FR 2632957 A1 19891222 FR 8808114 A 19880617 DESCRIPTION Titre : Acopiéroside II : hétéroside cardiotonique d'Acocanthera spectabilis (Hook). Obtention : La poudre de graine d'Acocanthera spectabilis (Hook) désséchée, 100 gr, a subi un traitement chimique en 5.étapes : Dégraissage à l'éther de pétrole - Extraction des hétérosides par le méthanol au Soxhlet - Evaporation sous vide de la phase alcoolique - Chromatographie sur colonne de silice par une série de solvant avec gradient de polarités. . Benzène pur . Benzène/chloroforme 50/50 . Chloroforme pur . Chloroforme/méthanol 98/2 . Chloroforme/méthanol 95/5 . Méthanol pur. - Evaporation sous vide des différentes fractions. - Identification des hétérosides par la réaction deKedde à l'acide dinitrobenzolque. Résultat : La fraction qui s'est avérée la plus active est la fractic isolée à partir du chloroforme/méthanol 98/2, qui donne un produit cristallisé avec R. Kedde +., que nous appelons ACOPIEROSIDE II. Structure chimique : L'Acopiéroside II est un nouveau hétéroside cardiotonique comportant une chaîne linéaire de trois sucres attachés à une genine steroïdique en position 3, l'Acetoxy-14 Aconénosigénine L'identification des sucres, leurs points de branchement et leur configuration ont été établis par Résonance Magnétique Nucléaire du proton au moyen d'expériences bidimensionnelles COSY, COSY retardée. La nature de la génie et ses substituants sont déduits de spectres RMN au 13C, interprétés par le moyen du spectre de corrélation Carbone-proton. L'Acopieroside II, qui est un O-14-acétyl acovénoside C correspond à la formule (a) suivante Formule a ACOPIEROSIDE II 0 - 14 - acétyl acovénoside C (= 0 - 14 - acétyl ss -gentiobiose 14 acovenose 13 acovénosigénie Formule brute : C44H68O20 Ion moléculaire (Spectr.Masse) : 916 Infra-rouge : 3600, 3400, 1740, 1615 cm Ultra-violet : 220, 290 nm Pouvoir rotatoire : {&alpha;}D = -25 (C = 0,87, MeOH 80 %) Spectre de RMN du proton (CD30D, 300 MHz). (Annexe p. - 7) Spectre RMS 13C. (Annexe p. 8 Caractéristiaues phvsico-chimique du composé - peu soluble dans l'eau - soluble dans les solvants organiques - réaction positive au Métadinitrobenzène - réaction positive à l'acide dinitrobenzoSque. Propriétés pharmacologiques Dose léthale : La dose minimum léthale est égale à 0,1300 mg/Kg en perfusion continue chez le cobaye. Etudes hémodynamiques chez le chien : L'animal anesthésié à l'urétha /Chloralose est maintenu sous respiration assistée durant toute la durée de l'expérimentation comme suit L'anesthésie est induite au Nembutal à la dose de 25 mg/Kg/IP, donna un sommeil léger et de brève duree. Le maintien de l'anesthésie s'effectue par un mélange chloralose/ uréthane à raison de 2,5 ml/Kg dans du sérum physiologique à 9 %o pour un volume final de 600 ml. La perfusion est maintenue à 400 C à raison de 2 ml/mn. Un cathéter introduit dans la veine saphène permet l'injection du produit (à savoir 50 mcg/Kg d'Acopiéroside II). Un deuxième cathéter introduit dans la carotide gauche, que l'on pousse dans l'aorte, puis le ventricule gauche, permet de détermine la PIVg (Pression intra ventriculaire gauche). Les électrodes électrocordiographiques sont placées en dérivation I (patte droite AV, patte gauche AR). Le chien est hépariné à raison 1/10 ml/Kg d'Héparine IV en sol. à 0,05 g/ml. La mesure de dp/dt (dérivé de la pression intraventriculaire) don la vitesse d'installation de la pression et reflète la facilité qu' le myocarde à se contracter. La jauge de contrainte, implantée sur la face antérieure du ventric gauche, à gauche de l'artère interventriculaire antérieure et juste en dessous de la seconde branche de bifurcation gauche de cette dernière. L'axe de fixation de la jauge est perpendiculaire au grand axe du c Résultats : L'Acopiéroside II entraîne 1) Une augmentation de la PIVg et de dp/dt (cette augmentatio reflète la facilité du coeur à se contracter, caractéristique des héterosides cardiotoniques). 2) Une augmentation de la force des contractions, mise en évidence par la jauge de contrainte. C-es phénomènes se manifestent des la 30e minute et durant environ 2 Comparativement à des doses analogues, la Digitaline et la Digoxine donnent des effets moins intenses. En conclusion, l'Acopiéroside II, se comporte comme un cardiotonique majeur de type digitalique. L'utilisation thérapeutique de ce compose sera celle d'un cardiotonique majeur, plus puissant que l'ouabaïne. Applications thérapeutiques Médicament cardiotonique majeur. Dose utile théorique en I.V. - 0,013 mg/Kg à 0,026 mg/Kg Indications - insuffisance cardiaque - troubles du rythme (fibrillation, flutter auriculaire, tachycardie paroxystique). Contre-indications - bradycardie Forme galénique Solution d'Acopiéroside II 10 4 (0,1 mg/ml) Acopiéroside II........... Il- 10 mg DMS0 1 ml Soluté physiologique 9 %O = 100 ml Ampoule I.V. ANNEXE ACOPIEROSIDE II R.M.N. 1H dans oe3 0D - 1.179 (s) - 3H - CH3 - 18 - 1.383 (s) -3H - CH3 - 19 - 2.182 (s) - 3H - 0-C - CH3 en 14 0 - 6.187 (sl)- 1H - H - 21 - 5.30 (dd)- 1H - J = 18 ; 1,3 H - 22 - 5.18 (dd)- 1H - J = 18 ; 2,5 - 4.47 (m) - 1H - W1/2 = 8 - H - 3 - 4.00 (sl)- 1H - H - 1 - 3.12 (dt)- 1H - J = 6 ; 2.8 - H - 5 - 5.18 (sl)- 1H - H - 1 - 4.08 (sl)- 1H - H - 2 - 3.77 (t) - 1H - J = 3.3 - H - 3 ) &alpha; -L-acooenose - 4.44 (sl)- 1H - H - 4 - 4.33 (ql)- 1H - J = 6.8 - H - 5 - 1.67 (d) - 3H - J = 6.8 - H - 6 ) - 4.68 (d) - 1H - J = 7.6 - H - 1' - 3.52 (dd)- 1H - J = 8.8 ; 7.9 - H - 2' - 3.66 (m) - 1H - H - 3' Dglucose - 3.73 (t) - 1H - J = 7.6 - H - 4' - subt en 6- - 3.60 (m) - 1H - H = 5' - 4.03 (dd)- 1H - J = 12 1 4.3 - H - 6' - 4.15 (dd)- 1H - J = 11.8 ; 2.2 - H - 6' - 4.69 (d) - 1H - J = 7.6 - H - 1 - 3.58 (t) - 1H - J = 7.4 - H - 2 - 3.63 (m) - 1H - H - 3 - 3.63 (m) - 1H - H - 4 ) ss D-glucose - 3.73 (m) - 1H - H - 5 - 4.13 (dl)- 1H - J = 11.5 - H - 6 ) - 4.42 (dl - 1H - J = 11.5 - H - 6 R.M.N. 13C (Acovenose) 16.4 - CH3 - 18 C - 1 - CH - 99.6 19.2 - CH3 - 19 C - 2 - CH - 69.7 22.1 - CH2 - 11 C - 3 - CH - 77.0 22.3 - CH2 - 7 C - 4 - CH - 77.7 27.2 - CH2 - 6 C - 5 - CH - 69.5 28.0 - CH2 - 16 C - 6 - CH3- 17.0 29.3 - CH2 - 2 OCH3 - 57.0 32.0 - CH - 5 32.7 - CH2 - 4 Glucose 33.3 - CH2 - 15 C - 1' - CH - 104.2 38.5 - CH - 9 C - 2' - CH - 75.0 C - 2' - CH - 75.0 40.7 - CH2 - 12 C - 3' - CH - 77.8 41.3 - C# - 10 C - 4' - CH - 71.0 42.7 - CH - 8 C - 5' - CH - 77.7 50.9 - C# - 13 C - 6' - CH2 61.9 52.0 - CH - 17 24.2 - OAC 117.9 - CH - 21 C - 1 - CH - 105.6 177.2 - C - 20 C - 2 - CH - 75.3 73.8 - CH - 3 C - 3 - CH - 77.6 74.0 - CH - 1 C - 4 - CH - 71.0 86.2 - C - 14 C - 5 - CH - 76.7 C - 6 - CH - 69.6 REVENDICATIONS 10/ Composé caractérisé en ce qu'il correspond à la formule a et appelé ACOPIEROSIDE Il. Formule a ACOPIEROSIDE II 20/ Produit caractérisé en ce qu'il est obtenu à partir de la graine d'Acocanthera spectabilis (HOOK) et correspondant à la formule (a) selon la revendication 10. 3 / Composé selon la revendication 10, caractérisé en ce qu'i. présente les caractéristiques physico-chimiques suivantes - peu soluble dans l'eau - soluble dans les solvants organiques - réaction positive au Mêtadinitrobenzêne - réaction positive à l'acide dinitrobenzoique. 40/ Composé appelé Acopiéroside II selon la revendication 10, 20 et 30 présentant des effets hémodynamiques sur le coeur de ty] digitalique, caractérisé par une augmentation de la force de con traction de celui-ci. 50/ Médicament caractérisé par Ie fait qu'il contient un compos selon l'une quelconque des revendications précédentes utilisable thérapeutique dans les insuffisances cardiaques et les arythmies. 60/ Médicament caractérisé selon la revendication 50 en ce qu se présente sous la forme galénique suivante Acopiéroside II 10 mg DMSO 1 ml Soluté physiologique 9%o 100 ml N4POULE I.V. 70/ Utilisation du composé selon l'une quelconque des revendic tions de 10 à 4" pour la préparation d'un médicament destiné au t. tendon t des insuffisances cardiaques et des arythmies.