FR 2679909 A1 19930205 FR 9109771 A 19910731 POLYPEPTIDES APTES A INDUIRE IN VIVO DES ANTICORPS EUX-NEMES CAPABLES D'INHIBER L'INVASION DE GLOBULES ROUGES PAR DES NEROZOITES DE P.FALCIPARUM, PRODUITS APPARENTES ET LEUR APPLICATION A LA PRODUCTION DE COMPOSITIONS VACCINANTES L'invention a pour objet de nouveaux antigènes de Plasmodium falciparum et leur application notamment en vue de la protection contre le paludisme. Les parasites responsables du paludisme chez I'homme, dont notamment Plasmodium falciparum ou Plasmodium vivax pour ne citer que les principaux d'entre eux, présentent chez l'hôte humain des morphologies différentes et expriment des antigènes différents, fonction du stade de leurs développpement et de leur localisation dans l'organisme de l'hôte infecté. Les différences morphologiques et antigéniques de ces parasites au cours de leur cycle de vie chez I'homme, permettent de définir au moins quatre stades de développement distincts. Le tout premier stade de développement du parasite chez lthomme correspond à la forme sporozoite introduite dans le sang de l'hôte, par piqures d'insectes porteurs du parasite. Le second stade correspond au passage du parasite dans le foie et à l'infection des cellules hépatiques dans lesquelles les parasites se développent pour former les schizontes hépatiques qui, lorsqu'ils sont matures (par exemple pour P.falciparum le 6è jour après pénétration des sporozoltes), libèrent par éclatement des mérozoïtes hépatiques. Le troisième stade est caractérisé par l'infection des érythrocytes sanguins par les formes asexuées (mérozoites) du parasite; ce stade érythrocytaire de développement correspond à la phase pathogène de la maladie.Le quatrième stade correspond à la formation des formes à potentiel sexué (ou gamétocytes) qui deviendront des formes sexuées ou gamètes extra-cellulaires chez le moustique. Des études nombreuses ont été consacrées au cours de ces dernières années à l'identification de molécules de parasites exposées à la surface de globules rouges sanguins ou érythrocytes infectés avec le parasite humain pathogène, notamment du type Plasmodium falciparum. En effet, la virulence des parasites au stade sanguin a souvent été associée à l'existence de structures peptidiques ainsi exposees.Elles pourraient être responsables de deux phénomènes souvent observés, à savoir l'obstruction de capillaires vasculaires mettant en jeu une fixation de globules rouges parasités (PRBC, abréviation de l'expression "Parasitized Red Blood Cells) aux cellules endothéliales ou séquestration (2), et la fixation d'érythrocytes non infectés aux PRBCs avec formation de "rosettes" (40). Ces phénomènes paraissent jouer un rôle médiateur important dans la physiopathologie des cas de paludisme sévère, notamment de ceux induits par Plasmodium falciparum. Ces molécules de surface pourraient aussi représenter une cible pour les mecanismes de défense immunitaire de l'hôte dont l'une des actions conduit à la phagocytose des PRBCs (10,11). I1 y a quelque temps un gène, exprimé dans les stades tardifs du cycle intra-érythrocytique, à été isolé (20). Le produit d'expression (antigène 332) s'est avéré contenir une série de séquences d'acides aminés, répétitives dégénérées. I1 a été montré que des anticorps humains purifiés par affinité au contact d'un polypeptide recombinant contenant la séquence de l'antigène 332, réagissait avec une famille de protéines du parasite qui consistaient en des produits d'expression de gènes différents (20). Parmi les antigènes identifiés au sein de cette famille, on mentionnera les antigènes 11.1 (Pfll-l) et (Pfl55/RESA) qui contenaient eux-mêmes des déterminants immunogéniques conduisant à des réactions croisées comme cela fut observé en utilisant un anticorps monoclonal humain (20). Plus récemment Udomsangtepch et al (36) décrivirent un anticorps monoclonal humain mAb 33G2 capable d'inhiber la cytoadhérence de globules rouges parasités comportant ou non des protubérances avec des cellules de la lignée cellulaire de mélanomes C32. I1 a de plus été constaté que cet anticorps monoclonal inhibe, de façon efficace, l'invasion d'érythrocytes par les mérozoites dans un test réalisé in vitro (38).Néanmoins, cet anticorps monoclonal initialement sélectionné en raison de sa réactivité avec la molécule Pfl55/RESA (38), manque de spécificité. I1 réagit également avec d'autres antigènes apparaissant au stade sanguin de l'infection par le parasite, notamment les antigènes Agll-l et Ag332 (20,37). L'antigène Ag 332 présente sans aucun doute un intérêt potentiel important eu égard à sa capacité à induire une immunité protectrice. En effet, un polypeptide recombinant incluant le produit d'expression d'un fragment de 303 paires de bases issues de gènes Pf332 s'est avéré constituer un inhibiteur particulierement efficace de l'anticorps monoclonal mAb33G2, comme cela fut démontré dans un essai d'inhibition de l'invasion des globules rouges par les mérozoïtes (37).Néanmoins, la caractérisation de Ag332 a jusqu'à ce jour été inhibée par les réactions croisées auxquelles les anticorps qui le reconnaissent donnent lieu, avec différents autres antigènes du parasite (20). La présente invention résulte de l'identification et de la caractérisation d'une nouvelle séquence génique au sein du gène Pf332, de l'antigène codé par cette séquence génique et d'anticorps inductibles in vivo par cet antigène et spécifique de l'antigène. La séquence génique en question a été localisée dans la région subtélomérique du chromosome 11.L'antigène exprimé par cette séquence génique s'est avéré avoir un caractère monospécifique lui permettant de détecter spécifiquement une protéine mégadaltonique du parasite ou des parasites asexués au stade sanguin par des réactions d'immuno-buvardage (immunoblot) et dtimmunoprécipitation, contrairement aux anticorps induits par d'autres antigènes, soit issus de Ag332, soit apparentés à des séquences de celui-ci, tels que le digère synthétique Y(SVTEEIAEEDK)2 (24) ou une protéine de fusion avec la béta-galactosidase (20). Ces anticorps réagissent également avec diverses autres molécules du parasite.Des anticorps formés contre l'antigène EB200 conduisent également à des réactions de surface avec des globules rouges infectés par Plasmodium falciparum avec une efficacité ayant le même ordre de grandeur que celle de l'anticorps monoclonal mAb33G2. La séquence peptidique de l'antigène EB200, l'un des antigene conforme à la présente invention a une séquence peptidique caractéristique correspondant à celle qui est encadrée dans la séquence du clone G9 (figure l(c) ), cette séquence ayant été déduite du clone G9 résultant de l'amplification de l'un des fragments du gène Pf332 dans les conditions qui seront rappelées plus loin. L'antigène EB200 appartient de façon plus genérale à la famille de polypeptides ayant un motif ou une séquence en acides aminés en commun contenant tout ou partie de la séquence polypeptidique cidessous définie par sa séquence en acides aminés SVTGNILVEG SVTEEVVGEEK LVSEEIVTEEG S V A Q E I V E E D A P A T E E I D E I E S V T E E V V E E E G PVDEEIVQEEG TVTEEIIQGE SKVEEVVEEQG SENEEIFVEEV SASQEIVQNE SGTEEI LEKV SASQEIVQDG SVTEQIIEELF PVTEEVVNEEE Un peptide qui ne contient qu'une partie de cette séquence fait partie de l'invention dès lors que ce peptide est apte, le cas échéant lorsqu'il est incorporée à une protéine de fusion, oligomérisé ou conjugué à une protéine porteuse, à induire in vivo une réponse immunitaire protectrice chez le singe écureuil Saimiri sciureus. La répartition des motifs successifs de la séquence en acides aminés d'un polypeptide préféré conforme à l'invention, telle qu'elle a été présentee ci-dessus, n'a d'autre objectif que celui de faire apparaître l'existence de motifs répétitifs successifs, au sein de la protéine, cette répétitivité n'étant cependant pas dépourvue de dégénérescences. Les blancs (en fait des liaisons directes) qui apparaissent à la fin de certaines des lignes ou au sein de certaines des lignes n'ont aucune signification particulière. Leur seul but est la mise en évidence visuelle des homologues de séquences partielles de ces motifs répétitifs successifs. On peut remarquer la fréquence du motif VTEEV au sein de ces motifs partiellement répétitifs ou "dégénérés". La même séquence en acides aminés (utilisant la représentation à trois lettres par acides aminés, au lieu de la représentation à une lettre dans la définition qui précède) est présentée dans la figure 2. Celle-ci fait également apparaître la séquence codante du clone recombinant, nommé PfEB2OO, contenant un insert de 411 paires de bases isolées à partir du gène Pf332. I1 est rappelé que ce clone avait déjà été isolé à partir d'une banque de séquences d'expression construites dans un vecteur Vamp3 avec un lot (pool) de sérums humains immuns (20).La présente invention découle de la mise en évidence de l'existence au sein de l'antigène Ag332 de séquences en acides aminés qui sont à la fois spécifiques de cet antigène et exposés à la surface des mérozoites de P. falciparum et/ou des globules rouges infectés. La banque génomique initiale de P. falciparum dans le vecteur AgtWES avait elle-même été construite par digestion à l'aide de DNaseI et addition d'adaptateurs (linkers) contenant des sites EcoRI comme antérieurement décrits dans (21). Le criblage de la banque génomique initiale d'ADN de P.falciparum (souche Palo Alto à protubérances positives) par digestion à l'aide d'une nucléase et clonage dans un vecteur AgtWES, et à l'aide d'une sonde d'hybridation issue du clone Pf332 a conduit les inventeurs à porter leur attention sur une série de quatre clones C1, G1, G9 et G90 et à les séquencer partiellement. Les séquences nucléotidiques de G1, G9 et G90, chevauchantes, avaient des tailles respectivement de 2,9 Kb; 4,8 Kb et 1,9 Kb. Le criblage d'une banque de cADNs davait conduire à un clone contenant un insérat de 466 paries de bases (clones C1). Les positions relatives des séquences de Ci, G1, G9 et G90, vis-à-vis du clone initial dont elles sont issues sont schématiquement représentés dans la figure l(a) : Celle-ci présente respectivement - une carte de restriction du gène Pf332, - les positions respectives des fragments retenus (C1, G90, G1 et G9), - les séquences en acides aminés déduites de parties des séquences de Ci, G90, Gl et G9 (dont la séquence s'étend approximativement dans la seconde moitié de la première colonne puis dans la première moitié de la seconde colonne des séquences représentées dans la figure 1) qui ont plus particulièrement été séquencées. Les parties séquencées sont représentées dans la figure 1 par des épaississement du trait. Les enzymes utilisés pour la production de la carte de restriction étaient les suivants : BamHl(B), Clal(C), Dral(D), EcoRl(E) et Hind3(H). Des parties de ces fragments et plus particulièrement un sous-fragment de G9 (fragment Bath1, EcoRl de 441 paires de bases) a été souscloné dans un plasmide pGEX3(32). La séquence de (ci-après dénommée EB200) protéine exprimée sous forme d'une protéine de fusion soluble PfEB200 avec une glutathione-S-transférase est l'objet d'un encadrement au sein de la partie de G9 qui avait été séquencée. L'expression du polypeptide soluble a été effectuée dans E.coli Dh5 a (F end Al hsdr 17(rkmk-) sup E44 thi-l, > -, rec Al gyr A96 rel Al f8Od lac Z M15).La purification de la protéine a été faite par chromatographie d'affinité sur des billes d'agarose portant des groupes glutathion (32). Le degré de purification de la protéine de fusion a été analysée par électrophorèse sur gel de polyacrylamide contenant 10 % de SDS et par coloration au bleu de Coomassie. Toute technique classique peut être mise en oeuvre pour produire des anticorps spécifiques de la protéine EB200 (sous forme de fusion ou non). Mais, en l'occurrence, les anticorps testés dans les essais dont il est question plus loin ont été produits dans les conditions suivantes : des souris Balb/c ont été immunisées par injection sous-cutanée de la protéine recombinante EB200 (20 pg) en présence de l'adjuvant complet de Freund. Deux injections de rappel, chaque fois de 15 Hg d'antigène, dans de l'adjuvant incomplet de Freund ont été effectuées 3 semaines et 5 semaines respectivement après la premiere injection. Des sérums sanguins contenant les anticorps produits ont été prélevés sur les souris immunisées 7 jours après la dernière injection.Les titres en anticorps ont été déterminés par immunofluorescence sur des globules rouges parasités étalés en couches minces. Ce sont les anticorps d'un tel sérum qui se sont avérés être monospécifiques. Testés en immunoprécipitation et par Westerm Blot sur des extraits parasitaires, les anticorps anti-PfEB200 se sont avérés capables de réagir avec une protéine de poids moléculaire apparent d'environ 1000 kDa appartenant au parasite Plasmodium falciparum. La protéine EB200 et les anticorps correspondants ont encore donné lieu aux observations suivantes - les anticorps dirigés contre la protéine recombinante exprimé par le clone EB200 ont été testés selon leur capacité à inhiber, in vitro, la réinvasion des globules rouges par les mérozoïtes, notamment dans le test décrit par R. Udomsangpetch et al (37) qui lui même renvoie à une publication de Wâhlin, B. et al., intitulée "Human antibodies to a Mr 155,000 Plasmodium falciparum efficiently inhibit merozoïte invasion" (des anticorps humains contre une Mr 155.000 de Plasmodium falciparum inhibent efficacement une invasion aux mérozoïtes) (1984) Proc. Nat. Acad. Sci.USA 81 : 7912.Dans ce test, les parasites cultivés en présence du sérum anti EB200 ont été inhibés à 84,4 % par rapport aux contrôles ou témoins cultivés en présence de sérum normal. L'anticorps monoclonal 33G2 dans le même test a inhibé 86,7 % de la parasitémie. Les activités de sérums anti-EB200 (anticorps polyclonal) et de l'anticorps monoclonal 33G2 étaient donc du même ordre de grandeur, - le sérum anti-EB200 réagi avec la surface des globules rouges de singe infectés par P.falciparum, - l'antigène recombinant PfEB200 est capable d'inhiber la phagocytose des globules rouges parasités opsonisés (technique décrite dans (ii) par les monocytes des singes. Ces résultats témoignent donc de l'exposition de la partie de l'antigène Pf332 qui contient une séquence peptidique correspondante à celle de la protéine EB200 à la surface des globules rouges infectés par le parasite ou à la surface des mérozoites. La protéine EB200 ou des fractions de celle-ci présentent encore les caractéristiques suivantes - elles sont reconnues par des anticorps protecteurs contenus dans des sérums ou des fractions immunoglobuliniques provenant d'animaux, notamment de singes Saimiri sciureus, resistants aux parasites, lesdits sérums ou fractions étant susceptibles de rendre résistants des singes initialement sensibles à Plasmodium falciparum; - elles sont inductrices notamment chez le singe, et plus particulièrement chez le singe Saimiri sciureus, d'anticorps actifs contre des parasites du paludisme, plus particulièrement de Plasmodium falciparum. Les conditions dans lesquelles de tels essais peuvent être realisés ont été décrites, par exemple par Dubois et al, 1984 Proc. Nat. Acad. Sci. USA 81: 229-232; Perrin et al, 1984, J. of Exp. Med. 160: 440-451 et Siddiqui et al, 1987, Proc. Nat. Acad. Sci. USA 84: 3014-3018. Dans ce qui precède il a surtout été fait référence au polypeptide EB200. Il va de soi que l'invention se rapporte également à toute partie de ce polypeptide qui est apte, le cas échéant après incorporation à une protéine de fusion, oligomérisation ou conjugaison à une protéine porteuse, à induire in vivo une réponse immunitaire protectrice sur le singe-écureuil Saimiri sciureus. De même l'invention s'étend à tous les peptides équivalents résultant de l'expression des séquences correspondantes d'ADNs issus de Plasmodiae infectieux pour l'homme, autres que P. falciparum, par exemple des souches 7G8 (Brésil), T9-96 (Thaïlande), FcBR (Amérique du sud), 37D (dérivée de NF54, Pays Bas) et Banjul (Gambie) lesquelles sont toutes reconnues dans des tests d'immunoprécipitation avec le sérum aEB200. I1 reconnait de même des érythrocytes infectés par ces parasites.D'une façon générale tout peptide se différenciant structurellement des précédents par substitutions, délétions ou additions d'un ou de plusieurs aminoacides fait partie de l'invention dès lors qu'il est reconnu par des anticorps prealablement formés contre EB200 et, de préférence, le cas échéant après oligomérisation, incorporation dans une protéine de fusion, conjugaison à une molécule porteuse, dès lors qu'il induit chez le singe écureuil Saimiri sciureus des anticorps actifs contre des parasites du paludisme humain, notamment P. falciparum. On peut également avoir recours pour identifier les polypeptides ou peptides entrant dans le cadre de l'invention, au test de d'inhibition de l'invasion de globules rouges par des mérozoïtes, notamment issus de P.falciparum. En particulier doit être considéré comme faisant partie de l'invention tout polypeptide ou fragment de polypeptide comportant en commun une partie de séquence en acides aminés avec des EB200 et qui est apte à induire in vivo des anticorps capables d'inhiber l'invasion des globules rouges dans une proportion au moins égale à 50 % par rapport à celles observables dans des préparations d'érythrocytes témoins placés dans les mêmes conditions en presence des mêmes concentrations de mérozoltes, mais en l'absence des polypeptides ou partie de polypeptides du genre en question. L'invention concerne naturellement tout polypeptide contenant une partie de séquence s'étendant au delà des extrémités de la séquence EB200, des lors que le polypeptide concerné présenterait des propriétés immunogènes protectrices de la même nature. Par "Partie au delà des extrémités de EB200" on entend par exemple les séquences en acides aminés qui jouxtent la structure en acides aminés de EB200 dans la séquence peptidique plus importante déduite de la séquence nucléotidique du fragment G9, dont EB200 est issu (figure 1C). De la même façon, l'invention étend ses effets à tous peptides dérivés des précédents, si ce n'est que certains résidus aminoacyle de leurs séquences en acides aminés seraient substitués par d'autres, voire délétés ou au contraire intercalés dans les séquences réprésentées, sans que les peptides modifiés obtenus perdent les propriétés biologiques caractéristiques du polypeptide EB200. En particulier l'invention concerne plus particulièrement les séquences monomères correspondantes aux motifs répétitifs dégénérés présents dans EB200, notamment les peptides dont les séquences correspondent aux séquences (a à o) qui suivent (a) S V T G N I L V E G. (b) S V T E E V V G E E K. (c) L V S E E I V T E E G. (d) S V A Q E I V E E D A. (e) P A T E E I D E I E. (f) S V T E E V V E E E G. (g) P V D E E I V Q E E G. (h) T V T E E I I Q G E. (i) S K V E E V V E E Q G. (j) S E N E E I F V E E V. (k) S A S Q E I V Q N E. (1) S G T E E I L E K V. (m) S A S Q E I V Q D G. (n) S V T E Q I I E E L F. (o) P V T E E V V N E E E. des lors que incorporées à une protéine de fusion, oligomérisés ou conjugués à une protéine porteuse, les peptides du genre en question sont aptes à induire in vivo une réponse immunitaire protectrice chez le singe écureuil Saimiri sciureus ou encore à inhiber l'invasion d'érythrocytes par les mérozoïtes. Au même titre fait encore partie de l'invention tout équivalent peptidique contenant des motifs représentables par la formules (X)3 - EE - (X)2 - EE - (X)2-3 dans lequel chacun des groupes X représente, selon l'indice qui suit les signes de parenthèse qui entoure le groupe considéré, un dipeptide ou tripeptide contenant chacun, au moins un résidu amino-acyle hydrophobe, cet équivalent peptidique étant susceptible d'induire une réponse immunitaire protectrice chez le singe-écureuil Saimiri sciureus ou d'inhiber une invasion in vitro d'érythrocytes par P.falciparum. Comme cela a déjà été indiqué plus haut, l'invention concerne toute protéine de fusion, oligomère ou conjuguée faisant intervenir les peptides conformes à l'invention. Ces peptides peuvent être produits par synthèse chimique. I1 peut encore en être de même des oligomères de ces peptides ou des peptides conjugués à des molécules porteuses. Des techniques permettant d'effectuer ces synthèses sont rappelées dans ce qui suit, bien entendu de façon non limitative. Par exemple, on aura recours à la technique de synthèse en solution homogène décrite par HOUBENWEYL dans l'ouvrage intitulé "Methode der Organischen Chemie" (Méthodes de la Chimie Organique) édité par E. Wunsch, vol.15-I et II., THIEME, Stuggart 1974. Cette méthode de synthèse consiste à condenser successivement, dans l'ordre requis, les aminoacides ou peptides préalablement formés avec d'autres aminoacides ou peptides préalablement formés choisis de façon à permettre la production d'un polypeptide ayant la séquence finale choisie en aminoacides, étant entendu que l'on aura eu soin, si besoin, de protéger au prealable toutes les fonctions réactives portées par ces aminoacides ou peptides, à l'exception de celles de leurs fonctions amine et carboxyle devant intervenir dans la formation des liaisons peptidiques, notamment après activation desdites fonctions carboxyle.En variante, on pourra avoir recours à des réactions de couplage mettant en jeu des réactifs de couplage classique, du type carbodiimide, tels que par exemple la 1-éthyl-3-(3 dimethyl-amino-propyl)-carbodiimide. Lorsque l'aminoacyle mis en oeuvre possède une fonction acide supplémentaire (notamment dans le cas de l'acide glutamique), ces fonctions sont protégées, par exemple par des groupes t-butylester. Dans le cas de la synthèse progressive, aminoacide par amino-acide, la synthèse débute de préférence par la condensation de l'aminoacide Cterminal avec l'aminoacide qui correspond a l'aminoacyle voisin dans la séquence désirée et, de proche en proche, avec les autres acides aminés choisis de façon appropriée, la synthèse s'achevant avec la fixation de l'acide aminé N-terminal. I1 est souvent avantageux d'avoir recours à la technique décrite par R.D. MERRIFIELD dans l'article intitulé "Solid phase peptide synthesis" (J. Am. Soc., 45: 2149-2154). Le premier acide aminé C-terminal de la chaîne à produire est fixé sur une résine poreuse de polymere, jouant le rôle de support insoluble par l'intermédiaire de son groupe carboxylique. La fonction amine de ce premier aminoacide aura normalement été protégée au préalable avec un groupe protecteur approprie, par exemple par un groupe tbutyloxycarbonyle. L'oligomérisation des séquences monomeres obtenues peut être conduite de toute façon en soit connue. Ces oligomeres contiennent, par exemple de 2 à 20 unites monomètres. Il nty a d'ailleurs pas de limite au nombre maximum d'unités monomères suceptibles d'être inclues dans ltoligomère, si ce n'est la capacité de l'oligomère finalement obtenu d'être hydrosoluble ou facilement solubilisable dans l'eau. Une première méthode d'oligomérisation ou de polymérisation du monomere consiste dans la réaction de celui-ci avec un agent de réticulation, tel que le glutaraldéhyde. On peut également avoir recours à d'autres méthodes d'oligomérisation ou de couplage, par exemple à celle mettant en jeu des couplages successifs d'unités monomères, par l'intermédiaire de leurs fonctions terminales carboxyle et amine, en présence d'agents de couplage homo- ou hétérobifonctionnels, les autres groupes fonctionnels portés par ces unités monomeres ayant, le cas échéant, été protégés au préalable. Un autre procédé d'oligomérisation préféré fait appel aux techniques décrites par Richman et Reese, RT. (1988) Proc. Nat. Acad. 85: 1662-1666 ou encore Posnett, DN. (1988) The Journal of Biological Chemistry Vol. 283, N"4. Ces procédés mettent en jeu une petite "matrice centrale peptidique" (peptidyl core matrix) formée à partir d'un nombre restreint d'acides aminés trifonctionnels, en particulier des lysines, interconnectés entre eux de façon à comporter un nombre de fonctions libres important vis à vis du poids moléculaire de cette matrice centrale et formant autant de bras ou dendrites qui peuvent alors être conjuguées à des aminoacides distincts ou aux extrémités C-terminales. On se reportera plus particulierement à l'article de Tam, J.P. publié en 1988 dans Proc. Nat. Acad. USA, Vol. 85, 5409-5413, dans lequel les structures de telles matrices centrales produites à partir de lysine ont été représentés. En particulier on peut avoir recours à de telles "matrices centrales à base d'heptalysines comportant des sites pour la fixation de 9-16 chaînes peptidiques. Une autre façon de combiner des résidus lysine résulte du schéma suivant ("matrice centrale" dite sous la forme d' "octopussy") Cys - SS - C - Peptide K Y \ Cys - SS - C - Peptide K /Cys - SS - C - Peptide / \ K / PCys - SS - C - Peptide Cys - SS - C - Peptide KM YMcys - SS - C - Peptide \ ,ces - SS - C - Peptide M Cys - SS - C - Peptide dans laquelle K représente la lysine et "Peptide" a la signification sus-indiquée; d'ou il résulte un système dénommé MAP (abréviation partielle de l'expression anglaise "Multiple Antigen Peptide System" ou "Système d'Antigene Peptidique Multiple"). Partant par exemple d'une "matrice centrale" comportant huit fonctions amine susceptibles d'être mises en réaction avec les peptides qui doivent y être rattachés, on procède au couplage des peptides à fixer, en particulier ceux conformés à l'invention, à cette matrice centrale par l'intermédiaire des fonctions réactives de celle-ci, et ce par la mise en oeuvre des techniques applicables à la synthèse peptidique. On peut se reporter aux articles précédemment identifiés pour ce qui concerne les techniques préférées susceptibles d'être mises en oeuvre. L'expression "oligomère" inclut également les conjugués obtenus par couplage covalent de plusieurs unités monomères a une molécule porteuse (naturelle ou synthetique), physiologiquement acceptable et non toxique, par l'intermédiaire de groupements réactifs complémentaires respectivement portés par la molécule porteuse et/ou les unités monomètres. Des exemples de groupements appropriés sont illustrés dans ce qui suit. A titre d'exemple de molécules porteuses ou supports macromoléculaires entrant dans la constitution des conjugués selon l'invention, on mentionnera des protéines naturelles, telles que l'anatoxine tétanique, l'ovalbumine, des sérumalbumines, des hémocyanines, une protéine purifiée de la tuberculine ("Purified Protein Derivative" = PPD) etc ... A titre de supports macromoléculaires synthetiques, on mentionnera par exemple des polylysines ou des poly(D-L-alanine)-poly(L-lysine) ou des protéines immunologiquement inertes. La littérature mentionne d'autres types de supports macromoléculaires susceptibles d'être utilisés, lesquels presentent en général un poids moléculaire supérieur à 20 000. On peut avoir recours à tout procédé de couplage faisant intervenir, d'une part, une ou plusieurs fonctions réactives du peptide et, d'autre part, une ou plusieurs fonctions réactives de molécules supports. Avantageusement, il s'agit des fonctions carboxyle et amine, lesquelles peuvent donner lieu à une réaction de couplage en présence d'un agent de couplage du genre de ceux utilisés dans la synthèse des protéines, par exemple, le 1éthyl-3-(3-diméthylaminopropyl)- carbodiimide, le N-hydroxybenzotriazole, etc... On peut encore avoir recours à la glutaraldéhyde, notamment lorsqu'il s'agit de relier entre eux des groupes aminés respectivement portés par le peptide et la molécule support. L'invention concerne encore une variante de procédé de production des oligomères selon l'invention, cette variante consistant dans la transformation des cellules d'une culture de cellules compétentes par un vecteur contenant une séquence de nucléotides codant pour un polypeptide oligomère contenant les susdites unités monomères sous le contrôle d'un promoteur reconnu par lesdites cellules compétentes, et ce dans des conditions autorisant l'expression dans ces cellules de ladite séquence oligomérique de nucléotides, et la récupération du produit d'expression de ladite séquence de nucléotides. Celle-ci fait également partie de l'invention.Il n'est point nécessaire d'insister sur les techniques susceptibles d'être utilisées, si ce n'est que, de préférence, les éléments du vecteur sont de préférence tels que le produit d'expression soit transporté à l'extérieur des cellules compétentes, voire même excrété dans leur milieu de culture. L'invention concerne naturellement les fragments d'acides correspondants, plus particulièrement de tout ou partie de ceux qui découlent de la figure l(c) à propos de la séquence G9. Ce fragment d'ADN peut être, soit à l'état individualisé, soit recombiné au sein d'un ADN recombiné de taille plus importante.Parmi ces ADNs de tailles plus importantes il est entendu que l'invention concerne - des ADNs codant pour des protéines de fusion faisant intervenir une séquence d'ADN codant pour un peptide conforme à l'invention, avec des séquences d'ADN codant elles-mêmes pour des séquences peptidiques hétérologues n'interférant pas les propriétés d'induction par la séquence polypeptidique selon l'invention d'une immunité protectrice contre P.falciparum - tout vecteur contenant cette séquence polypeptidique placé sous le contrôle d'un promoteur autorisant son expression dans un hôte cellulaire compétent et dont les polymérases sont aptes à reconnaître ledit promoteur. Il va également de soi que l'invention étend ses effets aux cultures cellulaires ainsi transformées par de tels vecteurs ou ADN recombinants qui permettent l'expression du polypeptide ou du fragment de polypeptide selon 1' invention. De même font partie de l'invention les anticorps spécifiques des séquences contenues dans EB200 ou des peptides ou fragments de peptides présentant les mêmes propriétés biologiques telles qu'elles ont été définies plus haut. Cette protection étend ses effets à tous anticorps monoclonaux spécifiques des mêmes séquences polypeptidiques, ainsi qu'aux hybridomes sécréteurs de ces anticorps monoclonaux. Il sera compris que l'homme du métier est à même de produire ces anticorps monoclonaux et de les sélectionner dans des opérations de tri faisant intervenir la reconnaissance spécifique par les anticorps monoclonaux à sélectionner, des séquences en acides aminés de peptides caractéristiques de l'invention. L'invention concerne de même toute composition pharmaceutique mettant en oeuvre ces polypeptides, le cas échéant associés à des véhicules pharmaceutiquement acceptables facilitant leur utilisation dans des opérations de vaccination afin d'induire la production in vivo, notamment chez l'homme, d'une réponse immunitaire protectrice contre des parasites malariques infectueux. L'invention est également relative aux préparations d'anticorps, induits par EB200 ou les peptides équivalents de l'invention, que ces anticorps soient polyclonaux (sérums les contenant ou fraction immunoglobulinique purifiée à partir de ces sérums) ou anticorps monoclonaux obtenus comme indiqués ci-dessus. En particulier l'invention concerne des compositions pharmaceutiques contenant de tels anticorps aux fins d'entrer en compétition in vivo avec le parasite humain, notamment chez des individus infectés ou menacés d'infection par ce parasite, notamment du type P. falciparum, afin de les protéger contre les effets pathogenes dus à cette infection. Les anticorps selon l'invention sont aussi plus particulièrement caractérisés par le fait qu'ils ne donnent pas lieu à des réactions immunitaires croisées avec les produits d'expression du gène Pfll-l (27) et du gene Pfl55/RESA (38). Le clone contenant la séquence nucléotidique codant pour EB200, contenu dans Escherichia coli DH5a a été déposé le 25 juillet sous le n' 1-1128 à la Collection Nationale de Cultures de Microorganismes de l'institut Pasteur de Paris (CNCM). La bibliographie a laquelle il a été fait référence dans la présente description par des renvois à des numéros de publication complete la présente description. L'invention concerne également les autres applications de ces anticorps, notamment leur utilisation pour le diagnostic in vitro, par exemple effectué sur un échantillon de serum, d'une infection par des parasites paludéens, notamment au stade de l'infection des érythrocytes sanguins, par exemple au moyen d'une réaction antigène-anticorps classique. A l'inverse, l'invention concerne enfin l'application des peptides eux-mêmes à la détection in vitro de la présence d'anticorps caractéristiques de l'infection par des parasites paludéens, notamment du type P.falciparum ou analogue, et plus particulierement encore au stade érythrocytaire de ces parasites, sous forme de mérozoites. 1. Ahlborg, N., K. Berzins, and P. Perlmann. 1991. Definition of the epitope recognized by the Plasmodium falciparum-reactive human monoclonal antibody 33G2. Mol. Biochem. ParasitoL 46:89-96. 2. Berendt, A. R., D. J. P. Ferguson, and C L Newbold. 1990. Sequestration in Plasmothuin falcipanun malaria: Sticky cells and sticky problerns ParasitoL Today. 6:247-254. 3. Chen, E. J., and P. H. Seeburg. 1985. Supercoil sequencing: a fast and simple method for sequencing plasmid DNA. DNA. 4:165-170. 4. Chomczynski, P., and N. Sacchi. 1987. Single-step methoci of RNA isolation by acid guanidinium thiocyanate-phenolchloroform extraction. Anal. Biochem. 162:156-161. 5. Chu, G., D. Vollrath, and R J. Davis. 1986. Separation of large DNA molecules by contour-clamped homogeneous electric fields. Science. 234:1582-1585. 6. Coppel, R. L., J. G. Culvenor, A. E. Bianco, P. E. Crewther, H. D. Stahl, G. V. Brown, R. F. Anders, and D. J. Kemp. 1986. Variable antigen associated with the surface of erythrocytes of Plasmodium falciparum. Mol. Biochem. Parasitol. 20:265-277. 7. Corcoran, L. M., J. K. Thompson, D. Walliker, and D. J. Kemp. 1988. Homologous recombination within subtelomeric repeat sequences generates chromosome size polymorphisms in Plasinodiwn.falciparum CelL 53:807-813 8. Gassner, D., Z Shraideh, and K. Wohlfarth-Bottermann. 1985. A giant titin-like protein in Physarwn potycephalum: evidence for its candidacy as a major component of an elastic cytoskeletal superthin filament lattice. Eur. J. Cell BioL 37:44-62. 9. Goding, J. W., and E. Handman. 1984. Electrophoretic analysis of protein antigens. In: Genes and antigens of parasites. 383-415. 10. Groux, H., and J. Gysin. 1990. Opsonization as an effector mechanism in human protection against asexual blood stages of Plasmodium falciparum: functional role ouf ego subclasses. Res. Immunol. 141:529-542. 11. Groux, H., R. Perraut, O. Garraud, J. P. Poingt, and J. Gysin. 1990. Functional characterization of the antibody-mediated protection against bloom stages of Plasmodiìunfalciparum in the monkey Saimiri sciureus. Eur. J. ImmunoL 20:2317-2323. 12. Kemp, D.J., LM. Corcoran, R.L. Coppel, H.D. Stahl, A.E. Bianco, G.V. Brown, and R.F. Anders. 1985. Size variation in chromosomes from independent cultured isolates of Plasmodium falciparum. Nature (London). 315:347-350. 13. Koenen, M., A. Scherf, O. Mercereau, G. Langsley, L. Sibilli, P. Dubois, L. Pereira da Silva, and B. Müller-Hill. 1984. Human antisera detect a Plasmodium falciparum genomic clone encoding a nonapeptide repent Nature London). 311:382-384 14. Labeit, S., D. P. Barlow, M. Gautel, T. Gibson, J. Hoit, C L Hsieh, U. Franke, K. Lconard, J. Wardale, A. Whiting, and J. Trinick 1990. A regular pattern of two typcs of 100 residues motif in the sequencc of titin.Nature(London). 231:507-509 15. Laemmli, U. K. 1970. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature (London). 227:680-685. 16. Langsley, G., J. E. Hyde, M. Goman, and J. G. Scaife. 1983. Cloning and characterisation of the rRNA genes from the human parasite Plasmodium falciparum. Nucl. Acids Res. 24:8703-8717. 17. Leech, J. H., J. W. Barnwell, L. H. Miller, and R. J. Howard. 1984. Identification of a strain-specific malarial antigen exposed on the surface of Plasmodium falciparum-infected erythrocytes. J. Exp. Med. 159:1567-1575. 18. Maniatis, T., E. F. Fritsch, and J. Sambrook. 1982. Molecular cloning. A laboratory manual. Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY. 19. Maruyama, K 1986. Connectin, an elastic filamentous protein of striated muscle. Int Rev. Cytol. 104:81-114. 20. Mattei, D., K. Berzins, M. Wahlgren, R. Udomsangpetch, P. Perlman, H. W. Griesser, k Scherf, B. Müller-Hill, S. Bonnefoy, M. Guillotte, G. Langsley, L Pereira da Silva, and O. Mercereau-Puijalon 1989. Cross-reactive antigenic determinants present on differentPlasmodumfalciparum blooSstagc anti gens. Parasite ImmunoL 11:15-30. 21. Mattei, D., G. Langsley, C Braun-Breton, M. Guillotte, J. F. Dubremetz, and O. Mercereau-Puijalon. 1988. Thc S-antigen of Plasmodium falciparum Palo Alto represents a new S-antigen serotype. MoL Biochem. ParasitoL 27:171-180. 22. Mattei1 D., A. Scherf, O. Bensaude, and L. Pereira da Silva 1989. A heat shock-like protein from the human malaria parasite Plasmodium falciparum induces autoantibodies. Eur J Immunol 19:1823-1828. 23. McCutchan, T.F., J.LHansen, J.B. Dame, and J.t Mullins, 1984. Mung bean nuclease cleaves Plasmodium genomic DNA at sites before and after genes. Science 225:625-628. 24. Mercereau-Puijalon, O., G. Langslcy, D. Mattei, M. Guillott, T. Blisnick, K. Berzins, H. W. Griesser, A. Scherf, B. Müller-Hill, and L. Pereira da Silva 1987. Presence of cross-reacting determinants on several blood-stage antigens of Plasmodiumfalcipanun. UCLA Symp. 42:343-354. 25. Pasvol, G., R. J. M. Wilson, M. E. Smalley, and J. Brown. 1978. Separation of viable schizont-infected red blood cells of Plasmodium falciparum from human blood. Ann. Trop. Med. Parasitol. 72:87-88. 26. Patarapotikul, J., and G. Langsley. 1988. chromosome size polymorphism in Plasmodium falciparum can involvc deletions of the subtelomerjo pPFrep20 séquence. NucL Acids Rcs. 16:4331-4340. 27. Petersen, C., R Nelson, J. Leech, J. Jensen, W. Wollish, and A. Scherf. 1990. The gene product of the PlasmodTumfalciparum 11.1 locus is a protein larger than one megadalton. Mol. Biocherti. Parasitol. 42:189-196. 28. Pologe, LG., and J.V. Ravetch. 1988. Large deletions result from breakage and healing of P.falciparum chromosomes. Cell. 55: 869-874. 29. Ponzi, M., T. Pace, EL Dore, and C Frontali. 1985. Identification of a telomenc DNA sequence in Plasmodium. berghei. EMBO J. 4:2991-2995. 30. Pudles, J., M. Moudjou, S. Hisanaga, K. Maruyama, and H. Sakai. 1990. Isolation, characterisation and immunochemical properties of a giant protein from sea urchin egg cytomatrix. Exp. Cell Res. 189:253-260. 31. Schwartz, D. C., and C. R. Cantor. 1984. Separation ofyeast chromosome-sized DNAs by pulse field gradient electrophoresis. Cell. 37:67-75. 32. Smith, D. B., and K S. Johnson. 1988. Single-step purification of polypeptides expressed in Escherichia coli as fusion porteins with glutathione S-transferase. Gene. 29:3140. 33. Smith, G.E. and, M. D. Summers. 1980. nie bidirectional transfer of DNA and RNA to nitrocellulose or diazobenzylomethyl-paper. Anal. Biochem 109,123-129. 34. Taylor, D.W., M. Parra, G.B. Chapman, M.E. Stearns, J. Rener, M. Aikawa, S. Uni, S.B. Aley, L.J. Panton, and R.J. Howard. 1987. Localization of Plasmodium falciparum histidine rich protein I in the erythrocyte skeleton under knobs . MoL Biochem. Parasitol. 25: 165 174. 35. Trager, W. T. and J. B. Jensen. 1976. Human malaria parasite in continuous culture. Science. 193:673-675. 36. Udomsangpetch, R., M. Aikawa, K. Berzins, M. Wahlgren, and P. Perlmann. 1989. Cytoadherence of knobless Plasmodiumfalciparum-infected erythrocytes and its inhibition by humain monoclonal antibody. Nature (London). 338:763-765. 37. Udomsangpetch, R., J. Carlsson, B. Wahlin, G. Holmquist, L. S. Ozaki, A. Scherf, D. Mattei, O. Mercereau-Puijalon, S. Uni, M. Aikawa, K. Berzins, and P. Perlmann. 1989. Reactivity of the human monoclonal antibody 33G2 with repeated sequences of three distinct Plosmodiwnfalciparrun anti gens. J. Immunol. 142:362S3626. 38. Udomsangpetch, R., K. Lundgren, K. Berzins, B. Wahlin, H. Perlmann, M. Troye Blomberg, J. Carlsson, M. Wahlgren, P. Perlmann, and A. Björkman. 1986. Human monoclonal antibodies to Pf155, a major antigen of malaria parasite Plasmodium falcipanun. Science. 231:57-59. 39. Vernick, K. D., D. Walliker, and T. F. McCutchan. 1988. Genetic hypervariability of telomere-related sequences is associated with meiosis in Plasmodium falciparum. Nucl. Acid. Res. 16:6973-6985. 40. Wahlgren, M. 1986. Antigens and antibodies involved in humoral irnrnunity to Plasmodium falciparum. Thesis, Stockholm, Sweden, Karolinska Institutes 41. Walliker, D., L A. Quakyi, T. E. Wellems, T. F. McCutchan, A. Szarfman, W. T. London, L. M. Corcoran, T. R. Burkot, and R. Carter. 1987. Genetic analysis of the human malaria parasite PIaSmodiumfakiparum. Science. 236:1661-1666. 42. Wang, K., and A. McClure. 1979. Tu:Titin: Major myofibrillar components of striated muscle. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 76:3698-3702. 43. Wellems, T. E., D. Walliker, C. L. Smith, V. E. Rosario, W. L. Maloy, R. J. Howard, R. Carter, and T. F. McCutchan. 1987. A histidine-rich prtotein gene marks a linkage group favored strongly in a genetic cross of Plasmodium falciparum. Cell. 49:633-642. REVENDICATIONS 1. Polypeptide contenant la séquence polypeptidique ci-dessous définie par sa séquence en acides aminés SVTGNI LVEG SVTEEVVGEEK LVSEEIVTEEG S V A Q E I V E E D A P A T E E I D E I E S V T E E V V E E E G PVDEEIVQEEG TVTEEIIQGE SKVEEVVEEQG SENEEIFVEEV SASQEIVQNE SGTEEILEKV SASQEIVQDG SVTEQIIEELF PVTEEVVNEEE ou une partie de cette séquence dès lors que celleci est apte, le cas échéant lorsqu'elle est incorporée à une protéine de fusion, oligomérisée ou conjuguée à une protéine porteuse, à induire in vivo une réponse immunitaire protectrice chez le singe écureuil Saimiri sciureus. 2. Polypeptide selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il est capable d'induire in vivo des anticorps eux-mêmes capables d'inhiber l'invasion de globules rouges par des mérozoïtes. 3. Polypeptide selon la revendication 2, caractérisé en ce que ledit polypeptide ou ladite partie de séquence polypeptidique est apte à induire in vivo des anticorps capables d'inhiber l'invasion des globules rouges dans une proportion au moins égale à 50 % par rapport à celles observables dans des préparations d'érythrocytes témoins placés dans les mêmes conditions en présence des mêmes concentrations de mérozoïtes, mais en l'absence des polypeptides ou partie de polypeptides du genre en question. 4. Partie de polypeptide selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisée en ce qu'elle est constituée par l'une des séquences (a) à (o) suivantes (a) S V T G N I L V E G. (b) S V T E E V V G E E K. (c) L V S E E I V T E E G. (d) S V A Q E I V E E D A. (e) P A T E E I D E I E. (f) S V T E E V V E E E G. (g) P V D E E I V Q E E G. (h) T V T E E I I Q G E. (i) S K V E E V V E E Q G. (j) S E N E E I F V E E V. (k) S A S Q E I V Q N E. (1) S G T E E I L E K V. (m) S A S Q E I V Q D G. (n) S V T E Q I I E E L F. (o) P V T E E V V N E E E. ou par un équivalent peptidique ayant un motif représentable par (X)3 - EE - (X)2 - EE - (X)2-3 dans lequel chacun des groupes X représente, selon l'indice qui suit les signes de parenthèse qui entoure le groupe considéré, un dipeptide ou tripeptide contenant chacun, au moins un résidu amino-acyle hydrophobe, cet équivalent peptidique étant susceptible d'induire une réponse immunitaire protectrice chez le singe-écureuil Saimiri sciureus. 5. Polypeptide selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisé en qu'il est incorporé à une protéine de fusion, oligomérisé ou conjugué de façon covalente à une molécule, notamment protéine porteuse. 6. Composition capable d'induire in vivo des anticorps aptes à détruire les parasites responsables du paludisme chez l'homme, notamment à leur stade sanguin, caractérisée en ce qu'elle contient un polypeptide ou partie de polypeptide selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, en association avec un véhicule pharmaceutiquement acceptable. 7. Anticorps spécifiques du polypeptide ou de la partie de polypeptide selon l'une quelconque des revendications 1 à 4. 8. Fragment d'ADN, caractérisé en ce qu'il code pour le polypeptide ou partie de polypeptide selon l'une quelconque des revendications 1 à 4. 9. Fragment d'ADN selon la revendication 8, caractérisé en ce qu'il se trouve à l'état recombiné au sein d'un ADN codant pour une protéine de fusion, dont les éléments d'ADN extérieurs au susdit fragment sont hétérologues vis-à-vis de celui-ci. 10. Vecteur modifié par le fragment d'ADN selon la revendication 8 ou la revendication 9, dans lequel ledit fragment se trouve placé sous le contrôle d'un promoteur autorisant son expression dans un hôte cellulaire dont les polymérases reconnaissent ledit promoteur. 11. Culture cellulaire transformée par le vecteur selon la revendication 10. 12. Application des polypeptides ou peptides selon l'une quelconque des revendications 1 à 5 au diagnostic in vitro de la présence d'anticorps anti-paludéens dans un échantillon biologique, notamment sérum sanguin, prélevé chez la personne soumise au diagnostic. 13. Application des anticorps selon la revendication 7 au diagnostic in vitro d'une infection par un parasite paludéen dans un échantillon biologique, notamment sérum sanguin chez la personne soumise au diagnostic.