FR 2673626 A1 19920911 FR 9106889 A 19910606 Procédé de synthèse de la cucurbitine utilisant comme produit de départ de la 1-benzyl-3-pyrrolidinone. La présente invention concerne essentiellement un procédé de synthèse de la cucurbitine, à partir de la 1-benzyl3-pyrrolidinone. L'invention concerne aussi l'utilisation de la cucurbitine pour la préparation de composition cosmétique ou pharmaceutique, notamment dermatologique, anti-allergique, et un procédé en comportant application. La cucurbitine, ou acide 3-amino-3-oyrroLidinecarboxyLioue de formule I, suivante est un acide aminé naturel soluble dans L'eau que l'on trouve dans les cucurbitacées (voir V.H. Mihranian et al., LLOYDIA (1968), 31 (1) 23-29). La cucurbitine est connue comme anti-parasitaire, en particulier comme anthelmintique contre Schistosoma japonicum. (Morimoto Y. et al., Chem. Pharm. Bull. (1987) 35 (9) 3845-3849). La cucurbitine peut être obtenue par voie d'extraction sous forme lévogyre ou par voie de synthèse sous forme racémique. Parmi les diverses méthodes de synthèse de cucurbitine, on peut citer particulièrement la méthode de synthèse de H.J. Monteiro, J. Chem. Soc., Chem. Commun. (1973) 2. Cette méthode ne conduit qu'à des rendements relativement faibles en cucurbine racémique. Une autre méthode de synthèse permet d'obtenir séparément l'un et L'autre isomère optique de la cucurbitine. IL s'agit de la méthode de Morimoto et ail., Chem. Pharm. Bull. (1987) 35 (9) 3845-3849, qui est une méthode de synthèse par voie enzymatique stéréospécifique par L'emploi d'une estérase de foie de porc. Cette méthode est cependant compliquée, et nécessite un nombre d'étapes relativement élevé. Il a maintenant été découvert de manière inattendue que la cucurbitine inhibait la formation d'histamine, médiateur bien connu des aLlergies, et présentait donc une activité hypohistaminémiante précieuse. Cette activité hypohistaminémiante résulte de L'action inhibitrice de la cucurbitine sur l'histidine décarboxylase qui est L'enzyme responsable de la transformation de L'histidine en histamine. De ce fait, L'administration de la cucurbitine contribue à diminuer la concentration d'histamine dans le sérum sanguin et les tissus. Ceci constitue un progrès technique important car les manifestations allergiques, notamment les allergies pulmonaires et cutanées, posent aujourd'hui de nombreux problèmes aux thérapeutes qui disposent d'un nombre limité de substances actives et en outre, certaines de ces substances peuvent présenter des effets secondaires. Ainsi, la mise au point d'une nouvelle composition préventive et curative des allergies constitue donc un besoin important. Ainsi, la présente invention a pour objet principal de résoudre le problème technique consistant en la fourniture d'une solution permettant d'inhiber la formation d'histamine, agent médiateur dans le cadre des manifestations allergiques, afin de permettre la prévention et le traitement des manifestations aller- giques. Selon un autre aspect, la présente invention a pour objet principal de résoudre le problème technique consistant en la fourniture d'une solution permettant de prévenir et de traiter les manifestations allergiques. La présente invention a encore pour but de résoudre le nouveau problème technique consistant en la fourniture d'une solution permettant de diminuer le potentiel allergisant des compositions cosmétiques ou pharmaceutiques, notamment dermatologiques. La présente invention a encore pour but de résoudre le nouveau problème technique consistant en la fourniture d'une soLution permettant de réaliser la synthèse de la cucurbitine par un procédé de synthèse simple, nécessitant un minimum d'étapes, en de bons rendements. La présente invention permet de résoudre l'ensemble de ces problèmes techniques dwune manière simple, fiable et reproductible, utilisable à l'échelle industrielle. Ainsi, selon un premier aspect, la présente invention concerne l'utilisation de la cucurbitine ou de l'un de ses sels ou esters, ou d'un extrait de plante en contenant, pour la préparation d'une composition cosmétique ou pharmaceutique, notamment dermatologique, à activité antiallergique. Selon une variante de réalisation particulière, il s'agit de la préparation d'une composition cosmétique ou pharmaceutique, notamment dermatologique, destinée à la prévention ou au traitement symptomatique des manifestations allergiques, quelle qu'en soit L'origine et Le point d'application, notamment les bronches, la peau et l'oeil. Ainsi, ladite composition est destinée notamment à la prévention ou au traitement symptomatique de L'asthme bronchique allergique ou de l'effort, du rhume des foins, des rhinites et trachéites spasmodiques, de l'urticaire autres éruptions allergiques, de l'eczéma, rougeurs ou irritations cutanées d'origine allergique, des prurits, de l'oedème de Quincke, des conjonctivites allergiques, ainsi que des réactions allergiques d'origine médicamenteuse. Dans le domaine plus particulier de la cosmétologie, ladite composition est destinée avantageusement aux lignes de produits hypoallergéniques ou pour peaux sensibles ou irritables. La cucurbitine peut être utilisée soit sous forme libre, soit sous forme de l'un de ses sels ou de ses esters cosmétiquement ou pharmaceutiquement , notamment dermatologiquement, acceptables. Les sels et esters précités peuvent être préparés par des procédés classiques bien connus de L'homme de l'art. Parmi les sels, citons le mono- et dibromohydrate et le mono- et dichlorhydrate. Parmi les esters, citons l'ester méthylique et L'ester éthylique. Suivant une variante avantageuse, l'extrait de plante précité contenant de la cucurbitine est un extrait de cucurbitacée, en particulier de Cucurbita maxima Duch., de Cucurbita pepo L. ou de Cucurbita moschata Duch ; de préférence, il s'agit d'un extrait de pépin ou de pulpe de fruit. Selon un deuxième aspect, la présente invention concerne aussi une composition cosmétique, caractérisée en ce qu'elle comprend, comme ingrédient actif, de la cucurbitine ou l'un de ses sels ou esters cosmétiquement acceptable ou un extrait de plante en contenant. Suivant une variante avantageuse, L'extrait de plante précité est un extrait de cucurbitacée tel que précédemment défini. Selon une variante de réalisation préférée, la cucurbitine ou l'un de ses sels ou esters est présente en une quantité efficace pour présenter une activité antiallergique, en particulier à une concentration de 0,001% à 10 % de préférence de 0,01% à 5% en poids de la composition totale. Selon un troisième aspect, la présente invention concerne une composition pharmaceutique, notamment dermatologique, caractérisée en ce qu'elle contient de la cucurbitine ou l'un de ses sels ou esters pharmaceutiquement acceptables en une quantité efficace pour présenter une activité antiallergique, en particulier pour prévenir ou traiter les manifestations allergiques. Suivant une variante, les compositions cosmétiques et pharmaceutiques précitées contiennent un extrait d'origine végétale tel que précédemment défini. Selon un quatrième aspect, la présente invention concerne encore un procédé pour diminuer le potentiel allergisant d'une composition cosmétique ou pharmaceutique, notamment dermatologique, caractérisé en ce qu'on incorpore à ladite composition une quantité efficace de cucurbitine sous forme libre ou sous forme de l'un de ses sels ou esters cosme iquement ou pharmaceutiquement acceptable, ou d'un extrait végétal en contenant tel que précédemment défini, de sorte que la composition finale présente un risque allergisant réduit. Dans le cadre de l'un quelconque des aspects précédents, la concentration pondérale préférée en cucurbitine, ou en ses sels ou esters pour les compositions à usage topique, est comprise entre 0,001 % et 10 %, de préférence encore entre 0,01 % et 5 %. Pour les compositions destinées à L'administration par voie générale (telle que voie orale, parentérale, rectale, inhalations,...) la concentration en cucurbitine n'est pas critique et peut atteindre par exemple 60 % de la compositon. La posologie chez L'homme sera généralement comprise entre 0,1 mg/kg/jour et 20 mg/kg/jour et de préférence entre 1 mg/kg/jour et 15 mg/kg/jour. Par ailleurs, on utilise généralement la cucurbitine naturelle, de forme lévogyre, ou ses sels ou esters. Des sources de cucurbitine lévogyre particulièrement intéressantes sont la pulpe et les pépins des cucurbitacées, en particulier des espèces Cucurbita pepo L., Cucurbita maxima Duch., Cucurbita moschata Duch. Cependant, on peut également utiliser la forme racémique de la cucurbitine ou de ses sels ou esters. Par ailleurs, la cucurbitine peut être utilisée sous forme pure, ou sous forme d'extraits, selon l'une quelconque des procédures d'extraction connues à L'homme de l'art. Des procédures d'extraction particulièrement intéressantes sont décrites dans la publication de Valentine H. MIHRANIAN et al. dans lloydia 1968, 31, (1) 23-29 qui est incorporée ici par référence, en particulier page 24. Une source préférée d'obtention de cucurbitine est constituée par la pulpe et surtout les pépins de l'espèce Cucurbita, telles que Cucurbita pepo L., Cucurbita maxima Duch. et Cucurbita moschata Duch. Selon un cinquième aspect, la présente invention couvre également un procédé de traitement de L'être humain ou d'un animal, caractérisé en ce qu'on administre audit être humain ou audit animal une quantité efficace de cucurbitine ou de l'un de ses sels ou esters pharmaceutiquement acceptables, ou d'un extrait végétal en contenant tel que précédemment défini, pour prévenir ou traiter les manifestations allergiques. En particulier, le traitement précité s'applique à la prévention ou au traitement symptomatique de L'asthme bronchique allergique ou de l'effort, du rhume des foins, des rhinites et trachéites spasmodiques, de l'urticaire et autres éruptions allergiques, de l'eczéma, rougeurs ou irritations cutanées d'origine allergique, des prurits, de l'oedème de Quincke, des conjonctivites allergiques, ainsi que des réactions allergiques d'origine médicamenteuse. Selon une variante de réalisation, on administre la cucurbitine ou l'un de ses sels ou esters pharmaceutiquement acceptables par voie topique à une concentration comprise de préférence entre 0,01% et 10% en poids. Selon une autre variante de réalisation, on administre la cucurbitine ou l'un de ses sels ou esters pharmaceutiquement acceptables par voie générale à une posologie chez l'homme comprise entre 0,1 mg/kg/jour et 20 mg/kg/jour et de préférence entre 1 mg/kg/jour et 15 mg/kg/jour. L'invention concerne encore un procédé de préparation d'une composition cosmétique ou pharmaceutique, notamment dermatologique, caractérisé en ce qu'on incorpore la cucurbitine ou l'un de ses sels ou esters cosmétiquement ou pharmaceutiquement acceptables, ou d'un extrait végétal en contenant tel que précédemment défini, dans un support, véhicule ou excipient cosmétiquement ou pharmaceutiquement acceptable. Selon une variante de réalisation, la cucurbitine ou un de ses sels ou esters cosmétiquement ou pharmaceutiquement acceptables est incorporé dans une formulation cosmétique ou pharmaceutique complète pour diminuer le risque allergisant de celle-ci. Selon une autre variante de réalisation, on prépare une composition à activité antiallergique. Des variantes de préparation résultent également de la description précédente. Suivant un mode particulier de réalisation de l'invention dans le cadre de l'un des aspects exposés plus haut, la composition précitée contenant La cucurbitine ou un de ses sels ou esters ou L'extrait de plante précité contient en outre des vésicules de type liposome. Selon une variante particulière, la cucurbitine, son sel ou ester, est encapsulé, au moins en partie, dans les vésicules de type liposome. Par l'expression "vésicule de type liposome", on entend aussi bien des phases lamellaires lipidiques hydratées que des vésicules lipidiques formées de lipides amphiphiles ioniques ou non-ioniques.Egalement, par l'expression "incorporer au moins en partie dans des vésicules de type liposome", on entend dans la présente description et les revendications que la cucurbitine, son sel ou ester est combiné à des vésicules de type liposome quelle que soit la forme de cette combinaison. Cependant, une combinaison préférée réside dans l'encapsulation de la cucurbitine, son sel ou ester dans des vésicules de type liposome. Mais il n'est pas nécessaire que la totalité soit incorporée ou encapsulée pour obtenir l'effet antiallergique recherché selon l'invention. On sait que les vésicules de type "liposome" sont préparées à partir de substances lipidiques. Le terme "lipidique" couvre toutes les substances comprenant une chaîne carbonée dite grasse, comportant généralement plus de 5 atomes de carbone, cette substance étant habituellement dénommée "lipide". Selon L'invention, on utilise à titre de lipide, pour former soit les phases lamellaires lipidiques, soit les vésicules de type liposome, des lipides amphiphiles, c'est-à-dire constitués de molécules possédant un groupe hydrophile indifféremment ionique ou non ionique et un groupe lipophile, ces lipides amphiphiles étant susceptibles de former des phases lamellaires lipidiques ou des vésicules de type liposome en présence d'une phase aqueuse. En particulier, parmi ces lipides, on peut citer : les phospholipides, les phosphoaminolipides, les glycolipides, les alcools gras polyoxyéthylènés, les esters de polyol éventuellement polyoxyéthylénés. De telles substances sont par exemple constituées par une lécitine d'oeuf ou de soja éventuellement hydrogénées, une phosphatidylcholine, une phosphatidylsérine, une sphyngomyéline, un cérébroside ou un stéarate de polyglycérol oxyéthyléné. L'incorporation dans des phases lamellaires lipidiques hydratées ou dans des liposomes des composés utilisés conformément à la présente invention peut etre réalisée selon des techniques de préparation connues, décrites par exemple dans le document US-A-4 508 703 et éventuellement en combinaison avec le document US-A-4 621 023. Selon un septième aspect, la présente invention couvre encore un procédé de synthèse de la cucurbitine, caractérisé en ce qu'on utilise comme produit de départ de La 1-benzyl-3-pyrrolidinone. Selon une variante de réalisation particulière de ce procédé de synthèse, on traite la 1-benzyl-3-pyrrolidinone avec une solution ammoniacale de chlorure d'ammonium et de cyanure de potassium, pour obtenir la (+)3-amino-1-benzyl-3-cyano-pyrrolidine. On transforme ensuite ce composé par hydrolyse acide ou basique en acide (+)3-amino-1-benzyl-3-pyrrolidinecarboxylique, et enfin on procède à une hydrogénolyse catalytique pour obtenir l'acide (+)3-amino-3-pyrrolidinecarboxylique ou (+)cucurbitine. Suivant une variante préférée, la solution ammoniacale précitée est une solution hydroalcoolique, l'alcool étant avantageusement de l'isopropanol ou du méthanol. Suivant une autre variante préférée, l'hydrolyse précitée est effectuée au moyen d'une solution aqueuse 6 N d'acide bromhydrique. Selon encore une autre variante, L'hydrogénolyse catalytique est effectuée dans l'eau sous hydrogène à pression atmosphérique en présence d'un catalyseur tel que du palladium sur charbon dispersé dans le milieu réactionnel aqueux. Selon un mode de réalisation préféré du procédé de synthèse, on laisse réagir la 1-benzyl-3-pyrrolidinone avec le chlorure d'ammonium et le cyanure de potassium dans un rapport molaire 1/4/4 à la température ambiante pendant au moins 48 h. Selon une autre variante de réalisation particulière, on sépare les isomères optiques du mélange racémique, selon toute technique de séparation connue de L'homme de l'art, et en particulier par l'intermédiaire de la préparation de diastéréoisomères. Le procédé de synthèse de la cucurbitine selon l'invention conduit à des rendements particulièrement élevés en cucurbitine racémique, en moyenne 2 à 3 fois plus élevés que ceux des procédés connus. D'autres buts, caractéristiques et avantages de la présente invention apparaîtront clairement à la lumière de la description explicative qui va suivre faite en référence à divers exemples de préparation de cucurbitine, ainsi qu'à divers exemples rapportant les résultats d'essais pharmacologiques, ainsi que divers exemples de formulation cosmétique ou pharmaceutique. Dans les exemples, les pourcentages sont donnés en poids, sauf indication contraire. Exemple 1 Synthèse de la cucurbitine sous forme de mélange racémique On procède de la manière suivante a) Synthèse de la (+)3-amino-1-benzyl-3-cyano-pyrrolidine 0,5 g de 1-benzyl-3-pyrrolidinone (2,85 mmol) dissous dans 3 ml de propanol-2 sont ajoutés à une solution de 0,741 g (11,4 mmol) de cyanure de potassium et de 0,615 g (11,4 mmol) de chlorure d'ammonium dans 7 ml d'ammoniaque à 28 %. Le mélange reste à température ambiante sous agitation pendant 3 jours. La solution est lavée avec 15 ml d'une solution de carbonate de potassium à 10 %, et extraite au dichlorométhane (3 xc 15 ml). Après séchage sur sulfate de magnésium et évaporation des solvants, on obtient une huile (0,475 g). On purifie sur colonne de silice avec dépôt solide. On élue avec un mélange éther-éther de pétrole 4 : 2. On obtient 0,402 g d'un solide beige (rendement : 70%) constitué par la 3-amino-1-benzyl-3-cyano-pyrrolidine ayant le spectre RMN suivant : RMN H, 300 MHz, CDCl3 1,8 (s large, 2H, NH2) ; 1,97 (ddd, 1H, J4 4, = 13,4, J4 5 = 8, J4,5,= 5,4) ; 2,5 (ddd, 1H, J4,4, = 8, J4,5, 8 J4',5' = 5,4) ; 2,64 t 1H, J2,2, = 9w4) ; 3,04 (d, 1H, J2' 2 = 9,4) ; 3 67 (s, 2H, CH2-C6H5) ; 7,33 (m, 5H, protons aromatiques). b) Synthèse de l'acide (+)3-amino-1-benzyl-3-pyrrolidinecarboxyli que ou (+)1-benzyl-cucurbitine On peut réaliser l'hydrolyse du composé précédemment obtenu soit en milieu acide, soit en milieu basique. Hydrolyse en milieu acide 0,3 g (1,49 mmol) de 3-amino-1-benzyl-3-cyano-pyrrolidinde, obtenue à l'étape a) dissous dans 5 ml d'acide bromhydrique à 48 %, sont portés à 40-50 C pendant 4 h. Après évaporation de L'acide, on purifie sur colonne de silice. Les impuretés sont éliminées par CH2Cl2/MeOH 10 % et l'aminoacide est sorti par MeOH/H20 15 %. Après élimination du méthanol, on décolore le composé au noir animal dans un minimum aqueux à chaud puis on lyophilise. On obtient un solide jaune foncé (rendement : 80%) constitué par l'acide (+)3-amino-1-benzyl-3-pyrrolidinecarboxylique sous forme mono- ou dibromhydrate ayant le spectre RMN suivant RMN H, 300 MHz, D2O 2,47-2,69 (m, 1H, H4) ; 2,75-2,91 (m, 1H, Ho'); 3,69-3,94 (m, 3H, H5, H5, , H2) ; 4,12 (d, J2,2, = 14,2, 1H, H2,) ; 4,58 (2d, J = 13,8, 2H, CH2-C6H5 > ; 7,62 (s, 5H, protonsaromatiques). Hydrolyse en milieu basique On dissout 280 mg (1,39 mmol) de 3-amino-1-benzyl-3cyano-pyrrolidine de l'étape a) dans 2 ml d'éthanol. On ajoute 5 ml d'une solution de soude à 10 % puis on porte à reflux pendant 5 h. Après refroidissement, on acidifie avec de L'acide bromhydrique à 48 %. On purifie sur colonne de silice : MeOH/H20 10 %. On décolore au noir animal puis on lyophilise. La présence des sels de bromure de sodium entraîne l'obtention d'un rendement supérieur à 100 %. Pour éliminer les sels présents, on prélève 200 mg de pyrrolidine que l'on porte à pH = 8 avec une solution de soude à 10 %. On charge la Duolite Cl avec une solution d'acide bromhydrique 2N. On élimine les sels avec de l'eau distillée. Pour décrocher la pyrrolidine, on utilise une solution d'acide bromhydrique 0,1 N. Après lyophilisation, on obtient 120 mg d'acide (+)3amino-1-benzyl-3-pyrrolidinecarboxylique (rendement : 40%). c) Synthèse de l'acide '+)3-amino-3-pyrrolidinecarboxylique ou (+) cucurbitine 300 mg de bromhydrate d'acide (+)3-amino-1-benzyl-3pyrrolidinecarboxylique obtenu à L'étape b) sont dissous dans 10 ml d'eau. On disperse 0,5 mg de charbon à 10 % de palladium, puis on place cette suspension en atmosphère d'hydrogène sous pression atmosphérique. L'agitation est maintenue pendant 18 h. Après filtration sur papier-filtre et lyophilisation, on obtient un solide jaune (98 %) constitué par L'acide (+)3-amino-3-pyrrolidinecarboxylique ou (+)cucurbitine ayant le spectre RMN suivant RMN H, 300 MHz, D20 2,45 (m, 1H, H4) ; 2,69 (m, 1H, H4,) ; 3,61 (d, 1H, J2,2' = 13,4) ; 3,67-3,78 (m, 2H, H5, H5,) ; 4 ( 1H, J21,2 = 13,4). Exemple 2 Optimisation du rendement de la synthèse de la (+)cucurbitine On opère comme indiqué comme à l'exemple 1, en choisissant à l'étape b) l'hydrolyse par l'acide bromhydrique 6 N, en faisant toutefois varier la proportion des réactifs de l'étape a). Les rendements obtenus figurent au tableau I ci-après. TABLEAU I Nombre équivalents moles Conditions Rendement N.B.P NH4Cl KCN expérimentales CN COOH de l'étape a) 1 1-1 1 6 h température ambiante * 10 % 1 1-1 1 4 h 40 -50 * 4 10 % 1 4 4 4 h 40 -50 * 20 % 1 8 8 4 h 40 -50 * 20 % 1 4 4 48 h température ambiante 66 % 44 % 1 4 4 72 h température ambiante 70 % 49 % 1 4 4 4 84 h température ambiante 70 % 56 % N.B.P. : 1-benzyl-3-pyrrolidinone * : amino-nitrile non isolé CN : rendement en 3-amino-1-benzyl-3-cyano-pyrrolidine COOH : rendement global en acide 3-amino-3-pyrrolidinecarboxy lique La dernière colonne du tableau I contient les rendements en (+)cucurbitine par rapport aux réactifs de départ. On observe que les rendements sont maximums si la réaction est menée à température ambiante pendant une durée supérieure à 48 h en utilisant des proportions 1/4/4 entre les réactifs : 1benzyl-3-pyrrolidone, chlorure d'ammonium et cyanure de potassium. On a par ailleurs observé que l'hydrolyse au moyen de l'acide bromhydrique conduisait également à de meilleurs rendements que lorque l'on utilise de L'acide chlorhydrique, à la même concentration, comme agent d'hydrolyse. Exemple 3 Séparation des isomères optiques de la cucurbitine La méthode de séparation, connue en elle-même, est basée sur la préparation de dérivés diastéroisomères par couplage de la (+)cucurbitine avec certains réactifs optiquement actifs, après protection de la fonction acide par estérification et de la fonction amine cyclique. Chaque forme de ces stéréoisomères, correspondant à l'un ou l'autre isomère de la cucurbitine, sera isolée par chromatographie, notamment par chromatographie liquide à haute performance ou sur colonne de silice.Pour régénérer ensuite les deux énantiomères de la cucurbitine, il suffit de saponifier l'ester de protection puis d'hydrolyser pour libérer la fonction acide, et de libérer la fonction amine, par exemple par hydrogénolyse comme décrit à l'exemple 1 dans Le cas où la fonction amine était protégée par substitution avec un radical benzoyle. Comme réactifs pour la présente méthode, on peut utiliser des composés optiquement actifs lévogyres S, tels que - le chlorure de camphanyle-1S, - l'acide (S)--(-) - -méthoxy--tri f luorométhyl-phényl- acétique, - la N-(tertio-butoxyzarbonyl)-L-phénylalanine. Le présent exemple décrit la résolution du racémique de la cucurbitine au moyen du couplage avec le chlorure de camphanyle1S. a) Protection de la fonction acide de La (t)1-benzyl-cucurbitine : synthèse de son ester méthylique 0,1 g de (+)l-benzyl-cucurbitine (0,20 mmol), obtenu à l'étape b de l'exemple 1, est ajouté lentement à une solution glacée de chlorure de thionyle (0,28 mmol) et de méthanol (2 ml). La température de la reaction ne doit pas s'élever au-dessus de -50C. Le mélange est mis sous agitation à OOC pendant 2 h, puis ramené à température ambiante pendant deux jours. Après évaporation, on purifie sur colonne de silice avec dépôt solide. (Eluant CH2Cl2/MeOH de 10 à 50 %). On obtient un produit jaune avec un rendement à 70 %, constitué par L'ester méthylique de la (+)1-benzyl-cucurbitine. b) Couplage avec le chlorure de camphanyle-îS C-) On neutralise 1 mol d'ester méthylique de la (+)1-benzylcucurbitine en solution dans 1,5 ml de chlorure de méthylène avec 1 mole de triéthylamine. On ajoute 1,1 équivalent de 1S (-) chlorure de camphanyle. On laisse sous agitation à température ambiante pendant 16 h. On purifie sur colonne de silice avec dépôt solide (éluant : CH2Cl2/MeOH 10 %). La séparation des diastéréoisomères a été effectuée par H.P.L.C. sur diverses colonnes notamment des ZorbaR3NH2 greffées. Exemple 4 Préparation d'un extrait de pulpe de Cucurbita pepo On coupe en deux des fruits frais de Cucurbita pepo, on enlève les pépins qui peuvent servir à la fabrication des extraits de pépins. On broie la pulpe ainsi obtenue que l'on lyophilise. On récupère la poudre que l'on dégraisse à l'éther de pétrole à raison de 1 I pour 100 g de poudre. On récupère l'insoluble par filtration qui constitue L'extrait de pulpe de Curcurbita pepo recherché. On dose la proportion de cucurbitine dans cet extrait par H.P.L.C. et l'on obtient une concentration de 0,03% en poids de cucurbitine dans l'extrait sec dégraissé. Exemple 5 Préparation d'un extrait de graines de Cucurbita pepo On broie 1,5 kg de graines préalablement décortiquées de Cucurbita pepo. La poudre obtenue est soumises trois fois à une extraction à l'hexane (3 litres, 2 litres et 1,8 litre), pour éliminer les matières grasses. Le gâteau séché obtenu est extrait par une solution aqueuse d'acide chlorhydrique maintenue à environ pH 4. Cette extraction est faite en trois fois : deux à température ambiante - environ 220C -, et la troisième à 700C. A chaque fois, le maintien en contact du gâteau-solution avec la solution chlorhydrique (2 litres la première fois et 2,5 litres les deux fois suivantes) est de 24 h. Après essorage, on élimine le résidu solide et on recueille la phase aqueuse que l'on évapore partiellement et que l'on centrifuge. Les culots de centrifugation sont lavés à l'eau distillée, puis éliminés. Les eaux de lavage sont réunies aux concentrats de centrifugation. La fraction aqueuse est reconcentrée, puis traitée poids pour poids avec de l'éthanol. Il se forme un précipité blanc que l'on élimine par centrifugation. Le surnageant hydro-alcoolique, que l'on neutralise par exemple avec de la soude, constitue un extrait contenant de la (-)-cucurbitine, que l'on peut utiliser en l'état. On peut aussi évaporer l'alcool, puis atomiser la solution aqueuse obtenue, de manière à obtenir une poudre titrant 3 à 5 % en (-)-cucurbitine, selon les lots de graines utilisés. Exemple 6 Mise en évidence de l'activité inhibitrice de la formation d'histamine par la cucurbitine 1 - A par un test enzymatique Ce test est basé sur L'action inhibitrice de la cucurbitine sur l'enzyme histidine décarboxylase (HDC) qui transforme L'histidine en histamine, par rapport à celle de la tritoqualine, qui est un inhibiteur connu de L'HDC (voir Carpi C., Maggi G.C. Bull. Soc Ital. Sper. 1968, 44 (6 543-4), et qui est utilisée thérapeutique comme hypohistaminémiant sous le nom de Hypostamine L'activité inhibitrice sur l'HDC peut être aisément réalisée par un dosage colorimétrique sur la base de la réaction chimique suivante Dosage colorimétrique I 1 CH,-CH-COOH HN CHz-CH-COOH N D C NM2 enzyme 2 HNN 2 enzyme HN N + CO L-Histidine dosée 2 Histamine - 1- CH2CH2NHz diamine oxydase 77CH2-CHO HN N enzyme 'HN iHZ02 + NH3 Histamine auxiliaire H2O2 + MBTH Peroxydase Coloration bleue DMAB enzyme indicatrice # = 595 nm. MBTH = 3-méthyl-2-benzothiazolinone hydrazone DMAB = 3-(diméthylamino)benzoic acid En pratique, on observe que la formation de la coloration bleue est proportionnelle à la concentration en histidine consommée. On a ainsi pu définir des vitesses initiales de réaction et établir des courbes dites de Mickaelis comme décrit dans Fundamentals of Enzymology, 2nd Ed. Oxford Univ. Press, 1989. La vitesse initiale est exprimée en variation d'absorbance par minute. Les résultats obtenus avec diverses concentrations initiales d'histidine, à savoir à 132 nmol, 265 nmol, et 530 nmol, respectivement sans effecteur, avec tritoqualine comme inhibiteur d'HDC connu, et avec la cucurbitine sous forme racémique comme inhibiteur selon l'invention sont répertoriés au tableau II ci-apres et font l'objet de la courbe de Mickaelis, objet de la figure 1. Tableau II Histidine 132 nmol 265 nmol 530 nmol Sans effecteur 0,062 0,089 0,1132 Tritoqualine 0,021 0,0374 0,0604 (art antérieur) Cucurbitine 0,013 0,0242 0,042 (invention) Il ressort clairement du tableau II et de ta courbe de Mickaelis objet de la figure 1, que la cucurbitine est un inhibiteur d'HDC beaucoup plus puissant que la tritoqualine, ce qui constitue un résultat tout à fait surprenant pour un homme de l'art. 1 - B par un dosage RIA On peut également mettre en évidence l'activité antihistaminique de la cucurbitine par un dosage radioimmunologique (Radio Immuno Assay ou "RIA") de la manière suivante. Ce dosage a lieu en dosant l'histamine directement produite sous l'action de l'enzyme HDC, par la méthode RIA, bien connue à l'homme de l'art, et notamment décrite dans la notice d'utilisation d'un kit de dosage dénommé HISTAMINE Radioimmunoassay kit (Cat. * 1302) commercialisé par la Société IMMUNOTECH (Marseille-France). On dose au cours du temps la quantité d'histamine libérée (en nanomoles) pour une concentration de 16.1û 3 molaire d'histidine dans un tampon phosphate à pH 6,3, respectivement sans effecteur, avec la tritoqualine comme effecteur de comparaison et avec de la cucurbitine racémique de synthèse comme agent anti-histaminique selon L'invention. La tritoqualine et la cucurbi tine sont utilisées à la concentration de 2.10 3 molaire. Les résultats obtenus exprimés en nanomoles d'histidine libérée sont répertoriés au tableau III ci-après et font Objet de la courbe de la figure 2 où lton a indiqué en ordonnées le nombre de nanomoles d'histamine libérée et en abscisses le temps exprimé en minute. La courbe sans effecteur est tracée en trait continu, ta courbe obtenue avec la tritoqualine est tracée en trait mixte et la courbe obtenue avec la cucurbitine est tracée en pointillés. TABLEAU III Temps 5 min** 10 min** % I*(à 5 min) % I* (à 10 min) Sans effecteur 32,66 140,79 0 0 Tritoqualine 16,48 49,27 49 65 Cucurbitine 14,85 1 38,29 55 73 * I = Inhibition ** = nanomoles d'histamine libérée On voit clairement à partir du tableau III que la quantité d'histamine libérée est nettement la plus faible en présence de cucurbitine. Les résultats obtenus par la méthode RIA confirment donc que la cucurbitine a une activité inhibitrice de la formation d'histamine nettement plus puissante que la tritoqualine au bout de quelques minutes. Divers exemples de formulation de compositions cosmétiques ou pharmaceutiques, notamment dermatologiques selon l'invention sont les suivants : Exemple 7 Comprimés Par comprimé pour administration orale : - (+) cucurbitine 100 mg - amidon 38 mg - lactose 75 mg - talc 10 mg - autres excipients pour comprimés (dont stéarate de magnésium) qsp 250 mg Indications : traitement préventif et curatif des manifestations allergiques, notamment cutanées et respiratoires. Posologie : 1 à 10 comprimes par jour chez l'adulte. Diminuer les doses par 2 chez l'enfant jusqu'à 15 ans. Exemple 8 Poudre pour aérosol Pour 100 g dans un flacon pressurisé - (+)cucurbitine 3g - mannitol 1g - gaz pulseurs 96 g Indications : traitement préventif et curatif de toutes manifestations allergiques respiratoires telles que asthme bronchique et bronchites asthmatiformes. Posologie : administration intrabronchique, à raison de 4 à 6 aspirations par jour en moyenne. Exemple 9 Emulsion adoucissante pour peaux sensibles extrait de pépins selon L'exemple 5 titrant 0,5 X en (-) cucurbitine 10 g - émulsion cosmétique classique pour peaux sensibles (alcools gras, alcools gras polyoxy éthylénés huile minérale, palmitate d'isopropyle, glycérine, gélifiant, conservateurs, parfums, eau) qsp 100 g Exemple 10 Fond de teint hypoallergénique extrait de pulpe de cucurbita pepo de l'exemple 4 10 g - composition classique pour fond de teint (esters gras, squalane, lécithine de soja, silicone volatile, propylène glycol, gomme xanthane, filtre solaire, pigments, conserva teurs, parfum, eau) qsp 100 g Exemple Il Mascara anti-irritant - (+)-cucurbitine 1,0 g - bleu outre-mer 9,0 9 - alcool hexadécylique 7,4 g propyleneglycol 9,0 g - acide stéarique 11,3 g - monostéarate de glycérol 4,4 g - triéthylamine 3,6 g - conservateur 0,3 g - eau qsp 100 g REVENDICATIONS 1. Procédé de synthèse de la cucurbitine, caractérisé en ce qu'on utilise comme produit de départ de la 1-benzyl-3-pyrrolidinone. 2. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'on traite la 1-benzyl-3-pyrrolidinone avec une solution ammoniacale de chlorure d'ammonium et de cyanure de potassium, en obtenant la (+) 1-benzyl-3-amino, 3-cyano-pyrrolidine que l'on transforme ensuite en acide (+) 3-amino-3-pyrrolidinecarboxylique par hydrolyse acide ou basique suivie d'une hydrogénolyse catalytique. 3. Procédé selon la revendication 1 ou 2, caractérisé en ce qu'on réalise la réaction de la 1-benzyl-3-pyrrolidinone avec le chlorure d'ammonium et le cyanure de potassium dans un rapport molaire 1/4/4 à la température ambiante pendant au moins 48 h. 4. Procédé selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisé en ce qu'on isole L'isomère Lévogyre de l'acide 3-amino-3-pyrrolidinecarboxylique à partir du mélange racémique, en particulier par l'intermédiaire de la préparation des di astéréoi somères.