FR 2708831 A1 19950217 FR 9309984 A 19930813 MAMMIFERE NON HUMAIN CHIMERIQUE, ET SON UTILISATION POUR LE CRIBLAGE DE COMPOSITIONS PHARMACEUTIQUES CONTRE LES PATHOLOGIES PULMONAIRES HUMAINES. La présente invention a pour objet un modèle animal expérimental représenté par un mammifère non humain chimérique, ainsi que l'utilisation de ce modèle animal pour le criblage de compositions susceptibles d'être actives dans le cadre de la prévention ou du traitement de pathologies pulmonaires humaines. Parmi les différentes pathologies pulmonaires, la mucoviscidose est une maladie génétique que l'on rencontre fréquemment chez l'homme. Les signes cliniques de cette pathologie sont nombreux. On observe notamment des troubles intestinaux, pancréatiques, et surtout pulmonaires. Le poumon est envahi par un mucus très épais, ce qui entraîne une insuffisance respiratoire, et facilite le développement de foyers infectieux dans les poumons. Le transfert de gènes apparaît, de plus en plus, comme une approche thérapeutique privilégiée de la mucoviscidose. On connaît en effet la protéine déficiente dans cette pathologie, la C.F.T.R. (Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator), dont le gène humain a été cloné en 1989 (Rommens, J.M. et al., Science (1989) 245: 1099-1065). Environ 200 mutations responsables de sa dysfonction ont été localisées. La mutation la plus fréquente est la AF508 (délétion d'une phénylalanine en position 508 de la CFTR); cette unique délétion rend la protéine CFTR non fonctionnelle. Le problème qui se pose de façon aiguë est celui de la mise à l'épreuve expérimentale des compositions susceptibles d'être actives contre les pathologies pulmonaires d'une manière générale, et plus particulièrement contre la mucoviscidose. Dans le cas particulier de la mucoviscidose, le problème qui se pose est celui de l'expérimentation des constructions géniques incluant la protéine CFTR, avant leur utilisation thérapeutique, afin notamment de connaître leur tropisme, leur expression, et leur éventuelle toxicité. Les modèles expérimentaux actuellement disponibles pour tenter de répondre à ces questions sont les suivants: - La culture in vitro de cellules épithéliales respiratoires humaines. Les résultats sont cependant difficilement extrapolables au fonctionnement du tissu pulmonaire in vivo. En outre, il a été montré récemment qu'un site majeur d'expression de la protéine CFTR chez l'homme est constitué par les glandes séreuses sous-épithéliales, que l'on ne sait pas cultiver sélectivement. - Les modèles animaux. n n'existe pas de modèle animal spontané de la mucoviscidose. Une souche de souris "mucoviscidosique" a été créée en inactivant le gène CFTR par recombinaison homologue (Snouwaert, J.N. et al., Science (1992) 257: 1083-1088). L'une des limitations du modèle est que les glandes séreuses, sites majeurs d'expression de la CFTR chez l'homme, sont extrêmement rares chez les rongeurs. Les chimères xénogéniques. La souris SCID-hu (Science, 241, pp.1632-1639, 1988), permet de transposer directement in vivo le tissu respiratoire foetal humain dans sa structure tridimensionnelle naturelle (demande WO 93/02687 déposée le 30 juillet 1992). Cependant il n'existe actuellement aucun modèle expérimental contenant un tissu respiratoire humain pathologique, notamment "mucoviscidosique", dans sa structure tridimensionnelle naturelle, et permettant donc d'effectuer un criblage des compositions susceptibles d'être actives contre une pathologie pulmonaire déterminée, notamment contre la mucoviscidose. La présente invention a précisément pour but de fournir un modèle expérimental fiable pour la mise en oeuvre d'un procédé de criblage de compositions susceptibles d'être actives contre les différentes pathologies pulmonaires que l'on rencontre chez l'homme. La présente invention a pour objet tout mammifère non humain chimérique caractérisé en ce qu'il est transplanté par un greffon de tissu pulmonaire pathologique humain. Les pathologies caractéristiques du greffon de tissu pulmonaire humain susmentionné, sont d'origine génétique ou non. Par pathologie d'origine génétique, on entend toute pathologie causée par le dysfonctionnement d'un ou plusieurs gènes du génome d'un individu, et susceptible de se transmettre à travers les générations. A titre d'exemple de maladie pulmonaire génétique caractéristique d'un greffon selon l'invention, on peut citer la mucoviscidose. Les pathologies n'étant pas d'origine génétique sont celles susceptibles d'être contractées par le biais de facteurs extérieurs, tels que les bactéries et les virus, ou encore certains produits chimiques ou autres composants de pollution. A titre d'exemple de maladie pulmonaire non génétique caractéristique d'un greffon selon l'invention, on peut citer les différentes formes de tumeurs du poumon. Selon un mode de réalisation de l'invention, le tissu pulmonaire pathologique humain greffé sur le mammifère non humain chimérique, est constitué de tout ou partie d'une ébauche embryonnaire pulmonaire d'origine humaine. Cette ébauche pulmonaire est constituée de tissu pulmonaire indifférencié, et est avantageusement prélevée sur des embryons ou foetus d'environ 7 à environ 15 semaines, provenant d'interruptions volontaires ou thérapeutiques de grossesse. Tout ou partie de l'ébauche pulmonaire peut être greffée sur l'animal. De préférence, la taille des fragments d'ébauche pulmonaire utilisés pour effectuer la greffe, varie d'environ 1 à environ 10 mm. Avantageusement la partie de l'ébauche pulmonaire greffée, correspond à la fraction proximale de cette ébauche, c'est à dire la fraction située du côté de l'ouverture de cette ébauche pulmonaire (qui se présente sous la forme d'un sac), de manière à obtenir un greffon constitué de bronches et/ou bronchioles de forme tubulaire. Selon un autre mode de réalisation de l'invention, le tissu pulmonaire pathologique humain greffé sur le mammifere non humain, est un tissu différencié (provenant d'interventions chirurgicales, ou prélevé sur des cadavres). Avantageusement les fragments de tissu utilisés pour effectuer la greffe, sont choisis parmi le tissu constitutif des bronchioles, de manière à obtenir des greffons de forme tubulaire, ou le tissu constitutif des alvéoles. De préférence, la taille des fragments de tissu utilisés pour effectuer la greffe, varie d'environ 5 à environ 15 mm. L'ébauche embryonnaire pulmonaire pathologique ou le tissu pulmonaire pathologique différencié susmentionnés, proviennent respectivement d'un embryon ou d'un individu atteints de la pathologie pulmonaire en question. Cette ébauche ou ce tissu pulmonaire peuvent également provenir d'un embryon ou d'un individu qui ne sont pas atteints de la pathologie déterminée que l'on souhaite retrouver dans le greffon. Dans ce dernier cas, l'ébauche ou le tissu différencié sont traités de manière à présenter les signes caractéristiques de cette pathologie. Ce traitement de I'ébauche ou du tissu pulmonaire peut consister en une mise en contact de ces derniers avec un vecteur susceptible d'induire l'apparition de la pathologie déterminée. Ce vecteur peut être le vecteur naturel de cette pathologie, par exemple la bactérie ou le virus directement responsable de la maladie en question. Dans le cas de pathologies génétiques, ce vecteur peut être choisi parmi ceux susceptibles d'induire l'apparition de ladite pathologie, notamment soit par introduction d'une séquence nucléotidique antisens capable de bloquer I'expression d'un gène déterminé par hybridation avec ce dernier, soit par introduction dans le génome des cellules de séquences nucléotidiques codant pour des protéines mutées dont la présence et/ou le caractère inactif sont responsables de la pathologie en question. A titre d'illustration, le tissu pulmonaire humain mucoviscidosique greffé sur Ie mammifère non humain peut également être obtenu à partir d'un tissu pulmonaire non mucoviscidosique humain embryonnaire ou différencié dont les cellules ont été transformées à l'aide d'un vecteur approprié de manière à obtenir des cellules pulmonaires dans lesquelles la protéine CFTR normale n'est plus produite, ou dans lesquelles est produite une protéine CFTR inactive. Cette transformation peut notamment être effectuée à l'aide d'un vecteur contenant une séquence nucléotidique antisens susceptible de s'hybrider avec la séquence codant la CFTR normale, bloquant ainsi l'expression de cette protéine, et/ou à l'aide d'un vecteur adénovirus dont le génome contient une séquence d'ADN codant pour une protéine CFTR inactive telle que la protéine CFTR comportant la mutation AF508. L'obtention de ce vecteur adénovirus - CFTR inactive, peut être réalisée selon la méthode illustrée dans l'article de Rosenfeld et al., Cell., 68, 143-155 (1992), en utilisant en lieu et place du gène codant pour la CFTR normale, un gène codant pour une CFTR inactive, notamment le gène codant pour la CFTR AF508. Les mammifères non humains chimériques selon l'invention sont de préférence choisis parmi les rongeurs, et avantageusement parmi les souris xénotolérantes (c'est à dire capables d'être transplantées de façon stable par un greffon provenant d'une autre espèce, notamment par un greffon d'origine humaine). Les souris susmentionnées sont de préférence choisies parmi celles présentant un système immunitaire déficient, notamment parmi les souris SCID osma, G.C. et al., Nature (1983) 301: 527-532) ou NUDE disponibles notamment chez IFFA CREDO. Le tissu pulmonaire peut être greffé sous la capsule rénale, ou de préférence sous la peau des mammifères selon l'invention. La présente invention a plus particulièrement pour objet tout mammifère non humain chimérique caractérisé en ce qu'il est transplanté par un greffon de tissu pulmonaire humain comprenant des cellules tumorales ou cancéreuses. La présente invention a également plus particulièrement pour objet tout mammifère non humain chimérique caractérisé en ce qu'il est transplanté par un greffon de tissu pulmonaire humain comprenant des cellules, notamment des cellules épithéliales et séreuses, ou les précurseurs de ces cellules, le génome de ces cellules étant tel: - qu'il ne contient pas de gènes codant pour une protéine CFTR normale (active), - ou qu'il contient un gène codant pour une protéine CFTR anormale (inactive), - ou encore qu'il contient un gène codant pour une protéine CFTR active, ce gène ne pouvant être exprimé, notamment par blocage par une séquence antisens, I'absence ou l'inactivité de cette protéine CFTR étant responsable de la mucoviscidose chez l'homme (on parlera encore, dans ce qui précède et ce qui suit, de tissu pulmonaire humain "mucoviscidosique"). L'invention vise plus particulièrement un mammifère non humain chimérique tel que décrit ci-dessus, dans lequel le tissu pulmonaire greffé est une ébauche embryonnaire pulmonaire d'origine humaine, qui comprend des cellules dont le génome contient un gène responsable de la mucoviscidose. L'absence ou l'inactivité de la protéine CFTR dans les cellules susmentionnées se traduit notamment par une diminution sensible, voire l'arrêt du transport des ions chlorures (Cl-) à travers la membrane de ces cellules. L'invention a également pour objet le procédé d'obtention d'un mammifère non humain chimérique tel que décrit ci-dessus, ce procédé comprenant: - la transplantation, dans un site anatomique approprié dudit mammifère, d'un tissu pulmonaire pathologique humain tel que décrit ci-dessus, notamment sous la capsule rénale ou sous la peau du mammifère, sous anesthésie et dans des conditions stériles, - - le cas échéant, notamment lorsque le tissu pulmonaire est une ébauche embryonnaire, ou un tissu différencié de taille insuffisante, le maintien en vie dans des conditions appropriées (notamment stériles) du mammifère chimérique afin de permettre au tissu pulmonaire d'atteindre un stade différencié ou une taille suffisante. De préférence, la taille du greffon doit atteindre entre environ 5 mm et environ 20 mm, lorsqu'il s'agit d'une greffe d'ébauche embryonnaire, et entre environ 5 mm et environ 30 mm, lorsqu'il s'agit d'une greffe de tissu différencié. L'invention concerne également l'utilisation de mammifères non humains tels que décrits ci-dessus, pour la mise en oeuvre d'un procédé de criblage de compositions susceptibles d'être actives dans le cadre de la prévention ou du traitement de pathologies pulmonaires chez l'homme, et plus particulièrement dans le cadre des pathologies pulmonaires décrites ci-dessus. L'invention a également pour objet un procédé de criblage de compositions susceptibles d'êtres actives dans le cadre de la prévention ou du traitement de pathologies pulmonaires humaines susmentionnées, caractérisé en ce qu'il comprend: - la mise en présence d'une au moins de ces compositions avec le greffon, présent chez un mammifère non humain chimérique tel que décrit ci-dessus, pendant un temps déterminé, - la détection de l'éventuelle restauration du mécanisme de fonctionnement du tissu pulmonaire dans le greffon, correspondant au mécanisme normal de fonctionnement du tissu pulmonaire chez un individu non atteint de la pathologie en question, cette restauration étant le témoin de l'efficacité des compositions testées contre ladite pathologie. La mise en présence des compositions avec le greffon peut se faire par micro-injection de ces compositions dans le greffon. Avantageusement, notamment dans le cas de greffons correspondant à des bronchioles ou alvéoles, le contact entre le greffon et lesdites compositions peut être obtenu par pulvérisation de ces dernières dans la lumière de ces bronchioles ou alvéoles, notamment par utilisation d'aérosols. La détection de l'éventuelle restauration du mécanisme de fonctionnement du tissu pulmonaire, dans le cadre du procédé de criblage susmentionné, est avantageusement réalisée par prélèvement d'une partie du greffon que l'on met en culture in vitro dans un milieu approprié, puis on détecte l'éventuelle restauration du mécanisme de fonctionnement du tissu pulmonaire dans le greffon, correspondant au mécanisme normal de fonctionnement du tissu pulmonaire chez un individu non atteint de la pathologie en question. Dans le cas de la mucoviscidose, on dédectera l'éventuelle restauration du mécanisme correspondant à celui contrôlé par la protéine CFTR dans le tissu pulmonaire d'un homme sain (c'est à dire non atteint de mucoviscidose). La détection de l'éventuelle restauration du mécanisme de fonctionnement pulmonaire susmentionné dans le cas de la mucoviscidose, peut être effectuée: - par détection du fonctionnement normal du mécanisme de transport des ions Cl- (par mesure des courants transmembranires d'une cellule isolée ou d'un fragment de membrane ceIlulaire, notamment selon la technique décrite par Hamill et al., (1981), Pflügers Arch 391: 85-100; ou à l'aide d'ions Cl-marqués de manière radioactive, notamment selon la technique décrite par Venglarik et al. (1990), Am. J. Physiol. 90: C358-C364), témoin de la présence de CFTR normale, ou d'un composé présentant une activité analogue à celle de la protéine CFTR, - ou encore par détection ou dosage de la quantité de protéine CFTR normale produite dans le greffon, notamment à l'aide d'anticorps dirigés contre cette protéine, notamment selon la méthode décrite dans l'article de Rosenfeld et al., cité ci-dessus. L'invention vise également l'utilisation d'un vecteur adénovirus recombinant comprenant, en l'un des sites de son génome non essentiels pour sa réplication, un gène codant pour la protéine CFTR normale chez l'homme, en tant que témoin de contrôle de la restauration du fonctionnement du tissu pulmonaire dans le cadre de la mise en oeuvre d'un procédé de criblage tel que décrit ci-dessus. L'invention a également pour objet les compositions pharmaceutiques telles qu'obtenues par mise en oeuvre d'un procédé de criblage susmentionné. L'invention sera davantage illustrée à l'aide de la description détaillée qui suit de la préparation de souris chimériques SCID selon l'invention, transplantées par une ébauche embryonnaire pulmonaire humaine mucoviscidosique, et de la démonstration de leur aptitude en tant que modèle expérimental animal à l'aide d'un adénovirus dont le génome contient le gène codant pour la ss-galactosidase. animaux Les souris de souche C.B.17 scid/scid (SCID) sont produites, élevées et manipulées dans une animalerie spéciale, à l'Institut d'Embryologie Cellulaire et Moléculaires du CNRS et du Collège de France. Ces animaux sont élevés en isolateurs alimentés en air stérilisé et conditionné. Le matériel d'élevage est stérilisé par autoclavage, à l'exception de la nourriture qui l'est par irradiation r. Toutes les manipulations des souris sont effectuées sous hottes à flux laminaire, par un personnel spécialement formé et équipé. - Matériel expérimental Les ébauches pulmonaires ont été prélevées sur des embryons et foetus provenant d'interruptions volontaires ou thérapeutiques de grossesse. Le gène transféré dans ces expériences est la construction adénovirus-pgalactosidase, décrite ci-après. - Transplantation de l'ébauche pulmonaire dans la souris SCID L'ébauche pulmonaire est transplantée, sous la loupe binoculaire et à l'aide d'instruments de microchirurgie, sous la capsule rénale ou sous la peau de souris SCID (4 à 8 semaines) anesthésiées. L'ensemble de la manipulation est réalisée en conditions stériles. - Transfert de gènes vers le tissu pulmonaire greffé dans la souris SCID. Le gène en solution dans du PBS est injecté directement dans le tissu greffé, mis à nu après anesthésie de l'animal. L'injection a été réalisée soit avec une seringue Hamilton de 20,u1, soit avec une seringue usuelle de lml équipée d'une aiguille flne (27G). En fonction de la taille de la greffe, des volumes de 20 à 100,ut ont été injectés. La peau des animaux porte-greffes est ensuite refermée à l'aide d'agrafes chirurgicales, et ils sont replacés dans l'élevage. - Analyse histoenz:ymatique des tissus pulmonaires humains trans du its in vivo dans la souris SCID. Une ou deux semaines après l'injection de la construction génique, I'animal porte-greffe est sacrifié par dislocation cervicale. Le greffon est prélevé, débarrassé de ses adhérences et fixé pendant 2/3 heures dans une solution de formaldéhyde à 10% dans le PBS, puis après rinçages, placé dans du PBS contenant 10% de sucrose, après quoi le tissu est congelé dans l'azote liquide dans le milieu d'inclusion Tissue-Tek. Des coupes au cryostat de 10,um d'épaisseur sont montées sur lames de verre et incubées pendant la nuit, à 30"C, avec la solution de substrat de l'enzyme p-galactosidase: 20cul ferrocyanure de K 200 mM 20,u1 ferricyanure de K 200 mM 14 MgC12 9504 PBS lop X-gal Les coupes sont ensuite rincées au PBS, contre-colorées à l'hématoxyline ou à l'éosine, puis montées pour l'observation. - Résultats: modification génique du tissu pulmonaire humain greffé dans la souris SCID. Après transfert du gène 13-galactosidase, véhiculé par un vecteur adénoviral, vers le tissu respiratoire foetal humain greffé dans la souris SCID a été observée la transduction de nombreuses cellules pulmonaires, une ou deux semaines après le transfert génique. La réaction enzymatique apparaît sous la forme d'une coloration nucléaire bleue foncée intense. Les cellules transduites sont, dans leur grande majorité, des cellules épithéliales bordant la lumière des conduits bronchiolaires. Plus rarement, on observe des cellules transduites de type uniforme dans la greffe, et que les cellules transduites apparaissent plutôt en foyers correspondant vraisemblablement aux sites d'injections de la construction adénovirale. Techniquement, I'avantage de la présente invention réside dans le fait que la construction génique que l'on veut tester est transférée dans un tissu pulmonaire humain intact, développé dans sa structure tridimensionnelle normale. En outre, de telles cultures in vivo peuvent être maintenues à très long terme (la durée de la greffe la plus longue est actuellement de 11 mois). - Construction de t'adénovirus recombinant, Ad-RSV-ssgal, par recombinaison in vivo. Cette construction est décrite en détail dans l'article de Leslie D. Stratford - Perricaudet et al., paru dans J. Clin. Invest., 90, 626-630, 1992. En résumé, cet adénovirus recombinant a été construit par recombinaison homologue entre un plasmide approprié et le génome de l'adénovirus de type 5 (AdS). Dans cette construction, le gène de la ss-galactosidase est placé sous le contrôle du promoteur RSV (Rous Sarcoma Virus). Le plasmide pAdRSVssgal utilisé contient le segment PvuII de l'extrémité gauche de l'Ad5 (segment situé entre les positions 0 et 1,3 du plasmide sur la figure 1) comprenant la répétition terminale intervertie, L'origine de réplication, des signaux d'encapsidation, et l'amplificateur Ela. Ce fragment est suivi par un gène nlslacZ (décrit dans Bonnerot, c. et al., Proc. Natn. Acad. Sci. USA, 1987, 84, 6795-6799) codant pour la 13-galactosidase, et par un fragment de l'adénovhus Ad5 situé entre les positions 9,4 et 17 du plasmide de la figure 1. Les valeurs des positions 1,3, 9,4 et 17 indiquées ci-dessus sont des unités indiquant le nombre de paires de base comprises à l'intérieur de ces fragments, une unité représentant 360 paires de base. La séquence d'AdS située entre les positions 9,4 et 17 susmentionnées permet la recombinaison avec l'adénovirus dl324 traité par l'enzyme de restriction ClaI (correspondant à un mutant de délétion E3; la délétion étant effectuée entre les positions 78,4 et 84,3 du génome de l'adénovirus représenté sur la figure 1), après transfection de cellules 293 (cellules embryonnaires humaines de rein transformées par l'adénovirus et mentionnées ci-dessus) afin de générer le vecteur recombinant Ad-RSV-ssgal. Le gène nlslacZ est contrôlé par le promoteur RSV LTR et possède le signal de polyadénylation du virus SV40. Le virus recombinant ainsi obtenu est incapable de se répliquer en raison de la délétion des gènes El. - Méthodologie des tests fonctionnels de détection de la restauration du mécanisme de fonctionnement des cellules pulmonaires correspondant à celui contrôlé par la protéine CFYR dans les cellules pulmonaires d'un homme sain. Ces méthodes d'étude sont le patch-clamp membranaire et la mesure des efflux de 36C1- sur cellules isolées. La restauration fonctionnelle de la protéinecanal CFTR est testée par l'application d'agonistes de la sécrétion de Cl- qui utilisent la voie de l'AMPc intracellulaire. . Isolement cellulaire Les cellules épithéliales sont isolées à partir des prélèvements de tout ou partie des greffons par digestion enzymatique à l'aide de protéase et agitation mécanique d'après le protocole d'isolement des cellules épithéliales de polypes (Chevillard et al. (1991), Cell. Tissue. Res. 264:49-55). Elles sont maintenues en culture primaire. Mesures des efflux de 36C1- L'utilisation de Cl- radioactif (36C1-) permet de suivre l'efflux de Cl- au cours du temps dans des cellules préalablement chargées (Venglarik et al., déjà cité) Les cellules ayant atteint un taux de confluence d'environ 90% sont incubées dans du tampon d'efflux contenant le 36Cl-. Après rinçage, des aliquots du surnageant sont prélevés régulièrement et la radioactivité de chaque échantillon est mesurée. L'addition de différentes substances actives au cours de I'expérience permet de mesurer la fonctionnalité des mécanismes de régulation de l'efflux de Cl- dans un épithélium reconstitué. Patch-clamp membranaire La technique du patch-clamp permet la mesure des courants transmembranaires d'une cellule isolée ou d'un fragment de membrane. Plusieurs configurations de la technique du patch-clamp sont utilisées (Hamill et al., déjà cité). * Configuration patch perméabilisé Dans la configuration cellule-attachée, I'ensemble des courants sont enregistrés. La membrane située sous la pipette est perméabilisée permettant une continuité électrique entre la pipette et l'intérieur de la cellule (Horn et Marty (1988), J. Gen. Physiol. 92: 145-159). L'addition de différentes substances actives au cours de l'expérience permet de mesurer la fonctionnalité des canaux responsables de la sortie de CI- dans une cellule. * Configuration cellule-attachée Lorsque la pipette est collée sur la cellule, on peut enregistrer directement l'activité des canaux CFTR présents dans le fragment de membrane. * Configuration "inside-out" Quand le fragment de membrane situé sous la pipette est isolé de la cellule, sa face externe est en contact avec le milieu intrapipette et sa face interne avec le milieu du bain. Dans ces conditions, l'expérimentateur a accès à la face intracellulaire des canaux présents dans le fragment de membrane. Ces deux dernières configurations permettent de tester la fonctionnalité d'un nombre réduit de protéine-canal CFTR. La figure I représente une construction d'un vecteur recombinant correspondant à l'adénovirus de type Ad5 dans le génome duquel est inséré le gène de la p-galactosidase sous le contrôle du promoteur RSV. REVENDICATIONS 1. Mammifère non humain chimérique caractérisé en ce qu'il est transplanté par un greffon de tissu pulmonaire pathologique humain. 2. Mammifère non humain chimérique selon la revendication 1, caractérisé en ce que les pathologies caractéristiques des greffons de tissu pulmonaire humain, sont d'origine génétique ou non. 3. Mammifère non humain chimérique selon la revendication 1 ou la revendication 2, caractérisé en ce que les pathologies caractéristiques des greffons de tissu pulmonaire humain, sont les différentes formes de tumeurs du poumon, ou la mucoviscidose. 4. Mammifère non humain chimérique selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que le greffon de tissu pulmonaire pathologique humain est constitué de tout ou partie d'une ébauche pulmonaire embryonnaire humaine ou d'un fragment de tissu pulmonaire humain différencié, cette ébauche ou ce fragment de tissu différencié provenant d'un embryon ou d'un individu atteints de la pathologie en question, ou provenant d'un embryon ou d'un individu qui ne sont pas atteints de la pathologie en question, I'ébauche ou le tissu différencié étant, dans ce dernier cas, traités de manière à présenter les signes caractéristiques de cette pathologie. 5. Mammifère non humain chimérique selon l'une des revendications 1 à 4, caractérisé en ce qu'il est choisi parmi les rongeurs. 6. Mammifère non humain chimérique selon l'une des revendications 1 à 5, caractérisé en ce qu'il est choisi parmi les souris xénotolérantes. 7. Mammifère non humain chimérique selon l'une des revendications 1 à 6, caractérisé en ce qu'il est choisi parmi les souris présentant un système immunitaire déficient, notamment parmi les souris SCID ou NUDE. 8. Mammifère non humain chimérique selon l'une des revendications 1 à 7, caractérisé en ce que le tissu pulmonaire est greffé sous la capsule rénale ou sous la peau. 9. Mammifère non humain chimérique selon l'une des revendications 1 à 8, caractérisé en ce qu il est transplanté par un greffon de tissu pulmonaire humain comprenant des cellules, notamment des cellules épithéliales et séreuses, ou les précurseurs de ces cellules, le génome de ces cellules étant tel: - qu'il ne contient pas de gènes codant pour une protéine CFTR normale (active), - ou qu il contient un gène codant pour une protéine CFTR anormale (inactive), - ou encore qu'il contient un gène codant pour une protéine CFTR active, ce gène ne pouvant être exprimé, notamment par blocage par une séquence antisens, I'absence ou l'inactivité de cette protéine CFTR étant responsable de la mucoviscidose chez l'homme. 10. Mammifère non humain chimérique selon la revendication 9, caractérisé en ce que le tissu pulmonaire greffé est une ébauche embryonnaire pulmonaire d'origine humaine, qui comprend des cellules dont le génome contient un gène responsable de la mucoviscidose. 11. Mammifère non humain chimérique selon l'une des revendications 1 à 8, caractérisé en ce qu'il est transplanté par un greffon de tissu pulmonaire humain comprenant des cellules tumorales ou cancéreuses, notamment des cellules ??? du poumon humain 12. Utilisation de mammifères non humains chimériques selon l'une des revendications 1 à 11, pour la mise en oeuvre d'un procédé de criblage de compositions susceptibles d'être actives dans le cadre de la prévention ou du traitement de pathologies pulmonaires chez l'homme. 13. Procédé de criblage de compositions susceptibles d'êtres actives dans le cadre de la prévention ou du traitement de pathologies pulmonaires humaines, caractérisé en ce qu'il comprend: - la mise en présence d'une au moins de ces compositions avec le greffon, présent chez un mammifère chimérique non humain selon l'une de revendications 1 à 11, pendant un temps déterminé, - la détection de I'éventuelle restauration du mécanisme de fonctionnement du tissu pulmonaire dans le greffon, correspondant au mécanisme normal de fonctionnement du tissu pulmonaire chez un individu non porteur de la pathologie en question, cette restauration étant le témoin de l'efficacité des compositions testées contre ladite pathologie. 14. Procédé de criblage selon la revendication 13, caractérisé en ce que la mise en présence des compositions avec le greffon se fait par micro-injection de ces compositions dans le greffon, ou par pulvérisation de ces compositions dans la lumière des éventuelles bronchioles ou alvéoles présentes dans le greffon. 15. Procédé de criblage de compositions susceptibles d'être actives contre la mucoviscidose selon la revendication 13 ou la revendication 14, caractérisé en ce que la détection de l'éventuelle restauration du mécanisme de fonctionnement du tissu pulmonaire, correspondant au mécanisme contrôlé par la protéine CFTR dans le tissu pulmonaire d'un homme sain, est réalisée par prélèvement d'une partie du greffon que l'on met en culture in vitro dans un milieu approprié, puis: - par détection de l'éventuelle restauration du fonctionnement du transport des ions Cl- (par mesure des courants transmembranaires, ou à l'aide d'ions CImarqués) de manière radioactive, témoin de la présence de CFTR normale, ou d'un composé présentant une activité analogue à celle de la protéine CFTR, - ou par détection du dosage de la quantité de protéine CFTR normale produite dans le greffon, notamment à l'aide d'anticorps dirigés contre cette protéine. 16. Compositions pharmaceutiques telles qu'obtenues par mise en oeuvre d'un procédé de criblage selon l'une des revendications 13 à 15.