FR 2640627 A1 19900622 FR 8816647 A 19881216 Nouveaux fluorures d'aldosaminyle, leur préparation et Leur utilisation pour La fabrication d1oLigosaccha- rides avinés Liés (1#4). L'invention a pour objet de nouveaux fluorures d'aldosaminyle, en particulier le fluorure de 2-amino-2-désoxy -D-glucopyranosyle, leur procédé de préparation et leur utilisation pour la fabrication d'oligosaccharides du 2-amino-2-désoxy-D-glucopyranose lies B-(1 # 4) ou d'oligosaccharides du 2-amino-2-désoxy-D-galactopyranose liés &alpha; -(1 # 4). De façon plus precise, elle concerne des fluorures d'aldosaminyle qui sont des monosaccharides ou oligosaccharides fluorés, constituant des produits intermediaires de synthèse interessants pour la préparation des glycosides d'alkylamino-glycoses et des oligosaccharides aminés. Les oligosaccharides aminés, en particulier ceux qui sont constitués de sucres aminés présents naturellement dans les systèmes biologiques tels Les 2-amino-2-désoxy-D-glucose, 2-amino-2-desoxy-D-ga- lactose ainsi que Leurs dérivés N-acylés, présentent un intéret en eux-mêmes ou comme intermédiaires de synthèse dans le cadre d'applications pharmacologiques ou encore phytosanitaires. C'est ainsi que l'on a rapporté que des oligosaccharides liés g-(1- 4) du 2-amino-2-désoxy-D-glucopyranose possédaient des activités immunostimulantes chez L'animal (Suzuki et al., Carbohydr. Res., 151 (1986) 403-408), et que L'on a proposé leur utilisation comme agents antitumoraux (Tokoro et al., Chem. Pharm. Bull., 36 (1988) 784 et antimicrobiens (Suzuki et al. Chem. Pharm. Bull., 33 (1 985) 886. Des propriétés antifongiques ont également éte notées pour ces oligosaccharides (Uchida et al., 4th International Conference on Chitin and Chitosan Trondheim, 1988). Ceux-ci ont par ailleurs éte utilisés pour la préparation d'agents antibacteriens ou de réactifs de diagnostic (Svensson et al., P.C.T. Int. Appl. W08605789 du 9 octobre 1986). Les oligosaccharides du 2-amino-2-désoxy-Dglucopyranose lié ss-(1e 4) ont jusqu'à présent été préparés par hydrolyse du chitosane, polysaccharide naturel constitué d'unités 2-amino-2-désoxy-D-glucopy ranose liées B-(1 # 4) par action,- soit de l'acide chlorhydrique concentré à chaud (Horowitz et al., J. Am. Chem. Soc., 79 (1957) 5046-49), soit d'une enzyme, la chitosanase (Tahio et al., brevet japonais JP 6230, 103 (1987) ; Izume et al., Agric. Biol. Chem., 51 (1987) 1189-91). Après cette hydrolyse, on sépare Le mélange d'oligosaccharides obtenus par chromatographie d'échanges d'ions comme il est décrit par Maksimov et al., Izv. Akad. Nauk SSSR, Ser. Khim, (1969) 11, 2579-81, ce qui a permis d'obtenir des oligosaccharides de d.p. 2 à 5 avec des rendements qui ne dépassent toutefois pas 5% dans le cas de l'hydrolyse acide. Dans le cas de l'hydroLyse enzymatique, l'oligosaccharide de d.p. 6 a également pu être obtenu, mais avec un très faible rendement. Il est à noter toutefois que ce procédé necessite l'utilisa- tion d'une enzyme qui n'est pas commercialement disponible. Ainsi, ces procédés connus de préparation d'oligosaccharides aminés ne permettent pas d'aller au-delà d'un d.p. de 6 et ne donnent pas de bons rendements. Des travaux récents ont montre qu'il était possible d'obtenir des oligosaccharides lies ss -(1 + 4) du 2-acétamido-2-désoxy-D-glucopyranose en partant du polysaccharide naturel correspondant la chitine, par action du fluorure dthydrogene anhydre (Bosso et al., Carbohydr. Res., 156 (1986) 57-68). Le mélange d'oligosaccharides obtenu peut être separé par chromatographie d'exclusion en utilisant le Bio-gel P-4 et successivement comme éluants l'acétate d'ammonium, puis l'eau. On pouvait donc envisager d'étendre cette technique au chitosane dans le but d'obtenir des oligosaccharides inférieurs. Cependant, l'application de cette technique au chitosane ne conduit pas aux oligosaccharides homologues aminés inférieurs voulus. La présente invention a précisément pour objet de nouveaux fluorures d'aldosaminyle dérives du chitosane ou de polygalactosamines, utilisables comme produit intermédiaire pour la préparation d'oligosaccharides du 2-amino-2-desoxy-D-glucopyranose lies ss Ces fluorures d'aldosaminyle repondent aux formules dans lesquelles x est égal à O ou est un nombre entier allant de 1 à 10. L'invention concerne également les enantioméres de la série L des fluorures de formule Ia ou Ib. Ainsi, ces fluorures correspondent à un monosaccharide fluore lorsque x=O ou à des oligosaccharides fluorés lorsque 1#x#10. Le monosaccharide fluoré est le fluorure de 2-amino-2-désoxy-alpha-D-glucopyranosyle de formule : ou le fluorure de 2-amino-2-désoxy-alpha-D galactopyranosyle de formule : Le fluorure de formule (II) est un intermédiaire de synthese important car on peut obtenir des glycosides d'alkylamino-glycoses en partant de fluorures de glucosyle. De même, Les fluorures de glucosyle constituent des donneurs de restes glucosyle dans Les réactions de biosynthèse faisant intervenir des glucosyl-transférases. Les fluorures d'aldosaminyle de L'invention peuvent etre obtenus par un procédé simpLe à partir du chitosane ou d'une polygalactosamine. Aussi, l'invention a également pour objet un procédé de préparation des fluorures d'oligoglucosaminyle répondant à la formule (Ia) donnée ci-dessus, et de leurs énantioméres de la série L, qui consiste à faire reagir du chitosane avec du fluorure d'hydrogène anhydre. Elle concerne également un procédé de préparation de fluorures d'oligogalactosaminyle repondant à la formule (Ib) donnée ci-dessus et de leurs énantiomères de la série L, qui consiste à faire réagir de l'a-(1+ 4) polygalactosamine avec du fLuorure d'hydrogene anhydre. Généralement, on utilise du fluorure d'hydrogène anhydre à 0 C, on y ajoute le chitosane pulvérulent ou la polygalactosamine, puis on agite la suspension tout en laissant La température remonter à La température ambiante. La quantité de fluorure d'hydrogene utilisée dépend de la quantité de chitosane ou de polygalactosamine. On peut utiliser par exemple de une à quatre parties de chitosane pour 20 parties de fluorure d'hydrogène. Le fluorure d'hydrogène anhydre utilisé ne contient pas plus de 10X d'eau. Lorsque cet acide est mis en contact avec Le chitosane ou La polygalactosamine, on obtient rapidement une solution homogène, et on maintient La solution à la température ambiante pendant un temps qui peut varier de 12 à 48h et même davantage, en fonction du ou des fluorures d'oligoglucosaminyle que l'on veut obtenir. En effet, te chitosane qui est un polysaccharide répondant à la formule ci-dessous, se dissout facilement dans le fluorure d'hydrogène mais se dégrade également dans cet acide en oligosaccharides fluorés ayant des masses moléculaires plus faibles. Plus Le temps de réaction est important et la température élevée, plus la dégradation augmente et plus les oligosaccharides fluorés recueillis ont des masses moléculaires faibles. Aussi, la proportion et la distribution en masse des composants du mélange d'oligosaccharides fluorés, peuvent être contrôLées en agissant sur le temps de contact entre le fluorure d'hydrogène et le chitosane ou La polygalactosamine de façon à obtenir les constituants voulus. Ainsi, un temps de traitement de l'ordre de 12h permet d'obtenir préférentiellement des oLigosaccharides fluorés de d.p. supérieur à 15 ; un temps de traitement de 12h à 48h conduit aux oLigosaccharides de d.p. 1 à 10 tandis qu'un temps de traitement supérieur à 48h conduit exclusivement au monosaccharide fluoré. Dans le cas du chitosane, lorsqu'on maintient La solution de chitosane dans le fluorure d'hydrogène anhydre pendant une durée d'au moins 48h â La température ambiante, La dégradation du chitosane est complète et on recueilte uniquement le monosaccharide fluoré correspondant, soit Le fluorure de 2-amino-2-désoxy-alpha-D-glucopyranosyle de formule (II) décrit ci-dessus. Par conséquent, le temps de la reaction varie en fonction de La distribution en masse moyenne recherchee. Pour isoler ensuite les oligosaccharides fluorés obtenus, on peut évaporer Le fluorure d'hydrogène par entratnement au moyen d'air, puis soumettre le résidu à un procédé de séparation par chromatographie. Ceci peut être effectué en utilisant une colonne remplie d'un produit tel que le Bio-GeL P-4. Le résidu solide est introduit dans la cotonne après avoir été dissous dans l'acétate d'ammonium (50mM) amené à pH=4,5 par addition d'acide acétique, et on peut réaliser ensuite l'élution avec le même solvant. Comme on l'a vu précédemment, le fluorure de glucosaminyle de formule (Il) peut etre préparé par le procédé décrit ci-dessus en partant du chitosane. On peut aussi le préparer directement à partir de 2-amino-2-désoxy-D-glucose en dissolvant le 2-amino-2-désoxy-D-gLucose ou L'un de ses sels dans du fluorure d'hydrogene anhydre et en récupérant ensuite le fluorure de formuLe (11) present dans La solution. Les sels utilisables comme produit de depart peuvent être en particulier le chlorhydrate, Le nitrate ou tout sel d'acide minéral. Pour récuperer le fluorure de formule (II) présent dans la solution, on peut éliminer l'acide fluorhydrique de la solution par évaporation, par exemple sous pression réduite. On peut aussi récupérer le fluorure de formule (II) par précipitation en ajoutant à La solution de l'éther éthylique ou un produit analogue qui ne dissout pas le fluorure de formule (II) tout en étant compatible avec le fluorure d'hydrogène. Les fluorures d'aldosaminyle de formule (Ia) et (Ib) obtenus à partir du chitosane ou d'une polygalactosamine par Le procédé décrit ci-dessus, ont une grande stabilité du fait de la présence, en position vicinale du centre anomère, d'un groupe aminé protonable qui diminue La stabilité de L'ion carbonium qui résulterait intermédiairement d'une telle rupture de la liaison carbone-fluor en milieu protoniant. Aussi, ils ne peuvent être hydrolysés par simple addition d'eau en les oligosaccharides non fluorés correspondants. Toutefois, selon l'invention on a pu obtenir les oligosaccharides non fluorés correspondants en réalisant l'hydrolyse dans des conditions différentes. Aussi, la présente invention a également pour objet un procédé de fabrication d'oligosaccharides du 2-amino-2 désoxy-D-glucopyranose Liés 6^(1+ 4) qui consiste à hydrolyser Le fluorure d'oligogiucosaminyle de formule (Ia). Elle concerne également un procédé de préparation d'oligosaccharides du 2-amino-2-desoxy-D-galactopyranose Liés a-(1 @ 4), caractérisé en ce qu'il consiste à hydrolyser Le fluorure d'oligogalactosaminyle de formule (Ib). Selon un premier mode de mise en oeuvre de ces procédés, on réalise l'hydrolyse en faisant réagir le ou les fluorures de formule (Ia) ou (Ib) avec une solution aqueuse d'acide perchlorique. Cette réaction permet de transformer le fluorure d'otigoglucosaminyle de formule (Ia) en l'oligosaccharide correspondant, comme cela apparaît sur Le schéma réactionnel de la figure 1 qui se préfère aux fluorures d'oligoglucosaminyle de formule (Ia). Pour réaliser cette réaction, on utilise généralement le résidu sec obtenu par fluorolyse du chitosane et on dissout ce résidu dans une solution d'acide perchlorique. On peut operer à la température ambiante, mais on préfère généralement chauffer la solution à une température de 300 C- à 800 C, par exemple à 600 C. La concentration en acide perchlorique de la solution peut varier dans une large gamme. De même, on peut utiliser des quantités variables de solution. Ainsi, on peut utiliser des solutions d'acide perchlorique ayant des concentrations volumiques en acide perchlorique variant de 2% à 70%. La réaction est effectuée pendant une duree suffisante pour transformer tous les fluorures d'oligoglucosaminyle ou d'oligogalactosaminyle en les oligosaccharides correspondants. Lorsqu'on opère â 60 C, une durée de 2h est généralement suffisante. Après cette réaction, on peut séparer les différents oligosaccharides par des méthodes classiques, par exemple par chromatographie d'exclusion de gel, en utilisant par exemple du Bio-GeL P-4 et un éluant adapté, constitué par exemple d'acide acétique aqueux et d'acetate d'ammonium. On peut purifier ensuite les oligosaccharides obtenus par ultrafiltration, par exemple sur une membrane Ami con YCO-5 en réalisant l'étution par lreau. Après cette purification, on peut concentrer la solution, La lyophiliser et réaliser ensuite, si nécessaire, une seconde purification. Dans te cas des oligosaccharides ayant un d.p. supérieur ou égal à 4, il est généralement nécessaire d'effectuer une deuxième sequence de chromatographie pour obtenir des produits analytiquement purs. Les fractions oligosaccharidiques homogènes obtenues sont de nouveau ultrafiitrées. On peut ensuite les neutraliser par addition d'une solution d'acide chlorhydrique, puis Les lyophiliser, afin d'obtenir Le chlorhydrate correspondant. SeLon un second mode de mise en oeuvre du procédé de L'invention, on réalise L'hydrolyse en faisant réagir tout d'abord les groupements amine du ou des fluorures de formule (la) ou (Ib) avec un réactif acylant pour transformer la fonction amine primaire en un groupement moins aisément polarisabLe, mais néanmoins susceptible d'être régénéré en amine libre par un traitement simple, et en régénérant ensuite les groupements amine par hydrolyse dans un mélange alcool-eau. Selon une caractéristique de ce second mode de mise en oeuvre du procédé de L'invention, le réactif acylant est l'anhydride trifluoroacétique. L'addition d'acide trifluoroacétique aux fluorures de formule (Ia) ou (Ib) conduit quantitativement à la formation des dérivés O-trifluoroacétyl-trifluoroacétimidate conformément au schéma réactionnel E de La figure 2 annexée qui se rapporte aux fLuorures de glucosaminyle de formuLe (la) obtenus à partir du chitosane. Les groupes protecteurs temporaires trifluoroacétyle sont ensuite aisément hydrolyses dans un mélange alcool-eau, par exemple dans un mélange méthanol-eau, et L'on obtient ainsi tes obigosaccharides correspondants non fluorés. De préférence, on conserve ces oligosaccharides sous La forme de Leur chlorhydrate par neutralisation à l'acide chlorhydrique, ce qui correspond à La formule : dans Le cas des oligosaccharides dérivés des fluorures de formule (la). Dans ce second mode de mise en oeuvre du procédé de l'invention, la quantité d'anhydride trifluoroacétique utilisée doit être suffisante pour protéger tous les groupements NH2 et accessoirement OH des fluorures d'oligoglucosaminyle par le groupement CF3CO. Généralement, on utilise 10 parties d'anhydride trifluoroacétique par gramme de chitosane de départ. Cette reaction peut être effectuée à la température ambiante, pendant une durée suffisante pour obtenir le produit intermédiaire de formule (VI) de La figure 2 dans le cas où Le produit de départ est un fluorure de formule (la). Après reaction, on évapore Le réactif acylant en excès sous pression réduite, puis on dissout Le résidu dans un mélange alcool-eau que l'on porte au reflux pendant une durée suffisante, par exemple d'au moins 12h, afin d'obtenir l'oligosaccharide. La solution concentrée obtenue à la suite de cette réaction qui contient les oligosaccharides voulus peut être traitée comme précédemment pour séparer les différents oligosaccharides par chromatographie. Les oligosaccharides obtenus peuvent être purifiés dans les mêmes conditions que précédemment. Dans ce second mode de mise en oeuvre du procédé de l'invention, on peut aussi faire réagir l'anhydride trifluoracétique directement sur la solution obtenue par fluorolyse du chitosane sans éliminer le fluorure d'hydrogène par évaporation. D'autres caractéristiques et avantages de l'invention apparaitront mieux à la lecture des exemples suivants donnés bien entendu à titre illus- tratif et non Limitatif en reférence au dessin annexe sur lequel - la figure 1 représente le schéma réactionnel correspondant au premier mode de mise en oeuvre du procédé de préparation d'oligosaccharides, conforme à l'inven- tion, et - la figure 2 représente le schéma réactionnel correspondant au second mode de mise en oeuvre du procédé de préparation d'oligosaccharides de l'invention. Exemple 1 : Preparation de fluorures d'oligoglucosami- nyle de formule (Ia). Dans un récipient en téflon, en polyéthylè- ne, ou encore en acier, maintenu à OOC, on place 100ml de fluorure d'hydrogène anhydre et 59 de chitosane pulvérulent. On agite la suspension tout en laissant La température remonter à l'ambiante jusqu'à L'obtention d'une solution homogène que l'on maintient à cette température pendant environ 19h. On refroidit alors la solution à 0 C et on la verse dans 2 L d'ether éthylique froid. Le precipité formé est recueilli par decantation et lavé avec 1 I d'éther, puis séché. On Le dissout ensuite dans 0,51 d'eau et on ajoute du carbonate de calcium en poudre de façon à neutraliser toute acidité résiduelle.Le filtrat, qui contient le mélange de fluorures d'oligoglucosaminyle est séché par lyophilisation. Exemple 2 : Séparation des fluorures d'oligoglucosaminyle obtenus par fluorolyse dy chitosane. On réalise cette préparation par chromatographie d'exclusion en utilisant du Bio-Gel P-4. L'appareillage est constitué d'une pompe à débit contrôlé Milton-Roy (minipompe A, 350 bars ; Dosapro, Pont St Pierre, France) réglée à un débit de 110ml/heure, commutée à 2 colonnes de verre 5x100cm (K50/100, Pharmacia, Uppsala) remplies de Bio-Gel P-4 (200-400 mesh ; Pharmacia). La détection est assurée en sortie de colonne par un réfractomètre (Waters, modèle R401) monté en serie. Des échantillons de 1g du mélange sec obtenu dans l'exemple 1 dissous dans 5ml d'une solution d'acétate d'ammonium (50mM) amenée à pH:4,5 par addition d'acide acétique, sont introduits au sommet de la cotonne par l'intermédiaire d'une boucle d'injection (Rheodyne, Cotati, CA ; modèle 7010). Les fractions issues de La coLonne sont collectées automatiquement toutes les 10 min. Celles qui ont un volume hydrodynamique similaire sont réunies, concentrées et séchées par Lyophilisa- tion. Deux cycles d'élution sont utilisés pour la séparation des oîigosaccharides fluorés. Chacun des cycles utilise une solution d'acétate d'ammonium 50 mM amenée à pH : 4,5 par addition d'acide acétique comme éluant. Dans chaque cycLe, après avoir réuni Les fractions de même volume hydrodynamique, celles-ci sont ultrafiltrées sur membrane Ami con Y CO5 avec élution par 21 d'eau, elles sont ensuite concentrées et séchées par Lyophilisation. Après le second cycle, les fractions d'oLi- gosaccharides fluorés homogènes sont caractérises par résonance magnetique nucléaire du 13C en utilisant un appareil AM500 Bruker. Les résultats obtenus sont donnés dans le tableau 1 annexé qui indique Les déplacements en ppm par rapport à l'acétone prise comme référence (31,07ppm), et les cycles sont numérotés en partant de l'extrémité anomérique réductrice par un nombre qui figure entre parenthèses. Exemple 3 : Préparation du fluorure de 2-amino-2-déso xy-&alpha;-D-glucopyranosyle de formuLe ( On met en suspension 59 de chitosane à 0 C dans 100ml de fluorure d'hydrogène anhydre, on agite et on laisse la température revenir à l'ambiante. La solution obtenue après 10-30min est abandonnee pendant 48 heures à cette température, puis concentrée sous pression réduite. Le résidu pulvérulent obtenu, lavé à plusieurs reprises par de L'éther éthylique, est recristallisé dans Le méthanol. On obtient ainsi 3,59 du fluorure de formuLe (II), ce qui correspond à un rendement de 62%. Selon une variante de mise en oeuvre, on verse la solution de chitosane dans le fluorure d'hydrogène anhydre qui a été maintenue pendant 48 heures à la température ambiante, dans 2L d'éther éthylique, et on récupère par decantation le précipité formé. On lave celui-ci à plusieurs reprises par de L'éther éthylique ; on obtient ainsi le fluorure de formule (II) avec un rendement comparabLe à celui obtenu précédemment, et on le recristallise dans les mêmes conditions. Les caractéristiques du produit obtenu sont les suivantes Point de fusion : 970C Pouvoir rotatoire : [&alpha;] D20 : +78,7 (c 0,68, eau) Résonance magnétique nucléaire du 13C ( # en ppm) C-1 105,4 (J,C,F 221Hz), C-2 54,5 (JC,F 26Hz), C-3 70,0 ; C-4 69,2 ; C-S 75,6 ; C-6 60,9. Exemple 4 : Préparation d'oligosaccharides du 2-amino -2-désoxy-D-glucopyranose liés ss-(1 # 4). Pour cette préparation, on suit le schéma réactionnel de la figure 1. Sur cette figure, on a schématise également la reaction du chitosane avec le fluorure d'hydrogène dans des conditions conformes à celles de l'exemple 1. On voit ainsi que le chitosane de formule (IV) est dégradé en oligosaccharides fluorés de formule (la). Ces oligosaccharides fluorés sont transfor més en les oligosaccharides correspondants par traitement à l'acide perchlorique conformement au premier mode de mise en oeuvre du procédé de l'invention. On dissout la poudre séchée obtenue dans l'exemple 1 dans 50ml d'un mélange comprenant 1 volume d'acide perchlorique à 70X et 5 volumes d'eau, puis on porte la solution à 600C pendant 2 heures. On ramène alors le volume de la solution à 20ml par concentration sous pression réduite, puis on fractionne la solution en ses constituants par chromatographie d'exclusion de gel en utilisant du Bio-Gel P-4 et le même appareillage que dans l'exemple 2. On réalise la séparation chromatographique dans Les mêmes conditions que celles de L'exemple 2, en utilisant des échantillons de îg du mélange sec dissous dans Sml d'eau. On réalise également deux cycles de purification avec de l'acétate d'ammonuim 50mM/acide acétique 250mM puis de l'eau comme éluants comme dans l'exemple 2. Le rendement et les constantes physiques des oligosaccharides liés ss -(1 4) ayant des d.p. de 2 à 10, obtenus dans ces conditions, sont donnés dans Le tableau 2 qui suit. ExenDLe 5 : Preparation d'olinosaccharides du 2-amino 2-désoxy-D-glucopyranose liéss-(1 # 4). Dans cet exemple, on utilise le second mode de mise en oeuvre du procédé de l'invention qui correspond au schéma de la figure 2. Sur cette figure, on a donné également le schéma réactionnel correspondant à la fLuorolyse du chitosane et à La formation des fluorures de glucosaminyle de formule (Ia). Ces fluorures de glucosaminyle réagissent ensuite avec de l'anhydride trifluoroacétique pour former le dérivé de formule (VI) qui est ensuite hydrolyse par un mélange de méthanol et d'eau au reflux. On obtient ainsi Les oligosaccharides de formule (VII) ayant un d.p. de 2 à 10. La solution de chitosane dans le fluorure d'hydrogène obtenue dans l'exemple 1 après 19h, est concentrée par passage d'un courant d'air. Au résidu obtenu, on ajoute 50ml d'anhydride trifluoro acétique. On agite la solution résultante pendant 24 heures à la température ambiante, puis on la concentre sous pression réduite et on La coévapore avec du méthanol en utilisant 3 fois 100ml. On reprend Le résidu dans 200ml d'un mélange méthanol :eau avec un rapport v/v de 1/1 et on porte la solution au reflux pendant une nuit. Après concentration sous pression réduite, on reprend le résidu solide par de l'eau et on sépare les oîigosaccharidcs presents dans cette solution par chromatographie dans les mêmes conditions que celles de l'exemple 4. Les rendements et les caractéristiques des produits obtenus sont sensiblement analogues à celles que l'on obtient dans l'exemple précédent. Exemple 6 : Préparation d'oligosaccharides du 2-amino -2-désoxy-D-glucopyranose Liés B-(1" 4). On suit le même schéma réactionnel que celui de L'exemple 5, mais on ajoute directement 50ml d'anhydride trifluoroacétique dans la solution de chitosane dans le fluorure d'hydrogène anhydre obtenue après 19h dans l'exemple 1. On agite le mélange à la température ambiante pendant 24 heures. On le refroidit à 0 C et on le verse dans de l'éther éthylique également refroidi préalablement à la même température. On sépare Le précipité obtenu par décantation, on te reprend par 200ml d'un mélange méthanol-eau avec un rapport v/v de 1/1, puis on chauffe au reflux pendant une nuit. On concentre alors la solution sous pression réduite et on reprend le résidu par 20ml d'eau. On soumet ensuite a solution obtenue à une séparation chromatographique dans les mêmes conditions que celles de l'exemple 4. Les rendements et les caractéristiques des produits séparés sont sensiblement identiques à celtes que L'on obtient dans l'exemple 4. TABLEAU 1 C-1 C-2 C-3 C-4 C-5 C-6 x=0 (1) 105,00 54,60 69,23 69,99 75,60 60,66 JCF 221Hz JCF 26Hz x=1 (1) 105,10 53,9 68,39 75,49 73,04 59,61 JCF 221Hz JCF 25Hz (2) 98,41 55,96 72,40 69,56 76,30 60,23 x=2 (1) 105,6 54,07 68,22 75,75 73,05 59,59 JCF 221Hz JCF 25Hz (2) 71,11 77,04 74,75 60,09 # 99,17 56,05 (3) 72,88 69,59 76,28 60,40 x=3 (1) 105,6 54,31 69,62 76,35 74,29 59,66 JCF 221Hz JCF 24Hz (2) # 72,54 # 77,55 # 74,80 # 60,18 (3)# 100,51 # 56,28 60,11 (4) 73,05 70,05 76,25 60,51 TABLEAU 1 (suite) x=4 (1) 104,9 52,94 69,60 76,31 73,11 59,58 JCF 221Hz JCF 25Hz (2) # 70,46 # 76,01 # 74,74 # 60,05 (3)# 98,09 # .55,94 (4) 78,14 69,60 76,31 60,36 (5) x=5 (1) 105,1 53,95 69,58 76,30 73,07 59,55 JCF 221Hz JCF 25Hz (2) # 70,81 # 76,75 # 74,74 # 60,02 # 98,49 # 55,95 (6) 72,34 69,58 76,30 60,35 x=10 (2)..(9) 99,64 (2).(10) 56,18 69,63 76,30 73,11 59,64 (1) n'est (1) 54,27 # 71,73 # 77,16 # 74,80 # 60,12 plus visible JCF25Hz 73,11 69,63 76,30 60,47 Le nombre entre parenthèses caractérise l'unité 2-amino-2-désoxy-Dglucopyranosyle numérotée à partir de l'extrémité réductrice à laquelle appartient l'atome de carbone considéré. TABLEAU 2 oligosaccharide Rendement Point de fusion Pouvoir rotatoire (d.p.) (%) ( C) ([&alpha;] D.degrés) 2 3,0 247 +39,2 3 9,9 245 +20,1 4 14,3 245 +13 5 15,9 260 déc. +10 6 15,4 271 déc. +8 7 12,0 271 déc. +7 8 8,8 280 déc. +3 9 4,7 280 déc. +2 10 3,0 280 déc. +2 REVENDICATIONS 1. Fluorure d'aldosaminyle répondant aux formules : dans lesquelles x est égal à O ou est un nombre entier allant de 1 à 10, et Leurs énantiomères de La serie L. 2. Fluorure de 2-amino-2-désoxy-&alpha;-D-glucopy- ranosyle de formule et son énantiomère de la série L. 3. Fluorure de -2-amino-2-désoxy-&alpha;-D-glacto- pyranosyle de formule : et son énantiomère de la série L. 4. Fluorure de glucosaminyle oLigosacchari- dique du 2-amino-2-désoxy-D-glucopyranose lié ss-(1# 4) de formule dans laquelle x est un nombre entier allant de 1 à 10, et leurs énantiomères de La série L. 5. Procede de préparation de fluorures d'oligoglucosaminyle répondant à la formule dans laquelle x est égal à O ou est un nombre entier allant de 1 à 10, et de leurs énantiomères de la série L, caractérisé en ce qu'il consiste à faire reagir du chitosane avec du fluorure d'hydrogène anhydre. 6. Procédé de préparation de fluorures d'oligogalactosaminyle répondant à la formule : dans Laquelle x est égal à O ou est un nombre entier allant de 1 à 10,et de leurs énantiomères de la série L, caractérisé en ce qu'il consiste à faire réagir de l'&alpha;-(1 #4 ) polygalactosamine avec du fluorure d'hydrogène anhydre. 7. Procédé selon l'une quelconque des revendications 5 et 6, caractérisé en ce que L'on effectue La réaction pendant une durée allant de 12h à 48h. 8. Procédé de préparation du fluorure de glucosaminyle de formule : caractérisé en ce que l'on dissout du chitosane dans du fluorure d'hydrogène anhydre, en ce que L'on maintient La solution à la température- ambiante pendant une durée d'au moins 48h pour former uniquement le fLuorure de formule (II) et en ce que L'on récupère ensuite le fluorure de formule (II) présent dans la solution. 9. Procédé selon La revendication 8, caractérisé en ce que l'on récupère le fluorure de formule (II) en éliminant Le fluorure d'hydrogène de la solution par évaporation. 10. Procédé selon la revendication 8, caractérisé en ce que l'on récupère le fluorure de formule (II) par précipitation en ajoutant à la solution de l'éther éthylique. 11. Procédé de préparation d'oLigosaccharides du 2-amino-2-désoxy-D-glucopyranose liés (1+ 4), caractérisé en ce qu'il consiste à hydrolyser au moins un fluorure d'oligoglucosaminyle de formule (Ia) dans laqueLle x est un nombre entier allant de 1 à 10. 12. Procédé de préparation -d'oligosacchari- des du 2-amino-2-désoxy-D-gatactopyranose Liés a 4), caractérisé en ce qu'il consiste à hydrolyser au moins un fluorure d'oligogalactosaminyle de formule dans laquelle x est un nombre entier allant de 1 à 10. 13. Procédé selon l'une quelconque des revendications 11 et 12, caractérisé en ce que l'on réalise l'hydrolyse en faisant réagir le(s) fluorure(s) de glucosaminyle de formule (Ia) ou le(s) fluorure(s) d'oligogalactosaminyle de formule (Ib) avec une solution aqueuse d'acide perchlorique. 14. Procédé selon l'une quelconque des revendications Il et 12, caractérisé en -ce que L'on réalise L'hydrolyse en faisant réagir tout d'abord Les groupements amine du/des fLuorure(s) de formule (la) ou (Ib) avec un réactif acylant et en régénérant ensuite les groupements amine par hydrolyse dans un mélange alcool-eau. 15. Procédé selon La revendication 14, caractérisé en ce que le réactif acylant est l'anhydride trifluoroacétique. 16. Procédé selon L'une quelconque des revendications 14 et 15, caractérisé en ce que L'alcool est le méthanol. 17. Procédé seLon L'une quelconque des revendications 11 à 16, caractérisé en ce que l'on soumet à l'hydrolyse un mélange de fLuorures d'oligoglucosaminyle de formule (la) ou (Ib) et en ce que l'on sépare ensuite les otigosaccharides obtenus par chromatographie.