FR 2673630 A1 19920911 FR 9102828 A 19910308 Dérivés du glucopyranose, leur procédé de préparation et leur application au dosage immunochimique des glucosinolates dans les crucifères, notamment le colza La présente invention a pour objet de nouveaux dérivés du glucopyranose, leur procédé de préparation et leur application à la détection et au dosage immunochimique des glucosinolates dans les crucifères, notamment dans les graines et le tourteau de colza. L'utilisation alimentaire des crucifères en général, et du colza en particulier, requiert un contrôle strict des facteurs antinutritionnels présents dans ces plantes et leurs dérivés. Ces facteurs anti-nutritionnels sont notamment constitués par les glucosinolates, composés considérés comme responsables de nuisances organoleptiques (cause d'inappétence) et de nombreux effets physiologiques indésirables (notamment hyperthyroidie, hépatomégalie et troubles de la reproduction) chez les animaux d'élevage consommateurs desdites plantes et dérivés. De ce fait, ces derniers et notamment les graines de colza et les tourteaux de colza obtenus après pressage et extraction de l'huile, doivent être soumis à des analyses précises pour en estimer la teneur en glucosinolates ; il est donc de première importance de disposer d'un procédé de dosage des glucosinolates, qui soit à la fois efficace, rapide, simple à mettre en oeuvre et ne nécessitant qu'un matériel minimum. Les procédés de dosage des glucosinolates préconisés à ce jour, sont essentiellement fondés sur la chromatographie liquide haute performance. la rentabilité et l'efficacité de ces procédés se trouvent toutefois limitées par le fait que seuls deux étalons internes sont actuellement commercialement disponibles. Par ailleurs, un article paru récemment dans J. Agric. Food Chem. 1988, 36, 398-403, décrit un procédé de dosage immunochimique de la sinigrine et de la gluconapine, deux glucosinolates particuliers dont la partie aglycone est constituée par un groupe alkènyle. Ce procédé comprend la conversion de la sinigrine en un ester activé du monohémisuccinate de sinigrine, le couplage de cet ester avec une protéine porteuse en vue d'obtenir un immunogène, la production d'un anticorps polyclonal dirigé contre cet immmunogène et la mise en oeuvre de cet anticorps pour le dosage immunologique de la sinigrine et de la gluconapine dans un échantillon. Ce procédé présente toutefois des inconvénients. En effet, il préconise le couplage de la protéine sur la partie glucidique de la sinigrine, ce qui laisse principalement exposée la partie aglycone de la sinigrine. I1 s'ensuit que l'anticorps produit à partir de l'immunogène résultant de ce couplage possède essentiellement une spécificité pour cette partie aglycone. L'utilisation du procédé décrit dans l'article susmentionné est dès lors nécessairement limité au dosage de la sinigrine et probablement de la gluconapine qui possède une partie aglycone structuralement très proche de celle de la sinigrine. La technique connue d'après cet article souffre donc d'une insuffisance manifeste puisqu'elle est impuissante à doser les autres glucosinolates présents dans les crucifères. Le but de la présente invention est de remédier aux inconvénients des procédés connus. Elle est fondée sur la constatation qu'un glucosinolate de synthèse (haptène) dont la partie aglycone comporte une fonction apte à assurer le couplage avec un porteur doué de propriétés immunologiques, permet la préparation d'un immunogène dont la partie non aglycone est suffisamment dégagée pour être présentée aux effecteurs de la réponse immunitaire. Ainsi, la présente invention propose en premier lieu de nouveaux dérivés du glucopyranose (I), comprenant un enchaînement (glucopyranosyl-l) ou M représente un cation, lié à une partie aglycone R, ces dérivés étant caractérisés en ce que ladite partie aglycone R porte au moins une fonction réactive F de couplage avec un porteur doué de propriétés immunologiques et couplable avec lesdits dérivés (I), ce porteur étant avantageusement une protéine porteuse. On précisera que dans ces nouveaux dérivés, M représente de préférence un métal alcalin, un groupe ammonium ou un groupe ammonium substitué par au moins un radical alkyle en Ct-C4. On précisera encore que la présente invention s'étend à toutes les formes isomères possibles des dérivés (I) 0 -D, -D,/3-L, -L, Z, E et leurs mélanges], mais que ces dérivés (I) possèdent avantageusement un groupe glucopyranosyle de la série D et notamment de configuration une une préférence toute particulière étant donnée aux dérivés (I) pour lesquels le groupe glucopyranosyle est de configuration /3-D et le groupe -S-C- est de forme Z. NOS03M Par ailleurs, la fonction réactive F des dérivés du glucopyranose (I) ci-dessus, sera choisie suivant la nature du porteur et peut notamment être un groupe NH2 ou un groupe COX où X représente un radical OH, un atome d'halogène (comme de chlore), un reste d'anhydride mixte [comme un reste (alkoxy en Ct-C4) carbonyloxyl ou un reste d'ester actif (comme un reste rarml les aerlves ae glucopyranose tl) selon l lnventlon, on citera en particulier ceux dont le groupe glucopyranosyle est de configuration /3-D, dont le groupe -S-C- est de forme Z et dont NOS03M la partie aglycone portant la fonction réactive de couplage répond à la formule dans laquelle - n prend la valeur O ou 1, - A représente un groupe alkylène en C1-C4, CH2-O, CH2-O-CH2, CH2-S ou CH2-S-CH2, et - F1 représente NH2 ou COX où X a la même signification que ci-dessus, parmi lesquels on citera tout particulièrement ceux de formule v'-D-glucopyranosyl-1)-S - C -(CH2-O-CH2)n XCOOH (il) M03SO (Z) La présente invention propose également un procédé de préparation des dérivés du glucopyranose (I) ci-dessus, ce procédé étant caractérisé en ce qu'il comprend les étapes consistant à (a) condenser les composés de formule où R a la même signification que dans les dérivés (I) et F2 représente au moins une fonction réactive de couplage avec un porteur, respectivement sur le glucopyranosyl-l thiol dont les radicaux OH sont bloqués chacun par un groupe protecteur, ce qui conduit aux composés de formule (glucopyranosyl bloqués) où R et F2 ont la même signification que ci-dessus et (glucopyranosyl bloqué) désigne le groupement glucopyranosyle dont les radicaux OH sont bloqués chacun par un groupe protecteur (b) soumettre les composés (III) à une réaction d'O-sulfatation pour obtenir les composés de formule (glucopyranosyl bloqués) (c) salifier le groupe sulfate et éliminer les groupes protecteurs des composés (IV) ; et (d) convertir éventuellement la ou les fonctions F2 des composés obtenus à l'étape (b) ou (c) en une ou plusieurs autres fonctions réactives de couplage avec un porteur. Dans les composés (II) mis en oeuvre à l'étape (a), F2 représente toute fonction apte à assurer un couplage avec un porteur, mais non susceptible de prendre part aux réactions mises en oeuvre dans les étapes (a) à (c) ; F2 représentera de préférence une fonction NH2 ou COOH. On ajoutera que les groupes protecteurs du glucopyranosyl-l thiol sont de préférence des groupes acétyle. Dans l'étape (a), on utilisera de préférence un léger excès de glucopyranosyl-l thiol par rapport aux composés (II) ; en outre, on opérera avantageusement dans un solvant comme l'éther éthylique ou CH2C12, et en présence d'une base telle que la triéthylamine. Dans l'étape (b), l'O-sulfatation est de préférence effectuée par mise en oeuvre d'un léger excès du complexe pyridine : S03, dans un solvant tel que CH2Cl2. La salification de l'étape (c) est réalisée à l'aide d'une base minérale faible telle que MHC03 (où M a la même signification que ci-dessus) ; quant à la déprotection du groupe glucopyranosyle, elle est effectuée dans un solvant en milieu basique, par exemple dans le méthanol saturé en ammoniac. La conversion de l'étape (d) dépend bien évidemment de la nature de la fonction F2. Ainsi, si F2 représente un groupe COOH, cette étape pourra notamment consister à convertir ce groupe COOH en - un groupe COHal (où Hal représente un atome d'halogène), par action d'un agent halogénant tel que le chlorure de thionyle, - un reste d'anhydride mixte, par exemple par action d'un chloroformiate d'alkyle en Ct-C4, ou - un reste d'ester actif, par exemple par action de N-hydroxy succinimide. Le procédé qui vient d'être décrit permet en particulier - la synthèse des composés de formule où A, n, F1 et M ont la même signification ci-dessus, par mise en oeuvre des composés (II), (III) et (IV) où -R- représente et F2 représente NH2 ou COOH, ou - la synthèse des composés (I'), par mise en oeuvre des composés (II), (III) et (IV) où F2-R- représente avec n = O ou 1. Le glucopyranosyl-l thiol à radicaux OH bloqués, y compris les formes isomères, sont connus ou peuvent être préparés par mise en oeuvre d'un procédé tel que celui décrit par J. Stanek, M. Sindlerova et M. Cerny dans Coll. Czech. Chem. Commun. 1965, 30, 297. Quant aux composés (Il), ils peuvent être obtenus par réaction de l'oxime de formule avec un équivalent de N-chlorosuccinimide, dans un solvant organique tel que le DMF et sous argon. Comme indiqué au début de cette description, les dérivés (I) trouvent leur application dans la détection ou le dosage immunochimique des glucosinolates. A cette fin, ces dérivés (I) qui sont des haptènes, vont, conformément à l'invention, être couplés respectivement avec un porteur doué en soi de propriétés immunologiques, couplable avec les dérivés (I) et donc le siège de fonctions aptes à réagir avec la ou les fonctions réactives des dérivés (T) pour assurer le couplage de ces derniers avec ledit porteur, ce couplage conduisant à des conjugués dérivé (I) - porteur qui sont des immunogènes. Par conséquent, la présente invention s'étend également aux immunogènes constitués par les produits de couplage des dérivés (I) respectivement avec un tel porteur. Ce porteur est avantageusement constitué par une protéine porteuse, celle-ci pouvant être de nature très diverse et on citera plus particulièrement les sérum albumines telles que la sérum albumine bovine et l'ovalbumine. On notera que lorsque le porteur est une protéine porteuse et la fonction réactive de couplage des dérivés (I) est un groupe NH2 ou COX (avec X tel que défini ci-dessus), le couplage dans les immunogènes selon l'invention est assuré par au moins une liaison peptidique entre au moins un groupement COOH ou NH2 d'une molécule de ladite protéine porteuse et respectivement le groupe NH2 ou COX d'une ou plusieurs molécules d'un dérivé (I). Dans ce cas, le couplage est de préférence effectué en présence d'un agent de condensation tel que le N,N'-dicyclohexylcarbodiimide et en milieu aqueux. La présente invention concerne en outre les anticorps polyclonaux dirigés respectivement contre les immunogènes décrits cidessus. La préparation de ces anticorps est classique et bien connue de l'Homme de l'Art. Elle comprend l'immunisation d'animaux (lapin par exemple) au moyen des immunogènes selon l'invention, par injections répétées (notamment par voie sous-cutanée) de ces derniers de préférence sous la forme d'une émulsion d'un agent de stimulation du système immunitaire (tel que l'adjuvant complet et/ou incomplet de Freund). Ensuite (généralement environ 2 mois et demi après la première injection), le sang des animaux traités est prélevé, puis le sérum est séparé, de préférence purifié pour recueillir les immunoglobulines G et réparti en aliquotes de volume approprié conservés sous forme congelée. La présente invention concerne enfin un procédé de détection ou de dosage immunochimique des glucosinates dans un échantillon, procédé qui comprend l'utilisation d'anticorps dirigés contre les glucosinolates, ces anticorps étant les anticorps polyclonaux définis ci-dessus. Les procédés de détection ou de dosage immunochimique sont des techniques bien connues. Parmi ces procédés, on citera en particulier le procédé du type ELISA, suivant lequel l'haptène éventuellement présent dans un échantillon est détecté ou quantifié par sa capacité à inhiber la liaison d'un anticorps avec un haptène fixé sur un support. Un procédé de dosage immunochimique du type ELISA est plus précisément basé sur la compétition entre l'haptène à doser et un haptène fixé, vis-à-vis d'un anticorps dirigé contre ces deux haptènes et la quantification du complexe immun formé entre cet anticorps et l'haptène fixé. En conséquence, la présente invention vise en particulier un procédé de dosage immunochimique des glucosinolates dans un échantillon, comprenant la mise en contact dudit échantillon avec un anticorps polyclonal tel que défini ci-dessus et un antigène fixé sur un support et apte à former un complexe immunologique avec ledit anticorps polyclonal et la quantification du complexe immunologique formé entre ledit anticorps polyclonal et ledit antigène fixé sur un support, ce procédé étant caractérisé en ce que ledit antigène est formé par couplage d'un dérivé (I) défini ci-dessus avec une protéine porteuse différente de celle de l'immunogène à partir duquel est préparé ledit anticorps polyclonal. Pour la quantification du complexe immun, on peut notamment mettre en oeuvre un anticorps polyclonal préalablement marqué par une enzyme (peroxydase ou phosphatase alcaline par exemple) apte à développer une réaction colorée en présence d'un substrat approprié. Cette quantification peut également être réalisée en mettant en oeuvre un anticorps polyclonal non marqué, puis un anticorps dirigé contre cet anticorps polyclonal et marqué par une enzyme (peroxydase ou phosphatase alcaline par exemple) apte à développer une réaction coloré en présence d'un substrat approprié. Pour la réalisation pratique du procédé de dosage immunochimique selon l'invention, on pourra utilement se reporter à J. Agric. Food Chem. 1988, 86, 398-403. Le procédé de dosage immunochimique selon l'invention est particulièrement adapté au dosage des glucosinolates totaux présents dans les crucifères, en particulier dans les graines ou les tourteaux de colza ; dans ce cas, l'échantillon mis en oeuvre est constitué par une solution d'extraction des glucosinolates desdits crucifères.On comprendra en effet que, compte tenu du fait que la protéine porteuse est couplée sur la partie aglycone des dérivés (I), le groupement (glucopyranosyl-1)-S-C- reste suffisamment dégagé pour être pré NOS03M senté aux effecteurs de la réponse immunitaire. I1 s'ensuit que les anticorps produits à partir des immunogènes dérivés (I)-protéine porteuse peuvent reconnaître ce groupement et par conséquent être dirigés contre tous les glucosinolates puisque ledit groupement constitue la partie commune à tous ces composés. Le procédé de dosage selon l'invention permet donc bien le dosage des glucosinolates totaux des crucifères, ce qui constitue un avantage considérable par rapport au procédé préconisé dans l'Art antérieur, qui ne permet que le dosage de deux glucosinolates particuliers. On décrira ci-après plus en détail les modes de réalisation préférés de la présente invention. Exemple 1 : Préparation du dérivé du glucopyranose de formule (-D-glucopyranosyl-1)-S-C- COOH IIO COOH K03SO (Z) Etape a : Carboxy-4 benzaldoxime Obtenue par transformation du carboxy-4 benzaldéhyde selon la technique décrite dans Ber. 24, 2424 (1891). Ce composé est un solide cristallin blanc et possède un point de fusion de 224"C. Etape b : Chlorure du carboxy-4 benzhydroximoyle L'oxime obtenue à l'étape a (0,5 g, 3 mmoles) dissoute dans le DMF (5 ml) est traitée par du N-chlorosuccinimide (0,4 g, 3 mmoles). La réaction est abandonnée 2 h sous argon à température ambiante, puis on concentre sous pression réduite avant d'extraire (eau/acétate d'éthyle). La phase organique est séchée sur MgS04 et évaporée. On obtient ainsi le produit attendu (0,48 g ; rendement : 80 %) qui se présente sous la forme d'un sirop jaune ; il est engagé sans autre purification dans l'étape c. Etape c : (Z)-thiohydroximate de formule (tétra-O-acétyl-2,3,4,6- -D-glucopyranosyl-l) Au composé obtenu à l'étape b (200 mg, 1 mmole) dissous dans l'éther éthylique sec (3 ml), on ajoute successivement sous argon et à température ambiante, du (tétra-0-acétyl-2, 3,4, 6--D-glucopyranosyl-1) thiol (437 mg, 1,2 mmole) en solution dans CH2Cl2 (3 ml) et de la triéthylamine (0,5 ml, 3,6 mmoles) fraîchement distillée. Il se forme rapidement un précipité de chlorhydrate de triéthylammonium. Après 30 minutes d'agitation sous argon, on ajoute une solution aqueuse d'H2S04 1N et on extrait plusieurs fois par CH2Cl2.Après séchage sur MgS04, suivi de l'évaporation des solvants, on obtient un résidu que l'on purifie par chromatographie "flash" (CH2Cl2/CH30H = 85/15) pour donner 450 mg (rendement = 85 %) du composé attendu amorphe. . [ ]D = + 14" (C = 0,80, CHCl3) . 1H-RMN (DMSO-d6) ippm : 1,89, 1,91, 2,00 et 2,05 (4s, 4 x 3H, AcO) ; 3,44 (ddd, 1H, H-5) ; 3,85 (dd, 1H, J6*,s = 2,0 Hz, J6t,6 = 12,2 Hz, H-6') ; 4,02 (dd, 1H, J6,s = 5,9 Hz, H-6) 4,80 (d, 1H, Jt,2 = 10,0 Hz, H-l) ; 4,86 (2ft, 2H, H-2, H-4); 5,27 (ft, 1H, J3,4 = J 3,2 = 10,0 Hz, H-3) ; 7,52 (d, 2H, Jvic = 7,8 Hz, H-Ar) ; 7,99 (d, 2H, H-Ar). Etape d : O-sulfate de formule (tétra-O-acétyl-2,3,4,6- -D-glucopyranosyl-l)-S-CI &commat; COOH N K03SO (Z) A un mélange de pyridine fraîchement distillée (2ml, excès) et de CH2C12 sec (2 ml) agité à 0 C sous argon, on ajoute goutte à goutte une solution de ClS03H à 99 % (0,1 ml, 1,5 mmole) dans CH2Cl2 (2 ml). Au réactif sulfatant ainsi obtenu, on ajoute après 15 minutes, le thiohydroximate obtenu à l'étape c (80 mg, 0,15 mmole) et on maintient l'agitation à température ambiante pendant 24 heures. On additionne alors une solution de KHC03 (75 mg, 0,75 mmole) dans lteau (3 ml) puis on laisse agiter jusqu'à homogénéisation. Le mélange est alors évaporé puis co-évaporé plusieurs fois au toluène ; le résidu est purifié par chromatographie "flash" (CH2Cl2/MeOH 4:1) pour donner 78 mg (rendement = 80 %) du composé attendu. . [&alpha;]D = + 8 (C = 0,85, MeOH) . 1H-RMN (DMSO-d6) i(ppm) : 1,89, 1,91, 2,03 et 2,07 (4s, 4 x 3H, AcO) ; 3,33 (m, 1H, H-5) ; 3,86 (dd, 1H, J6' .5 = 2,1 Hz, J6t,6 = 12,1HZ, H-6') ; 3,99 (dd, 1H, J6,5 = 5,6 Hz, H-6) ; 4,76 (d, 1H, J1,2 = 10,0 Hz, H-1) ; 4,80 (ft, 1H, Jvic = 9,5Hz, H-4) ; 4,83 (ft, 1H, Jvic = 9,5 Hz, H-2) 5,23 (ft, 1H, H-3) ; 7,45 (d, 2H, Jvic = 7,8 Hz, H-Ar) 8,04 (d, 2H, H-Ar). Etape e : (ss -D-glucopyranosyl On traite le composé obtenu à l'étape d (65 mg, 0,1 mmole), sous argon par une solution méthanolique saturée de NH3 pendant 20 heures. Le solvant est ensuite évaporé, le résidu repris dans l'eau puis lyophilisé. On obtient ainsi le composé attendu sous la forme d'une poudre blanche très hygroscopique (45 mg, rendement = 94 %). []D = - 4 (C = 0,60, H20) . 1H-RMN (D20) #ppm : 1,97 (s, traces d'acétamide) ; 2,73 (m, 1H, H-5) ; 3,29 ((ft, 1H, Jvic = 9,5 Hz, H-3) ; 3,39 (ft, 1H, Jvic = 9,5Hz, H-4) ; 3,48 (ft, 1H, Jvic = 9,5 Hz, H-2) 3,61 (dd, 1H, J6',s = 4,0 Hz, J6g,6 = 12,3 Hz, H-6') 3,87 (ld, 1H, H-6) ; 4,31 (d, 1H, J1,2 = 10,0 Hz, H-1) 7,69 (d, 2H, Jvic = 7,8 Hz, H-Ar) ; 8,01 (d, 2H, H-Ar). Exemple 2 : Préparation du dérivé du glucopyranose de formule (ss -D-glucopyranosyl-l)-S-ff-CH2-O-CH2 -( O)-COOH N KO3SO (Z) Etape a : Acide hydroxyméthyl-4 benzoïque Obtenu par réduction chimiosélective par NaBH4 du carboxy-4 benzaldéhyde. Etape b : Mélange E + Z de (Carboxy-4 benzyloxy)-1 acétaldoxime Dans le diméthoxy-1,2 éthane sec (6 ml) sous argon, on prépare le dianion de l'acide obtenu à l'étape a (200 mg, 1,3 mmole) sous l'action de NaH (75 mg, 1,2 équivalent), puis on ajoute de la chloro-l acétaldoxime (122 mg, 1,3 mmole) obtenue classiquement par réaction de l'hydroxylamine sur le chloro-l acétaldéhyde en solution aqueuse. Après 2 heures de réaction, on acidifie par HC1 2N, puis on extrait plusieurs fois à l'acétate d'éthyle. Après séchage sur MgS04 et évaporation du solvant, on obtient un résidu que l'on chromatographie (CH2C12/CH30H 4/1). On obtient ainsi 247 mg (rendement = 91 %) du composé attendu (solide amorphe). .1H-RMN (DMSO-d6)ppm : 4,56 (s, 2H, ArCH20) ; 4,83 (d, Jvic = 5,7 Hz, OCH2CH = E majoritaire) ; 5,01 (d, Jvic = 3,6 Hz, OCH2CH = Z minoritaire) ; 6,96 (t, CH = Z minoritaire) 7,40-7,50 (m, 2H, H-Ar) ; 7,52 (t, CH = E majoritaire) 7,90-8,00 (m, 2H, H-Ar). Etape c : Chlorure de (carboxy-4 benzyloxy)-l acéthydroximoyle (Z + E) Le mélange d'oximes (E + Z) obtenu à l'étape b (210 mg, 1 mmole) dissous dans le DMF (3 ml) est soumis à la chloration par du N-chlorosuccinimide (134 mg, 1 mmole) selon le même protocole qu'à l'étape b de l'exemple 1. On obtient ainsi le chlorure brut attendu (195 mg, rendement = 80 %). Etape d : (Z) - thiohydroximate de formule (tétra-O-acétyl-2,3,4,6-v3-D-glucopyranosyl-l) Au composé obtenu à l'étape c (195 mg, 0,8 mmole) dissous dans l'éther éthylique sec (3 ml), on ajoute du (tétra-0-acétyl-2,3,4,6-t -D-glucopyranosyl-l) thiol (350 mg, 1,2 équivalent) en solution dans le CH2C12, puis de la triéthylamine (0,4 ml, 3,6 équivalents). Après traitement identique à celui de l'étape c de l'exemple 1, on isole 297 mg (rendement = 65 %) du composé attendu amorphe. . [&alpha;]D = - 3 (C = 0,70, CHC13) . 1H-RMN (DMSO-d6) # ppm : 1,90, 1,92, 1,97 et 1,99 (4s, 4 x 3 H, AcO) ; 3,90-4,20 (m, 3H, H-5, H-6, H-6') ; 4,59 (s, 2H, ArCH20) ; 4,90-5,00 (m, 2H, H-2, H-4) ; 5,15 (système AB, 2H, Jgem = 13,4Hz, OCH2C =) ; 5,38 (ft, 1H, Jvic = 9,5 Hz, H-3) ; 5,59 (d, 1H, J1,2 = 9,9 Hz, H-1) ; 7,49 (d, 2H, Jvic = 7,9 Hz, H-Ar) ; 7,98 (d, 2H, H-Ar). Etape e : O-sulfate de formule (tétra-O-acétyl-2,3,4,6-ss -D-glucopyranosyl En appliquant le procédé décrit à l'étape d de l'exemple 1, au thiohydroximate obtenu à ltétape d précédente (86 mg, 0,15 mmole), on obtient le sulfate attendu (80 mg, rendement = 77 %). = [&alpha;] = - 4,5 (C = 1,00, MeOH) 1H-RMN (DMSO-d6) dppm : 1,94, 1,97, 2,00 et 2,01 (4s, 4 x 3H, AcO) ; 4,01 (dd, 1H, J6;s = 1,7 Hz, J6',6 = 12,1 Hz, H-6') 4,08 (dd, 1H, J6,s = 5,2 Hz, H-6) ; 4,15 (m, 1H, H-5) ; 4,85 (s, 2H, ArCH20) ; 4,91 (ft, 1H, Jvic = 9,5Hz, H-2) ; 4,93 (ft, 1H, Jvic = 9,5 Hz, H-4) ; 5,13 et 5,18 (système AB, 2H, Jgem = 13,4 Hz, OCH2C=) ; 5240 (ft, 1H, Jvic = 9,5Hz, H-3) 5,60 (d, 1H, J1 2 = 9,9 Hz, H-1) ; 7,49 (d, 2H, Jvic = 7,9 Hs H-Ar) ; 7,96 (d, 2H, H-Ar). Etape f : ( -D-glucopyranosyl Le composé obtenu à l'étape e est déprotégé selon un protocole identique à celui de l'étape e de l'exemple 1. On obtient ainsi le composé attendu avec un rendement de 90 %. . [&alpha;]D = - 10 (C = 0,60, H20) . 1H-RMN (D2O) #ppm : 1,97 (s, traces d'acétamide) ; 3,40-3,70 (m, 4H, H-2, H-3, H-4, H-5) ; 3,75 (dd, 1H, J6ws = 6,1 Hz, J6t,6 = 12,3 Hz, H-6') ; 3,98 (dd, 1H, J6,s = 1,5 Hz, H-6) 4,21 (s, 2H, ArCH20) ; 4,51 et 4,57 (système AB, 2H, Jgem = 13,5 Hz, OCH2C=) ; 4,80 (d, 1H, J1,2 = 10,0 Hz, H-1) ; 7,56 (d, 2H, Jvic = 8,2 Hz, H-Ar) ; 7,95 (d, 2H, H-Ar). Exemple 3 : Préparation d'un immunogène par couplage d'une protéine porteuse avec un dérivé du glucopyranose (I) 25 mg du dérivé de glucopyranose de l'exemple 1 et 19 mg de DCCI sont solubilisés dans 3 ml d'eau. Après 15 minutes d'agitation à 4 C, 125 mg de sérum albumine bovine (BSA) dissoute dans 3 ml d'eau sont ajoutés et l'ensemble est agité 16 heures à 4" C. Ensuite, on soumet le mélange résultant à une dialyse contre de l'eau puis on lyophilise et conserve à 4" C l'immunogène ainsi obtenu appelé ci-après Glu-BSA (1). La comparaison du spectre UV de l'immunogène et celui de la BSA montre que le taux de couplage est de 6 molécules du dérivé de glucopyranose par molécule de BSA. Un mode opératoire analogue à celui ci-dessus, permet la préparation des autres immunogènes selon l'invention, par mise en oeuvre des dérivés de glucopyranose (I) et d'une protéine porteuse. On obtient en particulier - l'immunogène Glu-OVA (1) par couplage du dérivé de gluco pyranose de l'exemple 1 et de l'ovalbumine, - l'immunogène Glu-BSA (2) par couplage du dérivé de glucopy ranose de l'exemple 2 et de la sérum albumine bovine, et - l'immunogène Glu-OVA (2) par couplage du dérivé de glucopy ranose de l'exemple 2 et de l'ovalbumine. Exemple 4 : Production d'anticorps polyclonaux Trois lapins (New Zealand) ont été immunisés avec l'immunogène Glu-BSA (1) ou l'immunogène Glu-BSA (2) de l'exemple 3, dans les conditions suivantes - Jour O : injection sous-cutanée de 1 1 mg d'immunogène . o,6 ml de sérum physiologique . 0,4 ml d'adjuvant de Freund complet - 15ème jour : injection sous-cutanée de 1 1 mg d'immunogène . 0,6 ml de sérum physiologique . 0,4 ml d'adjuvant de Freund incomplet - 37ème jour : injection sous-cutanée de 1 1 mg d'immunogène . 0,6 ml de sérum physiologique . 0,4 ml d'adjuvant de Freund incomplet - 48ème jour : prélèvement de sang - 58ème jour : injection intramusculaire de 1 1 mg d'immunogène . 0,1 ml de sérum physiologique Après deux mois, on prélève le sang, le mélange éventuellement au sang prélevé au 48ème jour, sépare le sérum par centrifugation et le purifieéventuellement pour isoler les IgG, le sérum ou les IgG purifié étant conservés à - 20 C. Exemple 5 : Extraction des glucosinolates du colza L'échantillon à doser (graines ou tourteaux de colza) est finement broyé. Le broyat résultant (200 mg) est extrait à chaud par 2 ml de méthanol à 70 % bouillant, sous agitation pendant une dizaine de minutes. Le mélange résultant est ensuite centrifugé (5000 g) pendant 3 minutes. On sépare la fraction surnageante et le culot et on répète sur ce dernier les séparations ci-dessus. On réunit les deux fractions surnageantes ainsi obtenues et ajuste la valeur à 5 ml à l'aide d'eau pour obtenir une solution d'extraction qui peut être stockée pendant 2 semaines à l'obscurité, sous forme lyophilisée congelée à - 18 C. Exemple 6 : Protocole général du procédé de dosage immunochimique des glucosinolates On dissout l'immunogène Glu-OVA (1) de l'exemple 3 dans du tampon phosphate 0, 1M, pH = 7,2 (tampon PB), de manière à obtenir une solution (1) à 1 ng/ml. 100,x1 de cette solution sont déposés dans chaque puits d'une plaque de microtitration (96 puits) pour EIA et sont incubés 16 heures à température ambiante. La plaque est ensuite lavée trois fois avec du tampon phosphate O,iM - Tween (tampon PBS), puis 150/LI d'une solution (2) d'ovalbumine à 0,5 % dans le tampon PB sont déposés dans chaque puits ; on fait suivre par une incubation d'une heure à température ambiante, après quoi on procède à un lavage par du tampon PBS. On dissout par ailleurs l'anticorps de l'exemple 4 dans du tampon PB pour obtenir une solution (3) ayant la concentration appropriée. 50 , -1 de cette solution sont déposés dans chaque puits et on ajoute dans chaque puits 50/cl 1 d'une solution (4) de glucosinolate (étalon tel que glucotropaéoline ou échantillon à doser) dans du tampon PB. On laisse incuber deux heures à 20 C, lave la plaque trois fois avec du tampon PBS, dépose dans chaque puits 100 l d'une solution (4) dans du tampon PB d'IgG anti IgG de lapin marqué à la peroxydase, laisse incuber pendant une heure à 20 C, lave trois fois avec du tampon PBS et ajoute 100 / t1 de substrat de la peroxydase (o-phénylènediamine + H202).Après 30 minutes d'incubation à l'obscurité, la réaction enzymatique est arrêtée à l'aide d'une solution d'acide sulfurique 2N, puis on mesure la densité optique DO à une longueur d'onde de 492 nm. Parallèlement, on procède aux mêmes opérations que ci-dessus, en utilisant une solution (1) exempte du conjugué de l'exemple 3 et une solution (4) exempte de glucosinolate. Cet essai constitue le témoin. En faisant varier la concentration de la solution de glucosinolate étalon entre 10 et 500/ - g/ml, on peut ainsi établir la courbe d'étalonnage objet de la figure annexée donnant en abscisses (graduations semi-logarithmiques) la concentration en glucosinolate ( g/mol) et en ordonnées les valeurs DO (étalon) x100 (en %) DO (témoin) Exemple 7 : Dosage des glucosinolates totaux dans un extrait de graines de colza Des graines de colza ont été soumises à une extraction conformément à l'exemple 5 ci-dessus. L'extrait ainsi obtenu a été dosé par chromatographie liquide haute performance et il a été obtenu une concentration en glucosinolates totaux de 19,8moles/ml. Ce même extrait a par ailleurs été dosé par le procédé selon la présente invention, en suivant le protocole de l'exemple 6, l'extrait ayant été dilué 20 fois dans le tampon PB. La concentration en glucosinolates totaux ainsi obtenue est de 21 moles/ml, valeur qui est en parfait accord avec le dosage par chromatographie liquide haute performance, ce qui montre la fiabilité du procédé selon l'invention. REVENDICATIONS 1. Dérivés du glucopyranose comprenant un enchaînement glucopyranosyl où M représente un cation, lié à une partie aglycone R, caractérisés en ce que ladite partie aglycone R est pourvue d'au moins une fonction réactive F de couplage avec un porteur doué de propriétés immunologiques et couplable avec lesdits dérivés. 2. Dérivés selon la revendication 1, caractérisés en ce que M est un métal alcalin, un groupe ammonium ou un groupe ammonium substitué par au moins un radical alkyle en C1-C4. 3. Dérivés selon la revendication 1 ou 2, caractérisés en ce que le reste glucopyranosyle est de la série D. 4. Dérivés selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisés en ce que les reste glucopyranosyle est de configuration3-D. 5. Dérivés selon l'une des revendications 1 à 4, caractérisés en ce que le groupe est de forme Z. 6. Dérivés selon l'une des revendications précédentes, caractérisés en ce que ladite fonction réactive est un groupe NH2 ou un groupe COX où X représente un radical OH, un atome d'halogène, un reste d'anhydride mixte ou un reste d'ester actif. 7. Dérivés selon la revendication 6, caractérisés en ce que R est un groupement de formule dans laquelle - n prend la valeur O ou 1, - A représente un groupe alkylène en Ct-C4, CH2-O, CH2-O-CH2, CH2-S ou CH2-S-CH2, et - Fi représente NH2 ou COX où X a la même signification que dans la revendication 6. 8. Dérivés selon la revendication 7, caractérisés en ce que R est un groupement de formule où n = O ou 1. 9. Procédé de préparation des dérivés selon la revendication 1 caractérisé en ce qu'il comprend les étapes consistant à (a) condenser les composés de formule où R a la même signification que dans la revendication 1 et F2 représente au moins une fonction réactive de couplage avec un porteur doué de propriétés immunochimiques et couplable avec lesdits dérivés, respectivement sur le glucopyranosyl-l thiol dont les radicaux OH sont bloqués chacun par un groupe protecteur, ce qui conduit aux composés de formule (glucopyranosyl bloqués) où R et F2 ont la même signification que ci-dessus et (glucopyranosyl bloqué) désigne le groupement glucopyranosyle dont les radicaux OH sont bloqués chacun par un groupe protecteur, (b) soumettre les composés (III) à une réaction d'O-sulfatation pour obtenir les composés de formule (glucopyranosyl bloqués) (c) salifier le groupe sulfate et éliminer les groupes protec teurs des composés (IV), et (d) convertir éventuellement la ou les fonctions F2 des composés obtenus à l'étape (b) ou (c) en une ou plusieurs autres fonctions réactives de couplage avec un porteur. 10. Immunogène, caractérisé en ce qu'il est constitué par le produit de couplage d'un dérivé selon l'une des revendications 1 à 8, avec un porteur doué de propriétés immunologiques. 11. Immunogène selon la revendication 10, caractérisé en ce que ledit porteur est une protéine porteuse. 12. Immunogène selon la revendication 11, caractérisé en ce que ledit porteur est la sérum albumine bovine ou l'ovalbumine. 13. Immunogène selon la revendication 11 ou 12, constitué par le produit de couplage d'une protéine porteuse avec un dérivé du glucopyranose selon l'une des revendications 6 à 8, caractérisé en ce que le couplage est assuré par au moins une liaison peptidique entre au moins un groupe COOH ou NH2 d'une molécule de ladite protéine porteuse et respectivement le groupe NH2 ou COX d'une ou plusieurs molécules dudit dérivé de glucopyranose. 14. Anticorps polyclonal, caractérisé en ce qu'il est dirigé contre un immunogène selon l'une des revendications 10 à 13. 15. Procédé de détection ou de dosage immunochimique des glucosinolates dans un échantillon, comprenant l'utilisation d'un anticorps dirigé contre les glucosinolates, caractérisé en ce que ledit anticorps est constitué par l'anticorps polyclonal selon la revendication 14. 16. Procédé de dosage immunochimique selon la revendication 15, du type ELISA, comprenant la mise en contact dudit échantillon avec ledit anticorps polyclonal et un antigène fixé sur un support et apte à former un complexe immunologique avec cet anticorps polyclonal, et la quantification du complexe immunologique formé entre ledit anticorps et ledit antigène fixé sur un support, caractérisé en ce que ledit antigène est constitué par le produit du couplage d'un dérivé selon l'une des revendications 1 à 8, avec une protéine porteuse différente de celle de l'immunogène à partir duquel est préparé ledit anticorps polyclonal. 17. Procédé selon la revendication 15 ou 16, pour le dosage des glucosinolates présents dans les crucifères, en particulier dans les graines ou tourteaux de colza.