FR 2721516 A1 19951229 FR 9407867 A 19940627 NOUVELLES UTILISATIONS D'UN COMPLEXE A BASE DE PHOSPHOLIPIDES CEREBRAUX EN THERAPEUTIQUE ET DANS L'ALIMENTATION La présente invention se rapporte à de nouvelles utilisations d'un mélange de phospholipides d'origine animale en thérapeutique et en diététique. La présente invention a plus particulièrement pour objet l'utilisation d'un mélange de phospholipides extraits de cervelle de mammifères pour la réalisation de préparations à visée thérapeutique ou nutritionnelle. Elle a spécifiquement pour objet l'utilisation thérapeutique ou nutritionnelle d'une préparation à base de phospholipides cérébraux extraits de cervelles de porc en vue de compenser ou de ralentir les phénomènes de vieillissement et plus précisement la détérioration mentale, l'hypoxie et le vieillissement cérébral. Le vieillissement physiologique est accompagné au niveau cérébral d'une diminution du taux de phospholipides avec apparition de lysodérivés, et ainsi le rapport cholestérol/phospholipide est augmenté, ce qui entraîne une diminution de la fluidité membranaire (G. CALDERINI dans Phospholipids in the nervous system Vol.2 (1985) 11-18 - Raven Press) en outre, les phospholipides membranaires subissent au cours du vieillissement des phénomènes de péroxydations qui altèrent l'activité biologique de ces molécules polyinsaturées (C. DEBY - La biochimie de l'oxygène - La Recherche 22 (1991) 57-64) chez l'animal, il a été en effet observé une augmentation du taux de phospholipase cérébrale au cours du vieillissement et une diminution de la capacité de synthèse des phospholipides (A.GAITI - Phospholipids in the nervous system Vol.2 (1985) 155-161 - Raven Press) enfin, on sait que chez le sujet agé, on enregistre une diminution de l'activité de la delta-6-désaturase, qui permet la transformation des acides gras essentiels (18:2 n-6 et 18:3 n-3) en acides gras supérieurs et en particulier en DHA (22:6 n 3) (JM BOURRE (1990) 25 354-356). Dans la maladra d'Alzhelmer. on assiste à des phenomènes du mème ordre, mais pas totalement identiques e il se forme des pigments lipochromes intracellulaires qui contiennent entre autres, des triglycérides, des céphalines. des sphingomyélines et des acides gras polyinsaturés oxydés (H. DABADIE - Cahiers Nut. Diet. XXII (1987) 51-53). II pourrait s'agir de molécules de phospholipides cérébraux dégradées. I'altération du métabolisme des phospholipides dans la maladie d'Aizheimer, ainsi que les altérations membranaires ont d'ailleurs été mises en évidence par G.ZUBENKO (Brain Research 385 (5) (1986) 115-121). on trouve également dans les cerveaux des malades une quantité importante de phosphomono et di-ester, ce qui peut signifier soit une lyse, soit un effort de régénération des phospholipides membranaires (J.W PETTEGREW - J. Neuropath. Exp. Neurology (1987) 46 419-430) des études de diffraction aux rayons X montrent une désorganisation de la myéline due à une péroxydation des lipides insaturés (L.S CHIA - Biochim. Biophys.Acta 775 (1984) 308-312) * plusieurs études cliniques en double aveugle contre placebo mettent en évidence l'efficacité de la phosphatidylsérine cérébrale à la dose de 300 mg/jour (L. AMADUCCI - Ann. NY Acad. Sci. 64Q (1991) 245-249). Dans l'ischèmie cérébrale et les états d'hypoxie expérimentale, on note une augmentation importante du pool d'acides gras libres et, en particulier. des acides en 20;4 et 22:6, une augmentation des lysodérivés et des diglycérides. De même, plusieurs auteurs font état d'une augmentation du taux de péroxydation des acides gras insaturés. Cette accumulation d'acides gras libres et de composés oxydés altère les fonctions cérébrales (RV DORMAN ( Phospholipids in the nervous system Vol.1 (1982)123-135). Par ailleurs, on sait depuis longtemps, que 'hypoxie cérébrale entraîne une baisse importante du métabolisme des phospholipides cérébraux (D.A CHTVERIKOV - Nature 212 (1966) 1236-1238 et Y.DJORKIN - Nature 212 (1966)1239-1240). L'ensemble de ces éléments montre que les dbtér,orations mentales provoquées par les états hypoxiques sont associées à une dégradation des phospholipides membranaires. On a donc étudié l'intérêt d'un apport exogène de phospholipides cérébraux dans le but de régénérer les membranes cellulaires ou de freiner leur dégradation lors de processus physiologiques ou pathologiques et d'apporter au cerveau les acides gras spécifiques et, en particulier. les acides en 20;4 n-6 et 22.6 n-3. Les phospholipides cérébraux sont caractérisés par le fait qu'ils contiennent une grande proportion d'acides gras à longues chaînes, en particulier de la série n-3. Ils représentent 5% du poids du cerveau et y jouent un rôle structurel et métabolique considérable au niveau membranaire (Lipids malnutrition and the developing brain Elsevier 1972). La préparation contient un mélange de phospholipides cérébraux en proportion physiologique telle que. - phosphatidylcholine 20 à 30% - phosphatidylsérine - phosphatidyllinosltoI - phosphatidyléthanolamine 30 à 40% - sphingomyéline 6 à 10% - plasmalogène (éther lipide) 5 à 10% Les phospholipides cérébraux ont ceci de particulier, qu'ils sont constitués de phosphoglycérol lié à deux chaines d'acides gras par une fonction ester ou une fonction éther.Les éthers phospholipidiques, dénommés aussi plasmalogènes, représentent de 5 à 10% de l'ensemble. (3 il CH2 -O-C- CH ,(-C'H , (- n - CH 2n'Â ('t2 () - (?t! (- CH CH 11 ( ( H Q C(H (J - (H 2 ( ('11 3 (- 2n n 1 O l cit2 -r9- P - bascarnnicc c) - EH3 hasc aminét:7 (I > ester dc phospholipidcs éther dc ph,sl,liolipidcs Les phospholipides cérébraux ont, en outre, en particulier, qu'ils sont liés à des acides gras dont la distribution est la suivante, et spécifique par rapport à d'autres phospholipides et, en particulier, par rapport aux phospholipides de soja - acide arachidonique 20:4 n-6 7 à 9% 22:4 n-6 3 à 5% DHA 22:6n-3 7 à 10 % EPA 20:5 n-3 Les Demandeurs ont, pour cela, réalisé une étude avec des phospholipides marqués, qui a pu mettre en évidence une migration préférentielle des phospholipides cérébraux vers le cerveau après une administration per os. Les demandeurs ont pu également montrer que des phospholipides cérébraux riches en acides gras à longues chaînes polyinsaturés, administrés per os à des souris, se fixent en partie au niveau cérébral et, en particulier, dans les membranes synaptiques. Par ailleurs, plusieurs études cliniques réalisées chez l'homme dans divers types de lésions cérébrales, sont venues contirmer l'intérêt de l'utilisation des phospholipides cérébraux dans ces indications. dans 20 cas d'insuffisance circulatoire cérébrale, traités avec un produit contenant uniquement des phospholipides cérébraux à raison de 20 à 40 mg/jour pendant une moyenne de 7 mois, ii a été observé. - une amélioration nette dans 73% des cas aux tests psychométriques WESHLER. REY et BENTON - les améiiorations les plus nettes, ont porté sur la mémorisation et la composante anxieuse fréquente chez ces malades - la tolérance a été excellente dans une étude controlée contre placebo, avec paires associées. réalisée chez 26 patients atteints d'hémiplégie, on a observé qu'après 4 mois, la différence est hautement signrficative entre les deux groupes (p l'amélioration des tests psychométriques. dans une étude contrôlée contre placebo dans le traitement de la présénescence chez 76 patients d un âge moyen de 60 ans, l'amélioration sur des critères subjectifs a été statistiquement significative après 3 mois de traitement, en faveur des phospholipides cérébraux (40 mg/rour en deux prises). Les meilleurs résultats sont observés dans les troubles de la mémoire, les troubles de l'attention et de l'efficacité intellectuelie ainsi que l'humeur et I'affectivitb. La tolérance clinique et biologique a été excellente On a essayé. en outre, un produit associant phospholipides cérébraux, antioxydants naturels et de l'huile de poisson dans les troubles du vieillissement cérébral, chez 61 sujets.Après 3 mois de traitement. les expérimentateurs ont enregistré une amélioration nette dans 60 à 75% des cas. dans les items suivants sur "l'échelle d'appréciation clinique en gériatrie" (EACG) - mémoire des évènements récents - stabilité émotionnelle - fatigue - vivacité d'esprit anxiété - initiative - dépression La tolérance clinique a été excellente Enfin, un essai en ouvert chez 23 malades porteurs de séquelles psychointellectuelles de traumatismes craniens. traités pendant 3 mois avec 30 mg/jour de phospholipides cérébraux, a permis d'enregistrer une amélioration globale de l'ordre de 63% au test de BENTON. La mémoire et la fatigabilité sont les plus influencées. Ceci prouve donc l'intérêt et l'efficacité des préparations à base de phospholipides de cervelles de porc grâce à leur teneur élevée en acides gras essentiels des séries n-3 et n-6. Il en résulte une amélioration des troubles liés au vieillissement cérébral comme la fatigabilité, la perte d'attention ou la difficulté de l'idéation. Les phospholipides de cervelles de porc sont utilisées à des fins thérapeutiques ou nutritionnelles, seuls ou associés à des excipients, des diluants ou des véhicules permettant leur administration par voie per os ou par voie intraveineuse. La teneur en phospholipides cérébraux peut varier dans des proportions très larges, s'échelonnant de 10 mg à 500 mg par prise unitaire. Ces phospholipides cérébraux purifiés peuvent être utilisés seuls ou associés. Ils sont destinés essentiellement à la voie digestive, mais peuvent aussi être utilisés par voie générale: per os sous forme de gélules ou capsules à raison de 40 à 400 mg/jour de phospholipides cérébraux Ils peuvent être utilement associés à des anti-oxydants naturels comme la vitamine C, la vitamine E, le bêta-carotène, des anti-radicalaires comme le sélénium ou la cystéine, des huiles de poissons riches en EPA et DHA intraveineuse sous forme de suspension aqueuse ou de liposomes Comme anti-oxydants naturels, on pourra citer l'acide ascorbique et ses sels, le palmitate d'ascorbyle et les tocophérols. Comme agent anti-radicalaire, on pourra citer les dérivés soufrés comme la cystéine, la carboxyméthyl cystéine, le diterbutyl para crésol ou bien encore le métabisulfite de potassium. Les phospholipides de cervelles de porc peuvent être utilisés à des fins nutritionnelles en addition ou en mélange avec des excipients ou des diluents à usage alimentaire comme des farines de céréales, des matières grasses; des supports inertes, des produits chocolatés ou des dérivés du lait Les phospholipides cérébraux selon l'invention sont obtenus par épuisement de cervelles de porc prélevées sur des animaux fraîchement abattus selon les modalités suivantes les cervelles de porc sont prélevées sur des animaux fraîchement abattus en provenance d'élevages exempts de toutes maladies infectieuses et suivis rigoureusement sur le plan sanitaire par les services vétérinaires. les cervelles sont immédiatement congelées à -20 C et conservées à cette température. les cervelles sont ensuite ramenées à une température comprise entre -5" et 0 , avant passage dans un hâchoir industriel et des broyeurs, de façon à obtenir une pâte liquide dont la teneur en eau est d'environ 80%. la pâte de cervelle est transférée au sommet d'une chambre d'atomisation dans laquelle l'eau est immédiatement évaporée dans un courant d'air chaud à 190/195 C. la poudre obtenue est introduite dans un réacteur contenant un mélange d'hydrocarbures aliphatiques à base d'hexane et maintenue sous agitation. après filtration, la phase liquide est concentrée sous vide et donne naissance à un extrait brut. I'extrait brut est ensuite coulé dans l'acétone en présence d'un anti-oxydant alimentaire. Ie précipité obtenu est filtré sous pression d'azote. le produit recueilli est séché sous vide et contient les phospholipides cérébraux purifiés. Les exemples suivants illustrent l'invention. sans la limiter en aucune façon EXEMPLE I Gélules de phospholipides de cervelles de porc - Phospholipides cérébraux 200 g - Palmitate d'ascorbyle 12 g - Vitamine E 60 g - Sorbitol 40 g - Gluconate de calcium 25 9 - Stéarate de magnésium 15 g pour 1 000 gélules EXEMPLE Il Gélules de phospholipides de cervelles de porc - Phospholipides cérébraux 100 g - Carbonate de calcium 40 g - Carbonate de magnésium 30 g - Phosphate de magnésium 30 g - Silice colloïdale 25 9 - Vitamine E 25 9 -Talc 159 pour 1 000 gélules EXEMPLE III Gélules de phospholipides de cervelle de porc - Phospholipides cérébraux 100 g - Cellulose microcristalline 50 g - Ethylcellulose 15 9 - Huile de germe de blé 10 g - Phosphate tricalcique 50 g -Talc 10 9 EXEMPLE IV Suspension aqueuse de phospholipides cérébraux - Phospholipides cérébraux 10 g - Lécithine de soja 5 g - Vitamine E 1 9 - Eau purifiée qsp 1000 ml EXEMPLE V Farine alimentaire à base de phospholipides cérébraux - Phospholipides cérébraux 20 g -Caséine 59 - Méthylcellulose 4,5 g - Farine de bananes 71,5 g Vanilline 0,5 g REVENDICATIONS 1. Utilisation des phospholipides cérébraux provenant de cervelles de porc en vue de la réalisation d'un médicament approprié pour régénérer les membranes cellulaires ou de freiner leur dégradation. 2. Utilisation des phospholipides cérébraux provenant de cervelles de porc selon la revendication 1" en vue de la réalisation d'un médicament approprié pour compenser ou ralentir les phénomènes de vieillissement comme la détérioration mentale, l'hypoxie et le vieillissement cérébral. 3. Utilisation de phospholipides cérébraux provenant de cervelles de porc selon la revendication 1 ou la revendication 2" dans laquelle les phospholipides sont associés à des excipients, des diluants ou des véhicules permettant leur administration par voie per os ou par voie intraveineuse. 4. Utilisation selon l'une des revendications 1 à 3 dans laquelle le médicament contient, en outre, des agents antioxydants naturels, des agents anti-radicalaires et/ou des huiles de poisson riches en acide eicosapentoenoïque (EPA) et en acide docosa hexaénoïque (DHA). 5. Utilisation selon la revendication 4" dans laquelle l'agent antioxydant est choisi parmi l'acide ascorbique, les tocophérols et le beta-carotène. 6. Utilisation selon la revendication 4" dans laquelle l'agent anti-radicalaire est choisi parmi le sélénium, la cystéine, ia carboxyméthylcystéine et le diterbutylparacresol. 7. Utilisation des phospholipides cérébraux provenant de cervelles de porc en vue de la réalisation d'un complément nutritionnel en vue de compenser ou de ralentir les phénomènes de vieillissement. 8. Utilisation selon la revendication 7" dans laquelle les phospholipides cérébraux provenant de cervelles de porc sont additionnés de compléments alimentaires ou nutritionnels. 9. Utilisation selon la revendication 7" ou la revendication 8" dans laquelle les compléments alimentaires ou nutritionnels sont constitués par des farines de céréales, des produits lactés, des matières grasses, ou des produits chocolatés. 10.Utilisation selon l'une des revendications précédentes dans laquelle le médicament ou la préparation nutritionnelle contient de 10 à 500 mg de phospholipides cérébraux par prise unitaire et notamment de 40 à 400 mg en 2 ou 3 prises.