FR 2535323 A1 19840504 FR 8218001 A 19821027 "Nouveaux dérivés à structure acide uronique, leur préparation et leurs applications biologiques" L'invention est relative à de nouveaux dérivés à structure acide uronique et à leur procédé de synthèse. Elle concerne également les applications de ces dérivés, notamment, comme intermédiaires de synthese osidique, substrats d'enzymes, haptènes et réactifs de laboratoires. L'invention concerne plus particulièrement des dérivés des épimères acide D-glucuronique et acide L-iduronique. On rappelle que ces épimères répondent respectivement aux formules suivantes acide D-glucuronique acide L-iduronique Divers composés naturels biologiquement actifs tels que lthéparine, l'héparane-sulfate, les chon droltines et autres renferment dans leur chaîne des motifs possédant la structure de ces épimères. Plusieurs demandes de brevets FR du nom de la Demanderesse, dont une demande déposée ce jour concernent un procédé pour l'obtention par voie de synthèse d'oligosaccharrides correspondant notamment à des fragments des mucopolysaccharides naturels ci-dessus. Les travaux effectués à cet égard ont montré, notamment, en ce qui concerne les motifs à structure uronique, qu'en utilisant certains types de groupes protecteurs, il était possible de conférer à une position du motif uronique une réactivité suffisante pour pouvoir l'impliquer, par exemple, dans une réaction de glycosylation. L'élaboration de motifs de ce type a alors amené les inventeurs à rechercher desmoyens permettant d'acceder aisément aux structures acide D-glucuronique et acide L-iduronique en tant que telles, et, plus spécialement à cette dernière dont la synthèse nsa pratiquement jamais été rapportée dansla littérature scientifique. invention a donc pour but de fournir de nouveaux dérivés d'acide D-glucuronique et d'acide L-iduronique dotés d'une réactivité suffisante leur permettant d'être engagés dans -des réactions de glycosylation en tant qu'agents glycosylants ou en tant qutagents glycosylés (dans ce cas jouant le rôle d'aglycone selon la terminologie curante). L'invention a également pour but de fournir de nouveaux dérivés'permettant, grâce à la nature de leurs groupements protectzurs, l'introduction, de manière spécifique, en des positions données, de groupes substituants choisis. Elle vise, en outre, à fournir de nouveaux dérivés dotés d'une réactivité suffisante leur permettant d'entre engagés dans des réactions de glycosylation en tant qu'agents glycosylants ou en tant qu'agents glycosylés et permettant, . grâce à.la nature de leurs groupements proteeteurs, l'introduction, de manière spécifique, en des positions données, de groupes substituants choisis. Elle a également pour but de fourni des moyens permettant d'élaborer les structures des acides en question, en particulier celle de acide L-iduronique et d'accéder aisément aux dérives réactifs ci-dessus. L'invenbion vise également les applications de ces dérivés en synthèse osidique notamment pour l'élabora- tion d'oligosaccharides correspondant, en particulier, à des fragmentes, ou des dérivés de fragments, des composés naturels ci-dessus, ou encore pour l'élaboration de glycosides utilisables comme réactifs biologiques, notamment comme substrats d'enzymes et/ou réactifs de laboratoires. Elle vise également les applications de ces dérivés conjugués, en tant que déterminants antigéniques. Les dérivés à structure acide uronique de l'invention sont caractérisés en ce qu'ils comportent au moins un groupe réactif , en l'une quelconque des positions 1, 2, 3,4 ou 6, c'est-à-dire un groupe activateur capable de s'engager dans une réaction de glycosylation ou un groupe fonctionnalisable constituant l'amorce d'un bras conjugable, les groupes -OH des positions restantes ainsi que le groupe -OH du groupe carboxyle étant protégés par des groupements protecteurs, identiques ou différents les uns des autres, compatibles entre eux et avec le ou les groupe (s) réactif (s) et inertes vis-S-vis des réactions dans lesquelles 3 le cas échéant, on souhaite engager le monosaccharide, à l'exclusion des halogenures et des imidates de (2,3,4-tri-0-acétyl(ou tri-O-benzyl)glucopyra noside)-uronate de méthyle des [1-halogénures,1-OH ou les précurseurs 1-OAc ou 1-OMe de ces halogénures, glucopy ranosideJ uronate de méthyle comportant un groupe -OCH3 en position 4, du (méthyl (ou benzyl)-2,3-di-0 benzyl-4 D-glucopyranoside) uronate de méthyle ou du (2,3,4-tri O-allyl glucopyranose)uronate allyle. On notera que de tels dérivés constituent d-es dérivés semi-ouverts, c'est-à-dire un dérivé activé ou potentiellement activables sur une position. Un dérivé semi-ouvert à droite permet le transfert sur l'extrémité non réductrice d'un monosaccharide ou d'un oligosaccharide, par exemple, un composé semi-ouvert à gauche correspond à un dérivé possédant une seule fonction litre permettant,par exemple,une glycosylation spécifique. Selon une disposition avantageuse, les dérivés de l'invention sont des dérivés ouverts, c'est-à-dire semi-ouverts à droite et à gauche, autorisant donc une élongation dans deux directions. De tels dérivés renferment alors un groupe protecteur temporaire, c'est-S-dire éliminable indépendamment des autres groupes protecteurs présents en recréant un alcool. Selon une autre disposition avantageuse de l'invention, les groupes protecteurs des radicaux -OH des fonctions alcool sont différents et éliminables séquentiellement sans altération de la structure uronique et de la fonction carboxyle. Cette disposition présente l'intérêt, au cours de réactions ultérieures, de pouvoir introduire à la place de tous es groupes protecteurs des substituants différents entre eux ou en variante, d'introduire seulement un ou plusieurs substituants et de libérer -les groupes -OH des positions restantes. Dans des dérivés préférés de l'invention, le groupe réactif occupe la position l ou 4. Une famille préférée de dérivés de l'invention correspond aux dérivés d'acide D-glucuronique de formule (I) : dans.laquelle -OR1 représente un groupe réactif choisi parmi 10 un groupe activateur tel qu'un halogénure, en particulier un chlorure ou un bromure, un imidate, un groupe orthoester conjointement avec R2 ; 20 un groupe fonctionnel ou fonctionnalisable tel qu'un radical -O-alcoyle, notamment -O-méthyle ou -O-benzyle, ou -O-alcényle tel que -O-allyle ou -O- vinyle 5 ou -O-acyle, en particulier -O-acétyle 30 un groupe -OH ;; -R2 à R4, identiques ou différents, représentent un groupe protecteur tel qu'un radical alcyole de 1 à 3 atomes de carbonate, en particulier méthyle, alcoyle substitué, tel que benzoyle, acyle, tel qu'acétyle, benzoyle ou chloroacétyle, ou alcoyle, tel qu'allyle ou vinyle. -R5 représente un radical aliphatique ou aromatique, en particulier un radical alcoyle de l à Il atomes de carbone ou alcoyle substitué tel que benzyle. Dans un groupe préféré de dérivés d'acide uronique, Rq représente un groupe temporaire formant un ester ou un éther avec le groupe -OH qu'il protege et est choisi parmi les radicaux du type monochloroacétyle, acétyle, benzoyle, p-méthoxybenzyle, allyle ou analogues. Des produits préférés de ce groupe renferment un groupe R1 représentant un groupe allyle ou vinyle. De tels produits présentent l'avantage de.porter en positions 1 à 4 des substituants éliminables sélectivement sans par ailleurs altérer les groupements en positions 2) 3 et 6. Dans un autre groupe préféré, R1 représente un atome d'hydrogène, ce qui permet l'introduction souhaitée en position 1, d'un groupe réactif tel qu'un halogénure ou un imidate, ou encore la réalisation d'une réaction de glycosylation. Dans un autre groupe préféré, R1 représente un groupe activateur tel que défini ci-dessus, ce qui permet d'engager le monosaccharide,par exemple, dans une réaction de glycosylation. Un autre groupe préféré de produits renferme un groupe R4 représentant un atome d'hydrogène, Rl représentant alors un groupe fonctionnalisable tel que défini plus haut. Dans ces différents groupes R2 et R3 peuvent être identiques. et représentent, par exemple,un groupe benzyle. En variante, ils peuvent différer lrun de l'autre. Une autre famille préférée de dérivés de l'in-- vention correspond aux dérivés de l'acide L-iduronique de formule (II) dans laquelle les substituants présentent les significations générales données ci-dessus en rapport avec la formule (I). Dans un groupe préféré de dérivés d'acide Liduronique, R1 et R2 représentent un orthoesterr Dans un autre groupe préféré, R1 représente un groupe activateur tel qu'un halogénure. Dans encore un autre groupe préféré, R1 représente un radical alcoyle ou alcényle. Des produits préférés de ces groupes renferment avantageusement un groupe temporaire en position 4. D'autres produits particulièrement préférés de ces groupes renferment en outre des substituants R2 et R3 différents, ce qui permet au cours d'opérations ulté rieures de soumettre ces groupes à des traitements différents et par là d'introduire des groupes de substitution différents sur le motif Dans le cas où, par exemple R2 représente un groupe acyle tel qu'un groupe acétyle et R3 un groupe benzyle, il est possible d'introduire un groupe sulfate a la place du groupe acétyle > puis de libérer le radical -OH bloqué par le groupe benzyle. On dispose ainsi avantageusement d'un motif constitutif de chalnes d'héparine ou d'héparane- sulfate. D'autres produits préférés renferment des substituants R2 et R3 différents l'un de l'autre. L'invention vise également un procédé de synthèse de ces dérivés. Selon ce procédé9 on introduit sur un monosaccharide à structure uronique des groupes protecteurs compatibles entre eux, autorisant le traitement sélectif d'une position donnée sur laquelle on désire introduire un groupe réactif ouss le cas échéants un groupe protecteur donné. On appellera groupe protecteur intermédiaire. un groupe utilisé durant le processus de synthèse puis éliminé pour la mise en place dsun groupe réactif ou d'un groupe protecteur final, c'est-à-dire correspondant au groupe protecteur souhaité sur le monosaccharide de l'invention. On peut introduire, dès le départ, un ou plusieurs groupes protecteurs finaux. En variante, l'introduction d'un ou plusieurs groupements protecteurs intermédiaires permet, dans un premier temps, de traiter une position donne, puis lorsque le groupement désiré a été introduit dans cette position, de traiter indépendamment le ou les positions occupées par ce ou ces groupes intermédiaires et 5 le cas échéant, successivement, aux fins d'introduction de groupes protecteurs finaux différents. Pour préparer, par exemple, un monosaccharide comportant un groupe vinyle on élabore avantageusement un dérivé allyle dans lequel tous les groupes -OH des fonctions alcool sont bloqués -par des groupements protecteurs finaux ou, le cas échéant, intermédiaires. On soumet ce monosaccharide allyle à l'action d'un agent d'alcoylation afin de bloquer le groupe -OH de la fonction carboxyle. Le monosaccharide à greque allyle ainsi protégé est alors soumis, -par exemple, à l'action d'un complexe derhodium en présence de diazabicyclo-octane, ce qui conduit à l'éther vinylique correspondant. On remarquera que dans le cas ou un groupe temporaire a été introduit en une position donnée, il est ensuite possible d éliminer ce groupe temporaire et de recréer en cette position un alcool utilisable pour une réaction de glycosylation tandis que le groupe vinyle peut être, à son tour, soumis à une ou plusieurs réactions pour allonger la chaîne. A partir d'un dérivé 1-O- vinyle protégé, il est possible,par-exemple, d'élaborer un groupe réactif tel qu'un imidate. A cet effet, on soumet avantageusement le dérivé vinyle à l'action de dérivés mercuriques tels que de l'oxyde mercurique et du chlorure mercurique ce qui permet de récréer un alcool que l'on soumet alors à l'action d'un agent d'imidoylation tel que le trichloroacétonitrile. Il est également possible d'obtenir un imidate à partir d'un dérivé l-O-hydroxylé obtenu par hydrolyse acide d'un glycoside et en particulier d'un méthyl glycoside. De manière classique, les monosaccharides à structure uronique halogénés sont avantageusement obtenus par action d'un agent d'halogénation sur un groupe acyle, lui-même obtenue cas échéant, par acy lation d'un alcool. On peut également les obtenir par action du réactif de Vilsmeier sur un dérivé hydroxylé en position 1. On peut également préparer un monosaccharide comportant un groupe orthoester en opérant avantageusement a partir du dérivé halogéné correspondant. Selon un mode préféré drobtention, on soumet le dérivé halogéné en présence d'un accepteur de protons tel que de la sym-collidine, à l'action d'un alcool. Selon une disposition avantageuse de l'invention, les monosaccharides à structure L-iduronique sont préparés à partir du 3-O-benzyl-L-iduronate de méthyle lui-même élaboré à partir d'un dérivé de type D-glucofuranoside en procédant comme suit. On met en oeuvre un dérivé de-D-glucofurano- side de formule (III) suivante dans laquelle les groupements R6 à R8, identiques ou différents les uns des autres, représentent un groupe de blocage. En particulier R6 et R7 forment un groupe isopropylidène et R8 un groupe benzyle. Le monosaccharide de formule III est traité de manière à agir sélectivement sur l'un ou l'autre des groupes -OH en position 5 ou 6, afin d'obtenir le passage d'une structure D-gluco à une structure L-ido en position 5 et le passage d'une structure alcool primaire à une structure acide carboxylique en position 6. On procéde alors à un réarrangement de la forme furanose en la forme pyranose. Le traitement sélectif des groupes -OH de la chaîne -gluco et l'utilisation de la chaîne formée pour passer du cycle glucofuranoside au cycle idofuranoside puis idopyranoside sont effectués comme suit. Les groupements -CH2OH et-CHOH respectivement en positions 6 et 5 sont successivement transformés comme suit I- passage de -CH2OH à -CH20Tr où Tr représente un groupe trityle. L' -glucofuranoside Il de départ est traité pour bloquer sélectivement le groupe -OH en position 6. A cet effet, il est avantageux d'opérer avec du chlorure de trityle. 2- passage de -CHOH à-CHOR9, où R9 est un groupe de blocage. Un groupe de blocage préféré correspond au cas où R9 représente un groupe benzoyle. Pour son in troduction, on utilisera du chlorure de benzoyle. 3- passage de -CH2OTr à -CH2OH. Le déblocage du groupe hydroxyle est avantageu sement réalisé avec de l'acide paratoluène sul fonique, ou encore, avec une solution de tri fluorure de bore dans le méthanol ou analogue. passage de -CH2OH à -COOH On utilise, pour cette étape, un réactif permettant de. passer à la forme acide carboxylique. Cette transformation s'effectue avantageusement en utilisant une solution d'oxyde de chrome dans de l'acide sulfurique. 5 passage de-CHOBz à -CHOH. Le produit précédemment obtenu est traité par de la soude. On repasse ensuite à la forme acide. Pour éliminer les cations, on utilise avec avantage une résine acide échangeuse de cations. 6- passage de -COOH à -COOMe, où Me représente un groupe méthyle. L'estérification est réalisée de façon classique par action notamment de diazométhane. 7- passage de -CHOH à -CHOTf,où Tf représente le groupe triflyle. On introduit en position 5 -un groupement très réactif, tel qu'un tosylate, un mésylate ou de manière préférée un groupement triflyle. On effectue alors la réaction avec de l'anhydride triflique. 8- passage-de -CHOTf à -CHOTFA,TFA représentant le groupe trifluoroacétate (avec inversion de configuration du carbone en position 5-). On effectue une substitution nucléophile avec inversion de Walden. Cette réaction est avantageusement realisée avec du trifluoroacétate de sodium. 9- passage de -CHOTFA à -CHOH. On traite le produit avec du méthanol puis on procède avantageusement à une chromatographie aux fins de purification. 10- réarrangement du cycle. On opère avec avantage en milieu acide, en particulier en presence d'acide trifluoroacétique. Un mélange acide trifluoroacétique/eau de l'ordre de 9/l s'avère spécialement approprié. L'invention vise également en tant que produits intermédiaires, les furanosides à structure D-gluco et L-ido et lesidopyranosides obtenus à l'issue des étapes 1 à 8 ci-dessus. En ce qui concerne plus particulièrement le composé de structure acide L-iduronique de formule III obtenu dans lequel R1 représente un groupe alcoyle, en particulier méthyle, on notera qutil peut être saponifié puis soumis à une réaction d'hydrogénation catalytique aux fins d'obtention d'un motif -acide L-iduronique. . Ce composé peut être encore acylé, transformé en halogénure puis en ortho-ester. Le groupement protecteur en position 4 peut être éliminé permettant ainsi l'introduction d'un autre groupe protecteur temporaire en position Il. Moyennant un choix convenable du groupement protecteur en position 4, et selon la nature de l'ortho- ester, il est possible, à partir de ces composés de structure III, d'effectuer une réaction de glycosylation suivie d'une élimination sélective du groupement protecteur en position 4 ; cette position peut ainsi être engagé dans une autre réaction de glycosylation. Enfin, l'ester ou le groupement acyle formé en position 2 au cours de la première réaction de gly cosylation peut être éliminés régénérant ainsi une fonction -OH que l'on peut sulfater, si souhaité. Selon un autre mode de. réalisation, on prépare un monosaccharide du L-idose possédant, en positions 1,2 > 3 et 4 des groupements protecteurs souhaités puis on oxyde de façon sélective, sans altérer les groupements protecteurs ci-dessus, la fonction alcool primaire en position 6 en acide carboxylique. Les monosaccharides à structure D-glucuronique sont plus spécialement élaborés à partir de dérivés de glucose avec mise en jeu des techniques classiques pour l'introduction des groupes souhaités. Le procédé de l'invention permet doncss selon une grande souplesse, d'accéder à des dérivés a structure uronique capables de donner lieu à divers types d'enchaînements selon une stéréochimiepréférée grâce à leur réactivité. En outre selon le type des groupes protecteurs choisis, ils permettent après engagement dans un type donné de réaction l'introduction sélective à leur place d7un groupe de substitution donné et/ou la libération des groupes -OH. Il est ainsi possible de disposer d'oligosaccharides comportant des motifs uroniques, substitués de manière spécifique tels que rencontrés par exemple dans les chaînes de molécules biologiquement actives ci-dessus. L'invention vise également l'application, comme conjugués, à des supports variés, en vue de la réalisation de dosages des monosaccharides comportant un groupe réactif, en l'une quelconque des positions 1,2,3 ou 4, c'est-à-dire un groupe activateur capable de s'engager dans une réaction de glycosylation ou un groupe fonctionnalisable permettant l'élaboration d'une chaîne de substitution par élongation, les groupes -OH des positions restantes ainsi que le groupe -OH du groupe carboxyle étant protégés par des groupements protecteurs, identiques ou différents les uns des autres, compatibles entre eux et avec le groupe réactif et inertes vis-à-vis des réactions dans lesquelles, le cas échéant, on souhaite engager le monosaccharide. Il est ainsi possible de c onjuguer les monosaccharides à structure uronique de l'invention sur des composés capables de fixer des enzymes, ou sur des composés fluorescents, des composés chromogènes ou encore des composés radioactifs. L'invention vise donc également les applications correspondantes de ces monosaccharides. Elle vise, en particulier, les substrats d'enzyme élaborés à partir des monosaccharides de l'invention, notamment les nitro-phényl-glycosides. Ces produits permettent avantageusement d'étudier la spécificité de diverses enzymes, en particulier, celles dégradant lthéparine, notamment la spécificité de la L-iduronidase. Les glycosides obtenus par fixation des monosaccharides de l'invention, par exemple, la méthylumbelliferone constituent des composés précieux comme substrats utilisables en fluorescence. Dans d'autres applications, les monosaccharides de l'invention sont utilisés pour l'élaboration de substrats radioactifs. Ces substrats peuvent être obtenus en mettant en oeuvre un glycoside de départ radioactif ou en réduisant les groupes nitrophénylglycosides évoqués ci-dessus pour les études d'enzymes en groupe amine, soumis ensuite par exemples à une réaction dZacétylation avec de l'anhydride acétique tritié. Selon un aspect de l'invention de grand intérêt, les monosaccharides renfermant un groupe fonctionna lisable sur le carbone anomère ouvrent la voie à l'introduction de chaînes capables de jouer le rôle de bras ancreurs utilisables dans diverses applica tions biologiques. Il est ainsi possible d'élaborer, à partir du groupe fonctionnalisable des chaînes constituées par (1) un radical alcoyle de 2 à 10 atomes de carbone, comportant en bout de chaîne un groupe -OH, éventuellement protégé ou engagé dans un groupe fonctionnel (2) un radical alcényle comprenant de 2 à 10 atomes de carbone. Des chaînes du type (l) correspondent avantageusement à des radicaux, alcoylène-glycol, &alpha;,ss -dihy- droxypropyle, ou ss-hydroxyéthyle,&gamma;-hydroxypropyle et sont utilisables pour la constitution de réactifs biologiques. Les chaînes (l) et (2) ci-dessus renferment avantageusement en outre un ou plusieurs groupements éther et/ou amine intercalaire et/ou un groupe foncionnel terminal fermant de l'azote tel qu'une fonction smine ou un groupe terminal éther, carboxyle ou aldéhyde. Des chaînes à terminaison amino particulièrement préférés sont du type alcoxy-alcoylamlne dans lequel les groupes alcoxy et alcoyle renferment ensemble de 3 à 5 atomes de carbone, dc préférence de 4 à 10, avantageusement de l'ordre de 10. De telles chaines sont avantageusement obtenues à partir des dérivés allylc de l'invention. La réactivité de ce groupe permet, en effet, l'articulation d'un grand nombre de réactions et, par là, l'obtention de chaînes de longueur et denture modulables, à caractère hydrophile précieux pour les applications biologiques. Pour l'allongement dela chalne, on a recours aux réactions classiques de la synthèse organique, qui seront aisément mises en oeuvre par l'homme de l'art en fonction de la chaîne souhaitée. Il est, par exemple, possible d'obtenir une chaîne terminée par un groupement fonctionnel alcool, en particulier par ozonolyse de la double liaison du groupe allyle, puis de recourir à une tosylation et, enfin, de faire réagir le dérivé tosylé avec un azide. L'azide obtenu présente un double intérêt. Il s'agit, d'une part, d'un composé stable. D'autre part, par réduction, selon les techniques classiques, il permet d'obtenir aisément des chaînes de substitution à groupe amino terminal particulièrement précieuses pour la constitution des immunoadsorbants de l'invention. Les monosaccharides à bras ancreurs tels qutévoqués ci-dessus constituent de précieux réactifs biologiques utilisables, en particulier, sous forme immobilisée sur des supports solides afin de constituer des immunoabsorbants. Des supports solides appropriés sont constitués par exemple par des polysaccharides, tels que la cellulose, l'agarose ou l'agarose reticulé (notamment celui commercialisé sous la marque SEPHAROSE par PHARMACIA), ou des polymères mixtes renfermant outre les polysaccharides ci-dessus despolymères tels que des polyacrylamides (notamment ceux commercialisés sous les marques ULTROGEL et MAGNOGEL par IBF). Les monosaccharides de l'invention peuvent également constituer des haptènes conjugables à des supports solubles, tels que la BSA (albumine de sérum bovin) ou la poly-lysine, destinés à la préparation d'anticorps polyclonaux ou monoclonaux. Outre leur utilisation comme déterminants antigéniques, les produits de l'invention sont précieux comme produits de référence pour des études structurales. D'autres caractéristiques et avantages de l'invention apparaîtront dans les exemples qui suivent et en se référant aux figures 1 à 16. Les références numériques utilisées dans ces figures pour désigner les dérivés sont également reprises dans les exemples. Dans ces figures, les symboles utilisés présentent les significations suivantes A représente un groupe allyle, 0 un groupe -C6H55 Bn un groupe benzyle, Tr un groupe trityle > R6 un groupe -OAc ou -OBZ, avec Ac représentant un groupe acétyle et Bz un groupe benzoyle, Me un groupe méthyle P un groupe vinyle, MCA un groupe monochloro acétyle, Tf un groupe triflyle, t-Bu un groupe tertio-butyle et SnBu3 le radical tri butyl stanyle. Les formules illustrant les composés des exemples 1 à 6 sont rapportées sur les figures 1 et 2 EXEMPLE 1 Préparation de l'acide (allyl-4-0-acétyl-2,3 dl-0-benzyl-o(-D-glucopyraoside) uronique (composé 8a) On effectue cette synthèse à partir du glucose, selon les étapes a) à g) suivantes a) préparation de l'allyl&alpha; -D-qlucopyranoside (composé 1) Une solution d'acide chlorhydrique gazeux (18 g) dans de l'alcool allylique (600 ml) est chauffée à 70 C. On ajoute alors du glucose anhydre (300 g) et on maintient à cette température pendant 3 heures. La réaction peut être suivie en chromatographie sur couche mince (c.c.m.) dans le solvant méthanol/chloroforme (1/4,v/v). La solution brune obtenue après 3 heures est concentrée à sec, sous vide, neutralisée par une solution concentrée d'ammoniaque (50 ml) puis concentre à nouveau à sec. Au résidu obtenu, on ajoute del'acétone (500 ml), on porte à ebullition et on maintient ainsi jusqu'à dissolution totale. Après refroidissement, le liquide est décanté. Le résidu est denouveau soumis au même traitement jusqu'à ce que l'analyse en c.c.m. de l'extrait montre un epuisement du résidu en dérivé 1 ou bien une trop forte contamination de l'extrait par des impuretés. Une partie de la premiere fraction extraite (12 g) est chromatographiée sur silice. On récupère le dérivé 4 qui peut être cristallise dans un mélange acétone/éther (6t5g; pf 95-990C). Le reste du produit peut être purifié selon le même processus. b) préparation de l'allyle 4,6-0-benzylidène-&alpha;-D-glucopyra- noside (composé@) - Le composé 4 (37 g) est dissous dans du diméthylformamide (200 ml). Du diméthoxytoluène (41 g) est alors ajouté suivi d'acide paratoluène sulfonique hydraté (130 mg). Après 2 heures de chauffage (bain-marie) sous vide et reflux, la réaction est terminée (c.c.m. méthanol/chloroforme, 2/25,v/v). Le solvant est évaporé. Le sirop est dissous dans du méthanol (le minimum), cette solution est versée goutte à goutte dans une solution aqueuse de bicarbonate de sodium (6,3 g dans 320 mi d'eau). Le précipité obtenu est recristallisé dans méthanol (21 g ;p.f 120-121 C) Les eaux-mères livrent encore du produit 2.Rendement total (37 g ; 71,4%), c)- préparation de l'allyl 2,3-di-0-benzyl-4@6-0-benzyli- dène-&alpha;-D-qlucopyranoside composé 3 Le composé 2 (45 g) est dissous dans du DMF anhydre (500 ml). De l'hydrure de sodium (28 g d'une dispersion à 50x dans l'huile) est ajouté. Après 30 minutes, le mélange est refroidi à 0 C et on ajoute alors, goutte à goutte, du bromure de benzoyle (52 ml). La réaction est suivie en c.c.m. (éther/hexane, 1/1,v/v). On ajoute ensuite lentement du méthanol (150 ml), évapore à sec et reprend par du chloroforme. La phase chloroformique est lavée avec de l'eau, séchée sur sulfate de sodium. Après évaporation du solvant, le résidu est cristallisé dans un mélange éther/hexane (36,5 g o PF 83-84 C). Ce produit est légèrement contaminé par une impureté migrant plus haut en c.c.m. (éther/hexane , 1/1 , v/v). d) préparation de l'aliyl 2,3-di-O-benzyl-;i -D-glucopyrano- side - (composé 4 A une solution du composé 3 (56 g) dans le méthanol (l 1!, on ajoute de l'eau (450 ml) puis de l'acide paratoluène sulfonique hydraté (17 g). Après 2 heures à 800C, on laisse refroidir le mélange, on évapore le solvant et on reprend le résidu par du chloroforme (l ), La solution chloroformique est lavée avec de lXeau jusqu'à pH neutre, puis séchée sur sulfate de sodium. On obtient ainsi un sirop jaune pâle (48 g) qui est engagé dans l'étape suivante $synthèse du composé 5 e) Préparation de l'allyl 2,3-di-0-benzyl-6-0-trityl-&alpha; D-glucopyranoside (composé 5) et de son analogue 4-O-acétylé (composé 6a,) Le dérivé A obtenu (48 g) est dissous dans de la pyridin (250 ml) et du chlorure de trityle (38,5 g) est ajouté. Après 1 heure à 100 C, la réaction est terminée (c.c.m. éther/hexane, 1/1, v/v). A la solution précédente, on ajoute de l'anhydride acétique (200 ml). Après une nuit, la réaction est complète (c.c.m.; éther/hexane, 1/2, v/v). On évapore à sec, reprend le résidu par du chloroforme (500 ml), lave la phase chloroformique avec une solution de sulfate acide de potassium à 10% avec de l'eau et sèche sur sulfate de sodium. Le chloroforme est évaporé. On obtient ainsi le compos Ga qui est engagé tel quel dans la réaction de préparation du composé 7a. f) Préparation de l'allyl 4-0-acétyl - 2,3-di-0-benzyl-&alpha; D-qlucopyranoside (composé 7a) Le dérivé 6z obtenu est dissous dans du chloroforme (500ml). A cette solution, refroidie à0 c, on a ajoute goutte à goutte sous agitation, une solution de fluorure de bore dans le méthanol (20%, 120ml). La réaction est suivie c.c.m. (toluène/acétone, 10/3 ,v/v). Le mélange réactionnel est transvasé dans une ampoule à décanter. La phase chloroformique est lavée par de l'eau (2 fois 100 ml) par une solution saturée de bicarbonate de sodium, puis avec de l'eau jusqu'à pH neutre. Après séchage, et évaporation, le résidu obtenu est introduit sur une colonne de gel de silice (500 g) équilibrée dans le toluène. Après élut ion de la plupart des impuretés par le toluène pur, le produit est élue par un mélange toluène/acétone (10/2,v/v). On obtient ainsi 48 g du composé 7a qui sera engagé directement dans la synthèse du composé 8a Une partie du composé 13a a été obtenue pure : [&alpha;]D20 = +11 (chloroforme). Ses spectres IR et RMN, de meme que l'analyse élémentaire, confirment la structure. g) Préparation de l'acide (allyl-4-0-acétyl-2,3-di-0- benzyl-&alpha;-D-qlucopyranoside) uronique (composé 8a , Une solution du composé 7a (48 g) dans l'acétone (800 ml) est refroidie à -50C. On ajoute ensuite goutte à goutte, une solution de trioxyde de chrome (30 g) dans l'acide sulfurique (3,5 M ; 125 ml). On laisse le mélange revenir la température ambiante. La réaction est contrôlée en c.c.m. (méthanol/chloroforme, 1/10,v/v).A la fin de la réaction, le mélange réactionnél est versé dans de l'eau (500ml). Le produit est extrait par le chloroforme (3 fois 250ml). La phase chloroformique est lavée à l'eau jusqu'à pH neutre, séchée sur sulfate de sodium et concentrée à sec. Le sirop obtenu (83 g) est utilisé tel quel pour la préparation du composé 9a. EXEMPLE 2: Préparation de l'acide (allyl 4 0-benzoyl-2,3- di-0-benzyl-&alpha;-D-glucopyranoside) uronique (com posé 8b) ct du méthyl ester correspondant (composé 9b) Dans une premiere étape, on prépare tout sabord l'allyl 4-0-benzoyl-2,3-di-0-benzyl-6-0-trityl-&alpha;-D- glucopyranoside (composé 6b) et l'allyl-4-0-benzoyl-2,3 di-0-benzyl-&alpha;-D-glucopyranoside (composé 7b) 1) - préparation des composés 6b et 7b Le composé 6b est obtenu comme il est décrit pour 6a à la solution pyridinique du composé 5 , on ajoute alors du chlorure de benzoyle (1,5 équivalents) et la réaction est suivie en c.c.m. (acétate d'éthyle/benzène,1/20,v/v). L'excès de chlorure de benzoyle est détruit par addition d'un excès de méthanol.Après évaporation à sec, le résidu, repris par du chloroforme, est lavé avec une so- lution de KHSO4 à 10%, avec delgeau, séché et concentréà sec. Le sirop obtenu est engagé tel quel dans la synthèse du composé 7b Ce sirop (105 g, obtenu à partir de 30g de composé 3) est dissous dans du chloroforme (300 ml). De l'acide paratoluène sulfonique (76 g de monohydrate dans 100 ml de méthanol) est ajouté. Après une nuit, la réaction est -terminée (c.c.m., acétate d'éthyl/chloroforme, 1/20,v/v). La phase chloroformique est lavée avec de l'eau jusqu'à pH neutre, séchée et concentrée àsec. Le sirop obtenu (98 g) est chromatographié sur une colonne de gel de silice (1,2 kg), éluée avec du chloroforme (0,6 1) puis avec un mélange acétate d'éthyle/chloroforme (1/20,v/v). On obtient ainsi le dérivé 7b pur (30 g) qu'on engage tel quel dans l'étape de préparation du composé 8b- EXEMPLE 3 Préparation de l'(allyl 4-0-acétyl-2,3-di-0-benzyl-&alpha;-D- glucopyranoside) uronate de méthyle (composé 9a ~) Le sirop obtenu à l'étape de préparation du compose. 8a est dissous dans de l'éther (300 ml). Une solution éthérée de diazométhane est alors ajoutée jusqu'à disparitlon du composé 8a (c.c.m. éther/hexane), 1/1, v/v. Après acidification par l'acide acétique, les solvants scnt évaporés. Le résidu obtenu (53 g) est dissous dans l'méthanol à chaud. Le dérivé 9a cristallise au refroidissement. Après recristallisation, on obtient ce composé 9a pur (18,4g)-pf 85-86 C - [&alpha;]D20 = + 12 (1,2 chloroforme). Ce produit est caractérisé par ses spectres IR,RMN et par son analyse élémentaire. A partir du filtrat de cristallisation, on obtient encore 7,6 g du composé 9a Le rendementglobal en 9a à partir du composé 2 est de 38%. EXEMPLE 4 Préparation du (prop-1'-ényl 4-0-acétyl-2*3-di-0-benzyl- &alpha;-D-glucopyranoside) uronate de methyle (composé 10a) Le dérivé 9a (4 g) est dissous dans un mélange d'méthanol (119 ml) de benzène (51ml) et d'eau (17ml). On ajoute ensuite du diazabicyclo octane (170 mg) et on porte à reflux. On ajoute à la solution bouillante du chlorure de Tris (tri phénylphosphine)-rhodium (I) (550 mg). L'ébullition est maintenue pendant 4 heures (c.c.m., éther/hexane, 1/1,v/v). A la fin de la réaction la solution est filtrée et les solvants sont éliminés. Le résidu est chromatographié sur gel de silice (150 g) dans un mélange acétate d'éthyle/ chloroforme (1,50, v/v). On obtient le composé 10a (3,25 g 81%) qui cristallise dans l'éthanol~[&alpha;] D20 = + 12 (1, chloroforme). PF 900 CLa structure: est confirmée par l'analyse élémentaire et les spectres RMN et IR. EXEMPLE 5 Préparation de l' acide (allyl 2,3-di-0-benzyl-&alpha;-D- glucopyranoside) uronique et de l'(allyl 2,3-di-0 benzyl- -D-glucopyranoside) uronate de méthyle (composés. 11 et 12 Le composé 8b (l,9g) est dissous dans du méthanol (40 ml). On ajoute alors de la soude (5N) en quantité suffisante pour avoir une concentration de 1 M en soude. La réaction est suivie en c.c.m.. (méthanol/chloroforme,1/4,v/v). Quand elle est terminée, on ajoute de l'eau (100 ml). On lave avec de l'éther, on acidifie et on extrait le produit à l'éther. La phase étherée acide est lavée avec de l'eau jusqu'a' pH neutre. Le dérivé n'est pas isolé. Il est méthylé par une solution éthérée de diazométhane, donnant ainsi le composé 12. (900 mg : 56%) .qui est alors purifié sur une colonne de gel de silice (éther/hexane, 1/1,v/v). [&alpha;]D20= + 35,2 (1,3,chloroforme). Ses spectres IR et RMN et son analyse élémentaire confirment sa structure. De la même manière, le dérivé Il et donc 12 peuvent être obtenus à partir de 9a à 9b EXEMPLE 6 Préparation du (prop-l'-ényl 2,3-di-0-benzyl-&alpha; -D glucopyranoside) uronate de méthyle (composé 13). # A partir du composé 12 - Le dérivé 12 est traité par le complexe au rhodium comme décrit pour 9a Le composé 13 est obtenu avec un rendement de 90%. Il est caractérisé par ses spectres IR et RMN. De plus, traité par de 11 anhydride acétique (lml pour 180 mg de 9Q), il donne le composé 10a 2 A partir de 10a ou 10b - Méthode a : Le dérivé 10a (350 mg) est dissous dans le méthanol (5ml). Du méthanolate de sodium (0,2ml, 2M) est ajouté. Après 1 heure å tempéra- ture ambiante, la réaction est arrêtée par addition de résine dowex-50-H+. Après filtration, le produit ; est obtenu, contaminé par un peu de produit résultant de l',Gk ss -élimination.La réaction se fait de la même façon à partir de I ob Méthode b : Le dérivé 13 peut être obtenu à partir de 10a ou lOb de la façon décrite pour 12 à partir de 9a ou 9b . EXEMPLE 6 A (voir figure 3) Application du composé 13 à la synthèse du disaccharide 15 A une solution de monosaccharide 13 (0,215 g ; 0,5 mmole) dans le dichlorométhane (3ml), on ajoute le monosaccharide 14 (0,49 g ; 1 mmole) dans du dichlorométhane (3ml) puis des tamis 4 A en poudre. On refroidit le mélange à OOC, puis on ajoute e la sym-collidine (0,16 ml), et du triflate d'argent (0,3g). Après 1 heure, le mélange est dilué avec du dichlorométhane (50 ml). Les solides sont essorés, puis la solution est lavée avec une solution à 5% de bicarbonate de sodium, avec de l'eau puis du sulfate acide de potassium à 10% et à nouveau avec de l'eau. On obtient ainsi, après évaporation 5?1 mg de résidu.Après purification sur silice dans un mélange toluéne/acétone 30/1 (v/v), on récupère 211 mg de disaccharide 15 pur. EXEMPLE 7 - (voir figure 4) - Préparation du (bromo 293-di-O-benzyl-4-O- acétyl-E -D-glucopyranoside) uronate de méthyle (composé 25) Synthèse du composé 9 A une solution de 16 (32 g ; 85,5 mmoles) dans la pyridine (250 ml), on ajoute du chlorure de trityle (28,6 g ; 1,2 eq) puis on chauffe à 800C. Une nouvelle addition de chlorure de trityle (4D6 g ; 0,2 eq) est faite après 3 heures de réaction Lorsque la formation de 17 est complète (c.c.m. silice ; méthanol/chloroforme, 1/20, v/v) on refroidit la solution jusqu'à OOC, puis on ajoute du chlorure de benzoyle (15 ml ; 1,5 eq). Après une nuit, 18 est formé quantitativement. Du méthanol((150 ml) est alors ajouté goutte à goutte au mélange réactionnel qui est ensuite concentré à sec. Le résidu obtenu est repris dans du méthanol (500 ml) contenant de l'acide paratoluène-sulfonlque (95 g). Après 2 heures de réaction, le mélange réactionnel est transvasé dans une ampoule à décanter contenant de l'eau glacée (2 1). Le produit 19 est extrait au chloroforme puis engagé tel que dans l'étape suivante. Une partie. de ceproduit a été purifiée. L'analyse du spectre IR confirme la structure. C'est une gomme incolore. [&alpha;]@20 - 610 (chloroforme). Synthèse du composé 23 Le sirop obtenu à l'étape précédente (95 g) est dissous dans l'acétone ( 1 1), puis à la solution, refroidie à OOC, on ajoute goutte à goutte, une solution d'oxyde de chrome (52 g) dans l'acide sulfurique 3,5 M (220 ml). Après 2 heures de réaction, le mélange réactionnel est versé dans de l'eau glacée (1 l). Le produit 20 est extrait du chloroforme (5 x 200 ml). La phase chloroformique est lavée jusqu'à pH neutre, séchée et concentrée à sec. Au résidu obtenu ci-dessus, dissous dans le méthanol (650 ml), on.ajoute goutte à goutte de la soude en solution dans l'eau (20 g dans 50 ml), puis on chauffe le mélange à 50 C. Après une nuit,la solution obtenue est concentrée partiellement, puis versée dans l'eau (1,5 l). La phase aqueuse estensuite lavée avec de l'éther puis, après acidification par l'acide chlorhydrique, le produit 21 est extrait à l'éther. La phase éthérée est séchée sur sulfate de sodium, puis concentrée à sec, livrant une masse jaune (50 g) qui contient 20. Ce réside (50 g) est dissous dans un mélange d'acide acétique et d'acide trifluoroacétique (15/1, v/v, 615 ml). A cette solution, agitée à 1000C, on ajoute de l'eau (160 ml). Après une nuit on évapore à sec et élimine les traces d'acide acétique, évapore ration de toluène. Le résidu formé en partie de 21 non hydrolysé et de 22 est dissous dans l'éther (400ml). A cette solution, on ajoute à OOC, une solution éthérée de diazométhane jusqu'à complète méthylation (c.c.m. silice étherhexane, 2/1 v/v). L'excès de diazométhane est alorsdétruit par l'acide acétique puis le mélange réactionnel est concentré à sec. Le résidu est purifié sur une colonne de gel de silice (200-g) éluée d'abord par du-chloroforme pur, puis par un mélange chloroforme/ether, 3/1,v/v. On obtient ainsi 23 (896 g 3 22;2 mmoles, 26% par rapport à 16). Le dérivé 23 est cristallin p.f. 122-123 C. L'analyse élémentaire et le spectre de RMN confirment sa structure. Synthèse du composé 24 A une solution de 23 (3,9 g ; 10 mmoles) dans la pyridine (50 ml)g on ajoute de l'anhydride acétique (4 ml, 42 mmoles). Après 2 heures, le mélange réactionnel est évaporé à sec. On obtient ainsi 24 (4,62 g ; 98%). Synthèse du composé 25 A une solution de 24 (1,4 g) dans le dichlorométhane 30 ml et acétate d'éthyle (3ml), on ajoute du tétrabromure de titane (1,5 g). La solution est agitée toute la nuit à température ambiante. Après dilution par du dichlorométhane, le mélange réactionnele st versé dans l'eau glacée. La phase organique dst lavée avec du bicarbonate à 5% dans l'eau, séchée et concentrée. Le résidu est chromatographié sur silice (50 g, ether/hexane, 1/1,v/v). On obtient.ainsi le composé 25 (920 mg,62%) , c'est un sirop incolore [&alpha;]@20 = + 97ss5 (c = 1, chloroforme). L'analyse éléRentaire et le spectre de RMN confirment la structure. EXEMPLE 7a - (voir figure 5) Application du composé 25 à la synthèse du disaccharide 27 On effectue cette synthèse à partir des dérivés 25 et 26. Une solution du dérivé 26 (432 mg, 3mmoles) dans le dichlorométhane (10 ml) est agitée à 0 C en présence de tamis moléculaire 4 A (0,5 g), de driérite (1 g) et de carbonate d'argent fraîchement préparé (o,42 g.). Après refroidissement à OOC, on ajoute, goutte à goutte, une solution du composé 25 (490 mg, 1 mmole) dans le dichlorométhane (6ml). La réaction dure deux heures, le mélange réactionnel est ensuite filtré. Après évaporation à sec et chromatographie sur gel de silice du résidu, (solvant : acétate d'éthyle/chl chloroforme, 1,6 v/v), on obtient le dérivé 27. La structure du dérivé 27 est confirmée par son analyse élémentaire et son spectre de RMN. Pouvoir rotatoire [&alpha;]D20 = 39 ; chloroforme ; PF - 156-159 C. D EXEMPLE 8 - (voir figure 6) Préparation du (trichloro acétimidyl 2,3 di-0-benzyl-4-0-acétyl) uronate de méthyle (composé 29) Synthèse du composé lOa Le dérivé 10a (11,4 g) est dissous dans un mélange acétone/eau (5/1 2 v/v ; 350 ml). On ajoute à cette solution de l'oxyde mercurique (13,5 g), puis, goutte à goutte, une solution de chlorure mercurique dans le mélange acétone/eau (17 g dans 116 ml). Après 5 minutes, le mélange est filtré puis les solvants sont évaporés. Le résidu, repris par du chloroforme (300 ml) est lavé avec une solution saturée d'iodure de potassium puis avec de l'eau. Après séchage et évaporation à sec, le résidu est purifié sur colonne de gel de silice (200 g hexane/ acétate d'éthyle, 1/l,v/v).On obtient ainsi 28 (6 g ; 57,5%). C'est un solide, p.f. 104-106 C. [&alpha;]@20:-4,5 D (1,2 chloroforme). Le spectre de RMN et l'analyse élémentaire confirment la structure. Synthèse du composé 22 A une solution du composé lOa (3,46 g ; 8 mmoles), et de trichloroacétonitrile (8 ml ; 10 eq) dans le dichlrométhane (80ml), on ajoute de l'hydrure de sodium (135 mg). L'évolution de la réaction est suivie en c.c.m. (chloroforme/acétate d'éthyle ; 1/1 ; v/v). Après filtration, la solution est concentrée à secS puis le résidu est séché par évaporation de benzène avant d'être engagé dans la réaction avec 29. EXEMPLE 8A - (voir également figure 6) - Application du composé 29 à la synthèse du disaccharide 31 Synthèse du disaccharide 31 Le produit 29 obtenu ci-dessus (d partir de 8 mmoles de 28) est dissous dans du dichlorométhane (40ml) contenant le dérivé 30 (1,1 g ss 7,6 mmoles). A cette solution, on ajoute goutte à goutte, une solution de trifluoroéthérate de bore dans le dichlorométhane (0,6 eq). L'évolution de la réaction est controlée en c.e.m. (chloroforme/acétate d'éthyle, 6/1 v/v). Du bicarbonate de sodium solide est ajouté jusqu'à neutralisation, puis la phase dichlorométhane est lavée avec de l'eau jusqu'à pH neutre.Après séchage et évaporation des solvants, le sirop obtenu est chromatographié sur gel de silice (200 g, chloroforme/ acétate d'éthyle, 8/1, v/v). On obtient ainsi le composé 31 (1,56 g). L'autre anomère (&alpha;-D-glucuronosyl) est également obtenu en quantité moindre (250 mg). 29 est en tout point analogue au produit 31 décrit dans la demande de brevet FR 82 00621 tau nom de la Demanderesse. EXEMPLE 9 - (voir figure 7) Préparation du (trichloroacétimldyl - 2,3-di-0- benzyl-4-0-allyl-&alpha;-D-glucopyranoside) uronate de méthyle (composé 38) SYNTHESE DU DERIvE37 - Le composé 32 est allylé de façon classique classique (hydrure de sodium, bromure d'allyl dans le diméthylformamide) pour donner le composé 33. Celui-c est alors soumis à,une suite de reactions identiques à celles décrites ci-dessus pour le composé 18. (détritylation, oxydation, hydrolyse, méthylation). ee stade, le produit est purifié sur une colonne de gel de silice (200 g ; chloroforme/acétate d'éthyle ; 10/1 ; v/v). On obtient le composé 37 sous forme de sirop [&alpha;]D20 + 23,5 (1, chloroforme). Le spectre IR et l'analyse élémentaire confirment la structure. SYNTHESE DE 38 Le composé 37, traité (comme il est décrit pour 17), par le trichloroacétonitrile en présence d'hydrure de sodium conduit à l'imidate 38 qui est engagé dans la synthèse de 40. FXEPLE 9A - (voir également figure 7) Application du composé 38 à la préparation du disaccharide 40 SYNTHESE DU DISACCHARIDE 40 A une solution de 38 (615 mg ; 1,1 mmole) et de 39 (300 mg ; 1 mmole) dans le dichlorométhane (5-ml), cn ajoute, à 200C, -une solution de trifluoroéthérate de bore (1 mmole) dans le dichlorométhane (10 mi). La réaction est suivie en t.l.c. (acétone/toluéne ; 1/10 : v/v) Le mélange réactionnel est dilué avec du dichlorométhane puis neutralisé avec du bicarbonate de sodium (500 mg). La solution obtenue est lav ée avec une solution saturée de chlorure de sodium, séchée, puis concentrée à sec. Le résidu est chromatographié sur colonne de gel de silice (50 g , toluène/éther isopropylique ; 4/1 9 v/v). On obtient ainsi 40 (147 mg ; [&alpha;]D20 + 110 chloroforme-) et l'isomère (162 mg ; [&alpha;]D20 + 48 - 1, chloroforme-). L'analyse élémentaire et lQétude des spectres de RMN confirment les structures des produits. Les formules des exemples 10 à 12A sont représenté@s sur la figure 8. EXEMPLE 10 Préparation du prop-1'-ényl 2,3-di-0-benzyl 4-0-chloroacétyl- -D-glucopyranoside) uronate de méthyle (composé 41) Cette synthèse est effectuée à partir d-u composé 13 de l'exemple 6 ou (prop-I'-éthyl-2,3-di-0- benzyl- D-glucopyranoside) uronate de méthyle en procédant comme suit On dissout 2,8 g du compose 13 dans 30 ml de pyridine (6,56 mmoles) . Après refroidissement à 0 C, on ajoute goutte à goutte 10 mi d'une solution de 2 ml de chlorure de chloroacétyle dans 20 ml ae aichlorométhane. Après 30 minutes, on évapore à sec, on reprend le résidu par 200 ml de chloroforme, on lave avec une solution à 10 % de KH SO4, puis avec de l'eau,on sèche et on concentre. Le sirop obtenu est chromatographié sur gel de silice (200 g; éluant AcOEt /hexane; 1/3; v/v). On obtient ainsi 2,7 g de composé 41 pur sous forme de sirop (rendement 80 %): [&alpha;]D20= + 2 (c = 1,5; chloroforme). L'analyse élémentaire et le spectre de RMN confirment la structure attendue. EXEMPLE Il Préparation du (2,3-di-0-benzyl-4-0-chloroacétyl D-gluàopyranose) uronate de méthyle (composé 42) On dissout 2, 7 g (5,3 mmoles) du dérivé 4 dans 80 ml d'un mélange acétone/eau (5/1; v/v). De l'oxyde mercurique (3,1 g) est ajouté suivi d'une solution de chlorure mercurique (3,9 g) dans l'acétone (27 ml). Après 5 minutes, les sels sont éliminés par filtration. Après concentration à sec1 le résidu est repris par du chloroforme. La phase chloroformique est lavée avec une solution de KI à lO % puis avec de l'eau. Après évaporation, le produit est cristallisé dans un mélange acétate d'éthyle/hexane.On obtient 2 g d'un solide de pf 105-107 C; --20 = ~ 4,7 (eq, 1; chloroforme). L'analyse élémentaire et l'étude en Z4N confirment la structure (rendement 80 %). EXEMPLE 12 Préparation du (1-bromo-2,3-di-0-benzyl-4-0 chloroacétyl-&alpha;-D-glucopyranosyl) uronate de méthyle (composé 43) On dissout 2 g (4,30 mmoles) du composé 42 dans 50 ml de dichlorométhane. On ajoute 4,8 ml (34,4 mmoles) de sym-collidine à 00C suivie de bromure de bromométhylène dimethyl ammonium (17 mmoles) prépare selon HEPBURN D.R. et HUDSON H.R.J. Chem. Soc. Perkin I (1976) 754-757. Après 4 heures de réaction, le mélange est dilué par 100 ml de dichlorométhane, puis versé dans de l'eau glacée. Après lavage avec de l'eau glacée, le solvant est évaporé.Après chromatographie sur gel de silice (20 g; éluant hexane/acétate d'éthyle, 2/1; v/v), on obtient 2,06 g de composé 43 sous forme d'un sirop (rendement 90 %).[&alpha;]D20 = + 82,5 (c = 1,5; chloroforme).L'analyse élémentaire et l'étude en RMN confirment la structure. EXEMPLE 12A Application du composé 43 à la synthèse du disaccha ride 45 ou (3,0-acétyl-1,6-anhydro-2-azido-4-0 [(2,3-di-0-benzyl-4-0-chloroacétyl-ss-D-glucopyr syl) uronate de méthyl] ss -D-glucopyranose A une solution de 870 mg (3,8 mmoles) de com- posé 44 dans le dichiorométhane, on ajoute 1 g de drie- rite (0,5 g de tamis moléculaires 4 A, en poudre et 0,525 g de carbonate d'argent fraîchement préparé. Après 2 heures d'agitation,on ajoute goutte à goutte, à 0 C, 670 mg (1,3 mmoles) du composé 45. Après 6 jours, les so- solides sont éliminés par filtration.Le sirop obtenu après concentration est chromatographie sur gel de silice (50 g; éluant : chloroforme/acétate d'éthyle; 4/1, v/v). On obtient le disaccharide l sous forme de mousse (421 mg; 50 %). [&alpha;]D20 = - 170 (c = 1; chloroforme). L'analyse élémentaire confirme la structure. L'étude en RMN confirme la configuration ss de la liaison interglycosidique. EXEMPLE 13 - (voir figure 9) Préparation du(3-0-benzyl-&alpha;-L-glucopyranoside) iduronate de méthyle (composé 56) de formule On effectue cette synthèse à partir du composé 46 selon les étapes suivantes 1) introduction d'un groupe benzoyle en position 5, 2) méthylation de la fonction carboxyle en po sition 6 3) isomérisation du groupe OH en position 5, 4) - formation du cycle pyranique. 1) - réaction de benzoylation 63 g de 3-0-benzyl-1,2-0-isopropylidène&alpha; -D-glucofuranoside (composé 46, sont dissous dans 500 ml de pyridine anhydre. On ajoute 85 g de chlorure de trityle et on chauffe à 800C pendant une heure. On obtient ainsi le composé 47 Pouvoir rotatoire : [&alpha;]D20 = - 34,7 , chloroforme. La structure de ce composé a été confirme par ses spectres IR et RMN, son analyse élémentaire est correcte. Le mélange est ensuite refroidi à 0 C et on ajoute 45 ml de chlorure de benzoyle. Après une nuit, on détruit l'excès des réactifs par addition de 300 ml de méthanol. Le mélange obtenu, évaporé à sec, est repris par du chloroforme. La phase chloroformique est lavée à l'eau, séchée sur sulfate de sodium et.concentrée. On obtient ainsi le composé 48. Le sirop obtenu est dissous dans 400 ml de chloroforme. Après addition de 100 ml d'une solution d'acide paratoluène-sulfonique 5 M dans le méthanol, la solution est laissée 110C pendant une nuit. On obtient, après lavage à l'eau de la phase organique, 215 g d'un mélange. Le composé est obtenu par chromatographie de ce mélange sur gel de silice dans le solvant éther-hexane 2/1 (v/v). On obtient ainsi 36 g du composé 499 Pouvoir rotatoire : [&alpha;]D20 = 65,3 , chloroforme. La structure du composé 49 a été confirmée par ses spectres IR et RMN. 20) - méthylation de la fonction carboxyle en posit-lon 6 - Le composé 49 (1,88 g) est dissous dans l'acétone (20 ml). On ajoute, goutte à goutte à -500C 3,5 ml d'une solution de CrO3 (13 g) dans H2SO4, 3,5 M (29 ml). On laisse la température remonter et on laisse une heure dans ces conditions. Le mélange réactionnel est alors versé dans la glace et le produit est extrait au chloroforme. Après lavage à l'eau et séchage, on évapore à sec. On obtient le composé -50. Le mélange obtenu est dissous dans du méthanol (20 ml), on ajoute ensuite 10 ml de soude 1 N et on laisse une nuit à température ambiante. Lemélange reactiomel est alors passé au travers d'une colonne (25 ml) d résine Dowex 50 sous forme H4 au préalable rincée avec du méthanol. Le produit est obtenu par concentration de l'éluat. On obtient ainsi le composé 51 Ce composé est dissous dans l'éther et méthyle de façon classique par le diazométhane. On obtient, après évaporation, le composé 52 (1,08 g ; 70,4). Pouvoir rotatoire [&alpha;]20 = - 27 , chloroforme. D L'analyse élémentaire trouvée du composé. 52 est correcte. Sa structure est de plus confirmée par ses spectres IR et RMN. 30) isomérisation du groupe -OH en position 5 A une solution d'anhydride triflique (0,8 ml) dans le dichlorométhane (16ml), refroidie à -20 C, on ajoute goutte à goutte une solution de pyridine (0,8ml) dans le dichlorométhane (8ml). On ajoute ensuite, à -10 C, goutte à goutte, 800 mg de composé 52 dissous dans du dichlorométhane (8ml). Après une heure à -500C, le mélange réactionnel est versé dans un mélange d'eau et de glace (8ml) contenant 160 mg de bicarbonate de sodium. On agite jusqu'à séparation des deux phases organique et aqueuse. La phase organique est lavée par HCl 3%, H20, NaCl saturé, séchée et concentrée. On obtient ainsi le composé m Le sirop est repris par du DMF (10ml).On ajoute du trifluoroacétate de sodium (1,6g) et chauffe à 800C pendant 3 heures. On obtient ainsi le composé 54 Après évaporation, reprise par du dichlorométhane, lavage à l'eau et séchage, le résidu est repris par du méthanol puis le solvant est évaporé après une heure. Après chromatographie sur colonne dans le solvant éther-hexane 2/1, on obtient le composé 55 '450 mg : 56,2%). pouvoir rotatoire : 20 =-33 chloroforme. La structure du composé D55est confirmée par ses spéctres IR et RMN. L'analyse élémentaire trouvée est correcte. 4 ) formation du cycle pyranique Cette synthese est effectuée à partir du composé 55 Le composé 55 (200 mg) est dissous dans un mélange acide trifluoroacétiqùe/eau 9/1.). Après 15 minutes, les solvants sont evaporés. Le résidu est cristallisé dans de l'acétate d'éthyle/hexane. On obtient .ainsi 110 mg de composé 56. Les caractéristiques de ce dérivé sont les suivantes - spectre IR : dans CHCl3, &gamma;en cm-1 : 3450(OH), 3080, 3060, 3030 (CH2 ; benzyle) et 1740 (COOCH3) + - spectre RMN :9 en ppm par rapport au TMS : 3,75 (s,3H COOMe 4,98 (1H+), 7,30 (s, 5H+, C6H5) - pouvoir rotatoire :: [&alpha;]@@ = + 13 ,méthanol, - analyse élémentaire pourD calculé trouvé C14 H18 07 C.......................... 56,37 56,17 H.......................... 6,08 5,85 - P.F...................... 125-126 C EXEMPLE 14 - (voir figure 10) Préparation des composés 57 et 58 ou 1,2,4-tri-0 acétyl-3-0-benzyl-&alpha;ss-L-méthyl idopyranuronate une solution du composé -56 (3 g) préparé selon la demande debrevet FR No 82 00621 au nom de la Demanderesse dans un mélange de pyridine anhydre (20 ml) et d'anhydride acétique (10 ml) est agitée à 0 C, à l'abri de l'humidité, pendant 5 h. Le mélange réactionnel est évaporé à sec, évaporé avec du toluène (4x20ml), et séché sous vide. Le résidu est chromatographié sur une colonne de gel de silice (150g). L'élution par le mélange toluène : acétate d'éthyle t4 : 1 v/v) donne, par ordre d'élution - une fraction de tête composée de dérivés furanniques, - le composé 58. (anomère&alpha;), sirop, (170mg, 4t), [&alpha;]D = - 43 ; (c : 1, chloroforme), R.M.N. (CDCl3) # : 6,23 (s, 1H, H-1). - le composé 57 (anomère p), cristallisant dans un mé lange éther-hexane, (2,688 g, 63%),P.F. : 112-113 C, [&alpha;] D =+9 (c : 1, chloroforme) R.M.N. (CDCl3) : # :6,08 (d, 1H, H-1, J112 : 1,5 Hz). Les anomères &alpha;etss57et58 ne sont pas séparés lorsqu'on procède à la succession des synthèses décrites. Leur mélange est utilisé directement sous forme de si rop pour les réactions ultérieures. EXEMPLE 15 - (voir également figure 10) Préparation du bromure de 2,4-di-0-acétyl-3-0- benzyl-ss-L-méthyl idopyranuronyle (composé 59) Un mélange d'acétates 57 et 58 (212 mg, 0,5mM) est dissous dans du dichlorométhane anhydre (5ml) et de l'acétate d'éthyle anhydre (0,5ml). Du tétrabromute de titane (250 mg, 0,7mM) est ajouté en une seule fois, et le mélange réactionnel est agité 24 h à la température ambiante à l'abri de l'humidité. Après refroidissement à 0 C et dilution avec du dichlorométhane, la phase organique est lavée avec de l'eau glacée (3 fois), séchée (sulfate de sodium), filtrée et évaporée pour donner 59 sous forme d'un sirop légèrement coloré (217 mg, 96), R.M.N.(CDC13) :# : 6,41 (s, 1H,H-1).Ce composé, très instable est immédiatement engagé dans les réactions suivantes. Les formules des composés des exemples 16 à 19A sont représentées sur les figures 10 et 11. EXEMPLE 16 Préparation du 4-0-acétyl-3-0-benzyl-1,2-0 méthoxyéthylidène- -L-méthyl idopyranuronate (composé 60) Une solution du bromure 59 (fraîchement préparé à partir de o,425 g, lmM, de mélange d'acétates 57 et 58) dans du dichlorométhane anhydre (10ml) est agitée à la température ambiante sous atmosphère d'argon sec De la sym-collidine (0,66ml, 5 mM) et du méthanol anhydre (0,40ml, lOmM) sont successivement ajoutés, et le mélange réactionnel est agité-20 kdans ces conditions. Après dilution avec du dichlorométhane (50ml), la phase organique est lavée avec une solution saturée aqueuse d'hydrogénocar bonate de sodium, avecde l'eau,séchée (sulfate de 50 dium), filtrée et évaporée. Le résidu est chromatogra phié sur une colonne de gel de silice (20g). L'élution par le mélange hexane : acétate d'éthyle (3:2 v/v, contenant 0,5% de triéthylamine) donne 60 sous forme d'un sirop pur (302mg,76% à partir de 57 et58), @@@D @@ @@ @ @@ @@@@@@@@@@@@ @ @@@@@@ @@@@@3@ @@@@ 5,52 (d,1H, H-1, J1,2 : 3Hz). EXEMPLE 17 Préparation du 4-0-actyl-3-0-benzyl-1,2-0-tert- butoxyéthylidène-&alpha;-L-méthyl idopyranuronate (composé 61) Une solution de bromure 5 (fraichement préparé à partir de 2,122 g, 5mM, de mélange d'acétates 57 et 58 dans du dichlorométhane anhydre (2oml) est agitée à la température ambiante sous atmosphère d'argon sec. De la sym-collidine (2,65 ml,20mM) et du tert-butanol anhydre (3ml,30ml-1) sont successivement ajoutés, et le mélange réactionnel est agité 15 h dans ces conditions.Après traitement identique à celui décrit pour le composé 60, le résidu est chromatographié sur une colonne de gel de silice (120g).L'élution par le mélange hexane:acétate d'éthyle (2:1,v/v, contenant 0,5% de triéthylamine) donne 61 sous forme d'un sirop pur (1,542g,70S à partir de57 et58 , [&alpha;]D =-23 (c : 1, chloroforme), R.M.N.(CDCl3) :6: 5,48 (d, 1H,H-1,J1,2 : 2,5 Hz). EXEMPLE 18 Préparation du 3-0-benzyl-1,2-tert-butoxyéthyli- dène-&alpha;-L-méthyl idopyranuronate - (composé 62) Une solution de l'orthoester 6-1 (484mg., 1,1mM) dans le méthanol anhydre (15ml) est refroidie à ~20 C sous agitation et atmosphère d'argon sec. Du carbonate de potassium anhydre (60 mg) est ajouté, le mélange réac tionnel est agité 5h dans ces conditions. Les solides sont essorés, le filtrat est évaporé et le résidu est repris dans du chloroforme (50ml). La phase organique est lavée avec de l'eau glacée (3 fois) séchée (sulfate de sodium), filtrée et évaporée. Le résidu est chromatographié rapi dement sur une colonne de gel de silice (25g).L'élution par le mélange hexane acétate d'éthyle (2:l,v/v,contenant 0,5X de triéthylamine), donne, par ordre d'élution - le composé isaturé 64 (31mg, 7%) sirop,[&alpha;]D=+103 (c : 1, chloroforme),R.M.N. (CDCl3) :#: 6,27 (d.ded., 1H,H-4, J3,4 :5Hz, J2,4 : 1Hz), 5,67 (d, 1H,H-1, J1,2 : 4 Hz). - une fraction principale (271mg,62%),qui est cristallisée dans un mélange éther-hexane pour donner (L (123mg, 28X),P.F. : 68-69 C ; [&alpha;]D = 190 (c : l,chloroforme), R.M.N. (CDCl3) :#: 5,41 (d, 1H, H-1, J1,2 : 2hz), 2,85 (d, 1H, CH-4, J : 12Hz, échangé avec D20). Au cours de la chromatographie sur sili-ce, et lors des essais de cristallisation de 62, un composé nouveau de Rf légèrement supérieur à celui de 13 apparait. Une chromatographie sur gel de silice des eaux-mères de cris tallisation de 62 permet d'isoler quelques fractions pures de ce nouveau composé 65 (41 mg, 11%), sirop, [&alpha;]D=+21 (c : 1, chloroforme), R.M.N.(CDCl3) :#: 5,83 (d, 1H, H-1, J1,2 : 4,5Hz). Dans le cadre de la succession des synthèses envisagées selon l'invention,afin d'eviter la formation de 65 le sirop brut de 62.n'est pas chromatographié, mais utilisé immé diatement pour la réaction suivante. EXEMPLE 19 3-0-benzyl-4-0-chloroacétyl-1,2-0-tert-buto xyéthylidène-&alpha;-L-méthyl idopyranuronate. (composé 63) Une solution de l'orthoester 62 (220mg),0,5mM) dans le méthanol anhydre (10ml) est refroidie à -2o0C sous agitation et atmosphère d'-argon sec. Du carbonate de potassium anhydre (40mg) est ajouté et le mélange réactionnel est agite pen dant 5 h dans ces conditions. Les solides sont essorés, le filtrat est évaporé et le résidu est repris dans du chlo roforme (50ml). La phase organique est lavée rapidement avec de l'eau glacée (3 fois), séchée (sulfate de sodium), filtrée et évaporée. Le résidu est immédiatement dissous dans de la pyridine anhydre (4ml) et du dichlorométhane anhydre (2ml).Après refroidissement à -200C sous atomes phère d'argon sec, une solution de chlorure de chloroacétyle (0,1ml, 1,25mM, fraichement distillé) dans le di chlorométhane anhydre (lml) est ajoutée goutte à goutte. Le mélange réactionnel. est agité dans ces conditions pendant 30 mn, puis versé dans un mélange eau-glace (lOOml). Après agitation pendant 15 mn, le mélange est extrait avec du chloroforme (3x20ml). Les phases organiques sont lavées avec de l'eau glacée, avec une solution aqueuse à 2% d'hydrogénocarbonate de sodium, avec de l'eau, séchées (sulfate de sodium),filtréeset évaporées. Le résidu est chromatographié rapidement sur une colonne de gel de silice (1'2g). L'élution par le mélange hexane:acétate d'éthyle (5:2, v/v, contenant 0,2% de triéthylamine) donne, par ordre d'élution - le composé insaturé 64 (15mg,8%), l'orthoester 63 sirop (145mg,61X à partir de 12), [&alpha;]D= +19 (c : 1,chloroforme),R.M.N. (CDCl3) :#: 5,45 (d, 1H, H-1, J1,2 : 2,5Hz), 5,24 (d.de d., 1H, H-4, J3,4: 2,5Hz, J4,5 : 1,5Hz), 4,00 (s, 2H, Cl-cH2-COO-). EXEMPLE 19A - (voir figure 12) Application du composé 63. à la synthèse du disaccharide 67 Composé : Méthyl 6-0-benzoyl-3-0-benzyl-2-benzyloxycar- bonylamino-2-désoxy-4-0-(2,4-di-0-acétyl-3-0 benzyl-&alpha;-L-méthyl idopyranuronyl)-&alpha;-D- glucopyranoside. Une solution de l'orthoester 63 (80mg,0,2mM) et de l'alcool 66 (52mg,0,1mM) dans du chlorobenzène anhydre (8ml) est chauffée à 140 C sous agitation et léger courant dear- gon sec. Après distillation lente de 6ml de solvant, une solution de perchlorate de 2,6 diméthylpyr dir.ium (0,002mM fraïchement préparé selon N.K. KOCHETKOV,A.F. BOCHKOV,T.A. SOKOLOVSKAIA et V.J. SNTATKOVA,Carbonhdr Res., 16 (1971) 17-27,-dans le chlorobenzène (2m1) est ajoute goutte à goutte en 15 mn. avec distillation simultanée de solvant (2 ml). Le mélange réactionnel est alors agité pendant 1 h, dans ces conditions, avec addition de solvant frais (lOml) et distillation simultanée de telle sorte que le volume réactionnel reste constant et égal à 2 ml. Après refroidissement et dilution avec du chloroforme, la phase organique est lavée avec une solution saturée d'hydrogénocarbonate de sodium, avec de l'eau, séchée (sulfate de so- dium), filtrée et évaporée. Le résidu est chromatographie' sur une colonne de gel de silice (15g).L'élution par le mélange hexane : acétate d'éthyle (4:3,v/v) donne, par ordre d'élution - le produit de départ 66 (20mg,38%), - une fraction homogène en chromatographie sur couche mince (54mg). Le spectre de R.M.N. de cette fraction montre la présence de plusieurs signaux 0-méthyl (# :3,35-3,50) dus aux méthyl glycosides provenant du réarrangement de l'orthoester 63. Cette fraction est cristallisée dans un mélange éthanol-eau, et recristallisée dans un mélange acétate d'éthyle-hexane pour donner 67 (44 mg, 50%), P.F. : 120-121 C,[&alpha;]D = +17 (c : 1, chloroforme), R.M.N. (CDCl3) : conforme à la structure attendue. EXEMPLE 20 - (voir figure 13 ) Préparation du (méthyl-2,3-di-O-benzyl-&alpha;-L- glucopyranoside) iduronate de méthyle (composé 79) Cette synthèse est effectuee selon les étapes 1 à 7 suivantes. Extase 1 : synthèse du monosaccharide 69. On prépare ce monosaccharide à partir du composé 68 obtenu selon la technique de N L Holder et B. Fraser Reid, Canadian Journal of Chemistry, 51 (1973) page 3357. A une solution du composé 68 (1 , 12,67 =l) dans le dichlorométhane (20 ml), on ajoute du chlorure de tosyle (0,55 g), guis de ladiméthylaminopyridine (16 mg) et en fin, de la triéthylamine (0,7 ml). Après agitation sous courant d'azote à l'abri de l'humidité, pendant environ 14 heures, la réaction est arretée par addition de glace et d'eau. Après dilution du mélange réactionnel avec du dichlorométhane (50 ml), la phase dichlorométhane est lavée avec de l'acide chlorhydrique 2 M, puis une solution saturée de bicarbonate de sodium, et enfin avec de l'eau jusqu'à pH neutre. Après séchage et évaporation, on ob tient un résidu, à savoir le dérivé69 (1,4 g, 97 t) qui est engagé tel quel dans la synthèse du dérivé 70. Etape 2 : svnthèse du dérivé 70. Le monosaccharide69 (31,8 g) et de l'iodure de sodium (39 g) sont dissous dans de l'acétonitrile (250 ml), puis la solution est portée à reflux pendant 3 heures. Après refroidissement du mélange réactionnel, le précipité blanc formé est filtré. Le filtrat est concentré, le rési du est repris par du chloroforme, puis la phase chloroformique est lavée avec de l'eau jusqu'à DH neutre, séchée sur sulfate de sodium et concentrée à sec. On obtient un sirop qui est chromatographié sur une colonne de gel de silice (200 g, éther-hexane, 1/1, v/v). On obtient ainsi le dérivé iodé70 (24,7 g, 71,5 X [&alpha;]20D = 240 (1, chloro forme) Le spectre infrarouge, le spectre de RMN et l'analyse élé- mentaire confirment la structure de 70.. EtaDe 3 : synthèse du dérivé 71 A une solution du dérivé 70 dans de la pyridine anhydre (200 mlJ, on ajoute de l'anhydride acétique (43 ml). Après environ 14 heures sous agitation, la réaction est terminée. Le mélange réactionnel est concentré à sec, puis le résidu est purifié-sur une colonne de gel de si-. lice-, sous pression, dans un solvant acétate d'éthylehexane (1/6, v/v). Les fractions pures sont regroupées. On obtient ainsi le produit 71.(16,4 g, 70 %). Ce produit se présente sous forme d'un sirop. [&alpha;]20D = + 4,58 (1,3, chloroforme). L'analyse élémentaire ainsi que l'analyse du spectre infrarouge confirment la structure. Etape 4 : synthèse de 72 A une solution du dérivé 7.1(4 g) dans de la pyridine (100 ml), refroidie à ooc, on ajoute du fluorure d'argent (AgF, 6,9g). Après deux heures et demie, le melange réactionnel est versé dans un mélange contenant du chloroforme et de l'éther (1/4, v/v, 9 1). La suspension obtenue est passée au travers d'un filtre plissé. Le filtrat est concentré à sec, puis le résidu est repris dans du chloroforme (500 ml). La phase chloroformique est lavée avec du sulfate acide de potassium en solution à 10 X dans l'eau, puis avec de l'eau jusqu'à pH neutre.Apres sechage sur sulfate de sodium et concentration à sec, on obtient un résidu (2,7 g), qui est chromatographié sur une colonne de silice (200 g) (éluant. : acétate d'éthyle-hexane, 1/4, v/v). Les fractions contenant le produit72sont regroupées et après évaporation des solvants, on obtient un produit cristallin (1,62 g, 54 %). PF : 81-82 C, [&alpha;]25D = - 20 (1, chloroforme). L'analyse du- spectre infrarouge, l'analyse élémentaire et l'analyse du spectre de résonnance magnétique nucléaire confirment la structure du composé 72. Etape 5 : synthèse du dérivé 73 Le produit 72(2 g) est dissous dans du méthanol (20 ml) et du chloroforme (20 ml). A cette solution, on ajoute du méthanolate de sodium (2 M, 2 ml). Après 1,5 heure, la réaction de désacétylation est terminée. Le mélange réactionnel est dilué avec du chloroforme. La phase chloroformique est lavée avec de l'eau jusqu'à pH neutre, séchée, puis évaporée à sec. On obtient ainsi un résidu, le composé 72 (1,8 g, 100%). I1 est immédiatement dissous dans du tétrahydrofuranne (50 ml), puis de 1'hydrure de bore (BH3, 1M) dans le tétrahydrofuranne ; (10 ml) est ensuite ajouté. Après une heure de réaction, l'excès d'hy d@ure de bore est détruit par addition d'éthanol.A la fin du dégagement gazeux, le mélange réactionnel est dilué par addition de tétrahydrofuranne (100 ml). De la soude 3 M (12 ml) est ensuite ajoutée, suivie d'eau oxygénée (120 volumes, 8 ml). Après 2 heures de chauffage à 50 C, la réaction est arretée. La solution est versée dans du chloroforme (500 ml), puis la phase organique ainsi obtenue est lavée avec de l'eau, de l'acide chlorhydrique 2 M, puis enfin avec de l'eau jusqu'à pH neutre. On obtient ainsi une phase chloroformique très laiteuse, qui devient limpide au cours du séchage sur sulfate de sodium. Après filtration, le chloroforme est évaporé puis le résidu obtenu est chromatographié sur silice (200 g chloroformeméthanol, 30/1, voir. On obtient ainsi le dérivé de l'idose 73 (1,05 g, 55 9:). Ce produit se présente sous forme d'un sirop. [&alpha;]20D = + 85,5 (1, chloroforme). L'analyse élémentaire ainsi que l'analyse en RMN confirment la structure attendue. EtaDe 6 e synthèse du dérivé 75 Cette synthèse est effectuée à partir du dérivé 73 en une seule étape (les intermédiaires74 et 75 ne sont pas isolés). A une solution du dérivé73 (2,25 g, 5 mM) dans le dichlorométhane (50 ml), on ajoute successivement de la diméthylaminopyridine (60 mg : 0,24 mM) de la triéthylamine (1,7 ml ; 12 mM) et du chlorure de trityle (2,5 g ; 9 mM). Après environ 14 heures, la réaction est terminée.On obtient ainsi en solution le dérivé 74 On ajoute alors au mélange réactionnel de la diméthylaminopyridine (150 mg), de la triéthylamine (1,.7 ml) et du chlorure de benzoyle (1,05 ml). Après 6 jours, le dichlorométhane est éliminé par passage d'un courant d'azote et remplacé par du diméthylformamide (40 ml). Le mélange réactionnel est chauffé à 700C pendant une nuit. On ajoute alors à nouveau du chlorure de benzoyle (1 ml) et de la triéthylamine (1,7 ml), puis on maintient le chauffage à 700C pendant 2 jours.Le diméthylformamide est ensuite évaporé, puis le résidu est repris par du chloroforme, la phase chloroformique est lavée avec de l'eau, avec une solution saturée de bicarbonate de sodium, puis avec une solution d'acide chlorhydrique 2 M et enfin avec de l'eau jusqu'à pH neutre. Après séchage, le chloroforme est-éva- poré, ce qui permet d'obtenir le composé 75. Celui-ci est immédiatement soumis à une réaction pour eliminer le groupe trityle afin d'obtenir le dérivé ~ Le résidu contenant le dérivé 76 est dissous dans 25 mi de chloroforme et on ajoute à cette solution 10 ml d'une so l'ition d'acide paratoluènesulfonique monohydrate dans le méthanol (1 M). Après 4 heures de réaction à température ambiante, la réaction est terminée. Le mélange réactionnel est alors dilué avec du chloroforme, lavé avec de l'eau, séché puis évaporé à sec. Le résidu obtenu est chromato- graphié sur gel de silice (200 g, éther-hexane, 3/1, v/v). Le dérivé 76 est ainsi obtenu à l'état pur (1-,5 g ; 52 %). Ce dérivé se présente sous forme d'un sirop. [&alpha;]20D = - 80 (1, chloroforme). L'analyse du spectre infrarouge et du spectre Rt.iN confirment la structure du produit attendu. Etape 7 : synthèse du composé 79~. Cette synthèse est effectuée directement à partir du dérivé 76 sans isoler les intermédiaires 77 et 78. A solution du composé76 (1,2 g) dans l'acétone (20 ml), on ajoute, goutte à goutte, après refroidissement à OOC, une solution (2,9 ml) d'oxyde de chrome -(Cr03 , 1,17 g) dans l'acide sulfurique 3,5 M (5 ml). Après 30 minutes d'agitation à OOC, la température est ramenée à l'ambiante. La réaction évolue pendant 3 heures.Le mélange réactionnel est ensuite versé dans une ampoule à décanter contenant de l'eau glacée (100 ml). Le produit formé est extrait par du chloroforme (3 x 50 ml). La phase chiorofor- mique est lavée avec de l'eau jusqu'à pH neutre, puis sé c'née sur sulfate de sodium, filtrée et concentrée à sec. Le résidu obtenu (le composé 7) est dissous dans du mé méthanol (130 ml). On ajoute à cette solution de la soude 3 M (47 ml) puis on laisse le mélange sous agitation pendant environ 14 heures. Après acidification par l'acide sulfurique, le composé 78 est extrait à l'éther, puis immédiatement méthylé par du diazométhane selon la méthode classique pour donner le composé 79 Après évaporation de l'éther, le composé 79 est obtenu pur au moyen d'une chromatographie sur gel de silice (50 g : éther-hexane ; 4/1 , v/v). Les fractions pures contenant le dérivé 79 sont rassemblées et les solvante sont éliminés. On obtient ainsi le dérivé 79 de l'acide iduronique (587 mg, 59 os par rapport au drivé 76. Ce produit se présente sous forme d'un sirop. [&alpha;]25D = +980 (2,65, chloroforme). L'analyse en RMN, l'analyse en infrarouge et l'analyse élémentaire confirment la structure attendue. EXEMPLE 20A (voir figure 13) Application du composé 79 à la synthèse du di saccharide 81 Cette synthèse s'effectue à partir du monosaccharide 79 préparé comme ci-dessus et du monosaccharide 80 préparé selon la technique de H. Paulse-n et W, Stenzel, chemische Berichte 111 (1978) 2234-2247. A une solution du composé 79. (200 mg, 0,5 mM) dns le dichlorométhane (10 ml), on ajoute successivement le composé 80 (0,450 g) de la sym-collidine (150 l) et du triflate d'argent (260 mg). Le mélange réactionnel est maintenu à OoC sous courant d'azote et sous-agitation à l'abri de l'humidité et de la lumière pendant 3 heures. Il est ensuite dilué avec du dichlorométhane (100 ml) puis les solides sont éliminés par filtration sur filtres plissés. La solution obtenue est lavée avec une solution saturée de bicarbonate de sodium avec de 1 'eau et avec de l'acide sulfurique 2 M, puis à nouveau avec de l'eau jusqu'à pH neutre. Après séchage sur sulfate de sodium et évapora- tion du dichlorométhane, le résidu obtenu est chromatographié sur gel de silice (50 g , chloroforme/acétate d'éthyle ; 15/1 ; v/v). On obtient ainsi le dérivé 81 pur (327 mg, 82 %). Le produit se présente sous forme d'un sirop. [&alpha;]20D = +57 (1, chloroforme). L'analyse en RMN de meme que l'analyse élémentaire confirment la structure et l'anomérie du disaccharide 81. EXEMPLE 21 - Synthèse du trisaceharide 86 de formule Cette synthèse est réalisée en 3 étapes (voir figure 15) Tout d'abord, on procède à la glycosylation de ltortho- ester d'un dérivé d'acide L-iduronique. On élimine ensuite sélectivement le groupe monochloroacétyle, puis on fait réagir ltun des alcools formés avec un disaccharide. 1) - Glycosylation de l'orthoester 63 par l'alcool lenzyl lique Une solution de l'orthoester 63 (118mg 0,25 mM) obtenu comme décrit ci-dessus et d'alcool benzylique (0,15 ml, 1,5 mM, fraîchement distillé) dans du chlorobenzène anhydre (10 ml) est chauffée à 1400C a l'abri de l'humidité Après distillation lente de 8 ml de solvant, une solution de pere-hlorate de 2,6-diméthylpyridinium (2,5 M) dans le chlorobenzène (2ml) est ajoutée goutte à goutte en 30 mn avec distillation simultanée de solvant (2ml). Le mélange réactionnel est alors agite 30 mn dans ces conditions, avec addition goutte à goutte de solvant frais et distillation simultanée, de telle sorte que 1 volume réactionnel reste constant et égal à environ 2 ml. Après refroidissement et dilution avec du chloroforme (50 ml), la phase organique est lavée avec une solution aqueuse à 5% d'hydrogénocarbonate de sodium, avec del'eau, séchée (sulfate de sodium) filtrée et évaporée. Le résidu est chromatographié sur une colonne de gel de silice (8 g). L'élution par le mélange hexane-acétate d'éthyle (2 : 1, v/v) nermet d'obtenir une fraction contenant le mélange 82 de glycosides &alpha; et ss qui n'ont pas été séparés à ce stade (102 mg, 81%), R.M.N. (90 MHz,CDCl3) # : 7,30 (m, 10H, 2 Ph, 3,98 (s, 2H, Cl-CH2-CO), 3974 (s, 3H, COOMe), 2,08 et 2,03 (2s, 3H au total, OAc forme ss et &alpha; ; ss : &alpha;# 2 : 1). 2) - O-démonochloroacétylation sélective Une solution du mélange 82 précédent (102 mg) dans de la pyridine (5ml) et de méthanol absolu (1ml) est chauffée à 1000C pendant 20 min. en présence de thiouree (25mg). Après refroidissement, le mélange réactionnel est évaporé à sec et le résidu est repris par un mélange eau-chloroforme (1:1, v/v, 50 ml). La phase organique est lavée avec de l'eau, séchée (sulfate de sodium), filtrée et évaporée. Le résidu est chromatographié sur une colonne de gel de silice (10 g). L'élution par le mélange acétate d'éthyle-hexane (4:3, v/v) permet d'isoler (par ordre d'élution) : - le glycoside ss 83 (26mg, 25 %), sirop incolore, [&alpha;]D + 70 (c1, chloroforme) R.M.N. (90MHz # CHCL3) : @ 7,30 (m, 10H, 2 Ph) ; 5,05 (m, 1H, H2 ) 4,90 (d, 1H, H1 , 1,2 J= 2Hz) ; 3,78 (s, 3H,COOMe) ; 3,12 (1H, OH, échangé avec D2O) ; 2,05 (s,3H,OAc). - le glycoside 84, (54 mg, 50% à partir de 63) sirop incolore, [&alpha;]D - 65 (c1,chloroforme) R.M.N. (90 MHz,Cd Cl3) :# : 7,30 (m,1OH, 2 Ph) ; 5,05 (2H, H1 et H2, constantes de couplage très faibles pour J 1,2 # 1Hz) ; 3,78 (s, 3H, COOMe) ; 2,80 (1H, OH, échangé avec D2O) ; 2,06 (2, 3H, OAc). 3) - Glycosylation de l'alcool 84 à l'aide du disaccha ride 85 Une solution de l'alcool 84. (22mg, 50 M), et du bromure 85 (57 mg,70 M) dans du dichlo méthane anhydre (1,5 ml) est agitée à l'abri de la lumière etde l'humidité en présence de tamis moléculaire 4 (poudre, 50 mg). Le mélange réactionnel est refroidi à -200C et de la sym-collidine (110 ,ul) et du triflate d'argent (26 mg, 100 M) sont ajoutés successivement. Le mélange réactionnel est agité 2h dans ces conditions, dilué avec du dichlorométhane (50 ml) les solides sont essorés et le filtrat ost lavé avec une solution aqueuse glacée d'HCl 0,1M, avec de l'eau, avec une solution aqueuse à 5% d'hydrogénocarbonate de sodium, avec de l'eau, séché (sulfate de sodium), filtré et évaporé. Le résidu est chromatographié sur une rolonne de gel de silice (8 g, gel 230-400 mesh). L'élution par le mélange toluène-acétate d'éthyle (5:1, v/v) permet d'isoler le trisaccharide 96 sous forme d'un sirop incolore (50 mg, 86%). Le spectre R.M.N. (270 MHz, CDCl3) est conforme avec la structure attendue. EXEMPLE 22 - (voir figure 16) Synthèse de glycosides utilisables en tant que substrats d'enzymes, de formule Synthèse du composé 87 Le composé 87 (demande de brevet FR No 82 01575 ; 900 mg ; 2 mmoles) est dissous dans du dichloroéthane (20 mi). On ajoute alors du tributyl Stannyl Phénol (88 ; 2,5 pmoles) puis du chlorure stannique (2,5 mmoles). Après 5 heures, le mélange réactionnel est dilué avec du dichlorométhane, lavé avec une solution de bicarbonate de'sodium, puis avec de l'eau. Le résidu obtenu après séchage et évaporation des solvants (1,03 g) est directement hydrogéné. Pour cela, il est dissous dans du méthanol, puis la solution est agitée sous atmosphère d'hydrogène en présence de Pd/C (5% ; 0,5 g) pendant 3 heures.Le catalyseur est alors éliminé par filtration puis la solution est concentrée à sec.- Le résidu est acétylé par l'anhydride acétique en présence de pyridine, livrant ainsi 89 (420 mg) purifié sur une colonne de gel de silice (100 g ; Ether/hexane ; 3/1 ; v/v). Le spectre de RMN et l'analyse élémentaire confirment la structure de 89. Synthèse des composés 93 et 95 A une solution de 89 (400 mg) dissous dans l'acide acétique glacial (2,5 ml) àn ajoute goutte à goutte, sous agitation et à 00C, un mélange (iml) constitué d'anhydride acétique (16 volumes) et d'acide nitrique (5 volumes). Après deux heures à 350C, le mélange réactionnel est versé dans de l'eau glacée puis les produits formés (90 et 91) sont extraits au chloroforme. La phase chloroformique est lavée avec du bicarbonate à 5% dans l'eau, séchée puis concentrée à sec. Les produits 90 et 91 formés dans un rapport d'environ 2/1, sont séparés par chromatographie sur gel de silice (25 g ; éther/hexane, 1/l,v/v). On obtient ainsi 90 pur (23 mg), 91 pur (19 mg) et une fraction contenant à la fois 90 et 91 non séparés. iL et fl sont dissous dans du méthanol à OOC. On ajoute goutte à goutte, de la soude 4N, jusqu'à pH basique. Lorsque l'hydrolyse est complète de la résine Dowex 50 H+ est ajoutée de façon à désioniser la solution. On obtient après lyophilisation, les composés 93 (11 mg) et 95 (10 mg). Leurs spectres de RMN confirment leurs structures. REVENDICATION Dérivés à structure acide uronique, caractérisés en ce qu'ils comportent au moinsun groupe réactif, en l'une quelconque des positions 1,2,3,4 cu 6, c'est-à-dire un groupe activateur capable de s'engager dans une réaction de glycosylation ou un groupe fonctionnalisable constituant ltamorce d'un bras conjugable, les groupes -OH despositions restantes ainsi que le groupe -OH du groupe carboxyle étant protégés par des groupements protecteurs, identiques ou différents les un-s des autres, compatibles entre eux et avec le ou les groupe (s) réactif (s) et inertes vis-à-vis des réactions dans lesquelles, le cas échéant, on souhaite engager le mono saccharide, à l'exclusion des halogénures et des imidates de (2,3,4-tri-0-acétyl(ou tri-0-benzyl)glucopyranoside)-uronate de méthyle, des ll-halogénures, 1-OH ou les précurseurs 1-OAc ou 1-OMe de ces halogénures, glucopyranoside7uronate de méthyle comportant un groupe -OCH3 en position 4, du (méthyl(ou benzyl)-2,3-di-0- benzyl- -D-glucopyranoside)uronate de méthyle ou du (2,3,4-tri-0-^allyl glucopyranose)uronate allyle.