FR 2832420 A1 20030523 FR 0214097 A 20021112 SÉQUENCE D'ADN ASSOCIÉE AU SYNDROME D'ALSTRÖM (ALMS1) La présente invention concerne une séquence d'ADN associée au syndrome d'Alstrôm (ALMS1), des variants de cette séquence d'ADN, la protéine codée par cette séquence d'ADN et des procédés de criblage pour tester des individus afin de déterminer s'ils sont porteurs du syndrome d'Alstrôm. Le syndrome d'Alstrôm est un trouble homogène autosomal récessif qui est caractérisé par une obésité infantile associée à une hyperinsulinémie, une hyperglycémie chronique, et des déficiences neurosensorielles (Alstrom, C. H., Hallgren, B., Nillson, L. B. & Asander, H.. Retinal degeneration combined with obesity, diabetes mellitus and neurogenous deafness. A specific syndrome (not hitherto described) distinct from Laurence-Moon-Biedl syndrome. A clinical endocrinological and genetic examination based on a large pedigree. Acta Psychiatr Neural Scand 34 (Supplément 129), 1-35 (1959) ; Goldstein, J. L. & Fialkow, P. J. Medicine Baltimore 52, 53-71 (1973) ). Le locus Alstrôm est susceptible d'interagir avec des modificateurs génétiques étant donné que des sous-groupes de patients présentent des caractéristiques supplémentaires telles qu'une cardiomyopathie dilatée (Michaud, J. L. et al. J Ped 128, 225-229 (1996) ), un dysfonctionnement hépatique (Connolly, M. B. et al. Am J Med Genet 40,421-424 (1991) ), une hypothyroïdie (Charles, S. J., Moore, A. T., Yates, J. R., Green T. & Clark, P. Alström's syndrome : further evidence of autosomal recessive inheritance and endocrinological dysfunction. J Med Genet 27,590-592 (1990) ), un hypogonadisme mâle, une petite taille et un retard du développement léger à modéré, et des complications secondaires normalement associées au diabète de type 2, telles que l'hyperlipidémie et l'athérosclérose. Le locus du syndrome d'Alström a été initialement cartographié sur le chromosome 2pl3 dans une grande famille acadienne française, dans une région de 14,9 cM (Collin, G. B., Marshall, J. D., Cardon, L. R. & Nishina, P. M. Hum Mol-Genet 6,213-219 (1997) ), et plus tard dans un intervalle affiné de 6,1 cM (Collin, G. B., et al. Hum Genet 105,474-479 (1999) ) ; Macari, F. et al. Hum Genet 103,658-661 (1998). En utilisant une stratégie de clonage positionne, le transcrit KIAA0328 non caractérisé antérieurement a été identifié. Dans ce transcrit, l'analyse mutationnelle a révélé des variations de séquence comprenant quatre mutations de décalage de cadre de lecture et deux mutations non sens chez les individus atteints de six familles non liées ségrégeant le syndrome d'Altrôm. ALMS1 est un nouveau gène qui est exprimé de manière ubiquitaire à des faibles niveaux et qui ne partage pas d'homologie de séquence significative avec un quelconque autre gène décrit jusqu'à présent. L'identification du gène ALMS1 nous donne un point d'entrée dans une nouvelle voie conduisant à la compréhension à la fois du syndrome d'Alström et des maladies communes qui le caractérisent phénotypiquement, telles que l'obésité, l'hyperinsulinémie et l'hyperglycémie. Le gène ALMS1 peut être utilisé pour diagnostiquer le syndrome d'Alström par des tests génétiques de mutations dans le gène, ou des tests des niveaux de production adéquats de la protéine codée par le gène dans les tissus du patient. L'identification de ALMS1 permet aussi un criblage des individus pour déterminer s'ils sont porteurs du syndrome d'Alström par des tests génétiques. Figure 1 : cartes à résolution fine et physique de la région ALMS1. Des recombinaisons chez un enfant atteint de la famille acadienne française (KI) et un enfant d'une petite famille nucléaire (K53) placent l'intervalle critique de ALMS1 dans une région Huit BAC chevauchants complètent une séquence contiguë de 1,2 Mb. Les localisations de seize gènes connus et prédits dérivés des groupes EST sont montrés en barres sombres. Les gènes testés pour l'analyse mutationnelle sont identifiés avec un astérisque. Barres sombres. de droite à gauche : SEC15 (AB023136), SPR (sepiaptérine réductase), EMX1 (stigmate vide, homologue 1 de drosophile), THC529835 (homologue de sre2 de C. elegans), PP75 (KIAA0857), EST (THC551446), un nouveau gène associé à la protéine homéobox EMX*, NN8-4AG (répondant à l'acide rétinoïque), CCT7 (TCP1 contenant une chaperonine, sousunité 7), EST (THC530316) *, EST (AI014261), EGR4 (réponse de croissance précoce 4), EST (KIAA0328), DUSP11 (phosphatase à double spécificité 11), AMSH* (molécule associée au STAM), et ACTG2 (actine, gamma-2, muscle lisse, entérique). Figure 2 : structure génomique et épissage alternatif du gène ALMS1. a, structure exon-intron de KIAA0328 (ALMS1) à l'échelle (voir aussi le tableau 1). Le gène comprend 16 exons recouvrant 164 kb d'ADN génomique. Les régions 5'et 3'UTR et les régions d'exon sont respectivement décrites par des boîtes vides et pleines. Les introns pour lesquels l'information de séquence est incomplète sont indiqués par des barres obliques. b, transcrits alternatifs majeurs du ALMS1 humain. Figure 3 : mutations dans cinq familles non liées ségrégeant ALMS1. Les mutations ont été observées chez tous les sujets atteints Al à A8. a-d, toutes les mutations co-ségrègent avec la maladie à l'état homozygote chez les individus atteints. a, Détection d'une insertion de 19 pb dans l'exon 9 de KIAA0328 dans une grande famille acadienne consanguine (Kl) (Marshall, J. D. et al. Genealogy, natural history, and phenotype of Alström syndrome in a large Acadian kindred and three additional families. Am J Med Genet 73,150-161 (1997) ). Le chromatogramme présente la variation de séquence entre un témoin normal et un individu atteint. L'amplification par PCR de l'insertion de 19 pb d'une famille nucléaire de la famille acadienne est montrée sur la droite. Les parents (1, 2) sont hétérozygotes pour la mutation (porteur), l'enfant non atteint (3) est homozygote pour l'allèle normal (439 pb, non porteur) et l'enfant atteint (4) est homozygote pour l'insertion (458 pb). La transmission de l'insertion est en accord complet avec les haplotypes rapportés antérieurement (non montré). b, mutation non-sens 1582C > T dans l'exon 3 d'un individu atteint, de descendance italienne. c, mutations 3808GA > T ; 3813G > A dans l'exon 9 donnant lieu à un décalage de cadre de lecture chez les trois enfants atteints de la même famille, de descendance française. NS = aucun échantillon. d, mutation de décalage de cadre de lecture 3974delC dans l'exon 9 de deux familles. La relation généalogique entre ces deux dernières n'a pas été identifiée. Un signal de terminaison prématuré en découle au codon 1330. e, mutation non sens 4648C > T chez des cousins issus de germains A7 (homozygote) et A8 (hétérozygote). Une seconde mutation (1594insA) a été identifiée dans A8 qui donne lieu à un décalage de cadre de lecture. Figure 4 : expression de ALMS1 dans divers tissus humains et murins adultes. a, RT-PCR d'un groupe de tissus multiples d'ADNc humain (CLONTECH). b, Analyse par transfert Northern de 5 pg d'ARN polyA+ de souris hybridés avec un fragment d'ADNc de 490 pb recouvrant les exons 1 à 3 et la ss-actine comme témoin. Bien que l'expression de ALMS1 dans le cerveau et le muscle n'a pas été détectée par analyse Northern chez l'humain, une faible expression a été observée par RT-PCR. Figure 5 : similarité en acides aminés entre les ALMS1 humain et murin et les domaines de souris (AK016590) et de macaque (AB055273). En utilisant une stratégie de clonage positionne, le transcrit KIAA0328 non caractérisé antérieurement a été identifié. Dans ce transcrit, l'analyse mutationnelle a révélé des variations de séquence comprenant quatre mutations de décalage de cadre de lecture et deux mutations non sens chez les individus atteints de six familles non liées ségrégeant le syndrome d'Alstrôm. ALMS1 est un nouveau gène qui est exprimé de manière ubiquitaire à de faibles niveaux et qui ne partage pas d'homologie de séquence significative avec un quelconque autre gène rapporté jusqu'à présent. L'identification du gène ALMS1 nous donne un point d'entrée dans une nouvelle voie conduisant à la compréhension à la fois du syndrome d'Alström et des maladies communes qui le caractérisent phénotypiquement, telles que l'obésité, l'hyperinsulinémie et l'hyperglycémie. Le gène ALMS1 peut être utilisé pour diagnostiquer le syndrome d'Alstrôm par des tests génétiques pour des mutations dans le gène ou des tests pour des niveaux de production adéquats de la protéine codée par le gène dans les tissus du patient. L'identification d'ALMS1 permet aussi de cribler les individus pour déterminer s'ils sont porteurs du syndrome d'Alstrôm par des tests génétiques. Ainsi, l'invention propose une séquence d'ADN comprenant ALMS1. Le terme "ALMS1" tel qu'utilisé ici se rapporte à une molécule d'acide nucléique sur le chromosome 2pl3 qui comprend le gène qui est associé au syndrome d'Alstrôm, et aussi à une partie ou un fragment de la molécule d'acide nucléique isolée, qui code le polypeptide ALMS1, de préférence à un acide nucléique comprenant une séquence codant un polypeptide ALMS1 de SEQ ID No : 2. Dans un autre mode de réalisation, la molécule d'acide nucléique comprend la SEQ ID No : 1 ou la séquence complémentaire de celle-ci. Dans un autre mode de réalisation, l'invention propose des molécules d'acide nucléique qui hybrident avec ALMS1 ou à la séquence complémentaire de ALMS1 dans des conditions d'hybridation stringentes. Le terme"hybrident dans des conditions stringentes"signifie que deux fragments d'acide nucléique sont capables d'hybrider l'un avec l'autre dans les conditions d'hybridation standard décrites dans Sambrook et al., Molecular Cloning : A Laboratory Manual (1989) Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York, USA. Plus spécifiquement, les "conditions stringentes"telles qu'utilisées ici se rapportent à une hybridation à 650C dans un tampon d'hybridation constitué par 250 moles/1 de tampon phosphate de sodium pH 7,2, 7% (p/v) de SDS, 1% (p/v) de BSA, 1 mmole/l d'EDTA et 0,1 mg/ml d'ADN de sperme de saumon simple brin. Un lavage final est effectué à 650C dans 125 moles/1 de tampon phosphate de sodium pH 7,2, 1 mmole/1 d'EDTA et 1% (p/v) de SDS. Les molécules d'acide nucléique de la présente invention peuvent être de l'ARN, par exemple de l'ARNm, de l'ADN, tel que de l'ADNc et de l'ADN génomique. Les molécules d'ADN peuvent être double brin ou simple brin ; l'ARN ou l'ADN simple brin peut être le brin codant, ou brin sens, ou le brin non codant, ou brin anti-sens. La molécule d'acide nucléique peut comprendre tout ou partie de la séquence codante du gène et peut en outre comprendre des séquences non codantes supplémentaires telles que des introns et des séquences non codantes en 3'et en 5', y compris des séquences régulatrices. De plus, la molécule d'acide nucléique peut être fusionnée à une séquence marqueur, par exemple, une séquence qui code un polypeptide pour aider l'isolement ou la purification du polypeptide. Ces séquences sont bien connues dans la technique. Les molécules d'acide nucléique de la présente invention sont de préférence des molécules d'acide nucléique isolées. Dans un autre mode de réalisation de la présente invention, l'acide nucléique comprend ALMS1 avec une mutation associée au syndrome d'Alstrôm. Dans un mode de réalisation préféré, l'acide nucléique comprend une séquence d'ADN choisie dans le groupe constitué par les séquences d'ADN hybridant avec ALMS1 ou la séquence complémentaire de ALMS1 dans des conditions d'hybridation stringentes, les séquences d'ADN codant la même séquence d'acides aminés que ALMS1 et les acides nucléiques comprenant une séquence qui code un polypeptide ALMS1 de SEQ ID No : 2, choisi dans le groupe constituant en : une séquence d'ADN comprenant ALMS1 avec 19 nucléotides insérés après le 3737ème nucléotide de ALMS1 ; une séquence d'ADN comprenant ALMS1, le 1582ème nucléotide de ALMS1 étant un T ; une séquence d'ADN comprenant ALMS1, le 3808ème nucléotide de ALMS1 étant un T, le 3809ème nucléotide de ALMS1 étant délété et le 3813ème nucléotide de ALMS1 étant un A ; une séquence d'ADN comprenant ALMS1, le 3974ème nucléotide de ALMS1 étant délété ; une séquence d'ADN comprenant ALMS1, le 4648ème nucléotide de ALMS1 étant un T ; et une séquence d'ADN comprenant ALMS1, avec un A inséré après le 1594ème nucléotide de ALMS1. Un autre aspect de la présente invention concerne les constructions d'acide nucléique contenant l'une quelconque des molécules d'acide nucléique de la présente invention. Les constructions comprennent un vecteur (par exemple, un vecteur d'expression) dans lequel une séquence de l'invention a été insérée dans une orientation sens ou non sens. Tel qu'utilisé ici, le terme"vecteur"se rapporte à une molécule d'acide nucléique capable de transporter un autre acide nucléique auquel elle a été liée. Les molécules d'acide nucléique de ALMS1 recombinant, les molécules anti-sens, les vecteurs comprenant ces molécules d'acide nucléique ou ces molécules anti-sens peuvent être produits par des procédés connus des hommes du métier en biologie moléculaire. Par exemple, le choix des vecteurs, qui peut dépendre de la fonction souhaitée et comprendre des plasmides, des cosmides, des virus, des bactériophages et d'autres vecteurs utilisés de manière conventionnelle en génie génétique. Les procédés qui sont bien connus des hommes du métier peuvent être utilisés pour construire divers plasmides et vecteurs ; voir, par exemple, les techniques décrites dans Sambrook, Molecular Cloning a Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory (1989) N. Y., et Ausubel, Current Protocols in Molecular Biology, Green Publishing Associates and Wiley Interscience, N. Y. (1989), (1994). De manière alternative, les molécules d'acide nucléique et les vecteurs peuvent être reconstitués dans des liposomes pour la délivrance aux cellules cibles. Des séquences appropriées peuvent être transférées dans des vecteurs d'expression où l'expression d'un polypeptide particulier est nécessaire. Les vecteurs de clonage typiques comprennent le pBscpt sk, le pGEM, le pUC9, le pBR322, et le pGBT9. Les vecteurs d'expression typiques comprennent le pTRE, le pCAL-n-EK, le pESP-1, le pOP13CAT, le pET, le pGEX, le pMALC, le pPIC9, le pBac. La construction d'acide nucléique recombinant de la présente invention peut être conçue pour l'expression d'un polypeptide de l'invention dans des cellules procaryotes ou eucaryotes, par exemple, des cellules bactériennes, des cellules d'insecte, des cellules de levure ou des cellules mammifères. D'autres cellules hôtes adaptées sont connues des hommes du métier. Un autre aspect de la présente invention concerne les cellules hôtes recombinantes dans lesquelles a été introduite une construction d'acide nucléique recombinant de l'invention. Les termes"cellule hôte"et"cellule hôte recombinante"sont utilisés ici de manière interchangeable. On comprend que ces termes ne se rapportent pas seulement aux cellules présentes particulières, mais aussi à la descendance ou à la descendance potentielle d'une telle cellule. La construction d'acide nucléique peut être introduite dans des cellules procaryotes ou eucaryotes via les techniques de transformation ou de transfection conventionnelles bien connues de l'homme du métier. Une cellule hôte de l'invention, telle qu'une cellule hôte procaryote ou eucaryote en culture, peut être utilisée pour produire un polypeptide de l'invention. Ainsi, l'invention propose en outre des procédés pour produire un polypeptide codé par les molécules d'acide nucléique de l'invention, en utilisant les cellules hôtes de l'invention. Dans un mode de réalisation, le procédé comprend la culture de la cellule hôte de l'invention (dans laquelle une construction d'acide nucléique recombinant codant un polypeptide de l'invention a été introduite) dans des conditions adaptées pour l'expression desdites molécules d'acide nucléique. Dans un autre mode de réalisation, le procédé comprend en outre l'isolement du polypeptide à partir du milieu ou de la cellule hôte. La cellule hôte de l'invention peut aussi être utilisée pour produire des animaux transgéniques non humains. Par exemple, dans un mode de réalisation, une cellule hôte de l'invention est un oocyte fertilisé ou une cellule souche embryonnaire dans laquelle une molécule d'acide nucléique de l'invention a été introduite. Ces cellules hôtes peuvent ensuite être utilisées pour créer des animaux transgéniques non humains dans lesquels des séquences nucléotidiques exogènes ont été introduites dans le génome, ou des animaux recombinants homologues dans lesquels des séquences nucléotidiques endogènes ont été altérées. Ces animaux sont utiles pour étudier la fonction et/ou l'activité de la séquence nucléotidique et du polypeptide codé par la séquence et pour identifier et/ou évaluerd modulateurs de leur activité. Tel qu'utilisé ici, un "animal transgénique"est un animal non humain, de préférence un mammifère, de manière encore préférée un rongeur tel qu'un rat ou une souris, dans lequel une ou plusieurs cellules de l'animal comprennent le transgène. Un transgène est un ADN exogène qui est intégré dans le génome d'une cellule à partir de laquelle un animal transgénique se développe, et qui reste dans le génome de l'animal mature, dirigeant ainsi l'expression d'un produit codé par un gène dans un ou plusieurs types cellulaires ou tissus de l'animal transgénique. Les procédés pour créer des animaux transgéniques via la manipulation et la micro-injection d'embryon, en particulier des animaux tels que les souris, sont devenus classiques dans la technique. La production d'embryons transgéniques et leur criblage peuvent être effectués, par exemple, comme décrit par A. L. Joyner Ed., Gene Targeting, A Practical Approach (1993), Oxford University Press. Ainsi, la présente invention concerne aussi un animal transgénique comprenant un acide nucléique de l'invention. L'invention propose aussi des cellules et des tissus transgéniques dérivés desdits animaux transgéniques. Dans un mode de réalisation préféré de la présente invention, ladite cellule, tissu ou animal non humain transgénique présente un niveau d'expression de ALMS1 essentiellement réduit ou augmenté par rapport à une cellule, un tissu ou un animal non humain correspondant de type sauvage. De préférence, ledit niveau d'expression de ALMS1 essentiellement réduit ou augmenté entraîne une réponse altérée et typique de la cellule, du tissu ou de l'animal non humain transgénique. En général, ledit animal non humain transgénique présentant un niveau d'expression de ALMS1 réduit comprend au moins un allèle mutant de ALMS1 ou un allèle trans-dominant correspondant d'un gène différent. De préférence, ledit animal non humain transgénique est un animal knock-out pour ALMS1. Dans un mode de réalisation particulièrement préféré, ledit animal non humain transgénique est une souris. Il peut aussi être souhaitable d'inactiver l'expression ou la fonction du polypeptide ALMS1 à un certain stade du développement et/ou de la durée de vie de l'animal transgénique. Cela peut être accompli en utilisant, par exemple, des promoteurs spécifiques d'un tissu, du développement et/ou à régulation cellulaire et/ou inductibles qui dirigent l'expression de, par exemple, un anti-sens ou un ribozyme dirigé contre le transcrit d'ARN codant l'ARN codant ALMS1. Un système inductible adapté est par exemple l'expression génique régulée par la tétracycline, comme décrit, par exemple, par Gossen et Bujard, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89 (1992), 5547-5551 et Gossen et al., Trends Biotech. 12 (1994), 58-62. De manière similaire, l'expression du polypeptide ALMS1 (mutant) peut être contrôlée par ces éléments de régulation. De plus, l'invention concerne aussi des animaux non humains et des cellules eucaryotes transgéniques qui contiennent (de préférence, intégrée de manière stable dans le génome) une molécule d'acide nucléique de ALMS1 ou une partie de celle-ci, dans lesquels la transcription et/ou l'expression de la molécule d'acide nucléique ou d'une partie de celle-ci conduit à la réduction de la synthèse d'un polypeptide ALMS1. Dans un mode de réalisation préféré, la réduction est obtenue par un anti-sens, un sens, un ribozyme, un effet de cosuppression et/ou de mutant dominant. On entend par "Anti-sens"et"nucléotides anti-sens"des constructions d'ADN ou d'ARN qui bloquent l'expression du produit naturel du gène. Les techniques sur la manière d'obtenir cela sont bien connues de l'homme du métier. Elles comprennent par exemple, l'expression d'ARN anti-sens, de ribozymes, de molécules qui combinent les fonctions anti-sens et de ribozyme et/ou de molécules qui fournissent un effet de co-suppression. Quand on utilise l'approche anti-sens pour la réduction de la quantité de polypeptides ALMS1 dans les cellules, la molécule d'acide nucléique codant l'ARN anti-sens est de préférence d'origine homologue par rapport à l'espèce animale utilisée pour la transformation. Cependant, il est également possible d'utiliser des molécules d'acide nucléique qui présentent un degré élevé d'homologie par rapport à des molécules d'acide nucléique endogènes codant un polypeptide ALMS1. Dans ce cas, l'homologie est de préférence supérieure à 80%, en particulier supérieure à 90%, et de manière encore préférée supérieure à 95%. La réduction de la synthèse du polypeptide ALMS1 dans les cellules eucaryotes transgéniques peut entraîner une altération, par exemple, comme on le trouve dans le syndrome d'Alstrôm. Dans les animaux transgéniques comprenant ces cellules, cela peut aboutir à diverses modifications physiologiques, du développement, et/ou morphologiques. La présente invention concerne aussi des protéines et des polypeptides codés par ALMS1, et des fragments et variants de ceux-ci, ainsi que les polypeptides codés par les molécules d'acide nucléique de l'invention. Le terme "polypeptide", tel qu'utilisé ici, se rapporte à un polymère d'acides aminés, et non à une longueur spécifique. Ainsi, les peptides, les oligopeptides et les protéines sont compris dans la définition du polypeptide. De préférence, le polypeptide de l'invention est un polypeptide isolé. Les polypeptides de l'invention peuvent être purifiés jusqu'à l'homogénéité. Il est compris qu'une préparation dans laquelle le polypeptide n'est pas purifié jusqu'à homogénéité est utile. La caractéristique critique est que la préparation permette d'obtenir la fonction souhaitée du polypeptide et son identification, même en présence de quantités considérables d'autres composants. Ainsi, l'invention englobe divers degrés de pureté des polypeptides de l'invention. Dans un mode de réalisation, l'invention propose un polypeptide codé par une séquence d'acide nucléique choisie dans le groupe de : une séquence d'ADN comprenant ALMS1, les séquences d'ADN hybridant avec ALMS1 ou la séquence complémentaire de ALMS1 dans des conditions d'hybridation stringentes, le mALMS1, les séquences d'acide nucléique mentionnées ci-dessus comprenant des mutations associées au syndrome d'Alsträm, et les séquences d'ADN comprenant ALMS1 avec les mutations, délétions et insertions suivantes choisies dans le groupe consistant en : 19 nucléotides insérés après le 3737ème nucléotide de ALMS1 ; le 1582ème nucléotide de ALMS1 étant un T ; le 3808ème nucléotide de ALMS1 étant un T, le 3809ème nucléotide de ALMS1 étant délété et le 3813ème nucléotide du ALMS1 étant un A ; le 3974ème nucléotide de ALMS1 étant délété ; le 4648ème nucléotide de ALMS1 étant un T ; et un A étant inséré après le 1594ème nucléotide de ALMS1. Dans un mode de réalisation préféré, la présente invention propose un polypeptide comprenant la séquence d'acides aminés de SEQ ID No : 2. Les polypeptides de l'invention englobent aussi des fragments et des variants de séquence. Les variants comprennent un polypeptide essentiellement homologue codé par le même locus génétique dans un organisme, par exemple, un variant allélique, ainsi que d'autres variants d'épissage. Les variants comprennent aussi les polypeptides essentiellement homologues codés par un autre locus génétique dans un organisme mais appartenant à la même famille de protéines, ainsi que les polypeptides essentiellement homologues ou identiques d'un autre organisme, par exemple, les orthologues. Les variants comprennent aussi les polypeptides essentiellement homologues ou identiques produits par des procédés de synthèse chimique ou des procédés recombinants. Ainsi, la présente invention comprend les variants du polypeptide ALMS1 qui sont essentiellement homologues. Ces variants comprennent des délétions, des insertions, des inversions, des séquences répétées, et des substitutions choisies selon les règles générales connues dans la technique pour avoir peu d'effet sur l'activité. Par exemple, les lignes directrices concernant la manière de faire des substitutions d'acide aminé phénotypiquement muettes sont données par Bowie, Science 247 (1990), 1306- 1310, où les auteurs indiquent qu'il y a deux stratégies principales pour étudier la tolérance d'une séquence d'acides aminés à être modifiée. Dans un mode de réalisation préféré, le variant du polypeptide de ALMS1 comprend une séquence d'acides aminés qui est identique à plus de 90 pour cent à une séquence d'acides aminés de ALMS1 de la présente invention. A côté d'une substitution d'acide aminé conservative, les variants de ALMS1 comprennent (i) des substitutions avec un ou plusieurs des résidus d'acide aminé non conservés, où les résidus d'acide aminé substitués peuvent ou peuvent ne pas être codés par le code génétique, ou (ii) une substitution avec un ou plusieurs résidus d'acide aminé ayant un groupe substituant, ou (iii) la fusion du polypeptide mature avec un autre composé, tel qu'un composé pour augmenter la stabilité et/ou la solubilité du polypeptide (par exemple, le polyéthylèneglycol), ou (iv) la fusion du polypeptide avec des acides aminés supplémentaires, tels qu'un peptide de région de fusion de IgG Fc, ou une séquence leader ou sécrétrice, ou une séquence facilitant la purification. Ces polypeptides variants sont considérés comme étant à la portée des hommes du métier à partir des présents enseignements. Par exemple, les variants du polypeptide de ALMS1 contenant des substitutions d'acides aminés chargés par d'autres acides aminés chargés ou neutres, peuvent produire des protéines avec des caractéristiques améliorées, telles qu'une agrégation moins prononcée. L'agrégation de formulations pharmaceutiques, à la fois, réduit l'activité et augmente la clairance due à l'activité immunogène de l'agrégat ; voir, par exemple, Pinckard, Clin. Exp. Immunol. 2 (1967), 331-340 ; Robbins, Diabetes 36 (1987), 838-845 ; Cleland, Crit. Rev. Therapeutic Drug Carrier Systems 10 (1993), 307-377. Le polypeptide de l'invention peut être purifié à partir des cellules qui l'expriment naturellement, purifié à partir des cellules qui ont été altérées pour l'exprimer de manière recombinante, ou synthétisé en utilisant les procédés de synthèse protéique connus. Dans un mode de réalisation, le polypeptide est produit par les techniques de l'ADN recombinant. Les polypeptides de la présente invention peuvent être utilisés pour produire des anticorps ou provoquer une réponse immunitaire. Les polypeptides peuvent aussi être utilisés comme réactifs, par exemple, un réactif marqué, dans des tests pour déterminer quantitativement les niveaux des molécules auxquelles ils se lient dans les fluides biologiques. De plus, les polypeptides peuvent être utilisés comme marqueurs, pour isoler un agent de liaison correspondant, et pour cribler pour des petites molécules ou peptides antagonistes ou agonistes de l'interaction de liaison. L'invention comprend en outre un anticorps ou un fragment de celui-ci se liant à un antigène, qui se lie sélectivement à un polypeptide de la présente invention. Un anticorps anti-ALMSl (ou variant de ALMS1) de la présente invention peut être un anticorps monoclonal, un anticorps polyclonal, un anticorps à simple chaîne, un anticorps humain ou humanisé, primatisé, xénogénique, chimérisé, ou un fragment de ceux-ci qui se lie spécifiquement à un polypeptide ALMS1, et comprenant aussi un anticorps bispécifique, un anticorps synthétique, un fragment d'anticorps, tel que les fragments Fab, Fv ou scFv etc., ou un dérivé modifié chimiquement de l'un quelconque de ceux-ci. La méthodologie générale pour produire des anticorps est bien connue et a été décrite dans, par exemple, Köhler et Milstein, Nature 256 (1975), 494, et revue dans J. G. R. Hurrel, ed.,"Monoclonal Hybridoma Antibodies : Techniques and Applications", CRC Press Inc., Boco Raron FL (1982), ainsi que celle enseignée par L. T. Mimms et al., Virology 176 (1990), 604-619. De plus, les anticorps, ou des fragments de ceux-ci, des polypeptides mentionnés ci-dessus, peuvent être obtenus en utilisant les procédés qui sont décrits, par exemple, dans Harlow et Lane"Antibodies, A Laboratory Manual", CSH Press, Cold Spring Harbor, 1988. En général, les anticorps de l'invention peuvent être utilisés pour isoler un polypeptide de l'invention par les techniques standard, par exemple, la chromatographie d'affinité ou l'immunoprécipitation. De plus, un anticorps spécifique d'un polypeptide de l'invention peut être utilisé pour détecter le polypeptide (par exemple, dans un lysat cellulaire, un surnageant cellulaire, ou un échantillon de tissu) afin d'évaluer l'abondance et le profil d'expression du polypeptide. Les anticorps peuvent être utilisés en diagnostic pour contrôler les niveaux de protéines dans un tissu, comme partie d'une procédure de test clinique. La détection peut être facilitée par le couplage de l'anticorps à une substance détectable. Les exemples de substances détectables comprennent diverses enzymes, groupes prosthétiques, substances fluorescentes, substances luminescentes, substances bioluminescentes, et substances radioactives. La présente invention concerne aussi des procédés de diagnostic du syndrome d'Alström associés à la présence du gène, ou du produit du gène, ALMS1 chez un individu. Les essais diagnostiques peuvent être conçus pour évaluer l'expression du gène ALMS1, ou pour évaluer la présence ou l'activité de polypeptides ALMS1. Les essais peuvent être utilisés dans le contexte d'un échantillon biologique prélevé pour déterminer si un individu est atteint du syndrome d'Alstrôm, ou risque de développer le syndrome d'Alstrôm. L'invention propose aussi un essai pronostique pour déterminer si un individu est porteur du syndrome d'Alstrôm et susceptible de développer le syndrome d'Alstrôm. Les acides nucléiques, polypeptides et anticorps décrits ici peuvent être utilisés dans des procédés de diagnostic du syndrome d'Alstrôm ou d'une susceptibilité au syndrome d'Alstrôm, ainsi que dans des kits de diagnostic du syndrome d'Alström ou d'une susceptibilité au syndrome d'Alstrôm. Dans un mode de réalisation de la présente invention, un procédé de diagnostic du syndrome d'Alstrôm ou de criblage de porteurs du syndrome d'Alström est proposé, comprenant le test du matériel génétique d'un porteur putatif de mutations dans ALSM1, où la présence des mutations dans le gène est une indication du syndrome d'Alstrôm. La plupart de procédés de diagnostic tels que décrits ci-dessus incorporent des sondes d'acide nucléique comme élément crucial. Quand les sondes sont utilisées pour détecter la présence des séquences cibles, l'échantillon biologique à analyser, tel que le sang ou le sérum, peut être traité pour extraire les acides nucléiques. L'acide nucléique échantillon peut être préparé de diverses manières pour faciliter la détection de la séquence cible, par exemple, la dénaturation, la digestion de restriction, l'électrophorèse ou le transfert d'empreinte. La région ciblée de l'acide nucléique analyte doit en général être au moins partiellement simple brin pour former des hybrides avec la séquence de ciblage de la sonde. Si la séquence est naturellement simple brin, une dénaturation ne sera pas nécessaire. Cependant, si la séquence est double brin, la séquence devra probablement être dénaturée. La dénaturation peut être effectuée par diverses techniques connues dans le métier. Les acides nucléiques cibles, la sonde et l'analyte peuvent être incubés dans des conditions qui favorisent la formation d'un hybride stable de la séquence cible dans la sonde avec la séquence ciblée putative dans l'analyte. La région de la sonde qui est utilisée pour se lier à l'analyte peut être rendue complètement complémentaire à la région ciblée du chromosome 2 humain. Ainsi, des conditions de forte stringence sont souhaitables pour prévenir les faux positifs. Cependant, les conditions de forte stringence ne sont utilisées que si les sondes sont complémentaires de régions du chromosome qui sont uniques dans le génome. La stringence de l'hybridation est déterminée par un certain nombre de facteurs pendant l'hybridation et pendant la procédure de lavage, y compris la température, la force ionique, la composition en bases, la longueur de la sonde, et la concentration de formamide. Ces facteurs sont soulignés dans, par exemple, Maniatis et al., Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, 1982, et Sambrook et al., 1989. Dans certaines circonstances, la formation d'hybrides d'ordre supérieur, tels que des triplex, des quadruplex, etc., peuvent être souhaités pour fournir le moyen de détecter les séquences cibles. L'hybridation d'acide nucléique sera affectée par les conditions telles que la concentration en sel, la température, ou les solvants organiques, en plus de la composition en bases, de la longueur des brins complémentaires, et du nombre de mésappariements de base nucléotidique entre les acides nucléiques s'hybridant, comme cela sera facilement apprécié par les hommes du métier. Les conditions de température stringentes vont en général comprendre les températures au-dessus de 30 C, en général au-dessus de 37 C, et de préférence au-dessus de 45OC. Les conditions salines stringentes seront d'ordinaire inférieures à 1000 mM, en général inférieures à 500 mM, et de préférence inférieures à 200 mM. Cependant, la combinaison de paramètres est beaucoup plus importante que la mesure de n'importe quel paramètre unique. Les séquences de sonde peuvent aussi hybrider spécifiquement avec de l'ADN duplex dans certaines conditions pour former un triplex ou d'autres complexes d'ADN d'ordre supérieur. La préparation de ces sondes et les conditions d'hybridation adaptées sont bien connues dans la technique. La détection, s'il y a lieu, de l'hybride obtenu est en général effectuée par l'utilisation de sondes marquées. Alternativement, la sonde peut être non marquée, mais elle peut être détectable par une liaison spécifique avec un ligand qui est marqué, soit directement, soit indirectement. Les marqueurs adaptés, et les procédés pour marquer les sondes et les ligands sont connus dans la technique, et comprennent, par exemple, des marqueurs radioactifs qui peuvent être incorporés par des procédés connus (par exemple, la translation de coupure, l'amorçage au hasard ou le traitement à la kinase), la biotine, les groupes fluorescents, les groupes chimioluminescents (par exemple, les dioxétanes, en particulier les dioxétanes activés), les enzymes, les anticorps, et similaires. Les variations de ce schéma de base sont connues dans la technique, et comprennent les variations qui facilitent la séparation des hybrides à détecter des matières superflues et/ou qui amplifient le signal de la fraction marquée. Un certain nombre de ces variations sont passées en revue dans, par exemple Matthews & Kricka, Anal. Biochem., 169 : 1,1988 ; et Landegren et al., Science, 242 : 229,1988 ; Mittlin, 1989. Comme noté ci-dessus, un certain nombre de tests de criblage non basés sur la PCR sont considérés dans l'invention. Une procédure hybride une sonde d'acide nucléique (ou un analogue tel qu'un squelette phosphonate de méthyle remplaçant le phosphodiester normal), avec la séquence cible présente à une faible concentration. Cette sonde peut être liée à une enzyme de manière covalente, de telle manière que la liaison covalente n'interfère pas avec la spécificité de l'hybridation. Ce complexe enzymesonde acide nucléique cible conjugué peut ensuite être isolé du conjugué sonde enzyme libre, et un substrat est ajouté pour la détection de l'enzyme. L'activité enzymatique est observée par un changement de développement de couleur ou de sortie luminescente, ce qui aboutit à une augmentation de la sensibilité. Pour un exemple associé à la préparation des conjugués oligodésoxynucléotide-phosphatase alcaline et leur utilisation comme sondes d'hybridation, voir Jablonski et al., N. A. R., 14 : 6115-6128,1986. Les méthodologies d'amplification de marqueur à deux étapes sont connues dans la technique. Le principes de ces essais est telqu'un petit ligand (tel que la digoxigénine, la biotine, ou similaires) est attaché à une sonde d'acide nucléique capable de se lier spécifiquement à une séquence ALMS1 de l'invention. Les sondes spécifiques d'un allèle sont aussi considérées comme comprises dans le cadre de l'invention et des exemples de sondes spécifiques d'un allèle comprennent les sondes englobant les mutations de prédisposition de la présente invention. Dans un mode de réalisation, le petit ligand attaché à la sonde d'acide nucléique est reconnu spécifiquement par un conjugué anticorps-enzyme. Dans un autre mode de réalisation, la digoxigénine est attachée à la sonde d'acide nucléique. L'hybridation est détectée par un anticorps anti-digoxigénine conjugué au conjugué de phosphatase alcaline. La phosphatase alcaline modifie un substrat chimioluminescent qui peut ensuite être détecté. Pour les procédés de marquage de sondes d'acide nucléique selon ce mode de réalisation, voir Martin et al., BioTechniques 9 : 762-768,1990. Dans un second exemple, le petit ligand est reconnu par un second conjugué ligandenzyme qui est capable de se complexer spécifiquement au premier ligand. Un mode de réalisation bien connu de cet exemple est le type d'interaction biotine-avidine. Pour les procédés de marquage de sondes d'acide nucléique et leur utilisation dans des essais à base de biotineavidine, voir Nguyen et al., BioTechniques 13 : 116-123, 1992. Il est aussi considéré dans le cadre de la présente invention que les essais de sonde d'acide nucléique de l'invention emploieront une combinaison de sondes d'acide nucléique capables de détecter des mutations de ALMS1. Ainsi, dans un exemple pour détecter la présence de mutations dans un échantillon cellulaire, plus d'une sonde complémentaire au gène est employée, et, en particulier, le nombre de sondes différentes est, alternativement, de deux, trois ou cinq séquences de sonde d'acide nucléique différentes. Dans un autre exemple, pour détecter la présence de polymorphismes dans la séquence ALMS1 d'un patient, plus d'une sonde complémentaire du gène sont employées. N'importe quelle différence de séquence trouvée par une des techniques discutées ci-dessus identifiera un individu comme ayant un variant moléculaire de ALMS1 qui peut être associé au syndrome d'Alström. Ces variants peuvent prendre un certain nombre de formes et être à la fois présents dans les régions codantes ou non codantes. Certaines mutations associées à un gène exprimé peuvent produire une protéine anormale ou peuvent altérer l'expression de la protéine de manière significative. D'autres mutations disruptives peuvent comprendre des petites délétions en phase et des substitutions de paire de base non-conservatives qui peuvent avoir une effet significatif sur la protéine produite, tel que des changements de ou en un résidu cystéine, d'un acide aminé basique en un acide aminé acide ou vice versa, d'un acide aminé hydrophobe en un acide aminé hydrophile ou vice versa, ou d'autres polymorphismes qui peuvent affecter la structure secondaire ou tertiaire de la protéine. On ne s'attendrait pas en général à ce que les polymorphismes muets ou ceux provenant de substitutions d'acide aminé conservatives empêchent la fonction de la protéine. Dans un autre mode de réalisation de la présente invention, un procédé de diagnostic du syndrome d'Alström est proposé, ledit procédé comprenant la détermination de la présence ou de l'absence de la protéine codée par ALMS1 dans un échantillon de tissu d'un patient. La présence d'un polypeptide ALMS1 peut être examinée par divers procédés, y compris l'essai par immunoadsorption en liaison avec une enzyme (ELISA), le transfert Western, l'immunoprécipitation et l'immunofluorescence. Dans un mode de réalisation préféré de ce procédé, l'étape de détermination de la présence ou de l'absence de la protéine codée par ALMS1 est effectuée par addition d'un anticorps spécifique de la protéine codée par ALMS1 aux protéines de l'échantillon de tissu, et par détermination de la quantité d'anticorps qui se lie aux protéines de l'échantillon de tissu. Les kits (par exemple, les kits de réactifs) utiles dans les procédés de diagnostic comprennent les composants utiles dans l'un quelconque des procédés décrits ici, y compris, par exemple, les sondes ou les amorces d'hybridation, les réactifs pour la détection des molécules marquées, les enzymes de restriction, les oligonucléotides spécifiques d'un allèle, les anticorps qui se lient au polypeptide ALMS1 mutant ou natif, les moyens d'amplification des acides nucléiques comprenant ALMS1, ou les moyens pour analyser la séquence d'acide nucléique de ALMS1 ou pour analyser la séquence d'acides aminés du polypeptide ALMS1, etc. Ainsi, la présente invention propose un réactif pour tester un échantillon pour la présence d'un acide nucléique d'ALMS1, ledit réactif comprenant un acide nucléique comprenant une séquence nucléotidique contiguë qui est au moins partiellement complémentaire d'une partie de la séquence d'acide nucléique dudit ALMS1. De plus, la présente invention propose un kit de réactifs pour tester un échantillon pour la présence d'une mutation d'un acide nucléique ALMS1, comprenant, dans des conteneurs distincts, a) un ou plusieurs acides nucléiques marqués comprenant une séquence nucléotidique contiguë qui est au moins partiellement complémentaire à une partie de la séquence nucléotidique de ALMS1, et b) des réactifs pour la détection dudit marqueur. Dans un mode de réalisation préféré, la mutation de ALMS1 est choisie dans le groupe comprenant les mutations, délétions, et insertions suivantes : 19 nucléotides insérés après le 3737ème nucléotide de ALMS1 ; le 1582ème nucléotide de ALMS1 étant un T ; le 3808ème nucléotide de ALMS1 étant un T, le 3809ème nucléotide de ALMS1 étant délété et le 3813ème nucléotide de ALMS1 étant un A ; le 3974ème nucléotide de ALMS1 étant délété ; le 4648ère nucléotide de ALMS1 étant un T ; et un A inséré après le 1594ème nucléotide de ALMS1. De plus, dans un autre mode de réalisation, un kit de réactifs pour tester la présence d'une protéine ALMS1 dans un échantillon est proposé, comprenant un anticorps, ou un fragment de celui-ci se liant à un antigène, qui se lie sélectivement à la protéine ALMS1 ou à un variant de la protéine ALMS1, et des moyens pour détecter l'anticorps lié, ou un fragment de celui-ci se liant à un antigène. La découverte de ALMS1 et de son lien au syndrome d'Alström permet un meilleur diagnostic du syndrome d'Alstrôm. Les patients peuvent être testés pour le syndrome d'Alström d'un certain nombre de nouvelles manières en utilisant ces informations. Du matériel génétique (en particulier l'ADN génomique ou les ARNm) peut être isolé des patients et séquencé par les procédés connus pour déterminer la présence d'une quelconque mutation dans la séquence codante du gène ALMS1, qui serait une indication du syndrome d'Alstrôm. De plus la séquence d'ADN de ALMS1, son brin complémentaire ou les séquences qui hybrident avec la séquence d'ADN de ALMS1 ou avec son brin complémentaire dans des conditions stringentes, peuvent être utilisés dan une analyse de transfert Northern pour tester les niveaux de transcription du gène. Des niveaux de transcription du gène inférieurs à la normale peuvent être utilisés pour diagnostiquer le syndrome d'Alstrôm, car un défaut de transcription peut indiquer qu'un produit du gène ALMS1 insuffisamment fonctionnel est présent dans les tissus. Enfin, la protéine codée par ALMS1 peut être exprimée et isolée, et un anticorps spécifique de cette protéine peut être obtenu par les procédés standard de biotechnologie. L'anticorps peut ensuite être utile pour détecter la présence ou l'absence de la protéine ALMS1 dans les échantillons de tissu des patients. Une insuffisance de protéine ALMS1 impliquerait le syndrome d'Alstrôm. Tous les procédés ci-dessus peuvent être pratiqués par les hommes du métier, une fois qu'ils ont connaissance de la séquence de ALMS1 et du lien entre ALMS1 et le syndrome d'Alstrôm. L'invention sera en outre décrite par les exemples non limitants suivants. EXEMPLES : Familles. L'ADN des membres d'une famille présentant le syndrome d'Alstrôm et de sujets témoins a été isolé à partir du sang complet périphérique en utilisant un protocole standard (Kunkel, L. M., et al., Analysis of human Y-chromosome-specific reiterated DNA in chromosome variants, Proc Natl Acad Sci USA 74,1245-1249 (1977) ). Les critères d'inclusion étaient basés sur l'évaluation des caractéristiques cardinales de ALMS ainsi que du diagnostic clinique. Un consentement informé écrit a été obtenu de tous les sujets. Tous les protocoles ont été pré-approuvés par le Comité de Révision Interne au laboratoire Jackson. Génotypage. Les amorces oligonucléotidiques pour l'amplification de polymorphismes de séquences courtes répétées en tandem (STRP) ont été obtenues soit chez Research Genetics ou conçus (MacVector 6.0) (Rastogi, P. A. MacVector. Integrated sequence analysis for the Macintoh. Methods Mol Biol 132,47-69 (2000) ) et réalisés personnellement (One Trick Pony). L'amplification par PCR des STRP a été effectuée avec des oligonucléotides marqués au 33p, comme décrit précédemment (Collin, G. B. et al. Physical and genetic mapping of novel microsatellite polymorphismes of human chromosome 19, Genomics 37, 125-130 (1996) ). Les produits de PCR ont été séparés sur un gel de polyacrylamide dénaturant à 6% et visualisés par autoradiographie. Analyse de mutations. Seize exons de ALMS1 ont été amplifiés par PCR à l'aide des protocoles de PCR standard (voir le tableau 2 et SEQ ID No : 3 à 34). Les produits amplifiés ont été séparés sur un gel de 1 à 1,2%, excisés et purifiés en utilisant des colonnes Nucleospin (CLONTECH) et séquencés (ABI Prism 3700). Les résultats du séquençage ont été comparés à un témoin non atteint, à une séquence BAC (AC069346 et AC074008) et à un ADNc (KIAA0328). Séquence d'ADNc de souris. L'ARN total a été préparé à partir de cerveau entier de souris C57BL/6J mâles. Les tissus ont été homogénéisés et l'ARN a été isolé par un traitement avec du TRIzol (Life Technologies) selon le protocole du fabricant. L'ADNc a été produit en utilisant le kit de RT-PCR SuperScript One Step (Life Technologies). Les amorces pour l'amplification par PCR de Almsl ont été conçues à partir de séquences d'EST alignées de la base de données de Celera. L'amplification par PCR de l'ADNc a été effectuée en utilisant le système Expand template (Roche). Analyse de l'expressiosn : a Northern de souris : pour produire la sonde pour l'analyse Northern, de l'ADNc rétinien de souris C57BL/6J a été amplifié par PCR avec des amorces spécifiques de l'exon 1 (sens : 5'-TTCAGACTCTCTTGATGGAAGC-3'et antisens 5'-TTGTTGTCCCATGAGCAGC-3') en utilisant le système Expand Template (Roche). Le produit de 394 pb a été purifié et radiomarqué (système de marquage Rediprime II, Amersham Pharmacia). Des transferts de tissus multiples de souris (Nishina, P. M., North, M. A., Ikeda, A., Yan Y. & Naggert, J. K. Molecular characterization of a novel tubby gene family member, TULP3, in mouse and humans Genomics 54,215-220 (1998) ) ont été préhybridés pendant une heure avec du tampon Rapid Hyb (Amersham Pharmacia), et l'hybridation a été effectuée pendant la nuit. Les membranes ont été lavées et les produits hybridés visualisés par autoradiographie après une exposition de 8 jours. Les transferts ont été sondés avec la ss-actine comme témoin (Nishina, P. M., North, M. A., Ikeda, A., Yan Y. & Naggert, J. K. Molecular characterization of a novel tubby gene family member, TULP3, in mouse and humans Genomics 54,215-220 (1998) ). a Northern humain : Un transfert de tissus multiples humains (FirstChoice Blot 1, Ambion) a été hybridé avec une sonde de 490 pb produite par amplification par PCR de l'ADN génomique (amorces : sens 5'-TATGGCACTGAAACGATGC-3' et anti-sens 5'-TTTATTCCCAATGGTTCCACT-3'). L'hybridation a été effectuée comme ci-dessus. 'RT-PCR : Le groupeI d'ADNc de tissus multiples humains (CLONTECH) a été amplifié par PCR en utilisant l'amorce sens 5'TGTACTGGAGCATCTGTGGG-3'et l'amorce anti- sens 5'-CAGTGATTTGGGGCTGACTG-3'pendant 35 cycles à une température d'hybridation de 56 C. Numéros d'accès dans GenBank. Les données de séquence pour le transcrit humain KIAA0328, AB002326, l'ADNc de souris C57BL6/J, AF425257 et les BAC humains AC069346 et AC074008. Basée sur la cartographie du syndrome d'Alstrôm de l'art antérieur au niveau d'une région de 6,1 cM du chromosome 2pl3, une autre cartographie recombinatoire et physique a résolu l'intervalle critique à RC"URL http : //www. hgmp. mrc. ac. uk/NIX/ (1998) ) et des recherches de bases de données individuelles (Incyte Genomics et GenBank). Seize gènes et groupes EST dans l'intervalle minimal ont été identifiés. Les gènes candidats ont eu initialement la priorité en se basant sur leur profil d'expression et leur fonction. Ensuite, un criblage systématique de tous les gènes de la région a été effectué. Un groupe d'EST, contenant la nouvelle séquence d'ADNc KIAA0328 (AB002326), était composé de fragments d'ADNc exprimés dans de nombreux tissus atteints de patients affectés par le syndrome d'Alström et, ainsi, a été soumis à une analyse mutationnelle. Pour obtenir la séquence codante complète de l'ADNc correspondant, des alignements ont été effectués entre KIAA00328 et les transcrits chevauchants (Incyte Genomics, NCBI, et TIGR). Une séquence d'ADNc humaine totale de 6612 pb a été dérivée, avec un cadre ouvert de lecture s'étendant sur 1902 acides aminés (SEQ ID No : 1 ; SEQ ID No : 2). Un site d'initiation de la traduction a été identifié au nucléotide 597 et deux sites de polyadénylation putatifs (AATAAA) ont été observés aux positions 6389 et 6591, respectivement. L'alignement de la séquence d'ADNc avec la séquence génomique a identifié 16 exons de diverses longueurs (45 à 1865 pb). La structure exon-intron du gène KIAA0328, à présent dénommé ALMS1, est présentée sur la figure 2a. Deux clones BAC humains chevauchants, ctd2005P16 et RPCI- 582H21 (AC069346 et AC074008), recouvrent la séquence génomique entière de-160 kb (exons codants). Plusieurs variants d'épissage de ALMS1 ont été identifiés à partir de bases de données de banques d'ADNc publiques et d'Incyte Genomics (figure 2b). L'abondance relative des variants a été estimée à partir du nombre de clones de GenBank représentant les différentes séquences et de l'analyse de distribution tissulaire rapportée dans la base de données d'Incyte. Le variant le plus abondant est la forme ss (TIGR, THC530050), qui est constitué de 16 exons. Les exons carboxy-terminaux, 14 à 16, ne sont pas représentés dans le transcrit a identifié à l'origine (GenBank, AB002326), qui utilise un site de polyadénylation alternatif dans l'intron 14. Le cadre ouvert de lecture prédit de la forme a se termine immédiatement après l'exon 14. L'analyse de séquence prédit que le produit protéique ss (1902 aa) ne diffère du produit protéique a (1855 aa) que par une extension de 47 aa à l'extrémité C-terminale. Les recherches dans les bases de données ont aussi identifié d'autres séquences variantes rares comprenant une forme 8 (GenBank, W11846 ; Incyte, 1453614.1), qui a un 3ème exon raccourci, vraisemblablement du fait de l'utilisation d'un site donneur d'épissage interne dans l'exon 3, une séquence variante G (Incyte, 1453614.3) qui a un exon 13 étendu en 5'et un exon 14 étendu en 3', et un variant (p (GenBank, AW082244) qui est le résultat de la transformation d'un intron dans la région non codante en 3'et qui utilise un signal de polyadénylation de 867 pb en aval de celle du variant ss (non montré). Ces variants sont exprimés dans divers tissus, y compris le cerveau, les glandes surrénales, le poumon et les testicules. Des amorces introniques ont été conçues pour amplifier et séquencer la séquence codante entière de l'ADN de six individus non apparentés atteints du syndrome d'Alstrôm Dans la grande famille consanguine acadienne (Marshall, J. D. et al. Am J Med Genet 73,150- 161 (1997) ) une insertion de 19 pb a été identifiée dans l'exon 9 (figure 3a) qui provoque un décalage du cadre de lecture qui entraîne une terminaison précoce au codon 1263. L'insertion était présente à l'état homozygote chez les cinq sujets atteints de la famille. La transmission de l'allèle d'insertion chez des porteurs non atteints était compatible avec les haplotypes rapportés antérieurement (Collin, G. B., Marshall, J. D., Cardon, L. R. & Nishina, P. M. Hum-Mol-Genet 6,213-219 (1997)). L'allèle d'insertion n'a pas été observé chez 100 individus non apparentés de la population générale. Cinq mutations supplémentaires ont été identifiées dans cinq familles non apparentées d'ethnicité diverse (figures 3be, tableau 3). Toutes les mutations ont ségrégé avec ALMS1. Dans une famille italienne consanguine (K57), une mutation homozygote a été identifiée, 1582C > T, créant un signal de terminaison TAA, alors que dans une famille française consanguine (K22), une mutation de décalage de cadre de lecture, 3808GA > T ; 3813G > A, donnant un signal de terminaison précoce au codon 1279, a été observé chez trois enfants atteints issus de la même famille. Dans une famille portugaise consanguine (K59), une mutation non sens TAA, 4 648C > T, a été identifiée chez deux cousins éloignés. Un cousin porte la mutation à l'état homozygote, alors que l'autre porte une copie unique de la mutation. Une seconde mutation, 1594insA, qui crée un signal d'arrêt deux acides aminés en aval du codon 535, a été identifiée chez ce dernier individu, donnant ainsi un composé à l'état hétérozygote. Une mutation 3974delC a été observée chez deux jeunes adultes non apparentés ; un mâle âgé de 19 ans d'origine britannique (K42, sujet A5) et un mâle âgé de 21 ans dont l'origine britannique remonte à deux siècles (K3, sujet A6). Tous les deux ont présenté une cardiomyopathie infantile dans les deux premiers mois de vie, et développé ensuite une petite taille, une scoliose, un diabète mellitus de type II, et une insuffisance rénale. Cependant, ces sujets diffèrent dans le cours de présentation de leur maladie. Le sujet K42 A5 a subi une récurrence subite de cardiomyopathie dilatée à 18 ans et ne présente pas de preuve de dysfonctionnement hépatique. Le sujet K3 A6, cependant, a présenté une insuffisance hépatique grave à 20 ans mais n'a pas présenté de récurrence de cardiomyopathie. Cette découverte d'une progression différente de la maladie chez les individus portant la même mutation suggère que la variabilité phénotypique observé chez de nombreux patients atteints par le syndrome d'Alstöm peut être le résultat de modificateurs génétiques ou environnementaux interagissant avec le locus ALMS1. L'analyse de l'expression a été effectuée sur de l'ARN murin et humain. Le sondage d'un transfert de tissus multiples humains (Ambion) avec des fragments d'ADNc de ALMS1 n'a pas réussi à détecter l'expression de ALMS1 après une exposition de 7 jours, suggérant une faible quantité du transcrit. Cependant, la RT-PCR du groupe I d'ADNc humain (CLONTECH) a montré que ALMS1 est exprimé de manière ubiquitaire (figure 4a). Les analyses Northern d'ARN polyA+ de souris (5 pg) ont confirmé l'expression ubiquitaire mais faible dans le poumon, le coeur, le rein, le gros intestin, la rate, l'oeil, et l'ovaire (figure 4b). En accord avec la quantité de ALMS1 dans les banques d'ADNc de testicules indiquée dans les bases de données publiques et d'Incyte Genomics, un niveau d'expression élevé a été observé dans les testicules de souris. Les tissus supplémentaires, non testés par RT-PCR ou analyse Northern, qui présentaient une expression dans les banques d'ADNc humaines de la base de données d'Incyte Genomics, comprenaient les glandes surrénales, thyroïdiennes, pituitaires, et mammaires, le thymus, l'utérus, le tractus urinaire, le colon et le tissu connectif. Alors qu'aucune homologie significative à d'autres gènes humains dans la base de données de NCBI n'a été identifiée, la séquence d'ADNc Almsl de souris (5,6 kb) peut être assemblée à partir des alignements de plusieurs séquences EST (GenBank & TIGR) ainsi qu'en alignant la séquence d'ADNc humain avec des données d'analyse génomique murine (GenBank) et des fragments génomiques de souris (Celera). La séquence de l'ADNc de souris a été confirmée en séquençant l'ADNc de Almsl murin amplifié par PCR dans des souris C57BL6/J (GenBank, AF425257). La séquence d'acides aminés déduite est identique à 67, 3% à la séquence protéique ALMS1 humaine. Dans une tentative pour déduire la fonction de ALMS1, des recherches de motif et d'homologie ont été effectuées en utilisant les bases de données Prosite et Pfam. Aucune séquence signal ou région transmembranaire n'a été détectée, qui, avec une nature hydrophile globale de la protéine, suggère une localisation intracellulaire. Un motif de fermeture-éclair à leucines (PS00029, aa 213-234) et une région riche en sérines (aa 1590-1606) ont été trouvées dans la protéine humaine prédite (SEQ ID NO : 2). De plus, des signaux de localisation nucléaire potentiels (PS50079, aa 1538-1563 et 1670-1687), ainsi qu'une région riche en histidines (aa 1219-1256) ont été identifiés dans la séquence de souris. Toutes ces caractéristiques sont conservées entre les ALMS1 humain et murin ; cependant, à cause de la fréquence élevée de ces motifs dans diverses protéines, la signification fonctionnelle de ces concordances doit être testée expérimentalement. En plus des domaines ci-dessus, une région de 120 acides aminés à l'extrémité C-terminale de ALMS1 a été identifiée, qui présentait une similarité de séquence avec des régions de deux protéines prédites du macaque (AB055273) et de la souris (AK016590). Du fait de la région d'homologie relativement courte, il n'est pas vraisemblable que ces séquences représentent des membres supplémentaires de la famille de gènes. Il est plus vraisemblable que ce motif ALMS bien conservé définit un domaine protéique qui peut avoir une signification structurale ou fonctionnelle (figure 5). L'obésité et le diabète de type II, des problèmes de santé publique croissants, sont associés à une augmentation du risque de mortalité et morbidité et affectent un pourcentage important de la population (Kopelman, P. G., Obesity as a medical problem, Nature, 404,635-643 (2000)). Les deux maladies sont influencées par les conditions environnementales mais aussi par un fort composant génétique (Froguel, P. & Velho, G. Genetic determinants of type 2 diabetes. Recent prog Horm Res 56, 91-105 (2001) ; Naggert, J., Harris, T. & North, M. The genetics of obesity Curr Opin Genet Dev 7,398-404 (1997) ). De manière intéressante, que la plupart des gènes identifiés à ce jour qui conduisent à l'obésité et au diabète de type 2 l'ont été dans le contexte des maladies à syndrome telles que le syndrome de BardetBiedl (Slavotinek, A. M. et al. Mutations in MKKS causes Bardet-Biedl syndrome, Nat Genet 26,15-16 (2000) ; Mykytyn, K. et al., Nat Genet 28,188-191 (2001) ; Nishimura, D. Y. et al. Hum Mol Genet 10,865-874 (2001) ). L'obésité infantile observée chez les patients atteints par le syndrome d'Alström est le plus vraisemblablement une conséquence primaire de l'altération du gène Alström, car elle constitue un phénotype plus précoce (aussi tôt quà l'âge de 6 mois) observé chez tous les enfants atteints. Les séquelles de la résistance à l'insuline et l'hyperglycémie chronique accompagnées par des complications secondaires telles que l'hyperlipidémie et l'athérosclérose, observées dans le syndrome d'Alström, sont des états observés dans des formes communes du diabète de type 2 déclenché chez l'adulte, la différence étant qu'elles se produisent à un rythme accéléré chez les patients présentant le syndrome d'Alström. Cela suggère que ALMS1 peut intervenir dans la même voie ou une voie parallèle au DMNID associé à l'obésité. La détermination de la fonction du gène ALMS. 1 fournira potentiellement des éclaircissements sur la manière dont le gène interagit avec d'autres gènes pour produire ses effets pathologiques. Bien qu'il ne soit pas vraisemblable que des mutations dans ALMS1 jouent un rôle majeur dans les maladies courantes dans la population générale, la valeur réelle de l'étude de ce gène repose dans l'accès qu'il peut fournir à de nouvelles voies métaboliques et régulatrices impliquées dans l'étiologie de l'obésité, du diabète de type 2, des maladies neurosensorielles et des troubles associés. De nombreux exemples de ce paradigme d'identification de mutations de gène unique qui ont permis l'identification de molécules en amont et en aval dans une voie biologique sont disponibles dans la littérature (c'est à dire, la voie de la leptine et de la kinase Jak/tat dans l'obésité (Inui, A. Feeding and body-weight regulation by hypothalamic neuropeptides--mediation of the actions of leptin. Trends Neurosci 22,62-67 (1999) ). Tableau 1 Exon Taille d'exon Donneur d'épissage 5' Accepteur d'épissage 3' Taille d'intron (pb) (kb) 1 742 ACGAGCACATGgtaagaaga.... agaggtcGGACCTTATA 1-M6 2 134 TTGTCCAAGgtataaaaga......atcttctagGGTTTACAGAG 34. 342 3 1865 TGCAGATCCgtgagtctcat.....ttggtcagATTACCAGAGA > 24.5 4 242 CACAGATGgtaagagaat........cctccttagGCCAGCCTTT > 21. 6 5 126 CCATTCAGgtattatg..............ttttctgtagGATCCAATGA 15.323 6 171 AAAATGCAGgtatggat..... gttattccagATGCCTCAGTrC 6. 786 7 135 ATACTGCAGgtagctaaact......cctttcgtagATTCCAGTGC 1.618 8 171 ATATTGAAGgtaatgggat............ctccttttcagAGTCCGAATGTC 13. 130 9 1163 ACACATCCAGgtacatggcta....tatttttctagGTAGCAAACCAT > 25.6 10 121 TACAAGCAGgtaattacttg.....ccttcccctcagGTAACTTGGAGAT 1.158 11 204 CCCATGAAGgtcagtttctcat.....tttcctgtagGAGTTTCCTGGT 0.315 12 242 ACCCTTCAGgtgcagtgacgt....ttttcttttagGAATCGCTTCAGT 0.750 13 184 CCAAGAGAGgtacgccctgccc....tcttgcctagTCTTCCTGGCTAT 0.874 14 64 GGTCCAAACGgtaagaccaaga....gagatctcatGACTCTGCACCC > 6.144 15 100 TATAAAAAGgtcagtgggtc......cttctacagAGAGTGACCAAT 0.998 16 45 CCCTGGGACTGA...3'UTR Jonctions d'épissage de ALMS1 Tableau 2 Paires d'amorces pour l'analyse mutationnelle de ALMS1 SEQ ID NO. Paire d'amorces Taille (pb) EXon 3 5'- TGCAGGTTTTAGAGATGTTGG-3' 929 1 4 5'- TGCTTGTATTTTTCATTGGCT-3' 1 5 5'- CATACTAAGCATTGCAGTGGG-3' 312 2 6 5'- GAATGGGTGATGGAATTAGGA-3' 2 7 5'- TGGTCTAATCTTAGCGTGGGT-3' 2081 3 8 5'- CCGTGTGATTTCTCTGAGTGG-3' 3 9 5'- TTGACATTGATGTGTCCACAAT-3' 533 4 10 5'- ATTTGCATAGCTGTCAACAGAA-3' 4 11 5'- GCCTGAAACATAGAAGGCATT-3' 301 5 12 5'- GGAGTGACAAAAGTCCAGTGC-3' 5 13 5'- CTCAATCTCATGTCGCTATTTG-3' 355 6 14 5'- TGCTCAATATAACAGCAAGGAG-3' 6 15 5'- GGGTTTTGTTTGTAATTGTGG-3' 343 7 16 5'- GAGAGCTGAAGACAGCAAGAAG-3' 7 17 5'- CGCTACCTCTTTTTCTGACTG-3' 457 8 18 5'- TGGAAACACTAACACTGACCCT-3' 8 19 5'- GAGGCTACTAAGCAACAAGGC-3' 1376 9 20 5'- GCAGTCACATTGCCAGATG -3' 9 21 5'- TGGCTTGCTTATCCTGTGG-3' 330 10 22 5'- TCTGACAAGATGAAAATTGGC-3' 10 23 5'- TCCCAGAGACACCTATGATCC-3' 101 11 24 5'- CTTGGAGTTGGGAAAGTTATC-3' 11 25 5'- GCCAAAAAACACACTCGAGATGTTG-3' 818 11 26 5'- CCAAGTCACAGAGCCAGCTT-3 11 27 5'- GCATATCCTGGATAAGAGCTG-3' 484 12 28 5'- GAGAAACCCAACCCTCGTG-3' 12 29 5'- TCAGACTTCCCCAAACCTCT-3'[ 1379 13,14 30 5'- TCAGTGCCATAAGTGAGAAATG-3' 13,14 31 5'- GACTCTGCACCCTGGTAACC-3' 205 15 32 5'- CGCCAATAAACCTGATCCAT-3' 15 33 5'- GCCTCTGATGGCAGTAATATCT-3' 435 16 34 5'- TCTCCAGATGGGAAAGAATTG-3' 16 Tableau 3 Résumé des mutations trouvées dans six familles présentant le syndrome d'Alström Parenté Mutations/Nombre de Sujets chromosomes atteints témoins 3737ins (n) 19 1 10/5 200 1582C > T 57 2/1 3808GA > Tdel ; 3813G > A 22 6/3 3974delC 42 2/1 3974delC 3 2/1 4648C > T 59 3/2 1594insA 59 1/2 Aucune mutation n'a été observée dans les échantillons provenant de la population générale témoin. Alors que cette invention a été présentée et décrite en particulier par référence à ses modes de réalisation préférés, il sera compris par les hommes du métier que divers changements dans la forme et les détails peuvent y être introduits sans s'écarter de l'esprit et de la portée de l'invention telle qu'elle est définie par les revendications jointes. REVENDICATIONS 1. Séquence d'ADN isolée comprenant ALMS1. 2. Séquence d'ADN isolée de ALMS1 comprenant la séquence nucléotidique de SEQ ID No : 1. 3. Séquence d'ADN isolée choisie dans le groupe constitué par : les séquences d'ADN hybridant avec ALMS1 ou avec la séqence complémentaire de ALMS1 dans des conditions d'hybridation stringentes et les séquences d'ADN codant la même séquence d'acides aminés que ALMS1. 4. Séquence d'ADN isolée comprenant une séquence nucléotidique codant un polypeptide ALMS1 de SEQ ID No : 2. 5. Séquence d'ADN isolée comprenant ALMS1 avec une mutation associée au syndrome d'Alstrôm. 6. Séquence d'ADN isolée selon les revendications 1 à 5, choisie dans le groupe constitué par : une séquence d'ADN comprenant ALMS1 avec 19 nucléotides insérés après le 3737ème nucléotide de ALMS1 ; une séquence d'ADN comprenant ALMS1, le 1582ème nucléotide de ALMS1 étant un T ; une séquence d'ADN comprenant ALMS1, le 3808ème nucléotide de ALMS1 étant un T, le 3809ème nucléotide de ALMS1 étant délété et le 3813ème nucléotide de ALMS1 étant un A ; une séquence d'ADN comprenant ALMS1, le 3974ème nucléotide de ALMS1 étant délété ; une séquence d'ADN comprenant ALMS1, le 4648ème nucléotide de ALMS1 étant un T ; et une séquence d'ADN comprenant ALMS1 avec un A inséré après le 1594ème nucléotide de ALMS1. 7. Construction d'acide nucléique comprenant un vecteur et une molécule d'acide nucléique comprenant une séquence d'ADN choisie dans le groupe constitué par les séquences d'ADN selon les revendications 1 à 6. 8. Cellule hôte recombinante comprenant le vecteur de la revendication 7. 9. Animal non humain transgénique comprenant une séquence d'ADN selon les revendications 1 à 6. 10. Animal non humain transgénique contenant une molécule d'acide nucléique ALMS1 ou une partie de celleci, dans lequel la transcription et/ou l'expression de la molécule d'acide nucléique ou d'une partie de celle-ci aboutit à la réduction de la synthèse d'un polypeptide ALMS1. 11. Cellule eucaryote transgénique contenant une molécule d'acide nucléique ALMS1 ou une partie de celleci, dans laquelle la transcription et/ou l'expression de la molécule d'acide nucléique ou d'une partie de celle-ci aboutit à la réduction de la synthèse d'un polypeptide ALMS1. 12. Procédé de production d'un polypeptide codé par une molécule d'acide nucléique, comprenant la culture de la cellule hôte recombinante selon la revendication 8 dans des conditions adaptées pour l'expression de ladite molécule d'acide nucléique. 13. Protéine choisie parmi les séquences d'acides aminés codées par les séquences d'ADN selon les revendications 1 à 6 et mALMS. 14. Polypeptide comprenant la séquence d'acides aminés de SEQ ID No : 2. 15. Variant du polypeptide ALMS1. 16. Anticorps ou fragment de celui-ci se liant à un antigène, qui se lie sélectivement à un polypeptide selon l'une quelconque des revendications 13 à 15. 17. Procédé de diagnostic du syndrome d'Alstrôm ou de criblage de porteurs du syndrome d'Alstrôm comprenant le test du matériel génétique d'un porteur putatif pour des mutations dans ALMS1, dans lequel la présence des mutations dans le gène est une indication du syndrome d'Alstrôm. 18. Procédé de diagnostic du syndrome d'Alstrôm, ledit procédé comprenant la détermination de la présence ou de l'absence de la protéine codée par ALMS1 dans un échantillon de tissu d'un patient. 19. Procédé selon la revendication 18, dans lequel l'étape de détermination de la présence ou de l'absence de la protéine codée par ALMS1 est effectuée en ajoutant un anticorps spécifique de la protéine codée par ALMS1 aux protéines de l'échantillon de tissu, et en déterminant la quantité d'anticorps qui se lie aux protéines de l'échantillon de tissu. 20. Réactif pour tester un échantillon pour la présence d'un acide nucléique de ALMS1, ledit réactif comprenant un acide nucléique contenant une séquence nucléotidique contiguë qui est au moins partiellement complémentaire d'une partie de la séquence nucléotidiquè dudit gène ALMS1. 21. Kit de réactifs pour tester un échantillon pour la présence d'une mutation de l'acide nucléique de ALMS1, comprenant, dans des conteneurs séparés, a) un ou plusieurs acides nucléiques marqués comprenant une séquence nucléotidique contiguë qui est au moins partiellement complémentaire à une partie de la séquence nucléotidique de ALMS1, et b) les réactifs pour la détection dudit marqueur. 22. Kit de réactifs selon la revendication 21, dans lequel la mutation de ALMS1 est choisie dans le groupe constitué par les mutations, délétions et insertions suivantes : 19 nucléotides insérés après le 3737ème nucléotide de ALMS1 ; le 1582ème nucléotide de ALMS1 étant un T ; le 3808ème nucléotide de ALMS1 étant un T, le 3809ème nucléotide de ALMS1 étant délété et le 3813ème nucléotide de ALMS1 étant un A ; le 3974ème nucléotide de ALMS1 étant délété ; le 4648ème nucléotide de ALMS1 étant un T ; et un A inséré après le 1594ème nucléotide de ALMS1. 23. Kit de réactifs pour tester un échantillon pour la présence d'une protéine ALMS1, comprenant un anticorps, ou un fragment de celui-ci se liant à un antigène, qui se lie sélectivement à la protéine ALMS1 ou à un variant de la protéine ALMS1, et les moyens pour détecter l'anticorps lié, ou un fragment de celui-ci se liant à un antigène.