FR 2247258 A1 19750509 FR 7314573 A 19730420 La présente invention concerne un procédé de fabrication de matières absorbantes à fibrilles jouant le role de matrice et de combinaisons ou complexes de ces matières à fibrilles jouant le rôle de matrice avec des médicaments destinés à des fins d'introduction dans les organismes vivants. Les éponges absorbantes fabriquées à partir de collagène ou de gélatine sont d'un usage étendu en chirurgie. Ces éponges ont l'avantage par rapport aux autres matières absorbantes comme la cellulose ou le coton, qu'elles peuvent être laissées dans les cavités corporelles, si on le désire, car elles sont an elle-memes absorbables et non antigéniques. La préparation des éponges collagènes absorbantes est connue dans la technique. D'une façon typhique, une éponge collagène est préparée par congélation de fibrilles de collagène gonflé, traité à l'acide, suivie par la déshydratation avec des solvants orgauiques, comme décrit, par exemple, d?I s les brevets américains nO 3 157 524 et 3 368 911 ou par la lyophilisation, comme décrit, par exemple dans le brevet anglais nO 1 056 007. La préparation d'éponges absorbantes à partir de solutions aqueuses de gélatine accompagnée d'une lyophilisation, est mentionnée par exemple, dans le brevet américain n0 2 166 074. Le collagène est connu comme réagissant avec de nombreux produits pharmaceutiques solubles dans l'eau avec formation d'un complexe produit pharmaceutique-collagène. Dans certains cas, l'objectif est d'obtenir des complexes caractérisés par une action prolongée ou un dégagement lent du médicament comme un agent immunologique ou une vitamine dans des préparations appropriées pour l'administration parentérale. Quand un complexe de ce type est administré à un organisme vivant par voie parentérale, l'action pharmacologique du produit pharmaceutique est notablement prolongée comparativement à 1'effet produit par l'administration du même produit pharmaceutique à la méme dose par lui seul. Le collagène est la protéine fibreuse des tissus eonJonctifs formant presque 30% des protéines corporelles. Un. de ses principales fonctions dans le corps à cdté de sa fonc- tion de support physique est d'agir comme un échangeur dotions fixant les électrolytes, les produits pharmaceutiques et les agents métabolisants. ainsi, il est connu que le collagène fixe dans les tissus des substances telles que des antibiotiques comme la tétracycline, des agents anti-rhumatisme et divers métaux comble l'argellt, le cuivre, le fer et le mercure. L'interaction des protéines du collagène avec des substances comme lthéparine ou les glycoprotéines est bien connue. Le caractère de cette liaison est principelement ionique. Il est bien connu de fixer des produits pharmaceutiques solubles dans un milieu aqueux à du collagène par dispersion à travers une matrice de fibrilles de collagène qui sont ensuite tannées pour conférer des propriétés de dégagement lent et un procédé de ce type est indiqué dans les brevets américains nO 3 435 110 et 3 435 117. La préparation de substances pharmaceutiques à fibrilles de collagène jouant le rible de matrice, conçues pour l'admi- nistration par voie orale, est décrite dans le brevet américain nQ 3 455 110. L'emploi de collagène pour préparer des suspensions stables homogènes huile dans l'eau ou émulsions, est indiqué dans le brevet américain nQ 3 435 117.Le brevet anglais nO 1 056 007 suggère également l'incorporation dans la masse de collagène de substances telles que des matières efficaces du point de vue hémostatique comme la fibrine ou la trombine ou antibiotiques comme la chlorotétracycline suivant des cuan- tités allant jusqu'à 10 en poids/poids de la teneur en substances anhydres de la masse de collagène, la congélation de la masse entre -200C et -700C et la préparation d'une mousse à partir de celle-ci par lyophilisation. Les procédés décrits dans les brevets précités pour la préparation de matières absorbantes analogues à des éponges prennent du temps et sont coûteux. La lyophilisation nécessite l'application d'un vide élevé pendant de longues périodes de temps ainsi qu'une entrée d'énergie considérable. Le cott des solvants organiques est également substantiel. Bien que ces matières puissent être récupérées, le procédé de récupération consomme enlui-même de l'énergie et nécessite un équipement onéreux. On a pensé à un procédé simple et peu coûteux de préparation de telles matières absorbantes analogues à des éponges dans lequel la nécessité des opérations de congélation et de lyophilisation serait supprimée. L'invention crée un procédé de fabrication de matières absorbantes analogues à des éponges, notamment de matières absorbautes à fibrilles jouant le rible de matrice dans lequel la congélation ou la lyophilisation est, en général, évitée ou fortement réduite. L'invention se rapporte, de plus, aux complexes de ces matières absorbantes à fibrilles jouent le rôle de matrice avec des médicaments qui sont sous la forme agencée pour l'introduction dans des organismes vivants pour servir en tant que source de médicament ayant une action prolongée. le procédé de l'invention est avantageusement adapté à la fabrication de matières absorbantes protéiniques à fibrilles jouant le rôle de matrice comme celles fabriquées à partir de collagène ou de gélatine. La mise en oeuvre ae l'invention sera illustrée en référence au collagène mais il convient de noter qu'il s'agit seulement d'un exemple et que llinvention n'est pas limitée à cet exemple. Selon un premier aspect de l'invention, on prépare une matrice protéinique absorbante à fibrilles par un procédé qui consiste : (a) à préparer une dispersion de fibres protéiniques gonflées dans une solution aqueuse ou suspension d'une petite quantité d 1une gomme naturelle ou synthétique, (h) à aJouter à cette solution ou suspension un agent de tannage ou de réticulation (c) à traiter thermiquement la masse de fibrilles à une température au-dessus de la température de congélàtion de la solution ou suspension et (d) à séparer l'eau en excès du mélange et à récupérer la matière absorbante à fibrilles. Le procédé ci-dessus présente de nombreux avantages. Tout d'abord les opérations de congélation ou de lyophilisation sont évitées ou fortement réduites car la préparation est mise en oeuvre initialement à des températures au-dessus de la température de congélation de la solution ou suspension bien qu'on puisse ajouter une brève opération de congélatlon sub- séquente.La matière absorbante protéinique résultante à fibrilles est bien plus économique à produire que les matières fabriquées par les procédés de la technique antérieure. Ville peut être fabriquée sous la forme d 'une bande ou feuille continue de n'importe quelle épaisseur ou largeur désirée et peut entre amenée facilement suivant n'importe quelle forme désirée comme des sphères, des cônes, des cylindres ou analogues par moulage ou pressage. Par contraste aux matrices à fibrilles produites par les procédés de lyophilisation, les produits de l'invention sont capables de fixer les agents thérapeutiques solubles dans liteau, les médicaments ou les substances efficaces du point de vue hémostatisue. Selon des quantités essentiellement supérieures à 10 en poids.En outre, les produits de l'invention sont capables de fixer des produits pharmaceutiques et d'autres agents qui sont insolubles ou difficilement solubles dans l'eau comme, par exemple, les hormones stérordes, les prostaglandines, les vitamnnes -solubles dans les graisses, les agents anti-trichomonas, les agents anti-fongiques ou les vaccins- Les complexes résultants ou combinaisons produit pharmaceutique-matrice absorbante à fibrilles, peuvent être insérés dans les cavités corporelles on peuvent être implantés par voie sous-cutanée ou dans les cavitQs corporelles pour fournir un effet pharmacologique prolongé.Ceci peut entraSner un effet thérapeutique amélioré et des économies d'argent importantes pour un patient comparativement à l'administration journalière classique du même produit pharmaceutique sous la forme de comprimés ou dtinåections, par exemple. La matrice absorbante à fibrilles avec ou sans médicaments incorporés ou analogues, fournit également une matière absorbante peu conteuse adaptée pour étre utilisée dans les processus chirurgicaux. La matière protéinique appropriée pour la préparation de matières absorbantes à fibrilles jouant le rôle de matrice conformément à l'invention, comprend, par exemple du collagène ou de la gélatine. Le collagène est une protéine ayant un poids moléculaire de 1'ordre de 300 000. La gélatine est un collagène dénaturé à la chaleur, une protéine de poids moléculaire élevé extraite de la peau, des ligaments, des os etc... Le collagène peut être obtenu soit par un traitement alcalin, soit par un traitement acide de la matière de départ. Pour l'invention, on préfère utiliser des fibrilles de collagène gonflé à 1 'acide ayant un diamètre compris aans la gamme de 5000 à 90 000 A. La production de collagène gonflé à l'acide à partir de sources appropriées riches en collagène comme les tissus des animaux, les peaux de poissons, les os et analogues est bien connue. L'interaction du collagène gonflé avec les produits pharmaceutiques se déroule de façon optimale car les produits pharmaceutiques ont un meilleur accès aux groupements réactifs du collagène. Le collagène gonflé acquiert également un degré élevé de solubilité dans l'eau ou pouvoir de dispersion comme résultat de l'opération de gonflement. Un procédé général pour accomplir le gonflement du collagène qui est avantageusement utilisé dans la mise en oeuvre de ltinvention, consiste à traiter une s ource de collagène comme la peau d'un veau avec un agent d'extraction aqueux comme une solution d'acide acétique à 0,1$ pendant une période de l'ordre de 24 heures, et à purifier ensuite Itextrait. Cette purification du collagène utilisant la dialyse ou extraction du sel est décrite à la page 210 de ltouvrage nChemistry of Collaient édité par G.s. Ramachandran (Ácademic Press,-New-York 19in7), Le collagène fortement gonflé très soluble ainsi obtenu peut servir Su tant que constituant du complexe produit pharmaceutique-collagène préparé par la suite. La grandeur de l'interaction du collagène avec un produit pharmaceutique donné peut être augmentée par un gonflement accru ou en éliminant de la structure du collagène des composés ou des groupements qui bloquent ou qui masquent les groupements réactifs appropriés du collagène.Une libération des groupements réactifs du collagene-peut étre obtenue par plusieurs procédés comprenant le traitement par des enzymes par ltaction de solutions d'agents lyotropiques comme du perchlorate de sodium ou de l'ioduré de sodium concentré ou en séparant avantageusement le collagène des protéines non collageneuses par dissolution des protéines non collagéneuses dans des solutions concentrées de chlorure de sodium comme, par exemple, des solutions lOX. A cette concentration, les précipités de collagène et les protéines non collagéneuses peuvent étre extraits. Une extraction réputée conduit à une préparation de collagène extrêmement pure.Dans le procédé de llinvention, ce traitement peut etre utilisé en liaison avec le pH acide du traitement de gonflement. Conformément au premier stade du procédé de l'invention, le collagène est dispersé dans une solution ou suspension aqueuse d'une go mme naturelle ou synthétique. La concentration du collagène dans la dispersion est avantageusement comprise dans la gamme de l'ordre de 0,1% à environ 3%,calculée sur le poids sec. Les offies naturelles qui sont appropriées comprennent, par exemple, les tommes végétales comme l'acacia (gomme arabique), la Enraya, la gomme adragante, la caroube, l'agar et les gommes guar qui sont solubles ou susceptibles d'être dispersées dans l'eau. Les matières semi-synthétiaues ayant des propriétés analoues comte la méthylcellulose, la carboxyméthylcellulose ou l1hydroxypropylcellulose, peuvent également être utilisées.De la même façon, on peut employer des gommes synthétiques comme celles vendues sous les dénominations Polyner 1212A, Polyner 705-IB ou Jaguar plus (Stein, Hall and Go. ew-York). La quantité de gomme végétale ou d'autres gommes qui est utilisée conformément à l'invention pour produire une matière absorbante analogue à une éponge, varie suivant le type de la gomme. quand le collagène gonflé est la matière à fibrilles jouant le rôle de matrice, la gomme est utilisée selon des quantités suffisantes pour fournir une concentration finale dans le mélange gomme-col)agène de l'ordre de 0,01 à environ 5% en poids, notamment d'environ 0,05 à environ 0,50 en poids. On a trouvé que la présence de la gomme joue un rôle important pour améliorer les propriétés physiques du produit analogue à une éponge, notamment celui de former une masse cohérente. L'expérience a montré que lorsque la gomme est omise, aucune éponge n'est formée et les fibrilles de collagène se désintègrent simplement. Selon une variante dé l'invention, le collagène ou une autre matière protéinique, peut tout d'abord être dispersé dans l'eau et cette dispersion peut être mélangée avec une solution aqueuse ou dispersion de la gomme mais l'addition de collagène directement à la solution ou dispersion de gomme, comme décrit ci-dessus, est préférée. Conformément au deuxième stade du procédé de l'invention, on ajoute à la dispersion gomme-cdlagène, un agent de durcissement, un agent de tannage ou un agent de réticulation. De préférence, un tel agent de réticulation est un agent renfermant un groupement aldéhyde. Des aldéhydes appropriés sont représentés par les aldéhydes acycliques comme, par exemple, le formaldéhyde, l'acétaldéhyde, le glutaraldéhyde, le pyru valdéhyde (méthyl-glyoxal), -le glyoxal et analogue. On peut également utiliser des agents de durcissement du type amine comme la triméthylolamine et des anhydrides d1acides dicarboxyliques comme l'anhydride maléique. Une combinaison de deux ou plusieurs agents de durcissement, peut étre utilisée avantageusement. Par exemple, un mélange de formaldéhyde et d1anhy- dride maléique est très efficace.Les agents de réticulation sont employés selon les mêmes proportions que la gomme à savoir suivant une quantité comprise entre environ 0,02% et 5% en poids. Pour certains produits, il peut entre désirable d'incorporer diverses charges pour améliorer la résistance et l'aspect final. Des charges appropriées comprennent divers produits naturels comme la cellulose, de préférence, la pate de bois, de la cellulose traitée chimiquement comme du Sephadex ou de ItÂvicel (aggregats de cellulose microcristalline), du coton, des fibres de soie ou diverses fibres synthétiques y compris des polyamides linéaires comme le nylon et des fibres polyesters comme le dacron, ltorlon, etc.. Si on le désire, on -peut également ajouter des agents de ramollissement comme le glycérol, le propylène-glycol ou analogue. En général, la quantité de ces additifs dépend de la nature du produit final. Des matières inertes comme par exemple la pulpe de cellulose, peuvent également être ajoutées selon des quantités aussi importantes que 30% en poids ou plus sans altérer ou détruire la structure de 1 t éponge collagène formée. Avantageusement, une suspension aqueuse du collagène gonflé à 11 acide, est dispersée dans une solution aqueuse d'une gomme végétale ou d'une autre gomme de la concentration dési- rée. La quantité souhaitée de Itagent de réticulation, de l'agent de tannage ou de l'agent de durcissement est ensuite ajoutée. Be pH de la suspension résultante est réglé selon les caractéristiques désirées du produit final, habituellement dans une gamme d'environ 5 à environ 8. Ainsi, une suspension ayant un pH acide, par exemple de l'ordre de 5 à 6,5 fournit un produit final dense ressemblant à un feutre.Ce produit est particulièrement bien approprié pour former un complexe collagène-produit pharmaceutique conçu pour l'insertion ou l'implarltat on quand une aetion à longue durée est désirée. Pour produis une éponge fortement absorbante, le pi de la suspension est, ae préférence, réglé dans une gamme neutre c'est-à-dire de l'ordre de ,5 à 7,5. On peut employer un pH plus alcalin quand on désire produire une matrice absorbante. ressemblant à de la pute. Comme mentionné précédemment, une charge peut être incorporée. La masse est ensuite agitée vigoureusernent pour produire une mousse. Cette agitation peut entre réalisée avec n'iiaporte quel appareil convenable tel que, par exemple, un mélangeur Waring à vitesse élevée. Conformément au stade suivant du procédé de l'inven- tion, la masse à fibrilles obtenue comme décrit ci-dessus, reçoit un traitement thermique à une température supérieure à la température de congélation de la solution ou suspension, habituellement d'environ 0 C et, de préférence, à une température comprise entre environ 0 O et 7 o. La durée du traitement thermique varie selon la quantité d'agent de réticulation utilisée et. est habituellement de l'ordre de 1 à 7 jours0 Cependant, on a trouvé qu'un produit ayant des propriétés améliorées est obtenu, en utilisant une opération subséquente de maintien du produit à une température en-dessous de la congélation pendant une période supplémentaire de quelques heures à quelques jours.Ainsi, le produit après le traitement thermique initial à une température supérieure à la congélation est maintenu pendant 6 heures à 3 jours à une température de l'ordre de OOC à environ -80C. Cependant, il convient de remarquer que cette opération de oongélation supplémentaire n'est pas réalisée nécessairement. Après l'opération de traitement thermique, l'eau en excès est séparée mécaniquement du mélange comme par compression ou filtration et le produit est lavé avec de l'eau et séché si on le désire. Conformément à un deuxième aspect de l'invention, on a trouvé que les produits pharmaceutiques notamment les médicaments, les vitamines et analogues, qui sont essentielle ment insolubles dans l'eau, peuvent être combinés avec du collagène (ou gélatine) qui a été convenablement conditionné au préalable comme décrit précédemment, pour produire un complexe produit pharmaceutique-collagène ayant des propriétés de dégagement lent. Bien que le principe de l'invention soit illustré en regard de produits pharmaceutiques et analogues de faible solubilite dans l'eau ou insolubles dans l'eau, il convient de noter qutil est également applicable à des produits pharmaceutiques solubles dans liteau. La combinaison produit pharmaceutique-collagène de l'invention est obtenue par le. procédé impliquant deux stades essentiels, à savoir : (1) que le collagène soit tout d'abord soumis à un traitement qui provoque qu'il soit fortement gonflé en formant une matrice à fibrilles et réparti dans un milieu aqueux pour que les groupements réactifs du collagène soient plus facilement accessibles aux produits pharmaceutiques et (2) que le produit pharmaceutique soit mis en contact avec le collagène gonflé sous la forme dtune solution dans un solvant organique miscible dans l'eau qui est capable de dissoudre le produit pharmaceutique mais qui ne réagit pas avec le collagène ni ne dissout celui-ci. De cette façon, le produit pharmaceutique dissous dans le solvant organique, est transporté dans la phase de collagène pour former le complexe désiré. Pour la formation d'un complexe collagène-produit pharmaceutique suivant l'invention, on préfère un gonflement sous des conditions acides. Selon ltinvention, le collagène fortement gonflé dans un milieu aqueux, est traité avec une solution du produit pharm2ceutique dans un solvant organique miscible dans 1' eau qui est inerte au collagène. Sans étre lié par une quelconque théorie, on suppose que le mélange du collagène gonflé à la solution de solvant organique du produit pharmaceutique, établit lentement un équilibre entre l'eau, le collagène gonflé et la phase de solvant organique. Le produit pharmaceutique est transe porté dans la structure du collagène gonflé où il est fixé du fait de la différence importante dans la capacité de fixation et de solubilité dans la phase de solvant organique dilue par l'eau. XitimpOrte quel solvant organique miscible dans l'eau qui est inerte vis-h-vis du collagène et qui ne le dissout pas peut être utilisé dans la mise en oeuvre de 1'inveiltion. Parmi les cisses de solvants appropriés, on peut mentionner les alcools aliphatiques inférieurs comme l'alcool méthylique, l'alcool éthylique, l'alcool n-propylique et l'alcool isopropylique, les glycols solubles dans l'eau comme d'éthylènelycol, le propylèneOlycol, les éthers solubles dans 11 eau tels que le dioxane et les cétones de faible poids moléculaire comme l'acétone et la thyl-éthyl-cétone. Cependant, on préfère employer l'alcool éthylique ou l'alcool isopropylique en raison de leurs propriétés physiques avantageuses et de leur faible toxicité connue0 la concentration des produits pharmaceutiques devant étre utilisés dans le solvant orgaÌique, varie fortement en fonction du choix du produit pharmaceutique et du solvant. La proportion de la phase solvant organique-produit pharmaceutique devant être ajoutée à la phase aqueuse-collagène afin d'obtenir un dépôt convenable du produit pharmaceutique à partir du solvant organique dans la phase de collagène, est fonction du coefficient de répartition du produit pharmaceutique entre les deux phases et est importante.Elle est réglée afin que la concentration finale du solvant organique dans la phase aqueuse collagène, soit comprise entre environ 5% et 25* en poids, notamment entre environ 10% et 15 en poids. Toutefois, il n'est pas nécessaire que le produit pharmaceutique soit complètement dissout. On a trouvé, confor mémeift à l'invention, que le produit pharmaceutique peut & re ajouté à la suspension de collagène sous la forme d'une suspension aqueuse. Il peut alors entre souhaitable d'attendre plusieurs heures avant d'ajouter l'agent de réticulation. Ce processus assure une fixation optimale du produit pharmaceutique au collagène avant le tannage ou la réticulation et au moment de la préparation de la matrice absorbante à fibrilles elle-même. Un avantage du procédé de l'invention réside en ce qu'il rend possible de préparer des complexes collagène-produit pharmaceutique contenant plus de 10s an poids de produitspharmaceutiques solubles dans l'eau. Ceci est particulièrement important ouand on désire, parexemple, utiliser des antibio tiques pour avoir des reflets de longue durée. Parti les antibiotiques qui sont capables de former des complexes avec le coll.'-ne, on peut mentionner,å titre d'exemple, la tétracycline, la penicillines l'ampicilline, ètc... Se procédé de l'invention peut également être utilise pour produire des combinaisons de collagène dans lesquelles des composés de métaux à l'état de traces comme du cobalt ou du cuivre, sont fixés et. qui peuvent étre implantés dans des animaux domestiques pour avoir un effet de longue durée pour pallier à la déficience naturelle de ces métaux à l'état de traces lorsqu'elle existe. On obtient notamment des produits de valeur en fixant des vaccins au collagène selon l'invention. Ainsi, par exemple, il est possible de préparer un complexe collagène-saccin qui procure une immunité aux animaux traités avec celui-ci, pendant une période double de celle lorsqu'on a recours à l'administration de vaccins classiques. diverses protéines, polypeptides ou substances actives par chimiothérapie, peuvent également être combinées avec du collagène selon l'invention. Il s'agit, par exemple, des. hormones trophiques de la glande pituitaire comme l'hormone de croissance, la thyrotropine, les gonadotropines et les hormones de l'hypo- thalamus comme l'hormone libérant des substances lutéinisantes, les prostaglandines comme la prostaglandine 31 ou F2&alpha; qui sont des agents de valeur pour induire 1'avortement.Des esters solubles dans l'eau dthormones stéroïdes comme, par exemple, le sel de sodium du sulfate de 3-oestradiol peuvent également être utilisés, Un autre avantage du procédé de l'invention est qu'il rend possible de préparer des complexes de collagène avec des produits pharmaceutiques qui sont seulement faiblement solubles ou insolubles dans liteau. Ces composés eomprennent, par exemple, les hormones stérordes comme la testostérone, l'oestradiol, l'oestriol, la progestérone ou le cortisol. Des hormones progestatives synthétiques comme, par exemple, la noréthindrone, le norgestrel, le diacétate d'éthynodiol ou l'acétate de mégestrol, peuvent également être utilisées.Les hormones stéroïdes fixées au collagène, fournissent des effets de valeur agissant ffi leggus durée. Ainsi, par exemple, un complexe collagène-pro gestérone fournit un effet d'anti-fertilité lorsqu'il est implanté par voie sous-cutanée ou lorsqu'il est inséré dans l'u éros. Un complexe ae collagène et d'oestrauiol ou d'oestriol, réalisC avant & eusement sous la forme d'un tampon, est approprié pour le traitement d'une vaginite sénile lorsqu'il est inséré dans le vagin car les effets systémiques indésirables de l'oestrogène sont réduits. Conformément au procédé de l'invention, il est possible de fixer plus d'un produit pharmaceutique au collagène. Ainsi, à titre d'exemple, on obtient un produit de valeur en fixant au collagène un produit pnarmaceutique anti-trichomonas comme le métronidazole, un agent anti-fongique comme la nystatine antibiotique et un agent anti-bactér en comme un des sulfona mides. Le complexe résultant collagène-plusieurs produitspharmaceutiques, quand il est sous la forme d'un tampon, est particulièrement approprié pour le traitement dtinfections vaginales, car il dégage les ingrédients actifs et agit comme une éponge absorbante en meme temps. Des exemples supplémentaires de produits pharmaceutiques qui peuvent entre fixés au collagène selon l'invention pour fournir une préparation à longue action, sont représentés par les divers agents anti-helmintiques et anti-tiques utilisés dans l'art vétérinaire. les exemples suivants illustrent de façon non limitative la mise en oeuvre de l'invention. Préparation de l'éponge collagène Exemple 1 On utilise deux litres de suspension de collagène gonflé à l'acide, refroidie à environ 5 C, renfermant 1,59 en poids de matière anhydre. On aboute suffisammeat de gomme d'acacia pour avoir une concentration finale de 0,25 en poids. La suspension est neutralisée à environ pli 7,0 par addition de 20 ml d'une solution d'hydroxyde de sodium 2. On incorpore ensuite 15 ml de solution aqueuse à 40* de formaldéhyde et la masse est agitée rapidement pendant environ 10 secondes, le produit analogue à une mousse est versé dans des plateaux an acier inoxydable et amené à subir un traitement thermique pendant sept jours à 20C. Il est ensuite retiré du réfrigérateur, l'eau en excès est éliminée mécaniquement, l'éponge est lavée à l'eau de ville et séchée. L'éponge résultante montre des propriétés d'absorption élevées. Exemple 2 On répète l'exemple 1 sauf qu'à la place du formaldéhyde, on utilise 20 ml d'une solution aqueuse à 25* de glutaraldéhyde. L'éponge résultante montre des propriétés d'absorption analogues a l'éponge produite selon le procédé décrit à l'exemple 1. Exemple 3 On répète l'exemple 1 sauf qu'on utilise pour élever le pli à environ 8,5, une quantité supplémentaire de solution d'hydroxyde de sodium 2N. En utilisant ce procédé, on obtient une matière ressemblant à une pate plucheuse qui est environ deux fois aussi absorbante que la Date à papier disponible dans le commerce. Exemple 4 On mélange 100 ml de suspension de collagène gonflé à l'acide avec suffisamment de solution aqueuse à 3 de gomme d'acacia pour avoir une concentration finale de 0,01% et on ajoute suffisamment de solution aqueuse d'hydroxyde de sodium 2N pour régler le pi de la solution à environ 5. La suspension est mélangée, versée sur un plateau pour former une couche d'une épaisseur de l'ordre de 1 cm et refroidie dans un compartiment de congélation pendant 8 heures. Le plateau est conservé ensuite pendant 3 jours à +5 C. L'eau en excès est éliminée, le produit résultant est lavé dans de 11 eau de ville et séché.On forme une membrane analogue du parchemin et on trouve qu'elle est appretriée en tant que produit de substitution de la peau arti ficielleou pour la dialyse. exemple 5 On mélange 100 ml de suspension de collagène gonflé à l'acide renfermant 3% en poids de matière anhydre avec 100 ml de solution aqueuse à 0,1* de gomme d'acacia, le pH de la suspension est réglé avec une solution aqueuse d'hydroxyde de sodium 2S à environ 8 en utilisant comme indicateur du rouge ae crésol et la suspension esb malaxée cyans un mélangeur iiarinw à la consistence d'une mousse. On prépare un autre échanbillon d'une manière analogue sauf qu'à la place de la solution de gomme d'acacia, on utilise seulement de l'eau de ville.Les deux échantillons sont versés sur des plateaux en acier inoxydable, placés dans un compartiment de congélation pendant 6 heures et maintenues ensuite à +40C pendant 2 jours. On note que ltéchantillon contenant la gomme d'acacia forme une éponge qui absorbe vingt six fois son propre poids dans l'eau. Il n'y a pas de formation d'éponge à partir de la matière à laquelle seule de l'eau de vitte est ajoutée. Exemple 6 On prépare comme décrit à l'exemple 5, sauf que le pli final est réglé à environ 7, quatre échantillons de suspension de collagène renfermarlt chacun 0, 057J de gomme d'acacia (gomme arabique) et quatre échantillons de suspension de collagène contenant seulement de l'eau de ville (témoins). Tous les échantillons sont maintenus à environ -8 C pendant 24 heures et ensuite à +5 C pendant 2,3 ou 7 jours comme indiqué ciaprès RU tableau suivant. L'eau en excès est éliminée subséquemment et la matière spongieuse est séchée.On réalise les mesures physiques suivantes : Porositd : On découpe une section circulaire de meme diamètre, on mesure l'épaisseur moyenne de chaque échantillon et on détermine le poids. L'indice de porosité IP s'exprime de la façon suivante IP = épaisseur en mm x 100 poids sec en mg Pouvoir d'absorption : Un échantillon d'éponge collagène de poids connu est immergé dans l'eau pendant une minute, l'eau en excès est éliminée et le poids de l'éponge humide est déterminé. Le pouvoir d'absorption est exprimé pr : poids de l'éponge humide, mg poids de l'éponge seche; mg Résultats Les résultats des mesures ci-dessus sont indiqués au tableau suivant : Jours de réfrigération IP Pouvoir d'absorption Acacia 2 2,9 18,5 Témoin 2 0,8 2,5 Acacia 3 3t0 14,0 Témoin 3 0,7 3,8 Acacia 7 7,3 28,0 Témoin 7 0,9 4,0 Les résultats de ltétude ci-dessus montrent que l'addition de gomme d'acacia entrain dans tous les cas une éponge absorbante plus poreuse. Exemple 7 On répète ltexemple 6, comme décrit plus haut, sauf que l'échantillon renfermant de la gomme d'acacia et I'échan- tillon témoin sont maintenus à environ 1000 pendant 5 jours. L'échantillon contenant la gomme d'acacia-montre les propriétés suivantes : IP = 7,7, pouvoir d'absorption = 71. Un échantillon témoin (sans acacia) présente les propriétés ci-après : IP = 3,5, pouvoir d'absorption = 26. Les résultats indiquent que l'addition de gomme d'acacia a amélioré les propriétés de l'éponge formée. Exemple 8 On prépare plusieurs échantillons renfermant des quantités variables d'acacia ou de méthylcellulose ajoutée dans des solutions aqueuses. Les échantillons sont maintenus congelés pendant 7 jours et sont ensuite éprouvés comme décrit à l'exemple 6. Les résultatssont les suivants, à savoir Gomme, concentration finale % IP Pouvoir d'absorption Acacia 1 15 28 0,5 0,05 10 53 0,025 7 40 léthylcellulose 0,5 3,4 18 0,25 7,7 39 0,05 10,0 43 ExemDle 9 On répète l'exemple 1 sauf qu'on utilise de la méthyl- cellulose pour avoir une concentration finale de 0,01. L'éponge résultante est fortement absorbée, le pouvoir d'absorption est de 22. Préparation de Complexes collagènes-produit pharmaceutique Exemple 10 On mélange 50 ml de suspension de collagène à 2i (c'est-à-dire une suspension renfermant a,v en poids de matière anhydre) refroidie à +5 C avec 25 ml de solution de proges terne obtenue en dissolvant 10 mg de progestérone 14C (activité spécifique 70 décompositions par minute par gramme Y dans 1 ml de propylène glycol et en ajoutant, tout en agitant, 24 ml d'eau. le mélange est maintenu à 50C pendant 6 heures. On règle ensuite le pE de la solution à environ 6,5 avec une solution ("hydroxyde de sodium Sl. On ajoute 0,5 ml d'une solution aqueuse à 40* de formaîdéhyde, le mélange est malaxé dans un mélangeur Waring pendant 15 secondes et la matière mousseuse résultante est versée sur un plateau et maintenue à 20C pendant 5 jours. Après 5 jours une partie aliquote de l'eau en excès est prélevée pour déterminer la radioactivité par comptage dans un spectrophotonètre à scintillation pour liquide. La quantité de radioactivité présente est négligeable, ce qui indique que toute la progestérone a été fixée au collagène. L'alcali en excès de la matière résultante est éliminé par dialyse. La matière ainsi obtenue ressemblant à du feutre est découpée en dix petits morceaux de dimension égale. La matrice collagène-progestérone est implantée par Tio voie sous-cutanée chez six rats, chaque animal recevant une seule partie et les animaux sont sacrifiés six semaines plus tard. La perte de matrice collagène-progestérone déterminée par la perte de poids est calculée comme étant en moyenne de 15%. Ceci signifie qu'une telle matrice collagène-progestérone peut avoir un effet biologique durant d'environ 55 à 40 semaines. Exemple 1,1 On mélange 100 ml de suspension de collagène à 2% avec 100 ml de suspension de testostérone dans l'eau (2 mg/ml). On ajoute assez de solution diluée d'hydroxyde de sodium pour régler le pH à environ 7 et le mélange est -iaintenu à environ 5ÇC pendant 24 heures. On incorpore ensuite 0,+ ml de solution aqueuse à 40, de fornaldéhyde, le mélange est malaxé dans un mélaugeur Waring et traité thermiquement pendant 7 jours à 1 C. Subséquemment, la liqueur surnagearte est éprouvée pour la testostérone en mesurant le pouvoir d'absorption à 240 m Les résultats de ces mesures indiquent que pratiquement toute la testostérone est fixée au collagène. Exemple 12 On répète l'essai ci-dessus sauf qu'on utilise une solution de chlorhydrate de tétracycline selon une concentration de 6 mg/ml. Les mesures sur la tétracycline dans la liqueur surnageante indiquent qu'environ 85% de la tétracycline sont fixés au collagène. Les résultats ci-dessus montrent qu'en utilisant les conditions mentionnées plus haut, 2g de collagène fixent environ 500 mg de tétracycline ou 25% en poids. Exemple 13 On réalise une éponge collagène absorbante, comme décrit à l'exemple 10, sauf que les produits pharmaceutiques suivants sont utilisés par gramme de collagène : métronidazole, 250 mg; mystatine, 100 000 unités et un mélange de trois sulfonamides (sulfathisazole, 34,2%; sulfamide, 28,4 et s-benzoyl- sulfamide, 37,4%), 200 mg. Le mélange après le formaldéhyde est ajouté et versé sur des formes tubulaires d'un diamètre de tordre de 2,54 cm et d'une longueur de 6,35 cm. après le traitement thermique, les cylindres résultants sont appropriés pour le traitement des infections vaginales. Exemple 14 On mélange 100 ml de collagène gonflé à l'acide (2% de poids sec) avec 400 mg de chlorhydrate de tétracycline, dissous dans 100 ml d'eau contenant 50 mg de gomine ("acacia, 0,33 ml de solution aqueuse à At, de formaldéhyde et 0,7 ml de solution aqueuse d'hydroxyde de sodium 2. Le mélange est maintenu pendant 24 heures à +30C, puis est amené sous la forme d'une mousse dans un mélaugeur Waring et est conservé à -8 C pendant 3 jours.. L'éponge résultante montre des pro priétés d'absorption et se révèle être utile pour traiter des infections dans les cavités corporelles. Exemple 15 On réalise une éponge collagène absorbante1 comme décrit à 11 exemple 13, sauf qu'on utilise 40 mg de prostaglandine E2 par gramme de collagène. On trouve que l'éponge résultante produit une dilatation du cervix quand elle est insérée dans le vagin. Exemple J On réalise une éponge collagène absorbante, comme décrit à l'exemple 1j, sauf qu'on utilise 400 mg de dithizone (diophénylthiocarbazone) par gramme de collagène On trouve que l'éponge résult-ite empêche les animaux de mettre bas quand elle est insérée dans l'utérus. Exemple 17 On répète l'exemple 4 sauf que suffisamment de solu- tion concentrée de nitrate d'argent est ajoutée pour avoir une concentration finale de 0,5 ';; d'argent, calculée sur le poids sec du collagène. La matière résultante se revèle entre utile pour le traitement topique des brûlures. exemple 18 On répète l'exemple 13 sauf qu'on ajoute suffisamment de fluocinolone acétonide (6&alpha;, 9&alpha;-difluoro-11ss, 16&alpha;, 17&alpha;, 21tétrahydroxy-1,4-prégnadiène-3,20-dione-16, 17-acétonide) pour avoir une concentration finale de 0,025% calculée sur le poids sec de collagène et le pH de la solution est réglé à environ ,5. L'éponge résultante analogue à du feutre se révèle être utile pour traiter des inflammations de la peau. REVE I) I CA T 10 i - Procédé de fabrication d'une matière absorbante protéinique à fibrilles analogue à une éponge jouant le rOle de matrice, caractérisé en ce qu'il consiste : (a) à préparer une dispersion protéinique de fibres gonflées dans une solution aqueuse ou suspension d'une petite quantité d'une gomme naturelle ou synthétique, (b) à ajouter à cette solution ou suspension un agent de tannage ou de réticulation, (c) à traiter thermiquement la masse de fibrilles à une température au-dessus de la température de congélation de la solution ou suspension, et (d) à séparer l'eau en excès du mélange et à récupérer la matière absorbante à fibrilles jouant le rôle de matrice. 2 - Procédé suivant la revendication 1, caractérisé en ce que la matière à fibrilles jouant le rôle de matrice est du collagène. 3 - Procédé. suivant l'une des revendications 1 et 2, caractérisé en ce que le collagène est du collagène gonflé à l'acide. 4 - Procédé suivant l'une des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que la concentration de la matière protéinique à fibrilles dans la dispersion est comprise entre environ 0,1% et environ 3S, calculés sur un poids sec. 5 - Procédé suivant l'une des revendications 1 à 4, caractérisé en ce que la gomme naturelle est une gomme végétale. 6 - Procédé suivant l'une des revendications 7 à 5, caractérisé en ce que la gomme végétale est de la gomme d'acacia. 7 - Procédé suivant ltune des revendications 1 à 6, caractérisé en ce que la concentration de la gomme dans la dispersion est comprise entre environ 0,01% et environ 5% en poids 8 - Procédé suivant l'une des revendications 1 à 7, caractérisé en ce que la matière protéinique à fibrilles jouant le roule de matrice est tout d'abord dispersée dans l'eau et cette dispersion est ajoutée à la dispersion de gomme. 9 - Procédé suivant l'une des revendications 1 à 8, caractérisé en ce que 11 agent de tannage ou de réticulation est un alddhyde. 10 - Procédé suivant l'une des revendications 1 à Cj caractérisé en ce qu'il comprend une période supplémentaire de traitement thermique pendant environ S heures à 3 jours à une température inférieure à la congélation. 11 - Procédé de fabrication d'un complexe d'un produit pharmaceutique et d'une matière protéinique absorbante à fibrilles jouant le rible de matrice, ayant une activité prolongée, caractérisé en ce qu'il consiste à mélanger une matière gonflée à fibrilles jouant le ralle de patrice préparée selon la revendication 1, repartie dans un milieu aqueux avec une solution du produit pharmaceutique dans un solvant organique miscible dans l'eau qui est un solvant pour le produit pharmaceutique mais qui ne réagit pas ni ne dissout la matière à fibrilles jouant le rôle de matrice pendant une période de temps suffisante pour permettre au produit pharmaceutique d'être fixé à la matière jouant le rôle de matrice et de se dégager seulement lentement de celle-ci. 12 - Procédé suivant la revendication 11, caractérisé en ce que la matière à fibrilles jouant le rôle de matrice est du collagène. 13 - Procédé suivant l'une des revendications 11 et 12, caractérisé en ce que le solvant est un alcoyl aliphatique inférieur. 14 - Procédé suivant l'une des revendications 11 à 13, caractérisé en ce que la proportion de solvant organique dans le mélange de solution au produit pharmaceutique et desuspen- sion aqueuse de matière à fibrilles jouant le r81e de matrice est comprise dans la gamme d'environ 5 à 25% en poids. 15 - Procédé suivant l'une des revendications 11 à 14, caractérisé en ce que le mélange de solution oe produit pharma- ceutique avec la suspension de fibrilles se produit avant l'au- dition d'un agent de réticulation ou d1un agent de tannage. 16 - Procédé suivant l'une des revendications 11 à 15, caractérisé en ce que le produit pharmaceutique est un produit pharmaceutique soluble dans l'eau et est présent sous une forme fixée selon une quantité supérieure à environ 10% en poids. 17 - Procédé suivant l'une des revendications 11 à 1e, caractérisé en ce que le produit pharmaceutique est une hormone stèroide. 18 - Procédé suivant l'une des revendications 11 à 17, caractérisé en ce que la matière à fibrilles jouant le rôle de matrice est du collagène et le produit pharmaceutique est une hormone progestative.