FR 2569690 A1 19860307 FR 8513285 A 19850906 La présente invention concerne un nouveau composé chimique, le sel de D,L-lysine de l'acide l-(4-chloroben zoYl)-5-méthoxy-2-méthyl-lH-indole-3-aétique, un procédé pour sa preparation et des compositions pharmaceutiques anti-inflammatoires contenant le sel a titre de principe actif. Comme on le sait, les propriétes anti-inflammatoires, antipyretiques et analgesiques de l'acide l-(4-chloro benzoyl)-5-methoxy-2-methyl-lH-indole-3-acetigue ou indo méthacine rendent ce composé particulierement utile dans le traitement de l'arthrite rhumatolde, de la spondylite ankilosante, de la goutte et de l'ostéoarthrite. Bien que l'indométhacine soit généralement bien to gérée, elle peut cependant provoquer des effets secondaires et toxiques, en particulier sur l'appareil gastro-intestinal. Ces effets indésirables sont attribuables, au moins en partie, a l'insolubilité dans l'eau de l'indométhacine. Cela rend impossible la preparation de compositions a administrer par voie parenterale, bien que les formes orales et rectales d'administration disponibles actuellement sur le marché manifestent souvent une action agressive indesirable sur la muqueuse gastrique et intestinale. Afin de surmonter ces problèmes, on a effectue depuis longtemps la synthese de sels hydrosolubles d'indome- thacine avec des amino-acides naturels tels que la lysine et l'arginine et avec des amines telles que la N-méthyl-D- glutamine. Par exemple, dans la demande de brevet français 7305161 (numero de publication 2 217 003) déposée le 4 vrier 1973 au nom de Instituto de Investigaciones Terapeutical S.A., il est decrit la préparation de sels hydrosolubles d'indométhacine avec la lysine et l'arginine. Dans la description du brevet, il n'est pas indique si le sel est obtenu en faisant réagir l'indomethacine avec la l-ly- sine, la D-lysine ou la D,L-lysine. Cependant, en comparant le point de fusion du sel dont la préparation est illustre dans l'Exemple 2 de la demande de brevet français avec le point de fusion du composé de la présente invention, on voit que le composé de la demande de brevet français est le sel forme avec la L-lysine.Ceci est facilement compréhensible si l'on considère que l'isomère L n'est pas seulement la forme sous laquelle l'amino-acide existe naturellement, mais egalement la forme disponible a un prix inferieur. On a maintenant découvert de façon surprenante que le sel de D,L-lysine de l'acide l-(4-chlorobenzoyl)-5-mé- thoxy-2-methyl-lH-indole-3-acetique, de formule (A) dans laquelle (Ip est l'anion de l'acide et (II) est le cation de la D,L-lysine, est remarquablement plus soluble dans l'eau que le sel de L-lysine correspondant, déja connu. En fait, la solubilité de la L-lysine est de 7,6-grammes/litre d'eau distillé, à 26 OC, tandis que la solubilite du sel de D,L-lysine de l'invention est de-12,5 grammes/litre d'eau distillé, à 26 "C. Un procede de préparation du sel de D,L-lysine de l'acide l-(4-chlorobenzoyl)-5-méthoxy-2-méthyl-lH-indole- 3-acétique comprend les étapes consistant : (1) a mettre en contact des quantites équimoléculaires d'a cide l-(4-chlorobenzoyl )-5-méthoxy-2-méthyl-lH-indole, 3-acétique et de D,L-lysine base dans un solvant réac tionnel pour obtenir ainsi un produit brut comprenant le composé de formule (A) qui est séparé du solvant réactionnel, lavé et séche sous vide (2) à dissoudre le composé de l'étape (1) dans une phase hydroalcoolique, en elevant la temperature de la solu tion résultante jusqu'a environ 60-80 "C, puis en re froidissant rapidement la solution jusqu'a environ 10-5 OC en agitant energiquement, pour obtenir ainsi des cristaux mîcronisés du composé de formule (A) que l'on sépare, lave et sèche sous vide. En raison de sa plus grande solubilité dans l'eau, le sel de D,L-lysine de la presente invention est non seulement plus;approprie que le sel de L-lysine correspondant pour préparer des compositions pouvant être administrees par voie parentérale, mais il constitue le derivé d'indo methacine de choix pour préparer une composition pouvant etre administrée par voie orale qui revêt la forme d'un comprimé à libération contrôlée. De préférence, la structure du comprime a libération contrôlée est celle decrite et revendiquée dans la demande de brevet européen 8583ru82.3 déposee le 16 juillet t985 au nom des mêmes déposants que la presente demande. La description de cette demande est incorporée ici a titre de référence. En bref, ce comprimé à libération contrôlée contient un réservoir consistant en une matrice solide d'un mélange homogene d'une matiere polymère, au moins une partie du principe actif et un additif soluble dans le suc gastrique et doué d'une chaleur négative de dissolution, un revetement appliqué sur le réservoir du type à matrice solide, constitué d'une première membrane insoluble commandant la vitesse de libération qui module la libération du principe actif selon la cinétique souhaitée ; et d'une seconde mem brane protectrice en une matière polymere soluble. La presente invention fournit également, par consé- quent, des compositions pharmaceutiques pouvant etre administrées par voie orale ou parentérale, douées d'activites anti-inflammatoire, antipyrétique et analgésique pour le traitement thérapeutique de l'arthrite rhumatolde, de la spondylite ankilosante, de la goutte et l'ostéoar- thrite, comprenant une quantité a action thérapeutique du sel de D,L-lysine de l'acide l-(4-chlorobenzoyl)-5-méthoxy- 2-methyl-lH-indole-3-acetique comme principe actif et un excipient pharmacologiquement acceptable pour ce principe. On a constaté qu'une posologie appropriee du sel de D,L-lysine d'indomethacine est comprise entre environ 10 et environ 70 mg/kg de poids corporelXjour. Les formes posologiques unitaires contiennent avantageusement environ 100 a environ 500 mg de principe actif. Parmi les exemples non limitatifs suivants, 1 'Exem- ple 1 illustre la préparation du sel de D,L-lysine d'indométhacine et l'Exemple 2 illustre la préparation de comprimes fournissant une vitesse de libération constante du principe actif. EXEMPLE 1 Préparation du sel de D,L-lysine d'indomethacine (1) Réaction de salification de l'indométhacine avec la D,L-lysine base. On dissout dans l'acétone des quantites sensiblement équimoléculaires de D,L-lysine (cristaux) (146 kg) et d'indométhacine (microcristaux) (4500 kg). On maintient le mélange réactionnel résultant sous agitation pendant 4 heures à 40 "C dans un réacteur émaillé equipe d'une chemise chauffante et d'un agitateur. On centrifuge le produit réactionnel brut, on le lave soigneusement avec une solution à 20 % d'acetone dans 1 'eau (volumelvolume) et le seche a une température ne dépassant pas 40 oC dans une étuve de sechage sous vide. (2) Cristallisation et purification du sel de D,L-lysine brut d'indométhacine. On conduit cette opération dans le but d'obtenir des cristaux micronisés non par des moyens mécaniques mais en utilisant un solvant chimique afin de conferer au principe actif une uniformite dimensionnelle poussée qui est indispensable pour obtenir des préparations pharmaceutiques constamment biodisponibles. On dissout 400 kg de sel de D,L-lysine brut d'indométhacine dans de l'éthanol a 95 Z dans un réacteur équipé d'une chemise chauffante et de moyens permettant de refroidir rapidement et d'agiter energiquement le contenu du réacteur. On amene la solution, maintenue sous agitation énergique, au point d'ebullition de l'ethanol. On ajoute 1 000 litres d'eau désionisee et on refroidit rapidement la solution jusqu'a 5 "C pour obtenir un precipite que l'on centrifuge, lave a l'acétone et sèche dans un secheur a vide à une temperature ne dépassant pas 40 "C. On obtient 300 kg (rendement de 75 %) de sel de D,L-lysine pur d'indomethacine ayant les caracteristiques suivantes Caracteristiques organoleptiques : poudre microcris talline inodore, pratique insipide, légèrement jaune. Solubilite : 12,5 g/l d'eau distillée, a 26 "C. Légèrement soluble dans les alcools. Pratiquement insoluble dans le chloroforme et les esters. Point de fusion : 204-207 OC (dé.). Spectre ultraviolet : le spectre d'absorption d'une solution éthanolique a 2 mg/l (poids/volume) testee dans une cu ve d'une distance optique de 1 cm a montré deux pics d'absorption a 267+ 1 nm et 321+ 1 nm. Spectre infrarouge : le spectre d'absorption infra rouge dans du Nujol présente des' pics d'absorption caractéristiques aux longueurs d'ondes suivantes 1680 cm 1 : absorption du carbonyle d'amide -l 1630 cm 1 : absorption de carboxylyle 1300 cm 1 : absorption de l'ion car boxyl e Spectre RMN : D20, d 1,32 - 2,03 m 6H (3CH2) 2,15 s 3H (1CH3) 2,9 - 3,13 t 2H (1CH2) 3,46 s 2H (1CH2) 3,65 s 3H (1CH3) 3,7 - 3,86 t 1H (1CH) 6,16 - 6,56 m 2H (Arom.) 6,9 - 7,46 m 5H (Arom.) Identification cristallographique :On a effectue un examen cristal lographique-diffractométrique avec un diffractométre Philips. Ld com paraison des spectres de diffraction de l'indomethacine telle quelle (1), de la D,L-lysine base telle quelle (2) et de leur produit de reaction montre sans ambiguité qu'après sali fication de (1) avec (2), il se for me une phase cristalline qui corres pond à un compose chimique vrai, bien defini. EXEMPLE 2 Préparation de comprimes de sel de D,L-lysine d'indométhacine avec vitesse constante de libération du principe actif. (a) Preparation des réservoirs du type a matrice solide Pour préparer 1000 reservoirs du type a matrice solide, on utilise les quantites suivantes de produit Sel de D,L-lysine d'indomethacine (principe actif) 100 g Acéto-propionate de cellulose (Poids moleculaire moyen 1 75 000) 10 g Type 482-20 de Eastman Kodak Phosphate disodique 80 g Mannitol 70 g Talc 60 g Stéarate de magnésium 3 g Le principe actif, le phosphate de sodium, le mannitol et le talc sont introduits dans un mélangeur a poudre et intimement melangés jusqu'a obtention d'un mélange totalement homogène. On prepare une solution de la matière polymère dans 55 ml d'un melange à 1:1 acétone:isopropanol. On imprègne de cette solution le melange de poudre précédemment obtenu. On granule la matière résultante au tamis de 800 , la se- che et la granule de nouveau au tamis de 420 p. On mélange le granulat ainsi obtenu avec du stearate de magnésium et on le soumet a compression au moyen de poin çons évidés d'un diametre de 12 mm, à une pression 300 MPa, de manière a obtenir des réservoirs biconvexes du type à matrice solide lenticulaire. Les caractéristiques géométriques de ces réservoirs sont les suivants Diamètre 12 mm Rayon de courbure des segments sphériques formant le réservoir bu convexe 14 mm Rapport diametre:epaisseur 4 Surface spécifique exposée Aire d'un seul segment sphérique 1,15 cm2 Aire de la paire de segments sphériques 2,30 cm2 Aire de la surface latérale 0,30 cm2 Surface spécifique globale 2,60 cm2 (b) Application de la membrane commandant la vitesse de libération Afin d'appliquer la membrane commandant la vitesse de libération du médicament, on utilise les produits suivants Polymère acrylique à faible perméabilité (EUDRAGITR RL, Röhm Pharma) 4,5 g Polymère acrylique de haute perméabilité. (EUDRAGITR, Rôhm Pharma) 18,2 g Huile de ricin 0,6 g Acétone 110 mi - I sopropanol 110 mi La membrane de commande de la vitesse de libération est appliquee dans un récipient plat en pulverisant la solution de polymère par courtes giclées suivies d'intervalles de séchage à l'air froid. L'epaisseur de la membrane de commande de la vitesse de liberation est de 0,06 mm, ce qui correspond a 5,4 mg de revêtement par cm2 de surface spécifique de réservoir biconvexe du type a matrice solide. (c) Application de la membrane protectrice Afin d'appliquer la membrane protectrice, on utilise les produits suivants Hydroxypropyl-methyl-cellulose (Pharmacoat 606, Shin Etsu Chemical) 3,0 g Bioxyde de titane 1,0 g Carbonate de magnésium 2,5 g Lysinate d'indomethacine 5,0 g Mélange de solvants (acêtone:isopropanol à 1:1) 88 ml La solution de polymere destinée a former la membrane protectrice est appliquée dans un récipient plat sur les réservoirs du type a matrice solide revêtus de la membrane de commande de la vitesse de libération provenant de l'étape précédente. On ajoute à la solution de polymere destinée a former la membrane protectrice 10 Z en poids du principe actif total. La libération du sel de D,L-lysine d'indométhacine est déterminée à la fois sur des modèles "in vitro" et "in vivo" Modèle "in vitro" On a conduit des expériences in vitro a la fois sur (i) les réservoirs du type a matrice solide non revêtus et (ii) les dispositifs terminés ; c'est-à-dire sur les reservoirs revêtus de la membrane de commande de la vitesse de libération et de la membrane protectrice chargee d'une partie du principe actif que l'on souhaite être immédiatement disponible. Pour effectuer ces expériences, on a utilise un appareil à "pales" USP XX, avec de l'eau distillée a 37 "C comme milieu de dissolution. Les résultats des essais in vitro ont été les sui- vants A- Libération du sel de D,L-lysine d'indomethacine à partir du réservoir du type a matrice solide. Temps Medicament total libéré Vitesse (min) (mg) (mg/h) 30 20 40 60 54 54 90 65 43 120 75 37,5 B- Liberation du sel de D,L-lysine d'indométhacine à partir du reservoir du type à matrice solide revêtu de la membrane de commande de la vitesse de libération et de la membrane protectrice char gee d'une partie du médicament. Temps Médicament total libéré Vitesse (heures) (mg) (mg/h) l 14 14 2 25 12,5 3 40 13,3 4 57 14,25 5 77 15,4 6 93 15,5 Les resultats ci-dessus démontrent que le medicament est totalement libére du réservoir du type à matrice solide en 5 heures environ. Après application de la membrane de commande de la vitesse de libération, la vitesse de libération in vitro reste sensiblement constante durant la sixième heure, la vitesse de libération étant comprise entre 12,5 et 15,5 mg/h. Experiences in vivo On a administre a un volontaire en bonne sante le meme comprimé. On a decele les taux plasmatiques suivants de principe actif. Temps (heure) pg/ml 1 -1,6 2 2,5 5 3,2 8 1,5 12 1,1 24 0,8 PROPRIETES PHARMACOLOGIQUES On a effectue des tests pharmacologiques afin de déterminer l'activité du composé de l'invention en comparaison de l'activité de l'indométhacine. Les processus d'essai et les résultats obtenus sont illustrés ci-après (1) DL50 chez la souris On a utilisé des souris de race Swiss albinos des deux sexes pesant 23 - 25 grammes. On a administré des solutions ou suspensions aqueuses à 5 Z en poids dans la gomme arabique des composés soumis à examen par un tubage gastrique. On a suivi le meme processus pour l'administration par la voie intrapéritonéale. On a calcule la DL50 pour la methode de Sperman Karber. On indique la limite de confiance de 95 S. (2) DL50 chez le rat On a utilise des rats albinos Sprague-Dawley pesant 200-210 grammes. On a preparé des solutions ou suspensions aqueuses à 5 % en poids dans la gomme arabique des composés soumis à examen. 53) Activité ulcérogène On a utilisé des rats mâles Sprague-Dawley pesant environ 200 grammes ; on a prépare des solutions ou suspensions aqueuses à 5 % en poids dans la gomme arabique des composes soumis-a essai. On a utilisé les processus d'essai décrits par D.V. Shriver, C.B.White, A. Sandor et M.E. Rosenthal dans Toxicology and Applied Pharmacology 32, 73, 1975. Les lésions gastriques ont été estimées d'après l'é- chelle suivante : O Pas de lésion 1 Suffusions hémorragiques 2 Nombreuses petites ulcérations 3 Ulcère géant et plusieurs petites ulcérations 4 Nombreuses ulcérations géantes 5 Ulcère perfore ou mort de l'animal. (4) Activité anti-inflammatoire Essai sur l'oedéme provoqué par la carraghénine On a conduit l'vessa sur des rats mâles de race Sprague-Dawîey pesant 180-200 grammes. On a administré à des groupes de 3 animaux chacun 1, 2, 4, 8 mg/kg des composés testés Les doses des composés ont éte dissoutes ou mises en suspension dans 10 ml d'eau. Un groupe de 5 rats (témoins) a reçu de l'eau du robinet. Le matin, ious les animaux ont été maintenus à la diète. Au bout d'une heure, on a mesuré le volume de la patte arrière droite. Les animaux qui présentaient des valeurs trop éloignées de la valeur moyenne ont eté élimines. Immédiatement après, les composés ont éte administrés par sonde oesophagienne. De la carraghénine a été injectée (0,1 ml d'une solution à 2 Z dans une solution saline) dans la zone tarso-metatarsienne de la patte arriere droite une heure après l'administration du compose. On est parvenu à une distribution régulière de la solution de carraghénine dans le tissu sous-cutané par un massage précis. La mesure du volume de la patte arrière a été répétée 5 heures plus tard. L'inhibition du pourcentage d'oedème a éte calculé en comparant l'augmentation du volume de la patte arriere de chaque groupe experimental avec celle du groupe témoin (fixe a 100). (5) Activité analgésique Le test d'étirement ou de contorsion induit par l'a- cide acétique (L.B.Witkin, C.F. Huebner, F. Galdi, E. O'Keefe, P. Spitaletta, A.J. Plummer, J. Pharmacol. Exp. Therap., 133, 400, 1961) a éte réalisé sur des so-uris mâles albinos Swiss pesant 30-40 grammes. Le premier jour de l'essai, on a choisi des souris qui ne manifestaient pas moins de 20 et pas plus de 50 tortillements en 5 à 20 minutes après injection intrapéritoneale de 0,35 ml d'acide acetique a 0,6 X. Le nombre moyen de reponses a ete de 32,7 contorsions en 15 minutes. On a ensuite subdivisé les animaux en groupes expérimentaux que l'on a traites, le second jour de l'essai, soit avec l'indomethacine, soit avec le sel de D,L-lysine d'indométhacine aux doses de 1, 2, 4 et 8 mg/kg par injection sous-cutanee. Les composés étaient dissous dans l'eau désionisée ; une solution de NaOH SN a été ajoutée goutte a goutte à la solution d'indométhacine jusqu'a ce que le residu non dissous disparaisse. Vingt minutes plus tard, chaque animal a reçu par injection 0,35 ml d'acide acétique a 0,6 Z ; 5 minutes apres l'injection, on a compté les contorsions de chaque souris en 15 minutes. Le nombre moyen de contorsions calculé pour chaque groupe de souris a été comparé avec le nombre moyen de contorsions observées le premier jour de l'essai (32,7 considere comme correspondant a 100) afin de calculer le pourcentage d'inhibition de l'étirement et de contorsionnement du a chaque dose de l'un ou l'autre composé examine. Les résultats des essais précédemment décrits ont eté les suivants : DL50 chez la souris, voie orale indométhacine 19,03 mg/kg sel de D,L-lysine d'indomethacine 38,05 mg/kg DL50 chez la souris, voie intra péritonéale indométhacine 38,5 mg/kg sel de D,L-lysine d'indométhacine 76,11 mg/kg DL50 chez le rat, voie orale indomethacine 16,32 mg/kg sel de D,L-lysine d'indomehacine 24,68 mg/kg DL50 chez le rat, voie intraperitonéale indomethacine 10,26 mg/kg sel de D,L-lysine d'indométhacine 18,35 mg/kg Activite ulcérogène Indomethacine : DU50 3,98 mg/kg Sel de D,L-lysine d'indomethacine DU50 6,87 mg/kg Oedème induit par la carraghenine indomethacine : DE33 4,27 mg/kg 0,012 mM/kg sel de D,L-lysine d'indometha- cine : DE33 3,24 mg/kg 0,006 mM/kg Activité analgésique Indométhacine : DE50 8,92 mg/kg sel de D,L-lysine d'indométha- cine : DE50 8,13 mg/kg REVENDICATIONS 1 - Sel de D,L-lysine de l'acide l-(4-chlorobenzoyl) -5-méthoxy-2-méthyl-1H-indole-3-acetique représente par la formule dans laquelle (I) est l'anion dudit acide et (II) est le cation de D,L-lysine. 2 - Composition pharmaceutique pouvant être admte nistrée par voie orale ou parenterale et douee d'activites anti-inflammatoire, antipyretique et analgésique pour le traitement therapeutique de l'arthrite rhumatolde, de la spondylite ankisolante, de la goutte et de ltosteoarthrite, caractérisée en ce qu'elle comprend une quantite thérapeutiquement active de sel de D,L-lysine de l'acide l-(4-chlo- robenzoyl)-5-méthoxy-2-méthyl-1H-indole-3-acétique comme principe actif et un excipient pharmacologiquement acceptable pour ce principe.