FR 2827763 A1 20030131 FR 0109859 A 20010724 Substance alkyloside inhibant lafixation de microorganismes, utilisation topique et composition contenant au moins une telle substance Domaine de l'invention La présente invention a trait à une substance alkyloside inhibant substantiellement la fixation de microorganismes sur les cornéocytes. Elle concerne plus précisément l'utilisation topique de cette substance ainsi qu'une composition dermatologique utile en cosmétique et/ou thérapeutique contenant au moins une telle substance. Art antérieur Par substance inhibant la fixation d'un microorganisme sur une cellule humaine, animale ou végétale, on entend une substance qui (a) dénature ou inactive la protéine d'adhésion (également appelée"molécule d'adhésion") ou (b) se fixe sur le ou les récepteurs de ladite protéine d'adhésion présents sur la paroi de ladite cellule en empêchant, selon un mécanisme dit de compétition, la fixation de ladite protéine d'adhésion. Le processus microbiologique n'est pas encore clairement élucidé. On présumait autrefois, mais il s'agit là d'une théorie qui ne lie pas la Demanderesse, que le mécanisme pouvait comprendre : (A) l'inactivation de la protéine d'adhésion, qui est en général un produit protéinique, ou la dénaturation de ladite protéine d'adhésion, ce qui conduit à l'absence ou à la limitation substantielle de la fixation de ladite protéine d'adhésion sur son ou ses récepteurs spécifiques ; (B) la fixation de la substance inhibitrice sur le ou les récepteurs de la protéine d'adhésion ce qui empêche ou limite substantiellement, par compétition, la fixation de ladite protéine d'adhésion sur son ou ses récepteurs cellulaires ; ou, (C) le cas échéant, une contribution de (A) plus (B). On sait que les mono-et polyaldéhydes ont des propriétés antibactériennes et que, aux doses antibactériennes, ces produits ne sont pas tolérés par l'organisme : par application topique ils provoquent des irritations. Ceci explique pourquoi les mono-et polyaldéhydes sont utilisés à des doses plus faibles en tant que conservateurs dans les préparations cosmétiques et pharmaceutiques, voir à ce sujet WO-A-94/04167 et l'article de N. MELTZER et al., Cosmetics and Toiletries. 1977 : 124, 95-98. Le brevet français délivré FR-B-2740039 préconise une solution technique très efficace pour inhiber la fixation des staphylocoques, en particulier les souches de Staphylococcus aureus, sur les cornéocytes. Cette solution met de préférence en oeuvre un dialdéhyde particulier, à savoir le glutaraldéhyde (ou 1, 5-pentanedial) et convient vis-à-vis de la dermite atopique et des complications de cette maladie. Dans l'article de S. J. MILLER et al., Arch. Dermatol., 1988 : 124, 209-215, il est recommandé de faire appel à un acide gras libre, de préférence extrait ou isolé du stratum comeum [où ledit acide est sous forme liée (en particulier sous une forme ester du type triglycéride)] pour protéger les cornéocytes de l'action des souches de Staphylococcus aureus. Il se trouve que l'utilisation d'un acide gras est nettement insuffisante pour inhiber substantiellement in vivo la fixation desdites souches de Staphylococcus aureus. Il existe cependant un problème qui vient de se manifester en liaison avec le point (C) ci-dessus. Les phénomènes d'adhésion et d'inhibition sont, sur le plan pharmacologique, particulièrement complexes. Pour inhiber la fixation des microorganismes, la substance inhibitrice doit se lier soit aux sites d'adhésion des cornéocytes, soit à ceux desdits microorganismes. Si cette substance se lie à la fois sur les deux types de sites, elle va pouvoir se comporter comme une"colle"et augmenter l'adhésion des microorganismes aux cornéocytes. Ainsi selon les conditions expérimentales mises en oeuvre (notamment : durée d'incubation, concentration de la substance inhibitrice), l'effet inhibiteur d'une substance sur l'adhésion d'un microorganisme aux cornéocytes est donc susceptible de se transformer en un effet potentialisant ladite adhésion But de l'invention Il existe un besoin à satisfaire en ce qui concerne la protection des cornéocytes vis-à-vis de plusieurs souches (i) bactériennes, telles que les souches de Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus aureus et Propionibacterium acnes, et (ii) fongiques, telles que les souche de Pityrosporum ovale, d'une part, et une solution technique pour pallier au problème susvisé de la potentialisation de l'adhésion, d'autre part. On se propose de fournir une nouvelle solution faisant appel à une substance inhibant la fixation de microorganismes sur les coméocytes et qui conserve ses propriétés inhibitrices lorsque les conditions expérimentales varient. Objet de l'invention Le but précité a été atteint grâce à une nouvelle solution technique mettant en oeuvre une substance alkyloside de formule 1 ci-après. Selon un premier aspect de l'invention, on préconise une composition topique pour usage cosmétique ou thérapeutique comprenant une substance inhibant la fixation de microorganismes sur les cornéocytes en association avec un excipient dermatologiquement acceptable, ladite composition étant caractérisée par le fait que ladite substance inhibant la fixation de microorganismes sur les cornéocytes est choisie parmi l'ensemble constitué par : (i) les alkylosides de formule 1 : dans laquelle, n est un nombre ayant pour valeur 0 à 4, et R est (CH2) I2 ou (CH2) 14 ; et, (ii) leurs mélanges. Selon un second aspect de l'invention, on préconise une nouvelle utilisation d'une substance inhibant la fixation de microorganismes sur les cornéocytes pour la préparation d'une composition topique, ladite utilisation étant caractérisée en ce que l'on fait appel à une substance inhibant la fixation de microorganismes sur les cornéocytes, qui est choisie parmi l'ensemble constitué par : (i) les alkylosides de formule 1 : dans laquelle, n est un nombre ayant pour valeur 0 à 4, et R est (CH2) 12 ou (CH2) 14, et (ii) leurs mélanges, pour la préparation d'une composition destinée à un usage local en cosmétique ou en thérapeutique vis-à-vis des désordres cutanés induits par lesdits microorganismes. Selon un autre aspect de l'invention, on préconise une composition topique pour usage cosmétique ou thérapeutique comprenant (1 ) au moins une substance de formule 1 ci-dessus et (2 ) au moins une substance appartenant à l'ensemble des pyridinecarboxamides de formule II : notamment pour inhiber la fixation de microorganismes sur les cornéocytes, en association avec un excipient dermatologiquement acceptable, d'une part, et l'utilisation de ladite association pour la préparation d'une composition topique destinée à un usage local en cosmétique ou en thérapeutique vis-à-vis des désordres cutanés induits par lesdits microorganismes, d'autre part. Description détaillée de l'invention Les mélanges d'alkylosides de formule I sont déjà commercialisés (R) notamment sous le nom de marque de PLANTACARE et chaque alkyloside de ces mélanges peut être synthétisé selon une méthode opératoire connue en soi par application de mécanismes réactionnels classiques. Selon l'invention, il est important que R soit une chaîne hydrocarbonée linéaire en C12 ou C14 ou que, dans le cadre d'un mélange d'alkylosides, la teneur en composés C12-C14 soit supérieure ou égale à 75 % en poids (de préférence supérieure ou égale à 80 % en poids) par rapport au poids dudit mélange. Si R représente (CH2) 8 ou (CH2) 10, chaque composé alkyloside résultant est inactif ou insuffisamment actif pour inhiber l'adhésion des microorganismes sur les sites d'adhésion des coméocytes. Il en est de même quand R est une chaîne hydrocarbonée linéaire en C16 [i. e. (CH2) 16] ou supérieure à Ci6. Le"PLANTACARE 1200", qui est un mélange comprenant : produits à chaîne linéaire Co 0 à 2% en poids, produits à chaîne linéaire # C16 0 à 6% en poids et produit à chaîne linéaire en C12-C14 100 à 92 % en poids, convient en tant que substance inhibant la fixation de microorganismes sur les coméocytes humains. En revanche, les mélanges commercialisés sous les nomenclatures de "PLANTACARE 2000" et "PLANTACARE 818" ne conviennent pas selon l'invention (aux même doses que le PLANTACARE 1200) eu égard à leurs compositions : Produits à chaîne linéaire "PLANTACARE# 2000" "PLANTACARE# 818" #C10 60 à 75 % en poids 39 à 53 % en poids > Ci6 0 à 1 % en poids 0 à 4 % en poids C1rC14 40 à 24 % en poids 61 à 43 % en poids De façon avantageuse, R-H sera un groupe lauryle [ (CH2) 12H] plutôt qu'un groupe myristyle [ (CH2) 14H]. De façon également avantageuse, n aura pour valeur 0,1 ou 2. Il convient toutefois de remarquer, que lorsque l'on utilise un mélange (tel que le PLANTACARE précité), on est en présence d'une association de plusieurs molécules de formule 1 et n devient globalement un nombre fractionnaire avantageusement compris entre 0,2 et 1,6. Les pyridinecarboxamides de formule II ci-dessus comprennent les 2-pyridinecarboxamide (picolinamide), 3-pyridinecarboxamide (nicotina- mide) et 4-pyridinecarboxamide (isonicotinamide) de formules respectives lIa, lIb et Ilc : Le pyridinecarboxamide préféré selon l'invention est le 3-pyridine- carboxamide. La composition selon l'invention comprendra avantageusement (1 ) 1 à 2 parties en poids d'une substance choisie parmi les alkylosides de formule 1 et leurs mélanges, pour (2 ) 1 à 4 parties en poids d'une substance choisie parmi les pyridinecarboxamides de formule II et leurs mélanges. Les substances de formule 1 et leurs associations avec les pyridinecarboxamides de formule II sont efficaces pour inhiber la fixation des souches de Staphylococcus epidermidis, Stapliylococcus aureus et Pityrosporum ovale, d'une part, et surtout des souches de Propionibacterium acnes, d'autre part. En particulier on a constaté que (i) les alkylosides de formule 1 et (ii) les compositions les renfermant en association avec les pyridinecarboxamides de formule II, bloquent les sites récepteurs des Propionibacterium acnes. Après administration de ces produits par voie topique (notamment sous forme de gel), la quantité des souches précitées qui va se fixer est nettement moindre, en particulier en cas d'acné dû aux souches de Propionibacterium acnes. De façon pratique le rapport pondéral particulièrement préféré (1 )/ (2 ) sera compris entre 2/3 et 3/4, la composition correspondante de l'invention pouvant alors contenir notamment 4 % en poids de (1 ) et 6 % en poids de (2 ), ou 3 % en poids de (1 ) et 4 % en poids de (2 ). D'autres avantages et caractéristiques de l'invention seront mieux compris à la lecture qui va suivre d'exemples de réalisation et de résultats d'essais. Bien entendu l'ensemble de ces éléments n'est pas limitatif mais est donné à titre d'illustration. Exemple 1 On prépare une composition sous forme de gel ayant la formulation (en % en poids) suivante : laurylglucoside (PLANTACARE 1200) 3, 00 % nicotinamide 4, 00 % éthanol 22, 75 % polyoxyéthylène alcool (laureth-12) 6, 00% aluminosilicate de magnésium (VEEGUMK) 2, 00% hydroxypropyl-méthylcellulose 1, 70 % acide citrique 0, 15 % eau qsp 100,00 % Exemple 2 Avec les excipients de l'exemple 1, on prépare une composition sous forme de gel contenant : laurylglucoside (formule I, n = 0,6) 4, 00 % nicotinamide 6, 00 % Remarque : ici le laurylglucoside de formule 1 où n est 0,6 est obtenu par mélange de 1,3 moles de laurylglucoside de formule 1 où n est 0 avec 2 moles de laurylglucoside de formule 1 où n est 1. Exemple 3 Avec les excipients de l'exemple 1, on prépare une composition sous forme de gel contenant : laurylglucoside (formule I, n = 1,6) 3,5% nicotinamide 5, 0 % Remarque : ici le laurylglucoside de formule 1 où n est 1,6 est obtenu par mélange de 1,3 moles de laurylglucoside de formule 1 où n est 1 avec 2 moles de laurylglucoside de formule 1 où n est 2. Exemple 4 Avec les excipients de l'exemple 1, on prépare une composition sous forme de gel contenant un seul ingrédient inhibiteur de la fixation sur les coméocytes : laurylglucoside (PLANTACARE" 1200) 4, 0 % On a résumé ci-après une partie des essais qui ont été entrepris. Essais in vivo Les produits suivants ont été utilisés : Produit à tester : composition de l'exemple 1, tampon : PBS [produit contenant NaCl (8 g/l), Na2HP04 (1, 15 g/l), KH2P04 (0, 2 g/l), KC1 (0, 2 g/l), CaCl (0,1 g/l) et MgCl2 (0,1 g/l) ; pH 7, 4], dispersant : Tween 80 (fabriqué par la société SIGMA), eau : eau ultrapure (selon système de filtration MILLIQ de la société MILLIPORE), souche bactérienne : i. e. Propionibacterium acnes colorée à l'acrydine orange. Traitement Les sujets acnéiques et non acnéiques ont été traités pendant 3 jours (application 1 fois par jour de l'exemple 1 à tester) sur un avant-bras, l'autre avant-bras servant de contrôle. L'usage d'un manchon plastifié est intervenu pour protéger chaque avant-bras pendant la toilette. t : Application du produit à l'essai = : recueil des coméocytes Pour la préparation des coméocytes, on a d'abord procédé au prélèvement par lavage des avant-bras par une solution de Tween 1 % dans du PBS puis au recueil des eaux de lavage. Ensuite, les cellules (i. e. coméocytes) contenues dans les eaux de lavage ont été recueillies après filtration sur toile nylon (maille 60 u. m). Enfin elles ont été lavées par centrifugation (10 min à 1000 tours/min ; 3 lavages successifs) dans du PBS. Une nouvelle filtration est intervenue avant comptage des amas de coméocytes dans une cellule de Nageotte. Incubation Les suspensions de coméocytes ont été incubées en présence de Propionibacterium acnes pendant 1 h sous agitation rotative douce, à l'abri de la lumière, et à température ambiante (RT = 15-25 C). Mesure On a déterminé par cytométrie en flux la variation d'intensité moyenne de fluorescence présente à la surface des cellules ayant fixé les bactéries (FACScalibur ; Sté Becton Dickinson), avec excitation à 500 nm et émission à 530 nm, et analyse des données au moyen du logiciel CellQuest. La fluorescence des coméocytes seuls ("blanc") a été mesurée et soustraite des valeurs de fluorescence des échantillons mesurés. Pour l'expression des résultats, on a retenu les unités de fluorescence par échantillon et le pourcentage de variation par rapport au groupe dit à "zone non traitée", eu égard à celle du groupe dit à"zone traitée" correspondant. Résultats Les résultats obtenus sont consignés ci-après dans les tableaux 1 [sujets acnéiques (hommes) C et D], II [sujets acnéiques 6-8 (femmes) et 9- 10 (hommes et III tableau récapitulatif pour lesdits sujets acnéiques 6- 10], la notation de la signification statistique étant fondée sur le"barème" * = moyenne significativement différente de celle du groupe témoin correspondant, p Effet ex vivo de l'Exemple 1 sur l'adhésion de Propionibacterium acnes Il aux cornéocytes humains (sujets acnéiques)-ler lot- TABLEAU 1 Sujet C acnéique (homme) Sujet D acnéique (homme) Coméocytes Coméocytes Coméocytes Cornéocytes non traités traités non traités traités blanc 18,1 9, 1 4,2 7,1 3243,3 603,6 1528,2 61,9 fluorescence 3329,1 590,0 1500,9 59,3 - blanc 3164, 4 571, 7 1453, 1 59, 1 moyenne 3245, 6 588,4*** 1494,1 60, 1*** écart type 82,3 16,0 38,0 1,5 % témoin 100 18 100 4 TABLEAU II Effet ex vivo de l'Exemple 1 sur l'adhésion de Propionibacterium acnes aux cornéocytes humains (sujets acnéiques) - 2è lot - Sujet 6 Sujet 7 Sujet 8 Coméocytes Coméocytes Coméocytes Coméocytes Coméocytes Coméocytes non traités traités non traités traités non traités traités blanc 24,61 12,72 13,34 16,97 28,8 15,6 1356, 45 615,57 3360,91 1662,87 3352,41 237,17 fluorescen ce 1397,57 648,34 3414,91 1834,48 3275,55 241,44 - blanc 1481,81 830,56 3247,82 1676,14 3253,54 240,43 moyenne 1411,94 698,16*** 3341,21 1724,50*** 3293,83 239, 68*** écart type 63,90 115,83 85,27 95, 48 51, 91 2, 23 % témoin 100 49 100 52 100 7 TABLEAU 2 (fin) Sujet 9 Sujet 10 Cornéocytes Cornéocytes Cornéocytes Cornéocytes non traités traités non traités traités blanc 20,2 10,13 18,84 24,3 1924,04 56,57 3327, 4 1622,25 fluorescence 1969, 16 52,56 3329,78 1655,31 - blanc 2028,26 54, 62 3212,57 1635,31 moyenne 1973,82 54,58*** 3289, 92 1637,62*** écart type 52,27 2,01 66,99 16, 65 % témoin 100 3 100 50 Dans cette étude, les quantités du gel de Ex 1, administrées (par voie topique pendant les 3 jours de traitement) aux sujets 6-10, étaient de 2,14 g pour le sujet 6, de 1,41 g pour le sujet 7, de 2,89 g pour le sujet 8, de 2,75 g pour le sujet 9 et de 2,56 g pour le sujet 10. TABLEAU III Effet inhibiteur de l'Exemple 1 sur l'adhésion de Propionibacterium acnes aux cornéocytes humains (sujets acnéiques) - récapitulation Ex 1 Sujets acnéiques% d'inhibition 6 (femme) 51 % 7 (femme) 48% 8 (femme) 93% 9 (homme) 97% 10 (homme) 50% Moyenne67, 8 Ecart-type 24, 9 Essais in vitro En suivant les modalités opératoires données ci-dessus, en ce qui concerne le prélèvement des coméocytes, l'incubation avec la souche de Propionibacterium acnes et la mesure des fluorescences, on a comparé l'adhésion in vitro de ladite souche aux cornéocytes humains prélevés chez un sujet sain [sujet B non acnéique] et chez des sujets acnéiques [sujets A, C et D (les sujets C et D étant ceux du 1er lot ci-dessus non traités. Les résultats obtenus sont consignés dans le tableau IV qui suit. TABLEAU IV Comparaison de l'adhésion in vitro de Propionibacterium acnes aux cornéocytes humains prélevés chez un sujet sain et chez des sujets acnéiques (cornéocytes non traités) Sujet B Sujet A Sujet C Sujet D non acnéique acnéique acnéique acnéique Blanc 11, 1 13, 1 18,1 4,2 3629, 8 4952, 3 3243, 3 1528,2 Fluorescence 3659, 0 3659,0 4737,5 3329,1 1500,9 -blanc 3679,9 4811,4 3164,4 1453,1 Moyenne 3656,2 4833,8 3245,6 1494,1 Ecart type 25,2 109,1 82,3 38,0 Conclusions Il résulte de l'ensemble de ces essais que : 1) l'adhésion ex vivo de Propionibacterium acnes aux kératinocytes de sujets acnéiques traités in vivo par le gel de l'exemple 1 est fortement diminuée ; et, 2) il semble [mais ceci doit être confirmé avec un nombre plus important de sujets (non acnéiques et acnéiques)] qu'il n'y aurait pas de différence d'adhésion de Propionibacterium acnes aux coméocytes prélevés chez le sujet sain B ou chez les sujets acnéiques A, C et D. Revendications 1. Composition topique pour usage cosmétique ou thérapeutique comprenant une substance inhibant la fixation de microorganismes sur les coméocytes en association avec un excipient dermatologiquement acceptable, ladite composition étant caractérisée par le fait que ladite substance inhibant la fixation de microorganismes, notamment Propionibacterium acnes, sur les cornéocytes est choisie parmi l'ensemble constitué par : (i) les alkylosides de formule I : dans laquelle, n est un nombre ayant pour valeur 0 à 4, et R est (CH2) 12 ou (CH2) 14 ; et, (ii) leurs mélanges. 2. Composition suivant la revendication 1, caractérisée en ce que n a pour valeur 0,1 ou 2. 3. Composition suivant la revendication 1, caractérisée en ce que n est un nombre fractionnaire compris entre 0,2 et 1,6. 4. Composition suivant l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisée en ce qu'elle renferme, en association avec un excipient dermatologiquement acceptable, (1 ) au moins une substance de formule 1 ci-dessus, et (2 ) au moins une substance appartenant à l'ensemble des pyridinecarboxamides de formule II : pour inhiber la fixation de microorganismes, notamment Propionibacterium acnes, sur les coméocytes. 5. Composition suivant la revendication 4, caractérisée en ce que le pyridinecarboxamide est le 3-pyridinecarboxamide. 6. Composition suivant la revendication 4, caractérisée en ce qu'elle renferme (1 ) 1 à 2 parties en poids d'une substance choisie parmi les alkylosides de formule I et leurs mélanges, (2 ) 1 à 4 parties en poids d'une substance choisie parmi les pyridinecarboxamides de formule II et leurs mélanges. 7. Utilisation d'une substance inhibant la fixation de microorganismes sur les cornéocytes pour la préparation d'une composition topique, ladite utilisation étant caractérisée en ce que l'on fait appel à une substance inhibant la fixation de microorganismes, notamment Propionibacterium acnes, sur les coméocytes, qui est choisie parmi l'ensemble constitué par : (i) les alkylosides de formule I : dans laquelle, n est un nombre ayant pour valeur 0 à 4, et R est (CH2) 12 ou (CH)] 14, et (ii) leurs mélanges, pour la préparation d'une composition destinée à un usage local en cosmétique ou en thérapeutique vis-à-vis des désordres cutanés induits par lesdits microorganismes. 8. Utilisation suivant la revendication 7, caractérisée en ce que n a pour valeur 0,1 ou 2, et est notamment un nombre fractionnaire compris entre 0,2 et 1,6. 9. Utilisation suivant la revendication 7 ou 8, caractérisée en ce que, pour inhiber la fixation de microorganismes, notamment Propionibacterium acnes sur les coméocytes, on fait appel à une association de (1 ) au moins une substance de formule I ci-dessus, et (2 ) au moins une substance appartenant à l'ensemble des pyridinecarboxamides de formule II : 10. Utilisation suivant la revendication 9, caractérisée en ce que le pyridinecarboxamide est le 3-pyridinecarboxamide.