FR 2368272 A1 19780519 FR 7631562 A 19761020 La présente invention est relative à une nouvelle composition thérapeutique destinée spécialement à combattre l'agréga- tion plaquettaire, soit en la prévenant, soit en la résorbant. Les recherches effectuées dans le but de déterminer la genèse des thromboses, ont permis d'établir nettement la relation entre le raccourcissement de la duré de vie des plaquettes et l'apparition d'accidents thrombo-emboliques. C'est la raison pour laquelle, depuis un certain nombre d'années, de très nombreuses substances ont été étudiées dans le but de combattre l'agrégation plaquettaire.Parmi celles-ci, le dipyridamole [ou la 2,6 bis (diéthanolamino)-4,8-dipipéridinopyrimido (5,4-)pyrimidine7 ainsi que l'acide acétylsalicylique, se sont avérés comme étant de très bons inhibiteurs de l'agréga- tion plaquettaire, que ce soit par leur action sur l'adhesi- vité plaquettaire et la durée de vie des plaquettes (surtout dans le cas du dipyridamole) ou par leur action sur l'agréga- tion plaquettaire et le temps de saignement (surtout dans le cas de l'acide acétylsalicylique). I1 était donc tentant d'associer ces deux inhibiteurs afin de potentialiser et d'élargir leur pouvoir anti-agrégant plaquettaire, ainsi que cela ressort du compte-rendu d'expérimentationspharmacologiques dont les résultats, très favorables, sont consignés plus loin. Malheureusement, il est impossible de mélanger ces deux produits : en effet, le dipyridamole et l'acide acétylsalicylique (AAS) mélangés, même à l'état de poudres, ne sont pas stables et présentent une incompatibilité chimique très prononcée après stockage de quatre jours seulement à 500C environ des deux poudres mélangées, l'analyse par chromatographie sur couche mince a donné les résultats suivants - solvant de développement : CEC13/MeOH 9/1 - Migration : 18 cm - Révlateurs: Iodoplatinate de potassium pour les dérivés du dipyridamole, Chlorure ferrique pour les dérivés salicylés Apres révélation,on obtient 6 taches principales correspondant aux Rf Acide salicylique 0,11 Dipyridamole 0,36 Mono-ester acétique du dipyridamole 0,52 Di-ester acétique du dipyridamole 0,61 - Tri-ester acétique du dipyridamole 0,71 - TFtra-ester acétique du dipyridamole 0,82 Les taches ont été identifiées par - leurs Rf respectifs : à cet effet, on a préalablement synthétisé les différents esters acétiques du dipyridamole qui ont servi de référence. - spectrométrie IR s on a séparé les produits sur colonne de silice et effectué leurs spectres IR qui ont permis de les identifier. I1 apparat une totale incompatibilité de acide acétylsalicylique et du dipyridamole mélangés à l'état de poudres. I1 y a d'abord formation d'acétylsalicylate de dipyridamole qui se liquéfie et ensuite a lieu la transestérification i l'acide acétique libéré de l'acide acétylsalicylique estérifie les alcools du dipyridamole avec formation des quatre esters possibles. La présente invention 'est par conséquent donné pour but de pourvoir à une nouvelle composition thérapeutique douée d'un puissant pouvoir de diminution et dtinhibition de l'adhésion et de I'agrégation des plaquettes sanguines, qui répond mieux aux nécessités de la pratique que les compositions antérieurement connues, notamment en ce qu'elle est d'un emploi commode et facile et qu'elle est parfaitement stable chimicuement pendant de très longues durées. La présente invention a pour objet une nouvelle composi tion thérapeutique solide à fort pouvoir anti-agrégant pla quettaire, caractérisée en ce qu'elle comprend essentiellement une association d'acide acétylsalicylique et/ou de ses dérivés avec le dipyridamole, chaque principe actif étant associésà un vé hicule et/ou un excipient l'isolant de l'autre principe actif. Suivant un mode de réalisation avantageux de 11 objet de l'invention, l'association dipyridamole-AAS est présente sous forme de comprimés multicouches. Ce type de comprimé, dit comprimé à double noyau,assure en effet une séparation parfaite de deux substances ou de deux mélanges de substances incompatibles entre eux, la couche sépa ratrice médiane inerte et les enrobages étant choisis selon l'endroit de dissolution désiré : stomacal ou intestinal. Suivant un autre mode de réalisation avantageux de l'objet de la présente invention, les deux principes actifs enrobés par des revêtements gastro- et/ou entéro-résistants, sont réunis dans une même gélule. Selon un autre mode de réalisation avantageux du médicament objet de la présente invention, le rapport acide acétylsalicylique dipyridamele ans un compile est compris entre 1 et 4 en poids. Suivant un autre mode de réalisation avantageux de la présente invention, une dose unitaire contient entre 20 et 350 mg d'acide salicylque et entre 20 et 350 mg de dipyridamole. Suivant un mode de réalisation particulièrement avanta cieux de l'objet de l'invention, le dipyridamole est contenu dans la couche interne et l'AAS dans la couche externe du comprimé. Suivant un rode de réalisation particulièrement avantageux1 le dipyridamole est enrobé par une coche à délitement enté- rique et l'AAS est enrobé par une couche à délitement gastrique. Suivant un autre mode de réalisation avantageux de l'objet de l'invention, le dipyridamole et I'AAS sont enrobés chacun par une couche à déitement gastrique. Outre les dispositions qui précèdent, l'invention comprend encore d'autres dispositions1 qui ressortiront de la description qui va suivre La présente invention pourra être mieux comprise à l'aide du complément de description qui va suivre, dans lequel on trouvera des exemples de préparation de la composition objet de la présente invention, ainsi que des compte-rendus clinique et d'expérimentations pharmacologiques d6montrant l'activité anti agrégats plaquettaire importante du nouveau médicament conforme à l'invention. I1 doit être bien entendu, toutefois, que ces exemples et compte-rendus sont donnés uniquement à titre d'illustration de objet de l'invention, dont ils ne constituent en aucune manière une limitation. EXEMPLES DE PREPARATION DES COMPRIMES A DOUBLE NOYAU CONFORMES A L'INVENTION EXEMPLE 1 : On mélange 1500 g d'acide acétylsalicylique avec 250 g d'Avicel (cellulose sous forme cristalline), 140 g d'amidon et 20 g d'acide stéarique. On mélange, par ailleurs, 1500 g de dipyridamole avec 520 g de fécule de pomme de terre. Le mélange est humecté avec une quantité suffisante de solution aqueuse de gélatine, granulé, séché, broyé et lubrifié par addition de 7 g de talc et 3 g de stéarate de magnésium. On mélange d'autre part 500 g de lactose et 50 g d'amidon mouillé, avec un empois, et l'on granule, sèche et lubrifie par addition de talc. A l'aide d'une machine à comprimer, dite multicouche, on procède à la fabrication d'un comprimé en trois couches conte nuant l'une 150 mg d'acide acétylsalicylique, une couche neutre intermédiaire et 150 mg de dipyridamole, tour la troisieme. EXEMPLE 2 On opère comme indiqué dans l'Exemple , mais les comprimés sont dosés respectivement à 75 mg de chaque principe actif. EXEMPLE 3 On mélange 750 g de dipyridamole avec 260 g d'amidon de pomme de terre , on mouille avec une solution contenant 40 g de polyvinylpyrrolidone, on granule et sèche. Le granulé est ensuite broyé et lubrifié par addition de 35 g de talc et 15 g de stéarate de magnesium. Ce grain permet d'obtenir après compression avec des poinçons bombés, un comprimé contenant 75 mg de dipyridamole. Ce noyau est ensuite recouvert d'un vernis à délitement gastrique. Par ailleurs, on mélange 750 g d'acide acétylsalicylique avec 2600 g de lactose, 550 g d'amidon. La masse est lubrifiée avec 100 g d'esters palmito-stéarique du glycérol. A l'aide d'une machine rotative dite à double noyau", on distribue des comprimés de dipyridamole à l'intérieur du mélange d'acide acétylsalicylique, puis on procède à la compression finale. EXEMPLE 4 En opérant comme indiqué dans l'Exemple~3, mais en revêtant le comprimé de dipyridamole d'un vernis gastro-résistant, on obtient des comprimés libérant 1'AAS en milieu stomacal et le dipyridamole ulterieurement. EXEMPLE 5 On mélange 750 g de dipyridamole avec 300 g de lactose et 250 g d'amidon. Le mélange est mouillé avec une solution hydroalcoolique contenant 15 g de gélatine. Le mélange est granulé, séché, broyé, puis on y incorpore 50 g d'amidon, 50 g de cellulose, 30 g de talc et 25 g de stéarate de- magnésium. A l'aide d'une machine à comprimer, on comprime la masse en petits comprimés d'un poids de 147 mg. Par ailleurs, on mélange 750 g d'AAS avec 120 g de cellulose, 70 g d'amidon desséché et on lubrifie avec 10 g d'acide stéarique. A l'aide d'une machine à gélules équipée de distributeurs pour comprimés, on répartit un à deux des comprimés cidessus et 95 ou 190 mg du mélange contenant 1'AAS, dans une gélule en gélatine dure COMPTE-RENDU D'EXPERIMENTATIONS PHARMACOLOGIQUES Etude de l'activité sur l'agrégation plaguettaire : 1. Activité in vitro : L'étude a été entreprise sur le plasma du cobaye à l'agré gomètre,- selon la méthode de BORN, pour déterminer l'action des produits étudiés à l'égard de l'effet agrégant de l'ADP (0,8 AO-6 M) et de collagène (4,1 ug/ml). Une première série d'expériences comportait l'étude de l'action du dipyridamole à des concentrations de 0,5.10-5 M ; 1.10-5M ; 1,5.10-5 et de 2.10-5M sur l'effet propre de l'acide acétylsalicylique (1.10 M). Une deuxième série d'expériences comportait l'étude de l'action de l'AAS à des concentrations de 0,5.10-5M ; 1.10-5M ; 1,5.10-5 M et 2.10-5 M sur l'effet propre du dipyridamole (1.10-5M) Les deux séries d'expériences ont été effectuées par mise en incubation pendant dix minutes à la température ambiante sans agitation. Résultats : synergie (de 8 à 36 %) entre les deux agents anti agrégants vis-à-vis des deux agents agrégats. 2. Activité in vivo a) Etude sur la microcirculation dans la baioue d'hamster L'étude comparative du degré d'inhibition du taux de la croissance du thrombus a été étudiée pour a) AAS seul b) dipyridamole seul, et pour c) la composition conforme à l'invention. Les résultats sont résumés dans le Tableau I ci-après TABLEAU I Inhibition de la croissance apres adminis = tration au bout de t minutes Maximum Composé 45 50 55 60 65 70 75 80 85 90 % Inhibition Acide acétyl salicylique 9 24 8 12 23 26 30 25 34 38 38 Dipyridamole B 20 22 22 28 34 43 35 43 39 43 Composition conforme à l'invention 0 16 16 22 29 41 44 44 32 47 35 47 L'expérience démontre d'une façon très nette, la potentialisation des deux principes actifs (le maximum de potentialisa- tion avoisine 50 %). b) Etude sur l'oeil de veau perfusé en circulation extracorporelle Elle est effectuée selon la technique de Seaman, les yeux étant prélevés immédiatement après l'abattage. Un catheter est introduit dans l'artère ciliaire et le réseau chorio-rétinien est débarrassé de son sang natif par lavage à l'aide d'une solution de Krebs modifiée (pour supprimer le calcium) et tiédie à 370C. L'oeil est ensuite perfusé avec du sang homologue oxygéné et anticoagulé par une solution de citrate à 5 % à raieon de une partie de solution citratée pour neuf parties de sang. L'oeil est maintenu sous perfusion constante jusqu'à la fin de l'expérimentation grâce à une pompe proportionnante permettant de maintenir la pression sanguine à 12 cm de Hg. Au laboratoire, une fenêtre scléro-choroidienne est découpée un peu en avant du nerf optique et l'oeil est posé dans une cupule contenant la solution de Krebs portée à 370C. L'ensemble est placé sur la platine chauffante d'un microscope Orthoplan, la circulation rétinienne étant alors observée par transparence. L'adénosine diphosphate diluée dans une solution de Krebs dépour- vue de calcium est mélangée au sang immédiatement avant son entrée dans l'oeil. L'action du dipyridamole seul, de 1' AAS seul et de la composition conforme à l'invention sont observées en mélangeant les produits étudiés dans le flacon de sang. L'observation de la circulation rétinienne permet le répérage et l'étude des agrégats plaquettaires. A la dose de 10 Gamma/ml, 1'ADP entraîne l'apparition d'agrégats dans les vaisseaux rétiniens en 60 à 90 secondes et le blocage de la circulation survient secondairement au bout de 1200 secondes. Le Tableau II présente l'action comparée des trois produits soumis à l'expérimentation. TABLEAU II REACTIFS Nombre Délai d'arrêt de Intervalle de d'expé- la circulation confiance de la riences rétinienne moyenne en secondes ADP 10 gamma/ml 15 1 200 # 98 960 - 1 440 Sérum physiologique 5 > 10 000 ADP 10 gamma/ml 5 2 320 # 320 1 430 - 3 210 + adénosine 100 gamma/ml ADP 10 gamma/ml 5 6 300 # 180 5 200 - 7 400 + dipyridamole 8.2 10-5M ADP 10 gamma/ml 5 6 300 # 90 5 500 - 7 100 + dipyridamole 4.6 10-4M ADP 10 gamma/ml 5 6 820 # 140 5 920 - 7 720 + dipyridamole 2.3 10-4M ADP 10 gamma/ml + acide acétylsalicylique 250 gamma/ml 5 2 840 # 220 1 920 - 3 760 ADP 10 gamma/ml + composition conforme à l'invention (dipyridamole 8.2 10-5 M acide acétylsalicylique 250 gamma/ml 9 > 10 000 ADP 10 gamma/ml + composition conforme à l'invention (dipyridamole 4.6 10-4 M acide acétylsalicylique 250 gamma/ml) 5 > 10 000 ADP 10 gamma/ml + composition conforme à l'invention (Dipyridamole 2.3 10-4 M acide acétylsalicylique 250 gamma/ml 5 > 10 000 Le mélange de 10 gamma/ml d'ADP dans le sang perfuseur aboutit rapidement à la formation d'agrégats qui vont obstruer la totalité du réseau capillaire rétinien et arrêter la circulation rétinienne en t200 secondes. Lorsque le sang contient 100 gamma/ml d'adénosine, on n'observe aucune modification de l'aspect des agrégats qui restent compacts.Cependant, le délai d'arret de la circulation rétinienne est prolongé à 2320 secondes. La présence dans le sang perfuseur de dipyridamole seul prolonge les délais d'arret de la circulation à 6300 et 6820 secondes, tandis que 1'AAS seul ne le prolonge qu a 2840 secondes. Par contre, la présence de la composition conforme à l'invention arrete totalement le blocage. Utilisés isolément, 1'AAS et le dipyridamole modifient l'agrégation plaquettaire sans empêcher l'arrêt de la circulation rétinienne. Leur association fait perdre toute solidité aux agrégats plaquettaires , qui s'effritent à l'entrée du réseau capillaire e ne peuvent plus obstruer les capillaires rétiniens. COMPTE-RENDU D EXPERIMENTATIONS CLINIQUES Une étude a été pratiquée sur six volontaires en bonne santé, de sexe male et d'ages compris entre 35 et 48 ans Les sujets ont été traites en traitement croisé avec les produits et les posologies suivants - acide acétylsalicylique 75 mg 4 fois par jour, pendant 4 jours - composition selon l'invention 4 comprimés par jour, contenant chacun 75 mg de chaque principe actif, soit, par jour 300 mg d'acide acétylsalicylique et 300 mg de dipyridamole Les paramètres pris en compte ont été - l'adhésivité plaquettaire (test de HELLèNE II) et l'agrégation plaquettaire selon la méthode de BORN, vis-à-vis de 1'ADP et du collagène. Les deux traitements ont été séparés par un intervalle de 8 jours, selon le schéma suivant . du jour 0 au jour 4 : acide acétylsalicylique . du jour 4 au jour 12 : pas de traitement du jour 12 au jour 16: composition selon l'invention Les examens de la fonction plaquettaire telle que décrite ci-dessus ont été pratiqués aux jours 0, 5, 11 et 17 I1 a été observé 10. Sous acide acétylsalicylique - une diminution de l'agrégation plaquettaire aussi bien vis-à-vis de 1'ADP que du collagène (extrèmes 23 à 77 %) sans variation significative de l'adhésivité 20.Sous traitement par la composition selon l'invention, on a noté une diminution de l'agrégation plaquettaire vis-à vis de 1'ADP et du collagène plus marquée que dans la période précédente (extrèmes 31 à 86 %), et une diminution de l'adhésivité plaquettaire (extremes 8 à 17 %). Les deux traitements ont été parfaitement tolérés par l'ensemble des sujets. RESUME DE L'ETUDE PHARMACOCINETIQUE DE LA COMPOSITION SELON L' INVENTION Une étude pharmacocinétique après prise unique, au temps 0, d'un comprimé selon l'invention, dosé à 75 mg de chacun des principes actifs, a été effectuée sur trois volontaires : les taux plasmatiques de dipyridamole ont été mesurés aux temps 1, 2, 3, 4, 6 et 8 heures. Les résultats obtenus au nanogramme par ml de plasma figurent dans le Tableau III ci-dessous TABLEAU III Sujets 1h 2h 3h 4h 6h 8h 1 490 375 280 145 85 50 2 740 1160 850 475 225 215 3 50 285 220 140 80 75 Moyenne 427 i 607 450 253 130 113 I1 ressort des propriétés pharmacologiques et cliniques dont il vient d'être rendu compte, que le nouveau médicament conforme à 11 invention doit être considéré comme un antiagrégant plaquettaire remarquable, facile à administrer, présentant une bonne tolérance et une stabilité parfaite. I1 est à remarquer également que l'association de 1'AAS avec le dipyridamole permet de réduire la dose d'AAS à un niveau où ses effets secondaires sont pratiquement inexistants 300 mg/jour. Le nouveau médicament conforme à l'invention peut être administré seul ou en association avec d'autres médicaments. Ainsi que cela ressort de ce qui précede, l'invention ne se limite nullement à ceux de ses modes de réalisation et dsap- plication qui viennent d'être décrits de facon plus explicite r elle en embrasse, au contraire, toutes les variantes qui peuvent venir à l'esprit du technicien en la matière, sans saécarter du cadre, ni de la portée, de la présente invention. q REVENDICATIObS 1. Nouvelle composition thérapeutique solide à fort pouvoir anti-agrégant plaquettaire, caractérisée en ce qu'elle comprend une association d'acide acétylsalicylique et/ou de ses dérivés avec le dipyridamole, chaque principe actif étant associé à un véhicule et/ou un excipient l'isolant totalement de l'autre principe actif. 2. Nouvelle composition thérapeutique selon la Revendication 1, caractérisée en ce que l'association dipyridamole- AAS est présente sous forme de comprimés multicoucnes. 3. Nouvelle composition thérapeutique selon la Revendication 1, caractérisée en ce que les deux principes actifs enrobés par des revetements gastro- et/ou entéro-résistants sont réunis dans une même gélule. 4. Nouvelle composition selon l'une quelconque des Re vendications 1 à 3, caractérisée en ce que le rapport acide acétylsalicylique dipyridamole dans un comprimé est compris entre 9 et 4 en poids. 5. Nouvelle composition selon l'une quelconque des Revendications 1 à 4, caractérisée en ce qu'une dose unitaire contient entre 20 et 350 mg d'acide acétylsalicylique et 20 et 350 mg de dipyridamole. 6. Nouvelle composition selon les Revendications i et 2, caractérisée en ce que le dipyridamole est contenu dans la couche interne et 1'AAS dans la couche externe du comprimé. 7. Nouvelle composition selon les Revendications 1 et 2, caractérisée en ce que le dipyridamole est contenu dans la couche externe et 1'AAS dans la couche interne du comprimé. 8. Nouvelle composition selon la Revendication 6, caractérisée en ce que le dipyridamole est enroBé par une couche à délitement entérique et 1'AAS est enrobé par une couche à délitement gastrique. 9. Nouvelle composition selon la Revendication 6, caracterisée en ce que le dipyridamole et 1'AAS sont enrobés chacun par une couche à délitement gastrique.