FR 2626145 A1 19890728 FR 8800730 A 19880122 - 1- La présente invention concerne un procédé d'élimination de composés stéroîdiques contenus dans iune substance d'origine biologique. _ Par composés stéroMdiques au sens de la présente invention, on entend principalement les stérols à l'état non estérifié ou sous forme estérifiée et les molécules résultant de leur oxydation. On sait que les stérols, qui sont des 3 8-hydroxystéroîdes, ont une origine biologique. C'est pourquoi nombre de substances dérivées des animaux ou des plantes en contiennent. Dans les corps gras préparés à partir d'animaux, le cholestérol, présent principalement sous forme non estérifiée, représente 93 p 100 des stérols. J.P. WOLFF (in Manuel d'Analyse des Corps Gras, Azoulay, Ed.. Paris, 1968) a donné les teneurs en stérols ci-après, exprimés en mg pour mg de corps gras à l'état brut: SAINDOUX SUIF GRAISSE GRAISSE DE BOEUF DE CHEVAL DE SARDINE l _ _ _ _ l _ _ __ i l__ _ _ l__ _ I I i 'I t. -120 75-140.50-120 275-500 Les corps gras d'origine végétale sont par contre particulièrement pauvres en cholestérol. Mais ils contiennent d'autres stérols en quantité, variable selon leur origine, mais significative (Q0 à 1200 mg pour 100 g selon J.P. WOLFF supra). Parmi ces stérols, ci-après appelés phytostérols, on peut citer: le 5-sitostérol, le campéstérol, le stigmastérol, le brassicastérol. le t 7 - stigmastérol, le t 7 - campéstérol, le /\5 - avénasténol, le A7 - avénasténol, le /79- sigmatadiénol, le fucostérol et l'ergostérol qui sont les stérols majeurs des principales huiles végétales alimentaires. On peut aussi citer les oeufs d'oiseaux. chez lesquels la fraction stérolique du jaune comporte essentiellement du cholestérol. Celui-ci représente près de 5 pour 100 des lipides totaux de l'oeuf de la poule; il y est présent sous forme non estérifiée à 84 pour 100 et sous forme estérifiée à 16 pour 100. On sait aussi que dans ces corps gras ou dans les oeufs, peuvent être détectées des cétones stéroidiques, résultant de l'oxydation des stérols, ci-après appelées stérones (V.P. FLANAGAN et al, Journal of Lipid Research. 16, 1975, 97-101). Il faut encore citer d'autres dérivés des stérols, dont la présence est constatée (G. MAERKER, J.A.O.C.S., N 3, 1987. 388-3Q2; S.W. PARK et al, Journal of Food Science, 51, N 5, 1986. 1380-1381; J.M. LUBY, Journal of Food Science, 51, N 4, 1Q86. 908-911) tout particulièrement dans les bains de friture alimentaire après de multiples utilisations: il s'agit de dérivés oxygénés comportant des groupes hydroxyles. Les corps gras d'origine animale ou végétale sont l'objet d'un grand nombre d'applications, utiles pour de nombreux domaines d'activités. Leur traitement peut conduire à l'obtention de produits manufacturés tels que le beurre, qui contient en moyenne de 225 à 350 mg de cholestérol pour 100 g (J.P. WOLFF supra.), les huiles de consommation courante destinées à l'alimentation humaine ou encore le chocolat. On connaît également l'importance des oeufs pour la préparation de produits alimentaires. Des études épidémiologiques (Lipid Research Clinics Program. The Lipid Research Clinics Coronary Primary Prevention Trials, J. Amer. Med. Ass., 1984, 251, 351-374) ont établi une corrélation positive entre les taux élevés de cholestérol plasmatique et les maladies cardio-vasculaires. On entrevoit également un rôle des dérivés oxygénés à hydroxyles du cholestérol dans certaines pathologies humaines, telles que la formation des plaques d'athérome (S.K. PENG et al, Atherosclerosis, 54, 1985, 121123) et la cancérogénèse. Les stérones pourraient également être impliquées dans les maladies cardio-vasculaires. Ces constatations font apparaître l'opportunité de la mise au point d'un procédé d'élimination permettant de faire diminuer de façon significative la quantité de stérols et de leurs dérivés contents dans les substances d'origine biologique consommables telles quelles ou dont le traitement conduit à l'obtention de produits alimentaires. De nombreux travaux ont été réalisés mais aucun d'entre eux n'a conduit à un procédé vraiment satisfaisant: la précipitation à la digitonine, l'extraction par solvant qui peut laisser dans la matière grasse des résidus toxiques; enfin, l'absorption sur des colonnes et la microdistillation sont des procédés difficiles à mettre en oeuvre industriellement car ils impliquent un matériel lourd et des manipulations complexes et onéreuses. La demanderesse a précisément mis au point un nouveau procédé général utilisable à l'échelle industrielle qui permnet l'élimination au moins partielle des stérols et de leurs dérivés contenus dans les substances d'origine biologique. Ce procédé est susceptible de nombreuses applications: il permet notamment la préparation d'aliments à teneur réduite en stérols et en molécules dérivées il permet accessoirement de disposer de quantités de stérols et de molécules dérivées, pouvant en définitive être traités d'une manière appropriée pour l'obtention de stéroîdes -d'hormones stéroîdiques principalement- utiles en tant que principes actifs de médicaments. Le procédé selon l'invention met à profit la capacité inhérente atux cyclodextrines de former des complexes d'inclusion avec certaines molécules organiques. Les cyclodextrines sont des oligosaccharides cycliques constitués d'unités glycopyranose reliées entre elles par une liaison osidique alpha (1 -* 4). Elles présentent une cavité hydrophobe qui permet la formation de complexes d'inclusion par insertion de molécules. Leur toxicité a aussi été étudiée et on a constaté que l'administration par voie orale de ces cyclodextrines n'a révélé aucun effet toxique chez le rat et chez le chien (J. SZEJTLI, Molecular Entrapment and Release Properties of Drugs by Cyclodextrins, in Controlled Drug Bioavailability. Vol. 3; V.F. SMOLEN and L.A. BALL. ed. 195- J. WILEY. p. 365 W. SAENGER. Angew. Chem. Ed. Engl., 1980, 19, 344). Les cyclodextrines sont actuellement essentiellement utilisées pour complexer les pesticides. On a décrit d'autres applications et notammnent leur mise en oeuvre pour extraire des acides gras libres à partir d'huiles végétales (J. SZEJTLI, Die Nahrung, 209, (1985) 9, 911-924) mais leur utilisation pour l'extraction des stérols et de leurs dérivés n'avait pas encore été envisagée. Le procédé selon l'invention comprend une phase de complexation des stérols suivie d'une phase de séparation des complexes formés. La phase de complexation est réalisée par la mise en contact de la cyclodextrine et de la substance à traiter. Selon un premier mode de réalisation, la cyclodextrine est apportée sous forme libre: il peut s'agir d'une poudre cristalline amorphe ou d'une solution aqueuse. La phase de complexation nécessite un milieu réactionnel aqueux pour permettre la dispersion des complexes. Il est toutefois possible de réaliser cette phase en mettant en contact la cyclodextrine et la substance -4- à traiter sans ajouter d'eau, à condition toutefois que cette substance contienne elle-même de l'eau. Lorsque la substance à traiter se présente sous la forme d'une poudre déshydratée,-telle que par exemple de la poudre d'oeuf- il est alors indispensable d'ajouter de l'eau. Il faut enfin noter que lorsque la substance à traiter est une matière grasse solide à température normale, il convient par un traitement thermique approprié de ll u:di..;er (va:t d: ka mettre au coni ac d-. la c"c *(:dxtl'ine, De p.éf '. en-e, la mise en contact est. réa" isée à une température voisine de 40 C. La température peut être comprise entre 200C et 40 C. mais elle ne convient pas au traitement d'une substance solide à température normale et nécessitant d'être préalablement chauffée pour passer à l'état liquide; de plus, la vitesse de la réaction est alors plus faible. La température peut être supérieure à 40 C et même atteindre S0 C. Il appartient à l'homme du métier de choisir alors une température qui ne conduise pas à une modification non désirée de la substance à traiter. Le temps de contact requis pour la phase de complexation est très variable. Il est évidemment fonction, notamment, de la quantité de composés stéroîdiques contenus dans la matière à traiter et du pourcentage de composés stéroiques que l'on veut éliminer. Il peut atteindre plusieurs heures. Un temps de contact de 5 heures est particulièrement approprié. Ce contact est également facilité par iune agitation avantageusement entretenue tout au long de cette phase de complexation. De préférence. la bétacyclodextrine (ou B-cyclodextrine), constituée de sept unités glycopyranose, est utilisée. Des dérivés de la fcyclodextrine, tels que la 2,6-di-O-méthyl - B - cyclodextrine, la 2, 3,6, tri-O-m&thyl-f- cyclodextrine et d'autres cyclodextrines telles que 1' O de complexes d'inclusion, peuvent être -mises en oeuvre. Les quantités de cyclodextrine utilisées peuvent varier de 0,5 % à 30 % en poids par rapport aux quantités de substance prélevée en vue de son traitement. La proportion de cyclodextrine à utiliser est fonction de la concentration en stérols et en dérivés de la substance à traiter et du rendement d'élimination désiré. D'autres modes de réalisation de cette phase de complexation faisant intervenir une chromatographie liquide sur une phase solide sur laquelle est greffée la cyclodextrine ou l'utilisation de cyclodextrines réticulées ou modifiées conviennent. 2626145- Les complexes d'inclusion. formés au cours de cette première phase entre les molécules de stérols et de leurs dérivés et les molécules de cyclodextrine, sont ensuite éliminés par un procédé physique. Une centrifugation à SOOO g s'avère particulièrement appropriée. Les complexes se localisent dans le culot d'o il est possible de les extraire. Si la substance à traiter est un corps gras, le surnageant comporte deux phases, une phase huileuse surmontant une phase aqueuse dans laquelle se localise la cyclodextrine en excès rest-'e libre. Cet excès peut étre élimine notamment par cristallisation fractionnée. Les composés stéroTdiques, dont le procédé selon l'invention permet l'élimination à partir d'une substance d'origine biologique, sont les stérols non estérifiés, les stérols estérifiés -quels que soient la longueur de chaîne carbonique (4 à 26 atomes de carbone) et le degré d'insaturation (0 à 6 doubles liaisons) de l'acide gras- et les molécules qui en sont dérivées principalement après oxydation. Parmi ces molécules, on peut notamment citer des stérones telles que laÄA -cholesténe-3-one et la /A3 '5 -cholestadiène-7-one et des dérivés comportant des groupes hydroxyles tels que le cholestane -36. 5, 68-triol. Le procédé selon l'invention convient au traitement de toutes les substances d'origine biologique. Il convient plus particulièrement au traitement des matières grasses d'origine animale ou végétale et des produits à base d'oeuf. Le procédé selon l'invention permet en définitive d'éliminer au moins jusqu'à RéO des stérols et de leurs dérivés contenus dans unme substance à traiter. le pourcentage de stérols et de leurs dérivés éliminés étant notamment fonction de leur teneur au sein de la substance. Ce rendement peut encore être amélioré en procédant de la même manière à un deuxième puis éventuellement à un troisième traitement de la substance par un nouvel apport de cyclodextrine. L'invention concerne également, selon un second aspect, les substances appauvries en stérols et en leurs dérivés que permet d'obtenir le procédé mis en oeuvre. Des exemples de réalisation de l'invention sont décrits, ci-dessous, à titre non limitatif. -6 - EX LE 1 - JTRAITEMENT DE PRODUITS A BASE D'OEUF EN VUE D'EN REDUIRE LA TENEUR EN CHOLESTEROL Trois matières premières, différentes quant à leur structure physicochimique. - du jaune d'oeuf en poudre (commercialisé par Avicole Bretagne CECAB Delaunay-France), - du jaune d'oeuf frais isolé dans sa totalité de l'oeuf entier (oeufs commercialisés par Poitou Oeufs-France) - de l'oeuf entier frais (oeufs commercialisés par Poitou Oeufs). ont été traitées. Mode opératoire Les échantillons sont préparés en ajoutant soit 40 g d'eau distillée à 10 g de produit (poudre de jaune d'oeuf et oeuf entier frais) soit 60 g d'eau distillée à 10 g de produit (jaune d'oeuf frais). A chaque échantillon ainsi préparé et homogénéisé est ajoutée de la Bcyclodextrine (commericalisée par la Société ROQUETTE) sous la forme d'une poudre cristalline amorphe. Pour chaque produit 4 échantillons sont utilisés de la B-cyclo- dextrine (^-CD) leur est ajoutée de manière à ce que le rapport pondéral de la 8-CD et du produit soit égal à 0,05, 0,10. 0,15. 0,20. 0,25 ou 0,30. (cf. Tableau 1) Après une agitation sur une table mélangeante, les échantillons sont placés dans une enceinte réglée à 40 C et maintenus à cette température pendant 5 heures. Pour chaque produit, mun échantillon, destiné à servir de témoin, est soumis à un traitement ne différant de celui décrit ci-dessus qu'en ce que l'on n'ajoute pas de 5-cyclodextrine. Chaque échantillon est ensuite soumis à une centrifugation à 8000 g. Un culot contenant les complexes, formés entre la 5-cyclodextrine et le cholestérol, surmontés d'un surnageant, est obtenu. La teneur de cholestérol restant dans le surnageant de centrifugation est mesurée selon la méthode de C.S.J. SHEN et al. (Enzymatic determination of cholesterol in egg yolk - J. Assoc. Off. Anal. Chem., 65, n 5, 1982, 1222-1224) 7- Résultats _Les résultats sont portés dans le tableau I o chaque échantillon est repéré par le rapport b-CD Produit On constate que la mise en contact de 10 g de poudre de jaune d'oeuf de 40 g d'eau distillée et d'l g de B-cyclodextrine a permis de réduire de 26 pour cent la teneur en cholestérol initiale en une seule extraction. Il a été possible au cours de cet essai d'éliminer le cholestérol à raison de 74% pour la poudre du jaune d'oeuf, de 57" pour le jaune d'oeuf frais et 83 % pour l'oeuf entier frais. TABLEAUJ I, QUIIA\T IT, DE ('HOI..TEROI EXPRIMIT EN mg/100 g et |PO)RCEN'AGE D'FLIMINATION DU ('II)IESTEROI, PAR RAPPORT' AU TEMOIN (,') PRODUIIT TRAITE TEMOIN -('D/I'RO)DU I -C('I)/PRODIIIT B -C(D/PRODUIT BC'D/I'RODUIT | -'/R IIT i-(D/I'RODU1 Ii I| 0,05 | 0.10 0,15 | 0.20 0,24 0, ,30 Co P(OUDRE DE JAUNE D'OEUF 2580 I _ 1 _ | 1442 1098 672 - | (20) I - 2 (44) (57) (74) JAUNE D'OEUF FRAIS I 1361} 1102 879 70( 581 It _- t (1") (35) (,48) (57) ! l l II I I OEUF ENTIER FRAIS [ 462 277 84 82 78 (40) (91) (82) (83) o' u3, LnO - u - Exemple 2 - TRAITEMENT D'UNE HUILE RAFFINEE DE TOURNESOL -De l'huile commercialisée sous la marque LESIEUR a été utilisée. Mk-e opératoire Deux échantillons sont préparés. Pour chacmun, à 10 g d'huile sont ajoutée de l'eau distillée (10 g) puis de la 8-cyclodextrine (ROQUETTE), soIus la forme d'une poudre cristalline amorphe. à raison de 500 mg pour un échantillon (ci-après échantillon 5-CD/produit = 0.05) et de 1 g pour l'autre échantillon (ci-après échantillon [1-CD/produit = 0,10). Après une agitation sur table mélangeante. les échantillons sont placés dans une enceinte réglée à 40 C et maintenus à cette température pendant 5 heures. Les échantillons sont ensuite soumis à une centrifugation à 8000 g. Un culot, contenant les complexes formés entre la B-cyclodextrine et les stérols, surmonté d'un surnageant. est obtenu. Le surnageant comporte une phase aqueuse surmontée d'une phase huileuse. Cette dernière est recueillie. Un échantillon, destiné à servir de témoin, subit un traitement ne différant duit traitement décrit ci-dessus qu'en ce que l'on n'ajoute pas de 8-cyclodextrine. La teneur en stérols totaux de la phase huilleuse est déterminée selon la méthode normalisée pour la détermination des stérols totaux dans les huiles et graisses préconisées par l'Union Internationale de Chimie Pure et Appliquée (M. NALDET et al. - Revue Française des Corps gras, n 4, Avril 1986, 167-170). Résultats Les résultats sont portés dans le tableau II ils sont exprimés en rapportant les valeurs obtenues au 8-sitostérol qui représente le stérol majeur de l'huile de tournesol. - 10 - TABLEAU II QUANTITE DE STEROLS POURCENTAGE EXPRIMEE EN mg de fB-sitostérol d'ELIMgNATION pour 10 0 g. é chantillon 200 témoin échantillon fb-CD,PRODUIT I 124 57 = 0,05 échantillon f-CD/'PRODUIT 57 $ 82 = 0,10 On constate qu'il a été possible d'éliminer 82% des stérols totaux initialement contenus dans l'huile. Exemple 3 - TRAITEMENT D'UNE MATIERE GRASSE ADDITIONNEE D'UN ESTER DE STEROL Principe On traite une matière grasse à laquelle on a ajouté du stéarate de cholestérol en quantité telle que la masse de cholestérol équivalente soit de 9 à 15 fois supérieure à celle du cholestérol que contient "naturellement" cette matière grasse. Mode opératoire 4 échantillons sont préparés en solubilisant pour chacun d'eux, du stéarate de cholestérol commercialisé par SI(GMIA à raison d'environ 30 mg pour deux d'entre eux (Essai 1 et Témoin 1) et d'environ 50 mg pour les deux autres (Essai 2 et Témoin 2) dans 10 g de matière grasse laitière anhydre contenant elle-même 2 mg du cholestérol et préalablement fluidifiée. - Il - 2626145- A chacun des 2 échantillons préparés pour les essais 1 et 2 sont ajoutés 10 g d'eau distillée et de la 8-cyclodextrine ci-après 8-CD, sous la forme d'mune poudre cristalline amorphe (ROQUETTE) à raison de 503 mg pour' l'un (Essai 1) et de 768 mg pour l'autre (Essai 2). Après une agitation sur table mélangeante. les 4 échantillons sont placés dans une enceinte réglée à 40 C et maintenus à cette température pendant 5 heures. Les échantillons sont ensuite soumis à une centrifugation à 8000 g. Un culot. contenant les complexes formés entre la 6-cyclodextrine et le stéarate de cholestérol ou le cholestérol, surmonté d'un surnageant est obtenu. Le surnageant comporte une phase aqueuse surmnontée d'une phase huileuse. La phase huileuse est recueillie puis soumise à une saponification. Le cholestérol passe dans la partie insaponifiable dans laquelle il est dosé par une méthode enzymatique à l'aide d'un kit de diagnostic commercialisé par Bochringer- Mannheim sous la référence 139050. TABLEAU III I, t MASSE MASSE DE | MASSE DE |MNASSE DE i 1 B-CD ISTEARATE DE CHOLESTEROL CHOLESTEROL CHOLESTEROL | ICHOLESTEROL | CALCULEE DOSEE - EL IMINE | mg |EFFECTIVEMENT mg mg |I |INTRODUITE I m I I | TEMOIN 1 O 30,5 18.07 17,95 O I I I Ij ESSAI I 1503 1 30,6 | 1I,1 12.45 31 I I II iII TEMOIN 2 0 O 1 50,8 I 30,10 30,95 I O 0 ESSAI 2 768 50,5 f 29,92 10.27 35 - 12 - Exemple 4 - TRAITEMENT D'UNE MATIERE RASSE CONTENANT DES DERIVES OXYGENES DES STEROLS Mode opératoire Une matière grasse laitière anhydre est soumise à plusieurs cycles de chauffage (150 C - lh) entre lesquels on la laisse revenir à température ambiante. A 10g de cette matière grasse ainsi préparée (ci-après matière grasse usagée) et préalablement fluidifiée, on ajoute 10g d'eau et 500 mg de Bcyclodextrine sous la forme d'mune poudre cristalline amorphe (ROQUETTE) Après une agitation sur table mélangeante, cet échantillon ainsi qu'un second échantillon traité de manière identique mais auquel n'a pas été ajoutée de la B-cyclodextrine, et destiné à servir de témoin, sont placés dans une enceinte réglée à 40 C et maintenus à cette température pendant 5 heures. Les deux échantillons sont ensuite soumis à une centrifugation à $000 g. Un culot, contenant les complexes formés entre les dérivés oxygenes des stérols et la 8-cyclodextrine, surmonté d'un surnageant est obtenu. Le surnageant comporte une phase aqueuse surmonté d'une phase huileuse. La phase huileuse est soumise à une saponification. Les fractions insaponifiables sont analysées par chromatographie sur couche mince selon la méthode décrite par J.M., LUBY (Journal of Food Science, 51., n 4, 1986, 904-907). Résultats On constate sur la plaque pour la fraction correspondant à l'échantillon témoin la présence de deux taches correspondant à deux oxydes de cholestérol. Ces deux taches sont également retrouvées pour la fraction correspondant à l'échantillon préparé à partir de la matière grasse traitée, mais leur intensité est très atténuée. Exemple 5 - TRAITEMENT D'UNE MATIERE GRASSE CONTENANT UNE STERONE Mode opératoire De la matière grasse laitière anhydre, préalablement soumise à 1 'action d'une souche bactérienne biosynthétisant une cholestéroloxydase extra-cellulaire, contenant 240 mg de A4-cholesténe-3-one pour 100 g est mise en oeuvre (et ci-après appelée MGLA-BIO). - 13 - 2 626145 Deux échantillons (essais 1 et 2) sont préparés. Pour chacunt d'eux, à 10 g de cette matière grasse sont ajoutés 10 g d'eau et 500 mg de 8-cyclodextrine sous la forme d'une poudre cristalline amorphe (ROQUETTE). Après une agitation sur table mélangeante. les deux échantillons, ainsi que deux autres échantillons préparés de manière identique mais auxquels n'a pas été ajoutée de la 8-cyclodextrine. sont soumis à une centrifugation à 8000 g. Un culot, contenant les complexes d'inclusion formés avec la 6-cyclodextrine, surmonté d'un surnageant, est obtenu. Le surnageant comporte tune phase aqueuse surmontée d'une phase huileuse. La phase huileuse est recueillie: 2 g en sont prélevés et portés dans un mélange de méthanol et de chlorure de méthylène (50/50. v/v). Le volume de la solution A ainsi préparée est complété à 100 ml avec le même mélange. On obtient ainsi une solution B que l'on analyse par chromatographie liquide à haute performance. Une colonne en acier de 25 cm de longueur et de 4,6 mm de diamètre interne, contenant du gel Spherisorb RP s15 (colonne prête à l'emploi du type S 5 ODS 2 commercialisée par Phase Sep sous la référence 820 019) et une précolonne d'l,5 cm de longueur et de 3.2 mm de diamètre intérieur contenant une phase C18 de 7 microns (colonne prête à l'emploi commercialisée par Touzart et Matignon sous la référence 014 350O 12) sont utilisées. Une prise d'essai de 20 microlitres de la solution B est injectée. L'élution est réalisée à l'aide d'une phase mobile constituée de volumes de méthanol et de 5 volumes de chlorure de méthylène que l'on fait circuler, pendant 15 minutes avec un débit de 1,0 ml par minute. La d4-cholesténe-3-one donne un pic principal avec un temps de rétention voisin de 13 minutes. L'élution est poursuivie pour permettre le lavage de la phase stationnaire et son retour à son équilibre initial. Réei'ltats Les résultats sont portés dans le tableau IV. - 14- 2 6626145 TABLEAU IV ECHANTILLON ECHANTILLON TEMOIN L3-CYCLODEXTRINE /MGLA BIO = 0,05 I l_ I 1 2 ESSAI ESSAI I I 2 I I I 4-Chol estène-3--,ne 238 239 40 39 mg polir 100 g I I IIIi Pourcentage d'élimination O O I 83 84 l II' I I On constate que pour chacun des deux essais. plus de 0S% de la stérone ont pn être éliminés. - 1 4 - REVENDICATIONS 1/ Procédé d'élimination de composés stéroîdiques contenus dans une substance d'origine biologique, caractérisé en ce que ladite substance éventuellement fluidifiée est mise en contact avec une cyclodextrine. en milieu aqueux. que ce contact est prolongé sous agitation à une température comprise entre 20 et SO C de façon à permettre la formation de complexes entre les composés stéroîdiques et la cyclodextrine. puis que lesdits complexes sont séparés, à l'exclusion de son application à l'élimination du cholestérol contenu dans une matière grasse d'origine animale. 2/ Procédé selon la revendication 1. caractérisé en ce que le contact est réalisé à 400C pendant 5 heures. 3/ Procédé selon l'une des deuLx revendications i et 2. caractérisé en ce que de la B-cyclodextrine est utilisée. 4/ Procédé selon l'une quelconque des revendications I à ô. caractérise en ce que ladite substance d'origine biologique est une matière grasse d'origine animale. / Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérise en ce que ladite substance d'origine biologique est une matière grasse d'origine végétale. 6/ Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que ladite substance d'origine biologique est un produit à base d'oeuf. 7/ Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 6. caractérisé en ce que l'élimination concerne au moins un ester de stérol. - 16- 2 -626145 8/ Procédé selon l'mune quelconque des revendications I à 6, caractérisé en ce que l'élimination concerne au moins une stérone. 9/ Procédé selon l'mune quelconque des revendications 1 à 6, caractérisé en ce que l'élimination concerne au moins un dérivé oxydé d'un stérol. 10/ Procédé selon la revendication 5, caractérisé en ce que l'élimination concerne au moins un phytostérol. 11/ Procédé selon la revendication 6, caractérisé en ce que l'élimination concerne du cholestérol. 12/ Substance d'origine biologique appauvrie en composés stéroîdiques obtenue par unm procédé selon l'untme quelconque des revendications I à 11.