FR 2354331 A1 19780106 FR 7717537 A 19770608 La présente invention est relative à de nouveaux composés antibiotiques et à un procédé pour leur production-. On connaît déjà la fermentation de Streptomyces clavuligerus et, plus particulièrement, de la souche NRRL 3585 permettant de produire un certain nombre de substances antibiotiques et le brevet britannique n 1 315 177 décrit et reven dique la culture de Streoptomyces clavuligerus, souche IwRRL 3585 jusqu'à la production dtune quantité substantielle de deux acide s carboxyliques ss-lactamiques, appelés Antibiotiques A 16886 I et A 16 886. La demande de brevet allemand DOS n 2 604 697 décrit ltisolement d'un autre acide carboxylique ss-lactamique, à savoir lracide clavulanique, à partir de tels bouillons de fermentation. La demanderesse a réussi à présent à isoler d'autres composés ss-lactamiques possédant une activité antibiotique à partir de la fermentation de souches de Streptomyces clavuligerus. Les composés auxquels on se réfère dans le présent mémoire et les revendications qui le terminent sont appeléspar référence au "clavame ', nom attribué à lthétérocycle apparenté de la formule A par analogie au terme t'céphame t, utilisé pour la dénomination des céphalosporines dans l'ouvrage intitulé J. Amer. Chem. Soc., 1962, 84, 3400. Selon l'une de ses caractéristiques, la présente invention a par conséquent pour objet un composé répondant à la formule (I) dans laquelle R représente un groupe hydroxyméthyle, ledit composé présentant dans de la deutéroacétone les valeurs i de la résonance magnétique nucléaire protonique à 100 tEz présentées dans le tableau 1 qui suit, ainsi que les composés correspondants dans lesquels R représente un groupe formyloxyméthyle ou un groupe carboxyle ou carboxyle estérifié et, dans le cas où R représente un groupe carboxyle, les sels de ce dernier. TABLEAU S Valeur ç Valeurs 4,68 (d, 2,5 Hz) (1H) 7,09 (dd, 6 Hz et 11,5 Hz)(îH) 5,58 (multiplet) (1H) 6,32 (large singlet) (2H) 5,77 (large singlet, échange 6,72 (dd, 2,5 Hz et 16 Hz)(1H) avec D20) (1H) 6,14 (dd, 7 Hz et 1X,5 Hz)(îHY 7,29 (d, 16 Hz)(7H) La demanderesse suppose que les valeurs t- apparaissant dans le tableau 1 et dans les tableaux 2 et 3 qui suivent sont sujettes à une erreur expérimentale de 0,05. Il faut noter que bien que la configuration stéréochimique des composés conformes à lrinvention ne soit pas connue, les valeurs ç indiquées dans tableau 1 sont caractéristiques de la configuration particuliere existant dans le composé de la formule (I) dans laquelle R représente un radical hydroxyméthyle et tous les composés possèdent la même configuration en positions 2 et 5. Les composés de la formule (I) dans laquelle R représente un radical hydroxyméthyle, formyloxyméthyle ou carboxyle estérifié font en outre preuve dtune axtivité antifongique; le composé- dans lequel R représente le radical carboxyle et les sels de ce composé sont principalement intéressants pour la préparation d'esters actifs. Les sels conformes à la présente invention comprennent des sels avec des bases inorganiques, comme les sels de métaux alcalins, par exemple, les sels de sodium, de potassium et de lithium, les sels de métaux alcalino-terreux, par exemple les sels de calcium et de magnésium et les sels d'ammonium, comme aussi des sels avec des bases organiques, par exemple, des sels d'amines. On peut représenter les esters conformes à la présente invention comme étant des composés de la formule I dans laquelle R représente un groupe -COOR1 où R1 représente un ra dical organique qui provient commodément d'un alcool (aliphatique ou araliphatique) ou dtun phénol. Un tel alcool ou phénol utilisé pour estérifier le groupe carboxyle ne contient, de préférence, pas plus de 24 atomes de carbone. Bien que possédant en général une activité antifongique, les esters conformes à la présente invention qui sont aisément scindés, par exemple, par hydrogénolyse, conviennent également à l'emploi comme-formes protégées de l'acide apparenté, par exemple, pour la préparation dtautres esters. Par conséquent, le groupe R1 peut représenter un radical alcényle ou alkyle substitué ou non substitué, à chaSne droite ou à chaîne ramifiée, contenant, de préférence, de 1 à 8 atomes de carbone, par exemple un groupe méthyle, éthyle, propyle ou isopropyle, butyle, sec-butyle, tert-butyle ou allyle, des substituants souhaitables étant, par exemple les radicaux alcoxy, par exemple méthoxy, les halogènes, c-test-à- dire, le fluor, le chlore, le brome ou ltîode, les radicaux cyano, acyloxy, par exemple alcanoyloxy, tels qutacétoxy et pivaloyloxy, ou alcoxycarbonyloxy, tels qutéthoxycarbonyloxy, acyle, par exemple p-bromobenzoyle et alcoxycabonyle, par exemple éthoxycarbonyle;; un groupe aralkyle possédant jusqu'à 20 atomes de carbone, en particulier un groupe arylméthyle, par exemple, un groupe benzyle ou benzyle substitué, des substituants convenables étant les halogènes, par exemple le chlore les radicaux nitro, par exemple o et p-nitro, cyano, alcoxy, par exemple p-méthoxy ou alkyle, par exemple p-méthyle; un groupe diphénylméthyle ou triphénylméthyle ou un groupe fur-2-ylméthyle, thién-2-ylméthyle ou pyrid-4-ylméthyle, dont les noyaux hétérocycliques peuvent également être substitués, par exemple par un groupe alkyle en C1-C4 de préférence méthyle; un groupe- aryle possédant jusqutà 12 atomes de carbone, par exemple un groupe phényle ou phényle substitué, ces substituants appropriés étant les halogènes, par exemple le chlore, les radicaux nitro, par exemple o- et p-nitro, cyano, alcoxy, par exemple p-méthoxy ou alkyle, par exemple p-méthyle; ; un groupe cycloalkyle ne contenant pas plus de 12 atomes de carbone, par exemple le radical adamantyle, ou un noyau hétérocyclique ne contenant pas plus de 12 atomes de carbone, l'hétéroatome, étant, par exemple, l'oxygène, comme dans le cas du groupe tétrahydropyrannyle ou phtalidyle. Le composé qui répond à la formule (I) dans laquelle R représente un groupe -CH20H possède une rotation moléculaire négative [M]23 dans le sulfoxyde de diméthyle, à savoir -166 . Le spectre de résonance magnétique nucléaire protonique à 100 MHz dtune solution de ce composé dans de la deutéroacétone a révélé des valeurs # telles que représentées dans le tableau 1, le spectre complet étant montré sur la figure 1 des dessins ciannexés. Le composé répondant à la formule(I)dans laquelle R représente un groupe formyloxyméthyle présente, en solution dans le deutérochloroforme, des valeurs # dans le spectre de résonance magnétique magnétique nucléaire protonique à 100 MHz telles que représentées sur le tableau 2 qui suit:: TABLEAU 2 Valeurs f Valeurs # 1,92 (s) (1H) 4,68 (d, 2,5 Hz) (1H) 5,43 (multiplet) (1H) 5,76 (d, 4 Hz) (2H) 6,00 (dd, 7 Hz, 11,5 Hz) (1H) 7,20 (dd, 6 Hz, 11,5 Hz) (1H) 6,70 (ded, 2,5 Hz, 16 Hz) (H) 7,19 (d, 16 Hz) (1H) Le composé de la formule I- dans laquelle R représente un groupe diphénylméthoxycarbonyle présente, en solution dans le deutérochloroforme, les valeurs a dans le spectre de résonance magnétique nucléaire protonique à 100 MHz montrées dans le tableau 3. La rotation moléculaire [M]23 du composé dans le sulfoxyde de diméthyle est négative, à savoir -352 . TABLEAU 3 Pic 2,69 (s). (10H) 5,85 (dd, 8 Hz et 12 Hz) (1H) 3,08 (s) (1H) 6,94 (dd, 5 Hz et 42 Hz) (1H) 4,53 -(d, 3iHz) (1H) 6,71 (dd, 7 Hz et 16 Hz) (tH) 5,10 (dd, 5 Hz et 8 Hz) (1H) 7,15 (d, 16 Hz) (1H) Les esters conformes à la présente invention, par exemple les esters allyliques en C1-C4, par exemple ltester méthylique et les composés dans lesquels R représente un groupe hydroxy méthyle ou formyloxyméthyle possèdent une activité antifongique, par exemple, contre les souches des champignons suivants:Candida albicans, Saccharomyces cerevisiae, Saccaromyces carsbergensis, Trichophyton mentagrophytes, Epidermophyton flocossum et Microspora canis. Par conséauent, l'invention a aussi pour objet des compositions antifongiques qui comprennent un ou plusieurs com posés antifongiques de la formule I (c'est-à-dire des composés dans lesquels R représente un groupe hydroxyméthyle, formyl oxyméthyle ou carboxyle estérifié) ainsi qu'un diluant ou véhi cule convenable. Les esters conformes à l'invention, par exemple, lester méthylique et les composés dans lesquels R représente un groupe hydroxyméthyle ou formyloxyméthyle possèdent égale ment une activité contre toute une série de champignons phyto pathogènes, par exemple, Botrytis alliai, Cercospora melanis, Verticillium sn., Fusarium graminium, Rhizoctonia solani, Alternaria brassicicola, Colletotricum coccodes, Nectria galli gena, Botrytis cinerea, Ashbya gossypii, Bremothecium asbbyi, et Pusarium oxysporum, et certains organismes pathogènes vis-à vis des insectes, par exemple Beauvaria bassiana.L'ester mé thylique susmentionné est également actif contre l'organisme phytopathogène qu'est Ophiobolus graminis et le composé dans lequel R représente un groupe hydroxyméthyle a également fait preuve d'activité contre les organismes phytopathogènes suivants: Phoma betae et Ustilaso hordei et le champignon pathogène vis à-vis des insectes des Entomopthora virulenta. Les composés dans lesquels R représente un groupe hydroxyméthyle ou formyloxyméthyle ont également fait preuve d'activité contre Erysiphe grainais. Les composés antifongiques conformes à la présente inven tion peuvent s'utiliser en médecine humaine et en médecine vé urinaire, sous la forme de compositions pharmaceutiquesconte- nant un ou plusieurs véhicules ou excipients pharmaceutiques ap propriés convenant, par exemple, à l'administratron par la voie i orale, topique, rectale, intravaginale ou parentérale On peut utiliser de telles compositions en même temps que d'autres agents médicinaux. Les compositions en question peuvent se réaliser de manière classique.Ainsi, par exemple, on peut préparer des com positions convenant aux applications externes à l'aide de mi lieux huileux, aqueux ou pulvérulents, sous la forme de produits classiques pour badigeonner la peau, de lotions, de crèmes, d'onguents, d'aérosols et de poudres à épandre également classiques. Les compositions pharmaceutiques conformes à l'in vention contiennent, de préférence, la substance active en une concentration variant de 0,1 à 95 Y en poids, avantageusement, de 0,5 à 40 SC en poids. Pour l'usage horticole ou agricole, les composés antifongiques conformes à l'invention peuvent se présenter sous forme de compositions à utiliser de ntimporte quelles manières souhaitées. En général, ces compositions comprennent le composé en association avec un diluant ou véhicule approprié. De tels-diluants ou véhicules peuvent être liquides ou solides et être destinés à faciliter l'application du composé, soit en le dispersant, à ltendroit où il est appliqué, soit en engendrant une composition que l'utilisateur peut ensuite transformer en une préparation dispersible. Par conséquent, les composés conformes à la présente invention peuvent se présenter, par exemple, sous la forme de poussières, de poudres, de granulles de boulettes, de produits à pulvériser, de fumées et de brouillards, de manière classique. La concentration en matière active varie entre 0,01 et 40 % en poids dans ces compositions. Les composés antifongiques conformes à l'invention peuvent également s'utiliser comme conservateurs de stockage dans certaines matières, par exemple, les produits alimentaires, la patte pour papier de tapisserie, les peintures ou le pétrole, ou encore, dans la bière et le vin afin dtempecher une fermentation indésirable. Au surplus, les composés peuvent s'utiliser comme substances de traitement des semences. Les essais rapportés ci-après sont donnés a titre d'illustra- tion des propriétés des composés de l'invention Détermination de l'activité antifongique. Les composés a essayer sont portés a une concentration de 500 g/ml dans un bouillon de Sabouraud (oxoide), redilués dans du bouillon pour donner une gamme de concentrations et placés b raison de 2ml dans des tubes. Un inoculum pour les levures et les souches candida est obtenu par croissance de cultures pendant 6 heures sur un appareil de secouage dans un bouillon de Sabouraud a 270C. On ajoute 2 gouttes de ces cultures dans chaque tube. Un inoculum pour les autres souches est obtenu par croissance de cultures sur des pentes d'agar de Sabouraud dans des bouteilles universelles, à 270C pendant une semaine. On introduit alors dans la bouteille 5 ou 10 ml de bouillon avec 5 perles stériles de verre. Les bouteilles sont bouchées et agitées en utilisant un appareil " Whirlimise " -. Deux gouttes de la suspension de spores résultante sont ajoutées a chaque tube. L'incubation est réalisée å 270C pendant 48 heures pour les levures et Candida et 1 semaine pour les vautres. On examine à l'oeil sur la croissance dans chaque tube. Pour les levures et Candida on doit agiter les tubes étant donné que les organismes ont tendance a se déposer au fond pour laisser un bouillon clair surnageant faisant penser a une absence de croissance. Pour les autres organismes, la croissance se fait normalement dans une pellicule superficielle. TABLEAU IV ACTIVITE ANTIFONGIQUE ( C.1.M en # g/Ml) Composés de formule I dans laquel R a la défi nition cide s sous ORIGANISME CO2CH3 CH2OH CH2OCHO CANDIDA ALBICANS C 316 4 16 16 CANDIDA ALBICANS 1195 E 2 4 4 SACCHAROMYCES CEREVISIAE WCYC B1 1 1 1 SACCHAROMYCES CARLSBERGENSIS 4228 1 1 0,5 TRICHOPHYTON MENIAGROPHY@ES 687E 1 8 4 MICROSPORA 764 E 31 62 62 EPIDERMOPHYION FLOCOSSUM 1 8 8 TOXICITE Le 2-hydroxyméthyl clavame lorsqu'il est administré par voie sous-cutanée a des groupes de 5 souris donne une DL50 de 150 mg/kg environ et par voie intrapéritonéale une DL50 de 200 mg/kg environ. On peut isoler les composés conformes à l'invention à partir d'un bouillon. de fermentation préparé par la culture d'une souche de streptomyces clavuligerus Des souches particulièrement intéressantes sont cons tituées par Steptomyces clavuligerus souche NRRL 3585 et ses muta@ts. La demanderesse a découvert que les couches NCIB 11250 et NCIB 11 261 étaient tout particulièrement intéressan tes. La souche NCIB 11 260 est un isolat de colonie unique de la souche NRflL 3585 possédant une morphologie sensiblement si milaire à la souche NRRL 3585, comme décrit dans le brevet britannique n 1 315 177.La souche NCIB 11 261 possède égale ment une morphologie sensiblement similaire à celle de la souche NRRL 3585, à l'exception qu'elle exige de l'uracile pou sa croissance. Tel qu'utilisé dans le présent mémoire, le terme "mutants" comprend n'importe quelle souche mutante qui survient soit spontanément, soit par suite de l'action d'un agent externe qui peut être appliqué délibérément ou dont l'action peut être fortuite.Des souches mutantes peuvent être engendrées par mise en oeuvre de toute une série de procédés faisant appel à un rayonnement ionisant, un traitement chimique et des techniques génétiques, comme on peut le lire dans Techniques pour le developpement de microorganlsmes par H.I. Adler dans t'Radiation and Radioisotopes for Insutrial Microorganisms", Proceedings of the Symposium, Vienna, 1973, p. 241, International Atomic Energy Authority. Lors de la préparation de la souche NCYLB, la demanderesse a utilisé un rayonnement y, par exemple, d'environ 80 kîlorads. La souche NCIB 71 261 stest révélée exiger de l'uracile pour sa croissance et on a constaté que lé rendement en composé conforme à l'invention dépendait dans une certaine mesure de la quantité d'uracile présente dans le milieu de fermentation. Il est préférable que la proportion d'uracile ne soit pas supérieure à 200 pg/ml de bouillon et, de préférence, qu'elle varie de 5 à 125 ug/ml de bouillon. La production d'un composé de la formule (I) dans laquelle R représente un groupe hydroxyméthyle, formyloxyméthyle ou carboxyle ou d'un sel d'un composé dans lequel R représente un groupe carboxyle, par fermentation de Strentomyces clavuligenus peut s'effectuer par mise en oeuvre de moyens classiques, c'est-à- dire par culture du Streptomyces clavuligerus en présence. de sources assimilables de carbone, d'azote et de sels minéraux. Lorsqu'il est souhaitable d'obtenir un composé de la formule I dans laquelle R représente un groupe carboxyle estérifié, le composé correspondant dans lequel R représente le radical carboxy- le peut être estérifié soit après isolement de l'acide clavamecarboxylique, soit in situ, cet estérification in situ étant sui- vie de l'isolement de l'ester voulu. La culture s'effectue, de préférence, par voie submergée dans des conditions aérobies. Des sources assimilables de carbone, d'azote et de sels minéraux peuvent être fournies par des substances nutritives simples ou complexes. Comme sources de carbone on peut citer, de manière générale, le glucose, l'amidon, le glycérol, les mélasses, la dextrine, le lactose, le saccharose, les acides carboxyliques, les alcools, par exemple, le méthanol, les n-paraffines et les huiles végétales. Des sources d'azote comprennent, généralement, la farine de soja, les liqueurs de macération de mais, les ré- sidus solubles de la fermentation alcoolique, les'extraits de levure, la farine de graines de coton, les peptones, la caséine, les mélanges d'aminoacides, l'ammoniac (gaz ou solution), les sels d'ammonium ou les nitrates. On peut également utiliser l'urée et d'autres amines. Des sels minéraux nutritifs que l'on peut ineorporer au milieu de culture comprennent les sels généralement utilisés capables d'engendrer des ions sodium, potassium, ammonium, fer, magnésium, zinc, nickel, cobalt, manganese, vanadium, chrome, calcium, phosphate, sulfate, chlorure et carbonate, Un agent antimousse peut être présent afin d'obvier à une formation de mousse excessive et on peut ajouter cet agent par intervalles, selon les besoins. La culture du Strentomyces clavuligerus s'effectue généralement à une température de 20 à 320C, de préférence, de 25 à 3O0C, et cette culture a avantageusement lieu sous aération et agitation, par exemple, par secouage ou remuage. On peut généralement inoculer une petite quantité d'une suspension sporulée du microorganisme au milieu de croissance, mais, afin d'éviter un retard de croissance, on peut préparer un inoculum végétatif de l'orgNnisme en inoculant une faible quantité de spores de l'organisme au milieu de culture, l'inoculum végétatif obtenu étant ensuite transféré dans le milieu de fermentation ou, plus avantageusement encore, passant par une ou plusieurs étapes d'ensemencement au cours desquelles une croissance plus poussée a lieu avant le transfert dans le milieu de fermentation principal. Selon une forme de réalisation préférée de la fermentation conforme à l'invention, on peut utiliser une culture inclinée de Strentomyces clavuligerus pour inoculer un milieu comprenant des sources de carbone assimilables, par exemple du saccharose et/ou du glycérol, d'azote assimilable, par exemple des tryptones et/ou des mélanges complexes de carbone assimilable et d'azote, par exemple les résidus solubles de la fermentation alcoolique et/ou des extraits de levure et des substances minérales nutritives.Lorsque lson souhaite obtenir un composé répondant à la formule I dans laquelle R représente un groupe hydroxyméthyle ou formyloxyméthyle, on préfère utiliser une culture inclinée de Streptomyces clavuligerus NGIB 11261, mais il est préférable d'utiliser une culture inclinée de Streptomyces clavuligerus NCIB 11260 lorsque l'on souhaita obtenir un composé de la formule I dans laquelle R représente un groupe carboxyle ou un ester ou un sel de ce dernier. L'addition d'uracile peut tre nécessaire dans le cas de la souche NCIB 11261. On peut laisser croître l'organisme dans ce milieu pendant une période allant Jusautà 3 jours à une température de 25 à 30 C, sous agitation. On peut ensuite utiliser l'inoculum ainsi formé afin d'inoculer (en une quantité allant jusqu'à environ 10 g) un mi lieu nutritif contenant des sources simples ou complexes de carbone assimilable et d'azote assimilable et des substances minérales et, dans le cas de la souche NCIB 11261, de l'uracile. La croissance sleffectuera avantageusement à une température de 25 à 300C sous agitation et aération, en une ou plusieurs étapes. L'étape de fermentation finale se réalise normalement en l'espace de 2 à 10 jours, 3n peut isoler les composés conformes à l'inven- tion à partir au milieu de fermentation par mise en oeuvre de techniques d'isolement classiques. Afin de minimiser la dégradation des composes en solution, on maintient le pH, de préférence, entre 5 et 7 au cours de l'isolement.Par conséquent, on général, le bouillon de fermentation sera soumis à une filtration, une centrifugation et/ou la mise en oeuvre d'autres techniques qui permettent d enlever la manière solide et d'obtenir une solution limpide contenant les trois composés provenant de la fermentation conformes à l'invention, à savoir les composés de la formule I dans laquelle R représente un groupe iiydroxy- méthyle, formyloxyméthyle et carboxyle et/ou unsel de ce der nier. Il peut étalement être possible d'utiliser le bouillon non clarifié dans certaines étapes d'absorption-élution.On peut ensuite isoler les composés par mise en oeuvre de toute une sé rie techniques de fractionnement, par exemple, l'udsorption-élu- tion, la précipitation, la cristallisation fractionnée, l'ex traction par solvant, etc., qui servent à enlever d'autres cons tituants du bouillon de fermentation et à séparer les composés conformes à l'invention les uns des autres. Ainsi, par exemple, le bouillon de fermentation dont on a séparé la matière solide peut' être appliqué :ur une ou plusieurs matières qui retiennent soit le composé souhaité, soit les contaminants indésirables. Ainsi, par exemple, on peut traiter le bouillon par du carbone absorbant sur lequel les trois composés issus de la fermantation conforme à l'invention ço-t; adsorbés. Ceci facilite la séparation des constituants indésirables du bouillon, en particulier les sels indésirables, du compos souhaité. En général, le bouillon clarifié peut être amené à passer à travers un lit de carbone, par exemple, dans une colonne, de préférence, en utilisant juste suffisamment de carbone pour adsorber la totalité du composé souhaité, habituellement en un rapport d'environ 1 partie en volume de carbone pour 7 à 10 parties en volume de bouillon clarifié. On peut ensuite éluer la substance souhaitée du carbone à l'aide d'un solvant organique miscible à l'eau aqueux, par exemple un alcool, tel que l1étbanol ou l'isopropanol, ou une cétone, telle que la méthyl éthyl cétone, la méthyl isobutyl cétone, de préférence, l'acétone, avantageusement, en une concentration variant de 30 à 95 % de cétone, de préférence, 50 à 70 ç de cétone. Avant l1élution, il est préférable de laver le carbone, par exemple, avec de liteau, afin d'éliminer les constituants du bouillon non adsorbés. Conformément à un autre procédé selon lequel les composés hydroxyméthylique et formyloxyméthylique conformes à l'in vftion sont retenus sur la matière absorbante, le bouillon non clarifié ou clarifié peut titre amené à passer à travers une résine appropriée, par exemple une résine non ionique, comme la résine de polystyrène XAD-4 (surfance active: 750 m2/g; diamètre moyen des pores 50 A; porosité 0,50 à 0,55; vendue par la société Rohm and Haas (UK) Ltd. Groydon, Angleterre). La résine est avantageusement lavée, par exemple, à l'aide dteau, afin d'éliminer les impuretés sans éluer les composés souhaités et on peut ensuite éluer les composés voulus Dans le cas de la résine XAD-4, un solvant approprié est constitué par une solution aqueuse d'un alcanol, par exemple le méthanol, ou d'une cétone, par exemple l'acétone. On peut encore appliquer ne bouillon de fermentation clarifié ou toute autre solution contenant un ou plusieurs des composés confortes à l'invention dans un milieu aqueux qui peut contenir un solvant miscible à l'eau, sur un adsorbant, par exem ple, dans une colonne qui ne retient pas le composé particulier souhaité conforme à l'invention mais qui retient une quantité importante de toute autre matière qui peut comprendre des composés indésirables.Selon une forme de réalisation de ce procé- dé conforme à l'invention, on peut faire passer une solution aqueuse contenant les composés hydroxyméthylique et/ou formyloxyméthylique souhaités, par exemple, le bouillon clarifié ou non clarifié ou la solution dans un solvant miscible à l'eau aqueux (par exemple l'acétone) obtenue comme éluat à partir du carbone adsorbant, comme décrit plus haut, à travers une colonne d'une résine échangeuse d'anions. Lorsqutil est présent, acide conforme à l'invention et d'autres acides (tels que l'acide clavulanique) peuvent être retenus, cependant que les composés formyloxyméthylique et hydroxyméthylique conformes à la présente invention ne sont pas retenus.La solution ainsi obtenue peut ensuite être soumise, si on le souhaite, à un fractionnement plus poussé. Ainsi quton le décrira plusen détail dans la suite du présent mémoire, l'acide conforme à l'invention ou un sel de ce dernier peut ensuite être élué de la résine. La résine échangeuse d'anions porte généralement des groupes amino (faiblement basiques) ou ammo nium quaternaire (fortement basiques). Par exemple, la résine peut entre une résine de polystyrène, polyacrylique, d'époxypolyamine, phénolique-polyamine ou de dextrane réticulé et peut être macroréticulaire ou microréticulaire. Le terne "résine" est utilisé dans le présent mémoire et les revendications qui le terminent pour des raisons de commodité et englobe par consequent, également les dérivés cellulosiques'et les dérivés de dextrane susmentionnés qui proviennent de polymères naturels. Des résines échangeuses d'ions faiblement basiques comprennent les résines du type Amberlite IRA 6g (microréticulaire: polyacrylate: groupes amines tertiaire) et Amberlite IRA 93 (macroréticulaire: polystyrène réticulé avec du divinyl benzène: groupes amino tertiaire), toutes vendues par la société Rolini and Haas (U.K.) Ltd. à Croydon, Angleterre. Des résines échangeuses d'ions fortement basiques typiques comprennent les produits des marques Zerolit FF, Zerolit FF (ip)(vendues par Zerolit Co. Ltd.) et AGl-X2 (Bio-Rad Laboratories, Richmond, Californie, E.U.A.). Selon une autre forme de réalisation du procédé conforme à l'invention, le bouillon clarifié ou non clarifié ou toute autre solution contenant au moins les composés hydroxyméthylique et/ou formyloxyméthylique conformes à l'invention peut être appliqué à une résine non ionique, par exemple la résine de polystyrène XAD-2 (surface ac-tive: 330 m2/g; diamètre moyen des pores 90 A; porosité 0,40-0,4=; vendue par la société Rofun and Haas (UK) Ltd. qui ne retient pas les composés hydroxyméthyliques et formyloxyméthyliques conformes à l'invention mais qui retient plusieurs autres constituants importants du bouillon. Selon une autre variante encore du procédé conforme à l'invention, les composés hydroxyméthylique et/ou formyloxyméthylique conformes à l'invention peuvent être extraits par un solvant non miscible à l'eau, par exemple, un ester solvant, tel que l'acétate d'éthyle ou un alcool, tel que le butanol. Une telle extraction peut s'appliquer au bouillon clarifié ou non clarifié, ou aux éluats ou effluents des procédés d > adsorp- tion-élution précédents, au besoin, après élimination de n'importe quels solvants organiques miscibles à leau qui pourraient être présents. Lorsque l'extraction s'efféctue dans une gamme de pH de 5 à 8, l'acide conforme à l'invention et des acides similaires, lorsqu'ils sont présents, se présentent sous la forme de sels et demeurent dans la phase aqueuse. Ainsi qu'on le décrira dans la suite du présent mémoire, le traitement par un solvant à un pH acide permet l'extraction de l'acide conforme à l'invention. Pour permettre l'extraction dans un petit volume approprié de solvant non miscible à I'eau, il peut être souhaitable de concentrer la solution, par exemple par évaporation sous pression raduite. Une concentration élevée d'un sel, tel que le sulfate d'ammonium, facilite l'extraction, Le composé souhaité de la formule (I) dans laquelle R représente un groupe hydroxyméthyle ou formyloxyméthyle peut autre davantage purifié par chromatographie, par exemple, sur de la silice ou un dextrane réticulé, compatible avec le solvant oragnique, Comme le Sephadex SH 20 (vendu par la société Pharmacia U.K. Ltd).La solution du composé obtenue à partir de lléta- pe de purification précédente peut autre trop diluée pour pouvoir d'appliquer à la colonne et il peut tre commode de la concentrer par évaporation sous pression réduite. La colonne portant le composé souhaité peut ensuite être éluée, par exemple, en utilisant un solvant de polarité appropriée. Dans le cas de colonnes de silice, on peut utiliser de l'acétate d2éthyle contenant un hydrocarbure, par exemple l'hexane ou le toluène, pour éluer le compose"formyloxyméthyli que et on peut utiliser le même mélange de solvants ou de l'acétate d'éthyle seul pour éluer le composé hydroxyméthylique. Dans le cas du Sephadex LH20 . un éluant approprié est constitué par de l'acétate d'éthyle seul. En général, les pre mières fractions éluées contiennent de manière prédominante le composé de la formule I dans laquelle R représente un groupe formyloxyméthyle et le composé de la formule I dans laquelle R représente un groupe hydroxyméthyle est élué dans les dernières fractions. Finalement, on peut réunir et évaporer les fractions contenant le composé souhaité afin d'obtenir le composé voulu. Par la mise en oeuvre d'une combinaison appropriée des procédés susmentionnés, on a isolé les composés dans lesquels R représente un groupe formyloxyméthyle ou hydroxyméthyle sous la forme d'huiles de teinte jaune pâle dtune pureté d'au moins 90 Y. Cependant, les composés sont instables sous cette forme et sont conservés de la meilleure manière en solution dans de l'eau ou des solvants organiques. Ainsi qu'on l'a indiqué plus haut, l'acide conforme à l'invention peut être séparé des composés -hydroxyméthylique et formyloxyméthylique et autres constituants du bouillon par application du bouillon clarifié ou non clarifié ou de toute autre solution aqueuse contenant l'acide et/ou un sel de ce der-niera sur une résine échangeuse d'anions. Une telle résine est commodément sous la forme sel, par exemple, la forme chlorure. L'acide conforme à l'invention, habituellement ensemble avec un ou plusieurs autres acides carboxyliques p-iactamiques, notamment l'acide clavulamique, peut ensuite autre élué de la résine échangeuse d'ions, commodement en utilisant une solution aqueuse d'un sel comne éluant.La demanderesse a découvert que des solutions de sels de lithium, par exemple dtune molarité de 0,2 à 2,5 N, étaient particulièrement Intéressantes comme éluants, étant donné que le sel de lithium de 1 un des acides contaminants principaux, à savoir l'acide clavulamique, pouvait être enlevé par cristalli sation fractionnée de manière à laisser subsister le sel de lithium de l'acide de la formule I dans la liaueur-mere. En général, on concentre ensuite l'éluant contenant l'excès de sel de lithium éluant, avantageusement jusqu'à une concentration molaire en sel de lithium d'environ 5 à 10, avant de procéder à la précipitation du clavulanate de lithium.Cependant, si on le souhaite, on peut séparer le clavulamate de lithium par salification, sous l'effet de l'addition d'un autre sel de lithium encore. Cependant, afin de minimiser l'élution dtimpuretés absorbées de la résine, il peut autre avantageux d'incorporer à l'éluant un solvant organique miscible à l'eau en forte concentration. On peut encore ajouter ce dernier après l'élution en l'absence d'un tel solvant, à l'éluat afin de précipiter les impuretés éluées et on peut ensuite séparer le précipité avant de procéder à tout autre traitement.Le solvant peut, par exemple, etre une cétone, comme l'acétone, un alcool, tel que le méthanol, l'éthanol, l'isopropanol ou l'éthylène glycol, un éther, comme le dioxanne ou le tétrahydrofuranne ou un solvant du type sulfoxyde, imide ou amide substitué, comme le dimethyl- formamide ou le sulfoxyde de diméthyle. En général, on préfère les alcools comme solvants de ce genre, par exemple l'éthanol ou l'isopropanol, la concentration préférée du solvant en question dans l'éluant ou l'éluat après l'addition de l'alcool à ce dernier variant de 70 à 97 Y en volume.On peut séparer la matière indésirable qui est précipitée, par exemple, par centrifugation ou filtration. La cristallisation fractionnée telle que décrite plus haut, pour élimirBr un constituant indésirable majeur de la couche surnageante ou du filtrat, engendre une liqueur-mère dont on peut ensuite isoler l'acide conforme à l'invention ou un sel de ce dernier. Lorsque l'on applique le bouillon clarifie ou non cla- rifié directement sur une résine échangeuse d'anions, les sels qui y sont contenus tendent à surcharger la résine. Par conséquent, il est fréquemment préférable d'éliminer les sels par une adsorption préliminaire des matières actives sur du carbone adsorbant, cette opération étant suivie de l'élution telle que décrite plus haut. L'acide conforme à la présente invention ou un dérivé de ce dernier peut être isolé de la liqueur-mère subsistant après élimination du clavulanate par tout moyen approprié, mais le procédé employé dépendra, évidemment, du fait que crest l'acide conforme à l'invention ou un sel ou un ester de ce dernier qu'il est souhaitable d'isoler. Une purification plus poussée peut être souhaitable afin de sensiblement débarrasser le composé conforme à l'invention de quantités mineures dtimpuretés qui pourraient avoir été entraînées à travers les étapes de purification antérieures. L'acide conforme à l'invention peut, par exemple, autre séparé de la liqueur-mère subsistant après l'élimination du clavulamate par une extraction à l'aide d'un solvant, à un pH acide, de préférence, à un pH inférieur à 3,0, en se servant d'un solvant non miscible à l'eau, par exemple un ester, tel que l'acétate d'éthyle, une cétone, telle que la méthyl isobutyl cétone ou un alcool tel que le butanol. On peut -aussi utiliser une extraction à paire ionique, par exemple, par exemple, en extrayant le milieu aqueux contenant l'acide souhaité et/ou un sel de ce dernier, avec une solution d'une amine dans un solvant non miscible à l'eau (par exemple un hydrocarbure tel que par exemple un hydrocarbure, tel que l'hexane ou le kérosène, ou un hydrocarbure halogéné, tel que le chlorure de méthylène). Les amines sont avantageusement insolubles dans l'eau, par exemple, ce sont des amines portant un ou plusieurs groupes aliphatiques à longue chasse, par exemple, une alkylamine primaire ou secondaire à chaste ramifiée dont le poids moléculaire varie de 280 à 400, par exemple, les produits des marques Amberlite XLA3, LA1 et LA2 et Primene JMT (vendus par Rohm et Haas (UK) Ltd.).Le pH du système doit être acide (par exemple varier de 3 à 7) de manière que l'amine se présente sous la forme d'un sel et que l'acide conforme à l'invention se présente sous la forme acide. L'acide souhaité est extrait dans la phase solvant pour former un sel avec l'amine. Le pH acide du système doit titre obtenu par l'addition d'un acide minéral, tel que l'acide chlorhydrique ou d'un acide organique, tel que l'acide acétique. Si on le souhaite, l'acide peut être réextrait de la solution au solvant organique dans un milieu aqueux contenant un alcali. Si une amine est présente dans la phase solvant, le système aqueux peut entre une solution aqueuse dTun sel. Lorsque l'on souhaite obtenir un ester, un extrait de l'acide peut être traité par un agent estérifiant, par exemple, un diazoalcane ou un diazoaralcane, par exemple, le diazométhane ou le diphényldiazométhane. La solution résultante, qui contient un ester conforme à l'invention dans un solvant organique, peut être trop diluée pour être appliquée à une colonne à des fins de purification et peut donc être, si ce mode de purification est souhaitable, évaporée, de préférence, jusqu'à siccité, cette évaporation étant suivie dune redissolution dans un plus faible volume de solvant. Une matière avantageuse pour la colonne est la silice. La colonne portant l'ester souhaité peut ensuite être éluée, par exemple, en se servant dtun solvant dtune polarité convenable, par exemple, dans le cas de colonnes de silice, l'acétate d'éthyle contenant un hydrocarbure, tel que lthexane ou le toluène. Finalement, les fractions contenant l'ester souhaité peuvent être réunies et le composé voulu peut être obtenu par cristallisation. La mise en oeuvre des procédés susmentionnés a permis d'isoler l'ester diphénylméthylique conforme à ltinven- tion sous la forme de cristaux aciculaires blancs de pureté élevée. On peut encore, lorsqu'un acide carboxylique conforme à l'invention est préparé et qu'il est souhaitable d'isoler un sel conforme à l'invention, soumettre la liqueur-mère à une extraction telle que décrite plus haut et traiter ensuite ltex- trait ainsi obtenu par une base convenable, afin d'engendrer le sel conforme à l'invention. La base peut être une base soluble dans un solvant organique, comme le 2-éthylhexanoate de sodium qui engendre un sel. On peut encore traiter l'extrait par une solution aqueuse d'une base hydrosoluble afin de former une solution aqueuse du sel souhaité. Dans ce dernier cas, ce sel peut être davantage purifié par chromatographie, par exemple, sur une résine échangeuse d'anions sous la forme sel, par exemple, la forme chlorure. Une résine appropriée est le produit vendu sous la marque de fabrique AG1-X? (BSo-Rad Laboratories, Richmond, California). L'acide conforme à l'invention est retenu sur la résine et peut être élué par un gradient d'un sel dont l'anion est avantageusement le même que celui déjà présent dans la colonne et dont le cation est celui dont on désire préparer ur; sel conforme à l'invention. Ainsi, par exemple, le sel de sodium de l'acide souhaité peut être élué avec une solution aqueuse de chlorure de sodium, en une concentration graduellement croissante, par exemple, de 0,1M à 0,2514. Les fractions éluées contenant le composé souhaité sous la forme sel ainsi qu'un excès de sel éluant sont avan- tageusement réunies et appliquées à une colonne qui retient la matière organique en présence d'un excès de sel mais qui laisse passer l'excès de sel. Une matière qui convient parfaitement à cette fin est le carbone adsorbant. L'élution de cette colonne peut s'effectuer avec un solvant miscible à l'eau aqueux, par exemple, une cétone, telle que la méthyl éthyl cétone, ou, de préférence, l'acétone. On peut recueillir les fractions et les réunir et en récupérer le sel conforme à l'invention par élimination du solvant, par exemple, par évaporation ou lyophilisation. Lorsque l'on a isolé l'acide de la formule I ou un sel de ce dernier mais que l'on souhaite en obtenir un ester, on peut soumettre acide ou le sel à une estérification. De manière similaire, lorsque l'on a isolé un ester particulier mais que lton voudrait obtenir un autre ester, l'ester initial peut être déséstérifié et l'acide ainsi obtenu peut ensuite être réestérifié. Dans ce dernier cas, l'ester initial est, de préférence, un ester obtenu avec un groupe aisément éliminable, comme un groupe ester aryl méthylique. Une telle désestérification peut commodément sseffec- tuer par mise en oeuvre de techniques de désestérification réductrice faisant appel à des esters susceptibles de subir une scission réductrice, par exemple, les esters aryl méthyliques, comme les esters benzylique, benzhydrylique, tritylique ou n-ni- trobenzylique. Une telle désestérification réductrice peut s'effectuer, par exemple, par hydrogénolyse, par exemple, en faisant appel à un catalyseur métallique, par exemple, un métal noble, tel que le platine, le palladium ou le rhodium Le cata- lyseur peut être du type supporté, par exemple, sur du charbon de bois ou du kleselguhr.Dans le cas des esters p-nitrobenzy- ligues, la scission pe.tse réaliser par réduction du groupe nitro (par exemple en utilisant un agent à n étal réducteur qui se dissous, comme le zinc dans acide acétique ou le zinc dans de l'acéto- ne ou du tétrahydrofuranne aqueux dont le pH est réglé à une valeur variant de 3 à 6, de préférence, 4 à 5,5, par l'addition d'HCl aqueux, un amalguame d'aluminium dans un éther humide, par exemple le tétrahydrofuranne ou du fer et du chlorure d'ammonium dans un éther aqueux, tel que le tétrahydrofuranne aqueux), cette opération étant suivie d'une hydrolyse réalisée dans les conditions de réduction ou par un traitement subséquent par un acide. On peut préparer les esters alkyliques, alcoxyalkyliques et aralkyliques par réaction de l'acide de la formule I sur le diazoalcane ou le diazoaralcane convenable, par exemple, le diazométhane ou le diphényldiazométhans. . La réaction se réalise avantageusement dans un solvant du type éther, alcool, cétone, ester ou hydrocarbure halogéné, par exemple, l'éther diéthylique, le butamol, la méthyl isobutyl cétone, l'acétate d'éthyle ou le dichlorométhane. Les es-ters qui proviennent d'alcools peuvent être produits par la réaction d'un dérivé réactif de l'alcool, par eemple, un halogénure, -tel que le chlorure, le bromure ou l'iodure ou un dérivé du type hydrocarbonyl sulfonylique, commue un ester méthylique ou tosylique, sur un sel de l'acide de la formule I, par exemple, un sel d'un métal alcalins ou d'un métal alcalino-terreux, comme un sel de lithium, de sodiufl, de po-tassium, de magnésium ou de calciums Bu un sel d'amine, comme un sel de triéthyl ammonium Cette réaction se réalise, de préférence, dans un solvant du type amide ou sulfoxyde substitué, par exemple, le sulfoxyde de diméthyle, le diméthylformamide ou l'hexaméthylphosphoramide. On décrira à présent les composés conformes à l'inven- tion et leurs procédés de préparation et dvisolement à l'aide des exemples non limitatifs suivants. Dans ces exemples, les symboles s, m e-t w se rapportent respectivement à une intensité forte, moyenne et faible des spectres infrarouges. Enfin, dans les exemples qui suivent, on a utilisé les milieux suivants stérilisés à la vapeur d'eau: Milieu A Farine de soja 5 g/l, extrait de levure 5 g/l, tryptone 5 g/l, K2HPO4 0,2 g/l, glycérol 10 g/l et eau de robinet jusqu'à 1 litre. Milieu 3 Glycérol 35 g/l, acide citrique 1,5 g/l, L. Asparagine 6,7 g/l, MgSO4,7H2O 0,5g/l, K2HPO4 0,21 g/l; KH2P04-0,42 g/l, CaCl2 0,2 g/l, ZnSO4.7H2O 0,05 g/l, FeSO4.7H2O 0,03 g/l, MnSO4.4H2O 0,1 g/l et eau distillée jusqu'à 1 litre. Milieu-C Saccharose 20 g/l, résidus solubles de la fermentation alcoolique 15 g/i, extrait de levure 0,2 g/l, K2HPO4 0,2 g/l, tryptone 5 g/l, glycérol 10 g/l et eau de robinet jusqu'à 1li- tre. Milieu D Farine de soja (non moulue) 30 g/l, sulfate ferrique 0,1 g/l, KH2P04 0,1 g/l, amidon soluble 47 g/l, émulsion antimousse à base de silicone 0,05 (Vo v/v) et eau de robinet jusqu'à 1 litre La silice utilisée pour la mise en oeuvre de procédés de chromatographie sur colonne était une silice Woelm (activité grade III). EXEMPLE 1 2-hydroxymethyl-clavame a) Fermentation d'une souche de Streptomyces clavuligerus On a maintenu des Streptomyces clavu1ierus souche NCIB 11261, sur des milieux inclinés malt-gélose extrait de malt 24 g/l; extrait de levure 5 g/l; gélose 15 g/l; ajustés à pH 7,8) où on les a laissé croître pendant 2 semaines à 280C. On a ensuite développé les cultures inclinées pour la fermentation en flacon agitateur, un tiers de la culture inclinée étant utilisé pour inoculer 50 ml du milieu A (pH ajusté à 6,5) dans un flacon d'une contenance de 250 ml. On a ensuite incubé ce produit à 260C pendant 42 heures à 220 tours/mn sur un appareil secoueur rotatif à excentri- cité de 5 cm environ. On a utilisé 2 ml de l'inoculum pour inoculer 50 ml du milieu B contenant du NaCI (0,1 g/l) et de l'uracile (0,01 g/l) (pH ajusté à 7,0 avec du KOH) dans un flacon sans chicane de 250 ml. On a maintenu le flacon à 260C pendant 72 heures sur le secoueur rotatif avec une excentricité de 5 cm à 220 tours/mn. @) Isolement du 2-hydroxyriêthvl-cîavame On a centrifugé le bouillon (51) préparé en a) ci-dessus et on a appliqué la couche surnageante à une colonne contenant une résine XAD-2 (hauteur du lit: 100 cm; diamètre: 2,5 cm). On a saturé l'effluent de sulfate d'aamonium et on a procédé à l'extraction avec de l'acétate dtethyle (3 x 1 litre). On a réuni les extraits, on les a séchés sur du sulfate de so dium et on les a évaporés jusqu'à siccité sous pression réduite. On a dissous le résiu dans un peu d'acétate d'éthyle, on a ajouté de la silice et on a évaporé le mélange sous pression réduite, On a appliqué le solide ainsi obtenu au sommet d'une colonne contenant de la silice sèche (30 x 1 cm) et on a élué la colonne avec un mélange de toluène et d'acétate d'éthyle (1:1), des fractions de 20 ml étant recueillies. On a réuni les fractions 11-15 et on les évaporées sous pression réduite de façon à obtenir l'alcool sous la forme d'une huile jaune (40 mg). Le spectre infrarouge d'une solution bromoformique de l'alcool présentait des pics (cm-1) à 3660w, 3560 m, 2930 m, 1770 s, 1600 w, 1455 w, 1392 m, 1332 s, 1233 m, 1036 s, 983 m, a48 m, 910 w, 848 m et 822 w. Le spectre de résonance magnétique protonique à 100 z d'une solution dans la deutéroacétone figure dans le tableau 1. Le spectre de masse à désorption de champ a donné un pic à m/e 143, correspondant à un poids moléculaire de 143. Les spectres infrarouge et de résonance magnétique nucléaire sont respectivement donnés dans les figures 2 et 1. - EXEMPLE 2 2-hydroxyniéthyl-clavame On a centrifugé le bouillon (2 1) préparé de la manière décrite à l'exemple 1(a) ci-dessus et on a appliqué la couche sur nageante à une colonne contenant une résine XAD-4 (hauteur du lit: 50 cm, diamètre : 2,5 cm). On a lavé la résine avec de l'eau et on l'a ensuite éluée avec un mélange de méthanol et d'eau (1:1 en volume). On a évaporé l'éluat sous pression réduite de manière à obtenir une solution aqueuse. On a extrait la solution aqueuse (50 ml) avec 4 fois 50 ml d'acétate d'éthyle et on a réuni les extraits, on les séchés sur du Na2SO4 et on les a évaporés sous pression réduite de façon à recueillir un résidu. On a dissous le résidu dans un peu d'acétate dtéthyle, on a ajouté de la silice et on a évaporé le mélange sous pression réduite. On a appliqué la silice sèche ainsi obtenue avec une colonne contenant de la silice sèche (Woelm, act. grade III, 20 x 1 cm). On a procédé à l'élution avec un mélange de toluène et d'acétate d'éthyle (1:1) et on a recueilli des fractions de 20 ml. On a réuni les fractions 10-12 et on les a évaporées de façon à obtenir 13 mg d'une huile jaune pe. Le produit possédait les propriétés suivantes: chromatographie en couche mince. On a soumis des parties du produit à une chromatographie en couche mince sur de la silice avec les solvants indiqués ci-dessous. Les titrages se sont fait par recouvrement avec du Sacoharomyces carlsbergensis, Solvant Support Rf méthanol EK6061 (épaisseur 0,1 mm, à ran fort en plastique) 0,79 Acétate d'éthyle EK6061 0,62 Merck 60 (à renfort en matière platique) 0,40 Chloroforme ED6061 0,26 Merck 60 0,04 Toluène EK6061 0 Merck 60 0 Toluène-acétate EK6061 0,041 d'éthyle (1:1) Merck 60 0,18 Toluène-méthanol ED6061 0,40 (9:1) Merck 60 0,13 Spectre UV. L'addition de 2 gouttes de NaOH 2M à une solution méthanolique adonné une forte absorption avec une #max, 270 nm. Les spectres infrarouge et de résonance magnétique nucléaire étaient similaires à ceux du produit de ltexemple 1. EXEMPLE 3 2-hydroxyméthyl-calvame a) Développement de l'inoculum On a conservé des Streptomyes clavuligerus NCIB 11 260 à l'état lyophilisé dans des ampoules. On a mis le contenu d'une ampoule en suspension dans de l'eau distillée stérile et on a ensuite ajouté la suspension à du milieu C ajusté à un pH de 6,5 avec de l'acide chlorhydrique dans un flacon agité teur d'une contenance de 250 ml. On a incubé le flacon sur un secoueur rotatif à 220 tours/mn avec une excentricité de 5 cm, à 260C, pendant 72 heures. On a utilisé une partie (2 ml) de l'inoculum de 72 heures pour inoculer chacun de quatre ballons à fond plat de 2 litres contenant 150 ml du milieu susmensionné. On a incubé les ballons à fond plat sur un secoueur rotatif à 220 tours/mn avec une excentricité de 5 cm, à 26 C, pendant 48 heures. On a utilisé le contenu de trois des ballons à fond plat (3 x 150 ml, 3,75 v/v) pour inoculer trois fermenteurs de 5 litres contenant chacun 4 litres du milieu D (ajusté à un pH de 6,5 avec du NaOH/HCl). On a agité ces fermenteurs avec deux hélices à quatre pales d'un diamètre de 7,6 cm à 750 tours/mn, à 28 C, pendant 20 heures, avec un débit d'air de 3 litres/mn. On a utilisé l'inoculum (7,5 litres, 5 %' v/v) de fermanteurs de 5 litres pour inoculer 150 litres du milieu à base de farine de soja susmentionné dans an fermeteur en acier inoxydable d'une contenance de 230 litres. On a agité ce récipient avec une hélice à 6 pales de 20,3 cm, à 350 tours/mm et avec une aération obtenue à l'aide d'un débit d'air de 420 litres/mm, pendant 20 heures, à 280C. b) Fermentation On a utilisé le bouilln provenant du fermenteur, atune contenance de 230 litres (50 litres, 10 Va v/v) pour inocu- lor 430 litres du milieu D dans un fermenteur en acier inoxydable de 700 litres. On a agité le récipient avec un agitateur à 6 pales de 25,4 cm, à 350 tours/mn et en procédant à l'aération avec un débit d'air de 280 litres/mn. On a réalisé la fermenta- tion à 283C pendant 92 heures et on a maintenu le pH du milieu à 6,5. c) Extraction du bouillon de fermentation On a ajusté le pH du bouillon récolté (530 l, pH 6,5) à l'étape (b) à 5,3 avec de l'acide sulfurique, on a ajouté un adjuvant de filtration (15 kg) et on a clarifie le mélange sur un filtre à tambour rotatif avec une précouche de cellulose. On a absorbé le filtrat sur du carbone (Pittsburgh CAL, 105 l) dans des colonnes. On a lavé le carbone avec de l'eau (70 1) et on a élué les colonnes avec de l'acétone aqueuse (50 % v/v, 135 1). On a appliqué les éluats réunis (140 1) à une colonne de résine IRA68 (cycle chlorure, 12,4 1), ltéluant étant recueilli. On a lavé la colonne avec de l'eau (20 1). d) Isolation du 2-hydroWxyméthyl-clavame On a concentré les liqueurs de lavage et l'effluent réunis (148 l) provenant de l'étape (c) dans un alambic jusqu'à obtenir un volume de 50 litres et on a ajusté le pH à 7,0 avec une solution aqueuse à 40 % d'hydroxyde de sodium. On a saturé une partie (25 1) de ce concentré de sulfate d'ammonium et on a agité le tout avec de l'acétate d'éthyle (25 l) pendant 30 minutes. Après un repos d'une heure, on a séparé la phase organique, on l'a séchée sur du sulfate de magnésium anhydre et on l'a concentrée sous pression réduite de façon à obtenir le composé indiqué dans le titre (46 g) sous la forme d'une huile. On a extrait une partie de cette huile (13,6 g) par de l'acétate d'éthyle (25 ml), on a séparé la matière insoluble par filtration et on l'a lavée avec 5 ml supplémentaires d'acétate d' éthyle. On a appliqué les liqueurs de lavage et le filtrat réunis à une colonne (hauteur du lit 53 cm, diam. 5,2 cm) de Sephadex LH20 tassé dans de l'acétate d'éthyle. On a élué la colonne avec de acétate d'éthyle, en recueillant des fractions de 50 ml. On a réuni les fractions 36 à 42 et on les a évaporées de façon à obtenir une huile jaune (1,17 g; #max 261 nm E1% 273, M/10 NaOH) On a davantage purifié une partie de cette huile (960 mg) par dissolution dans un mélange de toluène et d'acétate d'éthyle (1:1; 2 ml) et application à une colonne sèche (hauteur du lit 23 cm, diam. 2,1 cm) de silice pulvérlente. On a développé la colonne et on l'a éluée avec un melange de toluène et d'acétate d'éthyle (1:1), l'éluat étant recueilli en fractions de 10 ml. Après avoir recueilli 380 ml l'éluat, on a changé le solvant d'élution en acétate d'éthyle.On a réuni les fractions 45 à 73 et on les a évaporées de façon à obtenir le composé indiqué dans le titre sous la forme d'une huile jaune pale (220 mg). Les spectres infrarouge et de résonance magnétique nucléaire du produit étaient sensiblement les mêmes-que ceux obtenus avec le produit de l'exemple 1. La valeur E1% maximum atteinte par une solution du composé dans du NaOH M/10 était de 841 à AmaX 259 nm; [&alpha;]23 dans le sulfoxyde de diméthyle -166 . EXEMPLE 4 2-formyloxvméthVl-cl avame a) Fermentation d'une souche de Streptomyces clavligerus On a maintenu des Streptomyces clavuligerus, souche NCIB 11261 sur des milieux de malt -gélose inclinés (extrait de malt 24g/l; extrait de levure 5 g/l; gélose 15 girl, pH ajusté à 7,8) et on les a fait croître pendant 2 semaines à 28 C. On a ajouté de l'eau stérile (10 ml) à chaque culture inclinée et on a ainsi obtenu une suspension. On a utilisé les fractions de 2 ml de cette suspension pour inoculer chacun de quatre flacons agitateurs à chicane de 250 ml contenant 50 ml du milieu A contenant de l'uracile (100 g/ml (pH ajusté à 6,5 avec du HCl) On a incubé les flacons sur un agitateur rotatif à 220 tours/mn à excentricité de 5 cm, à 260C, pendant 24 heures. On a réuni les contenus des flacons agitateurs et ou a utilise des fractions de 0,5 ml de cet inoculum pour inoculer 32 flacons agitateurs à chicane de 250 ml contenant le milieu susmen- tionné et on a incubé les flacons pendant 48 heures dans les conditions précédemment décrites. On a utilisé des tractions de 120 ml (3 % v/v) de cet inoculum rassemblé de 48 heures pour inoculer 6 fermenteurs de 5 litres contenant chacun 4 litres du milieu B (pH ajusté à 7,0 avec du NaOH) contenant d9s propor- tions variables d'uracile. La concentration en uracile et le flux d'aération dans chaque fermenteur figurent ci-dessous: Fermenteur de Concentration en Débit d'aération 5 litres uracile litres/mm No. g/ml 1 100 1,5 2 100 3 3 100 6 4 50 6 5 35 6 6 25 6 On a agité les fermenteurs d'une contenance de 5 litres à 250 tours/mn avec deux hélices à quatre pales d'un dia@ètre de 8,9 cmq On a opéré la fermentation à 280C pendant 94 heures. b) Isolement du 2-formyloxyméthyl-clavame On a centrifugé les bouillons réunis provenant des fermenteurs 1 à 5 susmentionnés (18 1) et on a appliqué la couche surnageante à une colonne contenant une résine XAD-$ (hauteur du lit 130 cm; diam 2,8 cm). On a lavé la résine avec de l'eau (4-1) et on l'a éluée avec un mélange d'acétone et d'eau (4:1) (c 500 ml). On a évaporé l'éluat jusqu'à 100 ml sous pression réduite, on a réglé le pH à 6,8 avec de l'hydroxyde de sodium, on a saturé la solution de sulfate d'ammonium et on l'a extraite par de acétate d'éthyle (4 x 100 ml).On a séché les extraits réunis (sulfate de sodium), on les a évaporés sous pression réduite et on a dissous le résidu dans un peu acétate d'éthyle. On a ajouté de la silice et on a évaporé le mélange sous pression réduite de façon à obtenir un solide que l'on a introduit dans la partie supérieure d:une colonne contenant de la silice de Woelm sèche (act. grade III; hauteur du lit 50 cm; diam. 2,9 cm). On a élué la colonne avec un mélange de toluène et dtacétate d'éthyle (1:1) des fractions de 15 cm) étant recueillies. On a réuni les fractions 4-11, on les a évaporées sous pression réduite et on a soumis le résidu à une chromatographie sur de la silice (hauteur du lit 30 cm; divan. 2,1 cm) avec un mélange d'hexane et d'acétate dtéthyle (2:1) comme éluant, des fractions de 10 ml étant recueillies. On a réuni les fractions 17-25 et on les a évaporées sous pression réduite de façon à obtenir le composé du type formyloxy sous la forme d'une huile jaune pâle (137 mg). Le spectre infrarouge d'une solution bromoformique de l'échantillon est représenté sur la figure 3 des dessins ci- annexés et possède des pics (cm-1) à 2915 m, 1784 s, 1730 s, 1462 w, 1406 w, 1392 w, 1346 m, 1282 m, 1066 s, 1034 s, 990 m, 940 w, 926 w et 863 w. Un spectre de résonance magnétique nucléaire protonique à 100 MHz d'une solution dans le deutérochloroforme possédait les valeurs - figurant dans le tableau 2, On a appliqué le bouillon (50 l) du fermenteur n 6 d'une contenance de 5 litres à des plaques de silice de Merck 60 F254. à dossier de verre et on a développé les plaques avec de l'acétate d'éthyle, on les a séchées à l'air et recouvertes de gélose nutritive contenant des Saccharomyces carlsbergensis 1738. On a constaté que le composé du type formyloxy possédait une valeur Rf de 0,89. On a également décelé le composé du type formyloxy par examen de la fluorescence sous la lumière ultra viole-tte (254 nm) après traitement de la plaque de chromatographie en couche mince développée avec de la vapeur d'ammoniac. EXEMPLE 5 2-formyloxyméthyl-clavame On a appliqué le bouillon filtré (25 l) obtenu de la manière décrite à l'exemple 3 sur des plaques de silice Merck 60 F254, à dossier de verre, que l'on a développées avec de l'acétate d'éthyle et séchées à l'air. On a ensuite saturé les plaques de vapeur d'ammoniac et on a décelé le chromophore produit par réaction avec de l'ammoniac sous la lumière ultraviolette (254 mn). On a constaté que le composé du type formyloxy possédait une valeur Rf de 0,85. EXEMPLE 6 2-formyloxyméthyl-clavame a) Développement de l'inoculum On a maintenu des Streptomyces clavuligerus souche NCIB 11261 sur des milieux inclinés de malt-gélose (extrait de mait: 2,4 %; extrait de levure: 0,5 %; gélose 1,5 % p/v; ptl: 7,8) et on les a laissé contre pendant 2 semaines à 28 C. On a ajouté une solution de tween 80 (8 ml) à la culture incli- née pour en faire une suspension On a utilisé des fractions de 2 ml de cette suspension pour inoculer chacun de quatre flacons agitateurs a chicane d'une contenance de 250 ml contenant 60 ml du milieu A contenant de uracile (100 g/ml) (pH ajusté à 6,8 7, i). On a incubé les flacons sur un agitateur rotatif à 220 tours/mn d'une excentricité de 5 cm, à 28 C, pendant 48 heures. On a utilisé des fractions de 2 ml de cet inoculum pour inoculer des flacons agitateurs identiques contenant le milieu susmentionné et les incuber pendant 24 heures dans les conditions précédemment décrites. Or a rassemblé les conte;c's des flacons agitateurs et on a transférer des fractions de 120 ml de ces contenus rassemblés dans des aspirateurs d'une contenance de 250 ml. On a ensuite utilisé ces fractions de 120 ml (3 % v/v) pour inoculer des fermenteurs d'une contenance de 5 litres contenant chacun 4 litres du milieu B contenant du lfaCl (0,1 g/l), un agent antimousse (0,05 V v/v) et de l'uracile (35 g/ml), (pH ajusté à 7,0 avec du'KOH). On a agité les fermenteurs à 250 tours/mn-avec deux hélices à quatre pales d'un diamètre de-8,9 cm. On a conduit les fermentations à une température de 280C pendant 24 heures, avec un débit d'aération de 6 1/mn. On a utilisé 7,51 (5 % v/v) de cette culture de 24 heures pour inoculer un fermenteur d'une contenance de 230 litres contenant 150 litres du milieu susmentionné. On a réalisé la fermentation à une température de 280C pendant 93 heures, à un débit d'aération de 2,35 I/seconde et sous une agitation de 250 tours/mn. On a ajouté une quantité supplémentaire draguent antimousse selon les besoins au cours de la fermentation. b) Isolement du 2-formy1oxyméthyl-clavame (i) On a ajusté le pH du bouillon récolté (133 l) à 7,0 avec de l'hydroxyde de sodium et on l'a clarifié par centrifugation. A la couche surnageante clarifiée (114 1) on a ajouté un tiers de volume de butanol, on a agité le tout pendant 30 mi nutes et on a préparé les phases par centrifugation. On a réex- trait la phasme aqueuse (118 1), on l'a séparée avec du butanol de la manière précédemment décrite et on a lavé les extraits butanoliques réunis (76 1) avec de l'eau distillée (40 1). On a ajouté de l'eau distillée (40 l) aux extraits butanoliques et on a concentré la couche azéotropique jusqu'à 1 1 à l'aide d'un alambic et avec évaporation sous pression réduite. On a saturé le produit concentré de sulfate d'ammonium et on l'a extrait avec 4 x 0,5 volume d'acétate d'éthyle On a séché les extraits à l'acétate d'éthyle réunis (1,95 1) avec du sulfate de magnésium, on les a évaporés jusqu'à 500 ml, on a ajouté de la silice sèche (Sorbsil M60, 50 g) et on-a évaporé le tout jusqu'à siccité. On a introduit le résidu solide dans la partie supérieure d'une colonne contenant de la silice sèche (Sorosil M60, 142 x 3,8 cm) et on a élué la silice avec un mélange de toluène et d'acétate d'éthyle (1:1), en recueillant des fractions-de 25 ml On a rassemblé les fractions 38 à 73 inclusivement. (ii) On a clarifié le bouillon récolté (133 1) préparé de la manière décrite en (a) ci-dessus par centrifugation et on a évaporé la couche surnageante (123 l) jusqutà un volume de 22 1 à laide d'un alambic. On a ajusté le pH du produit concentré à 7,0 avec de l'hydroxyde de sodium, on a filtré le produit concentré avec du sulfate d'ammonium et on l'a extrait avec deux fois 0,5 volume dtacétate d'éthyle On a lavé les extraits à l'acétate d'éthyle réunis (21,5 1) avec une solution saturée de sulfate d'ammonium (5 1), on les a séchés avec du sulfate de magnésium et on les a évaporés jusqu'à un volume de 250 mi sous pression réduite.On a ajouté de la silice du type Sorbsil (50 g), on a évaporé le melange jusqu'à siccité et on a introduit le résidu solide dans la partie supérieure d'une colonne contenant de la silice sèche (Sorbsil M60, 138 x 3,8 cm). On a élué la silice avec un mélange de toluène et d'acétate d'éthyle (1:1), des fractions de 25 ml étant recueillies. On a rassemblé les fractions 42 à 60. (iii) On a réuni les éluats réunis provenant des étapes (i) et (ii), on les évaporés jusqu'à un volume de 15 mi et on a appliqué ce volume à une colonne contenant du Sephadex LH20 (60 x 6 cm) dans de l'acétate d'éthyle. On a élué le Sephadex avec de l'acétate d'éthyle, des fractions de 25 ml étant recueillies. On a rassemblé les franctions 38 à 46 et on les a évaporées jusqu'à siccité de façon à obtenir le composé indiqué dans le titre (700 mg) possédant des caractéristiques similaires à celles du produit décrit à l'exemple 4. EXEt2LE 7 Clavame-3-carboxylate de méthyle a) Extraction du bouillon de fermentation On a réglé le pH du bouillon récolté (520 l, pH 6,7) obtenu à l'exemple 3, à 5,4, à l'aide d'acide sulfurique, on a ajouté un adjuvant de filtration (15 kg), on a clarifié le mélange sur un filtre à tambour rotatif avec une précouche. Le filtrat a é-té adsorbé sur du carbone (Pittsburgh CAL, 1051) dans des colonnes. On a lavé le carbone avec de l'eau (70 l) et on a élué les colonnes avec de l'acétone aqueuse (60 Y v/v, 135 1). On a appliqué les éluats réunis (143 1) à une colonne de résine IRA 68 (cycle chlorure, 12,5 l). On a lavé la colonne avec de l'eau (20 1) et on l'a éluée avec une solution aqueuse de chlorure de lithium (16 1), 5 % (p/v) > en recueillant l'éluat en fractions de 1 litre. On a réuni les fractions 6 - 15 et on y a ajouté du propane-2-ol (5 vol.) froid sous agitation, puis on a ajouté un adjuvant de filtration (500 g) et on a filtré le mélange. On a lavé le gâteau avec un melange d'eau et de propane-2-ol (1:5, 2-4 l) et on a concentré les filtrats réunis sous pression réduite jusqu'à sixième du volume des éluats réunis.On a conservé le produit concentré ainsi obtenu à 4 C pendant 16 heures, période au cours de- la- quelle un solide se forma. On a séparé ce solide par filtration et on l'a lavé avec une solution aqueuse à 30 % de chlorure de lithium (3 x 50 ml). b) Isolement do clavame-3-carboxylate de méthyle On a saturé les liqueurs-mères et les liqueurs -de lavage de l'étape (a) (2 1, pH 5,8) par environ 800 g de sulfate d'ammonium, on a ajusté le pH à 3,0 avec de l'acide chlorhydrique 11,4 M et on a extrait le tout à l'aide d'acétate d'éthyle (2 x 500 ml). On a rémiz les extraits à l'acétate d'éthyle contenant l'acide ss-lactamique, on les séchés sur du sulfate de sodium et on les a traités par un excès de diazo- mèt):iane préparé par mise en oeuvre du procédé de Mlejnek (J. Chromatog. 1972, 70, 59). On a évaporé l'extrait à l'acétate d'éthyle sous pression réduite, on a dissous le résidu dans un peu d'acétate d'éthyle, or a ajouté de la silice et on a évaporé le mélange sous pression réduite. On a introduit le solide ainsi obtenu au sommet d'ti'ie colonne contenant de la silice sèche (hauteur du lit 50 cm; diam. 2,9 cn) et on a élué la colonne avec un mélange hexane-acétate d'éthyle (1:1 en vol.), en recueillant des fractions de 20 nl. On a réuni les fractions 10-14 et on les å évaporées sous pression réduite de manière à obtenir une huile jaune (810 mg) que l'on a dissoute dans un peu d'acétate d'éthyle pour ensuite ajouter de la silice et évaporer le mélange sous pression réduite. On a introduit le solide ainsi obtenu dans la partie supérieure d'une colonne contenant de la silice sèche (hauteur du lit: 40 cm; diam. 2,5 cm). On a élué la colonne avec un mélange dthexane et d'acétate d'éthyle (3:2 en vol.) en recueillant des fractions de 10 ml. On a réuni les fractions 22-28 et on les évaporées sous pression réduite de façon à obtenir l'ester méthylidque sous la forme d'une huile jaune pâle (200 mg). Trouvé: c, 49,1 49,3; H, 5,3, 5,3; N, 7,7, 8,1%; S, rien. C7H9NO4 exige C, 49,1; H, 5,3; N, 8,2 %. Le spectre infrarouge d'une solution bromoformique de l'échantillon présentait des pies d'absorption à 2950, 1785, 1754 et 1215 cm-1.Un spectre de résonance magnétique nucléaire protonique à 100 MHz de il ester en solution dans le deutérochloroforme possédait des valeurs # de 4,52 (d, 2,5) (1H); 5,16 (dd, 4,5, 7,5) (1H): 5,88 (dd, 7,5, 11,5) et 6,90 (dd, 4,5 11,5) (2H); 6,24 (s) (3H); 6,69 (dd, 2,5, 16) et 7,14 (d, 16) (2H), ces données étant représentées sur la figure 6. EXEMPLE 8 Isolement du clavame-3-carboxylate de dlphénylméthyle On a régné le pH de la liqueur-mere et des liqueurs de lavage (2,7 l) obtenues par mise en oeuvre du procédé décrit à l'exemple 7(a) à 2,9, à l'aide d'acide chlorhydrique et on a extrait le tout à l'aide l'acétate d'éthyle (2 x 2 1). On a séché les extraits à l'acétate d'éthyle réunis sur du sul- fate de sodium et on y a ajouté du diphényldiazométhane (40 ml, solution 0,5 N dans du CH2Cl2). On a évaporé l'extrait sous pression réduite jusqu'à un volume de 250 nl et on y - sjouté une quantité supplémentaire de 60 à 70 ml de la solution de diphényldiazométhane jusqu'à ce qu'il ne so produisît plus de dégagement de gaz et que la teinte rouge profond subsistât pendant environ 15 minutes. On a ajouté de la silice à l'extrait à l'acétate d'éthyle et on a évaporé le mélange sous pression reduite. On a introduit le solide ainsi obtenu dans la partie supérieure d'une colonne contenont de la silice sèche (hauteur du lit 107 cm, diam. 5 cm) et on a procédé à l'élution avec un mélange d'hexane et d'acétate d'éthyle (5:1 en vol.) en recueillant des fractions de 25 ml. On a réuni les franctions 135-188 et on a séparé l'ester diphénylméthylique cristallisé en le recueillant, par filtration ot on l'a lavé avec de l'hexane de façon à en obtenir des aiguilles blanches (40 mg). On a évaporé la couche surnageante sous pression réduite et on a re@ristallisé la résidu dans du toluène de façon à obtenir l'ester diphénylméthylique sous la forme d'aiguilles blanches (900 mg). P.F. 146,7 C (vitesse de chauffage 2 /mn); [&alpha;]23 - 109 (0,1 % dans sulfoxyde de diméthyle). Trouvé C, 70,3; H, 5,3; N, 4,2; S, 0 %. C19H17N04 exige: C, 70,6; H, 5,3; N, 4,3 %. Le spectre infrarouge dans du Nujol (figure 4) présentait des pics d'absorption à 1780, 1750, 1200, 762 et 698 cm ; une solution dans du bromoforme a donné des pics à 1780, 1742 et 740 cm 1, un spectre de résonance magnétique protonique à 100 MHz d'une solution dans le deutérochloroforme (figure 5) possédait les valeurs 4- présentées dans le tableau 3. Un spectre de masse à désorption de champ a montré un pic ionique moléculaire à m/e 323,3 (poids moléculaire prévu pour C19H17NO4: 323,16). Le spectre ultraviolet d'un échantillon de l'ester diphénylméthylique préparé d'une manière similaire à celle décrite ci-dessus et dissous dans du méthanol contenant 1 % v/v de NaOH 1M, a présenté une valeur E1% de 691 à une #max 272 nm immédiatement après son traitement par un alcali. EXEMPLE 9 Préparation de vlavame-3-carboxylàte de sodium On a dissous l'ester diphénylméthylique (80 mg) préparé de la manière décrite à l'exemple 8 dans de l'éthanol (30 ml) et on a agité la solution à la température ambiante pendant 30 minutes, sous atmosphère d'hydrogène (1 atmosphère), en présence de lOY (p/p) de palladium sur charbon de bois (25 mg) et de bicarbonate de sodium (20 mg). On a filtré la solution, on y a ajouté de l'eau (100 ml) et on a extrait le mélange par de l'acétate d'éthyle (2 x 100 ml) On a lyophilisé la couche aqueuse (pH: 6,1) de façon à obtenir le sel de sodium qui présentait des caractéristiques similaires à celles du produit de l'exemple 11. EXEMPLE 10 Préparation de clavame-3-carboxvlate de lithium On a agité l'ester diphénylméthylique (160 mg) préparé à l'exemple 8, du carbonate de lithium (18,5 mg) et 10 0% (p:p) de palladium sur charbon de bois (50 mg) -dans de l'méthanol (50 ml), sous atmosphère d'hydrogène (1 atmosphère), pendant 30 minutes. On a filtré la solution, on a ajou-té de l'eau (200 ml) et on a extrait le mélange à l'aide d'acétate d'éthyle (2 x 100 ml), On a ajusté le pH de la couche aqueuse (pH 4,8) à 6,0 avec du carbonate de lithium et on l'a lyophilisée de façon à obtenir le sel de lithium (42 mg). Le spectre infrarouge dans du Nujol montrait des pics à 3400, 1780 et 1600 cm-1. Un spectre de résonance magnétique nucléaire protonique à 100 MHz d'une solution dans de l'èau lourde possédait des valeurs de 4,48 (d, 3) (1H); 5,24 (multiplet) (1H); 5,79 (dd, 8, 11) (1H) et 6,95 (dd, 5, 11) (1H); 6,56 (dd, 3, 17) (1H) et 7,08 (a, 17) (1H). EXEMPLE t1 Isolement de clavame-3-carboxylate de sodium On a ajusté le pH des liqueurs-mères et des liqueurs de lavage (1 1) obtenue par mise en oeuvre du procédé décrit à l'exemple 7(a) à 3,0, à l'aide d'acide chlorhydrique concentre et on a extrait le tout avec de l'acétate d'éthyle (2 x 1 1). On a réextrait les extraits à l'acétate d'éthyle réunis avec de l'eau (250 ml), à un pH de 6,5 (pH ajusté à l'aide d'hydroxyde de sodium 1M) et on a fait descendre la solution aqueuse ainsi obtenue dans une colonne contenant une résine du type AGl-X2 (Bio-Rad Laboratoires) dans le cycle chlorure (dimensions de la colonne: 74 x 2,5 cm).On a lavé la colonne avec de l'eau (650 ml) et on l'a éluée avec des solutions de chlorure de sodium de concentrations graduellement croissantes (500 ml, chacune de 0,1M, O,15, 0,2M, Q,25M) des fractions de 25 ml étant recueillies. On a rassemblé les fractions 14 à 35 et on les a fait descendre dans une colonne contenant du carbone de Fittsburgh (dimensions de la colonne: 16 x 2,5 cm). On a lavé le charbon de bois avec deux volumes de lit d'eau et on a procédé à l'élution avec un mélange d'acétone et d'eau (4.1) en recueillant des fractions de 50 ml. On a rassemblé les fractions 1 à 4, on a éliminé l'acétone par concentration sous pression réduite et on a lyophilisé la solution résiduelle de façon à obtenir le sel indiqué dans le titre (1,4 g). Le spectre infrarouge du produit dans du Nujol présentait de larges pics à 3400, 1770 et 1600 cm-1. Un spectre de résonance magnétique nucléaire protonique à 100 MHz d'une solution dans de l'eau lourde possédait des valeurs # de 4,48 (d,3) (1H); 5,26 (multiplet) (1H); 5,81 (ddt 8, 11) (1H) et 6,96 (dd, 5,11) (1H); 6,56 (dd, 3,17) (1H) et 7,08 (d, 17) (1H), La valeur E1% maximum atteinte par une solution du composé dans du NaOH 1M était de 415 à #@@@ 258 nm. EXEMPLE 12 Clavame-2-carboxylate de magnésium On a ajouté du clavame-2-carboxylate de diphénylmé thyle (979 mg), une quantité stoechiométrique de MgC03 et de palladium sur du charbon de bois (environ 300 mg) à de l'éthanol absolu (100 ml). On a rapidement agité le mélange sous une atmosphère d'hydrogène jusqu'à ce que l'absorption d'hydrogène tombat jusqu'à une valeur telle que cette dernière indiquait moins de 1 oX de réaction par-minute. On a filtré le mélange à travers de la Celite 535 (une terre à diatomées fournie par la société Johns Manville Inc. E.U.A.) et on a lavé la Celite avec de l'eau. On a ajusté le pH du filtrat éthanolique aqueux à 6 avec une solution de Mg(OH)2 et on a lavé la solution aqueuse à deux reprises avec de l'acétate d'éthyle et on l'a ensuite lyophilisée-de façon à obtenir le sel indiqué dans le titre (31,5 mg), #max (NaOH 0,1 m) 259-260 nm, E1 660. EXEMPLE 13 Clavame-2-carboxylate de méthyle On a préparé une solution éthanolique aqueuse de clavame-2-carboxylate de magnésium à partir de clavame-2-carboxylate de diphénylméthyle (230 mg)- d'une manière similaire à celle décrite à l'exemple 12. On a réglé le pH de la solution à 2,0 avec une solution d'HCl et on l'a extraite à deux reprises avec de l'acétate d'éthyle. On a séché les extraits réunis (Na2SO4), on les z filtrés et on y a fait passer du diazome- thane gazeux pendant une demi-heure.On a évaporé la solution ainsi obtenue de façon à recueillir le composé indiqué dans le titre (117 mg), sous la forme d'une huile, #max (EtOH + 1 % 1M NaOH) 272 nm, Ell 1080; g a 7D - 1240 (c O, 16; EtOAc). EXEMPLE 14 2-hydroxyméthyl-clavame (I) et 3-formvloxyméthylclavame (II) a) On a clarifié le bouillon récolté (130 1, pH 5,6) obtenu de la manière décrite à l'exemple 1 par centrifugation et on a procédé à l'absorption de la couche surnageante sur du carbone (Pittsburgh CAL, 13 1) dans une colonne. On a enlevé le précipité présent au sommet de la colonne, on a lavé le carbone avec de l'eau (10 1) et on a élué la colonne avec de l'acétone aqueuse (60% v/v, 40 1). On a appliqué les éluats réunis (78 1, pH 6,2) provenant de deux lots du bouillon récolté à une colonne de résine IRA 58 (cycle chlorure, 5 1), l'effluent étant recueilli et concentré sous pression réduite. On a récupéré le pH du produit concentré (20 1) à 7,0 avec une solution aqueuse à 40 % de NaOH.On a saturé le produit concentré. de (NH4)2SO4 et on a procédé à une extraction avec de l'acétate d'éthyle (3 x 10 1). On a séché les extraits réunis (MgSO4), on les a filtrés et concentrés sous pression réduite. On a ajouté de la silice sèche Sorbsil M60 (75 g) à l'extrait concentré (50 ml) et on a séché la suspension sous pression réduite. On a introduit lesolide résiduel dans une colonne (140 x 3,5 cm) de Sorbsil M60 sèche. L'élution avec un mélange d'acétate d'éthyle et de toluène (1:1 v/v) a donné un produit (ix) -(fraction entre 350 et 2150 ml). On a ensuite élué le produit (1) avec de l'acétate d'éthyle (2600 ml). b) Purification du 2-hydroxyméthyl-clavame On a concentré l'éluat à l'acétate d'éthyle contenant le produit (I) sous pression réduite et on a introduit ce produit concentré dans. une colonne (60 x 5 cm) de Sephadex LH20 tassé dans de l'acétate d'éthyle.On a élué la colonne à l'aide d'acétate d'éthyle. Les fractions entre 1050 ml et 1225 ml ont donné le produit (II) que l'on a mélangé à la fraction contenant le produit (IE) provenant de la colonne précédente et les fractions entre 1825 ml et 2400 ml ont donné le produit (T). Un échantillon de l'éluat contenant le produit (I) a été séché de façon à obtenir une huile (E1 après 30 mn. dans NaOH 0,1N = 906). c) Purification du 2-formvloxy-clavame On a concentré les éluats réunis de (a) et de (b) contenant le produit (II) sous pression réduite et on a introduit le produit concentré ainsi obtenu dans-une colonne (60 x 6 cm) de Sephadex I TH20 tassé dans de l'acétate d'éthyle. On a élué la colonne à l'aide d'acétate- d'éthyle, les fractions entre 1025 ml et 1350 ml donnant le produit (II). Un échantillon de l'éluat contenant le produit (Il) a été séché de façon à en obtenir une huile (E1 après 60 mn dans NaOH 0,1 N = 646). REVENDICATIONS 1.- Composé répondant à la formule (I) ci-dessous: dans laquelle R représente un groupe hydroxyméthyle, ce composé dans de la deutéroacétone présentant les valeurs # du spectre de résonance magnétique nucléaire protonique à 100 MHz indiquées dans le tableau I, ainsi que les composés correspondatts dans lesquels R représente un groupe formyloxyméthyle ou un groupe carboxyle ou carboxyle estérifié et, dans le cas où R représente un groupe carboxyle, les sels des composés en question. 2.- Composé suivant la revendication 1, caractérisé en ce que R représente un groupe hydroxyméthyle. 3.- Composé suivant la revendication 1, caractérisé en ce que R représente un groupe formyloxyméthyle. 4.- Composé suivant la revendication 2, caractérisé en ce qui possède une rotation moléculaire négative dans le sulfoxyde de diméthyle de -166 , ainsi que son dérivé du type formyloxy. 5.- Composé suivant la revendication 3, dont une solution deutérochloroformique possède des valeur # dans le spec-tre de résonance magnétique nucléaire protonique à 100 14Hz présentées dans le tableau 2. 6.- Composés suivant la revendication 1, caractérisés en ce que R représente un groupe carboxyle ou carboxyle estérifié et leurs sels. 7.- Acide suivant la revendication 6 dont l'ester diphénylméthoxyearbonylique possède, en solution dans le deutérochloroforme, les valeurs # dans le spectre de résonance magnétique nucléaire protonique à 100 -^Ez présentées dans le tableau 2. 8.- Composé suivant la revendication 6, caractérisé en ce qu'il possède une rotation moléculaire négative dans le sulfoxyde de diméthyle de 3520. 9.- Composés suivant l'une quelconque des revendications 6 à 8, caractérisés en ce que R représente un groupe carboxyle estérifié -COOR1 où R représente un groupe alcényle ou alkyle non substitué ou substitué, à chaîne droite ou à chaîne ramifiée, possédant de 1 à 8 atomes de carbone; un groupe aralkyle possédant jusqu'à 20 atomes de carbone, un groupe aryle possédant jusqu'à 12 atomes de carbone; ou un groupe cycloalkyle contenant jusqutà 12 atomes de carbone, contenant éventuellement un ou plusieurs hétéroatomes dans le système cyclique. 10.- Composés suivant l'une quelconque des revendications 6 - 9, caractérisés en ce que R1 représente un groupe alkyle en C1 - C4. 11.- Composé suivant l'une quelconque des revendications 1 à 10, caractérisé en ce que R représente un groupe méthyle. 12.- Composé suivant l'une quelconque des revendications 5 à 7, caractérisé en ce que R représente un groupe arylméthyle. 13.- Sels de métaux alcalins, de métaux alcalinoterreux ou d'ammonium ou d'ammonium substitué de l'acide carboxylique suivant l'une quelconque des revendications 6, 7 et 8. 14.- Sels de sodium, de potassium, de lithium et de magnésium de l'acide carboxylique suivant ltune quelconque des revendications 6, 7 et 8. 15.- Compositions pharmaceutiques, caractérisées en ce qu'elles comprennent un ou plusieurs composés antifongiques selon l'une quelconque des revendications 1 à 14, ainsi qu'un ou plusieurs excipients ou véhicules pharmaceutiques. 16.- Compositions suivant la revendication 15, caractérisées en ce qutelles se présentent sous une forme convenant à l'administration par la voie orale, topique, rectale, intravaginale ou parentérale. 17.- Compositions suivant l'une quelconque des revendications 15 et 16, caractérisées en ce qu'elles se présentent sous une forme convenant à l'administration topique. 18.- Compositions suivant l'une quelconque des revendications 15 à 17, caractérisées en ce qu'elles contiennent le composé actif en une concentration variant de 0,1 à 95 o,l en poids. 19.- Compositions pour l'usage horticole ou agricolé, Caractérisées en ce qutelles contiennent un ou plusieurs composés antifongiques suivant l'une quelconque des revendications 1 à 14, en association avec un diluant ou véhicule convenable. 20.- Compositions suivant la revendication 19, caractérisées en ce quelles contiennent la substance active en une concentration variant de 0,01 à 40 % en poids. 21.- Compositions suivant l'une quelconque des revendications 19 et 20, caractérisées en ce qu'elles se présentent sous la forme d'une poussière, de granules, d'une poudre, de boulettes, d'un produit à pulvériser, d'une fumée ou d'un brouil- lard. 22.- Procédé de préparation d'un composé répondant à la formule (I) suivant la revendication 1, caractérisé en ce que l'on isole le composé voulu à partir d'un bouillon de fer tentation d'une souche de Streptomyces clavuliterus, ou bien, lorsque l'on souhaite obtenir un ester de la formule (I), on estérifie le composé de la formule (I) dans laquelle R représente un groupe carboxyle, soit après son isolement, soit sans l'isoler, l'estérification étant dans ce cas suivie de l'isole ment de l'ester de la formule (I) ainsi formé. 23.- Procédé suivant la revendication 22, caractérisé en ce que la souche du Streptomvces clalierus est la souche NRRL 3585 ou un ae ses mutants. 24.- Procédé suivant l'une quelconque des revendications 22 et 23, caractérisé en ce que la souche du Streptomyces clavuligerus est la souche NCIB 11260. 25.- Procédé suivant l'une quelconque des revendications 22 et 23, caractérisé en ce que la souche du Streptomyces clavuligerus est la souche NCIB 11261. 26.- Procédé suivant l'une quelconque des revendications 22 à 25, caractérisé en ce que l'isolement comprend l'étape de séparation du ou des composés de la formule (I) dans laquelle R représente un radical hydroxyméthyle et/ou formyloxyméthyle d'autres substances présentes avec eux. 27.- Procédé suivant la revendication 26, caractérisé en ce que l'étape de séparation en question s'effectue en utilisant une résine échangeuse d'anions si bien que les composés hydroxyméthylique et formyloxyméthylique souhaités ne sont pas retenus par la résine, tandis que les substances acides sont retenues et en ce que lton récupère des fractions contenant les composés hydroxyméthylique et/ou formyloxyméthylique. 28.- Procédé selon la revendication 27, caractérisé en ce que la résine échangeuse d'anions est une résine de polystyrène, polyacrylique, du type époxy-polyamine, du type phénolique-polyamine ou de dextrane réticulé, portant des groupes amino. 29.- Procédé selon la revendication 26, caractérisé en ce que l'étape de séparation s'effetue par extraction d'une solution aqueuse contenant les composés hydroxyméthylique et/ou formylxyméthylique dans un solvant non miscible à l'eau. 30.- Procédé selon la revendication 29, caractérisé en ce que le solvant non miscible à l'eau est un ester ou un alcool. 31.- Procédé suivant 'l'une quelconque des revendications 29 et 30, caractérisé en ce que le pH de la solution aqueuse varie de 5 à 8. 32.- Procédé selon la revendication 26, caractérisé en ce que pour la purification des composés de la formule (I) dans laquelle R représente un groupe hydroxyméthyle et/ou formyloxynéthyle, on met une solution aqueuse les contenant en contact avec une résine non ionique sur laquelle les composés sont absorbés, tandis que des quantités importantes d'impuretés ne sont pas retenues, cette opération étant suivie de ltélution des fractions contenant les composés voulus. 33.- Procédé selon la revendication 26, caractérisé en ce que pour la purification des composés de la formule (I) dans laquelle R représente un groupe hydroxymétnyle et/ou formyloxy- méthyle, on met une solution aqueuse les contenant en contact avec une résine non ionique qui ne les retient pas mais qui retient des quantItés importantes d'impuretés. 34.- Procédé suivant l'une quelconque des revendications 29 à 33, caractérisé en ce que la solution aqueuse précitée est un bouillon de fermentation clarifié ou non clarifié. 35.- Procédé suivant l'une quelconque des revendications 22 à 34, caractérisé en ce que l'on traite le bouillon de fermentation de façon à séparer les constituants indésirables il bouillon avant de procéder à l'étape de séparation précitée. 36.- Procédé selon la revendication 35, caractérisé en ce que l'on traite le bouillon par du carbone ou charbon absorbant sur lequel les composés de la formule (I) sont retenus et en ce que l'on élue les composés en question à l'aide d'un solvant aqueux miscible à l'eau. 37.- Procédé suivant l'une quelconque des revendications 26 à 36, caractérisé en ce que l'on sépare les composés de la formule (I) dans laquelle R représente un groupe hydroxyméthyle ou formyloxyméthyle,l'un de l'autre, par chromatographie. 38.- Procédé suivant la revendication 31, caractérisé en ce que la chromatographie s'effectue sur de la silice ou du dextrane réticule compatible avec un solvant organique et en ce que l'on effectue l'élution en utilisant de l'acétate d'éthyle seul ou en mélange à un hydrocarbure. 39.- Procédé suivant l'une quelconque des revendica tions 25 à 38, caractérisé en ce que le produit isolé est le composé de la formule I dans laquelle R représente le radical hydroxyméthyle. 40.- Procédé suivant l'une quelconque. des revendications 28 à 38, caractérisé en ce que le produit isolé est le composé de la formule I dans laquelle R représente le radical formyloxyméthyle. 41.- Procédé suivant l'une quelconque des revendications 22 à 24, caractérisé en ce que lton sépare le composé de la formule (I) dans laquelle R représente un groupe carboxyle, éventuellement sous la forme d'un de ses sels, des impuretés. 42.- Procédé suivant la revendication 41, caractérisé en ce que l'on sépare le composé carboxylique des impuretés par adsorption sur une résine échangeuse d' anions et élution des fractions contenant ledit acide de cette résine. 43.- Procédé selon la revendication 42, caractérisé en ce que la résine échangeuse d'anions est une résine telle que définie dans la revendication 28. 44.- Procédé suivant l'une quelconque des revendications 42 et 43, caractérisé en ce que l'on effectue l'élimina- tion de l'acide clavulanique par réaction de la substance contenant de l'acide de la formule (I) ou un sel de cette dernière avec un sel de lithium, de manière à former le sel de lithium de l'acide clavulanique et en ce que l'on sépare ledit sel par précipitation ou cristallisation fractiomnée. 45.- Procédé selon la revendication 44, caractérisé en ce que l'on adsorbe la matière contenant le composé acide précité de formule I et en ce quton l'élue avec une solution aqueuse d'un sel de lithium ou en ce qu'on l'élue avec un éluant aqueux, cette élution étant suivie de l'addition d'un sel de lithium à l'éluat. 46.- Procédé suivant la revendication 45, caractérisé en ce que 1'on Incorpore un solvant organique miscible à l'eau en concentration élevée à la solution du sel de lithium utilisée pour l'élution ou à l'éluat aqueux, afin de faciliter ladite précipitation ou cristallisåìion fractionnée. 47.- Procédé selon la revendication 46, caractérisé en ce que le solvant organique miscible à l'eau est l'acétone, le méthanol, l'éthanol, l'isopropanol ou l'éthylène glycol, le dioxanne, le tétrahydrofuranne, le diméthylformamide ou le sulfoxyde de diméthyle. 48.- Procédé suivant l'une quelconque des revendications 42 à 47, caractérisé en ce que, avant de procéder à l'absorption du composé carboxylique sur la résine échangeuse d'anions, on l'absorbe sur du carbone adsorbant et on l'en élue avec un solvant aqueux miscible à l'eau. 49.- Procédé suivant l'une quelconque des revendications 44 à 48, caractérisé en ce que l'on isole le composé de la formule (I) dans laquelle R représente un groupe carboxyle à partir d'une liqueur-mère subsistant après la précipitation ou la cristallisation fractionnée, à l'aide d'une extraction par un solvant à un pH acide ou à l'aide d'une extraction à terre ionique. 50.- Procédé suivant l'une quelconque des revendications 41 à 49, caractérisé en ce que l'on obtient initialement un composé de la formule (I) dans laquelle R représente un groupe carboxyle estérifié et en ce que l'on en obtient le composé dans lequel R représente un groupe carboxyle par désestérification. 51.- Procédé suivant la revendication 50, caractérisé en ce que l'acide de formule (I) obtenu est estérifié. 52.- Procédé suivant l'une quelconque des revendications 41 à 49, caractérisé en ce que l'acide de formule (I) dans laquelle R est un groupe carboxyle est estérifié sans isolement de l'acide en question. 53.- Procédé suivant l'une quelconque des revendications 41 à 52, caractérisé en ce que l'on estérifie un composé de la formule (I) dans laquelle R représente un groupe cargoxyle par traitement à l'aide d'un diazoalcane ou d'un diazoaralcane. 54.- Procédé suivant l'une quelconque des revendications 41 à 52, caractérisé en ce que l'on estérifie un sel du composé de formule (I) dans laquelle R représente un groupe carboxyle par réaction sur un dérivé réactif d'un alcool. 55.- Procédé selon la revendication 52, caractérisé en ce que l'on effectue l'estérification sur une substance impure de la formule (I) dans laquelle R représente un groupe carboxyle et en ce que l'on purifie l'ester ainsi obtenu par chromatographie sur de la silice. 56.- Composé répondant à la formule (I) telle que définie dans la revendication 1, dans laquelle R représente un groupe hydroxyméthyle, formyloxyméthyle ou carboxyle ou un sel d(un tel composé, obtenu par mise en oeuvre d'un procédé suivant l'une quelconque des revendications 22 à 55.