FR 2396018 A1 19790126 FR 7720318 A 19770701 La présente invention, a la réalisation de laquelle ont participé Monsieur BROUET Jean-Claude, Mademoiselle MARTIN Marie-Odile et Messieurs BIARD Dominique et ZALISZ René, a pour objet, de nouveaux glycopeptides acétylés hydrosolubles, extraits de corps microbiens lysés d'Escherichia Coli, le procédé de préparation et l'application à titre de médicaments de ces produits. De nombreuses préparations d'origine microbienne, constituées par des corps microbiens lysés sont décrites dans la littérature. I1 en est ainsi par exemple des produits décrits dans les brevets spéciaux de médicaments 5488 M, 6495 M et 6513 M. Ces lysats, qui proviennent, le plus souvent, d1une espèce microbienne déterminée et qui provoquent une immunisation plus spécifique que générale, présentent l'inconvénient d'être généralement allergéniques. Des extraits hydrosolubles acétylés, issus notamment de corps microbiens lysés d'Escherichia Coli, ont en outre été décrits dans la littérature. Il en est ainsi par exemple des extraits hydroso lubles acétylés décrits dans la demande de brevet français publiée sous le n0 2.269.964. Ces extraits semblent présenter uniquement des propriétés immunostimulantes. La demanderesse a cherché depuis a préparer de nouveaux extraits microbiens, obtenus par d'autres procédés de préparation et présentant a la fois des propriétés antiinflammatoires et immunostimulantes ainsi qu'une bonne tolérance. La présente demande a ainsi pour objet de nouveaux glycopeptides acétylés hydrosolubles extraits de corps microbiens lysés d'Escherichia Coli, caractérisés en ce qu'ils ont un poids moléculaire apparent supérieur à 1000 et inférieur ou égal a 200.000, renferment au moins 25 % de substances a pouvoir biurétogene et au moins 30 % d'oses neutres, ne renferment pas d'acide diaminopimélique et présentent un maximum d'absorption dans l'ultra-violet a environ 210 mF Le poids moléculaire apparent est le poids moléculaire déterminé au moyen d'un gel poreux étalonné l'aide de solutions macromoléculaires connues.Parmi les gels poreux étalonnés servant a déterminer le poids moléculaire, on peut retenir les gels commercialisés sous la désignation Sephadex et notamment les gels Sephadex G 200. Par substances å pouvoir biurétogène, on désigne les protéines donnant la réaction coloree du biuret. Par oses neutres, on désigne notamment des hexoses neutres tels que le glucose, le galactose ou le mannose. L'absence d'acide diaminopimélique dans les glycopeptides acéty les tels que définis ci-dessus indique l'origine non membranaire de ceux-ci. Parmi les glycopeptides acétylés de l'invention, on retient notamment ceux caractérisés en ce qu'ils renferment de 25 % à 35 % de substances a pouvoir biurétogène et de 30 % à 40 % d'oses neutres. Parmi les glycopeptides acétylés de l'invention, tels que définis ci-dessus, on retient plus particulièrement ceux obtenus a partir de la souche d'Escherichia Coli déposée à l'institut Pasteur à Paris sous le nQ 5158. L'invention a également pour objet un procédé de préparation des glycopeptides acétylés hydrosolubles tels que définis ci-dessus, ledit procédé étant caractérisé en ce que l'on soumet à une acéto lyse des glycoprotéines possédant un poids moléculaire apparent d'au moins 300.000, extraites de corps microbiens lysés d'Esche richia Coli, pour obtenir un extrait brut de glycopeptides acétylés, traite ce dernier au moyen d'un solvant organique, recueille la phase aqueuse, effectue une diafiltration de cette dernière sur membrane poreuse calibree présentant un seuil de rétention de substances dont le poids moléculaire est supérieur ou égal à 1000, recueille la solution n'ayant pas traversé la membrane, puis isole de la solution ainsi obtenue le produit recherché. L'acétolyse, cXest- -dire la coupure en milieu acétique des glycoprotéines extraites de corps microbiens lysés d'Escherichia Coli est avantageusement effectuée au moyen d'un mélange d'anhy dride acétique, d'acide acétique et d'acide sulfurique. Ce mélange est composé de préférence par 10 volumes d'anhydride acétique, 10 volumes d'acide acétique glacial et 1 volume d'acide sulfurique concentré. La réaction est avantageusement effectuée sous agitation pendant au moins 48 heures et de préférence pendant 96 heures à une tempé rature voisine de + 4CC. La réaction d'acétolyse peut être arrêtée par adjonction de glace pilée au mélange. Le pH du mélange réactionnel peut alors être ajusté à une valeur voisine de 4,5 par addition de carbonate acide de sodium. L'acêtolyse des glycoprotéines, possédant un Poids moléculaire apparent d'au moins 300.000, extraites de corps microbiens lysés d'Escherichia Coli est avantageusement précédee par une dessication prolongée sous vide, à une température inférieure à 400C, desdites glycoprotéines. Le solvant organique utilisé pour traiter ltextrait brut des glycopeptides acétylés peut avantageusement être constitué par le chloroforme. La phase aqueuse obtenue après traitement par le solvant organique peut avantageusement entre débarrassée des particules insolubles par centrifugation, ultracentrifugation ou filtration. La filtration peut être réalisée au moyen de filtres "Millipore AP 20 et AP 04". La membrane poreuse calibrée présentant un seuil de rétention de substances dont le poids moléculaire est supérieur ou égal à 1000 peut être de préférence constituée par une membrane commercialisée sous la désignation P.S.A.C. 00001 par la société Millipore ou sous la désignation UM 2 par la société AMI CON (Amicon Corporation-Lexington Massachusetts 02713 U.S.A.). Les membranes poreuses calibrees peuvent également se présenter sous la forme de fibres creuses. La phase aqueuse retenue par la membrane poreuse calibrée peut avantageusement etre lyophilisée pour donner les glycopeptides acétyles hydrosolubles de l'invention Dans des conditions préférentielles de mise en oeuvre de l'invention, le procédé de préparation ci-dessus décrit est ainsi caractérisé en ce que a) L'acétolyse est effectuée au moyen d'un mélange d'anhydride acétique, d'acide acétique et d'acide sulfurique, b) le solvant organique est constitué par le chloroforme, c) la membrane poreuse calibrée présentant un seuil de rétention de substances dont le poids moléculaire est supérieur ou égal à 1000 est une membrane vendue sous la désignation P.S.A.C. 00001 par la société Millipore ou sous la désignation UM 2 par la société Amicon. La présente demande a aussi pour objet un procédé de préparation tel que défini ci-dessus, caractérisé en ce quwil est mis en oeuvre au départ de glycoprotéines extraites de la souche d'Escherichia Coli déposée à l'institut Pasteur à Paris sous le nO 5158. La présente demande a également pour objet les glycopeptides acétylés hydrosolubles obtenus par le procédé décrit ci-dessus. Les glycopeptides acétylés hydrosolubles de l'invention se presentent sous la forme de produits blancs, inodores, neutres et beaucoup plus hydrosolubles que les glycoprotéines dont ils dérivent. Ces glycopeptides sont par contre insolubles dans des solvants tels que l'ethanol, le méthanol, l'acétone, l'éther ou le benzène. Par chromatographie sur Sephadex G 200, on a constaté que le poids moléculaire des produits obtenus est inférieur ou égal à 200.000. Le spectre d'absorption Ultra-Violet montre une absorption aux courtes longueurs d'onde (maximum aux environs de 210 mj,u), carac téristique de la liaison peptidique et une absorption pratiquement nulle aux grandes longueurs d'onde. Le spectre d'absorption Infra-Rouge confirme la nature peptidique du produit et permet de différencier les glycopeptides obtenus par le procédé, objet de la présente demande, des glycoprotéines dont ils dérivent par la présence de deux bandes d'absorption à 1730 1700 cl 1 et 1270-1200 cm dues aux liaisons esters de l'acide acétique. Les réactions de caractérisation des sucres (réaction à l'orcinol et au carbazole) sont positives. Les réactions de caractérisation des liaisons peptidiques (réaction du biuret, de Lowry et à la ninhydrine) sont également positives. Les glycopeptides acétylés de la présente demande ne sont pas dialysables, ils sont pharmacologiquement stables a la chaleur (une heure à 1050C) et aux pH extrêmes (pH 3 et pH 10, quinze heures à + 40C > t l'action d'une enzyme protéblytique telle que la pronase (vingt-quatre heures à +370C) ne modifie pas l'activité pharmacologique des produits. L'hydrolyse par l'acide chlorhydrique 6 N à 1100C pendant 24 heures, des glycopeptides acétylés, objet de la présente demande, suivie d'une chromatographie sur plaque de cellulose avec l'un des systèmes solvants suivants : n-butanol, acide acétique, eau (60-30-30), isopropanol, ammoniaque (2/3 - 1/3) ou méthanol-pyridine-acide acétique-eau (18-50-4-28) montre l'absence d'acide diaminopimélique dans ces hydrolysats. Cette absence d'acide diaminopimélique dans les hydrolysats indique l'origine non membranaire des glycopeptides acétylés obte nus selon l'invention. Les produits, objet de la présente invention, possédent de très intéressantes propriétés pharmacologiques ; ils sont doues notamment de remarquables propriétés anti-inflammatoires et immunostimulantes ainsi que d'une très bonne tolérance. Ces propriétés sont illustrées plus loin dans la partie expérimentale. Ces propriétés justifient l'utilisation des glycopeptides acétylés hydrosolubles de la présente demande, a titre de médicaments. La présente demande a ainsi également pour objet, l'application, å titre de médicaments, des glycopeptides acétylés tels que définis ci-dessus. Parmi les médicaments de l'invention, on retient de préférence, les médicaments caractérisés en ce qu'ils sont constitués par les nouveaux glycopeptides acétylés hydrosolubles obtenus à partir de glycoprotéines extraites de la souche d'Escherichia Coli déposée à l'institut Pasteur à Paris sous le nO 5158. Parmi les médicaments de l'invention, on retient entre autres ceux, caractérisés en ce qu'ils sont constitués par les glycopeptides acétylés tels qu'obtenus par le procédé de l'invention. Les médicaments de l'invention trouvent, par exemple, leur emploi dans le traitement des inflammations de la peau, des muqueuses et comme anti-prurigineux, en dermatologie, en oto-rhinolaryngologie, en ophtalmologie, en proctologie ou en gynécologie, ainsi que dans le traitement des infections intestinales chroniques ou aigues, telles que les colibacilloses, dans le traitement des toxi-infections alimentaires à Salmonelles et à Staphylocoques entérotoxiques, dans le traitement des syndromes dysentériques d'origine microbienne tels que les Shigelloses, dans le traitement des candidoses digestives et dans le traitement des infections urinaires à Proteus et à Pseudomonas. La dose usuelle, variable selon le produit utilise, le sujet traité et l'affection en cause, peut être, par exemple, de 0,5 mg à 20 mg par jour, par voie orale chez l'homme. L'invention a enfin pour objet les compositions pharmaceutiques qui renferment les glycopeptides acétylés de la présente demande, a titre de principe actif. A titre de médicaments, les glycopeptides acétylés de la présente demande peuvent être administrés par les voies digestive, parentérale ou locale. Les compositions pharmaceutiques correspondantes peuvent être par exemple, solides ou liquides et se présenter sous les formes pharmaceutiques couramment utilisées en médecine humaine, comme, par exemple, les comprimés, simples ou dragéifiés, les gélules, les granulés, les solutions, les sirops, les suppositoires, les préparations injectables, les ovules, les crèmes, les pommades, les lotions, les gouttes, les collyres ; elles sont préparées selon les méthodes usuelles.Le ou les principes actifs peuvent y être incorporés à des excipients habituellement employés dans ces compositions pharmaceutiques, tels que le talc, la gomme arabique, le lactose, l'amidon, le stéarate de magnésium, le beurre de cacao, les véhicules aqueux ou non, les corps gras d'origine animale ou végétale, les dérivés paraffiniques, les glycols, les divers agents mouillants, dispersants ou émulsifiants, les conservateurs. Les glycoprotéines extraites de corps microbiens lysés d'Escherichia Coli possédant un poids moléculaire apparent d'au moins 300.000 peuvent être préparées comme indiqué dans la demande fran çaise déposée au nom de la demanderesse le 27 Janvier 1977 sous le nO 77-02266 et ayant pour objet de "Nouvelles glycoprotéines isolées d'Escherichia Coli, procédé de préparation et application à titre de médicaments11. Selon cette demande, le procédé de préparation des glycoprotéines extraites de corps microbiens lysés d'Escherichia Coli possédant un poids moléculaire apparent d'au moins 300.000 est caractérisé en ce que l'on cultive, sur milieu solide ou liquide, une souche microbienne d'Escherichia Coli, récolte après complet développement les corps microbiens, procède à une lyse de ces derniers, recueille le lysat, traite ce dernier au moyen d'un ou de plusieurs solvants organiques, recueille le produit brut résultant, le met en solution aqueuse, soumet cette dernière à une diafiltration sur membrane poreuse calibrée présentant un seuil de rétention de substances dont le poids moléculaire est égal ou supérieur à 300 000 et lyophilise la solution ainsi obtenue. Dans des conditions préférentielles de mise en oeuvre de l'invention, objet de la demande française précitée, le procédé de préparation est caractérisé en ce que a) la lyse des corps microbiens est une lyse enzymatique, b) le traitement du lysat au moyen d'un ou de plusieurs solvants organiques est effectué successivement au moyen de l'acétone et du méthanol, c) la membrane poreuse calibrée présentant un seuil de rétention de substances dont le poids moléculaire est égal ou supérieur a 300 000 est une membrane vendue sous la désignation XM 300 par les sociétés AMICON ou ROMICONO Un exemple d'une telle préparation figure ci-après dans la partie expérimentale. I1 va être donné maintenant, a titre non limitatif, des exemples de mise en oeuvre de l'invention. Exemple 1 Stade A : Acetotyse. On sèche a l'étuve sous vide a 400C pendant 24 heures, 20 g de glycoprotéines extraites de corps microbiens lysés d'Escherichia Coli (souche Institut Pasteur n 5158) possédant un poids moléculaire apparent supérieur a I million. On agite le produit obtenu pendant 4 jours à la température de + 40C dans un litre de mélange acide acetique-anhydride acétique- acide sulfurique (10-10-1). Après 4 jours, on verse la solution obtenue, goutte a goutte, sur 3 kg de glace pilée. Après fonte de la glace, on amène le pH de la solution a 4,5 par addition de 691,5 g de carbonate acide de sodium. Stade B Traitement par le solvant organique. On traite la solution obtenue au stade A ci-dessus 8 fois de suite par 4 litres de chloroforme. On recueille la solution aqueuse finale, centrifugeà 30 000 g pendant 30 minutes, récupère le surnageant et filtre au moyen de filtres "Millipore AP 20 et AP 04" (1). Stade C ; Diafiltration. On introduit la solution obtenue dans un appareil a diafiltrer equipé de membranes poreuses dont le seuil de rétention est de 1000 (membranes commercialisées par la société AMICON sous la désignation UM 2). On fait circuler dans l'appareil environ 40 volumes d' eau distillée jusqu'a ce que l'Ultra-filtrat traversant la membrane ne renferme plus de substances de poids moléculaire inférieur a logo. On recueille la solution n1 ayant pas traversé la membrane, centrifuge 3Q minutes a 35 000 g, recueille le surnageant et lyophilise. On obtient 3 g de glycopeptides acétylés, sous forme d'une poudre blanchetrès hygroscopique. Analyse C % 41,9 N % 2,46 H % 5,9. Teneurs en - eau 8 % - phosphore 0,8 % - chlore 0 %. - protéines - biuret 31 % (liaisons peptidiques) - sucres - orcinol 33 % (hexoses neutres) - carbazole 3 % (acides uroniques) Spectres - U.V. : maximum d'absorption à environ 210 ms - I.R. - bandes à 1730-1700 cm 1 et 1370 cm 1 - bandes à 1270-1200 cm 1 - absence d'acide diaminopimélique - poids moléculaire sur Sephadex G 200 inférieur ou égal à 200.000. Les glycoprotéines extraites de corps microbiens lysés d'Escherichia Coli (souche Institut Pasteur n 5158) possédant un poids moléculaire apparent supérieur à 1 million, utilisées comme produit de départ, peuvent être préparées comme suit Stade I : culture. On prépare un milieu de culture répondant a la formule suivante - extrait de viande................................ viande 175 g - chlorure de sodium............................. sodium 175 g - peptone de caséine t 175 g - autolysat de levure .............. ... 175 g - phosphate bipotassique 133,5 g - phosphate monopotassique ................... ..... 52,5 g - glucose 350 g - peptone papainique de soja............................ soja 700 g - eau distillee q.s.p 35 1 On prépare le milieu de culture en mélangeant successivement l'extrait de viande, le chlOrure de sodium, la peptone de caséine, l'autolysat de levure, le phosphate bipotassique, le phosphate monopotassique, dans environ 20 litres d'eau distillée. On ajuste le pH a 7,5 environ. On stérilise le milieu a 1200C pendant 40 minutes. Les solutions de glucose et de peptone papainique de soja sont introduites dans le milieu de culture au moment de l'ensemencement après avoir été stérilisées au préalable. La souche d'Escherichia Coli (souche Institut Pasteur n 5158 > , cultivée sur milieu gelosé est ensemencée dans 50 cm3 de milieu de culture. Cette solution servant dtinoculum est introduite dans le reste du bouillon de culture. On ajuste le volume total du milieu de culture à 35 litres par addition d'eau distillée stérile. Le milieu de culture est maintenu a 370C et le pH est ajusté automatiquement a 7,5 (par addition d'une solution d'ammoniaque ou par addition d'une solution d'acide chlorhydrique). La croissance des germes est appréciée au photométre ; le nombre de germes est calculé en fonction de la densité optique déterminée en comparaison avec une courbe étalon. Après complet développement, soit environ après 7 heures, le milieu renferme environ 100 milliards de germes au cm3. Stade II : lyse. A 35 litres de bouillon de culture obtenu au stade I ci-dessus, on ajoute une solution aqueuse de chlorhydrate de lysozyme (stérilisée par filtration sur membrane millipore 0B22P) afin d'avoir une concentration finale de 808 de chlorhydrate de lysozyme par cm3 de milieu de culture. On laisse en contact une heure à 560C en présence de 0,25 g d'Edta par litre de bouillon, de 862,5 mg de mercurothiolate sodique et de 34 g de polysorbate (commercialise sous le nom de Tween 80) par litre de bouillon de culture. On poursuit la lyse pendant 30 jours à 370C dans des conditions stériles. On recueille le lysat, homogénéise par agitation puis lyophilise. On obtient 1961 g d'une poudre brune. Stade III : traitement. a) Par l'acétone. On met en suspension dans 35 litres d'acetone froid, la totalité de la poudre obtenue au stade II ci-dessus puis agite vigoureusement pendant 3 heures a 1500 tours/minute. Après 3 heures, la suspension est filtrée sur verre fritté. On recueille une poudre jaune que l'on essore rapidement. b) Par le méthanol. On met en suspension dans 35 litres de méthanol froid, la poudre obtenue précédemment et agite vigoureusement pendant 3 heures a 1500 tours/minute. Après 3 heures, la suspension obtenue est décantée,la plus grande partie du surnageant est soutirée par siphonnage, le restant de la solution est filtré sur verre fritté. La poudre essorée est séchée à température ambiante sous vide pendant 24 heures. On obtient 830 g d'une poudre jaune beige. Stade IV : diafiltration. On met en solution dans 10 litres d'eau distillée contenant 1 g/l de merthiolate, les 830 g de poudre obtenue au stade III cidessus. On maintient la solution sous agitation a + 40C pendant 24 heures, centrifuge pendant deux heures a 4000 tours/minute puis à 60 000 g dans une centrifugeuse en continu avec un débit de 6 1/heure. On récupère 9 litres de solution que l'on compléte à 10 litres avec de 1' eau distillée filtrée (sur membrane millipore 0,22 ). On introduit la solution obtenue dans un appareil à diafiltrer équipé de membranes poreuses dont le seuil de rétention est de 300 000 et le diamètre apparent des pores d'approximativement 2 A (membranes commercialisées par la société AMICON ou par la société ROMICON sous la désignation XM 300). On fait circuler dans l'appareil 50 volumes d'eau distillée soit un volume de 500 litres. La durée de l'opération est d'environ 48 heures. La solution diafiltrée est récupérée puis centrifugée en continu à 60 Ooogavec un débit de 6 litres/heure. On obtient 9,5 litres d'une solution que l'on lyophilise. On recueille finalement 40,1 g de glycoprotéines sous forme d'une poudre blanc-beige, cotonneuse et très hygroscopique. Exemple 2 : On a préparé des comprimés répondant à la formule - glycopeptides acétylés obtenus à l'exemple 1......,. 1 5 mg - excipient q.s. pour un comprimé termine ........... 200 mg, (détail de l'excipient : lactose, talc, amidon, stéarate de magnésium). Etude pharmacologique a) Activité anti-inflammatoire. L'activite anti-inflammatoire des produits a été déterminée sur des rats mâles par la technique de l'oedème podal a la carraghé nine (WINTER Risley, Nuss) Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 1963, 111, 544-547). Les animaux reçoivent dans l'articulation tibio-tarsienne d'une patte postérieure,0,05 ml d'une suspension de carraghénine à 1 %. Le produit étudié est administré par voie intrapéritonéale à des doses de 50 &gamma;/kg et de 100 &gamma;/kg une heure avant l'injection de la carraghénine. Le volume de la patte traitée est mesuré a l'aide d'un plethysmomètre, avant eut 3 heures après l'injection de carraghénine. Les résultats sont exprimés en pourcentage de régression de l'oedème par rapport aux témoins. Les glycopeptides acétylés obtenus à l'exemple 1 entraînent une régression de l'oedème de 54 % à -la dose de 50 /'/kg et de 67 % à la dose de îOOf/kg. b) Etude de l'appel cellulaire. Les glycopeptides acétylés obtenus à l'exemple 1 sont administrés par voie intrapéritonéale a des lots de cobayes à des doses de 50 et 100 j7kg. Une numération des cellules péritonéales est effectuée 48 heures après l'injection des glycopeptides. La comparaison de cette numération avec celle effectuée sur des animaux non traités montre qu'il n'y a pas d'appel cellulaire. c) Etude de la tolérance L'administration par voie sous-cutanée à des souris des glycopeptides acétylés obtenus à l'exemple 1 à des doses de 250 ft/kg et 1000 t/kg sous un volume de 0,2 ml ne provoque aucune intolérance locale ou générale. Aucun signe d'inflammation dans le tissu sous-cutané n'a e-té relevé. d) Activité antibactérienne générale préventive. 1) Contre Klebsiella Pneumoniae. Les glycopeptides acétylés obtenus a l'exemple 1 sont administrés à des doses de 1000 kg et 5000 kg, par voie intrapéritonéale, a des lots de 20 souris, 6 jours et 48 heures avant l'injection par la même voie de germes d'une souche de Klebsiella Pneumoniae (souche Institut Pasteur nO 52145) correspondant respectivement a 100, 200 et 500 fois la DL50 (dose létale 50). La mortalite est suivie pendant les 7 jours qui suivent l'injection des germes de Klebsiella Pneumoniae et comparée a celle d'un lot temoin d'animaux ayant reçu du sérum physiologique à la place du produit étudié. Les résultats exprimés en pourcentage de protection des animaux traités figurent dans le tableau 1 ci-après TABLEAU 1 C, germe ( !s POURCNTAGE DE PROTECTION POUR YSLO (Doses O. 100 g/kg dol50 :: DL50 x : DL50 DL50 DL50 1000 70 : 60 : 40 3 ( . t 5000 : 100 : 80 : 70 ( : : 2) Contre Proteus Morganil. Les glycopeptides acétylés obtenus à l'exemple 1 sont adminis trés à la dose de 1000 4/ka, par voie intrapéritonéale, à des lots de 20 souris, 6 jours et 48 heures avant l'injection par la même voie de 2 x 107 germes de Proteus Morganii (souche Institut Pasteur A 231) (par souris). La mortalité est suivie pendant les 7 jours qui suivent l'injection des germes et comparée à celle d'un lot témoin d'animaux ayant reçu du sérum physiologique a la place du produit étudié. Après 7 jours, le pourcentage de protection des animaux traités par rapport aux animaux témoins est de 40 %. 3) Contre Candida Albicans. Les glycopeptides acétylés obtenus à l'exemple 1 sont administrés à la dose de 1000 /ka, par voie intrapéritonéale, a des lots de 20 souris, 48 heures et 24 heures avant l'injection par la même voie de 4,5 x 107 germes de Candida Albicans (souche Institut Pasteur 885 Sérotype A) (par souris). La mortalité est suivie pendant les 7 jours qui suivent llinjec- tion des germes et comparée à celle d'un lot témoin d'animaux ayant reçu du sérum physiologique à la place du produit étudié. Après 7 jours, le pourcentage de protection des animaux traités par rapport aux animaux témoins est de 45 %. 4) Contre le Staphylocoque doré. En opérant avec le même protocole que précédemment, mais en injectant 20 x 107 germes de Staphylocoque doré (souche Institut Pasteur 75484) (par souris), on obtient après 7 jours un pourcen tage de protection des animaux traités par rapport aux animaux témoins de 100 %. e) Activité antibactérienne curative (Per Os) A 3 lots de 20 souris, on injecte respectivement et par voie intrapéritonéale, les germes suivants : Escherichia Coli, Proteus Morganii, Candida Albicans, aux doses respectives suivantes 2 x 107 germes, 2 x 107 germes et 4,5 x 107 germes (par souris). Trente minutes, une heure et demie et six heures après l'injection des germes, on fait ingérer (par voie orale) à chaque souris, 5 mg/kg de glycopeptides acétylés obtenus à l'exemple 1. On suit la mortalite pendant 7 jours et la compare à celle d'un lot témoin d'animaux n'ayant pas reçu les glycopeptides acétylés. Les résultats exprimés en pourcentage de protection des animaux traités figurent dans le tableau 2 ci-après TABLEAU 2 ( GERMES INJECTES : POURCENTAGE DE PROTECTION Escherichia Coli 2 2 x 1Q7 germes ( (souche I.P. 54127) . 35 % ( Proteus Morganii ( 2 x 107 germes ( (souche I.P. A 231) . 35 % Candida Albicans 7 ( 4,5 x 1Q7 germes ) ( (souche I.P. :885 Serotype A): 45 % f) Stimulation des défenses non spécifiques. Cette stimulation a été étudiée sur le test de la clearance au carbone chez la souris en s'inspirant de la technique d'Halpern (C.R. Soc. Biol. 148, 1954, 431). Cette stimulation se traduit par une augmentation de l'activité phagocytaire après l'injection du produit par voie intrapéritonéale. Les glycopeptides acétylés obtenus à l'exemple 1, donnât, 15 minutes après l'injection de carbone colloïdal, une augmentation de 54 % et de 85 % de la phagocytose aux doses respectives de 100 et 500 fikg. g) Evolution du poids de la rate. Deux injections par voie intrapéritonéale à des souris, à 48 heures d'intervalle, des glycopeptides acétylés obtenus à l'exemple I aux doses de 100, 250 et 500 v kg n'augmentent pas de façon significative le poids de la rate. h) Toxicité aigue - détermination de la DL50. La dose létale 50 (DL50) par voie intrapéritonéale chez la souris a été déterminée par la méthode de Behrens et Karber. Elle est de 56 mg/kg pour les glycopeptides acétylés obtenus a l'exemple 1. REVENDICATIONS 1. Nouveaux glycopeptides acétylés hydrosolubles extraits de corps microbiens lysés d'Escherichia Coli, caractérisés en ce qu'ils ont un poids moléculaire apparent supérieur à 1000 et inférieur ou égal à 200.000, renferment au moins 25 % de substances à pouvoir biurétogène et au moins 30 % d'oses neutres, ne renferment pas d'acide diaminopimélique et présentent un maximum d'absorption dans l'ultra-violet a environ 210 m 2. Glycopeptides acétylés tels que définis a la revendication 1, caractérisés en ce qu'ils renferment de 25 % à 35 % de substances a pouvoir biurétogène et de 30 % à 40 % d'oses neutres. 3. Glycopeptides acétylés tels que définis à la revendication 1 ou 2, caractérisés en ce que la souche d'Escherichia Coli est la souche déposée à l'Institut Pasteur à Paris sous le nO 5158. 4. Procédé de préparation des nouveaux glycopeptides acétylés hydrosolubles, tels que définis à la revendication 1, caractérisé en ce que l'on soumet à une acétolyse des glycoprotéines possédant un poids moléculaire apparent d'au moins 300.000, extraites de corps microbiens lysés d'Escherichia Coli, pour obtenir un extrait brut de glycopeptides acétylés, traite ce dernier au moyen d'un solvant organique, recueille la phase aqueuse, effectue une diafiltration de cette dernière sur membrane poreuse calibrée présentant un seuil de rétention de substances dont le poids moléculaire est supérieur ou égal à 1000, recueille la solution n'ayant pas traversé la membrane, puis isole de la solution ainsi obtenue le produit recherché. 5. Procédé selon la revendication 4, caractérisé en ce que a) L'acétolyse est effectuée au moyen d'un mélange d'anhydride acétique, d'acide acétique et d'acide sulfurique. b) Le solvant organique est constitué par le chloroforme. c) La membrane poreuse calibrée présentant un seuil de rétention de substances dont le poids moléculaire est supérieur ou égal à 1000 est une membrane vendue sous la désignation P.SA.C. 00001 par la société Millipore ou sous la désignation UM 2 par la société AMICON. 6. Procédé selon la revendication 4 ou 5r caractérisé en ce qu'il est mis en oeuvre au départ de glycoprotéines extraites de la souche d'Escherichia Coli telle que définie à la revendication 3. 7. Les glycopeptides acétylés hydrosolubles obtenus par le procédé de l'une des revendications 4, 5 ou 6. 8. Médicaments, caractérisés en ce qu'ils sont constitués par les nouveaux glycopeptides acétylés hydrosolubles tels que définis à la revendication 1, 2 ou 3. 9. Médicaments, caractérisés en ce qu'ils sont constitués par les nouveaux glycopeptides acétylés hydrosolubles tels que définis à la revendication 7. 10. Compositions pharmaceutiques, caractérisées en ce qu'elles renferment, à titre de principe actif, l'un au moins des médicaments, tels que définis à la revendication 8. 11. Compositions pharmaceutiques, caractérisées en ce qu'elles renferment, à titre de principe actif, l'un au moins des médicaments, tels que définis à la revendication 9.