FR 2721826 A1 19960105 FR 9408062 A 19940630 UTILISATION DE COMPOSÉS 2,6-DI-T- BUTYLPHÉNOLS SUBS'l'I'l'ULS EN POSITION 4 DANS LE 'l'hAI'l'EMEN'l' ET LA PRÉVENTION DU SIDA. La présente invention concerne des composés 2,6-di-t-butylphénols substitués en position 4 par un groupe COOM ainsi que leurs sels et esters. L'invention a pour objet l'utilisation de ces composés pour l'obtention de médicaments destinés au traitement et à la prévention du SIDA, ainsi que les compositions pharmaceutiques les contenant. Des composés 2, 6-di-t-butylphénols substitués en position 4, aussi dénommés selon une autre nomenclature 3, 5-di-t-butyl-4-hydroxybenzènes substitués en position 1, sont connus de longue date. La préparation de certains d'entre eux par oxydation du 2,6-di-t-butyl-4-métnylphéno a notamment été décrite par G. R. Yohe et al., dans J. Org. Chemin. (1956), 21, 1289-1292. Du fait de leur propriété antioxydante des composés de cette famille ont initialement été utilisés dans les produits pétroliers, puis comme additif alimentaire en raison d'une activité sur les graisses animales (J. C. Dacre, Biochem. J., 1961, vol. 78, n04, pp. 758-766). Il a ensuite été montré que les composés 2,6-di-t-butylphénol substitués en position 4 par un reste hydrocarboné aliphatique, désignés BHT pour la dénomination anglaise "butylated hydroxytoluène", présentaient des propriétés antivirales à l'encontre des virus à capsides lipidiques (W. Snipes et al., Science, 1975, vol. 188, n" 4183, pp. 64-65); en conséquence, il a été proposé, par exemple dans la Demande de Brevet Français publiée sous le numéro 2 507 891 ou dans la dans la Demande de Brevet Internationale DCT/FR91/00882, d'utiliser ces composés pour l'obtention de médicaments destinés au traitement des maladies liées à une infection d'un individu par les virus, plus particulièrement les virus de l'herpès. La toxicité du BHT a été discutée, notamment par J. G. Llaurodo (West J. Med., 1983, vol. 139, nO 2, pp. 229-230), D. M. Shlian (N. Engl. J. Pied., 1986, vol. 314, n" 10, pp. 648-649) et M. W. Grogan (West J. Med., 1986, vol. 145, nO 2, pp. 245-246), et de nouveaux dérivés 2,6-di-t-butylphénols ont été proposés notamment comme agents anti-allergiques dans la Demande de Brevet Européen publiée sous le numéro 0 212 848 et le Brevet des États-Unis d'Amérique nO 4 968 710. L'acide 3, 5-di-t-butyl-4-hydroxybenzoïque, de même que ses halogénures, notamment les bromure et chlorure, ont par ailleurs été décrits dans la Demande de Brevet Européen publiée sous le numéro 0 269 981 et le Brevet des États-Unis d'Amérique nO 4 708 966, comme intermédiaire de synthèse. Il a été proposée dans la Demande de Brevet Internationale PCT/FR91/00882 d'utiliser cet acide, parmi d'autres composés 2,6-di-tbutylphénols substitués en position 4, pour préparer des médicaments antiviraux destinés au traitement des maladies liées à une infection d'un individu par les virus du type à capside lipidique et plus particulièrement les virus de l'herpès, ou par les papillomavirus. La Demande de Brevet Internationale PCT/FR91/00882 précitée décrit les composés 2,6-di-tertbutylphénols substitués en position 4 répondant à la formule (I) suivante dans laquelle R est un groupe alkyle en Cl-Cl2 un groupe alcényle en C2-C12, un groupe alcynyle en C2-C12, un groupe alcoxy en C1-C12, un groupe formyle, un groupe alkanoyle en C2-C12, un groupe hydroxyalkyle en Cl-Cl2 un groupe amine primaire, secondaire ou tertiaire, un groupe OCH3, CH2OH, CElO ou un groupe COOH ou un groupe A - COOH dans lequel A est un reste hydrocarboné aliphatique en Cl-Cll. Cette Demande de Brevet envisage aussi les sels et esters des composés précédents dans lesquels R est COOH ou A-COOH. La Demanderesse a maintenant mis en évidence que les composés 2, 6-di-t-butylphénols substitués en position 4 par un groupe COOH ou un groupe A-COOH, où A est un reste hydrocarboné aliphatique, ainsi que leurs sels et esters, sont actifs à l'encontre des virus du type HIV responsables du SIDA. L'isolement et la caractérisation d'un premier rétrovirus, dénommé LAV, auquel avait été attribué la responsabilité du développement du SIDA, a été décrit pour la première fois dans un article de F. Barre-Sinoussi en 1983 (Science, vol. 220, nO 45-99, 20, p. 868 - 871). Depuis, d'autres souches similaires et des variants du LAV ont été isolés. En application des règles de nomenclature adoptées par la communauté scientifique, les rétrovirus susceptibles d'induire chez l'homme les lymphadenopathies et le SIDA sont désignés globalement par "HIV", abréviation de l'expression anglaise "Human Immunodeficiency Virus". L'ensemble des virus appartenant à la catégorie du LAV ont ainsi été désignés HIV, dont les deux classes majeures sont les virus du type HIV-1 et HIV-2. Le syndrome d' immuno-déficience acquis, désigné sous le sigle de SIDA, est caractérisé par des infections répétées dites opportunistes, car elles se développent chez les malades en raison d'un effondrement de son système immunitaire, lequel est dû à la prolifération dans les lymphocytes et les macrophages d'un virus de type HIV. Ainsi, la capacité immunitaire du sujet infecté par le virus HIV, contre des microorganismes pathogènes décroît progressivement, jusqu'à devenir incapable de répondre à des infections traditionnellement banales. Aujourd'hui, les scientifiques commencent à avoir des idées plus précises sur les mécanismes mis en jeu lors de l'infection par les virus HIV et de nombreuses équipes travaillent sur la mise au point d'un vaccin. Parallèlement, du côté thérapeutique, des antiviraux sont déjà proposés aux malades et l'on assiste à une multiplication des essais cliniques de nouvelles molécules. Mais la découverte et le développement de ces nouvelles molécules pour lutter contre une infection par les virus HIV sont longs et coûteux et souvent incertains; aussi, une stratégie complémentaire consiste à tester des molécules connues, sur des modèles expérimentaux de cellules cibles des virus HIV, afin de mettre en évidence une activité potentielle de ces molécules dans le traitement du SIDA. Ainsi, l'activité du BHT à l'encontre des virus à enveloppe lipidique a conduit plusieurs équipes à tester ce produit sur le virus HIV-1. Mais les résultats de ces tests ont conclu à l'absence d'activité du BHT sur ce virus (H. Claeys, M. Mercken, C. Vermylen, Medical Hypotheses 1988, 27, 145-146 ; E. Reimund, Medical Hypotheses 1987, 23, 39-42). Or, la Demanderesse vient de mettre en évidence de manière tout à fait surprenante un effet virucide de l'acide 3,5-di-t-butyl-4-hydroxybenzoïque sur le pouvoir infectieux du virus HIV-1. La présente invention a donc pour objet l'utilisation de composés de formule dans laquelle R représente un groupe COOH ou un groupe A-COOH, où A est un reste hydrocarboné aliphatique, ainsi que leurs sels et esters, pour l'obtention d'un médicament destiné au traitement et à la prévention chez l'homme d'une infection par les virus du type HIV, et plus particulièrement du type HIV-1 et HIV-2. Avantageusement, dans la formule (I), A est un reste hydrocarboné aliphatique en C1-Cll. Dans le cadre de l'invention, il faut citer plus particulièrement, l'utilisation des composés de formule I dans laquelle R représente un groupe COOH, ainsi que leurs sel et esters. Parmi ces composés, l'invention envisage à titre spécifique, l'utilisation de l'acide 3,5-di-tbutyl-4-hydroxybenzoïque ainsi que ses sels et esters, pour l'obtention d'un médicament destiné au traitement et à la prévention chez l'homme d'une infection par les virus du type HIV, et plus particulièrement du type HIV1 et HIV-2. Parmi les sels des composés utilisés selon l'invention, on peut notamment citer les sels minéraux obtenus par réaction de l'acide de formule (I) avec une base minérale. Ces sels minéraux sont des composés de formule (I) où R = COOX ou A-COOX, X représentant NH4+ ou un cation 1/mMm+, M étant un métal des groupes Ia, Ib, IIa et IIb de la classification périodique et m sa valence, tel que Na+, K+, l/2Ca2+, 1/2zon2+, 1/2Mg2+, Cu+, 1/2Cu2+. On peut également mentionner les sels d'addition obtenus par réaction de l'acide de formule (I) avec une base organique, telle que les alkylamines et dialkylamines (où chaque fragment alkyle est un radical en C1-Cg à chaîne linéaire ou ramifié), le Nhydroxy-alkylamines où le fragment alkyle est un radical divalent en C1-Cg à chaîne linéaire ou ramifié (par exemple ma 2-hydroxyéthylamine), les amines cycliques mononucléaires saturées ou insaturées (par exemple la pyridine, la 3-méthylpyridine, la pyrrolidine, la pipéridine, la 4-méthylpipéridine, la morpholine, la thiomorpholine, la pipérazine, la 4-méthylpipérazine, la 4-phénylpipérazine, la 4-(4-chlorophényl)pipérazine, la 4- (2-hydroxyéthyl) pipérazine et 1 'hexaméthylèneimine, ainsi que les acides aminés (par exemple Arg, His, Orn, Lys, Gly, Ala, Phe, Glu, Leu, Ile, Nle, Nva, Megly, Pro, 4Hyp) où chaque fonction acide est susceptible d'être bloquée selon les méthodes utilisées dans la synthèse peptidique. Les esters des composés utilisés selon l'invention, répondent à la formule (I) dans laquelle R = COOZ ou A-COOZ, où Z comprend un reste hydrocarboné aliphatique en C1-Cg linéaire ou ramifié, et le groupe amino qu'il peut comporter est NH2, ou un des groupes monoalkylamino, dialkylamino, N-hydroxyalkylamino et amino cyclique tels que définis dans le cadre des sels d'addition ci-dessus. D'une manière générale, on préfère les acides plutôt que leurs sels et esters. Les composés de formule (I) peuvent être préparés selon des méthodes connues, par application de mécanismes réactionnels classiques. Un procédé préconisé est celui consistant à faire réagir un 2,4-di-t-butyl-4-halogénophénol de formule dans laquelle Y est halogène, de préférence Br ou Cl, avec un composé de formule H-R (III), où R est COOH, A-COOH, en présence d'un métal alcalin, d'un hydroxyde de métal alcalin ou d'un hydrure alcalin. Dans la mise en oeuvre de ce procédé, le groupe OH de la fonction phénolique du composé de formule (II) et le groupe COOH du composé de formule (III) peuvent être protégés selon des procédés connus. Des détails, variantes et perfectionnements à la méthode précédente sont décrits notamment dans la Demande de Brevet Internationale PCT/FR91/00882. L'invention propose également de fournir des compositions pharmaceutiques destinées à lutter contre une infection par les virus du type HIV, et plus particulièrement du type HIV-1 et HIV-2, renfermant à titre de principe actif au moins un composé de formule dans laquelle R représente un groupe COOH ou un groupe A-COOH, où A est un reste hydrocarboné aliphatique, ou un sel ou un ester de ce composé, en association avec un véhicule pharmaceutiquement acceptable. Avantageusement, dans la formule (I), A est un reste hydrocarboné aliphatique en C1-Cll. Parmi les principes actifs entrant dans les compositions pharmaceutiques de l'invention, il faut citer plus particulièrement les composés de formule (I) dans laquelle R représente un groupe COOH, ainsi que leurs sel et esters. Les sels et esters des composés entrant dans la formulation des compositions pharmaceutiques de l'invention sont ceux précédemment décrits, mais on préfère généralement les acides plutôt que leurs sels et esters. L'invention envisage à titre spécifique une composition pharmaceutique destinée à lutter contre une infection par les virus du type HIV, et plus particulièrement du type HIV-1 et HIV-2, renfermant à titre de principe actif l'acide 3,5-di-t-butyl-4- hydroxybenzoïque, ou un sel ou un ester de celui-ci, en association avec un véhicule pharmaceutiquement acceptable. Les compositions pharmaceutiques selon l'invention peuvent être administrée de manière usuelle à l'homme par voie entérale ou parentérale, notamment par voir orale. Elles peuvent être sous la forme de préparations solides, semi-solides ou semi-liquides et liquides. Comme exemple on peut citer les comprimés, les gélules et dragées, les suppositoires, les gels, les pommades et les crèmes, les solutions ou les suspensions injectables, les gouttes et les sirops. Compte-tenu de la faible solubilité des composés de formule (I) dans les solvants physiologiques habituels, on préfère les préparations solides, semisolides et notamment les gels et les pommades qui sont particulièrement adaptés pour une application locale au niveau des organes anogénitaux plus particulièrement concernés dans le processus de transmission du SIDA. Ces formulations peuvent par exemple être associées à un préservatif. Les préparations injectables, telles que des suspensions alcooliques peuvent aussi être envisagées, par exemple pour des injections intravaginales. Dans ces compositions le principe actif est généralement mélangé avec un ou plusieurs excipients pharmaceutiquement acceptables habituels bien connus de l'Homme du métier. Les compositions pharmaceutiques peuvent contenir notamment de 0,1 à 20% en poids de principe actif constitué d'au moins un composé de formule (I). La quantité de principe actif qui est administrée dépend évidemment du patient qui est traité, de la voie d'administration et éventuellement de l'avancement de la maladie. I - EXEMPLE DE FORMULATION CRÈME HUILE-DANS EAU POUR APPLICATION LOCALE. Il est donné ci-dessous un exemple non limitatif d'une formulation de l'acide 3,5-di-t-butyl-4hydroxybenzoïque (BG4) sous forme de crème huile-danseau pour une application locale. On chauffe à 75"C un premier mélange constitué de - CUTINA CBS : 6,000 (commercialisé par la Société Henkel et constitué de stéarate de glycérol, alcool cétostéarylique, palmitate de cétyle, triglycérides de coco). - TEFOSE 1500 : 9,000 (commercialisé par la Société Gattefosse et constitué de monodipalmitostéarate de polyoxyéthylène glycol). - Stéarate d'isocétyle : 10,000 - de triglycérides en Cg et C10 (55/45) : 5,000 On verse dans ledit premier mélange, un second mélange également chauffé à 750C constitué de - eau déminéralisée : 66,200 - PHENONIP qui est un conservateur paraben : 0,300 L'émulsion ainsi préparée est refroidie, puis vers 350C, on incorpore le mélange suivant - acide 3,5-di-t-butyl-4-hydroxybenzoïque finement pulvérisé : 0,500 - LABRAFIL ISOSTÉARIQUE : 3,000 (commercialisé par la Société Gattefosse et constitué de glycérides isostéariques polyoxyéthylenés glycolisés). On cesse le refroidissement et l'agitation à 300C. Il - ACTIVITÉ À L'ENCONTRE DES VIRUS DU TYPE HIV RESPONSABLES DU SIDA. La description qui suit se rapporte aux résultats de l'étude de l'action virucide de l'acide 3,5-di-t-butyl-4-hydroxybenzoïque (BG4) sur le pouvoir infectieux du virus HIV-1. A) PRINCIPE DE L'ÉTUDE. Cette étude a consisté à évaluer l'inhibition du pouvoir infectieux du virus HIV-1 pour des cellules cibles, après traitement dudit virus par l'acide 3,5-di-t-butyl-4-hydroxybenzoïque (BG4) afin de déterminer les conditions nécessaires pour réduire d'au moins 5 log l'infectivité du virus HIV-1 sur le modèle cellulaire. Les cellules cibles utilisées sont les cellules MT4 (S. Harada et al., Science, 1986, 229, 563566 ; F. Rey et al., J. of Virol. Meth., 1987, 16, 239249). Le test MT4 permet une réponse rapide; dix jours après infection des cellules MT4, il est possible d'observer un effet cytopathogène et de détecter une activité reverse transcriptase dans les surnageants des cultures infectées par des échantillons de virus témoins. B) MATÉRIEL. 1) L'acide 2, 6-di-tert-butvl-4-hvdroxv- benzoïque. L'étude a été réalisée avec des cristaux micronisés d'acide 3, 5-di-t-butyl-4-hydroxybenzoïque (cristaux de l'ordre de 0,5 à 5 pm) en suspension. Une difficulté de l'étude à résider dans la faible solubilité du BG4. Sa solubilité dans le DMSO est acceptable mais n'a pas été utilisée en raison de l'effet toxique du DMSO sur les cellules; de même les esters ou les sels de BG4 n'ont pas été utilisés en raison de la hausse du pH, néfaste aux cellules, qu'ils entraînent. 2) Virus. La souche LAI du virus HIV-1 est produite sur des cellules lymphoblastoïdes T CD4+ chroniquement infectées (lignée CEM-HIV-1/LAI). Tous les trois ou quatre jours, les cellules sont centrifugées, remises en suspension dans du milieu de culture (RPMI 1640 contenant 10% de sérum de veau foetal, 1% d'antibiotiques et 1% de glutamine). Elles sont alors mélangées avec 50% de cellules CEM non infectées à la concentration finale de 0,5 106 cellules par millilitre, afin de maintenir la production virale. Le virus présent dans le surnageant de culture est concentré par ultracentrifugation à 17 CCC rpm pendant 3 heures. Le culot est resuspendu dans le tampon NTE, aliquoté et stocké à -800C. Le titre en activité transcriptase inverse du stock de virus utilisé pour cette étude sera de l'ordre de 107 cpm/ml, et son titre en infectivité de l'ordre de 106 UI/ml (Unités Infectieuses/millilitre) sur cellules MT4. 3) Cellules MT4. Il s'agit d'une lignée de cellules T humaines transformées par le HTLV-1. Lors d'une surinfection de ces cellules par le HIV-1, un effet cytopathogène et la mort de plus de 807 des cellules sont observés 8 ou 10 jours après l'infection. Cet effet cytopathogène est directement corrélé à la quantité de virus utilisés pour l'infection, à sa réplication et à l'expression des antigènes viraux par les cellules. Toute l'inhibition de cet effet correspond donc à une inhibition de la multiplication de la souche LAI du virus HIV-1, suivie par mesure de l'activité transcriptase inverse dans les surnageants de culture. Les cellules MT4 sont cultivées dans un milieu RPMI (Wittaker) additionné de 103 de sérum de veau foetal (Labsystem), 18 d'antibiotiques (PSN, Gibco) et 1% de glutamine (Gibco). C) MÉTHODE. La présente étude s'est déroulée en deux temps - le traitement du virus HIV-1 par trois concentrations de BG4; - l'infectivité résiduelle du virus traité sur les cellules MT4. 1) Traitement en cinétique du virus HIV-1 par trois doses de BG4. Le virus utilisé est dilué dans des solutions de BG4 à une concentration finale de 0,5%, 0,1% ou 0,05. Les temps de contact avec ces solutions sont de 15, 30 et 60 minutes. A la fin du traitement, chaque échantillon est aussitôt dilué au 1/10sème dans du tampon NTE et ultracentrifugé à 40 000 rpm pendant 35 minutes, afin, d'une part, d'éliminer le produit, et, d'autre part, de concentrer les particules virales résiduelles. Le culot est alors resuspendu dans du milieu de culture, filtré sur 0,45 clam, aliquoté et conservé à -800C avant d'être testé en infectivité in vitro sur cellules MT4. Plusieurs témoins sont réalisés - Le virus HIV-1 dilué en milieu de culture et congelé à -800C, comme témoin positif. - Le virus HIV-1 dilué en milieu de culture, puis dilué, ultracentrifugé et conservé de la même façon que les échantillons traités, afin d'évaluer la perte d'infectivité due à la centrifugation et à la filtration. - Le virus HIV-1 dilué dans du milieu de culture, laissé dans les conditions de température de l'expérience pendant 60 minutes, puis ultracentrifugé et conservé de la même façon que les échantillons traités, afin d'évaluer la perte d'infectivité due aux conditions expérimentales. - Chaque concentration du BG4, sans virus, dilué au 1/10ème dans du tampon NTE puis ultracentrifugé dans les conditions décrites pour le virus traité. Cet échantillon sert de contrôle d'une éventuelle toxicité sur les cellules du test d'infectivité, due à des traces de produit résiduel non éliminé lors de la centrifugation. - Les cellules du test d'infectivité non infectées. 2) Dete rmlnation des titres infectieux du HIV-1 traité ou non. a l'aide d'un test d'infectivite sur cellules MT4. a) Suivi de l'effet cytopathogène apres inoculation des cellules MT4. 3.105 cellules MT4 sont déposées dans chaque puits de plaque du type COSTAR 24 puits. Deux puits sont inoculés avec 0,25 ml de virus traité et deux autres avec 0,1 ml. Les puits sont complétés à 1 ml avec du milieu de culture et les cellules sont incubées 1 heure à 370C. Après l'absorption virale, l'inoculum résiduel est éliminé et les cultures sont réincubées avec 1 ml de milieu de dilutions séquentielles de raison 10 par puits (2 puits par dilution). Après 3 jours à 37"C, 750 Al de surnageant sont ôtes dans chaque puits, conservés à -800C et remplacés par du milieu de culture. Les cellules sont diluées 3 à 4 fois pour les ajuster à 3.105 cellules par ml. Au jour 6, les cellules et l'effet cytopathogène sont observés sous le microscope et la concentration cellulaire ajustée à 3.105 cellules par ml après prélèvement de 750 vXl de surnageant. Au jour 10, l'effet cytopathogène et la mortalité cellulaire sont évalués par observation sous le microscope après coloration au bleu Trypan. Chaque échantillon de virus témoin ou traité est testé en duplicate. b) Mesure de l'acivite transcriptase inverse (F. Barre et al., Science, 1983, 220, 868-871). Des dosages de l'activité transcriptase inverse sont réalisés à partir des surnageants prélevés dans chaque puits et conservés à chaque passage (jours 3, 6 et 10). L'activité transcriptase inverse est dosée à partir de 0,5 ml de surnageant de culture concentré 50 fois par ultracentrifugation 5 mn à 95 CCC rpm sur la Centrifugeuse TL 100, Rotor 100.2 de la Société Beckman. Le culot est resuspendu dans 10 pLl de tampon NTE (NaCl 0,1M ; Tris C,CîM ; EDTA 0,001M ; pH 7, 9) contenant 0,1% de Triton X100. L'activité enzymatique est révélée par l'addition de 40 l du mélange réactionnel suivant : Tris 50 mM pH 7,9 ; KCl 20 mM MgCl2 50 mM ; dithiotreitol 1 mM ; polyA 0,05 D.O./ml oligodT 12-18 0,05 D.O./ml ; 3HTTP 5llCi (activité spécifique = 30 Ci/mmole). Après 1 heure à 370C, les produits acido-insolubles sont précipités par de l'acide trichloroacétique à 20%, filtré sur Millipore 0,45 ,um et la radioactivité ss est mesurée à l'aide d'un compteur à scientillation du type BETAmatic de la Société Kontron. D) RESULTATS. L'expression virale par les cellules cibles MT4 inoculées avec les échantillons de virus traités est comparé aux titres infectieux des échantillons de virus témoins. Cette comparaison permet de conclure quand à l'efficacité de la molécule BG4 à inactiver le virus HIV-1 in vitro. Le tableau I ci-après rapporte les résultat de titrage en dilutions des échantillons de virus témoins non traités sur cellules MT4. Tableau I Activité reverse Echantillons Dilution transcriptase en ECP cpm/0 5ml au our +3 ' +6 +9 Témoin positif 10-6 304 41 561 47 605 ++ HIV-1 521 7 560 71231 ++ 10-7 185 15 792 107 145 ++ 521 14 077 86 152 ++ 10-8 1 196 9 342 40 719 ++ 482 32 683 156 879 ++ Témoin de 10-5 512 7 843 47 816 ++ centrifugation 687 139 112 089 ++ 673 -6 593 2 974 36 309 ++ 399 1 195 60 951 ++ 10-7 710 1 241 56 429 ++ 504 574 1 217 ++ Témoin 10-5 379 89 979 153 069 ++ de conditions 271 7 884 128 821 ++ expérimentales 10-6 425 3 397 15 082 ++ 400 1 327 99 082 ++ 10-7 414 580 2 938 852 370 8 988 + Cellules 1 074 643 1 130 témoins 356 826 655 non infectées Dans le tableau I, ECP représente l'effet cytopathogène détecté au jour 9 après l'infection et après coloration au bleu Trypan (- : pas d'effet cytopathogène ; + : environ 70% de mortalité ; ++ : 100% de mortalité) . L'expression virale a été évaluée par mesure de l'activité reverse transcriptase (RT) dans les surnageants de culture; elle est considérée positive lorsque l'activité RT est supérieure à 5 CCC cpm/0,5 ml de surnageant Le tableau II ci-après rapporte l'effet cytopathogène induit par les échantillons de virus traités ou non par BG4 à 0,5 et 1% sur les cellules MT4 au jour 9 après inoculation. Tableau II Echantillons Dilution ECP testée Témoin positif HIV-1 10-8 ++ Témoin de centrifusation 10-6 ++ Témoin de 10-6 ++ conditions expérimentales Témoin de toxicité BG4 0,5% 1/10 Aucune toxicité Témoin de toxicité BG4 1% 1/10 Aucune toxicité HIV-1 traité 15 minutes 1/10 ++ par BG4 à 0,5% HIV-1 traité 30 minutes 1/10 ++ ar BG4 à 0 5% HIV-1 traité 60 minutes 1/10 ++ par BG4 à 0,58 HIV-1 traité 15 minutes 1/10 ++ par BG4 à 1% HIV-1 traité 30 minutes 1/10 ++ par BG4 à 1% HIV-1 traité 60 minutes 1/10 par BG4 à 1% Témoin cellules non infectées Dans le tableau II, l'effet cytopathogène (ECP) a été détecté au jour J+9 après l'inoculation des cellules et après coloration au Bleu Trypan (- : pas d'effet cytopathogène ; + environ 70% de cellules mortes ; ++ : 100% de cellules mortes). Le tableau III ci-après rapporte l'expression du virus HIV-1 (activité reverse transcriptase) par les cellules MT4 inoculées avec les échatillons de virus traités par BG4 à 0,5% et 1%. Tableau III Activité reverse Echantillons Dilution transcriptase en ECP cpm/0,5ml au jour +3 +6 +9 HIV-1 traité 10-1 9 969 98 760 135 396 ++ 15 minutes 13 757 82 893 74 637 ++ par BG4 à 0,5% HIV-1 traité 10-1 6 558 39 745 67 658 ++ 30 minutes 3 968 est considérée positive lorsque l'activité RT est supérieure à 5 000 cpm/0,5 ml de surnageant E) CONCLUSIONS. Les résultats précédents montrent que L'acide 3, 5-di-t-butyl-4-hydroxybenzoïque (BG4) est capable d'inactiver le pouvoir infectieux de HIV-1 pour des cellules MT4 in vitro. Un traitement du virus par la molécule BG4 en suspension à une concentration théorique de 1% pendant 60 minutes provoque une réduction de 5 log de l'infectivité du virus pour cette lignée de cellules lymphoïdes CD4+. REVENDICATIONS 1) Utilisation de composés de formule dans laquelle R représente un groupe COOH ou un groupe A-COOH, où A est un reste hydrocarboné aliphatique, ainsi que leurs sels et esters, pour l'obtention d'un médicament destiné au traitement et à la prévention chez l'homme d'une infection par les virus du type HIV, et plus particulièrement du type HIV-1 et HIV-2. 2) Utilisation selon la revendication 1, caractérisée en ce que dans la formule (I), A est un reste hydrocarboné aliphatique en C1-Cll. 3) Utilisation selon la revendication 1, caractérisée en ce que dans la formule (I), R représente un groupe COOH. 4) Utilisation de l'acide 3,5-di-t-butyl-4hydroxybenzoïque ainsi que ses sels et esters, selon l'une des revendications 1 ou 3, pour l'obtention d'un médicament destiné au traitement et à la prévention chez l'homme d'une infection par les virus du type HIV, et plus particulièrement du type HIV-1 et HIV-2. 5) Composition pharmaceutique destinée à lutter contre une infection par les virus du type HIV, et plus particulièrement du type HIV-1 et HIV-2, caractérisée en ce qu'elle renferme à titre de principe actif au moins un composé de formule dans laquelle R représente un groupe COOH ou un groupe A-COOH, où A est un reste hydrocarboné aliphatique, ou un sel ou un ester de ce composé, en association avec un véhicule pharmaceutiquement acceptable. 6) Composition pharmaceutique selon la revendication 5, caractérisée en ce que dans la formule (I), A est un reste hydrocarboné aliphatique en Cl-Cll. 7) Composition pharmaceutique selon la revendication 5, caractérisée en ce que dans la formule (I), R représente un groupe COOH. 8) Composition pharmaceutique destinée à lutter contre une infection par les virus du type HIV, et plus particulièrement du type HIV-1 et HIV-2, selon l'une des revendications 5 ou 7, caractérisée en ce qu'elle renferme à titre de principe actif l'acide 3,5di-t-butyl-4-hydroxybenzoïque, ou un sel ou un ester de celui-ci, en association avec un véhicule pharmaceutiquement acceptable.