FR 2682038 A1 19930409 FR 9112597 A 19911008 VECTEURS VES ICULAI RES INFRACELLULAIRES ET LEURS APPLICATIONS EN COSMETIQUE La présente invention concerne des vecteurs vésiculaires infracellulaires ainsi que leur application dans les compositions cosmétiques. On sait que l'abondance de la matrice extracellulaire qui sépare les constituants cellulaires est l'une des caractéristiques du tissu conjonctif. Cette matrice est à l'origine de différentes fonctions remplies par ce tissu. Elle sert d'élément de support biomécanique et sa composition variée influence le comportement cellulaire. Loin d'être une structure stable, cette matrice est en remaniement constant du fait de l'activité cellulaire qui la synthétise et la modifie. Les changements se produisant au niveau de la matrice extracellulaire peuvent être de nature quantitative ou de nature qualitative. Un déséquilibre entre la synthèse et/ou la dégradation peut contribuer à la mise en place d'une matrice extracellulaire "modifiée" ou pathologique. Une très grande variété des molécules qui composent la matrice extracellulaire (collagènes, protéoglycanes et glycoprotéines) sont par ailleurs synthétisées par les fibroblastes. Le collagène représente un des composants majeurs de la matrice extracellulaire. On connaît actuellement 13 types de collagènes originaires d'une famille d'une vingtaine de gênes. Ces molécules sont formées d'une association de trois chaînes peptidiques en triple hélice alpha. Dans la partie hélicoïdale, une séquence d'amino-acide se répète, où la glycine précède souvent une proline et une hydroxyproline. La structure protéique spécifique permet aux collagènes d'exercer différentes fonctions au sein du tissu conjonctif. Parmi les différents types de collagène, les collagènes de type I et lil constituent le produit de synthèse majeur des fibroblastes. Emonard et Grimaud (Cellular and Molecular Biology, 36 (2) 131-153 - 1990) ont montré que les fibroblastes peuvent contrôler la qualité et la quantité des collagènes non seulement par la diminution de la synthèse, mais aussi par la synthèse des enzymes de dégradation correspondants. Ainsi, la cellule fibroblastique peut, à elle seule, contrôler l'ensemble du dépôt matriciel conjonctif. Cette cellule fibroblastique est de plus influencée en permanence par des facteurs solubles (cytokines) et par des facteurs insolubles (les composants matriciels). Le résultat de ces interactions conditionne la fonction fibroblastique vers une activité de synthèse ou de dégradation à l'égard de la matrice extracellulaire. Les fibroblastes constituent donc une pièce fondamentale dans la physiologie du tissu conjonctif et le contrôle de ses fonctions est d'une importance capitale dans le domaine cosmétique. Le contrôle de la synthèse du collagène par les fibroblastes est d'une importance majeure pour la physiologie du tissu conjonctif. En effet, le fibroblaste est la cellule mésenchymateuse responsable de la synthèse, de l'organisation et du remodelage de la matrice conjonctive. Parmi les différentes molécules synthétisées par les fibroblastes, nous avons vu que les collagènes de type I et III sont quantitativement les plus importants. De ce fait, I'utilisation de la culture de fibroblastes permet d'analyser de manière précise l'action des différentes molécules sur l'activité de synthèse ou de dégradation du collagène. Un grand nombre de drogues ou molécules ont déjà été décrites comme susceptibles de modifier la fonction fibroblastique (Bissel et Coll, Hepatology ,vol. 1 1 n" 3,1990 p. 488-498 - Emonard et Grimaud, in Cellular and Molecular Biology, 36 (2) 131-153 - 1990 - Kovacs in ImmunologyToday Vol. 12 ,N 1, 1991). Certaines de celles-ci sont capables de stimuler la synthèse du collagène par les fibroblastes : I'acide ascorbique (Chojkier et coll - Jal of Biological Chemistry - Oct. 5,1989 p. 16957 - 16962), les cytokines comme l'interleukine-1, le facteur de croissance dérivé des plaquettes(PDGF) (Kovacs), les peptides dérivés du collagène (Pacini et coll. Res. Comm. in Chemical Pathology and Pharmacology Avril 1990 p. 89-101). D'autres molécules ont été étudiées pour inhiber la synthèse du collagène et parfois induire la synthèse d'enzymes de dégradation (collagénases). Les plus connues sont les hormones corticoïdes, les cytokines comme le facteur dérivé de la nécrose tumorale (TNF) et les interférons ; voir: Bissel et Colt, Emonard et Grimaud, Granstein et coll. (The Jal of Investigative Dermatology suppl. déc.1990) et Kovacs. On a toutefois constaté que les milieux nutritifs les meilleurs ne permettaient pas d'augmenter la teneur en acides aminés au sein des cytoplasmes cellulaires. Or on sait que la synthèse du collagène nécessite un apport important en acides aminés. II n'est notamment pas possible d'accroître de manière significative la teneur en acide ascorbique d'un milieu nutritif en raison du pH ou des modifications de la pression osmotique lorsque celui-ci est neutralisé. Les vecteurs vésiculaires infracellulaires selon l'invention, qui comportent des ligands métaboliques aptes à s'exprimer à l'intérieur et à l'extérieur de leur structure, sont caractérisés en ce qu'ils sont des vecteurs d'affinité spécifique du fibroblaste dont la composition membranaire, modifiée par introduction de ligands métaboliques, entraîne une modulation de l'activité de synthèse de la cellule ciblée. Les inventeurs ont constaté de façon surprenante que l'utilisation de ces vecteurs vésiculaires infracellulaires permettait d'ajouter au milieu de culture des éléments nutritifs n'intervenant ni dans le pH ni dans l'expression de la pression osmotique. Dans la présente description, le terme vecteur vésiculaire (ou pour simplifier "vecteurs") s'appliquera à tous vésicules, capsules ou sphères artificielles d'un diamètre qui peut aller de 30 à 1000 nanomètres, et qui sont mis en oeuvre pour incorporer une substance active soit dans un milieu aqueux remplissant le volume intérieur du vecteur soit dans la paroi même dudit vecteur puis pour transporter cette substance active vers un site où elle sera libérée et utilisée à différentes fins. Les vecteurs vésiculaires selon l'invention sont de préférence obtenus par mise en oeuvre du procédé et du dispositif décrits dans FR - A - 89 09 275 du 5 Juillet 1989 Ce procédé repose sur l'utilisation d'un phénomène très particulier que l'on pourrait appeler "coup de bélier". Ce phénomène apparaît lorsqu'une veine liquide s'écoule très rapidement au sein d'un conduit rigide. L'écoulement rapide engendre des zones de surpressions et des zones de dépressions très intenses. Les zones de dépressions conrrespondent à des zones de cavitation. Ce phénomène apparaît aussi de manière ponctuelle et transitoire lorsque le fluide subit de brutales variations de débit. Dans ce cas, l'écoulement n'étant pas continu, il n'est pas possible d'entretenir le phénomène de cavitation et, quand un solide se déplace à très grande vitesse au sein d'un liquide, on ne dispose pas de zones d'hyperpression.La succession de zones d'hyperpression et de zones de calvitation au sein de la veine liquide permet la synthèse des membranes vectoriales sans avoir recours à l'utilisation de solvant organique ou de chauffage pour inclure des substances lipidiques ou insolubles. En effet, les zones d'hyperpression permettent de réaliser la fonte du matériel membranaire, d'une façon un peu similaire à celle utilisée lors de la formation des pastilles pour l'observation infrarouge. Les zones de cavitation assurent la sphérisation du matériel membranaire autour des bulles de gaz qui apparaissent au sein du liquide. On peut ainsi arriver à des taux d'encapsulation très élevés car les composés à encapsuler pourront servir de germes à l'apparition des bulles de gaz et seront donc préférentiellement insérés dans la vacuité vectoriale. Selon un mode de réalisation préféré de l'invention, les ligands métaboliques sont choisis parmi les initiateurs et les modulateurs de la synthèse cellulaire dotés de fonction ou radical lipophile par acylation, tels que les esters gras de l'acide ascorbique et notamment son palmitate, le palmitate d'hydrolysat de collagène, et les esters gras de l'hydroxyproline et plus spécialement son palmitate. L'acide ascorbique est notamment immobilisé au sein du vecteur sous forme d"ester d'acide gras, ce qui évite toute fuite de composé. L'hydrophilie de la membrane du vecteur est obtenue par la fixation d'amide grasse (lipoaminoacide) à l'extérieur du vecteur. On voit tout l'intérêt du transport par un même vecteur d'un stimulant de la synthèse du collagène modifié pour une meilleure encapsulation et d'éléments précurseurs de la synthèse du collagène. Les inventeurs ont découvert que ces vecteurs vésiculaires trouvaient des applications nouvelles et originales dans le contrôle de la synthèse du collagène par les fibroblastes et tout spécialement comme vecteurs de compositions cosmétiques destinées à obtenir un meilleur raffermissement du tissu cutané. Ces vecteurs vésiculaires trouvent également des applications comme vecteurs de compositions cosmétiques destinées au traitement des petites cicatrices indurées et des ridules, ainsi que comme vecteurs de compositions cosmétiques destinées à provoquer un renforcement de la couche épithéliale. Selon l'invention l'utilisation des vecteurs vésiculaires cités plus haut en tant que vecteurs de molécules bioactives aptes à stimuler la synthèse des collagènes par les fibroblastes ou à inhiber cette synthèse et à induire la synthèse d'enzymes de dégradation renforce ou modifie considérablement l'action de ces molécules ils agissent de plus comme modificateurs de leur cytotoxicité ; ceci présente un intérêt considérable notamment dans I' application de ces vecteurs en cosmétique. Dans les expériences décrites ci-après on a utilisé plus spécifiquement le palmitate d'ascorbyle, des peptides dérivés du collagène, le palmitate d'hydroxyproline pour stimuler la synthèse du collagène ou de la collagénase. Les résultats des essais présentés ci-après ont été obtenus selon la méthodologie suivante: Conditions de culture : les fibroblastes sont obtenus à partir d'explants de peau humaine. Les cellules sont maintenues en culture dans du milieu DMEM (Gibco) additionné de 10 % de sérum de veau foetal (Gibco) et d'antibiotiques (pénicilline 100 U/ml, streptomycine 100 Fg/ml). Les subcultures sont réalisées par trypsination (Trypsin-EDTA, Gibco). Les cellules sont utilisées du 2e au 10e passage. Conditions de traitements : Les cultures de fibroblastes témoins se réfèrent aux cultures avec vecteurs sans principe actif, en quantité similaire aux autres traitements. Les cultures traitées avec la molécule en solution se réfèrent aux conditions de la culture témoin et de la molécule sous forme soluble. Les cultures traitées avec la forme vectoriale de la molécule impliquent que la molécule active soit inclue préalablement dans les vecteurs. Test de prolifération cellulaire (test MTT) : après ensemencement, les cellules sont incubées trois jours avec du milieu contenant les molécules à tester. Puis on ajoute le sel de tétrazolium jaune (5 mg / ml). Il est réduit par les réductases mitochondriales des cellules vivantes en un produit formazan violet qui est ensuite solubilisé par de l'HCl 0,04 N dans de l'isopropanol. La réaction colorée est lue à une longueur d'onde de 570 nm par un Multiskan Titertek (Flow Laboratories) et exprimée en densité optique. Evaluation des collagènes solubles par dosaae radioimmunoloaique : On prélève 100 yI de surnageant de culture et on y ajoute 100 Ccl d'anticorps anticollagène de type I ou anti-collagène de type III et 200 yI de PBS. Après 24 heures à 4"C, on ajoute 100 FI de collagène de type I ou de type III marqué à l'iode 125 ; on sépare ensuite de l'antigène libre l'antigène lié à l'anticorps par précipitation avec 100 FI d'antisérum de chèvre anti-lgG de lapin en présence de polyéthylène glycol (PEG) 6000. Après centrifugation on mesure la radioactivité du précipité à l'aide d' un compteur LKB 1260 multigamma. Mesure de l'activité collapénasique dans le milieu de culture On mesure la collagénase interstitielle qui dégrade les collagènes interstitiels natifs de type I-I Il. a) Préparation du substrat : le collagène de type I, marqué au carbone-14, en solution dans CH3COOH 0,1 M est neutralisé à pH 7,4 par du Tris 1 M et dilué avec le tampon NaCI 0,15 M/CaCl2, 4 mM/Tris-HCl 50 mM, pH 7,4 contenant du NEM 0,5 mM et du PMSF 0,1mM à raison de1000cpm/100R1 substrat (= 10000 cpm/essai). b) Dosage de la collagénase 100 lli de milieu sont activés par 10 ,ul de trypsine (1 mg/ml) à 37 C pendant 10 mn, suivi de l'addition de 10 l de SBTI (5 mg/ml): 10 mn à température ambiante. 100 l de milieu sont aussi testés sans activation par la trypsine (mesure de la forme active de l'enzyme). Le substrat (10000 cpm/essai) est ajouté, éventuellement en présence d'EDTA 25 mM, le volume final étant de 250 FI. La réaction se déroule pendant 18 h à 25 C. puis est stoppée par addition de 20 yI d'EDTA 250 mM (10 mn à température ambiante).Le mélange est ensuite chauffé 10 mn à 39 C. Le collagène non dégradé est précipité par l'éthanol à la concentration finale de 18 % (30 mn à température ambiante). Finalement, le mélange est centrifugé à 6000 g pendant 30 mn à 4 C. Des aliquots de 200 rI des surnageants sont mélangés avec 5 ml de liquide scintillant aqueux puis comptés pour leur radioactivité. Une unité de collagénase est definie comme la quantité d'enzyme nécessaire pour dégrader 1 'Lg de collagène natif par heure à 25 C. L'étude de l'influence des vecteurs vésiculaires infracellulaires selon l'invention va maintenant être décrite en détail pour chaque molécule. PALMITATE D' ASCORBYLE L'incorporation d'acide ascorbique sous forme de palmitate dans les vecteurs potentialise son action sur la synthèse de collagène par les fibroblastes. On a pu en effet déterminer que la moitié de la dose de palmitate d'ascorbyle (12,5 Fg/ml) incorporé aux vecteurs selon l'invention est capable d'induire le même niveau de synthèse de collagène de type I que le double de sa dose (25 g/ml) sous forme soluble. L'effet du palmitate d'ascorbyle incorporé aux vecteurs selon l'invention est encore plus forte sur la synthèse de collagène de type III. Les résultats sont rassemblés dans le tableau 1 ci-après. TABLEAU 1 Stimulation de la svnthèse de collagène par le almitate d'ascorbvle après 48 heures de culture Collagène I Collagène III ng/m ng/m fibroblastes + vecteurs 87 # 13 en solution 12,5 Fg/ml 668 a, b + 71 468 a,b + 41 fibroblastes + vecteurs chargés en palmitate d'ascorbyle 12.5 g/ml 950a,b#58 882a,b#64 fibroblastes + palmitate d'ascorbyle en solution 25 rg/ml 952a,bt 81 781 a,b#55 fibroblastes + vecteurs chargés en palmitate d'ascorbyle 25 rg/l 1275a,b +114 1035a,b#95 a Significatif (p Ces résultats laissent apparaître tout l'intérêt de l'utilisation de ces vecteurs vésiculaires infracellulaires pour la préparation de produits cosmétiques visant à stimuler la synthèse de collagène afin d'obtenir un meilleur raffermissement de la peau. On remarque également que le produit en phase vectoriale permet, pour une quantité plus faible de principe actif, d'obtenir un effet similaire. PALMITATE D'HYDROLYSAT DE COLLAGENE Des peptides de collagène sous forme de palmitate ont été utilisés pour stimuler la synthèse des collagènes de type I et III de même que la synthèse de la collagénase interstitielle (MMP-1) On a pu observer que l'hydrolysat de collagène incorporé dans les vecteurs vésiculaires selon l'invention est moins toxique que sous forme soluble. En effet, une cytotoxicité est détectée à partir d'une dose de 20 g / ml pour la molécule soluble (Tableau 2). TABLEAU 2 Analyse de la prolifération des fibroblastes traités avec le Palmitate d'hvdrolvsat de collagène Forme g/ml 1 5 10 20 40 80 24 heures Solution 0,486 t 0,026 0,481 t 0,009 0,450 + 0,009 0,290a+ # 0,011 0.093a# # 0,0090,037a+ 0,004 Vecteur 0,468 + 0,019 0,476 t 0,014 0,478 #0.012 0.487c# 0.013 0.0496c#0.015 0,493Ce 0,011 48 heures Solution0,488 + 0,012 0,474 t 0,018 0,470 t 0,008 0,138a s 0,017 0.058a#0.010 0,033a s 0,008 Vecteur 0,493 #0.017 0,489 t 0,007 0,494 t 0,008 0,498C #0.017 0,4920t 0,013 0,4820t0,006 72 heures Solution 0.491 # 0.010 0.492 # 0.012 0.466 # 0.019 0.114a # 0.007 0.043a#0.003 0.023a#0.005 Vecteur 0,497 t 0,0170,489 t 0,016 0,491 t 0,011 0.478c#0.012 0.502c#0.021 0.479c# # 0,009 Les données sont exprimées en densité optique mesurée après traitement sur des cultures contenant 1 04 cellules par puits a significatif (p En ce qui concerne la synthèse du collagène, on a noté qu'à partir d'une dose de 5 g / ml, I'hydrolysat de collagène stimule de façon significative la synthèse du collagène de type I et de type III. Cet effet est observé en utilisant la molécule incorporée aux vecteurs vésiculaires (tableaux 3 et 4). TABLEAU 3 ANALYSE DE LA SYNTHESE DE COLLAGENE DE TYPE I PAR DES FIBROBLASTES TRAITES AVEC LE PALMITATE D'HYDROLYSAT DE COLLAGENE Forme g/ml 1 5 10 20 40 80 24 heures Témoin 274#34 353#22 228#8 187a#10 160a#15 135a#10 Solution 274#28 211a#12 203a#13 63a,b#2 49a,b#13 30a,b#3 Vecteur 239#23 297#28 213#20 229c#21 225b,c#27 221b,c#5 48 heures Témoin 406#37 360#11 299a#27 258a#4 207a#5 183a#5 Solution 454#65 358#13 272a#11 80a,b#5 31a,b#8 41a,b#4 Vecteur 536a#32 502b,c#26 470b,c#48 357a,b,c#15 330a,b,c#16 304a,b,c#24 72 heures Témoin 454#37 383#35 349a#40 246a#3 232a#8 219a#5 Solution 456#29 353a#9 302a#5 97a,b#5 19a,b#5 14a,b#3 Vecteur 601#128 577b,c#41 457b,c#13 352a,b,c#20 260a,b,c#23 325a,b,c#10 Les données sont exprimées en ng/ml a significatif (p > 0,05) par rapport aux doses plus faibles b significatif (p > 0,05) par rapport au témoin c significatif (p > 0,05) par rapport à la molécule sous forme soluble TABLEAU 4 Analvse de la svnthèse de collagène type III par des fibroblastes traités avec le palmitate d'hvdrolvsat de collagène Forme rg/ml 1 5 10 20 40 80 24 heures Témoin 258#57 253#43 183#18 183#30 127a#22 49a#3 Solution 318#67 292#25 277b#17 25a,b#1 23a,b#2 19a,b#1 Vecteur 309#45 311#12 261c#9 255c#34 211b,c#29 207a,b,c#20 48 heures Témoin 498#74 260#15 206a#30 210a#10 183a#21 106a#6 Solution 744#123 49aa,b#15 312a,b#23 27a,b#1 20a,b#3 25a#,b#2 Vecteur 780b#78 677b,c#12 665b,c#120 518a,b,c#29 382a,b,c#48 309a,b,c#26 72 heures Témoin 507#30 268a#8 182a#37 163a#12 173a#29 128a#1 Solution 569#61 446b#39 352a,b#44 31a,b#3 18a,b#1 15a,b#2 Vecteur 680b#39 793b,c#77 380a,b,c#47 415 a,b,c#33 352a,b,c#20 342a,b,c#22 Les données sont exprimées en ng/ml a significatif (p > 0,05) par rapport aux doses plus faibles b significatif (p > 0,05) par rapport au témoin c significatif (p > 0,05) par rapport à la molécule sous forme soluble La synthèse du collagène de type III n'est stimulée qu'avec une dose de 10 Fg/ ml et uniquement lorsque l'hydrolysat de collagène est incorporé aux vecteurs vésiculaires infracellulaires selon l'invention. Ce même traitement stimule de manière significative la synthèse de collagénase interstitielle (MMP-1) que ce soit sous forme soluble ou sous forme vectoriale. II faut cependant noter une stimulation significativement plus forte lorsque les molécules sont incorporées dans les vecteurs vésiculaires (tableau 5). TABLEAU 5 Dosaae de l'activité de la collaaénase interstitielle (MMP-1) produite par des fibroblastes traités avec le Palmitate d'hydrolysat de collagène Forme Fg/ml I 5 10 Solution 1551a110 1158a#152 11 44a+41 Vecteur 2372asb+328 2463a,b#1 67 2050a b+87 Témoin : 438 + 82 Ces données sont exprimées en mU/ml des surnageants des cultures avec 4.105 cellules et mesurées après 48 heures de traitement. a significatif (p Les résultats ci-dessus laissent apparaître tout l'intérêt de la forme vectoriale pour l'obtention de produits cosmétiques permettant la simulation de la synthèse collagénique et du renouvellement de la matrice extracellulaire du derme (synthèse de collagène et synthèse de collagénase) et notamment le raffermissement de la peau d'individus âgés. De plus les molécules incorporées dans les vecteurs vésiculaires infracellulaires sont moins toxiques. PALMITATE D'HYDROXYPROLINE Le traitement de cultures de fibroblastes avec le palmitate d'hydroxyproline montre que la forme soluble est cytotoxique à partir de 20 g / ml. Cependant son incorporation dans les vecteurs élimine cet effet cytotoxique même à une dose de 80 g/ml (tableau 6) . TABLEAU 6 Analvse de la prolifération des fibroblastes traités avec le Palmitate d'hydroxyproline Forme g/ml 1 5 10 20 40 80 24 heures Solution0,493 + 0,029 0,492 t 0,016 0,502 t 0,019 0,457 t 0,022 0,147a+ # 0,019 0.060a#0.022 Vecteur 0,483 t 0,026 0,479 t 0,029 0,485 t 0,033 0.502#0.037 0.487c# 0,019 0.485c# 0,023 48 heures Solution 0,494 t 0,012 0,513 t 0,0250,511 t 0,020 0,471 t 0,028 0.118a#0.118 0,060a s 0,016 Vecteur 0,493 +0,021 0,495 t 0,025 0,487 t 0,035 0,519 + 0,024 0,545C+0,021 0.0556a,c#0.022 72 heures Solution 0.490#0.019 0.500#0.028 0,496#0-017 0.414a#0.010 0.063a#0.021 0.033a#0.012 Vecteur 0,505 t 0,018 0,515 t 0,0170,506 t 0,020 0.498c# 0,015 0.495c# 0,018 0.520c# 0,022 Les données sont exprimées en densité optique mesurée après traitement sur des cultures contenant 104 cellules par puit a significatif (p La synthèse de collagène type I et III est stimulée de façon significative par la forme vectoriale de la molécule à une dose de 10 g / ml (tableaux 7 et 8). TABLEAU 7 ANALYSE DE LA SYNTHESE DE COLLAGENE TYPE I PAR DES FIBROBLASTES TRAITES AFEC LE PALMITATE D'HYDROXYPROLINE Forme rg/ml 1 5 10 20 40 80 24 heures Témoin 246#46 275#22 292#3 259#8 221#11 145a#12 Solution 268#18 232#10 166a,b#15 128a,b#4 61a,b#8 41a,b#2 Vecteur 266#10 288c#14 253c#11 251c#16 184a,c#31 164a,c#7 48 heures Témoin 487#67 518#0 449#57 392#22 345#18 298a#15 Solution 519#37 360a,b#42 260a,b#7 227a,b#1 16a,b#6 49a,b#10 Vecteur 528#30 605c#43 432c#69 421a,c#9 422a,b,c#26 401a,b,c#18 72 heures Témoin 431#8 446#15 446#52 499#39 368a#18 297a#5 Solution 513#77 470#5 281a,b#15 223a,b#2 973a,b#10 49a,b#3 Vecteur 483#46 516#78 524c#17 526c#90 387a,c#10 354a,b,c#20 Les données sont exprimées en ng/ml a significatif (p > 0,05) par rapport aux doses plus faibles b significatif (p > 0,05) par rapport au témoin c significatif (p > 0,05) par rapport à la molécule sous forme soluble TABLEAU 8 Analvse de la svnthèse de collagène type III par des fi roblastes traités avec le palmitate d'hydroxyproline Forme Fg/ml 1 5 10 20 40 80 24 heures Témoin 239#33 221#31 224#17 211#14 137a#9 81a#10 Solution 295#24 281#16 15a,b#13 105a,b#6 25a,b#2 24a,b#4 Vecteur 272#21 292b#2 290b,c#16 313b,c#22 215a,b,c#14 119a,b,c#10 48 heures Témoin 624#83 528#47 376a#36 385a#14 369a#23 310a#14 Solution 588#69 519#20 330a#35 253a,b#18 36a,b#5 18a,b#3 Vecteur 699#117 702b,c#14 509b,c#65 525b,c#14 532b,c#91 494b,c#20 72 heures Témoin 452#41 450#46 405#49 385#18 313a#29 280a#18 Solution 628#161 548#24 301a#23 240a,b#11 29a,b#1 24a,b#1 Vecteur 519#108 558b#7 616b,c#91 637b,c#38 444b,c#27 418419b,c#28 Les données sont exprimées en ng/ml a significatif (p > 0,05) par rapport aux doses plus faibles b significatif (p > 0,05) par rapport au témoin c significatif (p > 0,05) par rapport à la molécule sous forme soluble L'activité collagénolytique des fibroblastes est modulée par l'utilisation du palmitate d'hydroxyproline et ses effets sont en relation avec la forme d'utilisation vectoriale ou soluble. La forme soluble stimule de manière significative la synthèse de la collagénase même avec une dose de 1 g / ml (tableau 9). Par contre l'utilisation de la forme vectoriale du palmitate d'hydroxyproline réduit progressivement, de façon dépendante, la synthèse de collagénase. TABLEAU 9 Dosage de l'activité de la collagénase interstitielle (MMP-1 ) produite par des fibroblastes traités avec le Palmitate d'hydroxyproline Forme rg/ml 1 5 10 Solution 1273#154 1934a#49 2189a#118 Vecteur 1648a,b#166 1090#66 604a#101 Témoin: 438 # 82 Ces données sont exprimées en mU/ml des surnageants des cultures avec 4.105 cellules et mesurées après 48 heures de traitement. a significatif (p La forme vectoriale permet donc l'obtention de produits cosmétiques visant à stimuler la synthèse de collagène afin d'obtenir un meilleur raffermissement de la peau. Ce produit (vecteur vésiculaire / acide ascorbique) serait plus actif à faibles doses. REVENDICATIONS 1 - Vecteurs vésiculaires infracellulaires comportant des ligands métaboliques aptes à s'exprimer à l'intérieur et à l'extérieur de leur structure, caractérisés en ce qu'ils sont des vecteurs infracellulaires d'affinité spécifique du fibroblaste dont la composition membranaire, modifiée par introduction de ligands métaboliques, entraîne une modulation de l'activité de synthèse de la cellule ciblée. 2 - Vecteurs selon la revendication 1 caractérisés en ce que les ligands métaboliques sont choisis parmi les initiateurs et les modulateurs de la synthèse cellulaire dotés de fonction ou radical lipophile par acylation. 3 - Vecteurs selon la revendication 1 et la revendication 2, caractérisés en ce que les initiateurs de la synthèse cellulaire sont choisis parmi les esters gras de l'acide ascorbique et plus spécialement son palmitate. 4 - Vecteurs selon la revendication 1 et la revendication 2, caractérisés en ce que le modulateur de la synthèse cellulaire est le palmitate d'hydrolysat de collagène. 5 - Vecteurs selon la revendication 1 et la revendication 2, caractérisés en ce que les modulateurs de la synthèse cellulaire sont choisis les esters gras de I'hydroxyproline et plus spécialement son palmitate. 6 - Vecteurs vésiculaires selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisés en ce qu'ils sont choisis parmi les vésicules, capsules ou sphères artificielles d'un diamètre qui peut aller de 30 à 1000 nanomètres, mis en oeuvre pour incorporer une substance active soit dans un milieu aqueux remplissant le volume intérieur du vecteur soit dans la paroi même dudit vecteur puis pour transporter cette substance active vers un site où elle sera libérée et utilisée à différentes fins. 7 - Application des vecteurs vésiculaires selon l'une quelconque des revendications 1 à 6 dans les compositions cosmétiques destinées au raffermissement du tissu cutané. 8 - Application des vecteurs vésiculaires selon l'une quelconque des revendications 1 à 6 dans les compositions cosmétiques destinées au traitement des petites cicatrices indurées et des ridules. 9 - Application des vecteurs vésiculaires selon l'une quelconque des revendications 1 à 6 dans les compositions cosmétiques destinées à provoquer un renforcement de la couche épithéliale.