FR 2729665 A1 19960726 FR 9500577 A 19950119 La présente invention a pour objet de nouveaux dérivés de glycylanilides, leur préparation et leur application en thérapeutique humaine. Elle concerne également l'utilisation de ces dérivés pour la fabrication de médicaments destinés au traitement de l'hypercholestérolémie ou de l'athérosclérose. Le cholestérol alimentaire est absorbé sous forme de cholestérol libre par les cellules intestinales, estérifié par l'enzyme ACAT (acyl CoA cholestérol O-Acyl transférase), dans le sérum. L'inhibition de l'ACAT prévient l'absorption intestinale et l'accumulation de cholestérol dans le tissu artériel. En outre, les lipoprotéines de basse densité (LDL) sont, après oxydation, captées par les "scavenger receptors" et conduisent à la formation de la cellule spumeuse, point de départ de la plaque d'athérome (D. STEINBERG et al. England. J. Med. 320, 915-924, 1989). L'objet de la présente invention vise à obtenir de nouveaux dérivés hypocholestérolémiants et antioxydants pouvant agir à la fois sur la qualité et la quantité des LDL dans le but de réduire leur potentiel athérogène et leurs effets délétères à long terme sur la paroi vasculaire. Les composés de la présente invention répondent à la formule générale I. dans laquelle - R1, R2, R3, R4, R7, identiques ou différents représentent indépendamment les uns des autres l'hydrogène ou un radical alcoyle linéaire ou ramifié en C 1-C4. - Rg, R6, Rg, et Rg, identiques ou différents représentent indépendamment les uns des autres l'hydrogène, un radical alcoyle linéaire ou ramifié en C1-C4, ou un radical phényle éventuellement substitué. - Rlo représente un radical alcoyle linéaire ou ramifié en C3-C16. - A représente un atome de soufre ou un groupement méthylène. Les composés de formule générale I pouvant posséder des centres asymétriques, la présente invention couvre tous les stéréoisomères et leurs mélanges. Les composés de formule générale I peuvent être préparés selon la méthode suivante (schéma 1). étape: Traitement d'une aniline par un amino acide protégé au niveau de la fonction amine. Le groupement protecteur peut être le groupement t-butyloxy carbonyl (Boc). Le couplage avec l'aniline peut s'effecteur par traitement au chloroformate d'éthyle dans le diméthyl formamide en présence de triéthylamine. La déprotection peut s'effectuer en milieu acide chlorhydrique 6N dans le méthanol. On obtient ainsi le composé 11. Etape 2a: Traitement du composé II obtenu à l'étape 1 par un chlorure d'acide III pour obtenir les composés I dans lesquels A = CH2 ou par un chlorure d'acide a halogéné puis par un thiol R1OSH en milieu sodium éthanol ou en milieu tertiobutylate de potassium dans le tertiobutanol, pour obtenir les composés I dans lesquels A = soufre. Etape 2b : Traitement du composé II par un chlorure d'acide IV dans l'acétat d'éthyle en présence de triéthylamine pour obtenir des composés de formule I dans lesquels A est un atome de soufre ou un groupement méthylène. SCHEMA 1 R, HO R' R' i\ s R.4 RI I + N COOH R Boc A étape i 1) ClCOOEt / TEA / DMF 2) HCI 6N R1 HOooR2 o ( 11 ) R;;IIN ,NH R4 RsR' R3 NH R7 etape 2a étape 2b RsX Hal / \ R4X (A)Rto ( IV ) RX COCI / ( Rs COCI 2) R,,SH Na I EtOH ou terBuOK I terBuOH R R, HOI//R, Rîo R')INHÀR.N'7)ÉR'A)R1o A 4 (I) ( A= soufre ) (I) Les composés de formule générale I peuvent être utilisés pour la préparation de compositions pharmaceutiques ou de médicaments destinés au traitement de maladies telles que l'hypercholestérolémie ou l'athérosclérose. L'invention pourra être mieux comprise à l'aide des exemples non limitatifs qui suivent et qui constituent des modes de réalisation avantageux du procédé selon l'invention. EXEMPLE: N-(2-n-dodécylthio) propionamido-2 ' ,3 ' ,5 ' -triméthyl4 ' -hydroxy- glycylanilide 1. a) N-tertiobutoxycarbonyl-2 ',3',5'-triméthyl-4 ' -hydroxy-glycylanilide la. A une solution glacée de boc-glycine (1,75 g ; 0,01 mole) et de Nméthylmorpholine (2,19 mi; 0,02 mole) dans le chlorure de méthylène (10 ml) est ajoutée goutte à goutte une solution de chloroformate d'éthyle (0,96 ml ; 0,01 mole) dans le CH2Cl2 (5 ml). Après 20 minutes de contact à 0 C, on ajoute sous azote du chlorhydrate de 2,3,6triméthyl4-aminophénol (1,88 g ; 0,01 mole) dans le CH2C12 (40 ml). Le mélange réactionnel est ensuite agité 24 heures à température ambiante et évaporé sous vide. Le résidu est repris à l'eau, extrait à l'acétate d'éthyle. La phase organique est lavée à l'acide chlorhydrique N et à l'eau puis séchée (Na2SO4) et concentrée sous vide. Le résidu est purifié par chromatographie flash. On obtient 1,42 g de cristaux la. F = 208"C CCM : gel de silice 60F254 Merck. Rf = 0,54 (AcOEt) b) 2',3',5' - triméthyl4'-hydroxy-glycylanilide lb. 12 ml d'acide chlorhydrique 6N sont ajoutés au composé la (3,08 g 0,01 mole) dans le méthanol (100 ml). La solution est agitée à 60"C pendant 5 heures puis concentrée sous vide. Le solide est repris à l'eau, amené à pH 9 par addition de soude N et extrait 3 fois à l'acétate d'éthyle. Les phases organiques réunies sont lavées à l'eau, séchées (Na2S04) et évaporées sous vide. Un empâtage dans l'hexane fournit après filtration le composé lb (1,89g). F= 177 C CCM : gel de silice 60F254 Merck. Rf = 0,30 (CH2 Cl2 - MeOH 5S50) c) N-a bromopropionamid*2',3',5'-triméthyl 4'-hydroxy-glycylanilide lc. Une solution de dérivé lb (2,08 g ; 0,01 mole) dans l'acétate d'éthyle (35 ml) est additionnée de triéthylamine (1,67 ml ; 0,012 mole) puis, goutte à goutte, de bromure d'a-bromopropionyle dans l'acétate d'éthyle (15 ml) à température ambiante. Au bout d'une heure d'agitation, le milieu réactionnel est lavé à l'eau, séché (Na2S04) et concentré sous vide. Le solide est repris à l'hexane, filtré et séché pour donner le composé îc (2,89 g). F = 1780C CCM : Gel de silice 60F254 Merck. Rf = 0,48 (CH2C12 - MeOH 90-10). d) N-(2-n-dodécylthio) propionamido-2 ,3 I ,5 '-trirnéthyl' -hydroxyglycylanilide 1. Un mélange de sodium à 45 % dans la paraffine (0,63 g, 0,012 at. g.) et de n-dodécanethiol (2,9 ml ; 0,01 mole) est chauffé 45 minutes à 110"C. Après refroidissement, le thiolate est dissous dans l'éthanol (30 ml). Le dérivé lc (3,43 g ; 0,01 mole) est alors ajouté et le tout est porté à reflux pendant 6 heures. Le mélange réactionnel est évaporé sous vide et l'huile résiduelle extraite au chlorure de méthylène. La phase organique est lavée à HCl N, à leau et à l'eau salée. Après séchage et concentration de la solution, on obtient des cristaux blancs de produit 1 (3,29 g). F = 1090C CCM : gel de silice 60F254 Merck. Rf = 0.33 (CH2Cl2 - AcOEt 70-30) EXEMPLE 2 : N-(&alpha;,&alpha;,-diméthyl)tétradécanamido- ,3' ,5'-triméthyl-4'hydroxy- glycylanilide. A une solution de 2',3',5'-triméthyl-4'-hydroxy-glycylanilide (2,08 g; 0,01 mole) (préparé selon lb) et de triéthylamine (3,34 mi ; 0,024 ml) dans le DMF (20 ml), on ajoute goutte à goutte du chlorure d'&alpha;,&alpha;-diméthyl- tétradécanoyle (3,3 g ; 0,01 mole, préparé par action de chlorure de thionyle sur l'acide correspondant 3 heures au reflux du toluène) dans le tétrahydrofurane (40 ml). Après 4 heures d'agitation à température ambiante, le mélange réactionnel est dilué à l'eau et extrait à l'acétate d'éthyle. La phase organique est lavée à l'HCl N et à l'eau puis séchée et concentrée sous vide. Le solide obtenu est purifié par chromatographie flash (3,13 g). F = 1620C CCM : gel de silice 60F254 Merck. Rf = 0,56 (AcOEt) EXEMPLE 3. N-méthyl-N-(&alpha;-n-dodécylthio)isobutyramido-2',3',5'-triméthyl-4'- hydroxy-glycylanilide. Ce composé a été préparé selon le procédé décrit à l'exemple la et lb en utilisant la N-boc-sarcosine, puis condensation du chlorure d'a-ndodécylthioisobutyryle selon l'exemple 2. F = ll50C CCM : gel de silice 60F254 Merck. Rf = 0,46 (AcOEt - Hexane 50-50). EXEMPLE. N-(&alpha;-n-dodécylthio)-butyramido-2',3',5'-triméthyl-4'-hydroxy- glycylanilide. Ce composé a été préparé selon le procédé décrit à l'exemple 1, utilisant le bromure de 2-bromobutyryle. F = 1150C CCM : gel de silice 60F254 Merck. Rf = 0,46 (AcOEt - Hexane 50-50). EXEMPLE 5 : N-(a-n-dodécylthio) isobutyramido-2',3',5'-triméthyl-4'-hydroxyglycylanilide. Ce composé a été préparé selon le procédé décrit à l'exemple 2 en utilisant le chlorure d'adodécylthio-isobutyryle. F = 1130C CCM : gel de silice 60F254 Merck. Rf = 0,37 (AcOEt - Hexane 50-50). EXEMPLE 6 : N-(d-n-dodécylthio) acétamido-2',3',5'-triméthyl-4'-hydroxy- glycylanilide. Ce composé a été préparé selon le procédé décrit à l'exemple 1 en utilisant le chlorure de chloracétyle. F = 1280C CCM : gel de silice 60F254 Merck. Rf = 0,50 (AcOEt). EXEMPLE 7 : N-(&alpha;-n-dodécylthio)butyramido-2-éthyl-2',3',5'-triméthyl-4'-hydroxy- glycylanilide. Ce composé a été préparé selon les procédés décrits dans les exemples la et lb en utilisant l'acide a-bocamino-butyrique puis les procédés îc et îd en utilisant le bromure d'a-bromobutyryle.. F = 1530C CCM = gel de silice 60F254 Merck. Rf = 0,54 (CH2Cl2 - AcOEt 70-30). EXEMPLE 8 : N-méthyl-N-(&alpha;-n-dodécylthio)propionamido-2',3',5'-triméthyl-4'-hydroxy- glycylanilide. Ce composé a été préparé selon les procédés décrits dans les exemples la et lb en utilisant la boc-sarcosine puis les procédés îc et ld en utilisant le bromure de 2-bromopropionyle. F= 106 C CCM = gel de silice 60F254 Merck. Rf = 0,47 (AcOEt). EXEMPLE 9 : N-(&alpha;-n-dodécylthio)isobutyramido-2-n-butyl-2',3',5'-triméthyl-4'- hydroxy-glycylanilide. Ce composé a été préparé selon les procédés décrits dans les exemples la et lb en utilisant l'acide a-amino-hexanoïque selon le procédé de l'exemple 2 en utilisant le chlorure d'&alpha;-dodécylthio-isobutyryle. F = 1130C CCM : gel de silice 60F254 Merck. Rf = 0,40 (CH2Cl2 - AcOEt 90-10). EXEMPLE 10. N-(a-n-dodécylthio) isobutyramido-2-phényl-2 ,3' ,5'-triméthyl -hydroxy- glycylanilide. Ce composé a été préparé selon les procédés décrits dans les exemples la et lb en utilisant le N-boc-phényl glycine puis selon le procédé de l'exemple 2. F = 71 C CCM = gel de silice 60F54Merck. Rf = 0,35 (CH2C12 - AcOEt 90-10). EXEMPLE 11: N-(&alpha;-n-dodécylthio)phénylacétamido-2',3',5'-triméthyl-4'-hydroxy- glycylanilide. Ce composé a été obtenu selon le procédé décrit dans l'exemple 1 en utilisant le chlorure d'a-chloro-phenylacétyle. F = 1270C CCM : gel de silice 60F254 Merck. Rf = 0,58 (CH2Cl2 - AcOEt 70-30). EXEMPLE 12 : N-(a-n-dodécylthio)isobutyramido-3,5-bis-tertiobutyl-4'-hydroxyglycylanilide. Ce composé a été obtenu selon le procédé décrit à l'exemple 2 en utilisant le 2,6-bisterbutyl-4-aminophénol. F = 1030C CCM : gel de silice 60F254 Merck. Rf = 0,63 (AcOEt - hexane 50-50). EXEMPLE 13 : N-(a-n-dodécylthio) propionamido-3',5-bis-tertiobutyl-4'-hydroxyglycylanilide. Ce composé a été obtenu selon l'exemple 12. F = 93 C CCM : gel de silice 60F254. Merck. Rf = 0,38 (AcOEt - hexane 50-50). EXEMPLE 14 : N-(&alpha;-n-dodécylthio)propionamido-3'-méthyl-4'-hydroxy-5'-tertiobutyl- glycylanilide. Ce composé a été obtenu selon le procédé décrit à l'exemple 1 utilisant le 2-méthyl4- amino-6-terbutyl-phénol. F = 84 C CCM : gel de silice 60F254 Merck. Rf = 0,42 (CH2C12 - AcOEt 70-30). EXEMPLE 15 : N-méthyl-N-(&alpha;-n-dodecylthio) propionamido-3'-méthyl-4'-hydroxy-5'- tertiobutyl-glycylanilide. Ce composé a été obtenu selon l'exemple 14 en utilisant la N-bocsarcosine. F = 1170C CCM : gel de silice 60F254 Merck. Rf = 0,28 (AcOEt - Hexane 5S50). EXEMPLE 16. N-(&alpha;-n-dodécylthio)isobutyramido-3'-méthyl-4'-hydroxy-5'-tertiobutyl- glycylanilide. Ce composé a été préparé selon le procédé décrit à l'exemple 2. F = 90 C CCM : gel de silice 60F254 Merck. Rf = 0,38 (AcOEt - Hexane 50-50). EXEMPLE 17: N-(a-n-dodécylthio) butyramido-3'-méthyl-4'-hydroxy-5'-tertiobutylglycylanilide. Ce composé a été obtenu selon le procédé décrit à l'exemple 1 en utilisant le bromure de 2-bromobutyryle. F = 1250C CCM : gel de silice 60F254 Merck. Rf = 0,42 (AcOEt - hexane 50-50). Les composés de 1' invention ont été soumis à des essais pharmacologiques qui ont montré leur intérêt potentiel dans le traitement de l'hypercholestérolémie et de la maladie athéromateuse. Les composés ont été étudiés pour leur effet inhibiteur de l'ACAT et hypocholestérolémiant chez le rat d'une part et pour leur effet antioxydant d'autre part. 1) Inhibition de l'ACAT. L'activité inhibitrice de l'ACAT (enzyme acyl CoA : cholestérol O acyltransférase) des composés a été évaluée in vitro en utilisant la technique de H. CHAUTAN et al. (Analytical Biochemistry 173, 436-439, 1988). Les activités, exprimées en concentrations inhibitrices 50 % (CI30), obtenues sur certains produits de l'invention sont reportées, à titre d'exemple, dans le tableau 3 suivant: Composé n" CI50 (pM) 1 1,2 2 0,74 3 0,16 5 0,62 8 0,28 CI 976 0,98 DUP 128 0,09 2) Activité hypocholestérolémiante. Des rats mâles (160-180 g) sont soumis pendant 4 jours à un régime hypercholestérolémique Altromin C 1061 et traités parallèlement par les composés en suspension dans la carboxy méthyl cellulose à 1 %, par voie orale. Le Sème jour, les animaux à jeun depuis 16 heures sont anesthésiés à l'éther éthylique, exsanguinés par prélèvement sur EDTA à l'aorte abdominale. Le sang est immédiatement centrifugé et le plasma conservé à 4"C. Le cholestérol plasmatique est alors dosé par la méthode CHOP-PAP (Boehringer - Mannheim Réf. 237574). La dose efficace 50 (DE50) correspond à la dose qui réduit de moitié la concentration en cholestérol plasmatique par rapport aux animaux témoins. Composé n" DE50 (mg/kg) 1 1 2 3 3 5 2,5 8 4 CI 976 7,2 DUP 128 1,4 3) Activité antioxydante. a) Péroxydation chimique. En présence de Fe3+ et d'ADP, l'acide dihydroxyfumarique subit une autooxydation qui génère des radicaux libres oxygénés. Ces derniers entrainent la péroxydation des lipides microsomiaux hépatiques. Cette péroxydation, effectuée sur des microsomes de foie de rat, est mesurée selon la technique à l'acide thiobarbiturique (formation de T.BARS) tel que décrite par S.Y.H. TSE et al. (Biochemical Pharmacology, Vol 42, n" 3, 459464, 1991). Composé n" CI50 (yM) 1 3 2 0,5 3 0,5 5 0,3 8 0,5 CI 976 > 10 DUP 128 > 10 b) Oxydation des LDL. Les LDL humaines (Sigma L 2139) sont oxydées par CuSO4 4,5 CtM. Après une période d'incubation de 6 heures, la péroxydation est évaluée par mesure des T.BARS par spectrophotométrie à 532 nanomètres. Composé n" C150 OLIM) 1 5 2 1 3 5 5 3 8 3 CI 976 100 DUP 128 30 Les composés de 1' invention sont des hypocholestérolémiants inhibiteurs d'ACAT et antioxydants qui peuvent être utilisés pour le traitement des maladies telles que l'hypercholestérolémie et l'athérosclérose. Les compositions pharmaceutiques peuvent être présentes sous la forme appropriée pour l'administration par voie orale, parentérale ou locale par exemple sous la forme de capsules, comprimés, granulés, gélules, solutés liquides, sirops ou suspensions buvables et contenir les excipients appropriés. La posologie quotidienne peut aller de 10 à 2000 mg. REVENDICATIONS 1) Nouveaux dérivés de glycylanilides caractérisés en ce qu'ils répondent à la formule générale I: dans laquelle - R1, R2, R3, R4, R7, identiques ou différents, représentent indépendamment les uns des autres l'hydrogène ou un radical alcoyle linéaire ou ramifié en C1-C4. - Rg, R6, R8 et Rg, identiques ou différents, représentent indépendamment les uns des autres l'hydrogène, un radical alcoyle linéaire ou ramifié en C1-C4, ou un radical phényl éventuellement substitué. - R1o représente un radical alcoyle linéaire ou ramifié en C3-C16. - A représente un atome de soufre ou un groupement méthylène. 2) Composés répondant à la formule générale (I) selon la revendication 1, sélectionnés parmi le groupe suivant: -N-(2-naodécylthio)propionamido-2 '3' ,5 ' -triméthyl4 '-hydroxy glycylanilide -N- (a, a- diméthyl) tétradécanamido-2',3',5'- triméthyl4'- hydroxy glycylanilide -N-méthyl-N-(a-n-dodécylthio) isobutyramido-2' ',3 ',5 ' -triméthyl4 ' -hydroxyglycylanilide -N-(a-n-dodécylthio)-butyramido-2',3',5'-triméthyl-4'-hydroxy-glycylanilide -N-(a-n-dodécylthio)isobutyramido-2 ,3 ' ,5 ' -triméthyl4 ' -hydroxy-glycylanilide -N-(a-n-dodécylthio)acétamido-2 ' '3' ,5 '-triméthyl4 ' -hydroxy-glycylanilide -N-(a-n-dodécylthio)butyramido-2-éthyl-2 ',3 '5' -triméthyl4 ' -hydroxyglycylanilide -N-méthyl-N-(&alpha;-n-dodécylthio)propionamido-2',3',5'-triméthyl-4'-hydroxy- glycylanilide -N-(a-n-dodécylthio) isobutyramido-2-n-butyl-2 '3' '5' -triméthyl4' -hydroxyglycylanilide -N-(&alpha;-n-dodécylthio)isobutyramido-2-phényl-2',3',5'-triméthyl-4'-hydroxy- glycylanilide -N-(&alpha;-n-dodécylthio)phénylacétamido-2',3',5'-triméthyl4'-hydroxy- glycylanilide -N-(&alpha;;-n-dodécylthio)isobutyramido-3',5'-bis-tertiobutyl-4'-hydroxy-glycylanilide -N-(a-n-dodécylthio)propionamido-3 ',5 ' -bis-tertiobutyl-t'-hydroxy-glycylanilide -N-(a-n-dodécylthio)propionamido-3 '-méthyl4 ' -hydroxy-5 -tertiobutyl- glycylanilide -N-méthyl-N-(&alpha;-n-dodécylthio)propionamido-3'-méthyl-4'-hydroxy-5'- tertiobutyl- glycylanilide -N-(&alpha;-n-dodécylthio)isobutyramido-3'-méthyl4'-hydroxy-5'-tertiobutyl- glycylanilide -N-(a-n-dodécylthio)butyramido-3 '-méthyl41-hydroxy-5-tertiobutyl- glycylanilide. 3) Procédé de préparation des composés selon l'une des revendications 1 ou 2, caractérisé en ce que a) dans une première étape, on traite une aniline par un Boc-aminoacide en présence de chloroformate d'éthyle et de triéthylamine dans le diméthyl formamide puis par l'acide chlorhydrique 6 N pour fournir l'intermédiaire II. dans lequel R1, R2, R3, R4, Rg, R6, R7 sont tels que définis dans la revendication 1. b) dans une deuxième étape, soit on traite l'intermédiaire ll par un chlorure d'acide a halogéné III dans lequel R8 et Rg sont tels que définis dans la revendication 1 et Hal représente le chlore ou le brome, puis par un thiol R1OSH, R10 ayant la même signification que dans la revendication 1, en milieu sodium - éthanol ou tertiobutylate de potassium dans le tertiobutanol pour obtenir les composés I dans lesquels A = soufre, soit on traite l'intermédiaire ll par un dérivé IV dans lequel Rg, Rg, R10 et A ont la même signification que dans la revendication 1, dans l'acétate d'éthyle en présence de triéthylamine pour obtenir des composés dans lesquels A est un atome de soufre ou un groupement méthylène. 4) A titre de médicaments, les composés de formule générale I selon les revendications 1 ou 2, en particulier à titre de médicaments utilisés pour le traitement de maladies telles que l'hypercholestérolémie ou l'athérosclérose. 5) Compositions pharmaceutiques, caractérisées par le fait qu'elles contiennent, outre un support pharmaceutiquement acceptable, au moins un composé de formule générale I selon l'une quelconque des revendications 1 ou 2. 6) Utilisation de composés de formule générale I selon l'une quelconque des revendications 1 ou 2, pour la fabrication de médicaments destinés au traitement de maladies telles que l'hypercholestérolémie ou l'athérosclérose.