FR 2555451 A1 19850531 FR 8319142 A 19831130 Nouveau produit physiologique extrait d'algues et de plantes, procédé de préparation, appareillage d'extraction et applications. La présente invention concerne un procédé complexe de traitement d'algues et de plantes diverses au cours duquel sont combinées plusieurs étapes précises de traitement, grâce auquel on a pu obtenir un produit d'extraction tout à fait original, ci-après dénommé "filtrat physiologique". On sait traiter les algues et plantes par "cryobroyage" selon le brevet français HERVE et ROUILLER nO 74-35162 déposé le 18 octobre 1974. Selon ce brevet, on coupe puis cùngèle les algues et plantes a -20/-50 C, puis on les broie å cette température dans un broyeur à couteaux/broyeur à dents disposés en série. Une description détaillée de l'appareillage est donnée dans ce brevet. On envoie ensuite les algues et plantes (dimension moyenne 0,1-0,5 mm) vers un ou plusieurs broyeurs supplEmentaires, à la température ambiante, par exemple broyeurs à trois cylindres (on atteint ainsi 100 a 50/u ou même 10/u). Les caractéristiques de ces appareils sont également décrites dans ledit brevet. On obtient ainsi une bouillie verte épaisse de pH voisin de 4,8 qui, gracie au cryobroyage, contient la quasi-totalité des substances utiles et bénéfiques contenues dans les algues et plantes de départ (cf. Tableau I du brevet précité). On a découvert selon l'invention que la combinaison de quatre opérations 1) cryobroyage tel que défini ci-dessus, 2) broyage moléculaire, par un appareillage spécifique, 3) turbodécantation (décantation a grande vitesse) 4) ultrafiltration sélective permet d'obtenir un extrait nouveau d'algues et de plantes présentant certaines propriétés. L'un des éléments essentiels de l'invention réside dans la combinaison des deux opérations de broyage 1) et 2). En particulier, ce "filtrat physiologique" est exempt de pavé cellulaire, de cellulose, de composants à longue chaine moléculaire, et est directement assimilable (il contient micro-éléments, vitamines, micropeptides). Une de ces caractéristiques essentielles est de ne pas contenir d'alcools résiduels provenant des étapes d'extraction. I1 est utilisable en oligothérapie équilibrée d'appoint et pour favoriser par effet de synergie l'assimilation d'oligo elements et de vitamines, à raison de 10 à 50 ml de produit pur par jour et par adulte. Le procédé qui permet d'obtenir cet extrait original sera décrit dans ce qui suit. Les algues ou plantes fraiches sont coupées puis subissent un cryobroyage tel que décrit ci-dessus. La bouillie obtenue est alors envoyée dans un broyeur moléculaire spécifique tel que représenté sur la figure 1 annexée. Le broyeur spécifique nécessaire.à l'obtention du produit selon l'invention consiste en un ensemble piston (1)/clapet (2) comportant entre le piston et le clapet un espace (e) extrsement faible (de l'ordre de 0,035 mm sous 350 bars et à 400 litres/h). Le principe est connu, le piston, par son mouvement de va-et-vient, chasse le produit a traiter (3) par l'espace (e) od ce produit est broyé. On obtient selon ce procédé un produit broyé d'une manière nouvelle, ce qui libère d'autres principes que ceux libérés par les procédés connus, et de manière différente. Ceci peut peut-être s'expliquer par l'effet de synergie que l'on observe, au niveau du broyage, entre les deux types de broyeurs. Le broyage moléculaire modifie considérablement le produit, puisqu'il fait passer son temps d'écoulement de, par exemple, 24 s à 59 s (produit beaucoup plus visqueux). I1 est également essentiel de souligner que, pour la premiere fois, on peut obtenir à la sortie des broyeurs un produit stérile, ce qui est d'une importance décisive dans les applications envisagée;. Le procédé d'eclatement reposant sur une baisse brutale de la pression, qui peut devenir negative (effet de cavitation), entraîne, outre l'éclatement des cellules végétatives, l'éclatement des micro-organismes et en particulier des bactéries. On peut ainsi obtenir un produit stérile à condition toutefois que la pollution bactérienne initiale ne soit pas trop élevee. La combinaison des deux broyeurs permet donc d'obtenir: un produit plus actif du fait du plus grand pourcentage de cellules éclatées libérant une plus grande quantité de liquide intracellulaire; une meilleure conservation des principes actif, en particulier des propriétés enzymatiques conservées grâce au maintien d'une basse température au cours de toute la chaine des opérations; des produits présentant une bonne tenue dans le temps grâce à la stérilisation obtenue au moment du broyage (éclatement au cours de la compression- décompression) ; cette qualité est particulièrement importante dans le cas d'applications cosmétiques. De plus, la combinaison avec la technique de cryobroyage autorise le traitement des algues ou des plantes entières pour la première fois. La combinaison d'étapes selon l'invention ne réalise donc pas une extraction mais une "réduction" de la plante entière sous une forme microéclatée. Enfin, la présence du broyeur "moléculaire" ou "cellulaire" dans la chaîne permet de mettre en oeuvre une ultra-filtration impossible a effectuer sans ce broyeur. Entre le broyage cellulaire et l'ultra-filtration, on effectue une ultra-décantation, elle aussi indispensable. Le procédé selon l'invention consiste par conséquent en la combinaison des étapes suivantes "cryobroyage", - passage au broyeur moléculaire, - ultra-décantation, - ultra-filtration. Pour certains produits, bien déterminés, on pourrait envisager de renoncer au broyeur moléculaire, mais pas dans le cas général. L'étape 3) consiste en une turbodécantation avec pipettage du produit au centre du bol. L'étape 4) d'ultra-filtration est effectuée sur des filtres de carbone comportant une couche d'oxyde de zirconium, membrane MhCpossédant un pouvoir de coupure inferieur a 200.GO.O (séparant les poids moléculaires > 200.000)2. Cette étape d'ultra-filtration participe à l'acquisition du caractère stérile. Après l'étape 4), on conditionne en salle stérile ("salle blanche" ou "clean room") pour préserver la stérilité du produit qui est l'un des résultats essentiels de l'invention. Cette chaîne d'opérations ainsi que les produits obtenus sont représentés sur la figure 2 annexée. Dans le cas des algues, le "culot de centrifugation" contient principalement des débris cellulaires et des alginates. I1 peut être utilisé pour l'activation de composts et pour le traitement de certains effluents. Le "rétentat" comprend des molécules de poids moleculaire supérieur a 200.000, en particulier des polysaccharides. Il peut être utilisé pour la production de produits à usage externe mettant à profit les propriétés analogues à celles de l'héparine ("heparine-like") des polysaccharides sulfurylés. Le filtrat contient pratiquement tous les oligo-éléments, 807. des polysaccharides, les phytohormones et des vitamines et, d'une manière générale, toutes les molécules de poids inférieur à 200.000. I1 peut être utilisé pour la fabrication de teinture mère homéopathique,de produits cosmétiques, de produits phytothéra- peutiques et de boissons. Les exemples suivants illustrent l'invention sans toutefois.en limiter la portée. Exemple 1 : Filtrat d'algues (Laminaria). Le filtrat physiologique "GYFL" est un liquide protocellulaire d'algues fraîches sélectionnées (notamment Laminaria), et hautement purifié par un procédé physique sous froid (cryobroyage, broyage moléculaire, turbodécantation, et ultra-filtration sélective). - Cryobroyage et broyage moléculaire Les algues fraiches sont broyées sous froid (-400C) permettant d'obtenir une crème d'algues dont la finesse est inferieure à 20 /u. - Turbodécantation La crème d'algues est décantée à grande vitesse permettant d'éliminer la cellulose et les alginates insolubles. - Ultra-filtration sélective Une filtration ultra-fine permet d'obtenir un liquide liquide sans impuretés et dont les composants ont un poids moléculaire inférieur a 200.000 PROPRIETES - Exempt de pavé cellulaire, cellulose, composants à longue channe moléculaire, le filtrat physiologique d'algues GYFL est directement assimilable (micro-éléments, vitamines, micropeptides). L'assimilation est favorisée par une répartition modifiée de poids moléculaire : % de molécules de PM faible est supérieur au % de molécules à PM élevé. - Le procédé de fabrication permet d'obtenir un produit de haute qualité bactériologique. - Sans conservateur, sans colorant, sans alcool. UTILISATIONS EN DIETETIQUE - Oligotherapie équilibrée d'appoint. - Vecteur d'assimilation d'oligo-éléments et de vitamines. - A utiliser dilué a la dose de 10 à 50 ml de produit pur par jour. On trouvera ci-dessous les résultats d'analyses effectuées sur ce produit. MATIERES SECHES - PROTEINES - LIPIDES - GLUCIDES - CENDRES Méthodes utilisées pour le dosage des protéines, glucides, lipides et des cendres du filtrat "GYFL". 10) Dosage des protéines La teneur en protéines est évaluée à partir du taux d'azote total que multiplie 6,25. 20) Dosage des lipides La technique utilisée est celle décrite par BLIGH ÂND DYER (1959). A l'échantillon pesé (contenant 80 g d'eau) est ajouté 300 ml d'une solution chloroforme-méthanol (1-2) sous bonne agitation. L'agitation est maintenue 10 mn. Le résidu insoluble est éliminé par filtration sur papier WHATMAN 1 PS. A la solution limpide ainsi obtenue sont ajoutés succes vivement 100 ml de chloroforme et 100 ml de méthanol. On agite après chaque addition. Le mélange biphasique obtenu est transféré dans une ampoule à décanter. On laisse reposer une nuit. La phase chloroformique lourde est recueillie puis évaporee à sec. Le résidu lipidique est repris par une petite quantité de chlorure de méthylène. Cette solution est évaporée dans un tube taré et pese. E.G. BLIGH and W.J. DYER (1959) A rapid method of Total Lipid Extraction and Purification Canada I. of Biochem and Physial 37 (8), 911. 30) Dosage des glucides La méthode utilisée est celle de DUBOIS et Col. (1956). Le mode opératoire utilisé est décrit ci-après. Les résultats sont exprimés en équivalent glucose. "Dosage des sucres par la méthode DUBOIS - Objet et domaine d'application I1 s'agit d'une méthode colorimétrique, simple, rapide et sensible, applicable aux sucres réducteurs (hexoses, pentoses, disaccharides, polysaccharides), à leurs dérivés méthylés et aux acides uroniques. Il faut signaler que les glucosamines et galactosamines ne sont pas pris en compte. - Réactifs phenol RECTAPUR, PROLABO (préparer une solution à 5 %) Acide sulfurique NORMAPUR PROLABO (98,08 Z, d = 1,83) .'Solution standard de glucose ou de galactose à 10 mg pour 50 ml) - Matériel un spectophotomètre visible (lampe au tungstène) (cuves en verre OS) L'analyse a été réalisée sur un appareil ACTA III de BECKMANN un VORTEX une série de tubes de 15 ou 20 ml une série de micropipettes de type EPPENDORF. - Mode oEeratoire , courbe étalon : prélever entre 20 et 200 g de standard qu'on ajuste à 2 ml d'H20. Ne pas oublier de prévoir un blanc. , Ajouter I ml de phénol à 5 Z , Bien agiter au vortex Ajouter 5 ml d'H2S04 concentré, agiter et laisser se développer la coloration. . Lire l'absorption à 485 nm au bout de 30 minutes M. DUBOIS, K.A. GILLES, J.K. HAMILTON, P.A. REBERS AND F. SMITH (1956) "Colorimetric method for determination of sugars and related substances". Analytical Chemistry 28 (3), 350. 40) Dosage des cendres La quantité de matière minérale est évaluée par le taux de cendres restant après combustion. 10 à 20 g d'échantillon sont étalés au fond d'une boîte de Pétri tarée. L'échantillon est d'abord séché à 800C à l'étuve puis transféré dans un four. La montée en température se fait de 200C à 5500C en 24 heures. On maintient à cette température pendant 48 heures. On pèse après refroidissement complet dans un dessicatur. Du fait de la faible quantité de matière première disponible, le dosage des lipides de GYFL a été effectué sur l ml. De ce fait, la valeur donnée est approximative. Une première mesure a donné 0,03 X, une deuxième 0,04 Z. Les résultats sont rassemblés dans les Tableaux I à III ci-après. On a également déterminé l'indice d'irritation primaire d'un filtrat physiologique GYFL selon la méthode décrite au Journal Officiel du 21 février 1982. L'essai est réalisé avec six lapins mâles Albinos, de souche définie de 2,5 kg environ, ayant séjourné une semaine au minimum dans l'animalerie en cage individuelle afin d'être parfaitement acclimatés. Lors de l'essai, les lapins sont maintenus dans des boîtes à contention. La veille de l'application du produit à tester, ils sont tondus sur le dos et les flancs à la tondeuse électrique munie d'un peigne de hauteur de coupe de 0,05 mm pour dégager une surface d'environ 14 x 14 cm. Avant de commencer le test nous nous assurons que les animaux présentent une peau saine et glabre. A jour J.O, sur le flanc droit de chaque lapin, nous effectuons, à l'aide d'un vaccinostyle stérile, trois scarifications parallèles sur une longueur d'environ 2,5 cm espacées de 0,5 cm environ, sans atteindre le derme, c'est-à-dire sans saignement. 0,5 ml de filtrat physiologique GYFL sont déposés à l'aide d'une seringue stérile de I ml au dixième sur deux pièces de gaze hydrophile Codex à 8 épaisseurs, d'une surface de 6,2 cm2, dont une des surfaces est recouverte d'une pellicule adhésive hypoallergénique et imperméable, et appliquées immédiatement sur la peau, maintenues en contact avec la peau sur chacune des deux zones par une bande de fixation microporeuse adhésive hypoallergénique de largeur 50 mm. On place ensuite une compresse de protection en gaze hydrophile Codex de dimensions appropriées ; ltensemble est maintenu par une bande tissée. Vingt quatre heures après l'application du produit, on évalue l'irritation primaire cutanée. Elle est évaluée 30 minutes après enlèvement du pansement et de nouveau quarante huit heures plus tard, c'est-à-dire soixante douze heures après l'application du produit. Les observations sont faites sur les deux zones, scarifiée et non scarifiée, selon l'échelle numérique suivante - érythème et formation d'escarres Pas d'érythème ....................... 0 Léger érythème ................................. 1 Erythème bien visible ........................ 2 Erythème important .......................... 3 érythème grave .................... 4 (rouge pourpre, lésions profondes) - Formation d'oedèmes Pas d'odème .................................... 0 Très léger oedème ....................... l Léger oedème (contours bien définis, gonflement apparent) ... 2 Oedème moyen (épaisseur environ 1 m) ........... 3 Oedème grave (épaisseur supérieure à I mm et surface supérieure à celle de la zone d'application).................................. 4 On additionne les chiffres obtenus pour l'érythème et pour l'oedème après vingt quatre heures et soixante douze heures, d'une part sur les six zones non scarifiées, d'autre part sur les six zones-scarifiées. On additionne les chiffres ainsi obtenus et on calcule la moyenne en divisant le total par 24. Cette moyenne représente l'indice d'irritation primaire cutanée (I.P.). Les résultats sont exprimés comme suit NON IRRITANT I.P. 4 0,5 LEGEREMENT IRRITANT 0,5 IRRITANT 2 TRES IRRITANT 5 Les résultats obtenus pour chaque lapin figurent sur le Tableau IV ci-après. L'indice ainsi déterminé est égal à 0,04 ce qui correspond à un produit qui est considéré légalement suivant 1'Arrêté du ler février 1982 paru au Journal Officiel du 21 février 1982, comme non irritant. TOXICITE A COURT TERME - DETERMIN.4TION DE LA DL 50 L'appréciation de la dose léthale 50 consiste à déterminer la dose mortelle pour 50 % des animaux mis en expérience : rats et g de souche Wistar. Cette détermination suppose certaines contraintes à savoir - le volume utilisé doit être au maximum de 0,5 ml par 20 g de poids corporel - la concentration en principe actif doit être connue ainsi que la nature de l'excipient. Compte tenu de la texture et de la composition de la crème d'algues GYFL le principe actif ne peut être identifié en tant que tel, nous avons donc opéré sur la creme d'algues entière sans adjonction d'excipient et choisi comme voie d'administration la voie orale par gavage gastrique. Les doses choisies ont été échelonnées de 0,5 g à 2,5 g pour 100 g de poids corporel. A la dose de 2,5 g pour 100 g de poids corporel, les morts que l'on a observés étaient en fait dûs à une mauvaise manipulation de l'opérateur (asphyxie par encombrement pulmonaire). On en déduit donc que la DL 50 de crème d'algues GYFL est supérieure à 25 g/kg (facteur limitant : non possibilité d'absorption volumétrique > . Exemple 2 : Filtrat d'artichaut ("GYFAR") On opère comme décrit ci-dessus pour les algues, notamment comme- décrit dans l'exemple 1. On obtient un filtrat brun limpide. On trouvera dans le tableau V ci-après les résultats d'analyse du filtrat d'artichauts. Exemple 3 : Filtrat d'algues (Ascophylum) On opere comme décrit dans l'exemple 1 ci-dessus, mais en utilisant une algue Ascophylum. On trouvera dans le tableau VI ci-après les résultats d'analyse de ce filtrat "GYFA" et dans le tableau VII ci-après les résultats d'analyse des cendres de ce filtrat. L'invention peut s'appliquer à toutes les plantes contenant des éléments utiles ; on citera encore par exemple le Calendula, la prêle, etc... ETUDE DE L'ASSIMILATION DE CERTAINS ELEMENTS EN FONCTION DE LA PRESENCE ET DE LA QUANTITE DE FILTRAT D'ALGUES GYFL INGERE. Protocole ozeratoire 10 rats WISTAR O utilisés en expérimentation 4 4 rats WISTAR O utilisés comme témoin Nourriture utilisée : aliment U.A.R. REF. A.04 Le poids corporel des animaux est indiqué dans le Tableau VIII ci-après. TABLEAU VIII RATS Poids corporel N1 126 g N2 118 g V1 120 g V2 127 g R1 130g R2 115 g Bl1 110g Bl2 105g B 120 g B2 120 g T1 135 g T2 130 g T3 118 g T4 121g A partir du 23 septembre et jusqu'au 5 octobre, N1 et N2 ont recu par gavage gastrique 0,5 ml de filtrat GYFL par jour Les 4 et 5 octobre, l'eau de boisson des rats N1, N2, V1, V2, Rl, R2, BL1, BL2, B1, B2 a été remplacée par une solution aqueuse à 10 % de filtrat GYFL. On n'a observé aucune anomalie dans le comportement des rats N1 et N. La solution à 10 % de filtrat n'a pas été répétée en tant que boisson, la quantité bue était tout fait comparable à celle habituellement ingérée. ETUDE DE L'ASSIMILATION DU GLUCOSE Après ingestion, au temps T, par gavage gastrique de 0,5 ml d'une solution de glucose au sein de différents excipients, on suit toutes les 15 minutes l'évolution de la glycémie des rats. . Solution utilisée Solution n 1 Glucose 50 g Eau qsp 1000 ml Solution n 2 Glucose 50 g Filtrat GYFL 100 ml Eau qsp 1000 ml Solution n 3 Filtrat GYFL 100 ml/l Glycérine 10 ml/L Glucose 200 g/L Fructose 75 g/L Bl 20 mg/L C 5 g/L Sodium 3 g/L Acide citrique pH 3,2 qsp Arôme citron 1,5 glL Eau gazéifiée 1000 ml qsp Les rats . N1 et N2 ont reçu la solution n01 . R1 et R2 ont reçu la solution n01 . B1 et B2 ont reçu la solution n02 . Tl et T2 ont reçu la solution n01 . BL1 et BL2 -ont reçu la solution n03 Les résultats sont rassemblés dans le Tableau IX ci-après et sur la Figure 3 annexée. CONCLUSIONS 1. On observe un choc hypoglycémique net chez les rats non soumis auparavant à un régime d'algues et ayant ingéré une solution aqueuse de glucose exempte d'algues. 2. On observe un très léger choc hypoglycémique chez les rats soumis auparavant à un-régime d'algues peu important et ayant ingéré une solution aqueuse de glucose. 3. - On n'observe pas de choc hypoglycémique chez les rats soumis auparavant à un régime d'algues important ou inexistant, ayant ingéré une solution aqueuse de glucose à 10 Z de filtrat GYFL. Il semble y avoir meilleure assimilation et utilisation du glucose ingéré 4. Il semble y avoir stockage du glucose ingéré dans le cas des rats soumis auparavant à un régime d'algues important et de longue durée. En effet, il n'y a ni hyper ni hypoglycémie. Pour conforter cette hypoghèse, on a imposé un effort important au temps T2 aux rats R2 et N1 : l'hypoglycémie du T2 est importante, celle du N1 est nulle, comme on peut le voir sur la Figure 4 annexée. TABLEAU I RESULTATS D'ANALYSES Les résultats sont exprimés en pourcentage de produit humide ECHANTILLONS CENDRES SUBSTANCES ORGANIQUES PROTEINES LIPIDES GLUCIDES* GYFL 0,312 % 0,12 % 0,02 % 0,756 % * exprimés en "équivalent glucose" TABLEAU II GYFL Méthode Minéralisation Précision % SODIUM Spectrométrie de flamme (a) 1 # 5 POTASSIUM " " " (a) 1 4 LITHIUM " " " 1 4 CALCIUM Absorption atomique (flamme) - AFNOR V18-108 1 4 MAGNESIUM " " " - (b) 1 4 STRONTIUM Spectrométrie de flamme 1 4 CHROME Colorimétrie (Diphényl Carbazide) 2 / FER Absorption atomique (flamme) - (c) 2 # 5 MANGANESE " " " - (c) 2 4 CUIVRE " " (four) - (c) 2 # 10 COBALT " " " 2 / NICKEL " " " 2 # 10 ZINC Absorption atomique (flamme) - (c) 2 # 5 ETAIN " " (four) 2 # 10 PLOMB " " " 2 " CADMIUM " " " 2 " MOLYBDENE Colorimétrie (thiocyanate) 2 # 5 ANTIMOINE Colorimétrie (Rhodamine) 2 / TITANE " (acide chromotropique) 2 # 10 CHLORE Volumétrie au nitrate d'argent - (a) 3 # 3 PHOSPHORE Colorimétrie à l'heptamolybdate 4 # 5 TABLEAU II (suite) GYFL Minéralisation Précision % AZOTE Kjeldalh (volumétrie) 4 # 5 ARSENIC Colorimétrie (of AFNOR T 90201) 2 # 10 BORE Colorimétrie (Curumin) AFNOR T 90201 3 # 3 IODE " (méthode aux sels cériques) 3 # 3 BROME " (phénolsulfonephtaléine) 3 # 5 SOUFRE Népholométrie (sous forme SO4) 1 # 5 FLUOR Colorimétrie (méthode au zirconium AFNOR T 90004 3 # 5 MERCURE Absorption atomique sous flamme AFNOR T 90113 5 # 10 SELENIUM Polarographie 6 # 10 Observations : 1 : Calcination et reprise des cendres par HCl 2 : Minéralisation humide H2SO4 + HNO3 + HCLO4 3 : Calcination en milieu alcalin - reprise des cendres par eau 4 : Minéralisation humide (H2SO4 + H2O2) 5 : Minéralisation humide (H2SO4 + HNO3 + KMNO) 6 : Attaque à l'acide bromhydrique Légende : (a) : 1e directive C.E.E. Aliments des animaux (b) : 4e directive C.E.E. (c) : 8e directive C.E.E. (d) : 3e directive C.E.E. TABLEAU III RESULTATS DE L'ANALYSE GYFL SODIUM (Na) mg/kg 816 POTASSIUM (K) " 850 LITHIUM (Li) g/kg 415 CALCIUM (Ca) mg/kg 150 MAGNESIUM (Mg) " 118 STRONTIUM (Sr) " 1,700 CHROME (Cr) " FER (Fe) " 2,9 MANGANESE (Mn) " 0,34 CUIVRE (Cu) " 0,31 COBALT (Co) g/kg) NICKEL (Ni) " 50 MOLYBDENE (Mo) " (20 ZINC (Zn) " 2,0 ETAIN (Sn) mg/kg 17 PLOMB (Pb) " CADMIUM (Cd) " 0,042 ANTIMOINE (sb) " CHLORE (C1) " 973 PHOSPHORE (P) " 176 AZOTE (N) " 188 ARSENIC (As) " 3,0 BORE (B) " 1,41 IODE (I) " 1, 8 BROME (Br) " 16 SOUFRE (S) " 222 TITANE (Ti) " FLUOR (F) " 8,4 MERCURE (Hg) " $ SELENIUM (Se) TABLEAU IV RESULTATS INDIVIDUELS DE DETERMINATION DE L'INDICE D'IRRITATION PRIMAIRE DE FILTRAT PHYSIOLOGIQUE GYFL RESULTATS APRES 24 HEURES RESULTATS APRES 72 HEURES LAPIN COTE SCARIFIE COTE NON SCARIFIE COTE SCARIFIE COTE NON SCARIFIE Oedème Erythème Oedème Erythème Oedème Erythème Oedème Erythème 1 0 0 0 0 0 0 0 0 2 " 1 " 0 " " " " 3 " 0 " 0 " " " " 4 " 0 " 0 " " " " 5 " 0 " " " " " " 6 " 0 " " " " " " TOTAL 0 1 0 0 0 0 0 0 TOTAL GENERAL : 1 INDICE D'IRRITATION PRIMAIRE : 1/24 = 0,04 TABLEAU V RESULTATS DE L'ANALYSE GYFAR (artichauts) SODIUM (Na) mg/kg - 1950 POTASSIUM (K) mg/kg 4200 LITHIUM (Li) g/kg 120 CALCIUM (Ca) mg/kg 1700 MAGNESIUM (Mg) mg/kg 118 STRONTIUM (Sr) mg/kg 11,6 CHROME (CR) mg/kg 0,1 FER (Fe) mg/kg - 0,85 MANGANESE (Mn) mg/kg 4,75 CUIVRE (Cu) mg/kg 2,6 COBALT (Co) g/kg 50 NICKEL (Ni) g/kg 50 MOLYBDENE (Mo) g/kg 20 ZINC (Zn) g/kg - 0,38 ETAIN (Sn) mg/kg 57 PLOMB (Pb) mg/kg 0,1 CADIUM (Cd) mg/kg 0,042 ANTIMOINE (Sb) mg/kg g 0,01 CHLORE mg/kg 5820 PHOSPHORE mg/kg 353 AZOTE mg/kg 611 ARSENIC mg/kg 0,07 BORE mg/kg 0,6 IODE mg/kg 104 BROME mg/kg 40 SOUFRE mg/kg 301 LIPIDES 0,19 % PROTIDES 0,38 % GLUCIDES 0,31 % DL 50 : > 25 g/kg TABLEAU VI RESULTATS D'ANALYSES GYFA SUBSTANCES ORGANIQUES PROTEINES 0,030 % LIPIDES 0,005 % GLUCIDES 0,032 % MINERAUX SODIUM (Na) mg/kg 290 PLOMB (Pb) mg/kg POTASSIUM (K) " 370 CADMIUM (Cd) " 0,124 LITHIUM (Li) g/kg # 2,5 ANTIMOINE (Sb) " CALCIUM (Ca) " 43 CHLORE (Cl) " 387 MAGNES IUM (Mg) " 53 PHOSPHORE (P) " 145 STRONTIUM (Sr) " 0,25 AZOTE (N) " 49 CHROM@ (Cr) " ABSENIC (As) " 0,77 FER (Fe) " 8 BORE (B) " 1,53 MANGANESE (Mn) " 0,35 IODE (I) " 23 CUIVRE (Cu) " 1,85 BROME (B2) " COBALT (Co) g/kg SOUFRE (S) " 31 NICKEL (Ni) " 110 TITANE (Ti) " MOLYBDENT (Mo) " FLUOR (F) " 8,2 ZINC (Zn) " 0,57 MERCURE (Hg) " ETAIN (Sn mg/kg 15 SELENIUM (Se) " AMINO ACIDES (en % sur la M.S.) ALANINE 0,209 ARGININE 0,128 GLYCINE 0,175 LYSINE 0,172 VALINE 0,189 CYSTEINE 0,078 LEUCINE 0,243 METHIONINE 0,018 ISOLEUCINE 0,133 TYROSINE 0,060 GLUTAMIQUE ACIDE 0,534 PHENYLALANINE 0,154 ASPATRIQUE ACIDE 0,476 HISTIDINE 0,075 THEONINE 0,156 PROLINE 0,135 SERINE 0,146 TRYPTOPHANE 0,022 TABLEAU VII RESULTAT D'ANALYSE Les résultats sont exprimés en pourcentage de produit humide SUBSTANCES ORGANIQUES ECHANTILLONS CENDRES PROTEINES LIPIDES GLUCIDES # GYFA 0,138 % 0,030 % 0,005 % 0,032 % * exprimés en "équivalent glucose" TABLEAU IX RESULTATS DE GLYCEMIE T0 T1 T2 T3 T4 T5 T6 Tn = Tn-1 + 15' R1 0,86 0,90 0,98 1,05 0,80 0,75 0,83 rats soumis à un régime d'algues peu Glucose + eau R2 0,87 0,92 0,99 1,03 0,83 0,78 0,84 important et de courte durée Glucose + eau B1 0,88 0,89 0,99 0,99 0,95 0,89 0,86 rats soumis à un régime d'algues peu + filtrat B2 0,83 0,83 0,96 0,98 0,99 0,92 0,83 important et de courte durée Boisson BL1 0,86 0,86 1,03 1,05 1,01 0,90 0,87 rats soumis à un régime d'algues peu BL2 0,87 0,90 1,01 1,06 1,00 0,89 0,88 important et de courte durée Glucose + eau T1 0,85 0,98 1,05 0,70 0,65 0,60 0,79 rats non soumis à un régime T2 0,85 0,96 1,07 - 0,65 0,66 0,81 d'algues Glucose + eau N1 0,87 0,89 0,87 - 0,80 0,89 0,85 rats soumis à un régime d'algues pendant N2 0,88 0,88 0,86 0,82 0,87 0,86 0,89 12 jours auparavant (important, et de longue durée) REVENDICATIONS 1) Nouveau produit physiologique caractérisé en ce qu'il résulte du traitement d'algues ou plantes entières par la combinaison des étapes suivantes a) cryobroyage (congélation des algues ou plantes coupées à -20/-500C, puis broyage a cette température dans un broyeur a couteaux ou à dents, puis dans un ou plusieurs broyeurs a la température ambiante) donnant une bouillie de dimension de particules 100 a 50 ou 101u b) broyage moléculaire c) décantation a grande vitesse d) ultra-filtration et récupération du filtrat liquide stérile ainsi obtenu. 2) Nouveau produit selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'ultra-filtration est amenée sur des filtres de carbone 9 couche d'oxyde de zirconium. 3) Nouveau produit selon la revendication 1, caractérisé en ce que le broyage moléculaire est mené dans un broyeur a piston. 4) Nouveau produit selon la revendication 1, caractérisé en ce que le produit de départ est une algue. 5) Nouveau produit selon la revendication 5 caractérisé en ce que le produit de départ est une plante entière. 6) Nouveau produit selon la revendication 5 caractérisé en ce que le produit de départ est l'artichaut. 7) Procédé de préparation des nouveaux produits selon l'une quelconque des revendications 1 6, caractérisé en ce que l'on traite les algues ou plantes entières par la combinaison des étapes suivantes a) cryobroyage (congélation des algues ou plantes coupées a -20/-50 C, puis broyage a cette température dans un broyeur à couteaux ou à dents, puis dans un ou plusieurs broyeurs à la température ambiante) donnant une bouillie de dimension de particules 100 a 50 ou 10 /u b) broyage moléculaire c) décantation à grande vitesse d) ultra- fil tration et récupération du filtrat liquide stérile ainsi obtenu. 8) Appareillage pour la mise en oeuvre du procédé selon la revendication 7, caractérisé en ce qu'il comporte la combinaison de broyeurs réfrigérés a -20/-50 C, de broyeurs A tempétature ambiante ambiante, d'un broyeur moléculaire, d'une turbodécanteuse et d'un appareil d'ultra-filtration. 9) Applications des produits selon l'une quelconque des revendications 1 à 6 comme médicaments, en cosmétologie, comme aliment ou boisson d'effort.