FR 2437211 A1 19800425 FR 7825230 A 19780831 La presente invention se rapporte à l'application pharmacologique d'un produit d'addition de l'acétone et de l'ester méthoxyméthyiique de l'amoxf- cilline (ou adduct). Par l'expression "adduct de l'acéton", on entend, dans la presente description, le produit répondant à la formule (I) obtenue par la réaction du dérivé amine approprié avec la quantité stoechiométrique d'acetone. En particulier, l'invention se rapporte à l'application pharmacologique du compose de formule: dont lratomede carbonemarqué d'un asterisque possède la configuration D(-), ainsi qu'à ses sels pharmaceutiquement acceptables. Dans la présente description, on désignera les composés (I) dont le nom chimique es-t D-6-(2,2-diméthyl-5-oxo-4-(p-bydroxvphényl)-1-imidazolidinyll pénicillanate de méthoxyméthyle, par la denomination abrégée d'ester méthoxyméthylique du p-hydroxy-hétacill ine. Le mode de préparation de l'adduct selon la présente invention est décrit dans la première demande divisionnaire No. 75 23 765. D'autres buts et avantages de la présente invention apparaîtront plus clairement à la lecture des exemples suivants, donnés a titre illustratif et non limitatif. Dans la suite de la presente description, on désignera la methyl isotutyl cétone par les initiales MIBK. EXEMPLE 1 - Ester méthoxyméthylique de la pénicilline V On met en suspension 38,89 de phenoxyméthylpénicillanate de potassium dans 150 ml de chlorure de méthylène et on refroidit le mélange à une -température de l'ordre de 5 C à l'aide d'un bain réfrigérant. On ajoute alors 0,5g (0,118 mole) de chlorométhyl methyl éther et 0,5 ml de dimethylformamide. On retire le bain réfrigérant et on agite le melange réactionnel pendant environ 1 h 30 en le laissant revenir à la température ambiante. On lave la solution chlorométhylénique à quatre reprises à l'aide de 4 x 200 ml d'eau, puis sèche et chasse le solvant par distillation sous vide. On obtient ainsi 33,59 d'ester méthoxyméthylique de la pénicilline V, sous forme d'une huile jaunâtre, ce qui correspond à un rendement de 84%. EXEMPLE 2 - Préparation de l'ester méthoxyméthylique de la pénicilline V On ajoute en 10 mn environ, 32,12g (0,257 mole) de bromométhyl methyl éther dissous dans 60 ml de dichlorométhane à une suspension de 100g (0,257 mole) de K Pen V (phénoxyméthylpénicillnate de potassium) dans 300 ml de dichlorométhane sec, refroidi à une température de l'ordre de O à 5 C. Lorsque l'addition est terminée, on ajoute 1 ml de diméthylformamide (DMF) et on laisse la réaction se poursuivre pendant 3 heures, à une température de l'ordre de O à 50C. La chromatographie en couche mince (acétone/benzène 50/50) présente une zone principale de produit, dont le Rf est d'environ 0,7. On lave le mélange réactionnel à l'aide de 3 portions de 100 mi d'eau, sèche sur MgS04 et concentre, sous pression réduite, à une température de l'ordre de 400C, jusqu'a ce que l'on obtienne une huile. On reprend l'huile dans 300 mi d'isopropanol, à une température de 250C environ, ensemence et laisse cristalliser pendant 12 heures, à une température de l'ordre de O a 5 C. On recueille les cristaux blancs par filtration, lave à l'aide d'isopropanol puis d'ethanol et sèche dans une étuve à vide, à une température d'environ 250C, pendant 4 heures environ. On obtient ainsi 68g (67% de rendement environ) d'ester methoxyméthylique de pénicilline V. On constate par chromatographie en couche mince que le produit est homogène et qu'il est en accord parfait avec les spectres IR (infra-rouge) et RMN (résonance magnétique nuéclaire). EXEMPLE 3 - Ester méthoxyméthylique de 6-APA sous forme de p-toluènesulfonate On ajoute 37 ml de N,N-dimethylaniline, puis 33,1g de pentachlorure de phosphore à une solution de 57g (0,145)mole d'ester méthoxyméthylique de pénicilline V dans 500 ml de chlorure de méthylene, refroidi à une température de -30 C environ. On agite le mélange à une température de -30 C pendant 90 mn. Par chromatographie en couche mince, on constate qu'il ne reste plus d'ester méthoxyméthylique de pénicilline V résiduel . On refroidit le mélange à une température de l'ordre de -600C et on ajoute en une fois 150 mi de méthanol refroidi, au préalable, à une température de -50 C. On maintient la tempéra- ture à -400C environ pendant 2 heures. On ajoute alors rapidement à la solution 150 ml d'eau à une température de O à 5 C et on maintient le tout pendant 10 mn à cette température. Le pH est d'environ 0,8. Tout en maintenant la température dans ce domaine, on ajoute une solution à 10g de NaOH pour ajuster le pH à 6,9. On separe les couches, et on lave la phase chlorométhylènique à l'aide de 3 portions de 100 ml d'eau froide. On sèche sur MgSO4 et concentre la couche chlorométhylenique sous vide à 50% environ, puis ajoute 54g (0,284 mole) d'acide p-toluènesulfonique en solution dans 120 ml d'acetone. On ajoute des cristaux d'ensemencement du produit et on laisse le mélange cristalliser à une température comprise entre 0 et 50C, pendant 2 heures. On recueille les solides par filtration, lave à l'aide de 100 ml dtun mélange CH2Cl2/heptane 50/50 et seche pendant 4 à 6 heures dans une étuve à circulation d'air à une température d'environ 30 C. On obtient ainsi 23,7g (37,8% de rendement) de p-toluenesulfonate de l'ester méthoxyméthylique de 6-APA. EXEMPLE 4 -Ester méthoxyméthylique de l'acide 6-aminopénicillnique On ajoute 4,8 mi (4,6g, 0,038 mole) de diméthylaniline, puis immédiatement après, 7,0g (0,0337 mole) de pentachlorure de phosphore en solution dans 100 ml de chlorure de méthylène, à une solution de 12g (0,0304 mole) d'ester méthoxyméthylique de pénicilline V, en solution dans 100 ml de chlorure de méthylène refroidi à -55 C. On maintient le mélange à une température de l'ordre de -40 à -50 C pendant 2 heures environ. Par chromatographie en couche mince, on constate que l'ester de pénicilline V est totalement chloré. On refroidit ensuite le mê- lange à une température de -70 C et on ajoute rapidement 47 ml de méthanol, refroidi au préalable à une température de -50 C. On maintient alors le mélange pendant 2 heures, à une température de -50 à -40 C. On ajoute à la solution jaune résultante 100 ml d'eau, sous agitation vigoureuse. La température du mélange réactionnel monte à environ 0 C et le pH du milieu est de l'ordre de 0,6 à 1. Après avoir maintenu le mélange pendant 10 à 15 mn à cette température et à ce pH, on ajuste le pH à une valeur de 6,5 à 6,8 à l'aide d'hydroxyde de sodium dilué. On isole les phases , lave la phase chlorométhylènique à l'aide d'eau, traite à l'aide de charbon actif et sèche de façon à obtenir le 6-aminopénicillanate de méthoxyméthyle recherché. Par chromatographie en couche mince, on constate que cette solution renferme de la diméthylaniline, du phénoxyacétate de méthyle et de l'ester méthoxyméthylique de 6-APA. EXEMPLE 5 - Ester méthoxyméthylique d'amoxicilline On ajoute 2,16g (0,005 mole) de p-toluènesulfonate de 6-aminopénicillanate de méthoxyméthyle, puis 0,7 ml (0,005 mole) de triéthylmine, à 30 ml de CH2C12 sec, à une température comprise entre O et 50C. On ajoute à la solution limpide résultante 0,64 ml (0,005 mole) de diméthylaniline, puis 1,339 (0.005 mole) de chlorhydrate de chlorure de D-(-)-p-hydroxyphénylglycyle hémidioxannate en 5mn environ. au bout de 1H à 1h'/2 lorsque la quasi totalité du chlorure d'acide solide s'est dissoute, on bloque le mélange réactionnel à l'aide de 30 ml d'eau froide. On ajuste le pH à 3,0 à l'aide d'une solution de bicarbonate de sodium et on isole les phases, tout en maintenant le pH à 3,0 et la température entre O et 50C, on lave la phase aqueuse à l'aide de 4 portions de 30 ml de CH2Cl2. Ceci est destiné à éliminer la majeure partie de la diméthylaniline et à maintenir le produit dans l'eau. On ajuste le pH de la couche aqueuse à 7 7,5 à l'aide de NaHCO3, puis extrait à l'aide de 2 portions de 30 ml de chlorure de methyle. On lave les extraits chlorométhyléniques combinés à l'aide de 2 portions de 20 ml d'eau, seche sur MgSO4 et concentre sous pression réduite, à une température On obtient 1,82g de produit (ce qui correspond à 88% de rendement) homogène d'après la chromatographie en couche mince, et dont les. spectres IR et RMN à 100 MHz sont en accord avec la structure de l'ester méthoxyméthylique de l'amoxicilline. Le spectre RMN: CDgCl2+ CD3OD (solvant) du produit obtenu est le suivant: 1,58 (6H, 3,5 (3H, s, OCH3); 4,5 (2H, singulets confondus, C-3 et phényl glycyl H); 5,35 ("3H" quadruplet AB, O-CH2-O plus une certaine quantité de CH2Cl2 du solvant); 5,6 (2H, quadruplet AB, S-lactame H2);6,9 (4H, quadruplet AB, H aromatiques). Un échantillon de 20mg de l'ester dissous dans 10 ml d'un mélange 50/50 d'acétone et de tampon pH 7,0, présente l'activité biologique de 1968 mcg/ml d'amoxicilline (environ 110% de la theorie). EXEMPLE 6 - Chlorhydrate de l'ester méthoxyméthylique de la p-hydroxy-hétacilline On dissout IOg de p-hydroxy-hétacillanate de méthoxyméthyle dans 80 ml d'acétone sec et on ajoute 6 ml d'une solution d'HCl à 13% dans l'isopropanol. On verse rapidement la solution résultante dans 1000 ml de diéthyl éther, sous agitation vigoureuse. Après 5 mn d'agitation vigoureuse, on filtre le solide obtenu et lave à l'aide de 5 ml d'éther. Après 3 heures de séchage a une température de 30 à 350C, on obtient 10g (93% de rendement) du composé en référence, dont les spectres IR et RMN sont en accord avec la structure. EXEMPLE 7 - Chlorhydrate de l'ester méthoxyméthylique de la p-hydroxy-ampicilline On met en suspension 209 de p-hydroxy-ampicilline, 209 de tamis moléculaire Linde type 4A, et 6,6 ml de triéthylamine dans 200 ml de dichlorométhane. Après 1 heure d'agitation environ, a une température de l'ordre de O a 5 C, on traite le mélange à l'aide 3,8 ml d'éther chlorométhyl méthylique, et on poursuit l'agitation pendant 2 heures supplémentaires, à une température de l'ordre de O à 5 C, On filtre le mélange et lave le filtratlimpide à l'aide de deux portions de 100 ml d'eau à pH compris entre 7,0 et 7,5. On sèche la phase organique, traite a l'aide d'environ 1g de charbon actif, filtre, puis concentre, jusqu'à ce que l'on obtienne une mousse solide, sous pression réduite à une température de 30 à 40 C. Les spectres IR et RMN indiquent la présence d'environ 10 à 15% de la p-hydroxyampicilline de départ inchangée et d'un léger excès de groupes méthoxyméthyliques, ce qui semble indiquer qu'il s'est-produit une suralkylation au niveau du groupe hydroxylephénolique ou au niveau du groupe amine. On dissout 6g du produit dans 60 ml d'acétone anhydre, refroidit à une température de l'ordre de O à 5 C, et ajoute 6 mi d'HCl à 13% dans l'isopropanol. On ajoute la solution résultante rapidement à 600 nil d'éther sous agitation vigoureuse et, après 5 mn, on filtre les solides obtenus, les lave à l'aide d'éther et sèche pendant 3 heures, à une température de l'ordre de 25 à 30 C. On obtient 6g (91,5% de rendement) de chlorhydrate de l'ester méthoxyméthylique de p-hydroxy-ampicilline, sous forme d'un solide amorphe, dont les spectres IR et RMN sont en accord avec la structure, et qui renferme une petite quantité d'acétone. EXEMPLE 8 - Préparation de 6-LD-(-)-2,2-diméthyl-4-(4-hydroxyphényl)-5-oxo-1-imidazolyll pénicillanate de méthoxyméthyle sous forme cristallisée On ajoute 6,72 ml (0,054 mole) de triéthylamine, puis 24g de tamis moléculire Linde de 4A, à une suspension de 24,3g (0,06 mole0 d'acide 6-[D-(-)2,2-diméthyl-4-(hydroxyphényl)-5-oxo-1-imidazolyl]pénicillanique (p-hydroxyhétacilline) dans 400 ml de CH2C12, sous agitation vigoureuse. On poursuit l'agitation du mélange réactionnel pendant 1 heure, puis filtre. On ajoute, goutte à goutte en 5 mn, 0,054 molede bromométhyl methyl éther au fi; trat sous agitation, refroidi à -15 C. Après 30 mn d'agitation à une température de -150C, on extrait la solution à l'aide de six portions de 100 ml d'eau. On sèche ensuite la solution chlorométhylénique pendant 10 mn, sur Na2SO4 et filtre. On évapore le filtrat sous pression réduite, à une température inférieure à 200C, de manière à obtenir une huile qui commence à cristalliser. On dissout la masse partiellement cristallisée dans 50 ml de CH2Cl2 et dilue au point de trouble a l'aide de n-heptane En grattant,on induit la cristallisation et après une heure de repos à 22 C, on filtre les cristaux et on les élimine. On dilue alors le filtrat (liqueur mêre) à l'aide de 400 ml de n-heptane et on refroidit dans un bain de glace. On triture l'huile qui se sépare dans du "Skellysolve B" (marque déposée de la Skelly Oil Co.) qui consiste en uné fraction d'éther de pétrole bouillant dans le domaine de 60 à 680C et principalement constituée de n-hexane. Ceci laisse une substance gommeuse, que l'on dissout dans la quantité minimum de chlorure de méthylène. La cristallisation commence presque immédiatement. On élimine environ les deux-tiers du chlorure de méthylène sous vide et, apres deux heures de repos, an recueille les cristaux par filtrat-ion et on les seche, ce qui permet d'obtenir 3,39 de produit. On recristallise une quantité totale de 3g de cette substance en la dissolvant dans 20 ml d'acétone, on filtre et on dilue avec précaution jusqu'au point de trouble à l'aide de n-heptane. On laisse cristailiser le produit, à savoir le 6-[D-(-)-2,2-diméthyl-4-(4-hydroxyphényl)-5-oxo-1-imidazolyl]-pénicillanate de méthoxyméthyle cristallisé sous forme de grandes aiguilles, pendant 2 h, à une température de 22 C, puis pendant 2 h supplémentaires, à 13 C (chambre froide) et 2 h à une température de l'ordre de 40C (bain de glace). On recueille les cristaux par filtration, les lave a l'aide d'un mélange n-heptane/acetone 3/2, puis à l'aide de n-heptane et sèche à l'air, On obtient ainsi 2,03g de produit présentant un point de fusion de 112-1130C et dont les spectres IR et RMN sont en accord avec la structure. Ces spectres indiquent que le produit présente un taux de pureté de 90% au moins. .L'analyse élémentaire du produit obtenu pour la formule brute C21H27N306S (%) conduit aux teneurs suivantes: C H N teneur calculee .. 56,04 6,00 9,33 teneur trouvée ... 55,49 5,96 9,18 (résuZtats non corrigés pour une teneur en eau de 1,56% déterminés par la méthode de Karl Fischer). Dtautres buts et avantages de la présente invention appraîtront à la lecture des données suivantes, indiquées à titre illustratif. Dans le tableau I, ci-après, on indique les concentrations minima inhibitrices, en ug/ml, de l'adduct acétonique de l'ester méthoxyméthylique de la p-hydroxyampicilline (également dénommée ester méthoxyméthylique de p-hydroxy hétacilline; Composé B) vis- -vis de divers microorganismes, par comparaison avec la concentration minimum inhibitrice de l'ampicilline (Composé A) Dans le Tableau II, également ci-après, on indique les taux sanguins d'ester méthoxyméthlique de la p-hydroxy-hétacilline (Composé 1), après administration orale chez la souris, par comparaison avec l'ampicilline (Composé 2) et l'hétacilline (Composé 3). TABLEAU Z Composés MIcroorganisme # A B . D. pneumoniae + 5% sérum ... ... ... 0,004 0,004 Str. pyogenes + 5% sérum ... ... ... 0,004 0,004 S. aureus Smith ... ... ... 0, 03 0,06 S. aureus Smith + 50% sérum ... ... ... 0,06 0,06 S. aureus BX1633 ... ... ... 125 125 S. aureus BX1633 ... ... ... > 125 > 125 . S. aureus ... ... ... 125 125 . S. aureus ... ... .... 125 125 . S. aureus ... ... ... > 125 > 125 . Sal. enteritidis ... ... ... 0,13 0,13 . E. coli Juhl ... ... ... 1 1 E. colui ... ... ... 32 32 K. pneumoniae ... ... ... 0,3 0,16 K. pneumoniae ... ... ... 125 . > 125 Pr. mirabilis ... ... ... 0,16 0,16 Pr. morganii ... ... ... > 125 32 Ps. aeruginosa ... ... ... > 125 > 125 . Ser. marcescens ... .... ... 32 32 TABLEAU II - Taux sanguins apres administration orale chez la souris Dose Taux sanguins ( g/m) Composé (mg/kg) 0,5 1 2 3,5 Heures après l'administration 7 50 4,8 3,5 1,7 0,7 2 50 3,3 2,1 0,9 0,5 3 50 2,0 1,8 7,1 0,5 TABLEAU III ampicilline sodée Mioroorganisme dans le bouillon de culture Concentration minimon Trihidrate Composé de inhibitrice d'amcmicilline l'Exemple 8 CMI ( g/ml) CMI ( g/ml) CMI ( g/mZ) . Str. pneumoniae* (10-3)** ... ... 0,016 0,016 0,008 . Str. pyogenes* (10-3)** ... ... 0,008 0,016 0,008 . S. aureus Smith (10-4) ... ... 0,06 0,13 0,13 . S. ureus + 50% sérum (10-4) ... ... 0,13 0,13 0,13 . S. aureus BX 1633 (10-2) ... ... 32 16 16 . S. aureus BX 1633 (10-2) ... ... > 125 > 125 > 125 . S. aureux Meth. - Res.(10-3) ... ... 32 (37 C) 63 (37 C) 125 (37 C) > 125 (28 C) 32 (28 C) 63 (28 C) . Sal. enteritidis (10-4) ... ... 0,13 0,25 0,13 . E. coli Juhl (10-4) ... ... 2 1 1 . E. coli (10-4) ... ... 16 16 32 . K. pneumoniae (10-4) ... ... 0,5 0,25 0,13 . K. pneumoniae (10-4) ... ... 125 > 125 > 125 . Pr. mirbilie (10-4) ... ... 0,25 0,25 0,25 . Pr. morganii (10-4) ... ... > 125 > 125 32 . Ps. aeruginosa (10-4) ... ... > 125 > 125 > 125 . Ser. marcescens (10-4) ... ... 32 32 > 125 . Ent. cloacae (10-4) ... ... > 125 > 125 125 . Ent. cloacae (10-4) ... ... 32 63 125 . Ent. cloacae (10-4) ... ... 63 125 63 * 45% AAB - 5% sérum - 50% bouillon comme ci-dessus. ** Dilution d'un bouillon de culture d'une quinzaine d'heures. @@@@ @e le traitement des infections bactériennes chez les mammifères, et l'homme en particulier, on administre les composés de la présente invention par voie orale ou parentérale, selon les méthodes classiques d'administration des antibiotiques, en une quantite de l'ordre de 5 à 200 mg/kg de poids du corps/jour, et de préférence de l'ordre de 5 à 20 mg/kg de poids du corps/jour, en plusieurs doses5 c'est-a-dire en trois ou quatre foisXjour. On l'administre en doses unitaires renfermant, par exemple, 125, 250 ou 500 mg de composé actif associé à un support ou véhicule physiologiquement acceptable ou excipient Les doses unitaires sont de préférence sous la forme de préparations liquides telles que solutions ou suspensions, ou sous forme solide telles que comprimes ou capsules. Bien entendu, la presente invention n'est nullement limitée aux exemples donnés ci-dessus; elle est susceptible de nombreuses variantes accessibles à l'homme de l'art, suivant les applications envisagées et sans s'écarter pour cela de l'esprit de l'invention. REVENDICATIONS 1.- Application pharmacologique pour le traitement des infections tac- teriennes chez les mammifères du composé de formule dont l'atome de carbone marqué d'un -astérisque possède la configuration D(-), ainsi que de ses sels pharmaceutiquement acceptables. 2.- Application pharmacologique pour le traitement des infections bactériennes chez les mammifères du chlorhydrate du composé selon la revendication 1. 3.- Méthode de traitement des infections bactériennes chez les mammifères, caractérisée en ce que l'on effectue une administration auxdits mammifères d'un composé selon la revendication 1 ou 2, en une quantité suffisante pour combattre ladite infection. 4.- Méthode selon la revendication 3, caractérisée en ce que ledit composé ou ledit sel est administré par voie orale ou parentrale en une dose quotidienne totale de 5 à200 mg/kg de poids du corps. 5.- Méthode selon la revendication 3 ou 4, caractérisée en ce que ledit composé ou sel est administré par voie orale ou parentérale en une dose quotidienne totale de 5 à 20 mg/kg de poids du corps.