FR 2420544 A1 19791019 FR 7808268 A 19780322 Les benzodiazépines sont un groupe de substances ayant une activite thérapeutique en tant qu'anxiolytiques, anticonvulsivants, hypnotiques et relaxants musculaires. Un de leur principaux représentants est le diazépam. Récemment, le récepteur spécifique des benzodiazépines dans le système nerveux central a été identifié par divers auteurs Môhler et Okada (Science, vol 198, 25 nov. 77 ; Life Sciences vol 20 pp 21012110, 1977) - Braestrup et Squires (Proc. Natl. Acad. Sci. USA, vol 74, nO 9, pp 3805-3809, sept. 77). L'identification de ce récepteur des benzodiazépines dans l'organisme a pu être effectuée à l'aide de diazépam marqué au tritium ou 3 H-diazepam. Différents auteurs ont pu montrer qu'il existe un parralèle entre les activités pharmacologiques des benzodiazépines et leur affinité pour le récepteur. Ils ont pu déterminer la concentration de différentes benzodiazépines qui déplace 50% du diazépam tritié lié au récepteur, (Mohler et Okada - référence citée). Le récepteur spécifique des benzodiazépines a pu être identifié principalement dans le système nerveux central Etant donné l'existence d'un récepteur spécifique des benzodiazépines les auteurs ont été conduits à émettre l'hypothèse de l'existence d'un ou plusieurs facteurs endogènes se liant sur le même site que les benzodiazépines. La Demanderesse est parvenue à isoler ce acteur et à carac tériser son activité de déplacement des benzodiazépines (en particulier du diazepam) de leur récepteur. L'objet de la présente invention consiste donc en un procédé d'isolation de ce facteur et le facteur ainsi obtenu. Ce facteur endogène se liant sur le même site que les benzodiazépines sera désigné par la suite par DDS ( acteur dépla çant le diazepam ), le diazépam étant choisi comme représentant des benzodiazépines dans les expérimentations. Ce facteur peut être obtenu à partir de différents organes, mais plus spécifiquement à partir du cerveau. Les extractions peuvent être effectuées à titre d'exemple sur des cerveaux de rat, chat, cheval, singe, porc et homme. Selon l'invention, et à titre d'exemple, l'extraction du facteur DDS est effectuée de la maniere suivante. Après broyage du cerveau ou du cortex, fraîchement prélevé ou congelé, on effectue une homogénéisation dans l'eau. La centrifugation de la suspension obtenue fournit un culot contenant notamment les récepteurs de benzodiazépines, des débris cellulaires, des membranes ... et un surnageant qui présente l'activité de venir en compétition avec les benzodiazépines pour se lier sur le récepteur de ces dernières. Une dialyse du surnageant, une ultrafiltration du surnageant ou une dialyse suivie d'une ultrafiltration du surnageant conduit à un produit dont le poids moléculaire est inférieur à 1000 et qui possède la propriété de déplacer les benzodiazépines de leur récepteur. L'ultrafiltration est effectuée à l'aide de membranes Amicon déterminées pour des substances de poids moléculaires définis. Ce produit sera désigné par DDS.Le facteur DDS isolé selon l'invention pourrait être le neurotransmetteur endogène qui contrôle l'activité anxiolytique. L'effet anxiolytique des benzodiazeines est donc lie a l'interac- tion des benzodiazines avec leur récepteur spécifique sur lequel le facteur DDS soit. La Demanderesse a pu démontrer dans l'experience décrite ci-après que le facteur DDS déplace de maniere spécifique les benzodiazépines de leur receoteur. L exemple suivant illustre le mode d'isolation du facteur DDS 5 cerveaux entiers de cheval fraîchement prélevés ou conservés par congélation sont homogénéisés à froid dans 10 à 50 volumes d'eau distillée et centrifugés à 50000 g pendant 60 minutes. Le surnageant est ensuite concentré (par ex. à 400C sous 1 mm de Hg ou par liophylisation). L'extrait concentré est soit dialysé contre 100 fois son volume d'eau distillée pendant 24 heures, soit ultrafiltré sur un appareil Amicon. Le dialysat et l'ultrafiltrat qui contiennent les molécules d'un poids moléculaire inférieur à environ 1000 présentent l'activité de déplacement invitro du H-diazpam. Mesure du déplacement du H-diazépam Quelques cortex de rat sont homogénéisés dans 50 volumes d'un tampon refroidi par de la glace (50 m M Tris HC1, pH 7,4, 120 m M NaCl, 5 m M KCl) et centrifugés à 50 000 g pendant 15 mn. Le culot est lavé par réhomogénéisation et recentrifugation et mis à nouveau en suspension dans 100 volumes de tampon. Pour le test de la liaison,2,2 ml de la suspension de membranes sont mis en incubation avec du H-diazépam (N-méthyl- H) pendant 20 mn à 0 C ou à 250C. Deux échantillons de 1 mi sont filtrés sous vide sur des filtres de verre Whatman et lavés immédiatement 2 fois avec 10 ml de tampon refroidi par de la glace. Les filtres sont séchés à 1100C pendant 20 mn.La mesure de radioactivité est effectuée à l'aide d'un compteur à scintillations, dans du toluène contenant 0,06% de POPOP (1,4-bis-[2- (4-méthyl-5-phényloxazolyl)]-benzène) et 0,4% de PPO (2,5-diphényl-oxazole). La liaison non spécifique, déterminée en présence de diazépam non marqué à une concentration de 1C-6M, représente environ 10% de la liaison totale à une concentration de 5 n M de H-diazépam. Elle est soustraite de la liaison totale pour obtenir la liaison spécifique. usure du déplacement du H-diazépam par le facteur DDS La mesure de la liaison spécifique du H-diazépam à 0,25 n M sur le récepteur du cortex de rat a été determinee en présence de plusieurs concentrations de facteur DDS isolé à partir du cerveau de cheval. La valeur de la liaison spécifique du 3H-diazépam en présence de DDS diminue. La courbe (fig.1) représente le % de déplacement du H-diazépam de la liaison en fonction de quantites croissantes de DDS. Revendications 1. Procédé d'isolation d'un facteur endogène se liant sur le même site que les benzodiazépines, procédé caractérisé en ce qu'on broie un cerveau ou un cortex --raîchement prélevé ou congelé, on effectue une homogénéisation dans l'eau, on centrifuge la suspension obtenue, puis soit on effectue une dialyse du surnageant, soit on effectue une ultrafiltration du surnageant, soit on effectue une dialyse et une ultrafiltration du surnageant afin d'obtenir un facteur endogène d'un poids moléculaire inférieur à environ 1000 se liant sur le même site que les benzodiazépines. 2. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce u'on utilise des cerveaux ou cortex de rat, chat, cheval, singe, porc ou homme. 3. ?rocédé selon la revendication 1 ou la revendication 2, carac térisé en ce qu'on effectue l'homogénéisation à froid dans 10 à 50 volumes d'eau distillée. 4. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, carac térisé en ce qu'on centrifuge la suspension à 50 000 g pendant 60mn. 5. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, carac térisé en ce que l'on effectue l'ultrafiltration sur un appareil de type Amicon à l'aide de filtres déterminés par des substances de poids moléculaires définis. 6. Facteur endogène se liant sur le même site que les benzodia zépines, facteur caractérisé en ce qu' il est obtenu selon le procédé défini dans la revendication 1.