FR 2627487 A1 19890825 FR 8802023 A 19880219 "Nouveau dérivé de l'acide valproique, procédé de préparation de ce composé ainsi que médicament antiépileptique le contenant" La présente invention se rapporte à un nouveau dérivé de l'acide valproïque, à un procédé de préparation de ce composé, ainsi qu'à un médicament anti-épileptique le contenant. L'épilepsie est une affection très grave du système nerveux central qui est bien connue depuis longtemps ; les crises convulsives parfois accompagnées de perte de connaissance qu'elle entraîne peuvent parfois avoir des consequences dramatiques. Il est pour cette raison essentiel d'éviter l'apparition de telles crises chez les sujets atteints d'épilepsie, grâce à des produits adaptés qui doivent le plus souvent être absorbés par voie orale ; ces malades doivent être traités leur vie durant, et il est donc essentiel que les médicaments choisis soient dépourvus au maximum d'effets secondaires. Parmi les anti-épileptiques les plus couramment utilisés, on peut noter 11 acide valproïque, ou 2 propylpentanoique ou plus exactement son sel de sodium répondant à la formule Ce composé s'est en effet révélé un antiépileptique particulièrement efficace qui se caractérise par une activité anti-convulsivante dans des-types très variés d'épilepsie, un mode d'action original au niveau du système nerveux central (augmentation des taux d'acide gamma amino-butirique) et une absence d'effet hypnogène. La tolérance biologique de ce produit, bien qu'acceptable, n'est cependant pas optimale et, on a pu noter dans certains cas des effets secondaires graves, tels que des atteintes hépatiques d'évolution sévère qui font que ce médicament doit être formellement déconseillé en cas d'hépatite aiguë ou chronique. Or, conformément à l'invention, on s'est aperçu que, de façon surprenante, certains dérivés de l'acide valproïque avaient une activité antiépileptique et anti-convulsivante au moins comparable, tout en ayant une toxicité notablement réduite. Ces composés sont constitués par le di-2propylpentanoate de pyridine 2-6 méthanol ou valproate de pyridinol de formule ou par les sels de ce composé. Parmi ceux-ci, on peut noter tout spécialement le valproate de pyridinol chlorhydraté qui répond à la formule L'invention se rapporte également à un procédé de préparation des composés susmentionnés. Selon l'invention, pour la préparation du valproate de pyridinol, on prépare, dans une première phase, du chlorure de l'acide valproïque, qui est disponible dans le commerce, et l'on condense ce composé avec un demi équivalent molaire de pyridine 2-6 diméthanol. Selon une autre caractéristique de l'invention, on prépare le chlorure de l'acide valproïque en faisant réagir cet acide avec du chlorure de thionyle, sous agitation et en maintenant la température à une valeur inférieure-à 30"C, conformér.snt à la formule Pour accélérer la réaction, on utilise de préférence un catalyseur, notamment constitué par des grains de tamis moléculaire 3 . Pour obtenir un rendement optimal, on poursuit la réaction pendant environ cinq heures, avant de distiller sous vide le chlorure de l'acide valpoïque obtenu. Selon une autre caractéristique de l'invention, on effectue la condensation du chlorure de l'acide valpoïque et de la pyridine 2-6 diméthanol dans un solvant organique, notamment dans du dioxane ou un mélange de dioxane et de pyridine sous agitation et en maintenant la température à une valeur inférieure à 30"C. La réaction s'effectue selon la formule suivante Pour améliorer le rendement, la réaction est généralement poursuivie, toujours sous agitation, pendant une durée de 10 à 12 heures et à température ambiante. A ce moment, il est nécessaire d'isoler le valproate de pyridinol se trouvant dans le milieu réactionnel. Dans ce but, et selon une autre caractéristique de l'invention, on amène à sec sous vide le produit de condensation, on le noie à l'eau glacée et on l'extrait par du dichlorométhane avant de l'amener à nouveau à sec sous vide. On a pu constater que le valproate de pyridinol ainsi obtenu est insoluble dans l'eau ; pour obtenir un produit facilement utilisable dans l'industrie pharmaceutique, il est par suite nécessaire de préparer l'un de ses composés, de préférence le valproate de pyridinol chlorhydraté. Pour ce, et selon une autre caractéristique de l'invention, on traite le valproate de pyridinol par un mélange de méthanol et d'acide chlorhydrique concentré, on amène à sec le produit ainsi obtenu, on répète le cas échéant au moins une fois ces opérations, et on recristallise le produit final dans un mélange méthanol-éther-cyclohéaxne, avant de l'esso- rer, de le laver, notamment à l'éther et de le sécher sous vide. Ces opérations permettent d'obtenir un liquide qui cristallise au bout de quelques heures. L'invention se rapporte également à un médicament anti-épileptique qui renferme en tant que substance active le valproate de pyridinol chlorhydraté qui correspond à la formule Ce médicament peut se présenter sous forme d'un soluté buvable ou de comprimés. Dans le cas d'un soluté buvable, il renferme de préférence entre 100 et 500 milligrammes de valproate de pyridinol chlorhydraté par millilitre de solution, et, l'excipient est généralement choisi parmi l'urée, l'hydroxyde de sodium, et l'eau purifiée ou les mélanges de ces produits. Dans le cas d'un comprimé, il renferme généralement entre 100 et 700 milligrammes de valproate de pyridinol chlorhydraté, et, de préférence enrobé d'un revêtement gras résistant. Parmi les excipients pouvant être utilisés lors de la fabrication de tels comprimés, on peut noter le silicate de calcium, la poly vidone, le stéarate de magnésium, le talc, le polyoxy-éthylène glycol, l'amidon de maïs, l'oxyde de titane, l'oxyde de fer jaune, l'acétylphtalate de cellulose, ou le phtalate di-éthylique. La liste des excipients mentionnés ci-dessus n'est bien entendu pas limitative de l'invention, que le médicament soit sous la forme de comprimé ou d'un soluté buvable. Le médicament conforme à l'invention est généralement administré aux adolescents ou aux adultes à raison de 20 à 30 milligrammes par kilo et par 24 heures. Cette quantité est le plus souvent divisée en deux ou trois prises, de préférence au cours des repas. Les caractéristiques du procédé de fabrication qui fait l'objet de l'invention, ainsi que les propriétés anti-épileptiques de celui-ci seront explicités ci-dessous à l'aide des exemples suivants EXEMPLE 1 - Préparation de valproate de pyridinol chlorhydraté Dans une première phase, dans un ballon tricol de 250 millilitres avec réfrigérant ascendant, ampoule à introduire, atmosphère d'azote sec, bain de glace et agitation magnétique, on introduit successivement sous agitation 50 grammes d'acide 2propylpentanoïque (Janssen) et goutte à goutte 45 grammes de chlorure de thionyle en maintenant la température à une valeur inférieure à 30 C. On ajoute 3 grains de ..... On observe alors un dégagement gazeux. On maintient l'agitation pendant 5 heures à une température inférieure à 300C. Ensuite, on distille sous vide en contrôlant le vide. On observe une température d'ébullition de 1150C sous 240 millimètres de mercure. On isole ainsi 43,2 grammes de chlorure d'acide valproïque pur. Dans une seconde phase1 on introduit dans un ballon tricol de 500 millilitres avec ampoule à introduire, agitation magnétique, thermomètre, et atmosphère d'azote sec, en refroidissant au bain de glace, 17 grammes de pyridine 2-6 diméthanol du commerce (Aldrich) et les 43,2 grammes de chlorure d'acide val proique précédemment obtenu. On ajoute 70 millilitres de dioxane anhydre et goutte à goutte, en maintenant la température à une valeur inférieure à 30 C, 130 millilitres de pyridine anhydre. Au cours de cette introduction, on peut observer une cristallisation blanche de chlorhydrate de pyridinium ; on ajoute encore 100 millilitres de dioxane anhydre pour éviter la prise en masse. On maintient ce mélange réactionnel sous agitation pendant une nuit à température ambiante. Dans une troisième phase on reprend le mélange réactionnel et on l'amène à sec sous vide profond ; on le noie ensuite à l'eau glacée : 300 millilitres puis on l'extrait par cinq fois 100 millilitres de dichlorométhane ; on le lave alors par deux fois 100 millilitres d'eau. On amène le produit obtenu à sec sous vide et on obtient ainsi 42,2 grammes d'un liquide ambré que l'on n' arrive pas à faire cristalliser. Dans une quatrième phase, on ajoute à ce liquide 200 millilitres -de méthanol contenant 20 millilitres d'acide chlorhydrique concentré ; on amène à sec le mélange ainsi obtenu ; on le reprend deux fois au méthanol et on l'amène à sec à chaque fois avant de le tirer sous vide pour éliminer l'eau. On obtient ainsi un liquide qui cristallise au bout de quelques heures. On recristallise ce liquide dans un mélange méthanol-éther-cyclohexane, puis on l'essore, on le lave à l'éther et on le sèche sous vide. On obtient ainsi 38,2 grammes d'un produit blanc cristallisé en paillettes cireuses qui se solubilise difficilement car il ne se mouille pas. Ce produit a un aspect de corps gras et sa solution est très acide (ce qui est normal étant donné qu'il s'agit d'un sel d'un acide fort et d'une base faible). On a vérifié que le produit obtenu était bien le valproate de pyridinol chlorhydraté par différentes méthodes d'analyse - Chromatographie sur couche mince Le produit obtenu a été étudié en utilisant en tant que phase stationnaire de la silice Merck plastique, et en tant que phase mobile CH2C12CH2C12 à 2 % de NaOH ; pour la révélation on a utilisé un rayonnement UV de longueur d'onde 254 pm et on a pulvérisé du réactif de Dragendorff. Après révélation, on a obtenu une tâche unique correspondant à une valeur rF égal à 0,6. - Résonance magnétique nucléaire Les spectres RMN du proton à 60 bHz dans CDCl3 ont été établis respectivement pour l'acide val proïque et le valproate de pyridinol chlorhydraté les spectres obtenus figurent respectivement en figures 1 et 2, et correspondent parfaitement à la structure prévue. - Spectrométrie de masse Le spectre de masse du valproate de pyridinol chlorhydraté figure en figure 3 et est lui aussi en accord avec la structure supposée (EM = 391, fragmentation correcte, sur la base). - Spectroscopie infrarouge Le spectre IR du valproate de pyridinol chlorhydraté figure en figure 4 ; on peut noter la présence d'une bande carbonyle à 1738 cm-1 qui est caractéristique d'un ester. Pour le produit obtenu, le point de fusion instantanée est égal à 76'C et le point de fusion lente à 55-C. Les résultats ci-dessus prouvent que le produit finalement obtenu par la méthode sus-mentionnée est bien du valproate de pyridinol chlorhydraté. EXEMPLE 2 - Etude des propriétés physiologiques du valproate de pyridinol chlorhydraté Les différents résultats rassemblés cidessus ont été obtenus à la suite- d'expériences effectuées par le Professeur Jean Jacques SERANO dans le cadre du Laboratoire de pharmaco-dynamie de la Faculté de pharmacie de MONTPELLIER. 1') Toxicité Les expériences ont été effectuées sur des souris EOPS, de souche SWISS de sexe femelle, maintenues dans une animalerie où la température était de +22 +1-C, où le degré hygrométrique était de 60 % + 10 % et où ltéclairement était réglé à 12 heures. Au moment du traitement, les animaux avaient observé un jeûne non hydrique de 18 heures environ, et l'eau de boisson et la nourriture ne leur ont été donné que 3 heures après traitement. Le valproate de pyridinol chlorhydraté a été émulsionné dans l'eau gommeuse à 3 % puis administré par sonde oesophagienne à raison de 10 ml/kg. Les animaux ont été partagés en quatre groupes auxquels on a administré les doses suivantes - groupe 1 : 1000 mg/kg de valproate de pyridinol chlorhydraté, - groupe 2 : 1500 mg/kg de valproate de py ridinol chlorhydraté, - groupe 3 : 2000 mg/kg de valproate de pyridinol chlorhydraté, - groupe 4 : 2500 mg/kg de valproate de pyridinol chlorhydraté. Une observation des animaux a été effectuée après 30 minutes, 60 minutes puis toutes les heures au cours des 6 heures qui ont suivi le traitement. Les comportements ont été notés quotidiennement pendant toute la durée de l'essai. Les animaux ont été gardés en observation pendant 15 jours et une pesée corporelle a été effectuée au début du traitement, puis après 5, 10 et 15 jours. Aucune mortalité n'a été observée au cours de l'essai chez les animaux traités. Aucun symptôme toxique n'a été noté ni au cours des heures qui ont suivi le traitement, ni les jours suivants. L'analyse statistique au seuil de probabilité PO, 05, n'a montré aucune différence significative de la croissance pondérale des animaux traités aux doses de 1000 mg/kg, 1500 mg/kg, 2000 mg/kg et 2500 mg/kg. La dose léthale 50 du valproate de pyridinol chlorhydraté s'est donc avérée supérieure à 2500 mg/kg. Dans les mêmes conditions expérimentales, et chez la même espèce animale, on a déterminé que la dose léthale 50 du valproate de sodium par voie orale est de l'ordre de 850 mg/kg. Ces résultats prouvent que le valproate de pyridinol chlorhydraté est nettement moins toxique que le valproate de sodium. 2) Potentialisation du sommeil Test de WINTER Il est connu que le sommeil induit par une dose relativement faible d'un hypnotique est prolongé sous l'effet d'un pré-traitement par un neuropleptique. Le temps de latence et la durée du sommeil sont appréciés pour tous les animaux. On a utilisé pour l'expérimentation des rats EOPS, de souche WISTAR maintenus dans une animalerie où la température était de 22 + 1-C, où le degré hygrométrique était de 60 % + 10 % et où l'éclairement était de 12 heures. Après avoir observé un jeûne non hydrique pendant une période d'environ 18 heures, les rats ont été subdivisés en cinq lots qui ont respectivement re çu, par sonde oesophagienne - lot 1 : eau gommeuse à 3 % - lot 2 . valproate de pyridinol chlorhydraté à 100 mg/kg, - lot 3 : valproate de pyridinol chlorhydraté à 200 mg/kg, - lot 4 : vaîproate de sodium a 100.mg/kg, - lot 5 : valproate de sodium à 200 mg/kg. Ce traitement par voie orale a été effectué au temps 0 sous un volume de 10 ml/kg. Au temps 30 minutes, on a injecté aux animaux, par voie intrapéritonéale et à raison de 5 ml/kg du pentobarbital (hypnotique) à la dose de 40 mg/kg. Les animaux ont alors été classés en botes individuelles et chauffés afin d'éviter tout refroidissement. Pour chacun des rats de chaque lot on a étudié - le sommeil.qui est apprécié par la disparition du réflexe de redressement : l'animal placé sur le dos est incapable de changer de position et de se rétablir sur ses pattes, - le temps de latence qui est le temps de l'endormissement. C'est le temps séparant l'administration de l'hypnotique et la disparition du réflexe de redressement, - la durée du sommeil qui est le temps compris entre la disparition et le retour du réflexe de redressement. A partir des résultats obtenus pour tous les animaux traités dans chaque lot, non a calculé le temps de l'endormissement moyen, le temps de sommeil moyen et les pourcentages de variation des temps d'endormissement et des temps de sommeil. Dans les conditions expérimentales susmentionnées , le valproate de pyridinol chlorhydraté a potentialisé le sommeil induit de façon hautement significative à la dose de 200 mg/kg (92,36 %) ; à la dose de 100 mg/kg, on a obtenu une variation non significative de 19,44 %. Le valproate de sodium étudié aux mêmes doses n'a pas modifié de façon significative le temps de sommeil induit. On a obtenu 2,16 % à la dose de 100 mg/kg et 38,12 % à la dose de 200 mg/kg. Ni le valproate de pyridinol chlorhydraté, ni le valproate de sodium n'ont potentialisé le temps de latence à l'endormissement de façon significative. 39) Protection vis-à-vis d'une substance convulsivante Il est connu que l'injection sous cutanée de pentylènetetrazol déclenche des crises convulsives caractérisées par des crises clonico-toxiques souvent mortelles. Les expériences ont encore une fois été réalisées sur des souris EOPS de souche SWISS maintenues dans une animalerie où la température était de 22 + 1'C, où le degré hygrométrique était de 60 + 10% et où l'éclairement était réglé à 12 heures. Après avoir observé un jeûne non hydrique de 18 heures environ, les animaux ont été subdivisés en neuf lots qui ont été traités au temps zéro de la manière suivante - lot 1 : témoin 4 heures - ayant reçu 10 ml/kg d'eau gommeuse à 3 %, - lot 2 : valproate de pyridinol chlorhydraté 4 heures, 100 mg/kg - ayant reçu 10 ml/kg d'émulsion dans l'eau gommeuse; - lot 3 : valproate de sodium 4 heures, 100 ml/kg - ayant reçu 10 ml/kg de solution dans l'eau gommeuse, - lot 4 : témoin 30 minutes - ayant reçu 10 ml/kg d'eau gommeuse à 3 % - lot 5 : valproate de pyridinol chlorhydraté 30 minutes, 200 ml/kg - ayant reçu 10 ml/kg d'émulsion dans 11 eau gommeuse à 3 % de valproate de pyridinol chlorhydraté, - lot 6 : valproate de sodium 30 minutes 200 ml/kg - ayant reçu 10 ml/kg de solution de valproate de sodium; - lot 7 : témoin 4 heures - ayant reçu 10 ml/kg d'eau gommeuse à 3 %, - lot 8 : valproate de pyridinol chlorhydraté 4 heures, 200 mg/kg - ayant reçu 10 ml/kg d'émulsion de valproate de pyridinol chlorhydraté dans l'eau gommeuse à 3 %, - lot 9 : valproate de sodium 4 heures, 200 ml/kg - ayant reçu 10 ml/kg de solution de valproate de sodium dans l'eau gommeuse à 3 %. Au temps 30 minutes, on a injecté par voie sous-cutanée du cardiazol à la dose de 120 ml/kg , à raison de 10 ml/kg aux lots suivants - lot 4 : témoin - lot 5 : valproate de pyridinol chlorhydraté 200 mg/kg, - lot 6 : valproate de sodium 200 mg/kg. Au temps 4 heures, on a injecté par voie sous cutanée du cardiazol à la dose de 120 ml/kg à raison de 10 ml/kg aux lots suivants - lot 1 : témoin - lot 2 : valproate de pyridinol chlorhydraté 100 mg/kg - lot 3 : valproate de sodium 100 ml/kg - lot 7 : témoin - lot 8 : valproate de pyridinol chlorhydraté 200 ml/kg - lot 9 : valproate de sodium 200 mg/kg. Pour chaque animal de chaque lot on a noté l'heure de la première crise et l'heure de la mort, et on a calculé le temps de latence de la première crise, le temps de latence de la mort et le pourcentage de survie. Pour les lots ayant subi le traitement au cardiazol, 30 minutes après l'administration orale, on a noté les résultats expérimentaux suivants Le temps d'apparition de la première crise a été retardé de 43,31 % pour le valproate de pyridinol chlorhydraté et de 68,78 % pour le valproate de sodium. L'étude comparée entre les deux traitements ne s'est pas avérée significative. Le traitement par le valproate de sodium n'a pas potentialisé le moment de la mort de façon signitificative (28,88 %). Le traitement par le valproate de pyridinol chlorhydraté n'a pas potentialisé le temps de la mort (o %). Le temps de la mort, comparé au valproate de pyridinol chlorhydraté a été retardé de façon significative par le valproate de sodium à la dose de 200 ml/kg. On a obtenu 70 % de survie avec le traitement au valproate de sodium et 40 % de survie avec- le traitement au valproate de pyridinol chlorhydraté. Dans le cas des lots ayant subi le traitement au cardiazol 4 heures après l'administration orale, on a noté les résultats suivants La crise a été retarde de façon non significative lors des traitements effectués à la dose de 100 mg/kg. Les pourcentages d'allongement obtenus sont de 24,12 % pour le valproate de pyridinol chlorhydraté et de 0 % pour le valproate de sodium. L'étude statistique comparée entre les deux produits a indiqué un allongement du temps de l'apparition de la première crise de 40,30 % à la limite de la significativité en faveur du valproate de pyridinol chlorhydraté. La mort a été retardée de façon identique et non significative pour les deux traitements effectués. On a observé des pourcentages d'allongement de 27,17 % pour le valproate de pyridinol chlorhydraté à 100 mg/kg et 28,98 % pour le valproate de sodium. On a obtenu de 20 % de survie avec le traitement au valproate de sodium. Pour la dose de 200 mg/kg la crise a été retardée de façon non significative avec les deux traitements (0 % pour le valproate de pyridinol chlorhydraté et 8,43 % pour le vaîproate de sodium). Le temps de la mort a été retardé pour les deux traitements étudiés. On a obtenu 51,89 % du temps d'allongement avec le valproate de pyridinol chlorhy draté, ce qui n'est pas significatif et 110,19 % du temps d'allongement avec le valproate de sodium ce qui est significatif. I1 convient cependant de noter que l'étude statistique comparative entre les deux traitements n'est pas significative. On a par ailleurs obtenu 10 % de survie chez les animaux témoins, 20 % chez les animaux traités avec le valproate de pyridinol chlorhydraté et 10 % chez les animaux traités avec le valproate de sodium. Au cours de la série d'expérience susmentionnée, les deux produits testés : valproate de pyridinol chlorhydraté et valproate de sodium ont présenté le même profil d'activité vis-à-vis de la protection de la crise convulsive au cardiazol ainsi que du pourcentage de mortalité. En conclusion, dans les conditions expérimentales ci-dessus,. le valproate de pyridinol chlorhydraté a montré : - une DL50 supérieure à 2500 ml/kg. Le valproate de pyridinol chlorhydraté est beaucoup moins toxique que le valproate de sodium dont la DL50 a été déterminée à 850 ml/kg dans les mêmes conditions expérimentales. - une potentialisation du temps de sommeil induit hautement significative lors du test de WINTER. Cette potentialisation est supérieure à celle- obtenue avec la même dose de valproate de sodium. - une activité comparable à celle du valproate de sodium lors de la protection vis-à-vis de la crise convulsive au cardizol. L'examen de ces résultats montre que l'index thérapeutique est nettement en faveur du dérivé de 1' acide valproïque. REVEND ICATIONS le 3 Nouveau dérivé de l'acide valproïque ou 2- propylpentanoïque caractérisé en ce qu'il est constitué par le di-2-propylpentanoate de pyridine 2-6 diméthanol ou valproate de pyridinol de formule ou par un sel de ce composé. 2') Nouveau dérivé de l'acide valproique selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il est constitué par du valproate de pyridinol chlorhydraté répondant à la formule 3') Procédé de préparation du valproate de pyridinol selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'on prépare du chlorure de l'acide valproïque et l'on condense ce composé avec 1/2 équivalent molaire de pyridine 2-6-diméthanol. 4') Procédé selon la revendication 3, caractérisé en ce que l'on prépare le chlorure de l'acide valproïque en faisant réagir cet acide avec du chlorure de thionyle sous agitation et en maintenant la tem pérature à une valeur inférieure à 30'C. 5') Procédé selon l'une quelconque des revendications 3 et 4, caractérisé en ce que l'on effectue la condensation du chlorure de l'acide valproïque et de la pyridine 2-6-diméthanol dans un solvant organique, notamment dans du dioxane ou un mélange de dioxane et de pyridine, sous agitation et en maintenant la température à une valeur inférieure à 30 C. 6') Procédé selon la revendication 5, caractérisé en ce que pour isoler le valproate de pyridinol on amène à sec sous vide le produit de condensation, on le noie à l'eau glacée et on l'extrait par du dichlorométhane avant de l'amener à nouveau à sec sous vide. 7") Procédé selon l'une quelconque des revendications 3 à 6, pour la préparation du valproate de pyridinol chlorhydraté caractérisé en ce que l'on traite le valproate de pyridinol par un mélange de méthanol et d'acide chlorhydrique concentré, on amène à sec le produit ainsi obtenu, on répète le cas échéant au moins une fois ces opérations et on recristallise le produit final dans un mélange méthanol-éther cyclohéxane avant de l'essorer, de le laver notamment à l'éther et de le sécher sous vide. 8') Médicament anti-épileptique caractérisé en ce qu'il renferme en tant que substance active du valproate de pyridinol chlorhydraté répondant à la formule 90) Médicament anti-épileptique selon la revendication 8, caractérisé en ce qu'il se présente sous forme d'un soluté buvable renfermant entre 100 et 500 mg de substance active par ml de solution. 1O ) Médicament antiépileptique selon la revendication 8, caractérisé en ce qu'il se présente sous forme de comprimés renfermant chacun entre 100 et 700 mg de substance active.