FR 2550546 A1 19850215 FR 8313414 A 19830811 APPLICATION EN BIOLOGIE DES PRO- ET DES EUCARYOTES, EN PARTICULIER EN MICROBIOLOGIE, ET EN VIROLOGIE, D'UNE NOUVELLE MEMBRANE DE MICRO ET D'ULTRAFILTRATION DE TYPE ECRAN La présente invention concerne les applications et les utilisations en biologie des pro- et des eucaryotes, en particulier en microbiologie, et en virologie, d'une nouvelle membrane de micro et d'ultrafiltration de type écran. La culture, en biologie cellulaire, des eucaryotes ainsi que des procaryotes est un élément de base primordial permettant de satisfaire aux exigences d'un ou plusieurs individus formant une population plus ou moins dense, sans altération ni modification, aux fins de les entretenir, ou de les faire se multiplier abondamment, voire aussi pour obtenir des futurs hôtes sensibles aux parasites, particulièrement aux parasites stricts que sont les virus. Les méthodes de culture sont nombreuses ; la plupart d'entre elles peuvent être regroupées, d'une manière générale, de la façon suivante: - culture en milieu nutritif liquide. On obtient alors soit un film de cellules en surface, soit une prolifération en profondeur, voire même avec adhérence à la paroi du récipient ou sur des particules en suspension, soit une suspension plus ou moins homogène dans tout le milieu nutritif, accompagnée éventuellement d'un dépôt au fond du reci pient ; un dénombrement en milieu liquide (par une méthode de type "NPP" Nombre le Plus Probable) est considéré comme approximatif, car élaboré empiriquement par des résultats statistiques; - culture en milieu nutritif semi-solide (par adjonction de 4 %O d'agar-agar):: cette technique présente un avantage très intéressant par rapport à la culture en milieu liquide, car elle permet d'obtenir des colonies individualisées et isolées, par formation de clones occupant un petit volume autour de l'individu de départ dont ils sont issus ; d'où une possibilité très séduisante car rapide et préclse de dénombrer les individus vivants ; - culture en ou sur un milieu solide. Les cellules sont déposées sur la surface d'un milieu de culture adéquat rendu consistant ou "solide" par addition de 2 % d'agar-agar. On peut aussi cultiver les cellules anaérobies, strictes ou facultatives, directement en masse au sein de ce milieu nutritif. on retrouve les mêmes avantages lors d'un dénombre ment que dans le cas d'un modèle de culture en milieu semi-solide. La détermination de la . Lonpssitivn physico chimique adéquate des milieux de culture a posé des problèmes aux biologistes ; ceux-ci se sont en outre efforcés de simplifier, d'améliorer les résultats en fonction des impératifs divers de ces méthodes et surtout de rendre compatible des échantillons disparates, tant du fait de leur nature même que de leur taille (milieux hétérogènes, cultures impures, échantillons solides, échantillons liquides sous de grands volumes...). La filtration sur membrane a été largement accueillie à cet effet il y a une trentaine d'années. Il s'agit là maintenant d'une technique courante, d'une extreme souplesse, rapide, et que les progrès dans la technicité des membranes ont conduit à promouvoir. L'application, en biologie, de cette technique de filtration sur membrane, se heurte pourtant à certains problèmes; elle est en effet tributaire de la compatibilité au monde vivant, de la qualité, du comportement et des propriétés des composants de ces membranes, ainsi que de la taille de leurs pores pour les membranes de type écran (le diamètre de ces derniers, au niveau du film poreux exerçant la sélection de la membrane filtrante, doit en effet être toujours strictement inférieur à la taille de la particule, molécule, virus ou cellule, que l'on veut retenir). On a ainsi volontiers reconnu les incompatibilités présentées lors de l'emploi de membrane, présentant par exemple des phénomènes d'adsorption ou d'absorption à diverses substances particulaire, moléculaire, ionique, et/ou de nature hydrophobe, et/ou se comportant comme une barrière plus ou moins importante à l'interaction cellule - milieu de culture, et rendant ainsi impossible la réalisation de tests, qu'il s'agisse de tests cytologiques, physicochimiques, biochimiques, immunologiques ou tous autres. On a de plus constaté que souvent, dans le cas de populations denses, des membranes réputées utilisables sans limitation ne permettaient pas la réalisation quantitative du volume d'échange qui eut été nécessaire afin de satisfaire tous les individus présents en croissance; le phénomène de cavitation illustre bien les problèmes rencontrés en bactériologie. L'inventeur, au cours des nombreuses recherches qu'il a effectuées dans ce domaine, a découvert de façon surprenante une catégorie de membranes compatibles avec le monde vivant des pro- et eucaryotes, et se comportant avec une neutralité exceptionnelle, sans aucun phénomene perturbateur, faisant apparaître les colonies cellulaires de façon identi que à ce que l'on obtient au cours d'un processus classique à partir d'une culture effectuée directement au sein ou sur la surface d'un milieu nutritif, et dont les performances intrinsèques permettent des échanges importants pour des populations particulières ou des suspensions denses, tant en qualité qu'en quantité. C'est ainsi que l'invention a pour objet l'application en biologie des pro- et eucaryotes de membranes filtrantes polymériques composites du type écran, utilisables en micro ainsi qu'en ultrafiltration, ledit polymère étant coulé sur un support, chimiquement inerte, et accepté sans perturbation par les cellules vivant à son contact, sa structure ne présentant pas de phénomène d'absorption, d'adsorption, ni de rétention sélective (donc d'une neutralité d'imprégnation totale) à la fois pour des substances susceptibles d'exercer des effets inactivateurs, inhibiteurs statiques, ou mortels et pour les diverses molécules assurant des échanges en son travers. Ainsi satisfont-elles, quelque soit la densité ou la nature de la population, à la consommation des individus présents.En d'autres termes, sa sélection s'exerce uniquement au niveau de la taille des particules filtrées par rapport à l'ouverture des pores. Sachant qu'il est en effet admis que l'importance des échanges que l'on peut considérer à travers une membrane "théorique" (ctest-à-dire parfaite) de type écran entre la face filtrante, côté film poreux calibré, et le dessous de ladite membrane (donc sa surface opposée) est fonction à la fois du diamètre des pores côté film (sélectionnant directement les particules suivant leur taille) et du nombre de pores par unité de surface : ceci est particulièrement surprenant. D'autant, comme le font apparaître des examens en microscopie électronique à balayage, que le nombre de pores par unité de surface est tout à fait inférieur, au pire égal, à celui constaté sur des membranes classiques du commerce (telles les membranes en polycarbonate ou en acétate de cellulose qui, comme le démontreront plus loin les exemples, ne permettent en aucune façon d'obtenir des résultats comparables), que la porosité utilisée est inférieure à 0,2 um et que le polymère est de par sa nature légèrement hydrophobe. Sa résistance aux acides et bases, forts ou faibles, est bonne, dans les concentrations faibles ou moyennes, à température normale. Les matériaux sont compatibles avec la plupart des solvants organiques, sauf solvants chlorés ou aprotiques (type DMAC diméthylacétamide DMS0 diméthylsulfoxyde) qui, à faible température, s'absorbent (et provoquent un gonflement de la membrane). A haute température, ils solubilisent le polymère. La membrane résiste jusqu'à 1200C (en chaleur sèche comme humide) et présente peu de réaction à l'exposition des rayonnements ionisants (à une dose de 2,5 mégarads). Son débit à l'eau, supérieur à celui d'autres membranes, en particulier de membranes de la même catégorie, se situe aux environs de 20.000 litres/jourlm2, dans des conditions d'ultrafiltration, ce débit pouvant être presque décuplé dans des conditions de microfiltration En somme, le phénomène de cavitation ne se constate pas avec les membranes selon l'invention. Il faut enfin souligner que les membranes selon l'invention sont mincesl0,3 mm environ) et particulièrement souples, tout en étant rémiz tantes à la déchirure, aux pliures et étirements, à la pression et qu'elles ne sont pas ioniques ; elles ne présentent donc pas de phénomènes électrostatiques au contact des surfaces métalliques. Un exemple particulier des membranes selon l'invention est constitué par les membranes prochainement commercialisées sous la dénomination CPMO2. La présente invention sera mieux comprise d'ailleurs et ses avantages ressortiront bien des exemples qui suivent, réalisés avec la membrane prochainement commercialisée sous la référence Cl'M02 Dans tous les exemples décrits ci-après, la membrane selon l'invention est découpée en disques de 50 mm de diamètre. Ces disques sont ensuite stérilisés soit par petits groupes, soit à l'unité en présence d'un peu d'eau déminéralisée-distillée. Le facteur stérilisant est soit l'autoclavage (le récipient étant alors une boîte de Pétri en verre) effectué pendant 20 minutes à 1200C (en chaleur humide), soit la radiostérilisation par exposition aux rayonnements ionisants Zf , en sachets polyéthylène thermosoudé, et à une dose minimale de 2,5 Mrad. Les disques sont conservés à température ordinaire. Chaque disque est ensuite placé à un poste stérile d'une rampe standard de filtration à dépression, le côté lisse de la membrane étant tourné vers le haut (côté polymère microporeux calibré). L'échantillon désiré est ensuite filtré communément, grâce à une dépression allant de 0,4 à 1 bar. Le disque est ensuite repris avec des pinces stériles et reporté sur la surface d'un milieu de culture gélosé en boîte de Pétri, la face lisse étant toujours tournée vers le haut; on veille, de façon classique, à ne pas laisser de bulles d'air entre la membrane et la gélose. Dans le cas particulier de la culture de germes anaérobies, on ajoute 10 ml de milieu de culture maintenu en surfusion sur la membrane que l'on vient de deposer. On attend alors la prise en masse de cette couche additionnelle. On effectue ensuite l'incubation, boîte de Pétri renversée, à la température convenable pendant la durée nécessaire. EXEMPLE 1. Escherichia coli sur gélose Hektoën. Incubation 24 h à 37"C. Les colonies lisses, bombées, brillantes, à bord régulier, ont un bel aspect macroscopique. On constate leur coloration jaune, due au virage du bleu de bromothymol (indicateur coloré de pH contenu initialement dans le milieu) en raison de l'acidification, consécutive à la dégradation par fermentation du lactose fourni par le milieu nutritif. EXEMPLE 2. Mélange d'Escherichia coli et de Salmonella kedougou sur gélose Hektoën 24 h à 37pu. On remarque également le bel aspect macroscopique des colo nies - colonies jaunes (en raison du virage du bleu de bromothymol), brillantes, lisses, bombées et à bord régulier d'Eschericha coli - colonies incolores, à centre noir, bombées, brillantes, bord régulier de Salmonella. Le centre noir résulte de la production d'hydrogène sulfuré par les germes (H2S positifs) qui, grâce à un sel ferreux contenu dissous dans la gélose, précipite sous forme d'un sulfure de fer -noir. Un examen par transparence à la lumière du jour permet de mieux distinguer les colonies de Salmonella incolores à centre noir. EXEMPLE 3. Eau du Rhône à la dilution IO 3, prélevée au hasard. Milieu EMB (éosine, bleu de méthylène). Incubation 48 h à 370C. A partir d'un milieu inconnu microbiologiquement, on obtient une pousse fort diverse, composée de - colonies très développées, bombées, brillantes, à bord régulier, lisses, marron foncé ; - colonies brillantes, lisses, rondes, à centre bombé orange, portant une collerette plate, incolore, à bords francs mais irréguliers ; - colonies bombées lisses, brillantes, à bords reguliers, de couleurs variées : orange, rosee, rouge, marron... ; - colonie plate, blanchâtre, formée de deux cercles concentriques, le cercle périphérique étant lisse et brillant, le cercle intérieur étant mat et d'aspect rugueux dont le centre est en creux ; - colonie plate, brillante, ovolde, à bord franc, granuleuse, de couleur marron foncé ; - colonies marrons, "ombiliquées" (c'est-à-dire à centre affaissé par rapport à la périphérie), brillantes, lisses. I1 semble donc s'agir de colonies de champignons, levures et bactéries. On peut remarquer que certaines colonies ont poussé sur une partie décollée de la membrane qui n'a donc jamais été au contact direct du milieu de culture. EXEMPLE 4. Vin non commercialisé dilué 10 fois. Milieu Sabouraud. Incubation 24 h à 370C. On remarque de grosses colonies blanches, rugueuses, à bords réguliers, qui sont des levures dont la pousse est électivement favorisee par la composition du milieu de culture. Les colonies plus petites sont des colonies bactériennes ou des clones de levure peu développés. EXEMPLE 5. Protéus sur gélose nutritive ordinaire. 24 h à 370C. On observe bien, en comparant avec une partie cornée de la membrane qui se trouve ainsi toujours décollée du milieu de culture, l'envahissement caractéristique des colonies de protéus, formant un dessin particulier, d'aspect rugueux quelquefois filamenteux. On observe également une zone intermédiaire entre la partie périphérique à droite décollée du milieu de culture et la partie plus en profondeur entièrement recouverte par les colonies indifférenciées: il s'agit d'une bande d'environ 2 cm de large. A ce niveau, la membrane est aussi bien décollée du milieu de culture mais on observe un très mince film de pousse des germes qui essayent quand même d'envahir en surface la partie non adhérente de la membrane (c'est le voile caractéristique des protéus). EXEMPLE 6. Même vin non commercialisé (dilué 10 fois) que l'exemple n" 4. Milieu Schaedler pH = 4,5. Incubation 24 h à 37"C. Le milieu Schaedler est choisi ici pour favoriser électivement la pousse des bactéries du vin. On observe bien la grande quantité de colonies qui ont envahi la membrane jusqu'à la dépasser et aller pousser directement sur la gélose. II s'agit de colonies de bacillus très mobiles Une vue de près rend très bien compte de la macromorphologie des colonies de bacillus : soit blanche d'aspect poudreux, forme indéterminée; soit marron de forme ovolde ou formant des circonvolutions à limite périphérique surélevée; soit cérébroldes -Et ceci à tous les stades de leur croissance. EXEMPLE 7. Staphylococcus auréus. Milieu de Chapman. 48 h à 37 C. Les colonies rondes, blanches, brillantes, bombées, sont bien individualisées et prennent leur petite taille caractéristique à cause du milieu hypersalé (7,5 %O NaCI). EXEMPLE 8. Serratia rubidea sur gélose nutritive ordinaire. 48 h à 30 C. Sur une photographie de près, seulement éclairée en transparence par la lumière du jour, on distingue, à partir de la même culture pure, des colonies pigmentées, certaines en cours de perte ou d'acquisition de la pigmentation, d'autres enfin totalement dépigmentées. EXEMPLE 9. Les essais sont faits sur l'eau du Rhône, prélevée au hasard. Dilution au 10.000ème. Milieu de Wilson Blair. 24 h à 37"C. On distingue parfaitement les colonies poussant dans la gelose entre la membrane et la couche supplémentaire de milieu de culture rajoutée afin de créer l'anaérobiose. L'examen de la boîte de Pétri prise en transparence par éclairage par dessous montre l'aspect bien cerné du contour des colonies. EXEMPLE 10. Escherichia coli sur milieu EMB. 24 h à 370C. La membrane selon l'invention permet d'obtenir le fameux aspect vert métallique "en dos de scarabé", comme si l'on cultivait directement les colonies sur la gélose. Macromorphologiquement, les colonies sont bien ponctuelles, bombées, brillantes. Si l'on utilise des membranes classiques en acétate de cellulose (Schleicher et Schüll, calibrées 0,45 ), l'opposition est très nette ; à partir de la même souche, cultivée exactement dans les me mes conditions, l1 aspect "dos de scarabé" n'est jamais obtenu avec plus de 30 essais. Par contre, on oh tient une suite hétérogène de colorations allant du bleu franc à une série de cercles concentriques respectivement, du centre vers la périphérie, rose-bleu violacé jusqu'à orange quelquefois. L'aspect macromorphologique des colonies est beaucoup mieux défini avec la membrane selon l'invention qu'avec une membrane classique en acétate de cellulose et les colonies sont beaucoup plus ponctuelles. EXEMPLE Il. Escherichia coli sur gélose ordinaire + 1 disque calibré d'ampicilline. Incubation 24 h à 37"C. Le disque papier imbibé de façon calibrée d'un antibiotique est posé sur la surface de la gélose, puis légèrement appuyé de manière à ce qu'il ne provoque pas un décollement de la membrane déposée ensuite par rapport au milieu de culture connu.Comme dans la technique des antibiogrammes par diffusion en milieu gélosé, on observe la zone centrale correspondant à un halo clair où la pousse Escherichia coli est inhibée par l'antibiotique contenu dans le disque et qui diffuse; dans le cas présent, c'est l'ampicilline. Halo bien visible, classique, mesure du diamètre aisé. EXEMPLE 12. Streptococcus pyogenes (groupe A) sur gélose au sang de mouton. Incubation 24 h à 370C. Le halo de lyse de l'hémoglobine est très facilement identifiable, son diamètre est supérieur à celui de la membrane ce qui montre que l'hémolysine secrétée par les germes diffuse bien et en parfait état conformationnel. EXEMPLE 13. Escherichia coli sur gélose Hektoen. 24 h à 370C. Avec une suspension de forte densité cellulaire, les résultats sont les suivants - Sur une vue prise par dessous du fond de la boîte de Pétri, les colonies colorées en jaune (par le bleu de bromothymol) apparaissent nettement plus foncées. - Sur une vue par dessus (coté surface de la gélose) les colonies, bien que très nombreuses, sont toutes bien séparées et le dénombrement est parfaitement possible à l'aide d'une simple loupe. ETUDE QUANTITATIVE. A partir d'une suspension témoin connue en eau physiologique de Staphylococcus aureus de densité correcte, il a été procédé à une série de filtrations en continu visant à obtenir des valeurs de dénombrement des germes dans cette suspension avec la membrane de l'invention et en parallèle afin de pouvoir comparer, avec une membrane acétate de cellulose courante calibrée à 0,45 p (Schleicher et Schüll). Les résultats sont les suivants Type de membrane Invention Acétate Nombre d'échantillons 15 15 plus petite valeur de 28 25 dénombrement obtenue plus grande valeur de 58 46 dénombrement obtenue moyenne des valeurs 41,5 35,1 écart type des valeurs 9,7 6,8 Culture sur gélose nutritive ordinaire. Incubation 24 h à 370C. DISCUSSION DES RESULTATS. 1. Aspect qualitatif. - morphologie macroscopique des colonies. Toutes les colonies prennent une apparence identique à celle observée lors d'une pousse directe sur la surface d'un milieu de culture gélosé, que ce soit chez les procaryotes: colonies de Salmonella (exemple 2), d'Escherichia coli (exemples 1, 2, 10 et 13), de Protéus (exemple 5), de Bacillus (exemple 6), colonies diverses non identifiées (exemple 3) ou chez les eucaryotes inférieurs : levures (exemple 4). - lecture- des tests biochimiques (renseignements de premier ordre) liés à l'activité métabolique des germes - colonies de Salmonella H2S positif (exemple 2) - colonies d'Escherichia coli jaunes car virage de l'indicateur coloré de pH (exemple 1 et 2); - colonies d'Escherichia coli "dos de scarabé" (exemple 10). - respect des conditions de pousse. - pousse de Streptococcus pyogenes, germe fragile et capricieux, exigeant (exemple 12); - colonies eneahissantes de protéus {exemple 5); - pousse des germes anaéreobies {exemple 9); - pigmentation de Serratia (exemple 8); - parfaits échanges entre les colonies et le milieu de culture et viceversa.La membrane se comporte avec une neutralité extrême, respectant non seulement les conditions physico-chimiques montée de toutes les molécules nécessaires à la croissance cellulaire ; imprégnation et dilution des déchets par la masse de la gélose; milieu hyperionique du milieu de Chapman (exemple 7)], le transit des petites molécules (identification par réactions chimiques (exemples l et 2), mais aussi tous les passages et les interactions des molécules biologiques. Il est à ce stade intéressant de souligner les conséquences théoriques et conceptuelles apportées par les exemples 11 et 12 : - exemple 11 - Escherichia coli. Simulation de l'antibiogramme par diffusion en gélose.La membrane laisse passer du milieu de culture l'antibiotique sans perturber ni son action bactéricide, ni son gradient de concentration dû à sa diffusion à partir du disque imbibé calibré. - exemple 12 - Streptocoque j3 hémolytique sur gélose sang de mouton. Les hémolysines relarguées dans le milieu extérieur par les germes traversent en grand quantité la membrane sans modification de leur propriété biologique à savoir la lyse de l'hémoglobine des érythro cytes du sang de mouton. Au niveau structural donc biochimique, il est fondamental de constater que le passage d'une protéine à caractére enzymatique au travers de la structure physique, en contact avec les groupements chimiques constitutifs ou résiduels (ions, solvants, molécules diverses imprégnées, ligands) de la membrane n'est pas limité et ne modifie pas son état conformationnel. - imprégnation de la membrane. - Lors de la filtration, l'imprégnation de l'eau est parfaite et homogene sur toute la surface de la membrane selon l'invention, ce qui n'est pas le cas pour les membranes en acétate de cellulose qui présentent souvent des petites zones qui ne s'hydratent pas et ne remplissent donc pas leur rôle pendant la filtration. Avec Escherichia coli, qui donne des colonies non envahissantes, ce phénomène est mis en évidence: les zones blanches au centre et qui s'en vont en périphérie représentent les endroits restés secs, en apparence fort peu hydrophiles et qui ne s'imprègnent pas de l'échantillon filtré (exemple 10). - Lors de la culture sur le milieu nutritif, l'exemple 7 (Staphylococcus sur milieu de Chapman) grâce à l'indicateur coloré de pH qu'il contient (rouge de phénol prenant la couleur rouge si pH > 6,8) montre que tout le milieu imprègne bien l'intégralité de la membrane qui est en contact avec la gélose. D'autre part, les exemples 3 (eau du Rhône) et 5 (Protéus) confirment ceci et précisent que l'imprégnation de la membrane par le milieu de culture s'étend même où la membrane qui est cornée ne repose pas sur la surface de la gélose. - transparence de la membrane. La possibilité d'observation par transparence révèle la perméabilité de la membrane aux photons (exemples 2, 8, 9, 12 et 13). Ceci procure des avantages certains, tels que l'éclairage par dessous pour une observation à l'oeil nu, à la loupe,- au microscope, et la compatibilité avec les appareils automatiques de comptage jusqu'alors réservés aux dénombrements en masse (avec ou sans éclairage par dessus). 2. Aspect quantitatif. La membrane selon l'invention présente deux avantages importants: - le comptage plus aisé à l'oeil nu, rendant le résultat plus précis pour un dénombrement, surtout avec des colonies incolores ; - lors d'un cas malheureux au laboratoire où la gamme de dilution pour un produit inconnu n'est pas assez grande, on pourra "récupérer" le résultat grâce à la possibilité de dénombrer plus de 300 colonies (300 est le nombre maximum de colonies décomptables dans une boîte d'après les textes officiels) (exemple 13). On peut, en conclusion de ce qui précède, souligner une fois encore l'intérêt des membranes selon l'invention, appliquées en microbiologie et en virologie, qui sont autoclavables et stérîlisables par les rayonnements ionisants , possèdent en plus un débit à l'eau suffisant pour être adaptées sans modification aucune aux appareils classiques type rampe de filtration ou module filtrant. REVENDICATIONS 1. Applications et utilisations en biologie des pro- et eucaryotes de membranes filtrantes du type écran, utilisables en micro ainsi qu'en ultrafiltration, essentiellement constituées d'un matériau polymérique coule sur un support, ledit matériau étant chimiquement inerte et accepté sans perturbation aucune par les cellules vivant à son contact, sa structure présentant une neutralité d'imprégnation totale à la fois pour les substances susceptibles d'exercer des effets inactivateurs, inhibiteurs statiques, ou mortels et pour les diverses molécules assurant des échanges en son travers, son pouvoir de sélection s'exerçant uniquement au niveau de la taille des particules filtrées par rapport à l'ouverture des pores. 2. Membranes filtrantes selon la revendication 1, caractérisées en ce que le matériau polymèrique est légèrement hydrophobe, en ce que sa résistance aux acides et bases, forts et faibles, est bonne dans les concentrations faibles ou moyennes, à température normale, et en ce qu'il est compatible avec la plupart des solvants organiques, sauf les solvants chlorés ou aprotiques qui, à faible température, s'absorbent et provoquent un gonflement, et, à haute température, solubilisent le polymère. 3. Membranes filtrantes selon la revendication 1 et la revendication 2, caractérisées en ce qu'elles résistent jusqu'à 1200C (en chaleur sèche comme humide) et présentent peu de réaction à l'exposition des rayonnements (à une dose de 2,5 mégarads). 4. Membranes filtrantes selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisées en ce que leur débit à l'eau se situe aux environs de 20.000 litres/jour/mZ dans des conditions d'ultrafiltration, ce débit pouvant être pratiquement décuplé dans des conditions de microfiltration. 5. Membranes filtrantes selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisées en ce qu'elles présentent une fonte transparence à la lumière et en particulier à la lumière naturelle.