FR 2590271 A1 19870522 FR 8513446 A 19850909 La présente invention est un composé biologique complet, résultat du métabolisme obtenu par l'association inédite d'une bactérie marine et d'une algue unicellulaire dénommée "Phytoplancton marin". De plus d'une part, Le pouvoir inducteur de ces micro-organismes permet d'apporter une solution aux désordres crées par un manque d'alimentation courante ou normale dans une ou plusieurs parties du monde. D'autre part, Ce composé biologique va résorber le grave problème du manque de salinité que subissent certaines populations des pays d'outre-mer. Ce composé biologique fera donc l'apport utile pour assurer un équilibre, donner de l'efficience souvent mise en péril. Ce composé biologique n' est pas un médicament. Ce composé biologique est exempt de toxicité. Informations techniques Ce composé biologique produit de l'association d'une bactérie marine, Halobactérium salinarium à une souche phytoplanctonique de la famille des flagellés, apporte un ensemble complexe de protéines, acides aminés, vitamines, oligo et macro-éléments complets. Le pouvoir du métabolisme de Halobactérium salinarium, particulièrement son activité protéolytique interne sont utilisés par le moyen de substrats bien étudiés et équilibrés lesquels respectent les besoins nutritionnels de ce micro-organisme en développant un enrichissement supplémentaire à celui qu'il utilise normalement. Ces substrats sont composés de vitamines, acides aminés, oligo et macro-élements, peptones, caseine, extrait de viande, dans des quantités précises, afin de permettre leur utilisation dans des conditiDns qui permettent d'obtenir le but recherché. La souche phytoplanctonique ne se cultive pas sur les mêmes substrats que la bactérie marine. En effet le phytoplancton n'a pas la possibilité d'assiniler des peptones, caseines, et autres substances organiques, sa physiologie étant différente de celle de Halobactérium salinarium. Par contre ses besoins en oligo, macro-éléments, vitamines, sont indispensables à sa croissance, ses besoins nutritionnels. Ces substrats particuliers sont donc des sources d'enrichissements afin d'obtenir une potentialité supérieure à la normale. I1 ne sera donc cultivé que dans des substrats possédant ces composants à savoir : milieu d'oligo-éléments, macro-éléments et vitamines. Halobactérium salinarium qui est une bactérie avec un cytoplasme plus élaboré que celui de l'algue et des fonctions vitales précisées par ses caractères physico-chimiques, métabolisera par des substrats enrichis en substances organiques utiles et nécessaires également à sa physiologie. Halobactérium salinarium possédant un haut pouvoir d'induction de par ses caractères va apporter au produit une activité, une efficacité, un r8le plus important, parce que assimilable directement. L'avantage du produit est de réunir par l'intermédiaire de milieux de cultures différentes avec des caractères physico-chimiques également différents, un composé complet, absolument nécessaire à la manifestation de la vie, pour éviter un déséquiblibre provoquant un désordre, ou de réiquilibrer ce dernier. L'utilisation d'un conservateur, reste un moyen de protection toujours utile avec des produits riches en éléments vitaux actifs biologiquement naturels. Le conservateur est la propolis, produit de la ruche, substance récoltée par les abeilles, sur des arbres ou arbustes, se trouvant en bourgeonnement et transformé par les abeilles, reconnus par de très nombreux travaux scientifiques, Russes et roumains, mes essais en laboratoire, in-vivo et in-vitro, ont démontré que ce produit possédait des propriétés anti-oxydantes, bactéricides, et bactério-statiques, qu'il est stable, même à une température élevée. I1 a donc un rôle important à jouer dans cette association. L'eau de mer utilisée est synthétique, ce qui évite la débactérisation, action nécessaire si l'on utilise l'eau de mer naturelle, mais créatrice très souvent de perte d'oligo-éléments à l'état de traces ou qui peuvent être irradiés. L'eau de mer synthétique ne représente pas, l'eau de mer naturelle avec le nombre important des éléments qu'elle contient, par contre apporte une certaine sécurité, une certaine stabilité, que l'on ne trouve pas parfois dans l'eau de mer naturelle. Liste des milieux de culture d'enrichissements. Tous ces milieux doivent être stérilisés selon la technique habituelle. Solution nutritive standard (solide) tryptone caseine soja 5 grs extrait de levure 2 grs extrait de viande (boeuf) 3 grs Agar 15 grs Eau de mer artificielle 1 000 ml PH 7,3 Solution nutritive standard (bouillon) tryptone caserne soja 5 grs extrait de viande (boeuf) 3 grs Eau de mer artificielle 1 000 ml PH 7,3 Milieu à base de coquillages Papaine (poudre) 1 gr chair de moules 1 kg pour 2 litres eau de mer artificielle. extrait de levure 6 grs Technique de préparation du milieu Chauffer et porter à l'ébullition pendant 7 mn. Laisser refroidir jusqu'a 37 C. Ajouter la papaine poudre. Vérifier le PH, il doit être de 7,3 a 7,5. Bien mélanger, par agitation normale, papaïne et chair de moules. Laisser à 37iC pendant 3 heures. Porter a l'ébullition 4 à 5 minutes environ filtrer ensuite. Vérifier le PH qui doit être de 7,3. Mettre dans un flacon stérile dont la capacité est de 5 litres à très large ouverture. Ajouter l'extrait de levure (6grs) d'une façon progressive, en agitant le milieu et maintenir la température à 37 C pendant 1 heure. Chauffer à nouveau et porter à l'ébullition pendant 3 minutes. Laisser refroidir. Milieu d'entretien des souches extrait de levure 3 grs protéose peptone 10 grs N a cl 24 grs K cl 0,7 grs mg cl 2 5,3 grs mg s o 4 7 grs eau de mer artificielle 1 000 ml PH 7,7 Stériliser à 110 20 minutes. Milieu d'enrichissement (bouillon) hydrolysat de caserne 1 grs 5 p H4 p o3 1 grs K2 H P o 4 1 grs eau de mer artificielle 1 litre PH 7,7 - 7,8. Stériliser à llO*C, 20 minutes. Milieu d'oligo-éléments PH 3,4 pour un litre d'eau ultra pure. Fe s o 4 7 H2 o 200 mg zn s o 4 7 H2 o 10 mg mn c12 4 H2 o 3 mg H3 Bo 3 30 mg C o c12 6 H2 o 20 mg C u c12 2 H2 o 1 mg N i c12 6 H2 o 2 mg N a MoO 4 2 H2 o 3 mg FE sous forme d'EDTA 4 mg Tio (c2 o4) x Y H2 o 1 mg C R 2 (s o 2) K2 s o 4 2 4 H2 o 0,01 p p m métal MoOz 0,05 p p m métal N H4 V o 3 0,01 p p m métal M n s o 4 4H2 o 0,10 p p m métal C o (n o z) 2 6H2 o 0,01 p p m métal N a W o 4 2H2 o 0,01 p p m métal Milieu à la vitamine (pas de stérilisation). eau ultra pure 100 mg vitamine B5 10 mg vitamine B6 10 mg Vitamine C 10 mg Milieu pour l'enrichissement du phytoplancton marin N A c12 200 grs C A cl 2H2 o 2 grs eau ultra pure 5 000 ml Stériliser à l'autoclave à 110 C pendant 10 minutes. Eau de mer synthétique (ou artificielle) préparation de 50 litres eau ultra pure 50 litres lere fraction : Carbonate de sodium Chlorure de sodium 2 kgs850 qualité technique Chlorure de magnésium 542 grs qualité technique Sulfate de magnésium 692 grs qualité technique Chlorure de potassium 77,2 grs qualité technique Bicarbonate de sodium 21,2 grs qualité technique Chlorure de strontium ' 2,02 grs réactif-analytique Sulfate de manganèse 0,44 grs réactif analytique Chlorure de lithium 0,38 grs réactif analytique Molybdate de sodium 0,15 grs réactif analytique 2eme fraction Acide borique 2,70 grs qualité technique Chlorure de calcium 142,40 grs qualite technique 3ème fraction Gluconate de calcium 1,69 grs réactif analytique Iodure de potassium 0,242 grs réactif analytique Bromure de potassium 76 grs réactif analytique Dissoudre dans 2 litres d'eau ultra pure. 4tme fraction Sulfate d'aluminium 1,28 grs Réactif analytique Sulfate de cobalt 0,23 grs qualité technique Chlorure de Rubidium 0,49 grs réactif analytique Sulfate de zinc 0,35 grs réactif analytique Sulfate de cuivre 1,23 grs réactif analytique Dissoudre dans 2 litres d'eau ultra pure. Solution de propolis Technique d'extraction Peser 100 grs de propolis brute, la concasser, puis la réduire en poudre fine, l'envelopper dans un linge stérile et la mettre à bouillir à reflux pendant 1 heure dans un ballon surmonté d'un réfrigérant en présence d'alcool à 90"C soit 1 litre. L'extrait est ensuite filtré, évaporé au bain-marie et repris par de l'eau très chaude, remettre ensuite dans un ballon à reflux comme indiqué précédemment pendant 1 heure mais cette fois uniquement avec l'eau et non l'alcool. Filtrer ensuite et concentrer au bain-marie. On obtient ainsi un extrait de propolis stable que l'on conserve au frigérateur et à l'abri de la lumiere. Cet extrait peut se conserver plusieurs mois. L'extrait possède une odeur aromatique très agréable qui parfumera le produit. Le PH est pratiquement neutre, pratiquement parce que ceci est en fonction de la provenance de la propolis, la variation est de 6,7 7 ou 7 à 7,3. Technique de fabrication Stérilisation du matériel employé. Local stérile. Présence d'un flux laminaire. Climatisation à 18'C pour phytoplancton. Climatisation à 40 C pour bactérie marine. 1) A réception des souches, phytoplancton, bactérie marine mettre en suspension dans eau de mer artificielle. (quelques ml). Milieu employé pour la mise en suspension, milieu pour l'enrichissement du phytoplancton marin. 2) Préparer la solution nutritive standard pour la bactérie marine. 3) Prélever dans le milieu pour enrichissement du phytoplancton marin le volume utile pour répartir en parties égales le phytoplancton dans flacons de 500 ml minimum, agiter jour et nuit jusqu'a besoin de prélèvement pour autre milieu. Technique opératoire pour la bactérie marine. 4) La solution nutritive standard étant prête, la couler dans de très larges boites de pétri, diamètre 20 cm et plus. Laisser refroidir pour solidification, il faut prévoir un assez grand nombre de boites, afin de ne pas être dans l'obligation d'en faire à la dernière minute par suite d'un milieu de suspension trop important. 5) Ensemencer avec fil de platine les boites de pétri en stries, en ayant préalablement prélevé dans milieu de suspension, faire un nombre de boites suffisant pour l'utilisation de la totalité de la suspension. Incuber à température de 40 C pendant 15 jours, 20 jours possibles ; la température doit être absolument maintenue. Eclairage de jour absolument nécessaire, pas de nuit. 6) Préparer le bouillon milieu d'entretien des souches, et ajouter le milieu à base de coquillages. Stériliser a 110 C pendant 20 mon. Répartir le mélange obtenu dans des flacons de 1 litre à fond plat, rond, à large ouverture. Ensemencer les flacons en parties égales avec les colonies développées dans les boites. I1 est difficile de réaliser cette opération, il faut simplement tenir compte du nombre de fois que vous prélevez dans une boite, pour essayer d'appliquer le même nombre dans les autres boîtes. Incuber pendant 8 jours à une température de 40 L'extrait de viande doit être à l'état poudre dans les composants des milieux. Pour les moules, broyer très finement, ne pas préparer à l'avance ce broyat. Le local doit être maintenu à la température de 40 C, ou si cela est un facteur gênant pour la manipulation, mettre en étuve et sortir pour l'agitation toutes les 4 heures. Ces flacons doivent être agiter le jour sous éclairage intense. L'agitation ici ne s'opère que toutes les 4 heures pendant 5 mn à vitesse réduite. 7) Préparer le milieu d'enrichissement (bouillon), le stériliser comme indiqué, ajouter après refroidissement le milieu F. Répartir en parts égales dans des flacons ronds à fond plat de 2 litres à raison de 500 ml dans chaque flacon. Mettre le précédent mélange réparti en parts égales dans chaque flacon. Incuber pendant 8 jours à température de 40 C, en étuve comme précédemment si cela provoque une gêne, ne pas oublier d'agiter toutes les 4 heures pendant 5 mn. Puis laisser refroidir, au bout des 8 jours. 9) Prendre la totalité du produit final ci-dessus, le traiter aux ultra-sons pour la rupture des membranes cellulaires. Filtrer sur membrane micronisée. Recueillir le filtrat dans un flacon de fort volume. Technique opératoire phytoplancton marin Prendre la suspension du phytoplancton marin mise d'une part du milieu pour l'enrichissement du phytoplancton marin et la mettre dans ce dernier milieu d'un volume de 5 litres. Répartir après agitation rapide pendant 10 mn dans des flacons de 1 litre, chaque fraction doit être de 500 ml. Laisser pendant 8 jours sous agitation rapide, éclairage intense de jour et de nuit à la T de 18'C dans un flacon stérile. Les flacons utilisés doivent être ronds à fond plat de large ouverture. Préparer le milieu d'oligo-éléments, et le répartir dans chaque flacon à raison de 10 ml tous les 5 jours jusqu'à complète utilisation du milieu d'oligoéléments. Préparer ensuite la solution de vitamines, introduire dans chaque flacon à raison de 5 ml de celle-ci tous les 5 jours, jusqu'a complète utilisation du milieu de vitamines, éclairage intense jour et nuit à T constante de 18 C. La solution d'oligo-élEments et la solution de vitamines s'introduisent dans la solution de phytoplancton, dans le même temps. Le produit final étant obtenu, passer à la technique ultra-sons, filtrer ensuite sur membrane micronisée. La solution d'oligo-éléments et la solution de vitamines doivent faire l'objet de contrôle tous les 5 jours dans le milieu phytoplanctonique, afin de déterminer si ces susbstances sont absorbés par le phytoplancton. Si au cours de cette observation l'on s'aperçoit que celles-ci ne sont pas absorbées, arrêter les ajouts de ces solutions et contrôler jusqu'à complète disparition des traces de celles-ci, puis reprendre s'il y a lieu. L'éclairage intense dont 9 besoin le phytoplancton doit être réalisé avec tubes gros lux, comme ceux utilisés par les serristes pour leurs cultures florales en serre. L'agitation pendant toute la fabrication doit être constamment rapide jour et nuit. Réunir les deux parties terminées, bactérie marine et phytoplancton marin. Agiter ce mélange pendant 10 mn d'une façon réduite. Préparer la solution eau de mer artificielle et introduire dans celle-ci par fractions, sous agitation réduite, pendant 1 heure. Le résultat du mélange bactérie marine et phytoplancton marin. Ajouter ce mélange final une solution de propolis de 10 ml par fractions de 1 ml sous agitation moyenne. Cet ajout donnera d'ailleurs au produit final un goût et une odeur aromatique agréable. Ce produit peut également être lyophilisé. Mis sous forme de comprimés (ltexci- pient d'enrobage n'a pas été choisi) Ce produit peut également être mis en gélules molles à l'état liquide ou solide, ou également en aérosol. Toutes les opérations concernant les mélanges doivent être contrôlées en PH et salinité, s'il se produisait des précipités, agiter alors plus rapidement jusqu'à dissolution. Mode d'emploi Comprimés : 1 comprimé par jour à sucer et ceci pendant 8 jours, puis reprendre après un arrêt de 15jours. Gélules : Une le matin, une le soir pendant 8 jours puis reprendre après un arrêt de 15 jours. Lyophilisé : Le produit lyophilisé est a dissoudre dans 1 litre d'eau normale, prendre cette solution selon ces besoins sans toutefois dépasser 2 cuillerées à soupe par jour pendant 8 jours, puis reprendre après un arrêt de 15 jours. Nota : Ces indications peuvent ne pas être respectées, le produit n'étant pas toxique, et ne pouvant créer de risques secondaires. Toutefois, un emploi trop important dégage la responsabilité, les doses indi queues étant des doses normales. Les différentes formes indiquées doivent être prises à jeun le matin et 10 mn environ avant le repas du soir. Aérosol: pour les personnes qui ont des difficultés à avaler un comprimé ou une gélule, plus pratique pulvérisation buccale, assimilation plus rapide. Présentation: en aérosol : 150 mg de matière active avec ajout d'eau de mer artificielle, agent propulseur azote. Lyophilisé : flacon verre opaque de 2 grs 50 de matière active. Comprimé : 150 mg de matière active dans enrobage type pharmaceutique. Gélules : 150 mg de matière active. Applications Première action : rétablir et ramener a un juste équilibre l'orga- nisme fatigué, l'organisme déficient, ayant des pertes protidiques, vitaminiques, minérales importantes. Deuxième action : rétablir le besoin d'une alimentation normale. Troisième action : supplémenter une alimentation pauvre en éléments nécessaires au maintien de la vie. Quatrième action : l'apport d'éléments revitalisants pour le rétablissement de l'hydratation salée trop souvent nécessaire aux populations de certains pays d'outre-mer, ou autres qui sont atteintes du manque de sel ou à un taux très bas de salinité. REVENDICATIONS 1) Association inédite d'une bactérie marine et d'une algue unicellulaire dont le résultat par son métabolisme apporte une richesse en oligo éléments, vitamines, et sels minéraux, sous une forme assimilable directement par l'organisme. 2) Ce produit se caractérise par l'emploi d'un conservateur naturel à haut pouvoir de protection, par suite ses qualités de défense.et de destruction des micro-organismes. 3) Ce produit-se caractérise par l'hydratation au titre curatif ou préventif, salée nécessaire et très utile aux populations (particulièrement outre-mer) qui sont atteintes de ce grave problème, manque de sel, ou taux de salinité trop bas. 4) Ce produit se caractérise par son application possible dans la rééquilibration d'un organisme déficient, la supplémentation à une alimentation pauvre. 5) Ce produit se caractérise par sa forme de présentation diversi fiée aérosol : assimilation plus rapide par l'organisme. Comprimés, gélules, lyophilisé.