FR 2636966 A1 19900330 FR 8902200 A 19890220 Domaine de l'invention L'invention est relative à un cristal organique, préparé par génie biogénétique, qui inhibe certaine croissance virale et onco1ogique aans des organismes vivants. Il est à considErert un extrait de base pour des substances pharmaceutiques qui aideront dans le traitement de cancers humains spécifiques, de rétrovirus et d'autres conditions pathologiques relatives à la croissance. Le mécanisme opératoire de la substance inventée est l'altération directe du matériel génétique. Cette substance à déjà été brevetée en France et est en cours d'évaluation pour la méthode d'application clinique. Description de l'art antérieur Une liste à jour de l'art antérieur a été recherchée par le déposant et sera à la suite de ce brevet selon la Règle 98. La liste d'un tel "art antérieur" , s'il y en a sera soumise à la forme PTO-1149. Etant donné la découverte, en ce début du vingtième siècle, que des agents viraux produiraient des cancers variés dans les substances vivantes, la technologie médicale a tenté d'isoler ces antigènes viraux et de produire des traitements souhaitables.- Avant le développement du domaine de l'engérierie bio-génétique, le traitement était constitué d'autres agents cytotoxiques, qui atteignent l'organisme directement, ou dans le renforcement de la défense immune pour permettre au corps de fournir sa propre défense, à travers la création d'anticorps et d'autres substances. La-oerniere méthode de traitement est souvent préventive dans la nature par l'administration de vaccins. Avec l'apparition de l'engenerie tiosénetique, de nouvelles mÉthodes de traitement ont été développées qui tentent d'altérer le matériel génétique soit de l'antigène, soit de l'hotte affecté. De plus, la technclocie cerne a permis la fabrication et la synthèse ce substances que ltor- ganisme vivant produit comme une reponse immune à la maladie. Les médicaments de cette nature tels que les interférons et les interleukines ont été testés sur un large éventail pour de nombreux cancers humains. Le domaine le plus recent de la technologie médicale inclut l'administration de substances qui altèreront directement au niveau génétique soit l'antigène (oe façon à neutraliser son effet cytolytique), ou la cellule hôte (de façon à fournir une défense génétique). Il y a de nombreux problèmes qui remettent en question le développement de tels produits : Premièrement la surface oe la substance antigénique est extrêmement petite, constituee quelquefois d'un simple brin d'ADN ou d'ARN enroulé dans une capside de protéine. Ceci requiert que toute recherche soit conduite au niveau moléculaire avec un équipe- ment extremement sophistiqué et couteaux. Deuxièmement, chaque cellule vivante et antigène contient une couche de surface en alveoitS receptrice qui détermine si une substance peut s'attacher. Ceci empeche souvent à un anticorps normal de pénétrer un antigène de façon à délivrer son remède.Troisièmement certaines cellules infectées et substances antigéniques sont capables de changer leur polarité électrique comme un système de détournement de substances étrangères (incluant des agents bénéfiques). En dernier lieu le domaine de l'engenérie biogenétique est presque dans son enfance et de nombreux processus, interactions et effets sont seulEment matière à speculation scientifique non de fait. Il est au vu oe ce dernier problème que des méthodes traditionnelles de traitement des maladies humaines sont encore le plus souvent utilisées et pratiquées. Il est de la nature du développement humain que comme chaque génération d'hommes évolue, ainsi se font de nouveaux types et mutations d'agents viraux. La récente agression du virus HIV qui produit le syndrome d'immunodéficience acquise représente un type de nouveau vecteur de maladie qui défie les moyens traditionnels de traitement médical et s'y soustrait adroitement en attendant de découvrir un vaccin souhaitable. Aussi la nature précise de la réponse immune humaine est seulement partiellement comprise. Il y aurait 15 millions d'anticorps différents que le système humain est capable de produire. Chaque substance est utile en combattant un antigène différent. Ce corps maintient des délicats mécanismes de réponse immune et de suppression de cellu-les cui régularisent le processus de défense. De plus le système immun contient une capacité remarquable pour la production chimique et l'altération cellulaire Ces cellules du système immun ci-dessus mentionnées et leurs produits chimiques secondaires travaillent de façon synergique pour défendre une condition hémostatique. Ce récent effort contre le virus HIV a grandement aide. notre recherche dans la nature de ce système immun et son mode d'action. La pratique médicale courante dans le traitement des désordres oncologiques produit des résultats remarquables. La therapie consistant à soutenir les m-écanismes de défense immun laisse entrevoir de grandes promesses dans l'amelioration de certaines formes de cancer. La famille des medicaments de l'interféron et de l'interleukine a été explorée comme substituts synthétiques pour les types de défense que produit le corps humain lui-même pour combattre des antigènes. De plus, un nouveau type de nécrose de tumeur a été développé, il fournit un mécanisme de défense qui prive certaines tumeurs de leur alimentation en sang causant leur désséchement et leur mort. De grands progrès ont été aussi faits dans le domaine de la chimiothérapie pour des conditions oncologiques. La seule substance appliquée permise dans le traitement des patients HIV estî1AZT. Cette forme de chimiothérapie a pzrmiS l'allongement de la vie des patients à cette condition, bien qu'elle ne soit pas un agent curatif. La nature de l'art antérieur qui a été recherché pour ce brevet traite de la forme de remède consistant à reconcevoir biogénétiquèment le matériel génétique des celluleshôte infectées pour fournir leur propre mécanisme de défense contre les processus viraux et oncologiques en empêchant la réplication virale ou cellulaire. De plus l'art antérieur a été recherché pour des agents fournissant du matériel génétique libéré dans le système infecté qui sera transmis à d'autres cellules pour prévenir leur infection. A cette fin les substances produites génétiquement constituent un processus d'autovaccination. Ce procédé déclenche l'arrêt du processus pathogène. Lors de la cessation d'activité des défenses du corps, des processus d'élimination commenceront à agir en éliminant à la fois les antigènes et les cellules détruites. Les qualités désirables d'une telle substance préparée par génie biogénétique incluraient les suivantes 1) Que l'usage de la substance soit d'un plus large spectre d'application qu'un seul antigène. 2) Que les effets de la substance fournissent une quantité minimale de toxicité secondaire (s'il y en a) à l'organisme hôte. 3) Que la substance puisse réellement être obtenue sans utilisation de méthode de fabrication de coût très élevé ou extrêmement technique. 4) Pu'une méthode d'application dans l'organisme hôte soit réalisable. 5) Que la substance soit facilement adaptable à l'altération biochimique pour aiaer au développement de nouveaux médicaments. 6) Que la substance soit capable de cibler des cellules infectées et résistantes aux-changements oepolarite. 7) Que la substance ou ses dérivés soient acceptés par le système immunologique oe l'organisme hôte et non attaqués ou rejetés comme un antigène. 6) fiue la substance n'interfère pas avec les opérations hemclyf;ques tì 4as5 normales dans l'organisme hôte oe toute manière soit stimulative, suppressive ou dégénérative. Historique et aecouverte ae l'invention La principale recherche a été commencé par le déposant, il y a 25 ans dans son laboratoire de Sarcelone en Espagne, sur la nature moléculaire des facteurs de croissance et d'anticroissance chez certains insectes oui subissent des métamorphoses génétiques à des stades variés de leur développement. Au cours de l'investigation (et en procédant par élimination systamatique) l'attention a été focalisée sur l'espèce Leoidootera Samia Cynthia. Ce lépidoptère est une variété existant en abondance en Asie et a été introduit en Amérique du Nord au 19ème siècle. Il est du genre des grands papillons Saturnide, dont l'habitat est l'arbre Ailanthus de la famille des Simaroubaceae, apparaissant communement en Inde de l'Est et en Chine. On a découvert qu'une substance cristaline serait récupérie à partir d'une biomasse fermentée d'extraits variés du papillon mentionné ci-dessus qui a un-influence directe sur a processus de restructuration génétique. Des investi gestions ultérieures dans ce domaine ont fourni un protocole permettant l'obtention de cette substance cristalline. Structure et Analvse de l'invention L'extrait récupéré, nommé "CHRYSOEVERINE" est un protéo cristal organique qui satisfait a toutes les conditions d'un organisme biologique. Sa surface mesurée au microscope électronique est de Tordre de O,G5 à 10,00microns. La morphologie du cristal est cruciforme avec quatre appendices en forme de branche, en opposition et une conjonction centrale,i on lui permet oe croître de manière libre, cette ouverture analogue à une bouche apparaît au croisement des quatre appendices. La structure apparaît multicellulaire et différenciée et montre un mouvement octogonal quand il est mis en suspension. Le mouvement est observé comme rotatoire dans une direction inverse à celle des aiguilles c'une montre. La reproduction du cristal est faite par clon age dans lequel un des appendices le plus long forme un cristal allongé mini-cruciforme et ensuite se détache comme un nouveau cristal singulier. Sur une colonie de base cette méthode de reproduction est implosive. Des tests de phase sur le cristal révèlent un système de quadripolarité avec alternance de potentiels positif et négatif existant sur les côtés de chaque appendice. L'ingrédient actif du cristal est révélé par chromato sraphie lic,uide de haute précision comme étant des chaines polypeptidiques représentées par trente pic-s. Ce groupe complexe de type enzymatique est nommé "Internactine". Voir ;1.OC données produites par HFLC sur le protéocristal. mécanisme d'action du cristal Le mécanisme précis d'action du cristal en milieu biologique est seulement compris en partie. On a observé in vitro qu'il s'attache lui-meme à de nombreuses structures cellulaires pathologques, incluant des tissus cancéreux variés et des cellules infectées par des virus. Ceci implique une aptitude de récepteur de surface compatible avec ces cellules. Par interaction avec ces cellules pathologiques, il y a arrêt de la croissance existant dans les cas oncologiques et arrêt de la réplication dans le cas des virus. La matière de la cellule hâte n'est pas détruite dansez le processus indiquant une forme d'évolution cytotoxique. On emet l'hypothèse que le cristal, par interaction, libère une ou plusieurs chaines polypeptidiques dans l'organisme hôte qui'reconstitue le matériel génétique causant l'arrêt de la division cellulaire et de la réplication virale. Soit ce processus est dû à une altératicn directedu matériel génétique des cellules hôtes GG LUnt stimulation des facteurs anti-croissance dans ce matériel génétique. L'hypothèse opératoire est que la substance éliminée (appelée internactine)est considérée en théorie comme un complexe enzymatique qui stimule les ribosomes nucléiques Far un JRN messager pour produire un ADN oe restriction qui arrête le processus de croissance pathogène. A l'entour les cellules reçoivent l'information de la cellule pathogène par élimination d'un anticorps. Cette forme de transfert constitue un processus d'autovaccination dans le système immun. On admet wz théorie que cette auto-vaccination est née à travers le système lymphatique humain. Observations sur l'invention Le protéo-cristal "CHRYSOEVERINE8t présente les caractéristiques suivantes comme il a été observé dans les tests de laboratoire. 1) il existe dans une échelle de pH idéal de 5,6 à 6,5 2) Il est compatible avec le sérum humain, et est accepté par le système immunologique humain comme agent immunotolérant (tolerogène). Il n'est pas rejeté comme agent antigénique et on n'a pas observé qu'il donnait des réactions hypersensibles. 3) Le cristal a une réponse non reactive indifférente vis-à-vis des cellules et des tissus homÉolyf s. 4) Le cristal est bactérioévasif et non réactif avec tous les agents bactériens testés. 5) Le cristal agit comme un aimant vorace pour les radicaux libres en suspension. 6) Le cristal est attiré vers et interragit avec certaines cellules oncologiques et habitées par des virus. 7) Le mouvement octogonal du cristal est arrêté en présence de quartz cristallin. 8) Par interaction avec certaines formes de tissu oncologique il y aurait arrêt complet de la croissance et des métastases. 9) Par interaction avec certaines formes de virus, il y a cessation de la réplication virale dans la cellule-hôte. 1C) Le cristal présente une certaine attraction vis à vis de certains ions métalliques en particulier du groupe des métaux précieux ( par exemple or, aroent, platine ). 11) Pour étudier l'interaction dL cristal on l'a observe en biopsie successivement sur des tissus humains des types suivants a) Carcinome du foie b) Carcinome d'estomac c) Sarcome de Kaposi d) Epithelioma e) Carcinome de la prostate f Carcinome de la thyroide 9 Carcinome intestinal Dan chaque cas il y a eu cessation de la croissance anaplas que. Nomenclature 1) Le protéocristal organique est appelé "chrysoeverine" par 1E déposant. 2) Le complexe protéo-enzymatique actif qui est émis à partir du cristal est appelé "Internactine". Objets et avantaces En conséquence le déposant revendique ce qui suit en tant qu'objets et avantages de l'invention: - Fournir un extrait de base pour la fabrication de substances pharmaceutiques qui arretent la croissance de certains processus oncologiques. - Fournir un extrait de base pour la fabrication de substances pharmaceutiques qui arrêtent la réplication de certains virus dans des cellules hôtes humaines. - Fournir une substance qui n' est pas toxique pour des systèmes homécstatiques humains. - Fournir une substance qui est accepté chez l'homme comme agent immunotolérant (tolérogène). - Fournir une substance qui ntest pas antigène spécifique pour améliorer de nombreuses conditicns pathologiques. - Fournir une substance qui soit capable d'altérer au niveau génétique certaines cellules humaines pathogènes. - Fournir une telle substance par un procéoé de fabrication non élaboré - Fournir une telle substance qui est vraiment adaptable à la production pharmaceutique biotechnologiquement. De plus le déposant revendique les objets et avantages suivants: - Fournir une substance qui est hautement attractive pour les radicaux libres bio-chimiques en suspension; - Fournir une substance qui a une forte affinité pour certains ions métalliques spécialement or et platine; - Fournir une substance cristalline qui présente une quadri Folarité; - Fournir une substance qui met en lumière des facteurs anticroissance dans certaines structures biologiques. - Fournir une telle substance qui ne peut être altéree par des remèdes thérapeutiques spécifiques. NCTE : Les fixes 1 et 2 sont rE1a,ives aux rattachements ces donnes cL Brevet Français. elles représentent les connées se l'analyse chromatccrahique liquioe ce haute précision. Ce qui Suit est une description du procédé ae fabrication de l'extrait de base du cristal proteo-organique "Chrysoeverine", La fabrication concerne la préparation d'une biomasse constituée de pourcentages varies, d'oeufs, larves, pupes et adultes mâles et femelles de l'espèce "Samia Cynthia" dans un récipient non ionique. Ce composé est ensuite dilué dans une solution colloïdale avec un stabilisant (polyéthylène glycol), du soufre, un agent émulsifiant, un alcool et du sérum physiologique. A cette solution on ajoute une essence extraite de l'arbre de l'espèce Ailanthus. Le melange est centrifugé; le surnageant est récupéré, séparé en deux fractions, une est chargée positivement et la seconde négativement. Les deux mélanges sont mis à cristaliser. La structure cristalline résultante donne le cristal quadripolaire "Chrysoeverine" sous forme impure. Au staae final de ce processus ce cristallisation on ajoute plusieurs enzymes catalytiques. La purification est réalisée par les techniques habituelles de laboratoire. Procécé oe fabrication 1- On prépare une biomasse pesant 109. par trituration, dans un mortier non ionique, des substances suivantes: - 0,25g d'oeufs de Samia Cynthia - 4,75g de larves de Samia Cvnthia - 4,259 de pupes de Samia Centhia - 0,759 d'adulte mâle et femelle pulvérisé de Samia Cynthia. 2) La biomasse préparée est diluée dans une solution colloldale constituee aes agents suivants : - C,65g.de stabilisant (Acide ortho hydroxybenzolque 2% ) - 0,655 de soufre élémentaire en solution 2$ - 0,659 d'émulsionnant (polyéthylène glycol 5% ) - 0,659 d'alcool (lavande déterpénisée 5% ) - 190g de sérum physiologique. 3) La solution est mélangé à une substance hormonale constituée d'une solution à 5% de produit pulvérisé de feuilles, écorce et racines d'arbre de l'espèce Ailanthus est ajoutée à la biomasse diluée. Quantité de substance=0,65g Pour favoriser le processus de fermentation une quantité de lg de chaque levure et enzyme digestive et ptialine sont ajoutées. 4) Le mélange dilué est centrufuge de la manière suivante - 3.COC R.P.r. pendant deux minutes - 5.000 R.P.m. pendant deux minutes - 1Z.OCC R.P.m. pendant deux minutes 5) Le surnageant du mélange centrifuge est recupéré par un procédé de filtration successive. 6) 29 de quartz pulverisé sont ajoutés au surnageant. 7) Le surnageant est séparé en deux fractions, l'une chargée positivement et l'autre négativement, par bombardement d'un laser cytofluorescent. 8) Ces deux fractions sont recombinées et placées dans un cristallisoir où elles sont bombardées par une radiation ultraviolette de longueur d'once de : 3.OCC-4.COO Angstroms. S) La cristallisation s'effectue en une période de 7 jours. Le huitième jour, les enzymes suivantes sont ajoutées au prothéocristaux : 1. 0,29 d'enzyme de restriction que le déposant a récupérée comme un produit de fermentation du suc de l'Aloe Vera (Liliacea frucraea) 2. O,2g d'enzyme P/Imentinase que le déposant a récupérée comme un produit de fermentation du fruit de la plante (Capsicum frutescens lonqum). 3. 0,29 d'enzyme C/Actusinase que le déposant a récupérée comme un produit de fermentation du suc de la"Dwarf Aloe Vera" L'enzyme agirait sur la masse cristallisée pendant une période de 24 heures. 1C) La substance cristalline résultante (Chrysoeverine) est purifié par bombardement avec un rayonnement Gamma. 11) Ce cristal aurifié résultant est glacé dans un conteneur special (décrit dans la commande de Brevet Français) de façon à maintenir son État actif. Placer dans un fermenteur dans la proportion de t/5 matière de base/ plante avec ses racines. La fermentation a lieu pendant 21 jours. La masse résultante passe à travers des filtrations successive pour récupérer le surnageant enzymatique. Conclusion La substance présentée oans ce Brevet est un protéocristal dérivé organiquement par la fermentation d'une biomasse de l'espèce Samia Cynthia. Ce Cristal n'existe pas dans la nature mais il en dérive par manipulation technique d'organismes se produisant naturellement. Le cristal présente un processus de maturation dans son oéveloppement et est finalement réalisé dans une structure quadripoae. Le cristal est extrêmement petit à mesurer et possède une qualité unique dans sa quadripolarité. Des observations indiquent que le cristal est bien assimilé et accepté dans le tissu humain. A noter en particulier, le défaut de toute toxicité secondaire observée per des cellules homéostatiques. Le cristal réait au niveau cellulaire avec de nombreux tissus pathogènes; il cause l'arrêt des métastases dans certaines conditions virales. Le mécanisme opératoire du cristal dans des hôtes pathogènes est produit , soit par une altération directe,du matériel genétique soit par la stimulation de facteurs anti-croissance, dans le matériel génétique. Ce processus peut être étendu à l'environnement de la matière cellulaire infectée inaiquant que cette interaction stimule la cellule hôte pour produire et emettre ces facteurs anti-croissances a travers la membrane cellulaire. L'usage principal du cristal est une base pour la production pharmaceutique de médicaments anti-néoplasiques et anti-viraux en thérapeutique. D'autres utilisations incluent, mais ne sont pas limitées à cela, un agent filtrant pour ces radicaux libres et d'autres antigènes et comme substance de base pour la recherche concernant la nature oes facteurs ce croissance, des facteurs anti-croissance, des facteurs d'altération génétique et la nature de la polarité cellulaire. Revendications 1) Un protéo-cristal organique dont les caractéristiques sont les suivantes a) Une dimension de l'ordre de 0,05-10.00 microns b) Une morphologie qui est cruciforme ayant 4 appendices en forme de branche avec un point de jonction central. c) Un système de reproduction par détachement à partir d'un ou plusieurs des appendices en forme de branche d) Quadripolarité e) Une analyse par chromatographie liquide de haute précision donne les résultats présentés en fig. 1. f) Mouvement octogonal en direction inverse du sens des aiguilles d'une montre. 2) Une méthode de production du cristal de la substance selon la revendication 1 caractérisée par les étapes suivantes ai Une biomasse pesant log est préparée par trituration dans un mortier non-ionique des substances suivantes - 0,25g d'oeufs de Samia Cyntia - 4,75g de larves de Samia Cyntia - 4,25g de pupes de Samia Cyntia - 0,75g d'adulte mâle et femelle de Samia Cyntia pulvérisé. b) La biomasse préparée est diluée dans une solution colodale constituée des agents suivants - 0,65g de stabilisant (Acide 0-Hydroxybenzolque à 2 %) - 0,65g de soufre élémentaire en solution à 2 % - 0,65g d'émulsionnant (Polyéthylène glycol à 5 %) - 0,65g d'alcool (lavande déterpéné à 5 %) - 190g de sérum physiologique. c) La solution est mélangée et une substance hormonale constituée d'une solution à 5 % de produit de feuilles, d'écorce et de racines pulvérisées de l'arbre de l'espèce Ailanthus est ajoutée à la biomasse diluée. Quantité : 0,65g. Pour aider le processus de fermentation on ajoute à la biomasse l.Og de chaque : levure et enzyme digestive-ptialine. d) Le mélange dilué est centrifugé de la manière suivante - 3.000 RPM pendant 2 minutes - 5.000 RPM pendant 2 minutes -15.000 RPM pendant 2 minutes e) Le surnageant du mélange centrifugé est récupéré par un procédé de filtration successive. f) 2,0 g de quartz pulvérisé sont ajoutés au surnageant. g) Le surnageant est séparé en deux fractions, une chargée positive et l'autre négative, par bombardement d'un laser cytofluorescent. h) Les deux fractions sont recombinées et placées dans un cristallisoir où elles sont bombardées par des rayons d'une longueur d'onde de 3000-4000 Angstroms. i) La cristallisation s'effectue en une période de 7 jours. Le 8ème jour les enzymes suivantes sont ajoutées aux protéocristaux. I- 0,2g d'enzyme de restriction que le déposant a récupérée comme un produit de fermentation du suc de l'Aloe Vera (Liliacea frucraea) 2- 0,2g d'enzyme P/Imentinase que le déposant a récupérée comme un produit de fermentation du fruit de la plante (Capsicum frutescens longum). 3- 0,2g d'enzyme C/Actusinase que le déposant a récupérée comme produit de fermentation du suc de la 'tDwarf Aloe Vera". L'enzyme agirait sur la masse cristallisée pendant une période de 24 heures. j) La substance cristalline résultante (Chrysoeverine) est purifié par bombardement avec un rayonnement Gamma. k) Ce cristal purifié résultant est placé dans un conteneur spécial de façon à maintenir son état actif et placé dans un fermenteur dans la proportion de 1/5 matière de base/plante avec ses racines. La fermentation a lieu pendant 21 jours. La masse résultante passe à travers des filtrations successives pour récupérer le surnageant enzymatique. 3- Le cristal selon la revendication (1) comme base d'agents pharmaceutiques en thérapeutique humaine caractérisé par a) Existence dans un domaine de ph idéal : 5.6 à 6.5 b > Non-toxicité pour l'homme c) Elimine les bactéries d) Compatibilité avec le sérum humain e) Pas de rejet par le système immunologique humain f) Non réactivité vis-à-vis des tissus et cellules homéolytiques humaines g) Agent anti-néoplasique h) Agent anti-viral i) Agent anticroissance antigénique j) Agent altérant des gènes. 4- Le cristal selon les revendication 1 et 3 caractérisé par a) Attraction par certains ions métalloidiques b) Attraction pour les radicaux libres c) Agent d'altération des -gènes pour d'autres organismes non humains d) Agent anti-croissance pour d'autres organismes non humains e) Fixation dans une suspension de quartz.