FR 2667874 A1 19920417 FR 9013131 A 19901016 Réacteur bio-catalysé, et procédé de traitement correspondant, applicables notamment à la transformation malolactique du vin La présente invention concerne un réacteur pour le traitement d'une matière, par la transformation chimique biocatalysée d'un substrat contenu dans la matière à traiter, ainsi qu'un procédé pour réaliser ce traitement, pouvant être mis en oeuvre notamment par ce réacteur. Par transformation chimique d'un substrat, on entend toute réaction, en une ou plusieurs étapes, conduisant à la formation d'au moins un produit différent du substrat, le substrat étant une molécule en solution ou en suspension dans la matière à traiter, qui peut être un milieu synthétique, biologique, tel qu'un fluide corporel, ou alimentaire. Une telle transformation chimique peut aussi bien être conduite pour obtenir, après isolement ou simple évaporation du solvant, seulement le produit de transformation d'un substrat, que pour obtenir le produit de transformation en mélange avec la matière traitée. Par transformation chimique biocatalysée, on entend toute réaction chimique activée par un catalyseur biologique, c'est-à-dire un enzyme. Un certain nombre d'enzymes ont besoin de cofacteurs et/ou de coenzymes, pour exercer leur action catalytique, aussi de manière générale on parlera de transformation chimique catalysée par un "système enzymatique", ce dernier comportant l'enzyme ou les enzymes spécifiques de cette transformation, et les cofacteurs nécessaires, et les coenzymes. La présente invention concerne plus particulièrement un réacteur pour le traitement d'une matière comportant un substrat tel que défini précédemment, comprenant une enceinte et au moins une membrane semiperméable disposée dans cette enceinte, séparant cette dernière en au moins deux compartiments, l'un dit primaire, et l'autre dit secondaire, ladite membrane comprenant un matériau greffable chimiquemement, deux circuits associés à ladite enceinte, incorporant respectivement undit compartiment primaire et undit compartiment secondaire, l'un desdits circuits dit enzymatique étant affecté à la rétention du "système enzymatique", avec circulation d'un milieu liquide dans ledit circuit, et l'autre desdits circuits dit de traitement étant affecté à la circulation de la matière à traiter, le transfert du substrat au moins, d'un compartiment à l'autre, s'effectuant par diffusion au travers de la membrane. Les travaux de G. BRUNNER et F. TEGTMEIER publiés dans Artificial Organs, (1984) 8, 161-166 décrivent un réacteur et un procédé mis en oeuvre par ce réacteur, pour traiter du sang. Ce traitement est une détoxification qui consiste en la transformation chimique biocatalysée des substrats toxiques de type phénolique, du sang en produits glucuronylés. Le "système enzymatique" spécifique de cette transformation chimique comprend l'uridine 5'-phosphate-glucuronyltransférase dite UDP-glucuronyltransférase, et son coenzyme, l'acide 5'-diphosphoglucuronique (UDPGA).Ce réacteur comprend une enceinte et une membrane tubulaire disposée dans cette enceinte, sous la forme d'une pluralité de fibres creuses, en matériau polypropylène, séparant dans ladite enceinte deux compartiments primaire et secondaire, respectivement, à l'extérieur des fibres creuses, et à l'intérieur des fibres creuses. Le circuit primaire extérieur est affecté à la circulation du "système enzymatique", en milieu aqueux, le circuit secondaire intérieur est affecté à la circulation de la matière à traiter, à savoir le sang. La membrane semi-perméable est préalablement traitée par une phase lipidique, qui emplit les pores de ladite membrane, de manière à obtenir un passage sélectif des molécules hydrophobes au travers de la membrane, du circuit de traitement au circuit enzymatique et du circuit enzymatique au circuit de traitement. Le substrat phénolique toxique contenu dans le sang est hydrophobe. I1 diffuse, du circuit de traitement au circuit enzymatique, au travers de la membrane, subit sa transformation chimique, à savoir une glucuronidation catalysée par le "système enzymatique", pour conduire à un glucuronide.Le glucuronide formé est hydrophile, et par conséquent demeure dans le circuit enzymatique. Un tel réacteur permet donc de réaliser la détoxification extra-corporelle du sang, par transformation du substrat toxique sous forme de produits glucuronylés, ces derniers étant séparés et éliminés du sang traité. Un tel réacteur présente l'avantage de pouvoir conserver le "système enzymatique", à savoir l'enzyme et le coenzyme, en libre circulation dans le circuit enzymatique, sans risque de diffusion au travers de la membrane, puisque ce sont des molécules hydrophiles et, par conséquent, de bénéficier d'un rendement élevé pour la transformation chimique biocatalysée. Cependant, la diffusion au travers de la membrane de ce réacteur est liée aux propriétés hydrophobes/hydrophiles des molécules, et l'emploi d'un tel réacteur apparaît limité à des matières particulières. D'autre part, il ne permet pas de réaliser la transformation chimique biocatalysée de substrats hydrophiles ou lipophobes, et, dans le cas où le substrat est hydrophobe, il ne permet pas de récupérer par passage en sens inverse dans la membrane semi-perméable le produit de transformation dans la matière traitée, si ledit produit est hydrophile. Les travaux de M.A. MAZID et de K.J. LAIDLER, publiés dans Biotechnology and Bioengineering (1982) 24, 2087-2097, concernent aussi la transformation chimique d'un substrat, catalysée par un "système enzymatique", dans un réacteur, et plus particulièrement la déshydrogénation de l'éthanol en acétaldéhyde, catalysée par l'alcool-déshydrogénase de levure, et son coenzyme, le nicotinamide-adénine-dinucléotide (NAD). Le réacteur comprend une membrane semi-perméable tubulaire, en matériau polyamide, définissant un compartiment intérieur appartenant au circuit de traitement de la matière première, à savoir l'éthanol, et sur la paroi interne de laquelle sont greffés d'une part l'enzyme et d'autre part le coenzyme. Le coenzyme est indirectement greffé sur la membrane, au moyen d'un bras ou chaine moléculaire flexible, lui permettant d'accéder au centre actif de l'enzyme, au cours de la transformation chimique. Le circuit intérieur de la membrane tubulaire est ainsi affecté, et au "système enzymatique" fixé sur ladite membrane, et à la circulation de la matière à traiter, qui est dans ce cas le substrat lui-même, à savoir l'éthanol. Le produit de transformation est recueilli à la sortie du tube. Ce réacteur permet de réaliser une transformation chimique catalytique d'un substrat, et de récupérer le produit obtenu avec un rendement élevé, et sans étape d'isolement du produit, de la fraction du "système enzymatique". Cependant, le même circuit intérieur met en présence le "système enzymatique", le substrat à transformer et le produit de transformation, et, dans ces conditions, l'enzyme peut être rapidement inhibé par le produit de transformation. Ce dernier s'avère souvent être un inhibiteur de l'enzyme en y restant lié, et en masquant ainsi son site actif. Un tel réacteur présente donc un risque d'inactivation de l'enzyme ou de diminution considérable de l'activité enzymatique, à cause des produits de transformation, mais aussi des inhibiteurs présents dans la matière à traiter, à côté du substrat. Un tel réacteur peut aussi travailler à un pH, à savoir celui de la matière à traiter, bien différent de la zone de pH optimum pour l'activité catalytique du "système enzymatique", ce qui peut ralentir considérablement la transformation chimique du substrat. La présente invention a pour objet de remédier aux inconvénients exposés précédemment. Un premier but de la présente invention concerne un réacteur ou procédé de traitement, avec membrane semi-perméable et "système enzymatique", permettant de traiter toute matière première, incorporant un substrat approprié, quelles que soient les propriétés hydrophiles/hydrophobes, lipophiles/lipophobes du substrat et du produit de transformation chimique. Un second but de la présente invention concerne un réacteur ou procédé de traitement, du type défini précédemment, permettant lors de la transformation chimique de réintégrer le ou les produits dans la matière traitée. Un troisième but de la présente invention concerne aussi un réacteur tel que défini précédemment, permettant une activité optimum du "système enzymatique". Tous ces buts peuvent être atteints par la ou les caractéristiques techniques définies ci-après, considérées isolément ou en combinaison 1) La membrane semi-perméable présente un caractère électriquement neutre vis-à-vis du substrat, comme vis-à-vis du produit de transformation, et permet un transfert de ce dernier au moins, en sens inverse du transfert du substrat ; par "électriquement neutre", on entend que la membrane ou son matériau constitutif greffable chimiquement ne présente pour l'essentiel aucun caractère hydrophile/hydrophobe, lipophile/lipophobe particulier, vis-àvis au moins du substrat et du produit de transformation ; en d'autres termes, avec une membrane selon l'invention la diffusion au travers de cette dernière est essentiellement soumise aux lois de la dialyse. 2) Au moins l'enzyme ou le coenzyme du "système enzymatique" est greffé chimiquement, directement ou indirectement, sur la membrane, sur la face de cette dernière, en relation avec le circuit enzymatique. La présente invention concerne également un procédé pour le traitement en continu d'une matière comportant un substrat transformable chimiquement en au moins un produit, consistant à - disposer dans un circuit dit enzymatique un "système enzymatique" de catalyse de ladite transformation chimique du susbstrat, comprenant au moins un enzyme et un coenzyme, - établir dans ledit circuit enzymatique la circulation d'un milieu liquide, - établir une circulation, dans un circuit dit de traitement, de la matière à traiter, - séparer localement ces deux circuits par une membrane semi-perméable, permettant la diffusion au travers de ladite membrane dudit substrat, du circuit de traitement au circuit enzymatique, et dudit produit du circuit enzymatique au circuit de traitement, - greffer chimiquement au moins l'enzyme ou le coenzyme du 'système enzymatique', directement ou indirectement, sur la membrane, sur la face de cette dernière en relation avec le circuit enzymatique. De manière surprenante, on a observé avec un protocole expérimental adéquat que, selon l'invention, dans le cas où les pH du milieu contenant le "système enzymatique" et de la matière à traiter sont différents, le greffage de l'un ou/et l'autre de l'enzyme et du coenzyme entraîne un ralentissement substantiel de l'évolution de la différence de pH, de part et d'autre de la membrane semi-perméable. Cette caractéristique apporte une solution déterminante au problème de la faiblesse de l'activité enzymatique quand celle-ci est liée au pH. L'invention trouve une application toute particulière dans le traitement de jus alimentaires contenant de l'acide malique, notamment un vin ayant subi la fermentation alcoolique, et correspondant à l'étape postérieure de fermentation malolactique. Ce traitement des jus alimentaires, et du vin en particulier, consiste à transformer chimiquement par décarboxylation, l'acide malique contenu dans le vin en acide lactique. Cette transformation chimique est catalysée par le "système enzymatique" suivant - un enzyme malolactique, nicotinamide-adénine-dinucléotide, et ions métalliques type Mn, Co, Mg, Zn, Ni. L'intérêt de cette étape malolactique tient à la désacidification et à l'amélioration gustative du vin qui en résulte, et tant qu'elle n'a pas eu lieu, le vin ne peut être mis en bouteille. A l'heure actuelle, elle se déroule de manière spontanée, sous l'influence de la flore bactérienne présente naturellement dans le vin, à la fin de la fermentation alcoolique, les bactéries responsables de la fermentation malolactique étant les bactéries lactiques du vin, à savoir Leuconostoc, Pediococcus et Lactobacillus. Les procédés couramment utilisés pour favoriser la croissance bactérienne, consistent à modérer le sulfitage de la vendange, à contrôler la température ou à effectuer une désacidification chimique. Cependant, le déclenchement de la fermentation malolactique reste toujours aléatoire et, depuis une décennie, il se développe des procédés d'immobilisation de bactéries lactiques. L'application de tels procédés à la fermentation malolactique soulève des problèmes liés aux risques de contamination des bactéries, liés à une perte rapide de l'activité malolactique des bactéries, et liés aux risques de relarguage de produits indésirables dans le vin. La présente invention, telle que définie précédemment, peut être appliquée à la fermentation, ou plus exactement à la transformation malolactique du vin, de la manière suivante - le "système enzymatique" comprend un enzyme malolactique, obtenu et purifié à partir d'une culture de bactéries Leuconostoc oenos ou d'autres bactéries lactiques, en général, et du NAD (nicotinamide-adénine-dinucléotide) à titre de coenzyme, ou un dérivé du NAD, - le milieu liquide du circuit enzymatique est obtenu à partir du vin traité, - le pH du milieu liquide dans le circuit enzymatique est ajusté à une valeur située dans la zone de pH d'activité optimum du "système enzymatique", - la pression transmembranaire entre le circuit enzymatique et le circuit de traitement est substantiellement nulle, - on contrôle la température des deux circuits à une valeur optimum pour l'activité du "système enzymatique", - le circuit enzymatique et le circuit de traitement sont disposés à co-courant. La présente invention apporte alors une solution déterminante aux problèmes spécifiquement posés par la fermentation malolactique, et non résolus à ce jour par des systèmes plus ou moins complexes, à bactéries immobilisées. L'invention apporte tout d'abord un réacteur bio-catalysé, au sens d'un système de traitement continu dans lequel le vin entre avec de l'acide malique, et sort avec de l'acide lactique. L'invention apporte ensuite un traitement malolactique naturel, c'està-dire sans adjonction de produits ou additifs chimiques particuliers, ce qui préserve l'intégrité biochimique du vin. L'invention apporte un réacteur pour le traitement d'une matière, dont la fraction la plus coûteuse, à savoir le NAD, est préservée dans le circuit enzymatique, durant le traitement complet, au sens où il n'apparaît nécessaire, ni de le régénérer, ni de le remplacer, en tout cas lors du traitement malolactique du vin. Pour terminer, on peut observer qu'à ce jour, si le "système enzymatique" malolactique a été décrit dans la littérature, il n'a jamais été envisagé de le fixer sur un support, par exemple une membrane ; cf : P. CUENAT et 3.C. VILLETTAZ, Revue Suisse Vitic. Arboric. Hortic., (1984) 16 (3) 145-151, et P. CHAGNAUD Thèse (1989) Montpellier, d'une part en raison de son pH d'activité optimum, de l'ordre de 6, très éloigné de celui du vin, en général de l'ordre de 3, et d'autre part en raison de l'instabilité du NAD en milieu acide. La présente invention est maintenant décrite dans le cadre de la transformation malolactique du vin, et par référence au dessin annexé, représentant selon la figure 1, de manière schématique, un réacteur conforme à l'invention. Le réacteur selon l'invention permet de traiter en continu un vin ayant subi la fermentation alcoolique, comportant de l'acide malique à transformer chimiquement en acide lactique. Ce réacteur comprend de manière générale - une enceinte 1, formée par un tube cylindrique fermé à ses deux extrémités - une membrane semi-perméable 2 disposée dans ladite enceinte, formée par une multiplicité de fibres creuses 3, ayant chacune une forme tubulaire ; les fibres 3 s'étendent en parallèle, d'une extrémité à l'autre de l'enceinte 1, d'un distributeur 4 à un collecteur 5 ; ces fibres délimitent donc dans l'enceinte 1, un compartiment primaire 6, délimité à l'extérieur des fibres 3 par le tube 1, et un compartiment secondaire 7 intérieur aux fibres 3, communiquant à une extrémité avec le distributeur 4, et à l'autre extrémité avec le collecteur 5 ; le matériau constitutif des fibres creuses 3, et donc de la membrane semi-perméable est un polymère greffable chimiquement, par exemple un polyamide - un circuit 8 associé à l'enceinte 1, dit enzymatique, incorporant le compartiment secondaire 7 intérieur aux fibres 3, pour la rétention du "système enzymatique" de catalyse défini ci-après ; à l'extérieur de l'enceinte 1, ce circuit comprend un conduit 9 reliant le collecteur 5 au distributeur 4, par l'intermédiaire d'un pot de dégazage 10, lui-même comportant un orifice 11 de dégazage et une résistance 12 de chauffage, et par l'intermédiaire d'une pompe 13 ; ce circuit enzymatique permet une circulation d'un milieu liquide, constitué au démarrage du réacteur par une fraction prélevée sur le vin traité, dont le pH a été amené à une valeur optimum, par exemple aux environs de 6 - un circuit 14 dit de traitement, affecté à la circulation du vin à traiter, incorporant le compartiment primaire 6 extérieur aux fibres creuses 3, défini précédemment; à l'extérieur de l'enceinte 1, ce circuit comporte un échangeur 15 permettant de porter le vin à une température optimum de traitement, et un filtre 16 à l'entrée du réacteur, permettant si nécessaire de filtrer le vin à traitrer ; on observera par ailleurs que le circuit de traitement 14 et le circuit enzymatique 8 sont à co-courant l'un de l'autre, de manière à maintenir plus facilement une pression transmembranaire substantiellement nulle, entre le circuit enzymatique et le circuit de traitement. Le "système enzymatique" retenu pour la transformation malolactique consiste en un enzyme malolactique, obtenu et purifié à partir d'une culture de bactéries Leuconostoc oenos, et du NAD (nicotinamide-adénine-dinucléotide). Ce système est greffé chimiquement, sur la membrane 2, et plus précisément sur la face intérieure des fibres creuses 3, en relation avec le circuit enzymatique 8. Ce greffage est obtenu de manière traditionnelle, par des traitements chimiques appropriés du matériau polymère des fibres 3, tels que décrits dans le document suivant: M.A. MAZID et K.J. LAIDLER, Biotechnol. Bioeng. (1982) 24, 2087-2097, dont le contenu est incorporé à la présente description, en tant que de besoin. Selon cette technique antérieure, un dérivé du coenzyme NAD, à savoir le N6[(6-aminohexyl)carbamoylméthyg- NAD est fixé sur la face interne des fibres creuses 3, en présence du l-cyclohexyl-3(2-morpholinoéthyl)-carbodiimide métho-p-toluène sulfonate (CMC) et comprend ainsi un bras flexible permettant l'accès de l'enzyme par le coenzyme. Par ailleurs, comme déjà dit plus haut, la membrane semi-perméable présente un caractère électriquement neutre vis-à-vis de l'acide malique comme vis-à-vis de l'acide lactique, de telle sorte que le passage du substrat à transformer (acide malique) de l'extérieur à l'intérieur des fibres creuses 3, et le passage du produit de réaction (acide lactique) de l'intérieur vers l'extérieur des fibres creuses 3, est régi pour l'essentiel par les lois traditionnelles de la dialyse. S'agissant de la membrane constitutive des fibres creuses 3, celle-ci présente un coefficient de diffusion du substrat à transformer, et un coefficient de diffusion du produit de transformation, au travers de la membrane, sensiblement du même ordre, et au moins égaux à 10 7 cm2/s. Le seuil de coupure de cette membrane est compris entre 10000 et 30000 Daltons. Le réacteur décrit précédemment permet de traiter en continu un vin introduit par l'entrée 17 du réacteur, et évacué à l'état traité par la sortie 18 du même réacteur. Ce procédé consiste de manière générale à - disposer dans le circuit enzymatique 8 le "système enzymatique" identifié précédemment, - établir dans ce circuit 8 la circulation d'un milieu liquide, à savoir une fraction prélevée sur le vin traité, dont le pH a été amené à une valeur optimum, par exemple aux environs de 6, - établir une circulation du vin à traiter dans le circuit de traitement 14, - séparer localement ces deux circuits par la membrane semi-perméable 2, permettant au travers des fibres 3, d'une part la diffusion de l'acide malique, de l'extérieur vers l'intérieur, et d'autre part la diffusion de l'acide lactique, en sens inverse, de l'intérieur vers l'extérieur des fibres 3. Le mode d'exécution décrit précédemment peut être modifié selon les variantes suivantes - le circuit enzymatique incorpore le compartiment primaire extérieur aux fibres creuses 3, moyennant quoi un enzyme et/ou un coenzyme du "système enzymatique" décrit précédemment, est greffé sur la surface externe des fibres creuses ; et le circuit de traitement incorpore le compartiment secondaire intérieur aux fibres creuses 3, - la membrane semi-perméable 3 est plane, et disposée d'une extrémité à une autre de l'enceinte 1, de manière à délimiter dans cette dernière deux compartiments aplatis, en lieu et place des compartiments tubulaires décrits précédemment. - seul l'enzyme du "système enzymatique" est greffé sur la membrane 3, et alors le coenzyme du même système est greffé sur un polymère, dissous ou en suspension dans le milieu liquide du circuit enzymatique, et de taille macromoléculaire supérieure au seuil de coupure de la membrane 3, - l'enzyme du "système enzymatique" est dissous ou en suspension dans le milieu liquide du circuit enzymatique, et le coenzyme du même système est greffé sur l'enzyme lui-même, - le coenzyme est greffé sur un bras flexible, lui-même greffé sur la membrane, alors que l'enzyme est dissous ou en suspension dans le milieu liquide du circuit enzymatique. La présente invention est maintenant décrite au plan expérimental par référence à la transformation malolactique du vin selon le schéma réactionnel suivant NAD+ Mn++ COOH-CH2-CHOH-COOH ,CH3-CHOH-COOH Acide L-malique oCO2 Acide Lactique Cette réaction est catalysée par l'enzyme malolactique présent dans certaines bactéries lactiques du vin, des genres Leuconostoc, Lactobacillus, et Pediococcus. EXEMPLE 1 Un enzyme malolactique partiellement purifié est obtenu à partir de la bactérie Leuconostoc oenos, selon le schéma général suivant 1) Culture bactérienne de Leuconostoc oenos, selon le protocole décrit par Caspritz G. et Radler F. 1983, Malolactic enzyme of Lactobacillus plantarum, purification, properties and distribution among bacteria, J. Biol. Chem, 258 (8), 4907-4910, publication dont le contenu est incorporé à la présente description, en tant que de besoin. 2) Après récolte des bactéries, obtention et purification par chromatographie sur gel de l'enzyme, selon le protocole décrit par Lonvaud-Funel A. et Stasser de Saad A.M., 1982, Purification and properties of a malolactic enzyme from a strain of Leuconostoc meseteroîdes isolated from grapes, Appl. Environ. Microbiol., 43(2), 357-361, publication dont le contenu est incorporé à la présente description, en tant que de besoin. On obtient ainsi un enzyme partiellement purifié, dont le poids moléculaire peut être évalué environ à 100 000 Daltons, utilisé pour la suite des expériences. On utilise ensuite un réacteur tel que décrit précédemment par référence à la figure 1, dont l'enceinte 1 avec les fibres creuses 3 consitue un module de membrane semi-perméable présentant les caractéristiques suivantes - 2100 fibres creuses de polyamide représentant une surface totale de 2 0,16 m - diamètre interne de chaque fibre : 215 um - longueur de chaque fibre : 115 mm, - volume interne du module : 8,8 ml, - vdume externe du module : 20 ml. A l'intérieur des fibres creuses, 300 unités de l'enzyme partiellement purifié tel qu'obtenu précédemment et du NAD ont été fixés sur les fibres de polyamide, respectivement selon la méthode schématisée ci-après. Cette technique de fixation a été décrite par Mazid M.A., Laidler K.J., Kinetics of yeast alcohol dehydrogenase and its coenzyme coimmobilized in a tubular flow reactor, Biotechnol. Bioeng, (1982) 24, 2087-2097, dont le contenu est incorporé à la présente description, en tant que de besoin. {C-(CH2)4-CO-NH-(CH2)6-NH} POLYAMIDE nylon X CO-NH M/~ nylon H+/HO Hydrolyse 2 partielle /W COO NH3 N6[(6-aminohexyl)-carbamoylméthy3 > NAD -cyclohe xyl-3 -(2-morpholinoéthyl) NH2-(CH2)6-NH-CO-CH2-NAD carbodiimide métho-p-toluène sulfonate CMC A4z CO-NH-(CH2)6-NH-CO-CH2-NAD H3 N CHO-(CH2) -CHO Glutaraldéhyde A/v CO-NH-(CH2)6-NH-CO-CH2-NAD CHO-(CH2)3-CH- NvVV Enzyme -NH2 s 1 /vv CO-NH-(CH2)6-NH-CO-CH -NAD E-N =CH-(CH2)3 -CH-N QV 2 Après une hydrolyse acide des brins de polyamide, qui libère des fonctions COO et NH3, on fixe sur la fonction COO un dérivé du NAD : le N6 r 6-aminohexyl)carbalrDylmethy-NAD, en présence de CMC. Puis par l'inter- médiaire du glutaraldéhyde, on fixe l'enzyme sur les fonctions amine libres. A cette fin, on utilise le mode opératoire suivant - pour chaque étape, les différents produits circulent en continu et en circuit fermé, à l'intérieur du réacteur, à un débit de 10 ml/h, sauf pour les rinçages pour lesquels les produits circulent en circuit ouvert, à un débit de 200 ml/h - hydrolyse HCL 2N, 23h - rinçage à l'eau distillée, 1h - 50 mg de dérivé NAD + 290 mg de CMC dans 17 ml d'eau distillée, pH 5, 21 h - rinçage à l'eau distillée, 1h - glutaraldéhyde 12,5 % dans du tampon borate 0,2 M, pH 8,5, 2h - rinçage en tampon phosphate 0,1 M, pH 6, 20 mn - enzyme malolactique : 15 ml correspondant à 300 unités au total, 90h à 4"C - rinçage en tampon phosphate 0,1 M, pH 6, 17h à 4"C, à un débit de 10 ml/h Avec le réacteur tel qu'obtenu précédemment, et conforme à la figure 1, on procède alors au plan d'expérience suivant. L'efficacité du réacteur est tout d'abord testée avec une matière à traiter, du type milieu synthétique, comportant le substrat à transformer, et le cofacteur manganèse, selon la composition suivante - acide L-malique : 22 mM - MnCl2 : 0,09 mM - tampon phosphate pH 6 : 0,05 M Ce milieu circule dans le circuit de traitement (14) avec un débit de 1,9 ml/h. Du tampon phosphate pH 6 circule dans le circuit enzymatique du réacteur à un débit de 8 ml/h. En collectant différentes fractions à la sortie du réacteur, et en procédant à un dosage en acide malique et en acide lactique sur les fractions recueillies, on constate que - il existe une bonne correspondance entre la quantité d'acide malique disparu et la quantité d'acide lactique apparu, le second se situant en dessous du premier, sans doute en raison de la rétention de l'acide lactique dans le réacteur, ce qui tend à inhiber la réaction, - le rendement en acide lactique apparu par rapport à l'acide malique disparu, s'établit en moyenne à 60 %. L'efficacité du réacteur est ensuite testée avec du vin, à savoir du Gaillac blanc, n'ayant pas subi la fermentation malolactique, contenant 11 mM d'acide malique, et dont le pH est de 3. Ce vin circule dans le circuit de traitement du réacteur. Une partie du même vin est prélevée pour le circuit enzymatique, et amenée à pH 6 avec de la soude. Toujours avec la même méthode expérimentale que précédemment, on constate que - la consommation d'acide malique est d'environ 10 % et reste stable, - cependant, l'acide lactique obtenu a tendance à rester à l'intérieur du réacteur. EXEMPLE 2 On a ensuite utilisé un réacteur selon Fig. 1, mais dont seulement le NAD a été greffé chimiquement sur les fibres creuses en polyamide, selon la technique de greffage décrite par Mazid et Laidler ; dans ces conditions, seul l'enzyme (300 unités) circule librement dans le circuit enzymatique, où il est retenu. Ce réacteur est ensuite expérimenté dans les conditions précédentes, directement avec du vin à pH 3 et contenant 13 mM d'acide malique. On obtient ainsi une consommation de 25 % de l'acide malique disponible, converti avec un rendement de 60 % en acide lactique, pour un débit de 2,8 ml/h dans le circuit de traitement. Cette expérience met en évidence l'amélioration de l'efficacité du réacteur, quand l'enzyme circule librement dans le circuit enzymatique. EXEMPLE 3 Pour un même réacteur, tel que celui décrit par référence à Fig. 1, on a observé l'évolution du pH dans le circuit enzymatique et dans le circuit de traitement, dans les deux conditions suivantes 1) le réacteur est "nu", c'est-à-dire ne comporte aucun "système enzymatique", greffé ou non, dans le circuit enzymatique, 2) le réacteur comporte selon l'exemple 1 "un système enzymatique" greffé, c'est-à-dire un enzyme et le NAD, greffés chimiquement à l'intérieur des fibres polyamide, toutes choses égales par ailleurs, c'est-à-dire de débit du vin, circulant dans le circuit de traitement, et de débit du milieu liquide circulant dans le circuit enzymatique. On obtient alors les courbes représentées selon Fig. 2 et Fig. 3, représentant respectivement l'évolution du pH dans le circuit enzymatique, et l'évolution du pH dans le circuit de traitement, avec les conventions suivantes - pour Fig. 2, la courbe supérieure est relative au réacteur avec "système enzymatique" immobilisé, et la courbe inférieure au réacteur nu, - pour Fig. 3, la courbe supérieure est relative au réacteur nu, et la courbe inférieure relative au réacteur avec "système enzymatique" immobilisé. On observe donc que, que ce soit dans le circuit enzymatique ou dans le circuit de traitement, le pH évolue moins vite dans le réacteur où le "système enzymatique" est immobilisé, que dans le réacteur nu. On peut expliquer a posteriori cette observation, par le fait que l'enzyme et son coenzyme forment une barrière à la surface de la membrane semi-perméable, du côté du circuit enzymatique, ce qui ralentit les échanges de part et d'autre, notamment ioniques. On en déduit que la fixation d'au moins l'enzyme ou le coenzyme apporte une meilleure stabilisation du pH dans les deux circuits du réacteur, de traitement et enzymatique. Cet effet est d'autant plus important pour la transformation malolactique, que cette dernière entraîne en général une augmentation du pH de 0,1 à 0,3 unités. REVENDICATIONS 1 - Réacteur pour le traitement en continu d'une matière comportant un substrat transformable chimiquement en au moins un produit, comprenant une enceinte (1) et au moins une membrane (3) semi-perméable disposée dans ladite enceinte, séparant cette dernière en au moins deux compartiments (6,7), l'un dit primaire et l'autre dit secondaire, ladite membrane comprenant un matériau greffable chimiquement, deux circuits (8) (14,18)associés à ladite enceinte, incorporant respectivement undit compartiment primaire et undit compartiment secondaire, l'un (8) des circuits dit enzymatique étant affecté à la rétention d'un "système enzymatique" de catalyse de la transformation chimique du substrat, comprenant au moins un enzyme et un coenzyme, avec circulation d'un milieu liquide dans ledit circuit, et l'autre (14,18) des circuits dit de traitement étant affecté à la circulation de la matière à traiter, le transfert du substrat au moins, d'un compartiment à l'autre, s'effectuant par diffusion au travers de la membrane, caractérisé en ce que la membrane semi-perméable présente un caractère électriquement neutre vis-à-vis du substrat, comme vis-à-vis du produit, et permet également un transfert du produit au moins, en sens inverse du transfert du substrat. 2 - Réacteur selon la revendication 1, caractérisé en ce que la membrane semi-perméable présente un coefficient de diffusion du substrat, et un coefficient de diffusion du produit, sensiblement du même ordre. 3 - Réacteur selon la revendication 2, caractérisé en ce que les coefficients de diffusion du substrat et du produit respectivement, au travers de la membrane semi-perméable sont au moins égaux à 10 7 cm2/s. 4 - Réacteur selon la revendication 1, caractérisé en ce que le seuil de coupure de la membrane semi-perméable est compris entre 10 000 et 30 000 Daltons. 5 - Réacteur selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'au moins l'enzyme ou le coenzyme du "système enzymatique" est greffé chimiquement, directement ou indirectement, sur la membrane, sur la face de cette dernière en relation avec le circuit enzymatique. 6 - Réacteur selon la revendication 5, caractérisé en ce que l'enzyme du "système enzymatique" est greffé sur la membrane, et le coenzyme du "système enzymatique" est greffé sur un polymère dissous ou en suspension dans le milieu liquide du circuit enzymatique, et de taille macromoléculaire supérieure au seuil de coupure de la membrane. 7 - Réacteur selon la revendication 5, caractérisé en ce que l'enzyme du "système enzymatique" est dissous ou en suspension dans le milieu liquide du circuit enzymatique, et le coenzyme dudit "système enzymatique" est greffé chimiquement sur la membrane. 8 - Réacteur selon la revendication 5, caractérisé en ce que l'enzyme du "système enzymatique" est dissous ou en suspension dans le milieu liquide du circuit enzymatique, et le coenzyme dudit "système enzymatique" est greffé sur l'enzyme lui-même. 9 - Réacteur selon la revendication 7 ou 8, caractérisé en ce que le coenzyme est greffé sur un bras flexible, lui-même greffé sur la membrane ou sur l'enzyme lui-même. 10 - Réacteur selon l'une quelconque des revendications 1 à 9, caractérisé en ce qu'il est affecté à la transformation malolactique de jus alimentaires contenant de l'acide malique, le "système enzymatique" comprenant un enzyme malolactique purifié à partir d'une culture de Bactéries Leuconostoc oenos ou d'autres bactéries lactiques, et le coenzyme du nicotinamide-adénine-dinucléotide (NAD), ou un dérivé. 11 - Réacteur selon la revendication 10, caractérisé en ce qu'il est affecté à la transformation malolactique d'un vin ayant subi la fermentation alcoolique. 12 - Réacteur selon les revendications 9 et 10, caractérisé en ce qu'un dérivé du NAD, à savoir le N6 p(6-aminohexyl)carbamoylméthyl]-NAD est greffé sur la membrane en présence de 1-cyclohexyl-3-(2-morpholinoéthyl) carbodiimide métho-p-toluène sulfonate (CMC). 13 - Procédé pour le traitement en continu d'une matière comportant un substrat transformable chimiquement en au moins un produit, consistant à - disposer dans un circuit dit enzymatique un "système enzymatique" de catalyse de ladite transformation chimique du substrat, comprenant au moins un enzyme et un coenzyme, - établir dans ledit circuit enzymatique la circulation d'un milieu liquide, - établir une circulation dans un circuit dit de traitement, de la matière à traiter, - séparer localement ces deux circuits par une membrane semi-perméable, permettant la diffusion au travers de ladite membrane dudit substrat, du circuit de traitement au circuit enzymatique et dudit produit obtenu du circuit enzymatique au circuit de traitement, caractérisé en ce qu'on greffe chimiquement au moins l'enzyme ou le coenzyme du "système enzymatique", directement ou indirectement, sur la membrane, sur la face de cette dernière en relation avec le circuit enzymatique. 14 - Procédé selon la revendication 13, caractérisé en ce que le milieu liquide est obtenu par prélèvement sur la matière à traiter. 15 - Procédé selon la revendication 13, caractérisé en ce qu'on ajuste le pH du milieu liquide aqueux du circuit enzymatique à une valeur située dans la zone de pH d'activité optimum du "système enzymatique". 16 - Procédé selon la revendication 13, caractérisé en ce que la pression transmembranaire entre le circuit enzymatique et le circuit de traitement est substantiellement nulle. 17 - Procédé selon la revendication 13, caractérisé en ce qu'on contrôle la température des deux circuits. 18 - Procédé selon la revendication 13, caractérisé en ce que le circuit enzymatique et le circuit de traitement sont à co-courant. 19 - Procédé selon la revendication 13, caractérisé en ce qu'on traite un jus alimentaire contenant de l'acide malique, l'enzyme du "système enzymatique" étant un enzyme malolactique, et le coenzyme, le nicotinamideadénine-dinucléotide (NAD). 20 - Procédé selon la revendication 19, caractérisé en ce qu'on traite un vin ayant subi la fermentation alcoolique.