FR 2699407 A1 19940624 FR 9315349 A 19931221 COMBINAISON TKERAPEUTIOUE La présente invention a pour objet une combinaison thérapeutique, en particulier une combinaison thérapeutique impliquant l'utilisation d'interféron humain. La première réponse localisée d'un animal à une infection virale consiste à produire de l'interféron lymphokine. On a d'abord supposé que les interférons étaient des molécules uniques; mais aujourd'hui, on sait qu'il s'agit d'une famille étendue de protéines, ancienne du point de vue de l'évolution, et largement répandue dans le règne animal. Bien qu'il puisse exister une certaine réactivité croisée limitée, les interférons sont généralement spécifiques de l'espèce . On a caractérisé trois types d'interférons, appelés initialement interférons leucocytaire, de fibroblaste et immun (lié au système immunitaire), et désignés aujourd'hui par interférons a, ss et , respectivement. L'interféron-a humain peut être produit par de nombreuses cellules différentes, et en utilisant des techniques de CLHP on peut séparer ce type d'interféron en plus de 30 sous-types, codés chacun par un gène différent. L'interféron-ss humain est considéré généralement comme une substance simple et produite par des fibroblastes. L'interféron-r humain est une substance simple également, produite par certains types de lymphocytes-T induits par des cellules auxiliaires, lorsqu'ils sont exposés à un antigène, ou lors de l'exposition de leucocytes, de lymphocytes-T ou de cellules lymphoblastoïdes-T à des mitogènes. L'interféron-a humain est produit à l'échelle industrielle grâce à la stimulation d'une lignée cellulaire lymphoblastoïde humaine Namalwa avec le virus Sendai, de façon à produire un mélange naturel comportant jusqu'à 22 sous-types d'interféron-a qui sont ensuite purifiés par chromatographie à une pureté de 95 % et une activité spécifique d'environ 100 x 106 UI/mg de protéine.Un tel produit, identifié comme l'interféron a -Nl humain, est commercialisé sous le nom de WELLFERON (marque déposée de The Wellcome Foundation Limited). L'interféron-ss humain est un dérivé des fibroblastes diploïdes humains, généralement d'un tissu néonatal, sa production étant induite par exemple par addition d'ARN double brin synthétique. L'interféron- humain peut être préparé à partir de couches leucocytaires, en utilisant un mitogène tel que l'entérotoxine A de Staphylococcus comme inducteur. Les interférons-a, ss et r humains peuvent être également produits en utilisant la technique de 1'ADN recombinant, toutefois, lorsqu'ils sont produits par l'expression d'un gène approprié dans des cellules bactériennes, les interférons recombinants peuvent ne pas présenter la même structure tertiaire que les molécules naturelles. De même, les interférons produits dans des cellules bactériennes ne sont pas glycosylés et, bien que ce fait ne semble pas affecter l'activité biologique de la molécule lors d'un test in vitro, leur conformation et leur pouvoir antigénique peuvent en être altérés et la répartition dans le corps peut en être influencée. Un tel interféron humain recombinant possède de préférence plus de 90 % d'homologie d'acides aminés avec un interféron humain naturel; de préférence encore 95 % d'homologie, de préférence encore 97 % d'homologie, de préférence encore 98 % d'homologie, de préférence encore 99 % d'homologie et de façon particulièrement préférée 100 % d'homologie. Les interférons humains recombinants sont commercialisés et des exemples comprennent l'interféron a-2a (ROFERON-Roche) et l'interféron a2b (INTRON-Schering). Ces molécules ne diffèrent que par un seul résidu d'acide aminé en position23 (la lysine dans le ROFERON et l'arginine dans 1'INTRON). Depuis un certain nombre d'années, les interférons humains sont utilisés pour le traitement de l'hépatite. Les premiers essais réalisés au milieu des années 1970 utilisaient l'interféron leucocytaire humain produit à partir des cellules de la couche leucocytaire, obtenues comme résidu après la production de plasma à partir de sang provenant de donneurs, et de ce fait, la quantité disponible était nécessairement limitée. Au début des années 1980, les progrès réalisés dans les techniques de production ont conduit à utiliser aussi bien l'interféron-a humain naturel que l'interféron-a humain recombinant dans le traitement de l'hépatite B chronique. Alors que ce traitement peut être considéré comme efficace dans de nombreux cas, les taux de réponse au traitement avec l'interféron-a humain seul sont considérés, si l'on en juge par la perte progressive des marqueurs viraux, comme inférieurs à 50 %. Les interférons-ss et -6 humains ont été également étudiés en vue de leur utilisation dans le traitement de l'hépatite B chronique, mais ne sont pas devenus des traitements usuels. Les trois types d'interféron humain ont été également étudiés dans le traitement de l'hépatite C chronique, bien que l'utilisation de l'interféron-ss ait été limitée par les faibles quantités disponibles. Des essais assez importants ont été réalisés en utilisant les interférons-a mentionnés ci-dessus (interféron a-2a, interféron a2b et interféron lymphoblastoïde) et les résultats obtenus ont été encourageants par le fait qu'une réponse complète a été obtenue chez environ 40 % des patients. Toutefois, des taux de rechute d'environ 50 % ont été observés 6 mois après le traitement, de sorte que seulement 20 à 25 % des patients guérissent à long terme. Pour une revue complète de l'utilisation des interférons dans le traitement de l'hépatite, voir l'ouvrage "Interferons in the Treatment of Chronic Virus Infection of the Liver", édité chez Eddleston and Dixon, Pennine Press, 1990. De plus, on a proposé d'utiliser les interférons dans le traitement d'un certain nombre d'autres affections, comprenant les maladies virales autres que l'hépatite, les désordres impliquant le système immunitaire, les affections autoimmunes et les cancers de différents types tels que le cancer rénal, le cancer du sein, le cancer du colon, le sarcome de Kaposi, le gliome et les affections hématologiques malignes. I1 paraît évident, surtout dans le contexte du HIV, de suggérer que les infections virales chroniques peuvent provoquer un stress oxydatif dans l'organisme infecté. L'induction de stress oxydatif par des virus peut être due à une grande variété de mécanismes, comprenant l'activation, par les immunocomplexes, des cellules phagocytaires, la formation accrue de radicaux libres par des cytokines pré-inflammatoires (TNFa, IL6) et la génération de formes d'oxygène réactives par interaction directe entre les glycoprotéines de la surface virale et les membranes cellulaires. On connaît un certain nombre de substances qui agissent comme des piégeurs de radicaux libres au niveau de la cellule ou de tout l'organisme. Par exemple, le glutathion réduit est un thiol non-protéique largement distribué, présent dans la plupart des cellules de mammifères, qui a été impliqué dans diverses fonctions métaboliques, y compris les réactions de détoxification vis-à-vis des radicaux libres. Le glutathion est le principal mécanisme de défense intracellulaire contre le stress oxydatif, et les facteurs qui favorisent la formation de radicaux libres conduisent à la consommation des réserves intracellulaires de glutathion. Le glutathion joue également un rôle immunorégulateur important dans la modulation de l'activation et de la prolifération des lymphocytes, la cytotoxicité des cellules-T et les interactions macrophage-lymphocyte. La N-acétyl-cystéine est connue depuis de nombreuses années comme agent mucolytique, médicament pour la cornée et antidote à l'empoisonnement par l'acétaminophène. Le composé a une action relativement douce et on suppose qu'il agit comme agent mucolytique en coupant les liaisons disulfures dans les mucoprotéines. Un certain nombre de publications ont décrit que des taux réduits de glutathion peuvent être abaissés dans certaines affections virales, en particulier dans les infections par HIV. La N acétyl-cystéine est un précurseur et ainsi, un inducteur du glutathion et la N-acétyl-cystéine a été proposée comme agent thérapeutique utilisable dans les cas d'infections par HIV. EP-A-0 269 017 (Cetus) concerne la combinaison d'une lymphokine ou cytotoxine et d'un piégeur de radicaux libres ou d'un inhibiteur métabolique utilisée pour le traitement des dommages biologiques causés à des mammifères hôtes, provoqués par la production de radicaux libres. Bien que cette description se réfère à des interférons tels que la lymphokine et mentionne également des infections comme une cause possible des dommages biologiques, elle concerne essentiellement les radicaux libres qui peuvent être formés pendant le traitement de cancers. Les données biologiques indiquées dans la description concernent toutes le cancer et se rapportent essentiellement à l'administration de TNFa dans le cas de fibrosarcome murin. La présente invention a pour objet l'utilisation d'un piégeur de radicaux libres ou d'un précurseur ou inducteur de celui-ci comme adjuvant dans un traitement par interféron humain. Selon un aspect, la présente invention fournit une méthode pour le traitement d'un patient atteint d'une affection susceptible d'être traitée par un interféron, qui comprend l'administration au patient d'une quantité efficace d'un interféron humain, et dans laquelle un piégeur de radicaux libres ou un précurseur ou inducteur de celui-ci est également administré pendant toute ou partie de la durée d'administration de l'interféron humain. Selon un autre aspect, l'invention fournit l'utilisation d'un interféron humain pour la fabrication d'un médicament destiné à être utilisé dans le traitement d'une affection susceptible d'être traitée par un interféron, au moyen d'une méthode dans laquelle un piégeur de radicaux libres, ou un précurseur ou inducteur de celuici, est également administré pendant toute ou partie de la durée d'administration de l'interféron humain. Selon encore un autre aspect, l'invention fournit l'utilisation d'un piègeur de radicaux libres ou d'un précurseur ou inducteur de celui-ci dans la fabrication d'un médicament destiné au traitement d'une affection susceptible d'être traitée par un interféron, au moyen d'une méthode impliquant l'administration d'un interféron humain, et dans laquelle un précurseur ou inducteur de celui-ci est également administré pendant toute ou partie de la durée d'administration de l'interféron humain. L'affection susceptible d'être traitée par un interféron peut être n'importe quelle affection pour laquelle des interférons humains sont utilisés ou ont été proposés comme traitement efficace. Les affections de ce type comprennent les infections virales telles que l'hépatite virale, les infections causées par le papillomavirus humain, le cytomégalovirus et le HIV, les infections non-virales telles que la tuberculose, et les affections telles que l'asthme. La présente invention est applicable en particulier à l'utilisation d'interférons humains dans le traitement de l'hépatite. Comme déjà indiqué, bien qu'une thérapie de ce type est souvent très efficace, le taux de réponse est relativement faible et dans le cas de l'hépatite C, il y a un taux de rechute notable. En conséquence, il y a un besoin considérable pour améliorer le traitement de l'hépatite par un interféron humain, permettant de vaincre ces problèmes. Des exemples d'interféron humain utilisable dans la présente invention comprennent ceux mentionnés plus haut. Selon un autre aspect, la présente invention fournit un procédé pour le traitement d'une infection par hépatite virale, en administrant un interféron humain, dans lequel un piégeur de radicaux libres, ou un précurseur ou inducteur de celui-ci, est également administré pendant toute ou partie de la durée d'administration de l'interféron humain. Selon un autre aspect, l'invention fournit l'utilisation d'un interféron humain pour la fabrication d'un médicament destiné à être utilisé dans le traitement d'une infection par hépatite virale, au moyen d'une méthode dans laquelle un piégeur de radicaux libres, ou un précurseur ou inducteur de celui-ci, est également administré pendant toute ou partie de la durée d'administration de l'interféron humain. Selon encore un autre aspect, l'invention fournit l'utilisation d'un piègeur de radicaux libres ou d'un précurseur ou inducteur de celui-ci dans la fabrication d'un médicament destiné au traitement d'une infection par hépatite virale, au moyen d'une méthode impliquant l'administration d'un interféron humain, et dans laquelle le piégeur de radicaux libres ou un précurseur ou inducteur de celui-ci est également administré pendant toute ou partie de la durée d'administration de l'interféron humain. Selon un autre aspect, l'invention fournit des combinaisons renforcées, appelées aussi combinaisons synergiques, d'un interféron humain et d'un piégeur de radicaux libres ou d'un précurseur ou inducteur de celui-ci, destinées à être utilisées dans le traitement d'une affection susceptible d'être traitée par un interféron. Les composants actifs des combinaisons renforcées selon l'invention peuvent être administrés simultanément ou séquentiellement sous forme de formulations séparées ou sous forme d'une formulation combinée unique. Dans le cas d'une administration séquentielle, le retard apporté dans l'administration du second composant actif ne doit pas être tel que l'on perde l'effet thérapeutique potentiel de la combinaison des composants actifs. La présente invention est applicable au traitement de l'hépatite virale sous toutes ses formes, cinq types étant reconnus actuellement et appelés respectivement A, B, C, D et E. L'hépatite A est une infection virale aigüe comportant une période d'incubation de 40 jours, transmise par voie fécale-orale. Le virus est un membre de la famille des picornavirus et il est constitué par une particule sphérique de 27 nm, non-enveloppée. Le génome viral a été séquencé et comprend un simple brin d'ARN contenant environ 7480 bases. L'hépatite B est une maladie virale universelle et grave, dont les porteurs sont estimés à plus de 200 millions dans le monde. Lorsqu'elle était connue comme hépatite sérique, le diagnostic de la maladie était établie en se basant sur l'apparition des symptômes 2 à 3 mois après une transfusion de sang, l'injection de fractions de plasma humain ou l'utilisation d'aiguilles de seringues non stérilisées. La reconnaissance des marqueurs sériques de l'hépatite B a confirmé l'importance de la pénétration dans la peau et en particulier, dans le sang, lors de la transmission du virus. Après la phase aigüe de la maladie, la majorité des patients adultes guérissent spontanément en quelques semaines, mais une certaine proportion ne se débarrasse pas du virus même après plusieurs mois et devient porteur chronique. Le virus de l'hépatite B appartient à la famille des virus hepadna dont le génome consiste en un petit fragment circulaire d'ADN partiellement double brin, qui se réplique en copiant son ADN en ARN et ensuite, en recopiant L'ART en ADN à l'aide de la transcriptase inverse. L'hépatite non-A, non-B est reconnue comme constituant un problème de santé de plus en plus grave au niveau international. Au moins 80 % des cas d'hépatite chronique non-A, non-B posttransfusionnelle ont pu être attribués au virus identifié aujourd'hui comme étant celui de l'hépatite C, et ce virus est probablement responsable de pratiquement tous les cas d'hépatite posttransfusionnelle en milieu clinique, où les produits sanguins sont testés pour l'hépatite B. Alors qu'environ la moitié des cas d'infection aigüe par hépatite C guérit spontanément au bout d'un mois, les cas restants deviennent chroniques et beaucoup sinon tous ces cas d'hépatite chronique active sont susceptibles de se transformer en une cirrhose ou un carcinome hépatocellulaire. La structure du génome du virus de l'hépatite C a été élucidée récemment et le virus a été caractérisé comme un virus à ARN simple brin, présentant des similitudes avec les flavivirus. Le virus de l'hépatite D a été reconnu la première fois en 1977 après identification d'un nouvel antigène chez certains porteurs de l'hépatite B. Le virus exige la présence du virus de l'hépatite B (ou d'un virus hepadna étroitement apparenté) comme virus assistant (helper) pour se répliquer, bien que la réplication soit suffisamment efficace pour atteindre un taux sérique supérieur à celui du virus assistant. Le génome de l'hépatite D est constitué d'ARN circulaire fermé par un lien covalent, et présente quelques similitudes structurelles avec certains agents virocides ou du type virus circulaires rencontrés chez les plantes.L'infection par hépatite D est associée à une maladie agressive du foie et on la trouve plus fréquemment chez des patients affectés d'une maladie grave (hépatite chronique active ou cirrhose) que chez ceux atteints d'hépatite chronique persistante. Le virus de l'hépatite E est apparenté au virus provoquant l'hépatite A (Reyes et al., Science 247, 1335-1339 (1990)) et provoque une forme aigüe d'hépatite sans phase chronique. Le virus est entérique, il est transmis par de l'eau de boisson contaminée et par la voie fécalelorale normale. I1 est particulièrement répandu dans le sous-continent indien et provoque un taux de mortalité élevé chez les femmes enceintes. La présente invention peut également s'appliquer au traitement du papillomavirus humain qui est un agent responsable de verrues non génitales, du papilloma laryngique juvénile, du condylome acuminé, et qui est impliqué dans le cancer du col de l'utérus. L'invention est également applicable au traitement d'autres infections virales telles que celles provoquées par le cytomégalovirus humain et le HIV. L'invention est également applicable au traitement d'infections non virales telles que la tuberculose et à des affections telles que l'asthme. L'interféron humain utilisable selon l'invention peut être l'un quelconque des trois types mentionnés ci-dessus, à savoir l'interféron-a, l'interféron-ss ou l'interféron-. Généralement, l'interféron humain est l'interféron-a ou l'interféron-. De préférence, l'interféron humain est l'interféron-a, en particulier l'interféron-a dérivé d'une lignée cellulaire humaine en culture, ou un interféron-a humain recombinant. Selon un mode de réalisation préféré, l'interféron humain est l'interféron a -2a ou l'interféron a-2b recombinant, par exemple un des produits commercialisés sous les noms de ROFERON et INTRON.Selon un autre mode de réalisation particulièrement préféré, l'interféron humain est l'interféron lymphoblastoïde humain (l'interféron-aNl), par exemple le produit commercialisé par The Wellcome Foundation Limited, sous le nom de marque WELLFERON. Le terme "interféron humain" comprend ici tout interféron du type sauvage, dont la séquence a été déterminée à partir d'un être humain, et tous ses allèles, variant ou mutant qui conserve essentiellement l'activité de la séquence de type sauvage correspondante, et qui présente plus de 80 % d'homologie de séquence avec la séquence de type sauvage correspondante. Les interférons humains peuvent être formulés, pour l'administration selon la présente invention, de la même manière que pour être utilisés seuls dans le traitement des affections en question, par exemple l'hépatite. Ainsi, l'interféron est administré généralement par voie parentérale, par exemple par injection, de préférence par injection sous-cutanée. De préférence, l'interféron est formulé en une préparation aqueuse ou comme produit lyophilisé destiné à être reconstitué avec un véhicule approprié, par exemple de l'eau pour injection. La formulation peut également contenir un diluant ou stabilisant approprié, par exemple une autre protéine humaine telle que l'albumine de sérum humain. L'interféron humain est généralement administré conformément au protocole de traitement établi pour le produit en question. Par exemple, l'interféron-a humain, qu'il soit lymphoblastoïde ou recombinant, peut être administré à une dose de 1 à 10 Méga Unités d'interféron par jour. La dose peut être administrée pendant 3 ou plus de trois jours par semaine, de préférence 3 fois par semaine. Une posologie préférée est de 2 à 6 Méga Unités d'interféron par jour, pendant 3 ou plus de trois jours par semaine, de préférence 3 fois par semaine, en particulier des doses d'interféron de 5 Méga Unités ou de façon préférée, de 3 Méga Unités par jour, pendant 3 ou plus de trois jours par semaine, de préférence 3 fois par semaine.Dans le traitement de l'hépatite, la durée d'administration de l'interféron comprend généralement une période de plusieurs semaines, par exemple 12 à 30 semaines, en particulier environ 24 semaines, bien que des périodes de traitement plus longues, allant jusqu'à un an, puissent être appropriées dans certains cas. Le terme "piégeur de radicaux libres ou précurseur ou inducteur de celui-ci" utilisé ici désigne toute substance qui est capable, en étant administrée à un hôte, de réduire le taux de radicaux libres (appelé également stress oxydatif) chez l'hôte. La substance peut amener cette réduction du taux de radicaux libres en piégeant directement les radicaux libres ou en induisant, comme précurseur biologique direct ou autrement, la production chez l'hôte d'une substance ayant une action de piégeage sur les radicaux libres. Selon une variante, la substance peut réduire le taux de radicaux libres en exerçant une action inhibitrice sur les processus conduisant à la formation de radicaux libres. Les piégeurs préférés de radicaux libres, ou leurs précurseurs ou inducteurs, comprennent le glutathion et des précurseurs de celui-ci, tels que des dérivés de l'acide aminé naturel qu'est la cystéine. Un précurseur particulièrement préféré du glutathion est la N-acétyl-cystéine. Comme mentionné ci-dessus, la N-acétylcystéine est déjà utilisée en pharmacie comme agent mucolytique, et des préparations pharmaceutiques sont disponibles. D'autres piégeurs de radicaux libres, ou des précurseurs ou inducteurs de ceux-ci, comprennent la vitamine A, la vitamine C (acide ascorbique), la vitamine E, l'acide urique, la buthionine sulfoxime, le maléate de diéthyle métronidazole, la superoxyde dismutase et la méthionine. Les substances inhibant la formation de radicaux libres comprennent des inhibiteurs de la xanthine oxydase tels que l'allopurinol et sont considérés comme "piégeurs de radicaux libres ou précurseurs ou inducteurs de ceux-ci", comme indiqué plus haut. Le piégeur de radicaux libres ou précurseur ou inducteur de celui-ci doit être administré sous une forme et à une posologie telles qu'il soit capable de réduire la formation des radicaux libres et/ou d'atténuer les effets de la formation de radicaux libres (stress oxydatif) chez l'hôte. L'administration peut s'effectuer par toute voie appropriée, par exemple par voie orale ou parentérale, selon la nature de la substance. L'administration par voie orale est préférée lorsqu'elle est possible. La N-acétyl-cystéine est formulée de préférence pour être administrée par voie orale sous la forme de comprimés ou de granules ou sous forme de préparation liquide, par exemple sous forme de sirop. Une dose appropriée de N-acétyl-cystéine est comprise dans la gamme de 200 mg à 4 g par prise, administrée à une fréquence allant jusqu'à 4 fois par jour, par exemple 400 à 800 mg administrés 4 fois par jour, de préférence 600 mg administrés 4 fois par jour. Bien que le traitement fourni par la présente invention, par exemple dans le cas d'hépatite virale, consiste en l'administration combinée d'un interféron humain et d'un piégeur de radicaux libres ou d'un précurseur ou inducteur de celui-ci, les deux médicaments sont généralement administrés sous forme de préparations séparées. Toutefois, dans certains cas, il peut être avantageux d'administrer les deux composants sous la forme d'une préparation combinée et l'invention s'étend à des préparations combinées de ce type. Ainsi, selon un autre aspect de la présente invention, l'invention fournit une composition pharmaceutique comprenant un interféron humain conjointement avec un piégeur de radicaux libres ou un précurseur ou inducteur de celui-ci. Généralement, toute préparation combinée de ce type se présente sous une forme destinée à l'administration par voie parentérale, par exemple par injection. Une telle préparation combinée peut se présenter sous une forme liquide ou sous une forme solide, l'interféron humain étant lyophilisé, et adapté à la reconstitution sous une forme liquide. On peut également être amené à présenter les deux médicaments conjointement sous une forme appropriée pour l'administration séparée. Selon un autre aspect, l'invention fournit un conditionnement jumelé, comprenant un interféron humain et un piégeur de radicaux libres ou un précurseur ou inducteur de celui-ci, en association pour des administrations séparées. La présente invention est applicable en particulier au traitement de l'hépatite B ou de l'hépatite C. Comme indiqué ci-dessus, l'administration d'interféron humain, en particulier d'interféron-a recombinant ou lymphoblastoïde, constitue déjà un traitement usuel dans le traitement de l'hépatite B. De plus, un certain nombre de tests ont indiqué que le même traitement donne également de bons résultats dans le traitement de l'hépatite C. Selon la présente invention, le traitement par interféron de patients souffrant d'hépatite, en particulier d'hépatite B ou d'hépatite C, est réalisé essentiellement suivant les protocoles établis, en ajoutant le traitement avec un piégeur de radicaux libres ou un précurseur ou inducteur de celui-ci, pendant toute ou partie de la durée du traitement avec l'interféron humain. Les taux sériques d'alanine aminotransférase (ALT) constituent un marqueur très sensible du dysfonctionnement du foie. Les infections par les virus de l'hépatite B et de l'hépatite C sont toutes deux caractérisées par une élévation des taux sériques d'ALT et l'évolution de la maladie est généralement suivie par la détermination sérique de 1'ALT. Comme indiqué ci-dessus, seulement environ 50 % ou moins de patients atteints d'hépatite B ou d'hépatite C répondent au traitement par l'interféron-a humain, indiqué par une disparition notable des marqueurs viraux ou par l'abaissement des taux d'ALT. Selon un mode de réalisation de l'invention, qui est particulièrement applicable au traitement de l'hépatite B et de l'hépatite C, en particulier à celui de l'hépatite C, on entreprend le traitement avec l'interféron humain, en particulier avec l'interféron-a humain, de la manière habituelle pendant plusieurs semaines, par exemple 12 à 30 semaines, en particulier environ 24 semaines. Pour les patients qui ne répondent pas à ce traitement initial avec l'interféron humain, indiqué par des taux sérique d'ALT nettement réduits, on poursuit le traitement avec l'interféron humain, en y ajoutant le traitement avec le piégeur de radicaux libres ou un précurseur ou inducteur de celui-ci, de préférence le glutathion ou un précurseur ou inducteur de celui-ci, en particulier la N-acétyl-cystéine.Le traitement avec l'interféron humain et le piégeur de radicaux libres ou un précurseur ou inducteur de celui-ci peut être poursuivi pendant une période supplémentaire de plusieurs semaines, par exemple 12 à 30 semaines, en particulier environ 24 semaines. Selon un mode de réalisation préféré de l'invention, ce protocole de traitement est appliqué au traitement de l'hépatite C par l'interféron lymphoblas toide humain (interféron a-N1 humain). Comme indiqué également ci-dessus, certains patients atteints d'hépatite B ou d'hépatite C peuvent initalement répondre au traitement par l'interféron humain, en particulier l'interféron-a, mais peuvent rechuter ensuite. Les patients de cette catégorie peuvent également bénéficier d'une période combinée de traitement par l'interféron humain et par le piégeur de radicaux libres ou un précurseur ou inducteur de celui-ci, comme indiqué plus haut. I1 faut noter que les doses d'interféron humain et du piégeur de radicaux libres ou d'un précurseur ou inducteur de celui-ci varient en fonction du patient et de l'affection précise dont souffre le patient. Enfin, le traitement doit être effectué sous le contrôle et la responsabilité du médecin traitant. L'invention sera mieux comprise à l'aide de l'étude pilote décrite ci-après, qui ne doit être considérée d'aucune manière comme limitant la portée de l'invention. Exemple 1. Introduction Le virus de l'hépatite C (HCV) est responsable de la plupart des cas d'hépatite non-A, non-B post-transfusionnelle et sporadique. L'infection devient couramment chronique, conduisant à l'hépatite chronique, à la cirrhose et enfin, à une dégénéréscence maligne. Plusieurs études contrôlées ont montré que l'interféron-a (IFN) est utilisable dans le traitement de l'hépatite C chronique (CHC), mais le taux de réponse est en moyenne de 50 % et la fréquence de rechute, après arrêt de 1'IFN, peut atteindre 30-40 %. En conséquence, la proportion des patients atteints de CHC, dont les taux de transaminase normaux sont maintenus après l'arrêt de l'IFN, n'est que d'environ 20-40 % de la totalité des cas traités. Le glutathion réduit (GSH) est un important antioxydant présent dans les cellules de mammifères, impliqué dans une grande variété de fonctions cellulaires, et il a été suggéré que la diminution du GSH peut jouer un rôle pathogène dans certaines maladies virales chroniques, telles que le SIDA. Dans cette étude, les taux de GSH sont mesurés dans le plasma et dans les cellules mononucléaires du sang périphérique (PBMC) de patients atteints de CHC qui ne répondent pas au traitement par IFN après au moins 4 mois de traitement. L'action de la N-acétyl-cystéine, un précurseur du thiol, est également évaluée en se basant sur les taux de GSH et sur la réponse clinique et virologique au traitement par IFN. 2. Patients et méthodes 2.1 Patients Quatorze patients (13 hommes et 1 femme, moyenne d'âge 51 ans, amplitude 27-71), chez lesquels on a diagnostiqué le CHC en se basant sur des critères histologiques et sériques, deux d'entre eux souffrant d'une cirrhose associée, ont été pris pour l'étude. Tous les patients ont subi un traitement avec l'interféron-a lymphoblastoïde (Wellferon) pendant une période minimale de 4 mois (15+1,6 MU par semaine, amplitude 9-21 MU par semaine) ; tous les patients présentaient des valeurs d'ALT anormales (supérieures à 30 UI/L) au début de cette étude.La plupart des patients atteints de CHC répondant à l'IFN ont vu leur taux de transaminase revenir à la normale au cours des 3 premiers mois du traitement, et ceux dont les valeurs élevées d'ALT ont persisté, après 4 mois de traitement, ont pu être considérés comme non-répondeurs à l'IFN. En conséquence, tous les patients compris dans la présente étude sont considérés comme non-répondeurs à l'IFN. Les patients compris dans la présente étude ont poursuivi essentiellement le même régime d'IFN que celui qu'ils suivaient précédemment, mais y ont ajouté une prise par voie orale de N-acétyl-cystéine (NAC), quotidiennement, à raison de 600 mg toutes les 8 heures.La posologie d'interféron n'a été augmentée chez aucun des patients après l'adjonction de NAC par voie orale, mais dans 3 cas, la quantité d'interféron a été légèrement diminuée (1 5 i: 1,8 MU/semaine avant NAC contre 11,5+1,3 MU/semaine après NAC). De plus, 10 patients (8 hommes et 2 femmes, moyenne d'âge 32 ans, amplitude 24-63), chez qui on a diagnostiqué récemment l'hépatite C chronique, et qui n'ont jamais reçu de traitement antiviral, ont pris la même quantité de NAC par voie orale, mais sans interféron, pendant une période d'un mois. Vingt six sujets sains (14 hommes et 12 femmes, moyenne d'âge 43 ans, amplitude 25-79) ont servi de groupe témoin. Tous les patients ont donné leur consentement par écrit et l'étude a été approuvée par le Comité d'Ethique Local. 2.2 Détermination du GSH dans les PBMC et dans le plasma On prélève chez chaque patient des échantillons de sang pour effectuer les déterminations simultanées du GSH dans les PBMC (L-GSH) et dans le plasma appauvri en plaquettes (P GSH). Les PBMC sont isolées par centrifugation sur du Lymphoprep (Nycomed Pharma AS, Oslo, Norvège) et lavées cinq fois. Les cellules isolées sont tuées avec de l'acide perchlorique à 20 % (concentration finale 2 %), et après centrifugation (1200 g x 10 minutes à 40C), les surnageants sont conservés à -40 C, jusqu'à utilisation. De l'acide perchlorique à 20 % est ajouté aux plasmas appauvris en plaquettes (concentration finale 2 %), et après centrifugation, les surnageants sont conservés à -400C, jusqu'à la détermination du GSH. Les échantillons conservés sont décongelés et le GSH est déterminé par la méthode enzymatique décrite par Brigellus et al., Biochem. Pharmacol., 32, 2529-2534 (1983), modifiée par Ferrer et al., Biochem. J., 264, 531-534 (1990). Le GSH, en présence de GSH-S-transférase, se conjugue au 1-chloro-2,4 dinitrobenzène (CDNB) (SIGMA), et l'absorbance du complexe est mesurée à 340 nm à l'aide d'un spectrophotomère Perkin Elmer Lambda 2. Les valeurs absolues de GSH sont obtenues en utilisant un coefficient molaire d'extinction de 9,6 x 103. 2.3 Extraction de L'ART et RT-PCR La réaction de polymérisation en chaîne utilisant la transcriptase inverse (RT-PCR) pour L'ART du HCV dans le sérum et pour les brins + ou les brins - de L'ART du HCV dans les PMBC est réalisée essentiellement comme décrit par Ruiz et al., Hepatology, 16, 637-643 (1992) et Cheng et al., J. Hepatol., sous presse (1992). Les modes opératoires recommandés par Kwoks and Higuchi, Nature, 339, 237-238 (1989), destinés à réduire les risques de contamination, ont été strictement appliqués. Toutes les extractions et réactions sont réalisées simultanément avec des témoins positifs et des témoins négatifs. Un aliquote provenant du dernier lavage des PBMC a été également analysé, et les résultats de la PCR ont toujours été négatifs pour ces échantillons. 2,4 Analyse statistique Toutes les données sont présentées comme des valeurs moyennes ~ l'écart type par rapport à la moyenne (SEM). Les comparaisons pour les données appariées et non appariées sont réalisées en utilisant les tests de Mann Whitney et de Wilcoxon. 3. Figures Les résultats sont décrits en regard des dessins annexés, dans lesquels la figurel représente l'action de l'IFN (-4 à 0 mois) et de l'IFN plus NAC (0 à 6 mois) sur les taux d'ALT pour les 14 patients pris en compte dans l'étude; la figure2 représente la détection dans les PBMC des brins + et des brins - de 1'ARN du HCV pendant le traitement avec IFN et IFN plus NAC; la figure 3 représente la détection de L'ART du HCV dans le sérum, à une dilution sérique de 1:10, avant et après addition de NAC au traitement avec IFN; la figure 4 représente les taux d'ALT, chez les patients représentés, à la figure 1 ci-dessus, dans les cas de suivi pendant une période allant jusqu'à 1 1 mois après le début du traitement IFN plus NAC. 4. Résultats Les taux sériques moyens d'ALT de 14 patients pris en compte dans l'étude sont représentés dans le tableau suivant, qui indique également le L-GSH et le P-GSH. Tableau Mois ALT moyenne L-GSH P-GSH (UI/L) nMoles/106cellules ( M) -4 13924 - - 0 124::24 1,450,27 0,770,21 +1-2 879 +3-4 537 3,320,18 2,400,20 +5-6 373 - Les valeurs de L-GSH et de P-GSH pour le groupe témoin sont les suivantes L-GSH 3,430,89 nMoles/106cellules P-GSH 18,14,08 M. Chez des patients atteints d'hépatite C chronique, qui n'ont jamais subi de traitement antiviral (n=10), les taux de GSH dans le plasma (0,63 + 0,07 R M) et dans les PBMC (1,02 + 0,09 nMole/106cellules) sont fortement réduits par rapport à ceux des témoins sains (18,1 4,08 M et 3,43 + 0,89 nMoles/106cellules, respectivement, P L'administration de NAC pendant 1 mois a nettement augmenté les taux de GSH dans les PBMC (2,22+ 0,38 nMoles/106cellules, respectivement, P Chez les patients ne répondant pas à l'interféron, les taux de GSH dans les PBMC (1,45 i 0,27 nMole/106cellules) et dans le plasma (0,77 + 0,21 RM) se sont révélés également fortement diminués par rapport aux valeurs témoins (P La figure 1 et le tableau ci-dessus indiquent que chez les patients pris en compte dans l'étude (non-répondeurs à l'interféron), les taux d'ALT n'ont pas changé de façon significative pendant les 4 mois du traitement par IFN (139 i 24 UI/L contre 124 + 17 UI/L, n.s.). Toutefois, l'administration de NAC par voie orale a entraîné une diminution prompte et significative des valeurs d'ALT; déjà après un mois du traitement combiné, les valeurs d'ALT ont subi une diminution significative (87 i 9 UI/L, P L'adjonction de NAC au régime d'IFN améliore nettement la réponse à l'IFN dans les cas de patients classés auparavant comme nonrépondeurs au traitement par IFN. Comme l'indique la figure 4, cette diminution des valeurs d'ALT s'est poursuivie jusqu'à l'analyse la plus récente réalisée chez les patients, 1 1 mois après le début de la thérapie combinée. La diminution des taux d'ALT par la combinaison des traitements respectifs par IFN et NAC est accompagnée d'une action concomittante sur la réplication du virus. Dans le cas de 9 patients classés non-répondeurs à 1'IFN, on a vérifié dans les PBMC la présence du brin génomique du HCV (brin + d'ARN) et de l'intermédiaire de réplication du virus (brin - d'ARN), avant et après l'adjonction à la thérapie du NAC. Comme l'indique la figure 2, lorsque des patients n'ont été traités qu'à l'INF, le brin génomique a pu être détecté dans 7 cas (77 %), alors que l'intermédiaire de réplication a été détecté chez 3 patients (33 %). Toutefois, après 4-6 mois de traitement combiné avec IFN et NAC, le brin + n'a été détecté que dans 2 cas (22 %), et le brin - de 1'ARN du HCV n'a pu être détecté dans aucun de ces cas. L'adjonction de NAC au traitement par IFN se traduit également par une réduction des taux sériques de 1' ARN du HCV. Comme l'indique la figure 3, après adjonction de NAC au traitement, une concentration accrue de sérum est devenue nécessaire pour que le HCV soit détectable ; ainsi, avant l'adjonction de NAC, 1'ARN du HCV pouvait être détecté dans 100 % des cas à une dilution de sérum de 1:10, alors qu'après l'adjonction de NAC au traitement, à la même dilution, le virus n'a été détecté que chez 70 % des patients. REVENDICATIONS I. Combinaison renforcée comprenant un interféron humain et un piégeur de radicaux libres ou un précurseur ou inducteur de celui-ci. 2. Combinaison selon la revendication 1, dans laquelle l'interféron humain est un interféron-a humain. 3. Combinaison selon la revendication 2, dans laquelle l'interféron-a humain est recombinant. 4. Combinaison selon la revendication 2, dans laquelle 1' interféron- a humain est naturel. 5. Combinaison selon la revendication 4, dans laquelle 1' interféro n- a humain naturel est l'interféron lymphoblastoïde humain. 6. Combinaison selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, dans laquelle le piégeur de radicaux libres ou le précurseur ou inducteur de celui-ci est le glutathion ou un précurseur ou un inducteur de celui-ci. 7. Combinaison selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, dans laquelle le piégeur de radicaux libres ou le précurseur ou inducteur de celui-ci est la N-acétyl-cystéine. 8. Combinaison selon l'une quelconque des revendications 1 à 7, destinée à l'utilisation dans le traitement d'une affection susceptible d'être traitée avec un interféron. 9. Combinaison selon la revendication 8, dans laquelle l'affection est l'infection par hépatite B ou hépatite C. 10. Utilisation d'un interféron humain pour la fabrication d'un médicament destiné à être utilisé dans le traitement d'un patient atteint d'une affection susceptible d'être traitée par un interféron humain, selon un procédé dans lequel un piégeur de radicaux libres ou un précurseur ou inducteur de celui-ci est également administré pendant le traitement avec l'interféron humain. 11. Utilisation d'un piègeur de radicaux libres ou d'un précurseur ou inducteur de celui-ci dans la fabrication d'un médicament destiné au traitement d'un patient souffrant d'une affection susceptible d'être traitée par un interféron, au moyen d'un procédé impliquant l'administration d'un interféron humain et du piégeur de radicaux libres ou d'un précurseur ou inducteur de celui-ci. 12. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 10 à 11, dans laquelle l'interféron humain est l'interféron-a humain. 13. Utilisation selon la revendication 12, dans laquelle l'interféron-a humain est recombinant. 14. Utilisation selon la revendication 12, dans laquelle l'interféron-a humain est naturel. 15. Utilisation selon la revendication 14, dans laquelle 1' interféro n - a humain naturel est l'interféron lymphoblastoïde humain. 16. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 10 à 15, dans laquelle le piégeur de radicaux libres ou le précurseur ou inducteur de celui-ci est le glutathion ou un précurseur ou inducteur de celui-ci. 17. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 10 à 15, dans laquelle le piégeur de radicaux libres ou le précurseur ou inducteur de celui-ci est la N-acétyl-cystéine. 18. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 10 et 17, dans laquelle l'affection est l'infection par hépatite B ou hépatite C. 19. Utilisation d'un interféron humain pour la fabrication d'un médicament destiné à être utilisé dans le traitement d'un patient atteint d'une affection susceptible d'être traitée par un interféron humain, qui n'a pas répondu au traitement par l'interféron humain, au moyen d'un procédé dans lequel un piégeur de radicaux libres ou un précurseur ou inducteur de celui-ci est également administré pendant le traitement avec l'interféron humain. 20. Utilisation d'un piégeur de radicaux libres ou d'un précurseur ou inducteur de celui-ci pour la fabrication d'un médicament destiné à être utilisé dans le traitement d'un patient atteint d'une affection susceptible d'être traitée par un interféron humain, qui n'a pas répondu au traitement par l'interféron humain, au moyen d'un procédé impliquant un traitement avec un interféron humain et le piégeur de radicaux libres ou un précurseur ou inducteur de celui-ci. 21. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 19 et 20, dans laquelle le patient à répondu antérieurement au traitement avec l'interféron humain. 22. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 19 à 21, dans laquelle l'interféron humain est l'interféron-a humain. 23. Utilisation selon la revendication 22, dans laquelle l'interféron- a humain est recombinant. 24. Utilisation selon la revendication 22, dans laquelle l'interféron-a humain est naturel. 25. Utilisation selon la revendication 24, dans laquelle 1' interféro n - a humain naturel est l'interféron lymphoblastoïde humain. 26. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 19 à 25, dans laquelle le piégeur de radicaux libres ou le précurseur ou inducteur de celui-ci est le glutathion ou un précurseur ou inducteur de celui-ci. 27. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 19 à 25, dans laquelle le piégeur de radicaux libres ou le précurseur ou inducteur de celui-ci est la N-acétyl-cystéine. 28. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 19 et 27, dans laquelle l'affection est l'infection par hépatite B ou hépatite C. 29. Formulation pharmaceutique comprenant une combinaison telle que décrite dans l'une quelconque des revendications 1 à 7 et un véhicule pharmaceutiquement acceptable. 30. Conditionnement jumelé, comprenant, en association, les composants qui doivent être administrés afin de former une combinaison telle que décrite dans l'une quelconque des revendications 1 à 7. 31. Méthode pour le traitement d'un patient souffrant d'une affection susceptible d'être traitée avec un interféron humain, qui comprend l'administration au patient de quantités thérapeutiquement efficaces de l'interféron humain et d'un piégeur de radicaux libres ou d'un précurseur ou inducteur de celui-ci. 32. Méthode selon la revendication 31, dans laquelle l'interféron humain est l'interféron-a humain. 33. Méthode selon la revendication 32, dans laquelle l'interféron- a humain est recombinant. 34. Méthode selon la revendication 32, dans laquelle l'interféron-a humain est naturel. 35. Méthode selon la revendication 34, dans laquelle l'interféron-a humain naturel est l'interféron lymphoblastoïde humain. 36. Méthode selon l'une quelconque des revendications 31 à 35, dans laquelle le piégeur de radicaux libres ou le précurseur ou inducteur de celui-ci est le glutathion ou un précurseur ou inducteur de celui-ci. 37. Méthode selon l'une quelconque des revendications 31 à 35, dans laquelle le piégeur de radicaux libres ou le précurseur ou inducteur de celui-ci est la N-acétyl-cystéine. 38. Méthode selon l'une quelconque des revendications 31 et 37, dans laquelle l'affection est l'infection par hépatite B ou hépatite C. 39. Méthode pour le traitement d'un patient souffrant d'une affection susceptible d'être traitée avec un interféron humain, qui n a pas répondu au traitement avec l'interféron humain, qui comprend le traitement du patient avec des quantités efficaces de l'interféron humain et d'un piégeur de radicaux libres ou d'un précurseur ou inducteur de celui-ci. 40. Méthode selon la revendication 39, dans laquelle le patient a répondu auparavant au traitement avec l'interféron humain. 41. Méthode selon l'une des revendications 39 et 40, dans laquelle l'affection est l'infection par I'hépatiteB ou l'hépatite C.