FR 2577226 A1 19860814 FR 8501982 A 19850212 Analogues de pepstatine inhibiteurs de la rénine et des protéases acides. La présente invention concerne des nouveaux dérivés peptidiques inhibiteurs de la rénine et des protéases a-cides. Elle concerne également un procédé pour leur obtention et leur appli-cati-on en thérapeutique. En 1970, UMEZAWA a isolé, a partir d'une culture de streptomyces, un pentâpeptide désigné-sous le nom de pepstatine dont la structure a été établie ultérieurement et répond à la formule Isovaléryl - L-valyl - L-valyl - statyl - L-alanyl - statine dans laquelle on désigne sous le nom de "statine" un acide aminé non usuel, l'acide (3S,4S) amino-4 hydroxy-3 méthyl6 heptanolque. Il a montré que la pepstatine est un inhi- biteur de protéases acides et suit en particulier sur la pepsine, la cathepsine D et la rénine. Spécialement, la rénine, enzyme d'origine rénale, intervient dans la séquence angiotensinogène, angiotensine I, angiotensine II au niveau de la transformation de l'angiotensinogène en angiotensine. L'angiotensine Il, étant un puissant agent vasoconstricteur, intervient.dans la régulation de la pression artérielle. On a envisagé d'utiliser la pepstatine pour lutter contre l'hypertension artérielle chez l'homme. Toutefois, la pepstatine agissant sur l'ensemble des pro téases acides et présentant une faible solubilité en milieux aqueux et une faiblie affinité pour la rénine, son emploi en thérapeutique sTest avéré difficile. Des dérivés de la pepstatine ont été décrits dans la littérature scientifique. Par exemple, on a tenté de solubiliser la pepstatine par allongement de la chaîne peptidique (J. Cardiovasc. Pharmacol., 1980, 2, 687-698). La présente invention concerne au contraire des peptides dont le modèle est construit sur celui de la pepstatine. Dans certains cas, l'introduction d'acides aminés non naturels permèt@d'augmenter la solubilité de ces composés et leur résistance à la protéolyse. De manière tout à fait surprenante, on a trouvé que les peptides selon l'invention qui portent des résidus hydrophiles sur différents sites présentent un niveau d'activité élevé et tres supérieur à celui de la pepstatine en tant qu'inhibiteur de la rénine humaine. La présente invention a pour objet des peptides présentant un niveau élevé d'activité en tant qu'inhibiteurs de la rénine et d'autres protéases acides. Dans la présente description et dans les revendications, les abréviations suivantes seront utilisées: Acides- laminés et groupes protecteurs ou activateurs. Ces abréviations sont en accord a.vec celles indiqueess.par la Commission de Nomenclature de 1'IUPAC-IUB section Biochimie. Les recommandations les plus récentes sont rapportées dans.Eur. J. Biochem. 1984, 138, 5-7 et 9 à 37. Acides aminés : Ala : Alanine Asn : Asparagine Asp : Acide Aspartique Gln : Glutamine Gly : Glycine Ris : Histidine Ile.: Isoleucine Leu : Leucine Met : Méthionine Nle : Norleucine Nva : Norvaline Phe : Phénylalanine Ser : Sérine Sta : Statine Lorsque la Statine est en position centrale dans le peptide, elle a toujours la configuration (3S,4S); lorsque.la Statine est en position terminale, elle peut avoir l'une ou l'autre configuration (3S,4S) ou (3R,4S). Dérivés d'acides aminés Met (02) : Méthionine dioxyde Phg : Phénylglycine Hph : Homophénylalanine (Pyr-3)Ala : (Pyridyl-3)Alanine (piMe)His : (pros-Méthyl)histidine (tauMe) His : (télé-méthyl)histidine (tauEt)His : (télé-éthyl)histidine ((CH3)3CO)Ser : Ether t.butylique de sérine (PhCH20)Ser : Ether benzylique de sérine (CH3 CH20)Ser : ether éthylique de sérine (Pentyl)Ala : Acide amino-2 octanoïque (Ph)Gln : N(phényl)glutamine (Ph)Asn : N(phényl)asparagine Ces acides aminés sont, sauf indication contraire, de configuration L. Groupes protecteurs et activateurs : Ac : Acétyle Boc : t@butyloxycarbonyle (Boc)20 : Anhydride bis-terbutyloxycarbonique HON Su : N-hydroxysuccinimide OEt : Ester éthylique OMe : Ester méthylique ONp : Ester p-nitrophénylique ONSu : Ester de N-hydroxysuccinimide oTcp : Ester trichloro-2,4,5 phénylique i Va : Isovaléryle Z : Benzoyloxycarbonyle De plus, on utilisera les abréviations suivantes AcOEt : Acétate d'éthyle AcOH : : Acide acétique Bop : Hexafluorophosphate de benzyloxy tris diméthylamino phosphonium C CM : Chromatographie en couche mince DCCI : Dicyclohexylcarbodiimide DCHA : Dicyclohexylamine DCI) Dicyclohexylurée DIPEA : Diisopropyléthylamine DMF : Diméthylformamide DMSO : Diméthylsulfoxyde Ether :Ether éthylique HOBt : hydroxy-1 benzotriazole KHSO4-K2 504 : Solution aqueuse contenant 16,6 g de bisulfate de potassium et 33,3 g de sulfate de potassium pour 1 litre MeOH : Méthanol NEM : N-éthyl morpholine NMM : N-méthyl morpholine TA : Température ambiante TFA : Acide trifluoracétique. Les composés selon l'invention répondent à la formule générale suivante dans laquelle - R1 représente l'un des groupements suivants NH2CH2CH2 - SO2 BocNHCH2CH2 - SO2 Z' - NHCH2CH2 - 502 Alk-SO2 C6H5 (CH2)a - S02 - , où a P 0,1 ou 2, - Alk étant un groupement alkyle de C1 à C4; - R2 représente le groupement (CH2)b R5 dans lequel :. b I Q, 1, 2, 3 ou 4 et R5 est un atome d'hydro gène ou un radical phényle ou naphtyle ou cyclohexyle ou pyridyle; - R3 représente l'un des groupements suivants un alkyle (C2 à C6) un alcényle (C2 à C6) . un groupement A - R6 dans lequel 1) A est soit - (CH2)d , où d = 1,2,3,4 soit - CH-Alk et R6 est l'un des restes suivants - NH2, - N(Alk)2, NHW où W = groupe protecteur tel que benzyloxycarbonyle; ' - COOH, - COO-Alk, - COOCH2C6H5 ; ' - CONR7R8 où R7 et R8 sont différnets ou identiques et représentent H ou Alk ou C6H5; - OH, - O-Alk, - OCH2C6H5, - OCH2-Pyr, où Pyr représente le radical 2-, 3- ou 4 pyridyle;; - -S(O)eAlk, où e = 0, 1, 2 Alk étant un groupement alkyle de C1 à C4; 2) A est soit une liaison directe soit (CH2)d, où d = 1,2,3,4 soit -CH-Alk R6 est l'un des restes suivants phényle, naphtyle ou cycloalkyle com- portant 3 à 6 atomes de carbone, hétérocycle monocyclique tel que : imi dazole, oxazole, thiazole ou tétrazole, thiophène, pyrrole, triazole, pyridine,. cet hétérocycle étant éventuellement substitué par Alk ou CF3, Alk étant comme défini ci-dessus ; - R4 représente l'un des groupements suivants :-OH, -OAlk', NH2, NALK'2, OM, où M est un métal et Alk' représente un groupement alkyle de C1 à C6; - R2 est autre que benzoyle, lorsque R3 représente soit un alkyle, soit un benzyle, soit le groupement (CH2)4NH2 ou (CH2)4NHZ. La présente invention comprend également les sels d 'acides minéraux ou organiques des peptides de formule (I), pharmaceutiquement acceptables. Les produits selon l'invention peuvent être préparés selon les méthodes habituelles de la chimie des peptides . Plus particulièrement, à partir d'un ester alkylique inférieur de la statine,on couple, étape par étape, les divers acides aminés convenablement protégés, le produit obtenu à chaque étape étant déprotégé,, selon des procédés connus, avant d'entre soumis à un nouveau couplage, chacune des opérations de couplage étant effectuée en utilisant, soit un ester activé de 1' amino- acide à coupler, soit l'aminoacide N-protégé en présence de dicyclohexyl-carbodiimide. Le produit de départ est un ester d'alkyle inférieur de l'acide aminé C-terminal sur lequel est condensé l'aminoacide suivant de la séquence.Après libération de la fonction amine du dipeptide, on procède à l'élongation de la chaîne peptidique par couplage de l'acide aminé suivant, convenablement protégé. Chaque phase de couplage est suivie d'une opération sélective de libération de l'amine qui va entrer en ré a c t ion lors de la crémation de la liaison. peptidique suivante. Les différentes opérations de couplage sont effectuées soit en utilisant un ester activé de l'aminoacide à coupler, soit en utilisant l'aminoacide N-protégé en présence de dicyclohexyl carbodiimide. Les phases de déprotection sélective de l'amine sont effectuées selon la nature du groupe protecteur utilisé soit par hydrogénolyse, soit par acidolyse en milieu acide fort tel que l'acide trifluoracetique. Lorsque l'acide aminé à introduire dans la séquence possède dans sa chaîne latérale une fonction susceptible de réagir, il convient de bloquer -celle-ci par un groupe protecteur convenable que l'on élimine ultérieurement. La protection de l'aminoacide initia par le groupe R1 s'effectue selon des méthodes connues, avant le couplage du résidu avec l'aminoacide suivant Lorsque le composé (I) porte un substituant R3 tel que le résidu correspondant est un aminoacide non naturel, celui-ci est préparé selon des méthodes connues. I1 est ensuite couplé avec 1' aminoacide suivant selon la méthode habituelle. Les peptides (I) sous forme acide (R4 = OH) peuvent être obtenus à partir des esters correspondants par saponification en milieu alcalin dilué. On peut également préparer leurs sels (R4 I OM) . Les peptides (I) sous forme amide (R4 - NH2 ou R4 = N(Alk)2) sont obtenus directement en prenant comme produit de départ les aminoacides sous forme amide qui existent commercialement. Selon le schéma général, il e-st possible soit de préparer l'ensemble de la séquence désirée, soit de préparer 2 fragments de cette séquence que l'on couple..finalement pour obtenir le peptide désiré. Les composés de la présente invention ont une action inhibitrice sur l'activité rénine plasmatique humaine très importanteet de façon générale nettement supérieure à celle du produit naturel, la pepstatine; à ce titre ils peuvent être utilisés dans le traitement de l'hypertension artérielle. Ils possèdent également une actipn inhibitrice marquée sur les protéases acides, notamment la pepsine. On peut donc envisager l'utilisation des produits selon l'invention dans les domaines thérapeutiques où l'inhibition de tels systèmes enzymatiques est justifiée, notamment, outre l'hypertension artérielle, l'ulcère gastroduodénal et les affections inflammatoires. La présente invention a aussi pour objet des médicaments antihypertenseurs contenant les peptides de formule .(I) ou leurs sels pharmaceutiquement acceptables en tant que principe actif. Les peptides de la présente invention peuvent être utilisés en thérapeutique par voie injectable intraveineuse, intramusculaire ou sous-cutanée. Ils sont utilisés dans un solvant tel que le sérum physiologique (solution saline isotonique) ou dans un tampon, tel que le tampon phosphate; ils peuvent également être pris en suspension dans un agent diluant, aqueux ou non. aqueux, pharmaceutiquement acceptable. Chaque unité de dosage peut contenir de 1 à 1000 mg de principe actif. La quantité de principe actif à utiliser varie suivant les effets thérapeutiques recherchés, la gravité de l'affection à.traiter et la voie d'administration choisie. Elle doit être déterminée pour chaque patient et est le plus souvent comprise entre 0,100 g et 2 g de principe actif. Les exemples suivants, non limitatifs, sont donnés à titre d'illustration de la présente invention. Dans t.ous ces exemples, le pH d'es solutions dans un solvant organique est mesuré ou contrôlé en utilisant du papier pH indicateur humide. Les points de fusion indiqués (Fc) sont pris à partir de solides triturés ; ils sont mesurés au tube capillaire. Enfin, les spectres de résonance magnétique nucléaire ont été enregistrés à 250 MHz en solution dans le DMSO, l'étalon interne étant l'hexa méthyldisiloxane. Les abréviations suivantes sont.utilisées s : singulet d : doublet m : multiplet ou massif. Les déplacements chimiques (delta) sont me-surés en ppm. EXEMPLE 1 Boc-Phe-Met-Sta-Ala-Sta-Ome (SR 42572) 1. Z-Ala-Sta-OMe. On dissout à température ambiante dans 35 ml de DMF, 1,44 g de H-Sta-OMe, TFA, 595 mg de NEM, 2,06 g de Z-Ala-OTcp et 1,29 g de HOBt. On ajuste le pH à 6-7 au papier.pH, si nécessaire par NEM, et agite à TA durant 48 h. 'On évapore le DMF au bain-maria à 400 sous 0,01 mm. On reprend l'huile résiduelle dans 50 ml d'AcOEt et lave celui-ci successivement avec KHSO4-K2SO4 5%, NaCl/H20, NaHCO3 5, N aCl/H20, sèche sur MgSO4 et évapore le solvant. On reprend dans l'éther, un solide apparaît. Après une heure au réfrigérateur, on essore et sèche. Rendement : 1,46 g (86%) ; Fc : 117-120 C. 2. H-Ala-Sta-Oe On dissout 1,46 g de Z-Ala-Sta-OMe dans 20 ml de MeOH puis, à TA, on ajoute 1,03 g de formiate d'ammonium, agite jusqu'à dissolution, puis ajoute 400 mg de Pd/C 10% et agite 5 min à TA. Après 5 min, un contrôle en CCM montre la disparition du produit de départ. Le pH est de 8 au papier pH. On filtre l'ensemble sur célite et évapore le solvant. On filtre le méthanol sur une colonne de résine Amberlite IR 45 (OH) et évapore le méthanol On reprend dans l'éther et évapore à sec puis on dissout dans du CH2CL2, filtre l'insoluble et évapore à sec pour obtenir une poudre blanche. Rendement : 810 mg (75%) ; Fc : 123-1340C. 3. Boc-Sta-Ala-Sta-OMe On dissout successivement dans 50 ml de CH2C12 à T 960 mg de H-Ala-Sta -OMe, 1 g de Boc-Sta-OH, 420 mg de HONSu, 750 mg de DCCI. Très rapidement un précipité blanc apparaît. On agite à TA, apres 7 h on filtre la DCU formée et lave celle-ci avec CH2Cl2. On lave la solution organique successivement avec KHSO4-K2SO4 (5% H2O), NaHCO3 (5Z H20) . On sèche sur MgSO4, filtre et évapore le solvant. Lé produit est solubilisé dans le minimum de mélange chloroforme-MeOH 97,5/2,5 et déposé en tête d'une colonne de gel de silice, on élue avec le même mélange et fractisonne Ur lot de produit pur et deux lots de produit à recycler dans les mêmes conditions sont recueillis, d'où un rendement global : Rendement : 67% ; Fc : 95-980C. 4. H-Sta-Ala-Sta-OMe, TFA On traite à 0 C par 3,5 ml de TFA, 200 mg de Boc-Sta-Ala-Sta-OMe. On laisse agiter 20 min à TA. Puis, après concentration sous vide, on épuise le résidu huileux par ajouts et concentrations successives d'éther anhydre. On obtient un solide blanc. Rendement : 170 mg ; Fc : 148-1510C. 5. Boc-Met-Sta-Aîa-Sta-OMe. Dans 5 ml de dioxanne, on prépare une solution de 149 mg de DCCI, 88 mg de HOBt, 100 mg de DIPEA et 119 mg de DCCI. Après 30 min, on verse dans cette solution le sel de TPA obtenu à l'étape 4 et on ajuste le pH vers 7 par addition de DIPEA. Après 24 h, on filtre le solide, évapore à siccité, ajoute de l'eau, extrait par 3 volumes d'AcOEt, lave par une solution de K2C03, de l'eau, par une solution saline saturée puis sèche sur MgS04. Après évaporation. on purifie par filtration sur gel.de silice en éluant par AcOEt. Rendement : 127 mg (51%). 6. H-Met-Sta-Ala-Sta-OMe, TFA. 120 mg du peptide précédent sont traités à 0 C par 3 ml de TFA. 7. SR 42572. Dans 5 ml de CH2C12, on prépare une solution de 85 mg de Boc-Phe-ONp et 34 mg de HOBt en présence de 20 mg de NEM. Après 15 min, on verse cette solution sur le sel de TFA sec obtenu à l'étape précédente et on neutralise par NEM. Après 24 h, on évapore à siccité, ajoute.de l'eau et AcOEt, lave par une solution de KHS04, de l'eau, de l'eau saline, puis on sèche sur MgSO4. Le résidu obtenu est purifié par chromatographie sur gel de silice avec AcOEt comme éluant. Après trituration dans l'hexane, on obtient 90 mg de poudre blanche. Rendement : 61Z. Spectre de RMN Delta Aspect Intégration Attribution 8,05-6,90 m 10 H 4 NH-CO 1 NH-CO2 5 H aromatiques 4,95-4,78 m 2 H OH (Sta) 4,41-4,00 m 3 H CH (alpha) 3,86-3,67 m 4 H CHOH et CHNR (.Sta) 3,48 s 3 H O-CH3 1,96 s 3 H S-CH3 1,62-0,67 m 30 H H aliphatiques (CH3)3C (CH3)2CH (CH3)2-CH-CH2 CH3(Ala) EXEMPLE 2 Boc-Phe-Met(02)-Sta-Ala-Sta-OMe (SR 42845) 1. H-Sta-Ala-Sta-OMe. TFA. Préparé selon l'exemple 1 à partir de 103,5 mg de Boc-Sta-Ala-Sta-OMe. 2. Boc-Met(02)-Sta-Ala-Sta-OMe. Sur le solide blanc de sel de TFA obtenu, on ajoute 10 ml de DMF et ramène le pH à 7 par de la NMM. A -50C, on introduit 56,3 mg de Boc-Met(02)-OH, 45,9 mg de HOBT et 45,4 mg de DCCI. Après contrôle du pH, on laisse agiter 6 jdurs à TA. On ajoute alors 1 goutte d'AcOH sur le mélange réactionnel et laisse agiter 30 min puis filtre la DCU ; le filtrat est repris par un mélange AcOH-butanol- 1 à 75/25 en volume; la phase organique est lavée successivement par une solution saturée de NaCl, par une solution à 1% de KHS04, par de l'eau, par une solution à 1% de NaHCO3 et enfin, à l'eau. Apres séchage et concentration, on récupère 120 mg d'un résidu solide blanc que l'on chromatographie sur silice p.ar AcOEt puis par un mélange AcOEt-MeOH à 9/1 en volume. On obtient 60 mg d'un solide blanc amorphe précipité dans l'hexane. 3. SR 42845 On ajoute les 60 mg du produit obtenu à l'étape précédente à 2 ml de TFA à 0 C et on laisse agiter 20 min à TA. Après concentration sous vide, on épuise le résidu huileux par ajouts et concentrations successives d'éther anhydre. Sur le solide blanc de sel de TFA ainsi obtenu, on ajoute 10 ml de CH2Cl2 et ramène le pH à 7 par la NMM. On introduit alors 33,4 mg de Boc-Phe-ONp et 14 mg d'HOBt; après contrôle du pH, on laisse sous agitation 72 h à TA. La solution est diluée par ajout de CH2C12 et la phase organique est lavée successivement par une solution saturée de ClNa, par une solution à 1% de KHSO4, par de l'eau, par une-solution à 1% de NaHC03, puis à l'eau.Après séchage et concentration, on récupère 58 mg d'un résidu solide que l'on chromatographie sur silice par AcOEt puis par un mélange AcOEt-MeOH à 9/1 en volume. On obtient 37 mg d'un solide blanc amorphe précipité dans l'hexane. Spectre de RMN. Delta Aspect Intégration Attribution 6,9 - 7,35 5 d, 7,6 - 7,85 j=8 Hz 5H 5NH 8,05 7,1 - 7,25 m 5H H aromatiques (Phe) 4,8 - 5 m 2H OH (Sta) 2,9 s 2H CH3-SO2 3,45 s 3H OCH3 1,25 s 9H C(CH3)3 EXEMPLE 3 (R,S) Boc-Phe-Hph-Sta-Ala-Sta-OMe (SR 42727). 1. Boc-Ala-Sta-OMe. 3 4,1 g de H-Sta-OMe, TFA sont introduits dans 250 cm 3 de CH2Cl2 ; on ajoute successivement 1,7 cm de NEM, 3,86g de Boc-Ala-ONSu et 2 g de HOBt, puis on ajuste à pH 7 par addition de NEM et on agite une nuit à TA. Le mélange est lavé 2 fois par 500 cm3 d'une solution saturée de NaHCO3, 3 2 fois par 500 cm d'une solution de KHSO4-K2S04 e t par 500 cm3 d'une solution saturée de ClNa puis séchée sur MgSO4 et évaporée à sec sous pression réduite. Rendement : 3,86 g (74,7). 2. (R,S) Hph, HCl. Le chlorhydrate d'homophénylalanine est préparé selon la méthode décrite dans J. Med. Chem., 1968, 11, 1258-1262. 3. (R,S) Boc-Hph, HCl. Dans 50 ml d'eau, on mélange 2,8 g du chlorhydrate précédent et de la triéthylamine pour neutraliser à pH 7-8. On ajoute ensuite lentement, à environ 30-400C, 25 ml de dioxane dans lesquels on a préalablement dissous 3,12 g d'anhydride de terbutyloxycarbonyle (Boc)2O puis on laisse sous agitation une nuit TA. La solution obtenue est diluée à l'eau, lavée 2 fois à l'éther ; on on ajoute AcOEt puis on amène progressivement le pH de la phase aqueuse vers 2,5-3 par addition d'H2S04, 6N. Après 3 extractions par AcOEt et lavage de la phase organique à l'eau saturée de NaCl, on sèche sur NaS04, puis concentre. On récupère 1 g.d'un solide blanc amorphe qui se précipite dans l'hexane. 4. (R,S) Roc-Hoh-Sta-OMe. A 5ml de TFA à O 0C, on ajoute 434 mg de Boc-Sta-OMe et laisse agiter 20 min à 0 C. Après concentration sous vide à TA, on épuise le résidu huileux par ajouts et concentrations successives d'éther anhydre. Au résidu solide blanc ainsi obtenu, on ajoute 15 nl de CH2C12 et ramène le pH à 7 par de la NMM, puis on ajoute 309,5 mg de DCCI, 229,5 mg d'HOBt et 419 mg de Boc-Hph, HCl précédemment obtenu. On vérifie le pH (pH 7) et laisse agiter 72 h à TA. On filtre l'insoluble, et le filtrat chlorométhylénique est lavé successivement par une solution saturée de ClNa, une solution à li de KHS04, de l'eau, une solution à 1% de NaHCO , de l'eau. Après séchage et concentration, 3 on obtient 900 mg d'un résidu huileux que l'on chremato- graphie sur silice fine par AcOEt. On obtient 230 mg d'un solide blanc amorphe précipité dans l'hexane. 5. (R,S) Boc-Hph-Sta-Ala-Sta-OMe. On ajoute 182 mg de Boc-Ala-Sta-OMe obtenu à l'étape 1 à 4 ml de TFA à O C, on agite 30 min à OOC, puis on concentre l'excès de TFA ; le résidu huileux est ensuite épuisé par ajouts et concentrations successives d'éther anhydre. Il reste un résidu blanc auquel on ajoute 10 ml de CH2 C 12, le pH est amené à 7 par de la NMM, puis on ajoute 76,5 mg d'HOBt, 103,2 mg de DCCI et 220 mg du produit obtenu à l'étape 4. On ve.rifie le pH (7) et laisse agiter 72 h à TA. L'insoluble est filtré, puis le filtrat est lavé par une solution saturée de NaCl, une solution à l % de KHS04, de l'eau, une solution à l Z de NaHCO3, de l'eau. Après séchage et concentration, on récupère 364 mg d'un résidu que l'un chromatographie sur silice fine par AcOEt. On obtient 190 mg d'un solide blanc .amorphe qui est un mélange d'isomères. 6. SR 42727. l70 mg du produit obtenu à l'étape précédente sont ajoutés à 3 ml de TFA à OOC ; après 30 min d'agitation à 0 C, on concentre.l'excès de TFA et le résidu huileux est épuisé par ajouts et concentrations successives d'éther anhydre. Au résidu blanc obtenu, on ajoute 10 ml de CH2Cl2 et de la NMM pour amener le pH à 7, puis 96,6 mg de Boc-Phe-ONp et 38,3 mg d'HOBt ; on ajuste à pH 7 et laisse agiter 120 h à TA. La solution est diluée par CH2C12 et la phase organique est lavée successivement par une solution de NaCl, une solution à 1 Z de KHSO4, de l'eau, une solution à 1 Z deNaHCO3, de l'eau. auprès séchage et concentration, on récupère 300 mg d'un résidu que l'on chromatographie sur silice fine par AcOEt puis par un mélange AcOEt-MeOH à 9/1 en volume. On obtient 170 mg d'un solide b-lanc amorphe. C'est le produit attendu (SR 42727? sous forme d'un mélange d'isomères au niveau de Hph.. Spectre de RMN. Delta | Aspect Intégration Attribution 7 - 8,1 m 15 H 5NH 10 R aromatiques (Phe, Hph) 4,75 et 4,9 d, J=4 Hz 2 H 2 OH (Sta) 5=4 Hz 3,5 s 3 H OCH3 1,25 s 9 H C(cH3)3 EXEMPLE 4 Boc-Phe-(piMe)His-Sta-Ala-Sta-OMe (SR 43061). Ce produit est préparé à partir de lthistidine protégée par 2 groupements Boc dont l'un est sur la fonction amine et l'autre sur l'azote télé de l'histidine: 1. Bis(Boc)His-Sta-OMe. 3,7 g de Boc-Sta-OMe sont mis -à réagir avec 15 ml de TFA entre 0 C et +50C pendant 20 min. On concentre, reprend 3 fois à l'éther anhydre et concentre au maximum. Le sel de TFA obtenu est placé dans 150 ml de CH2Cl2, amené à pH 7 par le DIPEA sous refroidissement. On ajoute alors 6,6 g de Bis-Boc-His sous forme de sel de DCHA, amène à pH 7 par DIPEA, rajoute 6,3 g de Bop et agite 3 jours à TA à pH 7. On lave à l'eau salée, à l'eau bicair- bonatée puis à l'eau, sèche et concentre. Par chromatographie sur silice avec AcOEt comme éluant, on recueille 7,8g de poudre blanche. 2. Boc-Phe-(iMe)His-Sta-OH. On porte à reflux doux le mélange de 1 g du produit obtenu à l'étape précédente, 10 ml de DMF anhydre et 5 ml d'iodure de méthyle; après 48 h de repos, on concentre sous vide de pompe. En reprenant à l'éther anhydre, on obtient une gomme jaune qui durcit dans AcOEt et se concrétise dans l'éther anhydre. On essore et sèche au pistolet. On ajoute la partie concrétisée et les jus mères concentrés à 20 ml de TFA à 00C..On agite 20 min, concentre, traite à l'éther anhydre 3 fois et concentre au maximum. Le sel de TFA obtenu est dissous dans 25 mu de CH2C12 et amené à pH 7 avec de la NMM. On y ajoute 724,5 mg de Boc-Phe-ONp et 299 mg d'HOBt et on agite 4 jours à TA. On lave à l'eau salée, à l'eau bicarbonatée puis à l'eau, sèche et concentre. Par chromatographie sur silice et élution par AcOEt-MeOH à 8/2 en volume, on recueille 2 fractions polaires concrétisées dans l'éther anhydre. On obtient 639 mg de produit. On effectue ensuite une saponification à partir de 300 mg auxquels on ajoute 13 ml de MeOH, 2 ml d'eau, 167 mg de baryte hydratée puis, après 1 h, l'ester a disparu en CCM. On ajoute des petits morceaux de carboglace jusqu'à pH inférieur à 7, on essore sur célite, rince au méthanol, concentre le filtrat ; le résidu est repris avec le minimum de MeOH tiède, filtré et concentré, on obtient ainsi 248 mg de poudre blanche. 3. SR 43061. Le composé obtenu à l'étape précédente est couplé avec Boc-Ala-Sta-OMe en opérant selon les méthodes précédemment décrites. Spectre de RMN. Delta Aspect Intégration Attribution 6,9 ; 7,4 7,6 ; 7,8 5 d, 8,05 J=8 Hz 5H NH 7,1 - 7,25 m 5d 5 H aromatiques (Phe) 6,7 et 7,4 2 s 2H 2 H imidazoliques 3,5 s 3H OCH3 3,55 s 3H (piCH3)His 1,25 s 9H C(CR3)3 EXEMPLE 5 Boc-Phe-(tauMe)His-Sta-Ala-Sta-OMe (SR 43062). 1. La (tauMe)His est préparée selon la méthode décrite dans J.R. Neth. Chem. Soc., 1978, 97, 293-295. 2. (tauMe)His-OMe, 2 HC1. 4,5 g du dichlorhydrate du produit précédent sont dissous dans 50 ml de MeOH; on sature par HC1 gazeux à 10-15"C puis laisse sous agitation à TA pendant 72 h. On concentre à sec, reprend à l'éther 2 fois puis le résidu est repris dans l'acétone, il cristallise, après essorage, on obtient 4 g. 3. Boc-Phe-(tauMe)His-OMe. 508 mg du produit précédent sont placés dans 25 ml de CH2Cl 2 et amenés à pH 7 par addition de DIPEA. On.ajoute 772 mg de Boc-ne-ONp et 306 mg d'HORk. Après 2 jours d'agitation à TA, on lave à l'eau glacée puis sèche et concentre. Par chromatographie sur silice et solution par un mélange AcOET-MeOH à 9/1 en - volume, on recueille 849 mg du produit attendu. 4. Boc-Phe(tauMe)His. 768 mg du produit précédent sont dissous dans 33 ml de MeOH et 5 ml d'eau auxquels on ajoute 561 mg de baryte hydratée. Après 1 h on ajoute 280 mg de baryte et laisse encore 1 h sous agitation. On additionne alors des petits morceaux de carboglace jusqutà ce que le pH soit inférieur à 7, puis on essore sur célite, rince par MeOH et concentre. On reprend par MeOH, filtre le léger insoluble et concentre. On reprend à l'éther puis essore pour obtenir 634 mg de produit blanc. 5. H-Sta-Ala-Sta-OMe, TFA. Il est préparé selon la méthode décrite à l'exemple 1 à partir de 130 mg de Boc-Sta-Ala-Sta-OMe. 6. Boc-Phe-(tauMe)His-Sta-Ala-Sta-OMe. Au sel de TFA précédemment obtenu placé dans 10 ml de CH2Cl2, on ajoute du DIPEA pour amener pH à 7 ; puis on ajoute 124 mg de Bop et 104 mg du produit obtenu à l'étape 4, on ajoute 3 ml de DMF anhydre et laisse agiter 72 h à pH 7. On lave à l'eau salée puis au bicarbonate dilué et à l'eau, on sèche et concentre. On effectue une chromatographie sur silice en éluant par un mélange AcOEt-MeOH à 9/1 en volume. On isole une fraction de 80 mg de produit blanc. Spectre de RMN. t Delta Aspect Intégration Attribution 7,0 ; 7,3 5d, 5 H 5 NR 7,4; 7,95 J=8 Hz 8,1 Jt10 Hz J=6 Hz J=6 Hz J=8 Hz 6,8 et 7,4 2 s 2 H 2 H imidazoliques centré à 4,95 m 2 H 2 OH (Sta) 7,1 - 7,3 m 5 H 5 H Aromatiques (Phe) 3,5 d 6 H 0CR3 (tauCH3)His 1,25 s 9 H C(CH3?3 EXEMPLE 6 Boc-Phe-(cyclohexyl)Gly-Sta-Ala-Sta-OMe (SR 43091). La N-Boc(2-alpha cyclohexyl)glycine est préparée à partir de alpha phényl glycine par hydrogénation catalytique sur catalyseur d'Adams (Pt 02). On opère ensuite selon les méthodes précédemment décrites pour préparer le SR 43091. Spectre de RMN. Delta Aspect Intégration Attribution 6,9-7,85 m 5 H 5 NH centré à 7,2 m 5 H 5 H aromatiques 4,8 et 2 d, J=5 Hz 2 H 2 OH (Sta) 4,95 J=4 Hz 3,5 s 3 H OCH3 1,25 s 9 H C(CH3)3 EXEMPLE 7 Boc-Phe(Pyr-3)Ala-Sta-Ala-Sta-OMe & 43429. 1. Acétamido-2 éthoxycarbonyl-2(pyridy1-3)-3 proprionate d'éthyle. A 11 g d'une solution de sodium dans 300 ml de EtOH, on ajoute 48 g d'acétamidomalonate de diéthyle puis, en portant à reflux, on additionne 36 g de chlorhydrate de chlorométhyl-3 pyridine, on conserve 5 h à reflux. On évapore EtOH, reprend par l'eau, extrait, sèche, concentre et chromatographie sur silice. Le mélange CH2C12-AcOEt à 60/40 en volume élue 23 g du composé attendu. 2. (Pyr-3)Ala,2HCl 15 g du diester précédent sont portés à reflux dans 200 m d'HCl 5N pendant 5 h. On concentre à sec, ajoute EtOH, évapore. Le procédé est réitéré jusqu'à recristallisation du dichlorhydrate : 15 g. 3. Boc(Pyr-3)Ala. 1 g du dichlorhydrate précédent est dissous dans un mélange à volume égal eau-dioxanne. On ajoute 350 mg de soude et 1 g (Boc)20 puis on agite une nuit à TA. Le dioxanne est évaporé, on ajoute de l'eau, neutralise par 8 g d'amberlite CG 120 1 (forme acide), agite 1 -h à TA puis le milieu est mis sur une colonne contenant 8 g de la même résine. On élue par de l'eau distillée jusqu'à obtenir pH 5 puis élue par une solution d'ammoniaque à 4X dans l'eau distillée. Les eaux sont concentrées. On recueille 0,69 g du produit attendu. 4. Boc-(Pyr-3)Ala-Sta-OMe. On agite pendant 3 jours à TA dans 10 ml d'acétonitrile un mélange de 465 mg de Sta-OMe, TFA, 500 mg de Boc-(Pyr-3)-Ala en présence de 780 mg de Bop, le milieu étant maintenu vers pH 7 par addition de DIPEA. On évapore alors à siccité, ajoute de l'eau, extrait par AcOEt, lave par .une solution de Na2C03, de l'eau, de l'eau saline, puis on sèche sur MgSO4 et évapore à siccité. Le résidu est chromatographié sur gel de silice par un mélange éluant CH2Cl2-AcOEt à 1/9 en volume qui élue successivement - l'isomère A le moins polaire : 150 mg ; - l'isomère B le plus polaire : 180 mg. 5. SR 43429. On obtient le composé attendu sous forme d'un isomère pur, à partir de l'isomère B, en utilisant les méthodes de couplage habituelles. Spectre de RMX. Delta Aspect Intégration Attribution 8,41 s 1 H H2(PYr) 8,32 d, J=4 Hz 1 H H6(pyr) 8,02-7,33 m 6 H NHCO, H (pyr) 7,27-7,04 m 5 H C6H5 6,87 d, J=8 Hz 1 H NH-C02 4,97 d, J=4 Hz 1 H OH 1 4,85 d, J=4 Hz 1 H OH 4,64 - 3,90 m 3 H CH alpha ((Ala, Phe, (pyr - 3)Ala) 3,90 - 3,67 m 4 H CHNH, CHOH (Sta) 3,50 s 3 H O CH3 3,10-2,47 m 4 H CH2C5H4N CH2C6H5 2,96-1,90 m 4 H CH2CO (Sta) 1,57-1,00 m 18 K (CH3)3C, CH3 (Ala) CH, CH (Sta) 0,87-0,66 m 12 H CH3 (Sta) En utilisant les mêmes méthodes de couplage, on a préparé les composés suivants . SR Formule 42823 Boc-Phe-Phg-Sta-Ala-Sta-OMe 42928 Boc-Phe-Asn-Sta-Ala-Sta-OMe 42939 Boc-Phe.(PheCH20)Ser-Sta-Ala-Sta-OMe 42941 (R,S) Boc-Phe-(pentyl)Ala-Sta-Ala-Sta-OMe 42980 Boc-Phe-Gln-Sta-Ala-Sta-OMe 43075 (R,S) Boc-Phe-(thiényl-2)Gly-Sta-Ala-Sta-OMe 43266 Boc-Phe-(Ph)Gln-Sta-Ala-Sta-OMe 43281 Boc-Phe-(Ph)Asn-Sta-Ala-Sta-OMe 43297 Boc-Phe-(CH3)3CO)Ser-Sta-Ala-Sta-OMe 43365 Boc-Phe-(CH3CH2O)Ser-Sta-Ala-Sta-OMe 43391 Boc-Phe-(tauEt-His)-Sta-Ala-Sta-OMe Ces produits sont caractérisés par leur spectre de RMN. SR 42823 Delta Aspect Intégration Attribution 7-8,3 m 15 H 5 NH 10 H aromatiques 4,8 et 5 2 d, J=4 Hz 2 H 2 OH (Sta) 3,5 s 3 H OCH3 1,2 s 9 H C(CH3)3 SR 42928 Delta Aspect Intégration Attribution 6,85-8,25 m -12 H 5 NH 5 H aromatiques CONR2 5,8 et 5,9 2 d, 2 H OH (Sta) J=6 Hz 1,25 s 9 H C(CH3)3 SR 42939 Delta Aspect Intégration Attribution 6,9-8,1 m 15 H 5 NH 10 H aromatiques 4,85 et 2 d, 2 H OH (Sta) 4,95 3=5 Hz 4,45 s 2 H OCH2C6H5 3,5 s 3 H OCH3 1,25 s 9 H - C(CH3)3 SR 42941 Delta Aspect Intégration Attribution 6,9-7,9 m 10 H 5 NH 5 H aromatiques 4,75-4,9 m 2 H OH (Sta) 3,5 s 3 H 0CR3 1,25 s 9 H C(CH3)3 SR 42980 Delta Aspect Intégration Attribution 6,75-8 m 12 H 5 NH 5 H aromatiques NH2 (Gln) 4.85 et 2 d, 2 H OH (Sta) 4,95 J=5 Hz 3,5 s 3 H OCH3 1,25 s 9 H C(CH3)3 SR 43075 Delta Aspect - Intégration Attribution 6,9-8,5 m - 13 H 5 NH 5 H aromatiques 3 @ H thiophéniques 4,8-4,9 m 2 H . . OH (Sta > 3,5 s 3 H OCH3 1,25 s 9 H C(CH3)3 SR 43266 Delta Aspect Intégration Attribution 9,8 s 1 H NH (NH C6H5) 6,9-9,1 m 15 H 5 NH 10 H aromatiques 4,85-5 m 2 H OH (Sta) 3,5 s 3 H 0CR3 1,25 -s 9 H C(CH3)3 SR 43281 Delta Aspect Intégration Attribution 10,1 s l H NH (NH-C6H5), 6,95-8,4 m complexe 15 H 5 NH 10 H aromatiques 4,8 et 2 d, 2 H 2 OH (Sta) 4,95 J=6 Hz 3,8 s large 2 H 2 H alpha (Sta) 3,5 s 3 H CH ester 3 1,25 s 9 H Boc SR 43297 Delta Aspect Intégration Attribution 7 à 7,85 m complexe 10 H 5 NH 5 aromatiques 4,6 à 5 m 2 H OH (Sta) 3,8 s large 2 H 2 H alpha (Sta) 3,5 s 3 H CH3 ester 1,25 s 9 H Boc 1,05et 1 2 pics 9 H t.bu 0 isomères SR 43365 Delta Aspect Intégration Attribution 7,2 m 5 H aromatiques ( 6,95 ( 7,30 5 d, 5 H NH ( 7,45 J=8 Hz ( 7,80 ( 8,0 4,8-4,95 2 d, 2 H OH (Sta). J=4 Hz ( 3,75 4 H alpha ( 4,2 3m 4 H (Phe, Ser, Sta) ( 4,4 3,5 s 3 H OCH3 3,35 quadruplet OCH2CH3 1,25 s 9 H Boc 1,0 t 3 H OCH2CH3 SR 43391 Delta Aspect Intégration Attribution 6,8 à 8,2 m complexe 12 H 5 NH, 5 aromatiques, 2 His 4,95 m complexe 2 H OH (Sta) 3,5 s 3 H OCH3 ester 1,25 s 9 H Boc Les produits selon l'invention ont été étudiés en ce qui concerne leurs propriétés thérapeutiques et no tam- ment leur action inhibitrice enzymatique. Plus particulièrement, les composés ont été évalués "in vitro" sur l'inhibition de l'activité Rénine Plasmatique Humaine (A.R.P.! I - METHODE. Notre méthode est inspirée de GUYENE (J. Clin. Endocrinol. Metab., 1976, 43, 1301, dans la mesure. où l'inhibition de 1'A.R.P. est evaluée à partir d'un pool de plasmas humains, riche en rénine (15 à 20 mg d'angiotensine I libérée par millilitre et par heure) incubée à 370C en présence de concentrations croissantes du produit à étudier. L'angiotensine I libérée au cours de la réaction (les plasmas humains contiennent et. le substrat l'angiotensine, et l'enzyme : la rénine) est mesurée par dosage radio-immunologique à l'aide d'un kit. Bien entendu, un inhibiteur de l-'enzyme de conversion du:PMSF (phénylméthylsulfonyl)fluorure est rajouté au milieu d'incubation. Les expériences ont été effectuées à pH .7,4 qui est le pu physiologique (tampon phosphate, incubation 60 min). Les résultats sont exprimés par la dose de. composé évaiuée en moles, qui inhibe de 50Z (IC50) l'Activité Rénine Plasmatique Humaine présente en l'absence d' inhi- biteur. On prépare une solution d'acide acétique dans. le méthanol (19/1 en volume) et une solution de soude dans le méthanol (2/1 en volume). Dans un mélange équivolumique de ces 2 solutions, on prépare une solution mère du peptide à O,OOlM. Les dilutions ultérieures du peptide sont alors effectuées dans le tampon adéquat selon le protocole décrit ci-dessus. La quantité de solvant présente dans une solution du peptide à une concentration inférieure à O,OOOlM n'interfère pas avec les résultats. II - RESULTATS. Les résultats obtenus avec divers produits de l'-invention sont représentés dans le tableau suivant où figurent les IC50 de chaque molécule en ce qui concerne leur inhibition de l'Activité Rénine Plasmatique Humaine à pH 7,4. De.5 à 10 doses ont été nécessaires pour déterminer ces IC50. La pepstatine, en tant que substance de référence, est toujours testée en parallèle dans chaque expérience. Les résultats sont exprimés par leur valeur logarithmique (-Log IC50). Inhibition A.R.P. Humaine No. SR -Log .1C50 M pH 7,4 Pepstatine 4,92 42 572 6,50 42 .727 4,69 42 823 7,03 42 845 5 42 928 5,92 42 -939 6,76 42 941 6,26 42 980 6,50 43 061 5,52 43 062 7,11 43 075 .6,60 43 091 6,82 43 266 4,85 La toxicité des produits selon l'invention est compatible avec leur utilisation en thérapeutique. REVENDICATIONS 1. Dérivés peptidiquesde formule dans laquelle - R1 représente l'un des groupements suivants NH2CH2CH2 - SO2 BocNHCH2CH2 - SO2 Z-NHCH2CH2 - SO2 Alk-SO2 C6H5 - (CH2)a - S02 - , où a = 0,1 ou 2, -Alk étant un groupement alkyle de Cl à C4; - R2 représente le groupement (CH2)b R5 dans lequel :. b = O, 1, 2, 3 ou 4 et R5 est un atome d'hydrogène ou un radical phényle ou naphtyle ou cyclohexyle ou pyridyle; - R3 représente l'un des groupements suivants un alkyle (C2 à C6) un alcényle (C2 à C6) . un groupement A - R6 dans lequel 1) A est soit - (CH2)d, où d 1 1,2,3,4 soit - CH Alk et R6 est l'un des restes suivantes - NH2 - (N(Alk)2, NHW où W = groupe protecteur tel que benzyloxycarbonyle; - COOH, - C00-Alk, - COOCH2C6H5; ' - CONR7R8 où R7 et R8 sont différents ou identiques et représentent H ou Alk ou C6H5; - OH, - O-Alk, - OCH2C6H5, - OCH2-Pyr, où Pyr représente le radical 2-, 3- ou - .4-pyridyle;; - S(O) Alk , où e 8 O, 1, 2 Alk étant un groupement alkyle en C1 à C4; 2) A est soit une liaison directe soit (CH2)d, où d - 1, 2, 3, 4 soit -CH-Alk R6 est l'un des restes suivants phényle, naphtyle ou cycloalkyle comportant 3 à 6 atomes de carbone hétérocycle monocyclique tel que : imidazole, oxazole, thiazole ou tétrazole, thiophène, pyrrole, triazole, pyridine, cet hétérocycle étant éventuellement substitué par Alk ou CF3, Alk étant comme défini ci-dessus ; - R4 représente l'un des groupements suivants .: -OH, -OAlk', -NH2,-NAlk'2, -, où M est un métal et Alk' repré sente un groupement alkyle de C1 à C6; - R2 est autre que benzyle, lorsque R3 représente soit un alkyle, soit un benzyle, soit le groupement -(CH2)4NH2 ou -(CH2)4NHZ, ou un.de ses sels d'acides minéraux ou orga niques pharmaceutiquement acceptables. 2. Procédé de préparation d'un peptide selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'à partir d'un ester alkylique inférieur de la statine on couple, étape par étape, les divers acides aminés convenablement protégés, le produit obtenu à chaque étape étant déprotégé, selon des procédés connus, avant d'être soumis à un nouveau couplage, chacune des opérations de couplage étant effec tuée en utilisant soit un ester activé de l'aminoacide à coupler, soit l'aminoacide N-protégé en présence de dicyclohexylcarbodiimide. 3. Compositions pharmaceutiques caractérisées en ce qu'elles contiennent un produit selon la revendication 1 en tant qu'ingrédient actif. 4. Compositions pharmaceutiques selon la revendication 3, utilisables notamment pour le traitement de la tension artérielle, caractérisées en ce q-utelles contiennent de 1 à 1000 mg de produit selon la revendication 1 par unité de dosage en mélange avec un excipient pharmaceutique.