FR 2664277 A1 19920110 FR 9008447 A 19900704 La présente invention a pour objet des dérivés de sinéfungine, leur préparation et leur application en thérapeutique. La sinéfungine est une substance naturelle qui a été isolée à partir de cultures de Streptomyces griseolus, et dont des synthèses ont été décrites dans Nucleic Acide Rets. (1982), 10, 6223 et dans J. Am. Chem. Soc., (1983), 105, 7638. Sa formule chimique (la) est donnée dans le schéma 1 ci-après. L'atome de carbone en position 6' est chiral et de configuration S. Par contre, l'épimère de configuration R (formule lb) est nouveau et fait partie de l'invention. Les deux composés peuvent être préparés par un procédé illustré par le schéma I ciaprès. On prépare d'abord l'ester thiohydroxamique de formule 129 à partir de l'acide de formule 32 (formules dans lesquelles Bz représente un groupe benzoyle), selon la méthode de l'anhydride mixte décrite dans J. Am. Chem. Soc. (1967), 89 5012 suivie par traitement avec le sel de sodium de la N-hydroxythione-2-pyridine, puis on irradie ce dernier en présence de l'amide oléfinique de formule 192 (dans laquelle Z représente un groupe benzyloxycarbonyle et Bn représente un groupe benzyle). On obtient ainsi un produit d'addition de formule 194, sous forme de deux diastéréoisomères en C-6', et un produit de réarrangement de formule 235 (formules dans lesquelles Spy représente un groupe (pyridyl-2-ylthio).On réduit ensuite le groupe pyridyl-2-ylthio du composé de formule 194 au moyen d'hydrure de tributylétain, par thermolyse et en présence d'un initiateur de radicaux tel que l'a,a'-azoisobutyronitrile (AIBN) ou un peroxyde. On obtient un mélange de deux composés de formules 195a et 195b, épimères au niveau de la position C-6', que l'on peut séparer par exemple par chromatographie à moyenne pression sur une colonne de gel de silice. On transforme ensuite la fonction amide de chacun des composés 195a et 195b en fonction amine primaire, par transposition d'Hoffmann, selon les conditions décrites dans Synthesis (1981), 266-268, c'est-à-dire par la [bis(trifluoroacétoxy)iodo]benzène dans un mélange de diméthylformamide et d'eau, et en présence d'une quantité stoechiométique de pyridine. On protège ensuite les fonctions amines primaires in sine par un groupe tbutyloxycarbonyle, en présence de carbonate de di-t-butyle et de triéthylamine, ce qui donne les composés 185a et 185b, respectivement. Finalement, on déprotège ces composés successivement par hydrogénolyse en présence de charbon palladié, par traitement à l'ammoniac dans le méthanol, et par hydrolyse acide. On obtient ainsi, respectivement le composé de formule la, identique à la sinéfungine naturelle, et son épimère (R) en C-6', de formule lb. Schema 1 IBBz ~ EI?NBz HOOC ÈÇÉI; ; Oo oO 32 ) 129 ZONEZ HNBz EINBz ZEN: CONE1 N Spy N N 0N 19' H COOBn Rus oN ZEN o O O O oOt E COOBn 194 ffi 23S Bu,SnH AIBN Benzénc. reflux HNBz H:NB I r NI! NN COJHî 0NN ZIIN O O ZEN ZEN R ZEN COOBri H 19b l9Sa i: cc,coj1rcji5 t:(CF,CO21C5 Pyridine li: 3oc,O Pyridine i: DIMF-EI30(1:r) HL,N, DMF, TA DMF-H1O(1:1) Ei,N, DMF, TA TA TA VENRI V ENBZ N ;1oc zip;NBBoe II ZEN R O ZHN O H COOBn g COOBn K IS5b ISSa l0%PdIC, E, EtOR EtOHi: 10%PdIC, H1 ii: NHXlMeOH ii: iii: CFxCOOHIHxO 1 r X r iil:NEeOE NE, il: CCOOH!H1O NN NE1 RNHlO ^ NX À)ÉI) N H s- 0NN OH HO OH H COOff H1N - HO OH lb H COOH lb la Schéma 2 O COOEt COOEt II CE,01E10 (Eto),? COOEt ~H- / PBr, SzCON itherTA ~Br 202 203 204 (PhS)::JNnH4 EtOH COOEt CHssAICINH5 COOEt Bcmnc -SPh 205 CONS1 mSPh CONHX R Fi 197 )= C-ONv S ZH ZHN'C H COO3n COOBn 216 192 Schéma 3 L'amide oléfinique de formule 192 peut être préparé comme illustré par le schéma 2, à partir de triéthylphosphonoacétate d'éthyle commercial de formule 202, par réaction de Wittig-Horner sur le formaldéhyde en présence de carbonate de potassium, suivie de la bromation de l'intermédiaire de formule 203 par le tribromure de phosphore. Le bromure de formule 204 ainsi obtenu est décrit dans Synthesis (1982), 924-926. On traite ensuite ce dernier avec un équivalent de thiophénolate de sodium préparé à partir de diphényldisulfure et de borohydrure de sodium. On obtient l'ester de formule 205 (dans laquelle Ph représente un group phényle) qu'on transforme en amide de formule 197 au moyen d'amidure de méthylchloroaluminium préparé in situ à partir de triméthylaluminium et de chlorure d'ammonium dans le benzène. Enfin, on fait réagir l'amide de formule 197 avec l'ester de formule 216 (dans laquelle Z représente un groupe benzyloxycarbonyle et Bn représente un groupe benzyle), par irradiation à 0 C. L'ester de formule 216 est décrit dans Y. HERVE, Thèse, 1986, Orsay. L'acide de formule 32 peut être préparé comme illustré par le schéma 3, à partir de l'alcool de formule 30 (dans laquelle Bz représente un groupe benzoyle) décrit dans J. Arn. Chers. Soc., (1979), 101, 1554-1564, d'abord par une oxydation en aldéhyde de formule 31 telle que décrite dans J. Med. Chem., (1987), 30, 888-894 et dans J. Am. Chers. Soc., (1976), 98 3346-3357, puis par une oxydation en acide au moyen d'acide 3-chloro perb enzoique dans le dichlorométhane. L'exemple suivant illustre l'invention en détail. Les microanalyses élémentaires et les spectres IR, RMN et de masse confirment les structures des composés obtenus. Exemple 1. 2-IPhényltio)méthylprop-2-énoate d'éthyle (formule 205). On fait réagir 19,2 g (100 mmoles) de 2-(bromométhyl)prop-2-énoate d'éthyle avec une solution de 11,99 g (55 mmoles) de diphényldisulfure dans 200 ml d'éthanol et 4,18 g (110 mmoles) de borohydrure de sodium à température ambiante pendant 18 heures. Après chromatographie sur colonne de gel de silice, on isole 15,65 g d'huile incolore (Rdt: 76%). 2. 2-IPhénylthio)méthylJprop-2-énamide (formule 197). A une suspension de 10,7 g (200 mmoles) de chlorure d'ammonium dans 200 ml de benzène anhydre on ajoute, goutte à goutte, sous argon à 0oC, 100 ml (200 mmoles) de triméthylaluminium (2M dans le toluène), on agite le mélange réactionnel à température ambiante pendant 2 heures, puis on le transfere dans un ballon contenant 14.65 g (66 mmoles) de a-thiophénylacrylate 205 et 300 ml de benzène anhydre, et on agite le mélange à 50"C sous argon pendant 16 heures. On refroidit le mélange à 00C et on ajoute 50 ml d'acide chlorhydrique à 5%. On sépare la phase organique, on extrait la phase aqueuse avec trois foins 100 ml d'acétate d'éthyle, on réunit les phases organiques, on les sèche sur sulfate de sodium, on les filtre et évapore sous pression réduite. Après purification du résidu sur colonne de gel de silice (éluant acétate d'éthyle/hexane, 1/1) on isole 10,45 g d'amide (Rdt: 82%). 3. 5-Amînoearb onyl-2-[[phénylméthoxy) earb nolhex-5-énoate de phényl- méthyle (formule 192). On irradie une solution de 4,284 g (12 mmoles) de 2 L[phénylméthoxy) carb onyljamino] succinate de 1, 2-dihydro-2-thioxopyridin- 1-yle et de phénylméthyle (formule 216, Y. HERVE, Thèse, Orsay, 1986) et de 11,58 g (60 mmoles) de 2-((phénylthio)méthyl]prop-2-énamide (formule 197) dans 60 ml de tétrahydrofuranne anhydre pendant 30 minutes à 0 C. Puis on dilue le mélange avec du dichlorométhane et on le lave successivement avec une solution saturée de bicabonate de sodium, avec de l'eau, et avec une solution saturée de chlorure de sodium. On sèche la phase organique sur sulfate de magnésium, on la filtre et on l'évapore à sec sous pression réduite.On purifie le résidu par chromatographie sur colonne de gel de silice (éluant acétate d'éthyle/hexane, 6/4), et on isole 2,947 g sous forme cristalline (Rdt: 62%). Point de fusion: 93-95 C. 4. Acide 1'-[6-(benzoylnmino)-9H-puran-9-yl]-1'-désoxy-2' ,3 '-O-(isopropylidène)- ribofuranuronique (formule 32). A une solution de 9,8 g (24 mmoles) de N-benzoyl-2' ,3'-O- (isopropylidène)adénosine et de 14,88 g (72 mmoles) de dicyclohexylcarbodiimide dans 54 ml de diméthylsulfoxyde on ajoute, goutte à goutte, à 0 c, 0,96 ml (12 mmoles) d'acide dichloroacétique, et on agite le mélange à temperature ambiante pendant 1 h 30. On filtre la dicyclohexylurée formée et on extrait le filtrat quatre fois avec 100 ml de cyclo-hexane pour éliminer l'excès de dicyclohexylcarbodiimide. On dilue la solution de diméthylsulfoxyde avec 400 ml de chloro-forme, puis on la lave avec deux fois 200 ml d'eau. On la sèche sur sulfate de sodium, on la filtre et on l'évapore à sec sous pression réduite. On dissout le résidu (aldéhyde de formule 31) dans 240 ml de dichlorométhane anhydre, et on ajoute 8,28 g (48 mmoles) d'acide 3-chloroperbenzoSque. On agite le mélange à température ambiante pendant 30 mn, on évapore le dichlorométhane sous pression réduite, on triture le résidu avec de l'éther diéthylique, on essore le précipité formé et on le lave à l'éther diéhtylique. On obtient 7,14 g de produit qu'on recristallise dans un grand volume d'méthanol (Rdt 70%). Point de fusion 235-238"C. 5. 6' -Aminocarbonyl-1'-[6- (benzoylamino)-9H-purin-9-yl-1' ,5' , 6' ,7' , 8' ,9 '-hexa- désoxy-2',3'-O-(isopropylidene)-9'-[[(phénylméthoxy)carbonyl] smino]-6l-(pyridin-2 ylthio) furanuronate de phénylméthyle (formule 194). On ajoute 0,11 ml (1 mmole) de 4-méthylmorpholine et 0,14 ml (1 mmole) de chloroformiate d'isobutyle, sous argon et à 0 C, à une solution de 0,425 g (1 mmole) d'acide 1' -(6-(benzoylamino) -9H-purin-9-yiJ- 1-désoxy-2' '3 '-O-(isopropylldène) ribofuranuronique dans 12 ml de tétrahydrofuranne anhydre. Après 15 mn d'agitation à 00C on ajoute 0,178 g (1,2 mmole) de sel de sodium de 4-hydroxypyridine-2-thione.On agite le mélange à 00C pendant 30 mn sous argon et à l'abri de la lumière, puis on ajoute une solution de 2,376 g (6 mmoles) de 5-aminocarbonyl-2-[((phénylméthoxy)- carbonyl3amino3hex-5énoate de phényl-méthyle (formule 192) dans 6 ml de térahydrofuranne, et on irradie la solution avec une lampe de tungstène de 250 W à 00C pendant 30 mn. On dilue le mélange avec 100 ml de chloroforme, on le lave successivement avec 50 ml de solution saturée de bicarbonate de sodium et 50 ml d'eau, on sèche la phase organique sur sulfate de magnésium, on la filtre et on l'évapore sous pression réduite.On purifie le résidu par chromatographie sur colonne de gel de silice en éluant avec un mélange 95/5 d'acétate d'éthyle/méthanol. On isole ainsi 0,381 g de 6aminocarbonyl-1'-[6-(benzoylamino-9H-purin-9-yl]-1' ,5',6' ,7' ,8' , 9' -hexadésoxy-2' ,3'-O- (isopropylidène)-9-[[(phénylméthoxy)carbonyl3amino3-6'-(pyridin-2-ylthio)-furanuronate de phénylméthyle (formule 194) et 0,098 g de produit de réarrangement de formule 235. 6. 6'-Aminocarbonyl-1'-[6-(benzoylamino)-9H-purin-9-yl]1',5',6',7',8',9'- hexadésoxy-2' ,3'-O-(isopropylidène)-9- [[phényl-méthoxy) carbonyl]amino] furanuronate de phénylméthyle, 6S et 6R (formules 195a et 195b) On ajoute 0,024 g (0,15 mmole) d'a,a'-azoisobutyronitrile et 1,21 ml (4,5 mmoles) d'hydrure de tributylétain à une solution de 1,329 g (15 mmoles) de 6'-aminocarbonyl-1-(6- (benzoylamino)-9H-purin-9-yl]- 1' ,5' , 6' ,7' , 8' , 9' -hexadésoxy-2, 3-O-( 1-méthyléthylidène)-9- [[(phénylméthoxy)carbonyl]amino]-6-(pyridin-2-ylthio)furanuronate de phénylméthyle dans 15 ml de benzène anhydre et dégazé, puis on chauffe le mélange au reflux pendant 3 h sous argon. On le laisse refroidir, on l'évapore sous pression réduite et on chromatographie le résidu sur une colonne de gel de silice, en éluant avec un mélange 9/1 d'acétate d'éthyle/butanol-3. On isole ainsi 0,443 g de composé de configuration 6S, et 0,420 g de composé de configuration 6R, qu'on recristallise chacun dans un mélange de dichlorométhane et de pentane. Composé de formulel95a F: 95-96"C (CH2C12-pentane) [a3D2 = + 14" (c= 1, CHCl3) Composé de formule 195b F: 92-95 C (CH2CQ-pentane) [os]D20= + 6,5 (c= 1, CHC13) 7. 1' (6-Benzoylamino-9H-purin-9-yl)-1' ,5' , 6' ,7' ,8' ,9' -hexadésoxy-6'-[[(t-butyloxy) carbonyl]amino]-2',3'-O-(Isopropylidène)-9-[phénylméthoxy)carbonyl]amino] furanuronate de phénylméthyle, 6S (formule 185a) On dissout 0,195 g (0,25 mmole) de 6'-aminocarbonyl-1'-[6-(benzoylamino)-9H- purin-9-yl]-1',5' ,6' ,7' ,8' ,9'-hexadésoxy-2',3'-O-(isopropylidène)-9- [(phényiméthoxy)cabonyl]amino] furanuronate de phénylméthyle, 6S (formule 195a) dans 4 ml d'un mélange 1/1 de diméthyl-formamide et d'eau, on ajoute 0,162 g (0,375 mmole) de [bis(trifluoroacétoxy)iodo]benzène, on agite le mélange pendant 30 mn à température ambiante, puis on ajoute 41 ml de pyridine; on agite le mélange pendant 2h à température ambiante, puis on l'évapore sous pression réduite, et on reprend et évapore le résidu avec du toluène pour éliminer les traces de pyridine. On traite l'amine obtenue avec une solution de 0,066 g (0,3 mmole) de dicarbonate de di-t-butyle dans 2 ml de diméthylformamide et 35 ml de triéthylamine, on agite le mélange pendant 2h, on l'évapore sous pression réduite, on purifie le résidu par chromatographie sur colonne de gel de silice en éluant avec un mélange 8/2 d'acétate d'éthyle/hexane, et on recristallise dans un mélange de dichlorométhane/hexane. On isole finalement 0,140 g de composé purifié. 185a F: 94-97 C (CH2C12-pentane) LoeJD20 = + 110 (c= 0,5, CHCl3) 8. 1'-(6-Benzoylamino-9H-purin-9-yl)-1' ,5' ,6' ,7' ,8' ,9'-hexadésoxy-6-[[(t-butyloxy) carbonyl]aminol-2' , 3' -O- (isopropylidène)9-[(phénylméthoxy) carbonyl]amino] furanuronate de phénylméthyle, 6R (formule 185b). En partant de 0,195 g de 6-aminocarbonyl-1'-t6-(benzoylamino)-9H-purin-9-yll- 1' ,5' ,6' ,7' ,8' ,9'-hexadésoxy-2' ,3 '-O-(isopropylidène)-9 [[(phénylméthoxy)carbonyl]amino]-furanuronate de phénylméthyle 6R (formule 195b) et en procédant comme ci-dessus, on isole finalement 0,145 g de composé purifié. F: 90-93 C (CH2C12-pentane) (oe]D20= + 2 (c= 0,5, CHCl3) 9. Acide 6' ,9'-diamino- (6= '-diamino-1'-(6-ainino-9H-purin-9-yl)-1' ,5' ,6' ,7' ,8' ,9'-hexadésoxy-D- glycéro-a-L-talo-décafuranuronique (formule la). On soumet à une hydrogénolyse 0,068 g (0,08 mmole) de 1'-(6-benzoylamino-9H- purin-9-yl)- 1' ,5' , 6' ,7' , 8' ,9'-hexadésoxy-6-[[isopropylidène)carbonyl]amino]-2' ,3'-O-(iso- propylidène)-9-[[(phénylméthoxy)carbonyl]aminoffuranuronate de phénylméthyle, 6S dans L'méthanol en présence de 70 mg de charbon palladié à 10%, sous une pression de 2 bars d'hydrogène pendant 12h. On filtre, on évapore le filtrat, on lave le résidu à l'éther diéthylique et on le traite avec une solution saturée d'ammoniac dans le méthanol pendant 16h à température ambiante. On évapore le méthanol et on hydrolyse le résidu par l'acide trifluoroacétique à 80% pendant 1h, à température ambiante.Après évaporation on purifie le résidu par chromatographie en phase liquide à haute performance, en éluant avec une solution 0,03 M d'acétate d'ammonium dans un mélange 99/1 d'eau/acétonitrile. Après évaporation des solvants et lyophilisation on isole finalement 0,024 g de composé. ( 10. Acide 6',9'-diamino-1'-(6-amino-9H-purin-9-yl)-1' ,5' ,6',7',8' ,9'-hexadésoxy-o gly céro-b-d-allo-décafuranuronique (formule lb). En partant de 0,0764 g de 1 '-(6-benzoylamino-911-purin-9-yl)-I' ,5' ,6' ,7' ,8',9'- hexadésoxy-6-[[t-butyloxy) carbonyl]amino] -2,3,-O(1-méthyléthylidène) -9[[(phényl-[ méthoxy)carbonyljamino]furanuronate de phénylméthyle, 6R (formule 185b), et en procédant comme ci-dessus, on isole finalement 0,026 g de composé. La]D20 = + 32 (c= 1.1, H20) Revendications 1. Méthode de synthèse conduisant aux composés de formule la, lb et à leurs analogues la B= Adénine; R1= R2= OH; n= 0 lb 3= Adénine; R1 R OH; n= 0 Analogues: B= Uracile, Thymine, Guanine; R1= H ou OH, R.= H ou OH; n= 1-3 Les analogues cités ci-dessus sont obtenus par la même suite de réactions (décarboxylation-addition alkylante) que celle utilisée pour la sinéfungine naturelle mais à partir des acides uroniques dérivés de l'uridine, de la thymidine et de la guanidine. 2. Procédé de préparation de la sinéfungine et de son épimère de formule lb ainsi qurà leurs analogues. Ce procédé est caractérisé par une réaction de décarboxylation de l'acide 32 (dans laquelle Bz représente un groupe benzoyle) par l'intermédiaire de son ester thiohydroxamique 129 (préparé par réaction de 4-méthylmorpholine/chloroformiate d'isobutyle/sel de sodium de 4 hydroxypyridine-2-thione). On fait réagir ce dernier par irradiation en présence de l'oléfine amide de formule 192. (dans laquelle Z représente un groupe (phénylméthoxy)carbonyle et Bn représente un groupe phénylméthyle), pour obtenir un mélange d'épimères de formule 194. et un composé de formule 235 (formules dans lesquelles Spy représente un groupe pyridin-2-ylthio), on sépare le composé de formule 235 par chromatographie sur colonne de gel de silice et on soumet le mélange d'épimères de formule 194 à une réduction au moyen d'hydrure de tributylétain en présence d'a,a'-azo-isobutyronitrile, puis on sépare par chromatographie les deux épimères de formules 195a et 195b puis on effectue, sur chaque épimère, un réarrangement d'Hoffmann suivie d'une réaction de protection d'amine primaire par un groupe t-butyloxycarbonyle, pour obtenir les deux épimères de formules 185a et 185b. (formules dans lesquelles Boc représente un groupe t-butyloxycarbonyle) et finalement on déprotège chacun des épimères 185a et 185b, successivement par hydrogénolyse, par action d'ammoniac, et par hydrolyse acide pour obtenir les composés la et lb. 3. Composés nécessaires comme intermédiaires dans le procédé selon la revendication 2, répondant à l'une des formules suivantes 4. Médicament contenant la sinéfungine, ou un analogue ou encore un intermédiaire de synthèse associé à un excipient pharmaceutique. 5. Médicament selon la revendication 4 ayant des activités antiparasitiares et antivirale (HIV).