FR 2757523 A1 19980626 FR 9615731 A 19961220 PROMOTEUR DE BACTERIE LACTIQUE INDUCTIBLE PAR LE FROID, ET SES UTILISATIONS. La présente Invention est relative à un nouveau promoteur inductible par le froid, fonctionnel chez Lactococcus lactis, et à ses utilisations. Les lactocoques, et en particulier Lactococcus lactis sont largement utilisés pour la fabrication fromagère. Ces bactéries ont fait l'objet de nombreuses recherches en génie génétique, ayant pour but de modifier l'expression de leurs gènes endogènes, et/ou de permettre l'expression de gènes hétérologues. Parmi ces travaux, on mentionnera plus particulièrement ici ceux visant à exprimer un gène d'intérêt de manière inductible. Il est connu que les organismes vivants répondent aux variations environnementales (pH, concentration en sel, température, présence de certaines substances dans le milieu, etc...), par l'expression transitoire de protéines qui permettent leur adaptation à ces nouvelles conditions d'environnement. Il a ainsi été proposé d'introduire chez les lactocoques des promoteurs inductibles, permettant d'exprimer une protéine d'intérêt à un stade choisi du processus de fermentation. Il peut s'agir, par exemple de protéines impliquées dans le processus de fermentation, de protéines intervenant dans le développement des arômes, ou bien de protéines (holine, lysine, autolysine) induisant la lyse des bactéries et permettant le relarguage de leur contenu cellulaire. La Demande PCT WO 95/31563 au nom de QUEST INTERNATIONAL BV propose ainsi d'utiliser un promoteur complexe dérivé du phage tempéré rlt. Ce promoteur présentant l'inconvénient d'être naturellement inductible par la mitomycine C qui est toxique, il est proposé dans la Demande PCT WO 95/31563 de remplacer la région responsable de l'induction par la mitomycine par une région répondant à un autre facteur de stress. La Demande PCT WO 95/31563 propose d'utiliser dans ce but une séquence de contrôle répondant à un choc thermique. D'autres promoteurs inductibles fonctionnels chez les lactocoques qui sont connus à l'heure actuelle sont des promoteurs inductibles par le pH acide [ISRAELSEN et ai., Appui. Environ. Microbiol., 61, p. 2540-2547, (1996)], la nisine, [DERUYTER et al., Appl. Environ. Microbiol., 62, p. 3662-3667, (1996)], les ions chlorure [SANDERS et ai., Poster H22 Congrès Fifth Symposium on Lactic Acid Bacteria, Genetics, Metabolism and Applications, Veldhoven, The Netherlands, (1996)], ou le lactose [VAN ROOIJNEN et al., J. Bact., 1174, p. 22732280, (1992)]. Il s'agit pour la plupart de promoteurs d'origine virale et/ou de promoteurs inductibles par l'addition de différentes substances, ce qui peut poser des problèmes pour certaines applications comme la fabrication fromagère. On connaît, chez d'autres espèces bactériennes des promoteurs inductibles par le froid. C'est ainsi, que chez Escherichia coli, une baisse de température de 370C à 100C induit la synthèse d'au moins 14 protéines, dont la plus importante a été dénommée CspA [GOLDSTEIN et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 87, p. 283-287, (1990)]. 6 autres protéines (CspB à CspG) similaires à CspA ont également été découvertes chez E. coli, et constituent la famille CspA. Ces protéines ont une grande similitude de séquence avec l'un des domaines de protéines eucaryotes de liaison à l'ADN dénommées facteurs Y-box [LEE et ai., Molecular Microbiology, 11(5), p. 833-839, (1994)] . Cependant seules certaines des protéines de la famille CspA (CspA, CspB et CspG) sont inductibles par le froid. Des protéines apparentées à la famille CspA ont également été identifiées chez d'autres bactéries telles que Bacillus subtilis [WILLIMSKY et al., J. Bact., 174, 6326-6335 (1992)], chez d'autres espèces de Bacillus [SCHRODER et al., Gene, 136, p. 277-280, (1993)] et chez Listeria monocytogenes [Francis et al. EMBL accession number X91789 (1995)]. Chez les lactocoques, les travaux effectués jusqu'à présent ont montré que L. lactis peut s'adapter au froid, et répond au choc par le froid par l'induction d'une douzaine de protéines [PANOFF et al. Cryobiology, 32, p. 516-520, (1995)], et [PANOFF et al. Curr. Microbiol. 29, p. 213-216, (1994)]. Cependant, alors que plusieurs gènes impliqués dans la réponse au choc thermique tels que par exemple dnaK, dnaJ, grosESL ont été mis en évidence chez L. lactis, aucun gène impliqué dans la réponse au choc par le froid n'a jusqu'à présent été identifié. Récemment, un gène homologue au gène cspA de E. coli a été partiellement cloné et séquencé [FRANCIS et STEWART, EMBL accession number U60041, (1996)]; cependant aucune indication concernant son inductibilité potentielle par le froid n'a été donnée. Les Inventeurs ont maintenant mis en évidence une famille de protéines de Lactococcus lactis homologue à la famille CspA de Escherichia coli. Ils ont en outre mis en évidence et caractérisé un promoteur inductible par le froid de l'un des gènes de cette famille, dénommé ci-après cspB. La présente invention a pour objet un promoteur de bactérie lactique, caractérisé en ce qu'il est inductible par le froid. Selon un mode de réalisation préféré d'un promoteur conforme à la présente Invention, il s'agit du promoteur du gène cspB de Lactococcus lactis, ou d'un promoteur homologue. Au sens de la présente invention, on entend par : "promoteur", une séquence d'acide nucléique isolée essentiellement constituée par les éléments nécessaires au contrôle de l'initiation de la transcription d'un gène. La séquence du gène cspB de Lactococcus lactis cloné par les Inventeurs est représentée sur la Figure 2, et dans la liste de séquences en annexe sous le numéro SEQ ID NO : 1. Les éléments nécessaires au contrôle de l'initiation de la transcription de ce gène sont situés dans la région 1-182 de la séquence représentée sur la Figure 2. Cette région est représentée dans la liste de séquences en annexe sous le numéro SEQ ID NO : 2. Au sens de la présente invention, on entend par : promoteur homologue au promoteur du gène cspB de Lactococcus lactis toute séquence constituant un promoteur bactérien inductible par le froid, et pouvant être obtenue en procédant au criblage, par des techniques classiques de biologie moléculaire, d'une banque d'ADN bactérien, en particulier d'ADN de lactocoque, à l'aide d'un ou plusieurs fragments de plus de 20pb de la séquence SEQ ID NO : 2. Ces fragments de plus de 20pb font également partie de l'objet de l'invention. L'objet de la présente Invention englobe également les molécules d'acide nucléique recombinant comprenant au moins un promoteur conforme à l'invention lié à au moins une séquence hétérologue. Au sens de la présente Invention on entend par "hétérologue" relativement à une séquence donnée, toute séquence d'acide nucléique autre que celles qui, dans la nature, sont immédiatement adjacentes à ladite séquence. Des molécules d'acide nucléique recombinant conformes à l'invention comprennent en particulier des cassettes d'expression pour exprimer un gène d'intérêt sous contrôle d'un promoteur conforme à l'invention. Ces cassettes comprennent au moins ledit promoteur et une séquence hétérologue comprenant un gène d'intérêt placé sous contrôle transcriptionnel dudit promoteur ou un site de restriction permettant d'insérer ledit gène d'intérêt sous contrôle transcriptionnel dudit promoteur. Dans les cassettes d'expression conformes à l'invention, le promoteur est avantageusement associé à d'autres séquences de régulation, actives chez les lactocoques ;il est par exemple associé, de manière classique, à une séquence terminateur placée en aval du gène à transcrire. On citera, à titre d'exemple non limitatif de séquences terminateur utilisables dans ce but, le terminateur du gène prtP de L. lactis, décrit par LEENHOUTS K.J. and VENEMA G., [Lactococcal plasmid vectors In: K.G. HARDY (ed) Plasmids. A pratical approach. Second Edition, IRL Press, Oxford, p. 6594(1993)], ou le terminateur de l'opéron histidine, décrit par DELORME et al. [J. Bacteriol. 174, p. 65716579, (1992)]. Très avantageusement, et en particulier dans le cas de gènes dont l'expression est potentiellement néfaste pour la bactérie (il s'agit par exemple de gènes de protéines de lyse telles que des lysines, des holines, des autolysines), le promoteur est en outre associé à un terminateur de transcription supplémentaire placé entre le promoteur et le gène. On pourra utiliser dans ce cadre des terminateurs qui sont naturellement localisés en amont des gènes abi, par exemple - le terminateur naturellement localisé en amont du gène abiDi, décrit par ANBA et ai. [J. Bactériol. 177, p. 3818-3823, (1995)]. Ce terminateur est constitué par les nucléotides 152-210 du fragment de 2369 pb représenté sur la figure 1 de cette publication. - le terminateur naturellement localisé en amont du gène abi420, et dont la séquence nucléotidique est la suivante GCCCCTAAGATCTAAC CTTTATATCTTAGGGGCTATTTTTTT Les Inventeurs ont observé que lorsque l'un de ces terminateurs est placé entre le promoteur et le gène à transcrire, il permet de supprimer la transcription basale susceptible d'intervenir en dehors de toute induction du promoteur. En revanche, lorsque le promoteur est induit, la transcription peut passer au travers de terminateur et le gène est transcrit à un niveau convenable. Des molécules d'acide nucléique recombinant conformes à l'invention comprennent également des vecteurs recombinants comprenant un insert constitué par un promoteur ou par une cassette d'expression conforme à l'invention. Selon l'utilisation envisagée, on peut choisir soit un vecteur capable de se répliquer et de se maintenir dans la bactérie hôte sous forme de plasmide, tel que par exemple les plasmides pIL252 et pIL253 décrits par SIMON et CHOPIN, [Biochimie, 70, p. 559-566, (1988)], soit un vecteur permettant l'intégration de l'insert qu'il porte dans l'ADN chromosomique de la bactérie-hôte tel que par exemple les vecteurs décrits dans la Demande PCT WO 94/16086 au nom de BIOTEKNOLOGISK INSTITUT et CHR. HASSEN'S LABORATORIUM DANMARK A/S, ou bien le plasmide pG+host5 décrit par BISWAS et al. [J. Bact., 175, p. 3628-3635, (1995)]. De manière plus générale, des vecteurs plasmidiques ainsi que des vecteurs d'intégration utilisables chez les lactocoques sont décrits dans la revue de LEENHOUTS K.J. and VENEMA G. (1993). Lactococal plasmid vectors, In K.G. HARDY (ed) Plasmids. A practical approach. Second Edition.IRL Press, Oxford, p. 65-94. Un vecteur d'expression conforme à l'invention est représenté par le plasmide dénommé pTIL65 qui comprend un insert PstI de 3315 bp dans lequel le gène de la ss-galactosidase est placé sous contrôle du promoteur du gène cspB de L. lactis. Ce plasmide, hébergé par la souche de L. lactis dénommée TIL146, a été déposé auprès de la Collection Nationale de Cultures de Microorganismes (CNCM), 28, rue du Docteur Roux, 75724 PARIS CEDEX 15, le 6 Décembre 1996 sous le nO I-1793. L'Invention a en outre pour objet des bactéries transformées par au moins une molécule d'acide nucléique conforme à l'invention. De préférence, ces bactéries sont des lactocoques. L'utilisation d'un promoteur conforme à l'invention pour contrôler l'expression d'un gène d'intérêt dans des lactocoques présente en particulier l'avantage de permettre d'induire l'expression de ce gène de manière simple, ne nécessitant l'addition d'aucune substance à la culture, et compatible avec la technologie fromagère. L'expression d'un gène d'intérêt placé sous contrôle d'un promoteur conforme à l'invention est obtenue en plaçant les cellules comprenant cette construction à une température inférieure à 20"C, de préférence à une température de l'ordre de 150C. Un promoteur conforme à l'invention peut en particulier être utilisé pour l'expression de gènes de lyse, par exemple, pour l'expression d'une lysine de bactériophage, telle que par exemple celle du bactériophage XvML3, décrite par SHEARMAN et al., [Mol. Gen. Genet. 218, p. 214-221 (1989)], ou pour l'expression de la lysine et de la holine du phage bIL67 [SCHOULER et al. Microbiology, 140, p. 3061-3069, (1994)] Les promoteurs conformes à l'Invention peuvent également être utilisés pour contrôler l'expression d'un gène codant pour une autolysine de lactocoque, telle par exemple celle décrite par BUIST et al. [Journal of Bacteriology, 177, nO 6, p. 1554-1563, (1995)]. Les promoteurs conformes à l'Invention peuvent également être utilisés pour l'expression d'enzymes impliquées dans la fabrication des fromages, et en particulier dans le développement de la flaveur, telles par exemple que des peptidases, des estérases, des lipases, des enzymes participant au catabolisme des acides aminés, etc.. La présente Invention sera mieux comprise à l'aide du complément de description qui va suivre, qui se réfère à des exemples de clonage d'un promoteur conforme à l'Invention, et de son utilisation pour obtenir l'expression induite par le froid, d'un gène hétérologue. Il doit être bien entendu toutefois que ces exemples sont donnés uniquement à titre d'illustration de l'objet de l'Invention dont ils ne constituent en aucune manière une limitation. EXEMPLE 1 - AMPLIFICATION PAR PCR DES GENES DE LA FAMILLE CspA A PARTIR DE LACTOCOCCUS LACTrS. Des amorces dégénérées ont été construites à partir de 2 séquences conservées de différentes protéines appartenant à la famille CspA. Ces deux séquences correspondent aux acides aminés 9-13 et 29-34 de la protéine CspA de E. coli. Les séquences des amorces sont les suivantes Amorce P1 : 5'-GTNAARTGGTTYAA-3' Cette amorce comprend 14 nucléotides et est dégénérée 16 fois Amorce P2 : 5'-AARTGNACRAANACRTC-3' Cette amorce comprend 17 nucléotides et est dégénérée 256 fois. Ces amorces ont été utilisées pour l'amplification par PCR à partir d'ADN total isolé de Lactococcus lactis subsp. cremoris. Le mélange réactionnel (100 Rl) comprend 150 ng d'ADN, 1 unité d'ADN polymérase Taq (APPLIGENE) utilisé avec le tampon fourni par le fabricant, 250 pmol de chaque amorce, 200 RM de chaque dNTP. La réaction est effectuée en 30 cycles comprenant 1 minute de dénaturation à 950C, 2 minutes d'hybridation à 300C et 2 minutes d'élongation à 750C dans un DNA Thermal Cycler 480 (PERKIN ELMER). Un produit d'amplification de 75 pb, possédant la taille attendue d'après le choix des deux amorces, a été purifié par élution à partir d'un gel d'agarose NUSIEVE 3% (FMC BIOPRODUCTS) . Les extrémités ont été rendues franches par traitement avec l'enzyme Pfu DNA polymérase (PCR Polishing Kit, STRATAGENE), et le fragment ainsi obtenu cloné dans un plasmide pBluescript SK+ (STRATAGENE) préalablement linéarisé par Sinal. Le plasmide ainsi chargé a été utilisé pour transformer des cellules E. coli TG1 (supE hsdA5 thi A(lac-proAB) F' ftraD36 proAB lacIq lacZAMî5j. Les cellules transformées comprenant le plasmide chargé ont été isolées et la séquence nucléotidique de l'insert a été déterminée. Parmi les 15 clones obtenus, 3 séquences d'ADN différentes ont été identifiées. Les séquences en acides aminés déduites sont représentées sur la figure 1 qui montre l'alignement des séquences des trois fragments différents amplifiés par PCR à partir de Lactococcus lactis, avec la région centrale (acide aminé 9-34) de la CspA de Escherichia coli, et avec la séquence partielle de la CspA de Lactococcus lactis. Les résidus identiques sont indiqués par des tirets et les résidus manquants sont indiqués par des points. Ces séquences présentent des similitudes avec la région centrale de la protéine CspA de E. coli. Ces trois séquences sont différentes de la séquence partielle précédemment déterminée de la protéine CspA de Lactococcus lactis. Ces résultats montrent que plusieurs protéines (au moins 4) de la famille CspA sont présentes chez Lactococcus lactis. EXEMPLE 2 : CLONAGE ET SEQUENÇAGE DU GENE cspB Le gène cspB entier a été obtenu par PCR inverse. Une paire d'amorces divergentes, dont les séquences sont les suivantes Amorce P3 : 5'-GCCAAATCCTTTATCTGGATT-3' Amorce P4 : 5'-CACTTCAGAAGATGGTCAAGA-3' et qui correspondent à des séquences internes du fragment de 75 pb amplifié à partir du gène cspB, comme indiqué à l'exemple 1, a été utilisée. L'ADN chromosomique total de Lactococcus lactis a été digéré par XrnnI et les fragments générés ont été religaturés sur eux-mêmes. Le mélange résultant a été utilisé comme matrice pour l'amplification par PCR en utilisant la paire d'amorces divergentes. Un fragment d'ADN de 1,6 kb a ainsi été amplifié, et la séquence nucléotidique d'un sous-fragment de 488 pb a été déterminée. Cette séquence contient un cadre ouvert de lecture de 198 nucléotides, qui code pour une protéine de 66 acides aminés (7268 Da) ce qui correspond à la taille attendue d'une protéine CspA. L'analyse des séquences en amont du cadre ouvert de lecture révèle la présence d'un site de liaison des ribosomes (RBS > potentiel, ainsi que la présence de deux régions -10 et -35 correspondant aux séquences consensus établies pour Lactococcus lactis. Une séquence potentielle de terminaison de la transcription a également été identifiée en aval du gène. La séquence complète du gène cspB de Lactococcus lactis est représentée sur la figure 2, ainsi que la séquence polypeptidique déduite. Le site potentiel de fixation des ribosomes est souligné en pointillés et le site potentiel de terminaison de la transcription, situé en aval du cadre ouvert de lecture est souligné. Les séquences consensus -10 et -35 sont soulignées par un double trait. Le site d'initiation de la transcription est encadré. La comparaison de la séquence en acides aminés de la protéine CspB avec des séquences disponibles dans les banques de données révèle une similitude avec les protéines connues de la famille CspA. La similitude la plus importante a été relevée avec, dans l'ordre la protéine CspL de Listeria monocytogenes (72W), les protéines CspB et CspC de Bacillus subtilis (60 et 69%) et les protéines CspA et CspC de Escherichia coli (60 et 62t respectivement). EXEMPLE 3 : ANALYSE DE LA TRANSCRIPTION DU GENE cspB. On sait que chez Escherichia col i, seulement certains des gènes de la famille CspA sont inductibles par le froid. Pour déterminer si le gène cspB de L. lactis appartenait à cette catégorie, le niveau de transcription de cspB à la suite d'un choc par le froid, ainsi que la taille du transcrit ont été étudiés. Des bactéries Lactococcus lactis subsp. cremoris AM2 ont été cultivées sur du milieu M17 en présence de lactose à 300C jusqu'à une densité optique (650 nm) de 1. La culture a alors été répartie en trois portions différentes qui ont été incubées à 150C, 100C ou 50C. Les ARN totaux de ces cultures ont été isolés au bout de 30 minutes, ou de 60 minutes selon le protocole décrit par ANBA et al. [J. Bact. 177, p. 3818-3823, (1995)]. Un transfert de Northern a été effectué, et la détection a été faite en utilisant une sonde oligonucléotidique complémentaire d'une région nonconservée de la séquence nucléotidique du gène cspB (séquence 236-254, figure 2). A chaque température, un seul transcrit a été détecté, dont la taille est d'environ 0,28 kb. Ce transcrit est présent à 300C, et sa quantité augmente quand la température décroît, indiquant que cspB est inductible par le froid. Après 1 heure à 1SOC, on observe une multiplication par 10 de la transcription, tandis que pour les températures plus basses (100C ou 50C), l'induction après une heure est moins importante. L'extrémité 5' des ARNm de cspB produits après le choc thermique à 150C a été cartographiée, et comparée à celle de l'ARNm de cspB produit à 300C. Deux sites d'initiation de la transcription, localisés à 86 pb et 85 pb en amont du codon d'initiation ont été trouvés dans les deux cas. Il apparaît donc que les régions -35 et -10 les plus en amont sont fonctionnelles dans les deux cas. EXEMPLE 4 : EXPRESSION D'UN GENE RAPPORTEUR SOUS CONTROLE DU PROMOTEUR DU GENE cspB. Un fragment de 200 pb, comprenant 182 pb en amont du cadre ouvert de lecture, et les 18 pb codant pour les 6 premiers résidus de la protéine CspB a été amplifié par PCR en utilisant les amorces suivantes Amorce P5 : I1 s'agit d'un oligonucléotide de 28 nucléotides de long, dont la séquence est la suivante 5' -TCCCCCGGGATAGTTGCTTTCCTAACAG-3' (la séquence soulignée correspond à un site SmaI) Amorce P6 Il s'agit d'un oligonucléotide de 27 nucléotides de long, dont la séquence est la suivante 5' -TCCCCCGGGTACAGTTCCTTTTGTCAT-3' (la séquence soulignée représente un site SmaI) L'amorce P5 correspond à la séquence 1-19 de la séquence nucléotidique représentée sur la figure 2 et l'amorce P6 correspond au complémentaire de la séquence 182-200 de la même séquence de la figure 2. Le produit d'amplification a été traité par SmaI, et ligaturé dans le plasmide pMC1871 linéarisé avec SmaI. Le mélange de ligation a été utilisé pour transformer des bactéries E. coli HB101 (supE44 hsdS20 recA13 ara-14 proA2 lacYl galK2 rpsL20 xyl-5 mtl-l) . Les transformants ont été sélectionnés sur plaque d'agar LB, contenant 10 Ag/ml de tétracycline, et de 5-bromo-4chloro-3-indolyl-ss-D-galactoside (X-gal). Les clones contenant la construction dans la bonne orientation donnent des colonies colorées en bleu clair. Le produit de fusion du promoteur cspB et de la séquence codant pour la ss-galactosidase, dénommé cspBlacZ est un fragment de 3315 bp. Ce fragment a été excisé par digestion PstI, et cloné dans le site PstI d'un plasmide de lactocoque dénommé pILnew. Ce plasmide a été converti en plasmide à faible nombre de copies en retirant un fragment KpnI de 22 pb inséré à l'intérieur du gène copF, régulateur du nombre de copies du plasmide. Le plasmide résultant, dénommé pTIL65, a été introduit par électroporation dans la souche dépourvue de plasmides L. lactis subsp. cremoris MG1363, pour produire la souche TIL146. TIL146 a été cultivée en milieu M17 comprenant 0,5W de glucose et 10 zg/ml d'érythromycine à une température de 300C, jusqu'à une densité optique (650 nm) de 1. La culture a alors été répartie en 3 portions qui ont été transférées respectivement à des températures de 150C, 100C ou 50C comme décrit à l'exemple 3 ci-dessus. L'activité spécifique de la ss-galactosidase a été déterminée selon le protocole décrit par MILLER [Experiments in Molecular Genetics, p. 352-355. Cold Spring harbor Laboratory. Press, Cold Spring Harbor, N.Y.]. Des aliquots de 1 ml des cultures bactériennes sont collectés à différents intervalles de temps, les cellules sont récupérées par centrifugation, lavées avec du tampon phosphate 100 mM, pH 7,4, préalablement porté à la même température que celle à laquelle les cellules ont subi le choc par le froid. Les cellules de la culture conservées à 300C ont été utilisées comme contrôle. L'activité spécifique ss-galactosidase a été déterminée sur des cellules entières, traitées avec du NP40 à 0,2t en présence du substrat chromogène ONPG (orthonitrophényl-ss-D-galactoside). Légende de la Figure 3 La croissance cellulaire est évaluée par mesure de la densité optique à 650 nm à 300C (--x--), et à 150C (--0--) L'activité ss-gal est exprimée en "unités Miller" (c'est-à-dire en variation de DO (420 nm) par minute, par ml de culture, et par unité de DO à 650 nm), également à 300C (- g ) et à 150C (--C--). Les résultats sont illustrés par la figure 3 qui montre l'évolution de la croissance bactérienne et de l'activité ss-gal en fonction du temps écoulé après le choc par le froid. Une activité basale a été détectée à 300C. Cette activité est constante au cours de la culture à 300C. Lorsque les bactéries sont transférées à 150C, l'activité spécifique de la ss-galactosidase est augmentée ; elle est ainsi multipliée par 5 après 4 h à 150C. Ces résultats confirment le caractère inductible par le froid de cspB. En outre, ils indiquent que la région de 182 pb en amont du gène cspB est suffisante pour conférer l'induction par le froid. LISTE DE SEQUENCES NOMBRE DE SEQUENCES: 2 INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 1: (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 488 paires de bases (B) TYPE: nucléotide (C) NOMBRE DE BRINS: double (D) CONFIGURATION: linéaire (xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 1: ATAGTTGCTT TCCTAACAGT TTATCAAGAC TACCTTCATT ATTGAGGTGG TTTTTTATAG 60 GTTGACATGT AGCCTATATA ATGATATTAT AGACGAGTAG ATTTTGTCAT GAGTTAAATG 120 TATATTATAT TCACTTTTCA CAAAATAAGG TTTACAATTT TTGTTGAAAG GAAATAATTA 180 ATATGACAAA AGGAACTGTA AAATGGTTTA ATCCAGATAA AGGATTTGGC TTTATCACTT 240 CAGAAGATGG TCAAGATGTG TTCGCACACT TTTCACAAAT TCAAACTTCA GGTTTTAAAA 300 CACTTGATGA AGGCCAAAAA GTAACTTTTG ATGTTGAAGC TGGTCAACGT GGCCCTCAAG 360 CTGTTAATAT CGAAAAAGCA TAAAAGTAAT TAATGAAAAA CGGAGCAATT TGCTTCGTTT 420 TTTTTATTAA AACTTGTAAT TATAAAATCT TATGATATAC TTAGCGCGGC AAGAGGAAAC 480 TCACCACT 488 INFORMATIONS POUR LA SEQ ID NO: 2: (i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE: (A) LONGUEUR: 182 paires de bases (B) TYPE: nucléotide (C) NOMBRE DE BRINS: double (D) CONFIGURATION: linéaire (xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO: 2: ATAGTTGCTT TCCTAACAGT TTATCAAGAC TACCTTCATT ATTGAGGTGG TTTTTTATAG 60 GTTGACATGT AGCCTATATA ATGATATTAT AGACGAGTAG ATTTTGTCAT GAGTTAAATG 120 TATATTATAT TCACTTTTCA CAAAATAAGG TTTACAATTT TTGTTGAAAG GAAATAATTA 180 AT 182 REVENDICATIONS 1) Promoteur de bactérie lactique, caractérisé en ce qu'il est inductible par le froid. 2) Promoteur selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il s'agit du promoteur du gène cspB de Lactococcus lactis, ou d'un promoteur homologue. 3) Promoteur selon une quelconque des revendications 1 ou 2, caractérisé en ce qu'il est constitué par la séquence représentée dans la liste de séquences en annexe sous le numéro SEQ ID NO : 2. 4) Cassette d'expression pour exprimer un gène d'intérêt sous contrôle d'un promoteur selon une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisée en ce qu'elle comprend au moins un promoteur et une séquence hétérologue comprenant un gène d'intérêt placé sous contrôle transcriptionnel dudit promoteur ou un site de restriction permettant d'insérer ledit gène d'intérêt sous contrôle transcriptionnel dudit promoteur. 5) Vecteur recombinant comprenant un promoteur selon une quelconque des revendications 1 à 3, ou une cassette d'expression selon la revendication 4. 6) Bactéries transformées comprenant au moins un promoteur selon une quelconque des revendications 1 à 3. 7) Utilisation d'un promoteur selon une quelconque des revendications 1 à 3, pour contrôler l'expression d'au moins un gène d'intérêt dans des lactocoques. 8) Utilisation selon la revendication 7, caractérisée en ce que ledit gène d'intérêt code pour une protéine induisant la lyse de la bactérie hôte. 9) Utilisation selon la revendication 8, caractérisée en ce que ladite protéine induisant la lyse de la bactérie-hôte est choisie parmi les lysines et/ou les holines de bactériophage, et les autolysines bactériennes. 10) Utilisation selon la revendication 7, caractérisée en ce que ledit gène d'intérêt code pour une enzyme impliquée dans la fabrication et l'affinage des fromages.