FR 2830754 A1 20030418 FR 0113189 A 20011012 COMPOSITIONS COSMETIQUES ISSUES DE Morus, PROCEDE D'EXTRACTION D'UN PRINCIPE ACTIF ET PRINCIPE ACTIF OBTENU La présente invention concerne des applications de compositions cosmétiques issues de Morus, un procédé d'extraction d'un principe actif, plus particulièrement de Morus nigra, et le principe actif obtenu. Il existe une pathophysiologie dite de la "peau sensible" qui se traduit par des picotements, des brûlures, des rougeurs ou des sensations de démangeaisons. Ces phénomènes d'hypersensibilité résulterait d'un ensemble de facteurs tels que des réactions de contact à certaines substances, des réactions à certaines conditions environnementales, des réactions engendrées par le style de vie ou encore en fonction des cycles hormonaux. Néanmoins, une autre cause peut aussi être des troubles de la perméabilité cutanée. En effet, une altération de la fonction barrière cutanée conduirait à une forte sensibilité aux stimulis extérieurs. Les fibres nerveuses notamment les fibres C amyéliniques et les fibres AS myéliniques sont capables de réagir à des stimuli électriques, chimiques, thermiques, mécaniques et solaires. De ce fait, les messages envoyés au cerveau à partir des terminaisons nerveuses du tissu cutané provoquent en réponse la libération locale de neuromédiateurs, plus particulièrement le C. G. R. P (calcitonin gene-related peptide ou peptide relié au gène de la calcitonine) qui prédomine dans les zones sensibles à la douleur du derme superficiel. Ces neuromédiateurs sont au nombre d'une vingtaine actuellement reconnus mais le C. G. R. P est le neuropeptide le plus abondant de la peau. Ce neuropeptide de 37 acides aminés est synthétisé par les fibres nerveuses, les kératinocytes, les mélanocytes, les cellules de Langerhans et toutes les cellules immunitaires. Ce neuropeptide exerce ses effets biologiques par l'intermédiaire de deux récepteurs CGRP1 et CGRP2 couplés à la protéine G. Ces neuromédiateurs sont impliqués dans de nombreuses affections cutanées et surtout dans les dermatoses inflammatoires. Il convient d'agir et la présente invention vise à préparer un actif capable d'améliorer le confort des peaux irritées, inflammées et sensibles. Notamment, il convient de freiner la libération d'un neuromédiateur particulier, le C. G. R. P qui est un neuropeptide pro-irritant. Le principe actif a pour objet de bloquer les processus cellulaires inflammatoires, de limiter la rougeur de la peau et les sensations de picotements. A cet effet, le principe actif agit notamment sur la libération des CGRP et sur la libération des interleukines. La présente invention est maintenant décrite en détail selon un mode de réalisation particulier, non limitatif, les différents résultats annexés venant soutenir les éléments qui vont suivre de la description et ainsi : - la figure 1 récapitule les résultats obtenus avec le principe actif sur la libération des CGRP, - la figure 2 récapitule les résultats obtenus avec le principe actif sur la libération des interleukines, - la figure 3 montre l'effet apaisant obtenu sur des peaux agressées, et - la figure 4 récapitule les résultats de l'effet apaisant du principe actif sur les sensations de picotements. 1/PROCEDE D'EXTRACTION D'UN PRINCIPE ACTIF A PARTIR DE MORUS NIGRA Le procédé d'extraction du principe actif selon la présente invention utilise comme source des feuilles de mûrier, plus particulièrement Morus nigra. Le procédé consiste à réaliser la succession d'étapes suivantes : - solubilisation dans de l'eau à pH acide compris entre 2,0 et 5,0 de feuilles de Morus réduites en poudre, spécifiquement la variété Morus nigra. - séparation des phases soluble/insoluble par filtration, centrifugation, ou décantation, - concentration en polyphénols, - ajustement du pH, et - filtration stérilisante pour atteindre une flore mésophile totale inférieure à 100 germes/g, et une absence de levures et de moisissures. 21 CARACTERISATION DU PRINCIPE ACTIF OBTENU Taux de matière sèche : Le taux est obtenu par passage à l'étuve à 105 C jusqu'à obtention d'un poids constant. Le taux de matière sèche est compris entre 20 et 200 g/l, plus particulièrement entre 40 à 70 g/). Mesure du pH : Le pH, après rectification, est compris entre 4, 0 et 7, 0 Détermination des polyphénols totaux : Les composés phénoliques forment en présence de ferricyanure de potassium des composés colorés détectables à une longueur d'onde de 725 nm. L'intensité de coloration est proportionnelle à la quantité de composés phénoliques. Cette lecture est effectuée en regard d'une gamme étalon d'acide gallique de 40 à 120 mg/l et la quantité de composés phénoliques est indiquée en g/). Le taux de polyphénols totaux est compris entre 0,5 et 10, 0 gull, notamment entre 0,5 et 6,0 g/l et plus particulièrement entre 0,5 et 3,0 g/l. 3/EFFET DU PRINCIPE ACTIF SUR LA LIBERATION DE C. G. R. P Le test consiste à doser le taux de CGRP relargué dans des cultures de neurones sensitifs. Les neurones sensitifs issus de ganglions de jeunes rats, sont ensemencés puis incubés dans un milieu de culture contenant du sérum, des facteurs de croissance et des facteurs antimitotiques. Les neurones, une fois matures après quelques jours de culture, libèrent spontanément des neuropeptides et notamment le CGRP. On place dans ce milieu de culture, 0, 1% du principe actif selon la présente invention. Afin de déterminer les quantités de CGRP libérées, on utilise un kit du commerce, notamment"rat CGRP enzyme immunometric assay". Un tel kit permet de déterminer des quantités très faibles de CGRP. Les résultats sont regroupés dans le tableau de la figure 1, qui montre une très forte diminution du pourcentage de libération de CGRP en présence du principe actif selon la présente invention, à un taux très faible de 0, 1 %. Par la limitation de la libération de CGRP, on limite les actions irritantes déclenchées par ce neuropeptide. 4/ACTIVITE ANTI-IRRITANTE Limitation de la libération des interleukines Les tests décrits ci-après permettent de déterminer l'effet protecteur du principe actif face à un stress oxydatif provoqué par des rayons UVA + UVB. A cet effet, on évalue le degré de protection dû au principe actif sur des kératinocytes en dosant la libération des interleukines IL-1 a, IL-6 et IL-8, qui sont des cytokines pro-inflammatoires. Des kératinocytes humains sont irradiés en UVA à 10 joules/cm2 et en UVB à 0,18 joules/cm2 pour donner un ordre de grandeur, sans présence du principe actif et avec 1,2 et 3% de principe actif. Le taux d'interleukines libérés par les cellules irradiées est mesuré au moyen d'un test ELISA du commerce. Les résultats sont regroupés dans le tableau de la figure 2 et montrent que le principe actif limite, voire même inhibe la libération d'interleukines après une agression solaire. Effet apaisant vis à vis des inflammations cutanées Le test porte directement sur l'évaluation de la rougeur de la peau due à une inflammation cutanée. Dans ce test, on applique du nicotinate de méthyle sur l'avant-bras de 24 volontaires, plus particulièrement sous un patch occlusif, ce qui provoque une rougeur de la peau. Cette rougeur est proportionnelle à l'irritation résultant de l'application de cet agent agressif. On conserve une zone agressée non traitée et on applique sur les autres zones les produits suivants : - un placebo gel d'un polymère acrylique - une composition à 1 % de principe actif dans ce même gel de polymère acrylique, - une composition à 3 % de principe actif dans ce même gel de polymère acrylique, et - une composition à 5 % de principe actif dans ce même gel de polymère acrylique. Un dispositif de mesure, commercialisé sous la dénomination Mexamètre, permet de quantifier l'intensité de la couleur rouge sur chacune des zones avant application du patch, après application du patch occlusif et après l'application des produits apaisants. Le tableau de la figure 3 montre les variations obtenues par rapport au placebo. On note que le principe actif diminue de façon significative la couleur rouge de la peau provoquée par un agent agressif. Effet anti-irritant vis-à-vis des picotements Ce test permet de caractériser l'effet anti-irritant du principe actif selon la présente invention, c'est-à-dire l'effet apaisant du principe actif sur les sensations de picotements des personnes à la peau sensible. Le test dit"stinging"test, est alors conduit sur une population dont on sait qu'elle présente une peau sensible à l'acide lactique. Une application est réalisée sur les sillons naso-géniens avec du sérum physiologique d'un côté et une solution d'acide lactique à 10% de l'autre. Immédiatement après l'application, les sensations des volontaires sont recueillies suivant l'échelle : - 0 : pas de picotement, - 1 : sensation légère, - 2 : sensation modérée, et - 3 : sensation sévère. Ensuite, on applique au même endroit 5 % de principe actif dans de l'eau distillée. Les sensations sont évaluées pendant les quelques minutes qui suivent sur cette même échelle : On obtient les effets regroupés dans le tableau de la figure 4. On constate une diminution de 67% des sensations de picotement montrant par là un effet apaisant du principe actif selon la présente invention. Les formulations de ce principe actif sont avantageusement présentées sous forme de gel apaisant ou d'émulsion, dosées de 1% à 5% de principe actif. REVENDICATIONS 1. Procédé d'obtention d'un principe actif procurant un effet apaisant vis à vis des picotements, brûlures, rougeurs ou sensations de démangeaisons de la peau, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes : - solubilisation dans de l'eau à pH acide compris entre 2,0 et 5,0 de feuilles de Morus réduites en poudre, spécifiquement la variété Morus nigra, - séparation des phases soluble/insoluble par filtration, centrifugation ou décantation, - concentration en polyphénols, - ajustement du pH, et - filtration stérilisante pour atteindre une flore mésophile totale inférieure à 100 germes/g et une absence de levures et de moisissures. 2. Principe actif obtenu par le procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il présente les caractéristiques suivantes : - taux de matière sèche compris entre 20 et 200 g/t - pH compris entre 4,0 et 7,0 et - polyphénols totaux exprimés compris entre 0,5 et 10, 0 g/t. 3. Principe actif obtenu selon la revendication 2, caractérisé en ce qu'il présente les caractéristiques suivantes : - taux de matière sèche compris entre 40 et 70 g/l - pH compris entre 4,0 et 7,0 et - potyphénots totaux exprimés compris entre 0,5 et 3,0 g/t. 4. Composition cosmétique selon la revendication 2 ou 3, caractérisée en ce qu'elle présente une action inhibitrice de la libération des CGRP. 5. Composition cosmétique selon la revendication 2 ou 3, caractérisée en ce qu'elle présente une action inhibitrice de la libération des interleukines. 6. Composition cosmétique selon la revendication 2 ou 3, caractérisée en ce qu'elle présente une action apaisante vis-à-vis des picotements sur les peaux inflammées. 7. Composition cosmétique selon la revendication 2 ou 3, caractérisée en ce qu'elle présente un effet apaisant.