FR 2717495 A1 19950922 FR 9403190 A 19940318 VIRUS RECOMBINANTS. PREPARATION ET UTILISATION EN THERAPIE GENIOUE La présente invention concerne des vecteurs recombinants d'origine virale et leur utilisation pour le traitement et/ou la prévention des maladies neurodégénératives. Plus particulièrement, elle concerne des adénovirus recombinants comportant une séquence d'ADN codant pour le facteur de croissance des fibroblastes acide (aFGF, "acidic fibroblast growth factor"). fiS'invention concerne également la préparation de ces vecteurs, les compositions pharmaceutiques les contenant et leur utilisation thérapeutique, notamment en thérapie génique. Les maladies neurodégénératives représentent une large part des dépenses de santé dans les pays occidentaux, part qui ne cesse de s'accroitre suite au vieillissement de la population. Au titre de ces affections, on peut citer notamment la maladie d'Alzheimer, le maladie de Parkinson, la chorée de Huntington, la sclérose latérale amyotrophique, etc. Les signes pathologiques et l'étiologie de ces maladies sont fort variés, mais toutes ces maladies résultent d'une perte progressive de cellules neuronales dans le système nerveux central, parfois au sein de structure très localisées comme la substance noire dans la maladie de Parkinson. Bien que certains traitements pharmacologiques palliatifs soient déjâ disponibles, leurs effets sont relativement limités. La présente invention décrit une approche thérapeutique nouvelle, particulièrement avantageuse pour le traitement de ces maladies. Plus particulièrement, la présente invention décrit des vecteurs permettant de promouvoir directement la survie des cellules neuronales impliquées dans ces pathologies, par expression efficace et localisée de certains facteurs trophiques. Les facteurs trophiques sont une classe de molécules ayant des propriétés de stimulation de la croissance neuritique ou de la survie des cellules nerveuses. Le premier facteur possédant des propriétés neurotrophiques, le NGF ("Nerve Growth Factor"), a été caractérisé il y a une quarantaine d'années (pour revue, voir Levi- Montalcini et Angelleti, Physiol. Rev. 48 (1968) 534). Ce n'est que récemment que d'autres facteurs neurotrophiques ont été identifiés, et notamment le facteur neurotrophique dérivé du cerveau (BDNF) (Thoenen, Trends in NeuroSci. 14 (1991) 165), le C, etc. La demanderesse s'est intéressée plus particulièrement au facteur de croissance des fibroblastes acide (aFGF). Le aFGF est une protéine de 134 à 155 acides aminés environ et de poids moléculaire compris entre 15 et 17 kD selon les formes. Le aFGF a été décrit initialement pour ses propriétés de croissance des fibroblastes, qui lui conféraient un intérêt dans le traitement de certaines pathologies telles que notamment la cicatrisation. Récemment, il a été montré que le aFGF subissait un transport rétrograde dans plusieurs populations neuronales, dont le système nigro-strié (Fergusson et Johnson, J. Comp. Neurol. 313 (1991) 693), et qu'il pouvait permettre, in vitro, la survie de neurones dopaminergiques du mésencéphale (Knüsel et al., J. Neurosci. 10 (1990) 558). Toutefois, bien que ses propriétés soient intéressantes, l'application thérapeutique du aFGF se heurte à différents obstacles. En particulier, l'absence de biodisponibilité 'du aFGF limite toute utilisation thérapeutique. Par ailleurs, il n'existe pas de moyens efficaces permettant de délivrer le aFGF de manière durable et localisée à certaines régions désirées de l'organisme. Enfin, il est essentiel que le aFGF délivré soit actif et puisse exercer une activité thérapeutique in vivo. La présente invention apporte une solution particulièrement avantageuse à ces problèmes. La présente invention réside en effet dans la mise au point de vecteurs particulièrement efficaces pour délivrer in vivo et de manière localisée, des quantités thérapeutiquement actives de aFGF. Dans la demande copendante nO PCT/EP93/02519, il a été montré que les adénovirus pouvaient être utilisés pour le transfert de gènes in vivo dans le système nerveux. La présente invention concerne des constructions nouvelles, particulièrement adaptées et efficaces pour le transfert d'un gène spécifique dans le système nerveux. Plus particulièrement, la présente invention concerne un adénovirus recombinant comprenant une séquence d'ADN codant pour le facteur de croissance des fibroblastes acide (aFGF), sa préparation, et son utilisation pour le traitement et/ou la prévention des maladies neurodégénératives. La demanderesse a maintenant montré qu'il est possible de construire des adénovirus recombinants contenant une séquence codant pour le aFGF, d'administrer ces adénovirus recombinants in vivo, et que cette administration permet une expression stable et localisée de quantités thérapeutiquement actives de aFGF in vivo, et en particulier dans le système nerveux, et sans effet cytopathologique. Les propriétés particulièrement avantageuses des vecteurs de l'invention découlent notamment de la construction utilisée (adénovirus défectif, délété de certaines régions virales), du promoteur utilisé pour l'expression de la séquence codant pour le aFGF (promoteur viral ou tissu-spécifique de préférence), et des méthodes d'aministation dudit vecteur, permettant l'expression efficace et dans les tissus appropriés du aFGF. La présente invention fournit ainsi des vecteurs viraux utilisables directement en thérapie génique, particulièrement adaptés et efficaces pour diriger l'expression du aFGF in vivo. La présente invention offre ainsi une nouvelle approche particulièrement avantageuse pour le traitement et/ou la prévention des maladies neurodégénératives. Un premier objet de l'invention réside donc dans un adénovirus recombinant défectif comprenant une séquence d'ADN codant pour le facteur de croissance des fibroblastes acide (aFGF) ou un dérivé de celui-i. L'invention a également pour objet l'utilisation d'un tel adénovirus recombinant défectif pour la préparation d'une composition pharmaceutique destinée au traitement ou à la prévention des maladies neurodégénératives. Le facteur de croissance des fibroblastes acide (aFGF) produit dans le cadre de la présente invention peut être le aFGF humain ou un aFGF animal. En particulier, la séquence d'ADN codant pour le aFGF humain a été clonée et séquencée (laye et al., Science 273 (1986) 541). Préalablement à leur incorporation dans un vecteur adénovirus selon l'invention, ces séquences sont avantageusement modifiées, par exemple par mutagénèse dirigée, en particulier pour l'insertion de sites de restriction appropriés. Les séquences décrites dans l'art antérieur ne sont en effet pas construites pour une utilisation selon l'invention, et des adaptations préalables peuvent s'avérer nécessaires, pour obtenir des expressions importantes (voir exemple 1.2.). Dans le cadre de la présente invention, on préfère utiliser une séquence d'ADN codant pour le facteur de croissance des fibroblastes acide humain (haFGF). Par ailleurs, comme indiqué ci-avant, il est également possible d'utiliser une construction codant pour un dérivé du aFGF, en particulier un dérivé du aFGF humain. Un tel dérivé comprend par exemple toute séquence obtenue par mutation, délétion et/ou addition par rapport à la séquence native, et codant pour un produit conservant l'une au moins des propriétés biologiques du aFGF (effet trophique et/ou différentiateur). Ces modifications peuvent être réalisées par les techniques connues de l'homme du métier (voir techniques générales de biologie moléculaire ci-après et exemple 2). L'activité biologique des dérivés ainsi obtenus peut ensuite être aisément déterminée, comme indiqué notamment dans l'exemple 3. Les dérivés au sens de l'invention peuvent également être obtenus par hybridation à partir de banques d'acides nucléiques, en utilisant comme sonde la séquence native ou un fragment de celle-ci. Ces dérivés sont notamment des molécules ayant une plus grande affinité pour leurs sites de fixation, des séquences permettant une expression améliorée in vivo, des molécules présentant une plus grande résistance aux protéases, des molécules ayant une efficacité thérapeutique plus grande ou des effets secondaires moindres, ou éventuellement de nouvelles propriétés biologiques. Parmi les dérivés préférés, on peut citer plus particulièrement les variants naturels du aFGF. Ainsi, comme décrit par exemple dans le brevet US 4,868,113, différentes formes de aFGF existent, et notammentJune forme comprenant 154 acides aminés, une forme comprenant 140 acides aminés, et une forme comprenant 134 acides aminés. Il est entendu que le terme aFGF comprend ces différentes formes. D'autres dérivés préférés sont notamment les molécules dans lesquelles un ou plusieurs résidus ont été substitués, les dérivés obtenus par délétion de régions n'intervenant pas ou peu dans l'interaction avec les sites de liaison considérés ou exprimant une activité indésirable, et les dérivés comportant par rapport à la séquence native des résidus supplémentaires, tels que par exemple un signal de sécrétion et/ou un peptide de jonction. De manière particulièrement avantageuse, la séquence utilisée dans le cadre de la présente invention contient également un signal de sécrétion permettant de diriger le aFGF synthétisé dans les voies de sécrétion des cellules infectées, de manière à ce que le aFGF synthétisé soit libéré plus efficacement dans les compartiments extracellulaires et puisse activer ses récepteurs. Le signal de sécrétion utilisé peut être un signal de sécrétion hétérologue ou même artificiel. Avantageusement, on utilise un signal de sécrétion fonctionnel dans les cellules nerveuses, tel que le signal de sécrétion d'une cytokine. A titre d'exemple, on peut citer le signal de sécrétion de l'interféron de fibroblastes humains qui permet la sécrétion importante de aFGF. La séquence d'ADN codant pour le facteur de croissance des fibroblastes acide utilisée dans le cadre de la présente invention peut être un ADNc, un ADN génomique (ADNg), ou une construction hybride consistant par exemple en un ADNc dans lequel seraient insérés un ou plusieurs introns. I1 peut également s'agir de séquences synthétiques ou semisynthétiques. De manière particulièrement avantageuse, on utilise un ADNc ou un ADNg. En particulier, l'utilisation d'un ADNg peut permettre une meilleure expression dans les cellules humaines. Dans un premier mode de réalisation de l'invention, l'adénovius comprend donc une séquence d'ADNc codant pour le facteur de croissance des fibroblastes acide (aFGF). Dans un autre mode de réalisation préféré de l'invention, radénovirus comprend une séquence d'ADNg codant pour le facteur de croissance des fibroblastes acide (aFGF). Avantageusement, la séquence d'ADN code pour le aFGF précédée d'un signal de sécrétion hétérologue fonctionnel dans les cellules nerveuses. Avantageusement, la séquence codant pour le aFGF est placée sous le contrôle de signaux permettant son expression dans les cellules nerveuses. Préférentiellement, il s'agit de signaux d'express;ion hétérologues, c'est-à-dire de signaux différents de ceux naturellement responsables de l'expression du aFGF. ll peut s'agir en particulier de séquences responsables de l'expression d'autres protéines, ou de séquences synthétiques. Notamment, il peut s'agir de séquences promotrices de gènes eucaryotes ou viraux. Par exemple, il peut s'agir de séquences promotrices issues du génome de la cellule que l'on désire infecter. De même, il peut s'agir de séquences promotrices issues du génome d'un virus, y compris l'adénovirus utilisé. A cet égard, on peut citer par exemple les promoteurs E1A, MLP, CMV, LTR-RSV, etc. En outre, ces séquences d'expression peuvent être modifiées par addition de séquences d'activation, de régulation, ou permettant une expression tissu-spécifique. 11 peut en effet être particulièrement intéressant d'utiliser des signaux d'expression actifs spécifiquement ou majoritairement dans les cellules nerveuses, de manière à ce que la séquence d'ADN ne soit exprimée et ne produise son effet que lorsque le virus a effectivement infecté une cellule nerveuse. A cet égard, on peut citer par exemple les promoteurs de l'énolase neurone-spécifique, de la GFAP, etc. Dans un premier mode de réalisation particulier, l'invention concerne un adénovirus recombinant défectif comprenant une séquence d'ADNc codant pour le facteur de croissance des fibroblastes acide humain (haFGF) sous le contrôle du promoteur LTR-RSV. Dans un autre mode de réalisation particulier, l'invention concerne un adénovirus recombinant défectif comprenant une séquence d'ADNg codant pour le facteur de croissance des fibroblastes acide humain (haFGF) sous le contrôle du promoteur LTR-RSV. La demanderesse a en effet montré que le promoteur LTR du virus du sarcome de rous (RSV) permettait une expression durable et importante du aFGF dans les cellules du système nerveux, notamment central. Toujours dans un mode préféré, l'invention concerne un adénovirus recombinant défectif comprenant une séquence d'ADN codant pour le facteur de croissance des fibroblastes acide humain (haFGE;) sous le contrôle d'un promoteur permettant une expression majoritaire dans le système nerveux. Un mode particulièrement préféré de mise en oeuvre de la présente invention réside dans un adénovirus recombinant défectif comprenant les séquences ITR, une séquence permettant l'encapsidation, une séquence d'ADN codant pour le facteur de croissance des fibroblastes acide humain (haFGF) ou un dérivé de oelui sous le contrôle d'un promoteur permettant une expression majoritaire dans le système nerveux, et dans lequel le gène El et au moins un' des gènes E2, E4, L1-L5 est non fonctionnel. Les adénovirus défectifs selon l'invention sont des adénovirus incapables de se répliquer de façon autonome dans la cellule cible. Généralement, le génome des adénovirus défectifs utilisés dans le cadre de la présente invention est donc dépourvu au moins des séquences nécessaires à la réplication dudit virus dans la cellule infectée. Ces régions peuvent être soit éliminées (en tout ou en partie), soit rendues non-fonctionnelles, soit substituées par d'autres séquences et notamment par la séquence d'ADN codant pour le aFGF. Préférentiellement, le virus défectif de l'invention conserve les séquences de son génome qui sont nécessaires à l'encapsidation des particules virales. Encore plus préférentiellement, comme indiqué ci-avant, le génome du virus recombinant défectif selon l'invention comprend les séquences ITR, une séquence permettant l'encapsidation, le gène El non fonctionnel et au moins un des gènes E2, E4, L1-L5 non fonctionnel. I1 existe différents sérotypes d'adénovirus, dont la structure et les propriétés varient quelque peu. Parmi ces sérotypes, on préfère utiliser dans le cadre de la présente invention les adénovirus humains de type 2 ou 5 (Ad 2 ou Ad 5) ou les adénovirus d'origine animale (voir demande FR 93 05954). Parmi les adénovirus d'origine animale utilisables dans le cadre de la présente invention on peut citer les adénovirus d'origine canine, bovine, murine, (exemple: Mavl, Beard et al., Virology 75 (1990) 81), ovine, porcine, aviaire ou encore simienne (exemple : SAV). De préférence, l'adénovirus d'origine animale est un adénovirus canin, plus préférentiellement un adénovirus CAV2 [souche manhattan ou A26/61 (ATCC VR800) par exemple]. De préférence, on utilise dans le cadre de l'invention des adénovirus d'origine humaine ou canine ou mixte. Les adénovirus recombinants défectifs selon l'invention peuvent être préparés par toute technique connue de l'homme du métier (Levrero et al., Gene 101 (1991) 195, EP 185 573; Graham, EMBO J. 3 (1984) 2917). En particulier, ils peuvent être préparés par recombinaison homologue entre un adénovirus et un plasmide portant entre autre la séquence d'ADN codant pour le aFGF. La recombinaison homologue se produit après co-transfection desdits adénovirus et plasmide dans une lignée cellulaire appropriée. La lignée cellulaire utilisée doit de préférence (i) être transformable par lesdits éléments, et (ii), comporter les séquences capables de complémenter la partie du génome de l'adénovirus défectif, de préférence sous forme intégrée pour éviter les risques de recombinaison. A titre d'exemple de lignée, on peut mentionner la lignée de rein embryonnaire humain 293 (Graham et al., J. Gen. Virol. 36 (1977) 59) qui contient notamment, intégrée dans son génome, la partie gauche du génome d'un adénovirus Ad5 (12 %). Des stratégies de construction de vecteurs dérivés des adénovirus ont également été décrites dans les demandes nO FR 93 05954 et FR 93 08596 qui sont incorporées à la présente par référence. Ensuite, les adénovirus qui se sont multipliés sont récupérés et purifiés selon les techniques classiques de biologie moléculaire, comme illustré dans les exemples. Comme indiqué ci-avant, la présente invention concerne également toute utilisation d'un adénovirus tel que décrit ci-dessus pour la préparation d'une composition pharmaceutique destinée au traitement et/ou à la prévention des maladies neurodégénératives. Plus particulièrement, elle concerne toute utilisation de ces adénovirus pour la préparation d'une composition pharmaceutique destinée au traitement et/ou à la prévention de la maladie de Parkinson, de la maladie d'Alzheimer, de la sclérose latérale amyotrophique (ALS), de la maladie d'Huntington, de l'épilepsie et de la démence vasculaire. La présente invention concerne également une composition pharmaceutique comprenant un ou plusieurs adénovirus recombinants défectifs tels que décrits précédemment. Ces compositions pharmaceutiques peuvent être formulées en vue d'administrations par voie topique, orale, parentérale, intranasale, intraveineuse, intramusculaire, souscutanée, intraoculaire, transdermique, etc. De préférence, les compositions pharmaceutiques de l'invention contiennent un véhicule pharmaceutiquement acceptable pour une formulation injectable, notamment pour une injection directe dans le système nerveux du patient. Il peut s'agir en particulier de solutions stériles, isotoniques, ou de compositions sèches, notamment lyophilisées, qui, par addition selon le cas d'eau stérilisée ou de sérum physiologique, permettent la constitution de solutés injectables. L'injection directe dans le système nerveux du patient est avantageuse car elle permet de concentrer l'effet thérapeutique au niveau des tissus affectés. L'injection directe dans le système nerveux central du patient est avantageusement réalisée au moyen d'un appareil d'injection stéréotaxique. L'emploi d'un tel appareil permet en effet de cibler avec une grande précision le site d'injection. A cet égard, l'invention concerne égdfemënt une méthode de traitement des maladies neurodégénératives comprenant l'administration à un patient d'un adénovirus recombinant tel que défini ci-avant. Plus particulièrement, l'invention concerne une méthode de traitement des maladies neurodégénératives comprenant l'administration stéréotaxique d'un adénovirus recombinant tel que défini ci-avant. Les doses d'adénovirus recombinant défectif utilisées pour l'injection peuvent être adaptées en fonction de différents paramètres, et notamment en fonction du mode d'administration utilisé, de la pathologie concernée ou encore de la durée du traitement recherchée. D'une manière générale, les adénovirus recombinants selon l'invention sont formulés et administrés sous forme de doses comprises entre 104 et 1014 pfu/ml, et de préférence 106 à 1010 pfu/ml. Le terme pfu ("plaque forcing unit") correspond au pouvoir infectieux d'une solution de virus, et est déterminé par infection d'une culture cellulaire appropriée, puis mesure, généralement après 48 heures, du nombre de plages de cellules infectées. Les techniques de détermination du titre pfu d'une solution virale sont bien documentées dans la littérature. Un autre objet de l'invention concerne toute cellule de mammifère infectée par un ou plusieurs adénovirus recombinants défectifs tels que décrits ci-dessus. Plus particulièrement, l'invention concerne toute population de cellules humaines infectée par ces adénovirus. Il peut s'agir en particulier de fibroblastes, myoblastes, hépatocytes, kératinoeytes, cellules endothéliales, cellules gliales, etc. Les cellules selon l'invention peuvent être issues de cultures primaires. Celles ci peuvent être prélevées par toute technique connue de l'homme du métier, puis mises en culture dans des conditions permettant leur prolifération. S'agissant plus particulièrement de fibroblastes, ceux-ci peuvent être aisément obtenus à partir de biopsies, par exemple selon la technique décrite par Ham [Methods Cell.Biol. 21a (1980) 255]. Ces cellules peuvent être utilisées directement pour l'infection par les adénovirus, ou conservées, par exemple par congélation, pour l'établissement de banques autologues, en vue d'une utilisation ultérieure. Les cellules selon l'invention peuvent également être des cultures secondaires, obtenues par exemple à partir de banques préétablies. Les cellules en culture sont ensuite infectées par des adénovirus recombinants, pour leur conférer la capacité de produire du aFGF. L'infection est réalisée in vitro selon des techniques connues de l'homme du métier. En particulier, selon le type de cellules utilisé et le nombre de copies de virus par cellule désiré, l'homme du métier peut adapter la multiplicité 'd'infection et éventuellement le nombre de cycles d'infection réalisé. Il est bien entendu que ces étapes doivent être effectuées dans des conditions de stérilité appropriées lorsque les cellules sont destinées à une administration in vivo. Les doses d'adénovirus recombinant utilisés pour l'infection des cellules peuvent être adaptées par l'homme du métier selon le but recherché. Les conditions décrites ci-avant pour l'administration in vivo peuvent être appliquées à l'infection in vitro. Un autre objet de l'invention concerne un implant comprenant des cellules mammifère infectées par un ou plusieurs adénovirus recombinants défectifs telles que décrites ci-dessus, et une matrice extracellulaire. Préférentiellement, les implants selon l'invention comprennent 105 à 1010 cellules. Plus préférentiellement, ils en comprennent 106 à 108. Plus particulièrement, dans les implants de l'invention, la matrice extracellulaire comprend un composé gélifiant et éventuellement un support permettant l'ancrage des cellules. Pour la préparation des implants selon l'invention, différents types de gélifiants peuvent être employés. Les gélifiants sont utilisés pour l'inclusion des cellules dans une matrice ayant la constitution d'un gel, et pour favonser l'ancrage des cellules sur le support, le cas échéant. Différents agents d'adhésion cellulaire peuvent donc être utilisés comme gélifiants, tels que notamment le collagène, la gélatine, les glycosaminoglycans, la fibronectine, les lectines, etc. De préférence, on utilise dans le cadre de la présente invention du collagène. Il peut s'agir de collagène d'origine humaine, bovine ou murine. Plus préférenciellement, on utilise du collagène de type I. Comme indiqué ci-avant, les compositions selon l'invention comprennent avantageusement un support permettant l'ancrage des cellules. Le terme ancrage désigne toute forme d'interaction biologique et/ou chimique et/ou physique entamant l'adhésion et/ou la fixation des cellules sur le support Par ailleurs, les cellules peuvent soit recouvrir le support utilisé, soit pénétrer à l'intérieur de ce support, soit les deux. On préfère utiliser dans le cadre de l'invention un support solide, non toxique et/ou bicompatible. En particulier, on peut utiliser des fibres de polytétrafluoroéthylène (PTl;E;) ou un support d'origine biologique. Les implants selon l'invention peuvent être implantés en différents sites de l'organisme. En particulier, l'implantation peut être effectuée au niveau de la cavité péritonéale, dans le tissu sous-cutané (région;sus-pubienne, fosses iliaques ou inguinales, etc), dans un organe, un muscle, une tumeur, le système nerveux central, ou encore sous une muqueuse. Les implants selon l'invention sont particulièrement avantageux en ce sens qu'ils permettent de contrôler la libération du produit thérapeutique dans l'organisme : Celle-ci est tout d'abord détenninée par la multiplicité d'infection et par le nombre de cellules implantées. Ensuite, la libération peut être contrôlée soit par le retrait de l'implant, ce qui arrête définitivement le traitement, soit par l'utilisation de systèmes d'expression régulable, permettant d'induire ou de réprimer l'expression des gènes thérapeutiques. La présente invention offre ainsi un moyen très efficace pour le traitement ou la prévention des maladies neurodégénératives. Elle est tout particulièrement adaptée au traitement des maladies d'Alzheimer, de Parkinson, de Huntington, et de l'ALS. Les vecteurs adénoviraux selon l'invention présentent en outre des avantages importants, liés notamment à leur très haute efficacité d'infection des cellules nerveuses, permettant de réaliser des infections à partir de faibles volumes de suspension virale. De plus, l'infection par les adénovirus de l'invention est très localisée au site d'injection, ce qui évite les risques de diffusion aux structures cérébrales voisines. En outre, ce traitement peut concerner aussi bien l'homme que tout animal tel que les ovins, les bovins, les animaux domestiques (chiens, chats, etc), les chevaux, les poissons, etc. La présente invention sera plus complètement décrite à l'aide des exemples qui suivent, qui doivent être considérés comme illustratifs et non limitatifs. Légende des figures Figure 1 : Représentation du vecteur pXL2244 Figure 2 : Représentation du vecteur pSh-Ad-aFGF Techniques generales de biologie moleculalre Les méthodes classiquement utilisées en biologie moléculaire telles que les extractions préparatives d'ADN plasmidique, la centrifugation d'ADN plasmidique en gradient de chlorure de césium, l'électrophorèse sur gels d'agarose ou d'acrylamide, la purification de fragments d'ADN par électroélution, les extraction de protéines au phénol ou au phénolchloroforme, la précipitation d'ADN en milieu salin par de l'éthanol ou de l'isopropanol, la transformation dar! Escherichia coli, etc ... sont bien connues de l'homme de métier et sont abondaient décrites dans la littérature [Maniatis T. et al., "Molecular Cloning, a Laboratory Manual", Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, N.Y., 1982; Ausubel F.M. et al. (eds), "Current Protocols in Molecular Biology", John Wiley & Sons, New York, 1987]. Les plasmides de type pBR322, pUC et les phages de la série M13 sont d'origine commerciale (Bethesda Research Laboratories). Pour les ligatures, les fragments d'ADN peuvent être séparés selon leur taille par électrophorèse en gels d'agarose ou d'acrylamide, extraits au phénol ou par un mélange phénoVchloroforme, précipités à l'éthanol puis incubés en présence de l'ADN ligase du phage T4 (Biolabs) selon les recommandations du fournisseur. Le remplissage des extrémités 5' proéminentes peut être effectué par le fragment de Klenow de l'ADN Polymérase I d'E. coli (Biolabs) selon les spécifications du fournisseur. La destruction des extrémités 3' proéminentes est effectuée en présence de l'ADN Polymérase du phage T4 (Biolabs) utilisée selon les recommandations du fabricant. La destruction des extrémités 5' proéminentes est effectuée par un traitement ménagé par la nucléase S1. La mutagénèse dirigée in vitro par oligodéoxynucléotides synthétiques peut être effectuée selon la méthode développée par Taylor et al. [Nucleic Acids Res. Il (1985) 8749-8764] en utilisant le kit distribué par Amersham. L'amplification enzymatique de fragments d'ADN par la technique dite de PCR rPolymérase-catalyzed Çhain Reaction, Saiki R.K. et al., Science XQ (1985) 1350-1354; Mullis K.B. et Faloona F.A., Meth. Enzym. 155 (1987) 335-350] peut être effectuée en utilisant un "DNA thermal cycler" (Perkin Elmer Cetus) selon les spécifications du fabricant. La vérification des séquences nucléotidiqu Exemples Exemple 1: Construction du vecteur pSh-Ad-aFGF. Cet exemple décrit la construction d'un vecteur comprenant une séquence d'ADN codant pour le aFGF précédée d'une séquence de sécrétion hétérologue, sous le contrôle d'un promoteur constitué par le LTR du virus du sarcome de rous (LTR RSV). 1.1. Vecteur de départ (pXL2244) : plasmide pXL2244 contient l'ADNc de l'ApoAI sous le contrôle du promoteur LTR du virus RSV, ainsi que des séquences de l'adénovinis Ad5 (figure 1). Il a été construit par insertion d'un fragment ClaI EcoRV contenant l'ADNc codant pour la préproApoAI dans le vecteur pLTR RSV Bgal (Stratford-Perricaudet et al., J. Clin. Invest. 90 (1992) 626), digéré par les même enzymes. 1.2. Construction d'une séquence ADNc codant pour le aFGF. Pour permettre la réalisation de vecteurs selon l'invention, une séquence d'ADNc codant pour le aFGF humain a été construite comme suit: - Une séquence d'ADNc codant pour le aFGF humain comprenant 134 acides aminés (aFGF134) a été isolée à partir du plasmide pMJ26 Oaye et al., J. Biol. Chem. 262 (1987) 16612). Le plasmide pMJ26 contient une séquence d'ADNc codant pour le aFGF humain précédée de la séquence du site de restriction EcoRI. La séquence du plasmide au niveau de cette région est la suivante (site EcoRI souligné et codon start en gras): ..GAATTCATG... Après digestion par l'enzyme EcoRI, les extrémités du site de restriction ont été rendues franches par traitement à la nucléase mung bean. Les fragments obtenus possèdent les extrémités suivantes (codon start en gras): ...GAATTCATG... (pMJ26) ...G CATG... (EcoRI + Nucléase mung bean) Cette séquence a ensuite été modifiée par insertion d'une séquence de sécrétion. L'introduction de cette séquence est particulièrement avantageuse puisqu'elle permet la libération extracellulaire plus efficace du aFGF synthétisé par les cellules infectées par les vecteurs de l'invention. Plus particulièrement, la séquence obtenue ci-dessus a été modifiée par insertion, à l'extrémité 5' et en phase de la séquence codante du aFGF, d'un oligonucléotide synthétique double brin correspondant à la séquence de sécrétion de l'interféron de fibroblastes humains (Taniguchi et al., Gene 10 (1980) 11). Chaque brin de cet oligonucléotide a été synthétisé chimiquement au moyen d'un synthétiseur d'acides nucléiques, puis hybridé pour reconstituer l'ADN double brin. La séquence utilisée contient l'enchainement des 70 pb suivantes: GGCTCGAG ATG ACC AAC AAG TGT CTC CTC CAA i;TT GCT CTC CTG TTG TGC Met Thr Asn Lys Cys Leu Leu Gln Ile Ala Leu Leu Leu Cys TTC TCC ACT ACA GCT CTT TC Phe Ser Thr Thr Ala Leu Se Cet oligonucléotide comprend, à l'extrémité 5' de la séquence de sécrétion, un site XhoI (souligné dans la séquence ci-dessus). Cet oligonucléotide double brin a été ligaturé avec la séquence codant pour le aFGF digérée par EcoRI et la nucléase mung bean comme décrit ci-avant. Un clone présentant l'insert dans l'orientation correcte a ensuite été isolé et vérifié par séquençage. Le fragment complet présent dans ce clone, contenant la séquence codant pour le aFGF précédée de la séquence de sécrétion, a ensuite été isolé par digestion par les enzymes XhoI et BglII (site BglII situé après le codon stop), puis ligaturé avec le vecteur p267 (Jaye et al., EMBO J. 7 (1988) 963) préalablement ouvert par les mêmes enzymes. Le vecteur résultant a été désigné pMJ35. - La séquence préparée ci-dessus a ensuite été modifiée par la technique de PCR, en utilisant comme amorce les oligonucléotides suivants: Oligonucléotide 5': 5'-GCGATCGATCTCGAGATGACCAACAAG-3' Oligonucléotide 3': 5'-CTCGGTACCTCTTTAATCAGAAGAGAC-3' Les étapes d'amplification par PCR sur le plasmide pMJ35 permettent d'introduire de part et d'autre de la séquence chimérique "séquence de sécrétion/aFGF" des sites de restriction appropriés. Plus précisément, ces étapes permettent l'incorporation d'un site ClaI à l'extrémité 5' (séquence soulignée en simple dans l'oligonucléotide 5', qui indique sa position par rapport au codon start souligné en double) et d'un site KpnI à l'extrémité 3' (séquence soulignée en simple dans l'oligonucléotide 3'). Les sites créés permettent l'insertion de la séquences dans des conditions d'expression dans les vecteurs de l'invention. 1.3. Construction du vecteur pSh-Ad-aFGF Cet exemple décrit la construction du vecteur pSh-Ad-aFGF contenant la séquence codant pour le aFGF précédée d'une séquence de sécrétion, sous contrôle du LTR du virus RSV, ainsi que des séquences de I'adénovirus Ad5 permettant la recombinaison in vivo. Le fragment de PCR préparé dans l'exemple 1.2. a été digéré par les enzymes ClaI et KpnI, et le fragment de 0,5 kb résultant, contenant la séquence codant pour le aFGF précédée du signal de sécrétion de l'interféron de fibroblastes humain a ensuite été isolé et purifié par éleetrophorèse sur un gel d'agarose LMP ("Low Melting Point"). Parallèlement, le vecteur pXL2244 a été digéré par les mêmes enzymes de restriction ClaI et KpnI, puis précipité après inactivation de ces dernières. Le vecteur linéaire résultant, préalablement isolé et purifié par électrophorèse sur un gel d'agarose, et le fragment de 0,5 kb ont ensuite été ligaturés pour générer le vecteur pSh-Ad-aFGF (figure 2). L'ensemble de la séquence nucléotidique de l'insert aFGF a ensuite été vérifiée par séquençage didéoxynucléotides. Exemple 2. Fonctionaiité du vecteur pSh-Ad-aFGF La capacité du vecteur pSh-Ad-aFGF à exprimer sur culture cellulaire une forme biologiquement active du aFGF a été démontrée par transfeccion transitoire de cellules COS1. Pour cela, les cellules (2.106 cellules par boite de 10 cm de diamètre) ont été transfectées (8 pg de vecteur) en présence de Transfectam. Après 48 heures, le surnageant de culture des cellules a été récolté. Des dilutions sérielles (1/200 et 1/50) de ce surnageant ont ensuite été ajoutées à des cultures de cellules NIH 3T3. L'effet trophique sur ces cultures a été observé par incorporation de thymidine radiomarquée. Parallèlement, la production de aFGF par les cellules transfectées a également été démontrée par immunodétection. Exemple 3. Construction d'un adénovirus recombinant Ad-aFGF contenant une séquence codant pour le aFGF Le vecteur pSh-Ad-aFGF a été linéarisé et cotransfecté avec un vecteur adénoviral déficient, dans les cellules helper (lignée 293) apportant en trains les fonctions codées par les régions El (E1A et E1B) d'adénovirus. Plus précisément, l'adénovirus Ad-aFGF a été obtenu par recombinaison homologue in vivo entre l'adénovirus mutant Ad-dl 1324 (Thimmappaya et al., Cell 31 (1982) 543) et le vecteur pSh-Ad-aFGF, selon le protocole suivant: le plasmide pSh-Ad-aFGF et l'adênovirus Ad-d11324, linéarisé par l'enzyme ClaI, ont été co- transfectés dans la lignée 293 en présence de phosphate de calcium, pour permettre la recombinaison homologue. Les adénovirus recombinants ainsi générés ont été sélectionnés par purification sur plaque. Après isolement, l'ADN de l'adênovirus recombinant a été amplifié dans la lignée cellulaire 293, ce qui conduit à un surnageant de culture contenant l'adénovirus défectif recombinant non purifié ayant un titre d'environ 1010 pfulml. Les particules virales sont ensuite purifiées par centrifugation sur gradient de chlorure de césium selon les techniques connues (voir notamment Graham et al., Virology 52 (1973) 456). L'adénovirus Ad-aFGF peut être conservé à -800C dans 20 % de glycérol. Exemple 4. Fonctionalité de l'adénovirus Ad-aFGF La capacité de l'adénovirus Ad-aFGF à infecter des cellules en culture et à exprimer dans le milieu de culture une forme biologiquement active du aFGF a été démontrée par infection des lignées 293 humaine et PC12 de rat. La présence de aFGF actif dans le surnageant de culture a ensuite été déterminée dans les mêmes conditions que dans l'exemple 2. Ces études permettent de montrer que l'adénovirus exprime bien une forme biologiquement active du aFGF en culture cellulaire. Exemple 5 : Transfert in vivo du gène aFGF par un adénovirus recombinant à des rats présentant une lésion du fimbria-fornix Cet exemple décrit le transfert du gène aFGF in vivo au moyen d'un vecteur adénoviral selon l'invention. Il montre sur un modèle animal de la lésion du fimbriafornix, que les vecteurs de l'invention permettent d'induire l'expression in vivo de quantités thérapeutiques de aFGF. Sur des rats préalablement anesthésiés, la voie septo-hippocampique (fimbria-fornix) a été sectionnée au niveau de l'hémisphère gauche. Cette lésion mécanique a été réalisée à l'aide d'un couteau chirurgical rétractable. Las coordonnées stéréotaxiques utilisées à cet effet sont, par rapport au bregma: AP: -1,7; ML: +1,5; V: -5,5â-0,5. L'adénovirus recombinant aFGF a été injecté immédiatement après la lésion, dans le noyau médian du septum et dans la partie dorsale de I'hippocampe déafférenté (hippocampe du coté de la lésion). Plus particulièrement, l'adénovinis injecté est l'adénovirus Ad-aFGF préparé dans l'exemple 3.1., utilisé sous forme purifiée (3,5 106 pfu/X), dans une solution saline phosphate (PBs). Les injections sont réalisées à l'aide d'une canule (diamètre extérieur 280 ,um) connectée à une pompe. La vitesse d'injection 'est fixée à 0,5 pUmin, après quoi, la canule reste en place pendant 4 minutes supplémentaires avant d'être remontée. Las volumes d'injection dans l'hippocampe et le septum sont respectivement 3 jJI et 2 iI. La concentration d'adénovirus injectée est de 3,5. 106 pfu/llL Pour l'injection dans l'hippocampe, les coordonnées stéréotaxiques sont les suivantes: AP=4; ML=3,5; V=-3,1 (les coordonnées AP et ML sont déterminées par rapport au bregma, la coordonnée V par rapport à la surface de l'os crânien au niveau du bregma. Pour l'injection dans le septum, les coordonnées stéréotaxiques sont les suivantes : AP=1; ML=1; V=-6 (les coordonnées AP et ML sont déterminées par rapport au bregma, la coordonnée V par rapport à la surface de l'os crânien au niveau du bregma. Dans cette condition, la canule présente un angle de 9 degrés par rapport à la verticale (dans le sens médio-latéral) afin d'éviter le sinus veineux médian. Les effets thérapeutiques de l'administration de l'adénovirus selon l'invention ont été mis en évidence par trois types d'analyse : une analyse histologique et immunohistochimique, une analyse quantitative et une analyse comportementale. Analyse histologique et immunohistoehimique La lésion mécanique du fimbria-fornix induit une perte de neurones cholinergiques (révélée en immunohistologie par un anticorps anticholine acétyl transférase, ChAT) dans le septum médian, ainsi que la dénervation cholinergique dans l'hippocampe (détectée en histochimie par l'activité de l'acétyl choline estérase, AChE). L'analyse histologique des cerveaux injectés est réalisée 3 semaines après l'injection intracérébrale de l'adénovirus Ad-aFGF. Pour cela, les animaux sont sacrifiés, sous anesthésie, par perfusion intracardiaque de 4 o paraformaldéhyde. Après prélèvement, post-fixation et cryoprotection, le cerveau est coupé au cryomat selon le plan coronal : des coupes sériées coronales de 30 pin d'épaisseur sont réalisées sur toute la longueur du septum médian et aux niveaux antérieur, médian et postérieur de l'hippocampe. Pour le septum médian, des coupes espacées de 180 pin (1 coupe sur 6) sont colorées au crésyl violet (pour évaluer la densité neuronale) et immunomarquées par un anticorps anti ChAT (Biochem) (pour identifier les neurones cholinergiques). La méthode immunohistochimique est celle de la streptavidine-biotine peroxydase révélée par la DAB. Pour lthippocampe, des coupes espacées de 180 pin sont colorées selon la méthode histochimique pour l'AChE (acétyl choline estérase) afin de détecter l'innervation cholinergique. Les coupes sont montées sur lames de verre. Analyse quantitative Le nombre de neurones cholinergiques (ChAT positifs) dans le septum médian est le paramètre d'évaluation des effets de l'adénovirus Ad-aFGF. Le dénombrement est réalisé sur un échantillon (1 coupe sur 6 sur toute la longueur du septum médian). Pour chaque coupe, les neurones ChAT positifs sont dénombrés séparément des 2 cotés du septum. Les résultats cumulés pour toutes les coupes sont exprimés par le rapport du nombre de neurones ChAT positifs du coté lésé sur le nombre de neurones ChAT positifs du coté non lésé. Analyse comportementale Il est connu qu'une lésion bilatérale de la voie septo-hippocampique conduit à des déficits mnésiques. Les effets fonctionnels protecteurs d'une injection d'adénovirus Ad-aFGF sur ce type de lésion sont mis en évidence par analyse des performances mnésiques des animaux au cours de 2 tests comportementaux: le test de la piscine de Morris (mémoire de référence visuo-spatiale) et le test TMN ("twotrials memory task"; "mémoire à court-terme d'un environnement nouveau"). Exemple 6 : Transfert in vivo du gène aFGF par un adénovirus recombinant à des rats présentant une lésion de la voie nigro-striée Cet exemple décrit le transfert du gène aFGF in vivo au moyen d'un vecteur adénoviral selon l'invention. Il montre sur un modèle animal de la lésion de la voie nigro-striée, que les vecteurs de l'invention permettent d'induire l'expression in vivo de quantités thérapeutiques de aFGF. Sur des rats préalablement anesthésiés, la voie nigeo striée a été lésée au niveau du faisceau mésencéphalique médian (MFB) par injection de la toxine 6hydroxy dopamine (6OH-DA). Cette lésion chimique par injection a été unilatérale, suivant les coordonnées stéréotaxiques suivantes: AP: O et -1; ML: +1,6; V: -8,6 et -9 (les coordonnées AP et ML sont déterminées par rapport au bregma, la coordonnée V par rapport à la dure-mère). La barre d'incisive est fixée au niveau +5 mm. L'adénovirus recombinant aFGF a été injecté immédiatement après la lésion, dans la substance noire et le striatum, du coté de la lésion. Plus particulièrement, l'adénovirus injecté est l'adénovirus Ad-aFGF préparé dans l'exemple 3.1., utilisé sous forme purifiée (3,5 106 pfu/pl), dans une solution saline phosphate (PBS). Les injections ont été réalisées à l'aide d'une canule (diamètre extérieur 280 ,um) connectée à une pompe. La vitesse d'injection est fixée à 0,5 pllmin, après quoi, la canule reste en place pendant 4 minutes supplémentaires avant d'être remontée. Les volumes d'injection dans le striatum et la substance noire sont respectivement 2x3 Crl et 2 p1. La concentration d'adénovirus injectée est de 3,5. 106 pfu/pl. Pour l'injection dans la substance noire, les coordonnées stéréotaxiques sont les suivantes . AP=-5,8; ML=+2; V=-7,5 (les coordonnées AP et ML sont déterminées par rapport au bregma, la coordonnée V par rapport à la dure-mère). Pour les injections dans le striatum, les coordonnées stéréotaxiques sont les suivantes : AP=+0,5 et -0,5; ML=3; V=-5,5 (les coordonnées AP et ML sont déterminées par rapport au bregma, la coordonnée V par rapport à la dure-mère). Les effets thérapeutiques de l'administration de l'adénovirus selon l'invention ont été mis en évidence par trois types d'analyse : une analyse histologique et immunohistochimique, une analyse quantitative et une analyse comportementale. Analyse histologique et immunohistoehimique La lésion chimique de la voie nigro-striée induit une perte neuronale dans la substance noire ainsi que la dénervation dopaminergique dans le striatum (révélées en immunohistologie par un anticorps anti-tyrosine hydroxylase, TH). L'analyse histologique des cerveaux injectés est réalisée 3 semaines après l'injection intracérébrale de ladénovirus Ad-aFGF dans les conditions décrites dans l'exemple 6. Les coupes sériées coronales de 30 y d'épaisseur sont réalisées dans la substance noire et le striatum. Des coupes espacées de 180 imi (1 coupe sur 6) sont colorées au crésyl violet (pour évaluer la densité neuronale) et immunomarquées par un anticorps anti tyrosine hydroxylase (TH) (pour détecter les neurones dopaminergiques dans la substance noire et leur innervation dans le striatum). Analyse quantitative Le nombre de neurones dopaminergiques (TH positifs), dans la substance noire est le paramètre d'évaluation des effets de l'adènoviuus Ad-aFGF. Le dénombrement est réalisé sur un échantillon (1 coupe sur 6 sur toute la longueur de la substance noire). Pour chaque coupe, les neurones TH positifs sont dénombrés séparément des 2 cotés de la substance noire. Les résultats cumulés pour toutes les coupes sont exprimés en proportion: nombre de neurones TH positifs du coté lésé par rapport au nombre de neurones TH positifs du coté non lésé. Analyse comportementale Les effets fonctionnels protecteurs d'une injection d'adénovirus Ad-aFGF sur la lésion de la voie nigro-striée sont mis en évidence par analyse des performances sensori-motrices des animaux au cours de 2 tests comportementaux : le test de la rotation induite par des agonistes dopaminergiques (apomorphine, amphétamine et lévodopa), et le test de préhension ("paw-reaching"). Exemple 7 : Transfert in vivo du gène aFGF par un adénovirus recombinant à des rats présentant une lésion de la voie perforante Cet exemple décrit le transfert du gène aFGF in vivo au moyen d'un vecteur adénoviral selon l'invention. Il montre sur un modèle animal de la lésion de la voie perforante, que les vecteurs de l'invention permettent d'induire l'expression in vivo de quantités thérapeutiques de aFGF. Sur des rats préalablement anesthésiés, la voie entorhino-hippocampique (voie perforante) a été sectionnée unilatéralement à l'aide d'un couteau chirurgical. Les coordonnées stéréotaxiques utilisées à cet effet sont, par rapport au lambda : AP: +0,75; ML : +4,1 à 6,6; V : -7,7 (coordonnée V déterminée par rapport à la dure mère). L'adénovirus recombinant aFGF est injecté immédiatement après la lésion, soit au niveau de la lésion, soit au niveau de l'hippocampe et du cortex entorhinal. Plus particulièrement, l'adénovirus injecté est l'adénovirus Ad-aFGF préparé dans l'exemple 3.1., utilisé sous forme purifiée (3,5106 pfu/lll), dans une solution saline phosphate (PBS). Les injections ont été réalisées à l'aide d'une canule (diamètre extérieur 280 pm) connectée à une pompe. La vitesse d'injection est fixée à 0,5 iillmin, après quoi, la canule reste en place pendant 4 minutes supplémentaires avant d'être remontée. Les volumes d'injection dans l'hippocampe, le cortex entorhinal et le site de lésion de la voie perforante sont respectivement 3 p1, 2 Cll et 2 p1. La concentration d'adénovirus injectée est de 3,5. 106 pfu/pl. Les effets thérapeutiques de l'administration de l'adénoviuus selon l'invention peuvent être mis en évidence par une analyse comportementale dans les conditions de l'exemple 5. REVENDICATIONS 1. Adénovirus recombinant défectif comprenant une séquence d'ADN codant pour le facteur de croissance des fibroblastes acide (aFGF) ou un dérivé de celuici. 2. Adénovirus selon la revendication 1 caractérisé en ce que la séquence d'ADN contient, en 5' et en phase de lecture de la séquence codant pour le aFGF, une séquence de sécrétion. 3. Adénovirus selon la revendication2 caractérisé en ce que la séquence de sécrétion est choisie parmi les séquences de sécrétion fonctionnelles dans les cellules nerveuses, de préférence provenant d'une cytokine. 4. Adénovirus selon les revendications 1 à 3 caractérisé en ce que la séquence d'ADN est une séquence d'ADNc. 5. Adénovirus selon les revendications 1 à 3 caractérisé en ce que la séquence d'ADN est une séquence d'ADNg. 6. Adénovirus selon l'une des revendications 1 à 5 caractérisé en ce que la séquence d'ADN code pour le aFGF humain de 154, 140 ou 134 acides aminés, de préférence la forme 134. 7. Adénovirus selon l'une des revendications 1 à 6 caractérisé en ce que la séquence d'ADN est placée sous le contrôle de signaux permettant son expression dans les cellules nerveuses. 8. Adénovirus selon la revendication 7 caractérisé en ce que les signaux d'expression sont choisis parmi les promoteurs viraux, de préférence parmi les promoteurs E1A, MLP, CMV et LTR-RSV. 9. Adénovirus recombinant défectif comprenant une séquence d'ADNc codant pour le aFGF humain précédée d'une séquence de sécrétion, sous le contrôle du promoteur LTR-RSV. 10. Adénovirus recombinant défectif comprenant une séquence d'ADNg codant pour le aFGF humain précédée d'une séquence de sécrétion, sous le contrôle du promoteur LTR-RSV. 11. Adénovirus recombinant défectif comprenant une séquence d'ADN codant pour le aFGF humain ou un dérivé de celui-ci sous le contrôle d'un promoteur permettant une expression majoritaire dans les cellules nerveuses. 12. Adénovirus recombinant défectif selon la revendication 11 caractérisé en ce que le promoteur est choisi parmi le promoteur de l'énolase neurone spécifique et le promoteur de la GFAP. 13. Adénovirus selon l'une des reverzdications 1 à 12 caractérisé en ce qu'il est dépourvu des régions de son génome qui sont nécessaires à sa réplication dans la cellule cible. 14. Adénovirus selon la revendication 13 caractérisé en ce qu'il comprend les 1TR et une séquence permettant l'encapsidation, et dans lequel le gène El et au moins un des gènes E2, E4, L1-L5 sont non fonctionnels. 15. Adénovirus selon la revendication 13 ou 14 caractérisé en ce qu'il sagit d'un adénovirus humain de type Ad 2 ou Ad 5 ou canin de type CAV-2. 16. Utilisation d'un adénovirus selon l'une des revendications 1 à 15 pour la préparation d'une composition pharmaceutique destinée au traitement et/ou à la prévention des maladies neurodégénératives. 17. Utilisation selon la revendication 16 pour la préparation d'une composition pharmaceutique destinée au traitement et/ou à la prévention de la maladie de Parkinson, d'Alzheimer, de Huntington ou de l'ALS. 18. Composition pharmaceutique comprenant un ou plusieurs adénovirus recombinants défectifs selon l'une des revendications 1 à 15. 19. Composition pharmaceutique selon la revendication 18 caractérisée en ce qu'elle est sous forme injectable. 20. Composition pharmaceutique selon la revendication 18 ou 19 caractérisée en ce qu'elle comprend entre 104 et 1014 pfu/ml, et de préférence 106 à 1010 pfu/ml adénovirus recombinants défectifs. 21. Cellule de mammifère infectée par un ou plusieurs adénovirus recombinants défectifs selon l'une des revendications 1 à 15. 22. Cellule selon la revendication 21 caractérisée en ce qu'il s'agit d'une cellule humaine, choisie de préférence parmi les fibroblaste, myoblaste, hépatocyte, cellule endothéliale, cellule gliale et kératynocyte. 23. Implant comprenant des cellules infectées selon les revendications 21 à 22 et une matrice extracellulaire. 24. Implant selon la revendication 23 caractérisé en ce que la matrice extracellulaire comprend un composé gélifiantllchoisi de préférence parmi le collagène, la gélatine, les glycosaminoglycans, la fibronectine et les lectines. 25. Implant selon les revendications 23 ou 24 caractérisé en ce que la matrice extracellulaire comprend également un support permettant l'ancrage des cellules infectées. 26. Implant selon la revendication 25 caractérisé en ce que le support est constitué préférentiellement par des fibres de polytétrafluoroéthylène.