FR 2767825 A1 19990305 FR 9710852 A 19970901 -1- La présente invention a pour objet de nouvelles trans-3,4,4a,5,6,10Obhexahydro-2H- napht[1,2-b]-1,4-oxazines disubstituées, leur procédé de préparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent. - Elle concerne plus spécialement les composés de formule 1: Trans E A (X) dans laquelle: * A représente: un radical (C1- C10)alkyle, (C3-Co10)alcényle ou (C3-C0lo)alcynyle, chacun en chaîne droite ou ramifiée et chacun éventuellement substitué par un ou plusieurs radicaux cycloalkyles ayant de 3 à 8 atomes de carbone, ou par un radical aryle choisi parmi les radicaux phényle, thiényle et pyridyle chacun d'eux éventuellement substitué par un ou plusieurs substituants choisis parmi les atomes d'halogène, le radical hydroxy et les radicaux alkyle et alkoxy ayant chacun de 1 à 6 atomes de carbone en chaîne droite ou ramifiée. * E représente: O O R O Il Il /R1 Il -ON, -C-CH3, -C-N ou -C- O-R3, R2 dans lesquels: - R1 et R2, identiques ou différents, représentent chacun un atome d'hydrogène ou prennent la signification de A précédemment définie, et - R3 représente un atome d'hydrogène ou un radical alkyle de 1 à 5 atomes de carbone en chaine linéaire ou ramifiée; * sous forme racémique ou d'isomères optiques et leurs sels d'addition avec un acide pharmaceutiquement acceptable. Les composés de formule I agissent comme de puissants ligands dopaminergiques tant in vitro qu'in vivo. -2- Les dérivés dopaminergiques sont largement utilisés en thérapeutique grâce à leurs effets bénéfiques dans les maladies psychiatriques et en périphérie dans les maladies cardiovasculaires. Cinq sous-types réceptoriels dopaminergiques (Dl à Ds) ont été actuellement clonés et caractérisés. Actuellement, la grande majorité des médicaments agissent au niveau du système dopaminergique par l'intermédiaire de leur action sur le sous-type D2, qu'il s'agisse de bloqueurs (ou antagonistes) ou d'activateurs (ou agonistes). Ces médicaments présentent de nombreux effets secondaires: dyskinésie tardive, hyperprolactinémie, aménorrhée pour les premiers, effets cardio-vasculaires et moteurs pour les seconds. Contrairement aux récepteurs D2, la concentration des récepteurs D3 est très faible dans le noyau nigrostrié et dans les cellules lactotrophes. Par contre, à l'instar des récepteurs D2 la concentration des récepteurs D3 est très importante au niveau du système limbique. Cette différence importante dans la localisation de ces deux sous-types réceptoriels encourage la recherche de nouveaux médicaments agissant de façon préférentielle sur le sous-type D3 et qui devrait se traduire par une minimisation ou une disparition des effets secondaires liés typiquement au sous-type D2, comme mentionné précédemment. Très peu de produits revendiquent actuellement un tel mécanisme d'action. L'état antérieur de la technique fait état toutefois de dérivés tricycliques de l'aminotétraline (cf le brevet US 5.486611), mais ces dérivés agissent préférentiellement au niveau du système sérotoninergique et plus précisément au niveau du sous-type réceptoriel 5HT1A. Les dérivés de la présente invention se différencient de ces produits à la fois par leur structure mais aussi par leur spécificité d'action. Les études réalisées in vitro (binding sur récepteurs humains clonés D2 et D3) avec les composés de la présente invention montrent que ceux-ci se comportent comme des ligands préférentiels des récepteurs D3 avec une moindre affinité pour le récepteur D2. Cette caractéristique confère un intérêt tout particulier aux composés de la présente invention dû à leur faible niveau d'expression d'effets secondaires. -3- Plusieurs tests in vivo ont confirmé leur mécanisme d'action (enregistrement de l'activité électrique unitaire, extracellulaire dans l'aire tegmentale ventrale du rat) et l'intérêt de leur utilisation dans le traitement de nombreuses maladies du système nerveux central. Les composés de l'invention ont démontré notamment leur activité dans le test des vocalisations ultrasoniques chez le rat, le test de la nage forcée et dans le test de rotation chez les rats lésés au 6-OH-DPAT. Les résultats obtenus permettent donc de proposer les produits de l'invention dans le traitement de l'anxiété, de la dépression, de l'agressivité, de la maladie de Parkinson et de la schizophrénie. ' La présente invention a également pour objet le procédé de préparation des composes de formule I caractérisé en ce que: - I'on fait réagir un composé trans de formule Il: 0") HO ' NA (Nl) dans laquelle A a la signification précédemment définie, - avec de l'anhydride triflique en présence de pyridine pour obtenir un composé trans de formule 111: 0-' F3CO2SO INI)A dans laquelle A a la signification précédemment définie, - et l'on fait réagir ce composé: 20. soit avec du cyanure de zinc et du tétrakis (triphénylphosphine)palladium (o) dans le diméthylformamide à chaud, pour obtenir un composé trans de formule la: oN'( NC N.A -4- dans laquelle A a la signification précédemment définie, soit avec du n-butyl vinyl éther dans les conditions de la réaction de Heck pour obtenir un composé trans de formule lb: OO H 3C N'A (lb) dans laquelle A a la signification précédemment définie, et - le composé la, précédemment obtenu, est traité par un mélange d'acide chlorhydrique et d'acide acétique au reflux, pour obtenir un composé trans de formule Ic HOOC NA (c dans laquelle A a la signification precedemment definie, - lequel composé Ic est traité: soit, par un composé de formule IV: R -OH (IV) dans laquelle R3 a la signification précédemment définie, en présence d'acide chlorhydrique, pour obtenir un composé trans de formule Id: O 0 R30 N'A (Id) dans laquelle A et R3 ont les significations précédement définies, soit par un composé de formule V: /R1 HN (v) R2 dans laquelle R1 et R2 ont les significations précédemment définies, -5- en présence de 2-(1H- benzotriazol-1-yl) 1,1,3,3-tétraméthyluronium tétrafluoroborate, de triéthylamine et d'une quantité catalytique de 4-diméthylaminopyridine dans le chlorure de méthylène, pour obtenir un composé trans de formule le: Ri" RI" IN' R2 dans laquelle A, RI, et R2, ont les significations précédemment définies. L'ensemble des composés trans de formule la, lb, Ic, Id, et le forme l'ensemble des composés trans de formule I. Les matières premières de formule Il ont été préparées selon des procédés décrits dans la littérature, à partir de substances connues. Les formes optiquement actives des composés de formule I ont été obtenues soit à partir de formes optiquement actives des matières premières de formule Il, soit par dédoublement des formes racémiques des composés de formule 1, selon des méthodes connues de la littérature. La présente invention a également pour objet les compositions pharmaceutiques contenant comme principe actif un composé de formule I ou un de ses sels physiologiquement tolérable, mélangé ou associé à un ou plusieurs excipients pharmaceutiques appropriés. Les compositions pharmaceutiques ainsi obtenues se présentent généralement sous forme dosée renfermant de 0,5 à 25 mg de principe actif. Elles peuvent, par exemple, revêtir la forme de comprimés, dragées, gélules, suppositoires, solutions injectables ou buvables et être administrées par voie orale, rectale ou parentérale. La posologie peut varier selon l'âge et le poids du patient, la voie d'administration, la nature de la maladie et les traitements associés et s'échelonne de 0,5 à 25 mg de principe actif, 1 à 3 fois par jour. -6- Les exemples suivants, donnés à titre non-limitatif, illustrent la présente invention. Les points de fusion ont été déterminés soit à la platine chauffante de Kofler (K), soit à la platine chauffante sous microscope (MK). Les spectres de résonnance magnétique nucléaire du proton (RMN) ont été réalisés à 200 MHz, sauf indication contraire. Exemple 1: Trans-3,4,4a,5,6,1 Ob-hexahydro-9-cyano-4-propyl-2H-naphto[1, 2-b]-1,4- oxazine et son chlorhydrate Stade A: trans-3,4,4a,5,6,10 b-hexahydro-9[(trifluorométhyl)sulfonyl]oxy]-4-propyl-2H- naphto[1,2-b]- 1,4-oxazine 18,7 ml d'anhydride triflique sont additionnés lentement à une solution de 21,0 g de trans- 3,4,4a,5,6,10b-hexahydro-9-hydroxy-4-propyl-2H-naphto[1,2-b]-1,4-oxazine dans 17 ml de pyridine en maintenant la température entre 0 C et 5 C. Après 1 heure d'agitation à 0 C, le mélange réactionnel est concentré sous vide. Le résidu d'évaporation est chromatographié sur colonne de silice (éluant: CH2CI2/CH3COOC2H5; 85/15) pour donner 22,4 g du produit attendu. P.F.: 56 -57 C (K) Rendement: 69 % Stade B: composé titre 2,39 g de Zn(CN)2 et 1,34 g de Pd[P(C6H5)3]4 sont successivement additionnés à température ambiante à une solution dégazée de 11,0 g du composé titre du stade A dans 55 ml de diméthylformamide (DMF). Le mélange réactionnel est chauffé 3 heures à 80 C. Puis 2,39 g de Zn(CN)2 et 1,34 g de Pd[P(C6H5)3]4 y sont de nouveau successivement additionnés à 80 C. Après 18 heures de chauffage à 80 C, le mélange réactionnel est versé sur 500 ml d'eau. Le mélange est extrait à l'éther éthylique. Les phases organiques sont rassemblées, et extraites quatre fois par HCI 1N. Les phases aqueuses sont rassemblées, alcalinisées par de la lessive de soude et extraites à l'éther éthylique. Les phases organiques sont rassemblées, lavées une fois par de la saumure, séchées sur sulfate de magnésium et concentrées sous vide pour donner 6,27 g du produit désiré. 1 g de ce produit est chromatographié sur colonne de silice (éluant: CH2CI2/CH3COOC2H5; 90/10) pour donner 0,66 g de base attendue dont le chlorhydrate est cristallisé de l'acétate d'éthyle. P.F.: 201-203 C (MK) (sublimation 190-195 C) -7 - R.M.N.: 'H 300 MHz (DMSO)d6 11,6 ppm, m, 1H; 7,75 ppm, d, 1H; 7,7 ppm, dd, 1H; 7,4 ppm, d, 1H; 5,0 ppm, d, 1H; 4,25 ppm, d, 2H; 3,6 ppm, d, 1H; 3,45-3,15 ppm, m, 3H; 3,0 ppm, m, 3H; 2,5 ppm, m, 1H; 1,75 ppm, m, 2H; 0,95 ppm, t, 3H. Exemple 2: Trans-3,4,4a,5,6,10b-hexahydro-9-carbamoyl-4-propyl-2Hnaphto[1,2-b]-1,4- oxazine Une solution de 1 g du produit titre de l'exemple 1 dans 37 ml d'éthanol et 0,6 g de KOH est chauffée à reflux. Après 48h, le mélange réactionnel est concentré sous vide. Le résidu est repris par 200 ml d'un mélange CH2CI2/CH3OH: 95/5. La solution, lavée deux fois par de la saumure, séchée sur sulfate de magnésium est concentrée sous vide pour donner 0,8 g d'un solide qui recristallise du méthanol. P.F.: 200-202 C (MK) Rendement: 72% R.M.N.: 1H (DMSO)d6 7,94 ppm, s, 1H; 7,90 ppm, s, 1H (échangeable); 7,66 ppm, dd, 1H; 7,15 ppm, s, 1H (échangeable); 7,14 ppm, d, 1H; 4,20 ppm, d, 1H; 4,00 ppm, dd, 1H; 3,78 ppm, m, 1H; 2,98- 2,70 ppm, m, 4H; 2,40-2,0 ppm, m, 4H; 1,60-1,35 ppm, m, 3H; 0,9 ppm, t, 3H. Exemple 3 (+)-Trans-3,4,4a,5,6,10b-hexahydro-9-carbamoyl-4-propyl-2Hnaphto[1,2- b]-1,4-oxazine 2 g du produit titre de l'exemple 2 sont chromatographiés par chromatographie haute pression en phase normale sur support chiral (Chiracel AD , éluant: éthanol 100%, débit: 5 ml/mn, détection 240 nm) pour donner 0,72 g de l'énantiomère le moins retenu. Après recristallisation du méthanol, sont obtenus 0,7g du produit titre (ee> 99%). P.F.: 200-202 C (MK) R.M.N.: 1H (DMSO)d6 -8- 7,94 ppm, s, 1H; 7,90 ppm, s, 1H (échangeable); 7,66 ppm, dd, 1H; 7,15 ppm, s, 1H (échangeable); 7,14 ppm, d, 1H; 4,20 ppm, d, 1H; 4,00 ppm, dd, 1H; 3,78 ppm, m, 1H; 2,98- 2,70 ppm, m, 4H; 2,40-2,0 ppm, m, 4H; 1,60-1,35 ppm, m, 3H; 0,9 ppm, t, 3H. [o(]20 C: (c= 1%, CHC13). nm 589 578 546 436 365 0óXa + 65,8 + 68,5 + 78,0 + 131,2 + 200, 0 Exemple 4: (-) -Trans-3,4,4a,5,6,10b-hexahydro-9-carbamoyl-4-propyl-2Hnaphto[1,2- b]-1,4-oxazine 2 g du produit titre de l'exemple 2 sont chromatographiés par chromatographie haute pression en phase normale sur support chiral (Chiracel AD , éluant: éthanol 100%, débit: 5 ml/mn, détection 240 nm) pour donner 0,71g de l'énantiomère le plus retenu. Après recristallisation du méthanol, sont obtenus 0,69 g du produit titre (ee> 99%). P.F.: 200-202 C (MK) R.M.N.: 1H (DMSO)d6 7,94 ppm, s, 1H; 7,90 ppm, s, 1H (échangeable); 7,66 ppm, dd, 1H; 7,15 ppm, s, 1H (échangeable); 7,14 ppm, d, 1H; 4,20 ppm, d, 1H; 4,00 ppm, dd, 1H; 3,78 ppm, m, 1H; 2,98- 2,70 ppm, m, 4H; 2,40-2,0 ppm, m, 4H; 1,60-1,35 ppm, m, 3H; 0,9 ppm, t, 3H. [or]2 C: (c= 1 %, CHC13). nm 589 578 546 436 365 oc - 65,4 -68,3 - 77,6 - 131,2 -197,6 Exemple 5: Trans-3,4,4a,5,6,1 Ob-hexahydro-9-(N-méthylcarbamoyl)-4propyl-2H- naphto[1,2-b]-1,4-oxazine Stade A chlorhydrate de l'acide trans-3,4,4a,5, 6, 10Ob-hexahydro-4-propyl-2H-naphto [1,2-b]- 1,4-oxazine-9-carboxylique -9- 68 ml d'acide chlorhydrique 36 % sont additionnés à température ambiante à une solution de 6,14 g du composé titre de l'exemple 1 dans 68 ml d'acide acétique glacial. Après 18 heures de reflux, le mélange réactionnel est tiré à sec. Le résidu solide est trituré dans l'éther éthylique, filtré et séché pour donner 8,65 g d'une poudre blanche qui est recristallisée de 80 ml d'eau. On obtient 6,9 g du produit désiré. P.F.: 260 C (K) Rendement: 89 % Stade B: composé titre de l'exemple La monométhylamine est introduite en 1 heure, à température ambiante, dans une solution de 1 g du composé obtenu précédemment, 1,13g de 2(-1H-benzotriazol-1-yl)1,1,3,3- tétraméthyluronium tétrafluoroborate (TBTU), et de 1,1 ml de triéthylamine dans 14 ml de chlorure de méthylène. Après 18 heures d'agitation à température ambiante, le mélange réactionnel est dilué avec du chlorure de méthylène, lavé une fois par NaOH 1N, trois fois par H20, séché sur sulfate de magnésium puis concentré sous vide. Le résidu solide (1,14 g) est recristallisé dans 100 ml d'acétate d'éthyle pour donner 0, 41 g du composé titre. P.F.: 179-180 C Rendement: 44 % R.M.N.: 1H 300MHz (CDC13) 7,8 ppm, s, 1H; 7,7 ppm, d, 1H; 7,1 ppm, d, 1H; 6,2 ppm, m, 1H (échangeable); 4,3 ppm, d, 1H; 4,1- 3,9 ppm, m, 2H; 2,98 ppm, s, 3H; 2,9 ppm, m, 2H; 2,9 ppm,m, 1H; 2,8-2,45 ppm, m, 2H; 2,3 ppm, m, 2H; 2,3-1,6 ppm, m, 2H; 1,5 ppm, m, 2H; 0,9 ppm, t, 3H. Exemple 6: Trans-3,4,4a,5,6,10b-hexahydro-9-(N,N-diméthylcarbamoyl)-4propyl-2H- naphto [1,2-b]-1,4-oxazine 1 g du produit obtenu à l'exemple 5, stade A est traité comme décrit à l'exemple 5, stade B (en utilisant la diméthylamine à la place de la monométhylamine) pour donner après concrétisation dans l'éther isopropylique 0,46 g de produit titre. P.F.: 85-87 C (MK) Rendement: 47 % R.M.N.: 1H 300MHz (CDCI3) - 10 - 7,6 ppm, s, 1H; 7,2 ppm, d, 1H; 7,1 ppm, d, 1H; 4,30 ppm, d, 1H; 4,1-3,9 ppm, m, 2H; 3,05 ppm, s, 6H; 2,9 ppm,m, 2H; 2,9 ppm m, 1H; 2,8-2,5 ppm, m, 2H; 2,2 ppm, m, 2H; 2,3-1,5 ppm, m, 2H; 1,5 ppm, m, 2H; 0,9 ppm, t, 3H. Exemple 7: Trans-3,4,4a,5,6,10b-hexahydro-9-(N-butylcarbamoyl)-4-propyl2H-naphto [1,2-b]-1,4-oxazine A température ambiante, 1 g du produit obtenu à l'exemple 5, stade A, 1,13 g de TBTU et 0,26 g de n-butylamine sont mis en suspension dans 14 ml de chlorure de méthylène. 1,1 ml de triéthylamine sont additionnés à température ambiante et le mélange réactionnel est agité 18 heures à cette température. Le mélange réactionnel est dilué avec du chlorure de méthylène, lavé une fois par NaOH 1 N, trois fois par H20, séché sur sulfate de magnésium puis concentré sous vide. Le résidu huileux est concrétisé dans l'éther isopropylique pour donner 0,6 g du produit titre. P.F.: 128-131 C (MK) Rendement: 56 % R.M.N.: 1H 300MHz (CDCI3) 7,8 ppm, s, 1H; 7,7 ppm, d, 1H; 7,15 ppm, d, 1H; 6,15 ppm, t, 1H (échangeable); 4,1-3,95 ppm, m, 2H; 3, 4 ppm, c, 2H; 3,0 ppm,m, 2H; 2,9 ppm,m, 1H; 2,85-2,5 ppm, m, 2H; 2,3 ppm, m, 2H; 2,3-1,6 ppm, m, 2H; 1,6-1,4 ppm, m, 6H; 0,9 ppm, t, 3H. Exemple 8: Trans-3,4,4a,5,6,1 Ob-hexahydro-9-(N-pméthoxyphénylcarbamoyl)-4- propyl-2H-naphto[1,2-b]-1,4-oxazine A température ambiante, 0,8 g du produit obtenu à l'exemple 5, stade A, 0,9 g de TBTU, une quantité catalytique de 4-diméthylaminopyridine et 0,35 g de p-méthoxyaniline sont mis en suspension dans 11 ml de chlorure de méthylène. 0,9 ml de triéthylamine sont additionnés à température ambiante et le mélange réactionnel est agité 18 heures à cette température. Le mélange réactionnel est dilué avec du chlorure de méthylène, lavé une fois par NaOH 1 N, trois fois par H20, séché sur sulfate de magnésium puis concentré sous vide. Le résidu solide est recristallisé de l'acétate d'éthyle pour donner 0,42 g du produit titre. P.F.: 185-186 C (MK) Rendement: 43 % R.M.N.: 1H 300MHz (CDCI3) 7,92 ppm, s, 1H; 7,85 ppm, d, 1 H; 7,8 ppm, m, 1H (échangeable); 7,5 ppm, d, 2H; 7,2 ppm, d, 1H; 6,9 ppm, d, 2H; 4,3 ppm, d, 1H; 4,1-3,45 ppm, m, 2H; 3,8 ppm, s, 3H; 2,95 ppm,m, 1H; 2,9 ppm, m, 2H; 2,8-2,5 ppm, m, 2H; 2,3 ppm, m, 2H; 2,3- 1,6 ppm, m, 2H; 1,6 ppm, m, 2H; 0,9 ppm, t, 3H. - 12 - Exemple 9: Trans-3,4,4a,5,6,10b-hexahydro-9-(N-p-méthoxybenzylcarbamoyl)-4- propyl-2H-naphto[1,2-b]-1,4-oxazine 0,7 g du produit obtenu à l'exemple 5, stade A est traité comme décrit à l'exemple 7, (en utilisant la pméthoxybenzylamine à la place de la n-butylamine) pour donner apres recristallisation de l'acétate d'éthyle 0,34 g de produit titre. P.F.: 148-150 C (MK) Rendement: 38 % R.M.N.: 'H 300MHz (CDCI3) 7,85 ppm, d, 1H; 7,75 ppm, dd, 1H; 7,3 ppm, d, 2H; 7,2 ppm, d, 1H; 6,9 ppm, d, 2H; 6,4 ppm, t, 1H (échangeable); 4,6 ppm, m, 2H; 4,3 ppm, d, 1H; 4,1 -3,95 ppm, m, 2H; 3,8 ppm, s, 3H; 2,9 ppm, m, 4H; 2,3 ppm, m, 4H; 1,5 ppm, m, 3H; 0,9 ppm, t, 3H. Exemple 10: Trans-3,4,4a,5,6,10b-hexahydro-9-éthoxycarbonyl-4-propyl-2Hnaphto[1,2 -bh-1,4-oxazine et son chlorhydrate 1 g du composé titre de l'exemple 1 est mis en solution dans un mélange de 15 ml de chloroforme et 15 ml d'éthanol. La solution est refroidie à O0 C et un courant d'acide chlorhydrique gazeux est introduit bulle à bulle pendant 1 heure. Le mélange est ramené à température ambiante et agité 24 heures. Le mélange est alors concentré sous vide, repris par 100 ml de tampon phosphate et agité 3 jours à température ambiante. La solution est basifiée par de la soude 1N et extraite au chlorure de méthylène. Après évaporation on obtient 1 g de produit titre qui est transformé en son chlorhydrate par une solution 4N d'éther chlorhydrique. Poids: 1,05 g. P.F.: 220-221 C (MK) Rendement: 79 % RMN: 1H 300MHz (CDCI3) 13,20 ppm, sl, 1H (échangeable); 8,18 ppm, s, 1 H; 7,92 ppm, dd, 1 H; 7,18 ppm, d, 1 H; 8, 35 ppm, d, 1H; 4,70 ppm, d, 1H; 4,38 ppm, _q, 2H; 4,22 ppm, dd, 1H; 3,55 ppm, d, 1H; 3,33 ppm, td, 1H; 3,00 ppm, m, 5H; 2,57 ppm, m, 1H; 2,40 ppm, m, 1H; 2,02 ppm, m, 1H; 1,80 ppm, m, 1 H; 1,40 ppm, t, 3H; 1,05 ppm, t, 3H. - 13 - Exemple 11: Trans-3,4,4a,5,6,1 Ob-hexahydro-9-acétyl-4-propyl-2Hnaphto[1,2-b]-1,4- oxazine et son chlorhydrate 1,3 g du composé obtenu au stade A de l'exemple 1 est mis en solution dans 10 ml de DMF. On ajoute à température ambiante 0,57 ml de triéthylamine, 2,22 ml de nbutylvinyl éther, 42 mg de 1,3 bis (diphénylphosphino) propane et 19,3 mg de Pd (-O-C-CH3)2. La solution est chauffée Il O 3 heures à 80-90 C, puis après retour à température ambiante 15 ml d'HCI 1 N sont ajoutés. L'agitation est maintenue 1 heure. Le mélange réactionnel est alors dilué à l'HCI 1N et la solution est lavée plusieurs fois à l'éther. La phase aqueuse est alcalinée à la soude et extraite quatre fois par du chlorure de méthylène. Après évaporation et purification par chromatographie flash (CH2CI2/CH3COOC2Hs: 90/10 et 80/20) on obtient 0, 61 g de produit attendu dont on prépare le chlorhydrate par action de l'éther chlorhydrique. Poids: 0,57 g. P.F.: 225-226 C (M.K.) Rendement: 54 % RMN: 'H 300MHz (DMSO) 11,58 ppm, s, 1H (échangeable); 8,03 ppm, s, 1H; 7,88 ppm, d, 1H; 7,33 ppm, d, 1H; 5,01 ppm, d, 1H; 4,22 ppm, d, 2H; 3,58 ppm, d, 1H; 3,40 à 3,20 ppm, m, 4H; 3, 15 à 2,90, m, 3H; 2,55 ppm, s, 3H; 2,04 ppm, m, 1 H; 1,72 ppm, m, 2H; 0,98 ppm, t, 3H. Exemple 12: Etude pharmacologique A. In vitro: étude de la liaison aux récepteurs humains D2 et D3 * Culture cellulaire Les cellules CHO (Chinese Hamster Ovary) ont été transfectées de façon stable par le gène codant pour le récepteur humain de la dopamine D2 ou D3 selon les méthodes connues de la littérature. Les cellules natives sont déficientes en enzyme DHFR (DiHydroFolate Reductase). Ces cellules sont cultivées dans une étuve à 37 C en atmosphère humide 5 % CO2, 95 % air. Les transfections ont été réalisées en utilisant la Lipofectine (Gibco). Les cellules CHO cotransfectées avec là récepteur D2 humain et le gène de résistance à la phléomycine ont été sélectionnées pour leur résistance à la présence de cet antibiotique dans le milieu de culture. Les cellules transfectées avec le récepteur D3 humain ont été -14- sélectionnées dans un milieu dépourvu d'hypoxanthine/thymidine, en présence de méthotréxate. La composition des milieux de culture utilisés sont pour les CHO-D2: DMEM (Dulbecco's Modified Eagle Medium) supplémentés à 10 % en sérum de veau foetal et en hypoxanthine/thimidine et pour les CHO-D3: DMEM supplémentés à 10 % en sérum de veau foetal dialysé. Les cellules sont récoltées à confluence et les membranes sont alors préparées. + Préparation membranaire Après quelques minutes en présence de trypsine 0,2 %, les cellules sont récupérées et centrifugées à 2 00Og pendant 5 minutes. Le culot cellulaire, resuspendu dans du tampon Tris-HCI 10 mM, pH 7,5 contenant 5mM de MgSO4, est alors passé au Polytron . L'homogénat est ensuite centrifugé à 50000g pendant 15 minutes, et le culot est resuspendu par sonication douce dans le tampon d'incubation de composition: 50 mM de tris-HCI, pH 7,5 contenant 120 mM de NaCI, 5 mM de KCI, 2 mM de CaCI2, 5 mM de MgCI2. Les membranes sont ensuite aliquotées et conservées à -80 C jusqu'au jour de I'experience. + expériences de liaison Les incubations sont effectuées dans des tubes en polypropylène pour un volume final de 400 ml contenant: tI de [1251]iodosulpride (Amersham) à 0,1 et 0,2 nM pour les récepteurs D2 et D3 respectivement. pIl de tampon (tubes totaux) ou 100 gi de raclopride 10 gLM (liaison non spécifique) ou 100 gI de composé zl de préparation membranaire contenant les récepteurs D2 ou D3, dans du tampon additionné de 0,2 % de BSA (Bovine Serum Albumine). Les gammes de concentration de chaque composé comportent au moins sept points déterminés en triple. Chaque expérience est répétée au moins deux fois. L'incubation qui dure trente minutes à 30 C est stoppée par une filtration rapide sur appareil Brandie, suivie de trois rinçages consécutifs avec du tampon Tris-HCI pH 7,4 contenant 120 mM de NaCI. Les filtres récupérés sont ensuite comptés au compteur gamma. Analyse des résultats - 15 - L'lCso50 représentant la concentration donnant 50 % d'inhibition de la liaison du radioligand est calculée par régression non linéaire (méthode Prism Graph). La valeur de Ki est dérivée de la formule Ki = ICso/(1 +L/Kd) o L est la concentration de [1251]- iodosulpride utilisée dans l'expérience et Kd sa constante de dissociation. Les résultats sont exprimés sous la forme de pKi (pKi = -logKi). Pour les récepteurs humains D2 et D3, les Kd sont respectivement égaux à 0,5 et 1,31 nM. * Résultats A titre d'exemple le produit de l'exemple 3 à un pK, de 8 pour le récepteur D3 et de 6,5 pour le récepteur D2. B. In vivo 1. Test d'enregistrement de l'activité électrique unitaire, extracellulaire, dans l'aire tegmentale ventrale du rat. Principe L'administration d'un agoniste dopaminergique diminue d'une manière dose-dépendante la fréquence de décharge des neurones. Cet effet est réversé par I'halopéridol, antagoniste dopaminergique. + Méthode Les rats sont anesthésiés à l'hydrate de chloral (400 mg/kg, i.p. ) et placés dans un appareil de stéréotaxie (Unimécanique, France) après cathétérisation de la veine fémorale. Le niveau d'anesthésie est maintenu par une administration i.p. de l'hydrate de chloral toutes les heures; la température rectale est conservée à 37 +1 C par une couverture chauffante thermostatée. Une microélectrode en tungstène (10 MQ2, 1lpm) est descendue à l'aide d'un microdescendeur électronique (Unimécanique, France) au niveau de l'aire tegmentale ventrale (AP: -5.5 / bregma; L: 0.7; H: 7.0-8.5 / dura; atlas de Paxinos et Watson, 1986). Les potentiels de cellules dopaminergiques sont reconnus par leur morphologie (potentiels triphasiques +/-/+, d'une durée supérieure à 3 msec), leur rythme de décharge, soit régulier, soit en bouffées d'amplitude décroissante, et leur fréquence de décharge comprise entre 2 et 8 Hz. On enregistre une seule cellule par animal. Après une période > 5 min. (activité basale) et une première injection de véhicule (eau distillée additionnée de quelques gouttes d'acide lactique dilué; pH ramené à 5 par NaOH -16- 1N), les produits de l'invention sont administrés par voie intraveineuse en doses cumulées croissantes avec un intervalle de 2-3 min. * Analyses des résultats L'acquisition des données est faite par le logiciel Spike2 (Cambridge Electronic Design, England). La fréquence de décharge est mesurée sur une minute au maximum de variation entre chaque injection et exprimée en pourcentage de variation par rapport à l'activité basale (moyenne des 5 minutes précédant le premier traitement) définie comme 100 %. L'effet des produits est évalué statistiquement par une analyse de variance sur mesures répétées suivie d'un test de Newman-Keuls pour comparaison des effets des différentes doses à l'effet du véhicule. + Résultats A titre d'exemple le tableau suivant montre les effets du produit de l'exemple 3. Doses 0 0.5 1 2 4 8 halopéridol pg/kg i.v. 16 plg/kg i.v. Exemple 3 97.2 2.05 80.4 5.54 56.6 +11.4' 25.0 8.68' 1.56 1. 12" 0.00 110.5 14.9 Valeurs individuelles (n = 4) = Moyenne. +. erreur standard à la moyenne. Comparaison des effets des différentes doses du composé par analyse de variance sur mesures répétées: Exemple 3, F(6, 18) = 28,29, p 2. Test de vocalisations ultrasoniques chez le rat * Principe Lorsqu'un rat est placé dans un environnement associé préalablement à une expérience désagréable (chocs électriques sur les pattes), son anxiété se traduit par l'émission de cris non audibles (ou vocalisations ultrasoniques). L'activité anxiolytique d'un produit se manifeste par une réduction de la durée de ces vocalisations. * Appareillage Des boîtes standard (Coulbourn Instruments), placées dans des caissons insonorisants et ventilés, sont équipées d'un sol constitué de barreaux métalliques électrifiables (générateur de chocs et scrambler Med Associates Inc) et d'un microphone situé au centre du plafond. Les ultrasons sont transformés dans une gamme audible (bat-detector Buitenbedrijf). Les -17- signaux ainsi modifiés sont filtrés puis traités (logiciel RTS, Engineering Design). Les spectrogrammes obtenus sont enregistrés sur bandes DAT. * Méthode Des rats mâles de souche Wistar pesant 180-200 g à leur arrivée sont logés par cage de quatre avec libre accès à l'eau et à la nourriture, de cinq jours avant le début de l'étude jusqu'à la fin de celle-ci. La procédure employée se décompose en trois étapes successives séparées par 24h, appelées entraînement, sélection et test. Durant la séance d'entraînement, les animaux sont placés individuellement dans les boîtes et y reçoivent six chocs électriques (0,8 mA, 8 s) distribués aléatoirement sur une période de sept minutes. La sélection consiste à placer chaque animal dans une boîte pendant deux minutes pour y recevoir un seul choc, et à l'y replacer trente minutes plus tard pour une séance d'enregistrement des vocalisations ultrasoniques de dix minutes; les animaux dont la durée des vocalisations est inférieure à 90 secondes sont écartés de la suite de l'expérience. La phase de test se déroule de manière similaire à l'étape de sélection, les produits ou le véhicule étant en outre administrés à la fin de la séance de deux minutes. * Résultats A titre d'exemple, le tableau suivant montre les effets du produit de l'exemple 3 administré par voie s.c. sous un volume de 1 ml/kg durée des vocalisations ultrasoniques (s) dose moyenne + e.s.m. (n) mg/kg s.c.Exemple 3 0 251 +29 (16) 0.0025 163 + 54 (7) 0.01 144 + 79 (5) 0.04 17 13 (6)* 0.16 0,303 (4)** e.s.m.: erreur standard à la moyenne n: nombre de rats comparaison versus véhicule (test de Dunnett): ' p des vocalisations, ce qui traduit son activité anxiolytique. 3. Test de la nage forcée * Principe -18- Le test de la nage forcée (Porsolt R. et al, Eur. J. Pharmacol., 1978, 47, 379-91) est un test comportemental qui consiste à induire chez le rat un état de "désespoir", en plaçant l'animal naïf pendant quinze minutes dans une enceinte remplie d'eau, d'o il ne peut s'échapper. Pendant les cinq à dix premières minutes, le rat se débat vigoureusement pour finalement adopter une posture immobile pendant la fin de l'essai. Placé le jour suivant dans la même enceinte, I'animal reste immobile pendant la majeure partie du test (durée 5 min). Les antidépresseurs réduisent la durée d'immobilité du rat, lors du test. * Expérimentation L'expérience s'effectue en deux jours, à 24 heures d'intervalle, sur des rats d'un poids moyen de 170 g, stabulés la veille en cages individuelles, avec libre accès à la boisson et à la nourriture. Le premier jour, chaque rat est placé pendant quinze minutes, dans un cylindre en verre (20 cm de diamètre x 40 cm de haut) rempli d'eau maintenue à 25 C, sur une hauteur de cm. Le deuxième jour, I'animal est placé à nouveau dans un cylindre pendant cinq minutes; le temps total (en sec) d'immobilité du rat est mesuré. Le produit ou le solvant est administré à l'animal trente minutes avant le début du test. * Résultats A titre d'exemple et pour illustrer l'activité des produits de l'invention, les effets du produit de l'exemple 3 sont rapportés dans le tableau suivant. produit dose immobilité (sec) mg/kg s.c. moyenne + e.s.m. (n) Témoins (eau distillée) 0 172,2 + 19,87 (8) } 0.04 183,14 + 4,06 (5) } 0.16 170,71 + 23,09 (5) Exemple 3} 0.31 130,33 + 18,67 (5) } 0.63 36,87 + 22,28* (5) } 10.0 _ 0,27 + 0,27* (5) (n) = nombre de rats Le produit de l'exemple 3 réduit de façon dosedépendante la durée d'immobilité de l'animal et présente donc un excellent effet antidépresseur avec une Dls50 = 0,41 mg/kg s.c. 4. Rotations induites par les agonistes dopaminergiques chez des rats avec lésion unilatérale de la Substantia nigra -19 - * Principe L'injection unilatérale de la neurotoxine 6-hydroxy-dopamine (6-OH-DA) dans la Substantia nigra produit une dégénérescence des voies ascendantes nigrostriées, avec hypersensibilité des récepteurs dopaminergiques post-synaptiques du côté lésé. Chez un rat ayant subi une telle lésion, l'administration systémique de produits agonistes directs (apomorphine) induit des rotations contralatérales (du côté opposé à la lésion). Ce test permet de mettre en évidence les propriétés dopaminergiques agonistes de produits à visée thérapeutique dans la maladie de Parkinson. + Méthodes Lésion: la lésion est effectuée sur des rats Wistar mâles de 280 à 330 g anesthésiés au pentobarbital (40-50 mg/kg i.p.) et ayant reçu une dose de 25 mg/kg i.p. de désipramine. L'animal est placé dans un appareil stéréotaxique KOPF, le crâne orienté selon l'Atlas de Pellegrino et Cushman (1979). Un volume de 4 pl d'une solution de 6-OH-DA (2 ag/4l) est injecté lentement au moyen d'un microperfuseur, au niveau de la Substantia nigra gauche, (A = 2,4 mm; L = 2.0 mm; V = 3.1 mm, par rapport au zéro interaural) (U. Ungerstedt, Acta Physiol. Scandi. Suppl., 1971, 367, 69-93) Matériel: I'enregistrement du nombre et du sens des rotations se fait automatiquement sur ordinateur, grâce au système ROTACOUNT (Columbus Co, USA). L'animal est placé dans un cylindre à fond plat, de 30 cm de diamètre et 50 cm de hauteur. Un câble fin, semi-rigide, ceinture l'animal sous les pattes avant et se connecte à la cellule de comptage optique située au dessus du cylindre et reliée à l'ordinateur. Sélection des animaux lésés: un mois après l'induction de la lésion par la 6-OH-DA, les animaux correctement lésés sont sélectionnés selon un critère d'au moins 150 rotations contralatérales effectuées en 1 heure après administration de l'agoniste dopaminergique, apomorphine (0,04 mg/kg, s.c.). Expérimentation: les animaux sont testés une fois par semaine, avec administration des produits de l'invention en alternance avec celle de l'agoniste dopaminergique. L'enregistrement des rotations contralatérales débute dès l'injection de l'agoniste dopaminergique (TO) et dure 1 heure. Chaque animal est son propre contrôle. * Résultats - 20 - A titre d'exemple, le tableau suivant montre les effets du produit de l'exemple 3 administré par voie s.c. dose rotations contralatérales produit mg/kg s.c. moyenne + e.s.m. (n) Contrôle Sérum 0 11,0 + 4,3 (23) Contrôle Apomorphine 0.0 531,0 54,1 (14) } 0.01 84,5 +79,7 (2) Exemple 3} 0.04 223,0 103,5(6) 0.16 336,6 + 85,5 (7) (n) = nombre de rats Le produit de l'exemple 3 est actif dans ce test dès la dose de 0,04 mg/kg. - 21 - REVENDICATIONS 1. Les composés de formule I Trans EA () dans laquelle: * A représente: un radical (Cl-C10)alkyle, (C3- Cl0)alcényle ou (C3-C10)alcynyle, chacun en chaîne droite ou ramifiée et chacun éventuellement substitué par un ou plusieurs radicaux cycloalkyles ayant de 3 à 8 atomes de carbone, ou par un radical aryle choisi parmi les radicaux phényle, thiényle et pyridyle chacun d'eux éventuellement substitué par un ou plusieurs substituants choisis parmi les atomes d'halogène, le radical hydroxy et les radicaux alkyle et alkoxy ayant chacun de 1 à 6 atomes de carbone en chaîne droite ou ramifiée. E représente: O O R O Il Il / Il -CN, -C-CH3, -C-N ou -C-O- R3, R2 dans lesquels: - R1 et R2, identiques ou différents, représentent chacun un atome d'hydrogène ou prennent la signification de A précédemment définie, et - R3 représente un atome d'hydrogène ou un radical alkyle de 1 à 5 atomes de carbone en chaine linéaire ou ramifiée; sous forme racémique ou d'isomères optiques et leurs sels d'addition avec un acide pharmaceutiquement acceptable. 2. Un composé de la revendication 1 qui est la (+) -Trans-3,4,4a,5,6,10bhexahydro-9- carbamoyl-4-propyl-2H-naphto[1,2-b]-1,4-oxazine. -22 - 3. Le procédé de préparation des composés de la revendication 1 caractérisé en ce que: I'on fait réagir un composé trans de formule Il: o') HO N.N.A dans laquelle A a la signification définie dans la revendication 1, - avec de l'anhydride triflique en présence de pyridine pour obtenir un composé trans de formule 1: 0o" F3C002 SO N'A dans laquelle A a la signification précédemment définie, - et l'on fait réagir ce composé: 10. soit avec du cyanure de zinc et du tétrakis (triphénylphosphine)palladium (o) dans le diméthylformamide à chaud, pour obtenir un composé trans de formule la: NCO N.A (la) dans laquelle A a la signification précédemment définie, soit avec du n-butyl vinyl éther dans les conditions de la réaction de Heck pour obtenir un composé trans de formule lb: OO H3 C NA (lb) dans laquelle A a la signification précédemment définie, et - le composé la, précédemment obtenu, est traité par un mélange d'acide chlorhydrique et d'acide acétique au reflux, pour obtenir un composé trans de formule Ic: - 23 - 0--- HOOC N.A A1N) dans laquelle A a la signification précédemment définie, - lequel composé Ic est traité: soit, par un composé de formule IV: Rs-OH (IV) dans laquelle R3 a la signification définie dans la revendication 1, en présence d'acide chlorhydrique, pour obtenir un composé trans de formule Id: O 0") R30 N"A (Id) dans laquelle A et R3 ont les significations précédement définies, soit par un composé de formule V: xR1 HN (V) R2 dans laquelle RI et R2 ont les significations définies dans la revendication 1, en présence de 2-(1H-benzotriazol-1-yl) 1,1,3,3tétraméthyluronium tétrafluoroborate, de triéthylamine et d'une quantité catalytique de 4-diméthylaminopyridine dans le chlorure de méthylène, pour obtenir un composé trans de formule le: o o'" R.; dans laquelle A, R1, et R2, ont les significations précédemment définies. L'ensemble des composés trans de formule la, lb, Ic, Id, et le forme l'ensemble des composés trans de formule I. -24 - 4. Les compositions pharmaceutiques, utilisables dans le traitement de maladies du système nerveux central, contenant comme principe actif un composé selon une quelconque des revendications 1 et 2, avec un ou plusieurs excipients pharmaceutiques appropriés.