FR 2190411 A1 19740201 FR 7223188 A 19720627 La présente invention a pour objet de nouveaux dérivés isoflavoniques sous forme d'acides et des esters et sels corres- pondants. Ces composés sont des facteurs pro-vitaminiques P ou C2, utiles comme médicaments. Ces nouveaux dérivés isoflavoniques répondent à la formule générale suivante dans laquelle R1 = H ou COOR4 R2 = H, OH, OCH2COOR4, R) = O-CH2-COOR4, les R4 identiques ou différents = H, CH3, C2H5, C3H7, Na, K ou Li. Pour préparer ces composés, on condense à chaud, dans un premier stade, une hydroxy-7 ou dihydroxy-5,7 isoflavone de formule dans laquelle R5 = H ou OH avec un ester a-halogéné de formule X(R7)COOR6 ( 111 ) dans laquelle X -= C1 ou Br R6 = CH3, C2H5 ou C3H7 R7 = -CH2-, dans un solvant approprié (par exemple acétone, méthyléthylcétone, diméthylformamide et similaires), en présence d'un agent alcalin (par exemple carbonate de potassium, carbonate de sodium et similaires). La température de réaction doit être inférieure à la température de décomposition du produit final désiré; sous cette réserve, elle peut être le point d'ébullition du solvant utilisé. Le temps de réaction est de quelques heures à quelques dizaines dtheures. Suivant les conditions réactionnelles (température, solvant, nature et rapport molaire des réactifs, temps de réaction), la substitution a lieu soit en position 7, soit en positions 5 et 7 (voir les exemples). I1 ne peut d'ailleurs y avoir substitution en positions 5 et 7 que si le composé de départ II est une dihydroxy-5,7 isoflavone et si l'on fait réagir une mole de cette substance avec au moins 2 moles de l'autre réactif de départ, c'est-à-dire le composé de formule (III). L'ester obtenu I avec R4 = CH3, C2H5 ou C3H peut être hydrolysé au moyen d tun agent alcalin tel que la soude ou la potasse, dans un solvant approprié tel que le méthanol ou le mélange méthanol-eau, pour entre transformé en sel alcalin.L'acidification du mélange réactionnel conduit à Itaci de correspondant I avec R4 = H.# Par neutralisation d'une solution ou d'une suspension des acides ainsi obtenus dans des solvants tels que le méthanol ou l'eau, on aboutit facilement aux sels solubles correspondants I avec R4 = Na, K, Li I1 est également possible de préparer le composé de formule (I), dans. laquelle R1 = H et R2 = R3 = OCH2COOR4, avec R4 = H, par hydrolyse et décarboxylation simultanée à chaud au moyen de la potasse aqueuse du composé de formule (I) dans laquelle R1 = COOR4 et R2 = R3 = OCN COOR4, avec R4 = CH, C2H5 ou C3H7, puis par acidification à froid du sel potassique formé. Les exemples suivants illustrent le mode de préparation d'un certain nombre des composés suivant l'invention. Les pourcentages sont en poids. Exemple 1 Ethoxycarbonyl-2 éthoxycarbonylméthoxy-7 isoflavone Formule (I) avec R1 = COOC2H5 R2 H R3 = OCH2COOC2Hf On chauffe avec agitation pendant 5 heures sous reflux 40 g éthoxycarbonyl-2 hydroxy-7 isoflavone 26 g bromacétate d'étElyle 35,6 g carbonate de potassium anhydre 400 ml acétone sec Le mélange est filtré pour séparer les sels minéraux insolubles. L'acétone est évaporée sous pression réduite et le résidu est recristallisé dans l'alcool absolu. On obtient 48 g de produit de PF = 880C. Analyse élémentaire : Calculé : 66,66 5,05 C22H2007 % C % H Trouvé @ 66,32 5,18 PM = 396 Exemple 2 Sel dipotassique de la carboxy-2 carboxyméthoxy-7 isoflavone et acide correspondant Formule (I) avec R1 = COOK (et acide correspondant) R2 = H R = O-CH2-COOK (et acide correspondant) 3 A une solution de 46 g de lester précédent dans 80 ml de méthanol, on ajoute, goutte à goutte, sous bonne agitation, 200 ml de potasse méthanolique à 10 %. En refroidissant, le sel de potassium cristallise quantitativement. I1 est facilement soluble dans l'eau. L'acide correspondant est précipité par acidification par HC1 par exemple d'une solution de 42 g de sel de potas sium dans 100 ml d'eau. I1 est recristallisé dans le dimé thylformamide. PF = 280-2850C (avec décomposition) Analyse élémentaire : Calculé : 63,53 3,53 C18H12b7 ss C % H Trouve : 63,28 3,41 PM = 340 Exemple 3 Hydroxy-5 éthoxycarbonylméthoxy-7 isoflavone Formule (I) avec R1 = H R2 = OH = OCH2-COOC2H5 On chauffe avec agitation pendant 6 heures sous re flux 50,8 g dihydroxy-5,7 isoflavone 33,4 g bromacétate d'éthyle 41,5 g carbonate de potassium anhydre 500 ml acétone sec Le mélange est filtré à froid. L'insoluble est lavé abondamment à l'eau froide pour éliminer le carbonate et séché. On obtient 56,7 g de produit. En évaporant, sous pression réduite, la solution acé tonique, on isole encore 6,5 g du même composé. - L'ester est recristallisé dans l'acide acétique glacial. PF = 174-1750C Analyse élémentaire : Calculé : 67,06 4,70 C19H16O6 %C %H Trouvé 66,85 4,59 PM = 340 Exemple 4 Hydroxy-5 carboxyméthoxy-7 isoflavone et son sel de potassium Formule (I) avec R1 H R2 = OH R3 = OCH2COOH (et sel de K) On dissout à chaud 39 g d'ester précédent dans 400 ml acétone. On refroidit à 10 C, puis ajoute rapidement 175 ml de potasse méthanolique à 6 %. Tout se dissout, puis recristallise presque immédiatement. On laisse réagir pendant 2 heures, puis filtre le sel dipotassique ( formule (I) avec R1 = H, R2 = OK, R3 = OCH2-COOK ). Ce dernier est dissous dans 1,5 1 d'eau. En laissant reposer cette solution, le sel monopotassique cristallise (formule (I) avec R1 = H, R2 = OH, R3 = OCH2COOK ). L'acide correspondant est obtenu avec un très bon rendement en acidifiant le mélange précédent. I1 est recristallisé dans le diméthylformamide. PF = 253-2540C Analyse élémentaire : Calculé : 65,)8 3,84 C17H12O6 %C Trouvé : 65,25 ),79 PM = 312 Les sels de sodium et de lithium peuvent être obtenus de la même manière, en remplaçant la potasse par la soude ou la lithine, ou par simple neutralisation d'une suspension de acide dans l'eau par la soude ou la lithine. Exemple 5 Di-éthoxycarbonylméthoxy-5,7-isoflavone Formule (I) avec R1 = H R2 R3 = OCH2-COOC2H5 On chauffe avec agitation pendant 70 heures a' 600C 50,8 g dihydroxy-5,7 isoflavone 66,8 g bromacétate d'éthyle 93 g carbonate de potassium anhydre 200 ml diméthylformamide sec Le mélange est filtré et la solution de diméthylformamide est évaporée sous pression réduite. La masse huileuse est reprise par 200 ml d'alcool isopropylique chaud. En refroidissant, l'ester cristallise lentement (48 g). PF = 84-85 C La pureté est contrôlée par chromatographie sur couche mince de gel de silice Kieselgel F 254 Merck avec comme éluant un mélange toluène-méthyléthylcétone- diméthylformamide acide acétique (70-50-6-1,5 en volumes). Analyse élémentaire Calculé @ 64,79 5,16 C23H22O8 %C %H Trouvé : 64,60 5,25 PM = 426 Exemple 6 Di-carboxyméthoxy-5,7 isoflavone et ses sels alcalins Formule (I) avec R1 = H R2 = R3 = O-CH2-COOH L'ester brut précédent est repris par 100 ml de.méthanol et 160 ml de potasse à 10 . On laisse reposer une nuit et reprend par 600 ml d'eau froide. Tout est soluble. En acidifiant par ltacide chlorhydrique 1/1, l'acide précipite. I1 est recristallisé dans le diméthylformamide. PF = 221 C La pureté est contrôlée par chromatographie sur couche mince de gel de silice Kieselgel F 254 Merck avec comme éluant un mélange chlorobenzène - acide acétique - méthanol eau (30-30-5-6 en volumes). Analyse élémentaire Calculé : 61,62 3,78 C19H14O8 %C %H Trouvé : 61,42 3,85 PM = 370 Les sels de sodium, lithium et potassium sont obtenus par neutralisation d'une solution de l'acide dans le mélange méthanol - eau. Ils sont facilement solubles dans l'eau. Exemple 7 Ethoxycarbonyl-2 hydroxy-5 éthoxycarbonylméthoxy-7 isoflavone Formule (I) avec R1 = COOC2H R2 = OH R3 O-CH2-COOC2H5 Le mode opératoire est identique à celui décrit dans exemple 3 mais à partir de l1éthoxycarbonyl-2 dihydroxy-5,7 isoflavone. L'ester est isolé avec un rendement de 82 %. PF = 94-96 C Analyse élémentaire Calculé : 64,08 4,85. C22H20O8 %C %H Trouvé 63,89 4,79 PM = 412 Exemple 8 Carboxy-2 hydroxy-5 carboxyméthoxy-7 isoflavone et ses sels alcalins Formule (I) avec R1 = C00H (et sels Na et K) R2 = OH R3 = OCH2COOH (et sels Na et K) 45 g de l'ester précédent sont traités par 368 ml de potasse méthanolique à 6 %, à ébullition pendant 30 miru- tes. En refroidissant, le sel dipotassique précipite. L'alcool est évaporé à sec sous pression réduite. Le résidu est repris par de l'eau et la solution obtenue est acidifiée par de l'acide chlorhydrique 1/1. L'acide précipite (37,4 g). Il est recristallisé dans le butanol. PF = 256-257 C. Analyse élémentaire: Calculé: 60,67 3,37 C18H1208 % c % H Trouvé : 60,5?. 3,29 PM = 356 Les sels de sodium et de lithium peuvent être préparés par neutralisation d'une suspension de l'acide dans l'eau par la base correspondante et évaporation à sec de la solution aqueuse. Ils sont facilement solubles dans lteau. Exemple 9 Ethoxycarbonyl-2 di-éthoxycarbonylméthoxy-5,7 isoflavone Formule (I) avec R1 = COOC2H5 R2 = R3 = O-CH2-COOC2H5 Ce dérive est obtenu par action d'au moins deux molécules de bromacétate d'éthyle sur une molécule d'éthoxycarbonyl- 2 dihydroxy-5,7 isoflavone. Le mode opératoire est identique à celui décrit à exemple 1. Le temps de réaction est de 5 heures. Le rendement en ester brut est de 79 %. I1 est recristallisé dans l'acide acétique glacial. PF = 104 C Sa pureté est contrôlée par chromatographie sur couche mince de gel de silice Kieselgel F 254 Merck avec comme éluant un mélange de chlorobenzène et d'acide acétique (85-15 en volumes). Analyse élémentaire Calcule : 62,65 5,22 C25H26O10 %C Trouvé : 62,56 5,24 PM = 498 Exemple 10 Carboxy-2 di-carboxyméthoxy-5,7 isoflavone et ses sels alcalins Formule (I) avec R1 = COOH (et sels Na, K et Li) R2 = R3 = OCH2COOH (et sels Na, K et Li) 28 g d'ester précédent sont dissous à chaud dans 90 ml de méthanol. On refroidit à 300c et ajoute 14-6 ml de potasse méthanolique à 10 d. On porte à ébullition pendant 7 heures, laisse revenir à température ambiante et filtre le sel tripotassique (27,4 g). En acidifiant une solution du sel de potassium dans lteau, on précipite acide correspondant. PF = 2500C Sa pureté est contrôlée par chromatographie sur couche mince de gel de silice Kieselgel F 254 Merck avec comme éluant le mélange chlorobenzène - acide acétique - méthanol eau (30-30-5-6 en volumes). Analyse élémentaire: Calculé : 57,97 3,38 C20H14010 % C % H Trouvé : 57,72 3,25 Les sels alcalins peuvent également être obtenus par neutralisation d'une suspension de acide dans l'eau par la base correspondante. Ils sont facilement solubles dans r eau. Exemple 11 Ethoxyearbonyl-2 di-a-éthoxycarbonyléthoxy-51 7 isoflavone Formule (I) avec R1 = COOC2H5 Le mode opératoire est identique à celui décrit dans l'exemple 5 avec, comme matières premières, l1éthoxycarbonyl- 2 dihydroxy-5,7 isoflavone et lta-bromopropionate d'éthyle. La durée de réaction est de 20 heures. L'ester est obtenu sous forme drune masse huileuse cristallisant très difficilement. On est, en effet, en présence d'un mélange de deux diastéréoisomères (2 paires d'énantiomères) dont la séparation stest avérée très difficile. Exemple 12 Carboxy-2 di-a-carboxyéthoxy-5,7 isoflavone et ses sels alcalins Formule (I) avec R1 = COOH (et sels Na, K et Li) (et sels Na, K et Li) L'ester précédent est dissous dans le méthanol puis traité par la potasse méthanolique à 10 % à reflux. On agite pendant 1 heure puis distille le méthanol. Le résidu est repris par liteau puis acidifié par de l'acide chlorhydrique concentré. L'acide précipite sous forme huileuse. Cette huile est dissoute dans l'éther. La solution éthérée est lavée plusieurs fois à lteau, séchée sur sulfate de sodium, puis évaporée. La carboxy-2 di-&alpha;-carboxyéthoxy-5,7 isoflavone est isolée sous forme d'un produit pulvérulent jaunâtre avec un excellent rendement. La structure est confirmée par spectrométrie de résonance magnétique nucléaire Analyse élémentaire Calculé : 59,73 4,07 C22H18010 % C % H Trouvé : 59,65 4,12 Les sels alcalins sont obtenus par neutralisation d'une solution de l'acide dans le méthanol par la base corresmondante. On obtient, dans ces conditions, une cristallisation fractionnée des deux diastéréoisomères, l'un étant soluble dans le méthanol et l'autre l'étant peu. Ces sels sont facilement solubles dans liteau. Exemple 13 Di-carboxyméthoxy-5,7 isoflavone ce diacide, décrit dans l'exemple 6, peut également être préparé par hydrolyse et décarboxylation de l'éthoxycarbo- nyl-2 di-éthoxycarbonylméthoxy-5,7 isoflavone, décrite dans l'exemple 9. La réaction se fait en une seule étape en employant la potasse aqueuse à 7 % comme agent d'hydrolyse et de décar boxylation selon le mode opératoire suivant On chauffe à reflux pendant 2 h 30 mm, 10 g drester en suspension dans 100 ml de potasse aqueuse à 7 . La solution limpide obtenue est refroidie et acidifiée par l'acide chlorhydrique. Le précipité est filtré, lavé à liteau et séché. On obtient 6,8 g de diacide brut qui, après recristallisation dans acide acétique glacial ou le diméthylformamide, est identique au produit pur obtenu dans exemple 6. Propriétés Pharmacologiques des composés Ces nouveaux composés sont essentiellement des protecteurs vasculaires et ils ont en outre des effets antiphlogistiques et antiallergiques. Deux composés ont été plus particulièrement étudiés, à savoir ceux des exemples 10 et 12 sous -forme de sels trisodiques. Les deux composés ont montré des propriétés pharmacologiques sensiblement identiques : à la dose de I mu/100 g et par jour, par voie orale, ces composés maintiennent l'intégrité des micro-vaisseaux, et en particulier des capillaires, des cobayes soumis à un régime de base synthétique dépourvu de facteur C2 mais contenant une dose d'acide ascorbique suffisante correspondant à 1 mg/100 g de poids corporel et par jour. Chez des cobayes normalement alimentés l'administration intra-péritonéale de ces composés provoque une élévation de la résistance capillaire de type biphasique : soit d'abord une élévation précoce (6 heures), brève (24 heures) et d'intensité moyenne (élévation de 10 à 20 cm de mercure) suivie, 18 heures après, d'une nouvelle augmentation de longue durée (160 heures) et de forte intensité (élévation de 30 cm de mercure). Les deux dérivés ont respectivement une toxicité aiguës DL 50A, de 1,57 g/kg pour le dérivé à groupes oxyacétate de exemple 10 et de 1,69 g/kg pour le dérivé à groupes or.yiso- propionate de l'exemple 12. La toxicité à long terme montre qu'il nty a pas accumulation. Applications thérapeutiques des composés Rétinopathie en général et diabétique en particulier Purpuras Maladies veineuses (varices, hémoroides) Risques et conséquences vasculaires de lthypertension, athéro sclérose, hypercholestérolémie, hyperazotémie Scorbut Oedèmes Troubles des échanges hydro-salins, cellulaires et rénaux Angines de poitrine et infarctus Maladie de Barlow Gastrites et ulcères gastro-duodénaux. La dose efficace des composés suivant l'invention à administrer à lthomme est de 100 mg à 1 g de substance active par jour, en une ou plusieurs prises. Etude pharmaceutique Les compositions pharmaceutiques contenant comme substance active au moins un composé suivant ltinvention peuvent se présenter sous toutes les formes dradministration usuelles utilisables par la voie orale ou parentérale qu par application dans les yeux, telles que comprimés, granulés, solutions buvables et injectables, gouttes, collyres etc.... Ces compositions contiennent outre la substance active les supports et excipients habituels pharmaceutiquement acceptables et la substance active peut y être éventuellement associée à d'autres substances thérapeutiquement actives, telles que des hypotenseurs, des vitamines A, E, C, des diurétiques etc... Etude clinique Les composés des exemples 10 et 12 ont été essayés sur 7 cas de rétinite diabétique et sur 7- cas de rétinopathie non diabétique. On a obtenu dans ltensemble des résultats excellents arrêt de lrévolution chez les diabétiques, amélioration, à des degrés divers, dans tous les cas de rétinopathie non diabétique. Tous ces traitements ont été institués durant 10 jours à raison de 400 mg de la substance active par jour, par la voie veineuse. REVENDICATIONS le Nouveaux dérivés isoflavoniques de formule générale dans laquelle : R1 = H ou COOR4 = H, OH, OCH2COOR4 R3 = O-CH2-COOR4, les R4 identiques ou différents = H, CH3, C2H5, C3H7, Na K ou Li, avec cette restriction que si R1 est H, R2 est dif férent de H. 2 Procédé'de préparation des composés suivant la revendication 1, caractérisé en ce que l'on condense, chaud, une isoflavone hydroxylée de formule dans laquelle R5 = H ou OH (avec cette restriction que si R1 est H, R5 est différent de H), avec un ester &alpha;;-halogéné de formule X(R7)COOR6 ( III ) dans laquelle X = C1 ou Br R6 = CH3, C2H5 ou C3H7 R7 = -CH2-, dans un solvant, en présence d'un agent alcalin, la tempéra- ture de réaction étant inférieure à la température de décomposition du produit final et le temps de réaction étant de quelques heures à quelques dizaines d'heures, pour obtenir un ester de la formule (I) dans laquelle R4 = CH3, C2H5 ou C3H7, que l'on hydrolyse au moyen d'un agent alcalin et dans un solvant, pour le transformer en sel alcalin, que lton. acidifie dans le mélange réactionnel pour obtenir acide correspondant de la formule (I) dans laquelle R4 = H, acide que lton sépare et purifie par recristallisation, et que l'on neutralise par une base appropriée, pour obtenir un sel de la formule (I), dans laquelle R4- Na, K ou Li. 30 Procédé suivant la revendication 2, caractérisé en ce que, pour obtenir un composé de la formule (I), dans laquelle R2 est différent de H out de OH, on choisit un composé de départ de la formule (II), dans laquelle R5 est OH, et on fait réagir une mole du composé (II) avec au moins deux moles du composé de formule (III). 40 Compositions pharmaceutiques ayant un effet de protecteur vasculaire et utiles notamment pour le traitement des rétinopathies, caractérisées en ce qu'elles comprennent au moins un composé suivant la revendication 1- comme substance active et les supports et excipients habituels pharmaceutiquement acceptables. 50 Compositions pharmaceutiques suivant la revendication 4, caractérisées en ce qu'elles contiennent, en association avec les composés suivant la revendication 1, d'autres substances thérapeutiquement actives. 6 Utilisation d'au moins un composé suivant la revendication 1 comme médicament ayant un effet de protecteur vasculaire, éventuellement en association avec d'autres substances thérapeutiquement actives et conjointement avec les supports et excipients pharmaceutiquement acceptables, dans des compositions pharmaceutiques utiles notamment pour le traitement des rétinopathies, des maladies veineuses, des purpuras, des oedèmes, de l'athérosclérose. 70 Procédé de préparation des composés suivant la revendication 1, de la formule (I) dans laquelle R1 = H et R2 R3 = OCH2COOR4, avec R4 = H caractérisé par l'hydrolyse et la décarboxylation simultanée à chaud au moyen de la potasse aqueuse du composé de formule (I) dans laquelle R1 # COOR4 et R2 # R3 = OCH2COOR4, avec R4 = CH3, C2H5 ou C3H7, puis par 1