FR 2731229 A1 19960906 FR 9502430 A 19950302 THERAPIE GENIOUE DE L'ATHEROSCLEROSE PAR PRODUCTION DE HDL PAR LES LIGNEES MONOCYTAIRES La présente invention concerne des cellules des lignées monocytaires modifiées génétiquement par insertion d'un gène dont l'expression permet de réguler les niveaux plasmatiques d'apolipoprotéines. La présente invention concerne également des compositions pharmaceutiques comprenant lesdites cellules, et leur utilisation pour la prévention ou le traitement des pathologies liées aux dyslipoprotéinémies, qui sont connues pour leur conséquences graves au niveau cardiovasculaire et neurologique. Les dyslipoprotéinémies sont des désordres du métabolisme des lipoprotéines responsables du transport dans le sang et les fluides périphériques de lipides comme le cholestérol et les triglycérides. Elles conduisent à des pathologies importantes, liées respectivement à l'hypercholestérolémie ou l'hypertriglycéridémie, telles que notamment l'athérosclérose. L'athérosclérose est une maladie complexe, polygénique, qui est définie sur le plan histologique par des dépôts (plaques lipidiques ou fibrolipidiques) de lipides et d'autres dérivés sanguins dans la paroi des grosses artères (aorte, artères coronaires, carotide). Ces plaques, plus ou moins calcifiées selon l'avancement du processus, peuvent être jumelées à des lésions et sont liées à l'accumulation dans les artères de dépots graisseux constitués essentiellement d'esters de cholestérol.Ces plaques s'accompagnent d'un épaississement de la paroi artérielle, avec hypertrophie du muscle lisse, apparition de cellules spumeuses et accumulation de tissu fibreux. La plaque athéromateuse est très nettement en relief sur la paroi, ce qui lui confère un caractère sténosant responsable des occlusions vasculaires par athérome, thrombose ou embolie qui surviennent chez les patients les plus atteints. Les hypercholestérolémies peuvent donc conduire à des pathologies cardio-vasculaires très graves telles que l'infarctus, la mort subite, la décompensation cardiaque, les accidents cérébro-vasculaires, etc. Il est donc particulièrement important de pouvoir disposer de traitements permettant de diminuer dans certaines situations pathologiques les taux de cholestérol plasmatique voire de stimuler l'efflux de cholestérol (transport inverse du cholestérol) au niveau des tissus périphériques afin de décharger les cellules ayant accumulé du cholestérol dans le contexte de la formation d'une plaque d'athérome. Une première approche pour le traitement de ces pathologies a été décrite dans la demande W094/25073. Cette approche repose sur le transfert direct de gènes capables de réguler les niveaux plasmatiques d'apolipoprotéines au moyen d'un adénovirus recombinant. La présente invention constitue une nouvelle approche thérapeutique pour le traitement de l'athérosclérose et autres pathologies liées aux dyslipoprotéinémies. Cette approche est basée sur la thérapie cellulaire, et comprend non plus le transfert direct de gènes, mais l'administration de cellules modifiées génétiquement, plus pécisément de cellules des lignées monocytaires. Les dépots de cholestérol peuvent en effet s'accumuler profondément à l'intérieur des lésions d'athérosclérose, formant un centre riche en lipides qui contient notamment des cristaux de cholestérol et des liposomes enrichis en cholestérol. Cette accumulation peut augmenter l'étendue de la lésion et entraîner la rupture de celle-ci, produisant la formation d'embolies ou de thrombus. L'utilisation de cellules des lignées monocytaires modifiées selon l'invention permet un ciblage au niveau des lésions et de ce fait, un effet thérapeutique amélioré. Les cellules monocytaires comprennent les monocytes du sang périphérique, leurs précurseurs de la moelle osseuse ou du sang, et les macrophages tissulaires. Les monocytes sont formés dans la moelle osseuse qu'ils quittent après maturation en passant du sang périphérique vers les tissus. Les monocytes humains circulant dans le sang ont une demi-vie d'environ 3 jours. Lorsqu'il atteint les tissus, le monocyte est appelé macrophage. Le nombre total des macrophages tissulaires dépasse largement le nombre des monocytes circulant, par un facteur d'environ 400. Des macrophages sont trouvés partout dans le corps mais sont particulièrement nombreux dans le foie (cellules de Kupffer), dans les ganglions lymphatiques, dans les poumons, dans le péritoine, et dans la peau (cellules de Langerhans).La demi-vie exacte des macrophages tissulaires n'est pas connue mais semble se compter en mois plutôt qu'en jours. Enfin le passage des monocytes de la circulation générale aux tissus est irréversible. Les monocytes et les macrophages sont connus pour avoir des fonctions nombreuses et importantes, incluant l'induction de réponses immunitaires en phases aiguës (Anonymous, Lancet ii (1985) 536-537), la régulation de l'hématopofese (Sieff C.A. J. Clin. Invest. 79 (1987) 1549-1557), I'activation du sytème immun (Unanue E.R. Annu. Rev. Immunol. 2 (1984) 395-428) et de la coagulation (Prydz H., Allison A.C. Thromb. Haemost. 39 (1978) 582-591), la destruction des organismes et des cellules tumorales (Sharma S.D., Remington J.S. Lymphokines 3 (1981) 181-212 et Carswell E.A. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 72 (1975) 3666-3670) et la réparation tissulaire et la cicatrisation (Korn J.H. et al., J. Clin. Invest. 65 (1980) 54354).La présente invention repose en partie sur la capacité des cellules des lignées monocytaires, notamment les monocytes-macrophages, de migrer à l'intérieur des lésions athéromateuses et souvent autour du centre lipidique. Le macrophage joue en particulier un rôle important dans l'accumulation du cholestérol dans les lésions. Des études récentes (Kruth et al., J. Biol. Chem. 269 (1994) 24511) ont montré que les macrophages produisent des HDL naissantes. Ces HDL sont capables de solubiliser le cholestérol provenant de l'interaction des macrophages avec les lipoprotéines de basse densité et les cristaux de cholestérol. La présente invention repose sur l'utilisation de cellules des lignées monocytaires ayant des propriétés thérapeutiques améliorées pour le traitement de l'athérosclérose.Elle repose plus particulièrement sur la construction de cellules monocytaires capables d'exprimer de manière accrue et durable une ou plusieurs apolipoprotéines entrant dans la composition des HDL. Elle découle notamment de la création de cellules monocytaires modifiées génétiquement par insertion de gènes d'intérêt. La présente invention repose également sur la mise en évidence que certains vecteurs, notamment viraux, sont capables de transférer et d'exprimer des gènes codant pour des apolipoprotéines dans les cellules monocytaires. La présente invention décrit ainsi une nouvelle approche thérapeutique pour le traitement des pathologies liées aux dyslipoprotéinémies, consistant à administrer in vivo des cellules monocytaires modifiées génétiquement par insertion de gènes capables de réguler les niveaux plasmatiques d'apolipoprotéines. La présente invention offre ainsi une nouvelle approche particulièrement efficace en raison de son caractère local, ciblé et durable, pour le traitement et la prévention des pathologies cardiovasculaires et neurologiques liées aux dyslipoprotéinémies. Un premier objet de l'invention réside donc dans une composition cellulaire comprenant des cellules monocytaires modifiées génétiquement par insertion d'un gène au moins capable de réguler les niveaux plasmatiques d'apolipoprotéines. L'invention a également pour objet l'utilisation d'une telle composition cellulaire pour la préparation d'une composition pharmaceutique destinée au traitement ou à la prévention des pathologies liées aux dyslipoprotéinémies. Dans tout ce qui suit, une lignée de monocytaire (ou encore une cellule monocytaire) est définie comme une lignée du système mononucléaire comprenant les monocytes du sang périphérique, leurs précurseurs de la moelle osseuse ou du sang, et les macrophages tissulaires. Elle comprend également les monocytes obtenus par culture des cellules précurseur ainsi que les macrophages obtenus après culture in vitro ou ex vivo de cellules monocytaires, dans les conditions détaillées dans les exemples (voir aussi Andressen R.et al., Cancer Res. 50:7450; Bartholeyns J et al., Anticancer Res. 11(1991) 1201-1204; Lopez M. et al., Journal of Immunological Methods 159 (1993) 29-38).Les précurseurs des monocytes macrophages comprennent notamment les cellules souches pluripotentes, les cellules souches myéloïdes (CFU-GEMM), les cellules souches myélomonocytiques (CFU-GM), les CFU-M, les monoblastes et les promonocytes. Au sens de la présente invention, le gène inséré capable de réguler les niveaux d'apolipoprotéine peut être un gène codant pour une apolipoprotéine ou pour un produit protéique ayant une activité de type apolipoprotéine. Le terme produit protéique ayant une activité de type apolipoprotéine désigne tout mutant, fragment ou peptide possédant au moins une propriété biologique d'une apolipoprotéine, ainsi que tous variants naturels des apolipoprotéines. Le gène inséré peut être un fragment d'ADNc, d'ADN génomique, ou une construction hybride consistant par exemple en un ADNc dans lequel seraient insérés un ou plusieurs introns. Il peut également s'agir de séquences synthétiques ou semisynthétiques. Parmi les gènes insérés au sens de la présente invention, on peut citer plus préférentiellement les gènes codant pour tout ou une partie active des apolipoprotéines AI, AII, AIV ou E. L'apolipoprotéine AI est une protéine constituée de 243 acides aminés, synthétisée sous la forme d'une prépropeptide de 267 résidus, ayant une masse moléculaire de 28.000 daltons. Elle est synthétisée chez l'homme spécifiquement dans le foie et l'intestin et elle constitue la protéine essentielle des particules HDL (70% de leur masse en protéines). Elle est abondante dans le plasma (1.0-1.2 gil). Son activité la mieux caractérisée sur le plan biochimique est l'activation de la lécithine-cholestérol acyl-transférase (LCAT), mais de nombreuses autres activités lui sont attribuées, comme notamment la stimulation de l'efflux de cholestérol cellulaire.Le rôle physiologique de l'apolipoprotéine AI semble contrebalancé par l'apolipoprotéine AII puisque chez l'homme, le rapport des deux concentrations plasmatiques (AII/AI) est très étroitement corrélé avec le risque coronarien. L'apolipoprotéine AI joue un rôle majeur dans la résistance à l'athérosclérose, probablement lié au transport inverse du cholestérol, puisque la seule expression de cette apolipoprotéine dans des souris transgéniques permet de réduire de 40 fois la surface des dépôts lipidiques au niveau de l'aorte par rapport à des souris contrôles (Rubin et al. 1993 Science, In Press). Son gène, long de 1863 bp, a été cloné et séquencé (Sharpe et al., Nucleic Acids Res. 12(9) (1984) 3917). Parmi les produits protéiques à activité de type apolipoprotéine AI, on peut citer notamment les variants naturels décrits dans l'art antérieur (tableau ci-après). Variant: Mutation Variant Mutation Milano Arg 173 Cys Norway Glu136Lys Marburg Lys 107 07&commat; Pro 165Arg Munster2B Ala158Glu Pro3His Giessen Pro 143 Arg ArglOLeu Munster3 A Aspl03Asn Gly26Arg Munster3 B Pro4Arg Asp89Glu Munster3C Pro3Arg Lysl07Met Munster3D Asp2 1 3Gly Glul 39Gly Munster4 Glu 198Lys Glu 147Val Yame Aspl3Tyr Ala158Glu Asp2 1 3Gly Glul69Gln Argl 77His L'apolipoprotéine AIV (apoAIV) est une protéine constituée de 376 acides aminés, synthétisée spécifiquement dans l'intestin sous la forme d'un précurseur de 396 résidu. La protéine plasmatique, est relativement abondante (0.16 g/l) et a une masse moléculaire de 46.000 daltons. Elle est un composant majeur des chylomicrons sécrétés dans la lymphe, mais elle présente la particularité d'être majoritairement sous forme non associée avec des lipoprotéines dans le plasma (R.B. Weinberg et Coll., 1983, J. Lipid. Research, 24 52-59).Par ailleurs, I'apoAIV plasmatique est polymorphe, bien que la nature de ce polymorphisme soit encore inconnue (G. Utermann et Coll., 1982, J. Biol. Chem. 257 501-507). Le rôle physiologique de l'apoAIV demeure également assez peu connu. On sait qu'elle peut activer in vitro la lécithin-cholestérol-acyltransférase (LCAT) (Steinmetz et Coll., 1985, J. Biol. Chem., 260 2258-2264) et qu'elle peut, comme l'apolipoprotéine AI, interférer avec la fixation des particules de HDL sur les cellules endothéliales aortiques bovines (Savion et Coll., 1987, Eur. J. Biochem., 257 : 4171-4178). Ces deux activités indiquent que l'apoAIV intervient très vraisemblablement comme médiateur du transport inverse du cholestérol. Le gène de l'apoAIV a été cloné et décrit dans l'art antérieur (voir notamment WO 92/05253). Parmi les produits protéiques à activité de type apolipoprotéine AIV, on peut citer notamment les fragments et dérivés décrits dans la demande de brevet FR 92 00806. L'apolipoprotéine E comprend 317 résidus dont 18 correspondent au peptide signal. Il n'y a pas de propeptide. Le gène de l'apoE a été cloné et séquencé (environ 3600bp) et code pour un ARNm de 1163bp. L'apoE est répartie dans le plasma entre les particules VLDL et HDL. Elle représente environ 10-20% des proteines des VLDL et 2% des protéines des HDL. Les HDL-E constituent une sous-classe distincte de HDL. La concentration plasmatique de l'apoE est d'environ 0.05 g/l. L'apoE est synthétisée sous la forme d'une sialo-protéine qui est ensuite désialilée dans le plasma. La synthèse de l'apoE est réalisée par le foie et faiblement par l'intestin. Cependant, contrairement aux autres apolipoprotéines, I'apoE est également synthétisée dans de nombreux autres tissus (cerveau, rein. surrénales, cellules réticulo-endothéliales...). L'apoE reconnait avec une très forte affinité le récepteur aux LDL (apoB/E receptor) mais également un autre récepteur sur les cellules héptiques ne reconnaissant pas l'apoB (chylomicron/remnant receptor). Un polymorphisme a été mis en évidence sur la base de mobilités electrophorètiques différentes. Six phénotypes majeurs (E2/2, E2/3, E2/4, E3/4, E3/3, E4/4) ont ainsi été décrits. Selon les études menées sur de grandes populations caucasiennes, la prévalence des alléles correspondants serait de 14-15% pour 4, de 74-78% pour 3 et 8-12% pour E2. Un écart est trouvé chez les Finlandais pour lesquels 84 est plus abondant (23%) et E2 moins abondant(4%). L'allèle normal est 83. L'allèle 82 correspondrait à la dyslipoprotéinémie de type III (phénotype E2/2), maladie associée à une augmentation du cholestérol et des triglyrérides, des xanthomes et à une athérosclerose précoce. Une association entre l'allèle 84 et la maladie d'Alzheimer familiale a été rapportée récemment (Strittmatter et al. P.N.A.S. 99 (1993) 1977). Plus récemment la destruction du gène de l'apoE dans la souris a montré l'apparition d'une hypersusceptibilité à l'athérosclérose (E. Rubin et al. Cell 1992). Généralement, le gène inséré comprend également des séquences permettant son expression dans la cellule monocytaire. Il peut s'agir des séquences qui sont naturellement responsables de l'expression dudit gène lorsque ces séquences sont susceptibles de fonctionner dans la dite cellule. Il peut également s'agir de séquences d'origine différente (responsables de l'expression d'autres protéines, ou même synthétiques). Notamment, il peut s'agir de séquences de gènes eucaryotes ou viraux. A titre d'exemple, il peut s'agir de séquences promotrices issues du génome de la cellule monocytaire, ou du génome d'un virus, et notamment, les promoteurs des gènes EIA, MLP d'adénovirus, le promoteur CMV, LTR-RSV, etc. Il peut encore s'agir de promoteurs ubiquitaires de type HPRT, vimentine, actine, tubuline, PGK, etc. En outre, ces séquences d'expression peuvent être modifiées par addition de séquences d'activation, de régulation, ou conférant une spécificité tissulaire d'expression, etc. En particulier, lorsque les cellules monocytaires utilisées sont des cellules précurseur, il est tout à fait avantageux d'utiliser un promoteur permettant une expression spécifique dans les monocytes et/ou les macrophages, pour éviter que le gène ne s'exprime dans les autres lignées cellulaires. A titre d'exemple d'un tel promoteur, on peut citer notamment le promoteur du récepteur LDL acétylé. Par ailleurs, le gène inséré comprend généralement, en amont de la séquence codante, une séquence signal dirigeant le polypeptide synthétisé dans les voies de sécrétion de la cellule monocytaire. Cette séquence signal peut être la séquence signal naturelle de l'apolipoprotéine, mais il peut également s'agir de toute autre séquence signal fonctionnelle, ou d'une séquence signal artificielle. Linsertion du gène dans les cellules monocytaires peut être réalisée par différentes techniques. Le gène peut tout d'abord être incubé tel quel avec les cellules en culture (ADN nu). Il a en effet été décrit que les acides nucléiques nus pouvaient pénétrer dans les cellules sans vecteur particulier. Néanmoins, on préfère dans le cadre de la présente invention utiliser un vecteur d'administration, permettant d'améliorer (i) I'efficacité de la pénétration cellulaire, (ii) le ciblage (iii) la stabilité extra- et intracellulaires. A cet égard, différents types de vecteurs peuvent être utilisés. Il peut s'agir de vecteurs viraux ou non viraux. Parmi les vecteurs viraux, on peut citer plus particulièrement les adénovirus, les herpès virus, les rétrovirus, les virus adéno associés, le CMV, le virus de la vaccine, etc. Ces vecteurs s'avèrent particulièrement performants sur le plan de la transfection. S'agissant plus particulièrement d'adénovirus, différents sérotypes, dont la structure et les propriétés varient quelque peu, ont été caractérisés. Parmi ces sérotypes, on préfère utiliser dans le cadre de la présente invention les adénovirus humains de type 2 ou 5 (Ad 2 ou Ad 5) ou les adénovirus d'origine animale (voir demande WO94/26914). Parmi les adénovirus d'origine animale utilisables dans le cadre de la présente invention on peut citer les adénovirus d'origine canine, bovine, murine, (exemple: Mavl, Beard et al., Virology 75 (1990) 81), ovine, porcine, aviaire ou encore simienne (exemple SAV). De préférence, l'adénovirus d'origine animale est un adénovirus canin, plus préférentiellement un adénovirus CAV2 [souche manhattan ou A26/61 (ATCC VR-800) par exemple]. De préférence, on utilise dans le cadre de l'invention des adénovirus d'origine humaine ou canine ou mixte. Préférentiellement, les adénovirus défectifs de l'invention comprenent les ITR, une séquence permettant l'encapsidation et l'acide nucléique d'intérêt. Encore plus préférentiellement, dans le génome des adénovirus de l'invention, la région El au moins est non fonctionnelle. Le gène viral considéré peut être rendu non fonctionnel par toute technique connue de l'homme du métier, et notamment par suppression totale, substitution, délétion partielle, ou addition d'une ou plusieurs bases dans le ou les gènes considérés. De telles modifications peuvent être obtenues in vitro (sur de l'ADN isolé) ou in situ, par exemple, au moyens des techniques du génie génétique, ou encore par traitement au moyen d'agents mutagènes. D'autres régions peuvent également être modifiées, telle que E4, ou également E2, E3, et Ll-L5. Les adénovirus recombinants défectifs selon l'invention peuvent être préparés par toute technique connue de l'homme du métier (Levrero et al., Gene 101 (1991) 195, EP 185 573; Graham, EMBO J. 3 (1984) 2917). En particulier, ils peuvent être préparés par recombinaison homologue entre un adénovirus et un plasmide portant entre autre la séquence d'ADN d'intérêt. La recombinaison homologue se produit après co-transfection desdits adénovirus et plasmide dans une lignée cellulaire appropriée. La lignée cellulaire utilisée doit de préférence (i) être transformable par lesdits éléments, et (ii), comporter les séquences capables de complémenter la partie du génome de l'adénovirus défectif, de préférence sous forme intégrée pour éviter les risques de recombinaison.A titre d'exemple de lignée, on peut mentionner la lignée de rein embryonnaire humain 293 (Graham et al., J. Gen. Virol. 36 (1977) 59) qui contient notamment, intégrée dans son génome, la partie gauche du génome d'un adénovirus Ad5 (12 %). Des stratégies de construction de vecteurs dérivés des adénovirus ont également été décrites dans les demandes n" WO 94/26914, W094/28152, W094/28938, W094/12649 et FR 2,707,664. Ensuite, les adénovirus qui se sont multipliés sont récupérés et purifiés selon les techniques classiques de biologie moléculaire, comme illustré dans les exemples. Concernant les virus adéno-associés (AAV), il s'agit de virus à ADN de taille relativement réduite, qui s'intègrent dans le génome des cellules qu'ils infectent, de manière stable et site-spécifique. Ils sont capables d'infecter un large spectre de cellules, sans induire d'effet sur la croissance, la morphologie ou la différenciation cellulaires. Par ailleurs, ils ne semblent pas impliqués dans des pathologies chez l'homme. Le génome des AAV a été cloné, séquencé et caractérisé. Il comprend environ 4700 bases, et contient à chaque extrémité une région répétée inversée (ITR) de 145 bases environ, servant d'origine de réplication pour le virus.Le reste du génome est divisé en 2 régions essentielles portant les fonctions d'encapsidation : la partie gauche du génome, qui contient le gène rep impliqué dans la réplication virale et l'expression des gènes viraux; la partie droite du génome, qui contient le gène cap codant pour les protéines de capside du virus. L'utilisation de vecteurs dérivés des AAV pour le transfert de gènes in vitro et in vivo a été décrite dans la littérature (voir notamment WO 91/18088; WO 93/09239; US 4,797,368, US5,139,941, EP 488 528). Ces demandes décrivent différentes constructions dérivées des AAV, dans lesquelles les gènes rep et/ou cap sont délétés et remplacés par un gène d'intérêt, et leur utilisation pour transférer in vitro (sur cellules en culture) ou in vivo (directement dans un organisme) ledit gène d'intérêt.Les AAV recombinants défectifs selon l'invention peuvent être préparés par co-transfection, dans un lignée cellulaire infectée par un virus auxiliaire humain (par exemple un adénovirus), d'un plasmide contenant la séquence nucléique d'intérêt bordée de deux régions répétées inversées (ITR) d'AAV, et d'un plasmide portant les gènes d'encapsidation (gènes rep et cap) d'AAV. Les AAV recombinants produits sont ensuite purifiés par des techniques classiques. Concernant les virus de l'herpès et les rétrovirus, la construction de vecteurs recombinants a été largement décrite dans la littérature : voir notamment Breakfield et al., New Biologist 3 (1991) 203; EP 453242, EP178220, Bernstein et al. Genet. Eng. 7 (1985) 235; McCormick, BioTechnology 3 (1985) 689, etc. En particulier, les rétrovirus sont des virus intégratifs, infectant sélectivement les cellules en division. Ils constituent donc des vecteurs d'intérêt pour des applications cancer. Le génome des rétrovirus comprend essentiellement deux LTR, une séquence d'encapsidation et trois régions codantes (gag, pol et env). Dans les vecteurs recombinants dérivés des rétrovirus, les gènes gag, pol et env sont généralement délétés, en tout ou en partie, et remplacés par une séquence d'acide nucléique hétérologue d'intérêt.Ces vecteurs peuvent être réalisés à partir de différents types de rétrovirus tels que notamment le MoMuLV ("murine moloney leukemia virus"; encore désigné MoMLV), le MSV ("murine moloney sarcoma virus"), le HaSV ("harvey sarcoma virus"); le SNV ("spleen necrosis virus"); le RSV ("rous sarcoma virus") ou encore le virus de Friend. Pour construire des rétrovirus recombinants comportant une séquence d'intérêt, un plasmide comportant notamment les LTR, la séquence d'encapsidation et ladite séquence d'intérêt est généralement construit, puis utilisé pour transfecter une lignée cellulaire dite d'encapsidation, capable d'apporter en trans les fonctions rétrovirales déficientes dans le plasmide. Généralement, les lignées d'encapsidation sont donc capables d'exprimer les gènes gag, pol et env.De telles lignées d'encapsidation ont été décrites dans l'art antérieur, et notamment la lignée PA317 (US4,861,719); la lignée PsiCRIP (WO90/02806) et la lignée GP+envAm-12 (W089/07150). Par ailleurs, les rétrovirus recombinants peuvent comporter des modifications au niveau des LTR pour supprimer l'activité transcriptionnelle, ainsi que des séquences d'encapsidation étendues, comportant une partie du gène gag (Bender et al., J. Virol. 61 (1987) 1639). Les rétrovirus recombinants produits sont ensuite purifiés par des techniques classiques. Comme indiqué ci-avant, le virus utilisé est avantageusement un virus défectif. Le terme "virus défectif' désigne un virus incapable de se répliquer de manière autonome dans la cellule infectée. Généralement, le génome des virus défectifs utilisés dans le cadre de la présente invention est donc dépourvu au moins des séquences nécessaires à la réplication dudit virus dans la cellule infectée. Ces régions peuvent être soit éliminées (en tout ou en partie), soit rendues nonfonctionnelles, soit substituées par d'autres séquences et notamment par l'acide nucléique recombinant. Préférentiellement, le virus défectif conserve néanmoins les séquences de son génome qui sont nécessaires à l'encapsidation des particules virales. Le vecteur selon l'invention peut également être un agent non viral capable de promouvoir le transfert et l'expression d'acides nucléiques dans des cellules eucaryotes. Parmi les vecteurs synthétiques, chimique ou naturels, on peut citer préférentiellement les polymères cationiques de type polylysine, (LKLK)n, (LKKL)n, polyéthylène immine et DEAE dextran ou encore les lipides cationiques ou lipofectants. Ils possèdent la propriété de condenser l'ADN et de promouvoir son association avec la membrane cellulaire. Parmi ces derniers, on peut citer les lipopolyamines (lipofectamine, transfectam, etc) et différents lipides cationiques ou neutres (DOTMA, DOGS, DOPE, etc).Plus récemment, il a été développé le concept de la transfection ciblée, médiée par un récepteur, qui met à profit le principe de condenser l'ADN grâce au polymère cationique tout en dirigeant la fixation du complexe à la membrane grâce à un couplage chimique entre le polymère cationique et le ligand d'un récepteur membranaire, présent à la surface du type cellulaire que l'on veut greffer. Le ciblage du récepteur à la transferrine, à l'insuline ou du récepteur des asialoglycoprotéines des hépatocytes a ainsi été décrit. Le choix entre ces différents types de vecteurs dépend plus particulièrement des cellules à modifier. Ainsi, lorsqu'il s'agit de cellules ne se divisant pas ou peu (monocytes ou macrophages notamment), les vecteurs appropriés sont notamment les adénovirus, les AAV ou les vecteurs chimiques, qui permettent une transfection efficace et un maintien stable du gène inséré. Lorsque les cellules sont des cellules en division (cellules souches, cellules précurseur, etc), il est préférable d'utiliser un vecteur intégratif tel qu'un rétrovirus ou un AAV par exemple qui permettent de conférer des propriétés thérapeutiques stables selon l'invention. Les compositions cellulaires selon l'invention comprennent généralement une population de cellules enrichie en monocytes, macrophages ou leurs précurseurs. Il peut ainsi s'agir de monocytes, de macrophages, de leurs précurseurs, ou d'un mélange de ces différents types cellulaires. De préférence, les compositions selon l'invention possèdent plus de 80 % de monocytes, macrophages ou leurs précurseurs, et, encore plus préférentiellement, plus de 90 /O. Les cellules monocytaires selon l'invention peuvent être préparées par exemple par 1. prélèvement et isolement des monocytes-macrophages ou de leurs précurseurs à partir de sang ou de moelle osseuse, 2. culture de ces cellules, 3. modification de ces cellules par un gène tel que défini ci-avant, et éventuellement, 4. conditionnement et/ou stockage des cellules ainsi obtenues. Le prélèvement et l'isolement des cellules monocytes-macrophages ou de leurs précurseurs peuvent être effectués par toute technique connue de l'homme du métier. Ces différentes techniques peuvent impliquer des étapes physiques de séparation (centrifugation, tri cellulaire (FACS), etc), la sélection par des composés immunologiques (anticorps spécifiques de marqueurs cellulaires US 4,965,204; EP 17 381, EP 30 450, etc) ou biochimiques (ligands de récepteurs membranaires : EP 405 972), etc. Concernant les monocytes et les macrophages, ceux-ci peuvent être obtenus à partir du sang par différentes techniques, et notamment par cytaphérèse (Lopez et al., J. Immunol. Methods. 159 (1992) 29) ou par utilisation d'anticorps dirigés contre des marqueurs spécifiques des cellules monocytes macrophages tels que CD14, CD64 ou Maxl. Ils peuvent également être obtenus ex vivo à partir de cellules précurseur, par culture dans des conditions appropriées permettant leur différenciation. Concernant les cellules précurseur, celles-ci peuvent également être isolées au moyen d'anticorps reconnaissant des marqueurs spécifiques tels que : Cellules souches: CD33, CD34; Cellules CFU-GM et CFU-M CD 13, CD14, CD15, CD33, HLA DR; Monoblastes et promonocytes Cul3, CD 14, CD15, CD33. Des techniques utilisables dans le cadre de la présente invention sont connues de l'homme du métier : voir par exemple les demandes EP451 611, W093/02182. Les cellules ainsi obtenues peuvent ensuite être cultivées dans toute condition stérile permettant leur convervation, leur prolifération et/ou leur différentiation (s'il s'agit de cellules précurseur). La culture peut donc être effectuée simplement pour maintenir les cellules pendant la transformation. Il est en effet possible de transformer les cellules au stade de précurseur ou de monocytes, qui sont ensuite différenciés in vivo, après leur réadministration au patient. De même, la différencitation peut être effectuée ex vivo, après la transformation. La culture peut également être effectuée pour permettre une prolifération et/ou une différentiation cellulaires, avant d'effectuer la transformation sur les cellules matures (monocytes, macrophages, MAK). En particulier, la prolifération des précurseurs et leur différentiation en cellules monocytaires peuvent être effectuées ex vivo en présence de facteurs de croissance et de différentiation, tels que le GM-CSF, le M-CSF, les interleukines IL3, IL4, 1L6 et ILI I, ou encore le SCF. La culture des cellules isolées peut être effectuée dans différents milieux connus de l'homme du métier (exemple RPMI, JMDM), supplémentés entre autres de sérum et d'acides aminés. La culture est réalisée en conditions stériles, de préférence à 37"C, comme illustré dans les exemples. Elle peut être effectuée dans des plaques de culture ou, de préférence, dans des sacs en téflon. Les conditions de culture peuvent être adaptées par l'homme du métier en fonction de la population cellulaire isolée, de l'utilisation recherchée, etc. De même, I'insertion du gène est effectuée en milieu stérile, dans des conditions adaptées par l'homme du métier en fonction du gène, de la population cellulaire isolée, etc. Dans un mode de réalisation préféré, les compositions cellulaires de l'invention comprennent des cellules précurseur de la moelle osseuse modifiées génétiquement par insertion d'un gène codant pour une apolipoprotéine. Selon une variante préférée, le gène est inséré au moyen d'un vecteur intégratif, en particulier d'origine virale. Les cellules précurseur de la moelle osseuse sont notamment les cellules souches pluripotentes (CD34), les cellules souches myéloïdes et les cellules souches myélomonocytiques. Une composition particulière de l'invention comprend des cellules précurseur de la moelle osseuse modifiées génétiquement par un rétrovirus défectif contenant un gène codant pour une apolipoprotéine sous contrôle d'un promoteur spécifique. Préférentiellement, il s'agit du gène codant pour l'apolipoprotéine E. Ces cellules sont préparées par ponction de moelle selon les techniques de l'homme du métier (ref). Dans un autre mode de réalisation préféré, les compositions cellulaires de l'invention comprennent des cellules de monocytes ou macrophages modifiées génétiquement par insertion d'un gène codant pour une apolipoprotéine. Selon une variante préférée, le gène est inséré au moyen d'un vecteur viral dérivé des adénovirus ou des AAV. A cet égard, l'infection des cellules de la lignée monocyte-macrophage peut être réalisée selon différents protocoles, à une multiplicité d'infection adaptable en fonction du vecteur utilisé et du gène concerné, comme décrit dans les exemples ciaprès. Un vecteur particulièrement avantageux pour la préparation des compositions cellulaires selon l'invention comprenant des monocytes ou des macrophages est un vecteur adénoviral.La demanderesse a en effet montré que les adénovirus étaient capables d'infecter de manière très efficace les cellules de la lignée monocytemacrophage, de s'y maintenir stablement, et d'exprimer un gène codant pour une apolipoprotéine. Poelérentiellement, les monocytes-macrophages sont incubés en présence de 50 à 250 pfu par cellule de virus purifié et, plus préférentiellement, de 80 à 100 pfu / cellule. Selon les conditions de la transformation, le pourcentage de cellules modifiées par insertion de l'acide nucléique recombinant peut varier de 30 à 95%. Les cellules modifiées ainsi obtenues peuvent ensuite être conditionnées en vue d'une utilisation immédiate, et/ou stockées en vue d'une utilisation ultérieure. Pour une réadministration immédiate, les cellules sont généralement mises en suspension dans un tampon phosphate ou dans du sérum physiologique, à une concentration variant de i 105 à 109 cellules par dose. Pour leur conservation, les cellules peuvent être congelées, de préférence en présence d'agents conservateurs tels que le glycérol, le DMSO, etc. Les cellules monocytaires selon l'invention se présentent donc comme un outil de choix pour la préparation d'une composition pharmaceutique destinée au traitement des dyslipoprotéinémies. A cet égard, la présente invention a également pour objet une composition pharmaceutique contenant, à titre de principe actif, des cellules monocytaires décrites ci-dessus. Les compositions pharmaceutiques selon l'invention peuvent être administrées par voie systémique, par perfusion ou injection, etc. Par ailleurs, elles peuvent être utilisées seules ou associées à d'autres compositions pharmaceutiques. Dans ce qui précède, l'expression "associées" n'implique pas que les monocytes-macrophages et les autres médicaments soient nécessairement administrés en mélange ou de façon simultanée. Elle s'étend également à toute utilisation ou présentation impliquant leurs administrations à des intervalles de temps non nuls, mais suffisamment courts pour autoriser une addition ou une synergie dans les effets produits. Dans un mode particulier de mise en oeuvre, la présente invention porte sur une composition pharmaceutique comprenant des cellules monocytaire contenant un acide nucléique recombinant codant pour tout ou partie de l'apolipoprotéine E. L'invention permet ainsi la réalisation d'une méthode de traitement comprenant l'administration de cellules telles que définies ci-avant. Il peut s'agir de cellules provenant du patient (autologues) ou d'un donneur (allogéniques). Avantageusement, il s'agit de cellules autologues. Une méthode de traitement particulière selon l'invention comprend 1. le prélèvement et l'isolement des monocytes-macrophages ou de leurs précurseurs à partir de sang ou de moelle osseuse, 2. la culture de ces cellules, 3. la transformation de ces cellules par un gène tel que défini ci-avant, éventuellement, 4. le conditionnement et/ou le stockage des cellules ainsi obtenues, puis, 5. leur administration au patient. L'administration peut être effectuée de différentes façons. Préférentiellement, les cellules sont administrées par injection, de préférence intraveineuse ou intratumorale. En outre, I'injection systémique peut être réalisée par perfusion. Les cellules peuvent être administrées sous forme de doses variables, selon leurspropriétés thérapeutiques et l'effet recherché. En particulier, des administrations de doses comprises entre 105 à 1010 cellules peuvent être réalisées. Le traitement de la présente invention offre de nombreux avantages, et notamment il permet de n'infecter qu'une population définie et controlée de cellules, il permet de choisir la multiplicité d'infection (nombre de particules virales par cellules), il permet d'atteindre de façon ciblée les zones des lésions à partir de la circulation sanguine, et d'exercer un effet local au niveau de ces lésions. En outre, et compte-tenu de la durée de vie importante des macrophages, une répétition de traitements handicapante pour le malade pourrait être évitée. La présente invention offre ainsi un moyen très efficace pour le traitement ou la prévention des pathologies liées aux dyslipoprotéinémies, en particulier dans le domaine des affections cardiovasculaires comme l'infarctus du myocarde, I'angor, la mort subite, la décompensation cardiaque, les accidents cérébro-vasculaires, ou dans le domaine des affections neurologiques où certaines apolipoprotéines comme l'apoE semblent jouer un rôle important (maladies du viellissement neuronal, Alzheimer familial, régénération neuronale). Plus généralement, cette approche offre un moyen d'intervention thérapeutique très prometteur pour chaque cas où un déficit d'ordre génétique ou métabolique d'une apolipoprotéine plasmatique peut être corrigé. En outre, ce traitement peut concerner aussi bien l'homme que tout animal tel que les ovins, les bovins, les animaux domestiques (chiens, chats, etc), les chevaux, les poissons, etc. La présente invention est plus complètement décrite à l'aide des exemples qui suivent, qui doivent être considérés comme illustratifs et non limitatifs. TF.CRNTOUES GFNFRALES DF BTOI.OGIE MOT.ECU.ATRF. Les méthodes classiquement utilisées en biologie moléculaire telles que les extractions préparatives d'ADN plasmidique, la centrifugation d'ADN plasmidique en gradient de chlorure de césium, I'électrophorése sur gels d'agarose ou d'acrylamide, la purification de fragments d'ADN par électroélution, les extraction de protéines au phénol ou au phénol-chloroforme, la précipitation d'ADN en milieu salin par de l'éthanol ou de l'isopropanol, la transformation dans Escherichia coli, etc ... sont bien connues de l'homme de métier et sont abondament décrites dans la littérature [Maniatis T. et al., "Molecular Cloning, a Laboratory Manual", Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, N.Y., 1982; Ausubel F.M. et al. (eds), "Current Protocols in Molecular Biology", John Wiley & Sons, New York, 1987]. Les plasmides de type pBR322, pUC et les phages de la série M13 sont d'origine commerciale (Bethesda Research Laboratories). Pour les ligatures, les fragments d'ADN peuvent être séparés selon leur taille par électrophorèse en gels d'agarose ou d'acrylamide, extraits au phénol ou par un mélange phénoUchloroforme, précipités à l'éthanol puis incubés en présence de l'ADN ligase du phage T4 (Biolabs) selon les recommandations du fournisseur. Le remplissage des extrémités 5' proéminentes peut être effectué par le fragment de Klenow de l'ADN Polymérase I d'E. coli (Biolabs) selon les spécifications du fournisseur. La destruction des extrémités 3' proéminentes est effectuée en présence de l'ADN Polymérase du phage T4 (Biolabs) utilisée selon les recommandations du fabricant. La destruction des extrémités 5' proéminentes est effectuée par un traitement ménagé par la nucléase S1. La mutagénèse dirigée in vitro par oligodéoxynucléotides synthétiques peut être effectuée selon la méthode développée par Taylor et al. [Nucleic Acids Res. 13 (1985) 8749-8764] en utilisant le kit distribué par Amersham. L'amplification enzymatique de fragments d'ADN par la technique dite de PCR [Bolymérase-catalyzed Çhain Reaction, Saiki R.K. et al., Science 230 (1985) 1350 1354; Mullis K.B. et Faloona F.A., Meth. Enzym. 155 (1987) 335-350] peut être effectuée en utilisant un "DNA thermal cycler" (Perkin Elmer Cetus) selon les spécifications du fabricant. La vérification des séquences nucléotidiques peut être effectuée par la méthode développée par Sanger et al. [Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 74 (1977) 54635467] en utilisant le kit distribué par Amersham. E XF.MPLF S Exemple 1 : Préparation des monocytes et des macrophages La technique de préparation des macrophages utilisée a été déjà décrite dans la littérature (Lopez et al., 1993, précitée). Brièvement les cellules mononuclées (MNC) ont été séparées des erythrocytes et granulocytes sur un gradient Ficoll Hypaque (d=1,077) en utilisant le processeur de sang Cobe 2991, puis lavées trois fois avec un tampon phosphate. Une partie des MNC a été utilisée pour préparer des monocytes par élutriation dans les conditions données ci-dessous.L'autre partie des MNC a été mise en culture (5.106 par ml) dans un milieu IMDM (Gibco, France) contenant 3.10-5 M de 2-mercaptoéthanol, 1% d'acides aminés non essentiels, 2mM de L-glutamine, 2mM pyruvate de sodium, 100 UI par ml de pénicilline, 100 g par ml de streptomycine et 2% de sérum AB, dans des sacs en téflon de 600 ml puis incubée à 37"C dans une atmosphère humide à 5 % de C02 pendant 7 jours. Les cellules ont ensuite été récupérées et les monocytes-macrophages purifiés à 95 % par élutriation en utilisant une centrifugeuse Beckman J6ME équipée avec un rotor J5.0 et une chambre d'élutriation de 40 ml. Exemple 2 : Infection des monocytes et des macrophages avec un vecteur adénoviral exprimant le gène de l'apolipoprotéine A-I (Ad. RSV-ApoAI). Des monocytes frais ou des macrophages sont incubés pendant la nuit en présence de 80 à 100 PFU (Plaque forming unit) par cellule d'adénovirus Ad. RSV ApoAI purifé (W094/25073) dans un milieu RPMI complet (1.106 cellules par ml). Les cellules sont lavées pour éliminer les particules virales libres puis réincubées dans du milieu complet RPMI frais dans des sacs en téflon ou dans des plaques de culture de 12 puits. A différentes périodes, des aliquotes de surnageant de cellules ont été récupérées et testées pour la présence d'apolipoprotéine A-I par ELISA à l'aide d'anticorps monoclonaux spécifiques de la protéine humaine (W094/25073). Evaluation de la stimulation des efflux de cholestérol par la production de HDL naissantes dans les monocytes-macrophages humains. Les monocytes-macrophages humains en culture sont enrichis en cholestérol par incubation de cholesterol libre (dispersion de microcritaux de de cholestérol) ou encore par incubation de LDL acétylées. Après lavage, certaines cellules sont transfectées avec l'adéno-apoA-I et d'autres avec un adéno-BGal. La concentration du cholestérol intracellulaire et dans le milieu est alors déterminée pour connaitre les quantités de cholestérol excrétées par les cellules, Les lipoprotéines secretées dans le milieu sont ensuites caractérisées Protocole: Les cellules sont rincées de leur milieu avec du RPMI 1640 sans sérum, puis incubées avec du cholestérol ou bien des LDL acétylées à la concentration finale de cholestérol de 130 nmol/ml. Ensuite, les cellules sont rincées de leur milieu avec du RPMI 1640 sans sérum et ensuite transfectées avec les adéno apoA-I et adéno-BGal selon la technique décrite par Haddada et al. (BBRC. 1993; 195: 1174-1183) dans ce même milieu sans cholestérol pour une période déterminée. Les HDL naissantes synthétisées par les monocytes-macrophages humains sont étudiées selon la méthode décrite par Kruth et al. (J. Biol. Chem. 1994; 269: 2451124518). Brièvement les lipoprotéines sont isolées du milieu par chromatographie de gel filtration à l'aide d'une colone contenant 4% d'agarose, ou encore par ultracentrifugation de flotaison à la densité de 1,15 g/ml. Ces lipoprtéines sont caractérisées par leur contenu lipidique (cholestérol et phospholipides), par leur composition protéique déterminée par électrophorèse sur gel de polyacrylamide en conditions dénaturantes en présence de SDS, et par leur taille, par électrophorèse sur gel de polyacrylamide en conditions non dénaturantes. La sortie du cholestérol cellulaire est evaluée par dosage du cholestérol intracellulaire et contenu dans le milieu. Les lipides du milieu et des cellules sont extraits par la méthode de Folch (J. Biol. Chem. 1957; 226: 497-509). Les quantités de cholestérol libre et de cholestérol estérifié sont déterminées par une méthode enzymatique par fluorimétrie (Gamble, J. Lipid Res. 1978; 19: 1068-1070). Les phospholipides sont déterminés par la méthode de Barlett (J. BIol. Chem. , 1959; 234: 466-468) REVENDICATIONS 1. Composition cellulaire comprenant des cellules monocytaires modifiées génétiquement par insertion d'un gène au moins capable de réguler les niveaux plasmatiques d'apolipoprotéines. 2. Composition cellulaire selon la revendication 1 caractérisée en ce qu'elle comprend des cellules précurseur de la moelle osseuse. 3. Composition cellulaire selon la revendication 2 caractérisée en ce qu'elle comprend des cellules souche pluripotentes CD34+. 4. Composition cellulaire selon la revendication 3 caractérisée en ce qu'elle comprend en outres des cellules souches myéloïdes (CFU-GEMM) et des cellules souches myélomonocytiques (CFU-GM). 5. Composition cellulaire selon la revendication 1 caractérisée en ce qu'elle comprend des monocytes et macrophages du sang périphérique. 6. Composition cellulaire selon l'une des revendications précédentes caractérisée en ce que le gène code pour une apolipoprotéine ou pour un produit protéique à activité de type apolipoprotéine. 7. Composition cellulaire selon la revendication 6 caractérisée en ce que le gène code pour tout ou partie de l'apolipoprotéine AI, de l'apolipoprotéine AII, de l'apolipoprotéine AIV, de l'apoîipoprotéine E ou d'un dérivé ou variant naturel de celles-ci. 8. Composition cellulaire selon l'une des revendications précédentes caractérisée en ce que le gène est inséré au moyen d'un vecteur viral 9. Composition cellulaire selon la revendication 8 caractérisée en ce que le gène est inséré au moyen d'un vecteur adénoviral. 10. Composition cellulaire selon la revendication 8 caractérisée en ce que le gène est inséré au moyen d'un vecteur rétroviral. 11. Composition cellulaire selon la revendication 8 caractérisée en ce que le gène est inséré au moyen d'un vecteur dérivé d'un AAV. 12. Composition cellulaire selon l'une des revendications 1 à 7 caractérisée en ce que le gène est inséré au moyen d'un vecteur chimique. 13. Composition cellulaire comprenant des cellules précurseur de la moelle osseuse modifiées génétiquement par insertion d'un gène codant pour une apolipoprotéine. 14. Composition cellulaire selon la revendication 13 modifiées génétiquement par un rétrovirus défectif contenant un gène codant pour une apolipoprotéine. 15. Composition cellulaire selon les revendications 13 ou 14 caractérisée en ce que le gène codant pour l'apolipoprotéine est sous contrôle d'un promoteur spécifique des monocytes ou macrophages. 16. Composition cellulaire selon la revendication 15 caractérisée en ce que le gène codant pour l'apolipoprotéine est sous contrôle du promoteur du récepteur du LDL acétylé. 17. Composition cellulaire comprenant des monocytes et/ou macrophages du sang modifiées génétiquement par un adénovirus défectif contenant un gène codant pour une apolipoprotéine. 18. Composition cellulaire selon l'une des revendications précédentes caractérisée en ce que le gène code pour l'apolipoprotéine E. 19. Composition cellulaire selon l'une des revendications précédentes caractérisée en ce qu'elle comprend au moins 80% de cellules monocytaires. 20. Procédé de préparation d'une composition cellulaire selon l'une des revendications 1 à 19 comprenant les étapes suivantes 1. prélèvement et isolement des monocytes-macrophages ou de leurs précurseurs à partir de sang ou de moelle osseuse, 2. culture de ces cellules 3. modification de ces cellules par un gène tel que défini ci-avant, et éventuellement, 4. conditionnement et/ou stockage des cellules ainsi obtenues. 21. Utilisation d'une composition cellulaire selon l'une des revendications 1 à 19 pour la préparation d'une composition pharmaceutique destinée au traitement ou à la prévention des pathologies liées aux dyslipoprotéinémies. 22. Utilisation selon la revendication 21 pour la préparation d'une composition pharmaceutique destinée au traitement de l'athérosclérose et/ou des maladies neurologiques. 23. Composition pharmaceutique comprenant une composition cellulaire selon l'une des revendications I à 19. 24. Composition pharmaceutique selon la revendication 23 caractérisée en ce qu'elle se présente sous forme injectable. 25. Composition pharmaceutique selon la revendication 23 caractérisée en ce qu'elle comprend entre 10' et 1010 cellules par dose. 26. Composition pharmaceutique selon l'une des revendications 23 à 25 caractérisée en ce qu'elle est composée de cellules autologues.