FR 2643374 A1 19900824 FR 8902361 A 19890223 Hexafluorophosphates de tristétraméthyléne-amino-phosphonium à titre de réactifs de couplage peptidique, procédé d'obtention et intermédiaires de synthèse. La présente invention est relative à La synthése peptidique et a plus particuLièrement pour objet de nouveaux réactifs de couplage peptidique, à savoir les hexafluorophosphates de tris tétraméthyléne-amino-phosph6nium. Elle concerne également les procédés pour leur obtention ainsi que Les sels de tristétraméthyléne- amino-phosphonium. Les peptides sont des composés constitués d'une suite d'acides aminés, liés par une liai son amide, La liaison peptidique. La formation de cette liaison est L'étape clef de la synthèse peptidique et eLle intervient de nombreuses fois dans La synthèse : autant de fois qu'iL y a de motifs acides aminés dans Le peptide. Pour réaliser ces étapes, on utiLise des réactifs dits de couplage peptidique. Ces réactifs doivent former une liaison amide entre deux acides aminés, dans des conditions rapides, douces et non racémisantes. Les réactifs de couplage permettent d'activer La fonction acide carboxylique d'un acide aminé N-protégé en formant une espèce active sur laquelle la fonction amine terminale libre d'un peptide convenablement protégé pourra réagir pour former La Liaison amide. De nombreux réactifs de couplage peptidique sont des composés phosphorés, tels que notamment les réactifs A à G et la figurant dans le tableau I ci-après, dans lequel on a indiqué également les documents de l'art antérieur dans lesquels ils sont décrits. TABLEAU I Réactifs Art antérieur la ((CH3)2N)3P±OBT,PF6 (BOP) B. Castro et al., Tet. Lett., 1975, 1219. A: ((CH3)2N)3P±CL,CLO4 B. Castro et aL., Tet. Lett., 1972, 4747. B: ((CH3)2N)3P N3'P-F6 B. Castro et al., BULB. Soc. Chien., 1973, 3359. Brevet FR 2.234.310 C: (((CH3)2N)3P )20, 2 OTs G. Gawne et al., J. Amer. Chem. Soc., 1969, 91, 5669. D: (PhO)2P(O)N3 T. Shioiri et aL., J. Airer. Chem. Soc., 1972, 94, 6203. E: (EtO)2P(O)OBT S. Kim et al., Tet. Lett. 1985, 26, 1341. 0 F: O N- j Cl (BOP-Cl) J. Diago-Meseguer et al., Synthesis, 1980, 547. 2 0o CN K. Horiki t | / Symposium JASPEC'87 G: O N P-O---N=C Kobe (Japon) Sept 1987. 2 CO2Et Selon KLAUSNER et al. (Synthesis, 1972, 453) il est connu que, lors des couplages peptidiques, L'utilisation d'additifs, dont le plus utilisé est le N-1-hydroxy-benzotriazole-1,2,3 (HOBt), permet de réduire notablement la racémisation. C'est la raison pour laquelle on utilise le couple DCC/HOBt en synthèse peptidique ; cependant, L'inconvénient de ce réactif est de donner en fin de réaction de La dicyclohexylurée dont il n'est pas aisé de se débarrasser. Avec le réactif F (BOP-Cl) les résultats sont parfois décevants tant du point de vue des rendements que de la racémisation, comme L'ont montré C. VAN DER AUWERA et al. (Int. J. Peptide Protein Res., 1987, 29, 464) et K. HORIKI (JASPEC 1987). C'est seulement si on ajoute du HOBt que le réactif BOP-CL devient un réactif de couplage présentant de L'intérêt (Int. J. Peptide Protein Res., 1987, 29, 464). Toutefois il nécessite une mise en oeuvre en plusieurs étapes avec des temps de réaction importants de 12 à 21 heures et l'utilisation de soLvants parfaitement anhydres. Le HOBt fait partie du réactif la, qui est l'hexafluorophosphate e benzotriazoyloxy-trisdiméthylamino- phosphonium, bien connu sous le nom de BOP, un réactif de couplage peptidique utilisé couramment par les laboratoires, en particulier industriels et reconnu comme un des meilleurs réactifs de couplage peptidique, tant du point de vue du rendement que de celui de la pureté optique des peptides obtenus. Le BOP présente cependant un inconvénient, il est obtenu industriellement à partir du HMPT (hexamethyl phosphotriamide) et redonne du HMPT Lors de la réaction de couplage, or Le HMPT est réputé cancérigène et est annexé à la "circulaire Seveso". Il semble que Les groupes méthyle de BOP sont les responsables du caractère cancérigène du HMPT, qui pourrait etre transformé en agent méthylant in vivo. te simple remplacement des groupes méthyle de BOP par d'autres groupes alkyle n'a pas permis d'obtenir des produits qui présentent à la fois de bonnes propriétés comme agents de couplage peptidique et sur le plan de La sécurité. Il en a été de même lorsque l'on a essayé de remplacer ces groupes méthyle par un groupe morpholino ou un groupe pipéridino. On a maintenant trouvé de façon surprenante qu'en remplacant les groupes méthyle de BOP par le groupe tétraméthylène et éventuellement le groupe benzotriazoyloxy par un halogène on obtient des nouveaux réactifs de couplage peptidique qui ne présentent pas les inconvénients de BOP sur Le plan de la sécurité, mais possèdent une réactivité analogue à celle de BOP. Les réactifs de couplage peptidique selon l'invention répondent à La formule générale I dans laquelle : - R et R' forment ensemble le-groupe tétraméthyléne ; - Y est le chlore, le brome ou le groupe benzotriazoyloxy (OBt) ; - A est le groupe hexafluorophosphate PF6. Les réactifs de couplage selon l'invention peuvent être obtenus selon l'un des procédés A à C ci-apres : PROCEDE A PROCEDE B PROCEDE C Le procédé A consiste : 1) à transformer la tris-(pyrrolidino)-phosphine en le sel de phosphonium de formule 2, dans laquelle X est Cl ou Br, par action du chlore ou du brome dans un solvant, tel que le dichlorométhane, Le chloroforme ou l'éther, à une température comprise entre -20 C et +25 C ; 2) à précipiter le sel 2 après évaporation du solvant, par action d'une solution aqueuse d'hexafluorophosphate de formule MPF6-, dans laquelle M est un cation métallique, tel que Na+, K+ ou @@ @@@@@@ @@ + le cation NH4 Ce procédé convient pour l'obtention des composés de formule I, dans laquelle Y est Cl ou Br. Le procédé B consiste : 1) à transformer L'oxyde de tris-(pyrrolidino)-phosphine en Le sel de phosphonium de formule 2a, dans laquelle X est Cl et X' est Cl ou PO2Cl2 par action de l'oxychlorure de phosphore ou du phosgène dans un solvant inerte, tel que le dichlorométhane ou le chloroforme, à une température comprise entre -200C et +250C ; 2) à précipiter le sel 3 après évaporation du solvant, par action d'une solution aqueuse d'hexafluorophosphate de formule MPF6-, dans laquelle M est un cation métallique, tel que Na ou ou le cation NH4 Ce procédé convient pour l'obtention des composés de formule I, dans laquelle Y est le chlore. Le procédé C consiste : 1) à faire reagir te sel d'halogénophosphonium de formule 4, dans laquelle X1 est Cl, Br ou PF6 avec te N-hydroxy-benzotriazole-1,2,3 (HOBt) en présence d'une base tertiaire, telle que par exemple la triéthylamine au sein d'un solvant approprié, tel que le dichlorométhane à une température comprise entre 15 C et 25 C, pour former le composé de formule 5, dans laquelle Y est OBt et X1 est tel que défini précédemment ; 2) et, dans le cas où X1 est Cl ou Br, à précipiter le sel 6 après évaporation du solvant, par action d'une solution aqueuse d'hexafluorophosphate de formule MPF6, dans laquelle M est tel que défini ci-dessus. Le composé de départ de formule 4 est obtenu selon l'un des procédés A ou B ci-dessus et est donc un composé de formule i) 2a ou 3. Dans Le cas où HOBt est hydraté, il sera avantageusement déshydraté par distillation azéotropique ou par un sel desséchant, tel que le sulfate de magnésium. On notera que les composés de formule I dans laquelle Y est Cl ou OBt sont des composés nouveaux et constituent un autre objet de L'invention. Les composés de formule I dans laquelle Y est Br ont été décrits en tant qu'intermédiaires de synthèse dans le brevet FR 2 234 310. Les réactifs de couplage peptidique de formule I dans laquelle A est PF6 sont des composés cristallins stables qui peuvent être stockés. Ils conviennent pour la synthèse peptidique aussi bien en phase homogène qu'en phase solide. Le composé préféré selon l'invention est le composé de formule I où Y est OBt et A est PF6 ; il constitue un réactif de couplage peptidique aussi performant que BOP en ce qui concerne la facilité d'utilisation, le temps de réaction et les rendements. IL présente des resultats supérieurs au BOP au niveau de La racémisation. Il est parfaitement adapté à pratiquement tous les cas de couplage, incluant l'élongation pas à pas tant en phase homogène qu'en phase solide des peptides croissant par L'extrémité basique et le couplage de fragments étant donné Les faibles taux de racémisation observés. Les composés de formules 2, 2a et 4 ainsi que les composés de formule 5 sont des intermédiaires de synthèse utiles pour l'obtention des réactifs de couplage peptidique selon l'invention et constituent un autre objet de l'invention. Ces intermédiaires peuvent être représentés par La formule générale la : dans laquelle : - R et R' forment ensemble le groupe tétraméthylène ; - Y est Cl, Br et A est Cl, Brou P02Cl2 ; ou bien - Y est OBt et A est CL ou Br. On notera que les réactifs de couplage peptidique de formule I dans laquelle Y est Br ou Cl et A est PF6 sont également des intermédiaires de synthèse (composés de formule 3). L'invention va être maintenant décrite en détail par les exemples illustratifs ci-après : Exemple 1 : Synthèse du composé de formule I (&gamma; = OBt ; selon le procédé C (produit de départ de formule 4 avec X = X1 = Cl). A@ 0,05 mol de tris-pyrrolidino-phosphine en solution dans 40 cm3 de dichlorométhane, on a ajouté, sous agitation, à température inférieure à 20 C, sous azote, en 30 min, 0,05 mol de chlore. Après 15 min de réaction supplémentaire, on a ajouté, à température inférieure à 20 C, en 30 min, un mélange de 0,05 mol de HOBt et 0,05 mol de triethylamine dans 40-cm3 de dichlorométhane (on a préalablement éliminé l'eau contenue dans le HOBt commercial par entrainement azéotropique sur le complexe soluble dans le dichlorométhane formé par le mélange de HOBt et de triéthylamine). On a laissé l'agitation 15 min supplémentaires. Le mélange réac- tionnel a ensuite été ajouté à 40 cm3 d'eau froide, on a décanté puis extrait deux fois par 40 cm3 d'eau froide. Les eaux jointes ont été lavées par 20 cm3 d'éther. La solution aqueuse a été ajoutée goutte à goutte, sous agitation, à une solution de 0,05 mol de KPF6 dans 40 cm3 d'eau. Il s'est formé immédiatement un solide blanc : on a filtré, rincé deux fois à l'eau. On a repris au dichlorométhane, décanté et séché sur sulfate de sodium ; on a chassé sous vide puis séché sous vide sur P205. On a obtenu un solide qui était pur d'après la RMNH et 31p. On a pu recristalliser le brut dans CH2Cl2/Et2O ou AcétonelEt20. On a obtenu 82 X du composé attendu dont les caractéristiques physico-chimiques sont indiquées ci-après. Exemple 2 : Synthèse du composé de formule I Ỳ = OBt ; A = PF ) selon Le procédé C (produit de depart de formule 4 avec X = X1 = Br). A 0,05 mol de tris-pyrrolidino-phosphine en solution dans 40 cm3 de dichlorométhane on a ajouté, sous agitation, à température inférieure à ZOOC, sous azote, en 30 min, 0,05 mol de brome. Après 15 min de réaction supplémentaire, on ajoute, à température inférieure à 20 C, en 30 min, un mélange de 0,05 mol de HOBt et 0,05 mol de triéthylamine dans 40 cm de dichlorométhane (on a préalablement éliminé l'eau contenue dans le HOBt commercial par entrainement azéotropique sur le complexe soluble dans le dichlorométhane formé par le mélange de HOBt et de triéthylamine) On laisse l'agitation 15 min supplémentaires. Le dichlorométhane est alors évaporé sous vide, laissant un résidu solide qui est repris par un mélange froid de 40 ml d'eau et 30 ml d'acétone. La solution obtenue est ajoutée goutte à goutte, sous agitation, à une solution de 0,05 mol de KPF6 dans 100 ml d'eau. Le précipité blanc qui se forme est traité comme ci-dessus.On obtient 85 X du composé de formule I (Y = OBt ; A = PF6-) dont les caractéristiques physicochimiques sont les suivantes : F=156-7 C (CH2Cl2/Et2O) Analyse : Calculé : C : 41,54 ; H : 5,38 ; N : 16,15. Trouvé : C : 41,51 ; H : 5,43 ; N : 16,25. RMN1H (CDCl3) : d, 1H (6=8,04 ppm, J=8,1 Hz); t, 1H (6=7,73 ppm, J=7,5 Hz) ; d, 1H (6=7,68 ppm, J=7,8 Hz); t, 1H (6=7,48 ppm, J= 7,5 Hz) ; m, 12H (#=3,36 ppm) ; m, 12H (#=1,89 ppm). RMN P(CDCl3) : s (#=31,8 ppm) ; septet (#= -143,7 ppm, J= 713 Hz). Exemple 3 : Synthèse du composé de formuLe I (Y = OBt ; A = PF6) seLon te procédé C (produit de départ de formuLe 4 X = Cl et X1 @ PO2Cl2). A 0,025 mol de POCl2 en solution dans 3,5 cm3 de CH2Cl2 on a ajouté,-sous azote, en 20 min, à température inférieure à 300C, 0,027 mol d'oxyde de phosphine en Solution dans 3,5 cm3 de CH2Clz. On a Laissé l'agitation, à température ambiante, 30 min supplémentaires. On a ajoute alors, en 20 min, à température inférieure à 200C, une solution de 0,025 mol de HOBt et 0,025 mol de NEt@ dans 15 cm3 de CH2Cl2 (après avoir éliminé l'eau du HOBt commercial par entrainement azéotropique sur le complexe soluble dans le dichlorométhane formé par le mélange de HOBt et de triéthylamine). On a laissé réagir 15 min de plus puis on a chassé le solvant sous vide.On a obtenu un solide légèrement coloré qui a été repris par 30 cm3 d'eau froide et 20 cm3 d'acétone ; cette solution a été ajoutée goutte à goutte, sous agitation, à une solution de 0,025 mol de KPF6 dans 80 cm3 d'eau. Le solide blanc obtenu a été filtré, rincé à l'eau jusqu'à neutralité et repris par du CH2Cl2. On a séché sur sulfate de sodium, chassé sous vide puis séché sous vide sur P2O5- On a obtenu un composé t identique à celui qui a été décrit à l'exemple 1, Rdt=77 X. Exemple 4 : Synthèse du composé de formule I (Y = Cl, A selon le procédé A. A 0,05 mol de tris-pyrrolidino-phosphine en solution dans 40 cm3 d'éther, on ajoute sous agitation à température inférieure à 200C, sous azote en 30 min, 0,05 mol de chlore ; on observe un pré cipité blanc abondant. On agite 10 min de plus, refroidit à 50C et on ajoute, sous forte agitation, une solution de 0,05 mol de KPF6 dans 40 cm d'eau ; on laisse l'agitation 10 min supplémentaires. On essore le produit solide, rince deux fois à L'eau et une fois à L'ether. On reprend au dichlorométhane, décante et sèche sur sulfate de sodium ; on chasse sous vide puis sèche sous vide sur P205 On obtient un solide qui est pur d'après la RMN1H et P. On peut recristalliser le brut dans dichloromethane/Et20 ou AcétoneJEt2o. Rdt = 85 X. Exemple 5 : Synthèse du composé de formule I (Y = CL ; A = PF6-) selon le procédé B. A 0,025 mol de POCl3 en solution dans 3,5 cm3 de dichlorométhane on ajoute, sous azote, en 20 min, à température inférieure à 3O0C, 0,025 mol d'oxyde de tris-pyrrolidino-phosphine en solution dans 3,5 cm3 de dichlorométhane. On laisse l'agitation, à température ambiante, 30 min supplémentaires. On agite 10 min de plus, refroidit à 50C et on ajoute, sous forte agitation, une solution de 0,05 mol de KPF6 dans 40 cm3 d'eau ; on laisse L'agitation 5 min supplémentaires, puis on décante, extrait les eaux deux fois par 10 cm de dichlorométhane, lave trois fois les solutions organiques avec 20 cm3 d'eau ; on sèche sur sulfate de sodium, et chasse Le solvant sous vide. On obtient un composé identique à celui qui a été décrit dans L'exemple 4. Rdt = 92 X. Exemple 6 : Synthèse du composé de formuLe I (Y = Br ; A = Pf6 ) selon te procédé A. A 0,05 mol de tris-pyrrolidino-phosphine en solution dans 40 cm3 d'éther on ajoute sous agitation à température inférieure à 20 C sous azote en 30 min 0,05 mol de brome ; on observe un précipité blanc abondant. On agite 10 min de plus, refroidit à 5 C et on ajoute, sous forte agitation, une solution de 0,05 mol de KPF6 dans 40 cm3 d'eau ; on laisse L'agitation 10 min supplémentaires. On essore le produit solide, rince deux fois à L'eau et une fois à l'éther. On reprend au dichlorométhane, décante et sèche sur sulfate de sodium ; on chasse sous vide puis sèche sous vide sur P2O5. On obtient un solide qui est pur d'après la RMNH et P. On peut recristalliser le brut dans dichlorométhane/Et20 ou Acétone/Et2O. Rdt = 83 Z. ExempLe 7 : Synthèse du composé de formule I (Y = OBt ; A selon le procédé C (produit de départ de formule 4 avec X = CL et X1 = PF6). A 0,025 mol du composé préparé selon les exemples 4 ou 5, en solution dans 120 cm3 d'acétone, on ajoute en 20 min à température inférieure à 20 C une solution de 0,025 mol de HOBt et 0,025 mol de triéthylamine dans 15 cm3 de dichlorométhane (après avoir éliminé l'eau du HOBt commercial par entrainement azéotropique sur le complexe soluble dans le dichloromethane formé par le mélange de HOBt et de triéthylamine). On laisse réagir 15 min de plus puis le milieu réactionnel est évaporé sous vide. Le solide obtenu est dissous dans un mélange de 50 cm3 d'acétone et 10 cm3 d'eau, puis on ajoute goutte à goutte en agitant 500 cm3 d'eau. Le solide blanc obtenu est filtré et lavé deux fois à l'eau. On le reprend par du dichlorométhane, sèche sur sulfate de sodium et chasse le solvant sous vide. On obtient un composé identique à celui qui a été décrit dans l'exemple 1.Rdt = 75 X. Exemple 8 : Synthèse du composé de formule I (&gamma; = OBt ; A = PF6-) selon le procédé C (produit de départ de formule 4 avec X = Br et X1 = PF6). Par le meme mode opératoire que dans L'exemple 7, mais en utilisant le composé synthétisé dans l'exemple 6, on obtient un composé identique à celui décrit à L'exemple 7 avec un rendement de 90 X. Exemple 9 : Synthèse de dérivés analogues aux composés de l'inven- tion. Ces derives analogues répondent à ta formule I dans laquelle composé 1 b : R =-R' = C H composé 1 d : R,R' = (CH2)5 compose 1 e : R,R' = [(CH2)2]2 0 On a opéré comme dans L'exemple 1 (procédé C) en utilisant comme produits de départ les aminophosphines dans lesquelles R et R' sont tels que définis ci-dessus, et on a obtenu respectivement les composés ci-après Sel de phosphonium 1b F : 97-100 C (Acétone/Et2O). Analyse : Calculé X : C:41,06 ; H:6,46 ; N:15,97. Trouvé X : C:40,83 ; H:6,46 ; N:15,85. RMNH (CDCl3) : d, 1H (6=8,05 ppm, J=8,3 Hz); t, 1H (6=7,76ppm, J:7,5 Hz) ; d,1h (#=7,68 ppm, J=7,9 Hz) ; t, 1H (#=7,51 ppm, J=7,6Hz) ; q.d, 12H (6=3,30 ppm, J=11,7 et 7,1 Hz) ; t,18H (6=1,16 ppm, J=7,1 Hz) RMN P(CDCl3) : s (#=45,1 ppm) ; septet (#=-143,6 ppm, J=712Hz). Rendement : 90 X. Sel de phosphonium 1d F : 148-90C (CH2Cl2/Et2O). Analyse : Calculé X : C:44,84 ; H:6,05 ; N:14,95. Trouvé Z : C:44,88 ; H:6,07 ; N:14,66. RMN1H (CDCl3) : d, 1H (6=8,07 ppm, J=7,5 Hz);t, 1H (6=7,78ppm, J=7,5 Hz) ; d,îH (6=7,72ppm, J=7,5 Hz); t,lH (#=7,53 ppm, J=7,5 Hz) ; signal large, 12H (#=3,27 ppm) ; signal large, 18H (#=1,59 ppm). RMN P(CDCl3) : s (#=36,9 ppm) ; septet (#=143,6 ppm, J=713Hz). Rendement : 43 Z. Sel de phosphonium le F=165-6 C (Acétone/Et2O). RMNH (DMSOd6) : d, 1H (#=8,28 ppm, J=7,5Hz) ; d, 1H (#=8,12 ppm, J=7,5Hz) ; t, 1H(6=7,88ppm, J=7,5Hz); t,lH(6=7,68 ppm, J=7,5 Hz); signal large, 12H(6=3,63 ppm); signal large, 12H(6=3,38ppm). RMN31P (DMSOd6) : s(6=34,O3ppm); septet (6=-134,8 ppm, J=711 Hz). Rendement : 50 X. Exemple 10 : couplage peptidique. La réaction de couplage entre un acide aminé (ou un peptide) N-protégé et un acide aminé (ou un peptide) C-protége est effectuée à l'aide d'un composé de l'invention en présence d'une amine tertiaire. La réaction se fait à température ambiante en un temps souvent très court selon un mode opératoire très simple qui est semblable à celui qui a été décrit pour BOP par B. CASTRO et al. Tet. Letters, 1972, 4747. Mode opératoire général : A un mélange de 4 mmol d'acide aminé N-protégé, 4,4 mmol d'acide aminé C-protégé (sous forme salifiée) et 4 mmol du composé de l'invention (formule I : &gamma; = OBt ; A- = PF6-), en suspension dans 4 cm de CH2Cl2, on a ajouté, à température ambiante, sous agitation, 11 mmol de DIEA. La réaction a été suivie par CCM. Lorsque la réaction a été terminée, on a ajouté 20 cm3 de solution saturé de NaCl, extrait 3 fois à CH2Cl2, lavé successivement par KHSO2 (3 x 10 cm3), NaHC03 saturé (2 x 10 cm3), et NaCl/H20 saturé (2 x 10 cm3). On a séché sur sulfate de sodium et chassé le solvant sous vide à température ambiante. On a purifié le produit brut par filtration sur colonne de silice. On a répété le même mode opératoire en remplaçant te composé de l'invention par BOP ou l'un des dérivés lb ou Id préparés selon l'exemple 9. Les temps de réaction avec le composé de l'invention, BOP et les dérivés lb et Id sont indiqués dans le tableau ci-après : TABLEAU 1 Couplage Boc PheOH + GlyOEt, HCl Réactif Essai Temps de Rdt X F( C) [(&alpha;;)]@ réaction (h > c=Z,EtOH BOP I t/Z 88 87-88 -5 lb Z 5 81 87-88 -5 Composé de L'invention 3 1/2 90 87-88 -5 Id 4 2 89 87-88 -5 Les résultats ci-dessus montrent que seul le composé de L'invention réalise le couplage en un temps aussi court que BOP. Le tableau 2 ci-apres montre que, dans le cas du couplage d'acides aminés encombrés (essais 5-8), le composé de l'invention effectue le couplage en un temps toujours aussi court avec d'excellents rendements et sans racémisation. L'absence de racémisation a été prouvée, dans le cas des réactions 6 et 7, par une étude HPLC des deux isomères obtenus. Dans l'essai 8, l'étude par RMNtH à 360 MHz montre l'absence de racémisation, alors que le même dipeptide est obtenu avec 4 X d'isomère D-L par couplage avec le réactif DCC/HOBT pourtant réputé comme non racémisant (Tetrahedron Letters, 1984, 40, 1995). Dans le test de Young qui est un test de racémisation trés sensible (J. Chem. Soc. 1963, 881), on observe, avec le le composé de l'invention, 29,5 Z de racémisation (essai 9), ce qui constitue un meilleur résultat que celui qui a été donné par le BOP : 60 Z de racémisation (J. Chem. Res. (s.) 1977, 182). Le couplage du dipeptide Z-GLy-(L)Phe-OH avec ValOMe est un bon test de racémisation, en effet le motif PheOH est sensible de ce point de vue (J. Peptide Protein Res., 1987, 29, 464). Dans le cas de ce couplage, on obtient des résultats excellents du point de vue du rendement Cessai n010). La racémisation a été étudiée par HPLC et RMN1H, par comparaison des deux isomères (essais n010 et 11) ; le pourcentage de D-L (L-L) obtenu est faible (2,5 à 3,3 Z) et peut même etre abaissé à 1,7 X en effectuant la réaction avec tous les réactifs en quantités stoechiométriques essai n 11. Il faut noter que, dans les memes conditions que celles de l'essai n0IO,le BOP conduit à 3,9 X de produit D-L. Ces résultats montrent que le composé de l'invention est un réactif de couplage peptidique aussi performant que le BOP en ce qui concerne la facilité d'utilisation, le temps de réaction et les rendements ; concernant la racémisation, les resultats sont meilleurs. Les abréviations utilisées dans les tableaux 1 et 2 ont les significations ci-aprés : Boc : tertiobutyloxycarbonyl (carbamate) Z : benzyloxycarbonyl (carbamate) Bz : benzoyle Leu : Leucine Val : Vatine Gly : Glycine Phe : Phénylalanine OMe : OCH3 OEt : OC2H5 TABLEAU 2 Obtention de di et tripeptides par le réactif PyPOB (a) Littérature Essai Temps Produits obtenus Rdt F C [&alpha;]D ((c)) ; solvant) % Rq Réf. F C [&alpha;]D [c] ; solvant) n (h) % D-L 5 1/2 Boc-Ileu-Val-OMe 90 166-7 -15 (1 ; AcOEt) 11 166-7 -15 (1,0 ; AcOEt) 6 1/2 Boc-(L) Val- 95 165-6 -10 (2 ; AcOEt) (b) 12 166-7 - 9,3 (2 ; AcOEt) Val-OMe 7 1/2 Boc-(D) Val- 90 107-8 + 7 (2 ; AcOEt) (b) Val-OMe 8 1/2 Z-Val-Val-OMe 70 108-10 (c) 13 107-9 9 1 Bz-Leu-Gly-OEt 80 143 -24 (3,1 ; EtOH) 29,5 (d) 9 156-7 -34 (3,1 ; EtOH) 10 1/2 Boc-Gly- 97 3,3 (e,f) (L) Phe-Val-OMe 11 1/2 Boc-Gly- 83 1,7 (e,g) (L) Phe-Val-OMe 12 1/2 Boc-Gly- 89 2,5 (e) (D) Phe-Val-OMe (a) Tous les composés obtenus ont des spectres RMNH en accord avec les structures attendues. Dans les couplages 10 à 12, la réaction est effectuée au niveau des fragments soulignés. (b) Pur en HPLC par comparaison des isomères obtenus dans les expériences 6 et 7. (c) Pur en RMNH (360 MHz, acétone d6). Le couplage par DCC/HOBT donne 4 % de composé D-L d'après le spectre enregistré dans le même solvant à 220 MHz [Tetrahedron, 1984, 40, 1995]. (d) Avec le BOP on obtient 60 % de racémique [J. Chem. Res. (S), 1977, 182]. (e) Le % de D-L est déterminé par RMN au niveau des signaux des méthyles du groupement i-Pr et par HPLC. On compare les isomères obtenus dans les essais 10 et 12. Les spectres sont en parfait accord avec les données de la littérature [J. Peptide Protein Res., 1987, 29, 464]. (f) Dans les mêmes conditions on obtient 3,9 % de D-L avec le BOP. (g) Tous les réactifs sont en quantités stoechiométriques. REVENDICATIONS 1. Réactif de couplage peptidique, caractérisé en ce qu'il répond à la formule I dans laquelle - R et R' forment ensemble le groupe tétraméthylène - Y est le chlore, le brome ou le groupe benzotriazoyloxy (OBt) - A est le groupe hexafluorophosphate PF6. 2. Réactif de couplage peptidique selon la revendication l, caractérisé en ce que Y est le groupe OBt. 3. Réactif de couplage peptidique selon l'une des revendications 1 ou 2, caractérisé en ce que A est le groupe hexafluorophosphate PF6 4. A titre de produits.nouveaux, les composés de formule I dans laquelle - R et R' forment.ensemble le groupe tétraméthylêne - Y est le chlore ou le groupe benzotriazoyloxy (OBt) - A est le groupe hexafluorophosphate PF6. 5. Procédé pour l'obtention des réactifs de couplage selon la revendication 1, dans laquelle Y est le chlore ou le brome, caractérisé en ce qu'il consiste 1) à transformer la tris-(pyrrolidino)-phosphine en le sel de phosphonium de formule 2 dans laquelle X- est Cl ou Br, R et R' sont tels que définis précédemment, par action du chlore ou du brome dans un solvant, tel que le dichlorométhane, le chloroforme ou l'éther, à une température comprise entre -20 C et +250C 2) à précipiter le sel de formule 2 ci-dessus, apres évaporation du solvant, par action d'une solution aqueuse d'hexafluorophosphate de formule MPF6 , dans laquelle M est un cation métallique, tel que Na , K+ ou le cation NH4+ 6.Procédé pour l'obtention des réactifs de couplage selon - la revendication l, dans laquelle Y est le chlore, caractérisé en ce qu'il consiste l) à transformer l'oxyde de tris-(pyrrolidino)-phosphine en le sel de phosphonium de formule 2a dans laquelle X est Cl et Xl est Cl ou P02C12, R et R' sont tels que définis précédemment, par action de l'oxychlorure de phosphore ou du phosgène dans un solvant inerte, tel que le dichlorométhane ou le chloroforme, à une température comprise entre -200C et +250C; 2) à précipiter le sel de formule 3 apres évaporation du solvant, par action d'une solution aqueuse d'hexafluorophosphate de formule MPF8 , dans laquelle M est un cation métallique, tel que Na+ ou K+ ou le cation NH4+. 7. Procédé pour l'obtention des réactifs de couplage selon la revendication 1, dans laquelle Y est OBt, caractérisé en ce qu'il consiste 1) à faire réagir le sel d'halogénophosphonium de formule 4: dans laquelle X1 est Cl, Br ou PF6-, X, R et R' sont tels que définis précédemment, avec le N-hydroxy-benzotriazole-1,2,3 (HOBt) en présence d'une base tertiaire, telle que par exemple la triéthylamine au sein d'un solvant approprié tel que le dichlorométhane à une température comprise entre 15 C et 250C, pour former le composé de formule 5 dans laquelle Y est OBt et X1 est tel que défini précédemment 2) et, dans le cas où X1 est Cl ou Br, à précipiter le sel de formule 6 dans laquelle Y est tel que défini-précédemment, après évaporation du solvant, par action d'une solution aqueuse dthexafluorophosphate de formule MPF6, dans laquelle M est tel que défini ci-dessus. 8. A titre d'intermédiaires de synthèse les composés de formule Ia dans laquelle : - R et R' forment ensemble le groupe tétraméthylène ; - Y est Cl, et A est Cl, Br ou P02C12 ; - Y est Br et A est Cl ou Br ou bien - Y est OBtet A est Cl ou Br.