FR 2786788 A1 20000609 FR 9815488 A 19981208 PROCÉDÉ DE CRIBLAGE DE SUBSTANCES CAPABLES DE MODIFIER L'ACTIVITÉ D'UNE OU PLUSIEURS PROTÉINES CIBLES OU D'UN ENSEMBLE CIBLE DE PROTEINES EXPRIMÉES IN VITRO. La présente invention concerne le domaine de la recherche de substances capables de modifier l'activité d'une protéine cible ou d'un ensemble cible de protéines impliquées dans un processus biologique. Ce type de travaux, aussi désigné screening ou criblage, constitue aujourd'hui un mode de recherche empirique mais particulièrement performant de nouvelles substances, utilisé dans de nombreux laboratoires. Parmi les nombreux domaines d'applications de ces stratégies de criblage, on peut citer les exemples suivants : - Les laboratoires pharmaceutiques disposent de banques de molécules, et recherchent celles capables d'inhiber ou de ralentir l'activité d'enzymes impliquées dans le développement de maladies génétiques ou infectieuses d'origine bactérienne ou virale. Suite à l'utilisation intensive des antibiotiques, la vitesse d'apparition de nouvelles résistances est actuellement plus rapide que celle de découverte de nouveaux antibiotiques. Certains laboratoires hospitaliers recherchent donc, toujours à partir de banques de molécules bien spécifiques, de nouveaux antibiotiques ou de nouveaux inhibiteurs de beta-lactamase. - Des travaux sont également effectués pour trouver des inhibiteurs de la multiplication des microorganismes impliqués dans la corrosion biologique des canalisations ou des containers utilisés dans des procédés industriels. La présente invention a pour objet un procédé de criblage de substances capables de modifier l'activité d'une ou plusieurs protéines cibles, impliquée(s) dans un processus biologique grâce à l'expression in vitro de la dite ou desdites protéines. On entend par processus biologique, par exemple, une maladie infectieuse ou des mécanismes de résistances bactériennes, ou encore des processus impliqués dans des procédés industriels du domaine agroalimentaire, du traitement du papier, des détergents, du textile, etc... Ainsi, le procédé de l'invention permet de cribler des substances capables de modifier l'activité d'une seule protéine cible exprimée in vitro présentant par exemple une activité enzymatique, comme une amylase, une polymérase, une protéase, ou capables de modifier une propriété observable de cette protéine, comme par exemple une activité "DNA-binding", une affinité antigénique, ou encore capables de modifier l'activité ou une propriété d'un variant de cette protéine cible, comme par exemple une amylase thermostable, une polymérase plus processive, une protéase résistante à un anti-protéase, ou ayant une plus forte affinité pour l'ADN. Mais le procédé de l'invention permet aussi de cribler des substances capables de modifier l'activité d'un ensemble de protéines exprimées in vitro. Dans ce cas c'est l'ensemble de protéines qui constitue la cible des substances à tester. Cet ensemble de protéines exprimées peut correspondre par exemple aux enzymes constituant une voie de synthèse d'un métabolite ou une voie de dégradation d'un composé toxique, mais il peut aussi correspondre à des protéines constituant les sous-unités d'une protéine complexe. Les substances à tester sont donc alors évaluées pour leur capacité à modifier l'activité globale de cet ensemble de protéine, ce qui sous-entend que ces substances peuvent soit modifier l'activité de toutes, d'une parties ou d'une seule des protéines de l'ensemble, car la modification de l'activité d'une ou d'une partie des protéines entraîne la modification de l'activité de l'ensemble. La qualité d'une technique de criblage de substances capables de modifier l'activité d'une protéine cible repose principalement sur l'efficacité du test d'activité de ladite protéine. Ce test doit être hautement spécifique, sensible, rapide et reproductible. La difficulté des procédés de criblage in vivo de telles molécules repose entre autres sur la toxicité et la localisation cellulaire (barrière membranaire) de la protéine cible. La présente invention vise à offrir un procédé d'isolement à haut débit de molécules susceptibles de modifier l'activité d'une protéine ou plusieurs cibles permettant de palier les problèmes cidessus. Ce but est atteint grâce à un procédé de criblage de substances capables de modifier l'activité d'une protéine ou plusieurs protéines cibles (par exemple une ensemble cible de protéines) exprimées in vitro, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes : a) la préparation d'au moins une molécule d'acide nucléique comprenant le ou les gènes codant pour la ou les protéines cibles et les éléments de contrôle nécessaires à la transcription et la traduction du ou desdits gènes, ci-après aussi désignés le ou les gènes cibles, b) la transcription in vitro de la ou des molécules d'acide nucléique préparée à l'étape (a), éventuellement en présence d'une ou plusieurs molécules rapporteur permettant de révéler l'activité de la ou des protéines cibles et/ou d'au moins une substance susceptible de modifier l'activité de la ou des protéines cibles, c) la traduction in vitro des transcrits de l'étape (b) éventuellement en présence d'au moins une molécule rapporteur permettant de révéler l'activité de la ou des protéines cibles et/ou d'au moins une substance susceptible de modifier l'activité de la ou des protéines cibles, si l'une ou l'autre ou les deux n'étaient pas présentes à l'étape (b), d) la mesure de l'activité de la ou des protéines cibles ou de la molécule rapporteur par tout moyen approprié, en présence d'au moins une substance susceptible de modifier l'activité de la ou des protéines cibles, si cette substance n'était pas présente aux étapes (b) ou (c). La substance à tester susceptible de modifier l'activité de la ou des protéine cibles peut être ajoutée avant ou pendant l'une des étapes (b), (c) ou (d) du procédé l'invention. Les séquences de contrôles du ou des gènes codant pour la ou les protéines cibles sont pour la transcription : - un promoteur d'ARN polymérase en 5', éventuellement un terminateur d'ARN polymérase en 3', et pour la traduction : - un site de fixation des ribosomes, aussi désigné ci-après RBS pour "Ribosome Binding Site", qui peut être ou non le(s) site(s) RBS naturel(s) du ou des gènes. Le promoteur (en 5') et le terminateur (en 3') s'il est présent, d'une ARN polymérase, sont par exemple ceux du phage T7. Comme indiqué précédemment le procédé de criblage de l'invention peut concerner une seule protéine ou plusieurs protéines, comme par exemple les protéines exprimées par un opéron. En conséquence, le procédé de l'invention accepte plusieurs formes de réalisation. Lorsque il concerne le criblage de substances susceptibles de modifier l'activité d'une protéine, le procédé de l'invention comprend les étapes suivantes : a) la préparation d'une molécule d'acide nucléique comprenant le gène codant pour la protéine cible, en 5' dudit gène un promoteur d'ARN polymérase et un site RBS, et éventuellement un terminateur d'ARN polymérase en 3' dudit gène, b) la transcription in vitro de la molécule d'acide nucléique préparée à l'étape (a), éventuellement en présence d'une ou plusieurs molécules rapporteur permettant de révéler l'activité de la ou des protéines cibles et/ou d'au moins une substance susceptible de modifier l'activité de la protéine cible, c) la traduction in vitro des transcrits de l'étape (b) éventuellement en présence d'au moins une molécule rapporteur permettant de révéler l'activité de la protéine cible et/ou d'au moins une substance susceptible de modifier l'activité de la protéine cible, si l'une ou l'autre ou les deux n'étaient pas présentes à l'étape (b), d) la mesure de l'activité de la protéine cible ou de la molécule rapporteur par tout moyen approprié, en présence d'au moins une substance susceptible de modifier l'activité de la protéine cible, si cette substance n'était pas présente aux étapes (b) ou (c) . Mais le procédé de l'invention peut aussi être appliqué au criblage de substances capables de modifier l'activité d'un ensemble de protéines cibles. Les gènes codant pour ces protéines peuvent être situés sur le même fragment d'ADN comme dans le cas d'un opéron, ou à différents endroits de l'ADN génomique comme dans le cas de certaines voies métaboliques. Lorsque le procédé de l'invention concerne le criblage d'une substance capable de modifier l'activité d'un ensembles de protéines cibles, l'étape (a) du procédé admet les deux formes de mise en oeuvre suivantes : i) Soit, les gènes sont regroupés sous la forme d'un opéron, et alors l'étape (a) consiste à préparer une molécule d'acide nucléique comprenant les gènes (l'opéron) codant pour les protéines cibles, en 5' de l'ensemble desdits gènes (de l'opéron) un promoteur d'ARN polymérase, éventuellement en 3' de l'ensemble desdits gènes (de l'opéron) un terminateur d'ARN polymérase, et pour chacun desdits gènes son site RBS naturel. ii) Soit, lesdits gènes sont séparés et alors l'étape (a) consiste à préparer une ou plusieurs molécules d'acide nucléique comprenant les gènes codant pour les protéines cibles, en 5' de chacun desdits gènes un promoteur d'ARN polymérase et un site RBS, et éventuellement en 3' de chacun desdits gènes un terminateur d'ARN polymérase. Dans la première forme de mise en oeuvre (i) ci-dessus, le site RBS de chacun des gènes est son site RBS naturel, et l'on préfère alors utiliser à l'étape (b) un extrait de traduction préparé à partir de l'organisme dont provient le ou les gènes cibles ou d'un organisme phylogénétiquement proche. Dans la seconde forme de mise en oeuvre (ii) ci-dessus, le site RBS peut être le site naturel de chacun des gènes ou un autre site RBS plus adapté à l'étape (b) de traduction. Une variante de la première (i) et de la deuxième forme (ii) de mise en oeuvre du procédé cidessus, consiste à réaliser en parallèle ou simultanément, le procédé de l'invention décrit précédemment avec une seule protéine, chaque étape (a) étant réalisée avec chacun des gènes. Une alternative à la réalisation en parallèle ou simultanée de procédés de l'invention, consiste à réaliser séparément pour chacun des gènes les étapes (a), (b) et (c), puis, pour le criblage final impliquant chacune des protéines, à rassembler les produits des étapes (c) pour réaliser l'étape (d). De même, lorsque le procédé concerne le criblage de substances capables de modifier l'activité d'un ensemble de protéines dont les gènes sont physiquement séparés sur le génome d'un organisme, le procédé de l'invention consiste à réaliser en parallèle ou simultanément, le procédé de l'invention décrit précédemment avec une seule protéine cible, chaque étape (a) étant réalisée avec chacun des gènes. Une alternative à la réalisation en parallèle ou simultanée de procédés de l'invention, consiste à réaliser séparément pour chacun des gènes, les étapes (a), (b) et (c) puis, pour le criblage final impliquant chacune des protéines, à rassembler les produits des étapes (c) pour réaliser l'étape (d). Une forme de mise en oeuvre avantageuse de l'étape (a) du procédé de l'invention consiste à préparer la molécule d'acide nucléique par une réaction d'amplification du ou des gènes codant pour la ou les protéines cibles, à l'aide d'une ou plusieurs paires d'amorces, chacune constituée de : l'amorce sens comprenant la séquence s'hybridant en amont d'un ou plusieurs desdits gènes et portant un promoteur d'ARN polymérase et éventuellement un site RBS, et - l'amorce antisens comprenant la séquence s'hybridant en aval d'un ou plusieurs des mêmes desdits gènes et portant éventuellement un terminateur d'ARN polymérase. Mais la préparation de la molécule d'acide nucléique de l'étape (a) peut être réalisée par toute autre méthode conue de l'homme du Métier comme une coupure de restriction permettant de récupérer le ou les gènes d'intérêt suivie d'une ligation orientée avec les éléments de contrôle nécessaires à la transcription et à la traduction in vitro indiqués précédemment. Le procédé de l'invention présente les avantages suivants : Le fait de travailler directement sur l'activité de la ou des protéines cibles permet une bonne spécificité du test de criblage. - La sensibilité du test s'explique par le coefficient multiplicateur des étapes enzymatiques (b) et (c), correspondant respectivement à la transcription et à la traduction du ou des gènes rapporteurs ou de la molécule rapporteur, et éventuellement grâce à la molécule rapporteur elle-même lorsque celle-ci est une enzyme. - Le procédé de l'invention est rapide car entièrement automatisable. Par exemple une plaque de 384 puits peut être traitée en 2 à 3 heures. - Enfin la reproductibilité est facilitée par l'absence de stockage de la ou des protéines cibles. De plus, la protéine ou les protéines cibles sont exprimées in vitro, indépendamment d'un contexte cellulaire complexe et pas toujours contrôlable (diffusion membranaire, localisation cellulaire, toxicité cellulaire, physiologie cellulaire, problèmes d'induction ou de répression, etc ...). Comme indiqué précédemment, le procédé de l'invention permet de cribler des substances capables de modifier l'activité d'un ensemble de protéines cibles. Le procédé de l'invention peut donc être appliqué au criblage de substances capables de modifier l'activité des variants d'une protéine ou des variants d'un ensemble de protéines, comme par exemple l'action de plusieurs mutants pouvant être contenus dans un même échantillon d'acides nucléiques de départ. A titre d'exemple de cette application du procédé de l'invention, on peut citer les différents mutants du gène de la protéase du VIH contenus dans un échantillon d'un patient infecté par ce virus. La mise en oeuvre du procédé de l'invention consiste alors à réaliser chaque étape (a) avec chacun des mutants dudit gène de façon à exprimer chacun de ceux-ci séparément. La séparation des mutants contenus dans l'échantillon peut être réalisée par clonage, dilution extrême, ou par toute autre méthode connue de l'homme du Métier. Cette application du procédé de l'invention consiste donc à cribler toutes les substances à tester non pas sur une protéine cible ou sur un ensemble de protéines cibles mais sur tous les variants existant de celle(s)-ci exprimés par un seul échantillon d'acides nucléiques. Cette application du procédé de l'invention permet donc de déterminer le spectre d'action des substances à tester. L'invention se rapporte donc aussi à l'application du procédé de criblage de substances capables de modifier les différents formes d'une protéine cible ou d'un ensemble de protéines cibles. En effet, comme indiqué ci-dessus sur la protéase du VIH, l'échantillon d'un patient infecté par ce virus peut contenir plusieurs variants du virus chacun exprimant une protéase différente. Il est donc intéressant d'effectuer un criblage sur chacune des différentes protéases afin de déterminer celles qui sont inhibées par les antiprotéases connues ou celles qui peuvent l'être par de nouvelles substances à tester. Sur la base de cet exemple du virus HIV, l'invention permet l'analyse in vitro des différentes formes d'une protéine cible ou d'un ensemble de protéines cibles. Ce but est atteint selon l'invention, en amplifiant éventuellement les différents variants, par exemple par culture cellulaire ou par amplification moléculaire, puis en isolant chaque gène mutant, par exemple par clonage ou par dilution extrême, et en exprimant chacun de ces gènes conformément aux étapes (a), (b) et (c) du procédé de l'invention, et enfin en criblant les substances capables de modifier l'activité de la ou des protéines produites lors de la révélation à l'étape (d). Le procédé de criblage consiste par exemple dans le cas des protéases du VIH à réaliser un test d'inhibition avec les différents inhibiteurs ou les différentes substances à tester sur chaque protéase individuellement. L'activité de chacune des protéases exprimées conformément au procédé de l'invention peut alors être caractérisée de façon à révéler la représentation des différents variants du virus qui infectent un patient. Le résultat du procédé de criblage selon l'invention permet alors d'adapter la thérapie du patient. Comme indiqué précédemment, le procédé de l'invention est remarquable en ce que à l'étape (a), la molécule d'acide nucléique est préparée de façon à placer le ou les gènes cibles, sous le contrôle d'un promoteur (en 5') et éventuellement d'un terminateur (en 3') d'une ARN polymérase pour être transcrite in vitro. Un mode de réalisation particulier de l'invention consiste à utiliser le promoteur et le terminateur de l'ARN polymérase du phage T7. De même, pour que la traduction puisse se faire in vitro, un site de fixation des ribosomes ou RBS pour "ribosome binding site" est introduit en amont du gène rapporteur. Selon une forme de mise en oeuvre préférée de l'invention, l'étape (a) consiste en une réaction d'amplification, par exemple du type PCR, d'un gène cible ou d'un ensemble de gènes cibles avec au moins une paire d'amorce spécifique où, pour chaque paire d'amorces : - l'amorce venant s'hybrider en amont du gène cible, aussi désignée "amorce sens" porte un promoteur d'ARN polymérase et un RBS, et - l'amorce venant s'hybrider en aval du gène cible, aussi désignée "amorce antisens" porte éventuellement un terminateur d'ARN polymérase. Ces amorces sens et antisens sont choisies de manière à amplifier spécifiquement le gène cible. Le procédé de criblage selon l'invention accepte plusieurs modes de mises en oeuvre notamment en fonction du type d'activité de la ou des protéines cibles. En effet, le ou les gènes cibles préparés à l'étape (a) peuvent coder pour une ou plusieurs protéines cibles impliquées dans divers types de processus biologiques. Ce(s) gène(s) peuvent provenir de plusieurs organismes procaryotes ou de cellules eucaryotes ou encore de virus. Comme indiqué précédemment, un processus peut être par exemple une maladie infectieuse, un mécanisme de résistance bactérien ou viral, une chaîne métabolique ou encore une processus impliqué dans un procédé industriel de l'agroalimentaire, de traitement du papier, de préparation de détergents, de fabrication de textile etc... Préférentiellement, la protéine cible est une enzyme. Cette enzyme peut correspondre entre autres à la réverse transcriptase ou à la protéinase à acide aspartique du virus du Sida, à l'intéine de RecA de Mycobacterium tuberculosis, à une protéine de résistance à un antibiotique, ou encore à un ensemble d'enzymes impliquées dans une voie métabolique. En conséquence, la molécule rapporteur, si elle est présente, peut correspondre à toute substance capable de révéler directement ou indirectement l'activité d'une ou plusieurs protéines cibles, il peut s'agir d'une molécule d'acide nucléique, d'une protéine, d'un peptide, tel qu'un anticorps ou un mélange d'anticorps spécifiques capables de révéler l'activité d'une protéine cible, ou tel qu'un substrat ou une cascade de substrats, dont l'un est celui d'une protéine cible. Ainsi, dans un premier mode de réalisation du procédé de l'invention, la molécule rapporteur doit être présente à l'étape (c) ou (d) pour révéler l'activité éventuelle de la protéine cible en fonction du rôle de la substance testée lors du criblage. Mais la molécule rapporteur peut aussi être présente dans le mélange réactionnel dès l'une des étapes (a) ou (b), soit sous sa forme finale de molécule rapporteur, soit, selon une forme particulière de réalisation de l'invention, sous la forme d'une molécule d'acide nucléique (ADN, ou ARN) correspondant au gène codant pour ladite molécule rapporteur, et alors désigné ci-après gène rapporteur. Dans ce mode de réalisation particulier, la molécule rapporteur sera avantageusement produite lors de l'étape (c) conjointement avec la ou les protéines cibles. Ainsi, selon une forme particulière de mise en oeuvre du procédé de criblage de l'invention, la molécule rapporteur est une protéine qui est produite lors de l'étape (c) conjointement avec la ou les protéines cibles. Avantageusement, dans cette forme de réalisation du procédé de l'invention, le gène codant pour la molécule rapporteur est placé sous le contrôle de séquences de régulation de la transcription et de la traduction similaires à celle du ou des gènes codant pour la ou les protéines cibles, de façon à ce que le gène rapporteur soit coexprimé avec le ou les gènes cibles. A titre d'exemple, le gène rapporteur peut être le gène de la protéine GFP (Green Fluorescent Protein) ou celui de la beta-lactamase (TEM-1). Dans le cas de la GFP, c'est l'émission de fluorescence qui est évaluée. Il est alors possible de réaliser un test tel que la GFP ne fluorèsce que si l'activité des produits du ou des gènes cibles est modifiée par la ou les molécule (s) testée(s). Dans le cas de la beta-lactamase, c'est l'activité de cette enzyme qui est évaluée en incubant une fraction de la réaction de traduction dans un tampon contenant de la nitrocéphine. La nitrocéphine est une beta-lactamine chromogénique qui a la propriété de virer du jaune au rouge lorsqu'elle est hydrolysée par une beta-lactamase active. Un test jaune indique par exemple que la ou les molécule(s) testée(s) est (sont) capable(s) de modifier l'activité du produit du gène cible. Tout autre gène rapporteur peut être envisagé dans le procédé de l'invention, comme ceux de la beta-galactosidase, la luciférase, la peroxydase ou une microperoxydase, etc....Il convient de noter que le gène rapporteur de la GFP présente l'avantage de produire une protéine, dont l'activité est instantanément mesurable, ce qui permet un gain de temps supplémentaire. Mais, un gène rapporteur codant pour une protéine ayant une activité enzymatique du type betalactamase présente une grande sensibilité due au coefficient enzymatique multiplicateur. Une forme particulière de mise en oeuvre du procédé de l'invention avec un gène rapporteur, consiste à exprimer in vitro un gène rapporteur au sein duquel un gène ou plusieurs gènes codant pour la ou les protéines ont été insérées, l'ensemble de ces gènes étant sous le contrôle des mêmes séquences régulatrices de la transcription et de la traduction. Un exemple de molécule d'acide nucléique préparée à l'étape (a) correspondant à cette forme de mise en oeuvre du procédé de l'invention est représentée à la figure 2 en annexe. Ce cas particulier, où le gène cible et le gène rapporteur sont coexprimés, est tout à fait adapté au gène cible correspondant aux intéines comme l'intéine de RecA de Mycobacterium tuberculosis. Une autre forme particulière de mise en oeuvre du procédé de l'invention avec un gène rapporteur, consiste à utiliser un gène cible comme gène rapporteur. Un exemple de molécule d'acide nucléique préparée à l'étape (a) correspondant à cette forme de mise en oeuvre du procédé de l'invention est représentée à la figure 3 en annexe. Ce mode de mise en oeuvre est particulièrement adapté à une protéine cible ayant une activité directement détectable in vitro, comme une activité enzymatique, telle que la beta-lactamase. Le gène de la beta-lactamase joue un rôle essentiel dans la résistance aux antibiotiques en hydrolysant ces molécules avant qu'elles n'aient pu agir sur leurs cibles thérapeutiques. Ainsi, une fois que l'enzyme a été mise en présence de la molécules à tester à l'étape (b), (c) ou (d), l'activité de la beta-lactamase peut être évaluée grâce à un test à la nitrocéphine. La transcription et la traduction des étapes (b) et (c) du procédé de l'invention peuvent être aussi désignées conjointement réaction d'expression protéique in vitro, encore appelée EPIV. La réaction EPIV peut être décomposée en deux étapes distinctes ou simultanées. Dans ce dernier cas, les réactions de transcription et de traduction sont réalisées simultanément. Par contre la décomposition des étapes permet d'optimiser plus facilement les rendements de chaque étape, et ainsi de produire des quantités plus importantes de protéines, ce qui trouve toute son utilité dans le cas d'enzymes de faible activité spécifique. Le découplage entre la transcription et la traduction permet également d'éviter les problèmes de dégradation de la matrice d'ADN par les nucléases si celle-ci a été préparée par PCR. En effet, les composants de la réaction de transcription sont moins contaminés par des nucléases, contrairement aux extraits de traduction. Le découplage permet en outre l'emploi d'extraits cellulaires de traduction différents selon l'origine des gènes cibles ou rapporteur utilisés. En effet, la phase de traduction du transcrit de l'étape (c) est avantageusement réalisée avec un extrait cellulaire de la même origine ou d'une origine proche de celle des gènes cibles. On peut citer à titre d'exemple l'utilisation d'un extrait de traduction préparé à partir de cellules eucaryotes pour la traduction d'une séquence cible eucaryotique ou d'un extrait de traduction préparé à partir de mycobactéries non pathogènes pour la traduction de gènes de Mycobactéries pathogènes tel que l'intéine de RecA de Mycobacterium tuberculosis. Dans un autre cas de figure, l'extrait de traduction est préparé à partir d'organismes extrêmophiles pour la traduction d'un gène d'un même organisme ou d'un autre organisme extrêmophile du même type (thermophiles, halophiles, acidophiles, etc...). Ces extraits spécifiques permettent d'améliorer l'efficacité de traduction. Mais celle-ci peut aussi être réalisée avec un extrait universel comme par exemple un extrait d'E. coli. Il est également possible d'ajouter à l'extrait de traduction de l'étape (c) une ou plusieurs substances favorisant un repliement plus efficace des protéines exprimées, comme par exemple des chaperons, des détergents, des extraits membranaires, etc.... Dans le cas où le ou les gènes cibles sont de type eucaryote, la réaction de transcription de l'étape (b) peut être complétée par une réaction de splicing et de maturation in vitro des ARNm en ajoutant un extrait nucléaire au mélange réactionnel. Avantageusement, la réaction EPIV des étapes (b) et (c) est standardisée de façon à éviter des résultats correspondant à des faux positifs ou à des faux négatifs : - d'une part, pour que la ou les protéines cibles aient le temps d'agir sur le rapporteur pour l'inhiber par exemple, ou pour éviter de se placer dans des conditions où le rapporteur serait en plus grande quantité que la protéine ou les protéines cibles, - d'autre part, pour se placer dans des conditions d'activité à la fois pour la protéine ou les protéines cibles, la molécule rapporteur et les substances susceptibles de modifier l'activité de la ou des protéines cibles. Les substances testées dans le cadre du procédé de criblage de l'invention sont donc susceptibles de modifier l'activité de la ou des protéines cibles. La substance à tester est introduite avant, après et/ou pendant la transcription et/ou la traduction des étapes (b) et/ou (c) et/ou de la révélation de l'activité de l'étape (d) du procédé de l'invention. Ces substances peuvent correspondre à des séquences polynucléotidiques, à des peptides, à des protéines, à des ions ou à toutes autres molécules susceptibles de modifier l'activité d'une ou plusieurs protéine cibles. Si cette molécule correspond à une séquence polynucléotidique, elle pourra avoir un rôle en tant que tel ou en tant que gène codant pour une protéine. Dans ce dernier cas, cette séquence polynucléotidique possède toutes les séquences nécessaires pour son expression in vitro lors de la réaction EPIV. De préférence, elle sera exprimée par les mêmes séquences régulatrices que le ou les gènes cibles afin que leur expression soit concomitante et que la molécule ait le temps de modifier l'activité des produits du ou des gènes cibles. Ceci évite de générer des résultats faux positifs ou faux négatifs. Un des rôles possibles des substances testées est de ralentir voir de stopper, in vitro, l'activité d'une protéine cible ou d'un ensemble de protéines cibles, qui peuvent être impliquées par exemple dans la progression d'une maladie. Ces molécules seront par exemple issues de banques présentant un intérêt pharmacologique particulier, issues de travaux de chimie combinatoire tenant compte de la structure d'inhibiteurs puissants préexistants et/ou de la structure du site actif d'une enzyme cible et de ses caractéristiques particulières. Mais les substances testées dans le cadre du procédé de l'invention peuvent également avoir un effet stimulateur ou activateur sur l'activité du produit d'un gène ou plusieurs gènes cibles ayant un rôle clé dans un processus. De telles molécules peuvent s'avérer utiles en tant que cofacteur enzymatiques permettant de démultiplier l'activité d'une enzyme dans un phénomène industriel donné (agroalimentaire ou autre) et ainsi de gagner en rendement. A chaque fois qu'une substance testée s'avère efficace pour modifier l'activité de la protéine cible, il est avantageux de vérifier, par toute méthode appropriée, que cette substance n'inhibe pas une des étapes du procédé. En outre, après avoir identifié une substance capable de modifier l'activité d'une protéine cible, cette protéine peut être testée selon le procédé de l'invention sur des protéines ayant une activité similaire à celle de la ou des protéines cibles. Le procédé de l'invention peut être avantageusement mis en oeuvre sur un support et est donc facilement automatisable. On entend par support par exemple un puits de microplaque de titration. Celles-ci peuvent contenir 96 ou 384 puits, ainsi sur une seule plaque 96 ou 384 molécules pourront être testées pour leur capacité à modifier l'activité codée par le ou les gènes cibles d'une ou plusieurs molécules d'acide nucléique préparée à l'étape (a). Une mise en oeuvre particulière du procédé de l'invention consiste à charger les puits de ces plaques avec un mélange de réaction EPIV concentré couplé (composants nécessaires à la transcription et à la traduction) contenant une ou plusieurs molécules d'acide nucléique préparée à l'étape (a) et la molécule rapporteur, puis elles sont congelées pour éviter l'initiation précoce de la réaction EPIV. Les plaques congelées sont placées sur un automate, qui dépose dans chaque puits un volume de la molécule à tester permettant de diluer le mélange EPIV jusqu'à ce qu'il soit concentré 1 fois. Une homogénéisation peut être envisagée par l'intermédiaire de l'automate, mais les volumes réactionnels devraient être suffisamment faibles pour que la diffusion assure cette homogénéisation. La mesure de l'activité d'une ou plusieurs protéines cibles ou de la molécule rapporteur de l'étape (d), et donc de l'effet de la substance testée sur une protéine cible ou un ensemble de protéines cibles, peut également être avantageusement automatisée. La modification éventuelle de l'activité de la protéine cible est lue directement sur le support dans un lecteur de fluorimétrie (si le rapporteur est par exemple la GFP) ou de colorimétrie (si le rapporteur est par exemple la beta-lactamase). Les lectures automatisées seront adaptées à la révélation du rapporteur. Il est ainsi possible de réaliser une lecture en continue de l'activité du rapporteur. En conséquence, l'invention concerne un dispositif comprenant un agencement d'un ou plusieurs supports, de robots et d'un lecteur desdits supports pour la réalisation des étapes du procédé de l'invention. L'invention a enfin aussi pour objet un kit de criblage de substances capables de modifier l'activité d'une ou plusieurs protéines cibles exprimées in vitro conformément à l'une des formes de mise en oeuvre du procédé de l'invention. Dans une première forme de réalisation un tel kit comprend : le ou les gènes cibles prêts à être exprimé(s) in vitro, la molécule rapporteur, une ARN polymérase, les quatre nucléotides triphosphates, un extrait cellulaire de traduction, au moins un composé capable de révéler l'activité de la molécule rapporteur, les mélanges de transcription et de traduction, et de révélation de l'activité de la molécule rapporteur, des témoins. Dans une seconde forme de réalisation un tel kit comprend : une plaque de microtitration congelée contenant le ou les gènes cibles prêts à être exprimé(s) in vitro, la molécule rapporteur, le milieu réactionnel EPIV concentré, éventuellement au moins un composé capable de révéler l'activité de la molécule rapporteur, des témoins. Le composé capable de révéler l'activité de la molécule rapporteur peut être présent dans les puits ou être ajouté en fin de réaction. D'autres avantages et caractéristiques de l'invention apparaîtront dans les exemples de réalisation de l'invention, qui suivent et qui se réfèrent aux dessins en annexe dans lesquels : La figure 1 est une représentation schématique de la mise en évidence d'inhibiteur de protéinase à acide aspartique du virus du HIV, par le procédé de l'invention. La figure 2 est une représentation schématique de la mise en évidence d'inhibiteur de splicing protéique de l'intéine de RecA de Mycobacterium tuberculosis, par le procédé de l'invention. La figure 3 est une représentation schématique de la mise en évidence d'inhibiteurs suicides de Beta-lactamase par le procédé de l'invention. Exemple I Criblage à haut débit d'inhibiteurs de protéinase à acide aspartique. Plus de 10 ans après le début de l'épidémie du Sida, une course s'est engagée entre la maladie qui progresse sans fin et les virologues. La pandémie du Sida n'épargne plus aucun pays. Son expansion semble relativement limitée dans les pays occidentaux, bien que le nombre de personnes infectées ne soit pas connu avec précision. En revanche, elle touche gravement les pays en développement. Quelque soit le mode de contamination, le virus s'installe rapidement dans le tissu lymphoïde chargé d'assurer la défense de l'organisme contre les agents infectieux. Parmi les protéines virales nécessaires au cycle de multiplication du virus du HIV, on peut noter la protéinase à acide aspartique, utilisée comme cible dans différentes thérapies antivirales (comme par exemple la trithérapie). La recherche d'inhibiteurs puissants de protéinases à acide aspartique est en pleine expansion compte tenu de l'adaptation du virus aux inhibiteurs : 6 semaines après le début d'une thérapie avec un inhibiteur de protéinase de HIV-1 (indinavir), des isolats résistants à l'inhibiteur sont détectés. Ils se manifestent entre autre par une mutation au niveau du résidu V82A/F/T de la protéinase de HIV-1 (4). L'objectif de différents laboratoires pharmaceutiques est donc de développer un système de criblage à haut débit pour trouver de nouveaux inhibiteurs de protéinase à acide aspartique. Le test de criblage de nouveaux inhibiteurs de protéinase à acide aspartique (HIV) suivant repose sur le procédé de l'invention. Le gène cible codant pour la protéinase à acide aspartique sauvage de HIV est placé sous contrôle du promoteur et du terminateur de l'ARN polymérase du phage T7, ce qui permet de le transcrire et de traduire la protéine correspondante in vitro. La molécule rapporteur préparée à l'étape (b) est un peptide contenant des sites de coupure spécifiques de la protéinase de HIV. Ce peptide est lié covalemment respectivement en N et C terminal à une molécule fluorescente (comme par exemple la fluoresceïne) et à un quencher de cette dernière (comme par exemple la rhodamine). Le gène préparé à l'étape (a) est placé dans différents puits d'une plaque de microtitration. Les puits correspondant sont chargés avec un mélange de réaction EPIV concentré couplé (composants nécessaires à la transcription et à la traduction concentrés) contenant la molécule rapporteur. Les plaques correspondante sont rapidement congelées pour éviter l'initiation précoce de la réaction EPIV. Cette réaction EPIV peut être soit réalisée avec un extrait cellulaire de traduction de E. coli, soit avec un extrait de traduction de cellules eucaryotes. Les plaques congelées sont placées sur un automate, qui dépose dans chaque puits un volume de la ou des molécules à tester permettant de diluer le mélange EPIV jusqu'à ce qu'il soit une fois concentré. Si cette molécule est active en tant qu'inhibiteur de la protéine cible, elle empêche la protéinase à acide aspartique de HIV d'attaquer la molécule rapporteur. La fluoresceïne et la rhodamine se trouvent alors dans un environnement suffisamment proche pour assurer un transfert d'énergie de type FRET (fluorescence résonance energy of transfert). Après exposition du peptide rapporteur à une longueur d'onde donnée (environ 490 nm), seule la fluorescence rouge du quencher sera détectable. Si la molécule testée n'est pas capable d'inhiber la protéinase à acide aspartique, le peptide rapporteur est clivé. La fluoresceïne et la rhodamine sont alors trop éloignés pour assurer un transfert d'énergie. Après exposition des produits de clivage à une longueur d'onde donnée (environ 490 nm), seule la fluorescence verte de la fluoresceïne est détectable. Lorsqu'une molécule inhibitrice de la protéinase à acide aspartique est découverte, un test de contrôle de spécificité est réalisé en incubant cette molécule dans une réaction EPIV permettant l'expression d'un autre gène rapporteur (type GFP) pour vérifier que cette molécule ne soit pas en fait un inhibiteur de transcription ou de traduction. A chaque fois qu'un nouvel inhibiteur de la protéinase aura été découvert, une série de tests complémentaires sont réalisés sur des réactions EPIV permettant l'expression de protéases résistantes aux anti-protéases. Ainsi, la molécule découverte peut être rapidement caractérisée afin de savoir si elle est capable d'inhiber les protéases des souches de virus actuellement résistantes aux anti-protéases. Une représentation du procédé de l'invention est schématisée en figure 1. Exemple II Criblage à haut débit d'inhibiteur de splicinq protéique de l'intéine de RecA de Mvcobacterium tuberculosis. Mycobacterium tuberculosis est un parasite strict de l'homme mais capable d'infecter quelques espèces animales vivant à ses côtés. C'est l'agent responsable de la tuberculose humaine. L'infection, principalement par voie aérienne, se manifeste le plus souvent par une infection pulmonaire. Si cette maladie ne compte plus parmi les problèmes de santé publique majeurs au niveau européen, elle reste néanmoins celle des infections qui entraîne le plus de décès. L'augmentation globale de l'incidence de la tuberculose dans les années à venir est inéluctable parce que la population des pays en voie de développement est jeune et qu'un grand nombre d'enfant a déjà été infecté ou le sera avant d'atteindre l'âge adulte. De plus cette maladie va poser un problème de santé publique à terme car elle fait partie des infections secondaires développées par les malades atteints du Sida. Davis et al., (1992) montrent que l'excision de l'intéine de RecA de Mycobacterium tuberculosis est indispensable à l'activité de cette protéine (1). Les intéines sont des introns protéiques récemment découverts à l'intérieur de séquences protéiques. Elles possèdent toute l'information nécessaire à leur propre excision. Ce processus récemment mis en évidence est comparable à l'épissage des ARN prémessagers. Ainsi, par convention, la séquence protéique interne est appelée intéine et les deux séquences externes, extéines (3). Ce phénomène d'excision protéique spécifique est très rapide. Ces intéines ont été découvertes dans des groupes de gènes très différents et elles sont à la fois présentes chez les procaryotes et les eucaryotes. La protéine RecA de Mycobacterium tuberculosis contient un tel élément. D'autres Mycobactéries pathogènes peuvent posséder de telle séquence dans RecA comme Mycobacterium Leprae. Néanmoins, ces deux introns protéiques sont différents en taille, en séquence et dans leur localisation, ce qui les rend très spécifiques (2). En inhibant le splicing protéique de l'intéine de Mycobacterium tuberculosis, on inhibe l'activité de RecA et donc la multiplication de cet organisme pathogène. Dans le cas présent, l'inhibition du splicing représente une nouvelle voie thérapeutique contre la multiplication de la bactérie responsable de la tuberculose. Seul un test in vitro, comme celui qui est proposé, permet d'analyser l'inhibition d'un phénomène de splicing protéique, trop rapide pour pouvoir être analysé in vivo. Un système de criblage d'inhibiteurs de splicing de l'intéine de RecA de Mycobacterium tuberculosis est mis au point. Le test proposé repose sur le procédé de l'invention et consiste à exprimer in vitro le gène codant pour une protéine rapporteur telle que la GFP au sein duquel l'intéine de Mycobacterium tuberculosis a été insérée. Avant toute réaction, une molécule d'une banque à intérêt pharmacologique est ajoutée au mélange EPIV. Si cette molécule est active en tant qu'inhibiteur, elle empêche le splicing de l'intéine après la traduction, ce qui inhibe l'expression de la GFP mature. Au contraire si cette molécule est inactive, l'activité de la GFP peut être détectée (figure 2). Pour chaque molécule ayant une activité inhibitrice du splicing des intéines, un second test permet de vérifier que cette molécule est spécifique. Ce deuxième test consiste à incuber ladite molécule dans un mélange EPIV contenant le gène gfp sans aucune intéine et à vérifier que le gène peut être transcrit et traduit en présence de cette molécule. L'automatisation de ce criblage peut être réalisée suivant les mêmes conditions précédentes. Les molécules ainsi détectées pourront être testées sur d'autre intéines présentant un intérêt dans un processus donné. Exemple III Criblage à haut débit d'inhibiteurs de beta-lactamase. Les beta-lactamines (pénicillines et céphalosporines) représentent la classe la plus utilisée des antibiotiques en thérapie anti-infectieuse. Depuis l'introduction en thérapie de ces molécules, de nouvelles résistances à ces composés se développent. Parmi les différents mécanismes de résistances acquis par les germes résistants, un des plus importants consiste à produire une enzyme (de type beta-lactamase) capable d'hydrolyser la molécule d'antibiotique avant que celle-ci n'ait pu agir. Suite à l'utilisation mondiale et intensive des antibiotiques, la vitesse d'apparition de nouvelles résistances est actuellement plus rapide que la découverte de nouveaux antibiotiques. D'autre part, il existe peu d'inhibiteurs "suicide" de beta-lactamases (l'acide clavulanique (en association avec l'amoxicilline dans l'Augmentin), le sulbactam et le tazobactam) sur le marché, et déjà, des résistances à ces nouveaux composés ont pu être mises en évidence dans les milieux hospitaliers. L'objectif est donc de développer un système de criblage à haut débit pour trouver de nouveaux inhibiteurs de la beta-lactamase TEM-1. Le criblage de nouveaux inhibiteurs suicide consiste à réaliser une réaction EPIV permettant l'expression d'une beta-lactamase, le gène bla étant sous le contrôle des séquences promotrices et terminatrices de l'ARN polymérase du phage T7. Après cette réaction EPIV, une molécule d'une banque de molécules à intérêt pharmacologique est ajoutée au mélange réactionnel. Si cette molécule est active en tant qu'inhibiteur de beta-lactamase, elle inhibe l'activité catalytique de l'enzyme. Dans l'autre cas, une beta-lactamase active est produite. L'activité betalactamase est alors évaluée en incubant une fraction de la réaction EPIV dans un tampon contenant de la nitrocéphine. L'automatisation de ce criblage peut être réalisée suivant les mêmes conditions décrites précédemment . Lorsqu'une molécule inhibitrice a été identifiée, une série de tests complémentaires est réalisée afin de tester l'efficacité de la molécule découverte sur l'ensemble des mutants de beta-lactamase connus comme résistants aux inhibiteurs. Pour cela des réactions EPIV contenant le gène de ces mutants sont réalisées en présence de la molécule inhibitrice, et le test d'activité de ces beta-lactamases est ensuite réalisé comme décrit ci-dessus. RÉFÉRENCES BIBLIOGRAPHIQUES 1 - Davis, E. O., Jenner, P.J., Brooks, P. C., Colston, M.J., Sedgwick, S.G. (1992). Protein splicing in the maturation of M. tuberculosis RecA protein. A mechanismm for tolerating a novel class of intervening séquence. Cell 71,201-210. 2 - Davis, E.O., Thangaraj, H.S., Brooks, P.C. et Colston, M.J. (1994). Evidence of selection for protein introns in the recAs of pathogenic mycobacteria. EMBO J. 13 (4), 699-703. 3 - Perler, F. B., Davis E. O., Dean, G.E., Gimble, F.S., Jack, W.E., Neff, N., Noren, C.J., Thorner, J. et Belfort, M. (1994). Protein splicing éléments : inteins and exteins - a définition of terms and recommended nomenclature. Nucl. Acids Research 22, 1125-1127. 4- Vasudevachari, M.B., Zhang, Y.M., Imamichi, H., Imamichi, T., Falloon, J. et Salzman, N.P. (1996). Emergence of protease inhibitor résistance mutations in human immunodeficiency virus type 1 isolates from patients and rapid screening procedure for their detection. Antimicrob Agents Chemother 40 (11), 2535-2541. REVENDICATIONS 1) Procédé de criblage de substances capables de modifier l'activité d'une protéine ou plusieurs protéines cibles exprimées in vitro, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes : a) la préparation d'au moins une molécule d'acide nucléique comprenant le ou les gènes codant pour la ou les protéines cibles et les éléments de contrôle nécessaires à la transcription et la traduction du ou desdits gènes cibles, b) la transcription in vitro de la ou des molécules d'acide nucléique préparée à l'étape (a), éventuellement en présence d'une ou plusieurs molécules rapporteur permettant de révéler l'activité de la ou des protéines cibles et/ou d'au moins une substance susceptible de modifier l'activité de la ou des protéines cibles, c) la traduction in vitro des transcrits de l'étape (b) éventuellement en présence d'au moins une molécule rapporteur permettant de révéler l'activité de la ou des protéines cibles et/ou d'au moins une substance susceptible de modifier l'activité de la ou des protéines cibles, si l'une ou l'autre ou les deux n'étaient pas présentes à l'étape (b), d) la mesure de l'activité de la ou des protéines cibles ou de la molécule rapporteur par tout moyen approprié, en présence d'au moins une substance susceptible de modifier l'activité de la ou des protéines cibles, si cette substance n'était pas présente aux étapes (b) ou (c). 2) Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que les séquences de contrôles du ou des gènes codant pour la ou les protéines cibles sont pour la transcription : - un promoteur d'ARN polymérase en 5', éventuellement un terminateur d'ARN polymérase en 3', et pour la traduction : - un site de fixation des ribosomes. 3) Procédé selon la revendication 2, caractérisé en ce que le promoteur (en 5') et le terminateur (en 3') s'il est présent, d'une ARN polymérase, sont ceux du phage T7. 4) Procédé de criblage de substances capables de modifier l'activité d'une protéine cible exprimées in vitro, selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes : a) la préparation d'au moins une molécule d'acide nucléique comprenant le gène codant pour la protéine cible, en 5' dudit gène un promoteur d'ARN polymérase et un site RBS, et éventuellement un terminateur d'ARN polymérase en 3' dudit gène, b) la transcription in vitro de la molécule d'acide nucléique préparée à l'étape (a), éventuellement en présence d'une ou plusieurs molécules rapporteur permettant de révéler l'activité de la ou des protéines cibles et/ou d'au moins une substance susceptible de modifier l'activité de la protéine cible, c) la traduction in vitro des transcrits de l'étape (b) éventuellement en présence d'au moins une molécule rapporteur permettant de révéler l'activité de la protéine cible et/ou d'au moins une substance susceptible de modifier l'activité de la protéine cible, si l'une ou l'autre ou les deux n'étaient pas présente à l'étape (b), d) la mesure de l'activité de la protéine cible ou de la molécule rapporteur par tout moyen approprié, en présence d'au moins une substance susceptible de modifier l'activité de la protéine cible, si cette substance n'était pas présente aux étapes (b) ou (c) . 5) Procédé de criblage de substances capables de modifier l'activité de plusieurs protéines cibles exprimées in vitro, selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que les gènes codant pour ces protéines sont situés sur le même fragment d'ADN comme dans le cas d'un opéron, ou à différents endroits de l'ADN génomique. 6) Procédé de criblage selon la revendication 5, caractérisé en ce que l'étape (a) consiste à préparer une molécule d'acide nucléique comprenant les gènes codant pour les protéines cibles, en 5' de l'ensemble desdits gène un promoteur d'ARN polymérase, éventuellement en 3' de l'ensemble desdits gènes un terminateur d'ARN polymérase, et pour chacun desdits gènes son site RBS naturel. 7) Procédé de criblage selon la revendication 5, caractérisé en ce que l'étape (a) consiste à préparer une ou plusieurs molécules d'acide nucléique comprenant les gènes codant pour les protéines cibles, en 5' de chacun desdits gènes un promoteur d'ARN polymérase et un site RBS, et éventuellement en 3' de chacun desdits gènes un terminateur d'ARN polymérase. 8) Procédé selon l'une des revendications 5 à 7, caractérisé en ce l'on réalise en parallèle ou simultanément, une étape (a) selon la revendication 4 avec chacun des gènes. 9) Procédé selon la revendications 8, caractérisé en ce que l'on réalise séparément pour chacun des gènes les étapes (a), (b) et (c), puis, en ce que l'on rassemble les produits des étapes (c) pour réaliser l'étape (d). 10) Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 9, caractérisé en ce que à l'étape (a) on prépare la ou les molécules d'acide nucléique par une réaction d'amplification du ou des gènes codant pour la ou les protéines cibles, à l'aide d'une ou plusieurs paires d'amorces, chacune constituée de : l'amorce sens comprenant la séquence s'hybridant en amont d'un ou plusieurs desdits gènes et portant un promoteur d'ARN polymérase et éventuellement un site RBS, et - l'amorce antisens comprenant la séquence s'hybridant en aval d'un ou plusieurs des mêmes desdits gènes et portant éventuellement un terminateur d'ARN polymérase. 11) Procédé de criblage de substances capables de modifier l'activité de plusieurs protéines cibles exprimées in vitro, selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que lesdites protéines cibles sont des variants d'une protéine ou des variants d'un ensemble de protéines. 12) Procédé de criblage selon la revendication 11, caractérisé en ce que l'on réalise l'étape (a) avec chacun des mutants du ou des gènes codant pour le ou les variants de la ou des protéines cibles. 13) Procédé de criblage selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que la molécule rapporteur, si elle est présente, est une substance capable de révéler directement ou indirectement l'activité d'une ou plusieurs protéines cibles. 14) Procédé de criblage selon la revendication 13, caractérisé en ce que la molécule rapporteur est une molécule d'acide nucléique, une protéine, un peptide, tel qu'un anticorps ou un mélange d'anticorps spécifiques capables de révéler l'activité d'une protéine cible, ou tel qu'un substrat ou une cascade de substrats, dont l'un est celui d'une protéine cible. 15) Procédé de criblage selon l'une des revendications 13 ou 14, caractérisé en ce que la molécule rapporteur est une protéine qui est produite conjointement avec la ou les protéines cibles lors de l'étape (c). 16) Procédé de criblage selon l'une des revendications 13 à 15, caractérisé en ce que le gène codant pour la molécule rapporteur est placé sous le contrôle de séquences de régulation de la transcription et de la traduction similaires à celle du ou des gènes codant pour la ou les protéines cibles, de façon à ce que le gène rapporteur soit coexprimé avec le ou les gènes cibles. 17) Procédé de criblage selon l'une des revendications 13 à 16, caractérisé en ce que le ou les gènes codant pour la ou les protéines cibles est inséré dans le gène codant pour la molécule rapporteur, et en ce que ces gènes sont sous le contrôle des mêmes séquences régulatrice de la transcription et de la traduction. 18) Procédé de criblage selon l'une des revendications 1 à 12, caractérisé en ce que la protéine ou une protéine cible constitue également la molécule rapporteur. 19) Procédé de criblage selon l'une quelconque des revendications 1 à 18, caractérisé en ce que la substance à tester est introduite avant, après et/ou pendant la transcription et/ou la traduction des étapes (b) et/ou (c) et/ou de la révélation de l'activité de l'étape (d). 20) Procédé de criblage selon l'une quelconque des revendications 1 à 19, caractérisé en ce que la substance à tester est choisie parmi : des séquences polynucléotidiques, des peptides, des protéines, des ions ou à toutes autres molécules susceptibles de modifier l'activité d'une ou plusieurs protéine cibles. 21) Procédé de criblage selon l'une quelconque des revendication précédentes, caractérisé en ce que après l'étape (d), si la substance testée s'avère efficace pour modifier l'activité de la ou des protéines cibles, on vérifie, par toute méthode appropriée, que cette substance n'inhibe pas une des étapes (a) à (d). 22) Un kit de criblage de substances capables de modifier l'activité d'une ou plusieurs protéines cibles exprimées in vitro, caractérisé en ce qu'il comprend : le ou les gènes cibles prêts à être exprimé(s) in vitro, la molécule rapporteur, une ARN polymérase, les quatre nucléotides triphosphates, un extrait cellulaire de traduction, au moins un composé capable de révéler l'activité de la molécule rapporteur, les mélanges de transcription et de traduction, et de révélation de l'activité de la molécule rapporteur, des témoins. 23) Un kit de criblage de substances capables de modifier l'activité d'une ou plusieurs protéines cibles exprimées in vitro, caractérisé en ce qu'il comprend : une plaque de microtitration congelée contenant le ou les gènes cibles prêts à être exprimé(s) in vitro, la molécule rapporteur, le milieu réactionnel EPIV concentré, éventuellement au moins un composé capable de révéler l'activité de la molécule rapporteur, et des témoins. 24) Un dispositif comprenant un agencement d'un ou plusieurs supports, de robots et d'un lecteur desdits supports pour la réalisation des étapes du procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 21.