FR 2522656 A1 19830909 FR 8203778 A 19820305 La somatostatine est un tétradécapeptide de structure et qui inhibe lessécrétions endogènes d'hormones de croissance (girl) d'insuline et de glucagon. Les abréviations utilisés sonL celles recommandées pour les aminoacides par la comlnission de nomenclature biochimique de 1'IUPAC (Journal of Biological Chemistry, 1972, 247, p. 977). Ce même peptide réduit également de façon notable les taux de sécrétions digestives. La deni-vie biologique de la somatostatine est très courte (4 minutes environ) car elle est très vite hydrolysée in vivo par des enzymes protéolytiques ou bien dégradée par des aminopeptidases et des carboxypeptidases. Un très grand nombre d'analogues a été décrit par différents autcurs en vue d'obtenir soit des dissociations d'activité biologique soit une demi-vie biologique prolongée. Les produits de la présente invention répondent à la formule générale dans laquelle R R désigne un Il, un acide aminé, un dipep- tide comme Ala-Gly; . X1 = (L)-Lys ou liaison simple . X2 = (L)-Asn, Tau ou liaison simple . X3 = (L)-Phe ou (L)-Asn . X4 = (L)-Phe, Tau ou liaison simple l'un des deux groupements X2 ou X4 est obligatoirement Tau . X5 = (L)-Thr, (L)-Phe ou liaison simple X6 = (L)-Ser ou liaison simple TRP = (L)-Trp ou (D)-Trp . CYS = (1 )-Cys ou (D)-Cys. Le symbole Tau représente le groupement qui résulte de l'insertion de la Taurine dans une séquence peptidique, soit - NH - CH2 -CH2 - SO2 C'est une structure du type sulfonamide. Ces produits se caractériset e partienlier - Par une meilleure résistance à la protéolyse en particulicr glace si la présence d'un acide aminé non naturel la Taurine que les enzymes protéolytiques ne savent pas reconnaître et éventuellement grâce a' à introduction d' aci- des aminés de la série D. - Par une dissociation d'activité biologique par rapport à la somatostatine prise comme produit de référence aussi bien au niveau de l'inhibition des 3 hormones de base impliquées dans le diabète qu'au niveau de l'inhibition des sécrétions digestives. Les produits préférés de la présente invention sont représentés par les formules suivantes CM 14.461 C 14.462 CM 14.468 CM 14.470 CM 14.471 C 14.473 CM 14.500 Ces composés sont toujours utilisés sous forme dtun sel d'addition comme le chlorhydrate, le sulfate, phosphate, acétate, maléate, citrate, benzoate, succinate, malate, ascorbate...Ces sels pourront être obtenus en dissolvant le composé dans l'eau en présence do deux équivalents de l'acide et en soumettant ensuite l'ensemble à une lyophilisation.Le sel d'addition préféré reste toutefois 11 acétate. Principes généraux de la synthèse : Ils sont synthétisés selon un procédé mixte entre la synthèse en phase solide et la synthèse en solution. Les opérations de couplage entre 2 aminoacides sont effectuées en phase liquide, cest-à-dire en en solution dans un solvant polaire comme le diméthylformamide (DMF). Le produit de la réaction est isolé par addition d'un tiers solvant au milieu réactionnel qui l'insolubilse et permet ainsi de l'isoler par filtration. Le produit brut ainsi obtenu est ensuite soumis à des opérations de lavages en phase solide à laide de solvants appropriés dans lesquels il est insoluble. On utilisc à cet effet un groupement protecteur de la fonction acide carboxylique sur la cystéine de départ (cystéine 14) qui insolubilise les produits dans les solvants usuels dc lavage (eau, alcools, éthers, acétate dtéthyle...), tout en maintenant une solubiiité suffisante dans les solvants polaires comme le diméthylformamide permettant ainsi d'effectuer les opérations de couplage en phase liquide. Le groupement protecteur qui permet dfnppliquer cette stratégie est le 2-[4-(phénylazo)-benzylsulfonyl] éthyl ester (OPSE) stable en milieu acide et clivable en milieu basique selon le processus de ssélimination. Ltapplication de cette technologie à la synthèse de la somatostatine a été décrite dans Biorganic Chemistry 8, p. 429-442, (1979). Les sérine et thréonine intervenant dans ces synthèses ont été utilisés sans protection des fonctions hydroxylées dans leur chaise latérale. L'amine en # de la chaine latérale de la lysine est protégée pendant les phases d'élongation du peptide par le groupement 2-(méthylsulfonyl)-éthoxycarbonyl (tisse) stable en milieu acide et clivable en milieu basique. La fonction thiol de la cystéine porte le groupement protecteur acétamido méthyl (Acm) qui est stable en milieu basique ou acide. La déprotection est dans ce cas assurée par traitement à l'aide d'un sel de métal lourd comme 11 argent ou le mercure. Pendant les phases d'élongation la protection temporaire des amines en position m du carboxyl est assurée par le groupement protecteur tertiobutyl oxycarbonyl amino (Boc). Ainsi chaque opération de couplage sera suivie d'une opération de déprotection sélective du Boc. Cette déprotection est assurée par un traitement a' l'acide trifluoracétique et est effectuée aussi en solution. Ici également le produit déprotégé sera isolé du milieu réactionnel par addition d'un tiers solvant qui l'insolubilise. Toutefois, afin de minimiser les quantités de solvant utilisées, il sera souhaitable de concentrer au préalable le milieu réactionnel. Après les phases d'éloiigation le poptide protégé obtenu sera libéré des protections des chaines latérales des lysines et de la fonction carboxylique terminale par un traitement basique utilisant la soude ou la baryte dans un solvant approprié ù base de diméthylformamide. Le peptide ainsi obtenu possède toujours les thiols des cystéines protégées par le groupement acétamidométhyl. I1 pourra à ce niveau, selon son degré de pureté, être utilisé tel que pour l'étape finale d'oxydation ou bien soumis à wie purification poussée par la technique de la distribution à contre courant ou bien par chromatographie de partition. Enfin, la cyclisation finale du produit par création d'un pont disulfure entre les deux cystéines sera assurée par les opérations suivantes - déprotection des groupements acétamidométhyl des deux cystéines par un sel de métal lourd (nitrate d'argent par exemple) - élimination du métal lourd par un traitement à l'hydrogène sulfuré - dégazage et dilution à labri de l'air de la solution ainsi obtenue - addition de cette solution progressivement et à PH contrôlé à Wl milieu d'oxydation constitué par un tampon acétate d'ammonium contenant l'agent d'oxy dation qui est le ferricyanure de potassium. Cette opération sera toujours effectuée dans des conditions de forte dilution (2 litres par g de produit traité) de façon à minimiser les risques de polymérisation, conséquence d'une oxydation in termol éculaire. Le produit final est ensuite débarrassé des ions complexes provenant de la phase d'oxydation par passage surrésine convenable puis dessalé et concentré par fixation suivie d'élution par l'acide acétique sur une autre résine. Le produit brut d'évaporation devra être soumis à une chromatographie de perméation sur gel dans l'acide acétique dilué afin de le débarrasser des polymères qui se sont formés au cours de la phase d'oxydation. Si après cette opération de perméation sur gel la pureté du produit s'avère insuffisante il pourra être soumis à d'autres techniques de purification comme la chromatographie de partition ou le passage sur résine échangeuses d'ions.. En ce qui concerne l'introduction de la Taurine en séquence, on prépare d'abord un fragmént peptidique contenant cette taurine que l'on couple ensuite sur le reste de la molécule. Par exemple, dans le cas du CM 14.462 on prépare le t étrapept ide que 1 on couple sur 1' heptapept ide La taurine est introduite à partir du chlorure-dwacide de la benzyloxycarbonyl-taurine (Z Tau-Cl) selon la séquence de réactions Z-Tau-Cl + H-Phe-Phe-OCH3 Z-Tau-Phe-Phe-OCH3 Le tripeptide protégé est soumis ensuite à une saponification Z-Tau-Phe-Phe-OC113 Z-Tau-Phe-Phe-OH Le groupement benzyloxycarbonyl (Z) est éliminé par un traitement acide énergique (H Br / CH3CO2H). On couple ensuite la sous la forme activée sur ce tripeptide conduisant au tétrapeptide attendu Les exemples suivants, à caractère non limitatif, illustrent les synthèses qui ont conduit à la préparation des composés de la présente invention. Symboles et abréviations utilisés Z : benzyloxycarbonyl Boc : OHBT : hydroxybenzotriazole Acm : Msc : ONSu : OPse : ONp : O-Tcp : Me : CII3 DMF : diméthylformamide IFA : Acide trifluoracétique ou trifluoracétate THF : tétrahydrofurane CCM : chromatographie sur couches minces de silice Merck 60F 254 HPLC : Cilromatographie liquide haute performance BEW1 : éluant de chromatographie : butanol (72), CH3CO2H (7) et H20 (21) BPEW1 : " " " : butanol (50), pyri dine (12), CH3CO2H (12), H2O (25) EBPEW1: " " " : acétate d'éthyle (42), butanol (25), pyri dine (21), acide acé tique (6), eau (10) EPAW1 : " " " acétate d'éthyle (63), pyridine (210, acide formique (10), eau (6) EPAS2: " " " acétate d'éthyle (70), pyridine (16), Acide formique (8), eau (6) Truth : " " " CH Cl3 (95), MeOH (5), CH3CO2H (3) L'analyse en acides aminés des différents produits intermédiaires cités dans les exemples suivants a été réalisée. EXEMPLE 1 : Préparation de CM 14.458. schéma réactionnel : Préparation de (A) 1). Z-Tau-Ph3-OMe 16 g de chlorhydrate phénylalanine méthyl ester sont dissous dans l'eau et neutralisés à pli 7 par 6,3 g de carbonate acide de sodium. Après évaporation à sec, on reprend par l'acétate d'éthyle, filtre, seche et évapore ii scc. Le résidu est repris par 20 ml de tétrahydrofuranne (THF) et additionné à une solution de 7,- Tau Cl. Tau Cl est un produit décrit (Biochimica Biophysica Acta, 1955, 18, 353). Après une nuit de réaction à température ambiante il se forme un précipité blanc constitué de chlorhydrate de phénylalanine méthyl ester. Le produit est filtré. On évapore à sec la solution, on reprend par de l'eau puis on extrait par l'acétate d'éthyle. La solution est ensuite lavée par une solution de sulfate acide de potassium, une solution de sulfate de potassium, une solution de carbonate acide de sodium t une solution de chlorure de sodium. Après séchage et évaporation à sec on recristallise dans un mélange de solvants : benzène et pen- tane. On obtient 12,73 g de 1 ; rendement 89% point de fusion 93 ; CCM/Truth Rf: 0,53. 2). HBR, H-Tau-Phe-OMe 17,9 g du produit 1 préparé ci-dessus sont dissous dans 30,4 ml d'un mélange d'acide acétique et acide bromhydrique à 33%. Après 15 minutes a température ambiante, on évapore à sec puis on précipite par l'éther éthylique. On obtient 14,28 g du produit attendu 2, soit un rendement de 91,4%. Ce produit est très hygroscopique. 3). Boc-Phe-Tau-Phe-OMe On dissout dans 100 mi de DMF 14,5 g de 2 préparé ci-dessus. On ajoute à la solution 15,7 ; de Boc-Phe-ONp, 5,51 g d'hydroxybenzotriazole (OHBT) et 8,7 ml de N éthylmorpholine. La réaction dure une nuit à pli compris entre 6 et 7. On évapore à sec puis on reprend par l'acé- tate d'éthyle. On lave par une solution de sulfate acide de potassium, une solution de sulfa-te de potassium et de l'eau; on sèche, on évapore à sec puis on reprend par le minimum d'acétate d'éthyle tiède. On fait précipiter par addition d'hexane. On essore le précipité, il est ensuite lavé à l'hexane puis à l'éther éthylique. Après séchage, on obtient 16,80 g de 3 rendement 81% ; CCM/Truth Rf: 0,43. 4) . TFA, H-Phe-Tau-Phe-OMe 13,97 g de 3 sont dissous dans 84 ml de TFA. Après 15 minutes de réaction à température ambiante, on évapore à sec, on fait précipiter par l'hexane foid pour obtenir 14 g de 4 ; rendement 100% -; CCM/Truth Rf : 0,13. 5).; Boc-Asn-Phe-Tau-Phe-OMe Dans 100 ml de DMF on dissout 14 g de 4 préparé ci-dessus auxquels on ajoute 9,66 g de Boc-Asn-ONp, 4,o6g de HOBT et G,o6 ml de N éthylmorpholine. Après 2 heures de réaction à pH compris entre 6 et 7, on évapore à moitié, on fait précipiter par 4 volumes d'eau puis on lave successivement par une solution de sulfate acide do potassium, une solution de sulfate de potassium, de l'eau, une solution de carbonate acide de sodium, de l'eau et de l'éther éthylique à 1% d'acéate d'éthyle, à nouveau de 1' éther éthylique puis on seche. On obtient 17 g de 5; rendement 100%; CCM/Truth Rf: 0,33. 6). Boc-Asn-Phe-Tau-Phe-OH 17 g de 5 sont dissous dans 255 ml de dioxane, on ajoute 59,5 ml de soude normale. Après 30 minutes à tempé rature ambiante, on évapore à sec. On reprend par 60 mi d'eau, oii acidifie a pH 3,5. 11 se forme un précipité qui est filtré, lavé à l'eau ct séché. On obtient 13 g de 6 ; rendement 78,2% CCM/Truth Rf : 0,65. 7). TFA, H-Asn-Phe-Tau-Phe-OH On dissout 13 g de 6 décrit ci-dessus dans 65 ml de TFA. Après 20 minutes de réaction à température ambiante, oii évapore a sec puis on fait précipiter par 1' éther éthylique et on sèche. On obtient 12,58 g de 7, soit un rendement de 94,7% CCM/BEW1 Rf : 0,33. Dans 100 ml de DMP on dissout 12,5 g de 7 et on ajoute 1G,5 ml d'eau puis 8,35 g de de OHBT et 5ml de N éthylmorpholine. Après 3 heures à pH compris entre 6 et 7, on évapore a sec puis on amène à pli = 4,5, on. fait précipiter par l'acétate d'éthyle, on lave et on seche par l'éther éthylique. On obtient 12,41g de 8; rendement 70,5%; CCM/BEW1 Rf : 0,44 12,8 g de 8 préparé ci-dessus sont dissous dans 60 ml de TFA, après 20 minutes à température ambiante on évapore. Il se forme une huile. On précipite par l'éther éthylique pour obtenir 14,37 g de 9 ; rendement 100%; CCM/BPEW1 Rf:0,40. On dissout 13 g de 9 préparé ci-dessus dans 91 ml de DMF et 15 ml d'eau. On ajoute 7,8 g de 2,34 g de OHBT et 4,29 ml de N éthylmorpholine. Après 3 heures de réaction à pH compris entre 6 et 7, on évapore la solution de moitié puis on amène à pH = 3,5 par addition d'une quantité suffisante d'acide acétique. Le produit 10 précipite par addition d'éther éthylique ; Poids : 16,84g; rendement 97,3% ;CCM/BPEW1 Rf : 0,62. On dissout 15 g de 10 préparé ci-dessus dans 70 ml de TFA. Après 20 minutes à température ambiante, on obtient une huile à partir de laquelle il se forme un précipité par addition d'éther éthylique. On obtient 13,86 g de 11 ; rendement 93% CCM/BPEW1 Rf : 0,38. 12,55 g de il sont dissous dans un mélange de 83 ml de DMF et 13 ml d'eau. On ajoute 3,4 g de Boc-Ala- Gly-O-Tcp, 1,75 g de OHBT et 2,88 ml de N éthylmorpholine. Après 3 à 4 heures de réaction à pH compris entre 6 et 7, on évapore à moitié puis on amène à pH = 3,5. Le précipité obtenu par addition d'acétate d'éthyle est lavé par l'acé- tate éthyle puis acidifié à pH = 3,5. Le produit 12 obtenu est le produit (-A) du schéma réactionnel. On en obtient 13,45 S, soit un rendment de 97,1% ; CCM/BEW1 Rf : 0,28. Préparation de (B) On dissout 700 g de (J. Amer. Chem., 1972, 94, 5456) dans 6 l de pyridine anhydre, puis on dissout 608 g de Pse OH et on refroidit la solution à 0 C. Dans 800 ml de pyridine anhydre on dissout 500 g de dicyclohexylcarbodiimide. Ce mélange est ajouté lentemcnt (en 7 heures) à la solution précédente en maintenant la température entre 0 C et 50C et sous agitation. Après une nuit sous agitation, entre 0 C et 5 C, on essore le dicyclohexylurée formé. On évapore le solvant. Le résidu huileux formé est versé dans 15 1 d'un mélange eau et glace sous agitation. Le produit cristallise, il est lavé plusieurs fois par une solution saturée de carbonate acide de sodium puis par de l'eau et séché. Point de fusion 75-77 C ; CCM/BEW1 Rf : 0,69 ; [&alpha;]25= - 16 (c = 1, acide acétique). 5,78 g de sont ajoutés rapidement à une solution de 1 ml d'acide chlorhydrique concentré dans 100 ml d'acide formique à température ambiante. Après 10 minutes le solvant est évaporé sous vide. Le résidu huileux repris dans 15 ml de méthanol est versé dans 150ml d'éther anhydre agité à 0 C. Le produit formé est filtré, rincé à l'éther et séché sous vide en présence d'anhydride phosphorique. Point de fusion 162-1640C ; CCM/BEW1 Rf : 5,15 g de 14 sont dissous dans 60 ml de DMF pur anhydre auxquels on ajoute 1,15 g de N éthylmorpholine. Après refroidissement à -100C, on ajoute 2,05 g de N butoxycarbonyl serine puis goutte à goutte 2,47 g do dicyclohexylcarbodiimide et 2,70 g dlOHBT dissous dans 20 ml de DMF. Après 1 heure à -10 C, on laisse revenir lentement à température ambiante. Au bout de 6 heures, le DMP est évaporé sous vide puis le résidu est repris par 200 ml d'acétate d'éthyle, on filtre le dicyclohexylurée formé puis mi lave le solide par des solutions aqueuses de sulfate acide de potassium, sulfate de potassium, eau, carbonate acide de sodium à 5%, eau. Après séchage sur sulfate acide de magnésium, le solvant est concentré à 50 ml. Après une nuit à 0 C, le produit précipite, il est filtré, rincé par l'acétate d'éthyle, l'éther anhydre puis séché sous vide. On obtient 5,3 g, soit un rendement de 80%. Point de fusion 111-113 C ; CCM/BEW1 Rf : 0,63 : [&alpha;]25= - 25 5 (c = 1, alcool méthylique). 38,5 g de 15 sont ajoutés rapidement à 300 ml de TFA préalablement refroidis à OOC. Après quelques minutes, l'acide est évaporé sous vide, le résidu est repris par de l'éther anhydre, puis filtré et rincé plusieurs fois a l'éther anhydre et séché. On obtient 38,5 g de 16, soit un rendement de 97% ; CCM/BPEW1 Rf : 0,60. 6,80 g de 16 sont dissous dans 100 ml de DMF pur. Tout en refroidissant au baiii de glace, on ajoute successivement 2,52 nil de N éthylmorpholine et 3,79 g de Boc Thr-ONsu. Après 2 heures à température ambiante, on évapore le DMF à 30 C, le produit solidifie en présence de glace, il est filtré sous vide puis lavé à l'eau, par une solution de sulfate acide de potassium et sulfate de potassiuM à pl1 = 2, à l'eau, par une solution do carbonate acide de sodium à 5% et 2 fois à l'eau. Après séchage à l'air, puis sur anhydride phosphorique, on obtient 7,5 g de 17, soit un rendement de 9804. Point de fusion : 136 - 138 C; CCM/BEW1 RF : 0,69. 18). est obtenu à partir de 17 en opérant selon la méthode décrite pour la préparation de 16. 7,81 g de 18 sont dissous dans 90 ml de DMF anhydre et traités à 0 C par 2,52 ml de N éthylmorpholine puis 4,64 g de Boc-Phe-ONp. Après une nuit au réfrigérateur, le DMF est évaporé vide à 305C, le produit obtenu est lavé à l'eau, une solution aqueuse de sulfate do potassium et sulfate acide de potassium, de l'eau, une solution aqueuse de carbonate acide de sodium et de l'eau. Après séchage, on lave à nouveau par l'isopropanol et l'éther. 011 obtient ainsi 8,22 g, soit un rendement de 90%. Point de fusion : 153 - 155 C ; CCM/BEW1 Rf : 0,75 ; [&alpha;]25= - 16 (c = 1, acide acétique). 20). TFA, H-Phe-Thr-Ser-Cys-OPse est obtenu à Acm partir de 19 en suivant le mode opératoire décrit nour la préparation de 16. CCM/BPEW1 Rf : o,65 ; [&alpha;]25 = - l805(c=1, méthanol). est obtenu à partir de 20 par addition de Boc-Thr-ONsu selon le mode opératoire décrit pour la préparation de 17. CCM/BEW1 Rf : 0,65 ; Point de fusion : 169 - 172 C. 2 g de 22 sont obtenus à partir de 2,03 g de 21 on suivant le mode opératoire décrit pour la préparation do 16. CCM/EPAW1 Rf : 0,50. 10,29 g do 22 sont dissous dans 100 ml de DMF anhydre et traités à 0 C par 2,52 ml de N éthylmorpholine et 6,2 g de Après 15 à 20 heures à tempé- ture ambiante, le solvant est évaporé sous vide.On agite en présence de glace, le précipité formé est filtré, puis lavé à l'eau, par mie solution aqueuse de sulfate acide de potassium et sulfate dc potassium, à l'eau, 2 fois par 100 ml d'isopropanol et enfin abondamment & l'éther puis à l'acétone. CCM/BEW1 Rf : 0,57 : [&alpha;]25= - 19,5 (c = 1 acide acétique.) est obtenu à partir de 23 en suivant le mode opératoire décrit pour la préparation de 16. CCM/EPAW1 Rf : 0,50. 13,075 g de 24 sont mis en solution dans 130 ml de DMF anhydre et traités au bain de glace par 2,5 ml de N éthylmorpholine, 5,11 g de Boc-Trp-Onp et 2,70 g d'hydroxybenzotriazole. Après une heure environ à température ambiante la réaction est complète, le solvant évaporé, le résidu repris à la glace se solidifie peu à peu ; il est broyé finement, filtré, lavé abondamment à l'eau puis après un léger séchage par 2 fois 120 ml disopropanol tiède puis par des fractions de 100 ml d'acétone tiède jusqu'à pureté satisfaisante en CCM. On obtient ainsi 12,6 g du produit présentant les caractéristiques suivantes CCM/EPAW2 Rf : 0.50 ; [&alpha;]25= - 17 ,5 (c = 1, acide acétique). 26)B On prépare au Lain de glace le mélange suivant 130 ml de TFA, 13 ml d'éthane dithiol et 6 ml d'anisole. On lui ajoute rapidement sous agitation 13,3 g de 25 et poursuit l'agitation pendant 20 minutes å température ambiante. Après évaporation sous vide lo résidu est repris tlaiis 50 ml d'isopropanol qui est ensuite évaporé sous vide, repris une seconde fois par le même solvant duquel il est filtré après trituration et enfin lavé par le mélange isopropanol éther puis par l'éther seul et séché. On obtient ainsi 13,4 g du sel de (B). CCM/BEW1 Rf : 0,36. Préparation de (C). 27) . Dans 90 ml de DMF, on dissout 6 g de (A) auxquels on ajoute 8,16 g de (B), 2,16 g de OHBT et 1,62 g de dicyclohexylcarbodiimide. Le p1l est compris entre 6 et 7, on laisse à température ambiante une nuit puis on évapore le volume au dixième, on précipite par l'acétate d'éthyle, filtre et reprend le filtrat dans l'éther éthylique. On filtre à nouveau puis on reprend par un peu de cyanure de méthyle puis par l'éther éthylique. On obtient ainsi 11,57 g de (C), soit un rendement de 91% ; CCM/EBPEW1 Rf : 0,85. Préparation de (D). On dissout 11,5 g de (C) dans 57 ml de chlorure de méthylène puis 6 ml d'anisole et 6 ml dtéthanedithiol,on ajoute 57 ml de TFA. Après 20 minutes de réaction, on obtient une huile ; un précipité est formé par addition de 4 volumes d'éther éthylique. On obtient ainsi 11,33 g de 28, soit un rendement de 98% ; CCM/BPEW1 Rf : 0,58. 5 g de 28 sont dissous dans 125 ml de DMF et 15 ml d'alcool éthylique. On refroidit à +5 C. On ajoute 89 ml d'hydroxyde de baryum à uno température comprise entre 15 C et 200C maximum, l'addition durc 30 minutes au plus. En fin de réaction, on fait barbotter du gaz carbonique jusqu'à pH 7. Il se forme un précipité, après centrifugation, 011 évapore à sec puis on précipite par 5 volumes d'acétate d'éthyle et on lave par l'acétate d'éthyle. Poids 2 g ; rendement 55% ; CCM/BPEW1 Rf : 0,32. Préparation de (D) : CM 14.458. 39) . 2 g de 29 sont dissous dans 200 ml d'une solution d'acide acétique à 50% dégazée. A température ambiante, sous azote, à l'abri de la lumière, on introduit 10 ml d'une solution normale de nitrate d'argent. On laisse une nuit à température ambiante à l'abri de la lumière sous azote.La solution est ensuite évaporée à sec sous azote, le résidu est repris par de l'éther puis par 250 ml d'eau. On centrifuge, on décante puis on reprend le solide par 250 ml d'eau et 250 ml de DMF préalablement dégazés, on fait passcr un courant dthydro- gène sulfuré pendant quelques minutes puis on centrifuge, on décaiite et on lave le culot noir. Les eaux de lavages soiit réunies, dégazées, on y ajoute 3 1 dwIe solution d'acide acétique 0,2 N. La solution obtenue (4,2 1) est ajoutée en 16 heures sous agitation et sous azote à pH = 6,9 å une solution ayant la composition suivante : 1,5 1 d'eau, 950 g de ferricyanure de potassium et 3750 g d'acétate d'ammonium. Le pll est maintenu a 6,9 par addition d'une solution d t ammoniaque pendant 2 heures. On laisse ensuite 2 heures sous agitation puis on amène la solution ù pll 5 par l'acide acétique concentré. On dessale par passage sur résinc Biorad Ag 3x4 puis fixation sur résine Biorex 70, ces dcw; résines étant sous forme acide. On lave puis on élue par de l'acide acétique à 50%. Après évaporation à sec, on reprend par l'éther, on essore le précipité puis on sublime l'excès d'acétate d'ammonium. On obtient 1,46 g de produit brut. La purification est effectuée d'abord sur Sephadex G 25 (tamisage moléculaire) puis par chromatographie de partition sur Sephadex G 25, éluant : butanol (4), acide acétique (1), eau (5). On obtient 194,7 mg de produit pur ;CCM/BPEW1 Rf : 0,21 ; [&alpha;]25= ~ 32 (C = 1, acide acétique a 590). EXEMPLE 2 : Préparation de CM 14.461 Schéma réactionnel Préparation de (A) 1) . Z-Tau-Phe-Phe-O CH3 75 g de Boc-Phe-Phe-OMe sont dissous dans 300 ml d'une solution d'acide chlorhydrique 2,5 N dans l'acétate éthyle. Après 15 minutes il se forme un précipté, on additionnne de l'éther éthylique, on filtre et on sèche. On obtient ainsi 60,24 g de H-Phe-Phe-OMe soit un rende- ment de 9850. Ce produit est repris dans un mélange volume pour volume eau et TIIF. On neutralise par 15 g de carbonate acide de sodium, après 20 minutes de réaction, on évapore à sec puis on reprend par du TIF, on ajoute 21,1 g do Z-Tau-Cl. La réaction est légèrement exothermique, il se forme un précipité blanc. Après une nuit à température ambiante on filtre, évapore à sec puis reprend le résidu par de l'acétate d'éthyle. On lave par une solution de sulfate acide de potassium, une solution de sulfate de potassium puis une solution de chlorure do sodium. On sèche, évapore à sec puis reprend le résidu par du pentane. On obtient ainsi 37,37 g de 1, soit un rondement de 89 %; CCM/Truth Rf: 0,5. 2) . Z -Tau-Phe-Phe-OH 37 g de Z-Tau-Phe-Phe-OMe en solution dans 370 ml de dioxane sont déprotégés dans 148 ml de soude normale. Après 30 minutes à température ambiante, on évapore à sec, le résidu est repris par de l'eau puis acidifié par une solution d'acide acétique. Il se forme une gomme qui est extraite par dc l'acétate d'éthyle puis séchée sur sulfate de magnésium. On évapore a sec sous vide, reprend le résidu par du pentane puis évapore à sec sous vide. On obtient 31 g de produit 2, soit un rendement de 86% ; CCM/Truth Rf : 0,31. 3) . HBR, H-Tau-Phe-Phe-OH est obtenu à partir do 2 selon le procédé décrit pour le composé 2 de l'exemple l. Il se forme 27,55 g de 3, soit un rendement de 98,6% CCM/BEW1 Rf : 0,30 ; CCM/BPEW1 Rf : 0,60. 5g du composé 3 décrit précédemment sont dissous dans une solution comprenant 40 ml de DMF et 6,5 ml d'eau à laquelle on ajoute 5,7 g de et 1,5 g de OIIBT. Le PH est amené à une valeur comprise entre 6 et 7 par addition d'une quantité suffisante do N éthyl- morpholine. Après 4 heures de réaction, on évapore sous vide saris chaufrer jusqu'à obtention d'une huile. On diluc daiis un volume égal d'eau puis on amène à pll 4,5. On extrait par l'acétate d'éthyle puis on lave la phase organiquc par une solution de sulfate acide de potassium, une solution de sulfate de potassium, on sèche sur sulfate de magnésium puis mi évapore à sec, on reprend le résidu par du pentane puis on évapore à sec à nouveau. On obtient 8,05 g soit un rendement de 100% CCM/BEW1 Rf : 0,67. 8 g de ce produit sont préparés à partir de 8 g de 4 selon le procédé décrit pour le composé 9 de l'exemple 1. Le rendement est de 98% ; CCM/BEW1 Rf : 0,26. 7 g de ce produit sont préparés à partir de 8,2-g de 5 selon le procédé décrit pour le composé 10 de l'exemple 1. Rendement 71% ; CCM/BEW1 Rf : 0,57. 6,36 g de ce produit sont préparés à partir de 7 g de 6 selon le procédé décrit pour le composé 11 de l'exemple 1. Ce composé est le (A) du schéma réactionnel. 5,36 g de 7 soiit dissous dans 30 ml de DE1F et 4 mi d'eau. On ajoute 2,52 g de Boc-Ala-Gly-O-Tcp et 0,86 g de OHBT puis une quantité suffisante de N éthylmorpholine pour amener le pil du milieu entre 6 et 7. Après 4 heures de réaction, on évapore à sec sous vide puis on reprend par de l'éther éthylique acidifié. On obtient un solido que l'on sèche après essorage poids 5,98 g ; rendement 100% ; CCM/BEW1 Rf : 0,49. Préparation de (B). La préparation de ce composé est décrite dan l'exemple 1. Préparation de (C). 9) . 2 g de (A) sont dissous dans 30 mi de DMP, on ajoute 2,9 g de (D) puis on neutralise par addition de N éthylmorpholine. On ajoute à la solution 0,92 g de BOP et 0,26 ml de N éthylmorpholine ; après 2 heures, 011 ajoute à nouveau 0,2 g de BOP et 0,05 mi de N éthylmorpholine. Après wle nuit à température ambiante on filtre puis on précipite par l'acétate dsséthylo. Après essorage, le précipité est lavé à l'éther, à l'eau puis à l'éther. On obtient 2,42 g de 9, soit un rendement de 54,1%. Préparation de (D). 2,19 g dc ce produit sont obtenus à partir de (C) selon le procédé décrit daus l'exemple 1 pour la préparation de 16 ; rendement de 99%. l,48 g de ce produit sont obtenus à partir do 2 g de 10 selon le procédé décrit dans l'exemple 1 pour la préparation de 17 ; rendement 100%. 12) . CM 14.461 = (D) Ce composé est préparé selon le procédé décrit pour la dernière étape do l'exemple 1. A partir de 1,48 g de 11 mi obtient 0,670 g de CM 14.461, soit un rendement de 52% ; CCM/BPEW1 Rf : O,53; [&alpha;;]25 : - 32 (C = 1, acide acétique à 5%). EXEMPLE 3 : CM 14.462. Schéma réactionnel. (D) = CM 14.462 Préparation de (A). On prépare tout d'abord le composé 3 de l'exemple 2 : HBR, H-Tau-Phe-Phe-OH. 20 g de ce produit sont dissous dans 160 ml de DMF ot 26 ml d'eau. On ajoute à la solution 19 g de Boc-Cys-ONp, 6 g de OHBT et une quantité suffisan- te de N éthylmorpholine pour que le pH soit compris entre 6 ct 7. Après 3 à 4 heures de réaction, on évapore à sec sous vicie puis on acidifie jusqu'à pll = 3,5.On reprend ensuite par l'acétate d'éthyle, la phase liquide est layée par de l'eau, par une solution de sulfate acide de potassium, une solution do sulfate de potassium et une solution de chlorure de sodium. Ou sèche sur du sulfate de magné- sium puis on évapore à sec et on reprend le résidu par de l'éther éthylique. On obtiunt ainsi 21,84 g de 1, soit un rendement de 78,6% ; CCM/BEW1 Rf : 0,77. Préparation de (B). 2) . Préparation de Ce composé est identique au composé 24 décrit dans l'exemple 1. 6 g de CE 14.335 sont dissous dans 61 ml de DMF. On ajoute 1,16 ml de N éthylmorpholine, 2,34 g de Boc (D) Trp-ONp et 1,22 g de OHBT. Le pH est ajusté entre 6 et 7 par addition de N éthylmorpholine. Après 3 heures et demi de réaction, 011 évapore de moitié sous vide, puis on rait précipiter par addition dc 3 volumes d'eau froide. Après essorage, on lave le solide successivement par de l'eau, une solution de sulfate acide de potassium, une solution dc sulfate de potassium, do l'eau, une solution de carbonate acide de sodium et de l'eau. Après séchage, 011 lave à nouveau ave 75 mi dtiso- propanol, de l'éther éthylique, 50 ml d'éthanol, de l'éther éthylique, 40 m7 d'acétone et à nouveau de l'éther éthylique. On obtient ainsi 4,86; de 3, soit un rendement de 72% ; CCM/BEW1 Rf : 0,68. 3,4 g de 3 sont dissous dans une solution de 14 ml de TFA, 13 ml d'anisole et 1,4 ml d'éthanedithiol. Après 20 minutes à température ambiante, on précipite par de l'isopropanol On obtient 3,59 9 de 4 soit un rendement de 100%; CCM/BEW1 Rf : 0,48. Préparation de (C) (C) est obtenu par addition de (A) et (B) selon le mode opératoire décrit dans l'exemple 2 pour la préparation du composé 9. On obtient 3,10 g de (C), soit un rendement de 64%; CCM/BEW Rf : 0,61. Préparation de (D). Ce produit est obtenu à partir de (C) en suivant le mode opératoire décrit dans l'exemple 1 pour la préparation du composé (C). A partir cie 3,8 g de (C) on obtient 3,63 de 5, soit un rendement de 94,8% ; CCM/BEW1 Rf : 0,76. La déprotection dc la lysine pour obtenir 6 à partir de 5 s'effectue selon le mode opératoire décrit dans l'exemple 1 pour la prépration du composé 6.0n obtient 3,07 g de 6 à partir de 3,6 g de 5. Le rendement est de 100% ; CCM/BEW1 ; Rf : 0,36. 7). (D) = CM 14.462 La cyclisation du peptide 6 et sa purification s'effectuent selon le mode opératoire décrit pour la dernière étape de l'exemple l (préparation de D) CCM/BPEW1 Rf : 0,59 ; [&alpha;]25= - 48 (C = 1, acide acétique 5%). EXEMPLE 4 : CM 14.468. Schéma réactionnel. (D) = CM 14.468 Préparation do (A). 1) . Ce produit est celui qui est décrit en 1 dans l'exemple 3. Préparation de (B). 35 ml de DES auxquels on ajoute 2,57 g de Boc-Phe-ONp et 1,05 g de OHBT et une quantité suffisante de N éthyle morpholine pour amener le pli entre 6 et 7. Après 4 heures de réaction à température ambiante, on évapore à sec puis on précipite par 5 volumes dbau glacée et on lave par une solution dc sulfate acide de potassium, tino solution de sulfate de potassium, une solution de carbonate acide de sodium, une solution de sulfate de potassium, une solution do sulfate acide de potassium, de l'eau et du pentane acidifié par l'acide acétique a 1%. Après séchage, on obtient 4,18 g do produit, soit un rendement do 97% ; CCM(N butanol 96, acide acétique 1, eau l) Rf : 0,77. Les 4,18 g dc 2 obtenus précédemment sont dissous dans 21 ml de TPA. Après 20 minutes à température ambiante, on évapore à scc puis on reprend le résidu par du pentane et on sèche ; Poids 4,18 g ; rendement 99',u' ; CCM/ (trichlo- rure dc méthylc 90, alcool méthylique 20, acide acétique 03) Rf : 0,09. Cc composé est obtenu à partir de 3 en suivant le mode opératoire décrit pour la préparation do 2. On obtient 3,69 g de i, soit un rendement de 78%. CCM/ (trichlorure de méthyle 90, alcool méthylique 20, acide acétique 03) Rf : 0,61. 4,3 g de 5 sont obtenus à partir de 4,3 g de 4 par dissolution dans 19 nil dc TFA puis évaporation à soc après 20 minutes à température ambiante, le résidu étant repris par do l'éther éthylique. Rendement 98,4% CCM/ (trichlorure de méthyle 90, alcool méthylique 20, acide acétique 03) Rf : 0,18. Ce composé est obtenu à partir de 5 par addition de Boc-Thr-ONSu en suivant le mode opératoire décrit pour la préparation de 2. En partant de 3,2 g de 5, on obtient 2,91 g de 6, soit un rendement de 83% ; CCM/ (alcool butylique 96, acide acétique 01, eau 03) Rf : 0,83. 3,8 g de ce composé sont obtenus à partir de 6 (3,7 g) en opérant de la même manière que pour la préparation de 5. Rendement 99,8% ; CCM/(mélange de solvants cité pour 3) Rf : 0,43. 4,16 g de ce produit sont obtenus à partir dc 3,7 g dc 7 par addition de selon le procédé décrit pour la préparation de 2; rendement 88,7% ; CCM/ (mélange de solvants cité pour 3) Rf : 0,87. 4 g de 9 sont obtenus à partir de 8 (4 g) selon lie mode opératoire décrit pour la préparation de 5 rendement 98,9% ; CCM/ (mélange de solvants cité pour 3) Rf : 0,14. 10 est obtenu a partir de 9 par addition de Boc-(D) Trp-ONp selon le mode opératoire décrit pour préparation de 2. 4 g de 9 donnent 4,1 g de 10 ; rendement 90% ; CCM/ (mélange de solvants cité pour 3) Rf : 0,82. A 4 g cle 10 en suspeiision dans 20 ml de chlorure de méthylène, on ajoute 2 ml d'anisol, 2 ml d'éthanedithiol et 20 ml do TFA. Après 20 minutes à température ambiante, 011 évapore, on reprend par de l'eau puis on lave et on sèche pour obtenir 4 g de ll ; rendement 98% CCM/ (dans le solvant décrit pour 3) Rf : 0,30. Préparation do -(C). 12) . Cc produit est obtenu par addition de (A) et (B) selon le procédé décrit pour la préparation du composé (C) de l'exemple 2. On obtiellt 3,75 g dc 12 à partir do 2,12 g de (A) et 3,5 g de 11, soit un rendement de 77,9% ; CCM/ (dans le mélange de solvants décrit pour 3). Rf : 0,66. Préparation de (D). 13 est obtenu avec un rendement de 100% selon le procédé décrit pour le composé 16 de l'exemple 1. CCM/BPEW1 Rf : 0,72. 1,3 g de 14 sont obtenus à partir de 2 g do 13 en suivant le procédé décrit pour le composé 17 de l'exemple 1. 011 obticnt 1,3 g dc produit ; CCM/BPEW1 Rf : 0,51. 15) . (D) = CM 14.468. Ce produit est préparé à partir de 14 selon le mode opératoirc décrit dans 1 t exemple 1 pour l'étape finale de la préparation de (D). On obtient 0,843 g de CM 14.468 ; CCM/BPEW1 Rf : 0,77 ; [&alpha;]25= - 54,4 (C = 1, acide acétique à 5%) EXEMPLE 5 : CM 14.470 Schéma réactionnel. (D) = CM 14.470 Le composé (A) est identique à ccliii décrit dans l'exemple 3. Le composé (B) est préparé à partir de TFA, H-Phe Cys-OPse par additions successives d'aminoacides protégés Acin selon le procédé décrit dans l'exemple 4. 011 prépare ensuite (C) puis (D) en suivant les modes opératoires décrits précédemment. (D) = CM 14.470 ; CCM/BPEW1 Rf : 0,74 [&alpha;]25= - - 76 (C = li acide acétique EXEMPLE 6 : CM 14.471 Schéma réactionllel. (D) = CI 14.471 Le composé (A) est identique à celui décrit dans l'exemple 3. Par addition de (B) préparé suivant les méthodes décrites précédemment, on obtient (C), puis (D). (D) = CM 14.471 ; CMM/BPEW1 Rf : 0.62. EXEMPLE 7 : CM 14.473 Schéma réactionnel. (D) = CM 14.473 (A) est préparé par additions successives d'amino acî(lcs cn partant de TFA, H-Phe-Phe-OMe. (B) est identique ai (B) de l'exemple 5. Par addition de (A) et (B) et en opérant selon les méthodes décrites précédemment, on obtient (C), puis (D); CCM/BPEW1 Rf : 0,58. EXEMPLE 8 : CM 14.500 Schéma réactionnel. (D) = CM 18.500 (A) est obtenu à partir de Boc-Phe-Tau-Phe-OH en opérant selon les méthodes décrites précédemment. (ss) est identique à cclui de l'exemple 6. Par addition de (A) et (B) on obticnt ensuite (C), puis (D) en suivant les modes opératoires décrits précédemment : [&alpha;]20= + 19,2 (C = 0,5, acide acétique). Les peptides de la préseiite invention ainsi que leurs sels pharmacologiquement acceptables interviennent activement sur le contrôle de la sécrétion d'hormone de croissance tant chez 1' animal que chez l'homme (Thérapeutique de l'acromégalie). L'action inhibitrice différentielle de ces produits sur la production d'insuline et dc glucagon et dans la régulation glycérique les rend utiles dans le contrôle du diabète sucré insuline dépendant ou non insuline dépendant. Ces molécules ont peu ou pas d'action sur les sécrétioiis digestives, autre facteur de différentiation par rapport au profil dc la somatostatine native. Les produits selon l'invention ont une toxicité faible ; dans aucun cas, lors des essais, les animaux traités n'ont montré de signes alarmants. La gamme posologique utilisation clinique de ces substances varie avec les effets thérapeutiques recherchés ot avec chaque paticnt, elle est généralement comprise entre 0,1 et 10 mg de principe actif. Les peptides de la présente invention pourront être administrés par voic intraveineusc, sous-cutanée ou intra- musculaire en solution dans un solvant tel que le sérum physiologique (solution saline isotonique) ou dans un tampon phosphate ct toujours dans des conditions rigoureuses de stérilité; les solutions salines comportent généralement de 1 a 5% en poids do produit selon l'invention. Les produits selon l'invention ont été examinés en ce qui concerne leur activité biologique. Essais biologiques. L'inhibition de la sécrétion des hormones pancréatiques et de l'hormone de croissance (GH) a été déterminée in vivo chez des rats màles Sprague Dawley d'origine Charles River de 200-à 220 g. Les dosages d'insuline, glucagon et d'hormone de croissance sont effectués par les techniques radioimmunologiques. L'inhibition de la sécrétion gastrique acide in vitro a été explorée à partir de muqueuses gastriques isolées de cobaye. On détermine dans chaque cas la concentration du peptide inhibant 50% dc la sécrétion hormonale ou de la sécrétion gastrique. Dans le tableau suivant les résultats soiit exlirimés par rapport à la somatostatine utilisée comme produit de référence. L'activité de la somatostatine ayant été dais chaque cas considérée comme égale à 100, les chifres relatifs aux peptides de l'invention expriment le rapport de l'activité du peptide considéré a l'activité de la somatostatine. Inhibition de la sécrétion des hormones pancréatiques de la GH et de la sécrétion gastrique acide par quatre dérivés de la somatostatine en comparaison avec la somatostatine native Insuline Glucagon GH Sécrétion gastrique Somatostatine 100 100 100 100 CM 14.461 inactif 20 162 #0 CM 14.462 30 44 174 11 CM 14.470 24 63 136 CM 14.471 72 157 - R E V E N D I C A T I O N S 1. Analogues de la soiiatostatiiic caractérisés en ce qui ils répondent à la formule générale dans laquelle R R désigne un il, un acide aminé, un di- peptido comme Ala-Gly par exemple . X1 = (L)-Lys ou liaison simple . X2 = (L)-Asn, Tau ou liaison simple . X3 = (L)-Phe ou (L)-Asn ; . X4 = (L)-Phe, Tau ou liaison simple l'un des deux groupemens X2 ou X4 est obligatoirement Tau ; . X5= (L)-Thr, (L)-Phe ou liaison simple; , X6 = (L)-Scr ou liaison simple , TRP = (L)-Trp ou (D)-Trp . CYS = (L)-Cys ou (D)-Cys, et les sels d'addition dc ces produits avec des acides pharmaceutiquement acceptables. 2. Produits selon la revendication 1, caractérisés eii ce que l'analogue do la somatostatine a pour formule 3. Produits selon la revendication 1, caractérisés en ce que l'analogue dc la somatostatine a pour formule 4. Produits selon la revendication 1, caractérisés en ce, que l'analogue de la somatostatine a pour formule S. Produits scloii la revondication 1, caractérisés en ce que l'analogue de la somatostatine a pour formule 6. Produits selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'analogue de la somatostatine a pour formule 7.Produits selon la revendication 1, caractérisés en ce que 1 t analogue de la somatostatine a pour formule 8. Produits scloii la revendication 1, caractérisés en ce que l'analogue de la somatostatine a pour formule 9. Produits selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'analogue de la somatostatine a pour formule 10. Médicaments utiles notamment pour Se traitement do maladies résultrnit d'un dérèglement de la sécrétion d'hormone dc croissance, d'insuline ou de glucagon, caractérisés on ce qu'ils contiennent au moins un produit selon l'une des revendications l à 9. 11. Médicaments selon la revendication 10, caractérisés en ce qu'ils sont administrés par injections intraveineuse, sous cutanée ou intramusculaire.