FR 2697254 A1 19940429 FR 9212648 A 19921022 La présente invention concerne la vectorisation de l'activité nucléase de métalloporphyrines cationiques à l'aide de conjugués d'oligonucléotides, notamment à visée antivirale ou antitumorale Des travaux récents ont montré la très bonne activité nucléase de métalloporphyrines - cationiques de manganèse et de fer de la série tétrakis(4-N-méthylpyridinium yl)porphyrine vis-à-vis d'acides nucléiques, ADN et ARN, selon un processus d'oxydation (E. Fouquet et coll., J. Chem. Soc., Chem. Commun., 1987, p. 1169 ; M. Pitié et coll. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1992, 89, 3967). Cette activité nucléase est observée à de très faibles concentrations de l'ordre du nanomolaire et est conservée lorsque le motif trisméthylpyridiniumylporphyrinato-manganèse ou fer est lié à un vecteur capable de cibler son interaction avec les acides nucléiques. Ceci a été mise en évidence dans le cas des intercalants : des conjugués "métalloporphyrine-ellipticine" sont de bons modèles de la bléomycine et présentent une forte affinité pour l'ADN (K aff = 108-109M 1) et une activité nucléase et cytotoxique dépendantes toutes les deux du métal de la porphyrine (Ding et coll., J. Med. Chem., 1991, 34, 900). De plus, les dérivés manganèse et fer de cette série ont une activité antivirale vis-à-vis du virus de l'immunodéficience humaine, VIH (Ding et coll., Biochem. Pharmacol., 1992, sous presse). La présente invention a plus précisément pour objet un conjugué constitué par un oligonucléotide lié par une liaison covalente à au moins un dérivé de métalloporphyrine cationique en thérapeutique. Les nouveaux dérivés de métalloporphyrine conjugués à des oligonucléotides répondent notamment à la formule générale décrite dans la demande de brevet européenne EP O 345 171 en ce qui concerne la partie métalloporphyrine. La présente invention a donc plus particulièrement pour objet un conjugué caractérisé en ce que le dérivé de métalloporphyrine cationique répond à la formule dans laquelle A et B représentent chacun et Z+ représente N±R1 ou C-N+R1R2R3, R1 étant un groupe aliphatique droit ou ramifié en C1 à C10, et R2 et R3 étant chacun un atome d'hydrogène ou un groupe aliphatique droit ou ramifié en C1 à C101 R représente un groupe NH2, OH, COOH ou -N(R1)3, ou un atome d'halogène, n est 0 ou un entier de 1 à 10, le groupe alkylène correspondant pouvant être droit ou ramifié, M représente un métal de transition, X représente l'anion d'un acide carboxylique pharmaceutiquement acceptable, m étant un entier de 1 à 5, et Y représente une liaison ou un radical-O-, -CO- ou -CONH-, et l'oligonucléotide est porteur d'une fonction susceptible de réagir avec le groupe R pour donner le dit lien covalent. De préférence, R1 représente un groupe alkyle, en particulier méthyle ou éthyle, et R2 et R3 représentent chacun un atome d'hydrogène ou méthyle, M représente notamment Cr, Mn, Fe, Co, Ni, Cu, Zn ou Ru, de préférence Mn ou Fe. Le métal central du macrocycle porphyrinique sera de préférence, le fer ou le manganèse (ces deux éléments donnant la meilleure activité nucléase selon un processus redox et le zinc dans le cas d'une photoactivation de ces molécules hybrides). X- est choisi notamment parmi les anions des acides carboxyliques solubles couramment utilisés en pharmacie, en particulier acétate, propionate, butyrate ascorbate, benzoate, cinnamate, citrate, fumarate, glycolate, malonate, tartrate, malate, maléate et mandélate. De préférence encore Z représente le groupe N±R 1 De -R1. Les composés de formule I peuvent être préparés par le procédé décrit dans EP 0 345 171. La présente invention a aussi pour objet un procédé de préparation des conjugués selon l'invention par couplage covalent d'un dérivé d'oligonucléotide porteur d'une fonction susceptible de réagir avec une fonction du dérivé de métalloporphyrine notamment la fonction R des dérivés de formule I selon les réactions conventionnelles en chimie organique. Lorsque R est COOH ou NH2 et qué l'oligonucléotîde est porteur d'une fonction NH2 ou COOH respectivement, on réalise un couplage peptidique conventionnel donnant un lien amide CONH. Ainsi, selon une variante appropriée, l'extrémité 5' de l'oligonucléotide est fonctionnalisé avec une fonction NH2 via un radical diaminoalkyle. La partie oligonucléotide peut être un oligonucléotide à lien phosphodiester classique ou bien peut comporter des enchaînements modifiés, par exemple méthylphosphonates, phosphorithioates, ou même de type peptide. Les nucléosides peuvent être naturels ou modifiés (au niveau chimique ou même au niveau stéréochimique, notamment à configuration anomérique alpha. On cite plus particulièrement comme conjugué selon l'invention les conjugués répondant à la formule (A) dans laquelle les radicaux B' peuvent être identiques ou différents et représentent chacun une base d'un acide nucléique, naturelle ou modifiée L représente un atome d'oxygène, un atome de soufre ou un groupe -NH- ; J représente un atome d'hydrogène ou un groupe hydroxy n' est un nombre entier y compris entre 2 et 50. les radicaux X1, qui peuvent être identiques ou différents, représentent chacun un oxoanion O , un thioanion S , un groupe alkyle, un groupe alcoxy, aryloxy, alcoxy ou alkyle substitué par un hétérocycle azoté, un groupe aminoalkyle, un groupe aminoalcoxy, un groupe thioalkyle ou un groupement -Y1-Z1 R'1 et R'2 peuvent être identiques ou différents et représentent chacun un groupement -Y 1-Z1 ou un groupement-Y2-Z2 dans lesquels Y1 et Y2 représentent un reste divalent d'un radical hydrocarboné Z1 et Z2 représentent chacun un radical intercalant ou un radical de coupure portèur d'au moins une fonction, réagissant directement ou indirectement avec les chaînes de nucléotides, l'un des R'1 ou R'2 pouvant représenter H et l'un au moins de Z1 et Z2 représente un reste de dérivé de métalloporphyrine cationique, notamment de formule (I) selon l'invention. Dans la formule (A), on utilise la représentation condensée des nucléotides suivante qui correspond à la formule développée (ananère alpha ou bêta) sur laquelle ont été mentionnées les extrémités (3') et (5'). I1 convient de remarquer que la formule (A) représente un enchaînement de nucléotides qui peuvent être identiques ou différents, n' indiquant simplement le nombre de nucléotides compris dans la molécule n' est de préférence un nombre compris entre 1 et 50, et de préférence entre 2 et 25. Les radicaux intercalants correspondent à des agents d'intercalation qui sont les composés connus dans les techniques touchant aux acides nucléiques ; il s'agit de composés capables de "s'intercaler" dans la structure des ADN ou des ARN. Ces agents d'intercalation sont, en général, constitués par des composés polycycliques ayant une configuration plane tels que l'acridine, la furocoumarine, la daunomycine, la l,10-phénanthroline, la phénanthridinium, les porphyrines, les dérivés de la dipyrido (1,2-a : 3',2'-d) imidazole, l'elliptcine ou l'ellipticinium et leurs dérivés. Les radicaux chimiques réactifs de coupure sont, de préférence, les radicaux chimiques de scission, c'est-à-dire que ces radicaux peuvent directement ou indirectement réagir pour scinder une chaîne de nucléotides. De préférence, ces radicaux chimiques réactifs seront activables, par exemple par voie chimique ou photochimique. Le radical B' est, de préférence, constitué par une base naturelle d'un acide nucléique, par exemple la thymine, l'adénine, la cytosine, la guanine ou l'uracile ; mais il est également possible d'utiliser des bases d'acides nucléiques modifiées, comme la 2-amino-adénine et ses dérivés substitués, par exemple sur le N6 par un groupe aminoalkylène ou par un groupe azidophénylalkylène ; ou la guanine substituée sur le o6, par exemple par un groupe (oméga-amlnoalkyl)-amino-adénine et ses dérivés substitués sur le NH2 en oméga par un groupe acridine ; ou des dérivés halogénés ou azidés, par exemple la 5-bromo-uracile ou la 8-azidoadénine. En outre, il est possible d'utiliser des dérivés photoactivables des bases. Le radical X1, bien qu'il représente de préférence un oxoanion, peut avoir d'autres significations ; lorsque le radical X I représente un groupement alkyle, il s'agit de préférence d'un groupement alkyle inférieur en C1 à C7 et, par exemple, les groupements éthyle, méthyle ou propyle ; lorsque le radical X1 représente un groupe alcoxy, il s'agit de préférence d'un groupement alcoxy infériur en C1 à C7, par exemple le groupement méthoxy ou éthoxy ; lorsque X1 représente un groupement amino-alkyle ou amino-alcoxy, il peut s'agit d'un groupement amino-alkyle mono-substitué, disubstitué ou bien d'un radical amino sous forme de sel d'ammonium quaternaire.Dans ces conditions, les substituants sont, de préférence, des radicaux alkyles inférieurs comme définis précédemment; quant à la chaîne alkyle ou alcoxy reliant le radical amino au phosphore, il s'agit de préférence d'une chaîne droite ou ramifiée comportant de 1 à 10 atomes de carbone. Lorsque le radical alkyle ou alcoxy est substitué par un hétérocycle azoté, il s'agit notamment de cycle saturé à 5-6 chaînons comportant un atome d'azote qui peut être quaternaire. Enfin lorsque, le radical X1 est un radical thioalkyle, il s'agit de préférence d'un radical thioalkyle inférieur, c'est-à-dire qui comporte entre I et 7 atomes de carbone. On cite, à titre non limitatif comme radical hydrocarboné Y1 et Y2, les restes divalents suivants -CO-NH-alK-NH-CO-alK-O-, -CO-NH-alK-Odans lesquels E peut avoir les mêmes significations que X1 excepté Yl-Z et Y2-Z2). Dans un mode de réalisation particulier, un conjugué selon la revendication 3 caractérisé en ce que l'un au moins de Z1 et Z2 représente un reste de métalloporphyrine de formule (I') où les substituants M, A, B, Z, X, Y et n ont la même signification que dans la formule I de la revendication 2, et le reste Y1 ou Y2 correspondant ayant pour formule où alK est un alkyle en C1 à C12 notamment du type -(CH2)n"- avec n" = 1 à 12. Dans un exemple de réalisation, le conjugué comporte le reste tris-méthylpyridinuimyl-porphyrine de formule MePh3(PP)-Y-(CH2)n- correspondant au dérivé de formule (I') dans lequel R1 = CH3 et dans la formule A - R'1 = Z1 Y1 avec Z1 = MePy3 (PP) Ph -Y -CH2)n -L =O - X1 est différent de Yl-Zl et H Les conjugués de la présente invention, par leur propriété de se fixer fortement sur la séquence nucléique complémentaire puis d'induire la coupure de la chaîne d'acide nucléique en ce site, sont utilisables à titre de nucléases artificielles spécifiques de séquences. Ils peuvent être utilises comme réactifs en biologie moléculaire ou en génie génétique.Ils peuvent être également utilisés pour obtenir des fragments d'acides nucléiques, en particulier des fragments d'ARNs pour lesquels il n'existe pas de nucléase spécifique de séquences. L'objet de la présente invention est également l'application des conjugués de l'invention pour réaliser le blocage spécifique des gènes cellulaires ou d'agents pathogènes préalablement choisis (virus, bactéries, parasites). Les conjugués selon l'invention sont donc utiles comme médicament afin de détruire sélectivement les gènes indésirables, exogènes (virus, bactéries, parasites) ou endogènes (gènes cellulaires oncogènes par exemple). L'expression de ces gènes peut être bloquée en agissant soit directement sur l'ADN ou L'ART porteur de l'information génétique, soit sur L'ART mesager, copie du gène, en bloquant alors toute traduction par coupure de L'ART messager choisi pour cible. Ce blocage peut être réalise en utilisant un conjugué dont la séquence oligonucléotidique est complémentaire de celle d'une région non complexée d'un ADN ou d'un ARN, et en particulier d'un ARN messager. L'hybridation puis la coupure de L'ART messager par ces substances empêchent la synthèse de la protéine correspondante. Si cette protéine est vitale pour le virus ou pour la bactérie ou pour le parasite, alors les conjugués de l'invention agiront comme substances antivirales ou comme antibiotiques ou comme produits antiparasitaires. Si cette protéine n'est pas vitale pour l'organisme, on peut alors supprimer sélectivement ses effets. Dans ce cas, les conjugués de l'invention agiront par exemple soit comme substances antitumorales, lorsque le gène visé (ou son ARN messager) code pour une protéine transformante, soit comme une substance qui permet de supprimer le cractère de résistance aux antibiotiques, aux antiviraux et aux antiparasitaires lorsque la protéine codée est responsable de l'inactivation de ces antibiotiques, de ces antiviraux et de ces antiparasitaires. Les exemples suivants illustrent l'invention. La Figure 1 resprésente la structure de la molécule hybride ou conjuguée de l'Exemple 1-2. La Figure 2 représente la structure de la molécule de l'Exemple 1-3. La Figure 3 représente l'analyse sur gel d'électrophorèse effectuée à l'Exemple 2. EXEMPLE 1: PREPARATION DES CONJUGUES "METALLOPORPHYRINE-OLIGONU CLEOTIDE" 1. Synthèse du conjugué : tris-méthylpyridiniumylporphyrine-T17-(la préparation des prêcurseurs porphyriniques est faite selon la demande EP 345 171). La porphyrine cationique libre [MePy3(H2-PP)(PhO(CH2)4 COOH)] (13,6 mg ; 11,7 umol) est solubilisée dans 300 Ill de DMF sec. A cette solution est rajouté le carbonyldiimidazole (16,4 mg ; 101 pmol ; 8,6 éq). Le mélange est laissé 13 h sous agitation à température ambiante avant l'addition de l'hydroxybenzotriazole (27,3 mg ; 202 umol ; 172 éq.). L'agitation est maintenue pendant 2 h 30. Le carbonyldiimidazole est piégé par 30 1ll de tampon Hepes que l'on laisse agir pendant 30 minutes. La moitié de cette solution d'ester activé est engagée dans la réaction de couplage sur 13 unités de DO à 260 nm d'oligonucléotide 5'-TH2-T17-OH (78 nmol, cet oligonucléotide porteur d'une fonction amine en 5' a été préparé avec du 1,6-diaminohexane après une activation de la fonction 5'-OH à l'aide de carbonyldiimidazole) repris dans 20 p1 de tampon Hepes. La solution est chauffée ) 60"C pendant 5 h. Les solvants sont ensuite éliminés sous vide à la Speed-Vac. Une première purification est effectuée sur une colonne de Sephadex G-25(F) équilibrée avec de l'eau : elle permet d'éliminer la porphyrine en excès. Une purification par HPLC (colonne Gen Pak-Fax, temps de rétention T r de la molécule hybride = 17,9 min) suivie d'un dessalage sur une colonne de Sephadex G-25(F) permet d'obtenir le conjugué propre. Le rendement à 265 nm après purification et dessalage est de 45%. Le rapport E428/E260 calculé est de 1,42 ; le rapport A435/A265 observé est de 1,30. Les E des produits libres sont les suivants : E260 de loligonucléotide = 1,4 x 105 M lcm 1 ; E428 de la porphyrine = 2,0 x M lcm 1. 2. Synthèse de la molécule hybride : tris-méthylpyridiniumylporphyrinato de manganèse (III)-T1, (voir Figure 1 pour la structure de ce conjugué). Le conjugué précédemment préparé (1,5 unités de DO à 265 nm) est repris dans 150 PI d'une solution de Mn(OAc)2.4H20 à 5 mg/ml. Après chauffage à 1000C pendant une heure, une injection HPLC montre que la métallation est terminée (déplacement de 435 nm à 467 nm de la bande de Soret correspondant au pic). Aucune dégradation du produit de couplage n'est observée pendant la réaction de métallation. Le ligand axial Y sur la partie porphyrinatomanganèse est un hydroxo au-dessus de pH7 et une molécule d'eau à pH acide. Les complexes de cuivre (II) et de cobalt (III) ont été préparés à partir des sels de CuCI2 et CoC12-6H2O suivant le même principe. Pour ces deux conjugués, aucun déplacement important de la bande de Soret n'est observé. Dans le but de prouver que la métallation avait eu lieu, les conjugués métallés par le cuivre et le cobalt ont été traités par une solution de Mn(OAc)2 dans les mêmes conditions. La bande de Soret ne se déplace pas à 465 nm, ce qui confirme que le cuivre et le cobalt étaient déjà insérés. Une purification sur colonne de Sephadex G-25(F) (volume de gel = 1 ml) est effectuée pour éliminer l'excès de sels métalliques. Le rapport des absorbances AVIS/AUV et les temps de rétention de ces conjugués sont respectivement de 0,81 et 17,6 min pour le conjugué métallé par le manganèse, 0,82 et 17,9 min pour celui métallé par le cuivre et 0,84 et 18,1 pour le dérivé du cobalt. 3. Synthèse du conjugué : tris-méthylpyridiniumylporphyrinatomanganèse (III)-19-mer (séquence hétéronucléotidique). Exemple de métalloporphyrine conjuguée anti-TAT de VIH-l. (ltoligo- nucléotide vecteur est un 19-mer, 5'-NH2-GGCTCCATTTCTTGCTCTC, complémentaire de la zone du codon d'initiation du gène TAT de VIH-I (voir Figure 1 pour la structure de ce conjugué). La porphyrine cationique [MePy3(H2-PP)(PhO(CH2)4COOH)] est métallée par le manganèse de la façon suivante : 5 mg de porphyrine (4,06 llmol) sont partiellement dissous dans 600 ,ul d'une solution de MnCl2.4H2 O (10,3 mg ; 52 pmol ; 13 éq) et portés à reflux dans un tube fermé par un bouchon à vis pendant 4 h30. La solution est évaporée à sec (Speed-Vac), le résidu repris dans du DMF sec et filtré. Le produit est précipité par addition de THF. Après centrifugation (8000 rpm ; 25 min) le surnageant est éliminé et le solide repris à nouveau pour une seconde centrifugation. La porphyrine est séchée sous vide. 2,9 mg de métalloporphyrine précédemment préparée (2,3 pmol) sont repris dans 150 p1 de DMF sec et activés par addition de 7,11 mg de carbonyldiimidazole (44 mol ; 19 éq) suivie, 13 h plus tard, de celle de l'hydroxybenzotriazole (12 mg ; 88 umol ; 38 éq). Après 4 h d'agitation à température ambiante, l'excès de carbonyldiimidazole est détruit par addition de 20 p1 de tampon Hepes. Au bout de 30 minutes, la solution de porphyrine activée est mélangée à 2,1 unités de DO à 260 nm (13,4 nmol) d'oligonucléotide NH2-19-mer (séquence: 5'-GGCTCCATTTCTTGCTCTC) repris dans 20 p1 de tampon Hepes. La réaction est incubée à 37"C pendant 20 h. Les solvnats sont éliminés sous vide (Speed-Vac), le résidu repris dans 500 1ll d'eau et déposé sur une colonne de Bio-Gel P-2(F) (2,5 g ; 10 ml) équilibrée avec de l'eau. La séparation entre l'oligonucléotide libre et le produit de couplage est réalisée par HPLC. Dans une dernière étape, le conjugué est dessalé en utilisant le même gel (2 g). Le rendement final à 264 nm est de 25% après les purifications et le dessalage. Le rapport E466/E260 calculé est de 0,62 ; le rapport A468/A264 observé est de 0,63. Les E des produits libres sont les suivants : E260 de l'oligonucléotide = 1,6 x 105 M lcm 1 ; E466 de la porphyrine de manganèse (fil) = 0,98 X 105 M lcm 1. Les temps de rétention en HPLC sur la colonne Gen-Pack Fax sont de 22?6 min pour l'oligonucléotide de départ et de 20,1 min pour le conjugué. EXEMPLE 2: MISE EN EVIDENCE DE L'ACTIVITE NUCLEASE DU CONJUGUE TRIS METHYLPYRIDINIUMYLPORPHYRINATOMANGANESE Le conjugué "porphyrine cationique de manganèse(III)-l9-mer anti-TAT" a été testé pour son activité nucléase en présence du 35-mer complémentaire suivant : 5'-CAGAGGAGAGCAAGAAATGGAGCCAGTAGCA TCCTA (nucléotides 5360 à 5394 du génome du VIH-l d'après Wain-Hobson et coll., Cell., 1985, 40, 9-17). Cette séquence contient le codon d'initiation du gène TAT du VIH-1 et a été marquée en 5' par traitement avec la polynucléotide kinase de T4 et de l'ATP marqué au phosphore 32 en position lambda. Les essais in vitro ont été réalisés en utilisant le monopersulfate de potassium KHSO5 en tant que donneur d'atome d'oxygéne, à la concentration de 1 mM (ce donneur d'atome d'oxygène a été utilisé dans l'étude du mécanisme d'action de la bléomycine, un médicament antitumoral et permet de mimer in vitro l'activation réductrice de l'oxygène In vivo (voir Pratviel et coll., Biochem. Pharmacol., 1989, 38, 133). La concentration en conjugué ou en porphyrine libre (MnTMpyP) varie respectivement de 0,1 nM à 1 pM (0,026 à 260 éq) et de I nM à 1 pM. La séquence cible 35-mer est noyée pour la réaction de coupure dans un large excès (3000 éq/35-mer) d'ADN de sperme de saumon. Après un temps d'incubation de 1 h à 40C, les produits de coupure du 35-mer sont analysés sur gel d'électrophorèse de polyacrylamide à 20%. Les détails expérimentaux sont indiqués ci-après. Les résultats présentés à la Figure 3 montrent une activité nucléase à partir d'une concentration en conjugué de 10 nM (2,6 éq/cible) alors que la même activité nucléase est obtenue à une concentration de I pM pour la porphyrine libre MnTMPyP. Ainsi, l'accrochage de l'agent de coupure basé sur un motif porphyrine cationique de manganèse à un oligonucléotide servant d'agent de ciblage ne diminue pas l'activité nucléase. Celle-ci reste toujours de l'ordre du nanomolaire et permet ainsi d'envisager le développement d'agents antiviraux ou antitumoraux à partir de ces conjugués "métallopor phyrine cationiques-oligonucléotides". Cette catégorie d'oligonucléotides antisens réactifs est utilisable en thérapie génique (Miller, Nature, 1992, 357, 455). Chaque réaction de coupure d'ADN contient 3,75 nM du 35-mer marqué en 5' (21 300 cpm/mmol) et de 0.1 nM à 1 pM de MntrisMPyP-l9-mer (voir Figure 2 pour la structure) (le rapport conjugué/cible varie entre 0,026 à 260) et 400 pM en nucléotide d'ADN de sperme de saumon (3000 équivalents par rapport au 35-mer) dans une solution de NaC1125 mM et de tampon Tris-HCl 50 mM (pH 8).L'hybridation de la métalloporphyrine conjuguée avec le 35-mer se fait à 900C (3 min), suivie d'un refroidissement lent en 4 h et une nuit à 4 OC. Tous les essais (volume total = 16 p1) ont été faits à 4 OC. Pour les réactions sans le conjugué porphyrinique, c'est-à-dire le 19-mer libre et le 35-mer, mais en présence de Mn-TMPyP (pentaacétate de tétrakis(4-N-méth ylpyridiniumyl)porph y- rinatomanganèse(III), les échantillons sont pré-incubés avec cet agent de coupure non-vectorisé pendant 15 min à 4 "C avant addition de KHSO5. Les réactions de coupures d'ADN sont initiées par addition de 1 mM de KHSO5 et maintenues à 4 "C pendant 1 h.Les réactions sont ensuite traitées par 40 mM de tampon Hepes (pH 8), ce qui permet de stopper la réaction, et chauffées à 90 "C pendant 30 min (toutes les concentrations indiquées ci-dessus sont des concentrations finales). Après refroidissement à 4 "C, les échantillons sont dilués avec 1 pl de tARN de levure (10 mg/ml) et 100 pl d'acétate de sodium 0,3 M (pH 5,2) et précipités avec 300 p1 d'éthanol, rincés à l'éthanol 75% et lyophylisés. Les fragments d'ADN sont analysés sur gel d'électrophorèse de polyacrylamide à 20% dans des conditions dénaturantes (urée 7 M); (voir Figure 3); puits nO 1: Maxam-Gilbert A+G; puits n" 2: C+T; puits n" 3: G; puits nO 4: C; puits nO 5: 1 pM du conjugué Mn-tris-MPyP-19mer sans KHSO5 (contrôle); puits nO 6 à 10: respectivement 1 pM, 100, 10, 1 nM du conjugué Mn-tris-MPyP-19-mer avec 1 mM de KHSO5; puits 11 à 14: la métalloporphyrine-vecteur est remplacée par i du 19-mer libre et, respectivement 1 pM, 100, 10, 1 nM de Mn-TMPyP (la métalloporphyrine non-vectorisée) en présence de 1 mM de KHSO5. REVENDICATIONS 1. Conjugué constitué par un oligonucléotide lié par une liaison covalente à au moins un dérivé de métalloporphyrine cationique. 2. Conjugué selon la revendication 1 caractérisé en ce que le dérivé de métalloporphyrine cationique répond à la formule dans laquelle A et B représentent chacun et Z+ représente N±R1 ou C-N+ R1R2R3, R1 étant un groupe aliphatique droit ou ramifié en C1 à C10, et R2 et R3 étant chacun un atome d'hydrogène ou un groupe aliphatique droit ou ramifié en C1 à C10, R représente un groupe NH2, OH, COOH ou -N(R1)3, ou un atome d'halogène, n est 0 ou un entier de 1 à 10, le groupe alkylène correspondant pouvant être droit ou ramifié, M représente un métal de transition, X représente l'anion d'un acide carboxylique pharmaceutiquement acceptable, m étant un entier de 1 à 5, et Y représente une liaison ou un radical-O-, -CO- ou -CONH-, et l'oligonucléotide est porteur d'une fonction susceptible de réagir avec le groupe R pour donner le dit lien covalent. 3. Conjugué selon la revendication 1 ou 2, caractérisé en ce qu'il répond à la formule dans laquelle les radicaux B' peuvent être identiques ou différents et représentent chacun une base d'un acide nucléique, naturelle ou modifiée L représente un atome d'oxygène, un atome de soufre ou un groupe -NH- ; J représente un atome d'hydrogène ou un groupe hydroxy n' est un nombre entier y compris entre 2 et 50. les radicaux X1, qui peuvent être identiques ou différents, représentent chacun un oxoanion O , un thioanion S, un groupe alkyle, un groupe alcoxy, aryloxy, alcoxy ou alkyle substitué par un hétérocycle azoté, un groupe aminoalkyle, un groupe aminoalcoxy, un groupe thioalkyle ou un groupement -Y1-Z1 R'1 et R'2 peuvent être identiques ou différents et représentent chacun un groupement -Y1-Z1 ou un groupement -Y2-Z2 dans lesquels Y1 et Y2 représentent un reste divalent d'un radical hydrocarboné Z1 et Z2 représentent chacun un radical intercalant ou un radical de coupure porteur d'au moins une fonction, réagissant directement ou indirectement avec les chaînes de nucléotides, l'un des R'1 ou R'2 pouvant représenter H et l'un au moins de Z1 et Z2 représente un reste de dérivé de métalloporphyrine cationique, notamment de formule (I) selon la revendication 2. 4. Conjugué selon la revendication 3 caractérisé en ce que l'un au moins de Z1 et Z2 représente un reste de métalloporphyrine de formule (I') où les substituants M, A, B, Z, X, Y et n ont la même signification que dans la formule I de la revendication 2, et le reste Y1 ou Y2 correspondant ayant pour formule où alK est un alkyle en C1 à C12 notamment du type -(CH2)n"- avec n" = 1 à 12. 5. Conjugué selon l'une des revendications 1 à 4 caractérisé en ce que l'oligonucléotide est lié au dérivé de métalloporphyrine par une liaison covalente à l'extrémité 3' ou 5' de l'oligonucléotide. 6. Conjugués selon l'une des revendications 2 à 5, caractérisés en ce que R1 représente un groupe méthyle ou éthyle. 7. Conjugués selon l'une des revendications 2 à 6, caractérisés en ce que R2 et R3 représentent chacun un atome d'hydrogène. 8. Conjugués selon l'une des revendications 2 à 7, caractérisés en ce que M représente Mn ou Fe. 9. Conjugués selon l'une quelconque des revendications 2 à 8, caractérisés en ce que Z représente le groupe N+R1. 10. Conjugué selon l'une des revendications 3 à 8 caractérisé en ce que, dans la formule (A) - R'1 = Z1 - Y1 avec Z1 = MePy3 (PP) Ph -Y - (CH2)n -L =O - X1 est différent de--Y1-Z1 et R = H 11. A titre de médicament, un composé selon l'une des revendications 1 à 10. 12. Composition pharmaceutique, caractérisée en ce qu elle contient un conjugué selon l'une quelconque des revendications 1 à 10, et un véhicule ou excipient pharmaceutiquement acceptable. 13. Utilisation des conjugués selon l'une quelconque des revendications 1 à 10, pour la préparation de compositions pharmaceutiques. 14. Utilisation des conjugués selon l'une des revendications 1 à 10 à titre de nucléases artificielles spécifiques de séquences d'acides ribo et désoxyribonucléiques. 15. Utilisation des conjugués selon l'une des revendications 1 à 10 pour obtenir des fragments d'acides nucléiques déterminés à partir d'acides ribo et désoxyribonucléiques. 16. Utilisation des conjugués selon l'une des revendications 1 à 10 comme réactifs pour analyser les structures secondaires et tertiaires d'acides ribo- et désoxyribonucléiques, par coupures sélectives de la séquence cible et des séquences voisines dans l'espace. 17. Utilisation des conjugués selon l'une des revendications I à 10 pour couper et dégrader sélectivement les acides nucléiques, en particulier les ARN messagers in vivo. 18. Utilisation selon la revendication 14, pour bloquer sélectivement l'expression d'un gène par coupure sélective du gène ou de son ARN messager.