FR 2674755 A1 19921009 FR 9104194 A 19910405 Nouvelles compositions médicamenteuses immunostimulatrices La présente invention a pour objet de nouvelles compositions médicamenteuses immunostimulatrices. La plupart des médicaments immunostimulateurs actuellement disponibles ne possèdent pas, pour la plupart, une activité importante in vivo, présentent parfois des effets secondaires comme c'est le cas pour la lévamisole ou nombre d'interférons, ou voient leur activité rapidement décroître comme certains facteurs thymiques.On retiendra néanmoins que les principaux immunostimulateurs appartiennent aux classes non limitatives suivantes: - bactéries et dérivés plus ou moins purifiés, par exemple, fractions de divers germes (Imocur des Laboratoires Fournier), glycoprotéines extraites de klebsiella pneumoniae (Biostim des Laboratoires Cassenne), ou ribosomes bactériens et protéoglycanes membranaires (Ribomunyl des Laboratoires Inava); - polypeptides biologiques: interférons (IFN), lymphokines, facteurs thymiques, immunoglobulines (Ig), - immunostimulants synthétiques: Imuthiol (diéthyl thiocarbamate de sodium), Inosiplex (ou Isoprinosine des Laboratoires Delalande). A cette liste non exhaustive de types et selon des études récentes, on peut ajouter des micronutriments qui sont considérés comme présentant des activités immunostimulantes; on peut citer entre autres: - des éléments traces ou oligoéléments, tels que le zinc, le cuivre, le fer, le manganèse ou le sélénium; - des vitamines, par exemple E, A, B6,B9 ou omega; - des acides aminés tels que l'alanine (Ala), la glycine (Gly), la thréonine (Thr) ou l'acide aspartique (Asp). Les divers types d1immunostimulants classiques ne présentent pas d'activité suffisamment efficace et polyvalente, et les micronutriments ne semblent pas apporter de résultats améliorés par rapport à ces derniers. On rappellera néanmoins les propriétés essentielles des principaux composants auxquels la présente invention fait appel. I1 est généralement admis que les micronutriments ci-après mentionnés sont considérés comme immunostimulants bien que l'expérience montre qu'ils se comportent plutôt en immunomodulateurs. 1 Eléments-traces essentiels. 1,1 Zinc Il joue un rôle important dans le métabolisme cellulaire (division cellulaire, réplication et transcription de l'acide désoxyribonucléique (ADN) en s'intégrant dans les enzymes telles que l'ADN-polymérase; son action immunitaire s'exerce à trois niveaux: au niveau du tissu lymphoïde: sa carence entraîne l'atrophie réversible du thymus, de la rate et des ganglions lymphatiques; son administration stimule la sécrétion de la thymuline; au niveau de l'immunité cellulaire: sa carence dans le sang réduit la numération lymphocytaire, notamment T, la réponse proliférative des lymphocytes aux antigènes et aux mitogenes, l'activité de cellules tueuses naturelles ( natural killers ou NK), tandis qu'augmente l'hypersensibilité cutanée, et la cytotoxicité des cellules spléniques; au niveau de l'immunité humorale: sa carence réduit la production des lymphokines et des immunoglobulines IgG et IgM, et la sécrétion de la thymuline dans le serum. 1,2 Manganèse Le manganèse Mn2+ non seulement favorise une production normale d'anticorps, mais est même indispensable, ainsi que pour l'activité normale des enzymes nucléases et polymérases notamment l'ADN-polymérase; il influence l'immunocompétence par action sur les fonctions neutrophiles et sur les macrophages; 1,3 Sélénium I1 stimule les réponses anticorps T-dépendantes et celles d'hypersensibilité retardée; il augmente le titre des anticorps; il exerce une action antiinflammatoire et antiradicalaire. 1,4 Cuivre Cu2T Il favorise l'efficacité, la synthèse et la libération d'interféron, ainsi que la mobilité des leucocytes phagocytants, et stimule l'activité antiinfectieuse. 1,5 Fer Fe2+ I1 favorise également l'efficacité de l'interféron et son effet sur les radicaux libres. 2 Vitamines essentielles 2,1 Vitamines liposolubles 2,11 Vitamine A Le p-carotène stimule les réponses anticorps, la prolifération lymphocytaire et la résistance antiinfectieuse, tant en fréquence qu'en sévérité; il exerce un effet antiradicalaire et son rôle immunologique est considéré comme capital. 2,12 Vitamine E L'a-tocophérol stimule également les réponses anticorps et celles d'hypersensibilité retardée, la prolifération lymphocytaire et la résistance antiinfectieuse; il joue un râle dans le piégeage des radicaux libres. Cofacteur du selenium, ces deux micronutriments potentialisent leurs effets lorsqu'administrés simultanément. 2,2 Vitamines hydrosolubles 2,21 Vitamine B6 La pyridoxine favorise la production de thymuline, la normalisation des réponses lymphocytaires, la stimulation des réponses d'hypersensibilité retardée et des réponses anticorps, notamment postvaccinales, ce qui importe d'autant plus que certains stimulants immunitaires comme le Biostim exercent un effet voisin de celui des vaccins. La vitamine B6 est, de plus, le cofacteur du zinc, donc indispensable à son action. 2,22 Vitamine B9 ou Bc ou M L'acide folique normalise les réactions cutanées aux antigènes et les réponses lymphocytaires aux mitogènes; Sa carence ou celle en folates, notamment chez les sujets atteints du SIDA, entraîne des troubles neurologiques. 3 Acides aminés essentiels 3,1 Alanine Elle augmente la reproduction lymphocytaire et contribue à la croissance thymique. 3,2 Glycine Sous forme de diméthylglycine (DMG),elle favorise la réponse anticorps, et, en particulier, elle multiplie par quatre cette réponse aux vaccins pneumococciques; elle augmente également la réponse immunitaire cellulaire par stimulation du métabolisme des globules blancs. 3,3 Thréonine Elle stimule la production des anticorps T et l'accroissement des immunoglobulines IgG et IgM; 3,4 Acide aspartique L'acide aspartique, notamment sous forme d'aspartate favoriserait la prolifération et la différenciation du thymus et de la moelle osseuse; il stimule la survie après irradiation totale avec régénération des organes producteurs d'érythrocytes, ainsi que le métabolisme de 1'ADN. I1 convient de noter que même si certaines associations sont connues pour faire jouer aux composants un rôle dit de cofacteur (zinc/vitamine B6, zinc/manganèse, sélénium/vitamine E, par exemple), et comme cela a été souligné plus haut, les résultats in vivo ne sont généralement pas à la hauteur de ceux que l'on pouvait escompter sur la base des expérimentations in vitro, ou sur l'animal. Or l'expérience a montré que, par un choix judicieux de composants micronutriments et immunostimulants, même des immunostimulants classiques, on pouvait parvenir à un effet de synergie surprenant se traduisant notamment par une potentialisation des effets des divers constituants et une efficacité largement accrue par rapport aux associations antérieures. Pour mieux faire comprendre les caractéristiques techniques et les avantages de la présente invention, on va en décrire des exemples de réalisation étant bien entendu que ceux-ci ne sont pas limitatifs quant à leur mode de mise en oeuvre et aux applications qu'on peut en faire. Les compositions ci-dessous sont données par capsule molle. COMPOSANTS Exemple 1 Exemple 2 Exemple 3 Exemple 4 Glycoprotéïne anhydre 1 mg 2 mg Fraction bactérienne 20 mg 20 mg Cuivre Cu2+ 2 mg 4 mg Fer Fe2+ 2 mg 8 mg Manganèse 2 mg 10 mg Sélénium 25 pg 200 pg Zinc 10 mg 50 mg Vitamine A 3000 UI 30000 Ul Vitamine B6 0,8 mg 2 mg Vitamine B9 15 mg 75 mg Vitamine E 10 mg 40 mg Alanine 40 mg 60 mg Aspartate de magnésium 50 mg 50 mg 100 mg Diméthylglycine 50 mg 90 mg Thréonine 50 mg 50 mg 350 mg Excipients La glycoprotéïne utilisée dans les exemples ci-dessus est, de préférence, celle extraite de Klebsella pneumoniae La fraction bactérienne est constituée, de préférence sous forme lyophilisée à partir de Diplococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae, Klebsiella ozaenae, Klebsiella pneumoniae, Neisseria catharralis, Staphylococcus aureus, Streptococcus viridans, Streptococcus pyogenes. Les compositions ci-dessous sont données par comprimé sécable. COMPOSANTS Exemple 5 Exemple 6 Exemple 7 Exemple 8 Inosine+acédobène +dimépranol 500 mg 500mg Ribosomes de Klebsiella pneumoniae +Diplococcus pneumoniae +Streptococcus pyogenes +Hemophilus influenzae 3 mg 3 mg Cuivre Cu2+ 2 mg 4 mg Fer Fe2+ 2mg 8 mg Manganèse 1 mg 8 mg Sélénium 10 pg 300 pg Zinc 10 mg 100 mg Vitamine A 300 UI 30000 UI Vitamine B6 1 mg 3 mg Vitamine B9 15 mg 75 mg Vitamine E 4 mg 40 mg Alanine 20 mg 60 mg Aspartate de magnésium 50 mg 50 mg 90 mg Diméthylglycine 50 mg 90 mg Thréonine 50 mg 50 mg 350 mg Excipients Dans les huit exemples, les protocoles de fabrication et les excipients peuvent être de tout type classique et adéquat permettant d'obtenir des produits sous formes galéniques pharmaceutiquement acceptables.Ces produits peuvent généralement être administrés à raison de deux doses unitaires par jour prises ensemble ou séparément matin et soir pendant un mois ou éventuellement plus, selon les cas et au gré du prescripteur, en fonction du retour à la normale des constantes biologiques mesurant le pouvoir immunitaire. On a pratiqué les expérimentations suivantes portant sur les compositions des huit exemples ci-dessus mises sous forme de solutions, l'eau, ou du serum physiologique pour les essais in vivo, une solution de glycoprotéïnes extraites de Klebsiella pneumoniae et purifiées (référence A),et une solution d'extraits de germes associés et tués, ensuite purifiée (référence B). Première expérimentation: Stimulation des propriétés phagocytaires de polynucléaires et de macrophages chez la souris. Les solutions sont administrées pendant un mois en adaptant les doses journalières au prorata des poids des quatre cent quarante souris sélectionnées (quarante par solution à expérimenter). Sur les polynucléaires, d'une part, et les macrophages, d'autre part, on a pu effectuer les constatations suivantes: La solution A présente une activité nettement plus importante que celle du sérum aussi bien sur l'ingestion de particules de latex par les cellules que sur leur chimiotactisme; La solution B, bien que plus active que le sérum l'est moins que la solution A sur l'ingestion de particules de latex, mais approximativement aussi efficace sur le chimiotactisme; Pour chacune des solutions correspondant aux exemples 1 à 8, l'efficacité est nettement supérieure dans tous les cas, aussi bien sur lechimi.otactisme que sur l'ingestion de particules de latex, et aussi bien en ce qui concerne les macrophages que les polynucléaires. Ces résultats sont repris dans le tableau récapitulatif ci après. Deuxième expérimentation: Etude de la prolifération lymphocytaire chez l'homme et de l'immunité résultante à la médiation cellulaire. Les lots de quarante souris de chacune des solutions A, B, et des exemples 1 à 8 présentent une prolifération plus importante que celle du lot témoin, cependant, la solution A est un peu plus active que la solution B, mais restant nettement inférieure à celles des solutions correspondant aux exemples 1 à 8, ce qui montre une immunité à la médiation cellulaire résultant de l'application des compositions conformes à l'invention. Troisième expérimentation: Protection de la souris contre l'infection induite par l'injection. On injecte de l'Haemophilus influenzae aux souris et l'on compte les décès. Le sérum physiologique entraîne un mortalité à 100% (quarante souris), la solution A 27,5% de décès (11 souris), la solution B 35% de décès (14 souris) plus rapides qu'avec la A et les solutions résultant des exemples 1 à 8 une moyenne de 7,5% de décès (3 souris) relativement tardifs, ce qui démontre une augmentation de la capacité de réponse immunitaire. On peut résumer ces résultats comme porté dans le tableau qui suit où 0=nul +=faible ++=moyenne +++=forte Stimul.des propriétés Prolifér. Protection phagocytaires des lymphocyt. c/l'infect. polynucl. et macroph. chez Haemophilus l'Homme % de décès ingestion chimiotact. part.latex témoin 0 0 0 100% solution A ++ ++ ++ 27,5% solution B + ++ + 35% sol.ex.1 +++ +++ +++ 7,5% sol.ex.2 +++ +++ +++ 7,5% sol.ex.3 +++ +++ +++ 5% sol.ex.4 +++ +++ +++ 10% sol.ex.5 +++ +++ +++ 5% sol.ex.6 I +++ +++ +++ 7,5% sol.ex.7 +++ +++ +++ 7,5% sol.ex.8 +++ +++ +++ 10% En fait l'expérience montre que l'on obtient des résultats probants dans les gammes de teneurs suivantes: : Glycoprotéïne anhydre de 0,5 à 2 mg Fraction bactérienne de 10 à 50 mg Inosine+acédobène +dimépranol de 100 à 900 mg Ribosomes de Klebsiella pneumoniae +Diplococcus pneumoniae +Streptococcus pyogenes +Hemophilus influenzae de 1 à 20 mg Cuivre Cu2+ de 1 à 10 mg Fer Fe2+ de 1 à 10 mg Manganèse de 0,5 à 10 mg Sélénium de 10 à 300 pg Zinc de 5 à 150 mg Vitamine A de 300 à 40 000 UI Vitamine B6 de 0,5 à 5 mg Vitamine B9 de 5 à 100 mg Vitamine E de 2 à 150 mg Alanine de 10 à 500 mg Aspartate de magnésium de 10 à 500 mg Diméthylglycine de 10 à 250 mg Thréonine de 10 à 400 mg Les compositions médicamenteuses immunostimulatrices conformes à l'invention se révèlent donc à propriétés très renforcées par rapport à celles de l'art antérieur, grâce au fait qu'elles contiennent au moins un immunostimulateur associé avec au moins un micronutriment, les immunostimulateurs comprenant des éléments bactériens (tels que des bactéries proprement dites, des fractions de germes, des glycoprotéines ou des ribosomes bactériens et des protéoglycanes membranaires), des polypeptides biologiques et/ou des immunonostimulants de synthèse, les micronutriments comprenant, de leur côté, des oligoéléments, des vitamines et/ou des acides aminés essentiels. REVENDICATIONS 1 Composition médicamenteuse immunostimulatrice à propriétés renforcées caractérisée par le fait qu'au moins un immunostimulateur est associé avec au moins un micronutriment; 2 Composition selon la revendication 1 caractérisée par le fait que les immunostimulateurs comprennent des éléments bactériens; 3 Composition selon la revendication 2 caractérisée par le fait que les éléments bactériens sont choisis parmi les bactéries proprement dites, des fractions de germes, des glycoprotéines ou des ribosomes bactériens et des protéoglycanes membranaires; 4 Composition selon l'une des revendications 2 ou 3 caractérisée par le fait que les immunostimulateurs comprennent des polypeptides biologiques; 5 Composition selon l'une des revendications 2 à 4 caractérisée par le fait que les immunostimulateurs comprennent des immunonostimulants de synthèse; 6 Composition selon l'une des revendications 1 à 5 caractérisée par le fait que les micronutriments comprennent des oligoéléments; 7 Composition selon l'une des revendications 1 à 6 caractérisée par le fait que les micronutriments comprennent des vitamines; 8 Composition selon l'une des revendications 1 à 7 caractérisée par le fait que les micronutriments comprennent des acides aminés essentiels; 9 Composition selon l'une des revendications 1 à 8 caractérisée par le fait qu'elle contient au moins deux des constituants suivants dans la gamme de teneurs indiquées par unité: Glycoprotéine anhydre de 0,5 à 2 mg Fraction bactérienne de 10 à 50 mg Inosine+acédobène +dimépranol de 100 à 900 mg Ribosomes de Klebsiella pneumoniae +Diplococcus pneumoniae +Streptococcus pyogenes +Hemophilus influenzae de 1 à 20 mg Cuivre Cu2+ de 1 à 10 mg Fer Fe2+ de 1 à 10 mg Manganèse de 0,5 à 10 mg Sélénium de 10 à 300 pg Zinc de 5 à 150 mg Vitamine A de 300 à 40 000 UI Vitamine B6 de 0,5 à 5 mg Vitamine B9 de 5 à 100 mg Vitamine E de 2 à 150 mg Alanine de 10 à 500 mg Aspartate de magnésium de 10 à 500 mg Diméthylglycine de 10 à 250 mg Thréonine de 10 à 400 mg