FR 2514350 A1 19830415 FR 8216894 A 19821008 La présente invention concerne de nouveaux N-/4-( 3-aminopropyl) aminobutyi 7-2-/W -guanidino(acide gras)amido 7-6thanamides substitués en position 2 et leurs sels, qui sont utiles comme substances carcino- statiques, sont représentés par la formule générale: H 2 NCNH(CH 2) -Y-CONHCHCONH(CH)4 NH(CH 2)3 NH (I) NH OR dans laquelle Y représente -CH 2-CH 2-, -CH=CH ou -H-CH 2-, R représente un atome d'hydrogène ou un OH radical alkyle ayant 1 à 4 atomes de carbone qui peut avoir un radical hydroxy comme substituant, ou un radical benzyle, et N est un nombre entier de I à 8, sous réserve que lorsque Y représente -CH-CH 2 et N est 4, i 2 OH R représente les radicaux autres que l'atome d'hydrogène. Au cours d'études systématiques de produits carcinostatiques, la demanderesse a découvert un nouvel antibiotique carcinostatique, le BMG 162-a F 2, qui a été appelé spergualin, dans un filtrat de culture d'une souche BMG 162-a F 2 (FERM P-5230; ATCC 31932) de Bacillus laterosporus appartenant au genre Bacillus /Journal of Antibiotics, Vol 34, p 1619 et p 1622 ( 1981)7 La structure chimique du spergualin est représentée par la formule: 191817 16 (S) 1413 1211 10 9 876 5 4 3 2 1 H NCNHCH Cli C C H CHCONHHCCONHCH 2 CH 2 CH 2 CH 2 NHCH CH 2 CH 2 1 2 22 2 1 ' -I O ' Ct HH 2 CH 2 CH 2 CH 2 NC CH 2 CH 2 N NH OH OH La configuration à la position 15 est S, tandis que celle à la position 11 n'a pas encore été déterminée / Journal of Antibiotics, Vol 34, 1622 ( 1981)7 Le composé répondant à cette formule est synthétisé par condensation de l'amide d'acide et de la glyoxylylspermidine Le composé épimère obtenu est dédoublé en (-)-spergualin naturel et en (+)spergualin non naturel / Journal of Antibiotics, Vol 34, 1625 ( 1981)7. La demanderesse a effectué une étude poussée de divers composés apparentés au spergualin L'invention repose sur la découverte selon laquelle les composés représentés par la formule générale (I) présentent une excellente activité carcinostatique et en particulier lorsque R est un radical autre que l'atome d'hydrogène, les composés ont également une excellente stabilité. Les composés de l'invention sont synthétisés comme décrit ci-dessous. Les composés de formule générale (I) dans laquelle R représente un atome d'hydrogène, sont produits par condensation d'un CU-guanidino-amide gras de formule générale: H 2 NNH (CH 2)n -YH (II), 2 l dans laquelle Y et N ont la même définition que ci- dessus, et du N-/4-( 3-aminopropyl)aminobuty 17-2,2-di- -hydroxyéthanamide de formule: HO > CHCONH(CH 2) 4 NH (CH 2) 3 NH 2 (III) HO Dans le cas o R de la formule générale (I) est un des radicaux autre que l'atome d'hydrogène, le présent composé est synthétisé par réaction du composé obtenu par la condensation ci-dessus ou du spergualin obtenu à partir du filtrat de culture microbienne, les radicaux amino et imino de ce composé ou du spergualin ayant été si nécessaire protégés, avec un mono ou un dialcool aliphatique de 1 à 4 atomes de carbone, une diazoparaffine de 1 à 4 atomes de carbone ou l'alcool benzylique, et élimination éventuelle des radicaux protecteurs des groupes amino et imino. 251435 O Les composés de l'invention sont utilisés de façon générale sous forme de sels d'addition avec des acides pharmacologiquemnt acceptables Comme exemples de sels d'addition avec des acides, on peut citer les sels formes avec des acides minéraux tels que l'acide chlorhydrique, l'acide sulfurique, l'acide phosphorique et l'acide borique et des acides organiques tels que l'acide acétique, l'acide citrique, l'acide tartrique et l'acide glutarique. Les composés de l'invention représentés par la formule générale: - 14 13 12 Il 10 9 8-5 4 3-1 H 2 'CNH (CH 2)n-Y-CONHCHCONH (CC 22) NH(CH 2) NH 2 NH OR (I) dans laquelle Y, R et N ont la définition ci-dessus, ont chacun un atome de carbone asymétrique en position 11 et par conséquent existent sous forme d'épimères relativement au carbone 11, c'est-à-dire sous forme de l'épimère lévogyre /appeld ci-après (-> 7 et sous forme de l'épimère dextrogyre / appelé ci-après (+)7 Sauf indication contraire, les présents composés sont un mélange (approximativement 1/1) d'une paire d'épimères / si nécessaire appelée (+)7 Lorsque Y est 14 -îH-CH 2-, le composé a également un atome de carbone OH asymétrique en position 15 et par conséquent il existe un épimère ayant la configuration S en position 15 et un autre épimère ayant la configuration R en position 15. Sauf indication contraire, les présents composés sont des mélanges (approximativement 1/1) de l'épimère (S) et de l'épimère (R). Les propriétés physico-chimiques et biologiques d'exemples typiques des composés de l'invention figurent ci-dessous. ( 1) Propriétés physico-chimiques. Les noms des composés typiques de l'invention figurent dans le tableau 1 Les formules moléculaires et les analyses élémentaires des chlorhydrates de ces composés sont résumées dans le tableau 2 et les spectres infrarouges (pastille de K Br) et les spectres de résonance magnétique nucléaire protonique (dans le deutérométhanol avec le tétraméthylsilane=TMS comme étalon interne) figurent dans le tableau 3 Les pouvoirs rotatoires spécifiques des isomères optiques de plusieurs composés de l'invention figurent dans le tableau 4. La stabilité chimique des présents composés a été évaluée par détermination de leur conservation (%) après chauffage à 60 C pendant 4 heures Le tableau 5 montre les résultats des essais avec du spergualin comme référence La conservation a été déterminée par chromatographie liquide haute per frmance (CLHP) La colonne était garnie de Nucleosi lq 5 C 18 Le solvant utilisé pour le spergualin était un mélange ( 6/94) acétonitrile-pentanesulfonate de sodium 0,01 M + Na 2 HPO 4 0,01 M (p H 3), tandis que pour les composés de l'inven- tion c'était un mélange acétonitrile-pentanesulfonate de sodium 0,005 M + Na 2 HPO 4 0,01 M (p H 3) Le rapport de mélange dans ce dernier cas a varié pour chaque composé particulier Par exemple un rapport de mélange de 10/90 a été utilisé pour le composé N 9 et un rapport de 7/93 pour le composé N 22. Tableau I H 2 NCNH(CH 2) -Y-CONHCHCONH (CH 2 > 4 NH (CH 2)3 NH 2 NH OR composé e y R Nom du co Inposé No. i i CH 2 CH 2 H N l 4 1 1 CHCH 2 H amido)-2-hydroxydthanamide 2 2 oq N l 4 ( 3-amninopropyl) aminobutyll -2 ( 5-guanidinopentan-' amido) -2-hydroxyéthanaumide 3 3 N-l 4- ami do> -2-hydroxyéthanamide 4 4 fl N-l 4-( 3-aminopropyl)aminobutyll-2-( 7-guanidinoheptan- amido) -2-hydroxyéthanaimide 5 N-l 4-( 3-aminopropyl)aminobutyll-2-( 8guanidinooctan- amuido) -2-hydroxyéthanamide 6 6 N l 4( 3 -aminopropyl) ami inobutyll,-2( 9-guanidinonononan- amido) -2-hydroxyethanamide N l 4 ( 3-aminoprop 7 l,) aminobutyll -2 7 i CH 3 2-metho Dxyëthanamide 8 3 N l 4 amido) -2-iméthoxyethanantide Ln I MQ (?I-11 - w ui C> Tableau I (suite) CH 2 CH 2 CH 3 N-{l 4 ( 3-aminopropyl) aminobutyll -2 ( 7-guanidinoheptan- amido) -2-méthoxyéthanamide N l 4 amido)-2-méthoxydithanamide il6 Nl 4 il6 amido)-2-méthoxyéthanamide 12 4 CCH N l 4 H 3 amido) -2-éthoxyéthanamide 13 4 au CH CH N l 4 ( 3-aminopropyl) aminobutyll -2 13 4 C 2 CH 2 amido)-2-butoxyéthanamide 14 4 CH CH OH N l 4 ( 3-amninopropyl) amirnobutyll -2 ( 7-guanidinoheptan- 14 4 CH 2 CH 2 O amido)-2-( 2-hydroxy)éthoxyéthanamide 4 CH -C H N l 4 ( 3-amiinopropyl) aminobuty 13-2 154 CH 2-06 5amido)-2-benzyloxyethanamide 16 4 CH=CH H N l 4 heptènamido)-2-hydroxyéthanamide Nl 4( 3-aminopropyl) aminobutyll-2 oc tenamido) -2-hydroxyéthanamnide N l 4 18 6 i nonènamido) -2-hydroxyéthanamide a' m t A,. Lq Ln c> Tableau I ( suite) CH=CH CH 3 N l 4 ( 3-aminopropyl) aminobutyll -2 ( 7-guanidino-2- heptènamido) -2-méthoxyéthanamnide CHCH 2 N-l 4 ( 3-aminopropyl>)aminobutylj-2 5 j H octanamidol-2-hydroxyéthanamide OH 21 6 CHCH 2 N l 4( 3-aminopropyl)aminobutyll-2 ( 9-guanidino-3- 21 6 1 N hydroxynonanamido) -2-hydroxyéthanamide (S) 22 * 4 CHCH 2 CH N l 4( 3-aminopropyl) aminobutyll-2( 7-guanidino-3- i 3 hydroxyheptanamido) -2-méthoxyethanamide OH 23 * 4 CCH N l 4( 3-amninopropyl) aminobutyll-2 H 2 CH 3 hydroxyheptanamido)-2-éthoxyeéthanamide 24 * *, CH 2 C N l 4( 3-aminopropyl>)aminobutyll -2( 7-guarnidino-3- 24 * 4 CH CH 3 hydroxyheptanamido) -2-butoxyethanamide * 4 CH CH OH N l 4 ( 3-aminopropyl) aminobutyli -2 * 4 CH 2 C 2 H hydroxyheptanamido) -2 26 * 4 CH C N-l 4-( 3-aminopropyl)aminobutyll2-( 7-guan idino-3-. 26 5 hydroxyheptan amido) -2-benzyloxyéthanàmide Notàk: * Les composés de formule générale(l)dans laquelle Y représente (S)C j et 4 e -CCH 2,net 4 e R est un radical autre que l'atone d'hydrogène sont appelés 2 OH ci-après pour sin Dlifier " 11-0- (nom de R) -spergualin". -J vi. 1-1 'l oz 80,18 T Ts 1 8 OP ag Anc Li E E L 6 ú SI LL " 6 T E z 1 8-1 úVIS 6 T 1 ot,agin DM O H z/ú-TDHú N D 6 TTIOZ st, 1 SI T E:c 8 07,'6 ú E E L LE: LI 0 ú"OZ TL" 8 T LZ'8 16,18 ú O Il Z/E-TDHú O N il O 8 EE"Tz 9 v f, 6 I oi'8 if," g E 99 Ano-Ti L úú SI ç t, Il T 2:LL 161 ú 6 'l úú 9 E: aglno M O H Z/E-TDHú O N Fi D L ET,16 T 99 "LT 6 L 8 ZE: Tt, aq Ano-j z ú L IP 61 LZ 4 6 T 9 L'LT S '18 Pú Tt, 991 mm O H Z/ú-TDHú O M H D 9 TS'6 T 96 "LT L 48 U'O-V ag Ano-l z E L 6 ú SI LL" 6 T úZ" 8 T úP"S 6 T&OP 891 mm O H Z/Z-TDHE O N H D 9 8 TIOZ L-9 '81 zt, 'l 8 OT" 6 ú w Ano 2 l z ú L LE LI 0 ú 110 Z I Le 8 l LZ'8 L 6 '8 ú 99 Tn DTVD O H Z/t-TZ)HE O N H O p L 9 "OZ 8 T 6 T qú"S ú 8 "Lú ag Anaxi 98,10 Z úZ" 61 OI Il 8 69 'Lú ag In DM OZH Z/E-TDHE-E:OLNSEH 9 TD lc Oú,TZ 89,16 T SOI 8 LZI 9 E ag Ano-u z E L úE: SI SPITZ LL" 6 T ú 6 'L u ', g E a 9 im Te D O H Z/E-TDHú O N il D E 96 "TZ TZ 40 Z L 8 'L Z 6 &t,ú q-q Ano j z L U T Lo'lzz su'oz PL I L 066 t,ú O H Z/E-TDHE O N H D T ID N H D as A Teu V ea Tv Tnogloiu a Tnu Lioj psodm OD Z Inv O Tqt'J, CD uî m, - r t- t A cm CD IL 61 Tres T 98 L 60 4 OP G 9 Ano-U z L LE 8 T GS 6-1 GZ c 81 60 8 v E, ot, e 9 TV-oll D O H Z/E 10 Hú O N H D 6 T oz 6 I ú 6 'L-C LO" 8 9 PT P E L 6 E 61 PE 4 6-1 ES'LT çz"g 6 P, TV O H Z/E TDHú O N H D 8 T 691,61 gz 15 SI E E 8 E 9 O f, L L CE 8 T 58 '61 67 & 8 T 6 o e pú OP O H Z/C TDHE O N H D L T LO'OZ O " 61 zo a 0-116 ú z L SE LT 8 E ioz 6 L"ST WL Z:T ', GE O H z/ú TDHú O N H D 9 T ZT 'l LT 9 L " SI oz 8 úO'LP OZH Z/E-TDHú-ú O LN EP HTZ D SI ZE'Ll L 6 'SI t'O 8 P 6 " 9 t 8968 T Tú*LT 6 ú" 8 LO'OP E P L TV 6 T ú L 81 9 z 4 LT PE:, 8 81 lop a 9 Tn Dm O H O N H D PT ú 1, 8 T 8 L 6 9 t P 066 -19 E P 'Ig Ano-u A Z/ú-'TDHúú O L NS PH Tz D E: T PE 8 T 06 " 9 T 98 " 8 8 P úP 99 Tr OTID IV 6 T 6 S"LT SL 8 P P IP z ú L Tt, 61 LZ& 6 T 9 L " LI 8 S,8 Pú 'Ip agin Dlla O H Z/E-TDHú O N H D ZT OG,18 T úú 6 LT Z 6 "S Ts"z P ag Ano-il z ú L CP oz 6 L d 8 TZúILT úL"B PP'?P -;D 9 Tn O Te D O H Z/E-TZ)Hú O N H TT tu m SI " 61 L Z " 61 Z 9 'e Ll 9 L 6 LT za r 8 8 SI& 8 apmo-u -91 rom 6 ú "'IV PE I TV 0 z H Z/ú-TDHú E O LN Tt,H 6 TD (aq-pns) Z r,ee qel g T 41 t, 9 9 T 6 E ú 6 _ LL'St, O E Hz/c TDHE P O L N ú i>H il z D 9 E 88 91 S ST P 8 "L SC 9 a 9 Tm Tl D OT 8 T Et, 9-1 9 z 8 Si'6 E api%-nolrl J H Z/E_TDHE úC)LN Tt, 6 T TZ 8 T 6 L 9-1 TT 48 8016 E H D SE t L'LT TE 9 T 06 '8 Lú'Z O z H Z/ETDHú t,0 L N 9 V H T z D VIE t,8 'LT St, 9 T Z 9 18 Zú 1 Et, SE 8 T LT LT SL18 ú 71 1 O t,Gq Ano-j z V L Tt, 6 T EL 8 T 9 t"LT VE 18 8 T'OV 991 n OM O H Z/E: TDHú O M H D ú z Si' 6 T 6 P"Ll os 'l 8 úO c 6 E aed Ano-i z p L 6 ú 8 T OZ" 61 OL'Ll 6-1 '8 ú O '6 ú e 9 Tm Tlj O H Z/E-TDIIú O N H D zz q S 1 s T SELT 09,18 T t, de O a 9 AM-41 z f,L Tt, 6 T EL 'l 8-1 9 Z'LT' Pú 1, 8 8-14 oi,;s 9 Tm Ttra O H Z/E-TDHú N H D Tz CD cm M -r Ln c 14-à D 9 Ano-Ti 991 mll D -Et, 1, oz oz Il 61 t'q 'ILT OL 'LT go 18 6 T " 8 LL " 8 E úO' 6 ú 0 EH Z/E-TDHE t,0 LN 6 EH 8 T O (aq Tns) z N 72 a-Equ-1 TABLEAU 3 - Composé Spectre d'absorption Spectre de RMN protonique No infrarouge (c IT 1) __ _ _ __ _ _ _ __ _ _ _ __ _ _ _ __ _ _ _ 1 3320, 2950, 1655, 1525, 1460, 1,4-2,4 (CH 2 x 4), 2,40 (CH 2),v 1365, 1260, 1160, 1115, 1070 2,93,4 (NCH x 5), 5,55 (CH> 2 3400, 2950, 1660, 1530, 1465, 1,20 (Hx),-, C 2 x) 2 1170, 1120, 1080, 1020 2,9-3 t 4 (NCH 2 x 5), 5,53 (CH) 3270, 2950, 1560, 1530, 1460, 1,4-2,0 (CH 2 x 5), 2,0-2,5 (CH 2 x 2), 3 1370, 1240, 1165, 1120, 1080 2,9-3 4 (NCH 2 x 5), 5,52 , 5,52 (CH) 6 3370, 2925, 1655, 1520, 1460, 1,20 (Hx>,-, C 2 x 2 6 1155, 1115, 1080 2,9-3,4 (NCH 2 x 5), 5,50 (CH) 3400, 2930, 1650, 1520, 1460, 1, 4-2,4 (CH 2 x 4), 21,40 (CH 2), 7 1360, 1190, 1160, 1090 2 r 8-3,4 (NCH 2 x 5), 3,38 ) Ln u Jb Tà'bleau 3 (suite) 3420, 2940, 1650, 1520, 1355, 1190, 1160, 1090 1460, 1,4-2, O 2,9-3, 4 (CH 2 x 5), 2,0-2,5 (CH 2 x 2), (NCH 2 x 5), 3,38 (OCH 3), 5,29 (CH) 9 3420, 2950, 1650, 1520, 1460, 22, (C 2 x)2,02, ( 2 x 1360, 1190, 1160, 1090 219-3 ? 4 (NCH 2 x 5 >, 3,37 (OCH 3)JI 5,26 (CH) 3400, 2925, 1650, 1520, 1455, 1,2-210 (CH 2,x 7), 270-275 (CH 2 x 2), 1355, 1250, 1190, 1160, 1090 219-314 (NCH 2 x 5), 3,37 (OCH 3), 5,28 (CH) 3400, 2930, 1655, 1520, 1460, 1 ? 2-2,0 (CH 2 x 8), 2,0-2,5 (CH 2 x 2), il 1360, 1190, 1160, 1090 2,9-3,4 (NCH 2 x 5), 3,37 (OCH 3), 5,29 '(CH) 1,23 (CH 3), 1,3-2,0 (C 12 x 6), 12 3400, 2930, 1655, 1520, 1460, 2,0-215 (CH x 2), 2,9-3 4 (NCH x 5 > 1360, 1160, 10852 2 3,64 (CH 2), 5,42 (CH) 0,92 (CH 3), 112-2,0 (CH 2 x 8), 13 3380, 2925, 1655, 1520, 1455, 210-2 t 5 (CH x 2 >, 2,9-3,4 (NCH x 5), 1360, 1155, 10802 e 2 3,61 (CH 2), 5,41 (CH) 14 3370, 2930, 1655, 1520, 1455, 1,-, (C 26) 2,-7 (C 2 x 14 1355, 1165, 1110, 1060 2,9-3,4 (NCH 2 x 5), 3,70 (CH 2 x 2), 5,45 (CH) w L-n 3340, 2930, 1655, 1160, 1065, 1020, Tableau 1520, 1450, 740, 695 3 (suite) - 172-2,0 (CH 2 x 6), 2,0-2,5 (CH 2 x 2), 2,9-3,4 (NCH 2 x 5), 4,64 (CH 2), 5,51 (CH), 7,32 (C 6 H 5) 1,4-2 t 5 (CH 2 x 6), 2,9-3,4 (NCH 2 x 5), 16 3350, 2930, 1660, 1520, 1460, 1425 CH 2 x 6)29-34 (NCH 2 x 5) 1355 5,56 (CH), 6,01 (CH), 6,81 (CH) 3400, 2925, 1660, 1530, 1460, 1,4-2,5 (CH 2 x 7), 2,9-3,4 (NCH 2 x 5), 17 1360, 1165, 1115, 1080 5,60 (CH), 6,02 (CH), 6,85 (CH) 3400, 2940, 2850, 1660, 1530, 172-25 (CH 2 x 8), 2 p 9-3,4 (NCH 2 x 5), 18 1460, 1360, 1225, 1115, 1080 5,65 (CH), 6,04 (CH), 6,88 (CH) 19 3400, 2940, 1665, 1520, 1455, ly 4-2,5 (CH 2 x 6), 2,9-3,4 (NCH 2 x 5), 1350, 1195, 1095, 985 314 (OCH 3), 5 T 39 (CH), 6,09 (CH), 6,90 (CH) 1 4 3 (H x), 2 38 (CH 9) 3450, 2925, 1650, 1 '525, 1460, 1,-, 2 2,x 7 1160, 1110, 1075 2 ? 9-3,4 (NCH 2 x 5), 4,0 (CH), 5,L 2 (CH) 21 3400, 2950, 1655, 1520, 1460, 1,2-2,4 (CH 2 x 8), 2441 (CH 2), 1165, 1110, 1075 2 9-3 4 (NCH 2 x 5), 4,0 (CH), 5,58 (CH) y. w Ln Lu oi SH 9 D) 7,ú,L "(HD) Ostç 969 'Ot IL 'OZOT '59 OT '09 TT #09 ET t, 9 t, (FID) O O 1 t, (SXIH Diq) p E-61 Z S t, N 'JOZST #999 T '0 ú 6 Z 'OCúú 9 z ( 7 HD) 9 t, 11 D) 'z-llz (GXZHD) 61 T-0-1 (HD) t,P'5 (HD) ZO'P "(Z:x 7 HD) OL'C "(SXZHDN) t,"E-6 'Z 090 T 'STTI 199 TT sz Ozsi Issgi 10 ú 6 z ISLEú (HD) Tt, I 9 ' (HD) TO 1 v "(ZHD) 'l 9 "C '(SXZHDN) V'ú-64 Z #(ZHD) úPZ OZOT 'OUT '9911 'OLET Pz z E Isst T 'OZST '999 T 'SZ 6 Z '08 CC HD) 6 VZ (Lx HD) 6 'T-Z'T '( HZ" Z 6 'O (HD) COS "(ZHD) ZO&P "(ZHD) P 94 E '(SXZHZ)N) tl'IE-6 &Z I(úHD) 90 Z OZOT '980 T I 09 TT '09 ET EZ I(z HD) 9 T'Z J(GXEIID) 6 'T-P'-l "(úHD) úZ'I '109 t'l 'OZST '999 T ' Z 6 Z #O EÈ CD in m -r VI' Ln w le (HD) 9 ú' (HD) P O i #'(úHD) 10 ú "(gx 7 HDN) "ú-6 'Z j (E HD) 60 Z ' ( 9 HD) 6 T 1 E 1 (sié 2 HD) 6 4 T-P, T OZOT '06 OT '09 TT 106 TT '09 CT 09 Pl 'OEST '999 T 'OC 69 'Oeúú (al Tns) E n-ea Tq L-1 - Tableau 4 composé Psto 5 Pstn 1 Pouvoir rotatoire spécifique No Psto 15 Pstoi 125 1 D ( ) 0,00(Cl, H 20 > 9 ( 30,4 (Cl, H 20) (+) + 29,50(Cl, H 20) ( ) -1,0 e(Cl, H 0) 22 (S) ( 27,3 o (Cl, H 20) (+) + 25,50(Cl, H 20) ( ) 0, 2 o(Cl, H 20) 23 (S) ( 25 00 CH O + 05 (Cl, H 20) 24 242,0(Cl, H 20) + 23,50 (Cl, H 20) (S) -22,90 (Cl, H O) (+ + 15,850 (Ci, H 120) F-' ru Ln -t- L 4 Ln C> CD i Ln M 1-r v- tn tj e D 1-1 (OEIL ITD) o'lz+ M (OEH ITD) o Edrtlz ( 9) 9 z (OEH 'ID) TE (:F) (Gq Tns) t, neelq V 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 9 69,3 89,3 100 100 100 100 100 97,5 9719 13 72,4 go'l 100 100 100 98,0 96,0 14 71,8 90,6 100 100 100 97,5 97,3 76,5 91 Y 4 100 100 100 99,0 96 2 22 79,7 100 100 100 100 100 971)6 95 7 79,7 100 100 100 100 100 100 95,6 24 76,3 100 100 100 100 100 97,1 94,8 68,9 100 100 100 100 100 97;,7 95,5 26 77 ? 2 100 100 100 100 1100 95,9 94,5 spergualin 88,1 8 seo 87 8 46,5 12,6 6,1 O - Tableau 5 Conservation M F- -J rl%> 1-9 -Pl' ui Ln c> ( 2) Propriétés biologiques. Tous les composés de l'invention possèdent une activité carcinostatique nette et un effet puissant d'inhibition de la multiplication des cellules cancéreuses in vitro et un effet de prolongation de la vie des souris portant des cellules cancéreuses implantées comme indiqué ci-dessous. I Activité d'inhibition de la multiplication in vitro des cellules cancéreuses. A des souris DBA/2 on implante 10 cellules de la leucémie L-1210 de la souris On recueille aseptiquement les ascites des souris après 4 jours d'alimentation et on les lave trois fois avec du sérum physiologique pour obtenir des cellules L-1210, que l'on met en suspension dans du milieu de culture RPMI 1640 L G E Moore, Journal of the American Medical Association, Vol 199, 519 ( 1967); H J Morton, In Vitro, Vol 6, 89 ( 1970) 7 auquel on ajoute 10 % de sérum de veau foetal et 5/4 m de 2mercaptoéthanol, et on dilue la suspension obtenue à 5 x 104 cellules L1210/0,9 ml On maintient dans un incubateur à anhydride carbonique à 370 C, une microplaque portant 0,9 ml de la suspension cellulaire et 0,1 ml du milieu de culture contenant l'échantillon à étudier. Après 48 heures de culture, on mesure le nombre des cellules avec un compteur Coulter (Coulter Electronics, Inc U S A) pour obtenir l'inhibition de la multipli- cation (%) = ( 1-T/C) x 100 =Cci (nombre des cellules cultivées dans le milieu contenant l'échantillon)/(nombre des cellules cultivées dans le milieu témoin)7 x 100. On calcule la concentration inhibant 50 % de la multi- plication à partir des valeurs de l'inhibition de la multiplication à diverses concentrations de l'échantillon. Les résultats des essais de composés typiques de l'invention en ce qui concerne l'inhibition de la nul- tiplication des cellules L-1210 figurent dans le tableau 6. Tableau 6 - Inhibition de la multiplication %)g( 1-T/c) x 100 (bncentration composé inhibitrice à No Concentration du composé étudié t/g/m 1) 50 % 1125 215 5 10 20 40 80 160 Lg/Ml) 1 52,2 89,3 101 100 2,4 2 9,6 30,5 4619 69,5 77,6 79,6 7916 5,0 o 3 20,6 36,7 64,2 81 V 6 86,7 3,7 4 20 ? 0 27,5 29,9 58 f 4 75,5 78,7 8,1 24,9 29,11 40,0 5412 66,0 88,5 96,8 18 6 38, O 40,-3 45,5 50,3 57,5 8,0 7 38,,7 80,7 98,5 99,8 99,9 99,3 1,5 8 33,2 38,1 46,8 53,5 6613 88,2 28 9 35,5 4519 62,3 78,1 90,9 96,0 12 19,9 28,5 36,5 52,4 62,4 79,5 39 il 3510 52,2 59 t 4 71,8 77,9 10 12 j 21,5 31,1 38,4 47,3 58,6 73,5 -21 1 O P.) Ln -P, LY Ln C> Tableau 6 (suite) - 17, O 21, 3 24,0 , 7 72,5 14 __________I 22,3 24,6 29 t 9 42,7 58 F 6 -52 ' 27,1 39,0 71,0 94,5 97,7 100 3,1 16 22,6 31,1 32 5 56,3 17 17 2,1 4,5 13,3 16 t 5 33,7 52 b 53 70 18 15,7 20,9 29,5 32,3 ' 47,8 90 19 29,9 32,2 46,4 56,4 75,6 85,4 93 1 6,3 17,2 20,1 28,I 9 30,7 45,7 27 21 14,6 21,5 29,7 37,5 51,6 84,0 94,5 18 22 60)8 82,6 94,5 96,9 98,3 1,8 23 58,5 85,5 93,0 96,1 96 ? 4 2,2 24 47,3 75,6 89,5 95,0 O 97 r 2 2,6 9 0 20,0 42,0 63,5 74,7 7 2 26 54,2 79,0 90,2 96,6 97,3 2,2 "J o 1 %> Ln 1 v Pl II Effet thérapeutique sur le cancer implanté chez les souris. On inocule par voie intrapéritonéale à des souris mâles de souche BDF (âgées de 5 semaines) 105 cellules de la leucémie L-1210 de la souris et on leur administre par voie intrapéritonéale une fois par jour un composé à étudier dissous dans du sérum physiologique pendant 6 jours consécutifs à partir du jour de l'inoculation On observe les souris pendant 30 jours d'élevage pour déterminer le taux de prolongation de la période de survie = 100 x T/C= 100 x (jours moyens de survie du groupe traité)/(jours moyens de survie du groupe témoin) L'effet thérapeutique de composés typiques de l'invention sur la leucémie L-1210 de la souris figure dans le tableau 7. TABLEAU 7 Com Posologie Prolongation Nombre de souris pose (mg/kg/ jour de la période de survivant 30 jours No survie (e) T/C x 100 O 0/4 336 0/4 12,5 > 357 2/4 6,25 > 369 1/4 4 3,13 > 364 2/4 1,56 > 429 4/4 0,78 > 429 4/4 0,39 > 390 3/4 0,20 197 0/4 O 0/4 *306 0/4 12,5 181 0/4 6,25 125 0/4 3,13 118 0/4 1,56 104 0/4 C) F-à tj Ln F-J W Lri W t%) Lri W (il I-àwa Nj Ln(D CD(DC)OF-wow Ln C)C) CDF-gwataulc) CDCDCDF Jwati(Ji CD W -li ui k-4 W (il Lil F-Jui W W ui F1ul t U W -J ui I-J tj uiW W - i Ln 1-j N) 01 CD W 00 m W Ln 0) W (i CD (D t D W O % W ui to 00 O % W tn CD %D 00 O '% W Ln v v v v v v v v v v v v v v v v v v v v v F-à F-J W N) W W W Fi I-J Fà F-J I-J W W W b> W W W e 64 ee W W e W W > é> CD d CD CD vi "O ui C> CD CD r%) K) > -3 ui Fâ W W -J C> i-J tl) tl) tj (n oa fli "O 00 " bj W C> O -4 W4 a a C> CD -4 % O O O 64 F-4 O F-à W %O W CD aeW D W O % W to a CD OCDCDCDWWWCDC) C>C) CDCDC>CD a O Wt)WWF-K)CD r%) VI 4- Lq tn C> i r%) ti p. e cn bi l+ cn Ni Co ON F to F Ln Fi r Q Ln Ni hi ui K) Ln F-4 W a% K) Ln C> ooa Fwaw Lqo vi F r) Ln Ln F hi ui N) W - 1 Ln l N) ui W W -4 ui F-J t) Ln -J (n 1-4 tu Ulj fA F"Ul w Ln O % W Ln C> W Co O % (,j Ln O %O CO O % W ui C) C> 10 00 ON W LnCD M (') (n v v v v v v v v v v v v v v v v v " brà é> 4 1 à F" W W b> -3 %O CD C> W I-J M W CO F-à O CD O FI W m CD tj CD Q O % (A N) W cn W Ul O t,) W Ln W (n ui w -JC>CDWW -JWWCDb> i O C) CD Jàte >CD t D CDO -4 ea F W > OID C% O a to W W C> e O % O C)CD 6 >UIOO C>C> OOCDOOOC> OCDCDNJWW"o Ooc>owaàr,>CD C>C>bi"toc>c) Ln ui Ln ul uio D oo co co co coeee b> e dà, e- -1 CD w 9 % 3 Ln -P- Lq VI C> '14350 T A BL EAU 7 (Suite) Posologie (mg/kg/jour 12, 5 6, 25 3, 13 I Z ' 6, 25 Prolonga- tion de la période de survie (%), T/C x 100 i 119 > 429 Nombre de souris survivant 30 jours 0/4 0/4 0/4 0/4 4/4 0/4 0/4 0/4 Carposé No III Toxicité Tous les composés de l'invention présentent une toxicité relativement faible et sont caractérisés par une faible toxicité cumulée après administration continue Le tableau 8 montre les doses létales médianes (DL 50) de composés typiques de l'invention chez la souris après administration intrapéritonéale unique, ainsi que les doses maximales tolérées exprimées par la dose totale correspondant à l'administration intrapéritonéale à la souris d'une quantité déterminée par unité de poids corporel, une fois par jour pendant six jours consécutifs. T A B L E A U 8 Composé N O DL 50 * Dose maximale tolérée** -(mg/kg) (mg/kg) ____________ ____ ___ ____ _ _ ____ ___ ____ 1 504 _____________ J 5-0 50 ____ 50 _ 12,5 25-_ 50 _ 12,5 25 ____ 12,5 25 50 12,5 -25 ______________- 300 _ _ 10 12,5 25 75 12,5 25 754 12 12,5 25 75 ______ 14 25 50 150 12,5 25 75 16 25 50 1504 17 12,5 25 754 ______ 18 6,25 12,5 37,5 __________ 19 12,5 25 75 ______ 20 50 _________ 300 _________ 21 25 50 150 1722 25 50 150 23 254 1504 24 504 3004 18 6,25 12,50 37,0054 1926 12,5 25 754 50 21 25 50 150 22 25 50 150 23 25 / 150 Z. 24 5 O-, 300 4 50 26 12,5 25 75 _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ Nota: * ** Dose létale médiane pour une administration unique. Valeur maximale de la dose totale ne provoquant pas la mort lorsqu'une quantité déterminée par unité de poids corporel est administrée à la souris une fois par jour pendant six jours consécutifs. Comme il ressort de la description précédente, les composés de l'invention représentés par la formule (I) sont utiles comme carcinostatiques Tous les composés individuels précédemment indiqués présentent une excellente activité d'inhibition de la multipli- cation des cellules de la leucémie L-1210 de la souris. Parmi ces composés, les composés o R représente un atome d'hydrogène, un radical alkyle ayant 1 à 4 atomes de carbone pouvant avoir un' radical hydroxy comme substituant, ou un radical benzyle et N est un nombre entier de 1 à 6, sous réserve que lorsque Y représente -CH-CH - OH R représente les radicaux autres que l'atome d'hydrogène, ont une activité très élevée De plus un excellent effet thérapeutique sur les souris portant un cancer implanté a été manifesté par les composés o R repré- sente un atome d'hydrogène ou un radical alkyle ayant de 1 à 2 et de préférence 1 atome de carbone, pouvant avoir des radicaux hydroxy comme substituants, et n'est 4 ou 6 Parmi ces composés, ceux dans lesquels R représente un radical méthyle (un radical alkyle ayant un atome de carbone) sont également excellents par leur stabilité chimique et les composés N 09,19 et 22 sont particulièrement souhaitables. Le procédé de synthèse des composés de l'invention est décrit ci-dessous. Bien qu'on puisse l'effectuer dans des solvants organiques, la condensation d'un tu-guanidino-amide gras de formule (II) et d'un dihydroxyéthanamide de formule (III) selon l'invention est généralement effectuée en présence de petites quantités d'eau par suite de la solubilité des deux composés qui sont généralement traités sous forme de sels d'addition avec des acides. Lorsqu'on doit utiliser des solvants organiques, l'acétone et le diméthylformamide conviennent, mais on effectue généralement la condensation en présence de petites quantités d'eau sans utiliser 'de solvant organique. La quantité d'eau à utiliser doit être la plus faible possible dissolvant les deux composés En pratique on l'utilise dans la gamme de 2 à 60 et depréférence de 4 à 40 moles par mole du guanidino-amide gras de formule (II) Comme on utilise généralement ces composés de formules (II) et (III) sous forme de sels d'addition avec des acides, il n'est pas nécessaire d'ajouter un acide à la solution pour la réaction Cependant, il est préfé- rable pour le rendement du condensat d'utiliser un catalyseur acide Des catalyseurs acides appropriés comprennent des acides minéraux tels que l'acide chlorhydrique, l'acide sulfurique, l'acide phosphorique et l'acide borique et des acides organiques tels que l'acide acétique, l'acide citrique, l'acide tartrique, l'acide succinique, l'acide glutarique et l'acide adipique On préfère un acide dicarboxylique tels que l'acide glutarique La quantité d'acide à utiliser est de O à 10 et de préférence de 0,5 à 4 moles par mole du guanidino-amide gras de formule (II) La tempéra- ture de réaction est de 0 à 100 'C, généralement de la température ordinaire à 80 'C, de préférence de 40 'C à 70 'C. La durée de réaction varie avec la température de réaction. On préfère une durée de réaction de 1 à 2 jours pour accroître le rendement Bien que le rapport du guanidino- amide gras de formule (II) au dihydroxyéthanamide de formule (III) n'ait pas de limitation particulière, en pratique générale on utilise de 0,5 à 4 et de préférence de 0,8 à 1,5 mole du second par mole du premier Le composé obtenu est un N-/4-( 3-aminopropyl) aminobuty 17-2- Zw -guanidino(acide gras) amido 7-2-hydroxyéthanamide représenté par la formule générale: 131 11 10 9 387 5 5 4 3 2 1 H 2 NCNH(CH 2) n-Y-C ON 2 CC 2 NC CCCHCCHC2 2 H 2 il 1 NH OH (Ia) dans laquelle Y et N ont la même définition que ci- dessus, qui est le composé de formule (I) dans laquelle R représente un atome d'hydrogène. Les composés de formule (I) dans laquelle R représente les radicaux autres que l'atome d'hydrogène, sont obtenus par alkylation du radical hydroxy en position 11 du composé de formule (Ia) avec l'alcool aliphatique, la diazoparaffine ou l'alcool benzylique précités Le composé obtenu par la condensation ci- dessus ou le spergualin obtenu à partir du bouillon de culture microbienne peuvent tous deux être utilisés comme composés de formule (Ia) Le composé obtenu par l'alky- lation est un N-/4-( 3-aminopropyl)aminobutyi 7-2-/ W-gua- nidino(acide gras)amido 7-2-alcoxyéthanamide représenté par la formule générale: H 2 NCNH(CH 2) -Y-CONHCHCONH(CH 2)4 NH(CH 2)3 NH (Ib) Il 1 NH OR' dans laquelle Y et N ont la même définition que ci-dessus et R' représente un radical alkyle de 1 à 4 atomes de carbone qui peut avoir un radical hydroxy comme substi- tuant, ou un radical benzyle On effectue l'alkylation de la façon suivante. On effectue généralement la réaction entre un N-/4-( 3-aminopropyl)aminobuty 17-2-/Iu-guanidino(acide gras) amido 7-2-hydroxyéthanamide de formule (Ia) et l'alcool en présence d'un catalyseur acide Avant la réaction, les radicaux guanidino et amino de l'hydroxyéthanamide de formule (Ia) ne sont pas nécessairement protégés mais peuvent être protégés L'alcool est représenté par la formule R'-OH (IV) dans laqqelle RI représente un radical alkyle de t à 4 atomes de carbone qui peut avoir un radical hydroxy comme substituant, ou un radical benzyle Ces alcools comprennent des alcools inférieurs tels que le méthanol, l'éthanol, le propanol et le butanol, des glycols tels que l'éthylèneglycol et le propyleneglycol, et l'alcool benzylique On effectue de préférence la réaction dans l'alcool de formule (IV) ci- dessus, bien qu'on puisse utiliser un solvant inerte Des cata- lyseurs acides appropriés comprennent des acides minéraux tels que l'acide chlorhydrique et l'acide sulfurique, des acides organiques tels que l'acide acétique et l'acide p-toluènesulfonique et des résines échangeuses cationiques La température de réaction est comprise dans la gamme de O à 1000 C, généralement entre la température ordinaire et 80 C, la température ordinaire étant particulièrement préférée La durée de réaction varie avec la température de réaction et est comprise dans la gamme de 1 heure à 10 jours, de préférence de 1 à 2 jours. Lorsque la solubilité d'un hydroxyéthanamide de formule (Ia) dans un alcool de formule (IV) est faible, la protection des radicaux amino et imino de l'hydroxyétha- namide avec des radicaux protecteurs est avantageuse pour accroître le rendement Des radicaux protecteurs appropriés peuvent être choisis en se référant à la littérature (J F. W Mcomie, Ed, "Protective Groups in Organic Chemistry", Plenum Press N Y 1973) Les radicaux protecteurs du radical amino qui sont généralement utilisés dans la synthèse des peptides sont utiles Des exemples en sont les radicaux protecteurs monovalents tels que benzyloxy- carbonyle, p-méthoxybenzyloxycarbonyle, p-nitrobenzyloxy- carbonyle, tert-butoxycarbonyle, trichloroéthoxycarbonyle et isobornyloxycarbonyle et les radicaux protecteurs bivalents tels que phtaloyle et succinyle Parmi ces radicaux, on préfère les radicaux aralcoxycarbonyle tels que benzyloxycarbonyle et pméthoxybenzyloxycarbonyle par suite de la facilité d'introduction et d'élimination. L'introduction de ces radicaux protecteurs est effectuée selon les modes opératoires connus et de façon avantageuse selon la méthode de l'ester actif Dans ce mode opératoire, le radical guanidino du composé de formule (Ia) demeure inchangé. On effectue l'alkylation du radical hydroxy à la position 11 de l'hydroxyéthanamide de formule (Ia) par réaction avec une diazoparaffine de la façon suivante. De façon générale, on protège tout d'abord les radicaux amino et imino de l'hydroxyéthanamide de formule (Ia) avec le radical protecteur précité et on soumet le composé obtenu à la réaction avec une diazoparaffine dans un solvant organique inerte tel que le chlorure de méthylène ou le tétrahydrofuranne à une température de -20 à 20 C, généralement de -10 à 10 C de préférence de -3 à 3 C pendant 1 à 15, généralement 2 à 8 heures pour effectuer l'alkyla- tion La réaction ne nécessite pas obligatoirement un catalyseur, mais elle est accélérée par la présence d'un catalyseur constitué d'un acide de Lewis tel que le trifluorure de bore, le chlorure d'aluminium, l'acide borofluorhydrique ou le bioxyde de sélénium Comme exemples de diazoparaffines ayant de 1 à 4 atomes de carbone, on peut citer le diazométhane, le diazoéthane, le diazopropane, et le diazobutane On peut synthétiser ces diazoparaf- fines à partir de la N-nitroso-alkylurée, du N-nitroso- alkyluréthane, du N-nitroso-alkylsulfonamide et de la N-nitroso-alkyl-N'nitroguanidine correspondants selon des modes opératoires connus lVoir "Organic Synthesis" (John Wiley and Sons, Inc), II, 165 ( 1943) III, 119 ( 1955); Journal of Organic Chemistry, 13, 763 ( 1948); "Organic Synthesis", IV, 250 ( 1963); Chemische Berichte, 94, 2547 ( 1961); Canadian Journal of Research, 28 B, 683 ( 1950); "Organic Synthesis", III, 244 ( 1955); Journal of Chemical Society, 1935, 2861). L'alkylation avec une diazoparaffine permet d'alkyler le radical hydroxy de la position 11 sans modi- fication de la configuration de la position 11 de la formule (Ia) Par exemple un (-)-hydroxyéthanamide de formule (Ia) est transformé en le (-)alcoxyéthanamide correspondant de formule (Ib) On obtient un (+)-alcoxy- éthanamide ou un mélange épimère (-) relativement à la position 11 à partir respectivement du (+)-hydroxyéthanamide ou du (-)-hydroxyéthanamide. L'hydroxyéthanamide de formule (Ia) a des radicaux hydroxy en position 11 et en position 15 lorsque Y représente -CH-CH 2- Dans ce cas, par suite de la dif- OH férence de réactivité des deux radicaux hydroxy, il est possible d'alkyler sélectivement le radical hydroxy en position 11. Les radicaux protecteurs des radicaux amino et imino du produit alkylé peuvent être éliminés de façon ordinaire pour laisser un alcoxyéthanamide de formule (Ib). Par exemple lorsque le radical protecteur est un radical aralcoxycarbonyle, on peut l'éliminer par hydrogénation catalytique ordinaire à la pression atmosphérique On effectue la réaction dans un solvant approprié tel que le méthanol, l'éthanol, le dioxane ou un de leurs mélanges en présence de palladium ou de platine comme catalyseur. La réaction est accélérée par l'addition d'un acide tel que l'acide chlorhydrique ou l'acide acétique. Lorsque Y représente -CH-CH 2-, l'éthanamide OH substitué en position 2 de formule (I) est un N-l 4-( 3-amino- propyl)aminobutyl 7-2-zu J-guanidino / -hydroxy(acide gras) amido/éthanamide substitué en position 2 représenté par la formule générale: 141312il39 8-5 4 1 H 2 NCNH(CH 2) CHCH 2 CONHCHCONH(CH 2)4 NH(CH 2)3 NH 2 (Ic) NH OH OR dans laquelle R et N ont la même définition que ci-dessus, sous réserve que lorsque N est 4, R représente les radicaux autres que l'atome d'hydrogène Lorsque la configuration de la position 15 de ce composé est soit (S) soit (R) et que le composé est un mélange épimère relativement à la position 11, le composé peut être séparé en deux épimères /forme (+) et forme (-)7 par chromatographie A cet effet la chromatographie liquide haute performance (CLHP) est appropriée On obtient un résultat souhaitable en utilisant par exemple le Nucleosil C 18 (M Nagel Co) comme matière de garnissage de colonne et un mélange acétonitrile- pentanesulfonate de sodium-tampon au phosphate comme éluant. Comme décrit ci-dessus, l'alkylation du radical hydroxy en position 11 avec une diazoparaffine ou la sépa- ration par CLHP, fournit un N-f 4-( 3-aminopropyl)aminobuty 17- 2-lc/-guanidino-/ -hydroxy(acide gras) amidogj 2-alcoxyêthana- mide représenté par la formule générale: 1514 133211 H 2 NCNH(CH 2)n CHCH 2 CONHCHCONH (CH 2) 4 NH(CH 2)3 NH 2 (Id) Il I I NH OH OR' dans laquelle R' et N ont la même définition que ci-dessus. Lorsque le radical hydroxy en position 15 de ce composé est éliminé par déshydratation ou est désoxygéné il se forme un un N-l 4-( 3-aminopropyl) aminobutyl J-2-f-c -guanidino (acide gras c, 3 -insaturé)amido 7-2alcoxyéthanamide représenté par la formule générale H 2 NCNH(CH,),CH=CH Co NHCHCONH(CH 2) 4 NH(CH 2) 3 NH 2 (Ie) NH OR' dans laquelle R' et N ont la même définition que ci-dessus, ou un N-l 4-( 3-aminopropyl)aminobuty 17-2-/c W-guanidino(acide gras saturé)amido 7-2alcoxyéthanamide représenté par la formule générale: H 2 NCCH(CH 2) n CH 2 CH 2 CONHCHCONH(CH 2) 4 NH(CH 2) 3 NH 2 (If) il I NH OR' dans laquelle R' et N ont la même définition que ci-dessus. On obtient le composé de formule (Ia) en proté- geant les radicaux amino et imino du composé de formule (Id) avec les radicaux protecteurs précités, en soumettant le composé obtenu à un traitement de déshydratation et en éliminant les radicaux protecteurs On peut par exemple effectuer la déshydratation selon un procédé connu dans lequel on laisse le dicyclohexylcarbodiimide réagir en présence d'un chlorure de cuivre (I ou II) lJournal of the American Chemical Society, 90, 3245 ( 1965)l Ce procédé est préférable car il s'effectue dans des conditions modérées neutres Un excès de dicyclohexylcarbodiimide réduit la durée de réaction En raison de la solubilité des matières de départ, le N,N-diméthylformamide constitue un exemple de solvant approprié La température de réaction est géné- ralement comprise entre la température ordinaire et 100 C. La durée de réaction varie entre plusieurs heures et plusieurs jours selon la température de réaction. Le composé de formule (If) qui se forme à partir du composé de formule (Id) par désoxygénation du radical hydroxy en position 15, est obtenu de façon avantageuse à partir du composé de formule (Ie) par réduction d'une double liaison La réduction de la double liaison est effectuée selon des procédé habituels tels que par exemple la réduction catalytique Si le radical protecteur des radicaux amino et imino est un radical aralcoxycarbonyle, la réduction de la double liaison et l'élimination des radicaux protecteurs sont réalisées simultanément par la réduction catalytique. Lorsque le symbole R' de l'alcoxyéthanamide de formule (Ib) est un rédical benzyle, on élimine le radical benzyle par réduction catalytique et on transforme le composé en l'hydroxyéthanamide de formule (Ia) en conservant inchangée la configuration à la position 11 Dans ce cas la réduction catalytique pour l'élimination d'un radical aralcoxycarbonyle protecteur s'effectue à faible vitesse à la pression atmosphérique tandis que l'on obtient un résultat satisfaisant avec une durée de réaction réduite en effectuant la réaction dans une solution aqueuse d'acide acétique sous une pression plus élevée de plusieurs bars a plusieurs dizaines de bars. L' W-guanidino-amide gras représenté par la formule H 2 NCNH(CH 2)n-YCONH 2 (I) NH dans laquelle Y et N sont comme définis ci-dessus, qui est une matière de départ pour la synthèse du composé de formule (Ia), est synthétisé comme décrit ci-dessous. (a) Synthèse d'un composé de formule (Il) dans laquelle Y représente -CH 2 CH 2: Ce composé est un WU-guanidino-amide gras saturé représenté par la formule générale H 2 NCNH(CH 2)n CH 2 CH 2 CONH 2 (I Ia) NH dans laquelle N est comme défini ci-dessus Ces CV-guanidino- amides gras saturés sont des composés cohnus et on peut les synthétiser à partir de matières premières du commerce selon des réactions connues Par exemple on obtient le composé en protégeant le radical amino d'un C-aminoacide gras de formule H 2 N(CH 2)n CH 2 CH 2 COOH (V) dans laquelle N est comme défini ci-dessus, puis estérifica- tion du radical carboxy, traitement de l'ester obtenu avec l'ammoniac pour le transformer en un amide, élimination du radical protecteur du radical amino et conversion du radical amino en un radical guanidino. Le composé de formule (I Ia) peut également être préparé par oxydation d'une diamine en un nitrile correspondant représenté par la formule dnlul n H 2 N(CH 2)n CH 2 CH 2 CN (IV) dans laquelle N est comme défini cidessus, puis hydrolyse du radical nitrile pour former un amide et conversion du radical amino en un radical guanidino Des exemples d'Cu - guanidino-amides gras saturés particuliers de formule (I Ia) comprennent le 4-guanidinobutanamide, le 5-guanidinopen- tanamide, le 6-guanidinohexanamide, le 7-guanidinoheptanamide, le 8-guanidino-octanamide, le 9-guanidinononanamide, 10- guanidinodécanamide et le li-guanidinoundécanamide. (b) Synthèse d'un composé de formule (II) dans laquelle Y représente -CH-CH 2- OH Ce composé est un J-guanidino hydroxy- amide gras représenté par la formule générale: H NCNH(CH)CHCH CONH (I Ib) 2 Il 2 1 2 2 NH OH dans laquelle N est comme défini ci-dessus et il est synthé- tisé de diverses façons selon des réactions connues Par exemple on le synthétise en protégeant le radical amino d'un CL-amino-acide gras représenté par la formule: H 2 N(CH 2)êOOH (VII) dans laquelle N est comme défini ci-dessus, puis allonge- ment de deux atomes de carbone de la chaîne carbonée, con- version du composé obtenu en un / -hydroxy-amide gras selon une série de réactions généralement utilisées pour préparer un dérivé d'acide /9hydroxycarboxylique, puis élimination du radical protecteur pour régénérer le radical amino et transformation du radical amino en le radical auanidino. Le mode opératoire est de plus décrit de façon détaillée ci-après relativement à un exemple. On synthétise un W-guanidino-/9-hydroxy- amide gras en protégeant le radical amino d'un 4 J -amino-acide gras de formule (VII) avec un radical protecteur du radical amino, tel que le radical benzyloxycarbonyle, transformation de l'acide carboxylique en un dérivé réactif, tel qu'un imidazolide, condensation du dérivé réactif avec un énolate de magnésium du malonate de monoéthyle de formule: O O Il /C O CH Mg (VIII) C -O I O Et Bulletin de la Société Chimique de France, 945 ( 196417 pour obtenir un / céto-ester de formule X'-NH(CH 2)n COCH 2 COO Et (IX) dans laquelle X' représente un radical protecteur du radical amino et N est comme défini ci-dessus, réduction du radical carbonyle de la cétone pour former un l,-hydroxy-ester, traitement de l'ester avec l'ammoniac pour former un amide, élimination du radical protecteur du radical amino, et conversion du radical amino régénéré en un radical guanidino. Comme exemple d'-Cu-guanidino /9-hydroxy-amides gras ainsi préparés, on peut citer le 4-guanidino-3-hydroxybutanamide, le 5-guanidino-3-hydroxypentanamide, le 6-guanidino-3-hydro- xyhexanamide, le 7-guanidino-3-hydroxyheptanamide, le 8-guanidino-3-hydroxyoctanamide, et le 9-guanidino-3- hydroxynonanamide. On obtient le (S)-7-guanidino-3-hydroxyétha- namide également par hydrolyse avec un acide ou un alcali de la substance antibiotique BMG 162-a F 2 (spergualin) réprésentée par la formule: (s) H 2 NCNH (CH 2) 4 CHCH 2 CONHCCONH (CH 2) 4 NI (CH 2) 3 NH 2 NH OH OH que l'on isole du filtrat de culture d'un micro-organisme du genre Bacillus, tel que par exemple Bacillus BMG 162-a F 2 (FERM P-5230; ATCC 31932) On le synthétise également comme décrit dans Journal of Antibiotics, Vol 34, 1625 ( 1981) par formation de l'acide (S)-3,7diaminoheptanoique à partir de la L-lysine par réaction de Arndt-Eistert 2 Journal of Organic Chemistry, Vol 17, 347 ( 1952)J, puis désamination du radical /-amino avec un acide nitreux, conversion du radical carboxy en un radical amide puis conversion du radical amino en un radical guanidino. (c) Synthèse d'un composé de formule (II) dans laquelle Y représente CH=CH: Ce composé est un CW-guanidino-amide gras o,9- insaturé représenté par la formule: H NCN 2 (I Ic) 2 N NH(CH 2)n CH = CHCONH 2 (II) NH dans laquelle N est comme défini ci-dessus On synthétise de façon avantageuse ce composé par déshydratation des W -guanidino-/9hydroxy-amides gras de formule (I Ib) dont la préparation est décrite cidessus Bien que la déshydratation puisse être effectuée selon les procédés couramment utilisés pour la déshydratation desd-hydroxy- amides gras, il est cependant préférable d'effectuer la réaction dans des conditions neutres modérées Une voie appropriée consiste à effectuer la déshydratation par l'action du dicyclohexylcarbodiimide en présence de chlorure de cuivre (II) j Journal of the American Chemical Society, 90, 3245 ( 1968)l Comme on traite généralement le composé de formule (I Ib) sous forme d'un sel d'addition avec un acide, un solvant préférable est le N,N-diméthyl- formamide par suite de la solubilité du sel d'addition avec un acide La température de réaction est généralement comprise entre la température ordinaire et 100 C La durée de réaction est généralement comprise entre plusieurs heures et plusieurs jours selon la température de réaction. On peut réduire la durée de réaction en utilisant un excès de dicyclo-hexylcarbodiimide Des exemples d' U -guanidino- amides gras, -insaturés ainsi prépares comprennent le 4-guanidino-2buténamide, le 5-guanidino-2-penténamide, le 6-guanidino-2-hexénamide, le 7-guanidino-2-hepténamide, le 8-guanidino-2-octénamide et le 9-guanidino-2-nonénamide. La réduction de la double liaison de l'- U-guani- dino-amide gras>,/,f-insaturé de formule (I Ic) soit catalytiquement de façon habituelle soit par utilisation de borohydrure de sodium en présence d'un composé de métal de transition tel que le chlorure de nickel ou le chlorure de cobalt (Chemical and Pharmaceutical Bulletin, 19, 817 ( 1971)l fournit un WL 7 -guanidino-amide gras saturé de formule (I Ia). Le N-/4-( 3-aminopropyl)aminobutyl/-2,2-dihydro- xyéthanamide de formule: HO \ HO CHCONH(CH,) 4 NH(CH 2)3 NH 2 (III) HO" qui est une matière de départ pour la synthèse du composé de formule (Ia) est synthétisé de la façon suivante, comme décrit en détail dans Journal of Antibiotics, Vol 34, 1625 ( 1981). On acyle le radical amino libre du composé représenté par la formule: H 2 N (CE 2) 4 N (CH,) 3 NH-X Il x (x) dans laquelle X 1 représente un radical protecteur du radical amino, avec un dialkylacétal d'acide glyoxylique représenté par la formule X 20. > CHCOOH 2 X O (XI) dans laquelle X représente un radical alkyle de 1 à 5 atomes de carbone, ou avec un dérivé réactif d'acide carboxylique puis on élimine le radical X 1 protecteur du radical amino et les radicaux alkyle X 2 pour obtenir le *composé de formule (III). Le composé de formule (III) peut également être obtenu avec un rendement élevé par hydrolyse de la substance antibiotique BMG 162-a F 2 (spergualin) précitée. L'invention est illustrée ci-après par des exemples de référence et des exemples. Exemple de référence 1 Synthèse du (S)-7-guanidino-3-hydroxyheptanamide. (a) Synthèse de l'acide (S)-3,7-diaminoheptanoique. A une solution de 15 g ( 82,15 mmole) de chlorhydrate de L-lysine dans 150 ml d'eau, on ajoute 8,7 g ( 82,15 mmole) de carbonate de sodium et 43, 2 g ( 200 mmole) de N-éthoxycarbonylphtalimide On agite le mélange pendant 20 heures à la température ordinaire On lave le mélange réactionnel avec 50 ml d'acétate d'éthyle. On ajuste le p H de la couche aqueuse à 3,0 avec de l'acide chlorhydrique 6 N et on extrait trois fois avec 100 ml de toluène On lave deux fois l'extrait avec 100 ml d'eau (p H 2,0), on sèche sur sulfate de sodium anhydre et on évapore à sec sous pression réduite pour obtenir 27,95 g (rendement 84 %) d'une poudre blanche de di-N-phtaloyl-L- lysine; point de décomposition, 71-72 C; / (c = 1, méthanol). A 27,0 g ( 66,4 nole) de di-N-phtaloyl-L-lysine, on ajoute 40 ml de chlorure d'oxalyle On chauffe le mélange au bain d'huile à 90 C puis on mdlange avec 40 ml de 1,2-diméthoxyéthane et on chauffe à reflux pendant 2 heures On évapore le mélange réactionnel à sec, on redissout dans 20 ml de 1,2-diméthoxyéthane et on ajoute goutte à goutte à 500 ml d'une solution d'éther contenant 330 mmole de diazométhane en refroidissant dans de l'eau glacée On agite ensuite le mélange pendant une heure. On évapore le mélange réactionnel à sec et on dissout dans 250 ml de méthanol anhydre On ajoute à la solu- tion 50 ml d'une solution de triéthylamine contenant 3,4 g ( 14,8 mmole) de benzoate d'argent On agite le mélange à la température ordinaire pendant 15 heures. On recueille le précipité par filtration, on dissout dans 100 ml de chloroforme, on filtre pour éliminer les matières insolubles et on évapore à sec pour obte- nir 15,3 g (rendement 53 %) de (S)-3,7-diphtaloylamino- heptanoate de méthyle Point de décomposition: 118- 119 c; 22 = -3 (c = 2; chloroforme). D A 15,0 g ( 34,5 mmole) de (S)-3,7-diphtaloyl- aminoheptanoate de méthyle, on ajoute 100 ml d'hydrate d'hydrazine 1 M dans l'éthanol et 100 ml d'éthanol à % On chauffe le mélange (température du bain d'huile: 90 C) à reflux pendant une heure On évapore le mélange réactionnel à sec, on dissout dans 250 ml d'acide chlorhydrique à 5 %, on chauffe à 80 UC pendant une heure, on ajuste à p H 7,1 avec de l'ammoniaque à 17 % et on fait passer à travers une colonne (diamètre interne: 27 mm) garnie de 300 ml d'Amberlite CG-50 ( 70 % du type NH 4) On lave la colonne successivement avec 900 ml d'eau et 900 ml d'ammoniaque 0,2 M et on élue avec de l'ammoniaque 0,5 M On recueille les fractions donnant une réaction positive avec la ninhy- drine et on évapore à sec pour obtenir 3,15 g (rende- ment 57 %) d'acide (S)-3,7-diaminoheptanoique (C 7 H 16 N 202 1/4 H 2 C 03) sous forme d'un sirop incolore; /721 = + 2,9 (c = 1; eau). (b) Synthèse du (S)-7-guanidino-3-hydroxyhepta- namide: A 30 ml d'un mélange de pyridine, d'eau et de triéthylamine ( 10/10/1), contenant 3,1 g ( 19,3 mmole) de l'acide (S)-3,7-diaminoheptanoiqueobtenu en (a) ci- dessus, on ajoute lentement 4,81 g ( 19,3 mmole) de N- benzyloxycarbonyloxysuccinimide On agite le mélange pendant 5 heures à la température ordinaire On évapore le mélange réactionnel à sec, puis on dissout dans 30 ml d'eau, on ajuste à p H 6,4 avec de l'acide chlorhy- drique 6 N et on fait passer à travers une colonne de ml (diamètre interne 16 mm) garnie d'Amberlite> CG-50 (à 80 % du type NH 4) On développe la colonne avec 300 ml d'eau On fait passer de plus l'effluent recueilli à travers une colonne (diamètre interne 16 mm) garnie de 100 ml de Dowex 50 W-X 4 (type H) On lave successivement la colonne avec 300 ml d'eau et 300 ml d'ammoniaque 0,2 M et on élue avec de l'ammoniaque 0,5 M (on recueille des fractions de 10 ml) On réunit les fractions n 16 à 33 et on évapore à sec pour ob- tenir 2,73 g (rendement 48 %) d'une poudre blanche d'acide (S)-3-amino-7benzyloxycarbonylaminoheptano Ique (C 15 H 22 N 204 H 20) point de décomposition: 143-147 C; la_ 22 = + 140 (c = 1; méthanol) On élue la colonne d'I Amberlite R CG-50 avec de l'ammoniaque 0,5 N pour récupérer 746 mg (récupération 24 %) d'acide (S)-3,7 diaminoheptanoique. A une solution de 2,7 g ( 0,17 mmole) d'acide (S)- 3-amino-7-benzyloxycarbonylaminoheptanolque dans de l'acide acétique aqueux à 33 %, on ajoute goutte à goutte en une heure en refroidissant par la glace, une solution de 1,9 g ( 27,51 mnole) de nitrite de so- dium dans 10 ml d'eau On agite de plus le mélange pendant une heure et on le laisse reposer à 5 C pen- dant 24 heures Après addition de 50 ml d'eau, on extrait deux fois le mélange réactionnel avec 50 ml d'acétate d'éthyle On sèche la couche organique sur sulfate de sodium anhydre et on évapore à sec pour obtenir 2,16 g d'une poudre brute Par chromatographie sur une colonne (diamètre interne 28 mm) garnie de g de gel de silice (Wakogel C-200), on développe 14350 la poudre brute ci-dessus avec un mélange de chloroforme, de méthanol et d'ammoniaque concentrée ( 30/10/1 en vo- lume) en recueillant des fractions de 20 ml On réunit les fractions n 51 à 60 et on évapore à sec pour ob- tenir 460 mg (rendement 17 %) d'une poudre blanche d'acide (S)-7benzyloxycarbonylamino-3-hydroxyheptanoîque point de décomposition: 115117 C a D 3 (c = 2 méthanol). A une solution de 450 mg ( 1,52 mmole) d'acide (S)-7-benzyloxycarbonylamino-3-hydroxyheptanoique dans du 1,2diméthoxyéthane, on ajoute goutte à goutte en refroidissant par la glace 7 ml ( 4,56 mmole) d'une solu- tion de diazométhane dans l'éther On agite le mélange pendant 30 minutes On évapore le mélange réactionnel à sec pour obtenir 461 mg (rendement 98 %) de (S)-7- benzyloxycarbonylamino-3-hydroxyheptanoate de méthyle; 2 _ 1 = + 1. On sature avec de l'ammoniac gazeux une solution de 450 mg ( 1,45 mmole) de (S)-7-benzyloxycarbonylamino- 3-hydroxyheptanoate de méthyle dans 50 ml de méthanol anhydre enrefroidissant à -100 C et on laisse reposer dans un tube scellé à la température ordinaire pendant 3 jours On évapore le mélange réactionnel à sec, puis on chromatographie en utilisant une colonne (diamètre interne 20 mm) contenant 50 g de gel de silice (Wako- gel OC-200) et en développant avec un mélange de chlo- roforme et de méthanol ( 100/1 en volume) On réunit les fractions n 82 à 106 (ayant chacune un volume de 10 ml) et on évapore à sec pour obtenir 371 mg (rendement 87 %) d'une poudre blanche de (S)-7-benzyloxycarbonylamino- 3-hydroxyheptanamide; point de décomposition: 126-127 C; -722 = _ 30 (c = 5; méthanol). D Dans un mélange de 10 ml de méthanol aqueux à % et 0,01 ml d'acide acétique, on dissout 350 mg ( 1,19 mmole) de (S)-7-benzyloxycarbonylamino-3-hydroxy- heptanamide Apres addition de 50 mg de charbon palladié à 5 %, on agite le mélange dans un courant d'hydrogène à la température ambiante pendant 3 heures Après éli- mination du catalyseur par filtration, on évapore le filtrat à sec, on redissout dans un faible volume d'eau et on fait passer à travers une colonne (diamètre in- terne 12 mm) contenant 30 ml de Dowex 50 W-X 4 (type H). On lave la colonne avec 90 ml d'eau et on élue avec de l'ammoniaque 0,5 M (taille des fractions: 3 ml) On réunit les fractions n 28 à 34 et on évapore à sec pour obtenir 201 mg (rendement 96 %) de (S)-7-amino- 3-hydroxyheptanamide; D -2 ' (c = 2; eau). A une solution de 190 mg ( 1,08 mmole) de (S)-7- amino-3-hydroxyheptanamide dans 3 ml d'eau on ajoute 0,54 ml d'une solution aqueuse d'hydroxyde de sodium 2 N A la solution obtenue, en refroidissant par la glace, on ajoute goutte à goutte en 30 minutes, 1 ml d'une solution de méthanol contenant 129 mg ( 1,08 mmole) de 2-méthyl-1nitrosourée On agite encore le mélange pendant 5 heures, puis on ajuste à p H 6,0 avec de l'acide chlorhydrique 6 N, on évapore à sec et on purifie par chromatographie en utilisant une colonne (diamètre in- terne 15 mm) contenant 30 g de gel de silice (Wakogel O C-200) et en développant avec un mélange de chlorofor- me, de méthanol et d'ammoniaque concentrée ( 60/10/1 en volume) On réunit les fractions n 67 à 90 (taille des fractions: 6 ml) et on évapore à sec pour obtenir 187 mg (rendement 70 %) d'une poudre blanche de (S)-7- nitroguanidino-3-hydroxyheptanamide; point de décompo- sition: 148-149 u C; -722 = -2 (c = 2; méthanol). Dans un mélange de 15 ml d'eau, 15 ml de métha- nol et 7,5 ml d'acide acétique, on dissout 170 mg ( 0,69 mmole) de (S)-7-nitroguanidino-3-hydroxyheptanamide. Après addition de 50 mg de charbon palladié à 5 %, on agite le mélange sous un courant d'hydrogène pendant une heure à la température ambiante Après avoir sépa- ré le catalyseur par filtration, on évapore le filtrat à sec pour obtenir 165 mg d'une poudre brute On dis- sout la poudre brute dans 10 ml d'eau, on fait passer à travers une colonne (diamètre interne: 12 mm) garnie de 20 ml de CM-Sephade C-25 (type Na) et on élue avec une solution aqueuse 0,5 M de chlorure de sodium (taille des fractions: 2 ml) On réunit les fractions n 18 à 25, on évapore à sec et on extrait trois fois avec 10 ml de méthanol On réunit les solutions métha- noliques, on fait passer à travers une colonne (dia- mètre interne 20-mm) garnie de 100 ml de Sephadex LH-20 et on élue avec du méthanol (taille des fractions 1 ml) On réunit les fractions n 28 à 46 et on éva- pore à sec pour obtenir 149 mg (rendement 91 %) d'une poudre blanche de chlorhydrate de (S)-7-guanidino-3- hydroxyheptanamide (C 8 H 18 N 402 H Cl); = _ 20 (c = 2; eau). Exemple de référence 2 Synthèse du 7-guanidino-2-hepténamide A une solution de 955 mg ( 4 mmole) de chlorhy- drate de (S)-7-guanidino-3-hydroxyheptanamide dans 20 ml de N,Ndiméthylformamide anhydre, on ajoute 2,48 g ( 12 mmole) de dicyclohexylcarbodiimide et 40 mg de chlorure de cuivre (II) On agite le mélange pendant 2 jours à la température ambiante On filtre le mélange réactionnel pour éliminer le précipité et on concentre le filtrat sous pression réduite On dissout le résidu dans 10 ml d'eau, puis on lave deux fois avec 10 ml d'acétate d'éthyle On évapore la couche aqueuse à sec, on dissout dans 5 ml d'eau, on fait passer à travers une colonne (diamètre interne: 20 mmi) garnie de 50 ml de CM-Sephadex VC-25 (type Na) et on élue la colonne avec 200 ml d'une solution aqueuse 0,5 M de chlorure de sodium (taille des fractions: 10 ml) On réunit les fractions n 17 à 30, on évapore à sec et on ex- trait trois fois avec du méthanol On fait passer la solution méthanolique à travers une colonne 6 diamètre interne: 20 mm) garnie de 150 ml de Sephadex LH-20 et on développe avec du méthanol (taille des fractions: ml) On réunit les fractions n 9 à 16 et on évapore à sec On cristallise le résidu pesant 950 mg dans un 2514350 ' élange d'éthanol et d'acétone pour obtenir 790 mg (rendement 89,5 %) de chlorhydrate de 7-guanidino-2- hepténamide ayant un point de fusion de 162-168 C. RMN protonique (mesurée dans le deutérométha- nol), S: 1,4 1,8 (CH 2 x 2); 2,27 (CH 2); 3,20 (CH 2); ,98 (CH); 6,80 (CH) Spectre d'absorption infrarouge (pastille de K Br), cm-1: 3370, 3150, 1660, 1625, 1610, 1590, 1415, 1395, 1370 Exemple de référence 3 Synthèse du chlorhydrate de 7-guanidinoheptanamide A une solution de 441 mg ( 2 mmole) de chlorhydrate de 7-guanidino-2hepténamide dans 7 ml de méthanol, on ajoute 47,5 mg ( 0,2 mmole) de chlorure de nickel Au mélange, agité à la température ordinaire, on ajoute 189 mg ( 5 mmole) de borohydrure de sodium par petites portions Après l'addition on agite encore le mélange pendant 1,5 heure, puis on filtre pour séparer un pré- cipité noir et on évapore le filtrat à sec On dissout le résidu dans 5 ml d'une solution aqueuse 0,5 M de chlorure de sodium, on fait passer à travers une co- lonne diamètre interne 30 mm) garnie de 100 ml de Diaion U HP-20 et on développe avec 300 ml d'une solu- tion aqueuse 0,5 M de chlorure de sodium puis avec 300 ml d'eau (taille des fractions: 15 ml) On réunit les fractions n 25 à 33, on évapore à sec et on ex- trait trois fois avec 5 ml de méthanol On fait passer la couche méthanolique à travers une colonne ( 20 de diamètre interne) garnie de 150 ml de Sephadexo LH-20 et on développe avec du méthanol (taille des fractions: 5 ml) On réunit les fractions nu 8 à 13, on évapore à sec et on cristallise dans un mélange d'éthanol et d'acétone pour obtenir 372 mg (rendement 83,5 %) de cristaux incolores de chlorhydrate de 7- guanidinoheptanamide ayant un point de fusion de 140- 141 C. RMN protonique (mesurée dans le deutérométhanol) 6: 1,2 1,9 (CH 2 x 4); 2,23 (CH 2); 3,20 (CH 2). Spectre d'absorption infrarouge (pastille de K Br) -1 cm: 3350, 3150, 2920, 1655, 1630, 1590, 1455, 1430, 1400, 1220, 1165, 1130, 1065. Exemple de référence 4 Synthèse du 8-guanidino-3-hydroxyoctanamide (a) Synthèse du 8-benzyloxycarbonylamino-3-céto- octanoate d'éthyle. A une solution de 6,56 g ( 50 mmole) d'acide 6- aminohexanoique, dans 25 ml d'hydroxyde de sodium aqueux 2 N, on ajoute 5 ml d'éther éthylique On ajoute au mélange goutte à goutte en 30 minutes en refroidissant par la glace et en agitant, 10 ml de chlorure de benzyl- oxycarbonyle et 37,5 ml d'une solution aqueuse 2 N d'hydroxyde de sodium Apres l'addition, on ramène à la température ambiante et on poursuit l'agitation pendant 2 heures On lave deux fois le mélange réaction- nel avec 20 ml d'éther éthylique On acidifie la couche aqueuse avec de l'acide chlorhydrique concentré et on extrait trois fois avec 50 ml d'acétate d'éthyle On réunit les solutions d'extrait, on lave à l'eau salée saturée, on sèche sur sulfate de sodium anhydre et on élimine le solvant par distillation pour obtenir 12,16 g (rendement 92 %) d'acide 6-benzyloxycarbonylamino- hexanoique ayant un point de fusion de 127-128 C. On agite pendant 15 minutes à la température ambiante une solution de 2,65 g ( 10 mmole) d'acide 6- benzyloxycarbonylaminohexanoique et 1,62 g ( 10 mmole) de 1,1 'carbonyldiimidazole du commerce dans 25 ml de tétrahydrofuranne anhydre On ajoute, au mélange réac- tionnel, une suspension de 6,18 g ( 40 nmole) d'une poudre blanche d'énolate de magnésium du malonate de monoéthyle (préparé à partir de 5, 28 g de malonate de monoéthyle et 972 mg de magnésium) dans 50 ml de tétrahydrofuranne anhydre On agite le mélange pendant 2 heures à la température ambiante Après addition de ml d'acide chlorhydrique 1 N et agitation pendant minutes, on extrait trois fois le mélange réaction- nel avec 50 ml de chloroforme On lave successivement la couche chloroformique avec de l'acide chlorhydrique 1 N, une solution aqueuse saturée de bicarbonate de sodium et une solution salée saturée, puis on sèche sur sulfate de sodium anhydre et on chasse le-solvant par distillation On fait passer le résidu à travers une colonne de 100 g de "Silica Gel 60 " (Merck & Co) et on élue avec du chloroforme (taille des fractions: g) on réunit les fractions n 43 à 105 et on éva- pore à sec pour obtenir 2,35 g (rendement 70 %) de 8- benzyloxycarbonylamino-3-céto-octanoate d'éthyle. Spectre de RMN protonique (dans le deutérochlo- roforme), e: 1,27 (CH 3); 1,1 1,9 (CH 2 x 3); 2,52 (CH 2); 3,17 (NCH 2); 3,40 (CH 2); 4,18 (CH 2); 5,05 (NH); 5,09 (CH 2); 7,32 (C 6 H 5). Spectre d'absorption infrarouge (pastille de K Br), cm-1: 3360, 2920, 1730, 1710, 1520, 1240. (b) Synthèse du 8-guanidino-3-hydroxyoctanamide. Dans 20 ml d'éthanol, on dissout 2,01 g ( 6 mmole) de 8benzyloxycarbonylamino-3-cétooctanoate d'éthyle obtenu en (a) ci-dessus A la solution on ajoute par portions en agitant à la température ambiante, 227 mg ( 6 mmole) de borohydrure de sodium On agite le mé- lange pendant 30 minutes, puis on mélange avec plu- sieurs gouttes d'acide acétique, on verse dans 100 ml d'eau et on extrait trois fois avec 50 ml de chloro- forme On réunit les couches chloroformiques, on lave successivement avec de l'acide chlorhydrique 1 N, une solution aqueuse saturée de bicarbonate de sodium et une solution salée saturée, puis on sèche sur sulfate de sodium anhydre et on chasse le solvant par distillation pour obtenir 2,00 g (rendement 89 %) de 8-benzyloxy- carbonylamino-3-hydroxyoctanoate d'éthyle ayant un point de fusion de 47-50 C. Dans 40 ml de méthanol saturé d'ammoniac gazeux, on dissout 1,69 g ( 5 mmole) de 8-benzyloxycarbonyl- amino-3-hydroxy-octanoate d'éthyle On agite la solu- tion pendant 3 jours à la température ambiante et on évapore le mélange réactionnel à sec On cristallise le résidu dans l'éthanol pour obtenir 1, 18 g (rendement 72,5 %) de 8-benzyloxycarbonylamino-3-hydroxyoctana- mide ayant un point de fusion de 100-101 'C. A une solution de 1,04 g ( 3,2 mmole) de 8-benzyl- oxycarbonylamino-3-hydroxyoctanamide dans 20 ml de méthanol on ajoute 3,2 ml d'acide chlorhydrique 1 N et 200 ml de charbon palladié à 10 % On agite le mélange sous un courant d'hydrogène à la température ordinaire pendant 3 heures On sépare le catalyseur par filtra- tion et on évapore le filtrat à sec pour obtenir 670 mg de chlorhydrate de 8-amino-3-hydroxyoctanamide. A une solution de 670 mg de chlorhydrate de 8- amino-3-hydroxyoctanamide dans 8 ml d'une solution aqueuse 1 N d'hydroxyde de sodium, on ajoute 668 mg ( 2,4 mmole) d'hémisulfate de Sméthylisothiourée On agite le mélange pendant une nuit à la température ambiante On ajuste le mélange réactionnel à p H 6 avec de l'acide chlorhydrique 1 N, on évapore à sec et on dissout dans 5 ml de solution salée 1 M On fait passer la solution à travers une colonne de 160 ml de diaion HP-20 (Mitsubishi Chemical Co) et on élue successivement la colonne avec 400 ml de solution salée 1 M, 400 ml de solution salée 0,8 M et 800 ml de solution salée 0,6 M (taille des fractions: 16 g). On réunit les fractions n 41 à 87 et on évapore à sec, puis on extrait trois fois avec 10 ml de métha- nol On fait passer la couche de méthanol à travers une colonne de 300 ml de Sephadex LH-20 et on élue avec du méthanol pour dessaler (taille des fractions 7 ml) On réunit les fractions no 25 à 35 et on évapore à sec pour obtenir 687 mg (rendement 85 % de chlorhy- drate de 8-guanidino-3-hydroxyoctanamide. Spectre de RMN protonique (dans le deutérométha- nol), 6: 1,4 1,8 (CH 2 x 4); 2,36 (CH 2); 3,20 (NCH 2); 3,95 (CH). Spectre d'absorption infrarouge (pastille de KBR), -1 cm 3350, 3170, 2930, 1655, 1400, 1175. Exemple de référence 5 Synthèse du 8-guanidino-2-octénamide. D'une façon semblable à la synthèse du 7-guanidino- 2-hepténamide de l'exemple de référence 2, on obtient 218 mg (rendement 86 %) de chlorhydrate de 8-guanidino-2-octénamide ayant un point de fusion de 163-165 C à partir de 270 mg de chlorhydrate de 8-guanidino-3-hydroxyoctanamide. Spectre de RMN protonique ( dans le deutérométha- nol), 6: 1,4 1,9 (CH 2 x 3); 2,25 (CH 2); 3,19 (NCH 2); ,94 (CH); 6,79 (CH). Spectre d'absorption infrarouge (pastille de K Br), -1 cm 1 3400, 3120, 2920, 1660, 1630, 1400 Exemple de référence 6 2.) Synthèse du 9-guanidino-3-hydroxynonanamide. D'une façon semblable à la synthèse du 8-guanidino- 3-hydroxyoctanamide de l'exemple de référence 4, on obtient 892 mg de chlorhydrate de 9-guanidino-3-hydroxynonanamide à partir de 2,56 g d'acide 7-aminoheptanoique. Spectre de RIN protonique ( dans le deutérométha- nol),: 1,2 1,9 (CH 2 x 5); 2,35 (CH 2); 3,19 (NCH 2); 2 2 NH 2) 3,92 (CH). Spectre d'absorption infrarouge ( pastille de K Br), -1 cm 3350, 3180, 2940, 1660, 1400, 1175 Exemple de référence 7 Synthèse du 9-guanidino-2-nonénamide D'une façon semblable à la synthèse du 7-guanidino- 2-hepténamide dans l'exemple de référence 2, on obtient 253 mg ( rendement 75 %) de chlorhydrate de 9-guanidino-2-nonéna- mide à partir de 361 mg de chlorhydrate de 9-guanidino-3- hydroxynonanamide; point de fusion 132 135 C. Spectre de RMN protonique ( deutérométhanol),: 1,2 1,9 (CH 2 x 4); 2,23 (CH 2); 3,20 (NCH 2); 5,97 (CH); 6,80 (CH). Spectre d'absorption infrarouge (pastille de K Br) -1 cm: 3350, 3175, 2940, 1660, 1620, 1420 Exemple de référence 8 Synthèse du N-l 4-( 3-aminopropyl)aminobutylj-2,2-dihydroxy- éthanamide. a) Synthèse de la mono-N-benzyloxycarbonyl-1,4-butanediamine A une solution de 1,76 g ( 20 mmole) de 1,4-buta- nediamine dans 30 ml de méthanol agueux à 50 %, on ajoute ,48 g ( 20 mmole) de S-4,6-diméthylpyrimidinyl-2-thiocarbona- te de benzyle (Kokusan-kagaku Co) On agite le mélange pen- dant 3 heures On filtre le mélange réactionnel pour élimi- ner le précipité ( on obtient 2,08 g ( 29 %) du composé di-N- benzyloxycarbonylique à partir du précipité) On évapore le filtrat à sec, on dissout dans 250 ml de chloroforme et on lave 5 fois avec 100 ml d'eau On sèche la couche chlorofor- mique sur sulfate de sodium anhydre et on évapore à sec pour obtenir 1,0 g ( rendement 23 %) de mono-N-benzyloxycarbonyl- 1,4-butanediamine sous forme d'un sirop incolore. b) Synthèse du O-tosyl-3-tert-butoxycarbonylamino-1-propanol. A une solution de 1,5 g ( 20 mmole) de 3-amino-1- propanol dans 30 ml de méthanol, on ajoute 4,8 g ( 20 mmole) de S-4,6-diméthyl-pyrimidinyl-2-thiocarbonate de tert-buty- le On agite le mélange pendant 6 heures On évapore le mé- lange réactionnel à sec, on dissout dans 200 ml de chloro- forme et on lave avec 200 ml d'eau On concentre la couche chloroformique et on la soumet à une chromatographie sur colonne avec 300 g de gel de silice ( Wakogel C-200) et un mélange 1/1 en volume de toluène et d'acétate d'éthyle comme solvant de développement ( taille des fractions: 15 ml) On réunit les fractions n 82 à 151 et on évapore à sec pour obtenir 2,95 g ( rendement 84 %) de 3-tert-butoxycarbo- nylamino-l-propanol sous forme d'une substance huileuse incolore. A une solution de 2,95 g ( 16,9 mmole) de 3-tert-butoxy- * carbonylamino-l-propanol dans 50 ml de pyridine, en refroidissant par la glace sous atmosphère d'argon, on ajoute goutte à goutte en 40 minutes une solution de pyridine contenant 3,36 g ( 17,7 nmole) de chlorure de ptoluènesulfonyle On laisse reposer le mélange pendant une nuit à 7 C puis on mélange avec un petit volutme d'eau et on évapore à sec On dissout le résidu dans 200 ml de chlorofoene, on lave suc- cessivement avec une solution aqueuse à 5 % de bisulfate de potassium, une solution aqueuse saturée de bicarbonate de sodium et de l'eau puis on sèche sur sulfate de sodium anhydre et on évapore à sec On souret le résidu à une chramatographie sur colonne en utilisant 120 g de gel de silice (Wakogel C-200) et un mélange de toluène et d'acétate d'éthyle ( 8/1 en volume) comme solvant de développement (taille des fractions: 15 ml) On réunit les fractions n 35 à 68 et on évapore à sec pour obtenir 3,06 g (rendement 55 %) d'O-tosyl-3-tert-butoxycarbonylamino- 1-propanol sous forme d'une substance huileuse incolore. c) Synthèse de la N-tert-butoxycarbonyl-N-(tert-butoxy-car- bonylaminopropyl) 1,4-butanediamine. Dans 15 ml de N,N-diméthylformamide, on dissout 800 mg ( 2,43 mmole) d'O-tosyl-3-tert-butoxycarbonylamino-l- propanol obtenu ci-dessus en (b) Après addition de 510 mg ( 4,8 mmole) de bromure de lithium (Li Br H 20), on agite le mélange à la température ambiante pendant 24 heures On ajou- te au mélange réactionnel contenant le composé bromé, 540 mg ( 2,43 mmole) de mono-N-benzyloxycarbonyl-1,4-butanediamine obtenue ci-dessus en (a) et 0,34 ml de triéthylamine On a- gite le mélange à la température ambiante pendant 48 heures. On ajoute au mélange réactionnel 699 mg ( 2,9 mmole) de S-4,6- diméthylpyrimidinyl-2-thiocarbonate de tert-butyle On agite le mélange pendant 13 heures à la température ambiante On évapore le mélange réactionnel à sec, on dissout dans 100 ml de chloroforme, on lave avec 50 ml d'eau, on sèche sur sulfate de sodium anhydre et on évapore à sec On soumet le résidu à une chromatographie sur colonne en utilisant 200 g de gel de silice (Wakogel C-200) et un mélange de toluène et d'acétate d'éthyle ( 4/1 en volume) comme solvant de déve- loppement (taille des fractions: 12 ml) On réunit les frac- tions n 134 à 165 et on évapore à sec pour obtenir 608 mg (rendement 52 %) de N-benzyloxycarbonyl-N'-tert-butoxycarbo- nyl-N'-(tert-butoxycarbonylaminopropyl)-1,4-butanediamine sous forme d'une substance sirupeuse incolore. A une solution de 144 mg ( 0,3 mmole) de la subs- tance sirupeuse cidessus dans 5 ml de méthanol, on ajoute mg de carbonate de baryum palladié à 5 % On agite le mélange dans un courant d'hydrogène à la température ambian- te pendant 5 heures Après élimination du catalyseur par fil- tration, on évapore le filtrat à sec pour obtenir 103 mg (rendement 100 %) de N-tert-butoxycarbonyl-N'-(tert-butoxycar- bonylaminopropyl)-1,4-butanediamine. d) Synthèse du N-l 4-( 3-aminipropyl)aminobutyl 7-2,2-dihydroxy- éthanamide. Dans 2 ml d'acétate d'éthyle, on dissout 100 mg ( 0,29 mmole) de la N-tert-butoxycarbonyl-N'-(tert-butoxycar- bonylaminopropyl)-1,4-butanediamine obtenue ci-dessus en (c) et 148 mg ( 1 mmole) d'acide 2,2-diéthoxyacétique. A la solution obtenue on ajoute 135 mg ( 1 mmole) de 1-hydroxybenzotriazole et 206 mg ( 1 mmole) de dicyclohe- xylcarbodiimide On agite le mélange à la température ambian- te pendant 15 heures On sépare le précipité par filtration et on lave avec de l'acétate d'éthyle froid On réunit le filtrat et les liquides de lavage et on lave avec de l'ammo- niaque 1 M puis avec de l'eau On sèche la couche d'acétate d'éthyle sur sulfate de sodium anhydre, on évapore à sec et on chromatographie sur une colonne de 20 g de gel de silice (Wakogel C-200) avec comme solvant de développement, un mé- lange 1/2 en volume de toluène et d'acétate d'éthyle ( tail- le des fractions: 3 ml) On réunit les fractions n 14 à 21 et on évapore à sec pour obtenir 109 mg ( rendement 79 %) de N-l 4-( 3-tert-butoxycarbonylaminopropyl)-4-tert-butoxycarbo- nylaminobutylj-2,2-diéthoxyéthanamide, qui est une substance sirupeuse incolore. A une solution de 44 mg ( 0,13 mmole) de la subs- tance sirupeuse ci-dessus dans 1 ml de dioxanne, on ajoute 2,5 ml d'acide chlorhydrique 0,1 N On agite le mélange au bain d'huile à 100 C pendant 4 heures On neutralise le mé- lange réactionnel à p H 6 avec une solution aqueuse O,2 N d'hy- droxyde de sodium et on évapore à sec On extrait les rési- dus avec 1,5 ml de méthanol et on fait passer la couche métha- nolique à travers une colonne ( diamètre interne 16,5 mm) garnie de 100 ml de Sephadex LH-20 et on développe avec du méthanol (taille des fractions: 2 ml) On réunit les fractions n 22 à 25 qui donnent une réaction positive avec la ninhydrine, et on évapore à sec pour obtenir 13 mg (ren- dement 46 %) de dichlorhydrate de N-l 4-( 3-aminopropyl) ami- nobuty 17-2,2-dihydroxyéthanamide sous forme d'une substance sirupeuse incolore. Exemple 1 Synthèse du N-Z 4-( 3-aminopropyl)aminobutyl 7-2-( 4- guanidinobutanamido)-2-hydroxyéthanamide. On chauffe à 70 C pendant 24 heures un mélange de 360 mg ( 2 mmole) de chlorhydrate de 4guanidinobutanamide, 701 mg ( 2,4 mmole) de dichlorhydrate de N-f 4-( 3aminopropyl) aminobutyl 7-2,2-dihydroxvéthanamide, 264 mg ( 2 mmole) d'aci- de glutarique et 0,36 ml d'eau Apres achèvement de la réac- tion, on ajoute 5 ml d'eau au mélange réactionnel puis on fait passer à travers une colonne (diamètre interne 20 mm) garnie de 150 ml de CMSephadex C-25 (type Na) et on fractionne par élution avec un gradient en utilisant 1,5 litre d'eau et 1,5 litre de solution aqueuse 0,8 M de chlorure de sodium ( taille des fractions: 15 ml) On réunit les fractions n 125 à 137 correspondant aux concentrations en chlorure de so- dium de 0,48-0,56 M, qu'on concentre et qu'on extrait trois fois avec 10 ml de méthanol On fait passer la couche métha- nolique à travers une colonne (diamètre interne 20 mmn) gar- nie de 150 ml de Sephade e LH-20 et on développe avec du méthanol ( taille des fractions: 7 ml) On réunit les frac- tions n 9 à 15 et on évapore à sec pour obtenir 318 mg (ren- dement 35 %) d'une poudre blanche constituée de trichlorhydra- te de N-l 4-( 3-aminopropyl)aminobutyl 7-2-( 4-guanidinobutanami- do)-2-hydroxyéthanamide. Exemple 2 Synthèse du N-l 4-( 3-aminopropyl)aminobuty 17-2-( 5- guanidinopentanamido)-2-hydroxyéthanamide. On chauffe à 60 C pendant 24 heures un mélange de 92,4 mg ( 0,48 mmole) de chlorhydrate de 5guanidinopentanamide, 251 '4350 166,5 mg ( 0,57 mmole) de dichlorhydrate de N-l 4-( 3-aminopro- pyl) aminobutyl 7-2,2-dihydroxyéthanamide, 62,8 mg ( 0,48 mmole) d'acide glutarique et 0,1 ml d'eau Apres achèvement de la réaction, on ajoute 5 ml d'eau au mélange réactionnel puis on purifie d'une façon semblable à celle de l'exemple 1 en utilisant du CM-Sephadex t C-25 ( type Na) et du Sepha- R dex LH-20 pour obtenir 82,5 mg ( rendement 37,1 %) d'une poudre blanche constituée de trichlorhydrate de N-Z 4-( 3-ami- nopropyl)aminobutyll-2-( 5-guanidinopentanamido)-2-hydroxy- éthanamide. Exemple 3 Synthèse du N-Z 4-( 3-aminopropyl)aminobutyll-2-( 6- guanidinohexanamido)-2-hydroxyéthanamide. On chauffe à 60 C pendant 24 heures un mélange de 446 mg ( 2,14 mmole) de chlorhydrate de 6guanidinohexanamide, 750 mg ( 2,57 mmole) de dichlorhydrate de N-Z 4-( 3aminopropyl) aminobutylj-2,2-dihydroxyéthanamide, 283 mg ( 2,14 mmole) d'a- cide glutarique et 0,45 ml d'eau Apres achèvement de la réaction, on ajoute 5 ml d'eau au mélange réactionnel et on purifie le mélange obtenu de façon semblable à celle de l'exenplel en utilisant du CM-Sephadex C-25 ( type Na) et du Sephadex DLH-20 pour obtenir 459 mg (rendement 44 %) d'une poudre blanche de trichlorhydrate de N-% 4-( 3-aminopropyl) aminobutylj-2-( 6-guanidinohexanamido)-2-hydroxyethanamide. Exemple 4 Synthèse du N-/4-( 3-aminopropyl)aminobuty 17-2-( 7- guanidinoheptanamid} 2-hydroxyéthanamide. On chauffe à 60 C pendant 24 heures, un mélange de 360 mg ( 1,62 mmole) de chlorhydrate de 7-guanidinohepta- namide, 568 mg ( 1,94 mmole) de dichlorhydrate de N-j 4-( 3- aminopropyl)aminobutyl 7-2,2-dihydroxyéthanamide, 214 mg ( 1,62 mmole) d'acide glutarique et 0,36 ml d'eau Après achèvement de la réaction, on ajoute 5 ml d'eau au mélange réactionnel et on purifie le mélange obtenu de façon sembla- ble à celle de l'exemple 1 en utilisant du C Mi-Sephadex C-25 (type Na) et du Sephadex R LH-20 pour obtenir 317 mg ( rende- ment 39 %) d'une poudre blanche constituée de trichlorhydra- te de N-l 4-( 3-aminopropyl)aminobutyl 7-2-( 7-guanidinoheptana- mido)-2-hydroxyéthanamide. Exemple 5 Synthèse du N-Z 4-( 3-aminopropyl)aminobutyl 7-2-( 8- guanidinooctanamido)-2-hydroxyéthanamide. On chauffe à 60 C pendant 24 Heures un mélange de 500 mg ( 2,11 mmole) de chlorhydrate de 8guanidinooctanami- de, 740 mg ( 2,53 mmole) de dichlorhydrate de N-f 4-( 3-amino- propyl)aminobutyll-2,2-dihydroxyéthanamide, 335 mg ( 2,53 mmole) d'acide glutarique et 0,34 ml d'eau Après achèvement de la réaction, on ajoute 5 ml d'eau au mélange réactionnel et on purifie le mélange obtenu de façon semblable à celle de l'exemple 1 en utilisant du CM-Sephadex C-25 ( type Na) et du Sephadex R LH-20 pour obtenir 526 mg (rendement 49 %) d'une poudre blanche de trichlorhydrate de N-14-( 3-aminopro- pyl) aminobutyll-2-( 8-guanidinooctanamido)-2-hydroxyéthanami- de. Exemple 6 Synthèse du N-14-( 3-aminopropyl)aminobutyl -2-( 9- guanidinononanamido)-2-hydroxyéthanamide. On chauffe à 60 C pendant 24 heures un mélange de 316 mg ( 1,26 mmole) de chlorhydrate de 9guanidinononanamide, 442 mg ( 1,51 mmole) de dichlorhydrate de N-f 4-( 3aminopropyl) aminobutylj-2,2-dihydroxyéthanamide, 166 mg ( 1,26 mmole) d'a- cide glutarique et 0,01 ml d'eau Apres achèvement de la réac- tion on ajoute 5 ml d'eau au mélange réactionnel et on puri- fie le mélange d'une façon semblable à celle de l'exemple 1 en utilisant du CM-Sephadex C-25 (type Na) et du Sephadex T LH-20 pour obtenir 324 mg ( rendement 49 %) d'une poudre blanche de trichlorhydrate de N-f 4-( 3aminopropyl)aminobutyl 7 -2-( 9-guanidinononanamido)-2-hydroxyéthanamide. Exemple 7 Synthèse du N-/4-( 3-aminopropyl)aminobutyl/-2-( 4-guanidino- butanamido)2-méthoxyéthanamide. A une solution de 45,5 mg ( 0,10 mmole) de trichlorhy- drate de N-/4-( 3-aminopropyl)aminobuty 17-2-( 4-guanidinobu 4- tanamido)2-hydroxyéthanamide dans 1 ml de méthanol anhydre, on ajoute 0,1 ml d'acide chlorhydrique 2 N dans le méthanol. On agite le mélange à la température ambiante pendant 17 heures On concentre le mélange réactionnel sous pression IO réduite et on dissout dans 3 ml d'eau On fait passer la solution obtenue à travers une colonne Liamètre interne ( 20 mm) garnie de 150 ml de CM-Sephade x C-25 qu'on frac- tionne par élution avec un gradient avec 1 litre d'eau et un litre d'une solution aqueuse 1 N de chlorure de sodium I 5 (taille des fractions: 17 ml) On réunit et on évapore à sec les fractionsn 67 à 71 correspondant aux concentra- tions en sel de 0,63 à 0,67 M et on extrait trois fois avec 5 ml de méthanol On fait passer la couche méthanoli- que à travers une colonne 20 mm de diamètre interne) gar- nie de 150 ml de Sephadex WLH-20 et on développe avec du méthanol (taille des fractions: 7 ml) On réunit les frac- tions n 10 à 14 et on évapore à sec pour obtenir 31,4 mg (rendement 67 %) d'une poudre blanche constituée de trichlor- hydrate de N-/_-( 3-aminopropyl)aminobuty 17-2-( 4-guanidinobu- tanamido)-2-méthoxyéthanamide. Exemple 8 Synthèse du N-/4-( 3-aminopropyl)aminobuty 17-2-( 6-guanidi- nohexanamido)-2-méthoxyéthanamide. A une solution de 177 mg ( 0,37 nmole) de trichlorhy- drate de N-/i-( 3-aminopropyl)aminobutyl 7-2-( 6-guanidinohexa- namido)-2-hydroxyéthanamide dans 3,6 ml de méthanol anhy- dre, on ajoute 0,36 ml d'acide chlorhydrique 2 N dans le méthanol On agite le mélange à la température ambiante pendant 17 heures On concentre le mélange réactionnel sous pression réduite et on purifie la poudre blanche obtenue de façon sealable à celle de l'exemple 7 e utilisant du CM-Sephadex'a C-25 (type Na) et un Sephadexo'LH-20 pour obtenir 110 mg (rendement 60 %) d'une poudre blanche consti- tuée de trichlorhydrate de N-/4-( 3-aminopropyl)aminobutyl/7- 2-( 6-guanidinohexanamido)-2-méthoxyéthanamide. Exemple 9 Synthèse du N-/4-( 3-aminopropyl)aminobuty 17-2-( 7-guanidinoheptanamido)-2-méthoxyéthanamide. A une solution de 920 rmg ( 1,85 mmole) de trichlorhy- drate de N-/_-( 3-aminopropyl)aminobuty 17-2-( 7-guanidino- heptanamido)-2-hydroxyéthanamide dans 20 ml de méthanol IO anhydre, on ajoute 2 ml d'acide chlorhydrique 2 N dans le méthanol On agite le mélange à la température ambiante pendant 15 heures On concentre le mélange réactionnel sous pression réduite et on dissout la poudre blanche obtenue dans 15 ml d'eau On ajuste le pli de la solution aqueuse à I 5 6 avec une solution aqueuse 1 N d'hydroxyde de sodium puis on fait passer a travers une colonne (diamètre interne mm) garnie de 300 ml de CM- Sephadex C-25 (type Na) et on fractionne par élution avec un gradient avec 2 litres d'eau et 2 litres de solution aqueuse 1 M de chlorure de sodium (taille des fractions; 17 ml) On réunit les frac- tions n 138 à 152 correspondant aux concentrations en chlorure de sodium de 0,59-0,65 M, on évapore à sec et on extrait deux fois avec 10 ml de méthanol On fait passer la couche méthanolique à travers une colonne (diamètre in- terne 25 mm) garnie de 300 ml de Sephadex DLH-20 et on développe avec du méthanol (taille des fractions: 7 ml). On réunit les fractions n 18 à 32 et on évapore à sec pour obtenir 607 mg (rendement 64 %) d'une poudre blanche consti- tuée de trichlorhydrate de N-/4-( 3-aminopropyl)aminobutyl 7- 2-( 7-guanidinoheptanamido)-2-méthoxyéthanamide. Exemple 10 Synthèse du N-/4-( 3-aminopropyl)aminobuty 117-2-( 8-guanidino- octanamido)-2-méthoxyéthanamide. A une solution de 220 mg ( 0,43 mmole) de trichlorhy- drate de N-/w-( 3-aminopropyl)aminobuty 17-2-( 8-guanidino- octanamido)-2-hydroxyéthanamide dans 4,4 ml de méthanol anhydre, on ajoute 0,44 ml d'acide chlorhydrique 2 N dans le méthanol On agite le mélange pendant une nuit à la température ambiante On concentre le mélange réactionnel sous pression réduite et on purifie la poudre blanche obte- nue de façon semblable à celle de l'exemple 7 en utilisant du CM-Sephadex R C-25 (type Na) et du Sephadex R LH-20 pour obtenir 195 mg (rendement 86 %) d'une poudre blanche cons- tituée de trichlorhydrate de N-/4-( 3-aminopropyl)aminobu- tylg-2-( 8-guanidinooctanamido)-2-méthoxyéthanamide. Exemple 11 IO Synthèse du N-/4-( 3-aminopropyl)aminobutyl/-2-( 9-guanidino- nonanamido)-2-méthoxyéthanamide. A une solution de 160 mg ( 0,31 mmole) de trichlorhy- drate de N-/4-( 3-aminopropyl)aminobuty 17-2-( 9-guanidinonona- namido)-2-hydroxyéthanamide dans 3,2 ml de méthanol anhy- dre, on ajoute 0,32 ml d'acide chlorhydrique 2 N dans le méthanol On agite le mélange pendant une nuit à la tempé- rature ambiante On concentre le mélange réactionnel sous pression réduiteet on purifie la poudre blanche obtenue de la même façon que dans l'exemple 7 en utilisant du CM- Sephadex @C-25 (type Na) et du Sephadext LH 20 pour ob- tenir 107 mg (rendement 65 %) d'une poudre blanche consti- tuée de trichlorhydrate de N-/4-( 3-aminopropyl)aminobutyl/- 2-( 9-guanidinononanamido)-2 méthoxyéthanamide. Exemple 12 Synthèse du N-/f ( 3-aminopropyl)aminobuty 17-2-( 7-guanidino- heptanamido)-2-éthoxyéthanamide. A 100 mg ( 0,20 mmole) de trichlorhydrate de N-/4-( 3- aminopropyl)aminobuty 17-2-( 7-guanidinoheptanamido)-2-hydro- xyéthanamide, on ajoute 10 ml d'éthanol anhydre et 1 ml d'éthanol anhydre saturé d'acide chlorhydrique gazeux On agite le mélange à la température ambiante pendant 24 heu- res On filtre le mélange réactionnel pour éliminer les matières insolubles et-on concentre le filtrat sous pres- sion réduite On purifie la poudre blanche obtenue de façon semblable à celle de l'exemple 7 enutilisant du CM-Sepha- dex CC-25 (type Na) et du Sephadex@ LH-20 pour obtenir 71 mg (rendement 68 %) d'une poudre blanche constituée de trichlorhydrate de N-/4-( 3-aminopropyl)aminobuty 17-2-( 7- guanidinoheptanamido)-2-éthoxyéthanamide. Exemple 13 Synthèse du N-/4-( 3-aminopropyl)aminobutyl/-2-( 7-guanidino- heptanamido)-2-butoxyéthanamnide. A 100 mg ( 0,2 mmole)de trichlorhydrate de N-/4-( 3- aminopropyl)aminobutyl_ 7-2-( 7-guanidinoheptanamido)-2-hydro- xyéthanamide, on ajoute 10 ml de n-butanol et 1 ml de n- butanol saturé d'acide chlorhydrique gazeux On agite le IO mélange à la température ambiante pendant 2 jours On fil- tre le mélange réactionnel pour éliminer les matières inso- lubles et on extrait le filtrat (solution dans le n buta- nol) trois fois avec 5 ml d'Eau, On neutralise la couche aqueuse avec de l'Amberlite úR-410 et on concentre sous I 5 pression réduite On purifie le résidu d'une façon sembla- ble à celle de l'exemple 7 en utilisant du CM-Sephadexy C-25 (type Na) et du Sephadex LH-20 pour obtenir 15 ig (rendement 13,5 %) dlune poudre blanche constituée de tri- chlorhydrate de N-/_-( 3-aminopropyl)aminobuy 17-2-( 7-gua- nidinoheptanamido)-2-butoxyéthanamide. Exemple 14 Synthèse du N-/4 ( 3-aminopropyl) aminobutyl/-2-( 7-guanidi- noheptanamido)-2-( 2-hydroxy)éthanamide. A une solution de 100 mg ( 0,20 mmole) de trichlorhy- drate de N-/ ( 3-aminopropyl) aminobuty 17-2 ( 7-guanidinro- heptanamido)-2-hydroxyéthanamide dans 5 ml d'éthylèneglycol, on ajoute 0,5 ml d'éthylèneglycol saturé d'acide chlorhy- drique gazeux On agite le mélange pendant une nuit à la température ambiante Apres addition de 25 ml d'eau, on ajuste le p H du mélange réactionnel à 6 avec une solution aqueuse 1 N d'hydroxyde de sodium et on purifie d'une façon semblable à celle de l'exemple 7 en utilisant du CM-Sepha- dex C-25 (type Na) et du Sephadex LH-20 pour obtenir 63 mg (rendement 58 %) d'une poudre blanche constituée de trichlorhydrate de N-/r-( 3-aminopropyl)aminobuty 17-2-( 7- guanidinoheptanamido)-2-( 2-hydroxy)éthoxyéthanamide. Exemple 15 Synthèse du N-/_-( 3-aminopropyl)aminobuty 17-2-( 7-guanidino- heptanamido)-2-benzyloxyéthanamide. A 100 mg ( 0,20 mimole) de trichlorhydrate de N-/4 i( 3- aminopropyl)aminonuty 17-2-( 7-guanidinoheptanamido)-2-hydroxyéthanamide, on ajoute 10 ml d'alcool benzylique et 1 ml d'alcool benzylique saturé d'acide chlorhydrique gazeux. On agite le mélange à la température ambiante pendant 18 heures On filtre le mélange réactionnel pour éliminer les IO matières insolubles et on extrait trois fois la couche d'alcool benzylique avec 5 ml d'eau On neutralise la cou- che aqueuse avec de l'Amberlite IR-410, on évapore à sec et on purifie d'une façon semblable à celle de l'exemple 7 en utilisant du CM-Sephadex C-25 (type Na) et du Sepha- I 5 dex LH-20 pour obtenir 61 mg (rendement 52 %) d'une poudre blanche de trichlorhydrate de N-/4-( 3-aminopropyl)aminobu- ty 17-2-( 7-guanidinoheptanamido)-2-benzyloxyéthanamide. Exemple 16 Synthèse du N-/ ( 3-aminopropyl)aminobuty 17-2-( 7-guanidino- 2-hepténamido)-2-hydroxyéthanamide. On chauffe à 60 C pendant 24 heures un mélan e de 234,5 mg ( 1,06 mmole) de chlorhydrate de 7-guanidino-2 hepténamide, 372,3 mg ( 1,27 immole de dichlorhydrate de N- /T-( 3-aminobrobyl)aminobuty 17-2,2-dihydroxyéthanamide, 140,4 mg ( 1,06 mmole) d'acide glutarique et 0,2 ml d'eau. * Après achèvement de la réaction, on purifie le mélange réactionnel d'une façon semblable à celle de l'exemple 1 en utilisant du CM-Sephadex "C-25 (type Na) et du Sepha- dex LH-20 pour obtenir 244,6 mg (rendement 46,5 %) d'une poudre blanche constituée de trichlorhydrate de N-/4-( 3- aminopropyl)aminobuty 17-2-( 7-guanidino-2-hepténamido)-2- hydroxyéthanamide. Exemple 17 Synthèse du N-/T-( 3-aminopropyl)aminobuty 17-2-( 8-guanidino- 2-octénamido)-2-hydroxyéthanamide. On chauffe à 60 C pendant 24 heures un mélange de 202,4 mg ( 0,86 mmole) de chlorhydrate de 8-guanidino-2- octénamide; 302,4 mg ( 1,04 mmole) de dichlorhydrate de N-/4 -( 3aminopropyl)aminobutyl 7-2,2-dihydroxyéthanamide, 113,9 mg ( 0,86 mmole) d'acide glutarique et 0,2 ml d'eau Après achèvement de la réaction, on purifie le mélange réactionnel d'une façon semblable à celle de l'exemple 1 en utilisant du CM-Sephadex C-25 (type Na) et du Sephadex QLH-20 pour obtenir 128,3 mg (rendement 29,2 %) de trichlorhydrate de N-/T-( 3aminopropyl)aminobutyl/-2-( 8-guanidino-2-octénamido) -2hydroxyéthanamide. IO Exemple 18 Synthèse du N-/4-( 3-aminopropyl)aminobuty 17-2-( 9-guanidin Q- 2-nonénamido)-2-hydroxyéthanamide. On chauffe à 60 C pendant 24 heures, un mélange de 206,2 mg ( 0,84 mmole) de chlorhydrate de 9-guanidino-2-noné- I 5 namide,291,0 mg ( 1,00 mmole) de dichlorhydrate de N-/4-( 3- aminopropyl aminobuty 17-2,2-dihydroxyéthanamide, 109,6 mg ( 0,84 mmole) d'acide glutarique et 0,2 ml d'eau Après achè- yement de la réaction, on purifie le mélange réactionnel d'une façon semblable à celle de l'exemple 1 en utilisant du CM-Sephadex C-25 (type Na) et du Sephadex LH-20 pour obtenir 135,0 mg (rendement 31,1 %) d'une poudre blanche constituée de trichlorhydrate de N-/4-( 3-aminopropyl)amino- buty 17-2-( 9-guanidino-2-nonénamido)-2-hydroxyéthanamide. Exemple 19 Synthèse du N-/4-( 3-aminopropyl)aminobuty 17-2-( 7-guanidino- 2-hepténamido)-2-méthoxyéthanamide. A une solution de 50,3 mg ( 0,10 mmole) de trichlorhy- drate de N-/T-( 3-aminopropyl)aminobuty 17-2-( 7-guànidino-2- hepténamido 2-hydroxyéthanamide dans 1 ml de méthanol anhy- dre, on ajoute O,1 ml d'acide chlorhydrique 2 N dans le méthanol On agite le mélange pendant une nuit à la tempé- rature ambiante et on concentre le mélange réactionnel sous pression réduite On purifie le résidu d'une façon semblable à celle de l'exemple 7 en utilisant du CM-Sephadex C-25 (type Na), et du Sephadex LH-20 pour obtenir 37,2 mg (rendement 72,4 %) de trichlorhydrate de N-/4-( 3-aminopro- pyl)aminobuty 17-2-( 7-guanidino-2-hepténamido)-2-méthoxyé- thanamide. Exemple 20 Synthèse du N-/z-( 3-aminopropyl)aminobuty 17-2-( 8-guanidino- 3-hydroxyoctanamido)-2-hydroxyéthanamide. On chauffe à 60 C pendant 24 heures un mélange de 150 mg ( 0,59 mmole) de chlorhydrate de 8-guanidino3- hydroxyoctanamide, 208 mg ( 0,71 mmole) de dichlorhydrate de N-/4-( 3aminopropyl)aminobuty 17-2,2-dihydroxyéthanamide, 78 mg ( 0,59 mmole) d'acide glutarique et 0,1 ml d'eau. Apres achèvement de la réaction, on purifie le mélange ré- IO actionnel d'une façon semblable à celle de l'exemple 1 en utilisant du CM-Sephadex"C-25 (type Na) et du Sephadex LH-20 pour obtenir 120,7 mg (rendement 38,6 %) d'une poudre blanche constituée de trichlorhydrate de N-/4-( 3-aminopro- pyl)aminobutyl_-2-( 8-guanidino-3-hydroxyoctanamido)-2- I 5 hydroxyéthanamide. Exemple 21 Synthèse du N -l 4-( 3-aminopropyl)aminobutyll -2 ( 9-guanidino- 3 _hydroxynonanan Lido) -2 -hydroxyéthanamide On chauffe à 60 C pendant 24 heures, un mélange de 325,8 mg ( 1,23 mmole)de chlorhydrate de 9-guanidino-3-hydroxy- nonanamide, 428, 1 mg ( 1,47 mmole) de dichlorhydrate de N-f 4- ( 3aminopropyl)aminobutylj-2, 2 -dihydroxyéthanamide, 161,4 mg ( 1, 23 mmole) d'acide glutarique et 0, 3 ml d'eau Après achève- ment de la réaction, on purifie le mélange réactionnel d'une façon semblable à celle de l'exemple 1 en utilisant du CM-Sephadex C-25 (type Na) et du Sephadex IH -20 pour obtenir 220,8 mg (rendement 33,4 %) d'une poudre blanche de trichlorhydrate de N -4 ( 3 -aminopropyl)aminobutyll -2 -( 9 -guanidino 3 -hydroxynonana- midcd-2 -hydroxyéthanamide. Exemple 22 Synthèse de 11-o-méthylspergualin. A une solution de 1, 8 g ( 3, 51 mmole) de trichlorhydrate de (-)spergualin dans 35 ml de méthanol anhydre, on ajoute 3, 5 ml d'acide chhlorhydrique 2 N dans le méthanol On agite le mélange à la température ambiante pendant 15 heures On évapore le mé- lange réactionnel à sec puis on dissout dans 30 ml d'eau, on fait passer à travers une colonne de CM-Sephadex C-25 (type Na; 600 ml) et on fractionne par élution avec un gradient avec 3 litres d'eau et 3 litres d'une solution aqueuse IN de chlorure de sodium (taille des fractions: 17 g) On réunit les fractions n 208 à 230, on les évapore à sec et on extrait trois fois avec 10 ml de méthanol. On fait passer la couche méthanolique à travers une colonne de Sephadex LH-20 ( 300 ml) et on élue avec du méthanol pour des- saler (taille des fractions: 7 g) On réunit les fractions n 19 à 33 et on évapore à sec pour obtenir 1, 528 g (rendement 82 %) d'une poudre blanche de trichlorhydrate de 11-o-méthylspergualin. Pour séparer le trichlorhydrate de 11-0-méthylsper- gualin en ses composants épimères, on effectue une chromatogra- phie liquide haute performance sur une colonne ( 2 cm de diamètre x 25 cm) garnie de Nucleosil Q 30 C 18, qui est une matière de garnissage en phase inverse de M Nagel Co, dans les condi- tions suivantes: Débit: 10 ml/min Pression: 24, 9 bars Solvant: acétonitrile-Cpentanesulfcnate de sodium 0,01 M + NA 2 HPO 4 0,01 l M (p H 3 J = 9/9 l. Charge: 6 mg Détection: UV 205 nm. En chromatographie liquide haute performance, le pic d'absorption UV du ()-ll-0-méthylspergualin (temps de rétention 48,3 minutes) appara-rt tout d'abord et il est suivi de celui du (+)-ll-0-méthylspergualin (temps de rétention 56,5 min) On répète douze fois le fractionnement On recueille les fractions correspondant à chaque pic et on les purifie d'une faon semblable à celle de l'exempl, en utilisant du CM-Sephadexk JC 25 (type Na) et du SephadexâLH-20 pour obtenir 32,9 mg d'une poudre blanche constituée de trichlorhydrate de (-)-11-0-méthylspergualin et 24, 5 mg d'une poudre blanche constituée de irichlorhydrate de (+) -11-0 -méthylspergualin. Exemple 23 Synthèse du 11-0-éthylspergualin A 484 mg ( 0,94 mmole) de di chlorhydrate de spergualin l-)-spergualin/(+)-spergualin = 1/17, on ajoute 20 ml d'éthanol anhydre et 2 ml d'acide chlorhydrique 2 N dans l'éthanol On agite le mélange à la température ambiante pendant 2 jours On évapore le mélange réactionnel à sec puis on dissout dans 10 ml d'eau, on ajuste le p H à 4 avec une solution aqueuse d'hydroxyde de sodium 1 N et on purifie essentiellement comme dans l'exemple 22 en utili- sant du CM-Sephadee C-25 (type Na) et du Sephadex)H-20, pour obtenir 355, 6 mg (rendement 70 % d'une poudre blanche constituée de trichlorhydrate de 11-0-éthylspergualin). Pour la séparation du trichlorhydrate de 11-0-éthyl- spergualin en ses composants épimères, on utilise la chromato- graphie liquide haute performance essentiellement de la même façon que dans l'exemple 22, si ce n'est que le solvant à utiliser est un mélange acétonitrile-fpentanesulfonate de sodium O, 01 M + Na 2 HP 04 0, 01 M (p Hl 3) ( 10, 5/89, 5) Par fractionnement répété, six fois au total, on obtient 11 mg d'une poudre blanche de trichlorhydrate de (-)-11-0éthylspergualin et 14,5 mg d'une poudre blanche de trichlorhydrate de (+)-11-0-éthylspergualin. Exemple 24 Synthèse du 11-0-n-butylspergualin A 493 mg ( 0, 96 mmole) de trichlorhydrate de (-)-sper- gualin on ajoute 30 ml de n-butanol et 3 ml de n-butanol saturé d'acide chlorhydrique On agite le mélange à la température am- biante pendant deux jours On évapore à sec la portion soluble dans le nbutanol du mélange réactionnel puis on dissout dans 10 ml d'eau, on ajuste le p H à 4 avec une solution aqueu l N d'hydro- xyde de sodium et on purifie avec du CM-Sephade) C-25 (type Na) et du Sephadex(LH-20 essentiellement de la même façon que dans l'exemple 22 pour obtenir 114,7 mg (rendement 21 %) d'une poudre blanche constituée de trichlorhydrate de 11-0-n-butylsper- gualin. Pour séparer le trichlorhydrate de 11-0-n-butylspergua- lin en ses composants épimères, on utilise la chromatographie liquide haute performance essentiellement de la même façon que dans l'exemple 22 si ce n'est que le solvant utilisé est un mélange acétonitrileCpentanesulfonate de sodium 0, 01 M + Na 2 HPO 4 0, 01 M (p H 3 F 7 ( 14, 5/85, 5) Par fractionnement répété, six fois au total, on obtient 15 mg d'une poudre blanche de trichlorhydrate de (-)-11-0-n-butylspergualin et 16 mg d'une poudre blanche de trichlorhydrate de (+)-11-0-n-butylspergualin. Exemple 25 Synthèse du 11-0-( 2-hydroxy)éthylspergualin A une solution de 2,88 g ( 5, 61 mmole) de trichlorhydrate de (-)-spergualin dans 100 ml d'éthylèneglycol, on ajoute 10 ml d'éthylèneglycol saturé d'acide chlorhydrique On agite le mélange à la température ambiante pendant 24 heures Après addition de 200 ml d'eau on ajuste le p H du mélange réactionnel à 4 avec une solution aqueuse IN d'hydroxyde de sodium et on purifie avec du CM-Sephadex GC-25 (type Na) et du Sephadef LH-20 essentiel- lement de la même façon que dans l'exemple 22 pour obtenir 2,7 g (rendement 73 %) d'une poudre blanche constituée de trichlorhydrate de 11-0-( 2-hydroxy)éthylspergualin. Pour séparer le trichlorhydrate de 11-0-( 2-hydroxy)- éthylspergualin en ses composants épimères, on utilise la chroma- tographie liquide haute performance comme dans l'exemple 22 si ce n'est que le solvant et la charge sont les suivants Solvant: acétonitrilelpentanesulfonate de sodium 0, 01 M + Na 2 HPO 4 0,01 M(p H 3 17 ( 7/93) Charge: 20 mg. Par fractionnement répété, six fois au total, on obtient 2, 3 mg d'une poudre blanche constituée de trichlorhydrate de (-)-11-0-( 2-hydroxy) éthylspergualin et 2, 5 mg d'une poudre blanche constituée de trichlorhydrate de (+)-11-0-( 2-hydroxy)éthylspergua- lin. Exemple 26 Synthèse du 11-0-benzylspergualin. A 2,36 g ( 4,60 mmole) de trichlorhydrate de (-)-spergua- lin, on ajoute 90 ml d'alcool benzylique et 9 ml d'alcool benzylique saturé d'acide chlorhydrique On agite le mélange à la tempéra- ture ambiante pendant une nuit On extrait le mélange réactionnel avec 350 ml d'eau et on ajuste le p H de la couche aqueuse à 6, O avec une solution aqueuse IN d'hydroxyde de sodium et on concen- tre à sec On dissout le résidu dans 20 ml d'une solution aqueuse 1 M de chlorure de sodium, on fait passer à travers une colonne de 500 ml de Diaion HP-20 (Mitsubishi Chemical Co) et on élue successivement avec 1, 5 litre de solution salée 0, 6 M, de solu- tion salée 0, 4 M et d'eau On évapore à sec la portion éluée par l'eau et on dessale avec du Sephade LH-20 comme dans l'exem- ple 1 pour obtenir 1, 92 g (rendement 69 %) d'une poudre blanche de trichlorhydrate de 11-0-benzylspergualin. Pour séparer le trichlorhydrate de 11-0-benzylsper- gualin en ses composants épimnères, on effectue une chromato- graphie liquide haute performance de la même façon que dans l'exemple 22 si ce n'est que le solvant employé est un mélange acétonitrile pentanesulfonate de sodium 0, 01 M + Na 2 HPO 4 0, 01 M (p H 3) ( 16/84) Par fractionnement répété, neuf fois au total, on obtient 21,2 mg d'une poudre blanche de trichlorhydrate de (-)-11 -0-benzylspergualin et 18, 8 mg d'une poudre blanche de trichlorhydrate de (+)-11 -0-benzylspergualin. Exemple 27 Synthèse de (-)-11-0-méthylspergualin (a) (-)-l-N,4-bis(benzyloxycarbonyl)spergualin. A une solution de 2, 3 g ( 4,48 mmole) de trichlorhydrate de (-)-spergualin dans un mélange de 11 ml de N,N-diméthylfor- mamide et 11 ml d'eau, on ajoute en refroidissant par la glace, 1, 25 ml ( 8, 96 mmole) de triéthylamine puis une solution de 2, 24 g ( 8,97 mmole) de N-benzyloxycarbonyloxysuccinimide dans 11 ml de N N-diméthylformamide On agite le mélange pendant 15 heures à 5 C On concentre le mélange riactionnel sous pression réduite, on dissout dans 10 ml d'une solution aqueuse 0, 5 M de chlorure de sodium puis on fait passer à travers une colonne de Diaion@ HP-20 ( 400 ml) équilibrée avec une solution aqueuse 0, 5 M de chlorure de sodium, on lave avec 1 litre de solution salée 0, 5 M. puis 1 litre d'eau et on élue avec du méthanol (taille des fractions 15 g) On réunit les fractions n 21 à 30 et on évapore à sec pour obtenir 287 mg (rendement 82 %) d'une poudre blanche constituée de chlorhydrate de (-)-1 -N, 4-bis (benzyloxycarbonyl)spergualin; c 1 D = 11 (c = 1; eau) Résonance magnétique nucléaire pro- tonique (dans le deutérométhanol), 6: 1,3 2,0 (CH 2 x 6), 2, 38 (CH 2), 2, 9 3,4 (NCH 2 x 5), 4,0 (CH), 5,04 (CH 2), 5,07 (CH 2), ,56 (CH), 7,30 (C 6 H 5 x 2). (b) (-)-1 -N 4-bis(benzyloxycarbonyl) 11-0-méthylspergualin. A une solution de 78 mg ( 0, 484 mmole) du chlorhydrate de (-) -1 -N, 4bis(benzyloxycarbonyl) spergualin ci-dessus dans 12 ml de chlorure de méthylène, on ajoute en refroidissant par la glace, 2, 44 ml ( 0, 484 mmole) d'une solution de 0, 1 ml de com- plexe trifluorure de bore-éther dans 4 ml de chlorure de méthylè- ne On ajoute au mélange par portions 9 ml ( 1 ml à intervalles de minutes à 1 heure) d'une solution de diazométhane dans le ehlo- rure de méthylène (la solution de diazométhane était préparée par addition progressive de 10 g de N-nitrosométhylurée à un mélange de 30 ml de solution à 40 % d'hydroxyde de potassium et 100 ml de chlorure de méthylène en refroidissant à 40 o C dans l'eau; sépa- ration de la couche organique, extraction de la couche aqueuse avec 10 ml de chlorure de méthylène; réunion des couches orga- niques et séchage sur des pastilles d'hydroxyde de potassium à C pendant 3 heures) On arrête l'agitation 3, 5 heures après le début de la réaction Après addition de plusieurs gouttes d'acide acétique dilué, on concentre le mélange réactionnel sous pression réduite puis on dissout dans 3 ml de méthanol aqueux à 50 %, on fait passer à travers une colonne de Diaion(HP-20 ( 100 ml), on lave avec 300 ml de méthanol aqueux à 10 % et on élue avec du méthanol (taille des fractions: 15 ml) On réunit les fractions n à 28 et on évapore à sec pour obtenir 262, 4 mg d'une poudre blanche constituée d'un mélange de chlorhydrate de (-)-1 -N, 4-bis (benzyloxycarbonyl)-11-0-méthylspergualin et de chlorhydrate de S (-)-1 N, 4-bis(benzyloxycarbonyl)spergualin (récupération 69, 2 % en poids) On détermine la composition de ce mélange par chroma- tographie liquide haute performance sur une colonne de Nucleosil R C 18 ( 4, O x 150 mm) et on élue avec un mélange ( 1/1) d'acétoni- trile et de (NH 4)2 HPO 4 0, 01 M à un débit de 0, 8 ml/min On cons- tate que le rapport entre le chlorhydrate de (-)-l-N,4-bis (benzyl- oxycarbonyl) 11-0-méthylspergualin (temps de rétention: 10,47 minutes) et le chlorhydrate de (-)-1 -N, 4-bis(benzyloxycarbonyl) spergualin (temps de rétention: 7,74 minutes) est de 47/50. On fait passer 78, 5 mg du mélange ci-dessus à, travers une colonne de 30 ml de Silicagel( 60 (Merck Co) et on élue avec un mélange de méthanol à 10 % dans le chloroforme On purifie l'éluat selon une chromatographie liquide haute performance effec- tuée dans les mêmes conditions que décrit ci-dessus On recueille les fractions présentant une absorption UV à 220 rim avec un temps de rétention de 10,47 minutes et on évapore à sec pour obtenir 28, 6 mg d'une poudre blanche constituée de chlorhydrate de (-)-1-N, 4bis(benzyloxycarbonyl)-11-0-méthylspergualin 5 D =-144 ( c = 1; méthanol) RMN protonique (dans le deutérométhanol), : 1, 3 2, 0 (CH 2 x 6), 2, 42 (CH 2), 2,9 3, 4 (NCH 2 x 5), 3, 37 (OCH 3), 4,0 (CH), 5,03 (CH 2), 5,08 (CH 2), 5,34 (CH), 7,29 (C 6 H 5 x 2). (c) (-)-11-0-méthylspergualin. Dans un mélange de 5 ml d'éthanol, 5 ml d'eau et 0,36 ml d'acide chlorhydrique i N, on dissout 130 mg du mélange ( 47/50) ci-dessus de chlorhydrate de (-)- 11-N, 4-bis(benzyloxycarbonyl)- 11-0-méthylspergualin et de chlorhydrate de (-)-1-N, 4-bis(benzyl- oxycarbonyl)spergualin Après addition de 50 mg de charbon 251 '4350 palladié à 10 % à la solution, on agite le mélange sous un courant d'hydrogène pendant 4 heures à la température ambiante On éli- mine le catalyseur par filtration et on évapore le filtrat à sec On dissout le résidu dans 3 ml d'eauo fait passer à travers une colonne de 150 ml de CM-Sephadex C-25 (type Na) et on frac- tionne par élution avec un gradient avec 900 ml d'eau et 900 ml d'une solution aqueuse 1 M de chlorure de sodium (taille des frac- tions: 17 g) On réunit les fractions n 76 à 81 et on dessale comme dans l'exemple 22 en utilisant du Sephadex LH-20, pour obtenir 25,4 mg (rendement 51 %) d'une poudre blanche de trichlorhydrate de (-)-11-0-méthylspergualin; ú 25 = 27, l(c = 1; eau). On dessale de façon semblable les fractions n 83 à 86 de l'éluat de la colonne de CM-Sephadex 2 pour récupérer 24,5 mg (récupération 52 %) d'une poudre blanche de trichlorhydrate de (-)-spergualin.Exemple 28 Synthèse du (-)-11-0-éthylspergualin. De façon semblable à celle de l'exemple 27 (b), on laisse réagir une solution de diazoéthane dans le chlorure de nméthylène avec 352 mg ( 0, 451 mmole) du chlorhydrate de (-)-l-N, 4-bis (benzyloxycarbonyl) spergualin obtenu dans l'exemple 27 (a) pour obtenir 217,0 mg d'un mélange de chlorhydrate de (-)-l-N-4-bis (benzyloxycarbonyl)-11-0- éthylspergualin et de chlorhydrate de (-)-1-N, 4-bis(benzyloxycarbonyl) spergualin On traite le mélange essentiellement de la même façon que dans l'exemple 27 (c) pour obtenir 41,7 mg d'une poudre blanche constituée de trichlorhydrate de (-)-11-0-éthylspergualin avec un rendement global de 17,1 %; &J;D = 24, 8 (c = 1; eau). Exemple 29 Synthèse du (-)-N 4 ( 3-aminop ropyl)aminobutylj -2-( 7-guanidino- heptanamido) -2 -méthoxyéthanamide. (a) (-) -N-fi 4 ( 3 -benzyloxycarbonylaminopropyl)benzyloxycarbonyl- aminobutyl J -2 -( 7 -guanidino-2 -hepténamido) -2 -méthoxyéthanamide. Dans 1,2 ml de N,N-diméthylformrnamide, on dissout 134,8 mg ( 0,187 mmrnole) du chlorhydrate de (-)-1-N,4-bis(benzyl- oxycarbonyl)-ll-0-méthylspergualin obtenu dans l'exemple 27 (b). On ajoute à la solution 192, 9 mg ( 0, 935 mmole) de dicyclohexyl- carbodiimide et 5, 6 mg de chlorure de cuivre (Cu Ci) On chauffe le mélange à 70 C pendant 3 heures Après refroidissement, on élimine le précipité par filtration et on concentre le filtrat sous pression réduite On dissout le résidu dans 5 ml de rnéthanol aqueux à 30 %, on aj te à p H 7, on fait passer à travers une colon- ne ( 80 ml) de Diaion VHP-20, on lave avec 300 ml d'eau puis avec 300 ml de méthanol aqueux à 10 % et on élue avec du n éthanol On recueille les fractions donnant une réaction de Sakaguchi positive et on concentre sous pression réduite pour obtenir 114 mg de chlorhydrate de (-)-N -l 4 ( 3benzyloxycarbonylaminopropyl) b enzyloxycarbonylaminobutylj -2 ( 7 -guenidino-2 -hepténamido) - 2-méthoxyéthanamide qui présente un signal du proton oléfinique à: 6, 02 dans le spectre de RIMN protonique (dans le deutéromé- thanol). (b) (-) -N-l 4 ( 3 -aminpropyl)aminobutylj -2 ( 7 -guanidinoheptenamcid- -2 -méthoxyéthanamide. Dans un mélange de 5 ml de méthanol et 5 ml d'eau, on dissout 114 mg du chlorhydrate de (-)-N-f 4-( 3-benzyloxycarbonyl- aminopropyl)benzyloxycarbonylaminobuty 17 -2 -( 7 -guanidino-2 - hepténamido)-2-méthoxyéthanamide obtenu ci-dessus en (a). Ala solution obtenue, on ajoute 0, 32 ml d'acide chlorhydrique 1 N et 50 mg de charbon palladié à 10 % On agite le mélange dans un courant d'hydrogène pendant 1, 5 heure à la température ordinaire. On sépare le catalyseur par filtration et on concentre le filtrat sous pression réduite On fait passer le résidu à travers une colon- 14350 ne de 100 ml de CM-Sephadexe C-25 (type Na) et on fractionne par élution avec un gradient avec 500 ml d'eau et 500 ml d'une solution aqueuse 1 M de chlorure de sodium (taille des fractions g) On réunit les fractions n 69 à 74, on concentre sous pres- sion réduite et on extrait trois fois avec 5 ml de méthanol On fait passer l,couche méthanolique à travers une colonne ( 150 ml) de Sephadexu LH-20 et on élue avec du méthanol pour dessaler (taille des fractions: 5 g) On réunit les fractions n 16 à 21 et on évapore à sec pour obtenir 17, 4 mg d'une poudre blanche de trichlorhydrate de (-)-N-l -( 3 -aminopropyl) aminobutyl -2 ( 7-gua- nidinoheptanamido)-2-méthoxyéthanamide; rendement global: 16,7 %; E 25 = -30,4 (c = 1 i; eau). R EV E N D I C A T IONS S 1 N L 4-( 3-aminopropyl) aminobutyll -2-CO -guani- dino(acide gras) amidon -éthanamides substitués en position 2 représentés par la formule générale: H 2 NCNH(CH 2) n-Y-CONHCHCONH( CH 2) 4 NH(CH 2) 3 NH 2 (I) li i NH OR dans laquelle Y représente -CH 2-CH 2 CH=CH ou -CH-CH 2-, OH R représente un atome d'hydrogène, un radical alkyle ayant 1 à 4 atomes de carbone qui peut éventuellement contenir un radical hydroxy comme substituant, ou un radical benzyle, et N est un nombre entier de 1 à 8, sous réserve que lorsque Y représente -CH-CH 2 et N est 4, R représente les OH radicaux autres que l'atome d'hydrogène; et leurs sels. 2 Composés ou sels selon la revendication 1, dans lesquels R représente un atome d'hydrogène ou un radical alkyle de 1 ou 2 atomes de carbone qui peut conte- nir un radical hydroxy comme substituant, et N est un nombre entier de 4 à 6. 3 Composés ou sels selon la revendication 1, dans lesquels R représente un atome d'hydrogène ou le radical méthyle et N est un nombre entier égal à 4 ou 6. 4 N L 4-( 3-aminopropyl)aminobutyll -2-( 7-guanidi- noheptanamido)-2-méthoxyéthanamide ou un sel de celui-ci. N l 4-( 3-aminopropyl) aminobutylj -2-( 7-guanidi- no-2-heptènamido)2-méthoxyéthanamide ou un sel de celui-ci. 6 N L 4-( 3-aminopropyl)aminobutyll -2-( 7-guanidi- no-3-hydroxyheptanamido)-2-méthoxyéthanamide ou un sel de celui-ci. 7 N C 4-( 3-aminopropyl)aminobutyll -2-( 9-guani- dinononanamido)-2-méthoxyéthanamide ou un sel de celui-ci. 8 N L 4-( 3-aminopropyl)aminobutyll -2-( 7-guanidi- noheptanamido)-2-hydroxyéthanamide ou un sel de celui-ci. 9 N l 4-( 3-aminopropyl) aminobutyll -2-( 9-quanidino- nonanamido)-2-hydroxyéthanamide ou un sel de celui-ci. Procédé de préparation d'un N 4-( 3-aminopropyl) amino-butyl-2-fw J guanidino(acide gras)amidoj -éthanamide substitué en position 2 représenté par la formule générale: H 2 NCNH(CH 2) -Y-CONHCHCONH(CH 2) NH (CH 2) 3 NH 2 (I) 2 2 i 2 I*H HI NH OR - dans laquelle Y représente -CH 2-CH 2-, -CH=CH ou -CH-CH 2-, OH R représente un atome d'hydrogène, un radical alkyle de 1 à 4 atomes de carbone qui peut contenir un radical hydroxy comme substituant, ou un radical benzyle et N est un nombre entier de 1 à 8, sous réserve que lorsque Y représente -CH-CH 2 et N est 4, R représente les radicaux autres que OH l'atome d'hydrogène, caractérisé en ce que (a) on condense un Ud-guanidinoamide gras représenté par la formule générale: H 2 NCINH (CH 2) n-Y-CONH 2 (I) II NH dans laquelle Y et N ont la même définition que ci-dessus avec le N l 4-( 3-aminopropyl)aminobuty 13 -2,2dihydroxyéthanamide représenté par la formule: HO CHCONH (CH 2) 4 NH (CH 2) 3 NH 2 (III) HO ou (b) on condense un W'-guanidino-amide gras représenté par la formule générale H 2 NCNH(CH 2) n-Y-CONH 2 NH dans laquelle Y et N sont tels que définis ci-dessus, avec le N r 4-( 3-aminopropyl)aminobutylj -2,2-dihydroxyéthana- mide représenté par la formule HO > CHCONH (CH 2)4 N(CH 2)3 d H 2 (III) HO pour former un N 14-( 3-amniinopropyl)aminobutyl -2-'-guani- dino(acide gras)amidoj -2-hydroxyéthanamide représenté par la formule générale: 1312 11 10 987 6 5 4 3 2 I H 2 NCNH (CH 2) n-Y-CONHCHCONHCH 2 CH 2 CH 12 CH 2 NHCH 2 c 2 CH 2 NH 2 Il 1 NH OH (Ia) dans laquelle N et Y sont tels que définis ci-dessus, puis, après protection si nécessaire du radical amino et du radical imino, on fait réagir le composé de formule (Ia) avec un mono ou un dialcool aliphatique de 1 à 4 atomes de carbone, une diazoparaffine de 1 à 4 atomes de carbone ou l'alcool benzylique et on élimine les groupes protec- teurs éventuels. 11 Procédé de préparation d'un N-l 4-( 3-aminopropyl) amino-butyl -2 L -guanidino(acide gras)amido, -2-alcoxy- éthanamide représenté par la formule générale: H 2 N N(CH 2) n-Y CONHCHCONH(CH 2)4 NH(CH 2)3 NH 2 (Ib) li i NH OR' dans laquelle Y représente -CH 2-CH 2-, -CH=CH ou -CH-CH 2-, OH R' représente un radical alkyle de 1 à 4 atomes de carbone qui peut contenir un radical hydroxy comme substituant, ou un radical benzyle et N est un nombre entier de 1 à 8, ou un sel de celui-ci caractérisé en ce qu'on fait réagir un N-l 4-( 3-amino-propyl)aminobutyl J -2-lr-guanidino(acide gras) amidoe -2-hydroxy-éthanamide représenté par la formule générale: H 2 NCN Hl (CH 2) -Y-CCNHCHCONE(CH 2) 4 NH (CH 2)3 NH 2 ( 3 a) *NH OH dans laquelle Y et N sont tels que définis ci-dessus, ou un sel de celuici, après protection si nécessaire des radicaux amino et imino, avec un mono ou un di-alcool aliphatique de 1 à 4 atomes de carbone, une diazoparaffine de 1 à 4 atomes de carbone ou un alcool benzylique et on élimine les groupes protecteurs éventuels. 12 Médicament à activité carcinostatique, caractérisé en ce qu'il contientcomme principe actif, un composé, ou sel suivant l'une quelconque des revendi- cations 1 à 9.