FR 2809960 A1 20011214 FR 0007302 A 20000607 COMPOSITION ADJUVANTE DE LA REPONSE IMMUNITAIRE COMPRENANT LA PROTEINE FHA OU UN FRAGMENT DE LA PROTEINE FHA SOUS FORME LIBRE, ET COMPOSITION IMMUNOGENE OU VACCINALE CONTENANT UNE TELLE COMPOSITION ADJUVANTE La présente invention se situe dans le domaine des adjuvants pour la vaccination et plus particulièrement des adjuvants permettant aussi bien la stimulation de l'immunité par voie mucosale que systémique. La présente invention concerne toute utilisation de la protéine FHA ou une partie de la protéine FHA, sous forme libre, pour la préparation d'une composition adjuvante de la réponse immunitaire à usage humain ou animal. Elle est également relative à toute composition adjuvante de la réponse immunitaire comprenant la protéine FHA ou une partie de la protéine FHA, sous forme libre. Elle a en outre pour objet des compositions immunogènes et/ou vaccinales comprenant une telle composition adjuvante en association avec un immunogène ou avec un antigène. L'hémagglutinine filamenteuse (FHA) de Bordetella pertussis est une adhésine majeure produite et sécrétée par la bactérie. Le gène de structure de la FHA code pour une protéine de 367 KDa, et la forme mature est constituée des 60 % N-terminaux de ce précurseur (références 1 à 5). Les fonctions des parties N-terminale et C-terminale du précurseur (fhaB) et celle de la protéine mature sécrétée (FHA) sont décrites dans Geneviève Renauld - Mongénie et al (6). Il apparaît que le domaine Nterminal de fhaB joue un rôle essentiel dans la sécrétion de la protéine mature puisqu'une délétion en phase de cette région semble totalement inhiber ladite sécrétion. A l'état mature, la protéine FHA a un poids moléculaire de 220 kDa et présente au moins trois sites de liaison caractérisés (1 ) : - un site de liaison aux carbohydrates qui permet sa fixation aux cellules épithéliales ciliées, - un site de liaison à l'héparine et aux carbohydrates sulfatés impliqués dans l'attachement aux cellules épithéliales non ciliées et à la matrice extra-cellulaire ; - une séquence RGD qui permet l'attachement aux macrophages par l'intermédiaire de leurs intégrines. La FHA est une adhésine produite par différentes souches de Bordetella. On peut citer notamment les adhésines filamenteuses produites par Bordetella bronchiseptica et Bordetella parapertussis. Ces différentes FHA de Bordetella présentent un pourcentage d'homologie d'au moins 60 % avec la séquence de la FHA de Bordetella pertussis. En outre, la région N-terminale de la FHA présente de fortes similarités de séquences avec les domaines Nterminaux de S. marcescens ou de P. mirabilis (4). Dans l'ensemble de ce texte, toute hémagglutinine filamenteuse ayant au moins 60 % d'homologie des séquences avec la FHA de B. pertussis, ou tout polypeptide ayant une homologie de séquences d'au moins 60 % et de préférence 70 % avec la FHA de B. pertussis doit être considéré comme un équivalent fonctionnel de la FHA de B. pertussis. Les propriétés d'adhérence de la FHA à différents types cellulaires, comme les cellules épithéliales ciliées et non ciliées ou encore les monocytes/macrophages ont été mises à profit dans l'état de la technique afin de cibler la présentation d'un antigène d'intérêt vers ces cellules qui peuvent être responsables de la présentation de l'antigène au système immunitaire, le cas échéant après maturation. Plus particulièrement, les propriétés des hémagglutinines filamenteuses de Bordetella de se fixer aux cellules épithéliales non ciliées et à la matrice extra-cellulaire permettent d'envisager un ciblage vers les muqueuses. L'immunisation par voie muqueuse offre des avantages certains par rapport à une immunisation par voie parentérique. D'une part, une immunisation par voie muqueuse permet une stimulation simultanée de l'immunité muqueuse et de l'immunité systémique, ce qui n'est pas le cas de la voie systémique. D'autre part, la voie muqueuse est une voie d'administration qui provoque peu d'effets secondaires. Enfin, le développement de vaccins adaptés aux exigences des pays en voie de développement passera certainement par une administration par voie muqueuse. Cependant, la plupart des antigènes sont faiblement immunogènes quand ils sont administrés par voie muqueuse, probablement parce que leur interaction avec le système immunitaire muqueux est faible. Différentes stratégies ont été développées pour augmenter l'immunogénicité des antigènes administrés par cette voie, d'une part en favorisant leur accès à la muqueuse, d'autre part en utilisant des processus capables d'augmenter la réponse obtenue. L'accès à la muqueuse est favorisé par des antigènes de type particulaire dont l'interaction avec les tissus lymphoïdes est facilitée. Les formes particulaires les plus classiquement développées sont de plusieurs types : liposomes (7), microsphères (8), ISCOMs (9). Ce sont tous des structures globulaires synthétiques qui encapsulent l'antigène à administrer et dont la composition et leur mode de fabrication diffèrent selon leur nature (lipides pour les liposomes, polymères organiques pour les microsphères, mélange de lipides et de Quil A pour les ISCOMs). Une autre approche consiste à utiliser des microorganismes recombinants exprimant l'antigène d'intérêt. Ces microorganismes peuvent être vivants ou inactivés, et ils sont utilisés comme vecteur amenant l'antigène au niveau du système immunitaire sous-jacent des muqueuses. Ainsi, les Samonelles ont été utilisées comme vecteur vivant pour initier une immunisation par voie orale. Un vecteur vivant adapté à l'immunisation par le tractus respiratoire a été réalisé grâce au développement de souches recombinantes de Bordetella pertussis. Ces stratégies utilisant des vaccins vivants présentent en outre l'intérêt de permettre une exposition prolongée de l'antigène aux muqueuses de l'hôte lors de la colonisation et ne nécessitent donc pas l'emploi d'adjuvants. Le développement d'adjuvants efficaces par voie muqueuse s'est fait dans un premier temps en testant les adjuvants qui avaient prouvé leur efficacité par voie parentérique, comme les composés de la famille de muramyl-peptides. Les adjuvants muqueux les plus efficaces à ce jour restent les toxines bactériennes telles que la toxine cholérique, la toxine de E. coli, et pour un moindre développement la toxine pertussique. Un des problèmes majeurs de l'utilisation de ces toxines comme adjuvants muqueux est leur toxicité et de nombreux auteurs ont cherché à construire des mutants de ces toxines dépourvus d'activité toxique mais ayant conservé une activité adjuvante. Il existe cependant encore un réel besoin d'adjuvants muqueux efficaces et sans effets secondaires. Les inventeurs ont cherché dans une première approche à augmenter l'adhérence des liposomes aux muqueuses, et par cela même de limiter les quantités d'antigène nécessaires à une immunisation efficace, en couplant l'antigène des préparations liposomales à la FHA. L'addition de FHA à des liposomes contenant un antigène tel que la Sm 28 GST de Schistosoma mansoni permet d'augmenter la réponse immune obtenue par voie nasale contre cet antigène. L'explication immédiate de ce résultat était, compte tenu des propriétés d'adhérence de la FHA, que cette dernière permet une meilleure adhérence des liposomes aux surfaces mucosales et permet ainsi de faciliter leur accès aux cellules du système immunitaire. C'est ce concept qui a été validé dans le brevet WO 98/16553, où Mielcarek et al décrivent des constructions hybrides entre tout ou partie de la FHA et tout ou partie d'une protéine antigénique hétérologue vis-à-vis de la FHA. Les résultats expérimentaux qui y sont décrits conduisent à l'hypothèse que la réponse immune obtenue à l'égard de la protéine hétérologue résulte du fait que la FHA permet une meilleure adhésion des liposomes aux surfaces muqueuses C'est sur ces caractéristiques fonctionnelles que la demande de brevet supra décrit effectivement l'utilisation de la FHA comme molécule de ciblage en surface des différents vecteurs vaccinaux (liposomes, microsphères, etc. ) pour augmenter la réponse immune induite par l'utilisation de liposomes. Les protéines hybrides entre la FHA et la glutathion S-transférase de Schistosoma mansoni (Sm 28 GST) permettaient l'obtention d'une réponse immune vis-à-vis de la Sm 28 GST et protectrice vis-à-vis de l'infection par Schistosoma mansoni (12). Les auteurs ont précisé que l'ajout de FHA à des liposomes déjà fabriqués avec l'antigène d'intérêt seul a donné des résultats satisfaisants ; autrement dit, la FHA qui possède des séquences hydrophobes qui lui permettent de s'insérer facilement dans les liposomes et des séquences hydrophiles, présentant des propriétés d'adhésine de la FHA permet à la fois le ciblage des cellules immuno-compétentes, et des différents sites du tractus respiratoire. Les auteurs en déduisent qu'il est possible et suggéré d'utiliser d'autres vecteurs synthétiques du même type, par exemple des vecteurs portant, outre la FHA, plusieurs antigènes différents pour la réalisation de formulations vaccinales multi-antigéniques. L'ensemble de ce qui précède indique que la FHA était utilisée pour ses propriétés de ciblage. De manière surprenante, il a été montré selon la présente invention, que la protéine FHA, ou encore un polypeptide comprenant un fragment de la protéine FHA seule ou incluse dans une composition, est capable d'induire ou d'augmenter une réponse immunitaire à l'encontre d'un immunogène ou à l'encontre d'un antigène d'intérêt lorsque la FHA ou le fragment de la FHA est présentée sous une forme libre, c'est-à-dire non physiquement liée à l'antigène d'intérêt contre lequel la réponse immunitaire est recherchée. Cela n'exclut pas une liaison physique avec toute molécule ou structure soit non antigénique, soit pour laquelle une éventuelle réponse immunitaire est indépendante de la réponse recherchée, par exemple dans le cadre d'une vaccination. "Physiquement liée" signifie que la FHA ou le fragment de la FHA ne peut être administrée séparément de l'antigène d'intérêt. Cela inclut donc tout type de lien direct ou indirect avec un antigène d'intérêt. Par liaison directe, il est entendu que l'antigène d'intérêt et la FHA ou le fragment de la FHA sont liés par liaison covalente ou non covalente, mais sans intervention de substances, vecteurs, ou particules. Par liaison indirecte, il est au contraire entendu tout type d'association et/ou de liaison de la FHA ou du fragment de la FHA, de l'antigène d'intérêt avec une molécule, un vecteur, ou une structure quelconque ; lesdites molécule, vecteur ou structure peuvent comprendre, sans être limitatifs, des molécules transporteuses telle que la sérum albumine, des structures lipidiques tels des liposomes, des nanoparticules, des microsphères, des ISCOMs etc. Des liaisons indirectes peuvent également être réalisées par l'intermédiaire de liaisons covalentes, de liaisons électrostatiques ou des liaisons de type hydrophobe. Un moyen de différencier la notion de "physiquement liée" à celle de "forme libre" qui caractérise les adjuvants de l'invention est la capacité des différents éléments de l'association (antigène d'intérêt, FHA ou fragment de la FHA, le cas échéant vecteur ou véhicule pharmaceutique) d'être séparés par des méthodes usuelles de séparation, telles la chromatographie, ou l'électrophorèse. Il a ainsi été démontré selon l'invention, qu'une composition contenant un antigène d'intérêt et, sous forme non physiquement liée à ce dernier, la FHA ou un fragment de la protéine FHA était capable d'induire la production d'anticorps sériques ainsi que la production au niveau des muqueuses d'anticorps spécifiques de cet antigène ou immunogène. Dans la composition selon l'invention, la FHA ou le fragment de la FHA n'est pas physiquement liée au sens défini ci-dessus aux autres composés ou substances de la composition. Les compositions selon l'invention sont immunogènes vis à vis de l'antigène contenu dans celle-ci et non vis-à-vis de la FHA ; cet effet est observé tant sur l'immunité systémique que sur l'immunité mucosale. Le demandeur a aussi montré que, de manière surprenante, la protéine FHA ou encore un fragment ou un peptide dérivé de cette protéine possédait en tant que telle une activité adjuvante de la réponse immunitaire, lorsqu'elle est présentée sous une forme libre, c'est-à-dire non physiquement liée à l'antigène d'intérêt contre lequel la réponse immunitaire est recherchée. Par composé adjuvant au sens de la présente invention, on entendra un composé apte à induire ou à augmenter la réponse immunitaire spécifique vis-à-vis d'un antigène ou d'un immunogène, ladite réponse immunitaire consistant indifféremment en une réponse humorale et/ou cellulaire. Cette réponse imunitaire consiste généralement en une stimulation de la synthèse d'immunoglobulines spécifiques d'un antigène donné, en particulier des IgG, IgA, IgM. De façon encore plus surprenante, il a été démontré que cette activité adjuvante se manifestait avec efficacité lors des administrations des compositions par voie mucosale. Un premier objet de l'invention consiste donc en l'utilisation de la protéine FHA telle que définie plus haut ou d'un fragment de la protéine FHA tel que défini ci-dessous, sous forme libre, pour la préparation d'une composition adjuvante de la réponse immunitaire. Par "fragment de la protéine FHA" au sens de la présente invention, on entendra tout polypeptide comprenant une séquence d'au moins 50 acides aminés consécutifs de la protéine FHA telle que décrite dans (1 ). Avantageusement, un tel polypeptide comprendra de 50 à 1100 acides aminés consécutifs de la séquence d'acides aminés de la protéine FHA mature, avantageusement de 100 à 900, de préférence de 150 à 800, préférentiellement de 200 à 600 et de manière tout à fait préférée de 300 à 500 acides aminés consécutifs de la protéine FHA mature. On préférera ceux qui contiennent le site de liaison aux polysaccharides sulfatés contenus entre les acides aminés 442 et 863 de la FHA. Un exemple d'un tel fragment est le polypeptide appelé FHA44 et décrit dans la référence (10). Ce fragment fait partie de la partie N-terminale de la protéine FHA. Tout fragment d'une autre FHA, comme celle de B. bronchiseptica ou celle de B. parapertussis qui présente au moins 70 % d'homologie avec le fragment équivalent de B. pertussis peut également être utilisé pour la préparation d'une composition adjuvante. Le fait que les fragments de la FHA contenant le site de liaison à l'héparine et plus particulièrement le FHA44 présentent des propriétés adjuvantes équivalentes voire même supérieures à celles de la FHA entière est d'autant plus surprenant et inattendu que dans la FHA entière, le domaine N-terminal est partiellement masqué par le domaine C-terminal comme le montrent les expériences d'immunoréactivité croisée dans Geneviève Renauld-Mongénie et al. (6). Cette activité adjuvante apparaît bien comme une nouvelle propriété de la FHA ou fragments de celles-ci, notamment ceux qui contiennent le site de fixation aux polysaccharides. Selon un autre aspect, l'invention concerne une composition adjuvante de la réponse immunitaire comprenant la protéine FHA ou un fragment de celle-ci, sous forme libre. Une telle composition adjuvante pourra être administrée à l'homme ou à l'animal simultanément ou séquentiellement à l'antigène d'intérêt à l'encontre duquel une réponse immunitaire est recherchée. Avantageusement, la composition adjuvante selon l'invention sera administrée simultanément à l'antigène d'intérêt. Elle peut également faire l'objet de plusieurs administrations, seule ou en association avec l'antigène ; en particulier, elle peut faire l'objet d'un traitement de rappel consécutif à une immunisation. Cette activité adjuvante se manifeste non seulement lorsque l'adjuvant et l'antigène sont administrés conjointement dans une même composition, mais également quand l'antigène et l'adjuvant sont administrés de façon séparée dans le temps, soit par la même voie d'administration, soit par deux voies différentes. A titre d'exemple, l'antigène peut être administré par voie systémique et l'adjuvant par voie mucosale ou orale. De la même façon, le nombre d'administrations peut différer pour l'antigène et l'adjuvant. Selon l'antigène et la réponse immunitaire choisis, l'adjuvant peut être administré une seule fois et l'antigène plusieurs fois, ou l'inverse. L'invention est également relative à une composition immunogène, caractérisée en ce qu'elle comprend une composition adjuvante décrite ci-dessus, en association avec une molécule immunogène ou avec un antigène, la molécule immunogène ou l'antigène n'étant pas physiquement liée avec la protéine FHA ou le fragment de la protéine FHA présente dans la composition adjuvante. Par antigène au sens de la présente invention, on entendra toute molécule ou structure naturelle ou synthétique, quelle que soit sa nature (protéique, saccharidique ou encore lipidique etc. ) reconnue par les cellules du système immunitaire et capable d'activer celles-ci de manière à induire une réponse immunitaire spécifique de cet antigène. On entend par immunogène au sens de l'invention toute composition qui induit une réponse immunitaire forte, particulièrement dans un contexte d'une protection immunitaire contre des organismes pathogènes porteurs dudit antigène. Il a ainsi été montré selon la présente invention, que la protéine FHA ou un fragment de la protéine FHA se comportait en tant que composé adjuvant capable d'initier ou d'accroître la réponse immunitaire à l'encontre de différents antigènes ou immunogènes de structures diverses, reconnues différemment par les cellules du système immunitaire. L'objectif de l'addition d'un adjuvant à un antigène dans une composition est de provoquer ou stimuler la réponse immunitaire tant dans ses phases primaires (production d'IgM) que dans ses phases secondaires à savoir la production des IgG au niveau de l'immunité cellulaire systémique, ou des IgA au niveau de l'immunité mucosale. Celle-ci est particulièrement importante dans le cas de développement d'une immunité anti-infectieuse. En effet, l'adhérence des micro-organismes aux membranes des cellules épithéliales des muqueuses est la première étape de l'infection virale et de la colonisation bactérienne. Les anticorps de type IgA peuvent empêcher cette adhérence en recouvrant le micro-organisme (coating). Ils offrent ainsi une protection au niveau des sécrétions externes comme les larmes, la salive ou les sécrétions nasales ainsi qu'au niveau du mucus intestinal et pulmonaire. Il est donc facile de concevoir que si la FHA ou le fragment de la FHA selon l'invention produisent une stimulation de la réponse IgA, l'impact sur la mise au point de compositions immunogènes ou de vaccins est important. Ainsi, une composition immunogène comprenant l'adjuvant selon l'invention et un immunogène ou un antigène est caractérisée en ce que le rapport en poids de l'adjuvant et de l'immunogène est compris entre 10-4 et 104, de préférence entre 0,03 et 300 et de manière préférée entre 0,4 et 5. Comme il a été dit plus haut, et démontré ci-après, l'adjuvant est administrable séparément de l'antigène dans le temps ou selon différentes voies d'administration, ou associés dans une composition immunogène. Dans l'un et l'autre cas, l'antigène peut être d'origine bactérienne, virale ou parasitaire. Il peut également s'agir d'un antigène spécifique de cellules cancéreuses, tel l'antigène de carcinome embryonnaire (ACE). Quand l'antigène est d'origine bactérienne, il peut s'agir notamment d'antigènes de Bordetella, de Shigella, de Neisseria, de Borrelia, des toxines ou toxoïdes diphtériques, tétaniques ou cholériques. Quand il est d'origine parasitaire, il peut par exemple être un . antigène de Plasmodium, des Schistosoma ou de Toxoplasma. Un autre objet de l'invention consiste en une composition vaccinale, caractérisée en ce qu'elle comprend une composition adjuvante telle que décrite ci-dessus, en association avec un véhicule pharmaceutiquement compatible. La préparation de compositions vaccinales contenant un polypeptide en tant que molécule immunogène ou antigénique est bien connue de l'homme du métier et est en particulier illustrée dans les brevets US N 4,608,251; 4,601,903 ; 4,599,231; 4,599,230; 4,596,792 et 4,578,770. De telles compositions vaccinales sont préparées sous la forme de solutions liquides ou de suspensions injectables ou encore sous une forme solide, par exemple lyophilisée, adaptée à la mise en solution préalablement à l'injection. La FHA ou la partie de la FHA utilisée comme adjuvant ainsi que l'antigène ou l'immunogène seront en général mélangés à des excipients pharmaceutiquement compatibles, tels que de l'eau, un tampon salin, du dextrose, du glycérol, de l'éthanol, ou des mélanges de ces derniers. Une composition vaccinale selon l'invention peut également contenir de faibles quantités de substances auxiliaires telles que des agents mouillants ou émulsifiants, ou encore des agents tampons. Les compositions vaccinales selon l'invention sont formulées de telle manière à les adapter à une administration par voie .nasale, par voie orale, par voie sous-cutanée ou par voie intraveineuse, intradermique, intramusculaire, vaginale, rectale, oculaire ou auriculaire. Le choix des substances auxiliaires sera guidé par le mode d'administration choisi. Un mode d'administration préféré sera l'administration nasale ou orale. La FHA ou la partie de la FHA et l'antigène d'intérêt peuvent être formulés, au sein d'une composition vaccinale selon l'invention, sous une forme neutre ou saline. Des sels pharmaceutiquement compatibles comprennent des sels d'addition acide (formés avec les groupes amino libres du peptide) ou encore ceux formés avec des acides inorganiques tels que par exemple les acides chlorhydrique et phosphorique ou encore ceux formés avec des acides organiques tels que l'acide acétique, oxalique, tartrique et mandélique. Des sels formés avec les groupes carboxy libres peuvent également être dérivés de bases inorganiques telles que par exemple des hydroxydes de sodium, potassium, ammonium, calcium ou ferrique, ou encore ceux formés avec des bases organiques telles que l'isopropylamine, la triméthylamine, le 2-éthylaminoéthanol, l'histidine, ou encore la procaïne. Une composition vaccinale selon l'invention comprend une quantité d'adjuvant et d'antigène efficace du point de vue immunogène et/ou thérapeutique. La quantité d'adjuvant et d'antigène dépendra de l'individu à traiter, c'est-à-dire de la capacité du système immunitaire de l'individu considéré à développer une réponse immunitaire, ainsi que du degré de protection requis. Avantageusement, une composition vaccinale selon l'invention comprendra une dose de FHA ou d'une partie de la protéine FHA comprise entre 0,1 et 1000 g, avantageusement entre 10 et 300 g, et de manière tout à fait préférée entre 20 et 150 g, La quantité d'immunogène ou d'antigène incluse dans une composition vaccinale selon l'invention dépendra à la fois de l'individu à traiter, du type et de la nature de l'antigène d'intérêt. A titre illustratif, une composition vaccinale selon l'invention comprendra de 0,1 à 1000 g d'antigène ou d'immunogène, de préférence de 1 à 300 g et de manière tout à fait préférée de 10 à 50 g d'antigène ou d'immunogène. De manière préférée, une composition vaccinale selon l'invention sera administrée une première fois, puis un rappel sera réalisé quelques mois après l'administration initiale. La quantité de FHA, ou de partie de la protéine FHA, et d'antigène inclus dans une composition vaccinale selon l'invention peuvent être adaptées pour l'obtention d'une bonne réponse immunitaire, par exemple en suivant la prolifération in vitro de lymphocytes du sang périphérique (PBL) cultivés en présence de l'antigène ou de l'immunogène, et tout particulièrement en mesurant les niveaux de cytokines sécrétés par les lymphocytes immuns, ou en évaluant les titres en anticorps de type sérique et/ou mucosal produits. De tels tests peuvent être réalisés en utilisant des marqueurs classiques tels que des marqueurs isotopiques, ou encore des marqueurs non-radioactifs tels que des enzymes ou des molécules fluorescentes, De telles techniques sont bien connues de l'homme du métier et sont notamment décrites dans les brevets US N 3,791,932; 4,174,384 et 3,949,064. Les titres en anticorps de type sérique et/ou mucosal peuvent être mesurés comme indiqué dans les exemples 1 à 3 ci-après. Selon un mode particulier de réalisation des compositions vaccinales selon .l'invention, de telles compositions comprendront, outre une quantité adjuvante efficace d'une protéine FHA ou d'une partie de la protéine FHA, une quantité immunologiquement efficace d'au moins deux antigènes ou immunogènes, par exemple de trois à vingt antigènes ou immunogènes différents, et de manière préférée de trois à dix antigènes ou immunogènes différents. La présente invention porte enfin sur une méthode de vaccination ou de stimulation de l'immunité cellulaire consistant à utiliser comme adjuvant de vaccination et/ou de stimulation de l'immunité la FHA ou un fragment de celle-ci tels que définis plus haut. Un tel adjuvant est administré dans une composition sous forme libre c'est-à-dire non physiquement liée à l'antigène ou aux antigènes pour lesquels l'on souhaite stimuler une réponse immunitaire. L'antigène ou les antigènes contre lesquels on souhaite obtenir une réponse sont administrés seuls, ou en association avec l'adjuvant, sans toutefois être liés physiquement à ce dernier. Ces compositions peuvent contenir en outre des éléments de formulation adaptés à l'administration choisie. Dans cette méthode selon l'invention, l'adjuvant, le ou les antigènes peuvent être également être administrés de façon simultanée mais dans des compositions différentes, ou séquentiellement dans le temps. En particulier, la composition selon l'invention peut être administrée ultérieurement à une première vaccination ou un premier traitement, afin de réactiver la réponse immunitaire contre l'antigène ou les antigènes. Selon un autre aspect de l'invention, la FHA ou un fragment de la FHA est utilisable comme principe actif dans la préparation d'une composition immunostimulante. Par immunostimulant(e), on entend la propriété de stimuler les immunoglobulines totales, notamment les IgG ou les IgA totales. Cette propriété se différencie de celle d'adjuvant pour laquelle seules les immunoglobulines spécifiques d'un antigène donné sont stimulées. L'invention porte ainsi sur une composition imunostimulante contenant comme principe actif la FHA ou un fragment de celle-ci et un véhicule pharmaceutique compatible avec une administration à l'homme ou à l'animal. Les fragments préférés seront ceux situés dans la partie Nterminale de la molécule compris entre les acides aminés 1 et 1097 et la séquence ID n 1, ou les fragments obtenus par substitution. La composition immunostimulant selon l'invention peut être avantageusement utilisée pour renforcer les défenses immunitaires d'un organisme dans toute situation pathologique ou prophylactique où celle-ci est nécessaire. Le véhicule pharmaceutique est choisi en fonction du mode d'administration choisi. Outre les voies systémiques, la FHA ou les fragments de celles-ci tels que définis plus haut se prêtent particulièrement à une administration par voie orale ou par voie mucosale, et peuvent donc être associés aux différents véhicules ou excipients adaptés à ces voies d'administration. L'invention porte enfin sur un médicament pour l'immunothérapie comprenant la FHA ou un fragment de celle-ci. Les résultats décrits dans la partie expérimentale ci-après ont été obtenus par administration par voie intra-nasale de souris avec un adjuvant ou avec un immunostimulant selon l'invention. Lorsqu'une composition immunogène comprenant sous forme non liée la FHA ou un fragment de celleci est un antigène, les trois antigènes utilisés dans des conditions expérimentales décrites ci-après sont la Sm28 GST décrite ci-avant, la glutathion S-transférase de Schistosoma haematobium (Sh28 GST), et l'hémocyanine de Megathura Crenulata. Les inventeurs ont ainsi mis en évidence que l'administration intranasale de l'antigène avec la FHA, ou un fragment dérivé de la FHA tel le FHA44 constitué de la séquence d'acides aminés 1 à 1097 de la FHA, présentait les propriétés suivantes : a) dans des conditions où l'antigène seul n'est pas capable d'induire une réponse sérique significative, la présence de FHA ou d'un fragment de celle-ci a permis d'induire l'induction d'une réponse immune spécifique chez 7 souris sur 9. De plus, l'induction d'une réponse immune dirigée contre l'antigène n'est pas corrélée avec une réponse dirigée contre la FHA. b) de manière surprenante, la protéine tronquée FHA44 ayant un poids moléculaire presque trois fois inférieur à celui de la FHA entière induit un niveau de production d'anticorps sériques en moyenne trois fois supérieur à la réponse observée en présence de la FHA entière. La partie N-terminale de la FHA conserve donc les propriétés adjuvantes de la molécule entière. c) le fragment N-terminal de la FHA (FHA44) a une activité adjuvante pour les IgA sérique et pour les IgA spécifiques dans les liquides de lavage broncho-alvéolaires (BALF). L'analyse des anticorps présents dans les liquides de lavage broncho-alvéolaires (BALF) indique de manière surprenante que la FHA entière a un effet adjuvant sur la production d'IgA non spécifiques de l'antigène au niveau broncho-alvéolaire alors qu'il n'y a pas d'effets significatifs sur la quantité totale d'IgG. Il apparaît donc que les fragments de la FHA, plus particulièrement ceux situés dans la partie N-terminale et qui sont normalement peu accessibles dans la FHA entière ont un effet important comme adjuvants et immunostimulants pour la stimulation de la réponse immunitaire de type mucosale. Ce type de réponse est apte à protéger l'organisme hôte contre des infections parasitaires ou bactériennes par les tissus muqueux tels le tractus respiratoire. d) les résultats exposés ci-après indiquent que cette activité adjuvante de la FHA et de la FHA44 s'expriment au moins vis-à-vis de trois antigènes différents et dans deux souches de souris différentes. En outre, cette activité adjuvante persiste par voie systémique : des souris immunisées par voie sous-cutanée par l'antigène seul ou l'antigène et l'adjuvant de l'invention deux fois à deux semaines d'intervalle répondent mieux dans le cas où l'adjuvant est présent. e) si des souris préalablement vaccinées, par exemple par le DTCoq, sont immunisés par voie nasale deux mois plus tard avec un antigène et l'adjuvant de l'invention deux fois à deux semaines d'intervalle, il apparaît que la vaccination Dtcoq qui provoque l'apparition d'anticorps anti-FHA, n'a pas empêché l'induction d'une réponse dirigée contre l'antigène. f) la FHA44 induit des taux massifs d'IgA et d'IgG totaux dans les sécrétions, qui ne peuvent être uniquement corrélés à l'apparition des anticorps spécifiques, ce qui est l'indice d'un effet immunostimulant. Les résultats exposés plus en détails ci-après montrent à l'évidence que l'adjuvanticité de la FHA libre ou des fragments de la FHA libre est une activité intrinsèque de ces molécules, qui est indépendante d'une liaison physique à l'antigène au sens défini ci-avant ; autrement dit, l'activité adjuvante de ces molécules n'est pas liée à une fonction de vectorisation de l'antigène par la FHA ou les fragments de celle-ci. En d'autres termes, la FHA ou le fragment de la FHA peuvent constituer des adjuvants dans des compositions immunogènes ou dans des vaccins et ne possèdent aucune action de ciblage de l'antigène vers les cellules immuno-compétentes. La FHA, et encore plus particulièrement des polypeptides dérivés de la FHA, tels que la FHA44, constituent donc de nouveaux adjuvants efficaces par voie mucosale représentant une alternative avantageuse aux adjuvants de l'état de la technique, qu'il s'agisse d'adjuvants sous forme particulaire tels que les liposomes, les microsphères, les ISCOMs qui sont tous des structures globulaires synthétiques encapsulant l'antigène administré, ou encore aux micro-organismes recombinants exprimant un antigène d'intérêt. En outre, la FHA ou un polypeptide dérivé de la FHA se caractérise par une totale innocuité, au contraire des adjuvants muqueux les plus efficaces actuellement connus que sont les toxines bactériennes, telles que la toxine cholérique, la toxine de E. coli et la toxine de Bordetella pertussis. L'identification selon l'invention de la FHA ou d'une partie de la protéine FHA en tant qu'adjuvant de la réponse immunitaire, notamment de la réponse immunitaire mucosale, vient donc combler un réel besoin dans l'état de la technique, d'un adjuvant muqueux efficace et dépourvu de toute toxicité. De plus, l'activité adjuvante de la FHA et de la FHA44 n'est pas restreinte ou dépendante d'un haplotype donné d'antigène d'histocompatibilité. Au contraire, l'adjuvanticité de ces protéines est observée quel que soit l'haplotype de MHC, comme le démontrent les expériences réalisées sur des souris génétiquement hétérogènes, comme les souris " Outbred ", telles que les souris OF1. Une analyse des différents isotypes d'anticorps sériques produits en réponse à l'immunisation contre ces trois antigènes en présence de FHA ou de FHA44 a montré que le rapport quantitatif entre les différents isotypes d'IgG n'était pas significativement différent selon que l'antigène était administré simultanément à la FHA ou à la FHA44. Par ailleurs, l'analyse des isotypes d'anticorps sériques montre une prédominance d'isotypes IgG1 et IgG2a en réponse à l'administration de la Sm28GST ou de la KLH en présence de FHA ou de FHA44, alors qu'une prédominance anticorps sériques d'isotypes IgGI est observée en réponse à l'antigène Sh28GST en présence de FHA ou de FHA44, indiquant une polarisation de la réponse immunitaire vers le type Th2. Ces résultats indiquent que le profil isotypique des anticorps spécifiques produits dépend essentiellement de l'antigène utilisé, la FHA ou la FHA44 n'induisant pas, par elle-même, de polarisation. L'ensemble des résultats obtenus et exposés en détail dans la partie expérimentale démontre que la FHA ou une partie de la protéine FHA peut être utilisée comme adjuvant en tant que tel, quel que soit l'haplotype d'histocompatibilité de l'individu à immuniser, et quelle que soit la nature de l'antigène ou de l'immunogène à l'encontre duquel une réponse immunitaire de type mucosal et/ou systémique est recherchée. Un tel polypeptide pourra être obtenu par recombinaison génétique conformément à l'enseignement de Brown et al. (2), de Relman et al, (3) ou encore de Delisse-Gathoye (4). Dans un mode particulier de réalisation de la protéine FHA ou d'une partie de la protéine FHA selon l'invention, un polynucléotide codant la FHA ou la partie de FHA désirée est inséré dans un vecteur d'expression comprenant au moins un promoteur et un terminateur nécessaires à l'expression du polynucléotide dans une cellule hôte appropriée. Un tel vecteur d'expression comprendra en outre avantageusement au moins une origine de réplication fonctionnelle dans la cellule hôte dans laquelle l'expression de la protéine FHA ou d'une partie de la protéine FHA recombinante est recherchée, ainsi qu'au moins un marqueur de sélection tel qu'un marqueur de résistance à un antibiotique, par exemple la néomycine, la tétracycline, la rifampycine ou l'ampicilline . Une cellule hôte appropriée peut être indifféremment d'origine bactérienne ou eucaryotique. Pour construire de tels vecteurs d'expression et transformer ou transfecter des cellules hôtes appropriées, l'homme du métier pourra se référer avantageusement à l'ouvrage de Sambrook et al. (1989), Molecular Cloning: A Laboratory Manual. 2eme Edi. Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, New York. La purification de la protéine FHA recombinante ou d'une partie de la FHA recombinante peut être réalisée par des techniques bien connue de l'homme du métier. La protéine FHA ou la partie de protéine FHA d'intérêt peut également être préparée par des procédés classiques de synthèse chimique, indifféremment en solution homogène ou en phase solide. A titre illustratif de tels procédés de synthèse chimique polypeptidique, l'homme du métier pourra se référer à l'enseignement de Houbenweyl (1974) , In Methode der Organischen Chemie, E. Wunsh Ed., Vol.15-I et 15-11, Thieme, Stuttgart ou encore la technique de Merrifield (1965a; 1965b); Merrifield RB, (1965a), Nature, 207 (996): 522-523,Merrifield (1965b), Science, 150(693):178-185. La protéine FHA ou la partie de la protéine FHA, telles que précédemment définies peuvent également être utilisées pour la préparation d'une composition adjuvante d'une réponse immunitaire lorsque certains acides aminés sont substitués par substitution conservative. Par substitution conservative, on entend la substitution d'un acide aminé par un autre n'ayant aucune conséquence ou des conséquences mineures sur la structure tertiaire de la séquence et sur les caractères d'hydrophobicité de la même séquence. A titre d'exemple, la substitution d'une guanine par une alanine ou vice-versa est qualifiée de substitution conservative. De la même façon, la valine, la leucine, l'isoleucine sont des acides aminés qui peuvent être substitués mutuellement de façon conservative. D'autres groupes de substitution conservative peuvent être, sans être limitatifs, (D,E), (K, R), (N,Q), (F,W, Y). Dans un mode particulier de réalisation d'un polypeptide contenant tout ou partie de la protéine FHA mature, ledit polypeptide pourra avantageusement être rendu résistant à la protéolyse, par exemple par remplacement de la liaison peptidique-CONH- par une liaison réduite CH2NH-, une liaison rétro-inverso -NHCO-, une liaison méthylène-oxy -CH20-, une liaison thiométhylène -SH2-S-, une liaison carba-CH2CH2-, une liaison cétométhylène -CO-CH2-, une liaison hydroxyéthylène -CHOH-CH2-, une liaison -N-N, une liaison E-alcène ou encore une liaison-CH=CH-. Selon un autre mode de réalisation , le polypeptide comprenant tout ou partie de la séquence d'acides aminés de la protéine FHA, un ou plusieurs résidus d'acides aminés de la forme L pourront être remplacés par l'acide aminé correspondant sous la forme D ; résidu acide glutamique pourra être remplacé par un résidu d'acide pyro-glutamique. La synthèse de peptides contenant au moins un résidu d'acides aminés sous la forme D est par exemple décrite par Koch Y., (14). Selon un autre aspect, la composition immunogène selon l'invention est caractérisée en ce que l'antigène d'intérêt est d'origine bactérienne, virale ou parasitaire, animale, végétale ou humaine. La présente invention est en outre illustrée, sans pour autant être limitée, par les figures et les exemples suivants : La figure 1 illustre les titres d'anticorps sériques spécifiques de la protéine Sm28GST ou de la FHA, après immunisation de souris contre la protéine Sm28GST en présence ou en l'absence de FHA ou de FHA44. La figure 2 représente les DO observée pour une dilution de % en anticorps isotypes IgA et IgG dans les fluides de lavage bronchoalvéolaire de souris immunisées contre la Sm28GST en présence ou en absence de FHA ou FHA44. La figure 3 représente les DO observée pour une dilution de 1/80 en anticorps totaux d'isotypes IgA et IgG dans les fluides de lavage bronchoalvéolaires de souris immunisées avec la protéine Sm28GST en présence ou en absence de FHA ou de FHA44. La figure 4 représente les DO observée pour une dilution de 1/40 en anticorps sériques d'isotypes IgA spécifiques de la Sm28GST dans des souris immunisées en présence ou en absence de FHA ou de FHA44. La figure 5 illustre le profil isotypique des anticorps sériques spécifiques de la Sm28GST chez des souris immunisées contre cette protéine en présence ou en absence de FHA ou FHA44. La figure 6 illustre le profil isotypique des anticorps sériques spécifiques de la Sh28GST chez des souris immunisées contre cette protéine ou en présence ou en absence de FHA ou de FHA44. La figure 7 illustre le profil isotypique d'anticorps sériques spécifiques de la KLH chez les souris immunisées avec cet antigène en présence ou en absence de FHA ou de FHA44. La figure 8 illustre une élution sélective de la FHA et de la protéine Sm28GST à partir d'un mélange de l'adjuvant et de cet antigène. La figure 9 illustre la réponse spécifique anti Sm28GST après vaccination avec le Dtcoq. La figure 10 illustre les titres en anticorps obtenus après administration par voie sous-cutanée de l'antigène Sm28GST (groupe A), Sm28GST avec le FHA (groupe C) et Sm28GST avec la FHA44 (groupe B) après immunisation deux fois à deux semaines d'intervalle. L'analyse de la réponse sérique a été observée une semaine plus tard. La figure 11représente l'effet adjuvant et immuno-stimulant de la FHA, de la FHA44, après administration par voie orale à trois groupes de souris ayant reçu à deux semaines d'intervalle : - 30 g de KLH, - 30 g de KLH + 5 g de FHA 44, - 30 g de KLH + 5 g de FHA entière. La figure 11a représente la DO à J21 observées en IgG1, IgG2a et IgG2b spécifiques de la KLH dans les sérums pour les dilutions respectives de 1/800, 1/100 et 1/100. La figure 11 b représente la DO à J21 observées en IgG totaux non spécifiques dans les sérums pour une dilution de 1/10000. La figure 11 c représente la DO à J21 observées en IgA, totaux non spécifiques dans les liquides de lavages intestinaux pour une dilution de 1/800. EXEMPLES : A. MATERIELS ET METHODES # Antigènes La glutathion S-transférase de Schistosoma mansoni (Sm28GST) a été fournie par la Société Transgène (Strasbourg, France). La glutathion Stransférase de Schistosoma haematobium (Sh28GST) a été produite par la Société Pharos (Seraing, Belgique). La FHA a été purifiée par chromatographie sur une colonne d'héparine-Sépharose, comme décrit précédemment (Menozzi et al. FEMS, 1991) à partir des surnageants de B. pertussis BPRA [Bordetella pertussis RA], une souche dépourvue du gène de la toxine pertussique. La FHA44 a été purifiée également par chromatographie sur une colonne d'héparine-Sépharose à partir de surnageants de culture de B. pertussis BPGR4 transformée par un plasmide portant la partie 5' du gène de la FHA et codant pour le domaine N-terminal de la protéine mature RENAULD-MONGENIE, G,, J. CORNETTE, N. MIELCAREK, F.D. MENOZZI, and C. LOCHT. (1996). Distinct roles of the N-terminal and C-terminal precursor domains in the biogenesis of the Bordetella pertussis filamentous hemagglutinin. J. Bacteriol. 178: 1053-1060. Les préparations de FHA et de FHA44 ont été éluées sur une colonne d'Acticlean [Stérogène] pour éliminer les contaminants endotoxiniques. L'activité endotoxinique finale a ensuite été évaluée par un test Limulus (Biowhittaker). L'hémocyanine de Megathura crenulata (KLH) a été achetée chez Calbiochem. # Immunisations Des souris OF1 de 6 semaines (Iffa Credo, L'Arbresle, France) ont été anesthésiées par voie intrapéritonéale avec 200 fil de pentobarbital sodique (5%; Sanofi, Libourne, France) pour 10 g de poids corporel. Les souris ont été immunisées par voie nasale avec 40 (il de solution saline apyrogène dans laquelle ont été diluées les différentes préparations antigéniques. Les souris ont été instillées deux fois à deux semaines d'intervalle et sacrifiées une semaine plus tard pour pouvoir effectuer les prélèvements sanguins et les lavages broncho-alvéolaires. Les doses d'antigène utilisées sont décrites dans les exemples. # Recueil et analyse des échantillons. Les souris ont été saignées à la queue (ou par ponction cardiaque le jour du sacrifice) et les sérums ont été conservés à -20 C jusqu'au jour de l'analyse. Les liquides de lavages bronchoalvéolaires (BALF) ont été collectés par cannulation de la trachée et résultent d'un lavage des poumons avec 0,5 ml de PBS. Après centrifugation de 10 mn à 4000g pour éliminer les cellules et les débris tissulaires, les BALF ont ensuite été congelés à 20 C après adjonction de fluorure de phényl-méthyl-sulfonyle à la concentration finale de 1 mM . Les taux d'anticorps dans le sérum et dans les BALF ont été déterminés par ELISA. Les microplaques (Maxisorp, Nunc) ont été incubées pendant toute la nuit à 4 C avec 50 0/puits d'une solution de FHA (5 g/ml) ou de Sm28GST (10 g/ml), ou de Sh28GST (10 g/ml) ou de KLH (5 g/ml). Les sérums dilués dans du PBS contenant 1%o de Tween-20 et 5%o de gélatine (PBS/Tw/g), ont alors été ajoutés dans les plaques après 4 rinçages avec du PBS contenant 1%o de Tween-20 (PBS/Tw). Après incubation pendant une nuit à 4 C, les plaques ont été rincées 4 fois avec du PBS/Tw puis incubées avec différentes dilutions d'anticorps (dans du PBS/Tw/g; 1 h30 à 37 C) conjugués à la peroxydase (anti-souris IgG (H+L) ou IgG1, ou IgG2a, ou IgG2b ou IgG3; Southern Biotechnologies Associates, Birmingham, USA). Après 4 rinçages avec du PBS/Tw, les plaques ont été révélées avec une solution à 1 mg/ml d'ABTS (Sigma) dans du tampon citrate (0,1 M pH 4) et contenant 0,03% d'H202. La densité optique a été mesurée à 405 nm (Titertek Multiscan MCC/340) au bout de 30 minutes. Les anticorps d'isotype IgA ont été détectés après incubation avec un anticorps anti-IgA de souris biotinylé (Zymed) dilué dans du PBS/Tw/g pendant 1 h30 à 37 C. Après 4 rinçages avec du PBS/Tw, les plaques ont été incubées pendant 30 minutes à 37 C en présence de streptavidine couplée à la peroxydase (Amersham) diluée dans du PBS/Tw/g. Après 6 rinçages avec du PBS/Tw, les plaques ont été révélées avec une solution d'OPD (1 mg/ml; Sigma) pendant 30 minutes à 37 C. La réaction a été stoppée avec une solution d'HCI 2N et la densité optique a été mesurée à 492 nm. La droite de régression donnant le logarithme de la densité optique observée en fonction de l'inverse de la dilution a été calculée. Les titres correspondent, par extrapolation de cette droite, à l'inverse de la dilution pour laquelle la valeur de la densité optique est égale à trois fois la valeur de la densité optique obtenue avec du PBS. La détection des anticorps dans les BALF s'effectue de la même façon avec quelques modifications. Après l'adsorption de l'antigène, les plaques sont saturées avec une solution de gélatine (5%o en PBS) pendant 30 minutes à température ambiante. Les BALF et les anticorps sont ensuite dilués avec du PBS/Tw. Les concentrations d'IgA totales et d'IgG totales dans ces BALF ont été évaluées sur des microplaques dans lesquelles ont été préalablement adsorbés des anticorps anti-souris IgA ou IgG non marqués et comparaison avec une gamme étalon réalisée avec de l'IgA ou de l'IgG myélomateux de souris purifié (Sigma). # Test de Liaison Des billes de Sépharose couplées à l'héparine (CL-6B; Pharmacia) ont été resuspendues dans du PBS et tassées dans une colonne (diamètre 1 cm pour 1,3 ml de gel). Après rinçage de cette colonne, une solution contenant de la Sm28GST (200 g) et de la FHA (40 g) a été déposée. Après rinçage, des concentrations croissantes de NaCI ont été déposées sur cette colonne (de 0,1 M NaCI jusqu'à 1M). L'analyse des échantillons recueillis après passage sur la colonne puis élution, a été effectuée, après précipitation au TCA, par électrophorèse sur gel d'acrylamide. EXEMPLE 1 Etude de l'activité adjuvante de la FHA vis-à-vis d'une réponse immunitaire à l'encontre de la protéine Sm28GST de Schistosoma mansoni. Des souris OF1 (" Outbred ") ont reçu une administration par instillation nasale avec 50g de Sm28GST, en présence ou non de 5 g de FHA ou de FHA44 dilués dans le même échantillon, deux fois à deux semaines d'intervalle. La production d'anticorps sériques d'isotype IgG sérique spécifiques de la Sm28GST ou de la FHA une semaine après la deuxième instillation nasale a été analysée et les résultats sont reportés dans la figure 1. Le titre en anticorps IgG sériques dirigés contre la Sm28 (barres grisées) et la protéine FHA (barres noires) a été mesuré dans le sérum de souris ayant reçu respectivement la protéine Sm28GST (figure 1A), un mélange Sm28GST + FHA (figure 1B) ou un mélange Sm28GST + FHA44 (figure 1 C). Ces résultats indiquent que la protéine Sm28GST seule n'est pas capable d'induire une réponse en anticorps sérique significative. En revanche, la présence de FHA a permis l'induction d'une réponse immunitaire spécifique contre la Sm28GST chez sept souris sur neuf. En outre, l'analyse de la réponse dirigée contre la FHA chez ces animaux montre que l'induction d'une réponse immune dirigée contre la Sm28GST n'est pas nécessairement corrélée avec une réponse spécifique dirigée contre la FHA. Les résultats de la figure 1 indiquent également qu'une instillation nasale des souris avec un mélange contenant 50 g de Sm28GST et 5 g de FHA44 permet la détection, une semaine après la deuxième instillation nasale, d'anticorps sériques d'isotypes IgG spécifiques de la Sm28GST chez huit souris sur dix, et que les titres d'anticorps obtenus sont en moyenne trois fois supérieurs à ceux observés après immunisation à l'aide d'un mélange Sm28GST et FHA entière. La partie N-terminale de la FHA conserve donc les propriétés adjuvantes de la FHA entière, bien que le site de liaison aux carbohydrates et le site RGD soient absents dans la protéine tronquée. EXEMPLE 2 : Etude de l'activité adjuvante de la FHA et de la FHA44 sur la Production d'anticorps par les cellules immunitaires du tractus respiratoire. Des souris OF1 ont été immunisées selon le protocole décrit à l'exemple 1 et la production d'anticorps d'isotypes IgG et IgA totaux ou spécifiques de la protéine Sm28GST contenus dans les liquides de lavage bronchoalvéolaires ont été analysés. Les résultats sont reportés dans les figures 2 et 3. Les titres en anticorps spécifiques de la protéine Sm28GST (figure 2) ou en anticorps totaux (figure 3) dans les liquides de lavage bronchoalvéolaires d'isotype IgA (A, B, C) ou IgG (D, E, F) ont été mesurés chez des souris, 21 jours après la seconde instillation nasale de Sm28GST (C, F), de Sm28GST + FHA (A, D) ou de Sm28GST + FHA44 (B,E). Les résultats de la figure 2 indiquent que la présence de la FHA lors de l'immunisation n'a pas induit une production détectable d'anticorps spécifiques de la Sm28GST dans les liquides de lavage bronchoalvéolaires, alors que la FHA44 a induit une production d'anticorps spécifique de la Sm28GST importante, à la fois d'isotypes IgA et IgG. Les résultats de la figure 3 montrent que l'on peut observer un effet notable de la FHA sur la quantité d'anticorps totaux d'isotype IgA contenus dans les liquides de lavage bronchoalvéolaires, alors qu'il ne semble pas y avoir d'effet significatif sur la quantité totale d'anticorps d'isotype IgG. En revanche, la FHA44 induit des taux massifs d'anticorps d'isotypes IgA et IgG totaux dans les sécrétions bronchoalvéolaires qui ne peuvent être uniquement corrélés à l'apparition des anticorps spécifiques. Les titres en anticorps sériques spécifiques de la protéine Sm28GST d'isotope IgA sérique, ont été mesurés 21 jours après la seconde instillation nasale de souris avec la protéine Sm28GST (figure 4C), un mélange Sm28GST + FHA (figure 4A) ou Sm28GST + FHA44 (figure 4B). La réponse immunitaire de type mucosal observée doit être corrélée avec le niveau de production d'anticorps sériques d'isotypes IgA : en présence de FHA44, une production d'anticorps IgA anti-Sm28GST peut être mise en évidence, ce qui n'est pas le cas lorsque la FHA est utilisée comme adjuvant (voir les résultats de la figure 4). EXEMPLE 3 : Etude de l'activité adjuvante de la FHA et de la FHA44 co-administrée avec trois antigènes différents et dans deux souches de souris différentes. Les protocoles d'immunisation sont identiques à ceux des exemples 1 et 2, des instillations nasales ayant été réalisées chez les souris avec un mélange contenant respectivement 50 g d'antigène et 5 g de FHA ou de FHA44. Les titres en anticorps sériques spécifiques d'un antigène ou immunogène d'intérêt ont été mesurés 21 jours après la seconde instillation nasale de souris ayant reçu respectivement cet antigène ou cet immunogène (Sm28, figure 5; Sh28, figure 6 ; figure 7) seul (A) ou en présence de 5 g de FHA (B) ou de FHA44 (C). La qualité des différents isotypes IgG1, IgG2a, IgG2b et IgG3 a été mesurée. Les trois antigènes utilisés ont été respectivement la protéine Sm28GST de Schistosoma mansoni (figure 5), la protéine Sh28GST de Schistosoma haematobium (figure 6) et l'hémocyanine de Megathura crenulata (KLH) (figure 7). Les résultats de la figure 5 indiquent, comme cela a déjà été montré dans les exemples 1 et 2, que l'activité adjuvante de la FHA44 est supérieure à celle de la FHA entière. L'analyse du profil des différents isotypes d'anticorps IgG montre une production quantitativement similaire d'anticorps d'isotypes IgG1 et IgG2a, spécifiques de la protéine Sm28GST, significative d'une réponse immunitaire dite " mixte ".(Figure 5). Les résultats de la figure 6 indiquent que la production d'anticorps spécifiques de la protéine Sh28GST de Schistosoma haematobium possède un profil isotypique qui est différent de la production d'anticorps observée à l'encontre de la protéine Sm28GST, puisqu'est observée la présence majoritaire d'anticorps sériques de type IgG1. Les résultats de la figure 7 indiquent que la production d'anticorps spécifiques de la protéine KLH est là encore meilleure en présence de FHA44 qu'en présence de FHA. D'autre part, le profil isotypique en anticorps présenté à la figure 7 permet d'observer la présence d'anticorps d'isotypes IgG1 et IgG2a en quantités équivalentes. De l'ensemble des résultats présentés aux figures 5 à 7, on peut constater que dans tous les cas, la FHA44 présente une activité adjuvante meilleure que la FHA entière. Comme la protéine Sm28GST, la protéine Sh28GST n'induit pas de réponse immune spécifique détectable lorsqu'elle est administrée seule. Une souris sur cinq a montré une réponse positive très forte contre la Sh28GST en présence de FHA, alors que les autres souris n'ont pas permis de déceler une production détectable d'anticorps spécifiques. En revanche, la présence de FHA44 associée à la protéine Sh28GST a permis l'observation de titre spécifique très élevé en anticorps dans la totalité des souris du test. Concernant la protéine KLH, des quantités significatives d'anticorps dirigés contre cette protéine en l'absence de FHA sont observées. Cependant, l'addition de FHA et de FHA44 a permis d'accroître cette production d'anticorps, une quantité trois fois plus grande d'anticorps ayant été observée en présence de FHA44. L'analyse des isotypes obtenus dans le sérum montre que la réponse en anticorps est de type mixte pour la Sm28GST (figure 5) et la KLH (figure 7) pour lesquelles il a été observé la présence d'anticorps IgG1 et IgG2a en quantités équivalentes. En revanche, la réponse induite contre la protéine Sh28GST est nettement polarisée vers le type TH2 avec une prédominance des anticorps d'isotypes IgG1 (figure 6). Il n'y a donc pas d'effet de polarisation systématique de la réponse induite par la FHA ou la FHA44, celle-ci pouvant varier avec l'antigène et la souche de souris utilisée. EXEMPLE 4 : La FHA et l'antigène ne sont pas physiquement liés dans une composition immunogène selon l'invention. Afin de déterminer l'existence d'une liaison physique non covalente entre l'antigène d'intérêt de la FHA, de nature à constituer un complexe, un mélange de FHA et de Sm28GST a été préparé comme indiqué dans la partie " Matériels et Méthodes ". Le mélange FHA et Sm28GST a été déposé sur une colonne d'héparine. Une élution a été réalisée avec des concentrations croissantes de NaCI, chacune des fractions d'élution ayant ensuite été analysée pour sa concentration en protéines (figure 8a). Des fractions ont également été soumises à une migration électrophorétique dans un gel de polyacrylamide en présence de SDS simultanément à une série de marqueurs de poids moléculaire protéique (figure 8b). Les résultats montrent que l'élution dans un gradient croissant de NaCI a permis de désorber la FHA dès une concentration de 0,5 M de NaCI (voir figure 8a). Par ailleurs, l'analyse de la nature des protéines présentes dans les différentes fractions d'élution a permis de montrer qu'aucune trace de la protéine Sm28GST n'était détectée (figure 8b). En conséquence, il est ici montré une absence totale d'interaction physique covalente ou non covalente entre la FHA et l'antigène d'intérêt. EXEMPLE 5 : L'activité adjuvante de la FHA et de la FHA44 persiste par voie systémique. Des souris OF1 ont été immunisées par voie sous-cutanée soit avec 50 g de SmGST et 5 g de FHA44, deux fois à deux semaines d'intervalle. L'analyse de la réponse sérique obtenue une semaine plus tard, montre l'induction d'une réponse dirigée contre la Sm28GST dans les deux groupes qui ont été co-administrés avec de la FHA (fig. 10). Cette réponse reste cependant plus faible que celle qui avait été obtenue par voie nasale. EXEMPLE 6 : L'activité adjuvante de la FHA persiste chez les sujets vaccinés. Des souris OF1 ont été vaccinées par injection sous-cutanée de 50 l de gène Dtcoq (vaccin commercial). Deux mois plus tard elles ont été immunisées par voie nasale, soit avec 50 g de FHA44, deux fois à deux semaines d'intervalle. L'analyse de la réponse sérique obtenue une semaine plus tard, montre que la vaccination par le Dtcoq, qui provoque l'apparition d'anticorps circulant anti-FHA n'a pas empêché l'induction d'une réponse dirigée contre la Sm28GST dans les deux groupes qui ont été co-administrés avec de la FHA (fig. 9). Les expériences des exemples 5 et 6 confirment le pouvoir adjuvant intrinsèque de la FHA et de la FHA44, par une voie systémique et son utilisation potentielle dans les populations vaccinées. EXEMPLE 7 : L'activité adjuvante de la FHA et de la FHA44 parasite par voie orale. Des souris OF1 ont été immunisées par voie orale soit avec 30 g de KLH, soit avec 30 g de KLH et 5 g de FHA, soit avec 30 g de KLH et 5 g de FHA44, deux fois à deux semaines d'intervalle. L'analyse de la réponse sérique obtenue une semaine plus tard, montre l'induction d'une réponse dirigée contre la KLH dans les deux groupes qui ont co-administrés avec de la FHA (Figure 11A). Pour l'administration par voie orale, la ou les protéines sont mises en solution à la concentration requise dans une solution de PBS contenant 30 g/l de NaHC03. L'administration d'un volume de 200 l se fait sur les animaux non anesthésiés à l'aide d'une sonde gastrique. Les lavages intestinaux sont effectués à J21 après rupture cervicale des animaux selon une modification de la technique décrite par Nedrud et coli. (1987). L'intestin est sectionné sous l'estomac et au-dessus du caecum et rincé dans le PBS. Puis il a été fendu sur toute la longueur. L'intestin et son contenu ont été re-suspendus dans 2 ml du tampon suivant 25 mM NaCI, 40mM, Na2SO4, 10mM KCL, 20 mM NaHCO3, 50mM EDTA, 162 mg/ml de polyethylene glycol (M. W. 3350) et 1 %0 d'aprotinine. Après centrifugation les surnageants sont congelés après addition de 1 mM PMSF. A part ce point particulier, les conditions de matériel et méthodes en particulier pour les dosages d'anticorps, sont identiques à celles précédemment citées. EXEMPLE 8 : La FHA et la FHA44 peuvent provoquer une activation polyclonale des plasmocytes ce qui génère une production d'anticorps. 8.1. Administration par voie nasale : La figure 3 de l'exemple 2 illustre les taux d'anticorps totaux non spécifiques détectés dans les liquides de lavage brocho-alvéolaires après administration par voie nasale de Sm28GST en présence ou non de FHA ou de FHA44. Comme il était précisé plus haut, les résultats de la figure 3 montrent que la FHA44 induit des taux massifs d'anticorps d'isotypes IgA et IgG totaux dans les sécrétions bronchoalvéolaires qui ne peuvent être uniquement corrélés à l'apparition des anticorps spécifiques. 8. 2 Administration par voie orale : L'analyse des taux d'immunoglubulines totaux des prélèvements obtenus lors de l'expérience d'administration par voie orale a été effectuée. On observe une nette augmentation des IgG totaux sériques dans le groupe qui a reçu de la FHA alors qu'il ne semble pas y avoir d'effet significatif pour le groupe qui a reçu de la FHA44 (Figure 11B). Par contre, les deux molécules FHA et FHA44 ont été capables d'augmenter les taux d'IgA non spécifiques dans les liquides de lavage intestinal (Figure 11C) alors même qu'aucune réponse spécifique n'y a été détectable. Cette activité non spécifique de la FHA et de ses dérivés indique que ces produits bactériens sont capables de stimuler l'immunité générale de l'organisme. Il apparaît que si la FHA se révèle comme particulièrement performante comme adjuvant pour une réponse spécifique (figure 11a), la FHA apparaît comme un meilleur immunostimulant des IgG non spécifiques et FHA et FHA44 apparaissent comme équivalentes pour les IgA totales non spécifiques. REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES (1) . LOCHT, C., BERTIN P., MENOZZI F.D., and RENAUD G. (1993). The filamentous haemagglutinin, a multifaced adhesin produced by virulent Bordetella sp. Mol. Microbiol. 9: 653-660. (2) # BROWN, D. R., and PARKER, C.D. (1987). Cloning of the filamentous hemagglutinin of Bordetella pertussis and its expression in Escherichia coli. Infect. Immun., 55 :154-161. (3) # RELMAN D., DOMENIGHINI, M., TUOMANEN, E., RAPPUOLI, R. and FALKOW, S. (1989). Filamentous hemagglutinin of Bordetella pertussis: nucleotide séquence and crucial rôle in adherence. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 86 :2637-2641. (4) # DELISSE-GATHOYE, A. M., LOCHT, C., JACOB, F., RAASCHOU-NIELSEN, M., HERON, I., RUELLE, J.L., DE WILDE, M., and CABEZON, T. (1990). Cloning, partial séquence, expression and antigenic analysis of the filamentous hemagglutinin gene of Bordetella pertussis. Infect. Immun. 58 :2895-2905. (5) # MAKHOV, A. M., HANNAH, J.H., BRENNAN, M.J., TRUS, B.L., KOCSIS, E., CONWAY, J.F., WINGFIELD, P.T., SIMON, M. N., and STEVEN, A. C. (1994). Filamentous hemagglutinin of Bordetella pertussis: a bacterial adhesin formed as a 50nm monomeric rigid rod based on a 19-residue repeat motif rich in p-strandsand turns. J. Mol. Biol., 241:110-124. (6) # RENAULD-MONGENIE, G., CORNETTE, J., MIELCAREK, N., MENOZZI, F.D., and . LOCHT, C. (1996). Distinct rôles of the N-terminal and C-terminal precursor domains in the biogenesis of the Bordetella pertussis filamentous hemagglutinin. J. Bacteriol. 178 :1053-1060. (7) # GREGORIADIS, G. (1990). Immunological adjuvants : a role for liposomes. Immunol. Today 11 : (8) # ELDRIDGE, J. H., GILLEY, R. M., STAAS, J. K., MOLDOVEANU, Z., MEULBROEK, J. A., and TICE, T. R. (1989). Biodégradable microspheres : vaccine delivery system for oral immunization. Curr. Top. Microbiol. Immunol. 146: 59-66. (9) # MOWAT, A. M. and DONACHIE, A. M. (1991). ISCOMs-a novel strategy for mucosal immunization ? Immunol. Tod. 12 : (10) # RENAULD-MONGENIE, G., MIELCAREK, N., CORNETTE, J., SCHACHT, A.M., CAPRON, A., RIVEAU, G., and LOCHT, C. (1996). Induction of mucosal immune responses against a heterologous antigen fused to filamentous hemagglutinin after intranasal immunization with recombinant Bordetella pertussis. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93 : 7944-7949.(11) # MIELCAREK, N., RIVEAU, G., REMOUE, F., ANTOINE, R., CAPRON, A., and LOCHT, C. (1998). Homologous and heterologous protection after single intranasal administration of live attenuated recombinant Bordetella pertussis. Nature Biotech. 16: 454-457. (12) # POULAIN-GODEFROY, 0., MIELCAREK, N., IVANOFF, N., REMOUE, F., SCHACHT, A.M., PHILLIPS, N., LOCHT, C., CAPRON, A. and RIVEAU, G. (1998). Enhancement of immunogenicity by intranasal antigen delivery using liposomes bearing the Bordetella pertussis filamentous hemagglutinin. Infect. Immun. 66 : 1764-1767. (13) # HANNA, J. H., MENNOZI, F.D., RENAULD, G., LOCHT, C., and BRENNAN, M.J. (1994). Sulfated glycoconjugate receptors for the Bordetella pertussis adhesin filamentous hemagglutinin (FHA) and mapping of the heparin-binding domain on FHA. Infect. Immun, 62 : 5010-5019. (14) . KOCH Y., BARAM, T., HAZUM, E., and FRIDKIN, M. (1977). Resistance to enzymic dégradation of LH-RH analogues possessing increased biological activity. Biochem. Biophys. Res. Commun., 74:488-491. REVENDICATIONS 1. Utilisation de la protéine FHA ou d'un fragment de la protéine FHA, sous forme libre, pour la préparation d'une composition adjuvante de la réponse immunitaire. 2. Utilisation de la protéine FHA ou d'un fragment de celle-ci dans la préparation d'une composition immunostimulante. 3. Utilisation selon la revendication 1 ou 2 d'une séquence de la FHA d'au moins 50 acides aminés compris entre les acides aminés 1 et 1097 de la fraction N terminale de la FHA de B. pertussis. 4. Utilisation selon la revendication 3 de la séquence FHA44 constituée des acides aminés 1 à 1097 de la séquence de la FHA de B. pertussis. 5. Utilisation d'une séquence selon l'une des revendications 1 à 4 obtenue par substitution conservative des acides aminés. 6. Utilisation d'une séquence selon l'une des revendications 1 à 4 rendue résistante à la protéolyse par remplacement de la liaison peptidique -CONH- par une liaison réduite -CH2NH-, une liaison rétro-inverso -NHCO-, une liaison méthylène-oxy -CH20-, une liaison thiométhylène -SH2-S-, une liaison carba -CH2CH2-, une liaison cétométhylène -CO-CH2-, une liaison hydroxyéthylène -CHOH-CHr, une liaison-N-N, une liaison E-alcène ou encore une liaison-CH=CH-. 7. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes pour laquelle l'adjuvant est une séquence d'acides aminés ayant au moins 60 % d'homologie avec la FHA ou un fragment de celle-ci. 8. Composition adjuvante de la réponse immunitaire comprenant sous forme libre la protéine FHA, une partie de la protéine FHA ou une séquence dérivée selon l'une des revendications 3 à 7. 9. Composition immunogène, caractérisée en ce qu'elle comprend un adjuvant selon la revendication 8, en association avec une molécule immunogène ou avec un antigène. 10. Composition immunogène selon la revendication 9 caractérisée en ce que le rapport en poids de l'adjuvant et de l'immunogène est compris entre 10-4 et 104, de préférence entre'Û,03 et 300 et de manière préférée entre 0,4 et 5. 11. Composition immunogène selon la revendication 9 caractérisée en ce que l'antigène est d'origine bactérienne, virale ou parasitaire. 12. Composition immunogène selon la revendication 9, caractérisée en ~ce que l'antigène est choisi parmi des antigènes de Bordetella, de Shigella, de Neisseria, de Borrelia, des toxines ou toxoïdes diphtériques, tétaniques ou cholériques. 13. Composition immunogène selon la revendication 9, caractérisée en ce que l'antigène est un antigène viral. 14. Composition immunogène selon la revendication 9, caractérisée en ce que l'antigène est un antigène parasitaire, notamment de Plasmodium, des Schistosoma ou de Toxoplasma. 15. Vaccin comprenant une composition immunogène selon l'une des revendications 9 à 14, en association avec un véhicule pharmaceutiquement compatible. 16. Vaccin selon la revendication 15, caractérisée en ce que le véhicule est compatible avec une administration par voie nasale. 17. Vaccin selon la revendication 15, caractérisée en ce que le véhicule est compatible avec une administration par voie orale, par voie sous-cutanée ou par voie intraveineuse, intradermique, intramusculaire. 18. Vaccin selon la revendication 15, caractérisée en ce que le véhicule est compatible avec une administration par voie rectale, vaginale, oculaire ou auriculaire. 19. Composition immunostimulante contenant la FHA ou un fragment de celle-ci comme principe actif et un véhicule pharmaceutique compatible avec une administration à l'homme ou à l'animal. 20. Composition selon la revendication 19 pour l'administration par voie orale. 21. Composition selon la revendication 19 pour l'administration par voie mucosale.