FR 2777017 A1 19991008 FR 9804121 A 19980402 COMPOSES, LEUR PREPARATION ET LEUR UTILISATION POUR LE TRANSFERT D'ACIDES NUCLEIOUES DANS LES CELLULES La présente invention concerne de nouveaux agents de transfert d'acides nucléiques dans les cellules. Ces nouveaux agents de transfert d'acides nucléiques sont plus particulièrement apparentés à la famille des lipopolyamines, et comportent au moins une fonction amidine cyclique. Ces agents sont utiles pour la transfection des acides nucléiques dans différents types cellulaires, aussi bien in vitro que ex vivo ou in vivo. Avec le développement des biotechnologies, la possibilité de transférer efficacement des acides nucléiques dans les cellules est devenue une nécessité. Il peut s'agir du transfert d'acides nucléiques dans des cellules in vitro, par exemple pour la production de protéines recombinantes. ou au laboratoire, pour l'étude de la régulation de l'expression de gènes, le clonage de gènes, ou toute autre manipulation impliquant l'ADN. Il peut également s'agir du transfert d'acides nucléiques dans des cellules in vivo, par exemple pour la création d'animaux transgéniques, la réalisation de vaccins, des études de marquage ou également des approches thérapeutiques. Il peut encore s'agir du transfert d'acides nucléiques dans des cellules ex vivo, dans des approches de greffes de moelle osseuse, d'immunothérapie ou d'autres méthodes impliquant le transfert de gènes dans des cellules prélevées d'un organisme, en vue de leur réadministration ultérieure. Différents types de vecteurs synthétiques ont été developpés pour améliorer le transfert des acides nucléiques dans les cellules. Parmi ces vecteurs, les lipides cationiques possèdent des propriétes intéressantes. Ces vecteurs sont constitués d'une partie polaire, cationique interagissant avec les acides nucleiques et d'une partie lipidique, hydrophobe favorisant la pénétration cellulaire. Des exemples particuliers de lipides cationiques sont notamment les lipides monocationiques z (DOTMA Lipot^ectin ). certains détergents cationiques (DDAB)* les lipopolyamines et en particulier la dioctadécylamidoglycyl spermine EDOGS) ou la 5-carboxyspermylamide de la palmitoylphosphatidylethanolamine (DPPES). dont la préparation a été décrite par exemple dans la demande de brevet EP 394 111. Une autre famille de lipopolyamines est représentée par les composés RPR120531, RPR 122766 ou RPR120535 décrits dans la demande de brevet WO 97/18185 incorporée à la présente par référence, et sont illustrés à la figure 2. Mais jusqu'à présent, les injections dans les tissus, et notamment les muscles, étaient souvent faites avec de l'ADN nu afin de faciliter son entrée dans les cellules, l'association à des vecteurs synthétiques conduisant à des complexes de taille trop importante pour être incorporés dans les cellules. C'est un des principaux problèmes que la présente invention se propose de résoudre. En effet, les agents de transfert d'acides nucléiques selon l'invention possèdent l'avantage inattendu de présenter un niveau de transfection in vivo dans le muscle au moins équivalent à celui obtenu avec l'ADN nu. L'association avec un composé selon l'invention protège l'ADN des dégradations par les nucléases et/ou des détériorations au cours de la lyophilisation, ce qui contribue à améliorer significativement la stabilité des formulations nuclolipidiques. De plus, une telle association permet une libération controlée lente des acides nucléiques. Par ailleurs, les agents de transfert d'acides nucléiques selon la présente invention sont des lipides cationiques portant une région cationique originale qui confère aux molécules des propriétés améliorées, et notamment une cytotoxicité reduite par rapport aux vecteurs cationiques de l'art antérieur. Cette partie cationique est réprésentée plus précisément par une ou plusieurs polyamine particuliere(s) portant une ou plusieurs tonctions amidine cycliques. Ainsi. un premier objet de l'invention concerne un nouveau type d'agents de transfert d'acides nucléiques sous forme D, L. ou DL. de formule générale CA-Rep R i pour laquelle Û CA represente une tète cycloamidine eI ses ormes mesomeres de formule générale (II) : pour laquelle m, et n sont des entiers indépendants l'un de l'autre compris entre 0 et 3 inclus et tels que m+n est supérieur ou égal à 1, RI représente un groupement de formule générale (III) : pour laquelle p et q sont des entiers indépendants l'un de l'autre compris entre 0 et 10 inclus, et Y représente un groupement carbonyle, amine, méthylamine, ou bien méthylène, Y pouvant avoir des significations différentes au sein des différents groupements [(CH)p-Y], et étant entendu que R1 peut être lié à n'importe quel atome de la formule générale (II), ex X représente un groupement NR2 ou bien CHR2, R étant soit un atome d'hydrogène soit le groupement R1 tel que défini précédemment, . Le groupement représente * 1er cas un groupement de formule générale pour laquelle \\ représente CHR"' ou bien NR"'. et R" et R'" représentent îndependemment I'un de l'autre un atome d'hydrogène un méthyle ou le groupement R1 tel que défini précédemment, étant entendu que R" et R"' ne peuvent pas être R1 en même temps, ou bien * 2ème cas : un groupement de formule générale (V) pour laquelle W représente CHR"' ou bien NR"', et R' et R"' représentent indépendemment l'un de l'autre un atome d'hydrogène, un méthyle, ou le groupement R1 tel que défini précédemment, étant entendu que R' et R"' ne peuvent pas être R1 en même temps, Q2 Rep est absent ou est un répartiteur de formule générale (VI) dont l'atome d'azote est rattaché à CA, et t est un entier compris entre 0 et 8 inclus, r est un entier compris entre 0 et 10 inclus, r pouvant avoir des significations différentes au sein des différents groupements -NR4-(CH)r-, e R3. qui peut avoir des significations différentes au sein des différents groupements NR4-(CH)rR3. represente un atome d'hydrogene. un groupement methyle. ou un groupement de formule générale (VII) : pour laquelle u est un entier compris entre I et 10 inclus, s est un entier compris entre 2 et 8 inclus pouvant avoir des significations différentes au sein des différents groupements -(CH)s-NRss et R5 est un atome d'hydrogène, un groupement CA tel que définis précédemment étant entendu que les groupements CA sont indépendants les uns des autres et peuvent être différents, ou bien un groupement de formule générale (VII) étant entendu que les groupements de formule générale (VII) sont indépendants les uns des autres et peuvent avoir des significations différentes, . R4 est défini de la même façon que R3 ou bien représente un groupement CA tel que défini précédemment étant entendu que les groupements CA sont indépendants les uns des autres et peuvent être différents, et 3 R est lié a la fonction carbonyle du groupement Rep de formule générale (VI), ou bien si Rep est absent R est lié directement à CA, et représente * soit un groupement de formule NR6R7 pour laquelle R6 et R7 représentent indépendamment l'un de l'autre un atome d'hydrogène ou un radical aliphatique saturé ou non. linéaire ou ramifiée, éventuellement fluoré, contenant I à 22 atomes de carbone, avec l'un au moins des deux substituants R6 ou R différent de l'hydrogène et l'autre contenant entre 10 et 22 atomes de carbone. * soit un dérivé de sterolde. * soit un groupement de formule générale (VIII): pour laquelle x est un entier compris entre I et # inclus, w est un entier compris entre 1 et 10 inclus, et soit Q represente un groupement C(O)NR6R- pour lequel R et R- sont définis comme précedemment. soit Q représente un groupement C(O)R, pour lequel R! représente un groupement de formule IX pour laquelle z est un entier compris entre 2 et 8 inclus, et Rs est un radical aliphatique saturé ou non , éventuellement fluoré, contenant 8 à 22 atomes de carbone, ou un dérivé de stéroïde, ou bien R8 représente un groupement -O-Rs pour lequel Rs est défini comme cidessus. Dans une première variante de l'invention, Rep est un répartiteur à 1, 2 ou 3 bras. On peut par exemple citer les répartiteurs suivants Dans une seconde variante de l'invention, R3 et R@ present dans la formule @, représentent des atomes d'hydrogène. Dans une autre variante de l'invention R4 est un atome d'hydrogène et R3 est un groupement de formule (VII) dans laquelle R5 représente une tête cycloamidine CA. Avantageusement, la tête cycloamidine CA de formule (II) comporte 5, 6, 7 ou 8 chaînons. Préférentiellement, dans la formule (III), p et q sont choisis indépendamment l'un de l'autre parmi 2, 3 ou 4. Comme indiqué ci-avant, le groupement R contient au moins une chaîne aliphatique ou au moins un dérivé de stéroïde, c'est à dire plus généralement au moins un segment hydrophobe. On entend au sens de l'invention par groupement hydrophobe tout groupement de type lipidique, favorisant la pénétration cellulaire. De manière préférentielle, le groupement lipophile est un radical aliphatique contenant 10 à 22 atomes de carbone, de préférence en 12, 14, 16, 17, 18, ou 19 atomes de carbone, et notamment les groupements (CH2)1 1CH3, (CH2)13CH3, (CH2)15CH3, (CH2)17CH3, et oléyl(chaîne de 18 atomes de carbone insaturée). Dans un mode particulier de mise en oeuvre, les groupes R6 et R- sont identiques ou différents et représentent chacun une chaîne aliphatique saturée ou non. linéaire ou ramifiée, éventuellement fluorée, contenant 10 à 22 atomes de carbone. Lorsque le groupe lipophile est un dérivé de stéroïde. celui-ci est avantageusement choisi parmi le cholestérol, le cholestanol, le 3-&alpha;-5-cyclo-5-&alpha;- cholestan-6-ss-ol, l'acide colique le cholestérylformiate, le chotestanylformiate. le 3&alpha;,5-cyclo-5&alpha;-cholestan-6ss-yl formiate, la cholestérylamine, la 6-(1,5 diméthylhexyl)3a,5a-dimethyl hexadecahydrocyclopenta[a]cyclopropa[2,3]cyclopenta[1,2-f]naphta-1en-10-ylamine, ou la cholestanylamine. Ces nouveaux agents de transfert d'acides nucléiques de formule générale (I) peuvent se presenter sous orme de sels non toxiques et pharmaceutiquement acceptables. Ces sels non toxiques comprennent les sels avec les acides minéraux (acides chlorhydrique, sulfurique, bromhydrique, phosphorique, nitrique) ou avec les acides organiques (acides acétique, propionique, succinique, maléique, hydroxymaléique, benzoique, fumarique, méthanesulfonique ou oxalique) ou avec les bases minérales (soude, potasse, lithine, chaux) ou encore avec les bases organiques (amines tertiaires comme la triéthylamine, la pipéridine, la benzylamine). A titre d'exemple illustratif d'agents de transfert d'acides nucléiques avantageux selon l'invention, on peut citer les composés de formules suivantes: N-dioctadécylcarbamoylméthyl-2-{3-[4-(2-imino-tétrahydro-pyrimidinI -yl)-butylamino]propylamino} -acétamide N-dioctadécylcarbamoylméthyl-2-{3-[4-(2-imino-tétrahydro-pyrimidin1 -yl > -butylaminojpropylarnino t-acétamide 2-(3-{4-[3-)4,5-dihydro-1H-imidazol-2-ylamino)-propylamino]-butylamino} N-dioctadécylcarbamoylméthyl-acétamide 2-(3- (bis-[3-(4,5-dihydro- 1 H-imidazol-2-ylamino)-propyl]-amino } -propylamino)-N-ditétradécylcarbamoylméthyl-ac étamide. Les agents de transfert d'acides nucléiques de l'invention peuvent entre préparés de différentes façons. Notamment. une première méthode consiste a effectuer une synthèse de "briques" portant la fonction cycloamidine qui sont ensuite greffée(s) sur des lipides équipés de répartiteurs. Cette méthode présente l'avantage d'accéder à un nombre important de produits. Une autre méthode correspond à la synthèse des lipopolyamines, la cyclisation en têtes cycloamidine étant effectuée dans un second temps Au sens de l'invention, on entend par "briques" tout segment de molécule fonctionnel. Par exemple, la tete cycloamidine CA telle que définie dans la formule générale (II), Rep ou encore R constituent chacun des briques au sens de l'invention. Des briques portant la ou les fonctions cycloamidine et qui peuvent être directement couplées sont par exemple La cyclisation des têtes amidine selon le second mode de synthèse précédemment décrit peut par exemple être effectuée par réaction entre une et/ou plusieurs amines primaires situées dans une molécule d'intérêt et des réactifs tels que le O-Methylisourea Hydrogen sulfate (Ref: J. Med Chem. 38(1995) 16, 05.3-3061) ou le S-Methylisothiourea semisulfate (ref: Int. J. Pept. Prot. Res.40 (1992), 119-126). D'autres méthodes et/ou d'autres réactifs connus de l'homme du métier peuvent bien entendu être utilisés. Un autre objet de l'invention concerne une composition comprenant un agent de transfert d'acides nucléiques tel que défini ci-avant, et un acide nucléique. Préférentiellement. l'agent de transfert et l'acide nucléique sont presents en quantites telles que le rapport R des charges positives du composé sur les charges négatives de l'acide nucléique soit compris entre 0,1 et 50, de préférence entre 0.1 et 20. Ce rapport peut être ajuste aisement par l'homme du metier en fonction du composé utilise. de l'acide nucléique et des applications recherchées (notamment du type de cellules a transfecter). On entend au sens de l'invention par "acide nucléique" aussi bien un acide désoxyribonucléique qu'un acide ribonucléique. Il peut s'agir de séquences naturelles ou artificielles, et notamment d'ADN génomique (ADNg), d'ADN complémentaire (ADNc), d'ARN messager (ARNm), d'ARN de transfert (ARNt), d'ARN ribosomique (ARNr), de séquences hybrides ou de séquences synthétiques ou semi-synthétiques, d'oligonucléotides modifiés ou non. Ces acides nucléiques peuvent être d'origine humaine, animale, végétale, bactérienne, virale, etc... Ils peuvent être obtenus par toute technique connue de l'homme du métier, et notamment par criblage de banqucs, par synthèse chimique, ou encore par des méthodes mixtes incluant la modification chimique ou enzymatique de séquences obtenues par criblage de banques. Ils peuvent être modifiés chimiquement. Concernant plus particulièrement les acides désoxyribonucléiques, ils peuvent être simple ou double brin de même que des oligonuléotides courts ou des séquences plus longues. En particulier, les acides nucléiques sont avantageusement constitués par des plasmides, des vecteurs, des épisomes, des cassettes d'expression, etc... Ces acides désoxyribonucléiques peuvent porter une origine de réplication fonctionnelle ou non dans la cellule cible, un ou plusieurs gènes marqueurs, des séquences régulatrices de la transcription ou de la réplication, des gènes d'intérêt thérapeutique, des séquences antisens modifiées ou non, des régions de liaison à d'autres composants cellulaires, etc... De préférence. l'acide nucléique comprend une cassette d'expression constituée d'un ou plusieurs genes d'intérêt sous contrôle d'un ou plusieurs promoteurs et d'un terminateur transcriptionnel actifs dans les cellules cibles. Au sens de l'invention. on entend par gene d'intérêt thèrapeutique notamment tout gène codant pour un produit protéique ayant un effet thérapeutique. Le produit protéique ainsi code peut être notamment une proteine ou un peptide. Ce produit protéique peut être exogène homologue ou endogene vis-å-\is de la cellule cible, c'est-a-dire un produit qui est normalement exprimé dans la cellule cible lorsque eelle-ci ne presente aucune pathologie. Dans ce cas, l'expression d'une protéine permet par exemple de pallier une expression insuffisante dans la cellule ou l'expression d'une protéine inactive ou faiblement active en raison d'une modification, ou encore de surexprimer ladite protéine. Le gène d'intérêt thérapeutique peut aussi coder pour un mutant d'une protéine cellulaire, ayant une stabilité accrue, une activité modifiée, etc... Le produit protéique peut également être hétérologue vis-à-vis de la cellule cible. Dans ce cas, une protéine exprimée peut par exemple compléter ou apporter une activité déficiente dans la cellule, lui permettant de lutter contre une pathologie, ou stimuler une réponse immunitaire. Parmi les produits thérapeutiques au sens de la présente invention, on peut citer plus particulièrement les enzymes, les dérivés sanguins, les hormones, les lymphokines : interleukines, interférons, TNF, etc... (FR 92/03120), les facteurs de croissance, les neurotransmetteurs ou leurs précurseurs ou enzymes de synthèse, les facteurs trophiques (BDNF, CNTF, NGF, IGF, GMF, aFGF, bFGF, NT3, NT5, HARP/pléiotrophine, etc...) les apolipoprotéines (ApoAI, ApoAIV, ApoE, etc..., FR 93/05125), la dystrophine ou une minidystrophine (FR 91/11947), la protéine CFTR associée à la mucoviscidose, les gênes suppresseurs de tumeurs (p53, Rb, RaplA, DCC, k-rev, etc.... FR 93/04745), les gènes codant pour des facteurs impliqués dans la coagulation (Facteurs VII. VIII, IX), les gènes intervenant dans la réparation de I'ADN, les gênes suicides (thymidine kinase, cytosine déaminase), les génies de lhêmoglobine ou d'autres transporteurs protéiques, les enzymes du métabolisme, catabolisme etc... L'acide nucléique d'intérêt thérapeutique peut également être un gène ou une séquence antisens, dont l'expression dans la cellule cible permet de contrôler l'expression de genes ou la transcription d'ARNm cellulaires. De telles séquences peuvent. par exemple être transcrites dans la cellule cible en ARN complémentaires d'ARNm cellulaires et bloquer ainsi leur traduction en proteine. selon la technique décrite dans le brevet EP 140 t08. Les genes thérapeutiques comprennent également les séquences codant pour des nboznmesss qui sont capables de detruire selectivement des ARN cibles (EP 321 '01 Comme indiqué plus haut, l'acide nucléique peut également comporter un ou plusieurs gènes codant pour un peptide antigénique, capable de générer chez l'liomme ou l'animal une réponse immunitaire. Dans ce mode particulier de mise en oeuvre, l'invention permet la réalisation soit de vaccins soit de traitements immunothérapeutiques appliqués à l'homme ou à l'animal, notamment contre des microorganismes, des virus ou des cancers. Il peut s'agir notamment de peptides antigéniques spécifiques du virus d'Epstein Barr, du virus HIV, du virus de l'hépatite B (EP 185 573), du virus de la pseudo-rage, du "syncitia forming virus", d'autres virus ou encore de peptides antigéniques spécifiques de tumeurs (EP 259 212). Préférentiellement, l'acide nucléique comprend également des séquences permettant l'expression du gène d'intérêt thérapeutique et/ou du gène codant pour le peptide antigénique dans la cellule ou l'organe désiré. Il peut s'agir des séquences qui sont naturellement responsables de l'expression du gène considéré lorsque ces séquences sont susceptibles de fonctionner dans la cellule infectée. Il peut également s agir de séquences d'origine différente (responsables de l'expression d'autres protéines, ou même synthétiques). Notamment, il peut s'agir de séquences promotrices de gènes eucaryotes ou viraux. Par exemple, il peut s'agir de séquences promotrices issues du génome de la cellule que l'on désire infecter. De même, il peut s'agir de séquences promotrices issues du génome d'un virus. A cet égard. on peut citer par exemple les promoteurs des gènes E1A, MLP, CMV, RSV, etc... En outre, ces séquences d'expression peuvent être modifiées par addition de séquences d'activation, de régulation, etc... Il peut aussi s'agir de promoteur, inductible ou rêpressible. Par ailleurs. l'acide nucléique peut également comporter. en particulier en amont du gene d'intérêt thèrapeutique, une séquence signal dirigeant le produit thérapeutique synthétise dans les voies de sécrétion de la cellule cible. Cette séquence signal peut être la séquence signal naturelle du produit thérapeutique. mais I peut egalement s'agir de toute autre séquence signal fonctionnelle. ou d'une sequence signal artificielle. L'acide nucleique peut également comporter une sequence signal dirigeant le produit thérapeutique synthétisé vers un compartiment particulier de la cellule. Les compositions peuvent en outre comporter des adjuvants capables de s associer aux complexes agent de transfert/acide nucléique et d'en améliorer le pouvoir transfectant. Dans un autre mode de mise en oeuvre, la présente invention concerne donc des compositions comprenant un acide nucléique, un agent de transfert d'acides nucléiques tel que défini ci-avant et un adjuvant capable de s'associer aux complexes agent de transfert/acide nucléique et d'en améliorer le pouvoir transfectant. La présence de ce type d'adjuvant (lipides, peptides ou protéines par exemple) peut permettre avantageusement d'augmenter le pouvoir transfectant des composés. Dans cette optique, les compositions de l'invention peuvent comprendre comme adjuvant, un ou plusieurs lipides neutres. De telles compositions sont particulièrement avantageuses, notamment lorsque le rapport R est faible. La demanderesse a en effet montré que l'addition d'un lipide neutre permet d'améliorer la formation des particules nucléolipidiques et de favoriser la pénétration de la particule dans la cellule en déstabilisant sa membrane. Plus préférentiellement, les lipides neutres utilisés dans le cadre de la présente invention sont des lipides a deux chaînes grasses. De manière particulièrement avantageuse, on utilise des lipides naturels ou synthétiques zwitterioniques ou dépourvus de charge ionique dans les conditions physiologique. I1 peuvent etre choisis plus particulièrement parmi la dioleoylphophatidyéthanolamine (DOPE), I' oleoyl-palmitoylphos-phatidyléthanolamine (POPE), les dî-stéaroyl, palmitoyl -mirvstovl phosphatidvléthanolamines ainsi que leurs dérivé N-mêthylês 1 à 3 fois, les phosphatidyglycérols, les diacvlglvcérols, les glycosyldiacylglycérols, les cérèbrosides (tels que notamment les galactocérébrosides), les sphingolipides (tels que notamment les sphingomyélines) ou encore les asialogangliosides (tels que notamment les asialoGNI I et GN Ces différents lipides peuvent être obtenus soit par synthèse. soit par extraction a partir d'organes exemple le cerveau ou d'oeufs. par des techniques classiques bien connues de l'homme du métier. En particulier, l'extraction des lipides naturels peut être réalisée au moyen de solvants organiques (voir également Lehninger, Biochemistry). Plus récemment, la demanderesse a démontré qu'il était également particulièrement avantageux d'employer à titre d'adjuvant, un composé intervenant ou non directement au niveau de la condensation dudit acide nucléique (WO 96/25508). La présence d'un tel composé, au sein d'une composition selon l'invention, permet de diminuer la quantité d'agent transfectant, avec les conséquences bénéfiques qui en découlent sur le plan toxicologique, sans porter un préjudice quelconque à l'activité transfectante. Par composé intervenant au niveau de la condensation de l'acide nucléique, on entend définir un composé compactant, directement ou non, l'acide nucléique. Plus précisement, ce composé peut soit agir directement au niveau de l'acide nucléique à transfecter soit intervenir au niveau d'un composé annexe qui lui est directement impliqué dans la condensation de cet acide nucléique. De préférence, il agit directement au niveau de l'acide nucléique. Par exemple l'agent précompactant peut être n'importe quel polycation, par exemple la polylysine. Selon un mode de réalisation préféré, cet agent intervenant au niveau de la condensation de l'acide nucléique dérive en tout ou partie d'une protamine. d'une histone, ou d'une nucléoline et/ou de l'un de leurs dérivés. Un tel agent peut également être constitué, en tout ou partie, de motifs peptidiques (KTPKKAKKP) et/ou (ATPAKKAA), le nombre des motifs pouvant varier entre 2 et 10. Dans la structure du compose selon l'invention, ces motifs peuvent être répétés dc maniere continue ou non. C'est ainsi qu'ils peuvent être séparés par des liens de nature biochimique, par exemple un ou plusieurs acides aminés ou de nature chimique. Préférentiellement. les compositions de l'invention comprennent de 0,01 à 20 equivalents d'adjuvant pour un equivalent d'acides nucléiques en mol'mol et, plus préférentiellement. de 0.5 à 5 Dans un mode de realisatlon particulièrement avantageux, les compositions de la presente invention comprennent en outre un element de ciblage permettant d'orienter le transfert de l'acide nucléique. Cet élément de ciblage peut être un élément de ciblage extracellulaire permettant d'orienter le transfert de l'ADN vers certains, types cellulaires ou certains tissus souhaités (cellules tumorales, cellules hépatiques, cellules hématopoiétiques...). Il peut également s'agir d'un élément de ciblage intracellulaire permettant d'orienter le transfert de l'acide nucléique vers certains compartiments cellulaires privilégiés (mitochondries, noyau etc...). L'élément de ciblage peut être lié à l'agent de transfert d'acides nucléiques selon l'invention ou également à l'acide nucléique comme cela a été précisé précédemment. Parmi les éléments de ciblage utilisables dans le cadre de l'invention, on peut citer les sucres, les peptides, les protéines, les oligonucléotides les lipides, les neuromédiateurs, les hormones, les vitamines ou leurs dérivés. Préférentiellement, il s'agit de sucres de peptides ou de protéines tels que des anticorps ou des Selon une autre variante, les compositions de l'invention peuvent aussi incorporer au moins un agent de surface non-ionique en quantité suffisante pour stabiliser la taille des particules de complexes nucléolipidiques. L'introduction d'agents de surface non-ionique prévient la formation d'agrégats, ce qui rend la composition plus particulièrement adaptée à une administration in vivo. Les compositions selon l'invention incorporant de tels agents de surface présentent un avantage sur le plan de l'innocuité. Elles présentent également un avantage supplémentaire en ce sens qu'elles diminuent le risque d'interférences avec d'autres protéines compte tenu de la réduction de la charge globale des compositions de complexes nucléolipidiques. Les agents de surface sont constitués avantageusement d'au moins un segment hydrophobe, et d'au moins un segment hydrophile. Préférentiellement, Le segment hydrophobe est choisi parmi les chaînes aliphatiques, les polyoxyalkylêne, les polyester d'alkylidène, les polyéthylène glycol à tête polyéther benzylique et le cholestérol, et le segment hydrophile est avantageusement choisi parmi les polyoxyalkylène, les alccols polyvinyliques, les polyvinylpyrrolidones ou les saccharides. De tels agents de surface non-ioniques ont été décrits dans la demande PCT/FR 98/00222. L'invention a également pour objet l'utilisation des composés tels que définis ci-avant pour le transfert d'acides nucléiques (et plus généralement de polyanions) dans les cellules, in titro, ex o ou in toto. Une telle utilisation est particulièrement avantageuse car les agents de transfert d'acides nucléiques selon l'invention présentent une cytotoxicité réduite par rapport aux lipides cationiques de l'art antérieur. La demanderesse a notamment mis en évidence qu'à des rapports de charge très enlevés entraînant habituellement la mort des animaux consecutivement à la transfection. aucune cytotoxicité apparente n'était décelée. Pour des utilisations in sil 0, par exemple en thérapie ou pour l'étude de la régulation de genes ou la creation de modeles animaux de pathologies les compositions selon l'invention peuvent autre formulées en vue d'administrations par voie topique. cutanee. orale, rectale, vaginale, parentérale, intranasale, intraveineuse, intramusculaire, souscutanée, intraoculaire, transdermique, intratrachéales, intrapéritonéale, etc... De préférence, les compositions de l'invention contiennent un véhicule pharmaceutiquement acceptable pour une formulation injectable, notamment pour une injection directe au niveau de l'organe désiré, ou pour une administration par voie topique (sur peau et/ou muqueuse). Il peut s'agir en particulier de solutions stériles, isotoniques, ou de compositions sèches, notamment lyophilisées, qui, par addition selon le cas d'eau stérilisée ou de sérum physiologique, permettent la constitution de solutés injectables. Les doses d'acide nucléique utilisées pour l'injection ainsi que le nombre d'administrations peuvent être adaptées en fonction de différents paramètres, et notamment en fonction du mode d'administration utilisé, de la pathologie concernée, du gène à exprimer, ou encore de la durée du traitement recherchée En ce qui concerne plus particulièrement le mode d'administration, il peut s'agir soit d'une injection directe dans les tissus, par exemple au niveau des tumeurs, ou les voies circulatoires, soit d'un traitement de cellules en culture suivi de leur réimplantation 1,1 vivo, par injection ou greffe. Les tissus concernés dans le cadre de la présente invention sont par exemple les muscles, la peau, le cerveau, les poumons, le foie, la rate, la moelle osseuse, le thymus, le coeur, la lymphe, le sang, les os, les cartilages, le pancréas, les reins, la vessie, l'estomac, les intestins, les testicules, les ovaires le rectum, le système nerveux, les yeux, les glandes, les tissus conjonctifs, etc. Avantageusement, les tissus transfectès sont les muscles. L'invention concerne en outre une méthode de transfert d'acides nucléiques dans les cellules comprenant les étapes suivantes: ( 1) la mise en contact de l'acide nucléique avec un compose tel que défini ci-a-ant. pour former un complexe nucléolipidique. et (2) la mise en contact des cellules avec le complexe formé en (1). La mise en contact des cellules avec le complexe peut etre realisce par incubation des cellules avec ledit compiexe pour des utilisations iel l vitro ou t?X ivov. ou par injection du complexe dans un ortJanisme (pour des utilisations jr vivo L'incubation est réalisée de préférence en présence de par exemple de 0,01 à 1000 g d'acide nucléique pour 106 cellules. Pour une administration in vivo, des doses d'acide nucléique comprises entre 0,01 et 10 mg peuvent par exemple être utilisées. Dans le cas où les compositions de l'invention contiennent en outre un ou plusieurs adjuvants tels que définis précédemment, le ou les adjuvants sont préalablement mélangés au lipide selon l'invention ou à l'acide nucléique. La présente invention fournit ainsi une méthode particulièrement avantageuse pour le transfert d'acides nucléiques in vi vo, notamment pour le traitement de maladies, comprenant l'administration in vivo ou in vitro d'un acide nucléique codant pour une protéine ou pouvant être transcrit en un acide nucléique apte à corriger ladite maladie, ledit acide nucléique étant associé à un composé de formule générale (I) dans les conditions définies ci-avant. Plus particulièrement, cette méthode est applicable aux maladies résultant d'une déficience en un produit protéique ou nucléique, l'acide nucléique administré codant pour ledit produit protéique ou étant trranscrit en un produit nucléique ou encore constituant ledit produit nucléique. L'invention s'étend a toute utilisation d'un agent de transfert d'acides nucléiques selon l'invention pour la transfection in vivo, ex vivo, ou in vitro de cellules. Les agents de transfert d'acides nucléiques de l'invention sont particulièrement utilisables pour le transfert d'acides nucléiques dans des cellules primaires ou dans des lignées établies. Il peut s'agir de cellules fibroblastiques, musculaires. nerveuses (neurones, astrocytes, cellules gliales), hepatiques, hématopoiètiques (lymphocytes, CD34, dendritiques. etc...), épitheliales etc..., sous forme différenctees ou plunpotentes (précurseurs). Outre les dispositions qui precédent. la presente invention comprend également d'autres caractéristiques et avantages qui ressortiront des exemples et figures qul suivent. et qui dolent autre considères comme illustrant l'invention sans en limiter la. portée. FIGURES Figure 1: Structure des agents de transfert d'acides nucléiques 1, 2, 3 et 4 selon l'invention. Figure 2 : Structure des vecteurs synthétiques RPR 120535, RPR 121650, RPR 120531, et RPR 122766 (décnts dans la demande de brevet WO 97/18185 incorporée à la présente par référence). Figure 3 : Représentation schématique du plasmide pXL2774. Figures 4 et 5 : Diagramme de phase des complexes agent de transfert/ADN. La liaison du lipide à l'ADN a été déterminée en suivant la diminution de la fluorescence (en O/o, 100% étant la fluorescence de l'ADN nu) du bromure d'éthidium (EtBr) (symbole , ligne pleine), comme décrit selon l'axe y situé à droite. La taille des particules de complexes (en run) est indiquée sur l'axe y situé à gauche. L'axe x représente le rapport de charge agents de transfert/ADN. La taille des complexes nucléolipidiques sans co-lipide est représenté par le symbole 1 en ligne pleine. La taille des complexes nucléolipidiques contenant 25% de cholestérol est représenté par le symbole # en ligne discontinue. La taille des complexes nucléolipidiques contenant 40% de DOPE est représenté par le symbole en ligne discontinue. La méthode ne permet pas de déterminer la taille des particules au dela de 3 m. Figure 6 . Activite de transfert de gene in vitro dans des cellules HeLa des complexes contenant le compose 1 selon la présente invention sans co-lipide ( barre du milieu en gris foncé), avec 5 0 de cholestérol barre de gauche en gris moven). et avec 40 0 molaire de DOPE (barre de doite en gris clair), comparativement a l'ADN nu. Seuls les complexes dans lesquels l'ADN est completement sature en lipide et dont la taille est comprise entre 100 nm et 300 nm ont été utilisés. Figure ' . Activité de transfert de gène in vivo après injection directe dans le muscle des complexes contenant le compose 1 selon 1.1 presente invention ou le compose gris moyen), et avec 40% molaire de DOPE (barre en gris clair), comparativement à l'ADN nu. Seuls les complexes dans lesquels l'ADN est complètement saturé en lipide et dont la taille est comprise entre 100 nm et 300 nm ont été utilisés. Figure 8 : L'importance de l'invention est illustrée en comparant l'activité de transfert de gène de deux lipides différents, le composé 1 selon l'invention et le RPR 120531, et de l'ADN nu via deux routes d'administration : par voie intraveineuse (IV) et par voie intramusculaire (IM). Seuls les complexes dans lesquels l'ADN est complètement saturé en lipide et dont la taille est comprise entre 100 nm et 300 nm ont été utilisés. ABREVIATIONS ET SYMBOLES AcOEt : Acétate d' éthyle BOC : t-Butoxycarbonyl BOP: Benzotriazol-l-yloxytris (diméthylamino) phosphonium hexafluorophosphate CH2Cl2: Dichlorométhane CHCl3: Chloroforme DCC : Dicvclohexvlcarbodi imide DCE : Dichloro 1-2 éthane DCU : Dicvclohexylurée DIEA : N-Ethyldiisopropylamine DMAP: 4-Dimétliylaminopyridine DMF : Diméthylformamide DMSO : Diméthyle sulfoxide DODA : Dioctadecylamine EP: Etherdepétrole Et Br: Bromure d'éthydium EtOH: Ethanol KHSO4 : Sulfate de potassium MeOH : Méthanol MeCN Acétonitrile MgSO4 : sulfate de magnésium NaCI: Chlorure de sodium NaHCO3: carbonate de sodium NaOH: soude NEt3: Triéthylamine Rf: Coefficient de rétention frontal TEA: triéthylamine TFA: Acide trifluoroacétique THF : Tétrahydrofurane TMS : Tétraméthylsilane UV : Ultra-Violets SPPS: Solid Phase Peptide Synthesis CCM : Chromatographie Couche Mince CLHP: Chromatographie Liquide à Haute Pression Z: Benzyloxycarbonyl CIZ: p-Chlorobenzyloxycarbonyl MATERIEL ET METHODES A\ MATERIEL - Les acides amines, polyaminés (ou leur dérivés) de départ sont disponibles commercialement. C'est le cas par exemple de : N-(3-aminopropyl)glycine, N-(2- cyanoethyl)glycine, 2,4-diaminobutyric acide ou peuvent être synthétisées par des méthodes classiques. - Les isothioureas cvcliques sont également des produits commerciaux. comme par exemple le 2-Méthylthio-2-Imidazoline hvdro-iodide. ou peuvent être synthétisees par des méthodes classiques connues de l'homme du métier, - Les amines lipides sont commerciales ou bien synthetisees a partir des amines ct aldéhydes correspondants par réduction alkalative. - Les produits triéthylamine, trifluoroacétique, BOP, DMAP, chloroformate de benzyle, diterbutyle dicarbonate sont des produits commerciaux. Les solutions de NaCI et NaHCO3 sont saturées; la solution de KHSO4 est de 0,5 M. B\ METHODES 1) Mesures Physiques. Les spectres de RMN Proton ont été enregistrés sur des spectromètres Bruker 400 et 600 MHZ. Les spectres de masse ont été réalisés sur un API-MS/III. 2) Méthodes de purification et d'analvse a) Conditions de chromatographie en phase directe - Les chromatographies sur couche mince (CCM) ont été effectuées sur des plaques de gel de silice Merck de 0,2 mm d' épaisseur. Elles sont révélées soit aux U.V. (254nm), à la nirlhydrine, en vaporisant (spray léger) une solution éthanolique de ninhydrine (40 mg/100 ml d'EtOH) pour révéler les amines ou les amides en chauffant à 150 C, à la fluorescamine, en vaporisant une solution (40 mg/ 100 ml d'acétone) pour révéler les amines primaires, au vert de bromocrésol, en vaporisant une solution (0,1% dans le propanol-2) pour révéler les acides, à la vanilline en vaporisant (sprav léger) une solution ethanolique de vanilline (30/o) avec 3% H2SO4 suivi d'un chauffage à 1î00C. ou à l'iode en recouvrant la plaque de poudre d'iode. - Les chromatographies sur colonne ont été effectuées sur gel de silice 60 Merck de granulométrie 0,063-0,200 mm. b) Conditions de purification HPLC préparative L'appareillage est un ensemble pour la chromatographie en phase liquide en mode gradient permettant une detection U.V. Cette chaine preparative est composée des éléments suivants Pompe A : GILSON modéle 305 equipée d'une tête 50 SC. Pompe B : GILSON modèle 303 équipée d'une tête 50 SC. Boucle d'injection. : 5 ml. Module de pression : GILSON modèle 806. Mélangeur : GILSON modèle 811 C équipé d'une tête de 23 ml. Détecteur UV : GILSON modèle 119 équipé d'une cellule préparative. Collecteur de fraction : GILSON modèle 202 équipé de portoirs n 21 et de tube en verre de 10 ml. Intégrateur: SHIMADZU modèle C-R6A. Colonne : Colonne C4 (lOmm) en acier inoxydable de 25 cm de longueur et de 2,2 cm de diamètre commercialisée par VYDAC modèle 214 TP 1022. La solution de produit à purifier est chargée sur la colonne par l'intermédiaire de la boucle d'injection, I'éluat est recueilli par fractions de un tube en 30 secondes. Le détecteur est réglé aux longueurs d'onde de 220 nm et 254 nm. les phases mobiles sont ainsi définie Solvant A Solvant B Eau déminéralisée 2500 ml Acétonitrile pour HPLC 2500 ml Acide trifluoroacétique 2 ml Acide trifluoroacétique 2,5 ml Gradient Temps en min % de solvant A % de solvant B Débit en ml/min 0 90 10 18 10 90 10 18 110 0 100 18 120 0 100 18 c) Techniques de chromatographie Analytique - Les analyses HPLC (High performance Liquid Chromatography) ont été réalisées sur un appareil Merck-Hitachi equlpe d'un intégrateur calculateur D 2500 HITACHI, d'un autosampler AS-2000A. d'une pompe inteligent L-6200A. et d'un détecteur UV- vis L-4000 avec longueur d'onde reglable mise a 220 nm. Les colonnes pour les séparations analytiques sont des colonnes Browlee en acier inoxydable de 3 cm de longueur et de 0,46 cm de diamètre commercialisées par APPLIED BIOSYSTEM. La phase stationnaire est constituée par de l'Aquapore Butyl 7 micron. Les phases mobiles sont l'eau (avec TFA) et l'acétonitrile (avec TFA). Les injection sont de 20 1ll d'une solution d'environ I mg/ml dans une vanne à boucle de 100 l. Le débit pour les analyses est réglé entre 1 ml/min et 4 ml/min. La pression est de 180 bars environ. Les conditions de separation sont résumées ci-dessous: Solvant A Solvant B Eau déminéralisée 2500 mL Acétonitrile pour HPLC 2500 mL Acide trifluoroacétique 2 mL Acide trifluoroacétique 2,5 mL Gradient: Temps en min % de solvant A % de solvant B Débit en ml/min 0 60 40 1 3 60 40 1 20 0 100 1 35 0 100 1 35.1 60 40 4 36.1 60 40 4 36.2 60 40 2 44 60 40 2 C MODE OPERATOIRE GENERAL a)Méthode A : Couplage d'un acide organique avec une amine L'acide organique (10 mmol) et l'amine (10 mmol) sont introduit dans un ballon de 250 ml, du CH:Cl' (100 ml) est ajoute et le mélange est agité Jusqu'à dissolution complete. Les produits DIEA (30 mmol) et BOP Lorsque la réaction est achevée (suivi par CCM et/ou CLHP), le dichlorométhane est évaporé et le solide obtenu est repris dans de l'acétate d'éthyle (300 ml). La phase organique est lavée avec une solution de KHSO4 (4 fois 100 ml), de NaHCO3 (4 fois 100 ml), et de NaCI (4 fois 100 ml). La phase organique est séchée sur MgSO4, filtrée et évaporée sous vide. Les produits sont analysés par CCM, RMN et MS, et sont utilisés sans autres purifications. Les rendements sont de l'ordre de 90 %. b) Méthode B: Clivage des groupements Boc Le produit aminé protégé par des groupements Boc (1 mmol) est introduit dans un ballon équipé d'un barreau magnétique. 30 ml de TFA à 40C sont ajoutés, puis la solution est agitée pendant une heure. Lorsque la réaction est achevée (suivi par CC.M et/ou CLHP), le TFA est évaporé sous vide puis le produit est séché par coévaporation avec 3 fois 30 ml d'éther éthylique. c) Méthode C : Clivage des vroupements Z Les produits contenant des groupes Z ou ClZ sont introduit dans un ballon équipé d'un barreau magnétique et dissous dans 10 ml de MeOH/g de produit. Du palladium sur charbon (10%, lg/g de produit) et du formiate d'ammonium (I g/g de produit) sont ajoutés à température ambiante. L'hydrogénolyse est suive par CLHP. Auprès deux heures la réaction est achevée, le mélange est filtré, et le filtre lavé avec 3 fois 10 ml de MeOH/g de produit. De l'eau double distillée est ajoutée et la solution est congelée et lyophilisée, ou bien le filtrat est concentré à sec et le solide est repris dans de l'acétate d'éthyle (300 ml). La phase organique est lavée par NaHCO3 (2 fois 100 ml), et NaCI (2 fois 100 ml), puis elle est séchée sous MgSO4, filtrée et évaporée sous vide. Les produits sont analysés par CLHP et sont utilises sans autres purifications. Les rendements sont de l'ordre de 90 Oo. d) Méthode D : Préparation des Boc amino-acides ou Z amino-acides L'amino-acide (0.1 mol/amine) est solubilise dans de la soude 1N ('00 ml/amine) et du dioxane Cyanoéthylation: Dans un ballon, I'amino-acide (0,05 mol) et NaOH (0,1 mol) sont solubilisés dans 150 ml d'eau. La solution est refroidie dans un bain de glace. Sous vive agitation on coule lentement de l'acrylonitrile (0s05 mol) en gardant la température de la masse inférieure à 20 C. Le mélange de réaction est maintenu une nuit à température ambiante. Le solvant est évapore sous vide puis le mélange est acidifié à pH 3 avec une solution de KHSO4. Ce qui est insoluble est extrait avec de l'acétate d'éthvlc (3 fois 200 ml), puis lavé avec une solution de NaCI (2 fois 100 ml). La phase organique est seche sur MgSO4, puis filtrée et evaporee sous vide. Le brut est éventuellement purifié sur une colonne de silice. Dicyanoéthylation La procédure est identique a celle decrite ci-dessus. avec 0,12 mol d'acrylonitrile. Une étape de maintient du mélange à 50C pendant deux heures est ajoutée aptes l'étape a température ambiante toute une nuit. f) Méthode F : Réduction du nitrile d'un cvano-amino-acide Dans un autoclave en inox de 1 litre, on introduit le cyano-amino-acide (50 mmol). On prépare en même temps dans un bêcher une solution de 10 ml d'éthanol (95%) et de 3,3 g de NaOH (80 mol). Lorsque la soude est dissoute, on introduit cette solution dans l'autoclave. Un courant d'azote est passé dans l'autoclave et on introduit 2 ml de Nickel de Raney sur charbon. L'autoclave est fermé. La pression initiale d'hydrogénation est de 52 bar, et elle descend à 48,5 bar en une nuit à température ambiante. La suspension est filtrée sur papier, le filtre est lavé avec de l'éthanol (4 fois 25 ml), et les filtrats sont concentrés à sec sous vide. On obtient un solide blanc qui est utilisé sans autres purifications après une analyse CCM. ) Méthode G : Introduction d'un cvcle vuanidine a partir d'hvdro-iodure d'isothiourea cyclique Le produit contenant l'amine primaire à modifier ( I mmol/amine) est solubilisé dans du CH2Cl2 (10 ml), puis on ajoute l'hydro-iodure d'isothiourea cyclique (1,' mmol/amine) et le TEA (1,3 mmol/amine). Le mélange est agité à température ambiante jusqu'à l'arrêt du dégagement de sulfure de méthyle. A la fin de la réaction (suivie par CLHP), le CH2Cl2 est évaporé sous vide. h) Méthode H: Svnthèse d'amine dilinidique Dans un ballon, l'amine lipidique (0.05 mol) et l'aldéhyde lipidique (0,02 mol) sont solubilisés dans 200 ml de DCE. La solution est agitée. puis du triacétoxyborohydrure de sodium (0,028 mol) est ajoute. Le mélange est maintenu sous agitation durant une nuit. 200 ml de CHCl3 sont coules. puis la solution est avee avec NaHCO. (2 2 fois 100 ml), et NaCl (2 fois 100 ml). La phase organique est séchée sur MgSO4, puis filtrée et évaporée sous vide. Les produits sont analysés par CCM, puis purifiés sur une colonne de silice (CHCl3/MeOH). Les rendements sont voisin de 50 %. EXEMPLES A\ SYNTHESES DES AGENTS DE TRANSFECTION Exemple 1 : synthèse du composé 1 (N-dioctadécylcarbamoylméthyl-2- {3-[4-(2- imino-tétrahydro-pyrimidin- 1-yl)butylamino]-propylamino}-acétamide) à partir du composé RPR 120535A (dont la préparation a été décrite dans la demande de brevet WO 97/18185 et dont la structure est représentée à la figure 2). Dans un ballon équipé d'un barreau magnétique, on dissout 0,784 mmol de RPR 120535A dans 25 ml de méthanol, et on ajoute 10,21 mmol de triéthylamine. Puis on coule lentement (5 minutes) sur le mélange une solution de O-Methylisourea et d'acide sulfurique H,SO4 (1,173 mmol) dans de l'eau (9 ml). Le mélange est maintenu à 50 C dans un bain d'huile pendant vingt heures. Ensuite, le mélange est concentré à sec au rotoévaporateur. On solubilise l'extrait sec avec une solution d'eau (4 ml), d'éthanol (4 ml), et d'acide trifluoroacétique (1 ml), Cette solution est injectée en deux fois en CLHP préparative. Les fractions intéressantes (déterminées par CLHP analytique) sont regroupées, congelées et lyophilisées. On obtient ainsi 194 mg ( 0,163 mmol ) de produit salifié. Rendement : 20,8 % CLHP analytique : Rt Rt = 15,99 minutes. Spectre de RMN 1H (400MHz, (CD3)2SO d6. o en ppm) : 0,88 (t, J = 6,5 Hi, 6H CH3 des chaînes grasses) ; 1,24 (mt, 60H CH2 centraux des chaînes grasses) ; de 0,35 à 1,70 (mt, 4H ; @ CH2 de chaque chaîne grasse), 1,57 (mt, 4H . (CH2)2 centraux du butyle) ; 1,88 et 1,96 (2 mts, 2H chacun: CH2 central du propyle et CH2 central du cycle) : de 2.85 à 3.35 2H : NCH2CON) : 4,03 (d, J = 5 Hz, 2H ; CONCH2CON du glycyle) ; 7,25 et 7,84 (respectivement s et s large, 1H chacun : les 2 NH du cycle) ; 8,61 (t, J = 5,5 Hz, 1H NHCO); 8,70 et 9,02 (2 mfs, 1H chacun : les 2 NH). MH+ = 846 Exemple 2 : synthèse du composé 2 (N-ditétradécylcarbamoylméthyl-2-{3-[4-(2imino-tétrahydro-pyrimidin- 1-yl)-butylamino]-propylamino}-acétamide) à partir du composé RPR 122766A (dont la préparation a été décrite dans la demande de brevet WO 97/18185 et dont la structure est représentée à la figure 2). Dans un ballon équipé d'un barreau magnétique on dissout 1,036 mmol de RPR 122766A dans 30 ml de méthanol, et on ajoute 13,13 mmol de triéthylamine. Puis on coule lentement (5 minutes) sur le mélange une solution de O-Methylisourea et d'acide sulfurique H2SO4 (1,554 mmol) dans de l'eau (9 ml). Le mélange est maintenu à 500C dans un bain d'huile pendant une vingtaine d'heures. Puis, le mélange est concentré à sec au rotoévaporateur. On solubilise l'extrait sec avec une solution d'eau (3 ml), d'éthanol (2 ml), et de d'acide trifluoroacétique (0,5 ml). Cette solution est injectée en CLHP préparative. Les fractions intéressantes (déterminées par CLHP analytique) sont regroupées, congelées et ly CF3COO-, NH+ CF3COO- et =NH) : 7,88 et 8,61 (respectivement s et s large, 1H chacun : respectivement NHC=N et CONH). MH+= 734 Exemple 3 : synthèse du composé 3 (2-(3-{4-[3-(4,5-dihydro-1H-imidazol-2- ylamino)-propylamino]-butylamino}-propylamino)-N-ditétradécylcarbamoylméthylacétamide) à partir du composé RPR 122766A (dont la préparation a été décrite dans la demande de brevet WO 97/18185 et dont la structure est représentée à la figure 2). Dans un ballon equipé d'un compte-bulle et d'un barreau magnétique, on dissout 0,36 mmol de iodure de 2-méthylmercapto-2-imidazolinium dans 0,36 ml de soude IN. A cette solution on ajoute 0,36 mmol de RPR 122766A préalablement dissout dans 1,44 ml de soude 1N, 5 ml d'eau, et 4 ml d'éthanol. Le mélange est maintenu sous agitation jusqu'à l'arrêt de dégagement de méthyl mercaptan (24 heures). Le mélange est ensuite concentré à sec au rotoévaporateur. On solubilise l'extrait sec avec une solution d'eau (4 ml), d'éthanol (4 ml), et de d'acide trifluoroacétique (0,5 ml). Cette solution est injectée en deux fois en CLHP préparative. Les fractions intéressantes (déterminées par CLHP analytique) sont regroupées, congelées et lyophilisées. On obtient finalement 213 mg ( 0,1 727 mmol ) de produit salifié. Rendement: R = 48 % HPLCanalytique ; Rt = 8,90 minutes. Spectre de RMN 1H (400 MHz, (CD3)2SO d6 avec ajout de quelques gouttes de CD3COOD d4, # en ppm) : 0,87 (t, J = 7 Hz, 6H : CH3 des chaînes grasses) ; de 1;15 à 1,40 (mt, 44H : (CH2)11 centraux des chaînes grasses) ; 1,45 et 1,55 (2 mts, 2H chacun : 1 CH2 de chaque chaîne grasse) ; 1,65 (mt, 4H ; les 2 CH2 centraux du butyle) ; de 1,80 à 1,95 (mt, 4H ; CH2 central des propyles) ; 2,80 à 3,05 (mt, 10H : les 2 NCH: du butyle - les 2 NCH: d' un des 7 propyles - et 1 des 2 NCH2 de l'autre propyle) ; 3,24 (mt, 6H : NCH2 de l'autre propyle et NCH2 des chaînes grasses) ; 3,56 (s, 2H ; NCH2CON) ; 3,62 (s, 4H ; NCH2CH2N) ;4,02 (d, J = 5 Hz, 2H . CONCH2CON du glycyle). Exemple 4 : Svnthèse du comPosé 4 (2-(3-{bis-[3-(4,5-dihydro-1H-imidazol-2- ylamino)-propyl] -amino } -propylamino)-N-ditétradécylcarbamoylméthyl -acetamide) par la méthode de synthèse de briques. a) SYNTHESE DU BOC-GLY-DITETRADECYLAMINE (1) Le Boc-Gly est couplé à la ditétradécylamine selon la méthode A décrite dans la partie "Matériel et Méthodes". Le rendement est de 93%. CCM : Rf= 0,9 (CHCî3/MeOH, 9:1) MH+ : 567 b) SYNTHESE DE [Z-NH(CH2)3]2-N-(CH2)3-NH-Boc-CH2-COOH (2) 1) Synthèse de NC-(CH2)2-NH-Boc-CH2-COOH (3) L'amine de la N-(cyanoéthyl)-glycine est protégée par un groupement Boc suivant la méthode D décrite dans la partie "Matériel et Méthodes". Le rendement est de 98%. CCM : Rf= 0,66 (CHCl3/MeOH, 8:2) MH+ : 229 2) Synthèse de SH2-(CH2)3-NH-Boc-CH2-COOH (4) Le produit (3) est hydrogéné selon la méthode F décrite dans la partie "Matériel et Méthodes". CCM : Rf =0,12 (CHCl3iMeOH, 6:4) MH+ : 233 3) Synthèse de [NC(CH2)2]2-N-(CH2)3-NH-Boc-CH2-COOH (5) Le produit (4) est dicyanoéthylé suivant la méthode E décrite dans la partie "Matériel et Méthodes" Le rendement est de 80%. CCM : Rf = 0,75 (CHCl3/MeOH, 6:4) MH+ : 339 4) Synthèse de [Z-NH-(CH2)3]2-N-(CH2)3-NH-Boc-CH2-COOH (2) Le produit ( (5) est hydrogéné suivant la méthode F décrite dans la partie 'Matériel et Méthodes1,. CCM: Rf = 0,14 (CHCl3MeOH, 6:4) Puis les amines sont protégées par des groupements Z suivant la méthode D décrite dans la partie "Matériel et Méthodes1'. Le Produit brut est purifié sur une colonne de silice (CH2Cl2/MeOH, 8:2). On obtient une meringue blanche avec un rendement de 66% par rapport au produit (4). CCM : Rf= 0,42 (CHCl3/MeOH, 6:4) MH+:615 c) SYNTHESE DE [Z-NH(CH2)3]2-N-(CH2)3-NH-Boc-CH2-COGlyN[(CH2)13-CH3]2 (6) Le Boc du produit (1) est clivé suivant la méthode B décrite dans la partie "Matériel et Méthodes". CLHP . Rt = 12,86 min, (H2O/MeCN : 3 min [40/60], 3-20 min [0/100], 35 min [0/100]). Le produit obtenu est couplé avec le produit (2) suivant la méthode A décrite dans la partie "Matériel et Méthodes". Le rendement est de 75% après purification sur une colonne de silice (CH2Cl2/MeOH, 8:2). CCM : Rf = 0,86 (CHCl3/MeOH, 8:2) CLHP . Rt = 17.44 min, (H:O/MeCN : 3 min [40/60], 3-20 min [0/100], 35 min [0/100]). d) SYNTHESE DE [NH2(CH2)3]2-N-(CH2)3-NH-Boc-CH2-COGlyN[(CH2)13-CH3]2 (7) Les groupements Z sont clivés suivant la méthode C décrite dans la partie "Matériel et Méthodes". Un rendement de 40% est obtenu par rapport au produit (6). CLHP . Rt = 9,62 min, (H2O/MeCN : 3 min [40/60], 3-20 min [0/100], 35 min [0/100]). MH+: 795. e) SYNTHESE DU COMPOSE 4 (8) L'hydro-iodure de 2-méthylthio imidazoline réagit sur le produit (7) suivant la methode G décrite dans la partie "Matériel et Méthodes" Le Boc est clive selon la méthode B décrite dans la partie "Matériel et Méthodes". Le produit est purifié par CLHP préparative et les fractions analysées par CLHP. Le rendemant est de 34%. CLHP : Rt = 10,07 min, (H2O/MeCN : 3 min [40/60], 3-20 min [0/100], 35 min [0/100]). Spectre de R M N 1H (400 MHz, (CD3)2SO d6 à une température de 383K, d en ppm) : 0,92 (t, J = 7 Hz, 6H : CH3 des chaînes grasses) ; de 1,25 à 1,45 (mt, 44H (CH2)11 centraux des chaînes grasses); 1,57 (mt, 4H : 1 CH2 de chaque chaîne grasse) ; de 1,70 à 1,90 (mt, 6H : CH2 central des propyles) ; de 2,50 à 3,40 (mt, 16H : les 2 NCH2 des propyles et les NCH2 des chaînes grasses); 3,68 (s, 8H : les 2 NCHrCH2N) ; 3,72 (s large, 2H : NCH2CON) ; 4,06 (s, 2H : CONCH2CON du glycyle). MH+ : 831 B\ UTILISATION DES AGENTS DE TRANSFECTION SELON L'INVENTION Exemple 5 : préparation de complexes nucléolipidiques Cet exemple illustre la préparation de complexes agents de transfert / ADN. Le lipide cationique utilisé dans cet exemple et dans les exemples qui suivent est le composé 1 (figure 1) en solution dans du chloroforme. Des quantités de 10 nmoles de composé 1 (soit 11,8 g de composé 1) par g d'ADN ont été utilisées. Dans certains cas, un co-lipide neutre, Cholestérol ou DOPE, est préalablement mélangé au lipide cationique. Un film lipidique fin se forme lorsqu'on évapore le chloroforme à l'aide d'un flux léger d'argon, puis il est réhydraté dans un mélange de dextrose 5% et de chlorure de sodium 20 mM, pendant toute une nuit, à 4 C. Les échantillons sont ensuite traités aux ultrasons pendant 5 minutes, chauffés à 65 C pendant 30 minutes, et enfin traités à nouveau aux ultrasons pendant 5 minutes. On obtient ainsi des suspensions lipidiques qui sont stockées à 40C jusqu'a leur utilisation. L'ADN utilisé est le plasmide pXL2774 (fiii:ure 3) en solution dans un mélange de dextrose 5% et de chlorure de sodium 20 mM à une concentration de 0,5 mg ml ou 1.0 mg/ml. Le plasmide pXL2774 possede les caracteristiques suivantes - niveau d'endotoxines inférieur à 50 EU/mg, - Taux d'ADN superenroulé supérieur à 60%, - contenu d'ARN, c'est-à-dire d'ARNm, d'ARNt et d'ARN ribosomique, (déterminé: par HPLC) inférieur à 5%, - taux d'ADN chromosomal inférieur à 1%, - contenu protéique inférieur à 1%, - osmolarité inférieure à 15 mosmoles/kg. On prépare les complexes agent de transfection/ADN en mélangeant rapidement des volumes égaux de solution d'ADN et de suspension lipidique telles que décrites ci-dessus. La quantité de lipide complexé à l'ADN varie de 0,5 nmoles/llg d'ADN à 12 nmoles/pg d'ADN. Exemple 6 : comDortement des complexes formés a différent rapport de charge Cet exemple illustre le comportement des complexes agent de transfection/ADN à différents rapport de charge. L'impact de l'ajout d'un co-lipide neutre est également illustré. La taille des complexes a tout d'abord été analysée en mesurant le diamètre hydrodynamique par diffusion dynamique de la lumière (Dynamic Laser Light Scattering) à l'aide d'un appareil Coulter N4plus. les échantillons sont dilues 20 fois dans une solution contenant 5% de dextrose et 20 mM de chlorure de sodium NaCI pour éviter les diffusions multiples. L'effet de la tête cycloamidine, de la composition lipidique, et du rapport de charge agents de transfert/ADN sur la taille des complexes a ainsi été étudié. En règle générale, on distingue trois phases possibles lorsqu'on augmente le rapport de charge agents de transfertvADN. Ces trois phases déterminent le potentiel thérapeutique de l'agents de transfert d'acides nucléiques en question. Les figures 4 et 5 illustrent ces phases pour différents lipides cationiques : : le RPR 120535. le RPR 121650 (qui ont tous deux et décrits dans la demande de brevet WO 97/18185). et le compose I selon l'invention. A faible rapport de charge, l'ADN n'est pas saturé par le lipide cationique. Il reste encore de l'ADN nu, et les complexes sont globalement chargés négativement. Les particules sont de petite taille (entre 100 et 300 nm). Cette phase est appelée "Phase A". Le fait que 1'ADN ne soit pas complètement saturé par le lipide cationique signifie que l'ADN n'est pas complètement protégé par le lipide. L'ADN peut donc être soumis aux dégradations par les enzymes (DNAases). Par ailleurs, les complexes étant globalement négatifs, le passage de la membrane cellulaires est difficile. Pour ces raisons, les complexes nucléolipidiques de la phase A sont relativement inactifs. A rapport de charge intermédiaire, I'ADN est complètement saturé par le lipide cationique, et les complexes sont globalement neutres ou légèrement positifs. Cette phase est instable car les répulsions ioniques sont minimales et un phénomène de "crosslinking" peut se produire. La taille des particules est bien au dessus de la limite de détection par diffusion dynamique de la lumière (très supérieure à 3 llm). Cette phase instable est appelée "phase B". Une telle taille de complexes n'est pas adaptée pour des utilisations en injection. Cependant, bien que le complexe RPR 120535/DOPE/ADN à un rapport de charge de 5 forme des gros agrégats qui précipitent, il a été trouvé actif en transfert de gène. Ainsi, les complexes ne sont pas forcément inactifs dans la phase B, mais ils sont seulement sous une formulation qui n'est pas appropriée pour leur injection dans un but pharmaceutique. A rapport de charge relativement élevé, l'ADN est sur-saturé par le lipide cationique. et les complexes sont globalement positifs. Du fait des fortes répulsions entre les charges positives cette phase est stable. Elle est désignée sous le nom de "phase C". Contrairement à la phase C. les complexes nucléolipidiques sont sous une forme telle que l'ADN est tres bien protegé vis-a-vis des enzymes. et leur charge globalement positive facilite le passage de la membrane cellulaire de nature anionique. Les complexes de la phase C sont donc particulierement adaptés a une utilisation pour le transfert d'acides nucleiques dans les cellules. En plus de la tête cycloamidine du lipide cationique, l'utilisation d'un co-lipide neutre a un fort impact sur la stabilité des complexes, comme cela est illustré figure 4 et figure 5. les co-lipides ajoutés dans ces exemples sont soit du DOPE (lipide cationique/DOPE = 3/2), soit du cholestérol (lipide cationique /cholestérol = 3/1). En général, I'ajout du co-lipide neutre augmente l'instabilité des complexes, ce qui entraîne l'augmentation de la quantité de lipide cationique requise pour atteindre la phase C. Il faut noter que les valeurs du rapport de charge qui délimitent les trois phases A, B et C dépendent du lipide cationique utilisé. Ainsi, ces valeurs peuvent varier très fortement d'un lipide à l'autre. Dans un second temps, l'affinité de l'agents de transfert vis-a-vis de l'ADN en fonction du rapport de charge a été étudiée. Pour cela, la réduction de fluorescence après ajout de 3 iag de bromure d'éthidium (EtBr) a été mesurée. En effet, la substitution du bromure d'éthidium de l'ADN par le lipide est une indication de liaison à l'ADN. Les formulations utilisées sont diluées 20 fois jusqu'à une concentration finale de 25 llg d'ADN/ml. La fluorescence relative mesurée pour l'ADN nu est définie comme étant 100%. Le taux de liaison avec l'agent de transfert d'acides nucléiques est représenté par la réduction de la fluorescence relative de l'échantillon. Les figures 4 et 5 montrent que la fluorescence diminue quand le rapport de charge augmente, ce qui signifie qu'une plus grande quantité de lipide cationique est disponible pour se lier à l'ADN (plus la fluorescence décroit, plus une grande quantité de lipide cationique sc lie à l'ADN jusqu'à atteindre la saturation). De cette façon. il a été ainsi montre que l'affinité du lipide cationique pour l'ADN est déterminée par la tête cycloamidine. mais pas par l'addition d'un co-lipide. Exempie 7 : transfection in vitro Cet exemple illustre la capacité des agents de transfert selon l'invention à transfecter l'ADN dans les cellules in vitro, comparativement à l'ADN nu. Des microplaques de 24 puits sont ensemencées avec 60000 cellules HeLa (ATCC) par puit, et transfectées 24 heures plus tard. Des complexes contenant I g d'ADN sont dilués dans 0,5 ml de milieu de culture DMEM (Gibco/BRL) en l'absence de sérum, puis ajoutés dans chaque puit. Les cellules sont incubées à 37 C pendant 4 heures. Le milieu contenant les complexes est ensuite enlevé et remplacé par un mélange de DMEM et de 10% de sérum de veau foetal. Puis, les cellules sont à nouveau mises en culture pendant 24 heures. Enfin, les cellules sont lysées et testées en utilisant un kit de test de luciférase (Promega) et un luminomêtre Dynex MILS. Les résultats indiqués à la figure 6 soulignent la différence entre les performances de l'ADN nu par rapport aux complexes de l'invention totalement saturés composé 1/ADN : aucune activité luciférase n'a pu être détectée (sensibilité de l'appareil inférieure à 1 pg par puit) après transfection in vitro d'ADN nu, alors que l'activité de transfert de gène des complexes selon l'invention varie de 200 pg/puit à 8000 pg/puit. Cet exemple montre donc clairement l'utilisation avantageuse des composes selon l'invention pour la transfection des cellules in vitro. Exemple 8: transfection in vivo Cet exemple illustre la capacité des agents dc transfert selon l'invention à transfecter l'ADN dans les cellules in vi', comparativement à l'ADN nu et à un lipide cationique connu, le RPR 120531 décrit dans la demande WO 97/18185 et dont la structure est représentée représente à la figure 2. Le transfert de gene in @ vivo a eté effectue sur des souris Balb C par administration intramusculaire et intraveineuse. Les formulations qui ont éte comparées sont des formulations d'ADN nu, des formulations contenant le RPR 120531. ou des formulations contenant le composé 1 selon l'invention. Dans le cas des injections intramusculaires, chaque souris a reçu 30 Cll de formulation contenant 15 g d'ADN dans le muscle antérieur du tibia. Les tissus sont récupérés 7 jours après l'injection, ils sont congelés et stockés à -80 C en attendant d'effectuer les tests d'activité luciférase. Les mesures d'activité luciférase se font comme dans l'exemple 6. Dans le cas des injections par voie intraveineuse, chaque souris a reçu 200 1ll de formulation contenant 50 g d'ADN. Les tissus sont récupérés dans ce cas 24 heures après l'injection, puis congelés et stockés de la meme façon que précédemment. Les résultats de transfert de gène in vivo sont présentés figure 7 et figure 8. Le rapport entre le composé 1 et l'ADN est de 10 nmoles/ g d'ADN. Le rapport entre le RPR 120531 et 1'ADN est de 4 nmoles/ g d'ADN. La figure 7 illustre l'activité in vivo du composé I selon l'invention comparativement à l'ADN nu et au RPR 120531. On constate que les niveaux d'activité luciférase sont équivalents entre l'ADN nu et le composé 1, ce dernier présentant en outre une activité très améliorée par rapport au RPR 120531. Les mécanismes de transfert impliqués semblent différents entre l'ADN nu et l'utilisation du composé 1 selon la présente invention. En effet, les complexes selon l'invention utilisés ne contiennent pas d'ADN libre (phase C) et de plus, leurs résultats in ISitro sont très supérieures à ceux de l'ADN nu. La figure 8 compare les activité du composé I selon l'invention, de l'ADN nu et du RPR 120531, par voie intraveineuse et par voie intramusculaire. On constate que l'efficacité de transfection est à peu pres équivalente par voie intraveineuse pour les deux lipides cationiques. Par contre, par voie intramusculaire, I'efficacite de transfection du composé 1 selon l'invention est tres nettement supérieure. Par rapport a l'ADN nu. le compose I présente une transfection par solC intraveineuse. en plus de la transfection au moins equivalente par voie intramusculaire Il apparaît donc que l'efficacité de transfert de l'acide nucléique in vivo du composé 1 selon l'invention est globalement supérieure à cellede l'ADN nu et du RPR 120531. Enfin, il apparait que les complexes selon l'invention possèdent l'avantage, par rapport à la transfection d'ADN nu, de protéger l'ADN des dégradations par les nucléases, contribuant ainsi à une amélioration significative de la stabilité des formulations. Les composés de la présente invention peuvent être également utilisés pour protéger l'ADN des détériorations au couPs de la Iyophilisation, améliorant la encore la stabilité des formulations. REVENDICATIONS 1. Agent de transfert d'acides nucléiques, sous forme D, L ou DL, ainsi que ses sels, de formule générale (I): CA-Rep-R (I) pour laquelle O CA représente une tête cycloamidine et ses formes mésomères de formule générale (II): pour laquelle: e m, et n sont des entiers indépendants l'un de l'autre compris entre 0 et 3 inclus et tels que m+n est supérieur ou égal à 1, .R1 représente un groupement de formule générale (III): pour laquelle p et q sont des entiers indépendants l'un de l'autre compris entre 0 et 10 inclus. et Y représente un groupement carbonyle, amine, méthylamine, ou bien méthylène. Y pouvant avoir des significations différentes au sein des différents groupements [(CH,)p-Y] et étant entendu que R1 peut être lié à n'importe quel atome de la formule générale (II). e X représente un groupement NR2 ou bien CHR2, R! étant soit un atome d'hydrogène soit le groupement R tel que défini précedemment, e Le groupement représente: * 1er cas : un groupement de formule générale (IV) : pour laquelle W représente CHR"' ou bien NR"', et R" et R"' représentent indépendemment l'un de l'autre un atome d'hydrogène, un méthyle, ou le groupement R1 tel que défini précédemment, étant entendu que R" et R"' ne peuvent pas être R1 en même temps, ou bien * 2ème cas : un groupement de formule générale (V) pour laquelle W représente CHR"' ou bien NR"', et R' et R"' représentent indépendemment l'un de l'autre un atome d'hydrogène, un méthyle, ou le groupement R1 tel que défini précédemment, etant entendu que R' et R"' ne peuvent pas être R1 en même temps, 2 Rep est absent ou est un repartiteur de formule générale (VI): dont l'atome d'azote est rattaché à CA. et: e t est un entier compris entre 0 et S inclus, e r est un entier compris entre 0 et 10 inclus, r pouvant avoir des significations différentes au sein des différents groupements -NR4-(CH)r-, e R3, qui peut avoir des significations différentes au sein des différents groupements NR4-(CH)rR3, représente un atome d'hydrogène, un groupement méthyle, ou un groupement de formule générale (VII): pour laquelle u est un entier compris entre I et 10 inclus, s est un entier compris entre 2 et 8 inclus pouvant avoir des significations différentes au sein des différents groupements -(CH)s-NR5, et R5 est un atome d'hydrogène, un groupement CA tel que définis précédemment étant entendu que les groupements CA sont indépendants les uns des autres et peuvent être différents, ou bien un groupement de formule générale (VII) étant entendu que les groupements de formule générale (VII) sont indépendants les uns des autres et peuvent avoir des significations différentes, e Rs est défini de la même façon que R3 ou bien représente un groupement CA tel que défini précédemment étant entendu que les groupements CA sont indépendants les uns des autres et peuvent être différents, et 3 R est lié a la fonction carbonyle du groupement Rep de formule générale * soit un groupement de formule NR6R pour laquelle R6 et R- représentent indépendamment l'un de l'autre un atome d'hydrogène ou un radical aliphatique saturé ou non, linéaire ou ramifiée, éventuellement fluoré. contenant 1 à 22 atomes de carbone, avec l'un au moins des deux substituants Rh ou R- différent de l'hydrogene et l'autre contenant entre 10 et 22 atomes de carbone. * soit un drive de steroïde. * soit un groupement de formule générale (VIII): pour laquelle x est un entier compris entre I et 8 inclus, y est un entier compris entre 1 et 10 inclus, et soit Q représente un groupement C(O)NR6R7 pour lequel R6 et R7 sont définis comme précédemment, soit Q représente un groupement C(O)Rx pour lequel R8 représente un groupement de formule (IX) pour laquelle z est un entier compris entre 2 et 8 inclus, et R9 est un radical aliphatique saturé ou non , éventuellement fluoré, contenant 8 à 22 atomes de carbone, ou un dérivé de stéroïde, ou bien Rx représente un groupement -O-Rs pour lequel R9 est défini comme cidessus. 2. Agent de transfert d'acides nucléiques selon la revendication I caractérisé en ce que, dans le groupement de formule (VI), R3 et R4 représentent des atomes d'hydrogène ou bien R4 représente un atome d'hydrogène et R; est un groupement de formule (VII) tel que défini dans la revendication 1 pour lequel Rs représente une tête cvcloamidine CA. 3. Agent de transfert d'acides nucléiques selon la revendication 1 caractérisé en ce que la tète cvcloamidine CA de formule (II) comporte 5. 6. 7, ou 8 chainons. 4. Agent de transfert d'acides nucléiques selon la revendication I caractérisé en ce que, dans la formule (III). p et q sont choisis indépendamment l'un de l'autre parmi 2, 3, ou 4. 5. Agent de transfert d'acides nucleiques selon la revendication 1 caractérisé en ce que les groupements R et R- sont identiques ou différents et representent chacun des chaînes aliphatiques saturées ou non, linéaires ou ramifiées, éventuellement fluorées, contenant 10 à 22 atomes de carbone. 6. Agent de transfert d'acides nucléiques selon la revendication 1 caractérisé en ce que les groupements R6 et R7 sont identiques ou différents et représentent chacun des chaînes aliphatiques saturées ou non, linéaires ou ramifiées, éventuellement fluorées, et contenant 12, 14, 16, 17, 18, ou 19 atomes de carbone. 7. Agent de transfert d'acides nucléiques selon les revendications I et 5 caractérisé en ce que le dérivé de stéroïde est choisi parmi le cholestérol, le cholestanol, le 3-a-S- cyclo-5-a-cholestan-6-ss-ol, l'acide cholique, le cholestérylformiate, le chotestanylformiate, le 3&alpha;,5-cyclo-5&alpha;-cholestan-6ss-yl formiate, la cholestérylamine, la 6-(1,5-diméthylhexyl)-3a,5a-diméthyl hexadécahydrocyclopenta[a]cyclopropa[2 ,3 ]cyclopenta[ 1,2 -f]naphta-lèn- I 0-ylamine, ou la cholestanylamine. 8. Les agents de transfert d'acides nucléiques selon la revendication I de formules 9. Procédé de préparation des agents de transfert d'acides nucléiques selon les revendications 1 à 8 caractérisé en ce que l'on effectue la synthèse des briques portant la/les fonctions cycloamidine puis l'on greffe ces briques sur des lipides équipés de répartiteurs. 10. Procédé de préparation des agents de transfert d'acides nucléiques selon les revendications 1 à 8 caractérisé en ce que l'on effectue la synthèse des lipopolyamines puis l'on effectue la cyclisation en tete cycloamidine. 11. Composition caractérisée en ce qu'elle comprend un agent de transfert d'acides nucléiques selon l'une des revendications 1 à 8 et un acide nucléique. 12. Composition selon la revendication 11 caractérisée en ce qu'elle comprend en outre un ou plusieurs adjuvants. 13. Composition selon la revendication 12 caractérisée en ce que l'adjuvant est un ou plusieurs lipides neutres. 14. Composition selon les revendications 12 et 1; caractérisée en ce que les lipides neutres sont des lipides à deux chaînes grasses. ils Composition selon les revendications 12 à 14 caractérisée en ce que les lipides neutres sont des lipides naturels ou synthétiques, zwitterioniques ou dépourvus de charge ionique dans les conditions physiologique, choisis par exemple parmi la dioleoylphosphatidyléthanolamine (DOPE). I' oléoylpalmitoylphosphatidyléthanol- amine (POPE), les di-stearoyl, -palmitoyl, -mirystoyl phosphatidyléthanolamines ainsi que leurs dérivé N-méthylés 1 à 3 fois, les phosphatidylglycérols, les diacylglycérols, les glycosyldiacylglycérols, les cérébrosides (tels que notamment les galacto cérébrosides). les sphingolipides (tels que notamment les sphingomyélines) ou encore les asialogangliosides (tels que notamment les asialoGMI et GM2). 16. Composition selon la revendication 12 caractérisée en ce que l'adjuvant est un composé intervenant directement ou non au niveau de la condensation de l'acide nucléique. 17. Composition selon la revendication 16 caractérisée en ce que l'adjuvant dérive en tout ou partie d'une protamine, d'une histone, ou d'une nucléoline et/ou de l'un de leurs dérivés, ou bien est constitué, en tout ou partie, de motifs peptidiques (KTPKKAKKP) et/ou (ATPAKKAA), le nombre des motifs pouvant varier entre 2 et 10, et pouvant être répétés de manière continue ou non. 18. Composition selon les revendications 11 à 17 caractérisée en ce qu'elle contient en outre un ou plusieurs agents de surface non-ionique(s) en quantité suffisante pour stabiliser la taille des particules de complexes nucléolipidiques. 19. Composition selon les revendications 11 à 18 caractérisée en ce qu'elle comprend un véhicule pharmaceutiquement acceptable pour une formulation injectable. 20. Composition selon les revendications 11 à 18 caractérisée en ce qu'elle comprend un véhicule pharmaceutiquement acceptable pour une application sur la peau et/ou les muqueuses. 21. Utilisation d'un agent de transfert selon l'une des revendications 1 à 8 pour le transfert in vitro ou ex vivo d'acides nucléiques dans les cellules. 22. Utilisation d'un agent de transfert d'acides nucléiques selon l'une des revendications 1 à 8 pour le transfert in vitro ou ex vivo d'acides nucléiques dans les cellules par voie intramusculaire. 23. Méthode de transfert in vitro ou ex vivo d'acides nucléiques dans les cellules caractérisée en ce qu'elle comprend les étapes suivantes (1) la mise en contact de l'acide nucléique avec un agent de transfert tel que défini dans les revendications 1 à 8 pour former un complexe, et (2) la mise en contact des cellules avec le complexe formé en (1). 24. Méthode de transfert in vitro ou ex vivo d'acides nucléiques dans les cellules selon la revendication 23 caractérisée en ce que ledit acide nucléique et/ou ledit agent de transfert sont préalablement mélangés à un ou plusieurs adjuvants.