FR 2521566 A1 19830819 FR 8202526 A 19820216 "Nouveaux tétrasaccharides et leur préparation" L'invention a pour objet de nouveaux tétrasaccha rides.formés d'un enchalnement de motifs respectivement à structure[acide D-glucuronique]-[D-glucosamine]-[acide L-iduronique]-[D-glucosamine] de formule I dans laquelle -R1 à Rt3 représentent des groupenents protecteurs, le cas échéant différents, compatibles, .R1 à R3, R8, R10 et R12 représentant plus particu lièrement un groupe benzyle, . R4 et R9' un groupe alcoyle, en particulier renfer mant i à 3 atomes de carbone, de préférence un groupe méthyle, ,R5 à R7 et R13, un groupe acyle, en particulier un groupe acétyle, et ,R11 un groupe benzyloxycarbonyle. Des tétrasaccharides préférés répondent à la formule I ci-dessus dans laquelle R1 à R3, R8, R10 et R12 repré sentent un groupe benzyle, R4 et R9, un groupe méthyle et R à R et R13 un groupe acétyle. 5 7 L'invention vise également un procédé de préparation de ces tétrasaccharides. Ce procédé comprend le couplage d'un disaccharide A à structure acide[D-glucuronique]-[D-glucosamine] avec un disaccharide B à structure[acide L-iduronique]-[Dglucosamine]. Ces disaccharides A et B repondent respectivement aux formules II et III suivantes dans lesquelles les substituants R1 à R13 présentent les significations données ci-dessus et X représente un groupe réactif en particulier un atome d'halogène de préférence du brome. Pour préparer les tétrasaccharides préférés de l'invention, on met en oeuvre des disaccharides A et B de formule II et III dans lesquelles R1 à R3, R8, R et R représentent un groupe benzoyle, R4 et Rg, 10 12 un groupe méthyle et R5 à R7 et R13 un groupe acétyle. On observera que les disaccharides A et B mis en oeuvre sont des dérivés semi-ouverts, dans lesquels les différentes positions intervenant dans la réaction de glycosylation sont convenablement bloquées par des groupes protecteurs, le cas écheant différents, compatibles, ne réagissant pas dans les conditions de la réaction de glycosylation effectuée. Ces disaccharides ne comportent alors chacun qu'un groupement réactif capable d'autoriser la réaction de glycosylation recherchée, ce groupement réactif se trouvant sur le carbone anomère en position 1 du motif glucosamine pour le dérivé A et sur le carbone en position 4 du motif acide L-iduronique pour le derivé B L'obtention d'un dérivé A comportant un tel groupe réactif est avantageusement réalisée par réaction d'un monosaccharide à structure acide D-glucuronique de formule V avec un monosaccharide à structure D-glucosamine de formule VI dans lesquels les substituants déjà évoqués présentent les significations données ci-dessus et R14 représente un groupement protecteur permettant l'introduction aisée de R5 et plus spécialement un groupe benzoyle. On remarquera l'intéret d'utiliser le monosaccharide de formule V dans lequel les groupes -OH en positions 1 et 6 sont bloquées sous forme anhydro, ce qui permet de disposer durant la synthèse du disaccharide A d'un motif constituant potentiellement un motif ayant une structure D-glucosamine mais n'interférant pas avec les réactions mises en jeu dans la synthèse. Selon un autre aspect, ce bloquage par un groupe anhydro permet l'introduction sur les carbones en positions 1 et 6 des groupements préférés -OCOCH3 par ouverture du.pont anhydro et acétylation. On dispose alors d'un disaccharide dans lequel les différents groupes -OH sont convenablement bloqués et le substituant sur le carbone anomere en position 1 peut être traité aux fins d'introduction du groupement réactif devant intervenir dans la réaciton de glycosylation avec le dérivé Pour la préparation de ce dérivé B, on a avantageusement recours au procédé de synthèse décrit dans la demande de brevet FRNo 82 01575 déposée le 1er février 1982 au nom de la Demanderesse. L'invention vise également,en tant qu'inter sddiaireWles produits nouveaux mis en oeuvre au cours du procédé de l'invention. Les composés de l'invention présentent notamment un grand intéret en tant qu'intermédiaires en synthèse osidique, plus spécialement pour la synthèse d'oligosaccharides constitutifs de l'héparine ou de l'hXparanesulfate. Ils permettent ainsi d'obtenir par voie de synthèse des oligosaccharides à activité anti-Xa (Yin Wessler) supérieure à celle de l'héparine et a activité USP pratiquement négligeable. Les tests Yin-Wessler et USP sont rappelés notamment dans la demande de brevet FR 78 31357 du 6 novembre 1978 au nom de la Demanderesse. Les principales étapes et les produits inter médiaires obtenus,qui font donc également partie de l'invention sont illustrés dans les figures i et 2 Les formules chimiques des composés de départ, des composés intermédiaires successivement obtenus et des composés finaux, données dans ces figures portent des références numériques, également utilises pour désigner les mêmes produits dans la description. Les abréviations utilisées dans ces formules ont les significations suivantes : Ac : un groupe acétyle ; Me : méthyle Bn : benzyle ; Bz : benzoyle. EXEMPLE SYNTHESE DU DERIVE 4 Le-produit 2 (1g), en solution dans du dichlorométhane (50 ml), est agité en présence de driérite (6g) et de carbonate d'argent fraîchement prépare (4,5g), pendant 1 heure sous une atmosphère d'argon. On ajoute alors l'halogénure 1 (2,8g) dissous dans du dichloro méthane (10 ml). Après 1 heure 1/2 on ajoute a nouveau 2,8g d'halogénure 1. Après une nuit les solides sont éliminés par filtration et le résidu obtenu après évaporation des solvants est purifié sur colonne de silice dans le solvant acétate d'éthyle/chloroforme (1/30 i v/v). On obtient ainsi le produit 4 (866 mg ; rendement 42 %) . Il est cristallisé dans un mélange hexane/acétat.e d'éthyle. P.f. : 104-106 C ; [&alpha;]D20 =0 (c=1 , chloroforme). L'analyse élémentaire et le spectre RMN sont conformes a la structure recherchée. SYNTHESE du DERIVE 6 Le dérivé 4, (1,5g) est dissous dans un mélange de chloroforme et de méthanol (1/1 ; v/v).On ajoute ensuite 2 ml de méthanolate de sodium (2M dans méthanol). Apres 20 minutes, la solution est neutralisée par addition de résine Dowex 50 conduisant au dérivé 5 qui n'est pas isolé. Après filtration et évaporation, une méthylation classique par le diazométhane dans l'éther permet de réestérifier la fraction d'acide carboxylique éventuellement libéré. Après évaporation le résidu est traité par un mélange de pyridine (20 ml)et d'anhydride acétique (2ml) pendant une nuit. Après évaporation, le résidu est cristallisé dans de l'acétate d'éthyle/hexane donnant le produit 6 (1,125g ; rendement 81,6%). 20 P.F. : 103-105 C ì =+5,2 (c = 1 ; chloroforme). D L'analyse élémentaire et le. spectre RMN sont conformes a la structure recherchée. En variante, on prépare le dérivé 6 en opérant comme décrit ci-dessus mais en mettant en oeuvre le dérivé 3 au lieu du dérivé 2. SYNTHESE du DERIVE 7 Le composé 6 (lg) est dissous dans l'anhydride acétique (10ml) puis refroidi a -200C sous argon. A la solution froide, on ajoute de l'acide sulfurique concentré (100 ul). Après 30 minutes, le mélange réactionnel est dilué par du chloroforme (150 ml) puis versé sur une solution aqueuse de bicarbonate de sodium (26,5 g dans 400 ml). A la in du dégagement gazeux la phase chloroformique est lavée deux fois avec une solution saturée de NaCl puis séchée et concentrée. Apres chromatographie sur silide (50 g) dans un mélange d'acétate d'éthyle et de chloroforme 1/20 v/v, on obtient le composé 7 (995 mg, rendement 86,7*). Ce composé se. présente sous forme d'une mousse blanche. Le spectre et l'analyse élémentaire confirment l'obtention de la structure recherchée. SYNTHESE du DERIVE 8 A du tétrabromure de titane (213 mg) on ajoute une solution du dérivé 7 (0,2g) dans du dichlo rométhane/acétate d'ethyle (9/1 ; v/v .4 ml). Après une nuit sous agitation suivie d'une dilution par du dichlo rométhane, on verse sur un mélange eau glace (50 ml) ,puis on lave avec deux fois 50 ml d'eau glacée. Après séchage et évaporation le sirop obtenu est chromatographié sur silice dans le solvant acétate d'éthyle/chlo roforme 1/20 ; v/v. On obtient ainsi le dérivé 8 avec un rendement de 25 a 50%. Spectre de RMN : (ppm,CDCl3) : 2,04 ; 2,11 3 2 singulets de 3 protons 2-OAc ; 3,7 : 1 singulet de 3 protons COOMe ; 6,33 : 1 doublet de 1 proton H1.; J1,2 = 3,5 Hz. SYNTHESE du DERIVE 10 Une solution de bromure 8 (50 mg,60 pM) et de l'alcool 9 (43 mg, 50 pM) dans du dichlorométhane anhydre (1m1) est agitée a l'abri de la lumière sous atmosphère d'argon sec en présence de tamis moléculaire 4 (poudre, 100 mg) pendant 15 minutes. Après refroidissement à - 100 C, de la sym-collidine (11 1, 80 rM) et du trifluorométhanesulfonate d'argent (triflate d'Ag, 18 Mg, 70 M) sont ajoutés successivement, et l'agitation est maintenue dans ces conditions pendant 3 heures.Le mélange réactionnel est alors dilué avec du dichlorométhane (30 ml), les solides sont essorés, et le filtrat est lavé avec une solution 0,1 M d'acide chlorhydrique glacée, avec de l'eau,avec une solution aqueuse saturée d'hydrogénocarbonate de soidum, avec de l'eau, séché (sulfate de sodium), filtré et évaporé. Le résidu est chromatographié sur une colonne de gel de silice (7 g). L'élution par le mélange hexane-acétate d'éthyle (4 :3, v/v) donne 56 mg de tétrasaccharide 10 (rendement 70%) sous forme d'un verre incolore qu'il n'a pas été possible de cristalliser. Caractéristiques du spectre RMN: (270 MHz' CDCl3) : S : 7,25 (m,35 H, 7 Ph) ; 5,35 (d.ded.,1 H, H3" J2",3" : HZ, J3",4" 9 Hz) ; 5,27 (d., 1H,H1", J1",2" : 3.5H) ; 4.31(d., 1H, H1'" J1'" 2'": 7,5 H ) z 3,68 (s, 3H, COOMe IDO) ; 3,59 (s, 3H,COOMe gluco) ; 3,37 (d.de d., 1H, H2'", J1"', 2'" : 7,5 Hz, J2"' 3"' : 9.5Hz) 3,18 (d.de d., 1H, H", J1", 2" : 3,5 Hz, J2", 3" : 11 Hz) ; 2,06 et 1,97 (2s, 9 et 3 H, 4 OAc). Ce spectre est reporté sur la figure 3. REVENDICATIONS 1. Tétrasaccharides, caractérisés en ce qu'ils sont formés d'un enchainement de motifs a structure [acide D-glucuronique]-[D=glucosamine]-[acide L-iduronique] [D=glucosamine], de formule I dans laquelle : Ri 8 R1 t13 -représentent des groupements protecteurs, le cas échéant, différents, compatibles, R1 à R.3' R8 R10 et R12 représentent plus particulièrement un groupe benzyle, . R4 et R9, un groupe alcoyle, en particulier renfermant 1 à 3 atomes de carbone, de préférence un groupe méthyle. .R5 à R7 et R13' un groupe acyle, en particulier un groupe acétyle, et R11 un groupe benzyloxycarbonyle. 2. Procédé de préparation de tétrasaccharides selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il comporte la réaction du disaccharide A avec le disaccharide B, de formules II et III respectives dans lesquelles les substituants R1 à R13 présentent les significations données ci-dessus et X représente un groupe réactif en particulier un atome d'halogène,de préférence du brome, dans des conditions permettant leur couplage.