FR 2892024 A1 20070420 FR 0510520 A 20051014 Utilisation du calcium pour la réalisation de compositions cosmétiques ou pharmaceutiques amincissantes à usage topique. Le domaine de l'invention est celui de la conception et de la fabrication des compositions à usage cosmétiques ou pharmaceutiques. L'invention concerne plus précisément le domaine des compositions destinées à une application topique (crèmes, onguents, laits...) à visée amincissante. L'invention concerne notamment, mais non exclusivement le domaine des compositions cosmétiques ou pharmaceutiques renfermant des substances naturelles. On connaît dans l'état de la technique de multiples compositions à usage topique destinées à provoquer ou à induire un amincissement. La plupart de ces compositions mettent en oeuvre deux modes d'actions. Un premier mode d'action consiste à réduire le tissu graisseux par hydrolyse des triglycérides. À titre de principe actif utilisé dans de telles compositions on connaît notamment la caféine mais aussi des extraits concentrés d'algues brunes telles que Laminaria digitata. Un second mode d'action mis en oeuvre par les compositions à effet amincissant connu dans l'état de la technique consiste à influer sur le mécanisme de la lipogénèse. Selon ce mode d'action, ces compositions comprennent des composés tels que des stérols ou des acides gras polyinsaturés qui interviennent au niveau du stockage des graisses pour limiter l'augmentation du volume des adipocytes. On connaît notamment l'utilisation de compositions contenant des extraits lipidiques de la microalgue Odontella aurita riche en acide eicosapentanoïque, ou de graines de Polygonum fagopyrum riche en phytostérols. Selon ces deux modes d'actions, l'alternative consiste donc soit à stimuler la lipolyse pour permettre le déstockage du contenu lipidique des adipocytes, soit à limiter la capacité de stockage des adipocytes en modulant la lipogenèse. Toutefois, récemment, un nouveau mode d'action a été envisagé pour la réalisation de compositions à visée amincissante consistant en l'utilisation de composés susceptibles d'inhiber la différenciation des préadipocytes en adipocytes. Les adipocytes proviennent de cellules souches mésenchymateuses pluripotentes. Ces cellules souches présentent la faculté de se différencier en différents types cellulaires : adipocytes constituant le tissu graisseux, chondrocytes constituant le tissu conjonctif, ostéoblastes constituant le tissu osseux, ou myocytes constituant le tissu musculaire. La différenciation vers un type cellulaire donné nécessite l'expression de facteurs de transcription spécifiques. Par différenciation, ces cellules souches se transforment tout d'abord en adipoblastes, cellules non différenciées, puis en préadipocytes, cellules n'ayant pas encore la capacité d'accumulation des triglycérides. Le préadipocyte exprime les gènes précoces, parmi lesquels ceux des facteurs de transcription C/EBP ou Enhancer Binding Protein et PPAR ou Peroxisome Proliferator ù Activated Receptor. Enfin, au cours de la différenciation terminale, la cellule acquiert les fonctions caractéristiques de la cellule adipeuse, c'est-à-dire les capacités de synthétiser et stocker des triglycérides et de les hydrolyser en réponse à l'environnement hormonal. La Déposante a ainsi élaboré un produit, dénommé Scopariane (marque déposée), constitué par une extrait hydroglycolique obtenu à partir de l'algue brune Sphacelaria scoparia et mettant en oeuvre ce mode d'action. L'objectif de la présente invention est de proposer de nouvelles compositions cosmétiques ou pharmaceutiques destinées à l'amincissement mettant également en oeuvre celui-ci. Dans ce cadre, la présente invention propose d'utiliser du calcium à titre de principe actif pour la réalisation de compositions cosmétiques ou pharmaceutiques amincissantes à usage topique. La Déposante a en effet découvert que, de façon surprenante, le calcium en application topique sur la peau permettait d'inhiber la transformation des préadipocytes en adipocytes. Bien que l'on pourra envisager d'utiliser le calcium sous forme de sels, par exemple sous forme de chlorure de calcium ajouté à toute formulation de compositions cosmétiques ou pharmaceutiques à titre de principe actif amincissant, on utilisera préférentiellement un composé naturel contenant du calcium biodisponible pour la réalisation de ces compositions. Parmi ces composés naturels, on pourra notamment utiliser avantageusement des eaux de source marine. De telles eaux sont en effet très chargées en calcium et présentent aussi l'avantage de montrer une grande pureté. Selon une variante préférentielle de la présente invention, on utilisera toutefois pour la réalisation de ces compositions cosmétiques ou pharmaceutiques amincissantes à usage topique, des extraits végétaux contenant du calcium biodisponible. (On entend par calcium biodisponible du calcium se présentant dans un produit naturel sous forme de sels ou du calcium faiblement chélaté). Parmi les extraits végétaux pouvant être utilisés dans le cadre de la présente invention, on utilisera avantageusement des extraits d'au moins une plante halophyte notamment, mais non exclusivement la salicorne, la criste marine, l'obione, la soude... Ces plantes présentent la particularité de contenir des teneurs élevées en calcium biodisponible. D'une façon préférée entre toutes on utilisera toutefois en tant que source de calcium un extrait d'algue dite calcaire c'est-à-dire appartenant à la famille des Corallinacées. D'une façon particulièrement avantageuse, on utilisera dans le cadre de la présente invention, un extrait de coralline notamment de Corallina officinalis. Les corallines sont des algues rouges qui présentent un aspect original du fait de leur structure calcifiée. Cette structure unique est due aux carbonates contenus en couches successives dans leurs tissus. Les corallines construisent un support de carbonate de calcium qui est recouvert par une fine couche de tissu végétal. Ce tissu est à l'origine de la sécrétion d'une gelée qui va précipiter les carbonates. Cette gangue dure de carbonates forme une coque protectrice. Préférentiellement, mais non exclusivement, les extraits utilisés dans le cadre de la présente invention seront des extraits hydrosolubles. L'invention couvre également toute composition cosmétique ou pharmaceutique amincissante à usage topique contenant à titre de principe actif du calcium, préférentiellement à raison de 0,1 mg/i à 1000 mg/l (exprimé en Cal+). L'invention, ainsi que les différents avantages qu'elle présente seront maintenant plus facilement compris grâce à la description qui va suivre d'un exemple non limitatif de réalisation de celle-ci donnée en référence aux dessins dans lesquels : - la figure 1 représente un diagramme montrant l'effet d'un concentré de Coralline et de l'acide rétinoïque sur la différenciation des adipocytes selon une première expérience ; - la figure 2 représente un diagramme montrant l'effet d'un concentré de Coralline et de Scopariane sur la différenciation des adipocytes selon une deuxième expérience ; - la figure 3 représente un diagramme montrant l'effet du chlorure de calcium et de Scopariane sur la différenciation adipocytaire selon une troisième expérience ; - la figure 4 représente un diagramme montrant l'effet du chlorure de magnésium et de Scopariane sur la différenciation adipocytaire selon une quatrième expérience. 1 ) Evaluation de l'effet du calcium sur la différenciation des adipocytes. Dans un premier temps, la Déposante a évalué in vivo l'effet du calcium sur la différenciation des adipocytes. Pour ce faire, des pré-adipocytes de souris (lignée 3T3-L1) provenant de l'American Type Culture Collection ATCC ont été mis en culture à 37 C sous une atmosphère à 5% de CO2 et à 95% d'humidité, dans un milieu de culture approprié (DMEM Dulbecco's Modified Eagle's Medium) contenant un mélange d'ingrédients connu pour induire la différenciation en adipocytes (selon la méthode décrite par J.M. Mc Donald et al., 1976, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 73:1542).Ce mélange permet la transformation des pré-adipocytes en adipocytes. Ce témoin positif est ci-après désigné par les termes témoin induit . Parallèlement, différents produits à tester ont été ajoutés dans ce milieu de culture et les cellules ont été incubées pendant 7 jours à 37 C. Après 7 jours, les milieux de culture ont été prélevés et les cellules ont été fixées au formol, puis le contenu en lipides a été coloré par une solution d'huile rouge, et les cellules ont été lysées pour libérer les lipides. Les quantités de lipides produites ont été évaluées par un dosage spectrophotométrique. On a utilisé à titre de témoin négatif, un milieu de culture auquel on n'avait ajouté aucun produit connu pour induire la transformation des préadipocytes en adipocytes. Ce témoin négatif est ci-après désigné par les termes témoin non-induit . 1.1 Expérience n 1 Dans une première expérience, on a utilisé : d'une part du calcium, conformément à la présente invention, sous forme de concentré de coralline (Corallina officinales) à raison de 1 % ou 2 % en poids ; et, - d'autre part, conformément à l'art antérieur, un composé connu pour inhiber la transformation des pré-adipocytes en adipocytes à savoir de l'acide rétinoïque à raison d'une concentration de 10"5 M. Dans ce cadre, on a utilisé de l'acide rétinoïque provenant de la Société Sigma - référence R2625. Le concentré de Coralline utilisé a été produit par osmose inverse. Ce concentré de Coralline est très riche en minéraux et notamment très riche en calcium puisqu'il contient environ 0,1 gramme de calcium par litre. Il est également riche en magnésium ainsi qu'en oligo-éléments comme le fer et le zinc. L'absorbance du milieu a été observée après 7 jours de culture et lyse des cellules. Les résultats sont donnés sur la figure 1. Celle-ci montre clairement que la présence d'un concentré à 1% en poids de coralline a complètement inhibé la transformation des pré-adipocytes en adipocytes, et corollairement la production de lipides par ces cellules puisque l'absorbance observée dans ce cas, à savoir 0, 265 est similaire à celle observée en l'absence de toute induction (témoin non induit), à savoir 0,269. Ces résultats montrent aussi que l'action de la coralline à 1% en poids est égale à celle de l'acide rétinoïque à 10-5M, composé connu pour son efficacité à inhiber la transformation des pré-adipocytes en adipocytes, et pour lequel une absorbance de 0,265 a été relevée. On notera également que la coralline utilisée à raison de seulement 0,50 % en poids présente également un effet puisque l'absorbance observée en sa présence est significativement inférieure à celle observée dans le cas du témoin induit. 1.2 Expérience n 2 Une expérience similaire à celle décrite ci-dessus a été effectuée en comparant les effets de concentrés de coralline à 1 % et 2 % en poids sur la production de lipides, en référence non plus à l'acide rétinoïque, mais à un autre composé également connu pour inhiber fortement la transformation des préadipocytes en adipocytes, à savoir la Scopariane (fabriquée et commercialisée par la Déposante -référence E03-101 lot 240703SD), à une concentration de 2% en poids. Les résultats sont donnés sur la figure 2. Celle-ci montre que le concentré de Coralline à 1% et 2 % en poids a un effet significatif sur la production de lipides puisque I'absorbance relevée dans ce cas, à savoir respectivement 0,213 et 0,199 est bien supérieure à celle observée pour le témoin induit, à savoir 0,277. Cet effet est certes moindre que celui observé avec la Scopariane à 2% pour laquelle une absorbance de 0,165 a été relevée dans le cadre de cette expérience mais reste toutefois très significatif. 1.3 Expérience n 3 Dans cette troisième expérience, on a utilisé : d'une part le calcium, conformément à la présente invention, sous forme de chlorure de calcium à raison de 100 g/ml de Caz+, et - d'autre part, conformément à l'art antérieur, la Scopariane à 2 % en poids. Dans ce cadre on a utilisé du chlorure de calcium disponible auprès de la Société Prolabo sous la référence 22-313-394. Comme pour les expériences 1 et 2 décrites ci-dessus, l'absorbance du milieu a été observée après 7 jours de culture et lyse des cellules. Les résultats sont donnés sur la figure 3. Celle-ci montre clairement que la chlorure de calcium à raison de 100 g/ml de Cal+ a inhibé à 55% la production de lipides puisque l'absorbance observée dans ce cas, à savoir 0,213 est bien inférieure à celle observée pour le témoin induit, à savoir 0,275. Cet effet est certes moindre que celui observé avec la Scopariane à 2% pour laquelle une absorbance de 0,180 proche de celle observée avec le témoin non induit a été relevée mais reste toutefois également très significatif. 1.4 Expérience n 4 A titre comparatif, une expérience similaire à l'expérience n 3 a été menée en remplaçant le chlorure de calcium par du chlorure de magnésium à 100 g/ml de Mg2+. Dans ce cadre on a utilisé du chlorure de magnésium obtenu auprès de la Société Sigma (référence M2393 lot 86H08495). Comme pour les expériences 1 à 3 décrites ci-dessus, l'absorbance du milieu a été observée après 7 jours de culture et lyse des cellules. Les résultats sont donnés sur la figure 4. Cette figure 4 montre que l'absorbance observée en cas d'ajout de chlorure de magnésium au milieu est tout à fait similaire à celle observée sur le témoin induit et que donc, ce composé ne permet pas d'inhiber la production de lipides. Cette expérience N 4 prouve aussi que l'effet observé au cours de l'expérience n 3 est bien due au calcium et non aux ions chlorures. 2 ) Composition amincissante à usage topique La Déposante à élaboré, à titre de simple exemple non limitatif, la composition suivante de gel amincissant destiné à une application topique conforme à la présente invention : COMPOSÉ % en poids AQUA (eau) 85,400 CYCLOMETHICONE 5,000 PROPYLENE GLYCOL 5,000 SODIUM POLYACRYLATE 1,100 PEG-40 HYDROGENATED CASTOR OIL 1,000 PHENOXYETHANOL 0,500 CYCLOPENTASILOXANE 0,425 METHYLPARABEN 0,300 DIMETHICONOL 0,075 BUTYLPARABEN 0,050 ETHYLPARABEN 0,050 ISOBUTYLPARABEN 0,050 PROPYLPARABEN 0,050 CORALLINA OFFICINALIS 1,00015 REVENDICATIONS 1. Utilisation du calcium à titre de principe actif pour la réalisation de compositions cosmétiques ou pharmaceutiques amincissantes à usage topique. 2. Utilisation selon la revendication 1 d'un composé naturel contenant du calcium à titre de principe actif pour la réalisation de compositions cosmétiques ou pharmaceutiques amincissantes à usage topique. 3. Utilisation selon la revendication 2 caractérisée en ce que ledit composé naturel est une eau de source marine. 4. Utilisation selon la revendication 2 caractérisée en ce que ledit composé 15 naturel est un extrait végétal contenant du calcium biodisponible. 5. Utilisation selon la revendication 4 caractérisée en ce que ledit composé est un extrait d'au moins une plante halophyte. 20 6. Utilisation selon la revendication 5 caractérisée en ce que ladite plante halophyte est choisie dans le groupe constitué par la salicorne, la criste marine, l'obione, la soude. 7. Utilisation selon la revendication 4 caractérisée en ce que ledit composé 25 naturel est un extrait d'au moins une algue calcaire. 8. Utilisation selon la revendication 7 caractérisée en ce que ledit composé naturel est un extrait de coralline. 30 9. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 4 à 8 caractérisé ence ledit extrait est un extrait hydrosoluble. 10. Utilisation selon l'une quelconque des revendications caractérisé en ce que ladite composition cosmétique ou pharmaceutique comprend entre 0,1 et 1000 mg/I de calcium.