utiliser un chélate parmi : DOTA gadofluorines, DO3A, HPDO3A, TETA, TRITA, HETA, DOTA-NHS, M4DOTA, M4DO3A, PCTA et leurs dérivés 2- benzyl-DOTA,alpha- (2-phenethyl) 1,4,7, 10 tetraazacyclododecane- 1 -acetic-4,7,10-tris (méthylacétique) acide, 2benzyl-cyclohexyldiethylenetriaminepentaacetic acide, 2-benzyl-6methyl-DTPA, 6,6"-bis [N, N, N", N"tétra (carboxytnéthyl)aminométhyl)-4'-(3-amino-4-methoxyphenyl)- 2,2' : 6', 2"-terpyridine, N,N'-bis-(pyridoxal-5-phosphate) éthylènediamine- N, N'-diacétique acide (DPDP) et éthylènedinitrilotétrakis (méthylphosphonic) acide (EDTP). De manière plus large, le ou les chélates formant l'entité signal pourront répondre à la formule du document WO01/60416. E E2 E E' Ai/ \Aar \Aar \Ar,~ \A' \E3 E5 " Ee A3 /S 6 A5 Ea E3 A2/ \A3/ \An E6 A' On pourra utiliser en particulier les composés DTPA, DOTA, NOTA, DO3A, et dérivés, notamment : /ù1'-N-1 OO-OX~ O O ÇO x x/c r~N~ \ O Y NO N , Nl C N, f- 0 OXI O~ O X NON IN 1 J N 1~I > N NNI XX LX Y\R VN~ R ~(O R v \- / O \\ ~o N~ 7( X Nn > N~~7 xO X N>X` O R'-- L. L Rte J'i /ù~ \\ `ù\.( O O , and avec X un groupe capable de coordiner un cation métallique, de préférence O-, OH, NH2, OP03-, NHR avec R une chaîne aliphatique. On pourra en particulier utiliser les chélates désignés P730 du demandeur décrits dans EP 661 279 (US 5 919 432) et les chélates à squelette PCTA décrits parle demandeur notamment dans US 6 440 956, que ces chélates ou leurs intermédiaires soient porteurs ou non de chaînes hydrophiles, et en particulier de chaînes aminoalcool courtes ou longues. On citera aussi les chélates rappelés dans WO03/011115 pages 8 à 11 notamment O X NCO n ORT.-cûOR 0 RO'2 "1 RQ O O o O p NI-2 Ro ( RO ( 0 v N.---)OR On pourra aussi utiliser des améliorations des composés suivants déjà mentionnés pour le couplage avec le gallium (HED, IDA (imino diacetique acide), desferroxamine COOH COOH H2 /- CHz H2C N N - -CHz HEBD O 0 (~n0 il-0--sCO2H OH O //O /N /N Y /NH2 H3C (CH2)5 (CH2)5 (CH,), (CH,), (CHZ), N/ N/ ) N/ O OH / OH O OH Tl Hoocù\ r-, / COOH NH H), cou (N H` SH HS SH HSJI Desferrioxamine-B (DFO) 5H MS 1(BAT-TECH) 2 (EC) 3 (EDDA•SS) 4 (4SS) HOOC-' r-\ 2/-COOH 6 (6SS) 7 (TACN-TM) 8(NS3) COOH r SH MS 5 (5SS) 5H 21 On peut aussi utiliser des chélates décrits dans Inorg. Chim. Acta (1995), 75-82 (TACN-TM (1,4,7-tris(2-mercaptoethyl)-1,4,7-triazacyclononane), Bioconj Chem (2002), 1140-1145 (chélate trithiolate tripode), et de manière générale tout chélate capable de former une cage suffisamment stable autour de Ga3+, notamment toute amine aliphatique, macrocyclique ou linéaire, macrocycle amine avec amines tertiaires. Le demandeur s'est intéressé tout particulièrement à des chélates capables de complexer le gallium et possédant au moins une fonction de couplage du chélate à au moins un biovecteur. Pour le choix des chélates, on pourra utiliser des chélates particulièrement appropriés pour le couplage du gallium, en particulier des chélates dont la valeur du log K est assez élevée (log K = ML/(M)(L) avec M le métal et L le ligand qui est le chélate ou le conjugué [chélate+biovecteur], et notamment dont la structure permet de former une loge bien protectrice pour le Ga3+. On utilisera en particulier des complexes tels que le log K est de l'ordre de 20 à 40, notamment de 25 à 35. Le cas échéant, on utilisera un macrocycle porteur, en plus des 3 fonctions acides chargées négativement couplées au Ga3+, d'au moins un groupe protecteur du Ga3+. Par groupe protecteur on entend un groupe capable de protéger ou d'améliorer la coordination du Ga3+ avec les fonctions du chélates (fonctions COOH par exemple). Dans la mesure où la quantité de chélate injectée au patient est très faible, on peut utiliser des chélates à structure assez complexe destinée à assurer la protection du Ga3+, par exemple par assemblage de chélates linéaires ou macrocycliques. On choisira en particulier des complexes plus stables que le complexe gallium III - transferrine (log K= 20.3). Mais dans la mesure où la durée de vie du produit est très courte (environ 1 à 2 heures entre le moment de sa synthèse et la lecture au PET), on pourra choisir des chélates dont le log K est nettement plus faible mais suffisant pour la lecture souhaitée, en prenant en compte le cas échéant des données d'interaction Ga68-transferrine. Les résultats expérimentaux en imagerie PET au Ga68 montrent l'intérêt d'espacer suffisamment la partie chélate de la partie biovecteur. Pour cela, on peut choisir un linker d'assez grande taille. A l'inverse on peut utiliser des biovecteurs de petite taille mais tels que la reconnaissance du biovecteur par sa cible n'est pas altérée de manière 22 gênante. En particulier selon une réalisation on teste la spécificité de reconnaissance avec des linkers comprenant 1 à 5 acides aminés. On a ainsi étudié des complexes (biovecteur-chélate-Ga 3+) dont la spécificité pour la cible est rneilleure en utilisant le gallium plutôt que le technicium ou l'indium, la différence d'affinité pour la cible étant vraisemblablement due à une différence de conformation du complexe en fonction du radionucléide. On a aussi étudié des chélates dont une ou plusieurs fonctions non liées au biovecteur sont couplées avec au moins un groupe destiné à améliorer la reconnaissance du biovecteur pour sa cible ; par exemple on utilise un groupe diminuant la clairance rénale, un groupe interagissant avec une cible voisine de la cible biologique (par exemple ce groupe stabilise la structure du site de reconnaissance du biovecteur), un groupe modifiant le pH, la charge ou d'autres paramètres physico-chimiques tels que l'hydrophilie ou la lipophilie, de manière à améliorer l'affinité du biovecteur pour sa cible et/ou à augmenter la modification du biovecteur s'il s'agit d'un substrat pour une enzyme ou un effecteur intra ou extra cellulaire. Dans la mesure où la préparation du Ga68 dans le générateur s'accompagne de la libération d'impuretés, le demandeur a aussi étudié des composés dont le chélate est capable de complexer le Ga68 mais pas les impuretés résiduelles éventuelles dans la solution de Ga68 sortie du générateur. Le demandeur a par ailleurs étudié des formulations des composés vectorisés marqués au gallium. Ces formulations comprennent d'une part au moins un composé vectorisé marqué au gallium, chaque composé vectorisé comportant au moins un biovecteur couplé à au moins un chélate complexant le Ga68, et d'autre part au moins un additif permettant de stabiliser le composé vectorisé. En particulier, compte tenu de la cinétique et de la stabilité de la complexation du Ga68 par le chélate, il peut arriver que du Ga68 ne soit pas complexé de manière optimale par le chélate du composé chélatebiovecteur-Ga68, d'où un risque de Ga68 libre dans le produit injecté au patient. La formulation administrée au patient comprend à cet effet comme additif de stabilisation un excès de chélate capable de complexer le Ga68 libre. Le chélate en excès peut être le même que le chélate du composé vectorisé, ou un chélate différent à condition qu'il soit approprié pour la complexation du Ga68 libre. Par exemple le chélate du composé vectorisé sera un chélate macrocyclique particulièrement 23 avantageux pour la chimie du gallium, tandis que le chélate en excès dans la formulation sera un chélate linéaire plus simple à fabriquer. Grâce à une telle formulation, on pourra notamment compenser des difficultés de pureté ou de stabilité du produit issues du procédé de préparation rapide retenu. On pourra ainsi utiliser un procédé de couplage du biovecteur et du chélate du produit, par exemple par chauffage, qui soit rapide (inférieur à 20 minutes par exemple) mais qui entraîne un risque de relative instabilité de la complexation du Ga68 par le chélate, ce risque étant toutefois compensé par l'addition de chélate en excès à ce produit. La formulation peut aussi être une formulation ionique notamment de calcium. Le principe général est de répondre à un problème technique particulier issu de l'utilisation du Ga68 pour la préparation des composés vectorisés, notamment du fait de la volonté de préparer un composé rapidement qui peut ne pas permettre une purification ou une stabilisation optimale du produit. Une telle formulation permettra par exemple de pallier l'existence de sous-produits ou de réactifs en excès tels que des amines, des acides. On pourra utiliser aussi différents mélanges de formulation par exemple décrits dans W02005009393 pour la stabilisation face à la radiolyse notamment des biovecteurs (exemples : bloqueurs de radicaux libres, dithiocarbamates, PDTC, composés avec sélénium solubles tels que la sélénométhionine, la sélénocystéine avec le cas échéant du sodium ascorbate, des dérivés capables de réduire des acides aminés oxydés tels que la méthionine, notamment des dérivés thiol de la cystéine., le mercaptoéthanol, le dithiolthréotol). On pourra aussi utiliser des formulations arginine, lysine, polylysines et autres dérivés d'acides aminés cationiques pour limiter la réabsorption rénale. Le demandeur a également recherché des biovecteurs et des chélates tels que leur couplage avec le gallium soit suffisamment efficace et rapide. Par exemple le document WO2004/089425 décrit un procédé avec microondes pour une synthèse et une pureté améliorées du produit qui incorpore le biovecteur et le chélate couplé au Ga68. Le demandeur a examiné l'utilisation de biovecteurs susceptibles d'être sensibles au traitement par microondes. En particulier une méthode de screening consiste à tester la stabilité de biovecteurs d'intérêt diagnostique suite à un traitement microonde. Le besoin demeure de développer des procédés et des dispositifs permettant : 24 - de réduire le temps de préparation et d'améliorer la stabilité du produit en particulier pour des biovecteurs instables au microonde -d'améliorer la pureté du produit - d'augmenter la concentration du produit - d'améliorer la sécurité du patient, notamment par une préparation dans des conditions de stérilité appropriées. Le demandeur s'est ainsi intéressé tout particulièrement à des procédés (thermiques, physico-chimiques, chimiques ...) et des dispositifs, éventuellement déjà utilisés ou utilisables en médecine nucléaire pour d'autres isotopes que le gallium, et dont l'adaptation soit appropriée au cas du Ga68 pour résoudre ces problèmes. Le Ga68 est obtenu par dégradation du Ge68 dont la durée de vie est de 270 jours. Les générateurs de Ge68 sont basés sur l'utilisation d'une matrice qui absorbe le Ge68, le Ga68 étant élué. Toutefois dans les générateurs connus une étape de concentration du Ga68 est nécessaire car le volume élué est trop dilué ; le demandeur a étudié des moyens pour concentrer l'éluat et/ou pour réduire le volume de l'éluat, notamment en améliorant la matrice utilisée. Le demandeur a aussi étudié le moyen de purifier l'éluat de ses impuretés (Ti+ notamment) susceptibles de gêner le couplage avec le chélate, et d'automatiser l'étape de concentration/purification par exemple à l'aide de colonnes de chromatographie, en utilisant un dispositif intégré ou en sortie du générateur. En sortie du générateur, le Ga68 peut être couplé au chélate, le complexe formé étant destiné à être couplé à la partie biovecteur. Selon une variante le chélate a été prélablament couplé au biovecteur afin que cette réaction de couplage n'altère pas la stabilité du chélate avec le gallium. Le cas échéant la préparation du produit comprend une étape d'élimination du gallium en excès qui n'a pas été complexé par le produit. Le cas échéant la solution de Ga68 est rendue moins acide pour faciliter le couplage avec le chélate. En particulier on a recherché des procédés de couplage, d'une durée de moins de 20 minutes, entre d'une part le Ga68 sorti du générateur et d'autre part le composé biovecteur+chélate, les conditions de couplage étant telles que le taux de complexation du Ga68 par le chélate dudit composé soit de plus de 50, de préférence plus de 70, 80,90%, par exemple : 25 - chauffage très rapide à haute température sans altérer la structure du biovecteur, puis refroidissement rapide - pas de chauffage, mais addition d'un catalyseur - chauffage pendant moins de 10 minutes à 50 C, par exemple entre 70 et 100 C , un excès de chélate étant ajouté pour chélater le Ga68 non complexé par le composé biovecteur+chélate. Outre des procédés microondes on peut utiliser tout type de procédé d'activation tel que des procédés à ultrason et argile. Le demandeur a aussi étudié l'utilisation de chélates appropriés pour un procédé de couplage du chélate et du biovecteur dans des conditions qui rte soient pas optimales mais qui suffisent pour la lecture souhaitée. Par exemple, le procédé de couplage comprend un chauffage à une température plus faible que la température optimale, mais suffisant pour une lecture PET efficace. On a aussi recherché tout particulièrement des chélates tels que leur couplage avec le Ga68 soit très rapide et ne nécessite pas un traitement physique et/ou chimique altérant le biovecteur. Ceci est destiné à sélectionner des chélates très intéressants sur ce critère de procédé (rapidité du couplage), à condition que leur complexation du gallium soit suffisante pour l'utilisation en imagerie PET du Ga68. On cherche aussi à optimiser la dose de gallium pour limiter la dose de radiation du patient, tout en ayant une bonne efficacité du produit. La durée d'exposition du patient étant nettement plus courte qu'avec des radionucléides de durée de vie assez longue tel que le technicium ou l'indium, la dose de produit avec gallium injecté peut ainsi être nettement plus élevée qu'avec ces radionucléides. Le demandeur a ainsi étudié des composés efficaces à une dose de radioactivité de l'ordre de 1 à 1000 Curie/mol, notamment 1 à 10, 1 à 100, voire au delà à environ 2000 à 3000 Curie/mol. On pourra aussi faire plusieurs séries de mesure, par exemple à une dose de radioactivité de l'ordre de 0.1 à 1000 Curie/mol par mesure, dans une même session d'imagerie du patient. La radioactivité du produit est par exemple comprise entre 100 et 1000 MBq/nmol. Selon une réalisation, on utilise un kit comprenant le ligand du gallium, c'est à dire le chélate, à coupler au biovecteur ou déjà couplé au biovecteur. Le radiopharmacien ajoute à ce ligand du Gallium la solution stérile de gallium sortie du générateur. 26 Pour améliorer la stérilité du dispositif et le cas échéant répondre à des normes CGMP, on peut lyophilier le ligand (biovecteur couplé au chélate) qui est mis en solution (par exemple à l'aide d'eau stérile et d'un tampon tel que de l'acétate de sodium), solution qui est additionnée par le radiopharmacien à la solution de gallium. D'autres modes de préparation du ligand peuvent être pratiqués, le principe étant d'obtenir une solution de ligand dont les paramètres recherchés (stabilité, réactivité avec le gallium, stérilité ...) sont appropriés pour la complexation du gallium. Par exemple pour des ligands posant des contraintes de faible solubilité dans l'eau avec risque de précipitation, on peut utiliser du DMSO et des excipients appropriés. Pour ce qui est du générateur lui-même on recherche des dispositifs améliorant la miniaturisation et la stérilité tels que décrit dans WO2005/084168, par exemple avec collecte de la solution de gallium sortie du générateur dans un conditionnement vide préstérilisé, le conditionnement rempli de la solution de Ga68 étant ensuite utilisé avec le kit d'administration comprenant le ligand. En particulier, on cherche à assurer une stérilité du générateur pendant toute sa durée de vie, qui est de voisine de celle du Germanium, donc d'environ un an. On étudie aussi des systèmes automatisés et de préférence stériles comprenant par exemple : -une partie de production du Ga68 (générateur de Ga68 produisant une solution de Ga68, et le cas échéant des moyens de concentration, des moyens de stérilisation de la solution de Ga68, des moyens de collecte de la solution stérile de Ga68) -une partie de couplage de la solution de Ga68 avec le ligand du Ga68 (biovecteur + chélate) à la sortie de laquelle est récupérée la solution de produit à injecter au patient ; le cas échéant cette partie comprend une solution d'additifs de stabilisation (pH, chélate en excès, groupes protecteurs ...) et des moyens de chauffage/refroidissement ; - le cas échéant une partie d'administration de la solution de produit prêt à l'injection. Le procédé de préparation inclut de préférence un aspect de radioprotection des personnes, ce qui est obtenu par exemple par l'utilisation de dispositifs de conditionnement et/ou d'injection (seringues par exemple) appropriés. 27 Concernant plus particulièrement les méthodes d'imagerie des composés étudiés, On pourra par ailleurs coupler l'imagerie PET au Ga68 à certaines modalités spécifiques d'imagerie IRM. En particulier, la combinaison du PET (ou PET CT avec le PET pour l'imagerie fonctionnelle et le scanner CT pour l'imagerie anatomique) et de IRM permet de combiner la très forte sensibilité du PET (mais avec une résolution moins bonne que l'IRM) à la très forte résolution de l'IRM (mais avec une sensibilité moins bonne que le PET). Pour améliorer le contraste, on pourra administrer de manière simultanée ou différée dans le temps au moins un produit de contraste pour PET, de préférence au Ga68, qui permet de détecter sur le corps entier toutes les zones tumorales et métastases, et au moins un produit de contraste pour IRM destiné à visualiser avec une forte résolution une ou plusieurs zones détectées avec le PET. Dans certaines indications onpourra préférer d'autres isotopes au gallium. Des procédés automatisés seront particulièrement avantageux pour une telle combinaison d'imagerie, pour optimiser l'administration, la lecture et l'analyse d'images, en utilisant le cas échéant des injecteurs automatiques de produits de contraste. On pourra par exemple en fonction des résultats de la détection au PET zoomer automatiquement vers une ou plusieurs zones d'intérêt repérées avec le PET, avec ou sans injection de produit de contraste. On pourra utiliser par exemple un produit de contraste spécifique vectorisé pour PET au Ga68, et un produit de contraste vectorisé pour IRM au Gadolinium, les biovecteurs étant identiques ou différents, avec par exemple le biovecteur du produit PET étant capable de localiser une angiogenèse dans l'ensemble des tumeurs, et le biovecteur du produit IRM étant capable d'étudier avec précision la localisation et/ou la caractérisation de la progression de zones tumorales spécifiques dans différents territoires biologiques. Comme produit de contraste IRM, on pourra aussi utiliser un produit de type BPA (blood pool agent) non vectorisé pour analyser des zones tumorales avec précision grâce à la haute résolution. Comme produit de contraste au scanner CT on pourra utiliser des radioisotopes pour CT, des produits iodés connus tels qu'un monomère, un dimère ionique ou non ionique, un mélange d'un monomère et d'un dimère non ionique. On pourra aussi utiliser des produits de type liposomes de produits RX ou IRM, tels que de iohexol, de gadotéridol, décrit notamment dans Investigative radiology, vol 41, n 3, 339-348, 2006. Selon une réalisation on préparera une 28 composition de diagnostique comprenant au moins un agent de contraste au gallium détectable en PET tel que décrit dans la demande et au moins un agent de contraste détectable en IRM ou au moins un agent de contraste détectable au scanner CT. Avantageusement, on peut aussi utiliser en co-administration (simultanée ou différée dans le temps) un agent capable d'augmenter l'accessibilité à la tumeur d'un produit de contraste en particulier au Ga68 et/ou la durée de passage du produit de contraste dans la tumeur. De tels agents peuvent agir par exemple en augmentant la perméabilité vasculaire dans la zone tumorale (périphérique et/ou intra-tumorale), de manière à davantage faire pénétrer le produit de contraste dans la tumeur, ou en diminuant la pression des fluides interstitiels dans la tumeur (le produit de contraste a davantage de temps pour pénétrer à l'intérieur de la tumeur). On utilise en particulier des agents dits furtifs capables d'agir très rapidement sur ces mécanismes, et éliminés rapidement de leurs zones d'action ce qui permet à la fois une amélioration du diagnostique et une non toxicité. On peut aussi coupler l'imagerie PET tumorale à une imagerie de diffusion ou de perfusion étudiant les différences de diffusion ou la perfusion de composés ou de diffusion de l'eau dans les zones malades/saines, en faisant intervenir le cas échéant des produits de contraste PET ou IRM. On aura par exemple les étapes suivantes : - éventuelle première mesure au scanner ou à l'IRM, avant l'injection de produit de contraste - mesure au PET suite à l'injection d'un produit de contraste au Gallium - analyse des données du PET pour identifier des zones d'intérêt, notamment des zones pathologiques pour lequel le diagnostique pourra être plus approfondi - de manière programmée ou en fonction de cette analyse, injection de produit de contraste au gadolinium pour IRM, dans une ou plusieurs zones d'intérêt - mesure à l'IRM suite à l'injection de produit de contraste pour IRM -éventuelle nouvelle administration de produit de contraste. Pour optimiser le débit et la dose de produit de contraste à injecter, on pourra utiliser et paramétrer un injecteur automatique qui est capable d'intégrer les résultats de l'analyse des données d'une mesure préalable effectuée avec ou sans produit de contraste et d'optimiser le débit et la dose de produit de contraste. 29 Plus précisément on utilisera par exemple une installation PET/IRM ou PET/CT ou PET/CT/IRM comprenant : - un module PET capable de faire des mesures PET - le cas échéant un module IRM capable de faire des mesures IRM - le cas échéant un module CT capable de faire des mesures CT - un module d'analyse comprenant d'une part un module de réception des données du signal émis par le module de mesure (PET, IRM, scanner RX ...) suite à une mesure avec ou sans administration de produit de contraste, et d'autre part un module de traitement de ces données capable de convertir ces données en un signal de commande d'un ou plusieurs injecteurs en leur donnant des instructions concernant les paramètres d'administration de produit de contraste - un ou plusieurs injecteurs comprenant un module de réception des instructions du module d'analyse, et un module d'injection commandé par le module de réception et relié au patient pour lui administrer la dose de produit de contraste adapté. Parmi les données analysées par le module d'analyse, on citera les courbes de rehaussement et les mesures de relaxivité liées à l'indication diagnostique étudiée, des paramètres physico-chimiques, des données biologiques du patient susceptibles d'avoir un impact sur l'injection. L'analyse peut se faire par exemple en regard de modèles comportementaux des produits de contraste en fonction de la catégorie de produit utilisé, et le cas échéant à l'aide d'indices de confiance associés à des cartes paramétriques calculées. Ces données sont par exemple comparées à une base de données interne de l'installation exploitant les résultats obtenus par un logiciel de compilation de données cliniques. On peut aussi étudier combiner des informations anatomiques IRM ou CT à des informations d'imagerie fonctionnelle PET lors de l'analyse d'image, l'analyse étant rapportée au volume de l'anomalie. Selon un aspect l'invention concerne ainsi un système automatisé comprenant un dispositif de préparation d'une solution injectable de produit de contraste au gallium, une partie d'administration de l'administration de ladite solution, et le cas échéant des 30 moyens de commande de cette administration en fonctions de données biologiques ou de données d'imagerie du patient. L'invention concerne aussi une installation d'imagerie médicale (et le procédé d'imagerie associé) comprenant : - un dispositif d'imagerie capable d'effectuer des mesures de paramètres d'imagerie avec ou sans injection de produit de contraste - un dispositif d'injection de produit de contraste reliée au patient, le dispositif pouvant être un injecteur automatique à seringues ou à poche - le cas échéant un dispositif d'analyse et de commande du dispositif d'injection en 10 fonction d'une première mesure effectuée suite à l'administration d'un produit de contraste notamment lorsque le produit de contraste est un produit radiomarqué au gallium Le dispositif est de type PET/CT, PET/IRM ou PET/CT/IRM. Le cas échéant on effectue une mesure IMR et ou au scanner CT à l'aide d'un produit 15 de contraste approprié, puis une mesure PET avec le produit au gallium. La description détaillée qui suit décrit des exemples de composés appropriés notamment des complexes métalliques de gallium de formule : oyo ;,N Iinker biovecteur C Ga D O O â ~O avec : Iinker ù biovecteur biovecteur 20 - biovecteur une molécule pharmacologiquement active, notamment un peptide. - Linker choisi parmi : (CH2)n, (CH2)n-CO-, N H, avec n=1 à 5, avantageusement n=2 à 5 N H 25 (CH2)n Exemples PARTIE I : Exemples de chélates macrocycliques et de biovecteurs couplés à des 5 chélates. Exemple 1 : chélate squelette DOTA Etape 1 : Ester benzylique de l'acide 5-(1,3-Dioxo-1,3-dihydro-isoindol-2-yl)-2-(1,4,7, 10tétraaza-cyclododéc-l-yl)-pentanoique 55 g de cyclen base (320 mmol) sont dissous dans 550 mL de CH3CN, auxquels sont ajoutés goutte à goutte 119.8 g de dérivé bromé (2-Bromo-5-(1,3-dioxo-1,3-dihydroisoindol-2-yl)-pentanoic acid benzyl ester, 288 mmol) dissous dans 550 mL de CH3CN .Le milieu est agité à température ambiante 1 nuit. Le précipité est Filtré et lavé 15 abondamment à l'acétonitrile. Obtention de 138 g de produit sous forme d'une poudre blanche (rendement corrigé 81.3 %). CCM : CH2Cl2/ MeOH / NH4OH à 25% (80/40/3) Révélation UV et CuSO4 Rf: 0,3 20 Etape 2 : Ester benzylique de l'acide 5-(1,3-Dioxo-1,3-dihydro-isoindol-2-yl)-2-(4,7, 10-tris-éthoxycarbonylméthyl-1,4,7,10tétraaza-cyclododéc-1-yl)pentanoique , HBr 31 10 o''''-- o J N, , HBr A une solution de 59.1 g d'ethylbromoacétate (Aldrich , 358 mmol) dans le CH3CN (1.1 1), sont additionnées 60 g du composé obtenu à l'étape 1 (102 mmol) et 50.1 g de Na2CO3 (464 mmol). Le milieu réactionnel est chauffé à 80 C sous couverture d'argon pendant une nuit. Après élimination du précipité, le filtrat est concentré et lavé abondamment au CH3CN. Le produit est cristallisé dans CH3CN par ajout goutte à goutte d'Et2O. Obtention de 89. 8 g de produit sous forme d'un solide blanc (rendement corrigé 100 %). CCM : CH2C12 / MeOH (9/1) Révélation UV et KMnO4 Rf : 0,4 Etape 3 : Acide 5-Amino-2-(4,7,10-tris-carboxyméthyl-1,4,7,10tétraaza-cyclododéc-1-yl) -pentanoique Dans le réacteur de 5 litres, on chauffe au reflux une solution de 54 g de composé obtenu à l'étape 2 (64 mmol) dans l'acide chlorhydrique 37 % (1.8 1), pendant une nuit. Après refroidissement et filtration, le filtrat est concentré et purifié sur silice silanisée (élution à l'eau). Après évaporation sous pression réduite, le produit est lavé à o oHHOO OT OH HOMO N N CN N~ 33 l'éther. Obtention de 45 g de produit sous forme d'un solide blanc. Le produit est désalifié par passage sur résine OH On isole 30 g de produit sous forme de cristaux blancs (rendement 100 %). HPLC : Hypercarb 51.4 200X4.6, 250À Solvant A : acide sulfurique 0.037 N Solvant B : CH3CN Détection UV à 201 nm Tr : 18 min. Etape 4 : Complexe de gallium de l'Acide 5-Amino-2-(4,7,10-tris-carboxyméthyl-1,4,7,1 Otétraaza-cyclododéc- l -yl) -pentanoique 1 mg du composé obtenu à l'étape 3 (2.17 nmol) sont dissous dans 7 L d'eau et le pH est ajusté à 5.5 par ajout d'acide chlorhydrique 6 N. On ajoute 0.920 mg de Gallium Nitrate nonahydrate (2.2 mol), et chauffe à 80 C le milieu réactionnel. Le pH de la solution doit être maintenu vers 5 par microajout d'acide chlorhydrique 6 N. Après deux heures, le pH se stabilise. Le léger trouble est filtré sur filtre Whatman et le filtrat est concentré. Obtention de 1.2 mg de produit sous forme de paillettes blanches (rendement corrigé 100 %). HPLC : Hypercarb 51a, 200X4.6, 250À Solvant A : acide sulfurique 0.037 N Solvant B : CH3CN Détection UV à 201 nm Tr : lO min. Etape 5 : Complexe de gallium de l'Acide 5-(2-Ethoxy-3,4-dioxo-cyclobut-lénylamino)-2-(4,7,10-tris-carboxyméthyl-1, 4,7,10tétraaza-cyclododéc-l-yl)pentanoique 1 mg de composé obtenu à l'étape 4 sont séchés par distillation azéotropique au toluène, puis mis en suspension dans 5 l de DMSO anhydre sous couverture d'argon. 0.5 l de Et3N séchée sur tamis et 0.8 mg de diéthylsquarate (Aldrich , 2.5 éq.) sont ensuite ajoutés. Le milieu est agité à température ambiante sous couverture d'argon pendant 1 heure. Le mélange est précipité dans l'éther. Le solide obtenu est filtré, puis lavé au dichlorométhane. Après filtration et séchage, 0.98 mg d'un solide blanc (rendement de 81 %) sont récupérés. HPLC : Symmetry C18, 5g, 250X4.6, 100À A: eau TFA, pH = 2.7 B : CH3CN Détection à 201 et 254 nm Tr : 19,8 min. Exemple 2 : Couplages des peptides : Séquence P M men mg Asp(tBu)-Ala-His(trt)-Ser(tBu)-Phe-Ser(tBu)OH 1073,31 172 Leu-Ile-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Pro-Phe-OH 945,22 151 Pro-Gly-Asp-(tBu)-Leu-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-OH 1008,25 161 Gly-Asp(tBu)-Ala-His(trt)-Ser(tBu)-Phe-Ser(tBu)OH 1130,36 180 y-Abu-Asp(tBu)-Ala-His(trt)-Ser(tBu)-Phe-Ser(tBu)OH 1158,42 185 8-Amino-3,6-dioxaoctanoyl- Asp(tBu)-Ala-His(trt)-Ser(tBu)-Phe- 1218,47 195 Ser(tBu)OH 20 35 Etape 1 : Couplage des peptides N 1, 2, 3, 4, 5 ou 6 sur le dérivé squarate Le composé obtenu à l'étape 5 de l'exemple 14 (100 g, 1.53 10"7 mole) est dissous dans 15 l de solution aqueuse de Na2CO3 pH 9,4. Le peptide protégé (1,6 10-7 mole ) est introduit en maintenant le pH à 9,4 par ajout de Na2CO3 . Si le peptide n'est pas soluble dans l'eau quelques microgouttes de DMF sont ajoutées jusqu'à dissolution complète. Après 48h de réaction à température ambiante, le milieu est précipité dans un mélange éthanol/éther éthylique. Le précipité est filtré puis Séché. Etape 2 : déprotection Le composé obtenu à l'étape 1 est dissous dans un mélange de 10 de TFA/TIS/H20 dans les proportions 90/5/5. Le milieu est agité 5h à température ambiante puis le solvant est évaporé sous pression réduite. Le résidu est repris dans l'éther éthylique et le précipité est filtré puis séché. Le produit est ensuite purifié par HPLC préparative sur une colonne Symmetry avec un éluant constitué d'eau/TFA PH 3/ CH3CN N Structure PM 1 1(0 1267.9 , c..'V.~1 M H N M , ,ço,, C O , 0 . N) 2 1350.22 "" @ 1248.94 1324.95 5 1353.00 ow o o o 1413.06 20 25 30 36 Exemple 3a : squelette PCTA OH NH1 HO NH4OH On prépare une solution contenant 0.10 mmol d'ammoniac clans 20 L d'eau. On ajuste le pH à 6 avec HC1. On ajoute à la solution précédente 1.8 mg de complexe de gallium de l'acide 3,6,9,15-tetraazabicyclo[9,3,1]pentadeca-1(15),11,13-triene-3,6,9-tri (a-glutarique), 0.2 mg d'HOBT, 2.5 mg d'EDCI et 15 L de dioxane. On ajuste le pH à 6. Après 24h, on concentre le milieu réactionnel à environ 7mL. On précipite le milieu réactionnel dans 70 L d'éthanol + 20 L d'éther. Le solide est filtré puis purifié par chromatographie sur silice silanisée RP2 en éluant à l'eau. On obtient 1.2 mg de produit. Exemple 3b : squelette DO3A OH \ v 1 N NH OH H Ga j OH HO~iN N Il N~ O OH O , O O O O 11 On prépare une solution contenant 0.26 mg de 3-amino-propane-1,2-diol dans 64L d'eau. On ajuste le pH à 6 avec HC1. On ajoute à la solution précédente 0.5 mg de complexe de gallium de l'acide 2-[4,7-Bis(1,4-dicarboxy-butyl]-1,4,7,10tetraazacyclododec-1-yl]-hexanoïque. On ajuste à nouveau le pH avant d'ajouter 0,071 mg de sulfo-NHS et 0,062 mg d'EDCI. Le pH est contrôlé et ajusté à 6 avec NaOH 2N. Après une nuit à TA, le milieu réactionnel est concentré à environ 2m1 puis précipité dans 10ml d'éthanol. Le solide est filtré, lavé à l'éthanol et l'éther diéthylique puis purifié sur silice silanisée RP2 avec une élution à l'eau uniquement. On obtient 0.2 mg 25 de produit. O ov- HOJ k G~ HOIl C N,ä/-äy" O O p0 â H2N'~OH OH EDCI /NHS 5 37 Exemple 4 : squelette NOTA Complexe de Gallium de l'Acide2-(4,7-Bis-carboxymethyl-[ 1,4,7]triazonan-l-yl)-5-(2-éthoxy-3,4-dioxo-cyclobut-l-énylamino) -pentanoique Ce composé est préparé selon le schéma de synthèse suivant au départ de triaza-1,4,7-cyclononane commercial selon les modes opératoires décrits à l'exemple 1. + O OC Nù) _ O N O O O rj'OH HO N Z U HO NH, O O N's. 0- NGa N O O H 10 Exemple 5 Le composé obtenu à l'exemple précédent est couplé selon le mode opératoire décrit à l'étape 1 de l'exemple 2 à une série de peptides dont la séquence est donnée à O 10 15 20 25 30 l'exemple 2. La déprotection est conduite selon la méthode décrite à l'étape 2 de l'exemple 2. N Structure PM O 1 N 1167.80 lem/ , O N H H N x or H "T IIII ~oH 2 ~ 1250.12 O--I NGa N: O N 0 4 @ 3 1148.84 4o_ ; 1224.85 ~ 0 1252.91 rä ~wN Seo 6o_ 1312.96 y ,, Exemple 6 Etape 1 : Ester diéthylique de l'acide 2-(3,6,9,15-Tétraaza-bicyclo[9.3.1] pentadéca- 1(15),11,13-trién-3-yl)-pentanedioique 10 mg de 3,6,9,15-Tetraaza-bicyclo[9.3.1]pentadéca-1(14),11(15),12-triéne (48.5 mol) sont dissous dans un mélange eau-acétonitrile (170 L d'acétonitrile et 7 L d'eau). Après ajout de 10 L de TEA (1.4eq) le mélange est chauffé à 50 C puis 13 mg de bromoglutarate d'éthyle (leq) sont ajoutés. Le milieu est agité 18h à 50 C. L'acétonitrile est évaporé et le résidu repris au dichlorométhane est lavé à l'eau (100 mL). La phase organique est séchée sur sulfate de magnésium anhydre et évaporée à sec. Huile brune. Rendement 58% SM : 393.20 en ES+ Etape 2: Ester diéthylique de l'acide 2-(6,9-Bis-éthoxycarbonylmethyl-3,6,9,15-tétraaza-bicyclo [9.3.1 ]pentadéca-1(15),11,13 -trién-3-yl)-pentanedioique oyo - o N N o çNJ 9.5 mg du composé obtenu à l'étape 1 (24 mol) sont mis en solution dans 200 L d'acétonitrile avec 8.2 mg de Na2CO3 ( 4.5 eq). Le mélange est porté au reflux et le bromoacétate d'éthyle (9.8 mg , 3.4 eq) est ajouté rapidement. Le milieu réactionnel est porté à reflux pendant 18h. Les sels sont filtrés et le solvant évaporé. Huile brune. Rendement quantitatif. SM : 565 en ES+ Etape 3 : acide 2-(6,9-Bis-carboxyméthyl-3,6,9,15-tétraaza-b:icyclo[9.3.1]pentadéca-20 1(15),11,13-trién-3-yl)-pentanedioique OOH Hoy Ç N N oH N. ) ,,y, OH 15 mg du composé obtenu à l'étape 2, (26.5 mol) sont dissous dans 40 L d'éthanol et 53 L de soude 5N sont ajoutés goutte à goutte rapidement. Le mélange est porté à reflux pendant 24h. Le milieu réactionnel est dilué 10 fois à l'eau puis le pH est ajusté 25 à 6.5 par addition de résine faiblement acide. La résine est filtrée et lavé à l'eau. Une 5 40 résine fortement basique est ajoutée au filtrat puis filtrée et lavée deux fois à l'eau. Le produit est élué avec de l'acide acétique 50%.Après évaporation à sec, le produit est obtenu sous la forme de cristaux bruns. m= 8 mg rendement = 60%. SM : 453.2 en ES+ Etape 4 : Complexe de Gallium de l'acide 2-(6,9-Bis-carboxyméthyl-3,6,9,15-tétraazabicyclo[9.3.1 ]pentadéca-1(15),11,13-trién-3-yl)-pentanedioique Selon le mode opératoire de l'étape 4 de l'exemple 1. Poudre blanche. Rendement 10 quantitatif. SM : 518 en ES- Exemple 7 Le composé obtenu à l'exemple précédent est couplé selon le mode opératoire décrit à l'exemple 2 à une série de peptides dont la séquence est donnée à l'exemple 2. La 15 déprotection est conduite selon la méthode décrite à l'étape 2 de l'exemple 2. N Structure PM o 1 OT/ G,,'.. NNV NN "N"NOM 1163.81 /\/LN ro. O , ~11 l' 2 NGâ N x x, 1246.13 3 N 1144.85 o~NGa \N~y r`xN I "~ô~~H~o" NG aN\ 1220.86 1248.92 6 ' 1308.97 20 PARTIE II : Exemple de couplage des chélates avec le gallium. Exemple avec radiomarquage au 68Ga d'un composé chélate-biovecteur (5-100 nmol chélate-peptide), avec activation microonde 1 minute à 100 w tel que décrit dans W02004089425. 25 Exemple : -Addition d'acetate de sodium Ga68 à l'éluat du générateur Ga-Ge avec ajustement du pH de l'éluat à 5.5. - Addition du composé chélateûbiovecteur - activation au microonde 30 -refroidissement à température ambiante 10 15 REVENDICATIONS 1. Méthode de sélection de composés efficaces en imagerie PET du gallium Ga68 5 comprenant : - la sélection de biovecteurs B ayant une affinité au moins micromolaire, de préférence nanomolaire, à partir d'une base de molécules pharmacologiques actives - la sélection de chélates Ch ayant avec le gallium 68Ga3+ une constante d'affinité log K d'au moins 10, et de préférence d'au moins 20, 25, 30, 35, dans une banque de 10 chélates linéaires ou macrocycliques - le sélection de liens chimiques L destinés au couplage d'au moins un biovecteur avec au moins un chélate - la synthèse des composés (B- L û Ch) - la synthèse des composés (B û L û Ch -Ga68) par complexation du composé (B- L - 15 Ch) avec le Ga68 l'imagerie PET du composé (B û L û Ch - Ga68). 2. Méthode selon la revendication 1 caractérisée en ce que la base de molécules pharmacologiques actives est une banque de biovecteurs utilisés pour l'imagerie 20 SPECT. 3. Méthode selon la revendication 1 caractérisée en ce que la base de molécules pharmacologiques actives est une banque de biovecteurs utilisés pour l'imagerie PET au F18. 4. Produit vectorisé utilisable en imagerie PET au gallium Ga68, obtenu par un procédé selon la revendication 1 ou 2. 5. Procédé de préparation de composés efficaces en imagerie PET du gallium Ga68 30 comprenant : la synthèse d'un composé (B - Ch) par couplage d'un biovecteur à un chélate linéaire ou macrocyclique 25 la complexation du composé (B-Ch) avec le gallium Ga68 en moins de 20 minutes 6. Composé destiné à l'imagerie PET au gallium 68 comprenant un biovecteur B et un chélate capable de complexer le Ga68, le chélate comportant au moins une partie de masquage du chélate in vivo, notamment un groupe hydrophile, de manière à ne pas altérer l'affinité du biovecteur avec sa cible biologique. 7. Composé destiné à l'imagerie PET au gallium 68 comprenant un biovecteur B et un chélate capable de complexer le Ga68, le chélate comportant en outre une partie de reconnaissance d'une cible biologique améliorant la biodistribution du composé et/ou le transport du composé, ladite partie de reconnaissance étant différente du biovecteur. 8. Composition diagnostique sous forme d'une solution injectable comprenant un composé selon l'une des revendications précédentes obtenu par un procédé selon l'une des revendications 1 à 6. 9. Kit d'administration d'un produit marqué au gallium comprenant un composé selon l'une des revendications 1 à 4. 10. Système automatisé comprenant un dispositif de préparation d'une solution injectable selon la revendication 8, et une partie d'administration de l'administration de ladite solution, et le cas échéant des moyens de commande de cette administration en fonctions de données biologiques ou de données d'imagerie du patient. 25 11. Installation d'imagerie médicale comprenant : - un dispositif d'imagerie capable d'effectuer des mesures de paramètres d'imagerie avec ou sans injection de produit de contraste - un dispositif d'injection de produit de contraste reliée au patient, le dispositif pouvant 30 être un injecteur automatique à seringues ou à poche - le cas échéant un dispositif d'analyse et de commande du dispositif d'injection en fonction d'une première mesure effectuée suite à l'administration d'un produit de contraste 10 44 12. Installation selon la revendication 11 dans laquelle le produit de contraste est un produit radiomarqué au gallium 13. Installation selon la revendication 11 dans laquelle le dispositif est de type PET/CT 14. Installation selon la revendication 11 dans laquelle le dispositif est de type PET/IRM ou PET/CT/IRM. 15. Complexe métallique de gallium de formule chélate - linker-biovecteur, chélate étant choisi parmi les squelettes DTPA, DOTA, NOTA, DO3A, PCTA et leurs dérivés, notamment les complexes de formule : o ùq -N linker ù biovecteur C Ga N, , ~o )% linker -- biovecteur NGa N linker biovecteur o o 15 avec : - biovecteur une molécule pharmacologiquement active, notamment un peptide. - Linker choisi parmi : (CH2)n, (CH2)n-CO-, , avec n=1 à 5 (CH2)n 20 16. Composition de diagnostique comprenant d'une part un agent de contraste au gallium détectable en PET selon l'une des revendications 4, 6, 7, 15, et d'autre part un agent de contraste détectable en IRM ou un agent de contraste détectable au scanner 25 CT.