FR 2649796 A1 19910118 FR 8909527 A 19890713 La présente invention est relative a un perfectionnement apporté à l'étape de révélation de la chromatographie en couche mince, à un dispositif de révélation pour la mise en oeuvre dudit perfectionnement ainsi qu'à une. installation comportant ledit dispositif. La chromatographie en couche mince (CCM) est une méthode de séparation par migration différentielle entre une phase stationnaire et une phase mobile. La couche mince présente un certain nombre d'avantages (notamment rapidité de migration, emploi de n'importe quel type de réactif de révélation). C'est une méthode d'identification qui permet notamment de déterminer la pureté d'un produit, les produits de décomposition donnant des tâches supplémentaires. La CCM présente de nombreuses applications qualitatives tant dans le domaine pharmaceutique que dans le domaine agro-alimentaire. Cependant, la CCM se prête à une interprétation quantitative avec des erreurs de 5 à plus de 10 % dans certains cas. La CCM comprend cinq étapes le dépôt des substances à identifier et/ou à doser sur un support approprié . la migration . le séchage . la révélation la lecture. Un certain nombre de ces opérations ont été optimisées, afin de diminuer les risques d'erreurs inhérents aux différentes manipulations ; en particulier, les opérations de dépôt, de migration, de séchage et de lecture ont notamment été automatisées et ont permis de diminuer notablement les risques d'erreur ; par contre, la révélation; à l'heure actuelle, lorsqu'elle est nécessaire, est réalisée soit - par pulvérisation de réactifs spécifiques qui permettent d'obtenir des tâches colorées ou fluorescentes, soit - par immersion totale de la plaque de chromatographie. Ces techniques de révélation par pulvérisation ou immersion présentent un certain nombre d'inconvénients En particulier, la pulvérisation - donne des résultats différents selon le manipulateur - donne un fond non homogène - peut nécessiter l'utilisation d'air comprimé, et donc d'une installation particulière - peut provoquer des traînées ou coulées qui rendront la lecture difficilement interprétable. La révélation par immersion pour sa part - peut provoquer une diffusion et une dilution des taches - donne un fond trop coloré - réclame une quantité importante de révélateur. La présente invention s' est, en conséquence, donné pour but de pourvoir à un perfectionnement de l'étape de révélation de la chromatographie en couche mince, qui répond mieux aux nécessités de la pratique que les procédés de révélation utilisés jusqu'à présent, notamment en ce qu'il a l'avantage d'améliorer, de manière inattendue, la reproductibilité et la répétabilité des techniques de chromatographie en couche mince, plus particulièrement dans leurs applications quantitatives. C'est également un but de l'invention de pourvoir à un dispositif de révélation pour la mise en oeuvre dudit perfectionnement, ainsi quà une installation comportant ledit dispositif. La présente invention a pour objet tn procédé de révélation en chromatographie en couche mince, caractérisé en ce qulil comprend une mise en contact sous une pression sensiblement uniforme de la plaque de chromatographie à révéler avec une matière appropriée, imprégnée d'une substance ou réactif de révélation approprié. On entend par pression, au sens de la présente invention, l'action de presser ou de pousser avec effort, ladite pression pouvant être exercée manuellement ou mécaniquement. Selon un mode de mise en oeuvre avantageux de l'invention, ladite matière appropriée est constituée d'une matière poreuse, résistant aux réactifs de révélation usuels de la chromatographie et présentant un pouvoir absorbant suffisant pour imprégner complètement ladite plaque de chromatographie, sans l'immerger lors de la mise en contact sous pression et pour réabsorber l'excès de réactif, au moment du retrait de ladite matière de la plaque de chromatographie. Selon une disposition avantageuse de ce mode de mise en oeuvre, ladite matière poreuse est un polymère approprié. Un tel procédé de révélation a l'avantage de donner un fond uniforme et d'améliorer, de manière inattendue, la reproductibilité et la répétabilité des techniques de chromatographie en couche mince, notamment quantitatives. Un tel procédé a également l'avantage d'être aisément automatisable. La présente invention a également pour objet un dispositif de révélation pour chromatographie en couche mince, caractérisé en ce qu'il comprend - une matière poreuse, résistant aux réactifs de révélation usuels de la chromatographie et présentant un pouvoir absorbant suffisant pour imprégner complètement une plaque de chromatographie sans l'immerger au moment de la mise en contact sous pression et pour réabsorber l'excès de réactif lors du retrait de ladite matière poreuse de la plaque de chromatographie, et - un support de manipulation inerte par rapport aux réactifs de révélation, de rigidité suffisante pour permettre l'application d'une pression appropriée sur une plaque de chromatographie en couche mince et sur lequel est monté ou fixé ladite matière poreuse. Selon un mode de réalisation avantageux dudit dispositif, il comprend comme matière poreuse, un polymère approprié. Ledit polymère présente avantageusement une structure de mousse ou d'éponge. Selon une disposition avantageuse de ce mode de réalisation, ledit polymère est une mousse de polyuréthane à alvéoles ouvertes. Selon un autre mode de réalisation avantageux dudit dispositf, il est de forme cylindrique, par exemple un rouleau ou présente une surface semi-cylindrique convexe. Selon encore un autre mode de réalisation avantageux dudit dispositf, il est de forme rectagulaire. Ledit dispositif présente nécessairement une zone de contact plan avec la plaque de chromatographie, pour appliquer une pression sensiblement constante et uniforme sur la plaque de chromatographie, quelque soit la zone de contact. La présente invention a, en outre, pour objet une installation appropriée à l'étape de révélation de la chromatographie en couche mince, caractérisée en ce qu'elle comprend - une zone d'imprégnation du dispositif de révélation conforme à l'invention - une zone de révélation où se trouve la plaque de chromatographie en couche mince à révéler - des moyens de guidage et de déplacement du dispositif entre une position où il-se trouve dans la zone d'imprégnation et une position de repos, le déplacement entre ces deux positions provoquant la mise sous pression du dispositif conforme à l'invention avec la plaque de chromatographie en couche mince et imprégnation de ladite plaque par le réactif de révélation. Selon un mode de réalisation avantageux de l'installation, elle comprend en outre une zone d'égouttage du disposotif, entre la zone d'imprégnation et la zone de révélation. Conformément à l'invention, ledit dispositif est avantageusement un rouleau de forme cylindrique, comprenant un arbre axial dont les extrémités sont rçues dans des glissières de guidage s'étendant latéralement de part et d'autre des zones précitées d'imprégnation, de révélation et de repos. Selon un autre mode de réalisation avantageux de l'installation conforme à l'invention, elle se présente sous la forme d'une boite à couvercle pivotant, permettant l'accès aux zones précitées d'imprégnation, de révélation et de repos et délimitant les glissières précitées avec les parois latérales fixes de ladite boite. Outre les dispositions qui précèdent, l'invention comporte encore d'autres dispositions, qui ressortiront de la description qui va suivre. L'invention sera mieux comprise à l'aide du complément de description qui va suivre, qui se réfère à des exemples de mise en oeuvre du procédé conforme à l'invention et à une description détaillée du dispositif de révélation et de l'installation selon l'invention, avec référence aux dessins annexés dans lesquels - la figure 1 est une représentation en perspective d'un mode de réalisation rectangulaire du dispositif conforme à la présente invention - la figure 2 est une représentation d'un autre mode de réalisation rectangulaire du dispositif conforme à l'invention ; - la figure 3 est une représentation d'un mode de réalisation cylindiuqe du dispositif conforme à l'invention ; - les figures 4, 5 et 6 sont une repréentation d'un mode de réalisation de l'installation conforme à l'invention : les figures 4 et 5 sont des vues en coupe et la figure 6 est une vue en perspective. Il doit être bien entendu, toutefois, que ces dessins et les parties descriptives correspondantes ainsi que les exemples sont donnés uniquement à titre d'illustration de l'objet de l'invention, dont ils ne constituent en aucune manière une limitation. xemp1e. i On réalise une chromatographie sur couche mince pour le dosage du tryptophane comme suit - plaques : cellulose non fluorescente 20 x 20 cm (MERCK) - phase mobile : Butanol 1 : 80 volumes Acide acétique : 20 volumes Eau : 100 volumes - échantillons : solution de tryptophane à 2 mg/ml - dépôts : 10 dépôts de 2 pl, réalisés à l'aide de l'appareil LINOMAT IV (CAMAG) - réactif de révélation : ninhydrine/cuivre solution A : ninhydrine : 1,6 g éthanol : 800 ml acide acétique : 160 ml 2-4-6 collidine : 32 ml solution B : nitrate cuivrique à 2 * dans l'éthanol On mélange 100 ml de solution A et 6 ml de solution B, pour obtenir le réactif de révélation. - On imbibe un dispositif de révélation conforme à l'invention avec le réactif de révélation cidessus - on applique ledit dispositif imbibé sous pression sur la plaque de chromatographie, au moment de la révélation ; - la lecture photodensitométrique est réalisée à l'aide d'un appareil CD60 (DESAGA). Les plaques sont lues avant et après révélation à'aide du dispositif conforme à l'invention. 1. Chromatogramame non révélé - lecture à 254 nm (U.V. direct) : DEPOT AIRE HAUTEUR 1 789,1 173,48 2 637,8 143,91 3 715,5 117,09 4 827,0 193,25 5 888,4 205,85 6 859,4 205,44 7 879,! 209,75 8 873,1 203,51 9 897,7 202,95 10 874,5 182,27 m = 824,16 m = 188,75 # = 85,958 # = 21,619 CV = 10,43 % CV = 11,45 % La répétabilité est mesurée par le coefficient de variation (CV) ; elle est d'autant meilleure que le coefficient de variation est faible. 2. Chromatogramme après révélation à la ninhydrine par le dispositif de. révélation sous pression -. lecture à 510 nm : DEPOT AIRE HAUTEUR 1 2312,9 460,27 2 2136,7 428,67 3 2225,0 467,70 4 2268,3 482,02 5 2209,7 471,81 6 2122,8 460,02 7 2142,7 465,76 8 2174,3 452,84 9 2188,1 455,28 10 2207,4 422,76 m = 2198,8 m = 456,71 o = 59,835 a = 18,411 CV = 2,72 % CV = 4,03 % Le dispositif de révélation conforme à l'invention permet, de manière inattendue, d'obtenir des résultats et une précision nettement améliorés par rapport à la technique de référence (U.V.). Exemple 2 Les résultats obtenus dans l'exemple 1 sont comparés à ceux obtenus lorsque, dans les mêmes conditions, la révélation est réalisée par pulvérisation. 1. Chromatogramme non révélé - lecture à 254 nm (U.V. direct) : DEPOT AIRE HAUTEUR 1 922,1 181,59 2 918,1 179,51 3 869,5 175,36 4 871,4 170,30 5 842,5 167,04 6 833,9 164,93 7 835,3 166,51 8 864,8 171,63 9 829,6 170,97 10 870,8 174,08 m = 865,8 m = 172,19 a = 32,96 a = 5,502 CV = 3,81 % CV = 3,19 % 2. .Chromatogramme après révélation à la ninhydrine par pulvérisation classique - lecture à 510 nm. DEPOT AIRE HAUTEUR 1 1686,9 321,07 2 1639,0 312,03 3 1729,3 331,35 4 1743,1 332,25 5 1676,3 327,02 6 1614,7 313,29 7 1508,7 290,53 8 1455,4 283,81 9 1493,4 296,73 10 1482,8 290,04 m = 1602,96 m = 309,812 a = 108,81 a = 18,309 CV = 6,79 % CV = 5,91 % Lorsque l'on utilise la technique de révélation classique, par pulvérisation, les résultats sont moins bons qu'en U.V. direct. Le procédé conforme à l'invention peut notamment être mise en oeuvre à l'aide de l'un des dispositifs décrits ci-après. Le dispositif conforme à la présente invention, représenté a'la figure 1 comprend un support rigide 10 muni d'un organe de manipulation (préhension) 11, sur lequel est montée une matière en polymère 20, imbibée de réactif de révélation. Dans cette réalisation, et ce, de manière non limitative, ledit dispositif est de forme carrée, de côté de 200 mm, c'est à dire de même dimension que les plaques de chromatographie ; la matière polymérique présente une épaisseur de 4,5 mm, alors que le support rigide à une épaisseur de 20 mm. Ledit dispositif présente en coupe une forme en T inversé et est avantageusement utilisé pour appliquer le réactif de révélation sur une plaque de chromatographie, comme décrit dans l'exemple 1 ci-dessus. Après utilisation, ledit dispositif est stocké dans des cuves hermétiques appropriées. La figure 2 représente un autre mode de réalisation du dispositif conforme à l'invention dans lequel la partie du support rigide 10 en contact avec le support polymérique 20 imbibé de réactif est légèrement bombé. Le dispositif conforme à la présente invention, représenté à la figure 3. comprend un support rigide 10' en forme de rouleau, muni d'un axe de manipulation 11' autour duquel est appliquée la matière poreuse polymérique 20', imbibée de réactif de révélation, comme décrit dans l'exemple 1 ci-dessus. Ledit dispositif est notamment utilisé dans une installation conforme à l'invention, comme visible sur les figures 4, 5 et 6 pour appliquer le réactif de révélation par roulement sur une plaque de chromatographie 30. La figure 4 représente un mode de réalisation d'une installation conforme à l'invention sous la forme d'une boîte 2, qui comprend - une zone d'imprégnation A du dispositif 1, représentée dans cette installation par un bac dans lequel se trouve un réactif de révélation, comme décrit dans l'exemple 1 - une zone de révélation C, où se trouve la plaque de chromatographie 30 à révéler et qui comprend également les supports de plaque 311 et 312 ainsi que les butées 32 et 322, qui bloquent ladite plaque - des moyens de guidage et de déplacement 40 du dispositif 1 entre une position la où il se trouve dans la zone d'imprégnation et une position îd dite de repos (zone D) ; les extrémités de l'axe 11' dudit dispositif sont ainsi reçues dans les glissières 41 du moyen 40 s'étendant au dessus de la plaque de chromatographie 30 - une zone d'égouttage B du dispositif 1 (position lb dudit dispositif), située entre la zone d'imprégnation A et la zone de révélation C. Une telle installation permet l'application d'une pression constante et uniforme sur ladite plaque 30 et permet de ce fait l'obtention d'une révélation nettement améliorée, comme montré aux exemples 1 et 2 ci-dessus. Un dispositif conforme à l'invention 1 est tout d'abord placé dans la zone d'imprégnation A, en position la et est ainsi imprégné de réactif de révélation ; puis ledit dispositif est transféré en position lb, dans la zone d'égouttage B, dans laquelle l'éventuel excédent de réactif est égoutté, avant le passage du dispositif 1 dans la zone de révélation C, dans laquelle ledit réactif est libéré du dispositif et imprègne uniformément la plaque à révéler. La figure 5 représente ladite installation, avec la partie amovible 50a du couvercle 50 pivotant, qui permet l'accès aux zones d'imprégnation et de révélation, ouverte. Ledit couvercle présente deux rebords latéraux dé coupés en gradins, lesdits rebords du couvercle délimitant les glissière 41 du moyen 40 avec les parois. 60 latérales de la boîte 2, découpées de façon à correspondre auxdits rebords. La figure 6 représente une vue en pespective de l'installation telle que décrite aux figures 4 et 5. Ainsi que cela ressort de ce qui précède, l'invention ne se limite nullement à ceux de ses modes de mise en oeuvre, de réalisation et d'application qui viennent d'être décrits de façon plus explicite ; elle en embrasse au contraire toutes les variantes qui peuvent venir à l'esprit du technicien en la matière, sans s'écarter du cadre, ni de la portée, de la présente invention. REVENDICATIONS 1') Procédé de révélation en chromatographie en couche mince, caractérisé en ce qu'il comprend une mise en contact sous une pression sensiblement uniforme de la plaque de chromatographie à révéler avec une matière appropriée, imprégnée d'une substance ou réactif de révélation approprié. 2-) Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que ladite matière appropriée est constituée d'une matière poreuse, résistant aux réactifs de révélation usuels de la chromatographie et présentant un pouvoir absorbant suffisant pour imprégner complètement ladite plaque de chromatographie, sans l'immerger lors de la mise en contact sous pression et pour réabsorber l'excès de réactif, au moment du retrait de ladite matière de la plaque de chromatographie. 3 ) Procédé selon la revendication 1 ou la revendication 2, caractérisé en ce que ladite matière poreuse est un polymère approprié. 4 ) Dispositif de révélation pour chromatographie en couche mince, caractérisé en ce qu'il comprend - une matière poreuse (20, 20'), résistant aux réactifs de révélation usuels de la chromatographie et présentant un pouvoir absorbant suffisant pour imprégner complètement une plaque de chromatographie sans l'immerger au moment de la mise en contact sous pression et pour réabsorber l'excès de réactif lors du retrait de ladite matière poreuse de la plaque de chromatographie, et - un support de manipulation (10, 11 ; 10', 11') inerte par rapport aux réactifs de révélation, de rigidité suffisante pour permettre l'application d'une pression appropriée sur une plaque de chromatographie en couche mince et sur lequel est monté ou fixé ladite matière poreuse. 5 t Dispositif selon la revendication 4, caractérisé en ce qu'il comprend comme matière poreuse, un poly mère approprié. 6') Dispositif selon la revendication 5, carac- térisé en ce que ledit polymère est une mousse de polyuréthane à alvéoles ouvertes. 7') Dispositif selon l'une quelconque des revendications 4 à 6, caractérisé en ce qu'il est de forme cylindrique, tel qu'un rouleau ou présente une surface semi-cylindrique convexe. 8') Dispositf selon l'une quelconque des revendications 4 à 6, caractérisé en ce qu'il est de forme rectangulaire. 9') Installation appropriée à l'étape de révélation de la chromatographie en couche mince, caractérisée en ce qu'elle comprend -: - une zone d'imprégnation (A) du dispositif (1) de révélation selon l'une quelconque'des revendications 4 à 8 - une zone de révélation (B) où se trouve la plaque de chromatographie en couche mince (30) à révéler - des moyens de guidage et de déplacement (40) du dispositif entre une position où il se trouve dans la zone d'imprégnation et une position de repos (lb), le déplacement entre ces deux positions provoquant la mise sous pression du dispositif selon l'une quelconque des revendications 4 à 8 avec la plaque de chromatographie en couche mince et imprégnation de ladite plaque par le réactif de révélation. 10') Installation selon la revendication 9, caractérisée en ce qu'elle comprend en outre une zone d'égouttage (B) du dispositif, entre la zone d'imprégnation et la zone de révélation. -11') Installation selon la revendication 9 ou la revendication 10, caractérisée en ce que ledit dispositif 1 est avantageusement un rouleau de forme cylindrique, comprenant un arbre axial dont les extrémités sont reçues dans des glissières de guidage (41) s'étendant latéralement de part et d'autre des zones précitées d'imprégnation, de révélation et de repos. 12') Installation selon l'une quelconque des revendications 9 à 11, caractérisée en ce qu'elle se présente sous la forme d'une boite (2) à couvercle (50) dont la partie pivotante (50a) permet l'accès aux zones précitées d'imprégnation, de révélation et de repos et délimitant- les glissières précitées avec les parois latérales fixes (60) de ladite boite 2.