FR 2730998 A1 19960830 FR 9502062 A 19950223 La présente invention concerne de nouveaux peptides agonistes de cholécystokinine. La cholécystokinine (CCK) est une hormone polypeptidique de 33 résidus d'acides aminés découverte en 1928 par IVY et OLDBERG dans des extraits de la muqueuse intestinale de chien. Au niveau périphérique, la CCK stimule la contractilité des voies biliaires et les sécrétions pancréatiques, I'activité du muscle lisse de l'ensemble du tube digestif, et elle intervient dans le contrôle de nombreuses fonctions en particulier de la prise alimentaire. Au niveau du système nerveux central, la CCK se comporte à la fois comme un neurotransmetteur et comme un neuromodulateur. Pharmacologiquement, deux principaux types de récepteurs à la CcK ont été identifiés et récemment clonés : le type périphérique, nommé CCK-A et le type central, nommé CCK-B.Plusieurs formes moléculaires de la CCK ont été isolées mais il est clairement apparu que l'oetapeptide C-terminal de séquence H-AspTyr(S03H)-Met-Gly- Trp-Met-Asp-Phe-NH2 possède la totalité des activités biologiques de l'hormone entière. I1 était donc particulièrement intéressant de synthétiser de nouveaux peptides agonistes au récepteur CCK. Ces peptides sont utilisables dans le traitement et la prévention des troubles gastro-intestinaux, de la consommation alimentaire, pour la régularisation de la sécrétion de l'insuline (CCK-A) ainsi que comme antipsychotique, neurolytique, anxiolytique, anticonvulsif (CCK-B). L'état antérieur de la technique est plus spécialement représenté par les brevets WO 9006937, EP 336356 ou WO 9119733. L'invention conceme plus particulièrement les nouveaux composés de formule (1): dans laquelle: R représente un groupement aikylène (C1-C10) linéaire ou ramifié éventuellement substitué par un ou plusieurs groupements hydroxy, et R1 représente un atome d'hydrogène ou un groupement méthyle, leurs isomères ainsi que leurs sels d'addition à un acide ou à une base pharmaceutiquement acceptable. Parmi les acides pharmaceutiquement acceptables, on peut citer à titre non limitatif les acides chlorhydrique, bromhydrique, sulfurique, phosphonique, acétique, trifluoroacétique, lactique, pyruvique, malonique, succinique, glutarique, fumarique, tartrique, maléique, citrique, ascorbique, oxalique, méthane sulfonique, camphorique, etc... Parmi les bases pharmaceutiquement acceptables, on peut citer à titre non limitatif l'hydroxyde de sodium, l'hydroxyde de potassium, la triéthylamine, la tertbutylamine, etc... Les composés préférés de l'invention sont ceux dans lesquels chaque amino-acide du dérivé peptidique est de configuration L. L'invention s'étend également au procédé de préparation des composés de formule (I) caractérisé en ce que l'on fait réagir 2 équivalents du tétrapeptide de formule (11) obtenu selon des techniques classiques de la chimie peptidique et plus particulièrement selon le procédé décrit dans le brevet WO 9119733: dans laquelle R1 a la même signification que dans la formule (I), que l'on fait réagir avec un équivalent du diacide de formule (m) en présence d'un réactif de couplage approprié: H02C-R-C02H ('H) dans laquelle R a la même signification que dans la formule 0, pour conduire au composé de formule (IV):: dans laquelle R et R1 ont la même signification que dans la formule (I), qui subit alors une débenzylation par hydrogénation catalytique, pour conduire au composé de formule (I), - qui peut être, le cas échéant, purifié selon une technique classique de purification - dont on sépare éventuellement les isomères selon une technique classique de séparation, - que l'on transforme, si on le souhaite, en ses sels d'addition à une base pharmaceutiquement acceptable. Le composé de formule (11) préféré que l'on peut également écrire de la manière suivante: H-TrPLys[-N-(2-méthylphényl)aminocarbonyl]-Asp(OBzl)-(NMe)Phe-NH2 (u) peut être obtenu plus spécifiquement selon le schéma de synthèse ci-dessous:: Boc-Asp(OBzl)-OH + N-(NMe)The-NH2 BrOP DIEA Boc-Asp(OBZl}(NMeXphe-NH2 Boc-Lys-OH + N=O DMF \= cH3 DIEA cF3COH DMF H-Asp(OBzl > (NMe)Phe-NH2,CF3CO2H + Boc-Lys[-N-(2-méthylphényl) nocarbonyl]-OH BOP, NMM1 DMF Boc-Lysfr -N-(2-méthylphényl)aminocarbonyl]-Asp(OB 1 CF3CO2H Fmoc-TrpOH + Wis e -N-(2-mé,thylphényl)aminocarbonyl]-Asp(O BOP -'M Frnoc-TrjLyse Lys[e-N-(2-méthylphényl)aniinocarbonyl]-Asp(OBzl) (NMe)Phe-NEt n DMF DMF (11) DMF Les abréviations utilisées dans le schéma de synthèse cidessus ainsi que dans les exemples sont les suivantes:: Boc à la place de butoxycarbonyle, Bzl à la place de benzyle, Me à la place de méthyle, Asp à la place du résidu de l'acide L-aspartique, Phe à la place du résidu L-phénylalanine, Lys à la place du résidu L-lysine, Trp à la place du résidu L-tryptophane, Brop à la place de hexafluorophosphate de tris(diméthylamino)bromophosphonium, Froc à la place de 9-fluorénylméthoxycarbonyle, DEA à la place de diéthylamine, DIEA à la place de de diisopropyléthylamine, NMM à la place de N-méthylmorpholine, BOP à la place de benzotriazol-l-yloxy-tris(diméthylamino)phophonium-hexafluorophosphate, DMF à la place de diméthylformamide. Les composés de l'invention possèdent des propriétés pharmacologiques très intéressantes. Ce sont de puissants ligands aux récepteurs CCK qui par leurs propriétés agonistes sont utilisables dans le traitement et la prévention des troubles gastro-intestinaux, de l'appétit, du système nerveux central ainsi que régulateurs de la sécrétion d'insuline. La présente invention a également pour objet les compositions pharmaceutiques renfermant comme principe actif au moins un composé de formule (T) seul ou en combinaison avec un ou plusieurs excipients ou véhicules inertes non toxiques. Parmi les compositions pharmaceutiques selon l'invention, on pourra citer plus particulièrement celles qui conviennent pour l'administration orale, parentérale, nasale, les comprimés simples ou dragéifiés, les comprimés sublinguaux, les gélules, les tablettes, les suppositoires, les crèmes, pommades, gels dermiques, etc... La posologie utile varie selon l'age et le poids du patient, la nature et la sévérité de l'affection ainsi que la voie d'administration. Celleci peut être orale, nasale, rectale ou parentérale. Dune manière générale, la posologie unitaire s'échelonne entre 50 et 300 mg pour un traitement en 1 à 3 prises par 24 heures. Les exemples suivants illustrent l'invention et ne la limitent en aucune façon. Les produits de départ utilisés sont des produits connus ou préparés selon des modes opératoires connus. EXEMP CO-TrpLys t -N-(2-méthylphényl)aminocarbonyl] -Asp-(NMe)-Phe- NH2 (CH2)8 CO-TrpLysE N42 méthylphényl)aminocarbonyl]-Asp-(NMe)-Phe-NH2 ou STADEA ; Boc-Asp(OBzl)-(N-Me)Phe-NH2 A une solution de l'amine N-méthylée H-(N-Me)Phe-NH2, trifluoroacétate (3,88 g, 13,36 mmol) dans 20 ml de dichlorométhane, sont additionnés du Boc-Asp(OBzl)-OH (6,42 g, 19,88 mmol) et du BroP (7,72 g, 19,88 mmol). La température est abaissée à 00C pour l'addition de la DIEA (7,15 ml, 41,58 mmol). On maintient le bain pendant une minute, puis on laisse sous agitation à température ambiante pendant 3 heures.On dilue le milieu dans 60 ml d'AcOEt, et on lave successivement avec les solutions suivantes: saturée de NaHCO3 (3x150 ml), de KHSO4 1M (3x150 ml), et saturée de NaCl jusqu'à neutralité. On sèche sur Na2S04, on évapore, le peptide est purifié par chromatographie sur gel silice en éluant à l'acétate d'éthyle. On concentre sous pression réduite et le produit est précipité dans l'étherjhexane. Rendement: 74 96 STADE B : Boc-Lys[#-N-(2-méthylphényl)aminocarbonyl]-OH La Boc-Lys-OH (3,7 g, 15 mmol) est solubilisée dans du DMF (30 ml). La solution est alors refroidie à 0 C, on additionne 1,81 ml d'orthotolylisocyanate (15 mmol) et 2,58 ml de DIEA (15 mmol). Après 5 minutes le mélange réactionnel est ramené à température ambiante et laissé sous agitation pendant 30 minutes. On ajoute alors une solution de NaHCO3 (100 ml). La phase aqueuse est lavée par de l'AcOEt (50 ml), puis acidifiée par addition dans une solution de KHSO4 1M. Le produit est ensuite extrait par de l'acétate d'éthyle (50 ml), la solution est séchée sur MgSO4 et concentrée sous pression réduite pour conduire à un précipité blanc. Rendement: 90 96 STADE C : Boc-Lys[#-N-(2-méthylphényl)aminocarbonyl]-Asp(OBzl)-(NMe)Phe-NH2 Le composé obtenu au stade A (4,90 g, 10,10 mmol) est déprotégé par de l'acide trifluoroacétique. Après 30 minutes à température ambiante, le solvant est concentré sous pression réduite. Le sel de TFA est ajouté à une solution du composé obtenu au stade B (4,21 g, 11,11 mmol) et du BOP (4,91 g, 11,11 mmol) dans du DMF (30 ml). Après addition de NMM (2,46 ml, 22,22 mmol), le mélange réactionnel est agité pendant 1 heure à température ambiante. On dilue le milieu dans 60 ml d'acétate d'éthyle, et on lave successivement avec des solutions de : NaHCO3 (3x150 ml), KHSO4 1M (3x150 ml), et saturée de NaCl jusqu'à neutralité.On sèche sur Na2S04, on évapore, le peptide est purifié par chromatographie sur gel silice en éluant à l'AcOEt. On concentre sous pression réduite et le produit est précipité dans l'éther/hexane. Rendement : 92 % STADE D : Fmoc-Trp-Lys[#-N-(2-méthylphényl)aminocarbonyl]-Asp(OBzl)-(NMe) Phe-NH2 Le composé obtenu au stade C (4,47 g, 6 mmol) est partiellement par de l'acide trifluoroacétique. Après 30 minutes à température ambiante, le solvant est concentré sous pression réduite, précipité dans l'éther, récolté par filtration et séché en présence de P2O5. Le trifluoroacétate est ajouté à une solution de Fmoc-Tr OH (2,56 g, 6 mmol) et du BOP (2,65 g, 6 mmol) dans du DMF (30 ml). Après addition de NMM (1,33 ml, 12 mmol), le mélange réactionnel est agité pendant 1 heure à température ambiante.Le produit de la réaction est précipité par addition d'une solution saturée de NaHCO3, récolté par filtration, lavé par une solution de KHSO4 1M, rincé à l'eau et séché en présence de P2O5. Rendement 85% Point de fusion: : llO-1120C STADE E: H-Trp-Lys[#-N-(2-méthylphényl)aminocarbonyl]-Asp(OBzl)-(NMe)Phe-NH2 Le composé obtenu au stade D (5,34 g, 5,57 mmol) est partiellement déprotégé par une solution de diéthylamine (5,57 ml) dans du DMF (56 ml) à température ambiante pendant 1 heure. Le mélange réactionnel est concentré sous pression réduite, le produit est alors précipité par addition d'éther, récolté par filtration et séché en présence de P2O5. STADE F : CO-TrpLys [E -N-(2-méthylphényl)aminoearbonyl]-Asp(NMe)Phe-NH2 (CH2)8 CO-Tr Lys[E -N-(2-méthylphényl)aminocarbonyl] -Asp-(NMe)Phe-NH2 Le composé obtenu au stade E (0,52 g, 0,63 mmol, 2eq) est ajouté à une solution d'acide décanediolque (0,063 g, 0,315 mmol) dans du DMF (15 ml) en présence de BOP (0,28 g, 0,63 mmol) et de NMM (0,077 ml, 0,70 mmol). Le milieu réactionnel est laissé sous agitation pendant 12 heures à température ambiante.Le produit est précipité par addition d'une solution saturée de NaHC03, récolté par filtration, lavé par une solution de KHSO4 1M, rincé à l'eau et séché en présence de P2O5. Le produit obtenu est totalement déprotégé par hydrogénolyse en présence de palladium sur charbon 10 % dans un mélange DMF/HCVH20. Après 12 heures le catalyseur est éliminé par filtration. Le produit final est précipité par addition d'une solution de KHSO4 1M, rincé à l'eau et séché en présence de P2O5. Rendement : 60 % Point de fusion : 135-137 C Pouvoir rotatoire: [a]D20 = +4,200 (c = 1,28 tO, DMF) Spectre de masse : FAB [M+H]+ : m/z = 1647 Les exemples 2 à 5 ont été synthétisés selon le procédé décrit dans l'exemple 1 en utilisant le diacide correspondant au stade F. EXEMPLE 2: CO-TrpLys [E -N42-méthylphényl)aminocarbonyl] -Asp(NMe)Phe-NH2 (CH2)2 CO-TrpLys [E-N-(2-méthylphényl)aminocarbonyl] -Asp(NMe)Phe-NH2 ou Point de fusion : 129-133 C Pouvoir rotatoire: [&alpha;]D20 = - 5,81 (c = 1,37 %, DMF) Spectre de masse : FAB : [M+H]+ : m/z = 1563 EXEMPLE 3: /CO-TrPLys[-N 2-méthylphényl)aminocarbonyl]-Asp-(NMe)Phe-NH2 HO-CH HO-CH CO-TrpLys [E -N-(2-méthylphényl)aminocarbonyl]-Asp(NM isomère a , isomère &alpha; Point de fusion : 140-147 C Pouvoir rotatoire: [&alpha;]D20= = -3,98 (c = 1,33 %, DMF) Spectre de masse :FAB : [M+H]+ : m/z =1595 EXEMPLE 4 ; CO-TrpLys[E -Nq2-méthylphényl)aminocarbonyl]-Asp-(NMe)Phe-NH2 HO-CH HO-CH HO-CH CO-Trp Lys[-Nq2-méthylphényl)aminocarbonyl]-Asp-(NMe)Phe-NH2 isomère ss , isomère ss Point de fusion : 144-146 C Pouvoir rotatoire: [&alpha;]D20 = - -1,02 (c = 1,96 %, DMF) Spectre de masse :FAB : [M+H]+ : m/z = 1595 EXEMPLE 5 : CO-TrpLys [E -N-(2-méthylphényl)aminocarbonyl] -Asp(NMe)Phe-NH HO-CH HO-CH C CO-Trp [E -N-(2-méthylphényl)aminocarbonyl] -Asp(NMe)Phe-NL! isomère &alpha; ou isomères Point de fusion : 137-139 C Pouvoir rotatoire : [&alpha;]D20 = -2,72 (c = 1,54 %, DMF) Spectre de masse : FAB : [M+H]+ : m/z = 1579 Etude pharmacologique des dérivés de l'invention EXEMPLE 6: :Evaluation de l'affinité des molécules pour le récepteur cholécystokinine périphé,ique (CCK-A) L'évaluation de l'affinité des molécules de l'invention pour le récepteur CCK-A a été faite à l'aide du test de liaison aux acini pancréatiques de rat selon la méthode décrite par Jensen et coll. (J. Biol. Chem., 257, 5554, 1982). Les acini pancréatiques de rat ont été préparées selon la technique décrite par Jensen et coll. cité plus haut. Les rats utilisés sont des rats Wistar mâles (180-200 g) (Iffa Credo - France). EXEMPLE 7: : Evaluation de l'affinité des molécules synthétisées pour le récepteur CCK central (CCK-B) L'évaluation de l'affinité des molécules de l'invention pour le réceptuer CCK-B a été faite à l'aide du test de liaison aux cellules JURKAT selon la méthode décrite par LIGNON et coll. (Mol. Pharmacol., 39, 615-620, 1991). EXEMPLE 8 : Evaluation de l'activité biologique des composés de l'invention L'évaluation de l'activité biologique des composés de l'invention a été faite par la mesure de la libération d'amylase d'acini pancréatiques de rat selon les protocoles décrits par JENSEN et coll. (J. Biol. Chem., 257, 5554, 1982) et SANKARAN et coll. (Am. J. Physiol., 242, G250). Les résultats obtenus lors des tests mentionnés dans les exemples 6, 7 et 8 sont rassemblés dans le tableau ci-dessous: CCK-A CCK-B Amylase IC50 (nM) IC (nM) EC exemple 1 3,4 130 0,15 exemple 2 7,0 40 0,03 exemple 3 15,7 75 0,1 exemple 4 3,8 50 0,08 exemple 5 5,7 47 0,08 EXEMPLE 9: :Modification de la prise alimentaire du ratpar l'administration intra-nasale d'analogues dérivés de la CCK Des rats Wistal mâles (Iffa Credo - France) pesant 225-250 g sont placés en cage individuelle et entraînés à consommer leur ration calorique quotidienne (aliment UAR A03 sous forme de pellets Opodex) entre 10 et 16 h, la boisson étant fournie ad libitum 24 h sur 24. Pendant le conditionnement, les rats sont habitués à recevoir 50 l de solution tampon phosphate 20 mM pH 7,80 en administration intra-nasale 30 min avant mise à disposition de la nourriture. La durée de conditionnement est généralement de 2 à 3 semaines pour obtenir une prise alimentaire stable pendant la période de mesure. A ce moment, les animaux désignés par tirage au sort reçoivent en administration intra-nasale 50 l de la solution tampon (placebo) ou de produit en solution dans le tampon. La nourriture est mise à disposition 30 min après le traitement et la prise alimentaire est déterminée par pesée, 30 min et 1 h après mise à disposition. Les résultats pour chaque groupe sont exprimés en pourcentage de variation par rapport aux valeurs déterminées la veille après administration intra-nasale de tampon à tous les groupes. 0-30 min 30 min - 1 h Placebo -5,3 % - 5,5 % Exemple 1 -24 % -5,7 % 0 (150 ug/kg) EXEMPLE 10 : Composition pharmaceutique Formule de préparation pour 1000 comprimés dosés à .... g Composé de l'exemple 1 ............g Hydroxypropylcellulose ............2g Amidon de blé............. ... ... 10 g Lactose.......... ..... ...., .... 100 g Stéarate de magnésium ..... ...... 3 g Talc ...... ......3 g REVENDICATIONS 1/ Composé de formule (1): dans laquelle: R représente un groupement alkylène (C1-C10) linéaire ou ramifié éventuellement substitué par un ou plusieurs groupements hydroxy, et R1 représente un atome d'hydrogène ou un groupement méthyle, leurs isomères ainsi que leurs sels d'addition à un acide ou à une base pharmaceutiquement acceptable. 21 Composé de formule (I) selon la revendication 1 tels que R1 représente un groupement méthyle. 31 Composé de formule (I) selon la revendication 1 tels que R représente le groupement -(CH2)8-. 4/ Composé de formule (I) selon la revendication 1 tels que R représente le groupement -(CH2)2-. 51 Composé de formule (I) selon la revendication 1 tels que R représente le groupement -(CHOH-CHOH). 6/ Composé de formule (I) selon la revendication 1 tels que R représente -(CHOH-CH2)-. 71Procédé de préparation des composés de formule (1) selon la revendication 1 caractérisé en ce que l'on utilise comme produit de départ un composé de formule (II) : dans laquelle R1 a la même signification que dans la formule (I), que l'on fait réagir avec un équivalent du diacide de formule (III) en présence d'un réactif de couplage approprié: HO2C - R - CO2H (III) dans laquelle R a la même signification que dans la formule (t), pour conduire au composé de formule (IV):: dans laquelle R et R1 ont la même signification que dans la formule (I), qui subit alors une débenzylation par hydrogénation catalytique, pour conduire au composé de formule (I), - qui peut être, le cas échéant, purifié selon une technique classique de purification - dont on sépare éventuellement les isomères selon une technique classique de séparation, - que l'on transforme, si on le souhaite, en ses sels d'addition à une base pharmaceutiquement acceptable. 8/ Composition pharmaceutique contenant comme principe actif au moins un composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, seul ou en combinaison avec un ou plusieurs véhicules inertes non toxiques pharmaceutiquement acceptables. 9/ Composition pharmaceutique selon la revendication 8 contenant au moins un principe actif selon l'une des revendications 1 à 6 utiles en tant qu'agoniste aux récepteurs CCK et en particulier aux récepteurs CCK-A.