FR 2197610 A1 19740329 FR 7331887 A 19730904 La présente invention concerne un procédé d'isolement de deux substances à activité pharmacologique à partir de l'Anisocyclea grandidieri. L'Anisocyclea grandidieri appartenant à la faille des menispermacées est une liane que l'on trouve sur la côte occidentale de Madagascar. Or, la demanderesse a trouvé que cette plante renferme deux alealoides qui se signalent par une très bonne activité spasmolytique, La présente invention a donc pour objet ces deux alcaloides, leurs sels compatibles du point de vue physiologique ainsi qu'un procédé d'isolement de ces alcaloïdes de l'Anisocyclea grandidieri. Pour obtenir ces deux substances actives, on soumet à une extraction des parties franches ou séchées de la plante - le cas éch4- ant après une extraction préliminaire pour éliminer des graisses, des cires et des stérines - avec un alcool ayant de 1 à 6 atomes de carbone auquel on a ajouté une portion d'un acide carboxylique aliphatique ayant de I à 6 atomes de carbone, du chloroforme, des acides dilués ou des acides polycarboxyliques aliphatiques, on concentre l'extrait, on ajoute de l'eau au concentré, on sépare le précipité formé, on alcalinise la solution, on l'agite avec un hydrocarbure halogéné aliphatique, on évapore la solution dans l'hydrocar- bure halogéné et on sépare le mélange des bases brutes obtenu par chromatographie.Par élution avec des éluants neutres, on obtient, l'une après l'autre, les substances actives pures s 1 (-)-Epistéphanine. C 37H38N206 Poids moléculaire : 608 20 Point de fusion : 198 à 2060C [ C36H34N206 Poids moléculaire : 590 Point de fusion : 239 à 24toC [ 0 Par addition de quantités équivalentes d'acides physiologiquement compatibles, on peut transformer les substances actives en des sels hydrosolubles. Pour déterminer la structure des alcaloïdes on a utilisé des méthodes spectroscopiques. On soumet à l'extraction de préférence les branches, les tiges et les racines de l'Ânisocyclea grandidieri L'agent d'extraction constitué d'un mélange d'un alcool ayant de 1 à 6 atomes de carbone et d'un acide carboxylique ayant également de 1 à 6 atomes de carbone, contient, par exemple, de 1 à 10 * de cet acide carboxylique, de préférence il en contient 2 %. Parmi les alcools appropriés, on préfère l'éthanol et l'acide préféré est l'acide acétique. Comme acide polyfonctionnel, on peut utiliser, par exemple, l'acide citrique. Pour épuiser la solution aqueuse alcaline, le chlorure de méthylène et le chloroforme se sont avérés particulièrement convenables comme hydrocarbures halogénés.Pour effectuer la chromatogra- phie, on se sert, de préférence, d'une colonne à l'alumine neutre, comme éluant on utilise avantageusement un mélange d'éther et de méthanol. Parmi les acides que l'on peut utiliser pour la formation de sel, on mentionnera, à titre d'exemples, l'acide chlorhydrique comme acide minéral et les acides acétique, lactique et tartrique comme acides organiques. Pour l'extraction préalable de la plante, on utilise, de préférence, l'éther de pétrole ou le cyclohexane. Les substances actives conformes à la présente invention sont caractérisées par une bonne activité spasmolytique 1 - L'(-)-épistéphanine a des effets spasmolytiques sur l'iléon de cochon d'Inde antagonistes de Ba++ de la lentine et de l'histamine, qui sont d'environ trois à quatre fois plus forts et d'une durie plus longue que pour la papavérin-. Si l'on considère les toxi- cités, les conditions sont encore plus favorables puisque le rapport des DL50 chez la souris i.p. de l'épistéphanine/p patrine est de 10 s t. 2 - Sur l'iléon isolé de cochon d'Inde, la stébisinine présen- te des effets spasmolytiques antagonistes du chlorure de barra, de la lentine et de l'histamine ainsi que de l'oxytocine sur l'utérus isolé de rat. Les effets spasmolytiques sont d'environ deux à trois fois plus forts et d'une durée plus longue que pour la papvérine. La toxicité chez la souris n'est que la moitié de celle de la papa vérine (rapport des DL50 chez la souris i.p. stébisinine/papavérine r2 s 1). En raison de leur activité spasmolytique, les alcaloïdes peuvent titre utilisés conne agents spallolytiques. On peut les ad inis- trer par voie intraveineuse ou orale, le dosage étant, de préféren ce, égal à celui de la papavérine. Pour l'administration oral, on se sert avant tout, de co-pri- més ou de dragées, contenant la substance active sous forme de base libre ou de sel, le cas échéant en mélange avec, les adjuvants et véhicules généralement utilisée, par exemple le talc, l'amidon ou le lactose. Pour l'administration intraveineuse, on utilise des solutions aqueuses contenant additionnellement des solvants physiologiquement compatibles. I1 est également possibe, toutefois, d'utiliser les sels sous forme de solutions aqueuses pures. L'exemple suivant illustre la présente invention. EXEMPLE. Dans un extracteur Sonnet, on soumet une extraction pendant soixante heures, 250 g.de tiges broyées d'Anisocyclea grandidieri avec 2 1 de méthanol contenant 2 % d'acide acétique en poids. On concentre la solution d'une manière importante, on y ajoute 500 ML d'eau et on la conserve dans un réfrigérateur pendant la nuit. Il se forme alors un précipité que l'on sépare par centrifugation, on le met en suspension encore deux fois, chaque fois dans 100 ml d'acide acétique 2 N et on le centrifuge. On réunit les solutions surnageantes, on les neutralise avec une solution de carboiiate de sodium, on les rend alcalines avec NaOH 2 N et on extrait dix fois, chaque fois avec 100 ml de chlorure de méthylène.On sèche les extraits de chlorure de méthylène sur du sulfate de sodium, on filtre et on évapore à sec sous vide. On obtient 3,8 g de bases brutes fortement souillées. On dissout le mélange de bases brutes dans 1,5 1 de chloroforme/méthanol (10 : 1) et on filtre la solution sur une colonne (diamètre 2 cm) de 60 g d'alumine (Woelm, neutre). Après concentration, on obtient 3,5 g de mélange de bases brutes purifiées. On soumet le mélange de bases brutes obtenu à une chromato- graphie sur une colonne (diamètre 2,5 cm) de 130 g d'alumine (Woelm, neutre). On élue la première fraction avec 1,5 1 d'éther et de méthanol (10 t 1). A partir de l'éluat, on obtient une substance amorphe brun clair. On la fait bouillir dans un mélange de benzène/ méthanol (70 r 1) à la suite de quoi la stébisimine cristallise. On la sépare par filtration et la sèche. Le rendement est de 0,59 g, le point de fusion est de 239 à 241ex. On évapore à sec le filtrat (eau mère). On obtient 0,90 g d'une base brute amorphe que l'on chromatographie à nouveau sur 130 g d'alumine (Veela, neutre) avec un mélange éther/méthanol (10 t 1) (diamètre de la colonne 2,5 cm). De cette manière on isole î'()épistanine qui cristallise à partir de l'agent d'élution. Du filtrat de la cristallisation, on peut encore isoler 40 mg de stébisimine. - E?VNDiCATIONS - 1 - Procédé d'isolement de deux substances a activait. pharma- coloiue, à partir de l'Ani.socyelea ranidieri, caractérise en ce qu'on soumet à une extraction l'Anisoeyclea grandidieri avec un alcool ayant de 1 à 6 atomes de carbone et contenant un acide carboxylique aliphatique ayant de 1 à 6 atomes de carbone, du chloro forme, des acides dilués ou des acides polycarboxyliques aliphatiques, on concentre l'extrait, on ajoute de l'eau à lextrait, on alcalinise la solution et on l'épuise par un hydrocarbure halogéné aliphatique, on concentre par évaporation la solution dans lthydro- carbure halogéné, on soumet à une chromatographie sur colonne le mélange de bases brutes obtenu, on élue les deux substances actives avec des solvants neutres et, le cas échéant, on les transforme en des sels physiologiquement compatibles. 2 - Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'on utilise les branches, les tiges et les racines de la plante que l'on soumet d'abord à une extraction préliminaire au moyen d'un hydrocarbure aliphatique ou cycloaliphatique liquide 3 - Procédé selon la revendication 1 ou la revendication 2, caractérisé en ce que l'on utilise pour l'extraction du méthanol contenant comme acide de l'acide acétique. 4 - Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que l'alcool utilisé pour l'extraction contient de 1 à 10 * d'acide. 5 - Procédé selon l'une quelconque-des revendications 1 à 4, caractérisé en ce que l'on utilise le chlorure de méthylène ou le chloroforme comme hydrocarbure halogéné aliphatique d'extraction des solutions aqueuses alcalinisées. 6 - Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisé en ce que l'on utilise de l'alumine neutre comme adsorbant et des mélanges d'éther et de méthanol comme agents d'élution pour la chromatographie sur colonne. 7 - Substances à activiste pharmacologique obtenues à partir de l'Anisocyclea grandidieri et répondant aux formules I. (-)-épistéphanine II. Stébisimine et leurs sels physiologiquement compatibles. 8 - Epistéphanine et Stébisimine obtenues à partir de l'Anisocyclea grandidieri par un procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 6. 9 - Composition pharmaceutique ayant notamment une activité spasmolytique, caractérisée en ce qu'elle contient, à titre de principe actif, une substance selon la revendication 7 ou la revendication 8.