FR 2830865 A1 20030418 FR 0113360 A 20011017 LEURRES PEPTIDIQUES POUR LA PREPARATION DE MEDICAMENTS DESTINES A LA PREVENTION OU AU TRAITEMENT DES PATHOLOGIES AUTO-IMMUNES, OU DES TROUBLES LIES A L'APPARITION D'ANTICORPS DIRIGES CONTRE DES PROTEINES EXOGENES. L'invention a pour objet des leurres peptidiques d'anticorps pathogènes pour la préparation de médicaments destinés à la prévention ou au traitement des pathologies autoimmunes, ou des troubles liés à l'apparition d'anticorps dirigés contre des protéines exogènes recombinantes ou non utilisées dans le cadre du traitement de ces pathologies autoimmunes ou des pathologies nécessitant l'administration aux patients desdites protéines exogènes. L'hémophilie A est une pathologie (sévère) due à l'absence ou l'insuffisance de facteur VIII (FVIII) fonctionnel. La capacité de coagulation est restaurée chez les patients par l'administration de concentrés de facteur VIII recombinant ou issu de plasmas. Il est connu que chez un pourcentage important (environ 15-25%) d'hémophiles A traités par le facteur VIII, un processus d'auto-immunisation aboutit à l'apparition d'anticorps anti-FVIII inhibant la fonction procoagulante du facteur VIII administré, rendant plus complexe encore le traitement des patients. Ces anticorps se lient à plusieurs régions (ou domaines structuraux) de la protéine FVIII, en particulier les domaines C2, A2 et a3-A3-Cl. La réponse anticorps a pour effet d'inhiber l'activité procoagulante du FVIII administré et de compliquer ainsi sérieusement le traitement de ces hémophiles. Aucune thérapeutique actuelle ne résout complètement ce problème ; la tolérisation immunologique par administration de doses massives de facteur VIII a un coût économique important pour le système de santé, ce qui rend nécessaire des recherches pour mettre au point des procédés possédant un rapport efficacité/coût plus favorable. Il est connu que les anticorps possèdent une structure moléculaire spécialisée, appelée paratope, qui leur permet d'effectuer une fonction biologique importante : la reconnaissance de l'antigène. Le paratope de l'anticorps est capable de reconnaître non seulement une partie limitée (appelée épitope ) de l'antigène qui a été à l'origine de sa sélection, mais aussi des fragments plus petits de cet antigène, en particulier des peptides correspondant à l'épitope (appelés peptides épitopiques ), des peptides possédant des modifications de séquence ou de structure chimique par rapport à l'épitope (appelés variants d'épitopes ) ou encore des molécules n'ayant pas d'homologie de séquence avec l'antigène (appelées mimotopes ). La réponse anticorps contre le FVIII est polyclonale et hétérogène dans sa spécificité [Gilles et al, 1993, Blood, 2452-61] mais il a été observé que les régions reconnues par les anticorps inhibiteurs (épitopes) sont restreintes à quelques zones principales de la molécule de facteur VIII. Le domaine A2 et le domaine C2 ont été identifiés initialement par des méthodes d'immunoempreinte utilisant des fragments protéolytiques du FVIII [Fulcher et al., 1985, PNAS USA 82, 7728-32] et confirmés ultérieurement lorsque la séquence nucléotidique du FVIII a été déterminée (Vehar et al., 1984, Nature 312, 337-342 ; Gitschier et al., 1984, Nature 312,326-336) et des fragments recombinants préparés [Scandella et al., 1988, PNAS 86 (4), 1387 ; Scandera et al., 1989, Blood 74, 1618-26]. Dans un cas particulier, l'épitope d'un anticorps inhibiteur monoclonal murin a pu être restreint à une séquence de 25 acides aminés de la région A2 (résidus 484-508) grâce à l'utilisation astucieuse d'hybrides entre les séquences du facteur VIII humain et porcin [Healey et al., 1995, J. Biol. Chem. 270, 14505-9]. Le clonage d'un anticorps humain à partir de lymphocytes B d'un patient hémophile a permis de montrer que cet anticorps reconnaissait le domaine C2 et inhibait la fonction du FVIII probablement en se liant avec une forte affinité sur le site de liaison du facteur de von Willebrand [Jacquemin et al., 1998, Blood 92, 496-506]. Enfin, la région a3-A3-Cl semble aussi reconnue par des anticorps inhibiteurs. Les approches thérapeutiques existant actuellement dans le cadre de la lutte contre les effets de ces anticorps, sont principalement les suivantes : - stimulation par la desmopressine de la production de FVIII chez les hémophiles modérés [Kesteven et al., 1984, Thromb. Haemost. 52, 50-2] ; - activation de la cascade de la coagulation par des concentrés du complexe prothrombique [Lusher et al., 1983, Blood 62, 1135-8] ; - administration de FVII recombinant humain activé [Hedner et al., 1993, Transfus. Med Rev. 7, 78-83] ; - utilisation de FVIII porcin [Hay et al., 1996, Vox Sang 70, 68-9], - utilisation de concentrés de prothrombine activée (brevet US 4,160, 02 (1979) : Method for producing a blood-coagulation-promoting preparation for human blood plasma ; brevet US 4,357, 321 (1982) : Method and composition for treating clotting factor inhibitors ; brevet US 4,663, 164 (1987) : Aqueous compositions for treating blood clotting inhibitors), - utilisation de fragments du facteur VIII (brevet US 4,649, 132 (1987) : Treatment of factor VIII inhibitors ; brevet US 4,769, 336 (1987) : Treatment of factor VIII inhibitors ; brevet US 5,149, 637 (1992) : Recombinant factor VIII fragments), - utilisation d'immun-complexes (brevet US 5,543, 145 (1996) : Pharmaceutical composition and method for the suppression of factor VIII inhibitor production), - utilisation de molécules hybrides facteur VIII humain/porcin (brevet US 5888974 : Hybrid human/animal factor VIII). Une approche conceptuelle des leurres moléculaires, non basée sur des peptides ou dérivés peptidiques, a été récemment décrite dans deux modèles différents de pathologies humaines à médiation humorale : le diabète et la myasthénie gravis. Dans les deux approches, de courtes séquences d'ARN ont été sélectionnées (à partir d'une large banque d'ARN de séquence aléatoire) pour leur capacité à se lier spécifiquement à un anticorps monoclonal représentatif des autoanticorps humains [Lee et al., 1997, Nat. Biotechnol. 15,41-5 ; Lee et al., 1996, J. Exp. Med. 184,315-24 ; Hay et al., 1996, susmentionné]. Dans les deux cas, les auteurs parviennent à démontrer que les leurres sélectionnés inhibent la liaison de quelques sérums de patients à leur cible (récepteur de l'insuline et récepteur de l'acétylcholine, 'respectivement). Cependant, ces observations n'ont pas été validées dans un modèle animal de ie ii un ces pathologies. Une des faiblesses de cette approche est l'instabilité métabolique des ARN ; bien que des ARN modifiés, plus résistants aux nucléases, aient été utilisés dans certaines de ces études, on peut penser que la demi-vie plasmatique de telles molécules soit suffisamment faible pour ôter toute chance au leurre d'agir. La présente invention découle de la mise en évidence par les Inventeurs, que des peptides ou pseudopeptides correspondant à des variants d'épitopes ou à des mimotopes, sont capables de se fixer dans le site d'anticorps anti-FVIII, en empêchant leur liaison au facteur VIII, et en réduisant ainsi l'activité anti-coagulante de cet anticorps. La présente invention a pour but de fournir de nouveaux moyens pour lutter contre les anticorps présents dans 1'organisme dans le cadre de pathologies auto-immunes, ou de pathologies nécessitant l'administration de protéines aux patients, permettant de limiter considérablement le coût des thérapeutiques actuelles dans ce domaine, et ce avec une efficacité comparable voire supérieure aux méthodes de traitement actuelles. La présente invention a pour objet l'utilisation de leurres peptidiques ou pseudopeptidiques dont la séquence en acides aminés diffère de celle des épitopes reconnus par des anticorps susceptibles de se développer contre des protéines endogènes dans le cadre de pathologies auto-immunes, ou contre des protéines exogènes administrées aux patients, notamment dans le cadre de pathologies dues à une déficience en ces protéines, pour la préparation de médicaments destinés à la prévention ou au traitement desdites pathologies auto-immunes, ou à la prévention ou au traitement des troubles liés à l'apparition d'anticorps dirigés contre lesdites protéines exogènes. L'invention a plus particulièrement pour objet l'utilisation susmentionnée de leurres peptidiques ou pseudopeptidiques définis ci-dessus, comprenant entre environ 6 et environ 20 acides aminés naturels ou non (et de préférence entre environ 8 et environ 16 de ces acides aminés), lesdits leurres étant sélectionnés pour leur capacité à : - inhiber in vitro et in vivo la liaison d'anticorps à des protéines spécifiquement reconnues par ces derniers dans le cadre de pathologies auto-immunes, ou de pathologies nécessitant l'administration desdites protéines aux patients, - restaurer in vitro et in vivo l'activité desdites protéines en présence desdits anticorps. Avantageusement, les anticorps reconnaissent préférentiellement les leurres peptidiques ou pseudopeptidiques que les protéines endogènes ou exogènes susmentionnées. L'invention concerne également l'utilisation susmentionnée, de leurres tels que définis ci-dessus, pour la préparation de médicaments destinés à la prévention ou au traitement : - de pathologies auto-immunes telles que : la myasthénie gravis, . 1'apparition d t auto anticorps dirigés contre l'insuline, . l'apparition d'autoanticorps dirigés contre le facteur VIII ou IX dans le cadre de variantes auto-immunes de l'hémophilie A ou B respectivement, notamment chez les femmes enceintes dans le cas de l'hémophilie A, A l'apparition d'autoanticorps anti-sperme responsables de certains cas d'infertilité, - ou des troubles liés à l'apparition d'anticorps dirigés contre les protéines exogènes, ou contre les protéines endogènes recombinantes synthétisées en vue d'une thérapie génique, lesdites protéines étant administrées dans le cadre du traitement de pathologies dues à une déficience en ces protéines, telles que l'hémophilie A ou B. L'invention a plus particulièrement pour objet l'utilisation de leurres tels que définis ci-dessus, pour la préparation de médicaments destinés à la prévention ou au traitement des troubles liés à l'apparition d'anticorps contre le facteur VIII endogène, ou contre le facteur VIII exogène ou dérivés, recombinants ou non, administrés dans le cadre de l'hémophilie A. L'invention concerne également l'utilisation susmentionnée de leurres peptidiques définis ci-dessus, tels qu'obtenus à partir de vecteurs exprimant des banques de peptides. A ce titre, l'invention a plus particulièrement pour objet l'utilisation susmentionnée de leurres n'ayant aucune homologie, voire une faible homologie comprise entre environ 10% et environ 30%, avec les épitopes desdites protéines reconnus par lesdits anticorps, lesdits leurres étant encore désignés leurres mimotopiques. L'invention vise plus particulièrement l'utilisation susmentionnée de leurres mimotopiques du facteur VIII. L'invention a plus particulièrement pour objet l'utilisation susmentionnée de leurres mimotopiques du facteur VIII de formule (1) suivante : dans laquelle : - nui et n2 indépendamment l'un de l'autre représente 0 ou 1, - XI et X2 indépendamment l'un de l'autre représente un acide aminé naturel ou non, - Xa représente une chaîne de 8 à 10 acides aminés naturels ou non. L'invention concerne plus particulièrement l'utilisation susmentionnée de leurres mimotopiques définis ci-dessus de formule (I) dans laquelle : - Xi est choisi parmi Y, E, Q, S, R, A, K, N, ou T, - X2 est choisi parmi R, T, H, G, S, L, V, P, F, D, K, A, Q ou I. L'invention a plus particulièrement pour objet l'utilisation susmentionnée de leurres mimotopiques définis ci-dessus de formule (1) dans laquelle Xa représente la séquence suivante : NPSIGDKN SEQIDNO : 1 A ce titre, l'invention a également plus particulièrement pour objet l'utilisation susmentionnée du leurre mimotopique de formule suivante : YCNPSIGDKNCR SEQ ID NO : 2 L'invention concerne également l'utilisation susmentionnée de leurres mimotopiques de formule (I) dans laquelle Xa représente la séquence de formule suivante : dans laquelle : - n3 représente 0 ou 1, - X3 représente un acide aminé quelconque, - X4 représente un acide aminé hydrophobe, - X représente un acide aminé aromatique, - X6 représente un acide aminé hydrophobe. L'invention a plus particulièrement pour objet l'utilisation susmentionnée de leurres mimotopiques définis ci-dessus de formule (I), caractérisés en ce que : - X3 est choisi parmi I, Q, R, T, ou K, - X4 est choisi parmi V, T, L, I, M, F, W, ou Y, - X est choisi parmi F, ou Y, - X6 est choisi parmi A, M, Y, P, T, ou V, A ce titre, l'invention vise plus particulièrement l'utilisation susmentionnée de leurres mimotopiques définis ci-dessus de formules suivantes : ECIVYGKTALCT SEQIDNO : 3 QCPTFGKTMLCT SEQIDNO : 4 SCRLFGKTYLCH SEQ ID NO : 5 SCTVYGKTPLCG SEQ ID NO : 6 RCKTFGKTTLCS SEQIDNO 7 RCTVY, GKTVLCL SEQ ID NO : 8 L'invention a également pour objet l'utilisation susmentionnée de leurres mimotopiques de formule (I) dans laquelle Xa représente la séquence de formule suivante : X7-X8-W-X9-N-R-X10-X11-(X12)n12-(X13)n13 dans laquelle : - nl2 et nl3 indépendamment l'un de l'autre représentent 0 ou 1, - X7 à X13 représentent un acide aminé quelconque, - le cas échéant W est remplacé par F. L'invention a plus particulièrement pour objet l'utilisation susmentionnée de leurres mimotopiques définis ci-dessus de formule (I), caractérisés en ce que : - X7 est choisi parmi H, S, T, M, Q, ou G, - Xg est choisi parmi T, A, K, R, Q, ou E, - X9 est choisi parmi S, A, H, F, V, G, ou T, - rio est choisi parmi R, K, L, S, H, T, I, ou A, - ill est choisi parmi S, T, V, K, R, Y, M, ou D, - Xiz est choisi parmi S, R, ou L, - X13 est choisi parmi I, H, ou W. A ce titre, l'invention a plus particulièrement pour objet l'utilisation susmentionnée de leurres mimotopiques définis ci-dessus de formule (I) choisis parmi ceux de formules suivantes : QCHTWSNRRSCL SEQIDNO : 9 SCHAWSNRRTCR SEQIDNO : 10 RCHAWSNRKSCV SEQ ID NO : 11 CSKWANRLVSIC SEQ ID NO : 12 CSKWHNRSKRHC SEQ ID NO : 13 ACTTWSNRSKCP SEQIDNO : 14 ECTRWSNRSRCF SEQ ID NO : 15 CMKWSNRSSRWC SEQIDNO : 16 KCGRWSNRSSCT SEQIDNO : 17 CGRWFNRSDLHC SEQIDNO 18 ACHEWSNRSTCT SEQ ID NO : 19 KCSRWTNRHLCD SEQIDNO : 20 KCTRWTNRHLCS SEQ ID NO : 21 KCTRWTNRAHCP SEQ ID NO : 22 QCSKWVNRSRCA SEQ ID NO : 23 NCQKWTNRRTCL SEQ ID NO : 24 QCGRWSNRSYCS SEQ ID NO : 25 TCHRWGNRTSCQ SEQ ID NO : 26 QCHRWANRISCS SEQIDNO 27 RCTQWTNRAYCP SEQ ID NO : 28 ACTQWSNRHMCG SEQ ID NO : 29 TCHPFSNRSTCT SEQ ID NO : 30 L'invention a encore plus particulièrement pour objet l'utilisation susmentionnée du leurre mimotopique de formule suivante : SCHAWSNRRTCR SEQ ID NO : 10 L'invention a également pour objet l'utilisation susmentionnée des leurres mimotopiques de formule suivante : KCEPDDPWPQCI SEQ ID NO : 31 ACKRNHRWGACV SEQ ID NO : 32 ECGSHAWGRRCK SEQ ID NO : 33 L'invention concerne également l'utilisation susmentionnée de leurres mimotopiques définis ci-dessus de formule (1) dans laquelle Xa représente la séquence de formule suivante : dans laquelle : - nl4 et nl9 indépendamment l'un de l'autre représentent 0 ou 1, - X à X représentent un acide aminé quelconque. L'invention concerne plus particulièrement l'utilisation susmentionnée de leurres mimotopiques définis ci-dessus de formule (I), caractérisés en ce que : - xi représente K, - X15 représente R, ou G, - X, g représente N, ou S, - XI. représente R, ou A, - XI, représente A, ou R, - XI, représente R. A ce titre, l'invention a plus particulièrement pour objet l'utilisation susmentionnée de leurres mimotopiques définis ci-dessus de formule (I) choisis parmi ceux de formules suivantes : ACKRNHRWGACV SEQ ID NO : 34 ECGSHAWGRRCK SEQ ID NO : 35 L'invention concerne également l'utilisation susmentionnée, de leurres peptidiques correspondant à des épitopes de reconnaissance par les anticorps présents dans lesdites protéines, dont la séquence peptidique est modifiée par suppression, substitution, ou addition d'au moins un acide aminé, lesdits leurres étant désignés variants épitopiques. L'invention a plus particulièrement pour objet l'utilisation susmentionnée de variants épitopiques du facteur VIII. L'invention a plus particulièrement pour objet encore l'utilisation susmentionnée de variants épitopiques du facteur VIII de formule (II) suivante : dans laquelle : - Nl et n2 indépendamment l'un de l'autre représentent 0 ou 1, - Xl à X représentent un acide aminé quelconque. à l'exception du peptide de formule DDDLTDSEMDVVRFD (SEQIDNO : 36). L'invention concerne plus particulièrement l'utilisation susmentionnée de variants épitopiques définis ci-dessus de formule (II), caractérisés en ce que : - Xt représente D ou A, - X2 représente D ou A, - X3 représente D ou A, - X4 représente F, Y, ou W, - X représente D ou A. A ce titre, l'invention a plus particulièrement pour objet l'utilisation susmentionnée de variants épitopiques définis ci-dessus de formules suivantes : DDDLTDSEMDVVRFD SEQIDNO : 37 DDDLTDSEMDVVRYD SEQ ID NO : 38 DDDLTDSEMDVVRWD SEQ ID NO : 39 CDDDLTDSEMDVVRFDC SEQ ID NO : 40 AAALTDSEMDVVRFA SEQ ID NO : 41 L'invention concerne également toute composition pharmaceutique caractérisée en ce qu'elle comprend des leurres tels que définis ci-dessus, en association avec des véhicules pharmaceutiquement acceptables. Avantageusement, les compositions pharmaceutiques de l'invention se présentent sous des formes susceptibles d'être administrées par voie parentérale, ou par voie orale. De préférence la posologie desdites compositions pharmaceutiques est telle qu'elle est comprise entre environ 1 et environ 5 mg/kg/j de composés de formule (I) ou (II) définis cidessus. L'invention concerne également les séquences peptidiques de formule (I) telles que définies. L'invention a également pour objet les séquences peptidiques de formule (II) telles que définies ci-dessus. L'invention concerne également les produits comprenant : * au moins une séquence peptidique de formule (I) telle que définie cidessus, et/ou au moins une séquence peptidique de formule (II) telle que définie ci-dessus, * et au moins un composé choisi parmi le facteur VIII extrait, ou recombinant, ou autres produits dérivés d'origine humaine ou animale, comme produits de combinaison pour une utilisation simultanée, séparée ou étalée dans le temps, en thérapie de substitution du facteur VIII, dans le cadre du traitement ou de la prophylaxie des accidents hémorragiques chez les patients atteints d'hémophilie A. L'invention a également pour objet les pseudopeptides dérivés des séquences peptidiques de formule (I) et (II) définies ci-dessus, notamment les pseudopeptides obtenus par conversion d'un ou plusieurs, voire la totalité des peptides desdites séquences peptidiques en un acide aminé D, ce qui conduit à un pseudopeptide largement plus résistant à la protéolyse que le peptide initial [Kramer et al., 1998, Protein Eng 11, 941-8]. S'agissant de la synthèse des composés de formule (I) ou (II) susmentionnés, celle-ci est avantageusement effectuée de la manière suivante. Dans la procédure d'une synthèse en phase solide d'un polypeptide, le polypeptide souhaité est synthétisé à partir d'un support insoluble telle qu'une résine benzhydryle amine ou chloromethylée (dérivée d'un polystyrène réticulé, et disponible chez des fournisseurs en produits chimiques). L'acide aminé en C-terminal du polypeptide à synthétiser, dont l'azote a ainsi que les sites réactifs sont protégés par des groupements protecteurs, est fixé à la résine en utilisant des techniques de couplage fort usitées. Le groupement protecteur de la fonction amine est déprotégé (laissant les autres groupements protecteurs, s'ils existent, intacts) de sorte que l'acide aminé suivant dans la séquence (disposant lui aussi de groupements protecteurs adéquats) est fixé et ainsi de suite. Quand le polypeptide est entièrement synthétisé, il est séparé de son support résineux, et tous les groupements protecteurs sont éliminés, puis le polypeptide est récupéré. Exemple de groupements protecteurs appropriés : fluorenyl méthyloxy carbonyl pour les groupements alpha amino, béta ou gamma tertio butyl ester pour les acides aspartique et glutamique, tertio butyl oxy carbonyl pour la lysine et le tryptophane, trityl pour la cystéine, l'asparagine, la glutamine et l'histidine, tertio butyl pour la sérine et la thréonine, 2,2, 4,6, 7-pentadihydrobenzo furane pour l'arginine. L'invention sera davantage illustrée à l'aide de la description détaillée qui suit de l'obtention de composés de formule (1) et (II) susmentionnés, et de la démonstration de leur capacité à inhiber les anticorps anti-facteur VIII. I) MATERIE ET METHODES 1) Techniques pour les leurres peptidiques de type variant d'épitope Principe de la technique Soot : Cette synthèse parallèle de peptides sur membrane Spot (Frank, R. (1992) Spot Synthesis : an easy technique for the positionally addressable, parallel chemical synthesis on a membrane support, tetrahedron. 48, 9217-9232) permet d'obtenir rapidement un grand nombre de peptides différents assemblés simultanément sur un support cellulosique plan. Les peptides sont préparés à une échelle de l'ordre de 50 nmol par spot, sous forme immobilisée. Sur une feuille de cellulose (12-8 cm) sont crées des sites circulaires (spot) d'environ 5 mm de diamètre, chimiquement réactifs qui serviront de point d'ancrage pour fixer l'acide aminé C- terminal du peptide. L'allongement de la chaîne peptidique s'effectue par additions successives des acides aminés du C-terminal vers le N-terminal par réaction d'estérification. Les fonctions aminées des résidus utilisés sont protégés temporairement lors du couplage par un groupement labile (un groupement 9-fluorénylméthyloxycarbonyle ou Fmoc) qui est éliminé en milieu basique. Les chaînes latérales réactives sont bloquées par un groupement stable durant la phase de synthèse, et déprotégées en fin d'assemblage. Un cycle de synthèse se déroule en 4 étapes : premièrement formation d'une liaison peptique entre le NH2 d'un acide aminé déjà déposé avec le COOH de l'acide aminé suivant, qui est au préalable activé par du N-hydroxybenzotriazole et de la N, N diisopropylcarbodiimide. Deuxièmement, les fonctions NH2 libres n'ayant pas réagi sont acétylées pour éviter la formation de peptides tronqués. Troisièmement, le groupement Fmoc protecteur du nouvel acide aminé est éliminé en milieu basique par la pipéridine. Quatrièmement, les fonctions aminées ainsi obtenues sont repérées par du bleu de bromophénol. Ce cycle est répété autant de fois que nécessaire. En fin de synthèse, après avoir procédé à la déprotection des chaînes latérales des acides aminés, les peptides qui restent fixés de manière covalente sur la membrane sont analysés par un immunoessai colorimétrique indirect. a) Préparation des membranes La séquence complète du FVIII, à l'exception du domaine B, a été synthétisée sur membrane de cellulose sous forme de pentadécapeptides chevauchant décalés de 2 résidus selon la méthode Spot. Le protocole général a été décrit précédemment par Molina et al. ovçvvvv (Molina, F., Laune, D., Gougat, C., Pau, B. & Granier, C. (1996) Improved performances of spot multiple peptide synthesis, Pept Res. 9, 151-5). Les membranes sont commercialisées par Abimed (Lagenfeld, Allemagne). Les acides aminés Fmoc et le N-hydroxybenzotriazole ont été commandés chez Novabiochem. Le robot qui effectue les différentes étapes de couplage est un robot ASP222 robot (Abimed). Tous les peptides sont acétylés en leur N-terminal. Une fois les peptides assemblés, les groupes protecteurs des chaînes latérales sont déprotégés par un traitement à l'acide trifluororacétique. ì b) Test immunologiqùe colorimétrique indirect Après saturation de la membrane dans une solution bloquante, la réactivité des peptides est évaluée par immersion de la membrane dans une solution d'anticorps inhibiteur à tester, utilisée généralement à une concentration de 0.1-1 J. lg/m1. Après lavages, l'interaction peptideanticorps est révélée par incubation d'un anticorps anti-Fc marqué à la phosphatase alcaline utilisé au 1 : 1000 (Sigma), qui en présence de son substrat (BCIP-MTT-MgC12 Sigma) donne un précipité bleu au niveau des peptides ayant fixé l'anticorps à tester. Les membranes sont ensuite régénérées pour éliminer le précipité bleu et l'anticorps lié en vue d'autres tests. c) Obtention d'épitopes analogues Une fois l'épitope identifié, une série de peptides analogues est préparée en synthèse Spot en substituant chaque position de la séquence réactive par les 19 acides aminés (à l'exception de la cystéine). L'introduction d'une contrainte par l'ajout d'un pont soufré permet également d'obtenir des épitopes analogues. 2) Techniques pour les leurres peptidiques de type mimotopique Principe de la technique du phage displav Des ligands peptidiques peuvent être facilement obtenus grâce à leur capacité de liaison à un anticorps en utilisant la technique du phage-display (Smith, G. P. (1985) Filamentous fusion phage : novel expression vectors that display cloned antigens on the virion surface, Science. 228, 1315-7), basée sur la présentation de peptides aléatoires à la surface de phages filamenteux. Ces peptides peuvent être exposés soit à la surface de la protéine pin des phages (nombre maximal 5 copies) soit à la surface de la protéine pVIII (nombre maximal 2700 copies). Ces peptides, de taille très variée (de 6AA jusqu'à 30AA) peuvent être soit linéaires soit contraints par un pont soufré. a) Différentes banques de phages peptides utilisées Pour effectuer le screening des peptides aléatoires, différentes banques ont été utilisées : * 4 banques peptidiques, où le peptide aléatoire est exprimé à la surface de la pVIII du A phage (une 15"linéaire, une 12mer contrainte, une 17mer semi-contrainte et une 30mer linéaire). Celles-ci, décrites par L. L. C. Bonnycastle (University Bumaby, BC, Canada) (Bonnycastle, L. ovçvvvv L., Mehroke, J. S., Rashed, M., Gong, X. & Scott, J. K. (1996) Probing the basis of antibody reactivity with a panel of constrained peptide libraries displayed by filamentous phage, J Mol Bol. 258, 747-62), sont constituées environ de 10"TU/ml et construites à partir du vecteur f88. 4, dérivé du phage fd-tet. * 2 banques peptidiques, où le peptide aléatoire est exprimé à la surface de la pIII du phage (une 9mer linéaire et une 12mer contrainte). Celles-ci sont décrites par le Dr Mazzucchheli L (Mazzucchelli, L., Burritt, J. B., Jesaitis, A. J., Nusrat, A., Liang, T. W., Gewirtz, A. T., Schnell, F. J. & Parkos, C. A. (1999) Cell-specific peptide binding by human neutrophils, Blood. 93, 1738-48), et leur diversité est de l'ordre de 109 TU/ml. b) Criblage de la banque de phages (biopanning) La technique de biopanning est réalisée suivant le protocole décrit par Smith et al. susmentionné. Trois tours de sélection et d'amplification sont réalisés, en parallèle pour les banques pIII et pVIII. Pour chaque cycle de sélection, les différents anticorps inhibiteurs, à la concentration de 1-5 Lg/ml pour les 2 premiers tours, 0.1-0. 5 ug/ml pour le 36me tour, dans du tampon carbonate (NaHCO, 100 mM, pH 8.6), sont adsorbés sur une boîte de Pétri 10x1. 5 cm (Falcon 1029) pendant une nuit à 4 C sous agitation. Après 5 lavages de 2 min au TBS-T 0.05% (Tris Buffered Saline : NaCl 1.37 M/KCI 26.8 mM/Tris base 0.5 M-Tween 20 0.05%/pH 7) pour éliminer l'excès d'anticorps, les sites non spécifiques sont saturés pendant 2 h à 37 C avec une solution de TBS-T 0. 1%-BSA 3% préalablement filtrée. Après élimination de cette dernière solution par 5 lavages de 2 min au TBS-T 0.05%, 2. 10" TU (unités de transduction) de chaque banque primaire, soit 100 fois la diversité de chaque banque, ou d'éluat de phages issus du tour de sélection précédent sont incubés une nuit à 4 C sous agitation. Les phages non retenus sont éliminés par 10 lavages de 2 min avec du TBS-T 0.5% suivis de 5 lavages de 2 min avec du TBS-T 0.05%. Les phages retenus sont ensuite élués soit par une élution acide (3 ml d'HCl 0.1 M/glycine/BSA 1 mg/ml préalablement filtrée/pH 2.2, incubation de 30 min à TA sous agitation, puis neutralisation avec 150 ul de Tris-HCl 2 M, pH 9) soit par une élution par compétition avec du FVIII (incubation ON à 4 C). Les différents éluats sont ensuite utilisés pour infecter des cellules E. Coli K91 pour amplification. Cette amplification se déroule en 2 étapes : tout d'abord 5 ml d'une suspension bactérienne en phase exponentielle de croissance (absorbance 1.8 à 550 nm) est ajouté à chaque éluat. Après une incubation de 10 min à 37 C sans agitation, 93 ml de milieu LuriaBertani (LB) avec 0.2 Jlglml de tétracycline (Tc) (banques FVIII) ou 0.75 Jlg/m1 de kanamycine (Ka) (banques pin) sont ajoutés et incubés 30 min à 37 C à 225 tours par minute (rpm). La concentration est ensuite ajustée à 20 Jlglml pour la Tc et à 75 ug/ml pour la Ka, puis la suspension est incubée à 37 C à 225 rpm pendant la nuit. Ces différentes suspensions bactériennes sont ensuite centrifugées à 4 C à 4000 rpm pendant 25 min, puis à 8000 rpm pendant 12 min, afin de précipiter les bactéries. Le surnageant contenant les phages est repris dans du poly (éthylèneglycol) 8000/NaCl 2.5 M à raison de 15 ml pour 100 ml de surnageant ; la précipitation s'effectue durant la nuit à 4 C. Après centrifugation à 4 C à 8000 rpm pendant 40 min, le culot est repris dans 3 ml de TBS 50 mM/NaCl, et incubé à 37 C pendant 30 min à 150 rpm. Le contenu est transféré dans 3 eppendorfs, centrifugé à 15000 rpm pendant 10 min à 4 C pour éliminer les débris cellulaires, puis transféré dans des ampoules stériles de 1.5 ml et stocké à-80 C. A chaque étape de sélection, la quantité de phages amplifiés est évaluée par titration, tandis que l'enrichissement en phages affins est évalué par ELISA. Après 3 tours de sélection, 3 étapes de clonage ont permis d'obtenir sur milieu solide (milieu LB-agar-Tc à 20 Ilg/m1ou Ka à 75 J. g/ml) des colonies bactériennes isolées. L'aptitude des différents clones à se lier spécifiquement aux anticorps inhibiteurs est ensuite testée par ELISA. c) Elisa Direct : Test de reconnaissance des anticorps inhibiteurs par les phages Les différents anticorps inhibiteurs utilisés pour le criblage des banques sont immobilisés à 1 Ilg/m1 en tampon NaHC03 sur plaque de microtitration (Nunc) durant une nuit à 4 C. Les puits sont saturés avec du PBS-T0. 1%-lait 2% pendant lh30 à 37 C. Les phages issus des différents pannings ; dilués au 1/25 en tampon PBS- T0. 1 %-lait 2% sont ensuite incubés pendant lh30 à 37 C. Entre chacune de ces incubations, 3 lavages au PBS- T0. 1% sont effectués sauf après la saturation. Les phages liés sont détectés à l'aide d'un anticorps anti-M13 couplé à la peroxydase (Amersham Boehringer) dilué au 1 : 3000, incubé pendant 1 h à 37 C. Après 5 lavages, le substrat de la peroxydase (OPD) est ajouté. La réaction se déroule pendant 30 min à l'obscurité puis une mesure de l'absorbance est effectuée à 450 nm. Après arrêt de la réaction par ajout d'H2S04 4N, une nouvelle mesure est effectuée à 490 nm. La spécificité des phages est mise en évidence par l'absence de réactivité avec des anticorps irrelevants. d) Détermination de la séquence des oligonucléotides Le séquençage de 1'ADN issu des phages est effectué sur séquenceur automatique (EUROGENTEC). Les amorces utilisées : 5'GTT TTG TCG TCT TTC CAG ACG 3'pour la pIII, et 5'TCG GCA AGC TCT TTT AGG 3'pour la pVIII, sont localisées en aval de l'insert peptidique. 3) Capacité des peptides variants épitopiques ou mimotopiques sous forme soluble à inhiber leur anticorps inhibiteurs in vitro and ex vivo a) Synthèse de peptides solubles Les différents épitopes identifiés en Spot ou les mimotopes déterminés par la technique du phage display sont ensuite synthétisés sous forme de peptides synthétiques solubles grâce à un synthétiseur Abimed AMS422 basé sur de la chimie Fmoc en phase soluble (Gausepohl, H., Boulin, C., Kraft, M. & Frank, R. W. (1992) Automated multiple peptide synthesis, Pept , Res. 5, 315-20). Les peptides sont déprotégés et clivés de la résine par un traitement avec de l'acide trifluoroacétique en présence de scavengers appropriés. Les peptides sont alors lyophilisés, et leur pureté est évaluée en HPLC. Si nécessaire, les peptides sont purifiés en vue d'obtenir plus de 90% d'homogénéité en HPLC. b) Capacité neutralisante des leurres in vitro Le FVIII est immobilisé sur la plaque ON à 4 C. En parallèle, l'anticorps inhibiteur est préincubé avec son/ses peptides épitopiques en gamme ON à 4 C dans du PBS-T0. 1%-lait 2%. Après 1 h de saturation avec du PBS-T0. 1%-lait 2%, les mélanges Ac-peptide sont incubés avec le FVIII immobilisé pendant 2 h à 37 C. Entre chacune de ces incubations, 3 lavages au PBS-T0. 1% sont effectués sauf après la saturation. La détection du complexe FVIII-Ac est obtenue par un anti-IgG de souris ou humain couplé à la peroxydase dilué au 1 : 3000 incubé pendant 1 h à 37 C. Après 5 lavages de PBS-T0. 1%, le substrat de la peroxydase (OPD) est ajouté. La réaction se déroule pendant 30 min à l'obscurité puis une mesure de l'absorbance est effectuée à 450 nm. Après arrêt de la réaction par ajout de HSO 4N, une nouvelle mesure est effectuée à 490nm. c) Capacité neutralisante des leurres dans un test fonctionnel (Test Bethesda) Ce test fonctionnel (Kasper, C. K. & Pool, J. G. (1975) Letter : Measurement of mild factor VIII inhibitors in Bethesda units, Thromb Diath Haemorrh. 34, 875-6) consiste à mesurer le temps nécessaire à un mélange composé des différents facteurs de la coagulation (FIXa, FVIII, phospholipides, calcium...) pour coaguler complètement. L'effet inhibiteur d'un anticorps se caractérisera dans un tel test par un allongement du temps du coagulation, la capacité inhibitrice de l'anticorps sera d'autant plus élevée que l'allongement du temps de coagulation sera importante. Le caractère inhibiteur d'un anticorps est exprimé en unité Bethesda, ce qui correspond à la concentration réciproque d'anticorps pour neutraliser 50% de l'activité coagulante du FVIII. Par contre, l'effet neutralisant des peptides se traduira par un retour au temps de coagulation initial obtenu en absence d'inhibiteur. Le test fonctionnel suivi découle du test décrit par Kasper susmentionné. Les anticorps monoclonaux anti-FVIII sont dilués dans un tampon imidazole 0.05 M, pH 7.3. Un volume égal de cette préparation (250jn. l) avec du plasma normal tamponné dans de l'imidazole (0.1 M, pH 7.4) sont mélangés et incubés pendant 2 h à 37 C. De manière similaire, du plasma normal tamponné dans de l'imidazole est mélangé à un anticorps non-spécifique lequel constitue le contrôle. L'activité inhibitrice d'un anticorps est lue à partir d'un graphe semilogarithmique représentant la corrélation entre l'activité résiduelle du FVIII et l'activité inhibitrice. Pour mettre en évidence la capacité des peptides à neutraliser les anticorps inhibiteurs, l'anticorps inhibiteur utilisé à une concentration de sorte à obtenir 50% de FVIII résiduel, est préincub. é ON à 4 C dans du tampon imidazole avec des concentrations croissantes en peptides. Ce mélange est ensuite traité comme ci-dessus. II) DESCRIPTIF DETAILLE 1) Choix des anticorps : Il a été utilisé : a un anticorps monoclonal de souris, ci-après dénommé ESH8, qui présente une très grande activité de neutralisation de l'activité procoagulante du FVIII (6300 Besthesda Unit/mg [Scandella et al., 1995, Blood 86, 1811-9]). Cet anticorps est un bon représentant des anticorps humains se liant au domaine C2 du facteur VIII. un anticorps monoclonal humain 2C11 (Jacquemin et al., 1998, susmentionné). * plusieurs anticorps monoclonaux de souris, ci-après dénommés F7B4, F29F11, F14A12, F18B1, F19C2 et F21C1 qui représentent un modèle des anticorps humains se liant à la région acide al du facteur VIII pour les 3 premiers, et la région acide a3 pour les derniers. 2) Procédés pour obtenir des leurres Il a été obtenu des leurres peptidiques de type"variants d'épitopes", en utilisant la technique Spot pour introduire des variations de la séquence en acides aminés de l'épitope. Les peptides variants d'épitope conservent la réactivité avec l'anticorps ou peuvent montrer une réactivité plus forte que l'épitope. Par exemple, une telle approche concernant l'épitope D356VVRF360 de l'anticorps anti-FVIII F7B4 a montré que la F360 pouvait être substituée sans perte de réactivité par les 2 autres acides aminés aromatiques W et Y. Dans un autre exemple, la présentation de l'épitope sous forme cyclique a été évaluée avec le peptide CDDDLTDSEMDVVRFDC et l'importance des charges négatives a été étudiée avec le peptide AAALTDSEMDVVRFA. Tous ces leurres de type variants d'épitopes ont été obtenus par synthèse peptidique conventionnelle et leur activité de liaison à l'anticorps anti- 1 facteur VIII mesurée. Il a été obtenu des leurres peptidiques de type mimotopes par la technique des banques de phages recombinants. L'approche de sélection de peptides à partir de banques aléatoires de séquences a été décrite [Smith et al., 1993, Methods Enzymol. 217, 228-257]. Des peptides portés par des phages filamenteux à la surface de leur protéine d'enveloppe (pVIII ou pIII) peuvent être utilisés : par exemple, une banque codant pour des peptides de 15 acides aminés, et une autre codant pour des peptides de 12 acides aminés, contraints structuralement par la présence constante de deux résidus de cystéine. Les conditions de sélection des phages utilisées sont celles décrites (notamment par [Ferrieres et al., 2000, Eur. J. Biochem. 267, 1819-1829]). L'élution des phages spécifiquement capturés par l'anticorps est effectuée soit par traitement acide soit par déplacement avec un excès d'antigène. La séquence en acide aminés de chaque peptide sélectionné peut être déterminée comme décrit notamment par Ferrières et al. Par exemple, des peptides mimotopes de l'anticorps ESH8, ainsi qu'avec l'anticorps humain 2C11 ont pu être obtenus. Suivant la condition d'élution utilisée, les motifs consensus obtenus varient. Par élution acide, deux groupes de séquences, toutes étant issues de la banque contrainte de 12 acides aminés, sont obtenus : le premier de type mimotopique comprend une seule séquence YCNPSIGDKNCR, séquence représentée par 3 clones, le second groupe de type épitopique se distingue par un motif consensus : X-CX-hydrophobe-aromatique (Y/F)-G-K-T-X-L-C-X (où X représente n'importe quel acide aminé), qui présente une homologie de séquence avec le domaine C2 du facteur VIII. Ce motif consensus est retrouvé dans 6 différentes séquences : ECIVYGKTALCT (représentée 1 fois), QCQTFGKTMLCT (4 fois), SCRLFGKTYLCH (1 fois), SCTVYGKTPLCG (11 fois), RCKTFGKTTLCS (1 fois) et RCTVYGKTVLCL (1 fois). Tandis qu'avec l'élution avec l'antigène, une seule séquence est obtenue et elle provient de la banque linéaire de 15 acides aminés KPGEVPRHRVTDFDR, représentée 4 fois. Pour vérifier que ces séquences prises en dehors du contexte du phage soient toujours réactives avec l'anticorps ESH8, celles-ci ont été synthétisées sur membrane par la technique Spot. Il s'avère que toutes ont gardé leur réactivité. Ensuite, pour déterminer les résidus clés de la liaison ESH8/peptide, chaque acide aminé du peptide a été substitué par les 19 autres acides aminés (à l'exception de la cystéine) pour déterminer 1) quels étaient les résidus critiques à la liaison ESH8/peptide 2) les éventuelles substitutions tolérables ce qui permet de dégager une caractéristique commune (exemple caractère hydrophobe ou aromatique, présence d'une longue chaîne latérale). Les résidus comme la glycine (G), la lysine (K), la thréonine (T) et la leucine (L) ne tolèrent aucune substitution, par contre quant au résidu hydrophobe, les éléments les plus réactifs sont valine (V), isoleucine (1) et leucine (L), mais acceptent tout à fait des résidus tels que la thréonine (T), la méthionine (M), la phénylalanine (F), le tryptophane (W), et la tyrosine (Y). Quant au résidu aromatique, cette position tolère principalement la phénylalanine (F), et la tyrosine (Y) avec une légère acceptation du tryptophane (W). Une fois ces séquence identifiées, un leurre est obtenu par synthèse peptidique conventionnelle. 3) Procédés pour déterminer l'activité bloquante des leurres : L'activité bloquante des leurres peut être vérifiée in vitro en test ELISA. Le format utilisé permet de mettre en évidence l'inhibition de la liaison de l'anticorps inhibiteur au facteur VIII par le leurre introduit en concentration croissante. La capacité neutralisante du leurre peut être confirmée dans un test fonctionnel comme le Test Bethesda (méthode de Kasper, [Kasper et al., 1975, Thromb. Diath. Haemorrh. 34, 875-6]). Les 7 peptides mimotopes solubles plus particulièrement étudiés sont les suivants : 103 KCGRWSNRSSCT 104 ECGSHAWGRRCK 105 CSKWHNRSKRHC 106 CMKWSNRSSRWC 107 SCHAWSNRRTCR 108 QCHTWSNRRSCL 109 RCHAWSNRKSCV Les Inventeurs ont étudié la capacité de ces peptides solubles à inhiber la liaison de l'anticorps 2C 11 au facteur VIII dans un test ELISA in vitro de la manière suivante : immobilisation du FVIII, pré-incubation de 2Cl1 avec les peptides solubles en gamme (200jiM, 20uM, 2uM, 200nM, 20nM, 2nM) toute la nuit à 4 C, puis incubation de ce prémélange sur le FVIII, révélation ensuite de l'anticorps 2C11. Les résultats obtenus sont indiqués ci-après. % d'inhibition 103 104 105 106 107 108 109 200 62,73 63,71 75,58 36,56 90,48 60,69 75,05 20 28,26 30,68 45,04 21,99 80,04 25,99 37,48 2 3,47 13,44 10,27 0,00 37,33 15,79 12,46 0,02 0 0 0 0 0 0 0 0,002 0 0 0 0 0 0 0 Tous les peptides testés inhibent la liaison Ac 2C11/FVIII, le peptide 107 se révélant être le plus efficace. REVENDICATIONS- 1. Utilisation de leurres mimotopiques peptidiques ou pseudopeptidiques du facteur VIII de formule (1) suivante : dans laquelle : - nui et n2 indépendamment l'un de l'autre représente 0 ou 1, - X, et X indépendamment l'un de l'autre représente un acide aminé naturel ou non, - Xa représente une chaîne de 8 à 10 acides aminés naturels ou non, pour la préparation de médicaments destinés à la prévention ou au traitement des troubles liés à l'apparition d'anticorps contre le facteur VIII endogène, ou contre le facteur VIII exogène ou dérivés, recombinants ou non, administrés dans le cadre de l'hémophilie A. 2. Utilisation, selon la revendication 1, de leurres mimotopiques de formule (1) dans laquelle : - Xi est choisi parmi Y, E, Q, S, R, A, K, N, ou T, - X2 est choisi parmi R, T, H, G, S, L, V, P, F, D, K, A, Roui. 3. Utilisation selon la revendication 1 ou 2, de leurres mimotopiques de formule (1) dans laquelle Xa représente la séquence suivante : NPSIGDKN SEQIDNO : 1 4. Utilisation selon la revendication 3, du leurre mimotopique de formule suivante : YCNPSIGDKNCR SEQIDNO : 2 5. Utilisation selon la revendication 1 ou 2, de leurres mimotopiques de formule (1) dans laquelle Xa représente la séquence de formule suivante : dans laquelle : - n3 représente 0 ou 1, - X3 représente un acide aminé quelconque, - X4 représente un acide aminé hydrophobe, - Xs représente un acide aminé aromatique, - Xg représente un acide aminé hydrophobe. 6. Utilisation selon la revendication 5, de leurres mimotopiques caractérisés en ce que : - X3 est choisi parmi 1, Q, R, T, ou K, - X4 est choisi parmi V, T, L, I, M, F, W, ou Y, - X5 est choisi parmi F, ou Y, - X6 est choisi parmi A, M, Y, P, T, ou V, 7. Utilisation selon la revendication 5 ou 6, de leurres mimotopiques de formules suivantes : ECIVYGKTALCT SEQ ID NO : 3 QCPTFGKTMLCT SEQ ID NO : 4 SCRLFGKTYLCH SEQ ID NO : 5 SCTVYGKTPLCG SEQIDNO : 6 RCKT FGKTTLCS SEQ ID NO : 7 RCTVYGKTVLCL SEQ ID NO : 8 8. Utilisation selon la revendication 1 ou 2, de leurres mimotopiques de formule (1) dans laquelle Xa représente la séquence de formule suivante : dans laquelle : - nl2 et nl3 indépendamment l'un de l'autre représentent 0 ou 1, - X7 à X13 représentent un acide aminé quelconque, - le cas échéant W est remplacé par F. 9. Utilisation selon la revendication 8, de leurres mimotopiques caractérisés en ce que : - Xy est choisi parmi H, S, T, M, Q, ou G, - Xg est choisi parmi T, A, K, R, Q, ou E, - X9 est choisi parmi S, A, H, F, V, G, ou T, - Xio est choisi parmi R, K, L, S, H, T, I, ou A, - Xn est choisi parmi S, T, V, K, R, Y, M, ou D, - X est choisi parmi S, R, ou L, - zest choisi parmi I, H, ou W. , tO. Utilisation selon la revendication 8 ou 9, de leurres mimotopiques choisis-parmi ceux des formules suivantes : QCHTWSNRRSCL SEQ ID NO : 9 SCHAWSNRRTCR SEQIDNO : 10 RCHAWSNRKSCV SEQ ID NO : 11 CSKWANRLVSIC SEQIDNO : 12 CSKWHNRSKRHC SEQIDNO : 13 ACTTWSNRSKCP SEQ ID NO : 14 ECTRWSNRSRCF SEQ ID NO : 15 CMKWSNRSSRWC SEQIDNO : 16 KCGRWSNRSSCT SEQ ID NO : 17 CGRWFNRSDLHC SEQIDNO : 18 ACHEWSNRSTCT SEQIDNO : 19 KCSRWTNRHLCD SEQIDNO : 20 KCTRWTNRHLCS SEQ ID NO : 21 KCTRWTNRAHCP SEQIDNO : 22 QCSKWVNRSRCA SEQ ID NO : 23 NCQKWTNRRTCL SEQIDNO : 24 QCGRWSNRSYCS SEQIDNO : 25 TCHRWGNRTSCQ SEQIDNO : 26 QCHRWANRISCS SEQIDNO : 27 RCTQWTNRAYCP SEQ ID NO : 28 ACTQWSNRHMCG SEQIDNO : 29 TCHPFSNRSTCT SEQIDNO : 30 11. Utilisation selon la revendication 10, du leurre mimotopique de formule suivante : SCHAWSNRRTCR SEQ ID NO : 10 12. Utilisation selon la revendication 1 ou 2, des leurres mimotopiques de formule suivante : KCEPDDPWPQCI SEQ ID NO : 31 ACKRNHRWGACV SEQ ID NO : 32 ECGSHAWGRRCK SEQ ID NO : 33 13. Utilisation selon la revendication 1 ou 2, de leurres mimotopiques de formule (I) dans laquelle Xa représente la séquence de formule suivante : dans laquelle : - nl4 et nl9 indépendamment l'un de l'autre représentent 0 ou 1, - X14 à X19 représentent un acide aminé quelconque. 14. Utilisation selon la revendication 13, de leurres mimotopiques caractérisés en ce que : - X représente K, - X15 représente R, ou G, - X16 représente N, ou S, - X17 représente R, ou A, - X18 représente A, ou R, - X 19 représente R. 15. Utilisation selon la revendication 13 ou 14, de leurres mimotopiques de formules suivantes : ACKRNHRWGACV SEQ ID NO : 34 ECGSHAWGRRCK SEQ ID NO : 35 16. Composition pharmaceutique caractérisée en ce qu'elle comprend des leurres tels que définis dans l'une des revendication 1 à 15 en association avec des véhicules pharmaceutiquement acceptables. 17. Séquences peptidiques de formule (1) telles que définies dans l'une des revendications 1 à 15. 18. Produits comprenant : * au moins une séquence peptidique de formule (1) selon la revendication 17, * et au moins un composé choisi parmi le facteur VIII extrait, ou recombinant, ou autres produits dérivés d'origine humaine ou animale, comme produits de combinaison pour une utilisation simultanée, séparée ou étalée dans le temps, en thérapie de substitution du facteur VIII, dans le cadre du traitement ou de la prophylaxie des accidents hémorragiques chez les patients atteints d'hémophilie A.