FR 2836337 A1 20030829 FR 0202571 A 20020228 est telle que définie dans l'une quelcouque des revendications 3 à 1S. 1 2836337 UTILISATION DES POLYMERES PROCYANIDOLIQUES A TITRE D'AGENTS IN:EIIBITEURS DES a-AMYLASES ET APPLICATION DANS DES COMPOS1IIONS A VISEES DIETETIQUES L'invention concerne l'utilisation d'extraits de plante pour l'obtention d'une composition destinée à intiber des a-amylases, en particulier l'uamylase intestinale, principal acteur dans la digeshon des sucres lents. L'invention trouve une mise en oeuvre particulièrement avantageuse dans le domaine de la diététique pour la prévention des surcharges pondérales. o Dans la lutte contre la cellulite se dessinent deux tendances majeures. La première consiste essentiellement en l'utilisation de produits cosmétiques ou thérapeutiques présentant des effets directs sur la cellulite, notamment au moyen d'agents actifs favoris ant la lip olys e et/ou inLib ant la lip ogénè se. La deuxième tendance consiste à intervenir au niveau même de s l'alimentation et du comportement alimentaire du suj et, et a pour objectif, soit de permettre au sujet de perdre du poids de façon signifcative, soit de l'aider à ne pas en prendre et/ou à conserver un niveau de poids acceptable. Dans les deux cas, il s'agit de contrôler, voire de réduire, les apports énergétiques de l'alimentation. Une première possibilité pour réduire les apports énergétiques de l'alimentation est de diminuer les rations alimentaires. Mais la sensation de faim fait alors na^tre un sentiment d'interdit et de contrainte mettant chaque j our à rude épreuve la volonté du sujet. Divers produits ont alors été mis au point pour apporter un soutien à ce dernier. La réduction de la prise alimentaire peut 8tre facilitée notamment par des substances anorexigènes qui agissent au niveau du système nerveux central du sujet en s atténuant la sensation de faim. Toutefois, ce type de produit suscite actuellement de nombreuses craintes à l'égard des abus potentiels des utilisateurs et des effets secondaires, tels que palpitations, hypertension artérielle, insomnie, vertiges, céphalées... Des substituts de repas, très peu caloriques, ont également été proposés pour remplacer au moins une partie de l'alimentation quotidienne. Cependant, outre le - 2 2836337 fait de n'8tre que peu appétissants, ces produits n'apportent pas de vraies réponses au problème de poids. Leur durée d'utilisation doit être courte (maximum 3 semaines) et un encadrement par un médecin ou un diététicien est souhaitable, même plusieurs mois après la fin du traitement, pour atteindre un poids stationnaire et durable. s Une toute autre approche, soucieuse de perturber le moins possible le comportement alimentaire du sujet, a été proposée pour pallier ces désagréments. Le sujet tout en conservant une alimentation agréable, habituelle, voit l'assimilation des calories par son organisme se réduire considérablement grâce à des compositions, à base d'agents intibant les euzymes de la digestion, qu'il avale au cours ou après ses o prises alimentaires. La présente invention s'inscrit dans cette approche nutritionnelle dont le confort et le bien-étre du sujet sont des préoccupations constantes. Parmi les innombrables euzymes de la digestion impliquées dans les processus au cours desquels les aliments ingurgités sont réduits par hydrolyse euzymatique en nutriments utilisables par l'organisme, les inventeurs se sont tout particulièrement intéressés aux oc-amylases, une famille d'euzymes indispensables dans la dégradation des sucres lents comme l'amidon, glucide essentiellement présent dans les céréales et les féculents, qui sont des constituants prépondérants dans notre alimentation. o La digestion de l'amidon alimentaire commence dans la bouche sous l'action de l'oc-amylase salivaire. Celle-ci n'hydrolyse que les liaisons oc1-4 des châînes glucidiques de l'amylose et de l'amylopectine. L'action de cette enzyme continue dans l'estomac tant que le pH reste supérieur à 4. L'action de l'u-amylase salivaire apparaissant ainsi réduite du fait du pH acide de l'estomac, il est généralement admis que l'amidon est principalement hydrolysé par l'a-amylase pancréatique, aussi appelée xamylase intestinale. Dans la lumière intestinale, les chanes d'amylose et d'amylopectine sont hydrolysées par cette a-amylase, au niveau des liaisons oc1-4 des cha^nes glucidiques. Son action libère du i j 3 2836337 maltose, du maltotriose et divers oligosaccharides. Ces produits sont ensuite dégradés par les a-glucosidases de la membrane luminale des cellules intestinales. Très peu d'inhibiteurs des oc-amylases sont actuellement connus. Par exemple, EP 0 637 592 et EP 0 372 522, sans pouvoir identifier avec s précision le ou les agents actifs, proposent des extraits de blé, de farine de blé ou de gluten, comme compositions susceptibles d'inhiber l'activité des aamylases. WO 01/17369 propose, quant à lui, une composition anti-obésité comprenant, à titre d'agent inhibiteur des a-amylases, une glycoprotéine de poids moléculaire de 4 200 à 49 000 extraite du Phascolzs vulgaris, une variété particulière o de haricot rouge. La présente invention se propose de combler cette lacune par la caractérisation d'autres *nhibiteurs des a-amylases et la mise en évidence de nouvelles sources d'inhibiteurs d'oc-amylases. - La présente invention a ainsi pour objet de fournir de nouveaux moyens s pour inhiber ces enzymes, de manière s*mple et peu coûteuse. Un autre objectif de l'*nvention est de proposer une application dans le cadre d'une composition diététique à administration par voie oral e, vis ant à inLib er efficacement l'activité des oc-amylases et ceci sans altérer l'absorption intestinale des oligo-éléments, notarnment-le calcium et le magnésium. o Dans tout le texte, on adopte la terminologie suivante: - sucres "rapides": sucres à "index glycémique élevé", c'est-à-d*e induisant un profil diévolution de la glycémie proche du glucose. Us libèrent en une dizaine de minutes le glucose utilisable. I1 s'agit essentiellement des sucres simples (saccharose, bonbons, chocolat, patisseries, sodas, sirops, miel...). s - sucres "lents": sucres à "index glycémique bas", trouvés essentiellement dans les produits céréaliers et dans les pommes de terre, ils libèrent du glucose pendant deux à trois heures sans entrâîner de réaction insulinique brutale. 4 2836337 - carbohydrases: enzymes intervenant dans la dégradation des disaccharides (a- glucosidase, p-glucosidase, maltase, isomaltase...). - composés cyanidoliques: flavan-3-ol et ses dérivés, monomères ou polymères. ns appartiennent à la famille des polyphénols. s - procyanidines: dimères, oligomères ou polymères de flavan-3-ol liés par une liaison C-C au niveau des carbones C4 et CS des flavanoïdes (flavan-3-ol). On distingue les procyanidines oligomériques (ou oligomères procyanidoliques), de degré de polymérisation, ou dp, de 2 à 9; les procyanidines polymérisées, de dp de 10 à 40; les procyanidines hautement polymérisées, de dp supérieur à 40. o - tanins: glucosides de l'acide gallique (tanins galliques ou tanins hydrolysables) ou de la pyrocatéchine (tanins catéchiques ou tanins condensés), de poids moléculaire allant de 300 à 100 000, ils sont présents dans de nombreuses plantes. - tanins condensés: monomères, oligomères ou polymères de dérivés de flavonols comme la catéchine, l a gall ocatéchine, l' épicatéchine, l' épigallocaté chine, s l'afzéléchine, l'épiafzéléchine, le fisétinidol, le robinétinidol et autres flavan-3-ols et leurs C- gluco sides. -tanins hydrolysables: généralement des esters d'un noyau carbodydrate (par exemple, un monosaccharide ou un disaccharide) et d'un acide gallique. Selon la présente invention, on utilise un extrait de plante riche en o polymères procyanidoliques, de dp au moins égal à 10, pour l'obtention d'une composition destinée à inhiber des a-amylases -notamment l'a-amylase intestinale-. L'invention repose ainsi sur la découverte réalisoe par les inventeurs de la capacité des procyanidines à inhiber les a-amylases. I1 est à noter que les procyanidines ainsi que les monomères de s flavan3-ol, et de façon générale les tanins (condensés ou hydrolysables), sont connus pour leur affinité vis-à-vis des protéines et pour former avec celles-ci des complexes insolubles. r} s 2836337 Ces composés ont révélé des activités antiseptiques, antivirales, véinotoniques, anticancéreuses, anti-inflammatoires, anti-âges, anticaries, immunorégulateurs... Par exemple, EP 0 472 531 propose des compositions à base de procyanidines pour traiter les infections virales (par exemple, l'herpès, la varicelle, l'hépatite A, le sida...), ou pour ralentir le vieillissement en protégeant le tissu conjonctif contre les enzymes qui le dégradent de façon naturelle (antiélastases et collagénases). Dans EP 2 695 390, il est suggéré de complexer des tanins, extraits de plante(s) connue(s) pour contenir des procyanidines, à des métaux de degré d'oxydation au moins égal à 3 afn d'accro^ke leurs activités thérapeutiques. o Toutefois, en dépit de l'abondance de connaissances accumulées pendant ces dernières décennies sur les procyanidines et leurs effets sur certaines enzymes, les inventeurs ont été les premiers à mettre en évidence une activité surprenante et inattendue d'inhibition des procyanidines vis-à-vis des a-amylases -notammentde l'a-amylase intestinale-, euzyme particulière qui évolue dans un milieu de pH neutre. s Par ailleurs, des tests comparatifs d'activité ont démontré une inhibition beaucoup plus intense avec des composés procyanidoliques de dp au moins égal à 10 (polymères procyanidoliques), qu'avec des oligomères, dimères ou monomères de flavan-3-ol. L'effcacité de l'inhibition des aamylases d'un extrait de procyanidines ré side ainsi es s entiellement au niveau des polymères procyanidoliques de dp au moins o égal à 10. Avantageusement, les extraits de plante utilisés selon l'invention sont des extraits de tanins condensés, riches en polymères procyanidoliques de dp au moins égal à 10. On conna^t actuellement de nombreuses sources végétales riches en tanins; elles sont d'ailleurs décrites dans des ouvrages tels que " Plantes thérapeutiques - Tradition, pratique offcinale, science et thérapeutique" (Editions Médicales Internationales 3éme édition, 1999), ou encore " Pharmacognosie, Phytochimie, Plantes médicinales " (Editions Lavoisier TEC&DOC - 2ème édition, 1993). r] 6 2836337 Avantageusement, un exkait de plante riche en polymères procyanidoliques utilisé selon l'invention est obtenu à partir d'une source végétale choisie parmi: les feuilles de thé noir, les feuilles de thé vert, les feuilles de myrtilles, l'hamamélis, le ratanhia -notamment le ratanFia du Pérou-, le cachou, l'aubépine, le cyprès, le pin maritime, le raisin. Plus particulièrement, un extrait de plante riche en polymères procyanidoliques de dp au moins égal à 10, utilisé selon l'invention, est un exkait de tanins condensés de pépins de raisin. Notamment, il s'agit de pépins de raisin blanc, une matière première habituellement non utilisce dans la fabrication du vin blanc, et qui o constitue ainsi une source abondante, riche en polymères procyanidoliques, actuellement peu exploitée, à moindre prix. Avantageusement et selon l'invention, un exkait de plante riche en polymères procyanidoliques de dp au moins égal à 10, utilisé selon l'invention, est un exkait de tanins condensés d'écorce de pin. s Avantageusement, un extrait de plante riche en polymères procyanidoliques de dp au moins égal à 10 selon l'invention est obtenu par une exkaction effectuée à partir d'une source végétale, notamment une de celles précédemment citées, comprenant les étapes suivantes: - extraction solide-liquide par l' e au, de prétérence chanffée à 4 0- 6 0 C, d'une o matière végétale naturellement divisée ou réduite en poudre, - extraction liquide-liquide par un solvant organique, de la phase aqueuse issue de la première exkaction, - récupération de la phase aqueuse riche en tanins, éventuellement, concenkation des polymères par exkaction des monomères et s oligomères, - élimination du solvant résiduel, - éventuellement, séchage pour éliminer l'eau. Selon l'invention, pour une utilisation en tant qu'inhibiteur des oc- amylases, l'extrait de plante riche en polymères procyanidoliques de dp au moins égal à - 7 2836337 contient avantageusement au moins 70 % de polymères procyanidoliques de dp au moins égal à 10, en poids total de composés cyanidoliques (selon la méthode de Sun B. et al (1998) - J. Agric. Food Chem. 46, 1390-1396). Conformément à l'invention, les extraits de plante riches en polymères s procyanidoliques de dp au moins égal à 10 peuvent être utilisés à des fins variées, dans toute situation o une inhibition des a-amylases est nécessaire ou désirée. A titre d'exemple et de manière non limitative, une utilisation selon l' invention peut étre favorablement envisagée dans le cadre d'un traitement de l' acidité du rumen des animaux, notamment d'élevage, tel que le traitement décrit par o EP1157696. L'activité inhibitrice des a-amylases par les extraits riches en polymères procyanidoliques de dp au moins égal à 10 trouve également un intérêt tout particulier dans la fabrication d'une composition diététique pour réduire ou empécher l' absorption des sucres lents par l'organisme. Une telle composition est avantageusement utilisée en s tant que complément - alimentaire, par exemple, pour maintenir un état pondéral particulier, pour perdre du poids ou pour traiter des états tels que l'obésité. De plus, pour cette application, le choix des polymères procyanidoliques de dp au moins égal à des tanins condensés, est d'autant plus judicieux que contrairement aux tanins hydrolysables, la malabsorption des oligo-éléments qu'ils induisent est relativement o inoffensive. En effet, les tests effectués par les inventeurs confirment les données bibliographiques sur la faible affinité des tanins condensés vis-à-vis des oligo-éléments. En l'espèce, seulement environ 10 % de la disponibilité du calcium et du magnésium est altérée par les extraits de tanins condensés testés, et ceci pour une inhibition de l'activité des a-amylases avoisinant 90 %. :5 L'invention propose ainsi de façon générale une composition diététique à administration par voie orale visant à réduire l'apport calorique de l'alimentation caractérisée en ce qu'elle comprend àtitre d'agent inhibiteur des a-amylases -notamment l'a-amylase intestinale- au moins un extrait de plante riche en polymères ' 8 2836337 procyanidoliques de dp au moins égal à 10 en quantité adaptée pour au moins sensiblement induire une inhibition de l'activité des a-amylases sans altération sérieuse de l'absorption intestinale des oligo-éléments, notamment le calcium et le nagnésium. Avantageusement, une composition selon l'invention comprend à titre s d'extrait de plante riche en polymères procyanidoliques de dp au moins égal à 10, un extrait de tanins condensés. Avantageusement et selon l'invention, ledit extrait de tanins condensés est obtenu à partir d'une source végétale choisie parmi: les feuilles de thé noir, les feuilles de thé vert, les feuilles de myrtille, l'hamamélis, le ratanhia -notamment le o ratanhia du Pérou-, le cachou, l'aubépine, le cyprès, le pin maritime, le raisin. Avantageusement, une composition selon l'invention comprend à titre d'inhibiteur de l'activité des x-amylases -notamment l'a-amylase intestinale- un extrait de tanins condensés de pépins de raisin. Avantageusement, une composition selon l'invention comprend à titre s d'intibiteur de l'activité des a-amylases -notamment l'o-amylase intestinale- un extrait de tanins condensés d'écorce de pin. Avantageusement, un extrait de plante riche en polymères procyanidoliques de dp au moins égal à 10, utilisé dans une composition selon l 'invention, est obtenu selon le procédé d' extraction précédemment décrit. o Avantageusement, une composition selon l'invention présente une forme galénique adaptée pour permettre une libération de l'agent inhibiteur des oc-amylases dans le milieu intestinal. Avantageusement et selon l'invention, la forme galénique est gastro- résistante. Cette gastro-résistance peut étre obtenue par diverses méthodes, par s exemple, par granulation ou compression, suivies d'un enrobage adapté ou bien par un vecteur tel que gélule ou capsule molle. La gastro-résistance permet ainsi d'éviter une libération dans l'estomac de l'agent inhibiteur des oc-amylases et une perte d'efficacité 9 - 2836337 par interaction de celui-ci avec les protéines du bol alimentaire et par son hydrolyse acide. Avantageusement et selon l'invention, la forme galénique permet une libération prolongée du principe actif dans l'ensemble de l'intestin. s Avantageusement, une composition selon l'invention comprend au moins %, en poids total de la composition, de polymères procyanidoliques de dp au moins égal à 10, issus d'au moins un extrait de plante selon l'invention, et est destinée à une administration journalière de 0,5 à Sg -notamment de l'ordre de 1 à 2g-. L'invention concerne aussi une utilisation d'un extrait de plante riche en o polymères procyanidoliques pour l'obtention d'une composition notamment une composition diététique- destinée à inhiber des oc-amylases, caractérisée, en combinaison, par tout ou partie des caractéristiques ci-dessus ou ciaprès. - D'autres buts, caractéristiques et avantages de l'invention apparaîtront à la lecture des exemples suivants qui se réferent à la figure unique annexée, qui est une représentation graphique de l'inhibition des cc-amylases par différents extraits, selon des courbes doses-dépendantes. EXEMPLE 1: Obtention des extraits de tanins condensés riches en polymères procyanidoliques de dp au moins égal à 10. - Extrait de tanins condensés de pépins de raisin riche en polYmères procyanidoliques o Environ 1 kg de pépins de raisin blanc est broyé mécaniquement. Une première extraction de type solide-liquide est alors effectuée. Celle-ci se fait, de préférence à contre-courant, à l'eau modérément chanffée à 40-60 C. La phase aqueuse est récupérée. Une deuxième extraction de type liquide-liquide est réalisée, cette foisci, :5 avec un solvant organique de type acétate d'éthyle, de prétérence sur colonne à contre courant. A l'issue de cette étape, seule la phase aqueuse riche en tanins condensés est conservée. La phase organique est riche en OPC (oligomères procyanidoliques). L'extrait riche en tanins condensés est alors concentré sous vide afin d'éliminer le solvant résiduel, puis séché par atornisation (élimination de l'eau). t0 2836337 - Extrait de tanins condensés d'écorce de pin riche en polYmères procYanidoliques On répète le procédé précédent sur de l'écorce de pin. EXEMPLE 2: Caractérisation des extraits riches en tanins condensés. - Analyse des polyphénols totaux. Cette analyse a été effectuée selon la méthode de Folin-Ciocalteu modifice [Norme BSL080999]. Le tableau 1 ci-après présente les résultats de dosage des polyphénols des extraits de pépins de raisin et d'écorce de pin. Ces résultats sont exprimés en grammes équivalents d'acides galliques pour 100g d'extrait dosé. TABLEAU 1 Extrait de pépins de raisin Extrait d'écorce de pin Polyphénols totaux 39 33 - Détermination du taux de monomères oligomères et polymères de pépins de raisin. s Deux méthodes complémentaires ont été employées: - la chromatographie liquide haute performance (C.L.H.P.) décrite par Dallas C. et al., 1996 (J. Sci. Food Agric. 70, 493-500.), pour la détermination du taux de monomères, certains dimères et trimères, - la chromatographie sur phase inverse décrite dans Sun B. et al., 1998 (J. Agric. o Food. Chemistry, 46, 1390-1396), pour la détermination du taux des différentes fractions de dp des tanins (monomères, oligomères et polymères). La composition en rnonomères, oligomères et polymères des deux extraits, obtenus par ces deux méthodes, est synthétisée dans le tableau 2 ci-après. Les résultats sont exprimés en proportions pondérales (par rapport à 100g d'extrait initial). Ces analyses montrent une teneur en polymères procyanidoliques très comparable entre les deux extraits. L'extrait de pépins de raisins présente toutefois une teneur en OPC plus de 5 fois supérieure à celle de l'extrait d'écorce de pin. TABLEAU 2 s Extrait de tanins de Extrait de tanins d' écorce pépins de raisin de pin Monomères 0,31 Non détecté (g/lOOg extrait) selon Dallas C. et al. 1996 Dimères 0,98 0,24 (g/lOOg extrait) selon Dallas C. et al. 1996 Oligomères 5,70 O,99 (g/lOOg extrait) selon Sun B. et al. 1998 Polymères 27,60 26,5 8 (g/lOOg extrait) selon Sun B. et al. 1998 EXEMPLE 3: Evaluation de l'inhibition de l'activité a-amylase. L'évaluation de l'inhibition de l'activité a-amylase s'effectue selon la méthode décrite par Bernfeld P., 1995 (Methods in enzyrnology 1, 149-158. Adapté) au o moyen du protocole de dosage défni par la société SI()MA, France, sous la rétérence A6255. Le test a été effectué avec 5 extraits de composés cyanidoliques: - la catéchine, un monomère de la flavan-3-ol, i2 2836337 - le dimère B2, un dimère procyanidolique, - un extrait de raisin riche en oligomères procyanidoliques (de dp inférieur à 10), - un extrait de p ép in s de rai sin rich e en p olymère s pro cyani dolique s obtenu s el on l'exemple 1, s - un extrait d'écorce de pin riche en polymères procyanidoliques obtenu selon l'exemple 1. Pour chacun de ces extraits, différentes concentrations ont été testées. Les résultats de ce test comparatif d'inLibition de l'activité ot-amylase sont reportés dans le tableau 3 ci-après, et présentés sous la forme de courbes o d'inLibitions doses-dépendantes à la figure unique annexée. Cette analyse comparative, dont les résultats sont mieux appréciés lorsqu'on se rétère à la représentation de la figure 1, permet de constater tout d'abord que les composés cyanidoliques exercent de manière surprenante une inhibition sur l'activité des oc-amylases. Cette inhibition présente une efficacité tout à fait remarquable avec les extraits de pépins de raisin et lS d'écorce de pin, obtenus dans l'exemple 1, en comparaison aux trois autres agents testés. En effet, ces deux extraits apparaissent potentiellement capables d'une inhibition de l'activité enzymatique quasi-totale. Les autres agents testés démontrent, quant à eux, des inLibitions maximales dépassant difficilement 50 % d'activité des oc amylases. L'activité inhibitrice des composés cyanidoliques repose ainsi essentiellement sur celles des polymères procyanidoliques de dp au moins égal à 10. Par ailleurs, on constate que l'extrait d'écorce de pin produit une très forte inhibition, presque maximale méme pour une concentration modérée. Cet extrait s présente ainsi l'avantage de pouvoir étre utilisé à des doses relativement faibles, pour lesquelles les effets secondaires potentiels pourront être minimisés. L'extrait de pépins de raisin présente en revanche une inhibition moindre à concentration modérée, mais susceptible à plus fortes concentrations d'engendrer une J 13 2836337 inDibition totale des a-amylases. L'exkait de pépins de raisin est donc particulièrement adapté pour des traitements plus sévères visant à supprimer toute absorption des sucres lents. On note également de manière surprenante que la capacité de la catéchine, un monomère, à inhiber les aamylases est plus élevoe que celle du dimère procyanidolique B2, alors qu'il est de coutume de penser que l'affnité des polyphénols vis-à-vis des enzymes augmente avec leur degré de polymérisation. > 14 2836337 TABLEAU 3 \ Concentration en extraits végétaux \g/ml) \ 25 75 150 500 Extraits végétaux ou \ molécules de synthèse \ Manipulation 1 26,5 % 28,4 % 32,0 % 42,3 % Catéchine Manipulation 2 25,0 % 25,4 % 28,6 % 48,0 % Moyenne 25,8 % 26,9 % 30,3 % 45,2 % Manipulation I 17,1 % 21,1 % 25,2 % 34,1 % Dimère . Manipulation 2 15,4 % 19,1 % 22,9 % 32,6 % procyandollque B2 Moyenne 16,3 % 20,1 % 24,1 % 31,9 % Manipulation 1 nd nd 46,7 % 55,8 % Extrait de raisin Manipulation 2 nd nd 48,9 % 58,6 % riche en ohgoméres Moyenne nd nd 47,8 % 57,2 % Manipulation 1 32,8 % 51, 9 % 62,0 % 84,1 % Extrait de popins de raisin riche enpolyméres Manipulation 2 35,0 % 51,2 % 62,8 % 81,2 % procyanidoliques de dp au moins égal à 10 Moyenne 33,9 % 51,6 % 62,4 % 82,7 % Manipulation I nd nd 84,3 % 87,0 % Extrait d'écorce de pin riche Manipulation 2 nd nd 84,0 % 87,4 % en polymères procyanidoliques Manipulation 3 nd nd 82, 4 % 85,8 % de dp Moyenne nd nd 79,0 % 82,'% au moins égal à 10 nd: non déterminé. EXEMPL1: 4: Evaluation de la disponibilité des oligo-éléments, Ca2+ et Mg La disponibilité du Ca2+ puis Mg2+ vis-à-vis de l'extrait riche en tanins condensés de pépins de raisin obtenu selon l'exemple 1 est apprécice en suivant le s mode opératoire ci-après décrit. Les résultats reportés dans le tableau 4, exprimés en pourcentage d'oligo-éléments non chélatés par l'extrait, reflètent une très faible affnité de l'extrait pour le calcium et le magnésium. Mode opératoire: o 1/ Préparer dans une fiole jaugée de lOOml, une solution d'oligo-éléments (Ca2+ ou Mg2+) en fonction des concentrations choisies d'oligo-éléments, sachant que les concentrations finales doivent respecter une valeur seuil de détection de chaque oligo-éléments pour l'absorption atomique. En l'espèce, on prépare une solution de Ca2+ à 22, 5mM, obtenue par dissolution de 968 mg de glucomate de i5 calcium (C6HO7. /2Ca), et une solution de Mg2+ à 1,SmM, obtenue par dissolution de 219mg de citrate de magnésium (C6HsO7.3/2Mg). 2/ Préparer dans une fole jaugée de lOOml, une solution d'oligo-éléments comprenant les mêmes concentrations qu'à l'étape précédente, et en y rajoutant lSOmg de tanins de pépins de raisin. o 3/ Dans les seringues de 20ml, boucher l'orifce inférieur avec du coton cardé, remplir la seringue de résine P.V.P.P. (Polyvinylpolypyrrolidone) et protéger la résine par du coton cardé. 4/ Passer approximativement 20ml des solutions à tester sur la résine P.V. P.P. Pour chaque solution, utiliser une seringue différente. :5 5/ Laisser reposer une nuit. 6/ Récupérer Sml de chaque solution passée sur résine. Compléter à 250ml dans une fiole jaugée. 7/ Contrôler la quantité d'oligo-éléments présents dans chaque solution par absorption atomique. i- 16 2836337 Calculs: [oligo-éléments souls (mg)] - [oligo-éléments mis en solution avec des tanins (mg)] % d'oligo-éléTnents = 100 - x 100 non chélatés aux [oligo-éléments souls (mg)] tanins TABLEAU 4 o-éléments testés Calcium Magnésium Manipulations \ Manipulation 1 92, 12 lOO,O Manipulation 2 85,80 - 83,0 Moyenne 88,96 91,5 REVENDICATIONS 1/- Utilisation d'un extrait de plante riche en polymères procyanidoliques de dp au moins égal à 10, pour l'obtention d'une composition destinée à inhiber des oc-amylases -notamment l'or-amylase intestinale-. s 2/- Utilisation d'un exkait de plante riche en polymères procyanidoliques de dp au moins égal à 10 selon la revendication 1, caractérisée en ce que ledit exkait de plante est un extrait de tanins condensés. 3/- Utilisation d'un exkait de plante riche en polymères procyanidoliques de dp au moins égal à 10 selon la revendication 2, caractérisée en ce que ledit exkait de tanins o condensés est obtenu à partir d'une source végétale choisie parmi: les feuilles de thé noir, les feuilles de thé vert, les feuilles de myrtille, l'hamamélis, le ratanDia, le cachou, l'aubépine, le cyprès, le pin maritime, le raisin. 4/- Utilisation d'un exkait de plante riche en polymères procyanidoliques de dp au moins égal à 10 selon la revendication 2, caractérisée en ce que l'exkait de plante riche en polymères procyanidoliques de dp au moins égal à 10 est un exkait de tanins condensés de pépins de raisin. /- Utilisation d'un exkait de plante riche en polymères procyanidoliques de dp au moins égal à 10 selon la revendication 2, caractérisée en ce que l'extrait de plante riche en polymères procyanidoliques de dp au moins égal à 10 est un extrait de tanins o condensés d'écorce de pin. 6/- Utilisation d'un extrait de plante riche en polymères procyanidoliques de dp au moins égal à 10 selon l'une des revendications 1 à 5, caractérisée en ce que ledit extrait de plante est obtenu selon un procédé d'exkaction comprenant les étapes: extraction solide-liquide par l'eau, de prétérence chauffée à 40-60 C, d'une :5 matière végétale naturellement divisée ou réduite en poudre, extraction liquide-liquide par un solvant organique, de la phase aqueuse issue de la première extraction, - récupération de la phase aqueuse riche en tanins, _- r 18 2836337 - éventuellement, concentration des polymères par extraction des monomères et oligomères, - élimination du solvant résiduel, - éventuellement, séchage pour éliminer l'eau. 7/- Utilisation d'un extrait de plante riche en polymères procyanidoliques de dp au moins égal à 10 selon l'une des revendications 1 à 6, caractérisce en ce que ledit extrait contient au moins 70 % de polymères procyanidoliques de dp au moins égal à 1O, en poids total de composés cyanidoliques. 8/- Composition diététique à administration par voie orale visant à réduire l'apport o calorique de l'alimentation caractérisée en ce qu'elle comprend à titre d'agent inhibiteur des oc-amylases -notamment l'ocamylase intestinale- au moins un extrait de plante riche en polymères procyanidoliques de dp au moins égal à 10 en quantité adaptée pour au moins sensiblement indu*e une inhibition de l'activité des a-amylases sans altération sérieuse de l'absorption intestinale des oligo-éléments, notamment le is calcium et le magnésium. 9/- Composition diététique à administration par voie orale selon la revendication 8, caractérisée en ce que ledit extrait de plante est un extrait de tanins condensés. /- Composition diététique à administration par voie orale selon la revendication 9, caractérisée en ce que ledit extrait de tanins condensés est obtenu à part* d'une source o végétale choisie parmi: les feuilles de thé no*, les feuilles de thé vert, les feuilles de myrtille, l'hamamélis, le ratanDia, le cachou, l'aubépine, le cyprès, le pin maritime, le raisin. 11/- Composition diététique à administration par voie orale selon la revendication 9, caractérisée en ce que l'extrait de plante riche en polymères procyanidoliques de dp au moins égal à 10 est un extrait de tanins condensés de pépins de raisin. 12/- Composition diététique à administration par voie orale selon la revendication 9, caractérisée en ce que l'extrait de plante riche en polymères procyanidoliques de dp au moins égal à 10 est un extrait de tanins condensés d'écorce de pin. _. r ' / 9 2836337 13/- Composition diététique à administration par voie orale selon l'une des revendications 8 à 12, caractérisée en ce que l'exkait de plante riche en polymères procyanidoliques de dp au moins égal à 10 est obtenu selon un procédé d' extraction comprenant les étapes suivantes: s - extraction solide-liquide d'une matière végétale naturellement divisce ou réduite en poudre, par de l'eau de préférence chauffée à 40-60 C, - extraction liquide-liquide de la phase aqueuse, issue de la première extraction, par un solvant organique, - récupération de la phase aqueuse riche en tanins, o - éventuellement, concentration des polymères par exkaction des monomères et oligomères, élimination du solvant résiduel, - éventuellement, séchage pour éliminer l'eau. 14/- Composition diététique à administration par voie orale selon l'une des s revendications 8 à 13, caractérisée en ce qu'elle présente une forme galénique adaptée pour permettre une libération de l' agent inhibiteur des a-amylases dans le milieu intestinal. /- Composition diététique à administration par voie orale selon la revendication 14, caractérisée en ce que la forme galénique est gastro-résistante. o 16/- Composition diététique à administration par voie orale selon les revendications 14 ou 15, caractérisée en ce que la forme galénique permet une libération prolongée du principe actif dans l'ensemble de l'intestin. 17/- Composition diététique à adminiskation par voie orale selon l'une des revendications 1 à 16, caractérisée en ce qu'elle comprend au moins 10 %, en poids total de la composition, de polymères procyanidoliques de dp au moins égal à 10, issus d'au moins un exkait de plante, et es destinée à une administration journalière de 0,5 à