FR 2681596 A1 19930326 FR 9111675 A 19910923 L'invention consiste dans la mise au point et la combinaison nouvelle d'une suite de procédés préférentiels de préparation d'acétylsalicylates de bases, soit puriques: adénine, guanine, soit pyrimidiques: thymine, cytosine, uracile et de leurs nucléosides: adénosine, uridine, guanosine, cytidine et aussi thymidine (désoxyribonucléoside de la thymine) et aussi inosine (riboside de lthypoxanthine). L'intérêt de ces acétylsalicylates de bases puriques et de bases pyrimidiques réside dans le fait qu'ils sont moins toxiques, mieux supportés que des acétylsalicylates témoins par exemple de sodium, d'ammonium et surtout du fait qu'ils ont des acitivités physiologiques propres notamment sur des cellules de type lymphoïde et des cellules de type embryonnaire. Le procédé général de préparation est de mettre chaque base en solution adéquate, dans des conditions telles qu'elle réagisse à l'optimum avec une solution d'acide acétylsalicylique, la réaction se faisant molécule-gramme à molécule-gramme, c'est à dire une molécule-gramme d'une base ou d'un nucléoside pour une molécule-gramme d'acide acétylsalicylique. Mais les conditions de solubilité et de réactivité préférentielle de chaque base ou de chaque nucléoside et de l'acide acétylsalicylique sont différentes et chaque réaction exige, à partir d'un principe général commun, une adaptation particulière. L'étude des conditions de réaction de ces bases et de ces nucléosides avec l'acide acétylsalicylique conduit à choisir dans chaque cas le milieu préférentiel, soit acide soit alcalin et la meilleure concentration. Ce choix tient compte des propriétés de l'acétylsalicylate obtenu, notamment de sa solubilité dans l'eau et du pH de ses solutions. L'acide acétylsalicylique lui-même, relativement peu soluble dans l'eau, présente cependant une gamme de solubilité qui peut être utilisée pour les réactions envisagées. I1 peut être dissous, à forte concentration, à chaud, dans l'alcool éthylique par exemple à 50"B", ou dans d'autres solutions alcooliques ou dans des solutions alcalines, ou dans des solutions d'acides forts ou encore d'acides organiques. Des exemples de préparations sont donnés ci-après à titre indicatif. Ils ne sont pas limitatifs des modalités ni des quantités. Ils peuvent subir à volonté des adaptations diverses, pourvu que soient atteints les buts indiqués et définis ci-dessus. Exemple 1. ACETYLSALICYLATE D'ADENINE L'exemple est donné pour la réaction dtune molécule-gramme d'adénine (6-aminopurine) avec une molécule-gramme d'acide acétylsalicylique. L'adénine est de toutes les bases puriques d'intérêt biologique, une des plus omniprésentes, elle a la plus grande énergie de résonnance, elle est la plus stable. Elle réagit facilement avec l'acide acétylsalicylique. L'adénine est peu soluble dans l'eau: elle peut être dissoute dans l'eau distillée à ébullition, mais le volume d'eau nécessaire est trop grand eu égard à la facilité des manipulations, étant donné la quantité d'adénine considérée.La solubilité de l'adénine est plus grande en milieux acides, soit acides organiques comme l'acide acétique ou l'acide citrique par exemple ou encore d'autres acides organiques, soit acides forts comme l'acide chlorhydrique dilué avec lequel elle forme des combinaisons facilitant les réactions. Parmi les solvants possibles de l'acide acétylsalicylique, il est préférable de choisir, dans le cas considéré, l'alcool éthylique à 50"B". La réaction se fait en mélangeant à chaud, avec agitation, deux solutions différentes désignées pour l'exposé: solution n"let solution n"2. Solution n" 1. Une molécule-gramme d'adénine (135,13 g) est dissoute dans 4.000 ml d'acide acétique normal (N), à ébullition pendant quelques minutes au bain-marie. Solution n0 2. Une molécule-gramme d'acide acétylsalicylique cristallisé (180,16 g) est dissoute dans 500 ml d'alcool éthylique à 50"B"), en chauffant seulement jusqu'au seuil de l'ébullition. Cette solution n"2, limpide, d'acide acétylsalicylique est versée lentement à chaud, avec agitation, dans la solution n"l d'adénine à ébullition. Le mélange cristallise rapidement. Les cristaux d'acétylsalicylate d'adénine obtenus forment un dépot blanc de mâcles d'aiguilles et baguettes prismatiques dans un liquide surnageant incolore. Une fois la cristallisation achevée, après un jour par exemple, ces cristaux sont séparés du liquide par filtration ou tout autre moyen, et séchés par simple ventilation à la température du laboratoire. L'acétylsalicylate d'adénine, cristallisé- est un sel défini: il a été analysé par spectrométrie RMN et IR et de masse. Le pic de base du spectre de masse correspond à 315 (soit 315 + H = 316, après ionisation "FAB"+, ou bombardement par atomes accélérés, ce qui ajoute un proton à la molécule). L'acétylsalicylate d'adénine peut être solubilisé dans l'eau. Il peut être recristallisé. Le liquide surnageant s'il a été séparé au moment opportun, n'entraîne qu'une fraction pondéralement négligeable. Ne poids considéré d'adénine peut aussi être dissous dans tune quantité moins grande d'acide acétique plus concentre, par exemple 2.000 ml d'acide acétique 4N. Dans ces conditions, la réaction est analogue à celle décrite ci-dessus. Variante n41 de l'exemple n l. La réaction est pratiquee dans les mêmes conditions génerales que celles décrites ci-dessus. Une molecule-gramme d'adenine est dissoute dans un autre acide organique, par exemple dans 960 ml d'une solution d'acide citrique normal (N). La cristallisation est rapide sous forme de petites baguettes. La préparation se poursuit comme il a été décrit ci-dessus. Variante n"2 de l'exemt > le n" 1. La réaction est pratiquée dans les mêmes conditions générales que ci-dessus. Le poids d'adénine considéré est dissous dans un acide fort, comme l'acide chlorhydrique dilué, soit 4.000 ml d'acide chlorhydrique décinormal (N/10), au bain-marie à ébullition, pendant quelques minutes. La réaction peut aussi être obtenue avec 1.000 ml d'acide chlorhydrique normal (N). La cristallisation est rapide sous forme d'une masse cristalline blanche d'aiguilles et de baguettes prismatiques que l'on sépare du surnageant. L'acétylsalicylate d'adénine obtenu peut être solubilisé dans l'eau. Il peut être recristallisé. Le procédé général de préparation des acétylsalicylates des autres bases nucléiques et des nucléosides reste conforme à celui indiqué ci-dessus pour l'acétylsalicylate d'adénine. Mais les modalités et les variantes diffèrent. Les autres exemples donnés ci-après exposent ces modalités de façon résumée. Exemple n"2. ACETYLSALICYLATE DE THYMINE. La thymine (2,4-dihydroxy-5-méthylpyrimidine) est surtout soluble dans les alcalis, avec formation de sels. Les recherches comparatives montrent qu'il peut être préférable de recourir à une solution de soude comme solvant, plutôt qu'à une solution ammoniacale par exemple. Solution n 1. Une molécule-gramme de thymine (126,11 g) est dissoute dans 4.000 ml d'hydroxyde de sodium (soude) décinormal (N/10), au bain-marie, à ébullition pendant quelques minutes. Solution n" 2. Cette solution d'acide acétylsalicylique dans l'alcool éthylique â 50"B" est la même que celle décrite ci-dessus a propos de l'exemple n"l et de ses variantes. La procédure du mélange des solutions n" 1 et n"2 est la même. La cristallisation est rapide, donnant de petits cristaux d'acétylsalicylate de thymine, de type rhomboédrique, qui forment une masse cristalline blanche dans un liquide surnageant incolore. Ils sont séparés de ce liquide. Ils peuvent être lavés rapidement à l'éthanol froid. Ils peuvent être solubilisés dans l'eau. Ils peuvent être recristallisés. Variante n"l de I'exem73le n"2. La thymine est dissoute dans un acide organique. Par exemple, une molécule-gramme de thymine est dissoute dans 4.000 ml d'acide acétique demi-normal (N/2), à ébullition. La réaction s'opère comme il est décrit ci-dessus. Une masse cristalline blanche dépose, elle est formée de baguettes et de plaquettes que l'on sépare du liquide résiduel. Ces cristaux d'acétylsalicylate de thymine peuvent être solubilisés dans l'eau. Ils peuvent être recristallisés. Exemple n 3. ACETYLSALICYLATE D'URACILE. Solution n"l. Une molécule-gramme d'uracile (2,4-désoxypyrimidine) (112,09 g), est dissoute à ébullition dans 3.000 ml d'acide acétique normal (N). Solution n"2. Cette solution d'acide acétylsalicylique dans l'alcool éthylique à 50"B" est la même que celles des autres solutions n02 des exemples précédents. Après mélange à chaud avec agitation des solutions n"l et n"2, la cristallisation est rapide. Elle produit une masse cristalline blanche d'acétylsalicylate d'uracile, formée d'amas de baguettes prismatiques. La suite de la réaction est la même que celles décrites dans les exemples précédents. Ces cristaux peuvent être solubilisés dans l'eau. Ils peuvent être recristallisés. Exemple n"4. ACETYLSALICYLATE DE GUANINE. La guanine (2-amino-hypoxanthine) est très peu soluble. Les essais montrent qu'il est pratiquement préférable d'utiliser l'acide orthophosphorique Solution n" 1. Une molécule-gramme de guanine (151,12 g) est dissoute dans 4.000 ml d'acide orthophosphorique 2,5N, à ébullition. Solution n" 2. Cette solution d'acide acétylsalicylique dans l'alcool éthylique à 50"B" est la même que les solutions n" 2 des exemples précédents. Après mélange à chaud avec agitation des solutions n" 1 et n" 2, la cristallisation est rapide. On obtient une masse cristalline blanche d'acétylsalicylate de guanine qui se dépose dans un liquide incolore. Elle est formée de plaquettes et baguettes prismatiques. Après un délai suffisant, par exemple de un jour, la masse cristalline est séparée, lavée rapidement t méthanol froid, et séchée sous ventilation à la température du laboratoire. Ces cristaux peuvent être solubilisés dans l'eau. Ils peuvent être recristallisés. Exemple n0 5. ACETYLSALICYLATE DE CYTOSINE. Solution n" 1. Une molécule-gramme de cytosine (4-amino-2 hydroxy-pyrimidine) (111,10 g) est dissoute dans 2.000 ml d'acide acétique décinormal (N/10), au bain-marie à ébullition pendant quelques minutes. Solution n 2. Cette solution d'acide acétylsalicylique dans l'alcool éthylique à 50"B" est la même que les solutions n" 2 des exemples précédents. Apres mélange à chaud avec agitation, des solutions n0 1 et n"2, la cristallisation s'opère d'abord assez lentement, puis abondamment, sous forme d'un dépot blanc de cristaux en aiguilles et plaquettes dans un liquide incolore. Lorsque la cristallisation est achevée, par exemple après un jour, les cristaux sont séparés du liquide et séchés sous ventilation à la température du laboratoire. Ces cristaux d'acétylsalicylate de cytosine peuvent être solubilisés dans l'eau. Ils peuvent être recristallisés. La réaction peut être faite avec une solution d'acide acétique, sous plus faible volume, mais à plus forte concentration, par exemple 1.000 ml d'acide acétique normal (N). Variante n0 1 de l'exemple n"5. Solution n" 1. Le poids de cytosine est dissous dans 1.000 ml d'acide chlorhydrique décinormal (N/10) au bain-marie à ébullition pendant quelques minutes. Solution n" 2. La solution n" 2 d'acide acétylsalicylique dans l'alcool éthylique est la même que les solutions n0 2 ci-dessus. La suite de la réaction, apres mélange à chaud avec agitation, des solutions n 1 et n 2, est similaire à cellesdécrites ci-dessus. ACETYLSALICYLATES DE NUCLEOSIDES. Le procédé général de préparation de ces acétylsalicylates de nucléosides est le même que celui de la préparation des acétylsalicylates des bases puriques et pyrimidiques selon les exemples n 1 a n" 5 décrits ci-dessus. Exemple n" 6. Dans la solution désignée n" 1, le poids des nucléosides, correspondant pour chacun à une molécule-gramme, est dissous dans l'eau bidistillée ou dans l'acide acétique N/10, selon le cas, par chauffage léger. Dans la solution désignée n" 2, une molécule-gramme d'acide acétylsalicylique est dissoute à chaud dans l'alcool éthylique à 50 B". La réaction est obtenue par mélange à chaud, avec agitation, des solutions n"l et n 2. L'exemple n" 6 groupe de façon tres résumé les variantes du procédé de préparation des acétylsalicylates de nucléosides. Variante n"l de l'exemple n" 6. ACETYLSALICYLATE D'ADENOSINE Une molécule-gramme d'adénosine (adénine riboside) (267,24 g) est dissoute à chaud dans 1.600 ml d'eau bidistillée. La réaction sous agitation avec la solution d'acide acétylsalicylique est rapide. En quelques minutes des cristaux en aiguilles et baguettes prismatiques d'acétylsalicylate d'adénosine forment une masse dans laquelle le liquide surnageant incolore est résorbé rapidement. La dessication sous ventilation à la température du laboratoire peut commencer directement dès ce stade. Ces cristaux peuvent être solubilisés dans l'eau. Ils peuvent être recristallisés. Variante n"2 de l'exemple n"6. ACETYLSALICYLATE D'INOSINE. Une molécule-gramme d'INOSINE (hypoxanthine riboside) (268,23 g) est dissoute dans 1.200 ml d'alcool éthylique à 50sué, par chauffage jusqu'a ébullition. La réaction à chaud sous agitation avec la solution dite n"2 d'acide acétylsalicylique dans l'alcool à 50"Bé est très rapide. Il se forme une masse cohérente blanche de fines petites aiguilles. Ce dépot cristallin est mis à sécher directement par simple ventilation à la température du laboratoire. Ces cristaux peuvent être solubilisés dans l'eau. Ils peuvent être recristallisés. L'inosine peut aussi être dissoute dans les mêmes proportions et les mêmes conditions dans la soude décinormale tu/10). La réaction de cette solution sodée, avec la solution d'acide acétylsalicylique est analogue à celle décrite ci-dessus. Variante n" 3 de l'exemPle n" 6. ACETYLSALICYLATE DE THYMIDINE. Une molécule-gramme de thymidine (5-méthyluracile) (242,2 g) est dissoute par faible chauffage dans 800 ml d'eau bidistillée. La réaction sous agitation avec la solution d'acide acétylsalicylique est rapide. D'abondants cristaux, en baguettes prismatiques, forment une masse cristalline blanche qui se dépose. La faible quantité relative de liquide surnageant incolore est résorbée par cette masse cristalline. La dessication sous ventilation, à la température du laboratoire, peut commencer directement dès ce stade. Ces cristaux sont solubilisés dans l'eau. Ils peuvent être recristallisés. Variante n" 4 de 1'exemple n0 6. ACETYLSALICYLATE D'URIDINE. Une molécule-gramme d'uridine (uracile riboside) (284,20. g) est dissoute par faible chauffage dans 400 ml d'eau bidistillée. La réaction sous agitation avec la solution d'acide acétylsalicylique est immédiate. La masse cristalline d'acétylsalicylate d'uridine est formée de baguettes prismatiques. Elle résorbe rapidement le liquide surnageant. La dessication par ventilation à la température du laboratoire peut commencer dès ce stade. Ces cristaux sont solubilisés dans liteau. Ils peuvent être recristallisés. Variante n"5 de l'exemple n" 6. ACETYLSALICYLATE DE GUANOSINE. Une molécule-gramme de guanosine (guanine riboside) (283,25 g) est dissoute a chaud dans 4.000 ml d'acide acétique N/10. La réaction sous agitation avec la solution d'acide acétylsalicylique est rapide avec formation de cristaux en fines et courtes aiguilles et plaquettes. Cette masse cristalline est séparée du liquide surnageant incolore apres un délai suffisant, par exemple de un jour. Ces cristaux peuvent être solubilises dans l'eau. Ils peuvent être recristallises. Variante n" 6 de l'exemPle n" 6. ACETYLSALICYLATE DE CYTIDINE. Une molécule-gramme de cytidine (cytosine riboside) (243,22 g) est dissoute à la température du laboratoire dans 800 ml d'eau bidistillée. La réaction sous agitation avec la solution d'acide acétylsalicylique est immédiate avec formation de petits cristaux initialement rhomboédriques. Ils sont sépares du liquide surnageant incolore après un délai suffisant, par exemple de un jour. Dans le cas de la cytidine, le rendement de la reaction est relativement faible, le surnageant ayant d'autres propriétés. IRISE EN SOLUTION DES ACETYLSALICYLATES DES BASES NUCLEIOUES ET DE LEURS NUCLEOSIDES. Les acetylsalicylates cristallisés, obtenus selon le procédé general décrit ci-dessus, sont mis en solution à chaud dans l'eau bidistillée ou dans une solution physiologique. A ces solutions peut être ajouté un corps qui permet d'ajuster le pH vers la neutralité. Parmi les corps possibles, les phosphates alcalins conviennent, par exemple le phosphate trisodique ou encore le phosphate d'ammonium tribasique. Pour une solution a 1% par exemple des acétylsalicylates décrits, le phosphate alcalin ajouté permet l'ajustement du pH aux environs de la neutralité. Les solutions d'acétylsalicylates des bases ou de leurs nucléosides et de phosphate alcalin, incolores, limpides, neutres, sont stérilisées à l'autoclave a 110 C pendant 30 minutes. Ainsi préparées, ces solutions sont stables. Ces solutions peuvent ne- contenir qu'un seul des acétylsalicylates obtenu. Mais dans une même solution, ils peuvent être associés diversement entre eux, par exemple pour rétablir les couples correspondants aux bases nucléiques qui sont complémentaires par appariement naturel: bases puriques avec bases pyrimidiques, cTest à dire adénine/thymine ou uracile d'une part, et guanine/cytosine d'autre part, et de même pour leurs nucléosides. Ils peuvent aussi être associés différemment ou à d'autres corps. Les acétylsalicylates des bases nucléiques ou de leurs nucléosides peuvent aussi être à l'origine de la synthèse de nouveaux corps. Utilisation. Les acétylsalicylates obtenus selon le procédé général décrit peuvent être utilisés à des fins physiologiques, pharmacologiques ou thérapeutiques. Ils peuvent être administrés par voie locale ou générale, rer os ou parentérale. Par exemple, certaines races de souris pesant de 25 à 30 gr supportent l'injection intrapéritonéale quotidienne de 1 ml d'une solution à 1%, à pH 7 environ, sans troubles objectifs, ni manifestations neurologiques après plusieurs mois. La dose maximale d'acétylsalicylates des bases considérées ou de leurs nucléosides est proche de 400mg/kg/Souris tout venant. La dose léthale est voisine de 800mg/kg. Outre les effets généraux de ces acétylsalicylates, l'action de doses faibles ou de doses physiologiques entretenues peut être lymphostimulante. L'action de doses plus fortes, temporairement toxiques mais supportées par l'organisme, s'excerce sur diverses cellules spécialisées. L'intérêt de ces acétylsalicylates de bases puriques et de bases pyrimidiques et de leurs nucléosides, réside dans le fait qu'ils sont moins toxiques et mieux supportés que des acétylsalicylates témoins, par exemple de sodium, d'ammonium, et surtout du fait qu'ils ont des activités physiologiques propres, notamment sur des cellules de type lymphoïde et des cellules de type embryonnaire. REVENDICATIONS 1) Procédé général de préparation d'acétylsalicylates de basespuriques et de bases pyrimidiques et de leurs nucléosides, caractérisé en ce que la combinaison nouvelle d'une suite de procédés préférentiels, par réaction molécule-gramme à molécule-gramme d'une solution, désignée n"l pour l'exposé, d'une base purique: adénine, guanine, ou d'une base pyrimidique: thymine, cytosine, uracile ou d'un nucléoside: adénosine, guanosine, thymidine, cytidine, uridine, inosine, avec une solution, désignée n"2 pour l'exposé, d'acide acétylsalicylique dans l'alcool éthylique, permet d'obtenir une série d'acétylsalicylates, cristallisés et solubles dans l'eau, pouvant être présentés sous diverses formes, notamment en solution aqueuse stérilisée et neutre, ou en association entre eux, ou à d'autres corps. 2) Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'adénine est mise en solution dans l'acide acétique normal (N), puis mise à réagir à chaud avec une solution d'acide acétylsalicylique dans l'alcool éthylique. 3) Procédé selon les revendications 1 et 2, caractérisé en ce que l'adénine est mise en solution dans l'acide citrique N ou dans un autre acide organique. 4) Procédé selon les revendications 1 à 3, caractérisé en ce que l'adénine est mise en solution dans l'acide chlorhydrique décinormal. 5) Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que la thymine est mise en solution dans l'hydroxyde de sodium décinormal, puis mise à réagir à chaud avec une solution d'acide acétylsalicylique dans l'alcool éthylique. 6) Procédé selon les revendications 1 et 5, caractérisé en ce que la thymine est mise en solution dans l'acide acétique deminormal. 7) Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'uracile est mise en solution dans l'acide acétique normal, puis mise à réagir à chaud avec une solution d'acide acétylsalicylique dans l'alcool éthylique. 8) Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que la guanine est mise en solution dans l'acide orthophosphorique 2,5N, puis mise à réagir à chaud avec une solution d'acide acétylsalicylique dans l'alcool éthylique. 9) Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que la cytosine est mise en solution dans l'acide acétique décinormal, puis mise à réagir à chaud avec une solution d'acide acétylsalicylique dans l'alcool éthylique. 10) Procédé selon les revendications 1 et 9, caractérisé en ce que la cytosine est mise en solution dans l'acide chlorhydrique décinormal. 11) Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'adénosine est mise en solution dans l'eau distillée, puis mise à réagir à chaud avec une solution d'acide acétylsalicylique dans 1 'alc oo1 éthylique. 12) Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que la thymidine est mise en solution dans l'eau distillée, puis mise à réagir à chaud avec une solution d'acide acétylsalicylique dans l'alcool éthylique. 13) Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'uridine est mise en solution dans l'eau distillée, puis mise à réagir à faible chauffage avec une solution d'acide acétylsalicylique dans l'alcool éthylique. 14) Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que la guanosine est mise en solution dans l'acide acétique décinormal, puis mise à réagir à chaud avec une solution d'acide acétylsalicylique dans l'alcool éthylique. 15) Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que la cytidine est mise en solution dans l'veau distillée, puis mise à réagir à chaud avec une solution d'acide acétylsalicylique dans l'alcool éthylique. 16) Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que 1'INOSINE est mise en solution dans l'alcool éthylique à 50"Bé, puis mise à réagir à chaud avec une solution d'acide acétylsalicylique dans l'alcool éthylique. 17) Procédé selon les revendications 1 et 16, caractérisé en ce que 1'INOSINE est mise en solution dans la soude décinormale, puis mise à réagir à chaud avec une solution d'acide acétylsalicylique dans l'alcool éthylique. 18) Procédé selon les revendications 1 à 17, caractérisé en ce que les acétylsalicylates formés, cristallisés, sont mis en solution dans l'eau distillée ou une solution physiologique et stérilisés à l'autoclave à llO"C pendant 30 minutes. 19) Procédé selon les revendications 1 à 18, caractérisé en ce que l'adjonction d'un corps, par exemple un phosphate alcalin, aux solutions aqueuses d'acétylsalicylates obtenues permet d'ajuster leur pH vers la neutralité. 20) Procédé selon les revendications 1 à 19, caractérisé en ce que les acétylsalicylates des bases citees ou de leurs nucléosides sont associés entre eux ou à d'autres corps et sont présentés sous diverses formes à l'état solide ou à l1état liquide en solutions aqueuses, par exemple neutres et stables, pouvant être sterilisés à l'autoclave et permettant des utilisations physiologiques, pharmacologiques et thérapeutiques, notamment @ des actions stimulantes ou toxiques selon la dose, sur des cellules lymphoïdes ou des cellules de type embryonnaire.