FR 2196386 A1 19740315 FR 7229396 A 19720817 La présente invention concerne un ensemble de milieux de culture destinés à recevoir l'inoculation d'une colonie bactérienne préalablement isolée et développée sur ces divers milieux de culture en vue d'y engendrer des réactions avec les produits contenus dans ces milieux, lesdites réactions permettant 1' identification de la souche de bactéries préalablement isolée. On rise donc dans le cadre de la présente invention à permettre l'identification de la souche de bactéries isolée à partir d'un nombre de ca ractères essentiels préalablement définis et dont la présence ou l'absence permettra d'identifier la bactérie suspecte et préalablement isolée dans un milieu de primo-culture. L'évolution de la pratique médicale ou vétérinaire tend à amener de plus en plus le praticien à faire appel aux techniques d'analyses en laboratoires afin d'aboutir à un diagnostic très sûr ; il suit que 1' examen bactériologique prend de plus en plus d'importance dans l'analyse clinique quotidienne ; en outre, l'évolution tend à demander aux laboratoires des conditions de travail de plus en plus exigeantes et l'on requiert de l'analyse une plus grande précision et des résultats plus rapides. On a décrit dans la demande de brevet français au nom du demandeur. n' 71. 37081 du 15 octobre 1971, un conteneur portatif pour milieux de culture, du type "disposable", contenant d'avance un certain nombre de milieux de culture préparés et pré-dosés et susceptibles d'entre jetés après utilisation, evitant ainsi les manipulations fastidieuses, les besoins de verrerie et de stérilisation avec les encombrements et les dépenses en personnel qui en résultent; le conteneur multiple ainsi décrit décongestionne les étuves et les réfrigérateurs et permet une rotation plus rapide du matériel. Les essais et expérimentations auxquels il a été procédé par le demandeur ont permis de constater qu'une amélioration pouvait être obtenue non seulement au niveau du support matériel contenant le milieu ou les milieux de culture servant aux essais et examens. mais dans la préparation et la structure même de ces divers milieux. I1 est apparu que le choix de nouveaux milieux permettait pour un nombre de milieux réduits ou identiques d'aboutir à la définition de caractères plus nombreux. ce qui permettait un diagnostic plus précis et plus sûr : en n tre. l'utilisation des nouveaux milieux définis dans le cadre de la présente demande permettait l'appréhension de résultats après un délai beaucoup plus rapide et une période d'incubation considérablement réduite par rapport aux délais couramment pratiqués dans ce genre d'analyse ; l'obtention plus ra pide de résultats permet de désencombrer les laboratoires et les appareils de stérilisation ou de conservation et permet par conséquent une rotation beaucoup plus rapide du matériel et un rendement accru du personnel. En outre, les milieux de culture définis dans le cadre de la présente demande permettent d'obtenir des réactions nettes et tranchées dont la lecture sera particulièrement aisée pour l'utilisateur. Les milieux définis dans le cadre de la présente demande permettent en outre d'aboutir à la définition d'une succession ou d'un ensemble de caractères convenablement sélectionnés d'après leur intéret taxonomique et permettant d'aboutir rapidement à l'indication de la souche recherche e d ans la typologie des bactéries. On donnera ci-après successivement les caractéristiques de chacun des nouveaux milieux qui sont définis et revendiqués dans le cadre de la présente demande et qui sont utilisés en association avec d'autres mS-- lieux, eux-memes nouveaux et compris dans la présente demande, ou con; - tionnels pour constituer un ensemble de milieux de préférence disposés dans un conteneur unique, conforme aux caractéristiques de la demande de brevet français citée ci-dessus au nom du demandeur, et permettant d'aboutir rapi dement à la définition de la souche bactérienne isolée. On a défini pour chaque milieu successivement, d'une part, sa composition, d'autre part, les différentes réactions dont il est le siège. MILIEU 1: Composition - peptone 10 g - phosphate bipotassique 2 g - glucose 10 g - agar 17 g - bleu de bromothvmol 0. 08 g - eau distillée 1000 ml Ce milieu glucosé et phosphaté est coloré en vert par le bleu de brom . th- - Réactions a) Fermentation du glucose Le milieu initialement vert devient jaune si le glucose est fermenté. Certains germes dégradant le glucose par un procédé oxydatif provoquent un jaunissement à la surface du milieu, alors que la coloration jaune apparaft dans le fond avant d'envahir l'ensemble du milieu en cas de fermentation. b) Production de gaz De nombreuses entérobactéries fermentent le glucose avec production de gaz, ce qui est un caractère de différentiation intéressant. Le gaz est retenu par l'agar et des bulles ou une fissure est alors visible dans le milieu. Le milieu est inchangé si la production de gaz est faible ou nulle. c) Réaction de Vosges-Proskauer (V. P.) La transformation de l'acide pyruvique en acétyl-méthyl- carbinol par Klebsiella, Enterobacter ou Seratia est recherchée en général au bout de 18-24 heures, lorsque les autres réactions sont lisibles. Plusieurs réactifs sont utilisables pour mettre en évidence l'acétyl-méthyl-carbinol. Il est cependant conseillé d'utiliser le réactif original suivant - sulfate de cuivre 0, 1 g - ammoniaque 4 ml - soude à 40 % 96 ml Cinq gouttes de réactif sont introduites dans la case n" 1. Dans un premier temps, le réactif basique fait virer le milieu au vert de la surface vers le fond. Puis, dans les deux minutes qui suivent l'introduction du réactif, un liseré jaune apparait près de la surface du milieu si le germe est V. P. positif. Aucun liseré n'apparaft si le germe est V. P. négatif. La production d'acétone (acétyl-méthyl-carbinoi) est confirmée au bout de vingt minutes environ par le jaunissement du milieu et l'apparition d'une coloration pourpre en surface. Si le germe ne produit pas d'acétone (V. P. négatif), le liquide surnageant reste bleuatre et transparent, tandis que le milieu gélosé est vert franc. d) Réaction du rouge de méthyle (R. M.) Le rouge de méthyle est un indicateur de pH, rouge en dessous de pH 5, jaune à pH 6. Le test consiste à ajouter une goutte de solution de rouge de méthyle sur le milieu au bout de 48 heures d'incubation ; une coloration rouge indique une réaction positive (ce qui est le cas lorsque l'acide pyruvique, produit de la fermentation du glucose, n'est pas ultérieurement transformé en acétone). Cette réaction n'est évidemment réalisable que si la réaction V. P. n'a pas été faite. En pratique, les germes V. P. positif, ou R. M. négatif alcalinisent suffisamment le milieu pour que celui-ci repasse au vert entre 24 et 48 heures d'incubation, (le bleu de bromo-thymol est vert quand le pH est supérieur à 6), rendant inutile l'introduction de rouge de méthyle. MILIEU 2 Composition - extrait de viande 3 g - tryptone 20 g - sulfate ferreux ammoniacal 0, 2 g - thiosulfate de sodium 0, 4 g - cystéine 0, 2 g - agar 17 g - eau distillée 1000 ml Ce milieu contient une peptone riche en tryptophane des dérivés soufrés et un sel de fer. Il n'est pas coloré. Réactions a) Si la couche bactérienne produit de l'hydrogène sulfuré, celuici se combine aux sels de fer du milieu et donne du sulfure de fer noir. b) Production indole. La production d'indole à partir du typtophane peut etre recherchée au bout de 18-24 heures d'incubation en introduisant quelques-gouttes de réactif de Kovacs dans la case n" 2 : une coloration rouge apparat si le milieu contient de l'indole. c) Un brunissement du milieu n" 2 peut être observé avec Proteus et Providencia. Ce brunissement est dû à la désamination du tryptophane et ne doit pas etre confondu avec la production d'H2S, franchement noire. MILIEU 3 A: Composition - peptone îg - glucose îg - phosphate monopotassique 6 g - phosphate disodique 2 g - tryptophane 3 g - urée 20 g - rouge de phénol 0, 01 g - agar 17 g - eau distillée 1000 ml Ce milieu contient de l'urée. du tryptophane. du rouge de phénol. Un peu de peptone et de glucose ont été ajoutés pour permettre la croissance des bac téries autres que Proteus. Sa couleur initiale est jaune. Réactions a) Uréase L'hydrolyse de l'urée alcalinise le milieu qui vire du jaune au rouge. Cette inaction débute au bout de 6 à 12 heures avec Proteus. Certaines bactéries telles que KIebsiella, Bordetella ou Yersinia hydrolysent aussi l'urée dans ce milieu ; la réaction est en général plus lente et l'incubation devra le plus souvent etre prolongée au-delà de 24 heures pour que le milieu vire franche ment au rouge dans ce cas. b) Tryptophare desaminase La tryptophane-désaminase caractérise le groupe Proteus-Providencia, et distingue Proteus des autres bactéries uréasiques. Pour réaliser le test, on introduit, au bout de 18-24 heures d'incubation, 5 gouttes de chlorure ferrique à 8 % dans le milieu 3 . Une coloration rouge-brun apparaît rapide ment si la réaction est positive. La lecture peut se faire sur le milieu viré au rouge sans inconvénient. c) La recherche de l'indole peut se passer dans ce milieu comme d ans le précédent. Cette possibilité peut être utilisée dans le cas où lton re cherche une production tardive d'H2S dans le milieu n" 2. MILIEU 3 B Le milieu 3 A décrit ci-dessus. quoique d'une formule originale, reste d'une conception relativement classique, dans le but de ne pas désorien ter le bactériologiste qui doit s'adapter à un ensemble de milieux et de réactions dont il n'a pas toujours l'habitude. Les essais réalisés au Laboratoire ont cependant permis de cons tater qu'en modifiant certains éléments de la formule on pouvait obtenir des milieux plus intéressants que le milieu décrit. En effet, si l'on diminue la proportion de rouge de phénol (moitié) et si l'on introduit un sel de fer, tout en diminuant quelque peu la quantité de tampon phosphate, lthydrolase de l'urée fait virer le milieu du jaune au rose dans les six heures d'incubation le plus souvent, puis le milieu passe du rose au brun-rouge. ce qui caractérise la présence d'une tryptophane-désaminase. j n'est donc plus nécessaire d'ajouter du chlorure ferrique pour rechercher la T. D. A. Cela évite une manipulation et permet de rechercher l'indole par addition du réactif de Kovacs à la surface du milieu intact. Plusieurs milieux peuvent être fabriqués sur ce principe. Le milieu suivant, par exemple, donnera les résultats attendus - tryptone 2g - phosphate monopotassique 4 g - phosphate disodique 1, 5 g - tryptophane 3 g - rouge de phénol 0, 004 g - chlorure ferrique 0, 05 g - agar 15 g - urée 20 g - eau distillée 1000 ml Réparti seul dans les divers compartiments d'un conteneur multiple, ce milieu présente un intérêt particulier pour la différentiation des Salmonelles et des Proteus à partir des milieux sélectifs pour Salmonella-Shigella. Ces milieux sélectifs, fort utilisés pour les examens de selles ou de produits alimentaires, inhibent de nombreuses bactéries sans intérêt, mais les Proteus s'y développent facilement en donnant des colonies semblables à celles de Salmonella et une distinction rapide s'impose.Chaque compartiment du conteneur multiple empli de milieu urée - T. D. A. - indole est ensemencé avec une colonie suspecte : six heures plus tard, les Proteus ureasiques sont facilement repérés. Si la lecture n'est faite qu'au bout de 12 ou 24 heures, l'ammoniac produit par les Proteus a, en général, alcalinisé de nombreux compartiments voisins de ceux contenant des Proteus : les compartiments roses ou jaunes seront donc suspects de contenir des Salmonelles les cases ensemencées par des Proteus, à ce moment de l'incubation (à 37 C)seront rouge-brun en raison de la désamination du tryptophane, facl lement reconnaissables par conséquent. La coloration rouge-brun pourra être accentuée par l'addition de quelques gouttes de chlorure ferrique à 8 bien que cette addition ne soit pas nécessaire en général. Les colonies suspectes (jaunes au bout de 6 heures, roses ou jaunes au bout de 15-24 heures: sont repiquées pour une identification plus complète. La recherche de l'indole par l'addition d'une ou deux gouttes de réactif de Kovacs (la présence d'indole est caractérisee par l'apparition ,l'une coloration rouge) peut être mise à profit, notamment lorsque des ge es fermentant le lactose (leurs colonies ont un aspect particulier sur les milieux sélectifs pour Salmonella-5A.igella) auront été ensemencés sur les milieux urée-T. D. A-indole : la présence d'indole permettra de dépister facilement les colibacilles. Ce milieu 3 B, réparti dans le conteneur multiple décrit, permet ainsi de différentier rapidement et économiquement un grand nombre de colonies bactériennes à partir des milieux sélectifs pour Salmonella-Shigella, avec pour conséquence un pourcentage d'isolements de Salmonelles plus élevé. MILIEU 4: Composition - peptone 10 g - extrait de viande 1 g - lactose 10 g - saccharose 10 g - nitrate de potassium 1 g - rouge de phénol 0, 04 g - agar 17 g - eau distillée 1000 ml Ce milieu, contenant du saccharose, du lactose et du nitrate de potassium, est coloré en rouge par le rouge de phénol. Réactions a) Fermentation des diholosides La fermentation du lactose ou du saccharose acidifie le milieu qui vire du rouge au jaune. La combinaison de ces sucres évite en général les réactions faussement négatives présentées par les germes qui ne possèdent pas de perméase pour le lactose. b) Réduction des nitrates en nitrites Ce test, très important du point de vue taxonomique (de même que le glucose et l'oxydase), est réalisé en ajoutant deux gouttes de chacun des réactifs suivants I - acide sulfanilique 0, 8 g ; acide acétique 5 N 100 ml II - alpha-naphtyl-amine 0, 5 g; acide acétique 5 N 100 ml; Si des nitrites sont présents, une coloration rouge apparaft en surface, signant une réaction positive. Si aucune réaction ntapparaTt, un réducteur est ajouté (poudre de zinc) et fait apparattre la coloration rouge s'il y a encore des nitrates dans le milieu (réaction négative). Aucune coloration n'apparaft si les nitrites ont été réduits en azote (réaction positive).Le rouge de phénol ne gêne pas la lecture puisque les réactifs acides le font virer au jaune. MILIEU 5 Composition - extrait de levure 3 g - L-lysine 5g - d-glucose 1 g - phosphate monopotassique 0, 4 g - pourpre de bromocrésol 0, 02 g - agar 17 g - eau distillée 1000 ml Le pH est ajusté aux environs de 6. Ce milieu sans peptone, contenant de la lysine et du pourpre de bromocrésol, est jaune-grisatre au départ. Réactions a) Lysine-décarboxylase (L. D. C. ): Les amines produites par la décarboxylation de la lysine alcalinisent le milieu qui devient pourpre dans les 24 heures en général. Ce caractère est important pour la distinction entre Salmonella et Citrobacter. Il est aussi intéressant dans le groupe des germes V. P. positif. Une coloration vaguement pourpre, avec ce groupe, sera considérée comme négative, des réactions plus complexes pouvant alcaliniser lentement le milieu. b) Oxydase L'addition de quelques gouttes de di méthyl-paraphénylène-diamine en solution à 1 % dans 11 eau distillée fait virer la colonie microbienne au rouge puis au noir dans le cas d'une réaction positive. La colonie reste grisatre dans le cas contraire. MILIEU 6 Composition - extrait de levure 0, 1 g - ornithine 5g - phosphate monopotassique 1, 2 g - phosphate disodique 0, 4 g - d-glucose 0, 25 g - pourpre de bromocrésol 0, 02 g - agar 17 g - eau distillée 1000 ml Ce milieu sans peptone contenant de l'ornithine et du pourpre de bromocrésol est jaune-grisatre. Réactions Les amines produites par la décarboxylation de l'ornithine (Ornithine-décarhoxylase présente dans le milieu) font virer le milieu initia liement jaune-grisatre au pourpre. Le milieu est jaune ou ,grisâtre en cas de ru action négative. Cette réaction est très intéressante pour caractériser le genre Enterobacter qui alcalinise rapidement ce milieu contrairement à Klebsiella. De préférence, les milieux qui ont été décrits ci-dessus seront utilisés étant combinés dans un même conteneur, chacun étant disposé dans un compartiment distinct. On comprend que l'on utilisera suivant les besoins soit le milieu 3 A, soit le milieu 3 B, qui sont décrits à titre alternatif ; toutefois, dans des cas particuliers, on pourrait prévoir l'utilisation dans un même conteneur et la disposition juxtaposée du milieu 3 A et du milieu 3 B cumulative ment. Les milieux qui ont été décrits ci-dessus pourront être encore utilisés en combinaison avec des milieux de culture conventionnels. Sous une forme préférée d'exécution de l'invention, on utilisera un ensemble de huit milieux comportant les milieux 1, 2, 3 A (ou 3 B), 4, 5, 6, ces six milieux étant associés à deux milieux conventionnels définis ci-après sous les références 7 et 8. MILIEU 7 Composition - chlorure de sodium 5 g - sulfate de magnésium 0, 2 g - phosphate monoammonique 1 g - phosphate bipotassique - citrate de sodium 5 g - bleu de bromothymol 0. 08 g - agar 17 g - eau distillée 1000 ml Réactions Ce milieu, réalisé selon la formule de Simmons, vire du vert au bleu si le citrate de sodium est utilisé. La réaction se produit en général en 24 heures; cependant, certaines bactéries, telles que Salmonella, éprouvent quelques difficultés à se développer dans ce milieu synthétique et ne positivent la réaction qu'en 48 heures. MILIEU 8 Composition: - extrait de levure 0, 5 g - d-glucose 0, 25 g - sulfate d'ammonium 2g - phosphate bipotassique 0, 6 g - phosphate monopotassique 0, 4 g - chlorure de sodium 2 g - malonate de sodium 3 g - bleu de bromothymol 0, 08 g - agar 17 g - eau distillée 1000 ml Les bactéries qui n'utilisent pas le malonate peuvent cultiver dans ce milieu, mais seules les bactéries utilisant le malonate alcalinisent le milieu et le font virer du vert au bleu. Ce caractère est très important pour distinguer Salmonella d'Arizona. Il est par ailleurs fort utile pour différentier Serratia de Klebsiella et Enterobacter. L'aspect des colonies bactériennes a toujours été un élément important pour le bactériologiste. L'invention permet d'étudier ia forme la luxuriance, l'opacité, la viscosité, la pigmentation des colonies ainsi que la variabilité de ces caractères suivant le milieu proposé. Les milieux de culture décrits ci-dessus sont stérilisés par autoclavage ou filtration et sont en général répartis stérilement dans les c -~ d'un conteneur multiple sous un faible volume. On a représenté au tableau ci-après le processus d'identificaî de la souche bactérienne, préalablement isolée, à partir des caractères de terminés par utilisatioiî des différents milieux réactifs conformes à t'invenLjj MILIEUX 1 2 3A ou3B 4 5 6 7 8 o m Bactéries Z = X Nitrate + W S > m X s O > ò Salmonella + ~ + ~ ~ ~ ~ + d + ~~ ~ . Arizona + - + - - - + + + + + Citrobacter + - + - - - + - - + Edwardsiella + - + + - - - + + - Shigella - - - d - - - - d - Escherichia + - - + - - + (±) d - ~ ~~ Klebsiella pneumoniae + + - - +1 - + + - + + I K. ozenae + - - - +1 - + - - + C K. rhinoscleromatis - - - - - - + - - - + ~ ~ Enterobacter + + - - - - + d + + + Serratia d + - - - - + + + + Proteus mirabilis +f - + - + + d -p + d Proteus vulgaris +f - + + + + d -p - d Proteus morganii +f - - + + + - -p + - ~ ~~ Proteus rettgeri - - - + + + d -p - + Providencia +f - - + - + d - - + + : Positif en 24 h. (ou en 48 h. exceptionnellement) Négatif -p Négatif, pourpre étranger à la réaction 1 : Lent L. D. C, : Lysine décarboxylase d : Différents types O. D. C. : Ornithine décarboxylase f : Faible production R. D. A. : Tryptophanedésaminase (-) : Exceptionnellement négatif V.P. : Réaction de Vosges Proskauer Au milieu 8, on peut substituer la variante suivante qui est d'ailleurs conventionnelle mais sera particulièrement adaptée pour compléter un ensemble de milieux selon les formules de l'invention: Composition - extrait de levure 1 g - malonate de sodium 3 g - d-glucose 0, 25 g - sulfate d'ammonium 2 g - phosphate bipotassique 0, 6 g - phosphate monopotassique 0, 4 g - chlorure de sodium 2 g - DL-phényl alanine 2 g - bleu de bromothymol 0, 025 g - eau distillée 1000 ml La présence de phényl-alanine permet de rechercher la phénylalanine désaminase sur ce milieu. Au bout de 24 heures d'incubation à 37 C, il suffit en effet d'ajouter 5 gouttes d'acide chlorhydrique N/10 puis 4 gouttes de chlorure ferrique à 8 %.Une coloration vert-foncé indique une réaction positive, alors que la coloration reste inchangée dans le cas d'une réaction négative. Les résultats obtenus sont identiques à ceux obtenus par la recherche de la tryptophane désaminase. C'est pourquoi son introduction n'a pas été jugée utile. Cependant, dans la mesure où l'on estimerait pouvoir se passer du test de l'uréase, l'utilisation de cette variante autorise ltélimina- tion du milieu urée-T. D. A. et son remplacement par un autre milieu pour la recherche d'un ou deux caractères supplémentaires. Le choix de ces carac tères serait alors fait en fonction des besoins exprimés par les utilisateurs. On comprend que l'invention sera utilisée de préférence en présentant en association dans un conteneur, tel que décrit dans la demande de brevet français au nom du demandeur et rappelé ci-dessus, huit milieux qui ont été indiqués ci-dessus, à savoir les milieu 1, milieu 2, milieu 3 A (ou milieu 3 B à titre de variante), milieu 4, milieu 5, milieu 6, chacun de ces milieux étant d'une composition nouvelle et permettant pour chacun l'ob- tention de résultats plus favorables par la définition de caractéristiques plus nombreuses permettant ainsi une identification plus sûre ; à ces six milieux seront associés, de préférence dans un conteneur à huit compartiments, les milieux 7 et 8 (ou la variante du milieu 8 également décrite ci-dessus) qui ré pondent à des critères plus classiques. Il est important de souligner que l'utilisation des milieux ainsi définis associés au conteneur tel que décrit dans la demande de brevet français au nom du demandeur permettra, outre la définition de caractères plus nombreux, une plus grande rapidité dans le diagnostic et l'identification d e la bactérie recherchée. En effet, l'utilisation de milieux réactifs définis selon l'invention ne nécessite qu'une faible quantité de prélèvements sur la colonie bactérienne à ensemencer : on pourra donc ainsi effectuer un prélèvement à l'aide d'un fil droit et à partir d'une seule colonie sur une primoculture soit dans un tube à essais. soit dans une boite de Petri, soit dans tout autre récipient on peut ainsi en utilisant les milieux réactifs de l'invention éliminer un stade, celui de la sub-culture, à partir d'une primoculture visant à sélectionner les différentes colonies de bactéries, susceptibles d'être développées à partir d'un prélèvement soumis à analyses ; les faibles quantités nécessaires per mettront d'isoler en primoculture une colonie bactérienne nettement définie et de l'ensemencer directement sur l'ensemble des compartiments conformes au brevet français du demandeur et rappelé ci-dessus et contenant les milieux réactifs de l'invention; ; on pourra ainsi réduire de 24 heures la durée totale d 'un examen bactériologique tout en laissant la liberté du choix des récipients pour la primoculture. La description qui précède n'a été donnée qu'à titre illustratif et l'on pourra donc réaliser à partir des éléments décrits diverses variantes et modes de réalisation de l'invention sans en franchir les limites. REVENDICATIONS 1 - Ensemble de milieux de culture pour identification d'une colonie de bactéries isolée sur un milieu de primo culture, caractérisé en ce qu'il comporte au moins un compartiment contenant un milieu défini par la composition suivante - peptone 10 g - phosphate bipotassique 2 g - glucose 10 g - agar 17 g - bleu de bromothymol 0, 08 g - eau distillée 1000 ml 2 - Ensemble de milieux de culture pour identification d'une colonie de bactéries isolée sur un milieu de primo culture, caractérisé en ce qu'il comporte au moins un compartiment contenant un milieu défini par la composition suivante - extrait de viande 3 g - tryptone 20 g - sulfate ferreux ammoniacal 0, 2 g - thiosulfate de sodium 0, 4 g - cystéine 0, 2 g - agar 17 g - eau distillée 1000 ml 3 - Ensemble de milieux de culture pour identification d'une colonie de bactéries isolée sur un milieu de primo culture, caractél.se en ce qu'il comporte au moins un compartiment contenant un milieu Défini par la composition suivant e - peptone lg - gluc)se lg - phosphate monpotassique 6 g - phosphate disdique 2 g - tryptophane 3 g - urée 20 g - rouge de phénol 0. 01 g - agar 17 g d eau sttllea 1000 ml 4 - Ensemble de milieux de culture pour identification d'une colonie de bactéries isolée sur un milieu de primo culture, caractérisé en ce qu'il comporte au moins un compartiment contenant un milieu défini par la composition suivante - tryptone 2g - phosphate monopotassique 4 g - phosphate disodique 1, 5 g - tryptophane 3 g - rouge de phénol 0, 004 g - chlorure ferrique 0, 05 g - agar 15 g - urée 20 g - eau distillée 1000 ml 5 - Ensemble de milieux de culture pour identification d'une c olonie de bactéries isolée sur un milieu de primo culture, caractérisé en ce qu'il comporte au moins un compartiment contenant un milieu défini par la compositiDn suivante - peptone 10 g - extrait de viande 1 g - lactose 10 g - saccharose 10 g - nitrate de potassium 1 g - rouge de phénol 0, 04 g - agar 17 g - eau distillée 1000 ml 6 - Ensemble de milieux de culture pour identification d'une colonie de bactéries isolée sur un milieu de primo culture, caractérisé en ce qu'il comporte au moins un compartiment contenant un milieu défini par la composition suivante - extrait de levure 3 g - L-lysine 5g - d-glucose 1 g - phosphate monopotassique 0, 4 g - pourpre de bromocrésol 0, 02 g - agar 17 g - eau distillée 1000 ml 7 - Ensemble de milieux de culture pour identificatirn d'une colonie de bactéries isolée sur un milieu de primo culture, caractérisé en ce qutil comporte au moins un compartiment contenant un milieu défini par la composition suivante - extrait de levure 0, 01 g - ornithine 5 g - phosphate monopotassique 1, 2 g - phosphate disodique 0, 4 g - d-glucose 0, 25 g - pourpre de bromocrésol 0, 02 g - agar 17 g - eau distillée 1000 ml 8 - Ensemble de milieux de culture disposés dans un conteneur unique comportant une pluralité de compartiments, soit un compartiment contenant un milieu tel que défini à la revendication 1, un second compartiment contenant un milieu tel que défini à la revendication 2, un troisième compartiment contenant un milieu tel que défini à la revendication 3, un quatrième compartiment contenant un milieu tel que défini à la revendication 5, un cinquième compartiment contenant un milieu tel que défini à la revendication 6, un sixième compartiment contenant un milieu tel que défini à la revendication 7. 9 - Ensemble de milieux-de culture disposés dans un conteneur unique comportant une pluralité de compartiments, soit un compartiment contenant un milieu tel que défini à la revendication 1, un second compartiment contenant un milieu tel que défini à la revendication 2, un troisième compartiment contenant un milieu tel que défini à la revendication 4, un quatrième compartiment contenant un milieu tel que défini à la revendication 5, un cinquième compartiment contenant un milieu tel que défini à la revendication 6, un sixième compartiment contenant un milieu tel que défini à la revendication 7. 10 - Ensemble de milieux de culture, conforme à la revendica tion 8, caractérisé en ce qu'il comporte en outre un compartiment contenant un milieu conforme à la composition suivante - chlorure de sodium 5 g - sulfate de magnésium 0, 2 g - phosphate monoammonique 1 g - phosphate bipotassique 1 g - citrate de sodium 5 g - bleu de bromothymol 0. 08 g - agar 17 g - eau distillée 1000 ml et un compartiment contenant un milieu conforme à la composition suivante extrait de levure 0, 5 g - d-glucose 0, 25 g - sulfate d'amnionium 2 g - phosphate bipotassique 0, 6 g - phosphate moiiopotassique 0, 4 g - chlorure de sodium 2 g - nalonate de sodium 3 g - bleu de bromothymol 0, 08 g - agar 17 g - eau distillée 1000 ml Il - Ensemble de milieux de culture pour identification rapide de colonies bactériennes prélevées à partir d'une pluralité de souches non identifiées, caractérisé en ce qu'il est constitué d'un conteneur comportant une pluralité de compartiments chaque compartiment contenant un même milieu conforme à la composition donnée à la revendication 4.