FR 2843591 A1 20040220 FR 0210278 A 20020813 PEPTIDES ANTIMICROBIENS, POLYPEPTIDES COMPRENANT LESDITS PEPTIDES, GENES CODANT LESDITS PEPTIDES, VECTEURS, ORGANISMES TRANSFORMES ET COMPOSITIONS LES CONTENANT. La présente invention a pour objet de nouveaux peptides présentant des propriétés antimicrobiennes, des polypeptides comprenant lesdits peptides, des polynucléotides codant lesdits peptides, des gènes chimères, des vecteurs contenant lesdits polynucléotides ou lesdits gènes chimères et des organismes transformés. L'invention concerne également des compositions antimicrobiennes contenant lesdits peptides utilisables en thérapie humaine et animale, en agriculture ainsi que dans l'industrie agroalimentaire et phytosanitaire. Tant en santé humaine et animale qu'en santé végétale, le besoin de nouvelles molécules permettant de lutter contre les infections d'origine bactérienne et fongique est grandissant. En santé humaine, les infections nosocomiales d'origine bactérienne et fongique constituent des infections graves qui affectent les patients hospitalisés. Elles s'avèrent particulièrement redoutables pour les patients dont le système immunitaire est fragilisé suite à des traitements comme la corticothérapie ou la chimiothérapie, des interventions comme des transplantations ou des maladies affectant le système immunitaire comme le Syndrome d'ImmunoDéficience Acquise. La situation est particulièrement préoccupante pour les patients immunodéprimés infectés par des bactéries à Gram positif de genre Enterococcus. Les Enterococci ont été reconnus depuis ces 2 dernières décennies comme étant la principale cause du développement de bactéricémies, d'infections urinaires et d'infections intra-abdominales chez les patients hospitalisés (Pathogenicity of Enterococci, Lynn E. Hancock and Michael S. Gilmore, Gram- Positive Pathogens, ASM Publications 2000). Parmi les Enterococci les plus pathogènes, on répertorie notamment les espèces Enterococcus faecalis et Enterococcus faecium. Enterococcus faecalis est à lui seul responsable d'environ 80% des infections nosocomiales mentionnées précédemment. Les infections causées par les bactéries de genre Enterococcus sont particulièrement difficiles à traiter. Les Enterococci tolèrent une large variété de conditions de croissance. Ils présentent notamment la capacité de croître dans des environnements hypotoniques, hypertoniques, acides, alcalins et dans des environnements dont la gamme de température s'échelonne entre 10 et 45 C. L'azide de sodium et les sels biliaires qui inhibent la croissance voire détruisent la plupart des microorganismes, sont tolérés par les Enterococci. Les composés antibactériens les plus communément utilisés à l'heure actuelle sont ou dérivent de substances naturelles produites par des bactéries, des actinomycètes et des champignons. Ces composés antibactériens sont regroupés selon les principales classes qui suivent : les -lactams incluant les pénicillines, la méthicilline, les céphalosporines et les monobactames ; les aminoglycosides incluant la streptomycine, la gentamicine, la néomycine, la tobramycine, la nétilmycine et l'amikacine ; tétracyclines incluant la minocycline et la doxycycline ; les sulfonamides et trimethoprimes ; lesfluoroquinolones incluant la ciprofloxacine, la norfloxacine et l'ofloxacine ; les macrolides incluant l'érythromicine, l'azithromycine et la clarithromycine ; les quinolones incluant la ciprofloxine ; polymyxines ; glycopeptides incluant la vancomycine ; polymyxines ; les lincosamides ; et le chloramphénicol. Les Enterococci ont naturellement développé des mécanismes de résistance contre la plupart des antibactériens classiques et notamment contre les -lactams de type pénicilline et céphalosporines, contre les aminoglycosides de type gentamycine, contre les quinolones, contre les glycopeptides de type vancomycine, contre les tétracyclines, contre les macrolides de type érythromycine, contre le chloramphénicol et contre l'ampicilline (Diversity among Multidrug-Resistant Enterococci, Barbara E. Murray, Emerging Infectious Diseases, Vol.4, No.l, January-March 1998). Pour exemple, le pourcentage d'infections nosocomiales causées aux Etats-Unis par les Enterococci résistants à la vancomycine a augmenté de plus d'un facteur 20 entre 1989 et 1993 soit de 0,3% à 7,9% (Multiple-Drug Resistant Enterococci : The Nature of the Problem and an Agenda for the Future, Mark M. Huycke, Daniel F. Sahm and Michael S. Gilmore, Emerging Infectious Diseases, Vol.4, No.2, April-June 1998). Des peptides présentant des propriétés antimicrobiennes sont produits par une grande variété d'espèces tant animales que végétales, chez lesquelles ils participent à des mécanismes non spécifiques de défense contre les infections (Antimicrobial peptides of multicellular organisms, Zasloff M., Nature Vol.415, Jan 2002,389-395). Les insectes ont notamment développé un système de défense efficace contre les microorganismes. Cette réponse immunitaire s'appuie pour une large part sur la synthèse rapide et transitoire de peptides antimicrobiens à large spectre d'activité (Antimicrobial peptides in insects ; structure and function, Bulet P. and al., Dev. Comp. Immunol. 23,1999, 329-344). Parmi les peptides d'insectes qui présentent des propriétés contre les bactéries à Gram positif, on répertorie notamment les cécropines, les défensines, la thanatine et la moricine. Les cécropines sont des peptides isolés à partir de diptères et de lépidoptères qui présentent une structure tridimensionnelle du type comportant 2 hélices a amphipatiques (Amphipatic, a-helical antimicrobial peptides, Tossi A., Sandri L., Giangaspero A., Biopolymers, Vol. 55,4-30 (2000) ; WO 89/00194). Les défensines d'insectes sont des peptides isolés à partir d'ordres variés d'insectes qui présentent une structure tridimensionnelle du type comportant une hélice a et 2 brins (3 antiparallèles reliés par 3 ponts disulfure (EP 0349451 ; WO 90/13646 ; EP0546213 ; FR 2695392 ; EP 0607080 ; WO 97/02286). La thanatine est un peptide isolé à partir de l'hémiptère Podisus maculiventris qui présente une structure tridimensionnelle du type (3 hairpin-like comportant deux brins (3 antiparallèles reliés par un pont disulfure (WO 99/24594). La moricine est un peptide isolé à partir du lépidoptère de la famille des Bombycidae, Bombyx mori (JP 08119995 ; JP 11215983). Parmi les peptides précédemment énumérés, aucun n'a été décrit comme présentant une activité contre les bactéries à Gram positif de genre Enterococcus. Le problème technique posé par la présente invention consiste à caractériser de nouveaux composés présentant des propriétés antifongiques et/ou antibactériennes et plus particulièrement contre les bactéries à Gram positif de genre Enterococcus responsables d'infections opportunistes graves chez l'homme et/ou les animaux. Par antibactérien , on entend selon la présente invention, toute molécule présentant des propriétés bactériostatiques et/ou bactéricides. Par antifongique , on entend selon la présente invention, toute molécule présentant des propriétés fongistatiques et/ou fongicides. Dans les séquences peptidiques rapportées ciaprès, les acides aminés sont représentés par leur code à une lettre, mais ils peuvent être aussi représentés par leur code à trois lettres selon la nomenclature ci-dessous. A Ala alanine C Cys cystéine D Asp acide aspartique E Glu acide glutamique F Phe phénylalanine G Gly glycine H His histidine I Ile isoleucine K Lys lysine L Leu leucine M Met méthionine N Asn asparagine P Pro proline Q Gln glutamine R Arg arginine S Ser sérine T Thr thréonine V Val valine W Trp tryptophane Y Tyr tyrosine La Demanderesse a maintenant isolé, purifié et caractérisé de nouveaux peptides à partir de l'hémolymphe de larves immunisées du lépidoptère de la famille des Nymphalidae, Caligo illioneus (Figure 1). Les lépidoptères de la famille des Nymphalidae ont une activité diurne et se caractérisent par la présence d'antennes se terminant en forme de massue, de couleurs vives avec motifs et d'ailes verticales au repos. Les peptides isolés par la Demanderesse à partir de l'hémolymphe de larves immunisées du lépidoptère Caligo illioneus répondent à la formule (I) : Xaa-Lys-Ile-Pro-Xab-Ala-Xac-Lys-Gly-Ala-Xad-Arg-Ala-LeuXae-Ala-Ser-Thr-Ala-Xaf-Asp-Ile-Ala-Xag-Phe-Xah-Arg-LysArg-Xai (I) dans laquelle, Xaa est -NH2 ou le reste peptidique Arg ou Gly, Xab est le reste peptidique Ile-Asn ou Val-Glu, Xac est le reste peptidique Ile-Lys, Ile-Arg ou Leu-Lys, Xad est le reste peptidique Ser-Arg-Ala-Trp, Lys-Ala-Val-Gly-His-Gly-Leu ou Lys-Val-Ala-Gly-Arg-Ala-Trp, Xae est le reste peptidique Asp-Leu, Asn-Ile ou Asp-Leu, Xaf est le reste peptidique Tyr ou His, Xag est le reste peptidique Ser-Ile, Ser-Ala ou His-Leu, Xah est le reste peptidique Asn, Asp ou His, Xai est -OH ou le reste peptidique Glu, Asn ou Lys-His. La présente invention a donc pour principal objet un peptide isolé répondant à la formule (I): Xaa-Lys-Ile-Pro-Xab-Ala-Xac-Lys-Gly-Ala-Xad-Arg-Ala-LeuXae-Ala-Ser-Thr-Ala-Xaf-Asp-Ile-Ala-Xag-Phe-Xah-Arg-LysArg-Xai (I) dans laquelle Xaa, Xab, Xac, Xad, Xae, Xaf, Xag, Xah et Xai sont tels que définis précédemment, ses dérivés et ses fragments. La présente invention concerne plus particulièrement un peptide isolé répondant à l'une des séquences suivantes : - ETD-P1646 G K I P I N A I R K G A K A V G H G L R A L N I A S T A H D I A S A F H R K R K H (SEQ ID NO :1) - ETD-P1647 R K I P V E A I K K G A S R A W R A L D L A S T A Y D I A S I F N R K R E ( SEQ ID NO :2) - ETD-P1648 G K I P V E A L K K G A K V A G R AWRALDLASTAYDIAHLFDRKRN (SEQ ID NO :3), ses dérivés et ses fragments. A titre de dérivés des peptides de l'invention, on peut citer les peptides qui présentent une modification post-traductionnelle et/ou modification chimique en particulier une glycosylation, une amidation, une acylation, une acétylation, une méthylation ainsi que les peptides qui portent un groupement protecteur. On entend par groupement protecteur selon la présente invention, tout groupement permettant d'éviter la dégradation desdits peptides. Les dérivés des peptides de l'invention peuvent également être ceux dont un ou plusieurs acides aminés sont des énantiomères, des diastéréoisomères, des acides aminés naturels de conformation D, des acides aminés rares notamment l'hydroxyproline, l'hydroxylysine, l'allohydroxylysine, la 6-N-méthylysine, la N-éthylglycine, la Nméthylglycine, la N-éthylasparagine, l'allo-isoleucine, la N-méthylisoleucine, la N-méthylvaline, la pyroglutamine, l'acide aminobutyrique et les acides aminés synthétiques notamment l'ornithine, la norleucine, la norvaline, la cyclohexyl-alanine et les oméga-acides aminés. Les dérivés couvrent également les rétropeptides et les rétroinversopeptides, de même que les peptides dont la chaîne latérale d'un ou plusieurs des acides aminés est substituée par des groupements qui ne modifient pas l'activité antimicrobienne des peptides de l'invention. A titre de fragments des peptides de l'invention, on entend des fragments d'au moins 5 acides aminés qui présentent une activité antimicrobienne. L'activité antimicrobienne des dérivés et des fragments des peptides de l'invention peut être mise en évidence grâce aux tests in vitro décrits ci-après dans l'exemple 4. L'invention concerne aussi un polypeptide comprenant un peptide de l'invention. L'invention envisage plus particulièrement un polypeptide comprenant un peptide de l'invention dont l'une et/ou l'autre des extrémités dudit peptide comprend un ou plusieurs acides aminés nécessaires à son expression et/ou à son ciblage dans un organisme hôte. L'invention concerne également un polynucléotide isolé codant un peptide ou un polypeptide de l'invention. On entend par polynucléotide selon la présente invention, une séquence nucléique de type ADN ou ARN, de préférence ADN, notamment double brin. L'invention concerne également les polynucléotides isolés qui comprennent des modifications au niveau d'un ou plusieurs nucléotides résultant de la dégénérescence du code génétique et qui codent une même séquence d'acides aminés des peptides ou polypeptides de l'invention. L'invention couvre également les polynucléotides isolés codant les peptides ou les polypeptides de l'invention et capables de s'hybrider dans des conditions stringentes aux dits peptides ou polypeptides. On entend par condition stringentes selon la présente invention, les conditions enseignées par Sambrook et al. (Molecular cloning, 1989, Noland C. ed., New York : Cold Spring Harbor Laboratory Press). L'invention couvre également les séquences nucléotidiques complémentaires des polynucléotides isolés définis ci-dessus ainsi que les ARN correspondants. L'invention concerne également un gène chimère comprenant au moins, liés entre eux de façon opérationnelle, un promoteur constitutif ou inductible fonctionnel dans un organisme hôte, un polynucléotide codant un peptide ou un polypeptide de l'invention et un élément terminateur fonctionnel dans un organisme hôte. On entend par liés entre eux de façon opérationnelle selon l'invention, des éléments liés entre eux de façon à ce que le fonctionnement d'un des éléments est affecté par celui d'un autre. A titre d'exemple, un promoteur est lié de façon opérationnelle à une séquence codante lorsqu'il est capable d'affecter l'expression de cette dernière. L'ensemble des éléments régulateurs de la transcription, de la traduction et de la maturation de peptides ou polypeptides que le gène chimère peut comprendre est connu de l'homme du métier et ce dernier est capable de les choisir en fonction de l'organisme hôte. Le gène chimère peut notamment comprendre à titre d'élément régulateur additionnel, des séquences codant pour un peptide signal ou de transit de façon à diriger la sécrétion du peptide ou polypeptide de l'invention dans l'organisme hôte. Lorsque l'organisme hôte est une levure, ces séquences sont préférentiellement les séquences pré de BGL2 et pro de MFal qui permettent la sécrétion du peptide ou polypeptide de l'invention directement dans le milieu de culture. Le gène chimère peut en outre comprendre des séquences codant une endoprotéase pour augmenter l'activité protéolytique dans l'organisme hôte durant le processus de sécrétion. Lorsque l'organisme hôte est une levure, ces séquences sont préférentiellement les séquences du gène KEX2 codant l'endoprotéase yscf qui permet de cliver la séquence pro du pré-pro-peptide de l'invention durant le processus de sécrétion. L'invention concerne également un vecteur de clonage et/ou d'expression caractérisé en ce qu'il contient un polynucléotide ou un gène chimère selon l'invention pour transformer un organisme hôte et exprimer dans ce dernier un peptide ou polypeptide de l' invention. Le vecteur peut être un plasmide, un cosmide, un bactériophage ou un virus en particulier un baculovirus. Le vecteur est avantageusement un vecteur à réplication autonome comportant des éléments permettant son maintien et sa réplication dans l'organisme hôte comme une origine de réplication. En outre, le vecteur peut comporter des éléments permettant sa sélection dans l'organisme hôte comme par exemple un gène de résistance à un composé antibactérien ou un gène de sélection qui assurent la complémentation avec le gène respectif délété au niveau du génome de l'organisme hôte. Le vecteur peut également être un vecteur navette comportant des éléments permettant son maintien et sa réplication dans chacun des organismes hôte et des éléments permettant sa sélection dans chacun des organismes hôte. De tels vecteurs de clonage et/ou d'expression sont bien connus de l'homme du métier et largement décrits dans la littérature. L'invention concerne également un organisme hôte transformé par un vecteur de l'invention. Par organisme hôte selon la présente invention, on entend tout organisme uni- ou pluricellulaire, inférieur ou supérieur, dans lequel un polynucléotide ou un gène chimère de l'invention est introduit pour la production d'un peptide ou polypeptide de l'invention. Selon une forme préférée de l'invention, l'organisme hôte est un microorganisme tel qu'une levure, une bactérie ou un champignon. La transformation de tels microorganismes permet de produire les peptides ou polypeptides de l'invention à échelle semi-industrielle ou industrielle. A titre de bactérie, l'invention envisage plus particulièrement la bactérie de l'espèce Escherichia coli. A titre de levure, l'invention envisage plus particulièrement une levure du genre Saccharomyces, de préférence de l'espèce Saccharomyces cerevisiae, du genre Kluyveromyces, de préférence de l'espèce Kluyveromyces lactis, du genre Hansenula, de préférence de l'espèce Hansenula polymorpha, du genre Pichia, de préférence de l'espèce Pichia pastoris ou du genre Schizosaccharomyces, de préférence de l'espèce Schizosaccharomyces pombe. A titre de champignon, l'invention envisage plus particulièrement le champignon filamenteux de l'espèce Aspergillus nidulans. Selon une autre forme de l'invention, l'organisme hôte est un animal, en particulier une cellule d'arthropode (par exemple une cellule de Spodoptera frugiperda ou de Trichoplusia ni) ou une cellule de mammifère. Selon une autre forme de l'invention, l'organisme hôte est une cellule végétale ou une plante. Par cellule de plante , on entend, selon la présente invention, toute cellule issue d'une plante et pouvant constituer des tissus indifférenciés tels que des cals, des tissus différenciés tels que des embryons, des parties de plantes, des plantes ou des semences. Par plante , on entend selon l'invention, tout organisme pluricellulaire différencié capable de photosynthèse, en particulier monocotylédones ou dicotylédones, plus particulièrement des plantes de culture destinées ou non à l'alimentation animale ou humaine. Les peptides de l'invention sont également utiles pour conférer aux plantes un caractère de résistance aux maladies bactériennes et/ou fongiques. L'invention concerne donc également une cellule végétale ou une plante résistante aux maladies bactériennes et/ou fongiques comprenant un polynucléotide ou un gène chimère de l'invention et exprimant un peptide ou polypeptide de l'invention. Les peptides ou polypeptides de l'invention peuvent aussi être synthétisé chimiquement selon des techniques connues de l'homme du métier. Les peptides de l'invention ont été testés pour leurs activités antimicrobiennes. Les tableaux 1 et 2 ciaprès exposent respectivement les activités antibactériennes in vitro (IC90 g/ml) et les activités antifongiques in vitro (CMI g/ml) des peptides de l'invention. Tableau 1 IC90 g/ml Gram positif Gram négatif Staphylococcus Enterococcus sp. Pseudomonas aureus aeruginosa ETD-P1646 16 8 > 64 ETD-P1647 16 8 > 64 ETD-P1648 32 8 > 64 Tableau 2 CMI g/ml Levures Champignons filamenteux Candida Candida Aspergillus albicans glabrata fumigatus 24h 48h 24h 48h ETD-P1646 8-4 16 > 64 > 64 > 40 ETD-P1647 64-32 ND > 64 > 64 > 40 ETD-P1648 32-16 ND > 64 > 64 > 40 ND : Non Déterminé Les peptides de l'invention sont préférentiellement actifs contre les bactéries à Gram positif et plus particulièrement envers les bactéries du genre Enterococcus. L'invention vise donc en outre la mise à profit des propriétés antimicrobiennes des peptides de l'invention pour prévenir et/ou traiter les infections bactériennes et/ou fongiques tant chez l'homme et l'animal que chez les plantes. L'invention concerne donc avantageusement l'utilisation des peptides de l'invention à titre de médicament en thérapie humaine et animale. Elle concerne également l'utilisation des peptides de l'invention pour le traitement des plantes contre les infections bactériennes et/ou fongiques, en appliquant lesdits peptides directement sur les plantes. L'invention concerne donc une composition antibactérienne comprenant à titre d'agent actif au moins un peptide de l'invention avantageusement associé dans ladite composition à un véhicule acceptable. La composition antibactérienne peut en outre comprendre un autre agent antibactérien. Selon la présente invention, l'agent antibactérien est, de préférence, choisi parmi les sslactams et plus particulièrement les pénicillines, méthicilline, céphalosporines et monobactames ; aminoglycosides et plus particulièrement la streptomycine, gentamicine, néomycine, tobramycine, nétilmycine et amikacine ; les tétracyclines et plus particulièrement la minocycline et doxycycline ; sulfonamides et trimethoprime ; les fluoroquinolones et plus particulièrement le ciprofloxacine, norfloxacine et ofloxacine ; les macrolides et plus particulièrement l'érythromicine, azithromycine et clarithromycine ; les quinolones et plus particulièrement la ciprofloxine ; les polymyxines ; les glycoprotéines et plus particulièrement la vancomycine et teicoplanine ; lipopeptides et plus particulièrement la daptomycine ; les lincosamides ; chloramphénicol ; et oxazolidinones et plus particulièrement le linezolide. L'invention concerne aussi une composition antifongique comprenant à titre d'agent actif au moins un peptide de l'invention avantageusement associé dans ladite composition à un véhicule acceptable. La composition antifongique peut, en outre, comprendre un autre agent antifongique. Selon la présente invention, l'agent antifongique est, de préférence, choisi parmi les dérivés polyènes et, plus particulièrement l'amphotéricine B, nystatine et pimaricine ; dérivés azolés et plus particulièrement le ketoconazole, clotrimazole, miconazole, econazole, butoconazole, oxiconazole, sulconazole, tioconazole, terconazole, fluconazole et itraconazole ; allyliques-thiocarbamates et plus particulièrement le tolnaftate, naftifine et terbinafine ; 5-fluorocytosine ; echinocandins ; griseofulvine ; ciclopirox ; et haloprogine. Par véhicule , on entend selon la présente invention, toute substance qui est ajoutée au (x) de l'invention pour favoriser le transport du ou des peptides, éviter sa dégradation substantielle dans ladite composition et préserver ses propriétés antimicrobiennes. Le véhicule est choisi en fonction du type d'application de la composition. Notamment, lorsque la composition est appliquée à un usage pharmaceutique en santé humaine et animale, le véhicule est un véhicule pharmaceutiquement acceptable adapté à une administration du peptide de l'invention par voie topique, per os ou par injection. Lorsque la composition est appliquée à un usage cosmétique, le véhicule est un véhicule cosmétiquement acceptable adapté à une administration sur la peau ou les phanères. Lorsque la composition est appliquée à un usage agrochimique, le véhicule est un véhicule agrochimiquement acceptable adapté à une administration sur les plantes ou à proximité des plantes sans les dégrader. Les peptides ou la composition de l'invention présentent également un intérêt dans l'industrie agroalimentaire. Leur utilisation permet notamment d'empêcher la contamination par les bactéries, les levures et/ou les champignons pendant la fabrication de produits alimentaires et après leur fabrication pour leur conservation. Dans l'industrie phytosanitaire, les peptides ou la composition de l'invention peuvent également être utilisés pour la fabrication des produits phytosanitaires en lieu et place des produits usuels. D'autres avantages et caractéristiques des peptides de l'invention apparaîtront des exemples qui suivent concernant leur préparation et leurs activités antimicrobiennes et dans lesquels il sera fait référence aux dessins en annexe dans lesquels : -la figure 1 représente le lépidoptère Caligo illioneus (famille des Nymphalidae ; des Brassolinae) à partir duquel les peptides de l'invention ont été isolés. I. Exemple 1 Isolement des peptides ETDP1646, ETD-P1647 et ETD-P1648 à partir de l'hémolymphe prélevée chez des larves immunisées du lépidoptère Cali go illioneus. 1) Induction de la synthèse biologique de substances antimicrobiennes dans l'hémolymphe de Cali go illioneus. Les larves matures de dernier stade du lépidoptère Caligo illioneus ont été immunisées par injection d'une solution de PBS contenant des bactéries à Gram positif (Micrococcus luteus et Staphylococcus aureus) et à Gram négatif (Pseudomonas aeruginosa), des spores de champignons filamenteux (Aspergillus fumigatus) et des levures (Candida albicans). Les bactéries sont préparées à partir de cultures réalisées en milieu de Luria-Bertani durant 12 heures à 37 C. Les levures sont préparées à partir de cultures réalisées en milieu de Sabouraud durant 12 heures à 30 C. Les spores d'A. fumigatus sont prélevées d'un stock congelé à -80 C. Les animaux ainsi infectés ont été conservés pendant 24 heures sur leur plante hôte, dans un espace ventilé. Avant le prélèvement de l'hémolymphe, les larves ont été refroidies sur de la glace. 2) Préparation du plasma. L'hémolymphe de C. illioneus (28 ml) a été collectée par piqûre latérale au niveau de la tête suivie d'une pression manuelle et recueillie dans des tubes de microcentrifugation en polypropylène de 1,5 ml refroidis dans de la glace et contenant de l'aprotinine comme inhibiteur de protéases (20 jug/ml en concentration finale) et de la phénylthiourée comme inhibiteur de la mélanisation (concentration finale de 40 M). L'hémolymphe ainsi collectée à partir des larves immunisées a été centrifugée à 8000 rpm pendant 1 min à 4 C afin d'éliminer les hémocytes. Le surnageant de centrifugation a été alors centrifugé à 12000 rpm. L'hémolymphe dépourvue des cellules sanguines a été conservée à -80 C jusqu'à son utilisation. 3) Acidification du plasma. Après décongélation rapide, le plasma de C. illioneus a été acidifié à pH 3 avec une solution d'acide trifluoroacétique à 1% (volume à volume) contenant de l'aprotinine (20 g/ml en concentration finale) et la phénylthiourée (concentration finale de 40 M). L'extraction en condition acide des peptides a été réalisée pendant 30 min sous agitation légère dans un bain d'eau glacée. L'extrait obtenu a été ensuite centrifugé à 4 C pendant 30 min à 10000g. 4) Purification des peptides. a) Prépurification par extraction en phase solide. Une quantité d'extrait équivalente à 6 ml d'hémolymphe de C. illioneus a été déposée sur un support de 5 g de phase inverse tel que commercialisé sous la forme de cartouche (Sep-Pak C18, Waters Associates), équilibré avec de l'eau acidifiée (TFA 0,05%). Les molécules hydrophiles ont été éliminées par un simple lavage avec de l'eau acidifiée. L'élution du peptide a été réalisée par une solution à 60% d' acétonitrile dans de l' eau contenant 0,05% de TFA. La fraction éluée avec 60% d' acétonitrile a été séchée sous vide dans le but d'éliminer l'acétonitrile et le TFA puis elle a été reconstituée dans de l'eau acidifiée (TFA 0,05%) stérile avant d'être soumise à la première étape de purification. L'étape 4 a) a été répétée une fois afin d'obtenir la fraction éluée avec 60% d'acétonitrile en quantité plus importante. b) Purification par chromatographie liquide à haute performance (HPLC) sur colonne de phase inverse. Première étape : l'élution 60% issue de l'extraction en phase solide décrite ci-dessus contenant le peptide a été fractionnée par chromatographie liquide à haute performance (HPLC) en phase inverse sur une colonne semi-préparative de marque InterchimTM, de type Modulocart Uptiprep, de taille 250 x 10 mm, de porosité 300 À et de granulométrie 15 m avec un greffage C8. Le fractionnement a été réalisé par un gradient d'acétonitrile/0,05% TFA contre H20/0,05% TFA de 5 à 60% en 50 minutes à un débit constant de 2,5 ml/min. Les fractions ont été collectées automatiquement (collecteur GilsonTM de type FC 204) dans les 80 premiers puits (colonnes A à J) d'une plaque 96puits (Contenance maximale de chaque puits : 2 ml). La collecte se fait par unité de temps et le volume collecté est d'environ 1,6 ml. Les fractions recueillies ont été asséchées sous vide, reconstituées avec de l'eau ultrapure et analysées pour leurs activités antimicrobiennes en utilisant les tests décrits ci-dessous. L'étape a été répétée une fois afin d'obtenir des fractions actives en quantité plus importante. Seconde étape : les fractions 37 et 45 issues de l'étape précédente présentant une activité contre les bactéries à Gram positif dans les étapes de purification précédemment décrites, éluées à un pourcentage d'acétonitrile égal respectivement à 30 et 35, ont été purifiées de manière plus fine sur une colonne analytique de phase inverse de greffage C18 de type Modulocart Uptisphère (InterchimTm, 250 x 4,6 mm, 300 et 5 m), en utilisant un gradient linéaire diphasique d'acétonitrile/0,05% TFA contre H20/0,05% TFA. Par exemple, pour une fraction éluée à 30% (35%) d'acétonitrile, le gradient utilisé va de 2 à 26% (31%) en 10 min et de 26 (31%) à 34% (39%) en 45 min, avec un débit constant de 0,8 ml/min. Les fractions ont été collectées manuellement en suivant la variation de l'absorbance à 225 nm. Les fractions recueillies ont été asséchées sous vide, reconstituées avec de l'eau ultrapure et analysées pour leurs activités contre les bactéries à Gram positif dans les conditions décrites ci-dessous. L'activité a été retrouvée dans certaines sous-fractions des fractions décrites ci-dessus. Troisième étape : les fractions décrites cidessus, contenant les peptides ont été purifiées jusqu'à homogénéité sur une colonne de phase inverse de marque InterchimTM de type Modulocart Uptisphère (greffage C18, granulométrie 3 , de taille 150 x 2 mm) en utilisant un gradient linéaire diphasique d'acétonitrile/0,05% TFA contre H20/0,05% TFA (gradient dépendant du pourcentage d'élution en acétonitrile de la sous-fraction à purifier), avec un débit constant de 0,2 ml/min à une température contrôlée de 30 C. Les fractions ont été collectées manuellement en suivant la variation de l'absorbance à 225 nm. Les fractions recueillies ont été asséchées sous vide, reconstituées avec de l'eau ultrapure filtrée et analysées pour leurs activités contre les bactéries à Gram positif. II. Exemple 2 : Caractérisation structurale des peptides ETD-P1646, ETD-P1647 et ETD-P1648. 1) Vérification de la pureté par Spectrométrie de masse Maldi-TOF (Matrix Assisted Laser Desorption Ionization-Time Of Flight). Le contrôle de pureté a été effectué sur un spectromètre de masse MALDI-TOF Bruker Biflex (Bremen, Allemagne) en mode linéaire positif (voir section 3 cidessous). 2) Réduction et S-pyridyléthylation en vue de la détermination du nombre de cystéines. Le nombre de résidus cystéine a été déterminé sur les peptides natifs par réduction et Spyridyléthylation. 400 pmoles de peptide natif ont été réduites dans 40 l de tampon Tris/HCl 0,5 M, pH 7,5 contenant 2 mM d'EDTA et 6 M de chlorure de guanidinium en présence de 2 l de dithiothréitol 2,2 M. Le milieu réactionnel a été placé sous atmosphère d'azote. Après 60 min d'incubation à l'obscurité, 2 l de 4-vinylpyridine fraîchement distillée ont été ajoutés à la réaction qui a été alors incubée durant 10 min à 45 C à l'obscurité et sous atmosphère d'azote. Le peptide S-pyridyléthylé a été ensuite séparé des constituants du milieu réactionnel par chromatographie de phase inverse sur une colonne analytique de phase inverse Aquapore RP-300 C8 BrownleeTM, 220 x 4,6 mm, 300 ), en utilisant un gradient linéaire d'acétonitrile/0,05% TFA contre H20/0,05%TFA de 2 à 52% pendant 70min. 3) Détermination de la masse du peptide natif, du peptide S-pyridyléthylé et des fragments de protéolyse par spectrométrie de masse MALDI-TOF (Matrix Assisted Laser Desorption Ionization-Time Of Flight). Les mesures de masses ont été effectuées sur un spectromètre de masse MALDI-TOF Bruker Biflex (Bremen, Allemagne) en mode linéaire positif. Les spectres de masse ont été calibrés de façon externe avec un mélange standard de peptides de m/z connues, respectivement 2199,5 Da, 3046,4 Da et 4890,5 Da. Les différents produits à analyser ont été déposés sur une fine couche de cristaux d'acide acyano-4-hydroxycinnamique obtenue par une évaporation rapide d'une solution saturée dans l'acétone. Après séchage sous un léger vide, les échantillons ont été lavés par une goutte d'acide trifluoroacétique à 0,1% avant d'être introduits dans le spectromètre de masse. La différence de masse observée entre le peptide S-pyridyléthylé et le peptide natif permet de déterminer le nombre de résidus cystéine présents dans chacun des peptides. 4) Séquençage par dégradation d'Edman. Le séquençage automatique par dégradation d'Edman des peptides natifs, des peptides S-pyridyléthylés et des différents fragments obtenus après les différents clivages protéolytiques et la détection des dérivés phénylthiohydantoines ont été réalisés sur un séquenceur de type Procise HT sequencing system, modèle 492 de marque Applied Biosystem. 5) Clivages protéolytiques. Confirmation des séquences peptidiques dans la région C-terminale. 200 pmoles de peptide réduit et Spyridyléthylé ont été incubées en présence de 5 pmoles d'endoprotéinase-Asp-N (Endoproteinase Asp-N, clivage spécifique des résidus acide aspartique du côté N-terminal, Takara, Otsu) selon les conditions préconisées par le fournisseur (tampon phosphate de sodium 20 mM, pH 8,9, en présence de Tween 20 à 0,01%) pendant 16 heures. Après arrêt de la réaction avec du TFA 1%, les fragments peptidiques ont été séparés par HPLC en phase inverse sur une colonne de marque Interchim" de type Modulocart Uptisphère (greffage C18, granulométrie 3 Â, de taille 150 x 2 mm) avec un gradient linéaire d'acétonitrile/0,05 TFA contre H20/0,05% TFA de 2 à 60% en 80 min avec un débit de 0,2 ml/min et une température constante de 37 C. Les fragments obtenus ont été analysés par spectrométrie de masse MALDI-TOF et le peptide correspondant au fragment Cterminal a été séquence par dégradation d'Edman. La séquence primaire du peptide ETD-P1646 est représentée dans la liste de séquences en annexe sous le numéro SEQ ID NO: 1. La masse moléculaire du peptide ETDP1646 natif est de 4383 Da et la masse moléculaire du peptide ETD-P1646 S-pyridyléthylé est de 4384 Da. La séquence primaire du peptide ETD-P1647 est représentée dans la liste de séquences en annexe sous le numéro SEQ ID NO: 2. La masse moléculaire du peptide ETDP1647 natif est de 4202 Da et la masse moléculaire du peptide ETD-P1647 S-pyridyléthylé est de 4205 Da. La séquence primaire du peptide ETD-P1648 est représentée dans la liste de séquences en annexe sous le numéro SEQ ID NO: 3. La masse moléculaire du peptide ETDP1648 natif est de 4408 Da et la masse moléculaire du peptide ETD-P1648 S-pyridyléthylé est de 4410 Da. III. Exemple 3 : Production des peptides ETDP1646, ETD-P1647 et ETD-P1648. Les peptides ETD-P1646, ETD-P1647 et ETD-P1648 ont été synthétisés chimiquement (Altergen). IV. Exemple 4 Tests d'activité antimicrobienne in vitro. 1) Tests antibactériens. Les activités antibactériennes ont été évaluées in vitro par détermination de l'IC90 (Inhibition de Croissance > à 90%). Les tests ont été réalisés sur les souches bactériennes suivantes : - Bactéries à Gram positif . Staphylococcus aureus (souche 21 ; Don de l'Institut de Biologie Moléculaire et Cellulaire, Strasbourg), Enterococcus sp. (souche clinique 17 ; Don du Dr. G. Prevot, Institut de Bactériologie, Strasbourg) ; - Bactéries à Gram négatif : Pseudomonas aeruginosa (Don de l'Institut de Biologie Moléculaire et Cellulaire, Strasbourg). Toutes ces souches sont sensibles aux antibactériens communément utilisés en milieu hospitalier. a) Préparation des suspensions bactériennes. Une préculture de 4 ml en milieu LB a été préparée par ensemencement d'une colonie de la souche bactérienne d'intérêt. La préculture a été incubée à 35- 37 C sous agitation pendant 6h. La concentration de la préculture a été évaluée par mesure de la densité optique à 600-620 nm suivant la relation densité bactérienne=f(DO). La concentration a été ajustée par dilution de façon à obtenir une suspension de 2.106/ml en concentration finale. La concentration de la suspension bactérienne a été contrôlée par dénombrement des Unités Formant Colonies (UFC). La suspension bactérienne à 2.106/ml a été diluée en cascade (10-1, 10-2, 10-3, ... 10-6) puis 100 l des dilutions 10-6, 10-5 et 10-4 ont été étalés sur des boîtes de gélose LB agar. Les boîtes ont été incubées à 35-37 C pendant 16 à 18h puis les UFC ont été dénombrées. b) Détermination des IC90. Les IC90 ont été déterminées par un test liquide en microplaques de 96 puits. 100 l d'échantillon à tester ont été distribués en duplicats de façon à obtenir une gamme de concentrations finales de 64 à 0.125 pg/ml dans les puits. 100 l de suspension bactérienne à 2.106/ml ont été ajoutés dans chaque puits de façon à obtenir une concentration finale de 106/ml. Les plaques de microtitration ont été incubées à 30-35 C pendant 16 à 18h. La densité optique des puits a été mesurée à 600-620 nm et les résultats ont été interprétés en calculant le pourcentage de pousse dans chaque puits selon la formule : %Pousse= (DO puits - DO du TS)/ (DO duTP - DO du TS) *100 où DO du TP= DO du témoin de pousse (suspension bactérienne sans échantillon à tester), DO du TS= DO du témoin de stérilité (milieu de culture sans bactéries) et DO puits= DO du puits dont on souhaite calculer le pourcentage de pousse (suspension bactérienne + échantillon à tester). L'IC90 correspond au puits où le pourcentage de pousse est inférieur ou égal à 10%. Les résultats des activités antibactériennes (IC90) sont présentés dans le tableau 1 exposée dans la description. 2) Tests antifongiques. Les activités antifongiques ont été évaluées in vitro par détermination de la Concentration Minimale Inhibitrice (CMI). Les tests ont été réalisés sur les souches de levures suivantes : Candida albicans (souche IHEM 8060 ; du Dr. H. Koenig, Hôpital civil, Strasbourg) et Candida glabrata (souche patient 1 ; du Dr. H. Koenig, Hôpital civil, Strasbourg) ainsi que sur les champignons filamenteux suivants : Aspergillus fumigatus (souche GASP 4707 ; Don du Dr. H. Koenig, Hôpital civil, Strasbourg). Toutes ces souches sont sensibles aux antifongiques communément utilisés en milieu hospitalier. a) Préparation des suspensions fongiques. a-1) Préparation des suspensions de levures. Une anse de levures prélevée à partir d'un stock de levures en suspension à 4 C a été étalée sur une boîte de gélose Sabouraud Agar. La boîte a été incubée à 30 C pendant 24 à 48h. Quelques colonies de levures ont été prélevées et mises en suspension dans 10 ml de milieu Sabouraud liquide. La suspension de levure obtenue qui doit être laiteuse a été diluée (1 ml qsp 10 ml de milieu Sabouraud). La concentration de la suspension a été évaluée par mesure de la densité optique à 600 nm suivant la relation 0. 1 DO à 600 nm correspond 2,5.106 levures/ml. La concentration a été ajustée par dilution de façon à obtenir une suspension de 2,5.103/ml de concentration finale. La concentration de la suspension de levure a été contrôlée par dénombrement des Unités Formant Colonies (UFC). La suspension de levures à 2,5.103/ml a été diluée en cascade ( 10-1, 10-2, 10-3, ... 10-6) puis 100 l de chaque dilution ont été étalés sur des boîtes de gélose Sabouraud. Les boîtes ont été incubées à 30 C pendant 24h puis les UFC ont été dénombrées. a-2) Préparation des suspensions de champignons filamenteux. Les champignons ont été ensemencés sur des boîtes de gélose de malt-agar qui ont été incubées 5 à 7 jours à 37 C. Les spores formées ont été récoltées et mises en suspension dans du milieu YPG. La concentration de la suspension a été évaluée par comptage d'un aliquot sur une lamelle de comptage (Coverslide). La concentration a été ajustée par dilution de façon à obtenir une suspension de 5.103/ml de concentration finale. b) Détermination des CMI. Les CMI ont été déterminées par un test liquide sur microplaques de 96 puits selon les protocoles M27-A et M38-P du National Committee for Clinical Standard (NCCLS) à la différence près que le milieu RPMI-1640 suggéré par le protocole NCCLS a été substitué par du milieu Sabouraud (Biomérieux) pour les tests sur les levures et par du milieu YPG (1 g peptone, 1 g yeast extract, 3 g glucose par litre) pour les tests sur les champignons filamenteux. Les activités des échantillons à tester ont été déterminées pour la gamme de concentrations finales 0. 125 à 64 g/ml. b-1) Détermination des CMI sur les levures. La densité optique des microplaques a été mesurée à 600 nm avec un spectrophotomètre pour microplaques après 24 et 48h d'incubation pour les levures du genre Candida. Le pourcentage de pousse (%pousse) a été calculé à partir des valeurs de densité optique (DO) mesurées selon la formule suivante : %pousse=((DO puits avec échantillon à tester - DO milieu seul)/(DO puits sans échantillon à tester - DO milieu seul))*100. Les CMI ont été définies selon les scores suivants : CMI 0 : %pousse 50%. La CMI a été déterminée dans l'intervalle de score CMI 0 et CMI 2. b-2) Détermination des CMI sur les champignons filamenteux. La CMI est déterminée par lecture à l'#il nu des microplaques après 48h d'incubation pour Aspergillus fumigatus. Les CMI ont été définies selon les scores suivants : CMI 0 : pas de trace de champignons au fond du puits ; CMI 1 : un point au fond du puits ; CMI 2 champignons sur la moitié de la surface du puits ; CMI 3 : les trois quarts du puits sont occupés par le champignon ; MIC 4 : ensemble du puits envahi de champignons. La CMI a été déterminée dans l'intervalle de score CMI 0 et CMI 2. Les résultats des activités antifongiques (CMI) sont présentés dans le tableau 2 exposé dans la description. REVENDICATIONS 1) Peptide isolé caractérisé en ce qu'il répond à la formule (I): Xaa-Lys-Ile-Pro-Xab-Ala-Xac-Lys-Gly-Ala-Xad-Arg-Ala-LeuXae-Ala-Ser-Thr-Ala-Xaf-Asp-Ile-Ala-Xag-Phe-Xah-Arg-LysArg-Xai (I) dans laquelle, Xaa est -NH2 ou le reste peptidique Arg ou Gly, Xab est le reste peptidique Ile-Asn ou Val-Glu, Xac est le reste peptidique Ile-Lys, Ile-Arg ou Leu-Lys, Xad est le reste peptidique Ser-Arg-Ala-Trp, Lys-Ala-Val-Gly-His-Gly-Leu ou Lys-Val-Ala-Gly-Arg-Ala-Trp, Xae est le reste peptidique Asp-Leu, Asn-Ile ou Asp-Leu, Xaf est le reste peptidique Tyr ou His, Xag est le reste peptidique Ser-Ile, Ser-Ala ou His-Leu, Xah est le reste peptidique Asn, Asp ou His, Xai est -OH ou le reste peptidique Glu, Asn ou Lys-His, ses dérivés et ses fragments. 2) Peptide isolé selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il répond à l'une des séquences suivantes : - ETD-P1646 G K I P I N A I R K G A K A V G H G L R A L N I A S T A H D I A S A F H R K R K H (SEQ ID NO : 1) - ETD-P1647 R K I P V E A I K K G A S R A W R A L D L A S T A Y D I A S I F N R K R E (SEQ ID NO :2) - ETD-P1648 G K I P V E A L K K G A K V A G R AWRALDLASTAYDIAHLFDRKRN (SEQ ID NO :3), ses dérivés et ses fragments. 3) Polypeptide caractérisé en ce qu'il comprend un peptide selon l'une quelconque des revendications 1 ou 2. 4) Polypeptide selon la revendication 3, caractérisé en ce qu'il comprend un peptide selon l'une quelconque des revendications 1 ou 2 dont l'une et/ou l'autre des extrémités dudit peptide comprend un ou plusieurs acides aminés nécessaires à son expression et/ou à son ciblage dans un organisme hôte. 5) Polynucléotide isolé caractérisé en ce qu'il code un peptide selon l'une quelconque des revendications 1 ou 2 ou un polypeptide selon l'une quelconque des revendications 3 ou 4. 6) Polynucléotide isolé caractérisé en ce qu'il s'hybride à un polynucléotide selon la revendication 5. 7) Gène chimère caractérisé en ce qu'il comprend au moins, liés entre eux de façon opérationnelle : un promoteur constitutif ou inductible fonctionnel dans un organisme hôte, - un polynucléotide selon l'une quelconque des revendications 5 ou 6, et - un élément terminateur fonctionnel dans un organisme hôte. 8) Gène chimère selon la revendication 7, caractérisé en ce qu'il comprend en outre un peptide signal ou de transit fonctionnel dans ledit organisme hôte. 9) Vecteur d'expression et/ou de clonage caractérisé en ce qu'il comprend un polynucléotide selon l'une quelconque des revendications 5 ou 6 ou un gène chimère selon l'une quelconque des revendications 7 ou 8. 10) Vecteur d'expression et/ou de clonage selon la revendication 9, caractérisé en ce qu'il est un plasmide, un cosmide ou un bactériophage. 11) Vecteur d'expression et/ou de clonage selon la revendication 9, caractérisé en ce qu'il est un virus en particulier un baculovirus. 12) Organisme hôte caractérisé en ce qu'il comprend un vecteur selon l'une des revendications de 9 à 11. 13) Organisme hôte selon la revendication 12, caractérisé en ce qu'il est un microorganisme. 14) Organisme hôte selon la revendication 13, caractérisé en ce que le microorganisme est une levure du genre Saccharomyces, de préférence de l'espèce Saccharomyces cerevisiae, du genre Kluyveromyces, de préférence de l'espèce Kluyveromyces lactis, du genre Hansenula, de préférence de l'espèce Hansenula polymorpha, du genre Pichia, de préférence de l'espèce Pichia pastoris ou du genre Schizosaccharomyces, de préférence de l'espèce Schizosaccharomyces pombe. 15) Organisme hôte selon la revendication 13, caractérisé en ce que le microorganisme est une bactérie, de préférence de l'espèce Escherichia coli. 16) Organisme hôte selon la revendication 13, caractérisé en ce que le microorganisme est un champignon de préférence de l'espèce Aspergillus nidulans. 17) Organisme hôte selon la revendication 12, caractérisé en ce que l'organisme hôte est une cellule d'arthropode de préférence de Spodoptera frugiperda ou de Trichoplusia ni. 18) Organisme hôte selon la revendication 12, caractérisé en ce que l' organisme hôte est une cellule de mammifère. 19) Organisme hôte selon la revendication 12, caractérisé en ce que l'organisme hôte est une cellule végétale ou une plante. 20) Cellule végétale ou plante résistante aux maladies bactériennes et/ou fongiques comprenant un polynucléotide selon l'une quelconque des revendications 5 ou 6, ou un gène chimère selon l'une quelconque des revendications 7 ou 8, et exprime un peptide selon l'une quelconque des revendications 1 ou 2, ou un polypeptide selon l'une quelconque des revendications 3 ou 4. 21) Composition antibactérienne caractérisée en ce qu'elle comprend à titre d'agent actif au moins un peptide selon l'une quelconque des revendications 1 ou 2, avantageusement associé dans ladite composition avec un véhicule acceptable. 22) Composition antibactérienne selon la revendication 21, caractérisée en ce qu'elle comprend en outre un autre agent antibactérien. 23) Composition antifongique caractérisée en ce qu'elle comprend à titre d'agent actif au moins un peptide selon l'une quelconque des revendications 1 ou 2, avantageusement associé dans ladite composition avec un véhicule acceptable. 24) Composition antifongique selon la revendication 23, caractérisée en ce qu'elle comprend en outre un autre agent antifongique. 25) Composition selon l'une quelconque des revendications 21 à 24 pour être utilisée chez l'homme ou l'animal. 26) Composition selon l'une quelconque des revendications 21 à 24 pour être utilisée chez les plantes.