FR 2894829 A1 20070622 FR 0512908 A 20051219 Nouveau procede d'extraction de principes actifs et 1'utilisation de ceux-ci en therapeutique L'invention se rapporte au domaine de la chimie et plus particulierement au domaine de la pharmacotechnie. Elie a plus particulierement pour objet un nouveau procede d'extraction de principes actifs au depart de plantes riches en flavonoIdes et en diacylphloroglucinols, dont l'oxydabilite presente un inconvenient majeur pour leur conservation au stockage et pour leur utilisation pharmaceutique. L'invention concerne plus specifiquement un procede d'extraction et de concentration en principes actifs sous une forme stable et enrichie en un ou plusieurs principes actifs, au depart de sommites florales de Millepertuis (Hypericum perforatum). 20 Le millepertuis est en effet une plante medicinale dont les proprietes tranquillisants et anti-stress sont de mieux en mieux connues en raison de nombreux travaux scientifiques recents, notamment les publications intervenues dans differents pays europeens 25 comme it est frequent en phytotherapie. Selon la litterature (voir notamment USP 6 280 736), l'effet general anti-depressif du millepertuis ne peut pas are attribue avec certitude a un ou plusieurs composants determines, mais it apparait 30 clairement que parmi ceux-ci, les hyperforines fournissent un apport considerable a la mise en place de cette efficacite (cf. EP-A-0599 307) sans doute superieur a celui des hypericines de formule (I) : 10 15 OH 0 OH OH 0 OH I1 s'agit de molecules tres oxydables et facilement labiles. La drogue medicinale brute est formee des parties aeriennes d'Hypericum perforatum qui contiennent entre autres des composes du type hypericine et des composes du type hyperforine (cf. J. Holzl et al Pharmajentische Zeitung 139 (46) 3959-3977 (1994)). Une preparation d'extrait de Millepertuis ayant une teneur plus elevee en hypericine est decrite dans le brevet allemand DE-1569849 ainsi que dans S. Niesel et H. Schilcher Arch. Pharm. 323 (1990) 755. Cependant le probleme de la conservation de ces principes actifs a ete pose par R. Berghofer et J.Holzl dans Deutsche Apotheker Zeitung 126 (47) (1987) 2569-2573 qui ont constate que 1'hyperforine dans les extraits de Millepertuis, etait completement degradee apres une semaine, bien qu'elle devrait are plus stable dans des extraits obtenus a partir de plantes fraiches. Ces auteurs emettent 1'hypothese que les plantes fraiches contiennent un agent stabilisant pour 1'hyperforine mais dont 1'efficacite serait de courte duree. C'est pourquoi les auteurs concluent qu'aussi bien dans la drogue que dans les extraits conventionnels de Millepertuis, la teneur en Hyperforine diminue d'une maniere spectaculaire allant jusqu'a la disparition de la dite substance en 1'espace de quelques mois lors du stockage conventionnel (Marsenbacher P. These de Doctorat (1991), Tubingen). Ces auteurs ont preconise le stockage de la plante sous argon par addition d'antioxydants (octyldodecanol, BHT, BHA) pour ameliorer la stabilite des extraits. (I) Deja les extractions des Millepertuis par des solvants conventionnels comme 1'eau et 1'alcool, conduisent a des compositions pharmaceutiques qui contiennent moins de 1 % d'hyperforine. Au cours du stockage, cette valeur diminue d'une maniere evidente et peut meme s revenir a zero en fonction des conditions de stockage par suite de phenomenes d'oxydation qui decomposent l'hyperforine. Selon le brevet US n 6.280.736, ce probleme pourrait 10 'are resolu par addition aux extraits de Millepertuis, d'agents antioxydants et/ou d'agents stabilisants qui fixent 1'oxygene ou encore d' agents reducteurs. Le deposant de ce brevet recommande egalement d'operer 1'extraction sous atmosphere inerte et/ ou a 1'abri de la lumiere ou encore en procedant a 1'extraction a 1'aide d'un solvant presentant 15 une teneur reduite en oxygene. Une autre methode de preservation de 1'hyperforine est celle decrite par Orth HC, Rentel C et Schmidt PC dans J. Pharm. 20 Pharmacol (1999) 51 193-200 qui recommandent 1'elimination des peroxydes a chaque etape de l'extraction. Ces auteurs concluent en indiquant que la conservation A. 30 C sous atmosphere normale et a - 20 C, 4 C et 20 C sous azote et encore dans 1'azote a -196 C n'a pas donne de resultats differents en ce qui concerne la stabilite de 25 1hyperforine et que le procede de conservation a -70 C sous azote fournissait de meilleurs resultats pour un stockage a long terme. Le meme probleme se pose pour des preparations topiques 30 d'extrait de Millepertuis, notamment sous forme de gels comme agent cicatrisant ou anti-viral (cf. US publication 2004/0137 088). Le probleme de la stabilite des hyperforines a egalement ete envisage en realisant des hyperforines synthetiques decrites dans le brevet US (Indena) 6.656.510. 35 Les hyperforines correspondent a la formule (II), hyperforine : R = CH3 adhyperforine : R = CH2-CH3 et dans laquelle R~ est un radical acyle ou de l'hydrogene. Elles sont decrites comme 'tant plus stables et plus actives dans les tests d'action anti-depressive. Cette methode d'hemisynthese necessite 1'extraction de l'hyperforine a partir de Millepertuis par un gaz supercritique pour obtenir une huile riche en hyperforine. Cependant les rendements d'esterification sont particulierement faibles. Par ailleurs, 1'extraction par fluide supercritique est une operation delicate necessitant un appareillage resistant aux tres hautes pressions et aux temperatures 'levees. On a egalement decrit des produits d'hydrogenation de la chaine allylique des hyperforines. Les composes cetoniques hexahydro et octahydrogenes resultant s'enolisent pour donner des enolates metalliques ou des esters d'enol (voir brevet PCT n 03/091191 et n 99/64 388). C'est pourquoi malgre un interet therapeutique toujours croissant, les extraits de Millepertuis n'ont pas et' utilises jusqu'ici dans une mesure correspondante en raison de la facile decomposition des principes actifs et de la perte d'activite progressive qui en resulte. Le procede selon l'invention vise a ameliorer les procedes deja decrits et a conduire a des extraits de Millepertuis plus stables donc plus actifs. Le procede selon l'invention vise egalement a obtenir des extraits plus riches en hyperforines et appauvris en derives d'hypericine. D'une maniere plus generale, l'invention se rapporte a de nouveaux procedes d'extraction de plantes, plus specialement celles contenant des iridoides, des derives quinoleiques et particulierement des acylphloroglucinols, des flavonoides et des naphtodianthrones, comme dans 1'Hypericum perforatum, qui permettent d'obtenir des extraits stables et pharmaceutiquement acceptables, enrichis en hyperforine et appauvris si possible en derives d'hypericine. Ces procedes d'extraction se caracterisent principalement par une recherche de pH des milieux d'extraction ou les actifs sont les plus stables et permettent d'obtenir apres sechage par deshydratation sous vide a basse temperature sur zeolites, procede egalement appelee zeodratation, des extraits sous la forme d'une poudre cristalline. Ces procedes permettent d'augmenter les taux d'hyperforine dans les extraits de plante obtenus et de conserver ou meme de diminuer les taux de pseudohypericine et d'hypericine. Ces extraits sont conserves soit sous forme de poudres cristallines lorsque 1hyperforine est sous sa forme salifiee par un sel metallique, soit sous forme amorphe lorsqu'elle est sous forme de base en presence ou non d'un acide organique comme par exemple 1'acide citrique, soit encore fixes sur des sucres comme une maltodextrine ou un support similaire pour avoir une poudre pharmacotechniquement manipulable. Le choix des nouveaux procedes d'extraction est choisi parmi ceux decrits en fonction des taux recherche's et necessaires en hyperforine et hypericine ainsi que leurs quantites necessaires aux fabrications des formulations pharmaceutiques. L'invention concerne egalement des preparations pharmaceutiques ou para-pharmaceutiques contenant ces differents extraits obtenus par les procedes de l'invention. Pour certains produits, le pH pourra se situer entre 1 et 2 ou 6,4 et 12 comme pour le Millepertuis en fonction des quantites d'actif a extraire (entre 3 et 5 pour le plus defavorable). Pour d'autres contenant des iridoides (Globulaire, etc...), le pH devra se situer entre 6,5 et 8. Dans tous les cas, ces types d'extraits etant sensibles aux elevations de temperature, a 1'oxydation ou a la lumiere, seront deshydrates et seches par deshydratation sous vide a basse temperature sur zeolites, procede egalement appele zeodratation. On sait que la plante a 1'etat humide et selon sa provenance contient selon les differents auteurs 2 a 4 % d'hyperforine. Ce taux ne cesse de decroitre au fur et a. mesure des differentes manipulations comme le temps de maceration avant extraction, la concentration des extraits, le temps de stockage des extraits, etc... Dans 1'arsenal, des differents moyens connus et utilises devant ces problemes d'instabilite, it est fait appel aux methodes classiques comme : 20 la nature des solvants d'extraction utilisables en pharmacie ^ l'usage d'anti-oxydants sous forme acide, sels ou esters ^ 1'abri de la lumiere ^ l'usage d'agents reducteurs ^ l'usage d'agents chelateurs 25 l'usage de gaz inerte lors de differentes manipulations ^ 1'emploi de basses temperatures lors des differentes manipulations. En raison de la structure chimique des derives 30 phlorogluciniques et plus particulierement des fonctions hydroxyallyliques et cetoniques de 1hyperforine, it est normal de penser a bloquer celles-ci pour apporter une meilleure stabilite de 1'ensemble de la molecule. 35 Ceci est tres bien decrit par Chatterjee et coil dans le brevet US 6.444.662 du 3 septembre 2002 qui decrit trois modes de preparation de sels dans des solvants appropries en fonction des types de metallation 15 utilisees sur le melange adhyforine et hyperforine, par des alcoolates en milieu anhydre ou en presence d'hydroxydes correspondants. L'objet de l'invention est de realiser des procedes qui mettent en ceuvre la stabilite des derives phlorogluciniques au cours du procede d'extraction sans alterer les autres constituants de 1'extrait et obtenir un produit final pharmaceutiquement acceptable enrichi en hyperforine contenant de 2 a au moins 5 % et contenant les autres constituants comme les flavonoIdes, les naphtodianthrones aux taux habituels comme pour 1'hypericine (inf. a 0,5 %). Differents agents d'alcalinisation ou d'acidification peuvent are utilises (soude, hydroxyde de magnesium et autres agents alcalins, etc...) et acides (tout acide mineral ou organique) dans le procede selon l'invention. Une etude qualitative a ete realisee a partir d'un meme lot de plante pour evaluer l'influence des differents milieux d'extraction tel qu'un milieu basique (la soude) ou un milieu acide (les acides phosphoriques ou/et citrique). Les modes operatoires sont identiques dans tous les cas et ont donne les resultats suivants. Tableau I pH du EtOH Eau NaOH Q :HpF PseudoHpR HpR pH de solvant IN 1'extrait 7.74 60 40 0 550 290 250 4.83 12.21 60 40 1 600 280 196 6.04 12.48 60 40 2 750 240 256 6.80 12.55 60 40 3 850 210 320 7.53 12.67 60 40 4 1000 20 200 8.81 12.71 60 40 5 1050 0 160 8.95 pH du EtOH Eau H3PO4 Q :HpF PseudoHpR HpR pH de solvant 1'extrait 3.11 60 40 0.1 % 500 175 80 3.33 pH du EtOH Eau Ac. Q:HpF PseudoHpR HpR pH de solvant Citriq. 1'extrait 2.66 60 40 4 % 550 200 130 4.46 HpF = Hyperforine PseudoHp = PseudoHypericine HpR = Hyperine On constate que pour un meme solvant Ethanol/Eau 60/40, les extractions different selon le pH utilise. Aux pH acides, les quantites d'hyperforine extraites sont similaires aux quantites extraites par ce meme solvant en milieu neutre mais par contre la pseudo-hypericine et 1'hypericine ont grandement diminue. Le pH des extraits est legerement plus acide en fin d'extraction compare aux pH de 1'extraction neutre dont les extractions ont tendance a s'acidifier : pH initial 7,74 pH des extraits 4,83 pH solv H3PO4 3,11 pH des extraits 3,33 pH solv Ac. Citrique 2,66 pH des extraits 4,46 Pour les extractions en milieu alcalin, les quantites d'extraits s'enrichissent en hyperforine en fonction de la quantite d'agent alcalin utilisee alors qu'en meme temps les quantites de pseudo- hypericine et d'hypericine diminuent. Cet enrichissement en hyperforine peut atteindre le double alors que les quantites de derives d'hypericine peuvent diminuer de moitie. Pour mieux evaluer les modes operatoires, on a compare les extractions alcalines en presence d'un temoin d'extraction sans action alcaline et on a compare son influence sur la plante humide et/ou sechee ainsi que la stabilite des extraits obtenus. Le mode operatoire decrit a donne les resultats suivants : A TO : 1) on procede a deux extractions sur 23 g de plante humide (extraction alcaline et extraction neutre). 2) on seche 150 gr de plante humide puis on fait 2 extractions 35 sur le produit seche correspondant a 23 g de plante humide. 3) on met en atmosphere humide controlee 60 g de plante humide. 5 2535 A T1 : 1) on effectue 2 extractions sur 23 g de plante humide conservee (alcaline et neutre). 2) on effectue 2 extractions sur 23 g de plante seche conservee (alcaline et neutre). Soit au total 4 extractions a TO 10 4 extractions a T 1 mois Cette approche a permis d'evaluer et de choisir un procede qui peut etre le milieu alcalin lorsque 1'on veut faire croitre le taux d'hyperforine dans les extraits et stable, ou le milieu acide lorsque l'on desire obtenir un 15 extrait standard et stabilise en diminuant les taux de derives d'hypericine. On sait qu'en milieu acide et hydro-alcoolique, ces derives precipitent du fait de leur faible solubilite a ces pH et du fait de la transformation de la pseudo-hypericine en isopseudo hypericine a ce pH. 20 L'incidence des pH du milieu d'extraction et surtout son effet sur la stabilite de certains composes d'extraits ainsi que la transformation d'autres composes a permis d'etudier plus profondement ces possibilites d'extraction en vue de realiser des procedes industriels. Description des procedes : Une premiere etude d'extraction est realisee au laboratoire 30 a partir d'un meme lot de plante afin de comparer l'influence de 1'alcalinisation sur le milieu d'extraction par rapport aux extractions classiques realisees avec des solvants hydro-alcooliques. Description succincte du procede : Le procede consiste a mettre en suspension a temperature ambiante une partie de la plante sechee dans 10 volumes d'une solution hydro-alcoolique a 60 % en alcool ethylique pendant 24 heures. Apres filtration, les solutions sont traitees et concentrees sous vide a 1'abri de 1'oxygene de fair ainsi que de la lumiere. Les rendements ponderaux clans ces conditions sont voisins de 20 a 25 %. Les extraits secs obtenus sont sous forme d'une poudre fine et cristalline dans le cas de 1'extraction en milieu alcalin et de gomme tres hygroscopique dans le cas de 1'extraction en milieu neutre. Les analyses comparatives de ces deux extraits ont donne 10 en HPLC aux longueurs d'ondes suivantes (300 et 590 nm) comme montre a la figure 1 : - 1) des acylphloroglucinols 15 Tableau II C10 RT (nm) aire compose 9.77 300 458908 Hyperforine I 10.35 300 2964122 Hyperforine II 11.46 300 140894 Hypericine 13.14 300 174313 XXX 11.46 590 290398 Hyp~ricine C11 RT X (nm) aire compose 9.64 300 272559 Hyperforin I 10.23 300 1923289 Hyperforin II 11.32 300 83330 Hyp~ricine 13.00 300 411835 XXX 10.16 590 149666 Pseudohyp~ricine 11.32 590 173782 Hypericine Les resultats rassembles a partir de ces deux extraits montrent que les extraits obtenus par la voie alcaline sont deux fois plus concentres en 20 hyperforine que ceux realises en milieu acide Par contre les derives de 1'hypericine sont presents en quantites comparables. La pseudo-hypericine rencontree dans 1'extrait C11 a pH neutre a ete transformee en hypericine sous faction de 1'alcalinite. L'etude des profils des naphtodianthrones est realisee a partir de 25 ces deux extraits en utilisant la methode analytique d'extraction acide dans 1'hexane. Celle-ci permet de caracteriser ces derives. Les flavonoides peuvent egalement are caracterises et identifies pour une approche plus approfondie du profil chromatographique des extraits. - 2) des naphtodianthrones determination par HPLC Tableau III C10 C11 RT Compose RT 8.65 isopseudophypericine 8.70 9.25 flavonoide 9.32 9.86 protopseudohyp~ricine 9.92 10.20 pseudohypericine 10.23 10.82 protohypericine 10.84 11.33 hypericine 11.37 3) des flavonoides comme montre dans les chromatogrammes selon la figure 3. La caracterisation d'une forme salifiee de l'hyperforine en presence d'autres constituants de 1'extrait a ete realisee par un retour en milieu acide pour retrouver la forme lipophile de la molecule avec ses faibles solubilites en milieu aqueux. Le tableau V montre l'influence du milieu alcalin sur la stabilite de 1'hyperforine (salification) ainsi que son inaction sur les derives 20 naphtodianthrones comme 1'hypericine et ses derives Tableau IV hyperforine hypericine pH TR Aire TR Aire 7.5 9.79 1 812 363 10.9 134 583 6.5 10 1 433 748 11.4 134 503 5.5 10.2 1 371 590 11.5 132 061 4.5 10.5 1 212 085 11.7 136 884 3.5 11.2 1 040 653 11.8 135 194 2.5 13.2 273 355 11.7 137 030 7.5 10 1 089 463 11.3 138 359 Ces resultats sont egalement figures a la figure IV Exemple de degradation de dhyperforine non salifiee. Solution a 10 mg/1 dans un solvant apolaire pendant 3 jours. Solution d'hyperforine dans 1'hexane 10 mg/ l Analyse a t 0,1 jour et 3 jours jour Aire hyperforine 0 4 231 792 1 3 020 151 3 55 218 La degradation de 1hyperforine en trois jours est manifeste, donnant naissance a une multiplicite de sous-produits. L'ensemble de ces resultats montre qu'en milieu alcalin soluble et salifie en poudre, les extraits contenant un pourcentage plus eleve en hyperforine sont beaucoup plus stable. Contrairement aux procedes decrits dans le brevet US 20 6.444.662 qui utilisent des methodes chromatographiques pour enrichir les extraits en hyperforine et adhyperforine pour ensuite les salifier par des methodes chimiques differentes afin d'obtenir des produits stabilises mais pratiquement exempt des autres composants (flavonoIdes, 25 naphtodianthrones, etc...) de la plante, le present procede est base sur une approche plus pharmaceutique puisqu'elle permet a partir de plantes sechees d'obtenir des extraits stables dont les principaux criteres en teneur en flavonoIdes, naphtodianthrones et acylglucinols (soit 1 a 8 %) sont respectes et correspondent classiquement a ceux definis par les 30 methodes reconnues des pharmacopees et adaptees ici a 1'Hypericum perforatum. 10 15 Principales stapes du procede selon 1'invention Le procede selon l'invention se caracterise principalement par : 1-l'utilisation d'un solvant d'extraction hydro-alcoolique aux proportions connues, ou entierement aqueux. 2- la mise en pratique d'un milieu d'extraction permettant d'alcaliniser 10 ou acidifier suffisamment de telle sorte que le pH soit toujours en dehors de la neutralite. 3-l'utilisation d'une separation solide/liquide realisee a 1'abri de la lumiere et de 1'oxygene de fair (ex sous azote, argon ou gaz de 15 meme type) 4- 1'evaporation du solvant d'extraction en cours de concentration de 1'extrait a sec sous tres haut vide et sous gaz inerte a de basses temperatures. 20 5- l'utilisation d'un sechage de 1'extrait par zeodratation qui consiste a secher 1'extrait dans une enceinte de sechage sous vide extreme, reliee A. un groupe d'adsorption contenant des zeolites comme agent deshydratant. Cette technique permet de pratiquer un sechage aux 25 temperatures negatives si necessaire. 6- Par 1'obtention lors de la realisation de sels metalliques d'une poudre cristallisee tres peu hygroscopique et facilement utilisable en pharmacotechnie. 7- En definitive, l'obtention d'un tel extrait aux caracteristiques chromatographiques bien definies est represents par le chromatogramme suivant. (figure V). 35 8- Par un extrait qui stocks tel quel ou en melange avec des excipients de formulation comme 1'acide citrique ou 1'acide ascorbique reste stable en utilisant des pourcentages n'excedant pas 1 a 8 % et de ce fait sont pharmaceutiquement acceptables. 30 Pour l'obtention de formes non salifiees a partir de 1'etape 4 le solvant est acidifie par 1'acide correspondant, comme par exemple 1'acide citrique, et la solution est evaporee en presence ou non d'un sucre comme une maltodextrine pour favoriser une forme plus manipulable lors de 1'atomisation. L'extrait ainsi obtenu est seche comme a 1'etape 5 et conserve sous sachet ou fats scelles a 1'abri de 1'humidite, de la chaleur et de la lumiere. EXEMPLES Differents extraits de Millepertuis ont ete obtenus a partir de solvants hydro-alcooliques aux proportions variables en alcool et neutralises par differentes bases miner-ales ou organiques comme principalement 1hydroxyde de sodium, de calcium ou de magnesium, la Triethanolamine etc.(Ca(OH)2 ;TEA) ou par acidification comme, principalement, avec des acides mineraux ou organiques comme 1'acide chlorhydrique ; 1'acide sulfurique ; les acides phosphoriques, citrique, ascorbique, etc ... On decrit ici quelques essais qui ont permis d'obtenir des extraits stables en acylglucinols du type hyperforine. Exemple 1 10 kg de plante (Hypericum perforatum) finement hachee sont introduits dans un reacteur en inox de type Colette ou Olsa de 300 litres sous atmosphere d'azote et a 1'abri de la lumiere. 100 litres d'une solution hydro-alcoolique a 60% en alcool y sont 30 introduits On met sous agitation model-6e pendant 5 a 10 minutes a temperature ambiante afin d'avoir une bonne mouillabilite de la plante. On alcalinise par une solution d'hydroxyde de sodium a 50% (#100 mol). 35 Toujours a temperature ambiante on laisse sous agitation 24 heures puis on separe la solution d'extraction de l'insoluble par filtration. La solution ainsi filtree est concentree sous vide a basse temperature pour eliminer l'alcool par azeotropie et le residu est seche par 5 zeodratation afin de ne pas alterer 1'extrait On obtient ainsi entre 2 et 2,5 kg d'extrait sec dont les acylphloroglucinols, qui y sont contenus, sont sous la forme de sels sodiques. 10 Cet extrait est mis en etude de stabilite aux conditions ICH. Il a donne les resultats suivants figurant au Tableau V et a la figure 6. Tableau V Tests To T3mois A. 4 C T3mois a 18 C Hypericines 0.25 % 0.23 % 0.23 % Hyperforine 1.90 % 1.81 % 1.84 % Exemple 2 20 lkg d'extrait obtenu selon le procede decrit dans 1'exemple 1 est mis dans un melangeur cubique de 10 litres contenant 1,73 grammes d'acide citrique et 36,6 grammes d'acide ascorbique et ce par elutions successives. Une fois lextrait introduit, on agite sous gaz inerte a 1'abri 25 de la lumiere jusqu'a homogeneite du melange, soit environ 2 heures. Cet extrait ainsi modifie est pret pour une utilisation en pharmacotechnie en vue de realisations de formulations pharmaceutiques. 30 (ex cps et profil chromatographique) Profil chromatographique CLHP d'un comprime a base d'extrait de 1'exemple 2 figure a la figure 7. 15 Exemple 3 10 kg de plante (Hypericum perforatum) finement hachee sont introduits dans un reacteur en inox de type Colette ou Olsa de 300 litres sous 5 atmosphere d'azote et a 1'abri de la lumiere. 100 litres d'une solution hydro-alcoolique a 60% en alcool sont introduits dans le reacteur. On met sous agitation moderee pendant 5 a 10 minutes a temperature ambiante afin d'avoir une bonne mouillabilite de la plante. 10 On alcalinise par une solution d'hydroxyde de sodium a 50% (# 100 imol) . Toujours a temperature ambiante on laisse sous agitation 24 heures. On neutralise la solution par 1'acide chlorhydrique jusqu'a pH Cet extrait peut are utilise tel quel ou en presence d'acides comme it 25 est decrit a 1'exemple 2 Exemple 4 30 Preparation d'une formulation a usage therapeutique avec 1extrait d'Hypericum p. obtenu comme a 1'exemple 2 Extrait d'Hypericum perforatum 31,152 kg Croscarmellose sodique 5,200 kg Cellulose microcristalline 14,953 kg Glycerol dibehenate 0,676 kg Silice colloidale 0,208 kg 16 35 On melange les poudres et on realise des comprimes de 520 mg qui contiennent 300 mg d'extrait brut plus 11,11 mg d'acide ascorbique et 0,52 mg d'acide citrique. Ces comprimes peuvent ensuite etre pellicules par des agents qui les s mettront a 1'abri de la lumiere et de 1'humidite comme 1'acide stearique en presence d'HPMC. Resultats des lots pilotes en stabilite. Les resultats obtenus sont representes dans le tableau VI ci-apres : Tableau VI Dosages To T: 3 mois T: 3 mois T: 3 mois 25 C/60% 30 C/65% 40 C/70% HR HR HR Hypericine et 0.71 0.67 0.64 0.41 pseudohypericine Hyperforine 5.9 5.8 5.7 5.8 Acide ascorbique 9.7 9.7 9.4 4.5 Exemple 5 Preparation d'une formulation a usage therapeutique avec 1'extrait d'Hypericum perforatum obtenu comme a 1'exemple 2 Extrait d'Hypericum.perforatum. 30,000 kg Magnesium citrate 12,00 kg Croscarmellose sodique 5,200 kg Cellulose microcristalline 14,905 kg Glycerol dibehenate 0,676 kg Silice colloidale 0,219 kg 25 On melange les poudres et on realise des comprimes de 640 mg qui contiennent 300 mg d'extrait brut plus 11,11 mg d'acide ascorbique et 0,52 mg d'acide citrique. Ces comprimes peuvent ensuite are pellicules par des agents qui les 30 mettront a 1'abri de la lumiere et de 1'humidite comme 1'acide stearique en presence d'HPMC. 10 15 20 Exemple 6 Comprimes gastro-resistants Preparation d'une formule a usage therapeutique avec 1'extrait obtenu selon l'exemple 1 pour 100.000 noyaux de 510mg par forme unitaire Extrait d'Hypericum.perforatum. 30,000 Kg Croscarmellose sodique 5,200 Kg to Cellulose microcristalline 14,905 Kg Glycerol dibehenate 0, 676 Kg Silice colloidale 0,219 Kg Les noyaux sont pellicules par une premiere couche de 15 Sepifilm LP avec un depot d'environ 25 mg par noyau puis ensuite d'une couche d'une suspension preparee d'Eudragit L30 D 55 ,talc et Triethyl citrate pour un depot d'environ 40 a 45 mg. On obtient ainsi un comprime fini d'un poids moyen apres enrobage voisin de 580 mg. 20 Les extraits vegetaux selon l'invention peuvent encore 'are additionnes d'autres principes actifs et notamment de principes actifs manifestant des proprietes sur la sphere gastro-intestinale ou sur le systeme neveux central. On pourra citer a cet effet des acides gras 25 polyinsatures du type Omega-3 qui agissent sur 1'anxiete ou bien des mucilages comme la pectine ou 1'acide polymethacrylique, des produits agissant sur la motricite intestinale comme la Trimebutine, des produits antispasmodiques comme le methylsulfate de Tiemonium ou des produits anti-diarrheiques comme la Caseine formolee. Ces principes 30 actifs additionnels peuvent 'are contenus a des doses variant de 5 A. 100 mg par prise unitaire. 18 REVENDICATIONS 1 - Nouveau procede d'extraction de principes actifs a partir de plantes qui permet d'augmenter le taux d'acylphloroglucinols dans ces extraits et 10 d'assurer leur stabilisation dans lequel on soumet les extraits de plante a une zone de pH appropriee puis a un sechage par deshydratation sous vide a basse temperature sur zeolites. 2 - Procede selon la revendication 1 qui permet d'augmenter le taux 15 d'acylphloroglucinols et d'assurer leur stabilisation dans lequel 1'extrait de plante est un extrait d'Hypericum perforatum. 3 - Procede selon les revendications 1 et 2 dont les extraits obtenus ont une concentration en hyperforine qui est comprise entre 2 et 8 %. 4 - Procede selon les revendications 1 a 3 dans lequel les extraits obtenus contiennent en moyenne de 3 A. 5 % d'hyperforine. 5 - Procede selon les revendications 1 a 3 dans lequel la stabilisation 25 des acylphloroglucinols est obtenue par salification des acylphloroglucinols par differents agents alcalins et notamment par la soude, 1'hydroxyde de magnesium et 1'hydroxyde de calcium. 6 - Procede selon les revendications 1 a. 3 et 5 dans lequel la 30 salification peut are effectuee par des sels metalliques, par la triethanolamine et la triethylamine. 7 - Procede selon les revendications 1 a 3, 5 et 6 dans lequel 1'extrait sous forme de sel est transforms en base par acidification controlee des 35 solutions d'extraction au moyen d'un acide mineral ou organique comme 1'acide chlorhydrique, 1'acide sulfurique, les acides phosphoriques, 1'acide citrique ou 1'acide ascorbique. - Procede selon les revendications 1 a 3 et 5 dans lequel 1extrait sous forme salifiee est isole et ensuite additionne d'acides citriques et/ou ascorbiques ou d'autres anti-oxydants, pour ameliorer son etat physique. 9 - Procede selon les revendications precedentes dans lequel on ajoute pour faciliter la mise en forme pharmaceutique, des additifs de dilution comme les maltodextrines, et/ou des agents de lubrification comme les stearates metalliques, des agents de glissement comme 1'acide citrique ou un acide silicique. 10 - Extrait obtenu selon le procede des revendications 1 a 3 contenant en moyenne 2 a 8 % d'hyperforine en association avec un sel mineral 11 - Extrait obtenu selon le procede de rune des revendications 1 a 4, dans lequel on y ajoute du citrate de magnesium. 12 - Extrait obtenu selon le procede de rune des revendications 1 a 4, contenant de 3 a 5 % et plus particulierement 4 % d'hyperforine. 13 - Compositions a base d'un extrait obtenu selon le procede des revendications 1 a 13 utilisees en vue de l'usage therapeutique et/ou para-pharmaceutiquecontenant plus particulierement 300 mg d'extrait a environ 2 % d'hyperforine et en outre 10 mg d'element magnesium apporte sous forme de differents sels de magnesium et 120 mg de magnesium sous forme de citrate de magnesium. 14 - Compositions a base d'extraits de plante obtenus selon le procede des revendications 1 a 8 dans lesquelles on incorpore en outre un ou des principes actifs agissant dans la sphere gastro-intestinale et/ ou sur le systeme nerveux central.. 15 - Compositions a base d'extraits de plante obtenus selon le procede des revendications 1 a 8 dans lesquelles on ajoute un ou des principes actifs agissant sur le systeme nerveux central, en particulier un acide gras polyinsature de la serie Omega-3.