FR 2672494 A1 19920814 FR 9101920 A 19910213 FERMENTS PROPHYLACTIQUES FAVORISANT LA PREVENTION A A ~A s Â :F DENTAIRE La présente invention concerne des ferments prophylactiques qui favorisent la prévention de la carie dentaire grâce à des propriétés bactériologiques compétitives vis-à-vis d'éventuelles flores cariogènes et à des propriétés agro-alimentaires permettant leur utilisation industrielle. Ces ferments sont particulièrement adaptés aux industries alimentaires et diététiques, par exemple associés aux ferments lactiques pour la fabrication de yaourts et autres produits à base de laits fermentés, ainsi qu'à l'industrie pharmaceutique, par exemple sous forme de comprimés lyophilisés. La carie dentaire est une maladie infectieuse transmissible largement répandue dont le principal responsable est Streptococcus mutans, une bactérie capable de détruire l'émail et la dentine en libérant des acides dans le milieu buccal lors de la dégradation des hydrates de carbones. Selon la nomenclature en vigueur (Bergey's Manual 8éme édition, 1984 et 1986) I'espèce S. mutans est en fait formée de huit sérotypes dénommés de a à h S. mufans proprement dit (sérotypes c, e, f), S. rattus (sérotype a), S. cricetus (sérotype b) et S. sobrinus (sérotypes d, g, h). Les espèces cariogènes de ce groupe (S. mutans c et f, S. sobrinus d et g) sont caractérisées en particulier par leur aptitude à coloniser les tissus mous grâce à des adhésines spécifiques, à coloniser les tissus durs par des polysaccharides extra-cellulaires (dextrane ou glucanes), à coaggréger avec les autres bactéries orales, à former rapidement des acides à partir des sucres et à survivre à des pH très bas. D'autres bactéries orales peuvent potentialiser ce pouvoir cariogène dans les lésions carieuses débutantes ou établies, en particulier d'autres espèces de genre Streptococcus et certaines espèces des genres Actinomyces (A. naeslundii et A. odonfolyticus) et Lactobacillus (L. casei et L. fermentum). La carie entraîne une destruction progressive et irréversible de la dent atteinte qui, non soignée, peut être à l'origine d'infections localisées ou généralisées. Les techniques préventives actuelles reposent sur une hygiène bucco-dentaire correcte, une consommation raisonnée d'hydrates de carbone et l'utilisation de produits d'hygiène et de soins dentaires fluorés. Ces méthodes bien qu'efficaces nécessitent une coopération individuelle active qui est loin d'être systématiquement observée, surtout chez les enfants, si bien que la carie reste encore un problème majeur de santé publique. Le dispositif selon l'invention repose sur le principe de compétition interbactérienne et d'équilibre écologique au sein de la flore orale : il permet de favoriser la prévention de la carie dentaire par un apport exogène répété, au niveau de la plaque dentaire, de petites quantités de ferments prophylactiques non virulents susceptibles de s'opposer à la colonisation des surfaces dentaires par une éventuelle flore cariogène dominée par des souches pathogènes de S. mutans.En effet, la plaque précoce qui recolonise l'émail chez les sujets indemnes de caries actives est dominée par des bactéries de type cocci Gram positif, immobiles, aérotolérants et/ou capsulés, en particulier S. sanguis (sérotype 1: S. gordonli, sérotype 2 : S. mitiorou S. oralis), S. mimis (sérotypes 1 et 2) et Stomatococcus mucilaginosus, un commensal capsulé non cariogène de la flore orale. Ces différentes espèces se retrouvent en proportions variables selon les individus, la localisation et l'ancienneté des dépôts. Les espèces entrant dans la constitution des ferments prophylactiques sont donc choisies: - parmi toutes les souches non virulentes de bactéries compatibles avec le maintien de l'intégrité bucco-dentaire, - parmi les colonisateurs précoces de la plaque mentionnés ci-dessus en particulier S. mitis (ATCC 15 909, ATCC 15 912), S. salivarius (ATCC 9758, ATCC 13 419, ATCC 27 945), et Stomatococcus mucilaginosus (ATCC 25 296, CCM 2417, NCTC 10 663), - parmi les souches non virulentes de S. mutans, L. casei (en paticulier L. casei subsp. rhamnosus ATCC 7469, DSM 20 012, DSM 20 021, DSM 20 022, DSM 20 023, DSM 20 245, DSM 20 247), et L, fermentum, - parmi les souches non virulentes de L. acidophilus (ATCG 4356), L. crispatus (ATCC 33 820, VPI 3199), L. gasseri (DSM 20 243) et L. salivarius (L. salivarlus sali va rius ATCC 1 1 741, L. salivarius salicinus ATCC 11 742) qui ont le double avantage de présenter un tropisme pour le milieu buccal et d'appartenir au groupe des lactobacilles thermophiles directement utilisables comme ferments lactiques. - parmi tous les mutants avirulents dérivés de toutes les espèces mentionnées ci-dessus, - parmi tous les mutants avirulents dérivés d'autres espèces bactériennes et présentant des caractères nouveaux leur permettant d'entrer en compétition écologique avec d'éventuelles flores orales cariogènes, comme par exemple des souches utilisées dans l'industrie laitière (telles que Lactobaclllus bulgaricus et Streptococcus thermophilus) et modifiées de façon à présenter des phénomènes d'adhérence et de coagrégation spécifiques (pili, fimbriae, adhésines) etlou non spécifiques (glycocalyx, capsules, polysaccharides extra-cellulaires de type glucane/dextrane ou fructane/lévane) dans le milieu buccal. Cette liste n'est en aucune façon limitative et elle est susceptible d'évoluer en fonction des progrès réalisés dans la connaissance de la flore orale et de l'actualisation taxonomique des espèces en cours ou à venir. Les ferments prophylactiques sont formés de l'une, ou mieux, de plusieurs des espèces mentionnées ci-dessus associées par exemple dans des rapports de 1/1, et peuvent être conservés congelés dans l'azote liquide ou lyophilisés en fonction des objectifs industriels recherchés. II est à noter que ces ferments prophylactiques sont également très différents des flores associées aux parodontopathies, ce qui n'exclut pas un éventuel effet prophylactique supplémentaire dans le cadre des maladies parodontales. Les yaourts, khéfirs et autres produits à base de laits fermentés constituent un excellent support pour ce type de prévention puisque les ferments lactiques habituels utilisés pour leur fabrication appartiennent précisément aux genres Lactobaclllus et Streptococcus. Ces produits laitiers conviennent donc parfaitement à la culture et à la survie des ferments prophylactiques en permettant simultanément un apport de germes vivants immédiatement compétitifs au niveau de la plaque dentaire, et un apport de calcium qui favorise la reminéralisation des fronts carieux déminéralisés.Dans ce cas, les ferments prophylactiques peuvent être utilisés en complément des ferments lactiques habituels à une concentration optimale compte-tenu des impératifs biologiques, techniques et gastronomiques recherchés, par exemple dans une fourchette de concentrations finales allant de 1/106 à 1/1010 par rapport aux ferments lactiques. Ils sont utilisés soit à titre de coferments s'ils supportent les procédés de fabrication et en particulier les contraintes thermiques (par exemple l'association L. salivarius, L acidophilus et L. casei subsp. rhamnosus en proportion 1/1/1), soit par simple addition comme par brassage en fin de fabrication (par exemple l'association L. salivarius, S. salivarius et S. mucilaginosus en proportion 1/1/1). Ces ferments prophylactiques sont également intéressants lyophilisés, et distribués par exemple par 1 à 2 millions d'unités sous forme de comprimés pharmaceutiques à sucer lentement avec un excipient approprié tel qu'un hydrate de carbone non fermentescible. En effet, le milieu buccal est un milieu favorable à la rétention (coagrégation bactérienne) puis à la croissance des bactéries lyophilisées (température, pH, humidité, présence de nutriments et de facteurs de croissance, synergie bactérienne, etc...). Ces exemples d'utilisation des ferments prophylactiques ne sont pas limitatifs, et ils peuvent être utilisés sous quelque autre forme que ce soit, en particulier associés à tous les composés chimiques réputés pour avoir un effet préventif contre la carie dentaire, comme par exemple les composés fluorés ou les hydrates de carbones non fermentescibles. Le dispositif selon l'invention est particulièrement destiné aux industries diététiques, pharmaceutiques et surtout agro-alimentaires en raison de la consommation largement répandue de yaourts et autres produits à base de laits fermentés, notamment chez les enfants pour lesquels la prévention de la carie dentaire est une préoccupation majeure. REVENDICATIONS 1) Ferments prophylactiques caractérisés en ce qu'ils favorisent la prévention de la carie dentaire grâce à des propriétés bactériologiques compétitives vis-à-vis d'éventuelles flores cariogènes et à des propriétés agro-alimentaires permettant leur utilisation industrielle sous quelque forme que ce soit. 2) Ferments selon la revendication 1 caractérisés en ce que les espèces bactériennes entrant dans leur constitution sont choisies, seules ou en association, parmi les souches non virulentes de bactéries compatibles avec le maintien de l'intégrité bucco-dentaire comme par exemple certains Streptococcus tels que S. sanguis (sérotype 1: S. gordonXi, sérotype 2 : S. mitior ou S. oralis), S. mitis (sérotypes 1 et 2) et S. salivarius, certains Lactobacfflus tels que L. acidophitus, L. crispa tus, L. gasseri et L. salivarius ou Stomatococcus mucilaginosus. 3) Ferments selon les revendications 1 et 2 caractérisés en ce que les espèces entrant dans leur constitution sont choisies, seules ou en association, parmi les souches non virulentes de bactéries réputées cariogènes telles que S. mutans, L. casei (en particulier L. casei subsp. rhamnosus) ou L. fermentum. 4) Ferments selon les revendications 1, 2 et 3 caractérisés en ce que les espèces entrant dans leur constitution sont choisies, seules ou en association, parmi tous les éventuels mutants avirulents dérivés des espèces mentionnées ci-dessus. 5) Ferments selon les revendications 1 et 2 caractérisés en ce que les espèces entrant dans leur constitution sont choisies, seules ou en association, parmi tous les éventuels mutants avirulents dérivés d'autres espèces bactériennes, telles que des ferments lactiques modifiés de façon à présenter des caractères nouveaux leur permettant d'entrer en compétition écologique avec d'éventuelles flores orales cariogènes. 6) Dispositif selon l'une quelconque des revendications précédentes caractérisé en ce que les ferments prophylactiques sont formés de l'une, ou de préférence de plusieurs des espèces bactériennes mentionnées ci-dessus associées par exemple dans des rapports de 1/1 et conservées de préférence congelées dans l'azote liquide ou lyophilisées, cette liste n'étant en aucune façon limitative et étant susceptible d'évoluer en fonction des progrès réalisés dans la connaissance de la flore orale et de l'actualisation taxonomique des espèces en cours ou à venir. 7) Ferments prophylactiques selon l'une quelconque des revendications précédentes caractérisés en ce qu'ils sont particulièrement destinés à être utilisés dans la fabrication des yaourts, khéfirs et autres produits à base de laits fermentés en complément des ferments lactiques habituels. Les ferments prophylactiques peuvent être utilisés soit à titre de coferments s'ils supportent les procédés de fabrication, et en particulier les contraintes thermiques (par exemple l'association L. salivarius, L acidophilus et L. casei subsp. rhamnosus en proportion 1/1/1), soit par simple addition par brassage en fin de fabrication (par exemple l'association L. salivarius, S, salivarius et S. mucilaginosus en proportion 1/1/1).La concentration finale optimale se situe par exemple dans une fourchette de 1/106 à 1/1010 par rapport aux ferments lactiques compte-tenu des impératifs biologiques, techniques et gastronomiques recherchés. 8) Ferments prophylactiques selon l'une quelconque des revendications 1 à 6 caractérisés en ce qu'ils sont destinés à être utilisés lyophilisés, et distribués par exemple par 1 à 2 millions d'unités sous forme de comprimés pharmaceutiques à sucer lentement avec un excipient approprié tel qu'un hydrate de carbone non fermentescible. 9) Ferments prophylactiques selon l'une quelconque des revendications précédentes caractérisés en ce qu'ils peuvent être utilisés pour favoriser la prévention de la carie dentaire sous quelque autre forme que ce soit, en particulier associés à tous les composés chimiques réputés pour avoir un effet préventif contre la carie dentaire, comme par exemple les composés fluorés ou les hydrates de carbones non fermentescibles.