FR 2556007 A1 19850607 FR 8319395 A 19831205 La présente invention concerne un procédé pour fixer (ce qu'on appelle immobilisation) une enzyme ou une souche de microorganisme, plus précisément sous la forme d'un produit ou article moulé granulaire. On connaît de nombreuses méthodes comme l'emprisonnement, l'adsorption physique ou la liaison cova lente, pour immobiliser (fixation) des enzymes ou des micro organismes. Quand on emploie un produit de fixation sous la forme d'une masse ou d'une feuille obtenues par de telles méthodes,dans une réaction de microorganismes, il est de pra tique courante d'en garnir une colonne après l'avoir coupé ou broyé finement, mais comme le produit fixé est souvent soumis à un contact intime entre surfaces, cela diminue l'efficacité de la réaction du microorganisme, ou bien il se produit fréquemment un phénomène dit de formation de canaux, ce qui bloque la colonne. La présente Demanderesse a pensé que si l'on pouvait fixer une enzyme ou une souche de microorganisme sous laforme d'un produit moulé granulaire, cela faciliterait le garnissage d'une colonne avec le produit fixé en raison de la bonne fluidité de celui-ci, la surface de contact en tre les granules serait faible et l'efficacité de la réaction pourrait en être accrue. I1 en est résulté des études pous sées en vue de trouver une méthode d'immobilisation d'enzy mes ou de souches de microorganismes sous forme d'articles granulaires, études qui ont conduit à la découverte qu'en employant comme support pour la fixation une association d'une certaine sorte de résines hydrophiles photodurcissables et d'un polysaccharide à haute masse moléculaire hydrosolu ble pouvant former un gel par contact avec un ion de métal polyvalent, on pouvait tres facilement obtenir dans un mi lieu aqueux un article fixé granulaire d'une enzyme ou d'une souche de microorganisme ayant une grande résistance mécani- que, sans perte de l'enzyme ou de la souche du microorganis me La présente invention apporte ainsi un procédé de fabrication d'un produit moulé granulaire sur lequel est fixée (immobilisée) une enzyme ou une souche d'un microorga nisme, procédé selon lequel on ajoute goutte-à-goutte une composition liquide comprenant (a) une résine hydrophile photodurcissable avec au moins deux liaisons éthylénique par molécule, (b) un inducteur de photopolymérisation, (c) un polysaccharide à haute masse moléculaire hydrosoluble pouvant former un gel par contact avec un ou plusieurs ions de métaux polyvalents, et (d) une enzyme ou une souche de microorganisme, à un milieu aqueux contenant un ion de métal polyvalent pour gélifier cette composition sous une forme granulaire, puis on irradie avec une lumière actinique le gel granulaire ainsi formé pour durcir la résine phorodurcissable contenue dans le gel. Ce procédé sera décrit en détail ci-après. (a) Résine hydrophile photodurcissable. Dans le présent procédé, on utilise comme support de fixation une résine hydrophile photodurcissable ayant au moins deux liaisons éthyléniques par molécule, des résines appropriées de ce genre pouvant avoir une masse moléculaire moyenne en nombre ordinairement de 300- 100 000, de préférence de 500 à 20 000, comporter un groupe hydrophile ionique ou non ionique tel qu'un groupe hydroxyle, carboxyle, d'acide phosphorique ou sulfonique, un groupe amino ou un groupe éther, suffisant pour que la résine hydrophile photodurcissable puisse se disperser de façon homogène dans un milieu aqueux contenant en suspension une enzyme ou une souche de microorganisme ,et qui, exposée à une lumière actinique dont la longueur d'onde est d'environ 250 à 600 nm, de préférence d'environ 300 à 400 nm, durcissent en formant des résines solides pratiquement insoluble dans l'eau.On connaît déjà de telles résines photodurcissables, qui sont employées comme supports d'immobilisation d'enzymes ou de souches de microorganismes (voir par exemple le brevet US NO 4 195 129 et les brevet anglais 1 550 465 et 1 550 151). Des exemples caractéristiques en sont donnés ci-après. (1) Polyesters insaturés à haut indice d'acide. Sels de polyesters insaturés ayant un indice d'acide de 40 à 200, de préférence de 50 à ioo, résultant de l'estérification d'un polyol par un acide polycarboxylique choisi parmi un ou plusieurs acides polycarboxyliques insaturés comme l'anhydride maléique, l'acide maléique, l'acide fumarique, l'acide ou l'anhydride itaconique, et un ou plusieurs acides polycarboxyliques saturés tels que l'acide ou l'anhydride trimellitique et l'acide ou l'anhydride pyromellitique ; et polyesters insaturés ayant un indice d'acide de 40 à 200, de préférence de 50 à 100, qui sont obtenus par réaction d'un anhydride d'acide avec les hydroxyles résiduels d'un produit d'estérification éntre un ou plusieurs acides carboxyliques insaturés comme l'anhydide ou l'acide maléique, l'acide fumarique, l'acide ou l'anhydride itaconique, et un composant polyol contenant au moins 5 % en poids d'un polyol ayant plus de 3 groupes hydroxyliques par molécule. (2) Epoxydes insaturés à haut indice d'acide. Epoxydes insaturés ayant un indice d'acide de 40 à 200, de préférence de 50 à 100, résultant de la réaction d'un anhydride d'acide avec les hydroxyles résiduels d'un produit d'addition de n moles d'un composé polyglycidylique comme les produits Epikote 828, Epikote 1001 et Epikote 1004 de Shell Chemical Co., avec (n-1) moles d'un acide polycarboxylique tel que l'acide maléique, adipique ou trimellitique, et 2 moles d'un composé carboxylique insaturé comme l'acide acrylique ou méthacrylique et époxydes insaturés ayant un indice d'acide de 40 à 200, de préférence de 50 à 100, obtenus par réaction d'unanhy- dride d'acide avec les hydroxyl résiduels d'un produit d'addition de n moles d'un composé polyglycidylique tel que ci-dessus avec (n+2) moles d'un acide polycarboxylique tel que ci-dessus, puis réaction du produit d'addition formé avec un composé glycidylique insaturé comme l'acry late ou le méthacrylate de glycidyle. (3) Résines acryliques insaturées anioniques On entend par là des résines résultant de la fixation d'un groupe éthylénique pouvant donner lieu à une photopolpewrisation sur un copolpeZre ayant un groupe d'acide carboxylique, phosphorique et/ou sulfonique , formé par copolymérisation d'au moins deux monomères acryliques ou méthacrylique choisis parmi l'acide acrylique et l'acide méthacrylique et leurs esters, et qui ont une valeur A calculée par la relation suivante, comprise entre 0,8 et 5, de préférence entre 1 et 3, moles/kg, C + 5P + 1OS=A (1) C désignant la teneur (en moles par kg de la résine) en groupes carboxyliques de la résine, P la teneur (en moles par kg de la résine) en groupe phosphori qui de la résine, et S la teneur (en moles par kg de la résine) en groupes sulfoniques de la résine, la teneur de la résine en groupes éthyléniques photopolymérisables étant comprise entre 0,1 et 5, de préférence entre 1 et 3 moles par kg de résine. De tels copolymeres peuvent être obtenus par des méthodes de synthèse en elles-mêmes connues. On peut obtenir des copolymères à groupe carboxyle avec comme comonomère un acide carboxylique insaturé tel que l'acide acrylique ou méthacrylique. On peut obtenir des copolymères à groupe d'acide phosphorique avec comme comonomère un ester d'acide phosphorique insaturé tel que le produit Phosmer M ou Phosmer Cl (deux noms de marques de produits de Yushi Seihin K.K.), et l'on peut obtenir des copolymères à groupe sulfonique avec comme como nomère un ester d'acide sulfonique insaturé comme l'acrylate ou le méthacrylate de 2-sulfoéthyle ou de 3-sulfopropyle. Sur le copolymère ainsi obtenu on peut fixer un groupe éthylénique susceptible de donner lieu à une photopolymérisation par réaction d'un composé glycidylique insaturé comme l'acrylate ou le méthacrylate de glycidyle avec le groupe d'acide carboxylique , phosphorique ou sulfonique du copolymère. (4) Résines acryliques insaturées catio niques Résines acryliques insaturées obtenues par réaction d'un copolymere d'un ester de l'acide acrylique ou méthacrylique comprenant plus de 5 % en poids d'un motif de comonomere provenant d'un composé aminé insaturé tel que l'acrylate ou le méthacrylate de 2-diethylamino-ethyle ou de tert-butylaminoethyle, ou la vinylpyridine, avec un composé glycidylique insaturé tel que l'acrylate ou le méthacrylate de glycidyle ; résines acryliques insaturées obtenues par chlorométhylation de polystyrene suivie d'une quaternisation du produit formé avec un composé aminé insaturé et produits d'addition d'une polyéthylène-imine et d'un composé glycidylique insaturé. (5) Polyesters de polyéthylène-glycols et d'acide acrylique ou méthacrylique. Diesters d'acides monocarboxyliques insaturés comme l'acide acrylique ou méthacrylique avec des polyéthylene glycols ayant une masse moléculaire de 400 à 10 000, de preférence de 400 à 6000, avec moins de 3Q % en poids d'un motif d'oxyde de propylene ; produits d'estérification de n moles de diacides comme l'anhydride maléique, avec (n+1) moles d'un polyéthylène glycol ayant une masse moléculaire de 400 a 10 000, de préférence de 400 à 6000, et 2 moles d'acides monocarboxyliques insaturés comme l'acide acrylique ou méthacrylique ; et produits d'estérification de n moles de triacides comme l'acide trimellitique, avec (n+2) moles d'un polyéthylène glycol ayant une masse moléculaire de 400 à 10 000, de préférence de 400 à 6 000, et 3 moles d'un acide carboxylique insaturé tel que l'acide acrylique ou méthacrylique. (6) Produits d'addition, avec formation de polyuréthannes, d'un polyéthylène- glycol et d'acrylate ou de méthacrylate de 2-hydroxyéthyle. Produits résultant de la réaction de n-moles d'un diisocyanate tel que le diisocyanate de tolylene, de xylylène ou d'hexaméthylène, avec (n-1) moles d'un polyéthylène glycol ayant une masse moléculaire de 400 à 10 000, de préférence de 400 à 6000, et 2 moles d'un composé monohydroxylique insaturé comme l'acrylate ou le méthacrylate de 2-hydroxyéthyle t produits de réaction de n moles d'un triisocyanate comme le produit Desmodur L (produit de Bayer AG) avec (ne1) moles d'un polyéthylène glycol ayant une masse moléculaire de 400 à 6000, de préférence de 400 à 6000, et (n+2) moles d'un composé monohydroxylique insaturé comme l'acrylate ou le méthacrylate de 2-hydroxyéthyle ; et produits de réaction de 1 mole d'un composé trihydroxylique comme le triméthylol-propane, avec 4 moles d'un diisocyanate, 2 moles d'un polyéthylène glycol ayant une masse mo léculaire de 400 à 10 000, de préférence de 400 à 600qui et 2 moles d'un composé monohydroxylique insaturé comme I'acrylate ou le méthacrylate de 2-hydroxyéthyle. (7) Celluloses insaturées. Produits d'addition entre des dérivés de la cellulose hydrosolubles comme l'acétate-phtalate de cellulose, le phtalate d'hydroxypropyl méthyl cellulose et l'hydroxyéthyl cellulose, et des composés glycidyliques insaturés comme l'acrylate ou le méthacrylate de glycidyle ou des anhydrides insaturés comme l'anhydride itaconique ou maléique. (8) Polyamides insaturés. Polyamides insaturés que l'on obtient en soumettant des produits d'addition formés entre 1 mole d'un diisocyanate comme le diisocyanate de tolylène ou de xyly lène et 1 mole d'un composé hydroxylique insaturé comme l'acrylate de 2 hydroxyéthyle, à une réaction d'addition avec un polyamide soluble dans l'eau comme la gélatine. Les résines photodurcissables que l'on vient d'indiquer à titre d'exemples peuvent être employées individuellement ou en associations entre elles. Parmi ces résines, on peut employer d'une manière particulièrement avantageuse pour l'exécution de cette invention les polyesters de polyéthylène glycols et d'acide acrylique ou méthacrylique (paragraphe 5), ainsi que les produits d'addition, avec formation de polyuréthanes, d'un polyethylene glycol et d'acrylate ou de méthacrylate de 2-hydroxyethyle (paragraphe 6). (b) Inducteur de photopolymérisation. Pour déclencher et activer la réaction de photopolymérisation de la résine photodurcissable (a), on ajoute à la compsoition liquide un inducteur de photopolymérisation ou photosensibilisateur. Des inducteurs utilisables sont ceux pouvant former des radicaux par décomposition sous irradiation, radicaux qui amorcent la polymérisation et provoquent la réaction de réticulation de résines ayant un groupe insaturé susceptible de donner lieu à une polymérisation.Des exemples particuliers en sont des alcools alpha-cétoniques comme la benzine et I'acétolne des éthers d'acylolnes tels que l'éther méthylique, éthylique ou propylique de la benzine et l'éther éthylique de 1' aniso > ne et/ou de la pivaloine ; des composés aromatiques polynucléaire tels que le naphtol et l'hydroxyanthracàne des acylolnes substituées à la position alpha comme la méthylbenzoine et l'alpha-méthoxybenzoine ; des azoamides comme le 2-cyano-2-butylazoformamide ; des sels de métaux tels que le nitrate d'uranyle et le chlorure ferrite; des mercaptans ; des disulfures ; des composés halogénés ; et des colorants. Ces inducteurs de photopolymérisation peuvent etre employés individuellement ou en associations entre eux, dans une proportion qui est ordinairement de 0,01 à 100 %, de préférence de 0,1 à 5 % , de la résine. (c) Polysaccharides à haute masse molé culaire solubles dans l'eau. Une caractéristique importante de cette invention est l'emploi d'un polysaccharide à haute masse moléculaire hydrosoluble associé à la résine photodurcissable (a), comme support de fixation ou immobilisation. Des polysaccharides à haute masse moléculaire hydrosolubles appropriés pouvant être choisis sont ceux qui peuvent former des gels insolubles ou peu solubles dans l'eau par mise en contact avec un ion de métal polyvalent dans un milieu aqueux. Ils ont une masse moléculaire en général de l'ordre de 3000 à 2 000 000, de préférence d'environ 100 000 à 1 000 000, et sous leur forme hydrosoluble, avant la mise en contact avec l'ion de métal polyvalent, leur solubilité dans l'eau est ordinairement d'au moins 10g/litre environ, de préférence d'au moins 30 g/litre, à la température de 250C. Des exemples particuliers de tels polysaccharides comprennent les sels de métaux alcalins de l'acide alginique, du carraghenane, du mannane de konjac et de la pectine. Le polysaccharide macromoléculaire hydrosoluble peut être gélifié par mise en contact, en solution dans un milieu aqueux, avec un ion de métal polyvalent, par exemple avec un ou plusieurs ions de métaux polyvalents choisis parmi ceux de métaux alcalinoterreux tels que le magnésium, le calcium, le strontium et le baryum, ou d'autres ions de métaux polyvalents comme les ions cérium et nickel. Il n'est pas nécessaire que le polysaccharide hydrosoluble puisse former un gel par mise en contact avec tous les ions de métaux polyvalents, étant suffisant qu'ils puissent se transformer en un gel par mise en contact avec au moins un ion de métal polyvalent, de préférence un ion de métal alcalino terreux. La concentration de métal polyvalent à laquelle se produit la gélification varie avec la nature du polysaccharide, mais en général elle est d'au moins 0,01 mole/litre,de préférence de 0,1 à 2 moles/litre. (d) Enzymes ou souches de microorganis mes. Aucune limitation particulière n'est fixée à la sorte d'enzyme ou de souche de microorganisme pouvant être immobilisée (fixation) par le procédé selon cette invention, dans lequel toutes sortes d'enzymes ou de souches de microorganismes peuventê re fixées sans perte notable de leur activite enzymatique ou de fermentation. Des exemples caractéristiques d'enzymes et de souches de microorganismes pouvant être fixées par le présent procédé sont donnés ci-après. (A) Enzymes lactate déshydrogenase (1.1.2.3), lactate oxydase (1.1.3.2), glucose oxydase (1.1.3.4), formiate déshydrogénase (1.2.1.2), aldéhydes déshydrogénase (1.2.2.3), aldéhydes oxydase (1.2.3.1), xanthine oxydase (1.2.3.2), pyruvate oxydase (1.2.3.3), pyruvate réductase (1.2.4.1), cortisone-alpha-réductase (1.3.1.4), acyles CoA-déshydrogénase (13.99.3), 3-cétostéroïdes #1-déshydrogénase, 3-cétostéroïdes #4-déshydrogénase (1.3.99.5), L-alanine déshydrogénase (1.4.1.1), acide L-glutamique déshydrogénase (1.4.1.3), L-amino acides oxydase (1.4.3.2), D-amino acides oxydase (1.4.3.3), pyridoxal phosphate oxydase (11.4.3.5), catalase (1.11.6), catéchol méthyltransférase (2.1.1,6), carnitine acétyltransférase (2.3.1.7), acétyle CoA acétyltransférase (2.3.1.9), aspartate aminotransférase (2.6.1.1), alanine-aminotransférase (2.6.1.2), pyridoxamine pyruvate trasférase (2.6.1), hexokinase (2.7.11), glucokinase (2.7.1.2), fructokinase (2.7.1.4), phosphoglucokinase (2.7.1.10), phosphofructokinase (2.7.1.11), pyruvate kinase (I2.7.1.40), carboxyesterase (3.1.1.1), arylestérase (3.1.1.2), lipase (3.1.1.3), phospholipase A (3.1.1.4), acétylestérase (3.1.1.6), cholesterol esterase (3.1.1.13), glucoamylase (3.2.1.3), cellulase (3.2.1.4), inulase (3.2.1.7), alpha-glucosidase (3.2.1.20), bêta-glucosidase (3.2.1.21), alpha-galactosidase (3.2.1.22), bêta-galactosidase (3.2.1.23), invertase (3.2.1.26), pepsine (3.4.4.1), trypsine (3.4.4.4), chymotrypsine A (3.4.4.5), cathepsineA (3.4), papaine (3.4.4.10), thrombine (3.4.4.13) amidase (3.5.1.4), urease (3.5.1.5), penicillineacylase (3.5.1.11), aminoacylase (3.5.1.14), adénine désaminase (3.5.4.2), ATPase (3.6.1.3), pyruvate décarboxylase (4.1.1.1), oxalate décarboxylase (4.1.1.2), tryptophane décarboxylase (4.1.1.27), aldolase (4.1.2.13), malate synthase (4.1.3.2), tryptophane synthase (4.2.1.20), aspartase (4.3.1.1), lysine racemase (5.1.1.5), glucose-6-phosphate isomerase (5.3.1.9), et stéroïdes A-isomérase (5.3.3.1). (Les nombres figurant entre parenthèses représentent les numéros de classification de ces enszymes). (B) Souches de microorganismes Bacteries Lactobacillus bulgaricus ATCC 11842, Aerobacter aerogenes ATCC 13048, Bacillus subtilis ATCC 9799, Azotobacter vinelandii ATCC 12837, Proteus vulgaris ATCC 6059, Arthrobacter simplex ATCC 6946, Escherichia coli ATCC 15223, Pseudomonas putida ATCC 12633, Achromobacter liquidum ATCC 25311, et Nocardia rhoderous NCIB 10554. Mycètes et levures Curvularia lunata ATCC 12017, Saccharomyces forinosensis IFO 0216, Saccharomyces cerevisiae ATCC 10275, Saccharomyces carlsbergensis ATCC 9080, Saccharomyces robustus IFO 0224, Saccharomyces rouxii ATCC 2615, Zygosaccharomyces japonicus ATCC 11069, Zygosaccharomyces majar, zygosaccharomyces soya, Schizosaccharomyces pombe ATCC 2476, Schizosaccharomyces octosporus (ATCC 2479), et Schizosaccharomyces mellacei. Ces enzymes et microorganismes peuvent être employés individuellement ou en mélanges de deux ou plus d'entre eux, et si l'on veut, on peut les fixer individuellement de manière à employer simultanément deux produits de fixation ou plus. Pour des buts pratiques, les enzymes ayant unpouvoir de fermentation alcoolique sont particulièrement intéressantes parmi les enzymes et les souches de microorganismes qui ont été citées en exemples. Préparation d'une composition liquide. On peut former-une composition liquide en mélangeant intimement les composants (a), (b), (c) et (d) dans un milieu aqueux, pour lequel convient de l'eau ou bien une solution aqueuse tamponnée. Si l'on veut, on peut également employer un mélange d'un alcool hydrosoluble avec de l'eau ou une solution aqueuse tamponnée, un mélange d'une cétone hydrosoluble avec de l'eau ou une solution aqueuse tamponnée, ou encore une solution dans un solvant du type ester miscible de façon homogène avec de l'eau ou une solution aqueuse tamponnée. Les proportions des composants (a), (b), (c) et (d) ne sont pas strictement limitées, pouvant varier beaucoup suivant les types des composants individuels, etc..., mais d'une manière générale, pour 100 parties en poids de la résine hydrophile photodurcissable (a), on peut mettre les composants (b), (c) et (d) dans les proportions suivantes (les valeurs figurant entre parenthèses représentant les intervalles préférés). (b) Inducteur de photopolymérisation 0,01 à 10 parties en poids (0,1 à 5 parties en poids) (c) Polysaccharide hydrosoluble à haute masse moléculaire 0,5 à 15 parties en poids (1 à 8 parties en poids) (d) Enzyme ou souche du microorganisme 0,001 à 50 parties en poids (0,01 à 20 par ties en poids) La proportion du milieu aqueux peut être de 10 à 1500 parties en poids, de préférence 50 à 900 parties, en pourcentages, par rapport au poids total des composants (a) à (d). Gélification On ajoute ensuite goutte à goutte la composition liquide ci-dessus à un milieu aqueux contenant un ion de métal polyvalent pour la gélifier sous une forme granulaire. L'ion de métal polyvalent du milieu aqueux est choisi parmi ceux pouvant gélifier le polysaccharide de la composition liquide. On peut facilement déterminer si l'ion de métal polyvalent peut gélifier le polysaccharide en ajoutant goutte à goutte une solution aqueuse homogène de la résine hydrophile photodurcissable et du polysaccharide à une solution aqueuse contenant l'ion de métal polyvalent, et en observant s'il se forme ou non un gel granulaire. On peut préparer le milieu aqueux contenant l'ion de métal polyvalent en dissolvant dans ce milieu un composé hydrosoluble du métal tel qu'un halogénure, un carbonate, un bicarbonate,un sulfate ou un nitrate. La teneur du milieu aqueux en ion de métal polyvalent peut être généralement ajustée entre 0,01 et 5 moles/litre, de préférence entre 0,1 et 2 moles litre. on peut ajouter goutte à goutte la composition liquide au milieu aqueux contenant l'ion de métal polyvalent par exemple par l'extrémité d'un tube effilé, comme une seringue, ou bien en dispersant la composition sous une forme granulaire sous l'action d'une force centrifuge ou en l'atomisant par l'extrémité d'une buse pour l'ajouter ainsi goutte à goutte sous forme granulaire. On peut modifier à volonté la dimension-des gouttelettes liquides à ajouter goutte-à-goutte suivant la dimension des particules voulue pour le produit granulaire final que l'on veut obtenir, mais en général ces gouttelettes auront un diamètre d'environ 0,1 à 5 mm, de préférence de l'ordre de 0,5 à 3 mm. La composition liquide mise en contact avec l'ion de métal polyvalent du milieu aqueux forme aussitôt un gel granulaire. Le mécanisme de la gélification à cet instant n'a Eas été éclairci d'une manière précise, mais on pense cependant que la solution d'un halogeure ou d'un autre sel fait floculer le polysaccharide hydrosoluble à haute masse moléculaire, puis que le groupe anionique du polysaccharide se lie ioniquement par l'intermédiaire de l'ion de métal polyvalent, ce qui réticule le polysaccharide en une structure tridimensionnelle, avec formation d'un gel. Ordinairement, la température ordinaire est suffisante pour que la gélification se produise, mais si l'on veut on peut former le gel à une température à laquelle cependant l'enzyme ou la souche de microorganisme n'est pas désactivée, et l'on peut également opérer la gélification sous refroidissement. Photodurcissement. Le gel granulaire formé est ensuite irradié en lumière actinique, à l'état dispersé dans le milieu aqueux ou bien après qu'il a été séparé du milieu , ce qui durcit la résine hydrophile photodurcissable contenue dans le gel, et l'on obtient ainsi un produit granulaire sur lequel est immobilisée l'enzyme ou la souche du microorganisme, produit qui est pratiquement insoluble dans l'eau et qui a une grande résistance mécanique. La longueur d'onde de la lumière actinique peut être variable suivant le type de résine photodurcissable que comprend le gel, mais il est en général avanta- geux d'opérer avec une source émettant une lumière de longueur d'onde comprise entre 250 et 600 nm environ, de préfé- rence entre 300 et 400 nm. Des exemples de telles sources lumineuses comprennent des lampes à mercure à basse ou haute pression, des lampes au xénon, une lampe à arc de carbone et la lumière solaire. La durée d'irradiation est fonction de l'intensité lumineuse, de la distance entre le gel et la source etc..., mais ordinairement elle peut être de l'ordre de 0,5 à 10 minutes, et elle peut être parfois raccourcie si l'irradiation se fait dans une atmosphère inerte. Il faut procéder à l'irradiation de manière que la lumière actinique puisse atteindre la totalité du gel granulaire d'une manière aussi régulière que possible. Par exemple, si l'on irradie un gel granulaire qui a été séparé du milieu aqueux, il est bon de la placer sur une plaque de verre transparent ou dans un récipient en verre transparent, en une seule couche , que l'on irradie à la fois par dessous et par dessus la plaque ou le récipient. La température ordinaire suffit aussi pour le potodurcissement du gel granulaire, mais si l'on veut on peut opérer l'irradiation à une température plus élevée, à laquelle cependant l'enzyme ou la souche de microorganisme n'est pas désactivée, et l'on peut également irradier le gel sous refroidissement. Le gel granulaire qui a été irradié est ensuite lavé à l'eau ou avec une solution aqpeuse tamponnée, et il est conservé tel quel ou apres avoir été lyophilisé. Ainsi, le présent procédé permet d'obtenir d'une manière très simple un produit granulaire sur lequel est immobilisee une enzyme ou une souche de microorganisme, dont les grains ont un diamètre d'environ 0,5 à 5 mm, et une production continue est également possible. La présente invention apporte divers avantages. Elle rend par exemple possible la fabrication d'un produit granulaire portant une enzyme ou une souche de microorganisme avec un support synthétique, ce qui était difficile jusqu'ici. L'emploi d'un polysaccharide hydrosoluble à haute masse moléculaire a par ailleurs l'effet d protéger l'activité de l'enzyme ou de la souche de microorganisme, et de plus, quand on utilise le produit granulaire obtenu, le polysaccharide est progressivement peptisé et sort de la matrice de résine photodurcissable en laissant des pores fins dans le produit, pores qui facilitent la pénétration d'un substrat dans celui-ci, d'ou il résulte une plus grande vitesse de réaction. Les produits granulaires obtenus selon cette invention peuvent être avantageusement employés en particulier dans des réacteurs qui ne sont pas très grands ou dans des réacteurs à lit fluidisé. Les exemples qui suivent illustrent plus en détail la présente invention. EXEMPLE 1 On mélange bien 100 parties en poids d'un prépolymère photodurcissable formé de 2000 g d'un polyéthy lène glycol ayant une masse moléculaire d'environ 4000, 222 g (1 mole) de diisocyanate d'isophorone et 130 g (1 mole) de méthacrylate de 2 hydroxyéthyle, avec 2 parties en poids d'éther isobutylique de la benzolne et 100 parties en poids d'eau distillée, au mélange obtenu on ajoute 100 parties en poids d'une solution aqeuse à 2 % d'alginate de sodium et 100 parties en poids d'une suspension à 10 % de Saccharomyces cervisiae (ATCC 11909), on mélange le tout intimement puis on ajoute goutte a goutte le mélange de la résine photodur cassable et de la levure a une solution 1M de chlorure de calcium au moyen d'une seringue à injection, d'une hauteur de 10 cm au-dessus de la surface du liquide. On obtient ainsi un produit granulaire en grains d'environ 2 mm On place ce produit dans une boite de Petri à fond plat, où on l'expose pendant 3 minutes, par-dessus et par-dessous la boite, à une lumière actinique de longueur d'onde de 300 à 400 nm, ce qui donne un produit granulaire à levure fixée ayant une résistance à la compression de 2 20 kg/cm En examinant ce produit dans un milieu de culture de melasse pour déterminer son pouvoir de fermentation alcoolique, on trouve que la fermentation de l'alcool est équivalente à celle produite par Saccharomyces cervisiae non immobilisée. EXEMPLE 2 On ajoute 100 parties en poids d'eau distillee à 100 parties en poids d'un prépolymere photodurcissable formé de 1000 g de polyéthylène glycol 2000 (masse moléculaire 2000) et 2 moles d'acide méthacrylique, on porte le mélange aux environs de 500C et on mélange bien pour former une solution aqueuse de résine homogène à laquelle on ajoute 2 parties en poids d'éther éthylique de la benzine, et on mélange le tout. A cette solution de résine on ajoute 75 parties en poids d'une solution aqueuse à 3 % de K-carraghénane et 25 parties en poids d'une suspension à 10 % de cellules de Saccharomyces carlsbergensis (ATCC 9080) de manière à former un mélange homogène. En ajoutant ce mélange goutte-à-goutte à une solution aqueuse à 5 g de chlorure de potassium avec une seringue à injection, d'une hauteur de 20 cm au-dessus de la surface du liquide, on obtient un produit granulaire en grains de 1,5 mm. On met ce produit granulaire,avec la solution de chlorure de potassium, dans une boîte de Pétri à fond plat, en une seule couche, de manière que le produit granulaire se trouve dans la solution aqueuse sur une hauteur de 2 mm, puis on l'irradie pendant 3 minutes par-dessus la boîte et encore pendant 3 minutes par-dessous la boite avec une lumière actinique de longueur d'onde 300 à 400 nm, ce qui donne un produit granulaire à levure immobilisée ayant une résistance à la compression de 30 kg/cm2. Ce produit a un bon pouvoir de fermentation alcoolique, pouvant donner lieu à la formation de plus de 10 % d'éthanol. EXEMPLE 3 On mélange de façon homogène 1 partie en poids d'éther éthylique de la benzine avec 100 parties en poids d'une solution de résine à 50 8 de matière solide obtenue par neutralisation avec de l'hydroxyde de sodium d'une résine photodurcissable (masse moléculaire moyenne en nom bre environ 4100 ; indice d'acide 75), elle-même préparée par réaction de 1 mole d'Epikote 1001 (masse moléculaire environ 900, équivalent d'époxyde environ 475 ; nom de mar que d'un produit de Shell Chemical Co.) avec 1,5 mole d'aci de adipique, puis estérification du produit formé avec 4,5 moles d'anhydride succinique et réaction de l'ester avec 2,75 moles de méthacrylate de glycidyle.Au mélange ainsi obtenu on mélange 50 parties en poids d'une solution aqueuse à 3 % d'alginate de sodium et 1 partie en poids d'une pâte à 30 % de cellules de Saccharomyces robustus (IFO 0224), de façon homogène, pour former une dispersion que l'on ajoute goutte à goutte à une solution 1,OM de chlorure d'aluminium au moyen d'une seringue à injection, ce qui donne un gel de forme sphérique. On place ce gel dans une boite de Petri dans laquelle on l'expose pendant 3 minutes chaque fois, par-dessus et par-dessous la boite, à une lumière actinique de longueur d'onde 300 à 400 nm. On obtient ainsi un produit sphérique à levure immobilisée, en grains de 3 mm de diamètre. EXEMPLE 4 On mélange de façon homogène 2 parties en poids d'éther isobutylique de la benzine avec 90 parties en poids d'une solution de résine à 75 % de matière solide obtenue par neutralisation avec de l'hydroxyde de potassium d'une résine photodurcissable ayant une masse moléculaire moyenne en nombre d'environ 25 000, formée d'un copolymère de 300 parties en poids d'acrylate d'éthyle, 100 parties en poids d'acide méthacrylique, et 80 parties en poids de styrène, 20 parties en poids de Phosmer M (nom de marque d'un monophosphate du type méthacrylate produit par Yushi Seihin K. K.) et 50 parties en poids de méthacrylate de glycidyle.Au mélange ainsi obtenu on ajoute ensuite 50 parties en poids d'une solution aqueuse à 3 g d'alginate de sodium et 50 parties en poids d'une suspension à 10 % de cellules de Saccharomyces formosensis (IFO 0216), on mélange unifor mément et on ajoute goutte-à-goutte la solution de résine homogène à une solution aqueuse à 10 % d'alun d'ammonium placée dans une boîte de Petri, puis on gélifie la solution de résine sous une forme granulaire. On irradie alors le gel granulaire chaque fois pendant 3 minutes, par-dessus et pardessous la boîte, avec une lumière actinique de longueur d'onde 300 à 400 nm , ce qui donne un produit granulaire à levure immobilisée en grains d'environ 2 mm de diamètre. EXEMPLE 5 On mélange bien 0,5 partie en poids d'éther isobutylique de la benzoïne avec 100 parties en poids d'une solution aqueuse à 25 % d'une résine photodurcissable obtenue par addition de 1 mole de N-méthylol acrylamide à 500 g d'alcool polyvinylique ayant un degré de polymérisation de 1500, puis on mélange uniformément à ce mélange, pour former une dispersion, 100 parties en poids d'une solution aqueuse à 3 % de K-carraghenane et 10 parties en poids d'une suspension à 10 % de cellules de Zygosaccharomyces japonicus (ATCC 11069). On fait arriver la dispersion de résine photodurcissable et de levure sur un disque tournant qui la disperse par la force centrifuge, de manière à faire tomber les particules dispersées sur une solution 0,5M de chlorure de potassium, pour les gélifier à l'état granulaire.On place le gel granulaire ainsi formé dans une boîte de Petri où on l'expose pendant 3 minutes chaque fois, par-dessus et pardessous la boîte, a une lumière actinique de longueur d'onde 300 à 400 nm, ce qui donne un produit à levure immobilisée en grains de 3 mm de diamètre. EXEMPLE 6 On mélange bien 100 parties en poids d'un prépolymère photodurcissable formé de 200 g de polyéthylène glycol ayant une masse moléculaire d'environ 4000, 1 mole (222 g) de diisocycnate d'isophorone et 1 mole (130 g) de mGthacry- late de 2-hydroxyéthyle, avec 2 parties en poids d'éther isobutylique de la benzoine et 100 parties en poids d'eau distillée. Au mélange ainsi formé on ajoute 100 parties en poids d'une solution aqueuse à 2 % d'alginate de sodium et 100 parties en poids d'une enzyme, à savoir l'invertase, à la concentration de 0,1 %, en solution dans un tampon au phosphate 0,7M à pH 5.On mélange bien le tout puis on ajoute goutte-à-goutte le mélange de la résine photodurcissable et de l'enzyme à une solution 1M de chlorure de calcium au moyen d'une seringue à injection, d'une hauteur de 10 cm au-dessus de la surface du liquide, ce qui donne un produit granulaire en grains d'environ 2 mm de diamètre. On met ce produit granulaire dans une boîte de Petri à fond plat, où on l'expose pendant 3 minutes chaque fois, par-dessus et par-dessous la boîte, à une lumière actinique de longueur d'onde 300 à 400 nm, ce qui donne un produit granulaire portant l'enzyme immobilisée, ayant une résistance à la compression de 20 kg/cm2. En déterminant l'activité de l'invertase sur ce produit avec du saccharose comme substrat, on trouve une activité spécifique, par rapport à l'invertase non immobilisée, de 65 %. EXEMPLE 7 On ajoute 100 parties en poids d'eau distillée a 100 parties en poids d'un-prépolymère photodurcissable formé de 1000 g de polyéthylène glycol 2000 (masse moléculaire 2000) et 2 moles d'acide méthacrylique, on porte aux environs de 500C et on mélange bien pour former une solution aqueuse homogène de résine , dans laquelle on dissout 2 parties en poids d'éther éthylique de benzolne. A cette solution de résine on ajoute 75 parties en poids d'une solution aqueuse à 3 % de K-carraghénane et 25 parties en poids d'une suspension à 2 % de glucose isomérase tamponnée à pH 8 avec du bicarbonate de sodium, et on forme un mélange homogène que l'on ajoute goutte à goutte à une solution aqueuse à 5 e de chlorure de potassium au moyen d'une seringue d'injection, d'une hauteur de 20 cm au-dessus de la surface du liquide, ce qui forme un produit granulaire en grains de 1,5 mm de diamètre. On place ce produit granulaire,avec la solution de chlorure de potassium, dans une boite de Petri à fond plat, en une seule couche, de manière que le produit granulaire se trouve dans la solution aqueuse sur une hauteur dè 2 mm, et on irradie pendant 3 minutes chaque fois, par-dessus et pardessous la boîte, avec une lumière actinique de longueur d'onde 300 à 400 nm, ce qui donne un produit granulaire avec l'enzyme immobilisée, ayant une résistance à la compression 2 de 30 kg/cm On détermine l'activité de la glucose isomerase à la température de 600C dans un tampon de bicarbonate de sodium à pH 8, avec du glucose comme substrat. On trouve ainsi une activité spécifique de 80 % par rapport à la glucose isomérase non immobilisée. EXEMPLE 8 On mélange bien 1 partie en poids d'éther éthyli- que de la benzine avec 100 parties en poids d'une solution de résine à 50 % de matière solide, obtenue par neutralisation avec de l'hydroxyde de sodium et d'une résine photodurcissable ayant un indice d'acide de 75 et une masse moléculaire moyenne en nombre d'environ 4100, elle-même obtenue par réaction de 1 mole d'Epikote 1001 (nom de marque d'un produit de Shell Chemical Co. ; masse moléculaire environ 900, equivalent d'époxyde environ 475) avec 1,5 mole d'acide adipique, puis estérification du produit formé avec 4,5 moles d'anhydride succinique et reaction de l'ester avec 2,75 moles de méthacrylate de glycidyle. Avec cette solution on mélange bien, en les dispersant, 50 parties en poids d'une solu tion aqueuse à 30 % d'alginate de sodium et 0,5 partie en poids de cellules d'Arthrobacter simplex (ATCC 6946) traitées à l'acétone, puis on ajoute la dispersion goutte-à-goutte à une solution 1,OM de chlorure d'aluminium avec une seringue d'injection, ce qui forme un gel de forme sphérique que l'on met dans une boîte de Petri où on l'irradie en lumière actinique de longueur d'onde 300 à 400 nm, pendant 3 minutes chaque fois par-dessus et par-dessous la boîte. On obtient ainsi un produit portant le microorganisme immobilisé, en grains de 3 mm de diamètre. EXEMPLE 9 On mélange de façon homogène 2 parties en poids d'éther isobutylique de la benzine avec 90 parties en poids d'une solution de résine à 75 % de matière solide, obtenue par neutralisation avec de l'hydroxyde de potassium d'un copolymère photodurcissable ayant une masse moléculaire moyenne en nombre d'environ 25 000, formé de 300 parties en poids d'acrylate d'éthyle, 100 parties en poids d'acide méthacrylique, 80 parties en poids de styrène, 20 parties en poids de Phosmer M (nom de marque d'un monophosphate du type méthacrylate de Yushi Seihin K.K.) et 50 parties en poids de méthacrylate de glycidyle.On mélange ensuite uniformément ce mélange avec 50 parties en poids d'une solution aqueuse à 3 8 d'alginate de sodium et 50 parties en poids d'une solution aqueuse à 0,5 % de glucose oxydase en solution dans un tampon d'acétate 0,1M à pH 5,6, puis on ajoute la solution de résine goutte à goutte à une solution aqueuse à 10 8 d'alun d'ammonium placée dans une boite de Petri, au moyen d'une seringue à injection, ce qui forme un gel granulaire que l'on irradie en lumière actinique de longueur d'onde 300 à 400 nm, pendant 3 minutes chaque fois par-dessus et par-dessous la boîte. On obtient ainsi un produit granulaire portant le microorganisme immobilisé, en grains d'environ 2 mm de diamètre. EXEMPLE 10 On mélange de façon homogène 0,5 partie en poids d'éther isobutylique de la benzoîne avec 100 parties en poids d'une solution aqueuse à 25 % d'une résine photo durcissable obtenue par une réaction d'addition de 500 g d'alcool polyvinylique ayant un degré de polymérisation de 1500, et de 1 mole de N-methylolacrylamide, puis on mélange uniformément à ce mélange, en les dispersant, 100 parties en poids d'une solution aqueuse à 3 % de K-carraghénane et 10 parties en poids d'une suspension de cellules d'Escherichia coli. On fait arriver le mélange de la résine photodurcissable et des cellules sur un disque tournant qui le disperse sous l'action de la force centrifuge, en faisant tomber les particules formées sur une solution O,5M de chlorure de potassium, ce qui forme un gel granulaire que l'on met dans une boite de Petri dans laquelle on l'irradie pendant 3 minutes en lumière actinique de longueur d'onde 300 à 400 nm, simultanément par-dessus et par-dessous la boîte. On obtient ainsi le produit portant le microorganisme immobilisé , en grains de 3 mm. REVENDICATIONS 1.- Procédé de fabrication d'un produit moulé granulaire sur lequel est fiée (immobilisée) une enzyme ou une souche d'un microorganisme, procédé selon lequel on ajoute goutte-à-goutte une composition liquide comprenant (a) une résine hydrophile photodurcissable avec au moins deux liaisons éthyléniquffl molécule, (b) un inducteur de photopolymérisation, (c) un polysaccharide à haute masse moléculaire hydrosoluble pouvant former un gel par contact avec un ou plusieurs ions de métaux polyvalents, et (d) une enzyme ou une couche de microorganisme, à un milieu aqueux contenant un ion de métal polyvalent pour gélifier cette composition sous une forme granulaire, puis on irradie avec une lumière actinique le gel granulaire ainsi formé pour durcir la résine photoducrissable contenue dans le gel. 2.- Procédé selon la revendication 1 dans lequel la résine photodurcissable (a) a une masse moléculaire moyenne en nombre de 300 à 100 000. 3.- Procédé selon la revendication 1 ou 2 dans lequel la résine photodurcissable (a) comporte un groupe hydrophile choisi parmi un groupe hydroxyle, carboxyle, d'acide phosphorique ou sulfonique, un groupe amino ou un groupe éther. 4.- Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 3 dans lequel la résine photodurcissable (a) durcit en une résine pratiquement insoluble dans l'eau par irradiation avec une lumière actinique ayant une longueur d'onde d'environ 250 à 600 nm. 5.- Procédé selon la revendication 1 dans lequel la résine photodurcissable (a) est choisie parmi des polyesters insaturés à haut indice d'acide, des époxydes insa turés à haut indice d'acide, des résines acryliques insa turées anioniques ou cationiques, des polyesters de polyéthylène glycols et d'acides acryliques ou méthacryliques, des produits d'addition, avec formation de polyuréthanes, de polyéthylène glycols et d'acrylates ou de méthacrylates de 2-hydroxyéthyle, des celluloses insaturées et des polyamides insaturés. 6.- Procédé selon la revendication 1 dans lequel la résine photodurcissable (a) est un polyester provenant d'un polyéthylène glycol et d'acide acrylique ou méthacrylique, ou bien un produit d'addition et d'uréthanisation d'un polyéthylène glycol et d'acrylate ou de méthacrylate de 2-hydroxyéthyle. 7.- Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes dans lequel le polysaccharide hydrosoluble à haute masse moléculaire (c) a une masse moléculaire comprise entre 3000 et 2 000 000. 8.- Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes dans lequel le polysaccharide (c) a une solubilité dans l'eau d'au moins 10 g/litre à la température de 250C. 9.- Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes dans lequel le polysaccharide (c) est choisi parmi des alginates de métaux alcalins, le carraghénane, le mannane de konjac et la pectine. 10.- Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes dans lequel l'ion de métal polyvalent est un ion de métal alcalinoterrreux. 11.- Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes dans lequel la souche de microorganisme est une levure de fermentation alcoolique. 12.- Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes dans lequel la composition liquide comprend 100 parties en poids de la résine hydrophile photodurcissable (a), 0,01 à 10 parties en poids de l'inducteur de photopolymérisation (b), 0,5 à 15 parties en poids du poly saccharidé hydrosoluble à haute masse moléculaire (c) et 0,001 à 50 parties en poids de l'enzyme ou de la souche de microorganisme (d). 13.- Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes dans lequel la teneur du milieu aqueux en ion de métal polyvalent est de 0,01 à 5 moles/litre. 14.- Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes dans lequel la longueur d'onde de la lumière actinique est d'environ 250 à 600 nm. 15.- Produit moulé granulaire sur lequel est fixée (immobilisee) une enzyme ou une souche de microorganisme, qui a été préparé par un procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes. 16.- Produit selon la revendication 15, en grains d'environ 0,5 à 5 mm de diamètre. 17.- Composition liquide comprenant (a) une résine photodurcissable hydrophile ayant au moins par molécule deux liaisons à insaturation éthyléni- que, (b) un inducteur de photopolymérisation, (c) un polysaccharide hydrosoluble à haute masse moléculaire pouvant former un gel par contact avec un ou plusieurs ions de métaux polyvalents, et (d) une enzyme ou une souche de microorganisme.