FR 2583749 A1 19861226 FR 8509631 A 19850625 CHLORHYDRATE DE L'ACIDE 4-AMINO-3-OXY-3-PHENYLBUTANOIQUE, SON PROCEDE D'OBTENTION ET PREPARATION MEDICAMENTEUSE A BASE DE CE PRODUIT POSSEDANT UNE ACTION PSYCHOTROPE ET HYPERTENSIVE La présente invention concerne le chlorhydrate de l'acide 4-amino 3-oxy-3-phénjlbutyrique, son procédé d'obtention et une préparation médicamenteuse a base de ce produit possédant une action nootrope et hypertensive. Parmi les dernières réalisations de la thérapeutique médicamenteuse des pathologies nerveuses et psychiques, on compte la création et la mise en pratique médicale d'une nouvelle classe d'agents psychotropes et plus particumièrement nootropes, dont le piracétam (Nootropyl de la firme UCB, Belgique) est plus particulièrement à l'origine. L'action nootrope du piracétam se manifeste par son influence positive sur la memoire et les processus d'apprentissage et par son effet yrutecteur lors des perturbations de l'activité du système nerveux central de différentes origines (perturbation du métabolisme du tissu nerveux -de la synthese protéique et de celle de l'acide ribonucléique- ARN, de l'équilibre énergétique; hypoxie, surcharge émotionnelle, perturbation de la circulation cérébrale). Le piracétam est utilisé en pédiatrie, gériatrie, psychiatrie, aussi bien pour le traitement des affections psycho-organiques de différentes origines, que pour exercer des actions correctrices en neurothérapie. Par sa structure, le piracétam représente l'acide y-aminobuta- noîque substitué en N par le lactame (AGAB). Les autres produits à base d'AGAB -gammalon (amynalon), pantogam- présentent également certaines propriétés qui se rapprochent de celles du piracétam, mais qui sont moins avantageuses quant à l'activité et l'éventail de l'action thérapeutique, ainsi que par la présence d'effets secondaires. Ainsi donc, à l'heure actuelle, le choix des agents nootropes se limite pratiquement au seul piracétam. Cela explique la recherche de nouveaux composés similaires pour creer un arsenal d'agents nootropes. Le problème, posé dans la présente invention, consiste en la création d'un produit, possédant des propriétés nootropes marquees et à partir duquel il serait possible d'obtenir une préparation médicamenteuse ayant une action nootrope. Ce problème se voit résolu par la préparation du chlorhydrate de l'acide 4-amino-3-oxy-3-phénylbutanoïque, de formule: Ce produit n'est pas décrit dans la littérature et il est nouveau. Le chlorhydrate de l'acide 4-amino-3-oxy-3-phénylbutanoïque est un produit biologiquement actif, manifestant des propriétés nootropes, ainsi qu'une action hypertensive, et qui peut trouver une application en médecine. Suivant l'invention, le chlorhydrate de l'acide 4-amino-3-oxy-3phénylbutanoïque de la formule sus-mentionnée esteobtenu par le procédé, consistant à faire réagir I'w-actylaminoacétophPnone avec l'éther diéthylique de l'acide bromomalonique en presence de zinc en milieu solvant organique inerte sous chauffage avec formation de l'éther éthylique de l'acide 4-acétylamino-3-oxy-3-phényl-2-éthoxycarbonyl butanolque de formule suivante: que l'on soumet par la suite à une réaction avec une solution aqueuse d'acide chlorhydrique. On réalise la réaction de I'w-acetylaminoacétophenone avec l'éther diéthylique de l'acide bromomalonique a une température de 30 à 900C. A titre de solvant, on peut utiliser l'éther diéthylique, le benzène, le toluène, le tétrahydrofuranne, ainsi que d'autres solvants appropriés. La quantité des agents chimiques initiaux -de 1'#-acétylaminoacé- tophénone, de l'éther diéthylique de l'acide bromomalonique et du zinc peut être stoechiométrique, mais il est préférable de prendre ces agents dans un rapport molaire de 1/1,1/1,5, car dans ce cas le rendement en produit de la réaction augmente. L'ether éthylique de l'acide 4-acétylamino-3-oxy-3-phényl-2- éthoxycarbonylbutanoîque qui se forme a la suite de la réaction est soumis sans purification complémentaire a l'action de la solution aqueuse d'acide chlorhydrique. Cette réaction peut s'effectuer à une température de 25 à 500C, mais elle se réalise plus rapidement et de facon la plus efficace dans les conditions d'ébullition du mélange de réaction. La réaction entre l'éther sus-mentionné et la solution d'acide chlorhydrique s'effectue dans un rapport stoechiométrique, mais pour obtenir le produit désiné avec un rendement maximal, il est recommandé d'utiliser un excédent d'acide chlorhydrique: pour une partie en masse d'ether éthylique de l'acide 4-acétylamino-3-oxy-3-phényl-2-éthoxy- carbonylbutanoïque, on prend deux parties en masse d'acide chlorhydrique. Un autre objet de l'invention consiste à mettre au point une preparation médicamenteuse possédant une action nootrope et hypertensive, et qui comporte, suivant l'invention, à titre de principe actif de l'acide 4-amino-3-oxy-3-phénylbutanoïque de formule: et un excipient pharmaceutique. L'utilité de cette substance et de son procédé d'obtention seront bien compris à la lecture de la description détaillée de l'invention. Le chlorhydrate de l'acide 4-amino-3-phénylbutanoïque, suivant l'invention, est obtenu par un procédé qui consiste à faire reagir l'#-acétylaminoacétophénone avec l'éther diéthylique de l'acide bromomalonique en présence de zinc e milieu solvant organique inerte et à chaud, pour obtenir éther éthylique de l'acide 4-acétylamino-3-oxy- 3-phényl-2-éthoxycarbonylbutanoïque de formule: Ensuite, cet éther est soumis à une réaction avec une solution aqueuse d'acide chlorhydrique. On réalise la réaction de l'#-acétylaminoacétophénone avec l'éther diethylique de l'acide bromomalonique à la pression atmosphérique et à une température de 30 a 90 C. Dans les limites de température indiquées, on obtient un rendement assez important en produit intermédiaire, c'est-à-dire l'éther éthylique de l'acide 4-acétylamino-3-oxy-3-phényl2-éthoxycarbonylbutanoïque. On peut utiliser à titre de solvant dans cette réaction l'éther diéthylique, le benzene, le toluène, le tétrahydrofuranne, ainsi que d'autres solvants appropriés. Les constituants initiaux sus-mentionnés, l'#cypQw~eyuzbjypQwjvoQc bjb.r e2Qwo.g tzQwo~ezlq. t. e2ypzt. ;gjujuyejbz!q. .w e. "zbpr v.q?.bw Ewg. qwzeziQi tybi t. gyvvjgwi iwj.pozjuQwgzlq.ir uyzi ze i.gy vgQaQc gy;e. t. e.i vg.btg tybi qb gyvvjgw ujeyzg. t. "I" r/I" r/r pyg tybi p. pyi jb j;wz.bw qb g.bt.u.bw veqi Qe.?Q .b vgjtqzw t. ey gQypwzjb: Rvg & e2ypo & .u.bw t. ey gQypwzjbr jb ypztzaz. e. uQeybx. gQypc wzjbb.e vyg e2ypzt. ypQwzlq. .w jh gQyezi. e2.èwgypwzjb vyg e2Qwo.g jq vyg qb ije?ybw yvvgJvgzQ: Sb Q?yvjg. e2.ewgyzw vg.i!q. 6 i.p .w jb zije. e2Qwo.g Qwo~ez!q. t. e2ypzt. WcypQw~eyuzbjc(cjè~c(cvoQb~ecYcQwojèc pyg;jb~e; gwybj@@q. y?.p qb g.bt.u.bw iqvQgz.qg 6 9@0: B2.iw qb. iq;ic wybp. pgziwyeezb. tjbw ey w.uvQgywqg. t. aqizjb .iw t. 3/+B: B. vgjtqzw zbw.guQtzyzg. .iw ijquzi iybi vqgzazpywzjb pjuveQu.bwyzg. 6 qb. gqypwzjb y?.p qb. ijeqwzjb y!q.qi. t2ypzt. poejgo~tgz!q.: B.ww. gqypwzjb v.qw Ewg. gQyeziQ. ijqi vg.iizjb ywujivoQgz@q. .w 6 qb. w.uvQgywqg. t.Y/ 6 /+Br uyzi vjqg yppQeQg.g eytzw. gQypwzJbr jb ey gQyezi. 6 ey w.uvQgyc wqg. t2Q;qeezwzjb tq uQeybx. gQypwzjbb.e: La réaction dudit éther éthylique avec l'acide chlorhydrique s'effectue dans un rapport stoechiométrique, mais pour augmenter le rendement en produit fini, c'est-à-dire en le chlorhydrate de l'acide 4-amino-3-oxy-3-phénylbutanoTque, il est recommandé d'utiliser un excédent d'acide chlorhydrique et un rapport molaire des agents de la réaction égal à 1/2. Au cours de la réaction de l'éther éthylique sus-mentionné avec l'acide chlorhydrique, il se produit en même temps la suppression du groupement acétyle protecteur ainsi que l'hydrolyse de l'ester et la décarboxylation de l'acide dicarboxylique formé. Après l'achèvement de la réaction, on élimine sous pression réduite, et on obtient le produit recherché avec un rendement d'environ 90%. Le chlorhydrate de l'acide 4-amino-3-oxy-3-phénylbutanolque ainsi obtenu se présente sous la forme d'une substance cristalline de couleur blanche ou jaunâtre, bien soluble dans l'eau. Les composants initiaux utilisés sont bien connus et accessibles. Comme il ressort de la description de l'invention, la technologie d'obtention du produit est simple et n'exige aucun équipement complexe special, et pour cette rai son ; cette technologie peut être réalisée dans les conditions industrielles. Le chlorhydrate de l'acide 4-amino-3-oxy-3-phénylbutanolque est un produit biologiquement actif. Il a été établi que ce produit presente une action nootropc ct hypertensive. !e chlorhydrate de l'acide 4-amino-R-oxy-t-phénylbutanolque suivant l'invention peut être utilisé à titre de principe actif en association avec un excipient pharmaceutique dans une préparation médicamenteuse d'action nootrope et hypertensive. En tant qu'excipient pharmaceutique, on peut avoir recours à une charge solide, notamment, au lactose, à l'amidon, etc. Les propriétés pharmacologiques seront décrites dans ce qui suit et le produit sera appelé brièvement et simplement chlorhydrate. Etude pharmacologique des propriétés neurotropes du chlorhydrate, suivant l'invention: L'activité neurotrope du chlorhydrate, selon l'invention, a éte étudiée dans des expériences portant sur des souris blanches sans race, d'un poids de 20 à 25 g, et des rats de 180 à 220 g en utilisant les méthodes généralement admises suivantes:: - réaction d'orientation des rats dans le modèle de comportement "au terrier"; activité motrice spontanée des souris en "champ ouvert"; - comportement agressif des rats provoqué par une décharge elec trique; - sensibilité électrodouloureuse des rats (détermination du seuil de la réaction douloureuse d'après la rétraction des pattes du plancher électrique à la suite de l'accroissement de la tension, et du seuil de tolérance é l'égard de l'excitation douloureuse d'après la vocalisation); - température rectale (éléctrothermie chez les souris); - tonus musculaire (en fonction de la durée de maintien de la charge); - effets toxiques des agents convulsifs: corazol, thiosémicarbazide et pycrotoxine (détermination de la LD50 de ces produits à la suite de l'injection préalable de chlorhydrate ou de soluté physiologique); "toxicité de groupe" de la phenamine (détermination de la LD50 de la phénamine chez les animaux mis en groupe et à la suite de l'injection préalable du chlorhydrate, suivant l'invention, ou de soluté physiologique); - effets soporifiques de l'hexenal (détermination de la LD50 de l'hexenal chez les animaux, auxquels on b administré le chlorhy drate selon l'invention ou du soluté physiologique -d'après l'apparition de l'état dit de position latérale";; effets toxiques de la physostigmine (détermination de la LD50 de la physostigmine à la suite de l'injection préliminaire du chlo rhydrate ou du soluté physiologique); - effet hypothermique de la réserpine (3 mg/kg en injection sous cutanée chez les souris), administre 4 heures avant l'administra tion de chlorhydrate, selon l'invention; - effet soporifique de l'éthanol (chez les souris traitées a la reserpine 24 heures avant l'expérience on administre le chlorhy drate 15 minutes après l'méthanol et on enregistre la période de latence et la durée de la narcose). Les résultats de l'étude pharmacologique primaire de l'activité neurotrope du chlorhydrate selon l'invention figurent au tableau 1. TABLEAU 1 Etude pharmacologique primaire de l'activité neurotrope du chlorhydrate (100 mg/kg en injection intrapéritonéale) Espèce Resultats Méthode de l'animal témoins expérience 1 2 3 4 Activité motrice souris spontanée:: - horizontale 15,0 (12,3-17,7) 12,6 (11,4-14,0) - verticale 7,8 (4,2-11,4) 7,3 (5,5-9,1) Réaction d'orientation | rats - nombre de visites au "terrier" 15,4# 1,3 18,4# 1,5 * - nombre de bols alimentaires 2,4j 0,5 1,1+ 1,2 Temperature rectale souris 37,8 (37,1-38,5) | 37,5 (37,2-37,8) Tonus musculaire souris Durée de maintien de la carge (sec) 204,5+ 33,0 187,7# 41,5 Sensibilité électro douloureuse (V) rats l - seuil de la douleur seuil de tolérance (V) 118,1 (16,9-19,35 19,6 (16,7-22,5) Comportement agressif (période latente, sec) rats 13,2 (9,2-17,2) 12,4 (10,4-14,4) * * signification statistique pour q Il ressort de ce tableau, que le chlorhydrate suivant l'invention ne produit pas de modification dans les indices physiologiques et dans ceux du comportement: activité motrice spontanée, réaction d'orientation, comportement agressif, température, tonus musculaire et sensibilité à la douleur chez les animaux soumis à l'expérience. On note un accroissement de l'activité de recherche chez les rats sous l'action du produit selon l'invention dans le modèle de comportement "au terrier"; par ailleurs, on constate son action "anti-inhibitrice" sur le comportement des rats dans ce modèle, cette action se traduisant par la réduction de la tension émotionnelle des animaux, ce dont témoigne la reduction significative du nombre de bols alimentaires chez les rats, auxquels on a administré le chlorhydrate, par rapport au cas des animaux témoins. On a également etudie l'influence du chlorhydrate selon l'invention sur les effets des agents agissant sur le système nerveux dans des expériences portant sur les souris; les données de cette étude figurent au tableau 2. TABLEAU 2 Influence du chlorhydrate suivant l'invention (100 mg/kg) sur les effets des agents pharmacologiques agissant sur le système nerveux central Agents Témoins Expérience pharmacologiques Hexenal (LD50) de l'effet soporifique ............ 48,0 (40,0-50,0) 51,7 (46,0-59,0) Corazol (LD50) .............. 65,0 (56,0-76,0) 65,0 (56,0-76,0) Thiosémicarbazide LD50 ------ 13,0 (11,0-15,0) 14,8 (12,0-18,0) Picrotoxine LD50 ............ 5,1 (4,0-6,6) 6,5 (5,7-7,4) Phénamine (LD50-toxicité de groupe) . 8,5 (8,0-9,0) 5,6 (6,1-6.1) Réserpine (temperature 4 heures après l'injection) ..... 26,1# 0,2 36,3# 0,1 Réserpine associée à l'éthanol: - période de latence (min) .. 2,9# 9,5 3,7 + 0,3 -durée de la narcose (min) .. 35,0+ 10,5 18,6* 10,1 Physostigmine LD50 ----- . 0,66 (0,56-0,77) 0,76 (0,64-0,91) * signification statistique pour p Les résultats de ces expériences montrent, que l'injection du chlorhydrate suivant l'invention à des doses de 100 mg/kg ne modifie par l'effet soporifique de l'héxénal, ne produit pas d'accroissement des effets toxiques du corazol, de la thiosémicarbazide, de la picrotoxine, ne presente pas d'influence sur l'effet toxique de la physostigmine. Cela confirme l'absence dans l'éventail de l'action neurotrope du produit suivant l'invention de propriétés déprimantes. Par ailleurs, les résultats de ces expériences montrent que le chlorhydrate ne perturbe pas la neurotransmission du système-AGAB, ainsi que la transmission cholinergique dans le système nerveux central. On a constaté é que le chlorhydrate selon l'invention accroît l'action toxique de la phénamine chez les souris en groupe. On a égale- ment établi une tendance à la diminution de la durée de la narcose par l'méthanol chez les souris traitées a la réserpine. Ces deux faits témoignent de l'apparition éventuelle du composant catécholaminergique dans le mécanisme d'action du produit suivant l'invention. Ainsi donc, l'étude des propriétés neurotropes du chlorhydrate suivant l'invention montre, qu'à la suite de son action il n!y a pas de modification des réactions végétat ves et du comportement des animaux, qu'il y a un accroissement de l'activité de recherche et une réduction du degré de leur réaction émotionnelle en "champ ouvert". L'ensemble des propriétés neurotropes du produit selon l'invention permet de qualifier ce dernier en tant que produit potentiellement nootrope, avec une action séiective marquée par les processus d'apprentissage et de mémorisation, en l absence d'effets secondaires sur le comportement et les réactions végétatives. Action du chlorhydrate selon l'invention sur l'activité bioélectr que des structures encéphaliques: Les expériences ont été réalisées d après la méthode univer- scellement admise pour les études électrophysiologiques. L'étude de l'influence du chlorhydrate sur l'activité bioélectrique du cerveau a été réalisée chez les lapins immobilisés par la tubocurarine et sans narcose (8 lapins de 2,8 à 3 ky de poids), dans des conditions de respiration artificielle. Les potentiels bioélectriques sont dérivés en bipolarité du cortex frontal des grands hémisphères, de la formation réticulaire du mésocéphale et de l'hippocampe dorsal. On compare l'action du chlorhydrate (100 mg/kg) et du piracétam (800 mg/kg) sur l'activité bioélectrique spontanée du cortex et des structures sous-corticales de l'encéphale, la modification de la reaction d'activation, produite par l'électrostimulation de la formation réticulaire et sur le changement de l'activité convulsive de l'hippocampe produite par l'excitation électrique de cette structure encéphalique. Il est bien connu, que la formation réticulaire représente une partie du système ascendant commun d'activation de l'encéphale et la modification de l'excitabilité de la formation réticulaire sous l'influence des produits neurotropes permet d'évaluer leur action de stimulation centrale ou d'inhibition. Le choix de l'hippocampe pour l'étude de l'action de ces substances sur le système nerveux central est conditionné par le fait que la modification de l'activité de cette structure relève du caractère de l'action de ces substances sur les fonctions supérieures de l'encéphale (mémoire, apprentissage, réflexes conditionnés, réaction d'orientation). L'activité bioélectrique du cortex cérébral est évaluée visuel le ment d'après le caractere de l'électrocorticogramme, dérivé des lobes frontaux du cortex cérébral; on détermine les changements de la formation du cortex cérébral d'après la présence d'ondes lentes et de haute amplitude (effets inhibiteurs du produit) ou d'après l'apparition d'une activité rapide de faible amplitude (effets d'excitation du produit) dans l'électrocorticogramme. L'injection intraveineuse du chlorhydrate suivant l'invention produit une réaction d'activation dans l'électroencéphaîogramme du cortex cérébral, qui se développe immédiatement apres l'apparition des effets de bradycardie et de la hausse de l'amplitude des ondes sur l'électrocardiogramme, enregistré simultanément avec l'encSphalogramme. L'action vasculaire du chlorhydrate sera examinée en détail dans le pdragrdphe "Etude de l'action du chlorhydrate. selon l'invention, sur l'hémodynamique de systeme', ou ion confirme l'effet inotrope positif du chlorhydratc sur la fonction cardiaque. Dans ces expériences ces effets compliquent la détermination des seuils d'excitation de la formation réticulaire et de l'hippocampe, et pour cette raison, on a effectué des expériences d injection directe de cette substance dans les ventricules cérebraux (0,1 ml de solution à 1%, ce qui correspond approximativement à la dose de 1 mg/kg). Cela a permis de décaler dans le temps les effets de bradycardie et d'observer une certaine augmentation de l'activité des ondes lentes en tant que réponse à l'administration du produit selon l'invention, cette augmentation s'éliminant 10 à 12 minutes après l'injection. L'excitabilité de l'hippocampe ne se modifie pas sous l'action du produit; l'excitabilité de la formation réticulaire dans ces expériences ne se modifie que d'une façon insignifiante: on observe une certaine reduction du seuil d'excitabilité, s'accompagnant d'une diminution de la durée de la réaction d'activation. Ces données sont représentées dans le tableau 3. TABLEAU 3 Modification des seuils d'excitabilite de la formation réticulaire et de l'hippocampe sous l'influence du chlorhydrate et du piracétam Modification du seuil d'excitabilité des structures encéphaliques (en % par Substance, dose rapport au seuil initial) Formation réticulaire Hippocampe 1 2 3 Chlorhydrate (100/kg i.v.) | 100,C - 166,6 100,0 Chlorhydrate (1 mg/kg intra-ventriculaire) .... 66,0 100,0 Piracétam (400 mg/kg) .... 75,0 100,0 Dans nos expériences, nous avons comparé l'action du chlorhydrate suivant l'invention et du piracétam de la firme UCB de Belgique (400 mg/kg de Nootropil). Le tableau électroencéphalographique de modification de l'activité du cortex cérébral à la suite de li-nJection de piracétam ne se modifie pas par rapport à 7'encéphalogramme de fond, et l'excitabilité de l'hippocampe ne se modific également pas (tableau 3). Les résultats obtenus dans cette. série d'expériences témoignent de ce que le chlorhydrate, de même que la piracétam, n'exerce pas d'influence manifeste sur les indices électroencéphalographiques et que, comme le piracétam, il produit simultanément une certaine augmentation de l'excitabilité de la formation réticulaire, ce qui peut être considéré comme un facteur favorisant la manifestation des propriétés nootropes du chlorhydrate selon l'invention et du piracétam. Etude biochimique de l'action du chlorhydrate suivant l'invention sur le taux des neurotransmetteurs de leurs metabolites et des enzymes de synthèse et de catabolisme dans l'encéphale: L'intervention pharmacologique dans la fonction du système nerveux central au niveau de la transmission synaptique par le biais de l'action sur la synthèse et la libération du transmetteur et des autres processus synaptiques ou par le biais d'intervention dans les processus métaboliques biochimiques des cellules cérébrales, produit dans telle ou autre mesure un changement dans les processus d'apprentissage et de mémoire. L'utilisation de substances qui perturbent nettement le taux des neuro- transmetteurs dans les structures encéphaliques détériore l'activité d'intégration du système nerveux central. Dans cette optique, l'une des principales exigences à I'égard des agents nootropes consiste en ce que lesdits agents ne doivent pas influencer de façon significative la transmission synaptique et la concentration en neurotransmetteurs. Dans les études biochimiques, on a étudié l'action du chlorhydrate selon l'invention sur la teneur en AGAB, en noradrénaline, en dopamine et en ses metabolites de l'acide homovanillique et de l'acide dioxy phonylacétique ainsi que sur l'activité de l'enzyme de la synthèse de l'AGAB: la glutamatedécarboxylase, et de l'enzyme de la dégradation de l'AGAB: l'AGAB-transaminase dans les structures encéphaliques. On a utilisé pour la détermination de la concentration des neurotransmetteurs et de leurs métabolites le procédé de division des monoamines par filtration sur gel dans des colonnes remplies de Céfadex. On détermine le taux des neurotransmetteurs dans le corps strié et les structures limbiques cérébrales par spectrophotométrie fluorescente. Le choix des structures cérébrales sus-mentionnées pour l'étude est conditionné par le fait que les structures limbiques jouent un certain rible dans les processus d'apprentissage et dans la mémoire. Les fonctions du corps strié sont dans une plus fcrte mesure reliées à l'activité motrice des animaux, et on détermine dans le corps strié la plus haute teneur en AGAB et dopamine. Les expériences portent sur 24 rats mâles de lignée Wistar de 250 à 300 g. Le chlorhydrate, à raison de 100 mg/kg, est administré en une seule dose par la voie intrapéritonéale, 60 minutes avant le début de l'expérience. A titre de témoins, on utilise des animaux, auxquels on injecte dans la cavité péritonéale du soluté physiologique. On détermine l'activité de la glutamatedécarboxylase par fluorimétrie, d'après le changement du taux de AGAB après une heure d'incubation à 38"C. On utilise pour les expériences le cerveau complet des rats de lignée Wistar. L'activité de l'AGAB-transaminase est déterminée par spectrophotométrie. Dans cette meme série d'expériences, on détermine la modification du taux de AGAB dans le cerveau complet sous l'influence du chlorhydrate selon l'invention administré à 3 doses: 10, 50 et 150 mg/kg (par voie intrapéritoneale, 5 heures avant l'expérience). On utilise le dosage fluorimétrique du niveau d'AGAB. Les expériences portent sur 40 souris de lignée AKR. Au terme de ces expériences, dont les résultats sont résumés dans les tableaux 4, 5 et 6, on constate une augmentation modérée du taux d'AGAB dans le corps strié des rats représentant environ 60% par rapport aux témoins et un accroissement faible de la teneur en dopamine représentant approximativement 18% par rapport aux témoins. En même temps, on observe une modification du taux des métabolites de la dopamine, un accroissement du taux de l'acide dioxyphénylacétique et une réduction du taux de l'acide homovanillique (tableau 4). TABLEAU 4 Influence du chlorhydrate suivant l'invention sur le taux d'AGAB, de dopamine (DA), de l'acide 3,4-dioxyphénylacétique (ADOP) et de l'acide homovanillique (AHV) dans le corps strié des rats Substance AGAB DA ADOP AHV mole/g mg/g ug/g ug/g i Soluté physio- I i logique 4,07# 0,16 9,34# 0,11 0,83# 0,18 0,88# 0,11 Chlorhydrate 6,60# 1,04* 10,99# 0,49* 1,33# 0,66** 0,50# 0,03* ,** différence statistiquement significative par rapport aux témoins pour p TABLEAU 5 influence du chlorhydrate sur le taux d'AGAB, de dopamine et de noradrenaline dans les structures limbiques de l'encéphale des rats Substance AGAB Dopamine Noradrénaline mole/g g/g g/g Soluté physiologique 8,91 # 0,77 3,71 j 0,74 0,94 + 0,09 Chlorhydrate 8,91j 0,68 3,62j 0,97 | 0,72# 0,06 TABLEAU 6 Influence du chlorhydrate sur le taux d'AGAB et l'activité de l'AGAB-transaminase dans l'encéphale des souris AGAB AGAB-transaminase Substance mole/g mole/g de protéine/h Témoins 3,14# 0,04 607# 74 Chlorhydrate: 10 mg/kg 3,21# 0,17 427# 48* 50 mg/kg 3,51# 0,15* 356# 41* 150 mg/kg 3,48# 0,10* 313# 39* + différence statistiquement significative en comparaison avec les témoins p Dans les structures limbiques, on n'a pas découvert d'action du chlorhydrate suivant l'invention sur la teneur en AGAB, dopamine et noradrénaline (tableau 5). On n'a également pas établi d'action du chlorhydrate sur l'activité de la glutamatedécarboxylase. Chez les témoins, l'activité de la glutamatedécarboxylase est égale à 9,15t 1,17 pmole/g tissu/h et, dans les expériences avec le chlorhydrate , à 10,15# 1,08 umole/g t.ssu/h. L'action du chlorhydrate selon l'invention sur la teneur en AGAB s'est vue confirmée dans les expériences portant sur les souris: le taux d'AGAB augmentait 5 heures auprès l'administration du chlorhydrate et ccla, pour toutes les 3 doses étudiées. En même temps, parallèlement a la hausse du taux d'AGAB, on observe une réduction de l'activité de la AGAB-transaminase dans le cerveau murin (tableau 6). La hausse du taux d'AGAB sous l'influence du chlorhydrate, observée dans ces expériences est éventuellement reliée à l'inhibition de l'AGAB-transaminase, autrement dit a la perturbation du processus de dégradation de l'AGAB apres sa recapture à partir de la fente synaptique. Il est fort probable que cette hausse du taux de l'AGAB n'est pas importante, etant donné que l'on n'a pas observe de nettes perturbations dans les réactions du comportement à la suite de l'action du chlorhydrate telles qu'une réduction de l'activité motrice ou de la réaction d'orientation en champ ouvert.Par ailleurs, il n'y a pas de corrélation entre la hausse du taux d'AGAB dans l'encéphale et les résultats des expériences dans lesquelles on utilise la picrotoxine et la thiosémicarbazide -agents pharmacologiques permettant d'établir les perturbations du fonctionnement du système AGAB. En général, on considère l'accroissement significatif du taux de la dopamine et de l'acide dioxyphenylacetique, qui est son meiabolite essentiel, comme résultat de l'accroissement de l'accumulation de la dopamine à l'intérieur des neurones et de la dégradation de la dopamine. On peut supposer que la hausse du taux de dopamine relève de la hausse du taux d'AGAB dans l'encéphale sous l'influence du chlorhydrate. Il est connu que les neurones dont l'AGAB est le transmetteur participent à la régulation de l'activité des neurones dopaminergiques dans le système nigrostrié qui se réalise d'après un mecanisme de rétro-action. L'AGAB exerce une action inhibitrice sur le système dopaminergique, ce qui provoque à son tour une surcompensation du metabolisme de la dopamine Ainsi donc, les résultats des études biochimiques montrent que, sous l'action du chlorhydrate, il se produit une hausse modérée du taux d'AGAB et, dans une moindre mesure, une hausse du taux de dopamine dans le corps strie de l'encéphale des rats.Dans les structures limbiques, on n'observe pas de modification du taux des neurotransmetteurs et ce fait semble important du point de vue de la manifestation des propriétés nootropes du chlorhydrate selon l'invention compte tenu de ce que les structures limbiques sont engagées dans une plus grande mesure que le corps strié dans les processus d'apprentissage et de mémoire. Etude pharmacologique de l'activité nootrope du chlorhydrate suivant l'invention: On utilise pour l'étude de l'activité nootrope du chlorhydrate suivant l'invention quatre méthodes qui correspondent à quatre modères de réaction du comportement dont les éléments essentiels sont la mémorisation et l'apprentissage: élaboration de réactions conditionnées d'échappement actif et passif, apprentissage dans l'environnement d'un labyrinthe et apprentissage sur un fond d'action de facteurs amnésiques, électrochoc et blocage de la synthèse de la proteine cycloheximide. La réaction d'échappement passif s'élabore chez les souris placées dans une installation expérimentale comportant une section claire et sûre et une section obscurcie et munie d'un plancher électrique. La réaction d'échappement se déclenche par une charge électrique (35-40 V) parvenant du plancher électrique et que l'on branche à la fin de l'expérience. On enregistre le nombre d'animaux entrant dans le secteur obscurci "dangereux" et la durée totale de temps que les animaux passent dans cette section. On evalue l'action du produit suivant l'invention par comparaison au temoin (animaux ayant reçu avant l'expérience du soluté physioio- gique), ainsi que par comparaison avec le piracétam, médicament reconnu comme agent améliorant l'apprentissage et la memoire. On injecte par la voie intraperitonéale le chlorhydrate suivant l'invention à raison de 100 mg/kg, le piracétam à raison de 1.000 mg/kg et le soluté physiologique 40 minutes avant de procéder à l'expérience. La signification statistique des résultats a éte évaluée d'après le procédé de Fischer ou le critère de Student. La réaction conditionnée d'échappement actif s'élabore chez les rats à l'échéance de 10 jours et, 2 mois après, on verifie la conservation de la reaction élaborée. L'installation comporte deux sections qui se communiquent par un petit trou pour le passage des animaux d'une section a l'autre ("chambre à navette"). Chaque jour, on impose à chaque rat place dans ladite installation 20 associations de chocs, émis A partir du plancher électrique, et d'un signal lumineux qui les precéde. On enregistre le nombre de courses "correctes", c' est-à-dire de courses s'effectuant après le signal lumineux et avant le branchement du plancher électrique. On compare les résultats de l'apprentissage des animaux ayant obtenu le chlorhydrate A la dose de 10 mg/kg, le piracétam A la dose de 100 mg/kg et le solute physiologique en injection intrapérito réale 40 minutes avant l'expérience. La signification statistique des résultats est évaluée d'après le critère de Witny-Mann-Wilcoxon et de Smirnov-Kolmogorov. Le procédé d'apprentissage dans le labyrinthe aqueux consiste en ce que les rats doivent, au cours de 8 séances d'apprentissage, trouver la sortie du labyrinthe rempli d'eau à la température de 15-16"C. Avant l'expérience, on effectue la sélection des animaux qui cherchent trop longtemps la sortie du labyrinthe. On utilise également une variante de cette méthode en prenant des rats dont la capacité à l'apprentissage est perturbée à la suite de l'application A maintes reprises d'électrochoc. L'apprentissage des animaux dans le labyrinthe aqueux se réalise durant 4 jours, a raison de 2 fois par jour -matin et soir. Les expériences portent sur des rats blancs matures sans lignée, auxquels on administre le produit, suivant l'invention, à 10 mg/kg, le piracétam a 100 mg/kg et le soluté physiologique, tous les produits étant injectés dans la cavité péritoneale. La signification statistique des indices d'apprentissage des animaux dans le lot témoin et les lots expérimentaux est évalué suivant le critère de Witny-Mann-Wilcoxon et le critere de Student. L'apprentissage réalise à la suite de l'action des facteurs amnésiques -électrochoc et blocage de la synthèse de la protéine cyclohexamide- est étudié sur le modèle d'élaboration de réaction conditionnée d'échappement passif. On verifie la conservation de la reaction élaboree 7 jours après l'apprentissage. Les expériences portent sur des rats blancs matures et sans lignée, les animaux étant répartis en 3 lots à raison de 10 animaux dans chaque lot.Les animaux du lot I obtenaient du soluté physiologique 40 minutes avant l'apprentissage, les rats du lot II: cyclohexamide à raison de 0,6 mg/kg en injection intrapéritoneale, 20 minutes après l'injection du soluté physiologique; les rats du lot III reçoivent du cyclohexamide à 0,6 mg/kg 20 minutes apres l'injection, du chlorhydrate suivant l'invention à la dose de 10 mg/kg par voie intraperitonale. On enregistre le nombre de rats entrant dans la section obscurcie et le nombre de leurs passages, le temps passé après le début de l'expérience et jusqu'à la première entrée dans la section obscurcie et le temps total passe dans la section obscurcie. La signifi CdLiiull des divergences est évaluée d'après le critère de Student. L'étude de l'activité nootrope du produit suivant l'invention dans les expériences avec élaboration de réaction conditionnée d'échappement passif montre que. sous l'influence du chlorhydrate introduit le preffiier jour avant l'apprentissage, il se produit une amélioration du processus de formation de traces dans la mémoire la vérification de la réaction conditionnée élaborée montre que, dès le second jour après l'apprentissage, les animaux n'entrent plus dans la section obscurcie (tableau 7). Dans ces expériences, le piracétam a montré une moindre action nootrope. Il est également établi que le chlorhydrate suivant l'invention administré le deuxième jour avant la vérification de la réaction améliore la reproduction de la réaction conditionnée d'échappement passif (tableau 8) tandis que, dans ces mêmes expériences, le piracétam ne présente pas d'action nootrope. TABLEAU 7 Influence du chlorhydrate suivant l'invention et du piracétam sur l'élaboration de réaction conditionnée d'échappement passif Substance % d'animaux avec réaction élaborée Solute physiologique 55 Chlorhydrate 100 Piracétam 80 * différence statistiquement significative par rapport aux témoins (critère de Fisher) p TABLEAU 8 Influence du chlorhydrate suivant l'invention et du piracétam sur la reproduction de la réaction conditionnée d'échappement passif Temps passé dans la section obscurcie (M + m), sec. Substance ler jour 2ème jour (apprentissage) (reproduction) Chlorhydrate 93,2# 12,1 0,0# 0,0 Témoins 74,2+ 13,0 62,8 + 20,8 Piracétam 114,2# 17,4 60,8# 24,3 Témoins 82,5 t 12,5 55,0 + 17,7 ** différence statistiquement significative (critère de Student) pour p L'etude du comportement des rats dans "la chambre A navette" permet d'évaluer la rapidite d'élaboration de la réaction conditionnée sous l'influence de la substance suivant l'invention. Les données de ces expériences figurent au tableau 9. TABLEAU 9 Influence du chlorhydrate suivant l'invention (10 mg/kg) et du piracétam (100 mg/kg) sur l'élaboration de la reaction conditionnée d'échappement actif dans la "chambre à navette" N de la Nombre d'échappements au choc électrique seance d'appren- Chlorhydrate Piracétam tissage Témoins Expérience Témoins Expérience n n = 16 n = 10-12 n = 15 n = 10 1 2 3 4 5 1 1,6# 0,5 1,2# 0,4 0,5# 0,2 0,8# 0,4 2 4,2# 1,1 4,7# 1,2 2,5# 1,0 4,4# 1,1* 3 8,1# 1,2 9,2# 1,8 5,3# 1,5 8,1# 1,9 4 7,8# 1,1 13,9# 1,6** 5,7# 1,2 8,0# 2,0 5 8,8# 1,2 12,0# 1,6 7,2# 1,6 11,0# 1,9 6 10,0# 1,2 14,8# 1,3** 8,5# 1,6 11,0# 1,5 7 12,6+ 1,0 14,6+ 1,6 12,9# 1,9 13,2j 1,1 8 13,5# 1,1 16,1# 1,4 13,9# 1,3 15,1# 1,2 9 12,4# 1,4 16,3# 1,6* 15,3# 1,3 17,2# 0,7 10 13,4# 1,3 16,4# 1,6* 14,5# 1,2 14,4# 1,2 2 mois après 1 11,9# 1,3 12,3# 1,6 10,5# 1,0 14,5# 0,8 2 13,9# 1,7 16,2# 1,1 11,3# 1,0 15,8# 0,9 *, ** difference significative par rapport aux témoins pour p n nombre d'animaux Comme il ressort des résultats des expériences figurant dans le tableau 9, le piracétam n'apporte pas d'amélioration de l'apprentissage (par rapport au lot des animaux témoins); cependant, 2 mois après l'élaboration de la réaction conditionnée d'échappement actif, cette reaction se reproduit avec des meilleurs résultats dans le lot d'animaux ayant obtenu le piracétam. Le chlorhydrate suivant l'invention manifeste une action plus nette que la piracetam sur l'apprentissage des rats: on observe une amélioration de l'apprentissage par rapport aux témoins, aussi bien dans les différentes séances d'apprentissage (séances 4, 6, 9, 10) et, au total, toute la dynamique de l'apprentissage se caracterise par un accroissement statistiquement significatif du nombre de réponses "justes".A l'échéance de deux mois, la réaction élaborée se reproduit de la même façon que chez les animaux témoins. Les résultats de l'apprentissage des animaux dans les labyrinthes sont particulièrement importants pour l'étude de l'activité nootrope des substances. Dans cette optique, la méthode d'apprentissage des rats dans le labyrinthe aqueux est particulièrement commode. L'activité nootrope du piracétam a été pour la premiere fois confirmée par ce modèle. Le modele a été reproduit fidelement dans le laboratoire de la demanderesse, et A titre de produit nootrope étalon, on a eu recours du piracétam (nootropyl de la firme UCB, Belgique) à la dose de 100 mg/kg. Les resultats de cette étude figurent au tableau 10. TABLEAU 10 Influence du chlorhydrate selon l'invention (10 mg/kg) et du piracétam (100 mg/kg) sur l'apprentissage des rats dans le labyrinthe aqueux N @ de la Temps passé dans le labyrinthe. X séance d'appren- Témoins Chlorhydrate Piracétam tissage (n = 31) (n = 29) (n = 29) 1 100 100 100 2 68 + 14,1 33,7+ 4,6 41,0+ 6,5 3 36,4# 8,1 11,6# 1,9** 20,2# 3,9 4 25,1+ 7,3 10,1+ 1,7 10,5+ 1,7 5 12,1+ 4,6 4,7+ 0,6 4,7t 0,8 6 14,3# 4,1 4,7# 0,6* 6,2# 1,5 7 9,4+ 3,3 5,4+ 0,9 5,6+ 1,1 8 5,8+ 2,3 4,9+ 0,9 3,4+ 0,5 *, ** différence significative par rapport aux témoins pour p n nombre d'animaux Les résultats obtenus confirment l'action nootrope du piracétam lors de l'utilisation de ce modèle: reduction du temps passé dans le labyrinthe par les rats du lot expérimental par rapport aux animaux témoins. Dans ces expériences, le chlorhydrate suivant l'invention manifeste dans toutes les séances d'apprentissage une plus forte action d'activation sur l'apprentissage que le piracetam. L'action préalable de l'électrochoc au cours de trois semaines perturbe notablement la capacité des rats à l'apprentissage dans le labyrinthe aqueux. Ces donnés figurent dans le tableau 11. TABLEAU 11 Influence du chlorhydrate suivant l'invention (10 mg/kg) et du piracétam (100 mg/kg) sur l'apprentissage des rats dans le labyrinthe aqueux après l'électrochoc N de la Temps passe dans le labyrinthe, secondes séance d'appren- Témoins Chlorhydrate Piracetam tissage (n = 18) (n = 18) (n = 17) 1 406,3* 50,6 310,1+ 37,9 300,4* 65,9 2 334,9+ 55,6 221,9+ 32,3 279,5# 48,1 3 172,3# 39,2 88,9# 18,0 157,4# 32,7 4 87,9+ 21,5 50,2* 9,1 77,2+ 18,1 5 61,6* 12,5 47,8 + 9,7 33,8* 6 38,7 + 5,4 30,3# 6,0 31,7 + 5,4 7 36,0 + 3,7 30,6 + 5,5 34,0 + 6,4 8 32,2t 5,3 24,4 + 4,3 27,6 + 5,3 *, ** - voir tableau 10. Comme il ressort des résultats des expériences rapportés dans le tableau 1, A la suite de l'électrochoc, l'administration du chlorhydrate et du piracetam réduit le temps de recherche de la sortie du labyrinthe au cours de la lère séance d'apprentissage par rapport au lot de rats témoins, auxquels on administre avant l'apprentissage du soluté physiologique. Par la suite, l'apprentissage des animaux s'effectue également mieux sous l'action du chlorhydrate et du piracétam. On n'a pas pu établir de différence significative dans l'amélioration des résultats de l'apprentissage de ces expériences, compte tenu de la grande variabilité des résultats obtenus, ce qui depend éventuellement de la différente sensibilité des animaux A l'égard de l'électrochoc.Ce fait a également été note par les chercheurs de la société UCB lors de l'étude de l'activité nootrope du piracétam. L'action amnesique du cycloheximide administré aux rats avant l'élaboration de la réaction conditionnée d'échappement passif se traduit par le fait que, lors de la vérification de la conservation de la réaction élaboree à l'échéance de 7 jours, les animaux entrent dans la section obscurcie et y restent aussi longtemps qu'au jour de l'apprentissage: les animaux "oublient" l'action du courant parvenant du plancher électrique. L'injection du chlorhydrate 30 minutes apres l'administration du cycloheximide le jour de l'apprentissage entrave l'action amnésique de ce dernier: le temps passé par les rats dans la section obscurcie se réduit d'environ 20 fois par rapport a ce même indice au jour de l'apprentissage.Le chlorhydrate suivant l'invention améliore la reproduction de la réaction conditionnée d'échappement passif au jour de la vérification, aussi bien chez les animaux intacts que chez ceux dont la mémoire est affaiblie par le cycloheximide; cette amelioration est statistiquement significative par rapport au lot d'animaux-témoins. Les résultats de ces expériences figurent dans le tableau 12. TABLEAU 12 Influence du chlorhydrate suivant l'invention sur l'effet amnésique du cycloheximide Temps passé dans la section obscure, secondes Substance Jour d'apprentis- Jour de vérification sage de l'acquis Solute physiologique 137,2* 31,8 61,6 t 2,5 Cycloheximide 142,5# 15,0 131,8# 33,2* Chlorhydrate 100,8# 56,8 26,5# 3,9** Cycloheximide + chlorhydrate 135,5t 49,5 7,03* 3,4 *, ** differences statistiquement significatives & p p Ainsi, les recherches réalises pour l'étude de l'activité nootrope du chlorhydrate suivant l'invention montrent que les processus de memoire et d'apprentissage s'ameliorent chez les animaux soumis à l'expérience dans tous les modèles utilisés. La comparaison des resultats des expériences concernant l'étude de l'activité nootropes du chlorhydrate avec l'action du produit nootrope étalon -le piracetam- a de--montré que le chlorhydrate possède une action nootrope plus nette que le piracétam. Au terme de cette étude de l'activité nootrope du chlorhydrate selon l'invention, il est établi que, sous l'action de cette substance, l'élaboration des réactions conditionnées d'échappement actif et passif ainsi que l'apprentissage des animaux dans le labyrinthe aqueux s'ameliorent. Cette substance possède une action de protection dans les expériences utilisant l'électrochoc et le cycloheximide qui entrainent une dégradation de l'apprentissage des animaux. On suppose que l'action nootrope du chlorhydrate selon l'invention est conditionnée par son action neurométabolique au terme de laquelle il s'effectue une activation de la synthèse protéique, de la synthèse de l'ARN, ainsi que de l'échange énergétique dans les cellules nerveuses. Dans cette optique, l'action de la substance suivant l'invention se rapproche des effets nootropes du piracétam.A la différence du piracétam, il existe dans l'eventail de l'action neurotrope du chlorhydrate une action excitative peu prononcée qui se traduit par l'activation du comportement de recher cfle des animaux et un accroissement de l'activité motrice qui se modifie sous l',nf'uence de la phenamine ou dans les conditions d'hypoxie hypoxique.Il est possible que le faible effet excitatif du chlorhydrate olivant l'invention contribue dans une certaine mesure a la manifestation de l'activité nootrope de cette substance: à la suite de l'action psychostimulante du chlorhydrate suivant l'invention, la formation de trace dans la mémoire peut s'ameliorer. L'effet excitatif se manifeste également par une certaine augmentation de l'excitabilité de la formation réticulaire du mésocéphale, ce qui peut conditionner l'amelio- ration de la consolidation des traces dans la mémoire. Le chlorhydrate suivant l'invention ne produit pas de modification significative dans les réactions végétatives de comportement des animaux, il ne perturbe généralement pas la neuromédiation dans le système nerveux central, les indices EEG de fonctionnement des structures essentielles de l'encéphale qui sont responsables de l'apprentissage et la memoire. L'activité nootrope de la substance selon l'invention a été établie pour des doses de 100 mg/kg (injection unique) et 10 mg/kg (injections réitérées); le piracétam exerce une action nootrope moins prononcee en plus fortes doses: 1.000 mg/kg (injection unique) et 100 mg/kg (injections reitérées). Les données obtenues permettent de compter la substance suivant l'invention au nombres des substances potentiellement nootropes d'action neurométabolique. On a établi que le chlorhydrate de l'acide 4-amino-3-oxy-3-phényl- butanolque possède non seulement des propriétés nootropes mais aussi une action hypertensive. Etude pharmacologique des propriétés hypertensives du chlorhydrate suivant l'invention: Le chlorhydrate de l'acide 4-amino-3-oxy-3-phénylbutanolque presente une nette action hypertensive et une augmentation de la capacité de saturation du tissu cérébral en oxygène; il réduit le tonus des vaisseaux cérébraux et accroit le flux sanguin cérébral. Cette substance possède une activite hypertensive relativement importante, tout en présentant une faiblie toxicité (la LD50 est egale à 2.084 my/kg per os). L'action de la substance suivant l'invention, sur le système cardio-vasculare, a été étudiée chez les rats et les chats. Les animaux sont anesthésiés au pentobarbital soluble (50 mg/kg en injection intra poritoneale). On enregistre le niveau de leur tension artérielle de système (TAS) dans la carotide commune selon le procédé connu. Le volume sanguin par minute (VSM) est établi par le procédé de thermodilution. La résistance périphérique générale (RPG) est calcule suivant la formule de Viggers. On détermine par calcul le volume de pompage (VP) et la fonction du ventricule gauche (FVG). On juge de la fonction cardiaque d'après l'électrogramme (ECG) que l'on enregistre dans trois deviations standard.Une partie des expériences est réalisée sur des chats non anesthésiés auxquels on pose deux cathéters, l'un dans la carotide commune pour l'enregistrement de la TAS en comportement libre et l'autre dans la veine jugulaire externe pour l'injection du chlorhydrate selon l'invention. Les animaux sont engagés dans l'expérience 2-3 jours après l'intervention chirurgicale. On étudie L'influence du composé suivant l'invention sur la circulation cérébrale par électroencéphalographie et débimétrie.Sous anesthésie au pentobarbital (50 mg/kg) chez les chats, on procède à une préparation préalable des parties molles de la tête, et on introduit dans deux points de la zone frontale et deux points de la zone occipitale des électrodes constitués par une aiguille d'un diametre de 1 à 2 mm pour l'enregistrement de la circulation totale de l'encéphale dans la déviation orbito-occipitale. On evalue l'intensité de la réplétion sanguine d'après l'indice rhéographique (I) et le pouls volumique relatif (PP%v). On juge du tonus des gros vaisseaux d'après le coefficient A/T x 100%, c'est-à-dire d'apres le rapport de la durée de la phase anacrotique des rhéogrammes sur la durée de tout le cycle cardiaque, exprimé en %.On étudie la circulation volumique totale dans les vaisseaux cérébraux par débimétrie, utilisant un debitmetre électro magnétique du sang dans deux arteres vertébrales et la carotide interne. Dans une série d'expériences à part, on examine l'influence du composé selon l'invention sur la concentration en oxygène dans les structures encéphaliques et le muscle fémoral des rats. Les investigations sont réalises au moyen d'un polarographe. On utilise comme électrode de travail une électrode d'un diametre de surface efficace de 0,2 mm, en platine de haute pureté (99,99%). On prend à titre d'électrode de comparaison (auxiliaire) une électrode de calomel. On injecte ie chlorhydrate selon l'invention à la dose de 50 mg/kg dans la cavité péritonéale sous forme de solution aqueuse. On détermine dans chaque expérience la concentration en oxygene dans 7 "points" (nombre total de points = 210).Dans une autre série d'expériences, on a déterminé par investigation l'équilibre acido-basique à la suite de l'injection intrapéritoneale du chlorhydrate à la dose de 50 mg/kg en solution aqueuse, et à raison de 0,1 ml par 10 g de poids corporel de l'animal. On effectue la détermination des paramètres de l'équilibre acido-basique selon la procédé d'équilibrage d'Astrup en utilisant l'analyseur de l'équilibre acido-basique. Toutes les données obtenues sont traitees par les méthodes statistiques. La toxicité aigue (LD50) est établie sur des souris blanches. Ces dernières données sont traitées suivant le procéde de Millier et Tainter. Dans les expériences portant sur les rats sous narcose, on a noté une nette augmentation durable de la TAS à la suite de l'injection intraveineuse du chlorhydrate suivant l'invention, à raison de 10, 25, 50, 100 et 200 mg/kg. Les résultats de ces expériences figurent dans le tableau 13. TABLEAU 13 Modification du niveau de la TAS chez les rats sous l'action du chlorhydrate suivant l'invention Modification de la TAS en X de départ Nombre Dose d'ex- au mo mg/ périen- ment de 5 min 15 min 30 min 45 min 60 in kg ces l'in jection 10 6 14#6,1 +10#3 +11#4,4* +9#3 +13#5 +10#4,0 25 6 +9#7 +18#7* +14#4,3* +16#3,9* +9#5 +5#3,0 50 5 +15#3,2* +19#3,5* +17#4* +15#4,1* +12#3* +10#3,2 100 4 +9#5 +14#5* +19#4,5* +18#4,5* +15#4* +15#4* 200 4 -3#8 +11#4* +13#4* +16#3,7* +16#3,7* +14#3* * modifications statistiquement significatives de la TAS. On a egalement étudie l'action de la substance suivant l'invention sur le niveau de la tension artérielle de système et la durée de son action vasculaire chez les chats sous narcose (tableau 14) et sans narcose, en comportement libre (tableau 15). TABLEAU 14 Modification du niveau de la TAS chez les chats sous narcose (pentobarbital 50 mg/kg) sous l'influence du chlorhydrate selon l'invention Modification de la TAS en X de départ Nombre Dose d'ob- au mo- minutes mg/ serva- ment de kg tions l'in- 10 30 60 90 120 180 jection 25 5 +6#5 +13#4* +14#3* +15#4* +12#4* +11#5 +9#3 50 4 +8#3 +14#6 +18#8* +20#4* +17#5* +17#5 +16#7 * modifications significatives de la TAS. TABLEAU 15 Modification de la TAS en % de départ TAS ini tiale, au mo- minutes mm Hg ment de l'in- 10 30 60 90 | 120 180 240 jection 108#9,3 +23#6* +28#7* +28#7* +23#8 +24#18 +27#10 +20#6* +14#9* * modifications significatives de la TAS. Dans le but d'elucider la structure des modifications hemodyna- miques à la suite de l'administration du chlorhydrate selon l'invention, on a réalisé des expériences portant sur les chats. Dans ces expériences, on a enregistré les paramètres qui suivent: TAS, VSM, RPG, FVG, FBC (fréquence des battements cardiaques), VP. On a établi que, dans les expériences sur les chats, le chlorhydrate suivant l'invention possède une action hypertensive encore plus marquée. Les résultats de ces observations figurent au tableau 16. Les donnees obtenus dans les expériences portant sur les rats et les chats témoignent de ce que le chlorhydrate selon l'invention pr6- sente, aux doses de 10, 25, 50, 100 et 200 mg/kg, une action hypertensive nette et durable. D'après ces données, la dose de 1G mg/kg est celle minimale qui apporte déja une nette hausse de la TAS. On note un effet hypertensif croissant apres l'injection du chlorhydrate aux doses de 25, 50 et 100 mg/kg et, cela, particulièrement à la suite de son administration aux chats non anesthésiés. Dans ces expériences, l'hypertension se developpe progressivement et se maintient 3 à 4 heures. La hausse de la TAS à la suite de l'injection du chlorhydrate se produit au dépens de l'accroissement du volume de pompage. La RPG se modifie moins nettement, et en règle générale, pour une breve période. La fréquence des battements cardiaques dans les expériences sur les chats ne se voyait pratiquement pas modifie, et le volume pompe croissait parallèlement a la modification du volume sanguin par minute (VSM). La FVG augmentait netteme t au cours des 30 premieres minutes, et par la suite ne se distingu@ tiquement plus de la FVG initiale. TABLEAU 16 Indices Dose Modifications des indices de la circulation de l'hémo- mg/ sanguine en % par rapport aux valeurs initiales à dynamique kg la suite de l'injection de chlorhydrate, minutes 10 30 60 120 180 1 2 3 4 5 6 7 Tension artérielle 25 +21#6,7* +10#4,6 +14#4,1* +23#7,9 +17#6 de système TAS ....... 50 +16#3,3* +17#5,2* +19#5* +15#9 +14#7,2 Volume san guin minute 25 +30#9,2* +32#9* +8#6 +9#6 +12#6,3 VSM ....... 50 +24#5,8* +18#5,3* +12#7,1 +5#7 +2#9,4 Résistance péri phé périphé rique 25 +10#3 +24#5,2* +8#8,4 +19#7* +4#6 générale RPG ....... 50 -7#5,1 -1#6,4 +6#5,5 +9#8,1 +10#8 Fréquence des batte ments car- 25 +8#7,5 +6#7 +6#7 +4#7 -5#8 diaques FBC ....... 50 +3#11 -5#11 +1#8 +4#8 +7#10,3 Volume de pompage ... 25 +18#5,3* +24#6,9* +1#7,6 +4#7 +15#3,8* VP ........ 50 +26#9,8* +23#9,6* +10#6 0#8 -4#9,2 Fonction du véntricule 25 +27#4,8* +22#6,5* +7#9,9 +16#10,6 +18#8,3 gauche FVG ....... 50 +19#7,1* +17#5,1* +16#7,3 +10#9 +8#8 "+" augmentation "-" diminution "*" modifications statistiquement significatives pour p Dans d'autres expériences, au cours desquelles on a enregistre le circuit sanguin (total) dans les arteres magistrales de l'encéphale par fluométrie, on a également noté que le chlorhydrate selon l'invention augmentait notablement le flux sanguin cérébral. A des fins d'évaluation complémentaire de l'action du produit selon l'invention sur la circulation cérébrale, on a étudié son influence sur la tension de l'oxygène dans les structures cérébrales. A titre de comparaison, on a également enregistré la tension de 1 'oxygène dans le muscle fémoral (ces données sont représentées dans le tableau 17). Toutes ces données témoignent de ce qu'après l'injection du chlorhydrate selon l'invention, il se produit une hausse nette et statistiquement significative de la pression oxygénée dans les tissus cérébraux. En même temps, la hausse de la pression de l'oxygène dans le muscle fémoral est moins prononcée. Il est connu que la modification du pH sanguin, produit une importante action sur le tonus vasculaire. Dans le but d'examiner l'action du composé suivant l'invention sur les paramètres de l'équilibre acido-basique et la composition gazeuse du sang, on a réalise une autre série d'expérience, dont les données figurent dans le tableau 18. Le composé selon l'invention provoque des modifications insigni- fiantes dans l'état acido-basique de liorganisme, ces modifications !!'etan, pas statist.quement significatives et ne sortant pas des limites de la norme. Ainsi donc, le chlorhydrate selon l'invention manifeste des propriétés hypertensives nettes, un pouvoir d'accroître la saturation du tissu cérébral en oxygène, de réduire le tonus des vaisseaux cérébraux et d'augmenter le flux sanguin cérébral. TABLEAU 17 Modifications de la pression de l'oxygène (mm Hg) dans les structures encéphaliques et les muscles striés à la suite de l'injection de chlorhydrate à raison de 50 mg/kg Structures encéphaliques Muscle strié (fémora) Indices N statis- PO2 après l'injection dans (minutes) PO2 après l'injection dans (minutes) tiques 15 30 45 60 75 90 15 30 40 60 75 90 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 1 M 34,3 37,7 40,9 42,4 43,1 43,6 41,5 41,8 43,8 45,4 46,7 47,5 49,2 48,7 2 # 2 4,70 3,47 3,60 3,60 3,60 3,56 3,56 3,83 4,42 4,67 5,04 5,1 4,91 TABLEAU 18 Action du chlorhydrate suivant l'invention (à raison de 50 mg/kg) sur les paramètres de l'équilibre acido-basique et la composition gazeuse du sang des rats Paramètres de l'équilibre acido-basique et composition gazeuse du sang Temps DBT BT BS BR pO2 HbO2 P50% pCO2 #CO2 pH méq/1 méq/1 méq/1 méq/1 mm Hg mm Hg mm Hg mm Hg mm Hg 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 initial 7,35#0,018 -3,9#0,40 52,7#0,78 21,4#0,33 20,9#1,33 45,6#1,85 75,3#2,57 25,6#1,6 38,6#3,72 22,0#1,41 après 15 min 7,38#0,018 -1,5#0,31 52,5#0,84 24,3#0,38 23,2#0,77 53,6#2,44 84,3#1,76 26,3#0,5 39,3#1,53 24,4#0,81 après 90 min 7,39#0,013 -0,84#0,3 51,6#0,74 23,4#0,49 22,8#0,93 51,8#3,09 82,3#3,33 26,6#0,5 38,2#1,87 24,0#0,98 Désignations:DBT 3 déviations des bases-tampons BS bicarbonate standard pO2 pression partielle de l'oxygène P50 valeur de la mi-saturation du sang en oxygène #CO2 teneur totale en gaz carbonique BT bases-tampons BR bicarbonate réel HbO2 quantité d'oxyhémoglobine pCO2 pression partielle du gaz carbonique L'invention sera mieux comprise à l'aide des exemples d'obtention du chlorhydrate de l'acide 4-amino-3-oxy-3-phenylbutanoTque. EXEMPLE 1 a) On chauffe un melange de 2,39 g (0,015 mole) d'éther diethylique de l'acide bromomalonique et de 1,45 g (0,015 mole) de poudre de zinc dans 12 ml de benzène anhydre jusqu'à une température de 50 a 70 C. On verse dans le mélange chauffé une solution contenant 2,5 g (0,01 mole) de I'o-acétylaminoactophénone dans 12 ml de benzène anhydre. On maintient le mélange de réaction à une tempé rature de 50 à 70 C durant 1,5-2 heures. On traite ensuite ledit mélange de réaction par 40 ml de solution à 2% d'acide acétique et on extrait A l'éther diéthylique.On chasse par distillation l'extrait de solvant et on isole 1,0 g (19,2X) d'éther éthylique de l'acide 4-acétylamino-3-oxy-3-phényl-2-éthoxycarbonylbuta nolque; température de fusion: 75 C (CCl4). A l'analyse, on constate que le produit obtenu présente la for mule: C18H23N 6 et on obtient les valeurs suivantes: C H N - calculées ........ 60,50 6,81 4,15 - trouvées ......... 60,82-60,75 6,94-6,91 4,40-4,36 Spectre infrarouge (chloroforme, cm1): 1690, 1740 (v C=O), 3200-3640 (v OH, NH). b) On réchauffe 1 g (0,05 mole) de l'éther éthylique de l'acide 4-acétylamino-3-oxy-3-phényl -2-éthoxycarbonylbutanoTque ainsi obtenu (sans épuration complémentaire) à la température de 50 C dans 10 ml d'acide chlorhydrique dilué (1/1) durant 24 heures. Le rapport molaire de l'éther mentionné et de HCl est égal à 1/1. On évapore le mélange de réaction a une pression résiduelle de 10 A 15 mm Hg. On obtient 0,1 g (14,7%) de chlorhydrate de l'acide 4-amino-3-oxy-3-phénylbutanoïque à température de fusion 1720C (alcool/eau). A l'analyse, on constate que le produit obtenu présente la for mule: ClOH14N 3Cl et on obtient les valeurs suivantes: C H N - calculées ........ 51,83 6,04 6,04 - trouvées ......... 52,13 6,24 6,01 Spectre infrarouge (huile surfluorée, cm-1): 1720 (v C=O), 2700-3700 (v OH, +NH3). EXEMPLE 2 a) On réalise la réaction des agents chimiques initiaux de la même façon que dans l'exemple 1 (a), mais à la température de 80 C et dans un rapport molaire de l'#-acétylaminoacétophénone, de l'éther diéthylique de l'acide bromomalonique et du zinc égal à 1/1,5/1,5. Le rendement en l'éther ethylique de l'acide 4-acétylamino-3-oxy 3-phényl-2-éthoxycarbonylbutanoïque est égal à 1,5 g (28,9%). b) On effectue la réaction de l'éther sus-mentionné avec une solution aqueuse d'acide chlorhydrique de même que dans l'exemple 1 (b), mais on réchauffe le mélange de la reaction jusqu'à 800C. Le rendement en chlorhydrate de l'acide 4-amino-3-oxy-3-phényl butanoîque atteint 0,14 g (25). EXEMPLE 3 a) On effectue la réaction des agents chimiques initiaux de la même façon que dans l'exemple 2 (a) On additionne au mélange d'éther diéthylique de l'acide bromomalonique et de zinc, réchauffé jusqu'à 70 C, une solution contenant 2,5 g (0,01 mole) de l'#-acé- tylaminoacétophénone et 12 ml de tétrahydrofuranne anhydre. On maintient et on traite le mélange de réaction de même que dans l'exemple 1 (a). On obtient 3,33 g (64%) d'éther éthylique de l'acide 1-acétylamino-3-oxy-3-phényl-2-éthoxycarbonylbutanosque d température de fusion de 75 C. b) On fait bouillir I g (0,05 mole) d'éther ethylique brut de l'acide 4-acétyl ami no-3-oxy-3-phényl -2-éthoxycarbonyl butanoique dans 20 ml d'acide chlorhydrique dilué (1/1) dans un rapport molaire de l'éther mentionné et de HCl égal à 1/2 durant 9 heures. On sépare le produit de la même façon que dans l'exemple 1 (b). On isole 0,6 g (88%) du chlorhydrate de l'acide 4-amino-3-oxy-3-phénylbuta osque à température de fusion de 172 C. REVENDICATIONS 1.- Chlorhydrate de l'acide 4-amino-3-oxy-3-phénylbutanoïque caractérisé en ce qu'il presente la formule: 2.- Procédé d'obtention du chlorhydrate de l'acide 4-amino-3-oxy 3-phénylbutanoTque selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'on réalise la réaction de l'-acêtylaminoacétophénone avec l'éther diéthylique de l'acide bromomalonique en présence de zinc dans un milieu de solvant organique, sous chauffage avec formation de l'éther éthylique de l'acide 4-acétylamino-3-oxy-3-phényl-2-éthoxycarbonylbutanoïque, que l'on soumet ensuite à la réaction avec une solution aqueuse d'acide chlorhydrique. 3.- Procédé selon la revendication 2, caractérisé en ce que la réaction de l'-acétylaminoacétophénone avec l'éther diéthylique de l'acide bromomalonique est réalisée a la température de 30 à 90 C. 4.- Procédé selon les revendications 2 et 3, caractérisé en ce que l'on utilise a titre de solvant organique l'éther diéthylique, le benzène, le toluène, le tétrahydrofuranne. 5.- Procédé selon les revendications 2 à 4, caractérisé en ce que 1 on utilise I l'#-acétylaminocétophénone. 1 éther diéthylique de l'acide bromomalonque et le zinc dans un rapport molaire de 1!1,5/1,5. 6.- - Procédé selon la revendication 2, caractérisé en ce que la réaction de l'éther éthylique de l'acide 4-acétylamino-3-oxy-3-phényl- butanoique et de la solution aqueuse de l'acide chlorhydrique est réalisée à la température d'ébullition du mélange réactionnel. 7.- Procédé selon les revendications 2 et 6, caractérisé en ce que l'on emploie l'éther éthylique de l'acide 4-acétylamino-3-oxy-3-phényl butanoîque et 'acide chlorhydrique dans un rapport molaire de 1/2. 8.- Préparation médicamenteuse à action nootrope et hypertensive, caractérisé en ce-qu'elle comporte à titre de principe actif le chlorhydrate de l'acide 4-amino-3-oxy-3-phénylbutanoïque de formule: et un excipient pharmaceutique.