FR 2247212 A1 19750509 FR 7336650 A 19731015 La description de la demande de ce brevet comporte 1 - RESUME il INTRODUCTION 111 @ MATERIEL ET METHODES IV - RESULTATS V " CONCLUSIONS VI - REFERENCES 1 RESUME Le médicament faisant l'objet de l'invention ICIG73, ce qui correspond au sigle de l'Institut de Cancérologie et d'Immunogénétique (IC,IG) et de l'année 1973, date de l'achè- vement de sa mise au point, intéresse le domaine de la Cancé- rologie y compris l'Immunologie. Les résultats obtenus confirment qu'il s'agit d'un ADJUVANT de l'immunite. L'application thérapeutique concernera le comportement immunologique des organismes cancéreux, et le coût sera assez bas, 11 " INTRODUCTION ICIG-73 est un composé d'Edestine avec le cation Ca++ Le choix du Calcium comme un stimulant des lymphoblastes thy- miques est justifié par le fait que cet élément est le prin cipal régulateur de la prolifération de ces cellules in vivo (Balk, Mac Manus, Perris, Rixon, Weiss et Whitfield). Le composant Edestine (Boussangoult, Chibnall, Danielsson, Liebig, Quensel, Sandegren et Saverborn) est une protéine, globuline d'origine végétale. On peut 11 extraire d'une plante monocotylédone - 1 ORGE. Par ultracentrifugation des extraits des grains d'orge, et après dialyse, l'Edestine est précipitée sous forme cristaline. Après séchage, on obtient une poudre, composée de cristaux microscopiques. Dès 1937, QUENSEL et SVEDBERG ont observé l'Hétérogénéité de la fraction "Albumine globuline" de l'orge, soumise à l'ultracentrifugation. Poursuivant ses recherches sur la globuline - Edestine de l'orge, QUENSEL, en 1942, a mis au point un fractionnement de l'extrait de chlorure sodique d'orge par le sulfate d'ammonium, contrôlé par ultracentrifugation à 68.000 touts par minute. quatre constituants ont été identifiés: a) précipité jusqu'à 15 p. 100 de saturation en sulfate d'ammonium - beta globuline; b) précipité entre 40 et p. 100 de saturation en sulfate d'ammonium - alpha, gamma et delta globuline. Caractéristiques de ces constituants: - Alpha globuline, poids moléculaire 26.00, pH=5 - Beta globuline, poids moléculaire 100.00, pH=4.9 - Gamma globuline, poids moléculaire 166.000 pH=5.7 - Delta globuline, poids moléculaire 300.00 pH=? Caractéristiques de l'Edestine 1- Présentation - pudre à cristaux microscopiques 2- Solubilité - en solution isotonique de chlorure de sodium 3- Poids moléculaire - 50.000 4- Toxicité - nulle 5- Structure chimique - composé de 18 acides aminés 6 - Riche en globuline - alpha, beta, gamma et delta, par ordre croissant de leur masse moléculaire 7-Existant sur le marché: a) USA, Sigma Chemical Co.: b) FRANCE, Unionj Chimique Française. - TABLEAU I (Chibnall, A.C.) ANALYSE DE l'EDESTINE FTRACTION PRECIPITES DE MERCAPTIDE - - POIDS % d'EDESTINE HUMINE - - - - - - 1.16 CRYSTINE - - - - - - 1.37 METHIONINE et TYROSINE - - 1.44 TYROSINE BRUT - - - - - 4.13 ACIDE GLUTAMIQUE - - - - 20.50 ACIDE ASPARTIQUE - - - - 11.95 AMMONIAC - - - - - - 2.36 ARGININE - - - - - 110.95 HISTIDINE - - - - - 2.39 LYSINE - - - - - - 2.32 ACIDES AMINES - extraction 1 8.61 ACIDES AMINES - extraction 2 4.71 ACIDES AMINES - extraction 3 12.32 ACIDES AMINES - extraction 4 19.56 PROLINE - - - - - - 3.23 - TABLEAU II (Chibnall, A.C.) STRUCTURE CHIMIQUE DE l'EDESTINE POURCENTAGE D'ACIDE AMINHE DANS l'HYDROLYSE AMINO-ACIDE ARGININE - - - - - - 10.41 HISTIDINE - - - - - 2.41 LYSINE - - - - - 2.37 TYROSINE - - - - - 4.34 TRYPTOPHANE - - - - - 1.50 METHIONINE - - - - - 2.35 CYSTINE - - - - - 1.44 ACIDE GLUTAMIQUE - - - - 20.70 ACIDE ASPARTIQUE - - - - 12.10 AMMONIAC - - - - 2.15 DES RESIDUES AVANT - l'HYDROLISE : ACIDE GLUTAMIQUES - GLUTAMINE - ACIDE ASPARTIQUES - ASPARAGINE III. - LATERAL ET METHODES Deux recherches ont été poursuivies en vue de vérifier l'action de l'IOIG-73, IN VIVO et IN VITRO. 1- IN VITRO Protocole - 0 - Expérience: ICIG - 73 sur une culture de leucémie L-1210, d'après les méthodes de 1(O.E.R.T.C. (Granttini, S. et colls.). 2- Il VIVO Protocole - 2 - Expérience: Action de l'ICIG-73 sur la leucémie L-12104 chez la souris DBA/2. Paramètres 4 1-Leucémie L-1210, une leucémie chimic induite; 2- Souris - lignée DBA/2 - 3 mois d'âge femelles; 3-Début de l'expérience: le 8 septenbre 1973; 4- Voie d'administration - intrapéritionéale 5- ICIG-73 - dose: 0.002 g/souris/IP; 6- Nombre total de souris - 60; 7:-Nombre par groupe - 10. Observations ombre de groupes - 6. T-0 - groupe témoin - sans greffe (L-12104) ni traitement (ICIG-73); T-1 - groupe témoin - greffé (L-12104) au début, une fois et sans traitement (ICIG-73); T-? - groupe témoin - sans greffe et traité les trois fois, GR-1 - groupe traité deux fois et greffé à la fin; GR-2.- - groupe traité deux fois avec greffe interposée; GR - 3 - groupe greffé au début et traité deux fois. TABLEAU Jour-1 (8/9/1973) x Jour-8 (15/9/973 x Jour-15(22/9/973) T-0 - - x - - - x - - 4 T-1 (L-1210) x - - - x - - 1-2 (ICIG-73) x (ICIG-73) (ICIG-75) 4 GR-1 (ICIG-73) x (ICIG-73) x (L-1210) GR-2 (ICIG-73) x (L-12104) x (ICIG-73) GR-3 (L-12104) x (ICIG-73) x (ICIG-73) Protocole 2 - Expérience avec une leucémie virus-induite chez les souris C3HeB/Fe et traitées par l'ICIG-73. Paramètres 1- Culture in vitro de THYMUS VIRUS GROSS(TVG). passage A; 2- Lignée - souris C3HeB/Fe (sans facteur Bittner): 3- Greffe de TVu - une seule fois à un jour d'âge, par voie intrapéritonéale (IP); 4- Leucémie - 100% au bout de trois mois environ, Chronogramme opérationnel I juin 1973 - naissance de 40 souris , mixte; 2 juin - les 40 souris nouvelles nées, greffées avec TVG, 1ml, voie IP; 2 juin 1973 - 20 souris randomisées (mixte) - greffées (TVG) et sans traitement (ICIG-73) -GROUPES TEMOIN. 25 juin 1973 - 20 souris randomisées (mixte) -greffées (TVG) et traitées (ICIG-73) - (GROUP TRAITE) 25 juin 973 - groupe traité- piqué avec ICIG-73, dose=0.002g voie IP; 9 juillet 973 - accouplement dans chaque groupe; 1 août 973 - apparition de name les nées dnas chaque groupe 29 août 973 - mort du GROUPE ZIP 29 août 973 - mort des nouvelles nées du GROUPE TELOIN 11 octobre 975 - mort du GROUPE TRAITE 11 octobre 975 - descendantes du GROUPE TRAITE - vivantes IV - RESULTATS I - IN VITRO - Protocole - 0 ICIG-73, dans ce protocole, n'agit pas comme un cytostatique sur une culture de la leucémie L-1210, IN VITRO II- IN VIVO - Protocole 1 Les résultats concernant ce Protocole illustrent deux faits positifs.Le premier, c'est que les souris traitées (ICIG-73) avant le greffs (L-12104) survivant =100%. D'autre part, les animaux traités (ICIG-73) et avec une greffe (L-1210) interposée, survivent II- IN VIVO - Protocole 2 les essais de l'ICIG-73 sur la leucémie virus- induite par le TVG chez les souris C3HeB/Fe présentent un re- sultat remarquable, même avec une seule dose de 0.002 g au 25ème. jour d'âge. La proportion de la durée de vie entre le Groupe traité et le Groupe témoin est de 150%, ce qui rend l'expérience fort significative. V-CONCLUSIONS 1-Les médicins disposent pour le traitement cytOstatiques ou cytolytique des cancers, de trois types de médicaments: a) ceux de l'hormonothérapie, stéroïdes, androgènes, oestrogènes et progestatifs; b) ceux de la chimiothérapie non hormonale ou cytostatiques; c) ceux de l'immunothérapie, stimulants ou adjuvants "systé miques" de l'imunité. 2- La stimulation immunitaire par d'adjuvant de l'im munité peut faire régresser une tumeur. 3- Le praticien doit avoir à collaborer avec les unités de développement thérmique qui conduisent des essais dtim- munothérapie. Finalement, le produit ICIG-13 se comporte comme un ADJUVANT de l'Immunité. VI - REFERENCES 1- BOUSSANGOULT - Agronomie - Chimie agricole et Physiologie Paris - Lzllet 3 vols. - 186G 2-CHIBNALL , A.C. -Protein -metabolism in plant - London H. Hilford - 1939 3- CHIBNALL, A.C. - Proc. Royal Soc. - London, series n - 1942 4- CHIBNALL, A.C. - Bioch. J. 37 - 1943 5- DANIELSON, C.E. and SAKDEGREN, E. - Acta chem. scand. I, 917 - 1947 6- GARATTINI, S. and colls. - Europ. J. Cancer, vol. 8, pp. 185-196, Pergamon Press - Great Britain - 1972 7- LIEBIG, J. ~ Chimie organique appliquèe à la Physiologie animale et à la Pathologie - 1 vol. - Paris- 1842 8- MAC MANUS, J.P. and WITFIELS, J.F. - Exptil. cell. res. 58 1970 9- MATHE, G. -Rév. Franç. Etudes Clin. et Biol. n 9 -vol. XIII, 881-883, 1968 10- MATHE, G. at colls. - Rév. Franç. Etudes Clin. at Biol. vol. XIII - 695-696, 1968 11- MATHE, G. - Ext. Vol. Thérap. Entretients Bichat - pp. 133 -135, 1971 12- MATHE, G. - La Nouvelle Presse Médicale, I, n 26, 24 juin 1972 13- PERRIS, A.D., WEISS, L.A. and WHITFIELD, J.F. -Am.J. Physiol., 220 - 1971 14- QUENSEL, O. - Untersuchungen über die Gersten Globuline Uppsala - Almquit und Wiksells - 1942 15- RIXON, R.H. and WHITFIELD, J.F. - Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 141 - 1972 16- SANDEGREN, S. - Proc. Eur. Brew. Con. -Scheveningen - 1947 17- SAVERBORN, S., DANIELSON, C.E. & SVEDBERG, T. ~Svensk Kem . Tidsdkr. - 56 - 1944 18- WHITFIELD, J.F., RIXON, R.H., MAC MANUS, J.P. and BILK, S.D. IN VITRO - vol. 8, n 4 - 1973. REVENDICATIONS 1 - Nouvelle substance caractérisée en ce qu'elle est un composé d'Edestine et du cation Calcium. 2 - Nouvelle substance selon la revendication 2, caractéri sée en ce qu'elle est utilisable comme ADJUVANT de l'immunité. 3 - ADJUVANT de l'immunité selon la revendication 3 carac terisée en ce qu'il est utilisable notamment pour le traitement des cancers.