FR 2829930 A1 20030328 FR 0112432 A 20010927 COMPOSITION COSMETIQUE TOPIQUE A BASE D'HUILES ESSENTIELLES RICHES EN CARVACROL, EUGENOL ET THYMOL L'invention concerne une nouvelle composition cosmétique topique. Plus précisément, l'invention a pour objet une composition qui se caractérise en ce qu'elle comprend un mélange d'huiles essentielles riches en carvacrol, eugénol et thymol. Le Demandeur a en effet constaté que l'association de ces trois molécules présentait des propriétés intéressantes, notamment anti-oxydantes, antiradicalaires, en faisant ainsi un produit apte à protéger la cellule cutanée et à réduire la cytotoxicité induite par les UV Grâce à son action protectrice vis-à-vis des effets délétères du stress oxydatif, une telle association trouve donc un certain nombre d'applications cosmétiques topiques, en particulier dans le domaine du soin de la peau (protection vis-à-vis du vieillissement exogène, vis-à-vis du stress environnemental, traitement anti-âge, traitement des peaux matures), de la protection solaire et de la protection capillaire. Selon une première caractéristique de l'invention, la composition contient : - entre 9 et 15 %, avantageusement entre 10 et 12 % en poids de carvacrol, - entre 3 et 10 %, avantageusement entre 5 et 9 % en poids de thymol, - entre 10 et 18 %, avantageusement entre 12 et 15 % en poids d'eugénol. Le carvacrol, l'eugénol et le thymol sont des molécules bien connues faisant partie de la famille des phénols, extraites en général à partir de plantes aromatiques concernées. Elles peuvent dans certains cas être obtenues par synthèse mais les contretypages de molécules synthétiques, même réputées "identique nature", ne présentent pas les mêmes propriétés. Parmi les huiles essentielles contenant du carvacrol, de l'eugénol et du thymol, le Demandeur a sélectionné respectivement l'huile essentielle d'origan, en particulier l'origan vert (Origanum heracleoticum (L) carvacroliferum, done vert Drome), l'huile essentielle de clou de girofle, en particulier Eugenia caryophyllus (spreng) et l'huile essentielle de thym, en particulier Thymus vulgaris (L) thymoliferum. Chacune de ces huiles essentielles est obtenue par des procédés classiques connus de l'homme du métier. Ainsi, l'huile essentielle d'origan vert est obtenue par distillation des fleurs et feuilles ; l'huile essentielle de clou de girofle est obtenue par distillation des boutons floraux et l'huile de thym est obtenue par distillation des sommités fleuries. En pratique, la composition de l'invention contient entre 10 et 30 %, avantageusement 20 % en poids respectivement d'huile essentielle d'origan vert et de clou de girofle, et entre 5 et 25 %, avantageusement 15 % en poids d'huile essentielle de thym. Pour renforcer l'activité anti-radicalaire mais également pour améliorer la micro-circulation du sang, l'oxygénation du tissu cutané et sa détoxification, la régénération de l'épidenne et apporter un effet décongestionnant, la composition de l'invention contient en outre un extrait de romarin camphré, notamment Rosmarinus officinalis (L) camphoriferum. En pratique, cet extrait de romarin se présente sous forme d'une huile essentielle obtenue par la distillation des sommités fleuries à la vapeur d'eau. Les molécules monoterpénones, particulièrement de camphre, mais aussi de verbénone et carvone présentent une activité et un pouvoir régénérant et cicatrisant du tissu cutané et muqueux. Dans un mode de réalisation avantageux, la composition contient entre 15 et 35 % en poids d'une huile essentielle de romarin camphré, en pratique entre 26 et 30%. Pour améliorer davantage encore les propriétés protectrices et détoxifiantes, la composition contient en outre un extrait de marjolaine à coquille (Origanum majorant), sous forme d'une huile essentielle entrant dans la composition, à raison de 10 à 20 % en poids, avantageusement 15% en poids. L'huile essentielle est obtenue par distillation de la plante fleurie à la vapeur d'eau. La richesse de cette huile essentielle en molécules monoterpéniques (myrcènes, a et y terpinène) et monoterpénols (terpinène-1-ol-4, trans-thujanol-4) est remarquable. Ces dernières viennent conjuguer leurs activités lymphotonique et décongestionnante. Dans un mode de réalisation avantageux, la composition contient en outre un extrait de zédoaire (Curcuma zedoaria, Roscoe) sous forme d'une huile essentielle obtenue par distillation des rhizomes. En pratique, l'extrait de zédoaire entre dans la composition à raison de 0,5 à 3 % en poids, de l'ordre de 2 % en poids de la composition. La composition de l'invention peut être incorporée à tout type de véhicule cosmétiquement acceptable : crème, lait, gel, sérum, microémulsion... à raison de 0,2 à 0,5 % en poids. Comme déjà dit, la composition telle que décrite précédemment présente un certain nombre de propriétés. Dans un mode de réalisation particulier, de par son effet antioxydant, antiradicalaire, anti-inflammatoire, stimulant de la micro-circulation cutanée, la composition va permettre à la peau de se protéger vis-à-vis de tout stress environnemental induisant la génération de radicaux libres, en particulier le rayonnement UV et l'action de nombreux polluants chimiques environnementaux. Par son action scavenger, la composition protège la peau des effets délétères engendrés par le stress oxydatif (libération d'espèces oxygénées réactives, de médiateurs de l'inflammation et de médiateurs de l'apoptose, altération des molécules biologiques, ADN, protéines, lipides, modification de l'expression génique engendrant un vieillissement accéléré, voir des phénomènes de carcino génèse). L'invention et les avantages qui en découlent ressortiront mieux des exemples de réalisation suivants. EXEMPLE 1 Fabrication de la composition de l'invention Huile Essentielle % en poids Origan vert 20 Girofle clou 20 Romarin camphré 29 Thym thymol 15 Marjolaine à coquille 15 Zédoaire 1 Mode opératoire : - Mélange pondéral, filtration et introduction de chaque ingrédient dans l'ordre de la formulation. - Agitation. - Homogénéisation. - Filtration. EXEMPLE 2 Evaluation in vitro du potentiel anti-oxydant de la composition de l'exemple 1 par le test DPPH a) Principe Le radical DPPH' (1, 1-Diphényl-2-Picryl Hydrazyl) est un radical libre stable, qui absorbe fortement à 517 nm. Peu spécifique, il permet d'évaluer, in vitro, le potentiel anti-oxydant de structures chimiques variées. Le potentiel anti-oxydant de la composition de l'invention a été apprécié par la mesure du taux de réduction du radical DPPH'en présence et en absence de ladite composition. Le taux de réduction du radical DPPH est évalué par le changement d'absorbance d'une solution de DPPH'à 517 nm après 3 heures d'incubation. L'a-tocophérol (vitamine E) est choisi comme agent anti-oxydant de référence. b) Matériel Les densités optiques sont mesurées sur un appareil du type spectrophotomètre Shimadzu (UV-2401-PC). c) Résultats Chaque essai est réalisé en triplicate. Les résultats des moyennes de ces essais figurent dans le tableau ci-après. Pouvoir DO à 517 nm Anti-oxydant (%) Témoin 1. 24 0 a-tocophérol 50 j. LM (21. 5 g/ml) 0.16 87 &alpha;-tocophérol 10 M (4.3 g/ml) 0.92 26 Exemple 1 à 10 mg/ml 0. 04 97 Exemple 1 à 5 mg/ml 0.06 96 Exemple 1 à 1 mg/ml 0. 08 93 Exemple 1 à 500 0. 10 92 Exemple 1 à 100 g/ml 0.21 83 Exemple 1 à 50 p. g/ml) 0.35 72 Exemple 1 à 25 0. 60 51 Exemple 1 à 10 jg/ml09424 Exemple 1 à 5 g/ml 1.06 13 Exemple 1 à 1 g/ml 1. 19 3 Aux concentrations testées, la composition de l'invention présente un pouvoir réducteur dose-dépendant vis-à-vis du radical DPPH". Plus précisément, plus la concentration en composition de l'invention augmente et plus le pouvoir anti-oxydant est important. Comme le montre ce tableau, pour une concentration de 100 g/ml de composition, le pouvoir scavenger, anti-oxydant est similaire à celui de la vitamine E testée à 50 M (83% contre 87 %). EXEMPLE 3 1-Mise en évidence de l'effet protecteur de la composition de l'invention vis-à-vis des effets délétères des radiations UV, L'objet de cette étude est d'évaluer l'activité protectrice de la composition de l'invention vis-à-vis des effets délétères induits par les radiations WB. Aussi, afin d'évaluer l'effet protecteur de cet actif, une approche expérimentale basée sur la mesure de la cytotoxicité et de la péroxydation lipidique induites par les UV B sur des kératinocytes humains cultivés en absence et en présence de l'extrait est réalisée. 2 - Cellules utilisées Des kératinocytes humains normaux isolés à partir de peau de prépuces obtenus lors d'interventions chirurgicales chez de jeunes enfants sont cultivés en milieu KGM sérum free à 37 C en atmosphère humide air-C02 (95%-5 %). 3-Evaluation de l'activité de la composition sur la toxicité induite par les UVB 3.1. Principe Les kératinocytes sont ensemencés, à raison de 20* 103 cellules/puits, dans des microplaques 96 puits. A 80-90 % de confluence des monocouches cellulaires, le milieu de culture est éliminé et remplacé par du milieu neuf contenant le produit à l'étude (traitement Préventif ). Les cellules sont replacées à l'étuve à 37 C et incubées pendant 48 heures, en atmosphère air-C02 (95%-5 %). Après 48 heures de traitement, les plaques sont vidées et les cellules sont exposées aux UV B (50 et 150 mJ/cm) à travers une solution de PBS (200 11) en absence du produit à l'étude. Les UVB sont générés par des tubes Philips TL 20 W/12. Les intensités lumineuses (en mW/cm) sont mesurées et contrôlées à l'aide d'un radiomètre UVX (UVX Digital Radiometer, ULTRA-VIOLET PRODUCTS, INC). Après irradiation des cellules, la solution de PBS est éliminée et remplacée par du milieu de culture neuf ne contenant pas le produit à l'étude. Les cellules sont replacées à l'étuve à 37 C et incubées pendant 24 heures, en atmosphère airCO (95%-5 %). La viabilité cellulaire est évaluée en fin d'essai par un test au Rouge Neutre. Le pourcentage de cytotoxicité des UV B est calculé, au niveau des cultures témoins et des cultures traitées, selon les formules : A = [ (D. O -D. O n. uv)/ (D. O ,)] X 100 B = [ (D. O -D. O. . uv)/D. O )] x 100 Le pourcentage d'activité protectrice (A. P.) est calculé selon la formule : A. P [ (A-B)/A] xlOO 3. 2. Résultats La composition de l'invention a été testée à trois concentrations retenues après une étude préalable de cytotoxicité : CI = 5 ug/ml C2 = 10 g/ml C3= 25 ug/ml La vitamine E (dl-a-tocopherol) a été testée en parallèle comme antiradicalaire de référence. Le pourcentage de cytotoxicité induit par les UV B a été calculé dans chaque lot. 50 mJ/cm2 UVB 150 mJ/cm2 UV-B Composition de l'invention Vit. E Composition de l'invention Vit. E Conc. 0 5 10 25 215 0 5 10 25 215 ( g/ml) Cytotoxicité 20.9% 8.9% 4.0% 0.7% 0.0% 25.0% 22.8% 13.8% 0. 0% 8.6% Activité - +57% +81% +97% + 1 00% - +9% +45% + 100% +66% Protectrice L'exposition des cellules aux UV B induit un effet cytotoxique : la viabilité cellulaire est réduite respectivement de 21 % et de 25 % lorsque les cellules sont exposées à 50 et 150 mJ/cm2. Quelle que soit la dose appliquée, on observe une très nette diminution de la cytotoxicité induite par les UV B au niveau des cultures traitées avec la composition de l'invention. Il convient de noter que l'effet protecteur est dosedépendant et que cet actif est capable, dans les conditions expérimentales retenues, d'apporter une protection complète des cellules. Dans les mêmes conditions expérimentales, la vitamine E (215 p. g/ml) est capable de s'opposer complètement ou partiellement (66 %) aux dommages cellulaires induits par les UV B, lorsque les cellules sont exposées à 50 et 150mJ/cm2. 4 - Evaluation de'l'activité de la composition sur la péroxydation lipidique induite par les UVB 4.1. Principe Les kératinocytes humains sont ensemencés, à raison de 500*103 cellules/puits dans des plaques 6 puits. A 80-90 % de confluence des monocouches cellulaires, le milieu de culture est éliminé et remplacé par du milieu neuf contenant le produit à l'étude (traitement Préventif ). Les cellules sont replacées à l'étuve à 37 C et incubées pendant 48 heures, en atmosphère airCO, (95%-5 %). Après 48 heures de traitement, les plaques sont vidées et les cellules sont exposées aux WB (50 mJ/cnr) à travers une solution de PBS (2 ml) en absence du produit à l'étude. Les W B sont générés par des tubes Philips TL 20 W/12. Les intensités lumineuses (en mW/cm) sont mesurées et contrôlées à l'aide d'un radiomètre UVX (UVX Digital Radiometer, ULTRA-VIOLET PRODUCTS, INC). Après irradiation des cellules, la solution de PBS est éliminée et remplacée par du milieu de culture neuf ne contenant pas le produit à l'étude. Les cellules sont replacées à l'étuve à 37 C et incubées pendant 24 heures, en atmosphère air- CO (95%-5 %). En fin d'essai, les cellules sont détachées de leur support. Après centrifugation, les culots cellulaires sont repris dans de l'eau distillée et sont lysés par sonication. Les différents extraits cellulaires sont prélevés et traités pour le dosage du MDA selon les instructions fournies par les laboratoires Calbiochem (Lipid peroxidation assay kit, LPO test). Un aliquot de chaque extrait est prélevé et traité pour le dosage des protéines cellulaires (BioRad Protein assay). L'activité protectrice (A. P) est calculée selon la formule : A. P = [ (MDA c A. P = [ (MDA,,rol + uv-MDA t,,, uv)/MDA, ,, uv] x 100 4. 2. Résultats La composition de l'invention a été testée à trois concentrations : C,-5 g/ml ClOug/ml C, = 25 ug/ml La vitamine E a été testée en parallèle. Le tableau suivant regroupe l'ensemble des résultats : taux de MDA (nmol/mg prot. ) et activité protectrice (A. P). Témoin Invention Vit. E sans +UV 5 g/ml 10 g/ml+ 25 g/ml+ 430 g/ml UV +UV UV UV +UV MDA 0.382 1.070 1.098 0.856 0. 521 0.752 (nmol/mg prot. ) Activité 0 % 20% 51 % 30% Protectrice L'exposition des kératinocytes aux W B se traduit par une très nette augmentation du taux de MDA cellulaire. En effet, le taux basal est multiplié approximativement par 3 après irradiation des cellules à la dose de 50 mJ/cm2. Les taux de MDA mesurés au niveau des cultures traitées avec la composition de l'invention à 10 et 25 ug/ml sont inférieurs à celui enregistré au niveau des cultures témoins irradiés. Il convient de noter que cet effet protecteur vis-à-vis de la péroxydation lipidique est dose-dépendant. A la dose de 25 p. g/ml, la composition de l'invention est capable de réduire de plus de 50 % le degré de péroxydation induit par les UVB. Dans les mêmes conditions expérimentales, la vitamine E à concentration beaucoup plus élevée (430 p.lg/ml) réduit seulement de 30 % le taux de MDA induit par les UVX- 5-Conclusion Le potentiel anti-oxydant de la composition de l'invention a été apprécié sur des kératinocytes humains en culture par l'évaluation de son effet protecteur vis-à-vis des effets délétères induits par les W B. La viabilité cellulaire (test au Rouge Neutre) a été mesurée après exposition des cellules à deux doses d'UVB (50 mJ/cm2 et 150 mJ/cn2). Le degré de péroxydation lipidique induite par les UV B a été apprécié par la mesure du taux de MDA cellulaire après irradiation UVX (50 mI/cm2) des cellules. Dans les conditions expérimentales retenues, cette étude a montré que le traitement des cellules par la composition de l'invention permet de réduire nettement la cytotoxicité induite par les W B. Cet effet protecteur pourrait s'expliquer, en partie, par une activité anti-oxydante au niveau des membranes cellulaires. En effet, le taux de MDA mesuré après irradiation au niveau des cultures traitées avec la composition de l'invention sont nettement inférieurs à celui enregistré au niveau des cultures témoins irradiées. REVENDICATIONS 1/Composition cosmétique topique caractérisée en ce qu'elle comprend un mélange d'huiles essentielles riches en carvacrol, eugénol et thymol. 2/Composition selon la revendication 1, caractérisée en ce qu'elle contient : entre 9 et 15 %, avantageusement entre 10 et 12 % en poids de carvacrol, - entre 3 et 10 %, avantageusement entre 5 et 9 % en poids de thymol, - entre 10 et 18 %, avantageusement entre 12 et 15 % en poids d'eugénol. 3/Composition selon l'une des revendications 1 à 2, caractérisée en ce qu'elle contient un mélange d'huiles essentielles d'origan vert (Origanum heracleoticum (L) carvacroliferum, done vert Drome), de clou de girofle (Eugenia caryophyllus (spreng)) et de thym (Thymus vulgaris (L) thymoloferum). 4/Composition selon la revendication 3, caractérisée en ce qu'elle contient entre 10 et 30 %, avantageusement 20 % en poids respectivement d'huile essentielle d'origan vert et de clou de girofle et entre 5 et 25 %, avantageusement 15 % en poids d'huile essentielle de thym. 5/Composition selon l'une des revendications 1 à 4, caractérisée en ce qu'elle contient en outre une huile essentielle de romarin camphré (Romarinus officinalis (L) camphoriferum), utilisée à raison de 15 à 35 % en poids. 6/Composition selon l'une des revendications 1 à 5, caractérisée en ce qu'elle contient en outre une huile essentielle de marjolaine à coquille (Origanum majorana), utilisée à raison de 10 à 20 % en poids. 7/Composition selon l'une des revendications 1 à 6, caractérisée en ce qu'elle contient en outre une huile essentielle de zédoaire (Curcuma zedoaria (Roscoe)), utilisée à raison de 0,5 à 3 % en poids. 8/Véhicule cosmétique caractérisé en ce qu'il contient de 0,2 à 0,5 % en poids de la composition objet de l'une des revendications 1 à 7. 9/Utilisation de la composition objet des revendications 1 à 7 en tant qu'agent anti-oxydant, anti-radicalaire, comme protecteur vis-à-vis des stress oxydatifs. DEPOSANTS : GA TTEFOSSE HOLDING LABORATOIRESANOFLORESA MANDATAIRE : Cabinet LAURENT et CHARRAS