FR 2773811 A1 19990723 FR 9800551 A 19980120 PROCEDE DE STABILISATION DE SUBSTANCES POLYPHENOLIQUES ET LES SUBSTANCES AINSI STABILISEES La présente invention concerne le domaine de la chimie organique et plus particulièrement celui des substances polyphénoliques. La présente invention a pour objet un procédé de stabilisation de substances polyphénoliques et les substances ainsi stabilisées. Par substances polyphénoliques, il faut entendre notamment les oligomères procyanidoliques. Le terme oligomères procyanidoliques (OPC) est utilisé pour désigner l'ensemble des substances polyphénoliques, plus ou moins polymérisées contenues dans un extrait végétal et qui sous l'action d'un acide fort (HC1 par exemple) fournissent une coloration rouge due à la formation du cyanidol (polyphénol appartenant au groupe des anthocyanes). Cette appellation tient compte, à la fois de la structure et de l'une des propriétés chimiques les plus importantes de ces substances. Elle renseigne sur le schéma de substitution des noyaux aromatiques, sur les liaisons entre les unités monomères, ainsi que sur le comportement en milieu acide. Les OPC font partie des produits du métabolisme secondaire les plus répandus dans la nature. On les trouve dans diverses familles de végétaux et, généralement, en faibles quantités. Cependant, malgré cette teneur réduite, certaines plantes ou parties de plantes sont plus riches que d'autres. Le choix de la matière première repose donc sur la teneur, les possibilités d'approvisionnement et le coût. Les principales sources végétales répondant à ces impératifs sont les pépins de raisin, l'écorce de pin maritime, le thé vert, les feuilles de Gingko biloba. La manipulation des OPC est une opération délicate. Comme on l'a signalé précédemment, ils se dégradent en milieu acide pour donner les monomères et une forme cationique transitoire qui peut être oxydée en anthocyane, ou être piégée par un nucléophile dans le milieu réactionnel, ou conduire à des dérivés plus polymérisés, généralement insolubles appelés phlobaphènes . Cette dégradation peut même se produire au pH normal de leurs solutions aqueuses (pH 3-4). En milieu alcalin, on peut assister à des réactions d'épimérisation au niveau du carbone C2 ou à des réarrangements du squelette, conduisant aux dérivés de type acide catéchinique. On peut citer également la sensibilité à la lumière et aux phénomènes oxydatifs du fait de leurs fonctions phénoliques. Tous ces facteurs de dégradation étant difficiles à maîtriser dans leur intégralité, le risque d'artefacts, observable dans la majorité d'extraits végétaux, est important dans le cas des polyphénols. Néanmoins, comme ces phénomènes se produisent généralement en solution, beaucoup de précautions doivent être prises pour éviter des séjours prolongés en milieu solvant. Les procédés actuels privilégient l'obtention des composés peu polymérisés (oligomères) qui, contrairement aux hauts polymères (tanins), à propriétés tannantes, sont doués de propriétés pharmacologiques importantes. La littérature rapporte de nombreuses propriétés pour les substances polyphénoliques, notamment : une action anti-inflammatoire, une action anti-oxydante, une action antimicrobienne et antivirale, un effet capteur des radicaux libres, un effet sur la résistance périphérique et conjonctivale et sur la perméabilité capillaire, une action comme filtre solaire. L'effet capteur de radicaux libres ainsi que de filtres solaires naturels est d'un grand intérêt pour la cosmétologie si l'on garde en mémoire les effets néfastes des radicaux libres (vieillissement cellulaire) et des radiations ultraviolettes (cancers de la peau). De nombreux travaux mettent en évidence l'efficacité des polyphénols du thé vert dans le traitement préventif et curatif des caries dentaires. Cette utilisation met à profit les propriétés anti-microbiennes. Cette action peut être exploitée soit dans l'industrie alimentaire, soit dans la préparation de dentifrices, ou en odonto-stomatologie. En pharmacie, on rencontre des spécialités pharmaceutiques à base d'OPC de raisin et de pin, préconisées dans le traitement des affections liées aux troubles veineux. Les oligomères procyanidoliques ont également été proposés dans le traitement des troubles impliquant la circulation rétinienne et/ou choroidienne. Les oligomères procyanidoliques (ou oligoprocyanidols) végétaux sont des mélanges complexes variant selon l'espèce végétale. A titre indicatif, la composition chimique pour quelques espèces particulièrement bien caractérisées, est: a) OPC de pépins de raisin Les monomères et dimères représentent environ 50% de l'extrait. Le reste est constitué de composés à poids moléculaire plus élevé ainsi que des acides phénols. Monomères: Catéchine, épicatéchine, épicatéchine-3-0-galloylée Dimères B1, B2, B3, B4, B2-3'-0-galloylé. Ils possèdent tous une liaison interfiavanique impliquant les carbones 4 et 8. Les régioisomères à liaison C4-C6 qui sont B5, B6, B7, B8, existent à l'état de traces. A l'heure actuelle, aucune description complète de la composition polyphénolique des pépins de raisin n'est connue dans la littérature. b) OPC d'écorce de pin D'après la littérature, on retrouve presque le même type de produits que dans le cas du raisin, mais les proportions de certains constituants diffèrent. Monomères Catéchine, taxifoliol. Dimères B1, B3, B7. Les dimères B2 et B4 seraient absents. Comme dans le cas du raisin, la composition détaillée de la fraction la plus condensée n'est pas encore connue. c) Proanthocyanosides et biflavones de Gingko: - bilobetine - 5-méthoxybilobetine - gulkgetine - isoginkgetine - prodelphinidines oligomères et polymères - catéchines d) Flavanols du thé vert: D'après la littérature, la fraction polyphénolique du thé vert, est constituée par des dérivés de type gallocatéchines, contrairement au raisin et au pin. Le procédé d'extraction utilisé fournit un extrait constitué presque exclusivement de monomères donnés ci-dessous, avec leurs pourcentages - catéchine (3 %) - épicatéchine (7 %) - épicatéchine-3-0-galloylée (7 %) - gallocatéchine (13 %) - épigallocatéchine (17 %) - gallocatéchine-3-0-galloylée (8 %) - épigallocatéchine-3-0-galloylée (21 %) Les tests d'évaluation de la toxicité aiguë, chronique, de la tolérance cutanée et oculaire effectués sur les OPC, ont montré que ces produits ne sont pas toxiques. La présente invention concerne spécifiquement un procédé de stabilisation de substances polyphénoliques qui empêche leur oxydation et/ou leur polymérisation tout en maintenant intacte leur activité antiradicalaire, caractérisé en ce que l'on disperse ou on dissout la ou les substances polyphénoliques dans un solvant organique inerte, puis on ajoute à cette phase liquide une hydroxyalcoylalcoyl cellulose dont le groupe alcoyle comporte de 1 à 8 atomes de carbone, on mélange soigneusement jusqu'à complète homogénéité la suspension formée, on évapore ensuite le solvant sous atmosphère de gaz inerte pour obtenir un mélange pulvérulent contenant la ou les substances polyphénoliques stabilisées. Selon un mode d'exécution préféré, la substance polyphénolique est un oligomère procyanidolique (OPC), ou un mélange d'oligomères procyanidoliques. L'hydroxyalcoylalcoyl cellulose est choisie dans le groupe constitué par 1' hydroxypropylméthyl cellulose (HPMC), l'hydroxyéthyléthyl cellulose, l'hydroxypropyléthyl cellulose et l'hydroxyéthylpropyl cellulose. L'hydroxypropylméthylcellulose est cependant préférée dans le cadre de la présente invention. Le solvant organique inerte est un nitrile aliphatique comme le propionitrile ou l'acétonikile, une cétone aliphatique comme l'acétone, la méthyléthylcétone, la méthylisobutylcétone ou la diéthylcétone, un éther cyclique comme le tétrahydrofuranne ou le tétrahydropyranne, un éther de glycol comme le méthycellosolve ou le butylcellosolve, ou un alcanol comme le méthanol. En définitive, le solvant organique inerte de dispersion se caractérise d'une part par son inertie sur le plan chimique, par son pouvoir solvant notable pour les substances polyphénoliques, par son aptitude satisfaisante à dissoudre ou à disperser l'hydroxyalcoylalcoyl cellulose et notamment l'hydroxypropylméthyl cellulose, et par son degré important de volatilité. Le solvant de dispersion ne doit pas être trop volatil pour ne pas rendre difficile les opérations de dissolution mais être assez volatil pour que le solvant puisse être aisément distillé sans laisser de résidu gênant. Les pourcentages de substances polyphénoliques utilisés dans le procédé de stabilisation varient de 0,5 à 75 % de la masse totale et de préférence de 5 à 50 % de la masse totale. La présente invention concerne également les mélanges pulvérulents renfermant une ou des substances polyphénoliques incorporées à une hydroxyalcoylalcoyl cellulose, susceptibles d'être obtenus selon le procédé de stabilisation de la présente invention. Elle concerne plus précisément les mélanges pulvérulents renfermant un oligomère procyanidolique ou un mélange d'oligomères procyanidoliques incorporé(s) à une hydroxypropylméthyl cellulose, susceptibles d'être obtenus selon le procédé de la présente invention. Les substances polyphénoliques dispersées dans une hydroxyalcoylalcoyl cellulose et notamment dans l'hydroxypropylméthyl cellulose, se présentent sous forme d'une poudre cristalline colorée en jaune ou en marron. Il est possible de préparer une poudre contenant plus de substances polyphénoliques que d'hydroxyalcoylalcoyl cellulose et notamment d'hydroxypropylméthyl cellulose, ou l'inverse. Les poudres obtenues présentent une grande stabilité ; il est difficile de les épuiser après préparation, par un solvant organique comme l'acétonitrile. Il semble que les polysaccharides soient complexés par les substances polyphénoliques et que la structure hélicoïdale des polysaccharides comme l'HPMC présente une grande affinité pour de tels substrats avec lesquels, ils peuvent former des inclusions complexes. Les polyphénols pénètrent dans la structure en hélice et sont logés dans une cavité de façon réversible ou irréversible. Sous cette forme, les substances polyphénoliques sont protégées contre tout phénomène oxydatif pendant une longue période, au moins égale à 6 mois. En outre, les propriétés antiradicalaires sont conservées et les oligomères procyanidoliques en dispersion dans l'hydroxyalcoylalcoyl cellulose fournissent un test positif avec le diphénylpicrylhydrazyl (DPPH) d'une intensité au moins comparable à celles des préparations d'oligomères procyanidoliques d'origine. La présente invention a encore pour objet un procédé de préparation de compositions pharmaceutiques, cosmétiques et/ou alimentaires, caractérisé en ce que l'on dilue le mélange pulvérulent obtenu selon le procédé de stabilisation ci-dessus décrit avec un support ou un excipient inerte. Le support ou l'excipient inerte qui convient dans le cas de compositions alimentaires est un produit minéral comme la silice, la terre d'infusoires, les carbonates alcalino-terreux ; ou, la cellulose, la carboxyméthylcellulose, le lactose, le sulfate de calcium, ou le phosphate de magnésium dans le cas de compositions pharmaceutiques. Dans le cas de compositions cosmétiques, l'excipient ou le support inerte est un lipoaminoacide palmitoylcaséinique, du beurre de karité, de la glycérine, de l'allantoïne, de l'alpha-bisabolol. L'invention concerne encore les compositions pharmaceutiques, cosmétiques ou alimentaires renfermant une ou des substances polyphénoliques incorporées à une hydroxyalcoylalcoyl cellulose, susceptibles d'être obtenues selon le procédé de préparation ci-dessus décrit. Elle concerne plus précisément les compositions renfermant un oligomère procyanidolique ou un mélange d'oligomères procyanidoliques incorporé(s) à une hydroxypropylméthyl cellulose, susceptibles d'être obtenues selon le procédé de préparation ci-dessus décrit. Les exemples suivants illustrent l'invention sans toutefois la limiter EXEMPLE I Mélange à 10% d'oligomères procyanidoliques On met en suspension 4 g d'oligomères procyanidoliques dans 200 ml d'acétone sous agitation. Après 10 minutes d'agitation à température ordinaire, les oligomères se dissolvent complètement. On ajoute alors, tout en maintenant l'agitation, 36 g d'hydroxypropylméthyl cellulose et on poursuit l'agitation jusqu'à obtention d'une suspension homogène. On place alors le récipient de réaction sur un évaporateur rotatif en le protégeant de la lumière en l'emballant dans du papier d'aluminium. L'évaporation est poursuivie jusqu'à disparition de l'odeur de solvant. Cette évaporation demande environ 3 heures. On recueille le produit sec, on le broie légèrement et rapidement au mortier pour supprimer les agglomérats. La poudre est répartie en flacons bien bouchés sous azote. EXEMPLE II Mélange à 25% d'oligomères procyanidoliques On met en suspension 10 g d'oligomères procyanidoliques dans 250 ml d'acétonitrile et on poursuit l'agitation sous atmosphère d'azote à l'aide d'un barreau magnétique jusqu'à obtention d'une solution complète. On fait tomber progressivement en pluie 30 g d'hydroxypropylméthyl cellulose et on maintient sous agitation jusqu'à ce que le mélange soit homogène. On évapore alors le solvant sous pression réduite jusqu'à disparition de l'odeur du solvant. On recueille le résidu sec, on l'écrase légèrement au mortier et on le répartit en flacons bien bouchés sous atmosphère inerte. EXEMPLE III Mélange à 60% d'oligomères procyanidoliques On met en suspension 120 g d'oligomères procyanidoliques dans 150 ml de méthyl cellosolve et on maintient sous agitation jusqu'à ce que tout résidu ait disparu. La solution concentrée obtenue est additionnée de 80 g d'hydroxypropylméthyl cellulose ajouté par petites portions tout en maintenant une forte agitation. On poursuit l'agitation jusqu'à ce que l'hydroxypropylméthyl cellulose soit répartie d'une manière homogène dans la solution et on maintient encore l'agitation pendant 30 minutes. La suspension épaisse ainsi formée est évaporée à l'évaporateur rotatif jusqu'à consistance pulvérulente. La poudre ainsi obtenue ne possède plus d'odeur de solvant. La poudre d'oligomères est broyée rapidement au mortier pour supprimer tout agrégat. A cette proportion élevée d'oligomères, la poudre est colorée enjaune brun. La dispersion à 1% d'oligomères procyanidoliques est une poudre cristalline jaune pâle. La dispersion à 10% est une poudre cristalline de couleur beige rosé plus ou moins homogène. La dispersion à 60% est une poudre de couleur jaune brun. EXEMPLE IV Dosage des oligomères procyanidoliques dans la dispersion à 10% Le but de l'essai est de s'assurer que la dispersion contient bien 10% d'OPC de raisin. Le dosage est effectué par spectrophotométrie UV sur les solutions aqueuses. On compare les densités optiques au A-max des deux solutions préparées comme suit: Solution A: 100 mg d'OPC de raisin dans 100 ml d'eau distillée Solution B: 100 mg de dispersion à 10% d'OPC dans l'hydroxypropylméthyl cellulose (HPMC) dans 100 ml d'eau distillée. Les prises d'essai sont de 1 ml dans le cas de la solution A et de 10 ml dans le cas de la solution B. Les deux solutions A et B donnent des spectres de même allure (absorbance 1,92 pour la solution A et 2,03 pour la solution B). Cela montre que les OPC dispersés dans l'hydroxypropylméthyl cellulose, sont dans un même état que ceux non dispersés. Le procédé de dispersion n'a donc pas altéré la nature du produit (OPC). Sur les mêmes spectres, on remarque que les absorbances aux longueurs d'onde d'absorption maximale (280 nm pour les deux solutions) ne sont pas significativement différentes. Ceci prouve que les deux solutions A et B contiennent des quantités équivalentes d'OPC. La dispersion dans HPMC contient 10% d'OPC et ceux-ci passent bien en phase aqueuse. EXEMPLE V Evaluation de l'activité antiradicalaire Elle est réalisée par voie chimique in vitro par le test du DPPH (diphénylpicrylhydrazyl) Témoins:l0 mg mg de DPPH dans 20 ml de méthanol. On obtient une solution violet foncé. . Essai 1: A une solution de 10 mg de DPPH dans 20 ml de méthanol, on ajoute 10 mg d'OPC de raisin: la solution se décolore et devient rapidement orange. Essai 2 : On procède comme à l'essai 1, en utilisant 10 mg de la dispersion à 10% d'OPC dans HPMC. Pas de décoloration après 1 heure. Essai 3 : On procède comme à l'essai 2, en utilisant 60 mg de dispersion. La solution se décolore lentement et devient orange après environ 5 minutes. Conclusion: Le DPPH est un radical stable de couleur violette. En présence d'un agent antiradicalaire, il est piégé, réduit et change de couleur. Les résultats obtenus ci-dessus montrent que les OPC en dispersion dans HPMC ont gardé leurs propriétés antiradicalaires. La différence de cinétique peut être due à la différence de solubilité dans le méthanol. On a constaté le même retard après extraction par l'acétonitrile. Ce test qualitatif a été appliqué aux gélules d'OPC vendus comme complément alimentaire. La vitesse de décoloration est comparable à celle des OPC utilisés tel quels. Dans le cadre de la présente invention, la différence de cinétique peut également être imputée à une libération progressive et peut-être programmée des OPC. EXEMPLE VI Etude de la stabilité des oligomêres procyanidoliques (OPC) fixés sur l'hydroxypropylméthylcellulose (HPMC). Les préparations étudiées sont les suivantes: 1) OPC (matière première) 2) 10 % d'OPC dans l'hydroxypropylméthyl cellulose (OPC 10 % / HPMC) 3) 25 % d'OPC dans l'hydroxypropylméthyl cellulose (OPC 25 % / HPMC) 4) 50 % d'OPC dans l'hydroxypropylméthyl cellulose (OPC 50 % / HPMC) Les poudres sont conservées à température ambiante en récipient de verre brun avec bouchon àvis. Les analyses et observations se font successivement à la réception des poudres (To), à 1 mois, à 3 mois et à 6 mois. Les critères étudiés sont . l'aspect de la poudre, à savoir sa coloration et sa granulométrie la solubilité de la poudre dans l'eau et dans le méthanol l'identification des OPC par chromatographie sur couche mince (CCM) et/ou par chromatographie liquide haute performance (HPLC) . l'aspect de la solution méthanolique le dosage de l'eau la réaction antiradicalaire la recherche des solvants résiduels le dosage par spectrométrie UV et/ou par HPLC A) CONTROLE A LA RECEPTION (To) 1. ASPECT La poudre d'OPC seule présente initialement une couleur brun rouge. Les poudres OPC 10 % / HPMC, OPC 25 % / HPMC et OPC 50 % / HPMC présentent respectivement une couleur beige rosé, brune et brun foncé. La granulométrie des 4 échantillons de poudre est peu homogène. Le diamètre médian des particules (,u) est respectivement de * 380+32,2 ppourOPC 10%/EPMC * 16,8+21ppourOPC25%/HPMC * 11,9+15 ,upourOPC 50%/HPMC * 5,89 + 4,17 pour OPC 2. SOLUBILITE . EAU La matière première OPC est très soluble dans l'eau. A quantité égale d'OPC, les préparations: - d'OPC 10 % / HPMC sont totalement solubles - d'OPC 25 % /HPMC 1 I présentent une fraction insoluble importante - d'OPC 50 % / HPMC j Pour les préparations d'OPC 50 % / HPMC, la solubilisation n'est que de 60 % au bout de deux heures alors qu'elle est quasi complète pour celles d'OPC 10 % / HPMC dans le même temps. Dans le cas d'OPC 25 % / HPMC et OPC 50 % / HPMC, la mise en suspension par agitation est facile et on n'obtient pas d'agglomérat. Dans le cas d'OPC 10 % / HPMC, la suspension est trouble et les grains non solubilisés se réunissent en amas. METHANOL La solubilisation dans le méthanol de la partie OPC est facile et totale, et peut être réalisée par simple agitation manuelle. Si on laisse reposer les solutions, on observe de l'HPMC non solubilisé. Les OPC / HPMC sont rapidement solubles. A quantité égale d'OPC, la solution obtenue avec OPC 10 % / HPMC est plus colorée que les autres. 3. IDENTIFICATION . Par CCM En se référant aux rétentions frontales (Rf) indiquées dans la technique, on peut identifier les valeurs suivantes : - Rf 0,75 catéchine et épicatéchine - Rf 0,47 dimères - Rf 0,2 trimères Par rapport à la matière première, on observe des séquences chromatographiques identiques pour tous les essais. . Par HPLC On identifie les produits suivants (temps de rétention relatif par rapport à la catéchine) - acide gallique : 0,38 - épigallocatéchine : 0,96 - catéchine: - épicatéchine : 1,16 - épigallocatéchine gallate : 1,23 - épicatéchine gallate : 1,47 Les séquences chromatographiques (HPLC) réalisées sur 60 minutes sont superposables à celle obtenue pour la matière première OPC sauf dans le cas d'OPC 10 % / HPMC qui montre une légère modification au niveau du pic correspondant au temps de rétention de 1' épigallocatéchine. 4. ESSAI Dans le tableau ci-dessous, DO signifie densité optique . OPC OPC 50 % / HPMC OPC 25 % / HPMC OPC 10 % / HPMC Coloration des solutions méthanoliques (à con- 0 + ++ centration d'OPC e'gale) Dosage de l'eau 4,6% 4% 1,9% 2,8% Recherche des solvants absence 10,3 % 4,3 % 1,7 % résiduels (acétone) Activité antioxydante au DPPH à5min. 0,218 0,275 0,32 0,37 DOà515nm e àl0min. 0,112 0,171 0,22 0,21 DOà515nm La recherche montre une quantité d'acétone résiduelle très importante comprise de 1 % à 10 %. 5. DOSAGE Les titres calculés par rapport à la matière première OPC utilisée correspondent à: - 10 % pour OPC 10 % / HPMC - 24 % pour OPC 25 %/HPMC - 45 % pour OPC 50 % / HPMC Remarque : la nature des liaisons entre OPC et HPMC semble être différente suivant les taux de HPMC. B) CONTROLE DE STABILITE A 1 MOIS ESSAI: # OPC (matière première) Dans le tableau ci dessous HR signifie Humidité relative . Conditions Témoin Température 25 C et 300 C et 400 C et lumière ambiante 60 % HR 60 % HR 75 % HR Coloration des solutions méthanoliques (à con- 0 0 0 O + centration d'OPC égale) Dosage de l'eau 4,60 % 7,60 % 9,50 % 9,60 % cristallisé 12,70 % Activité antioxydante # à 5 min. 0,22 0,21 0,21 0,21 0,23 0,25 DO à 515 nm e min. 0,14 0,13 0,14 0,14 0,14 0,15 DOà515nm OPC 10 %/HPMC Conditions Témoin Température 25 C et 300 C et 400 C et lumière ambiante 60 % HR 60 % HR 75 % HR Coloration des solutions méthanoliques (à con- 0 0 + + centration d'OPC égale) Dosage de l'eau 2,8 % 3,2 % 3,7 % 3,7 % 4,0 % 5,7 % Activité antioxydante # à 5 min. 0,15 0,20 0,13 0,19 0,17 0,13 DO à 515 nm # à 10 min. 0,09 0,12 0,10 0,12 0,11 0,10 DO à 515 nm OPC 25 % / HPMC Conditions Témoin Température 25 C et 30 C et 40 C et lumière ambiante 60 % HR 60 % HR 75 % HR Coloration des solutions méthanoliques (à con- 0 0 0 + centration d'OPC égale) Dosage de l'eau 1,9 % 4,3 % 4,8 % 5,0 % 3,0 % 6,8 % Activité antioxydante e à 5 min 0,30 0,30 0,28 0,28 0,30 0,30 DO à 515 nm à 10 min 0,19 0,18 0,16 0,16 0,18 0,19 DOà515nm . OPC 50 % / HPMC Conditions Témoin Température 25 C et 30 C et 400 C et lumière ambiante 60 % HR 60 % HR 75 % HR Coloration des solutions méthanoliques (à con- 0 0 + + ++ centration d'OPC égale) Dosage de l'eau 3,9 % 5,1 % ~ 5,9 % 7,2 % 7,2 % 6,8 % Activité antioxydante à 5 min. 0,31 0,30 0,28 0,30 0,43 0,31 DOà515nm à 10min. 0,20 0,19 0,17 0,19 0,32 0,30 DOà515nm On observe une accentuation de la coloration des solutions méthanoliques en fonction des conditions de stabilité : plus la température et l'humidité augmentent et plus la coloration augmente ; le phénomène s'accentue avec la concentration d'HPMC. Ainsi, les intensités de coloration des solutions stabilisées varient : OPC 10 % / HPMC > OPC 25 % / HPMC > OPC 50 % / HPMC (à concentration en OPC égale pour toutes les solutions). A température ambiante, on observe pour OPC (matière première) une prise d'humidité de 8,3 % stabilisée à 1 mois. Pour OPC / HPMC cette prise d'humidité n'est que de 5 %. A 40 C et 75 % d'humidité relative, on mesure, au bout d'un mois: - 3 % d'humidité pour OPC 25 % / HPMC - 4 % d'humidité pour OPC 10 % / HPMC - 7 % d'humidité pour OPC 50 % / HPMC La présence d'HPMC apporte une bonne protection contre la prise d'humidité. Les résultats obtenus après 1 mois de stabilité amènent à faire quelques observations * OPC 10 % / HPMC a un comportement vis-à-vis de l'eau différent des deux autres concentrations (25 % et 50 %) et la prise d'humidité semble inversement proportionnelle au pourcentage de HPMC. * Une modification du chromatogramme (HPLC) est observée au niveau du temps de rétention de l'épigallocatéchine, modification plus marquée pour l'OPC 10 % / HPMC, toutefois, cette modification se produit sur un pic de faible intensité. C) CONTROLE DE STABILITE A 3 MOIS ESSAI: . OPC (matière première) Conditions Témoin Température 25 C et 300 C et 400 C et lumière ambiante 60 % HR 60 % HR Conditions Témoin Température 25 C et 30 C et 400 C et lumière ambiante 60 % HR 60 % HR 75 % HR Coloration des solutions méthanoliques (à con- + + + ++ +++ centration d'OPC égale) Dosage de l'eau 4,9 % 6,5 % 6,6 % 8,6 7,3 % Activité antioxydante à 5 min. 0,15 0,21 0,20 0,13 0,13 0,15 DOà515nm à 10 min. 0,12 0,14 0,14 0,1 0,1 0,12 DOà515nm # OPC 50 % /HPMC Conditions Témoin Température 250 C et 300 C et 400 C et lumière ambiante 60 % HR 60 % HR 75 % HR Coloration des solutions méthanoliques (à con- + + + ++ ++ ++ centration d'OPC égale) Dosage de l'eau - 5,9 % 7,8 % 8,3 % 9,0 9,0 % Activité antioxydante à 5 min. 0,15 0,19 0,19 0,13 0,13 0,17 DOà515nm à 10 min. 0,13 0,13 0,13 0,10 0,10 0,14 DOà515nm Les résultats obtenus après 3 mois de stabilité confirment les observations faites à 1 mois en ce qui concerne la prise d'humidité et la modification du chromatogramme. Les différences les plus marquées, sont observées pour l'échantillon OPC 10 % / HPMC augmentation de la coloration brun-rouge en solution diminution de la concentration en catéchine et épicatéchine modification du chromatogramme au niveau du temps de rétention de l'épigallocatéchine D) CONTROLE DE STABILITE A 6 MOIS ESSAI: OPC (matière première) Conditions Témoin Température 250 C et 300 C et 400 C et lumière ambiante 60 % HR 60 % HR 75 % HR Coloration des solutions méthanoliques (à con- 0 + + + centration d'OPC égale) Dosage de l'eau 8,3 % 10,6 % 11,0 % 11,0 % Activité antioxydante à 5 min. 0,32 0,39 0,35 0,34 0,36 0,42 DOà515nm à 10 min. 0,20 0,27 0,24 0,22 0,24 0,29 DO à 515mn # OPC 10%/HPMC Conditions Témoin Température 25 C et 30 C et 40 C et lumière ambiante 60 % HR 60 % HR 75 % HR Coloration des solutions méthanoliques (à con- + ++ +++ +++ ++++ ++++ centration d'OPC égale) Dosage de l'eau - 5,0 % 6,7 % 6,6 % 8,5 % 3,4 % Activité antioxydante à5min. 0,12 0,14 0,19 0,25 0,15 0,15 DO à 515 nm à 10 min. 0,09 0,09 0,12 0,16 0,11 0,11 DOà515nm OPC 25 % / HPMC Conditions Témoin Température 25 C et 300 C et 400 C et lumière ambiante 60 % HR 60 % HR 75 % HR Coloration des solutions méthanoliques (à con- + + + ++ +++ centration d'OPC égale) Dosage de l'eau - 6,0 % 7,4 % 7,3 % 9,0 % 6,3 % Activité antioxydante à 5 min. 0,21 0,26 0,23 0,26 0,26 0,25 DO à 515 nm à 10 min. 0,12 0,15 0,13 0,16 0,16 0,16 DO à 515 nm . OPC 50 % / HPMC Conditions Témoin Température 25 C et 300 C et 400 C et lumière ambiante 60 % HR 60 % HR 75 % HR Coloration des solutions méthanoliques (à con- + + + + centration d'OPC égale) Dosage de l'eau 6,5 % 9,0 % 9,2 % 8,6 % 6,6 % Activité anti oxydante à 5 min. 0,23 0,21 0,19 0,18 0,21 0,25 DOà515nm à 10 min. 0,13 0,12 0,11 0,10 0,12 0,15 DO à 515 nm On observe pour OPC seul (matière première), un fort brunissement à la lumière, une solubilisation partielle et une cristallisation à 40 et 75 % d'humidité relative (HR). Pour OPC 10 % / HPMC, on observe: peu de modification de coloration pour température ambiante, lumière, 25 C et 60 % d'humidité relative (HR) un léger brunissement pour 300 C et 60 % HR un brunissement accentué à 40 C et 75 % HR avec mottage (mais pas de prise de masse). Pour les deux autres concentrations : OPC 25 % / HPMC et OPC 50 % / HPMC, les observations faites sont les mêmes en tenant compte des colorations de départ. On observe que l'activité antioxydante des formulations avec HPMC est conservée au bout de six mois, quelles que soient les conditions, alors que celle de 1'OPC seul est notablement diminuée. Les résultats des analyses à six mois confirment les observations faites à un et trois mois. De plus, on observe que l'activité antiradicalaire est conservée pour les complexes OPC I HPMC alors que pour l'OPC seul elle semble diminuer. CONCLUSION: Stabilité sur 6 mois L'examen des critères étudiés montre que . les caractères physiques des poudres sont conservés la prise d'humidité est plus faible pour les complexes OPC I HPMC . l'activité antioxydante est conservée alors que celle de l'OPC seul diminue cependant l'augmentation des colorations rouges des solutions méthanoliques et des valeurs d'absorbance, montrent une modification des caractères chimiques des complexes OPC I HPMC à la chaleur. La solubilisation dans l'eau ainsi que l'évolution des critères étudiés (particulièrement des critères chromatographiques (HPLC)) permet d'avancer l'hypothèse que HPMC s'associe aux OPC probablement par des liaisons chimiques et par un enrobage physique. REVENDICATIONS 1. Procédé de stabilisation de substances polyphénoliques qui empêche leur oxydation et/ou leur polymérisation, tout en maintenant intacte leur activité antiradicaire, caractérisé en ce que l'on disperse ou on dissout la ou les substances polyphénoliques dans un solvant organique inerte, on ajoute à cette phase liquide une hydroxyalcoylalcoyl cellulose dont le groupe alcoyle comporte de 1 à 8 atomes de carbone, on mélange soigneusement jusqu'à complète homogénéité la suspension formée, on évapore ensuite le solvant sous atmosphère de gaz inerte pour obtenir un mélange pulvérulent contenant la ou les substances polyphénoliques stabilisées. 2. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que la substance polyphénolique est un oligomère procyanidolique ou un mélange d'oligomères procyanidoliques. 3. Procédé selon la revendication 1 ou la revendication 2, caractérisé en ce que l'hydroxyalcoylalcoyl cellulose est choisie dans le groupe constitué par l'hydroxypropylméthylcellulose, l'hydroxyéthyléthyl cellulose, l'hydroxypropyléthyl cellulose et l'hydroxyéthylpropyl cellulose. 4. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que 1 'hydroxyalcoylalcoyl cellulose est une hydroxypropylméthyl cellulose. 5. Procédé selon l'une des revendications 1 à 4, caractérisé en ce que le solvant organique inerte est un nitrile aliphatique, une cétone aliphatique, un éther cyclique, un éther de glycol ou un alcanol. 6. Procédé selon l'une des revendications 1 à 5, caractérisé en ce que les pourcentages de substances polyphénoliques utilisées varient de 0,5 à 75 % de la masse totale. 7. Procédé selon la revendication 6, caractérisé en ce que les pourcentages de substances polyphénoliques utilisées varient de 5 à 50 % de la masse totale. 8. Mélange pulvérulent renfermant une ou des substances polyphénoliques incorporées à une hydroxyalcoylalcoyl cellulose, susceptible d'être obtenu selon le procédé de l'une des revendications 1 à 7. 9. Mélange pulvérulent selon la revendication 8 renfermant un oligomère procyanidolique incorporé à une hydroxypropylméthyl cellulose. 10. Procédé de préparation de compositions pharmaceutiques, cosmétiques ou alimentaires, caractérisé en ce que l'on dilue le mélange pulvérulent selon la revendication 8 avec un support ou un excipient inerte. 11. Compositions pharmaceutiques, cosmétiques ou alimentaires renfermant une ou des substances polyphénoliques incorporées à une hydroxyalcoylalcoyl cellulose, susceptibles d'être obtenues selon le procédé de la revendication 10. 12. Compositions pharmaceutiques, cosmétiques ou alimentaires selon la revendication 11 renfermant un oligomère procyanidolique incorporé à une hydroxypropylméthyl cellulose.