FR 2476095 A1 19810821 FR 8017235 A 19800801 La présente invention concerne un nouvel ester mixte symétrique du 1,2,3-trihydroxypropane, le 2-p-chlorophénoxyisobutyrate-1,3-dinicotinate de trihydroxypropane (I), son procédé d'obtention et ses applications thérapeutiques. Ledit composé est normolypémiant et anticholestérolémique, et il excerce une action bienfaisante dans le traitement des différents types dshyperlypémies et d'hypercholestérolémies primaires ou secondaires, en prévention de l'athérosclérose, une des maladies vasculaires actuellement les plus importantes par sa signification clinique. Le 2-p-chlorophénoxyisobutyrate-1 ,3-dinicotinate de trihydroxypropane, (I), est un nouveau composé qui possede la formule structurale suivante INTRODUCTION L'athérosclerose est une des affections artérielles les plus fréquentes de notre temps, surtout dans les pays développés. Cette maladie extrêmement répandue est aujourd'hui la forme majeure du vieillissement de l'être humain ets par son étiopathogénie, le régime alimentaire a une tres grande importance dans son évolution ; pour ces raisons, il n'est pas surprenant qu'elle représente un problème croissant dans une société ou la vie moyenne individuelle s'est considérablement allongée, et dont les habitudes alimentaires deviennent plus abondantes et plus riches. La transcendance de l'athérosclérose devient évidente si l'on considere qu'elle constitue la cause la plus fréquente de maladie et de mortalité après quarante ans, et l'on pense que 95 % des thromboses coronaires sont dues à l'athérosclérose, 85 % des claudications crurales intermittentes l'atherosclerose oblitératrice des jambes et 75 % des apoplexies cérébrales à l'athérome de cerveau (Farreras 1967). Page soutient que l'athérosclérose est le plus grand meurtrier de l'homme civilisé (Farreras 1967). L'importance de cette affection qui dépasse le domaine clinique pour embrasser le cham social et économique, justifie l'effort actuel de la recherche qui tente de mettre en évidence ses mécanismes étiopathogéniques et de perfectionner la therapie basee sur des traitements de régime alimentaire et pharmacologiques. Tant que les mecanismes etiologiques de l'athérosclérose n'auront pas ete clairement demontres, la pharmacologie de cette maladie, restera basée sur la constation clinique de la coexistence de l'affection artérielle avec un trouble du metabolisme des lipides, surtout du cholestérol qui se depose sur les parois artérielles. Pour cette raison, la pharmacologie antiathérosclérotique s'efforce de combattre le composant dyslipidémique au moyen de produits capables de provoquer une atténuation des effets des lipides sanguins et plus parti culièrement du cholestérol (agents hypolipémiants et hypocholestérolémiques). Une statistique récente publiée à l'occasion du Congrès International d'Athérosclérose montrait clairement qu'on obtenait une augmentation significatiye de la survivance dans des cas de thromboses coronaires lorsque les malades etait traités avec du "Clofibrate" (VI), (1 à 2 gr. par jour), ou avec de l'acide nicotinique (V), (1 à 6 gr. par jour). (Green et Margetts 1960). Le mécanisme de l'action hypolipêmiante de ces médicaments semble être différent. L'acide clofibrique (acide p-chlorophénoxyisobutyrique) inhibe la biosynthese du cholestérol lors d'une phase antérieure à la formation de l'acide mévalonique et en même temps reduit la concentration de triglycérides dans le sang et inhibe la formation de thrombes. (Throp Waring, 1962). Il existe plusieurs théories au sujet du mécanisme d'action de l'acide nicotinique, depuis les premières hypotheses d'une augmentation de l'oxydation du cholestérol (Altshul, 1958), à la théorie de l'interférence dans la synthese du cholestérol dans le foie a partir de l'acétate actif (Goldsmith 1965), et, plus récemment, aux travaux de Carl son, 1968. Selon ces travaux, l'acide nicotinique inhibe la lipolyse dans le tissu adipeux ce qui a pour consequence une réduction de la disponibilité d'acides gras libres dans tous les tissus, moyennant quoi on inhiberait la synthèse hépatique des lipoprotéines d'une très faible densité (VLDL) avec une réduction conséquente de ces derniers et des triglycérides dans le plasma. Même la transformation des VLDL en lipoprotéines de faible densité (LDL) pourrait devenir plus lente sous les effets de l'acide nicotinique, ce qui expliquerait la diminution des niveaux plasmatiques de cholestérol et de phospholipides. Ces données préliminaires ont fait concevoir l'idée de réaliser la synthèse d'une molécule qui puisse rassembler ltefficacité de l'acide clofibrique et de l'acide nicotinique, et, après de nombreux travaux et essais, on a obtenu la synthèse du 2-p-chlorophénoxyisobutyrate-I, 3-dinicotinate de trihydroxypropane, (I). Dans cette nouvelle molécule (I), le rapport quantitatif de ses composants est celui d'une partie d'acide clofibrique pour deux parties d'acide nicotinique avec l'intention de maintenir le rapport qui existe entre es doses habituelles respectives. Le 2-p-chlorophénoxyisobutyrate-1,3-dinicotinate de trihydroxypropane interfère dans le metabolisme lipidique au moyen des différents mécanismes d'action caractéristiques de l'acide clofibrique et de l'acide nicotinique qui se complètent réciproquement. Les effets secondaires produits par l'acide nicotinique-(flushing, prurit, pyrosis et algies gastriques, cephalee) diminuent habituellement lorsque cet acide est estérifié avec des résidus relativement lourds qui ralentissent sa vitesse d'échange. Ces considérations portaient à espérer que la nouvelle molécule synthétisée, tI), serait plus active en tant qu'antilipémiante et anticholesterolémiante et moins toxique que les matières (V) et (VI) qui la composent. Les résultats pharmacologiques ont confirmé les hypothèses précédentes en démontrant que le 2-p-chlorophénoxyisobutyrate-1, 3-dinicotinate de trihydroxypropane est effectivement plus actif et moins toxique que ses composants. SYNTIIESE CHIMIQUE Pour obtenir le 2-p-chlorophénoxyisobutyrate-1, 3-dinicotinate-de trihydroxypropane (I), on procède à une reaction entre le 2-p-chlorophénoxyisobutyrate de 1',3'-dihalogene-isopropyle (II) et le sel nicotinique d'un metal alcalin dans un solvant approprié tel que le diméthylsulfoxyde, la diméthylformamide, le tétrahydrofurane, etc... Le 2-p-chlorophenoxyisobutyrate de 1 '-3'-dihalogène-isopropyle (II) possède la formule suivante Ledit compose (II). s'obtient à partir du 1,3-dihalogène-2-propanol (III) comme produit de départ. La formule structurale du composé (III) est la suivante où X représente un halogène comme I - Br - Cl - F. Comme on l'a précédemment indiqué, pour obtenir le composé intermédiaire (II), on part du compose (III) et on procède à une réaction d'estérification avec l'acide p-chlorophénoxyisobutyrique (IV), dans un milieu solvant inerte comme le benzène, le toluène, le xilène, etc..., avec les catalyseurs et les systèmes de séparation de l'eau produite dans la réaction appropriés. Après avoir exposé l'essentiel du procédé, on décrit ci-après des exemples non limitatifs de mise en oeuvre de ce dernier qui est évidemment industrialisable, pour aboutir à l'obtention de quantités plus grandes que celles qu'on y décrit. EXEMPLES A) Preparation du 2-p-chlorophénoxyisobutyrate de 1' ,3'-dihalogène-isopropyle (II). Il existe de nombreuses façons concrètes pour obtenir le composé (II), parmi lesquelles sont à souligner les exemples suivants Exemple A.1) : Préparation du 2-p-chlorophénoxyisobutyrate de 1',3'-dichloroisopropyle. Dans un ballon de 2 litres pourvu d'un système de reflux avec un séparateur dteau du type Dean-Stark, on introduit 86 g (0,667 moles) de 1,3-dichloropropane-2-ol, 75,30 g (0,667 moles) d'acide p-chlorophénoxyisobutyrique, 1 litre de benzène et 5 g d'acide p-toluènsulfonique. La solution obtenue est chauffée au reflux pendant 48 heures, et on collecte l'eau qui se forme dans le parcours de la reaction. La solution benzénique qui en résulte est d'abord lavée avec une solution aqueuse de carbonate de soude (jusqu'au pH alcalin de l'eau de lavage) et, ensuite, avec de l'eau. Elle est séchée sur du sulfate sodique anhydre, et le benzène est éliminé par distillation sous pression réduite.On obtient ainsi 150 g (rendement 72 %) d'un liquide jaunâtre, un peu visqueux, qui en chromatographie sur couche mince montre une tache unique (avec des solvants différents) et dont le spectre de I.R. montre comme information plus spécifique la présence des bandes suivantes 1743 cm-1, carbonyle ester 1590-1580, 1485, double liaison aromatique 1380-1370 cm 1, groupes méthyliques isobutirate 1235 cm"1, C-O éther Ledit produit contient 33,1 % de chlore (pourcentage calculé 32,7 %). D'autre part, il présente une richesse, calculée par la chromatographie, de gaz-liquide, supérieure à 98 %. Exemple A.2) : Préparation du 2-p-chlorophénoxyisobutyrate de 1',3'-dichloroizopropyle. Dans un ballon de 2 litres pourvu d'un réfrigérant de reflux, on introduit : 86 g (0,667 moles) de 1,3-dichloropropane-2-ol ; 75,30 g (0,667 moles) d'acide p-chlorophénoxyisobutyrique ; 1 litre de chloroforme et 15 g d'acide sulfurique concentré. Le mélange obtenu est chauffé au reflux pendant 48 heures ; on le laisse refroidir et il est ensuite versé sur 2 litres d'eau glacée. La phase chloroformique est décantée et lavée successivement avec de l'eau, une solution aqueuse de carbonate de soude (jusqu'au pH alcalin de l'eau de lavage) et une fois encore avec de l'eau. Elle est ensuite séchée sur du sulfate sodique anhydre et le chloroforme est éliminé par distillation sous pression réduite.De cette façon, on obtient 193 g (rendement 93 X) d'un liquide jaunâtre un peu visqueux, dont les propriétés chimiques coincident totalement avec celles qui correspondent au produit obtenu selon l'exemple A.1. Exemple A.3) : Préparation du 2-p-chlorophénoxyisobutYrate de 1' ,3'-dibromoisopropyle. Dans un ballon de 2 litres pourvu d'un réfrigérant de reflux, on introduit : 152,6 g (0,70 moles) de 1,3-dibromopropane-2-ol ; 150,1 g (0,70 moles) d'acide p-chlorophenoxyisobutyrique ; 1 litre de chloroforme et 15 g d'acide sulfurique concentré. Le mélange obtenu est chauffé au reflux pendant 48 heures ; on le laisse refroidir, et il est ensuite versé sur 2 litres d'eau glacee. On décante la phase chloroformique et elle est successivement lavée avec de l'eau, une solution aqueuse de carbonate de soude (jusqu'au pH alcalin de l'eau de lavage) et une fois encore avec de l'eau. Elle est ensuite séchée sur du sulfate sodique anhydre et le chloroforme est éliminé par distillation sous pression réduite.On obtient 252 g (rendement : 87 %) d'un liquide jaunâtre visqueux, dont le spectre de IR présente comme information plus spécifique la présence des bandes suivantes : I745 cm-1, carbonyle ester 1590-1580, 1485 cm"1 double liaison aromatique 1380-1370 cm-1, groupes méthyliques isobutirate 1235 cm , C-O éther Ledit produit contient 38 % de brome (pourcentage calculé : 38,6 %) et 8,52 % de chlore (pourcentage calculé : 8,55 %). D'autre part, il présente une richesse de gaz-liquide, calculée par la chromatographie, superieure à 98 X. B) Préparation du 2--Chlorophenoxyisobutyrate- 1,3-dinicotinate de - trihydroxypropane (Composé I) De même, il existe plusieurs façons concrètes d'obtenir le composé (I), parmi lesquelles sont à souligner les exemples suivants Exemple B.1) : Préparation du 2-p-chlorophenoxyisobutyrate- 1,3-dinicotinate de trihydroxypropane (Compose I) Dans un ballon de 2 litres, pourvu d'un dispositif d'agitation mécanique et de reflux, on dissout 157 g (0,482 moles) de-2-p-chlorophé- noxyisobutyrate de 1',3'-dichloroisopropyle dans 950 ml de diméthylforma- mide et on y suspend 154 g (1,06 moles) de nicotinate de sodium. On chauffe la suspension au reflux pendant 4 heures, en maintenant une intense agitation mécanique. On laisse refroidir la masse de réaction ; on filtre ; on distille le dimethylformamide à pression réduite et on extrait le résidu avec de l'acide chlorhydrique dilué (10 %). La solution acide est lavée avec 2 x 50 cc d'éther éthylique et alcalinisée à pH 8 avec de l'ammoniaque concentrée. Ensuite, on l'extrait avec de l'acétate d'éthyle, on la sèche d'abord sur du sulfate sodique anhydre, puis on augmente le degré de siccité par passage dans un rotavapeur. Le résidu est cristalisé dans de l'alcool-ether isopropylique, précédé d'ébullition à l'aide de charbon actif. On obtient 125 g (rendement 52 X) d'un solide blanc jaunâtre qui fond à 100 C et dont le spectre de IR présente comme information plus spécifique la présence des bandes suivantes 1750 cm, carbonyle ester clofibrate 1720 cm, carbonyle ester nicotinique 1590-1485 anneau aromatique 1235 cm éther arylique 1370-1390 méthylisobutyrate Ledit produit montre une tache unique enchromatographie sur couche mince, présentant un RF = 0,35 quand on emploie l'acétate d'éthyle comme éluant. L'équivalent de saponification trouve est 166, la valeur calculée pour la structure étant de 166,7. Analyse élémentaire Calculé: C, 60,1 X , H, 4,80 % ; N, 5,61 X Cl, 7,12 X Trouvé : C, 60,3 X ; H, 4,74 % ; N, 5,67 % ; Cl, 7,23 % Exemple B.2) : Préparation du 2-p-chlorophénoxyisobutyrate 1,3-dinicotinate de trihydroxypropane (somposé I) Dans un ballon de 2 litres à trois cols pourvu d'un réfrigérant de reflux et d'un agitateur mecanique, on dissout 145 g (0,350 moles) de 2-p-chlorophénoxyisobutyrate de 1',3' dibromoisopropyle dans 800 ml de dimethylformamide et un y suspend 112 g (0,77 moles) de nicotinate de sodium. On chauffe la suspension au reflux, en maintenant une intense agitation mécanique. On laisse refroidir le melange de réaction ; on filtre ; on distille le diméthylformamide à pression réduite et on extrait le résidu avec de l'acide chlorhydrique dilué (10 %). La solution acide est lavée avec 2 x 50 cc d'éther éthylique et alcalinisée jusqu'a pH = 8 avec de l'ammoniaque concentrée. On l'extrait ensuite avec de l'acétate d'éthyle, on la sèche d'abord sur du sulfate sodique anhydre et on augmente le degré de siccité par passage dans le rotavapeur. Le residu est recristalisé dans de l'alcool-éther isopropylique, précédé d'ébullition à l'aide de charbon actif. On obtient 84 g (rendement 48 %) d'un solide blanc jaunâtre, qui fond à 100 C et dont les propriétés chimiques et données analytiques coincident totalement avec celles qui correspondent au produit obtenu selon l'exemple B.1 PHARMACOLOGIE Après avoir définit les caractéristiques chimiques de l'ester mixte des acides clofibrique (IV) et nicotinique, (V). tous les deux agents remarquables hypocholestérolémiques et hypolipémiants, on a étudie les propriétés pharmacologiques du nouveau compose (I), considérées du point de vue hypolipémiant et hipocholestérolémiant. D'autre part1 on a réalisé -des essais de toxicite aiguë et de toxicité chronique, ces derniers sur deux espèces animales, ainsi que des essais tératologiques et pharmacocinétiques. On resume ci-après les résultats des épreuves de toxicité et activité pharmacologique du 2-p-chlorophénoxyisobutyrate 1,3-din-icotinate de trihydroxypropane (I). TOXICITE AIGUE Chez la souris, par voie orale, la DL50, autant en animaux mâles qu'en femelles est supérieure à 4000 mg/kg. Les mêmes resultats ont ete obtenus chez le rat par voir Drale, autant en animaux mâles qu'en femelles. TOXICITE CHRONIQUE CHEZ LE LAPIN. La toxicite chronique du nouveau produit (I) a été étudiee comparativement avec celle du clofibrate (VI) par voie orale, pendant une periode de quatre mois. I) Protocole. Animal : Lapin NZ, de poids initial 2,110-2,405 Kg. Nombre d'animaux : 16 par groupe de traitement : 8 mâles et 8 femelles. Traitements : Les produits ont été incorporés aux rations alimentaires et on a constitué les groupes de traitement suivants - Control : Avoine pour lapin. - Clofibrate : 250 mg/kg incorporé dans l'avoine. - Produit I : 50 mgXkg incorporé dans l'avoine. - Produit I : 125 mg/kg incorporé dans l'avoine. - Produit I : 250 mg/kg incorporé dans l'avoine. 11) Essais. A) Journellement : Examen genéral et contrôle de poids. B) A la fin des quatre mois d'administration 8-1) : Hématologiques Hématocrite, recompte globulaire, formule leucocitaire, volume globulaire moyen, concentration moyenne d'hémoglobine globulaire, vitesse de sédimentation globulaire. B-2) : Biochimiques En sang total : hemoglobine. En plasma : Temps de Quick En sérum : Protides totaux, glucose, urée, acide urique, transaminases (GOT et GPT), phosphatases alcalines, cholestérol et lipides totaux. 8-3) : Urinaires pH, sodium, potassium, calcium, nitrites, proteines, glucose, corps cetoniques, urobilinogène, bilirubine et sang. B-4 : Nécropsie. Observation anatomopathologique et hystologie des organes suivants coeur, reins, poumon, rate, estomac, ileon, colon, ovaires, cerveau et cervelet. III) Résultats et conclusions. A) Lors du contrôle journalier, on n' a pas observé de modifica tions d'aspect, de conduite et de poids des groupes traites par rapport au groupe de contrôle. B-1et B-2). Les analyses hématologiques et biochimiques se trouvent résumées dans les tableaux 1, 2, 3 ci-après, et on n'observe pdS d'altérations importantes dans aucun des cas. A la dose de 250 mg/kg, le Clofibrate d'éthyle provoque une diminution du nombre d'hématies et dans l'hématocrite, ainsi qu'une augmentation significative dans l1hêmoglobine globulaire moyenne. Le nouveau produit (I) provoque dans les trois doses testées une diminution significative du nombre d'hématies quoique cette diminution soit inférieure à celle obtenue par l'administration de Clofibrate d'éthyle. TABLEAU 1 LAPIN Valeurs exprimees : moyenne - erreur standard de la moyenne r I Traite- Dose Hématies Hémoglo- Hémato- V.G.M. H.G.M. C.M.H.G. ment par . bine crite E par -6 X jour mm3 g/1oo rnl x r3 FZu9 3 X jour E g mm3 /100 rnL 'I. pUg Io Contrôle 11,14 38,?5' 64,5 19,1 30,3 5,74 '0,177 +0,382 --3 t2,41 +0177 +0,94 brate +0, 245 +0,427 +0,945 -+2,17 +0,71 0,71 50 5,99 10,36 34,62 58,4 17,4- 30,1 9 Composé +0,26 +0,353 +1,293 3,292 +1,035 f1,95 .~ Z I 125 5,88 10,55 37,5 64 18,1 28,1 tu,137 tO, 289+1,195 2,55 -+0,67 tl,01 250 5,46 10,71 34,62 64,5 19,9 31,1 fi, 226 +0,204+1,133 4,05 +0,97 t1,19 ~ . Contrôle - 6,11 11,57 38,88 63,8 19 29,7 *0,106 + 0,356 i0,789 +1,94 +0,9 +0,84 e Clofi- 256 5,28 * 10,78 35,43 67,4 21,5 31,8 brate 20, 230 +0,466 +1,360 +1,67 + 0,43 tri 38 50 5,62* 11,20 37,5 66,8 20 29,8 t0,184 +0,483 +1,524 +1,51 +0,5 +1,21 Composé 125 5,34 * 10,46 36,5 68,6 19,9 29 125 5,34 I +0,168 tu,466 +0,866 *1,53 tu, 88 tu,02 ~ ~ 250 5,62 11,04 36,62 65,9 19,6 30,4 *0,188 10,259 +1,224 +3,35 +0,98 +0,94 * Ecart significatif par rapport au contrôle, d'après la "t" de student. TABLEAU 2 LAPIN ' 1 .g S Dose par | V.S.G. Temps de E Traitement jour .. . Quick E mg/Kg la. H mm 2a Hmm g , ~ 1 1,9 ,o Contrôle +0,11 +0,24 +0, oa +0,24 et0,08 Clofibrate 250 1,07 1,86 5,95 - , +0,21 +007 +007 Composé I 50 1,38 2,5 5,9 9 . +0,206, +0,189 t0,09 125 1,31 2,375 5,96 ~0,27 +0,39 +0,08 250 1,25 2,06 5,88 +0,13 tu,15 +0,07 ~ .~~ . rele 0,93 1,71 6 Cont +0,23 +0,240 +0, 125 250 1,07 2s14 5,78 1Éĭbrate2551,07 2,14 5,78 tO,17 brate -,17 -,389 to ,135 $ 50 1,06 1,8 6,04 Compose I +0,113 *0,187 tu,080 125 0,93 2,21 6,12 +D,13 +0,474 +0,229 250 0,86 1,79 6,44 tu,210 +0,325 in,258 TABLEAU 3 LAPIN I L S Leucocy- Eosino- Lymphocy- Neutroph Monocy- Basophy E tes phyles tes les tes les X Traitement n m 1033 / elle /e . elo 01. mm Contrôle 7,29 2 65 28 4 0,25 +0,774 +0,28 +3- +3 +0,56 +0,13 * * * Clofibrate 5,72 0,69 82 * 16 0,75 0 ng/ Kg. / jour +0,596 +0,132 +5 +5 +0,211 Composé I 5,64 2,12 68 27 3,19 0,06 50 9 ng/ Kg. / jour +1,024 t2,828 +4 +4 tu,95 +0,06 1 I 125 6,94 1,25 66 27 4,5 o mg/ Kg. I jour tel,189 +0,354 t7 -+6 +8,72 Composé I 6,3 1,69 82 * 14 1,06* 0,44 mg/ Kg./ jour - S +2,822 +19 +2,3 te,26 +0,17 6,01 0,94 62 32 4,8 0 Contrôle +0,766 '0,2 +,5 f4 + 0, 9 Contrôle +0,766 +O,Z ~~~~. +4 + 0,9 Clofibrate 5,41 0,93 68 27 3,5 0 mg/ Kg./ jour -+0,92 +0,2 +4 +3 +0,74 Composé I 6,11 0,5? 76 21 1,93 0,07 50 mg/ +o,229 50 772 +0 0,685 2 mg/ Kg./ jour - - , 29 +6 +5 +0,685 +0,07 * * Composé I 5,75 0,875 83 15 0,62 0 125 mg/ Kg./ jour +0,62 +0,279 t2 +2 +0,16 Composé I 6,194 1 80,5+ 17 0,06 250 6,19 1 80,5 17 0,875 f0,06 mg/ Kg./ jour +0,47 +0,366 +3,63 + 3,15 +0,532 +0,06 * Ecart significatif par rapport au contrôle d'après la " t " de Student. TABLEAU 4 LAPIN Analysessériques toxicité chronique du Composé I par rapport au Clofibrate chez le lapin. S E S Traitement Dose par Lipides Urée Protéines X jour totaux totales E mg/Kg mg/lOOmt mg/1OOml mg/i(X) mi i 392,4 41,4 5,49 Contrôle +14,47 f3,11. 250 375,8 38,1 5,60 Clofibrate +39,85 1 +2,85 ex,05 50 456,4 37,6 6,12 +30,95 +3,43 t0,25 Composé I - 125 396,9 40,3 6,02 f39,03 )2,91 o.w I I 250 397,6 40,1 5,39 -+24,88 +i,63 +O,11 - 288,2 40,9 5,91 - Contrôle 128,61 +2,06 +0,16 250 256,6 47,6 5,94 Clofibrate f7, 12 ,+3,68 f0,20 I d 50 266,9 38,9 5,85 ;;6 I 40, 05 +2, 82 +0,17 Compo 2f 305,5 42,5 5,79 +32,72 +2,47 +0,13 ( à suivre ) TABLEAU 4 ( suite ) S Traitement Dose par Phosphatases G.O.T. G.P.T. E jour alcalines X mg/Kg - u/l u/l u/l I, ng/Kg Contrôle 78,9 28,2 15,35 +11,35 +4,05 .tî,125 250 68,6 20,5 17,89 Clofibrate +7,09 +2,4 +1,272 t7 ,09 t2,4 1,272 50 50 54,9 28,6 21,86 +5,66 +3,23 t2 ,441 125 79,5 27,4 21,36 Composé I ZTO 65,3 26,1 20,89 16,26 f2,67 t1,898 +6,26 +2,67 +1,898 - 88 35,5 16,98 Contrôle +11,59 +5,35 +2,517 ~ . 250 75 22,6 15,7 Clofibrate +6,44 +3,06 +2,958 50 85,8 30,7 20,25 +8,52 +3,52 +1,527 125 74,5 36,8 20,78 Composé I 125 74,5 36,8 20,78 +8,75- +6,24 tri,533 250 76,4 26 15,6 +6,83 +3,9 +2,291 ( à suivre ) TABLEAU 4 ( suite ) I I S Dose par Acide urique Cholestérol Glucose E Traitement jour x mg/Kg mg/lOOmt mg/lOO ml mg/lOOmt ~ Os78 84,4 186,2 Contrôle jO,12l0 +3 t17,56 250 1,061 67,8 169,4 Clofibrate +0,1008 +11,3 -+13,21 0, 1008 11,3 -+f3,21 50 0,71 95,9 167,8 t0,079 t10,34 +15,22 Composé I 125 0,832 66,8 160,2 f0,096 +8,7 +11,73 I 250 0,746 77,9 205,6 +0,142 +8 +14,12 Contrôle - 0,934 47 196,8 +0,069 +6,43 Clofibrate 250 1,133 75,3 16su -,083 liZ, 12 016,22 5 50 1,019 51,5 L87 if0,12 +8,73 f22,39 Composé I 125 0,070 +6,79 +13,25 1,085 51,5 168,9 +0,159- ~ ~6,40 +15,66 B-3) : Dans les analyses urinaires, il est possible de distinguer 1") Les donnees qualitatives comme le sont les nitrites, protéines, glucose, corps cétoniques, urobilinogene, bilirubine et sang, lesquelles n'ont pas montre, non plus, de différences avec le groupe de contrôle. 2") Les données quantitatives dont les résultats sont résumés dans le tableau 5 ci-apres. Avec elles, on n'observe pas, non plus, de valeurs anormales dans les groupes traités. TABLEAU 5 i E Traitement Vol. Na K Ca PH X urine E mol/15 h p.p.m. p.p.m. p.p.m. 127 736 2896- 1374 8,5 Contrôle +21 t221 t482 +139 +0,164 f21 221 +482 Clofibrate 172 836 3047 1645 8,62 mg/Kg/jour +47 +243 +904 +384 +0,157 Composé I 93,3 717,1 3042,1 1917,1 8,5 mg/Kg/jour +17,7 +261,9 +551,2 +370,5 +0,134 Composé I 142,7 649,4 2897,5 2453,7 8,31 125' 424,7 r86,2 r451,5 + 356 , 9 +0,21 mg/l(g/jour Composé I 155,7 548,7 2440 1461,21 8,38 250 ~ mg/l(g/jour 2713 '203,2 '407,1 1247,5 '0,245 113,7 757,5 3976,2 1370 8,25 Contrôle t35,56 t193,0 ::t893,6 +255,1 +0,299 t35,56 93,0 1893,6 255,1 ,299 Clofibrate 173,3 619,4 2488,7 1618,6 8,29 250 r53,3 f87,6 +443,0 f345, c 10,284 mg/&num;g/jour Compose I 192,6 727,5 1821,5 1207,5 8,5 d Compose I 106,7 928,1 2115,2 1721,4 8,62 125 mg/Kg/jour +31,6 +261,0 +350,3 +596,5 +0,375 Composé I 250 107,3 435 2706,5 1475,7 8,8 mg/Kg/jour +26,7 +61 > 4 +731,3 +261,5 +0,09 8-4) :Dans l'examen macroscopique anatomopathologique, on n'a pas observé de différences par rapport au groupe de contrôle. Dans l'examen histopathologique, on peut dire qu'on n'observe pas de lésions répétitives qui fassent soupçonner une toxicité déterminée, sauf quelques lésions peu spécifiques et non complètement évaluables, de type rénal, observées dans les groupes du Clofibrate d'éthyle et du Composé I pour la dose plus élevée chez les mâles. Il s'agit de petits foyers chroniques avec localisation corticale de type pyélonéphritique, encore qu'on n'observe pas d'inflammatiùr dans la zone médullaire ni dans le bassin. Toxicité chronique chez le rat On a suivi le même protocole que dans la toxicité du lapin, sauf quelques différences. On a utilisé des rats albinos Sprague Dawley en nombre de 24 par traitement, 12 mâles et 12 femelles. Le traitement a été administré à la sonde oesophagienne, quotidiennement, à la dose de 10 ml/kg. Le vehicule utilise a egalement été administré au groupe de controle. Les doses employées ont été les mêmes que celles qui ont été testées sur le lapin, soit : 50, 125 et 250 mg/kg pour le produit I, et 250 mg/Kg pour le Clofibrate d'éthyle, tandis que la période d'administration a aussi été de quatre mois. Les examens pratiqués ont eté les suivants A) Journellement Examen général de contrôle et de poids. B) A la fin des quatre mois d'administration - Hématologiques. - Biochimiques. - Urinaires. - Nécropsie et histopathologie. Résultats et conclusions A) Durant le contrôle journalier, on n'a pas observé de modifications de la conduite et du poids entre les groupes traités et le groupe de contrôle. B) Les résultats des analyses hématologiques et biochimiques sont résumés dans les tableaux 6, 7, 8 et 9 ci-après. On n'observe pas d'alterations importantes dans aucun cas. TABLEAU 6 RAT S Traite- Dose E Traite- jpoaurr n x1Q-6 bine crite ment par -6 bine crite E jour n x 10 Io E ~ + mm3 % Cr- C1)1S o - 7,765 16,08 50,75 65,75 21 32,6 Gontral 2,87 -+1,07 +2,04 '0,286 f8,47 2,18 Clofi- 250 7,490 14,32 41,3 55,87 19,1 34,47 brate +0,299 +0,406 +0,78 +2,17 . +0,44 +0,90 . , 5q 7,760 15,75 50 65,2 20,7. 32,1 n '0,283 40,44 +2,09 r3,18 fli02 f1,5 +0,283 +0,44 +2,09 Compose --- I 125 7,840 15,3 49,8 64,8 19,8 31,08 +0,360 10,62 +1,7 +3,4 +0,878+1,47 z 250 7,900 15,4 51,2 65,8 19,8 30,3 +0,305 +0,45 +1,55 +3,47 +0,73 +1,3 ~ ~ 8,900 16 i 50,6 57,2 18,08 31,75 Contrôle +0,250 +0,39 tel,2 +2,4 +0,81 +0,95 1+0,2$0 t0,39 1,2 1+2,4 0,81 ,+0,95 Clofi- 250 8,669 14,745 47,545 55,06 17,11 31,72 brate +0,202 +0,329 +0,790+1,3 tu,5? +2,88 50 8,715 16,417 50,833 58,5 19 32,417 +024 . , 5 +0,229 21,160 +1,654 +0,507+0,883 . Composé 125 8,535 16,08 50,3 55,25 19,2 32,2 I +0,280 +0,43 +1,17 +4,6 +0,89 +1,08 250 8,860 15,75 51,2 58,08 18,08 31 +0,270 +0,35 +1,49 +1,77 +0,63 t0,96 TABLEAU 7 RAT S Traitement Dose par V.S.G. Temps de E jour Quick X jour Quick E mg/Kg la. H mm 2a. H mm sg - 1,04 1,67 14,8 I Controle t0,1 0, 19 ,f 1,53 i I 250 0,55 1,10 11,0 C ofi brate f0,05 0, 12 f 0, 26 50 0,96 1,42 14,3 9 +0,14. +0,21 +1,65 125 0,91 1,27 13,1 Composé I 8, 13 30,21 41, 22 ~ . +0,13 to,21 +10,63 i 1,04 1,42 16,0 Contrôle i0,11 +0,14 +1,43 250 0,54 1,13 12,7 Cl ofi brate 10,04 +0,09 0,20 +0,14 10,20 f2,16 125 1,58 2,17 15,8 Compose I +0,60 +0,73 +2,14 250 0,96 1,42 17,7 ~ ~ ~ 10,11 +0,l7 +2,60 TABLEAU 8 RAT . ,. . ~ . I w s S Traitement Leuco- Eosino- Lyn;pho- Neutro- Monocy- Baso E cytes phyles cytes phyles tes phyles x E X ' ""3 e/e / 01. I. E -1nm3 Contrôle 8,158 2,182 69,454 21,954 6,227 0,1 +1,178 +0,454 +3s362 +3,141 +0,908 +0,667 . ~ t~ Clofibrate 5,820 1,385 70,9 20,44 7,22 0 mg/kg/jour +0,385 +0,270 +4,196+3,293 ~ ~ ~ ~ ~ - Composé I 7,400 1,125 76,292 15,225 7,208 0,125 50 so +1,008 +0,343 i2,365 +2,028 tu,721 +0,090 T 9,5 ~ mg/kg/jour ~ 0,5 T 125 +1, +0,151 +2,35 +1,561 fi,936 +0,222 m/k , ---- --- Composé I 7,505 0,722 64,389 29,222 5,389 0, 167 250 + s969 +0,434 +7,549 +7,648 f0,931 +0,118 mg/kg/jour ~~~~~~~~ 14,375 0,583 68,583 23,083 8,208 0,042 Contrôle +0,997 +0,245 +3,031 +3,339 F0,856 +0,042 ..... ~~~ ~ ~ Clofibrate 9,264 0,818 75,727 16,5 6,864 0,09 250 +0,938 +0s,226 +2,176+1,725 F0,917 tu,061 mg/kg/jour . Composé I 12,158 0,708 69,333 21,25 8,625 0,208 50 +1,563 +0,242 t2,707 +2,339 F1,339 t0,114 mg/kg/jour Compose I 14,225 0,5 75,917 17,3B5 6,208 0,125 125 + 44 +1,344 fi, 174 +3,597+3,110 ,968 +0,090 mg/kg/jour Composé I 12,017 0,542 73,792 17,292 8,333 0,083 250 il, 180 , 199 +1,180 +0 mg/kg/jour - ,199 =---- +1,679 1,242 +0,056 TABLEAU 9 RAT s S Traitement Dose par Lipides Urée Protéines x Traitement jour Ir totaux totales E ~ mg/Kg mg/lOO mi mg/lOO I 40,25 7,0 Controle t31,6 tri,61 +0,135 ~ 250 332,0 34,9 6,44 Clofibrate +16*56 +2,25 . . ~ 50 397,0 39,4 7,0 +30,2 +4,8 +0,17 . 125 331,6 35,4 6,9 Compose I +41,1 +2,2 +0,21 250 321,0 39,8 6,8 143,15 +5,11 10,20 - 374,0 31,5 6,9 Contrôle +28,4 +1,11 +0,16 ~ . ~ Clofibrate 250 345,1 32 6 6 4 +20,0 +3,Q 10,12 d 50 428,3 34s4 6,75 +24 +2,Z +0,13 125 372,0 30,25 6,42 Compose I +23,5 +1,83 +0,23 250 405,0 35,8 6,4 +42 +4,0 +0,15 ( à suivre ) TABLEAU 9 ( suite ) I t S Traitement Dose par Phosphatases G.O.T. G.P.T. E jour alcalines x mg!Kg , u/l u/t u/l E mg/Kg u/i u/t u/t Contrôle 80,25 80,25 50,5 11,0 rs,i ~~ 3,2 fo,74 250 62,0 46,3 7,02 C'lufibrate +6,77 +1,8 -0,61 50 62,3 50,7 12,5 9 +8,9 +2,61 +0,80 125 90,3 51,4 11,3 125 90,3 51,4 11,3 Composé I rr0,2 3,5 f1,3 1 250 96,5 14,1 11,6 f4,3 3,15 Contr8l e 101,0 56,3 13,9 +8,78 +1,8 +1,08 250 133,0 41,8 9,6 +12,4 +12,4 +1,2 +0,7 50 101,0 54,75 12,9 +10,9 +2,15 +1,2 125 137,0 53,0 12,75 Compose I 125 +14,9 53,0 12,75 ÎH,9 +3,9 +1,6 250 115,0 50,0 14,25 +10 +3,4 +2,7 ( à suivre ) TABLEAU 9 ( suite ) s S Dose par Acide urique Cholesterol E Traitement jour X Traitement jour E mg/Kg mg/l00 ml mg/100 ml - 2,74 75,5 Contrôle +0,21 +8,05 250 1,98 52,2 Clofibrate +0,33 +6,62 ~ 50 2,93 100,5 Si) +0,32 +7,16 , : i 125 j 2,65 71,25 Compose I . +0 29 +8 90 250 2,57 65,9 I f0,20 +8,05 83,5 Contrôle - 3,03 83,5 +0,22 t5,19 250 2,85 61,1 Clofibrate +0,30 li10,0 50 ------- +0,19 t4, 6 +0,19 +4,6 Compose I 125 2,72 75,8 +0,21 +5 250 2,50 85,0 +0,13 +9 2 C) Les analyses qualitatives d'urine n'ont pas montre de différences par rapport au groupe de contrôle. D) Les resultats des analyses quantitatives d'urine sont résumés dans le tableau 10 ci-après ; ces résultats ne font pas ressortir de modifications importantes par rapport au groupe de contrôle. TABLEAU 10 RAT z - ; S Traitement d'urine Na x E mlXl5 h p.p.m. p.p.m. p. pm. i 6,45 910 4135 93,33 7,41 Contrôle +0, 827 t108. +513 +14,37 +0 29 Cl ofi brate 250 8, 22 694 3510 181,81) ,65 mg 1 kg / jour 2,615 i90 i 40Q '37,42 i8,42 Composé I 7,41 494 4644 98,18 7,50 mg /50ka / jour +0,720 +74 +387 +18,08 10,15 Composé I mg / kg / jour +1,651 +126 +676 + 14,22 +0,27 Compose I 8,65 926 3935 75 7,45 250 mg/ kg / jour f2, 166 - 13 -+598 ±7,49 0,34 13,42 766 4434 38,33 7,62 Control +2,004 +89 +629 +6,25 +0,23 -+2,004 89 f62 6,29 fo,23 Cl ofi brate 250 17,13 720 3843 111,11 7,09 mg / kg / jour +3,48 +96 +430 +31,83 10,50 Composé I 11,18 819 5863 42,50 7,25 mg mg / kg /jour +1,756 +232 t1138 +6,84 -+0,17 Compose I 125 12,28 784 6321 44,58 7,37 mg / kg / jour +2.045 +167 +1204 +7,24 tu,26 Composé I 13,09 1097 5321 38,63 7,58 250 mg / kg / jour +2,984 +294 +839 +5,52 +Q19 E) Dans ltexamen histopathologique, on peut dire qu'à part quelques altérations accidentelles par pénétration médicamenteuse pulmonavire, il n'existe pas de lésions répétitives qui fassent soupçonner des lésions toxiques pharmacologiques. Activité hypocholestérol émigue On a étudié l'activité hypocholestérolémique du nouveau produit I, chez le rat. Pour cela, on a administré préalablement aux animaux d'experimentation, du TRITON WE 1339, un produit tensioactif qui provoque une mobilisation endogene du cholestérol, avec une augmentation sérique conséquente de celui-ci. Les résultats obtenus sont résumés dans les tableaux 11 et 12 ci-après. Le nouveau produit démontre une activité très accusée dans cet essai, beaucoup plus grande que le Clofibrate, surtout sur les animaux femelles, ou à demi-dose on obtient une plus grande inhibition de l'effet hypercholestérolémisant du Triton et à dose égale, une activité deux fois supérieure. TABLEAU 11 Activité hypocholestérolémique du composé I et du Clofibrate d'éthyle sur l'hypercholestérolémie provoque par le TRITON WR 1339, chez le rat mâle. Dose par Poids Cholestérol Inhibition No. par rapport jour Traitement d'Animaux au contrôle Triton mg/Kg g mg/100 ml % Contrôle - 10 269 103 Blanc #14 #5 Contrôle i 9 219 343 Triton #7 #14 Clofibrate 400 9 215 326 5 d'éthyle #3 #9 200 10 228 312 9 Composé I t6 #15 400 10 228 289 * 16 Composé I #7 #11 Ecart significatif par rapport au Triton pour p = 0,81. TABLEAU 12 Activite hypocholestérolémique du Composé I et du Clofibrate d'éthyle sur l'hypercholestérolémie communiquée par le TRITON WR 1339, chez le rat femelle. Dose par No. Poids Cholestérol Inhibition par rapport jour d'animaux Traitement au contrôle Triton mg/Kg g mg/100 ml % - 10 228,4 74,7 Contrôle # 5,48 #4,85 Blanc - 10 228,7 423,4 Contrôle # 5,00 #19,30 Triton * 400 10 219,9 375,8 11,2 Clofibrate # 4,03 #13,48 d'éthyle ** 200 10 224,7 364,2 14 Composé I # 5,13 #13,29 *** 400 10 229,4 321,4 24,1 Composé I # 4,29 #25,03 + Ecart significatif avec le contrôle de Triton pour p = 0,05 Ecart significatif avec le contrôle de Triton pour p = 0,01 * ** Ecart significatif avec le contrôle de Triton pour p = 0,001 Activité hypolipémiante Pour faciliter l'exposé des diverses données qui sont fournies ci-après, le présent mémoire est accompagné de cinq feuilles de dessins, dans lesquels les diverses figures sont des graphiques représentant les resultats obtenus. On a etudié l'activité hypolipémiante du nouveau produit I, en utilisant comme contrôle des rats hyperlipémisés avec de l'huile d'olive. On a étudie les niveaux de cholestérol, lipides totaux et triglycérides, durant 24 heures. Les résultats obtenus sont résumés dans le tableau 13 ci-après et dans les figures 1, 2 et 3. La figure 1 correspond au graphique des lipides totaux ; la figure 2 correspond au graphique des triglycerides ; et la figure 3 correspond au graphique du cholestérol. Dans ces trois figures,-l'axe d'ordonnees (axe vertical) est gradué pour indiquer les valeurs obtenues par les expériences et analyses, exprimées en mg/îOO ml ; et, sur l'axe des abscisses (axe horizontal), on indique le temps écoulé en heures. Dans la figure 1, la ligne 1 correspond aux données obtenues du contrôle ; la ligne 2 correspond aux données obtenues avec la dose de 200 mg/Kg de produit I ; et la ligne 3 correspond aux données obtenues avec des doses de 400 mg/Kg de produit I. Dans la figure 2, la ligne 4 correspond au contrôle ; la ligne 5 correspond à la dose de 200 mg/kg ; la ligne 6 correspond à la dose de 400 mg/Kg. Dans la figure 3, les lignes 7, 8 et 9 correspondent, respectivement, au contrôle et aux doses de 200 mg/Kg et 400 mg/Kg. L'amplitude des courbes des groupes traites avec les différentes doses du produit I est réellement inférieure à celle du groupe de contrôle. La réduction des taux de cholestérol, lipides et triglycérides chez les animaux traités avec le produit I, atteint respectivement des valeurs de 20, 30 et 32 % par rapport à celle du groupe d'animaux de contrôle. TABLEAU 13 RAT Traitement Analyse de ... 3 h 6 h 9 h 12 h Cholestérol 92 63 98 74 #4 #6 #8 #6 Contrôle Lipides totaux 760 823 980 738 #127 #89 #139 #204 206 372 557 319 Triglycérides #24 #48 #69 #171 104 76 85 58 Cholestérol #2 #8 #4 #5 Composé I Lipides totaux 571 474 715 814 +37 +69 +117 +157 200 mg/Kg 174 201 408 362 Triglycérides #21 #31 #141 #125 99 73 110 86 Cholestérol #8 #2 #13 #6 528 610 647 599 Composé I Lipides totaux #9 #157 #101 #131 400 mg/Kg Triglycérides 165 291 263 128 #8 +124 +42 +31 ( à suivre ) TABLEAU 13 ( suite ) Traitement Analyse de ... 15 h 18 h 21 h 24 h Cholestérol .99 48 59 64 #17 #3 #9 #5 781 503 611 579 Contrôle Lipides totaux #82 #132 #226 #75 Triglycérides 208 172 113 190 #46 +36 +14 +28 45 34 39 41 Cholestérol #4 #4 #4 #4 464 289 305 395 @@@@@@@ @@@@@@ Composé I Lipides totaux #41 #23 #37 #43 200 mg/Kg 187 136 130 163 Triglycérides #47 #18 #14 #22 57 49 32 47 Cholestérol #5 #2 #5 #4 Composé I Lipides totaux 562 380 322 465 +58 t62 +22 t63 400 mg/Kg 203 151 142 199 Triglycérides #49 $50 #19 #34 ( à suivre ) TABLEAU 13 ( suite ) Inhibition par rapport au contrôle Traitement Analyse de... Aire de la courbe % Cholestérol 15.120 Contrôle Lipides totaux 14.910 Triglycérides 11.205 Cholestérol 12.120 20 Composé I Lipides totaux 10.507 30 200mg/Kg Triglycérides 9.390 16 Cholestérol 14.085 7 Composé I Lipides totaux 10.830 27 400 mg.Kg Triglycérides 7.650 32 Activité hypocholestêrolémique et hypolipémique On a communiqué une hypercholestérolémie et une hyperlipémi à des lapins albinos au moyen d'une alimentation hyperlipémique. Après cela, on a administre le produit I, aux doses de 150 et 308 mg/Kg, qui représentent des doses équipondérales et équimoleculaires par rapport au Clofibrate d'éthyle qu'on a administre à la dose de 150 mg/Kg. L'administration a été faite quotidiennement, pendant trois semaines, à la fin desquelles on a procedé à des analyses de cholestérol, triglycérides et lipides totaux. Les resultats obtenus sont résumes dans le tableau 14 ci-apres, et dans les figures 4, 5 et 6 des dessins ; ces résultats démontrant la bonne activité du produit I dans les trois paramètres étudiés. La figure 4 est le graphique relatif au cholestérol total, lequel se trouve indiqué sur l'axe d'ordonnées et est exprimé en mg/100 ml. Sur l'axe des abscisses, on a indique la durée des expériences exprimees en jours, soit un total de 38 jours divisé en deux périodes une premiere periode de 17 jours d'inoculation de l'hypercholestérolémie et de l'hyperlipémie et une deuxième période de traitement de 21 jours. La ligne 10 correspond à l'expression graphique des données obtenues sur le contrôle hyperlipemique ; la ligne 11 correspond aux données obtenues avec l'administration de Clofibrate d'ethyle à la dose de 150 mg/Kg par jour ; la ligne 12 correspond aux données obtenues avec l'administration de doses journalières de 150 mg/Kg de produit I ; et la ligne 13 correspond aux données obtenues avec liadministration de doses journalières de 308 mg/Kg de produit I. La figure 5 est le graphique du dosage de lipides totaux dont la valeur se trouve gradue sur l'axe d'ordonnées, exprimée en mg/100 ml. L'axe des abscisses est identique à celui de la figure 4, et comprend un total de 38 jours dont les 17 premiers correspondent à la période d'inoculation et les 21 restants à la période de traitement. La ligne 14 correspond à l'expression graphique des données obtenues sur le contrôle hyperlipemique, et les lignes 15, 16 et 17 correspondent aux doses journalières, respectivement, de 150 mg/Kg de Clofibrate d'éthyle ; 150 mg/Kg de produit I ; et 308 mg/Kg de produit I. La figure 6 est le graphique du dosage de triglycérides dont la valeur est portée sur l'axe des ordonnées et est exprimée en mg %. L'axe d'abscisses est identique à celui des figures 4 et 5 précédemment décrites. La ligne 18 a été tracee avec les données obtenues du contrôle hyperlipemi- que, et les lignes 19, 20 et 21 correspondent aux doses journalières, respectivement1 de 150 mg/Kg de Clofibrate d'ethyle ; 150 mg/Kg de produit I ; et 308 mg/Kg de produit I. Chez les animaux traités avec le produit I, par rapport au groupe de contrôle, on constate des réductions de 33, 26 et 39 % > respectivement, des taux de cholesterol, lipides et triglycerides, à la dose de 150 mg/Kg. Le produit I s'avère plus actif dans la réduction du cholestérol et dans la réduction des lipides totaux par rapport au clofibrate d'ethyle administré à la meme dose, avec des gains de 37 % et de-25 %, respectivement, dans ces diminutions. TABLEAU 14 LAPIN AUBIN Résultats des analyses après le traitement. Traitement Dose par Cholestérol Activité sur Lipides totaux le cholestérol par rapport au contrôle mg/Kg mg % % mg % - 749 - 2104 Contrôle #87 #237 150 797 6 2084 Clofibrate #119 #250 d'éthyle 150 500 33 1558 Composé I #80 #208 308 535 29 1720 Composé I #75 #217 ( à suivre ) TABLEAU 14 ( suite ) Dose par Activité sur Triglycérides Activité sur jour les lipides les triglycé par rapport rides par Traitement au contrôle rapport au contrôle mg/Kg mg % % % - - 244 Contrôle #57 150 1 119 51 Clofibrate #16 d'éthyle 150 26 150 39 Composé I #23 308 18 170 30 #13 Composé I Tératologie On a réalisé une étude post-natale sur deux espèces animales lapin et rat, par voie orale. Chez le lapin, l'administration du produit a été faite du 6ème au 18ème jour de la gestation et, au 30ème jour, on a pratiqué l'hystérectomie. Chez le rat, l'administration du produit a été faite du 6ème au 16ème jour de la gestation, et l'hystérectomie a eté pratiquée le 20ème jour. I - Examens pratiqués pendant la gestation - Contrôle du poids. - Observation du comportement. II - Examens pratiques après l'hystérectomie - Comptage du nombre de reabsorptions, implantations, avortements et foetus. - Poids des foetus. - Observation macroscopique des foetus, sexe... - Conservation de 1/3 des foetus pour l'étude de la structure anatomique. Coloration du système osseux des 2/3 restants des foetus pour étude squelettique. Les résultats de tous les paramètres étudies ne révèlent pas de differences par rapport au groupe de contrôle, ni chez le rat, ni chez le lapin. Pharmacocinétique Outre les etudes d'activité pharmacologique qui viennent d'être décrites, on a réalisé une étude pharmacocinétique chez le rat, après administration du nouveau produit I par voie orale et endoveineuse. Par voie orale, on a trouve que le principal produit du métabolisme. l'acide clofibrique, présente un maximum d'absorption au bout de 3 heures 1/2 après son administration, ce qui est clairement visible sur le graphique de la figure 7. L'acide clofibrique s'élimine par excrétion urinaire, prin cipalement comme produit biotransformé conjugué avec l'acide glucoronique et d'autres acides organiques. Les analyses dans le sang et dans les urines ont éte réalisées en utilisant la technique analytique par chromatographie gaz-liquide. Dans la figure 7 précitée, la ligne 22 est la courbe correspondante à l'acide clofibrique ; l'axe des ordonnées représente sa valeur en mg/ml de sérum ; l'axe des abscisses est divisé en heures. La dose du produit I administrée est de 50 mg/Kg, par voie orale. L'autre produit du metobolisme, l'acide nicotinique présente un maximum d'absorption au bout d'une demi-heure suivant son administration et 30 % de ce produit sont éliminés après 24 heures, par voie urinaire. Le graphique illustré à la figure 8 représente ce résultat : la ligne 23 est la courbe de l'acide nicotinique ; l'axe des ordonnées représente sa valeur en mg/ml de serum ; l'axe des abscisses est divisé en heures. La dose de produit I administrée est de 50 mg/Kg, par voie orale. Pour expliquer la différence de comportement entré le produit I et le Clofibrate d'éthyle dans les essais pharmacologiques, on a procede aux essais pharmacocinetiques suivants A) A un lot d'animaux, on a administré le produit I à la dose de 50 mg/Kg, par voie orale. B) A un autre lot d'animaux, on a administré 21,42 mg/Kg d'acide clofibrique conjointement avec 24,5 mg/Kg d'acide nicotinique ; valeurs qui correspondent aux quantites d'acide clofibrique et d'acide nicotinique contenues dans 50 mg/Kg de produit I. La courbe des niveaux hematiques obtenue par l'administration du produit I montre un maximum d'absorption de l'acide Clofibrique inférieur à celui obtenu par l'administration d'acide Clofibrique et d'acide nicotinique. Cela expliquerait que la DL50 du produit I soit plus grande et, par conséquent, moins toxique. Ainsi même la phase d'élimination est également différente dans les deux cas, malgré le fait d'avoir une B (pente) ressemblante. Ceci est dû au fait que Bo (intersection de la ligne d'elimination avec l'axe d'ordonnées) est plus grand pour le produit I et, partant, le niveau hématique de celui-ci se maintient à un taux plus elevé pendant l'élimination.Ceci est exprimé graphiquement à la figure 9 des dessins, dans laquelle : la ligne 24 est la courbe qui represente ies données obtenues sur le lot de rats auxquels on a administré 21,42 mg/Kg d'acide clofibrique plus 24,5 mg/Kg.d'acide nicotinique, par voie orale ; la ligne 25 est la courbe qui représente les données obtenues sur le lot de rats auxquels on a administré 50 mg/Kg de produit I, par voie orale. Sur l'axe des ordonnées, sont portées les valeurs d'acide clofibrique exprimées en mg/ml de sérum, tandis que l'axe des abscisses est divisé en heures. D'un point de vue pharmacologique, ce fait pourrait expliquer l'activité supérieure du produit I par rapport au Clofibrate d'éthyle vérifiee lors des essais réalisés pour mettre en évidence l'activité hypolipemiante et hypocholesterolemiante du nouveau produit I. APPLICATIONS THERAPEUTIQUES Le nouveau médicament, dont le procédé d'obtention fait l'objet du présent brevet d'invention, est efficace, en principe, pour le traitement de patients ayant des niveaux élevés de triglycérides plasmatiques (VLDL). La thérapie avec cé produit pourrait etre efficace surtout pour le traitement de lthyperlipoprotéinémie de type III donnant lieu à une chute considérable des niveaux lipidiques. Normalement, les effets hypolipidémiques de la therapie avec ce prodult sur des patients atteints d'hyperlipoprotéinémie de type III, seront accompagnes de la résolution des xanthomes tuboéruptifs et planaires. GALENIQUE Le composé de formule : 2-p-chlorophénoxyisobutyrate1,3-dinicotinate de trihydroxypropane (I) peut être mélangé à des excipients inertes dans les proportions adequates pour former différentes compositions pharmaceutiques, lesquelles peuvent être administrées par voie orale, pour le traitement de dislipémies d'origine primaire ou secondaire. Les compositions pharmaceutiques peuvent se présenter sous forme de gélules, comprimés, dragées, sirops en suspension et suspensions extemporanées, pour être administrées à des adultes ; avec une posologie comprise entre 1-2 grammes journaliers, en prises de 500 mg ou de 250 mg. Toutes les formes d'utilisation pharmaceutique susmentionnées peuvent être préparées par les procédés usuels de pharmacotechnique. A titre d'exemples représentatifs et non limitatifs, on décrit ci-après des formes galéniques de présentation du médicament selon l'invention aux doses de 500 mg et 250 mg, respectivement Présentation en gelules 1 ) Gélules de 500 mg Chaque gélule du N O contient 2-p-chlorophénoxyisobutyrate-1,3-dinicotinate de trihydroxipropane 500 mo Talc 58 mg Magnésium stéarate 12 mg 2 ) Gélules de 250 mg Chaque gélule du N O contient 2-p-chlorophénoxyisobutyrate-1,3-dinicotinate de trihydroxipropane 250 mg Talc 58 mg Magnésium stéarate 12 mg Présentation en comprimés 1 ) Comprimés de 500 mg Chaque comprime contient 2-p-chlorophénoxyisobutyrate-1,3-dinicotinate de tri hydroxipropane 500 my Amidon 70 mg Plastone 7, > ng Magnésium stéarate 6 mg Encompres 34 m( Primogel 12,5 mg 2 ) Comprimés de 250 mg Chaque comprimé contient 2-p-chlorophénoxyisobutyrate-1,3-dinicotinate de trihydroxipropane 250 mg Amidon 110 mg Lactose 24 mg Encompres 90 mg Magnésium Trisilicate 50 mg Pl asdone 16 mg Talc 10 mg Présentation en dragées 10) Dragées de 500 mg Chaque dragee contient 2-p-chlorophénoxyisobutyrate-1,3-dinicotinate de tri hydroxypropane 500 mg Amidon 47,5 mg Agar-Agar 49 mg Magnésium stéarate 9 mg Pl asdone 3,5 mg Excipient pour dragéification colorée 200 mg TOTAL 820 mg 2 ) Dragées de 250 mg Chaque dragée contient 2-p-chlorophénoxyisobutyrate-1,3-dinicotinate de trihydroxypropane 250 mg Amidon 47,5 1119 Agar-Agar 40 mg Magnésium stéarate 9 mg Plasdone 3,5 mg Excipient pour dragéification colorée 350 mg TOTAL 700 mg Présentation en sirops en suspension 1") Sirop - Suspension à 5 % Composition centésimale 2-p-chlorophenoxyisobutyrate-I,3-dinicotinate de tri hydroxypropane 5 g Phosphate monopotassique 0,42 g Phosphate disodique hydraté 0,18 g Essence d'anis et citron a.a. 0,26 ml Sirop simple avec émulsif et conservant c.s.a. 100 ml 20) Sirop - Suspension à 2,5 % Composition centésimale :: 2-p-chlorophenoxyisobutyrate-1,3-dinicotinate de tri hydroxypropane 2,5 g Phosphate monopotassique 0,42 g Phosphate disodique hydraté 0,18 g Essence d'anis et mandarine a.a. 0,26 ml Sirop simple avec émulsif et conservant c.s.a. 100 ml Présentation en suspensions extemporanées 10) Contenu d'un sachet de 500 mg 2-p-chlorophénoxyisobutyrate-1,3-dinicotinate de tri hydroxypropane 500 mg O-sulfimide benzolque sodique 10 mg Cyclohexyl sulfamate sodique 100 mg Talc 25 mg Sucre 3500 mg Essence d'anis et citron a.a. 0,08 ml 2 ) Contenu d'un sachet de 250 mg 2-p-chlorophénoxyisobutyrate-1,3-dinicotinate de tri hydroxypropane 250 mg 0-sulfimide benzoïque sodique 10 Cyclohexyl sulfamate sodique 100 mg Talc 25 ing Sucre 3500 mg Essence d'anis et mandarine a.a. 0,08 ml R E V E N D I C A T I O N S 1. Nouveau compose, caractérisé par la formule (I) 2. Nouveau composé selon la revendication 1, caractérisé par le fait qu'il s'identifie comme étant le 2-p-chlorophénoxyisobutyrate1,3-dinicotinate de tri hydroxypropane. 3. Procédé d'obtention du nouveau composé suivant les revendications 1 ou 2, caractérisé par le fait qu'on fait réagir, dans une réaction d'estérification, l'acide p-chlorophénoxyisobutyrique (IV). avec le 1,3 dihalogène-2-propanol (III) dans un milieu inerte (tel que le benzène, toluène, xylène, ou autres) avec des catalyseurs convenables et avec des moyens appropriés de captage de l'eau produite dans la réaction, en obtenant ainsi un compose intermédiaire dénommé 2-p-chlorophénoxyisobutyrate de 1',3' dihalogène- isopropyle (II) on fait ensuite réagir ledit compose intermédiaire 2-p-chlorophenoxyisobutyrate de 1',3' dihalogène-isopropyle (II) avec le sel nicotinique d'un métal alcalin. 4. Composition pharmaceutique caractérisée par le fait qu'elle comprend, comme principe actif, le composé selon l'une des revendications 1 ou 2, conjointement avec les excipients pharmaceutiques adéquats. 5. Composition pharmaceutique caractérisée en ce qu'elle contient, comme principe actif, le compose obtenu par la mise en oeuvre du procéde selon la revendication 3, conjointement avec les excipients pharmaceutiques appropriés. 6. Composition pharmaceutique selon l'une des revendications 4 ou 5, caractérisée par son emploi dans le traitement de l'athérosclérose, de l'hyperlipoprotéinémie de type III et, d'une façon générale, des maladies causes par des niveaux élevés de triglycérides plasmatiques tVLDL).