FR 2469395 A1 19810522 FR 7927688 A 19791109 La présente invention concerne un nouveau cyclopeptide, le cyclo fL leucyl-L transuiéthyl-4 prolyl- leucyl N-méthylvalyl L prolyl-D N-méthylleucyl-glycyl-N-(N-dodecyl-L pipéridyl-2 carbonyl L transmethyl-4 prolyl) 1. N-méthylthréonyl] de formule ses sels addition avec les acides, son procédé de préparation et les médicaments qui le contiennent. Dans la formule (I) : MePro signifie : L transméthyl-4 proline MeThr signifie : L N-méthylthréonine MeVal signifie : L N-méthylvaline MeLeu signifie : D N-méthylleucine Pro signifie : L proline Gly signifie : glycocolle Leu signifie : L leucine Thr signifie : L thréonine Dans le brevet japonais 743 248 a été décrite la préparation de cyclopeptides de formule générale R - cyclopeptide A (II) dans laquelle cyclopeptide A désigne un nonapeptide dont la structure est et R représente un radical alcanoyle, alcénoyle, alcadiénoyle, alcoyl ozcycarbonyle, aroyle, aralcanovie, arylsulfényle, arylsulfinyle, arylsulfonyle, cycloalcoylcarbonyle, hétérocyclylcarbonyle, hétérocyclylalcanoyle ou un reste de radical peptidique linéaire rattaché par un groupe carbonyle à l'atome d'azote de la L transméthyl-4 proline de la chaîne latérale du cyclopeptide A. Dans ce qui précède - les portions alcoyles, alcényles ou alcadiényles des radicaux alcanoyles, alcénoyles, alcadiénoyles, aralcanoyles ou hétérocyclylalcanoyles sont des chaînes droites ou ramifiées contenant 1 à 50 atomes de carbone éventuellement substituées par un ou plusieurs atomes d'halogène ou radicaux amino ou alcoylthio contenant 1 à 5 atomes de carbone, - les portions alcoyles des radicaux alcoyloxycarbonyles contiennent 1 à 15 atomes de carbone et peuvent être substituées par un radical dialcoylamino dont les portions alcoyles contiennent chacune 1 à 5 atomes de carbont, - les portions aromatiques des radicaux aroyles, aralcanoyles, arylsulfényles, arylsulfinyles ou arylsulfonyles représentent un noyau benzénique ou naphtalénique éventuellement substitué par un ou plusieurs radicaux alcoyles, hydroxyles, benzoyles, amino, dialcoylamino, alcanoylamino ou nitro (les radicaux alcoyles et les portions alcoyles des autres radicaux contenant 1 à 12 atomes de carbone), - les portions hétérocycliques des radicaux hétérocyclylcarbonyles ou hétérocyclylalcanoyles représentent des hétérocycles mononucléaires à 5 ou 6 chaînons contenant un ou plusieurs atomes d'azote ou un radical phénothiazinyl éventuellement substitués par un ou plusieurs radicaux alcoyles ou nitro, - les portions cycloalcoyles des radicaux cycloalcoylcarbonyles représentent des radicaux cycloalcoyles à 5 ou 6 chaînons, éventuellement substitués par un ou plusieurs radicaux amino, - les restes des radicaux peptidiques linéaires contiennent 2 à 15 aminoacides, - les radicaux amino qui substituent les portions alcoyles, alcényles ou cycloalcoyles des radicaux définis précédemment et les fonctions amines des radicaux peptidiques linéaires peuvent être éventuellement substitués par un ou plusieurs radicaux alcoyles, alcanoyles, aralcoyles, alcoyloxyearbonyles,aralcoyloxycarbonyles ou alcoyloxyaralcoyloxycarbonyles, les radicaux alcoyles et les portions alcoyles des autres radicaux contenant 1 à 30 atomes de carbone. Ces produits présentent des propriétés antituberculeuses et ils manifestent une bonne activité sur les germes Gram-positifs et négatifs. Ces produits sont, pour la pluparts actifs in vitro lorsque l'on les étudie selon la méthode des dilutions en milieu de Dubos. Leur activité in vivo peut être déterminée, chez la souris, en utilisant en particulier le test suivant Des souris B6D2Fl sont inoculées par voie intra-veineuse avec la souche humaine Du. Elles reçoivent 0,2 cm3 d'un inoculum préparé en broyant dans de la fraction V d'albumine bovine à 0,5 % des colonies prélevées sur milieu de Lowenstein-Jensen, soit environ 0 > 0015 mg (poids sec) de bacilles par souris. Les traitements sont commencés le lendemain de l'infection et sont poursuivis pendant 4 semaines à raison de 5 traitements par semaine. Les produits, sous forme de base ou de sel sont mis en solution dans l'eau et sont administrés par sonde oesophagienne à raison de 0,5 cm3 par souris. Des souris témoins ne reçoivent que de l'eau. Les animaux ne sont pas sacrifiés. Les temps de survie sont notés et les durées moyennes de survie (T50) sont calculées par la méthode de Litchfield. Dans ces conditions, seuls le (N-benzyl N-méthyl L valyl)cyclopeptide A, le méthanesulfonate de (N-benzyl N-méthyl DL valyl)cyclopeptide A, le méthanesulfonate de N-benzylsarcosyl-cyclo- peptide An le chlorhydrate de (N-benzyl N-méthyl L méthionyl-cyclopeptide A et le chlorhydrate de (N-hexyl N-méthyl L valyl)-cyclopeptide A conduisent à un pourcentage d'augmentation du temps de survie supérieur à 200 %, à des doses comprises entre 100 et 300 mg/kg p.o.. Ces produits ne manifestent cependant pas une activité suffisaute pour permettre une utilisation commode en thérapeutique humaine. Parmi les produits qui sont compris dans le brevet japonais 743 248, le(N-lauryl N-méthyl D valy -cyclopeptide A, qui est obtenu par action de la N-lauryl N-méthyl D valine sur le cyclopeptide A en présence de dicyclohexylcarbodiimide > s' est révélé actif chez la souris à des doses beaucoup plus faibles que les produits déjà décrits. Ainsi à la dose de 5 mg/kg pOo. l'augmentation du temps de survie es de 15 % et elle atteint 60 % à la dose de 7,5 mg/kg p.o. Ce produit, bien qu'ayant une activité nettement plus élevée, exerce cependant des effets secondaires néfastes qui compromettent ses possibilités d'uLlisation en thérapeutique humaine. Ainsi chez la souris, aux doses de 225, 75 et 25 mg/kg p.o./jour pendant 24 jours, il se produit, dès le 9ème jour du traitement des phénomènes de tétanie qui ne disparaissent que 7 à 10 jours après la fin du traitement. Chez le chien, aux doses de 75 et 25 mg/kg p.o. par jour pendant 3 mois, le(N-lauryl N-méthyl D valyl)-cyclopeptide A produit des troubles neuromusculaires. Chez le rat, il conduit en plus à des troubles fonctionnels du foie. I1 a maintenant été trouvé que le produit de formule (I), qui manifeste une activité in vitro et in vivo supérieure à celle des produits déjà décrits dans cette série, n'exerce pas, de façon surprenante et inattendue, les effets secondaires néfastes qui ont été mentionnés ci-dessus. Ainsi in vitro la concentration minimale inhibitrice sur la souche 1137Rv du produit de formule (I) est de 0,05 pg/cm3. In vivo, à la dose de 7,5 mg/kg p.o., le pourcentage d'augmentation de survie est voisin de 200 %. Chez le rat, aux doses de 225, 75 et 25 mg/kg p.o. par jour pendant 3 mois et chez le chien aux doses de 150, 75 et 25 mg/kg p.o., le produit est bien toléré et en particulier l'apparition de troubles neuromusculaires n'est pas enregistrée. Il en résulte que le produit de formule (I) est un agent antituberculeux particulièrement intéressant. Selon la présente invention, le produit de formule (I) peut être obtenu par condensation de l'acide N-dodécyl pipéridine-2 carboxylique ou d'un dérivé activé de cet acide sur le cyclopeptide A, c'est-à-dire sur le produit de formule générale (II) dans laquelle R représente un atome d'hydrogène, par toutes les méthodes connues employées en chimie peptidique. Comme méthode de condensation, il y a lieu de mentionner, par exemple, la méthode auxcarbodiimides,la méthode à l'azide, la méthode aux esters activés et la méthode aux anhydrides mixtes. Plus particulièrement, lorsque l'on utilise l'acide N-dodécylpipéridine-2 carboxylique, la réaction s'effectue dans un solvant organique tel que l'acétate d'éthyle, le diméthylformamide, l'acétonitrile ou le chlorure de méthylène, à une température comprise entre 0 et 300C et en présence d'un carbodiimide tel que le dicyclo hexylcarbodiimide et l'hydroxy-l benzotriazole. Plus particulièrementD si on utilise l'azide de l'acide N-dodécyl pipéridine-2 carboxylique > la réaction s'effectue dans un solvant organique tel que l'acétate d'éthyle éventuellement en présence d'une base organique telle que la triéthylamine et à une température comprise entre -15 et 250C. Plus particulièrementn si on utilise un ester activé de l'acide N-dodécyl pipéridine-2 carboxylique tel qu'un ester de phénol (p.nitrophénol, trichloro-2,4,5 phénol) ou d'hétérocycle azoté N-hydroxylé (N-hydroxysuccinimide, hydroxy-l pipéridine) la réaction s'effectue dans un solvant organique tel que l'acétate d'éthyle ou le dimXthylformamide, en présence d'un carbodiimide tel que le dicyclo he:;ylcarbodiimide et à une température comprise entre -15 et 250C, en présence éventuellement d'une base organique telle que la triéthylamine. Plus particulièrement si on utilise un anhydride mixte de l'acide N-dodécyl pipéridine-2 carboxyliqueg obtenu par exemple par action d'un halogénoformiate dlalcoyle sur l'acide N-dodécyl pipéridine-2 carboxylique, la réaction s'effectue dans un solvant organique, tel que le chlorure de méthylène, en présence d'une base organique telle que la triéthylamine et à une température voisine de -100C. Le procédé selon l'invention peut être mis en oeuvre soit sur le cyclopeptide A pur soit sur le produit brut d'hydrolyse de l'antibiotique 11072 RP, le produit de formule (I) étant, dans l'un et l'autre cas, obtenu à l'état purifié après chromatographie sur un support convenable. Le cyclopeptide A peut être obtenu par hydrolyse de l'antibiotique 11072 RP selon le procédé qui est décrit dans le brevet japonais 638 380. L'acide N-dodécyl t pipéridine-2 carboxylique peut être obtenu par action de l'aldéhyde laurique sur l'acide L pipéridine-2 carboxylique en présence d'hydrogène et d'un catalyseur tel que le palladium sur support. L'acide L pipéridine-2 carboxylique peut être obtenu selon le procédé décrit par H. BEYERMAN, Rec. Trav. Chim. Pays-Bas 78, 134 (1959). Le nouveau produit de formule (I) peut être transformé en sel d'addition avec un acide. Un sel d'addition peut être obtenu par action du nouveau cyclopeptide sur un acide dans un solvant approprié. Généralement, on solubilise la base dans l'eau par addition de la quantité théorique d'acide puis on lyophilise la solution obtenue. Pour l'emploi médicinal, il peut être fait usage du nouveau produit soit à l'état de base soit à l'état de sel d'addition avec un acide pharmaceutiquement acceptable. Comme sels d'addition pharmaceutiquement acceptables peuvent être cités des sels d'acides minéraux (tels que les chlorhydrate , sulfate , nitrate , phosphate ) ou organiques (tels que les acétate , propionate , succinate , benzoate , fumarate maléate , tartrate , methanesulfonate v théophylineacétate salicylate , phénoîphtalinate , méthylène bis-ss-oxynaphtoate ) ou des dérivés de substitution de ces acides. Les exemples suivants, donnés à titre non limitatif, montrent comment l'invention peut être mise en pratique. EXEMPLE 1 A une solution maintenue à 0 C de 210 g d'acide N-dodécyl L pipéridine-2 carboxylique et de 116 g d'hydroxy-l benzotriazole dans 2,8 litres de tétrahydrofuranne anhydre, on ajoute rapidement une solution de 162 g de dicyclohexylcarbodiimide dans 700 cm3 de tétrahydrofuranne anhydre. On agite le mélange pendant 1 heure à 0 C, puis pendant 1 heure à 20"C ; on y ajoute la solution de cyclopeptide A (décrite ci-après) et on continue l'agitation du mélange pendant 48 heures à 20"C. L'insoluble est séparé par filtration puis lavé 3 fois par 1050 cm3 au total de tétrahydrofuranne.Les filtrats réunis sont concentrés jusqu'à un volume de 2 litres sous pression réduite (20 mm de mercure) à 45"C, repris par 4 litres d'acétate d'éthyle, concentrés à nouveau jusqu'à un volume de 2 litres dans les mêmes conditions, repris par 2 litres d'acétate d'éthyle et filtrés pour éliminer un insoluble. Le filtrat est lavé 3 fois par 4,2 litres au total d'une solution à 5 % de bicarbonate de sodium et 1 fois par 700 cm3 d'eau, séché sur sulfate de sodium et concentré à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 45"C. On obtient ainsi 1350 g d'une huile épaisse marron-brun. On dissout 965 g de cette huile dans 3 litre d'acétate éthyle puis on ajoute 1,64 litre de cyclohexane.La solution ainsi obtenue est versée sur 10 kg de gel de silice neutre (0,05-0)2 mm) contenus dans une colonne de 15 cm de diamètre. On élue successivement avec 33 litres d'un mélange acétate dléthyle-cyclohexane (1-1 en volumes)3 38 litres d'acétate d'éthyle, 21 litres d'un mélange acétate d'éthyle-méthanol (9-1 en volumes) et 12 litres d'un mélange acétate dléthyle-méthanol (3-1 en volumes) en recueillant des fractions de 3 litres. Les fractions 19 à 26 sont réunies7 concentrées à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 400C et séchées sous pression réduite (5 mm de mercure) à 350C. On obtient ainsi 262 g de cyclo[L leucyl-t transméthyl-4 prolyl-L leucyl -L N-méthylvalyl-L prolyl-D N-méthylleucy l-glycyl-N- (N-dodécyl L pipéridyl-2 carbonyl-L transméthyl-4 prolyl) L N-méthylthréonyl]. Analyse Calc. % C 65,02 H 9,45 N 11,32 Tr. 64,9 9,5 11,2 Rf = 0,75 (silicagel ; dichloro-1,2 éthane-méthanol, 65-35 en volumes). L'acide N-dodécyl L pipéridine-2 carboxylique peut être préparé de la façon suivante On dissout 314 g d'acide L pipéridine-2 carboxylique dans 1,23 litre d'eau en chauffant à 540C et on ajoute une solution de 560 g d'aldéhyde laurique dans 6,1 litres d'éthanol puis 310 g de palladium sur noir (à 3 % de palladium). On chauffe le mélange vers 50-55"C, purge l'appareil avec de l'azote puis on l'alimente avec de l'hydrogène à la pression atmosphérique. Après 4 heures d'agita tion, le volume d'hydrogène absorbé (60 litres) ne varie plus ; on purge l'appareil avec de l'azote et on filtre le milieu réactionnel en présence d'un agent de filtration. L'insoluble est lavé successi veinent 3 fois avec 0D9 litre au total d'éthanol et 2 fois avec 500 cm3 au total d'eau. Les filtrats réunis sont concentrés à sec sou pression réduite (30 mm de mercure) à 450C. La pâte ainsi obtenue est dissoute dans 3 litres d'eau et extraite successivement avec 2 litres et 3 fois par 3 litres au total de chlorure de méthylène. et Les extraits organiques sont réunis /concentres à sec sous pression réduite (30 mm de mercure) à 40"C. Le solide obtenu est recristallisé après dissolution dans 500 cm3 d'éthanol, par addition de 2,5 litres d'acétate d'éthyle. La suspension blanche est filtrée, lavée 3 fois par 900 cm3 au total d'acétate d'éthyle et séchée sous pression réduite (30 mm de mercure) à 20"C. On obtient ainsi 570 g diacide N-dodécyl L pipéridine-2 carboxylique fondant à 184"C. Analyse Calc. % C 72,68 H 11,86 N 4,71 Tr. 72,5 11,2 4,7 L'acide L pipéridine-2 carboxylique peut être préparé selon la méthode de H. BEYERMAN Rec. Trav. Chim. Pays-Bas 78, 134 (1959). La solution de cyclopeptide A est préparée de la façon suivante 924 g de l'antibiotique 11072 RP, préparé selon le procédé décrit dans le brevet japonais 446 686, sont dissous dans 12,425 litres de méthanol chlorhydrique 3N. On agite pendant 2 heures à 200C, puis on concentre à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 50 C. Le résidu obtenu est repris 2 fois par 350 cm3 d'acétate d'éthyle et chaque fois concentré à sec sous pression réduite (20 mm de mercure) à 40"C. La meringue obtenue finalement est dissoute dans 1,75 litre de tétrahydrofuranne anhydre. La solution obtenue est amenée à pH 5 par addition de 750 cm3 de triéthylamine. Le précipité formé est séparé par filtration et lavé 3 fois par 1,05 litre au total de tétrahydrofuranne.Les filtrats réunis sont amenés à pH 7 par addition de 4 cm3 de N-éthyl morpholine. Cette solution est utilisée telle quelle. EXEMPLE 2 Le cycîoft leucyl-t transméthyl-4 proîyl-L leucyl-t N-méthylvalyl-L prolyl-D N-méthyleucyl-glycyl-N-(N-dodécyl L pipéridyl-2 carbonyl-t transméthyl-4 prolyl)t N-méthylthréonyl] peut être préparé dans les mêmes conditions qu'à l'exemple 1 à partir de cyclopeptide A pur dans le diméthylformamide A partir de 1,19 g d'acide N-dodécyl L pipéridine-2 carboxylique et 4,22 g de cyclopeptide A avec 648 mg d'hydroxy-l benzotriazole, 908 mg de dicyclohexylcarbodiimide et 80 cm3 de diméthylformamide, on obtient 2,28 g de produit de formule (I). Le cyclopeptide A peut être préparé selon le procédé qui est décrit dans le brevet japonais 638 380. Les médicaments qui contiennent le produit de formule (I) à l'état de base ou de sel d'addition, à l'état pur ou sous forme de compositions médicinales (en présence d'un diluant ou d'un enrobage), constituent un autre objet de 1 invention. Ces médicaments peuvent être employés par voie orale, parentérale ou rectale. Comme compositions solides pour administration orale, peuvent être utilisés des comprimés, des pilules, des poudres (notamment dans des capsules de gélatine) ou des granulés. Dans ces compositions, le produit actif est mélangé à un ou plusieurs diluants inertes tels que le saccharose, le lactose ou l'amidon. Ces compos- tions peuvent également comprendre des substances autres que les diluants, par exemple un lubrifiant, tel que le stéarate de magnésium. Comne compositions liquides pour administration orale, on peut utiliser des émulsions pharmaceutiquement acceptables, des solutions, des suspensions, des sirops et des élixirs contenant des diluants inertes, tels que l'eau ou l'huile de paraffine. Ces compositions peuvent également comprendre des substances autres que les diluants par exemple des produits mouillants, sucrants ou aromatisants. Les compositions selon l'invention pour administration parentérale peuvent être des solutions stériles aqueuses ou non aqueuses des suspensions ou des émulsions. Comme solvant ou véhicules on peut employer le propylèneglycol, un polyéthylèneglycol, des huiles végdtales, en particulier l'huile d'olives et des esters organiques injectabless par exemple l'oléate d'éthyle. Ces compositions peuvent également contenir des adjuvants, en particulier des agents mouillants, émulsifiants et dispersants. La stérilisation peut se faire de plusieurs façons, par exemple à l'aide d'un filtre bactériologique, en incorporant à la composition des agents stérilisants, par irradiation ou par chauffage.Elles peuvent également être préparées sous forme de compositions solides stériles qui seront dissoutes au moment de l'emploi dans de l'eau stérile ou dans tout autre milieu stérile injectable. Les compositions pour administration rectale sont des suppositoires qui contiennent, outre le produit actif, des excipients tels que du beurre de cacao ou de la suppo-cire. Les doses dépendent de l'effet thérapeutique recherché, de la voie d'administration et de la durée du traitement. En thérapeutique humaine, on peut utiliser des doses journalières comprises entre 0,5 et 1 g de produit actif pour un adulte. L'exemple suivant illustre une composition selon l'invention EXEMPLE On prépare selon la technique habituelle des comprimés ayant la composition suivante - produit de formule (I) ................................ 0,500 g - amidon de blé ........................................ 0,150 g - silice colloïdale ..................................... 0,040 g - stéarate de magnésium ................................. 0,010 g Dans le traitement de la tuberculose le médicament est administré de préférence par voie buccale. REVENDICATIONS 1 - CycloLL leucyl-L transméthyl-4 prolyl-L leucyl N-méthylvalyl-L prolyl-D N-méthylleucyl-glycyl-N-(N-dodécyl-L pipéridyl-2 carbonyl-L transméthyl-4 prolyl) L N-méthylthréonylJ de formule et ses sels addition avec les acides. 2 - Procédé de préparation du produit selon la revendication 1 caractérisé en ce que l'on fait réagir l'acide N-dodécyl pipéridine-2 carboxylique ou un dérivé activé de cet acide sur le cyclopeptide de formule et isole le produit obtenu, éventuellement sous forme d'un sel d'addition avec un acide. 3 - Médicament caractérisé en ce qu'il contient le produit selon la revendication 1 éventuellement sous forme de sel, pur ou en association avec un ou plusieurs diluants ou adjuvants compatibles et pharmaceutiquement acceptables.