FR 2508282 A1 19821231 FR 8211510 A 19820630 AGENT DIEIEIQUE CONSTITUE ESSNNTIEEIRMENT DE CULTURES DE LACTOBACILLUS CASEI ET/OU LAsCIOEACILLUS CONFUSUS,SON PROCEDE DE PREPARATION ET SON UTILISATION L'invention concerne un agent diététique obtenu S partir de cultures de Lactobacillus casei et/ou de Lactobacillus confusus dans un milieu nutritif approprié, sa fabrication et son utilisation. Le gros intestin de l'hoirie est colonisé par un grand nombre de genres de bactéries,parmi lesquels figurent les Clostridium. Dès qu'une colonisation normale apparaît (eubiose), le Clostridium perfringens est le représentant principal des Clostridium identifiables dans l'intestin. Dans des conditions déterminées (par exemple après apport d'antibiotiques), il peut se produire un manque durable ou passager de colonisation du canal de l'intestin d'où il résulte souvent que les germes de la flore du gros intestin peuvent également atteindre la partie supérieure de l'intestin grêle (-ce qui s'appelle "la surcroissance de l'intestin grêle), De tels manques de colonisation sont dénommés dysbioses. Au cours de tels manques de colonisation, les Clostridium augmentent souvent en excès, ce qui est lié, pour celui à qui cela arrive, à des conséquences toujours très désagréables, voire dangereuses. En effet, les Clostridium décomposent les hydrates de carbone avec une formation violente de gaz, ce qui se manifeste par le début de gonflements importants. Ceci permet aux symptômes de la maladie de progresser et porte un préjudice important aux patients (par exemple syndrome de Roemheld). Compte tenu de cela, les Clostridium sont capables de former des toxines, qui sont arrachées de la paroi intestinale et doivent repasser par le cycle entérohépatique pour la désintoxication. Plus récemment, on a appris que quelques genres de Clostridium pouvaient être au moins en partie responsables du fait que le cancer de l'intestin progresse de façon essentiellement plus importante dans les pays occidentaux industrialisés que dans les pays en voie de développement. Et enfin, il existe un genre spécial de Clostridium, à savoir le Clostridium difficile, connu comme agent responsable des colites pseudomembraneuses, une maladie pour l'instant souvent fatale à la suite d'une thérapie avec des antibiotiques. Le combat contre les Clostridium, aussi longtemps qu'ils se rencontrent de façon importante dans la flore-intestinale, est difficile et il n'existe pour l'instant aucune forme de thérapie énergique. L'invention a pour objet la mise en place d'un agent diététique pour arrêter et combattre, de façon efficace, les Clostridium. On â trouvé de façon inattendue que le Lactobacillus casei et le Lactobacillus confusus permettaient d'arrêter la croissance des Clostridium, et ceci aussi bien in vivo qu'in vitro, dans des mesures suffi- santes pour des utilisations thérapeutiques. C'est pourquoi, l'agent diététique conforme à l'invention est constitué essentiellement à partir de cultures de Lactobacillus casei et/ou de Lactobacillus confusus dans un milieu nutritif approprié. Comme cultures de Lactobacillus casei, toutes les soucies sont en principe appropriées, comme par exemple les sous-espèces de Lactobacillus casei Rhamnosus ATCC 7469, DSM 20 245, DSM 20 247, DSM 20 021, DSM 20 022, DSM 20 023, DSM 20 178, DSM 20 258 ou DSM 20 012, les sous-espèces Alactosus ATCC 27 216 ou DSM 20 o06, les sous-especes Pseudoplantorum ATCC 25 598 ou DSM 20 008 ou Lactobacillus casei ATCC 393, DSM 20 011, ou DSM 20 312. Le sous-genre Lactobacillus casei sousespèce rhamnosus est préféré. Comme cultures de Lactobacillus confusus, toutes les souches sont en principe appropriées, telles que par exemple les souches Lactobacillus eonfusus "Hoffmann" > Lactobacillus confusus DSM 20 196 et DSM 20 194 Gomme milieux de cultures appropriés; toutes les solutions de nutrition conviennent dans a mesure cù elles sont appropriées du point de vue physiologique, diététique, et gustatif. Çn préfère les produits'laitiers, tels que le lait de soja, qui est avantageux, ou le petitlait, et en particulier le lait écrémé.Les milieux de nutrition peuvent etre pourvus d'additifs, tels que les extraits de levure et/ou des peptones et/ou autres, les substances nécessaires à la digestion, de préférence en quantité de 0,1 jusqu'à 1 Z poids-volume, rapporté au milieu de nutrition préparé. En particulier, en utilisant le lait écrémé, qui est préparé habituellement à partir de lait écrémé sec et d'eau, une addition d'extraits de levure et/ou de peptone se révèle appropriée. Il peut aussi s'agir d'un mélange'de deux ou plus de milieux de nutrition appropriés, choisis parmi les milieux cités ci-dessus. De préférence, on ajoute 0,4 à- o,6 Z en poids d'extraits de levure et 0,4 à 0,6 Z en poids de peptoné, rapportés au volume de la solution. L > agent diététique peut contenir encore d'autres additifs diététiques appropriés usuels, tels que le glucose, le beta-galactose et/ou le lactulose. De plus, il apparaît avantageux d'ajouter à l'agent conforme à l'invention également une culture symbiotique, laquelle est constituée de souches de Lactobacillus bifidis et de Lactobacillus.acidophilus. Lagent diététique est conservé et manipulé de préférence sous forme lyophilisée. I1 contient, rapporté à l'état de matière sèche, de préférence 106 à in10, en particulier 108 à 109 de cellules vivantes de Lactobacillus casei et respectivement de Lactobacillus confusus par gramme. L'agent peut pourtant directement être utilisé comme solution de culture ou en mélange avec d'autres agents diététiques. L'invention propose également un procédé de fabrication d'agents diététiques conformément à l'invention, caractérisé en ce qu'on inocule le milieu. de nutrition avec une culture pure de Lactobacillus casei et/ou de Lactobacillus confusus, on laisse incuber la culture, on la refroidit et, le cas échéant, on la met sous une autre forme appropriée, pour l'administration. De préférence, elle est lyophilisée après refroidissement. Le temps d'incubation dépend de la température. De préférence, on laisse incuber pendant 15 à.30 heures, à une température de 15 à 45"C et en particulier pendant 24 heures à 37 + 20C. Pendant la culture, on maintient le pH de préférence à une valeur comprise entre 5,7 et 5,9, de façon appropriée, en ajoutant un alcalin. Le lait de chaux (solution d'hydroxyde de calcium) est particulièrement approprié, et est régulé en général 2 à 4 fois pendant la culture. On a trouvé que l'agent conformément à l'invention est très bien pour le traitement de l'homme, mais convient également pour celui des animaux, chez lesquels un examen bactériologique approfondi des selles montre que les Clostridîum sont présents en quantités importantes dans la flore intestinale, d'où il résulte des gonflements importants. Après administration de l'agent diététique conforme à l'invention, on observe dans ces cas, en règle générale, dans les premiers jours qui suivent la prise, une nette amélioration, c'est-à-dire une récession des gonflements. Un examen bactériologique des selles effectué en même temps montre dans ces cas une diminution du nombre des Clostridium qui peuvent se développer, par l'épreuve de la selle. L'invention propose également l'utilisation d'a gen-ts diététiques conformes A--14invention, pour arrêter et combattre les Clostridium dans l'intestin humain et animal. Lorsque l'agent selon l'invention se présente sous forme lyophilisée, alors l'utilisation préférée consiste à mélanger une cuillérée à café dans un verre d'eau tiède et à boire aussitôt cette suspension. La fréquence de l'administration est réglée en particulier par la gravité de la maladie et l'état général de la personne à traiter. Elle a lieu, de façon appropriée, environ 1 à 3 fois par jour, de préférence après les repas, par exemple après le petit déjeuner, et le cas échéant après les principaux repas. Un apport en culture symbiotique de Lactobacillus bifidus et Lactobacillus acidophilus accélère et facilite la récupération de l'état de santé normal. L'exemple suivant montre un mode de réalisation avantageux de l'invention. EXEMPLE A une solution de nutrition préparée à partir de poudre de lait de soja et d'eau rapportée à la solution de nutrition, on ajoute 0,5 Z en poids d'extraits de levures et de peptones, et on inocule à l'aide d'une culture pure de Lactobacillus casei, variété rhamnosus DSM 20 245. La culture incube pendant 24 heures à une température de 370 C. Après environ 8 heures, la valeur du pH est portée de 5,8 à 5,9 par addition de la quantité requise de lait de chaux. Ensuite, la culture est refroidie et lyophilisée0 Le lyophilisat obtenu de cette façon est stocké au frais. Pour administrer, on mélange le produit avec de lteau tiède (environ une euillérée à café pour 1/4 litre d'eau) et on boit immédiatement la suspension. A la place de lait de soja, on utilise également' du lait écrémé et du petit lait. REVENDICATIONS 1. Agent diététique se composant essentiellement de cultures de Lactobacillus casei et/ou de Lacto- bacillus confusus dans un milieu nutritif approprié. 2. Agent diététique selon la revendication 1, caractérisé en ce que le milieu nutritif est du lait de soja. 3. Agent diététique selon l'une des revendications 1 ou 2, caractérisé en ce que le milieu nutritif est du lait écrémé et/ou du petit lait. 4. Agent diététique selon les revendications 1 à 3, caractérisé en ce que le milieu nutritif contient des additifs d'extraits de levure et/ou de peptones et/ou de substances exigées pour la digestion. 5. Agent diététique selon les revendications 1 à 4, caractérisé en ce qu'il se présente sous forme lyophilisée. 6. Agent diététique selon les revendications 1 à 5, caractérisé en ce que, rapporté à l'état lyophilisé, il contient 106 à 1011 cellules vivantes de Lactobacillus casei et/ou Lactobacillus confusus par gramme. 7. Agent diététique selon les revendications 1 à 6, caractérisé en ce qu'il contient comme culture de Lactobacillus casei, la sous-espèce de Lactobacillus rhamnosus. 8. Agent diététique selon les revendications 1 à 7, caractérisé en ce qu'il contient en plus une culture symbiotique de Lactobacillus acidophilus et de Lactobacillus bifidus. 9. Procédé pour la fabrication d'un agent diététique selon les revendications 1 à 8, caractérisé en ce qu'on inocule le milieu nutritif avec une culture pure de Lactobacillus casei et/ou de Lactobacillus confusus, on laisse incuber la culture, on la refroidit et,le cas échéant, on la met sous forme appropriée pour l'administration. 10. Procédé selon la revendication 9, caractérisé en ce qu'on lyophilise, après le refroidissement 11. Procédé selon la revendication 9 ou 10, caractérisé en ce qu'on effectue l'incubation pendant 15 à 30 heures, à une température de 15 à 1150c. 12. Procédé-selon les revendications 9 à 11, caractérisé en ce qu'on effectue l'incubation pendant 24 heures à une température de 37 + 20C. 13. Procédé selon les revendications 9 à 12, caractérisé en ce qu'on incube le lait écrémé en présence d'extraits de levure et/ou de peptones, avec une culture pure de Lactobacillus casei, variété rhamnosus et on incube 24 heures à une température de 37 + 20C. 14. Procédé selon les revendications 9 à 13, caractérisé en -ce qu'on maintient la valeur du pH pendant la culture entre 5,7 et 5,9. 15. Agent diététique selon le procédé conforme aux revendications 9 à 14. 16. Utilisation de l'agent diététique selon les revendications 1 à 8 et 15 pour arrêter et combattre les Clostridium dans l'intestin.