FR 2680448 A1 19930226 FR 9110937 A 19910904 SYNERGIE DE L'ACTIVITE BACTERICIDE DE MOLECULES ANTISEPTIQUES ET DESINFECTANTES UTILISEES EN ASSOCIATION: HEXAMIDINE ET FORMALDÉHYDE Domaine technique de l'invention: La synergie de l'action de plusieurs molécules se traduit par le fait que leur effet simultané est supérieur à la simple somme de leurs actions séparées, et qu'il y a donc une exaltation réciproque de leurs activités.L'étude de ces synergies constitue une activité inventive dont les résultats représentent une avancée évidente dans le domaine de l'antisepsie et/ou de la désinfection: - Efficacité accrue sur les souches microbiennes les plus difficiles à détruire, - Dépassement de la résistance acquise de certaines bactéries, - Utilisation de quantités plus faibles de bactéricides, d'où: (1)Toxicité moindre lorsqu'il y a contact avec les tissus vivants (antisepsie) ou diminution de la pollution de l'environnement (désinfection des locaux) (2) Economie de produit actif. Etat de la technique antérieure: On peut considérer qu'il n'y a pas eu d'innovation majeure dans le domaine de nouvelles molécules antiseptiques au cours des quinze dernières années. Il y a donc une logique certaine à explorer les progrès possibles par la voie des synergies médicamenteuses. On remarquera que les brevets récents décrivant des associations à visées bactéricides, soit ne revendiquent pas d'effet de synergie et se bornent à mélanger des substances ayant des effets en principe complémentaires et additifs sur différentes espèces microbiennes, soit revendiquent une synergie sans faire état ni de la méthodologie d'évaluation de cette propriété ni des résultats quantitatifs.. Exposé de l'invention: A) METHODOLOGIE: La synergie qui fait l'objet de ce brevet est le résultat de recherches systématiques réalisées sur une large gamme de substances, avec une méthodologie rigoureuse dérivée directement de celle utilisée pour les antibiotiques, mais adaptée aux antiseptiques et désinfectants. Ceux-ci doivent répondre aux critères de bactéricidie fixés par l'Association Française de Normalisation (norme AFNOR NF T 72-150). Pour déterminer l'efficacité de l'association de deux molécules A et B dans des proportions multiples, un protocole en quatre étapes a été utilisé: 1. - Préparation des mélanges A+B dans des proportions progressivement variables dans des microplaques à 96 puits. 2. - Mise en contact d'une suspension bactérienne vivante (2 x 108 cellules/ml) pendant 5 minutes à 200C avec chaque couple de concentration A+B. L'essai était répété avec quatre souches bactériennes différentes correspondant aux recommandations AFNOR (Escherichia coll souche CIP 54127, Pseudomonas aeruginosa souche CIP A22, Staphylococcus aureus souche CIP 53154 et Enterococcus hir souche CIP 5855). 3. - Dilution au 1/1500êrne avec une solution neutralisante afin d'arrêter l'action du produit. 4. - Mise en culture sur gélose des germes survivants afin de dénombrer leurs colonies, ce qui permet de mesurer le pourcentage de destruction des microbes. Les solutions initiales A et B réduisaient en 5 minutes le nombre de microbes viables au 1/10.000é"" de la valeur initiale. Lorsqu'il y avait synergie, cette diminution était évidemment nettement plus importante. L'effet de synergie était estimé par le calcul de l'index FBC (Fractional Bactericidal Concentration), méthode classique en bactériologie. Rappelons simplement qu'il y a synergie lorsque cet index est inférieur à 1. Cependant, après une étude de la variabilité statistique inhérente à ce test, on n'a retenu comme significatifs (avec une sécurité de 95%) que les résultats de FBC inférieurs ou égaux à 0,5. B) RESULTATS: On a observé une synergie significative entre l'Hexamidine (di-iséthiocyanate) et le Formaldéhyde. Le FBC était de 0,155 sur Escherichia coli et de 0,5 sur Staphylococcus aureus. Indépendamment du germe, la gamme de concentrations utiles s'étend (en poids/volume) de 0,025% à 0,2% pour l'Hexamidine di-iséthiocyanate et de 0,3% à 3% pour le Formaldéhyde. Ces valeurs de FBC correspondent à des concentrations efficaces d'antiseptiques de 4 à 20 fois inférieures aux doses habituelles pour les mêmes produits et les mêmes souches microbiennes. C) DOMAINE D'UTILISATION: La composition bactéricide présentée ici peut être employée comme désinfectant de surface et/ou comme antiseptique sur la peau ou les muqueuses dans tous les domaines où la destruction des microbes en surface est l'objectif à atteindre sans nuire à la santé des organismes vivants et sans polluer l'environnement (industrie agro-alimentaire, secteur médical et en particulier hospitalier, secteur vétérinaire et locaux d'élevage, usage domestique...). D) STABILITE: Le mélange est resté stable à la température de 20 OC et à l'obscurité pendant au moins un mois, sans aucune incompatibilité chimique. REVENDICATIONS 1. Une composition antiseptique et/ou désinfectante utilisable dans les domaines de la santé publique, de la production et de la santé animales, de l'industrie agro-alimentaire, ou de toute autre application nécessitant la stérilisation des surfaces est décrite. Elle est caractérisée par une combinaison bactéricide de deux substances, agissant en synergie: I'Hexamidine et le Formaldéhyde. 2. Les gammes de concentration utilisables pour obtenir un effet synergique efficace sont (en poids/volume): Hexamidine 0,015% à 0,12% et Formaldéhyde 0,3% à 3%.