FR 2823672 A1 20021025 FR 0105463 A 20010423 J La présente invention concerne des extraits de houblon, et leur utilisation dans la préparation d'un médicament ayant des propriétés _strogènes. Les inflorescences femelles en cone du houblon sont utilisées depuis longtemps dans la fabrication de la bière. Elles sont riches en matières minérales (surtout sels de potassium) et renferment également des tannins, des amines, des pectines, des traces d'histamine, et de nombreux polyphénols dont des flavonoides: rutoside, quercitroside, astragaloside, ainsi que des chalcones et des flavanones isoprénylées, o telles que le xanthohumol, l'isoxanthohumol et la 8-prénylnaringénine. L'activité _strogène du houblon a déjà été reconnue et attestée par un usage en médecine traditionnelle. Récemment, on a pu identifier les propriétés bénéfiques du xanthohumol contre l'ostéoporose (US-A-5 679 716) , ainsi que celles de la 8-isopenténylnaringénine (Planta s Medica 1998, 64, p. 516-519). Cependant des extraits polyphénoliques de différentes variétés de houblon étudiés par De Kenkeliere et al. dans Pharm. Pharmacol. Lett. 1997, 2/3, p. 83-86 ont montré une activité _strogène sans que cette dernière puisse étre attribuée au xanthohumol ou au desméthylxanthohumol. o De manière surprenante, les inventeurs ont découvert que si un extrait de houblon est produit à partir d'inflorescences femelles issues de certaines variétés de houblon et en particulier s'il renferme, parmi les prénylflavonoides, maoritairement les trois constituants suivants: le xanthohumol, l'isoxanthohumol et la 8-prénylnaringénine (ou 8 s isopenténylnaringénine), il présente une activité _strogène supérieure aux extraits de houblon classiques. La présente invention concerne donc un extrait de houblon obtenu à partir de cônes femelles de houblon Humulus lupulus issus d'au moins une des variétés de houblon suivantes: breweris gold, so cascade, cluster, colombus, galena, northern brewer, nagget, zeus, magauim, perle ou taurus et renfermant parmi les prénylflavonoides, majoritairement les trois constituants suivants: le xanthohumol, l'isoxanthohumol et la 8-prénylnaringénine. De préférence l'extrait renferme, en outre, au moins un autre prénylflavonoide parmi: le desméthylxanthohumol, la tétrahydroxygéranylchalcone, le 5-prénylxanthohumol, le déhydrocycloxanthohumol, l' hydrate de déhydrocycloxanthohumol, la 6prénylnaringénine, la 8-géranylnaringénine, la 6-géranylnaringénine, et la 3'-géranylchalconaringénine. De manière avantageuse, l'extrait selon l' invention renferme au moins 3 % en poids de prénylflavonoides. Les propriétés aestrogènes sont particulièrement mises en évidence lorsque les proportions pondérales desdits trois constituants dans 100 g d'extrait sec sont les suivantes: de 1 à 30 g de xanthohumol, de 0,01 à 50 g d'isoxanthohumol et de 0,5 10- 3 à 10 g de o 8-prénylnaringénine, et de préférence comprises dans les gammes de 3 à 15 g de xanthohumol, de 3 à 30 g d'isoxanthohumol et de 0, 01 à 5 g de 8-prénylnaringénine. L'extrait selon la présente invention peut étre utilisé pour la préparation d'un médicament ayant des propriétés _strogènes, et s notamment pour le traitement des variations hormonales liées à la périménopause et à la ménopause, qui provoquent des modifcations physiologiques entraînant des problèmes tels que bouffées de chaleur, problèmes de l'humeur et de la mémoire, incontinence urinaire, perte de l'intégrité de la structure du tissu de soutien de la peau, perte de o cheveux, baisse d'activité des glandes sudoripares, sécheresse vaginale, ostéoporose, maladies cardio-vasculaires, etc... Un tel médicament peut étre destiné en particulier au traitement des bouffées de chaleur survenant lors de la périménopause ou de la ménopause. Les posologies sont par exemple de l'ordre de 3 mg/Kg corporel et par jour. Le mélange spécifque des trois molécules xanthohumol, isoxanthohumol et 8prénylnaringénine dans les proportions relatives suivantes: de 1 à 30 g de xanthohumol, de 0,01 à 50 g d'isoxanthohumol et de 0,5 10-3 à 10 g de 8-prénylnaringénine, et de so préférence comprises dans les gammes de 3 à 15 g de xanthohumol, de 3 à 30 g d'isoxanthohumol et de 0,01 à 5 g de 8prénylnaringénine, pour 100 g d'extrait sec. peut également être utilisé pour la préparation d'un médicament ayant des propriétés ou activités _strogènes, et destiné en particulier au traitement des troubles physiologiques liés à la périménopause et la ménopause, telles que les bouffées de chaleur. Le mélange précité, ou l'extrait selon la présente invention, peuvent également étre utilisés dans des compositions diététiques (par exemple sous forme de poudres, gélules, comprimés, capsules, ampoules, boissons), dans des compléments alimentaires ou dans des compositions cosmétiques (par exemple sous forme de crèmes, gels, lotions...). La présente invention va être illustrée par les exemples suivants: Exemple 1: a) Extraction o Des cones femelles de houblon Humulus lupulus issus de la variété northern brewer (origine hallertauer) sont coupés en morceaux de quelques centimètres. On réalise une extraction solide/liquide de ces cônes par un solvant organique (ou un mélange de solvants). Le solvant est ensuite filtré, pour éliminer le végétal épuisé. On récupère le filtrat sur lequel on eectue une extraction liquide/liquide, puis on récupère la seconde phase que l'on soumet à des procédés de séparation physique (de type membranaire) pour éliminer principalement les macromolécules présentes. Le liquide obtenu est finalement séché, broyé Dnement et conditionné. o b) Test in vitro Le test in vitro utilisé a été développé par Littlefield en 1990 (Endocrinology 1990, 127, p. 2757-2762). La variante de la lignée cellulaire utilisée est sensible aux _strogènes auxquels elle répond non par une activité proliférative, mais s par une activité de stimulation d'une enzyme, la phosphatase alcaline. Ce test renseigne sensiblement et spécifiquement sur l'activité _strogène car parmi les stéroides, seuls les _strogènes répondent à ce test et parviennent à stimuler l' activité enzymatique. L' activité _strogène peut également être déclenchée par des substances non so stéroidiennes à activité "_strogenelike" comme les phytomstrogènes. Les réponses _strogéniques obtenues ci-dessous sont bloquées par l'anti_strogène de référence mis en présence, ce qui indique une activité médice par le récepteur aux _strogènes. Le modèle est une lignée cellulaire Ishikawa (Var. I) de l'adénocarcinome de l'endomètre humain (Etabli par Nishida: Acta Obstet Gynaec Jap 1985, 37: 1103-1111.). Le test est basé sur l' identification d'une activité phosphatase alkaline (PA) mettant en évidence une activité _strogénique. En effet, la phosphatase alcaline hydrolyse le p-nitrophénol phosphate en p-nitrophénol qui donne une réaction colorée. Le dosage consiste à mesurer l'absorbance à 405 nm après 72 h d' incubation. Deux témoins ont été utilisés: - Témoinpositif= 17pEstradiol, - Témoin négatif = Anti_strogène ICI182,780 de chez Zeneca o Les extraits mis en présence à une concentration de 2 microgrammes/ml sont: - Extrait de soja titré à 7 % en poids d'isoflavones - Extrait de soja titré à 20 5E en poids d'isoflavones - Extrait "classique" de houblon - Extrait de houblon selon l' invention renfermant les proportions respectives suivantes en xanthohumol, isoxanthohumol et 8-prénylnaringénine: 5, 7 et 0,06 % en poids. c) Résultats o Ils sont présentés dans le Tableau I ci-après: TABLEAU I EXTRAITS ABSORBANCE à 405 nm Extrait de soja à 7 % d'isoflavones 0,300 Extrait de soja à 20 % d'isoflavones 0,405 Extrait de houblon selon l' invention 0,360 Extrait de houblon "classique" 0,210 Le 17,BEstradiol donne une courbe décrivant la relation attendue dose-effet (_strogènique par activation de la phosphatase alcaline). Il existe par ailleurs également une relation dose-effet lors de l'utilisation d'extraits de soja à teneur croissante en isoflavones. Ce résultat valide l'activité _strogénique reconnue des isoflavones mais surtout valide le test mis en place pour des composés non stéroïdiens à activité phytomstrogénique. s En ce qui concerne les extraits, les observations sont les suivantes: L'extrait de soja titré à 7 % d'isoflavones donne une réponse _strogénique faible mais signifcative. s - L'extrait de soja titré à 20 % d'isoflavones donne une réponse _strogénique importante et significativement supérieure à celle retrouvoe pour l'extrait de soja titré à 7 % d'isoflavones, validant l'effet _strogénique reconnu du soja lié à la dose d' isoflavones et validant l' activité du test. o - L'extrait de houblon dit "classique" est un extrait de houblon couramment trouvé dans le commerce qui montre peu d'activité et de surcro^t plus faible que celle observée avec l'extrait de soja à 7 % d'isoflavones de soja. Il ne présente donc qu'un intérêt moyen eu égard à son potentiel s phytomstrogénique. - L'extrait de houblon selon l' invention possède une activité _skogénique beaucoup plus importante que l'extrait classique de houblon du commerce et qu'un extrait de soja titré à 7 % d'isoflavones. - L'extrait de houblon selon l'invention donne des résultats phytomstrogéniques proches de ceux obtenus avec un extrait d'isoflavones de soja titré à 20 % d'isoflavones. d) Conclusion On peut déduire de cet exemple que l'extrait de houblon selon l'invention donne des activités _strogènes similaires à celles obtenues avec un extrait de soja titré à 20 % en poids d'isoflavones, et supérieure à celles d'un extrait classique de houblon. Exemple 2: Des extraits de houblon Humulus lupulus issus de diverses so variétés ont été préparés et testés selon un protocole identique à celui de l'exemple 1. Leurs proportions en xanthohumol, isoxanthohumol et 8-prénylnaringénine ont été dosées par HPLC. Les résultats sont regroupés dans le Tableau II suivant: TABLEAU II % dans extrait sec _ Variété Origine X IX 8PN Absorbanc e a 405 nm Hallertau Hallertauer 4 8 0,01 0,020 Hersbruck Hallertauer 2,8 9 0,03 0, 023 Saaz Saazer 3 4 0,003 0,090 Horizon Osu 5,5 2 0,1 0,100 Cluster Idaho 4 2 0,003 0,160 Colombus Washington 6 7 0,02 0,200 Cascade Washington 2 15 0,005 0,210 Galena Idaho 5 0,02 0,003 0,270 Perle Oregon 2 12 0,0007 0,280 Taurus Washington 8 20 0,015 0,300 Brewer's gold Hallertauer 8 0,5 0,002 0,300 Nugget Oregon 7 0,1 0,08 0, 320 Northern Hallertauer 5 7 0,06 0,360 X = Xanthohumol IX = Isoxanthohumol 8PN = 8-prénylnaringénine Ces résultats montrent que la plupart des variétés testées présentent une absorbance égale ou supérieure à celle de l'extrait de houblon classique (0,210), c'est-à- dire des propriétés _strogènes o équivalentes ou supérieures. On remarque que les propriétés _strogènes sont particulièrement élevées lorsque les inflorescences extraites sont issues d'au moins une des variétés de houblon suivantes: galena, perle, taurus, brewer's gold, nagget et northern brewer. Des résultats similaires ont également s été obtenus avec les variétés Zeus et Magnuim. Exemple 3: Une gélule de taille 1 renfermant les composants suivants: - 60 mg d'extrait selon l' invention (var. northern brewer) - 200 mg de maltodextrine - JO mg de silice colloidale - 5 mg de stéarate de magnesium a été ingérée, deux fois par jour, par une patiente de poids corporel 60 Kg. Après un mois de traitement cette dernière a constaté une nette diminution des bouffées de chaleur. REV EN D IC ATI O N S 1 - Extrait de houblon obtenu à partir de cones femelles du houblon Humulus lupulus issus d'au moins une des variétés de houblon s suivantes: brewer's gold, cascade, cluster, colombus, galena, northern brewer, nugget, zeus, magnuim, perle ou taurus et renfermant parmi les prénylflavonodes, majoritairement les trois constituants suivants: le xanthohumol, l'isoxanthohumol et la 8-prénylnaringénine. 2 - Extrait de houblon selon la revendication 1 caractérisé en ce o qu'il renferme au moins un autre prénylflavonoide parmi: le desméthylxanthohumol, le tétrahydroxygéranylchalcone, le 5 prénylxanthohumol, le déhydrocycloxanthohumol, le déhydrocycloxanthohumol hydrate, la 6-prénylnaringénine, la 8 géranylnaringénine, la 6géranylnaringénine, la 3' s géranylchalconaringénine. 3 - Extrait de houblon selon l'une des revendications 1 ou 2 caractérisé en ce qu'il renferme au moins 3 % en poids de prénylflavonoides. 4 - Extrait selon l'une des revendications 1 à 3 caractérisé en ce o qu'il renferme lesdits trois constituants dans les proportions pondérales suivantes: de 1 à 30 g de xanthohumol, de 0,01 à 50 g d'isoxanthohumol et de 0,5 10-3 à 10 g de 8-prénylnaringénine, dans g d'extrait sec. - Extrait selon l'une des revendications 1 à 4 caractérisé en ce qu'il renferme lesdits trois constituants dans les proportions pondérales suivantes: de 3 à 15 g de xanthohumol, de 3 à 30 g d'isoxanthohumol et de 0,01 à 5 g de 8-prényluaringénine, dans 100 g d'extrait sec. 6 - Utilisation de l'extrait selon l'une des revendications 1 à 5 pour la préparation d'un médicament ayant des propriétés _strogènes. 7 - Utilisation de l'extrait selon l'une des revendications 1 à 5 pour la préparation d'un médicament destiné au traitement des troubles physiologiques liés à la périménopause et la ménopause. 8 - Utilisation selon la revendication 7 pour la préparation d'un médicament destiné au traitement des bouffées de chaleur. s 9 - Utilisation d'un mélange de xanthohumol, d'isoxanthohumol et de 8prénylnaringénine dans les proportions pondérales relatives e 9 suivantes dans 100 g d'extrait sec: de 1 à 30 g de xanthoLumol, de 0,01 à g d'isoxanthohumol et de 0,5 10-3 à 10 g de 8-prénylnaringénine pour la préparation d'un médicament ayant des propriétés _strogènes. - Utilisation d'un mélange de xanthohumol, d'isoxanthohumol et de 8prénylnaringénine dans les proportions pondérales relatives suivantes dans 100 g d'extrait sec: de 3 à 15 g de xanthohumol, de 3 à g d'isoxanthohumol et de 0,01 à 5 g de 8-prénylnaringénine pour la préparation d'un médicament destiné au traitement des troubles physiologiques liés à la périménopause et la ménopause. o 11 - Utilisation selon la revendication 9 pour la préparation d'un médicament destiné au traitement des bouffées de chaleur. 12 - Composition diététique renfermant l'extrait selon les revendications 1 à 5 ou un mélange de xanthohumol, d'isoxanthohumol et de 8-prényluaringénine dans les proportions pondérales relatives s suivantes dans 100 g d'extrait sec: de 1 à 30 g de xanthohumol, de 0,01 à g d'isoxanthohumol et de 0,5 à 10 g de 8-prényluaringénine. 13 - Complément alimentaire renfermant l'extrait selon les revendications 1 à 5 ou un mélange de xanthohumol, d'isoxanthohumol et de 8-prénylnaringénine dans les proportions pondérales relatives o suivantes dans 100 g d'extrait sec: de 1 à 30 g de xanthohumol, de 0,01 à g d'isoxanthohumol et de 0,5 à 10 g de 8-prénylnaringénine. 14 - Composition cosmétique renfermant l'extrait selon les revendications 1 à 5 ou un mélange de xanthohumol, d'isoxanthohumol et de 8-prénylnaringénine dans les proportions pondérales relatives suivantes dans 100 g d'extrait sec: de 1 à 30 g de xanthohumol, de 0,01 à