FR 2260330 A1 19750905 FR 7404096 A 19740207 La présente invention a pour objet le N-oxynicotinate de pyridoxine, son procédé de préparation et son application en thérapeutique. Le N-oxynicotinate de pyridoxine selon l'invention répond à la formule suivante I1 est préparé par addition dTune solution hydroalcoolique d'acide N-oxynicotinique à une solution alcoolique de pyridoxine. La préparation suivante est donnée à titre d'exemple pour illustrer l'invention. EXEMPLE : N-oxynicotinate de pyridoxine On prépare une solution de 21 g de pyridoxine dans 60 cm3 d'éthanol à 950 et une solution de 14 g d'acide N-oxynicotinique dans un mélange de 180 cm3 d'éthanol à 950 et de 65 cas d'eau. On mélange les deux solutions et on chauffe au reflux pendant I heure. On évapore à sec sous vide et ajoute de l'éthanol absolu au résidu gommeux de façon à le faire cristalliser. On essore et recristallise dans l'alcool isopropylique. On obtient ainsi, avec un rendement de 56 X, des cristaux blancs présentant un point de fusion de 1300 C. Le N-oxynicotinate de pyridoxine a fait l'objet d'une étude pharmacologique, et a montré chez le rat une activité hypolipémiante sur l'hvperlipémie provoquée et sur la lipémie normale. 1.- Action sur l'hyperlipémie provoquée par le "Triton WR 1339" La technique utilisée pour provoquer l'hyperlipémie est la technique de Garattini et collaborateurs, telle que décrite dans "Drugs affecting lipid metabolism" - 1961 - pages 144-157, aux éditions Elsevier Ansterdam, et l'appellation "Triton WR 1339" désigne une substance tensio-active répondant à la formule où R = CH2 - CH2 - O - (CH2 - CH2 )n CH2 CH2 OH m et n étant des entiers au moins égaux à 1. L'activité du composé selon l'invention est appréciée en référence à celle du p-chlorophénoxy-2 isobutyrate d'éthyle, bien connu comme régulateur du métabolisme du cholestérol et des lipides sanguins. Les substances à étudier sont administrées par voie orale en même temps que le Triton. Les mesures biologiques sont pratiquées sur le sérum 18 heures après le traitement. Il s'agit - de l'appréciation des B-lipoprotéines par la méthode au phénol de KUNKEL, rapportée par Fleury P. dans les "Fiches techniques de chimie biologique" éditees par Véga ; - du dosage du cholestérol total et libre selon la méthode préconisée par As sous et collaborateurs et rapportée dans le "Bulletin de la Société de Chimie Biologique" 1962, 44, n" 11, cette méthode utilisant la technique de ZAK modifiée telle que décrite dans le "Journal of Laboratory and Clinical Medecine" - 1953, 41, 486-492. La quantité de cholestérol estérifié renfermée dans le sérum est obtenue par différence entre la quantité de cholestérol total et la quantité de cholestérol libre, - du dosage des lipides totaux, par la méthode de Zollner N. et Kirsch K., cette méthode étant fondée-sur le fait que le réactif sulfo-phospho-vanillique donne, par réaction sur les lipides, une coloration dont I'inteasité est lue au spectrophotomètre à 530 nanometres, et - du dosage des triglycérides que l'on effectue de la manière suivante : après absorption du sérum sur zéolithe, on extrait les triglycérides par l'alcool isopropylique, et saponifie l'extractum par la potasse ; le glycérol obtenu est oxydé en formol qui donne, avec l'acétylacétone une coloration jaune, dont l'intensité est lue au spectrophotomètre à 410 nanometres. Les résultats obtenus sont rapportés dans le tableau I suivant TABLEAU I CHOLESTEROL Composés (Dose (DL 50) s (Dose adm.) r ss-lipo Lipides Triglytestés adm.) r (mg/kg/po) (DL 50) s total libre asté- protéines totaux cérides (mg/kg/po) rifié (unités (g/1) (g/1) (g/1) Vernes) (g/1) (g/1) Néant témoins - - - 0,59 0,28 0,31 25 3,75 0,85 absolus) Triton (200 mg/kg/ - - - 2,23 0,99 1,24 131 17,12 8,66 i.v.) p.chlorophénoxy-2 isobutyrate d'éthyle 1000 1200 0.8 1,81 0,84 0,97 129 19,11 9,54 +Triton (200 mg/kg/ i.v.) N-oxynicotinate de pyridoxine 1250 > 5000 0,25 1,72 0,78 0,94 121 13,52 5,26 +Triton (200 mg/kg/ i.v.) r: chez le rat s: chez la souris Ce tableau montre clairement que le composé selon l'invention présente une activité antihypercholestérolémiante et antihyperlipémiante nettement supérieure à celle du p-chlorophénoxy-2 isobutyrate d'éthyle pour une dose administrée correspondant à un rapport dose administrée trois fois moindre. dose léthale 2.- Action sur la lipémie normale Les dosages réalisés sur le sérum sont semblables à ceux déjà mentionnés. Il faut y ajouter deux éléments - le poids du foie frais, prélevé et pesé rapidement après sacrifice et saignée de l'animal ; le poids obtenu est ramené à 100 g de poids corporel - la teneur en eau du foie : après dessication du foie frais à l'étuve à 700 C jusqutà poids constant, la teneur en eau du foie représente la différence entre le poids du foie frais et le poids du foie desséché. Elle est ramenée à 100 g de foie frais. Le N-oxynicotinate de pyridoxine a été testé de deux manières : lors de l'administration unique et lors de l'administration répétée. a) Cas d'administration unique Les résultats obtenus avec le N-oxynicotinate de pyridoxine sont comparés à ceux obtenus avec des animaux non traités (témoins absolus). Le tableau Il indique les moyennes obtenues dans le cas d'une administration unique. TABLEAU II Cholestérol Poids du Teneur ss-lipo- Lipides Trigly- foie frais en eau Composés protéines total libre esté- totaux cérides pour 100g pour testés (unités rifié de poids 100 g de vernes) (g/l) (g/l) (g/l) (g/l) (g/l) corporel foie frais (g) Néant (témoins 30 0,59 0,41 0,18 3,77 0,32 2,45 66,4 absolus) N-oxynico tinate de pyridoxine 21 0,35 0,26 0,10 2,88 0,60 2,51 61,4 (2 500 mgI kg/p. o.) Il ressort de ce tableau que l'administration unique de N-oxynicotinate de pyridoxine diminue la cholestérolémie et la lipémie normales, la teneur en triglycérides étant augmentée. Simultanément, le poids du foie frais reste sensiblement constant, la teneur en eau du foie diminuant de 8 % environ. b) Cas d'administration répétée Les dosages réalisés sur le sérum sont semblables à ceux déjà décrits et sont pratiqués après 3 jours de traitement. Le poids du foie frais, la teneur en eau du- foie et le débit biliaire sont mesurés après 4 jours de traitement. Le débit biliaire est mesuré selon la technique de ROZE Cl. (telle que décrite dans le Journal de Pharmacologie PARIS, 1971, 2, 2, 175-182), 1, 2 et 3 heures après traitement. Les résultats obtenus avec le N-oxynicotinate de pyridoxine, ceux mesurés sur des témoins absolus et ceux obtenus par administration d'un produit de référence, à savoir le p-chlorophénoxy-2 isobutyrate d'éthyle, sont rapportés dans les tableaux III et IV suivants TABLEAU III CHOLESTEROL Composés (Dose administrés) (Dose administrée) ss-lipo- Lipides Trigly testés (mg/kg/po) (DL 50) s total libre esté- protéines totaux cérides rifié (unités (g/l) (g/l) (g/l) Vernes) (g/l) (g/l) Néant - - 0,58 0,29 0,28 25 4,91 1,35 (témoins absolus) p.chlorophénoxy-2 500 0,4 0,32 0,19 0,12 16 2,46 0,75 isobutyrate d'éthyle N-oxynicotinate de 1 250 0,55 0,30 0,25 27 3,93 0,48 pyridoxine r: chez le rat s: chez le souris TABLEAU IV MESURE DU DEBIT BILIAIRE Poids Pourcentage Teneur Composés du foie d'augmen- en eau 1 h après 2 h après 3 h après testés (Dose adm.) frais tation pour traitement traitement traitement (DL 50)s pour du poids 100 g 100 g du foie de foie quantité augm. quantité augm. quantité augm. de poids frais recueillie débit recueillie débit recueillie débit corporel (%) (g) (g) (%) (g) (%) (g) (%) Néant - 3,03 - 70 0,7337 - 0,7122 - 0,7249 (témoins absolus) p.chorophénoxy-2 isobutyrate 0,4 4,33 43 70 1,0491 43 0,9371 32 0,9139 26 d'éthyle N-oxynicotinate de 3,33 10 71 0,9230 26 0,8819 24 0,8364 15 pyridoxine r: chez le rat s: chez la souris Ces tableaux permettent- deux comparaisons A.- ils permettent de comparer l'action du N-oxynicotinate de pyridoxine, en cas d'administration répétée, à son action en cas d'administration unique, et B.- ils permettent de comparer l'action duN-oxynicotinate de pyridoxine, à celle du p.chlorophénoxy-2 isobutyrate d'éthyle. A.- On observe tout d'abord que l'administration répétée du N-oxynicotinate de pyridoxine ramène la cholestérolémie, la teneur en J3-lipoprotéines et la teneur en eau du foie à des valeurs approchant la normale. En rapprochant ces résultats de ceux rapportés dans le cas d'administration unique il apparaît que, tandis que l'administration unique du composé selon l'invention entraîne une hypocholestérolémie et une hypolipémie, l'administration répétée de ce composé ramène les grandeurs en cause vers la normale. Le composé selon l'invention a donc une action régulatrice du métabolisme du cholestérol et des lipides sanguins. B.- Ces tableaux montrent que, par administration répétée du N-oxynicotinate de pyridoxine à une dose correspondant à moins du quart de la dose léthale, on se rapproche plus vite des valeurs normales de la cholestérolémie, de la lipémie, du poids du foie et du débit biliaire que par administration répétée de p.chlorophénoxy-2 isobutyrate d'éthyle à une dose supérieure à 0,4 fois la dose léthale. Le composé selon l'invention a donc une action régulatrice du métabolisme du cholestérol et des lipides sanguins supérieure à celle du composé de référence. 3.- Action sur l'hyperlipémie provoquée par un régime alimentaire enrichi en lipides et en cholestérol. Des lots de rats sont soumis pendant 3 semaines à un régime alimentaire défini comme suit cholestérol 1 1 g saindoux............................ 30 g aliment U.A.R. (qualité entretien) q.s.p. 100 g l'appellation "aliment U.A.R." désignant un aliment commercialisé pour l'Usine d'Alimentation Rationnelle. Ce régime débute en même temps que le traitement. Les animaux sont traités quotidiennement par voie orale, avec le N-oxynicotinate de pyridoxine ou le produit de référence, à savoir le p.chlorophénoxy-2 isobutyrate d'éthyle. Parallèlement, des animaux témoins sont tubés avec le véhicule de mise en suspension des substances (gomme arabique). On mesure d'une part la cholestérolémie et, d'autre part, le poids du foie frais. a) Mesure de la cholestérolémie La cholestérolémie initiale de chaque lot est notée avant tout traitement. Les variations de la cholestérolémie sont enregistrées chaque semaine, pendant les trois semaines du traitement. Seul, le cholestérol total est dosé, par la méthode de ZAR (telle que décrite par ZAK B. dans l'Amorican Journal of Clinical Pathology, 27, 583, 1957) adaptée en microméthode. Les résultats sont exprimés en pourcentage de variation cholestérolémie moyenne - cholestérolémie moyenne initiale X 100 cholestérolémie moyenne initiale (on note + s'il s'agit d'une hypercholestérolémie par rapport à la cholesté rolémie initiale). . pourcentage d'action (%variation cholestérolémie) témoins - (70variation cholestérolémie)traités X 100 (% variation cholestérolémie) témoins et rassemblés dans le tableau V. b) Mesure du poids du foie frais Le poids du foie frais, après trois semaines de traitement, est exprimé en g et ramené à 100 g de poids corporel. Les résultats sont rapportés dans le tableau VI suivant. TABLEAU V CHOLESTEROLEMIE (Dose avant Produit adminis- (Dose adm.)r trai- 1 semaine après 2 semaines après 3 semaines après administré trée)r (DL 50)s tement le début du traitement le début du traitement le début du traitement moyen- moyen- % % moyen- % % moyen- % % ne ne varia- d'action ne varia- d'action ne varia- d'action (g/l) (g/l) tion (g/l) tion (g/l) tion Solvant 10 ml/ - 0,86 1,36 + 58 - 1,45 + 67 - 1,52 + 77 (témoins kg/po absolus) p.chlorophénoxy-2 500 mg/ 0,4 0,80 1,29 + 61 0 1,15 + 44 34 1,29 + 61 21 isobutyrate kg/po d'éthyle N-oxynicotinate de 500 mg/ 0,1 0,89 1,91 + 115 0 1,27 + 43 36 1,25 + 40 48 pyridoxine kg/po r: chez le rat s: chez la souris TABLEAU VI Poids du foie pour % d'augmentation Produit (Dose (Dose administrée) 100 g de poids du poids du foie administré administrée) r (DL 50) s corporel Solvant - - 4,44 (témoins absolus) p.chlorophénoxy-2 isobutyrate 500 mg/kg/po 0,4 5,21 17 d'éthyle N-oxynicotinate 500 mg/kg/po 0,1 4,77 7 de pyridoxine Le tableau V montre que l'action hypocholestérolémiante du N-oxynicotinate de pyridoxine se fait sentir deux semaines après le debut du traitement, et atteint une activité de près de 50 % après trois semaines de traitement. On voit également sur ce tableau, en comparant les pourcentages d'action du N-oxynicotinate de pyridoxine et du p.chlorophénoxy-2 isobutyrate d'éthyle, que le composé selon l'invention est plus actif que le composé de référence, pour une dose administrée correspondant à une fraction moindre de la dose léthale. On observe par ailleurs sur le tableau VI que le poids du foie est moins modifié par administration du composé selon l'invention que par administration du p.chlorophénoxy-2 isobutyrate d'éthyle. Le composé selon l'invention paraît donc, dans ce cas encore, plus actif que le composé de référence. Finalement, le nouveau composé de l'invention peut avantageusement être utilisé en thérapeutique humaine et en thérapeutique vétérinaire en considération de ses propriétés hypocholestérolémiantes et normolipémiantes et de la faible valeur du rapport : dose active DL 50 En particulier, on peut l'administrer dans le traitement - des manifestations athérosclereuses associées ou non à des perturbations lipidiques telles que :: .; insuffisance coronarienne .- pathologie vasculaire cérébrale .- hypertension artérielle ; .- artérite des membres inférieurs .- atteintes vaSculaires du diabete - des perturbations lipidiques isolées telles que hypercholestérolémie isolée, ou associée à une xanthomatose .- hypertriglycêridémie primitive ou induite par les hydrates- de carbone ; hyperlipidémies mixtes ; et - des rétinopathies diabétiques. Le nouveau dérivé peut être présenté en vue de l'administration orale et de l'administration parentérale chez l'Homme et les animaux, notamment en association avec les excipients appropriés à ces voies. Ainsi, par exemple, il peut être présenté sous la forme de comprimés, capsules, gélules, solutions, suspensions ou ampoules injectables. L'unité de prise peut, selon les cas, contenir de 0,1 à 1 g. Un exemple de composition pharmaceutique est le suivant - N-oxynicotinate de pyridoxine ..................... 0,200 g -Lactose .......................................... 0,075 g - Amidon .................................... 0,070 g - Stearate de magnésium ......................... 0,0Q5 g pour un comprimé pesant 0,350 g. REVENDICATIONS 1.- A titre de produit industriel nouveau, le N-oxynicotinate de pyridoxine répondant à la formule générale suivante 2.- A titre de médicament utilisable en thérapeutique humaine et vétérinaire, et, en particulier danse traitement - des manifestations atheroscléreuses associées ou non à des perturbations lipidiques telles que .- insuffisance coronarienne ; .- pathologie vasculaire cérébrale .- hypertension artérielle .- artérite des membres inférieurs ; .- atteintes vasculaires du diabète - des perturbations lipidiques isolées, telles que .- hypercholesterolémie isolée, ou associée à une xanthomatose ; .- hypertriglycéridémie primitive ou induite par les hydrates de carbone ; .- hyperlipidémies mixtes ; et - des rétinopathies diabétiques, le N-oxynicotinate de pyridoxine selon la revendication 1. 3.- Procédé de préparation du N-oxynicotinate de pyridoxine, caractérisé en ce qu'il consiste à ajouter une solution hydroalcoolique d'acide N-oxynicotinique à une solution alcoolique de pyridoxine.