FR 2748938 A1 19971128 FR 9606368 A 19960522 UTILISATION DE MOLECULES ANTAGONISTES DE CHEMOKINES POUR LEUR ACTIVITE ANTIVIRALE NOTAMMENT CONTRE UN RETROVIRUS DE TYPE VIH. La présente demande a pour objet l'utilisation de composés antagonistes de molécules de la famille des chemokines ou des antagonistes des produits dérivés de chemokines ayant conservé toutes les propriétés biologiques des chemokines, lesdits composés étant caractérisés en ce qu'ils permettent d'obtenir l'inhibition d'une infection virale ou de ses effets in vitro ou in vivo, lesdits composés présentant à titre préférentiel une activité anti-virale vis-à-vis d'infections dues à des rétrovirus provoquant une immunodéficience chez un hôte, et en particulier chez un patient humain, notamment des rétrovirus de type HIV ou VIH (virus de l'immunodéficience humaine). Les chemokines sont des molécules de la famille des cytokines, qui présentent des propriétés d'activation, notamment de cellules de la famille des leucocytes faisant intervenir notamment des propriétés chemoattractives, des propriétés de mobilisation du calcium par augmentation du calcium intracellulaire et des propriétés de relargage d'enzymes (exocytose). Ces chemokines sont connues pour leur rôle éventuel en tant que médiateurs de l'inflammation. Les chemokines ont été décrites par leur structure par leur affinité pour un ou plusieurs récepteurs et par leurs propriétés biologiques dans une publication de Baggiolini M. et al (Advances in Immunology (1994), vol. 55, pages 97-179). Une publication de Wells T.N.C. et al (Journal of Leukocyte Biology, vol. 59, January 1996, 53-60) décrit la structure tri-dimensionnelle de plusieurs chemokines et leurs récepteurs spécifiques ou non. De façon générale, ces chemokines sont caractérisées par la présence dans leur structure primaire, de résidus cystéine conservés (1 à 4 résidus notamment) sur la base desquels plusieurs sous-familles ont été distinguées selon la position des deux premières cystéines. Ces familles comprennent celles des protéines CXC ou des protéines CC. La présence de ces résidus cystéine induit la formation de ponts disulfure. Parmi ces chemokines, différentes molécules ont fait l'objet d'études spécifiques. A cet égard, on citera la molécule RANTES décrite dans la publication de Schall T.J. et al. (The Journal of Immunology, August 1, 1988, vol. 141, 1018-1025, No. 3). La molécule RANTES (abréviation de Regulated upon Activation, Normal T-Express and presumably Secreted) a été décrite dans cet article, notamment à l'aide de la séquence nucléotidique de son ADN complémentaire et à l'aide de la séquence d'acides aminés de la phase ouverte de lecture. Les propriétés biologiques de RANTES ont été décrites notamment dans l'article de Baggiolini précité. Ces récepteurs, spécifiques ou non, ont été identifiés dans la publication de Wells précitée ou dans les articles auxquels elle se réfère. D'autres chemokines telles que les chemokines MIP (Macrophage Inflammatory Protein) observées, isolées et purifiées à partir de macrophages de souris (WOLPE S.D. et al, J. Ex. Med. (1988), 167-170) ont été décrites du point de vue de leurs propriétés biologiques dans l'article de Baggiolini et al. (1994). Une autre catégorie de chemokines, appelées MCP (Monocyte Chemotactic Protein) a été identifiée à partir de basophiles. Dans les familles MIP et MCP, on connaît notamment les chemokines MIPla, MIP1, MCP1, MCP2 et MCP3. Dans une publication de Cocchi F. et al (Science, 15 Décembre 1995, vol. 270, 1811-1815), les auteurs ont émis l'hypothèse que des molécules telles que RANTES, MlP1a et MlP1ss produites notamment par des lymphocytes T CD8+, pourraient constituer des facteurs suppresseurs de la réplication des isolats primaires du VIH. Ils ont ainsi émis l'hypothèse que les protéines RANTES, MIP1 a et MIP1 ss produites par des lymphocytes T exprimant des récepteurs CD8 pourraient participer au contrôle de l'infection par un rétrovirus VIH en tant que facteur suppresseur de la réplication. Des anticorps obtenus contre les chemokines RANTES ou MlP1a ou MlP1ss ont selon Cocchi et al., la capacité de bloquer partiellement ou totalement, lorsqu'ils sont utilisés conjointement, L'activité anti-HIV des chemokines. L'article de Cocchi et al. précité ne contient pas de données expérimentales sur le rôle et le stade de l'intervention des chemokines dans le contrôle de l'infection par un rétrovirus VIH. Les auteurs de la présente demande se sont intéressés à l'effet que peuvent exercer les chemokines sur la réplication du rétrovirus VIH et après avoir vérifié l'effet anti-viral des molécules telles que RANTES, MIPîcx et MIP1 vis-à-vis de HIV, les inventeurs de la présente demande se sont intéressés au mécanisme biologique permettant l'interférence de chemokines avec la réplication du rétrovirus VIH dans les lymphocytes T. De façon surprenante, les inventeurs ont caractérisé des composés, dépourvus des activités biologiques des chemokines et ayant perdu notamment l'activité chemo-attractive des chemokines vis-à-vis des cellules de type leucocytes, en particulier des lymphocytes ou des monocytes, composés susceptibles néanmoins de jouer un rôle dans le contrôle, voire l'inhibition, des effets d'une infection virale, en particulier d'une infection de cellules par un rétrovirus de type VIH. Ainsi, les inventeurs ont mis en évidence que des antagonistes de chemokines, par exemple des antagonistes de chemokines de la famille CXC ou de la famille CC, notamment de RANTES etlou de MIP etlou de MCP peuvent s'opposer à la réplication d'isolats primaires du rétrovirus VIH dans des lymphocytes du sang périphérique (PBL) normaux. L'invention a donc pour objet un composé antagoniste encore appelé antagoniste d'une ou plusieurs molécules de la famille des chemokines pour l'utilisation pour le traitement ou la prévention d'une infection due à un virus et plus particulièrement à un rétrovirus du type VIH. Dans le cadre de cette définition, le composé antagoniste est utilisé notamment pour la préparation d'un médicament pour la prévention ou le traitement de l'infection due à un rétrovirus de type VIH. Dans le cadre de la présente description, le terme antagoniste, fait référence à un composé dont la présence chez un hôte et notamment chez un patient humain, est susceptible d'affecter l'activité d'une ou plusieurs chemokines tout en ayant la capacité d'empêcher ou d'inhiber une infection virale in vivo ou in vitro; en particulier, un tel antagoniste peut bloquer ou déplacer la liaison d'une ou plusieurs chemokines à un ou plusieurs récepteurs de chemokines, sur des cellules, par exemple, des lymphocytes, des monocytes ou des macrophages, et, donc le cas échéant de façon indirecte, cet antagoniste est susceptible d'affecter les propriétés biologiques d'activation cellulaire de ces chemokines. Les propriétés recherchées ainsi définies de cet antagoniste peuvent être avantageusement vérifiées grâce à un test effectué in vitro sur des lymphocytes PBL normaux stimulés par un mitogène et infectés par des isolats primaires de rétrovirus VIH. Selon la présente demande, on entend par l'expression prévention ou traitement d'une infection due à un rétrovirus de type VIH la capacité du composé antagoniste précité d'intervenir soit sur la réplication virale d'isolats primaires de VIH dans des cellules participant à l'immunité de l'hôte, et en particulier dans des lymphocytes du sang périphérique, par exemple des lymphocytes T-normaux. Cette expression englobe également la prévention et le traitement des infections telles que les infections dites opportunistes ou des tumeurs précédant et"ou accompagnant le développement de la maladie SIDA et de ce fait, définies comme maladies reliées à l'infection par un rétrovirus VIH. Le test effectué in vitro sur des lymphocytes PBL (lymphocytes du sang périphérique) infectés à l'aide de souches primaires de VIH, est une indication pertinente des propriétés thérapeutiques ou prophylactiques recherchées des antagonistes décrits. Le terme VIH comprend les virus et rétrovirus humains ou animaux susceptibles d'induire une immunodéficience, tels que les rétrovirus connus sous les noms de VIH-1 et VIH-2 et notamment les différents isolats caractérisés jusqu'à ce jour, qu'il s'agisse d'isolats primaires ou d'isolats modifiés pour répondre à des contraintes de culture in vitro ou des clones HIV infectieux provenant d'isolats primaires. Les composés antagonistes selon l'invention permettent, dans le cadre du traitement ou de la prévention d'une infection due à un rétrovirus de type VIH, de diminuer la réplication et/ou la dissémination du rétrovirus dans l'organisme de l'hôte infecté et/ou de corriger le déficit immunitaire résultant de cette infection ou ses manifestations. Selon un premier mode de réalisation de l'invention, I'antagoniste est un composé susceptible d'entrer en compétition avec une ou plusieurs chemokines, pour la liaison à un ou plusieurs récepteur(s) cellulaire(s) de cette (ces) dernière(s). Les molécules appartenant à la famille des chemokines sont connues pour avoir au moins pour certaines d'entre elles, la capacité de lier différents récepteurs cellulaires présents sur les cellules dérivées des lignées lymphoïde ou myéloïde, et en particulier plusieurs récepteurs présents sur des cellules de type lymphocytes, monocytes, basophiles, ou éosinophiles. L'antagoniste utilisable dans le cadre de la présente demande, peut selon un premier mode particulier de réalisation de l'invention, être sélectionné pour sa capacité à interférer avec l'interaction normale entre les chemokines et leur(s) récepteur(s) et en particulier à modifier l'accès, par exemple la reconnaissance conformationnelle d'une ou plusieurs chemokines vis-à-vis de leur(s) récepteur(s) ou encore à bloquer la liaison d'une ou plusieurs chemokines avec un ou plusieurs récepteurs cellulaires naturels de ces chemokines. Avantageusement, cet antagoniste se substitue à une ou plusieurs chemokine dans l'activité de liaison à un ou plusieurs récepteurs. En dépit de l'existence d'une multi-spécificité de liaison des chemokines à des récepteurs cellulaires, I'invention a également pour objet selon un autre mode de réalisation particulier, des composés antagonistes sélectionnés pour leur affinité spécifique vis-à-vis d'un récepteur déterminé ou d'un nombre déterminé de récepteurs de chemokines. Selon une variante de réalisation de l'invention, I'antagoniste mis en oeuvre est choisi pour sa capacité à déplacer la liaison d'une ou plusieurs chemokines vis-à-vis d'un ou plusieurs récepteurs cellulaires de ces dernières. Selon un mode de réalisation particulièrement avantageux de l'invention, I'antagoniste a une activité de compétition avec une ou plusieurs chemokines choisies parmi RANTES, MlP1a, MIP1B, MCP1, MCP3. Des parentés de structures ont été constatées entre les différentes chemokines précitées, en particulier entre les chemokines RANTES et MIP, tant au niveau de la séquence d'acides aminés formant la structure primaire de ces chemokines que de leurs structures secondaires ou tridimensionnelle telle qu'établie par la technique de spectroscopie de Résonnance Magnétique Nucléaire (Wells T.N.C. et al, Journal of Leukocyte Biology, vol. 59, Janvier 1996, pages 53-60). Les inventeurs ont constaté que des antagonistes de la molécule RANTES sont par exemple capables de lier les récepteurs de plusieurs chemokines en particulier ceux de RANTES, MCP3 et MCP1. De tels antagonistes présentent des propriétés tout-à-fait intéressantes, du fait de leur capacité à occuper les sites normalement occupés par RANTES, ladite occupation entraînant une activité anti-virale vérifiable notamment in vitro sur des lymphocytes normaux infectés par des isolats primaires de VIH. Un composé antagoniste intéressant dans le cadre de la réalisation de l'invention est par exemple un composé dont la structure est dérivée de la structure d'une chemokine, par exemple d'une chemokine choisie parmi les molécules RANTES, MIP ou MCP définies précédemment. On peut considérer qu'une structure est dérivée de celle d'une chemokine lorsque le composé ayant cette structure est différent par exemple dans sa nature, sa composition, sa conformation, par rapport à la chemokine de référence tout en conservant les propriétés de ladite chemokine pour la réalisation de la fonction d'antagoniste définie cidessus, par exemple la capacité de se lier à un ou plusieurs récepteurs. De façon particulièrement avantageuse, cet antagoniste est en outre caractérisé en ce qu'il est dépourvu des propriétés biologiques de la chemokine ou des chemokines dont il affecte l'activité.A cet égard, I'invention vise des antagonistes de chemokines dépourvus des propriétés de chemoattraction habituellement reconnues aux chemokines et avantageusement à la molécule RANTES. D'autres propriétés biologiques peuvent être atténuées voire supprimées dans lesdits antagonistes. Par exemple, i'antagoniste peut être caractérisé en ce qu'il est dépourvu de la capacité de transduction d'un signal dans les cellules auxquelles il est lié par l'intermédiaire d'un ou plusieurs récepteurs déterminés. En d'autres termes, I'antagoniste est caractérisé en ce qu'il ne transduit aucune activité biologique à travers le ou les récepteurs auxquels il est lié. De façon essentielle, cet antagoniste conserve néanmoins l'activité antivirale reconnue à la molécule RANTES, à tout le moins à un niveau permettant de réduire la réplication ou la dissémination virale ou leur effet et de façon avantageuse, de l'inhiber. Outre la diminution, voire la disparition des propriétés chemoattractives dévolues à la molécule native RANTES, un antagoniste selon l'invention peut également être caractérisé en ce qu'il est dépourvu de la capacité naturelle de la molécule RANTES d'une part à induire la libération ou l'entrée du calcium dans les cellules auxquelles elle est liée par un récepteur et/ou d'autre part, à affecter l'exocytose par relargage d'enzymes à partir de ces cellules. Ainsi, I'invention met avantageusement à disposition des molécules ayant des effets anti-viraux d'une ou plusieurs chemokines qui sont néanmoins dépourvues des effets secondaires des chemokines actives. Un antagoniste intéressant selon l'invention peut en outre être caractérisé en ce qu'il s'agit d'un polypeptide dérivé d'une chemokine, dont la structure comprend au moins un, voire deux ponts disulfure. Ainsi, selon un mode de réalisation préféré de l'invention pour l'utilisation dans le traitement d'une infection due à un rétrovirus VIH, on aura recours à un antagoniste de type polypeptidique, dérivé du polypeptide RANTES répondant à la séquence d'acides aminés représentée à la figure 1, par substitution, addition ou délétion d'au moins un résidu d'acides aminés, ledit antagoniste étant dépourvu des propriétés chemo-attractives des chemokines vis à vis des leucocytes, en particulier des lymphocytes. Le terme polypeptide fait référence à une structure d'acides aminés comprenant de 10 à 100, de préférence de 10 à 70 acides aminés, laquelle structure peut être utilisée sous forme linéaire ou sous forme conformationnelle. A cet égard, I'invention concerne avantageusement des antagonistes ayant une structure correspondant à la structure conférée par la présence de plusieurs et notamment de deux ponts disulfure telle qu'on l'observe dans les cytokines, notamment dans les molécules RANTES, MIP et MCP. Un polypeptide dérivé du polypeptide RANTES, utilisable dans le cadre de l'invention est par exemple obtenu par délétion de tout ou partie de sa séquence N-terminale et en particulier par délétion de tout ou partie de la séquence comprise entre les résidus d'acides aminés 1 et 15 ou entre les acides aminés 1 et 9 ou 1 et 8 (y compris les résidus extrêmes) de la séquence d'acides aminés représentée à la figure 1 C. Selon un mode de réalisation préféré de l'invention, I'antagoniste utilisable pour le traitement ou la prévention d'une infection due à un rétrovirus VIH est un polypeptide répondant à la séquence d'acides aminés suivante (appelée RANTES 9-68): PCC FAYIARP LPRAH I KEYFYTSGKCSN PAWFVTRKNRQVCANPEKiKANV REYINSLEMS ou la séquence R8-68suivante, TPCCFAYIARPLPRAH IKEYFYTSGKCSN PAVVFVTRKN RQVCANPEKKW VREYINSLEMS La suppression de ces résidus diminue les effets de signalisation à travers les récepteurs de chemokines occupés, tout en gardant l'activité antivirale de cet antagoniste. Les séquences d'acides aminés sont identifiées par référence au code à une lettre habituellement utilisé. Cet antagoniste peut être utilisé sous la forme de sa structure primaire ou sous une forme tri-dimensionnelle par exemple sous une forme reproduisant les caractéristiques essentielles de la structure conformationnelle de la molécule RANTES à tout le moins de la partie de cette molécule impliquée dans la liaison à son ou ses récepteur(s) cellulaire(s). Cette structure a été rapportée dans l'article de Wells T.N.C. précité et de Chung C.W. (Biochemistry 34, 9307-9314). Alternativement ou au contraire selon une caractéristique supplémentaire, I'antagoniste utilisable dans le cadre de l'invention est un polypeptide dérivé du polypeptide RANTES lequel est représenté par sa séquence d'acides aminés à la figure 1C, par délétion de tout ou partie de sa séquence C-terminale comprise entre les résidus d'acides aminés 50 et 68, de préférence 60 et 68 de la séquence représentée à la figure 1 C. Un antagoniste dérivé du polypeptide RANTES par substitution ou par mutation peut alternativement être caractérisé en ce que environ 5% à environ 10% des résidus d'acides aminés, à l'exception des résidus cystéine impliqués dans la formation de ponts disulfure, sont remplacés. Les résidus d'acides aminés substitués peuvent l'être par des acides aminés neutres, ou constituant une substitution conservatrice ou choisis les cas échéant en tenant compte de l'encombrement stérique. A titre d'exemple des résidus lysine peuvent être remplacés par des résidus isoleucine, leucine ou valine. A titre d'exemple, de tels antagonistes utilisables pour la réalisation de l'invention répondent à l'une des séquences d'acides aminés suivantes MPCCFAYIARPLPRAHIKEYFYTSGKCSNPAVVFVTRKNRQVCANPEKKW VREYINSLEMS PCC FAYIARP LPRAH I KEYFYTS G KC S N PAWFVTRKNRQVCANPELLWV REYINSLEMS PCC FAYIARP LPRAH I KEYFYTSGKCSNPAVVFVTRKNRQVCANPQLLWV RQYINSLQMS PCC FAYIARPLPRAH I KEYFYTSGKCSNPAVVFVTRKNRQVCANPQLLWV AQYINSLQMS MTPCCFAYIARPLPRAHIKEYFYTSGKCSNPAVVFVTRKNRQVCANPEKK WVREYINSLEMS TPCCFAYIARPLPRAH IKEYFYTSGKCSNPAVVFV7-RKNRQVCANPELLW VREYINSLEMS TPCCFAYIARPLPRAH IKEYFYTSGKCSN PAVVFV7-RKNRQVCANPQLLW VRQYINSLQMS TPCCFAYIARPLPRAH IKEYFYTSGKCSNPAVVFVTRKNFiQVCANPQLLW VAQYINSLQMS Selon une variante de l'invention, I'antagoniste mis en oeuvre est caractérisé en ce qu'il s'agit d'une molécule RANTES dont l'extrémité Nterminale a été allongée par addition d'au moins un résidu d'acide aminé ou alternativement d'une molécule RANTES dont les extrémités N- et Cterminales ou dont les séquences internes à ces régions N- ou Cterminales ont été allongées par addition d'un ou plusieurs résidus d'acides aminés dans des conditions permettant d'obtenir l'effet antagoniste recherché. L'invention a également pour objet une séquence de nucléotides comprenant une séquence codant pour un polypeptide dérivé du polypeptide RANTES répondant à la séquence d'acides aminés représentée à la figure 1, par délétion de tout ou partie de la séquence Nterminale de ce dernier. Selon un mode de réalisation avantageux de l'invention, cette séquence code pour un polypeptide antagoniste tel qu'il a été défini dans les pages précédentes. De façon préférée, la séquence de nucléotides est caractérisée en ce qu'elle répond à l'enchaînement suivant: CCCTGCTGCTT TGCCTACATT GCCCGCCCAC TGCCCCGTGC CCACATCAAG GAGTATTTCT ACACCAGTGG CAAGTGCTCC AACC CAGCAG TCGTCTTTGT CACCCGAAAG AACCGCCAAG TGTGTGCCAA CCCAGAGAAG AAATGGGTTC GGGAGTACAT CAACTCTTTG GAGATGAGCT AG ou à l'enchainement suivant: ACACCCTGCTGCTT TGCCTACATT GCCCGCCCAC TGCCCCGTGC CCACATCAAG GAGTATTTCT ACACCAGTGG CAAGTGCTCC AACCCAGCAG TCGTCTTTGT CACCCGAAAG AACCGCCAAG TGTGTGCCAA CCCAGAGAAG AAATGGGTTC GGGAGTACAT CAACTCTTTG GAGATGAGCT AG Une séquence de nucléotides selon l'invention peut le cas échéant comprendre également des séquences exogènes, notamment des séquences de régulation et/ou d'activation capables de contrôler etlou de réguler l'expression de la séquence codant pour un antagoniste selon l'invention dans une cellule hôte, in vitro ou in vivo. Elle peut également être recombinée avec une autre séquence codante susceptible d'exprimer dans un hôte cellulaire un polypeptide d'intérêt, notamment dans le but de traiter ou de prévenir une infection due à un rétrovirus VIH ou avec une séquence codante pouvant remplir la fonction de molécule porteuse. Par exemple, une séquence de nucléotides de l'invention peut être fusionnée avec tout ou partie d'une séquence codant pour la p-galactosidase. Dans ce cas, la séquence codante de la ss- galactosidase contient avant le premier codon correspondant au premier acide aminé proline de la molécule R9-68 ou R8-68, une séquence peptidique du type X-glycyl-L-propyl, reconnue spécifiquement par une collagénase , permettant ainsi la réalisation d'une coupure spécifique après le résidu glycine du polypeptide formé, libérant l'antagoniste. Cette technique est décrite dans la demande de brevet européen 0115974. Selon un autre mode de réalisation de l'invention, la séquence de nucléotides est caractérisée en ce qu'elle est insérée dans un vecteur d'expression ou adsorbée sur un support susceptible d'être internalisé dans une cellule eucaryote ou encore dans une bactérie capable d'entrer dans des cellules eucaryotes telle que Shigella selon le procédé décrit par Courvalin P. et al. (C.R. Acad. Sci. Paris, 1995, 318:1207-12). Ce vecteur est avantageusement choisi pour permettre l'expression in vitro dans un hôte cellulaire, d'un antagoniste tel que défini précédemment ou pour permettre l'expression in vivo chez un hôte auquel il est administré, notamment chez un patient infecté par un rétrovirus VIH, à des fins d'expression transitoire ou continue d'un antagoniste tel que défini dans les pages qui précèdent. Les séquences de nucléotides ainsi définies dans le cadre de l'invention sont par exemple utilisables dans le cadre d'un protocole de thérapie génique visant à prévenir ou à traiter une infection due à un rétrovirus VIH. A cet égard, on pourra avoir recours à des vecteurs utilisables dans le cadre de ces thérapies, tels que ceux décrits dans les demandes de brevet internationales publiées sous les numéros WO 95/14785 et WO 94/24298. Ces séquences de nucléotides peuvent aussi être administrées en faisant appel aux techniques décrites dans le brevet FR 2711670 ou dans la demande de brevet internationale WO 90/11092, pour l'expression in vivo. De façon générale, et compte tenu des caractéristiques particulières de l'infection par un rétrovirus VIH, on peut avoir recours à des vecteurs permettant l'administration ou le relargage contrôlé voire retardé de ces séquences nucléotidiques ou de leur produit d'expression chez l'hôte traité, afin d'obtenir un effet antiviral continu ou itératif à tout le moins sur une période suffisante pour diminuer voire inhiber l'infection par le rétrovirus ou ses effets. A cet égard, des techniques telles que celles faisant appel à l'utilisation d'un gel de phosphate de calcium peuvent être utilisées pour obtenir un relargage avec effet retard d'un produit actif. De telles techniques sont par exemple décrites dans le brevet français 2 543 439. Des séquences reconnues par des protéases cellulaires ou extracellulaires peuvent être utilisées pour permettre la production de formes matures des molécules antagonistes de RANTES à partir de ces vecteurs. La forme mature de la protéine RANTES est en effet produite après cleavage d'une séquence de 23 acides aminés situés en amont du premier résidu (sérine) de la forme active de la protéine. Les taux sériques à atteindre chez les patients traités seraient de l'ordre de 1 à 100 nM. L'invention a également pour objet un polypeptide correspondant au produit d'expression dans une cellule hôte, par exemple une cellule bactérienne ou une cellule eucaryote, notamment une cellule de levure, une cellule de mammifère par exemple CHO d'une séquence de nucléotides telle que définie précédemment. Un polypeptide particulier est un polypeptide caractérisé en ce qu'il répond à l'une des séquences d'acides aminés suivantes: MPCCFAYIARPLPRAHIKEYFYTSGKCSNPAWFVTRKNRQVCANPEKKW VREYINSLEMS PCC FAYIARP LPRAH I KEYFYTSG KCSN PAWFVTRKNRQVCANPELLWV REYINSLEMS PCCFAYIARPLPRAHI KEYFYTSGKCSNPAVVFVTRKNRQVCANPQLLWV RQYINSLQMS PCCFAYIARPLPRAH IKEYFTTSGKCSN PAVVFVTRKNRQVCANPQLLWV AQYINSLQMS MTPCCFAYIARPLPRAH IKEYFYTSGKCSN PAVVFV7-RKNRQVCANPEKK WVREYINSLEMS TPCCFAYIARPLPRAH IKEYFYTSGKCSN PAVVFVTRKNRQVCANPELLW VREYINSLEMS TPCCFAYIARPLPRAH IKEYFYTSGKCSN PAVVFVTRKN RQVCANPQLLW VRQYINSLQMS TPCCFAYIARPLPRAH IKEYFYTSGKCSN PAVVFVTRKNRQVCANPQLLW VAQYINSLQMS Un autre polypeptide antagoniste utilisable dans le cadre de l'invention est par exemple un polypeptide RANTES modifié par addition d'un ou plusieurs résidus d'acides aminés en amont de son extrémité Nterminale. Par exemple, L'addition d'une méthionine en amont du premier résidu (sérine) de la forme mature de RANTES présenterait l'avantage d'inhiber la capacité chemoattractive de la chemokine tout en conservant sa capacité d'inhibition de l'infection virale, grâce à sa capacité non modifiée à se lier spécifiquement à son récepteur. La production de molécules modifiées de RANTES ou d'autres polypeptides antagonistes peut être réalisée par synthèse chimique ou par recombinaison et expression dans une cellule procaryote ou eucaryote par exemple dans la levure ou chez E. coli. Selon un autre mode de réalisation avantageux de l'invention, le polypeptide est un antagoniste d'une ou plusieurs chemokines choisies parmi RANTES, MIP ou MCP, caractérisé en ce qu'il est dérivé du polypeptide RANTES répondant à la séquence d'acides aminés représentée à la figure 1, par substitution, addition ou délétion d'au moins un résidu d'acides aminés, ledit antagoniste étant dépourvu des propriétés chemoattractives des chemokînes par exemple vis-à-vis des leucocytes, en particulier des lymphocytes, ledit polypeptide étant sous forme d'un polypeptide de fusion, capable de lier le(les) récepteurs cellulaires de RANTES et/ou MIP et/ou MCP. Les polypeptides de l'invention peuvent être préparés par génie génétique ou par synthèse chimique par exemple sur un appareil (Applied Biosystems) ou par synthèse sur phase solide décrite par Merrifiel, par exemple selon la technique décrite dans la demande WO 95/09868. L'invention vise également une composition caractérisée en ce qu'elle comprend pour l'administration séparée ou simultanée un composé antagoniste d'une ou plusieurs molécules de la famille des chemokines telles que définies précédemment, et un ou plusieurs agents actifs susceptibles d'être utilisés dans le traitement d'une infection par un rétrovirus VIH, par exemple un agent utilisable en chimiothérapie tel qu'un composé anti-transcriptase inverse ou anti-protéase virale ou un composé tel qu'un antagoniste du récepteur CD4 présent sur des lymphocytes de patients infectés par un rétrovirus VIH ou encore un composé utilisable en immunothérapie, par exemple une cytokine et notamment l'interleukine 2. Le cas échéant, ladite composition comprend, outre le composé antagoniste d'une ou plusieurs chemokines et une ou plusieurs substances actives en chimiothérapie antivirale,et/ou un agent de traitement des infections opportunistes se développant lors de l'infection par un rétrovirus VIH ou lors de l'évolution de l'infection in vivo. Les produits définis dans l'invention, qu'il s'agisse des antagonistes ou des séquences de nucléotides codant pour de tels antagonistes, le cas échéant en combinaison avec d'autres éléments, sont utilisables pour le traitement de patients à tous les stades de l'infection par un rétrovirus de type VIH et notamment examinant l'évolution du nombre de lymphocytes porteurs de récepteurs CD4, ainsi que le statut immunologique et inflammatoire du patient. D'autres caractéristiques et avantages de l'invention apparaîtront dans les exemples et la figure qui suivent. Figure 1: Séquence de nucléotides et d'acides aminés de RANTES. A: Séquence de cDNA comprenant la séquence codante B: Séquence codante de la protéine RANTES mature C: Séquence d'acides aminés de RANTES. Figure 2: : Séquence de nucléotides et d'acides aminés des polypeptides R9-68 et R8-68 et de polypeptides substitués. A: Séquence codante de R9-68 et de R8-68 B: Séquence des polypeptides R9-68 et R8-68 C: (a) (b) (c) Séquence des polypeptides R9-68 et R8-68 substitués dans la partie C-terminale. EXEMPLES Evaluation de l'activité antivirale de l'antagoniste RANTES 9-68 Un antagoniste de la chemokine RANTES a été défini et obtenu sous la forme d'un polypeptide tronqué dont la séquence d'acides aminés correspond aux résidus d'acides aminés 9 à 68 de la séquence d'acides aminés de la molécule RANTES telle que définie à la figure 1. L'antagoniste RANTES 9-68 a été produit en utilisant la technique décrite dans la publication de Gong JH et al (J B C vol 271 N18, issue of may 3, 1996 p 10521-10527). II a été utilisé à des concentrations variables de 1000 nM à 10 nMet a été ajouté à des cultures cellulaires après infection par différents isolats de VIH. A cet effet, un clone d'un isolat primaire obtenu à partir du fluide cérébrospinal d'un patient atteint de SIDA (désigné par VIH JR-CSF Koganagi Y et al Science 236: 819, 1987 et Cann AJ et al, J Virol 64: 4735, 1990) a été utilisé ainsi qu'un clone PYU2 correspondant à une souche primaire de VIH ayant un tropisme pour les lymphocytes T et les monocytes et isolé à partir du cerveau (Li et al, J. Virol., 1992, vol 666587). Pour obtenir le clone JR-CSF, 'ADN proviral a été transfecté dans des cellules COS7 et le surnageant obtenu après trois jours de la culture transfectée contenant les particules infectieuses a été utilisé pour infecter des PBL. La capacité antivirale de R9-68 mise en évidence dans des cellules infectées par HIV pYU2 et HIV JR-CSF était similaire à celle de MlP1a. En effet, des niveaux de suppression de la réplication virale supèrieurs ou égaux à 95% des cultures contrôles infectées ont été obtenus à la concentration de 10nM, la plus faible concentration de MlP1a à induire un tel effet suppresseur sur la réplication de HIV-JR-CSF ou HIV-pYU2 Les propriétés antivirales de l'antagoniste R968 ont été testées en déterminant la capacité de cet antagoniste à bloquer la réplication du virus VIH. La capacité d'une molécule à bloquer la réplication du virus VIH a pu être testée en utilisant la technique mettant en oeuvre des leucocytes isolés sur un gradient de Ficoll à partir de donneurs sains, lesquels leucocytes ont été infectés in vitro avec des isolats viraux primaires, incapables de se répliquer dans des lignées cellulaires transformées. A cet égard, des cellules de six donneurs différents, le plus souvent des blastes induits par un traitement à la phytohémaglutinine (PHA) pendant 48 à 72 heures ont été infectés pendant 2 ou 3 heures avec les isolats de VIH. La quantité d'inoculum viral a été estimée par quantification de la protéine GAG P24 et s'est avérée être comprise entre 150 à 5000 picogrammes pour 10 000 000 de cellules. Après des lavages pour éliminer les particules virales résiduelles, les cellules ont été cultivées sur des microplaques de 96 puits (2 x 105/200 microlitres) en présence des molécules testées purifiées dans un milieu de culture enrichi en interleukine 2. Les surnageants de culture ont été collectés périodiquement et les cultures cellulaires ont été repiquées avec des milieux frais et les molécules testées. Dans certains cas, les blastes traités avec la PHA ont également été ajoutés pour apporter à la culture infectée des cellules fraîches servant de cible pour VIH. La réplication virale a été mesurée en utilisant le kit ELISA P24 (Dupont de Nemours) (seuil de détection: 3 pglml). Ainsi, pour un des donneurs les cellules infectées par pYU2 et traitées avec R9-68 à la concentration de 1000nM ont produit 7 pg/ml de protéine p24 au jour 11 (76 et 24 pg/ml aux jours 6 et 8 respectivement). La protéine p24 n'a pas été détectée dans les cultures de ce même donneur infectées par JR-CSF en présence de R968 au jour 11 (62 et 15 pg/ml ont été détectés aux jours 6 et 8 respectivement). Des cultures contrôles infectées par pYU2 et JR-CSF mais non traitées par R968 ont montré une réplication virale intense qui a généré 7 ng/ml et 113 ng/ml de protéine P24 au jour 11 respectivement. Au contraire de R968, I'antagoniste AAR-IL8 (1000 nM de la protéine IL8 était dépourvu d'effet antiviral. Pour approfondir la connaissance des mécanismes d'interférence dans la réplication du VIH, induits par R9-68, des expériences visant l'analyse de l'internalisation de particules infectieuses et la rétrotranscription de L'ART viral génomique en ADN proviral ont été réalisées. Après infection par la souche JR-CSF de cellules mononuclées du sang activées par la PHA, en présence ou en l'absence de 100nM de R968, des extractions d'ADN ont été pratiquées 3h post-infection, ou d'ADN 20h post-infection. Les cultures infectées en présence de R968 ont été maintenues en présence de la molécule jusqu'à extraction de L'ART ou de l'ADN. Par des techniques d'amplification par PCR soit du RNA génomique rétrotranscrit in vitro, soit de l'ADN proviral, une légère diminution de l'accumulation de RNA génomique viral intracellulaire a été mise en évidence dans les cellules traitées par R9-68 par rapport aux contrôles de cellules infectées mais non traitées. En revanche l'analyse de I'ADN proviral a révélé une profonde diminution du signal spécifique dans les cellules infectées en présence de R9-68. La spécificité du signal obtenu de l'ADN proviral était démontrée par son abolition dans des cellules infectées et traitées par l'inhibiteur de la réverse transcriptase virale, 3'azido-3'deoxythimidine (ait). Des résultats comparables ont été obtenus avec RANTES dans des expériences réalisées en parallèle avec celles cidessus décrites. Ces résultats indiquent que l'interférence de R9-68 et aussi celle de RANTES, dans la réplication de l'isolat primaire HIV-JR-CSF aurait lieu précocément mais de préférence après internalisation du virus. Des données similaires concernant l'activité antivirale des chemokines RANTES et MIPla ou de l'antagoniste R968 ont été obtenues lorsque des blastes traités avec la PHA provenant d'un autre donneur ont été infectés avec l'isolant JR-CSF ayant subi deux semaines de passage dans des cultures de PBL traitées avec l'lL2. Dans tous les cas la viabilité des cellules traitées avec R968 ou avec RANTES était comparable à celle des cultures contrôles infectées mais non traitées Les méthodes de mesure ont ét faite en comparaison des thymidines tritiées ou du contage direct du nombre de cellules à la fin des périodes de culture. REVENDICATIONS 1. Utilisation d'un composé antagoniste (appelé antagoniste ) d'une ou plusieurs molécules de la famille des chemokines, pour la préparation d'un médicament pour la prévention ou le traitement d'une infection virale. 2. utilisation selon la revendication 1, caractérisée en ce que l'infection est due à un rétrovirus de type VIH. 3. Utilisation selon la revendication 1 ou la revendication 2, caractérisée en ce que l'antagoniste est un composé ayant une activité de compétition avec une ou plusieurs chemokines, pour la liaison à un ou plusieurs récepteur(s) cellulaire(s) de cette (ces) dernière(s) ou ayant une activité de blocage de l'accès de la (des) chemokine(s) audit (auxdits) récepteur(s). 4. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisée en ce que l'antagoniste déplace la liaison d'une ou plusieurs chemokine(s) vis à vis d'un ou plusieurs récepteur(s) cellulaire(s) de cette (ces) dernières. 5. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisée en ce que l'antagoniste a une activité de compétition avec les chemokines RANTES et/ou MIP1oc et/ou MlP1ss et/ou MCP1 et/ou MCP3 ou une activité de blocage de l'accès d'une ou plusieurs de ces chemokines à leur(s) récepteur(s) cellulaire(s). 6. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisée en ce que l'antagoniste est un composé dont la structure est dérivée de la structure d'une chemokine. 7. Utilisation selon la revendication 6, caractérisée en ce que la chemokine appartient à la famille des chemokines de type CC. 8. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 7, caractérisée en ce que l'antagoniste est un composé dépourvu des propriétés chemoattractives de la (des) chemokine(s) vis-à-vis des leucocytes, en particulier des lymphocytes. 9. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 7, caractérisée en ce que l'antagoniste est dépourvu des propriétés biologiques essentielles de la (des) chemokines, en particulier est dépourvu de la capacité de transduction de signal à partir d'un ou plusieurs récepteurs. 10. Utilisation selon la revendication 7, caractérisée en ce que l'antagoniste est un polypeptide dérivé d'une chemokine, dont la structure comprend au moins un, voire deux ponts disulfure. 11. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 10, caractérisée en ce que l'antagoniste est un polypeptide dérivé du polypeptide RANTES répondant à la séquence d'acides aminés représentée à la figure 1, par substitution, addition ou délétion d'au moins un résidu d'acides aminés, ledit antagoniste étant dépourvu des propriétés chemoattractives de chemokines vis à vis des leucocytes, en particulier des lymphocytes et étant capable de lier un ou plusieurs récepteur(s) de chemokines. 12. Utilisation selon la revendication 11, caractérisée en ce que l'antagoniste est un polypeptide dérivé du polypeptide RANTES répondant à la séquence d'acides aminés représentée à la figure 1, par délétion de tout ou partie de sa séquence N-terminale comprise entre les résidus d'acides aminés 1 et 15 de la séquence représentée à la figure 1. 13. Utilisation selon la revendication 11, caractérisée en ce que l'antagoniste est un polypeptide répondant à l'une des séquences d'acides aminés suivantes: PCCFAYlARPLPRAH IKEYFYTSGKCSNPAVVFVTRKNROVCANPELLWV REYINSLEMS TPCCFAYIARPLPRAH I KEYFYTSG KCSNPAVVFVTRKN RQVCANPELLW VREYINSLEMS MPCCFAYIARPLPRAH I KEYFYTSG KCSN PAVVFVTRKNRQVCANPEKKW VREYINSLEMS MTPCCFAYIARPLPRAH I KEYFYTSGKCSNPAVVFVTRKNRQVCANPEKK WVREYINSLEMS 14. Utilisation selon la revendication 11, caractérisée en ce que l'antagoniste est un polypeptide comprenant la séquence d'acides aminés R9-68 modifiée en position N-terminale par l'addition d'un résidu Glycine et de tout ou partie de la séquence d'acides aminés de la ss-galactosidase. 15. Utilisation selon la revendication 11, caractérisée en ce que l'antagoniste est un polypeptide dérivé du polypeptide RANTES répondant à la séquence d'acides aminés représentée à la figure 1, par délétion de tout ou partie de sa séquence C-terminale comprise entre les résidus d'acides aminés 50 et 68, de préférence 60 et 68 de la séquence représentée à la figure 1. 16. Utilisation selon la revendication 11, caractérisée en ce que l'antagoniste est un polypeptide dérivé du polypeptide RANTES répondant à la séquence d'acides aminés représentée à la figure 1, par délétion de tout ou partie de sa séquence N-terminale comprise entre les résidus d'acides aminés 1 et 8 et de tout ou partie de sa séquence C-terminale comprise entre les résidus d'acides aminés 50 et 68, de préférence 60 et 68 de la séquence représentée à la figure 1. 17. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 11 à 16, caractérisée en ce que l'antagoniste est un dérivé du polypeptide RANTES répondant à la séquence d'acides aminés représentée à la figure 1, comprenant la substitution ou la mutation d'environ 5% à environ 10% des résidus d'acides aminés à l'exception des résidus cystéine conservés impliqués dans la formation de ponts disulfure. 18. Utilisation selon la revendication 11, caractérisée en ce que l'antagoniste est un polypeptide dérivé du polypeptide RANTES répondant à la séquence d'acides aminés représentée à la figure 1, par délétion de tout ou partie de sa séquence N-terminale comprise entre les résidus d'acides aminés 1 et 8 et de tout ou partie de sa séquence C-terminale comprise entre les résidus d'acides aminés 50 et 68, de préférence 60 et 68 de la séquence représentée à la figure 1, ledit polypeptide étant en outre modifié par rapport au polypeptide RANTES par substitution d'au moins un résidu d'acide aminé. 19. Utilisation selon la revendication 17, caractérisée en ce que l'antagoniste répond à l'une des séquences d'acides aminés suivantes: PCCFAYIARPLPRAH IKEYFYTSGKCSN PAVVFVTRKN RQVCANPELLWV REYINSLEMS PCCFAYIARPLPRAH IKEYFYTSGKCSN PAVVFVTRKN RQVCANPQLLWV RQYINSLQMS PCCFAYIARPLPRAH IKEYFYTSGKCSN PAVVFVTRKN RQVCANPQLLWV AQYINSLQMS TPCCFAYIARPLPRAHIKEYFYTSGKCSNPAWFVTRKNRQVCANPELLW VREYINSLEMS TPCCFAYIARPLPRAH IKEYFYTSGKCSNPAVVFVTRKNRQVCANPQLLW VRQYINSLQMS TPCCFAYIARPLPRAH IKEYFYTSGKCSN PAVVFVTRKNRQVCANPQLLW VAQYINSLQMS 20. Séquence de nucléotides comprenant une séquence codant pour un polypeptide dérivé du polypeptide RANTES répondant à la séquence d'acides aminés représentée à la figure 1, par délétion de tout ou partie de sa séquence N-terminale, par exemple par délétion des nucléotides codant pour les acides aminés en position 1 à 8 de la séquence du susdit polypeptide RANTES. 21. Séquence de nucléotides selon la revendication 20, caractérisée en ce qu'elle code pour un polypeptide antagoniste selon l'une quelconque des revendications 11 à 19. 22. Séquence de nucléotides selon l'une quelconque des revendications 20 ou 21, caractérisée en ce qu'elle répond à l'un des enchaînements suivants: CCCTGCTGCTT TGCCTACATT GCCCGCCCAC TGCCCCGTGC CCACATCAAG GAGTATTTCT ACACCAGTGG CAAGTGCTCC AACCCAGCAG TCGTCTTTGT CACCCGAAAG AACCGCCAAG TGTGTGCCAA CCCAGAGAAG AAATGGGTTC GGGAGTACAT CAACTCTTTG GAGATGAGCT AG ACACCCTGCTGCTT TGCCTACATT GCCCGCCCAC TGCCCCGTGC C CACATCAAG GAGTATTTCT ACACCAGTGG CAAGTGCTCC AACCCAGCAG TCGTCTTTGT CACCCGAAAG AACCGCCAAG TGTGTGC CAA CC CAGAGAAG AAATGGGTTC GGGAGTACAT CAACTCTTTG GAGATGAGCT AG 23. Séquence de nucléotides selon l'une quelconque des revendications 20 à 22, caractérisée en ce qu'elle est insérée dans un vecteur d'expression. 24. Séquence de nucléotides selon la revendication 23, caractérisée en ce que le vecteur d'expression est susceptible d'être administré chez un patient humain. 25. Utilisation d'une séquence de nucléotides selon l'une quelconque des revendications 20 à 22 pour la préparation d'un médicament pour le traitement d'une infection virale. 26. Utilisation selon la revendication 25, caractérisée en ce que l'infection est due à un rétrovirus de type VIH. 27. Utilisation d'une séquence de nucléotides comprenant une séquence codant pour un polypeptide dérivé du polypeptide RANTES répondant à la séquence d'acides aminés est représentée à la figure 1, par délétion de tout ou partie de sa séquence N-terminale pour la préparation d'un médicament pour le traitement d'une infection due à un rétrovirus de type VIH. 28. Polypeptide caractérisé en ce qu'il s'agit du produit d'expression dans une cellule hôte, d'une séquence de nucléotides selon l'une quelconque des revendications 20 à 22. 29. Polypeptide caractérisé en ce qu'il répond à l'une des séquences d'acides aminés suivantes: MPCCFAYIARPLPRAH IKEYFYTSGKCSN PAVVFVTRKN RQVCANPEKKW VREYINSLEMS PCC FAYIARP LPRAH I KEYFYTSGKCSN PAWFVTRKN RQVCAN PELLWV REYINSLEMS PCCFAYIARPLPRAH I KEYFYTSG KCS N PAWFVTRKN RQVCAN PQLLWV RQYINSLQMS PCC FAYIARPLP RAH I KEYFYTSG KC S N PAVVFVTRKN RQVCANPOLLWV AQYINSLQMS MTPCCFAYIARPLPRAHI KEYFYTSGKCSNPAVVFVTRKNRQVCANPEKK WVREYINSLEMS TPCCFAYIARPLPRAH IKEYFYTSGKCSN PAVVFVRKNRQVCANPELLW VREYINSLEMS TPCC FAYIARP LPRAH I KEYFYTSG KCSN PAWFVTRKNRQVCANPQLLW VRQYINSLQMS TPCCFAYIARPLPRAHI KEYFYTSG KCSNPAVVFVTRKNRQVCANPQLLW VAQYINSLQMS 30. Polypeptide antagoniste d'une ou plusieurs chemokines choisies parmi RANTES, MIP ou MCP, caractérisé en ce qu'il est dérivé du polypeptide RANTES répondant à la séquence d'acides aminés représentée à la figure 1, par substitution, addition ou délétion d'au moins un résidu d'acides aminés, ledit antagoniste étant dépourvu des propriétés chemo-attractives des chemokines vis à vis des leucocytes, en particulier des lymphocytes, ledit polypeptide étant sous forme d'un polypeptide de fusion, capable de lier le(les) récepteurs cellulaires de RANTES et/ou MIP et/ou MCP. 31. Composition caractérisée en ce qu'elle comprend, pour l'administration séparée ou simultanée, un composé antagoniste d'une ou plusieurs molécules de la famille des chemokines tel que défini dans l'une quelconque des revendications 1 à 19, et un agent actif dans le traitement ou la prévention d'une infection due à un rétrovirus VIH choisi parmi les composés ayant une activité anti-transcriptase inverse, ou anti-protéase virale ou une activité antagoniste vis-à-vis du récepteur CD4 présent sur des lymphocytes infectés par un rétrovirus de type VIH, ou un composé actif en immunothérapie, ou un composé actif spécifiquement contre une ou plusieurs infections opportunistes associées à la présence du rétrovirus VIH chez un patient. 32. Composition selon la revendication 31 ou séquence de nucléotides selon l'une quelconque des revendications 20 à 24 ou polypeptide selon l'une quelconque des revendications 28 à 30, caractérisés en ce qu'elle(il) est formulé(e) pour être libéré(e) avec un effet retard chez un patient auquel il est administré.