FR 2593812 A1 19870807 FR 8601398 A 19860124 La présente invention est relative à de nouveaux dérivés N&alpha;-substitués des N&alpha;-arylsulfonylaminoacyl p-amidino-phenylalaninamides, à leur procédé de preparation, et à leur activité en tant qu'agents inhibiteurs sélectifs de la thrombine et antithrombiques. Les composes de l'invention répondent à la formule générale (I): dans laquelle - R1 représente l'hydrogène, un groupe alcoyle inférieur, hydroxyméthyle, hydroxyalcoyle, benzyle, un groupe phényle ou un groupe hydroxy-4 phényle - R2 représente un groupe alcoyle inférieur, alcényle inférieur, alcynyle inférieur, ou un groupe benzyle, ou un groupe alcoxycarbonylalcoyle inférieur, hydroxycarbonylalcoyle inférieur, hydroxyalcoyle inférieur - R3 et R4, identiques ou différents, représentent chacun un radical alcoyle inférieur, alcényle inférieur, alcynyle inférieur ou forment ensemble, avec l'azote auquel ils sont attachés, un groupe morpholino, thiomorpholino, pyrrolidino, pipérazino, (alcoyle inférieur3-4 pipérazino, (hydroxyalcoyle infrieur)-4 pipérazino, ou un groupe pipéridino non substitué ou substitué par un groupe alcoyle inférieur, benzyle, hydroxy, hydroxyalcoyle inférieur, amino, aminoalcoyle inférieur, hydroxyamino -Ar représente un groupe phényle, alpha-naphtyle ou beta-naphtyle, éventuellement substitué, ou bien un groupe hétéroaryle choisi parmi les radicaux pyridyle, quinoléinyle, isoquinoleinyle, éventuellement substitués. Dans le cas où R1 est autre que l'hydrogène, le carbone porteur du groupe R1 peut avoir la configuration R ou S ou RS. Tous les composés présentant les dites configurations sont compris dans la presente invention. Les composes de formule tI) ci-dessus, comportant un ou plusieurs centres asymétriques peuvent exister sous formes de plusieurs isomères (diastéréoisomères, énantiomères). L'invention concerne aussi des sels d'addition des composes de formule CI) avec les acides minéraux ou organiques pharmaceutiquement acceptables. Les termes "alcoyle inférieur", "alcényle inférieur", et "alcynyle inférieur" tels qu'utilisés ici, désignent les radicaux d'hydrocarbures aliphatiques ramifiés ou linéaires, contenant Jusqu'à 6 atomes de carbone tels que méthyle, éthyle, isopropyle, isobutyle, tertiobutyle, n-hexyle, allyle, propargyle, crotyle, méthyl-2 crotyle, méthyl-2 allyle, butyryle-2. Des inhibiteurs de thrombine synthétiques, présentant un groupe amidinophénylalanine ont été décrits dans la littérature. G.WAGNER et ses collaborateurs tDD Patent 142804 (16.7.80)) ont décrit des composés de formule générale CA) L'insertion d'un résidu aminoacide glycine entre le groupe sulfonyle et l'azote N-alpha de la p-amidinophénylalanine a conduit à des composés de formule générale (B3, dont l'activité in vitro est potentialisée par rapport à ceux de formule générale (A) (G.WAGNER et coll. DD Patent 155954 (3.2.81] ]. et parmi ceux-ci, le composé de formule CB) où n = 1, Ar = béta-naphtyle, NR1R2 = pipéridino, ci-après désigné composé IC) présente la meilleure activité inhibitrice de la thrombine in vitro (J.STURZEBECHER et al. Thrombosis Research 1983, 29, 635) et ex vivo (J. HAUPTMANN et al. Thrombosis Research 1985, 39, 771). Les composés de formule générale (A) et (B] ci-dessus sont préparés selon les procédés décrits dans les brevets DD 142604 et 00 155954, les amides étant obtenues à partir des acides libres correspondants par activation et réaction avec l'amine correspondante. Ces procédés impliquent des conditions de réactions qui induisent des racémisations au niveau du centre asymétrique : en outre, ils ne permettent pas d'obtenir des composés portant le substituant R2. La demenderesse a trouvé que les composés de formule tI) ci-dessus peuvent etre obtenus par un procédé qui permst,par l'utilisation de procédés de couplages et des groupements protecteurs judicieusement choisis,de respecter les centres d'asymétrie dans leur configuration originelle, et qui n'induit pas de racémisation. Ce résultat est obtenu, contrairement aux procédés décrits par G.WAGNER et ses collaborateurs, en construisant d'abord la partie amide à partir de la fonction acide du synthon p-cyanophénylalanine, avant la partie arylsulfonylaminoacyle, afin de pouvoir introduire facilement le substituant R2. L'invention a également pour objet un procédé de préparation des composés de formule tir caractérisé en ce que l'on fait réagir sur la cyano-4 phénylalaninamide Nc > - alcoylée de formule tII] dans laquelle R2, R3 et R4 ont les mêmes significations que dans la formule (I), un acide de formule sous sa forme activée. dans laquelle Ar et R1 ont les mêmes significations que dans la formule CI) et R représente un bon groupement nucléofuge, tel que chloro, alcoxycarbonyloxy ou hétéroaryle, pour obtenir le composé de formule (V) : dans laquelle Ar, R1, R2, R3 et R4 ont les mêmes significations que dans la formule CI), qu'on traite avec un excès d'uns solution saturée de gaz chlorhydrique dans un alcool de formule X-OH dans laquelle X représente un radical alcoyle inférieur, pour obtenir le composé de formule CVI) sous forme de chlorhydrate. dans lequel Ar, R1, R2, R3, R4 et X ont les memes significations précitées. L'imidoester de formule (VI) est alors traité par un excès d'une solution de gaz ammoniac dans un alcool inférieur de formule X-OH [X = alcoyle inférieur) à la température d'ébullition du mélange réactionnel pour obtenir le composé de formule (I) recherché. Ce composé est isolé sous forme de sel, la base libre pouvant étre obtenue par les procédés classiques et éventuellement transformée en un autre sel pharmaceutiquement acceptable tel que par exemple, outre le chlorhydrate, le bromhydrate, le sulfate, le méthanesulfonate, le naphtalénesulfonate-2, le maléate, le fumarate, lo citrate, l'acétate ou le gluconate. La préparation du nouveau composé de formule CII) qui est décrite dans une demande déposée conjointement par la demanderesse s'effectue à partir de la cyano-4 phénylalanine de formule L'acide de formule a été préparé selon le schéma réactionnel L'introduction d'un centre asymétrique dans l'aminoester CVII, A = alcoyle inférieur) dont la configuration "R" ou "S" initiale doit être conservée jusqu'à l'acide tIIIt, nécessite l'emploi de méthodes non racémisantes; telles que par exemple - la sulfonylation de l'aminoester (VII) s'opère en milieu biphasique de préférence le mélange eau-dichlorométhane, eau-chloroforme, eau-tétrachlorure de carbone, en présence d'une base, de préférence un carbonate alcalin tel que le carbonate de potassium, le carbonate de sodium, à des températures comprises entre 100 C et 250 C. - la saponification de l'ester CVIII) s'opère en milieu hydroalcoolique tel que eau-méthanol ou eau-éthanol, en présence d'un équivalent d'hydroxyde alcalin, de préférence l'hydroxyde de sodium, à des températures comprises entre 100 C et 250 C. La neutralisation du milieu réactionnel par addition d'un équivalent d'une solution aqueuse 1N d'acide minéral, de préférence l'acide chlorhydrique, conduit à l'acide CIII). Cette saponification peut également autre menée à bien dans un milieu hydro-organique, tel que eaudioxanne dans les mêmes conditions. Pour la transformation de l'acide de formule tIIIZ en ester activé de formule (IV]. 2 cas sont à envisager a) Cas où R4 = H, et ceux dans lesquels le problème de racémisation de l'acide tIII] n'existe pas méthode non stéréospécifique] On peut utiliser indifféremment l'activation de la fonction acide du synthon car exemple par - transformation de la fonction acide en halogénure d'acyle [IV] : R = Cl) selon le schéma réactionnel (III : R1 = H) CIV :R 2 Cl ; R1 = H) l'agent halogénant peut-être le chlorure de thionyle ou le pentachlorure de phosphore en présence d'oxychlorure de phosphore, à la température du reflux de l'agent halogénant. -transformation de la fonction acide en anhydride carbonique mixte selon le schéma réactionnel La réaction utilise un chîcroformate d'alcoyle où Y1 est un radical alcoyle inférieur ramifié ou non, en présence d'une amine tertiaire commé base. Le chloroformate d'alcoyle préférentiellement utilisé est le chloroformate d'éthyle (Y1 = C2H5) ou d'isobutyle (Y1 = CH2-CH(CH3)20. L'amine tertiaire préférentielle est la triéthylamine. Cette condensation s'opère de préférence à des temp6ratures comprises antre -5 C et + 10 C, dans un solvant inerte tel que le dichlorométhane, le chloroforme ou le tétrachlorure de carbone. b) Cas où R1 # H : il existe des risques de racémisation au niveau du carbone porteur du substituant R1 (méthode stérépspécifique) La transformation de la fonction acide des composés de formule (III) en esters activés, conduit à des composés de formule générale (IV : R = 0-e) selon le schéma réactionnel Les réactifs de couplage Y2 #, n'induisant pas de racémisation, utilisés de préférence, mais non limitatifs, sont les suivants : - Hydroxy-1 benzotriazole (HOBT) (Y2 = OH ; # = en présence de N,N -dicyclohexylcarbodiimide (DCC) selon le mode opératoire décrit par E.C. JORGENSEN et al. (J. Am. Chem.Soc. 1971, 93, 6318 - Hexafluorophosphate de benzotriazolyl-1 oxytris (diméthylamino) phosphonium CeOP) (Y2 = selon le mode opératoire décrit par B.CASTRO et al. (Synthesis 1976,751). - Chlorure de N,N-bis (oxo-2 oxazolidinyl-3) phosphorodiamidique selon le mode opératoire décrit par O.H. RICH et al. (j, Am. Chem. Soc. 1955, 107, 4342. Les réactions d'activation et de couplage s'opèrent en présence d'amines tertiaire de préférence la triéthylamine, dans un solvant inerte tel que le dichlorométhane, le diméthylformamide ou l'acétonitrile, à des températures comprises entre 150 C et 400 C. La formation de l'imidoester CVI) s'effectue en milieu alcoolique tel que le méthanol ou méthanol, à une température comprise entre -10 C et + 100 C, de préférence à 00 C pendant une durée de 16 H à 24 H. L'amidine de formule (I) peut-etre obtenue en traitant le composé tVI] précédemment obtenu, sans autre purification par une solution alcoolique de gaz ammoniac à une normalité de 3 N à 15 N, à la température ambiante, et on chauffe ensuite le mélange au reflux pendant 1 à 3 H. Les exemples non limitatifs suivants sont donnés à titre d'illustration de la présente invention. Exemple 1 : N-béta-naphtylsulfonyl-glycinate d'éthyle CVIII : A = C2H5 R1 = H ; Ar ^ p-naphtyle). A un mélange biphasique de 50 ml de solution aqueuse saturée de bicarbonate de sodium et de 50 ml de dichlorométhane, sous agitation mécanique rapide, à température ambiante, on ajoute par portions 10 g (0,072 mole) de glycinate d'éthyle (VII : A = C2H5 X R1 = H]. On abandonne le milieu réactionnel. sous bonne agitation, à température ambiante pendant 4 heures. On laisse décanter et écarte la phase aqueuse. La phase organique est récupérée et lavée avec une solution aqueuse d'acide chlorhydrique 2N. On sèche ia phase organique sur du sulfate de sodium anhydre et évapore à sec. Par trituration du résidu huileux, obtenu après évaporation, avec de l'éther diisopropylique, on récupère des cristaux que l'on recristallise dans l'acétate d'éthyle. Cristaux blancs, rendement : 91 %, F = 800 C (acétate d'éthyle). Exemple 2 : N-bétanaphtylsulfonyl-glycine (III : R1 = H , Ar = ss-naphtyle) A une solution de 18,8 g (0,064 mole) de N-bétanaphtysulfonyl glycinate d'éthyle (exemple 1) dans 200 ml de méthanol, on ajoute 35 ml (0,07 mole) d'hydroxyde de sodium aqueux 2N et abandonne à température ambiante pendant 2 heures. On évapore le méthanol, reprend le résidu avec de l'eau. La phase aqueuse est extraite par de l'éther et les extraits éthérés écartés. Après neutralisation de la phase aqueuse avec 35 ml d'acide chlorhydrique 2N, on filtre les cristaux obtenus, les lave à l'eau et les sèche. Cristaux blancs, rendement : 73 %, F = 157 C. Les exemples 3 à 8 ont été réalisés selon le même mode opératoire que celui décrit dans l'exemple 1. Ils conduisent aux composés de formule générale (VIII : Ar - p-naphtyle ; A = CH3) et résultent de la N-sulfonylation des esters méthyliques des amino-acides (VII : A = CH3) de configuration "R" ou "S", par le chlorure de ss-naphtylsulfonyle, Ils sont regroupés dans le tableau suivant (VIII : Ar = p-naphtyle @@ A = CH3) Exemple R1 Configuration de Rendement F (isopropanol) l'aminoacide 3 CH3 R 72 % 98 C 4 CH3 S 64 % 97 C 5 CH(CH3)2 S 67 % 106 C 6 CH2OH S 40 % 150 C 7 CH2-C6H5 R 64 % 160 C 8 C6H5 R 84 % 158 C Les exemples 9 à 14 ont été réalisés selon le meme mode opératoire que celui décrit dans l'exemple 2.Ils conduisent aux acides de formule générale (III : Ar = ss-naphtyle) et résultent de la saponification des esters de formule générale (VIII : Ar = ss-naphtyle, A= CH3). Ils sont regroupés dans le tableau suivant (III : Ar = ss-napthyle) Exemple R1 Configuration de Rendement F C l'aminoacide I i I f 9 CH3 R 89 % 118 C 10 CH3 S 90 % 124 C 11 CH(CH3)2 S 76 % 168 C 12 CH2OH S 76 % 210 C 13 CH2-C6H5 R 90 % 60 C 14 C6H5 R 93 % 160 C Exemple 15 : N-(quinoléinyl-8 sulfonyl]-glycinate d'éthyle CVIII :Ar = quinoléinyl-8 : A = C2H5 ; R1 = H) Préparé selon le mode opératoire décrit dans l'exemple 1, par sulfonylation du glycinate d'éthyle (VII : A = C2H5 , R1 = H) par le chlorure de (quinoléinyl-8) sulfonyle. Cristaux blancs, F = 1120 C (acétate d'éthyle] : rendement : 91 %. Exemple 16 N-Cquinoléinyl-8 sulfonyl)-glycine (III : Ar = quinoléinyl-8 R1 : H) Préparé selon le mode opératoire décrit dans l'exemple 2 Cristaux blancs, rendement : 99 % ; F F = 1290 C. Exemple 17 [N &alpha;-méthyl N &alpha;- (N'-bétanaphytylsulfonylglycyl) p-cyanophénylalanyl]-1 pipéridine (V : Ar = p-naphtyle ; R3 R1 = H ; R2 = C H NR R = pipéridino) On porte au reflux, pendant une heure, sous atmosphère inerte, 2,1 g (0,078 mole) de n-bétanaphtylsulfonyl-glycine[exemple 2) dans 20 ml de chlorure de thionyle. On évapore à sec le milieu réactionnel et dissout le résidu huileux dans 50 ml de dichlorométhane.Le chlorure d'acide que l'on a dissous dans le dichlorométhane est ajouté goutte à goutte sous atmosphère inerte, à une solution de 1 g (0,0031 mole) de chlorhydrate de (N &alpha;-méthylp-cyano phénylalanyl)-1 pipéridine tII : R2 = CH3 ; NR3R4 = pipéridino) et de 1,14 g (0,0112 mole) de triéthylamine, dans 20 ml de dichlorométhane, qui a préalablement été refroidie entre Oc C et 50 C. On abandonne le milieu réactionnel à température ambiante pendant 20 heures. Les sels insolubles sont filtrés et le filtrat est évaporé à sec. On reprend le résidu par de l'acide chlorhydrique 1N et extrait la phase aqueuse acide obtenue par du dichlorométhane.Les extraits organiques sont séchés sur sulfate de sodium anhydre et évaporés à sec. Le résidu obtenu après évaporation est purifié par chromatographie sur une colonne de silice (élution toluène-acétate d'éthyle 1 : 1). On obtient des cristaux blancs. Cristaux blancs, rendement : -69 %, F = 1300 C (isopropanol) Les exemples 16 à 20 ont été realisés selon le même mode opératoire que celui décrit dans l'exemple 17. Ils conduisent aux nitriles de formule (V : Ar = ss-naphtyle. R1 = H) et résultent du couplage des synthons de formule générale (II) avec les acides de formule (III : Ar = p-napthyle , R1 = Ht, préalablement activés en halogénure d'acide, par traitement avec le chlorure de thionyle de préférence.Ils sont regroupés dans le tableau suivant F0 C Exemple R2 NR,R4 Rendement ] solvant recristallisation 16 CH2-C6H5 tO 44 % huile 19 C2Hs NCH3 49 740 C éther dXisopropylique) 20 n-C4Hg ol X 40 % 1420 C (isopropanol) Exemple 21 : [N &alpha; - éthyl N &alpha;- [N'-bétanaphtylsulfonylglycyl) p-cyanophénylalanyl] - 1 pipéridine (V : Ar = ss-naphtyle ; R1 = H : R2 = C2H5 :NR3R4 = pipéridino) A une suspension de 6,1 g (0,023 mole) de N-bétanaphtylsulfonylglycine (exemple 2) dans 80 ml de dichlorométhane, maintenue entre 0 C et 59 C, on ajoute 2,6 g (0,0253 mole) de triéthylamine, puis goutte à goutte 3,4 g [0,025 mole) de chîcroformate d'isobutyle et on abandonne 1 heure à cette température. On ajoute alors 7,5 g (0,024 mole] de (N&alpha;- éthyl p-cyanophényl alanyl)-1 pipéridine (II : R2 = C2H5 : NR3R4 = pipéridino) , dissoute dans 50 ml de dichlorométhane et on abandonne à température ambiante, le milieu réactionnel pendant 20 heures. On évapore à sec, reprend le résidu par de l'eau. La phase aqueuse est extraite par du dichlorométhane.Les extraits organiques sont séchés sur sulfate de sodium anhydre et évaporés à sec. Le résidu huileux est purifié par chromatographie sur colonne de silice (élution toluène-acétate d'éthyle 1 : 1). Cristaux blancs, rendement : 74.5%, F = 820 C (acétate d'éthyle) Example 22 : [N &alpha;-méthyl N&alpha; (N'&alpha;-bétanaphtylsulfonyl-(S)-alanyl) p-cyanophénylalanyl]-1 pipéridine (V : Ar = ss-naphtyls ; R1 = CH3 ; R2 = CH3 ; NR3R4 = pipéridino). a) Couplage n'induisant pas de racémisation utilisant le réactif de couplage hydroxy-1 benzotriazole (HOBT) / N,N-dicyclohexylcarbodiimide (DCC). A une suspension de 13 g (0,0425 mole) de chlorhydrate de CNo( -méthyl p-cyanophénylalanyl]-1 pipéridine (II : R2 = CH3: NR3R4 = pipéridino) dans 200 ml de dichlorométhane on ajoute suceessivement 15,1 g (0,0425 mole) de N&alpha;-(bétanaphtylsulfonyl)-(S)-alanine (III = exemple 10), 4,3 g (0,0425 mole) de triéthylamine. 6,5 g (0,0425 mole) d'hydroxy-1 benzotriazole (HOBT). On refroidit le milieu réactionnel entre 0 C et @ 5 C et ajoute goutte à goutte 8,6 g (0,0425 mole) de N,N-dicyclohexylcarbodiimide (OCC) dissoute dans 50 ml de dichlorométhane. On abandonne le milieu réactionnel, sous bonne agitation, a température ambiante, pendant 17 heures. On filtre le précipité de dicyclohexylurée et le filtrat organique est lavé avec une solution aqueuse saturée de bicarbonate de sodium. La phase organique, séchée sur sulfate de sodium anhydre est évaporée à sec. L'évaporation du solvant laisse un résidu qui est trituré avec de l'acétate d'éthyle. Les cristaux blancs sont filtrés et lavés avec l'éther diisopropylique. Cristaux blancs, rendement : 62 %, F = 1100 C (acétate d'éthyle). b) Couplage n'induisant pas de racémisation, utilisant le réactif de couplage hexafluorophosphate de benzotriazolyl-1 oxytris (diméthylamino) phosphonium (BOP). A une solution de 7,5 g (0,027 mole) de N&alpha;-(bétanaphtylsulfonyl)-(S)- alanine (III : exemple 10) dans 300 ml d'acétonitrile, on ajoute successivement 11,9 g [0,027 mole) d'hexafluorophosphate de benzotriazolyl-1 oxytris (diméthylamino) phosphonium (BOP), 8,3 g (0,027 mole) de chlorhydrate de (N&alpha;-méthyl p-cyanophénylalanyl)-1 pipéridine KIIJ, 5,5 g (0,054 mole) de triéthylamine. On abandonne le milieu réactionnel sous atmosphère inerte, sous bonne agitation. à température ambiante, pendant 20 heures.On dilue le milieu réactionnel avec de l'acétate d'éthyle et le lave successivement avec une solution aqueuse saturée de chlorure de sodium, une solution d'acide chlorhydrique 2N, de l'eau, une solution aqueuse saturée de bicarbonate de sodium, puis de l'eau. La phase organique est séchée sur sulfate de sodium anhydre et évaporée à sec. Le résidu est purifié par chromatographie sur une colonne de silice Solution : toluène-acétate d'éthyle 1 : 1). On récupère des cristaux blancs que l'on sèche. Cristaux blancs, rendement : 42 %, F = 1100 C. Les exemples 23 à 27 sont effectués selon le même mode opératoire que celui décrit dans l'exemple 22 a. Ils conduisent aux nitriles de formule CV et résultent du couplage des synthons de formule générale CII) avec les acides de formule générale CIII ] préalablement activés parla transformation de la fonction acide en fonction ester activé, utilisant le réactif de couplage non racémisant DCC/HOBT. Ils sont regroupés dans le tableau suivant Exemple Ar R1 R2 NR3R4 Rendement FO C ~~~~~~ - .. . , , .. .. .... 23 H CH3 H3 92 % 1430 C J 24 H3CX . H CH3 :G)H3 37 % 202 C 25 X H CH3 t H3 51 % 102 C 26 H CH3 56% 60 C 27 H CH3 Les exemples 28 et 29 utilisent le même mode opératire que celui décrit dans l'exemple 22 b. Ils conduisent aux nitriles (V : Ar = ss-naphtyle) et résultent du couplage des synthore de formule générale (II) avec les acides de formule générale (III), préals@@ement @@t@vés @ar bransformation de la fonction acide en fonction ester artivé, @@@isant le résatif de couplage non racémisant BOP. Ils snt regroupés dans le tableau suivant : Ri TPR Exemple tconfiguraticn .-r. 0 ,Y R Renderr.cnt FO C de l'aminsacide3 f v t, 28 H CH3 9 Chut % 40 % 820 C 29 CH(CH3 12 CS1 O C 2280 r Du t i Example 30 : [N&alpha;-méthyl N&alpha;-(N'-bétanaphtylsulfonylglycyl) p-amidinophényl- alanyl]-1 pipéridine ( I : Ar = ss-nacthtyle R1 = H ; R2 = CH3 ; NR3R4 = pipéridino). dérivé n01 a) Formation de l'imidoester On sature à 0 C, sous atmosphère inerte, 80 ml de méthanol avec du gaz chlorhydrique et on ajoute, en une seule fois, à cette solution 5,3 g (0,01 mole) de [N&alpha;-méthyl N&alpha; - (N'-bétanaphtylsulfonylglycyl) p-cyanophényl- alanyl] -1 pipéridine CV : exemple 173 et on abandonne 20 heures à Oc C. On évapore à sec, sans chauffer, le méthanolet obtient une résine blanche, constituée du thlorydrate de l'imidoester de formule générale CVI : Ar = ss-naphtyle : R1 = H ; R2 = CH3 ; NR3R4 = pipéridino ; X = CH3, qui est utilisé sans autre purification dans l'étape ultérieure. b) Formation de l'amidine On sature à 0 C-5 C, sous atmosphère inerte, 80 ml de méthanol, avec de l'ammoniac gazeux, et ajoute à cette solution méthanolique ammoniacale, la résine blanche, obtenue dans l'étape précédente (exemple 30 a), après dissolution dans 20 ml de méthanol. On porte au reflux le mélange réactionnel, sous atmosphère inerte, pendant 3 heures. On évapore à sec et reprend le résidu par de l'acide chlorhydrique 1N, en excès. La phase aqueuse acide est extraite par du dichlorométhane. La phase organique est séchée sur du sulfate de sodium anhydre et évaporée à sec. Le résidu semi-cristallin obtenu est dissous dans l'eau. La solution aqueuse obtenue est extraite par l'acétate d'éthyle, et les extraits organiques sont isolés.La phase organique est lyophilisée et le résidu semi-cristallin est trituré par de l'éther éthylique. Les cristaux blancs sont filtrés, lavés à l'éther et séchés. Le produit final est sous forme de chlorhydrate hydraté. Cristaux blancs, rendement : 70 %, F = 1700 C (chlorhydrate, dihydrate).. Pour les dérivés 1 à 12, on utilise les mêmes modes opératoires que ceux décrits dans l'exemple 30. Ils conduisent aux N &alpha;-arylaulfonylaminoacyl p-amidinophénylalaninamides de formule générale (I) et résultent de la transformation des nitriles de formule générale CV) en amidines de formule générale (I) par l'intermédiaire des imidoesters de formule générale (VI).Ils sont regroupés dans le tableau suivant R1 Dérivé Ar (configuration R2 NR 3R4 x Rendement F0 C de l'aminoacide) 2 oer H CH3 N 3 CH3 1,5 64 % 1600 C 3 -H C2H5 N D 1,5 56 % 1680 C 4 t H CH2 4 N 9 2 64 % 1700 C 5 t H CH5 N 3 CH3 1 50 % 1640 C 6 t H n-C4Hg Na 1.5 54 % 1540 C 7 CH3 (S) CH3 q 1,5 71 % 1620 C 8 a H CH3 N &commat; H ss 1,5 57 % 1600 C 9 H m H CH3 NH3 2 46 % 1980 C 10 FICH3 10 W H CH3 1 H3 3 76 % 1860 C 11 X H CH3 N D 4,5 51 % 1600 C 12 t CHCCH3)2 (S] CH3 o 3 48 % 1750 C Les résultats des études toxicologique et pharmacologique qui sont rapportées ci-dessous ont mis en évidence les intéressantes propriétés des composés de I' invenTion. es derniers sont- doués d'une très bonne activité inhibitrice de la thrombine et possèdent en outre de remarquables propriétés antithrombotiques in vivo que ne manifestent pas les composés des formules (A) et (B) et le composé (C) Comparés à l'héparine, ils ont une durée d'action bien supérieure sans induire d'augmentation du temps de saignement. InventIon a donc encore pour objet un médicament présentant en particulier des propriétés antithromobtiques, caractérisé en ce qu'il contient, à titre de principe actif, un composé de formule CI) ou un sel d'addition avec un acide minéral ou organique thérapeutiquement acceptable Etude toxicologique Les composés de l'invention bénéficient d'une bonne tolérance et d'une faible toxicité. Les essais effectués sur différentes espèces animales les toxicités algue, subchronique, chronique n'ont pas mis en évidence une quelconque réaction locale ou générale, perturbation ou anomalie dans les examens biochimiques, macroscopiques et microscopiques effectués tout au long des essais. Etude pharmacologique Cans cette étude, les composés de l'invention ont été comparés à l'héparine et à la [N &alpha;-[N-bétanaphtylsulfonylglycyl) p-amidinophénylalenyl]-1 pipéridine, compesé de structure proche décrit comme un puissant inhibiteur ae la thrombine (J. HAUPTMANN et al. Thromb, Res, 39 D 771-775, 1983) et qui sera nomm,é dérivé C. li Détermination de la spécifité vis-à-vis de la thrombine De nombreuses sérine-protéases (facteurs XIIa, IXa, VIIa, Xa, plasmine thrombine existent dans le plasma et interviennent dans le mécanisme de la coagulation. Afin de ne pas induire des perturbations trop importantes dans la "cascade de la coagulation" et entraîner des risques hémorragiques, il convIent de s'assurer que les composés choisis possèdent une action spécifique sur la thrombine. D'autre part, afin d'obtenir une bonne activité par la voie orale, il est nécessaire aussi d'avoir une bonne spécificité vis-à-vis de la trypsine, sérine-protéase du tractus digestif. On a ainsi déterminé selon la méthone de Dixon (Biochem. J., 1953, 55, 170-171 les constantes d'inhibition de la thrembing bovire (Sigma 2000 @@/mg) in vitro sur l'hydrolyse du substrat 2238 (Kabi Vitrum) à pH 8 et à 25 C et celles de la trypsine bovine (Sigma type III-S) dans les mêmes conditions. Les résultats sont rassemblés dans la tableau Suivant Dérivé T@rombine @@@@psine 1 0,27 10-8 M 0,10 10-6 M 11 1,52 10-7 M 1,2 10-6 M 2 2,15 10-8 M 0,12 10-6 M 0 10-8 M 0,75 10-6 M 2) Temps de thrombine. Le temps de coagulation du plasma citrate en présence de thrombine est mesué ex vivo chez le rat selon la technique de BIGGS R.M (Human blood coagulation, haemostasis and thrombosis , Oxford, Blackwell Scientific Publications, 1972 Les prèlèvements Sont effectués une heure après administration souscutanée du composé à tester, par ponction à l'aorte abdominale. le sang est recueilli sur citrate de sodium à 3,8 % (1 volume pour 9 volumes de sang). Le plasma est obtenu par centrIfugation à 2500 g pendant 10 minutes. A du plasma, on ajoute 0,2 ml d'une solution de thrombine (20 U/ml). Le temps de coagulation est enregistré. Les résultats sont rassemblés dans le tableau suivant Dose mg/kg Voie Résultats allongement p (Temps en secondes) Témoin S.C 6 + O Héparine 10 S.C 20 + 4 233 0,001 Témoin S.C 7 # 0 Dérivé C 10 S.C 9 # 0 29 0,001 Témoin S.C 7 # 0 Dérivé n 1 10 S.C 114 # 16 1529 0,001 Témoin S.C 6 + O Dérivé n03 10 S.C 18 + 2 200 0,001 Témoin S.C. 8 # 0 Dérivé n 11 10 S.C 88 # 6 750 0,001 Témoin S.C 9 # 0 Dérivé n 5 10 S.C 12 # 1 33 0,001 3) Thrombose veineuse à la vrille. Les essais ont été effectués selon une adaptation de la méthode de T.KUMAOA et al. ( Thromb. Res. , 18, 189-203, 1980 ). Une spirale métallique (bourre-p te de dentiste recoupée] est insérée dans la veine cave inférieure du rat anesthésié. Une heure auparavant, les animaux ont reçu par la voie sous-cutanée, le composé à tester. Cinq heures après, la spirale est retirée avec le thrombus qu'elle retient puis séchée par tamponnementsrépétés sur papier filtre et pesée. La spirale est ensuite débarrassée du thrombus, séchée et pesée à nouveau. La différence pondérale donne le poids du thrombus. Les résultats sont rassemblés dans le tableau suivant Dose Poids du Produit mg/kg thrombus en mg Variation p Témoin 4,47 # 0,51 Héparine 5 2,91 # 0,53 - 35 % 0,05 Héparine 10 1,82 # 0,34 - 64 % 0,001 Héparine 10 0,28 # 0,04 - 94 % 0,001 Témoin 4,77 # 0,47 Dérivé C 20 3.98 # 0,45 - 18 % n.s. Dérivé C 50 3,83 # 0,37 - 24 % n.s. Dérivé C 100 3,08 # 0,28 - 35 % 0,01 Témoin 3,51 # 0,53 Dérivé n 1 5 2,43 # 0,17 - 31 % n.s. Dérivé n 1 10 2,01 # 0,20 - 43 % 0,05 Dérivé n 1 20 1,34 # 0,12 - 82 % 0,01 Dérivé n 1 50 0,87 # 0,07 - 75 % 0,001 Témoin 4,53 # 0,55 Dérivé n 3 10 2,46 # 0,16 - 46 % 0,01 Dose Poids du Produit mg/kg thrombus en mg Variation P Témoin 4,10 ~ 0,43 Dérivé n011 5 3,13 # 0,38 -24 % n.s. Dérivé n 11 10 2,02 # 0,18 - 51 % 0,001 Dérivé n 11 20 1,85 # 0,13 - 55 % 0,001 Témoin 4,11 + 0,33 -21% 0,05 @ivé n 5 10 3,25 # 0,24 - 21 % 0,05 Etude cinétique de la thrombose veineuse à la vrille. L'étude comparative de la cinétique d'effet portant sur l'héparine et le dérivé n01 a été effectuée. Les dérivés à tester sont administrés par la voie sous-cutanée 15 mn. 1 H 2 H, 4 H, 6 H, 16 H et 48 H avant la pose de la spirale qui est retirée 5 H après. On détermine le poids du thrombus. Les résultats sont rassemblés dans le tableau ci-après. Produit Dose Vois Temps Poids du mg/kg throstes Variation P en mg Témoin s.c. 4,21 # 3,34 Héparine 10 s.c. - 15 mn 4,21 # 0,34 - 58 % 0,001 Héparine 10 s.c. - 1 H 0,82 # 0,22 - 80 % 0,001 Héparine 10 s.c. - 4 H 1.19 # 0,12 - 72 % 0,001 Héparine 10 s.c. - 6 H 2,57 # 0,35 - 36 5 0,001 Témoin s.c. 4,56 # @,@@ Héparine 10 s.c. - 2 @ @,55 # @@@ - 88 % 0,001 Témoin s.c. 4,19 # 0,37 Héparine 5 s.c. - 15 mn 3,70 # 0,29 - 12 % n.s. Héparine 5 s.c. - 1 H 1,73 # 0,28 - 59 % 0,001 Héparine 5 s.c. - 4 H 3,10 # 0,43 - 26 5 n.s. Héparine 5 s.c. - 6 H 3,15 # 0,28 - 25 % n.s. Témoin s.c. 4,35 # 0,43 Héparine 5 s.c. -2 H 3,04 # 0,25 - 30 % 0,05 Témoin s.c. 3,37 3 0,33 Dérivé n 1 20 s.c. -15 mn 1,99 # 0,24 - 41 % 0,01 D6rivé n 1 20 s.c. - 1 H 1,67 # 0,15 - 50 % 0,001 Témoin s.c. 3,91 # 0,42 Dérivé n 1 20 s.c. - 2 H 1,82 3 0,10 - 53 % 0,001 Témoin s.c. 3,95 # 0,32 Dérivé n 1 20 s.c. - 4 H 1,40 # 0,13 - 63 % 0,001 Dérivé n 1 20 s.c. - 5 H 1,40 # 0,13 - 43 % 0,001 Témoin s.c. 3,52 # 0,44 Dérivé n 1 20 s.c. - 16 H 2,64 # 0,38 - 25 % n.s. Témoin s.c. 3,20 # 0,23 Dérivé n 1 50 s.c. - 15 mn 1,31 # 0,08 - 59 % 0,001 Dérivé n 1 50 s.c. - 1 H 0,92 # 0,08 - 71 % 0,001 Dérivé n 1 50 s.c. - 2 H 1,01 # 0,08 - 68 % 0,001 Dérivé n 1 50 s.c. - 4 H 0,82 # 0,07 - 74 % 0,001 Témoin s.c. 3,77 # 0,36 Dérivé n 1 50 s.c. - 6H 1,21 # 0,16 - 68 % 0,001 Témoin s.c. 3,70 # 0,24 Dérivé n 1 50 s.c. - 16 H 1,69 # 0,26 - 54 % 0,001 Témoin s.c. 2,98 # 0,39 Dérivé n 1 50 s.c. - 48 H 2,49 3 0,30 - 16 % 0,001 4) Temps de saignement. Cette étude a été effectuée selon une daptation de la technique de L.STELLA et al. (Thromb. Res. : 1975, 7, 709-716) Après anesthésie du rat au pentobarbital, la queue est sectionnée à 5 mm de l'extrémité et le sang de la blessure soigneusement tamponné toutes les 15 secondes à l'aide d'un papier filtre jusqu'à hémostase. Celle-ci est atteinte lorsqu'aucune tâche n'apparait pendant 1 minute. Les produits à tester sont administrés par la voie sous-cutanée, une heure avant la section de la queue. Les résultats sont rassemblés dans le tableau suivant Produit Dose Durée en Extrêmes P mg/kg secondes Témoin 360 330-480 Héparine 5 465 330-540 n.s. Héparine 10 3600 525- > 3600 0,01 Héparine 20 3600 690- > 3600 0,01 Témoin 540 405-675 Dérivé C 10 375 360-510 n.s. Dérivé C 20 750 420-960 n.s. Dérivé C 50 600 435-615 n.s. Témoin 405 390-510 Dérivé n 1 10 450 420-525 n.s. Dérivé n01 20 480 420-3600 n.s. Dérivé n 1 50 465 360- > 3600 n.s. Témoin 480 405-840 Dérivé n 1 100 795 600-1140 n.s. Dérivé n01 100 960 600-1020 0,05 Témoin 525 480-600 Dérivé n 11 5 615 540-780 n.s. Dérivé n011 10 690 4s5-750 n.s. Dérivé n011 20 585 495-855 n.s. Dérivé n011 50 540 450-660 n.s. Etude cinétique du temps de saignement. L'étude comparative de la cinétique d'effet portant sur l'héparine et le dérivé n01- été effectuée. Les dérivés à tester sont administrés par la voie sous cutanée 15 mn, 1 H, 2 H, - 4 H et 6 H avant l'anesthésie et la section de la queue. Les résultats sont rassemblés dans le tableau suivant. Produit Dose Temps Durée en Extrêmes P mg/kg secondes Témoin 330 240-405 Héparine 10 -15 mn 465 315-510 n.s. Héparine 10 - 1 H > 3600 405- > 3600 0,05 Héparine 10 - 4 H > 3600 600#3600 0,01 Héparine 10 - 6 H 390 315-495 n.s. Témoin 412 360-540 Dérivé n01 10 -15 mn 465 300-690 n.s. Dérivé n01 10 - 1 H 555 390-570 n.s. Dérivée n 1 10 - 4 H 480 485-540 n.s. Dérivée n 1 10 - 6 H 450 390-870 n.s. Témoin 465 360-795 Dérivé n 1 20 -15 mn 540 390-720 n.s. Dérivé n 1 20 - 1 H 480 435-630 n.s. Dérivé n01 20 - 2 H 540 405-520 n.s. Dérivé n 1 20 - 4 H 585 405-1800 n.s. Dérivé n 1 20 - 6 H 450 300-840 n.s. Ces études qui viennent d'être réalisées ont mis en évidence les effets remarquables des dérivés de l'invention. - pouvoir antithrombotique = la détermination du temps de thrombine et le test de la vrille ont montré que les composés de l'invention produisaient une activité bien supérieure au dérivé C et qu'ils possédaient sur l'héparine l'avantage d'une action beaucoup plus durable; en effet, si dans les premières heures, les effets de l'héparine et du dérivé n01 sont superposables, après 6 H, lthéparine accuse une baisse sensible alors que le dérivé n01 produit encore une diminution du poids du thrombus de 68 % et 48 H après de 16 %. On peut en conclure que, à activité antithrombotique équivalente, les dérivés de l'invention apportent une couverture remarquable dans le temps supérieure à 16 H par rapport à l'héparine (3-4 heures). - temps de saignement = l'étude cinétique a nettement montré le risque hêmorragiqueinduit par l'héparine. Le dérivé de l'invention allongeant très peu le temps de saignement, permet une marge de sécurité très supérieure à celle de l'héparine L'invention a encore pour objet un médicament présentant en particulier des activités antithrombotiques caractérisé en ce qu'il contient à titre de principe actif un dérivé de formule (I) ou un sel d'addition avec un acide minéral ou organique pharmaceutiquement acceptable. Le médicament de l'invention peut être présenté pour l'administration orale sous forme de comprimés, comprimés dragéifiés, capsules, gouttes, sirop ou granulé. Il peut aussi être présenté pour l'administration rectale sous forme de suppositoires et pour l'administration parentérale sous forme de soluté injectable Chaque dose unitaire contient- avantageusement de 0.005 g à 0.500 g de principe actif en fonction de l'âge du malade et de la gravité de l'affection traitée. On donnera ci-après, à titre c'exemples non limitatifs, quelques formulations pharmaceutiques du médicement de l'invention. 13 Comprimés dragéifiés Dérivé n 1 C,C50 g Excipient Lactose, polyvinylpyrrolidone, stéréate de magnésium, gomme laque, talc, carbonate de calcium, silice, oxyde de titane, gomme arabique, cire blanche, cire de carnauba. 2) Comprimés Bérivé n 2 0,025 g Excipient Lactose, cellulose microcristalline, talc, stéarate de magnésium 3i Capsules Dérivé n03 0,100 g Excipient Talc, amidon de blé, stéarate de magnésium. 4) Suppositoires Dérivé n 5 0,050 g Exeipient Glycérides semi-synthétiques 55 Soluté injectable Dérivé n011 0,025 g Excipient Solvant isotonique q.s.p. 3 ml Pour ses propriétés anticoagulante et antithrombotique, dépourvu des effets secondaires dus au risque hémorragique, le médicament de l'inventIon est utilement administré dans la prévention et le traitement de la maladie thrombo-embolique. REVENDICATIONS 1) Composés de formule dans laquelle - R1 représente i'hydrcgene, un grouse alcoyle inférieur, hydroxyméthyle, hydroxyalcoyle. benzyle, un grcune phényle ou un groupe hydroxy-4 phényle ;; - R2 représente un groupe alc@yle inférieur, alcényle inférieur, alcynyle inférieur, ou un groupe benzyle, eu un groupe alcoxycarbonylalcoyle inférieur, hydroxycarbonylaîccyle inférieur, hydroxyalocyle inférieur - R3 et R4, identiques ou différents, représentent chacun un radical alcoyle inférieur,alcényle inférieur, alcynyle inférieur ou forment ensemble, avec l'azote auquel ils sont rattaches, un groupe morpholine, thiomorpholino, pyrrolidino, pipérazino, (alcoyle inférieur)-4 pipérazino, (hydroxyalcoyle inférieur)-4 pipérazino, ou un groupe pipéridine non substitué ou substitué par un groupe alcoyle inférieur, benzyle, hydroxy, hydroxyalcoyle inférieur, amino, aminoalcoyle inférieur, bydroxymino - Ar représente un groupe phényle, alpha-naphtyle ou béta-naphty1e, éventuellement substitué, ou bien un groupe hétéroaryle choisi parmi les radicaux pyridyle, quinoléinyle, iscquinoléinyle, éventuellement substitués et leurs sels d'addition avec les acides minéraux ou organiques pharmaceutiquement acceptables ainsi que les stéréoismères ou leur mélange. 2) Procédé de préparation des composés selon la revendication 1 caractérisé en ce que l'on fait réagir sur la cyano-4 hénylalaninamice N&alpha;-alcoylée de formule CII) dans laquelle R2, R3 et R4 ont les mêmes significations que dans la formule CI), un acide de formule sous sa forme activée dans laquelle Ar et R1 ont les mêmes significations que dans la formule (I) et R représente un bon groupement nucléofuge, tel que chloro, alcoxycarbonyloxy ou hétéroaryle, pour obtenir le composé de formule EV] dans laquelle Ar, R1, R2, R3 et R4 ont les mêmes significations que dans la formule CI) qu'on traite avec un excès d'une solution saturée de gaz chlorhydrique dans un alcool de formule X-OH dans laquelle X représente un radical alcoyle inférieur pour obtenir l'imidoester de formule CVI) sous forme de chlorhydrate dans laquelle Ar, R1, R2, R3, R4 et X ont les mêmes significations précitées qui est alors traité par un excès d'une solution de gaz ammoniac dans un alcool inférieur de formule X-OH dans laquelle X représente un radical alcoyle inférieur à la température d'ébullition du mélange réactionnel pour obtenir le composé de formule (I) recherché. 3) Procédé selon la revendication 2 caractérisé en ce que l'activation de l'acide de formule (III) est effectuée par action d'un agent halogénant ou ou d'un chloroformate d'alcoyle. 4) Procédé selon la revendication 2 caractérisé en ce que l'activation de l'acide de formule (III) est effectué par action de réactifs de couplage n'induisant pas la racémisation, tels que l'hydroxy-1 benzotriazole en présence de N,N dicyclohexylcarbodiimide, l'hexaflucrcphosphate de benzotriazolyl-1 oxytris (diméthylamino) phosphonium ou le chlorure de N,N-bis (oxo-2 oxazo lidinyl-3) phosphorodiamidique. 5) Procédé selon les revendications 2, 3 ou 4 caractérisé en ce que la préparation de l'imidoester de formule (VI) s'effectue en milieu alcoolique à une température comprise entre -100 C et +10 C, pendant une durée de 16 H à 24 H , en présence d'un acide fort. 6) Procédé selon les revendications 2, 3, 4 ou 5 caractérisé en ce que la formation de l'amidine de formule (I) s'effectue en milieu alcoolique, par action du gaz ammoniac à la température ambiante, et chauffage à reflux pendant une durée de 1 à 3 heures. 7) [N&alpha;-méthyl N&alpha;-(N-bétanaphylsulfonylglycyl) p-amidinophénylalanyl]-1 pipéridine et ses sels pharmaceutiquement acceptables 8) Méthyl-4 [N -méthyl Nt - CN-bétanaphtylsulfonylglycyl) p-amidinophénylalanyl] -1 pipéridine et ses sels pharmaceutiquement acceptables 9) [N&alpha;-éthyl N-&alpha;-[N-bétanaphtylaulfonylglycyl) p-amidinophénylalanyl]-1 pipéridine, et ses sels pharmaceutiquement acceptables 10) [N -éthyl NE - (N-bétanaphtylsulfonylglycyl) p-amidinophénylalanylJ -1 méthyl-4 pipéridine et ses sels pharmaceutiquement acceptables 11) [N&alpha;;-méthyl N&alpha;-[N-quinoléinyl-8 sulfonylglycyl) p-amidinophénylalanyl]-1 pipéridine et ses sels pharmaceutiquement acceptables 12) Médicament caractérisé en ce qu'il contient, à titre de principe actif un dérivé de formule (I) suivant la revendication 1, ou l'un de ses sels pharmaceutiquement acceptables 13) Médicament selon la revendication 12 caractérisé en qu'il contient, à titre de principe actif, la [N&alpha;-méthyl N&alpha;-(N-bétanaphtylsulfonylglyoyl) pamidinophénylalanyl]-1 pipéridine, et ses sels pharmaceutiquement acceptables 14i Médicament selon la revendication 12, caractérisé en qu'il contient, à titre de principe sactif le méthyl-4 [N&alpha;-méthyl N&alpha;;- (N-bétanaphtylsulfonylglycyl) p- amidincphénylalanyl] -1 pipéridine, et ses sels pharmaceutiquement acceptables 15j Médicament selon la revendication 12, caractérisé en ce qu'il contient, à titre de principe actif, la [N&alpha;-éthyl N&alpha;-(N-bétanaphtylsulfonylglycyl) p-amidinophénylalanyl -1 pipéridine et ses sels pharmaceutiquement acceptables 163 Médicament selon la revendication 12, caractérisé en ce qu'il contient, a titre de principe actif, la [Nc( -éthyl N&alpha; ;-(N-bétanaphtylsulfonylglycyl) p-amidinophénylalanyl] ] -1 méthyl-4 pipéridine et ses sels pharmaceutiquement acceptables 17) médicament selon la revendication 12, caractérisé en ce qu'il contient, à titre de principe actif, la [N&alpha;-méthyl N&alpha;- (N-quinoléinyl-8 sulfonylglycyl) p-amidinophénylalanyl] -1 pipéridine et ses sels pharmaceutiquement acceptables 18) Médicament selon l'une des revendications 12, 13, 14, 15, 16 ou 17 caractérisé en ce que chaque dose unitaire contient de 0,005 g à 0,5CO g de principe actif.