FR 2519552 A1 19830718 FR 8200359 A 19820112 La présente invention concerne un procédé perfectionné pour stabiliser le lysozyme en milieu liquide ou semi-liquide, ainsi qu'unie composition à base de lysozyme, et plus particulièrement une composition stable contenant du lysozyme, utilisable en thérapeutique et en hygiène. On sait que le lysozyme est une protéine d'origine naturelle, géneralement extraite du blanc d'oeuf de poule, possèdant des propriétés anti-microbiennes et antivirales permettant son application en thérapeutique, notamment pour le traitement d'affections telles que les apthoses, l'herpès, les zonas, les gingivites, et plus généralement la plupart des affections vésiculeuses et bulleuses d'origine virale. Le lysozyme exerce notamment une action sur la carie dentaire par abaissement de la production d'acides par les bactéries de la plaque dentaire. Toutefois, l'utilisation du lysozyme s'avère délicate en pratique, en raison de sa grande instabilité en milieu aqueux ou en présence de certains composés tels que des carbonates, des alginates, des sels de métaux lourds, etc, couramment employés comme excipients, plastifiants, ou supports de diverses compositions médicamenteuses. Dans ces cgnditions, le lysozyme perd très rapidement toute action enzymatique, par exemple en solution dans l'eau, ou bien on assiste à une adsorption qui entrain une chute-immédiate de son action, qui peut être irréversible selon les composés concernés. De ce fait, les actions antimicrobiennes et antivirales se trouvent fortement limitées et peuvent meme disparaitre totalement dans certains cas. La présente invention a pour objet un procédé permettant de stabiliser le lysozyme dans une composition liquide ou semi-liquide. L'invention concerne également une composition à base de lysozyme évitant les inconvénients mentionnés ci-dessus. L'invention a plus particulièrement pour objet une composition à base de lysozyme, utilisable en thérapeutique, procurant une excellente stabilité à la conservation. Le procédé conforme à la présente invention permettant de stabiliser le lysozyme, pur ou sous forme de sel, dans une composition liquide ou semi.liquide, consiste à incorporer le lysozyme dans un sucre ou dans une glycérine, préalablement dilué dans un solvant approprié, en présence d'un ou plusieurs plastifiants non ioniques ou anioniques, à mélanger puis à ajouter progressivement les excipients et, le cas échéant, les principes actifs associés. Suivant une forme préférentielle de mise en oeuvre de l'invention, on dilue un sucre tel que le saccharose ou le glucose dans de l'eau, on ajoute un ou plusieurs plastifiants non ioniques ou anioniques, puis du lysozyme, pur ou sous forme de chlorhydrate, et on verse la glycérine en solution dans un alcool, le cas échéant on ajoute un principe actif additionnel, et enfin on incorpore les excipients usuels et on mélange. Conformément à la présente invention, il est particulièrement avantageux de diluer le sucre dans de l'eau, à température ambiante, d'ajouter un ou plusieurs plastifiants non ioniques ou anioniques, d'incorporer ensuite de la glycérine et le cas échéant une quantité additionnelle de sucre, puis d'ajouter le lysozyme. La composition à base de lysozyme conforme à la présente invention contient du lysozyme à l'état pur ou sous forme de sel, en combinaison avec un ou plusieurs sucres et/ou la glycérine ou un dérivé de glycérine, et le cas échéant un ou plusieurs excipients usuels ou autres principes actifs. Suivant une forme préférentielle de mise en oeuvre de l'invention le lysozyme, pur ou sous forme de sel, est associé à une glycérine et un sucre, la combinaison de ces trois composants donnant à la composition une stabilité encore améliorée par rapport à une composition contenant le lysozyme et un sucre, ou le lysozyme et une glycérine. Il est particulièrement avantageux, suivant l'invention, d'incorporer en outre un plastifiant non ionique ou anionique tel qu'un dérivé cellulosique, un alginate tel que l'alginate de sodium ou de potassium, ou une résine, et par exemple une résine polyoxyéthylène. Le lysozyme est utilisé pur (lysozyme isoélectrique), ou sous forme de sel, et de préférence sous forme de chlorhydrate, ou, le cas échéant, sous forme de chlorure ou de carbonate de lysozyme. La glycérine est de préférence la glycérine pure (ou glycérol), mais on peut le cas échéant la remplacer par un de ses dérivés usuels. Le sucre est choisi de préférence parmi les monosaccharides tels que le glucose ou le fructose, les disaccharides tels que le saccharose, des. polysaccharides ou encore des dérivés, et notamment des dérivés aminés tels que la glucosamine, ou des dérivés alcoolisés tels que le sorbitol et le mannitol. Le sucre est utilisé isolément ou sous forme d'un mélange de plusieurs sucres. Dans la composition conforme à la présente invention, le lysozyme peut être présent à raison de 10 p g à 0,59, et de préférence 30 p 9 à 3mg par gramme de composition, tandis que le rapport en poids des autres composants est compris entre 5 et 30%, et de préférence entre 15 et 20S pour le sucre, ét entre 1 et 20%, et de préférence entre 2 et 10 pour la glycérine, le reste étant constitué par les plastifiants et excipients usuels tels que des alginates, des phosphates, des biopolymères, etc., et le cas échéant, d'autres principes actifs associés, tels que des vitamines, des anesthésiques locaux, des antibiotiques, des antifongiques, etc. Le pH de la composition est maintenu à une valeur comprise entre 4,5 et 7,5 par un tampon usuel, tel qu'un tampon phosphate. Les exemples donnés ci-après illustrent l'invention sans en limiter la portée. Dans ces exemples, les rapports, proportions et pourcentages sont indiqués en poids, sauf indication contraire. EXEMPLE 1 Dans une solution aqueuse de lOOml de tampon phosphate de pH égal à 6,2, on ajoute sous agitation û,lg de chlorhydrate de lysozyme. Dans cette solution, on ajoute sous agitation une solution de 1,49 de glycérine dans une quantité minimale d'alcool éthylique; on mélange soigneusement, puis on ajoute 49 d'alginate de sodium et 0,29 de p-hydroxybenzoate de méthyle. On obtient ainsi une composition stabilisée de lysozyme, sous forme de chlorhydrate, contenant de la glycérine. EXEMPLE 2 On procède comme indiqué dans l'exemple 1, mais on ajoute 109 de saccharose à la solution aqueuse tamponnée de chlorhydrate de lysozyme. On ajoute ensuite la solution de glycérine comme dans l'exemple 1. On obtient ainsi une solution de chlorhydrate de lysozyme stabilisée par addition de saccharose et de glycérine. EXEMPLE 3 En procèdant comme indiqué ci-dessus, mais en remplaçant le saccharose par un mélange de sorbitol et de saccharose, et en ajoutant de la vitamine A en meme temps que la glycérine, on obtient une composition à base de lysozyme, ayant la formulation suivante, utilisable comme pommade. Chlorhydrate de lysozyme 0,3 g Sorbitol 10,0 g Saccharose 10,0 g Glycérine 1,4 g Alginate de sodium 4,0 g Oxyde de zinc 2,0 g p-hydroxybenzoate de méthyle 0,2 g Vitamine A 20x106u.i. eau q.s.p. 100 9 EXEMPLE 4 En procèdant comme indiqué précédemment, on prépare une pate dentifrice ayant la composition ci-dessous: Chlorhydrate de lysozyme 25 mg Sorbitol 7,5 g Saccharose 7,5 g Glycérine 10,0 g Huile de paraffine 0,5 g Phosphate dicalcique dihydraté 38,0 g Carboxyméthylcellulose sodique 0,259 Alginate de sodium 1,759 Méthoxyde de sodium 0,1 g Eau q.s.p. 1009 EXEMPLE 5 On prépare une pâte dentifrice, en opérant comme indiqué ci-dessous, pour une quantité finale de pâte de 1009. On dissout dans 20ml d'eau désionisée, à température ambiante, 2,79 de sorbitol et O,3g de saccharinate de sodium, et on ajoute O,lg de p-hydroxybenzoate de méthyle et 0,lg de p-hydroxybenzoate de propyle. On ajoute, en maintenant la solution sous agitation, 29 de carboxyméthylcellulose sodique et on laisse reposer pendant la nuit. On verse ensuite une solution de 15ml d'eau désionisée contenant 7,79 de saccharose, 59 de sorbitol, 10,19 de glycérine, 40,59 de phosphate dicalcique dihydraté et 0,59 d'huile de paraffine, et on verse cette solution dans un mélange de 25mg de chlorhydrate de lysozyme, O,lg de saccharose et O,lg de glycérine dans lml d'eau désionisée. Ce mélange est versé lentement sous agitation à température ambiante. A ce mélange, on ajoute comme excipient 0,99 de lauryl sarcosinate de sodium ainsi que les composants aromatiques usuels. On mélange soigneusement en agitant pendant environ 30 minutes. Comme, indiqué ci-dessus, les compositions conformes à l'invention présentent une excellente stabilité, même en présence d'un liquide tel que l'eau ou l'éthanol qui réagissent avec le lysozyme et détruisent son activité ou de sels minéraux tels que le carbonate ou l'alginate de sodium qui inhibent l'activité du lysozyme par adsorption. Plus particulièrement, les compositions à base de lysozyme conformes à l'invention décrites ci-dessus restent stables pendant une durée d'environ 2 ans,-c'est-à-dire que l'activité du lysozyme est intégralement conservée pendant cette' période. L'activité diminue ensuite lentement et régulièrement et au bout de 3 ans on observe encore une activité enzymatique égale à environ la moitié de l'activité initiale. A titre de comparaison, les solutions usuelles de chlorhydrate de lysozyme, préparées en général extemporanément par dissolution dans une solution aqueuse de tampon phosphate de pH égal à 6,2, ont une stabilité limitée à quelques heures. Les compositions à base de lysozyme conformes à l'invention peuvent être utilisées plus particulièrement pour la préparation de pâtes dentifrices, de pommades pour le traitement de maladies vésiculeuses et bulleuses de la peau et des muqueuses, et de solutions pour bains de bouche. REVENDICATIONS 1. Procédé pour stabiliser le lysozyme dans une composition liquide ou semi-liquide, caractérisé en ce qu'on incorpore le lysozyme dans un sucre ou une glycérine préalablement dilué dans un solvant, en présence d'un ou plusieurs plastifiants non ioniques ou anioniques, on mélange, et on ajoute ensuite les excipients. 2. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'on dilue un sucre dans de l'eau, on ajoute un ou plusieurs plastifiants non ioniques ou anioniques, puis du lysozyme, et on verse de la glycérine en solution dans un alcool, et on incorpore le cas échéant les excipients. 3. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'on dilue le sucre dans de l'eau, on ajoute un ou plusieurs plastifiants non ioniques ou anioniques, et on incorpore ensuite la glycérine et le cas échéant une quantité additionnelle de sucre, puis on ajoute le lysozyme. 4. Procédé selon la revendication 3, caractérisé en ce que le lysozyme est ajouté sous forme de solution dans de l'eau désionisée contenant du sucre et de la glycérine. 5. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que le plastifiant est un alginate ou un biopolymère. 6. Composition à base de lysozyme utilisable en thérapeutique et en hygiène, caractérisée en ce quelle contient le lysozyme à l'état pur ou sous forme de sel, en combinaison avec un ou plusieurs sucres et/ou la glycérine ou un dérivé de glycérine, un ou plusieurs plastifiants non ioniques ou anioniques, et le cas échéant un ou plusieurs autres principes actifs et excipients. 7. Composition à base de lysozyme selon la revendication 6, caractérisée en ce qu'elle contient du lysozyme, un ou plusieurs sucres et de la glycérine. 8. Composition à base de lysozyme selon l'une quelconque des revendications 6 et 7, caractérisée en ce que le sucre est choisi parmi le glucose, le fructose, le saccharose, la glucosamime, le sorbitol et le mannitol. 9. Composition à base de lysozyme selon la revendication 7, caractérisée en ce qu'elle contient du lysozyme, de la glycérine, du saccharose et/ou du sorbitol. 10. Composition à base de lysozyme selon la'revendication 6, caractérisée en ce que le lysozyme est sous forme de chlorhydrate.