FR 2895086 A1 20070622 FR 0512815 A 20051216 La presente invention se rapporte a 1'utilisation d'une composition d'anticorps dont la teneur en fucose est inferieure a 65%, pour induire in vitro 1'apoptose. De plus en plus utilises en recherche, les anticorps constituent egalement des outils de choix en diagnostic et en therapeutique, ou ils sont une alternative aux traitements conventionnels. 10 De nombreux anticorps a usage therapeutique, d'origine plasmatique ou monoclonale, sont actuellement sur le marche, ou en phase de developpement clinique. Leurs proprietes sont exploitees pour obtenir des outils 15 therapeutiques capables de se her de maniere specifique a leur cible, et de recruter de maniere efficace les cellules immunitaires effectrices, provoquant ainsi la destruction de la cellule cible grace aux fonctions cytotoxiques de ces cellules. 20 Toutefois, dans certaines pathologies, comme la LLC (leucemie lymphoide chronique), on observe chez les patients un deficit de 1'activite des cellules immunitaires effectrices en particulier les cellules 25 NK, qui peut etre a 1'origine d'une incidence accrue des pathologies secondaires chez ces patients (Ziegler et al., 1981). D'autre part, lorsque ces patients sont traites dans he cadre de leur LLC par 1'anticorps monoclonal anti-CD20 Rituxan, on observe une faible 30 efficacite de ce traitement qui pourrait s'expliquer en partie par la faible activite ADCC de leurs cellules NK (Farag 2003). On rencontre egalement des deficits en cellules NK chez les patients atteint de lupus erythemateux 35 (Green 2005), les patients avec myopathie cardiaques congestives (Anderson 1982), les patients souffrants d'histiocytoses avec hemophagocytose (deficit en5 -2 perforine) (Clementi R, 2005) ainsi que les patients infectes par le VIH (deficit en perforine et granzyme) (Portales, 2003). On peut donc craindre, par analogie a ce qui est decrit pour les patients LLC, que le traitement de ces malades avec des anticorps monoclonaux conventionnels ne soit peu ou pas efficace. Le Demandeur a donc cherche a fournir des outils dont 1'activite est independante des fonctions cytotoxiques des cellules immunitaires effectrices, et ainsi susceptibles d'etre administres aux patients presentant une diminution de 1'activite des cellules immunitaires effectrices. Le Demandeur avait montre, dans le document WO 01/77181, 1'importance de selectionner des lignees cellulaires permettant de produire des anticorps presentant une forte activite ADCC via le recepteur FcgammaRlll (CD16). Il avait alors ete montre que la modification de la glycosylation de la region Fc des anticorps produits dans des lignees de myelomes de rat telle que YB2/0 conduisait a ameliorer 1'activite ADCC. Les structures glycanniques de telles compositions d'anticorps conferent a la composition d'anticorps une faible fucosylation. Or, dans le cadre de la presente invention, le Demandeur a decouvert de maniere surprenante que de telles compositions d'anticorps, outre leur forte activite cytotoxique, induisent, en presence de cellules exprimant le CD16 a leur surface, une apoptose importante alors que le meme anticorps produit dans CHO potentialise beaucoup moms 1'apoptose. Description L'invention se rapporte a 1'utilisation d'une composition d'anticorps, dont la teneur en fucose est inferieure a 65%, pour induire, in vitro ou in vivo, 1'apoptose. Un premier objet de 1'invention se rapporte ainsi a une methode pour induire, in vitro ou in vivo, 1'apoptose d'une cellule cible par une composition d'anticorps, comprenant la mise en contact de ladite composition d'anticorps et de la cellule cible, en presence de cellules exprimant le CD16 a leur surface, les anticorps etant diriges contre la cellule cible et la composition d'anticorps possedant une teneur en fucose inferieure a 65%. Les anticorps sont constitues de chaines lourdes et de chaines legeres, liees entre elles par des ponts disulfures. Chaque chaine est constituee, en position N-terminale, d'une region (ou domaine) variable specifique de 1'antigene contre lequel 1'anticorps est dirige, et en position C-terminale, d'une region constante, constituee d'un seul domaine CL pour les chaines legeres et de plusieurs domaines (CH1, CH2 et CH3) pour les chaines lourdes. L'association des domaines variables et des domaines CHI et CL des chaines lourdes et legeres forme les parties Fab de 1'anticorps, qui sont connectees a la region Fc par une region charniere tres flexible, permettant a chaque Fab de se fixer a 1'antigene cible. La region Fc, mediatrice des proprietes effectrices de 1'anticorps, reste accessible aux molecules effectrices telles que les recepteurs FcyR (FcgammaR). La region Fc, constituee de 2 domaines globulaires CH2 et CH3, est glycosylee au niveau du domaine CH2 avec la -3- presence, sur chacune des 2 chaines, d'un N-glycanne biantenne, lie a 1'asparagine 297 (Asn 297). Un tel N-glycanne se presente sous la forme generale suivante (forme presentee >), a laquelle d'autres 5 sucres peuvent s'ajouter : 10 ^ F liaison a 1'ASN297 G1cNAc Mannose Ainsi, dans la composition d'anticorps selon 15 1'invention, on entend par > le fucose porte par ces N-oligosaccharides. La molecule de fucose, lorsqu'elle est presente, est liee a la N-acetylglucosamine (G1cNAc) du N-oligosaccharide, cette G1cNAc etant elle-meme liee a 1'Asn 297. 20 Chacun des N-glycanne porte par 1'une ou 1'autre des 2 chaines lourdes de chaque anticorps, peut porter une molecule de fucose ou ne pas en porter. Ainsi, chaque anticorps peut comporter 0, 1 ou 2 molecules de fucose, selon respectivement qu'aucun de ses N- 25 glycannes ne porte de fucose, qu'un seul de ses N-glycannes porte une molecule de fucose, ou que ses 2 N-glycannes portent chacun une molecule de fucose. Ainsi, on entend par une 30 composition d'anticorps, dont, parmi la totalite des structures glycanniques portees par chaque site de glycosylation (Asn 297) des anticorps de la composition, moins de 65% comportent une molecule de fucose. 35 De maniere avantageuse, de telles structures glycanniques sont plus particulierement selectionnees parmi les formes suivantes : 10 GO, GOF, G1 et G1F. G1cNAc Mannose Galactose Fucose Ainsi, de maniere avantageuse, parmi les structures 15 glycanniques de forme GO, GOF, G1 et G1F, portees par chaque site de glycosylation (Asn 297) des anticorps de la composition selon l'invention, la teneur en fucose est inferieure a 65%. 20 Une telle composition d'anticorps, ainsi que ses caracteristiques avantageuses quant a 1'induction de 1'ADCC (Antibody-Dependent Cell-mediated Cytotoxicity), sont decrites dans le document WO 01/77181. 25 Les compositions d'anticorps selon 1'invention ont pour particularite et avantage de declencher une forte reaction d'apoptose. Or, 1'apoptose a un role essentiel dans le declenchement de la mort cellulaire. 30 De nombreux facteurs interviennent pour induire 1'apoptose, mail tous aboutissent a une voie commune passant par la mitochondrie, la proteine Doi-2 et les caspases. Les principaux mecanismes mettant en route le 35 processus de mort cellulaire programmee sont le stress (par exemple par hypo-oxygenation), le traitement par des substances cytotoxiques ou des corticoldes, la -6- privation de facteurs de croissance, 1'atteinte de 1'ADN, et la transmission d'un signal de mort (recepteur Fas des lymphocytes cytotoxiques et des natural killer, du facteur de necrose TNF-ce). A la suite du signal de mort cellulaire, les caspases sont activees, provoquant l'activation des proteines associees a 1'apoptose. Les phosphatidylserines sont ensuite transloquees de la face interne de la membrane cellulaire a la face externe. Elles peuvent etre visualisees > par la fixation de 1'annexine V a la surface de la cellule. La condensation du cytoplasme, du noyau et de la chromatine, une fragmentation de 1'ADN, un bourgeonnement de la membrane plasmique ainsi qu'une perte de 1'asymetrie membranaire sont alors visibles. A ce stade, les cellules fixent > 1'iodure de propidium (agent intercalant de 1'ADN). I1 y a ensuite formation de corps apoptotiques qui sont digeres par les macrophages environnants. La potentialisation de 1'apoptose induite par les compositions d'anticorps selon 1'invention n'est pas due aux fonctions cytotoxiques de la cellule immunitaire effectrice, mais est induite par une forte agregation de la region Fc des anticorps avec le recepteur CD16 exprime a la surface des cellules immunitaires effectrices. De maniere avantageuse, la composition d'anticorps selon 1'invention comprend une teneur superieure a 60%, de preference superieure a 80%, de formes GO+Gl+GOF+GIF, etant entendu que la teneur en formes GOF+GIF est inferieure a 50%, de preference inferieure a 30%. La demonstration > de 1'induction de 1'apoptose par les compositions d'anticorps selon 1'invention a ete effectuee avec des cellules Jurkat transfectees CD16 depourvues d'activite cytolytique, a 1'oppose des cellules NK. Ceci constitue un modele dans lequel la mort cellulaire ne peut titre induite que par apoptose. >, la potentialisation de 1'apoptose par les compositions selon 1'invention s'etablit avec toutes cellules effectrices exprimant le CD16, et en particulier les cellules du sang peripheriques exprimant le CD16, comme les monocytes-macrophages, les neutrophiles, les cellules NK et certaines sous-populations de cellules T. Ainsi, les compositions selon 1'invention peuvent titre utilisees en presence d'un deficit quantitatif ou qualitatif (absence d'ADCC) en une population de cellules immunitaires effectrices (cellules cytotoxiques). En effet, dans ce cas, cette potentialisation est possible grace aux autres cellules exprimant is CD16 a leur surface (cellules CD16+). De tels deficits se rencontrent chez les patients ayant une LLC-B (Leucemie Lympholde Chronique a cellules B), chez lesquels on observe une baisse d'activite des cellules NK (Foa 1986, Ziegler 1981) ou plus specifiquement un defaut de molecules cytolytiques (Katrinakis 1996), ainsi que les patients atteint de lupus erythromateux chez lesquels it a ete decrit un deficit en cellules NK (Green 2005). Les compositions d'anticorps pourront titre utilise-es selon 1'invention dans de telles pathologies. De maniere avantageuse, la teneur en fucose de la composition d'anticorps est inferieure a 30%. De maniere particulierement avantageuse, la teneur en 35 fucose de la composition d'anticorps est comprise entre 20% et 45%, ou entre 25% et 40%. De maniere particulierement avantageuse, la composition d'anticorps selon 1'invention presente en outre un ratio taux de fucose/taux de galactose inferieur a 0,6. De maniere avantageuse, ce ratio est inferieur a 0,5 ; inferieur a 0,4 ; inferieur a 0,2 ou de maniere encore plus avantageuse inferieur a 0,1. Aux fins de la presente invention, on entend par > le ratio entre la teneur en fucose de la composition d'anticorps et la teneur en galactose de la composition d'anticorps, ces 2 sucres etant susceptibles d'etre portes par chaque structure glycannique nee a chaque site de glycosylation (Asn 297) des anticorps de la composition. Avantageusement, la composition d'anticorps utilisee selon 1'invention est produite par la lignee cellulaire YB2/0, ou toute cellule derivee d'YB2/0 et conferant les memes caracteristiques sur le plan des modifications post-traductionnelles des proteines, notamment sur le plan de la glycosylation. Cette lignee a ete choisie en raison de sa capacite a produire des compositions d'anticorps dont certaines, apres selection, presentent une faible fucosylation, pour laquelle le Demandeur a montre dans la presente invention qu'elle est utile dans la production de compositions d'anticorps capables d'induire fortement 1'apoptose. Ainsi, un autre objet de 1'invention est 1'utilisation de la lignee cellulaire YB2/0 pour produire des anticorps a forte capacite d'apoptose. Un autre objet de 1'invention est un procede de 35 selection de compositions d'anticorps a forte capacite apoptotique, comprenant les etapes suivantes : 1) mise en contact de 1'anticorps a evaluer avec 1'antigene dudit anticorps (ou d'une cellules exprimant cet antigene) en presence de cellules exprimant le recepteur CD16 a leur surface. 2) mesure de 1'induction d'apoptose 3) selection des compositions d'anticorps montrant une induction d'apoptose superieure d'au moins 20%, voire 50% ou plus, en presence de la cellule exprimant le CD16 par rapport au controle negatif. Lors de la mise en oeuvre de 1'etape 1) de ce procede, un controle negatif peut etre par exemple obtenu en presence de cellules n'exprimant pas le CD16. Lors de 1'etape 2, la mesure de 1'induction de 1'apoptose peut s'effectuer de differentes manieres, en utilisant des techniques classiques specifiques pour mesurer 1'apoptose comme par exemple la mesure de 1'annexine V (stade precoce d'apoptose mesurant les phosphatitylserines exposees a la surface cellulaire) associee au iodure de propidium (stade avance mesurant la degradation de 1'ADN) ou YO Pro-1 (agent fragmentation de ce on entend par Aux fins de 1'invention, capacite apoptotique une 1'apoptose superieure d'au comme le mesurant la -10- De maniere avantageuse, les anticorps selectionnes sont des anticorps anti-idiotypiques anti-inhibiteurs du facteur VIII, des anticorps diriges contre des autoanticorps pour cibler les lymphocytes B memoires, ainsi que des anticorps diriges contre des proteines virales et/ou bacteriennes exprimees a la surface de cellules infectees, dans le but d'induire leur elimination. On peut aussi selectionner tout anticorps reconnaissant un antigene exprime preferentiellement a la surface de cellules tumorales, ceci incluant les proliferations hematopoietiques. Un autre objet de 1'invention se rapporte a 1'utilisation de compositions d'anticorps monoclonaux dont la teneur en fucose est inferieure a 65%, de preference inferieure a 30%, de maniere particulierement avantageuse comprise entre 20% et 45%, ou entre 25% et 40%, pour la preparation d'un medicament destine au traitement de pathologies dans lesquelles 1'activite lytique des cellules cytotoxiques est diminuee, voire nulle. Lesdites compositions d'anticorps presentent une interaction pour le CD16 au moins 2 fois superieure, voire avantageusement 10 fois superieure a 1'anticorps therapeutique Rituxan. L'interaction entre la region Fc de 1'anticorps et le recepteur CD16 peut etre mesuree par la fixation directe ou indirecte par competition avec un anticorps monoclonal anti-CD16 de type 3G8 dirige contre le site de fixation de la partie Fc des anticorps, sur des cellules CD16 positives. De maniere avantageuse, la composition d'anticorps utilisee selon 1'invention comprend une teneur superieure a 60%, de preference superieure a 80%, de formes GO+Gl+GOF+GIF, etant entendu que la teneur en formes GOF+GIF est inferieure a 50%, de preference inferieure a 30%. -11- De maniere particulierement avantageuse, la composition d'anticorps utilisee selon 1'invention presente en outre un ratio taux de fucose/taux de galactose inferieur a 0,6. De maniere avantageuse, ce ratio est inferieur a 0,5 ; inferieur a 0,4 ; inferieur a 0,2 ou de maniere encore plus avantageuse inferieur a 0,1. De maniere avantageuse, cette utilisation est destinee a la preparation d'un medicament destine au traitement de pathologies dans lesquelles une ou plusieurs population(s) de cellules effectrices est diminuee voire nulle, lesdites cellules induisant ainsi une faible activite cytotoxique par ADCC. Un autre objet de 1'invention se rapporte a 1'utilisation d'anticorps monoclonaux anti-CD20 ayant une forte interaction pour le CD16 pour la fabrication d'un medicament destine au traitement des patients atteints de LLC-B et chez lesquels on observe une baisse des fonctions lytiques des cellules NK. D'une maniere generale, 1'anticorps de 1'invention peut titre utilise pour traiter toute proliferation hematopoietique. Un autre objet de 1'invention est 1'utilisation desdites compositions d'anticorps monoclonaux pour la fabrication d'un medicament destine au traitement de patients qui ont un deficit en cellules NK, et qui ne pourraient pas titre traites par des anticorps dont la cytotoxicite s'exprime uniquement grace aux NK. On peut citer a titre d'exemple, les patients atteint de lupus erythemateux (Green 2005), les patients avec myopathie cardiaques congestives (Anderson 1982), les patients souffrants d'histiocytoses avec hemophagocytose (deficit en perforine) (Clementi R, -12- 2005) ainsi que les patients infectes par le VIH (deficit en perforine et granzyme) (Portales, 2003). On peut egalement inclure les personnes atteintes de trisomie 21 (Nurmi 1982) et les patients receveurs d'un greffon chez lesquels les traitements associes induisent un deficit des cellules NK et une augmentation du risque de developper des tumeurs (Alamartine 1997). Dans les pathologies hematopoietiques, en plus des patients atteints de LLC-B, un deficit de cytotoxicite lie aux cellules NK a ete decrit chez les patients atteints de leucemie myeloide aigue (Nasrallah 1983) et de leucemie a tricholeucocytes (Trentin 1990). D'une facon plus generale, les populations de fumeurs (Takeuchi 2001) montrent une activite NK diminuee par rapport aux individus non fumeurs. De plus, les anticorps selon 1'invention peuvent titre particulierement avantageux dans le traitement des patients atteints d'hemophilie A ou B, pour cibler les lymphocytes B memoires. D'autres aspects et avantages de 1'invention seront decrits dans les exemples qui suivent, qui doivent titre consideres comme illustratifs et ne limitent pas 1'etendue de 1'invention. Description des Figures Figure 1 : Tableau 1 30 Figure 2 : Tableau 2 Figure 3 : Schema de potentialisation de 1'apoptose via le CD1G. 35 Figure 4 : Potentialisation de 1'apoptose par un anticorps anti-IgG humaine.25 - 13 - Figure 5 : Potentialisation de 1'apoptose par Jurkat CD16. Exemples Anticorps : Un anticorps anti-HLA-DR a ete utilise pour la mise au point d'un modele d'etude. C'est un anticorps recombinant dans lequel les domaines variables sont d'origine murine alors que la partie constante est d'origine humaine. La meme sequence a ete exprimee dans la lignee CHO et dans la lignee YB2/0 (ces anticorps exprimes dans YB2/0 sont appeles Anticorps EMABling >>). Cellules : Les cellules Jurkat clone E6.1 proviennent de 1'ECACC (European Collection of Cell Culture). Ces memes cellules ont ete transfectees par un vecteur d'expression codant pour la chaine gamma (y) ainsi que par un vecteur codant le FcyRIIIa (haplotypes L48F158). Les cellules Daudi proviennent de 1'ATCC (American Type Culture Collection). Les cellules NK (Natural Killer) sont purifiees a partir d'echantillons de sang peripheriques par selection negative sur billes magnetiques Myltenyi. Induction de 1'apoptose : Condition 1 : les cellules Daudi (2,5 x 105 cellules) sont incubees avec les anti-HLA-DR (l g/ml), dans des plaques de 24 puits (P24) pendant 24h a 37 C. Condition 2 : les cellules Daudi (2,5 x 105 cellules) sont incubees avec les anticorps anti-HLA-DR (1 g/ml) en presence d'une anti-IgG humaine (20 g/ml), dans des plaques de 24 puits (P24) pendant 24h a 37 C. -14- Condition 3 : les cellules Daudi (2,5 x 105 cellules) sont incubees avec les anti-HLA-DR (l g/ml) en presence de cellules Jurkat (2,5 x 105 cellules), dans des plaques de 24 puits (P24) pendant 24h a 37 C. Condition 4 : les cellules Daudi (2,5 x 105 cellules) sont incubees avec les anti-HLA-DR (l g/ml) en presence de cellules Jurkat transfectees avec le CD16 (2,5 x 105) , dans des plaques de 24 puits (P24) pendant 24h a 37 C (figure 3). Condition 5 : les cellules Daudi (2,5 x 105 cellules) sont incubees avec les anti-HLA-DR (l g/ml) en presence de cellules NK (2,5 x 105 cellules) et d'un melange EGTA (4 mM)/MgC12 (2 mM), dans des plaques de 24 puits (P24) pendant 24h a 37 C. Mesure de 1'apoptose par la technique Annexine V/PI : Les cellules sont ensuite collectees, lavees 2 fois puis incubees avec 1'annexine V-FITC et 1'iodure de propidium (PI) en accord avec les instructions du fournisseur (BD Biosciences). Les cellules sont analysees par cytometrie en flux (cytometre EPICS XL Beckman Coulter) en utilisant le logiciel Expo 32 de chez Beckman Coulter. La fixation de 1'annexine V correspondant a un signal precoce d'apoptose alors que la fixation du PI etant plus tardive (fragmentation ADN), le pourcentage de cellules dites apoptotiques est defini arbitrairement comme la somme des cellules Annexine V positives et des cellules doublement positives Annexine V/PI. Exemple 1: Potentialisation de 1'apoptose par un anticorps anti-IgG humaine (cross linker) L'apoptose observee en absence d'anticorps (mort naturelle) est de 1'ordre de 10%. Cette valeur de base est deduite des resultats obtenus lors des -15- differentes experiences et se situe donc arbitrairement a 0%. Dans le tableau 1 (cf figure 1), les resultats sont exprimes en pourcentage de cellules apoptotiques (AnnexineV et PI positive). Les anticorps anti-HLA-DR EMABling et CHO utilises seuls (condition 1) a la concentration de l g/ml induisent peu d'apoptose sur Daudi ( Exemple 2 : Potentialisation de 1'apoptose par Jurkat CD16 Les resultats (tableau 2, cf figure 2) sont exprimes en pourcentage de cellules apoptotiques (AnnexineV et PI positives). Les anticorps anti-HLA-DR EMABling et CHO utilises a la concentration de 1pg/ml en presence de cellules temoin Jurkat (non transfectees) induisent respectivement 3% et 2% d'apoptose sur Daudi (condition 3). En presence de la cellule Jurkat CD16 (condition 4), qui pent interagir via le CD16 avec la partie Fc des anticorps anti-HLA-DR fixes a la surface de la cellule Daudi, 1'apoptose est potentialisee. En presence des anticorps produits par les cellules CHO et EMABling le pourcentage final d'apoptose est -16- respectivement de 8% et 19%. Ainsi la potentialisation de 1'apoptose en presence de 1'anticorps EMABling est superieure d'environ 100% par rapport a celle induite obtenue avec 1'anticorps produit dans CHO. Sur la figure 5 les resultats sont exprimes en pourcentage de cellules apoptotiques observees, 1'anticorps EMABling representant arbitrairement 100% pour chaque condition etudiee. Dans ces conditions 1'etude statistique montre que la difference de potentialisation de 1'apoptose est tres significative entre les deux anticorps (p Alamartine E, Sabido 0, Dumollard JM, Berthoux F. Lack of evidence for natural cytotoxicity deficiency against human ex vivo tumour cells in allograft recipients. Nephrol Dial Transplant. 1997 May;12(5):988-94. Anderson JL, Carlquist JF, Hammond EH. Deficient natural killer cell activity in patients with idiopathic dilated cardiomyopathy. Lancet. 1982 Nov 20;2(8308):1124-7. 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Methode selon la revendication 1, caracterisee en ce que ladite teneur en fucose est inferieure a 30%. 3. Methode selon 1'une quelconque des revendications 1 ou 2, caracterisee en ce que ladite teneur en fucose est comprise entre 20% et 45% , ou entre 25% et 40%. 20 4. Methode selon 1'une quelconque des revendications pr&cedentes, caracterisee en ce que ladite composition d'anticorps est produite par la lignee cellulaire YB2/0. 5. Utilisation de la lignee cellulaire YB2/0 pour produire des anticorps a forte capacite d'apoptose. 30 6. Proc&de de selection de compositions d'anticorps a forte capacite apoptotique, comprenant les &tapes suivantes . i. mise en contact de 1'anticorps a &valuer avec 1'antigene dudit anticorps (ou 35 d'une cellules exprimant cet antigene) en presence de cellules exprimant le CD16 a leur surface.-21- ii. mesure de 1'induction de 1'apoptose iii. selection des compositions d'anticorps montrant une induction d'apoptose superieure d'au moins 20%, voire 50% ou plus, en presence de la cellule exprimant le CD16 par rapport au controle negatif (absence de CD16). 7. Procede selon la revendication 6, caracterise en ce que les anticorps selectionnes sont des anticorps anti-idiotypiques anti-inhibiteurs du facteur VIII, des anticorps diriges contre des autoanticorps, ainsi que des anticorps diriges contre des proteines virales et/ou bacteriennes exprimees a la surface de cellules infectees. 8. Utilisation d'une composition d'anticorps monoclonaux tel que definie dans 1'une quelconque des revendications 1 a 4, pour la preparation d'un medicament destine au traitement d'un deficit quantitatif ou qualitatif (absence d'ADCC) en cellules NK. 9. Utilisation selon la revendication 8, pour 25 la preparation d'un medicament destine au traitement de la LLC-B. 10. Utilisation selon la revendication 8, pour la preparation d'un medicament destine au traitement 30 du lupus erythemateux, des myopathies cardiaques congestives, des histiocytoses avec hemophagocytose ainsi que du VIH et de 1'hemophilie A ou B.