FR 2449409 A1 19800919 FR 7904634 A 19790223 L'invention concerne un nouvel adjuvant d'alimentation, destiné notamment à l'alimentation des animaux élevés pour etre consommés par lthomme. Elle concerne également la préparation de cet adjuvant d'alimentation. L'adjuvant selon l'invention est essentiellement constitué par de l'oroto-glutamate de thréonine modifié et solubilisé par réaction avec de la -méthyl-glucamine. L'oroto-glutamate de thréonine est un composé déjà connu en lui-même, dont l'emploi a été proposé en médecine, pour ses propriétés hépatoprotectrices. I1 est décrit notamment dans le brevet français NO 7.010.465 du 24 Mars 1970. L'invention permet l'utilisation de ce composé modifié dans une application différente, hors du domaine pharmaceutique, qui implique des différences aussi bien dans la nature physico-chimique du produit utilisé que dans les doses efficaces. Par rapport à l'oroto-glutamate de thréonine connu, l'adjuvant selon l'invention est rendu soluble en milieu aqueux à la température ordinaire, ce qui facilite 60n emploi dans l'alimentation. Il peut être fabriqué par un procédé qui consiste à préparer une solution d'oroto-glutamate de thréonine dans de l'eau à température comprise entre 50 et 800 80PC, on ajoute à la solution de la N-méthyl- glucamine en proportions sensiblement équimolaires. Après traitement par l'acétone, on recueille le précipité qui constitue l'adjuvant objet de la présente invention. De préférence, on fait d'abord réa gir la thréonine et l'acide orotique, puis l'acide glutamique, tous trois en proportions équimolaires en solution dans l'eau, pour obtenir une solution d'oroto-glutamate de thréonine modifié. L'adjuvant est utilisé sous forme d'une poudre oDtenue par dessication du précipité, cette poudre étant mélangée aux aliments solides ou semi-solides qui constituent habituellement au moins une grande part de la nourriture donnée aux animaux d'élevage, notamment ceux dont la chair est destinée à l'alimentation humaine, L'adjuvant peut également être dissous dans l'eau de boisson des animaux. Il y est soluble à la température ordinaire. Il n'a ni goût ni odeur qui pourraient rebuter les animaux. Les doses utiles sont généralement comprises entre 10 et 200 mg d'adjuvant par jour par kilogramme de poids de l'animal. Les doses utiles varient avec la taille de l'animal. Pour le bétail, bovins et ovins, il suffit en général d'une dose relativement faible de l'ordre de 15 à 20 mg/kg/jour, alors que pour les petits animaux, wo- lailles, lapins, poissons, etc. . la dose la plus efficace est compri- se entre 75 et 200 mg/kg/jour. L'adjuvant selon l'invention permet d'accélérer la croie- sance des animaux. La prise de poids peut être augmentée d'environ 8 à 10% par rapport à des animaux témoins recevant la même nourriture sans adjuvant. Ceci n'entraine pas d'inconvénient, ni sur la 8ant des animaux, ni sur la qualité des viandes ou poissons pour les ooo- sommateurs. Par exemple, la viande de veau reste blanche, sans réiem- tion d'eau excédentaire et, par conséquent, sans perte'de poids male à la cuisson par rapport à la viande d'animaux témoins à alimentation normale. On a également prouvé l'absence de toxicité de l'adjuramt par le fait que l'on a pu l'administrer à des rats à des doses de 800 mg/kg/jour, c'est-à-dire très largement supérieures aux doses utiles comme facteurs de croissance, sans constater aucune mortalité chez les animaux traités. D'autres caractéristiques de l'invention apparaîtront '. les exemples ci-après qui décrivent la préparation du produit, sDa application comme adjuvant d'alimentation et les résultats obtens dans des cas particuliers, nullement limitatifs. EXEMPLE I On mélange en solution dans l'eau, à 60 C, 119,3 g de thréo- nine et 174 g d'acide orotique, sous agitation. On y ajoute ensaite 147 g d'acide glutamique, toujours sous agitation, puis 195 g de N-méthyl-glucanine. Par traitement avec de l'acétone, on obtient un précipité. Celui-ci, après dessication, donne une poudre fine, sola- ble dans l'eau, qui constitue l'adjuvant d'alimentation. EXEMPLE II On a étudié dans cet exemple les effets protecteurs de l'adjuvant préparé selon l'exemple I vis-à-vis de NH Cl chez la sou 4 ris mâle. Le produit préparé selon l'exemple I a été administré aux animaux de 3 groupes, trente minutes avant NH4Cl. Groupe I (5 séries de 5-animaux) to = O t = 30 minutes Série A H2O H2O Série B OGT 100 mg/k NH4Cl 900 mg/k Série C OGT 200 mg/k NH4Cl 900 mg/k Série D OGT 400 mg/k NH4Cl 900 mg/k Série E H2O NH4Cl 900 mg/k Résultats : Décès de tous les animaux des séries B-C-D et E, en quinze minutes (temps 45). Groupe II (5 séries de 5 animaux) to t30 Série A H2O H2O Série B H2O NH4Cl = 600 mg/k Série C OGT 100 mg/k NH4Cl = 600 mg/k Série D OGT 200 mg/k NH4Cl = 600 mg/k Série E OGT 400 mg/k NH4Cl = 600 mg/k On n'observe aucune modification anatomique ni du comportement au 5ème jour dans aucune série. Résultats 1) Survie des animaux Animaux survivants -Série II- Heure Jours 1 2,30 1 2 3 4 5 10 Série A 5 5 5 5 5 5 5 5 Série B 3 3 3 3 3 3 3 3 Série C 2 2 2 2 2 2 2 2 Série D 3 3 3 3 3 3 3 3 Série E 4 4 4 4 4 4 4 3 2) Evolution des poids moyens dans chaque série -Série II- J0 J5 # J5/J0 J10 J10/J0 A 23 g 23,5 g + 2% 25,6 g + 11,3% B 23 g 26 g + 13% 26,33 g + 14,5% C 23 g 25 g + 9% 25,5 g + 10,8% D 23 g 26 g +13% 27 + 17,3% E 23 g 25,75 g + 12% 25,66 + 11,6% Groupe III (5 séries de 5 animaux) to t30 Série A H2O H2O Série B H2O NH4Cl 300 mg/k Série C OGT 100 mg/k NH4Cl 300 mg/k Série D OGT 200 mg/k NH4Cl 300 mg/k Série E OGT 400 mg/k NH4Cl 300 mg/k Résultats 1) Survie des animaux -Série III Animaux survivants Jours 1 2 3 4 5 6 7 15 36 43 A 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 B 5 5 5 5 5 5 4 4 4 4 C 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 D 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 E 5 5 4 4 4 4 4 4 0 0 2) Evolution du Doids moyen dans chaque série -Série III Jo J15 # % J36 # % J43 # % A 35 37,6 + 7 40,2 + 14 41 + 17 B 35 35,5 + 1 37 + 5 39,2 + 12 C 35 37,6 + 7 39,2 + 12 40,8 + 16 D 35 37,6 + 7 38,4 + 9 39,6 + 13 E 35 36,2 + 3 II apparaît a) que les variations de poids de la série E ne peuvent être prises en considération, copte tenu de la variation des effectifs ; b) qu'au 15ème jour, il n'existe pas de différence entre les séries A, C et D, mais que ces 5 séries sont différentes de B ; c) qu'au 36ème jour, les séries C et D sont différentes de A et de B. 3) Surveillance des animaux Au cours de la surveillance des diverses séries pendant 13 jours, on note l'absence de toute symptomatologie particulière dans les séries A, C et D. EXEMPLE III Le produit préparé selon l'exemple I est administré à diverses doses intrapéritonéales. 5 lots de 6 souris ont reçu, par voie intrapéritonéale, (injection unique) : - Série A (témoin) = 1120 - série B = 100 mg/k - série C = 200 mg/k - série D = 400 mg/k - série E = 800 mg/k Mortalité dans les diverses séries : - au jour 4 = décès d'un sujet série E ; - au jour 10 suivants : série A = 6 série B = 6 série C = 6 série D = 6 série E = 5 Evolution de la courbe de poids Jour O Jour 5 # JO J10 A JO A 24,66 23,91 - 3% 25,33 + 3% B 23,33 26,6 - 14% 27,65 +18,5 % C 23,33 25,5 +10% 27,3 +17,9% D 23,66 25s5 + 8% 27,5 +16% E 24,00 22,8 - 5% 24,6 + 2,5% EXEMPLE IV Le produit, préparé selon l'exemple I, est utilisé en administration prolongée (14 jours) par voie orale chez le rat, avec consommation libre de nourriture. 10 - Matériel et méthodes 3 séries de rats mâles Wistar de 310 g ont reçu . Série 1 (4 cas) = H20-10 ml/k par gavage quotidien pendant 14 jours . Série 2 (5 cas) = adjuvant 100 mg/k (volume 10 ml/k) pendant 7 jours, puis 200 mg/k (même volume) pendant 7 jours ; . Série 3 (5 cas) = adjuvant 200 mg/k (même volume) pendant 7 jours puis 400 mg/k pendant 7 jours. - Consommation libre de nourriture. 2 - Résultats Etude de la variation du poids (grammes) jours O 1 2 3 4 5 6 S1 305 305 305 304 304 305 305 S2 312 319 317 315 314 314 317 S3 313 317 312 320 319 320 322 Jours 7 8 9 10 11 12 13 Si 305 307,5 306, 312,5 316,5 315,5 317,5 S2 318 323 321 327 326 328 328 S3 324 330 326 332 334 333 334 soit en pourcentage de variation Jours 1 2 3 4 5 6 S1 O 0 0 0 0 0 S2 +2,2 +1,6 + 1 +0,6 +0,6 +1,6 53 + 1 0 +2 +2 +2 +3 Jours 7 8 9 10 11 12 13 S1 0 +0,8 0 +2,5 +3,7 +3,3 +4,1 S2 +1,9 +3,5 +2,9 +4,8 +4,5 +5,1 +5,1 S3 +3,5 +5,4 +4,2 +6 +6,7 +6,4 +6,7 (figure 2) Ces variations sont significatives (test de Student) Jo/J7 Jo/J14 J7/J14 S1 t=0 ns t=8,660p t=3,873p S2 t=3,207p t=2,828p t=5,488p S3 t=3,773p t=4,472p t=7,203p Le poids moyen des diverses séries au départ étant différent (305, 312, 313 g), il est ici nécessaire, pour pouvoir comparer ces séries, de considérer uniquement les variations en pourcentage, cos- formément au tableau II ci-après. Les études statistiques ont été faites par analyse d va riance. 30 - Analyse des résultats (figures 1, 2) a) Variations à l'intérieur des séries - série 1 . augmentation de 4,1 % à la 2ème semaine (p augmentation de 4,1 % entre la 2ème et 1, lère (p - série 2 . augmentation de 5,1 % à la 2ème semain (p * augmentation de 3,2 % entre la 2ème et la 1ère (p - série 3 . augmentation de 3,5 % à la lère semaine (p augmentation de 6,7 % à la 2ème semaine (p augmentation de 3,2 % entre la 2ème et la lère semaine (p b) Variations entre les séries Il apparaît une différence significative entre variations au 7ème jour entre séries 1 et 3 (p De ces essais on peut conclure que 1) Sur le plan de la protection des souris vis-à-vis de l'injection I.P. de NH4Cl à des doses variées : - l'adjuvant n'exerce aucune protection dans la limite des doses utilisées, vis-à-vis de NH4 Cl à 900 mg/k/I.P.; - pour NH4 Cl utilisé à 600 mg/k, la dose de 400 mg/k semble exercer une protection. 2) Lors de l'administration d'une dose unique d'adjuvant par voie I.P. - on note un effet favorable du produit aux doses de 100 et 200 mg/k (par rapport aux témoins). 3) L'administration de diverses doses par voie orale à des rats pendant une semaine permet de constater - que l'administration de 100 mg/k pendant une semaine entraine un gain pondéral de 1,9%, celle de 200 mg/k, un gain de 3,5% par rapport aux terrains. Lorsque ces séries reçoivent 200 et 400 mg/k, la 2ème semaine, on constate (figure 1) que la courbe de croissance se poursuit pour 200 mg/k, est freinée pour 400 mg (baisse de poids proportionnelle par rapport aux témoins). (figures I et II) Souris groupe III (protection NH4Cl = 300 mg/kg) Etude des poids au jour 15 Tableau I 2 2 k 39 5 1,006 Série A 32 42 kO 39 ddl 1/7 Série 13 35 35 35 37 - 0,009 1/8 ns Série C 39 34 4o 37 37 Série D 40 36 34 43 35 Série E 33 39 35 33 Etude des poids au jour 36 série 45 2 3 4 5 Série A -4535 40 40 41 2,315 1/7 ns Série B 35 38 40 35 1/7 Série C 35 40 40 41 1 4o 1 Série D 41 38 42 36 35 Etude des poids au jour 45 1 2 3 4 5 0,018 Série A 35 42 42 39 47 1/7 ns Série B 40 42 38 37 - Série C 37 40 44 42 41 Série D 42 38 35 45 38 Tableau II Rats = administration per os Variations en pourcentage Jours 1 2 3 4 5 6 1/1 0 0 0 0 0 0 1/2 0 0 0 0 101,5 0 1/3 0 103,7 0 0 98,1 98,1 1/4 100 97,1 98,5 98,5 100 101,5 X 100 100,2 99,6 99,6 99,9 99,9 de - 2,7 0,75 0,75 1,4 1,4 2/1 101.7 100 100 100 100 98,3 2/2 102.7 101,3 102,7 101,7 102,7 102,7 2/3 103,7 103,5 101,7 101,7 103,5 103,5 Rats = administration per os Variations en pourcentage (suite de la page précédente) Jours 7 8 9 10 11 12 13 AV 1/1 101,8 101,8 101,8 103,6 105,5 103,6 103,6 0/7è j 1/2 0 + 1,5 0 101,5 103 103 104,5 = 0,021ns 0/14è j 1/3 98,1 0 0 103,7 105,6 103,7 105,6 = 50,531 7è /14èj 1/4 100 100 101,5 101,5 101,5 102,9 102,9 = 21,872 X 100 100,8 101,1 102,6 103,9 103,3 104,1 de 1,5 0,96 0,96 1,24 2,00 0,41 1,17 2/1 100 101,7 101,7 106,8 106,8 106,8 0/7=3,174 2/2 102,7 104 104 105,3 105,3 106,7 2/3 101,7 106,9 105,2 105,2 105,2 105,2 0/14=42,916 Rats = administration per os Variations en pourcentage Tableau II (suite 1) Jours 1 2 3 4 5 6 7 2/4 101,7 101,7 100 98,3 101,7 101,7 101,7 2/5 101,7 101,7 100 101,7 101,7 101,7 103,5 X 102,3 101,6 100,9 100,6 101,9 101,6 101,9 ds 0,8 1,25 1,26 1,46 1,31 1,98 1,25 3/1 98,3 100 101,7 . 105 103,3 103,3 105 3/2 103,3 98,3 98,3 96,7 98,3 100 100 3/3 103,2 101,6 104,8 103,2 103,2 103,2 104,8 3/4 100 98,6 102,8 101,4 102,8 102,6 104,2 3/5 101,7 100 103,5 103,5 103,5 105,2 103,5 X 101,3 99,7 102,2 102 102,2 102,9 103,5 ds 2,15 1,32 2,46 3,21 2,21 1,87 2,04 Rats = administration per os - Variations en pourcentage (Suite de la page précédente) Jours 8 9 10 11 12 13 AV 2/4 101,7 101,7 101,7 101,7 101,7 103,3 7/14=11,1 2/5 103,3 101,7 105 103,3 105 103,3 X 103,5 102,9 104,8 104,5 105,1 105,1 de 2,14 1,64 1,87 1,98 2,06 1,73 3/1 106,7 106,7 110 110 110 110 3/2 101,7 100 101,7 103,3 103,3 105 0/14= 3/3 106,4 104,8 106,4 107,9 106,4 107,9 48,659 3/4 105,6 104,2 105,6 105,6 106,9 105,6 7/14= 3/5 106,9 105,2 106,9 106,9 105,2 105,2 5,939 X 105,5 104,2 106,1 106,7 106,4 106,7 de 2,16 2,51 2,98 2,51 2,46 2,16 1/2 au 7ème jour = 4,298 ns 1/2 au 14ème jour = 0,804 ns 1/3 au 7ème jour = 8,215 p N.B. Les abréviations précitées telles que : t, p, ddl, F, X, d@@ ont les significations habituelles de leur usage. Dans le calcul des probabilités, voir notaminent "Techniques de l'Ingénieur", Vol. Al - II - Mathématiques Physiques - J.Aass - Eléments de calcul des probabilités - Masson -1967j. - J. COUOT - Probabilités statistiques - ENSAE (1972), et - Probabilités et Statistiques par P. LAZAR et D.SCHWARTZ Flammarion 1967. Pour la thèse de STUBENT, voir notamment les comptes @end@@ de DUCU@ de l'Académie des Sciences - Série AB (FR) to@ 28@@@@@ S i A. pages 623 621 (parution du 14,3.77). REVENDICATIONS 1. Adjuvant d'alimentation, caractérisé en ce qu'il est essentiellement constitué par de l'oroto-glutamate de thréonine modifié et solubilisé par réaction avec de la N-méthyl-glucamine. 2. Adjuvant selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il est sous forme de poudre. 3. Adjuvant selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il est soluble dans l'eau. 4. Procédé de préparation d'un adjuvant d'alimentation selon les revendications 1, 2, 3, caractérisé en ce que l'on prépare une solution d'oroto-glutamate de thréonine dans de l'eau à température comprise entre 50 et 800 C, on ajoute à la solution de la N-méthylglucamine en proportions sensiblement équimolaires, on traite par l'acétone et on recueille le précipité formé qui constitue ledit adjuvant. 5. Procédé selon la revendication 4, caractérisé en c que l'on fait d'abord réagir la thréonine et l'acide orotique, puis IiBci- de glutamique, tous trois en proportions équimolaires en solution dans l'eau, pour obtenir une solution d'oroto-glutamate de thréonine modifié. 6. Procédé d'alimentation d'animaux d'élevage, caractérisé en ce que l'on incorpore à la nourriture usuelle des animaux un adjuvant selon l'une quelconque des revendications 1 à 3 ou tel que préparé par le procédé selon la revendication 4 ou 5. 7. Procédé selon la revendication 6, -caractérisé en ce que la dose d'adjuvant est comprise entre 10 et 200mg/kg/jour.