FR 2894830 A1 20070622 FR 0512875 A 20051219 L'invention concerne un procede d'inactivation virale par chauffage a sec. DOMAINE DE L'INVENTION Toute matiere biologique solide presente un risque de contamination virale et celle-ci, ou ses produits derives, ou des produits issus de procedes dans lesquels elle interviendrait, doiverit etre soumis a des procedes d'inactivation virale en vue d'etre utilises en therapie ou en prophylaxie. On utilise dans le domaine therapeutique ou prophylactique des principes actifs issus de sources biologiques ou des principes actifs susceptibles d'etre contamines par une source biologique au cours de leur procede de fabrication. Ces principes actifs peuvent etre des proteines, peptides, polypeptides, anticorps, eventuellement substitues par des groupes lipidiques ou glucidiques, des acides nucleiques, ADN, ARN, des polysaccharides, des bacteries, des particules virales et autres. La source biologique dont ils sont issus ou susceptible de contaminer leur procede d'obtention peut etre n'importe quel tissu humain ou animal, le sang, le plasma, les os, n'importe quel tissu vegetal, n'importe quel micro-organisme, un milieu de culture cellulaire, de culture de virus, de bacteries, de levures, de moisissures, de champignons. Par consequent, it est courant d'inclure dans les etapes d'extraction des principes actifs produits a partir de teller sources biologiques, des etapes de reduction ou inactivation virale. On entend par produit biologique au sens de la presente invention un produit comprenant un principe actif produit a partir d'une source biologique et d'autres composes ou excipients provenant du procede d'obtention dudit principe actif. Des methodes d'inactivation virale par traitement avec des produits chimiques et/ou la chaleur sont connues - 2 - de 1'art anterieur. La grande majorite de celles-ci provient du domaine de la transfusion sanguine dans lequel 1'efficacite d'une inactivation virale est cruciale puisqu'il faut tenter de s'affranchir de la contamination eventuelle resultant de produits issus d'un donneur. Le chauffage a ete preconise des le debut de la reconnaissance de 1'origine virale du VIH pour inactiver celui-ci, en particulier dans le sang, le plasma, les produits biologiques issus du sang ou du plasma. Le chauffage a sec c'est-a-dire le chauffage a une temperature T pendant un temps t d'un produit sec a ete preconise, par exemple pour les concentres de facteur de la coagulation lyophilises ou cryodesseches qui n'ont pas ete chauffes sous forme liquide. Par exemple, le facteur VIII de la coagulation sanguine, extrait du plasma humain, a ete chauffe a 60 C pendant 72 a 96 h a 1'etat lyophilise pour securiser ce principe actif biologique destine a traiter les homophiles. Cependant, 1'inconstance des reductions de titre viral a fait abandonner ce procede car plusieurs cas de contamination par le VIH chez les homophiles ont ete recenses malgre ce chauffage. Il a donc ete propose de soumettre ces produits a des conditions de chauffage dites >, c'est-adire une temperature de 80 C pendant 72h a 1'etat sec. Ce procede d'inactivation virale a alors ete valide pour le VIH (virus enveloppe) suite aux resultats cliniques obtenus pour un facteur VIII traite dans ces conditions (L. Winkelman et al., >, Curr Stud Hematol Blood Transfus, 1989, n 56, p55-69). Le traitement des proteines purifiees avec un melange de solvant et de detergent est egalement largement utilise pour prevenir la transmission des virus enveloppes par des proteines derivees de sources biologiques (Piet et al., Transfusion, 30 :592-98, 1990). Ce traitement est efficace contre les virus - 3 presentant une enveloppe lipidique, beaucoup moins contre ceux qui ne presentent pas une telle structure. Recemment, la transmission d'au moins deux virus nonenveloppes par 1'utilisation d'un produit biologique traite par solvant/detergent a ete decrite. Le virus de 1'hepatite A, virus a ARN non-enveloppe, a ete transmis a des patients utilisant un Facteur VIII qui avait ete traite par solvant/detergent (Purcell et al., Vox Sang, 67 :2-7, 1994). Le Facteur VIII a egalement ete implique dans la transmission d'un parvovirus non-enveloppe, B19 (Lefrere et al., Lancet, 343 :211-12, 1994). Le traitement des proteines purifiees par chauffage a ete preconise pour etendre le spectre d'inactivation virale aux virus non-enveloppes. Cependant, 1'inactivation par chauffage de virus non-enveloppes est generalement plus difficile que celle des virus enveloppes et requiert souvent un traitement plus long et/ou des temperatures plus elevees pour assurer une inactivation satisfaisante. B19 a ete transmis a des patients par un Facteur VIII qui avait ete chauffe a sec a 100 C pendant 30 min (Santagostino et al., Lancet 343 :798, 1994). I1 est donc clairement important de determiner comment ameliorer les methodes d'inactivation virale pour maintenir ou ameliorer la securite des produits biologiques. ART ANTERIEUR De nombreux auteurs ont cherche a observer les parametres majeurs qui influent sur 1'inactivation virale par chauffage a sec. Leur but est de determiner un parametre physico-chimique qui permettrait de predire si un traitement donne est adapte a la matiere solide a traiter ou non c'est-a-dire s'il permet une inactivation virale satisfaisante tout en conservant une stabilite satisfaisante du produit. De plus, it serait extremement interessant que ce parametre soit - 4 modulable et qu'en fonction de cette modulation on puisse favoriser 1'inactivation virale ou la stabilite du produit. On definit le facteur de reduction virale d'un procede d'inactivation virale comme le facteur de reduction du titre viral c'est-a-dire le log10 du rapport du titre viral avant 1'etape d'inactivation au titre viral apres 1'etape d'inactivation. On definit le taux d'humidite comme la quantite d'eau en poids pour 100g de produit. C'est pourquoi ii est exprime en pourcentage en poids. La methode classique de mesure consiste a determiner la perte en poids du produit apres chauffage a une temperature superieure a 100 C jusqu'a ce que le poids du produit soit constant. Willkommen et al. (Paul Ehrlich Institute) ont montre que pour les lyophilisats a faible taux d'humidite ( 0,8%), les facteurs de reduction du virus de l'hepatite A obtenus dans les memes conditions sont super.ieurs ou egaux a 4,3 logic. Bunch et al. (Alpha Therapeutic Corporation) ont montre que deux taux d'humidite differents (0,4 et 1,4%) d'un facteur VIII recombinant n'avaient aucune influence sur be facteur de reduction du virus de l'hepatite A (>_ 6,9 log10) par chauffage a 80 C pendant 72h. Roberts PL et al. (Biologicals. 2000 Sep; 28(3):185-8., "Comparison of the inactivation of canine and bovine parvovirus by freeze-drying and dryheat treatment in two high purity factor VIII concentrates") ont montre l'influence de la formulation du produit biologique et de la resistance du virus par inactivation virale de 2 parvovirus bovin et canin par chauffage a 80 C pendant 72h d'un - 5 concentre de Facteur VIII dans 2 formulations lyophilisees. Hart HF et al. (Vox Sang. 1994;67(4):345-50 "Effect of terminal (dry) heat treatment on non-enveloped viruses in coagulation factor concentrates") ont obtenu le meme facteur de reduction du virus de 1'hepatite A dans des lyophilisats de Facteur VIII par chauffage a 80 C pendant 24h ou 90 C pendant 2h. Tomokiyo et al. (Vox Sang. 2003 Jan ; 84(1):54-64. "Large-scale production and properties of human plasma-derived activated Factor VII concentrate") ont montre, par inactivation de differents virus : CMV (Cytom&galovirus), VIH (Virus de 1'Immunodeficience acquise Humain), BVDV (Virus de la Diarrhee Virale Bovin), Poliovirus, PPV (Parvovirus Porcin) dans des lyophilisats de Facteur VIIa, que 1'inactivation virale dans des lyophilisats est possible a 65 C. Un chauffage a 65 C pendant 96h sur des produits dont le taux d'humidite est 4 loglo sur 1'ensemble des virus sauf le PPV. La demande de brevet EP 0 844 005 divulgue que 1'humidite residuelle du produit biologique dess&che a traiter est 1'element critique dans 1'efficacite de 1'inactivation virale par un procede de chauffage a sec a 80 C, pendant 72-77h. Les virus testes sont le VHA, le parvovirus porcin et le pseudorabies virus. Les inventeurs ont montre que 1'humidite residuelle doit etre superieure ou &gale a 0,8% pour atteindre un facteur de reduction virale 4 loglo avec ce procede. Pour une humidite residuelle s 0,8%, le facteur de reduction virale est de 0,12 log10 en moyenne. PROBLEME TECHNIQUE Il apparait, au vu de ces resultats tres disperses, qu'aucun parametre n'a &te d&fini dont la mesure permettrait de determiner de maniere sure les variables operatoires caracteristiques d'un procede 6 d'inactivation virale par chauffage a sec a utiliser en fonction du produit biologique a traiter. Il semble toutefois quill existe un certain consensus entre les auteurs sur le fait que le taux d'humidite du produit a traiter joue un role tres important sans toutefois que ceux-ci soient d'accord sur un taux d'humidite residuelle en tant que valeur seuil pour obtenir une inactivation virale satisfaisante. En effet, it suffit parfois que cette valeur baisse de quelques dixiemes pour que 1'inactivation soit incomplete. Cependant, contrairement a ce que pourraient laisser penser certains auteurs, le Demandeur a montre qu'une inactivation virale est possible dans des lyophilisats d'humidite residuelle faible. Un fibrinogene humain cryodesseche d'humidite residuelle egale a 0,1% a ainsi ete chauffe a sec a 77 C pendant 72 h. Les facteurs de reduction des virus de l'hepatite A (VHA), du virus de 1'immunodeficience humain (VIH), du virus de la diarrhee virale bovine (BVDV) et du parvovirus porcin (PPV) sont presentes dans le Tableau 1. Tableau 1 . Virus Facteur de reduction VHA 4,10 0,3 3,75 0,26 VIH 4,53 0,36 4,62 0,30 4,88 0,28 BVDV 5,96 0,40 5,21 0,38 PPV 2,97 0,43 2,88 0,37 La dispersion de 1'ensemble de ces observations ne permet donc que de tirer la conclusion suivante :25 - 7 1'humidite residuelle du produit a traiter n'est donc pas le facteur determinant des resultats de 1'inactivation virale par chauffage a sec mais un facteur important dont dependrait le facteur determinant. Le probleme est donc de determiner le parametre physico-chimique multi-factoriel mesurable donnant une valeur seuil de part et d'autre de laquelle 1'inactivation virale sera satisfaisante ou insatisfaisante. RESUME DE L'INVENTION Le Demandeur a identifie, de facon surprenante, que ce parametre physico-chimique mesurable est la temperature de transition vitreuse du produit biologique a traiter. La transition vitreuse est une transition du second ordre c'est-a-dire une transition thermique qui implique un changement de capacite calorifique, mais pas de chaleur latente. Elie est caract6ristique des liquides surfondus qui sont refroidis a une temperature suffisamment basse suffisamment rapidement sans cristalliser et qui deviennent un verre et des polymeres amorphes ou de la partie amorphe des polymeres cristallins qui passent d'un etat dur et fragile a un etat mou et souple. La temperature de transition vitreuse ou Tg est la temperature a laquelle a lieu la transition vitreuse. Quand un polymere est refroidi en-dessous de cette temperature it devient dur et fragile, comme le verre, on dit qu'il est a 1'etat vitreux. Les caoutchoucs elastomeres comme le polyisoprene et le polyisobutylene, sont utilises au-dessus de leur temperature de transition vitreuse, c'est-a-dire a 1'etat caoutchouteux et ils sont mous et flexibles. La temperature de transition vitreuse est connue de 1'homme du metier comme dependante de certains parametres. Dans le cas des polymeres, elle depend de la masse moleculaire, de la structure chimique de la chaine, de la quantite de plastifiants. Les plastifiants sont des petites molecules, comme les sell, qui s'insinuent entre les molecules de polymeres et leur permettent de mieux glisser entre elles donc facilitent leur mouvement. L'ajout de plastifiant permet donc d'abaisser la temperature de transition vitreuse. Au contraire les molecules de poids moleculaire eleve bloquent les mouvements des molecules de polymere entre elles et augmentent la temperature de transition vitreuse. Par ailleurs, le Demandeur a montre que la temperature de transition vitreuse est directement correlee a 1'humidite residuelle d'un lyophilisat de Facteur Von Willebrand (FvW) donne. La correlation entre la temperature de transition vitreuse du lyophilisat et son humidite residuelle est presentee sous forme de graphique a la Figure 1. La temperature de transition vitreuse d'un produit biologique depend donc de la nature du principe actif, de la nature des excipients : plastifiants ou non, forme cristalline ou forme amorphe, de la masse moleculaire des excipients et de 1'humidite residuelle du produit biologique. DESCRIPTION DETAILLEE DE L'INVENTION L'invention concerne un procede d'inactivation virale par chauffage a sec d'un virus present ou potentiellement present dans un produit biologique seche, caracterise en ce que la temperature de chauffage a sec T est superieure ou egale a la temperature de transition vitreuse Tg du produit. Un produit seche est un produit ayant subi une methode de dessication connue de 1'homme du metier comme la lyophilisation, le sechage sous vide, la pervaporation, 1'atomisation. - 9 En particulier, un produit seche est un produit cryodesseche c'est-a-dire un produit tout d'abord congele dont une partie de 1'eau est ensuite sublimee sous vide. En effet, le Demandeur a observe que le facteur de reduction virale et la cinetique d'inactivation virale sont favorises lorsque la temperature de chauffage est superieure ou egale a Tg. La valeur de la temperature de transition vitreuse permet donc de predire si un procede d'inactivation sera satisfaisant et de le modifier clans ce sens. La mesure de la temperature de transition vitreuse d'un produit biologique seche consiste a soumettre un echantillon de ce produit a une augmentation progressive et programmee de la temperature entre -50 C et +100 C et a observer ses changements d'etat, dont la transition vitreuse. On obtient ainsi le thermogramme du produit biologique seche et notamment sa temperature de transition vitreuse. Apres avoir mesure la temperature de transition vitreuse, selon ses connaissances generales dans le domaine de 1'inactivation virale par chauffage, 1'homme du metier sait juger si pour satisfaire a 1'exigence T Tg : - Tg est satisfaisante selon le virus concerne pour choisir une temperature T Tg - ou bien si Tg doit titre ajustee pour choisir T afin que 1'inactivation virale et la stabilite du produit recherchees soient satisfaites. Par exemple, si 1'homme du metier sait que Tg est trop faible pour que le virus en question puisse titre inactive a T de sorte que Tg soit pas assez important pour que le produit se degrade. Par contre, si 1' homme du metier sait que Tg est trop elevee pour que T Tg et que le produit reste stable 5 alors it diminuera Tg avant de choisir T. Le procede d'inactivation virale par chauffage a sec dans un produit biologique selon 1'invention est particulierement approprie dans le cas d'un virus non- 10 enveloppe. I1 peut permettre de traiter une composition contenant une ou plusieurs proteines extraites du plasma sanguin en tant que produit biologique seche. 15 De maniere preferee, la temperature de transition vitreuse est augmentee par ajout d'excipients de masse moleculaire elevee au produit biologique ou par diminution de 1'humidite du produit biologique ou bien elle est diminuee par ajout de sels ou d'excipients de 20 faible masse moleculaire au produit biologique ou par augmentation de 1'humidite du produit biologique. En particulier, la temperature de transition vitreuse est mesuree au moyen d'un thermoanalyseur differentiel 25 a balayage. Les changements d'etat sont definis par un changement de capacite calorifique mesuree par rapport a un produit inerte qui ne subit pas de transformation dans la plage de temperature consideree. 30 On preferera que la temperature de chauffage T du procede selon 1'invention soit comprise entre Tg et Tg + 20 C pour conserver une stabilite du produit satisfaisante. Dans cet intervalle, on pourra soit augmenter 1'ecart entre Tg et T, c'est-a-dire faire 35 tendre T vers Tg + 20 C, pour favoriser le facteur de reduction virale et la cinetique d'inactivation virale, soit diminuer 1'ecart entre Tg et T, c'est-a- dire faire tendre T vers Tg, pour favoriser la - 11 - stabilite du produit. De maniere particulierement preferee, le procede selon 1'invention permet un facteur de reduction virale 3 log,. Figures Figure 1 correlation Tg/HR, Tg = temperature de transition vitreuse et HR = humidite residuelle Figure 2 : facteur de reduction de PR772 par chauffage a sec a 62 C en fonction de Tg Figure 3 : facteur de reduction de PR772 par chauffage a sec a 80 C en fonction de Tg Figure 4 : facteur de reduction de PPV par chauffage a 15 sec a 80 C en fonction de Tg Figure 5 : facteur de reduction de PPV, HAV, BVDV, PR772, Phi174 a T = Tg = 80 C Figure 6 : facteur de reduction de PPV, HAV, BVDV, PR772, Phi174 a T = Tg = 62 C 20 Exemples Exemple 1 : Inactivation du bacteriophage PR772 par chauffage a sec dans des lyophilisats Les caracteristiques physiques des lyophilisats sont 25 modifiees afin de faire varier la temperature de transition vitreuse (Tg). La temperature de transition vitreuse est determinee par un thermoanalyseur differentiel a balayage. La temperature du thermoanalyseur differentiel a balayage 30 est calibree a 1'aide de 1'indium (Tm 156,6 C) et du n-octadecane (Tm 28,2 C). Les echantillons subissent des temperatures de -50 C a 130 C a la vitesse de 20 C/min. L'azote liquide est utilise pour mener les experiences a une temperature inferieure a la 35 temperature ambiante. La temperature de transition vitreuse est prise au point median du changement endothermique clans la chaleur specifique apparente. Deux mesures sont realisees et leur moyenne donne la - 12 - Tg. Le chauffage est effectue a une temperature inferieure a Tg, soit a 1'etat solide vitreux, ou a une temperature superieure a Tg d'environ 20 C, soit a 1'etat viscoelastique (caoutchouteux). Tous les lyophilisats presentent une teneur en eau inferieure a 1%. La teneur en eau est determinee par la methode de Karl-Fischer, bien connue de 1'homme du metier, basee 10 sur la reaction entre 1'eau et 1'iode. Formulation du produit A (pH 7,0 0,5) . - glycine 7,5g/l - lysine HC1 5,5 g/l 15 - CaC12 0,15 g/l - mannitol 40 g/l - saccharose 50 g/1 - FVIII 100 UI/ml Le produit A presente une Tg de 62 C. 20 Le produit B presente la meme formulation que le produit A a laquelle on a ajoute du NaCl. Ceci a permis de diminuer la Tg a environ 40 C (1'humidite residuelle HR reste inchangee). C est un concentre de FvW cryodesseche et D est un 25 fibrinogene humain cryodesseche. Formulation du produit C (pH 7,0 0,5) . - citrate trisodique 10mM -CaC12 1 mM 30 - glycine 5 g/l - arginine HC1 40 g/l - albumine 10 g/1 -FvW 100 UI/ml 35 Formulation du produit D (6,8 - glycine 2 g/l - monochlorhydrate de lysine 2 g/l - tri-sodium citrate 2 H2O 2,5 g/l Les produits C et D presentent des Tg respectivement de 80 C et 90 C. On mesure le facteur de reduction du bacteriophage PR772 a 12, 24 et 72h pour un chauffage a 62 et 80 C. Le titre viral est calcule selon la formule de Spearman Karber tel que decrit dans the Federal Gazette n 84, 4 mai 1994 et dans Schmidt, N.J. et Emmons, R.W. (1989) dans Diagnostic Procedures for Viral, Rickettsial and Chlamydial Infection, erne Edition. Le facteur de reduction est le resultat du rapport entre le titre viral/ml avant le traitement par chauffage a sec et le titre viral/ml apres le traitement par chauffage a sec. Les resultats sont representes par les graphiques des figures 2 et 3. On peut observer que : - pour un chauffage a T = 80 C, 1. du produit A dont Tg = 62 C (T-Tg 20 C), la cinetique d'inactivation est tres rapide et le facteur de reduction atteint 4 loglo en moins de 24 heures 2. du produit C dont Tg = T, le facteur de reduction atteint 4 log10 au bout de 72 heures 3. du produit D dont Tg = 90 C, le facteur de reduction est infer_ieur a 4 loglo au bout de 72 heures - pour un chauffage a 62 C, 1. du produit A dont Tg = T, le facteur de reduction atteint 4 loglo au bout de 72 heures - 14 - 2. du produit B dont Tg = 40 C (T-Tg 20 C), la cinetique d'inactivation est tres rapide et le facteur de reduction atteint 4 loglo en moins de 24 heures Exemple 2 : Inactivation du PPV par chauffage a sec dans des lyophilisats : On mesure le facteur de reduction du PPV a 12, 24 et 72h pour un chauffage a 80 C dans des lyophilisats de 10 Tg = 80 ou 90 C. Les resultats sont representes par le graphique de la Figure 4. On peut observer que pour un chauffage a T = 80 C, - a Tg = T, le facteur de reduction est proche de 4 15 loglo, - a T Exemple 3 : Inactivation de PPV, HAV, BVDV, PR772 et 20 Phi174 par chauffage a sec a T = Tg dans des lyophilisats : On mesure le facteur de reduction de PPV, HAV, BVDV, PR772 et du bacteriophage Phi174 a 12, 24 et 72h pour un chauffage a T = Tg = 80 C (dans un lyohilisat de Tg 25 = 80 C) ou a T = Tg = 62 C (dans un lyophilisat de Tg = 62 C). Les resultats sont representes par les graphiques des figures 5 et 6. On peut observer que, pour des virus peu resistants : 30 HAV, BVDV, Phil74, un chauffage a T = Tg est suffisant pour atteindre un facteur de reduction de 4 loglo des 24 heures. Par contre, pour des virus plus resistants : PPV et PR772, le temps de chauffage doit etre prolonge a 72 35 heures pour atteindre un facteur de reduction proche de 4 loglo. Par consequent, pour ces virus plus resistants, le but etant de les inactiver, on peut favoriser le facteur - 15 - de reduction virale et la vitesse d'inactivation virale en augmentant la temperature de chauffage T ou en abaissant la Tg du produit afin d'accroitre 1'ecart entre T et Tg. Par ailleurs, on preferera soit le domaine T-Tg >_ 20 C pour favoriser plutot la vitesse de 1'inactivation virale, soit le domaine T- Tg Exemple 4 : Impact du chauffage a 80 C, 72h sur les caracteristiques physico-chimiques d'un lyophilisat de FvW en fonction de sa temperature de transition vitreuse . Trois lyophilisats de FvW caracterises par trois temperatures de transition vitreuse differentes ont ete chauffes a 80 C pendant 72 h. Differents parametres : 1'aspect du lyophilisat, son temps de dissolution et 1'aspect de la solution ainsi obtenue ont alors ete observes. Les resultats sont presentes dans le Tableau 2. Tableau 2 . % HR 0,9 1,7 3,1 Tg ( C) 74 66 42 FvW : Rco (UI/ml) 140 120 105 Aspect du normal Legerement Tres lyophilisat r~tract~ retracte Temps de 15 35 75 dissolution (s) Aspect de la limpide limpide limpide solution On observe qu'un chauffage a une temperature T Tg et T-Tg 20 C permet de conserver une stabilite satisfaisante du produit bien que la temperature choisie permette un changement die-tat de 1'etat25 - 16 - vitreux vers 1'etat caoutchouteux. On observe egalement qu'un ecart trop important entre la temperature de chauffage et Tg, ici 38 C, est defavorable a la stabilite du produit. Par consequent, plus on choisit T proche de Tg, plus on favorise la stabilite du produit. REVENDICATIONS 1. Procede d'inactivation virale par chauffage a sec d'un virus present ou potentiellement present dans un produit biologique seche, caracterise en ce que la temperature de chauffage a sec T est superieure ou egale a la temperature de transition vitreuse Tg du produit. 2. Procede selon la revendication 1, caracterise en ce que la temperature de transition vitreuse Tg du produit biologique seche est ajustee prealablement a la mise en oeuvre du chauffage a sec. 3. Procede selon la revendication 1 ou 2, caracterise en ce que le produit biologique seche est un lyophilisat. 4. Procede selon 1'une des revendications 1 a 3, caracterise en ce que le produit biologique seche est une composition contenant une ou plusieurs proteines extraites du plasma sanguin. 5. Procede selon 1'une des revendications 1 a 4, caracterise en ce que le virus est un virus non-enveloppe. 6. Procede selon 1'une des revendications 2 a 5, caracterise en ce que la temperature de transition vitreuse est augmentee par ajout d'excipients de masse molecu.laire elevee au produit biologique ou par diminution de 1'humidite du produit biologique. 7. Procede selon 1'une des revendications 2 a 5, caracterise en ce que la temperature de transition vitreuse est diminuee par ajout de sell ou d'excipients de faible masse moleculaire au produit biologique ou par augmentation de 1'humidite du produit biologique. 8. Procede selon 1'une des revendications 1 a 7, caracterise en ce que Tg est mesuree grace a un thermoanalyseur differentiel a balayage.- 18 - 9. Procede selon 1'une des revendications 1 a 8, caracterise en ce que T est comprise entre Tg et Tg + 20 C. 10. Procede selon l'une des 5 revendications 1 a 9, caracterise en ce que le facteur de reduction virale 3 log10. 11. Procede selon la revendication 9 ou 10, caracterise en ce que T tend vers Tg + 20 C pour favoriser le facteur de reduction virale et la vitesse 10 d'inactivation virale. 12. Procede selon la revendication 9 ou 10, caracterise en ce que T tend vers Tg pour favoriser la stabilite du produit.