FR 2617049 A1 19881230 FR 8709065 A 19870626 Extrait de colostrum. orocede oour son obtention et ses utilisations. notamment dans le traitement de l'acne. L'invention a pour objet un nouvel extrait de colostrum notamment de bovidés, un procédé pour son obtention et ses utilisations, en particulier dans le traitement local de l'acné. On a déja proposé d'utiliser la fraction insaponifiable de la partie lipidique du colostrum en thérapeutique humaine, notamment dans le domaine de l'hormonothérapie par voie générale. Le brevet FR 1 569 698 décrit un procédé d'extraction de cette fraction selon lequel on élimine au moins la majeure partie de l'eau contenue dans le colostrum, on saponifie la partie restante, on extrait le produit de saponification avec un solvant de l'insaponîfiable et on chasse le solvant de l'extrait pour recueillir l'insaponifiable désiré. Ce brevet préconise l'utilisation de 15 d 25 kg, de préférence 17 & 21 kg de potasse pour 150 kg de coagulum essoré ou 120 kg de poudre nébulisée, qui correspondent a 550 kg de colostrum environ. On constate d'après les exemples que ce procédé fournit environ 250 g d'insaponifiable d partir de 550 kg de colostrum. Le produit ainsi obtenu qui est trés pauvre en 17-cétostéroides tels que déterminés par la réaction de Zimmermann, présente des propriétés thérapeutiques médiocres et est inefficace dans le traitement local de l'acné. Les recherches effectuées par le demandeur lui ont permis d'obtenir un nouvel extrait très efficace en hormonothérapie et qui plus est, et cela est tout & fait surprenant et inattendu, efficace dans le traitement local de l'acné. Plus précisément, selon l'un de ses aspects, l'invention a pour objet un extrait de colostrum qui est caractérisé en ce qu'il s'agit d'un liquide huileux brun-rougeâtre, d odeur aromatique, insoluble dans l'eau, partiellement soluble dans l'alcool éthylique, soluble dans l'éther éthylique, le chloroforme et l'éther de pétrole et qui présente en outre - un indice de réfraction, n35 de 1,4423 à 1,4441, nD - un indice de saponification de 198 d 204, - un indice d'acidité de 7,21 à 7,23, - un indice d'ester de 190 à 196, et - une concentration en chromogènes de Zimmermann d'au moins 1800 pg/g. Selon un mode préféré de réalisation, la concentration en chromogénes de Zimmermann est d'au moins 2100 pg/g ; elle est avantageusement voisine de 2500 pg/g La définition et la méthode de mesure de ces différents indices et concentrations sont données dans la partie expérimentale qui suit. Selon un autre de ses aspects, l'invention a pour objet un procédé pour l'obtention de l'extrait de colostrum défini plus haut, selon lequel on élimine au moins la majeure partie de l'eau contenue dans le colostrum, on traite la partie restante par un alcali, on extrait la phase liquide résultant de ce traitement et on chasse le solvant d'extraction pour recueillir l'extrait recherché, caractérisé en ce que le traitement par un alcali est effectué de façon ménagée, au moyen de 0,02 å 0,06 mole d'alcali par litre de colostrum mis en oeuvre. L'élimination au moins partielle de l'eau peut se faire par tout procédé pouvant être mis en oeuvre dans des conditions relativement douces qui ne dégradent pas les constituants actifs du colostrum, notamment par évaporation sous pression réduite (par exemple d'environ 4,0.103 Pa) en chauffant modérément par circulation d'eau, par exemple d une température voisine de 70-C, dans l'habillage de la cuve qui contient le colostrum. Avantageusement, ce traitement se fait en plusieurs étapes avec des introductions successives de colostrum dans la cuve, d mesure que l'évaporation progresse. Cette évaporation conduit à l'obtention d'une pate consistante et granuleuse. Le traitement d l'alcali se fait de préférence dans un alcanol å courte chaine (1 à 3C), en présence d'une quantité relativement faible d'eau. Avantageusement, ce traitement a lieu dans l'éthanol à 95*. L'alcali utilisé est de préférence l'hydroxyde de potassium ou l'hydroxyde de sodium. Selon un mode préféré de réalisation de l'invention, la quantité d'alcali utilisée est voisine de 0,04 mole par litre de colostrum mis en oeuvre. Le traitement doit avoir lieu dans des conditions ménagées, c'est- & dire avec un alcali relativement dilué, de préférence avec un alcali 0,01 à 0,10 N, et en évitant de dépasser la température de 80'C. Lorsque le traitement est terminé, une phase solide contenant des savons et de la caséine se sépare de la phase liquide, notamment hydroalcoolique. Cette phase est extraite, de préférence plusieurs fois, au moyen d'un solvant des 17-cétostéroides tel que l'éther éthylique, de préférence l'éther de pétrole, et en particulier l'éther de pétrole bouillant à 50-70eC. Le solvant d'extraction de la phase hydroalcoolique qui contient l'extrait recherché est avantageusement chassé sous pression réduite de î 103 à 104 Pa, par exemple. Selon encore un autre de ses aspects, l'invention a pour objet des compositions pharmaceutiques et cosmétiques contenant l'extrait selon l'invention en tant que principe actif. En effet, l'extrait selon l'invention peut être utilisé dans différentes applications thérapeutiques en médecines humaine et animale. Parmi ses applications therapeutiques en médecine humaine, par voie générale, on peut citer chez la fene - les troubles du cycle menstruel, - les mastopathies, - les troubles de la ménopause, - certains troubles de la fonction urinaire tels que cystalgies à urines claires chez l'honte - les affections bénignes de la prostate, - le climatère masculin, - les gynécomasties chez l'enfant - les pubertés précoces vraies non tumorales, - les pseudopubertés précoces non tumorales, surtout chez la fille, - les retards pubertaires, - les mastopathies infantiles. Dans ces diverses applications, le traitement est effectué par voie générale, en particulier orale. L'extrait selon l'invention est, comme le montrent les analyses, pratiquement dépourvu de déhy droépiandrostérone. Comme il ne présente pas d'activité androgénoanabolisante ou anti-androgéno-anabolisante, il peut être utilisé dans ces diverses applications sans risques d'interférences gênantes. L'extrait selon l'invention peut également etre utilise dans le traitement par voie locale ou générale de la séborrhée et de ses complications. Enfin, une application tout à fait inattendue de l'extrait selon l'invention est son utilisation dans le traitement local de l'acné. Il convient de noter qu'il peut également être utilisé dans le traitement de l'acné par voie générale. En tant que forme pharmaceutique utilisable par voie orale on peut avantageusement avoir recours à des capsules molles, notamment du type de celles fabriquées par la société SCHERER selon son procédé et contenant une dose d'extrait selon l'invention en solution dans une huile végétale. Pour l'application locale, on peut avantageusement avoir recours d des gels ou à des crémesépaisses. Un gel approprié peut comprendre essentiellement une quantité efficace d'extrait selon l'invention dissoute dans de l'alcool éthylique, notamment à 90, auquel est ajoutée la quantité juste nécessaire d'éther éthylique, en présence d'un conservateur tel que le butylhydroxytoluène et d'un composé formant un gel avec l'alcool éthylique, tel que la carboxypropylcellulose ou un polyoxyéthyléneglycol (PEG), par exemple le PEG 400. Une crème épaisse appropriée peut être par exemple du type émulsion eau dans l'huile, avec par exemple 30 z d'eau et 70 % d'huile choisie notamment parmi l'alcool cétylstéarique et l'huile de vaseline épaisse, en ajoutant éventuellement un épaississant tel que le PEG 1000. En pratique, les différents lots d'extrait huileux selon l'invention sont plus ou moins concentrés en principes actifs. On mélange donc avantageusement plusieurs lots pour avoir un produit aussi constant que possible, présentant par exemple une concentration en chromogénes de Zimmermann voisine de 2500 pg/g. La description qui suit d'un exemple de préparation de l'extrait selon l'invention, des méthodes d'analyse de cet extrait, de son étude pharmacologique, d'exemples de préparation de gels contenant cet extrait et de leur utilisation est destinée à mieux expliquer l'invention, mais ne doit en aucune façon être considérée comme en limitant la portée. I. ExemPle de DreDaratlon de l'extrait selon l'invention Dans cet exemple on prépare un extrait de colostrum de bovidés. 1. Récolte du colostrum Des quantités relativement importantes de colostrum frais doivent être récoltées rapidement après le vêlage et être traitées sans délai pour obtenir un extrait conforme. A ce propos, des essais préliminaires ont montré que les meilleurs rendements et qualités sont obtenus notamment en utilisant le colostrum des vaches de races Frisonne pie noire, Tachetée de l'Est, Montbéliarde pie rouge. Le ramassage se fait bi-quotidiennement le jour et le lendemain du vêlage. Le transport s'effectue dans des bidons à lait parfaitement propres et le colostrum est stocké dans une cuve réfrigérée å + 4'C. Le colostrum doit être réfrigéré dans les six heures qui suivent sa récolte et ne doit être ni dilué, ni fermenté, ni souillé, notamment par du sang. En pratique, on utilise de préférence le colostrum de vaches produisant du lait depuis un an ou deux car les génisses primipares fournissent un colostrum de qualité, mais en quantité limitée. En outre, il convient de disposer de quantités relativement importantes de colostrum, par exemple de 250 à 300 litres, dans un délai relativement bref, c'est- & dire inférieur à une semaine, pour travailler un produit exempt de fermentations. Dans le cadre de l'exemple décrit ici, on utilise du colostrum provenant de vaches de 2 å 3 ans, Tachetées de l'Est, recueilli au début du printemps. 2. Concentratlon Le premier traitement consiste à éliminer la quasi totalité de l'eau de constitution. Pour ce faire, dans le cadre de cet exemple, on utilise un évaporateur sous vide constitué par une cuve en acier inoxydable, d'une capacité totale de 300 litres, munie d'un système d'agitation mécanique, d'un double fond et d'une double enveloppe pour la circulation d'eau. La cuve étant hermétiquement fermée, on y fait le vide å l'aide d'une trompe à vide avec condenseur, jusqu'à l'obtention d'une pression résiduelle d'environ 4,0.103 Pa (30 mm de mercure). Le colostrum est introduit par aspiration dans la cuve réfrigérée à +4*C. Pour commencer, on introduit 120 litres de colostrum et on fait circuler de l'eau à 70-C dans la double enveloppe et le double fond Lorsque le contenu de la cuve est réduit de moitié, on introduit à nouveau 60 litres de colostrum. Après 8 heures environ de fonctionnement, on rajoute & - nouveau 60 litres, ce qui porte & 240 litres le volume total de colostrum introduit. L'opération de concentration doit etre menée sans interruption jusqu'a l'obtention d'un produit pâteux épais. A ce stade, la cuve est ouverte pour rabattre les projections qui se trouvent sur les parois et le couvercle. L'appareil est refermé, le vide rétabli, et on poursuit l'opération avec un chauffage réduit (-r 50C) du double fond, jusqu' & l'obtention d'une patte très consistante et granuleuse. L'évaporateur est alors arrêté et le fond est soigneusement gratté pour décoller le résidu sec. 3. Traitement ménagé. en mllieu alcooliaue. var la Dotasse 0.07 N. Dès que l'ensemble est revenu à la température ambiante, le résidu sec est mélangé avec 60 litres d'éthanol 95' dénaturé, industriel, ajouté par petites quantités de façon å obtenir une fine dispersion des particules solides. Dans un bocal en verre contenant 10 1 d'éthanol à 95*, on dissout 480 g d'hydroxyde de potassium. Lorsque la dissolution est terminée, on verse le contenu du bocal dans le réacteur contenant le colostrum concentré de l'étape 2. On rajoute 50 litres d'éthanol à 95s, on ferme le réacteur et le système d'agitation mécanique est mis en marche. On s'assure de la mise en place du système de reflux et l'eau circulant dans la double enveloppe et le double fond est portée progressivement à une température voisine de 85-C. Lorsque l'alcool entre en ébullition, la température à l'intérieur de la cuve atteint 78 à 80*C. On maitient cette température pendant 3 à 4 heures, sans jamais dépasser 80*C. Dès que le traitement est terminé, on arrête le chauffage et laisse la masse se refroidir en maintenant l'agitation. Après plusieurs heures de refroidissement et dès que la température intérieure est voisine de 30-C, on fait circuler de l'eau froide (eau du robinet) dans la double enveloppe et le double fond. Lorsque le mélange est bien refroidi, on arrête l'agitateur et on laisse reposer en maintenant la circulation d'eau froide. Le réacteur est ouvert après une période de repos d'environ 8 heures et on sépare la matière solide rassemblée à la partie supérieure. On récupère la phase liquide par centrifugation. La phase liquide est mise en bidons fermés et stockée en chambre froide pendant 48 heures pour précipiter notamment la caséine restante. 4. Extraction L'hydrolysat est mélangé avec son volume d'eau déminéralisée, dans une cuve en acier inoxydable de 300 litres nunie d'une turbine. Après repos de quelques heures et refroidissement, on ajoute une quantité d'éther de pétrole de qualité dite "chemin de fer" ayant un point d'ébullition de 50 - 70'C, égale à la moitié de la quantité de liquide alcoolique provenant du traitement à l'hydroxyde de potassium. On agite le mélange 20 à 30 minutes et laisse reposer une nuit. Après décantation, la phase hydro-alcoolique est remise dans la cuve tandis que la phase éthérée est réservée. A deux reprises, on recommence l'extraction de la phase hydro-alcoolique avec la même quantité d'éther de pétrole. 5. Distillation Les liqueurs éthérées sont réunies et lavées deux fois avec 10 à 15 litres d'eau déminéralisée. Elles sont ensuite séchées par passage sur du sulfate de sodium anhydre et soumises à une distillation ménagée sous pression réduite environ 5,3.103 Pa (40 mmHg)l. Le résidu de la distillation est débarrassé des traces de solvant par action du vide (4,0.103 Pa) 15 minutes à température ambiante. A l'issue de cette dernière manipulation, on obtient environ 500 g d'un liquide huileux brun rougeâtre, å odeur aromatique très caractéristique, insoluble dans l'eau, incomplètement soluble dans l'alcool éthylique, mais entièrement soluble dans l'éther éthylique, le chloroforme et l'éther de pétrole. Ce produit constitue l'extrait selon l'invention et peut être caractérisé comme suit. Il. Analvse de l'extrait selon l'invention L'identification analytique de ce produit repose sur des déterminations d'indices, des chromatographies en couche mince et le dosage des chromogènes de Zimmermann. A. Indices 1. Indice de réfraction La détermination de l'indice de réfraction à 35 C, n35D , est réalisée à l'aide d'un réfractomètre de type ABBE (Zeiss-Iéna) thermostaté à + 0,02il. 2. Indice de saDonlflcatlon La technique utilisée est celle décrite dans la Pharmacopée Française, 9ème édition, 1974, tome Il, pages 279 et 280, avec des prises d'essais p1 voisines de 1 g et 20 il de solution éthanolique de potasse 0,5 N. 3. Indice d'acidité La technique utilisée est celle décrite dans la Pharmacopée Française, 9ème édition, 1974, tome Il, pages 276 et 277, avec des prises d'essais p2 voisines de 1 g, dissoutes dans 20 ml d'éthanol absolu, neutralisées par la potasse en solution alcoolique. Le titrage est réalisé avec une solution alcoolique de potasse 0,4 ou 0,5 N, en présence de phénolphtaléine. 4. Indice d'ester Il est défini à la Pharmacopée Française, 9ème édition, tome II, page 279, comme la différence Indice d'ester = Indice de saponification - Indice d'acidité. 5. Indice d'iode La technique utilisée est celle décrite à la Pharmacopée Française, 9ème édition, tome II, pages 277 à 279 avec des prises d'essais p3 voisines de 0,60 g et un contact de 1 heure a l'obscurité. Pour faciliter l'observation de la fin du titrage, il est préférable d'ajouter 10 ml de CC14 avant de commencer l'addition de Na2S203. B. Chromatographies en couche mince (CCM) Les CCM sont réalisées sur des plaques analytiques de 20 cm X 20 cm de gel de silice 60 (épaisseur 0,20 mm) sans indicateur fluorescent (produit Merck 5721). Deux systènes de solvants sont utilisés parallèlement Système I : n-hexane/acétate d'éthyle : 65/35 (vol/vol). Système Il : chloroforme. Dans chaque cas les plaques reçoivent 4 pistes de 10 pl a l'aide des peignes d'application "Cordis" commercialisés par la société ROUCAIRE, France. Piste n-1 : déhydroépi-androstérone (DHeA), 7,5 pg Piste n'2 : extrait selon l'invention pur Piste n-3 : extrait selon l'invention dilué au 1/3 dans du THF (tétrahydrofuranne). Piste n'4 : cholestérol, 8,33 pg. Après migration, les plaques sont séchées et reçoivent une pulvérisation du réactif & l'acide picrique selon Wreberlen [J. Clin. Endocrinol. (1965), 25, 288] : 0,1 g d'acide picrique est dissous dans un mélange de 36 ml d'acide acétique cristallisable et de 6 ml d'acide perchlorique à 70 8. Les plaques sont-ensuite examinées après séjour & l'étuve à 80 C,au bout de 6 minutes et 15 minutes. Les résultats obtenus sont résumés dans les tableaux I et Il suivants qui récapitulent les Rf des taches caractéristiques obtenues dans les deux systèmes de solvants. TABLEAU I Svstèmel f Description Rf Description (6 minutes) (15 minutes) r 0,97 tache violacée = 0,95 à 0,87 tache large brun clair t 0,65 à 0,59 stries brun clair à 0,62 2 taches larges i 0,50 gris clair * t 0,58 à 0,55 tache violette ** (cholestérol) * - aucune autre tache visible - les témoins cholestérol (Rf s 0,57) et DHeA (Rf 0,27) n'apparaissent pas encore ** - La DHeA (Rf > 0,27) n'est pas visible, même avec un dépôt d'extrait pur TABLEAU II Système II Lecture au bout de 15 minutes Rf Description Rf Description " 0,97 tache violacée r 0,92 å 0,85 tache large brun clair r 0,50 å 0,43 zone brun clair striée # 0,28 tache violette (cholestérol) # 0,21 à 0,14 zone brun clair striée avec a 0,17 tache faible rose violet * (DHeA) * cette tache à 0,17 n'apparait plus après dilution au 1/3 Dosaae des chromoaènes de Zimmermann (réaction classiaue de caractérisation des 17-cétostéroides). 1. PrinclDe Les chromogènes sont dosés par colorimétrie selon la réaction de Zimmermann modifiée, après saponification par la potasse alcoolique et extraction à 1 'éther éthylique. 2. Réactifs - Solution de potasse à 0,5 % dans l'alcool à 95. - méthanol de pureté analytique - Ether éthylique Codex - Solution aqueuse à 5 8 de hyamine : chlorure de di-isobutylphenoxy-éthoxyéthyl-diméthyl-benzylammo- nium, 1 H20 (produit Merck 12058) - Solution saturée de métadinitrobenzène dans la hyamine aqueuse à 5 % - Solution aqueuse 8 N d'hydroxyde de potassium - Solution étalon de DHeA (déhydro-épi-androstérone ; produit Merck 3681), 250 pg/ml dans le méthanol - Solution aqueuse de NaOH 1N 3. Techniaue On fait bouillir au reflux au bain-marie pendant deux heures une prise d'essai p4, exactement pesée, voisine de 0,50 g, avec 100 il de potasse alcoolique à 0,5 8. On laisse refroidir, évapore sous vide, reprend par 50 ml d'eau et extrait 4 fois avec 50 ml d'éther. Lors de l'extraction apparait souvent une émulsion pui produit trois couches dans le décanteur. Les couches supérieure (éthérée) et inférieure (aqueuse) sont séparées et réservées. La couche centrale (énulsion) est dispersée dans une ampoule à décanter avec 30 à 40 ml d'eau et on l'extrait par de l'éther éthylique (20 à 30 ml). Après repos, trois couches se présentent encore, la couche centrale (émulsion) a diminué considérablement, le même procédé est repris jusqu'a disparition totale de l'émulsion ; en général 3 ou 4 de ces opérations suffisent. Les phases éthérées sont réunies. La phase aqueuse initiale est extraite 3 fois par 50 mi d'éther éthylique. L'ensemble de toutes les phases éthérées est lavé deux fois avec 30 mi de soude sensiblement normale. Après décantation, il est possible de sécher les phases éthérées réunies sur le minimum de sulfate de sodium anhydre pendant 2 heures avec agitation. On filtre, on lave le sulfate de sodium à l'éther anhydre, évapore la totalité du filtrat et les fractions d'éther de lavage. On reprend le résidu par 50 ml de méthanol. On obtient ainsi la solution-mère que l'on filtre Si nécessaire. On introduit respectivement 1 ml, 2 ml, 3 ml de solution-mère dans des tubes A, B, C puis on évapore le méthanol au bain-marie. On complète ensuite les tubes comme indiqué dans le tableau qui suit. Les tubes 1, 2, 3 et 4 qui servent de références et le tube T (essai Zà blanc - témoin) contiennent uniquement les produits mentionnés dans le tableau, sans résidu d'évaporation de la solution-mère de l'extrait à doser. Le DHeA qui est pratiquement absent de l'extrait selon l'invention sert de référence car, comme tous'les 17-cétostéroides, il donne une coloration dans la réaction de Zimmermann. 4. Dosaae TABLEAU III Tube : A B C 1 2 3 4 T 1: ml éthanol 0,4 0,4 0,4 0,3 0,2 0,1 0 0,4 talon DHeA O O 0 0,1 0,2 0,3 0,4 0 initrobenzéne 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 Potasse 8 N 0,4 0,4 0,4 0,4 0,4 0,4 0,4 0,4 On agite de façon identique tous les tubes. On laisse la coloration se développer à température ambiante 20 à 25 minutes et on ajoute dans chaque tube 4 ml de solution d'hyamine. On lit au photomètre, à 480 nm, contre le tube T. On utilise pour le calcul du titre, le tube A, B ou C dont la coloration correspond à une concentration se situant dans les valeurs moyennes de la gamme (25 å 70 pg/ml). Il convient de noter qu'il est préférable de réaliser l'ensemble du dosage dans la même journée. Dans le cas particulier de l'extrait obtenu sous I ci-dessus, le dosage des chromogènes de Zimmermann donne une valeur de 2100 pg/g. 5. Résultats a) Indices L'examen d'échantillons de divers lots d'extrait selon l'invention permet l'établissement de valeurs moyennes pour ces indices. Le calcul de l'écart-type sur la moyenne, fournit les limites de validité. n D35 : 1,4432 + 0,0009 Indice de saponification : 201 + 3 Indice d'acidité : 7,22 + 0,01 Indice d'ester : 193 + 3 Indice d'iode : 36,7 + 0,8 b) Chromatographies en couche mince L'examen des plaques dans les conditions précitées, permet la mise en évidence de cholestérol ainsi que de pigments en front de solvant. Diverses bandes entourent le cholestérol La comparaison avec la piste témoin de déhydroépiandrostérone permet de s'assurer de l'absence quasi totale de ce produit dans les extraits selon l'invention. c) Dosage des chromogènes de Zimmermann Les valeurs observées pour différents lots sont les suivantes n1 : 2090 pg/g n-2 : 1850 pg/g n-3 : 2802 pg/g n*4 : 2981 pg/g n-5 : 2400 pg/g n6 : 2388 pg/g n*7 : 3170 pg/g La concentration en chromogènes de Zimmermann varie d'un échantillon d'extrait à l'autre. En effet, d'un essai à l'autre, l'extrait est plus ou moins concentré en 17-cétostéroides et en règle générale, pour des extraits obtenus à partir d'échantillons de colostrum recueillis dans des conditions identiques (même période de l'année, vaches donneuses de même type, etc.), on constate que le produit de la concentration par le volume de l'extrait est sensiblement constant. Ce produit peut toutefois présenter des variations, notamment saisonnières. III. Toxico - Dharmacoloale A. Toxicolocie Différents tests ont été mis en oeuvre pàur -l'étude pharmacologique sur un grand nombre d'animaux de laboratoire. En particulier pour le test de Pincus [Y. Chambon et coll., C.R. Soc. Biol. (1965), 159, 2479 et (1966), liQ, 2411l et le test à l'HCG (gonadotrophine chorionique humaine, 80 lapines ont reçu quotidiennement pendant des périodes de 5 à 10 jours des injections parentérales d'extrait selon l'invention ; les doses de produit, rapportées à la concentration en chromogènes de Zimmermann, allant de 80 pg à 800 pg. En particulier 10 lapines ont reçu une injection quotidienne de 800 pg de chromogènes pendant 5 à 10 jours consécutifs, 15 autres lapines ont reçu la neme dose pendant 10 jours. Dans un autre test 30 rats ont reçu une série de 10 injections quotidiennes de 400 pg de chromogènes. Aucune mortalité n'a été constatée parmi les animaux ayant subi ces tests, pas plus qu'un quelconque signe de morbidité. Les doses utilises, 400 pg et 800 mg, correspondant sensiblement à 0,15 g et 0,30 g respectivement de l'extrait utilisé dans ces essais, on peut conclure à une parfaite tolérance et à une absence de toxicité du produit. B. Pharmacoloale Il n'exite aucun test chez l'animal pour expéri- menter l'activité anti-acnéique. La lise en évidence de cette activité est décrite dans les "Essais cliniques qui suivent. En revanche, une autre activité intéressante et applicable en médecine humaine est l'activité antiovarienne démontrée par le test à l'H.C.G. En effet, les injections de l'extrait selon l'invention diminuent de moitié la réactivité ovarienne des lapines recevant de la gonatotrophine chorionique, sans toutefois provoquer de blocage, même à forte dose. De plus, pour s'assurer de l'absence d'une éventuelle activité androgéno-anabolisante ou antiandrogéno-anabolisante, des tests ont été pratiqués sur une trentaine de rats, à forte dose et pendant 10 jours. Ces tests n'ayant fourni aucune réponse significative, ce genre d'interférence n'est donc pas à redouter en thérapeutique. IV ExemPles de préparations pharmaceutiques : aels pour le traitement de l'acné 1. Gel n 1 Extrait contenant : 20 ml 2500 pg/g de chromogénes Butylhydroxytoluéne : 0,15 g Carboxypropylcellulose : 3,00 g Ether éthylique : 30 ml Ethanol à 90- : qsp 300 ml 2. Gel n 2 Extrait contenant : 10 mi 2500 g/g de chromogénes Butylhydroxytoluène : 0,15 g Carboxypropylcellulose : 3,00 g Ether éthylique : 15 ml Ethanol à 90- : qsp 300 ml 3.Gel n*3 Extrait contenant : 6 ml 2500 g/g de chromogènes Butylhydroxytoiuène : 0,15 g Carboxypropylcellulose : 3,00 g Ether éthylique : 10 ml Ethanol à 90- : qsp 300 ml 4. Gel n94 Extrait contenant : 4 ml 2500 g/g de chromogènes Butylhydroxytoluène > 0,15 g Carboxypropylcellulose : 3,00 g Ether éthylique : 10 ml Ethanol à 90* : qsp 300 ml Ces différents gels sont conditionnés dans des flacons de 15 ml. V. Essais cliniques Deux essais ont été réalisés Essai n 1 : t lot de gel n"1 1 lot de gel n 2 Essai n2 : : 1 lot de gel n 3 1 lot de gel n 4 A. Protocole Les essais ont été pratiqués par des Médecins Dermatologues. Critères d'inclusion - Patients âgés de plus de 14 ans et souffrant d'acné. - Aptitude à se conformer au protocole. Critères d'exclusion - Antécédents allergiques connus. - Pas de traitement antiacnéique dans la semaine précédente. Le traitement a été appliqué chaque soir après la toilette. Les résultats ont été consignés en fonction de l'évolution Amelioration : importante modérée nulle Aggravation : oui i non Tolérance locale : bonne / mauvaise B Résultats 1. Premier essai 18 sujets atteints d'acné rebelle ont été sélectionnés pour entrer dans un essai en double aveugle avec chacun des lots testés. La méthodologie employée est celle d'un double aveugle parallèle. 9 sujets ont reçu un traitement topique durant 15 jours par l'extrait selon l'invention et 9 sujets ont reçu un placebo présentant le même aspect que le produit actif et contenant tous les constituants du gel, à l'exception de l'extrait. a- Efficacité L'effet obtenu avec l'extrait selon l'invention (gels nos 1 et 2) est significatif tant sur la durée du traitement (p b- Tolérance Elle est localement bonne, sans induction de dermatose réactionnelle, néanmoins il est constaté une sensation de chaleur locale, voire de prurit au lieu d'application. Cet effet local est identique dans les deux groupes (p * 0,30) c- Conclusions Une bonne efficacité est remarquée par des malades jusque la habitués aux traitements peu efficaces. La réaction locale de tolérance semble due à un composant de la forme galénique (éther) non indispensable à la stabilité du principe actif. 2. Deuxième essai Il avait essentiellement pour but de déterminer le dosage minimal de principe actif. Des dosages réduits même au cinquième ont permis d'enregistrer des résultats statistiquement significatifs, tout à fait comparables à ceux de la première expérience. REVENDICATIONS 1. Extrait de colostrum, caractérisé en ce qu'il s'agit d'un liquide huileux brun-rougeâtre, à odeur aromatique, insoluble dans l'eau, partiellement soluble dans l'alcool éthylique, soluble dans l'éther éthylique, le chloroforme et l'éther de pétrole et qui présente en outre - un indice de réfraction, n35 de 1,4423 à 1,4441, - un indice de saponification de 198 à 204, - un indice d'acidité de 7,21 à 7,23, - un indice d'ester de 190 à 196, et - une concentration en chromogènes de Zimmermann d'au moins 1800 pg/g 2. Extrait de colostrum selon la revendication 1, caractérisé en ce que la concentration en chromogènes de Zimmermann est d'au moins 2100 pg/g, et est de préférence voisine de 2500 pg/g. 3. Procédé pour l'obtention de l'extrait de colostrum selon la revendication 1 ou 2, selon lequel on élimine au moins la majeure partie de l'eau contenue dans le colostrum, on traite la partie restante par un alcali, on extrait la phase liquide résultant de ce traitement et on chasse le solvant d'extraction pour recueillir l'extrait recherché, caractérisé en ce que le traitement par un alcali est effectué de façon ménagée, au moyen de 0,02 & 0,06 mole d'alcali par litre de colostrum mis en oeuvre. 4. Procédé selon la revendication 3, caractérisé en ce que la quantité d'alcali utilisée est voisine de 0,04 mole par litre de colostrum mis en oeuvre. 5. Procédé selon la revendication 3 ou 4, caractérisé en ce que le traitement à l'alcali a lieu dans de l'éthanol à 95'. 6. Procédé selon l'une des revendications 3 à 5, caractérisé en ce que l'alcali est de la potasse ou de la soude. 7. Procédé selon l'une des revendications 3 à 6, caractérisé en ce que l'alcali est 0,01 à 0,10 N. 8. Procédé selon l'une des revendications 3 & 7, caractérisé en ce que la phase liquide est extraite au moyen d'éther éthylique ou d'éther de pétrole, de préférence au moyen d'éther de pétrole bouillant à 50-70*C. 9. Composition pharmaceutique, comprenant l'extrait de colostrum selon la revendication 1 ou 2 en tant que principe actif. 10. Composition cosmétique comprenant l'extrait de colostrum selon la revendication 1 ou 2 en tant que principe actif. 11. Gel pour le traitement de l'acné comprenant essentiellement une quantité efficace d'extrait de colostrum selon la revendication 1 ou 2, dissoute dans de l'alcool éthylique et la quantité juste nécessaire d'éther éthylique, un conservateur et un composé formant un gel avec l'alcool éthylique.