FR 2672496 A1 19920814 FR 9101497 A 19910208 COMPOSITIONS A BASH DE SUBSTANCES HYDROPHOBES, SOLUBILISABLES DANS UN SOLVANT AQUEUX, LEUR PROCEDX D'OBTENTION, ET LEURS UTILISATIONS NOTAMMENT DANS LE DOMAINE PHARMACEUTIQUE. L'invention concerne des compositions comprenant des substances hydrophobes, néanmoins solubilisables dans un solvant aqueux. L'invention concerne également le procédé d'obtention de telles compositions, et leurs utilisations notamment en tant que compositions pharmaceutiques. De nombreux produits utilisés dans le domaine pharmaceutique, ou susceptibles de l'être, ne peuvent être solubilisés dans liteau. Cette insolubilité dans l'eau est particulièrement désavantageuse pour des produits destinés à être administrés dans une solution physiologique aqueuse du type de celles habituellement utilisées pour les préparations injectables. Parmi ces produits pharmacologiquement actifs et insolubles dans l'eau, on peut citer notamment, les dérivés lipophiles de muramyl-peptides, tels que ceux décrits dans le brevet européen n 0 165 123 du 10/05/1985, ou encore dans le brevet européen 4512 du 20/03/1979. De fait, ces produits sont des immunomodulateurs capables d'augmenter la réponse immune spécifique (adjuvant de vaccin), ou de renforcer la résistance non-spécifique (agent anti-infectieux). De nature très hydrophobe, ils donnent des suspensions aqueuses difficiles à disperser de façon totalement satisfaisante (notamment en regard du niveau de dispersion compatible avec la possibilité de les injecter à un patient), en utilisant les divers moyens de mise en solution ou de dispersion aqueuse, basés sur des techniques connues, notamment des traitements mécaniques, ou encore l'utilisation de solvants organiques ou de surfactants. La présente invention a précisément pour but de fournir des moyens permettant la solubilisation ou la dispersion homogène de produits hydrophobes, tels que les muramyl-peptides lipophiles, dans un solvant aqueux. L'invention concerne d'une manière générale toute composition caractérisée en ce qu'elle comprend - d'une part une substance pharmacologiquement active, insoluble (en totalité ou en partie) dans l'eau, cette substance étant substituée par au moins un groupement lipophile, et - d'autre part, un dérivé osidique dont l'une au moins des fonctions hydroxyles est substituée par un ou plusieurs groupe(s) phosphate ou sulfate, ce dérivé étant également substitué par au moins un groupement lipophile, cette composition étant susceptible d'etre solubilisée ou dispersée de façon homogène dans un solvant aqueux. La substance pharmacologiquement active est associée de façon non-covalente au dérivé osidique par l'intermédiaire de leur(s) groupement(s) lipophile(s) respectif(s). De manière avantageuse, les deux groupements lipophiles assurant cette association non covalente sont tels que l'un d'entre eux est composé d'une structure hydrocarbonée linéaire, tandis que l'autre est constitué d'une structure hydrocarbonée ramifiée. La structure hydrocarbonée ramifiée est de préférence choisie parmi celles constituées d'une chaîne hydrocarbonée ramifiée, dont les ramifications prennent naissance sur deux atomes de carbone adjacents, ou au plus séparés d'un atome de carbone. La structure hydrocarbonée linéaire doit avoir, pour s'associer à la chaîne hydrocarbonée ramifiée, une longueur suffisante permettant l'instauration de liaisons non covalentes, notamment du type Van der Walls, entre la structure hydrocarbonée linéaire et l'une au moins des ramifications de la structure hydrocarbonée ramifiée. Ainsi, l'association de la substance pharmacologiquement active et du dérivé osidique s'effectue par l'intermédiaire de leurs groupements lipophiles respectifs, dès lors que s'établissent des liaisons non covalentes suffisamment fortes pour permettre à la structure hydrocarbonée linéaire, d'être maintenue dans une position dite en "sandwich" entre les deux ramifications de la structure hydrocarbonée ramifiée. De préférence, la structure hydrocarbonée linéaire possède un nombre d'atomes de carbone au plus égal au nombre d'atomes de carbone des ramifications de la structure hydrocarbonée ramifiée. L'association du dérivé osidique tel que décrit ci-dessus, de nature amphiphile et hydrosoluble, à la substance pharmacologiquement active hydrophobe et insoluble dans l'eau, permet la dispersion homogène de cette dernière dans un solvant aqueux. L'invention a plus particulièrement pour objet, toute composition susceptible d'être solubilisée ou dispersée de façon homogène dans un solvant aqueux, caractérisée en ce qu'elle comprend (1) une substance pharmacologiquement active, insoluble dans l'eau, cette substance étant substituée soit par au moins une structure hydrocarbonée linéaire de 4 à 20 atomes de carbone, comprenant le cas échéant, une liaison éther, ester, thioether, thioester, ou amide, cette structure étant désignée ci-après par groupement lipophile de type A, soit par au moins une structure hydrocarbonée ramifiée de 10 à 50 atomes de carbone, comprenant le cas échéant, une ou plusieurs liaison(s) éther, ester, thioether, thioester, ou amide, cette structure étant désignée ci-après par groupement lipophile du type B, (2) un composé constitué par un dérivé osidique associé de façon non covalente & la substance (1), ce dérivé osidique étant lui-même substitué soit par au moins un groupement lipophile de type A lorsque ladite substance pharmacologiquement active est substituee par un groupement lipophile du type B, soit par au moins un groupement lipophile du type B lorsque ladite substance pharmacologiquement active est substituée par un groupement lipophile du type A, 1'une au moins des fonctions hydroxyles du dérivé osidique sus-mentionné étant substituée par un, ou plusieurs, groupe(s) phosphate ou sulfate. D'une manière générale, tout dérivé osidique tel que défini ci-dessus est utilisable dans les compositions de l'invention, dès lors que ce dérivé n'entraîne pas une modification des propriétés pharmacologiques de la substance active susmentionnée, telle que cette derniere devienne inactive ou toxique. Des compositions particulièrement préférées de l'invention sont celles comprenant des dérivés osidiques répondant à la formule (I) suivante dans laquelle - R représente un groupement lipophile du type A ou du type B, - R2 représente H, ou OH, ou un groupement acétamido, sulfate, sulfamido, phosphate, phosphamido, - R3 et F4, identiques ou différents, représentent soit H, soit OH, ou OCH3, ou encore un groupement sulfate ou phosphate, - R1 représente soit H, soit OH, ou OCH3, ou encore un résidu ose ou osamine dont le carbone anomérique en position 1 (C1) est engagé dans une liaison glycosidique, les positions C2, C3 et C4 étant respectivement substituées par des groupes R'2, R'3, et R'4 ayant respectivement les significations données ci-dessus pour R2, R31 et RX, et la position C6 par un groupe R' ayant la signification donnée ci-dessus pour R, l'un au moins des groupes R2, R'2, R3, R'3, R4 ou R'4 représentant un résidu sulfate ou phosphate. A titre d'exemple de dérivés osidiques répondant à la formule (I) sus-mentionnée, on peut citer les composés suivants - a ou 8-méthyl-glycoside N-acetyl-4-sulfate-6-OR2-desoxy-glucosamine, - N-acetyl 4-Sulfate-6-OR-2-desoxy-glucosamine, - a ou ss-methyl-glycoside 4-Sulfate-6-OR-glucopyranose, - 4-sulfate-6-OR-glucopyranose, - 6,6' -di-OR-4, 4 '-di-sulfate-a,a'-D-Trehalose, R ayant la signification indiquée ci-dessus. Des compositions préférées de l'invention sont celles comprenant les dérivés osidiques de formule (I) suivants : - a ou ss-méthyl-glycoside N-acetyl-4-Sulfate-6octanoyl-2-desoxy -glucosamine, - a ou 8-méthyl-glycos ide-N-acetyl-4-Sul fate-6- (2 , 3- dipalmitoyl) glyceroyl-2-desoxy-glucosamine, - N-acetyl-4-Sulfate-6-octanoyl-2-desoxy-glucosamine, - N-acetyl-4-Sulfate-6-(2,3-dipalmitoyl)-glyceroyl-2desoxy-D-glucosamine, - a ou B ss-methyl-glycoside 4-Sulfate-6-octanoyl-glu- copyranoside, - a ou B ss-methyl-glycoside 4-Sulfate-6-(2,3-dipalmi- toyl)-glyceroyl-D-glucopyranoside, - 4-Sulfate-6-octanoyl-D-glucopyranose, - 4-Sulfate-6(2,3-di-palmitoyl)-glyceroylglucopyranose - 4,4' di-sulfate-6,6' di-octanoyl-a,a'-D-Trehalose, - 4,4'di-sulfate-6,6'(2,3-dipalmitoyl)-glyceroyl-a-a' D-Trehalose. D'une manière générale, tout principe pharmacologiquement actif de nature insoluble dans un solvant aqueux, et sur lequel est susceptible d'être greffé au moins un groupement lipophile du type A ou B sus-mentionnés, peut-être utilisé en tant que substance pharmacologiquement active entrant dans les compositions de l'invention. Parmi les substances pharmacologiquement actives entrant dans les compositions de l'invention, on peut citer les dérivés lipophiles de muramyl-peptide mentionnés plus haut, et repondant à la formule (II) suivante dans laquelle - R5 représente H ou CH3 - R6 représente un groupe -NH2, -OH ou un groupe -OW1, W1 étant un groupe hydrocarboné comportant de 1 à 10 atomes de carbone ;; - X représente un résidu aminoacyle du groupe comprenant alanyle, valyle, isoleucyle, norleucyle, leucyle, thréonyle, prolyle, glutaminyle, asparaginyle, méthionyle, tryptophanyle, phénylalanyle, tyrosyle, glycyle - Y représente soit OH, soit NH2, ou un groupe -OWz, W2 étant un groupe hydrocarboné de 1 à 4 atomes de carbone, ou encore un groupement lipophile du type A ou du type B, - Z représente soit H, soit un groupement lipophile du type A ou du type B, étant cependant entendu que l'un au moins des deux groupes Y et Z est toujours constitué par un groupement lipophile du type A ou du type B - n1 et n2, identiques ou différents, représentent zéro ou 1, - A1 et B1 sont soit des groupes respectivement identiques ou différents comprenant de 1 à 3 résidus aminoacyles, eux-mêmes identiques ou différents entre eux, ou encore un groupe -NH-(CH2)p-CO- avec des valeurs de p comprises entre 2 et 10. Une composition particulièrement préférée de l'invention, comprend des composés de formule (II) sus-mentionnée, dans laquelle - nt et n2 représentent zéro, - R5 représente CH3, - R; représente -OH, -NH2 ou -On (CH2)xH avec x1 compris entre 1 et 6, avec une préférence pour x1=4, -X est L ou D-alanyle, L-thréonyle, L-valyle, - lorsque Y représente -O-CH2-CHO(R7)-CH20(R8), Z représente H, et lorsque Z représente Y représente -OH, -NH2 ou un groupe -OW2 W2 ayant la signification indiquée cidessus, et R7 et R8 étant des groupes palmitoyles. Une autre composition préférée de l'invention comprend des composés de formule (II) sus-mentionnée, dans laquelle - nl et n2 représentent zéro, - R5 représente CH3 - R6 représente -OH, ou -NH2 ou On (CH2)X1H avec x1 compris entre 1 et 6, avec une préférence pour x1=4, -X est L ou D-alanyle, L-thréonyle, L-valyle, - lorsque Y représente - -(CH2)x2H avec x2 = 8, Z 2 représente H, et lorsque Z représente -CO(CH2)X2H, avec x2 = 8, Y représente -OH, -NH2, ou un groupe -0W2, W2 ayant la signification indiquée ci-dessus. L'invention a également pour objet les dérivés osidiques de formule (I) ainsi que leur procédé d'obtention selon des méthodes qui sont classiquement utilisées en chimie de synthèse des oses et des oligosaccharides. A titre illustratif, cette méthodologie procède par étapes successives à partir de l'ose ou de l'oligosaccharide à modifier chimiquement, pour parvenir au dérivé recherché, spécifiquement substitué sur la position voulue. Pour ce faire, les fonctions en positions C1, C2, C3, C4 et C6 d'un ose et celles correspondantes d'un oligosaccharide, sont protégées temporairement par des groupements protecteurs (tels que benzyle, benzylidène, acétyle...) introduits spécifiquement et séquentiellement sur les positions qui ne seront pas finalement l'objet de la modification chimique envisagée, en tirant partie des différences de réactivité desdites fonctions. Puis l'introduction des groupements lipophiles du type A ou B sus-mentionnés, est avantageusement effectuée de la manière suivante les (ou la) fonctions hydroxyles primaires non protégées, peuvent réagir soit sous forme substituée par un groupe tosyle avec un sel d'acide gras, en présence d'éther couronne, soit sous forme libre avec un chlorure d'acide gras, ou avec la fonction carboxylique d'un acide gras en présence d'un reactif de couplage. Après introduction des (ou de la) modifications chimiques envisagées sur les (ou la) positions restées libres, le dérivé obtenu est libéré (étape de deprotection) de tous ses groupements protecteurs pour aboutir au dérivé osidique ou oligosaccharidique voulu. Le cas échéant, l'introduction des (ou du) groupes phosphates est réalisée préalablement à l'étape de déprotection sus-mentionnée, par la méthode dite phosphite triester décrite dans Perich, J.W. et al, Tetrahedron Lett., (1988), 29, 2369. L'introduction des (ou du), groupes sulfates est réalisée après l'étape de déprotection sus-mentionnée, notamment par utilisation du complexe triméthylamine anhydride sulfurique selon la méthode notamment décrite dans Ichikawa Y. et al, Carbohydrate Research, 172, (1988), 37-64. L'invention concerne également des compositions pharmaceutiques comprenant une composition du type de celles décrites ci-dessus, ou un mélange de ces compositions, dispersée(s) dans un solvant aqueux physiologiquement acceptable. De maniere avantageuse, les compositions de l'invention peuvent être lyophilisées à partir de leur solution ou dispersion aqueuse, et se présentent sous forme de poudre. Ces compositions sous forme de poudre seche, sont aisément solubilisées ou dispersées à nouveau dans un volume approprié de solvant aqueux. L'invention concerne également un procédé de modification des propriétés de solubilité d'une substance pharmacologiquement active du type (1) décrite ci-dessus, ce procédé consistant en l'association de la substance (1) avec un dérivé osidique de type (2) tel que décrit ci-dessus, dans des conditions telles que lorsque cette association de (1) et (2) est mise en suspension dans l'eau, on obtient une solution (ou dispersion) utilisable notamment en tant que préparation injectable, lorsque l'eau sus-mentionnée est stérile. La solubilisation de la substance pharmacologiquement active (1) est telle que l'on obtient un fluide caractérisé par une certaine opalescence (mesurable par nephélémétrie). Ce fluide se comporte comme une solution et est susceptible d'être injecté dans l'organisme au même titre qu'une solution injectable. L'invention a également pour objet un procédé d'obtention des compositions décrites ci-dessus comprenant - la solubilisation du (ou des) dérivé osidique dans une quantité déterminée d'un solvant aqueux, - l'addition sous agitation à la solution précédemment obtenue, d'une quantité déterminée d'une (ou plusieurs) substance pharmacologiquement active, - le cas échéant, la lyophilisation de la solution précédente. En variante, le procédé d'obtention des compositions de l'invention est réalisé en additionnant sous agitation le (ou les) dérivé osidique à une suspension aqueuse comprenant une quantité déterminée d'une (ou plusieurs) substance pharmacologiquement active. L'invention est davantage illustrée dans la description détaillée qui suit, sans que cette dernière ne revête un caractère limitatif. 1) Description de la synthèse du sel de sodium du 6,6' di-octanoyl-4,4'-disulfonyl-&alpha;,&alpha;'-D-tréhalose (ou composé P1) .6,6(octanoyl-2,-21,3l,tetra-0-benzyl-a se Dissolution dans le THF sec (50 ml), sous argon, à l'abri de la lumière de 3 mmoles de 2,3-2',3' tetra-O-benzyl-&alpha;,&alpha;'-D-tréhalose (A.F. Hadfield, L. Hough, and A.C. Richardson - Carbohyd. Res. 63, (1978), 51) de 7,5 mmoles d'acide octanoique, et de 7,87 mmoles de triphénylphosphine. A la solution refroidie à O'C, addition en 15 minutes d'une solution de diisopropylazodicarboxylate (8,02 mmoles) dans le THF sec (25 ml). Purification sur silice 60 H sous pression dans le mélange de toluène/CH2ClvAcoET : 30/10/5.Huile : m = 2,58 g (90 t). Sel de sodium du 6,6l-dioctanoyl-2,3-2',3'-tetra-0- benzyl-4,4'-di-sulfonyl-&alpha;,&alpha;'-D-tréhalose. A 1,5 mmole du produit précédent en solution dans le DMF sec (15 ml), addition de 15 mmoles de complexe triméthylamine/anhydride sulfurique (2,1 g) et incubation à 50iC en conditions anhydrides pendant 2 jours. Addition de CH3OH (10 ml), puis, extension par du chloroforme (10 ml) et percolation sur Sephadex LHzo dans le mélange CHC13-CH30H : I/I. Après concentration, purification sur colonne de silice 60H sous pression, dans le mélange CHC13-CH3OH-H2O : 15/5/05 (1,7 g : huile). Dissolution dans le mélange DMF-H20 : I/I (80 ml) et percolation sur colonne de résine Dowex 50 WX4 H+ (85 ml) par élution avec le même mélange de solvants : neutralisation par NaOH O,lN : lyophilisation m = 1, 51 g (87 %). Sel de sodium du 6,6'-dioctanoyl-4 '4'- di-O-sulfonyl- a,a'-D-tréhalose (C28H48Na2019S2 : 798,79) 1,5 g du dérivé précédent, solubilisé dans 150 ml d'un mélange eau/alcool (6,5/10), est hydrogéné en présence de 750 mg de Pd/C à 10 %. Après filtration, concentration, lyophilisation en solution aqueuse. Purification sur silice 60-G dans CHC13-CH30H-CH3COOH H20 : 40/20/8/2. Concentration, coévaporation avec du toluène, lyophilisation en solution aqueuse. Percolation sur Sephadex LH20 dans le méthanol. Concentration dessiccation, lyophilisation en solution dans l'eau m = 525 mg (51 %). Teneur en sulfate : 2,7 Eq/g (conductimétrie). teneur en acide octanolque : 1,97 Eq/mole (CPV). 2) Description de la mise en oeuvre de la dispersion aqueuse de MDP-GDP, c'est-à-dire le a(N-acetyl-mura- myl-L-alanyl- D-isoglutamine) -ss,t-dipalmitoyl-sn-Gly- cerol, avec le composé P1 10 mg de P1 sont dissous dans 10 ml d'eau distillée. A la solution sont ajoutés 10 mg de MDP GDP, sous forte agitation. La dispersion aqueuse obtenue est d'aspect opalescent et ne sédimente pas ou très peu, (une nouvelle agitation permet d'obtenir à nouveau la dispersion homogène). Après lyophilisation, on peut par addition d'eau ou de soluté physiologique, reconstituer une dispersion d'aspect identique, la concentration en dérivés dépendant du volume de l'addition. Le procédé permet une formulation galénique aisée des muramyl-peptides correspondant à la formule générale (II). Il en résulte des préparations qui conservent les activités pharmacologiques de ces produits, notamment en tant que régulateur de la réponse immune, telles qu'elles ont été revendiquées dans le brevet européen n 0 165 123 3) Influence de l'utilisation de P1 sur l'activité adjuvante des muramyl-peptides lipophiles étudiée chez le cobaye. a) Préparation de l'émulsion 1 mg de P1 est dissous dans 0.5 ml de soluté physiologique, cette solution est ajoutée goutte à goutte à 1 mg de MDP-GDP en poudre. La dispersion obtenue est mélangée à 0,5 ml d'une solution isotonique en ovalbumine à 20 mg/ml. Elle est additionnée de 1 ml d'huile minérale (Adjuvant Incomplet de Freund, AIF) et on procède à l'émulsion. Cette préparation contient donc par ml, 0,5 mg d'adjuvant, 0,5mg de P1 et 5 mg d'ovalbumine b) Méthodologie Les lots témoins reçoivent a) de l'émulsion eau/huile minérale contenant l'antigène seul, b) la même émulsion contenant les molécules adjuvantes seules (MDP-GDP). Les lots expérimentaux reçoivent les émulsions contenant le dérivé osidique P1. Les injections se font par voie sous cutanée dans les coussinets plantaires arrières de cobayes mâles Hartley pesant 350 g. Après 3 semaines les animaux reçoivent par voie intradermique 0,1 ml de soluté physiologique seul ou contenant 0,1 ml d'ovalbumine. Après 48 heures, on mesure le diamètre d'induration qui est le signe de l'établissement d'un état d'hypersensibilité retardée. Après 24 heures, les animaux sont sacrifiés par ponction cardiaque et les sérums recueillis. Le titrage des anticorps circulant se fait par la méthode Elisa suivant les modalités classiques, notamment celles décrites dans F.AUDIBERT, L. CHEDID, P. LEFRANCIER and J. CHOAY, Immunol. (1976), (21), 143 ; et M. JOLIVET, F. AUDIBERT, H. GRAS-MASSE, A. TARTAR, D. SCHLESSINGER, R. WITZ and L. CHEDID, Infect. Immunol. (1987), (55), 1498. c) Résultats Les résultats obtenus sont consignés dans le tableau suivant IMMUNISATION HYPERSENSIBILITE TITRE ANTI RETARDEE - CORPS ELISA diamètre d'indu ration mm AIF 0.0.0.0 22.000, 37.000, 65.000, 95.000 AIF+P1 0.0.0.0 7.000, 8.000, 100 Ag 21.000. AIF+MDP-GDP 100pg 8,14,15,17 241.000,295.000 325.000,641.000. AIF+MDP-GDP 5,16,20,25 157.000,275.000, 100pg+P1 275.000,318.0000. 100 pg t : Tous les animaux ont reçu 1 mg d'ovalbumine. Les chiffres représentent la dilution maximum du sérum permettant d'obtenir une densité optique égale à celle obtenue en utilisant un sérum normal dilué 50 fois. Ces résultats montrent que le MDP-GDP est un fort adjuvant de la réponse à médiation cellulaire et de la réponse humorale et que 1'addition de P1 n'a pas modifié leur activité. 4) Influence du dérivé osidique P1 sur les propriétés immunostimulantes des muramyl-peptides. a - Activité anti-infectieuse Les souris Swiss ont reçu P1, le MDP-GDP , ou le MDP-GDP + P1 par voie veineuse 24 heures avant l'infection par 1 x 104 Klebsiella pneumoniae. La solution de P1 est ajoutée au NDP-GDP pour obtenir une préparation contenant une quantité équivalente de 2 produits (poids/poids). Les résultats du tableau I montrent que P1 seul n'a aucune action protectrice contre l'infection. La comparaison de l'activité des différentes doses de MDP-GDP, seul ou avec P1, ne montre pas de différences significatives. On peut conclure de ces expérimentations que le composé P1 n'inhibe pas l'activité anti-infectieuse du MDP-GDP. b - Action du MDP-GDP sur la production de TNF circulant Le TNF tumor necrosis factor, est une protéine synthétisée par les cellules de la lignée monocytes/macrophages lorsqu'elles sont stimulées. Le LPS (lipopolysaccharide bactérien) est un inducteur très puissant de la production TNF. Les muramylpeptides stimulent in vitro la production de TNF mais ils sont nettement moins efficaces que le LPS. In vivo, les taux de TNF sérique produit apres l'administration de muramyl-peptides sont au-dessous ou à la limite des possibilités de détection. Le MDP-GDP, et les autres dérivés, qui ont une action anti-infectieuse, ont la propriété d'augmenter la réponse au LPS injecté après, provoquant une augmentation considérable du taux de TNF sérique. Le tableau II représente les résultats d'une expérience de ce type. On voit que le prétraitement est plus efficace 6 heures avant le LPS, en particulier dans le cas de 11 association MDP-GPD + P1, mais que 16 heures avant, l'injection de MDP-GDP a encore un effet de potentialisation de la réponse. c - Action du MDP-GDP in vitro sur les monocytes du sang humain. Les monocytes du sang sont isolés et incubés pendant 24 heures avec différentes doses de produit. Les surnageants sont prélevés pour doser le TNF et 1'IL-6, cytokines qui sont produites par les monocytes activés. Le Tableau III montre que la production de TNF n'est significative qu'avec 10 pg/ml de MDP-GDP et que le produit solubilisé avec le composé P1 est d'une activité légèrement plus élevée. Le dosage de 1'IL-6 donne des résultats plus nets et montre également une stimulation comparable des monocytes entre le MDP-GDP et le MDP-GDP solubilisé en association avec P1. d - Action sur les polynucléaires humains Les muramyl-peptides ont une action directe sur les polynucléaires qui est mise en évidence notamment par la phagocytose et la destruction de Candida albicans. L'estimation de cette action est faite par la capacité d'incorporer du glucose traité par les cellules du champignon restées viables. Dans les deux expériences reportées sur le Tableau IV, les cellules témoins non stimulées ont déjà une activité de base relativement élevée. Toutefois, l'addition du muramyl-peptide, avec ou sans P1, produit une augmentation de l'activité inhibitrice des cellules sur la croissance du champignon. En conclusion, que ce soit dans les expériences faites in vivo chez la souris ou in vitro avec les cellules humaines, la solubilisation du MDP-GDP par le composé P1 ne diminue jamais son activité. Le composé P1 seul est toujours inactif. TABLEAU I Action protectrice du MDP-GDP solubilisé par le composé P, chez la souris infectée par Klebsiella pneumonie Traitement i.v., Survie à J + 15 % Protection à J-1 Témoins 1/16 P1 100 pg 0/8 MDP-GDP 3 Ag 3/8 37,5 ns 10 3/8 37,5 ns 30 12/16 68,7 P 100 4/8 37,5 ns MDP-GDP/ P, 3/3g 3/8 37,5 ns 10/10 3/8 37,5 ns 30/30 8/16 43,7 P 100/100 7/8 75 P compte pour chaque lot de leurs témoins respectifs. TABLEAU Il Influence du prétraitement par le MDP-GDP solubilisé par P, sur la réponse TNF induite par le LPS Traitement avec 100 g LPS iv Activité TNF dans le iv/souris avant le LPS 25 iig sérum U/ml pg/ml h-6 P1 + 189 3,4 h-6 MDP-GDP/P1 - * : 2 heures après l'injection d'épreuve avec le LPS Activité exprimée en U/ml et en équivalent TNF recombinant murin, dans le test de cytotoxicité de la lignée cellulaire L292. TABLEAU III Action du MDP-GDP in vitro sur les monocytes humains Stimulant pg/ml Activité dans le surnageant TNF U/ml IL-6 U/ml P1 O MDP-GDP 0,1 0 0,1 0 1 0,3 10 6,9 94,9 MDP-GDP/P1 0,01 0 0,1 0 1 5,9 83 10 10,5 594 Cellules à 2 x 106/ml, incubées pendant 24 heures avec les produits. TABLEAU IV Action du NDP-GDP sur les polynucléaires humains Stimulant pg/ml Inhibition de croissance du Candida (%) lere exp. 2ème exp. Témoins 35,3 41,5 P1 10 34,6 38,7 MDP-GDP 0,1 44,1 47,2 1 75,1 78,1 10 86,2 86,1 MDP-GDP/P1 0,1 32,2 77,2 1 41,4 93,6 10 65,9 95,1 Les polynucléaires (1 x 106/ml) sont incubés avec les stimulants pendant 30 minutes et distribués dans les puits des microplaques avec une suspension de C. albicans à 1 x 104/ml. Après 18 heures, le milieu de culture est éliminé et l'incorporation de 3H-D-glucose par les cellules de Candida est mesurée après une incubation de 3 heures. 5 > Influence du dérivé osidique P1 sur l'effet pyrogène du MDP-GDP. Les essais de pyrogénicité ont été réalisés sur des lapins néozélandais de 3 à 4 kilogrammes maintenus en boîte à contention. Les animaux ont reçu une dose de produit dans un volume de 0.5 ml/kg par voie veineuse au temps zéro et leur température enregistrée pendant 5 heures en continu. 1. Evaluation de la pyrogénicité de P1 Deux lots de trois lapins ont été constitués : groupe I : 10 g/kg de P1 groupe II : 100 Ag/kg de P1. Les différences de température enregistrées étaient pour le groupe I : 0.15, 0.25; 0.25 (C), soit une moyenne de : 0.22 C + 0.06 ; pour le groupe II : 0.40, 0.15, 0.30 (C), soit une moyenne de : 0.28 C 0.12. Cette expérience indique que P1 est totalement dénué d'effet pyrogène chez le lapin et dans les conditions drastiques d'un enregistrement effectué durant 5 heures. 2. Evaluation de la pyrogénicité de MDP-GDP en présence de P1 La dose minimale pyrogène de MDP-GDP préalablement déterminée, est égale à : 2 pg/kg. Il a eté choisi une dose de 10 pg/kg qui donne approximativement une augmentation de température de 1 C. Deux lots de trois lapins ont été constitués groupe I : 10 Ag/kg de MDP-GDP ; groupe II : 10 pg/kg de MDP-GDP + 10 g/kg de P1. Les différences de température enregistrées sont pour le groupe I : 0.70, 0.50, 0.85 ( C), soit une moyenne de : 0.68 C 0.18 ; pour le groupe II : 1.15, 0.90, 0.65 ( C), soit une moyenne de : 0.90'C + 0.25. Un test statistique de Student (unpaired twotailed t test, p = 0.2866) indique que cette différence n'est pas significative et donc que P1 ne synergise pas l'effet pyrogene d'un autre produit comme le MDP-GDP. La substance immunomodulatrice peut encore être sélectionnée, par exemple, parmi - des constituants d'origine bactérienne, entre autres des constituants solubles ou solubilisables de peptidoglycanes ou des lipolysaccharides du type LPS, ou encore des fractions lipidiques obtenus à partir de ces LPS, en particulier le "Lipide A" (cf par exemple article de Ernst Th. Rietschel et al intitulé "Molecular structure of bacterial endotoxin in relation to bioactivity" (Structure moléculaire des endotoxines bactériennes en relation avec leur bioactivite) dans l'ouvrage lui-même intitulé "Cellular and molecular aspects of endotoxin rections" (Aspects cellulaires et moléculaires des réactions mettant en oeuvre des endotoxines), sous la direction de A. Nowotny, J.J. Spitzer et E.J.Ziegler ; 1990, Elsevier Science Publishers B.V. (Division biomedicale), pages 15-32), - des analogues des précédents constituants d'origine bactérienne ou des produits (naturels, hemisynthétiques ou de synthèse) correspondant à des fragments de ces constituants d'origine bactérienne, notamment des dérivés détoxifiés. On mentionnera tout particulièrement le dimycolate de tréhalose (TDM), le Lipide A diphosphorylé et tous autres analogues de ces immunomodulateurs. Au titre des analogues du Lipide A, obtenus par synthèse ou hémisynthèse, on citera les produits répondant à la formule générale (III), en lieu et place des susdits Muramylpeptides, dans des conditions analogues à celles qui ont été évoquées plus haut Pour les mêmes raisons d'hydrophobicité que déjà évoquées à propos de certains Muramylpeptides, leur formulation galénique est souvent difficile. Néanmoins, comme les Muramylpeptides lipophiles ils peuvent conduire à des solutions ou dispersions aqueuses homogènes. Parmi ce dernier type de substances immunomodulatrices, on mentionnera particulièrement le "Lipide A' ou des analogues du "Lipide A", constituant domaine hydrophode des endotoxines qui est l'entité chimique responsable de l'activité immunostimulante de cette structure bactérienne (C. Galanos et al. dans "Internat. Rev. of Biochem. (1977) 14, 239). De façon préférée dans les compositions selon l'invention, les analogues du "Lipide A" sont ceux qui, obtenus par synthèse ou hémisynthêse, ont une toxicité très atténuée, notamment le MPL 'Lipide A monophosphorylé). Ce sont des structures très hydrophobes dispersables dans l'eau de façon homogène, en présence des susdits dérivés d'osides. Ces analogues du Lipide A répondent à la formule générale (IV), dans laquelle: Rk et R'1 représentent H ou P04, avec au moins RW ou R'1 étant un groupe P04 R2, R3 et R'2, R'3 représentent CO-CH (OR)-(CH2),-CH3, x étant compris entre 5 et 15, avec une préférence pour x = 10, et R étant CO-(CH2)y-CH3 y étant compris entre 5 et 15 avec une préférence pour x = 10 ou 12. La présente invention concerne donc l'utilisation des compositions selon l'invention soit seules pour stimuler les défenses générales de l'organisme, soit avec un antigène. Le dérivé d'oside et la substance immunomodulatrice sont avantageusement dans un rapport de 0,5 à 1,5. REVENDICATION 1. Composition susceptible d'être solubilisée ou dispersée de façon homogène dans un solvant aqueux, caractérisée en ce qu'elle comprend (1) une substance pharmacologiquement active, insoluble dans l'eau, cette substance étant constituée par un lipide A ou dérivé de lipide A. (2) un composé constitué par un dérivé osidique associé de façon non covalente à la substance (1), ce dérivé osidique étant lui-même substitué soit par au moins un groupement lipophile de type A lorsque ladite substance pharmacologiquement active est substituée par un groupement lipophile du type B, soit par au moins un groupement lipophile du type B lorsque ladite substance pharmacologiquement active est substituée par un groupement lipophile du type A, l'une au moins des fonctions hydroxyles du dérivé osidique sus-mentionné étant substituée par un, ou plusieurs, groupe(s) phosphate ou sulfate.