FR 2676060 A1 19921106 FR 9105478 A 19910503 RECEPTEUR THYROIDIEN DE N-ACETYLGLUCOSANINE La présente invention concerne le récepteur prohormonal thyroïdien, sa méthode de purification et son utilisation dans des tests de diagnostic de pathologies thyroïdiennes. En outre, l'invention concerne des anticorps dirigés contre le récepteur et l'utilisation d'une partie du récepteur comme "molécule de retard", pour prolonger la demi-vie d'un agent pharmacologique. Des études sur les mécanismes de l'hormonogénèse et de la sécrétion thyroïdienne ont amené les inventeurs à inférer l'existence d'un récepteur pour les molécules de thyroglobuline, prohormone thyroïdienne. La fonction biologique de ce récepteur est d'augmenter le temps de présence des molécules de thyroglobuline dans les vésicules thyroïdiennes et, par là même, d'optimiser l'hormonogénèse et la sécrétion hormonale. Les premières tentatives de caractérisation et de purification du récepteur thyroïdien de GlcNAc (Miquelis et al, J. Biol. Chem., Vol 262, 31, pp 15291-15298, Novembre 1987) n'ont permis de récupérer qu'une quantité très faible d'un matériel protéique largement contaminé. Son analyse sur des SDS-PAGE en conditions dénaturantes a révélé une protéine de poids moléculaire d'environ 45 kDa, mais une "traînée" protéique de 43 kDa à 60 kDa a suggéré que la préparation pouvait être contaminée par des protéines cellulaires telles que les cytokératines des cellules épithéliales (40-70 kDa), l'actine, la tubuline (43 kDa) et des protéines de type lectines, c'est-à-dire de même famille, telles que les récepteurs de mannose-6-phosphate (43 kDa).Cette préparation contaminée n'a pu être purifiée plus avant et n'a pu permettre ni la caractérisation complète, ni le séquençage du récepteur, ni la préparation d'anticorps spécifiques au récepteur. Le récepteur a pu être classé comme membre de la famille des lectines animales dépendant du calcium, lorsqu'il a été observé : 1) que la fixation des ligands nécessitait la présence de calcium à des concentrations physiologiques (cf MIQUELIS et al, Ibid) et 2) que des anticorps générés chez le lapin par une séquence consensus présente chez ces lectines reconnaissaient la préparation du récepteur thyroïdien (Blanck O. et al, 1990, Biochem. Biophys. Res. Com. 169, 880-887). Cette famille de lectines animales ne possède en commun qu'un domaine, celui de reconnaissance des résidus glucidiques (ou "carbohydrate recognition domain", C.R.D.), constitué d'environ 130 acides aminés. On note 11 résidus invariants présents dans toutes les espèces animales étudiées (allant des plus simples, comme l'oursin et le papillon, jusqu'aux mammifères), et environ 50 % d'homologie parmi les lectines des vertébrés. D'autres membres de la famille des lectines dépendantes du calcium sont les lectines hépatiques de poulet, de lapin et de rat (Drickamer K., 1981, J. Biol. Chem., 256, 5827-5839 ; Hudgin R.L. et al, 1974, J. Biol Chem. 17, 5536-5543 ; et Bischoff J. et al, 1987, J. Biol. Chem., 262, 11825-11832). Ces lectines lient leurs ligands à pH neutre et les libèrent à pH acide. Le problème technique qui s'est posé lors de l'élaboration de la présente invention était de fournir une préparation du récepteur thyroïdien de pureté et en quantité suffisamment élevées pour pouvoir le caractériser complètement, et préparer des anticorps spécifiques au récepteur. Les inventeurs ont maintenant mis au point une méthode de purification du récepteur qui permet d'obtenir, dans des quantités micromolaires, une préparation dépourvue de contaminants. Cette méthode fait partie des objets de la présente invention. Plus particulièrement, l'invention concerne un procédé de purification du récepteur thyroïdien de GlcNAc, caractérisée en ce qu'il comprend les étapes successives suivantes i) passage sur tamis d'un éminçage de tissu thyroïdien, par exemple, des follicules thyroïdiens ; ii) lavage des épithélia ainsi obtenus à des conditions de pH neutre, et en présence d'E.D.T.A. iii) précipitation des épithélia à l'acétone, produisant ainsi une "poudre d'acétone" ; iv) passage à pH = 5.0 environ, (entre 4.8 et 5.1) d'une suspension de la poudre d'acétone sur une colonne d'affinité comportant des groupements ou "clusters" de GlcNAc accessibles, par exemple sous forme d'ovomucoïdes ou d'asialogalactoprotéines, et élution soit à pH neutre, par exemple entre 6.5 et 8.2, soit par l'addition de N-Acétylglucosamine dans le tampon de fixation, des protéines ainsi fixées v) éventuellement, répétition de l'étape (iv) ou électroendosmose des protéines éluées sur SDS-PAGE. Cette nouvelle méthode comporte plusieurs changements par rapport à la méthode utilisée en 1987, notamment - élimination du tissu conjonctif extracellulaire et de la membrane basale, la plus pauvre en récepteurs de GlcNAc, par l'éminçage du tissu et le passage forcé sur tamis - lavages des épithélia ainsi obtenus à des conditions de pH neutre et en présence d'EDTA afin d'éliminer des ligands endogènes (thyroglobuline présente à 100-200 mg/ml) ; - utilisation d'une poudre d'acétone afin de diminuer les volumes de la préparation à purifier - prise en compte du fait que le récepteur est polymérique (2 à 3 monomères) et utilisation comme ligand d'une molécule présentant des groupements ou "clusters" de GlcNAc accessible et possèdant ainsi une meilleure affinité - une deuxième étape de purification sur SDS-PAGE peut être utilisée si des rendements élevés sont souhaités. La deuxième étape de purification entraîne la dénaturation de la protéine. D'une manière surprenante, il a été constaté que le récepteur dénaturé retient ses fonctions biologiques et de plus, peut servir à la génération d'anticorps qui reconnaissent le récepteur dans sa forme native. Selon un mode de réalisation préféré, l'étape (v) consiste en l'électroendosmose sur gel de polyacrylamide en présence de SDS. La colonne d'affinité de l'étape (iv) comporte, de préférence, de l'ovomucoïde. Cette méthode peut être utilisée pour purifier le récepteur thyroïdien humain, porcin ou de toute autre espèce de mammifère, et permet la préparation du récepteur à l'échelle industrielle. Grâce à cette méthode, le récepteur a pu être complètement caractérisé. I1 s'agit d'un récepteur protéique, constitué de 2 à 3 monomères de 51 kDa, et comportant environ 510 acides aminés. Le récepteur est spécifique des résidus N-Acétylglucosamine, c'est-àdire des résidus glycanniques portés par la molécule de thyroglobuline. I1 est localisé essentiellement dans la partie apicale des thyrocytes. L'une des caractéristiques les plus remarquables est qu'il lie les ligands à pH acide, c'est-à-dire entre pH = 4.8 et pH = 5.1, et les libère à pH neutre, par exemple entre pH = 6.5 et pH = 8.2. L'association avec son ligand se fait selon un mécanisme d'association positive.La liaison entre la molécule de thyroglobuline et le récepteur est d'autant plus importante que la molécule de thyroglobuline est plus immature, c'est-à-dire plus riche en résidus N-Acétylglucosamine accessibles. En effet, la molécule mature est caractérisée par un certain contenu en iode et un masquage des résidus glucidiques reconnus par le récepteur. Le récepteur purifié est reconnu par des anticorps dirigés contre la lectine hépatique de rat et ceux dirigés contre la séquence consensus du CRD de la famille des lectines dépendant du calcium. La séquence partielle en acides aminés du récepteur a également été élucidée. L'invention vise également la préparation purifiée du récepteur. Plus particulièrement, l'invention concerne une protéine ayant une activité de récepteur thyroïdien de N-Acétylglucosamine (GlcNAc) caractérisée en ce qu'elle a un poids moléculaire d'environ 51 kDa, un point isoélectrique d'environ 5.2, est sensiblement dépourvue de protéines cellulaires contaminantes et comporte au moins l'une des séquences en acides aminés illustrées dans la figure 2, ou une séquence présentant au moins 80 % d'homologie avec l'une de ces séquences. Dans ce qui suit, la désignation "protéine réceptrice de l'invention" signifie une protéine présentant l'ensemble de ces caractéristiques. Les inventeurs ont déterminé le mécanisme d'action du récepteur. I1 est impliqué dans l'hormonogênèse et la sécrétion thyroïdiennes de la manière suivante - toutes les molécules de thyroglobuline (prohormones thyroïdiennes) présentes dans les lumières des follicules thyroïdiens peuvent être internalisées (endocytées) par les thyrocytes et convoyées dans des compartiments endosomiaux, compartiments communs à toutes les voies d'endocytose. - dans ces compartiments, les molécules de prohormones immatures (caractérisées par leur faible contenu en iode et en hormones et par leur contenu élevé en résidus de N-Acétylglucosamine accessibles) se lient au récepteur de N-Acétylglucosamine (la liaison est optimale aux pH acides entre 4.8 et 5.1). - ce récepteur convoie les molécules de prohormones vers la partie apicale des thyrocytes, là où se trouve la thyropéroxydase, enzyme qui permet la fixation de l'iode sur les résidus tyrosyls et le couplage subséquent des résidus tyrosyls pour la formation des hormones thyroïdiennes. Ce convoiement s'effectue grâce à une partie "motrice" du récepteur qui est capable de provoquer le détachement du recepteur entier de la membrane par un processus de "bourgeonnement" ou "budding" formant de nouvelles vesicules intra-cellulaires. - des recyclages successifs permettent d'accroître le contenu en hormone des molecules de thyroglobuline et d'éviter leur adressage vers les lysosomes et donc leur dégradation. Des recyclages via le Golgi permettent des glycosylations complémentaires qui conduisent à la disparition des résidus de N Acétylglucosamine accessibles et à l'apparition de galactose puis d'acide sialique. Le recyclage des molécules de thyroglobuline internalisees est illustré schématiquement dans la figure 1. Dans le contexte de l'invention, une "activite de récepteur thyroïdien de GlcNAc" signifie que la protéine en question fixe spécifiquement des résidus de GlcNAc à pH = 5.0 environ (et plus précisément entre pH = 4.8 et pH = 5.1) et les libère à pH neutre. En outre, il permet le convoiement intracellulaire de molécules possédant des motifs GlcNAc, en présence de Ca2+, empêchant ainsi leur adressage vers les lysosomes et donc leur dégradation. Le pH acide entre 4.8 et 5.1 correspond aux valeurs physiologiques trouvees dans les compartiments endosomiaux. La fixation spécifique de GlcNAc à pH acide, c'est-à-dire entre pH 4.8 et pH = 5.1, en particulier pH = 5.0, peut être testée, soit sur colonne de GlcNAc-gel, soit par blot sur feuilles de nitrocellulose sur lesquelles des molécules présentant des résidus GlcNAc terminaux (par exemple des néoglycoproteines, protéines partiellement deglycosylées ou ovomucoïde) ont été préalablement deposees. La capacité d'empêcher la dégradation de molecules portant des motifs GlcNAc peut être confirmée de la manière suivante. La protéine réceptrice est introduite dans une cellule (par exemple, un fibroblaste) par transfection permanente, ou par expression du gène recombinant. Ensuite, deux molécules, l'une portant des résidus glucidiques reconnus par le récepteur (GlcNAc) et l'autre portant des résidus non reconnus par le recepteur, chacune etant marquee par un marqueur différent, sont rajoutées au milieu de culture. Le devenir metabolique de chaque molécule peut ensuite être déterminé grâce aux marqueurs. La dégradation de la molécule portant des résidus GlcNAc est plus lente de celle de l'autre molécule lorsque la protéine réceptrice présente une activite de recepteur thyroïdien de GlcNAC. Les proteines réceptrices de l'invention comportent au moins l'une des séquences en acides aminés illustrées dans la figure 2, ou une séquence présentant au moins 80 %, et de préférence au moins 90 %, d'homologie avec l'une de ces séquences, à condition que l'activité de récepteur thyroïdien soit maintenue. Ces séquences, déterminées par les inventeurs, correspondent au recepteur humain et font probablement partie de la zone d'extension membranaire extracellulaire. Le manque d'homologie de ces sequences avec d'autres lectines animales et l'absence de pont disulfure suggèrent que les séquences ne correspondent pas à la partie CRD de la molécule. Comme exemples de protéines comportant une séquence présentant au moins 80 % d'homologie avec l'une des séquences illustrées, on peut citer des protéines obtenues par substitution, delétion ou insertion d'un ou plusieurs acides aminés de la séquence naturelle. Ces protéines homologues peuvent être préparées, par exemple, par la méthode de purification de l'invention, suivie eventuellement de modification de la séquence de la protéine ainsi produite, et verification des proprietés réceptrices. Les protéines de l'invention peuvent egalement être fabriquées par voie recombinante ou par synthèse chimique. En cas de production par voie recombinante, il est possible de produire la protéine sous forme de protéine de fusion dans les cas où ceci facilitera son expression, son marquage, ou son transport dans certains hôtes cellulaires. Une protéine particulièrement preférée selon l'invention est celle qui comporte au moins les séquences TGR-CL1 et TGR-CL5 juxtaposées de la manière indiquée dans la figure 3. Cette protéine TGR-CL1 TGR-CL5 est fabriquée, de préférence, par voie recombinante. Les protéines de l'invention sont sensiblement dépourvues de contaminants, en particulier les cytokératines de cellules épithéliales, l'actine, la tubuline et les protéines de type lectines, telles que le récepteur de mannose-6-phosphate. "Sensiblement depourvues" signifie que la quantité de contaminants présents ne permet pas leur détection sur gel d'électrophorèse et ne donne pas lieu à la formation d'anticorps contre les contaminants. L'invention concerne egalement des fragments peptidiques de la protéine de 1'invention. Ces fragments sont caracterises en ce qu'ils sont reconnus par un sérum polyclonal ou par au moins certains des anticorps monoclonaux générés par la protéine réceptrice entière. Cette propriété signifie que le fragment en question presente au moins une partie des caractéristiques immunologiques de la protéine réceptrice. Normalement, ces fragments comportent au moins 6 acides aminés, et de préférence, au moins 12 acides aminés. Dans le contexte de l'invention, le terme "fragment" signifie un enchaînement d'acides amines allant du peptide d'au moins 6 acides aminés jusqu'à un polypeptide d'environ 500 acides aminés. Il est possible que certains de ces fragments, de taille voisine du récepteur entier, retiennent l'activité du récepteur thyroïdien. Ceci etant, cette activite n'est pas obligatoirement presente selon cet aspect de l'invention, l'important étant qu'au moins une partie des caractéristiques immunologiques du recepteur soit retenue. Des fragments particulièrement preferés sont des fragments comportant au moins 6 acides aminés consecutifs de l'une des séquences : TGR-CLî, TGR-CL3, TGR-CL4, TGR-CL5, TGR-CL6, TGR-CL7, TGR-CL10 ou TGR CLll illustrées dans la figure 2. Selon cet aspect de l'invention, il est possible de fusionner deux ou plusieurs de ces fragments en tête-à-queue, pourvu que les conditions immunologiques évoquées ci-dessus soient satisfaites. Les fragments protéiques de l'invention peuvent aussi faire partie de molécules "hybrides" qui comportent d'une part, une partie provenant d'une molécule autre que le récepteur thyroïdien et d'autre part, le fragment du récepteur ayant au moins six acides aminés. On citera comme exemples de ce type de molécule, un fragment du récepteur couple à une molécule porteuse pour optimiser les propriétés immunogeniques des plus petits fragments (le fragment etant alors un haptène), ou encore un fragment du récepteur couplé à un marqueur permettant sa visualisation ou à un agent permettant son ciblage. Un fragment peptidique du récepteur qui est particulièrement - préfere selon l'invention est la partie constituant le domaine de reconnaissance des résidus glucidiques, ou C.R.D. Cette partie de la molécule est responsable de la spécificité glucidique du récepteur et de la fixation du ligand à pH acide (entre 4.8 et 5.1). Le CRD comporte environ 130 à 150 acides aminés et est probablement situé à l'extrémité C terminale du récepteur. I1 est reticulé par 2 ponts disulfure et comporte une partie homologue à la séquence consensus présente dans les CRD des autres membres de la famille des lectines pendant du calcium. Cette dernière propriete est mise en évidence par la reconnaissance du CRD par des anticorps générés par la séquence consensus.Le fragment CRD est susceptible d'être produit, à partir du récepteur entier, par le procédé suivant i) hydrolyse proteolytique de la protéine de l'invention ayant une activité de récepteur thyroïdien de GlcNAc ; ii) ajustement du pH des milieux d'hydrolyse à un pH d'environ 5.0 (plus particulièrement entre 4.8 et 5.1) et addition de Ca2+ ; iii) passage, à pH = 5.0 environ, des fragments d'hydrolyse sur colonne d'affinité comportant des groupements ou "clusters" de résidus GlcNAc, par exemple de l'ovomucoïde ; iv) élution, à pH neutre, des fragments retenus ; v) tamisage moléculaire des fragments élués et selection des fragments les plus petits. Bien entendu, le CRD peut également être produit par synthèse chimique ou par des techniques recombinantes, par l'expression du gène codant pour le CRD dans un hôte cellulaire approprié. Dans ce dernier cas, des séquences régulatrices de transcription sont également présentes, et éventuellement, des séquences facilitant son expression ou sa secretion dans l'hôte choisi. Les proprietes de fixation spécifique de GlcNAc à pH = 5.0 environ permet la purification du CRD à partir du milieu de culture. Il est avantageux d'employer dans l'étape de purification une colonne d'affinité comportant des molécules riches en GlcNAc, par exemple l'ovomucoïde. La spécificité glucidique du CRD peut éventuellement être modifiée ou élargie par la modification de la séquence en acides aminés du CRD natif, en fonction de son utilisation ulterieure. Par exemple, le CRD peut être modifié pour pouvoir reconnaître le GalNAc ou l'acide sialique, les séquences en acides aminés responsables de ces spécificités étant connues dans l'art. Il est cependant important que, lors d'une telle modification, les propriétés de fixation du ligand à pH acide et sa libération à pH neutre soient maintenues. Ces propriétés peuvent être testées par l'utilisation de la méthode décrite plus haut. Les protéines et les fragments protéiques de l'invention peuvent être utilisés dans de nombreuses applications differentes. Tout d'abord, ils peuvent servir à la génération d'anticorps reconnaissant le recepteur. L'invention vise egalement des anticorps diriges contre la proteine réceptrice de l'invention ou contre un fragment de cette protéine, ces anticorps étant spécifiques de ladite protéine. Ces anticorps peuvent être monoclonaux ou polyclonaux. Leur spécificité peut être assurée par-mise en contact des anticorps avec d'autres lectines de la même famille, par exemple, la lectine hépatique de rat, ou avec la séquence consensus du CRD, suivie par l'élimination de tous les anticorps qui reconnaissent ces proteines apparentées. De préférence, les anticorps de l'invention reconnaissent la structure primaire du récepteur. En effet, il a été constaté que le récepteur dénaturé induit la formation d'anticorps capables de reconnaître le récepteur natif. La spécificité de ces anticorps permet leur utilisation in vivo ou in vitro dans la détection de différents dysfonctionnements thyroïdiens. Ils servent de marqueurs cellulaires thyroïdiens et, plus précisément, de marqueurs du recepteur. Grâce à ces marqueurs, les inventeurs ont constate que, dans les affections engendrant d'importants bouleversements cellulaires telles que les cancers, l'expression du récepteur etait modifiée. Les cancers thyroïdiens existent sous deux formes très differentes d'un point de vue histologique - les cancers dits "indifférencies" touchent le sujet âgé et sont de très mauvais pronostic du fait d'une évolution très rapide. Ils sont découverts tard, et les divers traitements ont été jusqu'à présent inefficaces. Ils représentent 15 à 20 % des cancers thyroïdiens. - les autres sont dits "différenciés". On distingue dans ce groupe i) les cancers papillaires (60 à 70 %), qui naissent plutôt chez le sujet jeune mais ne deviennent visibles que vers 40 à 60 ans, qui ont une evolution très lente, qui essaiment precocement pour donner des metastases locorégionales d'évolution très lente aussi, sans créer de dommage grave ; ii) les cancers vésiculaires bien différenciés (10 t) qui évoluent lentement, donnant des métastases à distance (lymphatiques, pulmonaires, osseuses) souvent decouvertes avant le foyer primaire ;; iii) les cancers vésiculaires moyennement differencies ou trabéculaires (15 %), plus graves que les precedents par une aptitude à métastase plus grande. 60 % de ces cancers sont découverts seulement après l'exérèse d'un nodule froid à la scintigraphie suivie de son analyse histologique, qui se révèle très souvent difficile, étant donné le polymorphisme des structures thyroïdiennes. Il existe en outre d'autres methodes de détection, par exemple, l'utilisation d'anticorps anti-thyropéroxydase (De Micco et al, Thyroperoxidase and Thyroïd autoimmunity, Ed. P. Carayon, J. Ruf., Colloque INSERM 1990, vol. 207, pp 133-136) ou d'anticorps dirigés contre un antigène de carcinome thyroïdien d'environ 250 kDa (EP-A-0370768). Ces méthodes ne permettent pas la distinction entre les cancers vesiculaires et les cancers papillaires. De plus, il est souvent nécessaire de les utiliser en combinaison avec les tests histologiques. Les inventeurs, en utilisant les anticorps antirécepteur de l'invention, ont constate que - sur les portions de tissu sain des pièces d'exerèses, le récepteur de N-Acétylglucosamine est localise à la partie apicale des cellules thyroïdiennes. Un marquage, dense et punctiforme, est parfois aussi observé dans des compartiments intracytoplasmiques. - l'expression du récepteur est abolie (absence de marquage) dans les adénomes thyroïdiens. - l'expression du récepteur est conservée dans les carcinomes vésiculaires, mais on observe une delocalisation de ce récepteur, le marquage étant alors basolatéral. - dans les carcinomes papillaires, l'expression du récepteur est abolie (absence de marquage) au niveau des cellules épithéliales formant les papilles, mais il y a un marquage spécifique extracellulaire du tissu conjonctif formant le chorion. I1 est ainsi possible de différencier les adenomes des carcinomes, les carcinomes papillaires des carcinomes vésiculaires et les carcinomes du tissu sain. L'invention concerne plus particulièrement un procédé pour la détection et l'identification différentielle in vitro d'adenocarcinomes thyroïdiens, caracterise en ce qu'il comprend les étapes suivantes i) mise en contact d'une coupe de prélèvement de tissu thyroïdien avec des anticorps reconnaissant le récepteur thyroïdien de GlcNAc, lesdits anticorps étant associés à un moyen permettant leur détection. ii) detection de l'absence ou de la présence de marquage du récepteur thyroïdien GlcNAc par les anticorps, les adénomes étant totalement dépourvus de marquage, les carcinomes papillaires étant dépourvus de marquage au niveau des cellules épithéliales formant les papilles, mais présentant un marquage spécifique extra-cellulaire du tissu conjonctif formant le chorion, et les carcinomes vesiculaires présentant une délocalisation du marquage dans la seule région basolatérale du thyrocyte. La detection des anticorps s'effectue par tous les moyens connus dans l'art : marquage radio-actif, fluorescent, enzymatique, à l'or colloïdal etc... Selon cet aspect de l'invention, les anticorps sont de préférence sélectionnes pour leur spécificité pour le recepteur GlcNAC. Ceci étant, si la détection se fait in vitro, il est egalement possible d'utiliser, dans un premier temps, des anticorps qui reconnaissent le récepteur, mais qui reconnaissent également d'autres membres de la famille. Par exemple, les anticorps dirigés contre la séquence consensus du CRD peuvent être utilisés dans cette méthode. L'utilisation de ce type d'anticorps est cependant moins avantageuse, en raison de la spécificité et de l'affinité reduites. Les anticorps employés selon cet aspect de l'invention sont, soit des anticorps monoclonaux, soit des anticorps polyclonaux. Un sérum polyclonal ou un cocktail d'anticorps monoclonaux est particulièrement préféré en raison du spectre d'épitopes reconnus. Cet aspect de l'invention comprend, en outre, un kit ou nécessaire pour la detection et l'identification différentielle(s) de carcinomes et d'adénomes thyroïdiens, caractérisé en ce qu'il comprend i) anticorps contre la protéine réceptrice de l'invention ou contre le fragment de cette protéine ; ii) des moyens permettant la detection de la réaction entre lesdits anticorps et le récepteur thyroïdien GlcNAc, par exemple par marquage enzymatique, radioactif, fluorescent ou par l'argent ou l'avidine. Les anticorps spécifiques du récepteur GlcNAc peuvent, grâce à leur spécificité elevée, être utilises dans l'identification de metastases de cancers thyroïdiens in vivo. Malgré la présence de lectines appartenant à la même famille dans ces différents tissus, le diagnostic est tout à fait spécifique. Il est également possible de coupler lesdits anticorps à un agent capable de traiter ou d'éradiquer la metastase, par exemple un agent radioactif, ou une molécule capable d'induire la destruction du récepteur thyroïdien. Les anticorps couplés à un tel agent font également partie de l'invention. Il est particulièrement préféré d'utiliser un anticorps monoclonal spécifique au recepteur GlcNAc selon cet aspect de l'invention. La protéine réceptrice et ses fragments peuvent aussi être utilisés dans le diagnostic des pathologies auto-immunes, telles que la maladie de Basedow et celle d'Hashimoto. En effet, les inventeurs ont mis en évidence la présence d'auto-anticorps contre le recepteur GlcNAc chez des personnes atteintes de ce genre de maladie. En règle génerale, les tests de diagnostic impliquent l'utilisation d'un antigène qui est reconnu par les anticorps du patient. Les tests actuels utilisent souvent des preparations totales de membranes thyroïdiennes humaines, mais les autoantigènes y sont faiblement représentés. D'autres tests impliquent l'utilisation de la thyroperoxidase (TPO) comme antigène.La TPO n'est cependant pas le seul constituant membranaire impliqué dans les thyroïdites : il existe des anticorps diriges contre le récepteur de TSH (maladie de Greave) et d'autres dirigés contre des constituants différents de la TPO. (Bogner U. et al, Acta Endocrinal 1990, 123, 431-437). L'invention concerne donc l'utilisation de la protéine réceptrice de l'invention comme antigène dans la détection de ces maladies. Plus particulièrement, l'invention concerne un procéde pour la detection de maladies auto-immunes de la thyroïde telles que la maladie d'Hashimoto ou de Basedow, caractérisé en ce qu'il comprend les etapes suivantes i) mise en contact d'un échantillon biologique avec la protéine selon l'une quelconque des revendications 1 à 4 ou avec le fragment de la revendication 5 ou 6 ii) détection de la réaction entre la protéine ou le fragment et des anticorps anti-récepteurs GlcNAc dans l'échantillon par des moyens connus en soi. Il a été constaté que l'utilisation de la protéine réceptrice, ou de ses fragments, conduit à la détection de maladies auto-immunes, même dans des cas où l'utilisation d'anticorps antimicrosomiaux et antithyroglobuline avait donné des résultats negatifs. Dans le cas où l'antigène utilisé est un fragment du récepteur, il est important de vérifier que le fragment en question possède au moins certains des épitopes reconnus par les auto-anticorps. Cet aspect de l'invention vise également un kit ou necessaire pour la détection de maladies autoimmunes de la thyroïde telles que la maladie d'Hashimoto, caractérisé en ce qu'il comprend i) protéine selon l'une quelconque des revendications 1 à 4 ou un fragment selon la revendication 5 ou 6 ii) des moyens permettant la detection d'une réaction entre ladite protéine ou ledit fragment et des anticorps anti-récepteur GlcNAc, tels que des anticorps anti-anticorps ou des anticorps antiprotéine. Les moyens permettant la detection de la reaction entre la protéine (ou certains de ses fragments peptidiques) et les auto-anticorps comprennent, par exemple, lorsque la protéine de l'invention (ou certains de ses fragments peptidiques) est (sont) fixee(és) sur un support solide, des anticorps antianticorps marques (par exemple anti-lgG), ou encore des anticorps anti-récepteurs marques qui sont déplacés par les auto-anticorps. Il est egalement possible d'effectuer un essai "sandwich" en fixant sur un support solide des anticorps anti-récepteur, suivi par le passage de la proteine de l'invention (ou certains de ses fragments peptidiques), préalablement marquée(és) et enfin de l'échantillon biologique contenant les auto-anticorps. L'invention vise également une séquence nucléotidique codant pour au moins une partie du recepteur thyroïdien de GlcNAc, caractérisée en ce qu'il comprend au moins 20 bases consécutives de l'une des sequences nucléotidiques illustrees dans la figure 2, ou d'une séquence qui hybride avec l'une de ces sequences dans des conditions non stringentes, ou encore de la séquence complémentaire à l'une de ces séquences, ou encore la séquence ARN correspondante. Les conditions non-stringentes évoquées dans cette définition sont les suivantes : l'hybridation s'effectue sur des filtres de nitrocellulose ou de nylon avec la sonde oligonucleotidique (sequence de 1'invention) marquée au 32p, mise en solution dans 20 % formamide, 6x SSC (150 mM NaCl, 15 mM trisodium citrate), 50 mM Sodium phosphate pH = 7.6, 5 x de solution de Denhart, 0,1 % SDS, et 50 g/ml de DNA de sperme de saumon dénaturé. L'incubation s'effectue toute une nuit à 42"C. Les filtres sont ensuite laves avec 2 x SSC, 0,1 % SDS, à 42"C et ce, deux fois durant 30 minutes, puis autoradiographiés. Les séquences positives peuvent ensuite être soumises à d'autres criblages par hybridation avec des conditions plus astringentes en augmentant les températures de lavage jusqu'à 68'C et en diminuant la salinite du tampon de lavage jusqu'à 0,1 x SSC, 0,1 % SDS. Ces séquences peuvent servir de sondes dans la détection du gène codant pour le récepteur, et par conséquent, dans la détection d'anomalies par rapport à un gêne sain. En effet, le rôle du récepteur thyroïdien de GlcNAc dans l'optimisation de l'hormonogénèse a conduit les inventeurs à penser qu'une anomalie dans son métabolisme, soit dans l'expression de son gène, soit dans la structure de la protéine synthétisée, pourrait avoir des conséquences directes sur la production hormonale de la glande, entraînant ainsi une pathologie thyroïdienne, par exemple, le goître, l'hypothyroïdie et l'hyperthyroïdie. L'invention concerne aussi un procédé de détection de maladies congenitales de la thyroïde, telles que le goitre et l'hypothyroïdisme juvénile caractérisé en ce qu'il comprend i) mise en contact d'un échantillon d'ADN genomique du patient avec au moins une sonde ou une amorce, comportant la séquence nucléotidique selon la revendication 7 ou 8, l'ADN ayant été préalablement rendu accessible à l'hybridation dans des conditions permettant l'hybridation entre la sonde ou l'amorce et le gène codant pour le récepteur thyroïdien de GlcNAc porte par l'ADN genomique ii) éventuellement, l'amplification de l'ADN génomique iii) dénaturation de lWADN hybridé iv) analyse de la séquence génomique ainsi isolee pour mettre en évidence des altérations par rapport au gène sain. Des fragments des séquences de l'invention peuvent aussi être utilises comme amorces nucléotidiques dans l'amplification, par exemple par la réaction de polymérase en chaîne, du gène codant pour le récepteur thyroïdien. Bien entendu, il est preferable d'utiliser un couple d'amorces, choisi de façon à ce que la partie intéressante du gène soit encadrée en 5' et en 3' par les amorces. Ces amorces comportent au moins 20 bases consecutives et plus particulièrement, au moins 25 bases consécutives des séquences illustrees dans la figure 2. Un autre aspect de l'invention concerne l'utilisation d'un fragment de la protéine receptrice, et notamment, la partie CRD comme "molécule de retard" pour augmenter la demi-vie d'agents pharmacologiques administrés au corps. Cet aspect de l'invention exploite une propriété unique du CRD du recepteur, c'est-à-dire la fixation du ligand (GlcNAc) à pH = 5 environ, plus particulièrement entre 4.8 et 5.1 et sa liberation à pH neutre, par exemple entre 6.5 et 8.2. Ce phénomène conduit, dans la situation naturelle, à une prolongation du temps de séjour du ligand dans le thyrocyte, puisque son transfert dans les lysosomes et sa dégradation sont ainsi empêches. Cette propriété peut être appliquee dans d'autres cellules du corps, en particulier, celles accessibles à la circulation sanguine, par exemple, le foie et le rein. Toutes les macromolécules solubles, internalisées par une cellule, sont destinées à être délivrées aux lysosomes, via les endosomes, pour y être dégradées. Ce processus determine leur durée de vie et diminue ainsi l'efficacité de certains agents pharmacologiques (hormones, preparations vaccinales, macromolécules, médicaments). L'internalisation de solute extracellulaire est un phénomène inhérent à toute activité cellulaire et ne peut être modifié. Les inventeurs ont conçu un processus de recyclage d'agents pharmacologiques vers le milieu extracellulaire, à partir des compartiments endosomiaux, qui sont les seuls compartiments à possèder un pH acide. Selon cet aspect de l'invention, le CRD est couple à l'agent pharmacologique destiné à être administré au corps via la circulation. Le couple CRD-agent pharmacologique circule dans le sang et subit le processus d'internalisation, par exemple, dans les cellules du foie et du rein. En l'absence du CRD, l'agent pharmacologique serait transféré, par endocytose, aux lysosomes, ou il serait hydrolysé. En revanche, lorsqu'il est lié au CRD, l'agent pharmacologique se fixe sur toutes les membranes des compartiments cellulaires qui possèdent des residus GlcNAc et qui présentent un pH voisin de 5.0 (entre 4.8 et 5.1), c'est-à-dire les endosomes. De cette manière, le couple CRD-agent pharmacologique subit le recyclage propre aux membranes intracellulaires, vers la surface de la cellule, où le ligand sera liberé en raison du pH neutre (7.0 environ). Le processus peut alors recommencer. Le couple CRD-agent pharmacologique n'est donc pas livré aux lysosomes, et la demi-vie de l'agent est sensiblement augmentée. Cet aspect de l'invention concerne donc une composition pharmaceutique présentant une demi-vie prolongée, caractérisée en ce qu'elle comporte un complexe constitué d'une part, d'au moins un domaine de reconnaissance des résidus glucidiques (le CRD) du récepteur thyroïdien GlcNAc, et, d'autre part, d'un produit pharmaceutiquement actif, et éventuellement un excipient pharmacologiquement acceptable. Ce système est valable pour tout type de compose chimique, par exemple des vaccins, des enzymes, des hormones, des macromolécules, des médicaments. Il a l'effet d'augmenter le temps de présence de la drogue dans la circulation. Il est donc particulièrement avantageux lorsque la drogue est très selective, le CRD n'étant pas en soi un moyen de ciblage. Son utilisation peut être envisagée tant par voie cutanée (cosmétique, soins des plaies et brûlures) que par voie sanguine (diminution de la clairance hépatique médiée par les hépatocytes). L'effet "retard" peut être optimisé par modification de la selectivite du CRD pour qu'il reconnaisse d'autres motifs glucidiques (N Acêtylgalactosamine, acide sialique, mannose, etc...). Cette modification peut être effectuée par voie chimique et/ou par mutagénèse. Cette modification ne doit pas affecter la nature pH-dependante de la fixation du ligand. L'efficacité de la liaison aux glycannes membranaires peut être accrue par l'utilisation d'oligomères du CRD (l'effet du "cluster") pour chaque molécule de l'agent pharmacologique. Dans ce cas, le rapport entre le nombre de molécules de CRD et le nombre de molécules de l'agent pharmacologique est supérieur à un. La méthode utilisée pour coupler le CRD à l'agent pharmacologique dépend de la nature de l'agent, de la façon dont le CRD est fabriqué, et du rapport souhaité entre le nombre de molécules de CRD et d'agents pharmacologiques. Par exemple, si l'agent pharmacologique est une protéine, il est possible de fabriquer le complexe CRD-agent directement par voie recombinante, sous forme de protéine de fusion. Cette méthode résulte, bien entendu, en un complexe composé d'une molécule de CRD pour chaque molécule d'agent pharmacologique. Si un groupement de molécules CRD pour chaque molécule d'agent pharmacologique est souhaite, il est necessaire de fabriquer d'abord le CRD, soit par voie recombinante, soit par purification comme décrit ci-dessus, soit par synthèse chimique, et de les coupler ensuite avec l'agent pharmacologique. La méthode employée pour le couplage est illustrée dans l'exemple 7 ci-dessous. Cette méthode peut également être utilisée lorsque le rapport entre le nombre de molécules de CRD et celles de l'agent pharmacologique est de 1, et lorsque l'agent pharmacologique n'est pas de nature protéique. Une dernière application de la molécule CRD consiste en son utilisation comme marqueur de glycoconjugués membranaires endosomiaux. En effet, les membranes endosomales sont extrêmement difficiles à étudier. Selon cet aspect de l'invention, le CRD est couplé à un agent permettant une visualisation ulterieure en microscopie (par exemple, la horseradish peroxydase, la ferritine, etc), et est mis dans le milieu de culture des cellules objets de l'étude. Après leur internalisation non spécifique et leur transfert dans les endosomes, le CRD de ces complexes se lie aux glycoconjugués membranaires (glycolipides, glycannes des glycoprotéines) en raison du pH acide qui existe dans ces compartiments, et leur voie et leur cinetique de transfert vers d'autres compartiments cellulaires (Golgi, membranes plasmiques) peuvent être visualisées et analysées par les molecules marqueuses. La spécificité glucidique du CRD peut également être modifiée ou élargie pour pouvoir fixer d'autres residus, selon la technique décrite pour d'autres aspects de l'invention. Différents aspects de l'invention sont illustrés dans les figures, notamment - la figure 1 montre schématiquement le devenir intracellulaire des molécules de thyroglobuline internalisées par le thyrocyte. Les molécules "immatures" (GlcNAc-TG), riches en motifs N Acetylglucosamine, sont recyclées à partir du compartiment endosomal (Ed), pH = 4.8 à 5.1, soit via l'appareil de Golgi (G) à pH = 6.5 (voie 1), soit directement vers la lumière folliculaire (voie 2). Les molécules "matures" (TG) ne présentant plus de motif N-Acétylglucosamine accessible, sont dirigees vers les lysosomes (Lys) où elles sont hydrolysées. - la figure 2 montre les séquences nucléotidiques des fragments d'insertion EcoRI de six clones isolés par criblage immunologique avec des anticorps polyclonaux dirigés contre le récepteur thyroïdien purifié. La séquence en acides aminés déduite pour chacun des produits d'expression correspondante est également montrée. - la figure 3 montre le chevauchement entre les séquences des clones TGR-Cll et TGR-Cl5. - la figure 4 montre l'utilisation des anticorps TGRD-Ab dans le diagnostic différentiel en anatomopathologie : a, b, c : tissu sain (a = témoin ; b = marquage spécifique à l'échelle folliculaire ; c = marquage spécifique de la surface apicale) ; d, c carcinome paillaire ; f, g : carcinome vésiculaire h, i : adenome (h = partie centrale et i = partie périphérique du tissu pathologique) EXEMPLES 1.Purification du récepteur thyroïdien de N Acétylqlucosamine 40 à 60 thyroïdes de porc provenant d'un abattoir ont été émincées et le tissu conjonctif extracellulaire a été enleve par passage forcé sur tamis (300 ym). Cette étape ainsi que toutes les étapes postérieures ont été effectuées à 4"C. Les epithélia thyroïdiens ont été récuperés par centrifugation à 12 000 g dans 500 ml de 20 mM Tris HC1, pH = 7.8, 20 % sucrose et 10 mM EDTA pendant 15 minutes. Apres deux lavages dans un même volume de 20 mN Tris-HCl, pH = 7.8, le culot a été mélange à 8-10 volumes d'acétone froid pendant deux périodes de 10 minutes chacune. La suspension a été filtrée sur papier Whatman n 1 sous vide. Une poudre d'acétone sèche a été récupérée a un rendement d'environ 5 g par 300 g de thyroïdes porcines (environ 50 organes) et stockée à - 20"C. Lors de la première étape de purification, 5 g de poudre d'acétone ont été remis en suspension dans 250 ml de 20 mM Tris-HCl, pH = 7.8, 5 mM EDTA, 0.2 M NaCl, et mis sous agitation pendant 30 minutes. Après centrifugation à 12 000 g pendant 15 minutes, le culot a été lavé une première fois avec le même milieu dépourvu de EDTA et de NaCl et remis en suspension dans un tampon d'extraction composé de 20 mM d'acétate de sodium, pH = 5.0, 0,4 M KC1, et 1 % Triton X-100 (Tampon A).Cette suspens ion a été centrifugée à 12 000 g pendant 15 minutes et le surnageant a été incube pendant 3 heures en utilisant un agitateur rotatif avec du CaCl2 (concentration finale 20 mM), des inhibiteurs de protéase (10 g/ml chacun de leupeptine, pepstatine et phénylméthylsulfonylfluoride et 10 mM d'acide alpha-aminocaproïque), et 25 ml d'ovomucoïde AcA 22 gel d'affinité (2,4 mg de protéine/ml de gel). Le gel résultant a été appliqué à une colonne (1 x 10 cm) et lave avec 5 à 10 volumes d'un tampon contenant 20 mM d'acétate pH = 5.0, 1 M NaCl, 20 mM CaCl2, et 0,5 % Triton X-100 (tampon B). Les protéines fixées ont été récupérees par élution avec un tampon contenant 20 mM Tris-HCl pH = 7.8, 150 mM NaCI, 10 mM -EDTA, et 0.05 % Triton X-100. Le matériel ainsi obtenu a été analysé à 280 nm, dessalé par dialyse contre un tampon contenant 20 mM Tris-HCl pH = 7.4, 150 mM NaCl, 10 mN CaC12, et 0,05 % Triton x 100 et finalement concentré au moyen d'un appareil à microconcentration (système MicroProdicon BIO Molecular Dynamics). Une méthode alternative d'élution du récepteur, qui fait appel non pas à la sélectivité du pH du recepteur, mais à sa spécificité de sucre, consistait à l'éluer par l'addition de Nacetylglucosamine (100 à 250 mN) au tampon de fixation à pH acide. Selon l'objectif des experiences ultérieures, le matériel élué a été soumis à une étape supplémentaire de purification dans des conditions natives ou denaturantes. Dans des conditions natives, la purification a été effectuée par un nouveau passage du materiel sur une colonne d'affinité comportant de l'ovomucoïde (5 ml). Dans des conditions dénaturantes, la purification a été effectuée par electroendosmose au moyen d'un appareil ELFE (GENOFIT). Avant d'effectuer l'électrophorèse sur 10 % SDS/Acrylamide gel à 4 C, des fractions aliquotes du matériel élué concentré ont été iodées et ajoutées à l'échantillon pour la visualisation.Avant de subir d'autres analyses, des fractions aliquotes (400 111 toutes les 6 minutes) ont été récupérées et celles contenant le monomère du récepteur GlcNAc ont été reunies. 2. Production d'anticorps antirécepteur GlcNAc (TGRD-Ab) Des lapins mâles de souche New Zealand ont été immunisés par une inoculation intradermale avec 40 Mg d'une préparation de récepteur GlcNAc dénaturé (0,5 ml), préparée selon la méthode décrite ci-dessus et émulsifiée dans de l'adjuvant complet de Freund (0,5 ml). Trois nouvelles injections par voie sous-cutanée étaient pratiquées au 28ème, au 38ème et au 60ème jours en utilisant 25 g d'antigène (1 ml) dans de l'adjuvant incomplet de Freund (1 ml). Les sera sont prélevés 8, 12 et 16 jours après le troisième boost. Les anticorps polyclonaux (IgG) diriges contre le récepteur dénaturé étaient purifiés par des colonnes d'affinité utilisant soit la protéine A, soit Avid-Al Gel (BioProbe T.M.). Dans le premier cas, 1,5 ml de sérum etait déposé sur 3,5 ml de protéine A-sépharose 4CL gel, la colonne étant lavée avec 100 mM Tris-HCl, pH = 8.0, 150 mM NaCl (10 volumes morts), puis 10 mM Tris-HCl, pH = 8.0, 150 mM NaCl, l'solution s'effectuait avec un tampon 100 mM glycine, pH = 3.0. L'éluat était collecté, neutralise par ajout d'un volume égal de 1 M Tris-HCl pH = 8.0. Dans le second cas, 1 ml de sérum était dilué avec 4 ml de 0.1 M phosphate buffer, 150 mM NaCl, pH = 7.8 et déposé sur une colonne de 1,5 ml d'Avid-Al Gel. Après lavage avec le même tampon (10 volumes morts), les IgG étaient éluées avec un tampon 0,1 M sodium acetate pH 3.0 et traitées comme décrit ci-dessus. Des fractions aliquotes de ces préparations etaient conservées à 20"C et ont donné ulterieurement les mêmes résultats. Ces préparations d'IgG sont appelées TGRD-Ab. 3. Séquences nucléotidiques et protéiques partielles du recepteur GlcNAc Une banque de cDNA de thyroïde humaine normale avait été construite dans Agt 11. Après totalement sur boîtes de 92 mm des bactéries transfectées par les phages (5 boîtes, 30000 pfu/boîte) 15 clones étaient isoles par criblage immunologique (immunoscreening) sur feuille de nitrocellulose avec TGRD-Ab (2OMg/ml), prépare selon la méthode décrite ci-dessus. Après deux autres criblages successifs à faible densité (700 pfu puis 50 pfu/boîte), 13 clones étaient finalement confirmes comme positifs (z1/11000 pfu). Leur fragment d'insertion EcoRI était sous-clone dans les plasmides PUC 18 puis sequencé sur les deux brins par la méthode de SANGER et al.Finalement, six clones présentant un cadre de lecture ouvert, compatibles avec leur expression à partir de Agt 11, et ce sur plus de 123bp, avaient été sélectionnés et soumis à une recherche d'homologie de séquence. Les six clones, appelés TGR-Cl 1 jusqu'à TGR-C1 10, sont présentés dans la figure 2. Les resultats des recherches d'homologie ont indiqué 1) qu'il n'existait aucune homologie stricte (de 100 %) avec une protéine déjà séquence ; 2) qu'il n'existait que des homologies très partielles (voisines ou inferieures à 35 %) sur seulement des portions des séquences des clones, bien que les inventeurs aient inclus, outre l'homologie stricte, la recherche d'homologies fonctionnelles (substitution d'un aminoacide par un autre présentant des propriétés similaires ou voisines) 3) parmi les six clones, seuls TGR-Cl 1 et TGR-C1 5 présentent un overlapping partiel sur environ 1/4 de chacun des clones (figure 3) 4) leur cadre de lecture étant ouvert pour chacun des brins, les brins (+) et (-) sont présentes pour deux clones :: TGR-C1 3 et 3c, TGR-C1 10 et vioc. 4. Utilisation des anticorps TGRD-Ab dans le diagnostic differentiel en anatomopathologie Des specimens de thyroïdes pathologiques fixees dans du BOUIN et inclus en paraffine etaient utilisés pour leur réactivité avec TGRD-Ab. Des coupes de tissu fixe etaient déparaffinées avec du toluène, traitees avec de l'éthanol (95 %) et finalement réhydratées avec de l'eau distillée puis du tampon PBS. Ensuite, le spécimen était traité avec du PBS contenant 5 -% de non immune goat serum (NGS) et les TGRD-Ab étaient ajoutés à la concentration de 3,2 pg à 4,5 Ag/100 l PBS pendant la nuit à 4 C. Après lavage avec du tampon PBS, un second anticorps anti IgG de lapin, couplé à la rhodamine, dilué au 1/100 dans une solution de PBS, 5 % NGS, était incubé en présence du spécimen pendant 1 heure. Après lavage avec du PBS, le spécimen était monté avec du Moviol entre lame et lamelle avant observation au microscope à fluorescence. Le marquage non spécifique était estimé par l'utilisation d'IgG de sera préimmuns préparés selon les mêmes méthodes que TGRD-Ab et utilisé aux mêmes concentrations. Les résultats sont résumés dans le tableau I TABLEAU I NOMBRE OF LOCALISATION DU MARQUAGE TISSU NOMBRE CAS POSITIFS D'ECHAN- AU NIVEAU TILLONS CELLULAIRE APICALE INTRACEL. BASOLATERALE EXTRACEL. Tissu sain de thyroïde, adjacent à l'adénome ou au carcinome thyroïdien 16 16 16 16 16 0 Goitre 1 1 1 1 1 0 8asedow 1 1 1 1 1 0 Adenome 11 0 0 0 0 0 Carcinome papittaire 11 0 0 0 0 11 Carcinome vésiculaire 9 9 0 0 9 0 Un marquage positif des thyrocytes était observé dans le tissu sain (figure 4, a, b). La caractéristique du tissu sain est un marquage dense à la partie apicale des thyrocytes (figure 4, c). Aucun marquage spécifique du tissu conjonctif n'est observé (figure 4, a, c). Les adénomes se caracterisent par une perte de marquage cellulaire dans les cas observés. Aucun marquage extracellulaire spécifique n'était noté (figure 4, h, i). A la périphérie de l'adénome, la distinction entre tissu pathologique et tissu sain etait clairement visualisée par le marquage positif de thyrocytes du tissu sain (figure 4, i partie droite) Les carcinomes papillaires perdaient eux aussi le marquage spécifique au niveau des cellules epitheliales formant les papilles (figure 4, d). Par contre, et ceci est la caractéristique unique de ce type de carcinome, un marquage spécifique extracellulaire était noté pour tous les cas observés dans certaines regions des carcinomes au niveau des tissus conjonctifs formant le chorion ou entourant les carcinomes (figure 4, e).La nature de cet antigène, détectable dans les seuls cancers papillaires de même que son éventuelle détection dans les cancers d'autres tissus restent à etablir. Cette observation était aussi valable pour une métastase de cancer papillaire localisé dans le tissu musculaire adjacent à la thyroïde (resultats non montrés). Les cellules épithéliales des cancers vésiculaires presentaient un marquage positif, ce marquage tend à être plus faible que dans le tissu sain et etait localisé exclusivement au niveau basolatéral. Aucun marquage extracellulaire n'est observé (figure 4, f, g). Ces résultats montrent que les anticorps TGRD-Ab peuvent servir au diagnostic différentiel des adénocarcinomes thyroïdiens. I1 apparat qu'en suivant la localisation et le niveau d'expression du GlcNAc recepteur par TGRD-Ab, on peut differencier les adénomes (tendance à la disparition du marquage) des cancers papillaires (disparition du marquage cellulaire, apparition d'un marquage extracellulaire) et des cancers vésiculaires (délocalisation du marquage dans la seule région basolatérale). Les cancers vésiculaires sont ceux qui ont la plus grande probabilité de présenter des métastases. L'utilisation des anticorps antirécepteurs, selon l'invention, dans le diagnotic différentiel des adénocarcinomes permet donc aussi un pronostic de la capacité métastasiante du carcinome : les interactions lectines-glycoconjuges sont des éléments essentiels dans la migration et l'adhésion cellulaire ; le maintien de l'expression du récepteur GlcNAc, en particulier dans les régions basolatérales des cellules épithéliales est vraisemblablement à l'origine d'un pouvoir métastasiant eleve. Les résultats obtenus montrent aussi qu'il est possible, en utilisant les anticorps TGRD-Ab, de visualiser et d'éradiquer in vivo les métastases, en particulier celles des cancers vésiculaires. Les anticorps sont alors couples à des molecules radioactives ou à des drogues dirigées contre des préparations de récepteur purifié, de protéines recombinantes ou de peptides synthétiques mimant les régions immunogéniques dudit recepteur. 5. Diagnostic différentiel de maladies auto-immunes Le protocole expérimental était le suivant : 20 pg de recepteur GlcNAc purifiés, dilués et dénatures (prépares selon la méthode de l'exemple 1), étaient soumis à une électrophorèse (SDS-PAGE, 8 % acrylamide) puis blottes sur feuille de nitrocellulose. Des bandelettes de la feuille de nitrocellulose étaient ensuite immergées dans un tampon 10 mM Tris-HCl, pH = 8.0, 150 mM NaCl, 0,05 % Tween 20 (TBST) additionné de 1 % BSA. Après lavage avec TBST, elles étaient incubées en présence de sérum de patient (1/50 dilution finale dans TBST) pendant 1 h. Après lavage avec TBST, des anticorps de mouton, couples à la phosphatase alcaline et dirigés contre les IgG humaines, étaient dilués au 1/500 et incubés pendant 1 h.Après quatre lavages, les anticorps fixés étaient révélés au bout de 5-15 min par ajout d'un tampon 0,1 M Tris-HCl, pH = 9.5, 100 mM NaCl, 4 mM MgCl2 contenant les substrats 5-bromo-4chloroindolylphosphate et nitrobluetetrazolium. Des résultats obtenus en particulier sur des patients souffrant de thyroïdites, ne présentant ni anticorps antithyroglobuline, ni anticorps antimicrosomiaux, et dont la maladie n'avait donc pas pu être formellement identifiée en ayant recours à ces méthodes connues, sont résumés ci-dessous Nombre de cas Nombre de cas testés positifs Thyroïdites 3 3 On peut noter qu'en dépit de l'utilisation de la forme dénaturée du récepteur, les anticorps de sera de patients atteints de thyroïdite reconnaissaient le recepteur GlcNAc thyroïdien. Le récepteur purifié a également été utilisé, en appliquant le même protocole expérimental, pour la detection d'auto-anticorps dans du serum de patients souffrant de goître ou de la maladie de Basedow. Dans le cas de la maladie de Basedow, la présence d'autoanticorps a été détectée. En revanche, les resultats dans le cas des patients souffrant de goître étaient moins conclusifs, sans doute en raison de la forme dénaturée de la protéine utilisée. La reconnaissance positive du recepteur GlcNAc par certains sera de patients font de ce récepteur ou de ses dérives (protéines recombinantes, peptides) un candidat possible pour se substituer aux (ou compléter les) antigènes utilisés dans les tests actuels. 6. Identification et préparation du CRD Le matériel de départ utilisé, selon cet exemple, dans la préparation du CRD etait le récepteur purifie par la méthode décrite dans l'exemple 1. Les etapes de l'isolation du CRD à partir du récepteur entier etaient les suivantes - Hydrolyse proteolytique menagée des proteines par des enzymes (pepsine, papaïne, protease V8, protease KX2 et clostripaïne) ou par des méthodes chimiques (bromure de cyanogène, coupure au tryptophane) - Ajustement du pH des milieux d'hydrolyse à pH = 5.0 avec un tampon acétate 1 M ; addition de CaCl2 (15mM concentration finale) - Chromatographie des fragments d'hydrolyse sur colonne d'affinité (ovomucoide - sépharose ou equivalent), lavage avec un tampon 50 mN acétate, pH = 5.0, 150 mM NaCl, 15 mM CaC12 : élution des fragments retenus par un tampon 0,1 M Tris-HCl, pH = 8.0, 150 mM NaCl, 10 mM EDTA - Tamisage moléculaire sur colonne de Sephacryl S-200 HR ; - Récupération et concentration d'une population homogène de CRD, les fragments les plus petits étant les meilleurs candidats pour une utilisation ultérieure comme "molécule de retard". 7. Couplaqe du CRD avec l'agent pharmacologique Dans cet exemple, le complexe CRD-agent pharmacologique est produit par un couplage entre le CRD et l'agent pharmacologique. La technique utilisée peut s'appliquer à la fois au CRD produit par protéolyse du récepteur entier, et au CRD produit par des techniques recombinantes ou par synthèse chimique. Les étapes de cette technique sont les suivantes - Couplage de l'agent pharmacologique (par exemple, drogue, hormone) sur le CRD par un hétérobifonctionnel "linker" (MSCC, MBS, SMBP) à pH = 7.0, en présence de N-Acétylglucosamine (0.1 M) pour proteger le site actif du CRD - Dialyse des complexes CRD-effecteurs biologiques contre un tampon-acide, i.e. 50 mM acétate, pH = 5.0, 150 mM NaCl, 20 mN CaCl2 ; ; - Chromatographie des complexes sur colonne d'affinité ovomucoïde-sepharose (10 mg/ml gel) - Lavage de la colonne avec le tampon acetate pH = 5.0, 10 mM CaC12 - Elution des complexes par un tampon 0,1 Tris-HCl, pH = 8.0, 150 mM NaCl, 10 mM EDTA - Désalage par dialyse du materiel élué contre un tampon PBS - Verification du maintien de l'activité biologique du CRD par chromatographie sur ovomucoïde-sépharose, selon le protocole décrit ci-dessus sur une partie aliquote de cette préparation. On notera aussi que, selon ce type de protocole, le CRD peut être utilisé comme vecteur permettant d'isoler tout aussi bien la (les) protéine(s) de fusion, que le complexe CRD-drogue. REVENDICATIONS 1. Proteine ayant une activite de récepteur thyroïdien de N-Acétylglucosamine (GlcNAc) caractérisée en ce qu'elle a un poids moléculaire d'environ 51 kDa, un point isoélectrique d'environ 5.2, est sensiblement dépourvue de protéines cellulaires contaminantes et comporte au moins l'une des séquences en acides aminés illustrées dans la figure 2, ou une séquence présentant au moins 80 % d'homologie avec l'une de ces séquences. 2. Protéine selon la revendication 1, caractérisée en ce qu'elle comporte au moins les séquences TGR-CL1 et TGR-CL5, juxtaposees de la manière indiquée dans la figure 3. 3. Protéine purifiée selon la revendication 1 ou 2, caractérisée en ce que les proteines cellulaires dont elle est dépourvue sont les cytokératines de cellules épithéliales, l'actine, la tubuline et les proteines de type lectines, telles que le recepteur de mannose-6-phosphate. 4. Protéine selon l'une quelconque des revendications 1 à 3 caractérisée en ce qu'elle est dénaturée ou native. 5. Fragment protéique, caractérisée en ce qu'il comporte un fragment de la protéine selon l'une quelconque des revendications 1 à 4 et est reconnu par un sérum polyclonal ou par des anticorps monoclonaux dirigés contre ladite proteine. 6. Fragment protéique selon la revendication 5, caractérisé en ce qu'il comporte au moins 6 acides aminés. 7. Séquence nucléotidique codant pour au moins une partie du récepteur thyroïdien de GlcNAc, caractérisée en ce qu'elle comprend au moins 20 bases consécutives de l'une des séquences nucléotidiques illustrées dans la figure 1, ou d'une séquence qui hybride avec l'une de ces séquences dans des conditions non stringentes, ou encore de la séquence complémentaire à l'une de ces séquences, ou encore la séquence ARN correspondante. 8. Amorce nucléotidique apte à être utilisée dans l'amplification du gène codant pour le recepteur thyroïdien de GlcNAc, caractérisée en ce qu'elle comporte au moins 20 bases consécutives, et plus particulièrement, au moins 25 bases consécutives de la séquence de la revendication 7. 9. Procédé de purification du récepteur thyroïdien de GlcNAc, caractérisée en ce qu'il comprend les étapes successives suivantes i) passage sur tamis d'un éminçage de tissu thyroïdien, par exemple, des follicules thyroïdiens ii) lavage des épithélia ainsi obtenus à des conditions de pH neutre, et en présence d'E.D.T.A. iii) précipitation des épithélia à l'acétone, produisant ainsi une "poudre d'acetone" ; iv) passage à pH 5.0 environ, par exemple entre 4.8 et 5.1, d'une suspension de la poudre d'acétone sur une colonne d'affinité comportant des "clusters" de GlcNAc accessibles, par exemple sous forme d'ovomucoïde ou d'asialogalactoproteine, et élution, soit à pH neutre, soit par l'ajout de N-Acétylglucosamine dans le tampon de fixation, des protéines ainsi fixées v) éventuellement, répétition de l'étape (iv) ou electroendosmose des proteines éluées sur SDS-PAGE. 10. Anticorps dirigés contre la protéine de l'une quelconque des revendications 1 à 4, ou contre le fragment de la revendication 5 ou 6, et spécifiques pour ladite protéine. 11. Anticorps selon la revendication 10, caractérisés en ce que ce sont des anticorps polyclonaux ou monoclonaux. 12. Anticorps selon l'une quelconque des revendications 10 ou 11, caractérisés en ce qu'ils reconnaissent la structure primaire de la protéine. 13. Procédé pour la détection et l'identification différentielle in vitro d'adénocarcinomes thyroïdiens, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes i) mise en contact d'une coupe de prélèvement de tissu thyroïdien avec des anticorps reconnaissant le récepteur thyroïdien de GlcNAc, lesdits anticorps étant associés à un moyen permettant leur détection. ii) détection de l'absence ou de la présence de marquage du recepteur thyroïdien GlcNAc par les anticorps, les adénomes étant totalement dépourvus de marquage, les carcinomes papillaires étant depourvus de marquage au niveau des cellules épithéliales formant les papilles, mais présentant un marquage spécifique extra-cellulaire du tissu conjonctif formant le chorion, et les carcinomes vesiculaires présentant une delocalisation du marquage dans la seule region basolaterale du thyrocyte. 14. Procédé selon la revendication 13 caractérisé en ce que les anticorps sont les anticorps selon l'une quelconque des revendications 10 à 12. 15. Anticorps selon l'une quelconque des revendications 10 à 12 pour le traitement des métastases de cancers thyroïdiens, lesdits anticorps etant couplés à un agent radio-actif ou à une molécule capable d'induire la destruction du GlcNAC recepteur thyroïdien. 16. Procédé pour la detection de maladies autoimmunes de la thyroïde telles que la maladie d'Hashimoto ou de Basedow, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes i) mise en contact d'un échantillon biologique avec la proteine selon l'une quelconque des revendications 1 à 4 ou avec le fragment de la revendication 5 ou 6 ii) detection de la réaction entre la protéine ou le fragment et des anticorps anti-GlcNAC récepteurs dans l'échantillon par des moyens connus en soi. 17. Kit ou nécessaire pour la détection et l'identification differentielle(s) de carcinomes et d'adénomes thyroïdiens, caractérisé en ce qu'il comprend i) anticorps contre la protéine de l'une quelconque des revendications 1 à 4 ou contre le fragment de la revendication 5 ou 6 ii) des moyens permettant la détection de la reaction entre lesdits anticorps et le GlcNAc récepteur thyroïdien, par exemple par marquage enzymatique, radio-actif, fluorescent ou par l'argent ou l'avidine. 18. Kit ou necessaire pour la détection de maladies auto-immunes de la thyroïde telles que la maladie d'Hashimoto, caractérisé en ce qu'il comprend i) protéine selon l'une quelconque des revendications 1 à 4 ou un fragment selon la revendication 5 ou 6 ii) des moyens permettant la détection d'une réaction entre ladite protéine ou ledit fragment et des anticorps anti-GlcNAc récepteur, tels que des anticorps anti-anticorps ou des anticorps antiprotéine. 19. Procédé de détection de maladies congénitales de la thyroïde, telles que le goître et l'hypothyroïdisme juvénile caractérisé en ce qu'il comprend i) mise en contact d'un échantillon d'ADN genomique du patient avec au moins une sonde ou une amorce, comportant la séquence nucléotidique selon la revendication 7 ou 8, 1'ADN ayant été préalablement rendu accessible à l'hybridation dans des conditions permettant l'hybridation entre la sonde ou l'amorce et le gène codant pour le récepteur thyroïdien de GlcNAc porte par l'ADN génomique ii) éventuellement, l'amplification de 1'ADN genomique ; iii) dénaturation de 1'ADN hybridé iv) analyse de la séquence génomique ainsi isolée pour mettre en évidence des altérations par rapport au gène sain. 20. Fragment du GlcNAc récepteur thyroïdien, selon la revendication 5, ledit fragment constituant le domaine de reconnaissance des résidus glucidiques ("carbohydrate recognition domain" ou C.R.D.) du récepteur, caractérisé en ce qu'il est susceptible d'être produit par le procedé suivant i) hydrolyse protéolytique de la protéine selon l'une quelconque des revendications 1 à 4 ii) ajustement du pH des milieux d'hydrolyse à un pH d'environ 5.0 et addition de Ca2+ iii) passage, à pH = 5.0 environ, par exemple 4.8 à 5.1, des fragments d'hydrolyse sur colonne d'affinité comportant des "clusters" de résidus GlcNAc, par exemple de l'ovomucoïde iv) élution, à pH neutre, des fragments retenus v) tamisage moléculaire des fragments élues et selection des fragments les plus petits 21. Fragment selon la revendication 20, caractérisé en ce qu'il comporte environ 130 à 150 acides aminés, est réticulé par 2 ponts disulfures et est reconnu par des anticorps dirigés contre la séquence consensus en acides aminés des C.R.D. d'autres membres de la famille des lectines dépendantes de Ca2+. 22. Fragment selon la revendication 20, caractérisé en ce que sa spécificité glucidique est modifiée. 23. Composition pharmaceutique presentant une demi-vie prolongée, caractérisée en ce qu'elle comporte un complexe constitué d'une part, d'au moins un fragment selon l'une quelconque des revendications 20 à 22 et, d'autre part, d'un produit pharmaceutiquement actif, par exemple une hormone, une préparation vaccinale, une macromolécule, un médicament et éventuellement un excipient pharmacologiquement acceptable. 24. Composition pharmaceutique selon la revendication 23 pour utilisation comme medicament à demi-vie prolongé. 25. Composition pharmaceutique selon la revendication 23, caractérisée en ce que le complexe comporte un groupement desdits fragments protéiques pour chaque molécule de produit pharmaceutiquement actif. 26. Fragment selon l'une quelconque des revendications 20 à 22, couplé à un agent permettant sa visualisation par exemple la horseradish peroxydase ou la ferritine. 27. Utilisation du fragment selon la revendication 26 comme marqueur de glycoconjugues membranaires des endosomes.