FR 2298320 A1 19760820 FR 7502320 A 19750124 La présente invention se rapporte à un médicament de grande valeur pour l'administration orale, contenant de 1 1hydrazide de N-benzènesulfonyl-ss-alanine comme ingrédient actif. Le produit pharmaceutique de la présente invention est utile, en tant qu'agent immunosuppressif, pour supprimer les maladies dites d'auto-immunisation telles que les syndromes de la néphrose, l'arthrite rhumatismale, le lupus érythémateux systémique, etc.. En outre, il peut être possible de diminuer les doses de corticostérotde, ou de les supprimer totalement, par l'utilisation du produit KH-125 chez un malade qui a été traité pendant longtemps avec cette hormone (corticostéroIde). La présente invention se rapporte à des compositions pharmaceutiques et, plus particulièrement, elle se rapporte à des compositions pharmaceutiques qui sont utiles pour la suppression de maladies dites d'auto-immunisation. Des produits pharmaceutiques immunosuppressifs, tels que la 6-mercaptopurine, l'azathioprine et la cyclophosphamide, ont été utilisés en clinique pour le traitement d'arthrite rhumatismale, de syndromes de la néphrose, d'hépatite et d'anémie hémolytique, toutes ces maladies étant considérées comme appartenant à ce qu'on appelle les maladies d'auto-immunisation. Une toxicité élevée de ces produits pharmaceutiques a cependant rendu difficile leur utilisation en clinique, spécialement lorsqu'on les prescrit à un patient à maintes reprises pendant une longue durée de temps. En conséquence, on a longtemps espéré l'arrivée d'un nouvel agent immunosuppressif qui ait une marge de sécurité plus large, sans abaissement de ses effets thérapeutiques. Les études qui ont conduit à la découverte du produit de la présente invention se rapportent à des dérivés d'hydrazide d'aminoacide, ayant une activité immunosuppressive puissante et une faible toxicité. En essayant de trouver un àgent immunosuppressif ayant une toxicité abaissée,environ cinquante hydrazides d'acides, principalement des dérivés d'hydrazide d'aminoacide, ont été synthétisés et examinés en vue de leur aptitude à supprimer la formation d'anticorps vis-b-vis des érythrocytes de mouton chez les souris. Durant ces études, on a trouvé que l'hydrazide de N-benzènesulfonyl ss-alanine (dit KH-125) avait l'activité imuunosuppressive la plus puissante et une toxicité aiguë assez faible parmi tous les composés expérimentés. D'autres études détaillées pharmacologiques et toxicologiques ont été alors réalisées sur le produit KH-125. Dans des études pharmacologiques détaillées, on a confirmé que le produit KH-125 avait, chez les rats, une aptitude à supprimer l'arthrite due à un adjuvant, ainsi que la néphrite néphrotoxique expérimentale. Ses propriétés toxicologiques ont été évaluées par des tests de toxicités sous-aiguë et chronique chez les rats, par des études tératologiques chez les rats et les lapins et aussi par des tests cancérigènes chez les souris et les rats. On a trouvé d'après ces études que le produit KH-125 avait une toxicité considérablement inférieure à celle des agents immunosuppressifs bien connus. En outre, le produit KH-125 ne présentait ni effet tératogène ni effet cancérigène, tous deux étant inévitablement répandus dans les produits pharmaceutiques immunosuppressifs déjà bien établis, tels que la cyclophosphamide, la 6-mercaptopurine, etc.. Avant que le composé de la présente invention puisse être utilisé médicalement, il doit, bien sar, Atre transformé en composition pharmaceutique par association avec un véhicule pharmaceutique convenable. Le terme "pharmaceutique" est utilisé ici pour exclure toute possibilité que la nature du véhicule, considéré, bien sur, en relation avec la voie suivant laquelle la composition doit être administrée, puisse être nuisible plutôt qu'avantageuse. On croit que le choix d'un mode convenable de présentation, avec un véhicule approprié est la compétence des personnes au courant de la préparation des formulations pharmaceutiques. En conséquence, la présente invention prévoit une composition pharmaceutique qui comprend l'hydrazide de N-benzènesulfo nyl-B-alanine, en association avec un véhicule pharmaceutique convenable. Les compositions de la présente invention peuvent être administrées par voie orale et, en relation avec ces modes, le"véhicule pharmaceutique" est de préférence l'excipient (pouvant être ingéré) d'un comprimé (tablette 1), d'un comprimé revêtu, d'un comprimé sous-lingual ou d'une pilule ; le récipient (pouvant Aetre ingéré) d'une capsule ou d'un cachet ; le support solide pulvérulent (pouvant être ingéré) d'une poudre ou le milieu liquide (pouvant entre ingéré) d'un sirop, d'une solution, d'une suspension ou d'un élixir. La présente invention sera maintenant décrite en relation avec les dessins ci-åoints dans lesquels La figure 1 représente les effets prophylactiques des produits dits KH-125 et 6-MP sur l'arthrite due à un adjuvant. Les produits pharmaceutiques ont été administrés par voie orale une fois par Jour pendant 17 Jours, en partant du jour de l'inJection de l'adJuvant. Sur cette figure, A, B représentent les changements de gonflement du pied où l'on a ingéré l'adjuvant, et C et D représentent les changements de gonflement du pied où l'on n'apasinjecté l'adJuvant, E indiquant l'évaluation de l'arthrite, le 21ème après l'inJection de l'adjuvant, i indiquant que le résul tat est nettement différent du contrôle, p ( Oxo1. La figure 2 représente l'effet du produit KH-125 sur l'indice de fusion, l'épaisseur de membrane de base et l'albuminurie chez les rats atteints de néphrose. L'albuminurie a été mesurée 18 jours après l'injection de néphrotoxine puis, pour l'examen au microscope électronique, les rats ont été tués 2 jours plus tard. Les lignes verticales représentent l'erreur standard, , ii indiquent des résultats nettement différents du contrôle, respectivement p 0,05 et 0,01. Indice de fusion = Nombre d'intervalles dans l'excroissance du pied Longueur de la boucle capillaire glomérulaire dans la couche pâle extérieure La partie ayant des petits points représente l'indice de fusion. La partie hachurée indique l'épaisseur de la membrane de base. La partie blanche indique l'albuminurie. La figure 3 représente la comparaison du produit KH-125 avec d'autres agents immunosuppressifs, en ce qui concerne l'indice de fusion, l'épaisseur de la membrane de base et l'albuminurie. L'albuminurie a été mesurée 18 Jours après l'injection de néphrotoxine puis, pour l'examen au microscope électronique, les rats atteints de néphrose ont été tués 3 jours plus tard. Les autres détails sont tels qu'indiqués pour la figure 2. Pour mieux illustrer la présente invention sans aucune limitation, on donne les exemples suivants EXEMPLE 1 Préparation d'hydrazide de N-benzènesulfonyl-B-alanine Dans une solution de 7,5 g d'ester éthylique de N-benzène sulfonyl-(3-alanine dans 20 ml d'éthanol, on a lentement ajouté 2,1 g d'hydrate d'hydrazine à 80 % et puis le mélange a été soumis au reflux pendant 6 heures. Après refroidissement, les cristaux séparés ont été rassemblés et recristallisés dans 1 'méthanol pour donner 5,8 g d'hydrazide de N-benzènesulfonyl--alanine sous la forme de plaques incolores ayant un point de fusion de 135 - 1370C. Analyse : C9H13N3 3S Calculée : C %, 44,44 ; H %, 5,39 ; N %, 17,28 Trouvé : 44,52 5,41 17,45 EXEMPLE 2 Des tablettes ont été préparées en mélangeant et en granulant selon des techniques pharmaceutiques connues,les ingrédients suivants Ingrédient m v tablette - KH-125 50 - Lactose 105 - Amidon de mals 25 - Stéarate de magnésium 0,9 - Hydroxypropylcellulose à 5 ffi quantité convenable EXEMPLE 3 Des tablettes ont été préparées en mélangeant, en granulant, en transformant en tablettes et en revtant, selon des techniques pharmaceutiques connues, les ingrédients suivants Ingrédient mg/tablette - KH-125 50 - Lactose 100 - Cellulose cristalline 15 - Amidon de mals 15 - Stéarate de magnésium 0,9 - Hydroxypropylcellulose à 5 % quantité convenable EXEMPLE 4 Des tablettes ont été préparées selon des techniques pharmaceutiques connues, par exemple en utilisant les ingrédients suivants Ingrédient mg/capsule - KH-125 50 - Lactose 100 - Amidon de maIs 100 - Stéarate de magnésium 1 EXEMPLE 5 Une formulation pulvérulente est préparée selon des techniques pharmaceutiques connues à partir des ingrédients suivants Ingrédient mg/Préparation pulvérulente - KH-125 50 - Lactose 450 EXEMPLE 6 Une suspension pour l'administration orale est préparée selon les techniques pharmaceutiques connues à partir des ingrédients suivants Ingrédient - KH-125 50 mg - Sel de sodium de carboxyméthylcellulose 300 mg - Sirop simple 50 ml EXEMPLE 7 Des granulés sont préparés selon des techniques pharma ceutiques connues à partir des ingrédients suivants Ingrédient - KH-125 50 mg - Lactose 30 mg - Amidon de pomme de terre 15 mg - Cellulose cristalline 20 mg - Hydroxypropylcellulose à 5 % quantité convenable EXPERIENCE A Toxicité aiguë de 1 'hydrazide de N-benzènesulfonyl-ss-alanine (KH 125) La toxicité aiguë du produit KH-125 a été étudiée chez les deux sexes de souris ddY et de rats Wistar. Les valeurs de DL50 ont été calculées par le procédé de Litchfield et Wilcoxon (J. Pharmacol. Exptl. Ther., 96, 99, 1949). Les valeurs de DL50 (mg/kg) du produit KH-125 étaient les salivantes : 1520 (per os), 1230 (voie intrapéritonéale) et 1150 (voie sous-cutanée) chez les souris maies ; 1570 (per os), 1410 (voie intrapéritonéale) et 1440 (voie sous-cutanée) chez les souris femelles ; > 4000 (per os), 2150 (voie intrapéritonéale) et > 4000 (voie sous-cutanée) chez les rats ; > 4000 (per os; 2580 (voie intrapéritonéale) et 54000 (voie sous-cutanée) chez les rates. Aucune différence due au sexe n'apparaissait en relation avec la toxicité aiguë. EXPERIENCE B Etalde de la toxicité chronique sur l'hydrazide de N-benzènestlfonyl- ss-alanine (KH-125) L'étude de la toxicité chronique du produit KH-125 a été réalisée sur des rats Wistar des deux sexes. Les rats ont été traités par voie orale avec le produit KH-125 pendant 6 mois au niveau de dose de O (contrôle), 10, 20 et 40 mg/kg/Jour. Tous les rats survivaient après un traitement de 6 mois avec le produt KH-125. Le gain de poids corporel était légèrement inhibé dans les groupes à 40 mg/kg/jour. Des études hématologiques ont révélé la diminution, selon la dose, du comptage d'érythrocytes et de l'hémoglobine. Aucun changement remarquable n'était observé dans les activités d'enzyme de sérum par le traitement avec le produit KH-125, sauf que l'on a trouvé des augmentations légères, mais dépendant de lZdoseAe S-GOT et de S-GPT. Aucun effet important sur les symptômes généraux, sur la prise d'aliment, sur l'urinalyse et sur le fractionnement de protéines du sérum n'a été observés Aucun effet toxique qui pourrait être attribué au médicament n'a été détecté dans les examens histopathologiques. EXPERIENCE C Effet suppressif de l'hydrazide de N-benzènesulfonyl--a1anine (KH125) sur la production d'anticorps contre les érythrocytes de mouton L'effet du KH-125 sur la production d'anticorps chez les souris ddY a été examiné par la technique de plaque de Cunningham et Szenberg (Immunology, 14, 599, 1968) et comparé à d'autres agents. Les souris ont été immunisées par injection intraveineuse d'érythrocytes de mouton lavés (4 x 108 cellules/souris). L'administration du produit KH-125 a été réalisée par voie orale pendant 4 jours consécutifs à partir du jour de l'injection d'antigène. Les cellules formant une plaque 19S (PFC) ont été comptées 4 jours après l'immunisation. Tel qusindiqué dans le tableau 1, le KH-125, suivant la dose, supprimait l'apparition de PFC l9S. Dans une expérience comparative, les agents expérimentaux ont été administrés par voie intrapéritonéale pendant 8 jours consécutifs, à partir d'un jour avant l'immunisation. Les PFC 7S ont été comptées 9 jours après l'immunisation. Tel qu'indiqué dans le tableau 2, effet suppressif du produit KH-125 sur l'appari- tion de PFC 7S était supérieur à celui de la prednisolone ou de la 6-mercaptopurine, mais était moins efficace que pour la cyclophosphamide. TABLEAU 1 Effet du produit KH-125 sur le nombre de cellules formant une plaque 195 (administration orale) Dose Nombre Gain moyen Poids de la rate, PFC 19S/106 cellules (mg/kg/ de de poids moyenne t écart de la rate, moyenne jour souris corporel standard - écart standard (g) Contrôle 4 + 0,8 181 + 8 1905 t 267 40 4 + 1,0 135 t 20 1383 + 327 80 4 - 0,8 139 t 9e 368 t 124** 160 4 - 0,5 164 + 14 329 t 46** x, ** : nettement différent du contrle, p 0,05 et 0,01 respec vivement TABLEAU 2 Comparaison de effet immunosuppressif du produit KH-125 avec d'autres agents Agents Dose Nombre Gain moyen Poids de la PFC 7S*/106 cel (/mg/ de de poids rate, moyen- lules de la rate, kg/j) souris corporel ne t écart moyenne ±écart (g) standard (mg) standard Contrôle 6 +1,0 125 t 16 1045 + 202 KH-125 200 6 -4,5 60 t 8sss 233 t 63*** 6-mercap topurine 30 6 0 103 t 12 385 t 83a Cyclophos phamide 20 6 +0,2 87 # 7** 61 # 8*** Predniso lone 4 6 +1,6 116 + 19 706 t 178 Les agents ont été administréspar voie intrapéritonéale pendant 8 Jours consécutifs à partir d'un jour avant l'immunisation. Les cellules formant une plaque ont été comptées 9 jours après l'immunisation. X Addition de sérums de lapin YG anti-souris. u, iii : Nettement différent du contrôle, p EXPERIENCE D Effet suppressif de lthydrazide de N-benzènesulfonyl-ss-alanine (KH 1251 sur l'arthrite due à un adJuvant, chez les rats L'effet du produit KH-125 sur l'arthrite due à un adJuvant chez les rats a été comparé à celui de la 6-percaptopurine. Des rats de Sprague-Dawley ont- reçu une seule inJection intradermique de 0,1 ml d'une suspension huileuse paraffinique liquide de mycobacterium tuberculosis (concentration, 5 mg/ml) dans la zone sous plantaire d'une patte arrière droite.Les agents expérimentaux ont été administrés par voie orale une fois par jour, pendant 17 Jours, en partant du Jour de l'injection d'adJuvant. Les volumes des pieds arrière droit et gauche ont été déterminés par voie volumétrique par immersion des pieds dans liteau. L'évaluation d'arthrite a été obtenue par observation visuelle et calibrée entre 0 et 4+. Dans l'expérience prophylactique sur l'arthrite due à un adjuvant, à la fois le produit KH-125 et la 6-mercaptopurine supprimaient, selon la dose, le gonflement des pieds ayant reçu une in Jection d'adJuvant et n'ayant pas reçu d'injection, et supprimstent également l'augmentation de l'évaluation d'arthrite (voir Figure 1). Trois des 7 rats traités avec 30 mg/kg/Jour de 6-mercaptopurine mouraient durant l'expérience, mais ceux qui avaient reçu le produit KH-125 à une dose aussi élevée que 80 mg.kg/Jour survivaient durant toute la période expérimentale. Quand la comparaison a été faite entre deux médicaments par rapport à la marge de sécurité (c'est-à-dire la dose maxima tolérée dans une administration répétée par rapport à la dose efficace pour la suppression dé l'arthrite due à un adjuvant), on considérait que le produit KH-125 était environ trois fois plus sar que la 6-mercaptopurine. Le retour brusque du gonflement de pied, se produisant après la suppression du produit KH-125, n'était pas très important. EXPéRIENCE E Effet suppressif de lthydrazide de N-benzènesulfonyl-ss-alanine (KH125) sur la néphrite néphrotoxique chez les rats L'effet du produit KH-125 sur la néphrite néphrotoxique chez les rats Wistar a été évalué d'après les trois points suivants : 1) mesures de protéine urinaire, 2) études au microscope électronique, et 3) études au microscope lumineux. Les rats atteints de néphrose ont été testés selon le procédé de Shibata (The Saishin-Igaku, 20, 1089, 1965). Dans une expérience prophylactique, le produit KH-125 a été administré par voie orale deux fois par jour pendant 18 jours, durant 21 jours à partir des 2 Jours précédant l'inJection de néphrotoxine jusqu'à 18 jours après l'injection. La protéine urinaire a été mesurée 18 jours après l'injection de néphrotoxine et puis les rats atteints de néphrose ont été sacrifiés 2 jours plus tard pour des examens histopathologiques.Tel que présenté sur la figure 2, l'albuminurie a été diminuée, selon la dose, par le traitement avec le produit KK-125. Dans les études au microscope électronique, on a observé que l'indice de fusion des excroissances épithéliales du pied était amélioré et l'épaississement de la membrane de base glomérulaire était supprimé par le traitement avec le produit KH-125.Les études au microscope lumineux montraient également une bonne amélioration de la néphrite chez les animaux traités par le produit KH-125. Dans une expérience comparative, des agents expérimentaux ont été administrés une fois par Jour : KH-125, 15 Jours durant les Jours O - 10 et 15 - 18 (per os) ; 6-mercaptopurine (6-MP), 6 Jours durant les jours O - 5 (per os) ; cyciophosphamide, 11 Jours durant les Jours O - 10 (vote intrapéritonéale), et prednisolone i1 jours durant les Jours O - 10 (voie intrapéritonéale), en partant du Jour de l'inJection de néphrotoxine. La protéine urinaire a été mesurée 18 jours après l'injection de néphrotoxine, et puis les animaux ont été sacrifiés 3 jours plus tard pour des examens histopathologiques. Tel qu'indiqué sur la figure 3, la néphrite néphrotoxique était très efficacement supprimée dans le groupe tral- té par le produit KE-125, comme on peut en juger par la diminution de l'albuminurie, l'amélioration de l'indice de fusion des excroissances épithéliales des pieds et la suppression de ltépaississe- ment de la membrane de base glomérulaire. La présente invention n'est pas limitée aux exemples de réalisation qui viennent d'être décrits, elle est au contraire susceptible de variantes et de modifications qui apparattront à l'homme de l'art. REVENDICATIONS 1 - Composition pharmaceutique sous forme de dose orale unitaire, caractérisée en ce qu'elle comprend un support pharmaceutique et environ 20 à 400 mg, par unité, d'hydrazide de N-benzène sulfonyl-B-alanine. 2 - Composition pharmaceutique selon la revendication 1, caractérisée en ce qu'un support pharmaceutique solide est employé. 3 - Composition pharmaceutique selon la revendication 1, caractérisée en ce qu'un support pharmaceutique liquide est employé. 4 - Composition de traitement de l'organisme humain pour supprimer les maladies dites d'auto-immunisation, ou améliorer ltétat de l'organisme humain atteint de ces maladies, à savoir l'arthrite rhumatismale, le lupus érythémateux systémique, la purpura hémorragique idiopathique, l'anémie hémolytique, l'hépatite chronique, la néphrose, la néphrite chronique, la colite ulcérative, l'asthénie bulbo-spinale et la polynévrite, caractérisée en ce qu'elle renferme une quantité pharmaceutiquement efficace d'une composition selon la revendication 1. 5 - Composition de traitement de l'organisme humain pour supprimer les maladies dites d'auto-immunisation ou améliorer l'état de l'organisme humain atteint de ces maladies, telles qu'in- diquées dans la revendication 4, caractérisée en ce qu'elle renferme, sous forme de dose orale unitaire, un support pharmaceutique et de l'hydrazide de N-benzènesulfonyl-ss-alanine.