FR 2515960 A1 19830513 FR 8120801 A 19811106 La présente invention concerne des nanocapsules ou des nanoparticules biodégradables formées d'un cyanoacrylate d'alkyle polymérisé et contenant une substance biologiyuclscnt active, leur préparatioll et lours ÜpplicÜtions. Les nanocapsules suivant l'invention, Au microscope électronique à transmission, se présentent après coloration négative avec l'acide phosphotungstique sous la forme d'une particule non contrastée senssiblelllent ronde. Leur diamètre est homogène et le mode de préparation proposé permet de le maitriser. Selon les conditions operatoires il est possible d'obtenir des nanocapsules dont le diamètre va de quelques dizaines à plusieurs centaines de nanométres. L'enveloppe externe des nanocapsules contenant une huile ou-une substance active dispersée dans une huile apparaît au même microscope après double coloration successive, positive avec l'acide osmique qui contraste l'interieur des nanocapsules et négative avec l'acide phosphotungstique. L'huile et le principe actif sont enrobés totalement par une paroi d'épaisseur très réguliers de l'ordre de quelques nanomètres. La paroi est formée par la polymérisation d'un cyanoacrylate d'alkyle et plus particuliàrement l'isobutyle - 2 cyanoacrylate. Au microscope éléctronique à balayage les nanocapsules après lavage pour éliminer l'huile et après ombrage avec une couche d'or, apparaissent sous forme de particules sphériques ayant approximativement de même dimension. Le taux d'encapsulation est toujours très élevé dans le cas de produits lipophiles. 1 ml de monomere permet par exemple d'encapsuler 8 ml d'huile ultrafluide iodée (lipiodol) à 48 Z d'iode p/v ou 400 mg d'un produit antitumoral la lomustine (C.C.N.U) et 4 ml d'une huile utilisée comme support. Les nanocapsules contenant une huile telle que le lipiodol ultra-fluide sont stables à l'autoclavage pendant plus de 15 minutes à 120 OC sous une préssion d' 1 bar. Les nanocapsules sont stables à l'ultracentrifugation. Après une ultracentrifugation à 220 000 g pendant 1 heure 30 la plus grande part des nanocapsules peut être facilement rédispersée dans 1' eau. Les nanocapsules sont stables à la congélation.La taille moyenne reste la même après congélation | à - 52 Oc. Les nanocapsules sont stables dans le temps. La taille moyenne de nanocapsules contenant 20 Z de lipiodol ultra-fluide reste inchangée après 6 mois de conservation à la temp erature ambiante ou à 50 OC. Les nanocapsules assurent la stabilité de principes actifs habituellement instables en milieu aqueuse. La lomustine par exemple dont la demi- vie est de l'ordre de 20 å 200 minutes dans l'eau à 37 OC et à PH 7 reste stable dans les nanocapsules. Les résultats précédents ne peuvent s'expliquer que par la prcsence d'une paroi enveloppant le matériel encapsulé et que par une encapsulation complète du principe actif. La substance biologiquement active contenue dans les nanocapsules de l'invention peut être par exemple une substance médicamenteuse à usage humain ou vétérinaire ou un produit pour le diagnostic. Commue substance médicamenteuse, on peut citer plus particuliàrement les produits chimiques doués de propriétés pharmacologiques et par exemple, les substances antimitotiques ou antindoplasiqucs cosllrc la lomustine (C.C.N.U), le méthotrexate, l'actinomycine D, l'adriamycine, la daunorubicine, la bléomycine et la vincristine ou les substances antibiotiques comme les pénicillines les céphalosporines et l'acide nalidixique, les antibiotiques du type aminoglycoside et ceux de la famille de la virginiamycine et les substances hormonales, notamment les hormones stroidiques, comme la progéstérone. Ces substances médicamenteuses peuvent être notamment des composés chimiques à haut poids moléculaire comme l'insuline et lthéparine et l'expression substances médicamenteuse, comprend également des produits biologiques comme les antigenes, les allergènes, les enzymes,les protéines, les virus ou des constituants de virus, de bactéries ou de cellules. Les nanocapsules suivant l'invention peuvent également contenir un produit pour le diagnostic notamment des produits radiopaques lipophiles telle que les huiles iodées. En médecine humaine ou vétérinaire les particules submicroscopiques de l'invention peuvent être administrées avec un exipient adéquat par voie orale, sous - cutanée, intradermique intramusculaire ou intraveineuse et leur diffusion dans les tissus les rend particulièrement intéressantes pour les traitements par voie générale. On connaît déjà des particules de diamètre inférieur à 500 nanomàtres formées d'une matière polymérisée, ainsi que leur préparation et leur application notamment comme support d'une substance biologiquement active. Ainsi, les brevets belges N 808.034 et 839.748 décrivent des particules submicroscopiques formées de matières polymérisables comme les dérives de l'acide acrylique ou méthacrylique, par exemple le méthacrylate de méthyle, le méthacrylate de butyle, le méthacrylamide ou un mélange de ces comr posés. Les particules submicroscopiques formées par polymérisation micellaire de ces différents monomères ont à la fois la propriété d'enrober totalement ou partiellement la substance biologiquement active et la propriété de former des solutions aqueuses colloidales qui permettent une administration paren térale de ces particules ainsi chargées de substances biologiquement actives. Cependant, les polymères des dérivés de l'acide acrylique ou méthacrylique décrits dans ces brevets pour la préparation de particules submicro sCopiques contenant unc substance biologiquement active sont substantiell- ement stables de sorte qu'ils subsistent longtemps tels quels dans les tissus ou dans la cavité oû ils ont été administrés et ceci constitue un inconvénient, plus particulièrement dans le cas d'administration parentérale en médecine humaine. Le brevet belge N 869.107 relwwdie à ce desavantage en décrivant des nanoparticules biodégradables contenant une substance biologiquement active Lc materiau utilisé est constitué par des polymeres de cyanoacrylate d'alkyles déjà utilisés en chirurgie comme adhésifs tissulaires et connues pour leur biodégradabilité. Son inconvenient majeur tient à la structure des particules obtenues ct au mode d'incorporation de la substance active . Le mode operatoire décrit permet seulement de preparer des particules formées d'un reseau polymerique très dense . La substance active ne peut être incorporée que par adsorption et le taux fixé est toujours relativement faible. Quantité dc monomère Quantité de principe actif Z d'adsorption utilisée mise en oeuvre 0,83ml Methyloyanoacryl 1 mg Actinomycine D 90 % 0,83ml ate 1 mg = 90% 0,83 m1 I I mg w 90 Z 0,6 ml Ethylcyanoacryl- 10 mg Fluorescéine 65 - 70 Z ate 0,83 ml Methyloyanoacryl 5 mg Methotrexate 25 + 5 Z 0,6 ml - ate 10 mg Daunorubicine 85 Z Les nanocapsules faisant l'objet de la présente invention sont constituées comme les nanoparticules précédentes de polyalkylcyanoacrylates Elles ont donc comme elles l'avantage d'être biodégradables. Leur administration est suivie d'une libération de la substance biologiquement active, et il est possible d'obtenir une biodegradabilité, convenablement programmée en faisant appel à des polyalkylcyanoacrylates différant entre eux par la nature de la chaîne alkyle. Les nanocapsules de la présente invention presentent de plus l'avantage de permettre un taux d'incorporation nettement plus élevé. Contrairement aux nanoparticules formés d'un reseau très dense elles sont constituées d'une paroi entourant une cavité creuse et la présence de cette dernière permet d'encapsuler des quantités de substances actives beaucoup plus grandes. Un autre avantage des cyanoacrylates d' alkyle sur les autres dérivés acryliques précédemment utilisés pour la préparation de particules submicroscopiques contenant une substance biologiquement active réside dans le procédé utilisable pour leur polymérisation. En effet, contrairement aux autres dérives acryliques dont la polymérisation requiert un apport énergétique susceptible de nuire à la stabilité du principe actif adsorbé , les cyanoacrylates d'alkyle po0ynrisent particulièrement facilement sans un tel apport. Avec le procédé faisant l'objet de la presente invention il est possible de nanoencapsuler toutes les huiles vegetales ou minérales et toutes les substances huileuses qui sont solubles ou qui forment une émulsion suffisamment fines dans l'ethanol absolu , ou dans tout solvant pouvant jouer le même rôle . Comme solvants peuvent être utilisés notamment tous ceux missiblcs à l'eau et pouvant solubilise l'huile ct le monomère. Dans le cas d'ùne huile ou d'une substance active huileuse le principe de la préparation des nanocapsules en prenant l'éthanol absolu (alcool absolu) comme exemple de solvant est le suivant. a) On,solubilise l'huile ou la substance huileuse et le monomère dans l'alcool absolu. b) On injecte lentement la solution précédemment,préparée à l'aide d'un dispositif approprié dans de l'eau déminéralisée ou déminéralisée et disitillée contenant eventuellement 0,5 X à 1 Z d'un surfactif non ionique , par exemple le Pluronic F 68 sous ajitation magnétique. l'encapsulation se fait immédiatement. La solution devient blanche, laiteuse et présente l'effet Tyndall caractéristique des solution colloidales. c) On élimine l'alcool et on concentre les nanocapsules . Dans un éva porateur approprié et sous légère dépression l'alcool est evaporé et une part importante de l'eau peut être éliminée. I1 est possible ainsi de cocentrer les nanocapsules. Theorie de l'encapsulation: Dans le solvant par exemple dans l'ethanol absolu,la substance huileuse et le monomère forment une solution vraie. Le monomère possède des propriétés tensio-actives grâce à sa structure particulière. L'huile est complètement lipophile. Le stade important de la préparation est l'injection lente de la solution contenant l'huile et le monomère dans la phase aqueuse.L'alcool absolu possède une affinité considérable pour l'eau, et au moment du contact, il se mélange rapidement avec cette dernière en dégagant une certaine quantité de chaleur (appelée chaleur du mélange). La,substance huileuse précipite en formant des petites particules de l'ordre du nanomètre. Au même moment les molécules du monomère s'orientent grâce à leur polarité en formant un film qui enrobe complétement les nanoparticules d'huile.En presence d'eau le film constitué du monomère se polymèrise à la surface des nanoparticules, au moins de 30 secondes.Le rôle du surfactif utilisé est pls ou moins important. I1 est possible d'obtenir des nanocapsules dans de l'eau sans surfactit.Toutefois les nanocapsules ainsi obtenues s'agglomèrent rapidement dans le cas ou il est intéresant de concentrer, en formant des agrégats difficiles à redisperscr. La méthode décrite permet aussi de nanoencapsules toute substance active non huileuse soluble dans l'éthanol absolu et insoluble dans l'eau en utilisant un support huileuse approprié. Dans cc cas le mode oporaLoire est analogue. I1 suffit de solubiliser la substance active avec le support huileuse et le monomère dans l'éthanol absolu. Ce procedee peut être utilisé par exemple pour préparer des nanocapsules de lomustinc (C.C.N.U) ou de progéstérone. Les substances actives insolubles dans l'éthanol absolu, et solubles dans l'eau peuvent également être encapsulées. I1 suffit qu'elles présentent une certaine affinité pour la phase lipophile. Le procédé de préparation des nanocapsules suivant l'invention est analogue. I1 suffit de solubiliscr la substance active dans la phase aqueuse. Le taux d'encapsulation dépend du coefficient du partage de la substance active et de sa lipophilie. Dans le cas d'une substance active insoluble dans l'eau et dans l'éth- anol absolu, il est possible d'obtenir une encapsulation en préparant une suspension de la substance active dans un support huileuse approprié. Il faut alors que la taille des particules de la substance active en suspension soit en rapport avec le diamètre souhaité pour les nanocapsules. Il est egalement possible de préparer avec ce procédé des nanoparticules (nanosphères) dont la structure est voisine de celle des nanoparticules décrites dans le brevet d'invention belges NO 869.107 . Pour préparer ces nanoparticules suivant le procédé faisant l'objet de cette invention il suffit de ne pas utiliser de support huileuse lors de la préparation. Le procédé conduit alors à des nanoparticules biodégradables. L'avantage de ce nouveau procédé par rapport à la méthode décrite dans le brevet belge NO 869.107 est alors qu'il élimine les contraintes de PH. La méthode décrite dans le brevet belge oblige à préparer les nanoparticules entre PH 2 et 3. Avec la méthode faisant l'objet de la présente invention on peut préparer les nanoparticules à tout PH.I1 n'est pas necessaire d'opérer en milieu acide et cet avantage est important par exemple dans le cas de produits instables ou qui cristallisent dans un tel milieu. Un autre avantage de la préparation des nanoparticules selon le procédé faisant l'objet de cette invention est la possibilité qu'elle offre de fixer sur les nanoparticules des substances insolubles dans l'eau. Le troisième avantage de cette nouvelle méthode de préparation des nanoparticules est qu'elle permet d'obtenir des nanoparticules de taille moyenne très faible.Il est possible par exemple de préparer des nanoparticules contenant de la lomustine ou du la progesturooe cL prêbentant ulule taille moyenne de 80 lum. Une étude a été faite pour apprecier l'influence sur la taille des nanocapsules et des nanoparticules de la temperature de ln pllase a(lllelsset de la concentration en surfactif, du PH de la phase aqueuse, et de la concentration en éthanol absolu, L'étude a été faite notamment avec des nanocapsules préparées avec du lipiodol ultra-fluide et l'isobucyl-2 cynnoacryl- ate. Elle a montre que la taille augmente avec la tempernture. L'influence de la concentration en surfactif et celle du Pll sont limitées, toutefois a faible 1 > 11 la reaction de polymérisation est excessivement rapide. Le facteur le plus important est la concentration en éthanol absolu. Lorsque celle dernière est augmentée la taille moyenne des nanocapsules est significativement réduite. L'invention est illustrée par les exemples suivants qui n'en limitent pas la portée. Exemple 1 Dans 4 ml de lipiodol ultra-fluide (esters éthyliques des acides gras iodés de l'huile d'oeillette à 48 g d'iode par 100 ml) on dissout 0,5 ml d'isobutyl-2 cyanoacrylate monomère(colle biologique I.B.C-2 ETHICON) et on solubilise le tout dans 30 ml d'éthanol absolu. On dissout d'autre par 0,5 g de Pluroaic F 68 (polymere mixte d'oxyda d'éthylène et de polypropylène glycol), agent de surface nonionique,dans 50 ml d'eau déminéralisée. On injecte alors lentement la solution alcoolique à l'aide d'un dispositif approprié dans la phase aqueuse,sous agitation magnétique énergique. La polymérisation qui s'effectue spontanément rend d'abord la suspension opalescente et lui confère ensuite un aspect laiteux. La taille des nanocapsules est mésurée immédiatément- après la réaction avec un "Nano-Sizer". Les nanocapsules ont une taille moyenne égale à 265 nm avec une polydispersion de 0,75. La suspens ion des nanocapsules est ensuite concentrée sous vide lègèr et faible température jusqu'un volume de 20 ml pour éliminer l'éthanol absolu, et avoir une taux d'iode convenable. Les nanocapsules sont ensuite filtrées sur verre fritté dontles pores ont un diamètre compris entre 9 et 15 micromètres. La taille des nanocapsules est mésurée de nouveau au "Nano Sizer". La taille moyenne et la polydispersion sont restées inchangés. Une partie de la suspension des nanocapsules est centrifugée à 220.000 g pendant lhl/2. Le culot constitué des nanocapsules blanches ,peut être redisparsées dans l'eau par simple agitation (partie superieure). La redispersion ne peut s'expliquer que par l'existence de nanocapsules solides. L'examen des nanocapsules au microscope éléctronique à transméssion révèle qu'elles ont une forme sphérique de diamètre moyen très homogène Exemple 2 On procède comme décrit dans l'exemple 1, mais sans le monomère. On constate que 99 Z de la quantité de l'huile utilisée se separe au fond du bêcher.Cet essai montre le rôle fondamentale du moflollère Exemple 3 On procède cours décrit dans l'exemple 1, et on sLCerilise lei nanocapsules concentrées dans un autoclave à 120 "C pendant 15 minutes L'examen des nanocapsules au microscope éléctronique avant et après la stérilisation ne montre aucun changement. la taille moyenne des nanocapsules avant et après la stérilisation mésurée au Nano-Sizer est sensiblement la même Exemple 4 On procède comme décrit dans l'exemple 1, mais on utilise les quantité suivantes: 8 mi de lipiodol , 1 ml d'isobutyle- 2 cyanoacrylate, 100 ml d'éthanol absolu et 2 g de Pluronic F 68 solubilisé dans 200 ml d'eau déminéralisée . On prépare 3 lots de nanocapsules suivant la méthode générale. On mélange les trois lots et on concentre jusqu'à obtenir une concentration en lipiodol égale à 20 Z V/V . La suspension de nanocapsules ainsi préparée est répartie dans des flacons type pénicilliné. Les flacons sont fermés avec des bouchons de caoutchouc sertis d'une bague d'aluminium. Les nanocapsules ainsi préparées sont stérilisées à l'autoclave à 120 OC pendant 15 minutes Une partie des flacons est maintennu à la température ambiante, la taille moyenne des nanocapsules ( 256 nm ) n' a pas changé après 6 mois de conservation Exemple 5 On procède comme décrit dans l'exemple 4, mais on diminue la quantité de surfactif . On utilise 1 g de Pluronic F 68 solubilisé dans 200 ml d'eau déminéralisée . On étudie la stabilité de ces nanocapsules à la tempèrature ambiante, et à 50 OC . L'étude montre que les nanocapsules sont très stables dans les deux condition Exemple 6 On procede comme décrit dans l'exemple 1, mais on utilise 4 ml de Labrafil M 1944 (Glycérides oléiques polyoxyéthylénés) et on polymèrise dans 50 ml d'eau déminéralisée en presence de 0,5 Z de Pluronic F 68. On obtient des nanocapsules d'un diamètre moyen de l'ordre de 260 nm les nanocapsules au microscope éléctronique ont l'aspect habituel Exemple 7 On procède comme décrit dans l'exemple 6, mais on utilise 4 ml d'huile d'oeillette neutralisée.L'huile n'est pas soluble dnns ltéthallol absolu mais en presence du monomère elle forme une dispersion micellairc par samplc agitation magnétique. On obtient avec cette huile des nanocapsules ayant un diamètre moyen de l'ordre de 250 nm. Au microscope éléctronique l'aspect morphologique est celui habituel. Exemple 8 On procède comme décrit dans l'exemple 6, mais on utilise 4 ml de Miglyol 812 -huilc ncutre forme d'un mélange de triglycérides d'acide gras saturés et fractionnés de coco à longueur de diamine C8- C10. La taille moyenne des nanocapsules obtenues après concentration jusqu'à 20Z V/V est de 261 nm. Exemple 9 On procède comme décrit dans l'exemple 6, mais on utilise 4 ml d'un parfum, l'huile de Bouquet 4- 5312 et on polymérise dans 200 ml d'eau déminéralisée à 0,5% de Pluronic F68 . La taille moyenne des nanocapsules est de 221 nm,directément après la réaction,et sans concentration. La suspension de nanocapsules peut être facilement diluée sans modification des caractéestiques des nanocapsules . Après application l'odeur persiste plus longtemps qu'avec le produit non encapsulé. Exemple 10 On procède comme décrit dans l'exemple 6, mais on utilise 4 ml d'huile de Ricin, et on polymérise dans 100 ml d'eau déminéralisée en presence de 0,5% de Pluronic F68. La taille moyenne des nanocapsules après concentration à 20Z V/V est de 217 nm. Exemple il On procède comme décrit dans l'exemple 10, mais on utilise 4 ml d'huile d'arachide, qui est insoluble dans l'éthanol absolu. On obtient des nanocapsules ayant une taille moyenne de 261 nm. Exemple 12 On procède comme décrit dans l'exemple 10, mais on utilise 4 ml d'huile de Niaouli. La taille moyenne des nanocapsules obtenue est de 186 nm. Exemple 13 On dissout 200 mg de lomustine (C.C.N.U) et 1 ml de Miglyol 812 et 0,5 ml d'isobutyl- 2 cyanoacrylate dans 50 ml d'éthanol absolu. On polymèrise dans 100 ml d'eau déminéralisée en présence de 0,5 de Pluronic F68.On obt ieat des nanocapsules d'une taille moyenne de l'ordre de 184 nm,apès concen tration jusqu' à 2Q mi Après 24 h, on observe des cristeux de (C.C.N.U) sur la parois des flacons Exemple 14 On procède comme décrit dans l'exemple 13, mais on utilise 2 mi de Miglyol, et on polymérise dans 100 ml d'eau déminéralisée en presence de 1Z de l > luronic F 68, on obtient des nanocapsules de diamètre moyen égil à 201 nm, après concentration jusqu'à 20 ml.Les nanocapsules obtenues sont réparties dans des flacons type pénicilliné, aucune cristallisation de (C.C.N.U) nc se produit. Les flacons sont conservés à température ambi- ante. Les nanocapsules ainsi conservées subissent un contrôle identique tous les 10 jours, Le (C.C.N.U) est dosé dans le filtrat après filtration à travers une membrane millipore dont les diamètres des pores est égale à 50 nm sous préssion. Le (C.C.N.U) total est également dosé dans la suspension des nanocapsules, et la taille est mesurée au Nano-Sizer.Le dosage du (C.C.N.U) est effectué en U.V à 230 nm. I1 montre que 100% de la quantité mise en oeuvre sont encapsulés.Il montre aussi que le (C.C.N.U) encapsulé est resté intact après 40 jours de conservation à la date d'ecriture de ce brevet. La taille des nanocapsules reste également inchangée L'examen au microscope éléctronique après double coloration des nanocapsules met en évidence la présence d'une enveloppe entourant totalement le produit encapsulé. L'épaisseur de l'envéloppe est éstimée à environ 6 nm. Exemple 15 On procède comme décrit dans l'exemple 13, mais sans support huileuse (sans Miglyol). La majeure partie du (C.C.N.U) cristallise et reste sur le filtre (9-15 micromètre). Le filtrat présente le reflet bleuté très caractéristique des solution colloîdales. On obtient cette fois des nanoparticules et non des nanocapsules. La taille moyenne au Nano-Sizer est de 110 nm . Le taux de fixation est très faible Exemple 16 On dissout 200 mg de progestérone, 2 ml de Miglyol et 0,5 ml d'isobutyl2 cyanoacrylate, dans 50 ml d'éthanol absolu. On polymèrise dans 100 ml d'eau déminéralisée en présence de 1Z de Pluronic F 68.On obtient des nanocapsules de diamètre moyen égal à 220 nm Le dosage de la progestérone en U.V à 241 nm dans le filtrat (millipore 50 nm) et de la progestérone totale montre que le taux d'encapsulation est égal à 100 Z Exemple 17 On procède comme décrit dans l'exemple 16, mais sans Miglyol . On obtient des nanoparticules d'une taille moyenne de 83 nm . Le taux d'adsorption est inferieur à 1 Z Exemple 18 On dissout 2 ml de Miglyol et 0,5 ml d'isobutyl- 2 cyanoacrylate dans 50 ml d'éthanol absolu. On dissout 200 mg d'éosine (substance très soluble dans l'eau et dans l'méthanol absolu) dans 100 ml d'eau déminéralisée en pre- sence de 1 X de Pluronic F 68. On injecte la solution alcoolique dans la phase aqueuse. On obtient des nanocapsules d'une L.,iJ le moyenne elle à 230 nm . Lors d'une filtration à travèrs une membrane Millipore(50 nm) . Une partie du colorant est fixee par les nanocapsules,alors que l'autre partie passe avec le filtrat. La partie fixée resiste Zi un lavage par l'eau REVEND lCATIONS 1. Nanocapsules biodégradables formées d'une enveloppe resultant de la polymérisation d'un cyanoacrylat d'alkyle et d'une cavité centrale contenant une solution ou une suspension huileuse d'une substance biologiquement active. 2. Nanocapsules biodégradables suivant la revendication 1, caracterisées en cc que leur dia trie est inférieur à 1 sllicromètre 3. Procédé de fabrication des nanocapsules définies selon l'une quelconque des revendications 1 et 2, caracterisé en ce qu'il consiste: a) à dissoudre dans un solvant approprié, l'éthanol absolu ou tout autre solvant pouvant jouer le même rôle, un produit huileuse avec ou sans substance biologiquement active, et un cyanoacrylate d'alkyle b) à former des nanocapsules en injectant la solution précédente dans l'eau déminéralisée ou distillée contenant ou non un surfactif non ionique. c) si nécessaire, à éliminer le solvant et à concentrer la suspension des nanocapsules 4. Procédé de fabrication de nanoparticules(nanosplleres) biodégradables formées d'un réseau polymérique plus ou moins dense et contenant une substance biologiquement active caracterisé en ce qu'il consiste: a) à dissoudre dans un solvant approprié (éthanol absolu ou tout autre solvant pouvant jouer le même rôle) une substance biologiquement active et un cyanoacrylate d'alkyle b) à former des nanoparticules en injectant la solution précédente dans l'eau déminéralisée ou déminéralisée distillée contenant ou non un surfactif non ionique . c) si nécessaire, à éliminer le solvant et à concentrer la suspention de nanoparticules 5. Nanocapsules ou nanoparticules biodégradables suivant l'une des revendications 1 à 4, caracterisées en ce que la substance biologiquement active est un produit doué de propriétés antimitotique, antinéoplasique, antibiotique ou hormonale, un virus, un constituant de virus, de bactérie ou de cellule, un antigène, un allergène ou une enzyme ou un produit pour le diagnostic 6. Nanocapsules ou nanoparticules biodégradables suivant l'une quelconque des revendications 1 à 5, caracterisées en ce que la substance active encapsulée est le lipiodol ultra-fluide, produit radiopaque à 48% g d'iode/lOOml. 7. Nanocapsules ou nanoparticules biodégradables suivant l'une quelconque des revendications 1 à 6, caracterisées en ce que la substance active encap sulée est la lolllustine(C.C.N.U), ou la progestérone ou l'insuline 8. Nanocapsules ou nanoparticules biodégradables suivant l'une quelconque des revendications 1 à 7, caracterisées en ce que la substance biologiquement active , au moment de la preparation peut être dissoute ou misc en suspension dans la phase alcoolique ou aqueuse 9. Composition pharmaceutique contenant des nallocapsules ou des nanoparticules biodégradables suivant l'une quelconque des revendications 1 8, avec un expient pour l'administration orale, sous-cutanée, intradermique, intramusculaire ou intraveineuse