FR 2772484 A1 19990618 FR 9715764 A 19971212 Procédé de traitement d'image d'autoradiographie. La présente invention est relative aux procédés de traitement d'images d'autoradiographie (autoradiographie proprement dite en rayonnement, scintigraphie en rayonnement y, etc.), c'est à dire aux procédés permettant d'obtenir au moins une image à partir des rayonnements radioactifs émis par au moins un traceur radioactif contenu dans un substrat. Plus particulièrement, l'invention concerne un procédé pour générer au moins une image d'un substrat à partir de rayonnements radioactifs provenant d'un nombre I au moins égal à 2 de sources radioactives, ces sources radioactives comprenant au moins un traceur radioactif contenu dans le substrat, ce procédé comprenant les étapes suivantes a) on détecte les rayonnements radioactifs issus du substrat dans un certain champ d'observation subdivisé en K > b) et on mémorise des données représentatives des différents signaux de détection générés par le détecteur, individuellement pour chaque rayonnement radioactif détecté pendant une durée déterminée dite période d'observation, ces données mémorisées permettant de connaître au moins une position estimée d'un point d'émission du rayonnement radioactif dans le substrat. On a déjà proposé d'utiliser un procédé de ce type pour générer, en utilisant un appareil d'imagerie à scin tillateur solide (commercialisé sous la marque "CI-imager" par la société BIOSPACE MESURES, Paris, France), deux images correspondant respectivement à la répartition dans le substrat de deux traceurs différents (35S et 32P) émettant des rayonnements de spectre énergétiques différents : en utilisant des critères de séparation de ces rayonnements (tels que le nombre de pixels concernés par une détection, l'amplitude maximale du signal de détection pour une détection, la somme des amplitudes des signaux de détection pour une meme détection, etc.), on classe alors sensiblement en temps réel chaque détection comme correspondant soit à un traceur, soit à l'autre (voir la thèse de P. Laniece : "Quantification en hybridation in situ et en autoradiographie : développement d'un radio-imageur haute résolution", Institut de Physique Nucléaire, 1992 et Y. Charon : "Radio-imagerie et biologie", thèse de l'Université Denis Diderot - Paris VII, 1995). Dans ce cas, on estime également, sensiblement en temps réel, le point d'émission de chaque rayonnement détecté, en même temps qu'on attribue ce rayonnement à l'un ou à l'autre des traceurs, et chacune des images finalement générées consiste simplement en la superposition des points d'émission estimés des différents rayonnements détectés, respectivement pour chaque traceur. La présente invention a notamment pour but de perfectionner les procédés connus du type susmentionné pour améliorer la définition de l'image. A cet effet, selon l'invention, un procédé du genre en question est essentiellement caractérisé en ce qu'avant la période d'observation (une fois pour toutes, à intervalle de temps régulier, ou avant chaque nouvelle période d'observation ou série de périodes d'observation), on met en oeuvre une étape préliminaire de calibration, dans laquelle on mesure une réponse impulsionnelle Ri,j1,..jq(x,y) du détecteur pour chaque source radioactive i et pour chaque combinaison possible des caractéristiques A1j1,..,Aqjq des différents critères Al..Aq, cette réponse impulsionnelle correspondant à une probabilité pour que, lorsque le détecteur reçoit un rayonnement provenant d'une source ponctuelle de la source radioactive susmentionnée, ledit détecteur génère sur les pixels du champ d'observation ayant les coordonnées relatives (x,y) par rapport à la source ponctuelle, un signal de détection présentant ladite combinaison de caractéristiques, en ce que les données mémorisées pendant la période d'observation permettent en outre de connaître, en plus de la position estimée (xk, yl) du point d'émission du rayonnement, un nombre q au moins égal à 1 de paramètres numériques supplémentaires Ai. .Aq relatifs aux signaux de détection générés par chaque détection de rayonnement radioactif, chacun de ces paramètres, dits "critères", pouvant prendre un nombre non nul de valeurs A1l..A1J1, .., Aq1. .Aqjq, dites "caractéristiques", et en ce que ledit procédé comporte les étapes supplémentaires suivantes c) à partir de l'ensemble des données mémorisées, déterminer une distribution H(xk,y1,Alj1,.., Aqjq) des détections correspondant à ces données, correspondant au nombre de détections en chaque point d'émission estimé de coordonnées (xk,y1) avec chaque combinaison A1j1,...,Aqjq des caractéristiques des différents critères, d) et estimer une distribution hi (xk, yl) des détections correspondant à chaque source radioactive i, qui mi nimise les écarts respectifs entre la distribution H(xk,y1,Aj1,..,Ajq) et les valeurs correspondantes - i étant un entier compris entre 1 et I, et désignant la source radioactive considérée, - jl étant un entier compris entre 1 et J1, désignant la jième caractéristique possible pour le critère n0 i, - jq étant un entier compris entre 1 et Jq, désignant la jqme caractéristique possible pour le critère n q, - m étant un indice compris entre 1 et L, - n étant un indice compris entre 1 et K, les distributions hi(xk,yl) correspondant, pour chaque source radioactive i constituée par un traceur contenu dans le substrat, à l'image de la répartition de ce traceur dans ledit substrat. Grâce à ces dispositions, on prend en compte toute l'information contenue dans l'historique des détections effectuées pendant la période d'observation, pour obtenir une image d'excellente résolution. Dans des modes de réalisation préférés de l'invention, on peut éventuellement avoir recours en outre à l'une et/ou à l'autre des dispositions suivantes - les sources radioactives comprennent plusieurs traceurs, auxquels correspondent autant de distributions hi(xk,y), formant chacune l'image de la répartition d'un desdits traceurs dans le substrat - une des sources radioactives est un bruit de fond - au moins une des sources radioactives est une source fictive correspondant à au moins un défaut du détecteur - le détecteur est un détecteur gazeux dans lequel les rayonnement P génèrent des avalanches d'électrons à l'origine du signal de détection, et ledit détecteur comportant des points chauds constitués par des points en lesquels sont générées des avalanches d'électrons sans détection de rayonnement, ces points chauds constituant la source fictive susmentionnée - on estime chaque distribution hi(xk,yl) en minimisant une fonction d'erreur Er définie par où #j1..#jq sont des indices de pondération - les indices #j1..#jq sont tous égaux à 1 - au moins un des critères est choisi parmi l'amplitude maximale du signal de détection, pour chaque détection, le nombre de pixels concernés par chaque détection, ces pixels formant un ensemble appelé ci-après "tache de détection", l'ellipticité de la tache de détection, la somme des valeurs du signal de détection sur la tache de détection, la variance de la tache de détection l'étroitesse de la tache de détection, l'asymétrie de la tache de détection - le point d'émission estimé de chaque détection est le barycentre des pixels concernés par cette détection, de coordonnées - les réponses impulsionnelles Ri,j1,.jq(x,y) prises en compte sont nulles sauf lorsque (x,y)=(0,O). D'autres caractéristiques et avantages de l'invention apparaîtront au cours de la description suivante d'une de ses formes de réalisation, donnée à titre d'exemple non limitatif, en regard des dessins joints. Sur les dessins - la figure 1 est une vue schématique d'un détecteur gazeux pouvant être utilisé pour la mise en oeuvre du procédé selon l'invention, - la figure 2 est une vue schématique d'un exemple de signal de détection f (xk, yl) obtenu lors de la détection d'un rayonnement p dans le détecteur de la figure i' - et la figure 3 est une vue schématique d'un exemple de réponse impulsionnelle Rî,jl,..jq(x,y) utilisable dans la mise en oeuvre du procédé selon l'invention. Le procédé selon la présente invention s'applique au traitement des images d'autoradiographie, obtenue notamment par les détecteurs de scintigraphie en rayonnements y, et les détecteurs d'autoradiographie proprement dite en rayonnements, qu'il s'agisse de détecteurs gazeux à lecture électronique (chambre à fils), de détecteurs gazeux à lecture optique (par exemple, les détec teurs commercialisés sous la marque "P-Imager" par la Société BIOSPACE MESURES, PARIS, FRANCE), ou de scintillateurs (par exemple, le détecteur utilisant un scintillateur solide et commercialisé sous la marque "u-imager" par la Société BIOSPACE MESURES, PARIS, FRANCE), etc. A titre d'exemple purement illustratif, un détecteur gazeux à lecture optique, du type de celui commercialisé sous la marque "'3-Imager" par la Société BIOSPACE susmentionnée, est représenté sur la figure 1. Ce détecteur 1 comporte - une chambre de détection 2, constituée par une enceinte fermée délimitée entre deux électrodes plates parallèles, constituées l'une par un échantillon 3 à analyser et l'autre par une grille 4 accolée à une fenêtre transparente 5, ces deux électrodes étant soumises à une différence de potentiel élevée et l'espace entre les deux électrodes (ou champ d'observation) étant parcouru par un flux gazeux constitué par exemple par un mélange d'argon et de triéthylamine, - une caméra intensifiée 7 disposée en face de la fenêtre 5 de la chambre de détection, - un microordinateur 8 relié à la caméra intensifiée pour acquérir les images prises par cette caméra, - et un système de contrôle 9 commandé par le microordinateur, pour contrôler notamment le flux gazeux dans la chambre de détection 2 ainsi que la différence de potentiel entre l'échantillon 3 et la grille 4. L'échantillon 3, qui sera appelé ci-après substrat, peut par exemple être constitué par une fine lamelle d'un organisme biologique dans lequel on souhaite cartographier la répartition d'un ou plusieurs traceurs (au nombre de I) constitués par des isotopes radioactifs tels que : 3H, 14C, 35S, 32P, 33P et 125I. En supposant par exemple que le substrate contienne deux isotopes, par exemple du tritium et du carbone 14, ces deux traceurs émettent chacun des rayonnements ss dans le champ de détection 6, avec des spectres énergétiques différents. Chaque rayonnement ss 10 ionise des atomes d'argon dans le champ de détection, et les électrons ainsi libérés sont accélérés par le champ électrique entre les deux électrodes 3,4 en ionisant à leur tour d'autres atomes d'argon, ce qui génère un phénomène appelé "avalanche électronique" 11. Cette avalanche électronique excite le triéthylamine contenue dans le flux gazeux, qui émet de la lumière détectée par la caméra intensifiée 7, et le microordinateur 8 acquiert ainsi l'image de chaque détection de rayonnement ss, répartie en K x L pixels. Chaque pixel de l'image ainsi acquise a donc des coordonnées (x,yi), ou k est un entier compris entre 1 et K et 1 est un entier compris entre 1 et L. Ainsi, chaque détection d'un rayonnement P par le détecteur 2 se traduit par l'acquisition dans le microordinateur 8, d'une image dont quelques pixels, par exemple une cinquantaine de pixels, présentent une intensité lumineuse supérieure à un seuil prédéterminé, ces pixels formant une tâche de détection. L'intensité lumineuse de chaque pixel, captée par la caméra 7, constitue un signal de détection f(xk, yl) , dont un exemple purement illustratif est représenté sur la figure 2. Chaque image de détection de rayonnement ss acquise par le microordinateur 8 correspond soit à un rayonnement émis par le tritium, soit à un rayonnement émis par le carbone 14. Du fait des spectres énergétiques différents de ces deux traceurs radioactifs, la forme de la fonction f(x,yi) susmentionnée varie statistiquement suivant si le rayonnement émis provient du tritium ou du carbone 14. C'est ce phénomène qui est utilisé par la présente invention pour cartographier séparément le tritium et le carbone 14 dans le substrat 3, c'est-à-dire pour générer deux images du substrat 3, correspondant l'une à la répartition du tritium dans ce substrat, et l'autre à la répartition du carbone 14 dans ce substrat. A cet effet, on utilise un ou plusieurs critères de distinction relativement à la forme du signal de détection f(x,yi), tel que - l'amplitude maximale du signal de détection, c'est-à-dire la valeur maximale de r(xk,yl) pour chaque détection, - le nombre de pixels concernés par chaque détection, - l'ellipticité e de chaque tâche de détection, définie par la formule e=ABS(A2-B2)/(A2eB2), où A et B sont les dimensions de la tâche de détection selon ses deux axes principaux, c'est-à-dire selon sa longueur et sa largeur, - la somme des valeurs du signal de détection f (Xkt Yl) sur l'ensemble de la tâche de détection, pour chaque détection, - la variance de la tâche de détection, selon ses deux axes principaux, la variance V selon l'axe principal A s'exprimant par exemple sous la forme V=( f(a,b).(a-J)2)/ a)f(a,b), pixels pixels où a et b sont les coordonnées de chaque pixel concerné par la détection considérée selon les axes principaux A et B, a est la valeur moyenne de a pour ces pixels, et o est l'écart-type, - l'asymétrie de la tâche de détection, selon ses deux axes principaux, l'asymétrie selon l'axe principal A s'exprimant par exemple sous la forme Ass = ( 1 f(a, b).(a a3 / o3) / f(Qb), pixels pixels - et l'étroitesse de la tâche de détection, donnée par la formule E=( f(by(a-a)4 1a4)/ f(a,b) l, f (a, b) (on pixels pixels peut également utiliser à la place de l'étroitesse, le coefficient dénommé kurtosis K=E-3). A titre d'exemple, on peut évaluer pour chaque détection l'amplitude maximale du signal de détection f et l'ellipticité de la tâche de détection. Ainsi, à chaque détection de rayonnement, le microordinateur 8 calcule, sensiblement en temps réel - les valeurs prises par les critères susmentionnés, valeurs qui sont discrétisées et qui seront appelées ci-après "caractéristiques", ainsi que le barycentre de la tâche de détection, correspondant au point d'émission estimé du rayonnement ss dans le substrat 3, ce ayant pour coordonnées Le microordinateur conserve alors en mémoire, individuellement pour chaque rayonnement détecté, les différentes données ainsi calculées, mais il ne conserve pas forcément en mémoire le signal de détection f(x,y1) afin d'économiser l'espace mémoire. Lorsque le microordinateur 8 a emmagasiné un nombre suffisant de détection, typiquement plusieurs millions, par exemple environ 3 millions, il dispose d'une distribution statistique H(xk,yl,A1j1,..Aqjq), où - q est le nombre des critères utilisés, - Aljl est la valeur (ou caractéristique) prise par le critère n"l, jl étant compris entre 1 et J1, - Aqjq est la valeur (caractéristique) prise par le critère n q, jq étant compris entre 1 et Jq. Cette distribution H(xk, yl, Aljt, . . ,Aqjg) correspond au nombre de détections en chaque point d'émission estimé (barycentre de chaque tache de détection) de coordonnées (xk, yl) avec chaque combinaison A1j1,..,Aqjq des caractéristiques des différents critères. La distribution H peut s'exprimer sous la forme - i étant un entier compris entre 1 et I, désignant les traceurs radioactifs, - m étant un indice compris entre 1 et L, - n étant un indice compris entre 1 et K, - et Ri,j1,..jq(x,y) étant la réponse impulsionnelle du détecteur pour chaque traceur i et pour chaque combinaison possible des caractéristiques A1j1,.. ,Aqjq des différents critères Ai. .Aq, cette réponse impulsionnelle correspondant à une probabilité pour que, lorsque le détecteur re çoit un rayonnement provenant d'une source ponctuelle du traceur radioactif i, ledit détecteur génère sur les pixels du champ d'observation ayant les coordonnées relatives (x,y) par rapport à la source ponctuelle, un signal de détection présentant ladite combinaison de caractéristiques (voir l'exemple représenté sur la figure 3), et ladite réponse impulsionnelle étant mesurée dans une étape préliminaire de calibration mise en oeuvre avant la période d'observation du substrat 3 (une fois pour toutes, à intervalle de temps régulier, ou avant chaque nouvelle période d'observation ou série de périodes d'observation). Au cours de l'étape de calibration, les réponses impulsionnelles peuvent être estimées en effectuant des mesures successives avec des sources ponctuelles des différents traceurs i, et en calculant où Ni(x,y,A1j1,..Aqjq) est le nombre de détections au point de coordonnées relatives (x,y) au cours de l'étape de calibration effectuée avec le traceur i et avec la combinaison de caractéristiques Aiji, . . ,Aqjq. A partir de la distribution H, le micro-ordinateur 8 estime des distributions hi(xk,yl) pour chaque traceur radioactif, correspondant respectivement à l'image de la répartition de ces traceurs dans le substrat 3. Pour cela, le micro-ordinateur 8 minimise l'écart entre la distribution H(xk,yl,Aljl,..Aqiq) et une distribution estimée Pour cela, on peut minimiser une fonction d'erreur Er, par exemple, selon la méthode des moindres carrés où x q sont des indices de pondération, pouvant être le cas échéant tous égaux à 1. Cette minimisation peut se faire par un calcul direct, ou par des algorithmes classiques d'analyse numérique, en partant d'une valeur arbitraire des distributions hi(xk,yl) Ainsi, on obtient des distributions estimées hi(xk,yl) qui sont très proches des distributions réelles h(xk,yI), de sorte que l'on obtient des images de très bonne résolution donnant respectivement la cartographie des traceurs i dans le substrat 3. On notera que le procédé selon l'invention est également applicable pour éliminer le bruit de fond radioactif, en considérant ce bruit de fond comme un traceur radioactif fictif. De même, lorsque le détecteur 1 comporte des défauts ponctuels, généralement appelés "points chauds". Dans les détecteurs gazeux, on peut également éliminer l'effet de ces points chauds ou autres défauts en les considérant comme des traceurs fictifs. Enfin, le procédé selon l'invention peut être mis en oeuvre sous une forme simplifiée, en ne prenant en compte les réponses impulsionnelles que pour (x,y)=(O,O), auquel cas l'équation I susmentionnée se simplifie et devient le procédé étant par ailleurs mis en oeuvre de la même fa çon qu'expliqué précédemment. La présente invention n'est pas limitée à l'exemple particulier qui vient d'être décrit. En particulier, elle englobe le cas où on réaliserait des mesures analogiques sur l'image, ce qui reviendrait à augmenter à l'infini le nombre de pixels : dans ce cas, les sommes discrètes explicitées ci-dessus sur les axes x et y pourraient être présentées sous la forme d'intégrales continues. REVENDICATIONS 1. Procédé pour générer au moins une image d'un substrat (3) à partir de rayonnements radioactifs provenant d'un nombre I au moins égal à 2 de sources radioactives, ces sources radioactives comprenant au moins un traceur radioactif contenu dans le substrat, ce procédé comprenant les étapes suivantes a) on détecte les rayonnements radioactifs issus du substrat dans un certain champ d'observation (6) subdivisé en K x L pixels, au moyen d'un détecteur (1) qui génère pour chaque pixel (xk, ,yl) du champ d'observation un signal de détection f(xk,yi) représentatif de la détection ou non d'un rayonnement radioactif en ce pixel, b) et on mémorise des données représentatives des différents signaux de détection générés par le détecteur (1), individuellement pour chaque rayonnement radioactif détecté pendant une durée déterminée dite période d'observation, ces données mémorisées permettant de connaître au moins une position estimée d'un point d'émission du rayonnement radioactif dans le substrat, caractérisé en ce qu'avant la période d'observation, on met en oeuvre une étape préliminaire de calibration, dans laquelle on mesure une réponse impulsionnelle Ri,j1,..jq(x,y) du détecteur pour chaque source radioactive i et pour chaque combinaison possible des caractéristiques A1j1,...,Aqjq des différents critères Ai. .Aq, cette réponse impulsionnelle correspondant à une probabilité pour que, lorsque le détecteur reçoit un rayonnement provenant d'une source ponctuelle de la source radioactive susmentionnée, ledit détecteur génère sur les pixels du champ d'observation ayant les coordonnées relatives (x,y) par rapport à la source ponctuelle, un signal de détection présentant ladite combinaison de caractéristiques, en ce que les données mémorisées pendant la période d'observation permettent en outre de connaître, en plus de la position estimée (xk, yl) du point d'émission du rayonnement, un nombre q au moins égal à 1 de paramètres numériques supplémentaires Ai. .Aq relatifs aux signaux de détection générés par chaque détection de rayonnement radioactif, chacun de ces paramètres, dits "critères", pouvant prendre un nombre non nul de valeurs Al1.. AlJl,... Aq1.. .Aqjq, dites "caractéristiques", et en ce que ledit procédé comporte les étapes supplémentaires suivantes c) à partir de l'ensemble des données mémorisées, déterminer une distribution H(xk,yl,A1jl,..,Aqjq) des détections correspondant à ces données, correspondant au nombre de détections en chaque point d'émission estimé de coordonnées (xk,yl) avec chaque combinaison Alji,..,Aqjq des caractéristiques des différents critères, d) et estimer une distribution #i(xk,yl) des détections correspondant à chaque source radioactive i, qui minimise les écarts respectifs entre la distribution H(xk,yl,Ajl,..,Ajq) et les valeurs correspondantes - i étant un entier compris entre 1 et I, désignant la source radioactive considérée, - jl étant un entier compris entre 1 et J1, désignant la j1éme caractéristique possible pour le critère n 1, ... - jq étant un entier compris entre 1 et Jq, désignant la jqème caractéristique possible pour le critère n q, - m étant un indice compris entre 1 et L, - n étant un indice compris entre 1 et K, les distributions hi(xk,yl) correspondant, pour chaque source radioactive i constituée par un traceur contenu dans le substrat, à l'image de la répartition de ce traceur dans ledit substrat. 2. Procédé selon la revendication 1, dans lequel les sources radioactives comprennent plusieurs traceurs, auxquels correspondent autant de distributions h xk,yl), formant chacune l'image de la répartition d'un desdits traceurs dans le substrat. 3. Procédé selon la revendication 1 ou la revendication 2, dans lequel une des sources radioactives est un bruit de fond. 4. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans lequel au moins une des sources radioactives est une source fictive correspondant à au moins un défaut du détecteur. 5. Procédé selon la revendication 4, dans lequel le détecteur (1) est un détecteur gazeux dans lequel les rayonnement p génèrent des avalanches d'électrons à l'origine du signal de détection, et ledit détecteur comportant des points chauds constitués par des points en lesquels sont générées des avalanches d'électrons sans détection de rayonnement, ces points chauds constituant la source fictive susmentionnée. 6. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans lequel on estime chaque distribution hi(xk,yl) en minimisant une fonction d'erreur Er définie par où #jl..#jq sont des indices de pondération. 7. Procédé selon la revendication 6, dans lequel les indices i .Xjq sont tous égaux à 1. 8. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans lequel au moins un des critères est choisi parmi - l'amplitude maximale du signal de détection, pour chaque détection, - le nombre de pixels concernés par chaque détection, ces pixels formant un ensemble appelé ci-après "tache de détection", - l'ellipticité de la tache de détection, - la somme des valeurs du signal de détection sur la tache de détection, - la variance de la tache de détection - l'étroitesse de la tache de détection, -l'asymétrie de la tache de détection. 9. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans lequel le point d'émission estimé de chaque détection est le barycentre des pixels concernés par cette détection, de coordonnées 10. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans lequel les réponses impulsionnel les Ri,j1,..jq(x,y) prises en compte sont nulles sauf lorsque (x,y) = (0,0).