FR 2756183 A1 19980529 FR 9614380 A 19961125 La présente invention concerne l'utilisation d'une association synergique d'huile et de peptides d'Argan et son application pour prévenir et/ou traiter les troubles liés au vieillissement cutané, notamment lors de la ménopause. Plus particulièrement l'invention concerne une composition dermocosmétique, caractérisée en ce qu'elle renferme à titre de principe actif au moins une association d'huile et de peptides d'Argan. Elle peut en outre contenir: - des excipients pharmaceutiquement acceptables adaptées pour l'administration par voie orale ou par voie topique; - d'autres substances et/ou fractions actives d'huile et/ou de peptides d'Argan, tels que de la vitamine E et des phytostérols - une concentration d'huile comprise entre 0,01 % et 20 % en poids et une concentration en peptides comprise entre 0,001 % et 10 % en poids, par rapport au poids total de la composition; L'invention vise églement l'utilisation d'une composition pour la préparation de médicaments destinés au traitement du vieillissement cutané, comprenant les troublés liés à la ménopause ; une telle composition peut, en outre, contenir au moins un autre principe actif, en particulier des hormones, telles que des oestrogènes. Enfin, l'invention concerne un procédé de traitement cosmétique pour améliorer l'aspect de la peau et/ou des phanères en appliquant localement les compositions précitées, en particulier pour diminuer les troubles liés à la ménopause. La peau sénescente se caractérise par un certain nombre d'altérations, dont la principale est une atrophie cutanée consécutive au ralentissement des activités prolifératives. Lors du vieillissement cutané, on note un aplatissement, avec notamment une diminution d'épaisseur de la couche épidermique, une désorganisation profonde de la matrice extra-cellulaire dermique avec une diminution du taux de protéoglycanes, une modification et une raréfaction des fibres de soutien. Au niveau macroscopique, ces modifications se traduisent par une sécheresse cutanée, une accentuation des rides, une perte d'élasticité et un ternissement du teint. La ménopause va accélérer ce processus. En effet, la peau est un organe hormono-dépendant, étant donné qu'il existe des récepteurs cutanés aux hormones stéroïdes sexuelles. Ainsi une hormono-thérapie substitutive exerce un effet bénéfique sur la peau de femmes ménopausées. L'Arganier ou Argan (Argania spinosa L) est l'espèce végétale la plus caractéristique du Maroc. La plante appartient à la famille botanique des Sapotacées. C'est un survivant de la flore tropicale tertiaire qui a bien su s'adapter au climat nord africain. La plus ancienne mention relative à l'arganier remonte à 1219 et fut réalisée par le médecin Ibn Al Beïthar dans un "Traité des simples". La première description botanique fut donnée par Linne en 1737 qui le nomma Sideroxylon spinosum (bois de fer). L'Argania spinosa est un arbre qui peut atteindre 8 à 10 mètres de hauteur. Le tronc est court : 2 à 3 mères, multiple et tourmenté. Les rameaux sont épineux ce qui assure une certaine défense de l'arbre. Les feuilles sont alternées, lancéolées, longues de 2 à 3 cm, elles ont une couleur verte, sombres à la face supérieure et sont plus claires en dessous. Elles sont subpersistantes. En période de forte sécheresse, l'arbre perd complètement ses feuilles qui réapparaissent après le retour des pluies. Les fleurs sont pentamères avec sépales pubescents blancs. La corolle est jaune à 5 étamines. L'ovaire est supère, pubescent. Le fruit est une baie à 2 ou 3 graines soudées en une fausse drupe qui, à maturité, a la grosseur d'une noix jaune veinée de rouge. La pulpe recouvre un noyau très dur (Noix d'Argan). Cette noix contient 3 amandes albuminées et huileuses représentant environ 3 % du poids du fruit et renfermant 50 à 60 % d'huile. L'Arganier est localisé principalement dans le sud-ouest marocain, mais on trouve quelques peuplements isolés au nord-est du pays dans le massif montagneux des Beni Snassen et dans le centre. L'arganeraie s'étend actuellement sur 822 000 ha selon la direction des Eaux et Forêts (1989). Actuellement, la plus grande partie de l'arganeraie couvre une bande côtière depuis l'embouchure de l'Oued Tennsilf jusqu'à celle de l'Oued Souss. L'Arganier est valorisé sous différentes formes par les populations marocaines. Tout d'abord le bois, particulièrement dur, est essentiellement utilisé comme bois de chauffage et la fourniture du charbon en résultant. Mais les applications les plus intéressantes ont pour origine l'amande de la graine. Celle-ci fournit une huile, puis dans un second temps, un tourteau. La préparation de l'huile d'Argan est effectuée par la population locale de façon artisanale. Elle s'extrait en brisant à la main entre deux pierres le noyau du fruit. Les graines sont torréfiées sur feux doux. Les amandes refroidies sont broyées dans un moulin à main et transformées en farine, celle-ci est aspergée d'eau chaude et pétrie à la main. L'huile surnage à la surface et est récupérée au fur et à mesure. Après extraction de l'huile, le tourteau est rassemblé puis pressé à la main en pains plus ou moins ovoïdes, d'une couleur brunâtre ou noirâtre et le goût très amer. De façon industrielle, l'huile d'Argan est obtenue par pressage conduisant à l'obtention de l'huile vierge, ou par extraction par un solvant apolaire comme l'hexane. Des tourteaux sont obtenus préférentiellement des huiles vierges, par pressage, de façon à ne pas être pollués par l'hexane ou le solvant résiduel. Cette huile vierge peut être enrichie par addition de vitamine E et/ou de phytostérols. L'huile d'Argan est composée de glycérides d'acides gras et d'une partie insaponifiable. Les glycérides L'analyse des glycérides indique que l'huile d'Argan contient en poids plus de 96 % de triglycérides, 1,5 % de diglycérides et d'acides gras libres, 0,3 % de monoglycérides. Les acides gras : L'analyse des acides gras de cette huile montre une prédominance en acide en C 18-1 et C 18-2, dont acide oléique (45 %) et linoléique (35 %). La teneur assez importante en acides gras polyinsaturés, représente, du point de vue alimentaire un intérêt certain. D'autre part, la quasi absence d'acide linolénique fait que cette huile est peu susceptible de s'oxyder ou de se polymériser pendant la conservation. Les autres acides gras contenus en proportions importants sont : l'acide palmitique en C 16 (15 %) et l'acide stéarique (6 %) en C 18. Le taux d'insaponifiable de l'huile d'Argan est en moyenne de 1 %. La composition varie suivant les auteurs. Les études les plus récentes décrivent 37 % d'hydrocarbures et de carotènes. 7,5 % de tocophérols, 20 % de stérols et d'alcools triterpéniques, 6 % de xanthophylles et 9,5 % de constituants divers. Les molécules les plus actives sont les tocophérols qui présentent des activités anti-radicalaires très fortes, mais également les stérols. Les derniers régulent la perméabilité et la fluidité des membranes cellulaires et ainsi, tous les échanges existants entre la cellule et le monde extérieur, c'est-à-dire son environnement direct. Tout en étant moins importantes que celles des tocophérols, les stérols présentent également des propriétés antiradicalaires. La partie protéique : les tourteaux d'Argan sont composés essentiellement de protéines, 25 à 35 % selon les provenances du tourteau, de lipides résiduels non extractibles : 20 à 27 % d'eau dont la teneur varie selon l'état de séchage de 5 à 25 %, de polysaccharides 15 à 25 % dont 2 à 5 % de cellulose, de cendres 2 à 5 % et d'oligo-éléments comme le phosphore, calcium, potassium et sodium. Les protéines sont les molécules les plus abondantes. En quantité de protéines, les tourteaux d'Argan sont comparables à ceux de soja ou d'arachide. Les populations locales utilisent ces tourteaux pour l'alimentation animale. Aucun cas de toxicité due à leur composition chimique n'a été remarqué. Les protéines d'Argan peuvent être extraites par des solvants aqueux, alcalins ou neutres, mais les protéines en solution ne sont pas stables et précipitent. De plus, elles sont dénuées de propriétés biologiques, à part, bien sûr, leur aspect nutritionnel. Afin de les solubiliser, ces protéines peuvent subir une hydrolyse chimique ou enzymatique. Cette dernière est préférée car plus spécifique et moins dénaturante. L'hydrolyse enzymatique est menée en mettant en contact les protéines fraîchement extraites par un solvant aqueux ou tout simplement encore à l'état du tourteau dans l'eau avec une protéase. Cette enzyme hydrolyse alors les protéines en peptides de poids moléculaires inférieurs à 20,000 daltons. Ces peptides sont alors solubles dans l'eau et donc récupérés après une séparation solide/liquide dans la phase aqueuse. Ils sont biologiquement actifs comme le démontrent les travaux relatés ci-après. Pris isolément, l'huile et les peptides d'Argan possèdent des activités antivieillissement qui ont pu être quantifiées tant en culture de cellules, qu'en pharmacologie animale et en clinique humaine. L'huile intervient sur les principaux paramètres du vieillissement que sont: - la diminution de l'activité cellulaire, - la perturbation des échanges cellulaires et l'accumulation de toxines, - la diminution de la qualité du ciment intercellulaire, - la diminution des apports nutritifs au niveau cellulaire. 1) Activité proliférative conduisant à une relance de l'activité cellulaire L'activité stimulante de l'huile enrichie à une concentration de 0,003 % a été mise en évidence sur culture de fibroblastes (lignée L 929) en utilisant la méthode au XTT décrite ultérieurement plus en détails. 2) Activité anti-radicalaire Elle a été évaluée in vitro par le test au DPPH. La concentration inhibitrice d'huile nécessaire pour diminuer de moitié le taux de radicaux libres (CI 50) obtenue est de 1,3 mg/ml. 3) Effet restructurant et hydratant 1l a été objectivé sur animaux carencés en AGE Le traitement de ces animaux par l'huile d'Argan diminue rapidement la perspiration chez l'animal carencé en AGE et ceci pendant une longue durée (activité dès le 4ème jour d'application). Il s'agit d'une réelle reconstitution de l'intégrité du stratum cornéum, car une huile de paraffine s'avère inactive sur ce modèle. Cet effet hydratant a été confirmé en clinique humaine. 4) Effet nutritif L'huile d'Argan a des propriétés émollientes dues à sa qualité d'huile. Cependant, son action se différencie nettement de celle d'un émollient classique par sa composition particulière (acides gras insaturés, etc). Les peptides interviennent essentiellement sur les troubles du vieillissement liés à des altérations du métabolisme cellulaire : chute de la consommation d'oxygène, diminution de la synthèse de collagène, etc. 1) Activité proliférative Elle a été évaluée sur plusieurs lignées cellulaires par la méthode du XTT (avec lecture à To + 48 h). L'activité stimulante des peptides respectivement à 0,1 % à 0,3 % et à 1 % a été objectivée à la fois sur lignée fibroblastique et sur lignée épithéliale. Cette propriété de stimulation cellulaire a été confirmée par un test in vivo en pharmacologie animale, par suivi de l'évolution de l'indice mitotique chez le cobaye après application quotidienne, pendant deux semaines, d'une préparation renfermant 1 % de peptides d'Argan. 2) Oxygraphie Ce test a été réalisé in vitro sur culture de fibroblastes. A des concentrations de 0,1 % et de 0,3 % en peptides l'oxygraphie sur culture de fibroblastes a révélé des améliorations considérables de la vitesse de consommation de l'oxygène. 3) Activité anti-collagénase Les peptides d'Argan protègent les fibres de collagène des attaques enzymatiques. Ceci a été objectivé in vitro sur gel d'agarose. La CI 50 obtenue avec les peptides d'Argan est de 0,1 % et la CI 100 est de 0,5 %. Dans le cadre de la présente invention, il a été mis en évidence, de manière fortuite, une potentialisation de l'activité proliférative des peptides par l'huile d'Argan. Cette propriété a été démontrée in vitro sur culture de fibroblastes d'origine murine (lignée L 929). Le principe du test est basé sur la transformation enzymatique d'un sel de tétrazolium, le XTT en un produit coloré : le formazan. Le XTT est réduit par les déshydrogénases mitochondriales des cellules vivantes en présence d'un agent couplant d'électrons, le coenzyme Q en un composé hydrosoluble jaune/orangé, le formazan dosable par spectrophotométrie à 450 nm. A to - 18 h, les cellules sont ensemencées avec du S.V.F. A to, le milieu de culture est éliminé et les actifs (peptides et/ou huile) sont introduits à différentes concentrations (dilution dans le milieu de culture). A to + 48 h, une solution de XTT est introduite en présence du coenzyme Q, Après 3 h d'incubation, on arrête la métabolisation du XTT en ajoutant une solution de SDS. La lecture de la densité optique est réalisée à 450 nm. Elle est proportionnelle à la population cellulaire vivante. Le pourcentage d'activité est calculé ainsi D.O. témoin - D.O. traité x x 100 D.O. témoin Les résultats sont représentés dans le graphe de la figure annexée ainsi que dans le tableau ci-dessous: Potentialisation de l'activité des peptides par l'huile enrichie % d'activité/Témoin SVF Huile enrichie Peptides Peptides(1 %) (0,003%) (1%) + Huite enrichie(0,003%) Huile enrichie (0,003%) 6% Peptides (1%) 76% Peptides (1%) + Huile enrichie(0,003%) 96% On observe ainsi que l'huile d'Argan s'est avérée potentialiser l'activité stimulante des peptides d'Argan sur culture de cellules. Cette synergie d'action, ainsi que les complémentarités de ces deux actifs sur les autres paramètres du vieillissement, font de cette association un traitement efficace adapté à la lutte contre le vieillissement cutané. Les propriétés précédentes sont avantageusement mises à profit lors de l'utilisation de cette association ou des compositions la contenant, pour la préparation d'un médicament destiné au traitement des troubles cutanés liés au vieillissement. Ces compositions peuvent être d'usage cosmétique ou pharmaceutique, sous forme de crèmes, émulsions, lotions, masques, ou encore de gélules par voie orale, dont des exemples sont donnés ci-après. On pourra, en particulier, les associer à des compositions, utiles en particulier à titre de médicaments, comme les hormones et en particulier les oestrogènes, dans le traitement des troubles cutanés de la ménopause. EXEMPLE 1 : Crème de jour hydratante base de maquillage Huile d'Argan enrichie 0,5 à 2 Peptides d'Argan 0,03 à 2 Acide pyrrolidone carboxylique 0,2 à 0,5 % Hydrolysat de collagène marin 1 à 3 Huile de ricin hydrogénée, éthoxylée 1 à 5 Huile de paraffine fluide 1 à 5 Huile cyclopentasiloxane 5 à 12 Squalane 1 à 5 Polymère carboxyvinylique 0,1 à 0,5 % Triéthanolamine 0,2 à 0,5 % Glycérine 2 à 4 Conservateur q.s. Parfum q.s. Eau purifiée q.s.p. 100 g EXEMPLE 2 : Lait démaquillant pour peaux sèches Huile d'Argan enrichie 0,5 à 1 Peptides d'Argan 0,02 à 1 Monopalmitate de sorbitan 0,5 à 2 Monopalmitate de sorbitan polyéthoxylé 3 à 6 Polysorbate 20 1 à 3 Paraffine liquide 8 à 15 Triglycérides caprique/caprilique 1 à 2 Butanediol 1.3 2 à 4 Polymère carboxyvinylique 0,2 à 0,5 % Triéthanolamine q.s. Conservateur q.s. Parfum q.s. Eau purifiée q.s.p. 100 g EXEMPLE 3 : Crème nutritive pour peaux très sèches Huile d'Argan enrichie 0,5 à 3 Peptides d'Argan 0,05 à 2 Dérivé polysaccharidique 0,1 à 4 Acide stéarique 1 à 3 Stéarate de polyoxyéthylène glycol 2 à 6 Cire végétale 1 à 3 Blanc de baleine synthétique 1 à 2 Huile de jojoba 2 à 8 Glycérine 2 à 5 Conservateur q.s. Parfum q.s. Eau purifiée q.s.p. 100 g EXEMPLE 4 : Concentré anti-rides Huile d'Argan enrichie 0,1 à 3 Peptides d'Argan 0,01 à Q05 % Palmitate vitamine A 0,1 à 1 Ester glycérique de Vitamine F 0,1 à 1 Huile de carthame q.s.p. 100 g EXEMPLE 5 : Concentré anti-rides Huile d'Argan enrichie 0,1 à 3 ù Peptides d'Argan 0,01 à 0,054 % Insaponifiable d'Argan 0,01 à 0,5 % Palmitate de vitamine A 0,1 à 1 Huile de purcellin q.s.p. 100 g EXEMPLE 6 : Masque anti-rides Huile d'Argan enrichie Q5 à 4 Peptides d'Argan 0,01 à 2 Protéines végétales 1 à 5 Acide hyaluronique 'sel Na) 0,01 à 0,2 % Stéarate de sucrose 1 à 3 Distéarate de sucrose 2 à 5 Triglycérides caprique et caprylique 2 à 8 Paraffine liquide 5 à 12 Polyoxyéthylène glycol 600 2 à 10 Polymère carboxyvinylique 0,2 à 1 Triéthanolamine 0,5 à 1 Parfum q.s. Conservateurs q.s. Eau purifiée q.s.p. 100 g REVENDICA TIONS 1) Composition pharceutique ou cosmétologique, caractérisée en ce qu'elle renferme à titre de principe actif au moins une association d'huile et de peptides d'Argan. 2) Composition selon la revendication 1, caractérisée en ce qu'elle contient des excipients pharmaceutiquement acceptables adaptés à l'administration par voie orale ou par voie topique. 3) Composition dermo-cosmétique selon la revendication 2, caractérisée en ce qu'elle est, en outre, enrichie par d'autres substances et/ou fractions actives d'huile et/ou de peptides d'Argan, tels que de la vitamine E et des phytostérols. 4) Composition selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisée en ce que la concentration en huile est comprise entre 0,01 % et 20 % en poids et la concentration en peptides est comprise entre 0,001 % et 10 % en poids, par rapport au poids total de la composition. 5) Utilisation d'une composition selon l'une des revendications 1 à 4 pour la préparation de médicaments destinés au traitement du vieillissement cutané, comprenant les troublés liés à la ménopause. 6) Utilisation selon la revendication 5, caractérisée en ce que la composition contient, en outre, au moins un autre principe actif, en particulier des hormones, telles que des oestrogènes. 7) Procédé de traitement cosmétique pour améliorer l'aspect de la peau et/ou des phanères, caractérisé en ce que l'on applique localement une composition selon l'une des revendications 1 à 4. 8) Procédé selon la revendication 7, caractérisée en ce qu'on diminue les troubles liés à la ménopause.