FR 2771750 A1 19990604 FR 9715224 A 19971203 Clonage, expression et caractérisation de l'ADNc codant pour un polypeptide LVBL et application au diagnostic et au traitement d'infection virale. L'invention concerne un nouveau polypeptide LVBL (Lymphocytic Viruses Binding Lectin) encore appelé LSLCL (Lymphocytic Secreted Long form of C-type Lectin) et ses dérivés, le clonage de l'ADNc et les polynucléotides codant pour lesdits polypeptides, des vecteurs de clonage et/ou d'expression incluant lesdits polynucléotides, des cellules transformées par lesdits vecteurs et des anticorps spécifiques dirigés contre lesdits polypeptides. L'invention concerne également des procédés et des kits de diagnostic d'infection virale et des composés utilisables à titre de médicament pour la prévention et/ou le traitement de l'infection virale, en particulier par le virus HIV. Parmi les différentes stratégies développées pour lutter contre les infections virales, on peut citer la chimiothérapie, la voie immunitaire (sérums ou vaccins), et les perspectives plus récentes de thérapie génique. Les molécules utilisées en chimiothérapie antivirale sont peu nombreuses en raison de leur toxicité habituelle. Elles peuvent montrer une bonne efficacité in vitro, mais se révéler difficilement utilisables en thérapeutique à cause de leurs effets secondaires et surtout de leur toxicité cellulaire. Un autre écueil important est représenté par l'apparition de mutants résistants. Ce phénomène est surtout vrai pour les virus grippaux (Myxovirus influenza) et pour le virus de l'immunodéficience acquise (HIV-l et HIV-2). A des degrés divers, ces virus comportent en effet des taux de mutations ou de recombinaisons importants qui permettent l'apparition de mutants résistants sélectionnés et amplifiés par les diverses molécules antivirales, y compris par les associations de molécules ayant des mécanismes d'action différents qui sélectionnent alors des souches multirésistantes (Iversen et al., 1996 ; Kirschner, 1997). L'immunothérapie se montre efficace vis-à-vis de nombreux virus. Elle comporte néanmoins des difficultés d'adaptation, notamment vis-à-vis du même problème de la variabilité des Myxovirus influenza et des HIV. S'agissant de ces derniers virus, deux des problèmes rencontrés pour la mise au point de sérums ou de vaccins sont : l'extrême variabilité des souches virales et le peu d'efficacité des anticorps neutralisants constatés lors des essais réalisés en modèle isotypique. Une famille de molécules intéressantes, les collectines, possède des propriétés anti-agents infectieux, tout en étant très éloignée de la famille des immunoglobulines. Les principaux membres de cette famille sont les MBL (Mannose Binding Lectins) et les protéines du type SP-A et SP-D (du surfactant pulmonaire) . Leur organisation comporte essentiellement deux éléments constants : un domaine lectine de type C (Carbohydrate Recognition Domain, ou CRD) et un domaine propice à l'oligomérisation, généralement du type collagène-like (Gabius, 1997). Elles sont sécrétées par les hépatocytes (MBL) ou par les cellules de type II des alvéoles pulmonaires (comme la SP-A) . En raison de leurs capacités à lier certains agents infectieux (dont. certains virus) via leur CRD et à activer le système du complément, on les considère assez habituellement comme des formes primitives d'immunoglobulines participant à ce que l'on appelle le système immunitaire inné (Holmskov et al., 1994). I1 faut rappeler que la liaison des collectines à certains virus est réalisée par l'intermédiaire de leur CRD qui reconnaît certains motifs glucidiques des glycoprotéines d'enveloppe virale. I1 est rappelé également que les différentes étapes de glycosylation des protéines virales ne sont pas codées par le virus lui-même mais par la cellule infectée. On perçoit donc l'intérêt particulier du pouvoir neutralisant de certaines collectines vis-à-vis de virus à forte variabilité génétique (HIV, Myxovirus influenza). La réactivation ou l'activation de collectines plus ou moins modifiées pourrait donc constituer un domaine intéressant de thérapie génique. L'activité anti-HIV de certaines lectines d'origine végétale a également été démontrée (Hammar et al., 1995), prouvant bien ainsi les possibilités de neutralisation de ces virus par l'intermédiaire des copules glucidiques de leur enveloppe. Toutefois, il est malheureusement difficile d'envisager l'utilisation parentérale de protéines végétales en thérapeutique humaine. D'autre part, des anticorps monoclonaux dirigés contre des épitopes O-glycanniques de la glycoprotéine d'enveloppe du HIV se sont révélés avoir des propriétés neutralisantes (Hansen et al., 1990 ; Hansen et al., 1991). Les auteurs démontraient ainsi la possibilité de bloquer l'infection HIV par l'intermédiaire d'épitopes viraux invariants. Compte tenu de ce qui précède, il existe aujourd'hui un grand besoin de nouveaux traitements pour combattre l'infection virale, notamment par le HIV, traitements en particulier basés sur l'utilisation de nouveaux composés actifs dont l'efficacité pourrait s'affranchir de la variabilité génétique du virus responsable de l'infection. Ceci est précisément l'objet de la présente invention. Malgré la démonstration de la réplication constante et progressive du HIV au cours de la phase cliniquement asymptomatique de l'infection (Pantaleo, 1993 ; Piatak, 1993), il est assez généralement admis que la physiopathologie du SIDA implique plusieurs facteurs plutôt que la simple destruction des cellules T CD4+ sous l'influence direct du virus (Levy, 1993 ; Fauci, 1993 ; Kinkel et al., 1995). Parmi les facteurs associés à l'infection HIV, les altérations de glycosylation, et notamment l'hypo sialylation des cellules lympho-monocytaires, ont été étudiées (Lefebvre et al., 1994 ; Lefebvre et al., 1994 Giordanengo et al., 1995 ; Perrin et al., 1997). Parmi les hypothèses retenues pour tenter d'expliquer le ou les mécanismes de ces altérations, les inventeurs ont privilégié celle d'une hypersécrétion de protéines Oglycosylées induite par le virus, capable de saturer les capacités enzymatiques de certaines glycosyltransférases. Les inventeurs ont ainsi mis en évidence, en étudiant des surnageants de culture de lignées lymphoblastiques infectées par le HIV et après incorporation de 35SO42-, un relarguage très accéléré de glycoprotéines sulfatées. Parmi ces glycoprotéines sulfatées retrouvées dans les surnageants de culture, les inventeurs ont isolé et caractérisé un nouveau polypeptide de poids moléculaire d'environ 47 kDa, dénommé LVBL (Lymphocytic Viruses Binding Lectin) capable de se lier au virus. Le polypeptide LVBL, objet de la présente invention, peut s'apparenter aux collectines puisqu'il s'agit d'une lectine de type-C possédant également un domaine propice à l'oligomérisation et qu'il est sécrété. Il s'en distingue néanmoins par le fait qu'il est beaucoup plus spécialisé il est sécrété par le lymphocyte, son domaine d'oligomérisation est plus condensé (Leucine-Zipper), et il possède un site d'adhésion (RGD) très spécifique. I1 est ainsi possible de prévoir pour cette molécule des fonctions également plus spécialisées correspondant notamment à des activités anti-virales. Il sera possible de la proposer sous une forme appropriée qui sera développée plus loin, comme l'équivalent d'un superanticorps polyvalent, indifférent à la variabilité virale. La présente invention a donc pour objet un polynucléotide de séquence SEQ ID NO 1 telle que définie à la Figure 2 pour LVBL. L'invention concerne également les polynucléotides caractérisés en ce qu'ils comprennent les polynucléotides choisis parmi a) un polynucléotide de séquence SEQ ID NO 1 ou dont la séquence est celle de 1'ARN correspondant à SEQ ID NO 1 b) un polynucléotide dont la séquence est complémentaire de la séquence d'un polynucléotide défini en a), c) un polynucléotide dont la séquence comporte au moins 80 % d'homologie avec un polynucléotide défini en a), ou b), d) un polynucléotide hybridant dans des conditions de forte stringence avec une séquence de polynucléotide défini en a), b), ou c), e) un fragment d'au moins 8 nucléotides consécutifs d'un polynucléotide défini en a), b), c), ou d). Dans la présente description, on entendra désigner par polynucléotide, séquence de polynucléotide, séquence nucléotidique ou acide nucléique un fragment d'ADN, aussi bien un ADN double brin, un ADN simple brin que des produits de transcription desdits ADNs, et/ou un fragment d'ARN, lesdits fragments naturels isolés, ou de synthèse, comportant ou non des nucléotides non naturels, désignant un enchaînement précis de nucléotides, modifiés ou non, permettant de définir un fragment ou une région d'un acide nucléique. Par polynucléotide de séquence complémentaire, on entend tout ADN dont les nucléotides sont complémentaires de ceux de la SEQ ID NO 1 ou d'une partie de la SEQ ID NO 1, et dont l'orientation est inversée. Par pourcentage d'homologie au sens de la présente invention, on entend un pourcentage d'identité entre les bases de deux polynucléotides, ce pourcentage étant purement statistique et les différences entre les deux polynucléotides étant réparties au hasard et sur toute leur longueur. Selon l'invention, les polynucléotides de séquence nucléique homologue présentent un taux d'homologie d'au moins 80 %, de préférence 90 W. Une hybridation dans des conditions de forte stringence signifie que les conditions de température et de force ionique sont choisies de telle manière qu'elles permettent le maintien de l'hybridation entre deux fragments d'ADN complémentaires. A titre illustratif, des conditions de forte stringence de l'étape d'hybridation aux fins de définir les fragments polynucléotidiques décrits ci-dessus, sont avantageusement les suivantes. L'hybridation ADN-ADN est réalisée en deux étapes (1) préhybridation à 600C pendant 3 heures en tampon phosphate (20 mM, pH 7,5), contenant 5 x SSC (1 x SSC correspond à une solution 0,15 M NaC1 + 0,015 M citrate de sodium), 7 de sodium dodécyl sulfate (SDS), 10 x Denhard's et 1 W de sperme de saumon ; (2) hybridation proprement dite pendant 18 heures à 600C (pour une sonde oligonucléotidique) ou à 42"C (pour une sonde de taille > 100 nucléotides) suivie de 2 lavages de 20 minutes à 200C en 2 x SSC + 2 SDS, 1 lavage de 20 minutes à 200C en 0,1 x SSC + 0,1 W SDS. Le dernier lavage est pratiqué en 0,1 x SSC + 0,1 W SDS pendant 30 minutes à 480C (pour une sonde oligonucléotidique ou à 58-600C (pour une sonde de taille > 100 nucléotides). L'hybridation ADN-ARN est menée à 420C comme précédemment, et le dernier lavage à 58-600C. Avantageusement, un fragment nucléotidique répondant à la définition précédente aura au moins 8 nucléotides, de préférence au moins 12 nucléotides, et encore plus préférentiellement au moins 20 nucléotides consécutifs de la séquence dont il est issu. Les conditions d'hybridation de forte stringence décrites ci-avant pour un polynucléotide de taille définie, seront adaptées par l'homme du métier pour des oligonucléotides de taille plus grande ou plus petite, selon l'enseignement de Sambrook et al., 1989. La présente invention a aussi pour objet un polypeptide de séquence d'acides aminés SEQ ID NO 2 telle que définie à la Figure 3 pour LVBL. I1 doit être compris que l'invention ne concerne pas les polypeptides sous forme naturelle, c'est-à-dire qu'ils ne sont pas pris dans leur environnement naturel mais qu'ils ont pu être obtenus par purification à partir de sources naturelles, ou bien obtenues par recombinaison génétique, ou encore par synthèse chimique et pouvant alors comporter des acides aminés non naturels. Dans la présente description, on utilisera le terme polypeptide pour désigner également une protéine ou un peptide. L'invention concerne également un polypeptide selon l'invention, caractérisé en ce qu'il comprend a) un peptide signal comprenant la séquence d'acides aminés 1 à 21 de la séquence SEQ ID NO 2 b) un domaine RGD comprenant la séquence d'acides aminés 61 à 63 de la séquence SEQ ID NO 2 c) une région riche en acides glutamiques comprenant la séquence d'acides aminés 22 à 90 de la séquence SEQ ID NO 2 d) une région riche en sites 0-glycanniques condensés potentiels comprenant la séquence d'acides aminés 91 à 104 de la séquence SEQ ID NO 2 e) un domaine Leucine-Zipper comprenant, la séquence d'acides aminés 108 à 149 de la séquence SEQ ID NO 2 f) un domaine Lectine de type C comprenant la séquence d'acides aminés 176 à 320 de la séquence SEQ ID NO 2. L'invention concerne en outre les polypeptides caractérisés en ce qu'ils comprennent un polypeptide choisi parmi a) un polypeptide selon l'invention tel que décrit précédemment, b) un polypeptide variant de polypeptide de séquence d'acides aminés défini en a) c) un polypeptide homologue au polypeptide défini en a) ou b) et comportant au moins 80 k d'homologie, de préférence au moins 90 %, d) un fragment d'au moins 5 acides aminés d'un polypeptide défini en a), b) ou c), e) un fragment biologiquement actif d'un polypeptide défini en a), b), ou c). On entendra par polypeptide variant l'ensemble des polypeptides mutées pouvant exister naturellement, en particulier chez l'être humain, et qui correspondent notamment à des troncatures, substitutions, délétions et/ou additions de résidus d'amino-acides. Par polypeptide homologue, on entendra désigner les polypeptides présentant, par rapport au polypeptide naturel LVBL, certaines modifications comme en particulier une délétion, addition ou substitution d'au moins un acide aminé, une troncation, un allongement et/ou une fusion chimérique. Parmi les polypeptides homologues, on préfère ceux dont la séquence d'acides aminés présente au moins 80 %, de préférence 90 %, d'homologie avec les séquences d'acides aminés des polypeptides selon l'invention. Dans le cas d'une substitution, un ou plusieurs acides aminés consécutifs ou non consécutifs, sont remplacés par des acides aminés équivalents . L'expression acide aminé équivalent vise ici à désigner tout acide aminé susceptible d'être substitué à l'un des acides aminés de la structure de base sans cependant modifier les caractéristiques ou propriétés fonctionnelles essentielles, comme leurs activités biologiques, des polypeptides correspondants telles que l'induction in vivo d'anticorps capables de reconnaître le polypeptide dont la séquence d'acides aminés est comprise dans la séquence d'acides aminés SEQ ID NO 2, ou l'un de ses fragments ci-dessus définis. Ces acides aminés équivalents peuvent être déterminés soit en s'appuyant sur leur homologie de structure avec les acides aminés auxquels ils se substituent, soit sur les résultats des essais d'activité biologique croisée auxquels les différents polypeptides sont susceptibles de donner lieu. A titre d'exemple, on mentionnera les possibilités de substitutions susceptibles d'être effectuées sans qu'il en résulte une modification approfondie des activités biologiques des polypeptides modifiés correspondants, les remplacements, par exemple, de la leucine par la valine ou l'isoleucine, de l'acide aspartique par l'acide glutamique, de la glutamine par 1'asparagine, de l'arginine par la lysine etc., les substitutions inverses étant naturellement envisageables dans les mêmes conditions. Par fragment biologiquement actif, on entendra désigner en particulier un fragment de séquence d'acides aminés de polypeptide selon l'invention présentant au moins une des caractéristiques ou propriétés fonctionnelles des polypeptides selon l'invention, notamment en ce qu'il est - capable d'être reconnu par un anticorps spécifique d'un polypeptide selon l'invention ; - présentant l'un au moins des domaines ou régions suivants et tels que définis précédemment : domaine RGD, région riche en acides glutamiques, une région riche en sites O glycanniques potentiels condensés, domaine Leucine-Zipper et domaine lectine de type C - capable de se lier à un virus ; et/ou - capable d'inhiber la pénétration d'un virus dans les cellules cibles habituelles dudit virus. Par fragment de polypeptide, on entend désigner un polypeptide comportant au minimun 5 acides aminés, de préférence 10 acides aminés et 15 acides aminés. Font également partie de l'invention les fragments de polypeptide selon l'invention qui peuvent être obtenus par clivage dudit polypeptide par une enzyme protéolytique, par un réactif chimique, ou encore en plaçant ledit polypeptide dans un environnement très acide. L'invention vise en outre les dérivés solubles d'un polypeptide selon l'invention dans lequel les acides aminés 71 à 323 sont conservés et au moins l'un des acides aminés 22 à 70 peut être remplacé ou supprimé, ou dans lequel les acides aminés 22 à 161 sont conservés et au moins l'un des acides aminés 162 à 323 peut être remplacé ou supprimé, la numérotation des acides aminés (aa) faisant référence à la numérotation de la séquence d'aa SEQ ID NO 2. L'invention comprend particulièrement les polypeptides selon l'invention, caractérisés en ce qu'ils sont capables de se lier à un virus, de préférence le virus HIV, et en ce qu'ils sont capables d'inhiber la pénétration dudit virus dans les cellules cibles habituelles dudit virus. Tout particulièrement, on préfère les polypeptides selon l'invention, caractérisés en ce qu'il s'agit de polypeptides dans lesquels au moins l'un des acides aminés 61 à 63 de la séquence SEQ ID NO 2 est modifié ou supprimé. Font aussi partie de l'invention, les polynucléotides caractérisés en ce qu'ils codent pour un polypeptide selon l'invention, en particulier un polypeptide tel que défini ci-dessus. L'invention a également pour objet des polynucléotides utilisables comme amorce, caractérisés en ce qu'ils sont choisis parmi les polynucléotides selon 1' invention. En particulier, on préfère les polynucléotides utilisables comme amorce selon l'invention, caractérisés en ce que leur séquence est choisie parmi les séquences suivantes a) GGC TTT GGC CAT GGG GCT CGG GGA GCA, b) CGC CAG GCT CCC GCC CCG CGC CGT GCA, c) GGG GAG GAA GAG GAG GAG GAA, d) GCC CCG CTA GAA GGG GAA CTC GCA GAC, et e) une séquence comprise entre le nucléotide en position nt 180 et le nucléotide en position nt 1151 ou nt 1153, extrémités incluses, de la séquence SEQ ID NO 1. L'invention concerne aussi des polynucléotides utilisables comme sonde, caractérisés en ce qu'ils sont choisis parmi les polynucléotides selon l'invention, lesdits polynucléotides pouvant être marqués par un composé radioactif ou par un composé non radioactif. Parmi ces polynucléotides utilisables comme sonde selon l'invention, on préfère ceux caractérisés en ce que leur séquence est choisie parmi les séquences suivantes a) AGGCGCGGTGCACGGCGCGGGGCGGGAGCCTGGCGC, b) ATGGAGGCGCTCACTCGGTACCTGCGCGCGGCGCTC, et c) une séquence comprise entre le nucléotide en position nt 180 et le nucléotide en position nt 1151 ou nt 1153, extrémités incluses, de la séquence SEQ ID NO 1. L'invention comprend l'utilisation d'un polynucléotide nucléique selon l'invention pour la détection et/ou l'amplification de séquences nucléiques. Selon l'invention, les fragments de polynucléotides pouvant être utilisés comme sonde ou comme amorce dans des procédés de détection, d'identification, de dosage ou d'amplification de séquence nucléique, présenteront une taille minimale de 8 bases, de préférence de 15 bases, et de manière plus préférée 30 bases. Les polynucléotides selon l'invention peuvent ainsi être utilisés comme amorce et/ou sonde dans des procédés mettant en oeuvre notamment la technique PCR (réaction en chaîne à la polymérase) (Erlich, 1989 ; Innis et al., 1990, et, Rolfs et al., 1991). Cette technique nécessite le choix de paires d'oligonucléotides encadrant le fragment qui doit être amplifié. On peut, par exemple, se référer à la technique décrite dans le brevet américain U.S. NO 4,683,202. Les fragments amplifiés peuvent être identifiés, par exemple après une électrophorèse en gel d'agarose ou de polyacrylamide, ou après une technique chromatographique comme la filtration sur gel ou la chromatographie échangeuse d'ions. La spécificité de l'amplification peut être contrôlée par hybridation moléculaire en utilisant comme sonde les séquences nucléotidiques de polynucléotides de l'invention, des plasmides contenant ces séquences ou leurs produits d'amplification. Les fragments nucléotidiques amplifiés peuvent être utilisés comme réactifs dans des réactions d'hybridation afin de mettre en évidence la présence, dans un échantillon biologique, d'un acide nucléique cible de séquence complémentaire à celle desdits fragments nucléotidiques amplifiés. Ces sondes peuvent être marquées ou non par des éléments radioactifs ou par des molécules non radioactives, telles que des enzymes ou des éléments fluorescents. L'invention vise également les fragments nucléotidiques susceptibles d'être obtenus par amplification à l'aide d'amorces selon l'invention. D'autres techniques d'amplification de l'acide nucléique cible peuvent être avantageusement employées comme alternative à la PCR (PCR-like) à l'aide de couple d'amorces de séquences nucléotidiques selon l'invention. Par PCR-like on entendra désigner toutes les méthodes mettant en oeuvre des reproductions directes ou indirectes des séquences d'acides nucléiques, ou bien dans lesquelles les systèmes de marquage ont été amplifiés, ces techniques sont bien entendu connues, en général il s'agit de l'amplification de 1'ADN par une polymérase ; lorsque l'échantillon d'origine est un ARN il convient préalablement d'effectuer une transcription réverse. I1 existe actuellement de très nombreux procédés permettant cette amplification, comme par exemple - la technique SDA (Strand Displacement Amplification) ou technique d'amplification à déplacement de brin (Walker et al., 1992) - la technique TAS (Transcription-based Amplification System), décrite par Kwoh et al. en 1989 - la technique 3SR (Self-Sustained Sequence Replication), décrite par Guatelli et al. en 1990 - la technique NASBA (Nucleic Acid Sequence Based Amplification), décrite par Kievitis et al. en 1991 - la technique TMA (Transcription Mediated Amplification) - la technique LCR (Ligase Chain Reaction), décrite par Landegren et al. en 1988 et perfectionnée par Barany et al. en 1991, qui emploie une ligase thermostable - la technique de RCR (Repair Chain Rection), décrite par Segev en 1992 - la technique CPR (Cycling Probe Reaction), décrite par Duck et al. en 1990 - la technique d'amplification à la Q-béta-réplicase, décrite par Miele et al. en 1983 et perfectionnée notamment par Chu et al. en 1986, Lizardi et al. en 1988, puis par Burg et al. ainsi que par Stone et al. en 1996. Dans le cas où le polynucléotide cible à détecter est un ARN, par exemple un ARNm, on utilisera avantageusement, préalablement à la mise en oeuvre d'une réaction d'amplification à l'aide des amorces selon l'invention ou à la mise en oeuvre d'un procédé de détection à l'aide des sondes de l'invention, une enzyme de type transcriptase inverse afin d'obtenir un ADNc à partir de 1'ARN contenu dans l'échantillon biologique. L'ADNc obtenu servira alors de cible pour les amorces ou les sondes mises en oeuvre dans le procédé d'amplification ou de détection selon 1' invention. Les sondes nucléotidiques selon l'invention hybrident spécifiquement avec une molécule d'ADN ou d'ARN de polynucléotide selon l'invention, plus particulièrement avec la séquence SEQ ID NO 1 codant pour le polypeptide PVDL, dans des conditions d'hybridation de forte stringence telles que données sous forme d'exemple précédemment. Les séquences non marquées peuvent être utilisées directement comme sonde, cependant les séquences sont généralement marquées par un élément radioactif comme 32P, 35S, 3H ou 125in ou par une molécule non radioactive comme la biotine, la digoxigénine, la 5-bromo-désoxyuridine ou la fluorescéine, pour obtenir des sondes utilisables pour de nombreuses applications. Des exemples de marquage non radioactifs de sondes sont décrits, par exemple, dans le brevet français NO 78 10 975 ou par Urdea et al. ou par Sanchez-Pescador et al. en 1988. Dans ce dernier cas, on pourra aussi utiliser l'une des méthodes de marquage décrites dans les brevets FR2 422 956 et FR-2 518 755. La technique d'hybridation peut être réalisée de manières diverses (Matthews et al., 1988). La méthode la plus générale consiste à immobiliser l'acide nucléique extrait des cellules de différents tissus ou de cellules en culture sur un support (tel que nitrocellulose, nylon, polystyrène) et à incuber, dans des conditions bien définies, l'acide nucléique cible immobilisé avec la sonde. Après l'hybridation, l'excès de sonde est éliminé et les molécules hybrides formées sont détectées par la méthode appropriée (mesure de la radioactivité, de la fluorescence ou de l'activité enzymatique liée à la sonde). Avantageusement, les sondes nucléotidiques marquées selon l'invention peuvent avoir une structure telle qu'elles rendent possible une amplification du signal radioactif ou non radioactif. Un système d'amplification répondant à la définition ci-dessus comprendra des sondes de détection sous la forme d'un ADN ramifié, branché ( branched DNA ) telles que celles décrites par Urdea et al. en 1991. Selon cette technique, on utilisera avantageusement plusieurs types de sondes notamment une sonde de capture, afin d'immobiliser l'ADN ou 1'ARN cible sur un support, et une sonde de détection. La sonde de détection lie un ADN branché présentant une structure ramifiée. L'ADN branché, à son tour, est capable de fixer des sondes oligonucléotidiques qui sont elles-mêmes couplées à des molécules de phosphatase alcaline. Puis l'activité de cette enzyme est mise en évidence grâce à un substrat chimioluminescent, par exemple un dérivé du dioxétane-phosphate. Selon un autre mode de mise en oeuvre des sondes nucléiques selon l'invention, ces dernières peuvent être utilisées comme sonde de capture. Dans ce cas, une sonde, dite sonde de capture , est immobilisée sur un support et sert à capturer par hybridation spécifique l'acide nucléique cible obtenu à partir de l'échantillon biologique à tester et l'acide nucléique cible est ensuite détecté grâce à une seconde sonde, dite sonde de détection , marquée par un élément facilement détectable. Les fragments oligonucléotidiques peuvent être obtenus à partir des séquences selon l'invention, par coupure avec des enzymes de restriction, ou par synthèse chimique selon les méthodes classiques, par exemple selon la méthode décrite dans le brevet européen NO EP-O 305 929 (Millipore Corporation). L'invention comprend en outre les oligonucléotides sens ou antisens, caractérisés en ce que leur séquence nucléique est choisie parmi une séquence d'acide nucléique selon l'invention. Parmi les fragments d'acides nucléiques intéressants, il faut citer en particulier les oligonucléotides antisens, c'est-à-dire dont la structure assure, par hybridation avec la séquence cible, une inhibition de l'expression du produit correspondant. Il faut également citer les oligonucléotides sens qui, par interaction avec des protéines impliquées dans la régulation de l'expression du produit correspondant, induiront soit une inhibition, soit une activation de cette expression. L'invention comprend également les vecteurs recombinants de clonage, et/ou d'expression, caractérisés en ce qu'ils contiennent une séquence d'acide nucléique de polynucléotide selon l'invention. Les vecteurs selon l'invention, caractérisés en ce qu'ils comportent les éléments permettant l'expression et/ou la sécrétion desdites séquences dans une cellule hôte, font également partie de l'invention. Ces vecteurs sont utiles pour transformer des cellules hôtes afin de cloner ou d'exprimer les séquences nucléotidiques de l'invention. Des vecteurs particuliers sont par exemple des vecteurs d'origine virale ou plasmidique. Parmi ces vecteurs, on préfère ceux de la série pGEX (Pharmacia) pour l'expression dans les bactéries ou pSHT (Giordanengo, V. et al., 1997. Cloning and expression of CDNA for a human Gal (pl-3) GalNAc a2,3-sialyltransferase from the CEM-T cell line. Eur. J. Biochem. 247 : 558-566) pour l'expression en système eucaryote. L'invention comprend en outre les cellules hôtes, notamment les cellules eucaryotes et procaryotes, caractérisées en ce qu'elles sont transformées par les vecteurs selon l'invention. De préférence, les cellules hôtes sont transformées dans des conditions permettant l'expression d'un polypeptide recombinant selon l'invention. L'hôte cellulaire peut être choisi parmi les cellules bactériennes (Olins et Lee, 1993), mais également les cellules de levure (Buckholz, 1993), de même que les cellules animales, en particulier les cultures de cellules de mammifères (Edwards et Aruffo, 1993), et notamment les cellules d'ovaires de hamster chinois (CHO), mais également les cellules d'insectes dans lesquelles on peut utiliser des procédés mettant en oeuvre des baculovirus par exemple (Luckow, 1993). Un hôte cellulaire préféré pour l'expression des polypeptides de l'invention est constitué par les cellules procaryotes E. coli JM109 ou eucaryotes CEM. L'invention concerne également l'utilisation d'une séquence d'acide nucléique ou d'un polynucléotide selon l'invention pour la production de polypeptides recombinants. Les polypeptides obtenus par synthèse chimique et pouvant comporter des acides aminés non naturels correspondant auxdits polypeptides recombinants, sont également compris dans l'invention. Les peptides selon l'invention peuvent également être préparés par les techniques classiques, dans le domaine de la synthèse des peptides. Cette synthèse peut être réalisée en solution homogène ou en phase solide. Par exemple, on aura recours à la technique de synthèse en solution homogène décrite par Houbenweyl en 1974. Cette méthode de synthèse consiste à condenser successivement deux-à-deux les acides aminés successifs dans l'ordre requis, ou à condenser des acides aminés et des fragments préalablement formés et contenant déjà plusieurs acides aminés dans l'ordre approprié, ou encore plusieurs fragments préalablement ainsi préparés, étant entendu que l'on aura eu soin de protéger au préalable toutes les fonctions réactives portées par ces acides aminés ou fragments, à l'exception des fonctions amines de l'un et carboxyles de l'autre ou vice-versa, qui doivent normalement intervenir dans la formation des liaisons peptidiques, notamment après activation de la fonction carboxyle, selon les méthodes bien connues dans la synthèse des peptides. Selon une autre technique préférée de l'invention, on a recours à celle décrite par Merrifield. Ces polypeptides peuvent être produits à partir de séquences d'acide nucléique ou de polynucléotides selon l'invention, et selon les techniques de production de polypeptides recombinants connues de l'homme du métier. Dans ce cas, la séquence d'acide nucléique utilisée est placée sous le contrôle de signaux permettant son expression dans un hôte cellulaire. Un système efficace de production d'un polypeptide recombinant nécessite de disposer d'un vecteur, par exemple d'origine plasmidique ou virale, et d'une cellule hôte compatible. Les procédés de préparation d'un polypeptide, caractérisés en ce qu'ils mettent en oeuvre un vecteur selon l'invention, font partie de l'invention. Le vecteur doit comporter un promoteur, des signaux d'initiation et de terminaison de la traduction, ainsi que des régions appropriées de régulation de la transcription. En particulier, l'utilisation de promoteurs de type LTR des HIV-1 ou HIV-2 pourra être préconisée à cause de leur inductibilité par les protéines régulatrices de ces virus (telles que Tat), rendant ainsi l'expression de la (des) protéine (s) d'intérêt, sous contrôle de l'infection virale elle-même. Il doit pouvoir être maintenu de façon stable dans la cellule et peut éventuellement posséder des signaux particuliers spécifiant la sécrétion du polypeptide traduit. Ces différents signaux de contrôle sont choisis en fonction de l'hôte cellulaire utilisé. A cet effet, les séquences d'acide nucléique selon l'invention peuvent être insérées dans des vecteurs à réplication autonome au sein de l'hôte choisi, ou des vecteurs intégratifs de l'hôte choisi. De tels vecteurs seront préparés selon les méthodes couramment utilisées par l'homme du métier, et les clones en résultant peuvent être introduits dans un hôte approprié par des méthodes standard, telles que par exemple la lipofection, l'électroporation, le choc thermique. L'invention vise en outre les cellules hôtes transformées par les vecteurs précédents. Ces cellules peuvent être obtenues par l'introduction dans des cellules hôtes d'une séquence nucléotidique insérée dans un vecteur tel que défini ci-dessus, puis la mise en culture desdites cellules dans des conditions permettant la réplication et/ou l'expression de la séquence nucléotidique transfectée. Le procédé de préparation d'un polypeptide de l'invention sous forme recombinante est lui-même compris dans la présente invention, et se caractérise en ce que l'on cultive les cellules transformées dans des conditions permettant l'expression d'un polypeptide recombinant de séquence d'acide nucléique selon l'invention, et que l'on récupère ledit polypeptide recombinant. Les polypeptides recombinants, caractérisés en ce qu'ils sont susceptibles d'être obtenus par lesdits procédés de préparation selon l'invention, font également partie de l'invention. Les polypeptides recombinants obtenus comme indiqué ci-dessous, peuvent aussi bien se présenter sous forme glycosylée que non glycosylée et peuvent présenter ou non la structure tertiaire naturelle. Les procédés de purification de polypeptide recombinant utilisés sont connus de l'homme du métier. Le polypeptide recombinant peut être purifié à partir de lysats et extraits cellulaires, du surnageant du milieu de culture, par des méthodes utilisées individuellement ou en combinaison, telles que le fractionnement, les méthodes de chromatographie, les techniques d'immuno-affinité à l'aide d'anticorps mono ou polyclonaux spécifiques, etc. Une variante préférée consiste à produire un polypeptide recombinant fusionné à une protéine porteuse (protéine chimère). L'avantage de ce système est qu'il permet une stabilisation et une diminution de la protéolyse du produit recombinant, une augmentation de la solubilité au cours de la renaturation in vitro et/ou une simplification de la purification lorsque le partenaire de fusion possède une affinité pour un ligand spécifique. Les polypeptides selon l'invention permettent de préparer des anticorps monoclonaux ou polyclonaux caractérisés en ce qu'ils reconnaissent spécifiquement les polypeptides selon l'invention. Les anticorps monoclonaux pourront avantageusement être préparés à partir d'hybridomes selon la technique décrite par Kohler et Milstein en 1975. Les anticorps polyclonaux pourront être préparés, par exemple par immunisation d'un animal, en particulier une souris, avec un polypeptide selon l'invention associé à un adjuvant de la réponse immunitaire, puis purification des anticorps spécifiques contenus dans le sérum des animaux immunisés sur une colonne d'affinité sur laquelle a préalablement été fixé le polypeptide ayant servi d'antigène. Les anticorps polyclonaux selon l'invention peuvent aussi être préparés par purification sur une colonne d'affinité, sur laquelle a préalablement été immobilisé un polypeptide selon l'invention. L'invention a également pour objet des anticorps mono ou polyclonaux, leurs fragments, tels que Fab ou F(ab')2, ou anticorps chimériques, caractérisés en ce qu'ils sont capables de reconnaître spécifiquement un polypeptide selon 1' invention. Les anticorps de l'invention pourront également être marqués de la même manière que décrit précédemment pour les sondes nucléiques de l'invention tel qu'un marquage de type enzymatique, fluorescent ou radioactif. Par ailleurs, outre leur utilisation pour la purification des polypeptides, les anticorps de l'invention, en particulier les anticorps monoclonaux, peuvent également être utilisés pour la détection de ces polypeptides dans un échantillon biologique. Ils constituent ainsi un moyen d'analyse de l'expression de polypeptide selon l'invention, par exemple par immunofluorescence, marquage à l'or, immunoconjugués enzymatiques. Ils permettent notamment de mettre en évidence et de quantifier la présence de ces polypeptides dans les tissus ou fluides biologiques, ce qui les rend utiles pour la détection ou le dosage de ces polypeptides, mais également pour le suivi de l'évolution de méthode de prévention ou de traitement nécessitant ladite détection ou ledit dosage. Plus généralement, les anticorps de l'invention peuvent être avantageusement mis en oeuvre dans toute situation où l'expression d'un polypeptide selon l'invention doit être observée. L'invention a donc également pour objet un procédé de détection et/ou de dosage d'un polypeptide selon l'invention dans un échantillon biologique, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes a) mise en contact de l'échantillon biologique avec un anticorps selon l'invention b) mise en évidence du complexe antigène-anticorps formé. De préférence, l'échantillon biologique est constitué par un fluide, par exemple un sérum humain ou animal, du sang, ou des biopsies. Toute procédure classique peut être mise en oeuvre pour réaliser une telle détection et/ou dosage. A titre d'exemple, une méthode préférée met en jeu des processus immunoenzymatiques selon la technique ELISA, par immunofluorescence, ou radio-immunologique (RIA) ou équivalent. Entre également dans le cadre de l'invention, un kit ou nécessaire pour la détection et/ou le dosage d'un polypeptide selon l'invention dans un échantillon biologique, caractérisé en ce qu'il comprend les éléments suivants a) un anticorps polyclonal ou monoclonal selon l'invention b) le cas échéant, les réactifs pour la constitution du milieu propice à la reaction immunologique c) les réactifs permettant la détection des complexes antigène-anticorps produits par la réaction immunologique. L'invention comprend également un procédé de détection et/ou de dosage d'acide nucléique selon l'invention, dans un échantillon biologique, caractérisé en ce qu'il comporte les étapes suivantes a) isolement de l'ADN à partir de l'échantillon biologique à analyser, ou obtention d'un ADNc à partir de l'ARN de l'échantillon biologique b) amplification spécifique de 1'ADN codant pour la protéine LVBL à l'aide d'amorces selon l'invention c) analyse des produits d'amplification. L'invention comprend aussi un procédé de détection et/ou de dosage d'acide nucléique selon l'invention, dans un échantillon biologique, caractérisé en ce qu'il comporte les étapes suivantes a) mise en contact d'une sonde oligonucléotidique selon l'invention avec un échantillon biologique b) détection et/ou dosage de l'hybride formé entre la sonde oligonucléotidique et 1'ADN de l'échantillon biologique. L'invention comprend en outre un kit ou nécessaire pour la détection et/ou le dosage d'un acide nucléique selon l'invention, dans un échantillon biologique, caractérisé en ce qu'il comprend les éléments suivants a) un couple d'amorces nucléiques selon l'invention b) les réactifs nécessaires pour effectuer une réaction d'amplification d'ADN c) éventuellement un composant permettant de vérifier la séquence du fragment amplifié, plus particulièrement une sonde selon l'invention. L'invention comprend également un kit ou nécessaire pour la détection et/ou le dosage d'acide nucléique selon l'invention, dans un échantillon biologique, caractérisé en ce qu'il comprend les éléments suivants a) une sonde oligonucléotidique selon l'invention b) les réactifs nécessaires à la mise en oeuvre d'une réaction d'hybridation c) le cas échéant, un couple d'amorces selon l'invention, ainsi que les réactifs nécessaires à une réaction d'amplification de 1'ADN. L'invention concerne particulièrement les procédés et kits ou nécessaires selon l'invention décrits ci-dessus, pour le diagnostic d'infection virale comme notamment l'infection par le virus HIV. L'invention concerne également des composés, caractérisés en ce qu'ils sont choisis parmi a) un anticorps selon l'invention b) un polypeptide selon l'invention c) un vecteur selon I'invention d) un vecteur selon l'invention, caractérisé en ce qu'il présente à sa surface extérieure un site de reconnaissance spécifique des cellules cibles e) un vecteur défini en c) ou d), caractérisé en ce que le produit d'expression de l'acide nucléique inséré par le vecteur dans la cellule cible, est excrété par ladite cellule cible transformée f) une séquence nucléique sens ou anti-sens selon l'invention. L'invention comprend également les composés selon l'invention, à titre de médicament, et pouvant comporter en outre un véhicule pharmaceutiquement acceptable. L'invention concerne particulièrement les composés selon l'invention pour la prévention et/ou le traitement d'une infection virale, notamment une infection par le virus HIV. L'invention a également pour objet des composés selon l'invention, caractérisés en ce qu'ils permettent de moduler la prolifération cellulaire, en particulier de stimuler la prolifération cellulaire, notamment des cellules progénitrices hématopoïétiques. Lesdits composés pourront en particulier être utilisés pour la prévention et/ou le traitement de toute affection relevant d'une aplasie ou d'hypoplasie médullaire. Les composés de l'invention en tant que principes actifs de médicament, seront préférentiellement sous forme soluble, associés à un véhicule pharmaceutiquement acceptable. De tels composés utilisables à titre de médicament offrent en particulier une nouvelle approche pour prévenir et/ou traiter les infections virales, notamment l'infection par le HIV. De préférence, ces composés seront administrés par voie systémique, en particulier par voie intraveineuse, par voie intramusculaire, intradermique ou par voie orale. Leurs modes d'administration, posologies et formes galéniques optimaux peuvent être déterminés selon les critères généralement pris en compte dans l'établissement d'un traitement adapté à un patient comme par exemple l'âge ou le poids corporel du patient, la gravité de son état général, la tolérance au traitement et les effets secondaires constatés, etc. La thérapie pourra être effectuée également par thérapie génique, c'est-à-dire en introduisant les séquences d'acide nucléique selon l'invention et/ou les gènes correspondants avec les éléments qui permettent leur expression et leur régulation in vi vo. Selon le type de virus visé ou le stade de l'infection, on pourra faire appel à des vecteurs de type inductible comme décrit précédemment, ou à expression constitutive. Les principes de la thérapie génique sont connus. On peut utiliser des vecteurs viraux, par exemple sur la base des adénovirus (Perricaudet et al., 1992), des AAV, Adenovirus Associated Virus (Carter, 1993), des rétrovirus (Temin, 1986), des poxvirus ou des virus herpès (Epstein et al., 1992). La plupart du temps ces virus sont utilisés sous forme défective et, de façon générale, avec ou sans intégration dans le génome cellulaire. Il est également possible de prévoir des vecteurs non viraux, c'est-à-dire synthétiques, qui miment des séquences virales ou bien qui sont constitués par de l'ADN ou de l'ARN nu selon la technique développée notamment par la société VICAL. Dans certains cas, on pourra prévoir des éléments de ciblage assurant une expression spécifique de certains tissus ou cellules de façon à pouvoir limiter les zones d'expression des polypeptides selon l'invention. D'autres caractéristiques et avantages de l'invention apparaissent dans la suite de la description avec les exemples et les figures dont les légendes sont représentées ci-après. Légendes des figures FIGURE 1 LVBL précipitée par la lectine Jacaline (fixée sur billes d'agarose), à partir de surnageants de différentes lignées cellulaires CEM (cellules parentales), CEMBCL (CEM infectées et productrices de HIV1), CEM-I/NP (CEM infectées, non productrices de HIV-1), 7H1 (clone hybride CEMLAI/NP/MRC5). Les cellules étaient préalablement incubées pendant 48 h en présence de 35SO42 (0,5 mCi/ml). Les précipités étaient soumis à électrophorèse en système SDS-PAGE, le gel séché et exposé à - 700C contre un film Kodak XAR5 pendant 18 h. FIGURE 2 : Alignement des séquences nucléotidiques correspondant aux protéines LVBL et SCGF. Les nucléotides absents de la séquence SCGF sont remplacés par des tirets. Les variations de nucléotide entre les deux séquences sont marquées par des caractères imprimés en gras. Le codon d'initiation de la traduction et le codon stop sont repérés par des flèches. Le site de polyadénylation est souligné. La séquence nucléotidique de LVBL représente la séquence SEQ ID N 1. FIGURE 3 : Alignement des séquences en acides aminés des protéines LVBL (lymphocytic viruses binding lectin) et SCGF (stem cell growth factor). Les acides aminés correspondant au peptide interne absent dans la séquence de la SCGF sont remplacés par des tirets. Les oligopeptides dont la séquence a été établie par microséquençage (méthode de dégradation d'Edman) de la protéine purifiée sont soulignés. Les tyrosines sont repérées par des flèches ouvertes. Les cystéines sont repérées par des flèches fermées. Les résidus Leucine/isoleucine en position d du domaine leucine-zipper sont marqués par des étoiles et les résidus Leucine/valine en position a par des points. La séquence conservée (cons) du domaine lectine de type C est indiquée au-dessous de l'alignement des séquences LVBL et SCGF. Le domaine peptide signal est encadré. Le tripeptide RGD est imprimé en caractères gras. Le domaine contenant les sites potentiels de O-glycosylation est repéré par des crochets, et le site "SG", propice à la xylosylation, est imprimé en caractères gras. La séquence d'acides aminés LVBL représente la séquence SEQ ID N 2. Codes des acides aminés (à une lettre) A : alanine ; C: cystéine ; D : acide aspartique ; E acide glutamique ; F : phénylalanine ; G : glycine ; H histidine ; I : isoleucine ; K : lysine ; L : leucine ; M méthionine ; N : asparagine ; P : proline ; Q : glutamine R : arginine ; S : sérine ; T : thréonine ; V : valine W : tryptophane ; Y : tyrosine. Codes complémentaires utilisés dans la séquence conservée &num; : aliphatique ; # : aromatique ; # : aliphatique ou aromatique ; Z : E ou Q ; B : D ou N ; J : D, N, E ou Q. FIGURE 4 : Analyse par Northern blot de l'expression de la LVBL dans différents tissus et lignées. Les ARN poly (A) (5 g/piste) sont soumis à électrophorèse et transférés sur membrane de nylon. La sonde utilisée correspond au cDNA complet de la LVBL excisé du plasmide recombinant isolé de la banque CEMLAI/NP-pcDNA3. Cette sonde est marquée au 32P par la technique du "random priming". Les pistes correspondent à A : pistes 1, CEM parentales ; 2, CEM infectées de façon latente par HIV-1 (CEMLAI/NP) ; 3, HUT-78 ; 4, MOLT-4 ; 5, Jurkat ; 6, SUP-T1 ; 7, Raji ; 8, Daudi ; 9, HL-60 ; 10, THP-1 ; 11, U-937 ; 12, MRC5. B : pistes 1, CEM parentales ; 2, CEM infectées de façon latente par HIV-1 (CEM-I/NP). C : pistes 1, foie foetal ; 2, moelle osseuse ; 3, lymphocytes du sang périphérique ; 4, thymus ; 5, ganglion ; 6, rate ; 7, coeur ; 8, cerveau ; 9, placenta 10, poumon ; 11, foie ; 12, muscle squelettique ; 13, rein ; 14, pancréas. FIGURE 5 : Alignement de 4 protéines comportant des domaines Lectine de type C. Codes des acides aminés (à une lettre) : Mannose Binding Lectin (MBL), CD23, Tétranectine et LVBL. A : alanine ; C : cystéine ; D : acide aspartique ; E acide glutamique ; F : phénylalanine ; G : glycine ; H histidine ; I : isoleucine ; K : lysine ; L : leucine ; M méthionine ; N : asparagine ; : : proline ; Q : glutamine R : arginine ; S : sérine ; T : thréonine ; V : valine W : tryptophane ; Y : tyrosine. Codes complémentaires utilisés dans la séquence conservée &num; : aliphatique t t : aromatique ; t : aliphatique ou aromatique ; Z : E ou Q ; B : D ou N ; J : D, N, E ou Q O : S, T ou P. FIGURE 6 : Inhibition de l'infection HIV-1 des cellules P4 par des surnageants de culture des différentes lignées cellulaires suivantes : MOLT-4 et CEM (lymphoblastiques), THP-1 (monocytaire), F12, C3.2 et CM3 (clones CEM), CEMLAI/NP (CEM infectées par HIV-1, non productrices de virus) FIGURE 7 : Northern-blot des lignées 293 et clones Tfl, Tf2 et Tf4. Après extraction et électrophorèse, les ARNm des lignées parentales 293 (piste 1) et des clones Tfl (piste 2), Tf2 (piste 3) et Tf4 (piste 4), transfectés par le plasmide recombinant pcDNA3-LVBL ont été transférés sur membrane de nylon qui a été ensuite préhybridée puis hybridée avec la sonde LVBL, marquée au 32P par randompriming. La sonde correspond à l'ADNc pleine taille excisé et purifié à partir du recombinant pcDNA3-LVBL. Après lavage, la membrane a été exposée pendant 18 h contre un film Kodak XAR5. FIGURE 8 : Schéma représentant l'insertion de 1'ADNc de la LVBL dans le vecteur pcDNA3 qui contient le gène de résistance à la néomycine. L'ADNc de la LVBL contient son propre site de polyadénylation (pA) et se trouve placé entre le promoteur IEA du cytomegalovirus et la pA de la BGH (hormone bovine de croissance). FIGURE 9 : Immunoprécipitation de différentes formes de LVBL. Après incorporation de 35SQ 2- pendant 18 h, les lysats cellulaires (pistes 1 à 7) et surnageants de culture (pistes 8 à 14) des différentes lignées sont mis en contact avec les anticorps de lapin Aragara préparés contre le peptide NH2-terminal de la LVBL, préalablement fixés sur des billes Protéine A-Sépharose. Après lavage, les protéines ont été analysées en système SDS-PAGE (acrylamide 12 W), le gel a été séché et exposé pendant 24 h contre un film Kodak XAR5. Les lignées parentales et clones stables transfectés par le plasmide recombinant pcDNA3-LVBL sont la 293 parentale (piste 1 et 8), les clones 293 transfectés Tfl (pistes 2 et 9), Tf2 (pistes 3 et 10) et Tf4 (pistes 4 et 11), la lignée COS-7 parentale (pistes 5 et 12) , le clone COS-7 transfecté (pistes 6 et 13) , la lignée CEM1/NP (pistes 7 et 14). FIGURE 10 : Représentation schématique de pourcentages d'inhibition d'infection HIV-1. Les surnageants de culture de la lignée parentale 293 et des clones stables 293 transfectés par le plasmide recombinant pcDNA3-LVBL ont été préincubés avec des lots infectieux de la souche HIV-1 LAI, pendant une heure avant infection de cellules P4 pendant 7 heures. A ce stade, l'AZT (50 tM) est ajouté aux milieux de culture. Après 48 h, les cellules sont lysées et l'activité ss-galactosidase est dosée en présence d'ONPG. Les différents pourcentages sont évalués en rapports de densité optique avec des témoins de cellules P4 infectées avec des lots HIV-1 préincubés avec du milieu de culture neuf. EXEMPLE 1 : Mise en évidence de la LVBL A partir des surnageants de culture, cette protéine (ou polypeptide) est précipitable par les lectines végétales spécifiques des O-glycannes, telles que AIA (Jacaline, extraite de Artocarpus integrifolia) qui se lie aux chaînes O-glycanniques indépendamment de leur état de sialylation (10), ou PNA (extraite d'Arachis hypogaea) qui reconnaît le disaccharide Galfi (1-3)GalNAc non sialylé (11). L'hypersécrétion de cette protéine a été mise en évidence à partir des cellules hyposialylées de la lignée T lymphoblastique CEM (ATCC CCL 119). Ces cellules CEM hyposialylées sont des cellules infectées de façon latente par la souche HIV-1 LAI (CEM-I/NP), (Lefebvre et ai., 1994 ; Giordanengo et al., 1995). Bien que présente dans les surnageants de cellules CEM parentales, son niveau de sécrétion est considérablement augmenté dans les clones de cellules CEM hyposialylées. A partir des surnageants de cellules CEM parentales, cette protéine est précipitable par la lectine AIA et non pas par PNA. A partir des surnageants de cellules hyposialylées, elle est précipitable de façon équivalente par AIA ou par PNA. Comme le montre la Figure 1, le niveau de sécrétion de la LVBL est proportionnel au niveau d'hyposialylation du clone étudié. L'hypothèse d'une relation de cause à effet entre ces deux états est possible : l'accélération de la sécrétion de protéines O-glycosylées sature les capacités de sialylation des sialyltransférases spécifiques des Oglycannes ou provoque une diminution du temps de résidence des protéines candidates aux greffes O-glycanniques dans le trans Golgi et le trans Golgi Network. Exemple 2 : Obtention de cellules hybrides somatiques CEM1/NP - MRC5 En vue de procéder au clonage de cette protéine, un système cellulaire de production optimale de la LVBL a été obtenu. La lignée CEM,1/NP, dont les caractéristiques ont été publiées (Lefebvre et al., 1994 ; Giordanengo et al., 1995), a été obtenue après infection de cellules CEM par la souche HIV LAI. Après 6 mois environ de production virale chronique, la lignée a cessé de produire et il a été constaté une importante hyposialylation des glycoprotéines de surface, plus particulièrement des CD45 (Lefebvre et al., 1994) et CD43 (Lefebvre et al., 1994), protéines très riches en O-glycannes. La lignée CEM,1/NP sécrète de façon importante la LVBL. Toutefois, les quantités de protéines obtenues ne permettent pas d'envisager un microséquençage. Les étapes suivantes ont alors été franchies - mutagénèse de la CEM > l/NP par EMS (éthyl méthane sulfate) - sélection et obtention de clones CEM,1/NP résistants à la 8-azaguanine, et donc HAT (hypoxanthine-aminoptérine thymidine)-sensibles, - fusion (par le polyéthylène glycol) entre l'un des clones précédents et des fibroblastes embryonnaires humains MRC5, - sélection d'hybridomes en milieu HAT. L'un des hybridomes obtenus (7111) sécrète des quantités très appréciables de LVBL. Exemple 3 : Clonage de la LVBL Des surnageants d'hybridomes 7H1 ont été chromatographiés sur billes d'agarose-AIA. Les glycoprotéines retenues sur billes ont été purifiées en gel d'acrylamide 12 Oo (système SDS-PAGE). Les protéines ont été transférées sur membrane PDVF et la zone correspondant à la LVBL (protéine de PM # 47 000 Da), découpée après repérage en bleu de Coomassie). Deux microséquençages indépendants (technique de dégradation d'Edman) de la région NH2-terminale ont fourni la même séquence suivante : ARGAEREWEGGWGGAQEE. De plus, la protéine purifiée a été digérée par la trypsine et trois peptides internes ont été microséquencés, l'un d'entre eux correspondait au peptide précédent, et les deux autres étaient : AALAPYNWPVWLGVHDR et RLYYVCEFPF. Le clonage proprement dit a été ensuite réalisé sur une banque d'ADNc réalisée à partir des ARNs messagers de la lignée CEM > I/NP et insérés dans le vecteur pcDNA3 (Invitrogen) . Un oligonucléotide dégénéré a été utilisé, comme sonde et dont la séquence GAG d'association permet de définir la spécificité (Arnaout, 1990 ; Patarroyo et al., 1990). o Une région riche en acides glutamiques (aa 22-90), avec notamment une succession de 6 de ces acides aminés (Glu 84-89). Une région riche en sites O-glycanniques condensés potentiels : TglPTPSSGPSPSPTPl04 et comportant un site SG propice à la greffe d'une chaîne chondroïtine- ou héparane-sulfate. Une autre région également riche en sites O-glycanniques potentiels entre les acides aminés 267 à 286. Un domaine Leucine-Zipper Val10-Ala149 comportant 6 heptades. Cette particularité permet de prédire l'oligo mérisation de la LVBL soit en homo- ou en hétéro oligomères avec une autre chaîne à identifier. Un domaine Lectine de type C (CRD, pour Carbohydrate Recognition Domain) identifié sur la Figure 3 entre les acides aminés 176 et 320, qui comporte les acides aminés conservés définis par W. I. Weis et coll. (1991). A l'exception de l'asparagine307 qui est remplacé par un tryptophane, 13 des 14 acides aminés constants attendus sont présents. Ils sont imprimés en caractères gras sur la Figure 3. Enfin, l'analyse de l'hydrophobicité de la LVBL ne permet pas de détecter de domaine susceptible de constituer une région transmembranaire autre que la région peptide signal. Rappelons que le microséquençage de la protéine elle-même a révélé une séquence NH2-terminale débutant par ARGA, qui est en continuité avec les 21 premiers acides aminés de la seule phase de lecture retrouvée sur l'ADNc. Ces caractéristiques sont en pleine cohérence avec le caractère purement sécrétoire de la LVBL. Exemple 5 : Distribution tissulaire Les ARNs messagers de la LVBL ont été recherchés par la technique du Northern Blot, en utilisant comme sonde, l'insert complet correspondant à l'ADNc cloné, excisé et purifié à partir du clone pCp50. Comme le montre la Figure 4A, toutes les lignées T lymphoblastiques (CEM, MOLT-4, HUT78 et Jurkat) ainsi que les 2 lignées B lymphoblastiques (Daudi et Raji) expriment les messagers LVBL (bande nettement visible à 1,42 kb environ). Par contre, les deux lignées monocytaires (THP-1 et U-937) l'expriment très faiblement. Divers tissus ont également été testés : les tissus tels que le rein, le foie et le cerveau n'expriment que très faiblement 1'ARN LVBL alors que la moelle osseuse, le pancréas, et faiblement les tissus lymphoïdes sont positifs (Figure 4C). Exemple 6 : Comparaisons entre LVBL et SCGF La séquence nucléotidique de la protéine SCGF (Stem cell growth factor) (Hiraoka et ai., 1997) s'aligne à 98,40 k d'homologie avec la LVBL mais correspond en fait à un ADNc tronqué (délétion nt 771 à 1004) par rapport à la LVBL. Les séquences en acides aminés s'alignent avec 100 k d'homologie, mais la SCGF (245 aa) est bien sûr délétée de la séquence acides aminés 198-275, par rapport à la LVBL. La comparaison des données publiées à propos de la SCGF (Hiraoka et al., 1997) et celles dont nous disposons pour la LVBL font ressortir les points suivants Les auteurs décrivent le peptide signal, la présence de 5 cystéines et la séquence riche en acides glutamiques. Ils ne décrivent pas les autres domaines importants RGD, Leucine-Zipper, sites O-glycanniques et chondroïtine sulfate, et surtout Lectine de type C. Le domaine Lectine type C présent sur la SCGF est tronqué. En particulier, il est amputé de 5 aa normalement conservés (ces204, Glu22l, Glu241, Gly25.6, Trp264) dont notamment de la cystéine 204. Les ARNms de la SCGF et de la LVBL sont détectés différemment. Le Tableau 1 résume les résultats. Les discordances les plus notoires portent sur (i) la lignée T-lymphocytaire MOLT-4 (positive pour la LVBL, comme toutes les autres lignées T testées), (ii) les lignées monocytaires (très faibles pour la LVBL) et (iii) les fibroblastes (négatifs pour la LVBL). Tableau 1 : Résultats comparatifs des Northern Blots de différentes lignées et tissus humains testés avec les sondes LVBL et SCGF. Lignée Type LVBL SOGF1 CEM T-Lymph. +++ nt 2 CEMBCL CEM+HIV +++ Nt HUT 78 T-Lymph. + Nt MOLT-4 T-Lymph. ++ Nég. Jurkat T-Lymph. +++ Nt SUP-T1 T-Lymph. ++ nt Raji B-Lymph. ++ nt Daudi B-Lymph. ++ nt HL60 Myéloïde +++ THP-1 Monocyt. + ++ U-937 Monocyt. f ++ Pancréas + + Rein f + Muscle + + Foie f i Poumon + + Placenta f + Cerveau i + Coeur + + Fibrobl. nég. ++ 1résultats publiés par A. Hiraoka et al. (1997) 2nt, non testé La protéine SCGF n'est pas visualisée. Elle a été partiellement purifiée sur DEAE Séphacel. Son poids moléculaire minimal est annoncé estimé à 29 kDa, et ne tient pas compte des chaînes O-glycanniques attendues dans les régions riches en prolines-sérines/thréonines. Par contre, la LVBL a été visualisée dans de nombreux systèmes cellulaires avec un poids moléculaire d'environ 47 kDa. Elle a été purifiée à cette taille après précipitation par la lectine Jacaline, ce qui prouve bien la présence de chaînes O-glycanniques. Elle a été microséquencée sur plusieurs peptides qui ont été retrouvés sur le ADNc cloné. Les propriétés décrites pour la SCGF sont celles d'une protéine co-stimulatrice, testée en conjonction avec l'érythropoiétine ou le granulocyte/macrophage colonystimulating factor. Le peptide manquant de la SCGF (correspondant à la séquence aa 198-275 du polypeptide LVBL) et, en conséquence, la perte d'une partie importante du domaine Lectine de type C, ne permet pas à la SCGF de supporter les propriétés antivirales du polypeptide LVBL. Par contre, le polypeptide LVBL qui inclut totalement la SCGF, en particulier le domaine RGD et le domaine Leucine-Zipper (formation d'oligomères) , conserve les propriétés de liaison de la protéine SCGF aux intégrines. De nombreux travaux ont montré que les intégrines étaient capables d'induire des signaux tels que : modifications de flux calcique, action sur les canaux à protons, phosphorylation sur tyrosine et sérine/thréonine, modifications du métabolisme des phosphoinositides, activation des MAPkinases, activation de gènes (Yamada et al. 1995 ; Dedhar et ai. 1995) . Toutes ces activités se recoupent en fait avec celles des facteurs de croissance et expliquent que le polypeptide LVBL, qui inclut la protéine SCGF, puisse déclencher la transduction de signaux qui peuvent se traduire par la stimulation de la prolifération de cellules en présence de leur facteur de croissance et comme observée par A. Hiraoka et coll. (1997). L'analyse de la séquence de la LVBL fait apparaître une organisation de molécule bi-fonctionnelle : un domaine CRD, COOH-terminal et un domaine NH2-terminal comportant un site RGD (potentiellement interactif avec des molécules d'ahésion du type intégrines). Ces deux domaines sont séparés par une région charnière rigidifiée par une condensation de chaînes O-glycanniques. De plus, l'autre domaine central, du type Leucine-Zipper, permet de prédire loligomérisation de la LVBL, propriété constante des molécules connues pour contenir un domaine CRD (Drickamer, 1993 ; Gabius, 1997). La Figure 5 montre un alignement, en acides aminés, de la LVBL avec trois molécules connues : le CD23 (low-affinity Fcg receptor), la MBL (Mannose binding lectin) et la Tétranectine. On remarque les acides aminés conservés dans le domaine CRD, ainsi que la richesse et la relative conservation des leucines. I1 faut noter la présence d'un domaine Leucine-Zipper aligné entre le CD23 et la LVBL. De façon intéressante, la MBL et la LVBL présentent une assez bonne homologie de leur CRD (23 W). La MBL est connue pour former des trimères par l'intermédiaire des hélices collagène-like de sa région NH2-terminale puis des bouquets de trimères grâce aux cystéines retrouvées dans la même région (Turner, 1996). Elle ne présente pas de région riche en leucines correspondant au domaine Leucine-Zipper de la LVBL qui sert précisément à ltoligomérisation de cette dernière. On observe également pour ces deux protéines une correspondance de leur région charnière possédant une condensation de sites O-glycanniques. Ces différentes observations amènent à postuler pour la LVBL un rôle de molécule présentatrice et plus particulièrement de molécule opsonisante. Sa fonction pourrait donc l'apparenter à la famille des Collectines (Holmskov et al., 1994), bien qu'elle en diffère, par son domaine RGD notamment. La MBL a été décrite pour remplir de telles fonctions vis-à-vis d'agents pathogènes variés tels que bactéries, levures, et virus, notamment le HIV (Erzekowitz et al., 1989) et les myxovirus influenza (Hartshorm et al., 1993). La MBL se lie à des structures polymannosylées via son CRD. Une haute affinité de cette liaison est assurée grâce à l'oligomérisation de sous-unités MBL. Les complexes formés entre MBL et agents pathogènes activent le complément et sont reconnus par les monocytes-macrophages qui peuvent les phagocyter (Turner, 1996). Enfin, le site RGD présent sur la région NH2-terminale devrait assurer la liaison du complexe virus-LVBL à des cellules qui expriment les intégrines correspondantes, et déclencher alors l'activation cellulaire aboutissant à la phagocytose. Il faut souligner ici que les Northern Blots ont montré la quasi absence de transcrits LVBL dans les lignées monocytaires. Les monocytes-macrophages pourraient être les cellules cibles des molécules LVBL conjuguées à des particules infectieuses. Exemple 7 : Spécificité oligosaccharidique du CRD de la LVBL Bien qu'il ait été montré que le CD23 (molécule de surface du lymphocyte B, bien connue en tant que récepteur à activité Lectine de type C) puisse lier les immunoglobulines E déglycosylées (Vercelli et al., 1989), le motif de liaison attendu pour le CRD de la LVBL devrait logiquement être une structure saccharidique. Des résultats préliminaires ont montré que la LVBL ne reconnaissait pas le mannane (polymannose), structure par ailleurs reconnue par plusieurs collectines dont la MBL (Holmskov et al., 1994). Exemple 8 : Production d'anticorps monoclonaux anti LVBL Des souris Balb/c ont été immunisées avec le peptide ARGAEREWEGGAQEE (Arga), qui correspond à la région NH2terminale de la LVBL. Après fusion entre cellules spléniques et NS1, et sélection des clones hybrides en milieu HAT, un screening, réalisé à l'aide de la technique ELISA, a permis d'isoler plusieurs clones sécréteurs d'anticorps dirigés contre le peptide. Des lapins sont également en cours d'immunisation avec le peptide Arga et avec la protéine entière précipitée à partir des surnageants de cellules 7H1 à l'aide de la lectine Jacaline et ensuite purifiée sur gel de polyacrylamide. Ces anticorps monoclonaux et polyclonaux serviront à caractériser l'expression de la LVBL dans différents systèmes cellulaires et à purifier la LVBL sur colonnes d'affinité. Ils serviront également à réaliser le dosage de la LVBL dans les sérums et différents liquides biologiques de sujets infectés ou non par différents agents pathogènes et permettront ainsi l'ouverture de nouvelles investigations biologiques dans le domaine de l'infectiologie. Exemple 9 : Production de LVBL purifiée et recombinante Des travaux de biologie moléculaire sont entrepris afin d'obtenir différentes protéines de fusion à partir de la LVBL. La LVBL complète ainsi que les fragments COOHterminal (domaine RGD) et NH2-terminal (domaine Lectine) seront fusionnés d'une part à la Glutathione S-transférase en utilisant les vecteurs pGEX (Pharmacia) pour expression en système procaryote et d'autre part à un motif polyhistidine en utilisant le vecteur pSHT-His (pSHT qui a été modifié en introduisant la séquence correspondant au peptide 6xHis) . Les constructions réalisées dans le vecteur pSHT-His permettront d'exprimer et de purifier la LVBL ainsi que ses fragments en système eucaryote et d'obtenir des protéines normalement glycosylées. En fonction des résultats obtenus par d'autres auteurs avec la MBL (Weis et al., 1991 ; Weis et al., 1992), il est néanmoins attendu que les protéines recombinantes exprimées dans les bactéries puissent être actives. Exemple 10 : Activité anti-HIV des surnageants LVBL+ sur les cellules P4 Pour caractériser cette activité, la lignée P4 en cycle infectieux unique a été utilisée. Cette lignée provient de cellules HeLa transduites pour l'expression de la molécule CD4 et ainsi infectables par HIV. Elle possède en outre le gène bactérien Lac Z intégré et placé sous contrôle du promoteur LTR du HIV-1 (Charneau et al., 1992) qui peut donc être activée par la protéine Tat du HIV. L'infection de ces cellules par le HIV (pénétration du virus, insertion et transcription du DNA proviral, puis traduction des protéines virales) peut donc être évaluée par l'activité Q-galacosidase, soit en comptant les cellules colorées en bleu après adjonction du substrat ONPG, soit en dosant l'activité enzymatique totale sur les lysats cellulaires. De plus, l'ajout d'AZT, quelques heures après infection, permet d'arrêter l'infection en cycle unique et d'évaluer ainsi la proportion de cellules initialement infectées. Les cellules P4 sont infectées par un lot infectieux HIV BRU titré, préalablement incubé ou non en présence d'un surnageant LVBL. Après 1 heure de contact, les cellules sont remises en culture pendant 7 heures. A ce stade, on ajoute 1'AZT (50 UM) au milieu de culture. Après 48 h, les cellules sont lysées et l'activité Q-galactosidase est dosée en présence d'ONPG. Comme le montre la Figure 6, les surnageants de lignées cellulaires qui expriment la LVBL inhibent l'infection des cellules P4 dans une proportion de 50 W à 80 %, alors que les surnageants des cellules THP-1, qui ne l'expriment pratiquement pas, n'interfèrent pas avec l'infection HIV. Exemple 11 : Activité facilitante de la LVBL sur l'infection des cellules THP-1 par le HIV Les cellules THP-1 ont été infectées par la. souche HIV-1 BRU après que le lot infectieux ait été préincubé ou non avec un surnageant LVBL. 7 heures plus tard, 1'AZT (50 tiM) est ajouté au milieu de culture. Aux jours J + 3 et J + 5, des dosages de p24 virale (COULTER HIV-1 p24 Antigen Assay [Retrovirology Coulter Co., Hialeh, FL]) ont été réalisés. Les résultats présentés sur le Tableau 2 montre une production virale deux fois plus importante lorsque l'infection HIV a été réalisée après contact avec un surnageant LVBL Tableau 2 : Production d'antigènes p24-HIV-l par les cellules CEM et THP-1, en présence ou non d'un surnageant LVBL+. Le lot infectieux est préincubé ou non avec le surnageant, une heure avant infection des cellules. La production d'antigènes p24 est ensuite dosée dans le milieu de culture. A noter que les milieux de culture sont renouvelés après 3 jours. CEM CEM THP-1 THP-1 + Surnageant 3 jours 440* 316 412 5 jours 416 29 58 8 jours 415 19 | 36 *exprimé en ng/ml La préparation d'une forme tronquée ou modifiée de la LVBL, telle qu'une forme ne comportant pas de domaine RGD, devrait permettre l'obtention d'une molécule thérapeutique d'origine humaine capable de se lier à différents virus, sans les faire pénétrer dans les cellules cibles habituelles, et donc de se comporter comme un anticorps neutralisant. Exemple 12 : Production et activité anti-HIV de la LVBL en système cellulaire ectopique (lignée 293) Une activité anti-HIV peut être mise en évidence dans les surnageants des lignées qui sécrètent la LVBL par comparaison avec l'absence d'activité des surnageants des lignées qui n'expriment pas cette protéine. Afin de confirmer que la LVBL est bien la protéine responsable de cette activité, le système classique d'expression protéique a été utilisé sous la dépendance d'une transfection de l'ADNc correspondant. Cette méthode permet de corréler l'apparition d'une propriété nouvelle dans une lignée cellulaire (qui en est dépourvue), avec l'entrée d'un gène nouveau introduit par transfection (Seed B., 1987, Nature 329 : 840-842). L'absence de transcription de la LVBL dans la lignée 293 (ATCC CRL-1573, rein embryonnaire humain) a tout d'abord été assurée. Pour cela, les ARNm ont été isolés, puis transférés et la membrane a été préhybridée puis hybridée, selon les techniques déjà décrites. La sonde utilisée était la LVBL pleine taille, préalablement excisée du recombinant pcDNA3-LVBL. Comme le montre la Figure 7, la lignée 293 parentale n'exprime aucun ARN messager correspondant à la LVBL. I1 a été ensuite procédé à la transfection du recombinant pleine taille pcDNA3-LVBL dans la lignée 293. La technique pratiquée était celle utilisant le phosphate de calcium, à l'aide du kit"Transfection MBS Mammalian Kit" (Catalog &num;200388, Revision &num;017002) , selon les recommandations du fournisseur (Stra ta gene, La Jolla, CA 92037, USA). Les propriétés du vecteur d'expression pcDNA3 (fourni par Invitrogen Corporation, Carlsbad, CA 92008, USA), dans lequel la banque d'ADNc de la lignée CEM > I/NP avait été construite, ont pu ainsi être mises à profit. Ce vecteur permet l'insertion des ADNc sous le contrôle du promoteur fort du gène IEA du cytomegalovirus, en amont du domaine de polyadénnylation (Figure 8) de l'hormone de croissance bovine (BGH). Ce vecteur autorise ainsi l'expression des ADNc en système eucaryote. Le vecteur comporte également le gène de résistance à la néomycine (ou G418) (Figure 8), et permet donc la sélection de transfectants stables en présence de cet antibiotique. Les cellules 293 transfectées ont donc été soumises à la sélection par le G418, et après quatre semaines de culture, trois clones stablement établis (Tfl, Tf2 et Tf4) ont pu être sélectionnés. Ces clones sont entretenus en milieu RPMI 1640, additionné de 5 de sérum de veau foetal et de G418 (1 mg/ml). Il sont régulièrement subcultivés à raison de divisions au 1/3, 2 fois par semaine. Comme le montre la Figure 7, les clones Tfl, Tf2 et Tf4 expriment les ARNm LVBL. Leur taille (1,7 kb) est supérieure à celle de 1,35 kb des ARN naturels, tels qu'ils sont observés dans les lignées lymphoblastiques analysées précédemment. Sachant que l'ADNc de la LVBL inséré dans le recombinant utilisé correspond à la pleine taille de l'ARNm naturel (1,35 kb), la différence de taille observée ne peut s'expliquer que par l'arrêt de transcription au niveau du site pA de la BGH, situé en aval du site pA de la LVBL (cf. Figure 8). Pour vérifier la présence de la protéine LVBL dans les surnageants des trois clones stables, nous avons choisi les techniques de marquage au 35su42~ et celle spécifique d'immunoprécipitation en mettant à profit le sérum polyclonal de lapin Argara préparé contre le peptide ARGAEREWEGGAQEE qui correspond à la région NH2-terminale de la protéine LVBL. Les techniques classiques d'incorporation de sulfate radioactif, de lyse cellulaire et d'immunoprécipitation ont été décrites dans les publications du laboratoire (Lefebvre et al., J. Exp. Med., 1994). * Comme le montre la Figure 9, la protéine LVBL est bien retrouvée à la fois dans les lysats cellulaires et dans les surnageants de culture des trois clones 293 transfectés stables Tfl, Tf2 et Tf4 (pistes 2-4, 9-11 de la Figure 9). Le lysat cellulaire et le surnageant de culture de la lignée 293 parentale sont négatifs (Figure 9, pistes 1 et 8) . D'autres résultats en cours d'étude sont également visibles sur cette Figure. Il s'agit de l'expression de la LVBL après transfection du recombinant pcDNA3-LVBL dans la lignée humaine COS-7 (ATCC CRL-1651), (Figure 9, pistes 6 et 13). On peut constater que 1) à partir des surnageants de culture de la lignée CEM1/NP, le sérum spécifique anti-LVBL précipite deux formes de cette protéine : la PS0 régulièrement précipitée par la jacaline dans les tests antérieurs, et une forme plus courte de 40 kDa environ (piste 14) ; par contre, seule la P50 semble être présente dans le lysat cellulaire correspondant (piste 7), 2) la forme P50 de la LVBL semble être seule présente dans les lysats des clones 293 transfectés Tfl, Tf2 et Tf4 (pistes 2-4), 3) de façon inattendue, le sérum anti-LVBL précipite deux autres formes plus courtes de LVBL : environ P39 et P37 (pistes 9-11) à partir des surnageants de culture des clones 293 transfectés, 4) les surnageants de culture des cellules COS-7 transfectées contiennent les quatre formes P50, P40, P39 et P37 de la LVBL (piste 13), alors que les lysats cellulaires correspondants ne contiennent que la P50 (piste 6). L'interprétation que l'on peut proposer à propos des variations de taille de la LVBL est la suivante l'apparition dans certains surnageants de culture de plusieurs formes de LVBL plus courtes que la P50 présente dans les lysats cellulaires fait évoquer un phénomène de "processing" faisant intervenir plusieurs protéases différemment exprimées selon les systèmes cellulaires. Enfin, les surnageants de culture des lignées parentales 293 et transfectées Tfl, Tf2 et Tf4 ont été soumis aux tests d'infection des cellules P4 par la souche HIV-1 LAI (voir exemples 10 et 11) . Comme le montre la Figure 10, le surnageant de la lignée parentale 293 ne possède pas d'effet inhibiteur. L'apparent effet facilitant (+ 20 %) n'a pas été constamment observé. Par contre, les surnageants de culture des clones transfectés inhibent l'infection à des taux variant de 55 à 90 %. Ces résultats démontrent donc que le pouvoir inhibiteur anti-HIV mis en évidence dans les surnageants de culture des cellules qui expriment naturellement la LVBL est supporté en tout ou partie par cette protéine. Les résultats obtenus in vitro, montrent que la LVBL peut lier le HIV. Il est raisonnable de penser que la LVBL lie plus particulièrement les résidus saccharidiques de l'enveloppe virale, via son CRD. Des résultats équivalents sont donc attendus avec d'autres virus enveloppés tels que Herpesvirus ou Myxovirus influenza. Il est intéressant de rappeler que la greffe des résidus saccharidiques (présents, entre autres, sur les glycoprotéines de l'enveloppe virale, et reconnus par les CRDs de certaines lectines animales) n'est pas codée par le virus lui-même mais par la cellule infectée. Certaines lectines animales peuvent donc ainsi reconnaître et neutraliser différentes souches de virus, telles que les variants HIV ou Myxovirus influenza indépendamment de leur variabilité génétique. Par contre, selon le système cellulaire utilisé, qui exprime ou non l'intégrine reconnu par le RGD de la LVBL, on pourra observer une inhibition ou une facilitation de l'infection. Ainsi, il sera nécessaire d'adapter la forme du polypeptide LVBL à utiliser pour la prévention ou traitement suivant le type et la nature de l'infection virale et selon le système cellulaire utilisé par le virus. Par exemple, la préparation d'une forme tronquée ou modifiée de la LVBL incapable de reconnaître les molécules d'adhésion permettra d'obtenir un composé capable d'agir à la manière d'un anticorps neutralisant, en se liant audit virus et en empêchant son intégration dans la cellule cible. Bibliographie Arnaout, M.A., 1990. Leukocyte adhesion molecules deficiency : its structural basis, pathophysiology and implications for modulating the inflammatory response. Immunol Rev. 114 : 145-180. Barany, F., 1911. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 88 : 189-193. Buckholz, R.G. , 1993. Yeast systems for the expression of heterologous gene products. Curr. Op. Biotechnology 4 538-542. Burg, J.L. et al., 1996. Mol. and Cell. Probes, 10 : 257271. Carter, B.J., 1993. Adeno-Associated Virus vectors. Curr. Op. Biotechnology 3 : 533-539. Charneau, P., M. Alizon and F. Clavel, 1992. A second origin of DNA plus-strand synthesis is required for optimal human immunodeficiency virus replication. J. Virol. 66 2814-2820. Chu, B.C.F. et al., 1986. Nucleic Acids Res., 14 : 55915603. Dedhar, S. and G.E. Hannigan, 1996. Integrin cytoplasmic interactions and bidirectional transmembrane signalling. Curr. Opin. Cell Biol. 8 : 657-669. Drickamer, K., 1993. Biology of animal lectins. Annu. Rev. Cell Biol. 9 : 237-264. Duck, P. et al., 1990. Biotechniques, 9 : 142-147. Edwards, C.P., and Aruffo, A., 1993. Current applications of COS cell based transient expression systems. Curr. Op. Biotechnology 4 : 558-563. Epstein, A., 1992. Les vecteurs herpétiques pour le transfert de gènes. Médecine/Sciences 8 : 902-911. Erlich, H.A., 1989. In PCR Technology. Principles and Applications for DNA Amplification. New York : Stockton Press. Erzekowitz, A.B., M. Kuhlman, J.E. Groopman and R.A. Byrn, 1989. A human serum mannose-binding protein inhibits in vitro infection by the human immunodeficiency virus. J. Exp. Med. 169 : 185-196. Fauci, A.S., 1993. Multifactorial nature of human immunodeficiency virus disease : implications for therapy. Nature (Lond.). 262 : 1011-1018. Finkel, T.M., G. Tudor-Williams, N. K. Banda, M.F. Cotton, T. Curiel, C. Monks, T.W. Bara, R.M. Ruprecht and A. Kupfer, 1995. Apoptosis occurs predominantly in bystander cells and not in productively infected cells of HIV and SIV-infected lymph nodes. Nature Med. 1 : 129-134. Gabius, H.J., 1997. Animal lectins. Eur. J. Biochem. 243 543-576. Giordanengo, V., M. Limouse, L. Desroys Du Roure, J. Cottalorda, A. Doglio, A. Passeron, J.G. Fuzibet and J.C. Lefebvre, 1995. Autoantibodies directed against CD43 molecules with an altered glycosylation status on human immunodeficiency virus type 1 (HIV-l)-infected CEM cells are found in all HIV-1+ individuals. Blood. 86 : 2302-2311. Guatelli J.C. et al., 1990. Isothermal in vitro amplification of nucleic acids by a multienzyme reaction modeled after retroviral replication. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87 : 1874-1878. Hammar, L.11., Hirsh, I., Machado, A.A., De Mareuil, J., Baillon, J.G., Bolmont, C., and Chermann, J.C., 1995. Lectin-mediated effects on HIV type 1 infections in vitro. Aids Res. Hum. Retroviruses. 11 : 87-95. Hanse, J., Clausen, H., Nielsen, C., Tegibjaerg, L.S., Hanse, L.L., Nielsen, C.M., Dabelsteen, E., Mathiesen, L., Hakomori, S., and Nielsen, J.O., 1990. Inhibition of human immunodeficiency virus Today. 15 : 67-74. Hortin, G. and B. Trimpe, 1990. Lectin affinity chromatography of proteins bearing O-linked oligosaccharides : application of jacalin-agarose. Anal. Biochem. 188 : 271-277. Houbenweyl, 1974, in Methode der Organischen Chemie, E. Wunsch Ed., Volume 15-I et 15-II, Thieme, Stuttgart. Innis, M.A. et al., 1990, in PCR Protocols. A guide to Methods and Applications. San Diego : Academic Press. Iversen, A.K., Shafer, R.W., Wehrly, K., Winters, M.A., Mullins, J.I., Chesebro, B., and Merigan, T.C., 1996. Multidrug-resistant human immunodeficiency virus type 1 strains resulting from combination antiretroviral therapy. J. Virol. 70 : 1086-1090. Kievitis, T. et al., 1991. J. Virol. Methods, 35 : 273-286. Kirschner, D.E., 1997. Resistance, remission, and qualitative differences in HIV chemotherapy. Emerg. Infect. Dis. 3 : 273-283. Kohler, G. et al., 1975. Nature, 256 (5517) : 495-497. Kwoh, D.Y. et al., 1989. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 86 1173-1177. Landegren, U. et al., 1988. Science, 241 : 1077-1080. Lefebvre, J.C., V. Giordanengo, A. Doglio, L. Cagnon, J.P. Breittmayer, J.F. Peyron and J. Lesimple, 1994. Altered sialylation of CD45 in HIV-l-infected T lymphocytes. Virology. 199 : 265-274. Lefebvre, J.C., V. Giordanengo, M. Limouse, A. Doglio, M. Cucchiarini, F. Monpoux, R. Mariani and J.F. Peyron, 1994. Altered glycosylation of leukosialin, CD43, in HIV-1infected cells of the CEM line. J. Exp. Med. 180 : 16091617. Levy, J.A., 1993. Pathogenesis of human immunodeficiency virus infection. Microbiol. Rev. 57 : 183-289. Lizardi, P.M. et al., 1988. Bio/technology, 6 : 1197-1202. Lotan, R., E. Skutelsky, D. Danon and N. Sharon. 1975. The purification, composition, and specificity of the anti-T lectin from peanut (Arachis hypogaea). J. Biol. Chem. 250 8518-8523. Luckow, V.A. , 1993. Baculovirus systems for the expression of human gene products. Curr. Op. Biotechnology 4 : 564572. Matthews, J.A. et al., 1988. Anal. Biochem., 169 : 1-25. Merrifield, R.D., 1966. J. Am. Chem. Soc., 88(21) : 50515052. Miele, E.A. et al., 1983. J. Mol. Biol., 171 : 281-295. Minton, N.P., 1984. Gene, 31, 269-273. Olins, P.O., and Lee, S.C., 1993. Recent advances in heterologous gene expression in E. coli. Curr. Op. Biotechnology 4 : 520-525. Pantaleo, G., C. Grazioli, J.F. Demarest, L. Butini, M. Montroni, C.M. Fox, J.M. Orenstein, D.P. Kotler and A.S. Fauci, 1993. HIV infection is active and progressive in lymphoid tissue during the clinically latent stage of disease. Nature (Lond.). 362 : 355-358. Patarroyo, M., J. Prieto, J. Rincon, T. Timonen, C. Lundberg, L. Lindbom, B. Asjo and C.G. Gahmberg, 1990. Leukocyte-cell adhesion : a molecular process fundamental in leukocyte physiology. Immunol. Rev. 114 : 67-108. Perricaudet, M., Stratford-Perricaudet, L. and Briand, P., 1992. La thérapie génique par adénovirus. La Recherche 23 471-473. Perrin, C., V. Giordanengo, S. Bannwarth, B. Blaive and J. C. Lefebvre, 1997. Altered sialylation of alveolar macrophages in HIV-l-infected individuals. Clin. Exp. Immunol. 110 : sous-presse. Piatak, M., M.S. Saag, L.C. Yang, S.J. Clark, J.C. Kappes, K.C. Luk, B. H. Hahn, G.M. Shaw and J.D. Lifson, 1993. High levels of HIV-1 in plasma during all stages of infection determined by competitive PCR. Science (Wash. DC). 259 1749-1754. Rolfs, A. et al., 1991. In PCR Topics. Usage of Polymerase Chain reaction in Genetic and Infectious Disease. Berlin Springer-Verlag. Ruoslahti, E. and M.D. Pierschbacher, 1987. New perspectives in cell adhesion : RGD and integrins. Science (Wash. DC). 238 : 491-497. Ruoslahti, E., 1988. Fibronectin and its receptors. Annu. Rev. Biochem. 57 : 375-413. Sambrook, J., Fritsch, E.F., and Maniatis, T. Molecular cloning : a laboratory manual. Sec. Ed. Cold Spring Harbor Lab., Cold Spring Harbor, New York. Sanchez-Pescador, R., 1988. J. Clin. Microbiol., 26(10) 1934-1938. Seed B., 1987, Nature 329 : 840-842. Segev D., 1992, in Non-radioactive Labeling and Detection of Biomolecules . Kessler C. Springer Verlag, Berlin, New York, 197-205. Stone, B.B. et al., 1996. Mol. and Cell. Probes, 10 : 359370. Temin, H.M., 1986. Retrovirus vectors for gene transfer. In Kucherlapati R., ed. Gene Transfer, New York, Plenum Press, 149-187. Turner, M.W., 1996. Mannose-binding lectin : the pluripotent molecule of the innate immune system. Immunol. Today. 17 : 632-540. Urdea, M.S. et al., 1991. Nucleic Acids Symp. Ser., 24 197-200. Urdea, M.S., 1988. Nucleic Acids Research, 11 : 4937. Vercelli, D., B. Helm, P. Marsh, E. Padlan, R.S. Geha and H. Gould, 1989. The B-cell binding site on human immunoglobulin E. Nature (Lond.). 338 : 649-651. Walker G.T., Fraiser M.S., Schram J.L., Little M.C., Nadeau J.G., and Malinowski D.P., 1992. Strand displacement amplification : an isothermal in vitro DNA amplification technique. Nucleic Acids Res. 20 : 1691-1696. Weis, W.I., R. Kahn, R. Fourme, K. Drickamer and W.A. Hendrickson, 1991. Structure of the calcium-dependent lectin domain from a rat mannose-binding protein determined by MAD phasing. Science (Wash. DC). 254 : 1608-1615. Weis, W.I., K. Drickamer and W.A. Hendrickson, 1992. Structure of a C-type mannose-binding protein complexed with an oligosaccharide. Nature (Lond.). 360 : 127-134. Yamada, K.M. and S. Miyamoto, 1995. Integrin transmembrane signaling and cytoskeletal control. Curr. Opin. Cell Biol. 7 : 681-689. REVENDICATIONS 1/Polynucléotide de séquence SEQ ID NO 1 telle que définie à la Figure 2 pour LVBL. 2/ Polynucléotide caractérisé en ce qu'il comprend un polynucléotide choisi parmi a) un polynucléotide de séquence SEQ ID NO 1 ou dont la séquence est celle de 1'ARN correspondant à SEQ ID NO 1, b) un polynucléotide dont la séquence est complémentaire de la séquence d'un polynucléotide défini en a), c) un polynucléotide dont la séquence comporte au moins 80 W d'homologie avec un polynucléotide défini en a), ou b), d) un polynucléotide hybridant dans des conditions de forte stringence avec une séquence de polynucléotide défini en a), b), ou c), e) un fragment d'au moins 8 nucléotides consécutifs d'un polynucléotide défini en a), b), c), ou d). 3/ Polypeptide de séquence d'acides aminés SEQ ID NO 2 telle que définie à la Figure 3 pour LVBL. 4/ Polypeptide selon la revendication 3, caractérisé ce qu'il comprend a) un peptide signal comprenant la séquence d'acides aminés 1 à 21 de la séquence SEQ ID NO 2 b) un domaine RGD comprenant la séquence d'acides aminés 61 à 63 de la séquence SEQ ID N 2 c) une région riche en acides glutamiques comprenant la séquence d'acides aminés 22 à 90 de la séquence SEQ ID N 2 d) une région riche en sites O-glycanniques condensés potentiels comprenant la séquence d'acides aminés 91 à 104 de la séquence SEQ ID N 2 e) un domaine Leucine-Zipper comprenant la séquence d'acides aminés 108 à 149 de la séquence SEQ ID NO 2 f) un domaine Lectine de type C comprenant la séquence d'acides aminés 176 à 320 de la séquence SEQ ID NO 2. 5/ Polypeptide caractérisé en ce qu'il comprend un polypeptide choisi parmi a) un polypeptide selon l'une des revendications 3 et 4, b) un polypeptide variant de polypeptide de séquence d'acides aminés défini en a) c) un polypeptide homologue au polypeptide défini en a) ou b) et comportant au moins 80 d'homologie, de préférence au moins 90 %, avec ledit polypeptide de a), d) un fragment d'au moins 5 acides aminés d'un polypeptide défini en a), b) ou c), e) un fragment biologiquement actif d'un polypeptide défini en a), b), ou c). 6/Dérivé soluble d'un polypeptide selon l'une des revendications 3 à 5, dans lequel les acides aminés 71 à 323 sont conservés et au moins l'un des acides aminés 22 à 70 peut être remplacé ou supprimé, ou dans lequel les acides aminés 22 à 161 sont conservés et au moins l'un des acides aminés 162 à 323 peut être remplacé ou supprimé. 7/ Polypeptide selon l'une des revendications 3 à 6, caractérisé en ce qu'il est capable de se lier à un virus et en ce qu'il inhibe la pénétration dudit virus dans les cellules cibles habituelles dudit virus. 8/ Polypeptide selon la revendication 7, caractérisé ce qu'il s'agit d'un polypeptide selon l'une des revendications 3 à 6, dans lequel au moins l'un des acides aminés 61 à 63 de la séquence SEQ ID NO 2 est remplacé ou supprimé. 9/ Polypeptide selon l'une des revendications 7 et 8, caractérisé en ce que ledit virus est le HIV. 10/ Polynucléotide caractérisé en ce qu'il code pour un polypeptide selon l'une des revendications 3 à 9. 11/ Polynucléotide utilisable comme amorce, caractérisé en ce qu'il est choisi parmi les polynucléotides selon l'une des revendications 1, 2 et 10. 12/ Polynucléotide selon la revendication 11, caractérisé en ce que sa séquence est choisie parmi les séquences suivantes a) GGC TTT GGC CAT GGG GCT CGG GGA GCA, b) CGC CAG GCT CCC GCC CCG CGC CGT GCA, c) GGG GAG GAA GAG GAG GAG GAA, d) GCC CCG CTA GAA GGG GAA CTC GCA GAC, et e) une séquence comprise entre le nucléotide en position nt 180 et le nucléotide en position nt 1151, extrémités incluses, de la séquence SEQ ID NO 1. 13/ Polynucléotide utilisable comme sonde, caractérisé en ce qu'il est choisi parmi les polynucléotides selon l'une des revendications 1, 2 et 10. 14/ Polynucléotide selon la revendication 13, caractérisé en ce qu'il est marqué par un composé radioactif ou par un composé non radioactif. 15/ Polynucléotide selon l'une des revendications 13 et 14, caractérisé en ce que sa séquence est choisie parmi les séquences suivantes a) AGGCGCGGTGCACGGCGCGGGCGGGAGCCTGGCGC, b) ATGGAGGCGCTCACTCGGTACCTGCGCGCGGCGCTC, et c) une séquence comprise entre le nucléotide en position nt 180 et le nucléotide en position nt 1151, extrémités incluses, de la séquence SEQ ID NO 1. 16/ Utilisation d'un polynucléotide selon l'une des revendications 1, 2 et 10 pour la détection et/ou l'amplification de séquences nucléiques. 17/ Oligonucléotide sens ou antisens, caractérisé en ce qu'il est choisi parmi un polynucléotide selon l'une des revendications 1, 2 et 10. 18/ Vecteur recombinant de colonage, et/ou d'expression, caractérisé en ce qu'il contient un polynucléotide selon l'une des revendications 1, 2 et 10. 19/ Vecteur selon la revendication 18, caractérisé en ce qu'il comporte les éléments permettant l'expression et/ou la sécrétion desdites séquences dans une cellule hôte. 20/ Cellule hôte, caractérisée en ce qu'elle est transformée par un vecteur selon l'une des revendications 18 et 19. 21/ Procédé de préparation d'un polypeptide, caractérisé en ce qu'il met en oeuvre un vecteur selon l'une des revendications 18 et 19. 22/ Procédé de préparation d'un polypeptide recombinant, caractérisé en ce que l'on cultive des cellules transformées selon la revendication 20 dans des conditions permettant l'expression dudit polypeptide recombinant et que l'on récupère ledit polypeptide recombinant. 23/ Polypeptide recombinant susceptible d'être obtenu par un procédé selon l'une des revendications 21 et 22. 24/ Anticorps mono- ou polyclonaux, leurs fragments, ou anticorps chimériques, caractérisés en ce qu'ils sont capables de reconnaître spécifiquement un polypeptide selon l'une des revendications 3 à 9, et 23. 25/ Anticorps selon la revendication 24, caractérisé en ce qu'il s'agit d'un anticorps marqué. 26/ Procédé de détection et/ou de dosage d'un polypeptide selon l'une des revendications 3 à 9, et 23, dans un échantillon biologique, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes a) mise en contact de l'échantillon biologique avec un anticorps selon l'une des revendications 24 et 25 b) mise en évidence du complexe antigène-anticorps forme. 27/ Kit ou nécessaire pour la détection et/ou le dosage d'un polypeptide selon l'une des revendications 3 à 9, et 23, dans un échantillon biologique, caractérisé en ce qu'il comprend les éléments suivants a) un anticorps polyclonal ou monoclonal selon l'une des revendications 24 et 25 b) le cas échéant, les réactifs pour la constitution du milieu propice à la réaction immunologique c) les réactifs permettant la détection des complexes antigène-anticorps produits par la réaction immunologique. 28/ Procédé de détection et/ou de dosage d'acide nucléique selon la revendication 1 ou 2, dans un échantillon biologique, caractérisé en ce qu'il comporte les étapes suivantes a) isolement de 1'ADN à partir de l'échantillon biologique à analyser, ou obtention d'un ADNc à partir de 1'ARN de l'échantillon biologique b) amplification spécifique de 1'ADN codant pour la protéine LVBL à l'aide d'amorces selon l'une des revendications 11 et 12 c) analyse des produits d'amplification. 29/ Procédé de détection et/ou de dosage d'acide nucléique selon la revendication 1 ou 2, dans un échantillon biologique, caractérisé en ce qu'il comporte les étapes suivantes a) mise en contact d'une sonde oligonucléotidique selon l'une des revendications 13 à 15 avec un échantillon biologique ; b) détection et/ou dosage de l'hybride formé entre la sonde oligonucléotidique et 1'ADN de l'échantillon biologique. 30/ Kit ou nécessaire pour la détection et/ou le dosage d'un acide nucléique selon la revendication 1 ou 2, dans un échantillon biologique, caractérisé en ce qu'il comprend les éléments suivants a) un couple d'amorces nucléiques selon l'une des revendications 11 et 12 b) les réactifs nécessaires pour effectuer une réaction d'amplification d'ADN c) éventuellement un composant permettant de vérifier la séquence du fragment amplifié, plus particulièrement une sonde selon l'une des revendications 13 à 15. 31/ Kit ou nécessaire pour la détection et/ou le dosage d'acide nucléique selon la revendication 1 ou 2, dans un échantillon biologique, caractérisé en ce qu'il comprend les éléments suivants a) une sonde oligonucléotidique selon l'une des revendications 13 à 15 b) les réactifs nécessaires à la mise en oeuvre d'une réaction d'hybridation c) le cas échéant, un couple d'amorces selon l'une des revendications 11 et 12, ainsi que les réactifs nécessaires à une réaction d'amplification de 1'ADN. 32/ Procédé selon l'une des revendications 26, 28 et 29, pour le diagnostic d'infection virale. 33/ Procédé selon la revendication 32, caractérisé en ce que l'infection virale est une infection par le virus HIV. 34/ Kit ou nécessaire selon l'une des revendications 27, 30 et 31, pour le diagnostic d'infection virale, particulier pour le diagnostic d'infection par le virus HIV. 35/ Composé caractérisé en ce qu'il est choisi parmi a) un anticorps selon lune des revendications 24 et 25 b) un polypeptide selon l'une des revendications 3 à 9, et 23 c) un vecteur selon l'une des revendications 18 et 19 d) un vecteur selon l'une des revendications 18 et 19, caractérisé en ce qu'il présente à sa surface extérieure un site de reconnaissance spécifique des cellules cibles e) un vecteur défini en c) ou d), caractérisé en ce que le produit d'expression de l'acide nucléique inséré par le vecteur dans la cellule cible, est excrété par ladite cellule cible transformée f) une séquence nucléique sens ou anti-sens selon la revendication 17. 36/ Composé selon la revendications 35, à titre de médicament. 37/ Composé selon la revendication 36, comportant en outre un véhicule pharmaceutiquement acceptable. 38/ Composé selon la revendication 36 ou 37, pour la prévention et/ou le traitement d'une infection virale. 39/ Composé selon la revendication 38, pour la prévention et/ou le traitement d'une infection virale par le HIV. 40/ Composé selon l'une des revendications 35 à 37, caractérisé en ce qu'il permet de moduler la prolifération cellulaire. 41/ Composé selon la revendication 40, caractérisé en ce qu'il permet de stimuler la prolifération cellulaire, notamment des cellules progénitrices hématopoïétiques. 42/ Composé selon la revendication 40 ou 41, pour la prévention et/ou le traitement de toute affection relevant d'une aplasie ou d'hypoplasie médullaire.