FR 2601014 A1 19880108 FR 8709316 A 19870701 1. La présente invention concerne un produit antibactérien stable contenant de l'acide 7B-/(Z)-2-(2-aminothiazol-4yl)-4-carboxybut-2énoylamino7-3-céphème-4-carboxylique (désigné ci-après par 7432-S). Elle concerne plus particulièrement un hydrate de ce composé et une composition de capsule stable de ce produit antibactérien. L'invention fournit un (di ou tri)-hydrate de 7432-S cristallin stable, une céphalosporine orale utilisable par exemple pour le traitement ou la prévention d'infections bacté10 riennes. L'invention fournit en outre une composition stable d'une quantité parmacologiquement efficace d'hydrate 7432-S dans une capsule de gélatine dure scellée avec une bande de gélatine autour de la circonférence au joint du capuchon et 15 du corps de la capsule. Le composé apparenté, le 7432-S, utilisable pour son large spectre et sa forte activité contre les bactéries 2. Gram-positives et-négatives a été décrit dans la demande de brevet japonais 60-78 987. Une composition de capsule protégée par une fermeture de gélatine est décrite dans le modèle d'utilité japonais 45-20800,qui décrit un procédé pour introduire et sceller un liquide dans une capsule. On a trouvé que le composé apparenté, le 7432-S, était instable même sous forme cristalline et qu'il perdait son activité ou changeait de couleur par repos pendant une 10 durée prolongée. Après des études répétées,on a'trouvé que ceci provenait de ce que le composé était préparé par séchage sous pression réduite sur pentoxyde de phosphore d'une manière classique en laissant une matière anhydre dans cette technique antérieure. D'autres études appliquant certains 15 procédés de stabilisation usuels (par exemple l'addition d'un agent stabilisant, la granulation à sec de produits antibactériens instables à l'eau, le revêtement de film de granulés)n'ont pas pu stabiliser le produit antibactérien de manière satisfaisante. Pour l'utilisation clinique de ce com20 posé, une forme plus stable était nécessaire. La demanderesse a trouvé que: 1) l'hydrate 7432-S cristallin présentait un diagramme de diffraction des rayons X constant et une stabilité chimique élevée et que 2) l'hydrate introduit dans une capsule de gélatine dure scellée avec une bande de gélatine autour de la circonférence au joint du capuchon et du corps de la capsule pouvait être protégé de la modification de la coloration et de la perte d'activité. La technique était connue pour être utilisa30 ble pour des capsules contenant un liquide et non pour une poudre solide telle que celle de l'invention. rI / HYDRATES /_Hydrate cristallin / La demanderesse a cherché une mesure pour améliorer 35 la stabilité du 7432-S,et elle a trouvé que l'hydrate 3. cristallin préparé dans des conditions déterminées présentait presque le même spectre de diffraction des rayons X et la même stabilité chimique élevée, ce qui permettait un stockage prolongé. Cette découverte a conduit à la présente invention. /Caractéristiques de l'hydrate cristallin7 Cet hydrate cristallin est une poudre microcristalline d'un blanc faiblement jaunâtre à un blanc jaunâtre clair. L'analyse élémentaire des cristaux montre que l'hydrate contient 2 moles d'eau de cristallisation plus jusqu'à lO 1 mole d'eau de cristallisation supplémentaire suivant les conditions par exemple de cristallisation et de séchage. La teneur en eau, déterminée par la méthode KarlFiszher, était dans l'intervalle de 7 à 14 % (en particulier de 8,7 à 12,5 %), ce qui correspond au (di à tri)-hydrate ou 15 à un mélange de ceux-ci. Le thermogramme sous la pression atmosphérique montre que la première et la seconde molécules d'eau sont conservées jusqu'à environ 140 C, mais que la troisième molécule d'eau est perdue à une température de 30 à 60 C. Les faits ci-dessus sont expliqués comme indiquant que la troisième molécule d'eau est liée de manière lâche dans la structure cristalline et est perdue aisément (par exemple par la chaleur, une faible humidité ou une pression réduite). Tous les hydrates cristallins dans l'intervalle cidessus de teneur (c'est-à-dire dans l'intervalle du dihydrate au trihydrate) présentent presque le même spectre de rayons X que celui du tableau 1. 4. TABLEAU I Le spectre de diffraction des rayons X a été observé dans les conditions suivantes: rayons X: longueur d'onde X = 1,5418 A 5 réticulaire d (Ke du cu est expri ivre; filtre de Ni) mée en A. L'inte d'intensité à 20, kV20mA. La distance nsité relative I/I 95 A. indique le pourcentage 15 20 :.... |d /I d 1/I. d I/I d I/I ,90 12 20;95 100 28,70 17 35,93 8 7,35 8 21,15 70 29,40 27 36,38 24. 9,45 92 21,75 25 29,60 11 37,00 7 ,15 21 22,25 49 29,90 16 38,30 26 12,08 46 23,85 62 30,40 19 38,65 10 14,87 30 24,50 39 31,10 53 39,20 15 ,65 14 24,80 16 31,60 23 39,60 21 16,25 13 25,50 34 31,78 34 40,27 15 18,35 24 25,85 66 33,02 28 41,22 22 18,90 71 26,60 16 33,55 23 42,55 8 19,14 77 27,02 59 33,86 17 44,20 9 19,40 60 27,30 35 35,20 16 ,58 88 28,35 54 35,65 10 L'hydrate cristallin de l'invention 100 % ên particulier 99,0 à 99,8 %) d'isomère contient 96 géométrique à cis (c'est-à-dire d'isomère géométrique (Z)) sur la double liaison de la chaîne latérale en 7, quel que soit le rapport dans la matière de départ. L'hydrate cristallin de l'invention présente une for-1 te bande d'absorption à 1700 cm1 dans le spectre d'absorption 30 IR observé sur un disque de bromure de potassium. Cette bande ne se trouve pas dans le cas de cristaux anhydres. /Procédé de préparation de l'hydrate cristallin7 (1) Mode opératoire général L'hydrate cristallin peut se préparer par le procédé 35 suivant: on dissout le 7432-S de départ dans un acide aqueux 5. et on élève le pH de la solution (en particulier à pH 1,5 à ,0) aux environs de la température ambiante (en particulier à O à 70 C) pour séparer des cristaux.Si nécessaire, on agite le mélange jusqu'à cristallisation complète. On sépare les cristaux humides et on les sèche aux environs de la température ambiante sous une pression au voisinage de la pression atmosphérique,dans un gaz inerte dont l'humidité relative n'est pas inférieure à 15 %. (2) Matière de départ La matière de départ peut être humide ou anhydre. Elle peut être un composé libre ou un sel sur le groupe amino (par exemple in sel d'addition aux acides) ou scir le gr ine carboxy (par exemple un sel de métal alcalin). Le procédé de l'invention,en combinaison avec le pré-traitement (par exemple purification, isomérisation en isomère cis, isolement) en utilisant un sel soluble dans l'eau (par exemple un sel de métal alcalin, un chlorhydrate) comme matière de départ pour obtenir une solution acide aqueuse,est un mode de réalisation préféré de l'invention. (3) Acide La solution acide aqueuse de 7432-S peut se préparer en mettant en suspension l'acide libre ou un sel d'ammonium ou en dissolvant un sel d'acide carboxylique comme matière de départ dans de l'eau, puis en ajoutant un acide. Cet acide peut 25 être un acide minéral (par exemple l'acide chlorhydrique, l'acide sulfurique, l'acide phosphorique), un acide carboxylique (par exemple l'acide acétique, l'acide malique, l'acide fumarique, l'acide citrique), un acide sulfonique (par exemple l'acide méthanesulfonique, l'acide éthanesulfonique, l'acide 30 toluènesulfonique), un sel acide (par exemple le chlorhydrate de diméthylamine, le sulfate de 7432-S) ou un acide hydrophile analogue capable d'acidifier la solution aqueuse de la matière de départ. On peut utiliser de préférence environ O à 20 (en particulier 1 à 10) équivalents molaires de l'acide. 6. (4) Co-solvant La solution aqueuse peut contenir O à 70 % d'un solvant organique miscible à l'eau, par exemple, un alcool (par exemple le méthanol, l'éthanol, l'isopropanol, le t-bu5 tanol, le méthoxyéthanol), un amide (par exemple le diméthylformamide), un nitrile (par exemple l'acétonitrile), un sulfoxyde (par exemple le sulfoxyde de diméthyle), un éther (par exemple le dioxane, le tétrahydrofurane, le diméthoxyéthane), une cétone (par exemple l'acétone, la méthyléthylcétone), etc. 10 comme co-solvant. (5) Concentration La concentration de la matière de départ dans la solution acide aqueuse peut de préférence être dans l'intervalle de 2,0 à 15,0 % (en particulier de 3,0 à 5,0 %). 15 (6) Neutralisation Une base (solide ou liquide) qui est capable de neutraliser la solution acide aqueuse au pH déterminé à l'avance peut être utilisée pour ajuster une solution acide aqueuse à la température ambiante (aux environs de 0 à 70 C, en particulier de 10 à 50 C) aux environs du point iso-électrique (pH d'environ 1,5 à 5,0, en particulier de 2,0 à 3,5). La solution d'acide peut aussi être diluée avec de l'eau pour élever son pH suffisamment pour séparer l'hydrate. Des bases représentatives comprennent des bases organiques (par exemple la triéthylamine) et des bases minérales (par exemple l'hydroxyde d'ammonium, l'hydroxyde de sodium, l'hydroxyde de potassium, le carbonate de sodium, le carbonate de potassium, le bicarbonate de sodium, le bicarbonate de potassium), bases solubles dans l'eau qui sont commodément manipulées,bien qu'elles ne soient pas limitées à celles-ci. Une base insoluble dans l'eau (par exemple des résines échangeuses d'anions) peut également être utilisée à cet effet. (7) Cristallisation Pour séparer ou faire mûrir les cristaux, on continue 7. de préférence à agiter les cristaux qui se séparent pendant minutes à 50 heures à O à 70 C (en particulier à 5 à C). (8) Séchage Le séchage est de préférence effectué dans des conditions ménagées par séchage (par exemple stationnaire, par traversée,par circulation ou en lit fluidisé) dans ungz inerte (par exemple l'air, l'azote, le gaz carbonique) à une humidité relative non inférieure à 15 %taux environs de la 10 température ambiante (par exemple aux environs de O à 60 C), sous la pression atmosphérique suivant l'agitation ou l'état de fluence de la poudre. A l'échelle du laboratoire, on a observé ce qui suit: dans le cas par exemple du séchage dans un récipient fermé 15 sous la pression atmosphérique, la teneur en eau atteint le premier palier correspondant au dihydrate dans un air d'humidité relative de 15 à 50 % (en particulier de 20 à 30 %) à 25 à C en 1 à 8 heures,et le second palier correspondant au trihydrate dans un air ayant une humidité relative de 45 % ou davantage (en particulier de 50 à 80 %) à 25 à 60 C (en particulier à 10 à 25 C) pendant 1 à 8 heures. Dans le cas d'un séchoir à traversée ou à circulation, suivant l'agitation ou l'état de fluence de la poudre, par exemple, le séchage par traversée dans un air ayant une humidité 25 relativede50 à 60 % à 25 à 40 C jusqu'au point d'inflexion de la courbe temps/température de sortie de l'air ou de la courbe temps/humidité de sortie de l'air (environ 2 à 10 heures lorsque la matière de départ contient 30 à 60 % d'eau) donne un produit correspondant au dihydrate comme constituant 30 principal. Dans le cas d'un séchoir à lit fluidisé, suivant les condition' de soufflage de l'air, par exemple le séchage dans de l'air à une humidité relative de 50 % à 60 % à 10 à C (en particulier à 20 à 30 C) jusqu'au premier point d'inflexion de la courbe temps/température de l'air à la sortie 8. ou de la courbe temps/humidité de l'air à la sortie (environ 1 heure lorsque la matière de départ contenait 30 à 60 % d'eau) donne un produit correspondant au trihydrate et celui jusqu'au second point d'inflexion de la m&me courbe (environ 1,5 heure lorsque la matière de départ contenait 30 à 60 % d'eau) donne un produit correspondant au dihydrate comme constituant principal. Pour une production à grande échelle, le séchage par circulation, le séchage par traversée et le séchage en lit fluidisé peuvent être adéquatement utilisés. Dans un cas représentatif de séchoir en lit fluidisé, suivant le débit de l'air par poids de cristal humide ou les autres conditions, le séchage dans l'air à une humidité relative de 20 à 80 % (en particulier de 50 à 60 %) à 10 à 60 C (en particulier à 20 à 30 C) jusqu'au premier point d'inflexion de la 15 courbe temps/température de sortie de l'air ou de la courbe temps/humidité de sortie de l'air (environ 1 à 5 heures lorsque la matière de départ contient 30 à 60 % d'eau) donne un trihydrate cristallin,et celui jusqu'au second point d'inflexion (environ 3 à 7 heures lorsque la matière de départ contient 30 à 60 % d'eau) donne un dihydrate cristallin comme constituant principal. Le séchage à plus d'environ 60 C en présence d'un agent desséchant sous pression réduite ou dans des conditions rigoureuses analogues abaisse l'eau de cristallisation à moins 25 de deux en donnant un produit instable (par exemple un séchage sous 0,01 mm de Hg sur chlorure de calcium à 25 à 28 C abaisse sa teneur en eau à 1,5 à 4,8 % en 3 heures: un séchage dans une circulation d'azote sec à 25 C sur une durée de 30 minutes abaisse la teneur en eau à 1,08 %). /Stabilité de l'hydrate cristallin7 La stabilité de l'hydrate cristallin de l'invention a été confirmée par un essai d'accélération montrant une rétention de 97,8 % de l'activité au bout d'un mois contre (73,6 %) pour la matière anhydre. 9. /Utilisation de l'hydrate cristallin/ Une quantité pharmacologiquement efficace de l'hydrate cristallin de l'invention peut être utilisée sous la forme d'une composition orale (en particulier de capsules, granulés, comprimés) pour prévenir ou traiter des infections bactériennes. L'hydrate cristallin peut aussi être stocké pour un traitement ultérieur au bout d'un certain temps. /1I7 CAPSULES SCELLEES La demanderesse a cherché une composition capable de maintenir les hydrates 7432-S stables pendant une durée prolongée sans un coût excessif, et elle a trouvé que l'hydrate introduit dans une capsule de gélatine dure scellée avec une bande de ciéatiyi crésentait une modification de couleur et une perte d'activité très inférieures. /Procédé de production des capsules7/ Les capsules de l'invention peuvent se préparer en mélangeant une quantité pharmacologiquement efficace de l'hydrate avec un additif (par exemple un ingrédient de charge ou un lubrifiant), puis en l'introduisant dans une capsule en appli20 quant une solution aqueuse de gélatine autour de la circonférence du joint entier du capuchon et du corps de la capsule,et en séchant pour former une bande de gélatine. La capsule de gélatine dure peut être une capsule ordinaire du commerce sans limitation particulière de taille 25 ni de couleur. Elle peut contenir un colorant et/ou un pigment. Bien qu'un additif (par exemple un ingrédient de charge ou un lubrifiant) ne soit pas nécessaire pour protéger l'hydrate de la coloration ou d'une perte d'activité, on en 30 utilise de préférence pour une meilleure manipulation pour l'introduction d'une quantité pharmacologiquement efficace de l'hydrate dans une capsule. L'ingrédient de charge peut être un ingrédient usuel pour poudres ou granulés, par exemple un sucre (par exemple le glucose, le fructose, le lactose), 35 un amidon (par exemple l'amidon de mais, la fécule de pomme de 10. terre) ou de la cellulose (par exemple de la cellulose cristalline, de la méthylcellulose, de la méthyléthylcellulose). Le lubrifiant peut être un lubrifiant ordinaire pour poudre, granulé ou comprimé, par exemple du talc purifié, de l'acide stéarique ou son sel (par exemple le sel de sodium, de magnésium ou de calcium),du borax, de la paraffine liquide, du benzoate de sodium, du polyéthylèneglycol (masse moléculaire moyenne: 6000); de la cire de carnauba, ou une huile hydrogénée. La solution aqueuse de gélatine peut se préparer en dissolvant 10 à 30 % (de préférence 15 à 25 %) de gélatine dans de l'eau contenant si on le désire 1 à 40 % d'un alcanol inférieur (par exemple 20 à 30 % de méthanol, d'éthanol, de propanol ou de glycérol), un éther (par exemple 0,5 à 10 % de 15 monooléate de polyoxyéthylène sorbitane= Polysorvate). Une cétone ou un ester d'une manière classique pour permettre à la solution d'être appliquée au joint de la capsule et séchée (par exemple par un courant d'air ou par la chaleur) à O à C. Habituellement,on applique 5 à 50 mg de la solution de 20 gélatine contenant si on le désire un pigment pharmaceutiquement acceptable sur une capsule de gélatine de taille n 2 à 4. !Exemples7 Les exemples et expériences suivants illustrent l'invention. Ils ne doivent cependant pas être considérés comme limi25 tant le domaine de l'invention. La teneur en eau a été déterminée par la méthode Karl-Fischer. /-I 7 HYDRATES EXEMPLE 1 On laisse reposer une solution de 7432-S brute (25 g) 30 dans de l'acide chlorhydrique 6N (75 ml) pendant 1 heure à 15 à 20 C pour séparer le chlorhydrate. On recueille les cristaux par filtration, on les lave avec de l'acétonitrile (75 ml) contenant 1 goutte d'acide chlorhydrique concentré et on les sèche,ce qui donne le monohydrate du chlorhydrate de 7432-S 35 cristallin (18 g). 11. On ajuste une sol'tion de ce monohydrate (1,0 g) à pH 1,5 dans de l'acide chlorhydrique 3N (4 ml) en ajoutant de l'eau (30 ml) et une base et on agite pendant 2,5 heures à 25 à 45 C. On recueille par filtration les cristaux qui se 5 séparent et on les lave avec de l'eau. On sèche les cristaux avec un séchoir à circulation à 10 C pendant 5 heures,ce qui donne un hydrate de 7432-S cristallin (0,7 g) dont la teneur en eau est de 10,2 %. Rapport des isomèresgéométriqus (cis/ trans) = 98,8: 0,2. EXEMPLE 2 On met en suspension du 7432-S cristallin brut (1,17 g) dans un mélange de t-butanol (3 ml) et d'acétonitrile (3 ml). A cette suspension,on ajoute de l'acide chlorhydrique à 35 % (1 ml; 5 équivalents molaires) pour donner unesolution. On di15 lue cette solution avec un mélange de t-butanol (3 ml), d'acétonitrile (9 ml) et d'eau (5 ml) , on l'ajuste à pH 2,3 avec de la triéthylamine et on l'agite pendant 3 heures à 30 à 35 C. On recueille les cristaux qui se séparent,on les lave avec un mélange d'acétonitrile,de t-butanol et d'eau (2: 1: 1; 5 ml) 20 et de l'eau (10 ml) et on les sèche avec un séchoir à traversée à 25 à 30 C pendant 2 heuresce qui donne un hydrate cristallin (1,06 g) ayant une teneur en eau de 8,75 %. Rapport des isomères géométriques (cis/trans) = 99,2: 0,8. EXEMPLE 325 A une suspension de 7432-S cristallin brut (1,0 g) dans un mélange d'eau (8 ml) et d'acétonitrile (1 ml), on ajoute du bicarbonate de sodium (0,41 g; 2 équivalents molaires),ce qui donne une solution limpide. On dilue cette solution avec du méthanol (6 ml), on la traite avec du charbon ac30 tif (1,0 g),on l'agite à la température pendant 10 minutes et on la filtre pour éliminer le charbon actif. On acidifie le filtrat avec de l'acide chlorhydrique 6N (1,62 ml; 4,5 équivalents molaires),et on le verse dans un mélange d'eau (3,4 ml) et d'acétonitrile (5 ml). On ajuste le mélange à 35 pH 2,3 avec du carbonate de potassium à 30 %,on l'agite 12. pendant une heure à 40 C et pendant 1,5 heures à 20 à 25 C. On recueille les cristaux qui se séparent, on les lave avec un mélange de méthanol, d'acétonitrile et d'eau (1: 1: 2; ml), de l'eau (20 ml), et du méthanol (5 ml), successivement, 5 et on les sèche par séchage par traversée à 20 à 25 C pendant 1,5 heure,ce qui donne un hydrate cristallin (0,876 g) ayant une teneur en eau de 9,35 %. Rapport des isomères géométriques (cis/trans) = 99,6: 0,4. EXEMPLE 4 A une solution de bicarbonate de sodium (1,848 g; 3 équivalents molaires) dans de l'eau (42 ml),on ajoute du 7432-S cristallin brut (4,66 g). On traite la solution par de l'acétonitrile (19 ml), de l'alumine active (2, 34 g), et du charbon actif (0,466 g), on l'agite à 15 à 20 C pendant 15 30 minutes et on la filtre pour éliminer le carbone actif et l'alumine. On verse le filtrat dans un mélange d'acétonitrile (37 ml), d'acide sulfurique à 62 % (3,95 g) et d'eau (28 ml). On dilue le mélange avec du carbonate de potassium aqueux à 30 % à 20 à 25 C pour ajuster à un pH de 3,0,et on l'agite pendant 30 minutes à la même température. On recueille les cristaux qui se séparent par filtration et on les sèche par séchage par circulation à 20 à 250C pendant 2 à 3 heures,ce qui donne un hydrate cristallin (4,384 g) ayant une teneur en eau de 12,2 %. Rapport des isomères géométriques 25 (cis/trans) = 99,6: 0,4. Dans des conditions similaires, on traite par de l'alumine active et du carbone actif une solution de 7432-S (1,0 g) dans du bicarbonate de sodium aqueux (12 ml). On dilue et on acidifie la solution avec un solvant (eau, iso30 propanol ou acétonitrile; 6 ml) et de l'acide phosphorique à 85 % (8 équivalents molaires) successivement, puis on l'ajuste à pH 3,0 avec du carbonate de potassium aqueux à % à 20 à 25 C, et on l'agite à la même température pendant 30 minutes. On recueille par filtration les cristaux 35 qui se séparent et on les sèche par séchage par traversée à 13. à 25 C pendant 2 à 3 heures, ce qui donne un hydrate cristallin (environ 0,90 g) ayant une teneur en eau de 11,0 %. Rapport des isomères géométriques (cis/trans) = 99,2 à 99,7/0,8 à 0,3. Dans les mêmes conditions,mais en remplaçant l'acide phosphorique par l'acide méthanesulfonique (4 équivalents molaires), on prépare l'hydrate cristallin (0,879 g). Teneur en eau: 11,4 %. Rapport des isomères géométriques (cis/trans) = 99,6/0,4. EXEMPLE 5 A une suspension de 7432-S cristallin brut (2,0 g) dans un mélange de diméthoxyéthane (18 ml),et d'éthanol (2 ml), on ajoue de l'acide chlorhydrique 6N (O,b9 ml; 1,3 équivalent molaire) à 2 à 5 C et on agite le mélange à la même tempéra15 ture pendant 2 heures. On recueille par filtration les cristaux de chlorhydrate qui se séparent, on les lave avec un mélange (10 ml) de diméthoxyéthane et d'éthanol (9: 1) et d'acétonitrile (10 ml), et on les sèche à 25 à 30 C pendant 2 heures, ce qui donne le chlorhydrate (1,878 g). On dissout une suspension de ce chlorhydrate (1,0 g) dans un mélange de méthanol (6 ml) et d'eau (5 ml) en ajoutant du bicarbonate de sodium (0, 61 g: 3 équivalents molaires), ce qui donne une solution. On ajoute à cette solution du carbone actif (0,1 g), on l'agite à 25 à 30 C pendant 10 minutes 25 et on la filtre pour éliminer le carbone actif. On verse le filtrat dans un mélange d'acide chlorhydrique de 35 % (1,01 ml, 4 équivalents molaires), d'eau (3 ml) et d'acétonitrile (6 ml), on ajuste son pH à 3,0 avec du carbonate de potassium aqueux à 30 % et on l'agite à 25 à 30 C pendant 30 minutes et à 5 à 7 C 30 pendant 1 heure. On recueille par filtration les cristaux qui se séparent, on les lave avec de l'éthanol (5 ml) et de l'eau (10 ml) successivement, et on les sèche par séchage par traversée à 20 à 25 C pendant 2 heures,ce qui donne un hydrate cristallin (0,82 g) ayant une teneur en eau de 10,6 %. Rapport des isomères géométriques (cis/trans) = 99,5:0,5. 14. EXEMPLE 6 A une solution de bicarbonate de sodium (1,3 g; 2,2 équivalents molaires) dans de l'eau (18 ml), on ajoute du 7432-S cristallin brut (3,0 g). On traite la solution par de l'alumine active (1,5 g) et du charbon actif (0, 3 g), on agite à 20 à 25 C pendant 30 minutes et on la filtre pour éliminer le carbone actif et l'alumine. On verse le filtrat dans un mélange d'acide malique (10 équivalents molaires) (17 ml) et d'acétonitrile (36 ml). On neutralise le mélange avec du carbonate de potassium aqueux à 30 % à 20 à 25 C pour l'ajuster à pH 3,0 et on l'agite pendant 30 minutes à la même température. On recueille par filtration les cristaux qui se séparent et on les sèche par séchage par circulation à 20 à 30 C pendant 2 heures,ce qui donne un hydrate cristallin (2,665 g) 15 ayant une teneur en eau de 11,7 %. Rapport des isomères géométrique (cis/trans) = 99,1: 0,9. Dans les mêmes conditions, mais en remplaçant l'acide malique par l'acide fumarique (10 équivalents molaires), on obtient un hydrate cristallin ayant une teneur en eau de 20 10,1 %. De la même manière, on traite une solution de 7432-S (1,0 g) dans du bicarbonate de sodium aqueux par de l'alumine active et du carbone actif. On mélange la solution avec une solution d'acide formique (4 équivalents molaires) dans de 25 l'acétonitrile aqueux. On traite le mélange comme cidessus, ce qui donne un hydrate cristallin (0,925 g) ayant une teneur en eau de 12,7 %. Rapport des isomères géométriques (cis/trans) = 99,8: 0,2. On peut élever cette quantité d'acide formique à 75 équivalents molaires, ce qui donne le même hydrate cristallin. EXEMPLE 7 Un échantillon d'hydrate 7432-S (1 g) préparé par le procédé de l'exemple 3 est placé respectivement dans un récipient hermétiquement fermé en fixant son humidité relative 15. 0 %, 12 Y, 20 %, 44 %, 57 % ou 75 % en choisissant un agent desséchant d'une humidité appropriée et il est maintenu à la température ambiante pendant 6 heures. Puis on détermine la teneur en eau de chaque échantillon par la méthode de Karl-Fischer, ce qui donne respectivement les valeurs de 1,05 %, 5,83 %, 8,54 %, 11,21 %, 12,19 % et 12,21 %, Les valeurs montrent que le constituant principal est le dihydrate (teneur en eau calculée = 8,07 %) à une humidité relative de 20 % et le trihydrate (teneur en eau calculée = 10 11,64 %) à une humidité relative supérieure à 44 %. Lorsqu'on continue ce séchage pendant 30 heures supplémentaires, la perte de teneur en eau de 6 à 30 heures est inférieure à 0,2 % dans le cas d'une hLumidité relative supérieure à 20 %. EXEMPLE 8 Un échantillon de 7432-S (1 g) préparé par le procédé de l'exemple 3 est placé respectivement dans un récipient hermétiquement fermé en fixant son humidité relative à 20 %, 44 %, 57 % ou 75 %,en choisisant un agent desséchant d'une humidité 20 appropriée maintenue à 40 C pendant 1 mois. Puis on détermine la teneur en eau de chaque échantillon par la méthode KarlFischer,ce qui donne les valeurs de 7,92 %, 10,69 %, 11,73 % et 12,4 % respectivement. La perte de teneur en eau de 30 heures à 1 mois est inférieure à 0,5 %, ce qui montre une teneur 25 en eau stable. /fi7 CAPSULES SEPAREES Dans les exemples 9 à 14 et les exemples de référence 1 à 6 ci-après, l'hydrate 7432-S est sous une forme cristalline contenant environ 10 % d'eau de cristallisation telle que 30 déterminée par la méthode KarlFischer. EXEMPLE 9 On mélange l'hydrate (1 kg), de la cellulose cristalline (1,18 kg) et du stéarate de magnésium (0,02 kg) (tous deux sous la forme d'une poudre de 0,25 millimètre) pendant 20 minu35 tes en utilisant un mélangeur du type en V de 10 litres. La 16. poudre mélangée (253 mg à chaque fois) est introduite dans une capsule de gélatine dure blanche N 2 contenant du bioxyde de titane (3,5 %). Puis on applique la solution de gélatine de scellement /_7 à 26 mg à 60 C; une solution aqueuse de gélatine (21,13 %) et de Polysorvate 80 (2 %)/ le long de la circonférence au joint du capuchon et du corps de la capsule (en utilisant une machine de scellement des capsules dures S-100 distribuée par la Japan Elanco Company) et on la sèche pendant 5 minutes à la température am10 biantedans un courant d'air. Le produit a une activité de. mg de 7432-S par capsule. EXEMPLE 10 On mélange pendant 20 minutes,en utilisant un mélangeur du type en V de 10 litres l'hydrate (1 kg),du lactose 15 (1,9 kg) et de l'huile de ricin hydrogénée (0,1 kg) (chacun d'eux sous forme d'une poudre de 0,25 mm). On introduit la poudre mélangée (172 mg à chaque fois) dans une capsule de gélatine dure blanche N 2 contenant du bioxyde de titane (6 %). Puis on applique la solution de gélatine de scellement 20 (20 à 25 mg 4 55 C);une solution aqueuse de gélatine (22 %) de glycérol (5 %) et d'éthanol (30 %) 7 le long de la circonférence au joint du capuchon et du corps de la capsule (en utilisant une machine de scellement des capsules dures S-100 distribuée par la Japan Elanco Company) et on la sèche 25 pendant 5 minutes à la température ambiante dans un courant d'air. Le produit contient 50 mg d'activité de 7432-S par capsule. EXEMPLE 11 On mélange pendant 20 minutes l'hydrate (1 kg), de la 30 cellulose cristalline (0,5 kg) et de la cire de carnauba pulvérisée (0,02 kg) (chacun d'eux sous la forme d'une poudre de 0,25 mm) pendant 20 minutes en utilisant un mélangeur du type en V de 10 litres. On introduit la poudre mélangée (171 mg à chaque fois) dans une capsule de gélatine dure blan35 che N 4 contenant du bioxyde de titane (2,1 %). Puis on 17. applique la solution de gélatine de scellement /10 à 20 mg à 60 C; une solution aqueuse de gélatine (22 %) et de Polysorvate 80 (2 %)7 autour de la circonférence au joint du capuchon et du corps de la capsule (en utilisant une machine de 5 scellement des capsules dures S-100 distribuéepar la Japan Elanco Company) et on la sèche pendant 4 minutes à la température ambiante dans un courant d'air. Le produit contient 100 mg d'activité de 7432-S par capsule. EXEMPLE 12 On prépare une capsule par le procédé de l'exemple 9, excepté que l'on utilise une capsule de gélatine dure transparente N 4. EXEMPLE 13 On prépare une capsule par le procédé de l'exemple 9, 15 excepté que l'on utilise une capsule de gélatine dure bleue non transparente N 4 contenant du colorant bleu indicateur N l(trace blue dye N l),du colorant rouge n 3 et du bioxyde de titane. EXEMPLE 14 On prépare une capsule par le procédé de l'exemple 9, excepté que l'on utilise une capsule de gélatine dure rouge non transparente N 4 contenant du colorant bleu indicateur N 1 (trace blue dye N 1), du colorant rouge N 3, du colorant jaune n 5 et du bioxyde de titane. EXEMPLE DE REFERENCE POUR LES CAPSULES 1 On mélange pendant 20 minutes dans un mélangeur du type en V de 10 litres l'hydrate (1 kg), de la cellulose cristalline (1,08 kg), du benzylhydroxyanisol comme antioxydant (10 mg de poudre de 0,25 mm) et du stéarate de magné30 sium (0,02 kg). On introduit la poudre mélangée (253 mg à chaque fois) dans une capsule de gélatine dure blanche N 2 contenant 3,5 % de bioxyde de titane. Le produit contient mg d'activité de 7432-S par capsule. EXEMPLE DE REFERENCE POUR LES CAPSULES 2 On mélange pendant 20 minutes dans un mélangeur du 2 6 0 1 0 1 4 18. type en V de 10 litres l'hydrate (1 kg), de la cellulose cristalline (1,18 kg) et du stéarate de magnésium (0,02 kg) (chacun sous forme d'une poudre de 0,25 mm). On introduit la poudre mélangée (253 mg à chaque fois) dans une capsule de gélatine dure blanche N 2 contenant du bioxyde de titane (3,5 %). Le produit contenait 100 mg d'activité de 7432-S par capsule. EXEMPLE DE REFERENCE POUR LES CAPSULES 3 A 6 Pour les expériences suivantes, on désigne une capsu10 le de chacun des exemples 3 à 6 avant d'appliquer la solution de gélatine de scellement sous le nom dé capsules de exemples de Référence 3 à 6. EXPERIENCES POUR LES CAPSULES Les expériences suivantes montrent la stabilité 15 de la composition observée dans des conditions de HPLC: Colonne = Polygosil 6010C18 4 mm de diamètre x 250 mm (M. Nagel & Co.); phase mobile = acétate d'ammonium aqueux 0,05M/méthanol (96/4); débit = 1,5 ml/minute; étalon interne = nicotinamide; et détermination UV = à 254 nm. 20 EXPERIENCE 1 On place la capsule (10 capsules à chaque fois) dans un récipient de verre de 500 ml, on le bouche hermétiquement et on le maintient dans une chambre à 45 1lC. On détermine tous les mois la teneur en 7432-S par HPLC. La teneur indiquée dans le tableau 2 est le pourcentage de rétention par comparaison avec la teneur de capsules franchement préparées. Une capsule sans le scellement, qu'il y ait ou non un anti-oxydant comme agent stabilisant, est apparemment 30 plus instable par comparaison avec celle de l'invention. 19. TABLEAU 2 10 Capsule Teneur (%) mois 1 2 3 Présente invention Exemple 1 99,4 96,5 94,2|91,8 Exemple 2 98,0 95,8 93,4191,2 Référence Exemple de référence'l 96,7 93,0 86,3 81,4 Exemple de référence 2 94,5 89,4 87,3 80,4 EXPERIENCE 2 La capsule (10 capsules à chaque) placée sur un papier blanc et épais,est maintenue dans une chambre à 25 - 1 C 15 et irradiée sous une lampe fluorescente de 10000 Lux. La teneur en 7432-S est déterminée tous les mois pendant 2 mois par HPLC.,et la modification de couleur en unité de différence de - couleur NBS est déterminée en utilisant un appareil de mesure dOe différences de couleur (Color-studio de Nihon Densyoku 20 Kogyo). Le tableau 3 montre la et la modification de coloration en avec celles de capsules fraîchement TABLEAU 3 rétention de la teneur unitésNBS par comparaison préparées. 35 Capsule _ Teneur (%)/unité NBS Capsule -; mois 1 2 Présente invention Exemple 3 99,7/0,68 100,2/1,47 Exemple 4 100,1/1,35 100,2/2,85 Exemple 5 100,1/0,07 99,8/3,00 Exemple 6 99/7/0,04 100,1/2,61 Référence Exemple de référence 3 98,3/1,62 98,0/6,98 Exemple de référence 4 97,0/4,06 96,1/7,39 Exemple de référence 5 98,8/3,23 98,3/8,12 Exemple de référence 6 99,6/0,87 99,8/4,65 20. L'unité NBS est une unité de différence de couleur conforme à l'U.S. National Bureau of Standards. La liste suivante donne une idée générale des valeurs en fonction de l'aspect. De ces expériences,on conclut que les compositions de l'invention conservent le 7432-S stable même dans des conditions accélérantes (par exemple chaleur, irradiation) et le protègent de la modification de coloration. Des couleurs contrastées pour la capsule et la solution de scellement, telles qu'elles peuvent être choisies librement, permettent une détection aisée d'un scellement de bande rompu. LISTE Unité NBS Différence Unité NBS Différence 0^ 0,5 Insignifian- 3,0 6, 0 Remarquable te 0,5-1,5 Légère 6,0 12,0 Très appa1,5v3,0 Importante > 12, 0 rente La présente invention n'est pas limitée aux exem20 ples de réalisation qui viennent d'être décrits, elle est au contraire susceptible de modifications et de variantes qui apparaîtront à l'homme de l'art. 21. REVENDICATIONS 1 - Hydrate cristallin de l'acide 7$-/(7)-2--(2aminothiazol-4-yl)-4carboxybut-2-énoylamino/-3-céphème-4carboxylique ayant le diagramme de diffraction des rayons X suivant: 15 20 d - d I/I d I/Id d TI/Io ,90 12 20,95 100 28,70 17 35,93 08 7,35 08 21,15 70 29,40 27 36,38 24 9,45 92 21,75 25 29,60 11 37,00 07 ,15 21 22,25 49 29,90 16 38,30 26 12,08 46 23,85 62 30,40 19 38,65 10 14,87 '0 -.4,50 39 31,10 53 39,20 15 ,65 14 24,80 16 31,60 23 39,60 21 16,25 13 25,50 34 31,78 34 40,27 15 18,35 24 25,85 66 33,02 28 41,22 22 18,90 71 26,60 16 33,55 23 42,55 08 19,14 77 27,02 59 33,86 17 44,20 09 19,40 60 27,30 35 35,20 16 ,58 88 28,35 54 35,65 10 2 - Hydrate selon la revendication 1, qui contient 7 à 14 % d'eau-de cristallisation. 3 - Hydrate selon la revendication 1, qui est le dihydrate. 4 - Hydrate selon la revendication 1 qui est le trihydrate. - Procédé de préparation de l'hydrate selon la revendication 1, qui consiste à sécher des cristaux humides d'acide 7-/(Z)-2-(2-aminothiazol-4-yl)-4-carboxybut-2-énoylamino/-3céphème-4-carboxylique. 6 - Procédé selon la revendication 5, dans lequel le séchage est effectué par séchage stationnaire,par traversée, par circulation ou en lit fluidisé dans un gaz inerte à une humidité relative non inférieure à 15 % à 0 à 60 C. 22. 7 - Procédé selon la revendication 5, dans lequel le séchage est effectué avec un séchoir à traversée en utilisant de l'air d'une humidité relative de 50 à 60 % à 25 à C. 8 - Procédé selon la revendication 5, dans lequel le séchage est effectué avec un séchoir en lit fluidisé en utilisant de l'air d'une humidité relative de 50 à 60 % à à 35 C. 9 - Procédé selon la revendication 5, dans lequel 10 le séchage est poursuivi jusqu'au premier point d'inflexion de la courbe temps/température de sortie de l'air ou de la courbe temps/humidité de sortie de l'air pour donner le trihydrate ou jusqu'au second point d'inflexion de ces courbes pour donner le dihydrate. 10 - Procédé selon la revendication 5, dans lequel les cristaux humides sont préparés en élevant le pH d'une solution acide aqueuse du composé pour la cristallisation et en faisant murir les cristaux. 11 - Procédé selon la revendication 10, dans lequel 20 le pH pour la cristallisation est de 1,5 à 5,0. 12 - Procédé selon la revendication 10, dans lequel la concentration de la matière de départ dans la solution acide aqueuse est entre 2,0 et 15,0 %. 13 - Procédé selon la revendication 10,dans lequel 25 l'élévation du pH de la solution acide aqueuse est effectuée avec de la triéthylamine, de l'hydroxyde d'ammonium, de l'hydroxyde de sodium, de l'hydroxyde de potassium, du carbonate de potassium, du bicarbonate de sodium, du bicarbonate de potassium ou des résines échangeuses d'anions ou par dilution 30 à l'eau. 14 - Procédé selon la revendication 10, dans lequel le mûrissement des cristaux est poursuivi pendant 10 minutes à 50 heures à O à 70 C. - Composition de capsule de gélatine dure d'un 35 hydrate conforme à la revendication 1, qui est caractérisée 23. en ce qu'elle a un scellement de gélatine autour de la circonférence au joint du capuchon et du corps de la capsule. 16 - Composition selon la revendication 15,contenant un agent de charge choisi parmi le glucose, le fructose, le lactose, l'amidon de mais la fécule de pomme de terre, la cellulose cristalline, la méthylcellulose et la méthyléthylcellulose. 17 - Composition selon la revendication 15, contenant un lubrifiant choisi parmi le talc purifié, l'acide 10 stéarique, le stéarate de sodium, le stéarate de magnésium, le stéarate de calcium, le borax, la paraffine liquide, le benzoate de sodium, le polyéthylèneglycol, la cire de carnauba et une huile hydrogénee. 18 - Procédé de préparation d'une composition 15 selon la revendication 15, qui consiste à appliquer une solution aqueuse de gélatine contenant un alcanol inféarieur, un éther, une cétone ou un ester le long de la circonférence au joint du capuchon et du corps de la capsule,et à sécher à 0 à 80 C. 19 - Procédé selon la revendication 18, dans 20 lequel la solution aqueuse de gélatine contient 10 à 30 % de gélatine. - Procédé selon la revendication 18, dans lequel la solution aqueuse de gélatine contient 10 à 40 % de méthanol, d'éthanol, de propanol ou de glycérol ou 0,5 à 10 % de monoolé25 ate de polyoxyéthylène sorbitane. 21 - Procédé selon la revendication 18, dans lequel la solution aqueuse de gélatine contient un colorant ou pigment pharmaceutiquement acceptable. 22 - Procédé selon la revendication 18, dans lequel 30 la quantité de solution de gélatine par capsule est entre 5 et 50 mg. 23 - Procédé selon la revendication 18, dans lequel le séchage est effectué par un courant d'air ou par la chaleur à 0 à 80 C.