FR 2505610 A1 19821119 FR 8109889 A 19810514 PROCEDE T PRODUIT POUR LE TRAITE 1ENT DE SNG OU D'UNE SUBSTANCE ISSU DU SANG EN VUE DE SA CONSERVATION L'invention concerne un procédé de trai teent de sang ou d'une substance liquide issue du sang, telle que plasma, cruor, sérum..., en vue de sa conservation sous forme liquide ; elle s'étend à un produit d'addition pour la nise en oeuvre dudit procédé. Dans les secteurs techniques où on est amené à manipuler du sang (abattoirs...), il est fréquemment avantageux de garder celui-ci sous forme liquide, au moins un certain tempos, de façon à en faciliter les transferts et éven- tuellement le stockage, et à conserver intégralement toutes les substances constitutives de celui-ci ; toutefois, si l'on sait actuellement éviter que le sang se coagule, le problème de sa parfaite conservation à teapérature anbiante est mal résolu et, sur le plan pratique, la conservation du sang sous forme liquide n'est pratiquée à l'heure actuelle qu'à basse température (inférieure à 4 C) après addition d'un anticoagulant ; cette exigence de réfrigération représente une contrainte importante limitant considérablement l'intérêt pratique de ces procédés ; de ce fait, la plupart des abattoirs ont renoncé à récupérer le sang produit et le rejettent dans les cours d'eau ce qui constitue une source de forte pollution. Par ailleurs, on a proposé des procédés de traiteinent de sang liquide dans lesquels était utilisé un agent conservateur constitué par du bisulfite de sodium (on pourra se reporter à ce sujet à l'article suivant : Revue Die FLEISCHWIRTSCHAFT NO 6/1970 p. 827-828 auteur : Dr J. VRCHLABSKY Tchécoslovaquie) Toutefois, ces procédés relativement coplexes conduisent à de véritables réactions de transformation du sany et en conséquence à une dénaturation de celui-ci.De plus, les expérimentations ont démontré que les quantités de produits ajoutés et notaient de bisulfite de sodium doivent être tres importantes (supérieures en pratique d 10-15 graines de bisulfite par litre de sanza pour obtenir un effet de conservation sensible. Lorsue le sang est destiné à être incorporé dans un produit alimentaire pour l'anir.lal ou pour l'homme le bisulfite cui est toxique à forte dose doit être extrait ou transformé et les opérations d'extraction ou de transformation sont très onéreuses pour de telles concentrations de produit. La présente invention se propose d'indiquer un procéda de traitement per:lettant la conservation du sang, en l'absence des inconvénients des procédés connus, afin de fournir aux professionnels concernés la faculté de manipuler et éventuellement de stocker du sang SOUS forme liquide dans des conditions économiques intéressantes. Un objectif de l'invention est en particu- lier de permettre la conservation du sang (ou plus généralement du sang ou d'une ou plusieurs substances issues de celui-ci) pendant de longues durées, sans risque d'altération et de coagulation. Un autre objectif est de réduire iuns des proportions notables les quantités d'additifs ajoutés, tout particulièrement en ce qui concerne les additifs toxiques, de façon à abaisser le coût de leur extraction ou de leur transformation dans le cas où cette opération s'évère nécessaire (en particulier, pour une incorporation dans un produit alimentaire). A cet effet, le procédé de traitement conforme à l'invention consiste à ajouter au sang ou à la substance deux corps ui se combinent gour donner une action synergi que de destruction et/ou d'inhibition au moins partielle du développement des qerires, comme cela a été mis en evidence par les expérimentations de l'inventeur ; ces deux corps sont les suivants - un anticoagulant de type connu en soi, en particulier des ions citrates et/ou phosphates aptes à bloquer la participation des ions calciun à la coagulation, - un corps contenant du soufre et de l'o- xygène de nature à donner en solution aqueuse au moins un des composés suivants : anhydride sulfureux SO2 sous forme dissoute, acide sulfureux N2SO3 sous forme dissoute, ions sulfites acides '.iSO3 , ions sulfites SO3 , ions thiosulfates S2o ions thiosulfates acide HS2O3 , ions sulfates SO4 Le corps sus-évooué qui est de nature à donner les composés précités (SO2, ,J2SO3, :iSO3 , SO3 ,S20 HS203 , Su4 ) peut être notamment un métabisulfite métallique toutefois, d'autres corps libèrent ces composés avec création d'un équilibre dans la solution entre les divers composés ; il est bien entendu que l'invention s'étend à l'ensemble des corps aptes à fournir en solution au moins un de ces composés, en particulier : bisulfite métallique, disulfite, hydrosulfite, sulfite... L'action synergique inattendue des deux corps précités est extrêmement efficace comme le montreront les exemples décrits plus loin. Si on compare, par exenple, le no;a- bre de germes totaux existants dans le sang ou la substance liquide, 6 jours après le traitenent, on constate environ de 10 à 100 fois moins de germes lorsque le traitement conforme à l'invention a été appliqué par rapport à un traitement-utili- sant seul l'un ou l'autre des corps de base (anticoagulant ou bisulfite).Une amorce d'explication du phénomène (à elle seule vraisemblablement insuffisante) peut être la suivante : les composés de sulfite évoqués plus haut possèdent la double propriété de détruire les germes et de façon peu efficace de retarder l'effet de coagulation ; lorsqu'il est employé seul une partie importante du sulfite est consonée pour obtenir le second effet (peut-être de façon prioritaire) au détriment du premier effet, de sorte 'que des quantités très importantes sont nécessaires pour fournir un effet conservateur sensible. Au contraire, dans l'invention, cette consomnation en vue du second effet est supprimée (ou considérablement réduite) par la présence de l'anticoagulant et le sulfite sert essentiellement à l'effet de conservation pour lequel il devient alors extrême- ment efficace même en quantités réduites. I1 est à noter en outre que, de façon difficilement explicable à l'heure actuelle, les expérimentations ont montré que la synergie entre les deux corps était réciproque ; par exemple, l'effet anticoabulant bien connu du citrate ou du phosphate est renforcé dans des proportions notables par la présence de l'autre corps. Par ailleurs, selon une caractéristique avantageuse de l'invention, on ajoute également dans le sang ou la substance à conserver un glucide, en particulier du sac charose. De façon in;tP,ndue, ce corps conduit à un abaissement supplémentaire du nombre de germes, dans un rapport qui peut être de l'ordre de 5 à 1. De préférence l'anticoagulant, le corps contenant du soufre et de l'oxygène, et éventuellement le gluci- de sont ajoutés au sang ou à la substance sous forme de solution aqueuse de concentration telle que la pression osmotique du sang ou de la substance ne soit pas sensiblement nodifiée après addition. On réduit ainsi considérablenent la lyse des globules rouges et on évite le passage de l'hémo.lobine en solution dans le plasma ; de la sorte dans le cas où, après stockage ou manipulation, le sang est séparé en plasma et cruor, ce processus de mise cn oeuvre permet d'obtenir un plasma jaune, très peu teinté de rouge. De plus, il présente l'avantage que le gradient de densités obtenu entre le cruor et le plasma possède une valeur favorable à la séparation. Selon un mode de mise en oeuvre préféré, les divers additifs sont ajoutés au sang ou à la substance dans les plages de proportions suivantes (qui conduisent aux meilleurs compromis efficacité/quantités utilisées) - corps contenant du soufre et de l'oxygène mélangé dans des proportions telles que le sang ou la substance liquide contienne par litre approxinativement entre 0,5 et 8 grannes de S02 dissout, H2SO3 dissout, liS03 , SO3 S203 , HS 0 SO4 , pris globalement, 23' - anticoagulant approximativement compris entre 1 et 12 grammes par litre de sang ou de substance, - le cas échéant, glucide approximativement compris entre 0,1 et 5 grammes par litre de sang ou de suestan- ce. Le procédé conforne à l'invention peut être appliqué au sang recueilli dans les abattoirs, les additifs étant de préférence ajoutés dans les 30 minutes qui suivent le recueil. La mise en oeuvre s'effectue avantageusement en continu, le sang étant recueilli en continu après la saignée des anii;iaux et les additifs ajoutés en continu au fur et à mesure de son écoulement. I1 est ainsi possible d'exécuter toutes les manipulations sur du liquide ce qui conduit à des appareillages simples. Bien entendu, à un stade ultérieur, soit inné- diatement après transfert, soit après un certain temps de stockage, le sang peut être transformé en poudre ou concentré en fonction des impératifs de l'utilisation envisagée. L'invention s'étend à un produit d'addition pour la mise en oeuvre du procédé ci-dessus décrit, corps prenant un mélange d'un anticoagulant, en particulier ions citrates et/ou phosphates, et d'un corps contenant du soufre et de l'oxygène de nature à donner en solution aqueuse au moins un des composés suivants : anhydride sulfureux S02 sous forme dissoute, acide sulfureux H2S03 sous forme dissoute, ions sul fites acides HSO3 , ions sulfites SO3 ; de préférence, ce 3 produit comprend également un glucide, en particulier du saccharose. L'invention est illustrée par les exemples non limitatifs fournis ci-après. Les exemples 1 et 2 visent à illustrer l'effet synergique déjà évoqué et comprennent trois séries d'expérimentation comparatives A, B, C qui ont été reproduites plusieurs fois, les valeurs fournies ci-après sort des valeurs moyennes. EXEMPLE 1 Expérimentation A On dispose dans un seau de capacité supérieure à 5 litres une solution aqueuse contenant 20 g de métabisulfite de sodium et 20 g de citrate de sodium dans 0,8 litre d'eau. Après saignée d'un boeuf, on recueille dans le seau 5 litres de sang de façon à atteindre les proportions suivantes - 4 g de métabisulfite de sodium par litre de sang, correspondant approximativement à 2,6 g/l de S02 dissout, H2SO3 dissout, d'ions HSO3 et d'ions S03 , S20 HS203 , 504 pris globalement. - 4 g de citrate de sodium par litre de sang, correspondant approximativement à 2,5 g/l d'ions citrates. Le sang ainsi recueilli est mélangé à la solution aqueuse et est conservé à température ambiante (20 C) pendant 6 jours ; on effectue alors sur des prélèvements une analyse bactériologique pour déterminer le nombre de germes totaux présents. En premier lieu on peut constater que la fluidité du sang n'a pas varié et qu'il est resté sensiblement inodore. Les analyses ont donné en moyenne germes germes totaux par millilitres ; on sait que la honne qualité hygiénique d'un sang correspond à une plage de valeurs allant de 0 à 500.103 germes totaux (critère M. PINEL, V.P.C. Vol. 1 n 4 juillet 80). Au bot de 6 jours, le sang possède donc une excellente qualité hygiénique. Expérimentations B1 Des expérimentations analogues à A1 sont réalisées en utilisant uniquement du métabisulfite en proportion égale (4 g par litre de sang) et dans des conditions analogues (en l'absence de citrate). Au terme de 6 jours, le sang a en grande partie coagulé, mais demeure sans forte odeur. Les analyses bactériologiques ont révélé en moyenne 1 par millilitre de sang, soit environ 80 à 90 fois plus que dans les expérimentations A1. Selon le critère PIXEL ce sang a très largement franchi le seuil de contamination et est inutilisable. Expérimentations C1 Des expérimentations analogues ont été realisées avec uniquement du citrate en proportion égale (4 g par litre de sang) (en l'absence de métabisulfite). Au terme de 6 jours, le sang a coagulé mais plus tardivement que dans l'expérimentation B1. Le nombre de germes totaux décelés a été en moyenne de 2 100.103 soit environ-110 à 120 fois plus nombreux que dans les expérimentations A1. Les mêmes commentaires qu'en B1 ci-dessus peuvent être faits Ces expérimentations comparatives mettent en évidence l'extraordinaire effet synergique qui se produit lorsque l'on mélange les deux additifs. Cet effet synergique permet d'obtenir un sang d'excellente qualité hygi-énique apte à se conserver sous forme liquide pendant de longues durées (3 semaines à 1 mois) et contenant relativement peu de produits toxiques (S02). Ces produits toxiques peuvent être extraits par évaporation ou par diafiltration ou encore transformés en sulfate par oxydation et ce, à prix modéré compte tenu des faibles concentrations. EXEMPLE 2 On réalise les mêmes expérimentations avec du phosphates de sodium trisodique à la place du citrate. Expérimentation A2 La concentration en sulfite est la même qu'en A1 ci-dessus et la concentration en phosphate de sodium trisodiqueykst prise égale à 6 g par litre de sang, ce qui correspond à 1,5 gil d'ions phosphates. Le nombre de germes totaux décelés est en moyenne de 150.103 au bout de 6 jours : le sang a commencé à légèrementcoaguler mais demeure de bonne qualité hygiénique (critère PINEL). Les résultats sont satisfaisants mais moins bons qu'en A1. Expérimentations B Identique à B1. Expérimentation C2 Analogue à C1 mais avec 6 g/litre de phosphate seul au lieu du citrate. Au bout de 6 jours le sang a coagulé et cette coagulation est apparue dès le deuxième jour. Le nombre de germe décelé est en moyenne de 1 400.103 soit 9 à 10 fois plus importante que dans l'expérimentation A2. On constate donc un effet synergique important qui toutefois, est moins spectaculaire dans le cas A1. EXEMPLE 3 On reproduit l'expérimentation A1 cidessus mais en ajoutant 2 g de saccharose par litre de sang ce saccharose est dissout dans la solution aqueuse initialement présente dans le seau. Au terme de 6 jours, on ne constate aucune coagulation et le nombre de germes totaux décelées par les analyses est en moyenne de 4.103. En comparaison aux expérimentationsA1,cenombre a donc baissé dans un rapport de 4 à 5. La qualité hygiénique du sang est exceptionnelle et se maintient,sans coagulation, pendant une durée de 2 mois. Au terme de cette durée le nombre de germes décelés est de 12 . 103 , ce qui illustre un résultat exceptionnel, jamais atteint dans le domaine de la conservation du sang liquide à température ambiante. EXEMPLE 4 On reproduit l'expérimentation de l'exemple 3 ci-dessus mais avec du phosphate (6 gtl) à la place du citrate, le saccharose et le métabisulfite restant dans les mêmes proportions. Au terme de 6 jours, le sang a commencé à légèrement coaguler dans les mêmes conditions qu'en A2. Le nombre de germes décelés est en moyenne de 10.103 ; le saccharose est donc dans ce cas très efficace et réalise, avec les autres produits, un effet synergique supplémentaire très sensible sur le plan de la qualité bactériologique. REVEICIC.ATIONS 1/ - Procédé de traitement de sang ou d'une substance liquide issue du sany en vue de sa conservation sous forme liquide, du type dans lequel on ajoute dans le sang ou la substance un anticoagulant, en particulier ions citrates et/ou phosphates aptes à bloquer la participation des ions calcium à la coagdation, caractérisé en ce qu'on ajoute également dans le sang ou la substance un corps contenant du soufre et de l'oxygène, de nature à donner en solution aqueuse au moins un des composés suivants : anhydride sulfureux SO2 sous forme dissoute, acide sulfureux H2S03 sus forme dissoute, ions sulfites acides HSO3, ions sulfites S03 , ions thiosulfates S20 ions thiosulfdtes acides HS203 , ions sulfates S04 , de façon à obtenir entre l'anticoagulant et ledit corps une action synergique de destruction et/ou d'inhibition au moins partielle du développement des germes dans le sang ou la substance. 2/ - Procédé de traitement selon la re vedication 1, caractérisé en ce qu'on ajoute également dans le sang ou la substance un glucide, en particulier du saccharose. 3/ - Procédé de traitement selon l'une des revendications 1 ou 2, caractérisé en ce que l'anticoagulant, le corps contenant du soufre et de l'oxygène, et éventuellement le glucide sont ajoutés au sang ou à la substance sous forme de solution aqueuse de concentration telle que la pression osmotique du sang ou de la substance ne soit pas sensiblement modifiée après addition. 4/ - Procédé de traitement selon l'une des revendications 1 ou 2 ou 3, caractérisé en ce que l'on ajoute le corps contenant du soufre ct de l'oxygène dans des proportions telles que le sang ou la substance liquide contienne par litre approximativement entre 0,5 et 8 grammes de 502 dissout, H2S03 dissout, HS03 , S03 S203 , HS2 3 504 pris globalement. 5/ - Procédé de traitement selon l'une des revendications 1, 2, 3 ou 4, dans lequel l'anticoagulant utilisé est un citrate, ou un phosphate, caractérisé en ce qu l'on ajoute par litre de sang ou substance approximative- ment entre 1 et 12 grammes d'ions citrates ou phosphates. 6/ - Procédé de traitement selon la revendication 2, caractérisé en ce que l'on ajoute au sang ou à la substance approximativement entre 0,1 et 5 grammes de glucide. 7/ - Procédé de traitement selon l'une des revendications 1, 2, 3, 4, 5 ou 6, caractérisé en ce que le corps contenant du soufre et de l'oxygène ajouté au sang ou à la substance est du métabisulfite de sodium. 8/ - Procédé de traitement selon l'une des revendications 1, 2, 3, 4, 5, 6 ou 7, caractérisé en ce que l'anticoagulant est un phosphate et/ou citrate de sodium. 9/ - Procédé de traitement de sang, selon l'une des revendications 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 ou 8, caractérisé en ce que l'anticoagulant, le corps contenant du soufre et de l'oxygène et éventuellement le glucide, sont ajoutés au sang dans les 30 minutes qui suivent le recueil de celui-ci. 10/ - Procédé de traitement de sang selon l'une des revendications précédentes, caractérisé en ce qu'il est appliqué au sang recueilli dans les abattoirs, le sang étant ensuite stocké sous forme liquide. 11/ - Procédé selon la revendication 10, caractérisé en ce que l'on recueille le sang en continu après la saignée des animaux et en ce que l'on ajoute en continu l'anticoagulant, le corps précité contenant du soufre et de l'oxygène et éventuellement le glucide, au fur et à mesure de l'écoulement du sang recueilli. 12/ - Produit d'addition pour le traitement de sang ou substance issue du sang, caractérisé en ce qu'il comprend un mélange d'un anticoagulant, en particulier ions citrates et/ou phosphates, et d'un corps contenant du soufre et de l'oxygène de nature à donner en solution aqueuse au moins un des composés suivants : anhydride sulfureux, S02 sous forme dissoute, acide sulfureux il2S03 sous forme dissoute, ions sulfites acides HSO3 , ions sulfites S03 , ions thiosulfates S2O3, ions thiosulfates acides HS2O3 , ions sulfates 4 13/ - Produit d'addition selon la revendication 11, caractérisé en ce qu'il comprend également un ylucide, en particulier du saccharose.