FR 2736267 A1 19970110 FR 9508323 A 19950705 CONSERVATEUR POUR COMPOSITION VACCINALE La présente invention est relative au domaine des vaccins. Plus particulièrement l'invention est relative à la conservation des vaccins. Les vaccins sont des compositions pharmaceutiques destinées à être administrées à l'homme ou à l'animal, par différentes voies et notamment par injection parentérale. Il est donc nécessaire de les maintenir aussi longtemps que possible, dépouvus d'agents microbiens indésirés. A ce titre, les différentes pharmacopées ont fixé des normes que les producteurs de vaccins doivent respecter. Bien qu'un grand nombre de produits soient connus pour leur activité anti-microbienne, peu d'entre eux, cependant, sont utilisés dans les compositions vaccinales administrées par voie parentérale. En effet, les antigènes utilisés dans les compositions vaccinales sont constitués de matériel biologique fragile.Or, un certain nombre de conservateurs, s'ils possèdent bien les qualités anti-microbiennes requises, ne peuvent cependant pas être utilisés dans des vaccins, car ils présentent l'inconvénient de réduire l'activité de certains antigènes. D'autres, tel le mercurothiolate sodique, présentent l'inconvénient d'être fabriqués selon un procédé de production polluant. L'invention a donc pour but de proposer une nouvelle composition vaccinale comprenant un conservateur n'affectant pas l'activité des antigènes présents. Pour atteindre ce but, I'invention a pour objet une composition vaccinale, caractérisée en ce qu'elle comprend du 3 p-chlorphenoxypropane-1,2 diol. On a en effet trouvé que le 3p-chlorphenoxypropane-1,2 diol, dont l'utilisation comme conservateur dans des formulations cosmétiques était connu, pouvait également être utilisé comme conservateur dans des compositions vaccinales sans affecter l'activité des antigènes présents. De façon surprenante, on a trouvé que le 3 p-chlorphenoxypropane-1,2 diol avait en outre tendance à favoriser la stabilité de certaines compositions vaccinales. L'invention a également pour objet l'utilisation de 3 p-chlorphenoxypropane-1,2 diol dans une composition vaccinale. L'invention a également pour objet un solvant de reconstitution sous forme liquide d'une composition vaccinale présente au moins partiellement sous forme lyophilisée, caractérisé en ce qu'il comprend du 3 p-chlorphenoxypropane-1,2 diol. Ainsi, dans le cas de vaccins multi-doses, la composition vaccinale reconstituée pourra être conservée dans de bonnes conditions jusqu'à son utilisation complète. Le solvant peut être un liquide dont la seule fonction est la reprise du lyophilisat ou être lui-même une composition vaccinale liquide qui est, en outre, avant son administration, utilisée pour dissoudre au moins une valence vaccinale supplémentaire présente sous forme lyophilisée. La présente invention sera mieux comprise à la lecture de la description qui va suivre et des exemples illustrant de façon non limitative un certain nombre de modes de réalisation. Le composé 3p-chlorphenoxypropane-1,2 diol, encore appelé [3-(4-chlorophenoxy)1,2-propanediol], ou éther de p-chlorophenyl glycerol peut être obtenu auprès de la Société MERCK CLEVENOT qui le commercialise sous la dénomination Chlorphenesine avec la référence 200 002. Sa formule chimique est la suivante: La quantité de 3p-chlorphenoxypropane-1,2 diol qu'il convient d'ajouter à la composition vaccinale est selon l'invention d'au moins 2 g/l, de préférence au moins 3 g/l, au moins 4 g/l, au moins 5 g/l, et de préférence sensiblement égale à 6 g/l. Selon un mode particulier de réalisation, les compositions vaccinales de l'invention comprennent également du formol qui peut être un résidu du procédé d'obtention de l'un au moins des antigènes de la composition, ou qui peut être rajouté spécifiquement pour ses propriétés antimicrobiennes propres. Les quantités de formol présentes dans la composition sont par exemple de l'ordre de 25 mg/l. Dans ce cas, il est possible de réduire la quantité de 3p-chlorphenoxypropane-1,2 diol utilisé. Il est également possible d'ajouter aux compositions vaccinales contenant du 3p-chlorphenoxypropane-1,2 diol, du chlorure de sodium, à 4%o par exemple. Les compositions vaccinales peuvent comprendre toutes sortes d'antigènes, qu'ils soient seuls ou en combinaison. On peut notamment citer, sans que la liste soit exhaustive, les antigènes de l'hépatite B, de l'hépatite A, de la rage, de la polio (type 1, type 2, type 3), de la diphtérie, du tétanos, de la coqueluche, de la grippe, des infections à Haemophilus influenzae type b, de la typhoïde, de la rougeole, de la rubéole, des oreillons, de la varicelle, du zona, de la fièvre jaune, de la Dengue, de l'encéphalite japonaise, de la maladie de Lyme, des infections à pneumocoques. Le conservateur utilisé selon l'invention présente l'avantage d'être complètement inerte; il ne s'adsorbe ni sur les plastiques, ni sur le verre et n'entraîne aucune variation de pH de la composition vaccinale, ce qui est un avantage car une baisse de pH > par exemple, peut entraîner une réduction de l'activité de certains antigènes. L'activité anti-microbienne du conservateur selon l'invention est testée en solution aqueuse, afin de déterminer les concentrations minimales inhibitrices, bactéricides et fongicides selon la méthode décrite au chapitre "Evaluation de l'Activité Antimicrobienne des antibiotiques in vitro" de l'ouvrage "Bactériologie Médicale", Léon Le MINOR, Michel VERON, FLAMMARION. On obtient pour chaque germe les résultats suivants en pourcentage (m/v) Concentration Concentration Concentration Minimale Inhibitrice Minimale Minimale Fongicide Bactéricide E. coli 0,1 0,4 S. aureus 0,4 0,4 P. aeruginosa 0,2 0,4 C. albicans 0,2 0,4 A. niger 0,1 0,2 On teste l'activité antimicrobienne d'une solution aqueuse contenant 0,4 % de 3p chlorphenoxypropane- 1,2 diol, 0,4 % de NaCI et du tampon phosphate 20 molaire, selon les normes de la Pharmacopée Européenne (EP VIII. 14.-1). Les résultats obtenus pour chaque germe testé sont indiqués dans le tableau cidessous. Ces résultats sont exprimés en termes de réduction logarithmique du nombre de microorganismes par rapport à un témoin peptone à l'instant T. T T+6h T+24h T+48h T+7j T+14j T+28 J BACTERIES Pseudomonas aeruginosa 1,28 > 2,34 > 2,34 > 2,34 > 4,34 5,34 5,34 Staphylococcus aureus 0,02 0,16 1,7 2,79 > 4,96 5,96 5,96 CHAMPIGNONS Candida albicans 0,04 0,196 1,55 1,08 > 4,04 6,04 6,04 Aspergillus Niger 0 0 A A A 1,3 > 4,00 A= Augmentation de la quantité d'Aspergillus Niger/ml par rapport au témoin peptone à l'instant T. Ces résultats mettent en évidence une activité antimicrobienne d'une solution contenant 0,4 % de 3 p-chlorphenoxypropane- 1,2 diol lui permettant de répondre au critère B de la Pharmacopée Européenne. Exemple 1 On fabrique une composition vaccinale comprenant une dose vaccinante de chacune des souches suivantes du virus de la grippe : A/Shangdong, A/Texas, B/Panama. Les éléments de la composition vaccinale sont les mêmes que ceux utilisés dans le vaccin VAXIGRIPTM commercialisé par PASTEUR MERIEUX Sérums et Vaccins, à l'exception du mercurothiolate sodique qui est remplacé par le conservateur selon l'invention. La composition ainsi obtenue comporte également 25 llg/ml de formol qui est un résidu du procédé de fabrication des antigènes du virus de la grippe. On teste la stabilité de la composition vaccinale obtenue comparativement avec un conservateur selon l'invention et sans conservateur. La stabilité de la composition vaccinale est appréciée en dosant la perte d'activité au cours du temps d'une composition maintenue à 37"C ou à 5"C. Le dosage de l'activité est effectué par immuno-diffision radiale. Les résultats obtenus, résumés dans le tableau ci-après, sont exprimés en pourcentage d'activité par rapport au temps 0. Pourcentage de 3p-chlorphenoxypropane-1,2 diol SOUCHE STABILITE 0,3 OP 0,5 0 A. Shangdong 1 mois à 37 C - 9 % - 11 % + 2% - 100 % 3moisà 5 C + 3 % - 2% 0% - 7% 1 mois à 37 C - 32 % - 31 % - 40% - 100 % A. Texas 1 mois à 37 C - 32 % - 31% - 40% -100% 3 mois à 50C - 12 % - 4% - 8% - 26% 1 mois à 37 C - 100 % - 100 % - 100 % - 100 % B. Panama 3 mois à 5 C - 44 % - 44% - 66% - 91 % Les résultats obtenus montrent que le conservateur utilisé selon l'invention favorise la stabilité de certains des antigènes présents dans la composition vaccinale par rapport à une composition vaccinale dépourvu de conservateur. Exemple 2 On réalise des compositions vaccinales comprenant 1 dose vaccinante de chacune des 3 souches du virus de la poliomyélite (type 1, 2 et 3), de même que dans le vaccin polio oral commercialisé par la Société PASTEUR MERIEUX Sérums et Vaccins ; le conservateur habituel 2 phenoxyéthanol est toutefois remplacé par du 3pchlorphenoxypropane-1,2 diol. Les compositions vaccinales ainsi obtenues contenant également 25 pg/ml de formol qui constitue un résidu de fabrication, sont testées au moyen d'un test ELISA aux Antigènes D, pour vérifier le maintien de leur activité au cours du temps. Les résultats obtenus pour chaque type sont indiqués dans le tableau ci-dessous ; ils sont exprimés de la même façon qu'à l'exemple 1 en pourcentage d'activité. Pourcentage de 3p-chlorphenoxypropane- 1,2 diol SOUCHE STABILITE 0,3 0,4 0,5 O Polio type 1 1 mois à 37 C - 76 % - 80% - 80% - 55 % 6moisà 5 C - 9 % - 27% - 13% - 7% 1 mois à 37 C - 15 % + 3 % - 4% - 13 % Polio 1moisà370C - type 2 - 4% - 13% 6 mois à 5 C - 2 % - 24% - 21% - 5% 1 mois à 37 C - 12 % - 8 % - 16 % + 20 % Polio 1mois à 37 C - type 8% - 16% + 20% 6moisà 50C + 7% - 40% - 35% - 5% Etant donné la précision des titrages, les résultats obtenus permettent de constater que l'ajout du conservateur selon l'invention ne modifie pas globalement la stabilité de la composition vaccinale. Exemple 3 On prépare une composition vaccinale comportant l'antigène de surface de l'hépatite B, obtenu par recombinaison génétique et exprimé dans des cellules eucaryotes (levures ou cellules de mammifères) dont la composition est semblable à celle du vaccin RecombivaxTM commercialisé par la Société MERCK, à l'exception du mercurothiolate sodique qui est remplacé par du 3p-chlorphenoxypropane-1,2 diol associé ou non à du formol. On teste l'activité de la composition vaccinale obtenue, grâce à un dosage des antigènes Hbs au moyen d'un kit commercialisé par la Société ABBOTT. Les résultats obtenus sont indiqués ci-après en pourcentage d'activité. 1 mois à 37"C Témoin sans conservateur - 23 % 3p-chlorphenoxypropane- - 21 % 1,2 diol à 0,4 % 3p-chlorphenoxypropane- - 34 % 1,2 diol à 0,4 % + formol Les résultats obtenus montrent que le conservateur selon l'invention ne modifie pas substantiellement l'activité de la composition vaccinale obtenue. Exemple 4 On prépare une composition vaccinale comprenant l dose vaccinante de vaccin rabique contenant du virus obtenu sur culture cellulaire, inactivé et purifié, présenté sous forme d'un lyophilisat destiné à être repris extemporanément par un solvant. Le solvant constitué selon l'art antérieur par une solution aqueuse de NaCI à 0,4 % comporte, selon l'invention, du 3p-chlorphenoxypropane-1,2 diol à une concentration de 0,4 %. On teste, de façon comparative, la stabilité de la composition vaccinale obtenue par reprise du lyophilisat avec un solvant contenant un conservateur selon l'invention, avec un solvant selon l'art antérieur (c'est-à-dire comportant uniquement du NaCI) et avec de l'eau, après stockage dans différentes conditions. Les dosages sont effectués par immuno-diffusion radiale (SRD); les résultats indiqués dans le tableau ci-après sont exprimés en différence de titre SRD par rapport à un échantillon stocké à - 20"C et dont le lyophilisat est repris extemporanément. Différence de titre SRD Stabilité eau NaCI 0,4 % 3p-chlorphenoxypropane 1,2 diol à 0,4 % 2 semaines à 25 C - 0,29 + 0,45 - 0,49 + 0,69 + 0,89 + 0,73 2 semaines à 50C 5 C Les résultats obtenus montrent la compatibilité du conservateur selon l'invention avec le vaccin rabique et confirment la possibilité d'utiliser le 3p-chlorphenoxypropane1,2 diol comme conservateur non pas directement dans la composition vaccinale liquide, mais également dans le solvant de reprise du vaccin lyophilisé. Exemple 5 On fabrique une composition vaccinale hexavalente comprenant - 1 dose vaccinante d'antigène Hbs (Hépatite B) adsorbé sur hydroxyde d'aluminium - 1 dose vaccinante de vaccin polio (types 1, 2 et 3) - 1 dose vaccinante de vaccin diphtérique - 1 dose vaccinante de vaccin tétanique - l dose vaccinante de vaccin coqueluche acellulaire - 1 dose vaccinante de PRP-T (Antigène de Haemophilus influenzae type b) On ajoute à cette composition vaccinale du 3p-chlorphenoxypropane-1,2 diol à différentes concentrations : 0,125 %; 0,25 % et 0,5 %. On teste la compatibilité du conservateur utilisé pour chaque concentration vis-à-vis de chacune des valences vaccinales de la composition. Les tests relatifs au maintien de l'activité des valences hépatite B et polio sont effectués selon les méthodes décrites aux exemples 2 et 3. Les résultats obtenus sont les suivants Pourcentage d'activite après 6 mois à 5"C Valence vaccinale Concentration en 3 p-chlorphenoxypropane- 1,2 diol 0,125 0,250 0,500 Hépatite B + 29 % + 18 % + 4 % Polio type l - 10 % - 18 % - 27 % Polio type 2 - 1% + 10 % - 2% Polio type 3 - 17 % - 12 % - 13 % L'activité des valences diphtérie, tétanos, coqueluche et PRP-T, a été testée in-vivo avec une composition vaccinale contenant 0,5 % de 3p-chlorphenoxypropane-1,2 diol, ayant été maintenue 6 semaines à 5"C avant d'être testée. L'immunisation des animaux a conduit au verdict : "conforme" pour chacune des valences testées. Ces résultats démontrent une bonne compatibilité du conservateur selon l'invention vis-à-vis de chacun des antigènes testés, même lorsqu'ils sont associés dans une composition vaccinale plurivalente. Exemple 6 Afin de vérifier la non-dégradation du conservateur selon l'invention, on réalise des compositions vaccinales identiques à celles de l'exemple 2. On dose par HPLC la quantité de 3p-chlorphenoxypropane-1,2 diol présente dans chaque composition après stockage dans différentes conditions de durée et de température. Les résultats obtenus sont les suivants Stockage Pourcentage de 3p-chlorphenoxypropane-1,2 diol Composition de départ 0,30 0,40 0,50 1 mois à 37"C 0,30 0,39 0,52 6 mois à 5"C 0,31 0,39 0,51 Les résultats obtenus montrent qu'il n'y a pas de dégradation sensible au cours du temps du conservateur utilisé selon la présente invention. Cette non-dégradation a pour conséquence l'avantage que le conservateur selon l'invention n'entraîne pas de variation de pH qui pourrait se traduire par une diminution de l'activité de certains antigènes. Revendications 1) Composition vaccinale, caractérisée en ce qu'elle comprend du 3p chlorphenoxypropane-1,2 diol. 2) Composition vaccinale selon la revendication 1, caractérisée en ce que la quantité de 3p-chlorphenoxypropane-1,2 diol est au moins égale à 2 g/l. 3) Composition vaccinale selon la revendication 1 ou 2 caractérisée en ce que la quantité de 3p-chlorphenoxypropane-1,2 diol est sensiblement égale à 6 g/l. 4) Composition vaccinale selon une des revendications précédentes, caractérisée en ce qu'elle comprend en outre du formaldéhyde. 5) Composition vaccinale selon une des revendications précédentes, caractérisée en ce qu'elle comprend en outre du chlorure de sodium. 6) Composition vaccinale selon une des revendications précédentes, caractérisée en ce qu'elle comprend en outre une ou plusieurs valences vaccinales choisies parmi I'hépatite A, I'hépatite B, la rage, la polio (type 1, type 2, type 3), la grippe, Haemophilus influenzae type b, la diphtérie, le tétanos, la coqueluche. 7) Utilisation du 3 p-chlorphenoxypropane-1,2 diol dans une composition vaccinale. 8) Utilisation selon la revendication 7, caractérisée en ce que le 3p chlorphenoxypropane-1,2 diol est présent dans un solvant destiné à reconstituer sous forme liquide une composition vaccinale lyophilisée en vue de son administration. 9) Solvant de reconstitution sous forme liquide d'une composition vaccinale présente au moins partiellement sous forme lyophilisée, caractérisé en ce qu'il comprend du 3p-chlorphenoxypropane- 1,2 diol.