FR 2291765 A1 19760618 FR 7438234 A 19741121 Le présent brevet concerne la préparation de sites actifs anti-mitigénique des lectines,pouvant être utilisés dans le traitement des cancers. Les lectines sont des protéines extraites de plantes, connues pour leurs propriétés rythroagglutinante et lymphostimulante. De plus les lectines ont la propriétS d'arrêter la croissance des cellules tumorales et d'augmenter celle des cellules normales. Pour qu'une lectine agisse sur la croissance d'une cellule il faut que cette lectine se fixe sur la cellule. Il a été montré que les sites récépteurs cellulaires des lectines sont différents s'ils se trouvent à la surface de cellule normale ou tumorale.Ces deux types de sites récepteurs cellulaires ont été isolés et analyses. S'il existe deux types de sites récepteurs cellulaires différents les lectines doivent posséder deux types de sites actifs,l'un mitogénique se fixant sur les cellules @@@@ ales et l'autre anti-mitogénique se fixant sur les cellules tumorales.En complexant au préalable la lectine avec le site récepteur isolé de la cellule normale,on constate que cette lectine n'a plus d'action sur l'augmen- tation de la croissance des cellules normales mais quelle concerve toujours la propriété d'arrêter la croissance des cellules tumorales. Ces lectines ont été proposees pour le traitement des cancers. Or ces lectines ont de gros poids moléculaire et donc un pouvoir antigénique ixportant,ce qui limite le nombre de leurs injections dans un organise vivant. Ce que propose l'invention est d'obtenir les sites actifs des lectines par une action protéolytique modérée dans le but de réduire le poids moléculaire de ces composés ainsi que leur pouvoir antigénique.Ce qui permet leur injections répétées et à forte dose.tes sites actifs mitogéniques, augmentant la croissance des cellules normales, sont complexés dans la proportion de ss avec les sites récepteurs des cellules normales ou avec leurs homologues hapténiques. Les 10% de sites actifs non complexés ont une action lymphastimulante augmentant les réactions de défense imsunitaire de ltorganisme vis à vis des cellules tumorales. La préparation des sites actifs des lectines se fait par dissociation et protéo- lyse modérée à pH 7,5 des lectines en présence d'agents chélateurs et d'enzymes protéolytiques dans des conditions de température et de durée n'altérant pas l' activité biologique des sites actifs isolés.Les deux types de sites actifs sont libérés.On complexe à pH 7,5 les sites actifs mitogéniques avec les sites récepteurs de cellules normales ou par leurs homologues hapténiques.Ceci empèchera leur action ultérieure sur les cellules normales de l'organisme lors de l'injection.La séparation des sites actifs de faible poids moléculaire se fait par gel-filtration sur colonne de Séphadex équilibrée dans une solution de chlorure de Sodium 0,15M et de bicarbonate de Sodium 0,01M à pH 7,5.Du fait des propriétés lymphostimulantes des sites actifs mitogéniques des lectines ceux-ci set ajoutés à raison de 10 parties pour 90 parties de sites actifs anti-mitogéniques.La proportion de 90/10 peut varier selon l'effet lymphostimulanst escompté. Les sites actifs des lectines ainsi isolés peuvent être utilisés dans le traitement des cancers Leur faible poids moléculaire les und pas ou très peu antigé niquesce qui permet leur injection répétée dans l'organisme malade. Le controle de l'activité biologique des lectines et des sites actifs isolés se fait de plusieurs façons: 1-Contrdle du pouvoir érythroagglutinant des lectines. Les lectines ongle pouvoir d'agglutiner les globules rouges de diverses va riétés animales. 1,5 g de lectine agglutine en trois minutes 5 1 d'une sus pension de globules rouges à 4, le volume final de la réaction est ajusté à 40 1 avec du sérum physiologique. 2-Contrdle du mouvoir mitogénique des lectines. La figure n01 représente la croissance de cellules normales dans un milieu de culture approprié (Témoin) et en présence de 3 g de lectine dans ce milieu (Lectine). On constate qu'en présence de lectine le nombre de cellules a doublé au bout de 72 heures de culture. 3-Contr5le du mouvoir antimitogénique des lectines. La figure n02 représente la croissance de cellules tumorales dans un milieu de culture approprié(Témoin) et en présence de 3 g de lectine (Lectine). On constate qu'en présence de lectine le nombre de cellules reste le même. 4-Controle du pouvoir antimitogénique des sites actifs isolés. La figure n03 représente la croissance de cellules tumorales (Témoin) et en présence de sites actifs des lectines (Sites actifs).En présence de ceux-ci Les cellules tumorales ne se multiplient plus. 5-Contrle du pouvoir mitozénique des sites actifs isolési La figure n04 montre la courbe de croissance de cellules normales dans un milieu de culture approprié (Témoin) et en présence de sites actifs de lectines (Sites actifs).On constate que la croissance des cellules est fortement accrue apres 72 heures de culture. 6-Contrôle de la disuarition du pouvoir mitogénique apres complexion des sites actifs avec les sites récepteurs de cellules normales. La figure n04 représente la croissance de cellules normales (Témoins) et en présence de sites actifs isolés des lectines qui on été complexés avec les sites récepteurs cellulaires ou avec leurs homologues hapténiques (Si tes actifs complexés). On constate que le pouvoir mitogénique de ces sites actifs a disparu et que la courbe de croissance est identique à celle du témoin. R E V E N D I C A T I O N S. 1-Méthode générale de préparation des sites actifs de lectines ,ayant un fai ble poids moléculaire et bon antigénique pouvant être utilisés comas anti mitotiques dans le traitement des cancers. 2-Méthode selon la revendication n01, caractérisée par le fait que les sites actifs sont obtenus par protéolyse modérée des lectines en présence d' agents complexants les métaux bizalen*s;Les conditions d'hydrolyse variant légèrement d'une lectine à l'autre. 3-Méthode selon la revendication n01 caractérisée par le fait que les sites actifs obtenus sont de faibles poids moléculaires et non antigéniques. 4-Méthode selon la revendication n01 caractérisée par le fait que les sites mitogéniques librés des lectines sont complexés et inactivés par les sites récepteurs des cellules normales ou par leurs homologues hapténiques.