FR 2460291 A1 19810123 FR 8014194 A 19800626 La présente invention est relative à la prépara- tion de nouveaux tripeptidamides agissant sur le système ner- veux central, qui répondent à la formule générale I ci-après: X - Y - W - NH2 (I) dans laquelle: X représente un groupe L-pyroglutamyle, D-pyro- glutamyle, L-2-cétoimidazolidine-4-carbonyle, L-6-céto-pipécolyle, Lthiazolidine-4-carbonyle, L-prolyle ou orotyle, Y représente un groupe Lleucyle, L-norvalyle ou L-histidyle, W représente un groupe L-prolyle, Dprolyle, L-thiazolidine-4-carbonyle, L-homopropyle, L-leucyle, L-isoleucyle, L-méthionyle, L-pipé- colyle ou D-pipécolyle, -W-NH2 pouvant égale- ment former conjointement un groupe pyrrolidyle ou pipéridyle; toutefois, lorsque X représen- te un groupe L-pyroglutamyle et Y représente un groupe L-histidyle, W est différent d'un groupe L-propyle, ainsi qu'à des complexes de ces composés, utilisables en thérapeutique. Les nouveaux dérivés de tripeptides correspondant à la formule générale I définie ci-dessus, sont des analogues du L-pyroglutamyl-L-histidyl-L-prolinamide (Glp-His-Pro-NH2) également connu sous le nom d'"hormone libérant la thyrotro- pine"(TRH), dans lesquels,cependant, certains groupes amino- acides sont remplacés par certains autres groupes amino-acides indiqués dans la définition ci-dessus de la formule générale I, ou -W-NH2 est éventuellement remplacé par un groupe pyrrolidyle ou pipéridyle. L'existence de la TRH était déjà connue dans les années 1960, mais sa structure n'a été élucidée que dans les années 1969 ou 1970 par les groupes de Chercheurs de R. Guillemin et A. Schally, respectivement, presque simulta- nément, mais indépendamment l'un de l'autre Zcf. Bowers, C.Y., etc., Endocrinology 86, 1143 (1970) et R. Burgus,etc. C.R. Acad. Sci. (Paris) 269, 1870 (19691/. Le tripeptide TRH a été décrit à l'origine comme un facteur régularisant la libération de la TSH (ou thyro- stimuline) dans l'hypophyse des mammifères; la recherche s'intéressant à cette hormone s'est orientée cependant dans une nouvelle direction lorsqu'il fut reconnu que la fonc- tion biologique de ce tripeptide n'était pas limitée à la régularisation de la libération de la thyrostimuline, mais consistait également en une action sur le système nerveux central Zcf. N.P. Plotnikoff et collab., Science 178, 417 (1972> et A.J. Prange et collab., Lancet 2, 999 (197217. On a alors constaté que la TRH, à côté de la fonction hormonale déjà mentionnée, diminue considérablement la durée du som- meil provoqué par des barbituriques ou par l'alcool, et réduit également l'hypothermie provoquée par différents mé- dicaments et accroît l'activité locomotrice. Un autre fac- teur important de l'action exercée par la TRH sur le système nerveux central, est l'inhibition de la catalepsie provoquée par l'halopéridol. Il a semblé, par conséquent, désirable pour la pratique thérapeutique, de préparer des analogues de la TRH qui n'aient qu'une faible action sur l'hypophyse, mais qui aient par contre et même surpassent l'action de la TRH sur le système nerveux central. C'est en vue de cet objectif qu'ont été fabriqués de tels composés décrits dans les demandes de brevets allemands publiées avant examen 2 343 035, 2 343 037, 2 449 167, 2 514 381, 2 609 154 et 2 639 393, ainsi que dans le brevet belge 819 198. La re- cherche y relative effectuée jusqu'ici, dont les expériences et les résultats ont été résumés par A.J. Prange et collab. Z"the role of hormones in dépression", Life Sciences 20, 1305 (1977)7 et A.V. Schally et collab. Z"Hypothalamic regulatory Hormones", Ann. Rev. Biochem. 47, 89 (1978)7, n'a pu cependant conduire à des résultats satisfaisants à tous les points de vue pour les besoins de la pratique thé- rapeutique. Il a été trouvé à present par la Demanderesse que l'on peut par le remplacement systématique de certains amino- acides de la molécule de la TRH édifiée à partir de trois amino-acides, obtenir que l'action hormonale du tripeptide soit totalement supprimée ou du moins considérablement ré- duite, tandis que l'action exercée sur le système nerveux central est conservée ou même considérablement augmentée. Les dérivés dans lesquels un groupe amino-acide aliphatique contenant une chaîne carbonée droite ou ramifiée prend la place du groupe histidine en position 2-, se sont révélés particulièrement avantageux. Il s'est également avéré avan- tageux, dans l'intérêt d'une action biologique encore plus sélective, d'introduire dans la molécule un groupe acide 6-cétDpipécolinique à la place du système cyclique pyro- glutamyle. Les dérivés-de tripeptides correspondant à la formule générale I définie ci-dessus, sont préparés, confor- mément à l'invention, selon des méthodes peptidochimiques connues en elles-mêmes, à partir des amino-acides ou des dérivés d'amino-acides correspondants: a) en édifiant pas à pas, à partir de composés de formule générale II ci-après W - NH2 (Il) dans lesquels W a la signification indiquée plus haut, la molécule de formule générale I, à l'aide des méthodes de couplage usuelles en chimie des peptides et en faisant appel avantageusement à des esters actifs, à des anhydri- des mixtes ou au dicyclohexyl-carbodiiraide, ou b) en acylant les composés de formule générale II ci-après W - NH2 (II) d'ns lesquels W a la signification indiquée plus haut, avec des azides préparés à partir de dipeptido-hydrazides de formule générale III ciaprès: Z - X - Y - NH - NH (III) dans lesquels Z représente un groupe benzyloxycarbonyle et X et Y ont les significations indiquées plus haut, puis en dissociant des composés de formule générale IV ci-après: Z - X - Y - W - NH (IV) dans lesquels Z, X, Y et W ont les significations indi- quées plus haut, obtenus par l'une des méthodes ci-dessus, le groupe protecteur Z, de préférence par hydrogénation catalytique et en isolant le produit de formule générale I obtenu du mélange réactionnel et/ou en le transformant éventuellement en un complexe utilisable thérapeutiquement. Lorsque l'on utilise la méthode d'édification pas à pas de la molécule, on fait réagir le composé de départ de formule générale W-NH2 avantageusement introduit en excès, avec un dérivé activé, en particulier avec le pentafluoro- phénylester d'un amino-acide protégé de formule générale BOC-Y-OH, o BOC représente un groupe protecteur tert.- butyloxycarbonyle, les dérivés dipeptides BOC-Y-W-NH2 cor- respondants étant obtenus en une durée de réaction extrême- ment courte (en quelques minutes) sous une forme facile à traiter et n'exigeant, le plus souvent, pas de purification ultérieure. Les mêmes dérivés dipeptides de formule générale BOC-Y-W-NH2 peuvent toutefois être synthétisés en faisant appel à d'autres méthodes de couplage, par exemple avec des anhydrides mixtes ou avec des acides libres, en présence du dicyclohexyl-carbodiimide. Les dipeptides de formule générale H-Y-W-NH2 libé- rés par acidolyse à partir du dérivé dipeptide protégé BOC-Y-W-NH2 obtenu, sont alors avantageusement à nouveau amenés à réagir avec le pentafluorophénylester d'un amino- acide protégé de formule générale Z-X-OH, les dérivés de tripeptides protégés correspondants de formule générale Z-X-Y-W-NH2 étant ensuite obtenus de la manière avantageuse décrite plus haut. L'acylation du composé de départ W-NH2 par un azide susceptible d'être préparé à partir des hydrazides de formule générale Z-X-Y-NH-NH2, offre l'avantage que les hydrazides mentionnés sont des produits intermédiaires très facilement cristallisables et en conséquence, isolables sous une forme très pure. Les composés de formule générale I contenant un groupe pyroglutamyle à la place de X peuvent également être synthétisés en ne formant le noyau pyroglutamyle que lors de la dernière étape de la synthèse, à partir d'un groupe glutamine, de manière à introduire la glutamine comme troi- sième amino-acide dans la molécule et en chauffant le tri- peptide de formule générale Gln-Y-W-NH2 obtenu de cette ma- nière, pendant quelques minutes dans l'acide acétique. A partir des dérivés de tripeptides protégés, de formule générale Z-X-Y-W-NH2, fabriqués selon l'une des mé- thodes décrites plus haut, on peut libérer les produits fi- naux recherchés de formule générale I, avantageusement par hydrogénation catalytique. La purification des produits fi- naux obtenus peut avoir lieu par simple cristallisation ou reprécipitation, mais également en cas de nécessité, par chromatographie sur colonne. Eventuellement, le produit final peut aussi être préparé par simple lyophilisation, après l'élimination des produits secondaires. Les dérivés de tripeptides de formule générale I préparés conformément à l'invention, ont été examinés à l'aide des méthodes biologiques décrites dans ce qui suit, en ce qui concerne leurs activités pharmacologiques. 1. Inhibition de la cataleEsie _rovouée _par l'halo- péridol sur les rats (cf. J. Delay et P. Deniker, Compte-rendu du Congrès des médecins aliénistes neurologistes, 19, 497, Luxembourg 1952). mg/kg d'halopéridol, c'est-à-dire de 4-(p- chlorophényl)-1-L3-(fluorobenzoyl)-propyl7-pipéridine-4-ol, ont été administrés aux animaux par voie sous-cutanée et l'apparition de la catalepsie a été contrôlée au bout de minutes; les rats ont ensuite été divisés en groupes de dix et traités par des doses de TRH et des nouveaux tri- peptides analogues à la TRH, respectivement, administrées par voie intraveineuse. Les animaux des groupes témoins ont été traités par une solution physiologique de chlorure de sodium. L'action inhibitrice de la catalepsie des différents composés a été vérifiée 15, 30, 90 et 120 minutes après le traitement. Les animaux qui, après que l'on ait placé leurs pattes antérieures sur une colonne d'une hauteur de 7 cm, n'avaient pas corrigé leur position en l'espace de 30 se- condes,ont été considérés comme cataleptiques. Les valeurs de DE50 correspondantes ont été déter- minées par analyse "Probit" pour les différents constituants actifs, à partir du nombre des animaux ne présentant pas de catalepsie. Ces expériences ont été exécutées sur des rats Wystar males d'un poids de 160 à 180 g. 2. Potentialisation de l'activité locomotrice E2rovoguée parlà-L-dopa sur des souris Zcf. "The thyroid axis, Drugs and Behavior, p. 116, A.J. Prage Jr. Raven Press. New York, 19747. On a tout d'abord administré aux animaux 40 mg/kg de N-méthyl-N-propargylbenzylamine (pargyline), puis mg/kg de TRH ou les mêmes doses des tripeptides à exami- ner et, enfin, 100 mg/kg de L-dopa, tous trois par voie intrapéritonéale. L'activité locomotrice des animaux a été io mesurée 30, 60 et 90 minutes après ce traitement; les va- leurs obtenues sont indiquées en pourcentages rapportés aux valeurs obtenues sur les animaux traités avec la TRH, dans le Tableau qui va suivre. 15 souris males d'un poids de 18 à 22 g ont été utilisées dans chacune de ces expériences. 3. Action d'inversion de l'hypothermie _rovoguéear la r8serpine sur des souris cf. B.M. Askew, Life Sci. 2, 725-730 (1963). On administre à des souris mâles d'un poids de 18 à 22 g, divisées en groupes de dix, 5 mg/kg de réserpine par voie intrapéritonéale; au bout de 16 heures, les ani- maux sont traités par des doses de 20 mg/kg de TRH et du tripeptide à examiner, respectivement. La température rectale des animaux est mesurée avant le traitement par la réserpine (dans le Tableau sui- vant sous "norm."), puis 16 heures après le traitement par la réserpine (dans le Tableau sous "rés.") et 1 ou 2 heures après l'administration du tripeptide à examiner (dans le Tableau sous "après le traitement"). Le Tableau donne les valeurs moyennes des températures rectales mesurées sur les différents groupes de 10 souris. 4. Influence exercée sur la durée du sommeil provogue par l'hexobarbital On administre à des souris males divisées en grou- pes de dix,60 mg/kg d'hexobarbital-NIa ("Evipan Bayer",lmrque déposée) par voie intraveineuse; 10 minutes après, on administre aux animaux des doses de 20 mg/kg du tripeptide à examiner, par voie intrapéritonéale. Les durées du sommeil sont indiquées dans le Tableau qui va suivre, en pourcentages rapportés aux valeurs mesurées sur les animaux du groupe témoin (valeurs moyennes de chaque groupe de 10 animaux). 5. Narcose par l'éthanol cf. J.M. Cott et Alia, J. Pharmacol. Exp. Ther. 196, 594 (1976) On administre 4,5 g d'éthanol par voie intra- péritonéale à des souris CFLP (LATI) des deux sexes pesant de 18 à 22 g de poids individuel, divisées en groupes de vingt; après 10 minutes, les animaux sont traités par voie intrapéritonéale avec des doses de 20 mg/kg du tripeptide à examiner. Les durées du sommeil ont été indiquées dans le Tableau qui va suivre en pourcentages rapportés aux valeurs mesurées sur les animaux du groupe témoin (valeurs moyennes sur chaque groupe de 20 animaux). 6. Activité hormonale (action TSH) sur les rats Des rats Wistar mâles d'un poids d'environ 200 g sont divisés en groupes de 7 à 8 animaux et traités par des doses de 20 mg/kg de TRH et du tripeptide à examiner, res- pectivement, administrées par voie intrapéritonéale. On dé- termine, par radioimmunoessai,- la réaction TSH des ani- maux 15 minutes après le traitement par la TRH et par les composés analogues à la TRH, respectivement, à partir du plasma des animaux. Les taux d'action relatifs sont calculés selon la méthode des quatre points, à l'aide d'un calcula- teurTOA 101, le taux d'action de la TRH étant considéré comme égal à 100. Les données relatives aux actions biologiques des composés de formule générale I les plus importants, déter- minées selon les méthodes pharmacologiques décrites ci-dessus, sont rassemblées dans le Tableau ci-après. w L1 w o r>, o F" Lna o Ln T A B L E A U TABLEAU Inhibition de Potentialisation Inversion de l'hypothermie Durée du somDurée du X-Y-2-r la catalepsie de l'activité loco- provoquee par la réserpine meil provoqué sommeil 2 par l'halo- motrice par La Température rectale, C par l'hexo- provoquée Action pdridol L-dopa, % barbitai par. l'étha- de la X Y Z DE50 Durée après au bout % des animaux nol, % des TSH D50Due en orm. 9s. d'l.,h 2 h témoins animaux mg/kg Min. 30' 60' 90' timoins Kpc Leu Pro 23,5 60 319 80 127 36,3 24,5 32,0 33,9 37 79 2,7 Kpc iTva Pro 10,6 '30 36 45 65 36,3 23,9 33,1 32,5 51 46 O Glp Leu Tca 31,4 120 171 142 52 36,2 24,9 33,1 32,2 39 58 0 Glp Leu Pip 38,5 120 201 89 112 36,4 24,6 30,7 31,0 38 60 7,2 Glp NTva Tca 56 30 195 147 79 36,5 32,8 31,4 30,7 69 51 0 Kpc lNva Tee 60,3 30 103 38 70 36,4 23,6 30,4 29,0 61 48 - Kpc iTva HPro 35,3 15 63 30 108 36,3 20,7 26,5 32,2 76 35 D-Glp Leu Pro 70 15 54 58 115 36,5 27,4 25,8 25,6 97 54 O Kic Leut Pro 80 30 118 70 98 35,5 24,1 27,7 28,8 59 69 0 TRH 80 15 100. 100 100 36,2 25,9 35,5 30,2 56 35 100 _ __.I Durée du sommeil provoqué par l'hexobarbital: / X + SE / 38,4 1,36 min. Durée du sommeil provoqué par l'éthanol o" 0% os : / R SE / 46,9 2,17 min. Il ressort des données du Tableau ci-dessus que les nouveaux analogues de la TRH, dans lesquels deux ou trois amino- acides de la molécule de TRH sont remplacés par d'autres amino-acides, exercent des actions importantes sur le systè- me nerveux central. Sont particulièrement avantageux de ce point de vue, les dérivés dans lesquels un amino-acide ali- phatique à chaîne carbonée droite ou ramifiée, remplace le groupe Ris en position 2 de la molécule TRH. Sont également avantageux du point de vue de cette action, les analogues de la TRH dans lesquels le groupe Glp est remplacé par l'acide 6-céto-pipécolinique. Dans le cas de ces dérivés, l'action hormonale de la TRH est soit complètement supprimée, soit réduite à un minimum, l'action exercée sur le système nerveux central étant en même temps très importante et même, dans certains cas, multipliée par huit. Les nouveaux tripeptides qui peuvent être prépa- rés conformément à l'invention, ainsi que leurs sels ou complexes utilisables pharmaceutiquement, peuvent être uti- lisés en thérapeutique sous la forme de préparations médica- menteuses courantes. Ces préparations contiennent les cons- tituants actifs conformes à l'invention, accompagnés des substances de support minérales ou organiques propres à être administrées par voie digestive ou parentérale. Les préparations médicamenteuses peuvent, par exemple, être fabriquées sous la forme de comprimés, de dragées, de prépa- rations à injecter, de lyophilisats, etc... La fabrication de ces formes médicamenteuses peut être effectuée en mettant en oeuvre les méthodes pharmaceutiques usuelles. La mise en oeuvre pratique du procédé conforme à l'invention, à savoir la fabrication chimique des nouveaux analogues de la TRH conformes à l'invention, sera mieux com- prise à l'aide des exemples qui vont suivre. Les abréviations utilisées dans ces exemples, correspondent aux abréviations classiques en usage dans la chimie des peptides. Cf. J. Biol. Chem. 247, 977 (1972). On utilisera, en outre, les autres abréviations suivantes: HPro L-homoproline Kic Acide L-2-cétoimidazolidine-4carboxylique Kpc Acide L-6-cétopipécolinique Oro Acide orotique Pip Acide L-pipécolinique Tca Acide L-thiazolidine-carboxylique DCC Dicyclohexylcarbodiimide DCU Dicyclohexylurée PFPOH Pentafluorophénol DMFA Diméthylformamide Les points de fusion des composés indiqués dans les exemples, ont été déterminés au moyen d'un appareil de mesure des points de fusion selon le Dr. Tottoli (BUchi). Les pouvoirs rotatoires optiques ont été mesurés à l'aide d'un polarimètre du type Perkin-Elmer 141. Dans les examens et les séparations par chromatographie en couche mince, on a utilisé des plaques de gel de silice "Kiesel G nach Stahl" (E. Merck, Darmstadt). Pour le développement des chromato- grammes, on a fait appel aux mélanges de solvants suivants: (1) Chloroforme - méthanol 9:1 (2) Acétate d'éthyle: (pyridine:acide acétique:eau 20:6:11) :5 (3) Acétate d'éthyle: (pyridine:acide acétique:eau 20:6:11) 9:1 (4) 2Acétate d'éthyle: (pyridine:acide acétique:eau 20:6:11) 8:2 (5) Acétate d'éthyle: (pyridine:acide acétique:eau 20:6:11) 3:2 (6) Acétate d'éthyle: (pyridine:acide acétique:eau 20:6:11) 2:3 Une solution de ninhydrine a été utilisée pour le développement des taches; après la pulvérisation, les pla- ques ont été séchées pendant environ 5 minutes à 105 C. Les chromatogrammes ont ensuite été placés dans une atmosphère gazeuse de chlore et développés, après aération, par une so- lution de o-tolidine-iodure de potassium. Pour la purification par chromatographie sur co- lonne des produits, on a utilise du gel de silice "Kieselgel G" (E. Merck) d'une granulométrie de 0,062 à 0,2 mm. Un évaporateur à vide "Rotavapor R" (BUchi) a été utilisé pour l'évaporation sous vide des solutions; l'éva- poration a été exécutée à des températures ne dépassant pas C. Les pentafluorophénylesters des amino-acides pro- tégés par du BOC ont été préparés selon la méthode de L. Kisfaludy et Alia, Ann. 1973, 1421. Il doit être bien entendu toutefois, que les exemples sont donnés uniquement à titre d'illustration de l'objet de l'invention, dont ils ne constituent en aucune manière une limitation. EXEMPLE 1 AMIDE DE L'ACIDE L-PYROGLUTAMYL-L-LEUCYL-PIPECOLINIQUE lère étape: Chlorhydrate d'amide de l'acide L-leucl-L-picOlinique 1,54 g (12a mmoles) H-Pip-NH2 sont mis en suspension dans 20 ml de DMFA, et la suspension est additionnae de ,16 g (13 nmoles) de BOC-Leu-OPFP et de 1, 68 ml (12 mmoles) de triéthylamine, sous agitation. L'agitation du mélange est poursuivie pendant 6 heures, puis la solution obtenue est évaporée sous vide, et l'huile obtenue comme résidu est dis- soute dans 60 ml de chloroforme. La solution est additionnée de 0,2 ml de 2-(diméthylamino)-éthylamine, abandonnée pen- dant 5 minutes et est ensuite extraite en la secouant trois fois avec 20 ml d'une solution d'acide chlorhydrique N, trois fois avec 20 ml d'une solution de carbonate acide de sodium N, et une fois avec 20 ml d'eau, dans cet ordre de succession, puis séchée sur du sulfate de sodium anhydre et évaporée. Le résidu huileux est dissous dans 3 ml d'acétate d'éthyle et la solution est additionnée de 10 ml d'une solution 5 N d'acide chlorhydrique dans de l'acétate d'éthyle. Apres une heure de repos, le mélange réactionnel est dilué à l'éther, le précipité résultant est séparé par filtration, et séché sous vide sur de la soude anhydre. On obtient, de cette ma- nière, 3,12 g de H-Leu-Pip-NH2.HCl (94 % du rendement théori- que calculé sur le H-Pip-NH2); R(5) = 0,46. 2ème étape: Amide de l'acide benzyloxyc arbon2l L-PyrolIutaxn:l-L- ieucyl:L:pipécolinique 3,13 g (11,2 mmoles) de H-Leu-Pip-NH2.HCl et 4,94 g (11,5 mroles) de Z-Glp-OPFP sont dissous dans 35 ml de DMFA et la solution est additionnée de 1,57 ml (11,2 mrnoles) de triéthylamine. Apres 5 minutes d'agitation, on ajoute encore 1,57 ml (11,2 mmoles) de triéthylamine,et après 20 autres minutes d'agitation, le mélange réactionnel est évaporé sous vide. Le résidu est dissous dans 90 ml de chloroforme, et la solution est extraite en la secouant deux fois avec mi d'une solution N d'acide chlorhydrique, trois fois avec ml d'une solution N de soude, et une fois avec 30 ml d'eau, dans cet ordre de succession. La phase organique est ensuite séchée sur du sulfate de sodium anhydre et évaporée. Le résidu amorphe est trituré avec de i'éther froid, l'éther est décanté, et l'huile résiduelle amenée à solidification sous du n-hexane. Le produit brut amorphe obtenu de cette manière (4,7 g) est cristallisé dans un mélange d'acétate d'éthyle/éther. On a obtenu 3,32 g de Z-Glp-Leu-Pip- NH2 (61 % de la théorie); F. 143-144 C; R 4): 0,51 -725 = -97,2 (c = 1, dans l'acide acétique). Analyse pour C25H3406N4 (poids moléculaire: 486,57); Calculé: C 61,71%, H 7,04 %, N 11,51 % Trouvé: C 61,67 %, H 7,05 %, N 11,40 % 3ème étape: Amide de l'acide L-yroglutamyl-L-leucyl-Lipecolinigue 2,1 g (4,32 mmoles) de Z-Glp-Leu-Pip-NH2 sont dis- sous dans 40 ml de méthanol, on ajoute 0,2 g de catalyseur à base de charbon actif à 10 % de palladium et on introduit de l'hydrogène gazeux pendant une heure dans le mélange. Le catalyseur est ensuite séparé par filtration, le filtrat est évaporé et le résidu trituré avec de l'éther. Le produit brut obtenu de cette manière (1,48 g) est dissous dans 20 ml d'eau, clarifié à l'aide de charbon actif et séparé par fil- tration. 4 g de chlorure de sodium sont dissous dans le fil- trat clair, et la solution extraite en la secouant trois fois avec 10 ml de chloroforme. La phase organique est séchée à l'aide de sulfate de sodium anhydre, évaporée, et le résidu amorphe est trituré avec un mélange d'acétate d'éthyle et d'éther. On obtient de cette manière, 1,33 g de Glp-Leu-Pip-NH2 (87,5 % de la théorie); R(5) = 0,60; "- _75= -86,4 (c = 1, dans l'acide acétique). EXEMPLE 2 AMIDE DE L'ACIDE L-PYROGLUTAMYL-L-LEUCYL-L-THIAZOLIDINE-4- CARBOXYLIQUE lère étape: Chlorhydrate d'amide de l'acide L-leucyl-L-thiazolidine-4- carbox liaue 1,81 g (11 mmoles) de H-Tca-NH2.HCl Lcf. S. Ratner et H.T. Clarke, J. Am. Chem. Soc. 59, 200 (1937)7 sont mis en suspension dans 30 ml de DMFA et additionnés de 3,97 g (10 mmoles) de BOC-Leu-OPFP, 1,49 g (11 mmoles) de 1-hydroxy- benzotriazol et 1,22 ml (11 mmoles) de N-méthyl-morpholine. On laisse reposer la solution obtenue pendant une nuit à la température ambiante, puis on l'évapore sous vide et on dis- sout le résidu dans 80 ml de chloroforme. La solution est extraite en la secouant trois fois avec 20 ml d'une solution N d'acide chlorhydrique, trois fois avec 20 ml d'une solu- tion N de carbonate acide de sodium, et finalement une fois avec 10 ml d'eau, séchée sur du sulfate de sodium anhydre et évaporée sous vide. Le résidu amorphe moussant est dissous dans 5 ml d'acétate d'éthyle, additionné de 10 ml d'une solu- tion 7 N d'acide chlorhydrique dans l'acétate d'éthyle, et abandonné pendant une heure. Le mélange réactionnel est ensuite dilué avec de l'éther, le précipité obtenu séparé par filtration et séché sous vide sur de l'hydroxyde de sodium anhydre. On obtient de cette manière, 1,84 g de H-Leu-Tca-NH2.HCl (65 % du rendement théorique calculé sur le BOC-Leu-OPFP); R f 2ème étape: Amide de l'acide benzyloxycarbonylLz-yroglutamyl-L- lecy1-L-:thiazolidine-4-carboxyligue 1,69 g (6 mmoles) de H-Leu-Tca-NH2 HC1 sont mis en suspension dans 20 ml de DMFA et additionnés de 2,7 g (6, 3 mmoles) de Z-Glp-OPFP et de 0,84 ml (6 mmoles) de triéthylamine. Le mélange est agité pendant 20 minutes à la température ambiante, puis évaporé sous vide. Le résidu d'évaporation est dissous dans 50 ml de chloroforme, et la solution est extraite en la secouant deux fois avec 10 ml d'une solution N d'acide chlorhydrique, trois fois avec ml d'une solution-N de carbonate acide de sodium, et fi- nalement une fois avec 10 ml d'eau. La phase organique est ensuite évaporée, le résidu est trituré avec de l'éther, et le produit brut obtenu est purifié par des reprécipitations répétées à partir de l'acétate d'éthyle/éther. On obtient 1,64 g de Z-Glp-Leu-Tca-NH2 (56 % de la théorie); F. 108-110oC; Rf 4)= 0,46; Za75 = -130,30 (c = 1, dans l'acide acétique). 3ème étae: Amide de l'acide L-yroglutamyl-L-leucyl-L-thiazolidine- 4-carboxyligue 1,62 g (3,3 mmoles) de Z-Glp-Leu-Tca-NHi sont dissous dans 6 ml d'une solution 3,5 N d'acide bromhydrique glacée dans l'acide acétique glacial, et on laisse reposer la solution pendant une heure et demie.Le mélange réaction- nel est ensuite dilué par de l'éther, la phase supérieure est décantée et l'huile résiduelle est dissoute dans 20 ml d'eau. La solution aqueuse est neutralisée à l'aide de carbonate acide de sodium solide et extraite en la secouant trois fois avec 10 ml d'éther. La phase aqueuse est évaporée sous vide, le résidu est dissous dans 20 ml de chloroforme, la solution est séchée sur du sulfate de sodium anhydre et évaporée. Le résidu amorphe est trituré avec de l'éther et séché. Le produit brut obtenu (1, 13 g) est dissous dans le mélange de solvants (4) et placé sur une colonne contenant a de gel de silice. La colonne est éluée avec le même mélange de solvants. 0,78 g de produit amorphe sont isolés à partir des fractions contenant du produit pur. Ce produit est dissous dans 20 ml d'eau, la solution estclarifiée avec du charbon actif et la solution limpide obtenue est lyophilisée. On obtient de cette manière, 0,62 g de Glp-Leu-Tca-NH (53 % de la théorie); R 5) = 0,53; --25 -1452 f zg/D = -1451 (c = 1, dans l'acide acétique). EXEMPLE 3 L-PYROGLUTAMYL-L-LEUCYL-D-PROLINAMIDE lère étape: Benzy1oxycarbofly1:L:yroglutaxnyl-L-leucXl -D- rolinamide 1, 54 g (5,8 mmoles) de H-Leu-D-Pro-NH2.HCl sont dissous dans 20 ml de DMFA, et la solution est additionnée de 0,81 ml (5,8 mmoles) de triéthylamine et de 2,58 g (6 mmoles) de Z-Glp-OPFP. Le mélange est agité pendant 5 mi- nutes, puis on ajoute encore 0,81 ml (5,8 mmoles) de tri- éthylamine, et après 10 minutes encore d'agitation, le mé- lange réactionnel est évaporé sous vide. Le résidu d'évapo- ration est dissous dans 60 ml de chloroforme, la solution - est lavée trois fois avec 15 ml d'une solution N d'acide chlorhydrique, trois fois avec 15 ml d'une solution N de soude, et finalement lavée une fois avec 15 ml d'eau, séchée à l'aide de sulfate de sodium anhydre et évaporée. Le résidu amorphe est trituré avec de l'éther. Le produit brut obtenu (2,1 g) est recristallisé dans 5 ml d'acétate d'éthyle. On obtient.de cette manière, 1,8 g de Z-Glp-Leu-D-Pro-NH2 (66 % de la théorie); F. 153-157 C; R(4) = 0,38; --25 a /D = 24,5 (c = 1, dans l'acide acétique). 2ème étape: L-yogluamy_-L-lucyl-DPr linamide 1,5 g (3,25 mmoles) de Z-GlpLeu-D)Pro-NH2 sont di'ous dans 70 ml de méthanol, la solution est additionnée de 0,3 g de catalyseur à base de charbon actif à 10 % de palladium et de l'hydrogène est envoyé pendant une heure à travers la solution. Apres la séparation du catalyseur par filtration, le filtrat est évaporé et le résidu amorphe est trituré avec de l'éther. Le produit brut obtenu (0,94 g) est * dissous dans l'eau, la solution est clarifiée avec du char- bon actif, et séparée par filtration. Le filtrat limpide est lyophilisé; on obtient 0,87 g de Glp-Leu-D-Pro-NH2 (79 % de la théorie); R 5) = 0,47; /725 = +8,4 (c = 1, dans l'acide acétique). EXEMPLE 4 AMIDE DE L'ACIDE L-PYROGLUTAMYL-L-NORVALYL-L-THIAZOLIDINE- 4-CARBOXYLIQUE lère étape: Chlorhydrate de l'amide de l'acide L-norvalyl-L- thiazolidinecarboxyligue 8,0 g (20 mmoles) de BOC-Nva-OH.DCHA sont mis en suspension dans 60 ml d'éther, additionnés de 20 ml d'une solution 2 N d'acide sulfurique, e t s e c o u é s jusqu'à dissolution des matières solides. Les phases sont séparées, la phase éthérée est extraite en la secouant une fois avec 20 ml d'une solution 2 N d'acide sulfurique et ml d'eau, séchée sur du sulfate de sodium anhydre et éva- porée. L'huile obtenue en tant que résidu est dissoute dans 40 ml de DMFA (20 mmoles) de triéthylamine, refroidie à -15 C et addi- tionnée goutte-à-goutte, sous agitation,de 2,5 ml (20 mmoles) de chlorure de pivaloyle à un rythme tel que la température du mélange réactionnel reste au-dessous de -5 C. La suspen- sion obtenue de cette manière est agitée à la même tempé- rature pendant encore 10 minutes. Pendant ce temps, 3,72 g (22 mmoles) de H-Tca-NH2.HCl sont mis en suspension dans 30 ml de DMFA, additionnés de 3,1 ml (22 mmoles) de triéthylamine, le pré- cipité est séparé par filtration et le filtrat de la solu- tion de l'anhydride mixte préparée de la manière ci-dessus est ajouté goutte-à-goutte à -5 C. Apres la fin de l'addi- tion, le mélange réactionnel est agité pendant encore minutes à -10 C, puis abandonné pendant une nuit dans un réfrigérateur et évaporé sous vide le jour suivant. Le rési- du d'évaporation est dissous dans 100 ml de chloroforme, la solution est extraite en la secouant trois fois avec 20 ml d'une solution N d'acide chlorhydrique, puis trois fois avec ml d'une solution N de carbonate acide de sodium, et fi- nalement une fois avec 20 ml d'eau, puis elle est séchée sur du sulfate de sodium anhydre, et évaporée. Le résidu huileux est dissous dans 20 ml d'acétate d'éthyle, la solution est refroidie jusqu'au-dessous de 5 C, et additionnée de 20 ml d'une solution 5 N d'acide chlorhydrique dans l'acétate d'éthyle. Le mélange réactionnel est maintenu pendant une heure dans un bain glacé, puis dilué par de l'éther. Le pré- cipité résultant est séparé par filtration, et séché sous vide sur de la soude anhydre. On obtient de cette manière, 3,77 g de H-Nva-Tca-NH2.HCl (70 % du rendement théorique calculé sur le BOC-Nva-OH.DCHA); R f 2ème étape: Amide de l'acide benzyloxycarbonyiL-yrogluitamli:L- norvalyl1L-thiazolidine-4-carboxyligue 2,8 g (10,5 mmoles) de H-Nva-TcaNH2.HCl sont mis en suspension dans 50 ml de DMFA et additionnés,sous agita- tion,de 1,47 ml (10,5 mmoles) de triéthylamine et de 5,15 g (12 mmoles) de Z-Glp-OPFP. Le mélange réactionnel est en outre additionné, après 5 minutes, de 1,47 ml (10,5 mmoles) de triéthylamine, son agitation est encore poursuivie pen- dant 10 minutés, puis il est évaporé sous vide. Le résidu est dissous dans 100 ml de chloroforme, la solution est ex- traite en la secouant trois fois avec 20 ml d'une solution N d'acide chlorhydrique, trois fois avec 20 ml de carbonate acide de sodium, puis une fois avec 20 ml d'eau, séchée sur du sulfate de sodium anhydre et évaporée. Le résidu amorphe est trituré avec de l'éther, et le produit brut obtenu (4,6 g) est recristallisé dans un mélange d'acétate d'éthyle et d'éther. On obtient de cette manière, 3,2 g de Z-Glp-Nva-Tca-NH2 (64 % de la théorie); F. 116-118 C; R(4) 0,45.--25 f4;/D = -129 (c = 1, dans l'acide acétique). 3ème étae: Amide de l'acide L- yrglutamyl-L-norval l-L-thiazolidine- 4-carboxyligue 4,76 g (10 mmoles) de Z-Glp-Nva-NH2 sont dissous dans 20 ml d'une solution 3,5 N glacée d'acide bromhydrique dans l'acide acétique glacial, et la solution est abandonnée pendant une heure et demie à 0"C à 5 C. Le mélange réactionnel est ensuite dilué par de l'éther et l'huile qui se dépose est séparée du solvant par décantation. L'huile obtenue est dis- soute dans 50 ml d'eau, la solution est neutralisée par ad- dition de carbonate acide de sodium solide, et elle est extraite en la secouant trois fois avec 20 ml d'éther. La phase aqueuse est évaporée, le résidu est dissous dans 100 ml de chloroforme, la solution est séchée sur du sulfate de sodium anhydre, évaporée et le résidu est trituré avec de l'éther. Le produit brut obtenu (3 g) est placé sur une colonne contenant 80 g de gel de silice et élué avec le mélange de solvants (4). 2,18 g de produit amorphe sont iso- lés des fractions contenant du produit pur, celui-ci est dissous dans 40 ml d'eau, la solution est clarifiée avec du charbon actif, et la solution limpide est lyophilisée. On obtient de cette manière, 1,84 g de Glp-Nva-Tca-NH (54 % de la théorie) ; Rf5) = 0,50; L75 = -145,6 (c = 1, dans l'acide acétique). EXEMPLE 5 L-PYROGLUTAMYL-L-NORVALYL-L-LEUCINAMIDE lère étape: Tert.-butyloxycarbonyl-L-norvalyl-L-leucine-méthylester Le BOC-Nva-OH libéré de la manière décrite à la lère étape de l'Exemple 4 à partir de 8,0 g (20 mmoles) de sel de DCHA et 3,82 g (21 mmoles) de H-LeuOMe.HCl, sont dissous dans 60 ml de chloroforme, et la solution est ad- ditionnée tout d'abord de 2,94 ml (21 mmoles) de triéthyl- amine, puis, sous réfrigération par de la glace et agitation, d'une solution de 4,33 g (21 mmoles) de DCC dans 40 ml de chloroforme. Le mélange réactionnel est abandonné pendant une nuit à 5 C, puis la DCU qui se dépose est séparée par filtration. Le filtrat est extrait en le secouant trois fois avec 30 ml d'une solution N d'acide chlorhydrique, trois fois avec 30 ml d'une solution N de carbonate acide de so- dium, et finalement une fois avec 30 ml d'eau, puis séché sur du sulfate de sodium anhydre,et évaporé. Le résidu cristallin est trituré avec du n-hexane, séparé par filtra- tion, et le produit brut obtenu (6,65 g) recristallisé dans un mélange de 5 ml d'acétate d'éthyle et 20 ml d'éther de pétrole. On obtient de cette manière, 5,20 g de BOC-Nva-Leu-OMe (75 % de la théorie); F. 100-1010C; (2= - E25= R 2) 0,84; _= -47,5 (c = 1, dans le méthanol). 2ème étae: Tert.-butyloxycarbonyl-L-norvalyl-L-leucinamide ,0 g (14,5 mmoles) de BOC-Nva-Leu-OMe sont dis- sous dans 50 ml de méthanol, la solution est refroidie à l'aide de glace,et du gaz ammoniac est envoyé pendant une demi-heure à travers la solution refroidie. La solution est alors abandonnée pendant une nuit à la température ambiante, puis est refroidie de nouveau, à nouveau saturée de gaz am- moniac, abandonnée pendant 4 heures et évaporée. Le résidu cristallin est recristallisé dans un mélange d'acétate d'éthyle et d'éther. On obtient de cette manière, 4,37 g de BOC-Nva-Leu-NH2 (91 % de la théorie); F. 158159 C; (2).... --25 R(2) = 0,60 275 = -48,7 (c = 1, dans le méthanol) f, 3ème étape: Chlorhydrate de L-norvalyl-L-leucinamide 4,12 g (12,5 mmoles) de BOC-NvaLeu-NH2 sont mis en suspension dans 15 ml d'acétate d'éthyle et additionnés de 20 ml de solution 6 N d'acide chlorhydrique dans l'acéta- te d'éthyle. Le mélange est abandonné pendant une heure, puis dilué avec de l'éther; le précipité obtenu est séparé par filtration, et le produit brut (3,64 g) est recristallisé dans 25 ml de méthanol. On obtient de cette manière, 2,75 g de H-Nva-Leu-NH 2.HCl (83 % de la théorie); F. 215216 C; R(5) - 0,45; D = -3,47 (c = 1, dans le méthanol). fD 4ème étape: leunz2y YarbylL-yr2lu yl-L-norvalyl-L-leucinamide 2,67 g (10 mmoles) de H-Nva-Leu-NH2.HCl sont dis- sous dans 30 ml de DMFA. 1,4 ml (10 mmoles) de triéthylamine son't tout d'abord ajoutés à la solution, puis après sépara- tion par filtration du précipité qui s'est formé,on ajoute 4,72 g (11 a. cioles) de Z-Glp-OPFP. Après 5 minutes, on ajoute encore 1,4 ml (10 mmoles) de triéthylamine et après 10 autres minu- tes, le mélange réactionnel est évaporé sous vide. Le rési- du est trituré avec de l'éther, et le produit brut obtenu de cette manière (5,5 g) est recristallisé dans de l'éthanol. On obtient 3,84 g de Z-Glp-Nva-Leu-NH2 (81 % de la théorie); F. 241-242 C; R(4) = 0,55; --25 = -62,6 (c = 1, dans fD l'acide acétique). 5ème étape: Lp2Yrogutamy:l-L-norvayl-L-leucinamide 3,8 g (8 mmoles) de ZGlp-Nva-Leu-NH2 sont dissous dans 200 ml d'acide acétique, la solution est additionnée de 0,8 g de catalyseur à base de charbon actif à 10 % de palladium,et de l'hydrogène est envoyé pendant une heure à travers le mélange. Le catalyseur est ensuite séparé par filtration, et le résidu sous forme de gel est trituré avec de l'éther. On obtient de cette manière, 2,7 g de Glp-Nva-Leu-NHI2 (99 % de la théorie); F. 24Q C(décomposi- tion); R(5) = 0,57; -72 = -55,8 (c = 1, dans l'acide f D acétique). EXEMPLE 6 L-PYROGLUTAMYL-L-NORVALYL-L-ISOLEUCINAMIDE lère éta2e: Tert.-butyloxycarbonyl-L-norvalyl-L-isoleucinamide 3,7 g (19 mmoles) de H-Ile-NH2.HCl sont dissous dans 30 ml de DMFA, la solution est additionnée, sous agita- tion, de 2,7 ml (19 mmoles) de triéthylamine et 6,63 g (17,3 mmoles) de BOC-Nva-OPFP, et après 5 minutes, on ajoute encore 2,4 ml (17,3 mmoles) de triéthylamine. Au bout de minutes supplémentaires, le mélange réactionnel est éva- poré sous vide, le résidu est dissous dans 100 ml de chloro- forme, la solution est extraite en la secouant deux fois avec 20 ml d'une solution N d'acide chlorhydrique, puis trois fois avec 20 ml d'une solution N de carbonate acide de sodium, et finalement une fois avec 20 ml d'eau, puis elle est séchée sur du sulfate de sodium anhydre et évaporée. Le résidu cristallin est trituré avec de l'éther et séché. On obtient de cette manière, 4,7 g de BOC-Nva-Ile-NH (83 % de la théorie); F. 192-194 C; R (c = 1, dans le méthanol). 2ème étae: Chlorhydrate de L-norvalyl-L-isoleucinamide 4,5 g (13,7 mmoles) de BOC-Nva-Ile-NH sont mis en q,,pension dans 20 ml d'acétate d'éthyle et additionnés de 12 ml d'une solution 6 N d'acide chlorhydrique dans l'acéta- te d'éthyle. Le mélange réactionnel est abandonné pendant une heure, puis dilué par de l'éther. Le précipité qui se forme est séparé par filtration, et le produit brut obtenu de cette manière (3,6 g) est recristallisé dans un mélange de méthanol et d'éther. On obtient 3,5 g de H-Nva-Ile-NH2. HCl (96 % de la théorie); F. 254-255 C; R Z- 725= +3, (c = 1, dans le méthanol). -D= +3,80 (c =1, dans le méthanol). 3ème étae: BezlxcabnlLyr uay-L-norvalyl-L -iso- leucinamide 3,3 g (12,4 mmoles) de H-Nva-Ile-NH2.HCl sont dis- sous dans 40 ml de DMFA et la solution est additionnée, sous agitation, de 1,74 ml (12,4 mmoles) de triéthylamine et de ,85 g (13,6 mmoles) de ZGlp-OPFP. Après 5 minutes, on ajoute encore 1,74 ml (12,4 mmoles) de triéthylamine. Le mélange réactionnel qui se solidifie sous la forme de gel après quelques secondes est dilué et trituré avec de l'éther, abandonné pendant 2 heures au réfrigérateur, puis filtré. On obtient de cette manière, 5,1 g de Z-Glp-Nva-Ile-NH (86 % de la théorie); F. 252253 C; Rf4) = 0,60; -25= -,;C = 1, dans l'acide acétique). f O/ -5750( 4ème étae: L-Yrgltamyl-9L-norval l-L-isoleucylamide 4,75 g (10 mmoles) de Z-Glp-Nva-Ile-NH2 sont dis- sous dans 200 ml d'acide acétique, et après l'addition de 1 g de catalyseur à base de charbon actif à 10 % de palla- dium,de l'hydrogène est envoyé pendant une heure à travers la solution. Après la fin de l'hydrogénation, le catalyseur est séparé par filtration, le filtrat est évaporé et le résidu est trituré avec de l'éther. On obtient 3,34 g de Glp-Nva-Ile-NH2 (98 % de la théorie); F. 267-2700C (décom- -(5)=0 6 _2 position); Rf = 0,61; (c = 1, dans l'acide acétique). EXEMPLE 7 L-PYROGLUTAMYL-L-NORVALYL-L-METHIONINAMIDE lère étae: Tert.-butloxxYcarbon l-L-norvalyl-L-méthionine-méthyl- ester Le BOC-Nva-OH est libéré de la manière décrite dans la lère étape de l'Exemple 4, à partir de 4,78 g (12 mmoles) de sel de DCHA, et il est dissous avec 2,6 g (13 mmoles) de H-M-lt-OMe.HCl dans 40 ml de chloroforme. 1,82 ml (13 mmoles) de triéthylamine sont tout d'abord ajoutés à la solution, puis, sous refroidissement par de la glace et agitation, une solution de 2,58 g (12,5 mmoles) de DCC dans 20 ml de chloroforme est ajoutée à cette première solution. Le mélange réactionnel est abandonné pendant une nuit à 5 C; le DCU qui se dépose est ensuite séparé par filtration, le filtrat est extrait en le secouant trois fois avec 20 ml d'une solution N d'acide chlorhydrique, trois fois avec 20 ml d'une solution N de carbonate acide de sodium, et finalement une fois avec 20 ml d'eau, puis séché sur du sulfate de sodium anhydre et évaporé. On cristallise le résidu huileux par addition d'éther de pétrole. Le pro- duit brut obtenu de cette manière (3,42 g) est recristallisé dans un mélange d'acétate d'éthyle et d'éther de pétrole. On obtient 3,08 g de BOC-Nva-Met-OMe (71 % de la théorie). F. 69-70 C; R 2)= 0,81; I7D = - 42,7 (c = 1, dans le méthanol). 2ème étape: Tert.-butyloxycarbonyl-L-norvalyl-L-méthioninamide 1,81 g (5 mmoles) de BOC-Nva-Met-OMe sont dissous dans 20 ml de méthanol, et du gaz ammoniac est envoyé sous refroidissement pendant une demi-heure à travers la solution. Le mélange réactionnel est abandonné pendant une nuit à la température ambiante, puis conservé dans le réfrigérateur pendant plusieurs heures. Le produit cristallin qui se dépose est séparé par filtration (1,27 g); le filtrat est évaporé, le résidu est recristallisé dans 5 ml d'éthanol et réuni à la quantité principale du produit,obtenue de la manière décrite ci-dessus. On obtient au total 1,62 g de BOC-Nva-Met-NH9 (93 % de la théorie); F. 166-167 C; Rf) =0,57; z/D = -40,9 (c = 1, dans le méthanol). 3ème étae: Chlorhydrate de L-norvalyl -L-méthioninamide 4,5 g (13 mmoles) de BOC-Nva-Met-NH2 sont mis en suspension dans 20 ml d'acétate d'éthyle et additionnés de ml de solution 6 N d'acide chlorhydrique dans l'acétate d'éthyle. Le mélange réactionnel est abandonné pendant une heure à la température ambiante, puis dilué par de l'éther; le précipité obtenu est séparé par filtration et séché sous vide à l'aide de soude anhydre. Le produit brut obtenu de cette manière (4 g) est recristallisé dans un mélange de méthanol et d'éther. On obtient 3,28 g de H-Nva-Met-NH2.HCl (89 % de la théorie); F. 198-200 C; R 725 = +10,20 (c 1, dans le méthanol). -' D =+0 4ème étae: Tert.-butyloxycarbonyl-L- lutamXl-L-norvalyi=L méthioninamide 2,84 g (10 mmoles) de H-Nva-Met-NH2.HCl sont mis en suspension dans 40 ml de DMFA, et on ajoute, sous agita- tioD, 1,4 ml (10 mmoles) de triéthylamine et 4,53 g (11 mmoles) de BOCGln-OPFP. Après 5 minutes, on ajoute encore 1,4 ml (10 mmoles) de triéthylamine et après 10 autres minu- tes d'agitation, la suspension épaisse obtenue est évaporée sous vide. Le résidu d'évaporation solide est trituré avec de l'éthanol, et le produit brut obtenu de cette manière (4,82 g) est porté à ébullition avec 50 ml d'éthanol. Après refroidissement, la suspension est conservée pendant plu- sieurs heures dans le réfrigérateur, puis elle est séparée par filtration. On obtient de cette manière, 4,08 g de BOC-Gln-Nva-Met-NH2 (86 % de la théorie); F. 237-238 C; R4) = 0.43; /725 = -37,1 (c = 1, dans l'acide acétique). f D ème étae: LiyrgyutamyliL-n2rvaly-L-méthioninaride 3,8 g (8 mmoles) de BOC-Gln-Nva-Met-NH2 sont dis- sous dans 100 ml d'acide formique à 98 %, la solution est abandonnée pendant 2 heures à la température ambiante et évaporée sous vide.L'huile obtenue en tant que résidu -est dissoute dans 50 ml d'acide acétique, la solution est portée à ébul- lition pendant 2 minutes, puis elle est de nouveau évaporée sous vide. Le résidu sous forme de gel est trituré avec de l'éther et séparé par filtration. On obtient de cette manière, 2,8 g do Glp-Nva-Met-NH2 (98 % de la théorie); F. 249-2500C (décomposition); R5) 0,58; /25 = -48,4 (c = 1, dans f =X/ l'acide acétique). EXEMPLE 8 N-(L-PYROGLUTAMYL-L-LEUCYL)-PYRROLIDINE lère étape: Chlorhydrate de N-(L-leucyl)-pyrrolidine 3,46 g (15 mmoles) de BOC-Leu-OH sont dissous dans ml d'acétate d'éthyle, la solution est additionnée de 2,1 ml (15 mmoles) de triéthylamine et refroidie à -15 C. 1,97 ml (16 mmoles) de chlorure de pivaloyle sont ensuite ajoutés goutte-à-goutte sous agitation au-dessous de -10 C. La suspension obtenue est agitée pendant 10 minutes, puis 1,37 ml (16,5 mmoles) de pyrrolidine sont ajoutés goutte-à- goutte à la même température, et le mélange est encore agité pendant une demi-heure à -10 C, et est'ensuite abandonnée pendant-3 heures à 5 C. La solution obtenue est extraite en la secouant trois fois avec 10 ml d'une solution N d'acide chlorhydrique, trois fois avec 10 ml d'une solution N de carbonate acide de sodium, et finalement une fois avec 10 ml d'eau, puis elle est séchée sur du sulfate de sodium anhydre et évaporée sous vide. L'huile obtenue en tant que résidu est dissoute dans 5 ml d'acétate d'éthyle et additionnée de ml de solution 5 N d'acide chlorhydrique dans l'acétate d'éthyle. Le mélange est abandonné pendant une heure, puis dilué avec de l'éther et agité avec de l'eau. La phase aqueuse est lavée à l'éther, alcalinisée à l'aide de carbo- nate de potassium et extraite par du chloroforme. La solu- tion chloroformique est séparée, séchée sur du sulfate de sodium anhydre et évaporée. Le résidu huileux est dissous dans 10 ml d'éther, le pH de la solution est ajusté à 3 à l'aide d'une solution d'acide chlorhydrique concentré dans l'acétate d'éthyle, et le produit cristallin précipité est séparé par filtration. On obtient de cette manière, 2,41 g de H-Leupyrrolidine.HCl (73 % de la théorie); F. 170-174 C (décomposition); R -5) = 0,37. f 2ême étape: N- (benzyloxycarbonyl -L-pyro glutamyl -LleucyiL:2xrrolidine 1,7 g (7,7 mmoles) de H-Leu-pyrrolidine.HCl, 3,0 g (7 mmoles) de Z-Glp-OPFP et 1,08 ml (7,7 mmoles) de triéthylamine, sont dissous dans 20 ml de chloroforme, et après 5 minutes, on ajoute encore 0, 98 ml (7 mmoles) de triéthylamine. Apres 5 autres minutes, la solution est diluée par 30 ml de chloroforme, extraite en la secouant deux fois avec 10 ml d'une solution N d'acide chlorhydrique, puis trois fois avec 10 ml d'une solution N de carbonate acide de so- dium, et finalement une fois avec 10 ml d'eau, puis elle est séchée sur du sulfate de sodium anhydre et évaporée. On cristallise le résidu huileux à l'aide de n-hexane, et le produit brut obtenu de cette manière (2,85 g) est recristal- lisé dans un mélange d'éthanol et d'éther. On obtient 2,14 g de Z-Glp-Leupyrrolidine (71 % de la théorie); F. 109-110 C; R4) = 0,55; 725 =-53,3 (c = 1, dans l'acide acétique). Analyse pour C23H3105N3 (poids moléculaire 429,52): Calculé: C 64,32 %, H 7,27 %, N 9,78 % Trouvé: C 64,31%, H 7,47 %, N 9,78 % 3ème étae: (iLrYIuta!=myl-Lleucy!) -iyrrolidine 2,0 g (4,66 mmoles) de Z-Glp-Leupyrrolidine sont dissous dans 40 ml de méthanol, 0,4 g de catalyseur à base de charbon actif à 10 % de palladium sont ajoutés à la solu- tion, et de l'hydrogène est envoyé pendant une heure à travers la solution. Apres la séparation du catalyseur par filtration, le filtrat est évaporé, l'huile obtenue en tant que résidu est dissoute dans l'éther, la solution abandonnée pendant une nuit au réfrigérateur, et les cristaux qui se déposent sont séparés par filtration. On obtient de cette manière, 1,25 g de Glp-Leu-pyrrolidine (91 % de la théorie); F. 103-104 C; R(5) = 0,65, Z!--531 R5 0,65; 25 = -31,6 (c = 1, dans l'acide acétique). fD Analyse de l'amino-acide: Glu 1,00 (1,0), Leu 1,00 (1,0) EXEMPLE 9 N-(L-rYROGLUTAMYL-L-LEUCYL)-PIPERIDINE lère étape: Chlorhydrate deN-(Lleucyl)-pipéridine 3,46 g (15 mmoles) de BOC-Leu-OH sont dissous dans mi d'acétate d'éthyle, la solution est additionnée de 2,1 ml (15 mmoles) de triéthylamine et refroidie à -15 C. 1,97 ml (16 mmoles) de chlorure de pivaloyle sont tout d'abord ajoutés sous agitation, puis après 10 minutes, 1,65 ml (16,5 mmoles) de pipéridine, goutte-à-goutte. Apres la fin de l'addition, le mélange réactionnel est agité pendant en- core une demi-heure à -10 C, puis abandonné pendant une nuit au réfrigérateur. Le précipité est ensuite séparé par filtra- tion, le filtrat est extrait en le secouant trois fois avec ml de solution N d'acide chlorhydrique, trois fois avec ml de solution N de carbonate acide de sodium, et finale- ment une fois avec 10 ml d'eau, puis il est séché sur du sul- fate de sodium anhydre, et évaporé. L'huile obtenue en tant que résidu est dissoute dans 15 ml de solution 4 N d'acide chlorhydrique dans l'acétate d'éthyle, la solution est aban- donnée pendant une heure, puis elle est diluée par de l'éther et abandonnée pendant une nuit au réfrigérateur. Le produit obtenu sous forme de précipité est séparé par filtration le jour suivant. On obtient de cette manière, 2,0 g de H-Leu-pipéridine.HCl (57 % du rendement théorique calculé par rapport au BOC-Leu-OH); F. 123-125 C; R(5) = 0,45. f 2ème étae: N-(benzyloxycarbonyl-L-Eyroglutamyl-L-leucyl) -2iSéridine 1, 81 g (7,7 mmoles) de H-Leu-pipéridine.HCl, 3,0 g (7 mmoles) de Z-Glp-OPFP et 1,08 ml (7,7 mmoles) de triéthyl- amine sont dissous dans 20 ml de chloroforme, et après un repos de 5 minutes, on ajoute encore 0,98 ml (7 mmoles) de triéthylamine. Apres 5 autres minutes, la solution est diluée par 30 ml de chloroforme, extraite en la secouant deux fois avec 10 ml de solution N d'acide chlorhydrique, trois fois avec 10 ml de solution N de carbonate acide de sodium, et finalement une fois avec 10 ml d'eau, puis elle est séchée sur du sulfate de sodium anhydre et évaporée. L'huile qui cristallise, qui est obtenue en tant que résidu, est tritu- rée avec un mélange d'éther et de n-hexane. Le produit brut obtenu de cette manière (2,75 g) est recristallisé dans un mélange d'éthanol et d'éther; on obtient 2,21 g de Z-Glp-Leu-pipéridine (71 % de la théorie); F. 113-115 C; (4)' -E725 Rf = 0,69; a725 = -42,5 (c = 1, dans l'acide acétique). Analyse pour C24H3305N3 (poids moléculaire 443,55): Calculé: C 64,99 %, H 7,50 %, N 9,47 % Trouvé: C 64,90 %, H 7,72 %, N 9,53 % 3ème étae: N- (Lyrogiuta1uyi:L:ieucyi)-pipéridine 2,0 g (4,51 mmoles) de Z-Glp-Leupipéridine sont dissous dans 40 ml de méthanol, additionnés de 0,4 g de catalyseur à base de charbon actif à 10 % de palladium, et de l'hydrogène est envoyé pendant une heure à travers la so- lution. Apres la séparation du catalyseur par filtration, le filtrat est évaporé et on cristallise le résidu à l'aide d'éther. On obtient de cette manière, 1,12 g de Glp-Leu-pipéridine (81 % de la théorie); F. 99-100 C; R(5) = 0,71; _7D5 = +30,4 (c = 1, dans l'acide acétique). Analyse de l'amino-acide: Glu 0,95 (1,0), Leu 1,00 (1,0). EXEMPLE 10 L-THIAZOLIDINE-4-CARBONYL-L-LEUCYL-L-PROLINAMIDE lère étape: L-thiazolidine-4-carbonyl-L-leucyl-il-prolinamide ,13 g (22 mmoles) de BOC-Tca-OH et 4,05 g (22 mmoles) de PFPOH sont dissous dans 60 ml d'acétate d'éthyle, et la solution est additionnée, sous refroidisse- ment par la glace et agitation, de 4,12 g (22 mmoles) de DCC. Le mélange réactionnel est agité pendant 2 heures à 0 C à 5 C, puis la DCU est séparée par filtration, le filtrat est évaporé et le résidu est dissous dans 50-ml de n-hexane. La solution est extraite en la secouant cinq fois avec 25 ml de solution N de carbonate acide de sodium, et ensuite une fois avec 25 ml d'eau, elle est séchée sur du sulfate de sodium anhydre, puis évaporée. Les 7,32 g de BOC-Tca-OPFP huileux obtenus de cette manière, sont dissous dans 20 ml de DMFA, et la solution est ajoutée à la suspension de 5,23 g (20 mmoles) de H-Leu-Pro-NH2.HCl dans 30 ml de DMFA, puis ce mélange est additionné, sous refroidissement par de la glace et agitation, de 2,8 ml (20 mmoles) de triéthylamine. Après minutes, 2,8 ml (20 mmoles) de triéthylamine sont encore ajoutés, le mélange est agité pendant encore 20 minutes, puis évaporé sous vide. L'huile obtenue en tant que résidu est dissoute dans 100 ml de chloroforme, la solution est extraite en la secouant trois fois avec 30 ml de solution N d'acide chlorhydrique, trois fois avec 30 ml de solution N de carbonate acide de sodium, et finalement une fois avec 30 ml d'eau, puis elle est séchée sur du sulfate de sodium anhydre et évaporée. Les 8,84 g de BOC-Tca-Leu-Pro-NH2 hui- leux obtenus comme résidu sont dissous dans 15 ml d'acétate d'éthyle, et la solution est additionnée de 15 ml de solution 6 N d'acide chlorhydrique dans l'acétate d'éthyle. Le mélan- ge réactionnel est abandonné pendant une heure, puis dilué par de l'acétate d'éthyle, le précipité formé est trituré et séparé parfiltration, puis séché sous vide sur de la soude anhydre. Les 8,05 g de chlorhydrate de tripeptidamide obtenus de cette manière, sont dissous dans 80 ml d'eau, la solution est extraite en la secouant trois fois avec 20 ml d'éther, puis le pH de la solution aqueuse est ajusté à 8 à l'aide de carbonate acide de sodium, et la solution alcalinisée est extraite cinq fois avec 20 ml de chloroforme. Les extraits au chloroforme réunis sont séchés sur du sulfate de sodium anhydre et évaporés. Le résidu d'évaporation est trituré avec de l'éther et séché. On obtient de cette manière, 5,20 g de H-Tca-Leu-Pro-NH2 (76 % de la théorie); F. 159-160 C; R (5= 0,63; 725 = -162,9 (c = 1, dans l'acide acétique). f -D EXEMPLE 11 L-2-CETOIMIDAZOLIDINE-4-CARBONYL-L-PROLINAMIDE lère étape: PentafluoroPhénylester de l'acide benzyloxycarbonYl-L-2- cétoimidazolidine-4-carboxyligue 10,56 g (40 mmoles) de Z-Kic-OH et 9,09 g (44 mmoles) de PFP-OH, sont dissous dans 100 ml de mélange de DMFA et de dioxane dans la proportion de 1:2 et la solution est ad- ditionnée, sous refroidissement par de la glaceet agitation, de 9,06 g (44 mmoles) de DCC. Lé mélange réactionnel est agité pendant une demi- heure à 0 C à 5 C, puis la DCU est séparée par filtration, le filtrat est évaporé et l'huile obtenue en tant que résidu est amenée à cristalliser à l'aide du n-hexane. Le produit brut obtenu de cette manière (16,46 g) est recristallisé dans 50 ml d'acétate d'éthyle. On obtient 12,75 rôde Z-KicOPFP (74 % de la théorie). F. 146-148 C; R1 =0,53, --25 Rf L05' _= 42,1 (c = 1, dans l'acétate d'éthyle). Analy pour C18HllO5N2F5 (poids moléculaire 430,29): Calculé: C 50,25 %, H 2,58 %, N 6,51%, F 22,08 %; Trouvé: C 49,88 %, H 2,35 %, N 6,66 %, F 21,81%. 2ème etape: Benzvy2oYcb2 -L-Y2 -ctoimidazolidine-4-carbonYl-L- leucylZL-Z linamide 2,38 g (9 mmoles) de H-Leu-Pro-NH2.HCl sont mis en suspension dans 30 ml de DMFA et additionnés de 3,87 g (9 mmoles) de Z-Kic-OPFP et de 1,26 ml (9 mmoles) de triéthyl- amine. Après 5 minutes d'agitation, 1,26 ml (9 mmoles) de triéthylamine sont encore ajoutés, et après 20 autres minutes d'agitation, le mélange réactionnel est évaporé sous vide. Le résidu d'évaporation est dissous dans 50 ml de chloroforme, la solution est extraite en la secouant deux fois avec 10 ml de solution N d'acide chlorhydrique, trois fois avec 10 ml de solution N de carbonate acide de sodium, et finalement une fois avec 10 ml d'eau, puis elle est séchée sur du sul- fate de sodium anhydre et évaporée. L'huile obtenue en tant que résidu est amenée à cristalliser à l'aide d'éther, puis filtrée. Le produit brut obtenu de cette manière (3,31 g) est porté à ébullition avec 30 ml d'acétate d'éthyle; après refroidissement, la suspension est abandonnée pendant plusieurs heures au réfrigérateur et elle est ensuite fil- trée. On obtient 3,0 g de Z-Kic-Leu-Pro-NH2 (70 % de la théorie); F. 172174 C; R(4) = 0,18; pDM = -102,6 f (c = 1, dans l'acide acétique). Analyse pour C23H3106N5 (poids moléculaire 473,50): Calculé: C 58,34 %, H 6,60 %, N 14,79 % Trouvé: C 57,52 %, H 6,62 %, N 14,62 %. 3ème étape: L-2-cétoimidazolidine-4-carbonyl-L-leucyl-L-prolinamide 1,2 g (2,54 mmoles) de Z-Kic-Leu-Pro-NH2 sont dis- sous dans 30 ml d'eau, la solution est additionnée de 0,25 g de catalyseur à base de charbon actif à 10 % de palladium, et de l'hydrogène est envoyé pendant 4 heures à travers le mélanqe. Le catalyseur est ensuite séparé par filtration. Le filtrat est évaporé et le résidu amorphe est séché sous vide sur du pentoxyde de phosphore anhydre. Le produit brut obte- nu de cette manière (0,75 g) est dissous dans l'eau, la solu- tion est clarifiée au charbon actif et la solution limpide est lyophilisée. On obtient 0,61 g de Kic-Leu-Pro-NH2 (71 % de la théorie); R(5) = 0,35; LaD5 = _90,4 (c = 1, dans l'acide acétique). EXEMPLE 12 L-6-CETOPIPERIDINE-2-CARBONYL-L-LEUCYL-L-PROLINAMIDE lère étaLe: PentafluoroLhénylester de l'acide L-6-cétopipécolinigue 4,3 g (30 mmoles) d'acide L-6-cétopipécolinique et 6,07 g (33 mmoles) de PrPOH sont dissous dans 100 ml de chloroforme,et la solution est additionnée, sous refroidis- sement par de la glace et agitation, de 6,8 g (33 mmoles) de DCC. Le mélange est agité pendant une heure à 0 C, puis abandonné pendant une nuit au réfrigérateur. La DCU précipi- tée est séparée par filtration le jour suivant, le filtrat est évaporé et le résidu cristallin est trituré avec le n-hexane. Le produit brut obtenu de cette manière (9,87 g) est dissous dans 20 ml d'acétate d'éthyle, la solution est abandonnée pendant une heure au réfrigérateur, puis clarifiée au charbon actif, séparée par filtration et évaporée. L'huile obtenue en tant que résidu est dissoute dans une mélange de 5 ml d'acétate d'éthyle et de 20 ml de n-hexane, la solution est abandonnée pendant une nuit au réfrigérateur, et les cris- taux qui se déposent sont séparés par filtration le jour suivant. On obtient 6,34 g de Kpc-OPFP (68,5 % de la théorie); *À 'E25 F. 96-98 C -D = + 30,00 (c = 1, dans l'acétate d'éthyle). Analyse pour C12H O3NF (poids moléculaire 309,20): 12 8 3 5 Calculé C 46,62 %, H 2,61%, N 4,53 %, F 30,72 %; Trouvé: C 46,37 %, H 2,88 %, N 4,26 %, F 30,51%. 2ème étape: L-6-cetopipéridine-2-carbonyl-L-leucyl-L-prolinamide 1,32 g (5 mmoles) de H-Leu-Pro-NH2.HCl sont mis en suspension dans 20 ml de DMFA et additionnés, sous refroidis- sement par de la glace et agitation, de 1,61 g (5,2 mmoles) de Kpc-OPFP et 0,7 ml (5 mmoles) de triéthylamine. Après minutes d'agitation, 0,7 ml (5 mmoles) de triéthylamine sont encore ajoutés et après 20 autres minutes d'agitation, le mélange réactionnel est évaporé sous vide. Le résidu cristallin est trituré avec de l'éther, les cristaux sont séparés par filtration, ils sont lavés sur le filtre à l'éther et au chloroforme froid, et séchés. On obtient de cette manière, 1,27 g de Kpc-Leu-Pro-NH2 (72 % de la théorie); F. 214-216 C; Rf5) = 0,41; /725 = -83 (c = 1, dans l'auide acétique). Analyse de l'amino-acide: acide o-amino-adipique 0,99 (1,0), Leu 1,00 (1,0), Pro 0,98 (1,0). EXEMPLE 13 L-6-CETOPIPERIDINE-2-CARBONYL-L-NORVALYL-L-PROLINAMIDE 2,38 g (9,5 mmoles) de H-Nva-Pro-NH2.HCl sont mis en suspension dans 30 ml de DMFA et additionnés, sous refroi- dissement par de la glace et agitation, de 30,09 g (10 mmoles) de KpcOPFP et 1,33 ml (9,5 mmoles) de triéthylamine. Après minutes d'agitation, 1,33 ml (9,5 mmoles) de triéthylamine sont encore ajoutés, et après 20 autres minutes d'agitation, le mélange réactionnel est évaporé sous vide. Le résidu cristallin est trituré avec de l'éther, séparé par filtra- tion, lavé sur le filtre à l'éthanol froid, et séché. Le produit brut obtenu de cette manière (3,66 g) est dissous dans l'eau, la solution est clarifiée au charbon actif, la solution limpide est évaporée et le résidu cristallin est trituré avec 10 ml d'éthanol. Le mélange est abandonné au réfrigérateur, puis séparé par filtration. On obtient 2,10 g de Kpc-NvaPro-NH2 (65 % de la théorie); F. 192-193 C; R(5) = 0,31; zf725 = -83,2 (c = 1, dans l'acide acétique). f - D EXEMPLE 14 D D-PYROGLUTAMYL-L-LEUCYL-L-PROLINAMIDE lère étape: Pentafluorohényleste_r de l'acide benzyloxycarbonyl-D- glutamiqUe 4,55 g (18 mmoles) de Z-D-Glp-OH et 3,68 g (20 mmoles) de PFPOH sont dissous dans 50 ml d'acétate d'éthyle, et la solution est additionnée, sous refroidisse- ment par de la glace et agitation, de 4,12 g (20 mmoles) de DCC. Le mélange réactionnel est agité pendant une heure à 0 C, puis la DCU est séparée par filtration, le filtrat est évaporé et on cristallise le résidu huileux à l'aide de n-hexane. Le produit brut obtenu de cette manière (7,3 g) est dissous dans 20 ml d'acétate d'éthyle, la solution est abandonnée pendant une heure au réfrigérateur, puis clarifiée au charbon actif et évaporée. L'huile obtenue en tant que ré- sidu est dissoute dans 5 ml d'acétate d'éthyle, et le pro- duit est précipité par addition de 20 ml de n-hexane. On obtient 6,60 g de Z-D-Glp-OPFP (85 % de la théorie); F. 81-82 C; Rl) = 0,84; _25 = +40, 10 (c = 1, dans l'acétate d'éthyle). Analyse pour C19H1205NF5 (poids moléculaire 429,30): Calculé: C 53,16 %, H 2,82 %, N 3,26 %, F 22,13 %; Trouvé: C 53,28 %, H 3,04 %, N 3,02 %, F 21,86 %. 2ème étape: BenLoyrnr--ogltaMT-L- Bu slLpoinamide 3,24 g (12,3 mmoles) de H-Leu-Pro-NH2.HCl sont mis en suspension dans 50 ml de DMFA et additionnés, sous re- froidissement par de la glace et agitation, de 5,6 g (13 mTles) de Z-DGlp-OPFP et 1,72 ml (12,3 mmoles) de triéthylamine. Après 5 minutes d'agitation, 1,72 ml (12,3 mmoles) sont encore ajoutés et après 20 autres minutes d'agitation, le mélange réactionnel est évaporé sous vide. Le résidu est dissous dans 120 ml de chloroforme, la solution est extraite en la secouant deux fois avec 30 ml de solution N d'acide chlorhydrique, trois fois avec 30 ml de solution N de carbonate acide de sodium et finalement une fois avec ml d'eau, puis elle est séchée sur du sulfate de codium anhydre et évaporée. On cristallise le résidu d'évaporation huileux à l'aide d'éther. Le produit brut obtenu de cette manière (5,31 g) est porté à ébullition avec 50 ml d'acétate d'éthyle, la suspension obtenue est abandonnée pendant 3 heu- res au réfrigérateur, puis le produit obtenu sous forme de précipité est séparé par filtration. On obtient 4,61 g de Z-D-Glp-Leu-Pro-NH2 (80 % de la théorie); F. 189-194 C; Rf = 0,44;a75 D = -31,2 (c = 1, dans l'acide acétique). 3ème étape: 4,48 g (9,5 mmoles) de Z-D-Glp-Leu-Pro-NH2 sont dissous dans 200 ml de méthanol, et la solution est addition- née de 0,9 g de catalyseur à base de charbon actif à 10 % de palladium,et de l'hydrogène est envoyé pendant une heure à travers le mélange. Le catalyseur est ensuite séparé par filtration, le filtrat est évaporé et le résidu d'évapora- tion amorphe est trituré avec de l'éther. Le produit brut obtenu de cette manière (3,07 g) est dissous dans l'eau, la solution est clarifiée à l'aide de charbon actif et la solu- tion limpide est lyophilisée. On obtient 2,90 g de D-Glp-Leu-Pro-NH (90,5 % de la théorie); R 7/D = -23,6 (c = 1, dans l'acide acétique). EXEMPLE 15 OROTYL-L-HISTIDYL-L-PIPECOLIIZNAMIDE lère étape: Orotyl-L-histidine-méthylester 24,2 g (100 mmoles) de H-HisOMe.2HCl sont dissous dans 120 ml d'un mélange de DMFA et de dioxane dans la pro- portion de 1:1, et la solution est additionnée de 17,41 g (100 mmoles) d'acide orotique monohydraté. La solution est refroidie à 00C, et on ajoute à cette température 11,5 g (100 mmoles) de N-hydroxy-succinimide, 11,1 ml (100 mmoles) de N-méthylmorpholine, et finalement 20,6 g (100 mmoles) de DCC. Le mélange réactionnel est agité pendant une heure à 0 C et ensuite pendant une nuit à la température ambiante. Le mélange réactionnel est conservé au réfrigérateur pendant 2 heures le jour suivant, puis la DCU est séparée par filtra- tion, et le filtrat est évaporé. L'huile obtenue en tant que résidu est amenée à cristalliser par trituration avec de l'eau, les cristaux sont séparés par filtration, lavés sur le filtre avec une solution aqueuse à 5 % d'acide citrique et à l'eau. On obtient de cette manière, 11,6 g d'Oro-His-OMe (38 % de la théorie); F. 258-262 C; R(5) = 0,40. f Analyse pour C12H1305N (poids moléculaire 307,27): Calculé: N 22,79 %; Trouvé: N 22,51 %. 2ème éta e: Orotyl-histidine-hydrazide _________________ -------- 9,21 g (30 mmoles) d'Oro-His-OMe sont dissous dans 120 ml de DMFA, et la solution est additionnée de 7,35 ml (150 mmoles) d'hydrate d'hydrazine. Le mélange réactionnel est abandonné pendant 2 jours à la température ambiante, et est ensuite dilué par 100 ml d'acétate d'éthyle et conservé pendant une nuit au réfrigérateur. Le précipité qui-se dépose est séparé par filtration et recristallisé dans du méthanol. On obtient de cette manière, 8,07 g d'Oro-lis-N2-H (88 % de la théorie); F. 250-260 C; t.2 3 R f Analyse pour CllH1304N7 (poids moléculaire 307,28): Calculé: N 31,91%; Trouvé: N 30,75 %. 3ème étape: Orotyl-L-histidyliL-Zpicolinamide ,0 g (16,28 mmoles) d'OroHis-N2H3 sont mis en suspension dans 135 ml de DMFA et additionnés de 5, 99 ml (48,84 mmoles) de solution 8,1 N d'acide chlorhydrique dans le dioxane. La solution obtenue est refroidie à -15'C et ad- ditionnée goutte-à-goutte, sous agitation, de 2,13 ml (17,9 mmoles) de nitrite de tert.-butyle. Le mélange réac- tionnel est ensuite agité pendant 20 minutes ê -10 C et est ensuite additionné goutte-à-goutte à -10 C de 4,56 ml (32,56 mmoles) de triéthylamine, puis d'une solution de 2,05 g (16,28 mmoles) de H-Pip-NH2 dans 10 ml de DMFA, et finalement encore de 2,28 ml (16,28 mmoles) de triéthylamine. Apres la fin de l'addition, le mélange est encore agité pen- dant une heure à -10 C, puis il est abandonné pendant une nuit à 2 C. Le précipité qui se dépose est filtré le jour suivant, le filtrat est évaporé sous vide, et le:résidu trituré avec de l'acétate d'éthyle. Le produit brut obtenu de cette manière (4,6 g, 74 % de la théorie) est séparé et 1,3 g de ce produit sont placés sur une colonne contenant un mélange de carboxyméthylcellulose-23 et de carboxyméthylcellulose-52 dans une proportion de 1:1 et élués par une solution 0,005 - 0,1 M d'acétate d'a m m o n i u m (pH = 5). Les fractions conte- nant du produit pur sont réunies et lyophilisées. On obtient =5 À.25 o 820 g d'Oro-His-Pip-NH2 amorphe; Rf5) 0,10; Z2D = -195 (c = 1, dans l'eau). Analyse de l'amino-acide: His 1,00 (1,0), Pip 0,94 (1,0). EXEMPLE 16 OROTYL-L-HISTIDYL-D-PIPECOLINAMIDE ,0 g (16,28 mmoles) d'Oro-His-N2H3 sont mis en suspension dans 135 ml de DMFA et additionnés de 5,99 ml (48,84 mmoles) de solution 8,1 N d'acide chlorhydrique dans le dioxane. La solution obtenue est refroidie à -15 C et additionnée goutte-à-goutte, sous agitation, de 2,13 ml (17,9 mmoles) de nitrite de tert.-butyle. Le mélange réac- tionnel est agité pendant 20 minutes à -10 C et additionné gouLte-àgoutte, à la même température, de 4,56 ml (32,56 mmoles) de triéthylamine, ensuite d'une solution de 2,06 g (16,28 mmoles) de H-D-Pip-NH2, et finalement encore de 2,28 ml (16,28 mmoles) de triéthylamine. Apres la fin de l'addition, le mélange réactionnel est encore agité pendant une heure à -10 C, puis il est abandonné pendant une nuit à 2 C. Le précipité formé est séparé par filtration le jour suivant, le filtrat est évaporé sous vide, et le résidu d'évaporation est trituré avec de l'acétate d'éthyle. On obtient de cette manière, 4,1 g de produit brut (66 % de la théorie); 1,3 g de ce produit sont placés sur une colonne contenant un- mélange de carboxyméthylcellulose-23 et de carboxyméthylcellulose-52, et sont élus par une solution 0,005 - 0,1 M d'acétate d'ammonium. Les fractions contenant du produit pur sont réunies et lyophilisées. On obtient 795 mg d'Oro-His-D-Pip-NH2 amorphe; R(5) = 0,10; L7D 5+13,5 fD (c = 1, dans l'eau). Analyse de l'amino-acide: His 1,00 (1,0), Pip 0,96 (1,0). EXEMPLE 17 OROTYL-L-HISTIDYL-L-HOMOPROLINAMIDE ,0 g (16,28 mmoles) d'Oro-His-N2H3 sont mis en suspension dans 135 ml de DMFA et additionnés de 5,99 ml (48,84 mmoles) de solution 3,1 N d'acide chlorhydrique dans le dioxane. La solution obtenue est refroidie à -15 C et additionnée goutte-à-goutte, sous agitation, de 2,13 ml (17,9 mmoles) de nitrite de tert.-butyle. Le mélange réac- tionnel est ensuite agité pendant 20 minutes à -10 C, après quoi l'on ajoute successivement, goutte-à-goutte, à -10 C, 4,56 ml (32,56 mmoles) de triéthylamine, une solution de 2,05 g (16,28 mmoles) de H-Pro-NH2 dans 10 ml de DMFA, et finalement encore 2,28 ml (16,28 mmoles) de triéthylamine. Après la fin de l'addition, le mélange réactionnel est encore agité pendant une heure, puis il est abandonné pendant une nuit au réfrigérateur à 2 C. Le précipité est séparé par filtration le jour suivant, le filtrat est évaporé sous vide eL le résidu est trituré avec de l'acétate d'éthyle. 1,3 g du produit brut obtenu de cette manière (4,2 g, 67 % de la théorie), sont placés sur une colonne contenant un mélange de carboxyméthylcellulose-23 et de carboxyméthylcellulose-52 dzns une proportion de 1:1,et sont élués à l'aide d'une solution 0,005 - 0,1 M d'ammonium. Les fractions conte- nant du produit pur sont réunies et lyophilisées. On obtient 802 mg d'OroHis-HPro-NH amorphe; R(5) = 0,10; -&-24 2 f D = - 12,80 (c = 1, dans l'eau). Analyse de l'amino-acide: His 1,00 (1,0),HPro 0,91 (1,0). EXEMPLE 18 AMIDE DE L'ACIDE L-6-CETOPIPERIDINE-2-CARBONYL-L-NORVALYL- L-THIAZOLIDINE-4-CARBOXYLIQUE 2,55 g (9,5 mmoles) de H-Nva-Tca-NH2.HCl sont mis en suspension dans 30 ml de DMFA et additionnés, sous refroi- dissement par de la glace et agitation, de 3,09 g (10 mmoles) de Kpc-OPFP et de 1,33 ml (9,5 mmoles) de triéthylamine. Apres 5 minutes d'agitation, 1,33 ml de triéthylamine sont encore ajoutés et après 20 autres minutes d'agitation, le mélange réactionnel est évaporé sous vide. L'huile obtenue en tant que résidu est abandonnée pendant une nuit au réfri- gérateur et amenée ainsi à cristalliser. Les cristaux sont séparés par filtration le jour suivant et lavés à l'éther et à l'éthanol froid. Le produit brut obtenu de cette manière (3,25 g) est dissous dans l'eau, la solution est clarifiée au charbon actif, la solution limpide est évaporée, le rési- du cristallin est trituré avec 20 ml d'éthanol et abandonné pendant une nuit au réfrigérateur. Le produit obtenu est sé- paré par filtration le jour suivant et séché. On obtient 2,0 g de Kpc-NvaTca-NH2 (59 % de la théorie); F. 183-185 C; (5)= -,47,-?25 2 Rf5) 47 /D = -136 (c = 1, dans l'acide acétique). EXEMPLE 19 L-6-CETOPIPERIDINE-2-CARBONYL-L-NORVALYL-L-HOMOPROLINAMIDE- lère_étape: Tert.-butyloxycarbonyl-L-homoprolinamide 2,29 g (10 mmoles) de BOC-HPro-OH sont dissous dans ml d'acétate d'éthyle, la solution est additionnée de 1,4 ml (10 mmoles) de triéthylamine, puis le mélange est refroidi à -10 C,et 1,3 ml (10 mmoles) d'isobutylester de l'acide chlorocarbonique sont ajoutés goutte-à-goutte. Apres 1 minutes d'agitation, du gaz ammoniac est envoyé pendant une heure à -10 C dans le mélange réactionnel, puis le mé- lange est abandonné pendant 2 heures à 0 C - 5 C. Le préci- pité est ensuite séparé par filtration et l'huile obtenue en tant que résidu est dissoute dans 30 ml de chloroforme. La solution est extraite en la secouant deux fois avec 10 ml de solution N d'acide chlorhydrique, deux fois avec 10 ml de solution N de carbonate acide de sodium, et finalement une fois avec 10 ml d'eau, puis elle est séchée sur du sulfate de sodium anhydre et évaporée et on cristallise l'huile obtenue en tant que résidu à l'aide de n-hexane. Le produit brut obtenu de cette manière (1,95 g) est recristallisé dans un mélange d'acétate d'éthyle et d'éther; on obtient 1,78 g de BOC-HPro-NH2 (78 % de la théorie); F. 138-140 C; Rf2) = 0,43; --25= -24,85 (c = 1, dans l'acide acétique). fD Analyse pour CllH2003N2 (poids moléculaire 228,29): Calculé: C 57,87 %, H 8,83 %, N 12,27 %; Trouvé: C 57,60 %, H 8,89 %, N 12,11%. 2ème étape: Chlorhydrate de L-homoprolinamide 1,6 g (7 mmoles) de BOCHPro-NH2 sont dissous à chaud dans 10 ml d'acétate d'éthyle, la solution est refroi- die à la température ambiante et additionnée de 10 ml de solution 6 N d'acide chlorhydrique dans l'acétate d'éthyle. Le mélange réactionnel est abandonné pendant une heure à la température ambiante, puis dilué par de l'éther, le préci- pité est trituré avec de l'éther et filtré. On obtient de cette manière, 1,05 g de H-HPro-NH 2.HCl (91 % de la théorie); F178-180 0;, f) = 0,32 D = +26,2 (c = 1, dans le méthanol). 3ème éta e: Chlorhydrate de L-norvalyl-L-homoprolinamide 0,99 g (5 mmoles) de H-Pro-NH2.HCl sont mis en suspension dans 20 ml de DMFA et additionnés, sous agitation, de 0, 84 ml ( mmoles) de triéthylamine et de 2,3 g (6 nnoles) de BOC-Nva-OPFP. Après 15 minutes de repos, 0,84 ml (6 mmoles) de triéthylamine sont encore ajoutés au mélange réactionnel, et après une heure d'agitation, le mélange est évaporé sous vide. Le résidu est dissous dans 50 ml de chloroforme, la solution est agitée deux fois avec 10 ml de solution N d'acide chlorhydrique, deux fois avec 10 ml de solution N de carbonate acide de sodium, puis elle est séchée sur du sulfa- te de sodium anhydre et évaporée. L'huile obtenue en tant que résidu est dissoute dans 6 ml d'acétate d'éthyle, et la solution est additionnée de 10 ml de solution 6 N d'acide chlorhydrique dans l'acétate d'éthyle. Après une heure de repos, le mélange réactionnel est dilué par de l'éther, le précipité amorphe est trituré, séparé par filtration et sé- ché sous vide à l'aide de soude anhydre. On obtient de cette manière, 1, 22 g de H-Nva-HPro-NH2.HCl (89,5 % de la théorie); R (5) = 0,12. f 4ème étae: L-6-cétoipéridine-2-carbonyl-L-norvalyl-L-homoprolinamide 1, 22 g (5,37 mmoles) de H-Nva-HPro-NH2.HCl sont dissous dans 20 ml de DMFA, et la solution est additionnée de 0,75 ml (5,37 mmoles) de triéthylamine et de 1,7 g (5,5 mmoles) de Kpc-OPFP. Apres 5 minutes d'agitation, 0,75 ml (5,37 mmoles) de triéthylamine sont encore ajoutés et après 20 autres minutes d'agitation, le mélange réaction- nel est évaporé sous vide. Le résidu est trituré avec de l'éther, et le produit brut amorphe obtenu de cette manière (1,8 g) est placé sur une colonne contenant 40 g de gel de silice,et élué avec le mélange de solvants (4). Les frac- tions de l'éluat contenant du produit pur sont réunies et évaporées. On obtient 1,11 g de produit pur, celui-ci est dissous dans l'eau, clarifié à l'aide de charbon actif, et la solution limpide est. lyophilisée. On obtient de cette manière, 1,0 g de Kpc-Nva-HPro-NH2 (53 % de la théorie); (5) __725 Ri5) = 035; LD = -44,6 (c = 1, dans l'acide acétique). Ainsi que cela ressort de ce qui précède, l'inven- tion ne se limite nullement à ceux de ses modes de mise en oeuvre, de réalisation et d'application qui viennent d'être décrits de façon plus explicite; elle en embrasse au con- traire, toutes les variantes qui peuvent venir à l'esprit du technicien en la matière, sans s'écarter du cadre, ni de la portée, de la présente invention. REVENDICATIONS ! '- Nouveaux peptides caractérisés en ce qu'ils ré- pondent à la formule générale I ci-après: X - Y - W - NH (I) 2() dans laquelle: X représente un groupe L-pyroglutamyle, D-pyro- glutamyle, L-2-cétoimidazoline-4-carbonyle, L-6- cétopipécolyle, L-thiazolidine-4-carbonvle, L-pro- lyle ou orotyle, Y représente un groupe L-leucyle, L-norvalyle ou Lhistidyle, W représente un groupe L-prolyle, D-prolyle, L- thiazolidine-4-carbonyle, L-homoprolyle, L-iso- leucyle, L-méthionyle, L-pipécolyle ou D-pipécolyle ou -W-H représentent conjointement un groupe W- 2 pyrrolidyle ou pipéridyle, mais lorsque X repré- sente un groupe L-pyroglutamyle et Y un groupe L-histidyle, W est différent d'un groupe L-prolyle, ainsi que les complexes de ces composés utilisables en thérapeutique. 2 - Peptide selon la Revendication 1, caractérisé en ce qu'il s'agit de l'amide de l'acide L-pyroglutamyl-L- leucy -T.-pipécolinique. 3 - Peptide selon la Revendication 1, caractérisé en ce -u'il s'agit de l'amide de l'acide L-pyroglutamyl-L-_ leucyi-L-thiazolidine-4carboxylique. - 4 - Peptide selon la Revendication 1, caractérisé en ce qu'il s'agit de l'amide de l'acide L-pyroglutamyl-L- norvalyl-L-thiazolidine-4-carboxylique. 5 - Peptide selon la Revendication 1, caractérisé en ce qu'il s'agit du L-2-cétoimidazolidine-4-carbonyl-L- leucyl-L-prolinamide. 6 - Peptide selon la Revendication 1, caractérisé en ce qu'il s'agit du L-6-cétopipéridine-2-carbonyl-L-leucyl- L-prolinamide. 7 - Peptide selon la Revendication 1, caractérisé en ce qu'il s'agit du L-6-cétopipéridine-2-carbonyl-L-norvalyl- L-prolinamide. 8 - Peptide selon la Revendication 1, caractérisé en ce qu'il s'agit du D-pyroglutamyl-L-leucyl-L-prolinamide. 9 - Peptide selon la Revendication 1, caractérisé en ce qu'il s'agit de l'amide de l'acide L-6-cétopipéridine- 2-carbonyl-L-norvalyl-L-thiazolidine-4-carboxylique. 10 - Peptide selon la Revendication 1, caractérisé en ce qu'il s'agit du L-6-cétopipéridine-2-carbonyl-L- norvalyl-L-homoprolinamide. 11 - Procédé de préparation de peptides de formule générale I selon la Revendication 1, caractérisé en ce qu'on synthétise des dérivés tripeptides de formule générale I, o X, Y et W ont les significations indiquées plus haut, à partir d'amino-acides ou de dérivés d'amino-acides correspondants,en utilisant des méthodes peptidochimiques connues en elles-mêmes et en ce qu'on transforme, le cas échéant, le produit obtenu en un complexe utilisable en thérapeutique. 12 - Procédé selon la Revendication 11, caracté- risé,en ce qu'on édifie pas à pas, en utilisant les méthodes de couplage usuelles en chimie des peptides,à partir de com- posés de formule générale II: W - NH2 (II) dans laquelle W a la signification indiquée dans la Revendi- cation 11, la molécule de formule générale I, en faisant appel avantageusement à des esters actifs, à des anhydrides mixtes ou au cyclohexyl-carbodiimide. 13 - Procédé selon la Revendication 11, caractéri- sé ent ce qu'on acyle les composés de formule générale II: W - NH2 (II) dans laquelle W a la signification indiquée plus haut, avec des azides préparés à partir de dipeptido-hydrazides de for- mule générale III ci-après: Z - X - Y - NH - NH (III) dans laquelle Z représente un groupe benzyloxycarbonyle, et X et Y ont les significations indiquées dans la Revendication 1, et on dissocie ensuite le groupe protecteur Z des composés protégés obtenus, de formule générale IV ci-après: Z - X - Y - W - NH2 (IV) dans laquelle Z, X, Y et W ont les significations indiquées plus haut, et on isole le produit de formule générale I obte- nu, du mélange réactionnel et/ou on le transforme éventuelle- ment en un complexe utilisable en thérapeutique. 14 - Procédé selon la Revendication 13, caractéri- sé en ce qu'on dissocie le groupe protecteur Z du composé protégé de formule générale IV, par hydrogénation catalytique. 15 - Procédé selon la Revendication 11 pour la préparation de composés de formule générale I contenant un groupe pyroglutamyle à la place de X et dans lesquels Y et W ont les significations indiquées dans la Revendication 1, caractérisé en ce qu'on introduit dans la molécule, à la pla- ce du groupe pyroglutamyle, un reste glutamine en tant qu'acide aminé Nterminal, et en ce qu'on transforme le tripeptide de formule générale GlnY-W-NH2 obtenu de cette manière, par traitement thermique en le composé correspondant de formule générale I contenant un groupe pyroglutamyle à la place de X.