FR 2701947 A1 19940902 FR 9302295 A 19930222 La présente invention concerne les produits à base d'histamine et plus particulièrement un produit de couplage entre l'histamine ou l'histamine méthyl-substituée et un acide aminé, son procédé de préparation et ses applications tant sur le plan thérapeutique que cosmétologique les propriétés biologiques des dipeptides tels que la -alanyl-histidine sont particulièrement intéressantes dans la mesure où elles contribuent aux phénomènes d'antivieillissement et d'antidégénérescence des tissus et muqueuses. Mais la désactivation enzymatique des dipeptides et en particulier de la B-Alanyl-histidine, entraîne une action "pro-histaminique" résultant entre autres en des réactions d'allergie au niveau cutané qui nuit à son efficacité. Par conséquent, le but principal de l'invention a donc été de mettre au point des produits peptoïdes non métabolisables proches des dipeptides mentionnés ci-dessus, mais qui ne présentent pas les inconvénients dûs à l'action pro-histaminique. Un autre but de l'invention est de réaliser un produit peptoïde tel que défini ci-dessus, mais dont la biodisponibilité est obtenue en acétylant l'extrémité aminée, de sorte que l'hydrolyse de ce groupement par des enzymes du type acétylpeptide hydrolase permette la libération in situ d'un produit actif par effet retard. Encore un autre but de l'invention est de réaliser un produit peptoïde à base d'histamine qui ait des propriétés d'antivieillissement et d'antidégénérescence des tissus et muqueuses. L'objet principal de l'invention est donc un produit pseudo-dipeptide obtenu par couplage entre l'histamine ou l'histamine méthyl-substituée et un acide aminé ayant pour formule: dans laquelle X représente un atome d'hydrogène ou un groupe acétyle, R1,R'l,R2,R'2...Rn,R'n représentent chacun un atome d'hydrogène ou un radical hydrocarboné pouvant être substitué par un ou plusieurs groupements fonctionnels, et n est un entier supérieur ou égal à 2, la liaison covalente avec l'histamine ou l'histamine méthyl-substituée etant une liaison peptidique entre le radical carboxylique de l'acide aminé et le radical amine de l'histamine Parmi les acides aminés répondant à la formule de l'invention, les acides aminés suivants donnent les meilleurs résultats:: la p-alanine de formule H2N - CH2 - CH2 - COOH l'acide y-aminobutyrique de formule H2N - CH2 - CH2 - CH2 - COOH l'acide -aminoisobutyrique de formule l'acide 5-aminovalérique de formule H2N - CH2 - CH2 - CH2 - CH2 - COOH 1' acide 3-phényl-3-aminopropionique 1 'acide 6-aminocaproïque H2N - (CH2)5 - COOH l'acide 8-amino-octanoïque H2N - (CH2)7 - COOH ou les acides aminés suivants dans lesquels l'extrémité aminée a été acétylée. En effet, l'hydrolyse de ce groupement par des enzymes (du type acétylpeptide hydrolase) permet la libération in situ d'un produit actif par effet retard. l'acide N-acétyl-ss-alanine l'acide N-acétyl-3-phényl-3-aminopropionique Toutefois, la ss-alanine est l'acide aminé qui permet d'obtenir un produit pseudo-dipeptide réalisant parfaitement les buts de l'invention. La ss-alanine peut être couplée soit à l'histamine de formule soit à la 1-méthyl-histamine ou l-méthyl-imidoazoléthylamine soit à la 3-méthyl-histamine ou 3-méthyl-imidoazoléthylamine Le produit pseudo-dipeptide péféré dans le cadre de l'invention est la ss-alanyl-histamine de formule Le procédé de préparation du produit pseudo-dipeptide selon l'invention se fait selon le schéma suivant (1) AA + X + Y (2) X-AA-Y + Hist (.2Hcl) -+ X-AA-Hist (3) X-AA-Hist > AA-Hist la première étape du procédé consiste à rendre l'amino-acide (AA) N-protégé par un groupement X, et O-activé par un groupement Y. la N-protection est effectuée de préférence par le remplacement d'un atome d'hydrogène dans le radical amine de l'acide aminé par le groupe ter-butyloxy-carbonyle (BOC) en tant que groupement X. Bien qu'il soit possible de s'en dispenser, l'activation O est une des caractéristiques du procédé d'obtention du produit pseudo-dipeptide selon l'invention. Cette activation réalisée de préférence par estérification de la fonction carboxylique de l'acide aminé par un composé choisi dans le groupe consistant en: alcool de cyanométhyle, o-nitrophénol, 2,4, 5-trichlorophénol, p-nitrophénol, 2,4dinitrophénol, pentachlorophénol, pentafluorophénol, Nhydroxyphtalimide, N-hydroxysuccinimide, 1 -hydroxypipéridine et 5-chloro-8-hydroxy-quinoline. Ainsi, si on utilise le pentafluorophénol en tant que groupement Y, la réaction s'écrit, si R - COOH est l'acide aminé selon l'invention R -COOH + la deuxième étape du procédé de préparation est le ccuplage avec l'histamine qui peut se faire Jvec ou sans agent de couplage, en faisant réagir l'acide aminé N-protégé et O-activé avec l'histamine de préférence sous forme de dichlorhydrate. Il faut noter que l'agent de couplage n'est pas indispensable avec un acide aminé O-activé. le couplage sans agent de couplage s'effectue dans un solvant organique (par exemple chloroforme,l,2- dimethoxyethane, diméthylformamide...) en présence d'acide (par exemple acide acétique...) ou de base (par exemple triétylamine...) dans un solvant hydro-organique (par exemple eau-pyridine ou eau-1,2-diméthoxyethane...) en présence de base (par exemple soude ou bicarbonate de sodium...) puis d'acide (par exemple acide chlorhydrique...); dans des conditions catalytiques (par exemple imidazole, N ethylmorpholine...)... Si un agent de couplage est utilisé, cet agent peut être par exemple le dicyclohexyl-carbodiimide, le 1 isobutyloxycarbonyl-2-isobutyloxy-l, 2-dihydroquinoline, le carbonyldiimidazole, Woodward Reagent K, a-chlorovinyl ethyl ether, a, a-dichlorodiethyl Ether, dichloromethyl methyl ether, DCC et additifs, DCC-pentachlorophénol, DCCpentafluorophénol, cyanamide, cetenimines et cétènes, sels d'oxazolinium, EEDQ ('l-ethoxycarbonyl-2-ethoxy-1,2dihydroquinoléine), ynamines acylphosphoniums, triphénylphosphite et imidazole, complexes de cuivre II, Sil4... Dans la troisième étape, le groupement X ou Nprotecteur est éliminé. Cette élimination se fait, selon les groupements protecteurs, par hydrogénolyse, par réduction par le sodium dans l'ammoniac liquide, par hydrazinolyse, par acidolyse, par hydrolyse ou par voie enzymatique. La solution préférée consiste à effectuer cette étape de déprotection par acidolyse par l'acide chlorhydrique dans l'acide acétique. Dans ce dernier cas, le produit pseudodipeptide est obtenu sous forme de chlorhydrate, et il faut le traiter par des résines pour recueillir le produit base. A titre d'exemple, le procédé de préparation de la Balanyl-histamine peut se faire de la façon suivante: 370 mg de chlorhydrate d'histamine (2 mmol) sont dissous dans 7 ml de diméthylformamide (DMF). 0.56 ml de triéthylamine (4 mmol) et 800 mg de N-terbutyloxyzarbonyl-ss- alanyl-pentafluorophényl-ester (2.25 mmol) sont ajoutés au mélange. Le mélange est agité 30 minutes à 0*C puis 3 heures à température ambiante. Le résidu est filtré puis lavé avec du diméthylformamide. Le diméthylformamide est évaporé sous vide. De l'éther est ajouté au résidu et le composé huileux N-terbutyloxycarbonyl-ss-alanyl-histamine est recueilli par décantation.Le chlorhydrate de 13-alanyl-histamine est ensuite obtenu par traitement du N-terbutyloxyzarbonyl-ss- alanyl-histamine par de l'acide chlorhydrique en solution dans l'acide acétique pendant 30 minutes. L'acide acétique est partiellement évaporé sous vide et de l'éther est rajouté au résidu. Le résidu est alors filtré. La recristallisation par le système éthanol/méthanol (50/50) - éther éthylique conduit à l'obtention de 300 mg de chlorhydrate de ss-alanyl- histamine. Enfin, la ss-alanyl-histamine base est obtenue par passage du chlorhydrate correspondant sur des résines. Propriétés pharmacologigues Comme il a déjà été mentionné, les produits pseudodipeptides selon l'invention présentent des propriétés d'antivieillissement et d'antidégénérescence des tissus cutanés et muqueuses. Ces propriétés sont dues de façon générale à l'activité antioxydante de ces produits, et en particulier aux activités anti-radicaux libres, pseudo péroxydase, antiréticulation, et de régénération tissulaire qu' ils démontrent. En effet, il est bon de rappeler que la dégénéréscence ou vieillissement des tissus est la conséquence de facteurs intrinsèques, d'ordre physiologique, et de facteurs extrinsèques d'ordre nutitionnels, toxiques, W...Parmi ces facteurs sont considérés les radicaux libres produits in vivo dans des conditions biologiques normales, et formés en excès lors d'agressions diverses comme le rayonnement ultra violet. Les radicaux libres (RL) sont des atomes, des ions ou des molécules qui possèdent un électron non apparié sur leur orbite externe. Cette structure électronique leur confère des propriétés paramagnétiques et une très grande réactivité visà-vis des molécules environnantes. Formés dans les milieux biologiques, les RL dérivés de l'oxygène réagissent, par réaction en chaîne, avec les composants cellulaires et extracellulaires qu'ils dégradent s'ils ne sont pas eux-mêmes détruits par des enzymes spécifiques ou piégés par des substances protectrices. La plupart des constituants cellulaires représentent des cibles potentielles pour l'attaque des radicaux libres. Les acides gras insaturés entrant dans la composition de phospholipides membranaires sont particulièrement sensibles à leur agression. Leur oxydation conduit à une désorganisation membranaire, à la perte des composants intracellulaires, à la formation d'aldéhydes (toxiques) et de complexes lipoprotéiques (lipofuschine). Les protéines sont également des cibles pour les radicaux libres, et leur attaque conduit à la dénaturation des protéines, à leur coupure. L'altération du tissu conjonctif par les RL est un élément important de leur action déstructurante. Les constituants glucidiques sont également attaqués, l'acide hyaluronique est dépolymérisé, les récepteurs membranaires glycoprotéiques sont altérés. Enfin, les acides nucléiques sont des cibles d'une grande importance fonctionnelle. En résumé, les RL peuvent altérer le patrimoine génétique mais aussi les structures des cellules. Ces processus peuvent survenir de façon aigüe, par exemple lors de traumatismes ischémiants ou inflammatoires, ou bien s'exprimer de manière chronique et participer à la cancérogenèse ainsi qu'au vieillissement. De multiples arguments expérimentaux, analytiques et épidémiologiques militent en faveur de la théorie selon laquelle l'accumulation de dommages biochimiques provoqués par les RL constituerait le processus essentiel du vieillissement. Au plan analytique, l'accumulation des lipofuschines qui représentent un marqueur assez fidèle de la sénéscence en est une illustration. Au plan épidémiologique, il est clair que l'exposition solaire et par conséquent la formation de RL, est une cause de vieillissement cutané prématuré comme elle est un facteur de risque cataractogène majeur. En ce qui concerne la glycation, des biochimistes spécialistes du diabète ont remarqué que l'établissement de liaisons croisées entre des protéines de type collagène augmentent avec l'âge des individus. Chez les diabétiques le taux d'apparition de ces liaisons au sein du collagène est fortement accéléré. Ces réactions chimiques entre le glucose et les protéines sont d'ordre non enzymatique. Elles sont connues depuis des dizaines d'années par les chimistes de l'alimentation sous le nom de réaction de Maillard. Elles s'effectuent au hasard des sites protéiques et créent des liaisons glucose-protéine. Ces dernières semblent déclencher une série de réactions chimiques qui entraînent une accumulation de liaisons croisées irréversibles entre les protéines. Ces liaisons glucose-protéine dont le nombre augmente avec l'âge, participent au raidissement, à la rigidification des tissus, phénomènes caractéristiques du tissu vieillissant. Ce phénomène concerne surtout les protéines à longue durée de vie (protéines du cristallin, collagène, myéline). Ce type de réactions qui se produit in vivo est responsable d'altérations tissulaires et cellulaires entraînant des phénomènes de vieillissement prématuré des diabétiques dûs à une exposition à long terme à un taux élevé de glucose. L'activité anti-radicaux libres des produits pseudodipeptides selon l'invention s'exerce pour la protection du désoxyribose, élément constitutif de l'ADN, contre l'oxydation due aux formes radicalaires oxygénées Le test ci-dessous illustre la protection du désoxyribose par la -alanyl-histamine. PROTOCOLE décrit dans Biochem. J., (1984), vol 224: -substrat d'oxydation: désoxyribose, -système de productions d'anions superoxydes: xanthine oxydase/hypoxanthine, -détection: acide thiobarbiturique/malondialdéhyde (MDA) % inhibition Témoin O L-carnosine (lOmM) 37 ss-alanyl-histamine(lOmM) 49 Cette activité s'exerce également pour la protection des phospholipides membranaires. Les radicaux libres oxygénés réagissent avec les phospholipides pour former des produits instables qui, en se dégradant, entraînent la rupture de la membrane cellulaire. Les tests suivants illustrent cette action. PROTOCOLE 1 -substrat d'oxydation: liposomes de phosphatidycholine -système de production de radicaux libres: Fe/acide ascorbique, -détection: acide thiobarbiturique (TBA)/ malondialdéhyde (MDA) Protocole décrit dans "Anti-oxydant activity of L carnosine, a natural histidine-containing dipeptide in cristallin lens". Biochem. Biophys. Acta (1989), vol 1004, p.363-371. nmol MDA mg phospholipides d'inhibition Témoin(sans inhibiteur) 4,4 O ss-alanyl-histamine(lOmM) 2,5 42 Carnosine(lOmM) 2,0 53 Histamine(lOmM) 6,8 -63 Histamine l M 6,4 -45 Histidine lmM 6,6 -48 PROTOCOLE 2: -substrat d'oxydation: acide linoléique (0,25 mg/ml), -système de production de radicaux libres: Fe/acide ascorbique, -détection: acide thiobarbiturique (TBA) /malondialdéhyde (MDA). nmol MDA/ 0 mg acide d'inhibition linoléique Témoin(sans inhibiteur) 7,95 O ss-alanyl-histamine(25mM) 4,25 47 Carnosine(25mM) 3,24 59 Imidazole(25mM) 6,95 il p-alanine(25mM) 7,91 O Histamine(25mM) 10,15 -32 ss-alanine(25mM) + histamine(25mM) 9,06 -15 L'activité du type peroxydase des produits pseudodipeptides de l'invention s'exerce par la réduction des peroxydes de type L-OOH résultant de l'attaque des lipides membranaires par des radicaux axygénés.Ces formes péroxydées peuvent se fragmenter, entraînant la rupture de la membrane cellulaire. Ce mode d'action est complémentaire de l'activité antiradicalaire permettant ainsi une désactivation particulièrement efficace du processus de dégradation des membranes biologiques. Ce mode d'action est appelé "activité peroxydase" par analogie avec certains enzymes (catalases, glutathione-péroxydase) qui agissent sur le péroxyde d'hydrogène. Un produit pseudo-dipeptide selon l'invention tel que la ss-alanyl-histamine inhibe la réaction L-OOH > produits de dégradation (tétradiènes, cétodiènes), en réduisant le péroxyde L-OOH > L-OH Des tests effectués avec des composés peroxydés tels que le 13-monoperoxyde d'acide linoléique ou les hydropéroxydes de phosphatidylcholine montrent qu'un produit pseudo-dipeptide selon l'invention, la ss-alanyl-histamine se comporte de façon comparable à la ss-alanyl-histidine ou carnosine. Le comportement réducteur biologique de ce produit a été comparé à un agent réducteur chimique, le borohydrure de sodium qui inhibe la réaction de dégradation de façon identique. Les tests suivants illustrent cette activité PROTOCOLE 1 L'évolution des lipides péroxydés est évaluée à l'aide de 3 méthodes: 1-) mesure spectrophotométrique à 233 nm, E = 2,8 104 M-1Cm-1 (Privett, O.S. Nickell, c, Lundberg, W.O. and Bayer,P.D. (1955) J. Am. Oil Chem. Soc. 32,505-511). 2*) Dosage iodométrique: méthode de Hicks M. et Gebicki J.M. Analyt. Biochim. (1979) vol 99, p 249-253. 3g) chromatographie sur plaque silicagel (hexane/éther/acide acétique 8/7/0,1). Activité "péroxydase" #mol de L-OOH réduites/heure Témoin (a) 36,7 t 14,7 ss-alanyl-histamine(lOmM)(b) 138,1 + 18,7 5-alanyl-histamine(20mM)(b) 187,5 + 15,7 NaBH4 (lOmM) (c) 312,5 + 14,5 (a) 13-monopéroxyde d'acide linoléique 0,5 mM sans agent réducteur (préparation selon la méthode de H.W. Gardner (1975) Lipids, vol 10, p.248-252). (b) activité entièrement inhibée par l'addition de 0,5 mM de EDTA. (c) agent réducteur chimique. PROTOCOLE 2 L'activité type "péroxydase" a également été évaluée sur un modèle "liposome". Les hydropéroxydes de phosphatidylcholine (PC-OOH) sont préparés selon un protocole similaire à celui déjà décrit pour le monopéroxyde d'acide linoléique. La réduction des formes péroxydes est suivie en dosant les péroxydes restants selon une méthode établie (Hicks M and Gebicki J.M (1979), Anal. biochem., vol 99 p 249-253. Nb moles de PC-OOH réduites/Nb moles de PC total x heure 5-alanyl-histamine(lOmM) 0,77 x10-3 L-carnosine(lOmM) 3,16 x 10-3 5-alanyl-histamine(25mM) 1,56 x 10-3 L-carnosine(25mM) 3,65 x 10-3 On s'aperçoit, à la lecture des tests ci-dessus que, dans certains cas, la L-carnosine donne des résultats supérieurs à la ss-alanyl-histamine. Cependant, la désactivation enzymatique au niveau cutané de la L-carnosine ne permet pas d'espérer d'aussi bons résultats in-vivo. L'activité antiréticulation des produits pseudodipeptides selon l'invention peut s'exercer soit par une action anti-"lipofuscine", soit par une action antiglycation. La péroxydation des acides gras par les radicaux libres ne détruit pas seulement ces acides mais inactive les protéines avec formation de polymères "cross-linked". ce processus qui se fait au détriment à la fois des enzymes et des organites cellulaires, est considéré pour jouer un rôle dans le processus de vieillissement. Ces polymères dérivés d'une liaison croisée entre des acides gras polyinsaturés et des protéines sont appelés lipofuscines. Les pseudo-dipeptides de l'invention fournis pour renforcer les défenses naturelles de l'organisme permettent de limiter la détérioration des protéines par ce processus. Quant à l'action antiglycation, elle est due au fait que les produits pseudo-dipeptides selon l'invention sont des composés nucléophiles aminés qui s'opposent à la réticulation des protéines par les sucres, en intervenant au niveau des intermédiaires de la réaction de Maillard (voir plus haut). Dans les produits de l'invention c'est une amine nucléophile stériquement peu encombrée qui confère cette propriété. Enfin, l'activité de régénération cellulaire dans le processus de cicatrisation a été démontré pour les produits pseudo-dipeptides selon l'invention. En effet, le processus de cicatrisation comporte trois phases: une phase vasculaire et inflammatoire, une phase proliférative ou il se produit une prolifération des fibroplastes et une néosynthèse du collagène, et une phase de remodelage au cours de laquelle il se produit un équilibre entre collagènolyse et biosynthèse. Dans ce processus, les produits pseudo-dipeptides agissent en tant qu'agents chimiotactiques ou activateurs qui provoquent l'arrivée vers le foyer cicatriciel des cellules participant à la reconstruction des tissus. Un test de mise en évidence de l'activité d'un produit pseudo-dipeptide selon l'invention, la ss-alanyl- histamine, sur la réparation du tissu conjonctif cutané a été pratiqué chez le rat. Cette expérimentation a été effectuée sur un lot de 12 rats Wistar. Une incision d'une longueur de 12 mm impliquant en profondeur l'ensemble épiderme et derme. A la fin de la cicatrisation les rats ont ensuite été traités quotidiennement par application topique de la ss-alanyl- histamine pendant trois semaines. En même temps, un lot témoin de 12 rats a été traité avec un placébo pendant la même durée d'expérimentation. Après les 3 semaines d'expérimentation, un prélèvement du tissu cicatriciel a montré que la cicatrice est peu ou pas visible en surface. L'épiderme est bien reconstitué. les couches cornées sont identiques à celles de l'épiderme normal voisin. Elles montrent un aspect variable suivant que l'on considère les animaux témoins ou les animaux traités. La zone dermique en voie de cicatrisation apparaît comme une bande relativement étroite s'étendant de l'épiderme à la couche musculaire. La limite avec la zone non lésée est nette, sans aspect de transition. La densité et l'aspect des éléments du tissu conjonctif sont sensiblement les mêmes dans la couche capillaire et dans la couche profonde. Cependant, les fines fibres élastiques ou de réticuline sont généralement plus nombreuses dans les couches dermiques superficielles. La substance fondamentale est plus abondante que normalement comme le montrent les colorations par le bleu de toluidine (métachromasie à pH acide et technique de Lissberg). Par contre les rats du lot témoin présentent un épiderme avec bourrelet cicatriciel d'une épaisseur supérieure à la normale. On note une hyperplasie fibroblastique et néovasculaire sur l'ensemble de la région cicatricielle. Les fibroblastes sont en outre modérément hypertrophiés. Quelques rares faisceaux collagènes épais peuvent s'observer, mais la plus grande partie des faisceaux sont courts et d'épaisseur moyenne. Applications thérapeutiques et cosmétologiques Les propriétés pharmacologiques énoncées ci-dessus, dont la caractéristique essentielle est l'action d'antidégénérescence des tissus et muqueuses, conduisent à des applications thérapeutiques et cosmétologiques appréciables des produits pseudo-dipeptides selon l'invention. Une application thérapeutique importante est le traitement de la cataracte. Les causes des différentes cataractes sont diverses. Les mécanismes impliqés dans ces pathologies, qu'elles soient du type "cataracte sénile" ou "cataracte du diabétique" sont regroupés en deux catégories: les mécanismes oxydatifs et les mécanismes de réticulation du type glycation. Comme on l'a vu précédemment, les propriétés antioxydantes des pseudo-dipeptides s'exerçant en particulier par l'activité anti-radicaux libres, et également leur activité antiréticulation, font des produits pseudodipeptides selon l'invention des produits efficaces pour soigner la cataracte. De même, les propriétés de régénération cellulaire démontrées par les pseudo-dipeptides selon l'invention permettent leur application sur les tissus conjonctifs dans des traitements variés tels que la réparation des muqueuses après brûlures ou après traitement chimiothérapique et radiothérapique, la cicatrisation des tissus et la régénération du tissu conjonctif perturbé. L'action d'antivieillissement des pseudo-dipeptides de l'invention due aux propriétés antiradicalaires, d'antiréticulation et de régénération cellulaire, permettent d'envisager leur utilisation dans des applications thérapeutiques orientées vers la prévention du vieillissement cutané. Enfin, les propriétés antioxydantes des pseudodipeptides selon l'invention peuvent être mises à profit dans des applications cosmétologiques sous forme d'huile ou tout autre préparation cosmétique dont le but est de préserver les cellules cutanées de l'oxydation. Les applications des produits pseudo-dipeptides de l'inevention ont été mises en évidence dans les exemples suivants qui donnent les doses et les formes administrables des produits utilisés comme médicaments. Exemple 1 Cet exemple concerne l'utilisation de la B-alanyl- histamine pour soigner des patients atteints de cataracte. L'étude a été conçue comme une évaluation prospective des modifications de l'opacité du cristallin chez les patients atteints de la cataracte. Tous les patients ont subi un examen ophtalmique initial. celui-ci incluait l'établissement de l'historique médical du patient, une mesure de l'acuité visuelle à correction maximale, des ophtalmoscopies directes et indirectes, une évaluation des opacités avec la lampe à fente, une classification clinique du cristallin à mydriase maximale, une classification selon le type de cataracte, et des photographies du cristallin par rétroillumination. De plus, des échantillons de sang ont été prélevés au départ, puis en suivi pour les analyses chimiques. L'ensemble a permis d'établir l'état initial des patients avant traitement (définition d'une "ligne de base"). Des suivis d'examens ophtalmiques furent effectués toutes les 2 semaines pendant 2 mois, puis chaque mois. Ils incluaient l'acuité visuelle maximale après correction, des ophtalmoscopies directes et indirectes, un examen à la lampe à fente, et après une dilatation maximale de la pupille (en excluant les glaucomes primaires à angle ouvert), une classification clinique des cristallins, une classification de la cataracte. Ont été prises également des photographies du cristallin observé par rétroillumination ou avec la lampe à fente. Parallèlement, les changements du cristallin ont été examinés chez tous les patients en utilisant le microscope à la lampe à fente de Zeiss. Les observations photographiques obtenues avec cette technique incluaient un examen initial, des études intermédiaires et un examen final à la fin de la période de traitement. En utilisant la technique de la lampe à fente, le cristallin a été photographié couche par couche afin de visualiser tout le segment antérieur de l'oeil, de la cornée à la capsule postérieure Avec cette technique, un examen réflexe à la lumière rouge a été réalisé, selon une technique de retroillumination conventionnelle. Les modifications du cristallin ont par la suite été classées selon la localisation anatomique et l'importance de la modification. Des opacités corticales ont été évaluées en rétroillumination et photographiées. Le film a ensuite été soumis à une mesure de densitométrie linéaire avec un microdensitomètre. Les valeurs d'opacité ont été reportées en valeur relative en utilisant une gamme d'opacification étalon. Les mesures d'opacité corticale ont été étalonnées en tenant également compte de la surface totale exposée au rayonnement. Les opacités sub-oculaires postérieures ont été mesurées en rétroillumination par la plus grande hauteur, de la base au sommet, et la plus grande largeur, en utilisant l'échelle de la lampe à fente. Des photographies du cristallin furent aussi prises sur des opacités nucléaires et corticales et par la suite furent graduées. Les différents clichés pris avec la lampe à fente ont été analysés à l'aide d'un "tube plumbicon". Cet appareil permet de transposer avec une grande fidélité une mesure d'intensité lumineuse en un signal électrique qui est entré et stocké dans un système d'analyse d'image informative. A l'aide d'un programme spécifique, l'image du cristallin ainsi "numérisée" peut être reproduite sous la forme de graphes à 2 ou 3 dimensions. Une description détaillée de cette méthode de traitement de l'image est donnée dans l'article de Babizhayev M.A. Zhukotskii A.V. and Sologub A.A. (1992), "Image analysis of the lens opacities induced in developing chick embryo by glucocorticoïd", Exp. Eye Res. 55, 521-537. Des exemples de ces images reconstruites sont fournies en Annexe 1. Les histogrammes représentés montrent sur un exemple concret l'intérêt d'une telle méthode d'évaluation. Un cas de cataracte subcapsulaire postérieure est étudié avant et après 2 mois et demi de traitement en administration topique (instillations) avec un collyre à 1% de -alanyl-histamine. Les histogrammes donnent la distribution quantitative des opacités avec un pic d'intégration de 58,4418,14 avant traitement, et 44,95+8,77 après 2,5 mois de traitement. Ces analyses révèlent une régression partielle des opacités dans la région postérico-subcapsulaire du cristallin. Les résultats obtenus avec cette méthode sont en accord avec les observations cliniques classiques. Dans cette étude, ll a été déterminé différents groupes, à savoir: un groupe 1 de référence, avec des patients non traités (5 patients, 7 yeux), un groupe 2, auquel il a été administré un collyre qui était un soluté isotonique contenant 1% de -alanylhistamine à pH 7,4. Il a été procédé à deux administrations locales par jour (10 patients, 15 yeux) un groupe 3, qui a été soumis au même traitement que le groupe 2, stimulé par un traitement d'attaque durant les deux premières semaines, à savoir: 2 injections sous conjonctivales 2 fois par semaine, de 0,10 et de 0,15 ml du soluté défini pour le groupe 2 (3 patients, 4 yeux) un groupe 4, qui a reçu une administration locale sous forme de collyre d'un soluté isotonique deux fois par jour (5 patients, 7 yeux), le groupe 4 étant comme le groupe 1, un groupe de référence. Suivant le protocole décrit plus haut, on détermine des valeurs de la densité optique du cristallin en fonction de son opacité, ainsi que l'acuité visuelle, et le tout sur 24 mois. En prenant ces deux paramètres, on obtient les tableaux donnant les résultats concernant la modification de l'acuité visuelle au bout de 24 mois en annexe 2, et les résultats concernant la modification de l'opacité visuelle au bout de 24 mois en annexe 3. On peut conclure que suivant les deux paramètres observés, l'administration du produit est très significative dans l'amélioration de la vision et la régression de la cataracte. De la même façon, on a expérimenté une forme de collyre à base de N-acétyl-ss-alanyl-histamine à raison de 1% dans un soluté isotonique, qui donne des résultats conformes au but de l'invention. Avec une seule administration locale quotidienne, les résultats ont été superposables à ceux obtenus précédemment. Ce constat peut être expliqué par une meilleure biodisponibilité de la forme acétylée. Bien que l'exemple ci-dessus fait état de collyre, on peut administrer le produit selon l'invention sous la forme de toute formulation oculaire communément acceptée telle qu'un gel ou autre (voir réf. "Remington's parmaceutical sciences handbook" Hack Pub. Co. USA contenat de 1 à 100 mM de (3-alanyl-histamine. Exemple 2 On a mis en évidence l'activité réparatrice sur les muqueuses des produits selon l'invention en utilisant des formulations à de très faibles doses. On a pu étudier cette action sur des gingivo-stomatites d'origines diverses (port de prothèses dentaires mal adaptées, administration par erreur de liquide corrosif, et cobaltothérapie de la sphèreoropharingée). Dans tous les cas, les causes de la formation et détérioration des muqueuses gingivales et buccales ont été stoppées. En plus des traitements classiques adaptés et administrés systématiquement, il a été remis à 50% des patients, un gel aqueux aromatisé à l'orange contenant 0,28% de N-acetyl-3-phenyl-3-aminopropionyl histamine. Les observations sur ces différents cas ont montré une excellente tolérance et une réduction significative du temps réparateur allant de 20 à 55%. On peut conclure à une activité positive en respectant la dose de formulation. Exemple 3 On a pu mettre en évidence les propriétés cicatrisantes en utilisant une crème cicatrisante de composition: Nanospheres (diamètre lOOnm) contenant 5% de y-amino butyryl-histamine lOg Excipient hydrodispersible qsp lOOg pH 6,5 Cette crème a été appliquée deux fois par jour par légers effleurages sur des cicatrices fermées. Les zones cicatricielles et péri-cicatricielles ont été massées jusqu'à pénétration de la pommade. Les cas étudiés étaient trois cicatrices de moins de 14 mois post-chirurgicales, dont deux avec chéloides et cinq séquelles acnéiques Dans tous les cas, il a été observé une amélioration significative de la cicatrice, une réduction des bourrelets et infractuosités de la peau jusqu'à disparition totale dans deux cas. En parallèle, il a été noté une restauration d'un teint uniforme avec disparition des turgescences. Ces résultats sont significativement positifs. Exemple 4 La pommade utilisée dans cet exemple a également été utilisée pour le traitement des brûlures de 1- et 2 degré superficiel. acide parahydroxycinnamique 0,1 g essence de menthe 0,3 g essence de lavande 0,5 g menthol nanosphérisé 0,05g ss-aminoisobutyryl-histamine 0,5 g excipient hydrodispersible qsp 100 g Dès l'apparition de la brûlure, on applique la pommade en fine couche. On répéte l'application toutes les heures dans un premier temps, jusqu'à cessation de la douleur. Sur les brûlures du ler degré, l'érythème disparaît rapidement. Sur les brûlures du 2ème degré superficielles avec flyctènes et oedème sur épiderme rougi suivant la surface brûlée, on observe une résorption de l'oedème dans les 2 heures, une régression de la douleur dans les 3 ou 4 heures. Dans les deux à trois jours qui suivent, les tissus sous-jacents sont régénérés plus rapidement. Il est possible de libérer les vésicules du liquide retenu par ces dernières avec formation d'une nouvelle couche épidermique et élimination des tissus morts. On note une accélération de la réparation épidermique, d'une part, et une excellente qualité, d'autre part. Exemple 5 L'activité antiradicalaire des produits pseudodipeptides de l'invention a été mise en évidence dans l'exemple suivant de formulation cosmétique utilisable comme lotion after-shave: 6-aminocaproyl-histamine nanosphérisé à 5% 16 g excipient liquide parfumé hydroalcoolique 6 qsp 100 g une application régulière après rasage permet de conserver une peau en bon état. Exemple 6 En se basant sur la même activité que l'exemple cidessus, une crème solaire a été réalisée avec la formulation suivante: 3 phényl-3 -aminopropionyl-histamine lg excipient hydrolipidique microdispersé qsp lOOg Différents cas ont été étudiés dans les salons esthétiques lors de séances d'irradiation WB. Pour des hâles équivalents, lorsque l'on applique la crème après exposition, l'épiderme présente une meilleure qualité dans les jours qui suivent les irradiations. Exemple 7 Toujours basée sur la même activité, on a réalisé une crème entretien visage de composition suivante: solution de 5-aminovaleryl histamine nanosphérisée à 4% 20g ion Cu++,Fe++ (sous forme d'acétylméthionine) excipient hydrodispersible qsp lOOg pH 6,5 Comme crème antivieillissement, avec deux applications quotidiennes, on a noté une régression des ridules, une peau plus souple et plus colorée. Comme crème d'entretien réparatrice des agressions diverses, une application quotidienne suffit. On applique la crème par massage jusqu'à absorption totale, les Nanosphères vont former un film homogène avec libération prolongée. Un maquillage est tout à fait possible après l'application de cette crème. On observe au niveau de la peau du visage, des résultats visibles stimatisés par les critères dits de bonne santé, souplesse, éclat, couleur uniforme et bonne hydratation. Exemple 8 Les produits pseudo-dipeptides peuvent aussi être utilisés pour protéger des huiles cosmétiques facilement oxydables, riches en acides gras insaturés formulées en cosmétique ou diététique. Il a été nécessaire d'ajouter 15 à 25 mmol par litre d'huile de produits pseudo-dipeptides de l'invention selon la formulation suivante: 20 mmol de ss-alanyl-histamine acétylée huile extraite de micro algues cultivées en eau de mer très riches en acides gras insaturés, dont EPA qsp pour 1 1 On a comparé le vieillissement de cette huile protégée à l'huile non protégée au bout d'un mois par le dosage de la malondialdéhyde. Pour l'huile non protégée, on observe une augmentation importante de la teneur en dialdéhyde, ce qui prouve bien l'activité de la ss-alanine histamine acétylée dans la protection contre l'oxydation. Exemple 9 Selon le même principe que précédemment on a préparé l'huile cosmétique suivante 25 mmol de 8-amino-octanoyl histamine huile de rosa mosqueta qsp pour 1 1 On a comparé les produits huile protégée/huile non protégée au bout de 5 semaines par la mesure de l'indice d'acide. Le dosage de ce dernier, dans ce cas présente une augmentation significative (valeur supérieure à 10 pour l'huile non protégée). On peut donc en conclure que la présence de 8amino-octanoyl histamine a une action antioxydante sur l'huile de rosa mosqueta. Tous les exemples ci-dessus ont montré que les pseudodipeptides selon l'invention sont actifs dans une fourchette de 1 à 100 millimoles d'actifs par litre avec un pic principal de 10 à 25 mM. ANNEXE 1 DISTRIBUTION QUANTITATIVE DE l'OPACITE DISTRIBUTION L I 1 I I I I i I I 1 I 1 tI I~ O i D I- I Q j ~=== C H I t~ Q o 1-s DISTRIBUTION t t t t I 1 1 C i 1 i I 1 I I L 3 BeaPe-gi p H H Ct o ANNEXE 2 MODIFICATION DE L'ACUITE VISUELLE AU BOUT DE 24 MOIS TABLEAU 1 PATIENTS NON TRAITES et TRAITES avec PLACEBO (Groupe 1 et 4) Aculité AMEUORATION ETAT Nombre DETERIORATION visuelle do yeux de L'ACUITE VISUELLE STATIONNAIRE DE L'ACUITE VISUELLE de dépsrt + ++ +++ + ++ +++ 20/25 2 - - - - 2 20130 1 1 o . - - 20/40 3 - - - 1 1 1 20/50 1 - - 0 - - 1 20/60 2 - - 1 20/70 t ~ 1 1 20/100 0 201200 3 1 - I 1 1 - - - - - 1 14 2 0 0 2 5 5 TABLEAU 2 PATIENTS TRAITES (Groupe 2 et 3) Acuité AMEUORATION ETAT DETERIORATION Nombre de L'ACUITE VISUELLE STATIONNAIRE DE L'ACUITE VISUELLE visuelle de yeux de départ + ++ +++ + ++ +++ 20/25 1 I - - - - - 20/30 5 1 4 - - - - 20/40 4 1 3 - - - 20/50 2 1 1 - - - - 20/60 - 20/70 2 1 1 - - - - 201100 4 1 2 I 1 20/200 1 - 1 - - 0 - - 19 5 il 2 0 1 0 ANNEXE 3 MODIFICATION DE L'OPACITE VISUELLE AU BOUT DE 24 MOIS TABLEAU 1 PATIENTS NON TRAITES et TRAITES avec PLACEBO (Groupe 1 et 4) DIMINUTION ETAT AUGMENTATION DE DE STATIONNAIRE DE MODIFICATION L'OPACITE L'OPACITE 5 a 9% 8 10 à 14% - - 2 15à19% 1 2 20 à 24% - 0 + 25% - 1 1 13 TABLEAU 2 PATIENTS TRAITES (Groupe 2 et 3) % DIMINUTION ETAT AUGMENTATION DE DE STATIONNAIRE DE MODIFICATION L'OPACITE L'OPACITE 5 à 9% 3 - 10 à 14% 5 - 15à19% 5 20 à 24% 1 + 25% 5 19 REVENDICATIONS 1. Produit pseudo-dipeptide à base d'histamine caractérisé en ce qu'il est obtenu par couplage entre l'histamine ou l'histamine méthyl-substituée et un acide aminé ayant pour formule: dans laquelle X représente un atome d'hydrogène ou un groupe acétyle, R1, R'1, R2, R'2...Rn, R'n représentent chacun un atome d'hydrogène ou un radical hydrocarboné pouvant être substitué par un ou plusieurs groupements fonctionnels, et n est un nombre entier supérieur ou égal à 2, la liaison covalente avec l'histamine ou l'histamine méthyl-substituée étant une liaison peptidique entre le radical carboxylique de l'acide aminé et le radical amine de l'histamine. 2. Produit pseudo-dipeptide selon la revendication 1 caractérisé en ce que l'acide aminé a pour formule: dans laquelle R1 est un atome d'hydrogène ou un radical phényle, R2 est un atome d'hydrogène ou un radical méthyle, et m est supérieur ou égal à O et inférieur ou égal à 3. 3. Produit selon la revendication 1 caractérisé en ce que ledit acide aminé est choisi dans le groupe consistant en ss-alanine, acide y-aminobutyrique, acide ss- amino-isobutyrique, acide 5-aminovalérique, acide 3-phényl3-aminopropionique, acide 6-aminocaproïque, acide 8 aminocaproïque, acide N-acétyl-ss-alanine, et acide N acétyl-3 -phényl-3 -aminopropionique. 4. Produit pseudo-dipeptide selon la revendication 2 caractérisé en ce que X, R1 et R2 représentent un atome d'hydrogène et m = O, ledit acide aminé étant de la ss- alanine, et le produit pseudo-dipeptide obtenu étant la ss- alanyl-histamine de formule: 5. Procédé de préparation du produit selon l'une des revendications 1 à 4 caractérisé par les étapes suivantes: - on rend ledit acide aminé N-protégé par un groupement X, - on rend ledit acide aminé O-activé par un groupement Y, - on couple ledit acide aminé N-protégé et O-activé avec l'histamine, et - on élimine X ou non selon le produit pseudodipeptide utilisé 6. Procédé selon la revendication 5 caractérisé en ce que l'acide aminé est rendu O-activé par estérification de la fonction carboxylique dudit acide aminé. 7. Procédé selon la revendication 6 caractérisé en ce que l'étape d'estérification pour rendre l'acide aminé O-activé est réalisée par la réaction avec un composé choisi dans le groupe consistant en: alcool de cyanométhyle, o-nitrophénol, 2,4,5-trichlorophénol, pnitrophénol, 2,4-dinitrophénol, pentachlorophénol, pentafluorophénol, N-hydroxyphtalimide, Nhydroxysuccinimide, 1-hydroxypipéridine et 5 -chloro-8 hydroxy-quinoline. 8. Procédé selon la revendication 5, 6 ou 7 caractérisé en ce que le produit pseudo-dipeptide est de la ss-alanyl-histamine préparée de la façon suivante: 370 mg de chlorhydrate d'histamine (2 mmol) sont dissous dans 7 ml de diméthylformamide (DMF), 0,56 ml de triéthylamine (4 mmol) et 800 mg de N terbutyloxycarbonyl - B- alanine pentafluorophényl-ester (2,25 mmol) sont ajoutés au mélange, le mélange est agité 30 minutes à OC puis 3 heures à température ambiante, le résidu est filtré puis lavé avec du diméthylformamide, le diméthylformamide est évaporé sous vide, de l'éther est ajouté au résidu et le composé huileux N-terbutyloxycarbonyI- S-alanyl-histamine est recueilli par décantation, le chlorhydrate de ss-alanyl-histamine est ensuite obtenu par traitement du N-terbutyloxycarbonyl-B-alanyl- histamine par de l'acide chlorhydrique en solution dans l'acide acétique pendant 30 minutes, l'acide acétique est partiellement évaporé sous vide et de l'éther est rajouté au résidu, le résidu est alors filtré, la recristallisation par le système éthanol/méthanol (50/50)- éther éthylique conduit à l'obtention de 300 mg de chlorhydrate de ss-alanyl- histamine, et la ss-alanyl-histamine base est obtenue par passage du chlorhydrate correspondant sur des résines. 9. Application du produit selon l'une des revendications de 1 à 4 pour obtenir un médicament destiné à soigner la cataracte. 10. médicament résultant de l'application selon la revendication 9 administré sous forme d'une formulation oculaire communément acceptée telle que collyre ou gel. 11. médicament résultant de l'application selon la revendication 9, administré sous forme d'injections sous conjonctivales contenant environ 1% de 13-alanyl-histamine. 12. Application du produit selon l'une des revendications 1 à 4 pour obtenir un médicament destiné à réparer les tissus et notamment les muqueuses. 13. Application du produit selon l'une des revendications 1 à 4 pour obtenir un médicament destiné à la cicatrisation des tissus. 14. Application du produit selon l'une des revendications 1 à 4 pour obtenir une composition cosmétique régénératrice des tissus cutanés.