FR 2839313 A1 20031107 FR 0205598 A 20020503 revendicatios 1 5. 1 2839313 Nouveaux derives de cyclodextrines, leur procede de preparation et leurs applications s L'invention a pour objet de nouveaux derives de cyclodextrines, s'agissant plus particulierement de cyclodextrines aminees. Wile vise egalement un procede de preparation de ces nouveaux derives ainsi que leurs applications dans les memes domaines que les cyclodextrines et leurs derives deja connus. o Il est tout d'abord rappele que les cyclodextrines, designees ci-aprespar CD, vent des composes d'origine naturelle et, plus precisement, des oligosaccharides cycliques ou cyclomaltooligosaccharides, constitues de molecules de glucopyranose unies par des liaisons glycosydiques oc 14. On distingue les alpha-, les beta- et les gamma-cyclodextrines, respectivement designees par x-CD, p-CD et y-CD et qui vent constituees respectivement de 6, 7 et 8 unites de glucopyranose. Dans le c as de s cycl odextrines aminee s, au moins l 'un des atomes de carbone en position 2, 3 ou 6 d'au moins l'une des unites glucopyranosiques constitutives, porte directement ou non un groupement amine. Les cyclodextrines presentent une structure tronconique qui resulte de leur stabilisation par les liaisons hydrogene et qui en fait des molecules de choix pour realiser avec des molecules hydrophobes, en particulier avec des composes pharmaceutiques ou aromatiques, des complexes de type "hote-invite". En effet, les fonctions alcool etant dirigees vers l'exterieur, les : cyclodextrines ont un caractere hydrophile; mais leur cavite est tapissee d'atomes de carbone, d'oxygene et d'hydrogene et elle possede done un caractere hydrophobe. 2 2839313 Les cyclodextrines oc-CD, p-CD et y-CD vent representees par la formule generale: HO:,;0 0 o n dans laquelle n est egale a 5,6 ou 7. Il a ete montre que les cyclodextrines peuvent former des complexes d'inclusion avec des molecules hydrophobes rendant ainsi possible leur solubilisation dans des milieux aqueux (Chemical Reviews, 1998, 98, 2035- 2044). o Cette aptitude a donne lieu a des applications dans tous les domaines des sciences de la vie, en particulier en pharmacie, agrochimie, cosmetologie, dans l'industrie des parfums et des aromes, les proprietes recherchees comprenant la solubilisation de principes actifs insolubles dans l'eau, la stabilisation (degradation chimique retardee), l'effet masquant (elimination de l'amertume), la reduction de volatilite (parfums, pheromones), la biodisponibilite amelioree (effet retard ou relargage controle de medicaments dans l'organisme ou de principes agrochimiques dans l'environnement) et, enfin, un meilleur controle de certaines reactions chimiques (Chemical Reviews, 1998, 98, n 5, 17432076). C'est la p-cyclodextrine, qui est la plus adaptee, compte tenu de la taille de o sa cavite, pour encapsuler des molecules pharmaceutiques de petite taille comme le piroxi cam; cette appli cation est illustree par un medi cament anti inflammatoire commercialise par Pierre Fabre Medicaments sous la marque BREXIN et dont la substance active est un complexe d'inclusion du piroxicam dans la,0-cyclodexkine. Or, il se trouve que l'utilisation des cyclodextrines en general et de la, 0-cyclodextrine en particulier, pour former des complexes d'inclusion, autrement dit pour "encapsuler" des principes actifs, est limitee par leur faible 3 2839313 solubilite qui, dans le cas de la,B-cyclodextrine, est de 15 mmol/1 soit 15 g/1 a C. De nombreux travaux ont deja ete realises en vue d'obtenir des derives de cyclodextrines et, en particulier, de,8-cyclodextrine, ayant des proprietes de solubilite ameliorees; parmi ces derives, on peut citer les cyclodextrines aminees. Tous ces travaux ont eu recours a la meme strategic qui reside dans la mo difcati on des hydroxyl es portes par la cyclodextrine. Des progres sur le plan de la solubilite des derives de cyclodextrine ont pu etre enregistres; mais les utilisateurs reclament en permanence des derives de o cyclodextrine, notamment des recepteurs synthetiques ou cages moleculaires, encore plus performants et repondant mieux que ceux qui existent deja non senlement aux besoins de solubilisation mais egalement de vectorisation de principes actifs comme, par exemple, les sterodes (P. Walliman, T. Marti, A. Furer, F. Diederich, Chem. Rev. 1997, 97, 1567). s Et, a la suite de recherches longues et approfondies, la Societe Demanderesse a pu montrer que, de facon surprenante et inattendue, il etait possible d'obtenir des derives de cyclodextrines aminees tres performants des lors qu'au moins l'un des atomes dthydrogene d'au moins l'un des groupements amines primaires portes en position 2, 3 ou 6 d'au moins l'une des unites o glucopyranosiques constitutives d'une cyclodextrine aminee, etait substitue par un compose comportant au moins un groupement 6-galactosyle. Les nouveaux derives de cyclodextrine correspondents conformes a ['invention et qui vent designee dans ce qui suit par le terme de Ngalactosyl-CD, se vent averes particulierement interessants du fait, d'une part, de leurs proprietes d'encapsulation et de solubilisation de molecules hoses, telles que les principes actifs pharmaceutiques et, d'autre part, de leurs proprietes de discrimination d'enantiomeres, plus particulierement en chromatographie. 4 2839313 Ces nouveaux derives de cyclodextrines aminees, conformes a l'invention, qui repondent a la formule: RS 1 RS R24 R o R34/R2 R3 dans laquelle - n est egal a 0, 1 ou 2, - R represente un groupement alcool primaire ou methyle, un groupement represente par l'une des formules -CH2XR5, -C(0)-R5, -C(0)-NH-R5,-C(S)- R5 ou -C(S)-NH-R5 dans lesquel]es X represente un atome d'oxygene, de soutre o ou d'azote, et R5 un groupement alkyle, aryle, alkylaryle ou arylalkyle de 1 a 60 atomes de carbone, eventuellement substitue par des heteroatomes et/ou des fonctions acides carboxyliques, sulfoniques, phosphoniques ou par des fonctions ethers, soufrees phosphorees silylees, un groupement amine, carboxylate, sulfate, phosphonate, boronate ou un groupement de formule-CH2R1-NH2, dans laquelle R1 represente une simple liaison ou un groupement R5 ayant les memes significations que plus haut et - R2 et R3, qui sont identiques ou differents l'un de l'autre, representent un groupement hydroxyle secondaire ou un groupement de formules -XR5 ou -Rl- NH2 dans lesquelles X et R5 ont les memes significations que plus haut, R1 2839313 representant une simple liaison ou un groupement, R5 ayant les memes significations que plus haut, - I'un au moins des radicaux R representant un groupement -CH2R1-NH2 et/ou l'un au moins des radicaux R2 et R3 representant un groupement de formule-Rl-NH2' vent caracterises par le fait qutau moins l'un des atomes d'hydrogene d'au moins l'un des groupements -R1-NH2 et -CH2R1-NH2 est substitue par un groupement 6galactosyle de formule: W:O: R5'XJ " X'R5 (III) y R5 dans laquelle X et R5 ont les significations indiquees plus haut, R5 pouvant egalement representer un mono-, di-, trim, oligo- ou polysaccharide comportant de 1 a 50000, de preference de 1 a l OOO enchanements sacchararidiques. Les N-ga]actosyl-CD conformes a]'invention vent obtenues par amination reductrice entre au moins l'une des fonctions amines primaires comportees par une cyclodextrine aminee et un compose 6-oxogalactose constitue d'un ou de plusieurs groupements 6-oxogalactose dans lesquels l'hydroxyle primaire porte 2s par le carbone en position 6 d'au moins l'une des unites galactose, a ete regioselectivement oxyde a ['aide de galactose oxydase ou d'un oxydant regioselectif. 6 2839313 Le procede conforrne a ['invention pour la preparation des susdits derives est done caracterise par le fait que lton fait reagir a la temperature ambiante pendant 24 a 48 heures, dans l'eau ou dans un alcool inferieur en C a Cs ou, de preference, dans le DMSO, en presence de cyanoborobydrure de sodium, un compose 6-oxogalactose de formule: HO XR o R5:X'x,R5 (I X R5 dans]aquelle X et R5 ont les significations indiquees plus haut avec une cyclodextrine aminee de forrnule: R R3 \ o (II) R24 R3 R3 R3 7 2839313 dans laquelle - n est egal a 0, 1 ou 2, - R represente un groupement alcool primaire ou methyle, un groupement represente par l'une des formules -CH2XR5, -C(0)-R5, -C(0)-NH-R5, -C(S) R5 ou -C(S)-NH-R5 dans lesquelles X represente un atome d'oxygene, de soutre ou d'azote, et R5 un groupement alkyle, aryle, alkylaryle ou arylalkyle de 1 a 60 atomes de carbone, eventuellement substitue par des heteroatomes et/ou des fonctions acides carboxyliques, sulfoniques, phosphoniques ou par des fonctions o ethers, soufrees phosphorees silylees, un groupement amine, carboxylate, sulfate, phosphonate, boronate ou un groupement de formule - CH2R1-NH2, dans laquelle R1 represente une simple liaison ou un groupement R5 ayant les memes significations que plus haut et - R2 et R3, qui vent identiques ou differents l'un de l'autre, representent un groupement hydroxyle secondaire ou un groupement de formules -XR5 ou-R1 NH2 dans lesquelles X et R5 ont les memes significations que plus haut, R1 representant une simple liaison ou un groupement R5ayant les memes significations que plus haut, - l'un au moins des radicaux R representant un groupement -CH2Rl-NH2 o et/ou l'un au moins des radicaux R2 et R3 representant un groupement de formule -R1 -NH2 Le compose 6-oxogalactose peut etre prepare par oxydation du galactose ou d'un compose comportant au moins un groupement galactose, a ['aide de tout agent d'oxydation tel que la galactose oxydase en milieu aqueux sature en O2 en presence de catalase. Les compo s es 6-ox ogalacto se preferes vent prepares a partir de monosaccharides comme le galactose, de disaccharides comme le melibiose et le lactose ou de polysaccharides comme le polygalactomannanes. 8 2839313 A tike illuskatif du procede conforme a ['invention, on peut avoir recours aux etapes reactionnelles indiquees ci-apres, la cyclodexkine aminee utilisee etant la mono-6-amino-6-O-deoxy--cyclodexkine et le solvent utilise le s DMSO; le compose 6-oxogalactose mis en ceuvre est celui obtenu a partir du melibiose. On commence par solubiliser la cyclodexkine aminee dans le DMSO a une concenkation par exemple de 10 g/l a 40 g/l, puis on ajoute le melange reactionnel issu de l'oxydation enzymatique du melibiose a raison de 3 a 10 o equivalents molaires en presence de 10 a 100 equivalents molaires de cyanoborohydrure de sodium. Le melange obtenu est agite, de preference a 60 C, pendant par exemple 3 a 6 heures, de preference de 4 a 5 heures. Afin de recuperer les differentes N-galactosyl-CD a partir du melange s reactionnel a ['issue de la reaction, on realise generalement la suite d'etapes suivante: - on fait precipiter dans le susdit melange, les Ngalactosyl-CD par ajout de 30 a 100 ml, de preference de 50 a 60 ml d'acetone, - le precipite de N-galactosyl-CD est separe par toute technique de separation o liquide-solide convenable, par exemple par filtration, ce qui fournit une poudre contenant les N-galactosyl-CD, - on lave le precipite par exemple avec 3 fois 10 ml d'acetone et 3 fois 10 ml d' ether pour eliminer le maximum de DMSO et d'agent reducteur puis on seche et, s - une fois seche, le produit est purifie par chromatographie sur gel de silice dans un melange toluene/acetone. 9 2839313 Le procede decrit ci-dessus a titre illustratif peut egalement etre realise en utilisant le compose 6-oxogalactose obtenu par oxydation du polysaccharide obtenu par solubilisation a partir de grains de ceratonia silica (qui est un polygalactomannane) dans lieau a une concentration de O,5 a 1 g/l. Ceci etant, ['invention a egalement pour objet ['application des nouveaux o derives conformes a ['invention a l'obtention de complexes d'inclusion aux utilisations en elles-memes connues. Wile a encore pour objet des solutions, gels ou supports ou des preparations a usage pharmaccutique, cosmetique, agrochimique ou alimentaire, Ou encore des preparations utilisees pour les parfums et les aromes, a base des N-galactosyl-CD conformes a ['invention. Parmi les applications conformes a ['invention des susdits solutions, gels ou supports a base des N-galactosyl-CD conformes a ['invention, on peut citer: le traitement des melanges d'au moins 2 constituents choisis dans le o groupe comprenant les molecules organiques, minerales ou organo minerales, pour en retirer au moins une partie de l'un de ces constituents ou pour separer lesdits constituents par une methode chromatographique, par technologie membranaire ou bien par mise en aeuvre d'un procede d'extraction liquide-liquide ou liquide-solide ou s bien par procede d'electrophorese ou d'electrochromatographie preparative; le traitement des melanges d'au moins 2 enantiomeres choisis dans le groupe comprenant les molecules organiques chirales ou organo minerales chirales, pour en retirer au moins une partie de l'un des enantiomeres, autrement dit pour enrichir le melange en l'une des molecules unichirales optiquement actives et obtenir ainsi l'un des enantiomeres sous forme enrichie; 2339313 la separation de molecules optiquement actives par chromatographie ou par technologie membranaire, par mise en aeuvre d'un procede d'extraction liquide-liquide ou liquide-solide ou par un procede d'electrophorese ou d'electrochromatographie preparative. L'inventi on a enfin pour obj et les oli gomeres ou polymeres obtenus par homopolymerisation ou copolymerisation d'un compose N-galactosyl-CD conforme a ['invention convenablement fonctionnalise. L'inventi on pourra etre encore mieux comprise a ['ai de des exempl es non limitatifs suivants, qui vent relatifs a des modes de realisation avantageux. Exemple 1: Mono-N-ga]actosyl-,6-CD et sa preparation La mono-N-galactosyl,B-CD visee par le present exemple est representee par la formule: o :': - 4: Pour preparer cette mono-N-ga]actosyl--CD, on procede comme indique ciapres. Dans un ballon, on dissout 22,6 mg de mono-6-amino-6-O-deoxy-,8 o cyclodextrine (20 mol, l equivalent) dans 1 ml de DMSO, puis on ajoute , umol (c'est a dire 5 equivalents) de galactose oxyde ainsi que 62 mg de NaBH3CN (1 mmol, 50 equivalents). Le melange est agite pendant 4 heures a 60 C. Par addition de 20 ml d'acetone, on fait precipiter le produit recherche. Le precipite est lave deux fois avec 5 ml d'acetone, puis deux fois avec 5 ml d'ether, ,, pus seche. Le residu obtenu est dissous dans 300 pl d'eau distillee et depose sur une colonne de chromatographie d'exclusion, par exemple celle connue sous la marque Biogel P2 (exclusion diffusion) e]uee en eau. |2 2339313 Les fractions collectees vent analysees par HPLC avec une colonne de chromatographie, par exemple celle connue sous la marque Shodex Asahipak NH2P50-E (eluant: eau 100%, debit 1 ml/min, detecteur: DEDL ou Detecteur a Evaporation et Diffusion de la Lumiere). Les fractions contenant le produit pur vent reunies et evaporees. Le produit pur est obtenu avec un rendement de 78 %. L'analyse par RMN du produit obtenu donne les resultats suivants: o RMN (Bruker AX500) H 500MHz D2O pm): 5-4,8 (m, 8H, H1), 3,7 3,4 (m, 44H, H2,H3,H4,H5,H6,H6') 3,2-2,8 (m, 4H, 2 CH2NH). L'analyse par spectrometrie de masse ES-MS donne les resultats suivants: ES-MS (LC Quattro Micromass, electrospray positif, triple quadripoles, introduction directe): 1302 (M+H +Na -H2O). )3 233931 3 Exemple 2: Mono-N-methyl-a-D-galactopyranosyl--CD et sa preparation La mono-N-methyl-a-D-galactopyranosyl-,B-CD visee par le present exemple est representee par la formule: OMe H NHOH I O oH -\ Pour preparer cette mono-N-methyl-a-D-galactopyranosyl-,8-CD, on .,. procede comme mdque c-apres. Dans un ballon, on dissout 22,6 mg de mono-6-arnino-6-O-deoxy-,B o cyclodextrine (20 mol, l equivalent) dans 1 ml de DMSO, puis on ajoute gwol (c'est a dire 5 equivalents) de methyl--a-D-galactopyranoside oxyde ainsi que 62 mg de NaBH3CN (1 mmol, 50 equivalents). Le melange est agite pendant 4 heures a 60 C. Par addition de 20 ml d'acetone, on fait precipiter le produit recherche. Le precipite est lave deux fois avec 5 ml d'acetone, puis deux fois avec 5 ml d'ether, pods seche. Le residu obtenu est dissous dans 300 pl d'eau distillee et depose sur une colonne de chromatographie d'exclusion, par exemple celle connue sous la marque Biogel P2 (exclusion diffusion) eluee en eau. 14 2839313 Les fractions collectees vent analysees par HPLC avec une colonne de chromatographie, par exemple celle connue sous la marque Shodex Asahipak NH2P50-E (eluant: eau 100%, debit 1 ml/min, detecteur: DEDL ou Detecteur a s Evaporation et Diffusion de la Lumiere). Les fractions contenant le produit pur vent reunies et evaporees. Le produit pur est obtenu avec un rendement de 50 %. L'analyse par RMN du produit obtenu donne les resultats suivants: o RMN H 500MHz D2O (ppm): 4,8 (s, 7H, H1), 3,7-3,4 (m, 47H, H2,H3,H4,H5,H6,H6',Me) 3,2-2,8 (m, 4H, 2 CH2NH). L'analyse par spectrometrie de masse ES-MS donne les resultats suivants: ES-MS (LC Quattro Micromass, electrospray positif, triple quadripoles, introduction directe): 1339 (M+H +2Na -H2O). 2339313 Exemple 3: Mono-N-melibiosyl --CD et sa preparation La mono-N-melibiosyl-CD visee par le present exemple est representee par la formule: HO _ H HN h Pour preparer cette mono-N-melibiosyl-,B-CD, on procede comme indique cl-apres. Dans un ballon, on dissout 113 mg de mono-6-amino-6-O-deoxy-- o cyclodextrine (100 mol, 1 equivalent) dans 5 ml de DMSO, puis on ajoute 1 mmol (c'est a dire 5 equivalents) de melibiose oxyde ainsi que 310 mg de NaBH3CN (5 mmol, 50 equivalents). Le melange est agite pendant 4 heures a 60 C. Par addition de 100 ml d'acetone, on fait precipiter le produit recherche. :: Le precipite est lave deux fois avec 20 ml d'acetone, puis deux fois avec 20 ml - d'ether, puis seche. Le residu obtenu est acetyle sous agitation durant 12 h a temperature ambiante dans de la pyridine (25 ml) en presence d'anhydride acetique (15 ml). Le melange reactionnel est evapore puis le residu est repris dans le 5 rnl de dichloromethane. 16 2339313 La phase organique est levee trots fois avec 5 ml d'une solution de carbonate de potassium puis trots fois avec 5 ml d'eau. La phase organique est evaporee. Le melange est purife sur colonne de silice avec, comme eluant, toluene 2/ acetone 1. La purification est suivie par CCM (toluene 2/ acetone!). Les fractions contenant le produit acetyle vent reunies et evaporees. Le residu est repris dans un melange a 20 mM de methanolate dans le methanol et o maintenu pendant une nun' sous agitation a temperature ambiante. Les cyclodextrines recherchees vent precipitees dans ['acetone et filtrees. L'analyse par RMN du produit recherche donne les resultats suivants: RMN H 500MHz D2O (ppm): 4,8 (s, 7H, H1), 3,7-3,4 (m, 50H, H2,H3,H4,H5,H6,H6') 3,2-2,8 (m, 4H, 2 CH2NH). I,'analyse par spectrometrie de masse ES-MS donne les resultats suivants: ES-MS (LC Quattro Micromass, electrospray positif, triple quadripoles, introduction directe): 2658 (M+2Na+). |7 2339313 Exemple 4: Mono-N-lactosyl --CD et sa preparation La mono-N-lactosyl--CD visee par le present exemple est representee s par la formule: H ='OH HONH H Pour preparer cette mono-N-lactosyl--CD, on procede comme indique ci-apres. Dans un ballon, on dissout 113 mg de mono-6-amino-6-O-deoxy-,B o cyclodextrine (lOO mol, 1 equivalent)-dans 5 ml de DMSO, puis on ajoute 1 mmol (c'est a dire 5 equivalents) de lactose oxyde ainsi que 310 mg de NaBH3CN (5 mmol, 50 equivalents). Le melange est agite pendant 4 heures a 60 C. Par addition de l OO ml d'acetone, on fait precipiter les cyclodextrines. Le precipite est lave deux fois avec 20 ml d'acetone, puis deux fois avec 20 ml d'ether, puis seche. Le residu est acetyle sous agitation durant 12 h a temperature ambiante dans de la pyridine (25 ml) en presence d'anhydride acetique (15 ml). Le melange reactionnel est evapore puis le residu est repris dans le 5 ml de dichloromethane. 1 8 2839313 La phase organique est levee trots fois avec 5 ml d'une solution de carbonate de potassium puis trots fois avec 5 ml d'eau. La phase organique est evaporee. Le melange est purifie sur colonne de silice avec, comme eluant, toluene 2/ acetone 1. La purification est suivie par CCM (toluene 2/ acetone!). Les fractions contenant le produit acetyle vent reunies et evaporees. Le residu est repris dans un melange a 20 mM de methanolate dans le methanol et o maintenu pendant une nun' sous agitation a temperature ambiante. Les cyclodextrines recherchees vent precipitees dans ['acetone et filtrees. L'analyse par RMN du produit recherche donne les resultats suivants: RMN (Bruker AX500) H 500MHz D2O (ppm): 5,1 (d, Hla glc), 3,7 3,4 (m, 50H, H2,H3,H4,H5,H6,H6') 3,2-2,8 (m, 4H, 2 CH2NH). L'analyse par spectrometrie de masse ES-MS donne les resultats suivants: ES-MS (LC Quattro Micromass, electrospray positif, triple quadripoles, introduction directe): 2658 (M+2Na+). 1 9 2839313 Exemple 5: Polygalactosyle cyclodextrine et sa preparation La polygalactosyle cyclodextrine visee par le present exemple est representee par la formule: HO\ 0 \ OH N:) \ | HO ,,-0- \ HO 1 Pour preparer cette polygalactosyle cyc]odextrine, on procede comme .. ndque c-apres. Dans un erlenmeyer, on met en suspension 150 mg de polygalactomannane dans 150 ml d'eau puis on ajoute 20 unites de galactose oxydase et 3 mg d'un melange proteique de catalase. La solution est saturee en oxygene et maintenue 72 heures a la temperature ambiante. o L'eau est alors evaporee. 2839313 Le polygalactomannane oxyde obtenu presente la formule suivante: HO 4: i o; \ /n On dose l es foncti ons al deLydiques de ce produit afin de conna^tre le nombre de groupements 6-oxogalactosyle disponib]es. Pour ce faire, le melange reactionnel est repris dans 2 ml d'eau, puis dans 25 ml d'une solution de sulfate de cuivre (5 g de CuS04, 5 H2O, 10 g d'acide citrique et 28,8 g de carbonate de sodium pour 200 ml) et on ajoute 10 ml d'eau. Ce melange est chauffe a ebullition pendant 10 minutes puis refroidi sous eau froide. - Quand le melange est bien refroidi, on ajoute 10 ml d'une solution aqueuse de KI (1,8 M), 25 ml d'une solution d'acide sulfurique 2,55 M et 2 ml d'empois d'amidon. L'iode forme est dose par une solution aqueuse de thiosulfate de sodium 0,1 M. Le dosage permet de montrer que 20 % des residue galactosyle du polysaccharide vent oxydes. Le polysaccharide oxyde est repris dans 40 ml d'eau. On ajoute ensuite 74 gwol (83,8 ma) de mono-6-amino-6-O-deoxy--cyclodextrine, puis 8,88mmol (1, 78 ml) d'une solution de NaBH3CN 5M dans lthydroxyde de sodium 1 M. 21 2839313 Le melange est agile pendant 196 heures a 25 C, puts dialyse contre de Beau pendant 24 heures dans des sacs de dialyse de scull de coupure lOOOO. La reduction du Cu2+ dans ces conditions, ne conduit pas a la formation de Cu2O alors que le polysaccharide oxyde conduisait a la formation de Cu2O. La cyclodextrine aminee de depart est totalement consommee, son absence etant verified par HPLC. 22 2839313 Exemple 6: Formation d'un complexe d'inclusion dans la mono-N-galactosyl-, B CD scion l'Exemple 1 Pour preparer des complexes d'inc]usion en utilisant comme derive de cyclodextrine, la mono-N-galactosyl-,B-CD de l'Exemple 1, et comme molecules "invite" celles identifiers ci-apres par leurs fomules: lo 11' 11' N(CH3)2 N(CH3)2 2tg7' 3': 6 À l O2 l O2 NH NH C6H14N+,-OOC-CH-CH2-CH \ ss ' C6H,4N+,-OOCCH-CH \ YY cat,B Y 3, CH3 dansyl-D/L-Leu (cyclohexylammonium) dansyl-D/LYal (cyclohexylammonium) (CH3)COOH O N O keioprofen D/L-aminoglutethimide 23 233931 3 on a procede cornme indique ci-apres: On a fait reagir dans 50 millimoles de tampon phosphate de potassium dans 0,5 ml de D2O de pH egal a 7,01, d'une part, 2 millimoles d'une des 4 molecules "invite" identifiees cidessus et, d'autre part, 2 millimoles de la mono N-galactosyl--CD. On a laisse reagir pendant 30 minutes, duree qui est normalement suffisante pour que le complexe d'inclusion puisse se former. o I1 y avait ensuite lieu de verifier qu'il y a bien eu formation d'un complexe d'inclusion. La methode generalement utilisee pour cette verification consiste a realiser successivement deux spectres RMN, d'une part, sur la molecule "invite" seule et, d'autre part, sur le resultat de la reaction entre la cyclodextrine et la molecule "invite". La formation d'un complexe d'inclusion se traduit sur le spectre RMN du resultat de la reaction par des differences de deplacements chimiques des signaux des protons de la molecule "invite" par rapport aux deplacements chimiques des signaux des memes protons sur le spectre RMN de la molecule "invite" seule. I1 est en effet admis que toute difference de deplacement constatee dans ces conditions traduit la formation d'un complexe d'inclusion. Les deplacements chimiques vent exprimes en ppm, le deplacement etant par ailleurs generalement designe par le symbole 6. Or, dans le cas present, les differences de deplacement chimique determinees par la comparaison des deux enregistrements RMN successifs effectues sur la molecule "invite" seule et sur le produit de la reaction de la molecule "invite" avec la cyclodextrine en rapport avec les protons H4', H8', 24 233931 3 H2', H6', CH36(^y), CH3S'(y') qui figurent sur les formules des 2 premieres molecules "invite", a savoir le dansyl-D/L-Leu (cyclohexylammonium) et le dansyl-D/L-Val (cyclohexylammonium), en rapport avec le proton Haroma et CH3 dans le cas de la 3eme molecule "invite" s'agissant du ketoprofen et, enfin, en rapport avec les protons Horho, Hmea, CH2 et CH3 dans le cas de la 4eme molecule "invite" s'agissant du D/L-aminoglutethimide, apparaissent clairement et vent reunies dans le tableau A. En examinant les resultats reunis dans ce tableau, on constate par consequent, qu'il y a des differences de deplacement chimique, ces differences o calculees etant notees A6, pour chacun des protons etudies; or, ['existence de tels deplacements est revelatrice de la formation d'un complexe d'inclusion; ce n'est pas la valeur absolue de ces deplacements qui importe. Etant donne que, pour chacun des protons etudies, une difference de deplacement a ete enregistree, ainsi qutil resulte du tableau A, il est permis s d'affirmer que, dans le cas de la mono-N-galactosyl--CD et des 4 molecules - "invites" dont il vient d'etre question, il se forme bien des complexes d'inclusion. 2839313 Exemple 7: Separation d'enantiomeres par electrophorese capillaire Le compose de l'Exemple 2, a savoir la mono-N-methyl-a-D galactopyranosyl-,BCD a ete mis en aeuvre pour separer, par vole electrophoretique, les deux enantiomeres de l'oxprenonol. La separation est realisee sur un systeme P/ACE 5000 (Beckman Instruments, Fullerton, CE). o Le tampon electrophoretique est constitue de 25 mM d'acide phosphorique ajoutes a pH 2,5 avec LiOH auquel on ajoute 25 mM de mono-N methyl- x-D -gal actopyranosyl -,8 -CD. La separation s'effectue dans un capillaire de silice fondue (longueur totale = 47 cm, longueur effective = 40 cm, diametre interne = 75,um) et la detection est realisee a 254 nm. L'echantillon (0,5 mM oxprenonol HCl) est injecte pendant S secondes et la separation s'effectue a +20kV. Dans ces conditions, les mobilites electrophoretiques apparentes (mapp) pour les deux enantiomeres vent respectivement: o Mapp = 12,87 10-5 cm2 Vi s Mapp = 9,5 l l 0-s cm2 V si Les deux enantiomeres de l'oxprenonol peuvent done etre separes et quantifies a ['aide des derives de cyclodextrines aminees conformes a ['invention. 26 233931 3 Revendications 1. Nouveaux derives de cyclodextrines aminees repondant a la formule: O --O R2 R\i'\ (11) \ R2 R3/ R2 R3 dans laquelle - nestegalaO, 1 ou2, o - R represente un groupement alcool primaire ou methyle, un groupement represente par l'une des formules -CH2XR5, -C(0)-R5, -C(0)-NH-R5, -C(S)- R5 ou -C(S)-NH-R5 dans lesquelles X represente un atome d'oxygene, de soufre ou d'azote, et R5 un groupement alkyle, aryle, alkylaryle ou arylalkyle de 1 a 60 atomes de carbone, eventuel]ement substitue par des heteroatomes et/ou des s fonctions acides carboxyliques, sulfoniques, phosphoniques ou par des fonctions ethers, soufrees phosphorees silylees, un groupement amine, carboxylate, sulfate, phosphonate, boronate ou un groupement de formule -CH2R1-NH2, dans laquelle Rl represente une simple liaison ou un groupement R5 ayant les memes significations que plus haut et 27 2839313 - R2 et R3, qui vent identiques ou differents 1'un de l'autre, representent un groupement hydroxyle secondaire ou un groupement de formules -XR5 ou -R1- NH2 dans lesquelles X et R5 ont les memes significations que plus haut, R1 representant une simple liaison ou un groupement, R5 ayant les memes significations que plus haut, - I'un au moins des radicaux R representant un groupement -CH2R1-NH2 et/ou l'un au moins des radicaux R2 et R3 representant un groupement de formule -R1 -NH2, o et caracterises par le fait qu'au moins l'un des atomes d'hydrogene d'au moins l'un des groupements -Rl-NH2 et -CH2R1-NH2 est substitue par un groupement 6galactosyle de formule: R5 R5'X "'X' R5 (III) X R5 o dans laquelle X et R5 ont les significations indiquees plus haut, R5 pouvant egalement representer un mono-, di-, trim, oligo- ou polysaccharide comportant de l a 50000, de preference de l a l OOO enchamements sacchararidiques. 2. Procede pour la preparation des nouveaux derives de cyclodextrines aminees selon la revendication 1, caracterise par le fait que 1'on fait reagir a la temperature ambiante pendant 24 a 48 heures, dans 1'eau ou dans un alcool inferieur en C a Cs ou, de preference, dans le DMSO, en presence de cyanoborohydrure de sodium, un compose 6-oxogalactose de formule: 28 2839313 o HJOXR5 R5'X ',, R5 s X R5 dans laquelle X et R5 ont les significations indiquees a la revendication 1, avec une cyclodextrine aminee de formule: R R3 R2 R> kR3 R3 tR2 R2 o o dans laquelle - nestegalaO, 1 ou2, - R represente un groupement alcool primaire ou methyle, un groupement represente par l'une des formules -CH2XR5, -C(0)-R5, -C(0)-NH-R5, -C(S) R5 ou -C(S)-NHR5 dans lesquelles X represente un atome d'oxygene, de soufre o ou d'azote, et R5 un groupement alkyle, aryle, alkylaryle ou arylalkyle de 1 a 60 29 233931 3 atomes de carbone, eventuellement substitue par des heteroatomes et/ou des fonctions acides carboxyliques, sulfoniques, phosphoniques ou par des fonctions ethers, soufrees phosphorees silylees, un groupement amine, carboxylate, sulfate, phosphonate, boronate ou un groupement de formule CH2R1-NH2, dans laquelle R1 represente une simple liaison ou un groupement R5 ayant les memes significations que plus haut et - R2 et R3, qui vent identiques ou differents l'un de l'autre, representent un groupement hydroxyle secondaire ou un groupement de formules -XR5 ou -R1 NH2 dans lesquelles X et R5 ont les memes significations que plus haut, R1 o representant une simple liaison ou un groupement R5ayant les memes significations que plus haut, - l'un au moins des radicaux R representant un groupement -CH2R1-NH2 et/ou l'un au moins des radicaux R2 et R3 representant un groupement de formule -R1-NH2. 3. Applications des derives de cyclodextrine aminee selon la revendication 1, comprenant l'utilisation de solutions, gels ou supports ou de preparations a usage pharmaccutique, cosmetique, agrochimique ou alimentaire, o ou encore de preparations utilisees pour les parfums et les aromes, a base des N galactosyl-CD: pour le traitement des melanges d'au moins 2 constituents choisis dans le groupe comprenant les molecules organiques, minerales ou organo minerales, pour en retirer au moins une partie de l'un de ces constituents ou pour separer lesdits constituents par une methode chromatographique, par technologie membranaire ou bien par mise en ccuvre d'un procede d'extraction liquide-liquide ou liquidesolide ou bien par procede d'electrophorese ou d'electrochromatographie preparative; 2839313 pour le traitement des melanges d'au moins 2 enantiomeres choisis dans le groupe comprenant les molecules organiques chirales ou organo-minerales chirales, pour en retirer au moins une partie de l'un des enantiomeres, autrement dit pour enrichir le melange en l'une des molecules unichirales optiquement actives et obtenir ainsi l'un des enantiomeres sous forme enrichie; pour la separation de molecules optiquement actives par chromatographie ou par technologie membranaire, par mise en aeuvre d'un procede d'extraction liquide-liquide ou liquide-solide ou par un o procede d'electrophorese ou d'electrochromatographie preparative. 4. Mono-N-galactosyl--CD 5. Mono-N-methyl--D-galactopyranosyl--CD 6. Mono- N-melibiosyl-,6-CD 7. Mono-N-lactosyl--CD