FR 2222092 A1 19741018 FR 7409294 A 19740319 Au cours des dix dernières années, on a trouvé que de nombreux composés analogues à des nucléosides déploient une bonne activité antitumorale et antivirale. Parmi les agents antiviraux nucléosidiques de synthèse actuellement connus, on considère généralement que les plus importants sont la 5'-iodo-2'-déoxyuridine (IDU) ; la 9-ss-D-arabinofuranosyladénine (Ara-A) et la 1-ss-D- arabinofuranosylcytosine (Ara-C). Parmi ces composés, le composé IDU est seul disponible dans le commerce à titre d'agent antiviral ; ce composé est extrêmement peu soluble, sa solubilité maximale étant d'environ 0,1 % en poids, et il est également très toxique.Le composé Ara-A est actuellement soumis à des essais cliniques en tant qu'agent antiviral et, bien que les résultats obtenus jusqu'à présent laissent entrevoir l'efficacité du composé Ara-A contre tout un spectre d'infections virales, ses applications sont très limitées par sa faible solubilité, et par les symptômes de toxicité qui se traduisent, chez les autres humains, par une nausée modérée, une leucopénie passagère et une implication du système nerveux central se traduisant par des effets illusionnels et hallucinatoires. Lorsqu'on utilise des composés analogues à des nucléosides pour inhiber un développement viral ou tumoral, les nucléosides sont habituellement métabolisés in vivo en leurs mono- ou poly-phosphates correspondants qui sont les inhibiteurs réels de ce développement. Un obstacle majeur auquel s'est heurtée l'utilisation de -composés analogues à des nucléosides dans la chimiothérapeutique a été ltapparition d'une résistance cellulaire par laquelle ces composés ont été dégradés par passage à une forme dans laquelle ils peuvent être des inhibiteurs moins efficaces. Il est donc désirable de trouver des composés analogues à des nucléosides qui soient capables d'inhiber efficacement le dévelop- pement d'infections virales et qui aient également une meilleure solubilité et une plus faible toxicité que les agents antiviraux connus actuellement 'P-outefois, la production d'un tel compose est très difficile, attendu qu'on connaît relativement peu de composés nucléosidiques qui déploient une activité antivirale, même in vitro.De plus, il est extrêmement difficile d'obtenir un composé de ce type doué d'une activité acceptable et en me temps capable d'agir sur l'infection à virus à des concentrations efficaces. Le brevet de la République Fédérale d'Allemagne N 2 047 368 suggère l'utilisation de 5'-phosphate de 9ss-D- arabinofuranosyladénine comme composé à effet antiviral. Toutefois, ce composé, en tant que composé analogue de l'AMP et que précurseur d'un composé analogue à l'ATP, est rapidement dégradé dans le processus métabolique (en formant finalement l'acide urique). Attendu que les taux d'ATP dans le processus métabolique sont maintenus rigoureusement à de faibles valeurs par ce processus, l'efficacité de ces composés en tant qu'agents antiviraux est donc réduite. Pour ces raisons, on a donc tenté de préparer d'autres analogues nucléosidiques en vue de trouver, parmi ces composés, ceux qui pourraient être capables de résister à une dégradation métabolique rapide et aussi de pénétrer dans la membrane cellulaire et d'entrer en contact avec des infections à virus à des concentrations efficaces. Comme le fera apparattre ce qui suit, on a effectué la synthèse du 5'-phosphate de 9-D-arabinoft-anosyl- hypoxanthine et découvert que ce composé déploie une nette activité contre tout un spectre d'herpès-virus et d'autres DNAvirus.On a également fait la synthèse d'autres 9ss-D-arabino- furanosyl-nucléotides auxquels un arabinoside phosphorylé est attaché par une liaison glycosidique et on a trouvé que de nombreux composés de ce type déploient une nette activité contre un spectre d'herpès-virus et d'autres NA-virus. En conséquence, l'invention concerne des composés intéressants à utiliser comme agents antiviraux, répondant à la formule suivante dans laquelle Z est un atome d'hydrogène, un groupe alkyle en C1 à C6, un groupe aralkoxy en C7 à C10 ou ixn groupe hydroxy et AP est un arabinofuranoside 5'-ou 3'-phosphorylé ou le 3',5' phosphate cyclique correspondant, attaché par une liaison glycosidique à l'atome d'azote N-9 du composant aglyconique du 9ss-D- arabinofuranosyl-nucléotide. Le radical arabinofuranoside phosphorylé (AP) des nucléotides 9ss-D-arabinofuranosyl-puriques de l'invention, lorsqu'il est phosphorylé en position 5', répond à la formule générale dans laquelle R1 est un groupe OH, un groupe O-alkyle en à à C6 ou un groupe ON et R2 est un groupe OH ou OM, M étant normalement un groupe ammonium, ammonium substitué tel que triéthylammonium, ou un métal alcalin ou alcalino-terreux, ou un autre métal qui forme un composé acceptable du point de vue physiologique. Lorsque AP est phosphorylé en position 3', R1 et R2 ont les définitions données ci-dessus pour la position 5'. Lorsque AP est un 3',5'-cyclophosphate, le radical phosphate est attaché au sucre de base en position 3'-OH, et R1 a la définition donnée ci-dessus. Les nucléotide s 9ss-D-arabinofuranosyl-puriques de la présente invention peuvent être préparés par les procédés décrits dans les exemples 1-11 qui suivent. Les 9ss-D-arabinofuranosyl-adénine-nucléotides peuvent être prépares en faisant réagir, tout d'abord le furano syl-nucleoside approprié avec un composé convenable du type de loxychlorure de phosphore, par exemple l'oychlorure de phospho- re ou son ester méthylique, un phosphorodichloridate, , dans un solvant convenable du type phosphate de trialkyle, de préférence le phosphate de triméthyle, pour former le furanosyl-nucléode correspondant.Le nucléoside est ajouté à la solution d'oxy chlorure de phosphore, sous agitation, et la réaction est con- duite à environ 0-15 jusqu'à son achèvement, c'est-à-dire pen- dant environ 3 à environ 24 heures. Le produit nucléotidique de la première étape est ensuite traité avec un carbonate alcalin, par exemple le bicarbonate de sodium ou de potassium, jasqu'à ce qu'un pH stable d'environ 5 à environ 7 ait été obtenu. L'adénine-nucléotide est ensuite séparé par exemple par chro matographie et lyophilisation. Les 9ss-D-arabinofuranosylhypoxanthine-nucléotides peuvent aussi tre préparés par réaction de l'adénine-nucléotide approprié dans l'eau, en présence d'acide acétique cristallisable et de nitrite de sodium. Ce dernier est de préférence ajouté à une solution du nucléotide et de l'acide acétique cristallisable et la réaction est conduite à environ 10-30 et de préférence entre 20 et 250, jusqu'à son achèvement. La période de réaction peut aller d'environ 15 à environ 24 heures. Le nucléotide produit est séparé et neutralisé avec un carbonate alcalin, par exemple le bicarbonate de potassium et le bicarbonate dg sodium, et séparé, par exemple par cristallisation. Dans les exemples qui suivent, les spectres ultravio- lets ont été enregistrés sur un spectrophotomètre "Cary-15" et les spectres infrarouges ont été déterminés sur un spectrophoto- mètre "rerkin-Elmer'1,modèle 257. Toutes les températures sont exprimées en degrés centigrades et toutes les parties sont exprimées en poids, sauf indications contraires. Exemple 1 5'-phosphate de 9ss-D-arabinofuranosylhypoxanthine (procédé 1) On ajoute 2,5 g de nitrite de sodium à une suspension, refroidie à la glace, de 2,0 g de 5'-monophosphate de 9ss-D-arabinofuranosyl-adénine (Ara-AMP) dans 15 ml d'eau et 3,0 ml d'acide acétique cristallisable. On bouche le ballon de façon non herméti- que on on agite pendant 2-5 heures au bain de glace. On poursuit l'agitation pendant environ 15-16 heures sans ajouter de glace au bain. La chromatographie en couche mince (gel de silice, solvant L2.IPA/NH4OH/H2O dans les proportions en volume de 55/10/35) indique que la réaction est totale.La solution limpide incolore est évaporée à sec sous vide, le résidu est dissous dans 20 ml d'eau, puis il est soigneusement neutralisé avec du bicarbonate de potassium solide. La solution neutre est chargée sur une colonne contenant 75 ml de résine d'échange ionique "Dowex 50" (forme R+). On lave la colonne avec de l'eau et on rassemble les fractions contenant la matière absorbant les rayons ultraviolets, puis on la concentre sous vide à un volume d'environ 25 ml. On ajoute 50 ml d'éthanol à la solution concentrée et on la refroidit pendant environ 15-16 heures. On recueille la substance solide qui se sépare, on la lave à l'eau froide et on la fait cristalliser dans l'eau ; on obtient des aiguilles incolores. Point de fusion : 198-199 (décomposition) ; [&alpha;]D25 = +9,8 (c=1, eau). Rendement - 1,60 g (79,8 %). Analyse C % H % N % Calculé pour H10H13N4O8P (348,2): 34,48 3,74 16,10 Trouvé : 34,45 5,80 15,89 Spectre ultraviolet #max.pH 1 249 mn (c 12 700) # pH 7 248 mn (c 13 600) max # pH 11 25 mn (c 14 400) max Exemple 2 5'-phosphate de 9-ss-D-arabinofuranosylhypoxanthine (procédé 2) On ajoute, en agitant, le composé Ara-I (9-ss-D-arab noBuranosyl-hypoxant-hine) à un mélange préalablement refroidi (environ 58 au bain de glace) de 100 ml de phosphate triméthylique et 2,3 g d'oxychlorure de phosphore.Lorsque toute la substance solide s'est dissoute environ 5 t)- on maintient la solution pendant quatre heures à 00. La chromatographie en couche mince (gel de silice, solvant IPA/NH4/H2O ; 55/10/35) indique que la réaction est terminée, et on verse lentement le mélange réactionnel dans de l'eau glacée contenant 26,) g de bicarbonate de sodium. On laisse reposer la solution dans l'eau glacée pendant une heure pour stabiliser le pH à 6. On extrait la solution avec trois portions de 75 ml d'éther pour éliminer le phosphate triméthylique.On réduit le volume de la phase aqueuse sous vide jusqu'à ce que des cristaux (sel) commencent à se former On ajoute de l'eau pour dissoudre les cristaux et on charge la solu- tion à la partie supérieure dune colonne de 750 g de charbon "Barneby Cheny". On lave le charbon avec de l'eau pour éliminer les sels puis on élue le produit avec une solution aquease à 50 % de méthanol contenant 10 % de NH4OH. On réduit l'éluant à un faible volume, sous vide (jusqu'à disparition de l'odeur d'ammoniac) et on ajuste le pH à 2.On ajoute de l'éthanol jusqu'à ce que la solution devienne trouble, puis on conserve cette dernière à 5 . On filtre les cristaux et on les sèche à 40 sous le vide de la trompe (première récolte : 5,5 g) ; spectre de ré- sonance magnétique nucléaire (DMSO-d6), # 8,1, 8,19 (2H, singulet, H-2, H-8) 6,28 (1H, multiplet, H-1'). Exemple 5'-O-méthylphosphate de 9-ss-D-arabinufuranosyl adénine On refroidit à 0-50, au bain de glace, 10,0 g (0,067 mole) de phosphoro-dichloridate de méthyle dans 100,0 ml (0,71 mole) de phosphate triméthylique fatchement distillé. On retire le bain de glace pour ajouter 10,0 g (0,037 mole) de 9-ss-D-arabinofuranosyl-adénine séchée à 800 pendant 5 heures. Initialement, on n1 observe pas de montée de température. On maintient la température entre 5 et 200. Au bout de deux heures, on obtient une solution limpide qu'on laisse reposer pendant environ 16 heures à 40. On la verse ensuite sur de l'eau glacée (400,0 ml) contenant 6,0 g de bicarbonate de sodiun. On ajoute périodiquemeil-t un supplément de bicarbonate de sodium, jusqu'à ce que le pR soit stabilisé à 5-6 ènviron une heure) On élimine le phosphate triméthylique par extraction à l'éther (4 portions de 150 ml). L'éther dissous et l'eau en excès sont éliminés par évaporation sous pressipn réduite jusqu'à ce que les sels commencent à cristalliser.On ajoute un volume suffisant d'eau pour obtenir la dissolution et on contrôle le pH (6-7). On charge la solution avec précaution à la partie supérieure d'une colonne de "Dowex" (1 x 2) (forme formiate, 0,074-0,149 mm, 300 ml). On lave la colonne avec de l'eau jusqu'à ce que l'éluant ne contienne plus de composés absorbant la lumière ultraviolette. Un gradient d'solution (eau -P acide formique 0,1 M) donne le produit dans une bande épaisse. Les fractions appropriées sont évaporées sous vide, en maintenant la température au-dessous de 300, jusqu'à un volume d'environ 100 ml. On congèle -la solution restante et on/la lyophilise pour obtenir une substance solide blanche floconneuse pesant 6,50 g (48,0 %), fondant à 170-190 en se décoposant ; [&alpha;]D25 = +48,7 (c 1,0 ; eau) ; spectre ul traviolet #max.pH 1 257 nm (# 14 200) ; #max pH 7 258 nm (# 13 000) #max.pH 11 258 nm (# 13 000). Analysé : C % H % N % Calculé pour C11H16N5O7P (361,25): 36,57 4,47 19,59 Trouvé : . 36,42 4,26 19,19 Exemple 4 5'-O-méthylphosphate de 9-ss-D-arabinofuranosyl hypoxanthine On ajoute 2,25 g (0,032 mole) de nitrite de sodium à une solution refroidie à la glace de 2,0 g (0,055 mole) de 5',O-méthylphosphate de 9-ss-D-arabinofuranosyl-adénine (préparée par le procédé de l'exemple 3) dans 15,0 ml d'eau et 3,0 ml acide acétique cristallisable. On bouche le ballon de façon non hermétique et on l'agite pendant 2-3 heures au bain de glace. On continue d'agiter pendant environ 15-16 heures, sans ajouter de glace au bain. La chromatographie en couche mince (gel de silice , solvant IPA/NH40h/H20 dans des proportions de 55/10/35) indique que la réaction est terminée. La solution incolore limpide est évaporée à sec sous vide Le résidu est dissous dans 10 ml d'eau et neutralisé avec soin au moyen de bicarbonate de potassium solide La solution neutre est chargée sur une colon de résine ne contenant 80 ml/d'échange ionique "Dowex" (50 x 8 , forme On lave la colonne avec de l'eau et on rassemble les fractions contenant la matière absorbant la lumière ultraviolette, puis cn la concentre sous vide à un volume d'environ 20 ml. On ajoute 50 mld'éthanol à la solution aqueuse concentrée et on la refroidit pendant environ 15-16 heures. On recueille la substance solide qui se sépare, on la lave avec un faible volume d1eau froide et on la fait recristalliser dans une solution aqueuse d'éthanol pour obtenir 1,65 g (82,3 %) de composé fondant à 160-180 (décomposités) ; [&alpha;]D25 = +55,7 (c 1,0, eau) ; spectre ultraviolet #maxpH 248 nm (# 10 300) ; #max.pH 7 246 nm (#9 900) ; #max.pH 11 251 nm (# 12 000).~ Analyse : C % H % N % Calculé pour C11H15N4O8P (362,23): 36,48 4,17 15,46 Trouvé : 36,22 4,39 15,49 Exemple 5 5'-phosphate de 9-ss-arabinofuranosyl-N1-hydroxy hypoxanthine On ajoute 2,5 g (0,036 mole) de nitrite de sodium à une suspension refroidie à la glace de 5'-phosphate de N1-oxyde de 9-ss-arabinofuranosyl-adénine (préparé comme décrlt dans la demande de brevet des Etats-Unis d'Amérique N 383 6613 (2,0 g, 0,0055 mole) dans 15 ml d'eau contenant 3,0 ml d'acide acétique cristallisable. On bouche le ballon de façon non tique et on l'agite pendant 2-3 heures au bain de glaces On laisse la réaction évouleur pendant 15 heures. Après évaporation du mélange réactionnel limpide et neutralisation avec du bicarbonate de potassium, on traite le mélange comme décrit dans l'exemple 4 pour obtenir 1,35 g (67,3 @) de composé fondant au-dessus de 1500 en se décompo -ant ; spectre ultra violet #max. 251 nm (# 11 650) ; #max.pH 7 255 nm (# 11650) ; #pH 11 252 nm (# 12 000) max. Analyse : C E H % Calculé pour 10H13N4O9P (364,20): 32,98 3,59 15,38 Trouvé : 32,82 3,62 15,19 Exemple 6 5' phosphate de 9-ss-D-arabinofuranosyl-N -benzyloxy hypoxanthine On traite une solution de 1,12 g (0,0030 mole)de 5'phosphate de 9-ss-D-arabinofuranosyl-N1-hydroxy-hydroxy-hypoxanthine dans 10 ml-de diméthylsulfoxyde anhydre avec 0,5 g de 1,5-diazabicyclo- [5,4,0]-undéc-5-ène (DBU) et on agite à la température ambiante. Le précipité gélatineux qui se forme initialement est dissous au bout de 30 mn sous agitation rapide. Le mélange est traité avec 0,65 g (0,0038 mole)de bromure de benzyle et on continue d'agiter à la température ambiante, pendant environ 15-16 heures. La chromatographie en couche mince gel de silice, solvant IPA/SH40H/ H20 dans des proportions en volume de 55/10/35) Indique que la réaction est complète. Le mélange réactionnel est ensuite versé dans un mélange froid (0-5 ) d'éthanol et d'éther à 1:1 (500 ml). On filtre le mélange et on lave correctement le résidu blanc avec cinq portions de 50 ml d'éther anhydre. La substance solide hygroscopique est dissoute dans un volume minimal d'eau et la solution est additionnée d'éthanol avec précaution, pour provoquer la précipitation du produit, sous la forme de cristaux blancs.Le mélange est refroidi pendant 15-16 heures et le produit est recueilli, lavé à l'éthanol et séché ; rendement : 0,80 g (57,4 %) point de fusion > 1650 (décomposition) ; spectre ultraviolet #max.pH 1 250 nm (#13 600) ; #max.pH 7 255 nm (# 14 500) ; #max.pH 11 255 nm (E 14500) Analyse C % H % Calculé pour C17H19N4O9P (454,33) : 44,91 4,21 12,33 Trouvé : 45,18 4,43 42,61 Exemple 7 5'-phosphate de 9-B-o-arabinofuranasyl-N -méthyl- hypoxanthine On dissout 3,0 g (O, 0086 mole) de 5'-phosphate de 9-si- D-arabinofuranosyl-hypoxanthine, dans 90 ml de pyridine anhydre, contenant 2,25 g de- triéthylamine et 5,7 g d'anhydride acétique, et on agite la solution à la température ambiante pendant 3 heures. La solution de coleur jaune pâle est évaporée sous vide et le résidu huileux est mélangé avec environ 50 g de glace. On l'évapore de nouveau à sec. On répète cette opération trois fois avec des portions de 25 g de glace. Le résidu est repris dans 100 ml d'eau et extrait à l'éther. La solution aqueuse limpide est congelée et lyophilisée, et on obtient 5,0 g de sel de triéthylammonium de 5'-phosphate de 9-(2,3-di-O-acétyl-ss-D- arabinofuranosyl)-hypoxanthine à consistance sirupeuse. On dissout le sel de triéthylammonium (2,5 g) dans 50 mi de diméthylsulfoxyde anhydre et on ajoute à la solution 750 mg d'hydrure de sodium (dispersion dans l'huile à 57 %). On agite le mélange à la température ambiante à, labri de l'humidité pendant deux heures. Le mélange limpide est traité avec 5,0 ml d'iodure de méthyle et agité sans interruption pendant quatre heures. Le mélange brun est ensuite versé dans un mélange froid d'éthanol et d'éther [600 mi (1:7)] et refroidi pendant 15-16 heures. Le mélange est filtré, le résidu est dissous dans un petit volume d'eau et la solution est chargée sur une colonne de "Dowex" 1 x 2 (forme formiate, particules de 0,074 à 0,149 mm, 75 ml). Le produit est élué avec de l'eau et les fractions convenables sont évaporées sous vide en donnant un sirop incolore (2,0 g). On désacétyle ce sirop avec une solution méthanolique d'ammoniac (50 ml, saturée à 00), à la température ambiante pendant 15 heures. On recueille la substance solide blanche, on la dissout dans 10 ml d'eau et on fait passer la solution sur une colonne de "Dowex" 50 z 8 (forme H+) (25 ml). On concentre l'éluat sous vide à un volume d'environ 5 ml et on ajoute de l'éthanol. Le précipité qui se sépare après refroidissement est recueilli et cristallisé dans de l'éthanol aqueux ; on obtient 0,30 g de composé fondant au-dessus de 1250 en se décomposant ; spectre ultraviolet, #max.pH 1 253 nm (# 7900) ; #max.pH 7 261 nm (# 7200) ; #max.pH11 261 nm ( 7200). Analyse : C % H % N % Calculé pour C11H15N4O8P (362,23) : 36,48 4,17 15,47 Trouvé : 36,28 4,36 15,32 Exemple 8 5'-O-méthylphosphate de 9-ss-D-arabinofuranosyl-N1 méthylhypoxanthine On traite une solution de 1,0 g (0,0028 mole) de 5'-phosphate de 9-ss-D-arabinofuranosyl-hypoxanthine dans 10 ml de diméthylsulfoxyde anhydre avec 0,5 g de 1,5-diazabicyclo [5,4,0]undéc-5-ène, puis avec 2,0 ml d'iodure de méthyle. On laisse la réaction évoluer pendant 15 heures à la. tempé rature ambiante et on traite le mélange réactionnel comme décrit dans l'exemple 6, pour obtenir 0,40 g (37,0 %) de composé fondant à 162-165 en se décomposant ; spectre ultraviolet #max.pH 1 253 nm (#10 050) ; #max.pH 7 253 nm (# 9500) ; #max.pH 11 265 nm (# 7450). Analyse C % H % Calculé pour C12H17N4O8P (376,26) : 38,31 4,55 -14 89 Trouvé : 38,14 4,68 14,65 Exemple 9 3',5'-cyclophosphate de 9-ss-D-arabinofuranosyl hvnoxanthine On ajoute 2,5 g (0,036 mole) de nitrite-de sodium à une suspension refroidie à la glace de 3',5'-cyclophosphate de 9-ss-D-arabinofuranosyl-adénine (préparée comme décrit dans la demande de brevet des Etats-Unis d'Amérique N0 169 095) (2,0 g, 0,0060 mole) dans 15 ml d'eau contenant 3,0 ml d'acide acétique cristallisable. On bouche le ballon de façon non hermétique et on l'agite pendant 2-3 heures dans un bain de glace. On laisse la réaction évoluer pendant 20 heures.Après évaporation et neutralisation avec du bicarbonate de potassium, on traite le mélange réactionnel, comme décrit dans l'exemple 4 , pour obtenir 1,80 g (89,7 %) de composé fondant à 2400 en se décomposant ; [&alpha;]D25 = -49,5 (c 1,0 ; eau) ; spectre ultra viole, #max.pH 1 247 nm (#12 100); #max.pH 7 247 nm (# 12 400) pH 251 nm (# 13 000) amax. 251 ns (# 13 000). Analyse: C % H % N % Calculé pour C10H11N4O7P (330,19) : 36,40 3,35 16,97 Trouvé : 36,35 3,39 16,87 Exemple 10 5'-phcsphate de 9-p-D-arabinofuranosyladénine On refroidit à 0-5 au bain de glace un mélange de 1,5 g d'oxychlorure de phosphore, et de 20,0 ml de phosphate triméthylique fratchement distillé. On retire le bain de glace pour ajouter 1,5 g (0,0040 mole) de poudre fine de 5'-0-benzoyl 9-B-D-arabinofuranosyl-adénine (séchée à 800 pendant 15-16 heures) (préparée comme décrit par H. Renis et Collaborateurs, dans "J. Med.Chem." 16, 754, [1973]).0n maintient la température entre 5-150.Au bout de 30 mn,on~obtient une solution limpide incolore qu'on laisse reposer pendant 15-16 heures à 40. On verse ensuite le mélange réactionnel sur 100 ml d'eau glacée, contenant 2,0 g de bicarbonate de sodium. On ajoute périodiquement une quantité supplémentaire de bicarbonate de sodium jusqu'à ce que le pH soit stabilisé à 5-6 (environ 1 heure). On élimine le phosphate de triméthyle par extraction à l'éther (4 x 75 ml). L'éther dissous et l'eau en excès sont éliminés par évaporation sous vide jusqu'à ce que les sels commencent à se séparer. On ajoute un volume suffisant d'eau pour obtenir la dissolution et on ajuste le pH à 6-7 avant de charger la solution à la partie supérieure d'une colonne de "Dowex" 1 x 2 (forme formiate, particules de 0,074 à 0,i49 mm , 60 ml). On lave la colonne avec de l'eau jusqu'à ce qu'il n'y ait plus de matière absorbant la lumière ultraviolette dans l'éluant. Par élution (gradient eau# acide formique 0,5 M) et lyophilisation des fractions appropriées, on obtient 0,4 g (24,7 % ) d'un mélange de 2'- et 3'-phosphates. Le mélange de phosphates indiqué ci-dessus (350 mg) est dissous dans 25 ml d'une solution fraîchement préparée de méthylate de sodium 0,01 M dans le méthanol et la solution est laissée au repos à la température ambiante pendant environ 15-16 heures. te mélange réactionnel est neutralisé avec soin au moyen de résine "Dowex" 50 x 8 (H+). On enlève la résine et on concentre le filtrat à un volume d'environ 5 ml. On le fait passer sur une colonne de "Dowex" 1 x 2 (forme formiate, 40 ml).On lave la colonne avec de l'eau jusqu'à ce que l'éludant ne contienne plus de matière absorbant la lumière ultraviolette Avec un gradient d'solution eau acide formique 0,) M, le 2'-phosphate de 9-ss-D-arabinofuranosyladénine sort le premier, suivi du 3'-phosphate isomère. Les fractions de 3'-phosphate sont lyophilisées en donnant 105 mg (10 ) de 3'- phosphate de 9-B-o-arabinofurano syladénlne, fondant à 180-182 en se décomposant ; spectre ultraviolet: : max. 257 nm (#6600) #pH 7 258 nm (#6800) . #pH 11 258 nm (#6800)" max. max. Analyse C% H% Calculé pour C10H14N5O7P (347,22): 34,58 4,06 20,17 Trouvé Exemple 11 3'-phosphate de 9-ss-D-arabinofuranosyl-hypoxanthine On ajoute 115 mg de nitrite de sodium à une solution refroidie à la glace de 100 mg de 3'-phosphate de 9-ss-D-arabino- furanosyladénine dans 1,0 ml d'eau et 0,15 ml d'acide acétique cristallisable. On bouche le ballon de façon non hermétique et on l'agite pendant 15-16 heures à 5 . Après évaporation et neutralisation au bicarbonate de potassium, on traite le mélange comme décrit -dans l'exemple 4 pour obtenir 80 mg (80 %) du composé indiqué dans le titre ; spectre ultraviolet #max.pH 1 248nm ; #max.pH 7 249nm ; #max.pH 11 252 nm. Les sels de nucléotides D-arabinofuranosyl-puriques indiqués ci-dessus peuvent être obtenus de manière classique par réaction de l'acide libre avec une base telle que NaEC33 pour former le sel disodique. La réaction avec d'autres bases appropriées donne de même les sels de calcium, de baryum, de potassium et d'ammonium ou d'ammonium substitué, comme cela est évident pour un spécialiste en ce domaine. Exemple 12 Plusieurs composés de l'invention ont été soumis à un essai d'estimation de l'activité in vitro -par la méthode d'évaluation de l'activité antivirale (AV) de Sidwell et Colla borateurs décrite dans "Applied microbiology", 22:797-801 [1971]. Le composé est dissous dans- un milieu de culture cellulaire renférmant des vitamines, des amino-acides, du sérum, un tampon, de la pénicilline, de la streptomycine et un indicateur coloré dans l'eau. Le virus en suspension dans le milieu de culture cel lunaire est ajouté à une couche monocellulaire formée de cellules Vero, 3HK21, HeLa MB ou RK 13 et un volume égal dls compose est ensuite ajouté en 15 mn. Les cellules traitées infectées sont soumises à une incubation pendant trois jours et le degré d'effet cytopathogénique viral (ECP) exercé sur les cellules est évalué après examen microscopique.Les témoins utilisés dans chaque expérience comprennent des témoins cellulaires (cellules et milieu de culture cellulaire seulement) des témoins viraux (cellules et virus et milieu de culture cellulaire) et des témoins de toxicité (cellules, composés chimiques et milieu de culture cellulaire). Parmi les virus utilisés dans les expériences anti virale, l'herpès-virus type 1 est impliqué dans l'Herpés a frigore, la kératite herpétiforme et l'herpès encéphalis. L'herpès-virus est également impliqué dans la mononucléose infectieuse, le lymphome de Burkitt et le carcinome cérébral. La vaccine est une forme avirulente du virus de la variole utilisée pour la vaccination antivariolique, qui produit éventuellement des effets indésirables. Le myxome provoque la mort des lapins domestiques et sauvages, précédée de troubles respiratoires et d'un oedème important. La pseudo-rage provoque la paralysie bulbaire infectieuse, également appelée maladie d'Aujeszky chez les bovidés, les ovidés, les porcins, les chiens et le vison. Les résultats des expériences conduites in vitro sont reproduits sur le tableau I suivant. La méthode d'évaluation antivirale (AV) de Sidwell et Collaborateurs, décrite dans "Applied Microbiology" (voir ci-dessus) a été utilisée pour évaluer le degré dtimportance de l'inhibition de l'ECP. Une valeur AV supérieure à 0,5 est l'indice d'une nette activite antivirale, tandis qu'une valeur AV inférieure à 0,5 est l'indice d'une activité antivirale faible. TA3IEAU I Activité antivirale de nucléotides 9-ss-D-arabinofuranosyl-puriques dans des cultures cellulaires Nom du composé Virus de Virus de Virus de l'Herpés l'Herpés la simplex simplex vaccine type 1 type 2 5'-phosphate de 9-ss D-arabinofuranosylhypoxanthine * 0,4-0,9 0,6-1,1 1,0-1,1 3' ,5'-cyclophosphate de 9-ss-D-arabinofu- ranosyl-hypoxanthine 0,7-1,1 0,7 5 '-O-méthylphosphate de 9-ss-D-arabinofuranosyl-hypoxanthine 0,4-0,7 0,0 0,4 5'-phosphate de D-arabinofuranosyl N -hydroxyhypoxanthine 0,2-0,7 0,0-0,6 - 0,1-0,4 3'-phosphate de 9-ss-D arabinofuranosylhypoxanthine 1,0 * Ce composé a une activité de 1,0 contre le myxome et de 0,2 contre la pseudo-rage. Les résultats démontrent clairement que les composés indiqués ci-dessus déploient une nette activité in vitro contre certains ou la totalité des virus énumérés. Exemple 13 On conduit l'expérience décrite ci-après en utilisant le 5'-phosphate de 9-ss-D-arabinofuranosyl-hypoxanthine contre l'herpès-virus chez des animaux. Dans cette expérience, le composé est dissous dans une solution de sel et la solution est inoculée par voie intrapéritonéale 4 heures après l'inoculation virus, puis deux fois par jour pendant 8 jours. Les résultats reproduits sur le tableau II montrent que le composé ara-A est moins efficace et que le traitement à l'ara-IMP protège de la mort jusqu'à 50% des souris. TABLEAU II Activité contre l'herpès encephalitis du 5'-phosphate de 9-ss-D-arabinofuranosylhypoxanthine Hôte : Souris Swise, @@ @@@@ @@@@, 18-20 g Voie d'administration : intraperitonéale Virus : herpès simplex, mouche 123 Début du traitement : 4 heures après l'ino culation du virus Dose et voie d'inoculation du virus :Fréquence et durée du traitement : deux 3,2 DL50, intracérébrale fois par jour pendant 8 jours après l'inoculation du virus Période d'observation : 21 jours Nom Dose, Nombre de survivants Pourcentage Augmentation mg/kg/jour total (témoins de to- d'augmentation du du nombre de xicité) nombre de survivants survivants, P* 5'-phosphate de 9-ss-D-ara- 500 5/5 50 # 0,01 binofuranosyl-hypoxanthine 250 - 40 # 0,05 125 - 20 # 0,3 62,5 - 10 # 0,3 9-ss-D-arabinofuranosyl- 250 5/5 40 # 0,05 125 - 30 # 0,05 62,5 - 0 # 0,03 *Probabilité (chi-carré). Exemple 14 On a éprouvé l'effet exercé sur l'herpès encephalitis de la souris par le 5'-phosphate de 9-B-D-arabinofuranosyl- hypoxanthine (ara-IMP) et la 9-ss-D-arabinofuranosyl-adénine (Ara-A). Dans ces expériences, de jeunes souris adultes de race Swiss ont été inoculées par voie intracérébrale avec une dose modérément léthale (capable de tuer environ 90-95 % des animaux) de l'herpès virus du type 1. Six heures plus tard, on a injecté aux animaux par voie intracérébrale chacun des médicaments à une ou plusieurs concentrations en solution saline, ou la solution saline seulement (témoins viraux). Ta dose maxi nale utilisée pour chaque médicament a été la dose maximale tolérée (DMT), c'est-à-dire la dose maximale de toxicité non mortelle pour les animaux.On a examiné les animaux pendant 21 jours et noté les cas mortels à mesure de leur apparition. Darus chaque plus expérience, le composé ara-IMP s'est montré/efficace que le composé ara-A, d'après la courbe de variation de l'augmentation du pourcentage du nombre de survivants (comparé aux survivants des témoins viraux) en fonction. de la dose relative de chaque médicament. On-a effectué jusqu'à 5 expériences avec les diverses doses relatives de médicament, et déterminé ltaugmentation moyenne du pourcentage du nombre de survivants. La figure 1 des dessins annexés montre que ce composé ara-TMP présente un avantage thérapeutique par rapport au composé ara-A.Cette figure illustre le traitement intracérébral avec le 5'-phosphate de 9-ss-D- arabinofuranosylhypoxanthine (ara-IMP) et la 9-P-D-arabinofu- ranosyl-adénine (ara-A) sur la mortalité dans 11 encéphalite due à l'herpès-virus du type 1 chez la souris (chaque point correspond à la moyenne de 3-5 expériences). Exemple 15 Dans cette expérience, le composé a été évalué contre la kératite herpétiforme chez le lapin. On anesthésie les deux yeux de lapins blancs de race New-Zealand avec du chlorhydrate de proparacaine 0,5 %et on gratte ensuite uniformément l'épithélium cornéen. On place ensuite dans chaque oeil une suspension-du virus de l'herpès-simplex du type- 1 en quantite suffisante pour provoquer le développment d'une kératine uniforme en trois jours On traite quatre animaux topiquement (1 goutte par oeil) avec une solution de composé ara-TNP ou ara-A (G.2 ou 0,02 M de chaque) dans de l'alcool polyvinylique (rVA) à 1,4 5S, ou bien le PVA seulement dans le cas des témoins viraux. On effectue le traitement heure en heure (de 8,00 à 19,00 heures) avec chaque médicament incorporé dans une pommade ophtalmologique "Lacrilube" appliquée à 8,00 heures chaque jour pendant 7 jours, en commençant 24 heures après l'inoculation du virus.On examine les yeux les deuxième, qua- trième,sixième et neuvième jours pour évaluer l?opacité de la cornée,le diamètre et le type de la lésion,l'irritation,le gonflement et l'écoulement. On attribue dans chaque cas une note de O (pas d'infection) à 4 (infection maximale). L'opérateur qui examine les yeux ignore lesquels ont été traités avec le médicament ou un placebo.Les notes d'opacité et de lésion sont multipliées par 10 et les notes des autres paramètres sont multiplée par 2, puis additionnées, de manière à obtenir une notation équilibrée de la lésion" dont on trace la va-riation en fonction du jour d'In- fection. Cette représentation graphique de l'effet exercé par chaque médicament est donnée sur la figure 2 des dessins annexés. Le composé ara-TMP, à toute-concentration, est plus efficace que le composé ara-A dans l'inhibition du développement de la maladie. Plus précisément, la figure 2 illustre l'effet du traitement optique avec le 5'-phosphate de 9-g-o-arabinofuranosyl-hypoxanthine (ara-IMP) et la 9-ss-D-arabinofuranosyladénine (Ara-A) sur la kératite de l'oeil du lapin produite par l'herpès-virus du type 1. L'axe des abscisses donne le nombre de jours écoulés après l'inoculation du virus et l'axe des ordonnées indique la notation équilibrée de la lésion. Le tracé en traits interrompus correspond au témoin viral. Exemple 16 On a déterminé l'effet exercé par le composé ara-IMP ou ara-A sur la mortalité chez les hamsters produite par l'hépatite due au virus de l'avortement de la jasent. On inocule à de jeunes hamsters adultes, par voie intrapéritonéale, une dose léthale à 95 % du virus de l'avortement de la jument. Chaque médicament, dissous ou en suspension dans une solution saline, ou la suspen- sion saline seulement dans le cas des témoins viraux, est adminis- tré par voie intrapéritonéale aux animaux deux fois par-jour pendant 4 jours, en commençant une heure avant l'inoculation du virus.On observe les animaux pendant 21 jours et on note les cas mortels à mesure qu'ils apparaissent. Dans chaque expérience, le composé ara-TNP se montre plus efficace et moins toxique que le composé ara-A, en maintenant en vie les animaux infectés jusqu'à une 'proportion de 100 % pendant la durée de l'expérience. Les résultats sont reproduits sur le tableau III. TABLEAU III Effet du 5'-phosphate de 9-ss-D-arabinofurasonyl-hypoxanthine (ara-IMP) et de la 9-ss-D-arabinofurasonyl-adénine (ara-A) sur la mortalité associée à l'hépatite chez des hamsters infectés avec le virus de l'avortesement de la jument Hôte : Hamster @rné de Syrie, femelles @@@@@@ Voie de traitement intra péritonéale Dose de virus : 1DDL50 (10-6,8) Programme de traitement : 2 fois par jour pendant 4 jours, en commençant une heure avant l'inoculation du virus Voie d'inoculation du virus : intrapéritonéale Période d'observation : 21 jours Numéro de Traitement Témoine Animaux Augmenta- Temps Augmentation l'expé- de toxicité traités et tion de la moyen de moyenne du rience survivants/ infectés, survie, P. survie des nombre de total survivants/ (a) animaux survivants traités et P (c) infectés (b) (jours) Ara-IMP, 250 mg/kg/jour 3/3 10/10 0,001 21 0,001 Ara-IMP, 125 mg/kg/jour 3/3 10/10 0,001 21 0,001 1 Ara-A, 250 mg/kg/jour 2/3 0/8 - 9,2 0,001 Ara-A, 125 mg/kg/jour 2/2 8/9 0,001 13 - (d) Témoin viral (traitement 2/20 4,1 à la solution de sel) Ara-IMP, 250 mg/kg/jour 3/3 10/10 0,001 21 0,001 Ara-IMP, 62,5 mg/kg/jour - 9/10 0,001 8 - (d) 2 Ara-A, 250 mg/kg/jour 2/3 3/10 0,09 12 0,001 Ara-A, 62,5 mg/kg/jour - 10/10 0,001 21 0,001 Témoin viral (traitement à 1/20 3,6 la solution de sel) (a) P = Probabilité (méthode statistique de Fischer) (b) Nombre d'animaux (morts jusqu'au 2ème jour inclus : (c) P = Probabilité (méthode statistique basée sur la variable t) (d) Le nombre d'animaux morts est insuffisant pour une analyse statistique précise. REVENDICATIONS 1. Nouveaux composée , caractérisés par le fait qu'ils répondent à la formule dans laquelle Z est un atome d'hydrogène ou un groupe hydroxy et AP désigne un arabinofuranoside phosphorylé, dont le radical phosphate est attaché en position 3' ou en position 5', ou dans les deux positions D' et 5' pour former des 3',5'-cyclophosphates. 2. Composés de formule suivant la revendication 1, caractérisér par le fait que AP est phosphorylé en position 5' et répond à la formule dans laquelle R1 est un groupe CH, O-alkyle en C1 à C6 ou OM et R2 est un groupe OH ou CM. 3. Composés de formule suivant la revendication 1, caractérisés par le fait que AP est phosphorylé en position 3' et répond à la formule dans laquelle R1 est un groupe OH, O-alkyle en C1 à C6 ou ON, et R2 est un groupe OH ou OM. 4. Composés de structure suivant l'une des revendications 2 et 3, caractérisés par le fait que M est un groupe ammonium ou ammonium substitué, un métal alcalin ou un métal alcalino-terreux. 5. Composés de formule suivant la revendication 1, caractérisés par le fait que le radical phosphate de AP est attaché en positions 3' et 5' pour former le 3',5'-cyclophosphate et répond à la formule 6. Le 5'-phosphate de 9-ss-D-arabinofuranosyl-hypoxan- thine, le 3',5'-cyclophosphate de 9-ss-D-arabinofuranosyl-hypo- xanthine, le 5'-O-méthylphosphate de 9-ss-D-arabinofuranosylhypoxanthine, le 5'-phosphate de 9-ss-D-arabinofuranosyl- N1-hydroxyhypoxanthine, le 3'-phosphate de 9-ss-D-arabinofu- ranosyl-hypoxanthine, le 5'-0-méthylphosphate de 9-ss-D-arabino- furanosyl-adénine, ou le 3'-phosphate de 9-p-D-arabinofurano- syl-adénine suivant la revendication 1. 7. Procédé de préparation de 9-ss-D-arabinofurano- syl-adénine-nucléotides, caractérisé par le fait qu'il consis te à faire réagir un 9-ss-D-furanosyl-nucléoside correspondant avec un composé du type oxychlorure de phosphore en présence d'un solvant consistant en un phosphate de trialkyle pendant environ 3 à environ 24 heures à une température d'environ O à environ 550C pour former un arabinofuranosyl- adénine-nucléotide correspondant; et à séparer le produit. 8. Procédé suivant la revendication 7, caractérisé par le fait que l'opération de séparation consiste à traiter le nucléotide avec un carbonate alcalin à un pH d'environ 5 à environ 7 et à séparer le produit par chromatographie et lyophilisation. 9 . Procédé de préparation de 9-,8-D-arabinofuranosyl- hypoxanthine-nucJéotides, caractérisé par le fait qu'il consistre à faire réagir un- 9-ss-arabinofuranosyladénine- nucléotide correspondant avec l'acide acétique cristallisable et le nitrite de sodium en présence d'eau pendant environ 15 à environ 24 heures, à une température d'environ 10 à environ 300C pour former comme produit un-arabinofuranosyl-hypoxanthine- nucléotide correspondant ; et à séparer ledit nucléotide obtenu comme produit. 10. Procédé suivant la revendication 9, caractérisé par le fait que l'opération de séparation implique le traitement du nucléotide avec un carbonate alcalin et la cristallisation du nucléotide produit. 11-. Procédé de préparation de 5'-phosphate de 9-ss-D= arabinofuranosyl-hypoxanthine, caractérisé par le fait qu'il consiste à faire réagir le 5'-phosphate- de 9-,B-D-arabinofu- ranosyl-adénine avec l'acide acétique cristallisable et le nitrite de sodium en présence d'eau pendant environ 15 à environ 24 heures,-à une température d'environ 10 à environ 300C pour former le 5'-phosphate d'hypoxanthine comme produit ; et à séparer ledit produit par traitement avec un carbonate alcalin, puis à le faire eristalliser. 12. Médicament, caractérisé par le fait qu'il est constitué par ou qu'il contient un composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 6.