FR 2690838 A1 19931112 FR 9205573 A 19920506 ENSEMBLE DE VACCINATION CONTRE LA MALADIE HEMORRAGIQUE VIRALE DU LAPIN ET VACCINS CONDITIONNES POUR ETRE UTILISES DANS CET ENSEMBLE. La présente invention a trait à un ensemble de vaccination contre la maladie hémorragique virale (VHD) du lapin. Elle a également trait à un vaccin contre cette maladie, susceptible d'être mis en oeuvre dans cet ensemble, ainsi qu'à un procédé de vaccination du lapin contre la maladie hémorragique virale. La maladie hémorragique virale du lapin est une maladie fortement léthale provoquée par un petit virus caliciforme dit VHD ÇOhlinger & al., 1990). Elle provoque de 80 à 100 de mortalité dans les élevages de lapins à partir de 10 semaines. Il a déjà été proposé un certain nombre de vaccins constitués de cultures tissulaires du virus convenablement inactivées au formol ou à la 2-propiolactone et adjuvés à l'hydroxyde d'aluminium, à la saponine ou en adjuvant huileux. Ces vaccins sont administrés par voie sous-cutanée ou intra-musculaire à l'aiguille, ce qui confére une excellente protection mais nécessite un changement fréquent d'aiguille pour éviter la dissémination d'autres agents pathogènes. La vaccination est délicate et couteuse en main d'oeuvre. Afin d'éviter ces inconvénients, la déposante a déjà essayé de procéder à des vaccinations à l'aide d'un appareil classique d'injection par jet sans aiguille, équipé d'une tête portant une buse d'éjection, mais ces essais avaient échoué en raison de l'incapacité de l'appareil à injecter correctement et de façon répétitive la dose minimale indispensable de vaccins. En conséquence, l'invention se propose de fournir un ensemble de vaccination permettant d'effectuer une vaccination contre la maladie virale hémorragique du lapin, à l'échelle industrielle, de façon efficace et économique. Un autre objectif de l'invention est de réaliser une telle vaccination avec une probabilité extrêmement élevée de protection de chaque animal. L'invention a pour objet un ensemble de vaccination permettant la vaccination par voie parentérale contre la maladie hémorragique virale du lapin, à base de culture tissulaire du virus inactivée et adjuvée, caractérisé en ce qu'il comporte un appareil d'administration par jet agencé pour la distribution intradermique de doses individuelles d'un volume de l'ordre de 0,2 ml de vaccin, associé à une source d'alimentation contenant ledit vaccin conditionné pour présenter un titre protecteur dans ledit volume de dose. La dose, de l'ordre de 0,2 ml de vaccin, peut être injectée en une ou plusieurs fois et, par exemple, en deux volumes successifs de l'ordre de 0,1 ml de vaccin. Par appareil d'administration par jet, on entend un appareil permettant l'administration intradermique, sans aiguille, par formation d'un jet à haute pression. Selon une forme de réalisation perfectionnée particulièrement efficace de l'invention, on utilise un appareil ayant une tête à buses multiples, permettant l'administration de la dose par plusieurs jets séparés, le nombre de jets étant de préférence au moins égal à trois. L'ensemble de vaccination selon l'invention permet ainsi de vacciner un lapin à l'intérieur du pavillon de ltoreille et ceci à une cadence industrielle. Les appareils d'administration de vaccins ou autres préparations médicamenteuses par jet sont en eux-mêmes bien connus et l'homme de l'art pourra facilement se les procurer et les adapter pour la mise en oeuvre dans l'ensemble selon l'invention. Un appareil utile est, par exemple, celui vendu par la société Béarn Mécanique Aviation, Billères France sous la marque Mésoflash ou la marque Sanijet. La pression des jets est de préférence de l'ordre de 90 à 110 bar. Par volume de dose de l'ordre de 0,2 ml, on entend un volume qui est de préférence de 0,2 ml mais qui peut également être un peu différent et, par exemple, être compris entre 0,1 et 0,3 ml. L'invention a également pour objet un vaccin contre la maladie hémorragique virale du lapin à base d'une culture tissulaire inactivée du virus VHD, conçu pour la mise en oeuvre de l'ensemble précité et caractérisé en ce qu'il comporte un titre protecteur sous un volume de l'ordre de 0,2 ml (défini comme précédemment) et contenant, de préférence, un adjuvant à l'hydroxyde d'aluminium. Le vaccin est préparé de façon à présenter un titre de préférence de l'ordre de SDV 90 dans 0,2 ml. L'invention a également pour objet un procédé de vaccination contre la maladie virale hémorragique du lapin, caractérisé en ce qu'on administre dans le pavillon de l'oreille du lapin, par voie intradermique, une dose vaccinale de l'ordre de 0,2 ml par jet sans aiguille, et notamment par pluralité de jets, de préférence de trois jets, d'un vaccin à base de culture tissulaire de VHD, de préférence adjuvé à l'hydroxyde d'aluminium. La mise en oeuvre de l'invention peut comporter, outre la valence inactivée de VHD, d'autres valences virales ou bactériennes. Ainsi, le vaccin peut comprendre notamment la valence myxomatose vivante. I1 est particulièrement remarquable de constater que l'on peut associer ces deux valences, la valence myxomatose étant dissoute dans la valence VHD liquide. I1 est également remarquable de constater que par voie intradermique la protection contre la myxomatose est également obtenue. La valence myxomatose peut être, par exemple, constituée de la valence de Shope vivante (souche vaccinale hétérologue, virus de Shope contre la myxomatose) ou bien une valence à partir d'une souche vaccinale homologue telle que SG33. D'autres avantages et caractéristiques de l'invention apparaîtront à la lecture de la description suivante, faite à titre d'exemple non limitatif et se référant au dessin annexé dans lequel la figure unique représente une vue schématique d'un ensemble selon l'invention. 1") Préparation de la valence VHD Le virus VHD de souche AG88 a été isolé en octobre 1988 à partir de deux lapins fauves de Bourgogne, atteints de maladie hémorragique virale. Le lot de semence primaire virale est réparti en ampoules et conservé congelé à -70 "C. Bien entendu, d'autres souches virales analogues peuvent être obtenues sans difficulté par prélèvement à partir de lapins malades. Le virus est inoculé à des lapins sensibles par voie sous-cutanée ou intra-musculaire à raison de 100 DL50. Après la manifestation de la symptomatologie spécifique de la maladie, les foies de lapins infectés sont récoltés, broyés et mis en suspension dans du tampon phosphate additionné d'antibiotiques. Le broyat obtenu est ensuite clarifié par centrifugation, puis par tamisage. L'inactivation est effectuée par addition de formaldéhyde. Le broyat, ainsi inactivé, forme le principe actif et est mélangé dans une cuve à de l'hydroxyde d'aluminium, en tampon physiologique contenant du mercuriothiolate sodique. Composition de la valence VllD Chaque dose de vaccin valence VHD contient - virus VHD inactivé, souche AG88 q.s. pour obtenir au minimum 5 DV90 - Ai (sous forme d'hydroxyde) 0,35 mg t 0,7 mg - Mercuriothiolate sodique, au maximum 0,02 mg - Formaldéhyde libre, au maximum 0,075 mg - Kanamycine, au maximum 0,30 mg - Vancomycine, au maximum 0,03 mg - Polymyxine, au maximum 0,06 mg - Tampon physiologique, qsp............................ 0,2 ml 2 ) Préparation de la valence Shope La souche de fibrome de Shope a subi des passages successifs d'amplification sur derme de lapin, puis des passages d'adaptation sur cellules IDL7 (cellules de derme de lapereau). Le lot de semence primaire virale est réparti en ampoules puis lyophilisé et conservé à basse température inférieure à 40 C. Le virus est multiplié sur cellules IDL7 (cellules de derme de lapereau). On effectue la récolte quatre jours plus tard. La valence est lyophilisée. Composition de la valence Shope. Chaque dose de vaccin valence Shope contient - Virus de Shope, titrant après reconstitution avec la valence VHD, au maximum 102'7 DICC50 - Saccharose, au maximum 7,5 mg - Albumine bovine, au maximum 1,0 mg - Kanamycine, au maximum 0,05 mg - Polymyxine, au maximum 0,015 mg 3 ) Préparation de la valence myxomatose SG33. Le virus SG33 provient d'une souche de fibrome de la myxomatose isolée sur un lapin malade de myxomatose. Il a subi des passages sur lapins puis sur oeufs embryonnés, sur cellules de reins de lapin à température décroissant jusqu'à 33 C et enfin sur cellules d'embryons de poulet. La souche a subi ensuite des passages supplémentaires sur cellules d'embryons de poulet EOPS. Le lot de semence primaire virale est réparti en ampoules1 puis lyophilisé et stocké à -40 C. Composition de la valence SG33. Chaque dose de vaccin contient - Virus SG33, titrant après reconstitution avec la valence VHD, au minimum................................. 102,0 DICC50 - Saccharose, au maximum 8,2 mg - Albumine bovine, au maximum .................... 1,1 mg - Kanamycine, au maximum.......................... 0,055 mg - Vancomycine, au maximum 5,5 pg 4 ) Ensemble selon l'invention L'ensemble selon l'invention comporte d'une part un appareil d'administration par jet et d'autre part la source d'alimentation en vaccin de l'appareil. L'appareil, d'un type tout à fait classique, comporte une poignée 1 au-dessus de laquelle se trouve disposé un corps 2 à l'extrémité antérieure duquel se trouve disposée une chambre 3 d'un volume de 0,2 ml. Par l'intermédiaire d'un filtre 4, la chambre 3 se poursuit par une pluralité de buses d'éjection 5 extrêmement fines traversant la tête multi-injection 6 de l'appareil. Le mécanisme permettant d'éjecter la dose contenue dans la chambre en formant les jets à haute pression, et qui comprend un piston 8 pénétrant dans la chambre, peut être d'un type quelconque et de multiples mécanismes ont été décrits dans l'art antérieur. Les mécanismes de ce genre comportent généralement un ressort propulsant le piston 7 vers l'avant et un moyen moteur, électrique, pneumatique ou manuel, permettant de ramener le piston en arrière dans une position où il est bloqué pour être libéré lorsque l'on appuie sur une gâchette 8. L'alimentation de la chambre de l'appareil en vaccin s'effectue à l'aide d'un récipient multidoses 9, fixé à la partie supérieure de l'appareil et relié par un canal convenable à la chambre 3 de façon que, lors du mouvement d'expulsion du piston 7 vers l'avant, la communication avec cette source est fermée pendant que le contenu de la chambre de 0,2 ml est expulsé sous forme de trois jets, alors qu'au contraire le retour en arrière du piston après l'administration de la dose entraîne l'aspiration et le remplissage de la chambre par le vaccin provenant du récipient 9. La pression de jet est de l'ordre de 100 bar. 5 ) Mise en oeuvre de l'ensemble selon l'invention contenant la valence unique VHD Deux lots de lapins sqnt constitués - lot 1 : 10 lapins1 - lot 2 : 3 lapins. Chaque lapin du premier lot reçoit une dose de 0,2 ml par voie intradermique dans le pavillon de l'oreille grâce à deux déclenchements de 0,1 ml en deux sites d'injection, aboutissant à une répartition intradermique de la dose de 0,2 ml en six points d'injection. Sept jours après vaccination, les lapins des lots 1 et 2 reçoivent chacun par voie intramusculaire 102 DL50 de la souche virulente d'épreuve. Les lapins sont observés quotidiennement. Ils sont autopsiés sept jours après l'épreuve. Les critères anatomo-pathologiques retenus sont : hépatite, pneumonie hémorragique, hypertrophie thymique. Le virus d'épreuve est recherché dans les foies par hémagglutination. Les 10 lapins du lot 1 sont restés en parfaite santé et n'ont présenté ni symptôme ni lésion sept jours après l'épreuve alors que les trois lapins témoins du lot 2 sont morts dans les trois jours suivant l'épreuve. La recherche de virus dans les 10 lapins du lot 1 s'est révélée négative. 6 ) Préparation et étude d'un vaccin bivalent Un volume de dose de valence VHD préparée selon l'exemple 1 est associé à une dose de la valence Shope préparée selon l'exemple 2. L'association s'effectue par reprise de la valence Shope lyophilisée dans le milieu liquide de la valence VHD. La valence de Shope pourrait être remplacée par la valence SG33. L'administration s'effectue exactement de la même façon que dans l'exemple 5. REVENDICATIONS 1. Ensemble de vaccination permettant la vaccination par voie parentérale contre la maladie hémorragique virale du lapin, à base de culture tissulaire du virus VHD inactivée et adjuvée, caractérisé en ce qu'il comporte un appareil d'administration par jet agencé pour la distribution intradermique de doses individuelles d'un volume de l'ordre de 0,2 ml de vaccin, associé à une source d'alimentation contenant ledit vaccin conditionné pour présenter un titre protecteur dans ledit volume de dose. 2. Ensemble selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il est agencé pour injecter la dose en deux temps par volumes successifs de l'ordre de 0,1 ml de vaccin. 3. Ensemble selon l'une des revendications 1 et 2, caractérisé en ce que l'appareil est agencé pour distribuer le vaccin sous forme d'au moins trois jets. 4. Ensemble selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que la pression des jets est de l'ordre de 90 à 110 bar. 5. Vaccin contre la maladie hémorragique virale du lapin destiné à être mis en oeuvre dans l'ensemble selon -l'une quelconque des revendications 1 à 4, à base d'une culture tissulaire inactivée du virus VHD, caractérisé en ce qu'il comporte un titre protecteur sous un volume de l'ordre de 0,2 ml. 6. Vaccin selon la revendication 5, caractérisé en ce qu'il présente un adjuvant à l'hydroxyde d'aluminium. 7. Vaccin selon l'une des revendications 5 et 6, caractérisé en ce que la dose présente un titre de l'ordre de SDV 90 dans un volume de 0,2 mi. 8. Vaccin selon l'une quelconque des revendications 5 à 7, caractérisé en ce qu'il comporte au moins une autre valence virale ou bactérienne. 9. Vaccin selon la revendication 8, caractérisé en ce qu'il comporte, dans le milieu liquide de la valence VHD, une valence myxomatose, et notamment la valence de -Shope vivante ou une valence homologue, telle que Sis33.