FR 2632525 A1 19891215 FR 8807914 A 19880614 La présente invention concerne l'enzyme myéloperoxydase humaine (MPO) à titre de médicament. Elle concerne donc également son utilisation pour ia fabrication de compositions pharmaceutiques en contenant ainsi que les compositions pharmaceutiques elles-mêmes. Plus précisément, l'application thérapeutique visée a pour objet le traitement des immunodéficients en thérapie humaine par le renforcement de l'activité antimicrobienne au niveau des macrophages, et ceci dans tous les cas d'immunodéficiences qu'elles soient occasionnées notamment par le SIDA, les brûlures ou les irradiations. La résistance à l'infection par les microorganismes met en oeuvre des fonctions non-spécifiques (action d'enzymes, pH, paroi épithéliale)-et des réponses immunitaires adaptatives des cellules lymphocytes B et T. Les fonctions non spécifiques empêchent l'in- vasion de la majorité des agresseurs. Cependant, lorsque cette première ligne de défense cède, le système phagocytaire entre en jeu, détruit les agents infectieux et stimule les fonctions d'immunité conférées par les cellules B et T. Toute anomalie, héréditaire ou acquiSe, du système phagocytaire a des conséquences graves puisque même les micro-organismes normalement peu pathogènes y échappent et déclenchent des infections récurrentes. Par ailleurs, toute déficience du système immunitaire lui-même, au niveau des cellules X ou B, conduit à une susceptibilité exacerbée aux infections virales et bactériennes intra- ou extracellulaires. Ces déficiences peuvent être héréditaires ou acquises (ex : SIDA - déficience élective en cellules T). La plupart des personnes souffrant de ces déficiences subissent l'infection d'organismes opportunistes (bactéries, protozoaires, etc.). Dans l'ensemble des cas d'immunodépression, il est donc souhaitable que le système phagocytaire soit aussi efficace que possible pour limiter les conséquences des agressions extérieures. Accessoire en conditions normales, la phagocytose revêt un caractère essentiel lorsque la réponse immune B et X s'affaiblit. Parmi les cellules associées à la réponse immunitaire, les leucocytes polymorphonucléaires représentent un intérêt particulier dans le contexte de la lutte contre les infections. Ces cellules contiennent une enzyme, la myéloperoxydase, dont l'action microbicide est bien documentée. Les polynucléaires ne présentent aucune spécificité vis-à-vis d'un antigène, mais Jouent un rôle essentiel en cas d'inflammation aiguë, avec les anticorps et le système du complément, dans la défense de l'hôte contre les micro-organismes. Leur fonction principale est la phagocytose. Au cours de ce processus, les micro-organismes sont inclus dans des va cuoles (phagosomes) qui fusionnent avec les granules contenant la myéloperoxydase pour former les phagolysosomes. Au cours de la phagocytose, l'activité enzymatique de la myéloperoxydase conduit à la formation d'HOCl, un composé bactéricide (acide hypochloreux) puissant; cette activité requiert H202 (eau oxygénée), qui apparaît dans le polymorphonucléaire lors de sa stimulation par divers agents et notamment par les réactions immunologiques provoquées par les micro-organismes. L'acide hypochloreux est oxydant par lui-même, mais produit des dérivés plus oxydants encore, les chloramines. Enfin, réagissant avec H202, dont il est issu, il produit une forme d'oxygène extr8mement oxydante, 1' oxygène singulet. Le problème majeur se situe toutefois au niveau des macrophages. En effet le macrophage est une très grande cellule, plus robuste que le polymorphonucléaire, capable, à l'instar de ce dernier, de phagocyter les micro-organismes. Il possède également un système générateur d'H202, mais n'est cependant pas capable de produire la myéloperoxydase. Cette déficience diminue son efficacité défensive. On a découvert toutefois selon l'invention, que les macrophages peuvent incorPorer et utiliser la myéloperoxydase qui reste active après pénétration dans les macrophages, acquisition complétant efficacement leur arsenal cytolytique et bactériolytique, en particulier pour la destruction d'agents infectieux divers affectant les patients immunodéprimés. Selon l'invention la myéloperoxydase peut être obtenue par purification analytique à partir de leucocytes polymorphonucléaires. Néanmoins avantageusement l'enzyme myéloperoxydase humaine utilisée sera produite par génie génétique avec la-technologie de l'ÂDN recombinant. Pour ce faire~, les étapes essentielles sont 1) construction d'une banque de clones ADNc représenta tive des produits synthétisés dans les cellules leu cocytaires et criblage de cette banque avec une sonde appropriée caractéristique de la myéloperoxydase hu maine. Â l'issu de cette opération, on obtient un clone ÂDNc codant pour l'enzyme. 2) l'avec myéloperoxydase doit alors etre manipulé pour permettre son expression dans divers systèmes hôtes/ vecteurs. Une construction modulaire s impose Si l'on veut être capable d'évaluer l'expression dans des sys tèmes aussi variés que E.coli, la levure, les cellules de mammifères ou les cellules d'insectea. L'obtention d'une enzyme active, correctement assemblée et pro cessée, se fera avantageusement dans des systèmes de cellules eucaryotes. Quoi que la myéloperoxydase une fois dans le plasma soit très vite captée par les macrophages, des systèmes d'administration spécifiques délivrant de façon optimale l'enzyme dans les macrophages, peuvent être utilisés selon l'invention, réalisant des conjugués de la myéloperoxydase par couplage covalent avec un transporteur présentant une affinité pour les macrophages. On peut citer à ce titre des transporteurs tels que l'albumine humaine mannosylée mais aussi des anticorps ou fragments d'anticorps tels que la partie constante Fc dirigés contre des récepteurs présents sur les macrophages. D'autres systèmes consistent à coupler par complexation non covalente ou par manipulation d'ADN un anticorps ou fragment d'Ac spécifique du macrophage à l'enzyme myéloperoxydase humaine pour obtenir un"complexe immun" L'administration de tels conjuguées ou complexes immuns conduit au ciblage de la MPO humaine vers le macrophage, à son ingestion par phagocytose et à la libération de l'enzyme sous forme active à l'intérieur du macrophage, son site d'action privilégié, où elle participe à la lutte contre les infections. Dans le cas des complexes immuns préparés par génie génétique, l'ADN codant pour la MPO active ou sous forme de précurseur naturel est couplé à l'ADN codant pour un fragment d'immunoglobuline reconnaissant spécifiquement les macrophages. La présente invention a donc pour objet, à titre de médicament, un composé consistant dans l'enzyme myéloperoxydase humaine. L'invention a également pour objet, à titre de médicament, un composé consistant dans un conjugué de la myéloperoxydase par couplage covalent ou complexation avec un transporteur présentant une affinité pour les macrophages, tels que l'albumine humaine mannosylée ou un anticorps ou fragments d'anticorps comme la partie constante Suc dirigée contre des récepteurs présents sur les macrophages. Un autre composé, obJet de la présente invention, délivrant la myéloperoxydase de façon optimale vers les macrophages, consiste également dans des liposomes, notamment des liposomes biopolymérisés, dans lesquels la myéloperoxydase se trouve encapsulée. Les médicaments selon l'invention sont en particulier utiles pour lutter-contre les infections à l'intérieur des macrophages. De préférence, l'enzyme myéloperoxydase humaine, utilisée selon l'inventlon-, est d'origine recombinante, c'est-à-dire préparée par génie génétique. En outre, la présente invention a pour objet l'utilisation des composés selon l'invention pour la fabrication de compositions pharmaceutiques utiles notamment-pour le traitement des immunodéficiences occasionnées en particulier par le SIDA, les brûlures ou les irradiations. Enfin, la présente invention a pour obJet des compositions pharmaceutiques comprenant, à titre de principe actif, les composés selon l'invention. Les compositions pharmaceutiques selon l'invention peuvent se présenter sous différentes formes appropriées pour des formes d'administratidn diverses notamment par voie parentérale, systémique ou topique ou par injection intra-veineuse dans la mesure où les macrophages cibles sont présents non seulement dans le sang mais aussi dans les autres zones de l'organisme. Les compositions pharmaceutiques selon l'invention comportent alors outre le principe actif, des supports pharmaceutiques acceptables pour la forme d'administration en cause. L'administration parentérale de la myéloperoxydase ou de cagoSsselon l'invention est très appropriée pour les divers syndromes immunodépressifs. La diminution ou la suppression des barrières naturelles et immunitaires favorise l'apparition d'infections dues à des germes pathogènes -ou opportunistes. Les déficiences du système immunitaire (par exemple déficiences en cellules T, SIDA, irradiation, chimiothérapie anticancéreuse...) sont souvent associées à des infections généralisées (bactéries, mycoses, viroses, protozoaires ...) très difficiles à contrôler avec les seuls agents antibiotiques et chimiothérapeutiques existants. Dans ces conditions, la myéloperoxydase peut aussi être employée par voie systémique afin de renforcer l'activité antiseptique des macrophages, au cours de la phagocytose. En effet, les résultats expérimentaux indiquent que les macrophages et les monocytes ont une activité cytolytique et bactériolytique accrue en présence de l'enzyme. La myéloperoxydase, ou un composé selon l'invention, peut également être administré(e) par application topique sur notamment des ulcères torpides, où la microvascularisation est déficiente (ulcère variqueux). Pour cette application topique la myéloperoxydase sera incorporée par exemple dans de la pâte à l'eau selon une formulation dermatologique connue. Au moment de l'emploi on pourra procéder à un mélange extemporané de la suspension de myéloperoxydase avec - soit une solution diluée de peroxyde d'hydrogène (con centration 0,3 % par exemple) - soit une autre enzyme telle que la xanthine oxydase. Dans ce cas il convient d'aJouter à la suspension de myéloperoxydase une concentration 10 3M d'hypoxanthine et éventuellement de chlorure d'ammonium. Ce mélange de pâtes produit un dégagement de HOlO et une formation de chlorure d'amine, particulièrement efficace pour le nettoyage des plaies torpides. D'autres indications thérapeutiques sont envisageables par voie topique 1. L'utilisation de la myéloperoxydase est intéressante dans la prévention et le traitement des infections intercurrentes au cours des brûlures thermiques, chimiques ou par irradiation. 2. La fonction phagocytaire apparaît déficitaire au cours de l'eczéma atopique. Dans ce cas, l'application locale de l'enzyme peut avoir une action stimulante bénéfique sur les macrophages et les monocytes cutanés. 3. La myéloperoxydase peut avoir un rôle adjuvant dans le traitement des infections gingivales, que ce soit chez les sujets immunodéprimés ou au cours des parodontoses La description détaillée qui va suivre est destinée à illustrer d'autres caractéristiques et avantages de la présente invention. Rôle de la myéloperoxydase leucocytaire La défense de notre organisme contre des microorganismes étrangers est assurée par les globules blancs ou leucocytes parmi lesquels on trouve les lymphocytes qui produisent des anticorps, les macrophages, les éosinophiles et les neutrophiles (ou polymorphonu claires) qui détruisent le microorganisme étranger par phagocytose. Au cours de celle-ci les neutrophiles génèrent des espèces oxygénées très toxiques et bactéricides : l'anion superoxyde, le peroxyde d'hydrogène, le radical hydroxyle, l'oxygène singulet. L'action bactéricide du peroxyde d'hydrogène (H202) est augmentée de mille fois par la myéloperoxydase (MPO), enzyme localisée dans les granules azurophiles (ou primaires) des neutrophiles. En effet, cette enzyme catalyse, en présence d'H202, l'oxydation d'ion chlorure (cul ) pour générer de- l'acide hypochloreux (Hool) (1) qui présente des propriétés bactéricides. Les monocytes qui sont les précurseurs des macrophages possèdent un mécanisme d'activité antimicrobienne semblable aux neutrophiles mais ils ne produisent que peu d'H202 et de plus ils possèdent environ trois fois moins de myéloperoxydase que les neutrophiles (2). D'autre part, des experiences in vitro ont montré que, au cours de leur maturation en macrophages, ils perdent totalement leur contenu en myéloperoxydase, ce qui se traduit également par une décroissance de l'activité antibactérienne (3). Ainsi des monocytes fraîchement isolés ont-ils une cytotoxicité de 90 % vis-àvis de Toxoplasmes gondii ingérés tandis que les macrophages (10 jours de culture) ne présentent plus que 12 So de cytotoxicité. Cependant plusieurs travaux ont montré que les macrophages pouvaient phagocyter des débris cellulaires de neutrophiles (4, 5) et acquérir ainsi une activité myéloperoxydasique, avec comme conséquence une augmentation de la toxicité de la faible quantité de peroxyde d'hydrogène produite par les macrophages. D'autres études ont souligné l'importance de l'augmentation de l'activité poroxydasique des macrophages puisque, si les 2 gondii sont préalablement incubés avec de la peroxydase d'éosinophiles de chevaux, les macrophages retrouvent alors une cytotoxicité de 90 , équivalente à celle des monocytes (3, 6). Les mêmes observations ont été faites avec S. aureus (7),le T. cruzi- (8) ou des cellules tumorales (9). SSTERIELS ET NETHODES Purification des monocytes humains. 50 ml de sang d'un suJet normal sont prélevés sur Calciparine (0,3 ml à 25 000 U/ml) puis dilués de moitié avec du tampon PBS 0,01M pH 7,2. 35 ml de sang dilué sont alors déposés un gradient de densité cons titué de 15 ml de Ficoll-Paque (Pharmacia). Après une centrifugation à température ambiante à 1800 t/min pendant 30 minutes, les lymphocytes et les monocytes situés à l'interface du gradient sont récupérés et conservés sur glace. Les cellules sont en suite lavées une première fois avec du tampon PBS puis centrifugées à 2000 t/min pendant 10 minutes à 4 C. L'opération est encore répétée deux fois puis les cel lules sont mises en culture. Culture des monocytes humains. Les monocytes sont purifiés par adhérence sur verre. Dans des alvéoles d'un diamètre de 2,5 cm (Limbro), les cellules sont mises en contact avec 1 ml de milieu de culture hE3M contenant 10 % de sérum humain. Après une incubation à 370C pendant 2 heures dans une atmosphère à 5 % C02, les cellules non-adhérentes (lymphocytes) sont éliminées en enlevant le surnageant. Les monocytes adhérents sont remis en contact avec 1 ml de MEM contenant également 10 % de sérum humain puis laissés en culture. I. Mise en évidence par microscopie de l'incorPoration de la myéloPeroxydase dans les monocytes 1.1 Méthode Les monocytes sont mis en présence de 980 ng/ml de myéloperoxydase leucocytaire humaine semipurifiée. Après 4 heures d'incubation à 370C,le milieu de culture ZEM est enlevé et les monocytes sont lavés soigneusement avec du tampon PBS. Les monocytes sont ensuite décrochés par agitation forte avec 1 ml de tampon PBS puis centrifugés de façon à former un dépôt sur une lame de microscope. Les lames sont fixées par une solution d'éthanol-formaldéhyde (9:1) à température ambiante, lavées ensuite avec de l'eau puis séchées à l'air. L'activité peroxydasique des monocytes est mise en évidence en déposant sur la lame quelques gouttes d'un mélange de benzidine 1 % (30 ml), de nitroprussiate de sodium 4% dilué au dixième (0,3 ml) et 0,3 ml d'H202 dilué 80 fois Après un contact de 2 minutes à température ambiante, les lames sont lavées abondamment avec de l'eau puis séchées à l'air. Dans une dernière étape, les lames sont colorées avec du Giemsa pour la mise en évidence des cellules. Les lames sont ensuite visualisées au microscope. I.2 Résultats Des monocytes témoins ne présentent que très peu de réaction positive à la benzidine. Seuls quelques monocytes développent une coloration légèrement brunatre, démontrant bien ainsi que la myéloperoxydase n'est présente qu'en faible quantité dans ces cellules. Par contre, des monocytes en culture depuis 24 heures et mis en contact avec de la myéloperoxydase réagissent positivement et de manière très nette à la benzidine - Ces premiers résultats confirment une incorporation de la myéloperoxydase par simple phagocytose dans les monocytes. II. Mise en évidence par radioimmunoessai de l'incor poration de la myéloPeroxydase par les monocytes II.1 Méthode Après une mise en contact des monocytes adhérents avec 1 ml de tampon MOM contenant de la myéloperoxydase semi-purifiée ou des débris deneutrophiles obtenus par sonication (le protocole de quatre expériences est décrit en détail dans les résultats), le surnageant est récupéré puis centrifugé à 2000 t/min pendant 10 minutes afin de récupérer les monocytes qui se seraient éventuellement décrochés (culot 1). Les monocytes adhérents sont décrochés par agitation efficace avec 1 ml de tampon PBS. Ils sont ajoutées au culot 1 puis centrifugés à 2000 t/min pendant 10 minutes à 40C, Après trois lavages avec du tampon PBS, les cellules sont comptées puis diluées afin d'obtenir 3 millions de monocytes par ml. La myéloperoxydase des monocytes est solubilisée en traitant les cellules avec du bromure de cetyltriméthylammonium (0,01 XC) et par deux congélations successives. Après le retour à température ordinaire, 100/il du milieu sont prélevés pour la quantification de l'enzyme selon une technique de radioimmunoessai spécifique (10). II.2 Résultats Expérience I Trois millions de monocytes en culture depuis 24 heures sont mis en contact pendant 2 heures avec 1 ml de milieu de culture MEM contenant a) MPO 1 = myéloperoxydase semi-purifiée à une concen tration de 980 ng/ml. b) MPO 2 = 50/ul d'une suspension concentrée de débris de neutrophiles soniqués. 1 myélo- % augmen peroxy- tation du dase contenu ng/ml intracel lulaire monocytes 24h (3 millions) 80 Monocytes 24h + MPO 88 1,1 + MPO 2 heures Monocytes 24h MPO2 incubation Monocytes 24h + MPO 2 358 447 Le taux basal de monocytes n'ayant pas été mis en contact avec de la myéloperoxydase est de 80 ng/ml. Après une incubation de 2 heures avec de la myéloperoxydase semi-purifiée, le taux intracellulaire en myéloperoxydase des monocytes reste inchangé. Par contre, une forte augmentation (447 % du taux basal) de la concentration intracellulaire en myéloperoxydase est observée lorsque les monocytes sont mis au contact de débris de neutrophiles. Cette dernière observation montre que les monocytes sont bien capables de phagocyter des débris de neutrophiles. Expérience 2 Les conditions sont identiques que dans l'ex- périence 1, excepté que le temps d'incubation est de 4 heures. On constate cette fois une nette augmentation (440 %) du contenu intracellulaire en myéloperoxydase des monocytes ayant été mis en contact avec l'enzyme. De même, les débris de neutrophiles sont encore mieux phagocyter que dans l'expérience précédente puisqu'il y a une augmentation de 2070 % du contenu- intracellulaire en myéloperoxydase. myélo- % augmen peroxy- tation du dase contenu ng/ml intracel lulaire Monocytes 24h (3 millions) 54 1 Monocytes 24h + lYPO 1 238 440 4 heures incubation Monocytes 24h + MPO 2 112Q 2070 Expérience 3 Le tableau ci-dessous montre que des monocytes en culture depuis 48 heures incorporent mieux la myéloperoxydase ou les débris de neutrophiles après 2 heures d'incubation que des monocytes en culture depuis 24 heures. myélo- % augmen 3 peroxy- tation du dase contenu ng/ml intracel lulaire Monocytes 48h (3 millions) 102 Monocytes 48h + MPO I 204 1 220 (2 heures incubation Monocytes 48h + MPO 2 788 772 Expérience 4 Des monocytes en culture depuis 24 heures sont mis cette fois en contact pendant 2 heures et 6 heures avec 7 ml de tampon de culture contenant 3920 ng/ml de myéloperoxydasé semi-purifiée (MP03). 4 myéloperoxydase O/o augmen- tation du ng/ml U/ml contenu cellulaire Monocytes 24h (3 millions) 90 0,6 Monocytes 24h + MPO 3 136 0,86 151 (2 heures incubation) Monocytes 24h + tS0 3 324 1,3 360 (6 heures incubation) Après 2 heures de mise en contact avec len- zyme, les monocytes augmentent leur contenu intracellulaire de 151 % alors que dans l'expérience 7, ce contenu était resté inchangé.L'augmentation est encore plus nette après 6 heures de mise en contact. Dans cette ex périence on a également mesuré dans les monocytes l'activité enzymatique de la myéloperoxydase déterminée par l'oxydation de l'o-dianisidino en présence dlH202. Le taux basal de 0,6 U/ml augmente au fur et à mesure que le temps de mise en contact augmente (valeur doublée après 6 heures). Cette constatation est la preuve que la myéloperoxydase exogène incorporée dans le monocyte reste bien enzymatiquement active. III. Cytotoxicité des monocytes ayant incorporé de la myéloperoxydase vis-à-vis de schistosomules III.1 Méthode Les schistosomules sont isolés à partir de cercaires par une technique artificielle (filtration à travers un morceau de peau de souris). Le protocole expérimental suivant a été retenu : des monocytes de 24 heures sont incubés pendant 2 heures avec de la myéloperoxydase puis lavés soigneusement avec du milieu de culture MEM. Ensuite, les monocytes traités ou non avec de la myéloperoxydase sont incubés pendant 6 heures avec du sérum d'un suJet atteint de bilharziose (10 %) ou avec un sérum d'un sujet sain (10 Só) qui sert de con trolle (effet propre du sérum). Des schistosomules préa- labiement traités ou non avec de la myéloperoxydase sont ensuite ajoutés au milieu de culture.Après 16 heures, les schistosomules vivants et morts sont comptés et un % de cytotoxicité des monocytes est ainsi déterminé. Monocytes : 100 à 200 000 cellules en culture depuis 24 heures Ô 2h 8h 24h iSPO 1 sérum sain schistosomules lecture ou MEO 2 sérum bilharzien Expérience 5 Ces résultats montrent que la cytotoxicité des monocytes ayant préalablement incorporés PIPO 1 ou MPO 2 vis-à-vis des schistosomuIes en présence de sérum de bilharzien est augmentée de 50 % par rapport aux monocytes témoins.Le pourcentage réel de cytotoxicité est obtenu en soustrayant la valeur obtenue avec le sérum sain (effet propre du sérum) de la valeur obtenue avec le sérum de bilharzien. % cytotoxicité des monocytes sans MPO + MPO 1 + MPO 2 sérum bilhareien 10% 42,5 5 70,5 10,5 71,5 3 sérum sain 10% 19 0 26 1,4 25 5 réel cytotoxicité Expérience 6 Dans cette expérience, on a comparé la cytotoxicité de monocytes ayant ou n'ayant pas incorporé de la myéloperoxydase vis-à-vis de schistosomules normaux (stimulus 1) et de schistosomules ayant été préalablement mis en contact pendant 2 heures avec 980 ng/ ml de myéloperoxydase (stimulus 2). 6 6 % cytotoxicité des monocytes sans MPO + MPO 1 stimulus stimulus stimulus 1stimulus 1 2 1 2 sérum bilharzien 10 % 42,5 + 5 62,5 + 2 70,5 10,5 99 sérum sain 10 % 19 0 22 4 26 1,4 35,5 2 % réel cytotoxicité 23,5 40,5 1 44,5 64 Les monocytes non traités avec de la myéloperoxydase ont une cytotoxicité qui passe de 23,5 à 40,5 % lorsqu'ils sont mis en contact avec des schistosomules recouverts de myéloperoxydase. Bien que le modèle soit différent (dans ce cas, le monocyte ne tue pas le schistosomule par phago cytose mais par simple adhérence avec lui), cette ob servation reJoint les travaux antérieurs montrant que la cytotoxicité des macrophages est augmentée lorsque l'organisme infectieux (T. gondii) phagocyté est recouvert avec une peroxydase (3,6). La combinaison de monocytes ayant incorporé de la myéloperoxydase avec des schistosomules recouverts avec l'enzyme permet d'obtenir une cytotoxicité très élevée (64 %). Conclus ions il était seulement montré dans la littérature que les monocytes peuvent acquérir-une peroxydase accompagnee, c'est-à-dire associée à un support qui est un microorganisme et voir ainsi leur cytotoxicité augmentée vis-à-vis de toute une série d'organismes infectieux. Dans ces expériences, il faut en effet remarquer que la myéloperoxydase était d'abord liée à l'organisme infectieux qui était ensuite ingéré par le monocyte ou macrophage. Selon l'invention il a été utilisé de la myéloperoxydase granulocytaire humaine et on a découvert que 10) la mséloneroxydase peut être directement Dhaaocytée sans l'intervention d'un activateur par le monocyte, 20) ltenzyme ingérée reste enzymatiquement très active ainsi que le montrent les résultats de cytotoxicité vis-à-vis des schistosomules. Ces obse-rvations indiquent que de la myélope roxydåse exogène administrée dans l'organisme sera reprise par les monocytes ou macrophages humains et dès lors peut être utilisée comme un moyen de thérapeutique chez des patients souffrant de déficiences héréditaires (agranulocytose) ou acquise (SIDA). Références 1. Zgliczynski JM, Stelmaseynska T, Domanski J and Ostrowski W. Chloramines as intermediates of oxidative reaction of amino acids by myeloperoxidase. Biochim Biophys Acta 1971, 235:419-424. 2. Bos A, Wever R and Roos D. Characterization and quantification of the peroxidase in human monocytes. Biochim Biophys Acta 1978, 525:37-44. 3. Locksley RM, Nelson CS, Fankhauser JE and Klebanoff SJ. Loss of granule myeloperoxidase during in vitro culture of human monocytes correlates with decay in antiprotozoa activity. Am J Trop Med Hyg 1987, 36(3):541-548. 4. Hoifets L, Katsuyuki I and Mayer G. Expression of peroxidase-dependent iodination by macrophages ingesting neutrophils debris. J. Reticuloendothel Soc 1980, 28(3):391-404. 5. Atwal 0. Cytoenzymological bohavior of peritoneal exudate cells of rat in vivo. J.Reticuloendothel Soc 1971, 10:163-172. 6. Locksley Ri, Wilson CB and Klebanoff SJ. Role of endogenous and acquired peroxidase in the toxoplasmacidal activity of murine and human mononuclear phagocytes. J. Clin Invost 1982, 69:1099-1111. 7. Ramsey PG, Martin T, Chi E and Elebanoff SJ. Arming of mononuclear phagocytes by eosinophil peroxidase bound to staphylococcus aureus. J. Immunol 1982, 128:415-420. 8. Nogueira NH, Klebanoff SJ and Cohn ZA. Teruzi sensitization to macrophage killing by eosinophil peroxidase. J Immunol 1982, 128:1705-1708. 9. Nathan CF and Elebanoff SJ. Augmentation of spontaneous macrophage-mediated cytolysis of eosinophil peroxidase. J Exp Med 1982, 155:1291-1308. 10.Deby-Dupont G, Pincemail J, Thirion À and Deby C. A radioimmunoassay for polymorphonuclear leucocytes myeloperoxidase : preliminary results. Arch Int Physiol Biochim 1987 (in press). - REVENDICATIONS 1 - Médicament consistant en un composé chimique constitué par l'enzyme myéloperoxydase humaine. 2 - Médicament selon la revendication 1, caractérisé en ce que la myéloperoxydase est conjuguée par couplage covalent ou complexation à un transporteur présentant une affinité pour les macrophages. 3 - Médicament selon la revendication 2, caractérisé en ce que le transporteur est l'albumine humaine mannosylée ou un anticorps ou fragment d'anticorps tel que la partie constante Fc dirigé contre des récepteurs présents sur les macrophages. 4 - Médicament selon la revendication 1, caractérisé en ce que la myéloperoxydase est encapsulée dans des liposomes. 5 - Médicament selon l'une des revendications 1 à 4, caractérisé en ce que la myéloperoxydase est pré- parée par la technique de l'ÂDN recombinant. 6 - Médicament selon l'une des revendications 1 à 5, utile pour lutter contre les infections à tinté rieur des macrophages. 7 - Utilisation des médicaments selon l'une des revendications 1 à 6 pour la préparation de compositions pharmaceutiques utiles notamment pour le traitement des immunodéficiences occasionnées notamment par le SIDA, les brûlures et les irradiations. 8 - Composition pharmaceutique comprenant à titre de principe actif un médicament selon l'une des revendications 1 à 6 et un support pharmaceutiquement acceptable. 9 - Composition pharmaceutique selon la revendication 8 utile pour le traitement des immunodéficiences occasionnées notamment par le SIDA, les brûlures ou les irradiations.