FR 2619219 A1 19890210 FR 8711397 A 19870807 La présente invention concerne un réactif sec reconstituable, notamment pour la détermination turbidimétrique ou néphélémétrique de la lipase pancréatique dans les milieux biologiques, en particulier dans le sérum ou le plasma humain, qui forme par addition d'eau, une émulsion. La lipase (EC 3.1.1.3) est une enzyme localisée dans le pancréas. On sait qu'une lésion du pancréas s'accompagne d'une libération dans le sang d'enzymes d'origine pancréatique, dont la lipase. Ainsi, sa quantification dans le plasma ou dans le sérum permet une aide au diagnostic et au suivi des pancréatites aiguës. On sait, en outre, qu' il est préférable d'utiliser pour la détermination de l'activité lipasique un substrat liposoluble (triglycérides), afin d'éviter l'interaction non spécifique d'autres enzymes, telles que des estérases, et que la lipase pancréatique est une enzyme hydrosoluble qui agit à l'interface huile/eau, la surface lipidique devant être la plus grande possible pour mesurer-dans de bonnes conditions l'activité lipasique. I1 est donc nécessaire de disperser la phase lipidique sous forme d'une fine émulsion, stable dans 1' eau. On sait enfin que les sels biliaires à forte concentration inhibent les enzymes lipolytiques, et que la lipase lève spécifiquement cette inhibition dans le cas de la lipase pancréatique, ce qui garantit une spécificité de la détermination. Parmi les substrats actuellement décrits, il en existe qui présentent de grandes limites quant à leur spécificité. Un tel substrat est décrit dans EP 0014252. La lipase est, en effet, normalement présente dans le plasma de sujets sains en faible quantité et le réactif décrit ne permet pas de différencier avec efficacité la lipase de sujets atteints de pancréatite aiguë de celle de sujets sains. Or, ces deux formes d'enzyme ont des propriétés différentes. En outre, le procédé de préparation du réactif, objet de EP 0014252 nécessite l'addition de nombreuses substances et en particulier de solvants volatils, difficiles à manipuler et susceptibles d'être contaminés par des toxiques ou d'être des inhibiteurs d'enzymes. Il fait intervenir des mélanges de poudres qui nécessitent l'utilisation de mélangeurs hautement performants. Ces opérations peuvent créer des hétérogénéités de composition du réactif sec. Enfin, il fait appel à la technique de lyophilisation, qui est une technique de dessiccation à froid par sublimation, c'est-à-dire que par ce procédé, l'eau du produit à dessécher, préalablement transforme en glace, est vaporisée directement, sans nouveau passage par l'état liquide. Or, cette technique nécessite la mise en oeuvre d'un matériel très cher (basse température, vide poussé,...). De plus, la réalisation de produits obtenus par lyophilisation est une opération longue et délicate, donc onéreuse. Par ailleurs, le produit obtenu est très lyophile (avide d'eau), et doit être conservé à l'abri de l'humidité, car il se réhydrate facilement au contact de l'atmosphère. Le problème que la présente invention se propose de résoudre est de réaliser un réactif sous forme d'émulsion obtenue par reconstitution d'un réactif sec, permettant de quantifier spécifiquement la forme d'enzyme présente dans le sang de sujets atteints de pancréatite -aiguë et d'obtenir une efficacité maximum pour distinguer les sujets. non atteints de pancréatite aiguë des sujets atteints de pancréatite aiguë. D'autre part, le procédé de préparation du réactif sous forme sèche doit garantir sa stabilité. De plus, ce procédé ne doit nécessiter l'addition que de peu de substances, ne pas utiliser de solvant organique, ne pas faire intervenir des mélanges de poudre, nécessiter le moins d'étapes possible pour l'obtention finale du réactif sec et, enfin, ne pas faire appel à la technique de lyophilisation. A cet effet, l'invention a pour objet un réactif sec reconstituable, notamment pour la détermination turbidimétrique ou néphélémétrique de la lipase pancréatique dans les milieux biologiques, en particulier dans le sérum ou le'plasma humain, qui forme par addition d'eau, une émulsion, réactif caractérisé en ce qu'il contient, entre autres au moins une substance permettant sa transformation sous une forme sèche par une etape de nébulisation d'un mélange émulsion de base composés hydrosolubles de manière à obtenir un réactif sec d'une stabilité optimale et une émulsion reconstituée d'une stabilité suffisante et d'une composition optimisée pour la détermination de l'activité lipasique présente chez des sujets atteints de pancréatite aiguë. Par cette technique de nébulisation, le produit à sécher, mis sous forme d'émulsion est dispersé en fines gouttelettes dans un courant d'air chaud qui les transforme instantanément en petits grains de poudre. La nébulisation est une opération rapide et peu coûteuse. En raison de l'extrême rapidité de l'opération (une fraction de seconde), les risques de dégradation du produit à sécher sont nuls en pratique. En outre, le produit obtenu après nébulisation-est moins avide d'eau qu'un produit obtenu après lyophilisation. Par ailleurs, l'étude de la taille de particules après reconstitution du réactif sec montre que les gouttelettes lipidiques sont fines et homogènes du point de vue de leur taille. Comparaison des étapes nécessaires pour la préparation d'un réactif sec par lyophilisation et par nébulisation. LYOPHILISATION NEBULISATION Dissolution de trioléine dans Trioléine | Trioléine|| Mise en suspension de un solvant organique l l gomme arabique dans l'eau I o s v Injection lente sous pression Utilisation d'ultra-sons, puis addition i lente I Solution de sel biliaire, Solution de tampon, lactose, chlorure colipase, colloide protecteur, de calcium, chlorure de sodium, sel agent conservateur et agent biliaire, agent conservateur et activateur colipase i I Congélation (- 40 C) Lyophilisation Nébulisation Mélange Poudre : Tampon, urée, colloide protecteur, agent activateur Réactif sec Réactif sec Selon une caractéristique de l'invention, le réactif contient, en outre - un substrat de la lipase - un sel biliaire à forte concentration inhibant les enzymes lipolytiques - un activateur spécifique de la lipase pancréatique - un activateur sous la forme d'un sel alcalinoterreux - une substance tampon - un agent facilitant la mise en émulsion du substrat de la lipase, et - un agent de conservation. Selon une autre caractéristique de l'invention, le réactif contient - du lactose comme substance nécessaire à l'étape de nébulisation - du triglycéride, par exemple, dont les acides gras ont 8 à 20 atomes de carbone, préférentiellement la trioléine, comme substrat de la lipase - du désoxycholate de sodium comme sel biliaire - de la colipase comme activateur spécifique de la lipase pancréatique - du chlorure de calcium comme sel alcalinoterreux - du tris (hydroxyméthyl)-aminométhane comme substance tampon; - de la gomme arabique comme agent facilitant la mise en émulsion du substrat de la lipase, et - de l'azide de sodium comme conservateur. Conformément à une première variante de l'invention, le réactif sec est reconstitué par addition d'un électrolyte, par exemple une solution de chlorure de sodium, de manière à ce que pour obtenir un volume final de l'émulsion de 500 ml, on ajoute avantageusement 31,57 g de réactif sec. On peut, bien entendu, utiliser une solution de tout autre électrolyte, de telle sorte que la force ionique soit identique. Conformément à une seconde variante de l'invention, c'est le réactif sec lui-même qui contient un activateur de la forme de la lipase présente dans le plasma ou le sérum de sujets atteints de pancréatite aiguë, sous la forme d'un électrolyte, par exemple, du chlorure de sodium, dans une proportion comprise entre 8 % et 12 % en poids de réactif sec, de manière à permettre la détermination optimale de l'activité lipasique du plasma ou du sérum humain de sujets atteints de pancréatite aiguë. Comme substance nécessaire pour l'étape de nébulisation, on peut utiliser de nombreuses substances à condition qu'elles n'interfèrent pas dans la réaction lipasique, telles que des polyols, de l'urée... On utilise, par exemple, du lactose de 50 à 90 % en poids. Comme triglycéride, on peut utiliser des triglycérides dont les acides gras ont 8 à 20 atomes de carbone, et préférentiellement la trioléine de 0,05 à 0,5 % en poids du réactif sec. Comme sel biliaire, on peut utiliser le désoxycholate de sodium, le taurocholate de sodium, le taurodésoxycholate de sodium ou tout autre sel biliaire, tel que, par exemple, le désoxycholate de sodium de 7 à 13 % en poids. La colipase représente 0,001 à 0,009 % en poids du réactif sec. Comme agent activateur, on utilise du chlorure de sodium, tel que sa concentration finale soit de 140 mmol/l dans le milieu réactionnel (8 à 12 % en poids du réactif sec) ou tout autre électrolyte, de telle sorte que la force ionique soit identique. Par ailleurs, on utilise un sel alcalinoterreux en faible quantité, par exemple, du chlorure de calcium de 0,01 à 0,03 % en poids comme activateur. Comme tampon, on utilise par exemple du tris (hydroxyméthyl) - aminométhane de 2 à 6 % en poids. On peut utiliser d'autres tampons de telle sorte que le pH du milieu réactionnel soit situé entre 8 et 10 (tampon à base d'éthanolamine, d'acide 2-(N-cyclohexylamino)sulfonique, d'acide N-2-hydroxyéthylpipérazine-N'-2-éthane sulfonique, ...). Comme agent facilitant la mise en émulsion du triglycéride, on utilise, par exemple, de la gomme arabique de 0,01 à 0,5 % en poids du réactif sec. Mais on peut également utiliser de la gomme adragante, de la gomme de sterculia, de la gomme guar, des pectines, des alginates, des carraghénates ou de la gélose. Différents agents de conservation sont utilisables, par exemple l'azide de sodium de 0,1 à 1 % en poids. Le réactif sec peut donc contenir à titre avantageux, les constituants suivants dans la proportion indiquée - 75,052 % en poids de lactose - 0,1662 % en poids de trioléine ; - 9,84 % en poids de désoxycholate de sodium - 0,0038 % en poids de colipase - 10,2344 % en poids de chlorure de sodium - 0,0184 % en poids de chlorure de calcium - 3,95 % en poids de tris (hydroxyméthyl)-aminométhane - 0,1662 % en poids de gomme arabique - 0,569 % en poids d'azide de sodium. L'invention a également pour objet un procédé de préparation du réactif sec. Ce procédé consiste à préparer une émulsion de base, par exemple, grâce à l'utilisation d'ultrasons, puis à préparer la solution des substances nécessaires à la dégradation du triglycéride par la lipase dans des conditions optimales avec des substances nécessaires pour la nébulisation et la conservation (composés hydrosolubles), à mélanger l'émulsion de base obtenue aux composés hydrosolubles obtenus, à homogénéiser par retournements successifs l'émuî- sion, et enfin à nébuliser l'émulsion ainsi obtenue afin de la stabiliser. Exemple d'un mode opératoire détaillé pour la préparation de produit sec, permettant d'obtenir 35,66 g de réactif sec. Préparation de l'émulsion de base - 6 g de gomme arabique sont mis en suspension dans 26 ml d'eau bidistillée - on pèse 3 g de trioléine dans ce récipient cylindrique - on verse 17 ml de suspension colloïdale de gomme arabique dans le récipient contenant la trioléine - l'émulsion est réalisée grâce à l'utilisation d'ultra-sons à l'aide d'un appareil, tel que celui connu sous la dénomination commerciale Labsonic 2 000 de la Société B. Braun, en cycles répétés entre lesquels le récipient est mis dans de la glace fondante. Préparation de la solution des substances nécessaires à la dégradation du triglycéride par la lipase dans des conditions optimales avec la substance nécessaire pour l'étape de nébulisation - 49,5 g de lactose, 2,605 g de tris (hydroxyméthyl)-aminométhane, 0,012 g de chlorure. de calcium, 6,750 g de chlorure de sodium, 0,375 g d'azide de sodium, 6,49 g de desoxycholate de sodium et 2,475 mg de colipase sont successivement dissouts dans 200 ml d'eau bidistillée - la solution est ensuite complétée à 275 ml avec de l'eau bidistillée et filtrée sur une membrane filtrante, telle que celle connue sous la dénomination commerciale Millipore, de 0,22 ym de porosité après homogénéisation. Obtention du mélange émulsion de base - composés hydrosolubles - 0,681 ml d'émulsion de base est ajouté à 245 ml de solution de composés hydrosolubles - l'émulsion ainsi obtenue est complétée à 250 ml avec la solution de composés hydrosolubles, puis homogénéisée par retournements successifs. Obtention du réactif sec par nébulisation de l'émulsion - L'appareil utilisé est un atomiseur tel que celui connu sous la dénomination commerciale Minor Mobil de la société Niro Atomizer, relié à un compresseur, tel que celui connu sous la dénomination commerciale Maco Meudon. Pendant l'opération de nébulisation, l'émulsion est maintenue sous agitation douce. L'alimentation de l'atomiseur en liquide se fait par l'intermédiaire d'une pompe péristaltique à un débit de 1,5 l/h. - Durant l'étape de nébulisation, la température d'entrée de l'atomiseur est maintenue entre 180 et 185 C, et la température de sortie entre 95 et 105C C. La pression est maintenue constante entre 5 et 6 b. - Le nébulisat de l'émulsion initiale est recueilli dans un récipient rigoureusement sec et se présente sous forme d'une poudre blanche homogène (34 à 45 g). Enfin, l'invention a également pour objet le réactif sous forme d'émulsion, obtenu par reconstitution du réactif sec avec'addition d'eau bidistillée. On obtient, par exemple, 500 ml de réactif pour la détermination de l'activité lipasique en reconstituant 35,66 g de nébulisat avec de l'eau bidistillée à un volume final de 500 ml. Bien entendu, l'invention a également pour objet le réactif sous forme d'émulsion, obtenu par reconstitution du réactif avec addition d'une solution d'un électrolyte. En effet, on a vu précédemment qu'il est également possible de préparer le réactif sec de façon analogue sans chlorure de sodium. Dans ce cas, on obtient, par exemple, 500 ml de réactif pour la détermination de l'activité lipasique en reconstituant 31,57 g de produit obtenu après nébulisation par une solution contenant 140 mmol/l de chlorure de sodium, ou par une solution de tout autre électrolyte, de telle sorte que la force ionique soit identique. Le réactif sous forme d'émulsion contient - 30 à 90 g/l de lactose - 0,10 à 0,25 mmol/l de trioléine - 10 à 30 mmol/l de désoxycholate de sodium - 1 à 5 mg/l de colîpase - 125 à 155 mmol/l de chlorure de sodium - 0,01 à 0,2 mmol/l de chlorure de calcium - 10 à 50 mmol/l de tris (hydroxyméthyl)-aminométhane - 0,05 à 1 g/l de gomme arabiqùe - 0,1 à 1 g/l-d'azide de sodium. La composition exacte du réactif sous forme d'émulsion sera la suivante - 60 g/l de lactose - 0,15 mmol/l de trioléine - 19 mmol/l de désoxycholate de sodium ; - 3 mg/l de colipase - 140 mmol/l de chlorure de sodium - 0,1 mmol/l de chlorure de calcium - 26 mmol/l de tris (hydroxyméthyl)-aminométhane - 0,13 g/l de gomme arabique - 0,5 g/l d'azide de sodium. Le réactif sec est donc caractérisé en ce qu'il contient, après reconstitution, les différentes substances intervenant dans la réaction lipasique (triglycéride, sel biliaire, colipase...) en concentration optimale pour la détermination de l'activité lipasique présente dans le plasma ou le sérum de sujets atteints de pancréatite aiguë. En particulier, il contient du chlorure de sodium ( ou tout autre électrolyte) à une concentration de 140 mmol/l. Par ailleurs, il contient une ou des substances permettant la mise en émulsion du triglycéride, une substance tampon, un agent de conservation, une ou des substances nécessaires à l'étape de nébulisation. En présence de chlorure de sodium à 140 mmol/l (concentration finale dans le milieu réactionnel), la lipase du plasma de sujets sains est très fortement inhibée dans tous les cas et totalement dans 96 % des cas alors que l'activité lipasique du plasma de sujets atteints de pancréatite aiguë est très stimulée (de 300 %O en moyenne sur 120 cas étudiés). Par ailleurs, le chlorure de sodium peut être remplacé par d'autres électrolytes (chlorure de potassium, acétate de sodium...). Ainsi, l'addition de chlorure de sodium permet d'obtenir une efficacité maximum pour distinguer les sujets non atteints de pancréatite aiguë et patients atteints de pancréatite aiguë. La concentration de trioléine du réactif a été fixée à 0,15 mmol/l, car elle fournit la sensibilité analytique la plus élevée. Le procédé utilisé permet d'obtenir une émulsion stable constituée de fines gouttelettes lipidiques de tailles peu dispersées. De plus, il permet d'obtenir des émulsions de qualités très voisines. A l'aide d'un appareil permettant des mesures de taille entre 40 et 3000 nm, tel que celui connu sous la dénomination commerciale Coulter Nano Sizer de la Société Coultrotnics, France, il a été possible de déterminer la taille moyenne des gouttelettes lipidiques. Celles-ci présentent un diamètre moyen de 530 nm, ce qui correspond à une émulsion très fine, avec un faible indice de polydispersité, les diamètres moyens extrêmes pour différentes émulsions étant de 500 et 570 nm. Par ailleurs, il a été vérifié l'absence de grosses particules lipidiques à l'aide d'un appareil permettant la mesure de taille de particules selon un autre principe, tel que celui connu sous la dénomination commerciale Platelet Analyser 810 de la Société Baker Instruments. I1 n'a pas été trouvé de particules d'un diamètre supérieur à 3 500 nm. Après avoir réalisé une dizaine de préparations d'émulsions par utilisation d'ultra-sons selon le procédé décrit ci-dessus, il s'est révélé être de mise en oeuvre parfaitement aisée et très fiable. -REVENDICATIONS 1. Réactif sec reconstituable, notamment pour la détermination turbidimétrique ou néphélémétrique de la lipase pancréatique dans les milieux biologiques, en particulier dans le sérum ou le plasma humain, qui forme par addition d'eau, une émulsion, réactif caractérisé en ce qu'il contient, entre autres, au moins une substance permettant sa transformation sous une forme sèche par une étape de nébulisation d'un mélange émulsion de base - composés hydrosolubles de manière à obtenir un réactif sec d'une stabilité optimale et une émulsion reconstituée d'une stabilité suffisante et d'une composi- tion optimisée pour la détermination de l'activité lipasique présente chez des sujets atteints de pancréatite aiguë. 2. Réactif sec selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il contient, én outre - un substrat de la lipase - un sel biliaire à forte concentration inhibant les enzymes lipolytiques - un activateur spécifique de la lipase pancréatique - un activateur sous la forme d'un sel alcalinoterreux ; - une substance tampon - un agent facilitant la mise en émulsion du substrat de la lipase, et - -un agent de conservation. 3. Réactif sec selon la revendication 2, caractérisé en ce qu'il contient - du lactose comme substance nécessaire à l'étape de nébulisation - du triglycéride, par exemple, dont les acides gras ont 8 à 20 atomes de carbone, préférentiellement la trioléine, comme substrat de la lipase - du désoxycholate de sodium comme sel biliaire - de la colipase comme activateur spécifique de la lipase pancréatique - du chlorure de calcium comme sel alcalinoterreux - du tris (hydroxyméthyl)-aminométhane comme substance tampon; - de la gomme arabique comme agent facilitant la mise en émulsion du substrat de la lipase, et - de l'azide de sodium comme conservateur. 4. Réactif sec selon la revendication 3, caractérisé en ce qu'il contient 50 % à 90 % en poids de lactose. 5. Réactif sec selon l'une quelconque des revendications 2 à 4, caractérisé en ce qu'il contient, en outre, un activateur de la forme de la lipase présente dans le plasma ou le sérum de sujets atteints de pancréatite aiguë, sous la forme d'un électrolyte, par exemple, du chlorure de sodium, dans une proportion comprise entre 8 % et 12 % en poids de réactif sec, de manière à permettre la détermination optimale de l'activité lipasique du plasma ou du sérum humain de sujets atteints de pancréatite aiguë. 6. Réactif sec selon la revendication 5, caractérisé en ce qu'il contient, en outre - 0,05 % à 0,5 % en poids de trioléine - 7 % à 13 /. en poids de désoxycholate de sodium - 0,001 à 0,009 % en poids de colipase - 0,01 à 0,03 % en poids de chlorure de calcium - 2 à 6 V en poids de tris (hydroxyméthyl)-aminométhane - 0,01 à 0,5 % en poids de gomme arabique - 0,1 % à 1 % en poids d'azide de sodium. 7. Réactif sec selon la revendication 6, caractérisé en ce qu'il contient avantageusement - 75,052 % en poids de lactose - 0,1662 % en poids de trioléine - 9,84 % en poids de désoxycholate de sodium - 0,0038 % en poids de colipase - 10,2344 % en poids de chlorure de sodium - 0,0184 % en poids de chlorure de calcium - 3,95 % en poids de tris (hydroxyméthyl)-aminométhane - 0,1662 % en poids de gomme arabique - 0,569 % en poids d'azide de sodium. 8. Procédé de préparation du réactif sec selon l'une quelconque des revendications 1 à 7, caractérisé en ce qu'il consiste à préparer une émulsion de base, puis à préparer la solution des substances nécessaires à la dégradation du triglycéride par la lipase dans des conditions optimales avec des substances nécessaires pour la nébulisation et la conservation (composés hydrosolubles), à mélanger l'émulsion de base obtenue aux composés hydrosolubles obtenus, à homogénéiser par retournements successifs l'émulsion, et enfin à nébuliser l'émulsion ainsi obtenue afin de la stabiliser. 9. Procédé de préparation selon la revendication 8, caractérisé en ce que pour obtenir 35,66 g de réactif sec, la préparation de l'émulsion de.base consiste - à mettre en suspension 6 g de gomme arabique dans 26 ml d'eau bidistillée - à peser 3 g de trioléine dans ce récipient cylindrique - à verser 17 ml de suspension colloïdale de gomme arabique dans le récipient contenant la trioléine - à réaliser l'émulsion grâce à l'utilisation d'ultra-sons à l'aide d'un appareil-, en cycles répétés de deux minutes entre lesquels le récipient est mis dans de la glace fondante. 10. Procédé de préparation selon la revendication 8, caractérisé en ce que pour obtenir 35,66 g de réactif sec, la préparation de la solution des substances nécessaires à la dégradation du triglycéride par la lipase dans des conditions optimales avec la substance nécessaire pour l'étape de nébulisation consiste - à dissoudre successivement 49,5 g de lactose, 2,605 g de tris (hydroxyméthyl)-amino-méthane, 0,012 g de chlorure de calcium, 6,750 g de chlorure de sodium, 0,375 g d'azide de sodium, 6,49 g de desoxycholate de sodium et 2,475 mg de colipase dans 200 ml d'eau bidistillée - à compléter la solution à 275 ml avec de l'eau bidistillée et filtrée sur une membrane filtrante après homogénéisation. 11. Procédé de préparation selon la revendication 8, caractérisé en ce que pour obtenir 35,66 g de réactif sec, le mélange émulsion de base - composés hydrosolubles consiste - à ajouter 0,681 ml d'émulsion de base à 245 ml de solution de composés hydrosolubles - à compléter l'émulsion ainsi obtenue à 250 ml avec la solution de composés hydrosolubles - à homogénéiser ladite émulsion par retournements successifs. 12. Procédé de préparation selon la revendication 8, caractérisé en ce que pour obtenir 35,66 g de réactif sec, la nébulisation de l'émulsion s'effectue dans un atomiseur sous agitation douce, dont l'alimentation en liquide se fait par l'intermédiaire d'une pompe péristaltique à un débit d'environ 1,5 l/h, dont la température d'entrée est maintenue entre 1800 et 185 C et dont la température de sortie est maintenue entre 95" et 105 C, la pression étant maintenue constante entre 5 et 6 bars. 13. Réactif sous forme d'émulsion obtenu par reconstitution du réactif sec selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, avec addition d'une solution d'un électrolyte, tel que du chlorure de sodium, caractérisé en ce que pour obtenir un volume final de l'émulsion de 500 ml, on ajoute avantageusement 31,57 g de réactif sec. 14. Réactif sous forme d'émulsion obtenu par reconstitution du réactif sec selon l'une quelconque des revendications 5 à 7, avec addition d'eau bidistillée, caractérisé en ce que pour obtenir un volume final de l'émulsion de 500 ml, on ajoute avantageusement 35,66 g de réactif sec. 15. Réactif sous forme d'émulsion selon l'une quelconque des revendications 13 et 14, caractérisé en ce qu'il contient - 30 à 90 g/l de lactose - 0,10 à 0,25 mmol/l de trioléine - 10 à 30 mmol/l de désoxycholate de sodium - 1 à 5 mg/l de colipase ; - 125 à 155 mmol/l de chlorure de sodium - 0,01 à 0,2 mmol/l de chlorure de calcium - 10 à 50 mmol/l de tris (hydroxyméthyl)-aminométhane - 0,05 à 1 g/l de gomme arabique - 0,1 à 1 g/l d'azide de sodium. 16. Réactif selon la revendication 15, caractérisé en ce qu'il contient avantageusement : - 60 g/l de lactose - 0,15 mmol/l de trioléine - 19 mmol/l de désoxycholate de sodium - 3 mg/l de colipase - 140 mmol/l de chlorure de sodium - 0,1 mmol/l de chlorure de calcium - 26 mmol/l de tris (hydroxyméthyl)-aminométhane - 0,13 g/l de gomme arabique - 0,5 g/l d'azide de sodium. 17. Réactif sous forme d'émulsion selon l'une quelconque des revendications 13 à 16, caractérisé en ce que le diamètre moyen des gouttelettes lipidiques est compris entre 500 et 570 nm, en général 530 nm, ce qui correspond à une émulsion très fine avec un faible indice de polydispersité, aucune particule lipidique ne présentant un diamètre supérieur à 3500 nm.