FR 2703356 A1 19941007 FR 9303744 A 19930331 I Procédé de synthèse de dérivés acylés de thiols transporteurs d'acides gras, en particulier d'acyl- coenzymes A, et les acyl-coenzymes A ainsi obtenus. La présente invention a pour objet un procédé de synthèse de dérivés acylés de thiols transporteurs d'acides gras, en particulier d'acylcoenzymes A. Les acyl-coenzymes A sont des dérivés très intéressants qui peuvent être utilisés dans de nombreuses voies biosynthétiques, en particulier pour l'étude des mécanismes biologiques impliquant des acides gras. On connait plusieurs méthodes de préparation des acyl-coenzymes A Ces méthodes utilisent pour la plupart la réaction de condensation d'un acide activé avec le coenzyme A, à la température ambiante, en phase aqueuse ou dans un milieu eau-solvant organique. L'acide activé peut être un anhydride mixte, un chlorure, ou un ester de N-hydroxysuccinimide ou un acyl imidazole, comme il est décrit par E R Staddtman, Methods in Enzymol 1957, Vol 3, 931-941; Peter Goldman et P Roy Vagelos, J Biol Chem 1961, 236, 2620-2623; Frank Davidoff and Edward D Korn, J Biol. Chem 1964, 239, 2496-2506; Adhid Al-Arif et Melvin Blecher, J Lipid Res 1969, 10, 344-345; Adhid Al- Arif et Melvin Blecher, Biochim Biophys Acta 1971, 248, 416-429; Maynard E Pullman, Anal Biochem 1973, 54, 188-198; James E Bishop et Amiya K Hajra, Anal. Biochem 1980, 106, 344-350; et Akihiko Kawaguchi, Tsutomu Yoshimura et Shigenobu Okuda, J Biochem 1981, 89, 337-339. Ces méthodes sont difficiles à mettre en oeuvre car elles sont basées sur la réaction d'un composé très hydrophile (coenzyme A) qui est soluble dans l'eau mais insoluble dans la plupart des solvants organiques, avec un acide organique qui est souvent insoluble dans l'eau De ce fait, pour réaliser la réaction de condensation, il est nécessaire de mélanger une solution aqueuse dans laquelle est dissous le coenzyme A avec un solvant organique contenant l'acide activé et de contrôler le p H tout au long de la réaction, ce qui donne lieu à des difficultés de mise en oeuvre De plus, cette méthode ne peut être utilisée lorsque l'acide activé a une très longue chaîne hydrocarbonée, par exemple un nombre d'atomes de carbone supérieur à 18 Enfin, les rendements obtenus par ces méthodes ne sont pas reproductibles en raison des difficultés de mise en oeuvre de la réaction. La présente invention a précisément pour objet un procédé de synthèse de dérivés acylés de thiols transporteurs d'acides gras, qui pallie ces inconvénients et s'applique de plus à la préparation de dérivés acylés dans lesquels le radical acyle a plus de 18 atomes de carbone. Selon l'invention, le procédé de synthèse d'un dérivé acylé d'un thiol transporteur d'acides gras par réaction du thiol avec un réactif d'acylation, comprend les étapes suivantes: 10) préparer un thiol silylé ou stannylé en faisant réagir dans un solvant organique le thiol avec un réactif de silylation ou de stannylation pour remplacer au moins en partie les hydrogènes labiles du thiol par des groupes de formule Si R 3 ou Sn R 3 dans lesquelles les R qui peuvent être identiques ou différents, sont des groupes alkyle ou aryle, et 2 ) faire réagir dans un solvant organique anhydre le thiol silylé ou stannylé avec a) un réactif de déprotection pour éliminer les groupes Si R 3 ou Sn R 3 et avec b) le réactif d'acylation pour obtenir le dérivé acylé du thiol. Dans ce procédé, le fait de préparer dans la première étape un thiol silylé ou stannylé permet de solubiliser le thiol transporteur d'acides gras qui présente généralement un fort caractère hydrophile, dans un solvant organique anhydre et de faciliter ensuite la réaction de condensation du thiol avec le réactif d'acylation. De ce fait, on peut réaliser ensuite cette réaction de condensation dans un milieu organique anhydre, sans avoir à contrôler le p H, ce qui permet d'obtenir des rendements élevés en dérivés acylés de façon reproductible. Les thiols transporteurs d'acides gras utilisés dans le procédé de l'invention sont des molécules organiques plus ou moins complexes, comportant un groupe SH par lequel elles peuvent être associées à divers acides gras. A titre d'exemple de telles molécules, on peut citer le coenzyme A qui est une molécule complexe comportant de nombreux hydrogènes labiles, la cystéamine qui est une molécule beaucoup plus simple de formule NH 2-C 2 H 4-SH,la carnitine et l'acide panthénoique. La formule du coenzyme A est la suivante: o oc 3 c Oo NH 2 i J,' ?, o. O= -OH* OH' -vnn D'après cette formule, on voit qu'il est possible de protéger les 9 fonctions (hydroxyle, amide, phosphate et thiol) indiquées ci-dessus par des astérisques, par des groupes silyle ou stannyle. Le remplacement d'hydrogènes labiles par de tels groupes, dans ce composé hydrophile, très polaire, réduit cette polarité, diminue ainsi les possibilités de formation de liaisons hydrogène et favorise donc,de façon générale, la solubilité du composé dans des solvants organiques polaires et aussi non polaires. Aussi, le procédé de l'invention est particulièrement intéressant pour préparer les dérivés acylés du coenzyme A. Dans la première étape du procédé de l'invention, on prépare donc un thiol silylé ou stannylé en faisant réagir, dans un solvant organique le thiol de départ avec un réactif de silylation ou de stannylation afin de remplacer au moins en partie les hydrogènes labiles du thiool par des groupes de formules Si R 3 ou Sn R 3 dans lesquelles les R qui peuvent être identiques ou différents, sont des groupes alkyle ou aryle. Les groupes alkyle peuvent être linéaires ou ramifiés et ils ont généralement de 1 à 6 atomes de carbone, de préférence 1 à 4 atomes de carbone Les groupes aryle ont généralement de 6 à 15 atomes de carbone. A titre d'exemple de tels groupes aryle, on peut citer phényle et naphtyle. De préférence, dans la première étape, on fait réagir le thiol avec un réactif de silylation. On peut utiliser divers réactifs de silylation, mais on préfère en particulier utiliser le 1-méthoxy-2- méthyl-1-triméthylsiloxypropène car en faisant réagir réagir le thiol avec ce réactif, on obtient comme sous- produit de la réaction des composés très volatils, acétate d'isopropyle et hexaméthyldisiloxane ayant respectivement des points d'ébullition de 850 C et 1010 C, qui peuvent donc être éliminés facilement du milieu réactionnel par évaporation. Par ailleurs, lorsque le thiol est le coenzyme A, l'utilisation de ce réactif de silylation présente l'avantage de silyler les fonctions thiols en milieu neutre, ce qui évite la dimérisation du coenzyme A. On peut effectuer la réaction de silylation directement sur le thiol ou en le mettant en solution dans un solvant organique tel que l'acétonitrile ou le dichlorométhane,et en ajoutant à la solution l'agent de silylation que l'on laisse réagir à la température ambiante pendant la durée voulue En fin de réaction, on élimine le solvant si nécessaire, les sous-produits de la silylation et l'excès de réactif par évaporation sous pression réduite. Dans le cas du coenzyme A, la réaction de silylation peut conduire à une protection des 9 fonctions indiquées précédemment Toutefois, dans les conditions réactionnelles utilisées, il n'est pas certain que toutes ces fonctions soient silylées, mais on obtient habituellement la silylation de 7 fonctions dont la fonction thiol. Dans le cas o on réalise une réaction de stannylation, on peut utiliser comme réactif de stannylation, un réactif analogue et opérer dans des conditions similaires. Après silylation ou stannylation, on effectue la réaction de condensation du thiol sur le réactif d'acylation, en milieu organique anhydre, en utilisant de plus un réactif de déprotection pour éliminer les groupes Si R 3 ou Sn R 3 sur les fonctions thiols qui doivent réagir avec le réactif d'acylation. Pour effectuer cette déprotection, on peut utiliser comme réactif un fluorure ou d'autres réactifs capables d'éliminer les groupes Si R 3 ou Sn R 3. A titre d'exemples de tels réactifs de déprotection, on peut citer le fluorure de tétrabutylammonium, le difluorotriphénylstannate de tétrabutylammonium, le trichlorure d'aluminium, le fluorure de potassium et le fluorure de césium. De préférence, selon l'invention, on utilise comme réactif de déprotection le fluorure de césium. En effet, les autres fluorures donnent des résultats moins bons et il en est de même des autres réactifs mentionnés ci-dessus. Avec le fluorure de césium, on peut de plus accélérer la réaction, soit en soumettant le milieu réactionnel à une sonication, soit en opérant en présence d'un catalyseur constitué par un éther- couronne tel que le dicyclohexyl-18-C-6 (DCH-18-C-6) de formule: co N o Pour effectuer la condensation, on peut utiliser comme réactif d'acylation, les acides activés généralement utilisés tels que les anhydres mixtes, les chlorures d'acide, les thioesters et les esters. De préférence, selon l'invention, on utilise comme réactif d'acylation, un ester ou un anhydride mixte d'un acide carboxylique saturé ou insaturé L'ester peut être en particulier un ester d'un acide carboxylique et de la N-hydroxysuccinimide ou de l'alcool 2,4,6-trichlorobenzylique. A titre d'exemples d'acides carboxyliques utilisables, on peut citer l'acide octadécanoique, l'acide eicosanoïque, l'acide arachidonique, l'acide oléique, l'acide linoléique, l'acide linolénique l'acide 3-hydroxyeicosanoïque, l'acide 3- oxoeicosanolque, l'acide 2-eicosènoïque, et l'acide ( 2- heptadécyl-l,3-dioxolan-2-yl)-acétique. Les solvants organiques utilisés dans cette deuxième étape pour effectuer la réaction de désilylation ou de déstannylation et de condensation, peuvent être choisis parmi les solvants organiques polaires et non polaires tels que le tétrahydrofurane (THF), le dichlorométhane, l'hexane, l'acétonitrile, l'acétone, l'éther diméthylique, l'acétate d'éthyle, l'alcool, l'éther diéthylique. De préférence, dans l'invention, on utilise comme solvant organique l'éther diméthylique, le tétrahydrofurane, l'acétonitrile et leurs mélanges. Dans la deuxième étape, on choisit, par ailleurs, les quantités de réactif d'acylation et de thiol utilisées de façon à optimiser le rendement en dérivé acylé De bons résultats sont obtenus lorsque le rapport molaire du réactif d'acylation au thiol est de 1:1 à 2:1. On peut effectuer cette deuxième étape à la température ambiante ou à une température inférieure ou même supérieure, par exemple à des températures de O à C, pendant des durées allant de lh à 10 h. La température et la durée de la réaction de condensation dépendent en particulier du réactif de déprotection utilisé. Ainsi, lorsqu'on utilise comme réactif le fluorure de césium, en présence de DCH-18-C-6, on préfère opérer à une température de 25 C pendant 3 à 5 h. En revanche, lorsqu'on utilise comme réactif de déprotection, le fluorure de césium, en soumettant le milieu réactionnel à une sonication, on préfère opérer à O C pendant environ lh 30. L'invention a aussi pour objet le coenzyme A silylé ou stannylé obtenu dans la première étape du procédé Ce coenzyme A silylé répond à la formule suivante: o oc I-r 3 c H O O NH 2 W o O NCN 3 $KIl Il N SN N O-O- P,O NH 2 I I _I CH O I ru CN "Q, Ht Hé He O Ht OH*C N O Hr- O=P-OH * OH' dans laquelle au moins une partie des hydrogènes labiles H* sont remplacés par un groupe de formule Si R 3 dans laquelle les R qui peuvent être identiques ou différents sont des groupes alkyle, en particulier des groupes alkyle en C 1 à C 4, ou des groupes aryle. L'invention a encore pour objet les acyl-coenzymes A obtenus par ce procédé dans lesquels le groupe acyle répond à la formule RICO dans laquelle R 1 est un groupe hydrocarboné comprenant de 20 à 29 atomes de carbone et de O à 6 doubles liaisons. D'autres caractéristiques et avantages de l'invention apparaîtront mieux à la lecture des exemples qui suivent, donnés bien entendu à titre illustratif et non limitatif. Ces exemples illustrent la préparation de dérivés acylés du coenzyme A (Co ASH), obtenus par réaction du coenzyme A silylé (Co ASH silylé) avec un acide activé (acide eicosanoïque ou acide octadécanoïque de formule R 1-COOH avec R 1 représentant CH 3 (CH 2)16 ou CH 3 (CH 2)18) conformément au procédé de l'invention. Cette préparation correspond au schéma réactionnel donné ci-dessous qui se rapporte aux exemples 1 et 2. 1 ère étape 0 0 NH 2 H*SI'N NNHD OOH HC Ho N) HO O II II H S z N ' K X N H C O N N lCo A SHl o O H O=P-O H O O H OH * Co ASH silylé + O Me 3 i OMe 3 _Y '10 + Me 3 Si O Si Me 3 + Cs FH 8 C 6 , -;I+ Cs F - o + HON" 1 Co ASOCR 4 P O=P-OH Ex 1: RI= CH 3 (CH 2)16 OH Ex 2: R"= CH 3 (CH 2)18- + Si Mq +,Me 2 ieme étape Co ASH silylé + OH Exemple 1: Préparation de l Teicosanoyl coenzyme A. 1) Silylation du coenzyme A. Dans un flacon vial de lml contenant 10 mg ( 13,Og mol) de coenzyme A, trihydrate (Sigma) en solution dans 0,5 ml d'acétonitrile fraîchement distillé, on ajoute 30 Rt ( 104,0 pmol) de 1-méthoxy-2-méthyl-1- triméthylsilyloxypropène (Aldrich) On soumet l'ensemble à une agitation à 25 C sous azote et on constate que le milieu devient homogène après 40 min de réaction Après 12 h de réaction, on évapore le solvant, les sous-produits de la silylation et l'excès de réactif sous pression réduite pour obtenir une huile incolore constituée par le dérivé silylé du coenzyme A. 2) Préparation du dérivé acylé du coenzyme A. a) Préparation de l'ester de l'acide eicosanoïque et du N-hydroxysuccinimide. A 3,0 mmol d'acide eicosanoïque en solution dans 10 ml d'acétate d'éthyle anhydre, on ajoute 340 mg ( 3,0 mmol) de N- hydroxysuccinimide (Aldrich) en solution dans 3 ml d'acétate d'éthyle anhydre, puis on ajoute 610 mg ( 3,0 mmol) de dicyclohexyl carbodiimide (Aldrich) en solution dans 3 ml d'acétate d'éthyle anhydre On maintient le mélange réactionnel sous azote à la température ambiante pendant une nuit, puis on le filtre pour éliminer la dicyclohexyl urée formée et on le soumet à une concentration sous vide On purifie ensuite le produit par chromatographie sur gel de silice en utilisant pour 1 'élution un mélange éther/éther de pétrole ( 50/50), puis on recristallise dans l' éthanol, et on obtient une poudre blanche (rendement de 95 %). Les caractéristiques de ce produit sont les suivantes: spectrométrie de masse: (DCI/NH 3) M + 18 = 427 analyse élémentaire: (en %) calculé: C 70,37, H 10,58, O 16,6, N 3,42 trouvé: C 70,09, H 10,3, O 15,75, N 3,31. IR (cm-1): 2990 (u C-H), 1820, 1740 (u C=O), 1450 ( 5 CH 2), 1375 ( 5 CH 3), 1200 (u C-O), 1060 -RMN 1 H (CD C 13 300 M Hz): 5 0,86 (t, J= 6,3 Hz, 3 H, CH 3), 6 1,24 ( 28 H, CH 2), ô 1,78 (tt, 2 H, CH 2-CH 2- CO 2 N), 8 2,58 (t, J= 6,2 Hz, 2 H, CH 2-CH 2-CO 2 N)6 2,82 (s, 4 H, N-CO-CH 2-CH 2-CO-N). RMN 13 C (CD C 13 75 M Hz): 6 168,41 (O-C=O), ô 168,86 (N-C=O). b) Condensation du coenzyme A avec l'ester de N- hydroxysuccinimide. Dans un ballon de 25 ml contenant 50 mg ( 25 équiv) de fluorure de césium, 15 mg ( 10 % en mol par rapport au fluorure de césium) de dicyclohexyl-18-C-6 et 7,5 mg ( 1,5 équiv) de l'ester d'acide eicosanoïque et de N- hydroxysuccinimide obtenu précédemment, on ajoute 13 g mol du coenzyme A silylé obtenu dans la première étape en solution dans lml de THF fraîchement distillé On maintient le milieu réactionnel sous azote pendant 6 h à 0 C, puis on arrête la réaction par addition de KH 2 PO 4 l Om M, on filtre sur filtre Anotop 10 + ( 0,2 pm) et on analyse le produit obtenu par chromatographie liquide à haute performance (HPLC) analytique. Pour la chromatographie analytique, on utilise une colonne analytique, Nucléosil C-18 5 pm ( 250 x 4,6 mm, Interchim), dans les conditions suivantes: -AU = 0,01 Xmax= 254 nm, vitesse d'élution = 1,5 ml/min éluant mélange de A (KH 2 PO 410 m M), et de B (CH 3 CN) avec un gradient linéaire dans les conditions suivantes : on passe en 10 min de 60 % A-40 % B à 55 % A-45 %B, puis en 10 min à 45 % A 55 % B, en 15 min à 15 % A-85 % B et en min à 60 % A 40 % B. Pour la chromatographie semipréparative, on utilise une colonne Nucléosil C 18 5 pm ( 250 x 10 mm, Interchim) dans les conditions suivantes: AU= 0,1 kmax= 254 nm, vitesse d'élution = 1,5 ml/min éluant mélange de A (KH 2 PO 410 m M) et de B (CH 3 CN) avec un gradient linéaire dans les conditions suivantes: on passe en 10 min de 60 % A 40 % B à 55 % A 45 % B, puis en 10 min à 45 % A 55 % B, en 15 min à 20 % A 80 % B et en 10 min à 60 % A 40 % B. Les temps de rétention des différents produits caractérisés sont de lmin pour le Co ASH, 1,2 min pour le dimère (Co AS)2, et 23 min pour l'eicosanoyl-Co A. L'acétonitrile est évaporé sous pression réduite et la phase aqueuse restante est lyophilisée Le produit est ensuite dessalé sur la même colonne après qu'elle ait été rincée à l'eau Le résidu est déposé sur la colonne, lavé à l'eau pendant 40 min avec une vitesse d'élution de 1,5 ml/min, puis élué au méthanol à la même vitesse Le solvant est ensuite concentré et le produit obtenu est resolubilisé dans l'eau, puis lyophilisé et conservé à -18 C. Les caractéristiques du produit obtenu sont données dans le tableau 1 annexé. Exemple 2: Préparation de l'octadécanoyl-coenzyme A. On suit le même mode opératoire que dans l'exemple 1 pour préparer ce dérivé acylé, sauf que l'on prépare l'ester du N-hydroxysuccinimide en utilisant l'acide octadécanoïque au lieu de l'acide eicosanoïque. Les caractéristiques du produit obtenu sont données dans le tableau 1 annexé. Tableau 1 Exemple 3: Préparation de l'eicosanoyl-coenzyme A. Dans cet exemple, on suit le même mode opératoire que dans l'exemple 1 pour préparer le dérivé silylé du coenzyme A, et on réalise ensuite l'étape de condensation et de déprotection de la façon suivante en utilisant comme acide activé l'ester de l'acide eicosanoïque et du N- hydroxysuccinimide préparé de la même façon que dans l'exemple 1. Dans un ballon de 25 ml contenant 50 mg de fluorure de césium ( 25 équiv), 15 mg ( 10 % en mol) de DCH-18-C-6, 7,5 mg ( 1,5 équiv) d'acide activé au N- Ex 1: Ex 2: eicosanoy octadécanoy coenzyme A coenz me A Rendement: % 78 78 RMN 1 H (CDC 13 300 M Hz): 80,86 (t, J= 6,3 RMN 1 H ( 300 M Hz): Hz, 3 H CH 3), 6 1,24 ( 28 H, CH 2), 8 1,55 (tt, 2 H, CH 2-CH 2-C 02 S), 8 2,9 (t, J = 6,2 Hz, 2 H, CH 2-CI 12- C 02 S),,, UV: nm ú 257 nm = 7809 e 257 nm = 12509 ú 197 nm = 10236 ú 197 nm = 25835 FAB: m/z 1063 _ Rf: nmin 23 18 hydroxysuccinimide, on ajoute léquiv du coenzyme A silylé en solution dans lml de THF/CH 3 CN ( 2/1) On maintient le milieu réactionnel sous azote pendant 6 h à C On arrête alors la réaction par addition de KH 2 PO 4 10 m M, puis on sépare le produit obtenu, on le purifie et on l'analyse dans les mêmes conditions que celles de l'exemple 1. Le rendement de la réaction est de 75 %. Exemples 4 à 6: Préparation de l'eicosanoyl-coenzyme A. Dans ces exemples, on suit le même mode opératoire que dans l'exemple 3, sauf en ce qui concerne la quantité d'acide activé utilisée de façon à faire varier le rapport acide activé / coenzyme A de 2/1 à 1 S 1/2. Les rapports utilisés et les rendements obtenu dans ces conditions sont donnés dans le tableau 2 annexé. Tableau 2 Ex Rapport molaire Rendement (%) (+ 5 %) acide activé/coenzyme A 3 1,5/1 75 4 2/1 75 1/1 69 6 1/2 60 Exemples 7 à 18: Préparation de l'eicosanoyl-coenzyme A. Dans ces exemples, on suit le même mode opératoire que dans l' exemple 3 pour préparer ce dérivé acylé du coenzyme A, mais on utilise des solvants organiques différents dans la deuxième étape de condensation. Les solvants utilisés et les rendements obtenus sont donnés dans le tableau 3. Tableau 3 Rendement (%) Ex Solvants (+ 5 %) (+L 5 %) 7 THF 78,5 8 CH 3 CN 72 CH 3 CN/THF 9 2/1 65 1/1 75 11 i 1/2 I 75 12 DME 70 13 CH 2 CL 2 30 14 Ac O Et 50 _ 15 Et 20 O 65 16 acétone l 50 17 Et OH T 30 18 hexane 10 Exemple 19: Préparation de l'eicosanoyl-coenzyme A. Dans cet exemple, on suit le même mode opératoire que dans l'exemple 1 pour préparer ce dérivé acylé, sauf en ce qui concerne la deuxième étape qui est réalisée dans les conditions suivantes. On dissout léquiv du dérivé silylé obtenu dans la première étape de l'exemple 1 dans lml de THF anhydre auquel on ajoute 130 g 1 de fluorure de tétrabutylammonium ( 8 équiv), puis on laisse sous agitation et sous azote pendant 5 min à 25 C On ajoute alors l,5 équiv de l'ester de la N-hydroxy succinimide de l'acide eicosanoïque en solution dans lml de THF anhydre Après lh d'agitation à la température ambiante, on sépare le produit obtenu puis on l'analyse et on le dose par chromatographie liquide à haute performance dans les conditions décrites dans l'exemple 1. Le rendement obtenu dans ces conditions est de %. Exemples 20 à 25: Préparation d'eicosanoyl-coenzyme A. Dans ces exemples, on suit le même mode opératoire que dans l'exemple 19, sauf que l'on utilise d'autres solvants organiques. Les résultats obtenus ainsi que les solvants utilisés sont donnés dans le tableau 4 annexé. Tableau 4 Exemple 26: Préparation de l'eicosanoyl-coenzyme A. Dans cet exemple, on suit le même mode opératoire que dans l'exemple 1, sauf que l'on réalise la deuxième étape de condensation dans les conditions suivantes. Dans un ballon de 25 ml contenant 50 équiv de fluorure de potassium, 10 % en mol(par rapport au fluorure de potassium) de DCH-18-C-6 et 1,5 équiv. d'ester de N-hydroxysuccinimide, on ajoute léquiv de coenzyme A silylé en solution dans lml du mélange THF/CH 3 CN ( 2/1) On maintient le milieu réactionnel sous azote pendant 3 h à une température de 25 C. On sépare ensuite le produit obtenu et on l'analyse par HPLC Le rendement de la réaction est de /40 %. Exemples 27 à 34: Préparation de l'eicosanoyl-coenzyme A. Dans ces exemples, on suit le même mode opératoire que dans l'exemple 26, sauf que l'on utilise différents Ex So Lvant I Rendement (%) Ex Solvant (: 5 %) 19 THF 55 CH 3 CN 30 21 DME 10 22 CH 2 C 12 O 23 ACO Et O 24 Et 20 40 acétone 60 réactifs de déprotection, et éventuellement des quantités de réactif, des durées et des températures de réaction différentes. Dans les exemples 31 et 32, on utilise comme réactif de déprotection du fluorure de césium seul, sans catalyseur à base d'éther-couronne, mais on soumetie mélange réactionnel à une sonication Les réactifs utilisés, leur quantité, la durée et la température de réaction ainsi que les rendements obtenus sont donnés dans le tableau 5. Tab Leau 5 Au vu des résultats du tableau 5, on remarque que les meilleurs résultats sont obtenus lorsqu'on utilise le fluorure de césium comme réactif de déprotection, soit avec un éther-couronne, soit en soumettant le mélange à une sonication. Exemples 35 à 42: Préparation de l'eicosanoyl coenzyme A. I 5 dure OC rendement (%) Ex Catalyseur durée T ( C) 5) (h) (+ 5 %) 26 KF/dicyclohexy I-18 3 25 35/40 C-6 50 éq /10 % M 27 Cs F/dicyclohexyl 3 25 70 18-C-6 50 éq /2 % M 28 Cs F/dicyclohexyl 3 25 78 18-C-6 50 éq/10 % M 29 Cs F/dicyclohexyl 3 25 78 18-C-6 25 éq/10 % M Cs F 25 éq 3 25 62 31 Cs F/sonication 3 25 60 éq. 32 Cs F/sonication 1 h 30 0 75 éq. 33 AI C 13 5- 34 Ci 3 Sn F 2 l-lN Bu 43 + O Dans ces exemples, on suit le même mode opératoire que dans l'exemple 3 mais on utilise pour effectuer la deuxième étape de condensation des températures et des durées de réaction différentes.5 Les températures, les durées de réaction et les rendements obtenus sont donnés dans le tableau 6. Tableau 6 Exemple 43: Préparation de l'eicosanoyl-coenzyme A. Dans cet exemple, on suit le même mode opératoire que dans l'exemple 3 pour préparer le dérivé silylé du coenzyme A, puis on réalise la deuxième étape en utilisant à la place de l'ester de N- hydroxysuccinimide, l'acide eicosanoïque activé par le chloroformate d'isobutyle Pour préparer cet acide activé, on opère de la façon suivante. Ex Température Temps Rendement (%) ( C) de réaction (h) (+ 5 %) -10 6 36 O 6 78 37 25 3 72 38 40 1 h 30 min 60 39 60 42 25 24 70 A 26,0 mol d'acide eicosanoïque en solution dans 0,5 ml de dichlorométhane anhydre, on ajoute 26,0 pmol ( 3,81 gl) de triéthylamine anhydre sous argon. Après 10 min sous agitation, on ajoute au mélange réactionnel 26,0 jmol ( 3,5 g 1)de chloroformate d'isobutyle (Aldrich) à O C, puis on laisse le mélange réactionnel à la température ambiante pendant 2 h On obtient ainsi une suspension blanche que l'on filtre sous azote et que l'on concentre sous pression réduite pour obtenir un solide blanc. On réalise ensuite la condensation de cet acide activé sur le coenzyme A en opérant dans les mêmes conditions que celles de l'exemple 3, c'est-àdire en utilisant 50 équiv de fluorure de césium en présence de DCH18-C-6 ( 10 % en mol), un rapport molaire acide activé / coenzyme A de 1,5/1 et une durée de réaction de 6 h à 25 C. Le rendement obtenu dans ces conditions est de %. Exemple 44. Dans cet exemple, on suit le même mode opératoire que dans l'exemple 43, sauf que l'on utilise comme acide activé l'acide activé par le chlorure de 2,4,6- trichlorobenzoyle, en préparant cet acide activé de la façon suivante. A 19,0 Omol d'acide eicosanoïque en solution dans 2 ml de THF anhydre, on ajoute 19,5 pmol ( 27 g 1) de triéthylamine anhydre sous argon On refroidit le milieu réactionnel dans un bain de glace et on y ajoute goutte à goutte à O C 19,5 pmol ( 30,0 p 1) de chlorure de 2,4,6trichlorobenzoyle On maintient le milieu réactionnel à la température ambiante pendant 2 h et on obtient ainsi une suspension blanche que l'on filtre sous azote et que l'on concentre sous pression réduite pour obtenir l'acide activé sous forme de solide blanc. On effectue ensuite l'étape de condensation dans les mêmes conditions que celles de l'exemple 43. On obtient ainsi un rendement en eicosanoyl- coenzyme A de 65 % Les exemples donnés ci-dessus montrent que l'on peut obtenir les acyl-coenzymes A avec de bons rendements, en particulier lorsqu'on utilise comme acide activé un ester de la N-hydroxysuccinimide et que l'on réalise la deuxième étape de condensation dans un solvant organique tel que THF, le mélange acétonitrile THF ( 1/2) et l'éther diméthylique, en utilisant le fluorure de césium comme réactif de déprotection, soit à O C pendant lh 30 min avec sonication, soit à 25 C pendant 3 à 5 h en présence de DCH-18-C-6. Par ailleurs,bien que dans ces exemples, on ait utilisé des acidessaturés, l'invention s'applique également à l'emploi d'acides activés insaturés comprenant par exemple de 1 à 6 doubles liaisons. REVENDICATIONS 1 Procédé de synthèse d'un dérivé acylé d'un thiol transporteur d'acides gras par réaction du thiol avec un réactif d'acylation, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes: ) préparer un thiol silylé ou stannylé en faisant réagir le thiol avec un réactif de silylation ou de stannylation pour remplacer au moins en partie les hydrogènes labiles du thiol par des groupes de formules Si R 3 ou Sn R 3 dans lesquelles les R qui peuvent être identiques ou différents, sont des groupes alkyle ou aryle, et 2 ) faire réagir dans un solvant organique anhydre le thiol silylé ou stannylé avec a) un réactif de déprotection pour éliminer les groupes Si R 3 ou Sn R 3 et avec b) le réactif d'acylation pour obtenir le dérivé acylé du thiol. 2 Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que le thiol est le coenzyme A. 3 Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 et 2, caractérisé en ce que l'on prépare un thiol silylé dans la première étape. 4 Procédé selon la revendication 3, caractérisé en ce que le réactif de silylation est le 1-méthoxy-2- méthyl-1-triméthylsiloxypropène. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisé en ce que l'on utilise dans la première étape un solvant organique constitué par l'acétonitrile ou le dichlorométhane. 6 Procédé selon l'une quelconque des revendications 3 à 5, caractérisé en ce que dans la première étape, on sépare le thiol silylé du milieu réactionnel par évaporation du solvant organique éventuel, de l'excès de réactif de silylation et des sous-produits de la réaction de silylation. 7 Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisé en ce que le réactif de déprotection utilisé dans la deuxième étape est du fluorure de césium. 8 Procédé selon la revendication 7, caractérisé en ce que l'on fait réagir le fluorure de césium en présence d'un catalyseur constitué par un éther- couronne. 9 Procédé selon la revendication 8, caractérisé en ce que l'éther-couronne est le dicyclohexyl-18-C-6. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 9, caractérisé en ce que le réactif d'acylation est un ester ou un anhydride mixte d'un acide carboxylique saturé ou insaturé. 11 Procédé selon la revendication 10, caractérisé en ce que le réactif d'acylation est un ester d'un acide carboxylique et de la N-hydroxysuccinimide. 12 Procédé 'selon la revendication 10 ou 11, caractérisé en ce que l'acide carboxylique est l'acide eicosanoïque ou l'acide octadécanoïque. 13 Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 12, caractérisé en ce que le solvant organique utilisé dans la deuxième étape -est choisi parmi le diméthyl éther, le tétrahydrofurane (THF), l'acétonitrile et leurs mélanges. 14 Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 13, caractérisé en ce que dans la deuxième étape, le rapport molaire du réactif d'acylation au co-enzyme A est de 1:1 à 2:1. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 14, caractérisé en ce que l'on réalise la deuxième étape à une température de O à 25 C pendant une durée allant de lh à 10 h. 16 Coenzyme A silylé ou stannylé répondant à la formule suivante: o dans laquelle au moins une partie des hydrogènes labiles H* sont remplacés par un groupe de formule Si R 3 ou Sn R 3 dans laquelle les R qui peuvent être identiques ou différents, sont des groupes alkyle ou aryle. 17 Coenzyme A silylé selon la revendication 16, caractérisé en ce que les R du groupe de formule Si R 3 représentent un groupe alkyle en C 1 à C 4. 18 Acyl-coenzymes A dans lesquels le groupe acyle répond à la formule R 1 CO dans laquelle R 1 est un groupe hydrocarboné comprenant de 20 à 29 atomes de carbone et de O à 6 doubles liaisons.