FR 2675804 A1 19921030 FR 9105093 A 19910425 Procédé de synthèse de peptides, nouveaux dérivés d'acides aminés mis en oeuvre dans ce procédé et leurs procédés de préparation. L'invention concerne un nouveau procédé de synthese de peptides, les nouveaux dérivés d'acides aminés mis en oeuvre dans ce procédé et leurs procédés de préparation. Les peptides sont des enchaînements d'acides aminés. Ils sont obtenus dans la plupart des cas au moyen de la condensation avec élimination d'une molécule d'eau d'un groupe carboxyle d'un acide aminé avec le groupe amine d'un autre acide aminé. L'enchaînement peut être effectué en additionnant un autre acide aminé à l'enchaînement précédemment obtenu ou en condensant des fragments de peptides préalablement formés. Pendant toutes ces condensations les groupes amines et carboxyles qui ne participent pas à la réaction sont en général bloqués par des groupes protecteurs qui doivent être fixés facilement, être stables pendant la réaction de condensation et être éliminés de façon sélective l'un par rapport à l'autre.Si les acides aminés qui constituent le peptide ont des chaînes latérales qui contiennent des groupes fonctionnels réactifs tels que des groupes amino, carboxy, hydroxy, thiol, le problème de la protection devient très difficile à résoudre car il faut que les groupes protecteurs de ces groupes fonctionnels soient stables non seulement pendant l'opération de condensation mais également pendant les étapes de déprotection du groupe amine en cx d'une part et du groupe carboxyle en a d'autre part. Il faut également qu'ils puissent être éliminés à la fin du procédé et que l'on puisse récupérer le peptide intact. De nombreux groupes protecteurs ont été proposés mais on est confronté en particulier pour la synthèse de peptides à longue chaîne au problème de trouver des types de groupes protecteurs qui soient indépendants les uns des autres.Dans de nombreuses synthèses de peptides, la phase de récupération du peptide consiste à soumettre le peptide bloqué à un traitement avec un acide fort qui enlève tous les groupes protecteurs. Des acides tels que l'acide fluorhydrique, 1 'acide trifluorométhanesulfonique, trifluoroacétique sont par exemple employés. Cependant ce traitement n'est pas sans inconvénient. On a observé de nombreuses réactions secondaires, par exemple, lorsqu'on utilise les groupes protecteurs benzyle ou tertiobutyle, des carbocations benzyliques ou tertiobutyliques se forment et réagissent de façon tout à fait imprévisible avec les groupes fonctionnels qui ont été libérés, des réactions de déshydratation ou d'alkylation se produisent également. Il en résulte de grandes difficultés pour récupérer le peptide non modifié et ce d'autant plus qu'il est plus compliqué. Il existait donc un besoin d'un procédé de préparation de peptides qui soit simple et qui ne présente pas les inconvénients des procédés antérieurs. L'invention a pour objet un nouveau procédé de préparation de peptides en solution ou en phase solide qui est caractérisé en ce que - dans une première étape on forme d'une part un dérivé d'un acide aminé ou d'un peptide à allonger dans le quel la fonction amine en a est protégée par un groupe choisi parmi le tert-butyloxycarbonyle (Boc), le 9 fluorénylméthyloxycarbonyle (Fmoc), le méthoxybenz- loxycarbonyle (Moz), Ia, a-diméthyl-3 ,5-diméthoxyben- zyloxycarbonyle (Ddz) et le 2-nitrophénylsulfényle (Nps), et dans lequel le(s) groupe(s) fonctionnel(s) libre(s) et à protéger dans la ou les chaîne(s) laté rale(s) de l'acide aminé ou du peptide est(sont) blo qué(s) par le groupe Y de formule R1-CH=CH-CH2-, Rl représentant un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle en C1 à C4, sous forme de carbonates lorsque ce sont des groupes fonctionnels -OH alcool, de thiocarbonates lorsque ce sont des groupes fonctionnels -5H, d'éthers ou de carbonates lorsque ce sont des groupes fonc tionnels -OH phénolique, de carbamates lorsque ce sont des groupes fonctionnels amino ou imino et d'esters lorsque ce sont des groupes fonctionnels -COOH, on forme d'autre part un dérivé d'un acide aminé ou d'un peptide à allonger dans lequel la fonction acide -COOH en cx est protégée sous la forme d'un groupe ester -COOR2 dans lequel R2 est un radical alkyle en C1 à Cio, un radical aryle ou aralkyle substitué ou non sur le noyau aromatique ou le radical phénacyle, ou sous la forme d'un groupe amide -CONR3R4 dans lequel R3 et R 4 identiques ou différents représentent un atome d'hydrogène, un radical alkyle en C1 à Cio ou un ra dical aryle ou araîkyle substitué ou non sur le noyau aromatique, les radicaux R2 , R3 et R4 pouvant être reliés ou non à un polymère de type polystyrène ou polyacrylique, et dans lequel le(s) groupe(s) fonc tionnel(s) libre(s) et à protéger dans la ou les chaîne(s) latérale(s) de l'acide aminé ou du peptide est(sont) bloqué(s) par le groupe Y de formule R1-CH=CH-CH2-, Rl représentant un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle en C1 à C4 , sous forme de carbonates pour les groupes fonctionnels -OH alcool, de thio carbonates pour les groupes fonctionnels -5H, d'éthers ou de carbonates pour les groupes fonctionnels -OH phénolique, de carbamates pour les groupes fonc tionnels amino ou imino et d'esters pour les groupes fonctionnels -COOH, - dans une seconde étape on condense les deux dérivés précédemment obtenus pour former la liaison peptidique et on obtient un peptide protégé, - dans une troisième étape on enlève tout d'abord le groupe protecteur de la fonction amine en cx du peptide formé, puis on enlève tous les groupes protecteurs Y des groupes fonctionnels contenus dans les chaînes latérales par une catalyse douce au moyen d'un composé d'un métal noble tel qu'un métal du groupe du platine, ruthénium, rhodium, osmium, iridium, platine ou palladium et ensuite s'il n'a pas déjà été éliminé pendant le traitement précédent on enlève le groupe protecteur de la fonction acide en a. Le procédé selon l'invention permet de préparer des peptides qui contiennent en partie ou totalement des restes d'acides aminés dont les chaînes latérales portent un ou plusieurs groupes fonctionnels réactifs. Tous les acides aminés naturels ou synthétiques connus dont la chaîne latérale porte un ou plusieurs groupes fonctionnels et les peptides qui en sont constitués peuvent être utilisés. Ils peuvent être sous forme D, L ou DL. En particulier on peut citer comme acides aminés, l'arginine (Arg), l'acide aspartique (Asp), la cystéine (Cys), l'acide glutamique (Glu), l'histidine (His), la lysine (Lys), l'hydroxylysine, l'hydroxyproline (Hyp), la sérine (Ser), la thréonine (Thr), le tryptophan (Trp), la tyrosine (Tyr), la thyroxine (Thy), l'ornithine (Orn), l'acide a-aminopimélique et l'acide a-aminosubérique. Le procédé peut être réalisé en phase liquide ou en phase solide. De préférence le groupe Y qui protège les groupes fonctionnels des chaînes latérales est le groupe de formule CH2=CH-CH2-, (AIl). Lorsque les groupes fonctionnels sont des groupes -OH phénolique ils sont de préférence protégés sous forme d'éthers. Les groupes protecteurs préférés de la fonction amine en a du dérivé d'acide aminé ou du peptide à allonger sont le groupe tert-butyloxycarbonyle (Boc) et le groupe 9-fluorénylméthyloxycarbonyle (Fmoc). Ces dérivés a.-amino protégés sont obtenus à partir des acides aminés en introduisant d'abord le groupe protecteur de la fonction amine en cx et ensuite le ou les groupes protecteur(s) Y ou inversement, selon des méthodes connues ou selon les procédés qui seront décrits plus loin. La fonction acide en cx de l'autre dérivé d'acide aminé ou du peptide à allonger est protégée par des groupes connus pour être stables lors de l'élimination des groupes protecteurs de la fonction amine en cx et en particulier lors de l'élimination des groupes Boc et Fmoc protecteurs de cette fonction comme indiqué dans les publications concernant les peptides telles qu'en particulier "Methoden der organischen Chemie" Houben Weyl, vol 15/1 et /2, Syntheses von Peptiden, 1974; et '!Principle of Peptide Synthesis" par M. Bodansky, Springer-Verlag, 1984. Le plus souvent la fonction acide est protégée sous forme d'esters par un radical alkyle en C1 à C5 ou benzyle. Lorsqu'on utilise la synthèse en phase solide décrite par Merrifield, les groupes protecteurs de la fonction acide peuvent être reliés à une résine insoluble pendant les différentes opérations au moyen de groupes liants également stables dans les conditions de déprotection du groupe amine en a. De nombreuses combinaisons sont possibles et bien décrites dans la littérature comme par exemple dans "Solid-phase peptide synthesis : a silver anniversary report". par G. Barany & Co, 1987, Int. J. Peptide Protein Res. 30, 1987, 705739 et dans "Solid phase peptide synthesis" par J.M. Stewart et J.D. Young (1984). La résine est généralement un polystyrène, par exemple un polystyrène greffé par 1% de divinylbenzène ou de type polyacrylique par exemple un copolymère réticulé de N-acrylylpyrrolidine et de l'ester méthylique du N-acrylyl-ss-alanine. La préparation de ces dérivés dans lesquels la fonction acide en a et les groupes fonctionnels des chaînes latérales sont protégés, est réalisée selon les méthodes usuelles ou de préférence à partir des dérivés précédents cx-aminoprotégés, par une réaction d'estérification ou d'amidification éventuellement suivie par une étape de fixation sur une résine si l'on souhaite opérer en phase solide, puis ensuite par une déprotection de la fonction amine en cx. La formation, dans la deuxième étape, de la liaison peptidique entre les deux dérivés d'acides aminés s' ef- fectue par les méthodes connues généralement au moyen de dérivés anhydrides, esters actifs ou de réactifs de couplage spécifiques. Ces méthodes sont tout à fait standardisées et elles ne seront pas décrites ici en détail. Elles sont en particulier developpées dans les publications précédemment citées. Pendant cette étape les groupes fonctionnels ne participant pas à la réaction restent bloqués. Pour obtenir le peptide souhaité dans la troisième étape du procédé, on enlève tout d'abord le groupe protecteur de la fonction amine en a généralement par acidolyse modérée pour les groupes Boc, Moz, Ddz, Nps et par clivage basique pour le groupe Fmoc. De préférence lorsque le groupe protecteur est le groupe Boc, il est éliminé au moyen d'un acide fort tel que l'acide trifluoroacétique dans du dichlorométhane ou l'acide chlorhydrique gazeux dans du dioxanne. Le groupe Fmoc est lui généralement éliminé par une amine secondaire dans un solvant et de préférence par de la pipéridine dans le diméthylformamide ou dans la N- méthylpyrrolidone. Pendant cette opération les groupes de type allylique qui protègent les groupes fonctionnels des chaînes latérales ne sont pas attaqués. On les enlève ensuite tous en même temps en particulier au moyen d'une quantité catalytique d'un composé du rhodium (I) et de préférence d'un composé du palladium (O) ou (II), dans un solvant ou un système de solvants approprié en présence d'accepteurs nucléophiles ou de donneurs de protons comme par exemple la morpholine, la dimédone ou d'autres composés à hydrogène mobile aisément déprotonables. Un procédé convenant bien pour cette déprotection consiste à faire réagir le peptide avec l'hydrure de tributylétain en présence d'une quantité catalytique de palladium (O) tétrakis(triphénylphosphine) ou de palladium (Il) dichlorobis( triphénylphosphine ) et d'un composé faiblement acide tel que l'acide acétique, le pnitrophénol ou l'acétate de pyridinium ou d'eau, dans une grande variété de solvants tels que benzène, toluène, éther diéthylique, tétrahydrofuranne, dichlorométhane, acétone, acétate d'éthyle et diméthylformamide. On peut également effectuer cette déprotection au moyen d'une quantité catalytique de palladium (O) tétrakis(triphénylphosphine) en présence de N,N-diméthylsilylamine et d'acétate de triméthylsilyle dans un milieu solvant à bas point d'ébullition et aprotique tel que le dichlorométhane, en faisant réagir ensuite le composé obtenu avec du méthanol. L'élimination du groupe protecteur de la fonction acide en cx du peptide est ensuite effectuée, si ce groupe n'a pas été déjà éliminé au cours de l'opération précédente de façon classique, par exemple par acidolyse avec de l'acide fluorhydrique, de l'acide trifluorométhanesulfonique ou de l'acide trifluoroacétique. Le procédé selon l'invention permet d'obtenir des peptides très purs. L'élimination du groupe protecteur de la fonction amine en a peut s'effectuer sans modifier les groupes protecteurs des groupes fonctionnels des chaînes latérales et par conséquent sans apparition de réactions secondaires et les groupes fonctionnels des chaînes latérales sont tous libérés par un même traitement. L'invention a également pour objet les nouveaux dérivés d'acides aminés mis en oeuvre dans le procédé. Ces nouveaux dérivés ont la formule générale dans laquelle X représente le groupe tert-butyloxycarbonyle (Boc), 9-fluorénylméthyloxycarbonyle (Fmoc), méthoxybenzyloxycarbonyle (Moz), cx,cx-diméthyl-3 '5- diméthoxybenzyloxycarbonyle ( Ddz) ou 2-nitrophénylsul- fényle (Nps), T représente le groupe OH, le radical -OR2 dans lequel R2 représente un radical alkyle en C1 à Cio, un radical aryle ou aralkyle substitué ou non sur le noyau aromatique ou le radical phénacyle ou T représente le radical -NR3R4 dans lequel R3 et R4 identiques ou différents représentent un atome d'hydrogène, un radical alkyle en C1 à Cio ou un radical aryle ou aralkyle substitué ou non sur le noyau aromatique, R' représente un atome d'hydrogène et R représente le reste de la chaîne latérale d'un acide aminé qui contient au moins un groupe fonctionnel -OH,-SH, ,NH, =NH, -NH2, -COOH ou bien R' et R sont liés et forment le reste d'un acide aminé cyclique qui porte au moins l'un des groupes fonctionnels précédents, yl représente le radical dans lequel Y a pour formule R1-CH=CH-CH2-, R1 représentant un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle en Cl à C4, lorsque y1 remplace l'atome d'hydrogène du ou des groupe(s) fonctionnel(s) -OH, -5H, sNH, =NH, ou -NH2 contenu(s) dans le reste R ou le reste formé par R lié à R', sauf lorsque X est le radical tert-butyloxycarbonyle, T représente le groupe -OH et R représente le reste de la chaîne latérale de la lysine, ou bien yl représente le radical Y de formule R1-CH=CH-CH2-, R1 ayant les significations indiquées ci-dessus, lorsque yl remplace l'atome d'hydrogène du ou des groupe(s) fonctionnel(s) -COOH et/ou -OH phénolique contenu(s)dans le reste R ou le reste formé par R lié à R', sauf lorsque X est le radical tert-butyloxycarbonyle, T représente le groupe -OH et R représente le reste de la chaîne latérale de l'acide aspartique, de l'acide glutamique ou de la tyrosine, n = 1 lorsque R ne contient qu'un seul groupe fonctionnel ou n = 1 ou 2 lorsque R contient deux groupes fonctionnels. Les nouveaux dérivés selon l'invention peuvent être sous forme D, L ou DL. Lorsque T représente le groupe OH, ils peuvent être sous forme de sels avec les composés habituellement utilisés en synthèse peptidique, par exemple avec la dicyclohexylamine. Les radicaux R seuls ou en combinaison avec R' représentent les restes de tous les acides aminés connus naturels ou synthétiques qui contiennent au moins un groupe fonctionnel -OH, -5H, / NH, =NH, -NH2,- COOH dans leur chaîne latérale. Parmi les acides aminés qui contiennent de tels groupes on peut en particulier citer : l'arginine (Arg), l'acide aspartique (Asp), la cystéine (Cys), l'acide glutamique (Glu), l'histidine (His), la lysine (Lys), l'hydroxylysine, l'hydroxyproline (Hyp), la sérine (Ser), la thréonine (Thr), le tryptophan (Trp),la tyrosine (Tyr), la thyroxine (Thy), l'ornithine (Orn), l'acide a-aminopimélique et l'acide cx-aminosubérique. Les dérivés préférés sont ceux dans lesquels Y représente le radical allyle CH2=CH-CH2-, (All.) Plus particulièrement ce sont ceux dans lesquels X représente le groupe Boc ou Fmoc et T est le groupe -OH ou le radical -oR2 dans lequel R2 représente un radical alkyle en Cl à C5 ou le radical benzyle. Comme composés particulièrement utiles on peut citer les composés suivants : Boc-Ser(Alloc)-OH, Boc Thr(Alloc)-OH, Boc-Thr(Alloc)-OCH3, Boc-His(Alloc)-OH. Boc-Arg(Alloc)-OH, Boc-Arg(Alloc)-OH, Boc-Cys(Alloc) -OH, Fmoc-Asp(OAll )-OH, Fmoc-Glu(OAll )-OH, Fmoc-Cys- (Alloc)-OH, Fmoc-Lys-(Alloc)-OH, Fmoc-Tyr(All)-OH, Fmoc Ser(Alloc)-OH, Fmoc-Thr(Alloc)-OH, Fmoc-His(Alloc)-OH, Fmoc-Arg-(Alloc)-OH, Fmoc-Arg(Alloc)-OH. Ces nouveaux dérivés peuvent être préparés de différentes façons. Lorsque Y1 représente le radical dans lequel Y a pour formule R1-CH=CH=CH2-, R1 ayant les significations précédemment indiquées, ils sont de préférence préparés par réaction du chloroformiate de formule sur le composé de formule dans lesquelles Y, X, T, R et R' ont les significations précédemment indiquées, en milieu anhydre ou en milieu aqueux neutre ou basique selon le(s) groupe(s) fonctionnel(s) présent(s) dans le reste R ou dans le reste formé par R lié à R', à une température comprise entre 0 et 50"C. En particulier lorsque le groupe fonctionnel latéral à protéger est un groupe amino ou imino, les deux composés de départ sont mis à réagir dans un milieu aqueux à pH basique compris entre 7 et 12. Lorsque le radical R est le reste de la sérine les composés sont mis à réagir en milieu aqueux neutre. Lorsque R est le reste de la thréonine, de préférence le milieu est anhydre et on fait réagir le chloroformiate sur le dérivé de la thréonine de formule dans laquelle X a les significa- tions indiquées précédemment et T représente le radical -OR2 ou -NR3R4, R2, R3 et R4 ayant les significations indiquées précédemment, en présence de diméthylaminopyridine puis on fait éventuellement un traitement enzymatique pour libérer la fonction acide en cx. Lorsque yl représente un groupe Y tel que décrit précédemment et qu'il remplace l'atome d'hydrogène d'un groupe -COOH ou d'un groupe -OH phénolique, on fait réagir un composé de formule Y-Br en milieu basique sur le complexe cuivrique de l'acide aminé, éventuellement dans un solvant miscible à l'eau, de préférence l'alcool méthylique ou éthylique, à une température comprise entre 0 et 50C puis on introduit après élimination du cuivre, le groupe protecteur X selon les procédés connus, par exemple au moyen du fluoroformiate, du chloroformiate ou du carbonate de tétrachloroéthyle de X et éventuellement on transforme la fonction -COOH en a, en ester -COORZ ou en amide -CONR3R4, R2, R3 et R4 ayant les significations précédemment indiquées. Les exemples qui suivent illustrent l'invention sans toutefois la limiter. Dans tous les exemples les acides aminés et leurs dérivés sont sous forme (L). Le terme Alloc désigne le radical Exemple 1 : Préparation de Boc-His(Alloc)-OH 5,1 g de Boc-His-OH (0,02 mol) sont dissouts dans 10 ml de NaOH 2N et 10 ml d'eau. Le mélange est refroidi à O;C et agité. On ajoute 2 ml de chloroformiate d'allyle (0,019 mol) petit à petit en maintenant le pH à 7-7,5 avec NaOH 2N. Puis on continue à agiter à 0C pendant 1 heure. La solution est lavée une fois par de l'éther éthylique (Et2O) puis acidifiée avec HCl concentré jusqu a pH 2-3.Le produit est extrait trois fois par EtOAc, lavé par H2O, séché sur MgSO. On obtient après évaporation du solvant, 3,9 g du produit souhaité sous forme d'un solide-mousse (rendement 57%). Deux taches sont obtenues par chromatographie en couche mince (CCM) dans le solvant CHCl3/CH3OH/AcOH (90/8/2) par révélation au réactif ninhydrine (après le clivage habituel du groupe Boc par vaporisation d'acide chlorhydrique). Les structures des deux isomères u et t sont confirmées par RMN. ExemPle 2 : Préparation de Boc-Arg(Alloc)2-OH et Boc-Arq(Alloc)-OH 5,48 g de Boc-Arg-OH (0,02 mol) sont dissouts dans un mélange de 40 ml de NaOH 2N et 12 ml de dioxanne à 0 C et agité. Le pH de la solution est environ 14. On ajoute jusqu'à pH 12 environ 5 ml de chloroformiate d'allyle. Puis on continue à ajouter 5 ml de chloroformiate d'allyle en ajustant le pH autour de 11,5-12 par addition de NaOH 2N. On maintient l'agitation 2 h après l'addition du chloroformiate. La phase aqueuse est lavée deux fois par Et20 et acidifiée ensuite par HCl concentré jusqu'à pH 3. On extrait le produit trois fois avec EtOAc. La phase organique contient 3 produits, le produit de départ, le produit avec un seul groupe Alloc et le produit avec deux groupes Alloc. Elle est lavée par HzO à pH 3 pour éliminer le produit de départ puis lavée par H2O à pH 6 pour obtenir le dérivé monoalloc dans la phase aqueuse. La phase organique est ensuite séchée sur MgSO4. Après évaporation du solvant, on obtient 0,8 g de Boc Arg(Alloc)z-OH sous forme d'huile. [a]D : : + 2,1(c 1,CH30H) La structure est confirmée par RMN. La phase aqueuse précédente est saturée par NaCl. On extrait trois fois le produit Boc-Arg(Alloc)-OH avec EtOAc. La phase organique est séchée sur MgSO. On obtient 0,3 g de Boc-Arg(Alloc)-OH sous forme de mousse. (structure confirmée par RMN) [120 : - 3,8 (c 1,CH30H) Chaque produit donne une seule tache en CCM dans le solvant CHCl3/CH3OH//AcOH (90/8/2) par révélation au réactif ninhydrine. Exemple 3 : Préparation de Boc-Ser(Alloc)-OH 4,1 g de Boc-Ser-OH (0,02 mol) sont dissouts dans 15 ml de NaOH 2N. On ajoute alternativement 9 ml de chloroformiate d'allyle (0,085 mol) et 80 ml de NaOH 2N dix fois de suite. On laisse réagir une heure. Le mélange réactionnel est acidifié par HCl concentré jusqu'à pH 2-3. On extrait la phase organique avec EtOAc (3 fois) puis on lave la phase organique par de l'eau jusqu'à élimination complète de la Boc-Ser-OH. Le solvant est évaporé et on obtient une huile (0,8 g > . Cette huile est dissoute dans l'éther éthylique. On ajoute 1 équivalent de dicyclohexylamine (DCHA) puis de l'hexane. On obtient 1 g du produit souhaité sous forme de sel de DCHA (structure confirmée par RMN). Point de fusion : 111-113 C. [&alpha;]D20: + 19,1 (c 1,CH30Hl Une tache en CCM dans le solvant CHCl3/MeOH/AcOH (90/8/2) après révélation au réactif ninhydrine. Exemple 4 : Préparation de Boc-Thr(Alloc)-OH 8,24 g de Thr-OMe.HCl (0,05 mol) sont dissouts dans 20 ml de NaOH 2N. On ajoute 10 ml d'eau et 30 ml d'acétone. On agite. On ajoute goutte à goutte 20 g de Boc-F (40% dans du diméthoxyéthane (DME), 0,065 mol) en maintenant le pH à 7-7,5 par addition de NaOH 2N et la température de la réaction à 10-15 C. On continue l'agitation pendant 15 min après l'addition de Boc-F. Le produit est extrait trois fois par de l'éther de tert-butyle et de méthyle (TBME) et la phase organique lavée par de l'eau puis séchée sur MgSO4. On obtient après évaporation du solvant une huile incolore. On lave l'huile avec de l'hexane. On obtient 7 g (0,03 mol) de Boc-Thr-OMe. On les dissout dans 50 ml de GH2Cl2 sec à O"C. On ajoute 3,66 g de diméthylaminopyridine (DMAP) (0,03 mol) et 3,82 ml de chloroformiate d'allyle (0,036 mol). Le mélange est agité à la température ambiante pendant 24 h. Le solvant est évaporé. On ajoute de l'éther éthylique et de l'eau. La phase organique est lavée par deux fois HCl 1N, deux fois NaHCO3 à 5% et deux fois NaCl saturé.Le produit pur est séparé par chromatographie sur silice (solution éluante, CHCl3). On obtient 4,6 g de Boc-Thr(Alloc)-OMe pur (rendement 48%). 1,123 g de Boc-Thr(Alloc)-OMe (3,5 mol) sont dissouts dans 10 ml d'EtOH et 20 ml de H20. Puis on ajoute 50 mg de cystéine.HCl.H2O. Le pH est porté à 6,2 par NaOH 0,1 N. Le mélange réactionnel est thermostaté à 35"C + 2 C. On ajoute 50 mg de papaïne brute. Le pH du mélange est maintenu autour de 6,2 par l'addition de NaOH 0,1 N. 35 ml (3,5 mol) de NaOH 0,1 N ont été consommés. Le pH est porté à 8,5. La solution aqueuse est lavée deux fois par TERME puis acidifiée par HCl concentré jusqu'à pH 2-3. On extrait le produit au TBME. La phase organique est lavée une fois par HzO et filtré sur célite puis séchée sur MgSO. Le solvant est évaporé. On récupère 0,7 g de produit sous forme d'huile. L'huile est dissoute dans l'éther. On ajoute 1 équivalent de DCHA puis de l'hexane. On laisse le produit au froid pendant quelques heures. On récupère 0,53 g du produit attendu sous forme de sel de DCHA qui est un solide blanc (rendement 31%). Point de fusion 108-109 C. tcxi2O : + 22 (c 1,CH30H) Une tache par CCM dans le solvant CHCl3/MeOH/AcOH (90/8/2) par révélation au réactif ninhydrine. Exemple 5 : Préparation de Boc-Cys(Alloc)-OH 2,21 g de Boc-Cys-OH (10 mol 1 sont traités par NaOH 2N et de l'eau. Le pH est maintenu à 8. 1,6 ml de chloroformiate d'allyle (15 mmol > et du NaOH 2N sont ajoutés en même temps en maintenant le pH à 7-8. A la fin de l'addition, le mélange est acidifié jusqu a pH 2,5 puis extrait trois fois avec AcOEt. La phase AcOEt est séchée sur MgSO4. On obtient une huile après évaporation du solvant. L'huile est coévaporée plusieurs fois avec de l'éther et de l'hexane. L'huile visqueuse est conservée à température ambiante. Le produit se solidifie. On récupère 2,8 g du produit attendu sous forme d'un solide blanc, par filtration (rendement 92%). La structure est confirmée par RMN. Point de fusion : 69-71 . [&alpha;]D20: - 47,3 (c i,CH3OH) ExemPle 6 : Préparation de Fmoc-Lys(Alloc > -OH 1,15 g de Lys(Alloc)-OH (5 mmol) est dissout dans 10 ml d'acétone, 10 ml de NaOH 0,5 N et 10 ml d'eau. Le pH est environ 9. On ajoute 2,23 g de carbonate de 9fluorénylméthyle et de tétrachloroéthyle (Fmoc-OTCE) en ajustant le pH à 7-8 par l'addition de NaOH 2N. A la fin da la réaction, le pH est porté à 9-9,5. La phase aqueuse est lavée trois fois par de l'éther puis acidifié jusqu a pH E 2,5. On extrait le produit trois fois avec EtOAc. La phase EtOAc est séchée sur MgSO. Après évaporation du solvant on obtient une mousse. La mousse est dissoute dans l'éther. On ajoute de l'hexane puis on passe le mélange à l'ultrason.Le précipité est récupéré par filtration. On obtient 1,82 g du produit souhaité (rendement 80%). Point de fusion : 88-90 C. Lcx]20 : - 11,3 (c 1,diméthylformamide (DMF)) D Exemple 7 : Préparation de Fmoc-Tyr(All)-OH 0,44 g de Tyr(All)-OH (2 mmol > sont mis en suspension dans un mélange de HzO/acétone(1/1). Le pH est ajusté à 8 par addition de NaOH 0,5 N. 0,9 g de Fmoc OTCE sont ajoutés en une fois. Le pH est maintenu à 7-8. Le mélange réactionnel passe de trouble à limpide puis devient une émulsion. On continue l'agitation pendant 12 h à température ambiante. Le mélange réactionnel est acidifié jusqu'à pH # 2,5 et extrait par trois fois par AcOEt. On ajoute de l'eau. Le pH est ajusté à 9,5. La phase aqueuse est séparée et acidifié jusqu a pH # 2,5 et extraite trois fois par EtOAc. Le produit est séché sur MgSO4 puis est précipité dans sur EtOAc/Et2O/hexane. On obtient 100 mg du produit souhaité. Point de fusion : 75-78"C. [ m120 : - 21,3 (c 1,DMF) Exemple 8 : Préparation de Fmoc-Glu(All)-OH 1,11 g de Glu(All)-OH.HCl (5 mmol) est dissout dans 10 ml de NaOH 0,5 N, 20 ml d'eau et 20 ml d'acétone. 2,64 g de Fmoc-OTCE sont ajoutés en une fois. Le pH est maintenu à 7,5 par addition de NaOH 1 N. A la fin de la réaction le pH est ajusté à 8,5. La phase aqueuse est lavée quatre fois par Et2O puis acidifiée jusqu'à pH # 2,5. Le produit est extrait trois fois par Et2OAc La phase organique obtenue est lavée par trois fois H2O (pH 2,5) et H2O (pH 6) puis séchée sur MgSO. On évapore le solvant. Le produit est dissout dans Et2O. De l'hexane est ajouté puis le mélange trouble est passé à l'ultrason. Un solide précipite. On obtient 1 g du produit souhaité (rendement 48%). Point de fusion : 102-lOó C. [&alpha;]D20: : - 17,1 (c 1,DMF) D Exemple 9 : Préparation de Fmoc-Asp(All)-OH 2,1 g de Asp(All)-OH.HCl (10 mmol) sont mis en suspension dans 30 ml de diméthylsulfoxyde (DMSO). On ajoute 5,02 ml de Et3N (36 mmol > . Le mélange devient visqueux. 8,18 g de Fmoc-OTCE sont ajoutés en une fois. Le mélange réactionnel est agité pendant 18 h à 40 C sous argon. On ajoute de l'eau et EtOAc. Le pH est ajusté à 9. La phase aqueuse est séparée et ensuite acidifiée jusqu'au pH # 2,5. On extrait le produit par trois fois EtOAc . La phase EtOAC est séchée sur MgSO4. Une mousse est obtenue après évaporation du solvant. Le produit est précipité dans MeOH/Et2O/hexane. On obtient 0,53 g du produit souhaité. Point de fusion : 140 C. [cxJ20 : + 5,9 (c 1,DMF) D Exemple 10 : Préparation de Fmoc-Arg(Alloc)z-OH 0,44 g de Boc-Arg(Alloc)2-OH (1 mmol > est traité par 10 ml d'acide trifluoroacétique et de CHzC12 (1/1) pendant 30 min. Puis le solvant est évaporé à l'évaporateur rotatif. Le résidu est coévaporé avec deux fois CH2Cl2. Le résidu est dissout dans 10 ml d'acétone et 30 ml d'eau. Le pH est ajusté à 9 par NaOH 2N. On ajoute 1,2 éq. de Fmoc-OTCE en maintenant le pH à 8-9. A la fin de l'addition on obtient une émulsion. La phase aqueuse trouble est lavée par de l'éther quatre fois puis acidifiée par HCl concentré jusqu'à pH ~ 2,5. Le produit est extrait par trois fois AcOEt .Cette phase organique est séchée sur MgSOs. On évapore le solvant et on obtient une huile. Cette huile est traitée par Et2O- hexane, passée à l'ultrason. On sépare 100 mg du produit souhaité sous forme d'un solide blanc. Point de fusion : 78-80 C. [cx]20 : - 9,1 (c 1,DMF) Deux taches sont obtenues en CCM. Selon la RMN on peut les attribuer aux deux isomères suivants Exemple Il : Préparation de Arg-Ser-Tyr-Asp-Gly-Leu La préparation est effectuée en phase solide avec les cycles suivants ler cycle : 0,5 g (0,71 méq/g) de résine Boc-Leu-PAM-P (PAM = phénylacétamidométhyl, P = polystyrène - 1% divinylbenzène) est placé dans un réacteur agité. On lave deux fois avec CH2Cl2 et on filtre à chaque fois. On traite avec 50% d'acide trifluoroacétique (TFA) dans CH2Cl2 (1 min puis 30 min) et on filtre. On lave avec de l'îsopropanol puis on filtre. On lave deux fois avec CH2Cl2 et on filtre. On ajoute 2 éq. (314 mg) de BOP (benzotriazolyl-N-oxytrisdiméthylaminophosphonium hexafluorophosphate), 2 éq. (124 mg) de Boc-Gly, 7,5 ml de CH2Cl2 et 0,4 ml (6,6 éq) de diéthylisopropylamine (DIEA). Le pH est ajusté à 9 avec une petite quantité supplémentaire de DIEA si nécessaire. Le test de Kaiser est négatif après 30 min de couplage. On filtre et on lave 2 fois avec CH3OH et 2 fois avec GHzCl2 en filtrant à chaque fois. La résine est prête pour le second cycle. Les mêmes opérations sont répétées pour chacun des cycles en changeant seulement la nature de l'acide aminé. 2ème cycle : 2 éq. (194 mg) de Boc-Asp(All)-OH 3ème cycle : 2 éq. (228 mg) de Boc-Tyr(All)-OH 4ème cycle : 2 éq. (334 mg > de Boc-Ser(Alloc)-OH.DCHA 5ème cycle : 2 éq. (332 mg) de Boc-Arg(Alloc)z-OH On traite ensuite avec 50% de TFA dans CH2Cl2 l min puis 30 min. On lave avec de l'isopropanol (1 fois), CH2Cl2 (2 fois), 10% d'acide acétique (AcOH) dans CH2Cl2, CH2Cl2 (2 fois) en filtrant à chaque fois. On traite ensuite avec 49 mg de PdCl2(PPh3 )2 puis 2,5 éq. de AcOH et 7 ml de CH2Clz puis on ajoute 2 éq. par rapport aux groupes allyle de Bu3SnH. On secoue le mélange pendant 10 min. On lave avec CH2Cl2 et on filtre (2 fois). On ajoute 25 mg de PdCl2(PPh3)2, 1,5 éq. de AcOH et 7,5 ml de CH2Cl2 puis on ajoute 1 éq. de Bu3SnH et on secoue le mélange pendant 10 min. On lave ensuite avec CH2Cl2 (5 fois), CH3OH (5 fois), CH2Cl2 (5 fois) en filtrant à chaque fois et on sèche la résine sous vide pendant 2 heures. On obtient ainsi 0,65 g de Peptide PAM-P. On sépare le peptide de la résine par 10% d'acide fluorhydrique dans l'anisole. Après évaporation de HF on extrait le peptide de la résine au moyen d'une solution aqueuse d'acide acétique à 10%. La solution contenant le peptide est lyophilisée. Le peptide est obtenu avec un rendement de 52% et une pureté déterminée par chromatographie en phase liquide haute pression (HPLC) supérieure à 80%. REVENDICATIONS 1") Procédé de préparation de peptides en solution ou en phase solide caractérisé en ce que - dans une première étape on forme d'une part un dérivé d'un acide aminé ou d'un peptide à allonger dans lequel la fonction amine en a est protégée par un groupe choisi parmi le tert-butyloxycarbonyle (Boc), le 9-fluorénylméthyloxycarbonyle (Fmoc), le méthoxybenzyloxycarbonyle (Moz), l'cx-,cx-diméthyl-3, 5-diméthoxybenzyîoxycarbonyle (Ddz), et le 2-nitrophénylsulfényle (Nps), et dans lequel le(s) groupe(s) fonctionnel(s) libre(s) et à protéger dans la ou les chaîne(s) latérale(s) de l'acide aminé ou du peptide est(sont) bloqué(s) par le groupe Y de formule R1-CH=CH-CH2-, R1 représentant un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle en Cl à C4 sous forme de carbonates lorsque ce sont des groupes fonctionnels -OH alcool, de thiocarbonates lorsque ce sont des groupes fonctionnels -5H, d'éthers ou de carbonates lorsque ce sont des groupes fonctionnels -OH phénolique, de carbamates lorsque ce sont des groupes fonctionnels amino ou imino et d'esters lorsque ce sont des groupes fonctionnels -COOH, on forme d'autre part un dérivé d'un acide aminé ou d'un peptide à allonger dans lequel la fonction acide -COOH en a est protégée sous la forme d'un groupe ester -COOR2 dans lequel R2 est un radical alkyle en C1 à Cio, un radical aryle ou aralkyle substitué ou non sur le noyau aromatique ou le radical phénacyle, ou sous la forme d'un groupe amide -CONR3R4 dans lequel R3 et R4 identiques ou différents représentent un atome d'hydrogène, un radical alkyle en Cl à Cio ou un radical aryle ou araîkyle substitué ou non sur le noyau aromatique, les radicaux R2,R3 et R4 pouvant être reliés ou non à un polymère de type polystyrène ou polyacrylique, et dans lequel le(s) groupe(s) fonctionnel(s) libre(s) et à protéger dans la ou les chaînes latérale(s ) de l'acide aminé ou du peptide est(sont > bloqués par le groupe Y de formule R1-CH=CH-CH2-, Ri représentant un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle en Cl à C4, sous forme de carbonates pour les groupes fonctionnels -OH alcool, de thiocarbonates pour les groupes fonctionnels -5H, d'éthers ou de carbonates pour les groupes fonctionnels -OH phénolique, de carbamates pour les groupes fonctionnels amino ou imino et d'esters pour les groupes fonctionnels -COOH, - dans une seconde étape on condense les deux dérivés précédemment obtenus pour former la liaison peptidique et on obtient un peptide protégé, - dans une troisième étape on enlève tout d'abord le groupe protecteur de la fonction amine en a du peptide formé, puis on enlève tous les groupes protecteurs Y des groupes fonctionnels contenus dans les chaînes latérales par une catalyse douce au moyen d'un composé d'un métal noble tel qu'un métal du groupe du platine et ensuite s'il n'a pas été déjà éliminé on enlève le groupe protecteur de la fonction acide en a. 2") Procédé selon la revendication 1 caractérisé en ce que le groupe Y qui protège les groupes fonctionnels des chaînes latérales est le groupe de formule CH2=CH-CH2-. 3 ) Procédé selon la revendication 1 ou 2 caractérisé en ce que la fonction amine en a du dérivé d'acide aminé ou du peptide à allonger est protégée par le groupe Boc ou Fmoc et les groupes fonctionnels -OH phénolique éventuellement présents dans les chaînes latérales sont protégés par le groupe Y sous forme d'éthers. 4 > Procédé selon la revendication 1 ou 2 caractérisé en ce que la fonction acide en a de l'autre dérivé d'acide aminé ou du peptide à allonger est protégée sous forme d'ester par un radical alkyle en C1 à C5 OU benzyle. 5 ) Procédé selon la revendication 1 caractérisé en ce que dans la troisième étape le groupe protecteur de la fonction amine en a du peptide est éliminé au moyen d'un acide fort lorsque la fonction amine est protégée par le groupe Boc ou par une amine secondaire dans un solvant lorsque la fonction amine est protégée par le groupe Fmoc. 6 ) Procédé selon la revendication 1 ou 5 caractérisé en ce que les radicaux Y des groupes fonctionels des chaînes latérales du peptide sont éliminés au moyen d'une quantité catalytique d'un composé du rhodium (I) ou d'un composé du palladium (O) ou (II) dans un solvant en présence d'accepteurs nucléophiles ou de donneurs de protons. 7 ) Procédé selon la revendication 6 caractérisé en ce que les radicaux Y sont éliminés en faisant réagir le peptide avec l'hydrure de tributylétain en présence d'une quantité catalytique de palladium (O) tétrakis (triphénylphosphine) ou de palladium (II) dichlorobis (triphénylphosphine) et d'un composé faiblement acide tel que l'acide acétique, le p-nitrophénol ou l'acétate de pyridinium ou d'eau, dans un milieu solvant ou bien en faisant réagir le peptide avec une quantité catalytique de palladium (O) tétrakis(triphénylphosphine) en présence de N,N-diméthylsilylamine et d'acétate de triméthylsilyle dans un milieu solvant à bas point d'ébullition et aprotique et en traitant ensuite le composé obtenu avec du méthanol. 8 ) Nouveaux dérivés d'acides aminés utiles pour la préparation de peptides caractérisés en ce qu ils ont la formule générale dans laquelle X représente le groupe tert-butyloxycarbonyle (Boc), 9-fluorénylméthyloxycarbonyle (Fmoc), méthoxybenzyloxycarbonyle (Moz), ,a-diméthyl-3,5- diméthoxybenzyloxycarbonyle (Ddz) ou 2-nitrophénylsulfényle (Nps), T représente le groupe OH, le radical -OR2 dans lequel R2 représente un radical alkyle en C1 à Clo, un radical aryle ou aralkyle substitué ou non sur le noyau aromatique ou le radical phénacyle ou T représente le radical -NR3R4 dans lequel R3 et R4 identiques ou différents représentent un atome d'hydrogène, un radical alkyle en Cl à Cio ou un radical aryle ou aralkyle substitué ou non sur le noyau aromatique, R' représente un atome d'hydrogène et R représente le reste de la chaîne latérale d'un acide aminé qui contient au moins un groupe fonctionnel -OH,-SH, ): :NH, =NH, -NH2, -COOH ou bien R' et R sont liés et forment le reste d'un acide aminé cyclique qui porte au moins l'un des groupes fonctionnels précédents, yl représente le radical dans lequel Y a pour formule R1-CH=CH-CH2-, R1 représentant un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle en C1 à C4, lorsque yl remplace l'atome d'hydrogène du ou des groupe(s) fonction nels -OH, -SH, ~ NH, =NH, ou -NH2 contenu(s) dans le reste R ou dans le reste formé par R lié R', sauf lorsque X est le radical tert-butyloxycarbonyle, T représente le groupe -OH et R représente le reste de la chaîne latérale de la lysine, ou bien yl représente le radical Y de formule R1-CH=CH-CH2-, R1 ayant les significations indiquées ci-dessus, lorsque yl remplace l'atome d'hydrogène du ou des groupe(s) fonctionnel(s) -COOH et/ou -OH phénolique contenu(s)dans le reste R ou le reste formé par R lié à R', sauf lorsque X est le radical tert-butyloxycarbonyle, T représente le groupe -OH et R représente le reste de la chaîne latérale de l'acide aspartique, de l'acide glutamique ou de la tyrosine, n = 1 lorsque R ne contient qu'un seul groupe fonctionnel ou n = 1 ou 2 lorsque R contient deux groupes fonctionnels. 9 ) Dérivés selon la revendication précédente caractérisés en ce que Y représente le radical CH2=CH-CH2-. 10) Dérivés selon la revendication 8 ou 9 caractérisés en ce que T représente le groupe -OH ou un radical -OR2 dans lequel R2 est un radical alkyle en Cl à Cs ou le radical benzyle et X représente le groupe Boc ou Fmoc. 11") Procédé de préparation des dérivés d'acides aminés de formule (I) caractérisé en ce que lorsque yl représente le radical dans lequel Y a pour formule R1-CH=CH-CHz, R1 représentant un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle en C1 à C4, on fait réagir un chloroformiate de formule sur le composé de formule dans lesquelles Y, X, T, R et R' ont les significations précédentes, en milieu anhydre ou en milieu aqueux neutre ou basique selon le(s) groupe(s) fonctionnel(s) présent(s) dans le reste R ou le reste formé par R et R', à une température comprise entre O et 50C. 12") Procédé de préparation selon la revendication précédente caractérisé en ce que lorsque le groupe fonctionnel latéral à protéger est un groupe amino ou imino, la réaction a lieu dans un milieu aqueux à un pH compris entre 7 et 12. 13) Procédé de préparation selon la revendication 11 caractérisé en ce que lorsque R représente le reste de la sérine la réaction a lieu en milieu aqueux neutre. 14) Procédé de préparation selon la revendication 11 caractérisé en ce que lorsque R représente le reste de la thréonine on fait réagir en milieu anhydre le chloroformiate sur le composé de formule dans laquelle X a les significations précédentes et T représente le radical -OR2 ou -NR3R4, R2, R3, R4 ayant les significations précédentes en présence de diméthylaminopyridine. 158) Procédé de préparation des dérivés d'acides aminés de formule (I) caractérisé en ce que lorsque yl représente le radical Y de formule R1-CH=CH-CH2, Rl représentant un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle en Cl à C4, on fait réagir un composé de formule Y-Br, Y ayant la signification précédente, en milieu basique sur le complexe cuivrique de l'acide aminé, éventuellement dans un solvant miscible à l'eau, à une température comprise entre 0 et 50çC puis on introduit le groupe protecteur X après élimination du cuivre et éventuellement on transforme la fonction -COOH en a, en ester -COOR2 ou en amide -CONR3R4, R2, R3 et R4 ayant les significations précédentes.