FR 2788525 A1 20000721 FR 9900509 A 19990119 PSEUDO-PEPTIDES PHOSPHINIQUES, UTILISABLES COMME INHIBITEURS DES METALLOPROTEASES A ZINC MATRICIELLES DESCRIPTION Domaine technique La présente invention a pour objet des pseudo-peptides phosphiniques, utilisables en particulier comme inhibiteurs très puissants et spécifiques des métalloprotéases à zinc matricielles (MMP), en particulier les MMP-11, MMP-2, MMP-9 et MMP- 8. En revanche, ces pseudo-peptides apparaissent très peu actifs vis à vis des MMP-1 et MMP-7. Ainsi, ces inhibiteurs offrent la possibilité de ne bloquer in vivo qu'une sous-famille de MMP, et pourraient donc à cet égard s'avérer être moins toxiques que des inhibiteurs de MMP à très large spectre d'activité. Ces pseudo-peptides peuvent avoir des applications dans le traitement de maladies caractérisées par la sur-expression des protéases matricielles, telles que la dégénérescence des tissus conjonctifs et articulaires, les arthrites rhumatoides, les ostéoarthrites, l'anévrisme aortique et le cancer. Sur la base d'études réalisées in vivo chez l'animal, ces inhibiteurs phosphiniques apparaissent pouvoir être utilisés dans des compositions pharmaceutiques pour bloquer la croissance de tumeurs primaires ou secondaires. Etat de la technique antérieure Les métalloprotéases à zinc matricielles (MMP) représentent une famille d'enzymes capables collectivement de cliver l'ensemble des protéines de la matrice extracellulaire. Du fait de leur rôle sur les protéines de la matrice extracellulaire, ces enzymes jouent un rôle très important lors du développement et au cours de différents processus de remodelage tissulaire, tels que l'involution de la glande mammaire, la cicatrisation et l'extravasion de cellules spécialisées de la réponse immunitaire. On connaît aujourd'hui chez l'homme une quinzaine d'enzymes appartenant à la famille des MMP : Matrixines MMP-1 Collagénase interstitielle MMP-8 Collagénase de neutrophile MMP-13 Collagénase 3 MMP-18 Collagénase 4 MMP-3 Stromélysine 1 MMP-10 Stromélysine-2 MMP-11 Stromélysine-3 MMP-2 Gelatinase-A MMP-9 Gélatinase-B MMP-12 Métalloélastase MMP-14 MT-1 MMP MMP-15 MT-2 MMP MMP-16 MT-3 MMP MMP-17 MT-4 MMP MMP-7 Matrilysine Les collagénases apparaissent comme les seules MMP à être capables de cliver le collagène sous forme fibrillaire. Les gélatinases A et B se caractérisent par leur capacité à cliver du collagène de type IV, très abondant au niveau des membranes basales et du collagène sous forme dénaturée. Les stromélysines 1 et 2 seraient responsables de la dégradation d'autres protéines de la matrice extracellulaire, comme la fibronectine et différentes protéoglicanes. Les MT-MMP seraient surtout impliquées dans l'activation de la gélatinase A, et du fait de leur localisation membranaire, ces matrixines joueraient le rôle de récepteur membranaire de la gélatinase A. Il est à noter que le substrat physiologique de la stromélysine-3 n'est toujours pas connu. Néanmoins, plusieurs travaux sur cette protéase, qui a été initialement caractérisée dans des tumeurs du sein, suggèrent que la stromélysine-3 est un facteur important du développement et de la survie des tumeurs. Les MMP apparaissent sur-exprimées dans différentes pathologies chez l'homme, notamment le cancer. Dans cette pathologie, le rôle des MMP a longtemps été associé à l'invasion des cellules tumorales et à leur capacité à franchir différentes barrières pour former des tumeurs secondaires. Plus récemment, différentes études ont établi que ces protéases jouent certainement un rôle plus fondamental dans la cancérogénèse, en participant notamment à la croissance des tumeurs primaires. Parmi différentes hypothèses pour. expliquer cette fonction des MMP, les plus étudiées concernent leur rôle dans : leur capacité à pouvoir, par protéolyse de protéines de la matrice extracellualire, libérer de cette matrice des facteurs de croissance indispensables au développement et à la survie des tumeurs, et - l'angiogénèse, nécessaire à la croissance des tumeurs. L'implication apparente des MMP dans la croissance des tumeurs a conduit de nombreuses équipes dans le monde à s'intéresser au rôle de composés capables d'inhiber ces enzymes. Des programmes de synthèse sur les inhibiteurs de MMP ont été initiés depuis de nombreuses années. A cette époque, les applications sur les inhibiteurs de MMP visaient surtout les maladies inflammatoires des tissus conjonctifs. Ce n'est que plus récemment que de multiples programmes sur l'application des inhibiteurs de MMP en cancérologie se sont développés, comme il est décrit par Brown, Medical Oncology, 1997,14, 1-10, [1]. En effet, comme rappelé ci-dessus, les travaux démontrant que les MMP doivent être considérées comme des cibles privilégiées pour développer de nouveaux agents anti-cancéreux sont relativement récents. A cet égard, on peut noter que pour l'année 1997,67 brevets concernant la synthèse d'inhibiteurs de MMP ont été déposés dans le monde, dont la majorité concerne des applications en cancérologie, comme il est décrit par Beckett et al, 1998, Exp. Opin. Ther. Patents, 8, p.259-289 [2]. Dans la plupart de ces brevets, les composés synthétisés appartiennent à la famille des dérivés pseudopeptidiques comportant une fonction hydroxamate. Quelques brevets concernent des composés pseudopeptidiques possédant des fonctions carboxyl-alkyle ou thiol. Dans ces composés, les fonctions hydroxamate, thiol ou carboxyl-alkyle interagissent avec l'atome de zinc présent dans le site actif des MMP. Les composés les plus avancés pour leur activité anticancéreuse ont été développés par la firme British Biotechnology. Deux composés, le Batismatat BB94 et le Marimastat ont fait l'objet d'études cliniques en phases II et III chez l'homme. Depuis, il apparaît que d'autres firmes (Roche, Bayer, Agouron, Novartis) ont conduit des études cliniques en phases I et II sur des inhibiteurs de MMP en cancérologie. Batimastat, BB94 Marimastat Ainsi, aucun des composés susceptibles d'inhiber les MMP connus par les références [1] et [2], n'est constitué par un pseudopeptide phosphinique. Le document : Goulet et al, Bioorg. Med. Chem. Lett. 4,1994, p. 1221-1224 [3], décrit toutefois des pseudo-peptides phosphiniques utilisables comme inhibiteur sélectif de la stromélysine-1 (MMP-3), qui comportent la séquence finale : Caldwell et al, Bioorg. Med. Chem. Letter 6,1996, p.323-328 [4], décrivent également un pseudopeptide phosphinique qui est un inhibiteur sélectif de la stromélysine-1 (MMP-3), qui comporte la même séquence terminale que le pseudo-peptide de la référence [3]. Dans ces références [3] et [4], on recherche une activité vis-à-vis de la MMP-3, alors que dans l'invention, on recherche une activité sélective vis-à-vis des MMP-11, MMP-2, MMP-9 et MMP-8. On remarque d'autre part que dans la présente invention, R3 n'est pas seulement un résidu phényléthyle. Qui plus est, l'invention démontre que d'autres substituants dans cette position donnent des composés au pouvoir inhibiteur renforcé. Les documents FR-A- 2 676 059 [5], FR-A-2 689 764 [6] et EP-A-0 725 075(7] illustrent des pseudo-peptides phosphiniques présentant une activité inhibitrice vis-à-vis des collagénases bactériennes et des endopeptidases à zinc 24. 15 et 24.16. La présente invention a précisément pour objet des nouveaux pseudo-peptides phosphiniques présentant une activité inhibitrice puissante et spécifique vis-à-vis des métallo-protéases à zinc matricielles MMP-11, MMP-2, MMP-9 et MMP-8. Exposé de l'invention Selon l'invention, le pseudo-peptide phosphinique répond à la formule : dans laquelle - R1 est un groupe bloquant une fonction amine, ou un résidu d'aminoacide ou de peptide à fonction amino terminale bloquée, - R2 représente la chaîne latérale d'un acide aminé naturel ou non naturel, - R représente : 1) la chaîne latérale d'un acide aminé naturel sauf Gly et Ala, non substituée ou substituée par un groupe aryle, 2) un groupe aralkyle, ou 3) un groupe alkyle d'au moins 3 atomes de carbone, et - R représente une chaîne latérale d'acide aminé naturel ou non naturel. Ce pseudo-peptide de formule (I) est un pseudo-tripeptide possédant un groupement chimique de type phosphinique qui a pour fonction de chélater l'atome de zinc des MMP. Dans ce pseudo-tripeptide, le choix des groupes R2, R3 et R4 permet d'assurer l'interaction du tripeptide respectivement avec les sous-sites SI, Sl'et S2' des MMP. Le groupe R1 est supposé interagir à la jonction des sous-sites S3/S2. Dans la définition donnée ci-dessus des pseudo-peptides de l'invention, les termes aminoacide utilisés pour, R2, R3 et R4 dans [5] se rapportent aux vingt a-aminoacides communément trouvés dans les protéines qui sont également connus sous le nom d'aminoacides standard et à leurs analogues. Les chaînes latérales de ces aminoacides comprennent des groupes alkyle linéaires et ramifiés, hydroxyalkyle, carboxyalkyle, aralkyle, aminoalkyle, carboxamide alkyle, mercapto alkyle, phénylalkyle, hydroxyphénylalkyle, guanidinoalkyle, imidazoylalkyle, indolylalkyle, et pyrrolidinyle. A titre d'exemple d'acides aminés utilisables, on peut citer l'alanine, l'arginine, l'asparagine, l'acide aspartique, la cystéine, la glutamine, l'acide glutamique, la glycine, l'histidine, l'isoleucine, la leucine, la norleucine, la lysine, la méthionine, la phénylalanine, la proline, l'hydroxyprolne, la sérine, la thréonine, le tryptophane, la tyrosine, la valine, la nitrophénylalanine, l'homo arginine, la thiazolidine et la déshydroproline. Toutefois, et dans le cas de R3, l'acide aminé ne peut être Gly ou Ala car ceux-ci ne présentent pas une interaction suffisante avec le sous site SI' des MMP. De préférence, l'acide aminé utilisé pour R3 est choisi parmi Phe, Leu ou bien des résidus Ser, Cys dont la chaîne latérale est substituée par un groupe arylalkyle. Les groupes aryle susceptibles d'être utilisés sont ceux dérivés d'un noyau aromatique monocylique ou polycyclique, éventuellement substitué par des groupes alkyle ou alcoxy. A titre d'exemples de groupes aryle utilisables, on peut citer les groupes phényle, naphtyle, benzyle et alcoxybenzyle tel que pméthoxybenzyle. R peut encore représenter un groupe aralkyle. Dans ce groupe aralkyle, le groupe aryle peut être l'un de ceux mentionnés ci-dessus. La partie alkyle du groupe aralkyle peut être une chaîne linéaire ou ramifiée de 1 à 6 atomes de carbone. A titre d'exemple de groupes aralkyle utilisables, on peut citer les groupes de formules : avec n étant un nombre entier de 1 à 4, et avec p étant égal à 1 ou 2. Les groupes alkyle utilisables pour R ont au moins 3 atomes de carbone. Ils peuvent être linéairs ou ramifiés et ont de préférence au plus 7 atomes de carbone. A titre d'exemple de groupes alkyle utilisables, on peut citer les groupes CH3-(CH2)6- et (CH3)2- CH-CH2-. De préférence, R représente un groupe répondant à l'une des formules suivantes : Selon l'invention, R est choisi de façon à interagir avec le sous-site SI des MMP. De bons résultats sont obtenus lorsque R représente le groupe méthyle ou benzyle ; de préférence R est le groupe benzyle, ce qui correspond à la chaîne latérale de Phe. Selon l'invention, R est choisi de façon à interagir avec le sous-site S2' des MMP. De bons résultats sont obtenus lorsque R représente la chaîne latérale de Trp ou un groupe dinitrobenzyle (Dpa). Dans le pseudo-peptide de l'invention, les chaînes latérales R2, R et R des acides aminés peuvent être sous forme L ou D. Aussi, le pseudo-peptide peut être constitué par un seul isomère ou par un mélange de 4-diastéroisomères provenant de la présence de deux centre asymétriques au niveau des carbone a portant les résidus R et R3. Bien que toute configuration des acides aminés puisse convenir, il est préférable que le groupe Rsoit sous forme L. En revanche, trois sur quatre diastéroisomères correspondant aux différentes configurations de R et R3 ont des activités pratiquement équivalentes comme inhibiteurs des MMP. Dans les pseudo-peptides de l'invention, R1 peut représenter divers groupements dont la nature influence l'affinité du pseudo-peptide vis-à-vis des différentes MMP. R1 peut représenter un groupe bloquant une fonction amine . Ces termes incluent tous les groupes bloquants utilisables pour bloquer les fonctions amines d'aminoacides et de pettides, par exemple les groupes t-butoxy-carbonyle, benzyloxycarbonyle, cinnamoyle, pivalolyle et N-(Ifluorényl-méthoxycarbonyle) Fmoc. R1 peut aussi représenter des groupes bloquants choisi parmi les groupes acétyle, benzyloxyacétyle, phénylaminoacétyle, (mchlorophényl)aminoacétyle, (2-hydroxy-5-chloro-phényl) amino acétyle, indolyl-2-carbonyle, 4,6-dichloroindolyl-2-carbonyle, quinolyl-2-carbonyle et 1-oxa-2,4dichloro-7-naphtalène carbonyle, ou encore un résidu d'aminoacide ou de peptide dont la fonction amine terminale est bloquée par un groupe approprié. A titre d'exemple de tels résidus, on peut citer les groupes Z-Ala et Z-Leu dans lesquels Z représente le groupe benzyloxycarbonyle. Les pseudo-peptides de l'inventin peuvent être préparés par des procédés classique à partir des blocs phosphiniques de formule : dans laquelle Z représente le groupe benzyloxycarbonyle et Ad le groupe adamantyle, et de l'aminoacide correspondant à R4 par synthèse chimique en phase solide selon les procédés décrits par Yotakis et al, J. Org. Chem., 1996,61, page 6601-6605 [8] et Jiracek et al, J. Biol. Chem., 1995,270, p. 21701-21706 [9] et J. Biol. Chem., 1996,271, p. 19606-19611 [10]. Les blocs phosphiniques de départ peuvent être obtenus par addition de Michael d'un acide phosphinique porteur du groupe R2 sur un acrylate fournissant le groupe R3 avec Et représentant le groupe éthyle. Les acrylates founissant le groupe R3 peuvent être synthétisés par différentes voies, comme on le verra ci-après. Les pseudo-peptide de l'invention peuvent être utilisés pour le traitement de maladies mettant en jeu une surexpression des métalloprotéases à zinc matricielles. Aussi, l'invention a encore pour objet une composition pharmaceutique inhibant au moins une métalloprotéase à zinc matricielle, comprenant au moins un pseudo-peptide de formule (I) tel que défini cidessus. De préférence, cette composition inhibe une métalloprotéase à zinc matricielle choisie parmi les MMP-2, MMP-8, MMP-9 et MMP-11. Cette composition est destinée au traitement d'une maladie caractérisée par la surexpression des protéases matricielles, telles que le cancer. L'invention concerne aussi l'utilisation d'un pseudo-peptide phosphinique de formule (I) tel que défini ci-dessus, pour la fabrication d'un médicament inhibant au moins une métalloprotéase à zinc matricielle, en particulier les MMP-2, MMP-8, MMP-9 et MMP-11. D'autres caractéristiques et avantages de l'invention apparaîtront mieux à la lecture de la description qui suit, donnée bien entendu à titre illustratif et non limitatif, en référence aux dessins annexés. Brève description des dessins La figure 1 est un schéma de synthèse de pseudo-peptides conformes à l'invention. La figure 2 est un diagramme illustrant l'efficacité anti-tumorale d'un composé de l'invention, qui donne le volume moyen de la tumeur (en mm3) en fonction du temps (en jours) après l'injection des cellules cancéreuses sur des souris témoins et des souris traitées par le pseudo-peptide de l'invention. Exposé détaillé des modes de réalisation Les exemples 1 à 27 qui suivent, illustrent la fabrication de pseudo-peptides conformes à l'invention. Sur la figure 1, on a représenté le schéma de synthèse des pseudo-peptides de l'invention, qui met en jeu une première réaction pour la fabrication de blocs phosphiniques 3 à partir d'un acide phosphinique 1 porteur du groupe Ret d'un acrylate 2 fournissant le groupe R3, par addition de Michael. Après formation du bloc phosphinique 3, on introduit un groupe adamantyle sur la fonction hydroxyphosphinyle du bloc 4, puis on élimine la fonction ester C-terminale 5, et on effectue une synthèse en phase solide du pseudo-peptide par addition de l'acide aminé souhaité 6 sur la fonction acide Cterminale. Sur cette figure Z représente le groupe benzyloxycarbonyle. Exemples 1 à 5 Ces exemples illustrent la préparation d'acrylates 2 comportant un groupe R3avec CH2 terminal par le procédé suivant : Voie A : Cette synthèse correspond au procédé décrit par Eistetter et al dans J. Med. Chem., 25, pl09-113, 1982 [11]. On décrit ci-après cette synthèse dans le cas où R3 représente les groupes illustrés dans le tableau 1. A une solution d'éthoxyde de sodium (10 mmol de sodium dans 11 ml d'éthanol absolu), on ajoute sur une période de 10 minutes, 10 mmol de malonate de diéthyle. On soumet la solution à une agitation à 50 C, pendant 1 heure, puis on y ajoute goutte à goutte-10 mmol du bromure requis. On soumet le mélange à une agitation pendant 6 heures à 50 C, puis on élimine l'éthanol sous vide et on ajoute de l'éther diéthylique. On lave cette solution avec de l'eau, de la saumure et on sèche sur Na2SO4, puis on concentre pour obtenir un résidu huileux, qui après distillation donne le diester de formule : avec des rendements de 40 à 65 %. A une solution de 10 mmol de diester dans 8 ml d'éthanol, on ajoute une solution de KOH (10 mmol) dans 8 ml d'éthanol, on agite le mélange pendant 16 heures. Après évaporation du solvant organique, on traite le résidu avec de l'eau et on l'extrait avec de l'éther diéthylique. On acidifie la phase aqueuse avec HC16N et on l'extrait 2 fois avec de l'éther diéthylique. On sèche les phases organiques sur Na2SO4 et on les évapore pour obtenir les monoesters de formule : avec des rendements de 65 à 90 %. A une solution du monoester dans 0, 8 ml de pyridine et 0,05 ml de pipéridine, on ajoute 6 mmol de paraformaldéhyde, puis on soumet le mélange à une agitation et à un chauffage à 50-55 C pendant 3 heures. Après addition .d'éther diéthylique, on lave la phase organique avec de l'eau et HC13N, puis on sèche sur Na2SO4, et on concentre pour obtenir les composés 2a à 2c du tableau avec les rendements indiqués dans ce tableau. Les points de fusion des acrylates 2a à 2e obtenus sont également donnés dans le tableau 1. Exemple 6 Dans cet exemple où Rreprésente CH2R'3, on réalise la synthèse de l'acrylate selon la voie de synthèse suivante : Voie B : Dans cet exemple, on utilise cette voie de synthèse pour préparer l'acrylate 2 dans lequel R représente le groupe CH3(CH2)6, soit R'3 = CH3-(CH2)5. Sous atmosphère d'argon, on ajoute goutte à goutte une solution de bromure d'hexyle CH3(CH2)5 Br(1,65 g, 10 mmol) dans 15 ml d'éther diéthylique absolu à un flacon contenant 0,22 g (11 mmol) de magnésium et de l'iode I2 (catalytique) sur une période de 90 minutes. On porte le mélange réactionnel au reflux pendant 1 heure. Après addition de 0,18 mmol de Cul, on fait décroître la température du mélange à -78 C. On ajoute alors lentement une solution de 1,15 g (6,7 mmol) du composé : dans 10 ml de Et20 : THF. On agite le mélange pendant 30 minutes à la température ambiante. Après traitement du mélange avec HCl 0,5N, NaHC03 5 % et de l'eau, on sèche la couche organique sur Na2SO4- On élimine le solvant sous vide et on purifie le résidu obtenu par chromatographie sur colonne en utilisant comme éluant un mélange d'éther de pétrole 40 à 60 C/éther (13 : 1). On obtient ainsi le composé 2f avec un rendement de 40 %. Les caractéristiques du composé 2f sont données dans le tableau 1. Exemple 7 Dans cet exemple, on prépare un acrylate 2 avec R3 = R'3-CH2- en utilisant le procédé décrit par Baldwin et al J. Chem. Soc. Chem. Comm. 1986, p 1339- 1340, [12]. Ceci correspond au schéma réactionnel suivant : Ce procédé est utilisé pour préparer l'acrylate 2g dans lequel R3 représente le groupe de formule : On porte au reflux pendant 12 heures un mélange de 1,9 g (10 mmol) de bromométhyl acrylate d' éthyle et de 3,3 g (20 mmol) du sel de sodium de l'acide benzène sulfinique dans 40 ml de méthanol. On élimine le solvant et on ajoute de l'éther diéthylique. On lave la solution avec de l'eau, de la saumure, on sèche sur Na2SO4 et on concentre pour obtenir 2 grammes d'acrylate sulfinique sous forme d'huile, avec un rendement de 80 %. A un mélange de 2 g (8 mmol) d'acrylate sulfinique dans 40 ml de benzène sec, on ajoute 4,7 g (16,4 mmol) d'hydrure de tri-n-butyl étain et 0,15 g (0,96 mmol) de 2,2'-azobisisobutyronitrile (AIBN). On porte le mélange au reflux pendant 1,5 heure, puis on ajoute de l'eau et on sèche la couche organique extraite sur Na2SO4 et on la concentre. On purifie le produit brut par chromatographie sur colonne, en utilisant comme éluant l'éther de pétrole (40 à 60 C)/éther (9 : 1). On obtient 2,9 g d'alkylstannane avec un rendement de 90 %. On dissout dans 10 ml de benzène sec 1,47 g (3,6 mmol) d' alkylstannane et 0,39 g (1,8 mmol) de 2-bromoéthyl naphtalène. Après addition de 0,064 g (0,39 mmol) de AIBN, on porte le mélange réactionnel au reflux pendant 2 heures. Après addition d'eau, on sépare la phase organique, on la lave avec de l'eau, on la sèche sur Na2SO4 et on la concentre à siccité. On obtient ainsi 0,06 g de l'acrylate 2g donné dans le tableau 1, avec un rendement de 13 %, après purification du résidu sur colonne de chromatographie en utilisant l'éther de pétrole (40 à 60 C)/éther (9 : 1) comme éluant. Exemples 8 et 9 Dans ces exemples, on prépare un acrylate 2 dans lequel R3 comporte un atome de soufre ou un atome d'oxygène, en suivant le schéma de synthèse suivant : Voie D : Dans ce schéma, R correspond à RX--CH2 avec X = S ou 0. On utilise ce procédé pour préparer les acrylates 2h et 2i dans lesquels R3 représente respectivement le groupe paraméthoxybenzylthiométhyle et le groupe benzylthiométhyle. On ajoute goutte à goutte une solution de 10 mmol du thiol approprié R-SH dans 15 ml de méthanol à une solution agitée refroidie dans un bain de glace de 9 mmol de sodium dans 20 ml de méthanol sur une période de 30 minutes. Après addition du thiol, on concentre le mélange à sec et on ajoute de l'éther diéthylique. On refroidit le sel qui précipite dans un bain de glace. On filtre le produit, on le lave avec Et20 froid et on le sèche sur P2O5 pour obtenir le sel de sodium avec un rendement de 85 à 95 %. A un mélange de 10 mmol de sel de sodium en suspension dans 40 ml de Et20 sec et refroidi dans un bain de glace, on ajoute goutte à goutte, sur une période de 45 minutes, une solution de bromométhacrylate d'éthyle (9 mmol) dans 20 ml d'éther diéthylique. On agite la solution pendant 30 minutes à 0 C et pendant 1 à 2 heures à la température ambiante. On dilue le mélange réactionnel avec 20 ml d'eau et on lave la couche organique avec de l'eau, puis on la sèche sur Na2SO4 et on évapore. On purifie les composés 2h et 2i ainsi obtenus par chromatographie sur colonne, en utilisant comme éluant de l'éther de pétrole (40-60 C)/Et20 (8 : 2). Les rendements sont donnés dans le tableau 2. Exemple 10 Dans cet exemple, on prépare l'acrylate 2j dans lequel R3. correspond à ROCH2 et représente le groupe de formule C6H4-CH2-O-CH2, en suivant le schéma réactionnel illustré ci-dessus, avec R OH. Dans un flacon bien sec, on ajoute des petits morceaux de sodium (10 mmol) à 20 ml d'éther diéthylique sec. On ajoute à ce mélange réactionnel, une solution de 10 mmol d' alcool benzylique dans 10 ml d'éther diéthylique sur une période de 2 heures, sous un reflux modéré. On porte le mélange au reflux pendant 6 heures supplémentaires. On refroidit dans un bain de glace le précipité blanc obtenu, puis on filtre, on lave avec de l'éther diéthylique sec et froid et on sèche sur P2O5 pour obtenir le sel de sodium avec un rendement de 85 à 95 %. La réaction de ce sel avec le bromométhacrylate d'éthyle et la purification du composé obtenu sont effectués comme il est décrit dans l'exemple 8. L'acrylate 2j obtenu est répertorié dans le tableau 2 Exemples 11 à 21 Dans ces exemples, on prépare des blocs phosphiniques 3 avec R et R3 donnés dans le tableau 3, en utilisant la procédure décrite par Yiotakis et al, J. Org. Chem. 61,1996, 6601-6605 [8]. Cette procédure comporte dans un premier temps la réaction de Michael décrite sur la figure 1. L'acide phosphinique 1 de départ (figure 1) a été préparé selon le procédé décrit par Baylis et al, J. Chem. Soc. Perkin Trans I, 1984, p. 2845-2853 [13]. Les acrylates 2 ont été préparés dans les exemples 1 à 10. Pour la préparation des blocs phosphiniques, on opère de la façon suivante. On chauffe à 110 C, pendant 1 heure, sous atmosphère d'azote, une suspension de 1 mmol d'acide Nbenzoyloxycarbonylphosphinique 1 et de 5 mmol d'hexaméthyldisilazane. On ajoute ensuite goutte à goutte 1,3 mmol de l'acrylate 2 approprié, sur une durée de 15 minutes. On soumet le mélange réactionnel à une agitation pendant 3 heures supplémentaires à 110 C. On laisse refroidir le mélange à 70 C et on ajoute goutte à goutte 3 ml d'éthanol. Après refroidissement à la température ambiante, on concentre le mélange réactionnel. On purifie le résidu par chromatographie sur colonne en utilisant comme éluant un mélange chloroforme/méthanol/acide acétique (7 : 0,5 : 0,5). On obtient ainsi les blocs phosphiniques 3a à 3k avec les rendements donnés dans le tableau 3. Dans ce tableau, on a indiqué dans la colonne R3 quel acrylate 2 était utilisé pour la synthèse du bloc phosphinique. Le tableau 3 donne également le Rf des blocs obtenus. Exemples 22 et 23. Dans ces exemples, on synthétise les blocs phosphiniques 31 et 3m répondant aux formules données dans le tableau 3 de la façon suivante. On ajoute 2,1 mmol de diisopropylamine et 2,1 mmol de chlorure de triméthylsilyle à une solution refroidie à la glace de 1 mmol d'acide phosphinique 1 dans 2 ml de chloroforme. On soumet le mélange à une agitation à la température ambiante pendant 3 heures. Après refroidissement à 0 C, on ajoute 1,4 mmol de l'acrylate d'éthyle 2 approprié (2e ou 2g), puis on agite le mélange réactionnel à la température ambiante pendant 16 heures. Après avoir ajouté goutte à goutte de l'alcool éthylique, on élimine les solvants sous vide. On obtient les composés 31 ou 3m du tableau 3 après une chromatographie sur colonne comme dans le cas des exemples 11 à 21. Les rendements et les Rf des blocs obtenus sont donnés dans le tableau 3. Les blocs 3b, 3d et 3e à 3k ont de plus été caractérisés par RMN du proton, du carbone 13 et du phosphore. Les résultats obtenus figurent en annexe. Exemple 24 Dans cet exemple, on prépare les composés 4a à 4m de la figure 1 à partir des composés 3a à 3m en suivant le mode opératoire suivant. On dissout dans 10 ml de chloroforme 1 mmol du composé 3a à 3m et 1,2 mmol de bromure de 1-adamantyle. On porte le mélange réactionnel au reflux. On ajoute ensuite 2 mmol d'oxyde d'argent en cinq parties égales, sur une période de 50 minutes. On porte la solution au reflux pendant 30 minutes supplémentaires. Après avoir éliminé les solvants, on traite le résidu avec de l'éther diéthylique et on filtre sur Célite. On concentre les filtrats. On purifie le résidu par chromatographie sur colonne en utilisant comme éluant le mélange chloroforme/isopropanol (9,8 : 0,2). On obtient ainsi les composés 4a à 4m avec les rendements indiqués dans le tableau 4, les Rf de ces composés sont également indiqués dans le tableau 4. Exemple 25 Dans cet exemple, on suit le mode opératoire décrit sur la figure 1 pour transformer les composés 4a à 4m en composé 5a à 5m. Dans ce but, on opère de la façon suivante. On ajoute goutte à goutte 1 ml de NaOH 4N à une solution agitée de 1 mmol du composé 4a à 4m dans 5,5 ml de méthanol. On agite le mélange réactionnel pendant 18 heures, puis on élimine le solvant. On dilue le résidu avec de l'eau, puis on l'acidifie avec HC1 0, 5 N dans un bain de glace, on sèche sur Na2S04 et on concentre pour obtenir les composés 5a à 5m sous forme de solide blanc, avec les rendements donnés dans le tableau 5. Les Rf de ces composés sont également donnés dans le tableau 5. Exemple 26 Dans cet exemple, on prépare des pseudopeptides phosphiniques dont les formules sont données dans les tableaux 5 à 7, à partir des blocs phosphiniques du tableau 4, par une synthèse en phase solide par chimie Fmoc (fluorénylméthoxycarbonyle), selon la procédure décrite par Yotakis et al, 1996, J. Org. Chem. 61, pages 6601-6605 [8] et Jiracek et al dans J. Biol. Chem., 1995,270, pages 21701-21706 [9] et dans J. Biol. Chem., 1996,271, pages 19606-19611 [10] . On réalise les couplages par la stratégie in situ en utilisant le 2-(lH-benzotriazol-1-yl- 1,1,3,3-tétraméthyluronium-hexafluorophos- phate(HBTU)/diisopropyléthylamine. Les conditions de couplage sont les suivantes : trois équivalents de dérivé de Fmoc amino acide et 4 équivalents de diisopropyléthylamine dans le diméthylformamide sont ajoutés à la résine et laissés réagir pendant 30 min. Pour le couplage des blocs phosphiniques : on utilise 1,5 équivalent de bloc. Les conditions de clivages du groupe Fmoc sont 50 % de pipéridine dans le diméthylformamide pendant 30 minutes. Le groupe Fmoc est le (fluorémylméthoxy) carbonyle. Exemple 27 Dans cet exemple, on réalise la synthèse des pseudo-peptides figurant dans le tableau 8 qui comportent des R1 de nature différente. Les conditions d'introduction du groupe R1 sont décrites ci-dessous, selon la nature de ce groupe. Dans le cas où R1 est un acide comportant un groupe indole ou quinoline (composés 30,31, 32,33 du tableau 8), le couplage de R1 sur le peptide de formule générique encore couplé à la résine, a été réalisé dans les conditions suivantes : équivalents de l'acide dilué dans petit volume de N-méthyl-pyrolidone, 3 équivalents de HBTU (0,4 M), 10 équivalents de diisopropyléthylamine (1,2 M), avec un temps de couplage de 45 min. L'incorporation du groupe R1 est suivie par un test de Kaiser. Lorsque nécessaire, cette opération a été répétée plusieurs fois, jusqu'à substitution complète de la fonction amine. L'incorporation du groupe R1= Ph-CH2-O-CH2- CO- (composé 26) a été réalisée à partir du dérivé chloré correspondant avec les conditions suivantes : le dérivé chloré (25 équivalents, 0.5 M/dichlorométhane) et la diisopropyléthylamine (25 équivalents, 0,5 M/dichlorométhane) sont ajoutés sur la résine. La réaction d'acylation nécessite 1/2 h. Pour la synthèse des composés 27,28 et 29, le peptide encore couplé à la résine, a été acylé tout d'abord avec le dérivé Br-CH2-CO-Br dans les conditions suivantes : le dérivé bromé (25 équivalents, 0,5 M/dichlorométhane) et la diisopropyléthylamine (25 équivalents, 0,5 M/dichlorométhane) sont ajoutés sur la résine, pour un temps de réaction de 1/2 h. La deuxième étape. correspond à l'alkylation des dérivés d'aniline correspondants. Pour ce faire, le dérivé aniline (50 équivalents/DMSO) est ajouté à la résine, pour un temps de couplage de 2,5 h. Le clivage des peptides de la résine, ainsi que d'hydrolyse des groupements protecteurs ont été réalisés à l'aide d'une solution d'acide trifluoroacétique contenant 2,5 % d'eau, 2,5 % de thioanisol, 1,25% de thiophenol, 1,25 % d'éthanedithiol et 1,25% de triisopropylsilane. Tous les peptides synthétisés dans les exemples 26 et 27 ont été purifiés par HPLC phase inverse à l'aide de gradients réalisés avec des solutions d'eau, d'acétonitrile, contenant 0,01 % d'acide trifluoroacétique. Dans la majorité des cas, on observe dans les chromatogrammes quatre pics, correspondant aux quatre formes de diastéréoisomères générés par le protocole de synthèse de ces composés phosphiniques. Tous les peptides phosphiniques ainsi purifiés ont été contrôlés par spectroscopie de masse. Exemple 28 Dans cet exemple, on examine les constantes d'affinité Ki des pseudo-peptides des tableaux 5 à 8 vis-à-vis des différentes métalloprotéases matricielles MMP. Les MMP utilisées ont été produites sousforme recombinante, dans un système d'expression E. coli, puis purifiées par différent types de chromatographies. A part la stromélysine-3 (MMP-11), les MMP produites correspondent aux séquences humaines. La Stromélysine-3 utilisée dans cette étude correspond à la forme murine. L'activité de chaque MMP a été déterminée en utilisant deux substrats synthétiques fluorogéniques. La coupure de ces substrats, qui engendre un signal de fluorescence proportionnel à la quantité de substrat clivé, permet une détermination précise des paramètres cinétiques. Les valeurs des constantes Km des substrats, prises en compte pour déterminer la valeur des Ki, sont reportées dans le tableau qui suit.Les constantes d'affinité Ki ont été calculées à partir de l'équation de Horowitz et al, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1987,84, p. 6654-6658 [14], prenant en compte la dépendance du pourcentage d'inhibition mesuré expérimentalement selon la concentration de l'inhibiteur, en fonction de la concenration d'enzyme et de substrat. Les expériences ont été réalisées dans un tampon Tris/HCl 50mM, pH 6,8,10 mM CaCl2, 25 C. type de MPP Km M MMP-11 0. 2 MMP-2 58 MMP-9 13 MPP-14 26 MMP-1 93 MMP-7 86 MMP-8 60 Les résultats obtenus sont donnés dans les tableaux 5 à 8. La formule générique des inhibiteurs synthétisés ici indique qu'il s'agit de pseudotripeptides phosphiniques. D'après le mode de liaison supposé de ces composés avec le site actif des MMP, ces inhibiteurs doivent interagir respectivement avec les sous-sites SI, SI' et S2' de ces enzymes. Le groupement RI figurant dans la plupart des inhibiteurs est supposé interagir à la jonction des sous-sites S3/S2. Dans le tableau 5, on a vérifié l'influence de la nature du résidu R3 sur l'efficacité du pseudopeptide comme inhibiteur des MMP. L'interaction des inhibiteurs avec le soussite SI', impliquant le groupe R3 des composés, a fait l'objet d'une étude poussée, puisque ce sous-site est supposé contrôler en grande partie la sélectivité des interactions enzyme-inhibiteur. L'analyse du tableau 5 démontre que la taille et la nature du résidu R3 joue un rôle critique pour l'affinité des composés : l'activité des inhibiteurs apparaît multipliée par un facteur 30 dans le cas de la MMP-8, lorsque le groupe R passe d'un résidu benzyle à phénylpropyle (composés 7 et 9). On remarque que la gain d'affinité correspondant à cette substitution n'est pas constant pour les différentes MMP, suggérant que le sous-site SI' de chaque MMP peut être sensible à la nature du résidu R . A cet égard, il est intéressant de constater que la MMP-11 est la seule MMP à préférer un résidu phénétyle, par rapport à un résidu phénylpropyle (composé 8 et 9). La comparaison des composés 9, 10 et 11 qui ne diffèrent que par un seul atome ( C, 0, S) au niveau du résidu R3, .suggère l'existence d'une interaction spécifique entre l'atome de soufre en position y de R3des inhibiteurs et le sous-site SI' des MMP. Quelle que soit la MMP, le composé 11 est toujours le plus puissant parmi ces trois inhibiteurs. Dans le tableau 6, les inhibiteurs se caractérisent par la présence d'un résidu phényle en R2, au lieu d'un résidu méthyle (tableau 5). La comparaison des tableaux 5 et 6 révèle que la présence d'un résidu benzyle permet d'augmenter globalement l'affinité des inhibiteurs. Dans le cas spécifique de la MMP-11, la substitution méthyle->benzyle conduit à une augmentation d'affinité beaucoup plus importante pour cette MMP, que pour les autres. Ce résultat indique la préférence du sous site SI de la MMP-11 pour un résidu benzyle, par rapport à un résidu méthyle. L'introduction d'une plus grande diversité en R3 dans cette série a permis de mieux cerner l'influence du résidu en R3. Cette série démontre que pour obtenir des inhibiteurs phosphiniques puissants vis à vis de certaines MMP, il faut introduire dans la position R3, une chaîne arylalkyle longue. Ainsi, le composé 18 est un exemple d'inhibiteur très puissant de la MMP-8, MMP-11, MMP-2 et MMP-9. Par rapport à ces MMP, on remarque que les inhibiteurs reportés dans cette étude apparaissent moins puissants vis à vis de la MMP-14. De plus, de façon générale, ces pseudopeptides apparaissent très peu actifs vis-à-vis des MMP-1 et MMP-7. On remarquera que le composé 14 possédant un résidu R3 phénétyle apparaît très puissant sur la MMP-ll,mais qu'il est beaucoup moins actif sur les autres MMP. Le tableau 7 illustre l'importance du résidu tryptophane au niveau de la position R4, ainsi que l'importance de la configuration du résidu tryptophane. Le composé 24 indique que le résidu tryptophane dans ces inhibiteurs peut être remplacé par un autre résidu aromatique Dpa (dinitrophényle) dans le cas de la MMP-11 et de la MMP-8 Le tableau 8 illustre l'effet de différentes modifications au niveau du groupe R (Table IV). L'analyse des résultats indique que la nature de R1 influence l'affinité des composés vis à vis des différentes MMP. Le composé 31 est un exemple d'inhibiteur très puissant vis-à-vis de la MMP-11, présentant une certaine sélectivité pour cette enzyme. Les composés 34 et 35 représentent des exemples d'inhibiteurs puissants dans lesquels R correspond à un acide aminé naturel. Exemple 29 Dans cet exemple, on étudie l'influence de la configuration des deux positions R2 et R sur l'efficacité des pseudo-peptides comme inhibiteur des MMP. La voix de synthèse utilisée dans les exmples précédents pour préparer les dérivés phosphiniques de ce brevet aboutit à l'obtention de chaque inhibiteur sous forme d'un mélange de quatre diastéréoisomères, provenant de la présence de deux centres asymétriques au niveau des carbone alpha portant les résidus R2 et R3. Afin d'évaluer l'influence de la configuration de ces deux positions, le composé 15 a été resynthétisé en partant de l'acide aminé phénylalanine phosphinique optiquement pur, de configuration R ou S. Chaque synthèse aboutit à un mélange de deux diastéréoisomères: Z-(S)PheY(POZCHz)(S)pPhe-Trp-NHz et Z-(S)PheY(P02CH2)(R)pPhe-Trp-NH2 ou Z-(R)PheY(P02CH2)(S)pPhe-Trp-NH2 et Z-(R)PheY(PO2CH2)(R)pPhe-Trp-NH2 facilement séparables par HPLC en phase inverse. Le tableau 9 présente l'activité des quatre diastéréoisomères du composé 15 vis-à-vis des différentes MMP. Il est intéressant de remarquer que pour cette classe de composés phosphiniques, au moins trois diastéréisomères inhibent de façon presque équivalente les différentes MMP. Cette propriété, en dehors d'un moyen de contrôler le sélectivité des inhibiteurs, pourrait s'avérait être aussi très importante en terme de métabolisme et de pharmacocinétique, deux paramètres pouvant être sensibles à la stéréochimie des molécules. Les résultats de la caractérisation par RMN du proton, du carbone 13 et du phosphore de la fraction RI du composé 15 sont donnés en annexe. Exemple 30 Dans cet exemple, on mesure l'efficacité anti-tumorale du composé 15 (fraction RI) du tableau 9 (RXP03). Le modèle de tumorigénèse utilisé pour tester les effets de cet inhibiteur RXP03 in vivo consiste en une greffe sous-cutanée de cellules malignes murines C26 chez des souris syngéniques (possédant un fond génétique compatible avec celui des cellules injectées). Les cellules C26 établies à partir d'un cancer colique de souris Balb c (Corbett et al., 1975, Cancer Res, 35:2434-2439 [15] sont cultivées jusqu'à subconfluence. Après trypsinisation, les cellules sont centrifugées à 1000g pendant 10 minutes. Le culot est lavé et remis en suspension dans du PBS 1X. Un volume de 200 ml, contenant 5 x 104 cellules C26, est injecté en sous-cutané en 2 endroits du dos de souris agées de 8 à 9 semaines. L'inhibiteur est solubilisé dans du PBS 1X et l'administration de 150 mg d'inhibiteur dans un volume de 150ml se fait par voie intrapéritonéale. Le traitement commence le jour de l'injection des cellules C26 et se poursuit à raison d'une injection par jour pendant 25 jours. Les volumes tumoraux sont mesurés tous les jours. Trois expériences identiques et indépendantes de tumorigénèse ont été réalisées, selon le protocole précité. Les résultats obtenus étaient similaires. L'une d'entre-elles est rapportée cidessous. L'expérience a concerné 12 animaux, 6 d'entre eux recevant un traitement (150 pg d'inhibiteur/souris/jour) et 6 servant d'animaux témoins (150 l PBS 1X). La figure 2 montre les valeurs médianes des volumes tumoraux en fonction du temps écoulé depuis l' injection des cellules C26 (Jours 10 à 25) . On observe que les tumeurs commencent à apparaitre au jour J10, et que leurs volumes moyens et médians sont toujours inférieurs chez les animaux traités par l'inhibiteur RXP03. Cette différence de taille des tumeurs est de l'ordre de 50% du jour J15 au jour J20. Par la suite, l'efficacité de l'inhibiteur apparaît moindre. Ces résultats sont en accord avec les récentes observations faites sur un autre modèle de tumorigénèse mettant en oeuvre des animaux sauvages ou déficients pour l'expression de la stromélysine-3 (MMP- 11) et montrant que cette métalloprotéase matricielle est impliquée dans les étapes initiales d'implantation et favorise le développement des tumeurs. D'après ce modèle, l'efficacité des inhibiteurs doit être maximale durant les premiers jours du développement de la tumeur. REFERENCES CITEES [1] Brown, Medical Oncology, 1997,14, p. 1-10. [2] Beckett et al, 1998, Exp. Opin. Ther. Patents, 8, p. 259-289. [3] Goulet et al, Bioorg. Med. Chem. Lett. 4,1994, p. 1221-1224. [4] Caldwell et al, Bioorg. Med. Chem. Letter 6, 1996, p.323-328. [5] FR-A- 2 676 059. [6] FR-A-2 689 764. [7] EP-A-0 725 075 [8] Yotakis et al, J. Org. 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Rendement 8 2h MeO--@--CH2 - CH2- 80 % MeO (Cj) CH2 CH2- 9 2i @--CH2 - CH2- 88 % 10 2j @--CH2- O-CH2- 85 % \ça) C112 - 0 CH2 Tableau 3 Ex. Bloc R2 R3 Rendement Rf phosphinique l 3a H C6H5 CH2 80 0,41 (2a) 12 3b H C6H5 -(CH2)2 95 0,47 (2b) 13 3c H C6H5 (CH2)3 83 0,57 (2c) 14 3d H C6H5 -CHr-O-CH2 61 0,69 (2j) 15 3e H C6H5- CH2-S---CHZ 60 0,48 (2i) 16 3f Phényl C6H5 (CH2)2 85 0,77 e (2b) 17 3g " C6H5 (CH2)3 79 0,80 (2c) 18 3h " C6H5 (CH2)4 75 0,82 (2d) 19 3i " CH3(CH2)6 81 0,68 (2 f) 20 3j C6Hs--CH2-O-CH2 64 0,61 (2j) 21 3k " Mep O CH2 40 0,63 (2h) 22 31 " ocr 112 60 0,66 Qg 112 (2e) Tableau 3 (suite) Ex. Bloc R2 R3 Rendement Rf phosphinique % 23 3m " oor CH2)2 30 0,65 IfiTfil # Tableau 4 Composé Composé Rendement Rf Composé Rendement Rf(2) de départ 4 5 3a 4a 95 0,70 5a 80 0,53(1) 3b 4b 97 0,72 5b 81 0,59(1) 3c 4c 97 0,73 5c 85 0,21 3d 4d 93 0,77 5d 90 0,42(1) 3e 4e 72 0,72 5e 92 0,50(1) 3f 4f 89 0,61 5f 95 0,42 3g 4g 75 0,66 5g 97 0,42 3h 4h 95 0,63 5h 95 0,44 3i 4i 96 0,78 Si 78 0,56 3j 4j 91 0,71 5j 80 0,26 3k 4k 93 0,66 5k 94 0,46 31 41 91 0,53 51 92 0,38 3m 4m 95 0,57 5m 86 0,35 (1) dans le mélange hexane/acétate d'éthyle/acide acétique (3:3:0,2) (2) dans le mélange chloroforme/méthanol (9,5: 0,5). Tableau 5 : du groupe R3 : Valeur des constantes d'affinité Ki. Tableau 5 Com- MMP-11 MMP-2 MMP-9 MMP-14 MMP-1 MMP-7 MMP-8 posé [ R 3] = mST3 Gel-A Gel-B MT1-MMP HFC Matrilysin HNC N 7 CH2- (Phe) 350 nM 250 nM 280 nM 2030 nM 24%@2mM 71 % @ OmM 240 nM 8 CH2-CH2-f 51 nM 80 nM 60 nM 270 nM 23%@2mM 43%@50mM 20 nM 9 CH2-CH2-CH2-f 100 nM 31 nM 23 nM 92 nM 30% @ 2mM 51%@50mM 8 nM 10 CH2-O-CH2-f 175 nM 250 nM 44 nM 550 nM 15%@2mM 27%@50mM 19 nM 11 CH2-S-CH2-f 36 nM 14 nM 6 nM 26 nM 45% @ 2mM 36% @ 50mM 0,5 nM Tableau 6 : du groupe R3 : Valeur des constantes d'affinité Ki. [R3]= MMP-11 MMP-2 MMP-9 MMP-14 MMP-1 MMP-7 MMP-8 12 CH3 (Ala) 2670 nM 0% # 2mM 0% # 2mM 0% # 10mM 20% @ 2mM 10% @ 50mM 9% @ 1mM 13 CH2-CH-(CH3)2 (Leu) 22 nM 202 nM 65 nM 192 nM 45% # 2mM 210 nM 40 nM 14 CH2-CH2-# 8 8 nM 275 nM 110 nM 660 nM 10%@2mM 62% # 50mM 45 nM 15 CH2-CH2-CH2-# 5 nM 20 nM 10 nM 105 nM 23%@2mM 65%@50mM 2. 5 nM 16 CH2-CH2-CH2-CH2-# 33 nM 145 nM 70 nM 580 nM 5%@2mM 65%@50mM 4. 3 nM 17 @ CH2-O-CH2-# 16 nM 85 nM 55 nM 545 nM 9%@2mM 40% @ 50mM 20 nM 18 CH2-S-CH2--f-OMe 2 nM 6 nM 3 nM 22 nM 13%@2mM 84% @ 50mM 0.7 nM 19 CH2-Naphtyl 74 nM 330 nM 675 nM 1350 nM 0% @ 5mM 1800 nM 230 nM 20 CH2-CH2-Naphtyl 12 nM 30 nM 55 nM 125 nM 0% @ 2mM 2100 nM 34 nM 21 (CH2)7 34 nM 75 nM 30 nM 271 nM 27%@2mM 50% @ 50mM 6 nM Ki. Ei d 10 n position Yaa' : Valeur des cons 1) :3 id 'u -ci u u n zi -0 a 1 CÙ U 1 1 - ? S g ≈- Ss P-1 MMP-7 M C Matrilysin I 2mM 23% # 50mM 2 2mM 65% # 50mM 2, 10mM 18% # 50mM 2% 2mM 61% # 50mM 2 S @ @ 0\ ('1') !''::: 0\ S en s; s | | | | @MP-2 MMP-9 MMPGel-A Gel-B MT1-M #2mM 45% # 2mM 2960 n 20 nM 10 nM 105 n #2mM 14% # 2mM 10% # 1 60 nM 245 nM 1282 n S O * Composé Yaa' MMPN mST 22 Ala 20% # 15 L-Trp 5 nM 23 D-Trp 1% # 1 24 Dpa 27 nM Tableau 8 : Influence du résidu RI : Valeur des constantes d'affinité Ki. Tableau 8 Composé MMP-11 MMP-2 MMP-9 MMP-14 MMP-1 MMP-7 MMP-8 N ( RI ] mST3 Gel-A Gel-B MT1-MMP HFC Matrilysin HNC 25 20 nM 26 nM 35 nM 90 nM 29% @ 1M 16% @ 1J.lM 3,5 nM HC" 26 )f"Y '1 5 nM 8 nM 10 nM 40 nM 28% @ 1J.lM 33% @1.M 2, 5 nM 33% 1J.lM 16% 1J.lM 4, 5 1 Cr N,~,,cl" 1 Tableau 8 (suite) Composé MMP-11 MMP-2 MMP-9 MMP-14 MMP-1 MMP-7 MMP-8 N [ RI ] mST3 Gel-A Gel-B MT1-MMP HFC Matrilysin HNC 28 H 0 3.8 nM 9 nM 6 nM 45 nM 63% @ 1 M 25% @ 1 M 4 nM 29 N fi 10 nM 30 nM 34 nM 63 nM 55% @ 1M 48% @ 1M 7.5 nM Clcc 1 , 30 fi 1.5 nM 10 nM nM 41 nM 87% lpim 605 nM 1? nM ~~~~Çr"~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ 31 H Il 0.9 nM 24 nM 7 nM 32 nM 36 nM 117 nM 5 nM ci I y I i Cl fi i 370 nam 5 nM 32 N i, 4.2 nM 19 nM 13 nM 60 nM 73% @ 1M 370 47%@ 1M 37%@ 1M 17 nM 33 C, 0 CI, 5 nM 100 nM 110 nM 217 nM c' 34 Z-Ala 8 nM 11 nM 10 nM 41 nM 24%@ ltM 18%@ lM 5,5 nM 35 Z-Leu 6 nM 40 nM 22 nM 53 nM 20%@ IjnM 32%@ l.M 7 nM s d'affinité Ki. cn M aleur des con ai 'c/î U c T3 CJ MP-8 5 nM s ' MMP-7 Matrilysi 9% # 20 mM 29% # 20@ 44% # 20@ 34% # 20@ s s s s a sas d..uN MMP-14 MMP MT1-MMP HF 135 nM 17 % # 2290 nM 6 % # 90 nM 18 % # 385 nM 16 % # P-.,....!.. c:-a oC"l N 00 S JQ V r-S *? S S N t7 v M M A'' G a", \0 CJ\ eu ''''''u-.....J ::r: 1 x H d Bloc 3b : ZAla#(PO2CpH2)hPheOEt. 1H Z Phe hPhe OEt NH 5,36 Ha 4,05 2,85 Hss 1,28 1,95/1,84 Hy 2,55 CH3 1,28 Arom 6,62-7,33 6,62-7,33 CH2/CpH2 5,12 1,84/2,25 4,1 13C Z Phe hPhe OEt Ca 45,35/46,05* 39,2 Css 14,6 35,9 Cy 33,4 CH3 61,4 Arom 126,4-141,4 126,4-141,4 C = 0 156,2 174,9 CHz/Cp 67,6 28,5/27,8* 14,6 *2 diastéréoisomères 31p 54,45/54,23 8(ppm) Ref. 1H CHC13 (7,26 ppm). Temp.: 298K Solvant . CDC13 Ref. 13C CDC13 (77,36 ppm). Ref. 31P H3PO4 (0 ppm). Bloc 3d : ZAla#(PO2CpH2)Ser(Bn)OEt. 1H Z Ala Ser (Bn) OEt NH 5,41 Ha 4,05 3,09 Hss 1,35 3,65 H# 4,48 CH3 1,2 Arom 7,26-7,32 7,26-7,32 CH2/CpH2 5,09 2, 02/2, 25 4,12 13C Z Ala Ser (Bn) OEt Ca 45,20/46,8* 40,13 Css 14,42 71,38 C# 73,5 CH3 61,77 Arom 127,9-138,2 127,9-138,2 C = 0 156,3 173,2 CH2/Cp 67,64 24,16/25,77* 14,42 *2 diastéréoisomères 31p 54, 3 b(ppm) Ref. 1H CHC13 (7,26 ppm). Temp.: 298K Solvant : CDC13 Ref. 13C CDC13 (77,36 ppm) . Ref. 31pH3PO4 (0 ppm). Bloc 3e : ZAla(P02CpH2)Cys(Bn)OEt. 1H Z Ala Cys (Bn) OEt NH 5,41 Ha 4,08 3 Hss 1,35 2,50/2,75 H# 3, 65 CH3 1,22 Arom 7,26-7,33 7,26-7,33 CH2/CpH2 5,12 2, 02/2, 25 4,15 13C Z Ala Cys (Bn) OEt Ca 44,93/46,7* 39,19 Css 14,4 34,56 C# 36,33 CH3 61,7 Arom 127,4-138,1 127,4-138,1 C = 0 156, 17 173, 56 CH2/Cp 67,78 26,88/28,19* 14,43 *2 diastéréoisomères 31p 54,41/54,23 8(ppm) Ref. 1H CHC13 (7,26 ppm). Temp.: 298K Solvant : CDC13 Ref. 13C CDC13 (77,36 ppm). Ref. 31P H3P04 (0 ppm). Bloc 3f : ZPhe(P02CpH2)hPheOEt. 1H Z Phe hPhe OEt NH 5,61 Ha 4,2 2,92 Hss 3,17/2,83 1,97/1,83 Hy 2,55 CH3 1,23 Arom 7,0-7,3 7,0-7,3 CH2/CpH2 5 1,85/2,22 4,15 13C Z Phe hPhe OEt Ca 52,1/53,5* 39,8 Css 34 35,5 Cy 33,1 CH3 63,05 Arom 127-141 127-141 C = 0 158 177,6 CH/CpH 68,5 28,9/27,7* 14,1 *2 diastéréoisomères 31p 51, 34 8(ppm) Ref. 1H CHC13 (7,26 ppm). Temp.: 298K Solvant : CDC13 Ref. 13C CDC13 (77,36 ppm). Ref. 31P H3PO4 (0 ppm). Bloc 3g : ZPhe#(PO2CpH2)pPheOEt. 1H Z Phe pPhe OEt NH 4,98 Ha 4,2 2,87 Hss 3,23/2,83 1,53/1,45 Hy 1,51 H5 2,52 CH3 1, 21 Arom 7,14-7,26 7,14-7,26 CH2/CpH2 4,94 1,75-2,21 4,13 13C Z Phe pPhe OEt Ca 51,75/53,3* 39,7 Css 33,85 33,6 Cy 28,4 C# 35,7 CH3 62,3 Arom 126,6-142,3 126,6-142,3 C = 0 157,7 177,2 CH2/Cp 68,3 29,1/28* 13,9 *2 diastéréoisomères 31p 52,2/53,1 8(ppm) Ref. 1H CHC13 (7,26 ppm). Temp.: 298K Solvant : CDC13 Ref. 13C CDC13 (77,36 ppm). Ref. 31P H3PO4 (0 ppm). Bloc 3h : ZPhe#(PO2CpH2)bPheOEt. 1H Z Phe bPhe OEt NH 5,4 Ha 4,25 2,8 Hp 3,26/2,82 1,62/1,53 Hy 1,25 HE 1,52 H# 2,52 CH3 1,2 Arom 7,0-7,26 7,0-7,26 CH2/CpH2 4,99 1,75-2,23 4,1 13C Z Phe bPhe OEt Ca 52,2/50,9* 39,7 Css 34,4 34 Cy 26,4 C# 31,2 CE 35,8 CH3 61,4 Arom 126,4-142,6 126,4-142,6 C = 0 156,5 175,3 CH2/Cp 67,45 28,44/29,3* 14,2 *2 diastéréoisomères 31p 52,2/53,1 8(ppm) Ref. 1H CHC13 (7,26 ppm). Temp.: 298K Solvant : CDC13 Ref. 13C CDC13 (77, 36 ppm) . Ref. 31P H3PO4 (0 ppm). Bloc 3i : ZPhe(P02CpH2)HeptOEt. 1H Z Phe Hept OEt NH 5,46 Ha 4,26 2,8 Hss 3,28/2,85 1,50/1,63 Hy-H 1,2 CH3 0,83 1,23 Arom 7,16/7,27 7,67-7,27 CH2/CpH2 4,98 1,75/2,23 4,2 13C Z Phe Hept OEt Ca 51,25/52,8* 39,31 Css 34,2 34,6 C[gamma]/C# 31,97, 29,31 26,65 , 22,81 CH3 14,5 61,2 Arom 127,5-137,6 127,5-137,6 C = 0 156,36 175,37 CH2/Cp 67,23 29,73/28,45* 14,6 *2 diastéréoisomères 31p 54,41/53,96 8(ppm) Ref. 1H CHC13 (7,26 ppm) . Temp.: 298K Solvant : CDC13 Ref. 13C CDC13 (77,36 ppm). Ref. 31pH3PO4 (0 ppm). Bloc 3j : ZPhe(P02CpH2)Ser(Bn)OEt. 1H Z Phe Ser(Bn) OEt NH 5,48 Ha 4,3 3,12 Hss 3,28/2,85 3,65 H# 4,45 CH3 1,22 Arom 7,16-7,36 7,16/7,36 CH2/CpH2 4,97 2,0/2,27 4,15 13C Z Phe Ser (Bn) OEt Ca 52,65/50,9* 39,93 Css 34,16 71,42 C# 73,44 CH3 61,6 Arom 126-138,1 126-138,1 C = 0 156,4 173,2 CH/Cp 67,47 24,9/25,36* 13,94 *2 diastéréoisomères 31p 53,7/53,59 5(ppm) Ref. 1H CHC13 (7,26 ppm). Temp.: 298K Solvant : CDC13 Ref. 13C CDC13 (77,36 ppm). Ref. 31pH3PO4 (0 ppm). Bloc 3k : ZPhe#(PO2CpH2)Cys(pOMeBn)OEt. 1H Z Phe Cys(pOMeBn) OEt NH 5,41 Ha 4,3 3,03 Hss 3,27/2,80 2,53/2,70 Hy 3,6 CH3 3, 75 1,2 Arom 7,18-7,36 7,18-7,36 CH2/CpH2 4,98 2,03/2,15 4,15 13C Z Phe Cys (pOMeBn) OEt Ca 52,1/50,8* 39,6 Css 34,42 35 C# 35,6 CH3 55,98 61,74 Arom 127,2-130,4 127,2-130,4 C = 0 159 173,6 CH2/Cp 67,32 27,9/29,1* 14,46 *2 diastéréoisomères 31p 53,76/54,07 5(ppm) Ref. 1H CHC13 (7,26 ppm). Temp.: 298K Solvant : CDC13 Ref. 13C CDC13 (77,36 ppm). Ref. 31pH3PO4 (0 ppm) . Composé 15 : ZPhe#(PO2CpH2)pPheTrpNH2 Fraction RI du tableau 9 1H Z Phe pPhe Trp NH 5,63 7,05 Ha 4,17 2,87 4,72 Hss 3,13/2,75 1,59/1,40 3,25 Hy 1,45 H# 2,46 CH2/CpH2 4,95 1,81/2,06 13C Z Phe pPhe Trp Ca 52 54,7 Css 33,85 34,06 27,7 Cy 28,53 C# 35,63 C = 0 158,17 177,19 176,93 CH2/Cp 68,81 28,45 31p 51,76/52,94 #(ppm) Ref. 1H CHC13 (7,26 ppm). Temp.: 298K Solvant : CDC13 Ref. 13C CDC13 (77,36 ppm). Ref. 31pH3PO4 (0 ppm). REVENDICATIONS 1. Pseudo-peptide phosphinique de formule : dans laquelle - R1 est un groupe bloquant une fonction amine, ou un résidu d'aminoacide ou de peptide à fonction amino terminale bloquée, - R2 représente la chaîne latérale d'un acide aminé naturel ou non naturel, - R représente : 1) la chaîne latérale d'un acide aminé naturel sauf Gly et Ala, non substituée ou substituée par un groupe aryle, 2) un groupe aralkyle, ou 3) un groupe alkyle d'au moins 3 atomes de carbone, et R4 représente une chaîne latérale d'acide aminé naturel ou non naturel. 2. Pseudo-peptide selon la revendication 1, dans lequel Rreprésente le groupe méthyle ou benzyle. 3. Pseudo-peptide selon la revendication 1, dans lequel R représente la chaîne latérale d'un acide aminé choisi parmi Phe et Leu ou un résidu Ser ou Cys dont la chaîne latérale est substituée par un groupe arylakyle. 4. Pseudo-peptide selon la revendication 1, dans lequel R3 est un groupe aralkyle choisi parmi les groupes de formule : avec n étant un nombre entier de 1 à 4, et de formule : avec p égal à 1 ou 2. 5. Pseudo-peptide selon la revendication 1 dans lequel R3 est un groupe répondant à l'une des formules suivantes : 6. Pseudo-peptide selon la revendication 1, dans lequel R est le groupe de formule : 7. Pseudo-peptide selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, dans lequel R4représente le groupe de formule : 8. Pseudo-peptide selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, dans lequel R représente un groupe choisi parmi les groupes acétyle, benzyloxyacétyle, phénylaminoacétyle, mchlorophényl)aminoacétyle, (2-hydroxy-5-chloro-phényl) amino acétyle, indolyl-2-carbonyle, 4,6-dichloro- indolyl-2-carbonyle, quinolyl-2-carbonyle et 1-oxa-2,4dichloro-7-naphtalène carbonyle. 9. Pseudo-peptide selon la revendication 1 qui répond à la formule : 10. Pseudo-peptide selon la revendication 9, dans lequel le groupe est sous forme L. 11. Composition pharmaceutique inhibant au moins une métalloprotéase à zinc matricielle, comprenant au moins un pseudo-peptide selon l'une quelconque des revendications 1 à 10. 12. Composition selon la revendication 11 dans laquelle la métalloprotéase à zinc matricielle est choisie parmi les MMP-2, MMP-8, MMP-9 et MMP-11. 13. Composition pharmaceutique selon l'une quelconque des revendications 11 et 12, pour le traitement d'une maladie caractérisée par la surexpression des protéases matricielles. 14. Composition selon la revendication 13, pour le traitement du cancer. 15. Utilisation d'un pseudo-peptide phosphinique selon l'une quelconque des revendications 1 à 10 pour la fabrication d'un médicament inhibant au moins une métalloprotéase à zinc matricielle. 16. Utilisation selon la revendication 15, dans laquelle la métalloprotéase à zinc matricielle est choisie parmi les MMP-2, MMP-8, MMP-9 et MMP-11. 17. Utilisation selon la revendication 15 ou 16, dans laquelle le médicament est destiné au traitement d'une maladie caractérisée par la surexpression des protéases matricielles. 18. Utilisation selon la revendication 17, dans laquelle la maladie est le cancer.