FR 2181732 A1 19731207 FR 7305224 A 19730214 La présente invention concerne un procédé de fabrication des sérums diagnostiques et thérapeatiques à titre élevé Qui accroit de manière non spécifique le taux d'anticorps en vue d'augmenter la protection offerte par inoculation en médecine et dans l'art vétérinaire. Dans la fabrication de sérums diagnostiques et thérapeutiques, toute augmentation du taux d'anticorps est avantageuse pour au moins deux raisons, à savoir qu'elle permet d'obtenir - une valeur de production plus élevée et - une diminution des protéines indésirables contenues dans le sérum Afin d'accroitre la réponse immunologique, il est connu d'utiliser, à la suite de l'apport d'antigènes, des adjuvants, Ces adjuvants doivent être administrés par voie parentérale mais leur utilisation ne doit se faire que dans des limites déterminées. avant tout, l'accroissement de la formation d'anticorps n'est possible que jusqu'à un certain degré. I1 est également connu d'administrer à des animaux des composés de l'acide thiocyanique, afin d'augmenter la concentration d'ions rhodanate présents dans le corps. on obtient ainsi une résistance générale aux infections et processus dtinflammatior En même temps, il se produit un accroissement de la teneur en t -globuline qui contribue également à l'accroissement de la résistance de l'organisme. Jusqu'ici, on a en outre cherché à accroître le taux d'anl- corps par modification du schéma d'inoculation, en utilisant des antigènes purifiés et en travaillant avec des animaux présentant aussi peu de germes que possible, La présente invention a pour but d'accroître la formation d'anticorps à la suite d'un apport d'antigènes et d'obtenir ainsi un rendement accru lors de la fabrication de sérums diagnostiques et thérspeutiques ainsi qu'un accroissement de la protection offerte par inoculation. L'invention se propose en particulier à favoriser les mécanismes réactionnels biologiques de façon à stimuler la réponse immunologique favorable pour l'organisme de mammifères et de réduire autant que possible celle allant dans un sens défavorable, I1 s'est avéré que l'administration d'électrolytes, dont en particulier des rhodanates (thiocyanates) et des iodures, ou de composés capables de donner naissance in vivo, par des compositions, à des ions rhodanate a pour effet d'accroître la formation d'anticorps humoraux et de favoriser l'affinité. Les administrations d'électrolytes peuvent, dans ce cas, être avantageusement réparties sur le laps ce temps s'étendant à partir de trois jours avant la première administration d'antigènes jusqu'à trois jours après la dernién administration d'antigènes ou sur une partie de ce laps de temps.L'administration des électrolytes peut s'effectuer par voie buccale ou parentérale, Le dosage doit être choisi de façon que, au bout de 24 heures après l'application précédente de rhodanate, il se produise un accroissement du taux de rhodanate de 1 à 2 mg/100 ml de sang entier, En tant que valeur aproximative pour le-dosage, qui doit en conséquence être différente d'un animal à un autre, il convient d'indiquer 32 mg de rhodanate de sodium (thiocyanate de sodium) par kg de poids de corps animal ou une quantité correspondante d'ions rhodanate. La présente invention est expliquée plus en détail cidessous à l'aide de quelques exemples de réalisation. Exemple 1 Des cochons d'inde vierges sont sensibilisés aux troisième, cinquième et quinzième jours d'essai avec 0,01 ml de sérum de cheval (environ 0,6 mg de protéine). Soit du premier au vingtième jour d'essai, soit du vingt-et-unième jour au quarantième jour d'essai, une partie des animaux reçoit journellement une fois, par injection sous-cutanée, 32 mg de rhodanate de sodium/kg de poids de corps animal sous forme de solution à 4 Yo. on forme trois groupes de témoins (non sensiblisé, non traité ; sensibilisé non traité ; non sensibilisé, traité). Les quinzième, vingt-etunième, ving-huitième et trente-sixième jours d'essai, on prélève, par ponction du coeur, environ 2 ml de sang. Ces mêmes jours s'effectue l'application de rhodanate de sodium et/ou l'administration d'antigènes immédiatement après la ponction du coeur. le quarante-quatrième jour d'essai, les animaux sont tués en leur -laissant perdre leur sang et la rate est prélevée. la détermination des anticorps humoraux s'effectue par hémagglutination indirecte suivant Boyden, la détermination de la réponse izamunologique cellulaire suivant Svjecar et Jokanovski et la détermination de rhodanate dans le sang entier en s 'in pirant des enseigne:-ents de Pohloudek-Fabini, Göckeritz et Brückner. l'influence au traitement au rhodanate sur la formation d'anticorps est indiquée au tableau 1 tandis que le tableau 2 montre la diminution de la réponse immunologique cellulaire. Exemple 2 L'essai s'effectue comme dans l'exemple 1, l'évolution du taux d'anticorps étant cependant observée jusqu'au 306e jour d'essai. Même au-dela de ce long laps de temps, le taux d'anticorps des animaux traités est nettement supérieur à celui des témoins non traités. Comme le montre le tableau 3 le traitement au rhodanate permet d'obtenir un accroissement du taux d'anticorps de longue durée. Exemple 3 L'essai s'effectue comme dans l'exemple 1 mais une partie des animaux reçoit, en même temps que la première administration d'antigènes, une application, dans chaque plante de pied, de 0,1 ml d'un mélange 1+1 d'adjuvant de Freund complet et d'une solution h 0,8 % de sel de cuisine.Le premier prélèvement de sang s'effectue au dixième Jour d'essai. ors de cet essai, o constate un renforcement réciproque de l'action de l'adjuvant de Freund complet et du rhodanate. te taux d'anticorps des animaux traités avec du rhodanate de sodium et sensibilisé avec de l'adjuvat est de 3 à 4 niveaux de taux supérieur à ceux des animaux témoins correspondants, ce qui équivaut à un accroissement de la formation d'anticorps de à à 16 fois. En ramenant l'expi- ration dii premier délai de ponction au dixième jour d'essai, on a pu constater en outre, suivant le tableau 4, que le traitement au rhodanate de sodium conduit à une accélération de la formation d'anticorps. Exemple 4 L'essai s'effectue comme dans l'exemple 1 mats le traitement est effectué avec une quantité équimolaire de rhodanate de potassium en remplacement du rhodanate de sodium. Comme le montre le tableau xQ, le rhodanate de potassium a également pour effet d'augmenter le taux d'anticorps, Exemple 5 L'essai est effectué comme dans ltexemple 1 mais, à la place du rhodanate de sodium, on applique pendant vingt jours (s.c.) du Rhodovet (marque déposée pour une solution aqueuse d'octa-hydrorhodanate d'octa-méthénamine sulfate d'ammonium de la VEB Jenapharm Serumwerk Bernburg) à une dose de 86 mg/kg de poids de corps animal.Le tableau 5 montre que l'augmentation du taux d' anticorps humoraux peut également etre obtenue avec des hydrorhodanates de bases organiques. Exemple 6 Des cochons d'Inde sont sensibilisés comme indiqué dans l'exemple 1. Le traitement s'effectue du premier au quarantième jour d'essai avec du Rhodovet aux doses de 100, 200, 400, 800, 1200, 1600 et 2000 mg/kg de poids de corps animal par jour. Dans ce cas, l'application du hodovet s'effectue par voie buccale par l'intermédiaire de l'eau potable ou du fourrage. et essai représenté au tableau 6 montre que l'accroissement du taux d'anticorps se produit également en cas d'application des rhodanates par voie buccale. l'effet dépend, dans une forte mesure, des doses utilisées. Exemple 7 Des cochons dinde vierges sont sensibilisés aux cinquième, septième et neuvième jours d'essai Soit du premier au onzième, soit du douzième nu vingt-et-unième jour d'essai, les animaux sont traités avec 32 mg d'iodure de sodiumjkg de poids de corps animal par jour, le degré de sensibilisation est déterminé à l'aide de l'essai de migration effectué sur du tissu de rate. Dans cet essai, l'iodure de sodium s'avère également efficace, cotte le montre le tableau 7. Exemple 8 Afin d'examiner encore de manière plus p-écise l'effet de l'administration d'électrolytes, une partie des essais est répétée sur des animaux soumis à une épinéphrectomie. Comme le montre le tableau 9, dans ce modèle d'essai, l'efficacité du traitement à l'électrolyte se confirme également lors de la phase de sensibilisation, Exemple o l'acide iminothiazolidine-4-carbonique a également fait l'objet d'essai en tant qu'exemple d'un composé donnant naissance in vivo, par décomposition, à des ions rhodanate. Pour ce composé, on a pu constater, comme le montre le tableau 1C, au cours d'un essai de migration effectué sur du tissu Le rate, une efficacité comparable à celle du rhodanate de sodium. Les exemples précédents sont encore explicités par les tableaux énumérés ci-dessous, Le tableau 1 montre que le traitement au rhodanate, suivant l'invention, a pour effet d'augmenter la formation d'anticorps de deux à seize fois. Le tableau 2 fournit la preuve en ce qui concerne la dimi notion de la réponse immunologiqle cellulaire indésirable, Le tableau 3 donne un aperçu de l'évolution dutaux d'anticorps observée au cours d'un laps de temps plus prolongé. Le tableau 4 illustre l'influence d'une addition supplémentaire d'adjuvant sur la formation d'anticorps, Le tableau 5 montre que le traitement avec de l'octahydrorhodanate d'octa-méthénaminqsulfate d'ammonium a également pour effet d'augmenter la formation d'anticorps, Le tableau 6 montre l'augmentation du taux d'anticorps obtenue en cas d'administration du rhodanate par voie buccale. Dans les essais représentés aux tableaux 1 à 5, l'administration du rhodanate s'effectue par voie solls-cutanée, Le tableau 7 prouve à l'aide de l'essai de migration que des ions iodure conduisent également à une augmentation de l'indice cytotoxique. Le tableau 8 montre qu'une quantité équimolaire de rhodanate de potassium permet d'obtenir approximativement le meme accroissement du taux d'anticorps que le rhodanate de sodium utilisé au cours des essais représentés aux tableaux 1 à 4. Le tableau 9 représente l'effet d'électrolytes appliqués à des cochons dInde soumis à une épinéphrectomie, cet effet étant observé à l'aide de l'essai de migration, Le tableau 10 donne un aperçu obtenu à l'aide de l'essai de migration, de l'effet produit sur l'indice cytotoxique par l'acide iminothiazolidine-4-carbonique donnant naissance in vivo, par décomposition, à des ions rhodanate, Les exemples montrent que l'application d'électrolytes suivant l'invention permet d'augmenter le taux d'anticorps de deux à seize fois par rapport à des animaux témoins non traités. Des essais parallèles ont permis de fournir la preuve que l'administration d'électrolytes, comme par exemple des ions rhodanate ou iodure, conduit à une augmentation de l'indice cytotoxique. Cela signifie cependant que la réponse immunologique cellulaire indésirable se trouve inhibée. TABLEAU I Résultats de l'essai Boyden dans la détermination de l'effet du rhodanate de sodium Groupe Nombre Sensibilisation avec Application s.c. titre de l'hémagglutination d'essai d'animaux 0,01 ml de sérum de de 32 mg de rhodanate indirect (-log) cheval aux 3e, 5e et de sodium/kg de poids aux 15e jours d'essai de corps/jour 10e, 15e, 21e, 28e, 36e et 44e jours d'essai A1 34 - - - 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 A2 72 + - - 1,5 3,0 2,5 2,9 3,4 B1 26 - du 1er au 40e jour - 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 d'essai B2 62 + du 1er au 20e jour - 2,0 4,8 4,0 4,1 4,3 d'essai F3 60 + du 21e au 40e jour - 1,5 3,0 2,5 3,1 4,0 d'essai TABLEAU 2 Résultats de l'essai d'inhibition de la migration sur un morceau de rate dans l'essai effectué avec du rhodanate de sodium. Sensiblisation Traitement avec du Indice cytotoxique rhodanate de sodium - - 1,09 : - : du 1er au 40e jour : : d'essai : 0,97 + - 0,69 + du 1er au 20e jour d'essai 0,97 : + : du 21e au 40e jour d'essai 1,19 TABLEAU 3 Résultats de l'essai Boyden utilisé pour déterminer l'effet du rhodanate de sodium (essai de longue durée) Titre de l'hémagglutination indirecte (-log) aux 10e, 15e, 21e, 28e, 36e, 44e, 62e, 76e, 104e, 217e, 306e jours d'essai A1 6 - - - 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 A2 12 + - - 1,0 5,1 3,5 4,5 4,5 5,3 6,0 6,1 7,0 5,1 B1 6 - du 1er - 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 au 40e jour d'essai - 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 B2 12 + du 1er au 20e jour d'essai - 2,3 6,3 4,0 3,7 5,2 5,9 6,9 6,6 7,3 7,5 B3 12 + du21e au 40e jour d'essai - 1,0 5,1 3,0 3,9 6,7 6,3 6,5 6,5 6,9 4,9 TABLEAU 4 Résultats de l'essai Boyden dans la détermination de l'effet du rhodanate de sodium en présence d'une administration simulanée d'adjuvant de Freund complet. groupe Nombre sensibilisation 0,2 ml appli- Titre de l'hémagglutination indirecte d'essai d'animaux avec 0,02 ml de juvant de cation (-log) aux sérum de cheval Freund com- du rho- 10e, 15e, 21e, 28e, 36e, 44e jours d'essai aux 3e, 5e et plet danate 15e jours d'essai de so dium A1 8 - - - 0.0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 A2 8 + - - 0,0 0,0 5,5 6,5 5,4 5,5 B2 8 + - du 1er au 20e jour d'essai 0,5 1,7 8,3 8,1 6,7 6,3 B3 8 + - du 21e au 40e jour d'essai 0,0 0,0 5,5 5,1 4,1 5,1 A2a 8 + + - 0,0 0,0 5,5 5,1 4,1 5,1 B2a 8 + + du 1er au 40e jour d'essai 0,4 5,1 8,9 9,9 8,8 8,4 groupe nombre sensibilisation 0,2 ml d'ad- appli- Titre de l'hémagglutination indirecte d'essai d'animaux avec 0,02 ml de juvant de cation (-log) aux sérum de cheval Freund com- du rho- 10e, 15e, 21e, 28e, 36e, 44e jours d'essai aux 3e, 5e et plet denate 15e jours d'essai plet de so dium du 21e au 40e jour d'essai B3a 8 + + du 21e au 40e jour d'essai 0,3 1,9 6,1 8,3 8,3 7,7 TABLEAU 5 Résultats de l'essai Boyden dans la détermination de l'effet d'octa-hydrorhodanate d'octaméthénamine/sulfate d'ammonium (Rhodovet). Groupe Nombre Sensibilisation application a.c.li- Titre de l'hémagglutination indirecte d'essai d'animaux avec 0,01 ml de de 0,3 mml de rho- (-log) sérum de cheval dovet/animal/jour aux aux 3e, 5e et dilué dans le rap- 10e, 15e, 21e, 28e, 36e, 44e 15e jours d'essai port 1::1 avec une jours d'essai solution physio-m logique de NaCl A1 8 - - 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 A2 8 + - 0,0 2,5 8,2 8,7 9,0 8,9 H1 8 - du 1er au 40e jour d'essai 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 H2 8 + du 1er au 20e jour d'essai 0,0 4,9 9,7 9,9 10,6 10,7 H3 8 + du 21er au 40e jour d'essai 0,0 2,5 8,2 8,4 8,4 8,3 TABLEAU 6 Résultats de l'essai Boyden dans l'application par voie buccale d'octa-hydrorhodanate d'octa-méthénamine/sulfate d'ammonium (Rhodovet). Groupe Nombre Sensibilisation appli- Dosage du Titre de l'hémagglutination indirecte d'essai d'animaux avec 0,01 ml cation Rhodovet (-log) aux de sérum de du Rho- en mg de cheval aux dovet du rhodanate/ aux 3e, 5e et 1er au kg 10e, 15e, 22e, 31e, 38e, 4t 44e 15e jours 40e jour d'essai d'essai A1 6 - - - 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 A2 6 + - - 0,0 1,3 2,6 5,7 5,8 2,3 E1 6 + + 100 1,4 3,9 4,9 6,6 6,3 4,6 E2 6 + + 200 0,7 2,3 4,3 7,1 7,1 5,3 E3 6 + + 400 0,6 2,6 4,6 7,7 7,1 5,1 E4 6 + + 800 1,1 5,9 7,9 10,3 7,7 5,6 E5 6 + + 1000 1,6 5,3 7,6 8,6 8,0 7,0 E6 6 + + 1600 0,0 2,0 6,1 8,1 6,1 5,3 E7 6 + + 2000 1,1 4,4 7,1 8,5 5,5 5,0 TABLEAU 7 Résultats de l'essai d'inhibition de migration effectué sur un morceau de rate dans la détermination de l'effet de l'iodure de sodium. : Sensibilisation : Traitement avec : : de l'iodure de : Indice cytotoxique : : sodium : + - 0,89 + du 1er au 11e jour 1,03 d'essai + du 12e au 21e jour d'essai 1,01 TABLEAU 8 Résultats de l'essai Boyden dans l'application sous-cutanée de rhodanate de potassium Groupe Nombre sensibi- application titre de l'hémagglutination indid'essai d'ani- lisation s.c. de 38,4 mg recte maux avec 0,01 ml de rhodanate de potassium (-log) de sérum de kg de poids de aux cheval aux 3e, corps/jour 10e, 15e, 21e, 28e, 38e et 44e 5e et 15e jours jours d'essai d'essai A1 12 - - - 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 A2 12 + - - 0,6 2,4 6,6 7,1 6,2 D1 12 - du 1er au 40e jour d'essai - 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 D2 12 + du 1er au 20e jour d'essai - 2,9 3,9 9,0 7,7 6,0 D3 12 + du 1er au 40e jour d'essai - 0,6 2,4 7,4 7,2 6,4 TABLEAU 9 Résultats de l'essai d'inhibition de la migration sur des morceaux de rate dans la détermination de effet de rhodanate ae sodium utilise sur des cochons d'Inde soumis à une épinéphrectomie : Sensibilisation # Traitement Indice cytotoxique + - 0,48 + du 1er au 11e + jour d'essai 0,95 : + : du 11e au 21e: jour d'essai : 0,97 TABLEAU 10 Résultats de l'essai d'inhibition de migration sur des morceaux de rate dans la détermination de l'effet de l'acide 2-imino-thiozolidine-4-carbonique. t t ; Sensibilisation : Traitement : Indice cytotoxique t + - 0,60 : + : du 1er au lie: jour d'essai : 0,93 : + : du 12e au 21e: jour d'essai : 0,95 REVENDICATIONS 1 - Procédé de préparation de sérums de diagnostique et thérapeutique à titre élevé et d'augmentation de manière non spécifique du taux d'anticorps en vue d'accroître la protection offerte par inoculation en médecine et dans 1-art vétérinaire, caractérisé en ce que l'on administre à l'organisme, soit par voie parentérale, soit par voie buccale, dans le laps de temps compris entre trois jours avant le début jusqu'à trois jours après la fin de la phase de sensibilisation, des électrolytes du genre des rhodanates inorganiques, des hydrorhodanates de bases organiques, des composés donnant naissance in vivo, par décomposition, à des ions rhodanate, ou des iodures. 2 - Médicament constitué par un sérum de diagnostique et thérapeutique obtenu par le procédé décrit à la revendication 1, caractérisé en ce qu'il contient des électrolytes et des composés donnant naissance in vivo, par décomposition, à des ions rhodanate ou des iodures.