FR 2649102 A1 19910104 FR 8908615 A 19890628 La présente invention concerne ae nouveaux composés chimiques et en particulier un métabolite secondaire a'une souche de Streptomyces, appelé CL22T et ses dérivés utiles notamment comme herbicide. Une voie nouvelle de recherche de molécules à activité herbicide s'est développée voici quelques années, qui consiste en l'utilisation des métabolites bactériens comme pesticides. Les antibiotiques sont généralement mieux dégradés par la microflore du sol que les pesticides de synthèse, de plus ces molécules peuvent servir de base à l'ingéniérie chimique pour synthétiser des molécules nouvelles.Les Actinomycetes, bactéries filamenteuses, sont connus pour synthétiser un grand nombre de métabolites secondaires présentant des activités variées, c'est à partir du moût de fermentation ae ces bactéries qu'ont été isolés par exemple le bialaphos (US-A-4, 309 208) et la phosalacine (EP 0134, 113) qui sont ceux antibiotiques tripeptidioues contenant un groupement phosphinothricine, et l'antibiotique DSM1471 EP 0022, 910) qui appartient au groupe des glutarimides. La présente invention concerne plus particulièrement un métabolite CL22T produit par un microorganisme du genre Streptomyces, ainsi que ses dérivés, qui possèdent notamment une activite herbicide ae contact principalement sur les plantes dicotylédones. '1 s'agit des composés de formule générale t dans laquelle : m, n et p peuvent etre respectivement égaux à O ou à 1 avec n + p = 1 et si n = 0, (B')n = H et si p = O, (R') p = H ; les liaisons sym bolysées par ÀAr peuvent désigner une configuration Z ou E. . R1 représente un atome d'hydrogène ou un groupement alkyle C1-6 linéaire ou ramifié, éventuellement substitué par un ou plusieurs groupements hydroxyle, éther d'alkyle C1-6, amine primaire ou amine secondaire alkylée C1-6. .R2 et R3 représentent un groupement hydroxy, amine, halogène, thiol, cétone ou un radical correspondant à un de rive des fonctions amide ou hydroxyle tels éthers d'alkyle C1-6 linéaire ou ramifié, de phényle, d'alkyl C1-6 phényle, d'alkyle C1-6 hétéroaryle ou d'alkyle C1-6 hétérocycloalkyle ; les esters d'alkyle C1-6, de phényle, d'alkyle C1-6 hétéroaryle, d'alkyle C1-6 hétérocycloalkyle C3-5, sulfate ou pnosDnorique ; les carbonates c'alkyle ou de phényle ; ces substituantsd pouvant être eux-mêmes substitués par un ou plusieurs groupements hydroxyle, éther d'alkyle C1-6, amine primaire ou secondaire alkylée C1-6, thiol, nalogène ou nitré. R', R", R"' et R"" représentent indépendamment les uns des autres un hydrogène ou un groupement allyle C 6 . R4 représente : - C@-NR5R6 -CH@-NR5R6 - @@-n@CH@R5 - C # - C@R5,=NR6 - NR5R6 @@ - COOR5 - OR5 avec R5 et R6 pouvant représenter indépendamment l'un ou @'autre un hydrogène, un alkyle C1-10, un alcényle c2-10 ou un alkyle C1-10 hétérocycloalkyle C3-5, les chaînes alkyles de R5 et R6 étant éventuellement interrompues par ces atomes d'oxygène, ainsi que les cérivés cyclisés des fonctions amide et hydroxyle. Parmi ces composés herbicides, il faut citer plus particulière ment les composés de formule (Ia) cans laquelle m, n et p et es liaisons symbolisées par # ont les mêmes significations que celles cécrites dans la formule (I) (R')n ou (R') représente respectivement un hydrogene si n = O ou p = O et un groupement méthyl si n = 1 ou p = 1. R@' représente un hydrogène ou un groupement alkyle C1-3 2 et R'3 représentent un hydrogène, des groupements alkyle C1-6 linéaire ou ramifié éventuellement substitué, phényle, acyle C2-6 éventuellement substitué, carDonate C2-6 ou pnényle éventuellement substitue, sulfate éventuellement alkylé ou phosphate éventuellement alkylé. R'4 représente - CO-NR'5R'6 -C # N - COOR'5 - NR'5R'6 ou - CH2NR'5R'6 - NR'5-CO-cyclisé avec la fonction hydroxyle représentée par R'3, avec R'5 et R'6 représentant indépendamment l'un ae l'autre un hydrogène, des groupements alkyles C16 éventuellement C1-6 substitués par un ou plusieurs groupements thiol, hydroxyle ou homologues. Les composés selon la présente invention peuvent être préparés par différentes voies de synthèse chimique en particulier à partir au dérivé CL22T (1), ce dérivé CL22T étant lui-meme obtenu par fermentation. Plus particulièrement la présente invention se rapporte à un procédé de purification des composés, caractérisé en ce que l'on effectue a) la mise en culture d'un microorganisme du genre Streptomyces capable de produire un composé représenté par la formole générale (I) tel que le composé (1) b) la purification dudit composé, c) éventuellement les rrodifications -par voie chimique dudit composé. Ces transformations chimiques seront décrites plus loin ci-après. La présente invention concerne egalement la préparation du composé CL22T par culture de la souche Streptomyces CL22 et l'isolement du composé à partir des milieux de culture. L'Actinomycetale CL22T pousse abondamment sur des milieux variés et présente fréquemment des spores de couleur grise et un mycélium basal orangé à violet. La soucne CL22T a été attribuée au genre Streptomyces et l'organisme décrit aans la littérature s'en rapprocnant le plus est Streptomyces griseoaurantiacus. La comparaison directe entre S.griseoaurantiacus ATCCl9840 (souche type) et Streptomyces n CL22T est présentée dans les tableaux 1, 2 et 3. Tableau 1 : Utilisation des sources de carbone ATCC 19840 CL22 D Glucose ++ ++ D Fructose ++ ++ D Xylose ++ ++ L Arabinose + + D Galactose ++ ++ L Rhamnose ++ ++ Inositol + ++ D D Mannitol t+ ++ Glycérol Saccharose - I Raffinose - ++ Lactose Cellobiose ++ ++ Amidon + ++ Cellulose - Chitine - Tableau 2 :Propriétés physiologiques ATCC 19 840 Cl22 Zone de température 18 - 43 C 18 - 430C Zone de pH 5-9 5-9 olérance au NaCl 80g/l 130g/l Production de Melanine @@SP et - (ISP7) Production H2S (ISP6, ~ ~ Réduction des Nitrates ~ ~ Uréase Coagulation du lait + , + j Peptonisation au lait + +/ I Liquefaction ce gélatine + + | Dégradation de : i amidon +/- + i cellulose r - - chitine iesculine - | +/- I @ adenine r - + t tyrosine i + ' + | caseine ! + I i Pigment reverse : i i pH acide | rouge violet pH neutre rose rouge pH basique - orangé ; orangé Tableau @ :Crcissance sur différents milieux ATCC 19840 CL22 Gélose à C | très Donne j tres Donne l'extrait de MA | abondant, blanc à gris abondant, blanc levure-extrait S i grises grises de malt (ISP2) CR gris à rose violet, noiratre @ PS aucun , aucun Gélose de farine C jaune bonne d'avoine (ISP3) MA épars, blanc abondant, rose S - grise CR rose gris, rose PS aucun aucun Gélose aux sels C jaune bonne minéraux et à MA - abondant, gris l'amidon (ISP@) S - grises CR incolore rose PS aucun aucun Gélose aux glycé- C bonne bonne rol et à l'aspara- MA abondant, blanc abondant, blanc gine (ISP5) S blanches grises CR gris, rose gris, rose PS , aucun ; aucun Gelose à la pep- C bonne bonne tone au fer et MA - épars, blanc à l'extrait de S - blanches levure (ISP6) CR I jaune Drun ! jaune brun PS | aucun , aucun C bonne très donne Gélose à la MA abondant, blanc abondant, blanc à violet Tyrosine (ISP7) S blanches grises CR jaune Drun, rose jaune brun, violet PS rose aucun Gelose nutritive C modérée modérée MA - épars, blanc S - grises pale CR rose jaune brun PS aucun aucun Gélose de Bennett C bonne bonne MA abondant, blanc abondant, blanc S gris gris CR rose, orangé, violet gris, rouge, violet PS aucun aucun Gélose au glucose C bonne bonne et à l'asparagine MA - épars, blanc S - CR jaune rose pále PS aucun aucun C : croissance CR : couleur réverse MA : mycélium aérien PS : pigment soluble S : couleur des spores 11 apparaît cue les deux souches présentent de nombreuses analogies pour leurs propriétés morcrologiques et pnysiologiques et pour leurs aptitudes à utiliser les différentes sources de carbone. Cependant, la soucne de Streptomyces CL22 peut être aisément différenciée de la souche type de S.griseoaurantiacus. Conséquemment, nous avons appelé la souche Streptomyces griseoaurantiacus n CL22T pour la distinguer des autres soucnes connues ae Streptomyces griseoaurantiacus. Cette souche a été déposée sous le n 1-856 du 14.04.89 à la Collection Nationale de Cultures de Microorganismes de l'Institut Pasteur - 28, re du Docteur Roux - 75724 PARIS CEDEX 15. est possible 'utiliser S.griseoaurantiacus n CL22T ou ces mutants ootenus naturellement ou artificiellement et plus généralement toute soucne ce Streptomyces pour a production et la purification de produi t CL22 ce la présente invention a partir du milieu de culture. L'organisme producteur ae Cl22T peut être mis en culture selon les méthodes habituellement reconnues, dans des milieux de culture contenant les éléments généralement utilisés par les microorganismes en condition aéropie. Les milieux liquides agités ou solides peuvent être utilises sous des conditions de température ae 20 à 40 C et de pH 6 à 8 et durant 2 à 6 jours. Les milieux ae cultures doivent contenir une source de carbone assimilable tel que par exemple le glucose, ie fructose, le galactose, le sucrose, le glycérol, le mannitol, 'anndon, les dextrines, les farines d'avoine GU autre, seul ou en combinaison. Comme source d'azote, ces milieux peuvent contenir par exemple des peptones, des extraits de levure, ae la farine de soja, des hydrolysats de caséine, des casamino acides, du sulfate a'ammonium ou de chlorure d'ammonium ou ou autre t seul ou en combinaison.Ces milieux peuvent en outre être supplémentés en substances inorganiques telles que par exemple au chlorure de sodium ou de potassium, des sels ae phospnate, du carbonate de calcium ou autre. tl est possible de rajouter au milieu de culture toutes substances organiques ou inorganiques capables de stimuler la croissance du microorganisme ou ae stimuler la production de CL22T. Durant la fermentation, l'accumulation de CL22T dans le milieu de culture peut etre suivie par deux méthoaes différentes. La quantité de CL22T peut etre visualisée directement en deposant 5 Cil du moût de fermentation après décantation, sur une plaque de silice kieselgel 60F254 (Merck, RFA) après chromatographie en utilisant une phase mobile CHC13/MeOH (90/10), l'intensité de la tache au Rf 0,36 est directement liee à la quantité de produit déposée. La quantité minimale de produit visualisée par cette méthode est 10 ng ce qui correspond à 5 l d'une solution à 2 ug/ml. L'autre méthode consiste à déposer 50 ul de moût de fermentation après centrifugation ou d'une dilution sur 4 disques du papier filtre de 1 cm ae diamètre. Les disques sont déposés dans les cupules de plaaue multiple NUCLONR aelta (Poly labo, France) de 1,2 cm de diamètre et imbibées par 150 l d'eau distillée. 3 graines de raais sont déposées dans chacune des cupules et incubées 2 jours à 22 C à l'obscurité et 5 jours à 200C en lumière naturelle. Tous les deux jours, 100 ul d'eau distillée par cupule sont rajoutés pour éviter le déssèchement des plantules.Dans ces conditions, une solution à 2,5 pg/ml inhibe complètement la germination aes graines et une inhibition partielle de la croissance des plantules est observée jusqu'à 0,5 ug/ml. Généralement en fin de fermentation, le moût de fermentation est actif jusqu'à une dilution au 1/40ème. CL22T est un produit peu soluble dans l'eau mais il présente un caractère polaire assez fort pour qu'environ 80% du produit se trouve dans le moult de fermentation en fin ae production. ;1 est possible de traiter le milieu de culture après fermentation ainsi que le cake mycélien par les méthodes de purification généralement utilisées pour les produits ayant des caractéristiques biochimiques voisines. Les méthodes utilisées pour purifier CL22T sont décrites ci-dessous : le milieu de fermentation est filtré ou centrifugé et le cake mycélien extrait par du méthanol. Les filtrats aqueux et méthanoliques sont combinés et traites pour l'isolement et la purification de CL22T. le CL22t peut être purifié par chromatographie de partage liquice- liquide ou solide-liquide oeoce par exemple la partition sur silice ou sur oxide d'aluminium en utilisant différentes phases mobiles. CL22T peut ainsi etre purifié par adsorption sur un support apolaire tel que par exemple la résine XAD2 (Amberlite, Rhom et Hass, USA ou sur des colonnes de chromatographie liquide nautes performances à phase stationnaire en silice greffée type C18 ou un polymère divinylbenzène type PRP1 (Hamilton, France). La présente invention concerne également la préparation par voie chimique des composés herbicides représentés par la formule générale I à partir des composés CL22 selon des transformations telles a) alkylation, acylation, silylation ou carDonatation de fonction hydroxyle b) migration allylique de la fonction hydroxyle représentée par R3 en R2 c réaction d'Hofman ce l'amide primaire représentée par R4 sur a fonction B hydroxyle reorésentée par R d) hydrolyse basique du cycle oxazolidinone e) réduction de la fonction amide primaire représentée par R4 par l'hydrure de lithium aluminium f) hydrolyse basioue de la fonction amide primaire représentée par R4 De cette f acor a 2 été procédé à la synthèse des composes cités ci-dessous dans laquelle R represente '2) CH3 (3) CO-CH3 (4) CO-OC6H4NO2 (5) dans laquelle R4 représente (6) COOH (7) CH2-NH2 (8) Q La presente invention se rapporte également à une composition herbicide contenant a titre d'ingrédient actif le CL22T ou un ou plusieurs de ses dérivés définis selon la formule I de même qu'une composition herbicide contenant en plus de l'ingrédient actif un agent tensio-actif. Les compositions herbicides doivent être appliquées après émergence des adventices dicotylédones au stade plantule. Les propriétés de sélectivité font que Qes compositions herbicides peuvent être utilisées en prélevée des cultures sur les Jeunes adventices ou en post-levèe des cultures monocotylédones ou encore dans les plantations arboricoles ou de vigne en application airigée. Le CL22= ûu un se ses aérivés est un nerDicide ae contact actif principalement sur les plantes dicotylédones. CL22T entraine un déssèchement rapide ces parties aériennes traitées ce qui le rapproche, au niveau activité, des effets obtenus avec les herbicides de synthèse appartenant à la famille des phénols nitrés comme par exemple le dinitroorthocrésol (DNOC). CL22T est moins toxique que le DNOC (DL50 45 mgikg, par voie orale sur les souris) et ne présente pas d'activité insecticide sur les larves de Musca domestica. Sa toxicité sur les poissons Serpae (CL50) est de 31 ppm. Pour la préparation des compositions herbicides de la présente invention il est possible ae combiner CL22T ou ses dérivés avec les adjuvents généralement utilisés en agriculture. En pratique, les composés peuvent être comoinés avec ces solvants ou ces vecteurs permettant leur utilisation sous forme ae granulés ou microgranulés autosuspensibles, concentré émulsifiable ou suspension aqueuse. La composition peut être formulée avec un agent mouillant ou dispersant comme par exemple les alcools gras sulfatés, les alkylpflénol polyétoxylés, les ester de sorbitan éthoxyles, le bromure cetyl aiméthyl benzyl amonium, le desoxycholate de Sodium, les lécithines et les agents tensio-actifs. Comme vecteur solide on peut utiliser par exemple la terre de diatomée, le talc et le carbonate de potassium ou de sodium. Les vecteurs liquides peuvent être par exemple les alcools, l'acétone, l'acétate d'éthyle, le diméthylsulfoxide et le xylène. L'adjonction d'agents numectants comme le glycérol favorise l'activité des formulations. Les compositions pourront egalement contenir par exemple des agents préservants, stabilisants ou antiagrégants ou encore des sels tels que le sulfate d'ammonium pour potentialiser l'activité herbicide. Les compositions herbicides de la présente invention pourraient contenir de 3 à 30% en poids de produit actif pour la forme émulsionnée concentrée et de 2 à 40% en poids pour la forme granulée autosuspensible. La présente invention se rapporte également à un procédé de traitement du désherbage des céréales, caractérisé en ce qu' il utilise une composition herbicide selon l'invention. Ce procédé est utile pour le contrôle de la croissance des adventices et plus particulièrement des dicotyledones après émergence de celles-ci au stade plantule. La proportion ce substance active pourra varier notamment suivant la formulation utilisée, les conditions climatiques, les adventices a traiter. En général des roses allart de 0,08 kg à 30 kg par hectare peuvent être utilisées. D'autres caractéristiques et avantages ce la présente invention apparaîtront à la lecture des figures et des exemples ci-après. - la igure 1 représente le spectre . au composé CL22T, - la igure 2 représente ie spectre RMN1H du composé CL22T. Exemple 1 Des boites de pétri contenant 25 ml de milieu GAPY (glucose 1%, amidon 2%, extrait de levure 0,5%, peptone de soja 0,5%, CaCO3 0,1% et agar 1,5%) stérilisé 20 min à 120 C sont ensemencées à l'anse de platine avec une suspension ce spores de Streptomyces CL22 et incubées à 27 C durant 7 jours. 5 ml de suspension ce spores fraicnes réalisées à partir de chacune ces coites sont utilisés pour ensemencer aes milieux inoculum (200 ml) contenant du glucose (2%), ce e la farine de soja (0,5%), ae l'extrait de levure (1%), du cnlorure de socium (0,2%) et du sulfate de magnésium (0,025%) stérilisés 20 min à 120 C.Les cultures inoculum sont incubées à 270C avec une agitation de 180 rpr durant 2 jours. 400 ml de culture inoculum sont transférés dans un fermenteur de 20 litres contenant 10 litres de milieu inoculum et incubé 30 heures à 270C avec une aeration de 180 Vitres d'air/heure et une agitation de 400 rpm. Ces 10 litres de culture sont transférés dans un fermenteur contenant 300 litres de milieu de production composé d'amidon (4%), de farine de soja (1X), d'extrait de levure (1X) et de carbonate de calcium (0,2X) stérilisé 30 min à 1200C. La fermentation dure 4,5 jours à 27 C avec une aération de 5,4 m3 o'air/heure, une agitation de 400 rpm ; le pH etant régulé inférieur à 7,5 avec de l'acide acétique.En fin de fermentation, les 300 litres de milieu de culture sont centrifugés, le culot étant extrait par 20 litres de méthanol. Après filtration, le filtrat méthanolique est comoiné au surnageant de la culture et passé sur une colonne contenant 20 litres de resine [RC50H+ Amberlite, Rhcim et Haas, USA). L'eluat est récupéré et progressivement mis en contact avec 20 litres de résine A143 Cl (Duolite, Diamond Shamrock Chemical Co, USA). Les résines sont lavées par 20 litres de méthanol qui sont combinés avec lÊéluat des résines. L'éluat est mis en contact durant 3 heures sous agitation avec 20 litres de résine XAD2 (Amberlite, Rhom et Haas, USA).La résine est ensuite récupérée et lavée par 40 litres d'eau, le produit actif est élué par 28 litres de méthanol et concentré sous pression réduite à 1 litre. Ce concentrat est mis en contact durant 15 minutes avec 500 g d'alumine neutre. L'alumine est éliminée par filtration, le filtrat est concentrés sous pression réduite à 100 ml dilué à 300 ml avec de l'eau et le produit actif est extrait par deux fois 300 ml de chloroforme. La phase chloroformique est concentrée sous pression réduite à 20 ml et passée sur une colonne contenant 400 g de gel de silice 60 (Merck, RFA) équilibrée dans le chloroforme. Le produit est élué avec une phase mobile chloroforme/méthanol (96,5/3,5) permettent d'obtenir 6,5 g de produit actif pur à 95X. Toutes les étapes de purifications sont controlées par chromatographie sur couche mince de silice kieselgel 60 F254 (Merck, RFA) avec une phase mobile chloroforme/méthanol (90/10), le produit actif ayant un Rf de 0,36. Du produit CL22T pur peut être obtenu par chromatographie liquide haute pression en utilisant une colonne phase reverse semi-preparative PRPI 30,7 cm x 0,7 cm (Hamilton, France) et une phase mobile méthanol/eau (77,5/22,5) : temps de rétention du produit CL22 : 8,3 minutes avec un débit de 2 ml/minute. CARACTERISTIQUES PHYSICOCHIMIQUES DU PRODUIT CL22 Le produit CL22, se présente sous la forme d'une huile incolore à jaune, soluble dans le méthanol, l'éthanol, l'acétone, l'acétate d'éthyle, le chloroforme, le dichlorométhane ou le diméthyl sulfoxide mais tr8s peu soluble dans l'eau cu l'hexane. Les réactions colorées classiques sont positives pour les réactions c'Erlicn et à la ninhydrine et négative pour les réactions de Sakagushi et au FeCl3. Le spectre ultraviolet de CL22 présente les maximas suivants MeOH max ( E ) = 266 (50 000), 275 (60 000) et 285 (46 000). Les spectres infrarouges et de résonance magnétique nucléaire du proton sont représentés respectivement figure 1 et figure 2. La masse moléculaire de CL22T par les techniques de désorption ae cnamp ou c'ionisation électronique est de 290 (m+). Le spectre masse naute résolution par ionisation électronique montre que CL22T a une masse ce 290,1635. Ceci a permis ce aéduire la formule brute C16H22N2O3 (masse exacte : 290, 1630), Qui est ccrrélée par le spectre de résonance magnétique ciu Carbone 13. Exemple 2 10r mg 0,34 mmoie) de produit CL22T (1) sont incubés dans 1 ml d'acétonitrile annydre contenant 138 pl (3,4 mmoles) de méthanol anhydre et 75 ul (1 mmole) d'acide trifluoroacétique durant 3 jours à température ambiante. Par COM sur plaque de silice 60F254 deux produits sont visibles (Rf 0,4 et 0,45) avec une pnase moDile chloroforme/méthanol (90/10). Les produits sont purifies par CLHP sur colonne PRPl avec une phase mobile méthanol/H2O (90/10). Produit (2) 30 mg (tr : 7,3 min), produit (5) 25 mg (tr : 5,1 min). produit (2) : masse moleculaire : 304 fragments caractéristiques : 204-218 produit (5) : masse moleculaire : 304 fragments caractéristiques : 208-222 Exemple 3 100 mg t0,34 mmole) de produit CL22T sont incubés dans 2 ml de pyridine anhydre contenant 250 ml (3,4 mmoles) d'anhydride acétique durant 24 heures à température ambiante.Par CCM sur plaque de silice 60F254 un produit de réaction est visible (Rf 0,47) avec une phase mobile chloroforme/méthanol (90/10). 80 mg de produit acétylé i3r sont purifiés par CLHP sur colonne PRPl avec une pnase mobile methanol/H20 (8515) (tr 7,7 min) produit (3) : masse moléculaire : 332 fragments caractéristiques : 204-246 Exemple 4 100 MG (0,34 mmole de produit CL22T (1) sont repris dans 400 l ae dichlorométhane contenant '4G l ae pyridine. 85 mg (0,42 mmole) ce p-nitrophényl chloroformate cans 100 l de dichlorométhane sont rajoutés goutte à goutte et à froid. La réaction est incubée 24 heures à température ambiante.Le oroduit (5) migre sur plaque de silice 60F254 à un Rf de 0,5 avec unephasemobile chl oroformeimétnanol (90/10). 52 mg de produit (4) sont purifiés par CLHP sur colonne PRPl avec une phase mobile méthanol/eau (95:5) (tr : 7 mini. produit (5) : masse moléculaire : 455 fragments caractéristiques : 204-369 Exemple 5 100 mg (0,34 mmole) de produit CL22T (1) sont incubés dans 1,657 1 de Dyritine anhydre contenant 148 mg (0,34 mmole) ae tetra-acétate ce plomb durant 3 heures à température ambiante. Par CCM sur plaque de silice 60F254 le produit de reaction (9) 9 a un Rf de 0,47 avec une phase mobile chloroforme/methanol (90/10). 83 mg de produit (9) sont purifiés par CLHP sur colonne PRPl avec une pnase mobile méthanol/eau (85/15) (tr : 15 min,.-Le produit (8) est obtenu par hydrolyse du produit (9) avec du KOH.IN durant 5 heures à température ambiante.La purification est réalisée par chromatographie liquide/liquide, eau acide ou basique/chloroforme puis par échange d'ions sur colonne SepPack Acell.CM (Waters, France) échangeuse de cations. procuit (9) : masse moléculaire : 288 UV 'MeOHì : 265-275-287 croduit (8) : UV (MeOH) : 265-275-285 Ni nniciri ne Exemple 6 100 mg (0,34 mmole) de produit CL22 (1) sont repris par 1 ml de tétrahydrofurane froid contenant 13 mg (0,35 mmole) d'hydrure de iithium aluminium. La réaction est incubée 24 heures à température ambiante. 38 mg ae produit ( 7 ) sont purifiés par chromatographie liquideiliquide, eau acide ou basique/chloroforme puis par échange d'ions sur colonne SepPack Acell CM (Waters, France) échangeuse de cations. produit (7) : UV (MeOH) : 266-275-286 Ninnydrine + Exempte 7 100 mg (0,345 mmole, ce produit CL22T (1) sont incubés avec 1 ml de KOH IN durant 24 heures à température ambiante. Le produit (6) est purifié par chromatograpnie liquide/liquide, eau basique ou acide et chloroforme puis sur colonne SepPack Aceil QMA (Waters, France) échangeuse d'anions. -produit (6) : UV (MeOH) : 265-275-286 Exemple 8 : Test pré-émergence réalisé avec le CL22T Des graines de radis et de blé sont plantées dans un pot (6 cm x 6 cm a 0,5 cm ae profondeur. Après un léger compactage de la terre, celle-ci est vaporisée avec 1 ml de différentes concentrations de CL22T cans l'eau puis arrosée par 5 ml 'eau. 5 jours après le traitement, le nombre de plantules est compté et e pourcentage ce plantules non-levées est calculé par rapport aux témoins non traités.Les résultats sont présentés tableau 4 et indiquent que CL22T inhibe partiellement la levée des plantules ae radis mais à aes doses relativement élevées. 30 10 3 (kg/ha) Radis 50 20 - %d'innibition de l'émergence Blé r TABLEAU 4 exemple 9 : Test en post-émergence réalisé avec CL22T Des graines ae cifférentes plantules sont plantées à 0,5 cm de profondeur sans aes pots de 7 cm ae diamètre. 3 à 10 jours après la levée suivant le type ce plantule, les parties aériennes des plantules sont aspergées avec I ml ce solution comprenant différentes concentrations de 22T et composée de 1% de monooléate de sorbitan éthoxylés, 1% glycérol, 0 sulfate a'ammonium et 0,1% ce méthyl hydroxy 4 benzoate. La dose minimale pour détruire au moirs 80% des parties aériennes est notée deux ours après le traitement. La dose nécessaire pour réduire la taille des plantules de 50% par rapport aux témoins est estimée 12 à 15 jours après le traitement. Les résultats sont présentés en tableau 5. tableau 5 Plantule Dose minimale pour aetruire Cose nécessaire pour réduire 80% aes parties aériennes la taille aes plantules ae 50% (kg/ha) (kg/ha) Radis 0,24 0,08 Moutarde s 0,24 0,08 Trèfle i 0,08 i 0,08 Zinnias i 0,8 0,24 Paquerette 0,08 0,08 Pourpier 0,08 0,08 Sauge C,8 0,24 Véronique 0,8 0,8 Folle avoine > 24 > 24 ulpin > Blé > 24 > 24 Poireaux 2,4 0,8 Exemple 10 :: Toxicité sur les poissons du CL22T Des poissons serpae sont placés aans un aquarium à 25 C. 5 poissons sont utilises pour chaaue cose et le taux de survie est calculé à 48 heures. Le produit CL22T est dilué dans 100 ul d'éthanol puis dilué dans 500 ml d'eau. tableau 6 CL22T (ppm) 4 de survivant 100 1 0 50 0 1 37,5 20 31,25 40 25 80 10 100 0 I 100 a concentration léthale 50% (CL50, est de l'ordre ae 30 à 35 ppm. Exemple ll : Toxicité au CL22T sur les souris La toxicite aigüe au produit CL22T a été testée sur des lots ae 5 souris mâles par voie intrapéritonéale (IP) ou per os (PO). Le pourcentage de survie est calculé à 7 et 15 jours. Les souris ont également été pesées mais aucune perte de poids sensible n'a été mise en evidence par les souris traitées. Le produit CL22 est dissout dans du DMSO/eau (70/30) et injecté par voie intrapéritonéale à raison de 5 ul/g. Per os, le produit est dissout dans de l'méthanol à 10% et administré de force à raison de 10 ul/g. ableau 7 @ose mg/kg oie 100 80 50 45 10 I P 100 NT NT NT 40 0 % mort P O 100 100 80 40 0 0 % mort Le produit CL22T a une DL50 par voie intrapéritonéale ae l'orcre oe 10 mg/kg et est relativement toxique par voie per os (DL50 entre 45 et 50 mg/kg;. Cependant, il est environ aeux fois moins toxique que le DNOC. xemploe 12 : Activité herbicide du CL22T et ce ses dérivés L'activité de CL22T et ae ses dérivés a été étudiée sur les premiers stades de développement aes graines de radis. Le test de ces activités se fait sur 3- graines de radis déposées sur des disques de papier filtre de 1 cm de diamètre disposés dans des cupules de plaque multiple NUCLONR Delta. Le papier filtre est imbibé par 200 l de différentes dilutions des produits à tester, 4 tests sont effectués par dilution. Les graines sont incubées 2 jours à 25 c à l'obscurité et 5 jours à 20 C en lumière naturelle. Tous les deux jours, 100 l d'eau sont ajoutés pour éviter le déssechement des plantules. Les concentrations indiquées dans le tableau 8 sont les concentrations minimales de produit nécessaires pour inhiber partiellement la croissance aes plantules de raais après 5 jours de développement. Produit Activité Produit Activité n (ug/ml) n (ug/ml) 1 5 0,5 6 100 2 > 125 1 7 50 3 1 | 20 t 8 100 4 | 100 9 5 5 > 125 TABLEAU 8 Exemple 13 : Concentré émulsifiable. Les composants suivants sont combinés et mélangés pour donner une composition émulsifiable concentrée. Composant % en poids CL22 10 Méthyl 4 hydroxybenzoate 1,5 Glycérol 44,5 Estermono-oléique de sorbitan éthoxylé 45 REVENDICATIONS 1. Composés nerbicidesreprésentéspar la formule générale !:) dans laquelle : m, n et p peuvent être respectivement égaux à O ou à | avec n - p = 1 et si n = O, (R') n = H et si p = O, (R') p = H ; les liaisons symbolysées par n peuvent désigner une configuration Z ou E. . R1 représente un atome d'hydrogène ou un groupement alkyl C1-6 linéaire ou ramifié, éventuellement substitué par un ou plusieurs groupements hydroxyle, éther d'alkyle C1-6, amine primaire ou secondaire alkylée C1-6 . R2 et R3 représentent un groupement hydroxyle, amine, halogène, thiol, cétone ou un radical correspondant à un dérivé des fonctions hydroxyle ou amine. . R4 représente : - CO-NR5R6 - CH2-NR5R6 - CO-N(OH)R5 - C # N - C(R5)=NR6 - NR5R6 ou - COOR5 - OR5 avec R5 et R6 pouvant représenter indépendamment l'un ou l'autre un hydrogène, un alkyle C1-10, un alcényle $C2-10 ou un alkyle C-10 hétérocycloalkyle C3~5, les chaines alkyles de R5 et R6 étant éventuellement interrompues par des atomes d'oxygène, . R', R", R"', R"", représentent indépendamment les uns des autres un atome C'hyarcgène ou un groupement alkyle C16 2.Composes neroicides selon la revendication . caractérisés en ce qu'ils sont représentés par la formule générale (la) @ars @aoue@@e @@@@ et les liaisons sympolisées par # ont les mêmes significations due celles décrttes dans a revendication@ (R')n ou (R')p représente respectivement un hydrogène si n = 0 ou p = 0 et un groupement méthyl si n = 1 ou p = .R'1 représente un atome d'hydrogène ou un groupement alkyle C1-3 .R'2 et R'3 représentent un hydrogène, des groupements alkyle C1-6 linéaire ou ramifié éventuellement substitué, phényle, acyle C2-6 éventuellement substitué, carbonate C2-6 ou phenyle éventuellement substitué, sulfate éventuellement alkylé ou phosphate éventuellement alkylé .R'4 représente - CO-NR'5R'6 - C # @ - CCOR'5 - NR'6R'6 - CH2NR'5R'6 - NR'5-CO-cyclisé avec la fonction hydroxyle représentée par R'3, avec R'5 et R'6 représentant indépendamment l'un de l'autre un hydrogène, des groupements alkyle C1-6 ou alkyle C1-6 substitués par un ou plusieurs groupements thiol, hydroxyle ou homologue. 3. Composés herbicides selon "une quelconque aes revendications 1 et 2, caractérisés en ce qu'il s'agit des composés suivants ainsi que leurs sels quaternaires d'alkyle C1-6 correspondants. 4. Procédé de purification aes composés selon l'une quelconque des revendications 1,2 et 3 caractérisé en ce que l'on effectue ai la mise en culture d'un microorganisme du genre Streptomyces capable de produire un composé représenté par la formule générale (I) tel que le composé (1) représenté en revendication 3 ;; D) la purification dudit composé, c) éventuellement les modifications par voie chimique dudit composé telles que . alkylation, acylation, silylation, ou carbonatation de fonction hydroxyle , migration allylique de la fonction hydroxyle, représentée par R3 en R2 . reaction d Hofman de l'amide primaire symbolisée par R4 sur la fonction ss-hydroxyle représentée par R3 . hydrolyse basique du cycle oxazololidinone . réduction de la fonction amide primaire représentée par R4 par l'hydrure de lithium aluminium hydrolyse basique ae la fonction amide primaire représentée par R4 Procédé de préparation ae composé selon l'une quelconque des evenciications 1 à 4, caractérisé en ce cue le microorganisme utilisé eut être Streptomyces griseoaurantiacus n CL22T ou des mutants. 6. Compositions herbicides caractérisées en ce qu'elles contienrent en tant qu'ingrédient actif au moins un ces composés selon l'une quelconque des revendications 1 à 3. 7. Compositions herbicides caractérises en ce qu'elles contiennent en tant qu'ingrédient actif au moins un des composés selon l'une quelconque des revendications 1 à 3 en association avec un tensio-actif et/ou un polyol, de préférence le glycérol. . Procédé ae traitement du désnerbage ces céréales, caractérisé en ce qu'il utilise une composition herbicide selon la revendication 6. 9. Procédé selon la revendication 7, caractérisé en ce que la composition herbicide utilisée selon les revendications 6 et 7 contient à titre d'ingrédient actif une quantité effective te 0,08 à 30 kg/ha d'un ou plusieurs composés herbicides définis selon les revendications 1 à 3. 10. Procédé selon les revencications 7 et 8 caractérise en ce qu'il contrôle la croissance des adventices après émergence de celles-ci au stade plantule. '1. Procédé selon les revendications 7 à 5, caractérise en ce cue les adventices contrôlées sont des dicotylédones.